JP2022191261A - 操作されたＦｃコンストラクトに関する組成物及び方法 - Google Patents

操作されたＦｃコンストラクトに関する組成物及び方法 Download PDF

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Abstract

【課題】血中半減期、ならびに／又は、Ｆｃ受容体に対する結合親和性及び／もしくは結合活性、生物活性なＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクトを提供する。【解決手段】第一のＦｃドメイン単量体、第二のＦｃドメイン単量体を含む第一のポリペプチドと、第三のＦｃドメイン単量体、第四のＦｃドメイン単量体を含む、第二のポリペプチドと、第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドとを含むＦｃコンストラクトであって、前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて、第一のＦｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が組み合わされて、第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成するＦｃコンストラクトを提供する。【選択図】図４０

Description

関連出願への相互参照
本出願は、２０１７年１月６日に出願された米国仮特許出願第６２／４４３，４９５号
、２０１７年５月２３日に出願された米国仮特許出願第６２／５１０，２２８号、２０１
７年１１月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／５８９，４７３号に利益を主張す
るものである。これらの出願の各々の内容は、その全体を参照によって本明細書に組み入
れるものとする。
背景
治療用タンパク質、例えば、治療用抗体及びＦｃ融合タンパク質は、急速に、免疫疾患
及び炎症性疾患、がんならびに感染症をもつ患者にとって臨床的に重要な薬剤分類になっ
ている。
概要
本開示は、生物活性なＦｃドメインを含有する治療用コンストラクトを特徴とする。こ
うしたコンストラクトは、所望の血中半減期、ならびに／又は、Ｆｃ受容体に対する結合
親和性及び／もしくは結合活性を有し得る。
概して、本開示は、２～１０個のＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト、例えば２
、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のＦｃドメインを有するＦｃコンストラクトを
特徴とする。一部の実施形態では、Ｆｃコンストラクトが、２～１０個のＦｃドメイン、
２～５個のＦｃドメイン、２～４個のＦｃドメイン、２～３個のＦｃドメイン、３～５個
のＦｃドメイン、２～８個のＦｃドメイン又は２～６個のＦｃドメインを含む。一部の実
施形態では、Ｆｃコンストラクトが、２～４個のＦｃドメインを含む。一部の実施形態で
は、Ｆｃコンストラクトが、５～１０個のＦｃドメイン（例えば、５～６、５～７、５～
８、５～９又は５～１０個のＦｃドメイン）を含む。
一部の実施形態では、本開示のコンストラクト（例えば、２～４個のＦｃドメイン、例
えば２、３又は４個のＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト）及び均質な医薬組成物
（例えば、２～４個のＦｃドメイン、例えば２、３又は４個のＦｃドメインを有するＦｃ
コンストラクトを含有するもの）は、免疫応答の防止、ならびに、対象における免疫疾患
及び炎症性疾患（例えば、自己免疫疾患）の治療、例えば、対象における炎症を軽減する
こと、対象における自己抗体のクリアランスを促進すること、対象における抗原提示を抑
制すること、例えば対象における免疫応答の免疫複合体に基づく活性化を防止することに
おいて有用である。本明細書に記載のＦｃコンストラクトは、免疫細胞を有意に刺激する
ことなく、免疫疾患及び炎症性疾患を有する患者の治療に用いることが可能である。一部
の実施形態では、本開示のコンストラクト（例えば、５～１０個のＦｃドメイン、例えば
５、６、７、８、９又は１０個のＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト）及び均質な
医薬組成物（例えば、５～１０個のＦｃドメイン、例えば５、６、７、８、９又は１０個
のＦｃドメインを有するＦｃコンストラクトを含有するもの）は、例えば、対象における
免疫応答の免疫細胞活性化を誘導すること、対象における標的細胞（すなわち、がん細胞
又は感染細胞）のファゴサイトーシスを増加すること、及び、対象におけるがん及び感染
症等の疾患を治療することにおいて有用である。
これらコンストラクトの性質は、実質的に均質な組成物の効率的な生成を可能にする。
組成物の均質性の程度は、組成物の薬物動態とインビボでの性能とに影響を与える。組成
物の安全性、効能、均一性、及び信頼性を確実にするためには、組成物におけるこうした
均質性が望ましい。本開示のＦｃコンストラクトは、実質的に均質（例えば、少なくとも
８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％均質）である組成物又は集団中にあることが
可能である。
本明細書においてさらに詳細に記載するように、本開示は、同数のＦｃドメインをすべ
てが有するＦｃコンストラクトを含有する実質的に均質な組成物のみならず、こうした実
質的に均質な組成物を調製する方法を特徴とする。
第一の態様では、本開示は、ａ）ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第二のＦｃド
メイン単量体、及びｉｉｉ）第一のＦｃドメイン単量体を第二のＦｃドメイン単量体に結
合させるリンカーを含む第一のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、ｉ
ｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体を第四のＦｃド
メイン単量体に結合させるリンカーを含む第二のポリペプチドと、ｃ）第五のＦｃドメイ
ン単量体を含む第三のポリペプチドと、ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリ
ペプチドとを含むＦｃコンストラクトを特徴とし、ここで第一のＦｃドメイン単量体及び
第五のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第一のＦｃドメインを形成し、第二のＦｃド
メイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第二のＦｃドメインを形成
し、ならびに第三のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体は組み合わされて
第三のＦｃドメインを形成し、ここで第一と第二のポリペプチドはそれぞれ配列
Figure 2022191261000002
を含み、第三と第四のポリペプチドはそれぞれ配列
Figure 2022191261000003
を含む。
別の態様では、本開示は、ａ）ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第二のＦｃドメ
イン単量体、及びｉｉｉ）第一のＦｃドメイン単量体を第二のＦｃドメイン単量体に結合
させるリンカーを含む第一のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、ｉｉ
）第四のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体を第四のＦｃドメ
イン単量体に結合させるリンカーを含む第二のポリペプチドと、ｃ）第五のＦｃドメイン
単量体を含む第三のポリペプチドと、ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペ
プチドとを含むＦｃコンストラクトを特徴とし、ここで第一のＦｃドメイン単量体及び第
五のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第一のＦｃドメインを形成し、第二のＦｃドメ
イン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し
、ならびに第三のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第
三のＦｃドメインを形成し、ここで少なくとも一つのＦｃドメインが位置Ｉ２５３でアミ
ノ酸修飾（例えば、位置Ｉ２５３に単一アミノ酸修飾）を含む。別の態様では、本開示は
、ａ）ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）
第一のＦｃドメイン単量体を第二のＦｃドメイン単量体に結合させるリンカーを含む第一
のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量
体、及びｉｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体を第四のＦｃドメイン単量体に結合させるリ
ンカーを含む第二のポリペプチドと、ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペ
プチドと、ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドとを含むＦｃコンス
トラクトを特徴とし、ここで第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体は
組み合わされて第一のＦｃドメインを形成し、第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃ
ドメイン単量体は組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに第三のＦｃドメ
イン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し
、ここで少なくとも一つのＦｃドメイン単量体が位置Ｉ２５３にアミノ酸置換を含む。
一部の事例では、第一及び第二のポリペプチドは相互に同一であり、第三及び第四のポ
リペプチドは相互に同一である。一部の実施形態では、第一のＦｃドメインは、位置Ｉ２
５３にアミノ酸修飾を含む。一部の事例では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体のうち
一方又は両方は、位置Ｉ２５３にアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、第二のＦｃ
ドメインは、位置Ｉ２５３にアミノ酸修飾を含む。一部の実施形態では、第二及び第四の
Ｆｃドメイン単量体のうち一方又は両方は、位置Ｉ２５３にアミノ酸置換を含む。一部の
実施形態では、第三のＦｃドメインは、位置Ｉ２５３にアミノ酸修飾を含む。一部の実施
形態では、第三及び第六のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方は、位置Ｉ２５３にア
ミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、位置Ｉ２５３での各アミノ酸修飾（例えば、置
換）は、Ｉ２５３Ａ、Ｉ２５３Ｃ、Ｉ２５３Ｄ、Ｉ２５３Ｅ、Ｉ２５３Ｆ、Ｉ２５３Ｇ、
Ｉ２５３Ｈ、Ｉ２５３Ｉ、Ｉ２５３Ｋ、Ｉ２５３Ｌ、Ｉ２５３Ｍ、Ｉ２５３Ｎ、Ｉ２５３
Ｐ、Ｉ２５３Ｑ、Ｉ２５３Ｒ、Ｉ２５３Ｓ、Ｉ２５３Ｔ、Ｉ２５３Ｖ、Ｉ２５３Ｗ、及び
Ｉ２５３Ｙからなる群から独立して選択される。一部の実施形態では、位置Ｉ２５３での
各アミノ酸修飾（例えば、置換）はＩ２５３Ａである。一部の実施形態では、Ｆｃコンス
トラクト（例えば、少なくとも一つのＦｃドメイン単量体）は、位置Ｒ２９２に少なくと
も一つのアミノ酸修飾を含む。一部の実施形態では、少なくとも一つのＦｃドメイン単量
体は、位置Ｒ２９２にアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、第一のＦｃドメインは
、位置Ｒ２９２にアミノ酸修飾を含む。一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン（例え
ば、第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方）は、位置
Ｒ２９２にアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、第二のＦｃドメインは、位置Ｒ２
９２にアミノ酸修飾を含む。一部の実施形態では、第二のＦｃドメイン（例えば、第二の
Ｆｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方）は、位置Ｒ２９２に
アミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、第三のＦｃドメインは、位置Ｒ２９２にアミ
ノ酸修飾を含む。一部の実施形態では、第三のＦｃドメイン（例えば、第三のＦｃドメイ
ン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方）は、位置Ｒ２９２にアミノ酸置
換を含む。一部の実施形態では、第一、第二、及び第三のＦｃドメインの各々は、位置Ｒ
２９２にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む。一部の事例では、第一及び第五のＦｃド
メイン単量体の一方又は両方は、位置Ｒ２９２にアミノ酸置換を含み、第二及び第四のＦ
ｃドメイン単量体の一方又は両方は、位置Ｒ２９２にアミノ酸置換を含み、ならびに第三
及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、位置Ｒ２９２にアミノ酸置換を含む。
一部の実施形態では、第一、第二、及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸修飾（例
えば、置換）Ｒ２９２Ｐを含む。一部の実施形態では、位置Ｒ２９２での各アミノ酸修飾
（例えば、置換）は、Ｒ２９２Ｄ、Ｒ２９２Ｅ、Ｒ２９２Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｒ２９２Ｑ、
Ｒ２９２Ｒ、Ｒ２９２Ｔ、及びＲ２９２Ｙからなる群から独立して選択される。一部の実
施形態では、位置Ｒ２９２での各アミノ酸修飾（例えば、置換）はＲ２９２Ｐである。
すべての態様の一部の実施形態では、Ｆｃドメインの各々は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ配列
に基づき、本明細書に記載の修飾を含む（すなわち、ヒトＩｇＧ Ｆｃ配列の変異体であ
る）。一部の実施形態では、ベースＩｇＧ１ Ｆｃ配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２で
あり、最大１０個の単一アミノ酸修飾を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のＦ
ｃコンストラクトのＦｃドメインの各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有するＩｇ
Ｇ１ Ｆｃ配列（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）である。一部の実施形態では、Ｉ
ｇＧ１ Ｆｃ配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２であり、操作された空洞、操作された突
起、及び／又は静電気ステアリング修飾を修飾して、ポリペプチドのアセンブリを制御す
ること、及び／又は本明細書に記載されるように、結合関連変異を修飾して、コンストラ
クトの薬物動態を修飾することを含む。したがって、最大１０個の単一アミノ酸修飾は、
Ｉ２５３（例えば、Ｉ２５３Ａ）及びＲ２９２（例えば、Ｒ２９２Ｐ）の一方又は両方で
の修飾（例えば、置換）及びポリペプチドのアセンブリを制御するための操作された空洞
、操作された突起、及び／又は静電気ステアリング修飾を提供するための修飾（例えば、
置換）を含むことができる。一部の事例では、各Ｆｃドメイン単量体は、Ｉ２５３及びＲ
２９２の一方又は両方での置換に加えて、最大１０、９、８、７、６、５、４、３、２、
又は１個の単一アミノ酸修飾を含む。ペプチドのアセンブリを制御するための操作された
空洞、操作された突起、及び／又は静電気ステアリング修飾を提供する修飾は、好ましく
はＦｃドメインのＣＨ３ドメイン内にある。
別の態様では、本開示は、ａ）ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第二のＦｃドメ
イン単量体、及びｉｉｉ）第一のＦｃドメイン単量体を第二のＦｃドメイン単量体に結合
させるリンカーを含む第一のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、ｉｉ
）第四のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体を第四のＦｃドメ
イン単量体に結合させるリンカーを含む第二のポリペプチドと、ｃ）第五のＦｃドメイン
単量体を含む第三のポリペプチドと、ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペ
プチドとを含むＦｃコンストラクトを特徴とし、ここで第一のＦｃドメイン単量体及び第
五のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第一のＦｃドメインを形成し、第二のＦｃドメ
イン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し
、ならびに第三のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第
三のＦｃドメインを形成し、ここで少なくとも一つのＦｃドメインが位置Ｒ２９２にアミ
ノ酸修飾（例えば、単一アミノ酸修飾）を含む。別の態様では、本開示は、ａ）ｉ）第一
のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第一のＦｃドメ
イン単量体を第二のＦｃドメイン単量体に結合させるリンカーを含む第一のポリペプチド
と、ｂ）ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ
）第三のＦｃドメイン単量体を第四のＦｃドメイン単量体に結合させるリンカーを含む第
二のポリペプチドと、ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、ｄ）
第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドとを含むＦｃコンストラクトを特徴
とし、ここで第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体は組み合わされて
第一のＦｃドメインを形成し、第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体
は組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに第三のＦｃドメイン単量体及び
第六のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、ここで少なく
とも一つのＦｃドメイン単量体が位置Ｒ２９２にアミノ酸置換を含む。
一部の実施形態では、第一のＦｃドメインは、位置Ｒ２９２にアミノ酸修飾を含む。一
部の実施形態では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方は、位置Ｒ２
９２にアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、第二のＦｃドメインは、位置Ｒ２９２
にアミノ酸修飾を含む。一部の実施形態では、第二及び第四のＦｃドメイン単量体のうち
一方又は両方は、位置Ｒ２９２にアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、第三のＦｃ
ドメインは、位置Ｒ２９２にアミノ酸修飾を含む。一部の実施形態では、第三及び第六の
Ｆｃドメイン単量体のうち一方又は両方は、位置Ｒ２９２にアミノ酸置換を含む。一部の
実施形態では、第一、第二、及び第三のＦｃドメインの各々は、位置Ｒ２９２にアミノ酸
修飾（例えば、置換）を含む。一部の実施形態では、第一、第二、及び第三のＦｃドメイ
ンの各々は、アミノ酸修飾（例えば、置換）Ｒ２９２Ｐを含む（すなわち、各Ｆｃ単量体
は、例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２と比較して、Ｒ２９２Ｐ修飾を有する）。一部の
実施形態では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２
９２Ｐを含み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２
９２Ｐを含み、ならびに第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸
置換Ｒ２９２Ｐを含む。
一部の実施形態では、位置Ｒ２９２での各アミノ酸修飾（例えば、置換）は、Ｒ２９２
Ｄ、Ｒ２９２Ｅ、Ｒ２９２Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｒ２９２Ｑ、Ｒ２９２Ｒ、Ｒ２９２Ｔ、又は
Ｒ２９２Ｙから独立して選択される。一部の実施形態では、位置Ｒ２９２での各アミノ酸
修飾（例えば、置換）はＲ２９２Ｐである。一部の実施形態では、第一及び第三のＦｃド
メインの各々は、アミノ酸修飾（例えば、置換）Ｉ２５３Ａを含み、第一、第二、及び第
三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸修飾（例えば、置換）Ｒ２９２Ｐを含む。一部の実
施形態では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５
３Ａを含み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５
３Ａを含み、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２９
２Ｐを含み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２９
２Ｐを含み、ならびに第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置
換Ｒ２９２Ｐを含む。一部の実施形態では、第一、第二、及び第三のＦｃドメインの各々
は、アミノ酸修飾（例えば、置換）Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む。一部の実施形態で
は、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含
み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含
み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含
み、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含
み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含
み、ならびに第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２９
２Ｐを含む。
一部の実施形態では、各Ｆｃドメインの配列は、１０個以下の単一アミノ酸修飾を有す
るヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン配列に基づく。一部の実施形態では、各Ｆｃドメインの配
列は、１０個以下の単一アミノ酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２に基づく。
一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸
置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含み、第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを
含む。一部の場合では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸
置換Ｉ２５３Ａを含み、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸
置換Ｒ２９２Ｐを含み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸
置換Ｉ２５３Ａを含み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸
置換Ｒ２９２Ｐを含み、ならびに第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、
アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。
一部の実施形態では、第二のＦｃドメインは、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。一部の
実施形態では、第二及び第四のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方は、アミノ酸置換
Ｉ２５３Ａを含む。一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの
各々は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。一部の実施形態では、第一及び第五のＦｃドメ
イン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第三及び第六のＦｃドメ
イン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。一部の実施形態では、第
一のＦｃドメイン、第二のＦｃドメイン、及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸置
換Ｉ２５３Ａを含む。一部の実施形態では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又
は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又
は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又
は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。
一部の実施形態では、第二のＦｃドメインは、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。一部の
実施形態では、第二及び第四のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方は、アミノ酸置換
Ｒ２９２Ｐを含む。一部の実施形態では、第二のＦｃドメインは、アミノ酸置換Ｉ２５３
Ａ及びＲ２９２Ｐを含む。一部の実施形態では、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一
方又は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一
方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。一部の実施形態では、第一のＦｃドメイ
ン及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第二のＦｃドメイ
ンはアミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。一部の実施形態では、第一及び第五のＦｃドメイン
単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第三及び第六のＦｃドメイン
単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第二及び第四のＦｃドメイン
単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。
一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸
置換Ｉ２５３Ａを含み、第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを
含む。一部の実施形態では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミ
ノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミ
ノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミ
ノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミ
ノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃド
メインの各々は、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。一部の実施形態では、第一及び第五の
Ｆｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、第三及び第六の
Ｆｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。
一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインは、アミノ酸置換Ｒ
２９２Ｐを含み、第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。一部の実施形態
では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを
含み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを
含み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを
含む。一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々は、Ｉ２
５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む（例えば、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む）
。一部の実施形態では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸
置換Ｉ２５３Ａを含み、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸
置換Ｒ２９２Ｐを含み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸
置換Ｉ２５３Ａを含み、ならびに第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、
アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。
一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸
置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含み、第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｉ２５３Ａを
含む。一部の実施形態では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミ
ノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミ
ノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミ
ノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミ
ノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、ならびに第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方
は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む。一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン、第二の
Ｆｃドメイン、及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。一部
の実施形態では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ
２９２Ｐを含み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ
２９２Ｐを含み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸置換Ｒ
２９２Ｐを含む。
一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸
置換Ｒ２９２Ｐを含み、第二のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを
含む。一部の実施形態では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミ
ノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミ
ノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミ
ノ酸置換Ｉ２５３Ａを含み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミ
ノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン、第二のＦｃドメ
イン、及び第三のＦｃドメインの各々は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む
。一部の実施形態では、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸
置換Ｉ２５３Ａを含み、第一及び第五のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸
置換Ｒ２９２Ｐを含み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸
置換Ｉ２５３Ａを含み、第二及び第四のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ酸
置換Ｒ２９２Ｐ；を含み、第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は、アミノ
酸置換Ｉ２５３Ａを含み、ならびに第三及び第六のＦｃドメイン単量体の一方又は両方は
、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む。
一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体は、第
一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補
的な二量体形成選択モジュールを含む。一部の実施形態では、第二のＦｃドメイン単量体
及び第四のＦｃドメイン単量体は、第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単
量体間での二量体形成を促進する相補的な二量体形成選択モジュールを含む。一部の実施
形態では、第三のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体は、第三のＦｃドメ
イン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な二量体形
成選択モジュールを含む。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプ
チドは、同一のアミノ酸配列を含む、該配列からなる、又は該配列から本質的になり、ま
た第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは、同一のアミノ酸配列を含む、該配列か
らなる、又は該配列から本質的になる。一部の実施形態では、第二のＦｃドメイン単量体
及び第四のＦｃドメイン単量体の各々は、Ｄ３９９Ｋ及びＫ４０９Ｄ又はＫ４０９Ｅのい
ずれかを含む。一部の実施形態では、第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン
単量体の各々は、Ｋ３９２Ｄ及びＤ３９９Ｋを含む。一部の実施形態では、第二のＦｃド
メイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々は、Ｅ３５７Ｋ及びＫ３７０Ｅ．を含
む。一部の実施形態では、第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各
々は、Ｄ３５６Ｋ及びＫ４３９Ｄを含む。一部の実施形態では、第二のＦｃドメイン単量
体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々は、Ｋ３９２Ｅ及びＤ３９９Ｋを含む。一部の実
施形態では、第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々は、Ｅ３５
７Ｋ及びＫ３７０Ｄを含む。一部の実施形態では、第二のＦｃドメイン単量体及び第四の
Ｆｃドメイン単量体の各々は、Ｄ３５６Ｋ及びＫ４３９Ｅを含む。一部の実施形態では、
第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体の各々は、Ｓ３５４Ｃ及びＴ３
６６Ｗを含み、第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体はそれぞれ、Ｙ
３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。一部の実施形態では、第三
及び第四のポリペプチドの各々は、Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、第一のＦｃドメイ
ン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体はそれぞれ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８
Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン単量体及び第三の
Ｆｃドメイン単量体の各々は、Ｅ３５７Ｋ又はＥ３５７Ｒを含み、第五のＦｃドメイン単
量体及び第六のＦｃドメイン単量体はそれぞれ、Ｋ３７０Ｄ又はＫ３７０Ｅを含む。一部
の実施形態では、第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体は、Ｋ３７０
Ｄ又はＫ３７０Ｅを含み、第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体はそ
れぞれ、Ｅ３５７Ｋ又はＥ３５７Ｒを含む。一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン単
量体及び第三のＦｃドメイン単量体の各々は、Ｋ４０９Ｄ又はＫ４０９Ｅを含み、第五の
Ｆｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体はそれぞれ、Ｄ３９９Ｋ又はＤ３９９
Ｒを含む。一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量
体の各々は、Ｄ３９９Ｋ又はＤ３９９Ｒを含み、第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦ
ｃドメイン単量体はそれぞれ、Ｋ４０９Ｄ又はＫ４０９Ｅを含む。
一部の実施形態では、リンカー（例えば、スペーサー）は、
Figure 2022191261000004
を有するポリペプチドを含む。他の実施形態では、本明細書に記載するＦｃコンストラク
ト中の一つ又は複数のリンカーは、スペーサーであり、例えば、２～２００アミノ酸（例
えば、２～１００、３～２００、３～１５０、３～１００、３～６０、３～５０、３～４
０、３～３０、３～２０、３～１０、３～８、３～５、４～３０、５～３０、６～３０、
８～３０、１０～２０、１０～３０、１２～３０、１４～３０、２０～３０、１５～２５
、１５～３０、１８～２２及び２０～３０アミノ酸）のアミノ酸スペーサーである。一部
の場合では、アミノ酸スペーサーは、グリシンのみを含む、セリンのみを含む、又は、セ
リン及びグリシンのみを含む。一部の実施形態では、アミノ酸スペーサーはグリシンのみ
を含む。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000005
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５
、４、３、２、又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有
する、
Figure 2022191261000006
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカーの外側領域（例えば、サ
ブ配列
Figure 2022191261000007
の外側）における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、５
個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：７８の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一
部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個の
単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８の配列を含む、該配列からなる、
又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８の位置３３はアラニン、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８の位置７２はプロリン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８の位置
３１９はプロリンである。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000008
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最
大１０個の単一アミノ酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の配列を含む、該配列か
らなる、又は実質的に該配列からなり、ただし最大１０個（例えば、１個以下、２個以下
、３個以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一ア
ミノ酸修飾のいずれも、リンカーの外側領域（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000009
の外側）にはない。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９内のリンカーを代替的なリンカーと置き換
えることができる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの
各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の配列を含
む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の
位置１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の位置１３７はリシン、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：４９の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の位置４２６
はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の位置４３６はアスパラギン酸である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000010
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リ
ンカーの外側領域（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000011
の外側）における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、５
個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：６２の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一
部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個の
単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の配列を含む、該配列からなる、
又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の位置１３４はシステイ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の位置
１４６はトリプトファン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の位置２８０はアラニン、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６２の位置４２６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の位置４３６は
アスパラギン酸である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000012
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、
２個以下、３個以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）
の単一アミノ酸修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：６４の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態で
は、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカーの外側領域（例えば
、サブ配列
Figure 2022191261000013
の外側）に、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４の配列を
含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４内のリ
ンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリ
ペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、
ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４の位置３３はアラニンである。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000014
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リ
ンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000015
）の外側領域における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下
、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる
。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる
。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の位置３３はアラニ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の位置１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の
位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の位置１４６はトリプトファン、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：６５の位置２８０はアラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の位置４２６
はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の位置４３６はアスパラギン酸である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000016
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、
２個以下、３個以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）
の単一アミノ酸修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：６６の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態で
は、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リンカーの外側領域（例えば
、サブ配列
Figure 2022191261000017
の外側）に、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の配列を
含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６内のリ
ンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる。一部の実施形態では、第一のポリ
ペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、
ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の位置１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６
の位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の位置１４６はトリプトファン、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：６６の 位置３１９はプロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の位置４２
６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の 位置４３６はアスパラギン酸である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000018
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リ
ンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000019
）の外側領域における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下
、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる
。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる
。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の位置１３４はシス
テイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の
位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の位置２８０はアラニン、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：６７の位置３１８はプロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の位置４２６
はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の位置４３６はアスパラギン酸である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000020
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リ
ンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000021
）の外側領域における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下
、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる
。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる
。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の位置３３はアラニ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の位置１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の
位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６８の位置３１９はプロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の位置４２６は
リシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の位置４３６はアスパラギン酸である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000022
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リ
ンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000023
）の外側領域における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下
、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる
。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる
。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の位置３３はアラニ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の位置１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の
位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６９の位置２８０はアラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の位置３１９は
プロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の位置４２６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６９の位置４３６はアスパラギン酸である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000024
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リ
ンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000025
）の外側領域における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下
、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる
。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる
。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の位置７１はプロリ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の位置１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の
位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７１の位置４２６はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の位置４３６はア
スパラギン酸である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000026
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リ
ンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000027
）の外側領域における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下
、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる
。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる
。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の位置７２はプロリ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の位置１３４はシスチン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の位
置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７２の位置４２６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の位置４３６は
アスパラギン酸である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000028
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リ
ンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000029
）の外側領域における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下
、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる
。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる
。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の位置３３はアラニ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の位置７２はプロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の位置
１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：７４の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の位置４２６はリ
シン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の位置４３６はアスパラギン酸である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000030
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リ
ンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000031
）の外側領域における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下
、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる
。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる
。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の位置３３はアラニ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の位置７２はプロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の位置
１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：７５の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の位置２８０はア
ラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の位置４２６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７
５の位置４３６はアスパラギン酸である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000032
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リ
ンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000033
）の外側領域における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下
、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる
。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる
。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６の位置７２はプロリ
ン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６の位置３１９はプロリンである。一部の実施形態では
、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000034
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リ
ンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000035
）の外側領域における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下
、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる
。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる
。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の位置７２はプロリ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の位置１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の
位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７７の位置２８０はアラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の位置３１９は
プロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の位置４２６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
７７の位置４３６はアスパラギン酸である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000036
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、リ
ンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000037
）の外側領域における、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下
、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有する、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる
。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９内のリンカーを代替的なリンカーと置き換えることができる
。一部の実施形態では、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の位置３３はアラニ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の位置７２はプロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の位置
２８０はアラニン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の位置３１９はプロリンである。
一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000038
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドの各々は、最
大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の配列を含む、該配列
からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の位置３３は
アラニン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の位置７２はプロリンである。
一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000039
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドの各々は、最
大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の配列を含む、該配列
からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１２９
はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１４６はセリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６１の位置１４８はアラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１５０はアスパラギン酸
、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１８７はバリンである。
一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000040
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドの各々は、最
大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３の配列を含む、該配列
からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３の位置３３は
アラニンである。
一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000041
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドは、最大１０個（例えば、最大９、８、７、
６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）を
もつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列か
らなる。一部の実施形態では、第三のポリペプチド及び第四のポリペプチドの各々は、最
大１０個の 単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の配列を含む、該配
列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の位置７２
はプロリンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000042
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000043
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、最大９、８、７、６、５、
４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、
また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、
２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：７３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実
施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有
するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列から
なり、ただし最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、５個以下
、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾のいずれも、リンカー
（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000044
）の外側領域にはない。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８内のリンカーを代替的なリンカーと置
き換えることができる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最
大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８の配列を含む、該配列
からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８の位置３３は
アラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８の位置７２はプロリン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
７８の位置３１９はプロリンであり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個
の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の配列を含む、該配列からなる
、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の位置３３はアラニン
、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の位置７２はプロリンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000045
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000046
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又
は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：４９の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
１の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、
４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を
リンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000047
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の位置１３４はシス
テイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の
位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の位置４２６はリシン、及びＳ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の位置４３６はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプ
チドの各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の配
列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６１の位置１２９はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１４６はセリン、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１４８はアラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１５０
はアスパラギン酸、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１８７はバリンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000048
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000049
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又
は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：６２の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
１の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個
以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸
修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000050
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の位置１３４はシス
テイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の
位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の位置２８０はアラニン、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：６２の位置４２６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２の位置４３
６はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一ア
ミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１２９はシステイン、Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１４６はセリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１４８
はアラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１５０はアスパラギン酸、及びＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：６１の位置１８７はバリンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000051
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000052
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又
は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：６４の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個
以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸
修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000053
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４の位置３３はアラニ
ンであり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有す
る、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列から
なり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３の位置３３はアラニンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000054
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなるものであり、第三及び第
四のポリペプチドのそれぞれは、
Figure 2022191261000055
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又
は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：６５の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個
以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸
修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000056
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の位置３３はアラニ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の位置１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の
位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６５の位置２８０はアラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の位置４２６は
リシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５の位置４３６はアスパラギン酸であり、第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：６３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６３の位置３３はアラニンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000057
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000058
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又
は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：６６の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
１の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個
以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸
修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000059
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の位置１３４はシス
テイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の
位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の位置３１９はプロリン、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：６６の位置４２６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６の位置４３
６はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一ア
ミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１２９はシステイン、Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１４６はセリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１４８
はアラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１５０はアスパラギン酸、及びＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：６１の位置１８７はバリンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000060
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000061
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又
は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：６７の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
１の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個
以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸
修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000062
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の位置１３４はシス
テイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の
位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の位置２８０はアラニン、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：６７の位置３１８はプロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の位置４２６
はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の位置４３６はアスパラギン酸であり、第三及
び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：６１の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１２９はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１４
６はセリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１４８はアラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６１の位置１５０はアスパラギン酸、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１の位置１８７はバリ
ンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000063
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000064
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又
は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：６８の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個
以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸
修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000065
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の位置３３はアラニ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の位置１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の
位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６８の位置３１９はプロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の位置４２６は
リシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８の位置４３６はアスパラギン酸であり、第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：６３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６３の位置３３はアラニンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000066
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000067
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又
は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：６９の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個
以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸
修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000068
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の位置３３はアラニ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の位置１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の
位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６９の位置２８０はアラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の位置３１９は
プロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９の位置４２６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６９の位置４３６はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大
１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３の配列を含む、該配列か
らなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３の位置３３はア
ラニンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000069
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000070
の配列を含む。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個
（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば
保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８
、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置
換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該
配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個
（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、
８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000071
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の位置７１はプロリ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の位置１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の
位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７１の位置４２６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１の位置４３６
はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミ
ノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の配列を含む、該配列からなる、又は実質
的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の位置７２はプロリンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000072
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000073
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又
は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：７２の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７
０の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個
以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸
修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000074
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の位置７２はプロリ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の位置１３４はシスチン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の位
置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７２の位置４２６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２の位置４３６は
アスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の配列を含む、該配列からなる、又は実質的
に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の位置７２はプロリンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000075
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000076
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又
は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：７４の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７
３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個
以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸
修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000077
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の位置３３はアラニ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の位７２はプロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の位置１
３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：７４の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の位置４２６はリシ
ン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４の位置４３６はアスパラギン酸であり、第三及び第四
のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：７３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：７３の位置３３はアラニン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の位置７２はプロ
リンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000078
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000079
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又
は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：７５の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７
３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個
以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸
修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000080
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の位置３３はアラニ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の位７２はプロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の位置１
３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：７５の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の位置２８０はアラ
ニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５の位置４２６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５
の位置４３６はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の位置３３はアラニ
ン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の位置７２はプロリンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000081
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000082
の配列を含む。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個
（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば
保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８
、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置
換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該
配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個
（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、
８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000083
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６の位置７２はプロリ
ン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６の位置３１９はプロリンであり、第三及び第四のポリ
ペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０
の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：７０の位置７２はプロリンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000084
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000085
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000086
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000087
の配列を含む。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個
（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば
保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、また第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８
、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置
換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該
配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個
（例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、
８個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000088
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の位置７２はプロリ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の位置１３４はシステイン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の
位置１３７はリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の位置１４６はトリプトファン、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７７の位置２８０はアラニン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の位置３１９は
プロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の位置４２６はリシン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
７７の位置４３６はアスパラギン酸であり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大
１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の配列を含む、該配列か
らなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０の位置７２はプ
ロリンである。
一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000089
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペ
プチドの各々は、
Figure 2022191261000090
の配列を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又
は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：７９の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、また第三及び
第四のポリペプチドの各々は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７
３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、
第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０個（例えば、１個以下、２個以下、３個
以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８個以下、９個以下）の単一アミノ酸
修飾をリンカー（例えば、サブ配列
Figure 2022191261000091
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９内のリンカーは代替的なリンカーと置き換えることができる
）の外側領域に有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の配列を含む、該配列からなる、又は実
質的に該配列からなり、第三及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に
該配列からなる。一部の実施形態では、第一及び第二のポリペプチドの各々は、最大１０
個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の配列を含む、該配列からな
る、又は実質的に該配列からなり、ただしＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の位置３３はアラニ
ン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の位置７２はプロリン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の位置
２８０はアラニン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９の位置３１９はプロリンであり、第三
及び第四のポリペプチドの各々は、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有する、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：７３の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなり、ただしＳ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の位置３３はアラニン、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３の位置７
２はプロリンである。一部の実施形態では、Ｆｃコンストラクトは、コンストラクト４、
コンストラクト５、コンストラクト６、コンストラクト７、コンストラクト８、コンスト
ラクト９、コンストラクト１０、コンストラクト１１、コンストラクト１２、コンストラ
クト１３、コンストラクト１４、コンストラクト１５、コンストラクト１６、コンストラ
クト１７、コンストラクト１８、又はコンストラクト１９である。
一部の実施形態では、Ｆｃコンストラクトは、コンストラクト５、コンストラクト６、
コンストラクト７、コンストラクト９、コンストラクト１０、コンストラクト１１、コン
ストラクト１３、コンストラクト１４、コンストラクト１５、コンストラクト１６、コン
ストラクト１７、コンストラクト１８、又はコンストラクト１９である。
一部の実施形態では、第一のポリペプチド、第二のポリペプチド、第三のポリペプチド
、及び／又は第四のポリペプチドの各々は、Ｎ末端ＤのＱへのアミノ酸置換を含む。
第二の態様では、本開示のＦｃコンストラクトは、（ｉ）第一のＦｃドメイン単量体及
び第二のＦｃドメイン単量体を含む、第一のＦｃドメインと、（ｉｉ）第三のＦｃドメイ
ン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体を含む、第二のＦｃドメインとを含み、少なくと
も一つのＦｃドメインが位置Ｉ２５３にアミノ酸修飾を含む。別の態様では、本開示のＦ
ｃコンストラクトは、（ｉ）第一のＦｃドメイン単量体及び第二のＦｃドメイン単量体を
含む、第一のＦｃドメインと、（ｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイ
ン単量体を含む、第二のＦｃドメインとを含み、少なくとも一つのＦｃドメイン単量体が
位置Ｉ２５３にアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、位置Ｉ２５３での各アミノ酸
修飾（例えば、置換）は、Ｉ２５３Ａ、Ｉ２５３Ｃ、Ｉ２５３Ｄ、Ｉ２５３Ｅ、Ｉ２５３
Ｆ、Ｉ２５３Ｇ、Ｉ２５３Ｈ、Ｉ２５３Ｉ、Ｉ２５３Ｋ、Ｉ２５３Ｌ、Ｉ２５３Ｍ、Ｉ２
５３Ｎ、Ｉ２５３Ｐ、Ｉ２５３Ｑ、Ｉ２５３Ｒ、Ｉ２５３Ｓ、Ｉ２５３Ｔ、Ｉ２５３Ｖ、
Ｉ２５３Ｗ、及びＩ２５３Ｙからなる群から独立して選択される。一部の実施形態では、
位置Ｉ２５３でのアミノ酸修飾（例えば、置換）はＩ２５３Ａである。一部の実施形態で
は、Ｆｃコンストラクトは、位置Ｒ２９２に少なくとも一つのアミノ酸修飾（例えば、置
換）を含む。一部の実施形態では、位置Ｒ２９２でのアミノ酸修飾（例えば、置換）は、
Ｒ２９２Ｄ、Ｒ２９２Ｅ、Ｒ２９２Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｒ２９２Ｑ、Ｒ２９２Ｒ、Ｒ２９２
Ｔ、及びＲ２９２Ｙからなる群から選択される。一部の実施形態では、位置Ｒ２９２での
アミノ酸修飾（例えば、置換）はＲ２９２Ｐである。
一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体は、リ
ンカー（例えば、スペーサー）によって結合されている。一部の実施形態では、第二のＦ
ｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体は、リンカー（例えば、スペーサー）に
よって結合されている。一部の実施形態では、各リンカー（例えば、スペーサー）は、
Figure 2022191261000092
を有するポリペプチドから独立して選択される。
一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン単量体及び第二のＦｃドメイン単量体は、第
一のＦｃドメイン単量体及び第二のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補
的な二量体形成選択モジュールを含む。一部の実施形態では、第三のＦｃドメイン単量体
及び第四のＦｃドメイン単量体は、第三のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単
量体間での二量体形成を促進する相補的な二量体形成選択モジュールを含む。
別の態様では、本開示は、（ｉ）第一のＦドメイン単量体及び第二のＦｃドメイン単量
体を含む、第一のＦｃドメインと、（ｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃド
メイン単量体を含む、第二のＦｃドメインとを含み、少なくとも一つのＦｃドメインが位
置Ｒ２９２にアミノ酸修飾を含む、Ｆｃコンストラクトを提供する。別の態様では、本開
示は、（ｉ）第一のＦドメイン単量体及び第二のＦｃドメイン単量体を含む、第一のＦｃ
ドメインと、（ｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体を含む、
第二のＦｃドメインとを含み、少なくとも一つのＦｃドメイン単量体が位置Ｒ２９２にア
ミノ酸置換を含む、Ｆｃコンストラクトを提供する。一部の実施形態では、位置Ｒ２９２
での各アミノ酸修飾（例えば、置換）は、Ｒ２９２Ｄ、Ｒ２９２Ｅ、Ｒ２９２Ｌ、Ｒ２９
２Ｐ、Ｒ２９２Ｑ、Ｒ２９２Ｒ、Ｒ２９２Ｔ、及びＲ２９２Ｙからなる群から独立して選
択される。一部の実施形態では、位置Ｒ２９２でのアミノ酸修飾（例えば、置換）はＲ２
９２Ｐである。一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン
単量体は、リンカーによって結合されている。
一部の実施形態では、第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体は、リ
ンカーによって結合されている。一部の実施形態では、各リンカーは、
Figure 2022191261000093
を有するポリペプチドから独立して選択される。一部の実施形態では、リンカーは、
Figure 2022191261000094
である。
一部の実施形態では、第一のＦｃドメイン単量体及び第二のＦｃドメイン単量体は、第
一のＦｃドメイン単量体及び第二のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補
的な二量体形成選択モジュールを含む。一部の実施形態では、第三のＦｃドメイン単量体
及び第四のＦｃドメイン単量体は、第三のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単
量体間での二量体形成を促進する相補的な二量体形成選択モジュールを含む。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載のＦｃコンストラクトを調製する方法を特徴
とする。該方法には、ａ）本開示のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む宿
主細胞を提供することと、ｂ）Ｆｃコンストラクトの形成を許容する条件下で該宿主細胞
中でポリペプチドを発現することと、ｃ）Ｆｃコンストラクトを回収することとが含まれ
る。
別の態様では、本開示は、ａ）ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第二のＦｃドメ
イン単量体、及びｉｉｉ）第一のＦｃドメイン単量体を第二のＦｃドメイン単量体に結合
させるリンカーを含む第一のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、ｉｉ
）第四のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体を第四のＦｃドメ
イン単量体に結合させるリンカーを含む第二のポリペプチドと、ｃ）第五のＦｃドメイン
単量体を含む第三のポリペプチドと、ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペ
プチドとを含むＦｃコンストラクトを提供し、ここで第一のＦｃドメイン単量体及び第五
のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第一のＦｃドメインを形成し、第二のＦｃドメイ
ン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、
ならびに第三のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第三
のＦｃドメインを形成し、ここで少なくとも一つのＦｃドメインが位置Ｉ２５３でアミノ
酸修飾を含み、ここで第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000095
の配列を含み、前記第三及び第四のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000096
の配列を含む。別の態様では、本開示は、ａ）ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第
二のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第一のＦｃドメイン単量体を第二のＦｃドメイン
単量体に結合させるリンカーを含む第一のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第三のＦｃドメイン
単量体、ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体を第
四のＦｃドメイン単量体に結合させるリンカーを含む第二のポリペプチドと、ｃ）第五の
Ｆｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む
第四のポリペプチドとを含むＦｃコンストラクトを提供し、ここで第一のＦｃドメイン単
量体及び第五のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第一のＦｃドメインを形成し、第二
のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第二のＦｃドメイ
ンを形成し、ならびに第三のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体は組み合
わされて第三のＦｃドメインを形成し、ここで第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000097
の配列を含み、前記第三及び第四のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000098
の配列を含む。
別の態様では、本開示は、ａ）ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第二のＦｃドメ
イン単量体、及びｉｉｉ）第一のＦｃドメイン単量体を第二のＦｃドメイン単量体に結合
させるリンカーを含む第一のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、ｉｉ
）第四のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体を第四のＦｃドメ
イン単量体に結合させるリンカーを含む第二のポリペプチドと、ｃ）第五のＦｃドメイン
単量体を含む第三のポリペプチドと、ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペ
プチドとを含むＦｃコンストラクトを提供し、ここで第一のＦｃドメイン単量体及び第五
のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第一のＦｃドメインを形成し、第二のＦｃドメイ
ン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、
ならびに第三のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第三
のＦｃドメインを形成し、ここで少なくとも一つのＦｃドメインが位置Ｉ２５３でアミノ
酸修飾を含み、ここで第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000099
の配列を含み、前記第三及び第四のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000100
の配列を含む。別の態様では、本開示は、ａ）ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第
二のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第一のＦｃドメイン単量体を第二のＦｃドメイン
単量体に結合させるリンカーを含む第一のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第三のＦｃドメイン
単量体、ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体を第
四のＦｃドメイン単量体に結合させるリンカーを含む第二のポリペプチドと、ｃ）第五の
Ｆｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む
第四のポリペプチドとを含むＦｃコンストラクトを提供し、ここで第一のＦｃドメイン単
量体及び第五のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第一のＦｃドメインを形成し、第二
のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第二のＦｃドメイ
ンを形成し、ならびに第三のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体は組み合
わされて第三のＦｃドメインを形成し、ここで第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000101
の配列を含み、前記第三及び第四のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000102
の配列を含む。
別の態様では、本開示は、ａ）ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第二のＦｃドメ
イン単量体、及びｉｉｉ）第一のＦｃドメイン単量体を第二のＦｃドメイン単量体に結合
させるリンカーを含む第一のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、ｉｉ
）第四のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体を第四のＦｃドメ
イン単量体に結合させるリンカーを含む第二のポリペプチドと、ｃ）第五のＦｃドメイン
単量体を含む第三のポリペプチドと、ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペ
プチドとを含むＦｃコンストラクトを提供し、ここで第一のＦｃドメイン単量体及び第五
のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第一のＦｃドメインを形成し、第二のＦｃドメイ
ン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、
ならびに第三のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第三
のＦｃドメインを形成し、ここで少なくとも一つのＦｃドメインが位置Ｒ２９２でアミノ
酸修飾を含み、ここで第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000103
の配列を含み、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000104
の配列を含む。別の態様では、本開示は、ａ）ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、ｉｉ）第
二のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第一のＦｃドメイン単量体を第二のＦｃドメイン
単量体に結合させるリンカーを含む第一のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第三のＦｃドメイン
単量体、ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及びｉｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体を第
四のＦｃドメイン単量体に結合させるリンカーを含む第二のポリペプチドと、ｃ）第五の
Ｆｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む
第四のポリペプチドとを含むＦｃコンストラクトを提供し、ここで第一のＦｃドメイン単
量体及び第五のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第一のＦｃドメインを形成し、第二
のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体は組み合わされて第二のＦｃドメイ
ンを形成し、ならびに第三のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体は組み合
わされて第三のＦｃドメインを形成し、ここで第一及び第二のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000105
の配列を含み、第三及び第四のポリペプチドの各々は、
Figure 2022191261000106
の配列を含む。
本明細書に記載のいずれかのＦｃコンストラクトの一部の実施形態では、各Ｆｃドメイ
ンは、独立して、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ３ Ｆｃド
メイン、ＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、又はそれらの組み合わせである。本明細書に記載のい
ずれかのＦｃコンストラクトの一部の実施形態では、各Ｆｃドメインは、独立して、最大
１０個（例えば、最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０）の単一アミノ酸
修飾を有する、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ３ Ｆｃドメ
イン、ＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、又はそれらの組み合わせである。一部の実施形態では、
各Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。一部の実施形態では、各Ｆｃドメイ
ンは、ＩｇＧ２ Ｆｃドメインである。一部の実施形態では、各Ｆｃドメインは、ＩｇＧ
３ Ｆｃドメインである。一部の実施形態では、第一、第二、及び第三のＦｃドメインの
各々は、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。一部の実施形態では、各Ｆｃドメインは、ヒト
ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。一部の実施形態では、各Ｆｃドメインは、最大１０個（
例えば、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、５個以下、６個以下、７個以下、８
個以下、９個以下）の単一アミノ酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２を含む。
本明細書に記載のいずれかのＦｃコンストラクトの一部の実施形態では、一つ又は複数
のＦｃドメイン単量体は、最大１０個（例えば、最大１、２、３、４、５、６、７、８、
９又は１０）のアミノ酸修飾を有するヒトＩｇＧ Ｆｃドメイン単量体である。本明細書
に記載のいずれかのＦｃコンストラクトの一部の実施形態では、各Ｆｃドメイン単量体は
１０個以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０以下）のアミノ酸
修飾を有する。本明細書に記載のいずれかのＦｃコンストラクトの一部の実施形態では、
各Ｆｃ単量体は、１０個以下（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０
以下）のアミノ酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２の配列を含む。本明細書に記載
のいずれかのＦｃコンストラクトの一部の実施形態では、各Ｆｃ単量体は、５個のアミノ
酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２の配列を含む。本明細書に記載のいずれかのＦ
ｃコンストラクトの一部の実施形態では、各Ｆｃ単量体は、１０個のアミノ酸修飾を有す
るＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２の配列を含む。本明細書に記載のいずれかのＦｃコンストラ
クトの一部の実施形態では、各Ｆｃ単量体は、８個のアミノ酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：４２の配列を含む。それぞれの場合、修飾は、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２
９２Ｐの一方又は両方を含み得る。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載のＦｃコンストラクトを発現する宿主細胞を
特徴とする。該宿主細胞は、本開示のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む
ものであって、該ポリヌクレオチドは、宿主細胞内で発現される。
別の態様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３～７９からなる群から選択される
アミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。別の態様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：４９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１～７９からなる群から選択されるアミノ酸配列
を含むポリペプチドを提供する。
別の態様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８を含む又はからなる組成物、及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む又はからなるポリペプチドを提供する。別の態様では、
本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９を含む又はからなる組成物、及びＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：６１を含む又はからなるポリペプチドを提供する。別の態様では、本開示は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６２を含む又はからなる組成物、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む又
はからなるポリペプチドを提供する。別の態様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
４を含む又はからなる組成物、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む又はからなるポリペ
プチドを提供する。別の態様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５を含む又はから
なる組成物、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む又はからなるポリペプチドを提供する
。別の態様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７を含む又はからなる組成物、及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む又はからなるポリペプチドを提供する。別の態様では、
本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８を含む又はからなる組成物、及びＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：６３を含む又はからなるポリペプチドを提供する。別の態様では、本開示は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６９を含む又はからなる組成物、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む又
はからなるポリペプチドを提供する。別の態様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７
２を含む又はからなる組成物、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０を含む又はからなるポリペ
プチドを提供する。別の態様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４を含む又はから
なる組成物、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む又はからなるポリペプチドを提供する
。別の態様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５を含む又はからなる組成物、及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む又はからなるポリペプチドを提供する。別の態様では、
本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７を含む又はからなる組成物、及びＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：７０を含む又はからなるポリペプチドを提供する。別の態様では、本開示は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７９を含む又はからなる組成物、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む又
はからなるポリペプチドを提供する。別の態様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７
６を含む又はからなる組成物、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０を含む又はからなるポリペ
プチドを提供する。
一部の実施形態では、組成物は、１．１：１～１：１．１のモル比で存在するリストさ
れた第一及び第二のポリペプチドを含む。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載される組成物のいずれか一つを患者へ投与す
ることを含む、患者を治療する方法を提供する。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃ
ドメインを有するＦｃコンストラクト）の実質的に均質（例えば、少なくとも８５％、９
０％、９５％、９７％、９８％、９９％均質）な集団を含む医薬組成物、又は、本明細書
に記載のＦｃコンストラクトの実質的に均質な集団（例えば、三つのＦｃドメインを有す
るＦｃコンストラクトの実質的に均質な集団を含む組成物）と一つ又は複数の薬学的に許
容できる担体もしくは賦形剤とを含む組成物を特徴とする。こうした医薬組成物は、Ｆｃ
コンストラクトの実質的な凝集又は望まない多量体形成なしに作製することができる。
いくつかの態様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６を含むポリペプチド、及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０を含むポリペプチドを含む組成物を提供する。いくつかの態様
では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８を含むポリペプチド、及びＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：７３を含むポリペプチドを含む組成物を提供する。いくつかの態様では、本開示は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９を含むポリペプチド、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含むポ
リペプチドを含む組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載される組成物のいずれか一つを患者へ
投与することを含む、患者を治療する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６をコードする核酸配列、及
びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０をコードする核酸配列を含む細胞を提供する。いくつかの態
様では、本開示は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８をコードする核酸配列、及びＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：７３をコードする核酸配列を含む細胞を提供する。いくつかの態様では、本開示
は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９をコードする核酸配列、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を
コードする核酸配列を含む細胞を提供する。いくつかの態様では、本開示は、本明細書に
記載されるＦｃコンストラクトのいずれか一つをコードする核酸配列を含む細胞を提供す
る。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃ
ドメインを有するＦｃコンストラクト）又は本明細書に記載のＦｃコンストラクトの実質
的に均質な集団を含む組成物（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト
の実質的に均質な集団を含む組成物）を、対象に投与することを含む、対象において免疫
応答の免疫細胞活性化を軽減する方法を特徴とする。一部の実施形態においては、対象は
自己免疫疾患を有する。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃ
ドメインを有するＦｃコンストラクト）又は本明細書に記載のＦｃコンストラクトの実質
的に均質な集団を含む組成物（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト
の実質的に均質な集団を含む組成物）を、対象に投与することを含む、対象における炎症
又は炎症性疾患を治療する方法を特徴とする。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃ
ドメインを有するＦｃコンストラクト）又は本明細書に記載のＦｃコンストラクトの実質
的に均質な集団を含む組成物（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト
の実質的に均質な集団を含む組成物）を、対象に投与することを含む、対象において自己
抗体のクリアランスを促進する又は抗原提示を抑制する方法を特徴とする。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメ
インを有するＦｃコンストラクト）を投与することによって治療され得る例示的な疾患に
は、関節リウマチ（ＲＡ）；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；ＡＮＣＡ関連血管炎；
抗リン脂質抗体症候群；自己免疫性溶血性貧血；慢性炎症性脱髄性神経障害；移植におけ
る抗アロ、ＧＶＨＤにおける抗自己、抗置換、ＩｇＧ治療、ＩｇＧパラプロテインのクリ
アランス；皮膚筋炎；グッドパスチャー症候群；抗体依存性細胞媒介細胞障害を介して媒
介される器官系標的のＩＩ型過敏症候群、例えばギラン・バレー症候群、ＣＩＤＰ、皮膚
筋炎、フェルティ症候群、抗体媒介性拒絶反応、自己免疫性甲状腺疾患、潰瘍性大腸炎、
自己免疫性肝疾患；突発性血小板減少性紫斑病；重症筋無力症、視神経脊髄炎；天疱瘡及
び他の自己免疫性水疱性疾患；シェーグレン症候群；抗体依存性ファゴサイトーシスを介
して媒介される自己免疫性血球減少症及び他の障害；例えば滑膜炎、皮膚筋炎、全身性血
管炎、糸球体炎及び血管炎である他のＦｃＲ依存性炎症症候群を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクトは、抗原認識領域、例えば
可変領域又は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含まない。一部の実施形態では、Ｆｃコンスト
ラクト（又はＦｃコンストラクト内のＦｃドメイン）は、異なるポリペプチド内に存在す
る、Ｆｃドメイン単量体の会合によって全体的に又は一部形成される。一部の実施形態で
は、本明細書に記載のＦｃコンストラクトは、抗原認識領域、例えば可変領域又はＣＤＲ
を含む。或る実施形態では、Ｆｃコンストラクトは、二つのポリペプチドの会合を促進す
る追加ドメイン（例えば、ＩｇＭテールピース（ｔａｉｌｐｉｅｃｅ）又はＩｇＡテール
ピース）を含まない。他の実施形態では、連結してＦｃドメインを形成する二つのＦｃド
メイン単量体の間にのみ、Ｆｃコンストラクト内に共有結合が存在する。他の実施形態で
は、Ｆｃコンストラクトは、Ｆｃドメイン間に共有結合を含まない。さらに他の実施形態
では、Ｆｃコンストラクトは、Ｆｃコンストラクト内のＦｃドメインのすべて又は実質的
にすべてが、細胞表面上のＦｃ受容体と同時に相互作用することができるよう十分な構造
的柔軟性を備える。一実施形態では、ドメイン単量体は、一次配列が野生型と異なるか、
又は互いに異なるものであって、それらは、二量体形成選択モジュールを有する。
コンストラクトのＦｃドメインのＦｃドメイン単量体は、同一の一次アミノ酸配列を有
することが可能である。例えば、ＦｃドメインのＦｃドメイン単量体は両方とも同一の二
量体形成選択モジュールを有してよく、例えばＦｃドメインのＦｃドメイン単量体が両方
とも、ＣＨ３ドメイン間の界面において電荷をもつ残基の環の範囲内の少なくとも二つの
位置において同一の逆電荷の変異を有することができる。一部の実施形態では、第一のポ
リペプチド及び第二のポリペプチドは、同一のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態で
は、第三及び第四のポリペプチドは、同一のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では
、第一のＦｃドメイン単量体の配列は、第五のＦｃドメイン単量体の配列とは異なる。一
部の実施形態では、第三のＦｃドメイン単量体の配列は、第六のＦｃドメイン単量体の配
列とは異なる。一部の実施形態では、第二のＦｃドメイン単量体の配列は、第四のＦｃド
メイン単量体の配列と同じである。
本明細書に記載のＦｃコンストラクトのいずれかにおいては、或るコンストラクトのＦ
ｃドメインのＦｃドメイン単量体は、二つのＦｃドメイン単量体間（すなわち、Ｆｃコン
ストラクトのＦｃドメイン単量体と他の単量体との間）において、異なる配列、例えば２
０以下、１５以下、１０以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下又は２
以下のアミノ酸である、２０以下のアミノ酸（例えば、１５以下、１０以下のアミノ酸）
だけ異なる配列を有することが可能である。例えば、Ｆｃコンストラクトのいずれかの相
補的な二量体形成選択モジュールが、ドメイン単量体の一方のＣＨ３抗体定常ドメイン内
に操作された空洞と、Ｆｃドメイン単量体の他方のＣＨ３抗体定常ドメイン内に操作され
た突起とを含むことが可能であり、該操作された空洞及び該操作された突起は位置決めさ
れて、Ｆｃドメイン単量体の空洞に突起が挿入された対を形成することにより、本明細書
に記載のコンストラクトのＦｃドメイン単量体配列は異なるものであってよい。一部の実
施形態では、Ｆｃコンストラクトは、ＣＨ３ドメイン内のアミノ酸修飾を含む。一部の実
施形態では、Ｆｃコンストラクトは、選択的二量体化のためのＦｃドメイン単量体（一つ
又は複数のＦｃドメイン単量体）のＣＨ３内のアミノ酸修飾を含む。例示的な操作された
空洞及び突起を表１に示している。他の実施形態では、相補的な二量体形成選択モジュー
ルは、ドメイン単量体の一方のＣＨ３抗体定常ドメイン内に操作された（置換された）負
電荷をもつアミノ酸と、Ｆｃドメイン単量体の他方のＣＨ３抗体定常ドメイン内に操作さ
れた（置換された）正電荷をもつアミノ酸とを含むものであって、負電荷をもつアミノ酸
及び正電荷をもつアミノ酸は位置決めされて、相補的なドメイン単量体間においてＦｃド
メインの形成を促進する。例示的な相補的アミノ酸の変更を表２Ａ～２Ｃに示している。
一部の実施形態では、一つ又は複数のＦｃドメイン単量体は、同じ配列である。一部の実
施形態では、一つ又は複数のＦｃドメイン単量体は、同じ修飾を有する。一部の実施形態
では、一つ、二つ、三つ、又は四つのＦｃドメイン単量体だけが、同じ修飾を有する。
一部の場合では、Ｆｃドメインは少なくとも一つのアミノ酸修飾を含むものであって、
該アミノ酸修飾は、（ｉ）一つ又は複数のＦｃ受容体に対する結合親和性、（ｉｉ）エフ
ェクター機能、（ｉｉｉ）Ｆｃドメインの硫酸化のレベル、（ｉｖ）半減期、（ｖ）プロ
テアーゼ耐性、（ｖｉ）Ｆｃドメイン安定性、及び／又は、（ｖｉｉ）分解に対する感度
、の一つ又は複数を変える（例えば、修飾されていないＦｃドメインと比較して）。一部
の場合では、Ｆｃドメインは１６以下のアミノ酸修飾（例えば、２以下、３以下、４以下
、５以下、６以下、７以下、８以下、９以下、１０以下、１１以下、１２以下、１３以下
、１４以下、１５以下又は１６以下のアミノ酸修飾）を含む。一部の場合では、Ｆｃドメ
インは１６以下のアミノ酸修飾（例えば、ＣＨ３ドメインにおける２以下、３以下、４以
下、５以下、６以下、７以下、８以下、９以下、１０以下、１１以下、１２以下、１３以
下、１４以下、１５以下又は１６以下のアミノ酸修飾）を含む。
本開示はまた、本明細書に記載の任意のＦｃコンストラクトの実質的に均質な集団を含
む医薬組成物を特徴とする。一実施形態では、医薬品使用適格の滅菌注射器又はバイアル
が、医薬組成物を含有するものであって、唯一の活性成分又は主要活性成分が、本明細書
に記載のＦｃコンストラクトのいずれか一つの実質的に均質な集団である。該医薬組成物
は、例えば塩類、界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）、界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎ
ｔ）、充填剤、ポリマー、防腐剤及び他の医薬品賦形剤から選択される、一つ又は複数の
不活性成分を含んでもよい。
一部の実施形態では、Ｆｃコンストラクトは、異なるポリペプチド内に存在するＦｃド
メイン単量体の会合によって、少なくとも一部形成される。或る実施形態では、Ｆｃコン
ストラクトは、異なるポリペプチド内に存在するＦｃドメイン単量体の会合によって、形
成される。これら実施形態では、Ｆｃコンストラクトは、二つのポリペプチドの会合を促
進する追加ドメイン（例えば、ＩｇＭテールピース又はＩｇＡテールピース）を含まない
。他の実施形態では、連結してＦｃドメインを形成する二つのＦｃドメイン単量体の間に
のみ、共有結合（例えば、ジスルフィド架橋）が存在する。他の実施形態では、Ｆｃコン
ストラクトは、Ｆｃドメイン間に共有結合（例えば、ジスルフィド架橋）を含まない。さ
らに他の実施形態では、Ｆｃコンストラクトは、Ｆｃコンストラクト内のＦｃドメインの
すべて又は実質的にすべてが、細胞表面上のＦｃ受容体と同時に相互作用することができ
るように十分な構造的柔軟性を備える。これら実施形態のいずれかの或る実施形態では、
Ｆｃコンストラクトは、リンカー（例えば、柔軟なアミノ酸スペーサー）を介して連結す
る少なくとも二つのＦｃドメインを含む。
別の態様では、本開示は、Ｆｃドメイン単量体の選択的な二量体形成を促進する組成物
及び方法を特徴とする。本開示は、Ｆｃドメインを含み、該Ｆｃドメインの二つのＦｃド
メイン単量体は、ＣＨ３抗体定常ドメイン間の界面において電荷をもつ残基の環の範囲内
の少なくとも二つの位置において同一の変異を含む。本開示はまた、こうしたＦｃドメイ
ンの作製方法を含み、ＣＨ３抗体定常ドメイン間の界面において電荷をもつ残基の環の範
囲内の少なくとも二つの位置において二つのＦｃドメイン単量体配列内に同一の変異を有
する相補的な二量体形成選択モジュールを導入することを含む。ＣＨ３抗体定常ドメイン
間の界面は、電荷をもつ残基の環により包囲される疎水性パッチからなる。一つのＣＨ３
抗体定常ドメインが他と一体となるとき、これら電荷をもつ残基は、反対の電荷をもつ残
基と共に対を形成する。残基の２以上の相補的な対の両要素の電荷が反転していることに
よって、変異したＦｃドメイン単量体は同じ変異の配列のＦｃドメイン単量体に対して相
補性を維持するが、こうした変異なしではＦｃドメイン単量体に対する相補性はより小さ
い。この実施形態では、同一の二量体形成選択モジュールが、ホモ二量体形成を促進する
。こうしたＦｃドメインは、二重変異体である、Ｋ４０９Ｄ／Ｄ３９９Ｋ、Ｋ３９２Ｄ／
Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ／Ｋ３７０Ｅ、Ｄ３５６Ｋ／Ｋ４３９Ｄ、Ｋ４０９Ｅ／Ｄ３９９
Ｋ、Ｋ３９２Ｅ／Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ／Ｋ３７０Ｄ又はＤ３５６Ｋ／Ｋ４３９Ｅを含
有するＦｃドメイン単量体を含む。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、例えばＫ４０９
Ｄ／Ｄ３９９Ｋ／Ｅ３５７Ｋ／Ｋ３７０Ｅである二重変異体の任意の対を結合した四重変
異体を含むＦｃドメイン単量体を含む。
別の実施形態では、同一の二量体形成選択モジュールに加えて、ＦｃドメインのＦｃド
メイン単量体は、特定の会合を促進する非同一の変異（例えば、操作された空洞と突起）
を有する相補的な二量体形成選択モジュールを有する。結果として、二つのＦｃドメイン
単量体が、二つの二量体形成選択モジュールを含み、互いに対して相補性を維持するが、
他のＦｃドメイン単量体に対する相補性は小さい。この実施形態は、空洞含有Ｆｃドメイ
ンと突起含有Ｆｃドメイン単量体との間でのヘテロ二量体形成を促進する。一実施例では
、両Ｆｃドメイン単量体の電荷をもつ対の残基内の非同一の変異を有する相補的な二量体
形成選択モジュールが、一方のＦｃドメイン単量体上の突起及び他方のＦｃドメイン単量
体上の空洞と組み合わされる。
本明細書に記載のＦｃコンストラクトのいずれかにおいては、Ｆｃドメイン単量体の順
序は入れ替え可能であるということが理解される。例えば、リンカーによって第二のＦｃ
ドメイン単量体に接続された第一のＦｃドメイン単量体を有するポリペプチドでは、第一
のＦｃドメイン単量体のカルボキシ末端をリンカーのアミノ末端に結合させることができ
、これは今度はそのカルボキシ末端で第二のＦｃドメイン単量体のアミノ末端に結合され
る。別の方法として、第二のＦｃドメイン単量体のカルボキシ末端は、リンカーのアミノ
末端に結合することができ、これは今度はそのカルボキシ末端で第一のドメイン単量体の
アミノ末端に結合される。これらの構成の両方が本開示に包含される。
定義：
本明細書において、「Ｆｃドメイン単量体」という語は、少なくとも一つのヒンジドメ
イン（又はその部分）と第二の抗体定常ドメイン及び第三の抗体定常ドメイン（ＣＨ２及
びＣＨ３）を含むポリペプチド鎖又はその機能的断片（例えば、（ｉ）他のＦｃドメイン
単量体と二量体形成してＦｃドメインを形成することと、（ｉｉ）Ｆｃ受容体と結合する
こととが可能である断片）を指す。Ｆｃドメイン単量体は、例えばヒト、マウス又はラッ
トである、様々な起源のものとすることが可能である。Ｆｃドメイン単量体は、ＩｇＧ、
ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ又はＩｇＤを含む、任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプとす
ることが可能である（例えば、ＩｇＧ）。さらに、Ｆｃドメイン単量体は、ＩｇＧサブタ
イプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）とすること
が可能である（例えば、ＩｇＧ１）。Ｆｃドメイン単量体は、抗原認識領域、例えば可変
領域又は相補性決定領域（ＣＤＲ）として機能することが可能である免疫グロブリンの部
分を何も含まない。Ｆｃドメイン単量体は、１０個もの野生型Ｆｃドメイン単量体配列か
らの変更（例えば、単一アミノ酸修飾）を含有することが可能であり（例えば、１～１０
個、１～８個、１～６個、１～４個のアミノ酸置換、付加又は欠失）、該変更は、Ｆｃド
メインとＦｃ受容体間の相互作用を変える。好適な変更の例は、この技術分野で公知であ
る。
本明細書において、「Ｆｃドメイン」という語は、Ｆｃ受容体を結合することが可能で
ある二つのＦｃドメイン単量体による二量体を指す。野生型Ｆｃドメインでは、二つのＦ
ｃドメイン単量体が二つのＣＨ３抗体定常ドメイン間の相互作用によって二量体形成する
のみならず、二量体形成している二つのＦｃドメイン単量体のヒンジドメイン間に、一つ
又は複数のジスルフィド結合を形成する。
本開示では、「Ｆｃコンストラクト」という語は、本明細書に記載のＦｃドメインを形
成する会合したポリペプチド鎖を指す（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンス
トラクト）。本明細書に記載されるＦｃコンストラクトは、同一又は異なる配列を有する
Ｆｃドメイン単量体を含むことが可能である。例えば、Ｆｃコンストラクトは三つのＦｃ
ドメインを有することが可能であり、その二つがＩｇＧ１又はＩｇＧ１由来のＦｃドメイ
ン単量体を含み、三つ目がＩｇＧ２又はＩｇＧ２由来のＦｃドメイン単量体を含む。別の
例では、Ｆｃコンストラクトは三つのＦｃドメインを有することが可能であり、その二つ
が「空洞に突起が挿入された対」を含み、三つ目は「空洞に突起が挿入された対」を含ま
ない。本開示では、Ｆｃドメインは例えばＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ又はＨＶＲである抗体可変
領域を含まない。Ｆｃドメインは、例えばＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ
、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩｂ、ＦｃγＲＩＶであるＦｃ受容体と結合する最小
限の構造を形成する。一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクトは、抗
原認識領域、例えば可変領域又は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含まない。一部の実施形態
では、本明細書に記載のＦｃコンストラクトは、抗原認識領域、例えば可変領域又はＣＤ
Ｒを含む。
本明細書において、「抗体定常ドメイン」という語は、抗体の定常領域ドメイン（例え
ば、ＣＬ抗体定常ドメイン、ＣＨ１抗体定常ドメイン、ＣＨ２抗体定常ドメイン、又はＣ
Ｈ３抗体定常ドメイン）に相当するポリペプチドを指す。
本明細書において、「促進する」という語は、例えば他の別個のＦｃドメイン単量体に
対するよりも、互いに高い結合親和性を有する二つのＦｃドメイン単量体でＦｃドメイン
を形成することを支持するといったように、促すこと及び支持することを意味する。本明
細書に記載するように、結合してＦｃドメインを形成する二つのＦｃドメイン単量体は、
それらの各ＣＨ３抗体定常ドメインの界面において適合可能なアミノ酸修飾（例えば、操
作された突起及び操作された空洞）を有することが可能である。適合可能なアミノ酸修飾
は、こうしたアミノ酸修飾を有さない、又は適合しないアミノ酸修飾をもつ他のＦｃドメ
イン単量体よりも、こうしたＦｃドメイン単量体同士での選択的な相互作用を促進する又
は支持する。これは、相互作用する二つのＣＨ３抗体定常ドメインの界面におけるアミノ
酸修飾に起因して、Ｆｃドメイン単量体が、アミノ酸修飾を有さない他のＦｃドメイン単
量体に対するよりも互いに対して高い親和性を有することを理由に起こる。
本明細書において、「二量体形成選択モジュール」という語は、二つのＦｃドメイン単
量体間の好都合な対形成を促進するＦｃドメイン単量体の配列を指す。「相補的」な二量
体形成選択モジュールは、二つのＦｃドメイン単量体の互いに対する選択的な相互作用を
促進する又は支持する二量体形成選択モジュールである。相補的な二量体形成選択モジュ
ールは、同一の配列又は異なる配列を有することが可能である。例示的な相補的な二量体
形成選択モジュールを本明細書に記載している。
本明細書において、「操作された空洞」という語は、ＣＨ３抗体定常ドメイン内の本来
のアミノ酸残基の少なくとも一つが、本来のアミノ酸残基よりも低分子量の側鎖を有する
異なるアミノ酸残基で置換されることによって、ＣＨ３抗体定常ドメイン内に形成された
三次元の空洞を指す。「本来のアミノ酸残基」という語は、野生型のＣＨ３抗体定常ドメ
インの遺伝コードによってコードされた天然のアミノ酸残基を指す。
本明細書において、「操作された突起」という語は、ＣＨ３抗体定常ドメイン内の本来
のアミノ酸残基の少なくとも一つが、本来のアミノ酸残基よりも高分子量の側鎖を有する
異なるアミノ酸残基で置換されることによって、ＣＨ３抗体定常ドメイン内に形成された
三次元の突起を指す。「本来のアミノ酸残基」という語は、野生型のＣＨ３抗体定常ドメ
インの遺伝コードによってコードされた天然のアミノ酸残基を指す。
「空洞に突起が挿入された対」という語は、第一のＦｃドメイン単量体がそのＣＨ３抗
体定常ドメイン内に操作された空洞を含む一方で、第二のＦｃドメイン単量体がそのＣＨ
３抗体定常ドメイン内に操作された突起を含むものである二つのＦｃドメイン単量体を含
んだＦｃドメインを説明するものである。空洞に突起が挿入された対においては、第一の
Ｆｃドメイン単量体のＣＨ３抗体定常ドメイン内の操作された突起は、該突起と第二のＦ
ｃドメイン単量体のＣＨ３抗体定常ドメイン内の操作された空洞とが、ＣＨ３抗体定常ド
メイン間の界面における二量体の正常な会合を有意に妨害することなく相互作用するよう
に配置される。
本明細書において、「ヘテロ二量体Ｆｃドメイン」という語は、二つのＦｃドメイン単
量体のヘテロ二量体形成によって形成されるＦｃドメインを指すものであって、該二つの
Ｆｃドメイン単量体は、これら二つのＦｃドメイン単量体の好ましい形成を促進する異な
る逆電荷の変異（例えば、表２Ａの変異を参照）を含有する。図１及び２に示すように、
三つのＦｃドメインである、一つのカルボキシル末端「幹」Ｆｃドメインと二つのアミノ
末端「枝」Ｆｃドメインとを有するＦｃコンストラクトにおいては、アミノ末端「枝」Ｆ
ｃドメインのそれぞれが、ヘテロ二量体のＦｃドメイン（「枝ヘテロ二量体Ｆｃドメイン
」とも称する）となり得る（例えば、図１のＦｃドメイン単量体１０６及び１１４又はＦ
ｃドメイン単量体１１２及び１１６によって形成されるヘテロ二量体Ｆｃドメイン、図２
のＦｃドメイン単量体２０６及び２１４又はＦｃドメイン単量体２１２及び２１６によっ
て形成されるヘテロ二量体Ｆｃドメイン）。
本明細書において、「ホモ二量体Ｆｃドメイン」という語は、二つのＦｃドメイン単量
体のホモ二量体形成によって形成されるＦｃドメインを指すものであって、該二つのＦｃ
ドメイン単量体は、同一の逆電荷の変異（例えば、表２Ｂ及び２Ｃの変異を参照）を含有
する。図１及び２に示すように、三つのＦｃドメインである、一つのカルボキシル末端「
幹」Ｆｃドメインと二つのアミノ末端「枝」Ｆｃドメインとを有するＦｃコンストラクト
においては、カルボキシ末端「幹」Ｆｃドメインが、ホモ二量体のＦｃドメイン（「幹ホ
モ二量体Ｆｃドメイン」とも称する）であり得る（例えば、図１のＦｃドメイン単量体１
０４及び１１０によって形成されるホモ二量体Ｆｃドメイン、図２のＦｃドメイン単量体
２０４及び２１０によって形成されるホモ二量体Ｆｃドメイン）。
本明細書において、「ヘテロ二量体形成選択モジュール」という語は、適合するヘテロ
二量体形成選択モジュールを有する二つのＦｃドメイン単量体の好ましいヘテロ二量体形
成を促進するために、Ｆｃドメイン単量体のＣＨ３抗体定常ドメイン内に作製することが
可能である、操作された突起、操作された空洞及び特定の逆電荷のアミノ酸置換を指す。
ヘテロ二量体形成選択モジュールを含有するＦｃドメイン単量体が結合して、ヘテロ二量
体Ｆｃドメインを形成し得る。ヘテロ二量体形成選択モジュールの例を、表１及び２Ａに
示している。
本明細書において、「ホモ二量体形成選択モジュール」という語は、Ｆｃドメイン単量
体のホモ二量体形成を促進してホモ二量体Ｆｃドメインを形成するＣＨ３ドメイン間の界
面において電荷をもつ残基の環の範囲内の少なくとも二つの位置におけるＦｃドメイン単
量体内の逆電荷の変異を指す。ホモ二量体形成選択モジュールの例を、表２Ａ及び２Ｂに
示している。
本明細書において、「連結する」という語は、化学的な連結、組換え手段ならびに例え
ばジスルフィド結合及びアミド結合である化学結合を含む手段によって、２以上の成分、
要素、成分又は例えばポリペプチドであるタンパク質ドメインを組み合わせる又は付加す
ることを説明するために用いる。例えば、二つの単一ポリペプチドを結合して、化学的な
連結、化学結合、ペプチドリンカー又はその他の共有結合手段を介して、一つの隣接し合
うタンパク質構造を形成することが可能である。一部の実施形態では、第一のＦｃドメイ
ン単量体が、ペプチドリンカーを介して第二のＦｃドメイン単量体に連結するものであっ
て、該ペプチドリンカーのＮ末端が、例えばペプチド結合である化学結合を介して、第一
のＦｃドメイン単量体のＣ末端に連結し、またペプチドリンカーのＣ末端が、例えばペプ
チド結合である化学結合を介して、第二のＦｃドメイン単量体のＮ末端に連結する。他の
実施形態では、アルブミン結合ペプチドのＮ末端が、上記に記載したものと同一の方式で
、リンカーを介してＦｃドメイン単量体のＣＨ３抗体定常ドメインのＣ末端に連結する。
本明細書において、「会合した」という語は、ポリペプチド（又は一つの単一ポリペプ
チド内の配列）が、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメイン
を有するＦｃコンストラクト）を形成するように位置されるように、例えば水素結合、疎
水性相互作用又はイオン性相互作用であるポリペプチド（又は一つの単一ポリペプチド内
の配列）間の相互作用を説明するために用いる。例えば、一部の実施形態では、例えば二
つのＦｃドメイン単量体をそれぞれ含む二つのポリペプチドと、一つのＦｃドメイン単量
体をそれぞれ含む二つのポリペプチドとである四つのポリペプチドが会合して、三つのＦ
ｃドメインを有するＦｃコンストラクトを形成する（例えば、図１及び２に図示するとお
り）。四つのポリペプチドは、それらの各Ｆｃドメイン単量体を介して会合することが可
能である。ポリペプチド間の会合は、共有結合相互作用を含まない。
本明細書において、「リンカー」という語は、二つの要素間、例えばタンパク質ドメイ
ン間の結合を指す。リンカーは、共有結合又はスペーサーとすることが可能である。「結
合」という語は、化学結合、例えばアミド結合もしくはジスルフィド結合、又は、例えば
化学的な連結である化学反応により形成される任意の種類の結合を指す。「スペーサー」
という語は、二つのポリペプチド又はポリペプチドドメイン間に生じて二つのポリペプチ
ドもしくはポリペプチドドメイン間に空間及び／又は柔軟性をもたらすような、部分（例
えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー）又はアミノ酸配列（例えば、３～２
００のアミノ酸、３～１５０のアミノ酸、３～１００のアミノ酸、３～６０のアミノ酸、
３～５０のアミノ酸、３～４０のアミノ酸、３～３０のアミノ酸、３～２０のアミノ酸、
３～１０のアミノ酸、３～８のアミノ酸、３～５のアミノ酸、４～３０のアミノ酸、５～
３０のアミノ酸、６～３０のアミノ酸、８～３０のアミノ酸、１０～２０のアミノ酸、１
０～３０のアミノ酸、１２～３０のアミノ酸、１４～３０のアミノ酸、２０～３０のアミ
ノ酸、１５～２５のアミノ酸、１５～３０のアミノ酸、１８～２２のアミノ酸及び２０～
３０のアミノ酸の配列）を指す。アミノ酸スペーサーは、ポリペプチドの一次配列の一部
（例えば、ポリペプチド骨格を介して、離間したポリペプチド又はポリペプチドドメイン
に連結されるような）である。例えばＦｃドメインを形成する二つのヒンジ領域又は二つ
のＦｃドメイン単量体の間におけるジスルフィド結合の形成は、リンカーとは考えない。
本明細書において、「グリシンスペーサー」という語は、二つのＦｃドメイン単量体を
直列に連結する、グリシンのみを含有するリンカーを指す。グリシンスペーサーは、少な
くとも４、８、１２、１４、１６、１８又は２０のグリシン（例えば、４～３０、８～３
０、１２～３０、１２～５０、１２～１００又は１２～２００のグリシン、例えば、１２
～３０、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、
１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０の
グリシン）を含有し得る。一部の実施形態では、グリシンスペーサーは、配列ＧＧＧＧＧ
ＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）を含む、該配列からなる
、又は、実質的に該配列からなる。
本明細書において、「アルブミン結合ペプチド」という語は、血清アルブミンに対する
親和性及び血清アルブミンを結合する機能を有する１２～１６のアミノ酸のアミノ酸配列
を指す。アルブミン結合ペプチドは、例えばヒト、マウス又はラットである様々な起源の
ものとすることが可能である。本開示の一部の実施形態では、アルブミン結合ペプチドが
Ｆｃドメイン単量体のＣ末端と融合して、Ｆｃコンストラクトの血中半減期を増加させる
。アルブミン結合ペプチドは、直接又はリンカーを介して、Ｆｃドメイン単量体のＮ末端
又はＣ末端と融合することが可能である。
本明細書において、「精製用ペプチド」という語は、ポリペプチドの精製、単離又は同
定に用いることが可能である任意の長さのペプチドを指す。精製用ペプチドは、ポリペプ
チドに連結して、例えば細胞溶解混合物からの、ポリペプチドの精製及び／又はポリペプ
チドの単離を支援し得る。一部の実施形態では、精製用ペプチドは、精製用ペプチドに対
して特異的な親和性を有する別の部分と結合する。一部の実施形態では、精製用ペプチド
と特異的に結合するこうした部分は、基剤、樹脂又はアガロースビーズ等の固相支持体に
付加する。Ｆｃコンストラクトと連結し得る精製用ペプチドの例は、本明細書でさらに詳
細に記載する。
本明細書において、「多量体」という語は、本明細書に記載の少なくとも二つの会合し
たＦｃコンストラクトを含む分子を指す。
本明細書において、「抗原認識領域」という語は、抗体の抗原に対する認識及び結合を
担う、抗体の軽鎖及び重鎖の部分を指す。抗原認識領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ、例
えばＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３、ＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤ
Ｒ Ｈ３）及びフレームワーク領域（ＦＲ）を含む、軽鎖及び重鎖の可変領域（Ｆａｂ）
を含む。
本明細書において、「免疫応答の免疫細胞活性化」という句は、免疫複合体又はＦｃコ
ンストラクトの、細胞（例えば、免疫細胞（例えば、単球））上のＦｃγ受容体（Ｆｃγ
Ｒ）（例えば、活性化ＦｃγＲ、例えばＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、
ＦｃγＲＩＩＩａ又はＦｃγＲＩＩＩｂ）との結合によって誘導される又は活性化される
免疫応答を指す。免疫複合体は、抗体が抗原と結合することで形成される抗原－抗体複合
体である。免疫複合体はしばしば、ＦｃγＲを凝集して、かつ、炎症、感染症及び他の疾
患において重要な役割を果たす細胞内プロセスを抑制又は活性化する、複数のＦｃドメイ
ンを有する。一部の実施形態では、本開示のＦｃコンストラクトは、ＦｃγＲと結合して
、免疫細胞（例えば、単球）上でシグナル伝達する活性化ＦｃγＲ（例えば、ＦｃγＲＩ
、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ又はＦｃγＲＩＩＩｂ）を誘導す
ることができる。ＦｃγＲ－発現細胞におけるキナーゼリン酸化（例えば、Ｓｙｋリン酸
化）及びカルシウム流入等である、或る下流のシグナル伝達事象の測定を用いて、免疫複
合体又はＦｃコンストラクトの結合によって引き起こされる免疫応答の免疫細胞活性化を
検出することができる。例えば、細胞のキナーゼリン酸化（例えば、Ｓｙｋリン酸化）の
レベル又はカルシウム流入のレベルが、免疫複合体又はＦｃコンストラクトによる活性化
を何も含まない、細胞のキナーゼリン酸化（例えば、Ｓｙｋリン酸化）のレベル又はカル
シウム流入のレベルよりも、少なくとも５倍高い、例えば５～１００倍（例えば、５～１
００、１０～９５、１５～９０、２０～８５、２５～８０、３０～７５、３５～７０、４
０～６５、４５～６０又は５０～５５倍、例えば５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍
、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍
、２１倍、２２倍、２３倍、２４倍、２５倍、２６倍、２７倍、２８倍、２９倍、３０倍
、３１倍、３２倍、３３倍、３４倍、３５倍、３６倍、３７倍、３８倍、３９倍、４０倍
、４１倍、４２倍、４３倍、４４倍、４５倍、４６倍、４７倍、４８倍、４９倍、５０倍
、５１倍、５２倍、５３倍、５４倍、５５倍、５６倍、５７倍、５８倍、５９倍、６０倍
、６１倍、６２倍、６３倍、６４倍、６５倍、６６倍、６７倍、６８倍、６９倍、７０倍
、７１倍、７２倍、７３倍、７４倍、７５倍、７６倍、７７倍、７８倍、７９倍、８０倍
、８１倍、８２倍、８３倍、８４倍、８５倍、８６倍、８７倍、８８倍、８９倍、９０倍
、９１倍、９２倍、９３倍、９４倍、９５倍、９６倍、９７倍、９８倍、９９倍、又は１
００倍）高いものである場合に、免疫応答の免疫細胞活性化が誘導される。
本明細書において、「ファゴサイトーシス」という語は、細胞、しばしば食細胞（例え
ば、単球）が別の細胞、粒子又は病原体（例えば、微生物又は寄生体）を取り込んでファ
ゴソームを形成するものである、エンドサイトーシスの形態を指す。免疫系では、ファゴ
サイトーシスは、疾患細胞（例えば、がん細胞、感染細胞又は死細胞）、病原体及び細胞
片を除去するために用いられる主要な機序である。別の細胞（例えば、食細胞（例えば、
単球））により貪食されるものとして標的化される細胞を、標的細胞と称する。例えば、
本開示のＦｃコンストラクトが、免疫細胞上のＦｃγＲ（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲ
ＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ又はＦｃγＲＩＩＩｂ）と結合することによ
って活性化される免疫細胞（例えば、単球）は、対象におけるがん細胞又は感染細胞であ
り得る標的細胞を貪食し得る。
本明細書において、標的細胞のファゴサイトーシスを「増加する（させる）」又は「増
加する（させる）こと」とは、本開示のＦｃコンストラクトが免疫細胞（例えば、単球）
上のＦｃγＲ（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩ
ａ又はＦｃγＲＩＩＩｂ）と結合することによって誘導されるファゴサイトーシスが、Ｆ
ｃコンストラクトによる誘導なく発生するファゴサイトーシスのレベルと比較して、増加
することを指す。例えば、ファゴサイトーシスのレベルが、Ｆｃコンストラクトによる誘
導なく発生するファゴサイトーシスのレベルよりも少なくとも１０％高い、例えば１０～
１００％（例えば、１０～１００％、１５～９５％、２０～９０％、２５～８５％、３０
～８０％、３５～７５％、４０～７０％、４５～６５％又は５０～６０％、例えば１０％
、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％
，２１％，２２％，２３％，２４％，２５％，２６％，２７％，２８％，２９％，３０％
，３１％，３２％，３３％，３４％，３５％，３６％，３７％，３８％，３９％，４０％
，４１％，４２％，４３％，４４％，４５％，４６％，４７％，４８％，４９％，５０％
，５１％，５２％，５３％，５４％，５５％，５６％，５７％，５８％，５９％，６０％
，６１％，６２％，６３％，６４％，６５％，６６％，６７％，６８％，６９％，７０％
，７１％，７２％，７３％，７４％，７５％，７６％，７７％，７８％，７９％，８０％
，８１％，８２％，８３％，８４％，８５％，８６％，８７％，８８％，８９％，９０％
，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％又は１０
０％）高いものである場合、標的細胞のファゴサイトーシスは増加する。
本明細書において、「がんを治療する」という語は、対象におけるがんの治療的処置を
指す。治療的処置は、がんの進行を遅らせ、対象の予後を改善し、及び／又はがんを除去
する。
本明細書において、「感染症を治療する」という語は、対象における感染症の治療的処
置を指す。治療的処置は、感染症の進行を遅らせ、対象の予後を改善し、及び／又は感染
症を除去する。
本明細書において、「感染症」という語は、例えば細菌、ウイルス、真菌、寄生虫、原
生動物、節足動物ならびに他の微生物、寄生体及び虫等の病原体による、対象の細胞、組
織及び／又は器官への侵入を指す。一部の実施形態では、病原体は、対象の細胞、組織及
び／又は器官中で成長し、増殖し、及び／又は毒素を生成し得る。一部の実施形態では、
対象は病原体に対してネガティブな反応（すなわち、アレルギー反応又は免疫応答）を発
生し得る。感染症の例としては、細菌感染症、ウイルス感染症、真菌感染症、寄生虫感染
症及び原生動物感染症が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書において、「細菌感染症」という語は、一つ又は複数の細菌によって引き起こ
される感染症を指す。感染症の原因となる細菌の例は、この技術分野で周知であり、レン
サ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属の細菌（例えば、化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ））、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属
の細菌（例えば、大腸菌）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属の細菌（例えば、コレラ菌（Ｖ
ｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ））、腸炎（Ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ）属の細菌（例えば、サ
ルモネラ腸炎（Ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ））、及び、サルモネラ（Ｓ
ａｌｍｏｎｅｌｌａ）属の細菌（例えば、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ
））が挙げられるがこれらに限定されない。
本明細書において、「ウイルス感染症」という語は、一つ又は複数のウイルスによって
引き起こされる感染症を指す。感染症の原因となるウイルスの例は、この技術分野で周知
であり、レトロウイルス科のウイルス（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ））、ア
デノウイルス科のウイルス（例えば、アデノウイルス）、ヘルペスウイルス科のウイルス
（例えば、単純ヘルペスウイルス１型及び２型）、パピローマウイルス科のウイルス（例
えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ））、ポックスウイルス科のウイルス（例えば、
天然痘）、ピコルナウイルス科のウイルス（例えば、Ａ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス
、ライノウイルス）、ヘパドナウイルス科のウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス）、フ
ラビウイルス科のウイルス（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱ウイルス、西ナイルウイル
ス）、トガウイルス科のウイルス（例えば、ルビウイルス）、オルトミクソウイルス科の
ウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、フィロウイルス科のウイルス（エボラウ
イルス、マールブルグウイルス）、及び、パラミクソウイルス科のウイルス（例えば、麻
疹ウイルス、ムンプスウイルス）が挙げられるがこれらに限定されない。
本明細書において、「真菌感染症」という語は、一つ又は複数の真菌によって引き起こ
される感染症を指す。感染症の原因となる真菌の例は、この技術分野で周知であり、アス
ペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）の真菌（例えば、アスペルギルス・フミガーツ
ス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａ．
ｆｌａｖｕｓ）、アスペルギルス・テレウス（Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ）、アスペルギルス・
ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・カンジダス（Ａ．ｃａｎｄｉｄｕｓ）、ア
スペルギルス・クラバツス（Ａ．ｃｌａｖａｔｕｓ）、アスペルギルス・オクラセウス（
Ａ．ｏｃｈｒａｃｅｕｓ））、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）の真菌（例えば、カンジダ
・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・パラプローシス（Ｃ
．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・グラブラタ（Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ）、カン
ジダ・ギリエルモンジィ（Ｃ．ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ）、カンジダ・クルセイ（
Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ・ルシタニエ（Ｃ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）、カンジダ・
トロピカリス（Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ））、クリプトコックス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ）の真菌（例えば、クリプトコックス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ））、及び、ファサリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）の真菌
（例えば、フザリウム・ソラニ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ）、フザリウム・ベル
チシリオイデス（Ｆ．ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・オキシスポラム
（Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ））が挙げられるがこれらに限定されない。
本明細書において、「寄生虫感染症」という語は、一つ又は複数の寄生虫によって引き
起こされる感染症を指す。寄生虫の例としては、サナダムシ（条虫類（ｃｅｓｔｏｄｅ）
）、回虫（線虫類（ｎｅｍａｔｏｄｅ））、吸虫（吸虫類（ｔｒｅｍａｔｏｄｅ））及び
単生類が挙げられるがこれらに限定されない。
本明細書において、「原生動物感染症」という語は、一つ又は複数の原生動物によって
引き起こされる感染症を指す。原生動物の例としては、エントアメーバ属（Ｅｎｔａｍｏ
ｅｂａ）の原生動物（例えば、赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉ
ｃａ））、マラリア原虫属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）の原生動物（例えば、熱帯熱マラリ
ア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、四日熱マラリア原虫（Ｐ．ｍ
ａｌａｒｉａｅ））、ジアルディア属（Ｇｉａｒｄｉａ）の原生動物（例えば、ランブル
鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ））、及び、トリパノソーマ属（Ｔｒｙｐａｎ
ｏｓｏｍａ）の原生動物（例えば、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ
ｂｒｕｃｅｉ））が挙げられるがこれらに限定されない。
本明細書において、「ポリヌクレオチド」という語は、オリゴヌクレオチド又はヌクレ
オチド、及びその断片又は部分を指し、またゲノム由来もしくは合成由来のＤＮＡ又はＲ
ＮＡを指し、それは一本鎖又は二本鎖であり、センス鎖又はアンチセンス鎖を表し得る。
単一のポリヌクレオチドが、単一のポリペプチドに翻訳される。
本明細書において、「ポリペプチド」という語は、単量体がアミド結合を介して共に連
結するアミノ酸残基であるような単一のポリマーを説明している。ポリペプチドは、天然
、組換え又は合成的に産生されるかのいずれかである任意のアミノ酸配列を包含すること
を意図する。
本明細書において、「アミノ酸位置」という語は、タンパク質又はタンパク質ドメイン
内のアミノ酸の位置番号を指す。抗体又はＦｃコンストラクトのアミノ酸位置は、Ｋａｂ
ａｔナンバリングシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，ｅｄ
５，１９９１）を用いて番号付けた。
本明細書で使用される場合、「アミノ酸変異」、「アミノ酸変化」及び「アミノ酸修飾
」という用語は、互換的に使用され、参照Ｆｃドメインポリペプチド（例えば、野生型、
未変異、又は未改変Ｆｃ配列）と比較したときのＦｃドメインポリペプチドの変更を指す
。参照Ｆｃドメインポリペプチドは、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドで
あり得る。アミノ酸修飾は、アミノ酸置換、欠失及び／又は挿入を含む。一部の実施形態
では、アミノ酸修飾は単一アミノ酸修飾である。他の実施形態では、アミノ酸修飾は、複
数の（例えば１以上）アミノ酸修飾である。アミノ酸修飾は、アミノ酸置換、欠失及び／
又は挿入の組み合わせを含んでもよい。アミノ酸修飾の説明には、Ｆｃポリペプチドに対
してコードするヌクレオチド配列の、点変異（例えば、単一のヌクレオチドの他のものと
の交換）、挿入及び欠失（例えば一つ又は複数のヌクレオチドの付加及び／又は除去）等
の、遺伝子（すなわち、ＤＮＡ及びＲＮＡ）の変更である。別段の記載がない限り、挿入
は、挿入が発生すると指定されているアミノ酸位置のすぐ後に、一つ又は複数のアミノ酸
を付加することである。別段の記載がない限り、アミノ酸修飾、例えば、置換、挿入、及
び／又は欠失は、Ｆｃドメインを構成するＦｃドメイン単量体の両方に組み込まれる。他
の実施形態では、第一及び第二のＦｃドメイン単量体を有するＦｃドメインは、第二のＦ
ｃドメイン単量体中の一つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１
０又はそれ以上）のアミノ酸修飾とは異なる、第一のＦｃドメイン単量体中の例えば一つ
又は複数（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上）のアミ
ノ酸修飾を含み得る。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、例えば、アミノ酸位置Ｉ２
５３及び／又はＲ２９２において、均質なアミノ酸修飾を有する、例えば、第一及び第二
のＦｃドメイン単量体などのＦｃドメイン単量体を含み得る。他の実施形態では、Ｆｃド
メインは、例えば、アミノ酸位置Ｉ２５３及び／又はＲ２９２において、不均質なアミノ
酸修飾を有する、例えば、第一及び第二のＦｃドメイン単量体などのＦｃドメイン単量体
を含み得る。或る実施形態では、Ｆｃコンストラクト内の少なくとも一つ（例えば、１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上）のＦｃドメインがアミノ酸修飾
を含む。一部の例では、少なくとも一つのＦｃドメインは、一つ又は複数の（例えば、１
、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上の）単一アミノ酸修飾を含む。
一部の例では、Ｆｃドメインが、１６以下の単一アミノ酸修飾（例えば、１以下、２以下
、３以下、４以下、５以下、６以下、７以下、８以下、９以下、１０以下、１１以下、１
２以下、１３以下、１４以下、１５以下又は１６以下のアミノ酸修飾）を含む。一部の場
合では、Ｆｃドメイン単量体が、１０以下の単一アミノ酸修飾を含む。一部の場合では、
Ｆｃドメイン単量体が、１２以下の単一アミノ酸修飾を含む。一部の場合では、Ｆｃドメ
イン単量体が、１４以下の単一アミノ酸修飾を含む。
或る実施形態では、Ｆｃコンストラクト内の少なくとも一つ（例えば、少なくとも１、
２又は３）のＦｃドメインがアミノ酸修飾を含む。一部の例では、少なくとも一つのＦｃ
ドメインが、一つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又は２０又はそ
れ以上）のアミノ酸修飾を含む。一部の例では、少なくとも一つのＦｃドメインが、１０
以下の単一アミノ酸修飾を含む。
本明細書において、「パーセント（％）同一性」という語は、例えば本明細書に記載の
Ｆｃコンストラクト内のＦｃドメイン単量体配列である候補配列のアミノ酸（又は核酸）
残基であって、配列を整列させて、必要であれば最大のパーセント同一性を達成するよう
にしてギャップを導入した後で（すなわち、最適なアラインメントのために候補配列及び
参照配列の一方又は両方においてギャップを導入することが可能であり、比較目的のため
に非均一の配列は無視することが可能である）、野生型のＦｃドメイン単量体配列等の参
照配列のアミノ酸（又は核酸）残基に対して一致している、候補配列のアミノ酸（又は核
酸）残基の百分率を指すものである。パーセント同一性の決定のためのアラインメントは
、この分野の技術の範囲内である種々の方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ又はＭ
ｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公に利用可能であるコンピュータソ
フトウェアを用いて達成することが可能である。当業者は、比較している配列の全長にわ
たって最大のアラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アライン
メント測定用の適切なパラメータを決定することが可能である。一部の実施形態では、所
与の参照配列との、該参照配列での又は該参照配列に対する、所与の候補配列のパーセン
トアミノ酸（又は核酸）配列同一性（あるいは、所与の参照配列との、該参照配列での又
は該参照配列に対する、特定のパーセントアミノ酸（又は核酸）配列同一性を有する又は
含む、所与の候補配列と表すことがある）は、以下のとおりに計算される：
１００×（Ａ／Ｂの分数）
式中、Ａは候補配列及び参照配列のアラインメント内で同一として採点されたアミノ酸（
又は核酸）残基の数であり、Ｂは参照配列内のアミノ酸（又は核酸）残基の総数である。
候補配列の長さが参照配列の長さと等しくない場合の一部の実施形態では、参照配列に対
する候補配列のパーセントアミノ酸（又は核酸）配列同一性は、候補配列に対する参照配
列のパーセントアミノ酸（又は核酸）配列同一性と等しくないはずである。
特定の実施形態では、候補配列の全長にわたって又は候補配列の連続的なアミノ酸（又
は核酸）残基の選択された部分にわたって、候補配列が５０％～１００％の同一性（例え
ば、５０％～１００％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０％～１００％、９０
％～１００％、９２％～１００％、９５％～１００％、９７％～１００％、９９％～１０
０％又は９９．５％～１００％の同一性）をみせるということを、候補配列との比較のた
めに整列した参照配列が示し得る。比較の目的のために整列された候補配列の長さは、参
照配列の長さの少なくとも３０％、例えば少なくとも４０％、例えば少なくとも５０％、
６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％である。候補配列内のある位置が参照配列
内の対応する位置と同じアミノ酸（又は核酸）残基で占有されている場合であれば、分子
同士はその位置において一致している。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメ
インを有するＦｃコンストラクト）内のＦｃドメイン単量体は、野生型のＦｃドメイン単
量体配列（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）と、少なくとも９５％同一（例えば、少
なくとも９７％、９９％又は９９．５％同一）である配列を含み得る、該配列からなり得
る、又は、実質的に該配列からなり得る。一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコ
ンストラクト（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト）内のＦｃドメ
イン単量体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４、４６、４８、及び５０～５３のいずれか一つ
の配列と、少なくとも９５％同一（例えば、少なくとも９７％、９９％又は９９．５％同
一）である配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。
或る実施形態では、Ｆｃコンストラクト内のＦｃドメイン単量体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：４８、５２、及び５３の配列と、少なくとも９５％同一（例えば、少なくとも９７％、
９９％又は９９．５％同一）である配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的
に該配列からなり得る。
一部の場合では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト内のＦｃドメイン単量体は、本
明細書に記載のいずれかの配列と、少なくとも９５％同一（例えば、少なくとも９７％、
９９％又は９９．５％同一）である配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的
に該配列からなり得る。一部の場合では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト内のＦｃ
ドメイン単量体は、最大１０個（例えば、最大９、８、７、６、５、４、３、２又は１個
）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、本明細書に記載の配列
のいずれか一つである配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列から
なり得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト内の二つのＦｃドメイン単
量体を有するポリペプチド（例えば、図１のポリペプチド１０２及び１０８、図２のポリ
ペプチド２０２及び２０８）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３、４５、４７、及び４９のい
ずれか一つの配列と、少なくとも９５％同一（例えば、少なくとも９７％、９９％又は９
９．５％同一）である配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列から
なり得る。或る実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト内の二つのＦｃドメ
イン単量体を有するポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９配列と、少なくとも９５
％同一（例えば、少なくとも９７％、９９％又は９９．５％同一）である配列を含み得る
、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。
一部の実施形態では、二つのＦｃドメイン単量体間のスペーサーは、本明細書にさらに
記載したＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～３６（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、１８、２
６、及び２７）のうちのいずれか一つの配列と、少なくとも７５％同一（例えば、７５％
、７７％、７９％、８１％、８３％、８５％、８７％、８９％、９１％、９３％、９５％
、９７％、９９％、９９．５％又は１００％同一）である配列を含み得る、該配列からな
り得る、又は、実質的に該配列からなり得る。
本明細書において、「宿主細胞」という語は、タンパク質をそれらの対応する核酸から
発現するのに必要であるような、例えばオルガネラである、必要な細胞成分を含む媒体を
指す。核酸は典型的に、この技術分野で公知の従来の技術（形質転換、トランスフェクシ
ョン、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、直接の微量注入等）によって宿主細胞内に導入
されることが可能である核酸ベクター中に含まれる。宿主細胞は、例えば細菌細胞である
原核細胞、又は、例えば哺乳動物細胞（例えばＣＨＯ細胞）である真核細胞とすることが
できる。本明細書に記載するように、宿主細胞を用いて、その後結合して所望のＦｃコン
ストラクトを形成することが可能である所望のドメインをコードする一つ又は複数のポリ
ペプチドを発現する。
本明細書において、「医薬組成物」という語は、活性成分のみならず、活性成分を投与
方法に好適であるようにさせることが可能である、一つ又は複数の賦形剤及び希釈剤を含
有する薬用製剤又は医薬製剤を指す。本開示の医薬組成物は、Ｆｃコンストラクトと互換
性がある、薬学的に許容できる成分を含む。該医薬組成物は典型的に、静脈投与又は皮下
投与のために水性形態である。
本明細書において、ポリペプチド又はＦｃコンストラクトの「実質的に均質な集団」は
、組成物（例えば、細胞培養培地又は医薬組成物）中のポリペプチド又はＦｃコンストラ
クトの少なくとも５０％が、非還元ＳＤＳゲル電気泳動又はサイズ排除クロマトグラフィ
ーにより決定されるように、同数のＦｃドメインを有するというものである。ポリペプチ
ドの又はＦｃコンストラクトの実質的に均質な集団は、精製前、又は、プロテインＡもし
くはプロテインＧ精製後、又は、任意のＦａｂもしくはＦｃ特異的なアフィニティークロ
マトグラフィー単独の後で、得ることができる。種々の実施形態では、組成物中のポリペ
プチド又はＦｃコンストラクトの少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、
８０％又は８５％が、同数のＦｃドメインを有する。他の実施形態では、組成物中のポリ
ペプチドの又はＦｃコンストラクトの最大８５％、９０％、９２％又は９５％が、同数の
Ｆｃドメインを有する。実質的に均質な集団又は組成物は、少なくとも８５％の均質（例
えば、少なくとも８５％、９０％、又は９５％均質）である。
本明細書において、「薬学的に許容できる担体」という語は、医薬組成物中の賦形剤又
は希釈剤を指す。薬学的に許容できる担体は、製剤の他の成分と互換性があり、レシピエ
ントにとって有害でないものでなくてはならない。本開示では、薬学的に許容できる担体
は、Ｆｃコンストラクトに対して十分な薬学的安定性を与える必要がある。担体の性質は
、投与形態によって異なる。例えば、経口投与では、固形担体が好ましく、静脈内投与で
は概して、水溶液担体（例えば、ＷＦＩ及び／又は緩衝液）が用いられる。
本明細書において、「治療有効量」は、例えば薬剤投与量である、対象もしくは患者に
おいて所望の生物学的な効果の誘導に、又は、本明細書に記載の状態又は障害を有する患
者の治療に有効である量を指す。本明細書においては、「治療有効量」が、単回投与又は
任意の投薬もしくは経路での摂取、単独で又は他の治療薬剤と組み合わせての摂取のいず
れでも、所望の治療効果をもたらす量として解釈できるということも理解されたい。
図１は、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（Ｆｃコンストラクト１、Ｆｃコンストラクト２又はＦｃコンストラクト３）の説明図である。第一のポリペプチド（１０２）は、突起含有Ｆｃドメイン単量体（１０６）と直列に連結した、野生型Ｆｃドメイン単量体配列と比べてＣＨ３－ＣＨ３界面において異なる電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体（１０４）を含有する。第二のポリペプチド（１０８）は、他の突起含有Ｆｃドメイン単量体（１１２）と直列に連結した、野生型Ｆｃドメイン単量体配列と比べてＣＨ３－ＣＨ３界面において異なる電荷をもつアミノ酸を含有するＦｃドメイン単量体（１１０）を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ１１４及び１１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。 図２は、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（Ｆｃコンストラクト４）の説明図である。第一のポリペプチド（２０２）は、異なる電荷をもつアミノ酸及び突起を含有する他のＦｃドメイン単量体（２０６）と直列に連結された、野生型Ｆｃドメイン単量体配列と比べてＣＨ３－ＣＨ３界面において異なる電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体（２０４）を含有する。第二のポリペプチド（２０８）は、異なる電荷をもつアミノ酸及び突起を含有する他のＦｃドメイン単量体（２１２）と直列に連結された、野生型Ｆｃドメイン単量体配列と比べてＣＨ３－ＣＨ３界面において異なる電荷をもつアミノ酸を含有するＦｃドメイン単量体（２１０）を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ２１４及び２１６）はそれぞれ、異なる電荷をもつアミノ酸及び空洞を含有するＦｃドメイン単量体を含有する。 図３は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによる、Ｆｃコンストラクト２のリンカー（ＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８））内のＯ－キシロシル化したＳｅｒの同定を示す。 図４は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳで決定された、二つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト（図１３に示すＦｃコンストラクト）内のリンカーのＯ－キシロシル化の存在度を示している。 図５は、ＣＥ－ＳＤＳで決定された、４５℃で保存した、Ｆｃコンストラクト２及び４からの単量体Ｆｃ種の形成を示している。 図６は、ＬＣ－ＭＳで決定された、４５℃で２週間保存した、Ｆｃコンストラクト２のタンパク質分解産物を示している。 図７は、ＬＣ－ＭＳで決定された、４５℃で２週間保存した、Ｆｃコンストラクト４のタンパク質分解産物を示している。 図８は、リンカー長を変化させたＦｃコンストラクト２による、ＴＨＰ－１細胞によるＩＬ－８放出の抑制を示している。 図９は、リンカー長を変化させたＦｃコンストラクト２による、好中球中のカルシウム流出の抑制を示している。 図１０は、未精製培地中のＦｃコンストラクト２及びＦｃコンストラクト４の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥによるサイズ分布を示している。 図１１は、Ｆｃコンストラクト２（「静電的ステアリングあり」）と、三つのＦｃドメインを有するが「幹」サブユニット内の静電的ステアリング変異のない他のＦｃコンストラクト（「静電的ステアリングなし」）とについての発現及びアセンブリを示している。 図１２は、Ｃ末端リシンを除去してＦｃコンストラクト２を生成することにより、インビトロで相補依存細胞毒性（ＣＤＣ）が誘導されなかったということを示している。 図１３は、三つのポリペプチドで形成される二つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクトの説明図である。 図１４は、六つのポリペプチドで形成される五つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（Ｆｃ５Ｘ）の説明図である。 図１５は、六つのポリペプチドで形成される五つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（Ｆｃ５Ｙ）の説明図である。 図１６は、六つのポリペプチドで形成される五つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（反転Ｆｃ５Ｙ）の説明図である。 図１７は、二つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクトの説明図である。 図１８Ａは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト５）の説明図である。第一のポリペプチド（５０２）及び第二のポリペプチド（５０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ５０４及び５１０）に結合された野生型配列（それぞれ５０６及び５１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ５１４及び５１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（５０２）及び第二のポリペプチド（５０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ５１４及び５１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。５０６及び５１２はそれぞれ、アミノ酸修飾Ｉ２５３Ａを含有し、これは星印として表される。５０２及び５０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を有する。５１４及び５１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｂは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト６）の説明図である。第一のポリペプチド（６０２）及び第二のポリペプチド（６０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ６０４及び６１０）に結合された野生型配列（それぞれ６０６及び６１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ６１４及び６１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（６０２）及び第二のポリペプチド（６０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ６１４及び６１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。６０４、６１０、６１４、及び６１６はそれぞれ、アミノ酸修飾Ｉ２５３Ａを含有し、これは星印として表される。６０２及び６０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を有する。６１４及び６１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｃは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト７）の説明図である。第一のポリペプチド（７０２）及び第二のポリペプチド（７０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ７０４及び７１０）に結合された野生型配列（それぞれ７０６及び７１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ７１４及び７１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（７０２）及び第二のポリペプチド（７０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ７１４及び７１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。７０４、７０６、７１０、７１２、７１４、及び７１６はそれぞれ、アミノ酸修飾Ｉ２５３Ａを含有し、これは星印として表される。７０２及び７０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を有する。７１４及び７１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｄは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト８）の説明図である。第一のポリペプチド（８０２）及び第二のポリペプチド（８０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ８０４及び８１０）に結合された野生型配列（それぞれ８０６及び８１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ８１４及び８１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（８０２）及び第二のポリペプチド（８０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ８１４及び８１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。８０６及び８１２はそれぞれ、アミノ酸修飾Ｒ２９２Ｐを含有し、これはひし形として表される。８０２及び８０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を有する。８１４及び８１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｅは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト９）の説明図である。第一のポリペプチド（９０２）及び第二のポリペプチド（９０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ９０４及び９１０）に結合された野生型配列（それぞれ９０６及び９１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ９１４及び９１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（９０２）及び第二のポリペプチド（９０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ９１４及び９１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。９０６及び９１２はそれぞれ、星印として表されるアミノ酸修飾Ｉ２５３Ａ、及びひし形として表されるアミノ酸修飾Ｒ２９２Ｐを含有する。９０２及び９０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のアミノ酸配列を有する。９１４及び９１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｆは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト１０）の説明図である。第一のポリペプチド（１００２）及び第二のポリペプチド（１００８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ１００４及び１０１０）に結合された野生型配列（それぞれ１００６及び１０１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ１０１４及び１０１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（１００２）及び第二のポリペプチド（１００８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ１０１４及び１０１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。１００６及び１０１２はそれぞれ、ひし形として表されるアミノ酸修飾Ｒ２９２Ｐを含有し、１００４、１０１０、１０１４、及び１０１６はそれぞれ、星印として表されるアミノ酸修飾Ｉ２５３Ａを含有する。１００２及び１００８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のアミノ酸配列を有する。１０１４及び１０１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｇは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト１１）の説明図である。第一のポリペプチド（１１０２）及び第二のポリペプチド（１１０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ１１０４及び１１１０）に結合された野生型配列（それぞれ１１０６及び１１１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ１１１４及び１１１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（１１０２）及び第二のポリペプチド（１１０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ１１１４及び１１１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。１１０６及び１１１２はそれぞれ、ひし形として表されるアミノ酸修飾Ｒ２９２Ｐを含有し、１１０４、１１１０、１１１４、及び１１１６はそれぞれ、星印として表されるアミノ酸修飾Ｉ２５３Ａを含有する。１１０２及び１１０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のアミノ酸配列を有する。１１１４及び１１１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｈは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト１２）の説明図である。第一のポリペプチド（１２０２）及び第二のポリペプチド（１２０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ１２０４及び１２１０）に結合された野生型配列（それぞれ１２０６及び１２１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ１２１４及び１２１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（１２０２）及び第二のポリペプチド（１２０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ１２１４及び１２１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。１２０４、１２１０、１２１４及び１２１６はそれぞれ、アミノ酸修飾Ｒ２９２Ｐを含有し、これはひし形として表される。１２０２及び１２０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配列を有する。１２１４及び１２１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｉは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト１３）の説明図である。第一のポリペプチド（１３０２）及び第二のポリペプチド（１３０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ１３０４及び１３１０）に結合された野生型配列（それぞれ１３０６及び１３１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ１３１４及び１３１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（１３０２）及び第二のポリペプチド（１３０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ１３１４及び１３１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。１３０４、１３１０、１３１４及び１３１６はそれぞれ、ひし形として表されるアミノ酸修飾Ｒ２９２Ｐを含有し、１３０６及び１１３２はそれぞれ、星印として表されるアミノ酸修飾Ｉ２５３Ａを含有する。１３０２及び１３０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を有する。１３１４及び１３１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｊは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト１４）の説明図である。第一のポリペプチド（１４０２）及び第二のポリペプチド（１４０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ１４０４及び１４１０）に結合された野生型配列（それぞれ１４０６及び１４１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ１４１４及び１４１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（１４０２）及び第二のポリペプチド（１４０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ１４１４及び１４１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。１４０４、１４１０、１４１４及び１４１６はそれぞれ、ひし形として表されるアミノ酸修飾Ｒ２９２Ｐ、及び星印として表されるアミノ酸修飾Ｉ２５３Ａを含有する。１４０２及び１４０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を有する。１４１４及び１４１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｋは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト１５）の説明図である。第一のポリペプチド（１５０２）及び第二のポリペプチド（１５０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ１５０４及び１５１０）に結合された野生型配列（それぞれ１５０６及び１５１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ１５１４及び１５１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（１５０２）及び第二のポリペプチド（１５０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ１５１４及び１５１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。１５０４、１５１０、１５１４及び１５１６はそれぞれ、ひし形として表されるアミノ酸修飾Ｒ２９２Ｐを含有し、１５０６及び１５１２はそれぞれ、星印として表されるアミノ酸修飾Ｉ２５３Ａを含有する。１５０２及び１５０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を有する。１５１４及び１５１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｌは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト１６）の説明図である。第一のポリペプチド（１６０２）及び第二のポリペプチド（１６０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ１６０４及び１６１０）に結合された野生型配列（それぞれ１６０６及び１６１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ１６１４及び１６１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（１６０２）及び第二のポリペプチド（１６０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ１６１４及び１６１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。１６０４、１６０６、１６１０、１６１２、１６１４及び１６１６はそれぞれ、アミノ酸修飾Ｒ２９２Ｐを含有し、これはひし形によって表される。１６０２及び１６０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を有する。１６１４及び１６１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｍは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト１７）の説明図である。第一のポリペプチド（１７０２）及び第二のポリペプチド（１７０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ１７０４及び１７１０）に結合された野生型配列（それぞれ１７０６及び１７１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ１７１４及び１７１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（１７０２）及び第二のポリペプチド（１７０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ１７１４及び１７１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。１７０４、１７０６、１７１０、１７１２、１７１４及び１７１６はそれぞれ、ひし形によって表されるアミノ酸修飾Ｒ２９２Ｐを含有し、１７０６及び１７１２はそれぞれ、星印によって表されるアミノ酸修飾Ｉ２５３Ａを含有する。１７０２及び１７０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を有する。１７１４及び１７１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｎは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト１８）の説明図である。第一のポリペプチド（１８０２）及び第二のポリペプチド（１８０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ１８０４及び１８１０）に結合された野生型配列（それぞれ１８０６及び１８１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ１８１４及び１８１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（１８０２）及び第二のポリペプチド（１８０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ１８１４及び１８１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。１８０４、１８０６、１８１０、１８１２、１８１４及び１８１６はそれぞれ、ひし形によって表されるアミノ酸修飾Ｒ２９２Ｐを含有し、１８０４、１８１０、１８１４及び１８１６はそれぞれ、星印によって表されるアミノ酸修飾Ｉ２５３Ａを含有する。１８０２及び１８０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８のアミノ酸配列を有する。１８１４及び１８１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｏは、四つのポリペプチドで形成される三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクト（コンストラクト１９）の説明図である。第一のポリペプチド（１９０２）及び第二のポリペプチド（１９０８）の各々は、リンカーを介して突起含有Ｆｃドメイン単量体（それぞれ１９０４及び１９１０）に結合された野生型配列（それぞれ１９０６及び１９１２）よりも、ＣＨ３－ＣＨ３界面に電荷をもつアミノ酸を含有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第三のポリペプチド及び第四のポリペプチド（それぞれ１９１４及び１９１６）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド（１９０２）及び第二のポリペプチド（１９０８）の各々は、例えば、Ｅ３５７Ｋなどの静電気ステアリング変異も含有する。同様に、第三及び第四のポリペプチド（それぞれ１９１４及び１９１６）はそれぞれ、例えば、Ｋ３７０Ｄなどの静電気ステアリング変異を含有する。１９０４、１９０６、１９１０、１９１２、１９１４及び１９１６はそれぞれ、ひし形によって表されるアミノ酸修飾Ｒ２９２Ｐ、及び星印によって表されるアミノ酸修飾Ｉ２５３Ａを含有する。１９０２及び１９０８はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９のアミノ酸配列を有する。１９１４及び１９１６はそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を有する。 図１８Ｐは、コンストラクト４、コンストラクト５、及びコンストラクト７の発現を示すウェスタンブロットである。 図１９Ａは、ＦｃγＲＩＩｂに対するＴＲ－ＦＲＥＴ（３～８回の反復で示された平均±標準偏差）による、ＩｇＧ１とコンストラクト４、コンストラクト６、コンストラクト１６、及びコンストラクト１８の細胞結合を示すグラフである。図１９Ｂは、ＦｃγＲＩに対するＴＲ－ＦＲＥＴ（３～８回の反復で示された平均±標準偏差）による、ＩｇＧ１とコンストラクト４、コンストラクト６、コンストラクト１６、及びコンストラクト１８の細胞結合を示すグラフである。図１９Ｃは、ＦｃγＲＩＩａに対するＴＲ－ＦＲＥＴ（３～８回の反復で示された平均±標準偏差）による、ＩｇＧ１とコンストラクト４、コンストラクト６、コンストラクト１６、及びコンストラクト１８の細胞結合を示すグラフである。図１９Ｄは、ＦｃγＲＩＩＩａに対するＴＲ－ＦＲＥＴ（３～８回の反復で示された平均±標準偏差）による、ＩｇＧ１とコンストラクト４、コンストラクト６、コンストラクト１６、及びコンストラクト１８の細胞結合を示すグラフである。 図２０は、ｐＨ６．０でのＦｃＲｎに対する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による、コンストラクト４、コンストラクト７、コンストラクト６、コンストラクト１６、コンストラクト１８、及びコンストラクト１９の結合を示すグラフである。正規化最大結合レベルは、ＦｃＲｎに結合するのに機能的なドメインの数に比例する。 図２１は、マウスにおけるコンストラクト４、コンストラクト６、コンストラクト１６、及びＩＶＩｇの薬物動態を比較するグラフである。 図２２は、コンストラクト４、コンストラクト５、コンストラクト６、及びコンストラクト７の薬物動態を比較して、マウスにおける薬物動態に対する、減少したＦｃＲｎ結合を有するドメイン数、例えば、Ｉ２５３Ａ変異の影響を評価するグラフである。 図２３は、マウスにおけるコンストラクト２０（コンストラクト４）、コンストラクト１６、コンストラクト１８、及びコンストラクト１９の薬物動態を比較するグラフである。 図２４は、ＩＶＩｇ、コンストラクト４、コンストラクト６、コンストラクト１６、及びコンストラクト１８によって誘発されたＴＨＰ－１細胞におけるファゴサイトーシス阻害を比較するグラフである。 図２５は、パシフィックブルー標識のＩｇＧ１、コンストラクト４、コンストラクト６、コンストラクト１６、及びコンストラクト１８によって誘発された単球におけるＩＬ－８放出の阻害を比較するグラフである。 図２６は、コンストラクト４、コンストラクト５、コンストラクト６、コンストラクト７、コンストラクト１６、コンストラクト１８、及びコンストラクト１９によって誘発された抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）の阻害を比較するグラフである。 図２７は、１２日目の臨床スコアによって測定されたコラーゲン抗体誘発性関節炎（ＣＡＩＡ）モデルにおける様々な濃度で、コンストラクト４、コンストラクト６、コンストラクト１６、及びコンストラクト１８の有効性を比較するグラフである。 図２８は、臨床スコアによって測定された、１日目に予防的に投与されたＣＡＩＡモデルにおけるコンストラクト４及びコンストラクト１８の有効性を比較するグラフである。 図２９は、臨床スコアによって測定された、－３日目に予防的に投与されたＣＡＩＡモデルにおけるコンストラクト４及びコンストラクト１８の有効性を比較するグラフである。 図３０は、臨床スコアによって測定された、－７日目に予防的に投与されたＣＡＩＡモデルにおけるコンストラクト４及びコンストラクト１８の有効性を比較するグラフである。 図３１は、臨床スコアによって測定された、－１０日目に予防的に投与されたＣＡＩＡモデルにおけるコンストラクト４及びコンストラクト１８の有効性を比較するグラフである。 図３２は、コラーゲン抗体誘発性関節炎（ＣＡＩＡ）モデルに、１日目に１００ｍｇ／ｋｇで投与されたコンストラクト４（ＡＡ：黒四角、実線）、コンストラクト１８（Ｑ１：黒三角、破線）、コンストラクト１９（Ｑ２：黒ひし形、点線）、又は食塩水（灰丸、鎖線）の効能を比較したグラフである。等量の食塩水（灰丸、一点鎖線）は１日目に投与した。各時点について、平均及び平均の標準誤差を示している。 図３３は、コラーゲン抗体誘発性関節炎（ＣＡＩＡ）モデルに、－３日目に１００ｍｇ／ｋｇで投与されたコンストラクト４（ＡＡ：黒四角、実線）、コンストラクト１８（Ｑ１：黒三角、破線）、又はコンストラクト１９（Ｑ２：黒ひし形、点線）の効能を比較したグラフである。等量の食塩水（灰丸、一点鎖線）は１日目に投与した。各時点について、平均及び平均の標準誤差を示している。 図３４は、コラーゲン抗体誘発性関節炎（ＣＡＩＡ）モデルに、－７日目に１００ｍｇ／ｋｇで投与されたコンストラクト４（ＡＡ：黒四角、実線）、コンストラクト１８（Ｑ１：黒三角、破線）、又はコンストラクト１９（Ｑ２：黒ひし形、点線）の効能を比較したグラフである。等量の食塩水（灰丸、一点鎖線）は１日目に投与した。各時点について、平均及び平均の標準誤差を示している。 図３５は、コラーゲン抗体誘発性関節炎（ＣＡＩＡ）モデルに、－１０日目に１００ｍｇ／ｋｇで投与されたコンストラクト４（ＡＡ：黒四角、実線）、コンストラクト１８（Ｑ１：黒三角、破線）、又はコンストラクト１９（Ｑ２：黒ひし形、点線）の効能を比較したグラフである。等量の食塩水（灰丸、一点鎖線）は１日目に投与した。各時点について、平均及び平均の標準誤差を示している。 図３６は、最大ピークに正規化された精製済みコンストラクトＸ１（灰色）及びＸ２（黒色）のサイズ排除クロマトグラフィープロファイルを比較するグラフである。 図３７は、精製されたコンストラクトＸ１（右）、精製されたコンストラクトＸ２（中央）、及び分子量基準（右）についての非還元ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動の結果の画像である。二つのコンストラクトの等しい質量がロードされた。 図３８は、薬物動態に基づくＦｃＲｎ及びＦｃγＲＩＩｂ結合の低減の影響を評価するための、コンストラクトＸ１（野生型Ｆｃ多量体）（黒丸、実線）及びコンストラクトＸ２（Ｉ２５３Ａ／Ｒ２９２Ｐ変異を有するＦｃ多量体）（三角、破線）の薬物動態を比較するグラフである。各時点について、平均及び標準偏差を示している。 図３９は、カニクイザルに１０ｍｇ／ｋｇで投与された、コンストラクト６（円、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４及び６３）、１６（三角形、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６／７０）、及び１８（四角、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８及び７３）の薬物動態を示すグラフである。コンストラクト４（逆三角形、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９及び４８）は、カニクイザルに２０ｍｇ／ｋｇで投与された。 図４０は、カニクイザルに３０ｍｇ／ｋｇで投与された、コンストラクト６（灰円、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４及び６３）、１６（ひし形、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６及び７０）、及び１８（逆三角形、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８及び７３）の薬物動態を示すグラフである。コンストラクト４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９及び４８）を、カニクイザルに２０ｍｇ／ｋｇ（四角）、３０ｍｇ／ｋｇ（円）及び５０ｍｇ／ｋｇ（三角形）で投与した。
発明の詳細な説明
ＩｇＧのＦｃドメインを含む治療用タンパク質を用いて、炎症ならびに免疫疾患及び炎
症性疾患、がんならびに感染症を治療することが可能である。本開示は、Ｆｃドメインを
含有するＦｃコンストラクト（例えば、２～１０のＦｃドメインを有するＦｃコンストラ
クト、例えば２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のＦｃドメインを有するＦｃコン
ストラクト）を調製する組成物及び方法を特徴とする。本明細書に記載のＦｃコンストラ
クトは、製造結果を有意に向上させる構造的特徴（例えば、グリシンスペーサー）を組み
込むことによって、均質な医薬組成物の調製を促進する。
したがって、本開示は、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃド
メインを有するＦｃコンストラクト）の実質的に均質な集団を含む医薬組成物を特徴とす
る。均質性は薬物動態及びインビボでの組成物の性能に影響するため、均質性は医薬組成
物の重要な側面である。従来、医薬品の製造においては、製品の製造方法に依存していく
つかの因子によって引き起こされ得る、製品の均質性の問題が存在している。例えば、医
薬品は、ランダムな産物の切断、タンパク質加水分解、分解及び／もしくは凝集、適切で
ないサブユニットの会合、ならびに／又は効率の悪いタンパク質フォールディングを経る
ものであり得る。様々な生合成過程又は医薬品製造のために用いられる細胞機構を有する
様々な有機体がまた、産物内に異種構造を引き起こし得る。しばしば、所望の医薬品を含
有する初期培養は、厳しい精製過程を経て、医薬品を含有する異種性の低い組成物を生成
することが必要とされる。
一態様では、本開示は、Ｆｃコンストラクトのフォールディング効率を有意に改善し、
かつ、適切でないサブユニットの会合を最小限にするような構造的特徴を有するＦｃコン
ストラクトを特徴とし、これによって高い均質性をもつこれらＦｃコンストラクトを含有
する医薬組成物を導く。高度な均質性を有することで、医薬組成物の安全性、効能、均一
性及び信頼性が保証される。また高度な均質性を有することで、望まない物質によって引
き起こされる医薬品の可能性のある凝集又は分解（例えば、産物の分解及び／又は産物も
しくは多量体の凝集を最小限にするのみならず、望まない物質によって引き起こされる適
切でなく有害な副作用を制限する。
本明細書において詳細に記載するように、本開示は、同数のＦｃドメインをすべてが有
するＦｃコンストラクトを含有する実質的に均質のみならず、こうした実質的に均質な組
成物を調製する方法を特徴とする。
本明細書に記載のＦｃコンストラクトは、Ｆｃドメイン間にグリシンスペーサーを含む
。この技術分野で周知であるように、セリン及びグリシンの両方を含有するリンカーは、
タンパク質中で構造的柔軟性を提供するものであり、二つのポリペプチドの連結に通常用
いられる。実験を通して（実施例４を参照）、セリン及びグリシンの両方を含有するリン
カーは、リンカー内の複数のセリンにおいてＯ－グリコシル化（例えば、Ｏ－キシロシル
化）を受け、セリンのＮ末端においてタンパク質分解を受ける、ということが観察された
。本発明者らは、リンカーの配列と長さを最適化して、Ｆｃコンストラクトの均質性をさ
らに向上させることを目指した。本発明者らは、コンストラクト内のすべてのリンカーを
、グリシンのみを有するグリシンスペーサー（例えば、少なくとも１２のグリシン、例え
ば、１２～３０のグリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）とするようなＦｃコンストラク
トを作製した。Ｆｃコンストラクト内にオールグリシンスペーサーを有することで、セリ
ンにおけるＯ－グリコシル化が除去され、またコンストラクトのタンパク質分解速度が減
少することによってＦｃコンストラクトの均質性がさらに向上した（実施例４を参照）。
結果的に、Ｆｃコンストラクト内にオールグリシンスペーサーを用いることによって、Ｆ
ｃコンストラクトのより実質的に均質な集団を達成することができた。
均質性は、Ｆｃコンストラクト組成物の結果である。例えば、第一のアプローチ（「ア
プローチ（ａ）」）では、グリシンのみを含有するリンカーを組み込んでＦｃドメイン単
量体を連結することを利用することができる。実験を通して観察されたように、Ｆｃコン
ストラクト内のオールグリシンスペーサー（例えば、少なくとも１２のグリシン、例えば
、１２～３０のグリシン、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）は、Ｏ－グリコシル化を受けず、
セリン及びグリシンを含む従来のリンカーと比較してタンパク質分解の影響を受けにくか
った（実施例４を参照）。
さらに、別のアプローチ（「アプローチ（ｂ）」）では、本明細書に記載のＦｃコンス
トラクト（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト）を含有する組成物
の均質性は、Ｃ末端リシンを除去することによって向上する。こうしたＣ末端リシン残基
は、多くの種にわたって免疫グロブリン中で高度に保護されるが、タンパク質産生中に分
子機構によって完全に又は部分的に除去できる。本開示のＦｃコンストラクトのＣ末端リ
シンの除去により、得られる組成物の均一性が向上し、より均質なＦｃコンストラクトの
調製が達成される（実施例８を参照）。例えば、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（
例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト）の一部の実施形態では、Ｃ末
端リシンのコドンを除去し、それによってＣ末端リシン残基のないポリペプチドを有する
Ｆｃコンストラクトと、結果物の均質な集団とを生成する。
本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコン
ストラクト）を含有する組成物の均質性を向上するさらなるアプローチ（「アプローチ（
ｃ）」）では、以下のヘテロ二量体形成選択モジュールの二つのセットを利用した：（ｉ
）異なる逆電荷の変異を有するヘテロ二量体形成選択モジュール、及び、（ｉｉ）操作さ
れた空洞及び突起を有するヘテロ二量体形成選択モジュール。例えば実施例６で参照され
る実験を通して、Ｆｃコンストラクト内にヘテロ二量体Ｆｃドメインを形成しようとする
場合に、（ｉ）及び（ｉｉ）の両方を有することで、Ｆｃドメイン単量体の制御されない
会合と、それによる望まないオリゴマー及び多量体とが軽減されることによって、生成さ
れる医薬組成物の均質性をさらに向上するということが観察された。特定の実施例では、
（ｉ）少なくとも一つの逆電荷の変異と、（ｉｉ）少なくとも一つの操作された空洞又は
少なくとも一つの操作された突起とを含有するＦｃドメイン単量体を生成することができ
、（ｉ）少なくとも一つの逆電荷の変異と、（ｉｉ）少なくとも一つの操作された突起又
は少なくとも一つの操作された空洞とを含有する他のＦｃドメイン単量体と選択的に結合
してＦｃドメインを形成することとなる。別の実施例では、反転した電荷の変異Ｋ３７０
Ｄと、操作された空洞Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖとを含有する
Ｆｃドメイン単量体と、反転した電荷の変異Ｅ３５７Ｋと、操作された突起Ｓ３５４Ｃ及
びＴ３６６Ｗとを含有する他のＦｃドメイン単量体とを生成することができ、選択的に結
合してＦｃドメインを形成することとなる。
本明細書に詳細に記載するように、本開示のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃ
ドメインを有するＦｃコンストラクト）を含有する実質的に均質な組成物は、Ｆｃコンス
トラクト内の二つのＦｃドメイン単量体間でオールグリシンスペーサーを用いること（ア
プローチ（ａ））、Ｆｃコンストラクト内にＣ末端リシンを欠いているポリペプチドを用
いること（アプローチ（ｂ））、及び／又は、ヘテロ二量体形成選択モジュールの二つの
セット（（ｉ）異なる逆電荷の変異を有するヘテロ二量体形成選択モジュール及び（ｉｉ
）操作された空洞及び突起を有するヘテロ二量体形成選択モジュール）を用いて、Ｆｃコ
ンストラクト内の一部のＦｃドメイン単量体によってヘテロ二量体Ｆｃドメイン形成を促
進すること（アプローチ（ｃ））によって、達成され得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメ
インを有するＦｃコンストラクト）を含有する実質的に均質な組成物は、アプローチ（ａ
）を経て達成され得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメ
インを有するＦｃコンストラクト）を含有する実質的に均質な組成物は、アプローチ（ｂ
）を経て達成され得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメ
インを有するＦｃコンストラクト）を含有する実質的に均質な組成物は、アプローチ（ｃ
）を経て達成され得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメ
インを有するＦｃコンストラクト）を含有する実質的に均質な組成物は、アプローチ（ａ
）及び（ｂ）を組み合わせることで達成され得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメ
インを有するＦｃコンストラクト）を含有する実質的に均質な組成物は、アプローチ（ａ
）及び（ｃ）を組み合わせることで達成され得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメ
インを有するＦｃコンストラクト）を含有する実質的に均質な組成物は、アプローチ（ｂ
）及び（ｃ）を組み合わせることで達成され得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメ
インを有するＦｃコンストラクト）を含有する実質的に均質な組成物は、アプローチ（ａ
）、（ｂ）及び（ｃ）を組み合わせることで達成され得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクトを含有する医薬組成物の均
質性をさらに向上させるために、組成物中のＦｃコンストラクト内のポリペプチドの一つ
又は複数におけるＮ末端Ａｓｐが、Ｇｌｎに変異される。本明細書に記載のＦｃコンスト
ラクトの実質的に均質な集団を含む組成物の一部の実施形態では、組成物中のＦｃコンス
トラクト内のポリペプチドのそれぞれにおけるＮ末端Ａｓｐが、Ｇｌｎに変異される。
また、本開示のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンス
トラクト）では、Ｆｃドメイン単量体を連結するリンカーの長さが、Ｆｃコンストラクト
のフォールディング効率に影響を及ぼす。一部の実施形態では、少なくとも４、８又は１
２のグリシン（例えば、４～３０、８～３０、１２～３０のグリシン、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：２６及び２７）を有するリンカーを用いて、本開示のＦｃコンストラクト内のＦｃド
メイン単量体を連結することができる。
Ｉ．Ｆｃドメイン単量体
Ｆｃドメイン単量体は、ヒンジドメイン、ＣＨ２抗体定常ドメイン、及びＣＨ３抗体定
常ドメインを含む。Ｆｃドメイン単量体は、例えばヒト、マウス又はラットである様々な
起源のものとすることが可能である。Ｆｃドメイン単量体は、免疫グロブリン抗体アイソ
タイプＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ又はＩｇＤのものとすることが可能である。Ｆｃ
ドメイン単量体はまた、任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、Ｉ
ｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）のものとしてもよい。Ｆｃドメイン単量
体はまた複合型であってもよく、例えば、ヒンジ及びＩｇＧ１からのＣＨ２及びＩｇＡか
らのＣＨ３による複合型、又は、ヒンジ及びＩｇＧ１からのＣＨ２であるがＩｇＧ３から
のＣＨ３による複合型であってもよい。Ｆｃドメイン単量体の二量体は、白血球表面上に
ある受容体である、例えばＦｃγＲＩＩＩａであるＦｃ受容体と結合することが可能なＦ
ｃドメイン（本明細書でさらに規定される）である。本開示では、Ｆｃドメイン単量体の
ＣＨ３抗体定常ドメインが、ＣＨ３－ＣＨ３抗体定常ドメインの界面におけるアミノ酸置
換を含有して、それらの相互による会合を促進し得る。他の実施形態では、Ｆｃドメイン
単量体は、例えばアルブミン結合ペプチド又は精製用ペプチドである、Ｎ末端又はＣ末端
に付加するさらなる部分を含む。本開示では、Ｆｃドメイン単量体は、例えばＶＨ、ＶＬ
、相補性決定領域（ＣＤＲ）又は超可変領域（ＨＶＲ）である、いずれの種類の抗体可変
領域も含有しない。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメ
インを有するＦｃコンストラクト）内のＦｃドメイン単量体は、野生型のＦｃドメイン単
量体配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）と、少なくとも９５％同一（例えば、少なくとも
９７％、９９％又は９９．５％同一）である配列を含み得る、該配列からなり得る、又は
、実質的に該配列からなり得る。一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラ
クト（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト）内のＦｃドメイン単量
体は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例
えば置換、例えば保存的置換）をもつ野生型のＦｃドメイン単量体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：４２）である配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得
る。一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃド
メインを有するＦｃコンストラクト）内のＦｃドメイン単量体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
４４、４６、４８、及び５０～５３（実施例１、表４及び５を参照）のいずれか一つの配
列と、少なくとも９５％同一（例えば、少なくとも９７％、９９％又は９９．５％同一）
である配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。一部
の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメインを
有するＦｃコンストラクト）内のＦｃドメイン単量体は、最大１０個（９、８、７、６、
５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４、４６、４８、及び５０～５３（実施例１、表４及び５を参照
）のいずれか一つである配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列か
らなり得る。一部の場合では、これらのアミノ酸修飾は、グリシンスペーサーの長さの変
化に加えたものであり、すなわち、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２、又は
１個）の単一アミノ酸修飾は、すべてのグリシンスペーサー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：：２
３）の長さの変化に加えたものである。或る実施形態では、Ｆｃコンストラクト内のＦｃ
ドメイン単量体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８、５２、及び５３のいずれか一つの配列と
、少なくとも９５％同一（例えば、少なくとも９７％、９９％又は９９．５％同一）であ
る配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。或る実施
形態では、Ｆｃコンストラクト内のＦｃドメイン単量体は、最大１０個（９、８、７、６
、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をも
つ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８、５２、及び５３のいずれか一つである配列を含み得る、
該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。
Figure 2022191261000107
Figure 2022191261000108
ＩＩ．Ｆｃドメイン
本明細書で規定するように、Ｆｃドメインは、ＣＨ３抗体定常ドメイン間の相互作用に
よって二量体形成する二つのＦｃドメイン単量体を含む。本開示では、Ｆｃドメインは例
えばＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ又はＨＶＲである抗体可変領域を含まない。Ｆｃドメインは、Ｆ
ｃ受容体、例えばＦｃ－ガンマ受容体（すなわち、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ））、Ｆｃ－
アルファ受容体（すなわち、Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ））、Ｆｃ－イプシロン受容体（す
なわち、Ｆｃε受容体（ＦｃεＲ））及び／又は胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に結合す
る最小限の構造を形成する。一部の実施形態では、本開示のＦｃドメインは、Ｆｃγ受容
体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ（
ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ））及び
／又はＦｃγＲＩＶ及び／又は胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に結合する。
ＩＩＩ．Ｆｃドメイン修飾
修飾されていないＦｃドメイン単量体は、天然のヒトＦｃドメイン単量体又はＷＴヒト
Ｆｃドメイン単量体とすることが可能である。Ｆｃドメイン単量体は、ヒンジ、ＣＨ２ド
メイン及びＣＨ３ドメインを含む天然のヒトＦｃドメイン単量体、もしくは、定方向の二
量体形成を調整又は促進する、最大１６個（例えば、最大２、３、４、５、６、７、８、
９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６個）のアミノ酸修飾（例えば、単一ア
ミノ酸修飾）を有するその変異体とすることが可能である。Ｆｃドメイン単量体は、Ｉｇ
Ｇ１ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ３ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ４ Ｆ
ｃドメイン、又はそれらの組み合わせであり得る。Ｆｃドメイン単量体は、最大１０個（
９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば、置換、例え
ば、保存的置換）を有する、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ
３ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、又はそれらの組み合わせであり得る。一部
の場合では、Ｆｃドメイン単量体は、最大１０個のアミノ酸修飾（例えば、２、３、４、
５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、又は１６個以下のアミノ酸
修飾）を有するヒトＩｇＧ Ｆｃドメイン単量体である。一部の場合では、Ｆｃドメイン
単量体は、１０個以下のアミノ酸修飾（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０
、１１、１２、１３、１４、１５、又は１６個以下のアミノ酸修飾）を有するＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：４２の配列を含む、該配列からなる、又は実質的に該配列からなる。一部の場
合では、Ｆｃドメインは少なくとも一つのアミノ酸修飾を含むものであって、該アミノ酸
修飾は、（ｉ）一つ又は複数のＦｃ受容体に対する結合親和性、（ｉｉ）エフェクター機
能、（ｉｉｉ）Ｆｃドメインの硫酸化のレベル、（ｉｖ）半減期、（ｖ）プロテアーゼ耐
性、（ｖｉ）Ｆｃドメイン安定性、及び／又は、（ｖｉｉ）分解に対する感度、の一つ又
は複数を変える（例えば、修飾されていないＦｃドメインと比較して）。一部の場合では
、Ｆｃドメインは１６以下のアミノ酸修飾（例えば、ＣＨ３ドメインにおける２以下、３
以下、４以下、５以下、６以下、７以下、８以下、９以下、１０以下、１１以下、１２以
下、１３以下、１４以下、１５以下又は１６以下のアミノ酸修飾）を含む。
本開示のＦｃコンストラクトの少なくとも一つのＦｃドメインは、位置Ｉ２５３（例え
ば、Ｉ２５３Ａ、Ｉ２５３Ｃ、Ｉ２５３Ｄ、Ｉ２５３Ｅ、Ｉ２５３Ｆ、Ｉ２５３Ｇ、Ｉ２
５３Ｈ、Ｉ２５３Ｉ、Ｉ２５３Ｋ、Ｉ２５３Ｌ、Ｉ２５３Ｍ、Ｉ２５３Ｎ、Ｉ２５３Ｐ、
Ｉ２５３Ｑ、Ｉ２５３Ｒ、Ｉ２５３Ｓ、Ｉ２５３Ｔ、Ｉ２５３Ｖ、Ｉ２５３Ｗ、又はＩ２
５３Ｙ）及び／又は位置Ｒ２９２（例えば、Ｒ２９２Ｐ、Ｒ２９２Ｄ、Ｒ２９２Ｅ、Ｒ２
９２Ｌ、Ｒ２９２Ｑ、Ｒ２９２Ｒ、Ｒ２９２Ｔ、及びＲ２９２Ｙ）でのアミノ酸修飾を含
む。一部の例では、少なくとも一つのＦｃドメインは、例えば、Ｉ２５３Ａなどの位置Ｉ
２５３でのアミノ酸修飾を含む。一部の例では、少なくとも一つのＦｃドメインは、例え
ば、Ｒ２９２Ｐなどの位置Ｒ２９２でのアミノ酸修飾を含む。Ｆｃドメインは、位置Ｉ２
５３（例えば、Ｉ２５３Ａ）及び位置Ｒ２９２（例えば、Ｒ２９２Ｐ）でのアミノ酸修飾
の両方を含み得る。例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクトは、一つ、
二つ、又は三つすべてのＦｃドメインにおける位置Ｉ２５３（例えば、Ｉ２５３Ａ）での
アミノ酸修飾を含んでもよく、及び追加的又は代替的に、一つ、二つ、又は三つすべての
Ｆｃドメインの位置Ｒ２９２（例えば、Ｒ２９２Ｐ）でのアミノ酸修飾を含んでもよい。
Ｉ２５３Ａ及び／又はＲ２９２Ｐアミノ酸修飾を有する例示的なＦｃコンストラクトを図
２及び図１８Ｂ～１８Ｏに示す。
一部の実施形態では、半減期を変えるＦｃドメイン修飾は、例えば位置Ｉ２５３でのＦ
ｃドメインの修飾によって、修飾ＦｃドメインのＦｃＲｎへの結合を減少させることがで
きる。位置Ｉ２５３での修飾は、アミノ酸置換を含み得るが、ここで位置Ｉ２５３でのア
ミノ酸は、天然もしくは非天然のアミノ酸、位置Ｉ２５３でのアミノ酸の欠失、又はＦｃ
ドメインの位置Ｉ２５３での一つもしくは複数のアミノ酸残基の挿入で置換される。アミ
ノ酸Ｉ２５３の修飾は、複数の修飾（例えば、他の残基位置で、例えばＲ２９２）を含む
組み合わせ、例えば一つ又は複数のアミノ酸の置換、欠失及び／又は挿入の組み合わせの
部分とすることが可能である。特定の実施形態では、Ｆｃコンストラクトは、例えば、三
つのＦｃドメインを含有してもよく、少なくとも一つのＦｃドメインは、位置Ｉ２５３で
の修飾を含有する。例えば、位置Ｉ２５３での野生型アミノ酸残基、例えば、イソロイシ
ン（Ｉ）は、天然又は非天然のアミノ酸、例えば、アラニン（Ａ）で置換されてもよい。
一部の例では、位置Ｉ２５３での各アミノ酸修飾は、例えば、Ｉ２５３Ａ、Ｉ２５３Ｃ、
Ｉ２５３Ｄ、Ｉ２５３Ｅ、Ｉ２５３Ｆ、Ｉ２５３Ｇ、Ｉ２５３Ｈ、Ｉ２５３Ｉ、Ｉ２５３
Ｋ、Ｉ２５３Ｌ、Ｉ２５３Ｍ、Ｉ２５３Ｎ、Ｉ２５３Ｐ、Ｉ２５３Ｑ、Ｉ２５３Ｒ、Ｉ２
５３Ｓ、Ｉ２５３Ｔ、Ｉ２５３Ｖ、Ｉ２５３Ｗ、及びＩ２５３Ｙから独立して選択される
。
他の実施形態では、半減期を変えるＦｃドメイン修飾は、例えば位置Ｒ２９２でのＦｃ
ドメインの修飾によって、修飾ＦｃドメインのＦｃγＲＩＩｂへの結合を変えることがで
きる。位置Ｒ２９２での修飾は、アミノ酸置換を含み得るが、ここで位置Ｒ２９２でのア
ミノ酸は、天然もしくは非天然のアミノ酸、位置Ｒ２９２でのアミノ酸の欠失、又はＦｃ
ドメインの位置Ｒ２９２での一つもしくは複数のアミノ酸残基の挿入で置換される。アミ
ノ酸２９２の修飾は、複数の修飾（例えば、他の残基位置で、例えばＩ２５３）を含む組
み合わせ、例えば一つ又は複数のアミノ酸の置換、欠失及び／又は挿入の組み合わせの部
分とすることが可能である。特定の実施形態では、Ｆｃコンストラクトは、例えば、三つ
のＦｃドメインを含有してもよく、少なくとも一つのＦｃドメインは、位置Ｒ２９２での
修飾を含有する。例えば、位置２９２での野生型アミノ酸残基、例えば、アルギニン（Ｒ
）は、天然又は非天然のアミノ酸、例えば、プロリン（Ｐ）で置換されてもよい。一部の
例では、位置Ｒ２９２での各アミノ酸修飾は、例えば、Ｒ２９２Ｐ、Ｒ２９２Ｄ、Ｒ２９
２Ｅ、Ｒ２９２Ｌ、Ｒ２９２Ｑ、Ｒ２９２Ｒ、Ｒ２９２Ｔ、及びＲ２９２Ｙから独立して
選択される。
Ｆｃ受容体に対する変更された結合親和性をもつ例示的なＦｃドメインには、二重変異
体Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆを含有するＦｃ単量体が含まれる。これまでに、Ｓ２６７Ｅ／
Ｌ３２８Ｆ変異が、ＦｃγＲＩＩｂ受容体へのＩｇＧ１の結合を有意に特異的に高めるこ
とが証明されている（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
４５ ２００８）。
例えばＩ２５３Ａなどの位置Ｉ２５３で、例えば半減期を変えるためのアミノ酸修飾は
、ＦｃコンストラクトのＦｃドメイン、例えば、コンストラクト４（図２）の少なくとも
一つ（例えば、１、２、３、４、又は５個）で発生し得る。他の実施形態では、例えばＲ
２９２Ｐ などの位置Ｒ２９２でのアミノ酸修飾は、ＦｃコンストラクトのＦｃドメイン
、例えば、コンストラクト４（図２）の少なくとも一つ（例えば、１、２、３、４、又は
５個）で発生し得る。一部の実施形態では、例えば、アミノ酸修飾は、例えばＩ２５３Ａ
などの位置Ｉ２５３、及び例えばＲ２９２Ｐなどの位置Ｒ２９２の両方で発生し得る。例
えば、Ｆｃコンストラクト、例えば、コンストラクト４（図２）は、例えばＩ２５３Ａな
どのＩ２５３で、アミノ酸修飾を有する一つのＦｃドメインを含有してもよく、また例え
ばＲ２９２ＰなどのＲ２９２で、アミノ酸修飾を有する少なくとも一つ（例えば、１、２
、又は３個）のＦｃドメインを含有していてもよい。別の実施形態では、Ｆｃコンストラ
クト、例えば、コンストラクト４（図２）は、例えばＩ２５３ＡなどのＩ２５３で、アミ
ノ酸修飾を有する二つのＦｃドメインを含有してもよく、また例えばＲ２９２ＰなどのＲ
２９２で、アミノ酸修飾を有する少なくとも一つ（例えば、１、２、又は３個）のＦｃド
メインを含有していてもよい。さらに別の実施形態では、Ｆｃコンストラクト、例えば、
コンストラクト４は、例えばＩ２９３ＡなどのＩ２５３で、アミノ修飾を有する三つのＦ
ｃドメインを含有してもよく、また例えばＲ２９２ＰなどのＲ２９２で、アミノ酸修飾を
有する少なくとも一つ（例えば、１、２、又は３個）のＦｃドメインを含有していてもよ
い。例えばＩ２９３Ａ及び／又はＲ２９２Ｐなどの、アミノ酸位置Ｉ２５３及び／又はＲ
２９２での修飾を有する例示的なＦｃコンストラクトを、図１８Ａ～１８Ｏに示す。図１
８Ａ～１８Ｏには示されないが、本開示により意図されているのは、Ｆｃドメインを構成
するＦｃドメイン単量体内で、例えば、アミノ酸位置Ｉ２５３及び／又はＲ２９２でのア
ミノ酸修飾の不均質な組み合わせを有するＦｃコンストラクトである。
ＩＶ．二量体形成選択モジュール
本開示では、二量体形成選択モジュールは、二つのＦｃドメイン単量体の好ましい対形
成を促進してＦｃドメインを形成する、Ｆｃドメイン単量体の部分である。詳細には、二
量体形成選択モジュールは、二つのＦｃドメイン単量体の相互作用するＣＨ３抗体定常ド
メイン間の界面に位置するアミノ酸置換を含む、Ｆｃドメイン単量体のＣＨ３抗体定常ド
メインの部分である。二量体形成選択モジュールにおいては、アミノ酸置換が、それら置
換に選択されたアミノ酸の適合性の結果として、二つのＣＨ３抗体定常ドメインの好まし
い二量体形成を行う。好ましいＦｃドメインの最終形態は、二量体形成選択モジュールを
もたないＦｃドメイン単量体で、又は二量体形成選択モジュール内に適合しないアミノ酸
置換をもつＦｃドメイン単量体で形成される他のＦｃドメインに対して選択的である。こ
の種のアミノ酸置換は、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（登録商標）突然変異誘発等のこの技術分
野で周知の従来の分子クローニング技術を用いて行うことが可能である。
一部の実施形態では、二量体形成選択モジュールは、ＣＨ３抗体定常ドメイン内に操作
された空洞（本明細書でさらに説明する）を含む。他の実施形態では、二量体形成選択モ
ジュールは、ＣＨ３抗体定常ドメイン内に操作された突起（本明細書でさらに説明する）
を含む。選択的にＦｃドメインを形成するために、適合可能な二量体形成選択モジュール
をもつ二つのＦｃドメイン単量体、例えば操作された空洞を含む一方のＣＨ３抗体定常ド
メインと、操作された突起を含むもう一方のＣＨ３抗体定常ドメインとを結合して、Ｆｃ
ドメイン単量体の空洞に突起が挿入された対を形成する。操作された突起及び操作された
空洞は、ヘテロ二量体形成選択モジュールの例であり、それらは、適合するヘテロ二量体
形成選択モジュールを有する二つのＦｃドメイン単量体の好ましいヘテロ二量体形成を促
進するために、Ｆｃドメイン単量体のＣＨ３抗体定常ドメイン内に作製することが可能で
ある。
他の実施形態では、正電荷をもつアミノ酸置換を含有する二量体形成選択モジュールを
もつＦｃドメイン単量体と、負電荷をもつアミノ酸置換を含有する二量体形成選択モジュ
ールをもつＦｃドメイン単量体とを選択的に結合して、電荷をもつアミノ酸の好ましい静
電的ステアリング（本明細書においてさらに説明する）を経てＦｃドメインを形成するこ
とができる。一部の実施形態では、Ｆｃドメイン単量体は、以下の正電荷をもつアミノ酸
置換及び負電荷をもつアミノ酸置換の一つを含み得る：Ｋ３９２Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、Ｄ３９
９Ｋ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４３９Ｄ及びＫ４３９Ｅ。一実施例では、正電荷をも
つアミノ酸置換、例えばＤ３５６Ｋ又はＥ３５７Ｋを含有するＦｃドメイン単量体と、負
電荷をもつアミノ酸置換、例えばＫ３７０Ｄ又はＫ３７０Ｅを含有するＦｃドメイン単量
体とが選択的に結合して、電荷をもつアミノ酸の好ましい静電的ステアリングを経てＦｃ
ドメインを形成する。別の実施例では、Ｅ３５７Ｋを含有するＦｃドメイン単量体と、Ｋ
３７０Ｄを含有するＦｃドメイン単量体とが選択的に結合して、電荷をもつアミノ酸の好
ましい静電的ステアリングを経てＦｃドメインを形成する。一部の実施形態では、逆電荷
のアミノ酸置換を、ヘテロ二量体形成選択モジュールとして用い得るものであって、異な
るが適合する逆電荷のアミノ酸置換を含有する二つのＦｃドメイン単量体が結合して、ヘ
テロ二量体Ｆｃドメインを形成する。特定の二量体形成選択モジュールを、さらに以下に
説明される表１及び２Ａにさらに列記しているが、これらに限定されない。
他の実施形態では、二つのＦｃドメイン単量体が、ＣＨ３ドメイン間の界面における電
荷をもつ残基の環内の少なくとも二つの位置において、同一の逆電荷の変異を含有するホ
モ二量体形成選択モジュールを含む。ホモ二量体形成選択モジュールは、Ｆｃドメイン単
量体のホモ二量体形成を促進してホモ二量体Ｆｃドメインを形成する、逆電荷のアミノ酸
置換である。二つのＦｃドメイン単量体内の残基の２以上の相補的な対の両要素の電荷が
反転していることによって、変異したＦｃドメイン単量体は同じ変異の配列のＦｃドメイ
ン単量体に対して相補性を維持するが、こうした変異なしではＦｃドメイン単量体に対す
る相補性はより小さい。一実施形態では、Ｆｃドメインは、二重変異体である、Ｋ４０９
Ｄ／Ｄ３９９Ｋ、Ｋ３９２Ｄ／Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ／Ｋ３７０Ｅ、Ｄ３５６Ｋ／Ｋ４
３９Ｄ、Ｋ４０９Ｅ／Ｄ３９９Ｋ、Ｋ３９２Ｅ／Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋ／Ｋ３７０Ｄ又
はＤ３５６Ｋ／Ｋ４３９Ｅを含むＦｃ単量体を含む。別の実施形態では、Ｆｃドメインは
、例えばＫ４０９Ｄ／Ｄ３９９Ｋ／Ｅ３５７Ｋ／Ｋ３７０Ｅである二重変異体の任意の対
を結合した四重変異体を含むＦｃドメイン単量体を含む。ホモ二量体形成選択モジュール
の例を、表２Ｂ及び２Ｃにさらに示している。
さらなる実施形態では、（ｉ）少なくとも一つの逆電荷の変異と、（ｉｉ）少なくとも
一つの操作された空洞又は少なくとも一つの操作された突起とを含有するＦｃドメイン単
量体を、（ｉ）少なくとも一つの逆電荷の変異と、（ｉｉ）少なくとも一つの操作された
突起又は少なくとも一つの操作された空洞とを含有する他のＦｃドメイン単量体と選択的
に結合して、Ｆｃドメインを形成することができる。例えば、反転した電荷の変異Ｋ３７
０Ｄと、操作された空洞Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖとを含有す
るＦｃドメイン単量体と、反転した電荷の変異Ｅ３５７Ｋと、操作された突起Ｓ３５４Ｃ
及びＴ３６６Ｗとを含有する他のＦｃドメイン単量体とを選択的に結合して、Ｆｃドメイ
ンを形成する。
こうしたＦｃドメインの形成は、ＣＨ３抗体定常ドメイン内の適合するアミノ酸置換に
よって促される。ＣＨ３－ＣＨ３界面において、二つの二量体形成選択モジュールが適合
しないアミノ酸置換を含有する場合、例えば、操作された空洞を両方が含有する、操作さ
れた突起を両方が含有する、又は、同じ電荷をもつアミノ酸を両方が含有する場合は、ヘ
テロ二量体Ｆｃドメインの形成は促されない。
さらに、画成されたＦｃドメイン単量体によるＦｃドメインの形成を促進するために用
いる他の方法には、ヘテロ二量体の形成を可能にする、ロイシンジッパーの単量体α－へ
リックスのＦｃドメイン単量体それぞれに対するＣ末端融合を含むＬＵＺ－Ｙアプローチ
（米国特許出願公開公報第ＷＯ２０１１０３４６０５号）のみならず、ＩｇＡ及びＩｇＧ
ＣＨ３配列の交互セグメントをそれぞれが含むヘテロ二量体のＦｃドメイン単量体によ
りＦｃドメインを生成する、ストランド交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ（ｓｔｒａｎｄ－ｅ
ｘｃｈａｎｇｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｄｏｍａｉｎ））体のアプローチ（Ｄａｖｉｓ
ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２３：１９５－２０２，２
０１０）が含まれるが、これらに限定されない。
Ｖ．操作された空洞及び操作された突起
操作された空洞及び操作された突起の使用（すなわち、「ノブイントゥホール」ストラ
テジー）は、Ｃａｒｔｅｒ及びその共同研究者（Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏ
ｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９：６１７－６１２，１９９６；Ａｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ
Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２７０：２６－３５，１９９７；Ｍｅｒｃｈａｎｔ ｅｔ ａｌ．，
Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：６７７－６８１，１９９８）によって記述されて
いる。ノブとホールとの相互作用は、ヘテロ二量体形成を支持するが、一方、ノブ間及び
ホール間の相互作用は、立体的な不一致及び好ましい相互作用の損失に起因してホモ二量
体形成を妨げる。「ノブイントゥホール」技術は、米国特許第５，７３１，１６８号にも
開示されている。
本開示では、操作された空洞及び操作された突起を、本明細書に記載のＦｃコンストラ
クトの調製に用いる。操作された空洞は、或るタンパク質中の本来のアミノ酸が、より低
分子量の側鎖をもつ異なるアミノ酸で置換されたときに形成される空隙である。操作され
た突起は、或るタンパク質中の本来のアミノ酸が、より高分子量の側鎖をもつ異なるアミ
ノ酸で置換されたときに形成される突起である。詳細には、置換されようとするアミノ酸
は、Ｆｃドメイン単量体のＣＨ３抗体定常ドメイン内にあり、二つのＦｃドメイン単量体
の二量体形成に関与する。一部の実施形態では、一方のＣＨ３抗体定常ドメイン内の操作
された空洞は、もう一方のＣＨ３抗体定常ドメイン内の操作された突起を収納するように
形成されるため、両ＣＨ３抗体定常ドメインが、二つのＦｃドメイン単量体の二量体形成
を促進する又は支持する二量体形成選択モジュール（例えば、ヘテロ二量体形成選択モジ
ュール）（上記に記載した）として機能する。他の実施形態では、一方のＣＨ３抗体定常
ドメイン内の操作された空洞は、もう一方のＣＨ３抗体定常ドメイン内の本来のアミノ酸
をより良好に収納するように形成されている。さらに他の実施形態では、一方のＣＨ３抗
体定常ドメイン内の操作された突起は、もう一方のＣＨ３抗体定常ドメイン内の本来のア
ミノ酸とのさらなる相互作用を形成するように形成されている。
操作された空洞は、チロシン又はトリプトファン等のより長い側鎖を含有するアミノ酸
を、アラニン、バリン又はトレオニン等のより短い側鎖を含有するアミノ酸で置換するこ
とによって構築することが可能である。詳細には、一部の二量体形成選択モジュール（例
えば、ヘテロ二量体形成選択モジュール）（上記でさらに記載した）は、ＣＨ３抗体定常
ドメイン内にＹ４０７Ｖ変異等の操作された空洞を含有する。同様に、操作された突起は
、より短い側鎖を含有するアミノ酸を、より長い側鎖を含有するアミノ酸で置換すること
によって構築することが可能である。詳細には、一部の二量体形成選択モジュール（例え
ば、ヘテロ二量体形成選択モジュール）（上記でさらに記載した）は、ＣＨ３抗体定常ド
メイン内にＴ３６６Ｗ変異等の操作された突起を含有する。本開示では、操作された空洞
及び操作された突起はまた、ヘテロ二量体形成を促進する、ＣＨ３ドメイン間のジスルフ
ィド結合操作と組み合わされる。一実施例では、操作された空洞Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ
、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含有するＦｃドメイン単量体は、操作された突起Ｓ３５４
Ｃ及びＴ３６６Ｗを含有する他のＦｃドメイン単量体と選択的に結合して、Ｆｃドメイン
を形成することができる。別の実施例では、操作された空洞Ｙ３４９Ｃを含有するＦｃド
メイン単量体と、操作された突起Ｓ３５４Ｃを含有するＦｃドメイン単量体とが選択的に
結合して、Ｆｃドメインを形成することができる。ジスルフィド結合操作又は構造的計算
のいずれかと組み合わせた（ＨＡ－ＴＦ混合）、他の操作された空洞及び操作された突起
を表１に示すが、これらに限定されない。
（表１）
Figure 2022191261000109
ＣＨ３抗体定常ドメイン内の本来のアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換すること
は、本来のアミノ酸残基をコードする核酸を変更することによって達成することが可能で
ある。置換することが可能である本来のアミノ酸残基の数の上限は、界面における十分な
相互作用を維持したままにすることを考えれば、ＣＨ３抗体定常ドメインの界面における
残基の総数である。一部の場合では、ＣＨ３抗体定常ドメインは、１６個以下（例えば、
２、４、６、８、１０、１２、１４、又は１６以下）の単一アミノ酸修飾を有する。
ＶＩ．静電的ステアリング
静電的ステアリングは、より高次のタンパク質分子の形成を制御する、ペプチド、タン
パク質ドメイン及びタンパク質内の反対の電荷をもつアミノ酸間の好ましい静電的相互作
用の利用である。静電的ステアリングの効果を用いて、二重特異性抗体の生成の際のヘテ
ロ二量体形成に有利に、ホモ二量体の形成を低減するように抗体ドメインの相互作用を変
える方法が、米国特許出願公開公報第２０１４－００２４１１１号に開示されている。
本開示では、静電的ステアリングを用いて、Ｆｃドメイン単量体の二量体形成及びＦｃ
コンストラクトの形成を制御する。特に、静電的ステアリングを用いてＦｃドメイン単量
体の二量体形成を制御することは、ＣＨ３－ＣＨ３界面を形成する一つ又は複数のアミノ
酸残基が、正電荷をもつか又は負電荷をもつアミノ酸残基で置換されるため、導入された
特定の電荷をもつアミノ酸に応じて、相互作用は静電的に好ましくなるか又は好ましくな
いものとなる。一部の実施形態では、リシン、アルギニン又はヒスチジン等、界面の正電
荷をもつアミノ酸が、アスパラギン酸又はグルタミン酸等の負電荷をもつアミノ酸で置換
される。他の実施形態では、界面の負電荷をもつアミノ酸が、正電荷をもつアミノ酸で置
換される。電荷をもつアミノ酸は、相互作用するＣＨ３抗体定常ドメインの一方又は両方
に導入され得る。相互作用するＣＨ３抗体定常ドメインに電荷をもつアミノ酸を導入する
ことによって、二量体形成選択モジュール（上記においてさらに説明した）が形成される
が、それは電荷をもつアミノ酸間の相互作用の結果としての静電的ステアリング効果で制
御されるとおりに、Ｆｃドメイン単量体の二量体を選択的に形成することが可能である。
一部の実施形態では、静電的ステアリング効果で制御されるとおりにＦｃドメイン単量
体の二量体を選択的に形成することが可能である、反転した電荷を含む二量体形成選択モ
ジュールを形成するために、二つのＦｃドメイン単量体は、ヘテロ二量体形成又はホモ二
量体形成を経て選択的に形成され得る。
Ｆｃドメイン単量体のヘテロ二量体形成
Ｆｃドメイン単量体のヘテロ二量体形成は、限定するものではないが表２Ａに含むよう
な電荷残基対などである、二つのＦｃドメイン単量体内に異なるものであるが適合する変
異を導入することによって促進することが可能である。一部の実施形態では、Ｆｃドメイ
ン単量体は、以下の正電荷をもつアミノ酸置換及び負電荷をもつアミノ酸置換の一つを含
み得る：Ｄ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｒ、Ｅ３５７Ｋ、Ｅ３５７Ｒ、Ｋ３７０Ｄ、Ｋ３７０Ｅ、
Ｋ３９２Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、Ｄ３９９Ｋ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４３９Ｄ及びＫ４３
９Ｅ。一実施例では、正電荷をもつアミノ酸置換、例えばＤ３５６Ｋ又はＥ３５７Ｋを含
有するＦｃドメイン単量体と、負電荷をもつアミノ酸置換、例えばＫ３７０Ｄ又はＫ３７
０Ｅを含有するＦｃドメイン単量体とが選択的に結合して、電荷をもつアミノ酸の好まし
い静電的ステアリングを経てＦｃドメインを形成する。別の実施例では、Ｅ３５７Ｋを含
有するＦｃドメイン単量体と、Ｋ３７０Ｄを含有するＦｃドメイン単量体とが選択的に結
合して、電荷をもつアミノ酸の好ましい静電的ステアリングを経てＦｃドメインを形成す
る。
例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクトでは、三つのうち二つのＦｃ
ドメインは、静電的ステアリング効果によって促進されるように、二つのＦｃドメイン単
量体のヘテロ二量体形成によって形成され得る。「ヘテロ二量体Ｆｃドメイン」という語
は、二つのＦｃドメイン単量体のヘテロ二量体形成によって形成されるＦｃドメインを指
すものであって、該二つのＦｃドメイン単量体は、これら二つのＦｃドメイン単量体の好
ましい形成を促進する異なる逆電荷の変異（ヘテロ二量体形成選択モジュール）（例えば
、表２Ａの変異を参照）を含有する。図１及び２に示すように、三つのＦｃドメインであ
る、一つのカルボキシル末端「幹」Ｆｃドメインと二つのアミノ末端「枝」Ｆｃドメイン
とを有するＦｃコンストラクトにおいては、アミノ末端「枝」Ｆｃドメインのそれぞれが
、ヘテロ二量体のＦｃドメイン（「枝ヘテロ二量体Ｆｃドメイン」とも称する）となり得
る（例えば、図１のＦｃドメイン単量体１０６及び１１４又はＦｃドメイン単量体１１２
及び１１６によって形成されるヘテロ二量体Ｆｃドメイン、図２のＦｃドメイン単量体２
０６及び２１４又はＦｃドメイン単量体２１２及び２１６によって形成されるヘテロ二量
体Ｆｃドメイン）。枝へテロ二量体Ｆｃドメインは、Ｅ３５７Ｋを含有するＦｃドメイン
単量体と、Ｋ３７０Ｄを含有する他のＦｃドメイン単量体とによって形成され得る。
（表２Ａ）
Figure 2022191261000110
Ｆｃドメイン単量体のホモ二量体形成
Ｆｃドメイン単量体のホモ二量体形成は、対称的であるように両Ｆｃドメイン単量体内
に、同一の静電的ステアリング変異（ホモ二量体形成選択モジュール）を導入することに
よって、促進することが可能である。一部の実施形態では、二つのＦｃドメイン単量体が
、ＣＨ３ドメイン間の界面における電荷をもつ残基の環内の少なくとも二つの位置におい
て、同一の逆電荷の変異を含有するホモ二量体形成選択モジュールを含む。二つのＦｃド
メイン単量体内の残基の２以上の相補的な対の両要素の電荷が反転していることによって
、変異したＦｃドメイン単量体は同じ変異の配列のＦｃドメイン単量体に対して相補性を
維持するが、こうした変異なしではＦｃドメイン単量体に対する相補性はより小さい。Ｆ
ｃドメイン単量体に導入されて、そのホモ二量体形成を促進し得る静電的ステアリング変
異を、表２Ｂ及び２Ｃに示しているが、これらに限定されない。一実施形態では、Ｆｃド
メインは、例えばＫ４０９Ｄ／Ｄ３９９Ｋである二重の逆電荷の変異体（表２Ｂ）をそれ
ぞれ含む、二つのＦｃドメイン単量体を含む。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、例え
ばＫ４０９Ｄ／Ｄ３９９Ｋ／Ｋ３７０Ｄ／Ｅ３５７Ｋである四重の逆電荷の変異体（表２
Ｃ）をそれぞれ含む、二つのＦｃドメイン単量体を含む。
例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクトでは、三つのうち一つのＦｃ
ドメインは、静電的ステアリング効果によって促進されるように、二つのＦｃドメイン単
量体のホモ二量体形成によって形成され得る。「ホモ二量体Ｆｃドメイン」という語は、
二つのＦｃドメイン単量体のホモ二量体形成によって形成されるＦｃドメインを指すもの
であって、該二つのＦｃドメイン単量体は、同一の逆電荷の変異（例えば、表２Ｂ及び２
Ｃの変異を参照）を含有する。図１及び２に示すように、三つのＦｃドメインである、一
つのカルボキシル末端「幹」Ｆｃドメインと二つのアミノ末端「枝」Ｆｃドメインとを有
するＦｃコンストラクトにおいては、カルボキシ末端「幹」Ｆｃドメインが、ホモ二量体
のＦｃドメイン（「幹ホモ二量体Ｆｃドメイン」とも称する）であり得る（例えば、図１
のＦｃドメイン単量体１０４及び１１０によって形成されるホモ二量体Ｆｃドメイン、図
２のＦｃドメイン単量体２０４及び２１０によって形成されるホモ二量体Ｆｃドメイン）
。幹ホモ二量体Ｆｃドメインは、二重変異体Ｋ４０９Ｄ／Ｄ３９９Ｋをそれぞれ含有する
二つのＦｃドメイン単量体によって形成され得る。
（表２Ｂ）
Figure 2022191261000111
（表２Ｃ）
Figure 2022191261000112
Figure 2022191261000113
ＣＨ３抗体定常ドメイン内の本来のアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換すること
は、本来のアミノ酸残基をコードする核酸を変更することによって達成することが可能で
ある。置換することが可能である本来のアミノ酸残基の数の上限は、界面における十分な
相互作用を維持したままにすることを考えれば、ＣＨ３抗体定常ドメインの界面における
残基の総数である。一部の場合では、ＣＨ３抗体定常ドメインは、１６個以下（例えば、
２、４、６、８、１０、１２、１４、又は１６以下）の単一アミノ酸修飾を有する。
ＶＩＩ．リンカー
本開示では、ポリペプチド又はタンパク質ドメイン及び／又は会合する非タンパク質部
分間における結合又は接続を説明するために、リンカーを用いる。一部の実施形態では、
リンカーは、少なくとも二つのＦｃドメイン単量体間の結合又は接続であり、それに対し
てリンカーが、第一のＦｃドメイン単量体のＣＨ３抗体定常ドメインのＣ末端を、第二の
Ｆｃドメイン単量体のヒンジドメインのＮ末端に対して、二つのＦｃドメイン単量体が互
いに直列に連結するように接続するものである。他の実施形態では、リンカーは、Ｆｃド
メイン単量体とそれに付加されるその他のタンパク質ドメインとの間の結合である。例え
ばリンカーは、Ｆｃドメイン単量体のＣＨ３抗体定常ドメインのＣ末端を、アルブミン結
合ペプチドのＮ末端に付加させることが可能である。
リンカーは、例えばペプチド結合である単純な共有結合、例えばポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ）ポリマーである合成ポリマー、又は、例えば化学的な連結である化学反応で
形成した任意の種類の結合とすることが可能である。リンカーがペプチド結合である場合
は、一方のタンパク質ドメインのＣ末端におけるカルボン酸基が、縮合反応でもう一方の
タンパク質ドメインのＮ末端におけるアミノ酸と反応して、ペプチド結合を形成すること
が可能である。詳細には、ペプチド結合は、この技術分野で周知の従来の有機化学反応を
経る合成手段により、又は、宿主細胞からの自然な産生により形成することが可能である
ものであって、例えば二つのＦｃドメイン単量体である、直列にしたタンパク質両方のＤ
ＮＡ配列をコードするポリヌクレオチド配列を、宿主細胞内の、例えばＤＮＡポリメラー
ゼ及びリボソームである、必要な分子機構によって両方のタンパク質をコードする隣接し
合うポリペプチドへと直接転写又は翻訳されることが可能である。
リンカーが合成ポリマー、例えばＰＥＧポリマーである場合においては、該ポリマーは
、各端部が反応性の化学官能基で官能化されて、二つのタンパク質の接続端にある末端ア
ミノ酸と反応することが可能である。
リンカー（上記に示したペプチド結合は除く）が化学反応により形成される場合におい
ては、例えばアミン、カルボン酸、エステル、アジド又はこの技術分野で通常用いられる
他の官能基である化学官能基が、一方のタンパク質のＣ末端と、もう一方のタンパク質の
Ｎ末端とのそれぞれに対して合成的に付加することが可能である。この二つの官能基はそ
の後、合成化学手段を経て反応して化学結合を形成することによって、二つのタンパク質
を一つに接続することが可能である。こうした化学的連結手順は、当業者にとってルーチ
ンである。
スペーサー
本開示では、二つのＦｃドメイン単量体間のリンカーは、３～２００のアミノ酸（例え
ば、３～２００、３～１８０、３～１６０、３～１４０、３～１２０、３～１００、３～
９０、３～８０、３～７０、３～６０、３～５０、３～４５、３～４０、３～３５、３～
３０、３～２５、３～２０、３～１５、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３
～５、３～４、４～２００、５～２００、６～２００、７～２００、８～２００、９～２
００、１０～２００、１５～２００、２０～２００、２５～２００、３０～２００、３５
～２００、４０～２００、４５～２００、５０～２００、６０～２００、７０～２００、
８０～２００、９０～２００、１００～２００、１２０～２００、１４０～２００、１６
０～２００又は１８０～２００のアミノ酸）（例えば、３～１５０、３～１００、３～６
０、３～５０、３～４０、３～３０、３～２０、３～１０、３～８、３～５、４～３０、
５～３０、６～３０、８～３０、１０～２０、１０～３０、１２～３０、１４～３０、２
０～３０、１５～２５、１５～３０、１８～２２及び２０～３０のアミノ酸）を含むアミ
ノ酸スペーサーとすることが可能である。一部の実施形態では、二つのＦｃドメイン単量
体間のリンカーは、少なくとも１２のアミノ酸、例えば、１２～２００のアミノ酸（例え
ば、１２～２００、１２～１８０、１２～１６０、１２～１４０、１２～１２０、１２～
１００、１２～９０、１２～８０、１２～７０、１２～６０、１２～５０、１２～４０、
１２～３０、１２～２０、１２～１９、１２～１８、１２～１７、１２～１６、１２～１
５、１２～１４又は１２～１３のアミノ酸）（例えば、１４～２００、１６～２００、１
８～２００、２０～２００、３０～２００、４０～２００、５０～２００、６０～２００
、７０～２００、８０～２００、９０～２００、１００～２００、１２０～２００、１４
０～２００、１６０～２００、１８０～２００又は１９０～２００のアミノ酸）を含有す
るアミノ酸スペーサーである。一部の実施形態では、二つのＦｃドメイン単量体間のリン
カーは、１２～３０のアミノ酸（例えば、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、
１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０のアミノ
酸）を含有するアミノ酸スペーサーである。好適なペプチドスペーサーはこの分野におい
て公知であり、例えば、グリシン及びセリン等のフレキシブルなアミノ酸残基を含有する
ペプチドリンカーを含む。或る実施形態では、スペーサーは、例えばＧＳ、ＧＧＳ、ＧＧ
ＧＧＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、ＧＧＳＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）又はＳＧＧＧ
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）の、複数のモチーフ又は繰り返しモチーフであるモチーフを
含有することが可能である。或る実施形態では、スペーサーは、例えば
Figure 2022191261000114
である、ＧＳのモチーフを含む２～１２のアミノ酸を含有することが可能である。他の或
る実施形態では、スペーサーは、例えば
Figure 2022191261000115
である、ＧＧＳのモチーフを含む３～１２のアミノ酸を含有することが可能である。さら
に他の実施形態では、スペーサーは、例えば
Figure 2022191261000116
である、ＧＧＳＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）のモチーフを含む４～２０のアミノ酸を含
有することが可能である。他の実施形態では、スペーサーは、例えば
Figure 2022191261000117
である、ＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のモチーフを含有することが可能である
。或る実施形態では、スペーサーは、
Figure 2022191261000118
である。
一部の実施形態では、二つのＦｃドメイン単量体間のスペーサーは、グリシン残基のみ
を含有し、例えば、少なくとも四つのグリシン残基（例えば、４～２００、４～１８０、
４～１６０、４～１４０、４～４０、４～１００、４～９０、４～８０、４～７０、４～
６０、４～５０、４～４０、４～３０、４～２０、４～１９、４～１８、４～１７、４～
１６、４～１５、４～１４、４～１３、４～１２、４～１１、４～１０、４～９、４～８
、４～７、４～６又は４～５のグリシン残基）（例えば、４～２００、６～２００、８～
２００、１０～２００、１２～２００、１４～２００、１６～２００、１８～２００、２
０～２００、３０～２００、４０～２００、５０～２００、６０～２００、７０～２００
、８０～２００、９０～２００、１００～２００、１２０～２００、１４０～２００、１
６０～２００、１８０～２００、又は１９０～２００のグリシン残基）を含有する。或る
実施形態では、スペーサーは、４～３０のグリシン残基（例えば、４、５、６、７、８、
９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２
、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０のグリシン残基）を有する。一部
の実施形態では、グリシン残基のみを含有するスペーサーは、グリコシル化（例えば、Ｏ
－結合型グリコシル化、Ｏ－グリコシル化とも称する）されていないものであり得るか、
又は、例えば一つ又は複数のセリン残基を含有するスペーサー
Figure 2022191261000119
と比較して、低減されたレベルのグリコシル化（例えば、低減されたレベルのＯ－グリコ
シル化）（例えば、キシロース、マンノース、シアル酸、フコース（Ｆｕｃ）及び／又は
ガラクトース（Ｇａｌ）等のグリカン（例えば、キシロース）による低減したレベルのＯ
－グリコシル化）を有し得る（実施例４を参照）。
一部の実施形態では、グリシン残基のみを含有するスペーサーは、Ｏ－グリコシル化（
例えば、Ｏ－キシロシル化）されていないものであり得るか、又は、例えば一つ又は複数
のセリン残基を含有するスペーサー
Figure 2022191261000120
と比較して、低減されたレベルのＯ－グリコシル化（例えば、低減されたレベルのＯ－キ
シロシル化）を有し得る。
一部の実施形態では、グリシン残基のみを含有するスペーサーは、タンパク質分解を受
けないものであり得るか、又は、例えば一つ又は複数のセリン残基を含有するスペーサー
Figure 2022191261000121
と比較して、低減されたタンパク質分解速度を有し得る（実施例４を参照）。
或る実施形態では、スペーサーは、例えば
Figure 2022191261000122
である、ＧＧＧＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）のモチーフを含有することが可能である
。或る実施形態では、スペーサーは、例えば
Figure 2022191261000123
である、ＧＧＧＧＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）のモチーフを含有することが可能であ
る。或る実施形態では、スペーサーは、
Figure 2022191261000124
である。
他の実施形態では、スペーサーはまた、グリシン及びセリン以外のアミノ酸を含有する
こと、例えば
Figure 2022191261000125
を含有することも可能である。
本開示における或る実施形態では、１２アミノ酸ペプチドスペーサー又は２０アミノ酸
ペプチドスペーサーを用いて、二つのＦｃドメイン単量体、それぞれ配列
Figure 2022191261000126
からなる１２アミノ酸ペプチドスペーサー及び２０アミノ酸ペプチドスペーサーである二
つのＦｃドメイン単量体が直列に接続される（例えば、図１のポリペプチド１０２及び１
０８、図２の２０２及び２０８）。他の実施形態では、配列
Figure 2022191261000127
からなる１８アミノ酸ペプチドスペーサーを用いることができる。
一部の実施形態では、二つのＦｃドメイン単量体間のスペーサーは、上記に記載したＳ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～３６のうちのいずれか一つの配列と、少なくとも７５％同一（例
えば、少なくとも７７％、７９％、８１％、８３％、８５％、８７％、８９％、９１％、
９３％、９５％、９７％、９９％又は９９．５％同一）である配列を含み得る、該配列か
らなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。一部の実施形態では、二つのＦｃドメ
イン単量体間のスペーサーは、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）
の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、上記に記載したＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１～３６のいずれか一つである配列を含み得る、該配列からなり得る、又は
、実質的に該配列からなり得る。或る実施形態では、二つのＦｃドメイン単量体間のスペ
ーサーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、１８、２６及び２７のいずれか一つの配列と、少
なくとも８０％同一（例えば、少なくとも８２％、８５％、８７％、９０％、９２％、９
５％、９７％、９９％又は９９．５％同一）である配列を含み得る、該配列からなり得る
、又は、実質的に該配列からなり得る。或る実施形態では、二つのＦｃドメイン単量体間
のスペーサーは、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ
酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、１８、２
６、及び２７のいずれか一つである配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的
に該配列からなり得る。或る実施形態では、二つのＦｃドメイン単量体間のスペーサーは
、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又は２７の配列と、少なくとも８０％同一（例えば、少なく
とも８２％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、９９％又は９９．５％
同一）である配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る
。或る実施形態では、二つのＦｃドメイン単量体間のスペーサーは、最大１０個（９、８
、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置
換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又は２７の配列である配列を含み得る、該配列か
らなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。
ＶＩＩＩ．血清タンパク質結合ペプチド
血清タンパク質をペプチドに結合することで、タンパク質薬剤の薬物動態を向上させる
ことが可能であり、特にここに記載するＦｃコンストラクトは、血清タンパク質結合ペプ
チドと融合し得る。
一例として、ここに記載の方法及び組成物に用いることが可能であるアルブミン結合ペ
プチドは、概して、この技術分野において公知である。一実施形態では、アルブミン結合
ペプチドは、配列ＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）を含む。一部の
実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７配列と、少なくと
も８０％同一（例えば、８０％、９０％又は１００％同一）である配列を含む、該配列か
らなる、又は実質的に該配列からなる。一部の実施形態では、アルブミン結合ペプチドは
、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば
置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７配列である配列を含む、該
配列からなる、又は実質的に該配列からなる。
本開示では、アルブミン結合ペプチドは、Ｆｃコンストラクト内の特定のポリペプチド
のＮ末端又はＣ末端に付加し得る。一実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、Ｆｃコ
ンストラクト１～４（図１及び２）内の一つ又は複数のポリペプチドのＣ末端に付加し得
る。別の実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、Ｆｃコンストラクト１～４（例えば
、図１のポリペプチド１０２及び１０８ならびに図２のポリペプチド２０２及び２０８）
内の直列に接続した二つのＦｃドメイン単量体をコードするポリペプチドのＣ末端に融合
することが可能である。さらに別の実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、直列に接
続した二つのＦｃドメイン単量体をコードするポリペプチド内の第二のＦｃドメイン単量
体と連結するＦｃドメイン単量体Ｃ末端（例えば、図１のＦｃドメイン単量体１１４及び
１１６、図２のＦｃドメイン単量体２１４及び２１６）に付加することが可能である。ア
ルブミン結合ペプチドは、例えば化学的連結である化学的手段を介して、Ｆｃコンストラ
クトと遺伝的に融合、又は、Ｆｃコンストラクトに付加することが可能である。所望であ
れば、Ｆｃコンストラクトとアルブミン結合ペプチドとの間にスペーサーを挿入すること
が可能である。理論に拘束されなくとも、開示のＦｃコンストラクト内にアルブミン結合
ペプチドを包含することが、血清アルブミンに対するその結合を介して治療用タンパク質
の長い保持をもたらし得るということが予測される。
ＩＸ．Ｆｃコンストラクト
概して、本開示は、Ｆｃドメインを有するＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃド
メインを有するＦｃコンストラクト）を特徴とする。これらは、例えばＦｃγＲＩＩＩａ
であるＦｃ受容体に対する単一の野生型Ｆｃドメインよりも大きい結合親和性及び／又は
アビディティーを有し得る。本開示は、Ｆｃドメインの二つのＦｃドメイン単量体が互い
と二量体を選択的に形成して、それによって望まない多量体又は凝集の形成を回避するよ
うに、相互作用する二つのＣＨ３抗体定常ドメインの界面においてアミノ酸を操作する方
法を開示する。Ｆｃコンストラクトは、偶数のＦｃドメイン単量体を含み、Ｆｃドメイン
単量体の各対がＦｃドメインを形成する。Ｆｃコンストラクトは、二つのＦｃドメイン単
量体の二量体から形成される一つの機能的なＦｃドメインを、最低でも含む。一部の実施
形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクトは、抗原認識領域、例えば可変領域（例
えば、ＶＨ、ＶＬ、超可変領域（ＨＶＲ））又は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含まない。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクトは、抗原認識領域、例えば可
変領域（例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＨＶＲ）又はＣＤＲを含む。
三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクトは、四つのポリペプチドで形成され
得る（図１及び２）。第一及び第二のポリペプチド（例えば、図１のポリペプチド１０２
及び１０８、図２のポリペプチド２０２及び２０８）は、同一又は異なるものとすること
が可能であり、第三及び第四のポリペプチド（例えば、図１のポリペプチド１１４及び１
１６、図２のポリペプチド２１４及び２１６）についてもそうすることが可能である。図
１では、第一及び第二のポリペプチドは両方とも、リンカーを介して直列に連結された二
つのＦｃドメイン単量体（例えば、Ｆｃドメイン単量体１０４、１０６、１１０及び１１
２）をコードするものであって、一方のＦｃドメイン単量体は、ＣＨ３抗体定常ドメイン
内に電荷をもつアミノ酸置換を含有し（例えば、Ｆｃドメイン単量体１０４及び１１０）
、一方、他方のＦｃドメイン単量体は、ＣＨ３抗体定常ドメイン内に突起を含有する（例
えば、Ｆｃドメイン単量体１０６及び１１２）。第三及び第四のポリペプチドは両方とも
、空洞をもつＦｃドメイン単量体（例えば、Ｆｃドメイン単量体１１４及び１１６）をコ
ードする。幹ホモ二量体Ｆｃドメインは、Ｆｃドメイン単量体１０４及び１１０を結合す
ることによって形成され得、そのそれぞれが、そのＣＨ３抗体定常ドメイン内に同一の逆
電荷の変異を含有する（例えば、Ｆｃドメイン単量体１０４及び１１０のそれぞれがＤ３
９９Ｋ及びＫ４０９Ｄを含有する）。第一の枝へテロ二量体Ｆｃドメインは、Ｆｃドメイ
ン単量体１０６及び１１４を結合することによって形成され得る（例えば、Ｆｃドメイン
単量体１０６が、操作された突起Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗを含有し、Ｆｃドメイン単量
体１１４が操作された空洞Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０９Ｖを含有す
る）。第二のへテロ二量体Ｆｃドメインは、Ｆｃドメイン単量体１１２及び１１６を結合
することによって形成され得る（例えば、Ｆｃドメイン単量体１１２が、操作された突起
Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗを含有し、Ｆｃドメイン単量体１１６が操作された空洞Ｙ３４
９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０９Ｖを含有する）。
図２では、第一及び第二のポリペプチドは両方とも、リンカーを介して直列に連結され
た二つのＦｃドメイン単量体（例えば、Ｆｃドメイン単量体２０４、２０６、２１０及び
２１２）をコードするものであって、一方のＦｃドメイン単量体は、ＣＨ３抗体定常ドメ
イン内に電荷をもつアミノ酸置換を含有し（例えば、Ｆｃドメイン単量体２０４及び２１
０）、一方、他方のＦｃドメイン単量体は、ＣＨ３抗体定常ドメイン内に突起と電荷をも
つアミノ酸置換とを含有する（例えば、Ｆｃドメイン単量体２０６及び２１２）。第三及
び第四のポリペプチドは両方とも、空洞と電荷をもつアミノ酸置換とをもつＦｃドメイン
単量体（例えば、Ｆｃドメイン単量体２１４及び２１６）をコードする。幹ホモ二量体Ｆ
ｃドメインは、Ｆｃドメイン単量体２０４及び２１０を結合することによって形成され得
、そのそれぞれが、そのＣＨ３抗体定常ドメイン内に同一の逆電荷の変異を含有する（例
えば、Ｆｃドメイン単量体２０４及び２１０のそれぞれがＤ３９９Ｋ及びＫ４０９Ｄを含
有する）。第一の枝へテロ二量体Ｆｃドメインは、Ｆｃドメイン単量体２０６及び２１４
を結合することによって形成され得る（例えば、Ｆｃドメイン単量体２０６が、操作され
た突起Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗと逆電荷の変異Ｅ３５７Ｋとを含有し、Ｆｃドメイン単
量体２１４が操作された空洞Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０９Ｖと逆電
荷の変異Ｋ３７０Ｄとを含有する）。第二のへテロ二量体Ｆｃドメインは、Ｆｃドメイン
単量体２１２及び２１６を結合することによって形成され得る（例えば、Ｆｃドメイン単
量体２１２が、操作された突起Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗと逆電荷の変異Ｅ３５７Ｋとを
含有し、Ｆｃドメイン単量体２１６が操作された空洞Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８
Ａ及びＹ４０９Ｖと逆電荷の変異Ｋ３７０Ｄとを含有する）。
さらなる実施形態では、（ｉ）少なくとも一つの逆電荷の変異と、（ｉｉ）少なくとも
一つの操作された空洞又は少なくとも一つの操作された突起とを含有するＦｃドメイン単
量体を、（ｉ）少なくとも一つの逆電荷の変異と、（ｉｉ）少なくとも一つの操作された
突起又は少なくとも一つの操作された空洞とを含有する他のＦｃドメイン単量体と選択的
に結合して、Ｆｃドメインを形成することができる。例えば、反転した電荷の変異Ｋ３７
０Ｄと、操作された空洞Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖとを含有す
るＦｃドメイン単量体と、反転した電荷の変異Ｅ３５７Ｋと、操作された突起Ｓ３５４Ｃ
及びＴ３６６Ｗとを含有する他のＦｃドメイン単量体とを選択的に結合して、Ｆｃドメイ
ンを形成する。
一部の実施形態では、Ｆｃコンストラクトは、ａ）一般式Ａ－Ｌ－Ｂを有する第一のポ
リペプチドであって、式中、ｉ）Ａは第一のＦｃドメイン単量体を含み、ｉｉ）Ｌはリン
カーであり、ｉｉｉ）Ｂは第二のＦｃドメイン単量体を含む、第一のポリペプチドと、ｂ
）一般式Ａ’－Ｌ’－Ｂ’を有する第二のポリペプチドであって、式中、ｉ）Ａ’は第三
のＦｃドメイン単量体を含み、ｉｉ）Ｌ’はリンカーであり、ｉｉｉ）Ｂ’は第四のＦｃ
ドメイン単量体を含む、第二のポリペプチドと、ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第
三のポリペプチドと、ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドとを含む
ものであって、ＢとＢ’とが結合して第一のＦｃドメインを形成し、Ａと第五のＦｃドメ
イン単量体とが結合して第二のＦｃドメインを形成し、Ａ’と第六のＦｃドメイン単量体
とが結合して第三のＦｃドメインを形成するものであり、該Ｆｃコンストラクト内のＦｃ
ドメイン単量体内に組み込むことが可能である一部のアミノ酸変異の例は、表３Ａ～３Ｄ
に示している。一部の実施形態では、Ｆｃコンストラクト内の第一、第二、第三及び第四
のポリペプチドのそれぞれは、Ｃ末端リシンを欠いている。一部の実施形態では、Ｆｃコ
ンストラクト内の第一、第二、第三及び第四のポリペプチドのそれぞれにおけるＮ末端Ａ
ｓｐが、Ｇｌｎに変異される。一部の実施形態では、Ｌ及びＬ’のそれぞれは、配列
Figure 2022191261000128
を含む、該配列からなる、又は、実質的に該配列からなる。
（表３Ａ）
Figure 2022191261000129
（表３Ｂ）
Figure 2022191261000130
（表３Ｃ）
Figure 2022191261000131
（表３Ｄ）
Figure 2022191261000132
一部の実施形態では、Ｆｃコンストラクトは、三つのポリペプチドで形成された二つの
Ｆｃドメインを含有する。第一のポリペプチドは、リンカー（例えば、グリシンスペーサ
ー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６及び２７）を介した連結で直列に連結した二つのＦｃドメ
イン単量体を含有し、第二及び第三のポリペプチドは、一つのＦｃドメイン単量体を含有
する。第二及び第三のポリペプチドは、同一のポリペプチドであってもよく、又は、異な
るポリペプチドであってもよい。図１３は、こうしたＦｃコンストラクトの例を図示して
いる。第一のポリペプチド（１３０２）は、リンカー（例えば、グリシンスペーサー、Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６及び２７）を介して直列に連結した二つのＦｃドメイン単量体（
１３０４及び１３０６）を含有する。Ｆｃドメイン単量体１３０４及び１３０６はいずれ
も、ＣＨ３抗体定常ドメイン内に操作された突起を含有する。第二及び第三のポリペプチ
ド（１３０８及び１３１０）はそれぞれ、ＣＨ３抗体定常ドメイン内に操作された空洞を
有する一つのＦｃドメイン単量体を含有する。第一のポリペプチド内の一方のＦｃドメイ
ン単量体（１３０４）が、第二のポリペプチド（１３０８）と共に第一のヘテロ二量体Ｆ
ｃドメインを形成し、一方、第一のポリペプチド内のもう一方のＦｃドメイン単量体（１
３０６）が、第三のポリペプチド（１３１０）と共に第二のヘテロ二量体Ｆｃドメインを
形成する。この第二のポリペプチドと第三のポリペプチドとは、互いに付加又は連結して
いない。操作された、空洞に突起が挿入されるＣＨ３－ＣＨ３の界面が、Ｆｃドメイン単
量体のヘテロ二量体の形成を支持し、望まない多量体の制御されていない形成を回避する
。一部の実施形態では、Ｆｃドメイン単量体のそれぞれが、逆電荷の変異をさらに含有し
て、ヘテロ二量体形成を促進し得る。例えば、操作された突起及び逆電荷の変異（例えば
、Ｅ３５７Ｋ）を有するＦｃドメイン単量体１３０４が、操作された空洞及び逆電荷の変
異（例えば、Ｋ３７０Ｄ）を有するＦｃドメイン単量体１３０８をもつヘテロ二量体Ｆｃ
ドメインを良好に形成することができる。
さらに他の実施形態では、Ｆｃコンストラクトは、六つのポリペプチドで形成される五
つのＦｃドメインを含有することが可能である。二つの例を図１４及び１５に図示してい
る。これらの図示されたＦｃコンストラクトは、六つのポリペプチドで構成されるが、該
ポリペプチドのうち四つが同一の核酸によってコードされることが可能であり、残りの二
つのポリペプチドもまた、同一の核酸によってコードされることが可能である。結果とし
てこれらＦｃコンストラクトは、好適な宿主細胞内の二つの核酸の発現によって産生可能
である。
図１４は、六つのポリペプチドで形成される五つのＦｃドメインを含有するＦｃコンス
トラクトの説明図である。第一のポリペプチド及び第二のポリペプチド（１４０２及び１
４１０）はそれぞれ、リンカー（例えば、グリシンスペーサー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
６及び２７）を介して直列に連結した三つのＦｃドメイン単量体（それぞれ、１４０４、
１４０６、１４０８及び１４１２、１４１４、１４１６）を含有する。詳細には、ポリペ
プチド１４０２又は１４１０においては、第一の突起含有Ｆｃドメイン単量体（１４０４
又は１４１２）が、野生型配列と比べてＣＨ３－ＣＨ３界面において異なる電荷をもつア
ミノ酸を含有する第二のＦｃドメイン単量体（１４０６又は１４１４）と結合しており、
該第二のＦｃドメイン単量体（１４０６又は１４１４）は、第三の突起含有Ｆｃドメイン
単量体（１４０８又は１４１６）と結合している。Ｆｃドメイン単量体１４０６及び１４
１４は、ホモ二量体Ｆｃドメインの形成を促進する、同一の逆電荷の変異（例えば、Ｄ３
９９Ｋ／Ｋ４０９Ｄ）をそれぞれ含有し得る。第三のポリペプチド～第六のポリペプチド
（１４１８、１４２０、１４２２及び１４２４）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメイン単量
体を含有して、それぞれ１４０４、１４０８、１４１２及び１４１６であるＦｃドメイン
単量体のそれぞれと共にヘテロ二量体Ｆｃドメインを形成する。一部の実施形態では、Ｆ
ｃドメイン単量体１４０４、１４０８、１４１２、１４１６、１４１８、１４２０、１４
２２及び１４２４のそれぞれは、逆電荷の変異をさらに含有しヘテロ二量体形成を促進し
得る。例えば、操作された突起及び逆電荷の変異（例えば、Ｅ３５７Ｋ）を有するＦｃド
メイン単量体１４０８が、操作された空洞及び逆電荷の変異（例えば、Ｋ３７０Ｄ）を有
するＦｃドメイン単量体１４２０をもつヘテロ二量体Ｆｃドメインを良好に形成すること
ができる。
図１５は、六つのポリペプチドで形成される五つのＦｃドメインを含有するＦｃコンス
トラクトの説明図である。第一のポリペプチド及び第二のポリペプチド（１５０２及び１
５１０）はそれぞれ、リンカー（例えば、グリシンスペーサー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
６及び２７）を介して直列に連結した三つのＦｃドメイン単量体（それぞれ、１５０４、
１５０６、１５０８及び１５１２、１５１４、１５１６）を含有する。詳細には、ポリペ
プチド１５０２又は１５１０においては、第一の突起含有Ｆｃドメイン単量体（１５０４
又は１５１２）が、第二の突起含有Ｆｃドメイン単量体（１５０６又は１５１４）と結合
しており、該第二の突起含有Ｆｃドメイン単量体（１５０６又は１５１４）は、野生型配
列と比べてＣＨ３－ＣＨ３界面において異なる電荷をもつアミノ酸を含有する第三のＦｃ
ドメイン単量体（１５０８又は１５１６）と結合している。Ｆｃドメイン単量体１５０８
及び１５１６は、ホモ二量体Ｆｃドメインの形成を促進する、同一の逆電荷の変異（例え
ば、Ｄ３９９Ｋ／Ｋ４０９Ｄ）をそれぞれ含有し得る。第三のポリペプチド～第六のポリ
ペプチド（１５１８、１５２０、１５２２及び１５２４）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃドメ
イン単量体を含有して、それぞれ１５０４、１５０６、１５１２及び１５１４である各Ｆ
ｃドメイン単量体と共にヘテロ二量体Ｆｃドメインを形成する。一部の実施形態では、Ｆ
ｃドメイン単量体１５０４、１５０６、１５１２、１５１４、１５１８、１５２０、１５
２２及び１５２４のそれぞれは、逆電荷の変異をさらに含有しヘテロ二量体形成を促進し
得る。例えば、操作された突起及び逆電荷の変異（例えば、Ｅ３５７Ｋ）を有するＦｃド
メイン単量体１５０４が、操作された空洞及び逆電荷の変異（例えば、Ｋ３７０Ｄ）を有
するＦｃドメイン単量体１５１８をもつヘテロ二量体Ｆｃドメインを良好に形成すること
ができる。
図１６は、六つのポリペプチドで形成される五つのＦｃドメインを含有する別のＦｃコ
ンストラクトの説明図である。第一のポリペプチド及び第二のポリペプチド（１６０２及
び１６１０）はそれぞれ、リンカー（例えば、グリシンスペーサー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：２６及び２７）を介して直列に連結した三つのＦｃドメイン単量体（それぞれ、１６０
４、１６０６、１６０８及び１６１２、１６１４、１６１６）を含有する。詳細には、ポ
リペプチド１６０２又は１６１０においては、ＣＨ３－ＣＨ３界面において異なる電荷を
もつアミノ酸を含有する第一のＦｃドメイン単量体（１６０４又は１６１２）が、第二の
突起含有Ｆｃドメイン単量体（１６０６又は１６１４）と結合しており、該第二の突起含
有Ｆｃドメイン単量体（１６０６又は１６１４）は、野生型配列と比べて第三の突起含有
Ｆｃドメイン単量体（１６０８又は１６１６）と結合している。Ｆｃドメイン単量体１６
０４及び１６１２は、ホモ二量体Ｆｃドメインの形成を促進する、同一の逆電荷の変異（
例えば、Ｄ３９９Ｋ／Ｋ４０９Ｄ）をそれぞれ含有し得る。第三のポリペプチド～第六の
ポリペプチド（１６１８、１６２０、１６２２及び１６２４）はそれぞれ、空洞含有Ｆｃ
ドメイン単量体を含有して、それぞれ１６０６、１６０８、１６１４及び１６１６である
各Ｆｃドメイン単量体と共にヘテロ二量体Ｆｃドメインを形成する。一部の実施形態では
、Ｆｃドメイン単量体１６０６、１６０８、１６１４、１６１６、１６１８、１６２０、
１６２２及び１６２４のそれぞれは、逆電荷の変異をさらに含有しヘテロ二量体形成を促
進し得る。例えば、操作された突起及び逆電荷の変異（例えば、Ｅ３５７Ｋ）を有するＦ
ｃドメイン単量体１６０８が、操作された空洞及び逆電荷の変異（例えば、Ｋ３７０Ｄ）
を有するＦｃドメイン単量体１６２０をもつヘテロ二量体Ｆｃドメインを良好に形成する
ことができる。
別の実施形態では、二つ以上のＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクトは、同一の
一次配列を有する二つのポリペプチドで形成可能である。こうしたコンストラクトは、宿
主細胞内で、単一のポリペプチド配列の発現により形成することが可能である。図１７に
一例を図示している。この例では、三つのＦｃドメインを含有するＦｃコンストラクトを
コードするのに、単一の核酸は十分である。同一のポリペプチドの部分である二つのＦｃ
ドメイン単量体は、十分な長さ及び柔軟性であるフレキシブルなリンカーを含むことによ
ってヘテロ二量体Ｆｃドメインを形成することが許容される。この同一のポリペプチドは
また、フレキシブルなリンカー（例えば、グリシンスペーサー、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
６及び２７）を介して連結される第三のＦｃドメイン単量体も含有する。この第三のＦｃ
ドメイン単量体（１７０８）は、他のＦｃドメイン単量体（１７１６）に連結して、ホモ
二量体Ｆｃドメインを形成し、図１７に図示するＹ形状Ｆｃコンストラクトを産生するこ
とが可能である。Ｆｃドメインの形成は、図１７にも図示するように、二量体形成選択モ
ジュールを使用することで制御することが可能である。一部の実施形態では、Ｆｃドメイ
ン単量体１７０４、１７０６、１７１２及び１７１４のそれぞれは、逆電荷の変異をさら
に含有しヘテロ二量体形成を促進し得る。例えば、操作された突起及び逆電荷の変異（例
えば、Ｅ３５７Ｋ）を有するＦｃドメイン単量体１７０４が、操作された空洞及び逆電荷
の変異（例えば、Ｋ３７０Ｄ）を有するＦｃドメイン単量体１７０６をもつヘテロ二量体
Ｆｃドメインを良好に形成することができる。
一部の実施形態では、Ｆｃコンストラクト（例えば、図１のＦｃコンストラクト１～３
、図２のＦｃコンストラクト４）内の一つ又は複数のＦｃポリペプチドが、Ｃ末端リシン
残基を欠いている。一部の実施形態では、Ｆｃコンストラクト内のＦｃポリペプチドのす
べてが、Ｃ末端リシン残基を欠いている。一部の実施形態では、Ｆｃコンストラクト内の
一つ又は複数のＦｃポリペプチドにおいてＣ末端リシン残基が不在であることで、Ｆｃコ
ンストラクト（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト）の集団、例え
ば実質的に均質である三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクトの集団の均質性が
向上し得る（実施例８を参照）。一実施例では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３及び４４（実
施例１、表６を参照）のいずれか一つの配列を有するＦｃポリペプチド内のＣ末端リシン
残基は除去されて、Ｃ末端リシン残基を含有しない対応するＦｃポリペプチドを生成する
ことができる。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメ
インを有するＦｃコンストラクト）内のＦｃドメイン単量体は、野生型のＦｃドメイン単
量体配列（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）と、少なくとも９５％同一（例えば、少
なくとも９７％、９９％又は９９．５％同一）である配列を含み得る、該配列からなり得
る、又は、実質的に該配列からなり得る。一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコ
ンストラクト（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト）内のＦｃドメ
イン単量体は、最大１０（９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修
飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ野生型のＦｃドメイン単量体配列（例えば、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）である配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的
に該配列からなり得る。一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例
えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト）内のＦｃドメイン単量体は、Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４、４６、４８、及び５０～５３のいずれか一つの配列と、少なく
とも９５％同一（例えば、少なくとも９７％、９９％又は９９．５％同一）である配列を
含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。一部の実施形態で
は、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦｃコ
ンストラクト）内のＦｃドメイン単量体は、最大１０個（９、８、７、６、５、４、３、
２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：４４、４６、４８、及び５０～５３のいずれか一つの配列である配列を含み得る
、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。或る実施形態では、Ｆｃコ
ンストラクト内のＦｃドメイン単量体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８、５２、及び５３の
配列と、少なくとも９５％同一（例えば、少なくとも９７％、９９％又は９９．５％同一
）である配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。或
る実施形態では、Ｆｃコンストラクト内のＦｃドメイン単量体は、最大１０個（例えば最
大９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば
保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８、５２、及び５３配列である配列を含み
得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト内の二つのＦｃドメイン単
量体を有するポリペプチド（例えば、図１のポリペプチド１０２及び１０８、図２のポリ
ペプチド２０２及び２０８）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３、４５、４７、及び４９（実
施例１、表６参照）のいずれか一つの配列と、少なくとも９５％同一（例えば、少なくと
も９７％、９９％又は９９．５％同一）である配列を含み得る、該配列からなり得る、又
は、実質的に該配列からなり得る。一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンスト
ラクト（例えば、図１のポリペプチド１０２及び１０８、図２のポリペプチド２０２及び
２０８）内の二つＦｃドメイン単量体を有するポリペプチドは、最大１０個（９、８、７
、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修飾（例えば置換、例えば保存的置換）
をもつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３、４５、４７、及び４９（実施例１、表６を参照）のい
ずれか一つの配列である配列を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列か
らなり得る。或る実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト内の二つのＦｃド
メイン単量体を有するポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９配列と、少なくとも９
５％同一（例えば、少なくとも９７％、９９％又は９９．５％同一）である配列を含み得
る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。或る実施形態では、本明
細書に記載のＦｃコンストラクト内の二つのＦｃドメイン単量体を有するポリペプチドは
、最大１０個（例えば最大９、８、７、６、５、４、３、２又は１個）の単一アミノ酸修
飾（例えば置換、例えば保存的置換）をもつ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９配列である配列
を含み得る、該配列からなり得る、又は、実質的に該配列からなり得る。一部の実施形態
では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト内の二つのＦｃドメイン単量体を有するポリ
ペプチド（例えば、図１のポリペプチド１０２及び１０８、図２のポリペプチド２０２及
び２０８）におけるアミノ酸変異は、Ｆｃドメイン単量体（例えば、図１のＦｃドメイン
単量体１０４、１０６、１１０及び１１２、図２のＦｃドメイン単量体２０４、２０６、
２１０及び２１２）でのみ発生し、スペーサー内で発生しない。例えば、表８に示すポリ
ペプチドにおいては、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０～５３の配列を有するＦｃドメイン単量
体内で、追加のアミノ酸変異がなされる可能性があり、一方でＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８
、２６及び２７の配列を有するスペーサーは変化がない。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト内の第一、第二、第三及び
第四のポリペプチド（例えば、図１のポリペプチド１０２、１０８、１１４及び１１６、
図２の２０２、２０８、２１４及び２１６）の一つ又は複数におけるＮ末端Ａｓｐが、Ｇ
ｌｎに変異され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト内の第
一、第二、第三及び第四のポリペプチドのそれぞれにおけるＮ末端Ａｓｐが、Ｇｌｎに変
異される。他の実施形態では、本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦ
ｃドメインを有するＦｃコンストラクト）は、Ｇｌｎに変異されるものであるＮ末端Ａｓ
ｐを有する一つ又は複数のＦｃドメイン単量体を含み得る。一部の実施形態では、本明細
書に記載のＦｃコンストラクト内の第一、第二、第三及び第四のポリペプチドの一つ又は
複数におけるＮ末端ＡｓｐがＧｌｎに変異することで、Ｆｃコンストラクト（例えば、三
つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト）の集団、例えば実質的に均質である三つ
のＦｃドメインを有するＦｃコンストラクトの集団の均質性が向上し得る。例えば、表４
では、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクトにおいてＮ末端ＡｓｐをＧｌｎに
変異させた、第一、第二、第三及び第四のポリペプチドのアミノ酸配列を示している。
（表４）
Figure 2022191261000133
Figure 2022191261000134
Ｘ．宿主細胞及びタンパク質の産生
本開示では、宿主細胞は、本明細書に記載のポリペプチド又はコンストラクトを、それ
らの対応する核酸から発現するのに必要であるような、例えばオルガネラである、必要な
細胞成分を含む媒体を指す。核酸は、この技術分野で公知の従来の技術（形質転換、トラ
ンスフェクション、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、直接の微量注入等）によって宿主
細胞内に導入されることが可能である核酸ベクター中に含まれ得る。宿主細胞は、哺乳動
物起源、細菌起源、真菌起源又は虫起源のものとすることが可能である。哺乳動物宿主細
胞には、ＣＨＯ（又はＣＨＯ誘導細胞株、例えばＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ－ＤＸＢ１１ Ｃ
ＨＯ－ＤＧ４４）、マウス宿主細胞（例えば、ＮＳ０、Ｓｐ２／０）、ＶＥＲＹ、ＨＥＫ
（例えば、ＨＥＫ２９３）、ＢＨＫ、ＨｅＬａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、Ｗ
１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０及びＴ４７Ｄ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ
ならびにＨｓＳ７８Ｂｓｔの細胞が含まれるが、これらに限定されない。また、タンパク
質コンストラクトの発現を調節する、又は所望の特定の手法でタンパク質産物を修飾及び
プロセシングする、宿主細胞を選択することが可能である。様々な宿主細胞が、タンパク
質産物の翻訳後プロセシング及び修飾に関する特性及び特異的な機序を有する。適切な株
化細胞又は宿主系を選択して、発現されたタンパク質の正確な修飾及びプロセシングを確
実にすることが可能である。
タンパク質産物の、それらの対応するＤＮＡプラスミドコンストラクトからの発現及び
分泌のために、宿主細胞が、プロモータ、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポ
リアデニル化部位及び選択可能な標識を含む、この技術分野で公知である適切な発現制御
要素によって制御されるＤＮＡで、トランスフェクト又は形質転換され得る。治療用タン
パク質の発現方法は、この技術分野で公知である。例えば、Ｐａｕｌｉｎａ Ｂａｌｂａ
ｓ，Ａｒｇｅｌｉａ Ｌｏｒｅｎｃｅ（ｅｄｓ．）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｇｅｎｅ
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ｒｅｖｉｅｗｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；２ｎｄ
ｅｄ．２００４ ｅｄｉｔｉｏｎ （Ｊｕｌｙ ２０，２００４）；Ｖｌａｄｉｍｉｒ
Ｖｏｙｎｏｖ ａｎｄ Ｊｕｓｔｉｎ Ａ．Ｃａｒａｖｅｌｌａ（ｅｄｓ．）Ｔｈｅｒａ
ｐｅｕｔｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；
２ｎｄ ｅｄ．２０１２ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｕｎｅ ２８，２０１２）を参照されたい
。
ＸＩ．精製
Ｆｃコンストラクトは、タンパク質精製分野の公知である任意の方法、例えばクロマト
グラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー（例えばプロテインＡアフィニティー
）及びサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、又はタンパク質の
精製に関するその他の標準技術によって、精製することが可能である。例えば、Ｆｃコン
ストラクトは、プロテインＡカラム等のアフィニティーカラムを、適切に選択することと
、クロマトグラフィーカラム、濾過、限外濾過、塩析及び透析手順と組み合わせることと
によって、単離及び精製することが可能である（例えば、Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｓｃａｌｅ
Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｕｗｅ Ｇｏｔｔｓｃｈａｌ
ｋ（ｅｄ．）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，２００９；ａｎｄ Ｓｕｂｒ
ａｍａｎｉａｎ（ｅｄ．）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－Ｖｏｌｕｍｅ Ｉ－Ｐｒｏｄｕｃｔｉ
ｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ／Ｐｌｅｎ
ｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２００４）を参照）。
一部の例では、Ｆｃコンストラクトは、一つ又は複数の精製用ペプチドに連結して、例
えば全細胞溶解混合物からの、Ｆｃコンストラクトの精製及び単離を促進することが可能
である。一部の実施形態では、精製用ペプチドは、精製用ペプチドに対して特異的な親和
性を有する別の部分と結合する。一部の実施形態では、精製用ペプチドと特異的に結合す
るこうした部分は、基剤、樹脂又はアガロースビーズ等の固相支持体に付加する。Ｆｃコ
ンストラクトに連結することができる精製用ペプチドの例としては、ヘキサヒスチジンペ
プチド、ＦＬＡＧペプチド、ｍｙｃペプチド及び赤血球凝集素（ＨＡ）ペプチドが挙げら
れるが、これらに限定されない。ヘキサヒスチジンペプチド（ＨＨＨＨＨＨ（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：３８））は、マイクロモル親和性をもつニッケル官能性アガロースアフィニテ
ィーカラムと結合する。一部の実施形態では、ＦＬＡＧペプチドは、配列ＤＹＫＤＤＤＤ
Ｋ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）を含む。一部の実施形態では、ＦＬＡＧペプチドは、直
列にした、整数倍にした配列ＤＹＫＤＤＤＤＫ、例えば３×ＤＹＫＤＤＤＤＫを含む。一
部の実施形態では、ｍｙｃペプチドは、配列ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：４０）を含む。一部の実施形態では、ｍｙｃペプチドは、直列にした、整数倍にした配
列ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ、例えば３×ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬを含む。一部の実施形態では
、ＨＡペプチドは、配列ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）を含む。一部
の実施形態では、ＨＡペプチドは、直列にした、整数倍にした配列ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ、
例えば３×ＹＰＹＤＶＰＤＹＡを含む。ＦＬＡＧ、ｍｙｃ又はＨＡの精製用ペプチドに対
して特異的に認識かつ結合する抗体は、この技術分野で周知であり、しばしば市販されて
いる。これらの抗体により官能化された固相支持体（例えば、基剤、樹脂又はアガロース
ビーズ）を用いて、ＦＬＡＧ、ｍｙｃ又はＨＡペプチドを含むＦｃコンストラクトを精製
することができる。
Ｆｃコンストラクトに関しては、精製方法としてプロテインＡカラムクロマトグラフィ
ーを採用することができる。プロテインＡリガンドは、Ｆｃ領域を介してＦｃコンストラ
クトと相互作用するものであって、プロテインＡクロマトグラフィーは、大半の宿主細胞
タンパク質を除去することができる高度な選択的捕捉方法となっている。本開示では、実
施例２に記載するようにプロテインＡカラムクロマトグラフィーを用いて、Ｆｃコンスト
ラクトを精製できる。
ＸＩＩ．医薬組成物／製剤
本開示は、本明細書に記載する一つ又は複数のＦｃコンストラクトを含む医薬組成物を
特徴とする。一実施形態では、医薬組成物は、Ｆｃコンストラクトの実質的に均質な集団
を含む。種々の実施例では、医薬組成物は、Ｆｃコンストラクト１～４のいずれか一つの
実質的に均質な集団を含む。
例えば本明細書に記載のＦｃコンストラクト（例えば、三つのＦｃドメインを有するＦ
ｃコンストラクト）である本開示の治療用タンパク質コンストラクトを、医薬組成物内に
組み込むことが可能である。治療用タンパク質を含む医薬組成物は、当業者に公知である
方法によって調製することが可能である。医薬組成物は、水又は他の薬学的に許容できる
液体の滅菌溶液又は懸濁液を含む注射製剤で非経口投与することが可能である。例えば医
薬組成物は、注射用蒸留水（ＷＦＩ）、生理食塩水、乳化剤、懸濁剤、サーファクタント
、安定剤、希釈剤、結合剤、賦形剤等の薬学的に許容できる担体又は溶媒とＦｃコンスト
ラクトとを好適に組み合わせて、次いで通常許容される薬学的実施で求められる単位用量
形態で混合することによって、調製することが可能である。医薬製剤に含まれる活性成分
の量は、指定される範囲内で好適な用量が与えられるようなものとする。
注射用の滅菌組成物は、従来の薬学的実施に従って、媒体として注射用蒸留水を用いて
調製することが可能である。例えば、グルコースと、Ｄ－ソルビトール、Ｄ－マンノース
、Ｄ－マンニトール、塩化ナトリウム等の他の添加とを含有する生理食塩水又は等張液を
、任意に、好適な可溶化剤、例えばこの技術分野で通常知られる、エタノール等のアルコ
ール及びプロピレングリコール又はポリエチレングリコール等のポリアルコール、及びポ
リソルベート８０（商標）、ＨＣＯ－５０等の非イオン性界面活性剤と組み合わせて、注
射用水溶液として用いることができる。治療用タンパク質産物の調製方法は、この技術分
野で公知であり、例えば、Ｂａｎｇａ（ｅｄ．）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａ
ｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ （２ｄ ｅｄ．）Ｔａｙｌｏｒ＆Ｆｒａｎｃ
ｉｓ Ｇｒｏｕｐ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００６）を参照されたい。
ＸＩＩＩ．用量
医薬組成物は、投与形態と互換性のある手法で、治療効果があるような量で投与されて
、症状の改善又は治療をもたらす。医薬組成物は、例えば静脈内投与形態、皮下投与形態
、摂取可能な溶液、薬剤放出カプセル等の経口投与形態である、種々の投与形態で投与さ
れる。個々の対象に適切な用量は、治療目的、投与経路、及び患者の状態に依存する。概
して、組換えタンパク質は、１～２００ｍｇ／ｋｇ、例えば１～１００ｍｇ／ｋｇ、例え
ば２０～１００ｍｇ／ｋｇで投与される。したがって、最適な治療効果を得るために求め
られるとおりに、医療提供者が、用量を誂えて、力価決定し、投与経路を調整することが
必要となる。
ＸＩＶ．適応症
本開示の医薬組成物（例えば、２、３又は４つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラ
クトを含有するもの）は、対象における炎症を軽減し、対象における自己抗体のクリアラ
ンスを促進し、対象における抗原提示を抑制し、例えば対象における免疫応答の免疫複合
体に基づく活性化を防止することである、免疫応答を軽減し、ならびに、対象における免
疫の状態又は疾患及び炎症性の状態又は疾患を治療するのに有用である。例示的な状態及
び疾患には、関節リウマチ（ＲＡ）；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；ＡＮＣＡ関連
血管炎；抗リン脂質抗体症候群；自己免疫性溶血性貧血；慢性炎症性脱髄性神経障害；移
植における抗アロ、ＧＶＨＤにおける抗自己、抗置換、ＩｇＧ治療、ＩｇＧパラプロテイ
ンのクリアランス；皮膚筋炎；グッドパスチャー症候群；抗体依存性細胞媒介細胞障害を
介して媒介される器官系標的のＩＩ型過敏症候群、例えばギラン・バレー症候群、ＣＩＤ
Ｐ、皮膚筋炎、フェルティ症候群、抗体媒介性拒絶反応、自己免疫性甲状腺疾患、潰瘍性
大腸炎、自己免疫性肝疾患；突発性血小板減少性紫斑病；重症筋無力症、視神経脊髄炎；
天疱瘡及び他の自己免疫性水疱性疾患；シェーグレン症候群；抗体依存性ファゴサイトー
シスを介して媒介される自己免疫性血球減少症及び他の障害；例えば滑膜炎、皮膚筋炎、
全身性血管炎、糸球体炎及び血管炎である他のＦｃＲ依存性炎症症候群を含む。
一部の実施形態では、５～１０のＦｃドメインを有するＦｃコンストラクトを含有する
本開示の医薬組成物もまた、例えば、対象における免疫応答の免疫細胞活性化を誘導する
、対象における標的細胞（すなわち、がん細胞又は感染細胞）のファゴサイトーシスを増
加する、及び、対象におけるがん及び感染症等の疾患を治療するのに有用である。本開示
のＦｃコンストラクト及び均質な医薬組成物は、活性化Ｆｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲ
Ｉ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂ）と結合
して、免疫応答を誘導することができる。本開示のＦｃコンストラクト及び均質な医薬組
成物は、プライマリＴＨＰ－１単球からの、Ｓｙｋリン酸化及びカルシウム流出を活性化
し得る。活性化単球及びそれらの分化したマクロファージは、標的細胞を貪食する又は死
滅させる能力を有する。したがって本開示では、がん及び感染症等の疾患及び障害を抱え
る対象を治療するために用いることができる、治療方法を提供する。一部の実施形態では
、本明細書に記載のＦｃコンストラクト及び均質な医薬組成物を、治療有効量で対象に投
与して、対象においてがん細胞又は感染細胞を貪食させる又は死滅させることができる。
本開示の方法により治療できるがんには、膀胱がん、膵臓がん、肺がん、肝臓がん、卵
巣がん、大腸がん、胃がん、乳がん（ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）、前立腺がん、腎臓
がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、直腸がん、呼吸器系がん、泌尿器系がん、口腔
がん、皮膚がん、白血病、肉腫、カルシノーマ、基底細胞がん、非ホジキンリンパ腫、急
性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ－細胞慢性リンパ性白血
病（Ｂ－ＣＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、赤白血病、腎細胞がん、星細胞腫、乏突起星
細胞腫、胆道がん、絨毛がん、ＣＮＳがん、喉頭がん、小細胞肺がん、腺がん、巨細胞が
ん（又は燕麦細胞がん）、扁平上皮がん、未分化大細胞リンパ腫、非小細胞肺がん、神経
芽細胞腫、横紋筋肉腫、神経外胚葉性がん、神経膠芽腫、乳がん（ｂｒｅａｓｔ ｃａｒ
ｃｉｎｏｍａ）、悪性黒色腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍がん、及び、軟部組織腫瘍がんが
含まれるが、これらに限定されない。
本開示の方法により治療できる感染の例には、細菌感染症、ウイルス感染症、真菌感染
症、寄生虫感染症及び原生動物感染症が含まれるが、これらに限定されない。
感染症の原因となる細菌の例は、この技術分野で周知であり、レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ）属の細菌（例えば、化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｐｙｏｇｅｎｅｓ））、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属の細菌（例えば、大
腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ））、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属の細菌（例
えば、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ））、腸炎（Ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ）属
の細菌（例えば、サルモネラ腸炎（Ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ））、及
び、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属の細菌（例えば、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅ
ｌｌａ ｔｙｐｈｉ）が挙げられるがこれらに限定されない。
感染症の原因となるウイルスの例は、この技術分野で周知であり、レトロウイルス科の
ウイルス（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ））、アデノウイルス科のウイルス（
例えば、アデノウイルス）、ヘルペスウイルス科のウイルス（例えば、単純ヘルペスウイ
ルス１型及び２型）、パピローマウイルス科のウイルス（例えば、ヒトパピローマウイル
ス（ＨＰＶ））、ポックスウイルス科のウイルス（例えば、天然痘）、ピコルナウイルス
科のウイルス（例えば、Ａ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、ライノウイルス）、ヘパド
ナウイルス科のウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス）、フラビウイルス科のウイルス（
例えば、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱ウイルス、西ナイルウイルス）、トガウイルス科のウイ
ルス（例えば、ルビウイルス）、オルトミクソウイルス科のウイルス（例えば、インフル
エンザウイルス）、フィロウイルス科のウイルス（エボラウイルス、マールブルグウイル
ス）、及び、パラミクソウイルス科のウイルス（例えば、麻疹ウイルス、ムンプスウイル
ス）が挙げられるがこれらに限定されない。
感染症の原因となる真菌の例は、この技術分野で周知であり、アスペルギルス属（Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）の真菌（例えば、アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａ．ｆｌａｖｕｓ）、ア
スペルギルス・テレウス（Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａ．ｎｉｇ
ｅｒ）、アスペルギルス・カンジダス（Ａ．ｃａｎｄｉｄｕｓ）、アスペルギルス・クラ
バツス（Ａ．ｃｌａｖａｔｕｓ）、アスペルギルス・オクラセウス（Ａ．ｏｃｈｒａｃｅ
ｕｓ））、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）の真菌（例えば、カンジダ・アルビカンス（Ｃ
ａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・パラプローシス（Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌ
ｏｓｉｓ）、カンジダ・グラブラタ（Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・ギリエルモン
ジィ（Ｃ．ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ）、カンジダ・クルセイ（Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ）
、カンジダ・ルシタニエ（Ｃ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃ．
ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ））、クリプトコックス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）の真菌（
例えば、クリプトコックス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏ
ｒｍａｎｓ））、及び、ファサリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）の真菌（例えば、フザリウ
ム・ソラニ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ）、フザリウム・ベルチシリオイデス（Ｆ
．ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・オキシスポラム（Ｆ．ｏｘｙｓｐｏ
ｒｕｍ））が挙げられるがこれらに限定されない。
寄生虫の例としては、サナダムシ（条虫類（ｃｅｓｔｏｄｅ））、回虫（線虫類（ｎｅ
ｍａｔｏｄｅ））、吸虫（吸虫類（ｔｒｅｍａｔｏｄｅ））及び単生類が挙げられるがこ
れらに限定されない。
原生動物の例としては、エントアメーバ属（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ）の原生動物（例えば
、赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ））、マラリア原虫属（
Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）の原生動物（例えば、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕ
ｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、四日熱マラリア原虫（Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ））、ジアル
ディア属（Ｇｉａｒｄｉａ）の原生動物（例えば、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ ｌ
ａｍｂｌｉａ））、及び、トリパノソーマ属（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）の原生動物（例
えば、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ））が挙げら
れるがこれらに限定されない。
実施例１ Ｆｃコンストラクト設計
望ましくは、Ｆｃコンストラクトは、フォールディング効率を増加させ、望まない高分
子量のオリゴマー及び多量体を形成し得るサブユニットの制御されていない会合を最小化
し、及び実質的に均質な組成物を生成するように設計される。こうした目標を念頭に、本
発明者らは、スペーサーで離間された二つのＦｃドメイン単量体を含む長ポリペプチド（
図１のポリペプチド１０２及び１０８、ならびに図２のポリペプチド２０２及び２０８）
と、単一のＦｃドメイン単量体を含む短ポリペプチド（図１のポリペプチド１１４及び１
１６、ならびに図２のポリペプチド２１４及び２１６）とをそれぞれが含む四つのＦｃコ
ンストラクトを設計した（図１及び２）。それぞれはＩｇＧ１ Ｆｃ配列に基づくもので
あり、ポリペプチドのアセンブリを制御する操作された空洞、操作された突起、及び／又
は静電的ステアリングの修飾を包含する。長ポリペプチド及び短ポリペプチドをコードす
るＤＮＡ配列は、哺乳動物細胞での発現のために最適化され、ｐｃＤＮＡ３．４哺乳動物
発現ベクターにクローン化された。ＤＮＡプラスミドコンストラクトを、リポソームを介
して、ヒト胎生腎（ＨＥＫ）２９３細胞にトランスフェクトした。合計八つのＤＮＡプラ
スミドコンストラクトを用いて、それぞれが三つのＦｃドメインを有する四つのＦｃコン
ストラクトを構築した。
Ｆｃコンストラクト毎に、長ポリペプチド及び短ポリペプチドは、共発現されたときに
三つのＦｃドメインを含有する分枝した分子を産生するものであり、該長ポリペプチドの
Ｃ末端Ｆｃ単量体が互いに特異的に会合して一つのＣ末端Ｆｃドメインを形成することと
、長ポリペプチドのＮ末端Ｆｃ単量体が短ポリペプチドと特異的に会合して二つのＮ末端
Ｆｃドメインを形成することを伴う。Ｆｃコンストラクト１～４及びそれらの設計は、表
５ならびに図１及び２に記載している。各Ｆｃコンストラクトで利用される配列を、表６
に示している。以下の表７では、コンストラクト１～４のそれぞれにおける長ポリペプチ
ド及び短ポリペプチドの特性をさらに要約している。
（表５）
Figure 2022191261000135
（表６）
Figure 2022191261000136
Figure 2022191261000137
（表７）
Figure 2022191261000138
*配列位置は、Kabatナンバリングシステム（Kabat et al., Sequences of Proteins of I
mmunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., ed 5, 1991
）に従って番号付けた。
Ｆｃコンストラクト１～３における長ポリペプチド１０２及び１０８（図１）ならびに
Ｆｃコンストラクト４における長ポリペプチド２０２及び２０８（図２）のそれぞれは、
スペーサーを介して直列に連結した二つのＦｃドメイン単量体を含有する。以下の表８で
は、長ポリペプチドにおけるＦｃドメイン単量体及びＦｃコンストラクト１～４における
スペーサーの配列を提供している。
（表８）
Figure 2022191261000139
Figure 2022191261000140
Figure 2022191261000141
実施例２ Ｆｃコンストラクトの発現
発現したタンパク質を、Ｐｏｒｏｓ ＭａｂＣａｐｔｕｒｅ Ａ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｉｅｓ社）カラムを用いて、プロテインＡ系のアフィニティーカラムクロマトグ
ラフィーによって細胞培養上清から精製した。捕捉したＦｃコンストラクトを、リン酸緩
衝食塩水で洗浄し（低塩洗浄）、ｐＨ３のグリシン １００ｍＭで溶離した。溶出物は、
ｐＨ７．４のＴＲＩＳ １Ｍを添加することによって素早く中和して、０．２μｍフィル
ターで滅菌濾過した。
タンパク質は、Ｐｏｒｏｓ ＸＳ樹脂（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）
を用いて、イオン交換クロマトグラフィーによってさらに分取した。カラムは、ｐＨ６の
ＭＥＳ ５０ｍＭ（緩衝液Ａ）で予め平衡化して、溶離緩衝液として５０ｍＭのＭＥＳ、
４００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ６（緩衝液Ｂ）を用いたステップグラジェントにより
、サンプルを溶離した。
イオン交換の後、標的のフラクションは、タンジェンシャルフロー・フィルトレーショ
ンシステムにおいて、１０ｋＤａをカットオフするポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）膜カ
ートリッジを用いて、ＰＢＳ緩衝液に緩衝液交換した。サンプルはおよそ３０ｍｇ／ｍＬ
に濃縮して、０．２μｍフィルターで滅菌濾過した。
実施例３ Ｆｃコンストラクトを特性決定するために用いる実験アッセイ
ペプチド及びグリコペプチドの液体クロマトグラフィー－ＭＳ／ＭＳ
タンパク質は、６Ｍのグアニジン（Ｓｉｇｍａ社）中で１μｇ／μＬに希釈した。ジチ
オスレイトール（ＤＴＴ）を濃度１０ｍＭまで加えて、６５℃で３０分間、変性条件下で
ジスルフィド結合を減らした。氷冷後、サンプルを、暗闇中で１時間、３０ｍＭのヨード
アセトアミド （ＩＡＭ）と共にインキュベートして、遊離チオールをアルキル化（カル
バミドメチル化）した。その後タンパク質を、１０ｋＤａ膜を介して２５ｍＭの炭酸水素
アンモニウム緩衝液（ｐＨ７．８）中に透析し、ＩＡＭ、ＤＴＴ及びグアニジンを除去し
た。タンパク質は、Ｂａｒｏｃｙｃｌｅｒ（ＮＥＰ ２３２０、Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ｂｉ
ｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）中で、トリプシンで消化した。圧力は、３７℃で、２０，０００
ｐｓｉと周囲圧力との間を１時間に合計３０サイクルで循環させた。ペプチドのＬＣ－Ｍ
Ｓ／ＭＳ分析は、Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００（Ｄｉｏｎｅｘ）クロマトグラフィーシス
テムとＱ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）
質量分析計とで行った。ペプチドは、移動相として０．１％ＦＡ水溶液及び０．１％ＦＡ
アセトニトリル溶液を用いて、ＢＥＨ ＰｅｐＭａｐ（Ｗａｔｅｒｓ社）カラムで分離し
た。四重極型の分離幅（ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｗｉｄｔｈ）±１．５Ｄａで、２価イオン
（ｚ＝２）ｍ／ｚ ８４２．５に基づいて、一つずつキシロシル化されたリンカーペプチ
ドをターゲットとした。
インタクト質量分析
タンパク質は、７８．９８％の水、２０％のアセトニトリル、１％のギ酸（ＦＡ）及び
０．０２％のトリフルオロ酢酸からなる移動緩衝液中で、２μｇ／μＬの濃度に希釈した
。サイズ排除クロマトグラフィー分離は、合計カラム長７００ｍｍに直列にした二つのＺ
ｅｎｉｘ－Ｃ ＳＥＣ－３００（Ｓｅｐａｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、デラウェア
州ニューアーク）２．１×３５０ｍｍで行った。タンパク質は、８０μＬ／分の流量で、
上記した移動緩衝液を用いてＳＥＣカラムから溶出した。質量スペクトルは、ポジティブ
モードで動作させたＱＳＴＡＲ Ｅｌｉｔｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社
） Ｑ－ＴｏＦ質量分光計で取得した。それぞれのサイズのフラクション下の中性質量を
、クロマトグラフィーピークの全幅にわたってスペクトルを合計することによって、ベイ
ズのピークデコンボリューション（Ｂａｙｅｓｉａｎ ｐｅａｋ ｄｅｃｏｎｖｏｌｕｔ
ｉｏｎ）を用いてデコンボリュートした。
キャピラリー電気泳動－ドデシル硫酸ナトリウム（ＣＥ－ＳＤＳ）アッセイ
サンプルを１ｍｇ／ｍＬに希釈して、ＨＴ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ変性緩衝
液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）と混合した。混合物を４０℃で２０分間インキュベート
した。サンプルを７０μＬの水で希釈して、９６ウェルプレートに移した。サンプルは、
ＨＴ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ ＬａｂＣｈｉｐ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）
を備えたＣａｌｉｐｅｒ ＧＸＩＩ機器（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）で分析した。蛍光
強度を用いて、各サイズの変異体の相対存在度を計算した。
非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
サンプルを、Ｌａｅｍｍｌｉサンプルバッファー（４％ＳＤＳ、Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）中
で、９５℃で１０分間、変性させた。サンプルを、Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ ＴＧＸ ｓｔａ
ｉｎ－ｆｒｅｅゲル（４～１５％ポリアクリルアミド、Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）で電気泳動に
かけた。タンパク質のバンドは、ＵＶ照射又はクマシーブルー染色で可視化した。Ｃｈｅ
ｍｉＤｏｃ ＭＰイメージングシステム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）でゲルを画像化した。Ｉｍ
ａｇｅｌａｂ ４．０．１ソフトウェア（Ｂｉｏ－Ｒａｄ社）を用いて、バンドの定量化
を行った。
相補依存細胞毒性（ＣＤＣ）
ＣＤＣは、連続希釈されたリツキシマブ、Ｆｃコンストラクト４又はＩＶＩｇでＲａｊ
ｉ細胞（ＡＴＣＣ）がコーティングした比色分析アッセイで評価した。すべてのウェルに
ヒト血清補体（Ｑｕｉｄｅｌ社）を２５％ｖ／ｖで添加し、３７℃で２時間インキュベー
トした。細胞は、ＷＳＴ－１細胞増殖試薬（Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ社）を添加した後で、３７℃で１２時間インキュベートした。プレートを振とう機に２
分間移し、４５０ｎｍの吸光度を測定した。
実施例４ リンカーセリン残基のＯ－グリコシル化及びタンパク質分解
リンカーセリン残基におけるＯ－グリコシル化
実施例１で記載したように、本発明者らは、フォールディング効率を増加させ、制御さ
れていないサブユニットの会合を最小化し、及び実質的に均質な医薬品用の組成物を生成
するように、Ｆｃコンストラクトを設計した。こうした目的を達成するための努力として
、長ポリペプチド内の二つのＦｃドメイン単量体（図１の１０２及び１０８、図２の２０
２及び２０８）間における様々なリンカーを調べた。Ｆｃコンストラクト１及びＦｃコン
ストラクト２はそれぞれ、長ポリペプチド内の二つのＦｃドメイン単量体間にセリン－グ
リシンリンカー
Figure 2022191261000142
を有する。
長ポリペプチド内の二つのＦｃドメイン単量体間にリンカー
Figure 2022191261000143
を含有するＦｃコンストラクト２をペプチドＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分析したとき、Ｏ
－キシロシル化が観察された（図３）。しかしながら、フラグメントｙ２～ｙ９はキシロ
ースを含有していないように、リンカー内の５番目のセリンはＯ－キシロシル化されてい
ない。Ｏ－キシロシル化されている部位は複数存在し得るが、各ペプチドは、一つずつＯ
－キシロシル化されているのみである。この翻訳後修飾の範囲及び位置は、配列と発現系
との両方に依存し得る。
同様に、同一の（ＳＧ３）５リンカーを含有する二つのＦｃドメインを有するＦｃコン
ストラクト（図１３に示すＦｃコンストラクト）内でＯ－キシロシル化が観察された（図
４）。各リンカー内に最大二つのキシロース修飾をもつ、複数の部位での修飾が観察され
た。さらに、修飾のレベルは、バッチ間で一定しなかった。
セリン－グリシンリンカー内のセリン残基におけるＯ－キシロシル化が観察された後で
、リンカー配列をさらに最適化し、またＦｃコンストラクトの均質性をさらに向上させる
ために、グリシン残基のみを含有する代替的なリンカーについて調べた。結果として、Ｆ
ｃコンストラクト３及びＦｃコンストラクト４内での使用に、オールグリシンスペーサー
を選択した。Ｆｃコンストラクト３は、長ポリペプチド内の二つのＦｃドメイン単量体間
に、１５－ｍｅｒのオールグリシンスペーサー
Figure 2022191261000144
を有する。Ｆｃコンストラクト４は、長ポリペプチド内の二つのＦｃドメイン単量体間に
、２０－ｍｅｒのオールグリシンスペーサー
Figure 2022191261000145
を有する。
リンカーセリン残基におけるタンパク質分解
一部の実施形態では、Ｆｃコンストラクトは、リン酸緩衝食塩水中で４５℃でインキュ
ベーションすると、リンカー内でタンパク質分解を受け、単量体のＦｃ産物を生成するこ
とがわかった。Ｆｃコンストラクト２（ポリペプチド１０２及び１０８のそれぞれにおい
てリンカー
Figure 2022191261000146
を含有する）における単量体形成速度は、Ｆｃコンストラクト４（ポリペプチド２０２及
び２０８のそれぞれにおいてオールグリシンスペーサー
Figure 2022191261000147
を含有する）においてよりも速く（図５）、オールグリシンスペーサーは、タンパク質分
解の影響を受けにくいということを示唆した。この効果は、多様なリンカー長である三つ
のＦｃドメインを有する分枝したＦｃコンストラクトのうちでは一般的であるということ
が見出され、オールグリシンスペーサーは、セリン－グリシンリンカーよりもゆっくりと
タンパク質分解されるものであった（表９）。
（表９）
Figure 2022191261000148
また、ポリペプチド１０２及び１０８のそれぞれに（ＳＧ３）５リンカーをもつＦｃコ
ンストラクト２における単量体Ｆｃ産物の質量分析法による分析は、優位な産物がセリン
のＮ末端側に開裂されて、はじめのセリンを除くすべてがタンパク質分解を受け易いとい
うことを示していた（図６）。対照的に、ポリペプチド２０２及び２０８のそれぞれにＧ
２０スペーサーをもつＦｃコンストラクト４の開裂された産物は、任意の特定のスペーサ
ー残基に対して強い特異性を示さなかった（図７）。総合して、これらの結果は、オール
グリシンスペーサーは、タンパク質分解に対する感度が低いということを示唆した。タン
パク質分解を制限するために、Ｆｃコンストラクト４で用いたＧ２０スペーサーのような
、セリンを含まないスペーサーを用いることができる。こうしたグリシンスペーサーを使
用することで、最終的なＦｃコンストラクトの組成物の均質性が実質的に向上する。
実施例５ リンカー長の最適化
均質性をさらに最適化するために、（ＳＧ３）５リンカーを、Ｇ８、Ｇ１５又はＧ２０
スペーサーで置き換えて、Ｆｃコンストラクト２の配列が変動するように調整することで
リンカー長を探索した。インビトロアッセイによる解析では、おそらくＦｃγ受容体と相
互作用するＦｃコンストラクトの能力が変化することによって、リンカー長が生物活性に
影響を及ぼすことを示唆した。
プレート固定ＩｇＧによって刺激されたＴＨＰ－１細胞によるＩＬ－８放出の抑制は、
リンカー長に依存することがわかった（図８）。低Ｆｃコンストラクト濃度での抑制は、
Ｇ８ ＜ Ｇ１５ ＜ Ｇ２０の順となり、Ｇ２０スペーサーをもつＦｃコンストラクト
２において、ＴＨＰ－１細胞によるＩＬ－８放出を最も大きく抑制した。
また、好中球におけるカルシウム流出の抑制が、リンカー長に依存していることがわか
った（図９）。Ｇ８ ＜ Ｇ１５ ＜ Ｇ２０の順で抑制され、Ｇ２０スペーサーを有す
るＦｃコンストラクト２において、好中球におけるカルシウム流出を最も大きく抑制する
ことを示した。
実施例６ ノブイントゥホール技術によるヘテロ二量体形成の最適化
Ｆｃコンストラクト２の長ポリペプチド及び短ポリペプチド（図１のポリペプチド１０
２、１０８、１１４及び１１６）又はＦｃコンストラクト４の長ポリペプチド及び短ポリ
ペプチド（図２のポリペプチド２０２、２０８、２１４及び２１６）を発現するプラスミ
ドを、ＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトした。培養７日後に、遠心分離で細胞を除き
、生培地上清を非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離した（図１０）。可視化したタンパク質バ
ンドの濃度測定分析で、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクト２と、三つのＦ
ｃドメイン（Ｆｃ３）を有するＦｃコンストラクト４とが同様のレベルで発現しているこ
とが明らかになった。しかしながら、Ｆｃコンストラクト２のコンストラクトは、夾雑二
量体（Ｆｃ２）の種を有意に高いレベルで発現した（図１０）。コンストラクトの両セッ
トは、単量体の種（Ｆｃ１）を同様のレベルで発現した。画像中に存在するさらなるバン
ドは、偽トランスフェクト対照中に存在している培養成分を表す。
これら結果は、ヘテロ二量体形成を促進する静電的ステアリング変異と、「枝」サブユ
ニット内のヘテロ二量体形成を促進するノブイントゥホール変異（例えば、図１のＦｃド
メイン単量体１０６、１１４、１１２及び１１６、図２のＦｃドメイン単量体２０６、２
１４、２１２及び２１６）との両方を有することが、Ｆｃコンストラクトにおいてヘテロ
二量体Ｆｃドメインの形成を増強し、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクトの
アセンブリを最適化させて、Ｆｃコンストラクトを含有する組成物の均質性を向上させる
ということを示唆する。
実施例７ ホモ二量体形成を制御するための静電的ステアリング
望まない高分子量オリゴマー及び多量体を生成するものである、サブユニットの測定不
可能な会合を最小化するために、ヘテロ二量体形成を支持する変異（例えば、ノブ及びホ
ール）を「枝」サブユニット内に導入した（例えば、図１のＦｃドメイン単量体１０６、
１１２、１１４及び１１６、図２のＦｃドメイン単量体２０６、２１２、２１４及び２１
６）。これらアミノ酸置換が、ノブサブユニット（例えば、図１のＦｃドメイン単量体１
０６及び１１２、図２のＦｃドメイン単量体２０６及び２１２）による、対の片側である
ホール（例えば、図１のＦｃドメイン単量体１１４及び１１６、図２のＦｃドメイン単量
体２１４及び２１６）に対する誘引を保持し、また同時にノブサブユニット間での会合を
妨害する。ノブ変異はまた、野生型のＦｃ配列とのアセンブリを抑制するため、「幹」Ｆ
ｃサブユニット（例えば、図１のＦｃドメイン単量体１０４及び１１０、図２のＦｃドメ
イン単量体２０４及び２１０）のノブ及びホールの「枝」サブユニットに対する親和性を
さらに減少させるようなさらなる変異を含む必要性は疑問視される。この疑問に対処する
ため、カルボキシル末端「幹」サブユニット内に野生型Ｆｃドメイン単量体配列と、アミ
ノ末端「枝」サブユニット内にノブ変異をもつＦｃドメイン単量体とを含有する、Ｆｃコ
ンストラクトの長ポリペプチドを生成した。対応する短ポリペプチドは、ホール変異をも
つＦｃドメイン単量体とした。このＦｃコンストラクトは、Ｆｃコンストラクト２内のポ
リペプチドの配列に基づいているが、長ポリペプチドのそれぞれにおけるカルボキシル末
端「幹」サブユニット内に野生型Ｆｃドメイン単量体配列を有する。
ＨＥＫ２９３細胞を、Ｆｃコンストラクト２（長ポリペプチドのそれぞれにおけるカル
ボキシル末端「幹」サブユニット内のＦｃドメイン単量体にホモ二量体形成静電的ステア
リング変異を有する。実施例１の表５及び６）を発現するプラスミドと共に、又は、長ポ
リペプチドのそれぞれにおけるカルボキシル末端「幹」サブユニット内のＦｃドメイン単
量体が、野生型Ｆｃドメイン単量体配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）（上記に記載する
）で置き換えたＦｃコンストラクト２に基づくＦｃコンストラクトと共に、同時導入した
。培養７日後に、遠心分離で細胞を除き、生培地上清を非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離し
た。染色タンパク質のイメージングにより、「幹」サブユニット内に静電的ステアリング
変異をもたないＦｃコンストラクト（図１１において「静電的ステアリングなし」を印し
たもの（レーン１～３））では、相手方のＦｃコンストラクト２（図１１において「静電
的ステアリングあり」を印したもの（レーン４及び５））よりも、はるかに高いレベルの
単量体（Ｆｃ１）及び二量体（Ｆｃ２）を含有していることが明らかになった。また、三
量体よりも大きい分子量のバンドが、はるかに大量に検出できる（図１１のレーン１～３
）。
これら結果により、「幹」サブユニット内に二量体形成を促進する静電的ステアリング
変異を有すること（例えば、図１のＦｃドメイン単量体１０４及び１１０、図２のＦｃド
メイン単量体２０４及び２１０）により、Ｆｃコンストラクト内でのホモ二量体Ｆｃドメ
イン形成をさらに増強し、三つのＦｃドメインを有するＦｃコンストラクトのアセンブリ
をさらに最適化させ、Ｆｃコンストラクトを含有する組成物の均質性をさらに向上させる
ということが確認される。
実施例８ Ｃ末端リシン残基を排除することによる組成物均質性の最適化
免疫グロブリンのＣ末端リシン残基は、多数の種にわたって高度に保存されている。一
部の例では、ポリペプチド内のＣ末端残基は、タンパク質産生中に細胞機構によって除去
される。本発明者らは、Ｆｃコンストラクト内のポリペプチドのそれぞれからＣ末端リシ
ンを除去することによって、組成物中のＦｃコンストラクトの均一性をさらに向上させる
ことと、本明細書に記載するＦｃコンストラクトを含有するより均質な組成物を達成する
こととを目指した。Ｆｃコンストラクト２は、その長ポリペプチド（１０２及び１０８、
実施例１、表５～７、図１を参照）又は短ポリペプチド（１１４及び１１６）のいずれに
も、Ｃ末端リシン残基を何も含有していない。図１２は、Ｃ末端リシンを除去してＦｃコ
ンストラクト２を生成することにより、インビトロで相補依存細胞毒性（ＣＤＣ）が誘導
されなかったということを示している。これにより、Ｃ末端リシン残基を除去することに
よって、免疫学的な有害な副作用を誘引することなく、Ｆｃコンストラクトの医薬組成物
の均質性を向上させることができた。
実施例９ Ｉ２５３及び／又はＲ２９２アミノ酸修飾を有するＦｃコンストラクトの設計
変更（例えば、増加）された半減期を有するＦｃコンストラクトは、コンストラクト４
（Ｍ２３０）に基づいて設計され、ＦｃＲｎ（例えばＩ２５３Ａなどの位置Ｉ２５３での
、例えばアミノ酸修飾を含むことによる、例えばＦｃＲｎへの結合の減少）に対する結合
親和性を変化させる及び／又はＦｃγＲＩＩｂ（例えばＲ２９２Ｐなどの位置Ｒ２９２で
の、例えばアミノ酸修飾を含むことによる、例えばＦｃγＲＩＩｂへの結合の減少）に対
する結合親和性を変化させるアミノ酸修飾（例えば、単一変異又は変異の組み合わせ）を
含んだ（図１８Ａ～１８Ｏ）。
六つのＦｃコンストラクト（図２、１８Ｂ、１８Ｃ、１８Ｌ、１８Ｎ、及び１８Ｏ）を
調製し、それぞれが、例えばオールグリシンリンカー、例えば、
Figure 2022191261000149
のスペーサーによって分離された二つのＦｃドメイン単量体を含む長ポリペプチド、及び
単一Ｆｃドメイン単量体を含む短ポリペプチドを含み、位置Ｉ２５３（例えば、Ｉ２５３
Ａ）及び／又はＲ２９２（例えば、Ｒ２９２Ｐ）でのアミノ酸修飾の異なる結合価を有す
る。各ＦｃコンストラクトはＩｇＧ１ Ｆｃ配列に基づくものであり、ポリペプチドのア
センブリを制御する操作された空洞、操作された突起、及び／又は静電的ステアリングの
修飾を包含する。長ポリペプチド及び短ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、哺乳動
物細胞での発現のために最適化され、ｐｃＤＮＡ３．４哺乳動物発現ベクターにクローン
化された。ＤＮＡプラスミドコンストラクトを、リポソームを介して、ヒト胎生腎（ＨＥ
Ｋ）２９３細胞にトランスフェクトした。
Ｆｃコンストラクト毎に、長ポリペプチド及び短ポリペプチドは、共発現されたときに
三つのＦｃドメインを含有する分枝した分子を産生するものであり、該長ポリペプチドの
Ｃ末端Ｆｃ単量体が互いに特異的に会合して一つのＣ末端Ｆｃドメインを形成することと
、長ポリペプチドのＮ末端Ｆｃ単量体が短ポリペプチドと特異的に会合して二つのＮ末端
Ｆｃドメインを形成することを伴う。Ｆｃコンストラクト１２～１５、２４、２６及び２
７ならびにそれらの設計は、表１０ならびに図２及び１８Ｂ～１８Ｏに記載している。各
Ｆｃコンストラクトで利用される配列を表１１に示し、各Ｉ２５３Ａ及び／又はＲ２９２
Ｐアミノ酸修飾は太字で下線付きである。
コンストラクト４において、長ポリペプチドの各々は、リンカーを介して突起含有（修
飾Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗによって形成される）Ｆｃドメイン単量体に結合されたＣＨ
３－ＣＨ３界面において電荷をもつアミノ酸（Ｄ３９９Ｋ及びＫ４０９Ｄ）を有する一つ
のＦｃドメイン単量体を含有する。突起含有Ｆｃドメイン単量体は、Ｆｃドメインのアセ
ンブリを増強するアミノ酸修飾（Ｅ３５７Ｋ）を有する。短ポリペプチドはそれぞれ、空
洞含有（修飾Ｙ３４９Ｃ／Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖによって形成される）Ｆ
ｃドメイン単量体を有する。短ポリペプチドは、Ｆｃドメインのアセンブリを増強するア
ミノ酸修飾（Ｋ３７０Ｄ）も有する。コンストラクト４は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９の
アミノ酸配列を有する第一及び第二のポリペプチド、ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１
のアミノ酸配列を有する第三及び第四のポリペプチドを発現することによって形成される
。
コンストラクト１３～２７（図１８Ａ～１８Ｏ）は、本明細書に記載されるように、位
置Ｉ２５３及び／又はＲ２９２での特定の修飾を除いて、コンストラクト４と同一である
。コンストラクト５は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を有する第一及び第二
のポリペプチド、ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を有する第三及び第
四のポリペプチドを発現することによって形成される。コンストラクト６は、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を有する第一及び第二のポリペプチド、ならびにＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を有する第三及び第四のポリペプチドを発現することに
よって形成される。コンストラクト７は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を有
する第一及び第二のポリペプチド、ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を
有する第三及び第四のポリペプチドを発現することによって形成される。コンストラクト
８は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を有する第一及び第二のポリペプチド、
ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を有する第三及び第四のポリペプチド
を発現することによって形成される。コンストラクト９は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７の
アミノ酸配列を有する第一及び第二のポリペプチド、ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１
のアミノ酸配列を有する第三及び第四のポリペプチドを発現することによって形成される
。コンストラクト１０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のアミノ酸配列を有する第一及び第
二のポリペプチド、ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を有する第三及び
第四のポリペプチドを発現することによって形成される。コンストラクト１１は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６９のアミノ酸配列を有する第一及び第二のポリペプチド、ならびにＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を有する第三及び第四のポリペプチドを発現するこ
とによって形成される。コンストラクト１２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配
列を有する第一及び第二のポリペプチド、ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のアミノ酸
配列を有する第三及び第四のポリペプチドを発現することによって形成される。コンスト
ラクト１３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を有する第一及び第二のポリペ
プチド、ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のアミノ酸配列を有する第三及び第四のポリ
ペプチドを発現することによって形成される。コンストラクト１４は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：７４のアミノ酸配列を有する第一及び第二のポリペプチド、ならびにＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：７３のアミノ酸配列を有する第三及び第四のポリペプチドを発現することによって
形成される。コンストラクト１５は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を有する
第一及び第二のポリペプチド、ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を有す
る第三及び第四のポリペプチドを発現することによって形成される。コンストラクト１６
は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を有する第一及び第二のポリペプチド、な
らびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のアミノ酸配列を有する第三及び第四のポリペプチドを
発現することによって形成される。コンストラクト１７は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７の
アミノ酸配列を有する第一及び第二のポリペプチド、ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０
のアミノ酸配列を有する第三及び第四のポリペプチドを発現することによって形成される
。コンストラクト１８は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８のアミノ酸配列を有する第一及び第
二のポリペプチド、ならびにＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を有する第三及び
第四のポリペプチドを発現することによって形成される。コンストラクト１９は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７９のアミノ酸配列を有する第一及び第二のポリペプチド、ならびにＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を有する第三及び第四のポリペプチドを発現するこ
とによって形成される。
（表１０）Ｉ２５３及び／又はＲ２９２アミノ酸修飾を有するＦｃコンストラクト
Figure 2022191261000150
（表１１）アミノ酸配列
Figure 2022191261000151
Figure 2022191261000152
Figure 2022191261000153
Figure 2022191261000154
Figure 2022191261000155
実施例１０ Ｆｃ受容体結合特異性に対するＩ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐアミノ酸修飾の評
価
細胞ベースの結合アッセイを利用して、例えばＩ２５３Ａなどの位置Ｉ２５３、及び例
えばＲ２９２Ｐなどの位置Ｒ２９２におけるアミノ酸修飾が、目的の受容体に特異的であ
ること、例えばＦｃＲｎ受容体及びＦｃγＲＩＩｂ受容体に対するそれぞれの結合親和性
の低下を確認した。Ｆｃガンマ受容体に対するＦｃコンストラクトと対照との相対結合（
ＦｃγＲｓ）は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ Ｈ１３１、ＦｃγＲＩＩｂ、及びＦｃγ
ＲＩＩＩａ Ｖ１５８用の細胞ベースの均質な時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ－
ＦＲＥＴ）拮抗アッセイ（ＣＩＳＢＩＯ（登録商標））キットを使用して測定された。メ
ーカーの指示に従ってアッセイ試薬を調製した。自動液体ハンドラー（Ｆｒｅｅｄｏｍ
ＥＶＯｗａｒｅ １５０、ＴＥＣＡＮ（登録商標））を使用して、１０点、３倍連続希釈
系列と、サンプルあたり一つのブランクが生成された。アッセイプレートを、６６５及び
６２０ｎｍで、ＰＨＥＲＡｓｔａｒ蛍光リーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）
上で読み取った。ＩｇＧ１試料を対照として使用した。図１９Ａ～Ｄは、コンストラクト
１６及びコンストラクト１８におけるＲ２９２Ｐ変異が、ＩｇＧ１対照と比較して、Ｆｃ
γＲＩＩｂ発現細胞への結合を劇的に減少させる一方で、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、
及びＦｃγＲＩＩＩａ結合に対する影響を最小限に抑えることを示す。しかしながら、Ｉ
２５３Ａ変異は、コンストラクト６及びコンストラクト４の結合プロファイルの類似性、
及びコンストラクト１８及びコンストラクト１６の結合プロファイルの類似性によって示
されるように、任意のＦｃガンマ受容体への結合に対する影響は最小限であった。
Ｉ２５３Ａなどの位置Ｉ２５３、及びＲ２９２ＰなどのＲ２９２でのアミノ酸修飾の影
響を評価するために、ＦｃＲｎ結合上で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）結合実験を行い、
ｐＨ６．０でのセンサー結合Ｆｃコンストラクトに対する溶液相ヒトＦｃＲｎの親和性及
び正規化結合レベルを測定した。ヤギ抗ヒトＩｇＧをリファレンスに固定し、アミンカッ
プリング法の化学を使用してセンサー表面を試験した。Ｆｃコンストラクトを試験センサ
ー表面上に捕捉した。組換えヒトＦｃＲｎを、１．０μｍのトップ濃度で希釈系列のセン
サー表面上に流した。各サイクルの終了時に、センサー表面を１０ｍＭのグリシンｐＨ１
．７で再生した。ダブルリファレンス減算センサーグラムを平衡結合分析にかけた。最大
結合レベル（ＲＭａｘ）及び平衡解離定数（ＫＤ）が推定された。正規化された最大結合
レベルは、ＲＭａｘをＦＣコンストラクト捕捉レベルで割ることによって計算された。コ
ンストラクト１６は、コンストラクト４と同じレベルで捕捉され、予想されるＦｃＲｎへ
の結合の損失がないことを示す（図２０）。コンストラクト６及びコンストラクト１８は
、意図したとおりにＦｃＲｎに対する親和性を失う二つのＦｃドメインと一致して、大幅
に減少した捕捉レベルを示した（図２０）。同様に、ＦｃＲｎ結合を制限するために三つ
のドメインすべてに変異があった、コンストラクト７及びコンストラクト１９は、ＦｃＲ
ｎに結合しなかった（図２０）。
まとめると、このデータは、ＦｃγＲＩＩｂ（例えば、Ｒ２９２Ｐなどの位置Ｒ２９２
でのアミノ酸修飾）への結合を減少させる変異が、他のＦｃガンマ受容体への結合にほと
んど影響を与えず、結合ＦｃＲｎへの影響は最小限であるという意図された効果を有した
ことを示す。同様に、ＦｃＲｎへの結合を減少させる変異（例えば、Ｉ２５３Ａなどの位
置Ｉ２５３でのアミノ酸修飾）は、Ｆｃガンマ受容体結合に対する影響を最小限にするた
めに望ましい効果を有した。さらに、二つの変異（例えば、Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐな
どのＩ２５３及びＲ２９２の変異）を組み合わせて、ＦｃγＲＩＩｂとＦｃＲｎの両方に
対する減少したＦｃコンストラクト結合を達成することができる。
実施例１１ マウスにおけるＦｃ受容体の薬物動態に対するＩ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐア
ミノ酸修飾の評価
薬物動態に対する結合関連変異の影響は最初に、三つのＦｃドメインすべてにおいてＦ
ｃγＲＩＩｂ結合が低減されたコンストラクト４、コンストラクト１６、及び二つのＦｃ
ドメインにおいてＦｃＲｎ結合が低減されたコンストラクト６を比較することによって評
価された。ＩＶＩｇは、典型的なＩｇＧ挙動を示すコンパレータとして含まれた。雌Ｃ５
７ＢＬ／６マウス（ｎ＝１２、８～１０週齢）に、コンストラクト４、コンストラクト６
、コンストラクト１６、又はＩＶＩｇのそれぞれを０．１ ｇ／ｋｇで静脈内に投与した
。交互時点１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１日、２日、３
日、４日、及び５日で、時点につき４匹のマウスの伏在静脈から血液試料（５０μＬ）を
採取した。すべてのマウスを７、９、１１、１４、１６、２１、及び２３日で採血した。
Ｆｃコンストラクト及びＩＶＩｇ血清濃度は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ特異的ＥＬＩＳＡによ
り決定された。図２１に示されるように、Ｆｃコンストラクト６及びコンストラクト１６
の両方は、インビボで長持ちし、平均滞留時間（ＭＲＴ）で１．２～１．５倍の強化を生
じた（前もって、（例えば３倍～４倍の）強化は曲線下面積（ＡＵＣ）によって測定され
た）。
薬物動態学的にＦｃＲｎに対するＩ２５３Ａアミノ酸修飾結合価の影響をさらに探るた
めに、ＦｃＲｎに対する親和性が低下した一つ、二つ、又は三つのドメインを有する三つ
の化合物を、上述のように比較した。図２２に示されるように、全変異体は親化合物より
も長く維持された。平均滞留時間（ＭＲＴ）は、ＦｃＲｎに対する親和性の減少のために
修飾された各Ｆｃドメインと共に系統的に増加した。薬物曝露はＡＵＣによって測定する
こともできる。
変異を組み合わせる効果も検討された（図２３）。両方の受容体に変異を組み込むこと
は、ＦｃγＲＩＩｂへの結合を減少させることにより、この研究で達成した二倍の増強と
比較して、ＭＲＴを三倍増強した。薬物曝露はまた、例えば六倍の増強などのＡＵＣによ
り測定することができる。
実施例１２ インビトロ有効性に対するＩ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐアミノ酸修飾の評価
インビトロ有効性に対する結合変異の影響は、Ｆｃガンマ受容体に対する結合価に敏感
であることが前述されたアッセイを使用して評価された。ＴＨＰ－１細胞におけるファゴ
サイトーシスの阻害は、すべてのＦｃコンストラクト間で同等であった（図２４）。ＴＨ
Ｐ－１細胞を９６ウェルプレートに蒔く。Ｆｃコンストラクトを１０倍に連続希釈し、細
胞に添加した。３７ °Ｃで１５分間インキュベートした。次いで、ＦＩＴＣ標識ウサギ
ＩｇＧでコーティングされたラテックスビーズ（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）を細
胞に添加した。３７ °Ｃで３時間インキュベートした。細胞を二回洗浄し、１００μＬ
のＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ／２％ ＦＢＳ）中に再懸濁した。トリパンブルーを添加して
細胞表面ＦＩＴＣ信号をクエンチし、サンプルをＢＤ Ｃａｎｔｏ フローサイトメータ
ーで読み取った。データは、阻害剤（１００％ファゴサイトーシス）が存在しない場合の
合計細胞集団と比較したＦＩＴＣ陽性細胞のパーセンテージとして報告される。
プレート結合型ＩｇＧで刺激された単球によるＩＬ－８放出は、すべてのＦｃコンスト
ラクトによって比較的阻害された（図２５）。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ
Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）上の密度勾配
の遠心分離により、健康なヒトドナー（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｌｏｏｄ Ｃｏｍｐｏｎｅ
ｎｔｓ社）のバフィーコートから単離された。単球を、ＣＤ１６枯渇を伴わないＨｕｍａ
ｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｋｉｔ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｉｅｓ社）を使用して負の選択により単離した。ＦｃγＲ介在性サイトカインの
産生を、５０μｌの１００μｇ／ｍＬヒトＩｇＧ１（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ社
）で一晩コーティングした９６ウェルプレートを使用して刺激した。ＩＶＩｇ又は各Ｆｃ
コンストラクトを、アッセイの最終濃度の二倍で、培養プレート中で連続希釈した。精製
単球（１．５×１０５細胞／ウェル）を添加し、２４時間インキュベートし、そして培養
上清をＩＬ－８濃度（高存在ＩＬ－８のためのＣｕｓｔｏｍ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉ
ｎｅ ｋｉｔ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ社）について分析した。
同様に、ＡＤＣＣ阻害はすべてのＦｃコンストラクトにわたり同等であった（図２６）
。ＮＫ細胞（Ｈｅｍａｃａｒｅ）を解凍し、ＬＧＭ－３培地（Ｌｏｎｚａ）中で一晩放置
した。培養されたＲａｊｉ細胞を、エフェクターでＮＫ細胞を加える前に、異なる濃度の
各試験化合物及びリツキシマブ（２ｕｇ／ｍＬ）の存在下で３０分間インキュベートした
。標的細胞比５０Ｋ：１０Ｋ。ＮＫ及びＲａｊｉ細胞もプローブ単独の存在下でプレーテ
ィングした。細胞を６時間インキュベートした。Ｃｙｔｏｔｏｘ－Ｇｌｏをリードアウト
として使用した。
すべてのアッセイで、変異は無視できる程度の有効性の減少を生じた。
実施例１３ インビボ有効性に対するＩ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐアミノ酸修飾の評価
活性に対する受容体結合変異の影響をさらに評価するために、Ｆｃコンストラクトを、
コラーゲン抗体誘発性関節炎（ＣＡＩＡ）モデルを使用してインビボで試験した。雄Ｃ５
７ＢＬ／６マウスに、コラーゲンＩＩに対する四つの抗体の関節炎誘導用モノクローナル
抗体カクテル（ＡｒｔｈｒｉｔｏＭａｂ、ＭＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社；８ｍｇ）を腹
腔内注射した。４日目に、動物にリポ多糖（１００μｇ）を腹腔内注射した。治療的投与
のために、疾患誘導が不良な動物（ランダム化した日のスコア０）を除き、６日目に疾患
の深刻度に基づいて動物をランダム化し、媒体又は試験化合物を静脈内に投与した。予防
的投与のために、１日目から－１４日目（日数は０日を省いて数えた）の間の１日に、動
物に媒体又は試験化合物を静脈内投与した。臨床スコアパラメータは以下のとおりとした
：０＝正常：腫れ、赤み又は捻挫なし；完全な関節柔軟性。１＝軽度の関節炎：軽度の腫
れ及び／又は捻挫；完全な関節柔軟性。２＝中程度の関節炎：中程度の腫れ及び／又は捻
挫；関節柔軟性又は握力の低下。３＝重度の関節炎：重度の腫れ及び／又は捻挫；関節柔
軟性又は握力の重度の低下。４＝強直性関節；関節柔軟性なし、かつ、重度の障害性動作
；瀕死。動物は、１２日後に屠殺した。
図２７に示すように、ＦｃγＲＩＩｂ（コンストラクト１６）、ＦｃＲｎ（コンストラ
クト６）、又は両方（コンストラクト１８）への結合の低減は、親分子（コンストラクト
４）に対する有効性に最小限の効果があった。
実施例１４ インビボ反応耐久性に対するＩ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐアミノ酸修飾の評価
ＣＡＩＡモデルのマウスは、関節炎誘発性抗体を注射する前に、予防的に最大１４日間
治療された。図２８に示すように、１日目での予防処置は、コンストラクト４よりも、よ
り遅いクリアリングＱ１（コンストラクト１８）でより効果的であり、おそらく多日疾患
誘導全体にわたる薬物曝露がより大きいためだと思われる。コンストラクト４化合物は、
疾患誘導の３日前に投与した場合、有効性を失ったが（図２９）、Ｑ１（コンストラクト
１８）は疾患誘導の７日前に投与した場合、保護を提供した（図３０）。疾患誘導の１０
日前に投与された場合、両方のコンストラクトは効果的でなかった（図３１）。これらの
結果は、コンストラクト４と比較したコンストラクト１８の長い薬物動態プロファイルが
、反応のより大きな耐久性に変化することを実証する。
ＣＡＩＡモデルでの予防投与は、１日目（図３２）、－３日目（図３３）、－７日目（
図３４）、又は－１０日目（図３５）に、１００ｍｇ／ｋｇのコンストラクト４（親分子
）、コンストラクト１８（二つのドメイン中のＩ２５３Ａ及び三つのドメイン中のＲ２９
２Ｐ）（Ｑ１）、又はコンストラクト１９（三つすべてのドメイン中のＩ２５３Ａ及びＲ
２９２Ｐ）（Ｑ２）で行われた。媒体対照（食塩水）は、１日目にのみ投与した。
図３２は、コラーゲン抗体誘発性関節炎（ＣＡＩＡ）モデルに、１日目に１００ｍｇ／
ｋｇで投与されたコンストラクト４（ＡＡ：黒四角、実線）、コンストラクト１８（Ｑ１
：黒三角、破線）、コンストラクト１９（Ｑ２：黒ひし形、点線）、又は食塩水（灰丸、
鎖線）の効能を比較したグラフである。図３３は、－３日目に１００ｍｇ／ｋｇで投与さ
れたコンストラクト４（ＡＡ：黒四角、実線）、コンストラクト１８（Ｑ１：黒三角、破
線）、又はコンストラクト１９（Ｑ２：黒ひし形、点線）を比較したグラフである。図３
４は、－７日目に１００ｍｇ／ｋｇで投与されたコンストラクト４（ＡＡ：黒四角、実線
）、コンストラクト１８（Ｑ１：黒三角、破線）、又はコンストラクト１９（Ｑ２：黒ひ
し形、点線）を比較したグラフである。図３５は、－１０日目に１００ｍｇ／ｋｇで投与
されたコンストラクト４（ＡＡ：黒四角、実線）、コンストラクト１８（Ｑ１：黒三角、
破線）、又はコンストラクト１９（Ｑ２：黒ひし形、点線）を比較したグラフである。そ
れぞれについて、等量の食塩水（灰丸、一点鎖線）を１日目に投与した。各時点について
、平均及び平均の標準誤差を示している。
実施例１５ Ｆｃ多量体に対するＩ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐアミノ酸修飾の評価
（Ｓｔｒｏｍｅら、米国特許公開公報第２０１０／０２３９６３３Ａ１号；Ｊａｉｎ
ｅｔ ａｌ，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．１４，Ｒ１９２（２０１２））に
記載されるとおり、Ｆｃ多量体を生成した。詳細には、ＩｇＧ１ ＦｃをＣ末端において
ＩｇＧ２ヒンジ配列と融合した。野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ配列（コンストラクトＸ１）を用
いてＤＮＡコンストラクトを生成し、Ｉ２５３Ａ／Ｒ２９２Ｐ二重変異体（コンストラク
トＸ２）を使用した。ＤＮＡプラスミドコンストラクトを、リポソームを介して、ＨＥＫ
２９３細胞にトランスフェクトした。培養７日後に、遠心分離により細胞を除去した。
発現したタンパク質を、Ｐｏｒｏｓ ＭａｂＣａｐｔｕｒｅ Ａカラムを用いて、プロ
テインＡ系のアフィニティーカラムクロマトグラフィーによって細胞培養上清から精製し
た。捕捉したコンストラクトを、リン酸緩衝食塩水で洗浄し（低塩洗浄）、ｐＨ３のグリ
シン１００ｍＭで溶離した。溶出物は、１ＭのＴＲＩＳ ｐＨ７．４を添加することによ
って素早く中和して、０．２μｍフィルターで滅菌濾過した。
タンパク質は、Ｐｏｒｏｓ ＸＳ樹脂を用いて、イオン交換クロマトグラフィーによっ
てさらに分取した。カラムは、５０ｍＭのＭＥＳ、ｐＨ６（緩衝液Ａ）で予め平衡化して
、サンプルは、ロードする前に平衡用緩衝液で希釈した。溶離緩衝液として５０ｍＭのＭ
ＥＳ、４００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ６（緩衝液Ｂ）を用いた多段ステップグラジェ
ントにより、サンプルを溶離した。グラジェントステップには、低分子量の種を除去する
ための２カラム体積（ＣＶ）に対して０～４０％のＢのステップ、４０％のＢ（４ＣＶ）
で保持するステップ、次いで標的の種を単離するための４０～８０％のＢ（４ＣＶ）のス
テップ、その後１００％のＢまで線形に増加させるステップを含めた。すべてのタンパク
質含有フラクションを分析用サイズ排除クロマトグラフィーでスクリーニングし、成分を
２８０ｎｍの吸光度で定量した。足して全容量の８％を超えるＦｃ（およそ５０ｋＤａ）
及びＦｃ二量体（およそ１００ｋＤａ）のフラクションは除外した。コンストラクトＸ１
については、残りのすべてのフラクションが組み合わされた。コンストラクトＸ１とＸ２
の間の分子量分布の移動により、コンストラクトＸ１の分子量分布を模倣するために、コ
ンストラクトＸ２のフラクションが選択された。
イオン交換の後、標的のフラクションは、タンジェンシャルフロー・フィルトレーショ
ンシステムにおいて、３０ｋＤａをカットオフするポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）膜カ
ートリッジを用いて、ＰＢＳ緩衝液に緩衝液交換した。サンプルはおよそ３０ｍｇ／ｍＬ
に濃縮して、０．２μｍフィルターで滅菌濾過した。
コンストラクト４及びコンストラクトＸ１の分子量分布を、分析サイズ排除クロマトグ
ラフィー（図３６）（精製したコンストラクトＸ１（灰色）、及びＸ２（黒）、最大ピー
クに正規化された）及びドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（図
３７）（精製したコンストラクトＸ１（右）、精製したコンストラクトＸ２（中央）、及
び分子量基準（右）。二つのコンストラクトの同一質量をロードした）により比較した。
コンストラクトＸ１及びＸ２は、約１００ｋＤａ（二つのＦｃドメイン）から２５０ｋＤ
ａを超える複数のバンドを伴う範囲にわたる複数の種により構成され、大多数が単一成分
ではない。コンストラクトＸ２のサイズ分布はコンストラクトＸ１と類似しているが、最
高分子量成分と最低分子量成分の両方でわずかに広くなっている。
雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝１５、８週齢）に、コンストラクトＸ１又はコンストラ
クト４のそれぞれを０．１ｇ／ｋｇで静脈内に投与した。血液（２５μＬ）を、顎下の静
脈より採取し、血清へと処理した。第５日目の間中は、交互の時点において１群当たり５
匹のマウスを出血させるが、残りのすべての時点では、各群内で１５匹すべてのマウスを
出血させた。採集の時点としては、１５分及び３０分；１、２、４、６、８、２４時間；
２日を含めた。Ｆｃ多量体の血清中濃度は、Ｆｃ特異的検出抗体を含む抗－ヒトＩｇＧ
ＥＬＩＳＡで決定した。
図３８に提示するように、コンストラクトＸ１の血清中濃度は、各時点でコンストラク
トＸ２のそれよりも低い。コンストラクトＸ２へのＩ２５３Ａ変異及びＲ２９２Ｐ変異の
導入は、対応する野生型材料（コンストラクトＸ１）と比較してＦｃ多量体のクリアラン
スを遅延した。
実施例１６ カニクイザルにおけるＦｃ受容体の薬物動態に対するＩ２５３Ａ及びＲ２９
２Ｐアミノ酸修飾の評価
カニクイザルにおける薬物動態に対する結合関連変異の影響を、コンストラクト６、１
６、及び１８を比較することにより評価した。コンストラクト４の履歴データは、コンス
トラクト６、１６、及び１８を比較する研究よりも異なる用量レベルで実施されたカニク
イザルの試験から得られた。雄のカニクイザル（Ｎ＝３）に、各コンストラクト６、１６
、及び１８を１０ｍｇ／ｋｇ又は３０ｍｇ／ｋｇで静脈内に投与した。血液試料は４４日
間の過程で採取された。コンストラクト４、６、１６、及び１８を含む、ヒトＩｇＧ１
Ｆｃコンストラクトに特異的な抗体を使用したＥＬＩＳＡにより、Ｆｃコンストラクト濃
度が決定された。
図３９に示すように、１０ｍｇ／ｋｇで投与したコンストラクト１６は、２０ｍｇ／ｋ
ｇで投与したコンストラクト４よりもインビボでより長く持続している。 １０ｍｇ／ｋ
ｇで投与したコンストラクト１８は、２０ｍｇ／ｋｇで投与したコンストラクト４とイン
ビボで類似の持続性を有する。１０ｍｇ／ｋｇで投与したコンストラクト６は、２０ｍｇ
／ｋｇで投与したコンストラクト４と同じくらい、インビボで長く持続しない。
図４０に示すように、３０ｍｇ／ｋｇで投与したコンストラクト１６は、２０又は５０
ｍｇ／ｋｇのどちらかで投与したコンストラクト４よりもインビボでより長く持続する。
３０ ｍｇ／ｋｇで投与したコンストラクト１８の持続性は、２０ｍｇ／ｋｇ又は５０
ｍｇ／ｋｇで投与したコンストラクト４の中間である。 ３０ｍｇ／ｋｇで投与したコン
ストラクト６は、２０又は５０ｍｇ／ｋｇで投与したコンストラクト４と同じくらい、イ
ンビボで長く持続しない。
カニクイザルにおける薬物動態挙動は、マウスにおけるものとは異なることが注目され
る。マウスでは、ＦｃＲｎ及びＦｃガンマＲＩＩｂ結合の減少は両方ともそれぞれ結果的
に持続性の増加をもたらし、両方の組み合わせはさらに持続性の増加をもたらした。カニ
クイザルでは、ＦｃＲｎの減少は持続性の低下をもたらし、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合の減
少は持続性の増加をもたらし、その組み合わせは親分子と比較して持続性に正味の変化が
ほとんどなかった（コンストラクト４）。
他の実施形態
この明細書中に記載したすべての公開公報、特許及び特許出願は、あたかも独立の公開
公報又は特許出願それぞれが特別にかつ個別に示されて参照によって組み入れられるかの
ように、同じ程度まで参照することによってここに組み入れるものとする。
本開示について、その特定の実施形態に関連して説明したが、さらなる変形が可能であ
ることと、この出願は、概して本開示の原則に従い、かつ、本開示が関係する技術分野の
範囲内で公知又は通例である範囲にあり、先に述べた本質的な特徴に応用することができ
るような、本開示からの逸脱を含んだ、本開示の任意のバリエーション、使用又は適応を
網羅することを意図し、請求項の範囲に従うものであることとが理解されるであろう。
他の実施形態は、特許請求の範囲の範囲内とする。
本明細書において、「治療有効量」は、例えば薬剤投与量である、対象もしくは患者に
おいて所望の生物学的な効果の誘導に、又は、本明細書に記載の状態又は障害を有する患
者の治療に有効である量を指す。本明細書においては、「治療有効量」が、単回投与又は
任意の投薬もしくは経路での摂取、単独で又は他の治療薬剤と組み合わせての摂取のいず
れでも、所望の治療効果をもたらす量として解釈できるということも理解されたい。
[本発明1001]
ａ）以下：
ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、
ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及び
ｉｉｉ）前記第一のＦｃドメイン単量体を前記第二のＦｃドメイン単量体に結合する
リンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
ｂ）以下：
ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、
ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及び
ｉｉｉ）前記第三のＦｃドメイン単量体を前記第四のＦｃドメイン単量体に結合する
リンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むＦｃコンストラクトであって、
前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第一の
Ｆｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が
組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及
び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000300
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000301
を含む、
Ｆｃコンストラクト。
[本発明1002]
ａ）以下：
ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、
ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及び
ｉｉｉ）前記第一のＦｃドメイン単量体を前記第二のＦｃドメイン単量体に結合する
リンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
ｂ）以下：
ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、
ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及び
ｉｉｉ）前記第三のＦｃドメイン単量体を前記第四のＦｃドメイン単量体に結合する
リンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むＦｃコンストラクトであって、
前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第一の
Ｆｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が
組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及
び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、
少なくとも一つのＦｃドメイン単量体が、位置Ｉ253にアミノ酸置換を含む、
Ｆｃコンストラクト。
[本発明1003]
前記第一及び第五のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置Ｉ253にアミノ酸
置換を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1004]
前記第二及び第四のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置Ｉ253にアミノ酸
置換を含む、本発明1002又は1003のＦｃコンストラクト。
[本発明1005]
前記第三及び第六のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置Ｉ253にアミノ酸
置換を含む、本発明1002～1004のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1006]
位置Ｉ253での各アミノ酸置換が、Ｉ253Ａ、Ｉ253Ｃ、Ｉ253Ｄ、Ｉ253Ｅ、Ｉ253Ｆ、Ｉ
253Ｇ、Ｉ253Ｈ、Ｉ253Ｉ、Ｉ253Ｋ、Ｉ253Ｌ、Ｉ253Ｍ、Ｉ253Ｎ、Ｉ253Ｐ、Ｉ253Ｑ、
Ｉ253Ｒ、Ｉ253Ｓ、Ｉ253Ｔ、Ｉ253Ｖ、Ｉ253Ｗ、及びＩ253Ｙからなる群から独立して選
択される、本発明1002～1005のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1007]
位置Ｉ253での各アミノ酸置換がＩ253Ａである、本発明1006のＦｃコンストラクト。
[本発明1008]
少なくとも一つのＦｃドメイン単量体が、位置Ｒ292にアミノ酸置換を含む、本発明100
2～1007のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1009]
前記第一のＦｃドメインが、位置Ｒ292にアミノ酸置換を含む、本発明1002～1008のい
ずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1010]
前記第二のＦｃドメインが、位置Ｒ292にアミノ酸置換を含む、本発明1002～1009のい
ずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1011]
前記第三のＦｃドメインが、位置Ｒ292にアミノ酸置換を含む、本発明1002～1010のい
ずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1012]
位置Ｒ292での各アミノ酸置換が、Ｒ292Ｄ、Ｒ292Ｅ、Ｒ292Ｌ、Ｒ292Ｐ、Ｒ292Ｑ、Ｒ
292Ｒ、Ｒ292Ｔ、及びＲ292Ｙからなる群から独立して選択される、本発明1008～1011の
いずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1013]
位置Ｒ292での各アミノ酸置換がＲ292Ｐである、本発明1012のＦｃコンストラクト。
[本発明1014]
前記アミノ酸置換が、前記Ｆｃドメインの両方のＦｃドメイン単量体に存在する、本発
明1002～1013のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1015]
各Ｆｃドメイン単量体が、Ｉ253及びＲ292の一方又は両方での置換に加えて、最大10、
9、8、7、6、5、4、3、2、又は1個の単一アミノ酸修飾を含む、本発明1002～1014のいず
れかのＦｃコンストラクト。
[本発明1016]
前記アミノ酸修飾が、前記Ｆｃ単量体のＣＨ3ドメイン内にある、本発明1015のＦｃコ
ンストラクト。
[本発明1017]
ａ）以下：
ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、
ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及び
ｉｉｉ）前記第一のＦｃドメイン単量体を前記第二のＦｃドメイン単量体に結合する
リンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
ｂ）以下：
ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、
ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及び
ｉｉｉ）前記第三のＦｃドメイン単量体を前記第四のＦｃドメイン単量体に結合する
リンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むＦｃコンストラクトであって、
前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第一の
Ｆｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が
組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及
び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、
少なくとも一つのＦｃドメイン単量体が、位置Ｒ292にアミノ酸置換を含む、
Ｆｃコンストラクト。
[本発明1018]
前記第一及び第五のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置Ｒ292にアミノ酸
置換を含む、本発明1017のＦｃコンストラクト。
[本発明1019]
前記第二及び第四のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置Ｒ292にアミノ酸
置換を含む、本発明1017又は1018のＦｃコンストラクト。
[本発明1020]
前記第三及び第六のＦｃドメイン単量体のうち一つ又は複数が、位置Ｒ292にアミノ酸
置換を含む、本発明1017～1019のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1021]
位置Ｒ292での各アミノ酸置換が、Ｒ292Ｄ、Ｒ292Ｅ、Ｒ292Ｌ、Ｒ292Ｐ、Ｒ292Ｑ、Ｒ
292Ｒ、Ｒ292Ｔ、及びＲ292Ｙからなる群から独立して選択される、本発明1017～1020の
いずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1022]
位置Ｒ292での各アミノ酸置換がＲ292Ｐである、本発明1021のＦｃコンストラクト。
[本発明1023]
前記アミノ酸置換が、前記Ｆｃドメインの両方のＦｃドメイン単量体に存在する、本発
明1017～1022のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1024]
各Ｆｃドメイン単量体が、Ｉ253及びＲ292の一方又は両方での置換に加えて、最大10、
9、8、7、6、5、4、3、2、又は1個の単一アミノ酸修飾を含む、本発明1017～1023のいず
れかのＦｃコンストラクト。
[本発明1025]
前記アミノ酸修飾が、前記Ｆｃ単量体のＣＨ3ドメイン内にある、本発明1024のＦｃコ
ンストラクト。
[本発明1026]
各Ｆｃドメインの配列が、10個以下の単一アミノ酸修飾を有するヒトＩｇＧ1 Ｆｃド
メイン配列に基づく、本発明1001～1025のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1027]
各Ｆｃドメインの配列が、10個以下の単一アミノ酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
42に基づく、本発明1026のＦｃコンストラクト。
[本発明1028]
前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｉ253Ａ及び
Ｒ292Ｐを含み、前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｒ292Ｐを含む、本発明1002の
Ｆｃコンストラクト。
[本発明1029]
前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｉ253Ａを含む、本発明1002のＦｃコンスト
ラクト。
[本発明1030]
前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｉ253Ａを含
む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1031]
前記第一のＦｃドメイン、第二のＦｃドメイン、及び第三のＦｃドメインの各々が、ア
ミノ酸置換Ｉ253Ａを含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1032]
前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｉ253Ａ及びＲ292Ｐを含む、本発明1002のＦ
ｃコンストラクト。
[本発明1033]
前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｉ253Ａを含
み、前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｒ292Ｐを含む、本発明1002のＦｃコンス
トラクト。
[本発明1034]
前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｉ253Ａを含
み、前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｉ253Ａ及びＲ292Ｐを含む、本発明1002の
Ｆｃコンストラクト。
[本発明1035]
前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｒ292Ｐを含
み、前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｉ253Ａを含む、本発明1002のＦｃコンス
トラクト。
[本発明1036]
前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｉ253Ａ及び
Ｒ292Ｐを含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1037]
前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｉ253Ａ及び
Ｒ292Ｐを含み、前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｉ253Ａを含む、本発明1002の
Ｆｃコンストラクト。
[本発明1038]
前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｒ292Ｐを含
み、前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｉ253Ａ及びＲ292Ｐを含む、本発明1002の
Ｆｃコンストラクト。
[本発明1039]
前記第一のＦｃドメイン、第二のＦｃドメイン、及び第三のＦｃドメインの各々が、ア
ミノ酸置換Ｉ253Ａ及びＲ292Ｐを含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1040]
前記アミノ酸置換が、前記Ｆｃドメインの両方のＦｃドメイン単量体に存在する、本発
明1028～1039のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1041]
前記第一のＦｃドメイン単量体及び前記第五のＦｃドメイン単量体が、前記第一のＦｃ
ドメイン単量体及び前記第五のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
二量体形成選択モジュールを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1042]
前記第二のＦｃドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体が、前記第二のＦｃ
ドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
二量体形成選択モジュールを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1043]
前記第三のＦｃドメイン単量体及び前記第六のＦｃドメイン単量体が、前記第三のＦｃ
ドメイン単量体及び前記第六のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
二量体形成選択モジュールを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1044]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドが、同一のアミノ酸配列を有し、
前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドが、同一のアミノ酸配列を有する、
本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1045]
各Ｆｃドメイン単量体が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42のＦｃドメイン単量体配列と比較し
て、5個以下の単一アミノ酸修飾を有する、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンスト
ラクト。
[本発明1046]
各Ｆｃドメイン単量体が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42のＦｃドメイン単量体配列と比較し
て、5個以下の単一アミノ酸置換を有する、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンスト
ラクト。
[本発明1047]
各Ｆｃドメイン単量体が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42のＦｃドメイン単量体配列と比較し
て、3個以下の単一アミノ酸修飾を有する、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンスト
ラクト。
[本発明1048]
各Ｆｃドメイン単量体が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42のＦｃドメイン単量体配列と比較し
て、3個以下の単一アミノ酸修飾を有する、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンスト
ラクト。
[本発明1049]
前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
Ｄ399Ｋ、及びＫ409Ｄ又はＫ409Ｅのいずれかを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦ
ｃコンストラクト。
[本発明1050]
前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
Ｋ392Ｄ及びＤ399Ｋを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1051]
前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
Ｅ357Ｋ及びＫ370Ｅを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1052]
前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
Ｄ356Ｋ及びＫ439Ｄを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1053]
前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
Ｋ392Ｅ及びＤ399Ｋを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1054]
前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
Ｅ357Ｋ及びＫ370Ｄを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1055]
前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
Ｄ356Ｋ及びＫ439Ｅを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1056]
前記第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
Ｓ354Ｃ及びＴ366Ｗを含み、前記第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量
体の各々が、アミノ酸置換Ｙ349Ｃ、Ｔ366Ｓ、Ｌ368Ａ、及びＹ407Ｖを含む、本発明1002
～1040のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1057]
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、アミノ酸置換Ｓ354Ｃ及びＴ366Ｗを含み、
前記第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換Ｙ
349Ｃ、Ｔ366Ｓ、Ｌ368Ａ、及びＹ407Ｖを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコン
ストラクト。
[本発明1058]
前記第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
Ｅ357Ｋ又はＥ357Ｒを含み、前記第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量
体の各々が、アミノ酸置換Ｋ370Ｄ又はＫ370Ｅを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦ
ｃコンストラクト。
[本発明1059]
前記第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体が、アミノ酸置換Ｋ370
Ｄ又はＫ370Ｅを含み、前記第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体の
各々が、アミノ酸置換Ｅ357Ｋ又はＥ357Ｒを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦｃコ
ンストラクト。
[本発明1060]
前記第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
Ｋ409Ｄ又はＫ409Ｅを含み、前記第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量
体の各々が、アミノ酸置換Ｄ399Ｋ又はＤ399Ｒを含む、本発明1002～1040のいずれかのＦ
ｃコンストラクト。
[本発明1061]
前記第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体が、アミノ酸置換Ｄ399
Ｋ又はＤ399Ｒを含み、前記第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量体の
各々が、アミノ酸置換Ｋ409Ｄ又はＫ409Ｅを含む、本発明1002～1060のいずれかのＦｃコ
ンストラクト。
[本発明1062]
前記リンカーが、配列
Figure 2022191261000302
を有するポリペプチドを含む、本発明1002～1061のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1063]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000303
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1064]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000304
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1065]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000305
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1066]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000306
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1067]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000307
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1068]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000308
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1069]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000309
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1070]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000310
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1071]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000311
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1072]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000312
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1073]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000313
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1074]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000314
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1075]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000315
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1076]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000316
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1077]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000317
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1078]
前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000318
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1079]
前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドの各々が、
Figure 2022191261000319
の配列を含む、本発明1002又は本発明1017のＦｃコンストラクト。
[本発明1080]
前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドの各々が、
Figure 2022191261000320
の配列を含む、本発明1002又は本発明1017のＦｃコンストラクト。
[本発明1081]
前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドの各々が、
Figure 2022191261000321
の配列を含む、本発明1002又は本発明1017のＦｃコンストラクト。
[本発明1082]
前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドの各々が、
Figure 2022191261000322
の配列を含む、本発明1002又は本発明1017のＦｃコンストラクト。
[本発明1083]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000323
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000324
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1084]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000325
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000326
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1085]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000327
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000328
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1086]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000329
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000330
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1087]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000331
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000332
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1088]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000333
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000334
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1089]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000335
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000336
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1090]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000337
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000338
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1091]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000339
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000340
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1092]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000341
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000342
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1093]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000343
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000344
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1094]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000345
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000346
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1095]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000347
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000348
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1096]
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000349
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000350
を含む、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1097]
コンストラクト18、コンストラクト5、コンストラクト6、コンストラクト7、コンスト
ラクト9、コンストラクト10、コンストラクト11、コンストラクト13、コンストラクト14
、コンストラクト15、コンストラクト17、又はコンストラクト19である、本発明1002のＦ
ｃコンストラクト。
[本発明1098]
コンストラクト5、コンストラクト6、コンストラクト7、コンストラクト9、コンストラ
クト10、コンストラクト11、コンストラクト13、コンストラクト14、コンストラクト15、
コンストラクト16、コンストラクト17、コンストラクト18、又はコンストラクト19である
、本発明1002のＦｃコンストラクト。
[本発明1099]
前記第一のポリペプチド、第二のポリペプチド、第三のポリペプチド、及び／又は第四
のポリペプチドの各々が、Ｎ末端ＤのＱへのアミノ酸置換を含む、本発明1002又は本発明
1017のＦｃコンストラクト。
[本発明1100]
（ｉ）第一のＦｃドメイン単量体及び第二のＦｃドメイン単量体を含む、第一のＦｃド
メインと、
（ｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体を含む、第二のＦｃ
ドメインと
を含み、
少なくとも一つのＦｃドメイン単量体が位置Ｉ253にアミノ酸置換を含む、
Ｆｃコンストラクト。
[本発明1101]
位置Ｉ253でのアミノ酸置換の各々が、Ｉ253Ａ、Ｉ253Ｃ、Ｉ253Ｄ、Ｉ253Ｅ、Ｉ253Ｆ
、Ｉ253Ｇ、Ｉ253Ｈ、Ｉ253Ｉ、Ｉ253Ｋ、Ｉ253Ｌ、Ｉ253Ｍ、Ｉ253Ｎ、Ｉ253Ｐ、Ｉ253
Ｑ、Ｉ253Ｒ、Ｉ253Ｓ、Ｉ253Ｔ、Ｉ253Ｖ、Ｉ253Ｗ、及びＩ253Ｙからなる群から独立し
て選択される、本発明1100のＦｃコンストラクト。
[本発明1102]
位置Ｉ253でのアミノ酸置換がＩ253Ａである、本発明1101のＦｃコンストラクト。
[本発明1103]
位置Ｒ292に少なくとも一つのアミノ酸置換を含む、本発明1100～1102のいずれかのＦ
ｃコンストラクト。
[本発明1104]
位置Ｒ292でのアミノ酸置換が、Ｒ292Ｄ、Ｒ292Ｅ、Ｒ292Ｌ、Ｒ292Ｐ、Ｒ292Ｑ、Ｒ29
2Ｒ、Ｒ292Ｔ、及びＲ292Ｙからなる群から選択される、本発明1103のＦｃコンストラク
ト。
[本発明1105]
位置Ｒ292でのアミノ酸置換がＲ292Ｐである、本発明1104のＦｃコンストラクト。
[本発明1106]
前記第一のＦｃドメイン単量体及び前記第三のＦｃドメイン単量体が、リンカーによっ
て結合されている、本発明1100～1105のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1107]
前記第二のＦｃドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体が、リンカーによっ
て結合されている、本発明1100～1106のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1108]
各リンカーが、配列
Figure 2022191261000351
を有するポリペプチドから独立して選択される、本発明1106又は1107のＦｃコンストラク
ト。
[本発明1109]
前記リンカーが
Figure 2022191261000352
である、本発明1108のコンストラクト。
[本発明1110]
前記第一のＦｃドメイン単量体及び前記第二のＦｃドメイン単量体が、前記第一のＦｃ
ドメイン単量体及び前記第二のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
二量体形成選択モジュールを含む、本発明1100～1109のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1111]
前記第三のＦｃドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体が、前記第三のＦｃ
ドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
二量体形成選択モジュールを含む、本発明1100～1110のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1112]
（ｉ）第一のＦドメイン単量体及び第二のＦｃドメイン単量体を含む、第一のＦｃドメ
インと、
（ｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体を含む、第二のＦｃ
ドメインと
を含み、
少なくとも一つのＦｃドメインが位置Ｒ292に単一アミノ酸置換を含む、
Ｆｃコンストラクト。
[本発明1113]
位置Ｒ292でのアミノ酸置換の各々が、Ｒ292Ｄ、Ｒ292Ｅ、Ｒ292Ｌ、Ｒ292Ｐ、Ｒ292Ｑ
、Ｒ292Ｒ、Ｒ292Ｔ、及びＲ292Ｙからなる群から独立して選択される、本発明1112のＦ
ｃコンストラクト。
[本発明1114]
位置Ｒ292でのアミノ酸置換がＲ292Ｐである、本発明1113のＦｃコンストラクト。
[本発明1115]
前記第一のＦｃドメイン単量体及び前記第三のＦｃドメイン単量体が、リンカーによっ
て結合されている、本発明1112～1114のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1116]
前記第二のＦｃドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体が、リンカーによっ
て結合されている、本発明1112～1115のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1117]
各リンカーが、配列
Figure 2022191261000353
を有するポリペプチドから独立して選択される、本発明1115～1116のいずれかのＦｃコン
ストラクト。
[本発明1118]
前記リンカーが
Figure 2022191261000354
である、本発明1117のＦｃコンストラクト。
[本発明1119]
前記第一のＦｃドメイン単量体及び前記第二のＦｃドメイン単量体が、前記第一のＦｃ
ドメイン単量体及び前記第二のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
二量体形成選択モジュールを含む、本発明1112～1118のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1120]
前記第三のＦｃドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体が、前記第三のＦｃ
ドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
二量体形成選択モジュールを含む、本発明1091～1098のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1121]
ａ）以下：
ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、
ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及び
ｉｉｉ）前記第一のＦｃドメイン単量体を前記第二のＦｃドメイン単量体に結合する
リンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
ｂ）以下：
ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、
ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及び
ｉｉｉ）前記第三のＦｃドメイン単量体を前記第四のＦｃドメイン単量体に結合する
リンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むＦｃコンストラクトであって、
前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第一の
Ｆｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が
組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及
び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000355
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000356
を含む、
Ｆｃコンストラクト。
[本発明1122]
ａ）以下：
ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、
ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及び
ｉｉｉ）前記第一のＦｃドメイン単量体を前記第二のＦｃドメイン単量体に結合する
リンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
ｂ）以下：
ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、
ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及び
ｉｉｉ）前記第三のＦｃドメイン単量体を前記第四のＦｃドメイン単量体に結合する
リンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むＦｃコンストラクトであって、
前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第一の
Ｆｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が
組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及
び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000357
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000358
を含む、
Ｆｃコンストラクト。
[本発明1123]
ａ）以下：
ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、
ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及び
ｉｉｉ）前記第一のＦｃドメイン単量体を前記第二のＦｃドメイン単量体に結合する
リンカー
を含む、第一のポリペプチドと、
ｂ）以下：
ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、
ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及び
ｉｉｉ）前記第三のＦｃドメイン単量体を前記第四のＦｃドメイン単量体に結合する
リンカー
を含む、第二のポリペプチドと、
ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
を含むＦｃコンストラクトであって、
前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第一の
Ｆｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が
組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及
び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、
前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000359
を含み、
前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
Figure 2022191261000360
を含む、
Ｆｃコンストラクト。
[本発明1124]
各Ｆｃドメインが、独立して、ＩｇＧ1 Ｆｃドメイン、ＩｇＧ2 Ｆｃドメイン、Ｉｇ
Ｇ3 Ｆｃドメイン、ＩｇＧ4 Ｆｃドメイン、又はそれらの組み合わせである、本発明10
02～1123のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1125]
各Ｆｃドメインが、ＩｇＧ1 Ｆｃドメインである、本発明1002～1123のいずれかのＦ
ｃコンストラクト。
[本発明1126]
前記ＩｇＧ1がヒトＩｇＧ1である、本発明1125のＦｃコンストラクト。
[本発明1127]
各Ｆｃドメインが、最大10個の単一アミノ酸修飾をもつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42を含む
、本発明1126のＦｃコンストラクト。
[本発明1128]
各Ｆｃドメインが、独立して、最大10個の単一アミノ酸修飾をもつ、ＩｇＧ1 Ｆｃド
メイン、ＩｇＧ2 Ｆｃドメイン、ＩｇＧ3 Ｆｃドメイン、ＩｇＧ4 Ｆｃドメイン、又
はそれらの組み合わせである、本発明1002～1127のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1129]
前記Ｆｃドメイン単量体の一つ又は複数が、最大10個の単一アミノ酸修飾を有するヒト
ＩｇＧ Ｆｃドメイン単量体である、本発明1002～1127のいずれかのＦｃコンストラクト
。
[本発明1130]
各Ｆｃドメイン単量体が、10個以下の単一アミノ酸修飾を有する、本発明1002～1127の
いずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1131]
各Ｆｃ単量体が、10個以下の単一アミノ酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42の配列
を含む、本発明1002～1127のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1132]
それを必要とする対象において、自己抗体のクリアランスを促進すること、抗原提示を
抑制すること、免疫応答を軽減すること、又は、免疫応答の、免疫複合体に基づく活性化
を軽減することにおいて使用するための、本発明1002～1131のいずれかのＦｃコンストラ
クト。
[本発明1133]
関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＡＮＣＡ関連血管炎、抗
リン脂質抗体症候群、自己免疫性溶血性貧血、慢性炎症性脱髄性神経障害、臓器移植、Ｇ
ＶＨＤ、皮膚筋炎、グッドパスチャー症候群、抗体依存性細胞媒介細胞障害を介して媒介
される器官系標的のＩＩ型過敏症候群、例えばギラン・バレー症候群、ＣＩＤＰ、フェル
ティ症候群、抗体媒介性拒絶反応、自己免疫性甲状腺疾患、潰瘍性大腸炎、自己免疫性肝
疾患、突発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、視神経脊髄炎、天疱瘡及び他の自己免
疫性水疱性疾患、シェーグレン症候群、抗体依存性ファゴサイトーシスを介して媒介され
る自己免疫性血球減少症及び他の障害、ヘパリン誘発性血小板減少症（ＨＩＴ）、筋炎、
多発筋炎、抗体依存性感染増強、スティッフパーソン症候群、川崎病、封入体筋炎、全身
性硬化症、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ4関連疾患、バセドウ病、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ
）、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、妊娠性天疱瘡、腫瘍随
伴性天疱瘡、視神経炎、ロンバーグ病、ＦｃＲ依存性炎症症候群、滑膜炎、糸球体炎、及
び血管炎から選択される炎症性疾患又は自己免疫疾患又は免疫疾患の治療に使用するため
の、本発明1002～1131のいずれかのＦｃコンストラクト。
[本発明1134]
本発明1002～1131のいずれかのＦｃコンストラクトの実質的に均質な集団と、一つ又は
複数の薬学的に許容できる担体もしくは賦形剤とを含む、医薬組成物。
[本発明1135]
前記均質な集団が、少なくとも85％均質である、本発明1134の医薬組成物。
[本発明1136]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：76をコードする核酸配列、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：70をコード
する核酸配列を含む、細胞。
[本発明1137]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：78をコードする核酸配列、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：73をコード
する核酸配列を含む、細胞。
[本発明1138]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：79をコードする核酸配列、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：73をコード
する核酸配列を含む、細胞。
[本発明1139]
本発明1001～1131のいずれかのＦｃコンストラクトをコードする核酸配列を含む、細胞
。
[本発明1140]
対象における免疫応答の免疫細胞活性化を軽減する方法であって、本発明1001～1131の
いずれかのＦｃコンストラクトを前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1141]
前記対象が自己免疫疾患を有する、本発明1140の方法。
[本発明1142]
対象における炎症を治療する方法であって、本発明1001～1131のいずれかのＦｃコンス
トラクトを前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1143]
対象における自己抗体のクリアランスを促進する及び／又は抗原提示を抑制する方法で
あって、本発明1001～1131のいずれかのＦｃコンストラクトを前記対象に投与することを
含む、方法。
[本発明1144]
本発明1001～1131のいずれかのＦｃコンストラクトを調製する方法であって、
ａ）前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供することと
、
ｂ）前記Ｆｃコンストラクトの形成を許容する条件下で前記宿主細胞内で前記ポリペプ
チドを発現することと、
ｃ）前記Ｆｃコンストラクトを回収することと
を含む、方法。
[本発明1145]
本発明1001～1131のいずれかのＦｃコンストラクトを発現する宿主細胞であって、前記
宿主細胞が、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、前記ポリヌクレオ
チドが、前記宿主細胞内で発現される、宿主細胞。
[本発明1146]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：43～79からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ポリペプ
チド。
[本発明1147]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：49及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：61～79からなる群から選択されるア
ミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
[本発明1148]
配列
Figure 2022191261000361
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000362
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1149]
配列
Figure 2022191261000363
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000364
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1150]
配列
Figure 2022191261000365
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000366
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1151]
配列
Figure 2022191261000367
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000368
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1152]
配列
Figure 2022191261000369
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000370
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1153]
配列
Figure 2022191261000371
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000372
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1154]
配列
Figure 2022191261000373
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000374
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1155]
配列
Figure 2022191261000375
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000376
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1156]
配列
Figure 2022191261000377
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000378
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1157]
配列
Figure 2022191261000379
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000380
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1158]
配列
Figure 2022191261000381
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000382
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1159]
配列
Figure 2022191261000383
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000384
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1160]
配列
Figure 2022191261000385
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000386
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1161]
配列
Figure 2022191261000387
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
配列
Figure 2022191261000388
を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
を含む、組成物。
[本発明1162]
リストされた前記第一及び第二のポリペプチドが、1．1：1～1：1．1のモル比で存在す
る、本発明1148～1161のいずれかの組成物。
[本発明1163]
本発明1148～1162のいずれかの組成物を患者に投与することを含む、前記患者を治療す
る方法。

Claims (163)

  1. ａ）以下：
    ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、
    ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及び
    ｉｉｉ）前記第一のＦｃドメイン単量体を前記第二のＦｃドメイン単量体に結合する
    リンカー
    を含む、第一のポリペプチドと、
    ｂ）以下：
    ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、
    ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及び
    ｉｉｉ）前記第三のＦｃドメイン単量体を前記第四のＦｃドメイン単量体に結合する
    リンカー
    を含む、第二のポリペプチドと、
    ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
    ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
    を含むＦｃコンストラクトであって、
    前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第一の
    Ｆｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が
    組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及
    び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、
    前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000156
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000157
    を含む、
    Ｆｃコンストラクト。
  2. ａ）以下：
    ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、
    ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及び
    ｉｉｉ）前記第一のＦｃドメイン単量体を前記第二のＦｃドメイン単量体に結合する
    リンカー
    を含む、第一のポリペプチドと、
    ｂ）以下：
    ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、
    ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及び
    ｉｉｉ）前記第三のＦｃドメイン単量体を前記第四のＦｃドメイン単量体に結合する
    リンカー
    を含む、第二のポリペプチドと、
    ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
    ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
    を含むＦｃコンストラクトであって、
    前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第一の
    Ｆｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が
    組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及
    び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、
    少なくとも一つのＦｃドメイン単量体が、位置Ｉ２５３にアミノ酸置換を含む、
    Ｆｃコンストラクト。
  3. 前記第一及び第五のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置Ｉ２５３にアミノ
    酸置換を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  4. 前記第二及び第四のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置Ｉ２５３にアミノ
    酸置換を含む、請求項２又は３に記載のＦｃコンストラクト。
  5. 前記第三及び第六のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置Ｉ２５３にアミノ
    酸置換を含む、請求項２～４のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  6. 位置Ｉ２５３での各アミノ酸置換が、Ｉ２５３Ａ、Ｉ２５３Ｃ、Ｉ２５３Ｄ、Ｉ２５３
    Ｅ、Ｉ２５３Ｆ、Ｉ２５３Ｇ、Ｉ２５３Ｈ、Ｉ２５３Ｉ、Ｉ２５３Ｋ、Ｉ２５３Ｌ、Ｉ２
    ５３Ｍ、Ｉ２５３Ｎ、Ｉ２５３Ｐ、Ｉ２５３Ｑ、Ｉ２５３Ｒ、Ｉ２５３Ｓ、Ｉ２５３Ｔ、
    Ｉ２５３Ｖ、Ｉ２５３Ｗ、及びＩ２５３Ｙからなる群から独立して選択される、請求項２
    ～５のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  7. 位置Ｉ２５３での各アミノ酸置換がＩ２５３Ａである、請求項６に記載のＦｃコンスト
    ラクト。
  8. 少なくとも一つのＦｃドメイン単量体が、位置Ｒ２９２にアミノ酸置換を含む、請求項
    ２～７のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  9. 前記第一のＦｃドメインが、位置Ｒ２９２にアミノ酸置換を含む、請求項２～８のいず
    れか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  10. 前記第二のＦｃドメインが、位置Ｒ２９２にアミノ酸置換を含む、請求項２～９のいず
    れか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  11. 前記第三のＦｃドメインが、位置Ｒ２９２にアミノ酸置換を含む、請求項２～１０のい
    ずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  12. 位置Ｒ２９２での各アミノ酸置換が、Ｒ２９２Ｄ、Ｒ２９２Ｅ、Ｒ２９２Ｌ、Ｒ２９２
    Ｐ、Ｒ２９２Ｑ、Ｒ２９２Ｒ、Ｒ２９２Ｔ、及びＲ２９２Ｙからなる群から独立して選択
    される、請求項８～１１のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  13. 位置Ｒ２９２での各アミノ酸置換がＲ２９２Ｐである、請求項１２に記載のＦｃコンス
    トラクト。
  14. 前記アミノ酸置換が、前記Ｆｃドメインの両方のＦｃドメイン単量体に存在する、請求
    項２～１３のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  15. 各Ｆｃドメイン単量体が、Ｉ２５３及びＲ２９２の一方又は両方での置換に加えて、最
    大１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個の単一アミノ酸修飾を含む、請求項
    ２～１４のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  16. 前記アミノ酸修飾が、前記Ｆｃ単量体のＣＨ３ドメイン内にある、請求項１５に記載の
    Ｆｃコンストラクト。
  17. ａ）以下：
    ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、
    ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及び
    ｉｉｉ）前記第一のＦｃドメイン単量体を前記第二のＦｃドメイン単量体に結合する
    リンカー
    を含む、第一のポリペプチドと、
    ｂ）以下：
    ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、
    ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及び
    ｉｉｉ）前記第三のＦｃドメイン単量体を前記第四のＦｃドメイン単量体に結合する
    リンカー
    を含む、第二のポリペプチドと、
    ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
    ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
    を含むＦｃコンストラクトであって、
    前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第一の
    Ｆｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が
    組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及
    び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、
    少なくとも一つのＦｃドメイン単量体が、位置Ｒ２９２にアミノ酸置換を含む、
    Ｆｃコンストラクト。
  18. 前記第一及び第五のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置Ｒ２９２にアミノ
    酸置換を含む、請求項１７に記載のＦｃコンストラクト。
  19. 前記第二及び第四のＦｃドメイン単量体のうち一方又は両方が、位置Ｒ２９２にアミノ
    酸置換を含む、請求項１７又は１８に記載のＦｃコンストラクト。
  20. 前記第三及び第六のＦｃドメイン単量体のうち一つ又は複数が、位置Ｒ２９２にアミノ
    酸置換を含む、請求項１７～１９のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  21. 位置Ｒ２９２での各アミノ酸置換が、Ｒ２９２Ｄ、Ｒ２９２Ｅ、Ｒ２９２Ｌ、Ｒ２９２
    Ｐ、Ｒ２９２Ｑ、Ｒ２９２Ｒ、Ｒ２９２Ｔ、及びＲ２９２Ｙからなる群から独立して選択
    される、請求項１７～２０のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  22. 位置Ｒ２９２での各アミノ酸置換がＲ２９２Ｐである、請求項２１に記載のＦｃコンス
    トラクト。
  23. 前記アミノ酸置換が、前記Ｆｃドメインの両方のＦｃドメイン単量体に存在する、請求
    項１７～２２のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  24. 各Ｆｃドメイン単量体が、Ｉ２５３及びＲ２９２の一方又は両方での置換に加えて、最
    大１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個の単一アミノ酸修飾を含む、請求項
    １７～２３のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  25. 前記アミノ酸修飾が、前記Ｆｃ単量体のＣＨ３ドメイン内にある、請求項２４に記載の
    Ｆｃコンストラクト。
  26. 各Ｆｃドメインの配列が、１０個以下の単一アミノ酸修飾を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ
    ドメイン配列に基づく、請求項１～２５のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  27. 各Ｆｃドメインの配列が、１０個以下の単一アミノ酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
    ：４２に基づく、請求項２６に記載のＦｃコンストラクト。
  28. 前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及
    びＲ２９２Ｐを含み、前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む、請求
    項２に記載のＦｃコンストラクト。
  29. 前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む、請求項２に記載のＦｃコ
    ンストラクト。
  30. 前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを
    含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  31. 前記第一のＦｃドメイン、第二のＦｃドメイン、及び第三のＦｃドメインの各々が、ア
    ミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  32. 前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む、請求項２
    に記載のＦｃコンストラクト。
  33. 前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを
    含み、前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを含む、請求項２に記載のＦ
    ｃコンストラクト。
  34. 前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを
    含み、前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む、請求
    項２に記載のＦｃコンストラクト。
  35. 前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを
    含み、前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む、請求項２に記載のＦ
    ｃコンストラクト。
  36. 前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及
    びＲ２９２Ｐを含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  37. 前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及
    びＲ２９２Ｐを含み、前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａを含む、請求
    項２に記載のＦｃコンストラクト。
  38. 前記第一のＦｃドメイン及び第三のＦｃドメインの各々が、アミノ酸置換Ｒ２９２Ｐを
    含み、前記第二のＦｃドメインが、アミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む、請求
    項２に記載のＦｃコンストラクト。
  39. 前記第一のＦｃドメイン、第二のＦｃドメイン、及び第三のＦｃドメインの各々が、ア
    ミノ酸置換Ｉ２５３Ａ及びＲ２９２Ｐを含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  40. 前記アミノ酸置換が、前記Ｆｃドメインの両方のＦｃドメイン単量体に存在する、請求
    項２８～３９のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  41. 前記第一のＦｃドメイン単量体及び前記第五のＦｃドメイン単量体が、前記第一のＦｃ
    ドメイン単量体及び前記第五のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
    二量体形成選択モジュールを含む、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦｃコンスト
    ラクト。
  42. 前記第二のＦｃドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体が、前記第二のＦｃ
    ドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
    二量体形成選択モジュールを含む、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦｃコンスト
    ラクト。
  43. 前記第三のＦｃドメイン単量体及び前記第六のＦｃドメイン単量体が、前記第三のＦｃ
    ドメイン単量体及び前記第六のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
    二量体形成選択モジュールを含む、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦｃコンスト
    ラクト。
  44. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドが、同一のアミノ酸配列を有し、
    前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドが、同一のアミノ酸配列を有する、
    請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  45. 各Ｆｃドメイン単量体が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のＦｃドメイン単量体配列と比較
    して、５個以下の単一アミノ酸修飾を有する、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦ
    ｃコンストラクト。
  46. 各Ｆｃドメイン単量体が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のＦｃドメイン単量体配列と比較
    して、５個以下の単一アミノ酸置換を有する、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦ
    ｃコンストラクト。
  47. 各Ｆｃドメイン単量体が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のＦｃドメイン単量体配列と比較
    して、３個以下の単一アミノ酸修飾を有する、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦ
    ｃコンストラクト。
  48. 各Ｆｃドメイン単量体が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のＦｃドメイン単量体配列と比較
    して、３個以下の単一アミノ酸修飾を有する、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦ
    ｃコンストラクト。
  49. 前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
    Ｄ３９９Ｋ、及びＫ４０９Ｄ又はＫ４０９Ｅのいずれかを含む、請求項２～４０のいずれ
    か一項に記載のＦｃコンストラクト。
  50. 前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
    Ｋ３９２Ｄ及びＤ３９９Ｋを含む、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦｃコンスト
    ラクト。
  51. 前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
    Ｅ３５７Ｋ及びＫ３７０Ｅを含む、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦｃコンスト
    ラクト。
  52. 前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
    Ｄ３５６Ｋ及びＫ４３９Ｄを含む、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦｃコンスト
    ラクト。
  53. 前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
    Ｋ３９２Ｅ及びＤ３９９Ｋを含む、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦｃコンスト
    ラクト。
  54. 前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
    Ｅ３５７Ｋ及びＫ３７０Ｄを含む、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦｃコンスト
    ラクト。
  55. 前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
    Ｄ３５６Ｋ及びＫ４３９Ｅを含む、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦｃコンスト
    ラクト。
  56. 前記第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
    Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、前記第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイ
    ン単量体の各々が、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ
    を含む、請求項２～４０のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  57. 前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、アミノ酸置換Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗを
    含み、前記第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸
    置換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む、請求項２～４０のい
    ずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  58. 前記第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
    Ｅ３５７Ｋ又はＥ３５７Ｒを含み、前記第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイ
    ン単量体の各々が、アミノ酸置換Ｋ３７０Ｄ又はＫ３７０Ｅを含む、請求項２～４０のい
    ずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  59. 前記第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体が、アミノ酸置換Ｋ３７
    ０Ｄ又はＫ３７０Ｅを含み、前記第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量
    体の各々が、アミノ酸置換Ｅ３５７Ｋ又はＥ３５７Ｒを含む、請求項２～４０のいずれか
    一項に記載のＦｃコンストラクト。
  60. 前記第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体の各々が、アミノ酸置換
    Ｋ４０９Ｄ又はＫ４０９Ｅを含み、前記第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイ
    ン単量体の各々が、アミノ酸置換Ｄ３９９Ｋ又はＤ３９９Ｒを含む、請求項２～４０のい
    ずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  61. 前記第一のＦｃドメイン単量体及び第三のＦｃドメイン単量体が、アミノ酸置換Ｄ３９
    ９Ｋ又はＤ３９９Ｒを含み、前記第五のＦｃドメイン単量体及び第六のＦｃドメイン単量
    体の各々が、アミノ酸置換Ｋ４０９Ｄ又はＫ４０９Ｅを含む、請求項２～６０のいずれか
    一項に記載のＦｃコンストラクト。
  62. 前記リンカーが、配列
    Figure 2022191261000158
    を有するポリペプチドを含む、請求項２～６１のいずれか一項に記載のＦｃコンストラク
    ト。
  63. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000159
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  64. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000160
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  65. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000161
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  66. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000162
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  67. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000163
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  68. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000164
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  69. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000165
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  70. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000166
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  71. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000167
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  72. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000168
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  73. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000169
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  74. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000170
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  75. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000171
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  76. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000172
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  77. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000173
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  78. 前記第一のポリペプチド及び前記第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000174
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  79. 前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドの各々が、
    Figure 2022191261000175
    の配列を含む、請求項２又は請求項１７に記載のＦｃコンストラクト。
  80. 前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドの各々が、
    Figure 2022191261000176
    の配列を含む、請求項２又は請求項１７に記載のＦｃコンストラクト。
  81. 前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドの各々が、
    Figure 2022191261000177
    の配列を含む、請求項２又は請求項１７に記載のＦｃコンストラクト。
  82. 前記第三のポリペプチド及び前記第四のポリペプチドの各々が、
    Figure 2022191261000178
    の配列を含む、請求項２又は請求項１７に記載のＦｃコンストラクト。
  83. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000179
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000180
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  84. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000181
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000182
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  85. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000183
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000184
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  86. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000185
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000186
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  87. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000187
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000188
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  88. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000189
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000190
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  89. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000191
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000192
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  90. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000193
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000194
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  91. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000195
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000196
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  92. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000197
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000198
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  93. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000199
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000200
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  94. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000201
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000202
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  95. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000203
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000204
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  96. 前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000205
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000206
    を含む、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  97. コンストラクト１８、コンストラクト５、コンストラクト６、コンストラクト７、コン
    ストラクト９、コンストラクト１０、コンストラクト１１、コンストラクト１３、コンス
    トラクト１４、コンストラクト１５、コンストラクト１７、又はコンストラクト１９であ
    る、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  98. コンストラクト５、コンストラクト６、コンストラクト７、コンストラクト９、コンス
    トラクト１０、コンストラクト１１、コンストラクト１３、コンストラクト１４、コンス
    トラクト１５、コンストラクト１６、コンストラクト１７、コンストラクト１８、又はコ
    ンストラクト１９である、請求項２に記載のＦｃコンストラクト。
  99. 前記第一のポリペプチド、第二のポリペプチド、第三のポリペプチド、及び／又は第四
    のポリペプチドの各々が、Ｎ末端ＤのＱへのアミノ酸置換を含む、請求項２又は請求項１
    ７に記載のＦｃコンストラクト。
  100. （ｉ）第一のＦｃドメイン単量体及び第二のＦｃドメイン単量体を含む、第一のＦｃド
    メインと、
    （ｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体を含む、第二のＦｃ
    ドメインと
    を含み、
    少なくとも一つのＦｃドメイン単量体が位置Ｉ２５３にアミノ酸置換を含む、
    Ｆｃコンストラクト。
  101. 位置Ｉ２５３でのアミノ酸置換の各々が、Ｉ２５３Ａ、Ｉ２５３Ｃ、Ｉ２５３Ｄ、Ｉ２
    ５３Ｅ、Ｉ２５３Ｆ、Ｉ２５３Ｇ、Ｉ２５３Ｈ、Ｉ２５３Ｉ、Ｉ２５３Ｋ、Ｉ２５３Ｌ、
    Ｉ２５３Ｍ、Ｉ２５３Ｎ、Ｉ２５３Ｐ、Ｉ２５３Ｑ、Ｉ２５３Ｒ、Ｉ２５３Ｓ、Ｉ２５３
    Ｔ、Ｉ２５３Ｖ、Ｉ２５３Ｗ、及びＩ２５３Ｙからなる群から独立して選択される、請求
    項１００に記載のＦｃコンストラクト。
  102. 位置Ｉ２５３でのアミノ酸置換がＩ２５３Ａである、請求項１０１に記載のＦｃコンス
    トラクト。
  103. 位置Ｒ２９２に少なくとも一つのアミノ酸置換を含む、請求項１００～１０２のいずれ
    か一項に記載のＦｃコンストラクト。
  104. 位置Ｒ２９２でのアミノ酸置換が、Ｒ２９２Ｄ、Ｒ２９２Ｅ、Ｒ２９２Ｌ、Ｒ２９２Ｐ
    、Ｒ２９２Ｑ、Ｒ２９２Ｒ、Ｒ２９２Ｔ、及びＲ２９２Ｙからなる群から選択される、請
    求項１０３に記載のＦｃコンストラクト。
  105. 位置Ｒ２９２でのアミノ酸置換がＲ２９２Ｐである、請求項１０４に記載のＦｃコンス
    トラクト。
  106. 前記第一のＦｃドメイン単量体及び前記第三のＦｃドメイン単量体が、リンカーによっ
    て結合されている、請求項１００～１０５のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  107. 前記第二のＦｃドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体が、リンカーによっ
    て結合されている、請求項１００～１０６のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  108. 各リンカーが、配列
    Figure 2022191261000207
    を有するポリペプチドから独立して選択される、請求項１０６又は１０７に記載のＦｃコ
    ンストラクト。
  109. 前記リンカーが
    Figure 2022191261000208
    である、請求項１０８に記載のコンストラクト。
  110. 前記第一のＦｃドメイン単量体及び前記第二のＦｃドメイン単量体が、前記第一のＦｃ
    ドメイン単量体及び前記第二のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
    二量体形成選択モジュールを含む、請求項１００～１０９のいずれか一項に記載のＦｃコ
    ンストラクト。
  111. 前記第三のＦｃドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体が、前記第三のＦｃ
    ドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
    二量体形成選択モジュールを含む、請求項１００～１１０のいずれか一項に記載のＦｃコ
    ンストラクト。
  112. （ｉ）第一のＦドメイン単量体及び第二のＦｃドメイン単量体を含む、第一のＦｃドメ
    インと、
    （ｉｉ）第三のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体を含む、第二のＦｃ
    ドメインと
    を含み、
    少なくとも一つのＦｃドメインが位置Ｒ２９２に単一アミノ酸置換を含む、
    Ｆｃコンストラクト。
  113. 位置Ｒ２９２でのアミノ酸置換の各々が、Ｒ２９２Ｄ、Ｒ２９２Ｅ、Ｒ２９２Ｌ、Ｒ２
    ９２Ｐ、Ｒ２９２Ｑ、Ｒ２９２Ｒ、Ｒ２９２Ｔ、及びＲ２９２Ｙからなる群から独立して
    選択される、請求項１１２に記載のＦｃコンストラクト。
  114. 位置Ｒ２９２でのアミノ酸置換がＲ２９２Ｐである、請求項１１３に記載のＦｃコンス
    トラクト。
  115. 前記第一のＦｃドメイン単量体及び前記第三のＦｃドメイン単量体が、リンカーによっ
    て結合されている、請求項１１２～１１４のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  116. 前記第二のＦｃドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体が、リンカーによっ
    て結合されている、請求項１１２～１１５のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  117. 各リンカーが、配列
    Figure 2022191261000209
    を有するポリペプチドから独立して選択される、請求項１１５～１１６のいずれか一項に
    記載のＦｃコンストラクト。
  118. 前記リンカーが
    Figure 2022191261000210
    である、請求項１１７に記載のＦｃコンストラクト。
  119. 前記第一のＦｃドメイン単量体及び前記第二のＦｃドメイン単量体が、前記第一のＦｃ
    ドメイン単量体及び前記第二のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
    二量体形成選択モジュールを含む、請求項１１２～１１８のいずれか一項に記載のＦｃコ
    ンストラクト。
  120. 前記第三のＦｃドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体が、前記第三のＦｃ
    ドメイン単量体及び前記第四のＦｃドメイン単量体間での二量体形成を促進する相補的な
    二量体形成選択モジュールを含む、請求項９１～９８のいずれか一項に記載のＦｃコンス
    トラクト。
  121. ａ）以下：
    ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、
    ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及び
    ｉｉｉ）前記第一のＦｃドメイン単量体を前記第二のＦｃドメイン単量体に結合する
    リンカー
    を含む、第一のポリペプチドと、
    ｂ）以下：
    ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、
    ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及び
    ｉｉｉ）前記第三のＦｃドメイン単量体を前記第四のＦｃドメイン単量体に結合する
    リンカー
    を含む、第二のポリペプチドと、
    ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
    ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
    を含むＦｃコンストラクトであって、
    前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第一の
    Ｆｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が
    組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及
    び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、
    前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000211
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000212
    を含む、
    Ｆｃコンストラクト。
  122. ａ）以下：
    ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、
    ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及び
    ｉｉｉ）前記第一のＦｃドメイン単量体を前記第二のＦｃドメイン単量体に結合する
    リンカー
    を含む、第一のポリペプチドと、
    ｂ）以下：
    ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、
    ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及び
    ｉｉｉ）前記第三のＦｃドメイン単量体を前記第四のＦｃドメイン単量体に結合する
    リンカー
    を含む、第二のポリペプチドと、
    ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
    ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
    を含むＦｃコンストラクトであって、
    前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第一の
    Ｆｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が
    組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及
    び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、
    前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000213
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000214
    を含む、
    Ｆｃコンストラクト。
  123. ａ）以下：
    ｉ）第一のＦｃドメイン単量体、
    ｉｉ）第二のＦｃドメイン単量体、及び
    ｉｉｉ）前記第一のＦｃドメイン単量体を前記第二のＦｃドメイン単量体に結合する
    リンカー
    を含む、第一のポリペプチドと、
    ｂ）以下：
    ｉ）第三のＦｃドメイン単量体、
    ｉｉ）第四のＦｃドメイン単量体、及び
    ｉｉｉ）前記第三のＦｃドメイン単量体を前記第四のＦｃドメイン単量体に結合する
    リンカー
    を含む、第二のポリペプチドと、
    ｃ）第五のＦｃドメイン単量体を含む第三のポリペプチドと、
    ｄ）第六のＦｃドメイン単量体を含む第四のポリペプチドと
    を含むＦｃコンストラクトであって、
    前記第一のＦｃドメイン単量体及び第五のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第一の
    Ｆｃドメインを形成し、前記第二のＦｃドメイン単量体及び第四のＦｃドメイン単量体が
    組み合わされて第二のＦｃドメインを形成し、ならびに前記第三のＦｃドメイン単量体及
    び第六のＦｃドメイン単量体が組み合わされて第三のＦｃドメインを形成し、
    前記第一及び第二のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000215
    を含み、
    前記第三及び第四のポリペプチドの各々が、配列
    Figure 2022191261000216
    を含む、
    Ｆｃコンストラクト。
  124. 各Ｆｃドメインが、独立して、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、Ｉ
    ｇＧ３ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、又はそれらの組み合わせである、請求
    項２～１２３のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  125. 各Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである、請求項２～１２３のいずれか一項
    に記載のＦｃコンストラクト。
  126. 前記ＩｇＧ１がヒトＩｇＧ１である、請求項１２５に記載のＦｃコンストラクト。
  127. 各Ｆｃドメインが、最大１０個の単一アミノ酸修飾をもつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２を
    含む、請求項１２６に記載のＦｃコンストラクト。
  128. 各Ｆｃドメインが、独立して、最大１０個の単一アミノ酸修飾をもつ、ＩｇＧ１ Ｆｃ
    ドメイン、ＩｇＧ２ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ３ Ｆｃドメイン、ＩｇＧ４ Ｆｃドメイン
    、又はそれらの組み合わせである、請求項２～１２７のいずれか一項に記載のＦｃコンス
    トラクト。
  129. 前記Ｆｃドメイン単量体の一つ又は複数が、最大１０個の単一アミノ酸修飾を有するヒ
    トＩｇＧ Ｆｃドメイン単量体である、請求項２～１２７のいずれか一項に記載のＦｃコ
    ンストラクト。
  130. 各Ｆｃドメイン単量体が、１０個以下の単一アミノ酸修飾を有する、請求項２～１２７
    のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  131. 各Ｆｃ単量体が、１０個以下の単一アミノ酸修飾を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２の
    配列を含む、請求項２～１２７のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  132. それを必要とする対象において、自己抗体のクリアランスを促進すること、抗原提示を
    抑制すること、免疫応答を軽減すること、又は、免疫応答の、免疫複合体に基づく活性化
    を軽減することにおいて使用するための、請求項２～１３１のいずれか一項に記載のＦｃ
    コンストラクト。
  133. 関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＡＮＣＡ関連血管炎、抗
    リン脂質抗体症候群、自己免疫性溶血性貧血、慢性炎症性脱髄性神経障害、臓器移植、Ｇ
    ＶＨＤ、皮膚筋炎、グッドパスチャー症候群、抗体依存性細胞媒介細胞障害を介して媒介
    される器官系標的のＩＩ型過敏症候群、例えばギラン・バレー症候群、ＣＩＤＰ、フェル
    ティ症候群、抗体媒介性拒絶反応、自己免疫性甲状腺疾患、潰瘍性大腸炎、自己免疫性肝
    疾患、突発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、視神経脊髄炎、天疱瘡及び他の自己免
    疫性水疱性疾患、シェーグレン症候群、抗体依存性ファゴサイトーシスを介して媒介され
    る自己免疫性血球減少症及び他の障害、ヘパリン誘発性血小板減少症（ＨＩＴ）、筋炎、
    多発筋炎、抗体依存性感染増強、スティッフパーソン症候群、川崎病、封入体筋炎、全身
    性硬化症、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連疾患、バセドウ病、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ
    ）、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、妊娠性天疱瘡、腫瘍随
    伴性天疱瘡、視神経炎、ロンバーグ病、ＦｃＲ依存性炎症症候群、滑膜炎、糸球体炎、及
    び血管炎から選択される炎症性疾患又は自己免疫疾患又は免疫疾患の治療に使用するため
    の、請求項２～１３１のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクト。
  134. 請求項２～１３１のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクトの実質的に均質な集団と
    、一つ又は複数の薬学的に許容できる担体もしくは賦形剤とを含む、医薬組成物。
  135. 前記均質な集団が、少なくとも８５％均質である、請求項１３４に記載の医薬組成物。
  136. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６をコードする核酸配列、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０をコ
    ードする核酸配列を含む、細胞。
  137. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８をコードする核酸配列、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３をコ
    ードする核酸配列を含む、細胞。
  138. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９をコードする核酸配列、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３をコ
    ードする核酸配列を含む、細胞。
  139. 請求項１～１３１のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクトをコードする核酸配列を
    含む、細胞。
  140. 対象における免疫応答の免疫細胞活性化を軽減する方法であって、請求項１～１３１の
    いずれか一項に記載のＦｃコンストラクトを前記対象に投与することを含む、方法。
  141. 前記対象が自己免疫疾患を有する、請求項１４０に記載の方法。
  142. 対象における炎症を治療する方法であって、請求項１～１３１のいずれか一項に記載の
    Ｆｃコンストラクトを前記対象に投与することを含む、方法。
  143. 対象における自己抗体のクリアランスを促進する及び／又は抗原提示を抑制する方法で
    あって、請求項１～１３１のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクトを前記対象に投与
    することを含む、方法。
  144. 請求項１～１３１のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクトを調製する方法であって
    、
    ａ）前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供することと
    、
    ｂ）前記Ｆｃコンストラクトの形成を許容する条件下で前記宿主細胞内で前記ポリペプ
    チドを発現することと、
    ｃ）前記Ｆｃコンストラクトを回収することと
    を含む、方法。
  145. 請求項１～１３１のいずれか一項に記載のＦｃコンストラクトを発現する宿主細胞であ
    って、前記宿主細胞が、前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、前記ポ
    リヌクレオチドが、前記宿主細胞内で発現される、宿主細胞。
  146. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３～７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ポリ
    ペプチド。
  147. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１～７９からなる群から選択さ
    れるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
  148. 配列
    Figure 2022191261000217
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000218
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  149. 配列
    Figure 2022191261000219
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000220
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  150. 配列
    Figure 2022191261000221
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000222
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  151. 配列
    Figure 2022191261000223
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000224
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  152. 配列
    Figure 2022191261000225
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000226
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  153. 配列
    Figure 2022191261000227
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000228
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  154. 配列
    Figure 2022191261000229
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000230
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  155. 配列
    Figure 2022191261000231
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000232
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  156. 配列
    Figure 2022191261000233
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000234
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  157. 配列
    Figure 2022191261000235
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000236
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  158. 配列
    Figure 2022191261000237
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000238
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  159. 配列
    Figure 2022191261000239
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000240
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  160. 配列
    Figure 2022191261000241
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000242
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  161. 配列
    Figure 2022191261000243
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと、
    配列
    Figure 2022191261000244
    を含むか、又はそれから成るポリペプチドと
    を含む、組成物。
  162. リストされた前記第一及び第二のポリペプチドが、１．１：１～１：１．１のモル比で
    存在する、請求項１４８～１６１のいずれか一項に記載の組成物。
  163. 請求項１４８～１６２のいずれか一項に記載の組成物を患者に投与することを含む、前
    記患者を治療する方法。
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