CN108285488B - 异二聚体免疫球蛋白 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及改造的异二聚体免疫球蛋白或其片段，和制备所述免疫球蛋白或其片段的方法。

Description

异二聚体免疫球蛋白
本申请是申请日为2012年3月23日、发明名称为“异二聚体免疫球蛋白”的中国专利申请201280025113.6(国际申请号PCT/IB2012/051410)的分案申请。
相关申请
本申请要求2011年3月25日递交的美国临时申请No.61/467,727的权益，其中的所有内容以其整体引入本文作为参考。
发明领域
本发明涉及改造的异二聚体免疫球蛋白或其片段，和制备所述免疫球蛋白或其片段的方法。
发明背景
已报道过用于制备异二聚体蛋白质的方法。构建和生产异二聚体双特异性抗体的第一种方法是四源杂交瘤(quadroma)技术(Milstein C和Cuello AC,Nature,305(5934)：537-40(1983))，其由两株不同的杂交瘤细胞系的体细胞融合体组成，所述杂交瘤细胞系表达具有双特异性抗体所需特异性的鼠单克隆抗体。由于在所获得的杂合体-杂交瘤(或四源杂交瘤)细胞系中，两种不同的免疫球蛋白(Ig)重链和轻链随机配对，生成了多达10种不同的免疫球蛋白，其中仅一种是功能性的双特异性抗体(Kufer P等人，Trends Biotechnol,22(5)：238-44(2004))。错配副产物的存在显著降低了产量，并需要复杂的纯化方法来实现产品均质性。可以通过使用若干种合理的设计策略，降低Ig重链的错配，其中大多数通过设计CH3结构域同二聚体的两个亚基之间的人为互补的异二聚体界面，改造用于异二聚体化的抗体重链。Carter等人提出了第一份关于改造的CH3异二聚体结构域配对的报道，描述了用于生成异二聚体Fc部分的“突起-进入-空穴(protuberance-into-cavity)”方法(美国专利号5,807,706；‘隆突-入-孔(knobs-into-holes)’；Merchant AM等人，Nat Biotechnol,16(7)：677-81(1998))。目前也研发出备选的设计，涉及通过修饰模块的核心组成来设计新的CH3模块配对，如WO2007/110205所述；或设计模块之间的互补盐桥，如WO2007/147901或WO2009/089004所述。CH3改造策略的缺点是这些技术仍然导致产生显著量的不理想同二聚体。因此，仍然需要使同二聚体种类含量最小化的改造技术。
尽管这些专利公开中描述的Ig重链异二聚体化的各种方法，基于任何CH3结构域合理改造等来研发完整双特异性抗体(即，两个FAB片段，每个具有一组独特的可变重链结构域和轻链结构域，生成独特的抗原结合位点，和一个二聚体Fc区)所面临的主要障碍是两个FAB必需具有共同的轻链，从而规避它们轻链的错配(Carter P,J Immunol Methods，248(l-2)：7-15(2001))。虽然可以通过使用具有相同轻链但凭借其不同的重链而结合不同抗原的抗体来实现，但却必须分离这类抗体，这通常涉及使用展示技术，目前没有任何现有技术能够在不进行进一步的CDR或轻链改造的条件下，直接使用两种具有所需特异性的不同人单克隆抗体再装配成完整的双特异性抗体。因此，需要生成完整的、正确装配的双特异性抗体，其整体结构与天然抗体相似，即，包括2个FAB片段，每个片段具有一组独特的可变重链和轻链结构域，生成独特的抗原结合位点，和一个二聚体Fc区。
发明概述
本公开内容一般涉及改造异二聚体免疫球蛋白或其片段，和制备所述免疫球蛋白或其片段的方法。
在一个方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，其包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，其包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第12位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第119位被氨基酸残基取代，则第12位上取代的氨基酸残基和第119位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第13位被氨基酸残基取代，则第26位上取代的氨基酸残基和第13位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第27位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第18位被氨基酸残基取代，则第27位上取代的氨基酸残基和第18位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第79位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第84.3位被氨基酸残基取代，则第79位上取代的氨基酸残基和第84.3位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是在第11位，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是包含铰链区的结构域，则第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域在铰链区的第3位未被取代，
其中，各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000051
编号规则标注的。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上的取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000061
编号规则标注的。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第88位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、88和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、88和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、86、88和90位的另外的氨基酸残基，
其中，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第88位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第85.1和/或86位上取代的氨基酸残基相互作用，
其中，各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000071
编号规则标注的。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26位和选自第3、22、27、79、81、84、85.1、86和88位的另外的位置上的的氨基酸残基，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第20位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第26位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000081
编号规则标注的。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH2结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第88位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、86和90位的另外的氨基酸残基，其中在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第88位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第85.1和/或86位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000091
编号规则标注的。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH2结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26位的氨基酸残基，和任选的位于选自第3、5、7、20、22、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第20位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第26位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000101
编号规则标注的。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH4结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000111
编号规则标注的。
在另一个方面，本公开内容提供了生产异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段的方法，包括：
(a)在来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上取代第一亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基，获得包含改造的结构域的第一改造的免疫球蛋白链，
(b)在来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上取代第二亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基，获得包含改造的结构域的第二改造的免疫球蛋白链，
(c)培养包含编码所述改造的免疫球蛋白链的核酸的宿主细胞，其中所述培养使核酸表达并生成改造的免疫球蛋白链；和
(d)从宿主细胞培养物中回收异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段。
在另一个方面，本公开内容提供了改造多结构域蛋白质的结构域的蛋白质-蛋白质界面的方法，包括：
(a)提供包含具有蛋白质-蛋白质界面的结构域的多结构域蛋白质；
(b)选择包含不同于(a)的结构域的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域的天然存在的免疫球蛋白超家族成员作为供体结构域；
(c)重叠(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域与(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域的3D结构；
(d)在(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域与(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域的重叠3D结构中，鉴别暴露的蛋白质-蛋白质界面残基；
(e)用来自于在(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基的在等价3D结构位置上的氨基酸残基，取代在(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基中的至少一个氨基酸残基。
在另一方面，本公开内容提供了天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域用于改造异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段的用途，所述异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含至少一个改造的结构域，其具有用来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基取代的蛋白质-蛋白质界面，所述第二改造的免疫球蛋白链包含至少一个改造的结构域，其具有用来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基取代的蛋白质-蛋白质界面。
附图简介
图1：描述了改造的CH3结构域BTα链、改造的CH3结构域BTβ链与人IgG1 CH3结构域的氨基酸序列比对。使用EU编号规则。
图2：BTαHis和VL-BTβ链的各种配对的示意图。BTα链具有融合至其C端的多聚组氨酸标签序列，BTβ链具有融合至其N端的可变结构域抗体。
图3：证实同时产生BTαHis_VL-BTβ异二聚体和BTαHis_VL-BTβF405S异二聚体的SDS-PAGE分析(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。(M)如所指出的分子量标志物。(1)在非还原条件、蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβ的转染结果。(2)在还原条件、蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβ的转染结果。(3)在非还原条件、蛋白-A纯化后，具有铰链的人IgG1-Fc的转染结果。(4)在还原条件、蛋白-A纯化后，具有铰链的人IgG1-Fc的转染结果。(5)在非还原条件、蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβF405S的转染结果。(6)在还原条件、蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβF405S的转染结果。(A)未定义的聚集体。(B)BTαHis_VL-BTβ异二聚体。(C)BTαHis同型二聚体。(D)VL-BTβF405S同型二聚体。(E)VL-BTβF405S单体。(F)BTαHis单体。(G)BTαHis_VL-BTβF405S异二聚体。
图4A：评估在蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβ异二聚体的相对比例的光密度扫描测定法分析(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶，非还原条件)。(a)未定义的聚集体。(b)BTαHis_VL-BTβ异二聚体。(c)BTαHis同型二聚体。图4B：当忽略聚集体时，在蛋白-A纯化后，评估BTαHis_VL-BTβ异二聚体与BtαHis同型二聚体的相对比例的光密度扫描测定法分析(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶，非还原条件)。(a)未定义的聚集体。(b)BTαHis_VL-BTβ异二聚体。(c)BTαHis同型二聚体。
图5：SDS-PAGE分析，其证实产生BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。(M)如所指出的分子量标志物。(1)在非还原条件、蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβF405A的转染结果。(2)在还原条件、蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβF405A的转染结果。(3)在非还原条件、蛋白-A纯化后，具有铰链的人IgG1-Fc的转染结果。(4)在还原条件、蛋白-A纯化后，具有铰链的人IgG1-Fc的转染结果。(A)未定义的聚集体。(B)VL-BTβF405A同型二聚体。(C)BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体。(D)BTαHis同型二聚体。(E)VL-BTβF405A单体。
图6：Western印迹，其验证了产生BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体(4-12％SDSTris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。用抗His标签抗体检测Western印迹。(M)如所指出的分子量标志物。(1)在非还原条件、蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβF405A的转染结果。(2)在还原条件、蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβF405A的转染结果。(3)在非还原条件、蛋白-A纯化和Ni2+-sepharose后，BTαHis_VL-BTβF405A的转染结果。(4)在还原条件、蛋白-A纯化和Ni2+-sepharose后，BTαHis_VL-BTβF405A的转染结果。(5)在非还原条件、蛋白-A纯化、Ni2+-sepharose和蛋白-L琼脂糖后，BTαHis_VL-BTβF405A的转染结果。(6)在还原条件、蛋白-A纯化、Ni2+-sepharose和蛋白-L琼脂糖后，BTαHis_VL-BTβF405A的转染结果。
图7A：评估在蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体的相对比例的光密度扫描测定法分析(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶，非还原条件)。(A)未定义的聚集体。(B)VL-BTβF405A同型二聚体。(C)BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体。(D)BTαHis同型二聚体。(E)VL-BTβF405A单体。图7B：评估当忽略聚集体时，在蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体与同型二聚体的相对比例的光密度扫描测定法分析(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶，非还原条件)。(A)未定义的聚集体。(B)VL-BTβF405A同型二聚体。(C)BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体。(D)BTαHis同型二聚体。(E)VL-BTβF405A单体。
图7C：异二聚体BTαHis_BTβ(F405A)HA异二聚体的DSC温谱图。
图8：SDS-PAGE分析(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)，证实产生异二聚体Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S。(M)如所指出的分子量标志物。(1)在非还原条件、蛋白-A纯化后，实施例2的BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体的转染结果。(2)在还原条件、蛋白-A纯化后，实施例2的BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体的转染结果。(3)在非还原条件、蛋白-A纯化后，Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S的转染结果。(4)在还原条件、蛋白-A纯化后，Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S的转染结果。(5)在非还原条件、蛋白-A纯化后，“隆突-入-孔”Fc的转染结果。(6)在还原条件、蛋白-A纯化后，具有与可变结构域抗体融合的“孔(hole)”的“隆突-入-孔”Fc构建体的转染结果。
(A)Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S异二聚体。(B)VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S同型二聚体。(C)Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N同型二聚体。
图9：评估在蛋白-A纯化后，异二聚体Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S的相对比例的光密度扫描测定法分析(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶，非还原条件)。(A)Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S。(B)VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S同型二聚体。(C)Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N同型二聚体。
图10：SDS-PAGE，其证实在蛋白A纯化后，产生BTδ_VL-BTγ异二聚体。(M)如所指出的分子量标志物(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。(1)在还原条件、蛋白-A纯化后，BTδ_VL-BTγ异二聚体的转染结果。(2)在非还原条件、蛋白-A纯化后，BTδ_VL-BTγ异二聚体的转染结果。(A)BTδ_VL-BTγ异二聚体。(B)VL-BTγ同型二聚体。(C)VL-BTγ单体。
图11A：光密度扫描测定法分析，评估在蛋白-A纯化后，BTδ_VL-BTγ异二聚体的相对比例(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶，非还原条件)。图11B：光密度扫描测定法分析，评估在蛋白-A纯化后，忽略相对比例测量中的痕量聚集体和单体，BTδ_VL-BTγ异二聚体的相对比例(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶，非还原条件)。
图12：当表达单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子时，可能的配对的示意图。
图13：SDS-PAGE，其证实产生单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。(M)如所指出的分子量标志物。(1)在非还原条件、蛋白-A纯化后，单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子的转染结果。(A)单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子。(B)VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_VL(抗hCD19)-CKγ同型二聚体分子。(C)VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_VL(抗hCD19)-CKγ分子(半分子)。
图14：光密度扫描测定法分析，评估在蛋白-A纯化后，单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子的相对比例(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶，非还原条件)。(1)VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_VL(抗hCD19)-CKγ同型二聚体分子。(2)单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子。(3)VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_VL(抗hCD19)-CKγ分子(半分子)。
图15：单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子的DSC温谱图。
图16：当表达单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CK3分子时，可能的配对的示意图。
图17：SDS-PAGE，证实生产单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CK3分子(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。(M)如所指出的分子量标志物。(1)在非还原条件、蛋白-A纯化后，单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CK3分子的转染结果。(A)单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CK3分子。(B)VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_VL(抗hCD19)-CK3同型二聚体分子。(C)VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_VL(抗hCD19)-CK3分子(半分子)。
图18：光密度扫描测定法分析，评估在蛋白-A纯化后，单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CK3分子的相对比例(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶，非还原条件)。(1)VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_VL(抗hCD19)-CK3同型二聚体分子。(2)单价FAB改造的异二聚体VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CK3分子。(3)VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_VL(抗hCD19)-CK3分子(半分子)。
图19A：人IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4 CH1结构域的序列；使用
Figure BDA0001569050590000171
和EU编号规则；阴影位置表示没有取代。图19B：人IGHG1铰链区的序列；使用
Figure BDA0001569050590000172
和EU编号规则；阴影位置表示没有取代。图19C：人IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4 CH2结构域的序列；使用
Figure BDA0001569050590000173
和EU编号规则；阴影位置表示没有取代；(～)表示序列比对中的移码；图19D：人IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4 CH3结构域的序列；使用
Figure BDA0001569050590000174
和EU编号规则；阴影位置表示没有取代。
图20A：具有基于人TRAC(缩写为ALPHA)、TRBC2(缩写为BETA)、TRDC(缩写为DELTA)、TRGC1(缩写为GAMMA)和IGHG1 CH3(缩写为CH3)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的改造的人IGHG1 CH1结构域的序列；使用
Figure BDA0001569050590000175
和EU编号规则；阴影位置表示没有取代。图20B：具有基于人TRAC(缩写为ALPHA)、TRBC2(缩写为BETA)、TRDC(缩写为DELTA)、TRGC1(缩写为GAMMA)和IGHG1 CH3(缩写为CH3)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的改造的人IGHG1 CH2结构域的序列；使用
Figure BDA0001569050590000181
和EU编号规则；阴影位置表示没有取代。图20C：具有基于人TRAC(缩写为ALPHA)、TRBC2(缩写为BETA)、TRDC(缩写为DELTA)和TRGC1(缩写为GAMMA)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的改造的人IGHG1 CH3结构域的序列；使用
Figure BDA0001569050590000186
和EU编号规则；阴影位置表示没有取代。
图21A：具有基于人TRAC(缩写为ALPHA)、TRBC2(缩写为BETA)、TRDC(缩写为DELTA)、TRGC1(缩写为GAMMA)和IGHG1 CH3(缩写为CH3)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的改造的人IGHE CH4结构域的序列；使用
Figure BDA0001569050590000182
和EU编号规则；阴影位置表示没有取代。图21B：具有基于人TRAC(缩写为ALPHA)、TRBC2(缩写为BETA)、TRDC(缩写为DELTA)、TRGC1(缩写为GAMMA)和IGHG1 CH3(缩写为CH3)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的改造的人IGHM CH4结构域的序列；使用
Figure BDA0001569050590000183
和EU编号规则；阴影位置表示没有取代。
图22：具有基于人TRAC(缩写为ALPHA)、TRBC2(缩写为BETA)、TRDC(缩写为DELTA)、TRGC1(缩写为GAMMA)和IGHG1 CH3(缩写为CH3)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的改造的人IGKC结构域的序列；使用
Figure BDA0001569050590000184
和EU编号规则；阴影位置表示没有取代。
图23A：具有基于人TRAC(缩写为ALPHA)、TRBC2(缩写为BETA)、TRDC(缩写为DELTA)、TRGC1(缩写为GAMMA)和IGHG1 CH3(缩写为CH3)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的人IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6、IGLC7和改造的变体的序列；显示了Kabat残基第108至161位——同时使用
Figure BDA0001569050590000185
和Kabat编号规则；阴影位置表示没有取代。图23B：具有基于人TRAC(缩写为ALPHA)、TRBC2(缩写为BETA)、TRDC(缩写为DELTA)、TRGC1(缩写为GAMMA)和IGHG1 CH3(缩写为CH3)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的人IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6、IGLC7和改造的变体的序列；显示了Kabat残基第162至215位——同时使用
Figure BDA0001569050590000191
和Kabat编号规则；阴影位置表示没有取代。
图24：当表达Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体时，可能的修饰型重链配对的示意图。
图25：SDS-PAGE，证实产生Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ。显示了每个纯化步骤之后的蛋白质混合物的样品(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶，非还原条件)。(M)如所指出的分子量标志物。(1)蛋白-A层析后。(2)阴离子IEX后。(3)阳离子IEX后。(4)尺寸排阻层析后。(5)对照：scFv-Fc融合蛋白。(6)对照：单克隆抗体。
图26：光密度扫描测定法分析，评估在蛋白-A纯化后，Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体的相对比例(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶，非还原条件)。(a)VH(抗EGFR)CH1-BTα_VL(抗EGFR)-CK同型二聚体。(b)Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体。(c)scFv(抗HER2)-BTβ同型二聚体。测量忽略了杂质。
图27：Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体的DSC温谱图。
图28A：显示Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体与固定化人EGFR-Fc结合/解离的BIAcore传感图。
图28B：使用SPR技术证实双特异性的Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体同时与两种抗原结合。将Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体和人EGFR-Fc相继注射到固定化人HER2-Fc上(实线)。对照：(点线)Erbitux FAB-BTα_HerceptinscFv-BTβ异二聚体与固定化人HER2-Fc的结合，(虚线)缺少人EGFR-Fc与固定化人HER2-Fc的结合。
图29：当表达抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体时，可能的修饰型重链配对的示意图。两条重链VH(抗hVLA2)-CH1-BTα和VH(抗hCD19)-BTδ-BTβ的C端分别与His和c-myc标签融合。
图30：抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体的SDS-PAGE和Western印迹分析。在每个纯化步骤后采集样品(非还原条件下的4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)；同时显示了洗脱液和未结合的混合物。(M)如所指出的分子量标志物。(1)来自蛋白-A层析的洗脱液混合物。(2)来自蛋白-L层析的未结合的混合物。(3)来自蛋白-L层析的洗脱液混合物。(4)来自Ni2+-NTA层析的未结合的混合物。(5)来自Ni2+-NTA层析的洗脱液混合物。(a)SDS-PAGE。(b)用抗His标签抗体检测的Western印迹。(c)用抗c-myc标签抗体检测的Western印迹。
图31：流式细胞仪检测抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体与CD19+VLA2-和CD19-VLA2+细胞的结合。在FACS CyAnTM ADP流式细胞仪上捕获染色细胞。直方图展示了每种染色中根据藻红蛋白(PE)荧光密度(X轴)的最大事件的归一化％(Y轴)。
A和B：用抗hVLA2抗体(灰色直方图)作为同种型对照，或用抗hCD19_抗VLA2双特异性抗体(白色直方图)染色Raji细胞。通过(A)小鼠抗c-myc标签抗体或(B)小鼠抗His标签抗体，并用PE-标记的抗小鼠Ig抗体染色，揭示一抗的结合。
C和D：用抗hCD19抗体(灰色直方图)作为同种型对照，或用抗hCD19_抗VLA2双特异性抗体(白色直方图)染色HT1080细胞。通过(C)小鼠抗c-myc标签抗体或(D)小鼠抗His标签抗体，并用PE-标记的抗小鼠Ig抗体染色，揭示一抗的结合。
图32：抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体的DSC温谱图。
图33：SDS-PAGE分析，证实产生BTαIGHG3_VL-BTβF405A异二聚体(4-12％SDSTris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。(M)如所指出的分子量标志物。(1)在非还原条件、蛋白-A纯化后，BTαIGHG3_VL-BTβF405A的转染结果。(2)在还原条件、蛋白-A纯化后，BTαIGHG3_VL-BTβF405A的转染结果。(A)VL-BTβF405A_VL-BTβF405A同型二聚体。(b)BTαIGHG3_VL-BTβF405A异二聚体,(C)VL-BTβF405A链(半分子)。
图34：光密度扫描测定法分析，评估在蛋白-A纯化后，BTαIGHG3_VL-BTβF405A异二聚体的相对比例(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。(a)VL-BTβF405A_VL-BTβF405A同型二聚体。(b)BTαIGHG3_VL-BTβF405A异二聚体。(C)VL-BTβF405A链(半分子)。
图35：SDS-PAGE分析，证实产生Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA异二聚体(4-12％SDSTris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。(M)如所指出的分子量标志物。(1)在非还原条件、蛋白-A纯化后，Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA异二聚体的转染结果。(2)在还原条件、蛋白-A纯化后，FcIGHAG_VL-Fc IGHGA异二聚体的转染结果。(A)VL-Fc IGHGA_VL-Fc IGHGA同型二聚体。(B)Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA异二聚体。(C)Fc IGHAG_Fc IGHAG同型二聚体。(D)VL-Fc IGHGA链(半分子)。(E)Fc IGHAG链(半分子)。
图36：光密度扫描测定法分析，评估在蛋白-A纯化后，Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA异二聚体的相对比例(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。(A)VL-Fc IGHGA_VL-FcIGHGA同型二聚体。(B)Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA异二聚体。(C)Fc IGHAG_Fc IGHAG同型二聚体。(D)VL-Fc IGHGA链(半分子)。(E)Fc IGHAG链(半分子)。
图37：基于Fc链的改造的CH4的示意图。(A)BTαIGHM-4His链。(B)VL-BTβIGHM-4链。(C)BTαIGHE-4His链。(D)VL-BTβIGHE-4链。
图38：SDS-PAGE分析，证实产生BTαIGHM-4His_VL-BTβIGHM-4异二聚体(4-12％SDSTris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。(M)如所指出的分子量标志物。(1)非还原条件下的BTαIGHM-4His_VL-BTβIGHM-4异二聚体的转染结果。(2)还原条件下的BTαIGHM-4His_VL-BTβIGHM-4异二聚体的转染结果。(3)在非还原条件、蛋白-L纯化后，BTαIGHM-4His_VL-BTβIGHM-4异二聚体的转染结果。(4)在还原条件、蛋白-L纯化后，BTαIGHM-4His_VL-BTβIGHM-4异二聚体的转染结果。(A)BTαIGHM-4His_VL-BTβIGHM-4β异二聚体。
图39：光密度扫描测定法分析，评估在蛋白-L纯化后，BTαIGHM-4His_VL-BT IGHM-4β异二聚体的相对比例(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。
图40：SDS-PAGE分析，证实产生BTαIGHE-4His_VL-BTβIGHE-4异二聚体(4-12％SDSTris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。(M)如所指出的分子量标志物。(1)在非还原条件、蛋白-A纯化后，BTαIGHE-4His_VL-BTβIGHE-4异二聚体的转染结果。(2)在还原条件、蛋白-A纯化后，BTαIGHE-4His_VL-BTβIGHE-4异二聚体的转染结果。(A)BTαIGHE-4His_VL-BTβIGHE-4异二聚体。(B)BTαIGHE-4His_BTαIGHE-4His同型二聚体。(C)VL-BTβIGHE-4链(半分子)。(D)BTαIGHE-4His链(半分子)。
图41：光密度扫描测定法分析，评估在蛋白-A纯化后，BTαIGHE-4His_VL-BTβIGHE-4异二聚体的相对比例(4-12％SDS Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶)。
图42：本文中使用的
Figure BDA0001569050590000221
独特的编号规则，例如在实施例1、2、3、4、7、8、9、10、11和12中，用于鉴别针对IGHA1、IGHA2、IGHD、IGHE、IGHEP1、IGHG1、IGHG2、IGHG3、IGHG4、IGHGP和IGHM的人CH1、CH2、CH3和CH4恒定结构域的3D等价位置。标出了GenBank登录号。
图43：本文中使用的
Figure BDA0001569050590000222
独特的编号规则，例如在实施例5、6、7和9中，用于鉴别针对人IGKC恒定结构域的3D等价位置。标出了GenBank登录号。
图44：本文中使用的
Figure BDA0001569050590000223
独特的编号规则，例如在实施例7中，用于鉴别针对人IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7恒定结构域的3D等价位置。标出了GenBank登录号。
图45：本文中使用的
Figure BDA0001569050590000231
独特的编号规则，例如在实施例1、2、3、4、5、7、8、9、10、11和12中，用于鉴别针对人TRAC、TRBC1、TRBC2、TRDC、TRGC1、TRGC2(2x)和TRGC2(3x)恒定结构域的3D等价位置。标出了GenBank登录号。
发明详述
本公开内容一般涉及改造异二聚体免疫球蛋白或其片段和制备所述免疫球蛋白或其片段的方法。
本文中使用的术语“抗体”包括全长抗体，及其任何抗原结合片段或单链。抗体，特别是天然存在的抗体，是作为一份或多份拷贝的Y形单元存在的糖蛋白，所述单元包括四条多肽链。每个“Y”形含有2条相同拷贝的重链(H)和2条相同的轻链拷贝(L)，以其相对分子量命名。每条轻链与重链配对，而每条重链与另一条重链配对。共价的链间二硫键和非共价的相互作用将链连接在一起。抗体，特别是天然存在的抗体，含有可变区，这是两份拷贝的抗原结合位点。一种蛋白水解酶——木瓜蛋白酶将“Y”形切割成3个独立的分子，2个被称为“Fab”片段(Fab＝片段抗原结合)，一个被称为“Fc”片段或“Fc区”(Fc＝可结晶的片段)。Fab片段由完整的轻链和部分重链组成。重链含有1个可变结构域(VH)和3或4个恒定结构域(CH1、CH2、CH3和CH4，取决于抗体类型或同种型)。在CH1和CH2结构域之间的区域被称为铰链区，并允许在Y形抗体分子的2个Fab臂之间的柔性，允许其打开和闭合，以适应与被固定距离分开的2个抗原决定子的结合。本文中提及的“铰链区”是长度为6-62个氨基酸的序列区，仅存在于IgA、IgD和IgG中，涵盖了桥接2条重链的半胱氨酸残基。IgA、IgD和IgG的重链各自具有4个结构域，即，1个可变结构域(VH)和3个恒定结构域(CH1-3)。IgE和IgM的重链具有1个可变结构域和4个恒定结构域(CH1-4)。抗体的恒定区可以介导与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如，效应子细胞)和补体系统经典通路的第一补体(C1q)。每条轻链通常通过1个共价二硫键与重链连接。每条轻链含有1个可变结构域(VL)和1个轻链恒定结构域。轻链恒定结构域是κ轻链恒定结构域，在本文中被命名为IGKC，或者是λ轻链恒定结构域，在本文中被命名为IGLC。IGKC在本文中与Cκ或CK等价的使用，具有相同的含义。IGLC在本文中与Cλ或CL等价的使用，具有相同的含义。本文中使用的术语“IGLC结构域”指所有的λ轻链恒定结构域，例如，选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的所有的λ轻链恒定结构域。VH和VL区可以进一步细分为命名为互补决定区(CDR)的超变区，其间散布了更保守的、命名为框架区(FR或FW)的区域。每个VH和VL都包括3个CDR和4个FR，按下列顺序从氨基端至羧基端排列：FRl、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。
本文中使用的术语“全长抗体”包含构成抗体的天然生物学形式的结构，包括可变区和恒定区。例如，在大多数哺乳动物(包括人和小鼠)中，IgG类的全长抗体是四聚体，由2个相同的两条免疫球蛋白链对组成，每一对具有1条轻链和1条重链，每条轻链包含免疫球蛋白结构域VL和轻链恒定区，每条重链包含免疫球蛋白结构域VH、CH1(C[γ]1)、CH2(C[γ]2)、CH3(C[γ]3)和CH4(C[γ]4，取决于抗体类型或同种型)。在一些哺乳动物中，例如骆驼和羊驼，IgG抗体可以仅由2条重链组成，每条重链包含与Fc区连接的可变结构域。
通过恒定区遗传确定的，将抗体分类，也称为同种型。人恒定轻链分为κ(CK)和λ(C[λ])轻链。重链分为mu(μ)、delta(δ)、gamma(γ)、alpha(α)或epsilon(ε)，分别定义了抗体的同种型IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。因此，本文中使用的“同种型”意指通过其恒定区的化学和抗原特征定义的任何免疫球蛋白类别和/或亚类。已知的人免疫球蛋白同种型是IgGl(IGHG1)、IgG2(IGHG2)、IgG3(IGHG3)、IgG4(IGHG4)、IgA1(IGHA1)、IgA2(IGHA2)、IgM(IGHM)、IgD(IGHD)和IgE(IGHE)。所谓的人免疫球蛋白假-γIGHGP基因代表了另外的人免疫球蛋白重链恒定区基因，该基因已被测序，但由于改变的转换区而不编码蛋白质(Bensmana M等人，Nucleic Acids Res.16(7):3108(1988))。尽管具有改变的转换区，人免疫球蛋白假-γIGHGP基因仍具有所有的重链恒定结构域(CH1-CH3)和铰链的可读框。其重链恒定结构域的所有可读框编码与所有具有预测的结构特征的人免疫球蛋白恒定结构域良好匹配的蛋白质结构域。该另外的假-γ同种型在本文中被称为IgGP或IGHGP。还报道了其他的假免疫球蛋白基因，如人免疫球蛋白重链恒定结构域
Figure BDA0001569050590000251
和P2假基因(IGHEP1和IGHEP2)。IgG类是最常用于治疗目的的。在人中，该类别包括亚类IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。在小鼠中，该类别包括亚类IgGl、IgG2a、IgG2b、IgG2c和IgG3。
本文使用的术语“天然存在的免疫球蛋白超家族”指自然界中可见的免疫球蛋白超家族成员(Williams AF和Barclay AN,Annu Rev Immunol,6:381-405(1988))，即，未经过遗传改造的；包括但不限于抗原受体样抗体；免疫球蛋白；包括TCR恒定结构域家族的T细胞受体链；抗原呈递分子，如I类MHC、II类MHC或β-2微球蛋白；共受体，如CD4、CD8或CD19；抗原受体辅助分子，如CD3-γ、-δ和-ε链、CD79a或CD79b；共刺激或抑制分子，如CD28、CD80或CD86(也被称为B7.1和B7.2分子)；天然杀伤细胞上的受体，如杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)；粘附分子，如CD2、CD48、SIGLEC家族(例如，CD22、CD83)、CTX家族(例如，CTX、JAMs、BT-IgSF、CAR、VSIG、ESAM)、细胞间粘附分子(ICAM)、血管细胞粘附分子(例如，VCAM-1)、中性细胞粘附分子(NCAM)；细胞因子和生长因子受体，如白介素-1I型受体、白介素-1II型受体前体(IL-1R-2、IL-1R-β、CD121b抗原)、血小板来源的生长因子受体(PDGFR)、白介素-6受体α链前体(IL-6R-α、CD126抗原)、集落刺激因子1受体前体(CSF-1-R、CD115抗原、巨噬细胞集落刺激因子I受体)、肥大细胞/干细胞生长因子受体前体(SCFR、c-kit、CD117抗原)、碱性成纤维细胞生长因子受体1前体(FGFR-1、酪氨酸激酶受体CEK1)；受体酪氨酸激酶/磷酸酶，如酪氨酸-蛋白质激酶受体Tie-1前体或受体型酪氨酸-蛋白质磷酸酶mu前体；Ig结合受体，如多聚免疫球蛋白受体(PIGR)，或选择性Fc受体；和其他，如CD147、胸腺细胞分化抗原-1(Thy-1)(也被称为CD90)、CD7、嗜乳脂蛋白(Btn)、钠离子通道亚基β-1前体、Titin(大型胞内肌肉蛋白，也被称为肌联蛋白)。
本文中使用的T细胞受体(TCR)恒定结构域家族包括人TCR恒定结构域α，在本文中被称为“人TCR恒定结构域α”或“TRAC”(SEQ ID NO：1；GenBank数据库登录号AAO72258.1(第135-225位残基)，与
Figure BDA0001569050590000261
参照TRAC的完整序列等价)；人TCR恒定结构域β，在本文中被称为“人TCR恒定结构域β”或“TRBC2”(SEQ ID NO：2；GenBank数据库登录号AAA61026.1(第134-261位残基)，与
Figure BDA0001569050590000263
参照TRBC2的第1.8-124位残基等价)；人TCR恒定结构域δ，在本文中被称为“人TCR恒定结构域δ”或“TRDC”(SEQ ID NO：32；GenBank数据库登录号AAA61125.1(第135-221位残基)，与
Figure BDA0001569050590000262
参照TRDC的第1.7-120位残基等价)；人TCR恒定结构域γ，在本文中被称为“人TCR恒定结构域γ”或“TRGC1”(SEQ ID NO：33；GenBank数据库登录号AAA61110.1(第145-245位残基)，与
Figure BDA0001569050590000264
参照TRGC1的第1.1–124位残基等价)；和Pang SS等人，Nature,467(7317):844-8(2010)中公开的前T细胞抗原受体链(pre-TCR)。在本发明的范围内，等价的包括了人TCRβ和γ恒定结构域的同种异型变体(分别是
Figure BDA0001569050590000265
参照TRBC1和TRGC2(2x)或TRGC2(3x))。
Figure BDA0001569050590000267
参照是根据
Figure BDA0001569050590000266
(the international ImMunoGeneTicsinformation
Figure BDA0001569050590000268
(Lefranc MP等人，Nucleic Acids Res、27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol,29(3):185-203(2005)；Kaas Q等人，Briefings in FunctionalGenomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))。
可在本发明中用作供体结构域的优选的天然存在的免疫球蛋白超家族成员选自人TCR恒定结构域α、人TCR恒定结构域β、人TCR恒定结构域γ、人TCR恒定结构域δ、人TCR可变结构域α。人TCR可变结构域β、人TCR可变结构域γ、人TCR可变结构域δ、前T细胞抗原受体链和CH1、CH2、CH3、CH4、IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7结构域。更优选的是选自人TCR恒定结构域α、人TCR恒定结构域β、人TCR恒定结构域γ、人TCR恒定结构域δ和CH3结构域的供体结构域，特别是选自人TCR恒定结构域α、人TCR恒定结构域β、人TCR恒定结构域γ和人TCR恒定结构域δ的供体结构域。优选的，本发明提及的天然存在的免疫球蛋白超家族成员是人天然存在的免疫球蛋白。
本文使用的术语“免疫球蛋白片段”包括但不限于(i)结构域，(ii)由VL、VH、CL或CK与CH1结构域组成的Fab片段，包括Fab′和Fab′-SH，(ii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段，(iii)由单可变结构域组成的dAb片段(Ward ES等人，Nature,341(6242):544-6(1989))，(iv)F(ab')2片段，一种包含2个相连的Fab片段的二价片段，(v)单链Fv分子(scFv)，其中VH结构域和VL结构域通过肽接头相连，所述接头允许2个结构域关联形成抗原结合位点(BirdRE等人，Science、242(4877):423-6(1988)；Huston JS等人，Proc Natl Acad Sci U S A,85(16):5879-83(1988))，(vi)“双抗体(diabody)”或“三链抗体(triabodies)”，通过基因融合构建的多价或多特异性片段(Holliger P等人，Proc Natl Acad Sci U S A、90(14):6444-8(1993)；Tomlinson I和Holliger P,Methods Enzymol,326:461-79(2000))，(vii)scFv，与Fc区融合的双抗体或结构域抗体，和(viii)与相同或不同抗体融合的scFv。
本文使用的术语“异二聚体免疫球蛋白”或“异二聚体片段”或“异二聚体”包括至少包含第一和第二多肽(如第一和第二结构域)的免疫球蛋白分子或部分，其中第二多肽的氨基酸序列与第一多肽不同。优选的，异二聚体免疫球蛋白包含2条多肽链，其中第一链具有至少一个与第二链不同的结构域，且其中两条链通过其不同的结构域装配，即，相互作用。具体而言，异二聚体免疫球蛋白包括至少2个结构域，其中第一结构域与第二结构域不同，且其中两个结构域通过其蛋白质-蛋白质界面装配，即，相互作用。更优选的，异二聚体免疫球蛋白对至少2个不同配体、抗原或结合位点具有结合特异性，即，是双特异性的。本文使用的异二聚体免疫球蛋白包括但不限于全长双特异性抗体、双特异性Fab、双特异性F(ab’)2、与Fc区融合的双特异性scFv、与Fc区融合的双抗体和与Fc区融合的结构域抗体。优选的，异二聚体免疫球蛋白片段包含至少2个结构域，其中第一结构域与第二结构域不同，且其中2个结构域通过其蛋白质-蛋白质界面装配，即，相互作用。更优选的，异二聚体免疫球蛋白片段包含至少2个改造的结构域，其中第一改造的结构域不同于第二改造的结构域，即，第一改造的结构域的氨基酸序列与第二改造的结构域不同，且其中2个改造的结构域通过其蛋白质-蛋白质界面的相互作用而装配。
本文使用的“天然存在的异二聚体”包括但不限于IGKC结构域或IGLC结构域(IGLC1或IGLC2或IGLC3或IGLC6或IGLC7)，其与任何重链CH1结构域(IGHA1 CH1、IGHA2CH1、IGHD CH1、IGHE CH1、IGHG1 CH1、IGHG2 CH1、IGHG3 CH1、IGHG4 CH1、IGHGP CH1、IGHMCH1)例如，IGKC/IGHA1 CH1，IGLC2/IGHA1 CH1，IGLC3/IGHA1 CH1，IGLC6/IGHA1 CH1，IGLC7/IGHA1 CH1，IGKC/IGHA2 CH1，IGLC2/IGHA2 CH1，IGLC3/IGHA2 CH1，IGLC6/IGHA2CH1，IGLC7/IGHA2 CH1，IGKC/IGHD CH1，IGLC2/IGHD CH1，IGLC3/IGHD CH1，IGLC6/IGHDCH1，IGLC7/IGHD CH1，IGKC/IGHE CH1，IGLC2/IGHE CH1，IGLC3/IGHE CH1，IGLC6/IGHECH1，IGLC7/IGHE CH1，IGKC/IGHG1 CH1，IGLC2/IGHG1 CH1，IGLC3/IGHG1 CH1，IGLC6/IGHG1CH1，IGLC7/IGHG1CH1，IGKC/IGHG2 CH1，IGLC2/IGHG2 CH1，IGLC3/IGHG2 CH1，IGLC6/IGHG2CH1，IGLC7/IGHG2 CH1，IGKC/IGHG3 CH1，IGLC2/IGHG3 CH1，IGLC3/IGHG3 CH1，IGLC6/IGHG3 CH1，IGLC7/IGHG3 CH1，IGKC/IGHG4 CH1，IGLC2/IGHG4 CH1，IGLC3/IGHG4 CH1，IGLC6/IGHG4 CH1，IGLC7/IGHG4 CH1，IGKC/IGHGP CH1，IGLC2/IGHGP CH1，IGLC3/IGHGPCH1，IGLC6/IGHGP CH1，IGLC7/IGHGP CH1，IGKC/IGHM CH1，IGLC2/IGHM CH1，IGLC3/IGHMCH1，IGLC6/IGHM CH1.IGLC7/IGHM CH1
异二聚体化。“天然存在的异二聚体”的其他例子涵盖了与抗体可变轻链结构域(κ或λ)异二聚体化的抗体可变重链结构域、与TCRβ可变结构域异二聚体化的TCRα可变结构域、与TCRδ可变结构域异二聚体化的TCRγ可变结构域、与TCRβ恒定结构域异二聚体化的TCRα恒定结构域、与TCRδ恒定结构域异二聚体化的TCRγ恒定结构域。
本文使用的术语“同型二聚体免疫球蛋白”或“同型二聚体片段”或“同型二聚体”包括至少包含第一和第二多肽(如第一和第二结构域)的免疫球蛋白分子或部分，其中第二多肽的氨基酸序列与第一多肽相同。优选的，同型二聚体免疫球蛋白包括2条多肽链，其中第一链具有至少一个与第二链相同的结构域，且其中两条链通过其相同的结构域装配，即，相互作用。具体而言，同型二聚体免疫球蛋白包含至少2个相同的结构域，其中两个结构域通过其蛋白质-蛋白质界面装配，即，相互作用。优选的，同型二聚体免疫球蛋白片段包含至少2个不同结构域，其中第一结构域与第二结构域相同，且其中两个结构域通过其蛋白质-蛋白质界面装配，即相互作用。本文使用的“天然存在的同型二聚体”包括但不限于例如相同种类、同种型和亚类的2个CH3结构域，例如，人IGHG1 CH3/IGHG1 CH3、人IGHG2 CH3/IGHG2 CH3、人IGHG3 CH3/IGHG3 CH3、人IGHG4CH3/IGHG4 CH3、人IGHA1 CH3/IGHA1 CH3、人IGHA2 CH3/IGHA2 CH3、人IGHE CH3/IGHE CH3、人IGHEP1 CH3/IGHEP1 CH3、人IGHM CH3/IGHM CH3、人IGHD CH3/IGHD CH3、人IGHGP CH3/IGHGP CH3；相同种类、同种型和亚类的2个CH2结构域，例如，人IGHG1 CH2/IGHG1 CH2、人IGHG2 CH2/IGHG2 CH2、人IGHG3 CH2/IGHG3CH2、人IGHG4 CH2/IGHG4 CH2、人IGHA1 CH2/IGHA1 CH2、人IGHA2 CH2/IGHA2 CH2、人IGHECH2/IGHE CH2、人IGHEP1CH2/IGHEP1 CH2、人IGHM CH2/IGHM CH2、人IGHD CH2/IGHD CH2、人IGHGP CH2/IGHGP CH2；或相同种类、同种型和亚类的2个CH4结构域，例如，人IGHE CH4/IGHE CH4、人IGHM CH4/IGHM CH4。优选的“天然存在的同型二聚体”选自人IGHG1 CH3/IGHG1 CH3、人IGHG2 CH3/IGHG2 CH3、人IGHG3 CH3/IGHG3 CH3、人IGHG4 CH3/IGHG4 CH3、人IGHA1 CH3/IGHA1 CH3、人IGHA2 CH3/IGHA2 CH3、人IGHE CH3/IGHE CH3、人IGHM CH3/IGHM CH3、人IGHD CH3/IGHD CH3、人IGHGP CH3/IGHGP CH3、人IGHE CH2/IGHE CH2、人IGHMCH2/IGHM CH2、人IGHE CH4/IGHE CH4和人IGHM CH4/IGHM CH4。
大多数免疫球蛋白轻链联结成二聚体(Novotny J和Haber E,Proc Natl AcadSci U S A,82(14):4592-6(1985))。κ和λ轻链都被报道过同型二聚体化，κ和λ轻链二聚体的若干晶体结构可获得自Protein Data Bank(PDB)数据库(Roussel A等人，Eur JBiochem,260(1):192-9(1999),Huang DB等人，Proc Natl Acad Sci U S A,93(14):7017-21(1996)；www.pdb.org；Bernstein FC等人，Eur J Biochem,80(2):319-24(1977))。在本发明的范围内，IGKC结构域或IGLC结构域(IGLC1或IGLC2或IGLC3或IGLC6或IGLC7)的同型二聚体可被认为是用于蛋白质-蛋白质界面改造的亲代或供体结构域。因此，本文使用的“天然存在的同型二聚体”还包括但不限于相同种类、同种型和亚类的2个IGKC结构域，例如人IGKC/IGKC；相同种类、同种型和亚类的2个IGLC结构域，例如人IGLC1/IGLC1、人IGLC2/IGLC2、人IGLC3/IGLC3、人IGLC6/IGLC6、人IGLC7/IGLC7和IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的任何其他成对的组合。
本文使用的涉及2个结构域(例如涉及2个亲代结构域或2个供体结构域)的术语“异二聚体的形成”或“形成异二聚体”或“能够形成异二聚体”，意指第一结构域与第二结构域不同，且其中两个结构域通过其蛋白质-蛋白质界面装配，即，相互作用；其中，蛋白质-蛋白质界面通常是不同的。如果2个结构域的氨基酸序列中的至少一个氨基酸残基不同，则第一结构域与第二结构域不同。如果相比第二亲代或供体结构域的蛋白质-蛋白质界面，第一亲代或供体结构域的蛋白质-蛋白质界面具有至少一个含不同氨基酸残基的3D结构位置，则蛋白质-蛋白质界面通常是不同的。
本文使用的涉及2个结构域(例如涉及2个天然存在的亲代结构域或2个天然存在的供体结构域)的术语“天然存在的异二聚体的形成”或“形成天然存在的异二聚体”或“能够形成天然存在的异二聚体”，意指第一结构域与第二结构域不同，且其中两个结构域通过其蛋白质-蛋白质界面装配，即，相互作用；其中，蛋白质-蛋白质界面通常是不同的。如果2个结构域的氨基酸序列中的至少一个氨基酸残基不同，则第一结构域与第二结构域不同。如果相比第二亲代或供体结构域的蛋白质-蛋白质界面，第一亲代或供体结构域的蛋白质-蛋白质界面具有至少一个含不同氨基酸残基的3D结构位置，则蛋白质-蛋白质界面通常是不同的。
本文使用的涉及2个结构域(例如涉及2个亲代结构域或2个供体结构域)的术语“同型二聚体的形成”或“形成同型二聚体”或“能够形成同型二聚体”，意指第一结构域与第二结构域相同，且其中两个结构域通过其蛋白质-蛋白质界面装配，即，相互作用；其中，蛋白质-蛋白质界面通常是相同的。如果其氨基酸序列相同，则第一结构域与第二结构域相同。如果相比第二亲代或供体结构域的蛋白质-蛋白质界面，第一亲代或供体结构域的蛋白质-蛋白质界面在相同的3D结构位置具有相同的氨基酸，则蛋白质-蛋白质界面通常是相同的。
本文使用的涉及2个结构域(例如涉及2个天然存在的亲代结构域或2个天然存在的供体结构域)的术语“天然存在的同型二聚体的形成”或“形成天然存在的同型二聚体”或“能够形成天然存在的同型二聚体”，意指第一结构域与第二结构域相同，且其中两个结构域通过其蛋白质-蛋白质界面装配，即，相互作用；其中，蛋白质-蛋白质界面通常是相同的。如果其氨基酸序列相同，则第一结构域与第二结构域相同。如果相比第二亲代或供体结构域的蛋白质-蛋白质界面，第一亲代或供体结构域的蛋白质-蛋白质界面在相同的3D结构位置具有相同的氨基酸，则蛋白质-蛋白质界面通常是相同的。
本文使用的术语“结构域”包括独立的或在多结构域实体内，负责与蛋白质伙伴(即，另一个蛋白质(或其区域)或另一个结构域)选择性装配，和/或可以实施完整的生物学功能或部分功能(例如结合受体或底物)的多肽的任何区域。通常，本文中涉及的结构域不是铰链区和/或不含铰链区。结构域可以独立于蛋白链的其余部分存在。结构域形成紧密的三维结构，且是独立的稳定和折叠的。结构域的长度在约25个氨基酸至500个氨基酸长之间变动。优选的，本文使用的结构域的长度在约70个氨基酸至约120个氨基酸长之间变动。最短的结构域，如锌指，是通过金属离子或二硫桥稳定的。结构域通常形成功能单元，例如钙调蛋白的钙结合EF臂结构域。由于它们是自我稳定的，结构域可以通过遗传改造在一种蛋白质和另一种蛋白质之间“交换”，制备嵌合蛋白。免疫球蛋白由属于免疫球蛋白超家族的可变结构域和恒定结构域形成(Williams AF和Barclay AN,Annu Rev Immunol,6:381-405(1988)；Bork P等人，J Mol Biol、242(4):309-20(1994))。本文中包括的结构域是CH1和CH3，尤其是天然存在的CH1和CH3，来自IGHA1、IGHA2、IGHD、IGHE、IGHG1、IGHG2、IGHG3、IGHG4、IGHGP和IGHM；CH4，尤其是天然存在的CH4，来自IGHE和IGHM；IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7，尤其是天然存在的IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7。本文中包括的其他结构域是CH2，尤其是天然存在的CH2，来自IGHA1、IGHA2、IGHD、IGHE、IGHG1、IGHG2、IGHG3、IGHG4、IGHGP和IGHM。优选的，本文使用未糖基化的CH2结构域，其在未糖基化的形态下是本文所述的同型二聚体。在未糖基化的Fc片段中的CH2结构域比天然糖基化的Fc片段中的CH2结构域彼此更加接近。鼠未糖基化的IgG1 Fc片段的晶体结构显示，完全未糖基化的Fc片段可以采用“闭合的(closed)”结构，该结构的在第一未糖基化的免疫球蛋白链的CH2结构域的Pro 332与第二未糖基化的免疫球蛋白链的CH2结构域的Pro 332之间的距离仅为
Figure BDA0001569050590000321
(Feige MJ等人，J Mol Biol、391(3):599-608(2009))。包括在本文中的其他结构域是不具有根据本发明的改造的蛋白质-蛋白质界面的VH和VL结构域，即，除了在人源化过程中产生的回复突变外，所述结构域没有经过具体的改造来修饰其天然存在的蛋白质-蛋白质界面。本文使用的术语“天然存在的结构域”指可以在自然界中找到的结构域，即，未曾被遗传改造的。
对于包括在本发明中的所有免疫球蛋白恒定结构域，编号规则可以根据
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(
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the international ImMunoGeneTics information
Figure BDA0001569050590000333
Lefranc MP等人，Nucleic Acids Res、27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic AcidsRes,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；LefrancMP,Nucleic Acids Res.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol,29(3):185-203(2005)；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))。
对于选自IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4的所有的人CH1、CH2、CH3免疫球蛋白重链恒定结构域，编号规则可以根据“EU编号规则体系”(Edelman GM等人，Proc Natl Acad Sci US A,63(1):78-85(1969))。图19显示了对于选自IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4的所有的人CH1、CH2、CH3免疫球蛋白重链恒定结构域，IMGT特有的编号规则和EU编号规则之间的对应性。IGHG1的人CH1、铰链、CH2和CH3恒定区的完整对应性可见于IMGT数据库(
Figure BDA0001569050590000334
the international ImMunoGeneTics information
Figure BDA0001569050590000335
Lefranc MP等人，NucleicAcids Res、27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；Lefranc MP,Nucleic AcidsRes.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol,29(3):185-203(2005))；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))。
对于人κ免疫球蛋白轻链恒定结构域(IGKC)，编号规则可以根据“EU编号规则体系”(Edelman GM等人，Proc Natl Acad Sci U S A,63(1):78-85(1969))。图22显示了对于人IGKC免疫球蛋白轻链恒定结构域的IMGT特有的编号规则和EU编号规则之间的对应性。人CK结构域的完整对应性可见于IMGT数据库(
Figure BDA0001569050590000336
the internationalImMunoGeneTics information
Figure BDA0001569050590000337
Lefranc MP等人，Nucleic Acids Res、27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol,29(3):185-203(2005))；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))。
对于人λ免疫球蛋白轻链恒定结构域(IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7)，编号规则可以根据Dariavach P等人，Proc Natl Acad Sci U S A、84(24):9074-8(1987)和Frangione B等人，Proc Natl Acad Sci U S A,82(10):3415-9(1985)所述的“Kabat编号规则体系”(Kabat EA等人，Sequences of proteins of immunological interest.第5版-US Department of Health and Human Services,NIH公开n°91-3242(1991))。图23显示了对于人免疫球蛋白轻链恒定结构域(IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7)的IMGT特有的编号规则和Kabat编号规则之间的对应性。人IGLC结构域的完整对应性可见于IMGT数据库(
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the international ImMunoGeneTics information
Figure BDA0001569050590000342
Lefranc MP等人，Nucleic Acids Res、27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol,29(3):185-203(2005))；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))。
本文所述的人IGHG1免疫球蛋白重链恒定结构域的结构域边界如下：CH1[EU编号规则：118-215]、铰链γ1[EU编号规则：216-230]、CH2[EU编号规则：231-340]和CH3[EU编号规则：341-447]。本文所述的人CK结构域覆盖了第108至214位残基(EU编号规则)。本文所述的人IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7结构域覆盖了第108-215位残基(Kabat编号规则)。
本文使用的“多结构域实体”或“多结构域蛋白质”包括至少2个结构域。这2个结构域可以在1条免疫球蛋白链(1个多肽)中，或者可以在2条免疫球蛋白链(2个多肽)中。
本文使用的术语“改造的免疫球蛋白链”包括包含至少一个改造的结构域的免疫球蛋白链，所述改造的结构域具有不同于亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面。
本文使用的术语“亲代免疫球蛋白链”包括任何现有的免疫球蛋白链，尤其是天然存在的免疫球蛋白链，其可用作用于设计改造的免疫球蛋白链的亲代序列。优选的，亲代免疫球蛋白链，例如，第一改造的免疫球蛋白链的亲代免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代免疫球蛋白链和/或第三改造的免疫球蛋白链的亲代免疫球蛋白链是天然存在的免疫球蛋白链。
本文使用的术语“亲代结构域”包括任何现有的结构域，尤其是天然存在的结构域，更具体是形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体的天然存在的结构域，其可用作用于设计改造的结构域的亲代序列。第一、第二、第三和第四改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是锌指。亲代结构域通常是免疫球蛋白结构域，例如，免疫球蛋白链的结构域。优选的，亲代结构域，例如，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的其他改造的结构域的亲代结构域，和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是天然存在的结构域。
本文使用的术语“供体结构域”包括天然存在的结构域，尤其是形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体的天然存在的结构域，其可用作用于设计改造的结构域的供体序列，即，可用作用于取代亲代结构域中等价3D结构位置上的氨基酸残基的供体序列。
本文使用的术语“改造的结构域”包括从亲代结构域和供体结构域改造的结构域。
本文使用的术语“蛋白质-蛋白质界面”包括介导蛋白质结构域与另一个蛋白质结构域的氨基酸残基直接接触性关联的氨基酸残基，从而定义了3D界面。这些介导2个结构域之间的直接接触性关联的氨基酸残基包括一个伙伴中与其他伙伴的一个或多个氨基酸相互作用的任何氨基酸。本文使用的涉及相互作用的氨基酸残基的术语“相互作用的”包括一个伙伴中的任何氨基酸，所述氨基酸具有至少一个与其他伙伴的氨基酸残基的任何重原子的距离小于
Figure BDA0001569050590000361
的重原子。本文中的术语“氨基酸残基的重原子”指氨基酸残基的任何不是氢原子的原子。优选的，相互作用的氨基酸残基包括一个伙伴中的任何氨基酸，所述氨基酸具有至少一个与其他伙伴的氨基酸残基的任何重原子的距离小于
Figure BDA0001569050590000362
的重原子。最优选的，相互作用的氨基酸残基包括一个伙伴中的任何氨基酸，所述氨基酸具有至少一个与其他伙伴的氨基酸残基的任何重原子的距离小于
Figure BDA0001569050590000363
的重原子。可以通过力介导氨基酸残基的相互作用，包括范德华力、氢键、水介导的氢键、盐桥或静电力、疏水性接触、和二硫键或本领域技术人员已知的其他作用力。蛋白质-蛋白质界面比蛋白质复合物中的蛋白质表面更疏水且2倍埋入，通常在蛋白质表面折叠时装配(Bahadur RP等人，Proteins,53(3):708-19(2003))。分析47个FAB片段的实验确定的3D结构，显示恒定结构域轻链中多达50个残基和恒定结构域重链中多达52个残基构成了结构域蛋白质-蛋白质界面(Potapov V等人，J Mol Biol,342(2):665-79(2004))。CH3蛋白质界面涉及位于4个反向平行的β-链上的16个残基，这些残基形成分子间接触，并自表面埋入
Figure BDA0001569050590000364
2(Dall'Acqua W等人，Biochemistry,37(26):9266-73(1998))。
如果例如天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面，与例如天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面通过同型二聚体化相互作用，例如，如果2个供体结构域形成同型二聚体，且如果亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的所有氨基酸残基都被天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的氨基酸残基取代，则认为改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过同型二聚体化相互作用。因此，如果第一改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面的所有氨基酸残基与第二改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中相同3D位置上的氨基酸残基相同，则认为改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过同型二聚体化相互作用。
如果例如天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面，与例如天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面通过同型二聚体化相互作用，例如，如果2个供体结构域形成同型二聚体，且如果亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的所有氨基酸残基不是都被天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的氨基酸残基取代，则认为改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化相互作用。更特别的，如果例如天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面，与例如天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面通过同型二聚体化相互作用，例如，如果2个供体结构域形成同型二聚体，且如果第一亲代结构域的至少一个氨基酸残基被天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域中3D等价结构位置上的氨基酸残基取代，且其中第二亲代结构域没有被第一亲代结构域中相同3D结构位置上取代的相同氨基酸残基取代，则认为改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化相互作用。
如果例如天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面，与例如天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化相互作用，例如，如果2个供体结构域形成异二聚体，且如果亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的所有氨基酸残基或并非所有的氨基酸残基都被天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的氨基酸残基取代，则认为改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化相互作用。
因此，如果第一改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中，并非所有的氨基酸残基都与第二改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中相同3D位置上的氨基酸残基相同，则认为改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化相互作用。
术语“等价3D结构位置”或“等价3D位置”或“3D等价结构位置”或“3D等价位置”在本文中可互换的使用，包括当通过重叠2个结构域的碳α痕迹来将供体结构域的蛋白质-蛋白质界面重叠在亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面上时，占据了与亲代结构域中最近的残基距离小于
Figure BDA0001569050590000381
的3D位置的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸残基位置，其中供体结构域不同于亲代结构域。可以通过比较相同参照系中的原子坐标，实施重叠。除碳α痕迹外，还可以重叠2个结构域的骨架原子(N、C和O)。也可以基于目测选择3D结构位置(即，基于直觉的设计或基于知识的设计)，或在列举能量项后选择位置(即，合理设计)，所述能量项如范德瓦耳斯相互作用、氢键相互作用等。本文使用的结构域的3D结构包括实验解析的晶体或溶液状态的3D结构，可自蛋白质数据银行获得(www.pdb.org；Bernstein FC等人，Eur J Biochem,80(2):319-24(1977)；Berman HM等人，Nucleic Acids Res,28(1):235-42(2000))或其他数据库。此外，可以使用多种计算机方法，对从公开数据库中不可获得的或尚未被解析的结构域3D结构建模，所述计算机方法如仅需要蛋白质的氨基酸序列的Abinitio预测方法，或根据进化相关蛋白的实验结构构建蛋白质结构域的3D模型的线程(threading)和同源性建模方法(Zhang Y,Curr Opin Struct Biol,18(3):342-8(2008))。不受理论的约束，可以可选的使用
Figure BDA0001569050590000382
编号规则体系，鉴别免疫球蛋白结构域中的等价3D结构位置，因为该体系是基于对免疫球蛋白超家族结构域的3D结构的比较性分析的。
本文使用的术语“对结构域的核心完整性不必需的”包括对蛋白质结构域的正确折叠和/或疏水性核心不是必需的残基。折叠的蛋白质通常具有疏水性核心，其中侧链堆积使折叠状态稳定，且带电荷或极性侧链占据了暴露给溶剂的表面，在所述表面上它们与周围的水、离子或其他配体(如其他蛋白质或蛋白质结构域或碳水化合物)相互作用。分子内氢键的形成为蛋白质核心稳定性提供了另一个重要的贡献因素。对蛋白质结构域的核心完整性不是必需的残基包括但不限于非脯氨酸残基、不是参与分子内二硫键的半胱氨酸残基、暴露的残基，和不参与分子内氢键的残基。
本文使用的术语“蛋白质”和“多肽”具有相同的含义，并可以互换的使用。
本文使用的术语“氨基酸”和“氨基酸残基”包括天然氨基酸和非天然氨基酸。优选包括天然氨基酸。
本文使用的术语“带电荷的氨基酸”包括氨基酸赖氨酸(带正电荷)、精氨酸(带正电荷)、组氨酸(带正电荷)、天冬氨酸(带负电荷)和谷氨酸(带负电荷)。通常，本文使用的带电荷的氨基酸是赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。术语“带电荷的配对”或“氨基酸的带电荷的配对”或“带电荷的氨基酸配对”具有相同的含义，并可以互换的使用，包括1个带正电荷的氨基酸与1个带负电荷的氨基酸的任意组合。这包括下列带电荷的氨基酸配对：赖氨酸/天冬氨酸、赖氨酸/谷氨酸、精氨酸/天冬氨酸、精氨酸/谷氨酸、组氨酸/天冬氨酸和组氨酸/谷氨酸。
本文使用的术语“取代”或“氨基酸取代”或“氨基酸残基取代”指用第二氨基酸残基取代氨基酸序列中的第一氨基酸残基，而第一氨基酸残基不同于第二氨基酸残基，即，取代的氨基酸残基不同于被取代的氨基酸。
本文使用的术语“不相邻的氨基酸残基”或“不是相邻的氨基酸残基”指氨基酸序列中不是直接相连的2个氨基酸，即，它们之间具有至少一个间隔的氨基酸残基。
本文使用的术语“Fab”或“Fab区”包括包含VH、CH1、VL和轻链恒定免疫球蛋白结构域的多肽。Fab可以指分离的这一区域，或位于全长抗体或抗体片段环境中的这一区域。
本文使用的术语“Fc”或“Fc区”包括这样的多肽，所述多肽包含除第一恒定区免疫球蛋白结构域以外的抗体重链恒定区。因此，Fc指IgA、IgD和IgG的最后2恒定区免疫球蛋白结构域，IgE和IgM的最后3个恒定区免疫球蛋白结构域，和这些结构域N端的柔性铰链。对于IgA和IgM，Fc可以包括J链。对于IgG，Fc包括免疫球蛋白结构域Cgamma2和Cgamma3(C[γ]2和C[γ]3)，和Cgammal(C[γ]l)和Cgamma2(C[γ]2)之间的铰链。虽然Fc区的边界可以改变，但人IgG重链Fc区通常定义为包括残基C226或P230至其羧基端，其中编号规则是根据EU指数。Fc可以指分离的这一区域，或位于Fc多肽(例如抗体)环境中的这一区域。
本文中的术语“氨基酸修饰”包括多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失。本文中的“氨基酸取代”或“取代”意指亲代多肽序列中特定位置上的氨基酸被另一个氨基酸替代。例如，取代R94K指这样的变体多肽，其中第94位的精氨酸被赖氨酸替代。例如，94K表示第94位被赖氨酸取代。出于本文的目的，通常用斜线或逗号分开多个取代。例如，“R94K/L78V”或“R94K，L78V”指包含取代R94K和L78V的双重变体。本文使用的术语“氨基酸插入”或“插入”意指在亲代多肽序列的特定位置添加氨基酸。例如，插入-94表示在第94位的插入。本文使用的“氨基酸缺失”或“缺失”意指去除亲代多肽序列的特定位置上的氨基酸。例如，R94-表示缺失第94位的精氨酸。
术语“保守性修饰”或“保守性序列修饰”意在指代不显著影响或改变含有氨基酸序列的抗体的结合特征的氨基酸修饰。这类保守性修饰包括氨基酸取代、插入和缺失。可以通过本领域已知的标准技术将修饰导入到本发明的抗体中，所述标准技术如定点诱变和PCR-介导的诱变。
本文使用的“保守性氨基酸取代”包括这样的氨基酸取代，其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
异二聚体免疫球蛋白
在一个方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，其包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，其包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第12位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第119位被氨基酸残基取代，则第12位上取代的氨基酸残基和第119位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第13位被氨基酸残基取代，则第26位上取代的氨基酸残基和第13位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第27位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第18位被氨基酸残基取代，则第27位上取代的氨基酸残基和第18位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第79位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第84.3位被氨基酸残基取代，则第79位上取代的氨基酸残基和第84.3位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是在第11位，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是包含铰链区的结构域，则第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域在铰链区的第3位未被取代，其中，各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000431
编号规则标注的。
优选地，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，其包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，其包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第12位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第119位被氨基酸残基取代，则第12位上取代的氨基酸残基和第119位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第13位被氨基酸残基取代，则第26位上取代的氨基酸残基和第13位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第27位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第18位被氨基酸残基取代，则第27位上取代的氨基酸残基和第18位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上未取代的或取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第79位被氨基酸残基取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第84.3位被氨基酸残基取代，则第79位上未取代的或取代的氨基酸残基和第84.3位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是在第11位，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是包含铰链区的结构域，则第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域在铰链区的第3位未被取代，其中，各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000451
编号规则标注的。
甚至更优选地，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，其包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，其包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第12位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第119位被氨基酸残基取代，则第12位上取代的氨基酸残基和第119位上取代的氨基酸残基不是带电荷的氨基酸，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第13位被氨基酸残基取代，则第26位上取代的氨基酸残基和第13位上取代的氨基酸残基不是带电荷的氨基酸，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的氨基酸，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第27位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第18位被氨基酸残基取代，则第27位上取代的氨基酸残基和第18位上取代的氨基酸残基不是带电荷的氨基酸，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上取代的氨基酸残基不是带电荷的氨基酸，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第79位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第84.3位被氨基酸残基取代，则第79位上取代的氨基酸残基和第84.3位上取代的氨基酸残基不是带电荷的氨基酸，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上取代的氨基酸残基都不是带电荷的氨基酸，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是在第11位，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是包含铰链区的结构域，则第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域在铰链区的第3位未被取代，其中，各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000471
编号规则标注的。
根据
Figure BDA0001569050590000481
编号规则标注的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的IGLC结构域的第5位对应于根据Kabat编号规则的第116位。
根据
Figure BDA0001569050590000482
编号规则标注的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的IGLC结构域的第12位对应于根据Kabat编号规则的第123位。
根据
Figure BDA0001569050590000483
编号规则标注的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的IGLC结构域的第13位对应于根据Kabat编号规则的第124位。
根据
Figure BDA0001569050590000484
编号规则标注的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的IGLC结构域的第18位对应于根据Kabat编号规则的第129位。
根据
Figure BDA0001569050590000485
编号规则标注的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的IGLC结构域的第20位对应于根据Kabat编号规则的第131位。
根据
Figure BDA0001569050590000486
编号规则标注的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的IGLC结构域的第79位对应于根据Kabat编号规则的第160位。
根据
Figure BDA0001569050590000487
编号规则标注的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的IGKC结构域的第11位对应于根据EU编号规则的第122位。
根据
Figure BDA0001569050590000488
编号规则标注的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的IGKC结构域的第12位对应于根据EU编号规则的第123位。
根据
Figure BDA0001569050590000489
编号规则标注的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的IGKC结构域的第20位对应于根据EU编号规则的第131位。
根据
Figure BDA0001569050590000491
编号规则标注的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的IGKC结构域的第86位对应于根据EU编号规则的第176位。
根据
Figure BDA0001569050590000492
编号规则标注的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的CH1结构域的第20位对应于根据EU编号规则的第141位。
根据
Figure BDA0001569050590000493
编号规则标注的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的CH1结构域的第26位对应于根据EU编号规则的第147位。
根据
Figure BDA0001569050590000494
编号规则标注的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的CH1结构域的第27位对应于根据EU编号规则的第148位。
根据
Figure BDA0001569050590000495
编号规则标注的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的CH1结构域的第84.3位对应于根据EU编号规则的第176位。
根据
Figure BDA0001569050590000496
编号规则标注的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的CH1结构域的第86位对应于根据EU编号规则的第183位。
根据
Figure BDA0001569050590000497
编号规则标注的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的CH1结构域的第119位对应于根据EU编号规则的第213位。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上的取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000511
编号规则标注的。
优选地，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上未取代的或取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上的取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000521
编号规则标注的。
甚至更优选地，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的氨基酸，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上取代的氨基酸残基不是带电荷的氨基酸，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上的取代的氨基酸残基都不是带电荷的氨基酸，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000531
编号规则标注的。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上的取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000551
编号规则标注的。
优选地，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上未取代的或取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上的取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000561
编号规则标注的。
甚至更优选地，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上取代的氨基酸残基不是带电荷的氨基酸，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上的取代的氨基酸残基都不是带电荷的氨基酸，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000571
编号规则标注的。
在一些方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上的取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，优选的，不是带电荷的氨基酸，且其中，如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则在两个第86位上取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，优选的，都不是带电荷的氨基酸，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000591
编号规则标注的。
在一些方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，优选地不是带电荷的氨基酸，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上的取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，优选地不是带电荷的氨基酸，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，优选的，不是带电荷的氨基酸，且其中，如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则在两个第86位上取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，优选的，都不是带电荷的氨基酸，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000601
编号规则标注的。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第88位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、88和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、88和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、86、88和90位的另外的氨基酸残基，
其中，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第88位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第85.1和/或86位上取代的氨基酸残基相互作用，其中，各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000611
编号规则标注的。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26位和选自第3、22、27、79、81、84、85.1、86和88位的另外的位置上的的氨基酸残基，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第20位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第26位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000631
编号规则标注的。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH2结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第88位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、86和90位的另外的氨基酸残基，其中在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第88位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第85.1和/或86位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000641
编号规则标注的。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH2结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26位的氨基酸残基，和任选的位于选自第3、5、7、20、22、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第20位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第26位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000651
编号规则标注的。
在另一方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH4结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000652
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员及其供体结构域分别与天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员及其供体结构域的氨基酸序列相同。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员及其供体结构域的氨基酸序列分别不同于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员及其供体结构域。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和第四成员，特别是天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和第四成员的供体结构域不同于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员，特别是天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一、第二、第三和第四成员，特别是其供体结构域是彼此不同的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链及其改造的结构域不同于第二改造的免疫球蛋白链及其改造的结构域，即，改造的免疫球蛋白链，特别是其改造的结构域的氨基酸序列彼此不同，例如，第一和第二改造的免疫球蛋白链，特别是其改造的结构域具有在至少1个氨基酸、或至少2个氨基酸、或至少3个氨基酸、或至少4个氨基酸、或至少5个氨基酸、或至少5至10个氨基酸、或至少10至30个氨基酸上彼此不同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链和/或其改造的结构域的氨基酸序列不同于第二改造的免疫球蛋白链和/或其改造的结构域，其中，改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化相互作用。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链和/或其改造的结构域的氨基酸序列不同于第二改造的免疫球蛋白链和/或其改造的结构域，其中，改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过同型二聚体化相互作用。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中至少一个取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中至少一个取代的氨基酸残基相互作用。在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中，优选至少2个，更优选至少3个，最优选至少4个，特别是至少5个取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中至少一个取代的氨基酸残基相互作用。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的至少1个，优选至少2个，更优选至少3个，最优选至少4个，特别是至少5个氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的不同。
在一些实施方案中，每个第一和第二改造的免疫球蛋白链及其改造的结构域的氨基酸序列都与天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员及其供体结构域不同。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的氨基酸序列不同于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员及其供体结构域。在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的氨基酸序列不同于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员及其供体结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面没有被带电荷的氨基酸取代，优选没有被带电荷的配对取代。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面没有被26A和/或26E和/或86T取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面没有被20T和/或26K和/或85.1A和/或88T取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000681
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过同型二聚体化与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用，其中第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的氨基酸序列不同。
在一些实施方案中，改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域在结构域的环区域未被取代。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的至少一个3D结构位置与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面的相同3D结构位置相比，其氨基酸残基是不同的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域不同于第三改造的免疫球蛋白链及其改造的结构域，即，改造的免疫球蛋白链，特别是其改造的结构域的氨基酸序列彼此不同，例如，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链和/或第三改造的免疫球蛋白链，特别是第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域具有的氨基酸序列在至少一个氨基酸、或至少2个氨基酸、或至少3个氨基酸、或至少4个氨基酸、或至少5个氨基酸、或至少5至10个氨基酸、或至少10至30个氨基酸上是彼此不同的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的氨基酸序列与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域不同，其中，改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化相互作用。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的氨基酸序列与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域不同，其中，改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过同型二聚体化相互作用。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员及其供体结构域的氨基酸序列分别不同于天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员及其供体结构域。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员及其供体结构域的氨基酸序列分别与天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员及其供体结构域相同。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域各自的氨基酸序列都与天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和第四成员及其供体结构域不同。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的氨基酸序列与天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员及其供体结构域不同。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域与天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员及其供体结构域的氨基酸序列不同。
在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链具有相同的亲代结构域。在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链具有不同的亲代结构域。在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链具有这样的亲代结构域，所述亲代结构域具有氨基酸序列在1个氨基酸、或2个氨基酸、或3个氨基酸、或4个氨基酸、或5个氨基酸、或5至10个氨基酸、或10至30个氨基酸，优选的，至少1个氨基酸、或至少2个氨基酸、或至少3个氨基酸、或至少4个氨基酸、或至少5个氨基酸、或至少5至10个氨基酸、或至少10至30个氨基酸上彼此不同。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是相同的。在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是不同的。在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的1个氨基酸、或2个氨基酸、或3个氨基酸、或4个氨基酸、或5个氨基酸、或5至10个氨基酸、或10至30个氨基酸，优选的，至少1个氨基酸、或至少2个氨基酸、或至少3个氨基酸、或至少4个氨基酸、或至少5个氨基酸、或至少5至10个氨基酸、或至少10至30个氨基酸彼此不同。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域，特别是第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域，所述结构域选自CH1、CH2、CH3、CH4、IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7。CH1、CH3可来自IGHA1、IGHA2、IGHD、IGHE、IGHG1、IGHG2、IGHG3、IGHG4、IGHGP和IGHM。CH4可来自IGHE和IGHM。CH2可来自IGHA1、IGHA2、IGHD、IGHE、IGHG1、IGHG2、IGHG3、IGHG4、IGHGP和IGHM。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域，特别是第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自CH1结构域、CH4结构域、IGKC结构域、IGLC1结构域、IGLC2结构域、IGLC3结构域、IGLC6结构域和IGLC7结构域的结构域，优选选自CH1结构域、IGKC结构域、IGLC1结构域、IGLC2结构域、IGLC3结构域、IGLC6结构域和IGLC7结构域。
通常，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是天然存在的结构域。通常，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域来自人，例如天然存在的人结构域。优选的，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域来自人和相同的同种型、种类和亚类。在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的优选的亲代结构域，特别是第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域，更优选是人CH3结构域，特别是IGHG1的人CH3结构域。同等优选的，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域来自不同同种型。在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGHG1的CH3结构域，优选IGHG1的人CH3结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGHG3的CH3结构域，优选IGHG3的人CH3结构域。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域，特别是第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH4结构域，更优选是人CH4结构域，特别是IGHM的人CH4结构域或IGHE的人CH4结构域。
同等地，优选的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是轻链恒定结构域，如IGLC结构域或IGKC结构域。平等地，优选的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是轻链恒定结构域，如IGLC结构域或IGKC结构域，且优选的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域。更优选的是选自IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4的人CH1结构域，特别是IGHG1的人CH1结构域。最优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，或是IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域；或第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域或是IGKC结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域选自CH1、CH2、CH3、CH4、IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7。通常，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的亲代结构域是天然存在的结构域。通常，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域来自人。优选的，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域来自人且来自相同的同种型、种类和亚类。第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的优选的亲代结构域，和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是CH3结构域，更优选的是人CH3结构域，特别是IGHG1的人CH3结构域。同等优选的，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域来自不同同种型。在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是IGHG1的CH3结构域，优选IGHG1的人CH3结构域，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGHG3的CH3结构域，优选IGHG3的人CH3结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是CH4结构域，更优选是人CH4结构域，特别是IGHM的人CH4结构域或IGHE的人CH4结构域。同等优选的，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是轻链恒定结构域，如IGLC结构域或IGKC结构域。同等地，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白的另外的改造的结构域的优选的亲代结构域是轻链恒定结构域，如IGLC结构域或IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的优选的亲代结构域是CH1结构域。更优选的是选自IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4的人CH1结构域，特别是IGHG1的人CH1结构域。
来自相同种类、同种型和亚类的亲代结构域(例如IGHG1的人CH3结构域)作为例如第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域，形成同型二聚体。在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域形成同型二聚体，尤其是天然存在的同型二聚体。
在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域形成异二聚体，尤其是天然存在的异二聚体，例如，CH1结构域和IGKC结构域，或CH1结构域和IGLC结构域。
在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域形成异二聚体例如，IGHG1的CH3结构域和IGHG3的CH3结构域。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域形成同型二聚体，尤其是天然存在的同型二聚体。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域形成异二聚体，尤其是天然存在的异二聚体，例如，CH1结构域和IGKC结构域，或CH1结构域和IGLC结构域。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域形成异二聚体，例如，IGHG1的CH3结构域和IGHG3的CH3结构域。
在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域。
在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH3结构域。
在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是VH结构域且不是VL结构域。
在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不来自IgG2。
在一些实施方案中，优选的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且优选的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域；或优选的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且优选的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域。甚至更优选的，优选的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是人CH1结构域，且优选的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是人IGKC结构域；或优选的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是人IGKC结构域，且优选的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是人CH1结构域，更优选是选自IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4的人CH1结构域，特别是IGHG1的人CH1结构域。
在一些实施方案中，优选的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且优选的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域；或优选的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且优选的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域。甚至更优选的，优选的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是人CH1结构域，且优选的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是人IGLC结构域；或优选的第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是人IGLC结构域，且优选的第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是人CH1结构域，更优选是选自IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4的人CH1结构域，特别是IGHG1的人CH1结构域。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的优选的亲代结构域是CH1结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的优选的亲代结构域是IGKC结构域；或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的优选的亲代结构域是IGKC结构域，和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的优选的亲代结构域。甚至更优选的，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的优选的亲代结构域是人CH1结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的优选的亲代结构域是人IGKC结构域；或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的优选的亲代结构域是人IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的优选的亲代结构域是人CH1结构域，更优选是选自IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4的人CH1结构域，特别是IGHG1的人CH1结构域。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的优选的亲代结构域是CH1结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的优选的亲代结构域是IGLC结构域；或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的优选的亲代结构域是IGLC结构域，和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的优选的亲代结构域。甚至更优选的，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的优选的亲代结构域是人CH1结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的优选的亲代结构域是人IGLC结构域；或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的优选的亲代结构域是人IGLC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的优选的亲代结构域是人CH1结构域。更优选的是选自IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4的人CH1结构域，特别是IGHG1的人CH1结构域。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域，特别是第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域，是CH3结构域，优选是相同种类、同种型和亚类的CH3结构域，且第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是轻链恒定结构域，如IGLC结构域或IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是轻链恒定结构域，如IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是CH3结构域，优选是相同种类、同种型和亚类的CH3结构域。
在一些实施方案中，例如，如果异二聚体免疫球蛋白是F(ab’)2，则第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是轻链恒定结构域，如IGLC结构域或IGKC结构域；且第一改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是轻链恒定结构域，如IGLC结构域或IGKC结构域；其中第一改造的免疫球蛋白链包含在改造的结构域的亲代结构域和另外的改造的结构域的亲代结构域之间的铰链区。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的氨基酸残基是对结构域的核心完整性不必需的氨基酸，优选的，其中用于第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的取代的来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的氨基酸残基是对结构域的核心完整性不必需的氨基酸。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，或包含在选自第85.1和86位的位置上的氨基酸残基取代，更优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、85.1和88位的位置上的氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，或包含在选自第85.1和86位的位置上的氨基酸残基取代，特别是第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在第88位上的氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代或包含在选自第85.1和86位的位置上的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000771
编号规则标注的。
因此在一些方面，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、85.1、86、88位的位置上的氨基酸残基取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、85.1、86、88位的位置上的氨基酸残基取代，其中，如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则在2个第86位上取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，优选地不是带电荷的氨基酸，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000781
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在第20位上的氨基酸残基取代，选自20A、20E、20K、20N、20Q、20S、20T、20V和20W，和/或其保守性氨基酸取代，优选是选自20A、20N、20Q、20S、20T、20V和20W，和/或其保守性氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000782
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在第22位上的氨基酸残基取代，选自22A、22G、22I、22L、22T和22V，和/或其保守性氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000783
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在第85.1位上的氨基酸残基取代，选自85.1A、85.1C、85.1F、85.1H、85.1K、85.1M、85.1N、85.1R、85.1S、85.1T和85.1W，和/或其保守性氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000791
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在第86位上的氨基酸残基取代，选自86F、86H、86I、86T、86Q、86S、86V、86W、86Y，和/或其保守性氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000792
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在第88位上的氨基酸残基取代，选自88E、88I、88K、88L、88Q、88R、88T、88V、88W、88Y，和/或其保守性氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000793
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在第22位上的氨基酸残基取代，选自22A、22G、22I、22L、22T和22V，和/或其保守性氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000794
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在第26位上的氨基酸残基取代，选自26K、26Q、26R、26S、26T和26V，和/或其保守性氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000801
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在第85.1位上的氨基酸残基取代，选自85.1A、85.1C、85.1F、85.1H、85.1K、85.1M、85.1N、85.1R、85.1S、85.1T和85.1W，和/或其保守性氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000802
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在第86位上的氨基酸残基取代，选自86F、86H、86I、86T、86Q、86S、86V、86W、86Y，和/或其保守性氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000803
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在第88位上的氨基酸残基取代，选自88E、88I、88K、88L、88Q、88R、88T、88V、88W、88Y，和/或其保守性氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000811
编号规则标注的。
在一些实施方案中，如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代是在第88位，则在第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中，与第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第88位的取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基是第85.1和/或86位，或者如果第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代是在第88位，则在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中，与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第88位的取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基是第85.1和/或86位，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000812
编号规则标注的。
在一些实施方案中，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代的氨基酸残基包括第88位的氨基酸残基，且在第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位的氨基酸残基，优选第85.1和86位的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000813
编号规则标注的。通常，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第88位的取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第85.1和/或86位的取代的氨基酸残基彼此相互作用，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000814
编号规则标注的。
在一些实施方案中，如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代是在第85.1位，则在第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中，与第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第85.1位的取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基是第86位，或者如果第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代是在第85.1位，则在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中，与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第85.1位的取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基是第86位，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000815
编号规则标注的。
在一些实施方案中，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代的氨基酸残基包括第85.1位的氨基酸残基，且在第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代的氨基酸残基包括第86位的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000821
编号规则标注的。通常，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第85.1位的取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第86位的取代的氨基酸残基彼此相互作用，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000822
编号规则标注的。
在一些实施方案中，如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代是在第22位，则在第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中，与第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第22位的取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基是第22和/或86位，或者如果第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代是在第22位，则在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中，与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第22位的取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基是第22和/或86位，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000823
编号规则标注的。
在一些实施方案中，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代的氨基酸残基包括第22位的氨基酸残基，且在第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代的氨基酸残基包括第22和/或86位的氨基酸残基，优选第22和86位的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000824
编号规则标注的。通常，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第22位的取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第22和/或86位的取代的氨基酸残基彼此相互作用，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000825
编号规则标注的。
在一些实施方案中，如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代是在第20位，则在第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中，与第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第20位的取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基是第26位，或者如果第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代是在第20位，则在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中，与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第20位的取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基是第26位，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000831
编号规则标注的。
在一些实施方案中，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，且在第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代的氨基酸残基包括第26位的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000832
编号规则标注的。通常，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第20位的取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第26位的取代的氨基酸残基彼此相互作用，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000833
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHA1 CH2或人IGHA2 CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000834
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHA1 CH2或人IGHA2 CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000835
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHA1 CH2或人IGHA2 CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000841
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHD CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88R及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86H及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000842
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHD CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86H及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000843
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHD CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86H及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000844
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHE CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88E及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86Q及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000845
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHE CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86Q及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000851
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHE CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86Q及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22L及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000852
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHG1 CH2或人IGHG2 CH2或人IGHG3 CH2或人IGHG4 CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，和/或85.1R及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000853
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHG1 CH2或人IGHG2 CH2或人IGHG3 CH2或人IGHG4 CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1R及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000854
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHG1 CH2或人IGHG2 CH2或人IGHG3 CH2或人IGHG4 CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000855
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHP CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，和/或85.1H及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000861
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHP CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1H及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000862
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHP CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000863
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHM CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，和/或85.1K及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000864
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHM CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1K及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000865
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHM CH2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22I及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000874
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHA1 CH3或人IGHA2 CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88I及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，和/或85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000871
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHA1 CH3或人IGHA2 CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000872
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHA1 CH3或人IGHA2 CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000873
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHD CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86W及其保守的氨基酸取代，和/或85.1W及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000881
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHD CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86W及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1W及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000882
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHD CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86W及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22L及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000883
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHE CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，和/或85.1T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000884
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHE CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000885
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHE CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000891
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHG1 CH3或人IGHG2 CH3或人IGHG3 CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88K及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86Y及其保守的氨基酸取代，和/或85.1F及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000892
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHG1 CH3或人IGHG2 CH3或人IGHG3 CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86Y及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1F及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000893
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHG1 CH3或人IGHG2 CH3或人IGHG3 CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86Y及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000894
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHG4 CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88R及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86Y及其保守的氨基酸取代，和/或85.1F及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000901
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHG4 CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86Y及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1F及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000902
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHG4 CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86Y及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000903
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHP CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88K及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86Y及其保守的氨基酸取代，和/或85.1F及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000904
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHP CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86Y及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1F及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000905
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHP CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86Y及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000911
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHM CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88E及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000912
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHM CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000913
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHM CH3，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000914
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHE CH4，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88R及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86F及其保守的氨基酸取代，和/或85.1F及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000915
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHE CH4，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86F及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1F及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000921
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHE CH4，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86F及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000922
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHM CH4，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88I及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86H及其保守的氨基酸取代，和/或85.1F及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000923
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHM CH4，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86H及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1F及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000924
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGHM CH4，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86H及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000925
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000931
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000932
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000933
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88Y及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1A及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000934
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000935
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000941
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHA1 CH1或人IGHA2 CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88Q及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000942
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHA1 CH1或人IGHA2 CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000943
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHA1 CH1或人IGHA2 CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000944
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHD CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88Q及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000951
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHD CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000952
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHD CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000953
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHE CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88L及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000954
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHE CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86I及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000961
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHE CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86I及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000962
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHG1 CH1或人IGHG2 CH1或人IGHG3 CH1或人IGHG4CH1或人IGHGP CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000963
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHG1 CH1或人IGHG2 CH1或人IGHG3 CH1或人IGHG4 CH1或人IGHGP CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000964
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHG1 CH1或人IGHG2 CH1或人IGHG3 CH1或人IGHG4 CH1或人IGHGP CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000971
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHM CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88Q及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000972
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHM CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000973
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHM CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGKC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000974
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHA1 CH1或人IGHA2 CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88Q及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000981
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHA1 CH1或人IGHA2 CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000982
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHA1 CH1或人IGHA2 CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000983
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHD CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88Q及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000984
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHD CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000991
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHD CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000992
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHE CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88L及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000993
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHE CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86I及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590000994
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHE CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86I及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001001
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHG1 CH1或人IGHG2 CH1或人IGHG3 CH1或人IGHG4 CH1或人IGHGP CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001002
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHG1 CH1或人IGHG2 CH1或人IGHG3 CH1或人IGHG4 CH1或人IGHGP CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001003
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHG1 CH1或人IGHG2 CH1或人IGHG3 CH1或人IGHG4 CH1或人IGHGP CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001004
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHM CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88Q及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001011
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHM CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001012
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGHM CH1，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001013
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHA1 CH1或人IGHA2CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001021
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHA1 CH1或人IGHA2CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001022
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHA1 CH1或人IGHA2CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001023
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHD CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1M及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001024
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHD CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1M及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001025
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHD CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001031
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHE CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86I及其保守的氨基酸取代，和/或85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001032
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHE CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001033
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHE CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22G及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001034
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHG1 CH1或人IGHG2CH1或人IGHG3 CH1或人IGHG4 CH1或人IGHGP CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001041
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHG1 CH1或人IGHG2CH1或人IGHG3 CH1或人IGHG4 CH1或人IGHGP CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001042
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHG1 CH1或人IGHG2CH1或人IGHG3 CH1或人IGHG4 CH1或人IGHGP CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22G及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001043
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHM CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88T及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，和/或85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001044
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHM CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001051
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGKC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHM CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22G及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001052
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHA1 CH1或人IGHA2 CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88Y及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001053
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHA1 CH1或人IGHA2 CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001054
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHA1 CH1或人IGHA2 CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001061
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHD CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88Y及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1M及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001062
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHD CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1M及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001063
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHD CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001064
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHE CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88Y及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86I及其保守的氨基酸取代，和/或85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001071
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHE CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001072
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHE CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22G及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001073
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHG1 CH1或人IGHG2 CH1或人IGHG3 CH1或人IGHG4 CH1或人IGHGPCH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88Y及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001074
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHG1 CH1或人IGHG2 CH1或人IGHG3 CH1或人IGHG4 CH1或人IGHGPCH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001081
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHG1 CH1或人IGHG2 CH1或人IGHG3 CH1或人IGHG4 CH1或人IGHGPCH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22G及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001082
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHM CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88Y及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86T及其保守的氨基酸取代，和/或85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001083
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHM CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001091
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人IGLC1或人IGLC2或人IGLC3或人IGLC6或人IGLC7，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人IGHM CH1，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22G及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001092
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人TRAC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人TRBC1或人TRBC2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88W及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，和/或85.1C或85.1A或85.1C及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001093
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人TRAC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人TRBC1或人TRBC2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1C或85.1A或85.1C及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001094
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人TRAC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人TRBC1或人TRBC2，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001101
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人TRBC1或人TRBC2，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人TRAC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88R及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，和/或85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001102
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人TRBC1或人TRBC2，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人TRAC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001103
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人TRBC1或人TRBC2，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人TRAC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86S及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001104
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人TRDC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人TRGC1或人TRGC2(2x)或人TRGC2(3x)，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88L及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86F及其保守的氨基酸取代，和/或85.1M及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001111
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人TRDC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人TRGC1或人TRGC2(2x)或人TRGC2(3x)，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1M及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001112
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人TRDC，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人TRGC1或人TRGC2(2x)或人TRGC2(3x)，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22L及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001113
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人TRGC1或人TRGC2(2x)或人TRGC2(3x)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人TRDC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括88W及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86V及其保守的氨基酸取代，和/或85.1N及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001114
编号规则标注的。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人TRGC1或人TRGC2(2x)或人TRGC2(3x)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人TRDC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86F及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括85.1N及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001121
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是人TRGC1或人TRGC2(2x)或人TRGC2(3x)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是人TRDC，其中第一免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括86F及其保守的氨基酸取代，且第二免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸取代包括22A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001122
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自20V、20T、20A、20N、20Q、20E、20K、20W、20S、22A、22G、22T、22L、22I、22V、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1W、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86T、86H、86Q、86V、86W、86Y、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88T、88I、88K、88Y和88W的氨基酸残基取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自22A、22G、22T、22L、22I、22V、26Q、26T、26K、26V、26S、26R、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1W、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86T、86H、86Q、86V、86W、86Y、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88I、88T、88K、88Y和88W的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001123
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自20K、20N、20T、20S、22A、22L、22V、22T、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86F、86Y、86V、88W、88R、88L和88K的氨基酸残基取代和/或其保守性氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自22A、22L、22V、22T、26E、26T、26K、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86F、86Y、86V、88W、88R、88L和88K的氨基酸残基取代和/或其保守性氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001131
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自20K、20N、20T、20S、22A、22L、22V、22T、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86T、86F、86Y、86V、88W、88R、88L、88I和88K的氨基酸残基取代和/或其保守性氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自22A、22L、22V、22T、26E、26T、26K、26R、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86T、86F、86Y、86V、88W、88R、88L、88I和88K的氨基酸残基取代和/或其保守性氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001132
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第3、5、7、11、12、13、18、26、27、79、81、83、84、84.2和90位的位置上的另外的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001141
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第3、5、7、11、12、13、18、20、27、79、81、83、84、84.2和90位的位置上的另外的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001142
编号规则标注的。
优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86、88位的位置上的氨基酸残基取代，和在选自第26、79和90位的位置上的另外的氨基酸残基取代；且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86、88位的位置上的氨基酸残基取代，和在选自第3、5、7、20、81、84、84.2和90位的位置上的另外的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001143
编号规则标注的。
优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86、88位的位置上的氨基酸残基取代，和在选自第3、5、26、27、81、83和84位的位置上的另外的氨基酸残基取代；且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、85.1、86、88位的位置上的氨基酸残基取代，和在选自第7、20、27、79、81、84.2和90位的位置上的另外的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001144
编号规则标注的。
优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86、88位的位置上的氨基酸残基取代，和在选自第3、5、7、11、12、13、18、26、79、81、83和84.2位的位置上的另外的氨基酸残基取代；且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86、88位的位置上的氨基酸残基取代，和在选自第3、5、7、11、12、13、18、20、79、81、83和84.2位的位置上的另外的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001151
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自CH1结构域、CH4结构域、IGKC结构域、IGLC1结构域、IGLC2结构域、IGLC3结构域、IGLC6结构域和IGLC7结构域的结构域，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001152
编号规则标注的。
优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域选自IGKC结构域、IGLC1结构域、IGLC2结构域、IGLC3结构域、IGLC6结构域和IGLC7结构域。同等优选的，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH4结构域，特别是相同同种型、种类和亚类的CH4结构域。
优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域；或第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域。
优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域；或第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域。
在一些实施方案中，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自CH1结构域、CH4结构域、IGKC结构域、IGLC1结构域、IGLC2结构域、IGLC3结构域、IGLC6结构域和IGLC7结构域的结构域，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001161
编号规则标注的。
在一些实施方案中，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第12位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第119位被氨基酸残基取代，则第12位上取代的氨基酸残基和第119位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第13位被氨基酸残基取代，则第26位上取代的氨基酸残基和第13位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第27位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第18位被氨基酸残基取代，则第27位上取代的氨基酸残基和第18位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第79位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第84.3位被氨基酸残基取代，则第79位上取代的氨基酸残基和第84.3位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是在第11位，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是包含铰链区的结构域，则第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域在铰链区的第3位未被取代，
第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自CH1结构域、CH4结构域、IGKC结构域、IGLC1结构域、IGLC2结构域、IGLC3结构域、IGLC6结构域和IGLC7结构域的结构域和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第3、5、7、11、12、13、18、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、85.1、86、88和90位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001181
编号规则标注的。
优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、26、79、85.1、86、88和90位的位置上的氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第3、5、7、20、22、26、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的位置上的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001182
编号规则标注的。
优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第3、5、20、22、26、27、81、83、84、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第7、20、22、27、79、81、84.2、85.1、86、88和90位的位置上的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001183
编号规则标注的。
优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第3、5、7、11、12、13、18、20、22、26、79、81、83、84.2、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第3、5、7、11、12、13、18、20、22、26、79、81、83、84.2、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001184
编号规则标注的。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员选自TCR恒定结构域家族。在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和第四成员选自TCR恒定结构域家族。
优选的，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)。同等地，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域可以是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域可以是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)。
优选的，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)。同等地，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域可以是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域可以是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)。
在另一实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，其中SEQ ID NO：2的第75位氨基酸半胱氨酸(C)被丙氨酸(A)或丝氨酸(S)取代，优选被丙氨酸(A)取代。
在另一实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，其中SEQ ID NO：2的第75位氨基酸半胱氨酸(C)被丙氨酸(A)或丝氨酸(S)取代，优选被丙氨酸(A)取代。
在另一实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)，或其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)。
在另一实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和/或第二成员的供体结构域是IgA1 CH3结构域，优选IGHA1 CH3结构域，更优选人IGHA1 CH3结构域(SEQ ID NO：96)。在另一实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和/或第二成员的供体结构域是IgA2 CH3结构域，优选IGHA2 CH3结构域，更优选人IGHA2 CH3结构域(SEQ ID NO：97)。
在另一实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和/或第四成员的供体结构域是IgA1 CH3结构域，优选IGHA1 CH3结构域，更优选人IGHA1 CH3结构域(SEQ ID NO：96)。在另一实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和/或第四成员的供体结构域是IgA2 CH3结构域，优选IGHA2 CH3结构域，更优选人IGHA2 CH3结构域(SEQ ID NO：97)。
如果第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域，或第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域，和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是来自不同于IGHA1或IGHA2的同种型的CH3结构域，例如，IGHG1或IGHG2或IGHG3或IGHG4 CH3结构域，或优选IGHG1 CH3，更优选人IGHG1CH3，则作为供体结构域的IGHA1 CH3结构域或IGHA2 CH3结构域是特别有用的。
在另一实施方案中，所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的在等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，并且此外，所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面中的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，并且其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，并且此外，所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面中的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代。
在亲代结构域来自IgG1的情况下，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域可以选自例如，IgA、IgM或IgE的CH3结构域，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域可以选自例如IgM或IgE的CH4结构域，或IgG2、IgG3或IgG4的CH3结构域，天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域可以选自例如IgA、IgM或IgE的CH3结构域，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域可以选自例如IgM或IgE的CH4结构域，或IgG2、IgG3或IgG4的CH3结构域。通常，所选定的天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是相同的，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是相同的。
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域形成异二聚体，尤其是天然存在的异二聚体，或者尤其是CH1结构域和IGKC结构域，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白的第二成员的供体结构域可以是形成同型二聚体的结构域，通常是相同同种型、种类和亚类的结构域，优选CH3结构域，更优选人CH3结构域，甚至更优选IgG1 CH3结构域，特别是人IgG1CH3结构域。同等优选的是IgA1 CH3结构域或IgA2 CH3结构域，优选人IGHA1 CH3结构域或人IGHA2 CH3结构域。
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域形成异二聚体，尤其是天然存在的异二聚体，或者尤其是CH1结构域和IGKC结构域，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白的第二成员的供体结构域可以是形成异二聚体的结构域，优选TCR恒定结构域家族的结构域，更优选TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)和TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，或TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)和TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)。
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域形成同型二聚体，尤其是天然存在的同型二聚体，或者尤其是相同同种型、种类和亚类的结构域，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白的第二成员的供体结构域是形成异二聚体的结构域，优选TCR恒定结构域家族的结构域，更优选TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)和TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，或TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)和TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)。
如果第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域形成异二聚体，尤其是天然存在的异二聚体，或者尤其是CH1结构域和IGKC结构域，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白的第四成员的供体结构域优选是形成同型二聚体的结构域，通常是相同同种型、种类和亚类的结构域，优选CH3结构域，更优选人CH3结构域，甚至更优选IgG1 CH3结构域，特别是人IgG1 CH3结构域。
如果第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域形成同型二聚体，尤其是天然存在的同型二聚体，或者尤其是相同同种型、种类和亚类的结构域，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白的第四成员的供体结构域优选是形成异二聚体的结构域，优选TCR恒定结构域家族的结构域，更优选TCR恒定结构域α(SEQID NO：1)和TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，或TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)和TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)。
如果第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域形成异二聚体，尤其是天然存在的异二聚体，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白的第四成员的供体结构域是形成异二聚体的结构域，优选TCR恒定结构域家族的结构域，更优选TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)和TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，或TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)和TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)或TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)或TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和第四成员的供体结构域是IgG1CH3结构域(SEQ ID NO：47)，其条件是如果天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，以及如果天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)。
在一些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)或TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)或TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和第四成员的供体结构域是人IGHA1 CH3结构域(SEQ ID NO：96)或人IGHA2 CH3结构域(SEQ ID NO：97)，其条件是如果天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，以及如果天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQID NO：33)。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过同型二聚体化与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第114、116、118、123、124、131、133、137、138、160、162、164、165、167、174、176、178和180位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第114、116、118、122、131、133、137、138、160、162、165、167、174、176、178和180位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据Kabat编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S131V、S131T、S131A、S131N、S131Q、S131E、S131K、S131W、V133A、V133G、V133T、V133L、V133I、N137Q、N137T、N137K、N137V、N137S、N137R、N137E、S174T、S174M、S174A、S174R、S174H、S174K、S174W、S174F、S174C、S174N、S176I、S176T、S176H、S176Q、S176V、S176W、S176Y、S176F、T178Q、T178L、T178V、T178R、T178E、T178I、T178K、T178Y和T178W的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S114E、S114K、S14Q、F116A、F116T、F116Y、F118M、F118L、E123D、Q124E、S131K、S131T、S131N、V133L、V133A、V133T、N137T、N137E、N137K、N138K、N138E、Q160Y、Q160F、Q160K、S162A、S162G、S162D、S162T、T164V、T164M、E165L、D167E、D167S、S174A、S174M、S174N、S174F、S176F、S176V、S176Y、T178W、T178R、T178L、T178K、T180N、T180R和T180K的氨基酸残基，或选自S114E、S114K、S114Q、F116A、F116T、F116Y、F118M、F118L、E123D、Q124E、S131K、S131T、S131N、V133L、V133A、V133T、N137T、N137E、N137K、N138K、N138E、Q160Y、Q160F、Q160K、S162A、S162G、S162D、S162T、T164V、T164M、E165L、D167E、D167S、S174A、S174M、S174N、S174F、S176F、S176V、S176Y、T178W、T178R、T178L、T178K、T180N、T180R和T180K的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自131V、131A、131N、131Q、131E、131K、131W、131S、133A、133G、133T、133L、133I、137Q、137T、137K、137V、137R、137N、137E、174T、174M、174S、174R、174H、174K、174W、174F、174C、174N、176I、176T、176H、176Q、176W、176Y、176V、176F、178Q、178L、178V、178R、178E、178T、178I、178K、178E和178W的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据Kabat编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自114E、114K、114Q、116A、116Y、118M、118L、122D、131K、131N、133A、133L、133T、137T、137E、137K、138E、138K、160Y、160F、160K、162D、162A、162G、165L、165M、167E、167S、174N、174M、174F、174S、176V、176F、176Y、178W、178R、178L、178K、180N、180R和180K的氨基酸残基，或选自114E、114K、114Q、116A、116Y、118M、118L、122D、131K、131N、133A、133L、133T、137T、137E、137K、138E、138K、160Y、160F、160K、162D、162A、162G、165L、165M、167E、167S、174N、174M、174F、174S、176V、176F、176Y、178W、178R、178L、178K、180N、180R和180K的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据Kabat编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第124、126、128、133、134、139、141、143、147、148、168、170、173、175、181、183、185和187位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自141V、141T、141N、141Q、141E、141K、141W、141S、143A、143T、143L、143I、143V、147Q、147T、147V、147S、147R、147N、147E、181T、181M、181A、181R、181H、181K、181W、181F、181C、181N、183I、183H、183Q、183V、183T、183W、183Y、183F、185Q、185L、185R、185E、185I、185T、185K、185Y和185W的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S124E、S124K、S124Q、F126A、F126T、F126Y、L128F、L128M、K133D、S134E、T139Q、A141K、A141T、A141N、A141S、G143V、G143A、G143L、G143T、K147T、K147E、D148E、D148K、H168Y、H168F、H168K、F170D、F170A、F170G、F170T、V173L、V173M、Q175E、Q175S、Q175D、S181A、S181N、S181M、S181F、S183V、S183F、S183Y、V185W、V185R、V185L、V185K、T187N、T187K和T187R的氨基酸残基，或选自S124E、S124K、S124Q、F126A、F126T、F126Y、L128F、L128M、K133D、S134E、T139Q、A141K、A141T、A141N、A141S、G143V、G143A、G143L、G143T、K147T、K147E、D148E、D148K、H168Y、H168F、H168K、F170D、F170A、F170G、F170T、V173L、V173M、Q175E、Q175S、Q175D、S181A、S181N、S181M、S181F、S183V、S183F、S183Y、V185W、V185R、V185L、V185K、T187N、T187K和T187R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
根据Kabat编号规则，在作为亲代结构域的IGLC结构域的蛋白质-蛋白质界面中的第114、116、118、122、131、133、137、138、160、162、165、167、174、176、178和180位按相同的顺序对应于根据
Figure BDA0001569050590001281
编号规则标注的第3、5、7、11、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位。
根据EU编号规则，在作为亲代结构域的IGKC结构域的蛋白质-蛋白质界面中的第114、116、118、123、124、131、133、137、138、160、162、164、165、167、174、176、178和180位按相同的顺序对应于根据
Figure BDA0001569050590001282
编号规则标注的第3、5、7、12、13、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、85.1、86、88和90位。
根据EU编号规则，在作为亲代结构域的CH1结构域的蛋白质-蛋白质界面中的第124、126、128、133、134、139、141、143、147、148、168、170、173、175、181、183、185和187位按相同的顺序对应于根据
Figure BDA0001569050590001283
编号规则标注的第3、5、7、12、13、18、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位。
根据EU编号规则，在作为亲代结构域的CH4结构域的蛋白质-蛋白质界面中的第124、126、128、133、134、139、141、143、147、148、168、170、173、175、181、183、185和187位按相同的顺序对应于根据
Figure BDA0001569050590001284
编号规则标注的第3、5、7、12、13、18、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位。
因此，同等地，在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第3、5、7、12、13、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、85.1、86、88和90位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001291
编号规则标注的。
因此，同等地，在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第3、5、7、11、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001292
编号规则标注的。
因此，同等地，在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第3、5、7、12、13、18、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001293
编号规则标注的。
因此，同等地，在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是CH4结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第3、5、7、12、13、18、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001294
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第131、137、160、176、178和180位的位置上的氨基酸残基，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第124、126、128、141、143、147、170、173、175、181、185和187位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第178位的氨基酸残基、或包括T178W、或包括T178W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第131、137、160、176和180位的另外的氨基酸残基，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第181位的氨基酸残基、或包括S181A、或包括S181A及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第124、126、128、141、143、147、170、173、175、185和187位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S131K、N137T、Q160Y、S176V、T178W和T180N的氨基酸残基，或包括选自S131K、N137T、Q160Y、S176V、T178W和T180N的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S124E、F126A、L128F、A141T、G143V、K147T、F170D、V173L、Q175E、S181A、V185R的氨基酸残基，或包括选自S124E、F126A、L128F、A141T、G143V、K147T、F170D、V173L、Q175E、S181A、V185R和T187R的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第114、116、131、137、162、165、167、174、178和180位的位置上的氨基酸残基，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第141、143、147、168、183、185和187位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第174位的氨基酸残基、或包括S174A、或包括S174A及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第114、116、131、137、162、165、167、178和180位的另外的氨基酸残基，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第185位的氨基酸残基、或包括V185W、或包括V185W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第141、143、147、168、183和187位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S114E、F116A、S131T、N137T、S162D、E165L、D167E、S174A、T178R和T180R的氨基酸残基、或包括选自S114E、F116A、S131T、N137T、S162D、E165L、D167E、S174A、T178R和T180R的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自A141K、G143V、K147T、H168Y、S183V、V185W和T187N的氨基酸残基、或包括选自A141K、G143V、K147T、H168Y、S183V、V185W和T187N的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第114、116、131、133、137、138、162、164、174、176、178和180位的位置上的氨基酸残基，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第128、141、143、148、168、170、175、181、183、185和187位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第178位的氨基酸残基、或包括T178W、或包括T178W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第114、116、131、133、137、138、162、164、174和176位的另外的氨基酸残基，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第183位的氨基酸残基、或包括S183V、或包括S183V及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第128、141、143、148、168、170、175、181、185和187位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S114K、F116T、S131T、V133L、N137E、N138K、S162G、T164M、S174M、S176F和T178W的氨基酸残基，或包括选自S114K、F116T、S131T、V133L、N137E、N138K、S162G、T164M、S174M、S176F和T178W的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自L128M、A141N、G143A、D148E、H168F、F170A、Q175S、S181N、S183V、V185L和T187K的氨基酸残基，或包括选自L128M、A141N、G143A、D148E、H168F、F170A、Q175S、S181N、S183V、V185L和T187K的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第118、131、133、138、160、162、167、174、176、178和180位的位置上的氨基酸残基，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第124、126、141、143、147、148、170、173、181、183和185位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第176位的氨基酸残基、或包括S176V、或包括S176V及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第118、131、133、138、160、162、167、174、178、180位的另外的氨基酸残基，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第185位的氨基酸残基、或包括V185W、或包括V185W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第124、126、141、143、147、148、170、173、181和183位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自F118M、S131N、V133A、N138E、Q160F、S162A、D167S、S174N、S176V、T178L和T180K的氨基酸残基，或包括选自F118M、S131N、V133A、N138E、Q160F、S162A、D167S、S174N、S176V、T178L和T180K的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S124K、F126T、A141T、G143L、K147E、D148K、F170G、V173M、S181M、S183F和V185W的氨基酸残基，或包括选自S124K、F126T、A141T、G143L、K147E、D148K、F170G、V173M、S181M、S183F和V185W的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第114、116、118、123、124、133、137、160、162、164、174、176和178位的位置上的氨基酸残基，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第124、126、133、134、139、141、143、168、170、175、181、183和185位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第176位的氨基酸残基、或包括S176Y、或包括S176Y及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第114、116、118、123、124、133、137、160、162、164、174和178位的另外的氨基酸残基，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第183位的氨基酸残基、或包括S183Y、或包括S183Y及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第124、126、133、134、139、141、143、168、170、175、181和185位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S114Q、F116Y、F118L、E123D、Q124E、V133T、N137K、Q160K、S162T、T164V、S174F、S176Y和T178K的氨基酸残基，或包括选自S114Q、F116Y、F118L、E123D、Q124E、V133T、N137K、Q160K、S162T、T164V、S174F、S176Y和T178K的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F、S183Y和V185K的氨基酸残基，或包括选自S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F、S183Y和V185K的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括V185W和S183V、或包括V185W和S183V及其保守的氨基酸取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括S174A或S174A及其保守的氨基酸取代，和/或选自S114E、F116A、F118F、S131T、N137T、S162D、E165L、D167E、T178R、T180R的另外的氨基酸，或选自S114E、F116A、F118F、S131T、N137T、S162D、E165L、D167E、T178R、T180R及其保守的氨基酸取代的另外的氨基酸，其中氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括S176F和/或T178W，或包括S176F和/或T178W及其保守的氨基酸取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括H168F和/或F170A，或包括H168F和/或F170A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括T178W、或包括T178W及其保守的氨基酸取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括L128M、或包括L128M及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括T178W、或包括T178W及其保守的氨基酸取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括F170A、或包括F170A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括S183Y、或S183Y及其保守的氨基酸取代以及选自S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F和V185K的另外的氨基酸或选自S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F和V185K及其保守的氨基酸取代的另外的氨基酸，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括S174F和/或S176Y、或包括S174F和/或S176Y及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括S183Y、或S183Y及其保守的氨基酸取代，以及选自S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F和V185K或选自S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F和V185K及其保守的氨基酸取代的另外的氨基酸，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括S162T或S162T及其保守的氨基酸取代以及选自S114Q、F116Y、F118L、E123D、Q124E、V133T、N137K、Q160K、T164V、S174F、S176Y和T178K或选自S114Q、F116Y、F118L、E123D、Q124E、V133T、N137K、Q160K、T164V、S174F、S176Y和T178K及其保守的氨基酸取代的另外的氨基酸，其中氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第114、116、118、123、124、131、133、137、138、160、162、164、165、167、174、176、178和180位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S114E、S114K、S114Q、F116A、F116T、F116Y、F118M、F118L、E123D、Q124E、S131K、S131T、S131N、V133L、V133A、V133T、N137T、N137E、N137K、N138K、N138E,Q160Y、Q160F、Q160K、S162A、S162G、S162D、S162T、T164V、T164M、E165L、D167E、D167S、S174A、S174M、S174N、S174F、S176V、S176F、S176Y、T178W、T178R、T178L、T178K、T180N、T180R和T180K的氨基酸残基，或包括选自S114E、S114K、S114Q、F116A、F116T、F116Y、F118M、F118L、E123D、Q124E、S131K、S131T、S131N、V133L、V133A、V133T、N137T、N137E、N137K、N138K、N138E、Q160Y、Q160F、Q160K、S162A、S162G、S162D、S162T、T164V、T164M、E165L、D167E、D167S、S174A、S174M、S174N、S174F、S176V、S176F、S176Y、T178W、T178R、T178L、T178K、T180N、T180R和T180K的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第124、126、128、133、134、139、141、143、147、148、168、170、173、175、181、183、185和187位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S124E、S124K、S124Q、F126A、F126T、F126Y、L128F、L128M、K133D、S134E、T139Q、A141K、A141T、A141N、A141S、G143V、G143A、G143L、G143T、K147T、K147E、D148E、D148K、H168Y、H168F、H168K、F170D、F170A、F170G、F170T、V173L、V173M、Q175E、Q175S、Q175D、S181A、S181N、S181M、S181F、S183V、S183F、S183Y、V185W、V185R、V185L、V185K、T187N、T187K和T187R的氨基酸残基，或包括选自S124E、S124K、S124Q、F126A、F126T、F126Y、L128F、L128M、K133D、S134E、T139Q、A141K、A141T、A141N、A141S、G143V、G143A、G143L、G143T、K147T、K147E、D148E、D148K、H168Y、H168F、H168K、F170D、F170A、F170G、F170T、V173L、V173M、Q175E、Q175S、Q175D、S181A、S181N、S181M、S181F、S183V、S183F、S183Y、V185W、V185R、V185L、V185K、T187N、T187K和T187R的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第131、137、160、176、178和180位的位置上的氨基酸残基，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第124、126、128、141、143、147、170、173、175、181、185和187位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第178位的氨基酸残基、或包括T178W、或包括T178W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第131、137、160、176、180位的另外的氨基酸残基，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第181位的氨基酸残基、或包括S181A、或包括S181A及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第124、126、128、141、143、147、170、173、175、185和187位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S131K、N137T、Q160Y、S176V、T178W、T180N的氨基酸残基，或包括选自S131K、N137T、Q160Y、S176V、T178W、T180N的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S124E、F126A、L128F、A141T、G143V、K147T、F170D、V173L、Q175E、S181A、V185R和T187R的氨基酸残基，或选自S124E、F126A、L128F、A141T、G143V、K147T、F170D、V173L、Q175E、S181A、V185R和T187R的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第114、116、131、137、162、165、167、174、176、178、180位的位置上的氨基酸残基，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第141、143、147、168、183、185和187位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第174位的氨基酸残基、或包括174A、或包括174A及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第114、116、131、137、162、165、167、178和180位的另外的氨基酸残基，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第185位的氨基酸残基、或包括V185W、或包括V185W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第141、143、147、168、183和187位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S114E、F116A、S131T、N137T、S162D、E165L、D167E、S174A、T178R、T180R的氨基酸残基，或包括选自S114E、F116A、S131T、N137T、S162D、E165L、D167E、S174A、T178R、T180R的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自A141K、G143V、K147T、H168Y、S183V、V185W和T187N的氨基酸残基，或包括选自A141K、G143V、K147T、H168Y、S183V、V185W和T187N的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第114、116、131、133、137、138、162、164、174、176和178位的位置上的氨基酸残基，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第128、141、143、148、168、170、175、181、183、185和187位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第178位的氨基酸残基、或包括T178W、或包括T178W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第114、116、131、133、137、138、162、164、174和176位的另外的氨基酸残基，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第183位的氨基酸残基、或包括S183V、或包括S183V及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第128、141、143、148、168、170、175、181、185和187位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S114K、F116T、S131T、V133L、N137E、N138K、S162G、T164M、S174M、S176F和T178W的氨基酸残基，或包括选自S114K、F116T、S131T、V133L、N137E、N138K、S162G、T164M、S174M、S176F和T178W的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自L128M、A141N、G143A、D148E、H168F、F170A、Q175S、S181N、S183V、V185L和T187K的氨基酸残基，或包括选自L128M、A141N、G143A、D148E、H168F、F170A、Q175S、S181N、S183V、V185L和T187K的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第118、131、133、138、160、162、167、174、176、178和180位的氨基酸残基，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第124、126、141、143、147、148、170、173、181、183和185位的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第176位的氨基酸残基、或包括S176V、或包括S176V及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第118、131、133、138、160、162、167、174、178、180位的另外的氨基酸残基，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第185位的氨基酸残基、或包括V185W、或包括V185W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第124、126、141、143、147、148、170、173、181和183位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自F118M、S131N、V133A、N138E、Q160F、S162A、D167S、S174N、S176V和T178L的氨基酸残基，或包括选自F118M、S131N、V133A、N138E、Q160F、S162A、D167S、S174N、S176V和T178L的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，和T180K，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S124K、F126T、A141T、G143L、K147E、D148K、F170G、V173M、S181M、S183F和V185W的氨基酸残基，或包括选自S124K、F126T、A141T、G143L、K147E、D148K、F170G、V173M、S181M、S183F和V185W的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第114、116、118、123、124、133、137、160、162、164、174、176和178位的位置上的氨基酸残基，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括在选自第124、126、133、134、139、141、143、168、170、175、181、183和185位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第176位的氨基酸残基、或包括S176Y、或包括S176Y及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第114、116、118、123、124、133、137、160、162、164、174和178位的另外的氨基酸残基，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第183位的氨基酸残基、或包括S183Y、包括S183Y及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第124、126、133、134、139、141、143、168、170、175、181和185位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S114Q、F116Y、F118L、E123D、Q124E、V133T、N137K、Q160K、S162T、T164V、S174F、S176Y和T178K的氨基酸残基，或选自S114Q、F116Y、F118L、E123D、Q124E、V133T、N137K、Q160K、S162T、T164V、S174F、S176Y和T178K的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，和/或第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F、S183Y和V185K的氨基酸残基、或选自S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F、S183Y和V185K的氨基酸残基及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括V185W和S183V、或包括V185W和S183V及其保守的氨基酸取代，和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括S174A、或S174A及其保守的氨基酸取代，和/或选自S114E、F116A、S131T、N137T、S162D、E165L、D167E、T178R、T180R、或选自S114E、F116A、S131T、N137T、S162D、E165L、D167E、T178R、T180R及其保守的氨基酸取代的另外的氨基酸，其中氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，其中第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括S176F和/或T178W、或包括S176F和/或T178W及其保守的氨基酸取代，和/或其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括H168F和/或F170A、或包括H168F和/或F170A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，其中第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括T178W、或包括T178W及其保守的氨基酸取代，和/或其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括L128M、或包括L128M及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，且第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，其中第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括T178W、或包括T178W及其保守的氨基酸取代，和/或其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括F170A、或包括F170A及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括S183Y、或包括S183Y及其保守的氨基酸取代，和选自S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F和V185K的另外的氨基酸、或选自S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F和V185K及其保守的氨基酸取代的另外的氨基酸，和/或其中第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括S174F和/或S176Y、或包括S174F和/或S176Y及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IGKC结构域，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括S183Y、或包括S183Y及其保守的氨基酸取代，和选自S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F和V185K的另外的氨基酸，或选自S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F和V185K及其保守的氨基酸取代的另外的氨基酸，和/或其中第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括S162T、或包括S162T及其保守的氨基酸取代，和选自S114Q、F116Y、F118L、E123D、Q124E、V133T、N137K、Q160K、T164V、S174F、S176Y和T178K的另外的氨基酸，或选自S114Q、F116Y、F118L、E123D、Q124E、V133T、N137K、Q160K、T164V、S174F、S176Y和T178K及其保守的氨基酸取代的另外的氨基酸，其中氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第88位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84.2、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位的氨基酸残基，和任选的在选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、88和90位，或在选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、88和90位的位置上，或在选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、86、88和90位的位置上的另外的氨基酸残基，
其中，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第88位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第85.1和/或86位上取代的氨基酸残基相互作用，
其中，各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001491
编号规则标注的。
在作为亲代结构域的CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面中，根据
Figure BDA0001569050590001492
编号规则标注的第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位按相同的顺序对应于根据EU编号规则标注的第347、349、351、364、366、370、371、392、394、397、399、405、407、409和411位，
在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域。
在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是不同同种型的CH3结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG1CH3结构域，优选IGHG1的人CH3结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG3 CH3结构域，优选IGHG3的人CH3结构域，或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG3 CH3结构域，优选IGHG3的人CH3结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG1 CH3结构域，优选IGHG1的人CH3结构域。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和86位的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001501
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基不是带电荷的氨基酸，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001502
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基不是88I，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001503
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第85.1和/或86位取代的氨基酸残基不是带电荷的氨基酸，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001504
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基与第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第85.1和/或86位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基是88W、或88W及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001505
编号规则标注的。
在一些实施方案中，CH3结构域是选自人IgG1(IGHG1)、人IgG2(IGHG2)、人IgG3(IGHG3)和人IgGP(IGHGP)的结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基是K88W、或K88W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001506
编号规则标注的。
在一些实施方案中，CH3结构域是人IgA1(IGHA1)或IgA2(IGHA2)CH3结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是I88W、或I88W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001507
编号规则标注的。
在一些实施方案中，CH3结构域是人IgD(IGHD)CH3结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基是V88W、或V88W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001511
编号规则标注的。
在一些实施方案中，CH3结构域是人IgE CH3(IGHE)结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基是T88W、或T88W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001512
编号规则标注的。
在一些实施方案中，CH3结构域是人IgG4(IGHG4)CH3结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基是R88W、或R88W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001513
编号规则标注的。
在一些实施方案中，CH3结构域是人IgM(IGHM)CH3结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基是E88W、或E88W及其保守的氨基酸取代，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001514
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基选自88Q、88L、88V、88R、88E、88I、88T、88Y、88K和88W，和/或第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20Q、20E、20S、20K、20W、22A、22G、22T、22L、22I、22V、26R、26Q、26T、26K、26V、26S、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1F、85.1C、85.1N、85.1W、86S、86I、86T、86H、86Q、86V、86W、86Y和86F，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001521
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基选自88Q、88L、88V、88R、88E、88I、88T、88Y和88W，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001522
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20Q、20E、20S、22A、22G、22T、22L、22I、22V、26Q、26T、26K、26V、26S、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86T、86H、86Q、86V和86F，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001523
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20Q、20E、20S、20K、22A、22G、22T、22L、22I、22V、26Q、26T、26K、26V、26S、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86T、86H、86Q、86V和86F，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001524
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基选自88Q、88L、88V、88R、88E、88T、88Y和88W，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001525
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20V、20A、20N、20Q、20E、20S、22A、22G、22T、22L、22I、22V、26Q、26T、26K、26V、26S、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86H、86Q、86V和86F，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001526
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3E、3K、5A、5T、7F、7M、20K、20N、20T、22A、22L、22V、26E、26T、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、84L、84M、84.2E、84.2S、85.1A、85.1C、85.1M、85.1N、85.1S、86F、86S、86V、90K、90N和90R或选自3E、3K、5A、5T、7F、7M、20K、20N、20T、22A、22L、22V、26E、26T、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、84L、84M、84.2E、84.2S、85.1A、85.1C、85.1M、85.1N、85.1S、86F、86S、86V、90K、90N和90R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001531
编号规则标注的。
在一些涉及作为第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的CH3结构域的实施方案中，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基是88I及其保守的氨基酸取代，以及在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的任选的另外的氨基酸残基是81W及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001532
编号规则标注的。
在一些涉及作为第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的CH3结构域的实施方案中，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基是88I及其保守的氨基酸取代，以及在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的任选的另外的氨基酸残基是81W及保守的氨基酸取代，和/或在第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的任选的另外的氨基酸残基或其它的另外的氨基酸残基是86T及其保守的氨基酸取代和/或84R及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001533
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第88位和第20位的氨基酸残基，和任选的在选自第3、5、7、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86和90位的位置上的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001541
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位和第26位的氨基酸残基，和任选的另外的位置上的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001542
编号规则标注的。
在一些实施方案中，在第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的第85.1和/或86位上取代的氨基酸残基选自85.1A、85.1S、85.1C和85.1N，或选自85.1A、85.1S、85.1C和85.1N及其保守的氨基酸取代，和/或选自86S和86V，或选自86S和86V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001543
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的另外的氨基酸残基在选自第3、5、7、20、22、26、81、84、84.2、88和90位的位置上、或选自第3、5、7、20、22、26、81、84、84.2、85.1、88和90位的位置上、或选自第3、5、7、20、22、26、81、84、84.2、86、88和90位的位置，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001544
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的另外的氨基酸残基位于选自第20、22、26、79、85.1、86和90位的位置上，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的另外的氨基酸残基是在第84位，或者是84L、或者是84L及其保守的氨基酸取代，和任选的在选自第3、5、7、20、22、26、81、84.2、88和90位的位置上、或选自第3、5、7、20、22、26、81、84.2、85.1、88和90位的位置上、或选自第3、5、7、20、22、26、81、84.2、86、88和90位的位置上的另外的氨基酸，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001545
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20K、22V、26T、79Y、85.1S、86V和90N，或选自20K、22V、26T、79Y、85.1S、86V和90N及其保守的氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括在第85.1和86位的氨基酸残基，或包括85.1C及其保守的氨基酸取代，和86S及其保守的氨基酸取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自第3、5、7、20、22、26、81、84、84.2、88和90位，优选选自3E、5A、7F、20T、22V、26T、81D、84L、84.2E、88R和90R，或选自3E、5A、7F、20T、22V、26T、81D、84L、84.2E、88R和90R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001551
编号规则标注的。
在一些实施方案中，氨基酸残基取代85.1C被氨基酸残基取代85.1A或85.1S替代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001552
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的另外的氨基酸残基在选自第3、5、20、22、26、27、81、84、85.1和86位的位置上，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的另外的氨基酸残基在选自第7、20、22、27、79、81、84.2、88和90位的位置上、或选自第7、20、22、27、79、81、84.2、85.1、88和90位的位置上、或选自第7、20、22、27、79、81、84.2、86、88和90位的位置上，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001553
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3K、5T、20T、22L、26E、27K、81G、84M、85.1M、86F，或选自3K、5T、20T、22L、26E、27K、81G、84M、85.1M、86F及其保守的氨基酸取代，和/或
第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基在第79位，或者是79F，或者是79F及其保守的氨基酸取代，和任选的在选自第7、20、22、27、81、84.2、88和90位的位置上、或选自第7、20、22、27、81、84.2、85.1、88和90位的位置上、或选自第7、20、22、27、81、84.2、86、88和90位的位置上的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001561
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3K、5T、20T、22L、26E、27K、81G、84M、85.1M、86F，或选自3K、5T、20T、22L、26E、27K、81G、84M、85.1M、86F及其保守的氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第85.1和86位的氨基酸残基，或包括85.1N及其保守的氨基酸取代，和86V及其保守的氨基酸取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自7M、20N、22A、27E、79F、81A、84.2S、88L和90K，或选自7M、20N、22A、27E、79F、81A、84.2S、85.1N、86V、88L和90K及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001562
编号规则标注的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26位和选自第3、22、27、79、81、84、85.1、86和88位的另外的位置上的的氨基酸残基，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第20位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第26位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001563
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26和86位，和任选的选自第3、5、22、27、79、81、84、85.1、88和90位的另外的位置上的的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001571
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20和22位的氨基酸残基，和任选的在选自第3、5、7、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的位置上的另外的氨基酸残基，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26位，和在选自第3、5、22、27、79、81、84、85.1、86、88和90位的另外的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001572
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20和22位的氨基酸残基，和任选的在选自第3、5、7、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的位置上的另外的氨基酸残基，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26和86位，和任选的位于选自第3、5、22、27、79、81、84、85.1、88和90位的另外的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001573
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20N和20T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001574
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第26位上取代的氨基酸残基选自26T和26E及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001575
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第22位上取代的氨基酸残基选自22A和22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001581
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第86位上取代的氨基酸残基选自86V和86F及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001582
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20Q、20K、20S、20W和20E，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的另外的氨基酸残基选自22A、22G、22L、22I、22V、22T、26K、26R、26Q、26T、26V、26S、26N、26E、85.1W、85.1F、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1C、85.1N、86W、86Y、86S、86I、86H、86Q、86V、86T、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88T、88I、88Y、88K和88W，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001583
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20Q和20E，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自22A、22G、22L、22I、22V、26Q、26T、26V、26S、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1C、85.1N、86S、86I、86T、86H、86Q、86V、86T、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88T、88I、88Y和88W，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001584
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20Q、20K、20S和20E，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自22A、22G、22L、22I、22V、26K、26Q、26T、26V、26S、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1C、85.1N、86S、86I、86H、86Q、86V、86T、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88T、88I、88Y和88W，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001591
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位和第22位上取代的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20Q、20K、20S、20W、和20E和22A、22G、22L、22I、22V、22T，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自26K、26R、26Q、26T、26V、26S、26N、26E、85.1W、85.1F、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1C、85.1N、86W、86Y、86S、86I、86H、86Q、86V、86T、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88T、88I、88Y、88K和88W，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001592
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3E、3K、5A、5T、7F、7M、22A、22L、22V、26E、26T、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、84L、84M、84.2E、84.2S、85.1A、85.1C、85.1M、85.1N、85.1S、86F、86S、86V、88L、88R、88W、90K、90N和90R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001593
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3E、3K、5A、5T、7F、7M、26E、26T、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、84L、84M、84.2E、84.2S、85.1A、85.1C、85.1M、85.1N、85.1S、86F、86S、86V、88L、88R、88W、90K、90N和90R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001594
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第26位上取代的氨基酸残基选自26K、26R、26Q、26T、26V、26S、26N、26E，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自22A、22G、22L、22I、22V、22T、85.1W、85.1F、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1C、85.1N、86W、86Y、86S、86I、86H、86Q、86V、86T、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88T、88I、88Y、88K和88W，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001601
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第26位和第86位上取代的氨基酸残基选自26K、26R、26Q、26T、26V、26S、26N、26E和86W、86Y、86S、86I、86H、86Q、86V、86T、86F，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自22A、22G、22L、22I、22V、22T、85.1W、85.1F、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1C、85.1N、88Q、88L、88V、88R、88E、88T、88I、88Y、88K和88W，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001602
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3E、3K、22A、22L、22V、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、84L、84M、85.1A、85.1C、85.1M、85.1N、85.1S、86F、86S、86V、88L、88R和88W，及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001603
编号规则标注的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH2结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第88位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3和90位的位置上，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1和90位的位置上，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、86和90位的位置上的另外的氨基酸残基，其中在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第88位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第85.1和/或86位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001611
编号规则标注的。
在作为亲代结构域的CH2结构域的蛋白质-蛋白质界面中，根据
Figure BDA0001569050590001612
编号规则标注的第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86和90位按相同的顺序对应于根据EU编号规则标注的第239、241、243、258、260、264、265、288、290、292、293、295、296、301、303、305、307位。
在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH2结构域。
在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是不同同种型的CH2结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG1CH2结构域，优选IGHG1的人CH2结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG3 CH2结构域，优选IGHG3的人CH2结构域；或者其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG3 CH2结构域，优选的，IGHG3的人CH2结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG1 CH2结构域，优选IGHG1的人CH2结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基是88W或88W及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001613
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第85.1和/或86位上取代的氨基酸残基选自85.1A和85.1N、或选自85.1A和85.1N及其保守的氨基酸取代，和/或是86S、或86S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001614
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基选自88Q、88L、88V、88R、88I、88T、88K、88E、88Y和88W，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20K、20W、20S、20E、20Q、22A、22G、22T、22L、22V、26Q、26T、26K、26V、26S、26R、26N、26E、85.1R、85.1H、85.1K、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1W、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86H、86T、86W、86Y、86V、86Q和86F，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001621
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基选自88Q、88L、88V、88R、88I、88T、88K、88E、88Y和88W，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20K、20W、20S、22A、22G、22T、22L、22V、26Q、26T、26K、26V、26S、26R、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1W、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86H、86T、86W、86Y、86V和86F，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001622
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3E、3K、5A、5T、5Y、7M、7L、20K、20N、20T、20S、22A、22L、22V、26E、26T、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、83M、83T、84L、84.2E、84.2S、84.3D、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86F、86Y、90K、90N和90R、或选自3E、3K、5A、5T、5Y、7M、7L、20K、20N、20T、20S、22A、22L、22V、26E、26T、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、83M、83T、84L、84.2E、84.2S、84.3D、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86F、86Y、90K、90N和90R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001623
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第88位和第20位的氨基酸残基，和任选的位于选自第3、5、7、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86和90位的位置上的另外的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001624
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位和第26位的氨基酸残基，和任选的另外的位置的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001631
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的另外的氨基酸残基位于选自第20、22、26、79、85.1和90位的位置上，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基位于第84位、或者是84L、或者是84L及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第3、5、7、20、22、26、81、84.2、88和90位、或选自第3、5、7、20、22、26、81、84.2、85.1、88和90位、或选自第3、5、7、20、22、26、81、84.2、86、88和90位的位置上的另外的氨基酸，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001632
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20K、22V、26T、79Y、85.1S和90N、或选自20K、22V、26T、79Y、85.1S和90N及其保守的氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基位于第85.1位、或者是85.1C、或者是85.1C及其保守的氨基酸取代，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基位于第86位、或者是86S、或者是86S及其保守的氨基酸取代，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自第3、5、20、22、26、81、84、84.2、88和90位，优选选自3E、5A、20T、22V、26T、81D、84L、84.2E、88R和90R，或选自3E、5A、20T、22V、26T、81D、84L、84.2E、88R和90R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001633
编号规则标注的。
在一些实施方案中，氨基酸残基取代85.1C被氨基酸残基取代85.1A或85.1S替代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001634
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基位于选自第3、5、20、22、26、27、81、83、85.1和86位的位置，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基位于选自第7、20、22、27、79、81、84.2、88和90位的位置上、或选自第7、20、22、27、79、81、84.2、85.1、88和90位的位置上、或选自第7、20、22、27、79、81、84.2、86、88和90位的位置上，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001641
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3K、5T、20T、22L、26E、27K、81G、83M、85.1M和86F，或选自3K、5T、20T、22L、26E、27K、81G、83M、85.1M和86F及其保守的氨基酸取代，和/或
第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基位于第79位、或者是79F、或者是79F及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第7、20、22、27、81、84.2、88和90位、或选自第7、20、22、27、81、84.2、85.1、88和90位、或选自第7、20、22、27、81、84.2、86、88和90位的位置上的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001642
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3K、5T、20T、22L、26E、27K、81G、83M、85.1M和86F，或选自3K、5T、20T、22L、26E、27K、81G、83M、85.1M和86F及其保守的氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的第85.1位的氨基酸残基是85.1N、或者是85.1N及其保守的氨基酸取代，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的第22位的氨基酸残基是22A、或者是22A及其保守的氨基酸取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自7M、20N、27E、79F、81A、84.2S、88L和90K，或选自7M、20N、27E、79F、81A、84.2S、88L和90K及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001651
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基位于选自第5、7、20、83、84.3、85.1和86位的位置，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基位于选自第5、7、20、83、84.3和88位的位置、或选自第5、7、20、83、84.3、85.1和88位的位置、或选自第5、7、20、83、84.3、86和88位的位置，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001652
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自5Y、7L、20S、83T、84.3D、85.1F和86Y，或选自5Y、7L、20S、83T、84.3D、85.1F和86Y及其保守的氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基位于第20位、或者是20S、或者是20S及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第5、7、83、84.3和88位、或选自第5、7、83、84.3、85.1和88位、或选自第5、7、83、84.3、86和88位的位置上的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001653
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自5Y、7L、20S、83T、84.3D、85.1F和86Y、或选自5Y、7L、20S、83T、84.3D、85.1F和86Y及其保守的氨基酸取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基位于第85.1位、或者是85.1F、或者是85.1F及其保守的氨基酸取代，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基位于第20位、或者是20S、或者是20S及其保守的氨基酸取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自5Y、7L、83T、84.3D、86Y和88K，或选自5Y、7L、83T、84.3D、86Y和88K及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001661
编号规则标注的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH2结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26位的氨基酸残基，和任选的位于选自第3、5、7、20、22、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第20位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第26位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001662
编号规则标注的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH2结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基位于第26位，和选自第3、22、27、79、81、84、85.1、86和88位的另外的位置上，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第20位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第26位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001663
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，和任选的位于选自第3、5、7、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括位于第26和86位，和任选的位于选自第3、5、22、27、79、81、84、85.1、88和90位的另外的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001671
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20和22位的氨基酸残基，和任选的位于选自第3、5、7、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括位于第26位和位于选自第3、5、22、27、79、81、84、85.1、86、88和90位的另外的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001672
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20和22位的氨基酸残基，和任选的位于选自第3、5、7、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的位置上的另外的氨基酸残基，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括位于第26和86位，和任选的位于选自第3、5、22、27、79、81、84、85.1、88和90位的另外的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001673
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20N和20T及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001674
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第26位上取代的氨基酸残基选自26T和26E及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001675
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第22位上取代的氨基酸残基选自22A和22V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001681
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第86位上取代的氨基酸残基选自86V和86F及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001682
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20K、20Q、20E、20W和20S，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自22A、22G、22T、22L、22V、22I、26Q、26T、26K、26V、26S、26R、26N、26E、85.1R、85.1H、85.1K、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1W、85.1F、85.1C、85.1N、86Q、86S、86I、86H、86T、86W、86Y、86V、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88I、88T、88K、88Y和88W，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001683
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20K、20W和20S，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自22A、22G、22T、22L、22V、26Q、26T、26K、26V、26S、26R、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1W、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86H、86T、86W、86Y、86V、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88I、88T、88K、88Y和88W，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001684
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3E、3K、5A、5T、5Y、7M、7L、22A、22L、22V、26E、26T、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、83M、83T、84L、84.2E、84.2S、84.3D、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86F、86Y、88K、88L、88R、88W、90K、90N和90R，或选自3E、3K、5A、5T、5Y、7M、7L、22A、22L、22V、26E、26T、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、83M、83T、84L、84.2E、84.2S、84.3D、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86F、86Y、88K、88L、88R、88W、90K、90N和90R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001691
编号规则标注的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH4结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001692
编号规则标注的。在一些实施方案中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是天然存在的CH4结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基是88W及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590001701
编号规则标注的。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的优选至少2个，更优选至少3个，最优选至少4个，特别是至少5个氨基酸残基，更特别的至少6个，甚至更特别的至少7个，最特别的所有的氨基酸残基是被取代的。同等优选的，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中优选2个，更优选3个，最优选4个，特别是5个氨基酸残基，更特别的6个，甚至更特别的7个氨基酸残基是被取代的。同等优选的，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中优选少于2个，更优选少于3个，最优选少于4个，特别是少于5个氨基酸残基，更特别的少于6个，甚至更特别的少于7个氨基酸残基是被取代的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的至少1个，优选至少2个，更优选至少3个，最优选至少4个，特别是至少5个氨基酸残基，更特别的至少6个，甚至更特别的至少7个，最特别的所有的氨基酸残基是不同于第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面的。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是不相邻的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中至少2个，更优选至少3个，最优选至少4个，特别是至少5个被取代的氨基酸残基是不相邻的。
在一些实施方案中，相比第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的氨基酸序列，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的改造结构域的氨基酸序列不含一个或多个氨基酸残基的插入。
在一些实施方案中，相比第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白的另外的改造的结构域的亲代结构域的氨基酸序列，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的氨基酸序列不含一个或多个氨基酸残基的插入。
在一些实施方案中，相比第三改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的氨基酸序列，第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的氨基酸序列不含一个或多个氨基酸残基的插入。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链包括具有蛋白质-蛋白质界面的另外的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链和/或所述第二改造的免疫球蛋白链的所述另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面中等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且
其中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面是通过异二聚体化或同型二聚体化与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用的，
其中，所述第三改造的免疫球蛋白链的所述改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面中的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域与天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面不同于第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面。
优选的，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的。
优选的，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的优选至少2个，更优选至少3个，最优选至少4个，特别是至少5个氨基酸残基，更特别的至少6个，甚至更特别的至少7个，最特别的所有的氨基酸残基是被取代的。同等优选的，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的优选2个，更优选3个，最优选4个，特别是5个氨基酸残基，更特别的6个，甚至更特别的7个氨基酸残基是被取代的。同等优选的，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中优选少于2个，更优选少于3个，最优选少于4个，特别是少于5个氨基酸残基，更特别的少于6个，甚至更特别的少于7个氨基酸残基是被取代的。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少1个，优选至少2个，更优选至少3个，最优选至少4个，特别是至少5个氨基酸残基，更特别的至少6个，甚至更特别的至少7个，最特别的所有的氨基酸残基不同于第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是不相邻的。在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中，第一改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的至少2个，更优选至少3个，最优选至少4个，特别是至少5个氨基酸残基是不相邻的。
在一些实施方案中，第三改造的免疫球蛋白链包括具有蛋白质-蛋白质界面的另外的改造的结构域，其中所述第三改造的免疫球蛋白链的所述另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第五成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的位于等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，和
其中，第三改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化或同型二聚体化与第四改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用，
其中，所述第三改造的免疫球蛋白链的所述改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第六成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的位于等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，和
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第五成员的供体结构域与天然存在的免疫球蛋白超家族的第六成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第三改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域和第四改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面不同于第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面，也不同于第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面，也不同于第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面。
第三改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域和/或第四改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域选自CH1、CH2、CH3、CH4、IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7，其中第三改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域和/或第四改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面的取代的氨基酸残基例如选自如上文所述的第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的氨基酸残基的组。
天然存在的免疫球蛋白超家族的第五和/或第六成员的供体结构域例如选自针对如上文所述的天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和/或第二成员的供体结构域的组。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：13的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含含有选自SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16(优选SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：15)的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：13的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：14的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
因此，在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQID NO：13的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：13的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：13的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自K24、V26、T30、Y52、S65、V67、W69和N71的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：13的氨基酸残基的编号标注的。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：14的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少一个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自E7、A9、F11、T24、V26、T30、D54、L57、E59、A65、S67、R69和R71的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：14的氨基酸残基的编号标注的。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：15的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：15的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少一个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自E7、A9、F11、T24、V26、T30、D54、L57、E59、C65、S67、R69和R71的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：15的氨基酸残基的编号标注的。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：16的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：16的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少一个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自E7、A9、F11、T24、V26、T30、D54、L57、E59、S65、S67、R69和R71的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：16的氨基酸残基的编号标注的。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，所述第二改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链包含与SEQ ID NO：3的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：3的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少一个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自S144K、T146V、K150T、K172Y、F185S、Y187V、K189W和T191N,的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：3的氨基酸残基的编号标注的。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中第二改造的免疫球蛋白链包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，其中第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链包含与SEQ ID NO：4的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：4的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少一个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个或8个或9个或10个或11个或12个，最特别的所有的选自Q127E、Y129A、L131F、S144T、T146V、K150T、T174D、V177L、D179E、F185C、Y187S、K189R和T191R的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：4的氨基酸残基的编号标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：35的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：34的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ IDNO：35的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：35的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：35的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少1个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自K127、T129、T144、L146、E150、K151、G174、M177、M185、F187和W189的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：35的氨基酸残基的编号标注的。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：34的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：34的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少一个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自M131、N144、A146、E151、F172、A174、S179、N185、V187、L189和K191的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：34的氨基酸残基的编号标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：40的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：39的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ IDNO：40的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：40的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：40的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少1个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自K7、T9、T24、L26、E30、K31、G55、M57、M67、F69和W71的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：40的氨基酸残基的编号标注的。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：39的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：39的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少一个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自M11、N24、A26、E31、F51、A53、S58、N64、V66、L68和K70的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：39的氨基酸残基的编号标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：48的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：49的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ IDNO：48的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：48的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：48的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少1个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自Q7、Y9、D16、E17、Q22、S24、T26、K51、T53、D58、F64、Y66和K68的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：48的氨基酸残基的编号标注的。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：49的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：49的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少一个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自Q7、Y9、L11、D16、E17、T26、K30、K53、T55、V57、F67、Y69和K71的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：49的氨基酸残基的编号标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：76的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：14的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：76的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：76的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少1个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自K24、V26、T30、Y52、S65、V67、W69和N71的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：76的氨基酸残基的编号标注的。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：14的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少一个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自E7、A9、F11、T24、V26、T30、D54、L57、E59、A65、S67、R69和R71的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：14的氨基酸残基的编号标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：78的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：79的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ IDNO：78的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：78的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：78的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少1个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自E7、H9、R30、R57、E59、A65和T67的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：78的氨基酸残基的编号标注的。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：79的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：79的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少一个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自T24、L52、W54、I69和R71的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：79的氨基酸残基的编号标注的。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：84的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO：85的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ IDNO：84的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：84的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：84的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少1个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自K26、V28、Y56、S71、V73、W75和N77的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：84的氨基酸残基的编号标注的。
在另一方面，本发明提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，所述第二改造的免疫球蛋白链包含含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域。
在一些实施方案中，第二改造的免疫球蛋白链的具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域包含与SEQ ID NO：85的氨基酸序列至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，最优选至少96％，特别是至少97％，更特别的至少98％，最特别的至少99％同一的氨基酸序列，其条件是与SEQ ID NO：85的氨基酸序列至少80％同一的氨基酸序列含有至少一个，通常2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个，最特别的所有的选自E8、A10、F12、V28、D58、L61、A71、S73、R75和R77的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据序列表中SEQ ID NO：85的氨基酸残基的编号标注的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：3、4、6、7、13-29、34、35、36、39、40、41、42、48、49、50、51、59、61和68的氨基酸序列，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：3、4、6、7、13-29、34、35、36、39、40、41、42、48、49、50、51、59、61和68的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：3、4、6、7、13-29、34、35、36、39、40、41、42、48、49、50、51、59、61、68、73、78和84的氨基酸序列，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含选自SEQID NO：3、4、6、7、13-29、34、35、36、39、40、41、42、48、49、50、51、59、61、68、74、79和85的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：3、7、13、59和68的氨基酸序列，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：4、6、14、15、16、17、41、50和61的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：3、7、13、59、68、73和84的氨基酸序列，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：4、6、14、15、16、17、41、50、61、74和85的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：34、39和41的氨基酸序列，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：35、36、40和42的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：48、49、50和51的氨基酸序列，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：48、49、50和51的氨基酸序列。优选的，第一改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：48的氨基酸序列，且第二改造的免疫球蛋白链包含SEQ IDNO：49或SEQ ID NO：51的氨基酸序列。同等优选地，第一改造的免疫球蛋白链包含选自SEQID NO：50的氨基酸序列，且第二改造的免疫球蛋白链包含SEQ ID NO：49或SEQ ID NO：51的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一改造的免疫球蛋白链包含SEQ ID NO：78的氨基酸序列，和/或第二改造的免疫球蛋白链包含SEQ ID NO：79的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：3、7、13、59和68的氨基酸序列，且第三改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：4、6、14、15、16、17、41、50和61的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：34、39和41的氨基酸序列，和/或第三改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO 35、36、40和42的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：3、4、6、7、13-29、34、35、36、39、40、41、42、48、49、50、51、59、61、68、73、78和84的氨基酸序列，和/或第三改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：3、4、6、7、13-29、34、35、36、39、40、41、42、48、49、50、51、59、61、68、74、79和85的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链包含SEQ ID NO：78的氨基酸序列，和/或第三改造的免疫球蛋白链包含SEQ ID NO：79的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：3、7、13、59、68的氨基酸序列，和/或第三改造的免疫球蛋白链包含选自SEQ ID NO：3、7、13、59、68的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一改造的免疫球蛋白链包含SEQ ID NO：72的氨基酸序列，且第二改造的免疫球蛋白链包含SEQ ID NO：71的氨基酸序列，且与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用的第三改造的免疫球蛋白链包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其包含含有SEQ ID NO：72的氨基酸序列的第一改造的免疫球蛋白链，含有SEQ ID NO：70的氨基酸序列的第二改造的免疫球蛋白链，具有与第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用的改造的结构域的第三改造的免疫球蛋白链(所述第一改造的免疫球蛋白链包含SEQ ID NO：69的氨基酸序列)，和具有与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用的改造的结构域的第三改造的免疫球蛋白链(所述第二改造的免疫球蛋白链包含SEQ ID NO：42的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链包含Fc区。在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二和第三改造的免疫球蛋白链包含Fc区。通常，Fc区选自IgA、IgE、IgD、IgG和IgM Fc区。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链包含来自相同种类的Fc区，优选来自相同的种类和同种型，更优选来自相同的种类、同种型和亚类。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和/或第二和第三改造的免疫球蛋白链包含来自相同种类的Fc区，优选来自相同的种类和同种型，更优选来自相同的种类、同种型和亚类。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的Fc区是不同的。在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的Fc区具有通过1个氨基酸、或2个氨基酸、或3个氨基酸、或4个氨基酸、或5个氨基酸、或5至10个氨基酸、或10至30个氨基酸，优选至少2个氨基酸、或至少3个氨基酸、或至少4个氨基酸、或至少5个氨基酸、或至少5至10个氨基酸、或至少10至30个氨基酸彼此不同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开内容提供了双特异性的异二聚体免疫球蛋白或其片段。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中异二聚体免疫球蛋白或其片段是全长抗体。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中异二聚体免疫球蛋白或其片段是双特异性的全长抗体。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中双特异性的异二聚体免疫球蛋白或其片段或双特异性的抗体结合的抗原选自HER2、EGFR、CD19和VLA-2。优选的，双特异性的异二聚体免疫球蛋白或其片段或双特异性的抗体对HER2和EGFR是特异性的。同等优选的，双特异性的异二聚体免疫球蛋白或其片段或双特异性的抗体对CD19和VLA-2是特异性的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段(是Fab)，其具有第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段(是F(ab’)2片段)，其中第一改造的免疫球蛋白链包含改造的结构域和另外的改造的结构域，而第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质界面与第三免疫球蛋白链的改造的结构域相互作用，且另外的改造的结构域的蛋白质界面与第三免疫球蛋白链的改造的结构域相互作用，其中，这2种第三免疫球蛋白链的上述改造的结构域的蛋白质界面是彼此相同或不同的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，其中，至少一条额外的多肽与第一和/或第二改造的免疫球蛋白链融合。优选的，所述一条额外的多肽与第一改造的免疫球蛋白链融合。额外的多肽适当的选自Fab、scFv、双抗体、结构域抗体、药学活性肽或蛋白质、受体胞外结构域、移植CDR的多肽和治疗性改造的蛋白质支架。通常通过本领域技术人员已知的遗传改造实现融合，所述融合可包括不形成氨基酸序列部分融合的氨基酸序列接头。
在一些实施方案中，本公开内容提供了至少包含第一和第二不相同的改造的结构域的多结构域蛋白质，第一和第二改造的结构域各自含有蛋白质-蛋白质界面，其中第一亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面中的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且第二亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面中的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成异二聚体或同型二聚体。
多结构域蛋白质优选的包含Fc区。通常，Fc区选自IgA、IgE、IgD、IgG和IgM Fc区。
在一些实施方案中，本公开内容提供了异二聚体免疫球蛋白或其片段，或下文所述制备异二聚体免疫球蛋白或其片段的方法，其中，在亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中，在来自供体结构域的蛋白质-蛋白质界面等价3D结构位置上被取代的氨基酸残基是供体结构域的蛋白质-蛋白质界面中这样的氨基酸残基，当通过重叠2个结构域的碳α痕迹来重叠亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面时，所述氨基酸残基占据了与亲代结构域中最近的残基距离小于
Figure BDA0001569050590001891
的3D位置，其中供体结构域不同于亲代结构域。
制备异二聚体免疫球蛋白或其片段的方法
在另一方面，本发明提供了生产异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段的方法，包括：
(a)在来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上取代第一亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基，获得包含改造的结构域的第一改造的免疫球蛋白链，
(b)在来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上取代第二亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基，获得包含改造的结构域的第二改造的免疫球蛋白链，
(c)培养包含编码所述改造的免疫球蛋白链的核酸的宿主细胞，其中所述培养使核酸表达并生成改造的免疫球蛋白链；和
(d)从宿主细胞培养物中回收异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化或同型二聚体化与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，包括第一和/或第二亲代免疫球蛋白链的亲代结构域，所述亲代结构域选自CH1、CH2、CH3、CH4、IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7。CH1、CH3可来自IGHA1、IGHA2、IGHD、IGHE、IGHG1、IGHG2、IGHG3、IGHG4、IGHGP和IGHM；CH4可来自IGHE和IGHM。CH2可来自IGHA1、IGHA2、IGHD、IGHE、IGHG1、IGHG2、IGHG3、IGHG4、IGHGP和IGHM。在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自CH1结构域、CH4结构域、IGKC结构域、IGLC1结构域、IGLC2结构域、IGLC3结构域、IGLC6结构域和IGLC7结构域的结构域，优选的选自CH1结构域、IGKC结构域、IGLC1结构域、IGLC2结构域、IGLC3结构域、IGLC6结构域和IGLC7结构域。
通常，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域来自人。优选的，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域来自人且来自相同的同种型、种类和亚类。第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的优选的亲代结构域，特别是第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域，是CH3结构域，更优选是人CH3结构域，特别是IGHG1的人CH3结构域。
同等优选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是轻链恒定结构域，如IGLC结构域或IGKC结构域。同等地，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域优选是轻链恒定结构域，如IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域优选是CH1结构域，更优选是选自IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4的人CH1结构域，特别是IGHG1的人CH1结构域。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域形成天然存在的同型二聚体。在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域形成天然存在的异二聚体。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化或同型二聚体化，与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用。优选的，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸残基是对结构域的核心完整性不必需的氨基酸。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员选自TCR恒定结构域家族。优选的，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)。同等地，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域可以是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域可以是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)。在另一实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，其中SEQ ID NO：2的第75位氨基酸半胱氨酸(C)被丙氨酸(A)或丝氨酸(S)取代，优选被丙氨酸(A)取代。
在另一实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)；或其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1),天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2),天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32),天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)或TCR恒定结构域δ(SEQID NO：32)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)或TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和第四成员的供体结构域是IgG1 CH3结构域(SEQ ID NO：47)，其条件是：如果天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)；如果天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQID NO：33)。
在另一实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的另外的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链和/或所述第二改造的免疫球蛋白链的所述另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且
其中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化或同型二聚体化与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用，
其中，所述第三改造的免疫球蛋白链的所述改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，和
其中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面不同于第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的。
在一些实施方案中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域，特别是第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域，优选是相同种类、同种型和亚类的CH3结构域，且第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是轻链恒定结构域，如IGLC结构域或IGKC结构域。
在一些实施方案中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是轻链恒定结构域，如IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是CH3结构域，优选是相同种类、同种型和亚类的CH3结构域。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和/或第二亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是不相邻的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白的另外的改造的结构域的亲代结构域和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域之间的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是不相邻的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中优选至少2个，更优选至少3个，最优选至少4个，特别是至少5个取代的氨基酸残基是不相邻的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白的另外的改造的结构域的亲代结构域和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域之间的蛋白质-蛋白质界面中被取代的优选至少2个，更优选至少3个，最优选至少4个，特别是至少5个氨基酸残基是不相邻的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和/或第二亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的优选至少2个，更优选至少3个，最优选至少4个，特别是至少5个，更特别的是至少6个，最特别的至少7个氨基酸残基是被取代的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白另外的改造的结构域的亲代结构域和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的优选至少2个，更优选至少3个，最优选至少4个，特别是至少5个，更特别的是至少6个，最特别的至少7个氨基酸残基是被取代的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中，相比第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的氨基酸序列，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的改造结构域的氨基酸序列不含一个或多个氨基酸残基的插入。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中，相比第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中相同的3D结构位置，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的至少一个3D结构位置上的氨基酸残基是不同的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链具有来自相同种类的亲代结构域，优选来自相同的种类和同种型，更优选来自相同的种类、同种型和亚类。在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链具有相同的亲代结构域，即，具有相同氨基酸序列的亲代结构域。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链具有来自IgG1，优选人IgG1的亲代结构域。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链具有不同的亲代结构域。在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链具有氨基酸序列彼此不同的亲代结构域，所述序列在1个氨基酸、或2个氨基酸、或3个氨基酸、或4个氨基酸、或5个氨基酸、或5至10个氨基酸、或10至30个氨基酸上彼此不同。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链包含Fc区。在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和/或第二和第三改造的免疫球蛋白链包含Fc区。通常，Fc区选自IgA、IgE、IgD、IgG和IgM Fc区。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链包含的Fc区来自相同的种类，优选来自相同的种类和同种型，更优选来自相同的种类、同种型和亚类。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和/或第二和第三改造的免疫球蛋白链包含Fc区，其来自相同的种类，优选来自相同的种类和同种型，更优选来自相同的种类、同种型和亚类。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的Fc区是不同的。在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的Fc区具有的氨基酸序列在1个氨基酸、或2个氨基酸、或3个氨基酸、或4个氨基酸、或5个氨基酸、或5至10个氨基酸、或10至30个氨基酸上彼此不同。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中异二聚体免疫球蛋白或其片段是全长抗体。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中异二聚体免疫球蛋白或其片段是双特异性的全长抗体。
在一些实施方案中，本公开内容提供了结合选自HER2、EGFR、CD19和VLA-2的抗原的双特异性异二聚体免疫球蛋白或其片段或双特异性全长抗体。优选的，双特异性的异二聚体免疫球蛋白或其片段或双特异性的抗体是对HER2和EGFR特异性的。同等优选的，双特异性的异二聚体免疫球蛋白或其片段或双特异性的抗体是对CD19和VLA-2特异性的。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中，至少一个额外的多肽与第一和/或第二改造的免疫球蛋白链融合。优选的，额外的结构域与第一改造的免疫球蛋白链融合。任选的，在改造亲代结构域之前，额外的结构域可以与第一和/或第二亲代免疫球蛋白链融合。其他结构域适当的选自FAB、scFv、双抗体、结构域抗体、药学活性肽或蛋白质、受体胞外结构域、移植CDR的多肽和治疗性改造的蛋白质支架。
在另一方面，本发明提供了改造多结构域蛋白质的结构域的蛋白质-蛋白质界面的方法，包括：
(a)提供包含具有蛋白质-蛋白质界面的结构域的多结构域蛋白质；
(b)选择包含不同于(a)的结构域的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域的天然存在的免疫球蛋白超家族成员作为供体结构域；
(c)重叠(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域与(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域的3D结构；
(d)在(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域与(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域的重叠3D结构中，鉴别暴露的蛋白质-蛋白质界面残基；
(e)用来自于在(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基的在等价3D结构位置上的氨基酸残基，取代在(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基中的至少一个氨基酸残基。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族成员是天然存在的同型二聚体。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族成员是天然存在的异二聚体。
通常，至少2个，优选至少3个，更优选至少4个，最优选至少5个，特别是至少6个，更特别的至少7个氨基酸残基是被取代的。优选的，(a)的多结构域蛋白质的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域能够与另一个结构域形成同型二聚体，优选天然存在的同型二聚体。优选的，(a)的具有多结构域蛋白质的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域能够与另一个结构域形成异二聚体，优选天然存在的异二聚体。优选的，在免疫球蛋白链和选定的免疫球蛋白超家族成员中鉴别的已暴露的界面残基对结构域的核心完整性不是必需的。优选的，天然存在的免疫球蛋白超家族成员选自TCR恒定结构域家族。更优选的，供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)或TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)，而在可选的实施方案中，SEQ ID NO：2中第75位氨基酸半胱氨酸(C)被丙氨酸(A)或丝氨酸(S)取代。供体结构域同样优选的是CH3结构域，更优选人CH3结构域，特别是IGHG1的人CH3结构域。
在另一实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)或TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)。
在一些实施方案中，本公开内容提供了一种方法，其中，第一和/或第二亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是不相邻的。
优选的，在(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基选自K20、V22、T26、Y43、S61、V63、W65和N67，其中所述残基用于取代(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基的至少一个氨基酸残基，其中，各组成员的氨基酸位置对应于SEQ ID NO：1的氨基酸位置。可选优选的，在(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基选自E10、A12、F14、T28、V30、T34、D59、L63、E65、C75、S77、R79和R81，其中所述残基用于取代(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域中的鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基的至少一个氨基酸残基，其中，各组成员的氨基酸位置对应于SEQ ID NO：2中的氨基酸位置。
优选的，在(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基选自K4、T6、T22、L24、E28、K29、G53、M56、M63、F65、W67，其中所述残基用于取代(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基的至少一个氨基酸残基，其中，各组成员的氨基酸位置对应于SEQ ID NO：33的氨基酸位置。可选优选的，在(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基选自M13、N18、A20、E25、F44、A47、S51、N57、V59、L61、K63，其中所述残基用于取代(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基的至少一个氨基酸残基，其中，各组成员的氨基酸位置对应于SEQ ID NO：32中的氨基酸位置。
优选的，在(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基选自Q127、Y129、L131、D136、E137、Q142、S144、T146、K150、K172、T174、V177、D179、F185、Y187、K189，其中所述残基用于取代(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基的至少一个氨基酸残基，其中，各组成员的氨基酸位置对应于SEQ ID NO：12中的氨基酸位置。
在另一方面，本发明提供了天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域用于改造异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段的用途，所述异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含至少一个改造的结构域，其具有用来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基取代的蛋白质-蛋白质界面，所述第二改造的免疫球蛋白链包含至少一个改造的结构域，其具有用来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基取代的蛋白质-蛋白质界面。
通常，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，优选天然存在的异二聚体。优选的，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员选自T细胞受体链。
更优选的，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO：1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO：2)。
同等更优选的，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO：32)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO：33)。同等更优选的，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域是CH3结构域。
实施例
实施例1：构建具有基于人α/βT细胞受体恒定结构域的CH3-CH3蛋白质-蛋白质界面的免疫球蛋白Fc异二聚体。
本实施例证实了2条在CH3结构域(EU残基第341-447位)的蛋白质-蛋白质界面中具有突变的人IGHG1 Fc链(每条链由人铰链(γ1)、CH2和CH3恒定结构域组成；EU残基第221-447位)以至少76％的效率装配成异二聚体Fc分子，其中一条链的突变仔细的选自人T细胞受体(TCR)恒定结构域α的蛋白质-蛋白质界面残基的亚组(GenBank数据库登录号AAO72258.1[残基第135-225位]；SEQ ID NO：1；
Figure BDA0001569050590002001
参照TRAC[完整序列]，theinternational ImMunoGeneTics information
Figure BDA0001569050590002002
Lefranc MP等人，NucleicAcids Res,27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；Lefranc MP,Nucleic AcidsRes.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol,29(3):185-203(2005)；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))，且第二条链选自人TCR恒定结构域β的蛋白质-蛋白质界面残基的亚组(GenBank数据库登录号AAA61026.1[残基第134-261位]，SEQ ID NO：2；
Figure BDA0001569050590002011
参照TRBC2[
Figure BDA0001569050590002012
残基第1.8-124位])。TRBC2是人TCR恒定结构域β的2个天然存在的同种异型之一。TRBC1和TRBC2可以等价的用于突变IGHG1 Fc链的CH3结构域的目的，因为其蛋白质-蛋白质界面的氨基酸序列没有差异。
突变源自对LC13 TCR分子的晶体结构(Kjer-Nielsen L等人，Structure,10(11):1521-32(2002))和人IGHG1的Fc片段的晶体结构(Krapp S等人，J Mol Biol,325(5):979-89(2003))的重叠分析。TCR和IGHG1 Fc 3D结构是从Protein Data Bank(TRBC2(SEQ IDNO：2)和人IGHG1的PDB代码分别是1KGC和1H3Y；www.pdb.org；Bernstein FC等人，Eur JBiochem,80(2):319-24(1977))中检索到的，用Coot软件重叠(Emsley P和Cowtan K,ActaCrystallogr D Biol Crystallogr,60(Pt 12Pt 1):2126-32(2004))，并用Accelrys(Cambridge,UK)的Discovery-Studio软件进一步可视化。使用对TCR异二聚体恒定结构域和CH3同型二聚体的重叠3D结构的蛋白质-蛋白质界面的检验作为合理设计的起点。考虑若干参数；这些包括但不限于：保留脯氨酸残基；且保留参与结构域核心完整性以及IGHG1CH3同型二聚体的一些静电接触的氨基酸位置；取消在IGHG1 CH3同型二聚体中发现的特定疏水性接触，和用在TCR恒定结构域异二聚体中发现的选定的疏水性接触替代那些。该分析导致设计出2组氨基酸取代的亚组，1个亚组源自CH3同型二聚体的1个亚基的蛋白质-蛋白质界面与TCR恒定结构域α的蛋白质-蛋白质界面之间的等价3D位置，且第二个亚组源自CH3同型二聚体的第二亚基的蛋白质-蛋白质界面与TCR恒定结构域β的蛋白质-蛋白质界面之间的等价3D位置；每个亚组生成可以异二聚体化的2个新型和独特的CH3改造的结构域序列。
其改造的人IGHG1 Fc链被命名为“BTα链”，在其CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有源自人TCR恒定结构域α的蛋白质-蛋白质界面的突变(图1)，同时，其改造的人IGHG1Fc链被命名为“BTβ链”，在其CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有源自人TCR恒定结构域β的蛋白质-蛋白质界面的突变(图1)。更具体而言，BTα链(SEQ ID NO：3)(EU编号规则)由人IGHG1的免疫球蛋白Fc链组成，其具有含下列取代的改造的CH3结构域：S364K、T366V、K370T、K392Y、F405S、Y407V、K409W和T411N；和相应的，“BTβ链”(SEQ ID NO：4)(EU编号规则)由人IGHG1的免疫球蛋白Fc链组成，其具有含下列取代的改造的CH3结构域：Q347E、Y349A、L351F、S364T、T366V、K370T、T394D、V397L、D399E、F405C、Y407S、K409R和T411R。
可以在非还原和还原条件下，通过SDS-PAGE分析样品，评估异二聚体Fc的形成。因为BTα链和BTβ链具有相似的分子量，将BTβ链与可变轻链κ结构域抗体融合(缩写为VL，源自VBASE2humIGKV115序列的亚家族κI-O12成员，含IGKJ1*01连接，SEQ ID NO：5；Retter I等人，Nucleic Acids Res.33(Database issue):D671-4(2005))，生成SDS-PAGE迁移率的差异，因此促进对异二聚体(SEQ ID NO：6)形成的鉴别(图2)。此外，为了能够验证异二聚体中BTα链的存在，在其C端包括了一系列六组氨酸残基(SEQ ID NO：7)。该异二聚体构建体缩写为BTαHis_VL-BTβ。
为了生成BTαHis和VL-BTβ链cDNA编码序列，由GENEART AG(Regensburg,Germany)合成编码BTα链(SEQ ID NO：8)的改造的CH3结构域和BTβ链的改造的CH3结构域的cDNA。通过标准诱变合成BTβ链，最初含F405A突变，之后转化为F405C(SEQ ID NO：9)。使用PCR装配技术，将每条链各自的改造的CH3结构域cDNA编码序列融合到合成cDNA的下游，所述合成cDNA编码人IGHG1铰链(DKTHTCPPCP)和IGHG1 CH2恒定结构域(由GENEART AG分开合成)。在PCR过程中，位于BTαHis链的C端的多聚组氨酸序列包括在抗正义寡核苷酸中；同时，使用PCR装配技术，通过将结构域cDNA(由GENEART AG分别合成)融合到BTβ链cDNA编码序列的上游，改造位于VL-BTβ链N端的可变κ结构域抗体。最后，将BTαHis链和VL-BTβ链编码DNA序列(分别是SEQ ID NO：10和11)连接到基于修饰的pREP4载体(Invitrogen,CA,USA)的独立载体中，所述载体携带CMV启动子和牛生长激素多聚腺苷酸化信号。在两条链表达载体中，通过鼠VJ2C前导肽驱动分泌。
为了瞬时表达BTαHis_VL-BTβ异二聚体，使用聚乙烯亚胺(PEI)，将等量的各改造的链载体共转染到适应悬浮液的HEK-EBNA细胞(ATCC-CRL-10852)。通常，用DNA-PEI混合物转染密度为0.8-1.2百万细胞/ml的100ml细胞悬浮液，所述混合物含有50μg编码BTαHis链的表达载体和50μg编码VL-BTβ链的表达载体。当把编码各改造的链基因的重组表达载体导入宿主细胞时，通过进一步培养细胞4-5天，允许分泌到培养基(EX-CELL 293，HEK293-无血清培养基(Sigma,Buchs,Switzerland)，补充了0.1％普流罗尼克酸(pluronic acid)、4mM谷氨酰胺和0.25μg/ml遗传霉素)中，来生产异二聚体构建体。然后，使用重组StreamlinerProtein A培养基(GE Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland)，从无细胞上清液中纯化异二聚体构建体，并用于进一步分析。
瞬时转染产量高于20mg/l。图3显示了典型的SDS-PAGE分析的结果。在蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβ异二聚体是产生的主要种类，仅存在极少量的同型二聚体种类(1道)。特别感兴趣的是在还原条件下，与标准的同型二聚体人IGHG1 Fc(GenBank数据库登录号AAC82527.1残基第103-329位；SEQ ID NO：12(3道))的SDS-PAGE迁移率相比，BTαHis_VL-BTβ异二聚体降解成2条BTαHis链和VL-BTβ链的预期分子量的条带(2道；分别是25.5kDa和37.2kDa；对于Asn 297的链N-糖基化，每个这些分子量需要加上额外的3kDa)，而标准的同型二聚体人IGHG1 Fc(4道)瓦解成1个单一的分子量条带，具有与BTαHis链相似的迁移率。相应的，在非还原条件下，与标准的同型二聚体人IGHG1Fc比较，允许鉴别以非常低丰度存在的痕量的BTαHis同型二聚体。最后，还可以非常低的丰度检测聚集体。
通过光密度扫描测定法分析非还原的SDS聚丙烯酰胺(4-12％)凝胶条带，可以评估蛋白-A纯化制品中异二聚体与同型二聚体的比例。使用FluorChem SP成像系统(WitecAG,Littau,Switzerland)，按生产商提供的操作规程，定量不同上述种类的相对比例。BTα链His_VL-BTβ链异二聚体代表了总计至少76.1％的蛋白-A纯化材料(图4A)；当忽略相对比例测量中的聚集体痕迹时，BTα链His_VL-BTβ链异二聚体代表总计至少83.8％的蛋白-A纯化材料(图4B)。
实施例2：构建具有基于人α/βT细胞受体恒定结构域的CH3-CH3蛋白质-蛋白质界面的免疫球蛋白Fc异二聚体变体。
T细胞受体结构域非常易于在折叠过程中聚集和分离，这通常是由不正确的二硫键形成导致复合化(Pecorari F等人，J Mol Biol,285(4):1831-43(1999))。TCR恒定结构域β中未配对的半胱氨酸突变表现出促进大肠杆菌中的TCR分子生产(Willcox BE等人，Protein Sci,8(11):2418-23(1999))。此外，该未配对的半胱氨酸已在若干TCR分子晶体结构中被突变。在BTβ链编码DNA序列中的C405A和C405S突变源自对人IGHG1的Fc片段的晶体结构(Krapp S等人，J Mol Biol,325(5):979-89(2003))与CD1d–α-GalCer–特异性TCR分子5E的晶体结构(PDB代码2CDF，Gadola SD等人，J Exp Med,203(3):699-710(2006))和T细胞受体(TCR)HA1.7的晶体结构(PDB代码1J8H，Hennecke J和Wiley DC,J Exp Med,195(5):571-81(2002))的重叠分析。由于最初合成具有F405A突变的BTβ链的改造的CH3结构域，该构建体被直接用于构建与实施例1所述的VL-BTβ链相同的新型VL-BTβ链，但是导入F405A突变外。然后使用标准的诱变技术，修饰具有F405A突变的VL-BTβ链，生成具有F405S突变的第二VL-BTβ链。这两条分别除了F405A和F405S突变外，均与实施例1所述的VL-BTβ链相同的新链在本文中被称为“VL-BTβF405A链”或“VL-BTβF405A”，和“VL-BTβF405S链”或“VL-BTβF405S”。
如实施例1所述，实施BTαHis_VL-BTβF405S异二聚体和BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体的瞬时表达。BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体的产量与BTαHis_VL-BTβ异二聚体相似(各为22mg/l)。BTαHis_VL-BTβF405S异二聚体获得了37mg/l的产量。为了评估BTαHis_VL-BTβF405S异二聚体形成相对于实施例1所述BTαHis_VL-BTβ异二聚体的质量，在相同的SDS-PAGE凝胶上电泳两种BT异二聚体(图3，1道(BTαHis_VL-BTβ)和5道(BTαHis_VL-BTβF405S))。在蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβF405S异二聚体是产生的主要种类，然而与实施例1所述的BTαHis_VL-BTβ异二聚体相比，观察到显著更大量的单体种类和VL-BTβF405S同型二聚体种类，表明天然存在的F405C取代比突变型F405S取代更高的异二聚体装配效率。与BTαHis_VL-BTβ异二聚体相似，在还原条件下，BTαHis_VL-BTβF405S异二聚体降解成对于BTαHis链和VL-BTβF405S链的2个预期的分子量条带(6道)。
图5显示了BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体的典型的SDS-PAGE分析的结果。在蛋白-A纯化后，BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体是产生的主要种类，仅存在极少量的同型二聚体种类(1道)。与BTαHis_VL-BTβ异二聚体相似，在还原条件下，BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体降解成对于BTαHis链和VL-BTβF405A链的2个预期的分子量条带(2道)。相应的，在非还原条件下，与标准的同型二聚体人IGHG1 Fc(3道：非还原条件；4道：还原条件)比较，允许鉴别以非常低丰度存在的痕量的BTαHis同型二聚体。最后，还可以检测非常低丰度的痕量的VL-BTβF405A同型二聚体和单体以及聚集体。
为了进一步证实BTαHis_VL-BTβF405A异二聚体的身份，将蛋白-A纯化的材料上样到Ni2+亲和sepharose(GE Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland)上，这是特异性针对含有BTαHis链的种类的层析步骤，所述特异性是由于多聚组氨酸序列。在洗涤步骤后，混合来自Ni2+亲和步骤的结合和洗脱级分，并上样到蛋白-L亲和琼脂糖(GenScriptUSA Inc.,Piscataway,NJ,USA)上，这是特异性选择具有可变轻链K结构域抗体(即，theVL-BTβF405A链)的种类的超抗原亲和树脂。然后，通过用辣根过氧化物酶标记的抗多聚组氨酸序列的抗体进行Western印迹评估上述纯化步骤的结果，从而检测BTαHis链。印迹用Sigma Fast 3,3′-二氨基联苯胺沉淀底物(Sigma,Buchs,Switzerland)染色。图6显示了在Ni2+sepharose前后，更重要的是在蛋白-L琼脂糖层析之后一致检测到BTαHis链，证实了异二聚体的身份。
通过光密度扫描测定法分析非还原的SDS聚丙烯酰胺(4-12％)凝胶条带，可以评估蛋白-A纯化制品中异二聚体与同型二聚体的比例。使用FluorChem SP成像系统(WitecAG,Littau,Switzerland)，按生产商提供的操作规程，定量不同上述种类的相对比例。BTα链His_VL-BTβ链异二聚体代表了总计至少80.7％的蛋白-A纯化材料(图7A)；当忽略相对比例测量中的聚集体和VL-BTβF405A链单体的痕迹时，BTα链His_VL-BTβF405A链异二聚体代表总计至少86.9％的蛋白-A纯化材料(图7B)。
蛋白质稳定性是研发重组抗体治疗剂的关键命题。低下的稳定性可以影响抗体在各种细胞类型中表达时的折叠能力(Garber E和Demarest SJ,Biochem Biophys ResCommun,355(3):751-7(2007))，并导致一部分临床材料错误折叠、无功能和/或易于聚集，因此是潜在的免疫原性的(Chirino AJ等人，Drug Discov Today,9(2):82-90(2004))。为了评估异二聚体Fc片段在没有任何额外蛋白质结构域干扰情况下的内在稳定性，共表达不含可变κ结构域的BTβ链(该链经改造，与其他BTβ链相似，但具有C端HA标签(YPYDVPDYA)且无VL结构域，缩写为BTβ(F405A)HA链；SEQ ID NO：17)和BTαHis链。如上所述，纯化所获得的异二聚体分子：BTαHis_BTβ(F405A)HA，并使用差示扫描量热法(DSC)分析。在VP-DSC差示扫描微量热器(GE Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland)上进行量热测量。细胞体积是0.128ml，加热速率是1℃/miN，超压保持为64p.s.i。使用的蛋白质浓度为2mg/mlPBS(pH 7.4)。通过比较含有相同缓冲液的重复两次的样品，估算蛋白质的摩尔热容，所述缓冲液中忽略蛋白质。使用标准方法分析部分摩尔热容和熔化曲线。在使用Origin(v7.0版)软件(OriginLab Corporation,Northampton,MA,USA；GE Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland提供)中的Non-Two State模型进一步分析之前，对温谱图作基线校正和浓度归一化。
人IgG亚类的预期熔化线图是已知的(Garber E和Demarest SJ,Biochem BiophysRes Commun,355(3):751-7(2007))，所有线图都显示出含有三种未折叠相变(transition)，与CH2、CH3和FAB结构域的独立解折叠对应。在四种人IgG亚类中，IGHG1具有最稳定的CH3结构域(～85℃)；而其他亚类的CH3结构域是较不稳定的，但已知无一在低于70℃时熔化。类似的，已知所有的亚类的CH2结构域都具有～70℃的熔化温度(Garber E和Demarest SJ,Biochem Biophys Res Commun,355(3):751-7(2007))。总体上，预期稳定的抗体Fc片段(铰链-CH2-CH3)不会有低于70℃的熔化相变。图7C显示了BTαHis_BTβ(F405A)HA异二聚体的温谱图，在70℃表现出单尖相变，说明CH2结构域和改造的CH3结构域的熔化相变。重要的是应注意到，在热吸收峰之后，没有记录到任何尖锐的下降，表示在热解折叠后没有发生任何沉淀或聚集体形成，如对于稳定的抗体Fc片段所预期的(Liu H等人，Immunol Lett,106(2):144-53(2006))。此外，由于其结构域的熔化相变与对人IGHG4Fc片段观察到的相变相似，异二聚体Fc片段具有与天然存在的Fc片段相似的稳定性，其中CH2结构域和CH3结构域都在约70℃时熔化(Garber E和Demarest SJ,Biochem Biophys ResCommun,355(3):751-7(2007))。总而言之，该热解折叠的研究显示，基于TCRα和β恒定结构域的具有改造蛋白质-蛋白质界面的异二聚体Fc片段是稳定的，且适合构建其他治疗性异二聚体免疫球蛋白。
实施例3：构建含最少取代的具有基于人α/βT细胞受体恒定结构域的CH3-CH3蛋白质-蛋白质界面的免疫球蛋白Fc异二聚体变体。
为了鉴别将超过可能的同型二聚体形成而形成具有减少数量的氨基酸取代的异二聚体的BTα和β链的配对，其中对于一条链而言所述取代源自人T细胞受体(TCR)恒定结构域α(GenBank数据库登录号AAO72258.1，残基第135-225位；SEQ ID NO：1；
Figure BDA0001569050590002083
参照TRAC[完整序列]，the international ImMunoGeneTics information
Figure BDA0001569050590002084
LefrancMP等人，Nucleic Acids Res,27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol,29(3):185-203(2005)；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))的关键性蛋白质-蛋白质界面残基，并且对于第二条链而言所述取代源自人TCR恒定结构域β(GenBank数据库登录号AAA61026.1[残基第134-261位]，SEQ ID NO：2；
Figure BDA0001569050590002081
参照TRBC2[
Figure BDA0001569050590002082
残基第1.8-124位])的关键性蛋白质-蛋白质界面残基，将实施例1和2所述的2个或多个取代逐渐导入到各条链中。
有源自人TCR恒定结构域α和β的关键性蛋白质-蛋白质界面残基的氨基酸取代的多个亚组，它们可被选择分别用于在BTα和β链的TCR恒定结构域序列和人IGHG1 Fc序列之间轮换。对每个所考虑的亚组的残基选择是基于结构性考虑的，例如，蛋白质-蛋白质表面的相互作用计算。所有的取代亚组都通过使用标准的分子生物学技术(实施例1)，突变人IGHG1 Fc DNA编码序列(SEQ ID NO：12)而改造。然后，将所获得的变体独立的连接到前述修饰型pREP4载体中，并共转染到实施例1所述的HEK293-EBNA细胞。根据实施例1生产蛋白质。使用非还原和还原条件下的样品的SDS-PAGE分析和光密度扫描测定法的组合(如实施例1所述)，评估每个取代亚组的异二聚体化速率。
与实施例1相似，因为改造的链具有相近的分子量，因此将BTβ链变体与可变轻链κ结构域抗体(缩写为VL，源自VBASE2 humIGKV115序列的亚家族κI-O12成员，含IGKJ1*01连接，SEQ ID NO：5；Retter I.等人，2005,Nucleic Acids Res.,33,Database issue D671-D674)融合，产生SDS-PAGE迁移率的差异，因此有利于鉴别异二聚体的形成。为了区分这些链与实施例1，并且由于除了基于通过定点诱变导入的取代的特定TCRα和β恒定结构域以外，这些BT链具有与人IGHG1 Fc序列相同的氨基酸序列，因此在本文中分别将BTα和VL-BTβ链缩写为Fc(BTA)链和VL-Fc(BTB)链。对于每条链，使用EU编号规则，标注导入到人IGHG1Fc序列中的特定取代。表1中，按产量和异二聚体化速率概括了上述表达实验的结果。每条链作出2至6个取代。
图8显示了典型的SDS-PAGE分析的结果。在蛋白-A纯化后，异二聚体是产生的主要种类，仅存在极少量的同型二聚体种类(1道)。在还原条件下，异二聚体降解成对于改造的Fc(BTA)链和另一改造的VL-Fc(BTB)链的2个预期的分子量条带(2道；分别是～25kDa和～37kDa)。瞬时转染的产量高达50mg/l，而最佳异二聚体化速率为90％。
最佳的取代亚组组合是：Fc(BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N_VL-Fc(BTB)-F405A-Y407S(SEQ ID NO：23和24)，具有90％异二聚体化速率(图9)和30mg/l的瞬时转染产量。在每条链中测试的最小取代数是2，具有64％异二聚体化速率和35mg/l的瞬时转染产量。为了比较本文所述的异二聚体化技术和现有的方法，生成了“隆突-入-孔”Fc变体(Merchant AM等人，Nat Biotechnol,16(7):677-81(1998))，其具有涵盖了与可变轻链κ结构域抗体(VL，SEQ ID NO：5)融合的“孔”的部分(缩写为Fc-T366W_VL-Fc-T366S-L368A-Y407V；EU编号规则；SEQ ID NO：30和31)。在并列的表达实验中，基于“隆突-入-孔”的分子仅具有66％异二聚体化速率(数据未显示)。
表1：最小BT链的产量。括号中标注了异二聚体的形成百分比，当忽略相对比例测量中的杂质时，其代表了蛋白A纯化材料中的异二聚体百分比。
Figure BDA0001569050590002101
实施例4：构建具有基于人δ/γT细胞受体恒定结构域的CH3-CH3蛋白质-蛋白质界面的免疫球蛋白Fc异二聚体。
本实施例证实了2条在CH3结构域(EU残基第341-447位)的蛋白质-蛋白质界面中具有突变的人IGHG1 Fc链(每条链由人铰链(γ1)、CH2和CH3恒定结构域组成；EU残基第221-447位)以至少52％的效率装配成异二聚体Fc分子，其中一条链的突变仔细的选自人T细胞受体(TCR)恒定结构域δ的蛋白质-蛋白质界面残基的亚组(GenBank数据库登录号AAA61125.1[残基第135-221位]；SEQ ID NO：32；
Figure BDA0001569050590002111
参照TRDC[
Figure BDA0001569050590002112
残基第1.7-120位]，the international ImMunoGeneTics information
Figure BDA0001569050590002113
Lefranc MP等人，Nucleic Acids Res,27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；Lefranc MP,NucleicAcids Res.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol,29(3):185-203(2005)；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))，且第二条链选自人TCR恒定结构域γ的蛋白质-蛋白质界面残基的亚组(GenBank数据库登录号AAA61110.1[残基第145-245位]，SEQ ID NO：33；
Figure BDA0001569050590002114
参照TRGC1[
Figure BDA0001569050590002115
残基第1.1-124位])。TRGC1和TRDC是天然存在的同种型。TRGC1是人TCR恒定结构域γ的2个天然存在的同种异型之一。TRGC1和TRGC2(被称为2x或3x)都可以等价的用于突变IGHG1 Fc链的CH3结构域的目的，因为其蛋白质-蛋白质界面的氨基酸序列没有差异。
突变源自对G115γδTCR分子的晶体结构(Allison TJ等人，Nature,411(6839):820-4(2001))和人IGHG1的Fc片段的晶体结构(Krapp S等人，J Mol Biol,325(5):979-89(2003))的重叠分析。TCR和IGHG1 Fc 3D结构是从Protein Data Bank(人TCR和人IGHG1的PDB代码分别是1HXM和1H3Y；www.pdb.org；Bernstein FC等人，Eur J Biochem,80(2):319-24(1977))中检索到的，用Coot软件重叠(Emsley P和Cowtan K,Acta Crystallogr D BiolCrystallogr,60(Pt 12Pt 1):2126-32(2004))，并用Accelrys(Cambridge,UK)的Discovery-Studio软件进一步可视化。使用对TCR异二聚体恒定结构域和CH3同型二聚体的重叠3D结构的蛋白质-蛋白质界面的检验作为合理设计的起点。考虑若干参数；这些包括但不限于：保留脯氨酸残基；且保留参与结构域核心完整性以及IGHG1 CH3同型二聚体的一些静电接触的氨基酸位置；取消在IGHG1 CH3同型二聚体中发现的特定疏水性接触，和用在TCR恒定结构域异二聚体中发现的选定的疏水性接触替代那些。该分析导致设计出2组氨基酸取代的亚组，1个亚组源自CH3同型二聚体的1个亚基的蛋白质-蛋白质界面与TCR恒定结构域δ的蛋白质-蛋白质界面之间的等价3D位置，且第二个亚组源自CH3同型二聚体的第二亚基的蛋白质-蛋白质界面与TCR恒定结构域γ的蛋白质-蛋白质界面之间的等价3D位置；每个亚组生成可以异二聚体化的2个新型和独特的CH3改造的结构域序列。
其改造的人IGHG1 Fc链被命名为“BTδ链”，在其CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有源自人TCR恒定结构域δ的蛋白质-蛋白质界面的突变，同时，其改造的人IGHG1 Fc链被命名为“BTγ链”，在其CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有源自人TCR恒定结构域γ的蛋白质-蛋白质界面的突变(图1)。更具体而言，BTδ链(SEQ ID NO：34)由人IGHG1的免疫球蛋白Fc链组成，其具有含下列取代的改造的CH3结构域：L351M、S364N、T366A、G371E、K392F、T394A、D399S、F405N、Y407V、K409L和T411K(EU编号规则)；和相应的，“BTγ链”(SEQID NO：35)由人IGHG1的免疫球蛋白Fc链组成，其具有含下列取代的改造的CH3结构域：Q347K、Y349T、S364T、T366L、K370E、G371K、T394G、V397M、F405M、Y407F、K409W(EU编号规则)。
可以在非还原和还原条件下，通过SDS-PAGE分析样品，评估Fc异二聚体的形成。因为BTδ链和BTγ链具有相似的分子量，将BTγ链与可变轻链κ结构域抗体融合(缩写为VL，源自VBASE2humIGKV115序列的亚家族κI-O12成员，含IGKJ1*01连接，SEQ ID NO：5；Retter I等人，Nucleic Acids Res.33(Database issue):D671-4(2005))(VL-BTγ，SEQ ID NO：36)，生成SDS-PAGE迁移率的差异，因此促进对异二聚体形成的鉴别。所获得的异二聚体构建体缩写为BTδ_VL-BTγ。
为了生成BTδ和VL-BTγ链cDNA编码序列，由GENEART AG(Regensburg,Germany)合成编码BTδ链的改造的CH3结构域(SEQ ID NO：37)和BTγ链的改造的CH3结构域(SEQ IDNO：38)的cDNA。使用PCR装配技术，将每条链各自的改造的CH3结构域cDNA编码序列融合到合成cDNA的下游，所述合成cDNA编码人铰链IGHG1(DKTHTCPPCP)和CH2恒定结构域(由GENEART AG分别合成)。使用PCR装配技术，将结构域cDNA(由GENEART AG分别合成)融合到BTγ链cDNA编码序列的上游，改造位于VL-BTγ链N端的可变κ结构域抗体。
然后，将获得的变体独立连接到前述修饰的pREP4载体中，共转染到实施例1所述的HEK293-EBNA细胞。仍按实施例1生产。瞬时转染产量高达60mg/l。图10显示了典型的SDS-PAGE分析的结果。
为了评估蛋白-A纯化材料中异二聚体与同型二聚体的比例，根据实施例1所述的方法，通过光密度扫描测定法分析非还原的SDS聚丙烯酰胺(4-12％)凝胶条带，定量不同种类的相对比例。BTδ_VL-BTγ异二聚体代表了至少52.1％的蛋白-A纯化材料(图11A)；当忽略相对比例测量中的聚集体和单体痕迹时，BTδ_VL-BTγ异二聚体代表总量至少57.5％的蛋白-A纯化材料(图11B)。
实施例5：用具有基于人α/βT细胞受体恒定结构域的CH3-CH3蛋白质-蛋白质界面的异二聚体Fc，和具有基于异二聚体
Figure BDA0001569050590002133
细胞受体恒定结构域的CH1-CK蛋白质-蛋白质界面的FAB片段，构建含单价免疫球蛋白
本实施例证实了至少3条人免疫球蛋白链以至少50％的效率装配成FAB改造的异二聚体免疫球蛋白分子，所述3条人免疫球蛋白链为：一条由与人重链恒定结构域CH1(γ1)、铰链(γ1)、CH2(γ1)和来自BTα或BTβ链的改造的CH3结构域融合的重链可变结构域组成的链；1条BTα链或1条BTβ链；以及一条链，其由与人Cκ轻链恒定结构域融合的轻链可变结构域组成，其中，CH1(γ1)(IGHG1，EU残基第118-215位)和Cκ(IGKC，EU残基第108-214位)结构域的蛋白质-蛋白质界面已在选定的位置被分别来自天然存在的人TCR恒定结构域δ(GenBank数据库登录号AAA61125.1[残基第135-221位]；SEQ ID NO：32；
Figure BDA0001569050590002131
参照TRDC[
Figure BDA0001569050590002132
残基第1.7-120位]，the international ImMunoGeneTics information
Figure BDA0001569050590002141
Lefranc MP等人，Nucleic Acids Res,27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，DevComp Immunol,29(3):185-203(2005)；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))和天然存在的人TCR恒定结构域γ(GenBank数据库登录号AAA61110.1[残基第145-245位]；SEQ ID NO：33；
Figure BDA0001569050590002142
参照TRGC1[
Figure BDA0001569050590002143
残基第1.1-124位])的蛋白质-蛋白质界面残基亚组细心的取代。
突变源自对TCR分子的晶体结构和人FAB(γ1)片段的晶体结构的重叠分析。TCR和人FAB(γ1)片段3D结构是从Protein Data Bank(PDB代码分别是1HXM和1VGE；Allison TJ等人，Nature,411(6839):820-4(2001)；Chacko S等人，J Biol Chem，271(21):12191-8(1996))中检索到的，用Coot软件重叠(Emsley P和Cowtan K,Acta Crystallogr D BiolCrystallogr,60(Pt 12Pt 1):2126-32(2004))，并用Accelrys(Cambridge,UK)的Discovery-Studio软件进一步可视化。使用对δ/γTCR异二聚体恒定结构域和CH1(γ1)-Cκ异二聚体的重叠3D结构的蛋白质-蛋白质界面的检验作为合理设计的起点。考虑若干参数；这些包括但不限于：保留脯氨酸残基；且保留参与结构域核心完整性以及CH1(γ1)和Cκ结构域之间的一些静电接触的氨基酸位置；取消在CH1(γ1)-Cκ异二聚体中发现的特定疏水性接触，和用在TCR恒定结构域γ-δ异二聚体中发现的选定的疏水性接触替代那些。该分析导致设计出2组氨基酸取代的亚组，1个亚组源自CH1(γ1)结构域的蛋白质-蛋白质界面与TCR恒定结构域δ的蛋白质-蛋白质界面之间的等价3D位置，且第二个亚组源自Cκ结构域的蛋白质-蛋白质界面与TCR恒定结构域γ的蛋白质-蛋白质界面之间的等价3D位置；从而生成2个改造的、新型和独特的结构域，所述结构域仍然可以异二聚体化，但不同于天然存在的CH1(γ1)-Cκ异二聚体结构域配对。
包含可变重链结构域以及在其蛋白质-蛋白质界面中具有源自人TCR恒定结构域δ的蛋白质-蛋白质界面的突变的人CH1(γ1)结构域的FAB片段的改造的重链被命名为”VH-CH1δ”(图12)；同时，包含可变轻链结构域和在其蛋白质-蛋白质界面中具有源自人TCR恒定结构域γ的蛋白质-蛋白质界面的突变的人Cκ结构域的改造的κ轻链被命名为“VL-CKγ”(图12)。更具体而言，VH-CH1δ(SEQ ID NO：39)由改造的重链FAB片段组成，其具有含下列取代的改造的CH1(γ1)结构域：L128M、A141N、G143A、D148E、H168F、F170A、Q175S、S181N、S183V、V185L、T187K(EU编号规则)；和相应的，VL-CKγ(SEQ ID NO：40)由改造的κ轻链组成，其具有含下列取代的改造的Cκ结构域：S114K、F116T、S131T、V133L、N137E、N138K、S162G、T164M、S174M、S176F、T178W(EU编号规则)。
在该实施例中，使用来自人源化抗人CD19抗体(公开在PCT公开号：WO 2010/095031中(缩写为VH(抗hCD19)和VL(抗hCD19)))的可变重链和轻链结构域作为入口，分别构建VH-CH1δ和VL-CKγ链。与前述BTβ链(实施例1-3)上游融合的VH-CH1δ链的组合(在本实施例中应注意到，链具有C端的c-myc标签(EQKLISEEDLN)，缩写为BTβc-myc链)导致了新改造的免疫球蛋白重链，其一旦与上述新改造的VL-CKγ轻链和实施例1-3所述BTαHis链共表达，就生成了具有新型FAB片段的异二聚体单价(即，具有对一种抗原的一种特异性)免疫球蛋白分子的新类型，其中，CH1(γ1)和Cκ恒定结构域具有分别基于TCRδ和TCRγ恒定结构域蛋白质-蛋白质界面的新型蛋白质-蛋白质界面，和具有基于TCRα和β恒定结构域的异二聚体改造的CH3结构域的Fc片段(实施例1-3)。该新型免疫球蛋白分子缩写为VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ(SEQ ID NO：41、7和42)。
为了生成VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc链和VL(抗hCD19)-CKγ链cDNA编码序列(分别是SEQ ID NO：43和44)，由GENEART AG(Regensburg,Germany)合成同时涵盖了CH1δ结构域序列(SEQ ID NO：45)和CKγ结构域序列(SEQ ID NO：46)的独特cDNA。使用PCR，单独扩增每条链，且将各自的改造的恒定结构域cDNA编码序列融合到合成cDNA的下游，所述合成cDNA编码其各自的可变结构域(由GENEART AG分别合成)。然后，将获得的VH(抗hCD19)-CH1δcDNA片段进一步融合到具有C端c-myc标签的BTβF405A链的上游，生成最终的VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc链。之后，将两条链独立连接到实施例1所述的修饰型pREP4载体中。BTαHis链源自实施例1(SEQ ID NO：10)。
为了瞬时表达VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子，将等量的三种改造的链载体共转染到前述适应悬浮液的HEK293-EBNA细胞(实施例1)。然后，使用蛋白-A亲和层析，从无细胞上清液中纯化FAB改造的异二聚体构建体，用于进一步分析(根据实施例1的方法)。可以通过在非还原条件下SDS-PAGE分析样品，评估FAB改造的异二聚体分子的正确装配，因为正确装配的分子预期具有与可能的同型二聚体种类不同的SDS-PAGE迁移率。
瞬时转染的产量高于16mg/l。图13显示了典型的SDS-PAGE分析结果。在蛋白-A纯化后，VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子(1道)是产生的主要种类(A)，存在一些同型二聚体种类(B)和一些半分子(C)。
通过光密度扫描测定法分析非还原的SDS聚丙烯酰胺(4-12％)凝胶条带(根据实施例1所述的方法)，可以评估蛋白-A纯化制品中异二聚体与同型二聚体的比例。图14显示了VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子代表了至少50％的蛋白-A纯化材料。
使用差示扫描量热法(DSC)(参见实施例2的方法)，评估VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子的热稳定性。单克隆抗体具有其同种型特征性的熔化线图，通常是FAB片段、CH2和CH3结构域的组合相变(参见实施例2)；在抗体的熔化线图中，可以简单的鉴别出FAB片段的特异相变(Garber,E.和S.J.Demarest,Biochem Biophys ResCommun.,355(3)：751-7,2007)。图15显示了VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子的热解折叠实验的一个例子：观察到在70.7℃和～75℃的2个重叠的尖锐相变，对应改造的FAB片段、CH2结构域和改造的CH3结构域的熔化相变。由于在之前的测量中(实施例2)，BTαHis_BTβ(F405A)HA异二聚体Fc在70℃表现出单尖的熔化相变，因此，可总结出VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CKγ分子的改造的FAB片段的熔化相变具有～75℃的中点。重要的是应注意到：在热吸收峰之后，没有记录到任何尖锐的下降，表示在热解折叠后没有发生任何沉淀或聚集体形成(Liu H等人，Immunol Lett,106(2):144-53(2006))。总而言之，该热变性的研究显示，具有基于TCRδ和γ恒定结构域的改造蛋白质-蛋白质界面的新型FAB片段是稳定，且适合构建其他治疗性异二聚体免疫球蛋白；更确切的是包含两个新型的恒定结构域异二聚体配对的的免疫球蛋白分子，其中一对具有基于人T细胞受体恒定结构域α和β的改造的蛋白质-蛋白质界面，另一对具有基于人T细胞受体恒定结构域δ和γ的改造的蛋白质-蛋白质界面。
实施例6：用具有基于人α/βT细胞受体恒定结构域的CH3-CH3蛋白质-蛋白质界面的异二聚体Fc，和具有基于同型二聚体IGHG1 CH3恒定结构域的CH1-CK蛋白质-蛋白质界面的FAB片段，构建单价免疫球蛋白。
本实施例证实了至少3条人免疫球蛋白链以至少51.9％的效率装配成FAB改造的异二聚体免疫球蛋白分子，所述免邮球蛋白链为：一条由与人重链恒定结构域CH1(γ1)、铰链(γ1)、CH2(γ1)和来自BTα或BTβ链的改造的CH3结构域融合的重链可变结构域组成的链；1条BTα链或1条BTβ链；以及一条由与人Cκ轻链恒定结构域融合的轻链可变结构域组成的链；其中，CH1(γ1)(IGHG1，EU残基第118-215位)和Cκ(IGKC，EU残基第108-214位)结构域的蛋白质-蛋白质界面已在选定的位置被来自人CH3(γ1)恒定结构域(IGHG1,EU残基第341-447位；SEQ ID NO：47)的蛋白质-蛋白质界面残基亚组细心的取代。
突变源自对Fc(γ1)片段的晶体结构和人FAB(γ1)片段的晶体结构的重叠分析。Fc(γ1)片段和人FAB(γ1)片段的3D结构是从Protein Data Bank(PDB代码分别是1H3U和1VGE；Krapp S等人，J Mol Biol,325(5):979-89(2003)；Chacko S等人，J Biol Chem,271(21):12191-8(1996))中检索到的，用Coot软件重叠(Emsley P和Cowtan K,ActaCrystallogr D Biol Crystallogr,60(Pt 12Pt 1):2126-32(2004))，并用Accelrys(Cambridge,UK)的Discovery-Studio软件进一步可视化。使用对同型二聚体的CH3(γ1)恒定结构域配对和CH1(γ1)-Cκ异二聚体的重叠3D结构的蛋白质-蛋白质界面的检验，作为合理设计的起点。考虑若干参数；这些包括但不限于：保留脯氨酸残基且保留参与结构域核心完整性以及CH1(γ1)-Cκ异二聚体的一些静电接触的氨基酸位置；取消在CH1(γ1)-Cκ异二聚体中发现的特定疏水性接触，和用在同型二聚体CH3恒定结构域配对中发现的选定的疏水性接触替代那些。该分析导致设计出2组氨基酸取代的亚组，1个亚组源自CH1(γ1)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面与人CH3(γ1)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面之间的等价3D位置，且第二个亚组源自Cκ结构域的蛋白质-蛋白质界面与人CH3(γ1)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面之间的等价3D位置；从而生成2个改造的、新型和独特的结构域，所述结构域仍然可以异二聚体化，但不同于天然存在的CH1(γ1)-Cκ异二聚体结构域配对。
包含可变重链结构域以及在其蛋白质-蛋白质界面中具有源自CH3(γ1)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的突变的人CH1(γ1)结构域的FAB片段的改造的重链被命名为”VH-CH13”(图16)；同时，包含可变轻链结构域和在其蛋白质-蛋白质界面中具有源自CH3(γ1)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的突变的改造的人Cκ恒定结构域的改造的κ轻链被命名为“VL-CK 3”(图16)。更具体而言，VH-CH13链(SEQ ID NO：48)由改造的重链FAB片段组成，其具有含下列取代的改造的CH1(γ1)结构域：S124Q、F126Y、K133D、S134E、T139Q、A141S、G143T、H168K、F170T、Q175D、S181F、S183Y、V185K(EU编号规则)；和相应的，VL-CK3结构域(SEQ ID NO：49)由改造的轻链FAB片段组成，其具有含下列取代的改造的Cκ结构域：S114Q、F116Y、F118L、E123D、Q124E、V133T、N137K、Q160K、S162T、T164V、S174F、S176Y、T178K(EU编号规则)。
在该实施例中，使用来自人源化抗人CD19抗体(公开在PCT公开号：WO 2010/095031中(缩写为VH(抗hCD19)和VL(抗hCD19)))的可变重链和轻链结构域作为入口，分别构建VH-CH13和VL-CK3链。与前述BTβ链上游融合的VH-CH13链的组合(在本实施例中应注意到，链具有C端的c-myc标签(EQKLISEEDLN)，缩写为BTβc-myc链)导致了新改造的免疫球蛋白重链，其一旦与上述新改造的VL-CK3轻链和实施例1-3所述BTαHis链共表达，就生成了具有新型FAB片段的异二聚体单价(即，具有对一种抗原的一种特异性)免疫球蛋白分子的新类型，其中，CH1(γ1)和Cκ恒定结构域具有基于CH3(γ1)恒定结构域同型二聚体蛋白质-蛋白质界面的新型蛋白质-蛋白质界面，和具有基于TCRα和β恒定结构域的异二聚体改造的CH3结构域的Fc片段(参见实施例1-3)。该新型免疫球蛋白分子缩写为VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CK3(SEQ ID NO：50、7和51)。
为了生成VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc链和VL(抗hCD19)-CK3链cDNA编码序列(分别是SEQ ID NO：52和53)，由GENEART AG(Regensburg,Germany)合成同时涵盖了CH13结构域序列(SEQ ID NO：54)和CK3结构域序列(SEQ ID NO：55)的独特cDNA。使用PCR，单独扩增每条链，且将各自的改造的恒定结构域cDNA编码序列融合到合成cDNA的下游，所述合成cDNA编码其各自的可变结构域(由GENEART AG分别合成)。将获得的VH(抗hCD19)-CH13DNA片段进一步融合到具有C端c-myc标签的BTβF405A链的上游，生成最终的VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc链。之后，将两条链独立连接到实施例1所述的修饰型pREP4载体中。BTαHis链源自实施例1(SEQ ID NO：10)。
为了瞬时表达VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CK3分子，将等量的三种改造的链载体共转染到前述适应悬浮液的HEK293-EBNA细胞(实施例1)。然后，使用蛋白-A亲和层析，从无细胞上清液中纯化FAB改造的异二聚体构建体，用于进一步分析(根据实施例1的方法)。可以通过在非还原条件下SDS-PAGE分析样品，评估FAB改造的异二聚体分子的正确装配，因为正确装配的分子预期具有与可能的同型二聚体种类不同的SDS-PAGE迁移率。
瞬时转染的产量高于50mg/l。图17显示了典型的SDS-PAGE分析结果。在蛋白-A纯化后，VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CK3分子(1道)是产生的主要种类(A)，存在一些同型二聚体种类(B)和一些半分子(C)。
通过光密度扫描测定法分析非还原的SDS聚丙烯酰胺(4-12％)凝胶条带(根据实施例1所述的方法)，可以评估蛋白-A纯化制品中异二聚体与同型二聚体的比例。图18显示了VH(抗hCD19)-CH13-BTβc-myc_BTαHis_VL(抗hCD19)-CK3分子代表了至少51.9％的蛋白-A纯化材料。
总而言之，该实施例显示，具有基于同型二聚体CH3(γ1)恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的改造蛋白质-蛋白质界面的新型FAB片段适合构建其他治疗性异二聚体免疫球蛋白；更确切的是包含两个新型的恒定结构域异二聚体配对的的免疫球蛋白分子，其中一对具有基于人T细胞受体恒定结构域α和β的改造的蛋白质-蛋白质界面，另一对具有基于同型二聚体CH3(γ1)恒定结构域的改造的蛋白质-蛋白质界面。
实施例7：具有源自天然存在的同型二聚体或异二聚体免疫球蛋白超家族成员的改造的蛋白质-蛋白质界面的免疫球蛋白结构域。
该实施例提供了在人免疫球蛋白结构域中突变的各种组，从而在受体结构域中生成新型蛋白质-蛋白质界面，并且允许1个改造的结构域通过异二聚体化或同型二聚体化与另一个改造的结构域相互作用。
突变可以源自天然存在的二聚体免疫球蛋白超家族成员，例如天然存在的同型二聚体人IGHG1 CH3结构域或天然存在的异二聚体，如人TCRα(
Figure BDA0001569050590002211
参照TRAC，theinternational ImMunoGeneTics information
Figure BDA0001569050590002212
Lefranc MP等人，NucleicAcids Res,27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；Lefranc MP,Nucleic AcidsRes.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol,29(3):185-203(2005)；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))、TCRβ(
Figure BDA0001569050590002213
参照TRBC1和TRBC2)、TCRγ(
Figure BDA0001569050590002214
参照TRGC1、TRGC2(2x)和TRGC2(3x))和TCRδ(
Figure BDA0001569050590002215
参照TRDC)恒定结构域，并被导入到γ1、γ2、γ3、γ4、α1、α2、ε和
Figure BDA00015690505900022111
同种型的人重链免疫球蛋白恒定结构域中(分别是
Figure BDA0001569050590002216
参照IGHG1、IGHG2、IGHG3、IGHG4、IGHA1、IGHA2、IGHE、IGHM)，或导入到人免疫球蛋白轻链恒定结构域κ(
Figure BDA0001569050590002217
参照IGKC)中，或导入到人免疫球蛋白轻链恒定结构域λ1、λ2、λ3、λ6和λ7(分别是
Figure BDA0001569050590002218
参照IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7)。
在该实施例中，氨基酸取代源自对TCR结构域的3D结构(PDB代码：1KGC或1J8H(TCRα-TCRβ)和1HXM(TCRδ-TCRγ))和人IgG结构域的3D结构的重叠分析，所述3D结构是从公共数据库中检索到的(参见表2)，或根据利用度建模(α1、α2、ε的CH1结构域；γ2、γ3、α2、μ的CH2结构域；γ2、γ3、α2、μ的CH3结构域和μ的CH4结构域)。此外，氨基酸取代源自按配对模式对人IgG结构域的3D结构的重叠分析；例如，将人IGHG1 CH3同型二聚体结构域配对重叠到人IGHG1 CH1-Cκ异二聚体上。使用结构同源性-建模服务商Swiss-Model(Arnold K等人，Bioinformatics,22(2):195-201(2006)；http://swissmodel.expasy.org)的自动化模式计算模型，使用下列入口：根据项目需要，用特定的氨基酸取代从
Figure BDA0001569050590002219
数据库(theinternational ImMunoGeneTics information
Figure BDA00015690505900022110
Lefranc MP等人，NucleicAcids Res,27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；Lefranc MP,Nucleic AcidsRes.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol,29(3):185-203(2005)；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))中检索蛋白质结构域氨基酸序列，并且通过SWISS-MODEL软件，从相关的蛋白质结构域中自动鉴别由实验性解析的3D结构组成的3D结构模板。从RCSB蛋白质数据库(www.pdb.org；BermanHM等人，Nucleic Acids Res,28(1):235-42(2000))中检索所有的实验性解析的3D结构。用Coot软件进行重叠(Emsley P和Cowtan K,Acta Crystallogr D Biol Crystallogr,60(Pt12Pt 1):2126-32(2004))。在Accelrys(Cambridge,UK)的Discovery-Studio软件中进行可视化分析。按实施例1所述相似的规则，选择每个突变亚组。
用作供体结构域或亲代结构域的同型二聚体或异二聚体免疫球蛋白结构域的例子选自人IGHA1 CH1、IGHA1 CH2、IGHA1 CH3、IGHA2 CH1、IGHA2 CH2、IGHA2 CH3、IGHD CH1、IGHD CH2、IGHD CH3、IGHG1 CH1、IGHG1 CH2、IGHG1 CH3、IGHG2 CH1、IGHG2 CH2、IGHG2CH3、IGHG3 CH1、IGHG3 CH2、IGHG3 CH3、IGHG4 CH1、IGHG4 CH2、IGHG4 CH3、IGHGP CH1、IGHGP CH2、IGHGP CH3、IGHE CH1、IGHE CH2、IGHE CH3、IGHE CH4、IGHM CH1、IGHM CH2、IGHM CH3、IGHM CH4、IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6、IGLC7、TRAC、TRBC1、TRBC2、TRDC、TRGC1、TRGC2(2x)和TRGC2(3x)。
表2：用于重叠分析人IgG分子的PDB代码
Figure BDA0001569050590002231
人IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4同种型之间的CH1-CH3结构域的氨基酸变异的细节可见于图19。
图20-23中提供了可导入到人IGHG1-G4 CH1、IGHG1-G4 CH2、IGHG1-G4 CH3、IHGECH4、IGHM CH4、IGKC和IGLC(IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7)的蛋白质-蛋白质界面中的取代的完整列表，所述取代源自人TCR恒定结构域(TRAC、TRBC2、TRDC和TRGC1)或人IGHG1CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面，对应于
Figure BDA0001569050590002232
数据库(http://imgt.cines.fr/,theinternational ImMunoGeneTics information
Figure BDA0001569050590002233
Lefranc MP等人，NucleicAcids Res、27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；Lefranc MP,Nucleic AcidsRes.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol,29(3):185-203(2005)；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))中引用的
Figure BDA0001569050590002234
编号规则。
下文还提供了对考虑用关键性氨基酸残基进行取代的优选位置的完整概述，所述关键性氨基酸残基源自TCR恒定结构域(α、β、δ、γ)或IGHG1的CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面。由于
Figure BDA0001569050590002235
编号规则基于对免疫球蛋白超家族结构域的3D结构的比较性分析，因此定义了供体和受体(亲代)结构域之间的取代的3D等价位置。
7.1分子建模的例子
7.1.1基于人TCRα-TCRβ恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面，对异二聚体结构域配对建模
a.基于TCRα的取代
下文列举了人TCRα恒定结构域(供体结构域)的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸序列位置，所述位置用于取代亲代免疫球蛋白结构域的蛋白质-蛋白质界面中的3D等价氨基酸序列位置：
●人TCRα的供体位置如下：第20、22、26、79、85.1、86、88和90位(具有下列氨基酸：K20、V22,T26、Y79、S85.1、V86、W88和N90)，其中，各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002241
编号规则标注的(the international ImMunoGeneTics information
Figure BDA0001569050590002242
LefrancMP等人，Nucleic Acids Res,27(1):209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res,28(1):219-21(2000)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res,29(1):207-9(2001)；Lefranc MP,Nucleic Acids Res.31(1):307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol,29(3):185-203(2005)；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics,6(4):253-64(2007))。
●所有的人免疫球蛋白结构域中的受体位置如下：第20、22、26、79、85.1、86、88和90位；第79位的例外是：α1:CH2(78)、α2：CH2(78)、ε：CH2(81)和ε：CH3(80)，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002243
编号规则标注的。
b.基于TCRβ的取代
下文列举了人TCRβ恒定结构域(供体结构域)的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸序列位置，所述位置用于取代亲代免疫球蛋白结构域的蛋白质-蛋白质界面中的3D等价氨基酸序列位置：
●人TCRβ的供体位置如下：第3、5、7、20、22、26、81、84.1、84.3、85.1、86、88和90位(具有下列氨基酸：E3、A5、F7、T20、V22、T26、D81、L84.1、E84.3、C85.1或A85.1或S85.1、S86、R88和R90)，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002251
编号规则标注的。
●所有的人免疫球蛋白结构域中的受体位置如下：第3、5、7、20、22、26、81、84、84.2、85.1、86、88和90位；第81位的例外是α1：CH2(80)、α2中：CH2(80)、ε：CH2(83)；第84位的例外是α1：CH2(83)、α2：CH2(83)；对于第84.2位的例外是α1：CH2(84)、α2：CH2(84)，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002252
编号规则标注的。
c.对人IGHG1 CH3同型二聚体上的人TCRα-TCRβ恒定结构域蛋白质-蛋白质界面建模。
为了对基于具有源自人TCRα/β恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的人IGHG1 CH3同型二聚体的新型异二聚体建模，计算在其蛋白质-蛋白质界面中被选定氨基酸取代的人IGHG1 CH3单体的2个模型(参见上文的方法)。1个单体在其蛋白质-蛋白质界面的选定的等价3D位置上被来自人TCRα恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的氨基酸取代，而第二个单体在其蛋白质-蛋白质界面的选定的等价3D位置上被来自人TCRβ恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的氨基酸取代。进一步将获得的2个改造的蛋白质结构域模型的Cα痕迹覆盖在实验解析的亲代CH3同型二聚体3D结构(PDB代码1H3U)上，用于视觉观察。此外，使用在线PIC网络服务商(http://crick.mbu.iisc.ernet.in/～PIC/,Tina KG等人，Nucleic AcidsRes.35(Web Server issue):W473-6(2007))，对改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面实施计算机分析。表3和4列举了由计算机分析和直接测量鉴别的改造的异二聚体的蛋白质-蛋白质界面中的相互作用残基；各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002261
编号规则标注的。根据对大量免疫球蛋白结构域配对(在其蛋白质-蛋白质界面中被源自天然存在的同型二聚体和异二聚体蛋白质-蛋白质界面残基的取代改造)的建模，重复的发现第20、22、26、85.1、86和88位残基，特别是第22、85.1、86和88位残基(根据
Figure BDA0001569050590002262
编号)提供了在改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面之间最重要的接触。更一般而言，通过视觉观察和计算蛋白质-蛋白质相互作用(使用在线PIC网络服务商(http://crick.mbu.iisc.ernet.in/～PIC/,Tina KG等人，Nucleic Acids Res.35(Web Server issue):W473-6(2007)或本领域已知的其他蛋白质-蛋白质相互作用程序)，发现第20、22、26、85.1、86和88位残基，特别是第22、85.1、86和88位残基介导了所有的改造结构域的异二聚体化或同型二聚体化的最重要的相互作用。
不受理论的约束，对新型改造结构域的蛋白质-蛋白质界面的分析鉴别了4组重要的相互作用残基的亚组：第一改造的免疫球蛋白(BTα)的第88位残基与第二改造的免疫球蛋白(BTβ)的第85.1和86位残基相互作用，第一改造的免疫球蛋白(BTα)的第85.1位残基与第二改造的免疫球蛋白(BTβ)的第86位残基相互作用，第一改造的免疫球蛋白(BTα)的第22位残基与第二改造的免疫球蛋白(BTβ)的第22和86位残基相互作用，以及第一改造的免疫球蛋白(BTα)的第20位残基与第二改造的免疫球蛋白(BTβ)的第26位残基相互作用。相反，第二改造的免疫球蛋白(BTβ)的第88位残基与第一改造的免疫球蛋白(BTα)的第85.1和86位残基相互作用，第二改造的免疫球蛋白(BTβ)的第85.1位残基与第一改造的免疫球蛋白(BTα)的第86位残基相互作用，第二改造的免疫球蛋白(BTβ)的第22位残基与第一改造的免疫球蛋白(BTα)的第22和86位残基相互作用，以及第二改造的免疫球蛋白(BTβ)的第20位残基与第一改造的免疫球蛋白(BTα)的第26位残基相互作用。
表3：在新改造的CH3异二聚体中，TCRα-CH3单体的蛋白质-蛋白质界面对TCRβ-CH3单体的蛋白质-蛋白质界面的位置之间的相互作用。使用
Figure BDA0001569050590002271
编号规则。
Figure BDA0001569050590002272
表4：在新改造的CH3异二聚体中，TCRβ-CH3单体的蛋白质-蛋白质界面对TCRα-CH3单体的蛋白质-蛋白质界面的位置之间的相互作用。使用
Figure BDA0001569050590002273
编号规则。
Figure BDA0001569050590002274
7.1.2对基于人TCRδ-TCRγ恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的异二聚体结构域配对建模
a.基于TCRδ的取代
下文列举了人TCRδ恒定结构域(供体结构域)的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸序列位置，所述位置用于取代亲代免疫球蛋白结构域的蛋白质-蛋白质界面中的3D等价氨基酸序列位置：
●人TCRδ的供体位置如下：第7、20、22、27、79、82、84.2、85.1、86、88和90位(具有下列氨基酸：M7、N20、A22、E27、F79、A82、S84.2、N85.1、V86、L88和K90)，其中，各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002282
编号规则标注的。
●所有的人免疫球蛋白结构域中的受体位置如下：第7、20、22、27、79、81、84.2、85.1、86、88、90位；第79位的例外是α1：CH2(78)、α2：CH2(78)、ε：CH2(81)和ε：CH3(80)；第81位的例外是α1：CH2(80)、α2：CH2(80)、ε：CH2(83)和ε：CH3(82)；第84.2位的例外是α1：CH2(84)、α2：CH2(84)、ε：CH2(84.4)，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002281
编号规则标注的。
b.基于TCRγ的取代
下文列举了人TCRγ恒定结构域(供体结构域)的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸序列位置，所述位置用于取代亲代免疫球蛋白结构域的蛋白质-蛋白质界面中的3D等价氨基酸序列位置：
●人TCRγ的供体位置如下：第3、5、20、22、26、27、81、84、85.1、86和88位(具有下列氨基酸：K3、T5、T20、L22、E26、K27、G81、M84、M85.1、F86和W88)，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002283
编号规则标注的。
●所有人免疫球蛋白结构域中的受体位置如下：第3、5、20、22、26、27、81、84、85.1、86、88位；第81位的例外是α1：CH2(80)、α2：CH2(80)、ε：CH2(83)；第84位的例外是γ1、γ2、γ3、γ3：CH2(均为83)、α1：CH2(83)、α2：CH2(83)、ε：CH2(84.1)、μ：CH2(83)和μ：CH3(83)，其中，各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002293
编号规则标注的。
c.对人IGHG1 CH3同型二聚体上的人TCRδ-TCRγ恒定结构域蛋白质-蛋白质界面建模。
为了对基于具有源自人TCRδ/γ恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的人IGHG1 CH3同型二聚体的新型异二聚体建模，计算在其蛋白质-蛋白质界面中被选定氨基酸取代的人IGHG1 CH3单体的2个模型(参见上文的方法)。1个单体在其蛋白质-蛋白质界面的选定的等价3D位置上被来自人TCRδ恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的氨基酸取代，而第二个单体在其蛋白质-蛋白质界面的选定的等价3D位置上被来自人TCRγ恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的氨基酸取代。进一步将获得的2个改造的蛋白质结构域模型的Cα痕迹覆盖在实验解析的亲代CH3同型二聚体3D结构(PDB代码1H3U)上，用于视觉观察。此外，使用在线PIC网络服务商(http://crick.mbu.iisc.ernet.in/～PIC/,Tina KG等人，Nucleic AcidsRes.35(Web Server issue):W473-6(2007))，对改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面实施计算机分析。表5和6列举了由计算机分析和直接测量鉴别的改造的异二聚体的蛋白质-蛋白质界面中的相互作用残基；各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002292
编号规则标注的。根据对大量免疫球蛋白结构域配对(在其蛋白质-蛋白质界面中被源自天然存在的同型二聚体和异二聚体蛋白质-蛋白质界面残基的取代改造)的建模，重复的发现第20、22、26、85.1、86和88位残基，特别是第22、85.1、86和88位残基(根据
Figure BDA0001569050590002291
编号)提供了在改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面之间最重要的接触。更一般而言，通过视觉观察和计算蛋白质-蛋白质相互作用(使用在线PIC网络服务商(http://crick.mbu.iisc.ernet.in/～PIC/,Tina KG等人，Nucleic Acids Res.35(Web Server issue):W473-6(2007)或本领域已知的其他蛋白质-蛋白质相互作用程序)，发现第20、22、26、85.1、86和88位残基，特别是第22、85.1、86和88位残基介导了所有的改造结构域的异二聚体化或同型二聚体化的最重要的相互作用。
不受理论的约束，对新型改造结构域的蛋白质-蛋白质界面的分析鉴别了4组重要的相互作用残基的亚组：第一改造的免疫球蛋白(BTδ)的第88位残基与第二改造的免疫球蛋白(BTγ)的第85.1和86位残基相互作用，第一改造的免疫球蛋白(BTδ)的第85.1位残基与第二改造的免疫球蛋白(BTγ)的第86位残基相互作用，第一改造的免疫球蛋白(BTδ)的第22位残基与第二改造的免疫球蛋白(BTγ)的第22和86位残基相互作用，以及第一改造的免疫球蛋白(BTδ)的第20位残基与第二改造的免疫球蛋白(BTγ)的第26位残基相互作用。相反，第二改造的免疫球蛋白(BTγ)的第88位残基与第一改造的免疫球蛋白(BTδ)的第85.1和86位残基相互作用，第二改造的免疫球蛋白(BTγ)的第85.1位残基与第一改造的免疫球蛋白(BTδ)的第86位残基相互作用，第二改造的免疫球蛋白(BTγ)的第22位残基与第一改造的免疫球蛋白(BTδ)的第22和86位残基相互作用，以及第二改造的免疫球蛋白(BTγ)的第20位残基与第一改造的免疫球蛋白(BTδ)的第26位残基相互作用。
表5：在新改造的CH3异二聚体中，TCRδ-CH3单体的蛋白质-蛋白质界面对TCRγ-CH3单体的蛋白质-蛋白质界面的位置之间的相互作用。使用
Figure BDA0001569050590002301
编号规则。
Figure BDA0001569050590002311
表6：在新改造的CH3异二聚体中，TCRγ-CH3单体的蛋白质-蛋白质界面对TCRδ-CH3单体的蛋白质-蛋白质界面的位置之间的相互作用。使用
Figure BDA0001569050590002312
编号规则。
Figure BDA0001569050590002313
7.1.3对基于人IGHG1 CH3恒定结构域配对的蛋白质-蛋白质界面的异二聚体结构域建模
下文列举了人IGHG1 CH3恒定结构域(供体结构域)的蛋白质-蛋白质界面中的氨基酸序列位置，所述位置用于取代亲代免疫球蛋白结构域的蛋白质-蛋白质界面中的3D等价氨基酸序列位置：
a.人IGHG1的CH3的第一组供体位置包括下列位置：第3、5、12、13、18、20、22、79、81、84.2、85.1、86和88位(具有下列氨基酸：Q3、Y5、D12、E13、Q18、S20、T22、K79、T81、D84.2、F85.1、Y86和K88)，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002321
编号规则标注的。
除了所有的人免疫球蛋白轻链结构域以外，所有的人免疫球蛋白结构域中的针对第一组的受体位置如下：第3、5、12、13、18、20、22、79、81、84.2、85.1、86和88位；第81位的例外是γ1、γ2、γ3、γ3：CH2(所有都是第83位)；第84.2位的例外是除了γ1、γ2、γ3、γ3中：CH2(所有都是第84.3位)，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002322
编号规则标注的。
b.人IGHG1的CH3的第二组供体位置包括下列位置：第3、5、7、12、13、22、26、79、81、84、85.1、86和88位(具有下列氨基酸：Q3、Y5、L7、D12、E13、T22、K26、K79、T81、V84、F85.1、Y86和K88)，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002323
编号规则标注的。
所有的人免疫球蛋白轻链结构域中的针对第二组的受体位置如下：第3、5、7、12、13、22、26、79、81、83、85.1、86和88位；除了人IGLC结构域以外，后者的第二组如下：第3、5、7、11、12、22、26、79、81、83、85.1、86和88位，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002324
编号规则标注的。
c.对人CH1-CK异二聚体的蛋白质-蛋白质界面上的人IGHG1 CH3同型二聚体蛋白质-蛋白质界面建模
计算在其蛋白质-蛋白质界面中被源自人IGHG1 CH3恒定结构域(CH13)的蛋白质-蛋白质界面的等价3D位置上的氨基酸取代的人IGHG1 CH1结构域模型，和在其蛋白质-蛋白质界面中被源自人IGHG1 CH3恒定结构域(CK3)的蛋白质-蛋白质界面的等价3D位置上的氨基酸取代的人Cκ结构域模型(参见上文的方法)。进一步将获得的2个改造的蛋白质结构域模型的Cα痕迹覆盖在实验解析的亲代人IGHG1 CH1-Cκ异二聚体3D结构(PDB代码1VGE)，用于视觉观察。此外，使用在线PIC网络服务商(http://crick.mbu.iisc.ernet.in/～PIC/,Tina KG等人，Nucleic Acids Res.35(Web Server issue):W473-6(2007))，对改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面实施计算机分析。表7和8列举了由计算机分析和直接测量鉴别的改造的异二聚体的蛋白质-蛋白质界面中的相互作用残基；各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002331
编号规则标注的。根据对大量免疫球蛋白结构域配对(在其蛋白质-蛋白质界面中被源自天然存在的同型二聚体和异二聚体蛋白质-蛋白质界面残基的取代改造)的建模，重复的发现第20、22、26、85.1、86和88位残基，特别是第22、85.1、86和88位残基(根据
Figure BDA0001569050590002332
编号)提供了在改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面之间最重要的接触。更一般而言，通过视觉观察和计算蛋白质-蛋白质相互作用(使用在线PIC网络服务商(http://crick.mbu.iisc.ernet.in/～PIC/,Tina KG等人，Nucleic Acids Res.35(Web Serverissue):W473-6(2007)或本领域已知的其他蛋白质-蛋白质相互作用程序)，发现第20、22、26、85.1、86和88位残基，特别是第22、85.1、86和88位残基介导了所有的改造结构域的异二聚体化或同型二聚体化的最重要的相互作用。
不受理论的约束，对新型改造结构域的蛋白质-蛋白质界面的分析鉴别了4组重要的相互作用残基的亚组：第一改造的免疫球蛋白(CH13)的第88位残基与第二改造的免疫球蛋白(CK3)的第85.1和86位残基相互作用，第一改造的免疫球蛋白(CH13)的第85.1位残基与第二改造的免疫球蛋白(CK3)的第86位残基相互作用，第一改造的免疫球蛋白(CH13)的第22位残基与第二改造的免疫球蛋白(CK3)的第22和86位残基相互作用，以及第一改造的免疫球蛋白(CH13)的第20位残基与第二改造的免疫球蛋白(CK3)的第26位残基相互作用。相反，第二改造的免疫球蛋白(CK3)的第88位残基与第一改造的免疫球蛋白(CH13)的第85.1和86位残基相互作用，第二改造的免疫球蛋白(CK3)的第85.1位残基与第一改造的免疫球蛋白(CH13)的第86位残基相互作用，第二改造的免疫球蛋白(CK3)的第22位残基与第一改造的免疫球蛋白(CH13)的第22和86位残基相互作用，以及第二改造的免疫球蛋白(CK3)的第20位残基与第一改造的免疫球蛋白(CH13)的第26位残基相互作用。
表7：在新改造的CH1-CK异二聚体中，CH13单体的蛋白质-蛋白质界面对CK3单体的蛋白质-蛋白质界面的位置之间的相互作用。使用
Figure BDA0001569050590002341
编号规则。
CH13 CK3
3 13
5 12，13
12 79，88
13 3，5，7
18 3，5，26
20 3，5，7，26，85.1，86
22 7，22，86
26 20
79 26，81，83，85，1，86
81 79，81，83，85.1，86
84.2 79，88
85.1 79，81，86，88
86 79，81，83，85.1，86
88 26，81，83，85.1，86
表8：在新改造的CH1-CK异二聚体中，CK3单体的蛋白质-蛋白质界面对CH13单体的蛋白质-蛋白质界面的位置之间的相互作用。使用
Figure BDA0001569050590002342
编号规则。
CK3 CH13
3 13，18，20
5 13，18，20
7 13，20，22
12 5
13 3，5
20 26
22 22，86
26 20，79，88
79 12，81，84.2，85.1，86
81 79，81，85.1，86，88
83 79，81，86，88
85.1 20，79，81，86，88
86 20，22，79，81，86，88
88 12，84.2，85.1，86
7.2源自人TCR恒定结构域(TRAC、TRBC2、TRDC、TRGC1)和IGHG1 CH3的供体位置概括
源自人TRAC(TCRα，缩写为ALPHA)、TRBC2(TCRβ，缩写为BETA)、TRDC(TCR8，缩写为DELTA)、TRGC1(TCRγ，缩写为GAMMA)和IGHG1 CH3(缩写为CH3)的供体位置概括可见于表9中。各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002351
编号规则标注的。CH3的氨基酸位置(组i)是用于取代除轻链结构域外的所有人免疫球蛋白结构域的供体位置。CH3的氨基酸位置(组ii)是用于取代所有的人免疫球蛋白轻链结构域的供体位置。
表9：源自人TRAC、TRBC2、TRDC、TRGC1和IGHG1 CH3的供体位置。使用
Figure BDA0001569050590002352
编号规则。
Figure BDA0001569050590002361
Figure BDA0001569050590002362
(*或C或S)
7.3其他取代的基础
在更一般的方法中，来自免疫球蛋白超家族的天然存在的二聚体蛋白质结构域的蛋白质-蛋白质界面残基选自第3、5、7、12、13、18、20、22、26、27、79、81、82、84、84.1、84.2、84.3、85.1、86、88和90位，可用作供体残基生成新的二聚体，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002363
编号规则标注的。表10显示了选自源自不同同种型的异二聚体供体结构域CH1和同型二聚体结构域CH2、CH3和CH4的第20、22、26、85.1、86和88位的氨基酸残基，可用于取代亲代结构域中相同位置上的氨基酸。表11显示了来自多种异二聚体人免疫球蛋白超家族成员的选定的第20、22、26、85.1、86和88位上的氨基酸残基，可用于取代亲代结构域中相同位置上的氨基酸。
表10：异二聚体供体结构域CH1和同型二聚体CH2、CH3和CH4结构域的选定的第20、22、26、85.1、86和88位上的氨基酸残基。使用
Figure BDA0001569050590002364
编号规则。
Figure BDA0001569050590002371
表11：多种异二聚体人免疫球蛋白超家族成员的选定的第20、22、26、85.1、86和88位上的氨基酸残基。使用
Figure BDA0001569050590002372
编号规则。
Figure BDA0001569050590002381
7.4
Figure BDA0001569050590002382
独特编号规则、EU编号规则和Kabat编号规则之间的对应性
对于大多数上述人重链恒定结构域，
Figure BDA0001569050590002383
独特编号规则和EU编号规则之间的对应性可见于表12。人κ恒定轻链结构域的
Figure BDA0001569050590002384
独特编号规则和EU编号规则之间的对应性，以及人λ恒定轻链结构域的
Figure BDA0001569050590002385
独特编号规则和Kabat编号规则之间的对应性可见于表13。
人IGHG1 CH1-CH3、IGKC和IGLC结构域的完整对应性可见于图19A、19B、19C、19D、22、23A和23B中，以及可选的，可见于
Figure BDA0001569050590002386
数据库中(the internationalImMunoGeneTics information
Figure BDA0001569050590002387
Lefranc MP等人，Nucleic Acids Res，27(1)：209-12(1999)；Ruiz M等人，Nucleic Acids Res，28(1)：219-21(2000)；Lefranc MP，Nucleic Acids Res，29(1)：207-9(2001)；Lefranc MP，Nucleic Acids Res.31(1)：307-10(2003)；Lefranc MP等人，Dev Comp Immunol，29(3)：185-203(2005)；Kaas Q等人，Briefings in Functional Genomics&Proteomics，6(4)：253-64(2007))，更具体的可见于下列网页：
http：//imgt.cines.fr/textes/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGHGnber.html；
http：//imgt.cines.fr/textes/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGKCnber.html；
http：//imgt.cines.fr/textes/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGLCnber.html。
表12：人IGHG1、IGHG2、IGHG3和IGHG4的CH1、CH2和CH3结构域的
Figure BDA0001569050590002388
独特编号规则与EU编号规则之间的对应性
Figure BDA0001569050590002391
Figure BDA0001569050590002392
表13：人IGKC的
Figure BDA0001569050590002395
独特编号规则与EU编号规则之间的对应性，人IGLC(IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7结构域)的
Figure BDA0001569050590002396
独特编号规则与Kabat编号规则之间的对应性
Figure BDA0001569050590002393
Figure BDA0001569050590002394
实施例8：构建具有基于人α/βT细胞受体恒定结构域的CH3-CH3蛋白质-蛋白质界面的双特异性异二聚体免疫球蛋白。
受体酪氨酸激酶的HER家族是细胞生长、分化和存活的重要中介物(Earp HS等人，Breast Cancer Res Treat,35(1):115-32(1995))；受体家族包括四个不同的成员：表皮生长因子受体EGFR(ErbB1或HER1)、HER2(ErbB2或p185neu)、HER3(ErbB3)和HER4(ErbB4或tyro2)，一般可见于各种细胞组合中(Rowinsky EK,Annu Rev Med,55:433-57(2004)；Hynes NE和Lane HA,Nat Rev Cancer,5(5):341-54(2005))。受体二聚体化是ErbB功能和这些受体的信号传递活性的关键要求(Baselga J和Swain SM,Nat Rev Cancer,9(7):463-75(2009))；更具体而言，受体异二聚体化被认为增加了细胞对各种HER配体响应的多样性。靶向HER家族的单个受体的治疗剂目前被用于治疗疾病，如乳腺癌、非小细胞肺癌、结肠直肠癌、头颈癌和胰腺癌(Engelman JA和Janne PA,Clin Cancer Res.14(10):2895-9(2008)；Baselga J和Swain SM,Nat Rev Cancer,9(7):463-75(2009))。虽然这些治疗剂具有一定的成功，但涉及天然抗性和诱导抗性和毒性的问题目前限制了它们的疗效(RobertC等人，Lancet Oncol,6(7):491-500(2005)；Jones KL和Buzdar AU,Lancet Oncol,10(12):1179-87(2009))。能够靶向HER家族的多个受体的治疗剂可提供改良的临床功效和降低的毒性。
为了生产能够特异性结合至少2个HER受体的双特异性分子(图24)，选择源自重组人源化抗HER2抗体4D5(rhuMAbHER2、huMAB4D5-8、Trastuzumab或
Figure BDA0001569050590002401
美国专利号5,821,337)和重组嵌合抗EGFR抗体C225(IMC-C225、Cetuximab或
Figure BDA0001569050590002402
PCT公开号：WO 96/40210)的抗原结合位点，作为GENEART AG(Regensburg,Germany)基因合成的入口。对于两种抗体，合成重链可变序列(VH)和轻链可变序列(VL)，并将它们重塑成scFv片段(将VH和VL结构域与15个氨基酸的GlySer接头：(Gly4Ser)3融合)和嵌合FAB片段(即，与鼠VL-人CK链装配的鼠VH-人CH1(γ1)链)，分别用于抗HER2抗体4D5和抗EGFR抗体C225。所有的DNA操作都按照标准的分子生物学技术，主要涉及PCR扩增和PCR片段装配方法。为了生成双特异性分子的抗EGFR部分，将抗EGFR抗体C225鼠VH-人CH1(γ1)链融合在实施例1所述的BTα链上游(缩写为VH(抗EGFR)-CH1-BTα链，SEQ ID NO：56)，同时将抗EGFR抗体C225鼠VL融合在人κ恒定结构域上游(缩写为VL(抗EGFR)-CK链，SEQ ID NO：57。为了生成双特异性分子的抗HER2部分，将抗HER2scFv融合在实施例2所述的BTβF405A链上游，在两条序列之间含有短的GlySer氨基酸接头(GGGS)(缩写为scFv(抗HER2)-BTβ链，SEQ ID NO：58)。进一步将所有三种获得的链独立的连接到实施例1所述的修饰型pREP4载体中，并共转染到实施例1所述的HEK293-EBNA细胞中。还按实施例1所述的方法，生产蛋白质。
预期的双特异性分子由1条VH(抗EGFR)-CH1-BTα链、1条VL(抗EGFR)-CK链和1条scFv(抗HER2)-BTβ链(SEQ ID NO：59、60和61)组成，被命名为“Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ”。
为了从同型二聚体中分离Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体，在蛋白-A纯化(根据实施例1的方法)后实施离子交换层析(IEX)步骤。首先，实施阴离子型IEX步骤：将蛋白-A洗脱液进行缓冲液交换(成为50mM Tris-HCl pH 9.0)，并上样到在
Figure BDA0001569050590002411
Purifier上操作的4ml SourceQ 30填充的柱中(均来自GE Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland)。然后，用pH 9.0至pH 5.0的狭窄pH梯度洗脱Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ(最终的缓冲液条件是50mM醋酸钠pH 5.0)。在SDS-PAGE分析后，混合含有大部分Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体的级分，并重新更换缓冲液为50mM醋酸钠pH 5.0。在第二个步骤中，通过将阴离子型IEX步骤中更换缓冲液的级分上样到1ml MoNoS柱(GE Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland)上，并运行从50mM醋酸钠pH 5.0至50mM Tris-HCl pH 9.0的狭窄梯度，来实施阳离子型IEX。通过SDS-PAGE分析，选择含有Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体的级分。最后，在尺寸排阻层析柱(Superdex 200HR16/60，GE Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland)上加工纯化的Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体，去除聚集体的痕迹，并将最终的双特异性分子更换缓冲液为PBS。图25显示了每个纯化步骤之后的聚丙烯酰胺SDS凝胶图，以及2个对照分子：scFv-Fc融合蛋白和单克隆抗体。通过光密度扫描测定法分析非还原性SDS聚丙烯酰胺(4-12％)凝胶条带(参见实施例1的方法)，判断瞬时转染的产量达30mg/l，异二聚体化速率为49.5％。
为了评估Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体的稳定性，使用差示扫描量热法(DSC)分析纯化材料。如实施例2所述，在VP-DSC差示扫描微量热器(GEHealthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland)上进行量热测量。细胞体积是0.128ml，加热速率是1℃/min和超压保持在64p.s.i。使用的蛋白质浓度是0.95mg/ml PBS(pH 7.4)。图27显示了Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体的温谱图，在69.5和75.9℃表现出2个热相变。重要的是应注意到，在热吸收峰之后，没有记录到任何尖锐的下降，表示在热解折叠后没有发生任何沉淀或聚集体形成(Liu H等人，Immunol Lett,106(2):144-53(2006))。因此，对Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体观察到的熔化相变与对人IGHG4Fc片段CH2和CH3结构域观察到的相似，并与对稳定的人FAB片段通常观察到的熔化相变相似(Garber E和Demarest SJ,Biochem Biophys Res Commun,355(3):751-7(2007))。总而言之，该热解折叠的研究显示，具有基于TCRα和β恒定结构域的改造蛋白质-蛋白质界面的Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体具有与天然存在的免疫球蛋白相似的热稳定性。
通过在BIAcore 2000仪器(GE Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland)上表面等离振子共振(SPR)，测试Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体同时与其关联抗原(人EGFR和人HER2)结合的能力。在本实施例中，将人EGFR和HER2受体的重组胞外结构域独立融合到人Fc(γ1)片段的上游(缩写为EGFR-Fc和HER2-Fc，分别是SEQ ID NO：62和63)。简而言之，通过PCR分别从imaGene克隆号：EX-A0275-MO2和Ex-BOO17-M10(imaGene GmbH,campus Berlin-Buch,Berlin,Germany)中扩增人EGFR和HER2的胞外结构域。然后，使用PCR装配方法，将PCR产物融合到人Fc(γ1)部分的上游(分别是SEQID NO：64和65)，并且独立克隆到基于Invitrogen的pcDNA3.1载体DNA(Invitrogen AG,Basel,Switzerland)的哺乳动物细胞表达载体中。最后，将各重组载体转染到HEK293细胞中；在转染4-5天后，收获上清液，并通过蛋白A亲和层析纯化重组蛋白质至均质。在25℃下，在1x HBS-EP缓冲液(GE Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland)中实施SPR实验，流速为30μl/min。使用生产商提供的标准操作规程，通过胺偶联将纯化的Fc-融合抗原固定在研究级CM5芯片上(GE Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland)。固定在芯片的不同通道上的EFGR-Fc和HER2-Fc分别导致410和880响应单位(RU)的信号。使用缺少固定化抗原的通道作为参照通道。从测量值中减去该通道的响应。对于结合和共结合实验，在1x HBS-EP缓冲液(Healthcare Europe GmbH,Glattbrugg,Switzerland)中稀释Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体和EGFR-Fc，分别至25和100nM的终浓度。对于所有的分析物，注射都限于2分钟内。图28A显示了在Erbitux FAB-BTα_HerceptinscFv-BTβ异二聚体和固定化EGFR-Fc之间的结合和解离。图28B显示了Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ和EGFR-Fc作为分析物共结合在固定化HER2-Fc上。在该结合实验中，首先将Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体注射到含固定化HER2-Fc的通道上，显示Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体与抗原的结合。在上述第一次注射后3分钟，注射EGFR-Fc，导致与Erbitux FAB-BTα_Herceptin scFv-BTβ异二聚体的共结合事件；为了验证观察到的响应是真实的共结合事件，而不是两种抗原之间的相互作用，注射EGFR-Fc到固定化HER2-Fc上，未记录到显著的响应(图28B)。
实施例9：构建具有基于人α/βT细胞受体恒定结构域的CH3-CH3蛋白质-蛋白质界面，和具有基于异二聚体δ/γT细胞受体恒定结构域的CH1-CK蛋白质-蛋白质界面的FAB片段的双特异性异二聚体免疫球蛋白
实施例5提供了一组新的修饰型CH1(γ1)和Cκ恒定结构域，上述结构域基于人TCR恒定结构域δ和γ的蛋白质-蛋白质界面。该对新的FAB恒定结构域提供了生成人双特异性抗体的机会，而不需妥协使用共同轻链。
该新类型的双特异性抗体将基于2条具有不同可变结构域的不同重链，和2条具有不同可变结构域的不同轻链。正确的装配双特异性的抗体的四条不同的链是基于2个原则：(1)为了迫使2条不同的抗体重链异二聚体化，可使用实施例1-3所述的改造的异二聚体CH3结构域的新配对；(2)为了规避任何潜在的轻链错配，可将实施例5所述的CH1(γ1)和Cκ恒定结构域的新组合导入到双特异性的抗体的2个FAB臂之一中。因此，双特异性的抗体将在3个不同部分涵盖至少3种不同蛋白质-蛋白质界面：第一FAB臂，其具有CH1(γ1)和Cκ恒定结构域的天然存在的异二聚体配对，第二FAB臂，其具有含源自TCRδ和TCRγ恒定结构域的异二聚体配对的蛋白质-蛋白质界面的CH1(γ1)和Cκ恒定结构域的新型异二聚体配对，以及1个Fc片段，其具有含源自异二聚体TCRα和TCRβ恒定结构域的蛋白质-蛋白质界面的改造的CH3(γ1)恒定结构域的新型异二聚体配对(图29)。
为了生产完整和正确装配的、能够特异性结合至少2个抗原的双特异性抗体，选择来自人源化抗人CD19抗体的可变重链和可变轻链结构域(分别缩写为VH(抗hCD19)和VL(抗hCD19)，公开在PCT公开号：WO 2010/095031)，和来自人VLA-2受体(VLA2)抗体的人源化抗α2亚基的可变重链和可变轻链结构域(分别缩写为VH(抗hVLA2)和VL(抗hVLA2)，公开在PCT公开号：WO 2007/056858)，作为用于表达和功能性研究的入口。VH(抗hVLA2)和VL(抗hVLA2)结构域的编码cDNA可自PCT公开号WO 2007/056858所述的研究获得。
为了生成双特异性抗体的4条不同的链，使用PCR技术生成2条新的免疫球蛋白链：第一条链由融合在人CH1(γ1)-BTαHis链上游的可变重链VH(抗hVLA2)组成(实施例1和2)(缩写为VH(抗hVLA2)-CH1-BTαHis，SEQ ID NO：66)，且第二条链由融合在天然存在的人Cκ恒定结构域上游的可变轻链VL(hVLA2)组成(缩写为VL(抗hVLA2)-CK，SEQ ID NO：67)。在PCR装配后，将两条链cDNA独立的连接到实施例1所述的修饰型pREP4载体中。生产完整的双特异性抗体所需的最后两条免疫球蛋白链源自实施例5：第三条链由VH(抗hCD19)-CH1δ-BTβc-myc链(SEQ ID NO：43)组成，且第四肽链由VL(抗hCD19)-CKγ链(SEQ ID NO：44)组成。所获得的具有所有四条不同的链的双特异性抗体被缩写为抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体(SEQ ID NO：68、69、41和42)。
将携带重组免疫球蛋白链的所有四个载体共转染到HEK293-EBNA细胞中，根据实施例1所述的方法生产蛋白质。通过分别共转染链“1”与链“2”，以及链“3”与链“4”，获得少量具有对人VLA2抗原(缩写为抗hVLA2抗体)或人CD19抗原(缩写为hCD19抗体)的单特异性的抗体种类。这些抗体之后被用作FACS实验的对照(见下文)。
在蛋白A纯化后(根据实施例1的方法)，瞬时转染的产量是约18mg/l。为了分离完全装配的双特异性分子与痕量的同型二聚体种类，相继执行2个亲和层析步骤。第一个步骤是基于蛋白L的亲和层析(蛋白L树脂来自GenScript,Piscataway,NJ USA；根据生产商的操作规程使用)，并且利用了蛋白-L对源自κ亚组κ1和κ3，而非κ2轻链可变结构域的特异性(Nilson BH等人，J Biol Chem,267(4):2234-9(1992))。由于可变VL(抗hVLA2)轻链结构域属于κ2亚类，而可变VL(抗hCD19)轻链结构域属于κ1亚类，该步骤允许去除任何缺少可变VL(抗hCD19)结构域的同型二聚体抗体种类(见上文，链“4”)。对于第二个步骤，将蛋白L纯化后的蛋白质混合物更换缓冲液为50mM Tris-HCl pH 9.0，200mM NaCl，并上样在
Figure BDA0001569050590002451
Purifier上操作的1ml HisTrap Ni2+-NTA亲和层析柱(均来自GE Healthcare EuropeGmbH,Glattbrugg,Switzerland)上，流速为0.6ml/min。该步骤允许去除任何缺少BTα链的同型二聚体抗体种类(见上文，链“1”)。
为了验证抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体的存在，在纯化方法的不同步骤分离的等分样品上实施Western印迹分析。为了检测，使用缀合了辣根过氧化物酶的抗His标签(Sigma,Buchs,Switzerland)和抗c-myc标签(Roche Diagnotics(Schweiz)AG,Rotkreuz,Switzerland)抗体。为了染色，使用过氧化物酶底物SIGMA FAST 3,3’-二氨基联苯胺(Sigma,Buchs,Switzerland)。比较2个Western印迹，1个用抗His标签抗体检测，且1个用抗c-myc抗体检测，验证了在2个纯化步骤后抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体的存在(图30，图B和C中的5道)。
为了验证抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体的双重特异性，设计了2个独立的FACS结合实验。在两个实验中，测试双特异性的抗体与展示在靶细胞的细胞表面上的其2个关联抗原之一的结合，同时用具有第二特异性的链上存在的亲和性标签检测。因为抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体的特异性是同时针对人CD19细胞表面蛋白和人VLA-2受体的α2亚基的，因此，分别选择Raji细胞系(人Burkitt淋巴瘤细胞系，DSMZ克隆号：ACC319)和HT1080细胞系(人纤维瘤细胞系，ATCC克隆号：CCL-121)作为靶细胞。Raji细胞是严格的CD19+和VLA2-，而HT1080细胞是VLA2+和CD19-(数据未显示)，从而阻止了任何假阳性。
从标准的培养条件收获两种细胞系，并计数(根据台盼蓝排除，活力>90％)。在染色工艺之前，在染色缓冲液中洗涤细胞1次，所述缓冲液是补充了PAA(PAA Laboratories,Pasching,Austria；货号：A15-101)的2.5％FBS和GIBCO-Invitrogen AG(Basel,Switzerland，货号：15040)的10％维尔烯的PBS溶液。在V型底的96孔板中，每次对2x 105细胞实施冰上染色。在补充了10μg/ml抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体的50μl染色缓冲液中进行各个孵育步骤，并进一步孵育20min。然后，用冰冷的染色缓冲液洗涤细胞2次，并且用小鼠抗His标签抗体(Sigma,Buchs,Switzerland；货号：A7058-1VL)或小鼠抗c-myc标签抗体(Roche Diagnotics(Schweiz)AG,Rotkreuz,Switzerland；货号：11667149001)孵育20min，浓度均为染色缓冲液中10μg/ml。两个细胞系都制备仅保留细胞在染色缓冲液中的对照样品。为了检测，用染色缓冲液洗涤细胞2次，并且用1:200稀释在染色缓冲液中的缀合了藻红蛋白的小鼠抗人Ig Fc片段特异性抗体(eBioscience,San Diego,USA；供应商：eBioscience CBI Medicals PV,Baar,Switzerland；货号：12-4998-82)孵育20min。最后，用染色缓冲液洗涤细胞1次，并重悬在300μl冰冷的染色缓冲液中，通过流式细胞仪快速分析(CyAnTM ADP,Beckman Coulter International S.A.,Nyon,Switzerland)。使用
Figure BDA0001569050590002471
软件(Tree Star,Inc.,Ashland,OR,USA)处理数据；基于正向和侧向散射参数门限，对活细胞绘制直方图。图31A显示了用小鼠抗c-myc标签抗体检测到的抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体与Raji细胞的结合，在该实验中，使用缺少c-myc标签的抗hVLA2抗体作为阴性对照。图31B显示了用小鼠抗His标签抗体检测到的抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体与Raji细胞的结合，在该实验中，还使用抗hVLA2抗体作为阴性对照，因为它尽管具有多聚组氨酸标签序列，但缺少hCD19特异性。图31C显示了用小鼠抗c-myc标签抗体检测到的抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体与HT1080细胞的结合，在该实验中，使用抗hCD19抗体作为阴性对照，因为它虽然具有c-myc标签序列，但缺少hVLA2特异性。图31D显示了用小鼠抗His标签抗体检测到的抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体与HT1080细胞的结合，在该实验中，使用缺少多聚组氨酸标签序列的抗hCD19抗体作为阴性对照。当综合考虑上述四个独立的结合实验时，显示出当连接靶细胞与1个FAB臂时，通过位于对立的Fc亚基上的标签，抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体总是可检测的(携带另一FAB臂，参见图31B和31C)。这证实了抗hCD19_抗hVLA2作为由四条不同链组成的完全双特异性抗体的身份，这四条链正确的装配成2个不同的FAB片段，每个片段具有由异二聚体Fc区带来的特有的特异性。
使用量热法测量(DSC)评估抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体的热稳定性(参见实施例2的方法；使用的蛋白质浓度为0.57mg/ml PBS)。图32显示了抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体的温谱图，在70.9、76.6和82.8℃表现出3个尖锐的相变，其中无一低于70℃，从而暗示了稳定的免疫球蛋白分子(实施例2)。重要的是应注意到，在热吸收峰之后，没有记录到任何尖锐的下降，表示在热解折叠后没有发生任何沉淀或聚集体形成(Liu H等人，ImmunolLett,106(2):144-53(2006))。由于实施例2的BTαHis_BTβ异二聚体Fc片段在70℃展现出单尖熔化相变，因此可以概括出两个FAB臂的熔化相变都具有高于75℃的中点，如正确装配和稳定的FAB片段所预期的(Garber E和Demarest SJ,Biochem Biophys Res Commun,355(3):751-7(2007))。总而言之，该热解折叠的研究显示，抗hCD19_抗hVLA2双特异性抗体是稳定的。
该实施例还显示，在组合时，2个或多个具有源自人T细胞受体恒定结构域的改造的蛋白质-蛋白质界面的恒定结构域的新异二聚体配对可用作构件，用于生成在人中稳定且适合治疗性用途的新型双特异性抗体。
实施例10：构建具有混合的γ免疫球蛋白同种型背景的免疫球蛋白Fc异二聚体变体
本实施例证实了2个人CH3结构域装配成异二聚体Fc分子，其中1个结构域源自IGHG1，而第二个结构域源自IGHG3，在它们CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有仔细选自T细胞受体(TCR)恒定结构域α和β的突变(如实施例1所述)。
突变源自对人LC13 TCR分子的晶体结构(PDB代码1KGC；Bernstein FC等人，Eur JBiochem,80(2):319-24(1977))与人IGHG1的Fc片段的晶体结构(PDB代码1H3Y)的重叠分析，如实施例1所述。由于人IGHG1和IGHG3 CH3结构域仅在第384、392、397、422、435和436位(EU编号规则)不同，除第392位的残基外，它们的蛋白质-蛋白质界面都是相同的，并允许基于实施例1所述的3D等价位置，设计混合的同种型异二聚体免疫球蛋白。
该实施例描述的异二聚体免疫球蛋白由2条Fc链变体装配而成：1条源自人IGHG3的链，其在CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有仔细选自TCR恒定结构域α的蛋白质-蛋白质界面的突变(被称为BTαIGHG3链)(SEQ ID NO：73)，并且1条源自人IGHG1的链，其在CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有仔细选自TCR恒定结构域β的蛋白质-蛋白质界面的突变(被称为BTβF405A链)(SEQ ID NO：74)。为了产生SDS-PAGE迁移率的差异，将后一Fc链变体与可变轻链κ结构域抗体(缩写为VL)融合，获得被称为VL-BTβF405A链(SEQ ID NO：75)的改造的免疫球蛋白链。本文所述的源自IGHG3的改造的CH3结构域被缩写为CH3-BTαIGHG3结构域，并且具有SEQ ID NO：76。VL-BTβF405A链涵盖了实施例2描述的CH3-BTβF405A结构域(SEQ ID NO：14)。由2条上述链装配而成的异二聚体免疫球蛋白被缩写为BTαIGHG3_VL-BTβF405A异二聚体。
按实施例2所述构建编码VL-BTβF405A链的cDNA。编码BTαIGHG3链的cDNA涵盖了最初由GENEART AG(Regensburg,Germany)合成的CH3-BTαIGHG3结构域编码序列(SEQ ID NO：77)。之后，使用标准的PCR装配方法，将人IGHG1铰链和CH2结构域编码序列添加到该合成片段的上游。将编码PCR产物的各条链消化、纯化和独立的连接到前述修饰型pREP4载体中(实施例1)。然后，将获得的2个验证过序列的重组载体共转染到实施例1所述的HEK293-EBNA细胞中。仍根据实施例1生产和纯化蛋白质。对于BTαIGHG3_VL-BTβF405A异二聚体，获得10mg/l的产量。
为了评估蛋白-A纯化材料中异二聚体与同型二聚体的比例，根据实施例1描述的方法，通过非还原性SDS聚丙烯酰胺(4-12％)凝胶条带的光密度扫描测定法，定量不同种类的相对比例。在蛋白-A纯化后，BTαIGHG3_VL-BTβF405A异二聚体是产生的主要种类，之后是VL-BTβF405A_VL-BTβF405A同型二聚体和VL-BTβF405A链(半分子)(图33；1道)。在还原条件下，BTαIGHG3_VL-BTβF405A异二聚体降解成BTαIGHG3和VL-BTβF405A链(半分子)的2个预期分子量的条带(图33；2道)。图34显示了BTαIGHG3_VL-BTβF405A异二聚体占蛋白-A纯化材料的至少91％。
实施例11：构建具有混合的免疫球蛋白类型的背景的免疫球蛋白Fc异二聚体变体
本实施例证实了2个人Fc链装配成异二聚体Fc分子，其中所述Fc链源自IGHG1，在它们CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有仔细选自IGHA1或IGHA2的CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面的突变，从而证实了来自两对不同的同型二聚体免疫球蛋白结构域的蛋白质-蛋白质界面可以组合生成新的异二聚体蛋白质-蛋白质界面配对，所述配对在移植到天然存在的同型二聚体免疫球蛋白结构域配对上时，诱导结构域异二聚体化，，。应注意的是，本文所述方法的范围不限于IGHA1，而具有利用所有类型的同型二聚体免疫球蛋白结构域的广泛应用。IGHA1和IGHA2具有相同的CH3结构域氨基酸序列，而本文使用的IGHA1 CH3氨基酸序列(SEQ ID NO：96)与IGHA2 CH3氨基酸序列(SEQ ID NO：97)是完全可互换的。
突变源自对人IGHG1和IGHA1 Fc片段的晶体结构(分别是Krapp S等人，J MolBiol,325(5):979-89(2003)和Herr AB等人，Nature,423(6940):614-20(2003))的CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用的分析。IGHG1和IGHA1 Fc 3D结构是从Protein DataBank(PDB代码分别是1H3Y和1OW0；www.pdb.org；Bernstein FC等人，Eur J Biochem,80(2):319-24(1977))检索到的，并如实施例1所述进一步分析。
本实施例描述的异二聚体免疫球蛋白由2条Fc链变体装配而成：1条人IGHG1 Fc链，其在CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有源自天然存在的人IGHA1CH3恒定结构域配对的蛋白质-蛋白质界面中发现的3D等价位置的选定组的突变(被称为“Fc IGHAG”链)，以及第2条的改造的人IGHG1 Fc链，其在CH3结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有源自天然存在的人IGHA1CH3恒定结构域配对的蛋白质-蛋白质界面中发现的3D等价位置的选定组的突变(被称为“Fc IGHGA”链)，其中，在各个改造的CH3结构域中，天然存在的人IGHA1 CH3恒定结构域配对的蛋白质-蛋白质界面中发现的3D等价位置的选定组不同。更具体而言，“FcIGHAG”链由人IGHG1的免疫球蛋白Fc链组成，其具有含下列取代的CH3结构域：Q347E、Y349H、K370R、V397R、D399E、F405A和Y407T(EU编号规则)(缩写为CH3IGHAG结构域；SEQ IDNO：78)；并且相反的，“Fc IGHGA”由人IGHG1的免疫球蛋白Fc链组成，其具有含下列取代的CH3结构域：S364T、K392L、T394W、K409I和T411R(EU编号规则)(缩写为CH3IGHGA结构域；SEQID NO：79)。为了产生SDS-PAGE迁移率的差异，将一条Fc链变体与可变轻链κ结构域抗体(缩写为VL)融合。不同的PCR步骤产生2条最终的链：Fc IGHAG链(SEQ ID NO：80)和VL-FcIGHGA链(SEQ ID NO：81)。由装配这两条链获得的本文所述的异二聚体免疫球蛋白构建体被命名为Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA异二聚体。
由GENEART AG(Regensburg,Germany)合成CH3IGHGA和CH3IGHAG结构域的cDNA编码序列(分别是SEQ ID NO：82和83)，并将它们用于通过PCR装配方法生成其各自的改造的链。将编码PCR产物的各条链消化、纯化和独立的连接到前述修饰型pREP4载体中(实施例1)。然后，将获得的2个验证过序列的重组载体共转染到实施例1所述的HEK293-EBNA细胞中。仍根据实施例1生产和纯化蛋白质。对于Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA异二聚体，获得12mg/l的产量。
为了评估蛋白-A纯化材料中异二聚体与同型二聚体的比例，根据实施例1描述的方法，通过非还原性SDS聚丙烯酰胺(4-12％)凝胶条带的光密度扫描测定法，定量不同种类的相对比例。在蛋白-A纯化后，Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA异二聚体是产生的主要种类，之后是VL-Fc IGHGA_VL-Fc IGHGA同型二聚体和单链(Fc IGHAG链和VL-Fc IGHGA链，即，半分子)(图35；1道)。在还原条件下，Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA异二聚体降解成针对Fc IGHAG和VL-FcIGHGA链的2个预期分子量的条带(图35；2道)。图36显示了Fc IGHAG_VL-Fc IGHGA异二聚体占蛋白-A纯化材料的至少54％。
实施例12：构建具有不同免疫球蛋白类型背景的免疫球蛋白Fc异二聚体变体
12.1构建具有嵌合的IGHG1-IGHM免疫球蛋白类型背景的异二聚体变体
本实施例证实了2条链装配成异二聚体免疫球蛋白，每条链都由人IGHG1铰链、人IGHG1 CH2结构域和改造的人IGHM CH4结构域组成，其中1条链在其IGHM CH4结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有仔细选自T细胞受体(TCR)恒定结构域α的蛋白质-蛋白质界面的3D等价位置的突变，且第2条链在其IGHM CH4结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有仔细选自TCR恒定结构域β的蛋白质-蛋白质界面的3D等价位置的突变；3D等价位置与实施例1所述的那些相同。
具体而言，本实施例描述的异二聚体免疫球蛋白由2条Fc链变体装配而成：1条改造的链包含改造的IGHM CH4结构域，其中，它的蛋白质-蛋白质界面被天然存在的人TCR恒定结构域α的蛋白质-蛋白质界面中发现的3D等价位置的选定组取代(被命名为“BTαIGHM-4”链)，并且第二条改造的链包含改造的IGHM CH4结构域，其中，它的蛋白质-蛋白质界面被天然存在的人TCR恒定结构域β的蛋白质-蛋白质界面中发现的3D等价位置的选定组取代(被命名为“BTβIGHM-4”链)。更具体而言，BTαIGHM-4链涵盖了具有下列取代的人IGHM的CH4结构域(缩写为IGHM CH4α结构域；SEQ ID NO：84)：T20K、T22V、V79Y、F85.1S、H86V、I88W和T90N(IMGT编号规则)；并且相反的，BTβIGHM-4链涵盖了具有下列取代的人IGHM的CH4结构域(缩写为IGHM CH4β结构域；SEQ ID NO：85)：D3E、Y5A、L7F、T22V、S81D、M84L、F85.1A、H86S、I88R和T90R(IMGT编号规则)。
由GENEART AG(Regensburg,Germany)合成IGHM CH4α结构域和IGHM CH4β结构域的cDNA编码序列(分别是SEQ ID NO：86和87)，并将它们用于通过PCR装配方法生成它们各自的改造的链。通过在PCR反义寡核苷酸中包括多聚组氨酸编码序列，在BTαIGHM-4链的C端附加一段短的六组氨酸残基骨架(缩写为His)。为了产生SDS-PAGE迁移率的差异，将一条Fc链变体与可变轻链κ结构域抗体(缩写为VL)融合。不同的PCR步骤产生2条最终的链：BTαIGHM-4His链(SEQ ID NO：88)和VL-BTβIGHM-4链(SEQ ID NO：89)(图37标记的A和图37标记的B)。由装配这两条链获得的本文所述的异二聚体免疫球蛋白构建体被命名为BTαIGHM-4His_VL-BT IGHM-4β异二聚体。
将编码PCR产物的各条链消化、纯化和独立的连接到前述修饰型pREP4载体中。然后，将获得的2个验证过序列的重组载体共转染到实施例1所述的HEK293-EBNA细胞中。仍根据实施例1表达蛋白质。使用蛋白-L亲和琼脂糖(GenScript USA Inc.,Piscataway,NJ,USA)实施纯化。通过光密度扫描测定法分析非还原性SDS聚丙烯酰胺(4-12％)凝胶条带(根据实施例1描述的方法)，评估细胞培养上清液和蛋白-L纯化制品中的异二聚体与同型二聚体的比例。
在蛋白-L纯化后，分离出不含任何污染物的BTαIGHM-4His_VL-BT IGHM-4β异二聚体(图38，3道，标记为A)，根据光密度扫描测定法分析非还原性SDS-PAGE条带测量的，所述异二聚体占蛋白-L洗脱材料的100％(图39)。在还原条件下，BTαIGHM-4His_VL-BTβIGHM-4异二聚体条带降解成针对BTαIGHM-4His和VL-BTβIGHM-4链(半分子)的2个预期分子量的条带(图38；4道)。
12.2构建具有嵌合的IGHG1-IGHE免疫球蛋白类型背景的异二聚体
本实施例证实了2条链装配成异二聚体免疫球蛋白，每条链都由人IGHG1铰链、人IGHG1 CH2结构域和改造的人IGHE CH4结构域组成，其中1条链在其IGHE CH4结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有仔细选自T细胞受体(TCR)恒定结构域α的蛋白质-蛋白质界面的3D等价位置的突变，且第2条链在其IGHE CH4结构域的蛋白质-蛋白质界面中具有仔细选自TCR恒定结构域β的蛋白质-蛋白质界面的3D等价位置的突变；3D等价位置与实施例1所述的那些相同。
具体而言，本实施例描述的异二聚体免疫球蛋白由2条Fc链变体装配而成：1条改造的链包含改造的IGHE CH4结构域，其中，它的蛋白质-蛋白质界面被天然存在的人TCR恒定结构域α的蛋白质-蛋白质界面中发现的3D等价位置的选定组取代(被命名为“BTαIGHE-4”链)，并且第二条改造的链包含改造的IGHE CH4结构域，其中，它的蛋白质-蛋白质界面被天然存在的人TCR恒定结构域β的蛋白质-蛋白质界面中发现的3D等价位置的选定组取代(被命名为“BTβIGHE-4”链)。更具体而言，BTαIGHE-4链涵盖了具有下列取代的人IGHE的CH4结构域(缩写为IGHE CH4α结构域；SEQ ID NO：90)：T20K、A22V、Q26T、S79Y、F85.1S、F86V、R88W和E90N(IMGT编号规则)；并且相反的，BTβIGHE4链涵盖了具有下列取代的人IGHE的CH4结构域(缩写为IGHE CH4β结构域；SEQ ID NO：91)：Y5A、A22V、Q26T、T81D、R84L、T84.2E、F85.1A、F86S和E90R(IMGT编号规则)。
与实施例12.1类似的，由GENEART AG(Regensburg,Germany)合成IGHE CH4α和IGHE CH4β结构域的cDNA编码序列(分别是SEQ ID NO：92和93)，并将它们用于通过PCR装配方法生成它们各自的改造的链。通过在PCR反义寡核苷酸中包括多聚组氨酸编码序列，在BTαIGHE-4链的C端附加一段短的六组氨酸残基骨架(缩写为His)。为了产生SDS-PAGE迁移率的差异，将一条Fc链变体与可变轻链κ结构域抗体(缩写为VL)融合。不同的PCR步骤产生2条最终的链：BTαIGHE-4His链(SEQ ID NO：94)和VL-BT IGHE-4β链(SEQ ID NO：95)(图37标记的C和图37标记的D)。由装配这两条链获得的本文所述的异二聚体免疫球蛋白构建体被命名为BTαIGHE-4His_VL-BT IGHE-4β异二聚体。
将编码PCR产物的各条链消化、纯化和独立的连接到前述修饰型pREP4载体中。然后，将获得的2个验证过序列的重组载体共转染到实施例1所述的HEK293-EBNA细胞中。仍根据实施例1产生和纯化蛋白质。通过光密度扫描测定法分析非还原性SDS聚丙烯酰胺(4-12％)凝胶条带(根据实施例1描述的方法)，评估蛋白-A纯化制品中的异二聚体与同型二聚体的比例。
在蛋白-A纯化后，分离异二聚体(图40，1道，标记为A)，异二聚体化速率为10％(图41，峰2)，观察到对应于BTαIGHE-4His同型二聚体(图40，1道，标记为B)、VL-BTβIGHE-4链(半分子)(图40，1道，标记为C)和BTαIGHE-4His链(半分子)(图40，1道，标记为D)的条带。在还原条件下，BTαIGHE-4His_VL-BTβIGHE-4异二聚体降解成针对BTαIGHE-4His和VL-BTβIGHE-4链(半分子)的2个预期分子量的条带(图40；2道)。
本申请的实施方案：
1、异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，包括：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，其包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，其包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成了天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域，其中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第88位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、88和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、88和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、84、84.2、86、88和90位的另外的氨基酸残基，
其中，在第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第88位上取代的氨基酸残基与在第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第85.1和/或86位取代的氨基酸残基相互作用，
其中，每组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002561
编号规则标注的。
2、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是天然存在的CH3结构域。
3、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中相比第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的氨基酸序列，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的改造结构域的氨基酸序列不含一个或多个氨基酸残基的插入。
4、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体。
5、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基不是带电荷的氨基酸或不是88I，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002562
编号规则标注的。
6、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基是88W及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002571
编号规则标注的。
7、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第85和/或86位上取代的氨基酸残基选自85.1A、85.1S、85.1C和85.1N及其保守的氨基酸取代，和/或选自86S和86V及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002572
编号规则标注的。
8、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基选自88Q、88L、88V、88R、88E、88I、88T、88Y、88K和88W，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20Q、20E、20S、20K、20W、22A、22G、22T、22L、22I、22V、26R、26Q、26T、26K、26V、26S、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1F、85.1C、85.1N、85.1W、86S、86I、86T、86H、86Q、86V、86W、86Y和86F，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002573
编号规则标注的。
9、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基选自88Q、88L、88V、88R、88E、88I、88T、88Y和88W，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20Q、20E、20S、20K、22A、22G、22T、22L、22I、22V、26Q、26T、26K、26V、26S、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86T、86H、86Q、86V和86F，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002574
编号规则标注的。
10、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3E、3K、5A、5T、7F、7M、20K、20N、20T、22A、22L、22V、26E、26T、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、84L、84M、84.2E、84.2S、85.1A、85.1C、85.1M、85.1N、85.1S、86F、86S、86V、90K、90N和90R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002581
编号规则标注的。
11、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第88位和第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002582
编号规则标注的。
12、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位和第26位的氨基酸残基，和任选的另外的位置上的氨基酸残基，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002583
编号规则标注的。
13、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的另外的氨基酸残基位于选自第20、22、26、79、85.1、86和90位的位置上，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002584
编号规则标注的。
14、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20K、22V、26T、79Y、85.1S、86V和90N及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002585
编号规则标注的。
15、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基位于第84位或者是84L及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第3、5、7、20、22、26、81、84.2、88和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、81、84.2、85.1、88和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、81、84.2、86、88和90位的位置上的另外的氨基酸，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002591
编号规则标注的。
16、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的另外的氨基酸残基位于选自第3、5、7、20、22、26、81、84、84.2、88和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、81、84、84.2、85.1、88和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、81、84、84.2、86、88和90位的位置上，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002592
编号规则标注的。
17、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第85.1和86位的氨基酸残基，或包括85.1C及其保守的氨基酸取代和86S及其保守的氨基酸取代，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3E、5A、7F、20T、22V、26T、81D、84L、84.2E、88R和90R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002593
编号规则标注的。
18、实施方案17的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中氨基酸残基取代85.1C被氨基酸残基取代85.1A或85.1S替代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002594
编号规则标注的。
19、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的另外的氨基酸残基位于选自第3、5、20、22、26、27、81、84、85.1和86位的位置上，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002595
编号规则标注的。
20、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3K、5T、20T、22L、26E、27K、81G、84M、85.1M、86F及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002596
编号规则标注的。
21、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的另外的氨基酸残基位于选自第7、20、22、27、79、81、84.2、88和90位，或选自第7、20、22、27、79、81、84.2、85.1、88和90位，或选自第7、20、22、27、79、81、84.2、86、88和90位的位置上，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002601
编号规则标注的。
22、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基位于第79位，或者是79F及其保守的氨基酸取代，和任选的另外的氨基酸残基，其位于选自第7、20、22、27、81、84.2、88和90位，或选自第7、20、22、27、81、84.2、85.1、88和90位，或选自第7、20、22、27、81、84.2、86、88和90位的位置上，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002602
编号规则标注的。
23、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第85.1和86位的氨基酸残基，或包括85.1N及其保守的氨基酸取代和86V及其保守的氨基酸取代，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自7M、20N、22A、27E、79F、81A、84.2S、85.1N、86V、88L和90K及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002603
编号规则标注的。
24、实施方案1的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基是88I及其保守的氨基酸取代，且任选的，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界中取代的另外的氨基酸残基是81W及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002604
编号规则标注的。
25、异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26位和选自第3、22、27、79、81、84、85.1、86和88位的另外的位置上的氨基酸残基，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第20位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第26位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002611
编号规则标注的。
26、实施方案25的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的位置上的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26和86位的，和任选的选自第3、5、22、27、79、81、84、85.1、88和90位的另外的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002621
编号规则标注的。
27、实施方案25的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括位于第20和22位的氨基酸残基，和任选的位于选自第3、5、7、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26位和位于选自第3、5、22、27、79、81、84、85.1、86、88和90位的另外的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002622
编号规则标注的。
28、实施方案25的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20和22位的氨基酸残基，和任选的位于选自第3、5、7、26、27、79、81、84、84.2、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26和86位和任选的位于选自第3、5、22、27、79、81、84、85.1、88和90位的另外的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002623
编号规则标注的。
29、实施方案25的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是天然存在的CH3结构域.
30、实施方案25的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中相比第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的氨基酸序列，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的改造结构域的氨基酸序列不含一个或多个氨基酸残基的插入。
31、实施方案25的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体。
32、实施方案25的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20N和20T，及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002631
编号规则标注的。
33、实施方案25的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第26位上取代的氨基酸残基选自26T和26E及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002632
编号规则标注的。
34、实施方案25的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段,其中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20Q、20K、20S、20W和20E，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自22A、22G、22L、22I、22V、22T、26K、26R、26Q、26T、26V、26S、26N、26E、85.1W、85.1F、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1C、85.1N、86W、86Y、86S、86I、86H、86Q、86V、86T、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88T、88I、88Y、88K和88W，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002633
编号规则标注的。
35、实施方案25的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段,其中，第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20Q、20K、20S和20E，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自22A、22G、22L、22I、22V、26K、26Q、26T、26V、26S、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1C、85.1N、86S、86I、86H、86Q、86V、86T、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88T、88I、88Y和88W，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002634
编号规则标注的。
36、实施方案25的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3E、3K、5A、5T、7F、7M、22A、22L、22V、26E、26T、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、84L、84M、84.2E、84.2S、85.1A、85.1C、85.1M、85.1N、85.1S、86F、86S、86V、88L、88R、88W、90K、90N和90R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002641
编号规则标注的。
37、实施方案1-36的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白的亲代结构域是IgG1 CH3结构域。
38、实施方案1-36的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG1 CH3结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG3 CH3结构域，或者其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG3 CH3结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG1 CH3结构域。
39、异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH2结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第88位的氨基酸残基，和任选的位于选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3,85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位的氨基酸残基，和任选的位于选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1和90位，或选自第3、5、7、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、86和90位的位置上的另外的氨基酸残基，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第88位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的第85.1和/或86位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002651
编号规则标注的。
40、实施方案39的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是天然存在的CH2结构域。
41、实施方案39的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基是88W及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002652
编号规则标注的。
42、实施方案39的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第85和/或86位上取代的氨基酸残基选自85.1A和85.1N及其保守的氨基酸取代，和/或是86S及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002653
编号规则标注的。
43、实施方案39的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基选自88Q、88L、88V、88R、88I、88T、88K、88E、88Y和88W，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20K、20W、20S、20E、20Q、22A、22G、22T、22L、22V、26Q、26T、26K、26V、26S、26R、26N、26E、85.1R、85.1H、85.1K、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1W、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86H、86T、86W、86Y、86V、86Q和86F，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002661
编号规则标注的。
44、实施方案39的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第88位上取代的氨基酸残基选自88Q、88L、88V、88R、88I、88T、88K、88E、88Y和88W，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20K、20W、20S、22A、22G、22T、22L、22V、26Q、26T、26K、26V、26S、26R、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1W、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86H、86T、86W、86Y、86V和86F，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002662
编号规则标注的。
45、实施方案39的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3E、3K、5A、5T、5Y、7M、7L、20K、20N、20T、20S、22A、22L、22V、26E、26T、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、83M、83T、84L、84.2E、84.2S、84.3D、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86F、86Y、90K、90N和90R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002663
编号规则标注的。
46、实施方案39的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第88位和第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86和90位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002664
编号规则标注的。
47、实施方案39的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第85.1和/或86位和第26位的氨基酸残基，和任选的另外的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002671
编号规则标注的。
48、异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH2结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第20位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、22、26、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，且其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括第26位的氨基酸残基，和任选的选自第3、5、7、20、22、27、79、81、83、84、84.2、84.3、85.1、86、88和90位的另外的氨基酸残基，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第20位上取代的氨基酸残基与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中第26位上取代的氨基酸残基相互作用，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002681
编号规则标注的。
49、实施方案48的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是天然存在的CH2结构域.
50、实施方案48的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20N和20T，及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002682
编号规则标注的。
51、实施方案48的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第26位上取代的氨基酸残基选自26T和26E及其保守的氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002683
编号规则标注的。
52、实施方案48的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20K、20Q、20E、20W和20S，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自22A、22G、22T、22L、22V、22I、26Q、26T、26K、26V、26S、26R、26N、26E、85.1R、85.1H、85.1K、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1W、85.1F、85.1C、85.1N、86Q、86S、86I、86H、86T、86W、86Y、86V、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88I、88T、88K、88Y和88W，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002684
编号规则标注的。
53、实施方案48的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中第20位上取代的氨基酸残基选自20V、20T、20A、20N、20K、20W和20S，和/或其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自22A、22G、22T、22L、22V、26Q、26T、26K、26V、26S、26R、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1W、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86H、86T、86W、86Y、86V、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88I、88T、88K、88Y和88W，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002691
编号规则标注的。
54、实施方案48的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的另外的氨基酸残基选自3E、3K、5A、5T、5Y、7M、7L、22A、22L、22V、26E、26T、27E、27K、79F、79Y、81A、81G、81D、83M、83T、84L、84.2E、84.2S、84.3D、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86F、86Y、88K、88L、88R、88W、90K、90N和90R及其保守的氨基酸取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002692
编号规则标注的。
55、实施方案39-54的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG1 CH2结构域，或者其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG1 CH2结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG3 CH2结构域，或者其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG3 CH2结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG1 CH2结构域。
56、实施方案1-55的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是不相邻的。
57、实施方案1-55的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少2个氨基酸残基是被取代的。
58、异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH4结构域，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自第20、22、85.1、86和88位的氨基酸残基取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自第22、26、85.1、86和88位的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002701
编号规则标注的。
59、实施方案58的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是天然存在的CH4结构域。
60、实施方案58的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中相比第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的氨基酸序列，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的改造结构域的氨基酸序列不含一个或多个氨基酸残基的插入。
61、实施方案58的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体。
62、实施方案1-61的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的另外的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链和/或所述第二改造的免疫球蛋白链的所述另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且
其中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化或通过同型二聚体化与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用，
其中，所述第三改造的免疫球蛋白链的所述改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面，不同于第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面。
63、实施方案62的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是天然存在的结构域。
64、实施方案62的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体。
65、实施方案64的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和第四成员选自TCR恒定结构域家族。
66、实施方案62-65的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域形成异二聚体。
67、实施方案62-65的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，或是IGKC结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，或者其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是CH1结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，或是IGKC结构域。
68、实施方案62的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域形成天然存在的同型二聚体。
69、实施方案68的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是CH3结构域。
70、实施方案68的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是IgG1 CH3结构域。
71、实施方案68的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是IgA1 CH3结构域或IgA2 CH3结构域。
72、实施方案62-67的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用。
73、实施方案68-71的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过同型二聚体化与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用。
74、实施方案62-73的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和第四成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的氨基酸残基是对结构域的核心完整性不必需的氨基酸。
75、实施方案1-74的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链包含Fc区。
76、实施方案62-75的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域，和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少2个氨基酸残基是被取代的。
77、实施方案1-76的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段是全长抗体。
78、实施方案62或77的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段或全长抗体是双特异性的。
79、实施方案78的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中双特异性的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段或双特异性的全长抗体结合选自HER2、EGFR、CD19和VLA-2的抗原。
80、实施方案1-79的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中至少一个额外的多肽与第一和/或第二改造的免疫球蛋白链融合。
81、实施方案80的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中所述额外的多肽选自Fab、scFv、双抗体、结构域抗体、药学活性肽或蛋白质、受体胞外结构域、移植CDR的多肽和治疗性改造的蛋白质支架。
82、异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第20、22、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，则第5位的取代的氨基酸残基和第20位的取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位的取代的氨基酸残基和第26位的取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则2个第86位的取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002751
编号规则标注的。
83、实施方案82的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第22、26、85.1、86和88位的位置上的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002752
编号规则标注的。
84、实施方案82或83的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是天然存在的结构域。
85、实施方案82的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中，如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，则第5位的取代的氨基酸残基和第20位的取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，并且其中，如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则2个第86位的取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002753
编号规则标注的。
86、实施方案82或83的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用。
87、实施方案82或83的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH4结构域。
88、实施方案82或83的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自CH1结构域、CH4结构域、IGKC结构域、IGLC1结构域、IGLC2结构域、IGLC3结构域、IGLC6结构域和IGLC7结构域的结构域。
89、实施方案82或83的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域。
90、实施方案82或83的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC的结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域。
91、实施方案82或83的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自20V、20T、20A、20N、20Q、20E、20K、20W、20S、22A、22G、22T、22L、22I、22V、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1W、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86T、86H、86Q、86V、86W、86Y、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88T、88I、88K、88Y和88W的氨基酸残基取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自22A、22G、22T、22L、22I、22V、26Q、26T、26K、26V、26S、26R、26N、26E、85.1T、85.1M、85.1A、85.1S、85.1R、85.1H、85.1K、85.1W、85.1F、85.1C、85.1N、86S、86I、86T、86H、86Q、86V、86W、86Y、86F、88Q、88L、88V、88R、88E、88I、88T、88K、88Y和88W的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002771
编号规则标注的。
92、实施方案82或83的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自20K、20N、20T、20S、22A、22L、22V、22T、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86T、86F、86Y、86V、88W、88R、88L、88I和88K及其保守的氨基酸取代的氨基酸残基取代，和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自22A、22L、22V、22T、26E、26T、26K、26R、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86T、86F、86Y、86V、88W、88R、88L、88I和88K及其保守的氨基酸取代的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002772
编号规则标注的。
93、实施方案82或83的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自20K、20N、20T、20S、22A、22L、22V、22T、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86F、86Y、86V、88W、88R、88L和88K及其保守的氨基酸取代的氨基酸残基取代，和/或其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含选自22A、22L、22V、22T、26E、26T、26K、85.1S、85.1A、85.1N、85.1M、85.1F、86S、86F、86Y、86V、88W、88R、88L和88K及其保守的氨基酸取代的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002773
编号规则标注的。
94、实施方案82-93的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代位于第88位，则第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中与第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第88位取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基位于第85.1和/或86位，或者如果第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代位于第88位，则第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第88位取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基位于第85.1和/或86位，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002781
编号规则标注的。
95、实施方案82-93的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代位于第85.1位，则第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中与第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第85.1位取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基位于第86位，或者如果第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代位于第85.1位，则第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第85.1位取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基位于第86位，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002782
编号规则标注的。
96、实施方案82-93的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代位于第22位，则第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中与第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第22位取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基位于第22和/或86位，或者如果第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代位于第22位，则第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第22位取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基位于第22和/或86位，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002783
编号规则标注的。
97、实施方案82-93的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代位于第20位，则第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中与第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第20位取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基位于第26位，或者如果第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中的取代位于第20位，则第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域中与第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的第20位取代的氨基酸残基相互作用的取代的氨基酸残基位于第26位，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002784
编号规则标注的。
98、实施方案82-97的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第3、5、7、11、12、13、18、26、27、79、81、83、84、84.2和90位的位置上的另外的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002791
编号规则标注的。
99、实施方案83-97的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面包含在选自第3、5、7、11、12、13、18、20、27、79、81、83、84、84.2和90位的位置上的另外的氨基酸残基取代，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002792
编号规则标注的。
100、异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含：
(a)第一改造的免疫球蛋白链，其包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)第二改造的免疫球蛋白链，其包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域不是CH2结构域、不是CH3结构域、不是VL结构域且不是VH结构域，且其中，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第12位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第119位被氨基酸残基取代，则第12位上取代的氨基酸残基和第119位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第13位被氨基酸残基取代，则第26位上取代的氨基酸残基和第13位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第5位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，则第5位上取代的氨基酸残基和第20位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第27位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第18位被氨基酸残基取代，则第27位上取代的氨基酸残基和第18位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第20位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第26位被氨基酸残基取代，则第20位上取代的氨基酸残基和第26位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第79位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第84.3位被氨基酸残基取代，则第79位上取代的氨基酸残基和第84.3位上取代的氨基酸残基不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGLC结构域或IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面在第86位被氨基酸残基取代，则两个第86位上取代的氨基酸残基都不是带电荷的配对，
如果第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是在第11位，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是包含铰链区的结构域，则第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域在铰链区的第3位未被取代，
其中，各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002811
编号规则标注的。
101、实施方案100的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自CH1结构域、CH4结构域、IGKC结构域、IGLC1结构域、IGLC2结构域、IGLC3结构域、IGLC6结构域和IGLC7结构域的结构域，其中，第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括位于选自第3、5、7、11、12、13、18、20、22、26、27、79、81、83、84、84.2、85.1、86、88和90位的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure BDA0001569050590002812
编号规则标注的。
102、实施方案82或100的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域形成异二聚体。
103、实施方案102的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过同型二聚体化与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用。
104、实施方案82或100的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域形成同型二聚体。
105、实施方案82或100的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体。
106、实施方案82或100的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员选自TCR恒定结构域家族。
107、实施方案82或100的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO:1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO:2)或
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO:2)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO:1)。
108、实施方案107的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中SEQ ID NO:2中第75位氨基酸半胱氨酸(C)被丙氨酸(A)或丝氨酸(S)取代。
109、实施方案82或100的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO:33)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO:32)，或
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO:32)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO:33)。
110、实施方案82或100的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的同型二聚体。
111、实施方案110的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白的第二成员的供体结构域是CH3结构域。
112、实施方案110的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是IgG1 CH3结构域。
113、实施方案110的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是IgA1 CH3结构域或IgA2 CH3结构域。
114、实施方案82-113的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且此外，所述第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且其中所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且此外，所述第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代。
115、实施方案82-114的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中，与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中相同的3D结构位置相比，第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面中的至少一个3D结构位置上的氨基酸残基是不同的。
116、实施方案82-115的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的。
117、实施方案82-116的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的氨基酸残基是对结构域的核心完整性不必需的氨基酸。
118、实施方案82-117的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中异二聚体免疫球蛋白片段包含至少2个改造的结构域，其中第一改造的结构域不同于第二改造的结构域，且其中两个改造的结构域通过它们蛋白质-蛋白质界面的相互作用而装配。
119、实施方案89的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括位于选自第114、116、118、123、124、131、133、137、138、160、162、164、165、167、174、176、178和180位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
120、实施方案90的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括位于选自第114、116、118、122、131、133、137、138、160、162、165、167、174、176、178和180位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据Kabat编号规则标注的。
121、实施方案89的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S131V、S131T、S131A、S131N、S131Q、S131E、S131K、S131W、V133A、V133G、V133T、V133L、V133I、N137Q、N137T、N137K、N137V、N137S、N137R、N137E、S174T、S174M、S174A、S174R、S174H、S174K、S174W、S174F、S174C、S174N、S176I、S176T、S176H、S176Q、S176V、S176W、S176Y、S176F、T178Q、T178L、T178V、T178R、T178E、T178I、T178K、T178Y和T178W的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
122、实施方案89的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S114E、S114K、S114Q、F116A、F116T、F116Y、F118M、F118L、E123D、Q124E、S131K、S131T、S131N、V133L、V133A、V133T、N137T、N137E、N137K、N138K、N138E、Q160Y、Q160F、Q160K、S162A、S162G、S162D、S162T、T164V、T164M、E165L、D167E、D167S、S174A、S174M、S174N、S174F、S176F、S176V、S176Y、T178W、T178R、T178L、T178K、T180N、T180R和T180K及其保守的氨基酸取代的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
123、实施方案90的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自131V、131A、131N、131Q、131E、131K、131W、131S、133A、133G、133T、133L、133I、137Q、137T、137K、137V、137R、137N、137E、174T、174M、174S、174R、174H、174K、174W、174F、174C、174N、176I、176T、176H、176Q、176W、176Y、176V、176F、178Q、178L、178V、178R、178E、178T、178I、178K、178E和178W的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据Kabat编号规则标注的。
124、实施方案90的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自114E、114K、114Q、116A、116Y、118M、118L、122D、131K、131N、133A、133L、133T、137T、137E、137K、138E、138K、160Y、160F、160K、162D、162A、162G、165L、165M、167E、167S、174N、174M、174F、174S、176V、176F、176Y、178W、178R、178L、178K、180N,180R和180K及其保守的氨基酸取代的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据Kabat编号规则标注的。
125、实施方案89的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第178位的氨基酸残基，或包括T178W及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第131、137、160、176和180位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
126、实施方案89的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第174位的氨基酸残基，或包括S174A及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第114、116、131、137、162、165、167、178和180位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
127、实施方案89的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第178位的氨基酸残基，或包括T178W及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第114、116、131、133、137、138、162、164、174和176位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
128、实施方案89的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第176位的氨基酸残基，或包括S176V及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第118、131、133、138、160、162、167、174、178和180位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
129、实施方案89的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第176位的氨基酸残基，或包括S176Y及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第114、116、118、123、124、133、137、160、162、164、174和178位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
130、实施方案89或90的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基包括位于选自第124、126、128、133、134、139、141、143、147、148、168、170、173、175、181、183、185和187位的位置上的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
131、实施方案89或90的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自141V、141T、141N、141Q、141E、141K、141W、141S、143A、143T、143L、143I、143V、147Q、147T、147V、147S、147R、147N、147E、181T、181M、181A、181R、181H、181K、181W、181F、181C、181N、183I、183H、183Q、183V、183T、183W、183Y、183F、185Q、185L、185R、185E、185I、185T、185K、185Y和185W的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
132、实施方案89或90的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括选自S124E、S124K、S124Q、F126A、F126T、F126Y、L128F、L128M、K133D、S134E、T139Q、A141K、A141T、A141N、A141S、G143V、G143A、G143L、G143T、K147T、K147E、D148E、D148K、H168Y、H168F、H168K、F170D、F170A、F170G、F170T、V173L、V173M、Q175E、Q175S、Q175D、S181A、S181N、S181M、S181F、S183V、S183F、S183Y、V185W、V185R、V185L、V185K、T187N、T187K和T187R及其保守的氨基酸取代的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
133、实施方案89或90的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第185位的氨基酸残基，或包括V185W及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第141、143、147、168、183和187位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
134、实施方案89或90的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第181位的氨基酸残基，或包括S181A及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第124、126、128、141、143、147、170、173、175、185和187位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
135、实施方案89或90的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第185位的氨基酸残基，或包括V185W及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第124、126、141、143、147、148、170、173、181和183位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
136、实施方案89或90的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第183位的氨基酸残基，或包括S183V及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第128、141、143、148、168、170、175、181、185和187位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
137、实施方案89或90的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中取代的氨基酸残基包括第183位的氨基酸残基，或包括S183Y及其保守的氨基酸取代，和任选的位于选自第124、126、133、134、139、141、143、168、170、175、181和185位的另外的氨基酸残基，其中各组成员的氨基酸位置是根据EU编号规则标注的。
138、实施方案82-137的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是不相邻的。
139、实施方案82-138的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少2个氨基酸残基是被取代的。
140、实施方案82-139的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中相比第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的氨基酸序列，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的改造结构域的氨基酸序列不含一个或多个氨基酸残基的插入。
141、实施方案82-140的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链具有至少一个氨基酸、或至少2个氨基酸、或至少3个氨基酸、或至少4个氨基酸、或至少5个氨基酸、或至少5-10个氨基酸、或至少10-30个氨基酸彼此不同的氨基酸序列。
142、实施方案82-141的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中至少一个额外的多肽与第一和/或第二改造的免疫球蛋白链融合。
143、实施方案142的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中所述额外的多肽选自Fab、scFv、双抗体、结构域抗体、药学活性肽或蛋白质、受体胞外结构域、移植CDR的多肽和治疗性改造的蛋白质支架。
144、实施方案82或100的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链包括具有蛋白质-蛋白质界面的另外的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链和/或所述第二改造的免疫球蛋白链的所述另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且
其中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化或同型二聚体化与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用，
其中，所述第三改造的免疫球蛋白链的所述改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体，且
其中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面不同于第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面。
145、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和第四成员选自TCR恒定结构域家族。
146、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO:1),天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO:2)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO:32)且天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO:33)。
147、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO:32)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO:33)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO:1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO:2)。
148、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO:1)或TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO:32)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO:2)或TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO:33)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和第四成员的供体结构域是IgG1 CH3结构域(SEQ ID NO:47)，其前提条件是如果天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO:1)，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO:2)，以及如果天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO:32)，则天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQID NO:33)。
149、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO:1)或TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO:32)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO:2)或TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO:33)，天然存在的免疫球蛋白超家族的第三和第四成员的供体结构域是人IGHA1 CH3结构域(SEQ ID NO:96)或人IGHA2 CH3结构域(SEQ ID NO:97)，其前提条件是如果天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO:1),则天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO:2)，以及如果天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO:32),则天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO:33)。
150、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域是IgA1 CH3结构域或IgA2 CH3结构域。
151、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是天然存在的结构域。
152、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域选自CH1、CH2、CH3、CH4、IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7。
153、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域选自CH1、CH2、CH3、CH4、IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7。
154、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域形成异二聚体。
155、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域形成同型二聚体。
156、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的。
157、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是CH3结构域。
158、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IgG1 CH3结构域。
159、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是IgG1CH3结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IgG3 CH3结构域，或者其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域是IgG3 CH3结构域，且第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域是IgG1 CH3结构域。
160、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是不相邻的。
161、实施方案144的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的亲代结构域和/或第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少2个氨基酸残基是被取代的。
162、实施方案82-161的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其包含Fc区。
163、实施方案82-161的任一项的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段是全长抗体。
164、实施方案144或163的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段或全长抗体是双特异性的。
165、实施方案164的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段，其中双特异性的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段或双特异性的全长抗体结合选自HER2、EGFR、CD19和VLA-2的抗原。
166、生产异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段的方法，其包括：
(a)在来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上取代第一亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基，获得包含改造的结构域的第一改造的免疫球蛋白链，
(b)在来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上取代第二亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基，获得包含改造的结构域的第二改造的免疫球蛋白链，
(c)培养包含编码所述改造的免疫球蛋白链的核酸的宿主细胞，其中所述培养使核酸表达并生成改造的免疫球蛋白链；和
(d)从宿主细胞培养物中回收异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段。
167、实施方案166的方法，其中亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被来自供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置取代的氨基酸残基是供体结构域的蛋白质-蛋白质界面中这样的氨基酸残基，当通过重叠两个结构域的碳α痕迹来重叠到亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面上时，所述氨基酸残基占据了与亲代结构域的最接近残基距离小于
Figure BDA0001569050590002951
的3D位置，其中所述供体结构域不同于亲代结构域。
168、实施方案166的方法，其中第一亲代免疫球蛋白链的亲代结构域选自CH1、CH2、CH3、CH4、IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7。
169、实施方案166的方法，其中第二亲代免疫球蛋白链的亲代结构域选自CH1、CH2、CH3、CH4、IGKC、IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7。
170、实施方案166的方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域形成同型二聚体。
171、实施方案166的方法，其中第一和/或第二亲代免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域。
172、实施方案166的方法，其中第一和/或第二亲代免疫球蛋白链的亲代结构域是CH4结构域。
173、实施方案166的方法，其中第一和第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域形成异二聚体。
174、实施方案166的方法，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，或者其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域。
175、实施方案166的方法，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，或是IGKC结构域，或者其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，或是IGKC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域。
176、实施方案166的方法，其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，或者其中第一改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是选自IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6和IGLC7的IGLC结构域，且第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域是CH1结构域。
177、实施方案166-176的方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体。
178、实施方案166-177的任一项的方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员选自TCR恒定结构域家族。
179、实施方案178的方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO:1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO:2)。
180、实施方案179的方法，其中SEQ ID NO:2中第75位氨基酸半胱氨酸(C)被丙氨酸(A)或丝氨酸(S)取代。
181、实施方案178的方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO:33)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO:32)。
182、实施方案166的方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的同型二聚体。
183、实施方案182的方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白的第二成员的供体结构域是CH3结构域。
184、实施方案166的方法，其中第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域和第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的。
185、实施方案166的方法，其中第一和/或第二亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是不相邻的。
186、实施方案166的方法，其中相比第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的亲代结构域的氨基酸序列，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的改造结构域的氨基酸序列不含一个或多个氨基酸残基的插入。
187、实施方案166的方法，其中第一和/或第二亲代免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少2个氨基酸残基是被取代的。
188、实施方案166的方法，其中第一和第二亲代免疫球蛋白链包含Fc区。
189、实施方案166-188的任一项的方法，其中来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的氨基酸残基是对结构域的核心完整性不必需的氨基酸。
190、实施方案166的方法，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链包含具有蛋白质-蛋白质界面的另外的改造的结构域，其中所述第一改造的免疫球蛋白链和/或所述第二改造的免疫球蛋白链的所述另外的改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来自天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且
其中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面通过异二聚体化或同型二聚体化与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面相互作用，
其中，所述第三改造的免疫球蛋白链的所述改造的结构域的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基被来天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，且
其中，第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面不同于第一改造的免疫球蛋白链的改造的结构域与第二改造的免疫球蛋白链的改造的结构域的蛋白质-蛋白质界面。
191、实施方案190的方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第三成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第四成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体或天然存在的同型二聚体。
192、实施方案190的方法，其中第一改造的免疫球蛋白链和/或第二改造的免疫球蛋白链的另外的改造的结构域与第三改造的免疫球蛋白链的改造的结构域是不同的。
193、实施方案166或190的任一项的方法，其中异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段是全长抗体。
194、实施方案166或193的方法，其中异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段或全长抗体是双特异性的。
195、实施方案194的方法，其中双特异性的异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段或双特异性的抗体结合选自HER2、EGFR、CD19和VLA-2的抗原。
196、实施方案166-190的任一项的方法，其中至少一个额外的多肽与第一和/或第二改造的免疫球蛋白链融合。
197、实施方案196的方法，其中所述额外的多肽选自Fab、scFv、双抗体、结构域抗体、药学活性肽或蛋白质、受体胞外结构域、移植CDR的多肽和治疗性改造的蛋白质支架。
198、改造多结构域蛋白质的结构域的蛋白质-蛋白质界面的方法，其包括：
(a)提供包含具有蛋白质-蛋白质界面的结构域的多结构域蛋白质；
(b)选择包含不同于(a)的结构域的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域的天然存在的免疫球蛋白超家族成员作为供体结构域；
(c)重叠(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域与(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域的3D结构；
(d)在(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域与(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域的重叠3D结构中，鉴别暴露的蛋白质-蛋白质界面残基；
(e)用来自于在(b)的具有蛋白质-蛋白质界面的供体结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基的在等价3D结构位置上的氨基酸残基，取代在(a)的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域中鉴别出的、暴露的蛋白质-蛋白质界面氨基酸残基中的至少一个氨基酸残基。
199、实施方案198的方法，其中(a)的多结构域蛋白质的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域能够与另外的结构域形成同型二聚体。
200、实施方案198的方法，其中(a)的多结构域蛋白质的具有蛋白质-蛋白质界面的结构域能够与另外的结构域形成异二聚体。
201、实施方案198的方法，其中在多结构域蛋白质的结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族成员的供体结构域中鉴别出的、暴露的界面残基对结构域的核心完整性是不必需的。
202、实施方案198的方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族成员是天然存在的异二聚体。
203、实施方案198的方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族成员选自TCR恒定结构域家族。
204、实施方案198的方法，其中免疫球蛋白超家族的天然存在的成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO:1)或TCR恒定结构域β(SEQ ID NO:2)。
205、实施方案204的方法，其中SEQ ID NO:2中第75位氨基酸半胱氨酸(C)被丙氨酸(A)或丝氨酸(S)取代。
206、实施方案198的方法，其中免疫球蛋白超家族的天然存在的成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO:33)或TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO:32)。
207、实施方案198的方法，其中天然存在的免疫球蛋白超家族成员是天然存在的同型二聚体。
208、天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域用于改造异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段的用途，所述异二聚体免疫球蛋白或其异二聚体片段包含第一改造的免疫球蛋白链和第二改造的免疫球蛋白链，所述第一改造的免疫球蛋白链包含至少一个改造的结构域，其具有用来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基取代的蛋白质-蛋白质界面，所述第二改造的免疫球蛋白链包含至少一个改造的结构域，其具有用来自于天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面的至少一个氨基酸残基取代的蛋白质-蛋白质界面，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异二聚体。
209、根据实施方案208的用途，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一和第二成员的供体结构域选自T细胞受体链。
210、根据实施方案208的用途，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域α(SEQ ID NO:1)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域β(SEQ ID NO:2)。
211、根据实施方案208的用途，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域是TCR恒定结构域δ(SEQ ID NO:32)，且天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域是TCR恒定结构域γ(SEQ ID NO:33)。
序列表
<110> 格兰马克药品股份有限公司(Glenmark Pharmaceuticals S.A.)
<120> 异二聚体免疫球蛋白
<130> PCT
<160> 97
<170> PatentIn版本3.3
<210> 1
<211> 91
<212> PRT
<213> 人(Homo sapiens)
<220>
<221> T 细胞受体恒定结构域α
<222> (1)..(91)
<400> 1
Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys
1 5 10 15
Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr
20 25 30
Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr
35 40 45
Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala
50 55 60
Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser
65 70 75 80
Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro
85 90
<210> 2
<211> 128
<212> PRT
<213> 人
<220>
<221> T细胞受体恒定结构域β [人]
<222> (1)..(128)
<400> 2
Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro
1 5 10 15
Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu
20 25 30
Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn
35 40 45
Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys
50 55 60
Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu
65 70 75 80
Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys
85 90 95
Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp
100 105 110
Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg
115 120 125
<210> 3
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> BT α 链
<400> 3
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Lys
130 135 140
Leu Val Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ser Leu Val Ser Trp Leu Asn Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 4
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> BT β 链
<400> 4
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val
115 120 125
Ala Thr Phe Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr
130 135 140
Leu Val Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro
165 170 175
Leu Leu Glu Ser Asp Gly Ser Phe Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 5
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL: 修饰的 VBASE2-humIGKV115-IGKJ*01
<400> 5
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 6
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-BT β 链
<400> 6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His
100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145 150 155 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val Ala Thr Phe Pro
225 230 235 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu Val Cys Leu
245 250 255
Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
260 265 270
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro Leu Leu Glu Ser
275 280 285
Asp Gly Ser Phe Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 7
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> BT α His 链
<400> 7
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Lys
130 135 140
Leu Val Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ser Leu Val Ser Trp Leu Asn Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys His His His His His His
225 230
<210> 8
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 CH3-BT α 链
<400> 8
ggccagccca gagaacccca ggtgtacacc ctgcccccca gcagagatga gctgaccaag 60
aaccaggtca agctcgtgtg cctggtcacc ggcttctacc ccagcgatat cgccgtggag 120
tgggagagca acggccagcc tgaaaacaac tactacacca ccccccctgt gctggacagc 180
gacggcagct tcagcctggt gtcctggctg aacgtggaca agagccggtg gcagcagggc 240
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 300
ctgagcctgt ctcctggcaa g 321
<210> 9
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 CH3-BT β 链
<400> 9
ggacagccca gggaacctga ggtggccaca ttcccaccta gccgggacga gctgacaaaa 60
aatcaggtca ccctcgtctg tctcgtgacc ggcttttacc cttccgacat tgccgtggaa 120
tgggaatcca atgggcagcc cgagaacaat tacaagacag acccccccct gctggaatcc 180
gatggcagct tctgcctgag cagccggctg cgggtggaca agtccagatg gcagcagggg 240
aatgtctttt cctgctccgt catgcatgaa gccctccaca atcattatac acagaaaagc 300
ctgagcctga gccccggcaa g 321
<210> 10
<211> 699
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 BT α His 链
<400> 10
gacaaaactc acacatgccc cccctgccct gcccctgagc tgctgggcgg accctccgtg 60
ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc ctgatgatca gccggacccc cgaggtgacc 120
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaggac cctgaggtga agttcaattg gtacgtggac 180
ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag ccccgggagg aacagtacaa cagcacctac 240
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggaatacaag 300
tgcaaggtct ccaacaaggc cctgcctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 360
ggccagccca gagaacccca ggtgtacacc ctgcccccca gcagagatga gctgaccaag 420
aaccaggtca agctcgtgtg cctggtcacc ggcttctacc ccagcgatat cgccgtggag 480
tgggagagca acggccagcc tgaaaacaac tactacacca ccccccctgt gctggacagc 540
gacggcagct tcagcctggt gtcctggctg aacgtggaca agagccggtg gcagcagggc 600
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 660
ctgagcctgt ctcctggcaa gcatcaccat caccatcac 699
<210> 11
<211> 1005
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 VL-BT β 链
<400> 11
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgcc gggccagcca gagcatcagc tcctacctga actggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctatgct gcctcctctc tccagagcgg cgtgcccagc 180
cggttttccg ggtctgggtc cgggacagat ttcaccctga ccatcagcag cctccagccc 240
gaggatttcg ccacctacta ctgccagcag agctacagca cccccaacac cttcggccag 300
ggaacaaagg tggagatcaa gcgggacaaa actcacactt gcccaccgtg cccagcacct 360
gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 420
atctcccgga cccctgaggt cacctgcgtg gtggtggacg tgagccacga ggaccctgag 480
gtgaagttca attggtacgt ggacggcgtg gaggtgcaca acgccaagac caagccccgg 540
gaggaacagt acaacagcac ctaccgggtg gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggac 600
tggctgaacg gcaaggaata caagtgcaag gtctccaaca aggccctgcc tgcccccatc 660
gaaaagacca tcagcaaggc caagggacag cccagggaac ctgaggtggc cacattccca 720
cctagccggg acgagctgac aaaaaatcag gtcaccctcg tctgtctcgt gaccggcttt 780
tacccttccg acattgccgt ggaatgggaa tccaatgggc agcccgagaa caattacaag 840
acagaccccc ccctgctgga atccgatggc agcttctgcc tgagcagccg gctgcgggtg 900
gacaagtcca gatggcagca ggggaatgtc ttttcctgct ccgtcatgca tgaagccctc 960
cacaatcatt atacacagaa aagcctgagc ctgagccccg gcaag 1005
<210> 12
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人 IGHG1 Fc 链
<400> 12
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 13
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> CH3-BT α 结构域
<400> 13
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Val Cys Leu Val Thr Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Ser Leu Val Ser Trp Leu Asn Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 14
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> CH3-BT β 结构域，具有取代 F405A
<400> 14
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val Ala Thr Phe Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu Val Cys Leu Val Thr Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro Leu Leu Glu Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Ala Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 15
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> CH3-BT β 结构域
<400> 15
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val Ala Thr Phe Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu Val Cys Leu Val Thr Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro Leu Leu Glu Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 16
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> CH3-BT β 结构域，具有取代 F405S
<400> 16
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val Ala Thr Phe Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu Val Cys Leu Val Thr Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro Leu Leu Glu Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Ser Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 17
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> BT β (F405A) HA 链
<400> 17
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val
115 120 125
Ala Thr Phe Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr
130 135 140
Leu Val Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro
165 170 175
Leu Leu Glu Ser Asp Gly Ser Phe Ala Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala
225 230 235
<210> 18
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> Fc (BTA)-Y407V-K409W
<400> 18
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Trp Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 19
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> Fc (BTA)-K392Y-K409W
<400> 19
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
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130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
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Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Trp Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 20
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> Fc (BTA)-T366V-K409W
<400> 20
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165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Trp Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 21
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> Fc (BTA)-Y407V-K409W-T411N
<400> 21
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1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Trp Leu Asn Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
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225
<210> 22
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> Fc (BTA)-F405S-Y407V-K409W-T411N
<400> 22
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20 25 30
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35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
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115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
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Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ser Leu Val Ser Trp Leu Asn Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 23
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> Fc (BTA)-S364K-T366V-K370T-K392Y-K409W-T411N
<400> 23
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
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65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
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100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Trp Leu Asn Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 24
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-Fc (BTB)-F405A-Y407S
<400> 24
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1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
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130 135 140
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165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225 230 235 240
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260 265 270
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275 280 285
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His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 25
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-Fc (BTB)-F405A-K409R
<400> 25
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
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Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
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Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
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Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
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275 280 285
Asp Gly Ser Phe Ala Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
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305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 26
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-Fc (BTB)-Y407S-K409R
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
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130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
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Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225 230 235 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
245 250 255
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
260 265 270
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
275 280 285
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Ser Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 27
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-Fc (BTB)-K409R-T411R
<400> 27
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His
100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145 150 155 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225 230 235 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
245 250 255
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
260 265 270
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
275 280 285
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Arg Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 28
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-Fc (BTB)-F405A-Y407S-K409R
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His
100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145 150 155 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225 230 235 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
245 250 255
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
260 265 270
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
275 280 285
Asp Gly Ser Phe Ala Leu Ser Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 29
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-Fc (BTB)-F405A-Y407S-K409R-T411R
<400> 29
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His
100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145 150 155 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Ser Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225 230 235 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
245 250 255
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
260 265 270
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
275 280 285
Asp Gly Ser Phe Ala Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 30
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> Fc-T366W (隆突)
<400> 30
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 31
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-Fc-T366S-L368A-Y407V (孔)
<400> 31
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His
100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145 150 155 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225 230 235 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala
245 250 255
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
260 265 270
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
275 280 285
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 32
<211> 87
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> T细胞受体恒定结构域δ [人]
<400> 32
Arg Ser Gln Pro His Thr Lys Pro Ser Val Phe Val Met Lys Asn Gly
1 5 10 15
Thr Asn Val Ala Cys Leu Val Lys Glu Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Arg
20 25 30
Ile Asn Leu Val Ser Ser Lys Lys Ile Thr Glu Phe Asp Pro Ala Ile
35 40 45
Val Ile Ser Pro Ser Gly Lys Tyr Asn Ala Val Lys Leu Gly Lys Tyr
50 55 60
Glu Asp Ser Asn Ser Val Thr Cys Ser Val Gln His Asp Asn Lys Thr
65 70 75 80
Val His Ser Thr Asp Phe Glu
85
<210> 33
<211> 101
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> T细胞受体恒定结构域γ [人]
<400> 33
Val Ser Pro Lys Pro Thr Ile Phe Leu Pro Ser Ile Ala Glu Thr Lys
1 5 10 15
Leu Gln Lys Ala Gly Thr Tyr Leu Cys Leu Leu Glu Lys Phe Phe Pro
20 25 30
Asp Val Ile Lys Ile His Trp Glu Glu Lys Lys Ser Asn Thr Ile Leu
35 40 45
Gly Ser Gln Glu Gly Asn Thr Met Lys Thr Asn Asp Thr Tyr Met Lys
50 55 60
Phe Ser Trp Leu Thr Val Pro Glu Lys Ser Leu Asp Lys Glu His Arg
65 70 75 80
Cys Ile Val Arg His Glu Asn Asn Lys Asn Gly Val Asp Gln Glu Ile
85 90 95
Ile Phe Pro Pro Ile
100
<210> 34
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> BT δ 链
<400> 34
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Met Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Asn
130 135 140
Leu Ala Cys Leu Val Lys Glu Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Phe Thr Ala Pro Pro
165 170 175
Val Leu Ser Ser Asp Gly Ser Phe Asn Leu Val Ser Leu Leu Lys Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 35
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> BT γ 链
<400> 35
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Lys Val
115 120 125
Thr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr
130 135 140
Leu Leu Cys Leu Val Glu Lys Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Gly Pro Pro
165 170 175
Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Met Leu Phe Ser Trp Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 36
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-BT γ 链
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His
100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145 150 155 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Lys Val Thr Thr Leu Pro
225 230 235 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu Leu Cys Leu
245 250 255
Val Glu Lys Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
260 265 270
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Gly Pro Pro Met Leu Asp Ser
275 280 285
Asp Gly Ser Phe Met Leu Phe Ser Trp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 37
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA， 编码BT δ 链的改造的CH3 结构域
<400> 37
ggccagccca gagaacccca ggtgtacacc atgcccccca gcagggacga gctgaccaag 60
aaccaggtca acctggcctg cctggtcaaa gagttctacc ccagcgatat cgccgtggaa 120
tgggagagca acggccagcc tgagaacaac tacttcaccg cccctcccgt gctgagcagc 180
gacggcagct tcaacctggt gtccctgctg aaggtggaca agagccggtg gcagcagggc 240
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 300
ctgagcctga gccccggaaa g 321
<210> 38
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码BT γ 链的改造的CH3 结构域
<400> 38
ggccagcccc gcgagcccaa agtgacaacc ctgcccccca gccgggacga gctgaccaag 60
aatcaggtca cactgctgtg cctggtggaa aagttctacc ccagcgatat cgccgtggaa 120
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagaccg gccctcccat gctggacagc 180
gacggcagct tcatgctgtt cagctggctg accgtggaca agagccggtg gcagcagggc 240
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 300
ctgagcctga gccccggaaa g 321
<210> 39
<211> 98
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> CH1 δ 结构域
<400> 39
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Met Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Asn Leu Ala Cys Leu Val Lys Glu Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val Phe Thr Ala Pro Ala Val Leu Ser Ser Ser Gly Leu Tyr Asn
50 55 60
Leu Val Ser Leu Val Lys Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val
<210> 40
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> CK γ 结构域
<400> 40
Arg Thr Val Ala Ala Pro Lys Val Thr Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Thr Val Leu Cys Leu Leu Glu Lys Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Gly Val Met Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Met Leu Phe Ser Trp Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 41
<211> 461
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VH(抗-hCD19)-CH1 δ-BT β c-myc 链
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Met Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Asn
130 135 140
Leu Ala Cys Leu Val Lys Glu Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val Phe Thr Ala Pro Ala Val
165 170 175
Leu Ser Ser Ser Gly Leu Tyr Asn Leu Val Ser Leu Val Lys Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val Ala
340 345 350
Thr Phe Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu
355 360 365
Val Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro Leu
385 390 395 400
Leu Glu Ser Asp Gly Ser Phe Ala Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn
450 455 460
<210> 42
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL(抗-hCD19)-CK γ 链
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Ile Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ala Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Lys Val Thr Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Thr Val Leu Cys Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Gly Val Met Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Met Leu Phe
165 170 175
Ser Trp Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 43
<211> 1383
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码VH(抗-hCD19)-CH1 δ-BT β c-myc 链
<400> 43
caggtccagc tggtgcagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggcgt gagcctgccc gactacggcg tgagctgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtg atctggggct ccgagacaac ctactacaac 180
agcgccctga agagccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatttg 240
caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgaa gcactactac 300
tacggcggca gctacgccat ggactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
gcgtcgacca agggccccag cgtgttcccg atggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
ggcacagcca acctggcctg cctggtgaag gagtacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480
tggaactctg gagccctgac ctccggcgtg ttcaccgccc ccgccgtgct ctccagcagc 540
ggcctgtaca acctggtgag cctcgtgaag gtgcccagca gcagcctggg aacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagccc 660
aagagctgcg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaagccaaag gacagcccag ggaacctgag gtggccacat tcccacctag ccgggacgag 1080
ctgacaaaaa atcaggtcac cctcgtctgt ctcgtgaccg gcttttaccc ttccgacatt 1140
gccgtggaat gggaatccaa tgggcagccc gagaacaatt acaagacaga cccccccctg 1200
ctggaatccg atggcagctt cgccctgagc agccggctgc gggtggacaa gtccagatgg 1260
cagcagggga atgtcttttc ctgctccgtc atgcatgaag ccctccacaa tcattataca 1320
cagaaaagcc tgagcctgtc tcctggcaag gaacaaaaac tcatctcaga agaggatctg 1380
aat 1383
<210> 44
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码VL(抗-hCD19)-CK γ 链
<400> 44
gatattcaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaaacca 120
gggaaagcca tcaagctcct gatctatcac accagccggc tgcacagcgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa ggcgccacac tgccctacac cttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa acgtacggtg gccgctccca aggtgaccat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc accgtgctgt gcctgctgga gaagttctac 420
ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tccagagcgg caacagccag 480
gaaggcgtca tggagcagga cagcaaggac tccacctaca tgctgttcag ctggctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gc 642
<210> 45
<211> 294
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码CH1 δ 结构域
<400> 45
gcgtcgacca agggccccag cgtgttcccg atggccccca gcagcaagag caccagcggc 60
ggcacagcca acctggcctg cctggtgaag gagtacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 120
tggaactctg gagccctgac ctccggcgtg ttcaccgccc ccgccgtgct ctccagcagc 180
ggcctgtaca acctggtgag cctcgtgaag gtgcccagca gcagcctggg aacccagacc 240
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa ggtg 294
<210> 46
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码CK γ 结构域
<400> 46
cgtacggtgg ccgctcccaa ggtgaccatc ttccccccca gcgacgagca gctgaagagc 60
ggcaccgcca ccgtgctgtg cctgctggag aagttctacc cccgggaggc caaggtgcag 120
tggaaggtgg acaacgccct ccagagcggc aacagccagg aaggcgtcat ggagcaggac 180
agcaaggact ccacctacat gctgttcagc tggctgaccc tgagcaaggc cgactacgag 240
aagcacaagg tgtacgcctg cgaggtgacc caccagggcc tgtccagccc cgtgaccaag 300
agcttcaacc ggggcgagtg c 321
<210> 47
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人 CH3 (同种型 γ 1)恒定结构域
<400> 47
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 48
<211> 98
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> CH13 结构域
<400> 48
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gln Val Tyr Pro Leu Ala Pro Ser Ser Asp
1 5 10 15
Glu Thr Ser Gly Gly Gln Ala Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Ser Gly Leu Tyr Phe
50 55 60
Leu Tyr Ser Lys Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val
<210> 49
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> CK3 结构域
<400> 49
Arg Thr Val Ala Ala Pro Gln Val Tyr Ile Leu Pro Pro Ser Asp Asp
1 5 10 15
Glu Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Thr Cys Leu Leu Lys Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Lys Glu Thr Val Val Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 50
<211> 461
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VH(抗-hCD19)-CH13-BT β c-myc 链
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Pro Leu Ala Pro Ser Ser Asp Glu Thr Ser Gly Gly Gln Ala Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val Lys Thr Thr Pro Ala Val
165 170 175
Leu Asp Ser Ser Gly Leu Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val Ala
340 345 350
Thr Phe Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu
355 360 365
Val Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro Leu
385 390 395 400
Leu Glu Ser Asp Gly Ser Phe Ala Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn
450 455 460
<210> 51
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL(抗-hCD19)-CK3 链
<400> 51
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Ile Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ala Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Gln Val Tyr Ile Leu Pro Pro Ser Asp Asp Glu Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Thr Cys Leu Leu Lys Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Lys
145 150 155 160
Glu Thr Val Val Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Phe Leu Tyr
165 170 175
Ser Lys Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 52
<211> 1383
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码VH(抗-hCD19)-CH13-BT β c-myc 链
<400> 52
caggtccagc tggtgcagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggcgt gagcctgccc gactacggcg tgagctgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtg atctggggct ccgagacaac ctactacaac 180
agcgccctga agagccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatttg 240
caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgaa gcactactac 300
tacggcggca gctacgccat ggactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
gccagcacca agggccccca ggtgtaccct ctggccccca gcagcgacga gacaagcgga 420
ggccaggcca gcctgacctg cctggtgaaa gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480
tggaactctg gcgccctgac cagcggcgtg aaaaccaccc ctgctgtgct ggacagcagc 540
ggcctgtact tcctgtacag caaagtgacc gtgcctagca gcagcctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agtggaaccg 660
aaaagctgcg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaagccaaag gacagcccag ggaacctgag gtggccacat tcccacctag ccgggacgag 1080
ctgacaaaaa atcaggtcac cctcgtctgt ctcgtgaccg gcttttaccc ttccgacatt 1140
gccgtggaat gggaatccaa tgggcagccc gagaacaatt acaagacaga cccccccctg 1200
ctggaatccg atggcagctt cgccctgagc agccggctgc gggtggacaa gtccagatgg 1260
cagcagggga atgtcttttc ctgctccgtc atgcatgaag ccctccacaa tcattataca 1320
cagaaaagcc tgagcctgtc tcctggcaag gaacaaaaac tcatctcaga agaggatctg 1380
aat 1383
<210> 53
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 VL(抗-hCD19)-CK3 链
<400> 53
gatattcaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaaacca 120
gggaaagcca tcaagctcct gatctatcac accagccggc tgcacagcgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa ggcgccacac tgccctacac cttcggccct 300
gggaccaaag tggatatcaa aagaaccgtg gctgctcctc aggtgtacat cctgcctccc 360
agcgacgatg agctgaagtc tggcaccgcc agcgtgacat gtctgctgaa gaacttctac 420
ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaagtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagcaaa 480
gaaaccgtgg tggaacagga cagcaaggac tccacctact ttctgtactc caagctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccagggc 600
ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gc 642
<210> 54
<211> 294
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 CH13 结构域
<400> 54
gccagcacca agggccccca ggtgtaccct ctggccccca gcagcgacga gacaagcgga 60
ggccaggcca gcctgacctg cctggtgaaa gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 120
tggaactctg gcgccctgac cagcggcgtg aaaaccaccc ctgctgtgct ggacagcagc 180
ggcctgtact tcctgtacag caaagtgacc gtgcctagca gcagcctggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agtg 294
<210> 55
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码CK3 结构域
<400> 55
agaaccgtgg ctgctcctca ggtgtacatc ctgcctccca gcgacgatga gctgaagtct 60
ggcaccgcca gcgtgacatg tctgctgaag aacttctacc cccgcgaggc caaggtgcag 120
tggaaagtgg acaacgccct gcagagcggc aacagcaaag aaaccgtggt ggaacaggac 180
agcaaggact ccacctactt tctgtactcc aagctgaccc tgagcaaggc cgactacgag 240
aagcacaagg tgtacgcctg cgaagtgacc caccagggcc tgagcagccc cgtgaccaag 300
agcttcaacc ggggcgagtg c 321
<210> 56
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 VH(抗-EGFR)-CH1-BT α 链
<400> 56
caggtccagc tgaagcagag cggcccaggc ctcgtgcagc cctctcagtc tctcagcatc 60
acctgcaccg tgtccggctt cagcctgacc aactacggcg tgcactgggt ccgccagagc 120
cccggcaagg gcctggaatg gctgggcgtg atctggtccg gcggcaacac cgactacaac 180
acccccttca ccagcaggct gtccatcaac aaggacaaca gcaagagcca ggtgttcttc 240
aagatgaaca gcctgcagag caacgacacc gccatctact actgcgccag ggctctgacc 300
tactacgact acgagttcgc ctactgggga cagggcaccc tggtcactgt ctccgccgcc 360
agcaccaagg gccccagcgt gttccccctg gcccccagca gcaagagcac ctctggcggc 420
acagccgccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg agcccgtgac agtgtcctgg 480
aacagcggag ccctgacctc cggcgtccac accttccccg ccgtgctgca gagcagcggc 540
ctgtacagcc tgagcagcgt ggtcacagtg ccctctagca gcctcggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaaccacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaggt ggagcccaag 660
agctgcgaca aaactcacac atgccccccc tgccctgccc ctgagctgct gggcggaccc 720
tccgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagccg gacccccgag 780
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccac gaggaccctg aggtgaagtt caattggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagcccc gggaggaaca gtacaacagc 900
acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggaa 960
tacaagtgca aggtctccaa caaggccctg cctgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaaggcc agcccagaga accccaggtg tacaccctgc cccccagcag agatgagctg 1080
accaagaacc aggtcaagct cgtgtgcctg gtcaccggct tctaccccag cgatatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaacgg ccagcctgaa aacaactact acaccacccc ccctgtgctg 1200
gacagcgacg gcagcttcag cctggtgtcc tggctgaacg tggacaagag ccggtggcag 1260
cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagtccctga gcctgtctcc tggcaag 1347
<210> 57
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 VL(抗-EGFR)-CK 链
<400> 57
gacatcctgc tgacccagag ccccgtgatc ctgagcgtgt ccccaggcga gagggtgtcc 60
ttcagctgca gagccagcca gagcatcggc accaacatcc actggtatca gcagaggacc 120
aacggcagcc ccaggctgct gatcaagtac gccagcgagt ccatcagcgg catccccagc 180
aggttcagcg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga gcatcaacag cgtggagagc 240
gaggacatcg ccgactacta ctgccagcag aacaacaact ggcccaccac cttcggagcc 300
ggcaccaagc tggaactgaa gaggaccgtg gctgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagtc cggcaccgcc agcgtggtct gcctgctgaa caacttctac 420
ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gaaagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtcac ccaccagggc 600
ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642
<210> 58
<211> 1422
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 scFv(抗-HER2)-BT β 链
<400> 58
gaggtgcagc tggtcgagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggctc cctgcggctg 60
tcctgcgccg cctccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtggcccgg atctacccta ccaacggcta caccagatac 180
gccgactccg tgaagggccg gttcaccatc tccgccgaca cctccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgctc cagatgggga 300
ggagatggct tctacgccat ggactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctcc 360
ggtggcggtg gcagcggcgg tggtggttcc ggaggcggcg gttctgacat ccagatgacc 420
cagtccccct ccagcctgtc tgcctccgtg ggcgaccggg tgaccatcac ctgccgggcc 480
tcccaggacg tgaacaccgc cgtggcctgg tatcagcaga agcctggcaa ggcccctaag 540
ctgctgatct actccgcctc cttcctgtac tccggcgtgc cttcccggtt ctccggctcc 600
cggtccggca ccgacttcac cctgaccatc tcctccctgc agcctgagga cttcgccacc 660
tactactgcc agcagcacta caccacccct cctaccttcg gccagggcac caaggtggag 720
atcaagggag gaggagggtc agacaaaact cacacttgcc caccgtgccc agcacctgaa 780
ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 840
tcccggaccc ctgaggtcac ctgcgtggtg gtggacgtga gccacgagga ccctgaggtg 900
aagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggag gtgcacaacg ccaagaccaa gccccgggag 960
gaacagtaca acagcaccta ccgggtggtg tccgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg 1020
ctgaacggca aggaatacaa gtgcaaggtc tccaacaagg ccctgcctgc ccccatcgaa 1080
aagaccatca gcaaggccaa gggacagccc agggaacctg aggtggccac attcccacct 1140
agccgggacg agctgacaaa aaatcaggtc accctcgtct gtctcgtgac cggcttttac 1200
ccttccgaca ttgccgtgga atgggaatcc aatgggcagc ccgagaacaa ttacaagaca 1260
gacccccccc tgctggaatc cgatggcagc ttctgcctga gcagccggct gcgggtggac 1320
aagtccagat ggcagcaggg gaatgtcttt tcctgctccg tcatgcatga agccctccac 1380
aatcattata cacagaaaag cctgagcctg agccccggca ag 1422
<210> 59
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VH(抗-EGFR)-CH1-BT α 链
<400> 59
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe Thr
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ser Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Val
355 360 365
Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ser Leu Val Ser Trp Leu Asn Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 60
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL(抗-EGFR)-CK 链
<400> 60
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Val Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 61
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> scFv(抗-HER2)-BT β 链
<400> 61
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser
130 135 140
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala
145 150 155 160
Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
165 170 175
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly
180 185 190
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
210 215 220
Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu
225 230 235 240
Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
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325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val Ala Thr Phe Pro Pro Ser Arg Asp Glu
370 375 380
Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu Val Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro Leu Leu Glu Ser Asp Gly Ser Phe Ala
420 425 430
Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 62
<211> 851
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人 EGFR-Fc
<400> 62
Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln
1 5 10 15
Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn
20 25 30
Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg
35 40 45
Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr
50 55 60
Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu
65 70 75 80
Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala
85 90 95
Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro
100 105 110
Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn
115 120 125
Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val
130 135 140
Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu
145 150 155 160
Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp
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Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala
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Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys
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His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys
210 215 220
Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn
245 250 255
Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro
260 265 270
Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly
275 280 285
Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys
290 295 300
Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu
305 310 315 320
Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys
325 330 335
Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe
340 345 350
Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu
355 360 365
Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln
370 375 380
Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu
385 390 395 400
Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val
405 410 415
Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile
420 425 430
Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala
435 440 445
Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr
450 455 460
Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln
465 470 475 480
Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro
485 490 495
Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val
500 505 510
Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn
515 520 525
Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn
530 535 540
Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His
545 550 555 560
Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met
565 570 575
Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val
580 585 590
Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly
595 600 605
Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Gly Gly Gly
610 615 620
Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
625 630 635 640
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
645 650 655
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
660 665 670
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
675 680 685
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Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
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755 760 765
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785 790 795 800
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
805 810 815
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
820 825 830
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
835 840 845
Pro Gly Lys
850
<210> 63
<211> 862
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 人 HER2-Fc
<400> 63
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1 5 10 15
Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln
20 25 30
Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser
35 40 45
Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile
50 55 60
Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val
65 70 75 80
Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp
85 90 95
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100 105 110
Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys
115 120 125
Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr
130 135 140
Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr
145 150 155 160
Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met
165 170 175
Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser
180 185 190
Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro
195 200 205
Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly
210 215 220
Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly
225 230 235 240
Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr
245 250 255
Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser
260 265 270
Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser
275 280 285
Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp
290 295 300
Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys
305 310 315 320
Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser
325 330 335
Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu
340 345 350
Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala
355 360 365
Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile
370 375 380
Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu
385 390 395 400
Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn
405 410 415
Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly
420 425 430
Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His
435 440 445
Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe
450 455 460
Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp
465 470 475 480
Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly
485 490 495
His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe
500 505 510
Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu
515 520 525
Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu
530 535 540
Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp
545 550 555 560
Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala
565 570 575
Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp
580 585 590
Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys
595 600 605
Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln
610 615 620
Arg Ala Ser Pro Leu Thr Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
625 630 635 640
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
645 650 655
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
660 665 670
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
675 680 685
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
690 695 700
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
705 710 715 720
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
725 730 735
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
740 745 750
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
755 760 765
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
770 775 780
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
785 790 795 800
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
805 810 815
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
820 825 830
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
835 840 845
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
850 855 860
<210> 64
<211> 2577
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 人 EGFR-Fc
<400> 64
ctggaggaaa agaaagtttg ccaaggcacg agtaacaagc tcacgcagtt gggcactttt 60
gaagatcatt ttctcagcct ccagaggatg ttcaataact gtgaggtggt ccttgggaat 120
ttggaaatta cctatgtgca gaggaattat gatctttcct tcttaaagac catccaggag 180
gtggctggtt atgtcctcat tgccctcaac acagtggagc gaattccttt ggaaaacctg 240
cagatcatca gaggaaatat gtactacgaa aattcctatg ccttagcagt cttatctaac 300
tatgatgcaa ataaaaccgg actgaaggag ctgcccatga gaaatttaca ggaaatcctg 360
catggcgccg tgcggttcag caacaaccct gccctgtgca acgtggagag catccagtgg 420
cgggacatag tcagcagtga ctttctcagc aacatgtcga tggacttcca gaaccacctg 480
ggcagctgcc aaaagtgtga tccaagctgt cccaatggga gctgctgggg tgcaggagag 540
gagaactgcc agaaactgac caaaatcatc tgtgcccagc agtgctccgg gcgctgccgt 600
ggcaagtccc ccagtgactg ctgccacaac cagtgtgctg caggctgcac aggcccccgg 660
gagagcgact gcctggtctg ccgcaaattc cgagacgaag ccacgtgcaa ggacacctgc 720
cccccactca tgctctacaa ccccaccacg taccagatgg atgtgaaccc cgagggcaaa 780
tacagctttg gtgccacctg cgtgaagaag tgtccccgta attatgtggt gacagatcac 840
ggctcgtgcg tccgagcctg tggggccgac agctatgaga tggaggaaga cggcgtccgc 900
aagtgtaaga agtgcgaagg gccttgccgc aaagtgtgta acggaatagg tattggtgaa 960
tttaaagact cactctccat aaatgctacg aatattaaac acttcaaaaa ctgcacctcc 1020
atcagtggcg atctccacat cctgccggtg gcatttaggg gtgactcctt cacacatact 1080
cctcctctgg atccacagga actggatatt ctgaaaaccg taaaggaaat cacagggttt 1140
ttgctgattc aggcttggcc tgaaaacagg acggacctcc atgcctttga gaacctagaa 1200
atcatacgcg gcaggaccaa gcaacatggt cagttttctc ttgcagtcgt cagcctgaac 1260
ataacatcct tgggattacg ctccctcaag gagataagtg atggagatgt gataatttca 1320
ggaaacaaaa atttgtgcta tgcaaataca ataaactgga aaaaactgtt tgggacctcc 1380
ggtcagaaaa ccaaaattat aagcaacaga ggtgaaaaca gctgcaaggc cacaggccag 1440
gtctgccatg ccttgtgctc ccccgagggc tgctggggcc cggagcccag ggactgcgtc 1500
tcttgccgga atgtcagccg aggcagggaa tgcgtggaca agtgcaacct tctggagggt 1560
gagccaaggg agtttgtgga gaactctgag tgcatacagt gccacccaga gtgcctgcct 1620
caggccatga acatcacctg cacaggacgg ggaccagaca actgtatcca gtgtgcccac 1680
tacattgacg gcccccactg cgtcaagacc tgcccggcag gagtcatggg agaaaacaac 1740
accctggtct ggaagtacgc agacgccggc catgtgtgcc acctgtgcca tccaaactgc 1800
acctacggat gcactgggcc aggtcttgaa ggctgtccaa cgaatgggcc taagatcccg 1860
tccggtggtg gtggtggtac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccctga gctgctgggc 1920
ggacccagcg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc 1980
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accctgaggt gaagttcaat 2040
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 2100
aactccacct accgggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 2160
aaggaataca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgcctg cccccatcga aaagaccatc 2220
agcaaggcca agggccagcc cagggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 2280
gagatgacca agaaccaggt gtccctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 2340
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 2400
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagagcagg 2460
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 2520
acccagaaga gcctgagcct gtcccccggc aagagcgccc atcatcacca tcaccat 2577
<210> 65
<211> 2586
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 人 HER2-Fc
<400> 65
acccaagtgt gcaccggcac agacatgaag ctgcggctcc ctgccagtcc cgagacccac 60
ctggacatgc tccgccacct ctaccagggc tgccaggtgg tgcagggaaa cctggaactc 120
acctacctgc ccaccaatgc cagcctgtcc ttcctgcagg atatccagga ggtgcagggc 180
tacgtgctca tcgctcacaa ccaagtgagg caggtcccac tgcagaggct gcggattgtg 240
cgaggcaccc agctctttga ggacaactat gccctggccg tgctagacaa tggagacccg 300
ctgaacaata ccacccctgt cacaggggcc tccccaggag gcctgcggga gctgcagctt 360
cgaagcctca cagagatctt gaaaggaggg gtcttgatcc agcggaaccc ccagctctgc 420
taccaggaca cgattttgtg gaaggacatc ttccacaaga acaaccagct ggctctcaca 480
ctgatagaca ccaaccgctc tcgggcctgc cacccctgtt ctccgatgtg taagggctcc 540
cgctgctggg gagagagttc tgaggattgt cagagcctga cgcgcactgt ctgtgccggt 600
ggctgtgccc gctgcaaggg gccactgccc actgactgct gccatgagca gtgtgctgcc 660
ggctgcacgg gccccaagca ctctgactgc ctggcctgcc tccacttcaa ccacagtggc 720
atctgtgagc tgcactgccc agccctggtc acctacaaca cagacacgtt tgagtccatg 780
cccaatcccg agggccggta tacattcggc gccagctgtg tgactgcctg tccctacaac 840
tacctttcta cggacgtggg atcctgcacc ctcgtctgcc ccctgcacaa ccaagaggtg 900
acagcagagg atggaacaca gcggtgtgag aagtgcagca agccctgtgc ccgagtgtgc 960
tatggtctgg gcatggagca cttgcgagag gtgagggcag ttaccagtgc caatatccag 1020
gagtttgctg gctgcaagaa gatctttggg agcctggcat ttctgccgga gagctttgat 1080
ggggacccag cctccaacac tgccccgctc cagccagagc agctccaagt gtttgagact 1140
ctggaagaga tcacaggtta cctatacatc tcagcatggc cggacagcct gcctgacctc 1200
agcgtcttcc agaacctgca agtaatccgg ggacgaattc tgcacaatgg cgcctactcg 1260
ctgaccctgc aagggctggg catcagctgg ctggggctgc gctcactgag ggaactgggc 1320
agtggactgg ccctcatcca ccataacacc cacctctgct tcgtgcacac ggtgccctgg 1380
gaccagctct ttcggaaccc gcaccaagct ctgctccaca ctgccaaccg gccagaggac 1440
gagtgtgtgg gcgagggcct ggcctgccac cagctgtgcg cccgagggca ctgctggggt 1500
ccagggccca cccagtgtgt caactgcagc cagttccttc ggggccagga gtgcgtggag 1560
gaatgccgag tactgcaggg gctccccagg gagtatgtga atgccaggca ctgtttgccg 1620
tgccaccctg agtgtcagcc ccagaatggc tcagtgacct gttttggacc ggaggctgac 1680
cagtgtgtgg cctgtgccca ctataaggac cctcccttct gcgtggcccg ctgccccagc 1740
ggtgtgaaac ctgacctctc ctacatgccc atctggaagt ttccagatga ggagggcgca 1800
tgccagcctt gccccatcaa ctgcacccac tcctgtgtgg acctggatga caagggctgc 1860
cccgccgagc agagagccag ccctctgacg gagcccaaga gctgcgacaa gacccacacc 1920
tgccccccct gccctgcccc tgagctgctg ggcggaccca gcgtgttcct gttccccccc 1980
aagcccaagg acaccctgat gatcagccgg acccccgagg tgacctgcgt ggtggtggac 2040
gtgagccacg aggaccctga ggtgaagttc aattggtacg tggacggcgt ggaggtgcac 2100
aacgccaaga ccaagccccg ggaggagcag tacaactcca cctaccgggt ggtgtccgtg 2160
ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggaat acaagtgcaa ggtgtccaac 2220
aaggccctgc ctgcccccat cgaaaagacc atcagcaagg ccaagggcca gcccagggag 2280
ccccaggtgt acaccctgcc ccccagccgg gaggagatga ccaagaacca ggtgtccctg 2340
acctgcctgg tgaagggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaacggc 2400
cagcccgaga acaactacaa gaccaccccc cctgtgctgg acagcgacgg cagcttcttc 2460
ctgtacagca agctgaccgt ggacaagagc aggtggcagc agggcaacgt gttcagctgc 2520
agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac tacacccaga agagcctgag cctgtccccc 2580
ggcaag 2586
<210> 66
<211> 1365
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 VH(抗-hVLA2)-CH1-BT α His 链
<400> 66
caggtgcagt tgcaggagag cggcccaggc ctggtgaagc ccagcgagac actgagcctg 60
acctgcaccg tgagcggctt cagcctgacc aactacggca tccactggat caggcagccc 120
ccaggcaagg gcctggagtg gctgggcgtg atctgggcca ggggcttcac caactacaac 180
agcgccctga tgagcaggct gaccatcagc aaggacaaca gcaagaacca ggtgtccctg 240
aagctgtcca gcgtgacagc cgccgacacc gccgtgtact actgcgccag ggccaacgac 300
ggcgtgtact acgccatgga ctactggggc cagggcaccc tggtcaccgt cagctcagcg 360
tcgaccaagg gccccagcgt gttcccgcta gcccccagca gcaagagcac cagcggcggc 420
acagccgccc tgggctgcct ggtgaaggac tacttccccg agcccgttac cgtgtcctgg 480
aactctggag ccctgacctc cggcgtgcac accttccccg ccgtgctcca gagcagcggc 540
ctgtacagcc tgagcagcgt ggtgacagtg cccagcagca gcctgggaac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaaccacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaggt ggagcccaag 660
agctgcgaca aaactcacac atgccccccc tgccctgccc ctgagctgct gggcggaccc 720
tccgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagccg gacccccgag 780
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccac gaggaccctg aggtgaagtt caattggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagcccc gggaggaaca gtacaacagc 900
acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggaa 960
tacaagtgca aggtctccaa caaggccctg cctgccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaaggcc agcccagaga accccaggtg tacaccctgc cccccagcag agatgagctg 1080
accaagaacc aggtcaagct cgtgtgcctg gtcaccggct tctaccccag cgatatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaacgg ccagcctgaa aacaactact acaccacccc ccctgtgctg 1200
gacagcgacg gcagcttcag cctggtgtcc tggctgaacg tggacaagag ccggtggcag 1260
cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagtccctga gcctgtctcc tggcaagcat caccatcacc atcac 1365
<210> 67
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 VL(抗-hVLA2)-CK 链
<400> 67
gacttcgtga tgacccagag ccccgccttc ctgagcgtga ccccaggcga gaaggtgacc 60
atcacctgca gcgcccagag cagcgtgaac tacatccact ggtaccagca gaagcccgac 120
caggccccca agaagctgat ctacgacacc agcaagctgg ccagcggcgt gcccagcagg 180
ttcagcggca gcggctccgg caccgactac accttcacca tcagcagcct ggaggccgag 240
gacgccgcca cctactactg ccagcagtgg accaccaacc ccctgacctt cggccagggc 300
accaaggtgg agatcaagag gaccgtggcc gcccccagcg tgttcatctt cccccccagc 360
gacgagcagc tgaagagcgg caccgccagc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420
cgggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggcaa cagccaggag 480
agcgtcaccg agcaggacag caaggactcc acctacagcc tgagcagcac cctgaccctg 540
agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aggtgaccca ccagggcctg 600
tccagccccg tgaccaagag cttcaacagg ggcgagtgc 639
<210> 68
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VH(抗-hVLA2)-CH1-BT α His 链
<400> 68
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Arg Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Asn Asp Gly Val Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Val
355 360 365
Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ser Leu Val Ser Trp Leu Asn Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys His His His His His His
450 455
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<211> 213
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL(抗-hVLA2)-CK 链
<400> 69
Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Gln Ser Ser Val Asn Tyr Ile
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ala Pro Lys Lys Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Thr Asn Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
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<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VH(抗-hCD19)-CH1 δ-BT β 链
<400> 70
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Met Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Asn
130 135 140
Leu Ala Cys Leu Val Lys Glu Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val Phe Thr Ala Pro Ala Val
165 170 175
Leu Ser Ser Ser Gly Leu Tyr Asn Leu Val Ser Leu Val Lys Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val Ala
340 345 350
Thr Phe Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu
355 360 365
Val Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro Leu
385 390 395 400
Leu Glu Ser Asp Gly Ser Phe Ala Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 71
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VH(抗-hCD19)-CH13-BT β 链
<400> 71
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Pro Leu Ala Pro Ser Ser Asp Glu Thr Ser Gly Gly Gln Ala Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val Lys Thr Thr Pro Ala Val
165 170 175
Leu Asp Ser Ser Gly Leu Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val Ala Thr Phe Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu Val Cys Leu Val Thr
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro Leu Leu Glu Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Ala Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 72
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VH(抗-hVLA2)-CH1-BT α 链
<400> 72
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Arg Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Asn Asp Gly Val Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Val
355 360 365
Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ser Leu Val Ser Trp Leu Asn Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 73
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> BT α IGHG3 链
<400> 73
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Lys
130 135 140
Leu Val Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ser Leu Val Ser Trp Leu Asn Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 74
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> BT β F405A 链
<400> 74
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val
115 120 125
Ala Thr Phe Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr
130 135 140
Leu Val Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro
165 170 175
Leu Leu Glu Ser Asp Gly Ser Phe Ala Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 75
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-BT β F405A 链
<400> 75
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His
100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145 150 155 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val Ala Thr Phe Pro
225 230 235 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu Val Cys Leu
245 250 255
Val Thr Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
260 265 270
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Asp Pro Pro Leu Leu Glu Ser
275 280 285
Asp Gly Ser Phe Ala Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 76
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> CH3-BT α IGHG3 结构域
<400> 76
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Val Cys Leu Val Thr Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Tyr Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Ser Leu Val Ser Trp Leu Asn Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 77
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA 编码 CH3-BT α IGHG3 结构域
<400> 77
ggccagccca gagaacccca ggtgtacacc ctgcccccca gccgggaaga gatgaccaag 60
aaccaggtga aactggtgtg cctggtgaca ggcttctacc ccagcgatat cgccgtggaa 120
tgggagagca gcggccagcc tgagaacaac tactacacca ccccccccat gctggacagc 180
gacggcagct tcagcctggt gtcctggctg aacgtggaca agagccggtg gcagcagggc 240
aacatcttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accggttcac ccagaagtcc 300
ctgagcctga gccccggcaa g 321
<210> 78
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> CH3 IGHAG 结构域
<400> 78
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val His Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Arg Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Arg Leu Glu Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Ala Leu Thr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 79
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> CH3 IGHGA 结构域
<400> 79
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Leu Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Ile Leu Arg Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 80
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> Fc IGHAG 链
<400> 80
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Glu Val
115 120 125
His Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Arg Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Arg Leu Glu Ser Asp Gly Ser Phe Ala Leu Thr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 81
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-Fc IGHGA 链
<400> 81
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His
100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145 150 155 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225 230 235 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Thr Leu Thr Cys Leu
245 250 255
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
260 265 270
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Leu Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser
275 280 285
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Ile Leu Arg Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 82
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 CH3 IGHAG 结构域
<400> 82
ggccagccta gagaacctga ggtgcacacc ctgcccccca gcagagatga gctgaccaag 60
aaccaggtgt ccctgacctg tctcgtgcgg ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 120
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccccag actggaaagc 180
gacggcagct ttgccctgac cagcaagctg accgtggaca agagcagatg gcagcagggc 240
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 300
ctgagcctga gccccggcaa g 321
<210> 83
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 CH3 IGHGA 结构域
<400> 83
ggccagccta gagaacccca ggtgtacaca ctgcccccca gcagagatga gctgaccaag 60
aaccaagtga ccctgacctg cctcgtgaag ggcttctacc cctccgatat cgccgtggaa 120
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacctgacct ggccccctgt gctggacagc 180
gacggctcat tcttcctgta cagcatcctg cgggtggaca agagcagatg gcagcagggc 240
aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 300
ctgagcctga gccccggcaa g 321
<210> 84
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> IGHM CH4 α 结构域
<400> 84
Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg
1 5 10 15
Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Lys Ile Val Cys Leu Val Thr
20 25 30
Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln
35 40 45
Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Tyr Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro
50 55 60
Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Ser Ala Val Ser Trp Leu Asn Val Ser Glu
65 70 75 80
Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala His Glu
85 90 95
Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly
100 105 110
Lys
<210> 85
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> IGHM CH4 β 结构域
<400> 85
Gly Val Ala Leu His Arg Pro Glu Val Ala Leu Phe Pro Pro Ala Arg
1 5 10 15
Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Val Cys Leu Val Thr
20 25 30
Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln
35 40 45
Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Asp Ala Pro Leu Pro Glu Pro
50 55 60
Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Ala Ala Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Glu
65 70 75 80
Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala His Glu
85 90 95
Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly
100 105 110
Lys
<210> 86
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 IGHM CH4 α 结构域
<400> 86
ggcgtggccc tgcacagacc cgacgtgtac ctgctgcctc ctgccagaga gcagctgaac 60
ctgcgggaaa gcgccaagat cgtgtgtctc gtgaccggct tctcccctgc cgacgtgttc 120
gtgcagtgga tgcagagagg ccagcccctg agccccgaga agtactacac aagcgccccc 180
atgcctgagc cacaggcccc tggaagatac agcgccgtgt cttggctgaa cgtgtccgag 240
gaagagtgga acaccggcga gacatacacc tgtgtggtgg cccatgaggc cctgcccaat 300
agagtgaccg agcggaccgt ggacaagagc accggaaag 339
<210> 87
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 IGHM CH4 β 结构域
<400> 87
ggcgtggccc tgcacagacc agaggtggcc ctgtttccac ccgccagaga gcagctgaac 60
ctgcgggaaa gcgccaccat cgtgtgtctc gtgaccggct tcagccctgc cgacgtgttc 120
gtgcagtgga tgcagagagg ccagcccctg tcccccgaga aatacgtgac agacgccccc 180
ctgcctgagc cacaggcccc tggaagatat gccgccagca gcagactgcg ggtgtccgag 240
gaagagtgga acaccggcga gacatacacc tgtgtggtgg cccatgaggc cctgcccaat 300
agagtgaccg aacggaccgt ggacaagagc accggcaag 339
<210> 88
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> BT α IGHM-4 His 链
<400> 88
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp
115 120 125
Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser
130 135 140
Ala Lys Ile Val Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe
145 150 155 160
Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Tyr
165 170 175
Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Ser Ala
180 185 190
Val Ser Trp Leu Asn Val Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr
195 200 205
Tyr Thr Cys Val Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu
210 215 220
Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys His His His His His His
225 230 235
<210> 89
<211> 341
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-BT β IGHM-4 链
<400> 89
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His
100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145 150 155 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Glu Val Ala Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Val
245 250 255
Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met
260 265 270
Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Asp Ala Pro
275 280 285
Leu Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Ala Ala Ser Ser Arg Leu
290 295 300
Arg Val Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val
305 310 315 320
Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp
325 330 335
Lys Ser Thr Gly Lys
340
<210> 90
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> IGHE CH4 α 结构域
<400> 90
Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp
1 5 10 15
Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Lys Leu Val Cys Leu Ile Thr Asn Phe
20 25 30
Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu
35 40 45
Pro Asp Ala Arg His Tyr Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser
50 55 60
Gly Phe Ser Val Val Ser Trp Leu Asn Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu
65 70 75 80
Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro
85 90 95
Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly Lys
100 105 110
<210> 91
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> IGHE CH4 β 结构域
<400> 91
Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Ala Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp
1 5 10 15
Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Val Cys Leu Ile Thr Asn Phe
20 25 30
Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu
35 40 45
Pro Asp Ala Arg His Ser Thr Asp Gln Pro Leu Lys Glu Lys Gly Ser
50 55 60
Gly Phe Ala Val Ser Ser Leu Leu Arg Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu
65 70 75 80
Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro
85 90 95
Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly Lys
100 105 110
<210> 92
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 IGHE CH4 α 结构域
<400> 92
ggacctagag ccgcccctga ggtgtacgcc tttgccacac ctgagtggcc cggcagccgg 60
gacaagagaa aactcgtgtg cctgatcacc aacttcatgc ccgaggacat cagcgtgcag 120
tggctgcaca acgaggtgca gctgcccgac gccagacact acaccaccca gcccagaaag 180
accaagggca gcggcttcag cgtggtgtcc tggctgaatg tgaccagagc cgagtgggag 240
cagaaggacg agttcatctg cagagccgtg cacgaggccg ccagcccttc tcagacagtg 300
cagagggccg tgtccgtgaa ccctggaaaa 330
<210> 93
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> cDNA，编码 IGHE CH4 β 结构域
<400> 93
ggacctagag ccgctcctga agtggccgcc tttgccacac ctgagtggcc cggcagcaga 60
gacaagagaa ccctcgtgtg cctgatcacc aacttcatgc ccgaggacat cagcgtgcag 120
tggctgcaca acgaggtgca gctgcccgat gccagacaca gcaccgacca gcccctgaaa 180
gagaagggca gcggctttgc cgtgtccagc ctgctgagag tgaccagagc cgagtgggag 240
cagaaggacg agttcatctg cagagccgtg cacgaggccg ccagcccttc tcagacagtg 300
cagagggccg tgtccgtgaa ccctggaaaa 330
<210> 94
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> BT α IGHE-4 His 链
<400> 94
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val
115 120 125
Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Lys
130 135 140
Leu Val Cys Leu Ile Thr Asn Phe Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln
145 150 155 160
Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro Asp Ala Arg His Tyr Thr Thr
165 170 175
Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe Ser Val Val Ser Trp Leu
180 185 190
Asn Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg
195 200 205
Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val
210 215 220
Ser Val Asn Pro Gly Lys His His His His His His
225 230 235
<210> 95
<211> 338
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> VL-BT β IGHE-4 链
<400> 95
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asn
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Asp Lys Thr His
100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145 150 155 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Ala Ala Phe Ala
225 230 235 240
Thr Pro Glu Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Val Cys Leu
245 250 255
Ile Thr Asn Phe Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn
260 265 270
Glu Val Gln Leu Pro Asp Ala Arg His Ser Thr Asp Gln Pro Leu Lys
275 280 285
Glu Lys Gly Ser Gly Phe Ala Val Ser Ser Leu Leu Arg Val Thr Arg
290 295 300
Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu
305 310 315 320
Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro
325 330 335
Gly Lys
<210> 96
<211> 111
<212> PRT
<213> 人
<220>
<221> 人 CH3 (同种型 α 1)恒定结构域
<222> (1)..(111)
<400> 96
Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu
1 5 10 15
Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly
20 25 30
Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu
35 40 45
Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser
50 55 60
Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala
65 70 75 80
Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu
85 90 95
Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala
100 105 110
<210> 97
<211> 111
<212> PRT
<213> 人
<220>
<221> 人 CH3 (同种型 α 2)恒定结构域
<222> (1)..(111)
<400> 97
Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu
1 5 10 15
Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly
20 25 30
Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu
35 40 45
Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser
50 55 60
Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala
65 70 75 80
Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu
85 90 95
Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala
100 105 110

Claims (16)

1.异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，包括：
(a)改造的第一免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述改造的第一免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的至少一个氨基酸残基被天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面中的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代；和
(b)改造的第二免疫球蛋白链，包含具有蛋白质-蛋白质界面的改造的结构域，其中所述改造的第二免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的至少一个氨基酸残基被天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域的蛋白质-蛋白质界面中的等价3D结构位置上的氨基酸残基取代，
其中，改造的第一免疫球蛋白链的改造的结构域的氨基酸序列和改造的第二免疫球蛋白链的改造的结构域的氨基酸序列是不同的，且
其中，天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的TCR恒定结构域异源二聚体或天然存在的TCR恒定结构域同源二聚体，且
其中，改造的第一和第二免疫球蛋白链的亲代结构域是CH3结构域，其中改造的第一免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基由20K、22V、26T、79Y、88W和90N组成，且其中改造的第二免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-白质界面中被取代的氨基酸残基由85.1A和86S组成，其中各组成员的氨基酸位置是根据
Figure FDA0003872353220000011
编号规则标注的。
2.权利要求1的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中改造的第一和第二免疫球蛋白链的亲代结构域是天然存在的CH3结构域。
3.权利要求1的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中相比改造的第一免疫球蛋白链和/或改造的第二免疫球蛋白链的亲代结构域的氨基酸序列，改造的第一免疫球蛋白链和/或改造的第二免疫球蛋白链的改造结构域的氨基酸序列不含一个或多个氨基酸残基的插入。
4.权利要求1的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中天然存在的免疫球蛋白超家族的第一成员的供体结构域和天然存在的免疫球蛋白超家族的第二成员的供体结构域形成天然存在的异源二聚体。
5.权利要求1-4的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中改造的第一和第二免疫球蛋白的亲代结构域是IgG1 CH3结构域。
6.权利要求1-4的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中改造的第一免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG1 CH3结构域，改造的第二免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG3 CH3结构域，或者其中改造的第一免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG3 CH3结构域，改造的第二免疫球蛋白链的亲代结构域是IgG1 CH3结构域。
7.权利要求1-4的任一项的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中改造的第一和/或第二免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中被取代的氨基酸残基是不相邻的。
8.权利要求1-4的任一项的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中改造的第一和/或第二免疫球蛋白链的亲代结构域的蛋白质-蛋白质界面中的至少2个氨基酸残基是被取代的。
9.权利要求1-4的任一项的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中改造的第一和第二免疫球蛋白链包括Fc区。
10.权利要求1-4的任一项的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段是全长抗体。
11.权利要求1-4的任一项的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段是双特异性的。
12.权利要求10的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段是双特异性的全长抗体。
13.权利要求11的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中双特异性的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段结合选自HER2、EGFR、CD19和VLA-2的抗原。
14.权利要求12的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中双特异性的全长抗体结合选自HER2、EGFR、CD19和VLA-2的抗原。
15.权利要求1-4的任一项的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中至少一个额外的多肽与改造的第一和/或第二免疫球蛋白链融合。
16.权利要求15的异源二聚化免疫球蛋白或其异源二聚化的片段，其中所述额外的多肽选自Fab、scFv、二价体、结构域抗体、制药活性肽、受体胞外结构域、移植CDR的多肽和治疗性改造的蛋白质支架。
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