JP7146771B2 - 操作されたFcコンストラクトに関する組成物及び方法 - Google Patents
操作されたFcコンストラクトに関する組成物及び方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7146771B2 JP7146771B2 JP2019537119A JP2019537119A JP7146771B2 JP 7146771 B2 JP7146771 B2 JP 7146771B2 JP 2019537119 A JP2019537119 A JP 2019537119A JP 2019537119 A JP2019537119 A JP 2019537119A JP 7146771 B2 JP7146771 B2 JP 7146771B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- domain
- seq
- amino acid
- sequence
- polypeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/16—Otologicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/577—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 tolerising response
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Neurology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
Description
本出願は、2017年1月6日に出願された米国仮特許出願第62/443,495号、2017年5月23日に出願された米国仮特許出願第62/510,228号、2017年11月21日に出願された米国仮特許出願第62/589,473号に利益を主張するものである。これらの出願の各々の内容は、その全体を参照によって本明細書に組み入れるものとする。
治療用タンパク質、例えば、治療用抗体及びFc融合タンパク質は、急速に、免疫疾患及び炎症性疾患、がんならびに感染症をもつ患者にとって臨床的に重要な薬剤分類になっている。
本開示は、生物活性なFcドメインを含有する治療用コンストラクトを特徴とする。こうしたコンストラクトは、所望の血中半減期、ならびに/又は、Fc受容体に対する結合親和性及び/もしくは結合活性を有し得る。
を含み、第三と第四のポリペプチドはそれぞれ配列
を含む。
を有するポリペプチドを含む。他の実施形態では、本明細書に記載するFcコンストラクト中の一つ又は複数のリンカーは、スペーサーであり、例えば、2~200アミノ酸(例えば、2~100、3~200、3~150、3~100、3~60、3~50、3~40、3~30、3~20、3~10、3~8、3~5、4~30、5~30、6~30、8~30、10~20、10~30、12~30、14~30、20~30、15~25、15~30、18~22及び20~30アミノ酸)のアミノ酸スペーサーである。一部の場合では、アミノ酸スペーサーは、グリシンのみを含む、セリンのみを含む、又は、セリン及びグリシンのみを含む。一部の実施形態では、アミノ酸スペーサーはグリシンのみを含む。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2、又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば、置換、例えば保存的置換)を有する、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカーの外側領域(例えば、サブ配列
の外側)における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:78の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:78内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:78の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:78の位置33はアラニン、SEQ ID NO:78の位置72はプロリン、及びSEQ ID NO:78の位置319はプロリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:49の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:49の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただし最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾のいずれも、リンカーの外側領域(例えば、サブ配列
の外側)にはない。SEQ ID NO:49内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:49の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:49の位置134はシステイン、SEQ ID NO:49の位置137はリシン、SEQ ID NO:49の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:49の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:49の位置436はアスパラギン酸である。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:62の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカーの外側領域(例えば、サブ配列
の外側)における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:62の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:62内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:62の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:62の位置134はシステイン、SEQ ID NO:62の位置137はリシン、SEQ ID NO:62の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:62の位置280はアラニン、SEQ ID NO:62の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:62の位置436はアスパラギン酸である。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾(例えば、置換、例えば保存的置換)を有する、SEQ ID NO:64の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカーの外側領域(例えば、サブ配列
の外側)に、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:64の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:64内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:64の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:64の位置33はアラニンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:65の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカー(例えば、サブ配列
)の外側領域における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:65の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:65内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:65の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:65の位置33はアラニン、SEQ ID NO:65の位置134はシステイン、SEQ ID NO:65の 位置137はリシン、SEQ ID NO:65の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:65の位置280はアラニン、SEQ ID NO:65の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:65の位置436はアスパラギン酸である。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾(例えば、置換、例えば保存的置換)を有する、SEQ ID NO:66の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカーの外側領域(例えば、サブ配列
の外側)に、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:66の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:66内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:66の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:66の位置134はシステイン、SEQ ID NO:66の位置137はリシン、SEQ ID NO:66の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:66の 位置319はプロリン、SEQ ID NO:66の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:66の 位置436はアスパラギン酸である。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:67の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカー(例えば、サブ配列
)の外側領域における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:67の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:67内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:67の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:67の位置134はシステイン、SEQ ID NO:67の位置137はリシン、SEQ ID NO:67の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:67の位置280はアラニン、SEQ ID NO:67の位置318はプロリン、SEQ ID NO:67の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:67の位置436はアスパラギン酸である。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:68の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカー(例えば、サブ配列
)の外側領域における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:68の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:68内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:68の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:68の位置33はアラニン、SEQ ID NO:68の位置134はシステイン、SEQ ID NO:68の位置137はリシン、SEQ ID NO:68の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:68の位置319はプロリン、SEQ ID NO:68の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:68の位置436はアスパラギン酸である。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:69の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカー(例えば、サブ配列
)の外側領域における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:69の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:69内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:69の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:69の位置33はアラニン、SEQ ID NO:69の位置134はシステイン、SEQ ID NO:69の位置137はリシン、SEQ ID NO:69の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:69の位置280はアラニン、SEQ ID NO:69の位置319はプロリン、SEQ ID NO:69の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:69の位置436はアスパラギン酸である。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:71の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカー(例えば、サブ配列
)の外側領域における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:71の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:71内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:71の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:71の位置71はプロリン、SEQ ID NO:71の位置134はシステイン、SEQ ID NO:71の位置137はリシン、SEQ ID NO:71の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:71の位置426はリシン、SEQ ID NO:71の位置436はアスパラギン酸である。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:72の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカー(例えば、サブ配列
)の外側領域における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:72の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:72内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:72の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:72の位置72はプロリン、SEQ ID NO:72の位置134はシスチン、SEQ ID NO:72の位置137はリシン、SEQ ID NO:72の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:72の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:72の位置436はアスパラギン酸である。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:74の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカー(例えば、サブ配列
)の外側領域における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:74の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:74内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:74の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:74の位置33はアラニン、SEQ ID NO:74の位置72はプロリン、SEQ ID NO:74の位置134はシステイン、SEQ ID NO:74の位置137はリシン、SEQ ID NO:74の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:74の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:74の位置436はアスパラギン酸である。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:75の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカー(例えば、サブ配列
)の外側領域における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:75の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:75内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:75の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:75の位置33はアラニン、SEQ ID NO:75の位置72はプロリン、SEQ ID NO:75の位置134はシステイン、SEQ ID NO:75の位置137はリシン、SEQ ID NO:75の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:75の位置280はアラニン、SEQ ID NO:75の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:75の位置436はアスパラギン酸である。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:76の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカー(例えば、サブ配列
)の外側領域における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:76の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:76内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:76の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:76の位置72はプロリン、及びSEQ ID NO:76の位置319はプロリンである。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:77の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカー(例えば、サブ配列
)の外側領域における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:77の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:77内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:77の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:77の位置72はプロリン、SEQ ID NO:77の位置134はシステイン、SEQ ID NO:77の位置137はリシン、SEQ ID NO:77の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:77の位置280はアラニン、SEQ ID NO:77の位置319はプロリン、SEQ ID NO:77の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:77の位置436はアスパラギン酸である。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:79の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカー(例えば、サブ配列
)の外側領域における、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:79の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。SEQ ID NO:79内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:79の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:79の位置33はアラニン、SEQ ID NO:79の位置72はプロリン、SEQ ID NO:79の位置280はアラニン、及びSEQ ID NO:79の位置319はプロリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:73の位置33はアラニン、及びSEQ ID NO:73の位置72はプロリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:61の位置129はシステイン、SEQ ID NO:61の位置146はセリン、SEQ ID NO:61の位置148はアラニン、SEQ ID NO:61の位置150はアスパラギン酸、及びSEQ ID NO:61の位置187はバリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:63の位置33はアラニンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の 単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:70の位置72はプロリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、最大9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:78の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:78の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただし最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾のいずれも、リンカー(例えば、サブ配列
)の外側領域にはない。SEQ ID NO:78内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:78の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:78の位置33はアラニン、SEQ ID NO:78の位置72はプロリン、及びSEQ ID NO:78の位置319はプロリンであり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:73の位置33はアラニン、及びSEQ ID NO:73の位置72はプロリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:49の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:76内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:49の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:49の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:49の位置134はシステイン、SEQ ID NO:49の位置137はリシン、SEQ ID NO:49の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:49の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:49の位置436はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:61の位置129はシステイン、SEQ ID NO:61の位置146はセリン、SEQ ID NO:61の位置148はアラニン、SEQ ID NO:61の位置150はアスパラギン酸、及びSEQ ID NO:61の位置187はバリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:62の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:62内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:62の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:62の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:62の位置134はシステイン、SEQ ID NO:62の位置137はリシン、SEQ ID NO:62の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:62の位置280はアラニン、SEQ ID NO:62の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:62の位置436はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:61の位置129はシステイン、SEQ ID NO:61の位置146はセリン、SEQ ID NO:61の位置148はアラニン、SEQ ID NO:61の位置150はアスパラギン酸、及びSEQ ID NO:61の位置187はバリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:64の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:64内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:64の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:64の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:64の位置33はアラニンであり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:63の位置33はアラニンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなるものであり、第三及び第四のポリペプチドのそれぞれは、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:65の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:65内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:65の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:65の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:65の位置33はアラニン、SEQ ID NO:65の位置134はシステイン、SEQ ID NO:65の位置137はリシン、SEQ ID NO:65の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:65の位置280はアラニン、SEQ ID NO:65の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:65の位置436はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:63の位置33はアラニンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:66の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:66内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:66の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:66の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:66の位置134はシステイン、SEQ ID NO:66の位置137はリシン、SEQ ID NO:66の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:66の位置319はプロリン、SEQ ID NO:66の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:66の位置436はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:61の位置129はシステイン、SEQ ID NO:61の位置146はセリン、SEQ ID NO:61の位置148はアラニン、SEQ ID NO:61の位置150はアスパラギン酸、及びSEQ ID NO:61の位置187はバリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:67の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:67内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:67の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:67の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:67の位置134はシステイン、SEQ ID NO:67の位置137はリシン、SEQ ID NO:67の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:67の位置280はアラニン、SEQ ID NO:67の位置318はプロリン、SEQ ID NO:67の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:67の位置436はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:61の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:61の位置129はシステイン、SEQ ID NO:61の位置146はセリン、SEQ ID NO:61の位置148はアラニン、SEQ ID NO:61の位置150はアスパラギン酸、及びSEQ ID NO:61の位置187はバリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:68の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:68内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:68の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:68の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:68の位置33はアラニン、SEQ ID NO:68の位置134はシステイン、SEQ ID NO:68の位置137はリシン、SEQ ID NO:68の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:68の位置319はプロリン、SEQ ID NO:68の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:68の位置436はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:63の位置33はアラニンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:69の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:69内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:69の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:69の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:69の位置33はアラニン、SEQ ID NO:69の位置134はシステイン、SEQ ID NO:69の位置137はリシン、SEQ ID NO:69の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:69の位置280はアラニン、SEQ ID NO:69の位置319はプロリン、SEQ ID NO:69の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:69の位置436はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:63の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:63の位置33はアラニンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:71の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:71内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:71の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:71の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:71の位置71はプロリン、SEQ ID NO:71の位置134はシステイン、SEQ ID NO:71の位置137はリシン、SEQ ID NO:71の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:71の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:71の位置436はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:70の位置72はプロリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:72の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:72内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:72の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:72の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:72の位置72はプロリン、SEQ ID NO:72の位置134はシスチン、SEQ ID NO:72の位置137はリシン、SEQ ID NO:72の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:72の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:72の位置436はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:70の位置72はプロリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:74の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:74内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:74の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:74の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:74の位置33はアラニン、SEQ ID NO:74の位72はプロリン、SEQ ID NO:74の位置134はシステイン、SEQ ID NO:74の位置137はリシン、SEQ ID NO:74の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:74の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:74の位置436はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:73の位置33はアラニン、及びSEQ ID NO:73の位置72はプロリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:75の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:75内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:75の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:75の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:75の位置33はアラニン、SEQ ID NO:75の位72はプロリン、SEQ ID NO:75の位置134はシステイン、SEQ ID NO:75の位置137はリシン、SEQ ID NO:75の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:75の位置280はアラニン、SEQ ID NO:75の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:75の位置436はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:73の位置33はアラニン、及びSEQ ID NO:73の位置72はプロリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:76の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:76内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:76の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:76の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:76の位置72はプロリン、及びSEQ ID NO:76の位置319はプロリンであり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:70の位置72はプロリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:77の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:77内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:77の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:77の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:77の位置72はプロリン、SEQ ID NO:77の位置134はシステイン、SEQ ID NO:77の位置137はリシン、SEQ ID NO:77の位置146はトリプトファン、SEQ ID NO:77の位置280はアラニン、SEQ ID NO:77の位置319はプロリン、SEQ ID NO:77の位置426はリシン、及びSEQ ID NO:77の位置436はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:70の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:70の位置72はプロリンである。
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:79の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば置換、例えば保存的置換)をもつ、SEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個(例えば、1個以下、2個以下、3個以下、4個以下、5個以下、6個以下、7個以下、8個以下、9個以下)の単一アミノ酸修飾をリンカー(例えば、サブ配列
、SEQ ID NO:79内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる)の外側領域に有するSEQ ID NO:79の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:79の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:79の位置33はアラニン、SEQ ID NO:79の位置72はプロリン、SEQ ID NO:79の位置280はアラニン、及びSEQ ID NO:79の位置319はプロリンであり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大10個の単一アミノ酸修飾を有する、SEQ ID NO:73の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしSEQ ID NO:73の位置33はアラニン、及びSEQ ID NO:73の位置72はプロリンである。一部の実施形態では、Fcコンストラクトは、コンストラクト4、コンストラクト5、コンストラクト6、コンストラクト7、コンストラクト8、コンストラクト9、コンストラクト10、コンストラクト11、コンストラクト12、コンストラクト13、コンストラクト14、コンストラクト15、コンストラクト16、コンストラクト17、コンストラクト18、又はコンストラクト19である。
を有するポリペプチドから独立して選択される。
を有するポリペプチドから独立して選択される。一部の実施形態では、リンカーは、
である。
の配列を含み、前記第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む。別の態様では、本開示は、a)i)第一のFcドメイン単量体、ii)第二のFcドメイン単量体、及びiii)第一のFcドメイン単量体を第二のFcドメイン単量体に結合させるリンカーを含む第一のポリペプチドと、b)i)第三のFcドメイン単量体、ii)第四のFcドメイン単量体、及びiii)第三のFcドメイン単量体を第四のFcドメイン単量体に結合させるリンカーを含む第二のポリペプチドと、c)第五のFcドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、d)第六のFcドメイン単量体を含む第四のポリペプチドとを含むFcコンストラクトを提供し、ここで第一のFcドメイン単量体及び第五のFcドメイン単量体は組み合わされて第一のFcドメインを形成し、第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体は組み合わされて第二のFcドメインを形成し、ならびに第三のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体は組み合わされて第三のFcドメインを形成し、ここで第一及び第二のポリペプチドの各々は、
の配列を含み、前記第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む。
の配列を含み、前記第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む。別の態様では、本開示は、a)i)第一のFcドメイン単量体、ii)第二のFcドメイン単量体、及びiii)第一のFcドメイン単量体を第二のFcドメイン単量体に結合させるリンカーを含む第一のポリペプチドと、b)i)第三のFcドメイン単量体、ii)第四のFcドメイン単量体、及びiii)第三のFcドメイン単量体を第四のFcドメイン単量体に結合させるリンカーを含む第二のポリペプチドと、c)第五のFcドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、d)第六のFcドメイン単量体を含む第四のポリペプチドとを含むFcコンストラクトを提供し、ここで第一のFcドメイン単量体及び第五のFcドメイン単量体は組み合わされて第一のFcドメインを形成し、第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体は組み合わされて第二のFcドメインを形成し、ならびに第三のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体は組み合わされて第三のFcドメインを形成し、ここで第一及び第二のポリペプチドの各々は、
の配列を含み、前記第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む。
の配列を含み、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む。別の態様では、本開示は、a)i)第一のFcドメイン単量体、ii)第二のFcドメイン単量体、及びiii)第一のFcドメイン単量体を第二のFcドメイン単量体に結合させるリンカーを含む第一のポリペプチドと、b)i)第三のFcドメイン単量体、ii)第四のFcドメイン単量体、及びiii)第三のFcドメイン単量体を第四のFcドメイン単量体に結合させるリンカーを含む第二のポリペプチドと、c)第五のFcドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、d)第六のFcドメイン単量体を含む第四のポリペプチドとを含むFcコンストラクトを提供し、ここで第一のFcドメイン単量体及び第五のFcドメイン単量体は組み合わされて第一のFcドメインを形成し、第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体は組み合わされて第二のFcドメインを形成し、ならびに第三のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体は組み合わされて第三のFcドメインを形成し、ここで第一及び第二のポリペプチドの各々は、
の配列を含み、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
の配列を含む。
本明細書において、「Fcドメイン単量体」という語は、少なくとも一つのヒンジドメイン(又はその部分)と第二の抗体定常ドメイン及び第三の抗体定常ドメイン(CH2及びCH3)を含むポリペプチド鎖又はその機能的断片(例えば、(i)他のFcドメイン単量体と二量体形成してFcドメインを形成することと、(ii)Fc受容体と結合することとが可能である断片)を指す。Fcドメイン単量体は、例えばヒト、マウス又はラットである、様々な起源のものとすることが可能である。Fcドメイン単量体は、IgG、IgE、IgM、IgA又はIgDを含む、任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプとすることが可能である(例えば、IgG)。さらに、Fcドメイン単量体は、IgGサブタイプ(例えば、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3又はIgG4)とすることが可能である(例えば、IgG1)。Fcドメイン単量体は、抗原認識領域、例えば可変領域又は相補性決定領域(CDR)として機能することが可能である免疫グロブリンの部分を何も含まない。Fcドメイン単量体は、10個もの野生型Fcドメイン単量体配列からの変更(例えば、単一アミノ酸修飾)を含有することが可能であり(例えば、1~10個、1~8個、1~6個、1~4個のアミノ酸置換、付加又は欠失)、該変更は、FcドメインとFc受容体間の相互作用を変える。好適な変更の例は、この技術分野で公知である。
100×(A/Bの分数)
式中、Aは候補配列及び参照配列のアラインメント内で同一として採点されたアミノ酸(又は核酸)残基の数であり、Bは参照配列内のアミノ酸(又は核酸)残基の総数である。候補配列の長さが参照配列の長さと等しくない場合の一部の実施形態では、参照配列に対する候補配列のパーセントアミノ酸(又は核酸)配列同一性は、候補配列に対する参照配列のパーセントアミノ酸(又は核酸)配列同一性と等しくないはずである。
[本発明1001]
a)以下:
i)第一のFcドメイン単量体、
ii)第二のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第一のFcドメイン単量体を前記第二のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
b)以下:
i)第三のFcドメイン単量体、
ii)第四のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第三のFcドメイン単量体を前記第四のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
c)第五のFcドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
d)第六のFcドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むFcコンストラクトであって、
前記第一のFcドメイン単量体及び第五のFcドメイン単量体が組み合わされて第一のFcドメインを形成し、前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体が組み合わされて第二のFcドメインを形成し、ならびに前記第三のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体が組み合わされて第三のFcドメインを形成し、
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、
Fcコンストラクト。
[本発明1002]
a)以下:
i)第一のFcドメイン単量体、
ii)第二のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第一のFcドメイン単量体を前記第二のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
b)以下:
i)第三のFcドメイン単量体、
ii)第四のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第三のFcドメイン単量体を前記第四のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
c)第五のFcドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
d)第六のFcドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むFcコンストラクトであって、
前記第一のFcドメイン単量体及び第五のFcドメイン単量体が組み合わされて第一のFcドメインを形成し、前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体が組み合わされて第二のFcドメインを形成し、ならびに前記第三のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体が組み合わされて第三のFcドメインを形成し、
少なくとも一つのFcドメイン単量体が、位置I253にアミノ酸置換を含む、
Fcコンストラクト。
[本発明1003]
前記第一及び第五のFcドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置I253にアミノ酸置換を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1004]
前記第二及び第四のFcドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置I253にアミノ酸置換を含む、本発明1002又は1003のFcコンストラクト。
[本発明1005]
前記第三及び第六のFcドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置I253にアミノ酸置換を含む、本発明1002~1004のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1006]
位置I253での各アミノ酸置換が、I253A、I253C、I253D、I253E、I253F、I253G、I253H、I253I、I253K、I253L、I253M、I253N、I253P、I253Q、I253R、I253S、I253T、I253V、I253W、及びI253Yからなる群から独立して選択される、本発明1002~1005のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1007]
位置I253での各アミノ酸置換がI253Aである、本発明1006のFcコンストラクト。
[本発明1008]
少なくとも一つのFcドメイン単量体が、位置R292にアミノ酸置換を含む、本発明1002~1007のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1009]
前記第一のFcドメインが、位置R292にアミノ酸置換を含む、本発明1002~1008のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1010]
前記第二のFcドメインが、位置R292にアミノ酸置換を含む、本発明1002~1009のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1011]
前記第三のFcドメインが、位置R292にアミノ酸置換を含む、本発明1002~1010のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1012]
位置R292での各アミノ酸置換が、R292D、R292E、R292L、R292P、R292Q、R292R、R292T、及びR292Yからなる群から独立して選択される、本発明1008~1011のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1013]
位置R292での各アミノ酸置換がR292Pである、本発明1012のFcコンストラクト。
[本発明1014]
前記アミノ酸置換が、前記Fcドメインの両方のFcドメイン単量体に存在する、本発明1002~1013のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1015]
各Fcドメイン単量体が、I253及びR292の一方又は両方での置換に加えて、最大10、9、8、7、6、5、4、3、2、又は1個の単一アミノ酸修飾を含む、本発明1002~1014のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1016]
前記アミノ酸修飾が、前記Fc単量体のCH3ドメイン内にある、本発明1015のFcコンストラクト。
[本発明1017]
a)以下:
i)第一のFcドメイン単量体、
ii)第二のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第一のFcドメイン単量体を前記第二のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
b)以下:
i)第三のFcドメイン単量体、
ii)第四のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第三のFcドメイン単量体を前記第四のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
c)第五のFcドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
d)第六のFcドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むFcコンストラクトであって、
前記第一のFcドメイン単量体及び第五のFcドメイン単量体が組み合わされて第一のFcドメインを形成し、前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体が組み合わされて第二のFcドメインを形成し、ならびに前記第三のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体が組み合わされて第三のFcドメインを形成し、
少なくとも一つのFcドメイン単量体が、位置R292にアミノ酸置換を含む、
Fcコンストラクト。
[本発明1018]
前記第一及び第五のFcドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置R292にアミノ酸置換を含む、本発明1017のFcコンストラクト。
[本発明1019]
前記第二及び第四のFcドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置R292にアミノ酸置換を含む、本発明1017又は1018のFcコンストラクト。
[本発明1020]
前記第三及び第六のFcドメイン単量体のうち一つ又は複数が、位置R292にアミノ酸置換を含む、本発明1017~1019のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1021]
位置R292での各アミノ酸置換が、R292D、R292E、R292L、R292P、R292Q、R292R、R292T、及びR292Yからなる群から独立して選択される、本発明1017~1020のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1022]
位置R292での各アミノ酸置換がR292Pである、本発明1021のFcコンストラクト。
[本発明1023]
前記アミノ酸置換が、前記Fcドメインの両方のFcドメイン単量体に存在する、本発明1017~1022のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1024]
各Fcドメイン単量体が、I253及びR292の一方又は両方での置換に加えて、最大10、9、8、7、6、5、4、3、2、又は1個の単一アミノ酸修飾を含む、本発明1017~1023のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1025]
前記アミノ酸修飾が、前記Fc単量体のCH3ドメイン内にある、本発明1024のFcコンストラクト。
[本発明1026]
各Fcドメインの配列が、10個以下の単一アミノ酸修飾を有するヒトIgG1 Fcドメイン配列に基づく、本発明1001~1025のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1027]
各Fcドメインの配列が、10個以下の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:42に基づく、本発明1026のFcコンストラクト。
[本発明1028]
前記第一のFcドメイン及び第三のFcドメインの各々が、アミノ酸置換I253A及びR292Pを含み、前記第二のFcドメインが、アミノ酸置換R292Pを含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1029]
前記第二のFcドメインが、アミノ酸置換I253Aを含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1030]
前記第一のFcドメイン及び第三のFcドメインの各々が、アミノ酸置換I253Aを含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1031]
前記第一のFcドメイン、第二のFcドメイン、及び第三のFcドメインの各々が、アミノ酸置換I253Aを含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1032]
前記第二のFcドメインが、アミノ酸置換I253A及びR292Pを含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1033]
前記第一のFcドメイン及び第三のFcドメインの各々が、アミノ酸置換I253Aを含み、前記第二のFcドメインが、アミノ酸置換R292Pを含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1034]
前記第一のFcドメイン及び第三のFcドメインの各々が、アミノ酸置換I253Aを含み、前記第二のFcドメインが、アミノ酸置換I253A及びR292Pを含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1035]
前記第一のFcドメイン及び第三のFcドメインの各々が、アミノ酸置換R292Pを含み、前記第二のFcドメインが、アミノ酸置換I253Aを含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1036]
前記第一のFcドメイン及び第三のFcドメインの各々が、アミノ酸置換I253A及びR292Pを含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1037]
前記第一のFcドメイン及び第三のFcドメインの各々が、アミノ酸置換I253A及びR292Pを含み、前記第二のFcドメインが、アミノ酸置換I253Aを含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1038]
前記第一のFcドメイン及び第三のFcドメインの各々が、アミノ酸置換R292Pを含み、前記第二のFcドメインが、アミノ酸置換I253A及びR292Pを含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1039]
前記第一のFcドメイン、第二のFcドメイン、及び第三のFcドメインの各々が、アミノ酸置換I253A及びR292Pを含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1040]
前記アミノ酸置換が、前記Fcドメインの両方のFcドメイン単量体に存在する、本発明1028~1039のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1041]
前記第一のFcドメイン単量体及び前記第五のFcドメイン単量体が、前記第一のFcドメイン単量体及び前記第五のFcドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な二量体形成選択モジュールを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1042]
前記第二のFcドメイン単量体及び前記第四のFcドメイン単量体が、前記第二のFcドメイン単量体及び前記第四のFcドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な二量体形成選択モジュールを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1043]
前記第三のFcドメイン単量体及び前記第六のFcドメイン単量体が、前記第三のFcドメイン単量体及び前記第六のFcドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な二量体形成選択モジュールを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1044]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドが、同一のアミノ酸配列を有し、前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドが、同一のアミノ酸配列を有する、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1045]
各Fcドメイン単量体が、SEQ ID NO:42のFcドメイン単量体配列と比較して、5個以下の単一アミノ酸修飾を有する、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1046]
各Fcドメイン単量体が、SEQ ID NO:42のFcドメイン単量体配列と比較して、5個以下の単一アミノ酸置換を有する、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1047]
各Fcドメイン単量体が、SEQ ID NO:42のFcドメイン単量体配列と比較して、3個以下の単一アミノ酸修飾を有する、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1048]
各Fcドメイン単量体が、SEQ ID NO:42のFcドメイン単量体配列と比較して、3個以下の単一アミノ酸修飾を有する、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1049]
前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換D399K、及びK409D又はK409Eのいずれかを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1050]
前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換K392D及びD399Kを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1051]
前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換E357K及びK370Eを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1052]
前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換D356K及びK439Dを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1053]
前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換K392E及びD399Kを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1054]
前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換E357K及びK370Dを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1055]
前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換D356K及びK439Eを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1056]
前記第一のFcドメイン単量体及び第三のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換S354C及びT366Wを含み、前記第五のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換Y349C、T366S、L368A、及びY407Vを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1057]
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、アミノ酸置換S354C及びT366Wを含み、前記第一のFcドメイン単量体及び第三のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換Y349C、T366S、L368A、及びY407Vを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1058]
前記第一のFcドメイン単量体及び第三のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換E357K又はE357Rを含み、前記第五のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換K370D又はK370Eを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1059]
前記第一のFcドメイン単量体及び第三のFcドメイン単量体が、アミノ酸置換K370D又はK370Eを含み、前記第五のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換E357K又はE357Rを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1060]
前記第一のFcドメイン単量体及び第三のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換K409D又はK409Eを含み、前記第五のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換D399K又はD399Rを含む、本発明1002~1040のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1061]
前記第一のFcドメイン単量体及び第三のFcドメイン単量体が、アミノ酸置換D399K又はD399Rを含み、前記第五のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換K409D又はK409Eを含む、本発明1002~1060のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1062]
前記リンカーが、配列
を有するポリペプチドを含む、本発明1002~1061のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1063]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1064]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1065]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1066]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1067]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1068]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1069]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1070]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1071]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1072]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1073]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1074]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1075]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1076]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1077]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1078]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1079]
前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドの各々が、
の配列を含む、本発明1002又は本発明1017のFcコンストラクト。
[本発明1080]
前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドの各々が、
の配列を含む、本発明1002又は本発明1017のFcコンストラクト。
[本発明1081]
前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドの各々が、
の配列を含む、本発明1002又は本発明1017のFcコンストラクト。
[本発明1082]
前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドの各々が、
の配列を含む、本発明1002又は本発明1017のFcコンストラクト。
[本発明1083]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1084]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1085]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1086]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1087]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1088]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1089]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1090]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1091]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1092]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1093]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1094]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1095]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1096]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1097]
コンストラクト18、コンストラクト5、コンストラクト6、コンストラクト7、コンストラクト9、コンストラクト10、コンストラクト11、コンストラクト13、コンストラクト14、コンストラクト15、コンストラクト17、又はコンストラクト19である、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1098]
コンストラクト5、コンストラクト6、コンストラクト7、コンストラクト9、コンストラクト10、コンストラクト11、コンストラクト13、コンストラクト14、コンストラクト15、コンストラクト16、コンストラクト17、コンストラクト18、又はコンストラクト19である、本発明1002のFcコンストラクト。
[本発明1099]
前記第一のポリペプチド、第二のポリペプチド、第三のポリペプチド、及び/又は第四のポリペプチドの各々が、N末端DのQへのアミノ酸置換を含む、本発明1002又は本発明1017のFcコンストラクト。
[本発明1100]
(i)第一のFcドメイン単量体及び第二のFcドメイン単量体を含む、第一のFcドメインと、
(ii)第三のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体を含む、第二のFcドメインと
を含み、
少なくとも一つのFcドメイン単量体が位置I253にアミノ酸置換を含む、
Fcコンストラクト。
[本発明1101]
位置I253でのアミノ酸置換の各々が、I253A、I253C、I253D、I253E、I253F、I253G、I253H、I253I、I253K、I253L、I253M、I253N、I253P、I253Q、I253R、I253S、I253T、I253V、I253W、及びI253Yからなる群から独立して選択される、本発明1100のFcコンストラクト。
[本発明1102]
位置I253でのアミノ酸置換がI253Aである、本発明1101のFcコンストラクト。
[本発明1103]
位置R292に少なくとも一つのアミノ酸置換を含む、本発明1100~1102のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1104]
位置R292でのアミノ酸置換が、R292D、R292E、R292L、R292P、R292Q、R292R、R292T、及びR292Yからなる群から選択される、本発明1103のFcコンストラクト。
[本発明1105]
位置R292でのアミノ酸置換がR292Pである、本発明1104のFcコンストラクト。
[本発明1106]
前記第一のFcドメイン単量体及び前記第三のFcドメイン単量体が、リンカーによって結合されている、本発明1100~1105のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1107]
前記第二のFcドメイン単量体及び前記第四のFcドメイン単量体が、リンカーによって結合されている、本発明1100~1106のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1108]
各リンカーが、配列
を有するポリペプチドから独立して選択される、本発明1106又は1107のFcコンストラクト。
[本発明1109]
前記リンカーが
である、本発明1108のコンストラクト。
[本発明1110]
前記第一のFcドメイン単量体及び前記第二のFcドメイン単量体が、前記第一のFcドメイン単量体及び前記第二のFcドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な二量体形成選択モジュールを含む、本発明1100~1109のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1111]
前記第三のFcドメイン単量体及び前記第四のFcドメイン単量体が、前記第三のFcドメイン単量体及び前記第四のFcドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な二量体形成選択モジュールを含む、本発明1100~1110のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1112]
(i)第一のFドメイン単量体及び第二のFcドメイン単量体を含む、第一のFcドメインと、
(ii)第三のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体を含む、第二のFcドメインと
を含み、
少なくとも一つのFcドメインが位置R292に単一アミノ酸置換を含む、
Fcコンストラクト。
[本発明1113]
位置R292でのアミノ酸置換の各々が、R292D、R292E、R292L、R292P、R292Q、R292R、R292T、及びR292Yからなる群から独立して選択される、本発明1112のFcコンストラクト。
[本発明1114]
位置R292でのアミノ酸置換がR292Pである、本発明1113のFcコンストラクト。
[本発明1115]
前記第一のFcドメイン単量体及び前記第三のFcドメイン単量体が、リンカーによって結合されている、本発明1112~1114のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1116]
前記第二のFcドメイン単量体及び前記第四のFcドメイン単量体が、リンカーによって結合されている、本発明1112~1115のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1117]
各リンカーが、配列
を有するポリペプチドから独立して選択される、本発明1115~1116のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1118]
前記リンカーが
である、本発明1117のFcコンストラクト。
[本発明1119]
前記第一のFcドメイン単量体及び前記第二のFcドメイン単量体が、前記第一のFcドメイン単量体及び前記第二のFcドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な二量体形成選択モジュールを含む、本発明1112~1118のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1120]
前記第三のFcドメイン単量体及び前記第四のFcドメイン単量体が、前記第三のFcドメイン単量体及び前記第四のFcドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な二量体形成選択モジュールを含む、本発明1091~1098のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1121]
a)以下:
i)第一のFcドメイン単量体、
ii)第二のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第一のFcドメイン単量体を前記第二のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
b)以下:
i)第三のFcドメイン単量体、
ii)第四のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第三のFcドメイン単量体を前記第四のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
c)第五のFcドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
d)第六のFcドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むFcコンストラクトであって、
前記第一のFcドメイン単量体及び第五のFcドメイン単量体が組み合わされて第一のFcドメインを形成し、前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体が組み合わされて第二のFcドメインを形成し、ならびに前記第三のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体が組み合わされて第三のFcドメインを形成し、
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、
Fcコンストラクト。
[本発明1122]
a)以下:
i)第一のFcドメイン単量体、
ii)第二のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第一のFcドメイン単量体を前記第二のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
b)以下:
i)第三のFcドメイン単量体、
ii)第四のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第三のFcドメイン単量体を前記第四のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
c)第五のFcドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
d)第六のFcドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むFcコンストラクトであって、
前記第一のFcドメイン単量体及び第五のFcドメイン単量体が組み合わされて第一のFcドメインを形成し、前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体が組み合わされて第二のFcドメインを形成し、ならびに前記第三のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体が組み合わされて第三のFcドメインを形成し、
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、
Fcコンストラクト。
[本発明1123]
a)以下:
i)第一のFcドメイン単量体、
ii)第二のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第一のFcドメイン単量体を前記第二のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
b)以下:
i)第三のFcドメイン単量体、
ii)第四のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第三のFcドメイン単量体を前記第四のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
c)第五のFcドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
d)第六のFcドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むFcコンストラクトであって、
前記第一のFcドメイン単量体及び第五のFcドメイン単量体が組み合わされて第一のFcドメインを形成し、前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体が組み合わされて第二のFcドメインを形成し、ならびに前記第三のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体が組み合わされて第三のFcドメインを形成し、
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
を含む、
Fcコンストラクト。
[本発明1124]
各Fcドメインが、独立して、IgG1 Fcドメイン、IgG2 Fcドメイン、IgG3 Fcドメイン、IgG4 Fcドメイン、又はそれらの組み合わせである、本発明1002~1123のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1125]
各Fcドメインが、IgG1 Fcドメインである、本発明1002~1123のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1126]
前記IgG1がヒトIgG1である、本発明1125のFcコンストラクト。
[本発明1127]
各Fcドメインが、最大10個の単一アミノ酸修飾をもつSEQ ID NO:42を含む、本発明1126のFcコンストラクト。
[本発明1128]
各Fcドメインが、独立して、最大10個の単一アミノ酸修飾をもつ、IgG1 Fcドメイン、IgG2 Fcドメイン、IgG3 Fcドメイン、IgG4 Fcドメイン、又はそれらの組み合わせである、本発明1002~1127のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1129]
前記Fcドメイン単量体の一つ又は複数が、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するヒトIgG Fcドメイン単量体である、本発明1002~1127のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1130]
各Fcドメイン単量体が、10個以下の単一アミノ酸修飾を有する、本発明1002~1127のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1131]
各Fc単量体が、10個以下の単一アミノ酸修飾を有するSEQ ID NO:42の配列を含む、本発明1002~1127のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1132]
それを必要とする対象において、自己抗体のクリアランスを促進すること、抗原提示を抑制すること、免疫応答を軽減すること、又は、免疫応答の、免疫複合体に基づく活性化を軽減することにおいて使用するための、本発明1002~1131のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1133]
関節リウマチ(RA)、全身性エリテマトーデス(SLE)、ANCA関連血管炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性溶血性貧血、慢性炎症性脱髄性神経障害、臓器移植、GVHD、皮膚筋炎、グッドパスチャー症候群、抗体依存性細胞媒介細胞障害を介して媒介される器官系標的のII型過敏症候群、例えばギラン・バレー症候群、CIDP、フェルティ症候群、抗体媒介性拒絶反応、自己免疫性甲状腺疾患、潰瘍性大腸炎、自己免疫性肝疾患、突発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、視神経脊髄炎、天疱瘡及び他の自己免疫性水疱性疾患、シェーグレン症候群、抗体依存性ファゴサイトーシスを介して媒介される自己免疫性血球減少症及び他の障害、ヘパリン誘発性血小板減少症(HIT)、筋炎、多発筋炎、抗体依存性感染増強、スティッフパーソン症候群、川崎病、封入体筋炎、全身性硬化症、IgA腎症、IgG4関連疾患、バセドウ病、自己免疫性内耳疾患(AIED)、抗リン脂質症候群(APS)、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、妊娠性天疱瘡、腫瘍随伴性天疱瘡、視神経炎、ロンバーグ病、FcR依存性炎症症候群、滑膜炎、糸球体炎、及び血管炎から選択される炎症性疾患又は自己免疫疾患又は免疫疾患の治療に使用するための、本発明1002~1131のいずれかのFcコンストラクト。
[本発明1134]
本発明1002~1131のいずれかのFcコンストラクトの実質的に均質な集団と、一つ又は複数の薬学的に許容できる担体もしくは賦形剤とを含む、医薬組成物。
[本発明1135]
前記均質な集団が、少なくとも85%均質である、本発明1134の医薬組成物。
[本発明1136]
SEQ ID NO:76をコードする核酸配列、及びSEQ ID NO:70をコードする核酸配列を含む、細胞。
[本発明1137]
SEQ ID NO:78をコードする核酸配列、及びSEQ ID NO:73をコードする核酸配列を含む、細胞。
[本発明1138]
SEQ ID NO:79をコードする核酸配列、及びSEQ ID NO:73をコードする核酸配列を含む、細胞。
[本発明1139]
本発明1001~1131のいずれかのFcコンストラクトをコードする核酸配列を含む、細胞。
[本発明1140]
対象における免疫応答の免疫細胞活性化を軽減する方法であって、本発明1001~1131のいずれかのFcコンストラクトを前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1141]
前記対象が自己免疫疾患を有する、本発明1140の方法。
[本発明1142]
対象における炎症を治療する方法であって、本発明1001~1131のいずれかのFcコンストラクトを前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1143]
対象における自己抗体のクリアランスを促進する及び/又は抗原提示を抑制する方法であって、本発明1001~1131のいずれかのFcコンストラクトを前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1144]
本発明1001~1131のいずれかのFcコンストラクトを調製する方法であって、
a)前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供することと、
b)前記Fcコンストラクトの形成を許容する条件下で前記宿主細胞内で前記ポリペプチドを発現することと、
c)前記Fcコンストラクトを回収することと
を含む、方法。
[本発明1145]
本発明1001~1131のいずれかのFcコンストラクトを発現する宿主細胞であって、前記宿主細胞が、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、前記ポリヌクレオチドが、前記宿主細胞内で発現される、宿主細胞。
[本発明1146]
SEQ ID NO:43~79からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
[本発明1147]
SEQ ID NO:49及びSEQ ID NO:61~79からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
[本発明1148]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1149]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1150]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1151]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1152]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1153]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1154]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1155]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1156]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1157]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1158]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1159]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1160]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1161]
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1162]
リストされた前記第一及び第二のポリペプチドが、1.1:1~1:1.1のモル比で存在する、本発明1148~1161のいずれかの組成物。
[本発明1163]
本発明1148~1162のいずれかの組成物を患者に投与することを含む、前記患者を治療する方法。
IgGのFcドメインを含む治療用タンパク質を用いて、炎症ならびに免疫疾患及び炎症性疾患、がんならびに感染症を治療することが可能である。本開示は、Fcドメインを含有するFcコンストラクト(例えば、2~10のFcドメインを有するFcコンストラクト、例えば2、3、4、5、6、7、8、9又は10のFcドメインを有するFcコンストラクト)を調製する組成物及び方法を特徴とする。本明細書に記載のFcコンストラクトは、製造結果を有意に向上させる構造的特徴(例えば、グリシンスペーサー)を組み込むことによって、均質な医薬組成物の調製を促進する。
Fcドメイン単量体は、ヒンジドメイン、CH2抗体定常ドメイン、及びCH3抗体定常ドメインを含む。Fcドメイン単量体は、例えばヒト、マウス又はラットである様々な起源のものとすることが可能である。Fcドメイン単量体は、免疫グロブリン抗体アイソタイプIgG、IgE、IgM、IgA又はIgDのものとすることが可能である。Fcドメイン単量体はまた、任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプ(例えば、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3又はIgG4)のものとしてもよい。Fcドメイン単量体はまた複合型であってもよく、例えば、ヒンジ及びIgG1からのCH2及びIgAからのCH3による複合型、又は、ヒンジ及びIgG1からのCH2であるがIgG3からのCH3による複合型であってもよい。Fcドメイン単量体の二量体は、白血球表面上にある受容体である、例えばFcγRIIIaであるFc受容体と結合することが可能なFcドメイン(本明細書でさらに規定される)である。本開示では、Fcドメイン単量体のCH3抗体定常ドメインが、CH3-CH3抗体定常ドメインの界面におけるアミノ酸置換を含有して、それらの相互による会合を促進し得る。他の実施形態では、Fcドメイン単量体は、例えばアルブミン結合ペプチド又は精製用ペプチドである、N末端又はC末端に付加するさらなる部分を含む。本開示では、Fcドメイン単量体は、例えばVH、VL、相補性決定領域(CDR)又は超可変領域(HVR)である、いずれの種類の抗体可変領域も含有しない。
本明細書で規定するように、Fcドメインは、CH3抗体定常ドメイン間の相互作用によって二量体形成する二つのFcドメイン単量体を含む。本開示では、Fcドメインは例えばVH、VL、CDR又はHVRである抗体可変領域を含まない。Fcドメインは、Fc受容体、例えばFc-ガンマ受容体(すなわち、Fcγ受容体(FcγR))、Fc-アルファ受容体(すなわち、Fcα受容体(FcαR))、Fc-イプシロン受容体(すなわち、Fcε受容体(FcεR))及び/又は胎児性Fc受容体(FcRn)に結合する最小限の構造を形成する。一部の実施形態では、本開示のFcドメインは、Fcγ受容体(例えば、FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32)、FcγRIIB(CD32)、FcγRIIIA(CD16a)、FcγRIIIB(CD16b))及び/又はFcγRIV及び/又は胎児性Fc受容体(FcRn)に結合する。
修飾されていないFcドメイン単量体は、天然のヒトFcドメイン単量体又はWTヒトFcドメイン単量体とすることが可能である。Fcドメイン単量体は、ヒンジ、CH2ドメイン及びCH3ドメインを含む天然のヒトFcドメイン単量体、もしくは、定方向の二量体形成を調整又は促進する、最大16個(例えば、最大2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15又は16個)のアミノ酸修飾(例えば、単一アミノ酸修飾)を有するその変異体とすることが可能である。Fcドメイン単量体は、IgG1 Fcドメイン、IgG2 Fcドメイン、IgG3 Fcドメイン、IgG4 Fcドメイン、又はそれらの組み合わせであり得る。Fcドメイン単量体は、最大10個(9、8、7、6、5、4、3、2、又は1個)の単一アミノ酸修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有する、IgG1 Fcドメイン、IgG2 Fcドメイン、IgG3 Fcドメイン、IgG4 Fcドメイン、又はそれらの組み合わせであり得る。一部の場合では、Fcドメイン単量体は、最大10個のアミノ酸修飾(例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、又は16個以下のアミノ酸修飾)を有するヒトIgG Fcドメイン単量体である。一部の場合では、Fcドメイン単量体は、10個以下のアミノ酸修飾(例えば、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、又は16個以下のアミノ酸修飾)を有するSEQ ID NO:42の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の場合では、Fcドメインは少なくとも一つのアミノ酸修飾を含むものであって、該アミノ酸修飾は、(i)一つ又は複数のFc受容体に対する結合親和性、(ii)エフェクター機能、(iii)Fcドメインの硫酸化のレベル、(iv)半減期、(v)プロテアーゼ耐性、(vi)Fcドメイン安定性、及び/又は、(vii)分解に対する感度、の一つ又は複数を変える(例えば、修飾されていないFcドメインと比較して)。一部の場合では、Fcドメインは16以下のアミノ酸修飾(例えば、CH3ドメインにおける2以下、3以下、4以下、5以下、6以下、7以下、8以下、9以下、10以下、11以下、12以下、13以下、14以下、15以下又は16以下のアミノ酸修飾)を含む。
本開示では、二量体形成選択モジュールは、二つのFcドメイン単量体の好ましい対形成を促進してFcドメインを形成する、Fcドメイン単量体の部分である。詳細には、二量体形成選択モジュールは、二つのFcドメイン単量体の相互作用するCH3抗体定常ドメイン間の界面に位置するアミノ酸置換を含む、Fcドメイン単量体のCH3抗体定常ドメインの部分である。二量体形成選択モジュールにおいては、アミノ酸置換が、それら置換に選択されたアミノ酸の適合性の結果として、二つのCH3抗体定常ドメインの好ましい二量体形成を行う。好ましいFcドメインの最終形態は、二量体形成選択モジュールをもたないFcドメイン単量体で、又は二量体形成選択モジュール内に適合しないアミノ酸置換をもつFcドメイン単量体で形成される他のFcドメインに対して選択的である。この種のアミノ酸置換は、QuikChange(登録商標)突然変異誘発等のこの技術分野で周知の従来の分子クローニング技術を用いて行うことが可能である。
操作された空洞及び操作された突起の使用(すなわち、「ノブイントゥホール」ストラテジー)は、Carter及びその共同研究者(Ridgway et al.,Protein Eng.9:617-612,1996;Atwell et al.,J Mol Biol.270:26-35,1997;Merchant et al.,Nat Biotechnol.16:677-681,1998)によって記述されている。ノブとホールとの相互作用は、ヘテロ二量体形成を支持するが、一方、ノブ間及びホール間の相互作用は、立体的な不一致及び好ましい相互作用の損失に起因してホモ二量体形成を妨げる。「ノブイントゥホール」技術は、米国特許第5,731,168号にも開示されている。
静電的ステアリングは、より高次のタンパク質分子の形成を制御する、ペプチド、タンパク質ドメイン及びタンパク質内の反対の電荷をもつアミノ酸間の好ましい静電的相互作用の利用である。静電的ステアリングの効果を用いて、二重特異性抗体の生成の際のヘテロ二量体形成に有利に、ホモ二量体の形成を低減するように抗体ドメインの相互作用を変える方法が、米国特許出願公開公報第2014-0024111号に開示されている。
Fcドメイン単量体のヘテロ二量体形成は、限定するものではないが表2Aに含むような電荷残基対などである、二つのFcドメイン単量体内に異なるものであるが適合する変異を導入することによって促進することが可能である。一部の実施形態では、Fcドメイン単量体は、以下の正電荷をもつアミノ酸置換及び負電荷をもつアミノ酸置換の一つを含み得る:D356K、D356R、E357K、E357R、K370D、K370E、K392D、K392E、D399K、K409D、K409E、K439D及びK439E。一実施例では、正電荷をもつアミノ酸置換、例えばD356K又はE357Kを含有するFcドメイン単量体と、負電荷をもつアミノ酸置換、例えばK370D又はK370Eを含有するFcドメイン単量体とが選択的に結合して、電荷をもつアミノ酸の好ましい静電的ステアリングを経てFcドメインを形成する。別の実施例では、E357Kを含有するFcドメイン単量体と、K370Dを含有するFcドメイン単量体とが選択的に結合して、電荷をもつアミノ酸の好ましい静電的ステアリングを経てFcドメインを形成する。
Fcドメイン単量体のホモ二量体形成は、対称的であるように両Fcドメイン単量体内に、同一の静電的ステアリング変異(ホモ二量体形成選択モジュール)を導入することによって、促進することが可能である。一部の実施形態では、二つのFcドメイン単量体が、CH3ドメイン間の界面における電荷をもつ残基の環内の少なくとも二つの位置において、同一の逆電荷の変異を含有するホモ二量体形成選択モジュールを含む。二つのFcドメイン単量体内の残基の2以上の相補的な対の両要素の電荷が反転していることによって、変異したFcドメイン単量体は同じ変異の配列のFcドメイン単量体に対して相補性を維持するが、こうした変異なしではFcドメイン単量体に対する相補性はより小さい。Fcドメイン単量体に導入されて、そのホモ二量体形成を促進し得る静電的ステアリング変異を、表2B及び2Cに示しているが、これらに限定されない。一実施形態では、Fcドメインは、例えばK409D/D399Kである二重の逆電荷の変異体(表2B)をそれぞれ含む、二つのFcドメイン単量体を含む。別の実施形態では、Fcドメインは、例えばK409D/D399K/K370D/E357Kである四重の逆電荷の変異体(表2C)をそれぞれ含む、二つのFcドメイン単量体を含む。
本開示では、ポリペプチド又はタンパク質ドメイン及び/又は会合する非タンパク質部分間における結合又は接続を説明するために、リンカーを用いる。一部の実施形態では、リンカーは、少なくとも二つのFcドメイン単量体間の結合又は接続であり、それに対してリンカーが、第一のFcドメイン単量体のCH3抗体定常ドメインのC末端を、第二のFcドメイン単量体のヒンジドメインのN末端に対して、二つのFcドメイン単量体が互いに直列に連結するように接続するものである。他の実施形態では、リンカーは、Fcドメイン単量体とそれに付加されるその他のタンパク質ドメインとの間の結合である。例えばリンカーは、Fcドメイン単量体のCH3抗体定常ドメインのC末端を、アルブミン結合ペプチドのN末端に付加させることが可能である。
本開示では、二つのFcドメイン単量体間のリンカーは、3~200のアミノ酸(例えば、3~200、3~180、3~160、3~140、3~120、3~100、3~90、3~80、3~70、3~60、3~50、3~45、3~40、3~35、3~30、3~25、3~20、3~15、3~10、3~9、3~8、3~7、3~6、3~5、3~4、4~200、5~200、6~200、7~200、8~200、9~200、10~200、15~200、20~200、25~200、30~200、35~200、40~200、45~200、50~200、60~200、70~200、80~200、90~200、100~200、120~200、140~200、160~200又は180~200のアミノ酸)(例えば、3~150、3~100、3~60、3~50、3~40、3~30、3~20、3~10、3~8、3~5、4~30、5~30、6~30、8~30、10~20、10~30、12~30、14~30、20~30、15~25、15~30、18~22及び20~30のアミノ酸)を含むアミノ酸スペーサーとすることが可能である。一部の実施形態では、二つのFcドメイン単量体間のリンカーは、少なくとも12のアミノ酸、例えば、12~200のアミノ酸(例えば、12~200、12~180、12~160、12~140、12~120、12~100、12~90、12~80、12~70、12~60、12~50、12~40、12~30、12~20、12~19、12~18、12~17、12~16、12~15、12~14又は12~13のアミノ酸)(例えば、14~200、16~200、18~200、20~200、30~200、40~200、50~200、60~200、70~200、80~200、90~200、100~200、120~200、140~200、160~200、180~200又は190~200のアミノ酸)を含有するアミノ酸スペーサーである。一部の実施形態では、二つのFcドメイン単量体間のリンカーは、12~30のアミノ酸(例えば、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29又は30のアミノ酸)を含有するアミノ酸スペーサーである。好適なペプチドスペーサーはこの分野において公知であり、例えば、グリシン及びセリン等のフレキシブルなアミノ酸残基を含有するペプチドリンカーを含む。或る実施形態では、スペーサーは、例えばGS、GGS、GGGGS(SEQ ID NO:1)、GGSG(SEQ ID NO:2)又はSGGG(SEQ ID NO:3)の、複数のモチーフ又は繰り返しモチーフであるモチーフを含有することが可能である。或る実施形態では、スペーサーは、例えば
である、GSのモチーフを含む2~12のアミノ酸を含有することが可能である。他の或る実施形態では、スペーサーは、例えば
である、GGSのモチーフを含む3~12のアミノ酸を含有することが可能である。さらに他の実施形態では、スペーサーは、例えば
である、GGSG(SEQ ID NO:2)のモチーフを含む4~20のアミノ酸を含有することが可能である。他の実施形態では、スペーサーは、例えば
である、GGGGS(SEQ ID NO:1)のモチーフを含有することが可能である。或る実施形態では、スペーサーは、
である。
と比較して、低減されたレベルのグリコシル化(例えば、低減されたレベルのO-グリコシル化)(例えば、キシロース、マンノース、シアル酸、フコース(Fuc)及び/又はガラクトース(Gal)等のグリカン(例えば、キシロース)による低減したレベルのO-グリコシル化)を有し得る(実施例4を参照)。
と比較して、低減されたレベルのO-グリコシル化(例えば、低減されたレベルのO-キシロシル化)を有し得る。
と比較して、低減されたタンパク質分解速度を有し得る(実施例4を参照)。
である、GGGG(SEQ ID NO:19)のモチーフを含有することが可能である。或る実施形態では、スペーサーは、例えば
である、GGGGG(SEQ ID NO:24)のモチーフを含有することが可能である。或る実施形態では、スペーサーは、
である。
からなる12アミノ酸ペプチドスペーサー及び20アミノ酸ペプチドスペーサーである二つのFcドメイン単量体が直列に接続される(例えば、図1のポリペプチド102及び108、図2の202及び208)。他の実施形態では、配列
からなる18アミノ酸ペプチドスペーサーを用いることができる。
血清タンパク質をペプチドに結合することで、タンパク質薬剤の薬物動態を向上させることが可能であり、特にここに記載するFcコンストラクトは、血清タンパク質結合ペプチドと融合し得る。
概して、本開示は、Fcドメインを有するFcコンストラクト(例えば、三つのFcドメインを有するFcコンストラクト)を特徴とする。これらは、例えばFcγRIIIaであるFc受容体に対する単一の野生型Fcドメインよりも大きい結合親和性及び/又はアビディティーを有し得る。本開示は、Fcドメインの二つのFcドメイン単量体が互いと二量体を選択的に形成して、それによって望まない多量体又は凝集の形成を回避するように、相互作用する二つのCH3抗体定常ドメインの界面においてアミノ酸を操作する方法を開示する。Fcコンストラクトは、偶数のFcドメイン単量体を含み、Fcドメイン単量体の各対がFcドメインを形成する。Fcコンストラクトは、二つのFcドメイン単量体の二量体から形成される一つの機能的なFcドメインを、最低でも含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のFcコンストラクトは、抗原認識領域、例えば可変領域(例えば、VH、VL、超可変領域(HVR))又は相補性決定領域(CDR)を含まない。一部の実施形態では、本明細書に記載のFcコンストラクトは、抗原認識領域、例えば可変領域(例えば、VH、VL、HVR)又はCDRを含む。
を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。
本開示では、宿主細胞は、本明細書に記載のポリペプチド又はコンストラクトを、それらの対応する核酸から発現するのに必要であるような、例えばオルガネラである、必要な細胞成分を含む媒体を指す。核酸は、この技術分野で公知の従来の技術(形質転換、トランスフェクション、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、直接の微量注入等)によって宿主細胞内に導入されることが可能である核酸ベクター中に含まれ得る。宿主細胞は、哺乳動物起源、細菌起源、真菌起源又は虫起源のものとすることが可能である。哺乳動物宿主細胞には、CHO(又はCHO誘導細胞株、例えばCHO-K1、CHO-DXB11 CHO-DG44)、マウス宿主細胞(例えば、NS0、Sp2/0)、VERY、HEK(例えば、HEK293)、BHK、HeLa、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT20及びT47D、CRL7O3OならびにHsS78Bstの細胞が含まれるが、これらに限定されない。また、タンパク質コンストラクトの発現を調節する、又は所望の特定の手法でタンパク質産物を修飾及びプロセシングする、宿主細胞を選択することが可能である。様々な宿主細胞が、タンパク質産物の翻訳後プロセシング及び修飾に関する特性及び特異的な機序を有する。適切な株化細胞又は宿主系を選択して、発現されたタンパク質の正確な修飾及びプロセシングを確実にすることが可能である。
Fcコンストラクトは、タンパク質精製分野の公知である任意の方法、例えばクロマトグラフィー(例えば、イオン交換、アフィニティー(例えばプロテインAアフィニティー)及びサイズ排除カラムクロマトグラフィー)、遠心分離、溶解度差、又はタンパク質の精製に関するその他の標準技術によって、精製することが可能である。例えば、Fcコンストラクトは、プロテインAカラム等のアフィニティーカラムを、適切に選択することと、クロマトグラフィーカラム、濾過、限外濾過、塩析及び透析手順と組み合わせることとによって、単離及び精製することが可能である(例えば、Process Scale Purification of Antibodies,Uwe Gottschalk(ed.)John Wiley&Sons,Inc.,2009;and Subramanian(ed.)Antibodies-Volume I-Production and Purification,Kluwer Academic/Plenum Publishers,New York(2004)を参照)。
本開示は、本明細書に記載する一つ又は複数のFcコンストラクトを含む医薬組成物を特徴とする。一実施形態では、医薬組成物は、Fcコンストラクトの実質的に均質な集団を含む。種々の実施例では、医薬組成物は、Fcコンストラクト1~4のいずれか一つの実質的に均質な集団を含む。
医薬組成物は、投与形態と互換性のある手法で、治療効果があるような量で投与されて、症状の改善又は治療をもたらす。医薬組成物は、例えば静脈内投与形態、皮下投与形態、摂取可能な溶液、薬剤放出カプセル等の経口投与形態である、種々の投与形態で投与される。個々の対象に適切な用量は、治療目的、投与経路、及び患者の状態に依存する。概して、組換えタンパク質は、1~200mg/kg、例えば1~100mg/kg、例えば20~100mg/kgで投与される。したがって、最適な治療効果を得るために求められるとおりに、医療提供者が、用量を誂えて、力価決定し、投与経路を調整することが必要となる。
本開示の医薬組成物(例えば、2、3又は4つのFcドメインを有するFcコンストラクトを含有するもの)は、対象における炎症を軽減し、対象における自己抗体のクリアランスを促進し、対象における抗原提示を抑制し、例えば対象における免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を防止することである、免疫応答を軽減し、ならびに、対象における免疫の状態又は疾患及び炎症性の状態又は疾患を治療するのに有用である。例示的な状態及び疾患には、関節リウマチ(RA);全身性エリテマトーデス(SLE);ANCA関連血管炎;抗リン脂質抗体症候群;自己免疫性溶血性貧血;慢性炎症性脱髄性神経障害;移植における抗アロ、GVHDにおける抗自己、抗置換、IgG治療、IgGパラプロテインのクリアランス;皮膚筋炎;グッドパスチャー症候群;抗体依存性細胞媒介細胞障害を介して媒介される器官系標的のII型過敏症候群、例えばギラン・バレー症候群、CIDP、皮膚筋炎、フェルティ症候群、抗体媒介性拒絶反応、自己免疫性甲状腺疾患、潰瘍性大腸炎、自己免疫性肝疾患;突発性血小板減少性紫斑病;重症筋無力症、視神経脊髄炎;天疱瘡及び他の自己免疫性水疱性疾患;シェーグレン症候群;抗体依存性ファゴサイトーシスを介して媒介される自己免疫性血球減少症及び他の障害;例えば滑膜炎、皮膚筋炎、全身性血管炎、糸球体炎及び血管炎である他のFcR依存性炎症症候群を含む。
望ましくは、Fcコンストラクトは、フォールディング効率を増加させ、望まない高分子量のオリゴマー及び多量体を形成し得るサブユニットの制御されていない会合を最小化し、及び実質的に均質な組成物を生成するように設計される。こうした目標を念頭に、本発明者らは、スペーサーで離間された二つのFcドメイン単量体を含む長ポリペプチド(図1のポリペプチド102及び108、ならびに図2のポリペプチド202及び208)と、単一のFcドメイン単量体を含む短ポリペプチド(図1のポリペプチド114及び116、ならびに図2のポリペプチド214及び216)とをそれぞれが含む四つのFcコンストラクトを設計した(図1及び2)。それぞれはIgG1 Fc配列に基づくものであり、ポリペプチドのアセンブリを制御する操作された空洞、操作された突起、及び/又は静電的ステアリングの修飾を包含する。長ポリペプチド及び短ポリペプチドをコードするDNA配列は、哺乳動物細胞での発現のために最適化され、pcDNA3.4哺乳動物発現ベクターにクローン化された。DNAプラスミドコンストラクトを、リポソームを介して、ヒト胎生腎(HEK)293細胞にトランスフェクトした。合計八つのDNAプラスミドコンストラクトを用いて、それぞれが三つのFcドメインを有する四つのFcコンストラクトを構築した。
*配列位置は、Kabatナンバリングシステム(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., ed 5, 1991)に従って番号付けた。
発現したタンパク質を、Poros MabCapture A(LifeTechnologies社)カラムを用いて、プロテインA系のアフィニティーカラムクロマトグラフィーによって細胞培養上清から精製した。捕捉したFcコンストラクトを、リン酸緩衝食塩水で洗浄し(低塩洗浄)、pH3のグリシン 100mMで溶離した。溶出物は、pH7.4のTRIS 1Mを添加することによって素早く中和して、0.2μmフィルターで滅菌濾過した。
ペプチド及びグリコペプチドの液体クロマトグラフィー-MS/MS
タンパク質は、6Mのグアニジン(Sigma社)中で1μg/μLに希釈した。ジチオスレイトール(DTT)を濃度10mMまで加えて、65℃で30分間、変性条件下でジスルフィド結合を減らした。氷冷後、サンプルを、暗闇中で1時間、30mMのヨードアセトアミド (IAM)と共にインキュベートして、遊離チオールをアルキル化(カルバミドメチル化)した。その後タンパク質を、10kDa膜を介して25mMの炭酸水素アンモニウム緩衝液(pH7.8)中に透析し、IAM、DTT及びグアニジンを除去した。タンパク質は、Barocycler(NEP 2320、Pressure Biosciences社)中で、トリプシンで消化した。圧力は、37℃で、20,000psiと周囲圧力との間を1時間に合計30サイクルで循環させた。ペプチドのLC-MS/MS分析は、Ultimate 3000(Dionex)クロマトグラフィーシステムとQ-Exactive(Thermo Fisher Scientific社)質量分析計とで行った。ペプチドは、移動相として0.1%FA水溶液及び0.1%FAアセトニトリル溶液を用いて、BEH PepMap(Waters社)カラムで分離した。四重極型の分離幅(isolation width)±1.5Daで、2価イオン(z=2)m/z 842.5に基づいて、一つずつキシロシル化されたリンカーペプチドをターゲットとした。
タンパク質は、78.98%の水、20%のアセトニトリル、1%のギ酸(FA)及び0.02%のトリフルオロ酢酸からなる移動緩衝液中で、2μg/μLの濃度に希釈した。サイズ排除クロマトグラフィー分離は、合計カラム長700mmに直列にした二つのZenix-C SEC-300(Sepax Technologies社、デラウェア州ニューアーク)2.1×350mmで行った。タンパク質は、80μL/分の流量で、上記した移動緩衝液を用いてSECカラムから溶出した。質量スペクトルは、ポジティブモードで動作させたQSTAR Elite(Applied Biosystems社) Q-ToF質量分光計で取得した。それぞれのサイズのフラクション下の中性質量を、クロマトグラフィーピークの全幅にわたってスペクトルを合計することによって、ベイズのピークデコンボリューション(Bayesian peak deconvolution)を用いてデコンボリュートした。
サンプルを1mg/mLに希釈して、HT Protein Express変性緩衝液(PerkinElmer社)と混合した。混合物を40℃で20分間インキュベートした。サンプルを70μLの水で希釈して、96ウェルプレートに移した。サンプルは、HT Protein Express LabChip(PerkinElmer社)を備えたCaliper GXII機器(PerkinElmer社)で分析した。蛍光強度を用いて、各サイズの変異体の相対存在度を計算した。
サンプルを、Laemmliサンプルバッファー(4%SDS、Bio-Rad社)中で、95℃で10分間、変性させた。サンプルを、Criterion TGX stain-freeゲル(4~15%ポリアクリルアミド、Bio-Rad社)で電気泳動にかけた。タンパク質のバンドは、UV照射又はクマシーブルー染色で可視化した。ChemiDoc MPイメージングシステム(Bio-Rad社)でゲルを画像化した。Imagelab 4.0.1ソフトウェア(Bio-Rad社)を用いて、バンドの定量化を行った。
CDCは、連続希釈されたリツキシマブ、Fcコンストラクト4又はIVIgでRaji細胞(ATCC)がコーティングした比色分析アッセイで評価した。すべてのウェルにヒト血清補体(Quidel社)を25%v/vで添加し、37℃で2時間インキュベートした。細胞は、WST-1細胞増殖試薬(Roche Applied Science社)を添加した後で、37℃で12時間インキュベートした。プレートを振とう機に2分間移し、450nmの吸光度を測定した。
リンカーセリン残基におけるO-グリコシル化
実施例1で記載したように、本発明者らは、フォールディング効率を増加させ、制御されていないサブユニットの会合を最小化し、及び実質的に均質な医薬品用の組成物を生成するように、Fcコンストラクトを設計した。こうした目的を達成するための努力として、長ポリペプチド内の二つのFcドメイン単量体(図1の102及び108、図2の202及び208)間における様々なリンカーを調べた。Fcコンストラクト1及びFcコンストラクト2はそれぞれ、長ポリペプチド内の二つのFcドメイン単量体間にセリン-グリシンリンカー
を有する。
を含有するFcコンストラクト2をペプチドLC-MS/MSによって分析したとき、O-キシロシル化が観察された(図3)。しかしながら、フラグメントy2~y9はキシロースを含有していないように、リンカー内の5番目のセリンはO-キシロシル化されていない。O-キシロシル化されている部位は複数存在し得るが、各ペプチドは、一つずつO-キシロシル化されているのみである。この翻訳後修飾の範囲及び位置は、配列と発現系との両方に依存し得る。
を有する。Fcコンストラクト4は、長ポリペプチド内の二つのFcドメイン単量体間に、20-merのオールグリシンスペーサー
を有する。
一部の実施形態では、Fcコンストラクトは、リン酸緩衝食塩水中で45℃でインキュベーションすると、リンカー内でタンパク質分解を受け、単量体のFc産物を生成することがわかった。Fcコンストラクト2(ポリペプチド102及び108のそれぞれにおいてリンカー
を含有する)における単量体形成速度は、Fcコンストラクト4(ポリペプチド202及び208のそれぞれにおいてオールグリシンスペーサー
を含有する)においてよりも速く(図5)、オールグリシンスペーサーは、タンパク質分解の影響を受けにくいということを示唆した。この効果は、多様なリンカー長である三つのFcドメインを有する分枝したFcコンストラクトのうちでは一般的であるということが見出され、オールグリシンスペーサーは、セリン-グリシンリンカーよりもゆっくりとタンパク質分解されるものであった(表9)。
均質性をさらに最適化するために、(SG3)5リンカーを、G8、G15又はG20スペーサーで置き換えて、Fcコンストラクト2の配列が変動するように調整することでリンカー長を探索した。インビトロアッセイによる解析では、おそらくFcγ受容体と相互作用するFcコンストラクトの能力が変化することによって、リンカー長が生物活性に影響を及ぼすことを示唆した。
Fcコンストラクト2の長ポリペプチド及び短ポリペプチド(図1のポリペプチド102、108、114及び116)又はFcコンストラクト4の長ポリペプチド及び短ポリペプチド(図2のポリペプチド202、208、214及び216)を発現するプラスミドを、HEK293細胞にトランスフェクトした。培養7日後に、遠心分離で細胞を除き、生培地上清を非還元SDS-PAGEで分離した(図10)。可視化したタンパク質バンドの濃度測定分析で、三つのFcドメインを有するFcコンストラクト2と、三つのFcドメイン(Fc3)を有するFcコンストラクト4とが同様のレベルで発現していることが明らかになった。しかしながら、Fcコンストラクト2のコンストラクトは、夾雑二量体(Fc2)の種を有意に高いレベルで発現した(図10)。コンストラクトの両セットは、単量体の種(Fc1)を同様のレベルで発現した。画像中に存在するさらなるバンドは、偽トランスフェクト対照中に存在している培養成分を表す。
望まない高分子量オリゴマー及び多量体を生成するものである、サブユニットの測定不可能な会合を最小化するために、ヘテロ二量体形成を支持する変異(例えば、ノブ及びホール)を「枝」サブユニット内に導入した(例えば、図1のFcドメイン単量体106、112、114及び116、図2のFcドメイン単量体206、212、214及び216)。これらアミノ酸置換が、ノブサブユニット(例えば、図1のFcドメイン単量体106及び112、図2のFcドメイン単量体206及び212)による、対の片側であるホール(例えば、図1のFcドメイン単量体114及び116、図2のFcドメイン単量体214及び216)に対する誘引を保持し、また同時にノブサブユニット間での会合を妨害する。ノブ変異はまた、野生型のFc配列とのアセンブリを抑制するため、「幹」Fcサブユニット(例えば、図1のFcドメイン単量体104及び110、図2のFcドメイン単量体204及び210)のノブ及びホールの「枝」サブユニットに対する親和性をさらに減少させるようなさらなる変異を含む必要性は疑問視される。この疑問に対処するため、カルボキシル末端「幹」サブユニット内に野生型Fcドメイン単量体配列と、アミノ末端「枝」サブユニット内にノブ変異をもつFcドメイン単量体とを含有する、Fcコンストラクトの長ポリペプチドを生成した。対応する短ポリペプチドは、ホール変異をもつFcドメイン単量体とした。このFcコンストラクトは、Fcコンストラクト2内のポリペプチドの配列に基づいているが、長ポリペプチドのそれぞれにおけるカルボキシル末端「幹」サブユニット内に野生型Fcドメイン単量体配列を有する。
免疫グロブリンのC末端リシン残基は、多数の種にわたって高度に保存されている。一部の例では、ポリペプチド内のC末端残基は、タンパク質産生中に細胞機構によって除去される。本発明者らは、Fcコンストラクト内のポリペプチドのそれぞれからC末端リシンを除去することによって、組成物中のFcコンストラクトの均一性をさらに向上させることと、本明細書に記載するFcコンストラクトを含有するより均質な組成物を達成することとを目指した。Fcコンストラクト2は、その長ポリペプチド(102及び108、実施例1、表5~7、図1を参照)又は短ポリペプチド(114及び116)のいずれにも、C末端リシン残基を何も含有していない。図12は、C末端リシンを除去してFcコンストラクト2を生成することにより、インビトロで相補依存細胞毒性(CDC)が誘導されなかったということを示している。これにより、C末端リシン残基を除去することによって、免疫学的な有害な副作用を誘引することなく、Fcコンストラクトの医薬組成物の均質性を向上させることができた。
変更(例えば、増加)された半減期を有するFcコンストラクトは、コンストラクト4(M230)に基づいて設計され、FcRn(例えばI253Aなどの位置I253での、例えばアミノ酸修飾を含むことによる、例えばFcRnへの結合の減少)に対する結合親和性を変化させる及び/又はFcγRIIb(例えばR292Pなどの位置R292での、例えばアミノ酸修飾を含むことによる、例えばFcγRIIbへの結合の減少)に対する結合親和性を変化させるアミノ酸修飾(例えば、単一変異又は変異の組み合わせ)を含んだ(図18A~18O)。
のスペーサーによって分離された二つのFcドメイン単量体を含む長ポリペプチド、及び単一Fcドメイン単量体を含む短ポリペプチドを含み、位置I253(例えば、I253A)及び/又はR292(例えば、R292P)でのアミノ酸修飾の異なる結合価を有する。各FcコンストラクトはIgG1 Fc配列に基づくものであり、ポリペプチドのアセンブリを制御する操作された空洞、操作された突起、及び/又は静電的ステアリングの修飾を包含する。長ポリペプチド及び短ポリペプチドをコードするDNA配列は、哺乳動物細胞での発現のために最適化され、pcDNA3.4哺乳動物発現ベクターにクローン化された。DNAプラスミドコンストラクトを、リポソームを介して、ヒト胎生腎(HEK)293細胞にトランスフェクトした。
細胞ベースの結合アッセイを利用して、例えばI253Aなどの位置I253、及び例えばR292Pなどの位置R292におけるアミノ酸修飾が、目的の受容体に特異的であること、例えばFcRn受容体及びFcγRIIb受容体に対するそれぞれの結合親和性の低下を確認した。Fcガンマ受容体に対するFcコンストラクトと対照との相対結合(FcγRs)は、FcγRI、FcγRIIa H131、FcγRIIb、及びFcγRIIIa V158用の細胞ベースの均質な時間分解蛍光共鳴エネルギー移動(TR-FRET)拮抗アッセイ(CISBIO(登録商標))キットを使用して測定された。メーカーの指示に従ってアッセイ試薬を調製した。自動液体ハンドラー(Freedom EVOware 150、TECAN(登録商標))を使用して、10点、3倍連続希釈系列と、サンプルあたり一つのブランクが生成された。アッセイプレートを、665及び620nmで、PHERAstar蛍光リーダー(BMG Labtech GmbH)上で読み取った。IgG1試料を対照として使用した。図19A~Dは、コンストラクト16及びコンストラクト18におけるR292P変異が、IgG1対照と比較して、FcγRIIb発現細胞への結合を劇的に減少させる一方で、FcγRI、FcγRIIa、及びFcγRIIIa結合に対する影響を最小限に抑えることを示す。しかしながら、I253A変異は、コンストラクト6及びコンストラクト4の結合プロファイルの類似性、及びコンストラクト18及びコンストラクト16の結合プロファイルの類似性によって示されるように、任意のFcガンマ受容体への結合に対する影響は最小限であった。
薬物動態に対する結合関連変異の影響は最初に、三つのFcドメインすべてにおいてFcγRIIb結合が低減されたコンストラクト4、コンストラクト16、及び二つのFcドメインにおいてFcRn結合が低減されたコンストラクト6を比較することによって評価された。IVIgは、典型的なIgG挙動を示すコンパレータとして含まれた。雌C57BL/6マウス(n=12、8~10週齢)に、コンストラクト4、コンストラクト6、コンストラクト16、又はIVIgのそれぞれを0.1 g/kgで静脈内に投与した。交互時点15分、30分、1時間、2時間、4時間、6時間、8時間、1日、2日、3日、4日、及び5日で、時点につき4匹のマウスの伏在静脈から血液試料(50μL)を採取した。すべてのマウスを7、9、11、14、16、21、及び23日で採血した。Fcコンストラクト及びIVIg血清濃度は、ヒトIgG1 Fc特異的ELISAにより決定された。図21に示されるように、Fcコンストラクト6及びコンストラクト16の両方は、インビボで長持ちし、平均滞留時間(MRT)で1.2~1.5倍の強化を生じた(前もって、(例えば3倍~4倍の)強化は曲線下面積(AUC)によって測定された)。
インビトロ有効性に対する結合変異の影響は、Fcガンマ受容体に対する結合価に敏感であることが前述されたアッセイを使用して評価された。THP-1細胞におけるファゴサイトーシスの阻害は、すべてのFcコンストラクト間で同等であった(図24)。THP-1細胞を96ウェルプレートに蒔く。Fcコンストラクトを10倍に連続希釈し、細胞に添加した。37 °Cで15分間インキュベートした。次いで、FITC標識ウサギIgGでコーティングされたラテックスビーズ(Cayman Chemical)を細胞に添加した。37 °Cで3時間インキュベートした。細胞を二回洗浄し、100μLのFACS緩衝液(PBS/2% FBS)中に再懸濁した。トリパンブルーを添加して細胞表面FITC信号をクエンチし、サンプルをBD Canto フローサイトメーターで読み取った。データは、阻害剤(100%ファゴサイトーシス)が存在しない場合の合計細胞集団と比較したFITC陽性細胞のパーセンテージとして報告される。
活性に対する受容体結合変異の影響をさらに評価するために、Fcコンストラクトを、コラーゲン抗体誘発性関節炎(CAIA)モデルを使用してインビボで試験した。雄C57BL/6マウスに、コラーゲンIIに対する四つの抗体の関節炎誘導用モノクローナル抗体カクテル(ArthritoMab、MDBiosciences社;8mg)を腹腔内注射した。4日目に、動物にリポ多糖(100μg)を腹腔内注射した。治療的投与のために、疾患誘導が不良な動物(ランダム化した日のスコア0)を除き、6日目に疾患の深刻度に基づいて動物をランダム化し、媒体又は試験化合物を静脈内に投与した。予防的投与のために、1日目から-14日目(日数は0日を省いて数えた)の間の1日に、動物に媒体又は試験化合物を静脈内投与した。臨床スコアパラメータは以下のとおりとした:0=正常:腫れ、赤み又は捻挫なし;完全な関節柔軟性。1=軽度の関節炎:軽度の腫れ及び/又は捻挫;完全な関節柔軟性。2=中程度の関節炎:中程度の腫れ及び/又は捻挫;関節柔軟性又は握力の低下。3=重度の関節炎:重度の腫れ及び/又は捻挫;関節柔軟性又は握力の重度の低下。4=強直性関節;関節柔軟性なし、かつ、重度の障害性動作;瀕死。動物は、12日後に屠殺した。
CAIAモデルのマウスは、関節炎誘発性抗体を注射する前に、予防的に最大14日間治療された。図28に示すように、1日目での予防処置は、コンストラクト4よりも、より遅いクリアリングQ1(コンストラクト18)でより効果的であり、おそらく多日疾患誘導全体にわたる薬物曝露がより大きいためだと思われる。コンストラクト4化合物は、疾患誘導の3日前に投与した場合、有効性を失ったが(図29)、Q1(コンストラクト18)は疾患誘導の7日前に投与した場合、保護を提供した(図30)。疾患誘導の10日前に投与された場合、両方のコンストラクトは効果的でなかった(図31)。これらの結果は、コンストラクト4と比較したコンストラクト18の長い薬物動態プロファイルが、反応のより大きな耐久性に変化することを実証する。
(Stromeら、米国特許公開公報第2010/0239633A1号;Jain et al,Arthritis Res.Ther.14,R192(2012))に記載されるとおり、Fc多量体を生成した。詳細には、IgG1 FcをC末端においてIgG2ヒンジ配列と融合した。野生型IgG1 Fc配列(コンストラクトX1)を用いてDNAコンストラクトを生成し、I253A/R292P二重変異体(コンストラクトX2)を使用した。DNAプラスミドコンストラクトを、リポソームを介して、HEK293細胞にトランスフェクトした。培養7日後に、遠心分離により細胞を除去した。
カニクイザルにおける薬物動態に対する結合関連変異の影響を、コンストラクト6、16、及び18を比較することにより評価した。コンストラクト4の履歴データは、コンストラクト6、16、及び18を比較する研究よりも異なる用量レベルで実施されたカニクイザルの試験から得られた。雄のカニクイザル(N=3)に、各コンストラクト6、16、及び18を10mg/kg又は30mg/kgで静脈内に投与した。血液試料は44日間の過程で採取された。コンストラクト4、6、16、及び18を含む、ヒトIgG1 Fcコンストラクトに特異的な抗体を使用したELISAにより、Fcコンストラクト濃度が決定された。
この明細書中に記載したすべての公開公報、特許及び特許出願は、あたかも独立の公開公報又は特許出願それぞれが特別にかつ個別に示されて参照によって組み入れられるかのように、同じ程度まで参照することによってここに組み入れるものとする。
Claims (5)
- a)以下:
i)第一のFcドメイン単量体、
ii)第二のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第一のFcドメイン単量体を前記第二のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
b)以下:
i)第三のFcドメイン単量体、
ii)第四のFcドメイン単量体、及び
iii)前記第三のFcドメイン単量体を前記第四のFcドメイン単量体に結合するリンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
c)第五のFcドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
d)第六のFcドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むFcコンストラクトであって、
前記第一のFcドメイン単量体及び第五のFcドメイン単量体が組み合わされて第一のFcドメインを形成し、前記第二のFcドメイン単量体及び第四のFcドメイン単量体が組み合わされて第二のFcドメインを形成し、ならびに前記第三のFcドメイン単量体及び第六のFcドメイン単量体が組み合わされて第三のFcドメインを形成し、
(1)前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドがそれぞれSEQ ID NO:76の配列を含み、かつ前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドがそれぞれSEQ ID NO:70の配列を含むか、または(2)前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドがそれぞれSEQ ID NO:78の配列を含み、かつ前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドがそれぞれSEQ ID NO:73の配列を含む、
Fcコンストラクト。 - 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドがそれぞれSEQ ID NO:76の配列を含み、かつ前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドがそれぞれSEQ ID NO:70の配列を含む、請求項1に記載のFcコンストラクト。
- 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドがそれぞれSEQ ID NO:78の配列を含み、かつ前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドがそれぞれSEQ ID NO:73の配列を含む、請求項1に記載のFcコンストラクト。
- それを必要とする対象における自己抗体のクリアランスの促進、抗原提示の抑制、免疫応答の軽減、または免疫応答の免疫複合体に基づく活性化の軽減において使用するための、請求項1、2または3に記載のFcコンストラクトを含む組成物。
- 関節リウマチ(RA);全身性エリテマトーデス(SLE);ANCA関連血管炎;抗リン脂質抗体症候群;自己免疫性溶血性貧血;慢性炎症性脱髄性神経障害;臓器移植;GVHD;皮膚筋炎;グッドパスチャー症候群;抗体依存性細胞媒介細胞障害を介して媒介される器官系標的のII型過敏症候群、ギラン・バレー症候群、CIDP、フェルティ症候群、抗体媒介性拒絶反応、自己免疫性甲状腺疾患、潰瘍性大腸炎、自己免疫性肝疾患;突発性血小板減少性紫斑病;重症筋無力症、視神経脊髄炎;天疱瘡及び他の自己免疫性水疱性疾患;シェーグレン症候群;抗体依存性ファゴサイトーシスを介して媒介される自己免疫性血球減少症及び他の障害;ヘパリン起因性血小板減少症(HIT);筋炎;多発性筋炎;抗体依存性増強;スティッフマン症候群;川崎病;封入体筋炎;全身性強皮症;IgA腎症;IgG4関連疾患;グレーブス病;自己免疫性内耳疾患(AIED);抗リン脂質抗体症候群(APS);尋常性天疱瘡;落葉状天疱瘡;妊娠性類天疱瘡;腫瘍随伴性天疱瘡;視神経炎、Parry Romberg症候群;FcR依存性炎症性症候群;滑膜炎;糸球体炎;及び血管炎からなる群から選択される、炎症性または自己免疫または免疫疾患の治療における使用のための、請求項1、2または3に記載のFcコンストラクトを含む組成物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2022150723A JP2022191261A (ja) | 2017-01-06 | 2022-09-21 | 操作されたFcコンストラクトに関する組成物及び方法 |
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762443495P | 2017-01-06 | 2017-01-06 | |
US62/443,495 | 2017-01-06 | ||
US201762510228P | 2017-05-23 | 2017-05-23 | |
US62/510,228 | 2017-05-23 | ||
US201762589473P | 2017-11-21 | 2017-11-21 | |
US62/589,473 | 2017-11-21 | ||
PCT/US2018/012488 WO2018129255A1 (en) | 2017-01-06 | 2018-01-05 | Compositions and methods related to engineered fc constructs |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022150723A Division JP2022191261A (ja) | 2017-01-06 | 2022-09-21 | 操作されたFcコンストラクトに関する組成物及び方法 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020504143A JP2020504143A (ja) | 2020-02-06 |
JP2020504143A5 JP2020504143A5 (ja) | 2021-02-18 |
JP7146771B2 true JP7146771B2 (ja) | 2022-10-04 |
Family
ID=62791103
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019537119A Active JP7146771B2 (ja) | 2017-01-06 | 2018-01-05 | 操作されたFcコンストラクトに関する組成物及び方法 |
JP2022150723A Pending JP2022191261A (ja) | 2017-01-06 | 2022-09-21 | 操作されたFcコンストラクトに関する組成物及び方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022150723A Pending JP2022191261A (ja) | 2017-01-06 | 2022-09-21 | 操作されたFcコンストラクトに関する組成物及び方法 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11220531B2 (ja) |
EP (1) | EP3565588A4 (ja) |
JP (2) | JP7146771B2 (ja) |
KR (1) | KR102624254B1 (ja) |
CN (2) | CN110650748B (ja) |
AU (1) | AU2018205808A1 (ja) |
BR (1) | BR112019013955A2 (ja) |
CA (1) | CA3049383A1 (ja) |
SG (2) | SG11201906139VA (ja) |
WO (1) | WO2018129255A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SG10201913507SA (en) | 2014-05-02 | 2020-02-27 | Momenta Pharmaceuticals Inc | Compositions and methods related to engineered fc constructs |
KR102462084B1 (ko) * | 2016-05-23 | 2022-11-02 | 모멘타 파머슈티컬스 인코포레이티드 | 유전자 조작 Fc 작제물에 관한 조성물 및 방법 |
CN110650748B (zh) | 2017-01-06 | 2024-01-02 | 动量制药公司 | 与经工程改造的Fc构建体相关的组合物和方法 |
AU2020344164A1 (en) | 2019-09-13 | 2022-04-14 | CSL Behring Lengnau AG | Recombinant IgG Fc multimers for the treatment of immune complex-mediated kidney disorders |
KR20220110818A (ko) | 2019-12-06 | 2022-08-09 | 체에스엘 베링 렝나우 아게 | Fc 다량체의 안정한 조성물 |
GB202005879D0 (en) * | 2020-04-22 | 2020-06-03 | Petmedix Ltd | Heterodimeric proteins |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011517456A (ja) | 2008-04-02 | 2011-06-09 | マクロジェニクス,インコーポレーテッド | HER2/neu特異的抗体およびその使用方法 |
WO2015168643A2 (en) | 2014-05-02 | 2015-11-05 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods related to engineered fc constructs |
Family Cites Families (53)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2556219B1 (fr) | 1983-12-07 | 1987-06-26 | Merieux Inst | Nouveau medicament immunomodulateur, a base de fragments fc d'igg humaines |
US5426641A (en) | 1994-01-28 | 1995-06-20 | Bell Communications Research, Inc. | Adaptive class AB amplifier for TDMA wireless communications systems |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
AU3804397A (en) | 1996-06-14 | 1998-01-07 | Smithkline Beecham Corporation | Hexameric fusion proteins and uses therefor |
US20090074839A1 (en) | 1997-01-22 | 2009-03-19 | Marton Milankovits | Pharmaceutical Compositions Primarily for the Treatment and Prevention of Genitourinary Infections and their Extragenital Complications |
US7951917B1 (en) | 1997-05-02 | 2011-05-31 | Genentech, Inc. | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
US20020062010A1 (en) | 1997-05-02 | 2002-05-23 | Genentech, Inc. | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
EP1240337B1 (en) | 1999-12-24 | 2006-08-23 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for prolonging elimination half-times of bioactive compounds |
US20050089932A1 (en) | 2001-04-26 | 2005-04-28 | Avidia Research Institute | Novel proteins with targeted binding |
US20050249723A1 (en) | 2003-12-22 | 2005-11-10 | Xencor, Inc. | Fc polypeptides with novel Fc ligand binding sites |
JP5620626B2 (ja) | 2005-03-31 | 2014-11-05 | 中外製薬株式会社 | 会合制御によるポリペプチド製造方法 |
GB0614780D0 (en) | 2006-07-25 | 2006-09-06 | Ucb Sa | Biological products |
US7825093B2 (en) | 2006-10-25 | 2010-11-02 | Amgen Inc. | Methods of using OSK1 peptide analogs |
BRPI0620639A2 (pt) | 2006-12-21 | 2011-11-22 | Micromet Ag | anticorpos de cadeia simples biespecìficos e composição farmacêutica compreendendo os mesmos |
US20080260738A1 (en) | 2007-04-18 | 2008-10-23 | Moore Margaret D | Single chain fc, methods of making and methods of treatment |
US20090252729A1 (en) | 2007-05-14 | 2009-10-08 | Farrington Graham K | Single-chain Fc (scFc) regions, binding polypeptides comprising same, and methods related thereto |
CA2688490C (en) | 2007-06-01 | 2022-06-21 | Scott E. Strome | Immunoglobulin constant region fc receptor binding agents |
PL2235064T3 (pl) | 2008-01-07 | 2016-06-30 | Amgen Inc | Sposób otrzymywania cząsteczek przeciwciał z heterodimerycznymi fc z zastosowaniem kierujących efektów elektrostatycznych |
JP2012504660A (ja) | 2008-10-06 | 2012-02-23 | ユニバーシティ オブ シカゴ | 細菌eap、empおよび/またはadsaタンパク質に関連する組成物および方法 |
US20100143353A1 (en) | 2008-12-04 | 2010-06-10 | Mosser David M | POLYPEPTIDES COMPRISING Fc FRAGMENTS OF IMMUNOGLOBULIN G (lgG) AND METHODS OF USING THE SAME |
US10865233B2 (en) | 2008-12-18 | 2020-12-15 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | NKG2D-fc for immunotherapy |
MX2011007833A (es) | 2009-01-23 | 2011-10-06 | Biogen Idec Inc | Polipeptidos fc estabilizados con funcion efectora reducida y metodos de uso. |
WO2010135534A2 (en) | 2009-05-20 | 2010-11-25 | Children's Medical Center Corporation | Compositions for the treatment of metastatic cancer and methods of use thereof |
US8858948B2 (en) | 2009-05-20 | 2014-10-14 | Theraclone Sciences, Inc. | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of influenza |
JP5683581B2 (ja) | 2009-06-30 | 2015-03-11 | リサーチ ディベロップメント ファウンデーション | 免疫グロブリンFcポリペプチド |
SG179196A1 (en) | 2009-09-16 | 2012-04-27 | Genentech Inc | Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof |
AU2010303415B2 (en) | 2009-10-07 | 2015-02-19 | Macrogenics, Inc. | Fc region-containing polypeptides that exhibit improved effector function due to alterations of the extent of fucosylation, and methods for their use |
ES2688978T3 (es) | 2009-11-23 | 2018-11-07 | Amgen Inc. | Anticuerpo monomérico Fc |
GB0922209D0 (en) | 2009-12-18 | 2010-02-03 | Univ Nottingham | Proteins, nucleic acid molecules and compositions |
WO2011146902A1 (en) | 2010-05-21 | 2011-11-24 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Bi-specific fusion proteins |
EA201291482A1 (ru) | 2010-07-09 | 2013-10-30 | Байоджен Айдек Хемофилия Инк. | Химерные факторы коагуляции |
CN105820256A (zh) | 2010-07-28 | 2016-08-03 | 格利克尼克股份有限公司 | 天然人蛋白片段的融合蛋白以产生有序多聚化免疫球蛋白fc组合物 |
AU2011288412A1 (en) | 2010-08-13 | 2013-02-21 | Medimmune Limited | Monomeric polypeptides comprising variant Fc regions and methods of use |
EP2635607B1 (en) | 2010-11-05 | 2019-09-04 | Zymeworks Inc. | Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain |
CA2827188C (en) | 2011-03-17 | 2020-02-11 | Itai Benhar | Bi- and monospecific, asymmetric antibodies and methods of generating the same |
CA2812739A1 (en) | 2011-03-25 | 2012-10-04 | Glenmark Pharmaceuticals S.A. | Hetero-dimeric immunoglobulins |
EP3693000B1 (en) | 2012-06-08 | 2022-03-02 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Procoagulant compounds |
CN104582736A (zh) | 2012-06-21 | 2015-04-29 | 印第安纳大学研究及科技有限公司 | Fc效应子功能改变的肠降血糖素受体配体多肽Fc区融合多肽和缀合物 |
US9683044B2 (en) | 2012-08-20 | 2017-06-20 | Gliknik Inc. | Molecules with antigen binding and polyvalent FC gamma receptor binding activity |
JP2015536317A (ja) | 2012-10-17 | 2015-12-21 | リバプール・スクール・オブ・トロピカル・メディスン | 免疫調節タンパク質 |
CN104558194B (zh) | 2013-10-17 | 2018-04-27 | 泰州迈博太科药业有限公司 | 一类抗CD20-Flex双功能融合蛋白、其制备方法及用途 |
AU2014348552A1 (en) * | 2013-11-13 | 2016-06-02 | Zymeworks Inc. | Monovalent antigen binding constructs targeting EGFR and/or HER2 and uses thereof |
US10137170B2 (en) | 2013-12-20 | 2018-11-27 | Indiana University Research And Technology Corporation | Lipidated incretin receptor ligand human immunoglobulin Fc-region fusion polypeptides |
KR20160107190A (ko) * | 2014-01-15 | 2016-09-13 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 변형된 FcRn-결합 및 유지된 단백질 A-결합 성질을 갖는 Fc-영역 변이체 |
CN113248613A (zh) * | 2014-01-15 | 2021-08-13 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 具有修饰的FCRN结合性质的Fc区变体 |
RU2016139022A (ru) | 2014-03-05 | 2018-04-25 | Юсб Биофарма Спрл | МУЛЬТИМЕРНЫЕ Fc-БЕЛКИ |
SG11201606597QA (en) | 2014-03-05 | 2016-09-29 | Ucb Biopharma Sprl | Multimeric fc proteins |
WO2015158867A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Ucb Biopharma Sprl | Multimeric fc proteins |
NZ726514A (en) | 2014-05-29 | 2019-01-25 | Macrogenics Inc | Tri-specific binding molecules and methods of use thereof |
EP3423572B1 (en) * | 2016-03-02 | 2023-11-29 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Methods related to engineered fc constructs |
KR102462084B1 (ko) | 2016-05-23 | 2022-11-02 | 모멘타 파머슈티컬스 인코포레이티드 | 유전자 조작 Fc 작제물에 관한 조성물 및 방법 |
CN110650748B (zh) | 2017-01-06 | 2024-01-02 | 动量制药公司 | 与经工程改造的Fc构建体相关的组合物和方法 |
-
2018
- 2018-01-05 CN CN201880016496.8A patent/CN110650748B/zh active Active
- 2018-01-05 CA CA3049383A patent/CA3049383A1/en active Pending
- 2018-01-05 EP EP18736414.6A patent/EP3565588A4/en active Pending
- 2018-01-05 SG SG11201906139VA patent/SG11201906139VA/en unknown
- 2018-01-05 CN CN202311710523.0A patent/CN117886928A/zh active Pending
- 2018-01-05 AU AU2018205808A patent/AU2018205808A1/en active Pending
- 2018-01-05 BR BR112019013955-9A patent/BR112019013955A2/pt unknown
- 2018-01-05 KR KR1020197023075A patent/KR102624254B1/ko active IP Right Grant
- 2018-01-05 JP JP2019537119A patent/JP7146771B2/ja active Active
- 2018-01-05 SG SG10202107391YA patent/SG10202107391YA/en unknown
- 2018-01-05 WO PCT/US2018/012488 patent/WO2018129255A1/en unknown
- 2018-01-05 US US16/474,640 patent/US11220531B2/en active Active
-
2021
- 2021-11-16 US US17/527,741 patent/US11827682B2/en active Active
-
2022
- 2022-09-21 JP JP2022150723A patent/JP2022191261A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011517456A (ja) | 2008-04-02 | 2011-06-09 | マクロジェニクス,インコーポレーテッド | HER2/neu特異的抗体およびその使用方法 |
WO2015168643A2 (en) | 2014-05-02 | 2015-11-05 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods related to engineered fc constructs |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Robert L. Shields et al.,The Journal of Biological Chemistry,2001年,Vol. 276, No. 9,6591-6604 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20190099333A (ko) | 2019-08-26 |
BR112019013955A2 (pt) | 2020-02-11 |
SG11201906139VA (en) | 2019-08-27 |
AU2018205808A1 (en) | 2019-07-25 |
KR102624254B1 (ko) | 2024-01-12 |
CA3049383A1 (en) | 2018-07-12 |
CN110650748B (zh) | 2024-01-02 |
WO2018129255A1 (en) | 2018-07-12 |
JP2022191261A (ja) | 2022-12-27 |
EP3565588A1 (en) | 2019-11-13 |
RU2019124710A3 (ja) | 2021-05-26 |
US11827682B2 (en) | 2023-11-28 |
US20220267388A1 (en) | 2022-08-25 |
US20190345206A1 (en) | 2019-11-14 |
CN110650748A (zh) | 2020-01-03 |
CN117886928A (zh) | 2024-04-16 |
SG10202107391YA (en) | 2021-08-30 |
EP3565588A4 (en) | 2020-12-16 |
US11220531B2 (en) | 2022-01-11 |
RU2019124710A (ru) | 2021-02-08 |
JP2020504143A (ja) | 2020-02-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7295301B2 (ja) | 操作されたFcコンストラクトに関する組成物及び方法 | |
JP7146771B2 (ja) | 操作されたFcコンストラクトに関する組成物及び方法 | |
JP2020128415A (ja) | エンジニアリングされたFc構築物に関連する組成物および方法 | |
US20220267460A1 (en) | COMPOSITIONS AND METHODS RELATED TO ENGINEERED Fc-ANTIGEN BINDING DOMAIN CONSTRUCTS | |
RU2816477C2 (ru) | КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ, СВЯЗАННЫЕ СО СКОНСТРУИРОВАННЫМИ Fc-КОНСТРУКЦИЯМИ | |
CN113164592A (zh) | 与工程化Fc-抗原结合结构域构建体有关的组合物和方法 | |
BR112021000427A2 (pt) | Composições e métodos relacionados a construtos do domínio de ligação fc-antígeno manipulado direcionado a ctla-4 | |
CA3105985A1 (en) | Compositions and methods related to engineered fc-antigen binding domain constructs targeted to ccr4 | |
US20210284717A1 (en) | Compositions and methods related to engineered fc-antigen binding domain constructs |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190910 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190731 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210105 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210105 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20210322 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20210526 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20210528 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20211027 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211116 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220214 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220413 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220516 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220823 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220921 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7146771 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |