KR20200052383A

KR20200052383A - 헤테로 이량체 면역글로불린

Info

Publication number: KR20200052383A
Application number: KR1020207012685A
Authority: KR
Inventors: 스타니슬라스 블레인; 다코 스케그로; 폴 와즈만
Original assignee: 아이크노스 사이언스 에스. 아.
Priority date: 2011-03-25
Filing date: 2012-03-23
Publication date: 2020-05-14
Also published as: US20140187753A1; JP2014511836A; MX2018010572A; IL270815B2; BR112013023918A2; AU2015210378A1; CN107840894A; AU2015210378B2; JP2020040980A; CN108285488B; IL270815A; IL228387A0; SG188638A1; MX358752B; HK1248717A1; JP2018008957A; NZ608724A; EP2688909A2; US20140066599A2; US20180094077A1

Abstract

본 발명은 조작된 헤테로-이량체 면역글로불린(engineered hetero-dimeric immunoglobulins) 또는 이의 단편(fragments) 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

헤테로 이량체 면역글로불린{Hetero-dimeric Immunoglobulins}

관련된 출원

본 출원은 2011.03.25일에 출원된 미국 가출원 번호 61/467,727의 이익을 주장한다; 본 명세서의 모든 것은 그들 전체에 참조로 포함된다.

기술분야

본 발명은 조작된 헤테로-이량체 면역글로불린(hetero-dimeric immunoglobulin} 또는 이의 단편 및 이의 제작 방법에 관한 것이다.

헤테로-이량체(hetero-dimeric) 단백질의 제작 방법에 관하여는 알려져 있다. 헤테로-이량체 이중특이성(bispecific) 항체의 구성 및 생산을 위한 첫번째 접근은 이중특이성 항체의 원하는 특이성과 함께 쥣과의 단일클론 항체(murine monoclonal antibodies)를 발현하는 두개의 다른 혼성세포주(hybridoma cell lines)의 체세포 융해(somatic fusion)로 구성된 쿼드로마 기술(quadroma technology)이었다(Milstein C 및 Cuello AC, Nature, 305(5934):537-40(1983)). 혼성화-혼성세포주(hybrid-hybridoma)(또는 쿼드로마) 세포주의 결과 내에서 두 다른 면역글로불린(immunoglobulin; Ig) 중(heavy) 및 경쇄(light chain)의 임의적 접합(random pairing)때문에, 최대 열개의 다른 면역글로불린 종(species)이 생성되었고, 이중 오직 하나가 기능적 이중특이성 항체이다(Kufer P et al., Trends Biotechnol, 22(5):238-44(2004)). 부접합(mispaired) 부산물(by-product)의 존재는 생산율을 유의적으로 감소시켰고, 생산물 균질성(product homogeneity)을 달성하기 위한 정교한 정제 절차가 요구되었다. Ig 중쇄의 부접합은 몇 가지 이론적 설계전략(rational design strategies)를 사용하여 감소시킬 수 있고, 대부분은 CH3 도메인 호모-이량체(homo-dimer)의 두 아단위(subunit) 사이의 인공적인(man-made) 상보적(complementary) 헤테로-이량체 인터페이스의 디자인(design)을 통한 헤테로-이량체화(hetero-dimerization)를 위하여 항체 중쇄를 조작한다. 조작된 CH3 헤테로-이량체 도메인 접합의 첫번째 보고는 헤테로-이량체 Fc 일부분(moiety) 생산을 위해 "protuberance-into-cavity" 접근에 묘사되었고, Carter et al.에 의해 제작되었다(U.S.Patent No. 5,807,706; 'Knobs-into-holes'; Merchant AM et al., Nat Biotechnol, 16(7):677-81(1998)). 대체 설계는 최근에 개발되었고, WO2007/110205에 설명된 모듈의 핵심 조성물(core composition) 변형에 의한 새로운 CH3 모듈(module) 접합의 디자인 또는 WO2007/147901 또는 WO2009/089004에 설명된 모듈 사이의 상보적 염다리(salt bridges)의 디자인 중 하나를 포함한다. CH3 조작전략의 단점은 상기 기술이 아직도 바람직하지 않은 호모-이량체의 유의적인 양을 생산하는 결과에 있다. 이런 이유로 호모-이량체 종의 콘텐츠(content)를 최소화하는 조작기술의 필요성이 요구된다.

본 명세서에 언급된 헤테로-이량체화 Ig 중쇄의 다양한 접근에 구애받지 않고, 어떠한 CH3 도메인의 합리적인 조작 또는 다른 것에 기초한 완전한(full) 이중특이성 항체[예를 들어, 독특한 항원 결합위치(binding site) 및 하나의 이량체 Fc 부위를 생성하는 가변(variable) 중 및 경쇄 도메인의 독특한 셋트를 각각 갖는 두 FAB 단편]의 발전과 직면한 주요 문제점은 그들의 경쇄의 부접합을 피하기 위한 두 FAB에 일반적인 경쇄를 갖는 것이 요구된다는 것이다(Carter P, J Immunol Methods, 248(1-2):7-15(2001)). 비록, 이는 그들의 분명히 다른 중쇄에 의해서 다른 항원에 결합하기 위한 동일한 경쇄를 갖는 항체를 사용함으로써 해결될 수 있지만, 이는 디스플레이 테크놀로지(display technologies)의 사용에 일반적으로 포함되는 상기 항체의 분리가 요구되고, 전체 이중특이성 항체 안으로, 추가적인 CDR 또는 경쇄의 조작 없이 재조립하기 위해 원하는 특이성의 두개의 분명한 인간 단일클론항체의 직접적인 사용을 가능하게 할 수 있는 기술이 현재 없다. 따라서, 자연적 항체와 이들의 전체적인 구조가 비슷한, 예를 들어, 독특한 항원 결합위치 및 하나의 이량체 Fc 부위를 생성하는 가변 중 및 경쇄 도메인의 독특한 셋트를 각각 갖는 두 FAB 단편으로 구성된, 전체의, 정확하게 조립된, 이중특이성 항체의 생성이 필요하다.

발명의 요약

본 공개는 일반적인 조작된 헤테로-이량체(hetero-dimeric) 면역글로불린 또는 이의 단편 및 이를 만드는 방법에 관한 것이다.

한 측면에서, 본 공개는 하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 제공한다:

(a) 단백질-단백질 인터페이스(interface)와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된(engineered) 면역글로불린 쇄(chain), 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인(parent domain)의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과(super-family)의 첫번째 구성원(member)의 기부(donor) 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환; 및

(b) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄, 여기서 상기 두번째 조직된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환,

여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체(homo-dimer)를 형성하지 않고,

여기서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은, CH2 도메인이 아니고, CH3 도메인이 아니며, VL 도메인이 아니고, VH 도메인이 아니며,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 12 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 119 위치에 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 12 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 119 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 26 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 13 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 26 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 13 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 5 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 20 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 27 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 18 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 27 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 18 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 20 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 26 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 79 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 84.3 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 79 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 84.3 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 86 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 86 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 11 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 경첩영역(hinge region)으로 구성된 도메인이면, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 경첩영역의 3 위치에 치환되지 않으며,

상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.

또 다른 측면에서, 본 공개는 하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 제공한다:

(a) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환; 및

(b) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄, 여기서 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환,

여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하고,

여기서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은, CH2 도메인이 아니고, CH3 도메인이 아니며, VL 도메인이 아니고, VH 도메인이 아니며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 치환된 아미노산 잔기로 구성하며,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 20 위치에 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍(charged pair)이 아니고,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 26 위치에 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 86 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 86 위치에 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.

여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 일치하지 않고,

여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하며,

여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH3 도메인, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치의 아미노산 잔기 및 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7. 20. 22. 26. 27. 79. 81, 84, 84.2, 85.1, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며,

여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 88 위치가 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 85.1 및/또는 86 위치가 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.

(a) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환; 및

(b) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄, 여기서 상기 두번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환,

여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH3 도메인, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치의 아미노산 잔기 및 3, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 86 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 20 위치가 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 26 위치가 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.

여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치의 아미노산 잔기 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3 및 90으로 구성된 군으로부터 선택 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1 및 90으로 구성된 군으로부터 선택 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 88 위치가 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 85.1 및/또는 86 위치가 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.

여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치의 아미노산 잔기 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 20 위치가 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 26 위치가 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.

(a) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환; 및

(b) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환,

여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH4 도메인, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 치환된 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 치환된 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.

또 다른 측면에서, 본 공개는 하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 제조하기 위한 방법을 제공한다:

(a) 조작된 도메인으로 구성된 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄를 얻기 위해 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 첫번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 하나의 아미노산 잔기를 치환하는 단계;

(b) 조작된 도메인으로 구성된 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 얻기 위해 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 두번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 하나의 아미노산 잔기를 치환하는 단계;

(c) 상기 조작된 면역글로불린 쇄를 암호화하는 핵산(nucleic acid)으로 구성된 숙주세포를 상기 핵산이 발현되고, 상기 조작된 면역글로불린 쇄가 생산되도록 배양하는 단계; 및

(d) 숙주세포 배양으로부터 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 회복하는 단계.

또 다른 측면에서, 본 공개는 하기를 포함하는 다중도메인(multidomain) 단백질의 단백질-단백질 인터페이스를 조작하기 위한 방법을 제공한다:

(a) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 도메인을 포함하는 다중도메인을 제공하는 단계;

(b) 상기 단계 (a)의 도메인과 다른 단백질-단백질 인터페이스와 함께 도메인을 포함하는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과 구성원의 기부 도메인을 선택하는 단계;

(c) 상기 단계 (a)의 단백질-단백질 인터페이스와 도메인 및 상기 단계 (b)의 단백질-단백질 인터페이스와 기부 도메인의 3D 구조를 겹치는 단계:

(d) 상기 단계 (a)의 단백질-단백질 인터페이스와 도메인 및 상기 단계 (b)의 단백질-단백질 인터페이스와 기부 도메인의 겹쳐진 3D 구조에 있어서 노출된 단백질-단백질 인터페이스 잔기를 확인하는 단계; 및

(e) 상기 단계 (a)의 단백질-단백질 인터페이스와 도메인의 확인된 노출된 단백질-단백질 인터페이스 아미노산 잔기의 적어도 한 아미노산 잔기와 상기 단계 (b)의 단백질-단백질 인터페이스와 기부 도메인으로부터 확인된 노출된 단백질-단백질 인터페이스와 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환하는 단계.

또 다른 측면에서, 본 공개는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 적어도 하나의 아미노산 잔기가 치환된 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 적어도 하나의 조작된 도메인으로 구성된 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 적어도 하나의 아미노산 잔기가 치환된 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 적어도 하나의 조작된 도메인으로 구성된 두번째 조작된 면역글로불린 쇄로 구성된 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 조작하기 위한 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인의 용도를 제공한다.

도 1: 조작된 CH3 도메인 BT 알파 쇄(alpha chain) 및 인간 IgG1 CH3 도메인과 함께 조작된 CH3 도메인 BT 베타(beta) 쇄의 아미노산 서열의 정렬(alignment)을 나타낸 도이다.
도 2: BT 알파 His 및 VL-BT 베타 쇄의 다양한 접합의 개략도(schematic diagram)를 나타낸 도이다. 상기 BT 알파 쇄는 이의 C-말단(C-terminus)에 결합된 폴리히스티딘 태그(polyhistidine tag) 서열을 갖고, BT 베타 쇄는 이의 N-말단(N-terminus)에 결합된 가변 도메인 항체를 갖는다.
도 3: BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체 및 BT 알파 His-VL-BT 베타 F405S 헤테로-이량체 둘의 생산을 나타내는 SDS-PAGE 분석[4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔(Tris-glycine polyacrylamide gel)] 결과를 나타내는 도이다. (M) 지표로써의 분자량 마커(molecular weight marker). (1) 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 형질주입(transfection) 생산량(output), 비-감소 상태(non-reducing condition). (2) 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 형질주입 생산량, 감소 상태(reducing condition). (3) 단백질-A 정제 후, 경첩(hinge)과 함께 인간 IgG1-Fc 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (4) 단백질-A 정제 후, 경첩과 함께 인간 IgG1-Fc 형질주입 생산량, 감소 상태. (5) 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405S 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (6) 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405S 형질주입 생산량, 감소 상태. (A) 확실하지 않은 응집체(aggregates). (B) BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체. (C) BT 알파 His 호모-이량체(homo-dimer). (D) VL-BT 베타 F405S 호모-이량체. (E) VL-BT 베타 F405S 단량체(monomer). (F) BT 알파 His 단량체. (G) BT 알파 His_VL-BT 베타 F405S 헤테로-이량체.
도 4A: 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝(scanning densitometry analysis)을 나타낸 도이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔, 비-감소 상태). (A) 확실하지 않은 응집체. (B) BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체. (C) BT 알파 His 호모-이량체. 도 4B: 응집체를 제외하였을 때, 단백질-A 정제 후, BT 알파 His 호모-이량체에 대한 BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔, 비-감소 상태). (A) 확실하지 않은 응집체. (B) BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체. (C) BT 알파 His 호모-이량체.
도 5: BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체의 생산을 나타내는 SDS-PAGE 분석결과를 나타내는 도이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔). (M) 지표로써의 분자량 마커. (1) 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (2) 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 형질주입 생산량, 감소 상태. (3) 단백질-A 정제 후, 경첩과 함께 인간 IgG1-Fc 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (4) 단백질-A 정제 후, 경첩과 함께 인간 IgG1-Fc 형질주입 생산량, 감소 상태. (A) 확실하지 않은 응집체. (B) VL-BT 베타 F405A 호모-이량체. (C) BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체. (D) BT 알파 His 호모-이량체. (E) VL-BT 베타 F405A 단량체.
도 6: BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체의 생산을 확인하기 위한 웨스턴 블랏을 나타내는 도이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔). 웨스턴 블랏은 항 His 표지 항체(anti His tag antibody)로 탐지되었다. (M) 지표로써의 분자량 마커. (1) 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (2) 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 형질주입 생산량, 감소 상태. (3) 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 형질주입 생산량 및 Ni²⁺-세파로스(Ni2+-sepharose), 비-감소 상태. (4) 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 형질주입 생산량 및 Ni²⁺-세파로스, 감소 상태. (5) 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 형질주입 생산량, Ni²⁺-세파로스, 및 단백질-L 아가로스(agarose), 비-감소 상태. (6) 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 형질주입 생산량, Ni²⁺-세파로스, 및 단백질-L 아가로스, 감소 상태.
도 7A: 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔, 비-감소 상태). (A) 확실하지 않은 응집체. (B) VL-BT 베타 F405A 호모-이량체. (C) BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체. (D) BT 알파 His 호모-이량체. (E) VL-BT 베타 F405A 단량체. 도 7B: 응집체를 제외하였을 때, 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 호모-이량체에 대한 헤테로-이량체의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔, 비-감소 상태). (A) 확실하지 않은 응집체. (B) VL-BT 베타 F405A 호모-이량체. (C) BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체. (D) BT 알파 His 호모-이량체. (E) VL-BT 베타 F405A 단량체.
도 7C: 헤테로-이량체 BT 알파 His_BT 베타(F405A) HA 헤테로-이량체의 DSC 온도기록도를 나타내는 도이다.
도 8: Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S 헤테로-이량체의 생산을 확인하기 위한 웨스턴 블랏을 나타내는 도이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔). (M) 지표로써의 분자량 마커. (1) 실시예 2로부터의 BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체, 단백질-A 정제 후 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (2) 실시예 2로부터의 BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체, 단백질-A 정제 후 형질주입 생산량, 감소 상태. (3) Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S, 단백질-A 정제 후 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (4) Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S, 단백질-A 정제 후 형질주입 생산량, 감소 상태. (5) "knob-into-hole" Fc, 단백질-A 정제 후 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (6) 가변 도메인에 결합된 "hole"과 함께 "knob-into-hole" Fc 구성, 단백질-A 정제 후 형질주입 생산량, 감소 상태. (A) Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S 헤테로-이량체. (B) VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S 호모-이량체. (C) Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N 호모-이량체.
도 9: 단백질-A 정제 후, Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S 헤테로-이량체의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔, 비-감소 상태). (A) Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S. (B) VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S 호모-이량체. (C) Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N 호모-이량체.
도 10: 단백질-A 정제 후, BT 델타(delta)_VL-BT 감마(gamma) 헤테로-이량체의 생산을 나타내는 SDS-PAGE 분석결과를 나타내는 도이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔). (M) 지표로써의 분자량 마커. (1) BT 델타_VL-BT 감마 헤테로-이량체, 단백질-A 정제 후 형질주입 생산량, 감소 상태. (2) BT 델타_VL-BT 감마 헤테로-이량체, 단백질-A 정제 후 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (A) BT 델타_VL-BT 감마 헤테로-이량체. (B) VL-BT 감마 호모-이량체. (C) VL-BT 감마 단량체.
도 11A: 단백질-A 정제 후, BT 델타_VL-BT 감마 헤테로-이량체의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔, 비-감소 상태). 도 11B: 상대적인 비율 측정에 있어서, 응집체 및 단량체의 흔적(traces)을 제외하고 단백질-A 정제 후, BT 델타_VL-BT 감마 헤테로-이량체의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔, 비-감소 상태).
도 12: 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자 조작된 1가(monovalent)의 FAB가 발현할 때, 가능한 접합의 상태를 나타내는 도이다.
도 13: 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자 조작된 1가의 FAB의 생산을 확인하는 SDS-PAGE를 나타내는 도이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔). (M) 지표로써의 분자량 마커. (1) 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자 조작된 1가의 FAB, 단백질-A 정제 후 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (A) 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자 조작된 1가의 FAB. (B) VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_VL(항-hCD19)-CK 감마 호모-이량체 분자. (C) VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자[반-분자(half-molecule)].
도 14: 단백질-A 정제 후, 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자 조작된 1가의 FAB의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔, 비-감소 상태). (1) VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_VL(항-hCD19)-CK 감마 호모-이량체 분자. (2) 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자 조작된 1가의 FAB. (3) VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자(반-분자).
도 15: 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자 조작된 1가의 FAB의 DSC 온도기록도를 나타내는 도이다.
도 16: 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK3 분자 조작된 1가의 FAB가 발현할 때, 가능한 접합의 상태를 나타내는 도이다.
도 17: 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK3 분자 조작된 1가의 FAB의 생산을 확인하는 SDS-PAGE를 나타내는 도이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔). (M) 지표로써의 분자량 마커. (1) 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK3 분자 조작된 1가의 FAB, 단백질-A 정제 후 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (A) 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK3 분자 조작된 1가의 FAB. (B) VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_VL(항-hCD19)-CK3 호모-이량체 분자. (C) VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_VL(항-hCD19)-CK3 분자(반-분자).
도 18: 단백질-A 정제 후, 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK3 분자 조작된 1가의 FAB의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔, 비-감소 상태). (1) VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_VL(항-hCD19)-CK3 호모-이량체 분자. (2) 헤테로-이량체 VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK3 분자 조작된 1가의 FAB. (3) VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_VL(항-hCD19)-CK3 분자(반-분자).
도 19A: 인간 IGHG1, IGHG2, IGHG3 및 IGHG4 CH1 도메인의 서열; IMGT^® 및 EU 번호가 사용되었다; 음영위치(shaded position)는 치환되지 않음을 나타낸다. 도 19B: 인간 IGHG1 경첩부위의 서열; IMGT^® 및 EU 번호가 사용되었다; 음영위치는 치환되지 않음을 나타낸다. 도 19C: 인간 IGHG1, IGHG2, IGHG3 및 IGHG4 CH2 도메인의 서열; IMGT^® 및 EU 번호가 사용되었다; 음영위치는 치환되지 않음을 나타낸다; (~)는 서열 정렬에 변화를 나타낸다. 도 19D: 인간 IGHG1, IGHG2, IGHG3 및 IGHG4 CH3 도메인의 서열; IMGT^® 및 EU 번호가 사용되었다; 음영위치는 치환되지 않음을 나타낸다.
도 20A: 인간 TRAC(약어로 ALPHA), TRBC2(약어로 BETA), TRDC(약어로 DELTA), TRGC1(약어로 GAMMA), 및 IGHG1 CH3(약어로 CH3) 불변(constant) 도메인에 기초한 단백질-단백질 인터페이스(interface)를 갖는 조작된 인간 IGHG1 CH1 도메인의 서열; IMGT^® 및 EU 번호가 사용되었다; 음영위치는 치환되지 않음을 나타낸다. 도 20B: 인간 TRAC(약어로 ALPHA), TRBC2(약어로 BETA), TRDC(약어로 DELTA), TRGC1(약어로 GAMMA), 및 IGHG1 CH3(약어로 CH3) 불변 도메인에 기초한 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 조작된 인간 IGHG1 CH2 도메인의 서열; IMGT^® 및 EU 번호가 사용되었다; 음영위치는 치환되지 않음을 나타낸다. 도 20C: 인간 TRAC(약어로 ALPHA), TRBC2(약어로 BETA), TRDC(약어로 DELTA), TRGC1(약어로 GAMMA), 및 IGHG1 CH3(약어로 CH3) 불변 도메인에 기초한 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 조작된 인간 IGHG1 CH3 도메인의 서열; IMGT^® 및 EU 번호가 사용되었다; 음영위치는 치환되지 않음을 나타낸다.
도 21A: 인간 TRAC(약어로 ALPHA), TRBC2(약어로 BETA), TRDC(약어로 DELTA), TRGC1(약어로 GAMMA), 및 IGHG1 CH3(약어로 CH3) 불변 도메인에 기초한 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 조작된 인간 IGHE CH4 도메인의 서열; IMGT^® 및 EU 번호가 사용되었다; 음영위치는 치환되지 않음을 나타낸다. 도 21B: 인간 TRAC(약어로 ALPHA), TRBC2(약어로 BETA), TRDC(약어로 DELTA), TRGC1(약어로 GAMMA), 및 IGHG1 CH3(약어로 CH3) 불변 도메인에 기초한 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 조작된 인간 IGHM CH4 도메인의 서열; IMGT^® 및 EU 번호가 사용되었다; 음영위치는 치환되지 않음을 나타낸다.
도 22: 인간 TRAC(약어로 ALPHA), TRBC2(약어로 BETA), TRDC(약어로 DELTA), TRGC1(약어로 GAMMA), 및 IGHG1 CH3(약어로 CH3) 불변 도메인에 기초한 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 조작된 인간 IGKC 도메인의 서열; IMGT^® 및 EU 번호가 사용되었다; 음영위치는 치환되지 않음을 나타낸다.
도 23A: 인간 TRAC(약어로 ALPHA), TRBC2(약어로 BETA), TRDC(약어로 DELTA), TRGC1(약어로 GAMMA), 및 IGHG1 CH3(약어로 CH3) 불변 도메인에 기초한 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 인간 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, IGLC7 및 조작된 변종(variants)의 서열; 카뱃(Kabat) 잔기 108 내지 161은 IMGT^® 및 카뱃 번호가 모두 사용되어 보여진다; 음영위치는 치환되지 않음을 나타낸다. 도 23B: 인간 TRAC(약어로 ALPHA), TRBC2(약어로 BETA), TRDC(약어로 DELTA), TRGC1(약어로 GAMMA), 및 IGHG1 CH3(약어로 CH3) 불변 도메인에 기초한 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 인간 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, IGLC7 및 조작된 변종의 서열; 카뱃 잔기 162 내지 215는 IMGT^® 및 카뱃 번호가 모두 사용되어 보여진다; 음영위치는 치환되지 않음을 나타낸다.
도 24: 얼비툭스(Erbitux) FAB-BT 알파_허셉틴(Herceptin) scFv-BT 베타 헤테로-이량체가 발현할 때, 변형가능한 중쇄 접합(pairings)의 상태를 나타내는 도이다.
도 25: 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타의 생산을 확인하는 SDS-PAGE를 나타내는 도이다. 각각의 정제 단계 후, 단백질 풀(pool)의 샘플(sample)이 보여진다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔, 비-감소 상태). (M) 지표로써의 분자량 마커. (1) 단백질-A 크로마토그래피(chromatography) 후. (2) 음이온(anion) IEX 후. (3) 양이온(cation) IEX 후. (4) 크기-배제 크로마토그래피(size-exclusion chromatography) 후. (5) 대조군: scFv-Fc 융합 단백질(fusion protein). (6) 대조군: 단일클론 항체(monoclonal antibody).
도 26: 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔, 비-감소 상태). (A) VH(항-EGFR) CH1-BT 알파_VL(항-EGFR)-CK 호모-이량체. (B) 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체. (C) scFv(항-HER2)-BT 베타 호모-이량체. 불순물(impurities)은 측정으로부터 제외되었다.
도 27: 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체의 DSC 온도기록도를 나타내는 도이다.
도 28A: 고정된 인간 EGFR-Fc에/로부터 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체의 결합(binding) 및 분리(dissociation)를 보여주는 BIAcore 센서그램(sensorgram)을 나타내는 도이다.
도 28B: SPR을 사용한 두 항원에 대한 이중특이성(bispecific) 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체의 동시(simultaneous) 결합을 나타내는 도이다. 상기 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체 및 인간 EGFR-Fc는 고정된 인간 HER2-Fc[실선(solid line)]에 연속적으로 주입되었다. 대조군: (점선) 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체가 고정된 인간 HER2-Fc에 결합, (파선) 인간 EGFR-Fc가 고정된 인간 HER2-Fc에 결합하지 않음.
도 29: 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체가 발현할 때, 변형가능한 중쇄 접합의 상태를 나타내는 도이다. VH(항-hVLA2)-CH1-BT 알파 및 VH(항-hCD19)-BT 델타-BT 베타의 두 중쇄는 C-말단에 His 및 c-myc 표지가 각각 결합하여 있다.
도 30: 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체의 SDS-PAGE 및 웨스턴 블랏 분석의 결과를 나타내는 도이다. 샘플은 각 정제 단계 후 채취되었다4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔, 비-감소 상태); 용출액(eluate) 및 결합되지 않은 풀 모두 보인다. (M) 지표로써의 분자량 마커. (1) 단백질-A 크로마토그래피로부터 용출액 풀. (2) 단백질-L 크로마토그래피로부터 결합되지 않은 풀. (3) 단백질-L 크로마토그래피로부터 용출액 풀. (4) Ni²⁺-NTA 크로마토그래피로부터 결합되지 않은 풀. (5) Ni²⁺-NTA 크로마토그래피로부터 용출액 풀. (A) SDS-PAGE. (B) 웨스턴 블랏은 항 His 표지 항체로 탐지되었다. (C) 웨스턴 블랏은 항 c-myc 표지 항체로 탐지되었다.
도 31: CD19⁺ VLA2^- 및 CD19^- VLA2⁺ 세포에 결합하는 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체의 유동세포 분석 탐지(flow cytometry detection). 막대그래프(histograms)은 각각의 염색을 위한 피코에리트린(Phycoerythrin; PE) 형광밀도(X 축)에 대한 최대 이벤트의 평준화된(normalized) %(Y 축)를 나타낸다. A 및 B: 라지(Raji) 세포는 동위원소(isotope) 대조군으로서 항-hVLA2 항체(회색 막대그래프) 또는 항-hCD19_항-VLA2 이중특이성 항체(흰색 막대그래프)로 염색되었다. 일차 항체의 결합은 (A) 마우스 항 c-myc 표지 항체 또는 (B) 마우스 항 His 표지 항체로 나타내어졌고, PE-표지된 항-마우스 Ig 항체로 염색되었다. C 및 D: HT1080 세포는 동위원소 대조군으로서 항-hCD19 항체(회색 막대그래프) 또는 항-hCD19_항-VLA2 이중특이성 항체(흰색 막대그래프)로 염색되었다. 일차 항체의 결합은 (C) 마우스 항 c-myc 표지 항체 또는 (D) 마우스 항 His 표지 항체로 나타내어졌고, PE-표지된 항-마우스 Ig 항체로 염색되었다.
도 32: 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체의 DSC 온도기록도를 나타내는 도이다.
도 33: BT 알파 IGHG3_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체의 생산을 확인하는 SDS-PAGE 분석을 나타내는 도이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔). (M) 지표로써의 분자량 마커. (1) 단백질-A 정제 후, BT 알파 IGHG3_VL-BT 베타 F405A 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (B) 단백질-A 정제 후, BT 알파 IGHG3_VL-BT 베타 F405A 형질주입 생산량, 감소 상태. (A) VL_BT 베타 F405A_VL-BT 베타 F405A 호모-이랑체. (B) BT 알파 IGHG3_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체. (C) VL-BT 베타 F405A 쇄(반 분자).
도 34: 단백질-A 정제 후, BT 알파 IGHG3_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔). (A) VL-BT 베타 F405A_VL-BT 베타 F405A 호모-이량체. (B) BT 알파 IGHG3_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체. (C) VL-BT 베타 F405A 쇄(반 분자).
도 35: Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA 헤테로-이량체의 생산을 확인하는 SDS-PAGE를 나타내는 도이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔). (1) 단백질-A 정제 후, Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA 헤테로-이량체 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (2) 단백질-A 정제 후, Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA 헤테로-이량체 형질주입 생산량, 감소 상태. (A) VL-Fc IGHGA_VL-Fc IGHGA 호모-이량체. (B) Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA 헤테로-이량체. (C) Fc IGHAG_Fc IGHAG 호모-이량체. (D) VL-Fc IGHGA 쇄(반 분자). (E) Fc IGHAG 쇄(반 분자).
도 36: 단백질-A 정제 후, Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA 헤테로-이량체의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔). (A) VL-Fc IGHGA_VL-Fc IGHGA 호모-이량체. (B) Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA 헤테로-이량체. (C) Fc IGHAG_Fc IGHGA 호모-이량체. (D) VL-Fc IGHGA 쇄(반 분자). (E) Fc IGHGA 쇄(반 분자).
도 37: Fc 쇄에 기초한 조작된 CH4를 나타내는 도이다. (A) BT 알파 IGHM-4 His 쇄. (B) VL-BT 베타 IGHM-4 쇄. (C) BT 알파 IGHE-4 His 쇄. (D) VL-BT 베타 IGHE-4 쇄.
도 38: BT 알파 IGHM-4 His_VL-BT 베타 IGHM-4 헤테로-이량체의 생산을 확인하는 SDS-PAGE를 나타내는 도이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔). (M) 지표로써의 분자량 마커. (1) BT 알파 IGHM-4 His_VL-BT 베타 IGHM-4 헤테로-이량체 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (2) BT 알파 IGHM-4 His_VL-BT 베타 IGHM-4 헤테로-이량체 형질주입 생산량, 감소 상태. (3) 단백질-L 정제 후, BT 알파 IGHM-4 His_VL-BT 베타 IGHM-4 헤테로-이량체 형질주입 생산량, 비 감소 상태. (4) 단백질-L 정제 후, BT 알파 IGHM-4 His_VL-BT 베타 IGHM-4 헤테로-이량체 형질주입 생산량, 감소 상태. (A) BT 알파 IGHM-4 His_VL-BT 베타 IGHM-4 베타 헤테로-이량체.
도 39: 단백질-L 정제 후, BT 알파 IGHM-4 His_VL-BT IGHM-4 베타 헤테로-이량체의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔).
도 40: BT 알파 IGHM-4 His_VL-BT 베타 IGHE-4 헤테로-이량체의 생산을 확인하는 SDS-PAGE를 나타내는 도이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔). (M) 지표로써의 분자량 마커. (1) 단백질-A 정제 후, BT 알파 IGHE-4 His_VL-BT 베타 IGHE-4 헤테로-이량체 형질주입 생산량, 비-감소 상태. (2) 단백질-A 정제 후, BT 알파 IGHE-4 His_VL-BT 베타 IGHE-4 헤테로-이량체 형질주입 생산량, 감소 상태. (A) BT 알파 IGHE-4 His_VL-BT 베타 IGHE-4 헤테로-이량체. (B) BT 알파 IGHE-4 His_VL-BT 알파 IGHE-4 His 호모-이량체. (C) VL_BT 베타 IGHE-4 쇄(반 분자). (D) BT 알파 IGHE-4 His 쇄(반 분자).
도 41: 단백질-A 정제 후, BT 알파 IGHE-4 His_VL-BT 베타 IGHE-4 헤테로-이량체의 상대적인 비율을 평가하는 밀도계측 분석 스캐닝을 나타내는 것이다(4-12% SDS 트리스-글리신 폴리아크릴아마이드 겔).
도 42: 인간 IGHA1, IGHA2, IGHD, IGHE, IGHEP1, IGHG1, IGHG2, IGHG3, IGHG4, IGHGP, 및 IGHM의 CH1, CH2, CH3, 및 CH4 불변 도메인을 위해 동등한 3D 구조적 위치를 확인하기 위하여, IMGT® 고유번호가 본 명세서에서, 예를 들어 실시예 1, 2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 및 12에서 사용되었다. GenBank 등록번호(accession number)가 표시되었다.
도 43: 인간 IGKC 불변 도메인을 위해 동등한 3D 구조적 위치를 확인하기 위하여, IMGT® 고유번호가 본 명세서에서, 예를 들어 실시예 5, 6, 7, 및 9에서 사용되었다. GenBank 등록번호(accession number)가 표시되었다.
도 44: 인간 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7 불변 도메인을 위해 동등한 3D 구조적 위치를 확인하기 위하여, IMGT® 고유번호가 본 명세서에서, 예를 들어 실시예 7에서 사용되었다. GenBank 등록번호(accession number)가 표시되었다.
도 45: 인간 TRAC, TRBC1, TRBC2, TRDC, TRGC1, TRGC2(2x), 및 TRGC2(3x) 불변 도메인을 동등한 3D 구조적 위치를 확인하기 위하여, IMGT® 고유번호가 본 명세서에서, 예를 들어 실시예 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 및 12에서 사용되었다. 진뱅크 등록번호(GenBank accession number)가 표시되었다.

본 공개는 일반적으로 헤테로-이량체(hetero-dimeric) 면역글로불린 또는 이의 단편을 조작 및 이의 제작 방법에 관한 것이다.

본 명세서에 사용된 용어 "항체(antibody)"는 전장(full-length) 항체 및 어떤 항원(antigen)에 결합하는 이의 단편 또는 단일쇄(single chain)를 포함한다. 항체 및 특별히 자연적으로 발생한 항체는 Y-형태 단위(Y-shaped unit)의 하나 또는 그 이상의 복제본(copies)으로 존재하는 글라이코단백질(glycoproteins)이고, 이는 네개의 폴리펩티드 쇄를 고려한다. 각각의 "Y" 형태는 중쇄(heavy chain; H) 두개의 동일한 복제본, 및 경쇄(light chain; L) 두개의 동일한 복제본을 함유하고, 이들은 이들의 상대적인 분자량에 의해서 명명되었다. 각각의 중쇄와 경쇄는 쌍을 이루고, 및 다른 중쇄와 각각의 중쇄도 쌍을 이룬다. 쇄 사이의 공유결합(covalent bond)은 이황산 결합(disulfide bond) 및 비공유 결합(noncovalent interaction)은 쇄를 함께 연결한다. 항체 및 특별히 자연적으로 발생한 항체는 가변부위(variable region)를 함유하고, 이는 항원결합위치(antigen binding site)의 두 복제본이다. 파파인(Papain)은 단백질 분해효소(proteolytic enzyme)로 "Y" 형태를 세개의 분리된 분자로 분열시키고, 둘은 "Fab" 단편[Fab = 단편 항원 결합(fragment antigen binding)]이라 불리고, 하나는 "Fc" 단편 또는 "Fc 부위"[Fc = 결정가능한 단편(fragment crystallizable)]라고 불린다. Fab 단편은 전체적인 경쇄 및 중쇄의 부분으로 구성된다. 중쇄는 한 가변 도메인(variable domain; VH) 및 셋 또는 네개의 불변 도메인(constant domains)[CH1, CH2, CH3, 및 CH4, 항체 분류 또는 이소타입(isotype)에 따름]을 함유한다. CH1 및 CH2 도메인 사이의 부위는 경첩(hinge) 부위라고 불리고, Y-형태 항체 분자의 두 Fab 팔(arms) 사이에 유연성을 갖게 하고, 이는 고정된 거리에 의해서 분리된 두 항원 결정기(antigen determinants)에 결합하는 공간을 제공하기 위해 열리고, 닫히게 한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "경첩부위(hinge region)"는 길이에 있어서 6 내지 62 아미노산의 서열부위이고, 오직 IgA, IgD, 및 IgG를 나타내고, 이는 두 중쇄의 다리(bridge)인 시스테인(cysteine) 잔기를 포함한다. 상기 IgA, IgD, 및 IgG의 중쇄는 각각 네 도메인, 즉 한 가변 도메인(VH) 및 세 불변 도메인(CH1-3)을 갖는다. IgE 및 IgM은 중쇄에 한 가변 및 네 불변 도메인(CH1-4)을 갖는다. 상기 항체의 불변 부위는 숙주 조직 또는 인자(factor)에의 결합을 매개할 것이고, 이는 면역 시스템[예를 들어, 작동체 세포(effector cell)의 다양한 세포 및 보체계(complement system) 고전적 경로(classical pathway)의 제 1 성분(first componene; C1q)을 포함한다. 각각의 경쇄는 일반적으로 한 공유결합 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결된다. 각각의 경쇄는 한 가변 도메인(VL) 및 한 경쇄 불변 도메인을 함유한다. 상기 경쇄 불변 도메인은 IGKC로 본 명세서에 지정된 카파(kappa) 경쇄 불변 도메인이고, 또는 본 명세서에서 Cκ 또는 CK 및 이와 같은 의미를 갖는 동등한 IGLC, IGKC로 지정된 람다(lambda) 경쇄 불변 도메인이다. 본 명세서에서 언급된 용어 "IGLC 도메인(IGLC domain)"은 모든 람다 경쇄 불변 도메인, 예를 들어, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택된 모든 람다 경쇄 불변 도메인을 나타낸다. 상기 VH 및 VL 부위는 초가변성(hypervariability), 상보성 결정 부위(complementarity determining region; CDR)로 불리는, 더욱 보존된(conserved) 부위와 함께 배치된(interspersed), 뼈대(framework) 부위(FR 또는 FW)로 불리는 부위로 추가적으로 더 나뉠 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 세 CDR 및 네 FR을 고려하고, 하기의 순서대로 아미노-말단(amino-terminus)에서 카복시-말단(carboxy-terminus)으로 배열되었다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 상기 중쇄 및 경쇄의 가변부위는 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다.

본 명세서에서 사용된 용어 "전장 항체(full length antibody)"는 항체의 자연적 생물학적 형태를 이루고, 이는 가변 및 불변 부위를 포함한다. 예를 들어, 인간 및 마우스를 포함하는 대부분의 포유동물(mammals)에 있어서, IgG 종류의 전장 항체는 4분자체(tetramer)이고, 두 면역글로불린 쇄의 두 동일한 쌍으로 구성되며, 각각의 쌍은 한 경쇄 및 한 중쇄를 갖고, 각각의 경쇄는 면역글로불린 도메인 VL 및 경쇄 불변 부위를 포함하며, 각각의 중쇄는 면역글로불린 도메인 VH, CH1(C[γ]1), CH2(C[γ]2), CH3(C[γ]3), 및 CH4(C[γ]4, 항체 종류 또는 이소타입에 따름)를 포함한다. 어떤 포유동물에 있어서, 예를 들어 낙타 및 라마에 있어서, IgG 항체는 오직 두 중쇄로 구성될 것이고, 각각의 중쇄는 Fc 부위에 결합된 가변 도메인을 포함한다.

항체는 종류로 그룹화되고, 또한 이소타입, 불변부위에 의해 유전적으로 결정되어 언급된다. 인간 불변 경쇄는 카파(CK) 및 람다(C[λ]) 경쇄로 분류된다. 중쇄는 뮤[mu(μ)], 델타[delta(δ)], 감마[gamma(γ)], 알파[alpha(α)], 또는 입실론[epsilon(ε)]으로 분류되고, 항체의 이소타입은 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로 각각 정의된다. 따라서, 본 명세서에서 사용된 "이소타입(isotype)"은 화학적 및 그들 불변부위의 항원 특성에 의해 정의된 면역글로불린의 어떤 종류 및/또는 하위종류(subclass)를 의미한다. 알려진 인간 면역글로불린 이소타입은 IgGl(IGHG1), IgG2(IGHG2), IgG3(IGHG3), IgG4(IGHG4), IgAl(IGHA1), IgA2(IGHA2), IgM(IGHM), IgD(IGHD), 및 IgE(IGHE)가 있다. 이른바, 서열분석되었으나, 변형된 스위치(switch) 부위때문에 단백질로 암호화되지 않는 인간 면역글로불린 슈도(pseudo)-감마 IGHGP 유전자는 추가적인 면역글로불린 중쇄 부위 유전자를 대표한다(Bensmana M et al., Nucleic Acids Res, 16(7):3108(1988)). 변형된 스위치 부위를 갖음에도 불구하고, 상기 인간 면역글로불린 슈도-감마 IGHGP 유전자는 모든 중쇄 불변 도메인(CH1-CH3) 및 경첩을 위해 개방형 해독틀(open reading frame)을 갖는다. 이의 중쇄 불변 도메인을 위한 모든 개방형 해독틀은 예상가능한 구조적 특징과 함께 모든 인간 면역글로불린 불변 도메인과 잘 조절된 단백질 도메인을 암호화한다. 상기 추가적인 슈도-감마 이소타입은 본 명세서에서 IgGP 또는 IGHGP로 언급된다. 다른 슈도 면역글로불린 유전자는 인간 면역글로불린 중쇄 불변 도메인 입실론 P1 및 P2 슈도-유전자(IGHEP1 및 IGHEP2)가 보고되었다. 상기 IgG 종류는 약학적 목적을 위해 가장 일반적으로 사용된다. 사람에 있어서 상기 종류는 하위종류 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함한다. 마우스에 있어서 상기 종류는 하위종류 IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c 및 IgG3를 포함한다.

본 명세서에서 사용된 용어 "자연적으로 발생한 면역글로불린 상과(naturally occuring immunoglobulin super-family)"는 자연에서 찾을 수 있는, 즉 유전적으로 조작되지 않은 면역글로불린 상과의 구성원을 언급하고, 항체와 같은 항원 수용체(receptor); 면역글로불린; TCR 불변영역과를 포함하는 T 세포 수용체 쇄; 1형 MHC, 2형 MHC 또는 베타-2마이크로글로불린과 같은 항원 제시 분자; CD4, CD8, 또는 CD19와 같은 공-수용체(co-receptor); CD3-γ, -δ 및 -ε쇄, CD79a 또는 CD79b와 같은 항원 수용체 액세서리(accessory) 분자; CD28, CD80 또는 CD86(B7.1 및 B7.2 분자로 또한 알려짐)과 같은 공-자극(co-stimulatory) 또는 억제(inhibitory) 분자; 킬러-세포(killer-cell) 면역글로불린-성 수용체(KIR)과 같은 자연살해 세포(natural killer cell)의 수용체; CD2, CD48, SIGLEC 과(family)(예를 들어, CD22, CD83), CTX 과(예를 들어, CTX, JAMs, BT-IgSF, CAR, VSIG, ESAM), 세포 내 부착 분자(intracellular adhension molecules; ICAM), 혈관세포(vascular cell) 부착 분자(예를 들어, VCAM-1), 신경세포(neural cell) 부착 분자(NCAM)과 같은 부착 분자; 1형 인터루킨-1 수용체(interleukin-1 receptor type I), 2형 인터루킨-1 수용체 전구체(precursor)(IL-1R, IL-1R-베타, CD121b 항원), 혈소판-유래 성장인자 수용체(platelet-derived growth factor receptor; PDGFR), 인터루킨-6 수용체 알파 쇄 전구체(IL-6R-알파, CD126 항원), 콜로니 자극 요소 1 수용체 전구체(colony stimulating factor 1 receptor precursor)[CSF-1-R, CD115 항원, 대식세포(macrophage) 콜로니 자극 요소 1 수용체], 비만(mast)/줄기(stem) 세포 성장인자 수용체 전구체(SCFR, c-kit, CD117 항원), 염기성 섬유모세포 성장인자(basic fibroblast growth factor receptor 1 precursor)[FGFR-1, 티로신 키나아제(tyrosine-kinase) 수용체 CEK1]과 같은 사이토카인(cytokine) 및 성장인자 수용체(growth facotr receptor); 티로신-단백질 수용체 타이-1(Tie-1) 전구체 또는 수용체-종류 티로신-단백질 포스파타제 뮤 전구체와 같은 수용체 티로신 키나아제/포스파타제(phosphatase); 중합의 면역글로불린 수용체(polymeric immunoglobulin receptor; PIGR), 또는 선택된 Fc 수용체와 같은 Ig 결합 수용체; 및 CD147, 흉선세포 분화 항원-1(thymocyte differentiation antigen-1; Thy-1), 또한 CD90, CD7, 부티로필린(butyrophilins; Btn), 나트륨 채널 아단위 베타-1 전구체(sodium channel subunit beta-1 precursor), 티틴(titin)[또한, 코넥틴(connectin)이라고 알려진 거대 세포 내 근육 단백질(huge intracellular muscle protein)]과 같은 다른 것을 포함하나 이에 한정하지 않는다.

본 명세서에서 사용된 T 세포 수용체(T cell receptor; TCR) 불변영역 과는 본 명세서에서 "인간 TCR 불변 도메인 알파(human TCR constant domain alpha)" 또는 "TRAC"로 언급된 인간 TCR 불변 도메인 알파[서열번호 1; IMGT^® 참조(reference) TRAC의 완전한 서열과 동등한 진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAO72258.1(135 내지 225 잔기)], 본 명세서에서 "인간 TCR 불변 도메인 베타(human TCR constant domain beta)" 또는 "TRBC2"로 언급된 인간 TCR 불변 도메인 베타[서열번호 2; IMGT^® 참조 TRBC2의 1.8 내지 124 잔기와 동등한 진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAA61026.1(134 내지 261 잔기)], 본 명세서에서 "인간 TCR 불변 도메인 델타(human TCR constant domain delta)" 또는 "TRDC"로 언급된 인간 TCR 불변 도메인 델타[서열번호 32; IMGT^® 참조 TRDC의 1.7 내지 120 잔기와 동등한 진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAA61125.1(135 내지 221 잔기)], 본 명세서에서 "인간 TCR 불변 도메인 감마(human TCR constant domain gamma)" 또는 "TRGC1"으로 언급된 인간 TCR 불변 도메인 감마[서열번호 33; IMGT^® 참조 TRGC1의 1.1 내지 124 잔기와 동등한 진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAA61110.1(145 내지 245 잔기)], 및 Pang SS et al., Nature, 467(7317):844-8(2010)에 공개된 전 T-세포 항원 수용체 쇄(pre T-cell antigen receptor chains; pre-TCR)를 포함한다. 본 발명의 범위(scope)안에서, 인간 TCR 베타 및 감마 불변 도메인의 알로타입(allotype) 변종[각각 IMGT^®참조 TRBC1, 및 TRGC2(2x) 또는 TRGC2(3x)]이 동일하게 포함된다.

IMGT^®참조는 IMGT^®를 따른다[국제 면역유전학 정보시스템^®(the international ImMunoGeneTics information system^®)(Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21 (2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)].

바람직하게, 기부 도메인(donor domain)으로써 본 발명에서 사용될 수 있는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과 구성원은 인간 TCR 불변 도메인 알파, 인간 TCR 불변 도메인 델타, 인간 TCR 불변 도메인 감마, 인간 TCR 불변 도메인 델타, 인간 TCR 가변 도메인 알파, 인간 TCR 가변 도메인 베타, 인간 TCR 가변 도메인 감마, 인간 TCR 가변 도메인 델타, 전 T-세포 항원 수용체 쇄 및 CH1, CH2, CH3, CH4, IGKC, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7 도메인으로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱 바람직하게, 기부 도메인은 인간 TCR 불변 도메인 알파, 인간 TCR 불변 도메인 베타, 인간 TCR 불변 도메인 감마, 인간 TCR 불변 도메인 델타, 및 CH3 도메인으로 구성된 군으로부터 선택되고, 구체적으로, 기부 도메인은 인간 TCR 불변 도메인 알파, 인간 TCR 불변 도메인 베타, 인간 TCR 불변 도메인 감마 및 인간 TCR 불변 도메인 델타로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 본 발명에서 언급된 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과 구성원은 인간 자연적으로 발생한 면역글로불린이다.

본 명세서에서 사용된 용어 "면역글로불린 단편(immunoglobulin fragments)"은, (i) 도메인, (ii) VL, VH, CL 또는 CK 및 Fab' 및 Fab'-SH를 포함하는 CH1 도메인으로 구성된 Fab 단편, (ii) VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편, (iii) 단일 가변도메인으로 구성된 dAb 단편[Ward ES et al., Nature, 341(6242):544-6 (1989)], (iv) F(ab')₂ 단편, 두 결합된 Fab 단편을 포함하는 이가(bivalent)의 단편, (v) 단일쇄 Fv 분자(scFv), 이의 VH 도메인 및 VL 도메인은, 항원결합부위(antigen binding site) 형성에 연결하기 위한 두 도메인을 허용하는 펩티드 링커(peptide linker)로 연결되었다[Bird RE et al., Science, 242(4877):423-6 (1988); Huston JS et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 85(16):5879-83 (1988)], (vi) 유전자 융합(fusion)에 의해 제작된 "디아바디(diabodies)" 또는 "트리아바디(triabodies)", 다가(multivalent) 또는 다중특이성(multispecific) 단편[Holliger P et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 90(14):6444-8(1993); Tomlinson I and Holliger P, Methods Enzymol, 326:461-79(2000)], (vii) Fc 부의에 융합된 scFv, 디아바디 또는 도메인 항체 및 (viii) 같거나 또는 다른 항체와 융합된 scFv.

본 명세서에서 사용된 용어 "헤테로-이량체 면역글로불린(hetero-dimeric immunoglobulin)" 또는 "헤테로-이량체 단편(hetero-dimeric fragment)" 또는 "헤테로-이량체(hetero-dimer)"는 면역글로불린 분자 또는 첫번째 및 두번째 도메인과 같이 적어도 첫번째 및 두번째 폴리펩티드를 포함하는 부분을 포함하고, 여기서 두번째 폴리펩티드는 첫번째 폴리펩티드와 아미노산 서열이 다르다. 바람직하게는, 헤테로-이량체 면역글로불린은 두 폴리펩티드 쇄를 포함하고, 여기서 첫번째 쇄는 두번째 쇄와 적어도 하나의 동일하지 않은 도메인을 갖고, 두 쇄는 조립되며, 즉 그들의 비 동일한 도메인을 통해 상호작용한다. 더욱 바람직하게는, 헤테로-이량체 면역글로불린은 적어도 두 다른 리간드(ligand), 항원 또는 결합위치, 즉 이중특이성의 결합특이성을 갖는다. 본 명세서에서 사용된 헤테로-이량체 면역글로불린은 전장의 이중특이성 항체, 이중특이성 Fab, 이중특이성 F(ab')₂, Fc 부위에 융합된 이중특이성 scFv, Fc 부위에 융합된 디아바디 및 Fc 부위에 융합된 도메인 항체를 포함하나 이에 한정하지 않는다. 바람직하게는, 헤테로-이량체 면역글로불린 단편을 적어도 두 도메인을 포함하고, 여기서 첫번째 도메인은 두번째 도메인과 일치하지 않으며, 두 도메인은 조립되고, 즉, 그들의 단백질-단백질 인터페이스(protein-protein interface)를 통해 상호작용한다. 더욱 바람직하게는, 헤테로-이량체 면역글로불린 단편은 적어도 두 조작된 도메인을 포함하고, 여기서 첫번째 조작된 도메인을 두번째 조작된 도메인과 일치하지 않으며, 즉 첫번째 조작된 도메인은 두번째 조작된 도메인과 아미노산 서열이 다르고, 여기서 두 조작된 도메인은 그들의 단백질-단백질 인터페이스를 통해 상호작용하여 조립된다.

본 명세서에서 사용된 "자연적으로 발생한 헤테로-이량체(naturally occurring hetero-dimer)"는 IGKC 도메인 또는 IGLC 도메인(IGLC1 또는 IGLC2 또는 IGLC3 또는 IGLC6 또는 IGLC7)을 포함하나 이에 한정하지 않으며, 이는 어떤 중쇄 CH1 도메인(IGHA1 CH1, IGHA2 CH1, IGHD CH1, IGHE CH1, IGHG1 CH1, IGHG2 CH1, IGHG3 CH1, IGHG4 CH1, IGHGP CH1, IGHM CH1), 예를 들어 IGKC/IGHA1 CH1, IGLC2/IGHA1 CH1, IGLC3/IGHA1 CH1, IGLC6/IGHA1 CH1, IGLC7/IGHA1 CH1, IGKC/IGHA2 CH1, IGLC2/IGHA2 CH1, IGLC3/IGHA2 CH1, IGLC6/IGHA2 CH1, IGLC7/IGHA2 CH1, IGKC/IGHD CH1, IGLC2/IGHD CH1, IGLC3/IGHD CH1, IGLC6/IGHD CH1, IGLC7/IGHD CH1, IGKC/IGHE CH1, IGLC2/IGHE CH1, IGLC3/IGHE CH1, IGLC6/IGHE CH1, IGLC7/IGHE CH1, IGKC/IGHG1 CH1, IGLC2/IGHG1 CH1, IGLC3/IGHG1 CH1, IGLC6/IGHG1 CH1, IGLC7/IGHG1 CH1, IGKC/IGHG2 CH1, IGLC2/IGHG2 CH1, IGLC3/IGHG2 CH1, IGLC6/IGHG2 CH1, IGLC7/IGHG2 CH1, IGKC/IGHG3 CH1, IGLC2/IGHG3 CH1, IGLC3/IGHG3 CH1, IGLC6/IGHG3 CH1, IGLC7/IGHG3 CH1, IGKC/IGHG4 CH1, IGLC2/IGHG4 CH1, IGLC3/IGHG4 CH1, IGLC6/IGHG4 CH1, IGLC7/IGHG4 CH1, IGKC/IGHGP CH1, IGLC2/IGHGP CH1, IGLC3/IGHGP CH1, IGLC6/IGHGP CH1, IGLC7/IGHGP CH1, IGKC/IGHM CH1, IGLC2/IGHM CH1, IGLC3/IGHM CH1, IGLC6/IGHM CH1, IGLC7/IGHM CH1와 헤테로-이량체화한다. "자연적으로 발생한 헤테로-이량체"의 다른 예는 항체 가변 경쇄 도메인(카파 또는 람다)과 헤테로-이량체화되는 항체 가변 중쇄 도메인, TCR 베타 가변 도메인과 헤테로-이량체화되는 TCR 알파 가변 도메인, TCR 델타 가변 도메인과 헤테로-이량체화되는 TCR 감마 가변 도메인, TCR 베타 불변 도메인과 헤테로-이량체화되는 TCR 알파 불변 도메인, TCR 델타 불변 도메인과 헤테로-이량체화되는 TCR 감마 불변 도메인을 고려한다.

본 명세서에서 사용된 용어 "호모-이량체 면역글로불린(homo-dimeric immunoglobulin)" 또는 "호모-이량체 단편(homo-dimeric fragment)" 또는 "호모-이량체(homo-dimeric)"는 면역글로불린 분자 또는 첫번째 및 두번째 도메인과 같이 적어도 첫번째 및 두번째 폴리펩티드를 포함하는 부분을 포함하고, 여기서 두번째 폴리펩티드는 첫번째 폴리펩티드와 아미노산 서열이 동일하다. 바람직하게는 호모-이량체 면역글로불린은 두 폴리펩티드 쇄를 포함하고, 여기서 첫번째 쇄는 두번째 쇄와 적어도 한 동일한 도메인을 가지며, 두 쇄는 조립되고, 즉 그들의 단백질-단백질 인터페이스를 통해 상호작용한다. 바람직하게는, 호모-이량체 면역글로불린 단편은 적어도 두 도메인을 포함하고, 여기서 첫번째 쇄는 두번째 쇄와 적어도 한 동일한 도메인을 가지며, 두 쇄는 조립되고, 즉 그들의 동일한 도메인을 통해 상호작용한다. 특별히, 호모-이량체 면역글로불린은 적어두 두 동일한 도메인을 포함하고, 두 도메인은 조립되며, 즉 그들의 단백질-단백질 인터페이스를 통해 사용작용한다. 바람직하게는, 호모-이량체 면역글로불린 단편은 적어도 두 도메인을 포함하고, 여기서 첫번째 도메인은 두번째 도메인과 동일하며, 두 도메인은 조립되고, 즉, 그들의 단백질-단백질 인터페이스를 통해서 상호작용한다. 본 명세서에서 사용된 "자연적으로 발생한 호모-이량체(naturally occurring homo-dimers)"는, 예를 들어 같은 종(species), 이소타입 및 하위 종류의 두 CH3 도메인, 예를 들어 인간 IGHG1 CH3/IGHG1 CH3, 인간 IGHG2 CH3/IGHG2 CH3 , 인간 IGHG3 CH3/IGHG3 CH3, 인간 IGHG4 CH3/IGHG4 CH3, 인간 IGHA1 CH3/IGHA1 CH3, 인간 IGHA2 CH3/IGHA2 CH3, 인간 IGHE CH3/IGHE CH3, 인간 IGHEP1 CH3/IGHEP1 CH3, 인간 IGHM CH3/IGHM CH3, 인간 IGHD CH3/IGHD CH3, 인간 IGHGP CH3/IGHGP CH3, 같은 종, 이소타입 및 하위종류의 두 CH2 도메인, 예를 들어 인간 IGHG1 CH2/IGHG1 CH2, 인간 IGHG2 CH2/IGHG2 CH2 , 인간 IGHG3 CH2/IGHG3 CH2, 인간 IGHG4 CH2/IGHG4 CH2, 인간 IGHA1 CH2/IGHA1 CH2, 인간 IGHA2 CH2/IGHA2 CH2, 인간 IGHE CH2/IGHE CH2, 인간 IGHEP1 CH2/IGHEP1 CH2, 인간 IGHM CH2/IGHM CH2, 인간 IGHD CH2/IGHD CH2, 인간 IGHGP CH2/IGHGP CH2, 또는 같은 종, 이소타입 및 하위 종류의 두 CH4 도메인, 예를 들어 인간 IGHE CH4/IGHE CH4, 인간 IGHM CH4/IGHM CH4를 포함하나 이에 한정하지 않는다. 바람직하게, "자연적으로 발생한 호모-이랑체(naturally occurring homo-dimers)"는 인간 IGHG1 CH3/IGHG1 CH3, 인간 IGHG2 CH3/IGHG2 CH3, 인간 IGHG3 CH3/IGHG3 CH3, 인간 IGHG4 CH3/IGHG4 CH3, 인간 IGHA1 CH3/IGHA1 CH3, 인간 IGHA2 CH3/IGHA2 CH3, 인간 IGHE CH3/IGHE CH3, 인간 IGHM CH3/IGHM CH3, 인간 IGHD CH3/IGHD CH3, 인간 IGHGP CH3/IGHGP CH3, 인간 IGHE CH2/IGHE CH2, 인간 IGHM CH2/IGHM CH2, 인간 IGHE CH4/IGHE CH4, 및 인간 IGHM CH4/IGHM CH4로 구성된 군으로부터 선택된다.

대부분의 면역글로불린 경쇄는 이량체에 결합한다[Novotny J and Haber E, Proc Natl Acad Sci U S A, 82(14):4592-6(1985)]. 카파 및 람다 두 경쇄는 호모-이량체화가 보고되어 있고, 카파 및 람다 경쇄 이량체의 몇몇 크리스탈 구조를 단백질 데이타 뱅크(Protein Data Bank; PDB) 데이타베이스로부터 이용할 수 있다[Roussel A et al., Eur J Biochem, 260(1):192-9(1999), Huang DB et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 93(14):7017-21(1996); www.pdb.org; Bernstein FC et al., Eur J Biochem, 80(2):319-24(1977)]. 본 발명의 범위안에서, IGKC 도메인 또는 IGLC 도메인(IGLC1 또는 IGLC2 또는 IGLC3 또는 IGLC6 또는 IGLC7)의 호모-이량체는 단백질-단백질 인터페이스 조작을 위한 부모(parent) 또는 기부 도메인으로 고려된다. 따라서, 본 명세서에서 사용된 "자연적으로 발생한 호모-이량체"는 또는 같은 종, 이소타입 및 하위종류의 두 IGKC 도메인, 예를 들어 인간 IGKC/IGKC, 같은 종, 이소타입 및 하위종류의 두 IGLC 도메인, 예를 들어 인간 IGLC1/IGLC1, 인간 IGLC2/IGLC2, 인간 IGLC3/IGLC3, 인간 IGLC6/IGLC6, 인간 IGLC7/IGLC7 및 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7의 어떤 다른 쌍 조합(pairwise combination)을 포함하나 이에 한정하지 않는다.

두 도메인 관련, 예를 들어 두 부모 도메인 또는 두 기부 도메인과 관련되어 본 명세서에서 사용된 용어 "헤테로-이량체의 형성(formation of a hetero-dimer)" 또는 "헤테로 이량체의 형성(forming a hetero-dimer)" 또는 "헤테로-이량체 형성 가능성(capable to form a hetero-dimer)"은 첫번째 도메인이 두번째 도메인과 동일하지 않고, 두 도메인은 조립되며, 즉 그들의 단백질-단백질 인터페이스를 통해 상호작용하고, 여기서 단백질-단백질 상호작용은 일반적으로 동일하지 않음을 의미한다. 만약 두 도메인이 적어도 한 아미노산 잔기에 의해 아미노산 서열이 다르다면, 첫번째 도메인은 두번째 도메인과 동일하지 않다. 만약 첫번째 부모 또는 기부도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 두번째 부모 또는 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 비교하여 적어도 한 3D 구조적 위치에 다른 아미노산 잔기를 갖는다면, 상기 단백질-단백질 인터페이스는 일반적으로 동일하지 않다.

예를 들어, 두 자연적으로 발생한 부모 도메인 또는 두 자연적으로 발생한 기부 도메인의 두 도메인과 관련되어 본 명세서에서 사용된 용어 "자연적으로 발생한 헤테로-이량체의 형성(formation of a naturally occurring hetero-dimer)" 또는 "자연적으로 발생한 헤테로-이량체의 형성(forming a naturally occurring hetero-dimer)" 또는 "자연적으로 발생한 헤테로 이량체 형성 가능성(capable to form a naturally occurring hetero-dimer)"은 첫번째 도메인이 두번째 도메인과 동일하지 않고, 여기서 두 도메인은 조립되며, 즉, 그들의 단백질-단백질 인터페이스를 통해 상호작용하고, 여기서 단백질-단백질 인터페이스는 일반적으로 동일하지 않음을 의미한다. 만약 두 도메인이 적어도 한 아미노산 잔기에 의해 아미노산 서열이 다르다면, 첫번째 도메인은 두번째 도메인과 동일하지 않다. 만약 첫번째 부모 또는 기부도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 두번째 부모 또는 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 비교하여 적어도 한 3D 구조적 위치에 다른 아미노산 잔기를 갖는다면, 상기 단백질-단백질 인터페이스는 일반적으로 동일하지 않다.

예를 들어, 두 부모 도메인 또는 두 기부 도메인의 두 도메인과 관련되어 본 명세서에서 사용된 용어 "호모-이량체의 형성(formation of a homo-dimer)" 또는 "호모-이량체의 형성(forming a homo-dimer)" 또는 "호모-이량체 형성의 가능성(capable to form a homo-dimer)"은 첫번째 도메인이 두번째 도메인과 동일하고, 여기서 두 도메인은 조립되며, 즉, 그들의 단백질-단백질 인터페이스를 통해 상호작용하고, 여기서 단백질-단백질 인터페이스는 일반적으로 동일함을 의미한다. 만약 그들의 아미노산 서열이 같다면, 첫번째 도메인과 두번째 도메인은 동일하다. 만약 첫번째 부모 또는 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 두번째 부모 또는 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 비교하여 동등한 3D 구조적 위치에 동일한 아미노산을 가지면, 단백질-단백질 인터페이스는 일반적으로 일치한다.

예를 들어, 두 자연적으로 발생한 부모 도메인 또는 두 자연적으로 발생한 기부 도메인의 두 도메인과 관련되어 본 명세서에서 사용된 용어 "자연적으로 발생한 호모-이량체의 형성(formation of a naturally occurring homo-dimer)" 또는 "자연적으로 발생한 호모-이량체의 형성(forming a naturally occurring homo-dimer)" 또는 "자연적으로 발생한 호모-이량체 형성의 가능성(capable to form a naturally occurring homo-dimer)"은 첫번째 도메인이 두번째 도메인과 동일하고, 여기서 두 도메인은 조립되며, 즉, 그들의 단백질-단백질 인터페이스를 통해 상호작용하고, 여기서 단백질-단백질 인터페이스는 일반적으로 일치함을 의미한다. 만약 그들의 아미노산 서열이 같다면, 첫번째 도메인과 두번째 도메인은 일치한다. 만약 첫번째 부모 또는 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 두번째 부모 또는 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 비교하여 동등한 3D 구조적 위치에 동일한 아미노산을 가지면, 단백질-단백질 인터페이스는 일반적으로 일치한다.

본 명세서에서 사용된 용어 "도메인(domain)"은 단백질 파트너(partnet)[즉, 다른 단백질(또는 그의 부의) 또는 다른 도메인]와 선택적인 조립의 역할을 하는 폴리펩티드의 어떤 부위를 포함 및/또는 완전한 생물학적 기능 또는 결합 수용체, 또는 기질(substrate) 같은 부분, 다중도메인 독립체(entity)에 독립적으로 또는 그 안에서 수행할 수 있다. 일반적으로 본 명세서에서 언급된 도메인은 경첩부위가 아니고, 및/또는 경첨부위를 함유하지 않는다. 상기 도메인은 단백질 쇄의 나머지(rest)에 독립적으로 존재할 수 있다. 도메인은 조밀한 삼-차원 구조(compact three-dimensional structure)를 형성하고, 독립적으로 안정적이고 접힌다. 도메인은 약 25 아미노산에서 최대 500 아미노산 길이 사이로 다양한 길이를 형성한다. 바람직하게는, 본 명세서에서 사용된 도메인은 약 70 아미노산에서 최대 120 아미노산 길이 사이로 다양한 길이를 형성한다. 아연집게(zinc finger)와 같은 가장 짧은 도메인은 금속이온(metal ions) 또는 이황화물다리(disulfide bridges)에 의해 안정화된다. 도메인은 종종 칼모듈린(calmodulin)의 칼슘-결합 EF 손 도메인(calcium-binding EF hand domain)과 같은 기능적 단위를 형성한다. 그들은 자가-안정(self-stable)하기 때문에, 도메인은 키메라(chimeric) 단백질을 제조하기 위해 한 단백질 및 다른 것 사이에 유전적 조작으로 "교체(swapped)"될 수 있다. 면역글로불린은 면역글로불린 상과에 속한 가변 및 불변 도메인으로 제조된다[Williams AF and Barclay AN, Annu Rev Immunol, 6:381-405(1988); Bork P et al., J Mol Biol, 242(4):309-20(1994)]. 본 명세서에 포함된 도메인은 CH1 및 CH3, 구체적으로 IGHA1, IGHA2, IGHD, IGHE, IGHG1, IGHG2, IGHG3, IGHG4, IGHGP 및 IGHM으로부터 자연적으로 발생한 CH1 및 CH3; CH4, 구체적으로 IGHE 및 IGHM으로부터 자연적으로 발생한 CH4; IGKC, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7, 구체적으로 자연적으로 발생한 IGKC, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7이다. 추가적으로 본 명세서에 포함된 도메인은 CH2, 구체적으로 IGHA1, IGHA2, IGHD, IGHE, IGHG1, IGHG2, IGHG3, IGHG4, IGHGP 및 IGHM으로부터 자연적으로 발생한 CH2. 바람직하게는 비글라이코실화(unglycosylated) CH2 도메인이 본 명세서에 사용되었고, 그들의 비글라이코실화 형태는 본 명세서에 언급된 바와 같이 호모-이량체이다. 비글라이코실화된 Fc 단편에 있어서 CH2 도메인은 자연적인 글라이코실화된 Fc 단편에 있어서 CH2 도메인과 비교하여 훨씬 더 밀접하게 근접한다. 상기 쥣과(murine)의 비글라이코실화된 IgG1 Fc 단편의 크리스탈 구조는 완전히 비글라이코실화된 Fc 단편이 첫번째 비글라이코실화된 면역글로불린 쇄의 CH2 도메인으로부터 Pro 332 및 두번째 비글라이코실화된 면역글로불린 쇄의 CH2 도메인으로부터 Pro 332 사이의 거리는 "근접한(closed)" 오직 11.6 Å이다[Feige MJ et al., J Mol Biol, 391(3):599-608(2009)]. 추가적으로 본 명세서에 포함된 도메인은 VH 및 VL 도메인으로 본 발명의 조작된 단백질-단백질 인터페이스를 갖지 않고, 즉 인간화 과정(humanization process)에서 유발되는 복귀돌연변이(backmutation)를 제외하고 이의 자연적으로 발생한 단백질-단백질 인터페이스를 변형하기 위해 특별히 조작되지 않았다. 본 명세서에서 사용된 용어 "자연적으로 발생한 도메인(naturally occurring domain)"은 자연에서 발견할 수 있는, 즉 유전적으로 조작되지 않은 도메인을 언급한다.

본 발명에서 포함된 모든 면역글로불린 불변 도메인을 위해서, 번호는 IMGT^®을 따를 수 있다[IMGT^®, 국제 면역유전학 정보시스템^®(the international ImMunoGeneTics information system^®; Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)].

IGHG1, IGHG2, IGHG3, 및 IGHG4로 구성된 군으로부터 선택된 모든 인간 CH1, CH2, CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 위해서, 번호는 "EU 번호 시스템(EU numbering system)"을 따를 수 있다[Edelman GM et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 63(1):78-85(1969)]. IGHG1, IGHG2, IGHG3, 및 IGHG4로 구성된 군으로부터 선택된 모든 인간 CH1, CH2, CH3 면역글로불린 중쇄 불변 도메인을 위한 IMGT 고유의 번호 및 EU 번호 사이의 관련성은 도 19에서 보인다. IGHG1의 인간 CH1, 경첩, CH2, 및 CH3 불변 부위를 위한 완전한 관련성은 IMGT 데이타베이스에서 찾을 수 있다[IMGT^®, 국제 면역유전학 정보시스템^®(the international ImMunoGeneTics information system^®; Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)].

인간 카파 면역글로불린 경쇄 불변 도메인(IGKC)을 위하여, 번호는 "EU 번호 시스템"을 따를 수 있다[Edelman GM et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 63(1):78-85(1969)]. 인간 IGKC 면역글로불린 경쇄 불변 도메인을 위한 IMGT 고유의 번호 및 EU 번호 사이의 관련성은 도 22에서 보인다. CK 도메인을 위한 완전한 관련성은 IMGT 데이타베이스에서 찾을 수 있다[IMGT^®, 국제 면역유전학 정보시스템^®(the international ImMunoGeneTics information system^®; Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)].

인간 람다 면역글로불린 경쇄 불변 도메인(IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7)을 위하여, Dariavach P et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 84(24):9074-8(1987) and Frangione B et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 82(10):3415-9(1985)에 설명된 바와 같이 번호는 "카뱃(Kabat) 번호 시스템"을 따를 수 있다[Kabat EA et al., Sequences of proteins of immunological interest. 5th Edition - US Department of Health and Human Services, NIH publication n° 91-3242(1991)]. 인간 면역글로불린 경쇄 불변 도메인(IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7)을 위한 IMGT 고유의 번호 및 카뱃 번호 사이의 관련성은 도 23에서 보인다. 인간 IGLC 도메인을 위한 완전한 관련성은 IMGT 데이타베이스에서 찾을 수 있다[IMGT^®, 국제 면역유전학 정보시스템^®(the international ImMunoGeneTics information system^®; Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)].

인간 IGHG1 면역글로불린 중쇄 불변 도메인은 본 명세서에서 하기의 도메인 경계(boundaries)로서 언급되었다: CH1[EU 번호: 118-215], 경첩γ1[EU 번호: 216-230], CH2[EU 번호: 231-340], 및 CH3[EU 번호 341-447]. 인간 CK 도메인은 본 명세서에서 108 내지 214 잔기(EU 번호)에 걸쳐 이어진다. 인간 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7 도메인은 본 명세서에서 108 내지 215 잔기(카뱃 번호)에 걸쳐 이어진다.

본 명세서에서 사용된 "다중도메인 독립체(multidomain entity)" 또는 "다중도메인 단백질(multidomain protein)"은 적어도 두 도메인을 포함한다. 이들 두 도메인은 한 면역글로불린 쇄(한 폴리펩티드)일 수 있고, 또는 두 면역글로불린 쇄(두 폴리펩티드)일 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 "조작된 면역글로불린 쇄(engineered immunoglobulin chain)"는 부모 도메인과 다른 단백질-단백질 인터페이스와 함께 적어도 한 조작된 도메인을 포함하는 면역글로불린 쇄를 포함한다.

본 명세서에서 사용된 용어 "부모 면역글로불린 쇄(parent immunoglobulin chain)"는 어떤 존재하는 면역글로불린 쇄, 구체적으로 조작된 면역글로불린 쇄의 디자인을 위한 부모 서열로 사용될 수 있는 자연적으로 발생한 면역글로불린 쇄를 포함한다. 바람직하게는, 부모 면역글로불린 쇄, 예를 들어 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 면역글로불린 쇄 및/또는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 면역글로불린 쇄는 자연적으로 발생한 면역글로불린 쇄이다.

본 명세서에서 사용된 용어 "부모 도메인(parent domain)"은 어떤 존재하는 도메인, 구체적으로 자연적으로 발생한 도메인, 더욱 구체적으로 조작된 도메인의 디자인을 위한 부모 서열로 사용할 수 있는, 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하는 자연적으로 발생한 도메인을 포함한다. 첫번째, 두번째, 세번째 및 네번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 아연집게가 아니다. 부모 도메인은 일반적으로 면역글로불린 도메인, 예를 들어 면역글로불린 쇄의 도메인이다. 바람직하게는, 부모 도메인, 예를 들어 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및/또는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 도메인이다.

본 명세서에서 사용된 용어 "기부 도메인(donor domain)"은 자연적으로 발생한 도메인, 구체적으로 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하는 자연적으로 발생한 도메인을 포함하고, 이는 조작된 도메인의 디자인을 위해서 기부 서열로 사용, 즉 부모 도메인에 있어서 동등한 3D 구조적 위치에 치환된 아미노산 잔기를 위해 기부 도메인으로 사용될 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 "조작된 도메인(engineered domain)"은 부모 도메인 및 기부 도메인의 조작된 형태 도메인을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 용어 "단백질-단백질 인터페이스(protein-protein interface)"는 3D 인터페이스를 정의하기 위해 다른 단백질 도메인의 아미노산 잔기와 함께 단백질 도메인의 직접-접합 결합(direct-contact association)을 매개하는 아미노산 잔기를 포함한다. 두 도메인 사이의 직접-접합 결합을 매개하는 이들 아미노산 잔기는 다른 파트너로부터 하나 또는 그 이상의 아미노산과 함께 상호작용하는 한 파트너로부터 어떤 아미노산을 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 아미노산 잔기의 상호작용과 관련한 용어 "상호작용(interacting)"은 다른 파트너에 있어서, 아미노산 잔기의 어떤 중원자(heavy atom)로부터 15 Å 보다 적게 떨어진 적어도 한 중원자를 갖는 하나의 파트너로부터 어떤 아미노산을 포함한다. "아미노산 잔기의 중원자(heavy atom of an amino acid residue)"는 본 명세서에서 수소원자(hydrogen atom)이 아닌 아미노산 잔기의 다른 원자를 언급한다. 바람직하게, 아미노산 잔기 상호작용은 다른 파트너로부터 아미노산 잔기의 어떤 중원자로부터 10 Å 보다 적게 떨어진 적어도 한 중원자를 갖는 하나의 파트너로부터 어떤 아미노산을 포함한다. 보다 바람직하게, 아미노산 잔기 상호작용은 다른 파트너로부터 아미노산 잔기의 어떤 중원자로부터 5 Å 보다 적게 떨어진 적어도 한 중원자를 갖는 하나의 파트너로부터 어떤 아미노산을 포함한다. 아미노산 잔기의 상호작용은 반데르 발스 힘(van der Waals forces), 수소 결합(hydrogen bond), 물-매개(water-mediated) 수소 결합, 염다리(salt bridges) 또는 정전기력(electrostatic forces), 소수성 접합(hydrophobic contacts), 및 이황화 결합(disulfide bond) 또는 당업계의 당업자에게 잘 알려진 다른 힘을 포함한다. 단백질-단백질 인터페이스는 더욱 소수성이고, 단백질 복합체에 있어서 많은 단백질 표면으로서 두배 매장(bury)하며, 일반적으로 그들이 접힐 때 조립된다[Bahadur RP et al., Proteins, 53(3):708-19(2003)]. 47 FAB 단편의 분석은 실험적으로 결정된 불변 도메인 경쇄에 있어서 최고 50 잔기 및 불변 도메인 중쇄에 있어서 최대 52 잔기까지 도메인 단백질-단백질 인터페이스를 포함한다[Potapov V et al., J Mol Biol, 342(2):665-79(2004)]. CH3 단백질 인터페이스는 분자 내 접합을 만드는 네개의 역평행(antiparallel) 베타-가닥(beta-strands)에 위치한 16 잔기를 포함하고, 각각의 표면으로부터 1090 Å2에 매장되었다[Dall'Acqua W et al., Biochemistry, 37(26):9266-73(1998)].

예를 들어 만약, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 예를 들어 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 호모-이량체화에 의해서 상호작용하면, 예를 들어 만약, 두 기부 도메인이 호모-이량체를 형성하면, 및 만약, 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 모든 아미노산 잔기가 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 아미노산 잔기로 치환되면, 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 호모-이량체화에 의한 상호작용을 고려한다. 따라서 만약, 첫번째 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 모든 아미노산 잔기가 두번째 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기와 동등한 3D 위치에서 일치하면, 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 호모-이량체화에 의한 상호작용을 고려한다.

예를 들어 만약, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 예를 들어 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 호모-이량체화에 의해서 상호작용하면, 예를 들어 만약, 두 기부 도메인이 호모-이량체를 형성하면, 및 만약, 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 모든 아미노산 잔기가 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 아미노산 잔기로 치환되지 않으면, 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 호모-이량체화에 의한 상호작용을 고려한다. 더욱 구체적으로, 만약, 예를 들어 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 예를 들어 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 단백질-단백질 인터페이스가 호모-이량체화에 의해 상호작용하고, 예를 들어 만약, 두 기부 도메인이 호모-이량체를 형성하면, 및 만약, 첫번째 부모 도메인에 있어서 적어도 한 아미노산 잔기가 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인에 있어서 3D 동등한 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환되고, 여기서 두번째 부모 도메인은 동등한 3D 구조적 위치의 첫번째 부모 도메인으로 치환된 동일한 아미노산 잔기로 치환되지 않는다.

예를 들어 만약, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 단백질-단백질 인터페이스 및 예를 들어 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 헤테로-이량체화에 의해 상호작용하면, 예를 들어 만약, 두 기부 도메인이 헤테로-이량체화에 의해 상호작용하고, 예를 들어 만약, 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 모든 아미노산 잔기가 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 아미노산 잔기로 치환되거나 치환되지 않으면, 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 헤테로-이량체화에 의한 상호작용을 고려한다.

따라서 만약, 첫번째 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 모든 아미노산 잔기가 두번째 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기와 동등한 3D 위치에서 일치하지 않으면, 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 헤테로-이량체화에 의한 상호작용을 고려한다.

용어 "동등한 3D 구조적 위치(equivalent 3D structural position)" 또는 "동등한 3D 위치(equivalent 3D position)" 또는 "3D 동등한 구조적 위치(3D equivalent structural position)" 또는 "3D 동등한 위치(3D equivalent position)"는 본 명세서에서 자유롭게 사용되었고, 두 도메인의 탄소 알파 흔적에 포개져서 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 덮어씌워질 때 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 잔기의 위치를 포함하고, 부모 도메인의 가장가까운 잔기까지 6 Å의 거리 이하 내에 위치하는 3D 위치를 사용하며, 여기서 기부 도메인은 부모 도메인과 다르다. 겹침(superimposition)은 참조와 같은 틀(frame)에 있어서 원자의 좌표(coordinate)를 비교하여 수행될 수 있다. 탄소 알파 흔적에 비해, 두 도메인의 뼈대(backbone) 원자(N, C 및 O)는 포개질 수 있다. 3D 구조적 위치는 외관검사(visual inspection)[예를 들어, 디자인에 기초한 직관(intuition) 또는 디자인에 기초한 지식(knowledge)]에 기초하여 선택될 수 있고, 또는 위치는 반데르 발스 힘, 수소 결합 상호작용 등[즉, 이론적 디자인(rational design)]과 같은 나열된 에너지 용어 후에 선택될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 도메인의 3D 구조는 단백질 데이타 뱅크[www.pdb.org; Bernstein FC et al., Eur J Biochem, 80(2):319-24(1977); Berman HM et al., Nucleic Acids Res, 28(1):235-42(2000)] 또는 다른 데이타베이스에서 검색될 수 있는 크리스탈(crystalline) 또는 용액(solution)에 있어서 실험적으로 풀린 3D 구조를 포함한다. 추가적으로, 공공의 데이타베이스로부터 이용할 수 없거나, 풀리지 않은 도메인의 3D 구조는 오직 단백질의 아미노산 서열이 필요한 Ab initio 예측 방법과 같은 컴퓨터를 사용한 방법의 수를 사용 또는 더듬어(threading) 모형을 만들 수 있고, 단백질 도메인을 위한 3D 모델의 상동 모델링 방법(homology modeling method)은 진화관련된 단백질의 실험적 구조로부터 세워진다[Zhang Y, Curr Opin Struct Biol, 18(3):342-8(2008)]. 이론에 얽매이지 않고, 변형된 IMGT^® 번호 시스템이 면역글로불린 상과 도메인의 3D 구조의 비교분석에 기초한 이후, 상기 시스템이 면역글로불린 도메인에 있어서 동등한 3D 구조적 위치를 확인하기 위하여 사용될 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 "도메인의 핵심 무결성에 비 필수(non-essential to the core integrity of the domain)"은 정확한 접힘 및/또는 단백질 도메인의 소수성 핵심을 위한 비-필수인 잔기를 포함한다. 접힌 단백질은 접힘 상태의 안정화를 포장하는(packing) 측쇄(side chain)에 일반적으로 소수성 핵심을 갖고, 대전되거나 극성(polar) 측쇄는 그들이 주위의 물, 이온 또는 다른 단백질 또는 단백질 도메인 또는 탄수화물(carbohydrate)과 같은 다른 리간드와 상호작용하는 용액-노출된(solvent-exposed) 표면을 차지한다. 분자 내 수소결합의 형성은 단백질 핵심 안정성(stability)에 또 다른 중요한 기여(contribution)를 제공한다. 단백질 도메인의 핵심 무결성에 비 필수 잔기는 분자 내 이황화 결합, 노출된 잔기, 및 분자 내 수소결합에 포함되지 않는 잔기를 포함하는 비-프롤린(non-proline) 잔기, 비 시스테인(non cysteine) 잔기를 포함하나 이에 한정하지 않는다.

본 명세서에서 사용된 용어 "단백질(protein)" 또는 "폴리펩티드(polypeptide)"는 같은 의미가 있고, 자유롭게 사용된다.

본 명세서에서 사용된 용어 "아미노산(amino acid)" 또는 "아미노산 잔기(amino acid residue)"는 비-자연적(non-natural) 아미노산뿐만 아니라 자연적(natural) 아미노산을 포함한다. 바람직하게는 자연적 아미노산을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 용어 "대전된 아미노산(charged amino acid)"은 아미노산 리신(lysine)(양전하로 대전), 아르기닌(arginine)(양전하로 대전), 히스티딘(histidine)(양전하로 대전), 아스파르트산(aspartic acid)(음전하로 대전) 및 글루탐산(glutamic acid)(음전하로 대전)을 포함한다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 대전된 아미노산은 리신, 아르기닌, 히스티딘, 아스파르트산 및 글루탐산이다. 용어 "대전된 쌍(charged pair)" 또는 "대전된 아미노산의 쌍(charged pair of amino acid)" 또는 "대전된 아미노산쌍(charged amino acid pair)"은 같은 의미이고, 자유롭게 쓰이며, 한 양전하로 대전된 아미노산과 한 음전하로 대전된 아미노산의 어떤 조합(combination)을 포함한다. 이는 대전된 아미노산의 하기의 쌍을 포함한다: 리신/아스파르트산, 리신/글루탐산, 아르기닌/아스파르트산, 아르기닌/글루탐산, 히스티딘/아스파르트산, 및 히스티딘/글루탐산.

본 명세서에서 사용된 용어 "치환(substitution)" 또는 "아미노산 치환(amino acid substitution)" 또는 "아미노산 잔기 치환(amino acid residue substitution)"은 두번째 아미노산 잔기와 아미노산 서열에 있어서 첫번째 아미노산의 치환을 언급한 반면에, 첫번째 아미노산 잔기는 두번째 아미노산 잔기와 다르고, 즉 치환된 아미노산 잔기는 치환된 아미노산과 다르다.

본 명세서에서 사용된 용어 "인접하지 않은 아미노산 잔기(amino acid residue which are not adjacent)" 또는 "인접하지 않은 아미노산 잔기(not adjacent amino acid residue)"는 바로 인접하지 않은 아미노산 서열 내의 두 아미노산, 즉 그들 사이에 있어서 적어도 한 사이에 있는 아미노산 잔기를 갖는 것을 언급한다.

본 명세서에서 사용된 용어 "Fab" 또는 "Fab 부위(Fab region)"는 VH, CH1, VL, 및 경쇄 불변 면역글로불린 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. Fab는 별개로 상기 부위, 또는 전장의 항체 또는 항체 단편의 맥락에 있어서 상기 부위를 언급할 것이다.

본 명세서에서 사용된 용어 "Fc" 또는 "Fc 부위"는 첫번째 불변 부위 면역글로불린 도메인을 제외한 항체 중쇄의 불변 부위를 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, Fc는 IgA, IgD, 및 IgG의 마지막 두 불변 부위 면역글로불린 도메인 및 IgE 및 IgM의 마지막 세 불변 부위 면역글로불린 도메인, 및 상기 도메인에 유연한 경첩 N-말단을 언급한다. IgA 및 IgM을 위해, Fc는 J 쇄를 포함할 것이다. IgG를 위해, Fc는 면역글로불린 도메인 C감마2(Cgamma2; C[γ]2) 및 C감마3(Cgamma3; C[γ]3 및 C감마1(Cgamma1; C[γ]1) 및 C감마2(C[γ]2) 사이의 경첩을 포함한다. 비록, Fc 부위의 경계가 다양할 것이지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 부위는 일반적으로 이의 카복시-말단(carboxyl-terminus)에 C226 또는 P230 잔기를 포함하는 것으로 정의되고, 상기 번호는 EU 지표(index)에 따랐다. Fc는 항체의 예에서, 고립된 상기 부위 또는 Fc 폴리펩티드의 맥락에서 상기 부위를 언급한다.

본 명세서에 사용된 용어 "아미노산 변형(amino acid modification)"은 폴리펩티드 서열에 있어서 아미노산 치환(substitution), 도입(insertion), 및/또는 결실(deletion)을 포함한다. 본 명세서의 "아미노산 치환(amino acid substitution)" 또는 "치환(substitution)은 부모 폴리펩티드 서열에 있어서 특정 위치의 아미노산이 다른 아미노산으로 교체(replacement)되는 것을 의미한다. 예를 들어, R94K 치환은 변종 폴리펩티드를 언급하고, 여기서 94 위치의 아르기닌이 리신으로 교체된다. 본 명세서의 목적을 위해, 다중 치환(multiple substitutions)은 사선(slash) 또는 콤마(comma)로 일반적으로 분리된다. 예를 들어, "R94K/L78V" 또는 "R94K, L78V"는 R94K 및 L78V 치환을 포함하는 이중(double) 변종을 언급한다. 본 명세서에서 사용된 "아미노산 도입(amino acid insertion)" 또는 "도입(insertion)"은 부모 폴리펩티드 서열에 있어서 특정 위치에 아미노산이 추가되는 것을 의미한다. 예를 들어, 삽입-94(insert-94)는 94 위치에 도입을 표시한다. 본 명세서에서 사용된 "아미노산 결실(amino acid deletion)" 또는 "결실(deletion)"은 부모 폴리펩티드 서열에 있어서 특정 위치에 아미노산이 제거되는 것을 의미한다. 예를 들어, R94-는 94 위치 아르기닌의 결실을 표시한다.

용어 "보존적 변형(conservative modifications)" 또는 "보존적 서열 변형(conservative sequence modifications)"은 아미노산 서열을 함유하는 항체의 결합 특징에 유의적인 영향 또는 변형이 없는 아미노산의 변형을 언급하는 것을 의미한다. 상기 보존적 변형은 아미노산 치환, 도입, 및 결실을 포함한다. 상기 변형은 당업자에게 알려진 표준기술(standard techniques)에 의해 본 발명의 항체 내로 도입될 수 있고, 이는 부위 특이적 돌연변이 유도(site-directed mutagenesis) 및 PCR-매개 돌연변이 유도(PCR-mediated mutagenesis)이다.

본 명세서에 사용된 "보존적인 아미노산 치환(conservative amino acid substitution)"은 아미노산 잔기가 비슷한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 교체되는 아미노산 치환을 포함한다. 비슷한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 과(families)는 당업자에게 자명하다. 상기 과는 염기성(basic) 측쇄(예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성(acidic) 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 극성으로 대전되지 않은 측쇄[예를 들어, 글리신(glycine), 아스파라긴(asparagine), 글루타민(glutamine), 세린(serine), 트레오닌(threonine), 티로신(tyrosine), 시스테인(cysteine), 트립토판(tryptophan)], 비극성 측쇄[예를 들어, 알라닌(alanine), 발린(valine), 루신(leucine), 이소루신(isoleucine), 프롤린(proline), 페닐알라닌(phenylalanine), 메티오닌(methionine)], 베타-가지가 있는(beta-branched) 측쇄[예를 들어, 트레오닌(threonine), 발린, 이소루신] 및 방향족(aromatic) 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함한다.

헤테로-이량체 면역글로불린

여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체(hetero-dimer) 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체(homo-dimer)를 형성하고,

여기서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 상과의 부모 도메인은 CH2 도메인이 아니고, CH3 도메인이 아니며, VL 도메인이 아니고, VH 도메인이 아니며,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 12 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 119 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 12 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 119 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 26 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 13 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 26 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 13 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 5 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 27 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 18 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 27 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 18 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 26 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 79 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 84.3 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 79 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 84.3 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기가 11 위치 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 경첩부위를 포함하는 도메인이면, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 경첩부위의 3 위치는 치환되지 않고, 여기서 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

바람직하게, 본 공개는 하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 제공한다:

여기서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인이 아니고, CH3 도메인이 아니며, VL 도메인이 아니고, VH 도메인이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 26 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 79 위치의 아미노산 잔기가 치환 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 84.3 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 79 위치에 치환되지 않거나 치환된 아미노산 잔기 및 84.3 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

더욱 바람직하게, 본 공개는 하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 제공한다:

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 12 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 119 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 12 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 119 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 26 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 13 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 26 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 13 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 5 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 27 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 18 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 27 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 18 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 26 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 79 위치의 아미노산 잔기가 치환 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 84.3 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 79 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 84.3 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니며,

첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 카벳(Kabat) 번호에 따른 116 위치와 일치하는 IGLC 도메인의 5 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 카벳 번호에 따른 123 위치와 일치하는 IGLC 도메인의 12 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 카벳 번호에 따른 124 위치와 일치하는 IGLC 도메인의 13 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 카벳 번호에 따른 129 위치와 일치하는 IGLC 도메인의 18 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 카벳 번호에 따른 131 위치와 일치하는 IGLC 도메인의 20 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 카벳 번호에 따른 160 위치와 일치하는 IGLC 도메인의 79 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 EU 번호에 따른 122 위치와 일치하는 IGKC 도메인의 11 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 EU 번호에 따른 123 위치와 일치하는 IGKC 도메인의 12 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 EU 번호에 따른 131 위치와 일치하는 IGKC 도메인의 20 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 EU 번호에 따른 176 위치와 일치하는 IGKC 도메인의 86 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 EU 번호에 따른 141 위치와 일치하는 CH1 도메인의 20 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 EU 번호에 따른 147 위치와 일치하는 CH1 도메인의 26 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 EU 번호에 따른 148 위치와 일치하는 CH1 도메인의 27 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 EU 번호에 따른 176 위치와 일치하는 CH1 도메인의 84.3 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 EU 번호에 따른 183 위치와 일치하는 CH1 도메인의 86 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 EU 번호에 따른 213 위치와 일치하는 CH1 도메인의 119 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

여기서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인이 아니고, CH3 도메인이 아니며, VL 도메인이 아니고, VH 도메인이 아니며, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 26 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니고, 여기서 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 26 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환되지 않거나 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고, 여기서 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 5 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 26 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니며,

바람직하게는, 본 공개는 하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 제공한다:

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 26 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환되지 않거나 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고, 여기서 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 26 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니고,

어떤 측면에서, 본 공개는 하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 제공한다:

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 5 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며, 바람직하게는 대전된 아미노산이 아니고, 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며, 바람직하게는 대전된 아미노산이 아니며, 여기서 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 26 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고, 바람직하게는 대전된 아미노산이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고, 바람직하게는 대전된 아미노산이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 20 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 5 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고, 바람직하게는 대전된 아미노산이 아니며,

여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 86 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고, 바람직하게는 대전된 아미노산이 아니며, 여기서 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 CH3 도메인이고, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고,

여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 85.1 및/또는 86 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하며,

여기서, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 CH3 도메인이고, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 26 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하며,

여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 CH2 도메인이고, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 85.1 및/또는 86 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 CH2 도메인이고, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 26 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 CH4 도메인이고, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기의 치환을 포함, 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기의 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성한다. 어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성한다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원 및 이의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원 및 이의 도메인과 각각 아미노산 서열이 일치한다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원 및 이의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원 및 이의 기부 도메인과 각각 아미노산 서열이 다르다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및 네번째 구성원, 구체적으로 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및 네번째 구성원의 기부도메인은 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원, 구체적으로 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인과 다르다. 어떤 실시예에서, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째, 두번째, 세번째 및 네번째 구성원, 구체적으로 이의 기부 도메인은 각각 다른 것과 다르다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 일치하지 않다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 이의 조작된 도메인은 두번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 이의 조작된 도메인은 일치하지 않고, 즉 조작된 면역글로불린 쇄, 구체적으로 이의 조작된 도메인은 각각 다른 것과 아미노산 서열이 다르며, 예를 들어, 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄, 구체적으로 이의 조작된 도메인은 적어도 한 아미노산에 의해 또는 적어도 두 아미노산에 의해 또는 적어도 세 아미노산에 의해 또는 적어도 네 아미노산에 의해 또는 적어도 다섯 아미노산에 의해 또는 적어도 다섯 내지 열 아미노산에 의해 또는 적어도 열 내지 삼십 아미노산에 의해 각각 다른 것과 다른 아미노산 서열을 갖는다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 이의 조작된 도메인은 두번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 이의 조작된 도메인과 아미노산 서열이 다르고, 여기서 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 헤테로-이량체화(hetero-dimerization)에 의해서 상호작용한다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 이의 조작된 도메인은 두번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 이의 도작된 도메인과 아미노산 서열이 다르고, 여기서 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 호모-이량체화(homo-dimerization)에 의해서 상호작용한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 적어도 한번 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 적어도 한번 치환된 아미노산 잔기와 상호작용한다. 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 바람직하게는, 적어도 두번, 더욱 바람직하게는, 적어도 세번, 가장 바람직하게는 적어도 네번, 구체적으로 적어도 다섯번 치환된 아미노산 잔기가 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 적어도 한번 치환된 아미노산 잔기와 상호작용한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한번, 바람직하게는 적어도 두번, 더욱 바람직하게는 적어도 세번, 가장 바람직하게는 적어도 네번, 구체적으로 적어도 다섯번 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 다르다.

어떤 실시예에서, 상기 각각의 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 이의 조작된 도메인은 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원 및 이의 기부도메인과 아미노산 서열이 다르다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원 및 이의 기부 도메인과 아미노산 서열이 다르다. 어떤 실시예에서, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원 및 이의 기부 도메인과 아미노산 서열이 다르다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 대전된 아미노산으로 치환되지 않고, 바람직하게는 대전된 쌍으로 치환되지 않는다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 상과의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 26A 및/또는 26E 및/또는 86T로 치환되지 않고, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20T 및/또는 26K 및/또는 85.1A 및/또는 88T로 치환되지 않으며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 호모-이량체화에 의해 상호작용하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 아미노산 서열이 일치하지 않는다.

어떤 실시예에서, 상기 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인에서 도메인의 루프(loop) 부위는 치환되지 않는다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 3D 구조적 위치는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 동등한 3D 구조적 위치와 비교하여 아미노산 잔기가 다르다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 도작된 도메인은 세번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 이의 조작된 도메인과 일치하지 않고, 즉 조작된 면역글로불린 쇄, 구체적으로 이의 조작된 도메인은 각각의 다른 것과 아미노산 서열이 다르며, 예를 들어, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄, 구체적으로 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 적어도 한 아미노산에 의해 또는 적어도 두 아미노산에 의해 또는 적어도 세 아미노산에 의해 또는 적어도 네 아미노산에 의해 또는 적어도 다섯 아미노산에 의해 또는 적어도 다섯 내지 열 아미노산에 의해 또는 적어도 열 내지 삼십 아미노산에 의해 각각 다른 것과 다르다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인은 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인과 아미노산 서열이 다르고, 여기서 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 헤테로-이량체화에 의해서 상호작용한다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인은 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인과 아미노산 서열이 다르고, 여기서 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 호모-이량체화에 의해서 상호작용한다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원 및 이의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원 및 이의 기부 도메인과 각각 아미노산 서열이 다르다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원 및 이의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원 및 이의 기부 도메인과 각각 아미노산 서열이 일치하지 않는다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및 네번째 구성원 및 이의 기부도메인과 아미노산 서열이 다르다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인은 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원 및 이의 기부 도메인과 아미노산 서열이 다르다.

어떤 실시예에서, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원 및 이의 도메인과 아미노산 서열이 다르다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 일치하는 부모 도메인을 갖는다. 어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 일치하지 않는 부모 도메인을 갖는다. 어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 한 아미노산에 의해 또는 두 아미노산에 의해 또는 세 아미노산에 의해 또는 네 아미노산에 의해 또는 다섯 아미노산에 의해 또는 다섯 내지 열 아미노산에 의해 또는 열 내지 삼십 아미노산에 의해, 바람직하게는 적어도 한 아미노산에 의해 또는 적어도 두 아미노산에 의해 또는 적어도 세 아미노산에 의해 또는 적어도 네 아미노산에 의해 또는 적어도 다섯 아미노산에 의해 또는 적어도 다섯 내지 열 아미노산에 의해 또는 적어도 열 내지 삼십 아미노산에 의해 다른 것과 각각 다른 아미노산 서열을 갖는 부모 도메인을 갖는다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 일치한다. 어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 일치하지 않는다. 어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 한 아미노산에 의해 또는 두 아미노산에 의해 또는 세 아미노산에 의해 또는 네 아미노산에 의해 또는 다섯 아미노산에 의해 또는 다섯 내지 열 아미노산에 의해 또는 열 내지 삼십 아미노산에 의해, 바람직하게는 적어도 한 아미노산에 의해 또는 적어도 두 아미노산에 의해 또는 적어도 세 아미노산에 의해 또는 적어도 네 아미노산에 의해 또는 적어도 다섯 아미노산에 의해 또는 적어도 다섯 내지 열 아미노산에 의해 또는 적어도 열 내지 삼십 아미노산에 의해 다른 것과 각각 다르다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인, 구체적으로 CH1, CH2, CH3, CH4, IGKC, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택된 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인을 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다. CH3는 IGHA1, IGHA2, IGHD, IGHE, IGHG1, IGHG2, IGHG3, IGHG4, IGHGP 및 IGHM 일 수 있다. CH4는 IGHE 및 IGHM 일 수 있다. CH2는 IGHA1, IGHA2, IGHD, IGHE, IGHG1, IGHG2, IGHG3, IGHG4, IGHGP 및 IGHM 일 수 있다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인, 구체적으로 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인, CH4 도메인, IGKC 도메인, IGLC1 도메인, IGLC2 도메인, IGLC3 도메인, IGLC6 도메인, 및 IGLC7 도메인으로 구성된 군으로부터, 바람직하게는 CH1 도메인, IGKC 도메인, IGLC1 도메인, IGLC2 도메인, IGLC3 도메인, IGLC6 도메인, 및 IGLC7 도메인으로 구성된 군으로부터 선택된 도메인이다.

일반적으로, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 도메인이다. 보통, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 인간, 예를 들어 자연적으로 발생한 인간 도메인이다. 바람직하게는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 인간 및 같은 이소타입(isotype), 종(species) 및 하위종류(subclass)이다. 어떤 실시예에서, 바람직한 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인, 구체적으로 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH3 도메인, 더욱 바람직하게 인간 CH3 도메인, 구체적으로 IGHG1으로부터 인간 CH3 도메인이다. 동일하게 바람직하게, 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 다른 이소타입이다. 어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGHG1으로부터 CH3 도메인, 바람직하게는, IGHG1으로부터 인간 CH3 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGHG3로부터 CH3 도메인, 바람직하게는 IGHG3로부터 인간 CH3 도메인이다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인, 구체적으로 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH4 도메인, 더욱 바람직하게는 인간 CH4 도메인, 구체적으로 IGHM으로부터 인간 CH4 도메인 또는 IGHE로부터 인간 CH4 도메인이다.

동일하게, 바람직한 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인과 같은 경쇄 불변 도메인이다. 동일하게, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인과 같은 경쇄 불변 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 CH1 도메인이다. 더욱 바람직하게는 IGHG1, IGHG2, IGHG3, 및 IGHG4로 구성된 군으로부터 선택된 인간 CH1 도메인, 구체적으로 IGHG1으로부터 인간 CH1 도메인이다. 가장 바람직하게는, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인 또는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인이다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 CH1, CH2, CH3, CH4, IGKC, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일반적으로, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 자연적으로 발생한 도메인이다. 일반적으로, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 인간으로부터이다. 바람직하게는, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 인간이고, 같은 이소타입, 종 및 하위종류이다. 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 바람직한 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 CH3 도메인, 더욱 바람직하게는 인간 CH3 도메인, 구체적으로, IGHG1으로부터 인간 CH3 도메인이다. 동일하게, 바람직한 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및/또는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 이소타입이 다르다. 어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인은 IGHG1으로부터 CH3 도메인, 바람직하게는 IGHG1으로부터 인간 CH3 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 IGHG3로부터 CH3 도메인, 바람직하게는 IGHG3로부터 인간 CH3 도메인이다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및/또는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 CH4 도메인, 더욱 바람직하게는 인간 CH4 도메인, 구체적으로 IGHM으로부터 인간 CH4 도메인 또는 IGHE으로부터 인간 CH4 도메인이다. 동일하게, 바람직한 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인과 같은 경쇄 불변 도메인이다. 동일하게, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 바람직한 부모 도메인은 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인과 같은 경쇄 불변 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 바람직한 부모 도메인은 CH1 도메인이다. 더욱 바람직하게는, IGHG1, IGHG2, IGHG3, 및 IGHG4로 구성된 군으로부터 선택된 인간 CH1 도메인, 구체적으로 IGHG1으로부터 인간 CH1 도메인이다.

같은 종, 이소타입 및 하위종류로부터의 부모 도메인, 예를 들어 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인으로, 예를 들어 IGHG1으로부터 인간 CH3 도메인은 호모-이량체를 형성한다. 어떤 실시예에서 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 호모-이량체, 구체적으로 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 헤테로-이량체, 구체적으로 자연적으로 발생한 헤테로-이량체, 예를 들어 CH1 도메인 및 IGKC 도메인 또는 CH1 도메인 및 IGLC 도메인을 형성한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 헤테로-이량체, 예를 들어 IGHG1으로부터 CH3 도메인 및 IGHG3로부터 CH3 도메인을 형성한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 호모-이량체, 구체적으로 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성한다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 헤테로-이량체, 구체적으로 자연적으로 발생한 헤테로-이량체, 예를 들어 CH1 도메인 및 IGKC 도메인 또는 CH1 도메인 및 IGLC 도메인을 형성한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 헤테로-이량체, 예를 들어 IGHG1으로부터 CH3 도메인 및 IGHG3로부터 CH3 도메인을 형성한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인이 아니다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH3 도메인이 아니다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 VH 도메인이 아니고, VL 도메인이 아니다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG2로부터가 아니다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 IGKC 도메인이며, 또는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 IGKC 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 CH1 도메인이다. 더욱 바람직하게, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 IGKC 도메인이며, 또는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 IGKC 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 CH1 도메인이며, 더욱 바람직하게는, IGHG1, IGHG2, IGHG3, 및 IGHG4로 구성된 군으로부터 선택된 인간 CH1 도메인, 구체적으로 IGHG1으로부터 인간 CH1 도메인이다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 IGLC 도메인이며, 또는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 IGLC 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 CH1 도메인이다. 더욱 바람직하게, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 IGLC 도메인이며, 또는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 IGLC 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 CH1 도메인이며, 더욱 바람직하게는, IGHG1, IGHG2, IGHG3, 및 IGHG4로 구성된 군으로부터 선택된 인간 CH1 도메인, 구체적으로 IGHG1으로부터 인간 CH1 도메인이다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 바람직한 부모 도메인은 CH1 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 IGKC 도메인이며, 또는 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 바람직한 부모 도메인은 IGKC 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 바람직한 부모 도메인은 CH1 도메인이다. 더욱 바람직하게, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 CH1 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 IGKC 도메인이며, 또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 IGKC 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 CH1 도메인이며, 더욱 바람직하게는, IGHG1, IGHG2, IGHG3, 및 IGHG4로 구성된 군으로부터 선택된 인간 CH1 도메인, 구체적으로 IGHG1으로부터 인간 CH1 도메인이다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 바람직한 부모 도메인은 CH1 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 바람직한 부모 도메인은 IGLC 도메인, 또는 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 바람직한 부모 도메인은 IGLC 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 바람직한 부모 도메인은 CH1 도메인이다. 더욱 바람직하게, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 CH1 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 IGLC 도메인이며, 또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 IGLC 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 인간 CH1 도메인이며, 더욱 바람직하게는, IGHG1, IGHG2, IGHG3, 및 IGHG4로 구성된 군으로부터 선택된 인간 CH1 도메인, 구체적으로 IGHG1으로부터 인간 CH1 도메인이다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인, 구체적으로 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH3 도메인, 바람직하게는 같은 종, 이소타입 및 하위종류의 CH3 도메인, 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린은 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인과 같은 경쇄 불변 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH1 도메인이다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인과 같은 경쇄 불변 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH1 도메인이며, 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH3 도메인, 바람직하게는 같은 종, 이소타입 및 하위종류의 CH3 도메인이다.

어떤 실시예에서, 예를 들어 만약, 헤테로-이량체 면역글로불린이 F(ab')₂이면, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인과 같은 경쇄 불변 도메인이며, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인은 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인과 같은 경쇄 불변 도메인이며, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 조작된 도메인의 부모 도메인 및 추가적으로 조작된 부모 도메인 사이의 경첩(hinge) 부위를 포함한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 아미노산 잔기는 도메인의 핵심 무결성(core integrity)에 비필수인 아미노산이고, 바람직하게는, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 치환을 위해 사용된 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기는 도메인의 핵심 무결성에 비필수 아미노산이다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 바람직하게는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 치환을 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함 또는 85.1 및 86으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 더욱 바람직하게는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 22, 85.1, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함 또는 85.1 및 86으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 구체적으로 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 88 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 85.1, 86, 및 88fh 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환 또는 85.1 또는 86으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 여기서 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

따라서, 어떤 실시예에서, 본 공개는 하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 제공한다:

여기서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인이 아니고, CH3 도메인이 아니며, VL 도메인이 아니고, VH 도메인이 아니며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 85.1, 86, 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함, 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 85.1, 86, 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 여기서 만약 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 86 위치의 아미노산 잔기가 치환되고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 86 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고, 바람직하게는 대전된 아미노산이 아니며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 20A, 20E, 20K, 20N, 20Q, 20S, 20T, 20V 및 20W 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택, 바람직하게는 20A, 20N, 20Q, 20S, 20T, 20V 및 20W 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 20 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 22A, 22G, 22I, 22L, 22T 및 22V 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 22 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 85.1A, 85.1C, 85.1F, 85.1H, 85.1K, 85.1M, 85.1N, 85.1R, 85.1S, 85.1T, 및 85.1W 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 85.1 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 86F, 86H, 86I, 86T, 86Q, 86S, 86V, 86W, 86Y 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 86 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 88E, 88I, 88K, 88L, 88Q, 88R, 88T, 88V, 88W, 88Y 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 88 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 22A, 22G, 22I, 22L, 22T 및 22V 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 22 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 26K, 26Q, 26R, 26S, 26T, 및 26V 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 26 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 85.1A, 85.1C, 85.1F, 85.1H, 85.1K, 85.1M, 85.1N, 85.1R ,85.1S, 85.1T, 및 85.1W 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 85.1 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 86F, 86H, 86I, 86T, 86Q, 86S, 86V, 86W, 86Y 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 86 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 88E, 88I, 88K, 88L, 88Q, 88R, 88T, 88V, 88W, 88Y 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 88 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 만약 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환이 88 위치이면, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 치환된 88 위치의 아미노산 잔기와 상호작용하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치이고, 만약 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환이 88 위치이면, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 치환된 88 위치의 아미노산 잔기와 상호작용하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 85.1 및/또는 86 위치이며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산 잔기가 88 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 치환된 아미노산 잔기가 85.1 및/또는 86 위치, 바람직하게는 85.1 및 86 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

일반적으로, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 88 위치가 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 85.1 및 또는 86 위치가 치환된 아미노산 잔기는 서로 상호작용하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 만약 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환이 85.1 위치이면, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 치환된 85.1 위치의 아미노산 잔기와 상호작용하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 86 위치이고, 만약 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환이 85.1 위치이면, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 치환된 85.1 위치의 아미노산 잔기와 상호작용하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 86 위치이며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산 잔기가 85.1 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 치환된 아미노산 잔기가 86 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다. 일반적으로, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 85.1 위치가 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 86 위치가 치환된 아미노산 잔기는 서로 상호작용하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 만약 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환이 22 위치이면, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 치환된 22 위치의 아미노산 잔기와 상호작용하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 22 및/또는 86 위치이고, 만약 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환이 22 위치이면, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 치환된 22 위치의 아미노산 잔기와 상호작용하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 22 및/또는 86 위치이며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산 잔기가 22 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 치환된 아미노산 잔기가 22 및/또는 86 위치, 바람직하게는 22 및 86 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다. 일반적으로, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 22 위치가 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 22 및/또는 86 위치가 치환된 아미노산 잔기는 서로 상호작용하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 만약 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환이 20 위치이면, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 치환된 20 위치의 아미노산 잔기와 상호작용하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치이고, 만약 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환이 20 위치이면, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 치환된 20 위치의 아미노산 잔기와 상호작용하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 26 위치이며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산 잔기가 20 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 치환된 아미노산 잔기가 26 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다. 일반적으로, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 20 위치가 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 26 위치가 치환된 아미노산 잔기는 서로 상호작용하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH2 또는 인간 IGHA2 CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH2 또는 인간 IGHA2 CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH2 또는 인간 IGHA2 CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22T 및 이의 보존적인 아미노산을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88R 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86H 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86H 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86H 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88E 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86Q 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86Q 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86Q 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22L 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH2 또는 인간 IGHG2 CH2 또는 인간 IGHG3 CH2 또는 인간 IGHG4 CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 85.1R 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH2 또는 인간 IGHG2 CH2 또는 인간 IGHG3 CH2 또는 인간 IGHG4 CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1R 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH2 또는 인간 IGHG2 CH2 또는 인간 IGHG3 CH2 또는 인간 IGHG4 CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHP CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 85.1H 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHP CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1H 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHP CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 85.1K 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1K 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH2이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22I 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH3 또는 인간 IGHA2 CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88I 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH3 또는 인간 IGHA2 CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH3 또는 인간 IGHA2 CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86W 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1W 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86W 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1W 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86W 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22L 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH3 또는 인간 IGHG2 CH3 또는 인간 IGHG3 CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88K 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH3 또는 인간 IGHG2 CH3 또는 인간 IGHG3 CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH3 또는 인간 IGHG2 CH3 또는 인간 IGHG3 CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG4 CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88R 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG4 CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG4 CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHP CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88K 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHP CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHP CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88E 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH3이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH4이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88R 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86F 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH4이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH4이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH4이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88I 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86H 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH4이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86H 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH4이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86H 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH1 또는 인간 IGHA2 CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88Q 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH1 또는 인간 IGHA2 CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH1 또는 인간 IGHA2 CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88Q 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88L 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86I 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86I 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH1 또는 인간 IGHG2 CH1 또는 인간 IGHG3 CH1 또는 IGHG4 CH1 또는 IGHGP CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH1 또는 인간 IGHG2 CH1 또는 인간 IGHG3 CH1 또는 IGHG4 CH1 또는 IGHGP CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH1 또는 인간 IGHG2 CH1 또는 인간 IGHG3 CH1 또는 IGHG4 CH1 또는 IGHGP CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88Q 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA CH1 또는 인간 IGHA2 CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88Q 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA CH1 또는 인간 IGHA2 CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA CH1 또는 인간 IGHA2 CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88Q 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88L 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86I 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86I 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH1 또는 인간 IGHG2 CH1 또는 인간 IGHG3 CH1 또는 IGHG4 CH1 또는 IGHGP CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH1 또는 인간 IGHG2 CH1 또는 인간 IGHG3 CH1 또는 IGHG4 CH1 또는 IGHGP CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH1 또는 인간 IGHG2 CH1 또는 인간 IGHG3 CH1 또는 IGHG4 CH1 또는 IGHGP CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88Q 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH1이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH1 또는 인간 IGHA2 CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH1 또는 인간 IGHA2 CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH1 또는 인간 IGHA2 CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1M 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1M 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86I 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22G 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH1 또는 인간 IGHG2 CH1 또는 인간 IGHG3 CH1 또는 인간 IGHG4 CH1 또는 인간 IGHGP CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH1 또는 인간 IGHG2 CH1 또는 인간 IGHG3 CH1 또는 인간 IGHG4 CH1 또는 인간 IGHGP CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH1 또는 인간 IGHG2 CH1 또는 인간 IGHG3 CH1 또는 인간 IGHG4 CH1 또는 인간 IGHGP CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22G 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGKC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22G 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH1 또는 인간 IGHA2 CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH1 또는 인간 IGHA2 CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1T 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH1 또는 인간 IGHA2 CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1M 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1M 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHD CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86I 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHE CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22G 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH1 또는 인간 IGHG2 CH1 또는 인간 IGHG3 CH1 또는 IGHG4 CH1 또는 IGHGP CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH1 또는 인간 IGHG2 CH1 또는 인간 IGHG3 CH1 또는 IGHG4 CH1 또는 IGHGP CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHG1 CH1 또는 인간 IGHG2 CH1 또는 인간 IGHG3 CH1 또는 IGHG4 CH1 또는 IGHGP CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22G 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGLC1 또는 인간 IGLC2 또는 인간 IGLC3 또는 인간 IGLC6 또는 인간 IGLC7이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHM CH1이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22G 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRAC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRBC1 또는 인간 TRBC2이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1C 또는 85.1A 또는 85.1C 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRAC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRBC1 또는 인간 TRBC2이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1C 또는 85.1A 또는 85.1C 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRAC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRBC1 또는 인간 TRBC2이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRBC1 또는 인간 TRBC2이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRAC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88R 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRBC1 또는 인간 TRBC2이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRAC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRBC1 또는 인간 TRBC2이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRAC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRDC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRGC1 또는 인간 TRGC2(2x) 또는 인간 TRGC2(3x)이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88L 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86F 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1M 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRDC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRGC1 또는 인간 TRGC2(2x) 또는 인간 TRGC2(3x)이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1M 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRDC이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRGC1 또는 인간 TRGC2(2x) 또는 TRGC2(3x)이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22L 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRGC1 또는 인간 TRGC2(2x) 또는 인간 TRGC2(3x)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRDC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 85.1N 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRGC1 또는 인간 TRGC2(2x) 또는 인간 TRGC2(3x)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRDC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 85.1N 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRGC1 또는 인간 TRGC2(2x) 또는 인간 TRGC2(3x)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 인간 TRDC이며, 여기서 상기 첫번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 86F 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 두번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 치환은 22A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 20E, 20K, 20W, 20S, 22A, 22G, 22T, 22L, 22I, 22V, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1W, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86T, 86H, 86Q, 86V, 86W, 86Y, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88T, 88I, 88K, 88Y, 및 88W으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 치환을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22A, 22G, 22T, 22L, 22I, 22V, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26R, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1W, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86T, 86H, 86Q, 86V, 86W, 86Y, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88I, 88T, 88K, 88Y, 및 88W으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20K, 20N, 20T, 20S, 22A, 22L, 22V, 22T, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86F, 86Y, 86V, 88W, 88R, 88L, 및 88K 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 치환을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22A, 22L, 22V, 22T, 26E, 26T, 26K, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86F, 86Y, 86V, 88W, 88R, 88L, 및 88K 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20K, 20N, 20T, 20S, 22A, 22L, 22V, 22T, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86T, 86F, 86Y, 86V, 88W, 88R, 88L, 88I, 및 88K 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 치환을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22A, 22L, 22V, 22T, 26E, 26T, 26K, 26R, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86T, 86F, 86Y, 86V, 88W, 88R, 88L, 88I 및 88K 및/또는 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 3, 5, 7, 11, 12, 13, 18, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 3, 5, 7, 11, 12, 13, 18, 20, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

바람직하게는, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환 및 26, 79, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환 및 3, 5, 7, 20, 81, 84, 84.2, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

바람직하게는, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환 및 3, 5, 26, 27, 81, 83, 및 84로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 85.1, 86, 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환 및 7, 20, 27, 79, 81, 84.2, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

바람직하게는, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환 및 3, 5, 7, 11, 12, 13, 18, 26, 79, 81, 83, 및 84.2로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환 및 3, 5, 7, 11, 12, 13, 18, 20, 79, 81, 83, 및 84.2으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기로 치환을 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기로 치환을 포함하고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인, CH4 도메인, IGKC 도메인, IGLC1 도메인, IGLC2 도메인, IGLC3 도메인, IGLC6 도메인, 및 IGLC7 도메인으로 구성된 군으로부터 선택된 도메인이며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

바람직하게는, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인, IGLC1 도메인, IGLC2 도메인, IGLC3 도메인, IGLC6 도메인, 및 IGLC7 도메인으로 구성된 군으로부터 선택된다. 동일하게, 바람직하게는 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH4 도메인, 구체적으로 같은 이소타입, 종 및 하위 종류의 CH4 도메인이다.

바람직하게는, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인이며, 또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인이다.

바람직하게는, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인이며, 또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인이다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인이 아니고, CH3 도메인이 아니며, VL 도메인이 아니고, VH 도메인이 아니다.

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 12 위치의 아미노산 잔기가 치환되고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 119 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 12 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 119 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 26 위치의 아미노산 잔기가 치환되고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 13 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 26 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 13 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 5 위치의 아미노산 잔기가 치환되고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 20 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 27 위치의 아미노산 잔기가 치환되고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 18 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 27 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 18 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 20 위치의 아미노산 잔기가 치환되고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 26 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 79 위치의 아미노산 잔기가 치환되고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 84.3 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 79 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 84.3 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 86 위치의 아미노산 잔기가 치환되고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 86 위치의 아미노산 잔기가 치환되면, 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,

만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 11 위치이며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 경첩 부위를 포함하는 도메인이면, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 경첩 부위의 3 위치에 치환되지 않으며,

상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인, CH4 도메인, IGKC 도메인, IGLC1 도메인, IGLC2 도메인, IGLC3 도메인, IGLC6 도메인, 및 IGLC7 도메인으로 구성된 군으로부터 선택된 도메인 및/또는 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 3, 5, 7, 11, 12, 13, 18, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

바람직하게는, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 26, 79, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환으로 구성되고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환으로 구성되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

바람직하게는, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 3, 5, 20, 22, 26, 27, 81, 83, 84, 85.1, 86, 및 88으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환으로 구성되고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 7, 20, 22, 27, 79, 81, 84.2, 85.1, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환으로 구성되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

바람직하게는, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 3, 5, 7, 11, 12, 13, 18, 20, 22, 26, 79, 81, 83, 84.2, 85.1, 86, 및 88으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환으로 구성되고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 3, 5, 7, 11, 12, 13, 18, 20, 22, 26, 79, 81, 83, 84.2, 85.1, 86, 및 88으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환으로 구성되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원은 TCR 불변영역 과로부터 선택된다. 어떤 실시예에서, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및 네번째 구성원은 TCR 불변영역 과로부터 선택된다.

바람직하게는, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이다. 동일하게, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)일 수 있고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)일 수 있다.

바람직하게는, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이다. 동일하게, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)일 수 있고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)일 수 있다.

다른 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이며, 상기 서열번호 2에 있어서 75 위치 아미노산인 시스테인(cysteine; C)은 알라닌(alanine; A) 또는 세린(serine; S), 바람직하게는 알라닌으로 치환된다.

다른 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이며, 상기 서열번호 2에 있어서 75 위치 아미노산인 시스테인은 알라닌 또는 세린, 바람직하게는 알라닌으로 치환된다.

다른 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이며, 또는 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이다.

다른 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및/또는 두번째 구성원의 기부 도메인은 IgA1 CH3 도메인, 바람직하게는 IGHA1 CH3 도메인, 더욱 바람직하게는 인간 IGHA1 CH3 도메인(서열번호 96)이다. 다른 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및/또는 두번째 구성원의 기부 도메인은 IgA2 CH3 도메인, 바람직하게는 IGHA2 CH3 도메인, 더욱 바람직하게는 IGHA2 CH3 도메인(서열번호 97)이다.

다른 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및/또는 네번째 구성원의 기부 도메인은 IgA1 CH3 도메인, 바람직하게는 IGHA1 CH3 도메인, 더욱 바람직하게는 인간 IGHA1 CH3 도메인(서열번호 96)이다. 다른 실시예에서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및/또는 네번째 구성원의 기부 도메인은 IgA2 CH3 도메인, 바람직하게는 IGHA2 CH3 도메인, 더욱 바람직하게는 IGHA2 CH3 도메인(서열번호 97)이다.

기부 도메인으로써 IGHA1 CH3 도메인 또는 IGHA2 CH3 도메인은, 만약 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인 또는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인이 IGHA1 또는 IGHA2, 예를 들어 IGHG1 또는 IGHG2 또는 IGHG3 또는 IGHG4 CH3 도메인 또는 바람직하게 IGHG1 CH3, 더욱 바람직하게는 인간 IGHG1 CH3와 다른 이소타입으로부터의 CH3 도메인이면 특별히 유용하다.

다른 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기가 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환되고, 추가적으로 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기가 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환되며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기가 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환되고, 추가적으로 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기가 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환된다.

부모 도메인이 IgG1으로부터의 경우, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은, 예를 들어 IgA, IgM 또는 IgE의 CH3 도메인으로부터 선택될 수 있고, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인은, 예를 들어 IgM, IgE의 CH4 도메인으로부터 또는 IgG2, IgG3 또는 IgG4의 CH3 도메인으로부터 선택될 수 있으며, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은, 예를 들어 IgA, IgM 또는 IgE의 CH3 도메인으로부터 선택될 수 있고, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은, 예를 들어 IgM 또는 IgE의 CH4 도메인으로부터 또는 IgG2, IgG3 또는 IgG4의 CH3 도메인으로부터 선택될 수 있다. 일반적으로 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 선택된 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 같고, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 같다.

상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 헤테로-이량체, 구체적으로 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성하거나, 또는 구체적으로 CH1 도메인 및 IGKC 도메인인 경우, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린의 두번째 구성원의 기부 도메인은 호모-이량체를 형성하는 도메인, 일반적으로 같은 이소타입, 종, 및 하위 종류의 도메인, 바람직하게는 CH3 도메인, 더욱 바람직하게는 인간 CH3 도메인, 더욱 바람직하게는 IgG1 CH3 도메인, 구체적으로 인간 IgG1 CH3 도메인일 수 있다. 동일하게, 바람직하게 IgA1 CH3 도메인 또는 IgA2 CH3 도메인, 바람직하게는 인간 IGHA1 CH3 도메인 또는 인간 IGHA2 CH3 도메인이다.

상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 헤테로-이량체, 구체적으로 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성하거나, 또는 구체적으로 CH1 도메인 및 IGKC 도메인인 경우, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린의 두번째 구성원의 기부 도메인은 헤테로-이량체를 형성하는 도메인, 바람직하게는 TCR 불변영역 과로부터의 도메인, 더욱 바람직하게는 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1) 및 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2) 또는 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33) 및 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)일 수 있다.

상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 호모-이량체, 구체적으로 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하거나, 또는 구체적으로 같은 이소타입, 종, 및 하위 종류의 도메인인 경우, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린의 두번째 구성원의 기부 도메인은 헤테로-이량체를 형성하는 도메인, 바람직하게는 TCR 불변영역 과로부터의 도메인, 더욱 바람직하게는 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1) 및 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2) 또는 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33) 및 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이다.

상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 헤테로-이량체, 구체적으로 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성하거나, 또는 구체적으로 CH1 도메인 및 IGKC 도메인인 경우, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린의 네번째 구성원의 기부 도메인은 호모-이량체를 형성하고, 일반적으로 같은 이소타입, 종 및 하위 종류의 도메인, 바람직하게는 CH3 도메인, 더욱 바람직하게는 인간 CH3 도메인, 더욱 바람직하게는 IgG1 CH3 도메인, 구체적으로 인간 IgG1 CH3 도메인이다.

상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 호모-이량체, 구체적으로 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하거나, 또는 구체적으로 같은 이소타입, 종 및 하위 종류의 도메인인 경우, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린의 네번째 구성원의 기부 도메인은 헤테로-이량체를 형성하고, 바람직하게는 TCR 불변영역 과로부터의 도메인, 더욱 바람직하게는 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1) 및 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2) 또는 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33) 및 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이다.

상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 헤테로-이량체를 형성하는 경우, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린의 네번째 구성원의 기부 도메인은 헤테로-이량체를 형성하고, 바람직하게는 TCR 불변영역 과로부터의 도메인, 더욱 바람직하게는 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1) 및 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2) 또는 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33) 및 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이다.

어떤 실시예에서, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이며, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이다.

어떤 실시예에서, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이며, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이다.

어떤 실시예에서, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1) 또는 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2) 또는 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이며, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및 네번째 구성원의 기부 도메인은 IgG1 CH3 도메인(서열번호 47)이고, 여기서 만약 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인이 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)이면, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이고, 만약 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인이 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이면, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이다.

어떤 실시예에서, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1) 또는 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2) 또는 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이며, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및 네번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH3 도메인(서열번호 96) 또는 인간 IGHA2 CH3 도메인(서열번호 97)이고, 여기서 만약 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인이 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)이면, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이고, 만약 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인이 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이면, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 헤테로-이량체화에 의해 상호작용한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 호모-이량체화에 의해 상호작용한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114, 116, 118, 123, 124, 131, 133, 137, 138, 160, 162, 164, 165, 167, 174, 176, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114, 116, 118, 122, 131, 133, 137, 138, 160, 162, 165, 167, 174, 176, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 카뱃 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S131V, S131T, S131A, S131N, S131Q, S131E, S131K, S131W, V133A, V133G, V133T, V133L, V133I, N137Q, N137T, N137K, N137V, N137S, N137R, N137E, S174T, S174M, S174A, S174R, S174H, S174K, S174W, S174F, S174C, S174N, S176I, S176T, S176H, S176Q, S176V, S176W, S176Y, S176F, T178Q, T178L, T178V, T178R, T178E, T178I, T178K, T178Y, 및 T178W로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S114E, S114K, S114Q, F116A, F116T, F116Y, F118M, F118L, E123D, Q124E, S131K, S131T, S131N, V133L, V133A, V133T, N137T, N137E, N137K, N138K, N138E, Q160Y, Q160F, Q160K, S162A, S162G, S162D, S162T, T164V, T164M, E165L, D167E, D167S, S174A, S174M, S174N, S174F, S176F, S176V, S176Y, T178W, T178R, T178L, T178K, T180N, T180R, 및 T180K로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하거나, 또는 S114E, S114K, S114Q, F116A, F116T, F116Y, F118M, F118L, E123D, Q124E, S131K, S131T, S131N, V133L, V133A, V133T, N137T, N137E, N137K, N138K, N138E, Q160Y, Q160F, Q160K, S162A, S162G, S162D, S162T, T164V, T164M, E165L, D167E, D167S, S174A, S174M, S174N, S174F, S176F, S176V, S176Y, T178W, T178R, T178L, T178K, T180N, T180R, 및 T180K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 131V, 131A, 131N, 131Q, 131E, 131K, 131W, 131S, 133A, 133G, 133T, 133L, 133I, 137Q, 137T, 137K, 137V, 137R, 137N, 137E, 174T, 174M, 174S, 174R, 174H, 174K, 174W, 174F, 174C, 174N, 176I, 176T, 176H, 176Q, 176W, 176Y, 176V, 176F, 178Q, 178L, 178V, 178R, 178E, 178T, 178I, 178K, 178E, 및 178W로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114E, 114K, 114Q, 116A, 116Y, 118M, 118L, 122D, 131K, 131N, 133A, 133L, 133T, 137T, 137E, 137K, 138E, 138K, 160Y, 160F, 160K, 162D, 162A, 162G, 165L, 165M, 167E, 167S, 174N, 174M, 174F, 174S, 176V, 176F, 176Y, 178W, 178R, 178L, 178K, 180N, 180R, 및 180K로 구성된 군으로부터 선택, 또는 114E, 114K, 114Q, 116A, 116Y, 118M, 118L, 122D, 131K, 131N, 133A, 133L, 133T, 137T, 137E, 137K, 138E, 138K, 160Y, 160F, 160K, 162D, 162A, 162G, 165L, 165M, 167E, 167S, 174N, 174M, 174F, 174S, 176V, 176F, 176Y, 178W, 178R, 178L, 178K, 180N, 180R, 및 180K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 카뱃 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 124, 126, 128, 133, 134, 139, 141, 143, 147, 148, 168, 170, 173, 175, 181, 183, 185, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 141V, 141T, 141N, 141Q, 141E, 141K, 141W, 141S, 143A, 143T, 143L, 143I, 143V, 147Q, 147T, 147V, 147S, 147R, 147N, 147E, 181T, 181M, 181A, 181R, 181H, 181K, 181W, 181F, 181C, 181N, 183I, 183H, 183Q, 183V, 183T, 183W, 183Y, 183F, 185Q, 185L, 185R, 185E, 185I, 185T, 185K, 185Y, 및 185W로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S124E, S124K, S124Q, F126A, F126T, F126Y, L128F, L128M, K133D, S134E, T139Q, A141K, A141T, A141N, A141S, G143V, G143A, G143L, G143T, K147T, K147E, D148E, D148K, H168Y, H168F, H168K, F170D, F170A, F170G, F170T, V173L, V173M, Q175E, Q175S, Q175D, S181A, S181N, S181M, S181F, S183V, S183F, S183Y, V185W, V185R, V185L, V185K, T187N, T187K 및 T187R로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하거나, 또는 S124E, S124K, S124Q, F126A, F126T, F126Y, L128F, L128M, K133D, S134E, T139Q, A141K, A141T, A141N, A141S, G143V, G143A, G143L, G143T, K147T, K147E, D148E, D148K, H168Y, H168F, H168K, F170D, F170A, F170G, F170T, V173L, V173M, Q175E, Q175S, Q175D, S181A, S181N, S181M, S181F, S183V, S183F, S183Y, V185W, V185R, V185L, V185K, T187N, T187K 및 T187R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호를 따라 나타낸다.

부모 도메인으로서 IGLC 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서, 카뱃 번호에 따른 114, 116, 118, 122, 131, 133, 137, 138, 160, 162, 165, 167, 174, 176, 178, 및 180 위치는 IMGT^® 번호로 나타내어지는 3, 5, 7, 11, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88, 및 90 위치와 같은 순서대로 상응한다.

부모 도메인으로서 IGKC 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서, EU 번호에 따른 114, 116, 118, 123, 124, 131, 133, 137, 138, 160, 162, 164, 165, 167, 174, 176, 178, 및 180 위치는 IMGT^® 번호로 나타내어지는 3, 5, 7, 12, 13, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 85.1, 86, 88, 및 90 위치와 같은 순서대로 상응한다.

부모 도메인으로서 CH1 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서, EU 번호에 따른 124, 126, 128, 133, 134, 139, 141, 143, 147, 148, 168, 170, 173, 175, 181, 183, 185, 및 187 위치는 IMGT^® 번호로 나타내어지는 3, 5, 7, 12, 13, 18, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88, 및 90 위치와 같은 순서대로 상응한다.

부모 도메인으로서 CH4 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서, EU 번호에 따른 124, 126, 128, 133, 134, 139, 141, 143, 147, 148, 168, 170, 173, 175, 181, 183, 185, 및 187 위치는 IMGT^® 번호로 나타내어지는 3, 5, 7, 12, 13, 18, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88, 및 90 위치와 같은 순서대로 상응한다.

따라서, 동등하게 어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 IGKC 도메인이며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 3, 5, 7, 12, 13, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 85.1, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

따라서, 동등하게 어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인이며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 3, 5, 7, 11, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

따라서, 동등하게 어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH1 도메인이며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 3, 5, 7, 12, 13, 18, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

따라서, 동등하게 어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH4 도메인이며, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 3, 5, 7, 12, 13, 18, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 131, 137, 160, 176, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 124, 126, 128, 141, 143, 147, 170, 173, 175, 181, 185, 및 187으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 178 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 T178W를 포함 또는 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 131, 137, 160, 176, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 181 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S181A를 포함 또는 S181A 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 124, 126, 128, 141, 143, 147, 170, 173, 175, 185, 및 187으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S131K, N137T, Q160Y, S176V, T178W, 및 T180N으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 또는 S131K, N137T, Q160Y, S176V, T178W, 및 T180N 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S124E, F126A, L128F, A141T, G143V, K147T, F170D, V173L, Q175E, S181A, V185R로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 S124E, F126A, L128F, A141T, G143V, K147T, F170D, V173L, Q175E, S181A, V185R 및 T187R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114, 116, 131, 137, 162, 165, 167, 174, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 141, 143, 147, 168, 183, 185 및 187으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 174 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S174A를 포함 또는 S174A 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 114, 116, 131, 137, 162, 165, 167, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 185 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 V185W를 포함 또는 V185W 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 141, 143, 147, 168, 183, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S114E, F116A, S131T, N137T, S162D, E165L, D167E, S174A, T178R, 및 T180R으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 또는 S114E, F116A, S131T, N137T, S162D, E165L, D167E, S174A, T178R, 및 T180R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 A141K, G143V, K147T, H168Y, S183V, V185W, 및 T187N로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 A141K, G143V, K147T, H168Y, S183V, V185W, 및 T187N 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114, 116, 131, 133, 137, 138, 162, 164, 174, 176, 178 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 128 , 141, 143, 148, 168, 170, 175, 181, 183, 185, 및 187으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 178 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 T178W를 포함 또는 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 114,116, 131, 133, 137, 138, 162, 164, 174, 및 176으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 183 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S183V를 포함 또는 S183V 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 128, 141, 143, 148, 168, 170, 175, 181, 185, 및 187으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S114K, F116T, S131T, V133L, N137E, N138K, S162G, T164M, S174M, S176F, 및 T178W으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 또는 S114K, F116T, S131T, V133L, N137E, N138K, S162G, T164M, S174M, S176F, 및 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 L128M , A141N, G143A, D148E, H168F, F170A, Q175S, S181N, S183V, V185L, 및 T187K로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 L128M , A141N, G143A, D148E, H168F, F170A, Q175S, S181N, S183V, V185L, 및 T187K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 118, 131, 133, 138, 160, 162, 167, 174, 176, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 124, 126, 141, 143, 147, 148, 170, 173, 181, 183 및 185로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 176 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S176V를 포함 또는 S176V 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 118, 131, 133, 138, 160, 162, 167, 174, 178, 180으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 185 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 V185W를 포함 또는 V185W 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 124, 126, 141, 143, 147, 148, 170, 173, 181, 및 183으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 F118M, S131N, V133A, N138E, Q160F, S162A, D167S, S174N, S176V, T178L, 및 T180K으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 또는 F118M, S131N, V133A, N138E, Q160F, S162A, D167S, S174N, S176V, T178L, 및 T180K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S124K, F126T, A141T, G143L, K147E, D148K, F170G, V173M, S181M, S183F, 및 V185W로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 S124K, F126T, A141T, G143L, K147E, D148K, F170G, V173M, S181M, S183F, 및 V185W 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114, 116, 118, 123, 124, 133, 137, 160, 162, 164, 174, 176, 및 178로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 124, 126, 133, 134, 139, 141, 143, 168, 170, 175, 181, 183, 및 185로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 176 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S176Y를 포함 또는 S176Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 114, 116, 118, 123, 124, 133, 137, 160, 162, 164, 174, 및 178로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 183 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S183Y를 포함 또는 S183Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 124, 126, 133, 134, 139, 141, 143, 168, 170, 175, 181, 및 185로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S114Q, F116Y, F118L, E123D, Q124E, V133T, N137K, Q160K, S162T, T164V, S174F, S176Y, 및 T178K으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 또는 S114Q, F116Y, F118L, E123D, Q124E, V133T, N137K, Q160K, S162T, T164V, S174F, S176Y, 및 T178K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, S183Y, 및 V185K로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, S183Y, 및 V185K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이며, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 V185W 및 S183V를 포함 또는 V185W 및 S183V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함, 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S174A를 포함 또는 S174A 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및/또는 S114E, F116A, F118F, S131T, N137T, S162D, E165L, D167E, T178R, T180R로 구성된 군으로부터 선택 또는 S114E, F116A, F118F, S131T, N137T, S162D, E165L, D167E, T178R, T180R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S176F 및/또는 T178W를 포함 또는 S176F 및/또는 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함, 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 H168H 및/또는 F170A를 포함 또는 S168F 및/또는 F170A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 T178W를 포함 또는 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함, 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 L128M을 포함 또는 L128M 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 T178W를 포함 또는 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함, 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 F170A를 포함 또는 F170A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이며, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S183Y 또는 S183Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, 및 V185K로 구성된 군으로부터 선택 또는 S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, 및 V185K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S174F 및/또는 S176Y를 포함 또는 S174F 및/또는 S176Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이며, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S183Y 또는 S183Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, 및 V185K로 구성된 군으로부터 선택 또는 S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, 및 V185K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S162T 또는 S162T 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 S114Q, F116Y, F118L, E123D, Q124E, V133T, N137K, Q160K, T164V, S174F, S176Y, 및 T178K로 구성된 군으로부터 선택 또는 S114Q, F116Y, F118L, E123D, Q124E, V133T, N137K, Q160K, T164V, S174F, S176Y, 및 T178K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114, 116, 118, 123, 124, 131, 133, 137, 138, 160, 162, 164, 165, 167, 174, 176, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S114E, S114K, S114Q, F116A, F116T, F116Y, F118M, F118L, E123D, Q124E, S131K, S131T, S131N, V133L, V133A, V133T, N137T, N137E, N137K, N138K, N138E, Q160Y, Q160F, Q160K, S162A, S162G, S162D, S162T, T164V, T164M, E165L, D167E, D167S, S174A, S174M, S174N, S174F, S176V, S176F, S176Y, T178W, T178R, T178L, T178K, T180N, T180R, 및 T180K으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 또는 S114E, S114K, S114Q, F116A, F116T, F116Y, F118M, F118L, E123D, Q124E, S131K, S131T, S131N, V133L, V133A, V133T, N137T, N137E, N137K, N138K, N138E, Q160Y, Q160F, Q160K, S162A, S162G, S162D, S162T, T164V, T164M, E165L, D167E, D167S, S174A, S174M, S174N, S174F, S176V, S176F, S176Y, T178W, T178R, T178L, T178K, T180N, T180R, 및 T180K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 124, 126, 128, 133, 134, 139, 141, 143, 147, 148, 168, 170, 173, 175, 181, 183, 185, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S124E, S124K, S124Q, F126A, F126T, F126Y, L128F, L128M, K133D, S134E, T139Q, A141K, A141T, A141N, A141S, G143V, G143A, G143L, G143T, K147T, K147E, D148E, D148K, H168Y, H168F, H168K, F170D, F170A, F170G, F170T, V173L, V173M, Q175E, Q175S, Q175D, S181A, S181N, S181M, S181F, S183V, S183F, S183Y, V185W, V185R, V185L, V185K, T187N, T187K 및 T187R으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 또는 S124E, S124K, S124Q, F126A, F126T, F126Y, L128F, L128M, K133D, S134E, T139Q, A141K, A141T, A141N, A141S, G143V, G143A, G143L, G143T, K147T, K147E, D148E, D148K, H168Y, H168F, H168K, F170D, F170A, F170G, F170T, V173L, V173M, Q175E, Q175S, Q175D, S181A, S181N, S181M, S181F, S183V, S183F, S183Y, V185W, V185R, V185L, V185K, T187N, T187K 및 T187R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 131, 137, 160, 176, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 124, 126, 128, 141, 143, 147, 170, 173, 175, 181, 185, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 178 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 T178W를 포함 또는 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 131, 137, 160, 176, 180으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 181 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S181A를 포함 또는 S181A 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 124, 126, 128, 141, 143, 147, 170, 173, 175, 185, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에 있어서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S131K, N137T, Q160Y, S176V, T178W, T180N으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 S131K, N137T, Q160Y, S176V, T178W, T180N 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S124E, F126A, L128F, A141T, G143V, K147T, F170D, V173L, Q175E, S181A, V185R, 및 T187R로 구성된 군으로부터 선택 또는 S124E, F126A, L128F, A141T, G143V, K147T, F170D, V173L, Q175E, S181A, V185R, 및 T187R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114, 116, 131, 137, 162, 165, 167, 174, 176, 178, 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 141, 143, 147, 168, 183, 185 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 174 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 174A를 포함 또는 174A 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 114, 116, 131, 137, 162, 165, 167, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 185 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 V185W를 포함 또는 V185W 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 141, 143, 147, 168, 183, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에 있어서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S114E, F116A, S131T, N137T, S162D, E165L, D167E, S174A, T178R, T180R으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 S114E, F116A, S131T, N137T, S162D, E165L, D167E, S174A, T178R, T180R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 A141K, G143V, K147T, H168Y, S183V, V185W, 및 T187N으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 A141K, G143V, K147T, H168Y, S183V, V185W, 및 T187N 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114, 116, 131, 133, 137, 138, 162, 164, 174, 176, 및 178으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 128, 141, 143, 148, 168, 170, 175, 181, 183, 185, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 178 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 T178W를 포함 또는 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 114,116, 131, 133, 137, 138, 162, 164, 174, 및 176으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 183 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S183V를 포함 또는 S183V 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 128, 141, 143, 148, 168, 170, 175, 181, 185, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에 있어서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S114K, F116T, S131T, V133L, N137E, N138K, S162G, T164M, S174M, S176F, 및 T178W으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 S114K, F116T, S131T, V133L, N137E, N138K, S162G, T164M, S174M, S176F, 및 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 L128M , A141N, G143A, D148E, H168F, F170A, Q175S, S181N, S183V, V185L, 및 T187K으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 L128M , A141N, G143A, D148E, H168F, F170A, Q175S, S181N, S183V, V185L, 및 T187K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 118, 131, 133, 138, 160, 162, 167, 174, 176, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 124, 126, 141, 143, 147, 148, 170, 173, 181, 183 및 185로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 176 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S176V를 포함 또는 S176V 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 118, 131, 133, 138, 160, 162, 167, 174, 178, 180으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 185 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 V185W를 포함 또는 V185W 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 124, 126, 141, 143, 147, 148, 170, 173, 181, 및 183로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에 있어서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 F118M, S131N, V133A, N138E, Q160F, S162A, D167S, S174N, S176V, 및 T178L으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 F118M, S131N, V133A, N138E, Q160F, S162A, D167S, S174N, S176V, 및 T178L 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 T180K로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S124K, F126T, A141T, G143L, K147E, D148K, F170G, V173M, S181M, S183F, 및 V185W으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 S124K, F126T, A141T, G143L, K147E, D148K, F170G, V173M, S181M, S183F, 및 V185W 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114, 116, 118, 123, 124, 133, 137, 160, 162, 164, 174, 176, 및 178로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 124, 126, 133, 134, 139, 141, 143, 168, 170, 175, 181, 183, 및 185로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 176 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S176Y를 포함 또는 S176Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 114, 116, 118, 123, 124, 133, 137, 160, 162, 164, 174, 및 178로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 183 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S183Y를 포함 또는 S183Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 124, 126, 133, 134, 139, 141, 143, 168, 170, 175, 181, 및 185로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에 있어서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S114Q, F116Y, F118L, E123D, Q124E, V133T, N137K, Q160K, S162T, T164V, S174F, S176Y, 및 T178K로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 S114Q, F116Y, F118L, E123D, Q124E, V133T, N137K, Q160K, S162T, T164V, S174F, S176Y, 및 T178K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택, 및/또는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, S183Y, 및 V185K로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함 또는 S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, S183Y, 및 V185K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이며, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 V185W 및 S183V를 포함 또는 V185W 및 S183V 및 이의 보존적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S174A 또는 S174A 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및/또는 S114E, F116A, S131T, N137T, S162D, E165L, D167E, T178R, T180R로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함 또는 S114E, F116A, S131T, N137T, S162D, E165L, D167E, T178R, T180R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S176F 및/또는 T178W를 포함 또는 S176F 및/또는 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 H168F 및/또는 F170A를 포함 또는 H168F 및/또는 F170A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 T178W를 포함 또는 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 L128M을 포함 또는 L128M 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이고, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이며, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 T178W를 포함 또는 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 F170A를 포함 또는 F170A 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이며, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S183Y를 포함 또는 S183Y 및 이의 보존적인 아미노산 잔기 및 S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, 및 V185K로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산을 포함 또는 S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, 및 V185K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택, 및/또는 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S174F 및/또는 S176Y를 포함 또는 S174F 및/또는 S176Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하며, 상기 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인이 CH1 도메인이고, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인이 IGKC 도메인이며, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S183Y를 포함 또는 S183Y 및 이의 보존적인 아미노산 잔기 및 S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, 및 V185K로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산을 포함 또는 S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, 및 V185K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택, 및/또는 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S162T를 포함 또는 S162T 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 S114Q, F116Y, F118L, E123D, Q124E, V133T, N137K, Q160K, T164V, S174F, S176Y, 및 T178K로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산을 포함, 또는 S114Q, F116Y, F118L, E123D, Q124E, V133T, N137K, Q160K, T164V, S174F, S176Y, 및 T178K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH3 도메인이며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치의 아미노산 잔기 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며,

여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 85.1 및/또는 86 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

부모 도메인으로서 CH3 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서, IMGT^® 번호에 따른 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90 위치는 EU 번호로 나타내어지는 347, 349, 351, 364, 366, 370, 371, 392, 394, 397, 399, 405, 407, 409 및 411 위치와 같은 순서대로 상응한다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 다른 이소타입의 CH3 도메인이다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG1 CH3 도메인, 바람직하게는 IGHG1으로부터의 인간 CH3 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG3 CH3 도메인, 바람직하게는 IGHG3로부터의 인간 CH3 도메인이며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG3 CH3 도메인, 바람직하게는 IGHG3로부터의 인간 CH3 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG1 CH3 도메인, 바람직하게는 IGHG1으로부터의 인간 CH3 도메인이다.

어떤 실시예에서, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단ㅂ낵질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및 86 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니며, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 88I가 아니고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 85.1 및/또는 86 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 아미노산이 아니고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 85.1 및/또는 86 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 88W 또는 88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, CH3 도메인은 인간 IgG1(IGHG1), 인간 IgG2(IGHG2), 인간 IgG3(IGHG3) 및 인간 IgGP(IGHGP)로 구성된 군으로부터 선택된 도메인이고, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 K88W 또는 K88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기이며, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, CH3 도메인은 인간 IgA1(IGHA1), 인간 IgA2(IGHA2) CH3 도메인이고, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 I88W 또는 I88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기이며, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, CH3 도메인은 인간 IgD(IGHD) CH3 도메인이고, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 V88W 또는 V88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기이며, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, CH3 도메인은 인간 IgE CH3(IGHE) 도메인이고, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 T88W 또는 T88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기이며, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, CH3 도메인은 인간 IgG4(IGHG4) CH3 도메인이고, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 R88W 또는 R88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기이며, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, CH3 도메인은 인간 IgM(IGHM) CH3 도메인이고, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 E88W 또는 E88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기이며, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88I, 88T, 88Y, 88K 및 88W로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 20E, 20S, 20K, 20W, 22A, 22G, 22T, 22L, 22I, 22V, 26R, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 85.1W, 86S, 86I, 86T, 86H, 86Q, 86V, 86W, 86Y 및 86F로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88I, 88T, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 20E, 20S, 22A, 22G, 22T, 22L, 22I, 22V, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86T, 86H, 86Q, 86V, 및 86F로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 20E, 20S, 20K, 22A, 22G, 22T, 22L, 22I, 22V, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86T, 86H, 86Q, 86V, 및 86F로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88T, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20V, 20A, 20N, 20Q, 20E, 20S, 22A, 22G, 22T, 22L, 22I, 22V, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86H, 86Q, 86V, 및 86F로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3E, 3K, 5A, 5T, 7F, 7M, 20K, 20N, 20T, 22A, 22L, 22V, 26E, 26T, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 84L, 84M, 84.2E, 84.2S, 85.1A, 85.1C, 85.1M, 85.1N, 85.1S, 86F, 86S, 86V, 90K, 90N, 및 90R로 구성된 군으로부터 선택 또는 3E, 3K, 5A, 5T, 7F, 7M, 20K, 20N, 20T, 22A, 22L, 22V, 26E, 26T, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 84L, 84M, 84.2E, 84.2S, 85.1A, 85.1C, 85.1M, 85.1N, 85.1S, 86F, 86S, 86V, 90K, 90N, 및 90R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인으로서 CH3 도메인에 관하여, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88I 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 선택적으로 추가적인 아미노산 잔기는 81W 및 이의 보존적인 아미노산 치환이며, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인으로서 CH3 도메인에 관하여, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88I 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 선택적으로 추가적인 아미노산 잔기는 81W 및 이의 보존적인 아미노산 치환이며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 선택적으로 추가적인 아미노산 잔기는 86T 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및/또는 84R 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88 위치 및 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기로 구성되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치 및 26 위치의 아미노산 잔기 및 선택적으로 추가적인 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 85.1 및/또는 86 위치에 치환된 아미노산 잔기는 85.1A, 85.1S, 85.1C 및 85.1N으로 구성된 군으로부터 선택, 또는 85.1A, 85.1S, 85.1C 및 85.1N 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 86S 및 86V로 구성된 군으로부터 선택 또는 86S 및 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84, 84.2, 85.1, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84, 84.2, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20, 22, 26, 79, 85.1, 86, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 84 위치이고, 또는 84L이며, 또는 84L 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84.2, 85.1, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84.2, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20K, 22V, 26T, 79Y, 85.1S, 86V, 및 90N으로 구성된 군으로부터 선택 또는 20K, 22V, 26T, 79Y, 85.1S, 86V, 및 90N 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 85.1C 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터, 바람직하게는 3E, 5A, 7F, 20T, 22V, 26T, 81D, 84L, 84.2E, 88R 및 90R로 구성된 군으로부터 또는 3E, 5A, 7F, 20T, 22V, 26T, 81D, 84L, 84.2E, 88R 및 90R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 85.1C 아미노산 잔기 치환은 85.1A 또는 85.1S 아미노산 잔기 치환으로 교체되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3, 5, 20, 22, 26, 27, 81, 84, 85.1, 및 86으로 구성된 군으로부터 선택된 위치, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 7, 20, 22, 27, 79, 81, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 7, 20, 22, 27, 79, 81, 84.2, 85.1, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치, 또는 7, 20, 22, 27, 79, 81, 84.2, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3K, 5T, 20T, 22L, 26E, 27K, 81G, 84M, 85.1M, 86F로 구성된 군으로부터 선택 또는 3K, 5T, 20T, 22L, 26E, 27K, 81G, 84M, 85.1M, 86F 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택, 및/또는

두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 79 위치이고 또는 79F 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 7, 20, 22, 27, 81, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 7, 20, 22, 27, 81, 84.2, 85.1, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 7, 20, 22, 27, 81, 84.2, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기이며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3K, 5T, 20T, 22L, 26E, 27K, 81G, 84M, 85.1M, 86F으로 구성된 군으로부터 선택 또는 3K, 5T, 20T, 22L, 26E, 27K, 81G, 84M, 85.1M, 86F 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및 86 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 85.1N 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 7M, 20N, 22A, 27E, 79F, 81A, 84.2S, 88L, 및 90K로 구성된 군으로부터 선택 또는 7M, 20N, 22A, 27E, 79F, 81A, 84.2S, 85.1N, 86V, 88L, 및 90K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH3 도메인이며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치의 아미노산 잔기 및 3, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 위치를 포함하며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 26 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기, 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 및 86 위치 및 3, 5, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 및 22 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기, 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치 및 3, 5, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 및 22 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기, 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 및 86 위치 및 선택적으로 3, 5, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20N 및 20T, 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 26T 및 26E, 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 22 위치에 치환된 아미노산 잔기는 22A 및 22V, 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 86 위치에 치환된 아미노산 잔기는 86V 및 86F, 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 20K, 20S, 20W 및 20E으로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 22A, 22G, 22L, 22I, 22V, 22T, 26K, 26R, 26Q, 26T, 26V, 26S, 26N, 26E, 85.1W, 85.1F, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1C, 85.1N, 86W, 86Y, 86S, 86I, 86H, 86Q, 86V, 86T, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88T, 88I, 88Y, 88K 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 및 20E으로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 22A, 22G, 22L, 22I, 22V, 26Q, 26T, 26V, 26S, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86T, 86H, 86Q, 86V, 86T, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88T, 88I, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 20K, 20S 및 20E으로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 22A, 22G, 22L, 22I, 22V, 26K, 26Q, 26T, 26V, 26S, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86H, 86Q, 86V, 86T, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88T, 88I, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치 및 22 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 20K, 20S, 20W 및 20E 및 22A, 22G, 22L, 22I, 22V, 22T으로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 26K, 26R, 26Q, 26T, 26V, 26S, 26N, 26E, 85.1W, 85.1F, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1C, 85.1N, 86W, 86Y, 86S, 86I, 86H, 86Q, 86V, 86T, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88T, 88I, 88Y, 88K 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3E, 3K, 5A, 5T, 7F, 7M, 22A, 22L, 22V, 26E, 26T, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 84L, 84M, 84.2E, 84.2S, 85.1A, 85.1C, 85.1M, 85.1N, 85.1S, 86F, 86S, 86V, 88L, 88R, 88W, 90K, 90N, 및 90R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3E, 3K, 5A, 5T, 7F, 7M, 26E, 26T, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 84L, 84M, 84.2E, 84.2S, 85.1A, 85.1C, 85.1M, 85.1N, 85.1S, 86F, 86S, 86V, 88L, 88R, 88W, 90K, 90N, 및 90R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 26K, 26R, 26Q, 26T, 26V, 26S, 26N, 26E으로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 22A, 22G, 22L, 22I, 22V, 22T, 85.1W, 85.1F, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1C, 85.1N, 86W, 86Y, 86S, 86I, 86H, 86Q, 86V, 86T, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88T, 88I, 88Y, 88K 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 26 위치 및 86 위치에 치환된 아미노산 잔기는 26K, 26R, 26Q, 26T, 26V, 26S, 26N, 26E 및 86W, 86Y, 86S, 86I, 86H, 86Q, 86V, 86T, 86F으로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 22A, 22G, 22L, 22I, 22V, 22T, 85.1W, 85.1F, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1C, 85.1N, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88T, 88I, 88Y, 88K 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 26 위치 및 86 위치에 치환된 아미노산 잔기는 3E, 3K, 22A, 22L, 22V, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 84L, 84M, 85.1A, 85.1C, 85.1M, 85.1N, 85.1S, 86F, 86S, 86V, 88L, 88R, 및 88W, 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인이며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및 86 위치의 아미노산 잔기 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 85.1 및/또는 86 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

부모 도메인으로서 CH2 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서, IMGT^® 번호에 따른 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86 및 90 위치는 EU 번호로 나타내어지는 239, 241, 243, 258, 260, 264, 265, 288, 290, 292, 293, 295, 296, 301, 303, 305, 307 위치와 같은 순서대로 상응한다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인이다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 다른 이소타입의 CH2 도메인이다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG1 CH2 도메인, 바람직하게는 IGHG1으로부터의 인간 CH2 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG3 CH2 도메인, 바람직하게는 IGHG3로부터의 인간 CH2 도메인이며, 또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG3 CH2 도메인, 바람직하게는 IGHG3로부터의 인간 CH2 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG1 CH2 도메인, 바람직하게는 IGHG1으로부터의 인간 CH2 도메인이다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 88W 또는 88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 85.1 및/또는 86 위치에 치환된 아미노산 잔기는 85.1A 및 85.1N으로 구성된 군으로부터 선택 또는 85.1A 및 85.1N 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및/또는 86S 또는 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 88Q, 88L, 88V, 88R, 88I, 88T, 88K, 88E, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20K, 20W, 20S, 20E, 20Q, 22A, 22G, 22T, 22L, 22V, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26R, 26N, 26E, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1W, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86H, 86T, 86W, 86Y, 86V, 86Q 및 86F로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 88Q, 88L, 88V, 88R, 88I, 88T, 88K, 88E, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20K, 20W, 20S, 22A, 22G, 22T, 22L, 22V, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26R, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1W, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86H, 86T, 86W, 86Y, 86V, 및 86F로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 추가적으로 치환된 아미노산 잔기는 3E, 3K, 5A, 5T, 5Y, 7M, 7L, 20K, 20N, 20T, 20S, 22A, 22L, 22V, 26E, 26T, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 83M, 83T, 84L, 84.2E, 84.2S, 84.3D, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86F, 86Y, 90K, 90N, 및 90R로 구성된 군으로부터 선택 또는 3E, 3K, 5A, 5T, 5Y, 7M, 7L, 20K, 20N, 20T, 20S, 22A, 22L, 22V, 26E, 26T, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 83M, 83T, 84L, 84.2E, 84.2S, 84.3D, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86F, 86Y, 90K, 90N, 및 90R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에 있어서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88 위치 및 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에 있어서, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 또는 86 위치 및 26 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 추가적인 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20, 22, 26, 79, 85.1, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 84 위치이고 또는 84L이며 또는 84L 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84.2, 85.1, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84.2, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20K, 22V, 26T, 79Y, 85.1S, 및 90N으로 구성된 군으로부터 선택 또는 20K, 22V, 26T, 79Y, 85.1S, 및 90N 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 85.1 위치에 치환된 아미노산 잔기는 85.1C이며 또는 85.1C 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 86 위치에 치환된 아미노산 잔기는 86S이고, 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환이며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3, 5, 20, 22, 26, 81, 84, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군, 바람직하게는 3E, 5A, 20T, 22V, 26T, 81D, 84L, 84.2E, 88R 및 90R로 구성된 군 또는 3E, 5A, 20T, 22V, 26T, 81D, 84L, 84.2E, 88R 및 90R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 85.1C 아미노산 잔기 치환은 85.1A 또는 85.1S 아미노산 잔기 치환에 의해서 교체되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3, 5, 20, 22, 26, 27, 81, 83, 85.1, 및 86으로 구성된 군으로부터 선택된 위치, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 7, 20, 22, 27, 79, 81, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 7, 20, 22, 27, 79, 81, 84.2, 85.1, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 7, 20, 22, 27, 79, 81, 84.2, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치이며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3K, 5T, 20T, 22L, 26E, 27K, 81G, 83M, 85.1M, 및 86F으로 구성된 군으로부터 선택 또는 3K, 5T, 20T, 22L, 26E, 27K, 81G, 83M, 85.1M, 및 86F 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택, 및/또는

두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 79 위치이고, 또는 79F이며, 또는 79F 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 7, 20, 22, 27, 81, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 7, 20, 22, 27, 81, 84.2, 85.1, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 7, 20, 22, 27, 81, 84.2, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기이며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3K, 5T, 20T, 22L, 26E, 27K, 81G, 83M, 85.1M, 및 86F로 구성된 군으로부터 선택 또는 3K, 5T, 20T, 22L, 26E, 27K, 81G, 83M, 85.1M, 및 86F 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 85.1 위치에 치환된 아미노산 잔기는 85.1N 이고 또는 85.1N 또는 이의 보존적인 아미노산 치환이며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 22 위치에 치환된 아미노산 잔기는 22A이고, 또는 22A 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 7M, 20N, 27E, 79F, 81A, 84.2S, 88L, 및 90K로 구성된 군으로부터 선택 또는 7M, 20N, 27E, 79F, 81A, 84.2S, 88L, 및 90K 및 이의 보존적인 아미노산 치환이며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 5, 7, 20, 83, 84.3, 85.1, 및 86으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 5, 7, 20, 83, 84.3, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 5, 7, 20, 83, 84.3, 85.1, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치, 또는 5, 7, 20, 83, 84.3, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 5Y, 7L, 20S, 83T, 84.3D, 85.1F, 및 86Y로부터 구성된 군으로부터 선택 또는 5Y, 7L, 20S, 83T, 84.3D, 85.1F, 및 86Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 이루어진 군으로부터 선택, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산은 20 위치이고, 20S이며, 20S 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 5, 7, 83, 84.3, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 5, 7, 83, 84.3, 85.1 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 5, 7, 83, 84.3, 86 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 5Y, 7L, 20S, 83T, 84.3D, 85.1F 및 86Y로부터 구성된 군으로부터 선택 또는 5Y, 7L, 20S, 83T, 84.3D, 85.1F 및 86Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 이루어진 군으로부터 선택, 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산은 85.1 위치이고, 85.1F이며, 85.1F 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20 위치이고, 20S이며, 20S 및 이의 보존적인 아미노산 치환이며, 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 5Y, 7L, 83T, 84.3D, 86Y, 및 88K로 구성된 군으로부터 선택 또는 5Y, 7L, 83T, 84.3D, 86Y, 및 88K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인이며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치의 아미노산 잔기 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 26 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인이며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치의 아미노산 잔기 및 3, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 위치를 포함하며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 26 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 및 86 위치 및 선택적으로 3, 5, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 및 22 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치 및 3, 5, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 및 22 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 및 86 위치 및 선택적으로 3, 5, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 위치의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20K, 20Q, 20E, 20W 및 20S로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 22A, 22G, 22T, 22L, 22V, 22I, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26R, 26N, 26E, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1W, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86Q, 86S, 86I, 86H, 86T, 86W, 86Y, 86V, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88I, 88T, 88K, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20K, 20W 및 20S로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 22A, 22G, 22T, 22L, 22V, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26R, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1W, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86H, 86T, 86W, 86Y, 86V, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88I, 88T, 88K, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3E, 3K, 5A, 5T, 5Y, 7M, 7L, 22A, 22L, 22V, 26E, 26T, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 83M, 83T, 84L, 84.2E, 84.2S, 84.3D, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86F, 86Y, 88K, 88L, 88R, 88W, 90K, 90N, 및 90R로 구성된 군으로부터 선택 또는 3E, 3K, 5A, 5T, 5Y, 7M, 7L, 22A, 22L, 22V, 26E, 26T, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 83M, 83T, 84L, 84.2E, 84.2S, 84.3D, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86F, 86Y, 88K, 88L, 88R, 88W, 90K, 90N, 및 90R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 제공한다:

여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린의 조작된 도메인은 동일하지 않고,

여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH4 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함, 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86, 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다. 어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 자연적으로 발생항 CH4 도메인이다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 88 위치의 아미노산 잔기는 88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 바람직하게는 적어도 둘, 더욱 바람직하게는 적어도 셋, 가장 바람직하게는 적어도 넷, 구체적으로 적어도 다섯 아미노산 잔기, 더욱 바람직하게는 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기가 치환된다. 동일하게, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 바람직하게 둘, 더욱 바람직하게 셋, 가장 바람직하게 넷, 구체적으로 다섯 아미노산 잔기, 더욱 구체적으로 여섯, 더욱 구체적으로 일곱 아미노산 잔기가 치환된다. 동일하게, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 바람직하게 둘보다 적은, 더욱 바람직하게 셋보다 적은, 가장 바람직하게 넷보다 적은, 구체적으로 다섯보다 적은 아미노산 잔기, 더욱 구체적으로 여섯보다 적은, 더욱 구체적으로 일곱보다 적은 아미노산 잔기가 치환된다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한, 바람직하게 적어도 둘, 보다 바람직하게 적어도 셋, 가장 바람직하게 적어도 넷, 구체적으로 적어도 다섯 아미노산 잔기, 더욱 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 다르다.

어떤 실시예에서, 상기 치환된 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기는 인접하지 않다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 상기 치환된 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 둘, 더욱 바람직하게 적어도 셋, 가장 바람직하게 적어도 넷, 구체적으로 적어도 다섯 아미노산 잔기는 인접하지 않다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 아미노산 서열은 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 아미노산 서열과 비교하여 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기의 도입을 함유하지 않는다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 아미노산 서열은 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 서열과 비교하여 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기의 도입을 함유하지 않는다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 아미노산 서열은 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 아미노산 서열과 비교하여 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기의 도입을 합유하지 않는다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 추가적으로 조작된 도메인을 포함하고, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환, 및

여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 헤테로-이량체화 또는 호모-이량체화에 의해 상호작용한다.

여기서, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환, 및

여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성, 및

여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인과 다르다.

바람직하게는, 첫번재 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 동일하지 않다.

상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 바람직하게는 적어도 둘, 더욱 바람직하게는 적어도 셋, 가장 바람직하게는 적어도 넷, 구체적으로 적어도 다섯 아미노산 잔기, 더욱 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기는 치환된다. 동일하게, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 바람직하게 둘, 더욱 바람직하게 셋, 가장 바람직하게 넷, 구체적으로 다섯 아미노산 잔기, 더욱 구체적으로 여섯, 더욱 구체적으로 일곱 아미노산 잔기가 치환된다. 동일하게, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및/또는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 바람직하게 둘보다 적은, 더욱 바람직하게 셋보다 적은, 가장 바람직하게 넷보다 적은, 구체적으로 다섯보다 적은 아미노산 잔기, 더욱 구체적으로 여섯보다 적은, 더욱 구체적으로 일곱보다 적은 아미노산 잔기가 치환된다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한, 바람직하게 적어도 둘, 보다 바람직하게 적어도 셋, 가장 바람직하게 적어도 넷, 구체적으로 적어도 다섯 아미노산 잔기, 더욱 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 다르다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 치환된 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기는 인접하지 않다. 어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 치환된 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 둘, 더욱 바람직하게 적어도 셋, 가장 바람직하게 적어도 넷, 구체적으로 적어도 다섯 아미노산 잔기는 인접하지 않는다.

어떤 실시예에서, 세번째 조작된 면역글로불린 쇄는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 추가적으로 조작된 도메인을 포함하고, 여기서 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 다섯번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환, 및

여기서, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 네번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 헤테로-이량체화 또는 호모-이량체화에 의해 상호작용한다.

여기서, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 여섯번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환, 및

여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 다섯번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 여섯번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성, 및

여기서, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 네번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 다르다.

상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 네번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 CH1, CH2, CH3, CH4, IGKC, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인 및/또는 치환된 네번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기는, 예를 들어 상기 언급한 바와 같이 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기의 군으로부터 선택된다.

상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 다섯번째 및/또는 여섯번째 구성원의 기부 도메인은, 예를 들어 상기 언급한 바와 같이 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및/또는 두번째 구성원의 기부 도메인의 군으로부터 선택된다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 14, 서열번호 15 및 서열번호 16, 바람직하게는 서열번호 14 또는 서열번호 15를 포함하는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함한다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함한다.

따라서, 또 다른 측면에서 본 발명은 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 K24, V26, T30, Y52, S65, V67, W69, 및 N71로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 13의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다. 어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 E7, A9, F11, T24, V26, T30, D54, L57, E59, A65, S67, R69, 및 R71로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 14의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 E7, A9, F11, T24, V26, T30, D54, L57, E59, C65, S67, R69, 및 R71로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 15의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 헤테로-이량체화에 의하여 상호작용한다.

어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 16의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 16의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 E7, A9, F11, T24, V26, T30, D54, L57, E59, S65, S67, R69, 및 R71로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 16의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하고, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함 및 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 헤테로-이량체화에 의하여 상호작용한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 S144K, T146V, K150T, K172Y, F185S, Y187V, K189W, 및 T191N로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 3의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

또 다른 측면에서, 본 공개는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 헤테로-이량체화에 의해 상호작용한다.

어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 4의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 4의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 Q127E, Y129A, L131F, S144T, T146V, K150T, T174D, V177L, D179E, F185C, Y187S, K189R, 및 T191R로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱 또는 여덟 또는 아홉 또는 열, 또는 열하나 또는 열둘, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 4의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함한다.

또 다른 어떤 측면에서, 본 발명은 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 35의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 35의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 K127, T129, T144, L146, E150, K151, G174, M177, M185, F187, 및 W189로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 35의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

또 다른 어떤 측면에서, 본 발명은 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 34의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 34의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 M131, N144, A146, E151, F172, A174, S179, N185, V187, L189, 및 K191로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 34의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함한다.

또 다른 어떤 측면에서, 본 발명은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 40의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 40의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 K7, T9, T24, L26, E30, K31, G55, M57, M67, F69, 및 W71로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 40의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

또 다른 어떤 측면에서, 본 발명은 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 39의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 39의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 M11, N24, A26, E31, F51, A53, S58, N64, V66, L68, 및 K70으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 39의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함한다.

또 다른 어떤 측면에서, 본 발명은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 48의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 48의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 Q7, Y9, D16, E17, Q22, S24, T26, K51, T53, D58, F64, Y66, 및 K68로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 48의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

또 다른 어떤 측면에서, 본 발명은 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 49의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 49의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 Q7, Y9, L11, D16, E17, T26, K30, K53, T55, V57, F67, Y69, 및 K71로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 49의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 76의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 76의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 76의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 K24, V26, T30, Y52, S65, V67, W69, 및 N71로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 76의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 E7, A9, F11, T24, V26, T30, D54, L57, E59, A65, S67, R69, 및 R71로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 14의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함한다. 또 다른 어떤 측면에서, 본 발명은 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 78의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 78의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 E7, H9, R30, R57, E59, A65, 및 T67로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 78의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

또 다른 어떤 측면에서, 본 발명은 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 T24, L52, W54, I69, 및 R71로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 79의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함한다.

또 다른 어떤 측면에서, 본 발명은 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 84의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 84의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 K26, V28, Y56, S71, V73, W75, 및 N77로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 84의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

또 다른 어떤 측면에서, 본 발명은 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인은 서열번호 85의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게 적어도 90%, 더욱 바람직하게 적어도 95%, 가장 바람직하게 적어도 96%, 구체적으로 적어도 97%, 더욱 구체적으로 적어도 98%, 가장 구체적으로 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 이때 서열번호 85의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 상기 아미노산 서열은 E8, A10, F12, V28, D58, L61, A71, S73, R75, 및 R77로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 적어도 하나, 일반적으로 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱, 가장 구체적으로 모든 아미노산 잔기를 함유하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열목록에 있는 서열번호 85의 아미노산 잔기의 번호를 따라 나타낸다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 3, 4, 6, 7, 13 내지 29, 34, 35, 36, 39, 40, 41, 42, 48, 49, 50, 51, 59, 61, 및 68로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 3, 4, 6, 7, 13 내지 29, 34, 35, 36, 39,, 40, 41, 42, 48, 49, 50, 51, 59, 61, 및 68로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 3, 4, 6, 7, 13-29, 34, 35, 36, 39, 40, 41, 42, 48, 49, 50, 51, 59, 61, 68, 73, 78 및 84로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 3, 4, 6, 7, 13-29, 34, 35, 36, 39, 40, 41, 42, 48, 49, 50, 51, 59, 61, 68, 74, 79 및 85로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 3, 7, 13, 59, 및 68로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 4, 6, 14, 15, 16, 17, 41, 50, 및 61로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 3, 7, 13, 59, 68, 73 및 84로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 4, 6, 14, 15, 16, 17, 41, 50, 61, 74 및 85로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 34, 39, 및 41로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 35, 36, 40, 및 42로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 48, 49, 50, 및 51로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 48, 49, 50, 및 51로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 48로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 49 또는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함한다. 동등하게 바람직하게는, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 50으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 49 또는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 서열번호 3, 7, 13, 59, 및 68로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 서열번호 4, 6, 14, 15, 16, 17, 41, 50, 및 61로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 서열번호 34, 39 및 41로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 서열번호 35, 36, 40, 및 42로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 서열번호 3, 4, 6, 7, 13 내지 29, 34, 35, 36, 39, 40, 41, 42, 48, 49, 50, 51, 59, 61, 68, 73, 78 및 84로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 서열번호 3, 4, 6, 7, 13 내지 29, 34, 35, 36, 39,, 40, 41, 42, 48, 49, 50, 51, 59, 61, 68, 74, 79 및 85로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 서열번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 및 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 서열번호 3, 7, 13, 59, 68로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 서열번호 3, 7, 13, 59, 68로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄, 및/또는 서열번호 71의 아미노산 서열을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 상호작용하는, 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 72의 아미노산 서열을 포함하고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 상호작용하는 조작된 도메인과 함께 세번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 상호작용하는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄는 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 Fc 부위를 포함한다. 어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 쇄 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 및/또는 두번째 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄는 Fc 부위를 포함한다. 일반적으로, 상기 Fc 부위는 IgA, IgE, IgD, IgG, 및 IgM Fc 부위로 구성된 군으로부터 선택된다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 같은 종으로부터, 바람직하게는 같은 종 및 이소타입으로부터, 더욱 바람직하게는 같은 종, 이소타입 및 하위 종류로부터의 Fc 부위를 포함한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 및/또는 두번째 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄는 같은 종으로부터, 바람직하게는 같은 종 및 이소타입으로부터, 더욱 바람직하게는 같은 종, 이소타입 및 하위 종류로부터의 Fc 부위를 포함한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 Fc 부위는 동일하지 않다. 어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로=이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 Fc 부위는 한 아미노산에 의해 또는 두 아미노산에 의해 또는 세 아미노산에 의해 또는 네 아미노산에 의해 또는 다섯 아미노산에 의해 또는 다섯 내지 열 아미노산에 의해 또는 열 내지 삼십 아미노산에 의해, 바람직하게는 적어도 두 아미노산에 의해 또는 적어도 세 아미노산에 의해 또는 적어도 네 아미노산에 의해 또는 적어도 다섯 아미노산에 의해 또는 적어도 다섯 내지 열 아미노산에 의해 또는 적어도 열 내지 삼십 아미노산에 의해 각각 다른 아미노산 서열을 갖는다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 이중특이성인 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편은 전장의 항체이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편은 이중특이성인 전장의 항체이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 이중특이성 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편 또는 이중특이성 항체는 HER2, EGFR, CD19 및 VLA-2로 구성된 군으로부터 선택된 항원에 결합한다. 바람직하게는 상기 이중특이성 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편 또는 이중특이성 항체는 HER2 및 EGFR에 특이적이다. 동등하게 바람직하게는, 상기 이중특이성 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편 또는 이중특이성 항체는 CD19 및 VLA-2에 특이적이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄와 함께 Fab인 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 F(ab')₂인 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄는 조작된 도메인 및 추가적으로 조작된 도메인을 포함하며, 반면 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질 인터페이스는 세번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인과 상호작용하고, 추가적으로 조작된 도메인의 단백질 인터페이스는 세번째 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인과 상호작용하며, 상기 두 세번째 면역글로불린 쇄의 상기 조작된 도메인의 단백질 인터페이스는 다른 것과 같거나 다르다.

어떤 실시예에 있어서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편을 제공하고, 여기서 적어도 한 추가적인 폴리펩티드는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄와 융합된다. 바람직하게는, 상기 한 추가적인 폴리펩티드는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄와 융합된다. 적절하게, 추가적인 폴리펩티드는 Fab, scFv, 디아바디, 도메인 항체, 약학적인 활성 펩티드(pharmacologically active peptide) 또는 단백질, 수용체 세포 외 도메인, CDR 이식된 폴리펩티드 및 치료상으로 조작된 단백질 스캐폴드(therapeutic engineered protein scaffold)로 구성된 군으로부터 선택된다. 융합(fusion)은 일반적으로 당업자에게 잘 알려진 바와 같이 유전적 조작(genetic engineering)에 의해 달성되고, 융합되기 위한 아미노산 서열의 부분을 형성하지 않는 아미노산 서열 링커(linker)를 포함할 것이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 적어도 첫번째 및 두번째 비동일하게(nonidentical) 조작된 도메인을 포함하는 다중도메인(multidomain) 단백을 제공하고, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 도메인의 각각은 단백질-단백질 인터페이스를 함유하며, 상기 첫번째 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환되고, 상기 두번째 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환되며,

여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 헤테로-이량체 또는 호모-이량체를 형성한다.

상기 다중도메인 단백질은 바람직하게 Fc 부위를 포함한다. 일반적으로 상기 Fc 부위는 IgA, IgE, IgD, IgG, 및 IgM Fc 부위로 구성된 군으로부터 선택된다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편 또는 하기에 설명된 바와 같이 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편의 제조방법을 제공하고, 여기서 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 치환된 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기는 두 도메인의 탄소 알파 추적(carbon alpha traces)에 겹쳐져서(superimposing) 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 덮어씌워졌을 때 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 아미노산 잔기이며, 부모 도메인의 가장 가까운 잔기까지의 거리는 6 Å 이하의 3D 위치에 존재하고, 상기 기부 도메인은 부모 도메인과 다르다.

헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편의 제조 방법

또 다른 측면에서, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 제조하는 방법을 제공한다:

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인이 일치하지 않는다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 헤테로-이량체화 또는 호모-이량체화에 의해 상호작용한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 CH1, CH2, CH3, CH4, IGKC, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택된 첫번째 및/또는 두번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인을 포함하는 방법을 제공한다. CH1, CH3는 IGHA1, IGHA2, IGHD, IGHE, IGHG1, IGHG2, IGHG3, IGHG4, IGHGP 및 IGHM으로부터 일 수 있다; CH4는 IGHE 및 IGHM으로부터 일 수 있다. CH2는 IGHA1, IGHA2, IGHD, IGHE, IGHG1, IGHG2, IGHG3, IGHG4, IGHGP 및 IGHM으로부터 일 수 있다. 어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인, CH4 도메인, IGKC 도메인, IGLC1 도메인, IGLC2 도메인, IGLC3 도메인, IGLC6 도메인, 및 IGLC7 도메인으로 구성된 군으로부터, 바람직하게는 CH1 도메인, IGKC 도메인, IGLC1 도메인, IGLC2 도메인, IGLC3 도메인, IGLC6 도메인, 및 IGLC7 도메인으로 구성된 군으로부터 선택된 도메인이다.

일반적으로, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 인간으로부터이다. 바람직하게는, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 인간으로부터 및 같은 이소타입, 종 및 하위 종류로부터이다. 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인, 구체적으로 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH3 도메인, 더욱 바람직하게는 인간 CH3 도메인, 구체적으로 IGHG1으로부터의 인간 CH3 도메인이다.

동등하게 바람직하게는, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인이고, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인과 같은 경쇄 불변 도메인이며, 동등하게, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인과 같은 경쇄 불변 도메인이며, 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 바람직한 부모 도메인은 CH1 도메인, 더욱 바람직하게는 IGHG1, IGHG2, IGHG3, 및 IGHG4로 구성된 군으로부터 선택된 인간 CH1 도메인, 구체적으로 IGHG1으로부터의 인간 CH1 도메인이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성한다. 어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 헤테로-이량체화 또는 호모-이량체화에 의해 상호작용한다. 바람직하게는, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 아미노산 잔기는 도메인의 핵심 무결성에 비필수 아미노산이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원은 TCR 불변영역 과로부터 선택된다. 바람직하게, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)이고, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이다. 동일하게, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)일 수 있고, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)일 수 있다. 다른 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메일 알파(서열번호 1)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이며, 서열번호 2에 있어서 75 위치 아미노산인 시스테인(C)은 알라닌(A) 또는 세린(S), 바람직하게는 알라닌(A)로 치환된다.

또 다른 측면에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이며, 또는 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이고, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이며, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32) 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이며, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1) 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1) 또는 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이고, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2) 또는 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이며, 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및 네번째 구성원의 기부 도메인은 IgG1 CH3 도메인(서열번호 47)이고, 여기서 만약, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인이 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1)이면, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이고, 만약 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인이 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이면, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이다.

다른 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 추가적으로 조작된 도메인을 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환되고,

상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 헤테로-이량체화 또는 호모-이량체화에 의해 상호작용하며,

상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 상기 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환되고,

상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인과 다르다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 동일하지 않다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인, 구체적으로 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH3 도메인, 바람직하게는 같은 종, 이소타입 및 하위 종류의 CH3 도메인이고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH1 도메인이며, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인과 같은 경쇄 불변 도메인이다.

어떤 실시예에서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인과 같은 경쇄 불변 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH1 도메인이며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 CH3 도메인, 바람직하게는 같은 종, 이소타입 및 하위 종류의 CH3 도메인이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 치환된 첫번째 및/또는 두번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기는 인접하지 않다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기 및/또는 치환된 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 인접하지 않다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 치환된 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 바람직하게는 적어도 둘, 더욱 바람직하게는 적어도 셋, 가장 바람직하게는 적어도 넷, 구체적으로 적어도 다섯 아미노산 잔기는 인접하지 않다.

어떤 실시예에서, 본 발명은 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및/또는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인의 바람직하게는 적어도 둘, 더욱 바람직하게는 적어도 셋, 가장 바람직하게는 적어도 넷, 구체적으로 적어도 다섯 아미노산 잔기는 인접하지 않다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및/또는 두번째 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 바람직하게는 적어도 둘, 더욱 바람직하게는 적어도 셋, 가장 바람직하게는 적어도 넷, 구체적으로 적어도 다섯, 더욱 구체적으로 적어도 여섯, 가장 구체적으로 적어도 일곱 아미노산 잔기가 치환된다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및/또는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 바람직하게는 적어도 둘, 더욱 바람직하게는 적어도 셋, 가장 바람직하게는 적어도 넷, 구체적으로 적어도 다섯, 더욱 구체적으로 적어도 여섯, 가장 구체적으로 적어도 일곱 아미노산 잔기가 치환된다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 아미노산 서열은 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 아미노산 서열과 비교하여 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기의 도입을 함유하지 않는다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 3D 구조적 위치는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 동등한 3D 구조적 위치와 비교하여 아미노산 잔기가 다르다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 같은 종으로부터, 바람직하게는 같은 종 및 이소타입으로부터, 더욱 바람직하게는 같은 종, 이소타입 및 하위 종류로부터의 부모 도메인을 갖는다. 어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 동일한 부모 도메인, 즉 동일한 아미노산 서열을 갖는 부모 도메인을 갖는다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 IgG1, 바람직하게는 인간 IgG1으로부터의 부모 도메인을 갖는다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 동일하지 않은 부모 도메인을 갖는다. 어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 한 아미노산에 의해 또는 두 아미노산에 의해 또는 세 아미노산에 의해 또는 네 아미노산에 의해 또는 다섯 아미노산에 의해 또는 다섯 내지 열 아미노산에 의해 또는 열 내지 삼십 아미노산에 의해 각각 다른 아미노산 서열을 갖는 부모 도메인을 갖는다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 Fc 부위를 포함한다. 어떤 실시예에서 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및/또는 두번째 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄는 Fc 부위를 포함한다. 일반적으로, 상기 Fc 부위는 IgA, IgE, IgD, IgG, 및 IgM Fc 부위로 구성된 군으로부터 선택된다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 같은 종으로부터, 바람직하게는 같은 종 및 이소타입으로부터, 더욱 바람직하게는 같은 종, 이소타입 및 하위 종류로부터의 Fc 부위를 포함한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및/또는 두번째 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄는 같은 종으로부터, 바람직하게는 같은 종 및 이소타입으로부터, 더욱 바람직하게는 같은 종, 이소타입 및 하위 종류로부터의 Fc 부위를 포함한다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 Fc 부위는 동일하지 않다. 어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 Fc 부위는 한 아미노산에 의해 또는 두 아미노산에 의해 또는 세 아미노산에 의해 또는 네 아미노산에 의해 또는 다섯 아미노산에 의해 또는 다섯 내지 열 아미노산에 의해 또는 열 내지 삼십 아미노산에 의해 각각 다른 아미노산 서열을 갖는다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편은 전장의 항체이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편은 이중특이성인 전장의 항체이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 HER2, EGFR, CD19 및 VLA-2로 구성된 군으로부터 선택된 항원에 결합하는 이중특이성 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 단편 또는 이중특이성 전장 항체를 제공한다. 바람직하게는, 상기 이중특이성 헤테로-이량체 또는 이의 단편 또는 이중특이성 항체는 HER2 및 EGFR에 특이적이다. 동일하게 바람직하게는, 상기 이중특이성 헤테로-이량체 또는 이의 단편 또는 이중특이성 항체는 CD19 및 VLA-2에 특이적이다.

어떤 실시예에 있어서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 적어도 한 추가적인 폴리펩티드는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄와 융합된다. 바람직하게는, 상기 추가적인 도메인은 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄와 융합된다.

선택적으로, 상기 추가적인 도메인은 조작되기 전 부모 도메인의 첫번째 및/또는 두번째 부모 면역글로불린 쇄와 융합될 수 있다. 적절하게, 상기 추가적인 도메인은 FAB, scFv, 디아바디, 도메인 항체, 약학적인 활성 펩티드 또는 단백질, 수용체 세포 외 도메인, CDR 이식된 폴리펩티드 및 치료상으로 조작된 단백질 스캐폴드로 구성된 군으로부터 선택된다.

다른 측면에서, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는 다중도메인(multidomain) 단백질의 단백질-단백질 인터페이스를 조작하기 위한 방법을 제공한다:

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과 구성원은 자연적으로 발생한 호모-이량체이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과 구성원은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체이다.

일반적으로 적어도 둘, 바람직하게 적어도 셋, 더욱 바람직하게 적어도 넷, 가장 바람직하게 적어도 다섯, 구체적으로 적어도 여섯, 더욱 구체적으로 적어도 일곱 아미노산 잔기가 치환된다. 바람직하게는, 상기 단계 (a)의 다중 도메인 단백질의 단백질-단백질 인터페이스와 함께인 도메인은 다른 도메인과 호모-이량체, 바람직하게는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성할 수 있다. 바람직하게는, 상기 단계 (a)의 다중 도메인 단백질의 단백질-단백질 인터페이스와 함께인 도메인은 다른 도메인과 헤테로-이량체, 바람직하게는 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성할 수 있다. 바람직하게는, 면역글로불린 쇄와 동일하고 면역글로불린 상과 구성원으로 선택된 노출된 인터페이스 잔기는 도메인의 핵심 무결성에 비필수 아미노산이다. 바람직하게는, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과 구성원은 TCR 불변영역 과로부터 선택된다. 더욱 바람직하게는 상기 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열번호 1) 또는 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이고, 반면 다른 실시예에서, 서열번호 2에 있어서 75 위치의 아미노산인 시스테인(C)은 알라닌(A) 또는 세린(S)로 치환된다. 기부 도메인으로서 CH3 도메인이 바람직할 뿐만 아니라, 더욱 바람직하게는 인간 CH3 도메인, 구체적으로 IGHG1으로부터의 인간 CH3 도메인이다.

다른 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33) 또는 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이다.

어떤 실시예에서, 본 공개는 방법을 제공하고, 여기서 치환된 첫번째 및/또는 두번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기는 인접하지 않는다.

바람직하게는, 상기 단계 (a)의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 도메인의 동일하게 노출된 단백질-단백질 인터페이스 아미노산 잔기의 적어도 한 아미노산 잔기 치환을 위해 사용된 상기 단계 (b)의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 기부 도메인의 동일하게 노출된 단백질-단백질 인터페이스 아미노산 잔기는 K20, V22, T26, Y43, S61, V63, W65 및 N67로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열번호 1의 아미노산 위치와 상응한다. 다르게 바람직하게는, 상기 단계 (a)의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 도메인의 동일하게 노출된 단백질-단백질 인터페이스 아미노산 잔기의 적어도 한 아미노산 잔기 치환을 위해 사용된 상기 단계 (b)의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 기부 도메인의 동일하게 노출된 단백질-단백질 인터페이스 아미노산 잔기는 E10, A12, F14, T28, V30, T34, D59, L63, E65, C75, S77, R79 및 R81로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열번호 2의 아미노산 위치와 상응한다.

바람직하게는, 상기 단계 (a)의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 도메인의 동일하게 노출된 단백질-단백질 인터페이스 아미노산 잔기의 적어도 한 아미노산 잔기 치환을 위해 사용된 상기 단계 (b)의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 기부 도메인의 동일하게 노출된 단백질-단백질 인터페이스 아미노산 잔기는 K4,T6, T22, L24, E28, K29, G53, M56, M63, F65, W67로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열번호 33의 아미노산 위치와 상응한다. 다르게 바람직하게는, 상기 단계 (a)의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 도메인의 동일하게 노출된 단백질-단백질 인터페이스 아미노산 잔기의 적어도 한 아미노산 잔기 치환을 위해 사용된 상기 단계 (b)의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 기부 도메인의 동일하게 노출된 단백질-단백질 인터페이스 아미노산 잔기는 M13, N18, A20, E25, F44, A47, S51, N57, V59, L61, K63으로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열번호 32의 아미노산 위치와 상응한다.

바람직하게는, 상기 단계 (a)의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 도메인의 동일하게 노출된 단백질-단백질 인터페이스 아미노산 잔기의 적어도 한 아미노산 잔기 치환을 위해 사용된 상기 단계 (b)의 단백질-단백질 인터페이스와 함께 기부 도메인의 동일하게 노출된 단백질-단백질 인터페이스 아미노산 잔기는 Q127, Y129, L131, D136, E137, Q142, S144, T146, K150, K172, T174, V177, D179, F185, Y187, K189로 구성된 군으로부터 선택되고, 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 서열번호 12의 아미노산 위치와 상응한다.

다른 측면에서, 본 발명은 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 적어도 하나의 아미노산 잔기가 치환된 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 적어도 하나의 조작된 도메인으로 구성된 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 적어도 하나의 아미노산 잔기가 치환된 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 적어도 하나의 조작된 도메인으로 구성된 두번째 조작된 면역글로불린 쇄로 구성된 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 조작하기 위한 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인의 용도를 제공한다.

일반적으로, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체, 바람직하게는 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성한다. 바람직하게, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원은 T 세포 수용체 쇄(T cell receptor chain)로부터 선택된다.

더욱 바람직하게, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 알파(서열변호 1)이고, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 베타(서열번호 2)이다.

동등하게 더욱 바람직하게, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 델타(서열번호 32)이고, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변 도메인 감마(서열번호 33)이다. 동등하게 더욱 바람직하게, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 CH3 도메인이다.

실시예

실시예 1. 인간 α/β T 세포 수용체 불변 도메인(human α/β T cell receptor constant domain)에 기초하여 CH3-CH3 단백질-단백질 인터페이스(protein-protein interface)를 갖는 면역글로불린(immunoglobulin) Fc 헤테로-이량체(hetero-dimer)의 제작

본 실시예는 CH3 도메인(EU 잔기 341 - 447)의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 돌연변이를 갖는 두 인간 IGHG1 Fc 쇄[인간 경첩(hinge)(γ1), CH2 및 CH3 불변 도메인으로 구성된 각 쇄; EU 잔기 221 - 447]를 첫번째 쇄를 위해 인간 T-세포 수용체(TCR) 불변 도메인 알파[진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAO72258.1(잔기 135 - 225); 서열번호 1; TRAC를 참조한 IMGT^®(완전한 서열), 국제 면역 유전학 정보 시스템^®, Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)] 및 두번째 쇄를 위한 인간 TCR 불변 도메인 베타[진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAA61026.1(잔기 134 - 261), 서열번호 2; TRAC2를 참조한 IMGT^®(IMGT^® 잔기 1.8 - 124)]를 신중하게 선택하였고, 적어도 76% 효능(efficacy)로 헤테로-이량체 Fc 분자 안으로 조립하였다. TRBC2는 인간 TCR 불변 도메인 베타를 위해 자연적으로 발생한 두 이소타입 중 하나이다. TRBC1 및 TRBC2 둘 모두는 그들 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 서열에 있어서 차이가 없으므로 IGHG1 Fc 쇄의 CH3 도메인을 변화시키기 위한 목적으로 동등하게 사용될 수 있다.

돌연변이는 인간 IGHG1으로부터의 Fc 단편의 크리스탈 구조(crystal structure)[Krapp S et al., J Mol Biol, 325(5):979-89(2003)]와 함께 LC13 TCR 분자의 크리스탈 구조[Kjer-Nielsen L et al., Structure, 10(11):1521-32(2002)]에 덮어씌운 것의 분석으로부터 유래되었다. TCR 및 IGHG1 Fc 3D 구조 모두 단백질 데이타 뱅크(Protein Data Bank)[PDB는 TRBC2(서열번호 2) 및 인간 IGHG1 각각을 위해 1KGC 및 1H3Y로 암호화되었다; www.pdb.org; Bernstein FC et al., Eur J Biochem, 80(2):319-24(1977)]로부터 검색되었고, 코트 소프트웨어(Coot software)[Emsley P and Cowtan K, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 60(Pt 12 Pt 1):2126-32(2004)]로 겹쳐졌으며, 아셀리스(Accelrys, Cambridge, UK)의 디스커버리-스튜디오 소프트웨어(Discovery-Studio software)로 추가적으로 시각화되었다. TCR 헤테로-이량체 불변 도메인 및 CH3 호모-이량체의 겹쳐진 3D 구조의 단백질-단백질 인터페이스 검사(examination)는 이론적 설계(rational design)을 위한 시작점(starting point)으로써 사용되었다. 몇몇의 파라메터(parameters)가 고려되었다; 이는 프롤린(prolines) 잔기의 보존(preservation), 및 IGHG1 CH3 호모-이량체로부터 정전기의 접촉(electrostatic contacts)의 부분뿐만 아니라 도메인 핵심(core)의 무결성(integrity)에 있어서 포함된 아미노산 위치의 보존, IGHG1 CH3 호모-이량체에 있어서 발견된 특이적 소수성 접촉 제거(abrogating), 및 이들을 TCR 불변 도메인 헤테로-이량체에 있어서 발견된 선택된 소수성 접촉으로 교체하는 것을 포함하나 이에 한정하지 않는다. 상기 분석은 아미노산 치환(substitutions)의 두 집합(subsets)의 디자인을 이끌고, 첫번째 집합은 CH3 호모-이량체의 첫번째 집합의 단백질-단백질 인터페이스 및 TCR 불변 도메인 알파의 단백질-단백질 인터페이스 사이의 동등한 3D 위치로부터 기원하였고, 두번째 집합은 CH3 호모-이량체의 두번째 집합의 단백질-단백질 인터페이스 및 TCR 불변 도메인 베타의 단백질-단백질 인터페이스 사이의 동등한 3D 위치로부터 기원하였다; 각각의 집합은 헤테로-이량체화 할 수 있는 두개의 새롭고, 독특한(unique) CH3 조작된 도메인 서열을 만들었다.

인간 TCR 불변 도메인 알파의 CH3 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 이의 단백질-단백질 인터페이스로부터 유래된 돌연변이를 갖는 조작된 인간 IGHG1 Fc 쇄는 "BT 알파 쇄(BT alpha chain)"라 지정되었고(도 1), 그동안 인간 TCR 불변 도메인 베타의 CH3 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 이의 단백질-단백질 인터페이스로부터 유래된 돌연변이를 갖는 조작된 인간 IGHG1 Fc 쇄는 "BT 베타 쇄(BT beta chain)"로 지정되었다(도 1). 더욱 구체적으로, BT 알파 쇄는 하기의 치환과 함께 조작된 CH3 도메인을 갖는 인간 IGHG1으로부터 면역글로불린 Fc 쇄로 구성: S364K, T366V, K370T, K392Y, F405S, Y407V, K409W, 및 T411N(서열번호 3)(EU 번호); 및 따라서, 상기 "BT 베타 쇄"는 하기의 치환과 함께 조작된 CH3 도메인을 갖는 인간 IGHG1으로부터 면역글로불린 Fc 쇄로 구성된다: Q347E, Y349A, L351F, S364T, T366V, K370T, T394D, V397L, D399E, F405C, Y407S, K409R, 및 T411R(서열번호 4)(EU 번호).

헤테로-이량체의 형성은 비-감소(non-reducing) 및 감소(reducing) 상태하에서 샘플의 SDS-PAGE 분석에 의해 평가될 수 있다. BT 알파 쇄 및 BT 베타 쇄는 비슷한 분자량을 갖기 때문에, SDS-PAGE 유동성(mobility)에 있어서 차이를 생산하기 위해, 상기 BT 베타 쇄는 가변 경쇄 카파(variable light-chain Kappa) 도메인 항체[VL로 축약, 아과(subfamily) 카파I-O12 구성원은 IGKJ1*01 접합(junction)과 함께 VBASE2humIGKV115 서열로부터 유래되었다, 서열번호 5; Retter I et al., Nucleic Acids Res, 33(Database issue):D671-4 (2005)]와 융합되었고, 결과적으로 헤테로-이량체 형성의 확인을 촉진하였다(도 2). 또한, 헤테로-이량체에 있어서 BT 알파 쇄의 존재를 확인하기 위하여, 여섯개 히스티딘(histidine) 잔기의 시리즈(series)가 이의 C-말단(C-terminus)에 포함되었다(서열번호 7). 상기 헤테로-이량체 컨스트럭트(construct)는 BT 알파 His_VL-BT 베타(BT alpha His_VL-BT beta)로 축약되었다.

BT 알파 His 및 VL-BT 베타 쇄 cDNA 암호 서열을 제작하기 위하여, BT 알파 쇄의 조작된 CH3 도메인(서열번호 8) 및 BT 베타 쇄의 조작된 CH3 도메인을 암호화하는 cDNA는 GENEART AG(Resensburg, 독일)에 의해 합성되었다. 상기 BT 베타 쇄는 선택적으로 F405A 돌연변이와 합성되었고, 이는 표준 돌연변이화(standard muatgenesis)에 의해 나중에 F405C(서열번호 9)로 변환된다. PCR 조립 기술(assembly technique)을 사용에서, 각 쇄는 인간 IGHG1 경첩(DKTHTCPPCP) 및 IGHG1 CH2 불변 도메인(각각 GENEART AG에 의해 합성된다)을 암호화하는 합성 cDNA(synthetic cDNA)의 다운스트림(downstream)이 융합된 그들 각각의 조작된 CH3 도메인 cDNA 암호화 서열(coding sequence)을 갖는다. BT 알파 His 쇄의 C-말단에 위치하는 상기 폴리히스티딘(polyhistidine) 서열은 PCR 증폭 동안에 안티-센스(anti-sense) 올리고뉴클레오티드를 포함한다; 그동안 VL-BT 베타 쇄의 N-말단에 위치한 가변 카파 도메인 항체는 PCR 조립 기술을 사용하여 BT 베타 쇄 cDNA 암호화 서열의 업스트림(upstream)에 도메인 cDNA(각각 GENEART AG에 의해 합성된다) 융합에 의해 조작된다. 최종적으로, DNA 서열(각각, 서열번호 10 및 11)을 암호화하는 상기 BT 알파 His 쇄 및 VL-BT 베타 쇄는 CMV 프로모터 및 소 성장호르몬(Bovine Growth Hormone) 폴리-아데닐화 신호(poly-adenylation signal)을 운반하는 변형된 pREP4(Invitrogen, CA, 미국) 벡터에 기초한 벡터에 의존적으로 결찰되었다(ligated). 상기 두 쇄 발현-벡터에 있어서, 분비는 뮤린(murine) VJ2C 리더(leader) 펩티드에 의해 촉진된다.

BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체의 일과성 발현(transient expression)을 위해, 각각 조작된 쇄 벡터의 동일한 양을 폴리에틸렌이민(polyethylneiminel PEI)을 사용하여 부유액-적응된(suspension-adapted) HEK-EBNA 세포(ATCC-CRL-10852)안으로 공-형질주입하였다(co-transfected). 일반적으로, ㎖ 당 80 내지 120만개의 세포 밀도인 부유액인 세포 100 ㎖에 50 ㎕ BT 알파 His 쇄를 암호화하는 발현벡터 및 50 ㎕ VL-BT 베타 쇄를 암호화하는 발현벡터를 함유하는 DNA-PEI 혼합물(mixture)로 형질주입하였다. 각각 조작된 쇄 유전자를 암호화하는 재조합 발현벡터가 숙주세포(host cell) 안으로 도입될 때, 상기 헤테로-이량체 컨스트럭트는 배양 배지[EX-CELL 293, 0.1% 플루로닉 산(pluronic acid), 4 mM 글루타민(glutamine), 및 0.25 ㎍/㎖ 제네티신(geneticin)이 첨가된 HEK293-무혈청 배지(Sigma, Buchs, 스위스)]안으로 분비를 허용하기 위하여 4 내지 5일의 기간 동안 세포를 추가적으로 배양하여 생산되었다. 상기 헤테로-이량체 컨스트럭트는 재조합 스트림라인 r단백질 A 메디아(Streamline rProtein A media)(GE Healthcare Europe GmbH, Glattbrugg, 스위스)를 사용하여 무세포 상층액(cell-free supernatant)로부터 정제되었고, 추가적인 분석을 위해 사용되었다.

일과성 형질주입 생산물 수확량(yields)은 20 ㎎/L를 넘었다. 일반적인 SDS-PAGE 분석의 결과는 도 3에 보여진다. 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체는 약간의 호모-이량체 종 존재(present)와 함께 생산되는 주요 종이다(레인 1). 구체적인 관심은 감소 상태하에서, 표준 호모-이량체 인간 IGHG1 Fc[진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAC82527.1 잔기 103 - 329; 서열번호 12(레인 3)]의 SDS-PAGE 유동성을 비교하는 것이고, 상기 BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체는 상기 BT 알파 His 쇄 및 VL-BT 베타 쇄[레인 2: 각각 25.5 kDa, 및 37.2 kDa, Asn 297에 쇄 N-글라이코실레이션(N-glycosylation)을 고려하여 상기 각 분자량에 추가적인 3 kDa을 더할 필요가 있다]를 위한 두 예상 분자량 밴드로 깨지고, 반면에 표준 호모-이량체 인간 IGHG1 Fc(레인 4)는 상기 BT 알파 His 쇄와 비슷한 유동성을 갖는 하나의 독특한 분자량 밴드로 붕괴된다. 따라서, 비-감소 상태하에서, 표준 호모-이량체 인간 IGHG1 Fc의 비교는 매우 낮은 존재도(abundance)에서 BT 알파 His 호모-이량체 존재의 추적의 확인을 허용한다. 결론적으로, 응집체(aggregates)는 매우 낮은 존재도에서 또한 탐지될 수 있다.

비-감소 SDS-폴리아크릴아마이드(polyacryamide)(4 - 12%) 겔 밴드의 밀도계측 분석 스캐닝(scanning densitometry analysis)에 의해 단백질-A 정제된 조제용 물질에 있어서 호모-이량체에 대한 헤테로-이량체의 비율을 측정하는 것은 가능하다. 상기 언급된 다른 종의 상대 밀도는 제조사에 의해 제공되는 하기의 프로토콜(protocol)에 의해 FluorChem SP 이미징 시스템(Witec AG, Littau, 스위스)을 사용하여 정량할 수 있다. 상기 BT 알파 쇄 His_VL-BT 베타 쇄 헤테로-이량체는 단백질-A 정제된 물질 전체에서 적어도 76.1%를 나타낸다(도 4A); 상대밀도 측정에 있어서, 응집체의 추적이 누락되었을 때, 상기 BT 알파 쇄 His_VL-BT 베타 쇄 헤테로-이량체는 단백질-A 정제된 물질 전체에서 적어도 83.8%를 나타낸다(도 4B).

실시예 2: 인간 α/β T 세포 수용체 불변 도메인에 기초하여 CH3-CH3 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 면역글로불린 Fc 헤테로-이량체 변종의 제작

T-세포 수용체 도메인은 접히는(folding) 동안 응집(aggregation) 및 잘못된 결합(misassociation)의 경향이 있고, 이는 종종 부정확한 이황화 결합(disulfide bond) 형성에 의해서 합성된다[Pecorari F et al., J Mol Biol, 285(4):1831-43(1999)]. TCR 불변 도메인 베타에 있어서, 쌍을 이루지 않은 시스테인(cysteine)의 돌연변이는 E. coli에서 TCR 분자의 생산을 촉진함을 보여준다[Willcox BE et al., Protein Sci, 8(11):2418-23(1999)]. 게다가, 상기 쌍을 이루지 않은 시스테인은 몇몇의 TCR 분자 크리스탈 구조에 있어서 돌연변이되었다. DNA 서열을 암호화하는 BT 베타 쇄에 있어서 C405A 및 C405S의 돌연변이는 CD1d-α-GalCer-특이적 TCR 분자 5E[PDB는 2CDF로 암호화되었다. Gadola SD et al., J Exp Med, 203(3):699-710(2006)]와 함께 인간 IGHG1으로부터 Fc 단편의 크리스탈 구조[Krapp S et al., J Mol Biol, 325(5):979-89(2003)] 및 T 세포 수용체(TCR) HA1.7의 크리스탈 구조[PDB는 1J8H로 암호화되었다. Hennecke J and Wiley DC, J Exp Med, 195(5):571-81(2002)]와 함께 덮어씌워진 분석으로부터 유래되었다. BT 베타 쇄의 조작된 CH3 도메인이 원래 F405A 돌연변이와 함께 합성된 후, 상기 컨스트럭트는 F405A 돌연변이의 도입을 제외하고, 상기 실시예 1에 묘사된 VL-BT 베타 쇄와 동일한 새로운 VL-BT 베타 쇄의 제작에 직접 사용되었다. F405S 돌연변이를 갖는 상기 VL-BT 베타 쇄는 표준 돌연변이화 기술을 사용하여 F405A 돌연변이를 갖는 두번째 VL-BT 베타 쇄의 제작을 위해 변형되었다. 상기 두 새로운 쇄는 각각 그들의 F405A 및 F405S 돌연변이를 제외하고, 상기 실시예 1에 묘사된 VL-BT 베타 쇄와 동일하였고, 본 명세서에서 "VL-BT 베타 F405A 쇄" 또는 "VL-BT 베타 F405A" 및 "VL-BT 베타 F405S 쇄" 또는 "VL-BT 베타 F405S"로 언급된다.

BT 알파 His_VL-BT 베타 F405S 헤테로-이량체 및 BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체의 일과성 발현은 상기 실시예 1에 묘사된 바와 같이 수행되었다. BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체를 위한 생산 수확량은 BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체와 비슷했다(각각 22 ㎎/L). 37 ㎎/L의 BT 알파 His_VL-BT 베타 F405S 헤테로-이량체 생산 수확량을 수득하였다. 실시예 1에 묘사된 BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체 위에 BT 알파 His_VL-BT 베타 F405S 헤테로-이량체 형성의 질을 평가하기 위하여, 두 BT 헤테로-이량체는 같은 SDS-PAGE 겔에서 달렸다[도 3, 레인 1(BT 알파 His_VL-BT 베타) 및 5(BT 알파 His_VL-BT 베타 F405S)]. 단백질-A 정제 후, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405S 헤테로-이량체는 주요 종 생산이었으나, 실시예 1에 묘사된 BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체와 비교하였을 때, VL-BT 베타 F405S 호모-이량체 종에 더하여 단량체(monomeric) 종의 유의적으로 많은 양이 관찰되었으며, 이는 돌연변이된 F405S 치환 위에 자연적으로 발생한 F405C 치환의 높은 헤테로-이량체 조립 효능을 나타낸다. BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체와 비슷하게, 감소 상태하에서, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405S 헤테로-이량체는 BT 알파 His 쇄 및 VL-BT 베타 F405S 쇄의 두 예상된 분자량 밴드로 나누어졌다(레인 6).

BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체를 위한 전형적인 SDS-PAGE 분석의 결과는 도 5에 나타내었다. 단백질-A 정제 후, 상기 BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체는 작은 호모-이량체 종 존재와 함께 생산된 주요 종이다(레인 1). BT 알파 His_VL-BT 베타 헤테로-이량체와 비슷하게, 감소 상태하에서, BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체는 BT 알파 His 쇄 및 VL-BT 베타 F405A 쇄의 두 예상된 분자량 밴드로 나누어졌다(레인 2). 따라서, 비-감소 상태하에서, 표준 호모-이량체 인간 IGHG1 Fc(레인 3: 비-감소 상태, 레인 4: 감소 상태)와의 비교는 매우 낮은 존재도에서 BT 알파 His 호모-이량체 존재의 추적을 확인을 허용한다. 결론적으로, 응집체뿐만 아니라 VL-BT 베타 F405A 호모-이량체 및 단량체(monomer)의 추적은 또한 매우 낮은 존재도에서 탐지될 수 있다.

BT 알파 His_VL-BT 베타 F405A 헤테로-이량체의 확인을 또 증명하기 위하여, 단백질-A 정제된 물질은 Ni²⁺ 친화성(affinity) 세파로오스(sepharose)(GE Healthcare Europe GmbH, Glattbrugg, 스위스)에 로딩되었고, 폴리히스티딘 서열때문에 BT 알파 His 쇄를 포함하는 종에 특이적인 크로마토그래피 단계가 수행되었다. 세척 단계 후, Ni²⁺ 친화성 단계로부터 결합되고 용출된 부분(fraction)은 모아지고, 단백질-L 친화성 아가로스(agarose)(GenScript USA Inc., Piscataway, NJ, 미국)에 로딩되었으며, 초항원(superantigen) 친화성 레진은 가변 경쇄 카파 도메인 항체, 즉 VL-BT 베타 F405A 쇄를 갖는 종을 특이적으로 선택한다. 상기 정제 단계의 생산량(output)은 말-라디쉬 퍼록시다제(horse-radish peroxidase)가 표지되고 폴리히스티딘 서열에 대한 항체와 함께 웨스턴 블랏에 의해 평가되고, 그리고나서 BT 알파 His 쇄가 탐지된다. 상기 블랏은 기질(substrate)이 침전한 Sigma Fast3.3'-디아미노벤지딘(Diaminobenzidine)(Sigma, Buchs, 스위스)을 사용하여 염색되었다. 도 6은 BT 알파 His 쇄가 지속적으로, Ni²⁺ 세파로오스 전과후뿐만 아니라, 더욱 중요하게는 단백질-L 아가로스 크로마토그래피 후에 헤테로-이량체의 확인을 증명하기 위해 탐지되었다.

비-감소 SDS-폴리아크릴아마이드(polyacryamide)(4 - 12%) 겔 밴드의 밀도계측 분석 스캐닝(scanning densitometry analysis)에 의해 단백질-A 정제된 조제용 물질에 있어서 호모-이량체에 대한 헤테로-이량체의 비율을 측정하는 것은 가능하다. 상기 언급된 다른 종의 상대 밀도는 제조사에 의해 제공되는 하기의 프로토콜(protocol)에 의해 FluorChem SP 이미징 시스템(Witec AG, Littau, 스위스)을 사용하여 정량할 수 있다. 상기 BT 알파 쇄 His_VL-BT 베타 쇄 헤테로-이량체는 단백질-A 정제된 물질 전체에서 적어도 80.7%를 나타낸다(도 4A); 상대밀도 측정에 있어서, 응집체 및 VL-BT 베타 F405A 쇄 단량체의 추적이 누락되었을 때, 상기 BT 알파 쇄 His_VL-BT 베타 F405A 쇄 헤테로-이량체는 단백질-A 정제된 물질 전체에서 적어도 86.9%를 나타낸다(도 4B).

단백질의 안정성(stability)은 재조합 항체 치료의 발전을 위해 중요한 문제이다. 낮은 안정성은 다양한 세포 종류에서 발현할 때 항체의 접는(fold) 능력에 영향을 줄 수 있고[Garber E and Demarest SJ, Biochem Biophys Res Commun, 355(3):751-7(2007)], 잘못접히고, 비 기능적 및/또는 응집체의 경향이 있으며, 따라서 잠재적인 면역성(immunogenic)인 임상적 물질의 부분을 이끈다. 추가적인 단백질 도메인으로부터 어떤 간섭(interference)없이 헤테로-이량체 Fc 단편의 본질적 안정성(intrinsic stability)을 평가하기 위하여, 불변 카파 도메인이 없는 BT 베타 쇄[상기 쇄는 다른 BT 베타 쇄와 비슷하게 조작되었고, C-말단에 HA 태그(tag)(YPYDVPDYA)를 가지며, VL 도메인이 없고, BT 베타(F405A) HA 쇄로 축약된다; 서열번호 17]는 BT 알파 His 쇄와 공-발현하였다(co-expressed). 헤테로-이량체 분자의 결과: BT 알파 His_BT 베타(F405A) HA는 상기와 같이 정제되었고, 시차주사 열량측정법(differential scanning calorimetry; DSC)을 사용하여 분석되었다. 열량 측정(calorimetric measurements)은 VP-DSC 시차주사 열량측정기(differential scanning microcalorimeter)(GE Healthcare Europe GmbH, Glattbrugg, 스위스)로 수행되었다. 세포 부피는 0.128 ㎖, 가열 속도는 1℃/분이었고, 초과압(excess pressure)은 64 p.s.i.를 유지하였다. 상기 단백질은 PBS(pH 7.4)에 2 ㎎/㎖의 농축액으로 사용되었다. 상기 단백질의 몰 열용량(molar heat capacity)은 상기 단백질이 제거된 동일한 완충액(buffer)를 포함하는 복제 샘플(duplicate sample)과 비교하여 추정되었다. 부분(partial) 물 열용량 및 녹는 곡선(melting curve)는 표준 방법에 의해서 분석되었다. 온도기록도(thermograme)은 기준치로 수정되었고, 농도는 Origin(v7.0) 소프트웨어(OriginLab Corporation, Northampton, MA, 미국; GE Healthcare Europe GmbH, Glattbrugg, 스위스에의해 제공됨)에 있어서 비-두 상태 모델(Non-Two State model)을 사용하여 추가적으로 분석되기 전에 표준화되었다(normalized).

인간 IgG 하위분류를 위한 예상된 융해곡선(melting profiles)은 알려져 있고[Garber E and Demarest SJ, Biochem Biophys Res Commun, 355(3):751-7(2007)], 모든 곡선(profiles)은 CH2, CH3, 및 FAB 도메인의 독립적으로 펼쳐진(unfolding) 것에 상응하여 세 펼쳐진 변화(three unfolding transitions)을 함유하기 위해 보여진다. 네 인간 IgG 하위분류에서, IGHG1은 가장 안정한 CH3 도메인(~ 85℃)을 갖고, 다른 하위분류 CH3 도메인은 덜 안정하며, 비록 아무것도 70℃이하에서 녹지 않는 것이 알려져 있다. 비슷하게, 모든 하위분류는 CH2 도메인을 위해 ~ 70℃의 녹는점을 갖는 것이 알려져 있다[Garber E and Demarest SJ, Biochem Biophys Res Commun, 355(3):751-7(2007)]. 전체가 녹지 않는 변화는 안정한 항체 Fc 단편(경첩-CH2-CH3)에서 70℃보다 낮을 것으로 예상된다. 도 7C는 70℃에서 단일 급격한(sharp) 변화을 나타내는 BT 알파 His_BT 베타(F405A) HA 헤테로-이량체의 온도기록도를 나타내고, 이는 CH2 도메인 및 조작된 CH3 도메인 모두의 융해 변화를 위해 계산된다. 열 흡수피크(heat absorption peak)가 기록된 후, 어떠한 급격한 감소도 기록되지 않은 것은 중요하고, 이는 침전(precipitation) 또는 응집(aggregate) 형성이 안정한 항체 Fc 단편에서 예상된 바와 같이 열에 펼쳐진 뒤 발생하지 않음을 나타낸다[Liu H et al., Immunol Lett, 106(2):144-53(2006)]. 게다가, 헤테로-이량체 Fc 단편은,CH2 도메인 및 CH3 도메인 모두가 약 70℃에서 녹고, 이의 융해 변화가 인간 IGHG4 Fc 단편에서 관찰된 것과 비슷한 이래로 자연적으로 발생한 Fc 단편과 비슷한 안정성을 갖고 있다[Garber E and Demarest SJ, Biochem Biophys Res Commun, 355(3):751-7(2007)]. 결론적으로, 상기 열에 펼쳐진 연구는 TCR 알파 및 베타 불변 도메인에 기초한 조작된 단백질-단백질 인터페이스와 함께 헤테로-이량체 Fc 단편이 추가적인 치료상의 헤테로-이량체 면역글로불린의 제작을 위해 안정하고 적합함을 나타낸다.

실시예 3: 최소의 치환과 함께 인간 α/β T 세포 수용체 불변 도메인에 기초하여 CH3-CH3 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 면역글로불린 Fc 헤테로-이량체 변종의 제작

첫번째 쇄를 위한 인간 T-세포 수용체(TCR) 불변 도메인 알파[진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAO72258.1, 135 - 225 잔기; 서열번호 1; TRAC를 참조한 IMGT^®(완전한 서열), 국제 면역 유전학 정보 시스템^®, Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)] 및 두번째 쇄를 위한 인간 TCR 불변 도메인 베타[진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAA61026.1(잔기 134 - 261), 서열번호 2; TRAC2를 참조한 IMGT^®(IMGT^® 잔기 1.8 - 124)]로부터의 키(key) 단백질-단백질 인터페이스 잔기로부터 기원하는 아미노산 치횐의 감소된 수와 함께 가능한 호모-이량체의 형성위에 헤테로-이량체를 형성할 BT 알파 및 베타 쇄의 쌍을 확인하기 위하여, 상기 실시예 1 및 2에 묘사된 치환의 둘 또는 그 이상이 각 쇄에 있어서 서서히 도입되었다.

인간 TCR 불변 도메인 알파 및 베타로부터의 키 단백질-단백질 인터페이스 잔기로부터 기원하는 아미노산 치환의 다중 집합은 BT 알파 및 베타 쇄 각각에 있어서 TCR 불변 도메인 서열 및 인간 IGHG1 Fc 서열사이를 오가기 위해 선택할 수 있다. 각 고려된 집합을 위한 잔기의 선택은 구조적 고려(structural consideration), 예를 들어 단백질-단백질 표면 상호작용 계산에 기초하였다. 모든 치환 집합은 표준 분자생물학 기술(실시예 1)을 사용하여 인간 IGHG1 Fc DNA 암호화 서열(서열번호 12)의 돌연변이화에 의해 조작되었다. 결과 변종은 독립적으로 이전에 언급된 변형된 pREP4 벡터에 결찰되었고, 실시예 1에 묘사된 바와 같이 HEK293-EBNA 세포주안으로 공-형질주입되었다. 단백질 생산 또한 실시예 1에 따랐다. 치환의 각 집합은 비-감소 및 감소 상태하에서 샘플의 SDS-PAGE 분석 및 밀도계측 스캐닝(실시예 1에 언급된 바와 같이)의 조합을 사용하여 이의 헤테로-이량체화 비율이 평가되었다.

조작된 쇄가 비슷한 분자량을 갖기 때문에, 실시예 1과 유사하게, BT 베타 쇄 변종은 SDS-PAGE 유동성에 있어서 차이를 생성하고, 따라서 헤테로-이량체 형성의 확인을 촉진하기 위하여 가변 경쇄 카파 도메인 항체[VL로 축약, 아과 카파I-O12 구성원은 IGKJ1*01 접합과 함께 VBASE2humIGKV115 서열로부터 유래되었다, 서열번호 5; Retter I et al., 2005, Nucleic Acids Res, 33(Database issue):D671-4(2005)]와 융합되었다. 실시예 1로부터 이들 쇄를 구분하기 위하여, BT 쇄가 부위 특이적 돌연변이 유도에 의해 도입된 치환에 기반을 둔 특이적 TCR 알파 및 베타 불변 도메인을 제외하고 인간 IGHG1 Fc 서열와 동일한 아미노산 서열을 가진 이후, 상기 BT 알파 및 VL-BT 베타 쇄는 본 명세서에서 Fc(BTA) 쇄 및 VL-Fc(BTB) 쇄로 각각 축약되었다. 각 쇄를 위해, 인간 IGHG1 Fc 서열안으로 도입된 특이적 치환은 EU 번호를 사용하여 나타내었다. 발현 실험의 결과는 수확량 및 헤테로-이량체화 비율면에서 하기 표 1에 요악되었다. 2 내지 6 치환이 각 쇄에 제작되었다.

전형적인 SDS-PAGE 분석의 결과는 도 8에서 보여진다. 단백질-A 정제 후, 상기 헤테로-이량체는 작은 호모-이량체 종 존재와 함께 생산된 주요 종이다(레인 1). 감소 상태 하에서, 헤테로-이량체는 조작된 Fc(BTA) 쇄 및 다른 조작된 VL-Fc(BTB)쇄(레인 2: 각각 ~ 25 kDa 및 ~ 37 kDa)의 두 예상된 분자량 밴드로 나누어진다. 일과성 형질주입 생산 수확량은 최고 헤테로-이량체화 비율이 90%일 동안 최대 50 ㎎/L이다.

치환 집합의 최고 조합이다: 90% 헤테로-이량체와 비율과 함께 Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S(서열번호 23 및 24)(도 9) 및 30 ㎎/L의 일과성 형질주입 수확량. 각 쇄에 있어서 시험된 치환의 최소 수는 64% 헤테로-이량체화 비율과 함께 둘 및 35 ㎎/L의 일과성 형질주입 수확량이다. 본 명세서에 묘사된 헤테로-이량체화 기술을 존재하는 방법과 비교하기 위해서 가변 경쇄 카파 도메인 항체에 융합된 "hole"을 둘러싸는 위치와 함께 "knob-into-hole" Fc 변이[Merchant AM et al., Nat Biotechnol, 16(7):677-81(1998)]가 제작되었다(Fc-T366W_VL-Fc-T366S-L368A-Y407V로 축약; EU 번호; 서열번호 30 및 31). 발현 실험과 나란히, 분자에 기초한 "knob-into-hole"은 오직 66% 헤테로-이량체화율을 가졌다(데이타는 표시되지 않음).

실시예 4: 인간 δ/γ T 세포 수용체 불변 도메인에 기초하여 CH3-CH3 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 면역글로불린 Fc 헤테로-이량체의 제조

본 실시예는 그들의 CH3 도메인(341 - 447 EU 잔기)의 단백질-단백질 인터페이스에 돌연변이를 갖는 두 인간 IGHG1 Fc 쇄[인간 경첩(γ1), CH2 및 CH3 불변 도메인으로 구성된 각 쇄; 221 - 447 EU 잔기]를 첫번째 쇄를 위한 인간 T-세포 수용체(TCR) 불변 도메인 델타[진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAA61125.1(135 - 221 잔기); 서열번호 32; TRDC를 참조한 IMGT^®, 국제 면역 유전학 정보 시스템^®; Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)] 및 두번째 쇄를 위한 인간 TCR 불변 도메인 감마[진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAA61110.1(145 - 245 잔기), 서열번호 33; TRGC1을 참조한 IMGT^®(1.1 - 124 IMGT^®잔기)]로부터 단백질-단백질 인터페이스의 집합으로부터 신중하게 선택되었고, 적어도 52% 효능으로 헤테로-이량체 Fc 분자로 조립되었다. TRGC1 및 TRDC는 자연적으로 발생한 이소타입이다. TRGC1은 인간 TCR 불변 도메인 감마를 위한 두 자연적으로 발생한 이소타입 중 하나이다. TRGC1 및 TRGC2(2x 또는 3x로 일컫음) 모두 그들의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 서열에 있어서 차이가 없는 이후, IGHG1 Fc 쇄의 CH3 도메인을 돌연변이시키기 위한 목적을 위해 동등하게 사용될 수 있다.

돌연변이는 인간 IGHG1으로부터의 Fc 단편의 크리스탈 구조[Krapp S et al., J Mol Biol, 325(5):979-89(2003)]와 함께 G115 γδTCR 분자의 크리스탈 구조[Allison TJ et al., Nature, 411(6839):820-4(2001)]에 덮어씌운 것의 분석으로부터 유래되었다. TCR 및 IGHG1 Fc 3D 구조 모두 단백질 데이타 뱅크[PDB는 인간 TCR 및 인간 IGHG1을 위해 각각 1HXM 및 1H3Y로 암호화되었다; www.pdb.org; Bernstein FC et al., Eur J Biochem, 80(2):319-24(1977)]로부터 검색되었고, 코트 소프트웨어[Emsley P and Cowtan K, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 60(Pt 12 Pt 1):2126-32(2004)]로 겹쳐졌으며, 아셀리스(Cambridge, UK)의 디스커버리-스튜디오 소프트웨어로 추가적으로 시각화되었다. TCR 헤테로-이량체 불변 도메인 및 CH3 호모-이량체의 겹쳐진 3D 구조의 단백질-단백질 인터페이스 검사는 이론적 설계을 위한 시작점으로써 사용되었다. 몇몇의 파라메터가 고려되었다; 이는 프롤린 잔기의 보존, 및 IGHG1 CH3 호모-이량체로부터 정전기의 접촉의 부분뿐만 아니라 도메인 핵심의 무결성에 있어서 포함된 아미노산 위치의 보존, IGHG1 CH3 호모-이량체에 있어서 발견된 특이적 소수성 접촉 제거, 및 이들을 TCR 불변 도메인 헤테로-이량체에 있어서 발견된 선택된 소수성 접촉으로 교체하는 것을 포함하나 이에 한정하지 않는다. 상기 분석은 아미노산 치환의 두 집합의 디자인을 이끌고, 첫번째 집합은 CH3 호모-이량체의 첫번째 집합의 단백질-단백질 인터페이스 및 TCR 불변 도메인 알파의 단백질-단백질 인터페이스 사이의 동등한 3D 위치로부터 기원하였고, 두번째 집합은 CH3 호모-이량체의 두번째 집합의 단백질-단백질 인터페이스 및 TCR 불변 도메인 감마의 단백질-단백질 인터페이스 사이의 동등한 3D 위치로부터 기원하였다; 각각의 집합은 헤테로-이량체화 할 수 있는 두개의 새롭고, 독특한 CH3 조작된 도메인 서열을 만들었다.

인간 TCR 불변 도메인 델타의 CH3 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 이의 단백질-단백질 인터페이스로부터 유래된 돌연변이를 갖는 조작된 인간 IGHG1 Fc 쇄는 "BT 델타 쇄(BT delta chain)"라 지정되었고, 그동안 인간 TCR 불변 도메인 감마의 CH3 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 이의 단백질-단백질 인터페이스로부터 유래된 돌연변이를 갖는 조작된 인간 IGHG1 Fc 쇄는 "BT 감마 쇄(BT gamma chain)"로 지정되었다. 더욱 구체적으로, BT 델타 쇄는 하기의 치환과 함께 조작된 CH3 도메인을 갖는 인간 IGHG1으로부터 면역글로불린 Fc 쇄로 구성: L351M, S364N, T366A, G371E, K392F, T394A, D399S, F405N, Y407V, K409L, 및 T411K(서열번호 34)(EU 번호); 및 따라서, 상기 "BT 감마 쇄"는 하기의 치환과 함께 조작된 CH3 도메인을 갖는 인간 IGHG1으로부터 면역글로불린 Fc 쇄로 구성된다: Q347K, Y349T, S364T, T366L, K370E, G371K, T394G, V397M, F405M, Y407F, K409W(서열번호 35)(EU 번호).

헤테로-이량체의 형성은 비-감소 및 감소 상태하에서 샘플의 SDS-PAGE 분석에 의해 평가될 수 있다. BT 델타 쇄 및 BT 감마 쇄는 비슷한 분자량을 갖기 때문에, SDS-PAGE 유동성에 있어서 차이를 생산하기 위해, 상기 BT 델타 쇄는 가변 경쇄 카파 도메인 항체[VL로 축약, 아과 카파I-O12 구성원은 IGKJ1*01 접합과 함께 VBASE2humIGKV115 서열로부터 유래되었다, 서열번호 5; Retter I et al., Nucleic Acids Res, 33(Database issue):D671-4 (2005)]와 융합되었고(VL-BT 감마 서열번호 36), 결과적으로 헤테로-이량체 형성의 확인을 촉진하였다. 상기 헤테로-이량체 컨스트럭트는 BT 델타_VL-BT 감마(BT delta_VL-BT gamma)로 축약되었다.

BT 델타 및 VL-BT 감마 쇄 cDNA 암호 서열을 제작하기 위하여, BT 델타 쇄의 조작된 CH3 도메인(서열번호 37) 및 BT 감마 쇄의 조작된 CH3 도메인(서열번호 38)을 암호화하는 cDNA는 GENEART AG(Resensburg, 독일)에 의해 합성되었다. PCR 조립 기술을 사용에서, 각 쇄는 인간 IGHG1 경첩(DKTHTCPPCP) 및 CH2 불변 도메인(각각 GENEART AG에 의해 합성된다)을 암호화하는 합성 cDNA의 다운스트림이 융합된 그들 각각의 조작된 CH3 도메인 cDNA 암호화 서열을 갖는다. VL-BT 감마 쇄의 N-말단에 위치한 가변 카파 도메인 항체는 PCR 조립 기술을 사용하여 BT 감마 쇄 cDNA 암호화 서열의 업스트림에 도메인 cDNA(각각 GENEART AG에 의해 합성된다) 융합에 의해 조작된다.

결과 변종은 독립적으로 이전에 언급된 변형된 pREP4 벡터에 결찰되었고, 실시예 1에 묘사된 바와 같이 HEK293-EBNA 세포주안으로 공-형질주입되었다. 단백질 생산 또한 실시예 1에 따랐다. 일과성 형질주입 수확량은 최대 60 ㎎/L이다. 전형적인 SDS-PAGE 분석의 결과는 도 10에 나타내었다.

단백질-A 정제된 물질에 있어서, 호모-이량체에 대한 헤테로-이량체의 비율(proportion)을 평가하기 위하여, 다른 종의 상대 비율은 실시예 1에 묘사된 절차에 따라 비-감소 SDS-폴리아크릴아미드(4 - 12%) 겔 밴드의 밀도계측 분석 스캐닝에 의해 정량화되었다. BT 델타_VL-BT 감마 헤테로-이량체는 단백질-A 정제된 물질의 적어도 52.1%를 나타낸다(도 11A); 상대 비율 측정에 있어서, 응집체 및 단량체의 추적을 제거할 때, 상기 BT 델타_VL-BT 감마 헤테로-이량체는 단백질-A 정제된 물질의 적어도 57.5%를 나타낸다(도 11B).

실시예 5: 인간 α/β T 세포 수용체 불변 도메인에 기초한 CH3-CH3 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 헤테로-이량체 Fc, 및 헤테로-이량체 δ/γ T 세포 수용체 불변 도메인에 기초한 CH1-CK 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 FAB 단편과 1가의(monovalent) 면역글로불린의 제작

본 실시예는 적어도 세 인간 면역글로불린 쇄를 나타낸다: 한 쇄는 인간 중쇄 불변 도메인 CH1(γ1), 경첩(γ1), CH2(γ1) 및 BT 알파 또는 BT 베타 쇄로부터 조작된 CH3 도메인과 융합된 중쇄 가변 도메인으로 구성되고, 한 쇄는 인간 Cκ 경쇄 불변 도메인과 융합된 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서 CH1(γ1)(IGHG1, 118 - 215 EU 잔기) 및 Cκ(IGKC, 108 - 214 EU 잔기) 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 자연적으로 발생한 인간 TCR 불변 도메인 델타[진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAA61125.1(135 - 221 잔기); 서열번호 32; TRDC를 참조한 IMGT^®(1.7 - 120 IMGT^®잔기), 국제 면역 유전학 정보 시스템^®; Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)], 및 자연적으로 발생한 인간 TCR 불변 도메인 감마[진뱅크 데이타베이스 등록번호 AAA61110.1(145 - 245 잔기), 서열번호 33; TRGC1을 참조한 IMGT^®(1.1 - 124 IMGT^®잔기) 각각으로부터 단백질-단백질 인터페이스 잔기의 집합과 함께 선택된 위치에 주의 깊게 치환되었고, 적어도 50%의 효능으로 FAB 조작된 헤테로-이량체 면역글로불린 분자 내로 조립되었다.

돌연변이는 인간 FAB(γ1) 단편의 크리스탈 구조와 함께 TCR 분자의 크리스탈 구조에 덮어씌운 것의 분석으로부터 유래되었다. TCR 및 인간 FAB (γ1) 단편 3D 구조 모두 단백질 데이타 뱅크[PDB는 각각 1HXM 및 1VGE로 암호화되었다; Allison TJ et al., Nature, 411(6839):820-4(2001); Chacko S et al., J Biol Chem, 271(21):12191-8(1996)]로부터 검색되었고, 코트 소프트웨어[Emsley P and Cowtan K, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 60(Pt 12 Pt 1):2126-32(2004)]로 겹쳐졌으며, 아셀리스(Cambridge, UK)의 디스커버리-스튜디오 소프트웨어로 추가적으로 시각화되었다. δ/γ TCR 헤테로-이량체 불변 도메인 및 CH1(γ1)-Cκ 헤테로-이량체의 겹쳐진 3D 구조의 단백질-단백질 인터페이스 검사는 이론적 설계을 위한 시작점으로써 사용되었다. 몇몇의 파라메터가 고려되었다; 이는 프롤린 잔기의 보존, 및 CH1(γ1), 및 Cκ 도메인 사이로부터 정전기의 접촉의 부분뿐만 아니라 도메인 핵심의 무결성에 있어서 포함된 아미노산 위치의 보존; CH1(γ1)-Cκ 헤테로-이량체에 있어서 발견된 특이적 소수성 접촉 제거, 및 이들을 TCR 불변 도메인 감마-델타 헤테로-이량체에 있어서 발견된 선택된 소수성 접촉으로 교체하는 것을 포함하나 이에 한정하지 않는다. 상기 분석은 아미노산 치환의 두 집합의 디자인을 이끌고, 첫번째 집합은 CH1(γ1) 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 TCR 불변 도메인 델타의 단백질-단백질 인터페이스 사이의 동등한 3D 위치로부터 기원하였고, 두번째 집합은 Cκ 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 TCR 불변 도메인 감마의 단백질-단백질 인터페이스 사이의 동등한 3D 위치로부터 기원하였다; 두 조작된 도메인의 제작에 의해서, 새롭고 독특한 도메인은 헤테로-이량체화 할 수 있으나, 자연적으로 발생한 CH1(γ1)-Cκ 헤테로-이량체 도메인 쌍과는 달랐다.

FAB 단편의 조작된 중쇄는 가변 중쇄 도메인을 포함하고, 인간 TCR 불변 도메인 델타의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서, 이의 단백질-단백질 인터페이스로부터 유래한 돌연변이를 갖는 인간 CH1(γ1) 도메인은 "VH-CH1 델타"라 지정되었고(도 12), 그동안 조작된 카파 경쇄는 가변 경쇄 도메인을 포함하고, 인간 TCR 불변 도메인 감마의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 이의 단백질-단백질 인터페이스로부터 유래된 돌연변이를 갖는 인간 Cκ 도메인은 "VL-CK 감마"로 지정되었다(도 12). 더욱 구체적으로, VH-CH1 델타는 하기의 치환과 함께 조작된 CH1(γ1) 도메인을 갖는 조작된 중쇄 FAB 단편으로 구성: L128M , A141N, G143A, D148E, H168F, F170A, Q175S, S181N, S183V, V185L, T187K(서열번호 39)(EU 번호); 및 따라서, 상기 VL-CK 감마는 하기의 치환과 함께 조작된 Cκ 도메인을 갖는 조작된 카파 경쇄로 구성된다: S114K, F116T, S131T, V133L, N137E, N138K, S162G, T164M, S174M, S176F, T178W(서열번호 40)(EU 번호).

본 실시예에서, PCT 출원번호 WO 2010/095031에서 공개된 인간화된(humanized) 항 인간 CD19 항체로부터의 가변 중쇄 및 경쇄 도메인[VH(항-hCD19), 및 VL(항-hCD19)로 축약]이 VH-CH1 델타 및 VL-CK 감마 쇄 각각을 만들기 위한 인풋(input)으로 사용되었다. 상기 묘사된 BT 베타 쇄(실시예 1 내지 3)[본 실시예에서, 상기 쇄는 C-말단에 c-myc 태그(tag)(EQKLISEEDLN)를 갖고, BT 베타 c-myc 쇄로 축약된다고 기록]의 업스트립에 융합된 VH-CH1 델타 쇄의 결합(combination)은 상기 묘사된 새롭게 조작된 VL-CK 감마 경쇄와 한때 공-발현된(co-expressed) 새롭게 조작된 면역글로불린 중쇄의 결과이고, 실시예 1 내지 3에서 묘사된 BT 알파 His 쇄는 신규한 FAB 단편을 갖는 헤테로-이량체 1가의(즉, 하나의 항원을 위한 한 특이성을 갖음) 면역글로불린 분자의 새 형태를 제작하고, 여기서 CH1(γ1) 및 Cκ 불변 도메인은 각각 TCR 델타 및 TCR 감마 불변 도메인 단백질-단백질 인터페이스에 기초한 신규한 단백질-단백질 인터페이스를 가지며, 헤테로-이량체 조작된 CH3 도메인과 함께 Fc 단편은 TCR 알파 및 베타 불변 도메인에 기초한다(실시예 1 내지 3). 상기 신규한 면역글로불린 분자는 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마(서열번호 41, 7, 및 42)로 축약된다.

VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc 쇄 및 VL(항-hCD19)-CK 감마 쇄 cDNA 암호 서열을 제작하기 위하여(각각 서열번호 43 및 44), CH1 델타 도메인 서열(서열번호 45) 및 CK 감마 도메인 서열(서열번호 46) 모두를 고려하는 독특한 cDNA는 GENEART AG(Resensburg, 독일)에 의해 합성되었다. PCR 조립 기술을 사용에서, 각 쇄는 개별적으로 증폭되었고, 각각의 조작된 불변 도메인 cDNA 암호 서열은 그들 각각의 가변 도메인(각각 GENEART AG에 의해 합성된다)을 위한 합성 cDNA 암호의 다운스트림에 융합된다. VH(항-hCD19)-CH1 델타 cDNA 단편 결과는 마지막의 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc 쇄를 제작하기 위하여 C-말단 c-myc 태그를 갖는 BT 베타 F405A 쇄의 업스트립에 추가적으로 융합된다. 그 뒤에, 상기 두 쇄는 실시예 1에 묘사된 변형된 pREP4 벡터에 독립적으로 결찰된다. 상기 BT 알파 His 쇄는 실시예 1로부터 유래했다(서열번호 10).

VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자의 일과성 발현을 위해, 세 조작된 쇄 벡터의 동량이 상기 언급된 바와 같이(실시예 1) 부유액-적응된 HEK293-EBNA 세포 안으로 공-형질주입되었다. FAB 조작된 헤테로-이량체 컨스트럭트는 단백질-A 친화성 크로마토그래피를 사용하여 무세포 상층액으로부터 정제되었고, 추가적인 분석을 위해 사용되었다(실시예 1에 따라 진행). FAB 조작된 헤테로-이량체의 정확한 조립은 비-감소 상태하에서 샘플의 SDS-PAGE 분석에 의해 평가될 수 있고, 정확히 조립된 분자는 가능한 호모-이량체 종으로부터 다른 SDS-PAGE 유동성을 가짐이 예측된다.

일과성 형질주입 수확량은 16 ㎎/L 이상이었다. 전형적인 SDS-PAGE 분석의 결과는 도 13에서 보여진다. 단백질-A 정제 후, VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자(레인 1)는 어떤 호모-이량체 종(B) 및 어떤 반-분자(C) 존재와 함께 생산된 주요 종(A)이다.

비-감소 SDS-폴리아크릴아마이드(polyacryamide)(4 - 12%) 겔 밴드의 밀도계측 분석 스캐닝에 의해 단백질-A 정제된 조제용 물질에 있어서 호모-이량체에 대한 헤테로-이량체의 비율을 측정하는 것은 가능하다(실시예 1에 따라 진행). 도 14는 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자가 단백질-A 정제된 물질에서 적어도 50%를 나타냄을 보여준다.

VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자의 열 안정성은 열량 측정(DSC)을 사용하여 평가되었다(방법은 실시예 2 참조). 단일 항체는 그들의 이소타입의 특성인 융해곡선을 갖고, 이는 일반적으로 FAB 단편, CH2 및 CH3 도메인을 위한 변화로 결합된다; 항체 융해곡선내에서, FAB 단편을 위한 특이 변화는 쉽게 확인될 수 있다[Garber, E. and S.J. Demarest, 2007, Biochem Biophys Res Commun., 355(3):751-7]. 도 15는 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자를 위한 열 펼쳐진 실험의 예를 보여준다: 70.7℃ 및 ~ 75℃에서 두 겹쳐진 급격한 변화가 관찰되었고, 조작된 FAB 단편, CH2 도메인, 및 조작된 CH3 도메인의 융해 변화를 위해 설명되었다. BT 알파 His_BT 베타(F405A) HA 헤테로-이량체 Fc는 이전의 측정에 있어서(실시예 2) 70℃에서 단일의 급격한 융해 변화를 나타내었고, 이는 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK 감마 분자의 조작된 FAB 단편의 융해 변화가 ~ 75℃의 중간지점(mid-point)을 가진다고 결론지을 수 있다. 열 흡수피크가 기록된 후, 어떠한 급격한 감소도 기록되지 않은 것은 중요하고, 이는 침전 또는 응집 형성이 열에 펼쳐진 뒤 발생하지 않음을 나타낸다[Liu H et al., Immunol Lett, 106(2):144-53(2006)]. 결론적으로, 상기 열에 펼쳐진 연구는 TCR 델타 및 감마 불변 도메인에 기초한 조작된 단백질-단백질 인터페이스와 함께 신규한 FAB 단편이 추가적인 치료상의 헤테로-이량체 면역글로불린의 제작을 위해 안정하고 적합함을 나타낸다; 더욱 정확하게, 면역글로불린 분자는 불변 도메인의 두 신규한 헤테로-이량체 쌍, 인간 T-세포 수용체 불변 도메인 알파 및 베타에 기초한 조작된 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 한 쌍, 및 인간 T-세포 수용체 불변 도메인 델타 및 감마에 기초한 조작된 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 다른 쌍을 포함한다.

실시예 6: 인간 α/β T 세포 수용체 불변 도메인에 기초한 CH3-CH3 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 헤테로-이량체 Fc, 및 호모-이량체 IGHG1 CH3 불변 도메인에 기초한 CH1-CK 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 FAB 단편과 함께 1가의 면역글로불린 제작

본 실시예는 적어도 세 인간 면역글로불린 쇄를 나타낸다: 한 쇄는 인간 중쇄 불변 도메인 CH1(γ1), 경첩(γ1), CH2(γ1) 및 BT 알파 또는 BT 베타 쇄, 한 BT 알파 또는 한 BT 베타 쇄로부터 조작된 CH3 도메인과 융합된 중쇄 가변 도메인으로 구성되고, 한 쇄는 인간 Cκ 경쇄 불변 도메인과 융합된 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서 CH1(γ1)(IGHG1, 118 - 215 EU 잔기) 및 Cκ(IGKC, 108 - 214 EU 잔기) 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 인간 CH3(γ1) 불변 도메인(IGHG1, 341 - 447 EU 잔기; 서열번호 47)로부터 단백질-단백질 인터페이스의 집합과 함께 선택된 위치에 주의 깊게 치환되었고, 적어도 51.9%의 효능으로 FAB 조작된 헤테로-이량체 면역글로불린 분자 내로 조립되었다.

돌연변이는 인간 FAB(γ1) 단편의 크리스탈 구조와 함께 Fc(γ1) 단편의 크리스탈 구조에 덮어씌운 것의 분석으로부터 유래되었다. Fc(γ1) 단편 및 FAB(γ1) 단편 3D 구조 모두 단백질 데이타 뱅크[PDB는 각각 1H3U 및 1VGE로 암호화되었다; Krapp S et al., J Mol Biol, 325(5):979-89(2003), Chacko S et al., J Biol Chem, 271(21):12191-8(1996)]로부터 검색되었고, 코트 소프트웨어[Emsley P and Cowtan K, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 60(Pt 12 Pt 1):2126-32(2004)]로 겹쳐졌으며, 아셀리스(Cambridge, UK)의 디스커버리-스튜디오 소프트웨어로 추가적으로 시각화되었다. 호모-이량체 CH3(γ1) 불변 도메인 쌍 및 CH1(γ1)-Cκ 헤테로-이량체의 겹쳐진 3D 구조의 단백질-단백질 인터페이스 검사는 이론적 설계을 위한 시작점으로써 사용되었다. 몇몇의 파라메터가 고려되었다; 이는 프롤린 잔기의 보존, 및 CH1(γ1)-Cκ 헤테로-이량체로부터 정전기의 접촉의 부분뿐만 아니라 도메인 핵심의 무결성에 있어서 포함된 아미노산 위치의 보존; CH1(γ1)-Cκ 헤테로-이량체에 있어서 발견된 특이적 소수성 접촉 제거, 및 이들을 호모-이량체 CH3 불변 도메인 쌍에 있어서 발견된 선택된 소수성 접촉으로 교체하는 것을 포함하나 이에 한정하지 않는다. 상기 분석은 아미노산 치환의 두 집합의 디자인을 이끌고, 첫번째 집합은 CH1(γ1) 불변 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 CH1(γ1) 불변 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 사이의 동등한 3D 위치로부터 기원하였고, 두번째 집합은 Cκ 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 인간 CH3(γ1) 불변 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 사이의 동등한 3D 위치로부터 기원하였다; 두 조작된 도메인의 제작에 의해서, 새롭고 독특한 도메인은 헤테로-이량체화 할 수 있으나, 자연적으로 발생한 CH1(γ1)-Cκ 헤테로-이량체 도메인 쌍과는 달랐다.

FAB 단편의 조작된 중쇄는 가변 중쇄 도메인을 포함하고, CH3(γ1) 불변 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서, 이의 단백질-단백질 인터페이스로부터 유래한 돌연변이를 갖는 인간 CH1(γ1) 도메인은 "VH-CH13"이라 지정되었고(도 16), 그동안 조작된 카파 경쇄는 가변 경쇄 도메인을 포함하고, CH3(γ1) 불변 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 이의 단백질-단백질 인터페이스로부터 유래된 돌연변이를 갖는 조작된 인간 Cκ 불변 도메인은 "VL-CK3"으로 지정되었다(도 16). 더욱 구체적으로, VH-CH13은 하기의 치환과 함께 조작된 CH1(γ1) 도메인을 갖는 조작된 중쇄 FAB 단편으로 구성: S124Q, F126Y, K133D, S134E, T139Q, A141S, G143T, H168K, F170T, Q175D, S181F, S183Y, V185K(서열번호 48)(EU 번호); 및 따라서, 상기 VL-CK3은 하기의 치환과 함께 조작된 Cκ 도메인을 갖는 조작된 경쇄 FAB 단편으로 구성된다: S114Q, F116Y, F118L, E123D, Q124E, V133T, N137K, Q160K, S162T, T164V, S174F, S176Y, T178K(서열번호 49)(EU 번호).

본 실시예에서, PCT 출원번호 WO 2010/095031에서 공개된 인간화된 항 인간 CD19 항체로부터의 가변 중쇄 및 경쇄 도메인[VH(항-hCD19), 및 VL(항-hCD19)로 축약]이 VH-CH13 및 VL-CK3 쇄 각각을 만들기 위한 인풋으로 사용되었다. 상기 묘사된 BT 베타 쇄[본 실시예에서, 상기 쇄는 C-말단에 c-myc 태그(EQKLISEEDLN)를 갖고, BT 베타 c-myc 쇄로 축약된다고 기록]의 업스트립에 융합된 VH-CH13 쇄의 결합은 상기 묘사된 새롭게 조작된 VL-CK3 경쇄와 한때 공-발현된 새롭게 조작된 면역글로불린 중쇄의 결과이고, 실시예 1 내지 3에서 묘사된 BT 알파 His 쇄는 신규한 FAB 단편을 갖는 헤테로-이량체 1가의(즉, 하나의 항원을 위한 한 특이성을 갖음) 면역글로불린 분자의 새 형태를 제작하고, 여기서 CH1(γ1) 및 Cκ 불변 도메인은 각각 CH3(γ1) 불변 도메인 호모-이량체 단백질-단백질 인터페이스에 기초한 신규한 단백질-단백질 인터페이스를 가지며, 헤테로-이량체 조작된 CH3 도메인과 함께 Fc 단편은 TCR 알파 및 베타 불변 도메인에 기초한다(실시예 1 내지 3). 상기 신규한 면역글로불린 분자는 VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK3(서열번호 50, 7, 및 51)로 축약된다.

VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc 쇄 및 VL(항-hCD19)-CK3 쇄 cDNA 암호 서열을 제작하기 위하여(각각 서열번호 52 및 53), CH13 도메인 서열(서열번호 54) 및 CK3 도메인 서열(서열번호 55) 모두를 고려하는 독특한 cDNA는 GENEART AG(Resensburg, 독일)에 의해 합성되었다. PCR 조립 기술을 사용에서, 각 쇄는 개별적으로 증폭되었고, 각각의 조작된 불변 도메인 cDNA 암호 서열은 그들 각각의 가변 도메인(각각 GENEART AG에 의해 합성된다)을 위한 합성 cDNA 암호의 다운스트림에 융합된다. VH(항-hCD19)-CH13 cDNA 단편 결과는 마지막의 VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc 쇄를 제작하기 위하여 C-말단 c-myc 태그를 갖는 BT 베타 F405A 쇄의 업스트립에 추가적으로 융합된다. 그 뒤에, 상기 두 쇄는 실시예 1에 묘사된 변형된 pREP4 벡터에 독립적으로 결찰된다. 상기 BT 알파 His 쇄는 실시예 1로부터 유래했다(서열번호 10).

VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK3 분자의 일과성 발현을 위해, 세 조작된 쇄 벡터의 동량이 상기 언급된 바와 같이(실시예 1) 부유액-적응된 HEK293-EBNA 세포 안으로 공-형질주입되었다. FAB 조작된 헤테로-이량체 컨스트럭트는 단백질-A 친화성 크로마토그래피를 사용하여 무세포 상층액으로부터 정제되었고, 추가적인 분석을 위해 사용되었다(실시예 1에 따라 진행). FAB 조작된 헤테로-이량체의 정확한 조립은 비-감소 상태하에서 샘플의 SDS-PAGE 분석에 의해 평가될 수 있고, 정확히 조립된 분자는 가능한 호모-이량체 종으로부터 다른 SDS-PAGE 유동성을 가짐이 예측된다.

일과성 형질주입 수확량은 50 ㎎/L이었다. 전형적인 SDS-PAGE 분석의 결과는 도 17에서 보여진다. 단백질-A 정제 후, VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK3 분자(레인 1)는 어떤 호모-이량체 종(B) 및 어떤 반-분자(C) 존재와 함께 생산된 주요 종(A)이다.

비-감소 SDS-폴리아크릴아마이드(4 - 12%) 겔 밴드의 밀도계측 분석 스캐닝에 의해 단백질-A 정제된 조제용 물질에 있어서 호모-이량체에 대한 헤테로-이량체의 비율을 측정하는 것은 가능하다(실시예 1에 따라 진행). 도 18은 VH(항-hCD19)-CH13-BT 베타 c-myc_BT 알파 His_VL(항-hCD19)-CK3 분자가 단백질-A 정제된 물질에서 적어도 51.9%를 나타냄을 보여준다.

결론적으로, 본 실시예는 호모-이량체 CH3(γ1) 불변 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 기초한 조작된 단백질-단백질 인터페이스와 함께 신규한 FAB 단편이 추가적인 치료상의 헤테로-이량체 면역글로불린의 제작을 위해 안정하고 적합함을 나타낸다; 더욱 정확하게, 면역글로불린 분자는 불변 도메인의 두 신규한 헤테로-이량체 쌍, 인간 T-세포 수용체 불변 도메인 알파 및 베타에 기초한 조작된 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 한 쌍, 및 호모-이량체 CH3(γ1) 불변 도메인에 기초한 조작된 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 다른 쌍을 포함한다.

실시예 7: 자연적으로 발생한 호모-이량체 또는 헤테로-이량체 면역글로불린 상과(super-family) 구성원으로부터 유래된 조작된 단백질-단백질 인터페이스와 면역글로불린 도메인

본 실시예는 수용체(acceptor) 도메인에 있어서 신규한 단백질-단백질 인터페이스를 생성하기 위한 인간 면역글로불린 도메인의 다양한 셋트(set)를 제공하고, 한 조작된 도메인이 다른 조작된 도메인과 헤테로-이량체화(hetero-dimerization) 또는 호모-이량체화(homo-dimerization)에 의해 상호작용하는 것을 허용한다.

돌연변이는 자연적으로 발생한 이량체 면역글로불린 상과 구성원으로부터, 예를 들어 자연적으로 발생한 호모-이량체 인간 IGHG1 CH3 도메인으로부터 또는 인간 TCRα[TRAC를 참조한 IMGT^®, 국제 면역 유전학 정보 시스템^®; Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)], TCRβ(TRBC1 및 TRBC2를 참조한 IMGT^®), TCRγ[TRGC1(2x), 및 TRGC2(3x)를 참조한 IMGT^®) 및 TCRδ(TRDC를 참조한 IMGT^®) 불변 도메인과 같은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체로부터 유래되었고, γ1, γ2, γ3, γ4, α1, α2, ε, 및 μ 이소타입(각각 IGHG1, IGHG2, IGHG3, IGHG4, IGHA1, IGHA2, IGHE, IGHM을 참조한 IMGT^®)의 인간 중쇄 면역글로불린 불변 도메인안으로 또는 인간 면역글로불린 경쇄 불변 도메인 κ(IGKC를 참조한 IMGT^®)안으로 또는 인간 면역글로불린 경쇄 불변 도메인 λ1, λ2, λ3, λ6, 및 λ7(각각 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7을 참조한 IMGT^®)안으로 도입되었다.

본 실시예에서, 아미노산 치환은 공공의 데이터베이스(표 2 참조) 또는 유용성에 따른 모델인 인간 IgG 도메인의 3D 구조와 함께 TCR 도메인[PDB 코드: IKGC 또는 1J8H(TCRα-TCRβ) 및 1HXM(TCRδ-TCRγ)]의 3D 구조를 덮어씌운 것의 분석으로부터 유래된다. 또한, 아미노산 치환은 쌍의 현명한 방식에 있어서 인간 IgG 도메인의 3D 구조에 덮어씌운 것의 분석으로부터 유래된다; 예를 들어, 도메인의 인간 IGHG1 CH3 호모-이량체 쌍은 인간 IGHG1 CH1-Cκ 헤테로-이량체에 겹쳐진다. 모델은 하기의 인풋과 함께 자동화된 모드(mode)로 구조 상동성-모델링(homology-modeling) 서버(server) SWISS-MODEL[Arnold K et al., Bioinformatics, 22(2):195-201(2006); http://swissmodel.expasy.org]을 사용하여 계산되었다: 단백질 도메인 아미노산 서열은 연구에 필요에 따라 특이적 아미노산 치환과 함께 IMGT^® 데이터베이스로부터 유래되었고[국제 면역 유전학 정보 시스템^®; Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9 (2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)], 3D 구조 주형(template)은 SWISS-MODEL 소프트웨어에 의해 자동적으로 확인된 관련된 단백질 도메인으로부터 실험적으로 풀린 3D 구조로 구성된다. 모든 실험적으로 풀린 3D 구조는 RCSB 단백질 데이터 은행(Protein Date Bank)로부터 유래되었다[www.pdb.org; Berman HM et al., Nucleic Acids Res, 28(1):235-42(2000)]. 덮어씌운 것은 코트 소프트웨어[Emsley P and Cowtan K, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 60(Pt 12 Pt 1):2126-32(2004)]를 사용하여 수행되었으며, 아셀리스(Cambridge, UK)의 디스커버리-스튜디오 소프트웨어로 추가적으로 시각화되었다. 돌연변이의 각 집합의 선택은 실시예 1에 묘사된 것과 유사한 기준을 따랐다.

기부(donor) 도메인 또는 부모(parent) 도메인으로서 사용되기 위한 호모-이량체 또는 헤테로-이량체의 예는 인간 IGHA1 CH1, IGHA1 CH2, IGHA1 CH3, IGHA2 CH1, IGHA2 CH2, IGHA2 CH3, IGHD CH1, IGHD CH2, IGHD CH3, IGHG1 CH1, IGHG1 CH2, IGHG1 CH3, IGHG2 CH1, IGHG2 CH2, IGHG2 CH3, IGHG3 CH1, IGHG3 CH2, IGHG3 CH3, IGHG4 CH1, IGHG4 CH2, IGHG4 CH3, IGHGP CH1, IGHGP CH2, IGHGP CH3, IGHE CH1, IGHE CH2, IGHE CH3, IGHE CH4, IGHM CH1, IGHM CH2, IGHM CH3, IGHM CH4, IGKC, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, IGLC7, TRAC, TRBC1, TRBC2, TRDC, TRGC1, TRGC2(2x), 및 TRGC2(3x)로 구성된 군으로부터 선택된다.

인간 IGHG1, IGHG2, IGHG3, 및 IGHG4 이소타입 사이의 CH1-CH3 도메인을 위한 아미노산 변화의 세부사항은 도 19에서 찾을 수 있다.

인간 IGHG1-G4 CH1, IGHG1-G4 CH2, IGHG1-G4 CH3, IHGE CH4, IGHM CH4, IGKC, 및 IGLC(IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7) 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 도입될 수 있는 인간 TCR 불변 도메인(TRAC, TRBC2, TRDC, 및 TRGC1) 또는 인간 IGHG1 CH3 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 유래된 치환의 완전한 목록은 도 20 내지 23에서 제공되고, 이는 IMGT^® 데이터베이스에 있어서 언급된 바와 같이 IMGT^® 번호에 상응한다[http://imgt.cines.fr/, the international ImMunoGeneTics information system®; Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)]

TCR 불변 도메인(α, β, δ, γ) 또는 IGHG1의 CH3 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 유래된 키 아미노산 잔기와 함께 치환되기 위해 고려된 바람직한 위치의 완전한 개요는 또한 하기에 제공된다. IMGT^® 번호가 면역글로불린 상과 도메인의 3D 구조의 비교분석(comparative analysis)에 기초한 이후, 이는 기부 및 수용체(부모) 도메인 사이에서 치환의 3D 동등한 위치에 정의된다.

7.1. 분자 모델링(modeling)의 실시예

7.1.1. 인간 TCRα-TCRβ 불변 도메인 단백질-단백질 인터페이스에 기초한 헤테로-이량체 도메인 쌍의 모델링

a. 치환에 기초한 TCRα

부모 면역글로불린 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 3D 동등한 아미노산 서열 위치의 치환에 사용된 인간 TCRα 불변 도메인(기부 도메인)의 단백질-단백질 인터페이스로부터 아미노산 서열 위치는 하기 목록에 있다:

ㆍ인간 TCRα로부터의 기부 위치는 하기에 있다: 20, 22, 26, 79, 85.1, 86, 88, 및 90(하기의 아미노산을 가짐: K20, V22, T26, Y79, S85.1, V86, W88, 및 N90), 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다[국제 면역 유전학 정보 시스템^®; Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)].

ㆍ모든 인간 면역글로불린 도메인에 있어서 수용체 위치는 하기에 있다: 20, 22, 26, 79, 85.1, 86, 88, 및 90; α1:CH2(78), α2:CH2(78), ε:CH2(81) 및 ε:CH3(80)에 있어서 79 위치는 제외, 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

b. 치환에 기초한 TCRβ

부모 면역글로불린 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 3D 동등한 아미노산 서열 위치의 치환에 사용된 인간 TCRβ 불변 도메인(기부 도메인)의 단백질-단백질 인터페이스로부터 아미노산 서열 위치는 하기 목록에 있다:

ㆍ인간 TCR 베타로부터의 기부 위치는 하기에 있다: 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84.1, 84.3, 85.1, 86, 88, 및 90(하기의 아미노산을 가짐: E3, A5, F7, T20, V22, T26, D81, L84.1, E84.3, C85.1 또는 A85.1 또는 S85.1, S86, R88, 및 R90), 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

ㆍ모든 인간 면역글로불린 도메인에 있어서 수용체 위치는 하기에 있다: 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88, 및 90; α1:CH2(80), α2:CH2(80), ε:CH2(83)에 있어서 81 위치는 제외; α1:CH2(83), α2:CH2(83)에 있어서 84 위치는 제외, 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

c. 인간 IGHG1 CH3 호모-이량체에 인간 TCRα-TCRβ 불변 도메인 단백질-단백질 인터페이스 모델링

인간 TCRα/β 불변 도메인으로부터 유래된 단백질-단백질 인터페이스와 함께 인간 IGHG1 CH3 호모-이량체에 기초한 신규한 헤테로-이량체의 모델을 제작하기 위하여, 선택된 아미노산과 함께 인간 IGHG1 CH3 단량체의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 이의 두 모델이 계산되었다(상기 방법 참조). 첫번째 단량체는 인간 TCRα 불변 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터의 아미노산과 함께 이의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 선택된 동등한 3D 위치에 치환되고, 두번째 단량체는 인간 TCRβ 불변 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 아미노산과 함께 이의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 선택된 동등한 3D 위치에 치환된다. 두 조작된 단백질 도메인을 위한 결과 모델의 Cα 추적은 외관검사(visual inspection)을 위해 실험적으로 풀린 부모 CH3 호모-이량체 3D 구조(PDB는 1H3U으로 암호화되었다)에 추가적으로 겹쳐졌다. 또한, 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 전산분석(computational analysis)은 온라인 PIC 웹 서버[http://crick.mbu.iisc.ernet.in/~PIC/, Tina KG et al., Nucleic Acids Res, 35(Web Server issue):W473-6(2007)]를 사용하여 수행되었다. 표 3 및 4 목록의 조작된 헤테로-이량체의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 상호작용하는 잔기는 전산분석, 및 직접적인 측정으로 확인하였다; 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다. 자연적으로 발생한 호모-이량체 및 헤테로-이량체 단백질-단백질 인터페이스 잔기로부터 유래된 치환과 함께 그들의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 조작된 면역글로불린 도메인 쌍의 많은 수의 모델링을 위해, 20, 22, 26, 85.1, 86 및 88 잔기, 구체적으로 22, 85.1, 86 및 88 잔기(IMGT^®에 따른 번호)는 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 사이에 가장 중요한 접촉으로 제공되기 위해 반복적으로 발견된다. 더욱 일반적으로, 외관검사 및 단백질-단백질 상호작용의 계산[온라인 PIC 웹 서버(http://crick.mbu.iisc.ernet.in/~PIC/, Tina KG et al., Nucleic Acids Res, 35(Web Server issue):W473-6(2007) 또는 당업자에게 알려진 다른 단백질-단백질 상호작용 프로그램을 사용]에 의해서, 20, 22, 26, 85.1, 86 및 88 잔기, 구체적으로 22, 85.1, 86 및 88 잔기는 모든 조작된 도메인의 헤테로-이량체화 또는 호모-이량체화를 위한 가장 중요한 상호작용을 매개하기 위해 발견되었다.

이론에 얽매이지 않고, 새롭게 조작된 도메인 단백질-단백질 인터페이스의 분석은 상호작용하는 잔기의 네 중요한 집합을 확인하였다: 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 알파)에 있어서 88 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린(BT 베타)에 있어서 85.1 및 86 잔기와 상호작용하고, 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 알파)에 있어서 85.1 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린(BT 베타)에 있어서 86 잔기와 상호작용하며, 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 알파)에 있어서 22 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린(BT 베타)에 있어서 22 잔기 및 86 잔기와 상호작용하고, 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 알파)에 있어서 20 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린(BT 베타)에 있어서 26 잔기와 상호작용한다. 반대로, 두번째 조작된 면역글로불린(BT 베타)에 있어서 88 잔기는 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 알파)에 있어서 85.1 및 86 잔기와 상호작용하고, 두번째 조작된 면역글로불린(BT 베타)에 있어서 85.1 잔기는 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 알파)에 있어서 86 잔기와 상호작용하며, 두번째 조작된 면역글로불린(BT 베타)에 있어서 22 잔기는 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 알파)에 있어서 22 잔기 및 86 잔기와 상호작용하고, 두번째 조작된 면역글로불린(BT 베타)에 있어서 20 잔기는 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 알파)에 있어서 26 잔기와 상호작용한다.

새롭게 조작된 CH3 헤테로-이량체에 있어서 TCRα-CH3 단량체의 단백질-단백질 인터페이스부터 TCRβ-CH3 단량체의 단백질-단백질 인터페이스까지 위치 사이의 상호작용. IMGT ^® 번호가 사용되었다.

TCRα-CH3(BT 알파)	TCRβ-CH3(BT 베타)
20	3, 5, 7, 26, 84.2, 85.1, 86
22	5, 7, 22, 86, 88
26	20, 88, 90
79	26, 81, 84, 85.1, 86
85.1	20, 81, 86, 88, 90
86	22, 81, 84, 86, 88
88	26, 81, 84, 84.2, 85.1, 86
90	26,84.2,85.1

표 4. 새롭게 조작된 CH3 헤테로-이량체에 있어서 TCRβ-CH3 단량체의 단백질-단백질 인터페이스부터 TCRα-CH3 단량체의 단백질-단백질 인터페이스까지 위치 사이의 상호작용. IMGT ^® 번호가 사용되었다.

TCRβ-CH3(BT 베타)	TCRα-CH3(BT 알파)
3	20
5	20, 22
7	20, 22
20	26, 85.1,86
22	22, 86
26	20, 79, 88, 90
81	79, 85.1, 86, 88
84	79, 86, 88
84.2	20, 79, 88, 90
85.1	20, 79, 86, 88, 90
86	20, 22, 79, 85.1, 86
88	22, 26, 85.1, 86
90	26, 85.1

7.1.2. 인간 TCRδ-TCRγ 불변 도메인 단백질-단백질 인터페이스에 기초한 헤테로-이량체 도메인의 모델링a. 치환에 기초한 TCRδ

부모 면역글로불린 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 3D 동등한 아미노산 서열 위치의 치환에 사용된 인간 TCRδ 불변 도메인(기부 도메인)의 단백질-단백질 인터페이스로부터 아미노산 서열 위치는 하기 목록에 있다:

ㆍ인간 TCR 델타로부터의 기부 위치는 하기에 있다: 7, 20, 22, 27, 79, 82, 84.2, 85.1, 86, 88, 및 90(하기의 아미노산을 가짐: M7, N20, A22, E27, F79, A82, S84.2, N85.1, V86, L88, 및 K90), 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

ㆍ모든 인간 면역글로불린 도메인에 있어서 수용체 위치는 하기에 있다: 7, 20, 22, 27, 79, 81, 84.2, 85.1, 86, 88, 90; α1:CH2(78), α2:CH2(78), ε:CH2(81) 및 ε:CH3(80)에 있어서 79 위치는 제외; α1:CH2(80), α2:CH2(80), ε:CH2(83) 및 ε:CH3(82)에 있어서 81 위치는 제외; α1:CH2(84), α2:CH2(84), ε:CH2(84.4)에 있어서 84.2 위치는 제외, 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

b. 치환에 기초한 TCRγ

부모 면역글로불린 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 3D 동등한 아미노산 서열 위치의 치환에 사용된 인간 TCRγ 불변 도메인(기부 도메인)의 단백질-단백질 인터페이스로부터 아미노산 서열 위치는 하기 목록에 있다:

ㆍ인간 TCR 감마로부터의 기부 위치는 하기에 있다: 3, 5, 20, 22, 26, 27, 81, 84, 85.1, 86, 및 88(하기의 아미노산을 가짐: K3, T5, T20, L22, E26, K27, G81, M84, M85.1, F86, 및 W88), 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

ㆍ모든 인간 면역글로불린 도메인에 있어서 수용체 위치는 하기에 있다: 3, 5, 20, 22, 26, 27, 81, 84, 85.1, 86, 88; α1:CH2(80), α2:CH2(80), ε:CH2(83)에 있어서 81 위치는 제외; γ1, γ2, γ3, γ3:CH3(모든 83을 위한) α1:CH2(83), α2:CH2(83), ε:CH2(84.1), μ:CH2(83) 및 μ:CH3(83)에 있어서 84 위치는 제외, 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

c. 인간 IGHG1 CH3 호모-이량체에 인간 TCRδ-TCRγ 불변 도메인 단백질-단백질 인터페이스 모델링

인간 TCRδ/γ 불변 도메인으로부터 유래된 단백질-단백질 인터페이스와 함께 인간 IGHG1 CH3 호모-이량체에 기초한 신규한 헤테로-이량체의 모델을 제작하기 위하여, 선택된 아미노산과 함께 인간 IGHG1 CH3 단량체의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 이의 두 모델이 계산되었다(상기 방법 참조). 첫번째 단량체는 인간 TCRδ 불변 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터의 아미노산과 함께 이의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 선택된 동등한 3D 위치에 치환되고, 두번째 단량체는 인간 TCRγ 불변 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 아미노산과 함께 이의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 선택된 동등한 3D 위치에 치환된다. 두 조작된 단백질 도메인을 위한 결과 모델의 Cα 추적은 외관검사(visual inspection)을 위해 실험적으로 풀린 부모 CH3 호모-이량체 3D 구조(PDB는 1H3U으로 암호화되었다)에 추가적으로 겹쳐졌다. 또한, 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 전산분석(computational analysis)은 온라인 PIC 웹 서버[http://crick.mbu.iisc.ernet.in/~PIC/, Tina KG et al., Nucleic Acids Res, 35(Web Server issue):W473-6(2007)]를 사용하여 수행되었다. 표 5 및 6 목록의 조작된 헤테로-이량체의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 상호작용하는 잔기는 전산분석, 및 직접적인 측정으로 확인하였다; 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다. 자연적으로 발생한 호모-이량체 및 헤테로-이량체 단백질-단백질 인터페이스 잔기로부터 유래된 치환과 함께 그들의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 조작된 면역글로불린 도메인 쌍의 많은 수의 모델링을 위해, 20, 22, 26, 85.1, 86 및 88 잔기, 구체적으로 22, 85.1, 86 및 88 잔기(IMGT^®에 따른 번호)는 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 사이에 가장 중요한 접촉으로 제공되기 위해 반복적으로 발견된다. 더욱 일반적으로, 외관검사 및 단백질-단백질 상호작용의 계산[온라인 PIC 웹 서버(http://crick.mbu.iisc.ernet.in/~PIC/, Tina KG et al., Nucleic Acids Res, 35(Web Server issue):W473-6(2007) 또는 당업자에게 알려진 다른 단백질-단백질 상호작용 프로그램을 사용]에 의해서, 20, 22, 26, 85.1, 86 및 88 잔기, 구체적으로 22, 85.1, 86 및 88 잔기는 모든 조작된 도메인의 헤테로-이량체화 또는 호모-이량체화를 위한 가장 중요한 상호작용을 매개하기 위해 발견되었다.

이론에 얽매이지 않고, 새롭게 조작된 도메인 단백질-단백질 인터페이스의 분석은 상호작용하는 잔기의 네 중요한 집합을 확인하였다: 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 델타)에 있어서 88 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린(BT 감마)에 있어서 85.1 및 86 잔기와 상호작용하고, 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 델타)에 있어서 85.1 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린(BT 감마)에 있어서 86 잔기와 상호작용하며, 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 델타)에 있어서 22 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린(BT 감마)에 있어서 22 잔기 및 86 잔기와 상호작용하고, 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 델타)에 있어서 20 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린(BT 감마)에 있어서 26 잔기와 상호작용한다. 반대로, 두번째 조작된 면역글로불린(BT 감마)에 있어서 88 잔기는 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 델타)에 있어서 85.1 및 86 잔기와 상호작용하고, 두번째 조작된 면역글로불린(BT 감마)에 있어서 85.1 잔기는 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 델타)에 있어서 86 잔기와 상호작용하며, 두번째 조작된 면역글로불린(BT 감마)에 있어서 22 잔기는 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 델타)에 있어서 22 잔기 및 86 잔기와 상호작용하고, 두번째 조작된 면역글로불린(BT 감마)에 있어서 20 잔기는 첫번째 조작된 면역글로불린(BT 델타)에 있어서 26 잔기와 상호작용한다.

새롭게 조작된 CH3 헤테로-이량체에 있어서 TCRδ-CH3 단량체의 단백질-단백질 인터페이스부터 TCRγ-CH3 단량체의 단백질-단백질 인터페이스까지 위치 사이의 상호작용. IMGT ^® 번호가 사용되었다.

TCRδ-CH3(BT 델타)	TCRγ-CH3(BT 감마)
7	20, 22
20	3, 5, 26, 27, 85.1, 86
22	5, 22, 26, 86
26	20, 88
27	13
79	26, 81, 84, 85.1, 86
81	81, 84, 85.1, 86
84.2	20, 81, 88
85.1	20, 81, 86, 88
86	20, 22, 84, 86, 88
88	26, 81, 84, 85.1, 86
90	26, 27, 85.1, 90

표 6. 새롭게 조작된 CH3 헤테로-이량체에 있어서 TCRγ-CH3 단량체의 단백질-단백질 인터페이스부터 TCRδ-CH3 단량체의 단백질-단백질 인터페이스까지 위치 사이의 상호작용. IMGT ^® 번호가 사용되었다.

TCRγ-CH3(BT 감마)	TCRδ-CH3(BT 델타)
3	20
5	20, 22
20	7, 26, 84.2, 85.1, 86
22	7, 22, 79, 86
26	20, 79, 88, 90
27	20, 90
81	81, 84.2, 85.1, 88
84	79, 81, 86, 88
85.1	20, 79, 81, 86, 88, 90
86	20, 22, 79, 81, 85.1, 86, 88
88	84.2, 85.1, 86

7.1.3. 인간 IGHG1 CH3 불변 도메인 쌍 단백질-단백질 인터페이스에 기초한 헤테로-이량체 도메인의 모델링부모 면역글로불린 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 3D 동등한 아미노산 서열 위치의 치환에 사용된 인간 IGHG1 CH3 불변 도메인(기부 도메인)의 단백질-단백질 인터페이스로부터 아미노산 서열 위치는 하기 목록에 있다:

a. IGHG1의 인간 CH3로부터의 기부 위치의 첫번째 셋트는 하기의 위치를 포함한다: 3, 5, 12, 13, 18, 20, 22, 79, 81, 84.2, 85.1, 86, 및 88(하기의 아미노산을 가짐: Q3, Y5, D12, E13, Q18, S20, T22, K79, T81, D84.2, F85.1, Y86, 및 K88), 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

모든 인간 면역글로불린 경쇄 도메인을 제외한 모든 인간 면역글로불린 도메인에 있어서 첫번째 셋트를 위한 수용체 위치는 하기에 있다: 3, 5, 12, 13, 18, 20, 22, 79, 81, 84.2, 85.1, 86, 및 88, γ1, γ2, γ3, γ3:CH2(모든 83을 위한)에 있어서 81 위치는 제외; γ1, γ2, γ3, γ3:CH2(모든 84.3을 위한)에 있어서 84.2 위치는 제외; α1:CH2(84), α2:CH2(84), ε:CH2(84.4)에 있어서 84.2 위치는 제외, 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

b. IGHG1의 인간 CH3로부터의 기부 위치의 두번째 셋트는 하기의 위치를 포함한다: 3, 5, 7, 12, 13, 22, 26, 79, 81, 84, 85.1, 86, 및 88(하기의 아미노산을 가짐: Q3, Y5, L7, D12, E13, T22, K26, K79, T81, V84, F85.1, Y86, 및 K88), 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

모든 인간 면역글로불린 경쇄 도메인에 있어서 두번째 셋트를 위한 수용체 위치는 하기에 있다: 3, 5, 7, 12, 13, 22, 26, 79, 81, 83, 85.1, 86, 및 88, 하기에 있어서 두번째 셋트인 인간 IGLC는 제외: 3, 5, 7, 11, 12, 22, 26, 79, 81, 83, 85.1, 86, and 88, 여기서 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다.

c. 인간 CH1-CK 헤테로-이량체 단백질-단백질 인터페이스에 인간 IGHG1 CH3 호모-이량체 단백질-단백질 인터페이스의 모델링

인간 IGHG1 CH3 불변 도메인(CH13)의 단백질-단백질 인터페이스로부터 유래된 동등한 3D 위치의 아미노산과 함께 이의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 인간 IGHG1 CH1 도메인의 모델을 제작하기 위하여, 인간 IGHG1 CH3 불변 도메인(CK3)의 단백질-단백질 인터페이스로부터 유래된 동등한 3D 위치의 아미노산과 함께 이의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 인간 Cκ 도메인의 모델이 계산되었다(상기 방법 참조). 두 조작된 단백질 도메인을 위한 결과 모델의 Cα 추적은 외관검사(visual inspection)을 위해 실험적으로 풀린 부모 인간 IGHG1 CH1-Cκ 헤테로-이량체 3D 구조(PDB는 1VGE로 암호화되었다)에 추가적으로 겹쳐졌다. 또한, 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 전산분석은 온라인 PIC 웹 서버[http://crick.mbu.iisc.ernet.in/~PIC/, Tina KG et al., Nucleic Acids Res, 35(Web Server issue):W473-6(2007)]를 사용하여 수행되었다. 표 7 및 8 목록의 조작된 헤테로-이량체의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 상호작용하는 잔기는 전산분석, 및 직접적인 측정으로 확인하였다; 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타낸다. 자연적으로 발생한 호모-이량체 및 헤테로-이량체 단백질-단백질 인터페이스 잔기로부터 유래된 치환과 함께 그들의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 조작된 면역글로불린 도메인 쌍의 많은 수의 모델링을 위해, 20, 22, 26, 85.1, 86 및 88 잔기, 구체적으로 22, 85.1, 86 및 88 잔기(IMGT^®에 따른 번호)는 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 사이에 가장 중요한 접촉으로 제공되기 위해 반복적으로 발견된다. 더욱 일반적으로, 외관검사 및 단백질-단백질 상호작용의 계산[온라인 PIC 웹 서버(http://crick.mbu.iisc.ernet.in/~PIC/, Tina KG et al., Nucleic Acids Res, 35(Web Server issue):W473-6(2007) 또는 당업자에게 알려진 다른 단백질-단백질 상호작용 프로그램을 사용]에 의해서, 20, 22, 26, 85.1, 86 및 88 잔기, 구체적으로 22, 85.1, 86 및 88 잔기는 모든 조작된 도메인의 헤테로-이량체화 또는 호모-이량체화를 위한 가장 중요한 상호작용을 매개하기 위해 발견되었다.

이론에 얽매이지 않고, 새롭게 조작된 도메인 단백질-단백질 인터페이스의 분석은 상호작용하는 잔기의 네 중요한 집합을 확인하였다: 첫번째 조작된 면역글로불린(CH13)에 있어서 88 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린(CK3)에 있어서 85.1 및 86 잔기와 상호작용하고, 첫번째 조작된 면역글로불린(CH13)에 있어서 85.1 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린(CK3)에 있어서 86 잔기와 상호작용하며, 첫번째 조작된 면역글로불린(CH13)에 있어서 22 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린(CK3)에 있어서 22 잔기 및 86 잔기와 상호작용하고, 첫번째 조작된 면역글로불린(CH13)에 있어서 20 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린(CK3)에 있어서 26 잔기와 상호작용한다. 반대로, 두번째 조작된 면역글로불린(CK3)에 있어서 88 잔기는 첫번째 조작된 면역글로불린(CH13)에 있어서 85.1 및 86 잔기와 상호작용하고, 두번째 조작된 면역글로불린(CK3)에 있어서 85.1 잔기는 첫번째 조작된 면역글로불린(CH13)에 있어서 86 잔기와 상호작용하며, 두번째 조작된 면역글로불린(CK3)에 있어서 22 잔기는 첫번째 조작된 면역글로불린(CH13)에 있어서 22 잔기 및 86 잔기와 상호작용하고, 두번째 조작된 면역글로불린(CK3)에 있어서 20 잔기는 첫번째 조작된 면역글로불린(CH13)에 있어서 26 잔기와 상호작용한다.

새롭게 조작된 CH1-CK 헤테로-이량체에 있어서 CH13 단량체의 단백질-단백질 인터페이스부터 CK3 단량체의 단백질-단백질 인터페이스까지 위치 사이의 상호작용. IMGT ^® 번호가 사용되었다.

CH13	CK3
3	13
5	12, 13
12	79, 88
13	3, 5, 7
18	3, 5, 26
20	3, 5, 7, 26, 85.1, 86
22	7, 22, 86
26	20
79	26, 81, 83, 85.1, 86
81	79, 81, 83, 85.1, 86
84.2	79, 88
85.1	79, 81, 86, 88
86	79, 81, 83, 85.1, 86
88	26, 81, 83, 85.1, 86

표 8. 새롭게 조작된 CH1-CK 헤테로-이량체에 있어서 CK3 단량체의 단백질-단백질 인터페이스부터 CH13 단량체의 단백질-단백질 인터페이스까지 위치 사이의 상호작용. IMGT ^® 번호가 사용되었다.

CK3	CH13
3	13, 18, 20
5	13, 18, 20
7	13, 20, 22
12	5
13	3, 5
20	26
22	22, 86
26	20, 79, 88
79	12, 81, 84.2, 85.1, 86
81	79, 81, 85.1, 86, 88
83	79, 81, 86, 88
85.1	20, 79, 81, 86, 88
86	20, 22, 79, 81, 86, 88
88	12, 84.2, 85.1, 86

7.2. 인간 TCR 불변 도메인(TRAC, TRBC2, TRDC, TRGC1) 및 IGHG1 CH3로부터 유래된 기부 위치의 요약인간 TRAC(TCRα, ALPHA로 축약), TRBC2(TCRβ, BETA로 축약), TRDC(TCRδ, DELTA로 축약), TRGC1(TCRγ, GAMMA로 축약) 및 IGHG1 CH3(CH3로 축약)로부터 유래된 기부 위치의 요약은 표 9에 나타내었다. 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내었다. CH3(i 셋트)를 위한 아미노산 위치는 경쇄 도메인을 제외한 치환된 모든 인간 면역글로불린 도메인을 위한 기부 위치이다. CH3(ii 셋트)를 위한 아미노산 위치는 모든 인간 면역글로불린 경쇄 도메인을 위한 기부 위치이다.

(* 또는 C 또는 S)

7.3. 추가적인 치환의 근거

보다 일반적인 접근에 있어서, 3, 5, 7, 12, 13, 18, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 82, 84, 84.1, 84.2, 84.3, 85.1, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 면역글로불린 상과의 자연적으로 발생한 이량체 단백질 도메인으로부터 단백질-단백질 인터페이스 잔기는 새로운 이량체 제작을 위하여 기부 잔기로서 사용될 수 있고, 여기서 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내었다. 표 10은 부모 도메인에 있어서 같은 위치의 아미노산 치환에 사용될 수 있는 다른 이소타입으로부터의 헤테로-이량체 기부 도메인 CH1, 및 호모-이량체 도메인 CH2, CH3 및 CH4로부터 선택된 20, 22, 26, 85.1, 86, 및 88 위치의 아미노산 잔기를 나타낸다. 표 11은 부모 도메인에 있어서 같은 위치의 아미노산 치환에 사용될 수 있는 다양한 헤테로-이량체 인간 면역글로불린 상과로부터 선택된 20, 22, 26, 85.1, 86, 및 88 위치의 아미노산 잔기를 나타낸다.

다양한 헤테로-이량체 인간 면역글로불린 상과 구성원의 선택된 20, 22, 26, 85.1, 86, 및 88 위치의 아미노산 잔기. IMGT ^® 번호가 사용되었다.

	20	22	26	85.1	86	88
인간 IGKC	S	V	N	S	S	T
인간 IGLC1-IGLC7	T	V	S	A	S	Y
인간 TRAC	K	V	T	S	V	W
인간 TRBC1, TRBC2	T	V	T	C	S	R
인간 TRDC	N	A	K	N	V	L
인간 TRGC1, TRGC2(2x, 3x)	T	L	E	M	F	W

7.4. IMGT ^® 독특한 번호, EU 번호, 및 카뱃(Kabat) 번호 사이의 관련성상기에 인용된 인간 중쇄 불변 도메인의 대부분을 위한 IMGT^® 독특한 번호 및 EU 번호 사이의 관련성은 표 12에서 나타낸다. 인간 카파 불변 경쇄 도메인을 위한 IMGT^® 독특한 번호 및 EU 번호 사이의 연관성, 및 인간 람다 불변 경쇄 도메인을 위한 IMGT^® 독특한 번호 및 카뱃 번호 사이의 연관성 모두는 표 13에서 나타낸다.

인간 IGHG1 CH1-CH3, IGKC, 및 IGLC 도메인을 위한 완전한 관련성은 IMGT^® 데이타베이스에서 찾을 수 있고[국제 면역 유전학 정보 시스템^®; Lefranc MP et al., Nucleic Acids Res, 27(1):209-12(1999); Ruiz M et al., Nucleic Acids Res, 28(1):219-21(2000); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 29(1):207-9(2001); Lefranc MP, Nucleic Acids Res, 31(1):307-10(2003); Lefranc MP et al., Dev Comp Immunol, 29(3):185-203(2005); Kaas Q et al., Briefings in Functional Genomics & Proteomics, 6(4):253-64(2007)], 더욱 구체적으로 하기 페이지에서 찾을 수 있다:

http://imgt.cines.fr/textes/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGHGnber.html;

http://imgt.cines.fr/textes/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGKCnber.html;

http://imgt.cines.fr/textes/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGLCnber.html.

실시예 8: 인간 α/β T 세포 수용체 불변 도메인에 기초한 CH3-CH3 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 이중특이성 헤테로-이량체 면역글로불린의 제작

수용체 티로신 키나아제(tyrosine kinases)의 HER 과(family)는 세포 성장, 분화, 및 생존에 중요한 매개체(mediators)이다[Earp HS et al., Breast Cancer Res Treat, 35(1):115-32 (1995)]; 수용체 과는 네 뚜렷한 구성원을 포함한다: 일반적으로 세포에 있어서 다양한 조합으로 발견되는 표피 생장인자 수용체(epidermal growth factor receptor) EGFR(ErbB1, 또는 HER1), HER2(ErbB2 또는 p185^neu), HER3(ErbB3) 및 HER4(ErbB 또는 tyro2)[Rowinsky EK, Annu Rev Med, 55:433-57(2004); Hynes NE and Lane HA, Nat Rev Cancer, 5(5):341-54(2005)]. 수용체 이량체화는 ErbB 기능 및 이들 수용체의 신호 활성을 위해 필수적인 요건이다[Baselga J and Swain SM, Nat Rev Cancer, 9(7):463-75(2009)]; 더욱 구체적으로, 수용체 헤테로-이량체화는 다양한 HER 리간드(ligands)에 대하여 세포의 다양성을 증가시킬 것을 생각된다. HER 과로부터 단일 수용체가 표적인 치료법(therapeutics)은 현재 유방암(breast cancer), 소세포 폐암(non-small cell lung cancer), 직장암(colorectal cancer), 뇌(head) 및 경부(neck) 암 및 췌장암(pancreatic cancer)와 같은 질병의 치료에 사용되고 있다[Engelman JA and Janne PA, Clin Cancer Res, 14(10):2895-9(2008); Baselga J and Swain SM, Nat Rev Cancer, 9(7):463-75(2009)]. 비록 상기 치료가 약간의 성공을 했어도, 타고나거나(native) 유도된 내성(resistance) 및 독성(toxicity)과 연관된 쟁점은 현재 그들의 효험을 제한한다[Robert C et al., Lancet Oncol, 6(7):491-500(2005); Jones KL and Buzdar AU, Lancet Oncol, 10(12):1179-87(2009)]. HER 과로부터 다중 수용체 표적이 될 수 있는 치료법은 진보된 임상적 효능 및 낮은 독성을 제공할 것이다.

적어도 두 HER 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 이중특이성 분자를 제작하기 위해서(도 24), 재조합 인간화 항-HER2 항체 4D5(rhuMAbHER2, huMAB4D5-8, Trastuzumab or Herceptin^®; 미국 출원번호: 5,821,337), 및 재조합 키메라 항-EGFR 항체 C225(IMC-C225, Cetuximab or Erbitux^®; PCT 출원번호: WO 96/40210)로부터 유래된 항원 결합 부위는 GENEART AG(Regensburg, 독일)에서 유전자 합성을 위해 인풋으로서 선택되었다. 두 항체를 위하여, 중쇄 가변 서열(heavy chain variable sequence; VH) 및 경쇄 가변 서열(light chain variable sequence; VL)은 합성되었고, 항-HER2 항체 4D5 및 항-EGFR 항체 C225 각각을 위한 scFv 단편[VH 및 VL 도메인은 15 아미노산 GlySer 링커와 융합되었다: (Gly₄Ser)₃] 및 키메라 FAB 단편[즉, 뮤린(murine) VH-인간 CH1(γ1) 쇄는 뮤린 VL-인간 CK 쇄와 조립되었다] 안으로 재구성되었다. 모든 DNA 조작(manipulations)은 표준 분자생물학 기술을 따랐고, 주로 PCR 증폭, 및 PCR 단편 조립 방법을 포함한다. 이중특이성 분자의 항-EGFR 부분을 제작하기 위해, 항-EGFR 항체 C225 뮤린 VH-인간 CH1(γ1) 쇄는 실시예 1에 묘사된 BT 알파 쇄의 업스트림에 융합되었고[VH(항-EGFR)-CH1-BT 알파 쇄로 축약, 서열번호 56], 그동안 항-EGFR 항체 C225 뮤린 VL은 인간 카파 불변 도메인의 업스트립에 융합되었다[VL(항-EGFR)-CK 도메인으로 축약, 서열번호 57]. 이중특이성 분자의 항-HER2 부분을 제작하기 위해, 항-HER2 scFv는 두 서열 사이에 짧은 GlySer 아미노산 링커(GGGS)와 함께 실시예 2에 묘사된 BT 베타 F405A 쇄의 업스트림에 융합되었다[scFv(항-HER2)-BT 베타 쇄로 축약, 서열번호 58]. 모든 세 결과 쇄는 실시예 1에 언급된 변형된 pREP4 벡터 안으로 독립적으로 결찰되었고, 실시예 1에 묘사된 바와 같이 HEK293-EBNA 세포안으로 공-형질주입되었다. 단백질 생산은 또한 실시예 1에 묘사된 방법을 따랐다.

한 VH(항-EGFR)-CH1-BT 알파 쇄, 한 VL(항-EGFR)-CK 쇄 및 한 scFv(항-HER2)-BT 베타 쇄(서열번호 59, 60, 및 61)로 구성된 예상된 이중특이성 분자는 "얼비툭스(Erbitux) FAB-BT 알파_허셉틴(Herceptin) scFv-BT 베타"로 지정되었다.

호모-이량체로부터 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체를 분리하기 위하여, 이온교환 크로마토그래피(ion-exchange chromatography; IEX) 단계가 단백질-A 정제(방법은 실시예 1을 따랐다) 후 수행되었다. 첫째, 음이온(anion)-IEX 단계가 수행되었다: 단백질-A 용출액(eluate)의 완충액(buffer)가 교체되었고(50 mM Tris-HCl pH 9.0으로), AKTA 정제기(purifier)(둘 모두 GE Healthcare Europe GmbH, Glattbrugg, 스위스)로 작동되는 컬럼 포장된(packed) 4 ㎖ SourceQ 30으로 로딩되었다. 그리고나서, 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타는 pH 9.0부터 pH 5.0까지 얕은 pH 변화 범위(shallow pH gradient ranging)로 용출되었다[최종 완충액 상태는 50 mM 초산나트륨(sodium acetate) pH 5.0이었다]. SDS-PAGE 분석 다음으로, 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체의 대부분을 포함하는 부분이 모아지고, 50 mM 초산나트륨 재완충되었다(rebuffered). 두번째 단계에서, 양이온(cation) IEX가 음이온 IEX 단계로부터 재완충된 부분이 1 ㎖ MonoS 컬럼(GE Healthcare Europe GmbH, Glattbrugg, 스위스)에 로딩되어 수행되었고, 50 mM 초산나트륨 pH 5.0으로부터 50 mM Tris-HCl pH 9.0까지 얕은 범위로 작동(running)되었다. 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체를 포함하는 부분은 SDS-PAGE 분석에 의해 선택되었다. 최종적으로, 정제된 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체는 응집체의 추적을 제거하기 위해 사이즈 배제 크로마토그래피(size-exclusion chromatography) 컬럼(Superdex 200 HR 16/60, GE Healthcare Europe GmbH, Glattbrugg, 스위스)으로 다듬어졌고, PBS로 마지막 이중특이성 분자 완충액이 교체되었다. 도 25는 두 대조군 분자뿐만 아니라 각 정제 단계 후 폴리아크릴아미드 SDS 겔 곡선(profiles)을 나타낸다: scFv-Fc 융합 단백질 및 단일클론 항체. 일과성 형질주입으로부터 생산 수확량은 비-감소된 SDS-폴리아크릴아미드(4 - 12%) 겔 밴드(방법은 실시예 1 참조)의 밀도계측 분석 스캐닝에 의해 판단된 49.5% 헤테로-이량체화 비율과 함께 최대 30 ㎎/L이었다(도 26).

얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체를 평가하기 위하여, 정제된 물질이 시차주사 열량법(differential scanning calorimetry; DSC)을 사용하여 분석되었다. 열량 측정은 실시예 2에 묘사된 바와 같이 VP-DSC 시차주사 미세열량 분석기(differential scanning microcalorimeter, GE Healthcare Europe GmbH, Clattbrugg, 스위스)를 사용하였다. 세포 부피는 0.128 ㎖였고, 가열속도는 1℃/분이었으며, 초과압은 64 p.s.i를 유지하였다. 단백질은 PBS(pH 7.4)에 0.95 ㎎/㎖의 농도로 사용되었다. 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체의 온도기록도는 두 69.5 및 75.9℃에서 두 열의 변화가 존재함을 나타낸다. 열 흡수피크가 기록된 후, 어떠한 급격한 감소도 기록되지 않은 것은 중요하고, 이는 침전 또는 응집 형성이 열에 펼쳐진 뒤 발생하지 않음을 나타낸다[Liu H et al., Immunol Lett, 106(2):144-53(2006)]. 따라서, 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체를 위해 관찰된 융해변화는 인간 IGHG2 Fc 단편 CH2 및 CH3 도메인을 위해 관찰된 것과 유사하고, 안정적인 인간 FAB 단편을 위해 관찰된 일반적 융해변화와 유사하다[Garber E and Demarest SJ, Biochem Biophys Res Commun, 355(3):751-7 (2007)]. 결론적으로, 상기 열에 펼쳐진 연구는 TCR 알파 및 베타 불변 도메인에 기초한 조작된 단백질-단백질 인터페이스와 함께 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체가 자연적으로 발생한 면역글로불린 열-안정성과 유사함을 나타낸다.

얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체가 이의 동족항원(cognate antigens)(인간 EGFR 및 인간 HER2) 모두에 동시에 결합하는 능력은 BIAcore 2000 장비(GE Healthcare Europe GmbH, Clattbrugg, 스위스)로 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance; SPR)에 의해 시험되었다. 본 실시예에서, 인간 EGFR 및 HER2 수용체로부터 재조합 세포 외 도메인은 각각 인간 Fc(γ1) 단편(EGFR-Fc 및 HER2-Fc로 축약, 각각 서열번호 62 및 63)의 업스트림에 융합되었다. 간략하게, 인간 EGFR 및 HER2의 세포 외 도메인은 imaGenes 클론(clone) 번호 EX-A0275-MO2 및 Ex-BOO17-M10(imaGenes GmbH, campus Berlin-Buch, Berlin, 독일)으로부터 PCR로 각각 증폭되었다. PCR 산물은 PCR 조립 방법을 사용하여 인간 Fc(γ1) 위치의 업스트림에 융합되었고(각각, 서열번호 64 및 65), Invitrogen의 pcDNA3.1 벡터 DNA(Invitrogen AG, Basel, 스위스)에 기초한 포유류 세포 발현 벡터(mammalian cell expression vector)안으로 독립적으로 복제(cloned)되었다. 최종적으로 각 재조합 벡터는 HEK293 세포내로 형질주입되었고; 형질주입 후 4 내지 5일 후, 상층액을 모아서 재조합 단백질을 단백질-A 친화성 크로마토그래피에 의해 균질성(homogeneity)으로 정제되었다. SPR 실험은 1x HBS-EP 완충액(GE Healthcare Europe GmbH, Clattbrugg, 스위스)에서 30 ㎕/분의 유속으로 25℃에서 수행되었다. 정제된 Fc-융합된 항원은 제조사에 의해 제공된 표준 프로토콜을 사용하여 아민 연결(amine coupling)을 통하여 연구-등급(research-grade) CM5 칩(chip)(GE Healthcare Europe GmbH, Clattbrugg, 스위스)에 고정되었다. 칩의 다른 채널(channels)에 고정된 EFGR-Fc 및 HER2-Fc는 각각 410 및 880 응답단위(response units; RU)의 신호를 초래하였다. 고정된 항원이 없는 채널은 참조 채널로 사용되었다. 상기 채널로부터의 반응은 측정으로부터 뺐다. 결합 및 공-결합(co-binding) 실험을 위하여, 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체 및 EGFR-Fc는 1x HBS-EP 완충액(Healthcare Europe GmbH, Clattbrugg, 스위스)으로 25 및 100 nM의 최종 농도가 되도록 각각 희석되었다. 모든 분석제(analytes)를 위하여, 주입(injections)은 2분으로 제한되었다. 도 28A는 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체 및 고정된 EGFR-Fc 사이의 결합 및 분리를 나타낸다. 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 및 고정된 HER2-Fc의 분석제로써 EGFR-Fc의 공-결합은 도 28B에 나타내었다. 본 결합 실험에 있어서, 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체는 고정된 HER2-Fc와 함께 채널에 처음으로 주입되었고, 항원에 대한 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체의 결합을 보여준다. 상기 첫번째 주입 3분 후, EGFR-Fc가 주입되었고, 얼비툭스 FAB-BT 알파_허셉틴 scFv-BT 베타 헤테로-이량체와 함께 공-결합 이벤트의 결과를 나타내었다; 관찰된 반응이 사실인 공-결합 이벤트이고, 두 항원 사이의 상호작용이 아님을 확인하기 위해, EGFR-Fc가 고정된 HER2-Fc에 주입되었고, 유의적인 반응은 기록되지 않았다(도 28B).

실시예 9: 인간 α/β T 세포 수용체 불변 도메인에 기초한 CH3-CH3 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 이중특이성 헤테로-이량체 면역글로불린, 및 헤테로-이량체 δ/γ T 세포 수용체 불변 도메인에 기초한 CH1-CK 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 FAB 단편의 제조

실시예 5는 인간 TCR 불변 도메인 델타 및 감마의 단백질-단백질 인터페이스에 기초한 변형된 CH1(γ1) 및 Cκ 불변 도메인의 신규한 셋트를 제공한다. 상기 FAB 불변 도메인의 새로운 쌍은 일반적인 경쇄를 사용하는 타협을 갖지 않는 인간 이중특이성 항체를 생성하기 위한 기회를 제공한다.

상기 이중특이성 항체의 신규한 타입(type)은 다른 가변 도메인을 갖는 두 구별되는 중쇄에 기초하고, 상기 두 구별되는 중쇄는 다른 가변 도메인을 갖는다. 이중특이성 항체의 네 구별되는 쇄의 정확한 조립은 두 원칙에 기초한다: (1) 두 다른 항체 중쇄를 헤테로-이량체화하기 위해서, 실시예 1 내지 3에 묘사된 조작된 헤테로-이량체 CH3 도메인의 신규한 쌍이 사용될 것이다, (2) 어떠한 잠재적인 경쇄의 잘못된 쌍을 피하기 위하여, 실시예 5에 묘사된 CH1(γ1) 및 Cκ 불변 도메인의 신규한 셋트가 이중특이성 항체의 두 FAB 팔(arms) 중 하나에 도입될 것이다. 따라서, 상기 이중특이성 항체는 세 다른 위치에 있어서 적어도 세 다른 단백질-단백질 인터페이스를 고려한다: 첫번째 FAB 팔은 CH1(γ1) 및 Cκ 불변 도메인의 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 쌍을 갖고, 두번째 FAB 팔은 TCR 델타 및 TCR 감마 불변 도메인의 헤테로-이량체 쌍으로부터 기원한 단백질-단백질 인터페이스와 함께 CH1(γ1) 및 Cκ 불변 도메인의 신규한 헤테로-이량체 쌍을 가지며, 한 Fc 단편은 헤테로-이량체 TCR 알파 및 TCR 베타 불변 도메인으로부터 기원한 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 CH3(γ1) 불변 도메인의 신규한 헤테로-이량체 쌍을 갖는다(도 29).

적어도 두 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 완전하고 정확히 조립된 이중특이성 항체를 생산하기 위해, 인간화된 항 인간 CD19 항체로부터 가변 중쇄 및 가벼변 경쇄 도메인H(항-hCD19) 및 VL(항-CD19)로 각각 축약, PCT 출원번호: WO 2010/095031에서 공개됨], 인간 VLA-2 수용체(VLA2) 항체의 인간화된 항 알파 2 아단위(subunit)로부터 가변 중쇄 및 가변 경쇄[VH(항-hVLA2) 및 VL(항-hVLA2)로 각각 축약, PCT 출원번호: WO 2007/056858에서 공개됨]가 발현 및 기능적 연구를 위해 인풋으로 선택되었다. VH(항-hVLA2) 및 VL(항-hVLA2) 도메인을 위해 암호화한 cDNA는 PCT 출원번호: WO 2007/056858에 묘사된 연구로부터 유용하다.

이중특이성 항체의 네 구별되는 쇄를 생산하기 위하여, 두 새로운 면역글로불린 쇄가 PCR 기술을 사용하여 생산되었다: 첫번째 쇄는 인간 CH1(γ1)-BT 알파 His 쇄의 업스트립에 융합된 가변 중쇄 VH(항-hVLA2)로 구성되고(실시예 1 및 2)[VH(항-hVLA2)-CH1-BT 알파 His로 축약, 서열번호 66], 두번째 쇄는 자연적으로 발생한 인간 Cκ 불변 도메인의 업스트림에 융합된 가변 경쇄 VL(hVLA2)로 구성된다[VL(항-hVLA2)-CK로 축약, 서열번호 67]. PCR 조립 다음에, 두 쇄 cDNA는 독립적으로 실시예 1에 묘사된 변형된 pREP4 안으로 결찰되었다. 최종 두 면역글로불린 쇄는 실시예 5로부터 기원된 완전한 이중특이성 항체의 생산에 필요하다: 세번째 쇄는 VH(항-hCD19)-CH1 델타-BT 베타 c-myc 쇄(서열번호 43)로 구성되고, 네번째 쇄는 VL(항-hCD19)-CK 감마 쇄(서열번호 44)를 포함한다. 네 구별되는 쇄를 모두 갖는 이중특이성 항체 결과는 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체(서열번호 68, 69, 41, 및 42)로 축약된다.

재조합 면역글로불린 쇄를 운반하는 모든 네 벡터는 HEK293-EBNA 세포 내로 형질주입되었고, 단백질 생산은 실시예 1에 묘사된 절차에 따라 수행되었다. 인간 VLA2 항원(항-hVLA2 항체로 축약) 또는 인간 CD19 항원(hCD19 항체로 축약) 중 하나쪽으로 단일 특이성을 갖는 항체 종의 적은 수는 "둘" 쇄과 함께 "하나" 쇄, 및 "넷" 쇄과 함께 "셋" 쇄의 공-형질주입(co-transfection)에 의해 각각 얻어진다. 이들 항체는 FACS 실험에서 대조군으로 나중에 사용된다(하기 참조).

일과성 형질주입의 생산 수확량은 단백질 A 정체 후(실시예 1을 따라 진행) 약 18 ㎎/L였다. 호모-이량체 종의 추적으로부터 완전히 조립된 이중특이성 분자를 분리하기 위하여, 두 친화성 크로마토그래피 단계가 순차적으로 시행되었다. 첫번째 단계는 단백질 L 친화성 크로마토그래피(단백질 L 수지는 GenScript, Piscataway, NJ, 미국으로부터 구입; 제조사의 프로토콜에 따라 사용됨)에 기초하였고, 카파 하위군(subgroup) κ1 및 κ3, 그러나 κ2는 아닌 것으로부터 기원한 경쇄 가변 도메인으로 단백질-L의 특이성의 사용으로 제조되었다[Nilson BH et al., J Biol Chem, 267(4):2234-9 (1992)]. 가변 VL(항-hVLA2) 경쇄 도메인이 κ2 하위종류(subclass) 속하고, 가변 VL(항-hCD19) 경쇄 도메인이 κ1 하위종류에 속한 이후로, 상기 단계는 경쇄 VL(항-hCD19) 도메인이 결핍된 어떤 호모-이량체 항체 종의 제거를 위해 허용된다(상기 참조, "넷" 쇄). 두번째 단계를 위해, 단백질 L 정제 후 단백질 풀(pool)은 50 mM Tris-HCl pH 9.0, 200 mM NaCl로 완충액이 교체되었고, AKTA 정제기(둘 모두 GE Healthcare Europe GmbH, Glattbrugg, 스위스)로 작동되는 1 ㎖ HisTrap Ni²⁺-NTA 친화성 크로마토그래피 컬럼 0.6 ㎖/분의 유속으로 로딩되었다. 상기 단계는 BT 알파 쇄가 결핍된 어떤 호모-이량체 항체 종의 제거를 위해 허용된다(상기 참조, "하나" 쇄).

항-hCK19_항-hVLA2 이중특이성 항체의 존재를 확인하기 위하여, 웨스턴 블랏 분석이 정제 단계의 다른 단계에서 분리된 샘플 표본(sample aliquot)으로 수행되었다. 탐지를 위하여, 항 His 표지가 결합된 말-라디쉬 퍼록시다제(horse-radish peroxidase)(Sigma, Buchs, 스위스) 및 c-myc 표지[Roche Diagnostics(Schweiz) AG, Rotkreuz, 스위스]가 사용되었다. 염색을 위하여, 퍼록시다제 기질 SIGMA FAST 3,3'-디아미노벤지딘(Diaminobenzidine)(Sigma, Buchs, 스위스)이 사용되었다. 두 웨스턴 블랏의 비교에서, 항 His 표지 항체로 탐지된 하나 및 항 c-myc 항체로 탐지 하나로 두 정제 단계 후 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체의 존재가 탐지되었다[도 30, B 및 C 패널(panels)에서 레인 5].

항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체의 이중의 특이성(dual specificity)을 확인하기 위하여, 두 독립적인 FACS 결합 실험이 디자인되었다. 두 실험에 있어서, 상기 이중특이성 항체는 두번째 특이성을 갖는 쇄의 친화성 표지 존재와 함께 탐지되는 동안 표적 세포의 세포-표면에 보여지는 이의 두 동족항원의 하나에 대한 결합을 확인하였다. 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체 특이성이 인간 CD19 세포-표면 단백질 및 인간 VLA-2 수용체의 알파 2 아단위 모두를 향한 이후, Raji 세포주[인간 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma) 세포주, DSMZ 클론번호: ACC319], 및 HT1080 세포주[인간 섬유육종(fibrosarcoma) 세포주, ATCC 클론번호: CCL-121)가 표적 세포로써 각각 선택되었다. Raji 세포는 순전히(strictly) CD19⁺ 및 VLA2^-이고, HT1080 세포는 VLA2+ 및 CD19이며(데이터는 나타내지 않음), 따라서, 어떤 허위 양성(false positive)을 막는다.

두 세포주는 표준 배양 조건으로 모아졌고, 세어졌다[트립판 블루배제(trypan blue exclusion)에 따른 생존력(viability) > 90%]. 세포는 염색 완충액에서 한번 세척되었다; PBS 용액은 염색 절차 전에 PAA로부터 구입한 2.5% FBS(PAA Laboratories, Pasching, 오스트리아; 카탈로그 번호: A15-101) 및 GIBCO-Invitrogen AG로부터 구입한 10% 베르센(versene)(Basel, 스위스, 카탈로그 번호: 15040)이 첨가되었다. 염색은 조건(condition) 당 2 x 10⁵ 세포로 얼음위 V-바닥(bottom) 96-웰(well) 플레이트(plate)에서 수행되었다. 각 배양 단계는 10 ㎍/㎖ 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체가 첨가된 50 ㎕ 염색 완충액에서 수행되었고, 추가적으로 20분 동안 배양되었다. 그리고나서 세포는 차가운 염색 완충액으로 세척되었고, 마우스 항 His 표지 항체(Sigma, Buchs, 스위스, 카탈로그 번호: A7058-1VL), 또는 마우스 항 c-myc 표지 항체[Roche Diagnostics(Schweiz) AG, Rotkreuz, 스위스; 카탈로그 번호: 11997149001) 중 하나와 함께 둘 모두 10 ㎍/㎖ 농도의 염색 완충액에서 20 분간 배양되었다. 오직 염색 완충액에만 보관된 세포인 대조군 샘플은 모든 세포주를 위해 또한 제작되었다. 탐지를 위하여, 세포는 염색 완충액으로 두 번 세척되었고, 피코에리트린-결합된(Phycoerythrin-conjugated) 마우스-항-인간 Ig Fc 단편 특이적 항체(Nilson BH eeBioscience, San Diego, 미국; 유통업체: eBioscience CBI Medicals PV, Baar, 스위스; 카탈로그 번호: 12-4998-82)를 염색 완충액에 1:200 희석도로 사용되어 20분 배양되었다. 최종적으로, 세포는 염색 완충액으로 한번 세척되었고, 300 ㎕ 차가운 염색 완충액에 재현탁되었으며, 바로 유동세포 분석법(flow cytometry)(CyAn^TM ADP, Beckman Coulter International S.A., Nyon, 스위스)에 의해 분석되었다. 데이타는 Flowjo® 소프트웨어(Tree Star, Inc., Ashland, OR, 미국)로 가공되었다(processed); 막대그래프는 앞면 및 측면 분산 매개변수 게이팅(Foward and Side Scatter parameter gating)에 기초하여 살아있는 세포에서 표시되었다. 도 31A는 마우스-항 c-myc 표지 항체로 탐지된 Raji 세포에서 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체의 결합을 나타내고, 본 실험에서 c-myc 표지 결핍된 항-hVLA2 항체는 음성대조군으로 사용되었다. 도 31B는 마우스-항 His 표지 항체로 탐지된 Raji 세포에서 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체의 결합을 나타내고, 본 실험에서 항-hVLA2 항체는 폴리히스티딘(polyhistidine) 표지 서열을 가짐에도 불구하고, hCD19 특이성이 결핍된 이후, 음성대조군으로 사용되었다. 도 31C는 마우스-항 c-myc 표지 항체로 탐지된 HT1080 세포에서 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체의 결합을 나타내고, 본 실험에서 항-hCD19 항체는 c-myc 표지 서열을 가짐에도 불구하고 hVLA2 특이성이 결핍된 이후, 음성대조군으로 사용되었다. 도 31D는 마우스-항 His 표지 항체로 탐지된 HT1080 세포에서 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체의 결합을 나타내고, 본 실험에서 폴리히스티딘 표지 서열이 결핍된 항-hVLA2 항체는 음성대조군으로 사용되었다. 상기 네 독립적인 결합 실험에 따르면 한 FAB 팔과 표적 세포가 참여할 때, 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체는 다른편(opposite) Fc 아단위에 위치한 표지를 통해서 항상 탐지 가능하다(다른 FAB 팔로 운반됨, 도 31B 및 31C 참조). 이는 네 다른 쇄로 구성되는 완전한 이중특이성 항체가 되는 바와 같이 항-hCD19_항-hVLA2의 정체성(identity)이 헤테로-이량체 Fc 부위에 의해 함께 가져오는 독특한 특이성을 갖는 두 구별되는 FAB 단편 각각으로 정확히 조립된다.

항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체의 열 안정성은 열량측정기(DSC)를 사용하여 평가되었다(실시예 2 참조, 방법을 위해; 단백질은 PBS에 0.57 ㎎/㎖의 농도로 사용되었다). 도 32는 70.9, 76.6 및 82.8℃에서 세 급격한 변화를 갖는 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체의 온도기록도를 나타내고, 어떤 것도 70℃이하는 아니며, 따라서 안정한 면역글로불린 분자를 나타낸다(실시예 2). 열 흡수피크가 기록된 후, 어떠한 급격한 감소도 기록되지 않은 것은 중요하고, 이는 침전 또는 응집 형성이 열에 펼쳐진 뒤 발생하지 않음을 나타낸다[Liu H et al., Immunol Lett, 106(2):144-53(2006)]. 실시예 2로부터의 BT 알파 His_BT 베타 헤테로-이량체 Fc 단편이 70℃에서 단일 급격한 융해변화를 나타낸 이후, 두 FAB 팔을 위한 융해변화는 적절한 조립 및 안정적인 FAB 단편을 위해 예상된 바와 같이 우수한 중간점(mid-point superior)를 갖는 결론을 내릴 수 있다[Garber E and Demarest SJ, Biochem Biophys Res Commun, 355(3):751-7(2007)]. 결론적으로, 상기 열에 펼쳐진 연구는 항-hCD19_항-hVLA2 이중특이성 항체가 안정함을 보여준다.

본 실시예는 조합되었을 때, 인간 T-세포 수용체 불변 도메인으로부터 유래된 조작된 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 둘 또는 그 이상의 신규한 헤테로-이량체 쌍이 사람에 치료 용도(therapeutic use)를 위한 안정하고 적합한 신규한 이중특이성 항체를 생산하기 위한 구성요소(building block)로서 사용될 수 있다.

<110> Glenmark Pharmaceuticals S.A. <120> HETERO-DIMERIC IMMUNOGLOBULINS <130> 20FPI-04-009 <150> PCT/US61/467.727 <151> 2011-03-25 <160> 97 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 91 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys 1 5 10 15 Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr 20 25 30 Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr 35 40 45 Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala 50 55 60 Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser 65 70 75 80 Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro 85 90 <210> 2 <211> 128 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro 1 5 10 15 Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 20 25 30 Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn 35 40 45 Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys 50 55 60 Glu Gln Pro Ala 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ctgcccccca gcagagatga gctgaccaag 60 aaccaagtga ccctgacctg cctcgtgaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 120 tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacctgacct ggccccctgt gctggacagc 180 gacggctcat tcttcctgta cagcatcctg cgggtggaca agagcagatg gcagcagggc 240 aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 300 ctgagcctga gccccggcaa g 321 <210> 84 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial sequence <400> 84 Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg 1 5 10 15 Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Lys Ile Val Cys Leu Val Thr 20 25 30 Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln 35 40 45 Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Tyr Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro 50 55 60 Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Ser Ala Val Ser Trp Leu Asn Val Ser Glu 65 70 75 80 Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala His Glu 85 90 95 Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly 100 105 110 Lys <210> 85 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial sequence <400> 85 Gly 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<212> DNA <213> Artificial sequence <400> 87 ggcgtggccc tgcacagacc agaggtggcc ctgtttccac ccgccagaga gcagctgaac 60 ctgcgggaaa gcgccaccat cgtgtgtctc gtgaccggct tcagccctgc cgacgtgttc 120 gtgcagtgga tgcagagagg ccagcccctg tcccccgaga aatacgtgac agacgccccc 180 ctgcctgagc cacaggcccc tggaagatat gccgccagca gcagactgcg ggtgtccgag 240 gaagagtgga acaccggcga gacatacacc tgtgtggtgg cccatgaggc cctgcccaat 300 agagtgaccg aacggaccgt ggacaagagc accggcaag 339 <210> 88 <211> 239 <212> PRT <213> Artificial sequence <400> 88 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 1 5 10 15 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp 115 120 125 Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser 130 135 140 Ala Lys Ile Val Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe 145 150 155 160 Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Tyr 165 170 175 Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Ser Ala 180 185 190 Val Ser Trp Leu Asn Val Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr 195 200 205 Tyr Thr Cys Val Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu 210 215 220 Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys His His His His His His 225 230 235 <210> 89 <211> 341 <212> PRT <213> Artificial sequence <400> 89 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His 100 105 110 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 130 135 140 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 145 150 155 160 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 165 170 175 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 180 185 190 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 195 200 205 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 210 215 220 Ser Lys Ala Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Glu Val Ala Leu Phe 225 230 235 240 Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Val 245 250 255 Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met 260 265 270 Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Asp Ala Pro 275 280 285 Leu Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Ala Ala Ser Ser Arg Leu 290 295 300 Arg Val Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val 305 310 315 320 Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp 325 330 335 Lys Ser Thr Gly Lys 340 <210> 90 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial sequence <400> 90 Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp 1 5 10 15 Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Lys Leu Val Cys Leu Ile Thr Asn Phe 20 25 30 Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu 35 40 45 Pro Asp Ala Arg His Tyr Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser 50 55 60 Gly Phe Ser Val Val Ser Trp Leu Asn Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu 65 70 75 80 Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro 85 90 95 Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly Lys 100 105 110 <210> 91 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial sequence <400> 91 Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Ala Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp 1 5 10 15 Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Val Cys Leu Ile Thr Asn Phe 20 25 30 Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu 35 40 45 Pro Asp Ala Arg His Ser Thr Asp Gln Pro Leu Lys Glu Lys Gly Ser 50 55 60 Gly Phe Ala Val Ser Ser Leu Leu Arg Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu 65 70 75 80 Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro 85 90 95 Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly Lys 100 105 110 <210> 92 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial sequence <400> 92 ggacctagag ccgcccctga ggtgtacgcc tttgccacac ctgagtggcc cggcagccgg 60 gacaagagaa aactcgtgtg cctgatcacc aacttcatgc ccgaggacat cagcgtgcag 120 tggctgcaca acgaggtgca gctgcccgac gccagacact acaccaccca gcccagaaag 180 accaagggca gcggcttcag cgtggtgtcc tggctgaatg tgaccagagc cgagtgggag 240 cagaaggacg agttcatctg cagagccgtg cacgaggccg ccagcccttc tcagacagtg 300 cagagggccg tgtccgtgaa ccctggaaaa 330 <210> 93 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial sequence <400> 93 ggacctagag ccgctcctga agtggccgcc tttgccacac ctgagtggcc cggcagcaga 60 gacaagagaa ccctcgtgtg cctgatcacc aacttcatgc ccgaggacat cagcgtgcag 120 tggctgcaca acgaggtgca gctgcccgat gccagacaca gcaccgacca gcccctgaaa 180 gagaagggca gcggctttgc cgtgtccagc ctgctgagag tgaccagagc cgagtgggag 240 cagaaggacg agttcatctg cagagccgtg cacgaggccg ccagcccttc tcagacagtg 300 cagagggccg tgtccgtgaa ccctggaaaa 330 <210> 94 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial sequence <400> 94 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 1 5 10 15 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val 115 120 125 Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Lys 130 135 140 Leu Val Cys Leu Ile Thr Asn Phe Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln 145 150 155 160 Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro Asp Ala Arg His Tyr Thr Thr 165 170 175 Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe Ser Val Val Ser Trp Leu 180 185 190 Asn Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg 195 200 205 Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val 210 215 220 Ser Val Asn Pro Gly Lys His His His His His His 225 230 235 <210> 95 <211> 338 <212> PRT <213> Artificial sequence <400> 95 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His 100 105 110 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 130 135 140 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 145 150 155 160 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 165 170 175 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 180 185 190 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 195 200 205 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 210 215 220 Ser Lys Ala Lys Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Ala Ala Phe Ala 225 230 235 240 Thr Pro Glu Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Val Cys Leu 245 250 255 Ile Thr Asn Phe Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn 260 265 270 Glu Val Gln Leu Pro Asp Ala Arg His Ser Thr Asp Gln Pro Leu Lys 275 280 285 Glu Lys Gly Ser Gly Phe Ala Val Ser Ser Leu Leu Arg Val Thr Arg 290 295 300 Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu 305 310 315 320 Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro 325 330 335 Gly Lys <210> 96 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 96 Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu 1 5 10 15 Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly 20 25 30 Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu 35 40 45 Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser 50 55 60 Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala 65 70 75 80 Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu 85 90 95 Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala 100 105 110 <210> 97 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97 Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu 1 5 10 15 Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly 20 25 30 Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu 35 40 45 Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser 50 55 60 Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala 65 70 75 80 Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu 85 90 95 Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala 100 105 110

Claims

하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린(hetero-dimeric) 또는 이의 헤테로-이량체 단편(hetero-dimeric fragment):
(a) 단백질-단백질 인터페이스(interface)와 함께 조작된 도메인을 포함하는
에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과(super-family)의 첫번째 구성원(member)의 기부(donor) 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환; 및
(b) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄, 여기서 상기 두번째 조직된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환,
여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 일치하지 않고,
여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체(hetero-dimer) 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체(homo-dimer)를 형성하며,
여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째로 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH3 도메인이고, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치의 아미노산 잔기 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 88 및 90으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 86, 88 및 90으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고,
여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 88 위치가 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 85.1 및/또는 86 위치가 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하며,
여기서, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린의 부모도메인은 자연적으로 발생한 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 아미노산 서열은 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 아미노산 서열과 비교하여 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기의 삽입(insertion)을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 88 위치 아미노산 잔기는 전하를 띄는 아미노산이 아니고 또는 88I가 아닌 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 88 위치 아미노산 잔기는 88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환(conservative amino acid substitutions)이고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 85 및/또는 86 위치 아미노산 잔기는 85.1A, 85.1S, 85.1C 및 85.1N 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 86S 및 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고 상기 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 88 위치 아미노산 잔기는 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88I, 88T, 88Y, 88K 및 88W로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산은 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 20E, 20S, 20K, 20W, 22A, 22G, 22T, 22L, 22I, 22V, 26R, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 85.1W, 86S, 86I, 86T, 86H, 86Q, 86V, 86W, 86Y 및 86F로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 88 위치 아미노산 잔기는 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88I, 88T, 88Y 및 88W로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 88 위치 추가적인 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 20E, 20S, 20K, 22A, 22G, 22T, 22L, 22I, 22V, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86T, 86H, 86Q, 86V, 및 86F로 구성된 군으로부터 선택되고 상기 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3E, 3K, 5A, 5T, 7F, 7M, 20K, 20N, 20T, 22A, 22L, 22V, 26E, 26T, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 84L, 84M, 84.2E, 84.2S, 85.1A, 85.1C, 85.1M, 85.1N, 85.1S, 86F, 86S, 86V, 90K, 90N, 및 90R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88 위치 및 20 위치, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치 및 26 및 선택적으로 추가적인 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 추가적으로 치환된 아미노산 잔기는 20, 22, 26, 79, 85.1, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서, 추가적으로 치환된 아미노산 잔기는 20K, 22V, 26T, 79Y, 85.1S, 86V, 및 90N 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 추가적으로 치환된 아미노산 잔기는 84 위치 또는 84L 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 선책적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84.2, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84.2, 85.1, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84.2, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 추가적으로 치환된 아미노산 잔기는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84, 84.2, 85.1, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 81, 84, 84.2, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및 86 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 85.1C 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함, 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서, 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3E, 5A, 7F, 20T, 22V, 26T, 81D, 84L, 84.2E, 88R 및 90R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 17항에 있어서, 상기 85.1C로 치환된 아미노산 잔기는 85.1A 또는 85.1S로 치환된 아미노산 잔기로 교체되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 추가적으로 치환된 아미노산 잔기는 3, 5, 20, 22, 26, 27, 81, 84, 85.1, 및 86으로 구성된 군으로부터 선택된 위치이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 추가적으로 치환된 아미노산 잔기는 3K, 5T, 20T, 22L, 26E, 27K, 81G, 84M, 85.1M, 86F 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 추가적으로 치환된 아미노산 잔기는 7, 20, 22, 27, 79, 81, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 7, 20, 22, 27, 79, 81, 84.2, 85.1, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 7, 20, 22, 27, 79, 81, 84.2, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 추가적으로 치환된 아미노산 잔기는 79 위치 또는 79F 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 7, 20, 22, 27, 81, 84.2, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 7, 20, 22, 27, 81, 84.2, 85.1, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 7, 20, 22, 27, 81, 84.2, 86, 88, 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및 86 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 85.1N 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 86V 및 이의 보존적인 아미노산 치환을 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 추가적으로 치환된 아미노산 잔기는 7M, 20N, 22A, 27E, 79F, 81A, 84.2S, 85.1N, 86V, 88L, 및 90K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88I 및 이의 보존적인 아미노산 치환 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 선택적 추가적으로 치환된 아미노산 잔기는 81W 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편:
(a) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환; 및
(b) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄, 여기서 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환,
여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 일치하지 않고,
여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하며,
상기 첫번째 및/또는 두번째로 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH3 도메인이고, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치의 아미노산 잔기 및 3, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 86 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 위치를 포함하고, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 20 위치의 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 26 위치의 아미노산 잔기와 상호작용하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.
제 25항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 위치의 아미노산 잔기, 및 추가적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 및 86 위치의 아미노산 잔기 및 추가적으로 3, 5, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 위치를 포함, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 25항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 및 22 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치의 아미노산 잔기 및 3, 5, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 위치를 포함, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 25항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 및 22 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 26, 27, 79, 81, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함, 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 및 86 위치의 아미노산 잔기 및 선택적으로 3, 5, 22, 27, 79, 81, 84, 85.1, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 위치를 포함, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 25항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 25항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린의 쇄의 조작된 도메인의 아미노산 서열은 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 아미노산 서열과 비교하여 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기의 도입(insertion)을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 25항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 25항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20N 및 20T, 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 25항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 26T 및 26E 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 25항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 20K, 20S, 20W 및 20E으로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 22A, 22G, 22L, 22I, 22V, 22T, 26K, 26R, 26Q, 26T, 26V, 26S, 26N, 26E, 85.1W, 85.1F, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 851S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1C, 85.1N, 86W, 86Y, 86S, 86I, 86H, 86Q, 86V, 86T, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88T, 88I, 88Y, 88K 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 25항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 20K, 20S 및 20E로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 22A, 22G, 22L, 22I, 22V, 26K, 26Q, 26T, 26V, 26S, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86H, 86Q, 86V, 86T, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88T, 88I, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 25항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3E, 3K, 5A, 5T, 7F, 7M, 22A, 22L, 22V, 26E, 26T, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 84L, 84M, 84.2E, 84.2S, 85.1A, 85.1C, 85.1M, 85.1N, 85.1S, 86F, 86S, 86V, 88L, 88R, 88W, 90K, 90N, 및 90R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^®번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1 내지 36항에 있어서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인은 IgG1 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1 내지 36항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG1 CH3 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG3 CH3 도메인 또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG3 CH3 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG1 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편:
(a) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환; 및
(b) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄, 여기서 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환,
여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 일치하지 않고,
여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하며,
여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치의 아미노산 잔기 및 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7. 20. 22. 26. 27. 79. 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치 또는 3, 5, 7, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 88 위치가 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 85.1 및/또는 86 위치가 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.
제 39항에 있어서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 CH2 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 39항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 88W 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 39항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 85 및/또는 86 위치에 치환된 아미노산 잔기는 85.1A 및 85.1N 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택, 및/또는 86S 및 이의 보존적인 아미노산 치환이고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 39항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88위치에 치환된 아미노산 잔기는 88Q, 88L, 88V, 88R, 88I, 88T, 88K, 88E, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20K, 20W, 20S, 20E, 20Q, 22A, 22G, 22T, 22L, 22V, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26R, 26N, 26E, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1W, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86H, 86T, 86W, 86Y, 86V, 86Q 및 86F로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 39항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기는 88Q, 88L, 88V, 88R, 88I, 88T, 88K, 88E, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20K, 20W, 20S, 22A, 22G, 22T, 22L, 22V, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26R, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1W, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86H, 86T, 86W, 86Y, 86V, 및 86F로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 39항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3E, 3K, 5A, 5T, 5Y, 7M, 7L, 20K, 20N, 20T, 20S, 22A, 22L, 22V, 26E, 26T, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 83M, 83T, 84L, 84.2E, 84.2S, 84.3D, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86F, 86Y, 90K, 90N, 및 90R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 39항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 88 위치 및 20위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 39항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치 및 26 위치 및 선택적으로 추가적인 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편:
(a) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄, 여기서 상기 첫번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환; 및
(b) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄, 여기서 상기 두번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환,
여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 일치하지 않고,
여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하며,
여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 20 위치의 아미노산 잔기, 및 선택적으로 3, 5, 7, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치의 아미노산 잔기 및 선택적으로 3, 5, 7, 20, 22, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 84.3, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 20 위치가 치환된 아미노산 잔기는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 26 위치가 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.
제 48항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 CH2 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 48항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20N 및 20T, 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 48항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 26T 및 26E 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 48항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20K, 20Q, 20E, 20W 및 20S로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 22A, 22G, 22T, 22L, 22V, 22I, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26R, 26N, 26E, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1W, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86Q, 86S, 86I, 86H, 86T, 86W, 86Y, 86V, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88I, 88T, 88K, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 48항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 20V, 20T, 20A, 20N, 20K, 20W 및 20S로 구성된 군으로부터 선택 및/또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 22A, 22G, 22T, 22L, 22V, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26R, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1W, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86H, 86T, 86W, 86Y, 86V, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88I, 88T, 88K, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 48항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 추가적인 아미노산 잔기는 3E, 3K, 5A, 5T, 5Y, 7M, 7L, 22A, 22L, 22V, 26E, 26T, 27E, 27K, 79F, 79Y, 81A, 81G, 81D, 83M, 83T, 84L, 84.2E, 84.2S, 84.3D, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86F, 86Y, 88K, 88L, 88R, 88W, 90K, 90N, 및 90R 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 39항에 있어서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG1 CH2 도메인 또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG1 CH2 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG3 CH2 도메인 또는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG3 CH2 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IgG1 CH2 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1 내지 55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치환된 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기는 인접하지 않는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1 내지 55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 두 아미노산 잔기는 치환된 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편:
(a) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환; 및
(b) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환,
여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 일치하지 않고,
여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하며,
여기서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH4 도메인, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 치환된 아미노산 잔기를 포함, 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 치환된 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.
제 58항에 있어서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 CH4 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 58항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 아미노산 서열은 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 아미노산 서열과 비교하여 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기가 도입된 것을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 58항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1 내지 61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 단백질-단백질 인터페이스와 함께 추가적으로 조작된 도메인을 포함하고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 상기 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 아미노산 잔기로 치환, 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 헤테로-이량체화(hetero-dimerization) 또는 호모-이량체화(homo-dimerization)에 의해서 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 상호작용하며,
여기서, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 상기 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 아미노산 잔기로 치환되고,
여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인이 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하며,
여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인과 다른 것을 특징으로 하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 62항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 62항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 64항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및 네번째 구성원은 TCR 불변영역 과(constant domain family)로부터 선택된 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 62 내지 65항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 헤테로-이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 62 내지 65항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인, 및 IGKC 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH1 도메인, 또는 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 62항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 호모-이량체인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 68항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 IgG1 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 68항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 IgG1 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 68항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 IgA1 CH3 도메인 또는 IgA2 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 62 내지 67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 헤테로-이량체화에 의해 상호작용하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 68 내지 71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 호모-이량체화에 의해 상호작용하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 62 내지 73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및 네번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 아미노산 잔기는 도메인의 핵심 무결성(core integrity) 비 필수(non essential) 아미노산인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1 내지 74항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 Fc 부위(region)를 포함하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 62 내지 75항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 두개의 아미노산 잔기 및/또는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 치환된 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1 내지 76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편은 전장(full-length) 항체인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 62 또는 77항에 있어서, 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편 또는 전장 항체는 이중특이적(bispecific)인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 78항에 있어서, 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편 또는 이중특이적 전장 항체는 HER2, EGFR, CD19, 및 VLA-2로 구성된 군으로부터 선택된 항원에 결합하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 1 내지 79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 추가적인 폴리펩티드는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄에 융합된 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 80항에 있어서, 상기 추가적인 폴리펩티드는 Fab, scFv, 디아바디(diabody), 도메인 항체, 약학적인 활성 펩티드(pharmacologically active peptide) 또는 단백질, 수용체 세포외 부위(receptor extracellular domain), CDR 이식된 폴리펩티드(CDR grafted polypeptide), 및 치료상으로 조작된 단백질 스캐폴드(therapeutic engineered protein scaffold)로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편:
(a) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환; 및
(b) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환,
여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하고,
여기서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은, CH2 도메인이 아니고, CH3 도메인이 아니며, VL 도메인이 아니고, VH 도메인이 아니며, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20, 22, 85.1, 86 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 치환된 아미노산 잔기로 구성하며,
여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인이고, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 20 위치에 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍(charged pair)이 아니고,
여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 26 위치에 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,
여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 86 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 86 위치에 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.
제 82항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22, 26, 85.1, 86 및 88로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82항에 있어서, 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 5 위치에 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아님, 및 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 86 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 86 위치에 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 83항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 헤테로-이량체화(hetero-dimerization)에 의해서 상호작용하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 83항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH4 도메인이 아닌 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 83항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인, CH4 도메인, IGKC 도메인, IGLC1 도메인, IGLC2 도메인, IGLC3 도메인, IGLC6 도메인, 및 IGLC7 도메인으로 구성된 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 83항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 83항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 83항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 20V, 20T, 20A, 20N, 20Q, 20E, 20K, 20W, 20S, 22A, 22G, 22T, 22L, 22I, 22V, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1W, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86H, 86Q, 86V, 86W, 86Y, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88T, 88I, 88K, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 치환을 포함 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 22A, 22G, 22T, 22L, 22I, 22V, 26Q, 26T, 26K, 26V, 26S, 26R, 26N, 26E, 85.1T, 85.1M, 85.1A, 85.1S, 85.1R, 85.1H, 85.1K, 85.1W, 85.1F, 85.1C, 85.1N, 86S, 86I, 86T, 86H, 86Q, 86V, 86W, 86Y, 86F, 88Q, 88L, 88V, 88R, 88E, 88I, 88T, 88K, 88Y, 및 88W로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 83항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20K, 20N, 20T, 20S, 22A, 22L, 22V, 22T, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86T, 86F, 86Y, 86V, 88W, 88R, 88L, 88I, 및 88K, 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 치환을 포함 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22A, 22L, 22V, 22T, 26E, 26T, 26K, 26R, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86T, 86F, 86Y, 86V, 88W, 88R, 88L, 88I, 및 88K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 83항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 20K, 20N, 20T, 20S, 22A, 22L, 22V, 22T, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86F, 86Y, 86V, 88W, 88R, 88L, 및 88K, 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 치환을 포함 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 22A, 22L, 22V, 22T, 26E, 26T, 26K, 85.1S, 85.1A, 85.1N, 85.1M, 85.1F, 86S, 86F, 86Y, 86V, 88W, 88R, 88L, 및 88K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기의 치환을 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 93항 중 어느 한 항에 있어서, 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환이 88 위치이면, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산이 85.1 및/또는 86 위치, 또는 만약, 두번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인에 있어서 치환이 88 위치이면, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 88 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 85.1 및/또는 86 위치이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 93항 중 어느 한 항에 있어서, 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환이 85.1 위치이면, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 85.1 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산이 86 위치, 또는 만약, 두번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인에 있어서 치환이 85.1 위치이면, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 85.1 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 86 위치이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 93항 중 어느 한 항에 있어서, 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환이 22 위치이면, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 22 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산이 22 및/또는 86 위치, 또는 만약, 두번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인에 있어서 치환이 22 위치이면, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 22 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 22 및/또는 86 위치이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 93항 중 어느 한 항에 있어서, 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환이 20 위치이면, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산이 26 위치, 또는 만약, 두번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인에 있어서 치환이 20 위치이면, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 20 위치에 치환된 아미노산 잔기와 상호작용하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 26 위치이고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 3, 5, 7, 11, 12, 13, 18, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기의 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 83 내지 97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 3, 5, 7, 11, 12, 13, 18, 20, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 추가적인 아미노산 잔기의 치환을 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
하기를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편:
(a) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환; 및
(b) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 조작된 도메인을 포함하는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄, 상기 두번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환,
여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모-이량체를 형성하고,
여기서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH2 도메인이 아니고, CH3 도메인이 아니며, VL 도메인이 아니고, VH 도메인이 아니며,
여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 12 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 단백질-단백질 인터페이스가 119 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 12 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 119 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,
여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 26 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 13 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 26 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 13 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,
여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 5 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 20 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 5 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 20 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,
여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 27 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 18 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 27 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 18 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,
여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 20 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 26 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 20 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 26 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,
여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 79 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 84.3 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 79 위치에 치환된 아미노산 잔기 및 84.3 위치에 치환된 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니며,
여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 CH1 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 86 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스가 86 위치의 치환된 아미노산 잔기이면, 상기 86 위치에 치환된 두 아미노산 잔기는 대전된 쌍이 아니고,
여기서 만약, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 IGKC 도메인 및 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 11 위치의 치환된 아미노산 잔기 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인이 경첩영역(hinge region)으로 구성된 도메인이면, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 경첩영역의 3 위치에 치환되지 않으며,
상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타냄.
제 100항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인, CH4 도메인, IGKC 도메인, IGLC1 도메인, IGLC2 도메인, IGLC3 도메인, IGLC6 도메인, 및 IGLC7 도메인으로 구성된 군으로부터 선택된 도메인, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 3, 5, 7, 11, 12, 13, 18, 20, 22, 26, 27, 79, 81, 83, 84, 84.2, 85.1, 86, 88 및 90으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 IMGT^® 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 100항에 있어서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 헤테로-이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 102항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 호모 이량체화에 의해서 상호작용하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 100항에 있어서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 호모 이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 100항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 100항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원은 TCR 불변영역 과로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 100항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 알파(alpha)(서열번호 1) 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 베타(beta)(서열번호 2), 또는
상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원은 TCR 불변영역 베타(서열번호 2) 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원은 TCR 불변영역 알파(서열번호 1)인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 107항에 있어서, 상기 서열번호 2에 있어서 75 아미노산 위치의 시스테인(cysteine; C)은 알라닌(alanine; A) 또는 세린(serine; S)으로 치환되는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 100항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 감마(gamma)(서열번호 33) 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 델타(delta)(서열번호 32), 또는
상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 델타(서열번호 32) 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 감마(서열번호 33)인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 100항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 호모 이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 110항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 110항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 IgG1 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 110항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 IgA1 CH3 도메인 또는 IgA2 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 113항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환 및 추가적으로 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환 및 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환 및 추가적으로 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 있는 아미노산 잔기로 치환되는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 114항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 하나의 3D 구조적 위치는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 동등한 3D 구조적 위치와 비교하여 다른 아미노산 잔기인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 115항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 도작된 도메인은 일치하지 않는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 116항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 아미노산 잔기는 도메인의 핵심 무결성에 필수적이지 않은 아미노산인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 117항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 단편은 적어도 두 조작된 도메인을 포함하고, 상기 첫번째 조작된 도메인은 상기 두번째 조작된 도메인과 일치하지 않으며, 상기 두 조작된 도메인은 그들의 단백질-단백질 인터페이스를 통한 상호작용으로 조립되는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114, 116, 118, 123, 124, 131, 133, 137, 138, 160, 162, 164, 165, 167, 174, 176, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기로 구성되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 90항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7으로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114, 116, 118, 122, 131, 133, 137, 138, 160, 162, 165, 167, 174, 176, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기로 구성되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 카뱃(Kabat) 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S131V, S131T, S131A, S131N, S131Q, S131E, S131K, S131W, V133A, V133G, V133T, V133L, V133I, N137Q, N137T, N137K, N137V, N137S, N137R, N137E, S174T, S174M, S174A, S174R, S174H, S174K, S174W, S174F, S174C, S174N, S176I, S176T, S176H, S176Q, S176V, S176W, S176Y, S176F, T178Q, T178L, T178V, T178R, T178E, T178I, T178K, T178Y, 및 T178W로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기로 구성되고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S114E, S114K, S114Q, F116A, F116T, F116Y, F118M, F118L, E123D, Q124E, S131K, S131T, S131N, V133L, V133A, V133T, N137T, N137E, N137K, N138K, N138E, Q160Y, Q160F, Q160K, S162A, S162G, S162D, S162T, T164V, T164M, E165L, D167E, D167S, S174A, S174M, S174N, S174F, S176F, S176V, S176Y, T178W, T178R, T178L, T178K, T180N, T180R, 및 T180K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 90항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 131V, 131A, 131N, 131Q, 131E, 131K, 131W, 131S, 133A, 133G, 133T, 133L, 133I, 137Q, 137T, 137K, 137V, 137R, 137N, 137E, 174T, 174M, 174S, 174R, 174H, 174K, 174W, 174F, 174C, 174N, 176I, 176T, 176H, 176Q, 176W, 176Y, 176V, 176F, 178Q, 178L, 178V, 178R, 178E, 178T, 178I, 178K, 178E, 및 178W로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 카뱃(Kabat) 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 90항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 114E, 114K, 114Q, 116A, 116Y, 118M, 118L, 122D, 131K, 131N, 133A, 133L, 133T, 137T, 137E, 137K, 138E, 138K, 160Y, 160F, 160K, 162D, 162A, 162G, 165L, 165M, 167E, 167S, 174N, 174M, 174F, 174S, 176V, 176F, 176Y, 178W, 178R, 178L, 178K, 180N, 180R, 및 180K 및 이의 보존적인 아미노산 치환으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 카뱃(Kabat) 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 178 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 131, 137, 160, 176, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 174 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S174A 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 114, 116, 131, 137, 162, 165, 167, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 178 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 T178W 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 114, 116, 131, 133, 137, 138, 162, 164, 174, 및 176으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 176 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S176V 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 118, 131, 133, 138, 160, 162, 167, 174, 178, 및 180으로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인 및 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 176 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S176Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 114, 116, 118, 123, 124, 133, 137, 160, 162, 164, 174, 및 178로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89 또는 90항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 176 위치의 아미노산 잔기를 포함 또는 S176Y 및 이의 보존적인 아미노산 치환, 및 선택적으로 124, 126, 128, 133, 134, 139, 141, 143, 147, 148, 168, 170, 173, 175, 181, 183, 185 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 위치에 추가적인 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89 또는 90항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 141V, 141T, 141N, 141Q, 141E, 141K, 141W, 141S, 143A, 143T, 143L, 143I, 143V, 147Q, 147T, 147V, 147S, 147R, 147N, 147E, 181T, 181M, 181A, 181R, 181H, 181K, 181W, 181F, 181C, 181N, 183I, 183H, 183Q, 183V, 183T, 183W, 183Y, 183F, 185Q, 185L, 185R, 185E, 185I, 185T, 185K, 185Y, 및 185W로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89 또는 90항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 S124E, S124K, S124Q, F126A, F126T, F126Y, L128F, L128M, K133D, S134E, T139Q, A141K, A141T, A141N, A141S, G143V, G143A, G143L, G143T, K147T, K147E, D148E, D148K, H168Y, H168F, H168K, F170D, F170A, F170G, F170T, V173L, V173M, Q175E, Q175S, Q175D, S181A, S181N, S181M, S181F, S183V, S183F, S183Y, V185W, V185R, V185L, V185K, T187N, T187K, 및 T187R로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 아미노산 잔기를 포함하고, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89 또는 90항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 185 위치의 아미노산 잔기 또는 V185W 및 이의 보전적인 아미노산 치환을 포함하고, 선택적으로 141, 143, 147, 168, 183, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89 또는 90항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 181 위치의 아미노산 잔기 또는 S181A 및 이의 보전적인 아미노산 치환을 포함하고, 선택적으로 124, 126, 128, 141, 143, 147, 170, 173, 175, 185, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89 또는 90항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 185 위치의 아미노산 잔기 또는 V185W 및 이의 보전적인 아미노산 치환을 포함하고, 선택적으로 124, 126, 141, 143, 147, 148, 170, 173, 181, 및 183으로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89 또는 90항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 183 위치의 아미노산 잔기 또는 S183V 및 이의 보전적인 아미노산 치환을 포함하고, 선택적으로 128, 141, 143, 148, 168, 170, 175, 181, 185, 및 187로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 89 또는 90항에 있어서, 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 있어서 치환된 아미노산 잔기는 183 위치의 아미노산 잔기 또는 S183Y 및 이의 보전적인 아미노산 치환을 포함하고, 선택적으로 124, 126, 133, 134, 139, 141, 143, 168, 170, 175, 181, 및 185로 구성된 군으로부터 선택된 위치의 추가적인 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 각 군 구성원의 아미노산 위치는 EU 번호에 따라 나타내는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 137항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치환된 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기는 인접하지 않는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 138항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 두 아미노산 잔기는 치환되는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 139항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 아미노산 서열은 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 아미노산 서열과 비교하여 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기의 도입(insertion)을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 적어도 한 아미노산에 의해 또는 적어도 두 아미노산에 의해 또는 적어도 세 아미노산에 의해 또는 적어도 네 아미노산에 의해 또는 적어도 다섯 아미노산에 의해 또는 적어도 다섯 내지 열 아미노산에 의해 또는 적어도 열 내지 삼십 아미노산에 의해 각각으로부터 다른 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 141항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 한 추가적인 폴리펩티드는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄에 결합하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 142항에 있어서, 상기 추가적인 폴리펩티드는 Fab, scFv, 디아바디(diabody), 도메인 항체(domain antibody), 약학적인 활성 펩티드(pharmacologically active peptide) 또는 단백질, 수용체 세포외 도메인(receptor extracellular domain), CDR 이식된 폴리펩티드(CDR grafted polypeptide), 및 치료적으로 조작된 단백질 스캐폴드(therapeutic engineered protein scaffold)로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 또는 100항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 상기 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기와 추가적으로 조작된 도메인을 포함 및/또는 상기 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환되고,
여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 헤테로-이량체화 또는 호모 이량체화에 의해 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 상호결합하며,
여기서, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 상기 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 한 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환되고,
여기서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모 이량체를 형성하며,
여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 다른 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및 네번째 구성원은 TCR 불변영역 과로부터 선택된 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 알파(서열번호 1), 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 베타(서열번호 2), 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 델타(서열번호 32) 및 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 감마(서열번호 33)인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 델타(서열번호 32), 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 감마(서열번호 33), 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 알파(서열번호 1) 및 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 베타(서열번호 2)인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 알파(서열번호 1) 또는 TCR 불변역영 델타(서열번호 32), 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 베타(서열번호 2) 또는 TCR 불변영역 감마(서열번호 33), 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및 네번째 구성원의 기부 도메인은 IgG1 CH3 도메인(서열번호 47), 만약 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원이 TCR 불변영역 알파(서열번호 1)이면, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 베타(서열번호 2) 및 만약 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인이 TCR 불변영역 델타(서열번호 32)이면, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 감마(서열번호 33)인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 알파(서열번호 1) 또는 TCR 불변역영 델타(서열번호 32), 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 베타(서열번호 2) 또는 TCR 불변영역 감마(서열번호 33), 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 및 네번째 구성원의 기부 도메인은 인간 IGHA1 CH3 도메인(서열번호 96) 또는 인간 IGHA2 CH3 도메인(서열번호 97), 만약 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원이 TCR 불변영역 알파(서열번호 1)이면, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 베타(서열번호 2) 및 만약 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인이 TCR 불변영역 델타(서열번호 32)이면, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 감마(서열번호 33)인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 IgA1 CH3 도메인 또는 IgA2 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및/또는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 자연적으로 발생한 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH1, CH2, CH3, CH4, IGKC, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH1, CH2, CH3, CH4, IGKC, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 헤테로-이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 호모 이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 일치하지 않은 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 CH3인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 IgG1 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인은 IgG1 CH3 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 IgG3 CH3 도메인 또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인은 IgG3 CH3 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 IgG1 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기 및/또는 치환된 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 인접하지 않은 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 두 아미노산 잔기 및/또는 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 부모 도메인은 치환된 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 161항 중 어느 한 항에 있어서, Fc 부분으로 구성된 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 82 내지 161항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편은 전장(full-length) 항체인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 144 또는 163항에 있어서, 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편 또는 전장 항체는 이중특이성(bispecific)인 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
제 164항에 있어서, 상기 이중특이성 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편 또는 이중특이성 전장 항체는 HER2, EGFR, CD19 및 VLA-2로 구성된 군으로부터 선택된 항원에 결합하는 것을 특징으로 하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편.
하기의 단계를 포함하는 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 제조하는 방법:
(a) 조작된 도메인으로 구성된 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄를 얻기 위해 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 첫번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 하나의 아미노산 잔기를 치환하는 단계;
(b) 조작된 도메인으로 구성된 두번째 조작된 면역글로불린 쇄를 얻기 위해 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 두번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 하나의 아미노산 잔기를 치환하는 단계;
(c) 상기 조작된 면역글로불린 쇄를 암호화하는 핵산(nucleic acid)으로 구성된 숙주세포를 상기 핵산이 발현되고, 상기 조작된 면역글로불린 쇄가 생산되도록 배양하는 단계; 및
(d) 숙주세포 배양으로부터 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 회복하는 단계.
제 166항에 있어서, 상기 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치에 치환된 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기는 두 도메인의 탄소 알파 추적(carbon alpha traces)에 겹쳐져서(superimposing) 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에 덮어씌워진 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기, 부모 도메인의 가장 가까운 잔기까지의 거리는 6 Å 이하의 3D 위치에 존재, 상기 기부 도메인은 부모 도메인과 다른 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1, CH2, CH3, CH4, IGKC, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 두번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1, CH2, CH3, CH4, IGKC, IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 호모 이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH4인 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 및 두번재 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 헤테로-이량체인 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인, 또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인인 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인, 또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인 또는 IGKC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린의 부모 도메인은 CH1 도메인인 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인, 또는 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 IGLC1, IGLC2, IGLC3, IGLC6, 및 IGLC7로 구성된 군으로부터 선택된 IGLC 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인은 CH1 도메인인 것을 특징으로 하는 방법.
제 166 내지 176항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 166 내지 177항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린의 첫번째 및 두번째 구성원은 TCR 불변영역 과로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 178항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 알파(서열번호 1) 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 베타(서열번호 2)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 179항에 있어서, 상기 서열번호 2의 75 위치 아미노산인 시스테인(cysteine; C)는 알라닌(alanine; A) 또는 세린(serine; S)으로 치환되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 178항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 감마(서열번호 33) 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원은 TCR 불변영역 델타(서열번호 32)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 호모 이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 182항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린의 두번째 구성원의 기부 도메인은 CH3 도메인인 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 일치하지 않은 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 치환된 첫번째 및/또는 두번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기는 인접하지 않을 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 아미노산 서열은 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질 서열과 비교하여 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기가 도입되지 않은 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 및/또는 두번째 부모 면역글로불린 쇄의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스에서 적어도 두 아미노산 잔기가 치환된 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 및 두번째 부모 면역글로불린 쇄는 Fc 부분으로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
제 166 내지 188항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 아미노산 잔기는 도메인의 핵심 무결성(core integrity) 비 필수(non essential) 아미노산인 것을 특징으로 하는 방법.
제 166항에 있어서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄는 단백질-단백질 인터페이스와 추가적으로 조작된 도메인으로 구성되고, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 상기 추가적으로 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환되며,
여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 헤테로-이량체화 또는 호모 이량체화에 의해서 세번째 조작된 면역글로불린의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 상호작용하고,
여기서, 상기 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 상기 조작된 도메인의 부모 도메인의 단백질-단백질 인터페이스의 적어도 하나의 아미노산 잔기는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환되며,
여기서, 상기 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인의 단백질-단백질 인터페이스는 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인 및 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 단백질의 단백질-단백질 인터페이스와 일치하지 않은 것을 특징으로 하는 방법.
제 190항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 세번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 네번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체 또는 자연적으로 발생한 호모 이량체를 형성하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 190항에 있어서, 상기 첫번재 조작된 면역글로불린 쇄 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄의 추가적으로 조작된 도메인 및 세번째 조작된 면역글로불린 쇄의 조작된 도메인은 일치하지 않은 것을 특징으로 하는 방법.
제 166 또는 190항에 있어서, 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편은 전장 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
제 166 또는 193항에 있어서, 상기 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편 또는 전장 항체는 이중특이성인 것을 특징으로 하는 방법.
제 194항에 있어서, 상기 이중특이성 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편 또는 이중특이성 항체는 HER2, EGFR, CD19 및 VLA-2로 구성된 군으로부터 선택된 항원에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 166 내지 190항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 추가적인 폴리펩티드는 첫번째 및/또는 두번째 조작된 면역글로불린 쇄에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 196항에 있어서, 상기 추가적인 폴리펩티드는 Fab, scFv, 디아바디, 도메인 항체, 약학적인 활성 펩티드 또는 단백질, 수용체 세포외 도메인, CDR 이식된 폴리펩티드, 및 치료적으로 조작된 단백질 스캐폴드로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
하기의 단계를 포함하는 다중도메인(multidomain) 단백질의 단백질-단백질 인터페이스를 조작하기 위한 방법:
(a) 단백질-단백질 인터페이스와 함께 도메인을 포함하는 다중도메인을 제공하는 단계;
(b) 상기 단계 (a)의 도메인과 다른 단백질-단백질 인터페이스와 함께 도메인을 포함하는 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과 구성원의 기부 도메인을 선택하는 단계;
(c) 상기 단계 (a)의 단백질-단백질 인터페이스와 도메인 및 상기 단계 (b)의 단백질-단백질 인터페이스와 기부 도메인의 3D 구조를 겹치는 단계:
(d) 상기 단계 (a)의 단백질-단백질 인터페이스와 도메인 및 상기 단계 (b)의 단백질-단백질 인터페이스와 기부 도메인의 겹쳐진 3D 구조에 있어서 노출된 단백질-단백질 인터페이스 잔기를 확인하는 단계; 및
(e) 상기 단계 (a)의 단백질-단백질 인터페이스와 도메인의 확인된 노출된 단백질-단백질 인터페이스 아미노산 잔기의 적어도 한 아미노산 잔기와 상기 단계 (b)의 단백질-단백질 인터페이스와 기부 도메인으로부터 확인된 노출된 단백질-단백질 인터페이스와 동등한 3D 구조적 위치의 아미노산 잔기로 치환하는 단계.
제 198항에 있어서, 상기 단계 (a)의 다중도메인 단백질의 단백질-단백질 인터페이스와 도메인은 다른 도메인과 호모 이량체를 형성할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제 198항에 있어서, 상기 단계 (a)의 다중 도메인의 단백질-단백질 인터페이스와 도메인은 다른 도메인과 헤테로-이량체를 형성할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제 198항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과 구성원의 기부 도메인에 있어서 확인된 다중도메인 단백질의 도메인에 있어서 노출된 인터페이스 잔기는 도메인 핵심 무결성에 비 필수적인 것을 특징으로 하는 방법.
제 198항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과 구성원은 자연적으로 발생한 헤테로-이량체인 것을 특징으로 하는 방법.
제 198항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과 구성원은 TCR 불변영역 과로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 198항에 있어서, 상기 면역글로불린 상과의 자연적으로 발생한 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 알파(서열번호 1) 또는 TCR 불변영역 베타(서열번호 2)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 204항에 있어서, 상기 서열번호 2의 75 위치 아미노산인 시스테인(cysteine; C)는 알라닌(alanine; A) 또는 세린(serine; S)으로 치환되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 198항에 있어서, 상기 면역글로불린 상과의 자연적으로 발생한 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 감마(서열번호 33) 또는 TCR 불변영역 델타(서열번호 32)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 198항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과 구성원은 자연적으로 발생한 호모 이량체인 것을 특징으로 하는 방법.
자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 자연적으로 발생하는 헤테로-이량체를 형성하고, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 적어도 하나의 아미노산 잔기가 치환된 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 적어도 하나의 조작된 도메인으로 구성된 첫번째 조작된 면역글로불린 쇄 및 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인의 단백질-단백질 인터페이스로부터 적어도 하나의 아미노산 잔기가 치환된 단백질-단백질 인터페이스를 갖는 적어도 하나의 조작된 도메인으로 구성된 두번째 조작된 면역글로불린 쇄로 구성된 헤테로-이량체 면역글로불린 또는 이의 헤테로-이량체 단편을 조작하기 위한 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인의 용도.
제 208항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 및 두번째 구성원의 기부 도메인은 T 세포 수용체 쇄(T cell receptor chain)로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
제 208항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 알파(서열번호 1) 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 베타(서열번호 2)인 것을 특징으로 하는 용도.
제 208항에 있어서, 상기 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 첫번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 델타(서열번호 32) 및 자연적으로 발생한 면역글로불린 상과의 두번째 구성원의 기부 도메인은 TCR 불변영역 감마(서열번호 33)인 것을 특징으로 하는 용도.