KR20190015755A - 항-b7-h3 항체 및 항체 약물 콘쥬게이트 - Google Patents

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데브라 차오
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Abstract

본 발명은 B7 호몰로지 3 단백질(B7 homology 3 protein; B7-H3) 항체 및 항체 약물 콘쥬게이트(antibody drug conjugate; ADC)에 관한 것으로서, 이는 조성물과, 상기 항체 및 ADC의 사용 방법을 포함한다.

Description

항-B7-H3 항체 및 항체 약물 콘쥬게이트
관련 출원
본 출원은 2016년 6월 8일자로 출원된 미국 가출원 제62/347,476호, 및 2016년 7월 25일자로 출원된 미국 가출원 제62/366,511호의 우선권을 주장한다. 전술한 미국 가출원들의 전체 내용은 명백하게 본원에 참고로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자 제출되었으며, 전체가 본원에 참고로 포함되는 서열 목록을 포함한다. 2017년 6월 7일자로 생성된 상기 ASCII 복사본은 117813-12620_St25.txt로 명명되며, 크기가 159,744 바이트이다.
B7 호몰로지 3 단백질(B7 homology 3 protein; B7-H3)(또한 CD276 및 B7RP-2로 공지되고, 본원에서 "B7-H3"으로 지칭됨)은 면역글로불린 수퍼패밀리의 제I형 막관통 당단백질이다. 인간 B7-H3은 추정 신호 펩티드, V-유사 및 C-유사 Ig 도메인, 막관통 영역 및 세포질 도메인을 포함한다. 인간에 있어서의 엑손 중복은 몇 개의 보존된 시스테인 잔기를 포함하는 IgV-IgC-IgV-IgC-유사 도메인(4IgB7-H3 이소형) 또는 단일 IgV-IgC-유사 도메인(2IgB7-H3 이소형) 중 어느 하나를 갖는 2가지 B7-H3 이소형의 발현으로 이어진다. 인간 조직 및 세포주에서의 주된 B7-H3 이소형은 4IgB7-H3 이소형이다(문헌[Steinberger et al., J. Immunol. 172(4): 2352-9 (2004)]).
B7-H3은 공동-자극 및 공동-저해 시그널링 기능 둘 다를 갖는 것으로 보고되었다(예를 들어, 문헌[Chapoval et al., Nat. Immunol. 2: 269-74 (2001)]; 문헌[Suh et al., Nat. Immunol. 4: 899-906 (2003)]; 문헌[Prasad et al., J. Immunol. 173: 2500-6 (2004)]; 및 문헌[Wang et al., Eur. J. Immunol. 35: 428-38 (2005)] 참조). 예를 들어, 시험관 내 연구는, B7-H3이 세포독성 T-림프구(CTL)의 증식을 증가시키고 인터페론 감마(IFN-γ) 생성을 상향조절하여(항-CD3 항체의 존재 하에) T 세포 수용체 신호를 모방할 수 있었기 때문에 B7-H3의 공동-자극 기능을 보여주었다(문헌[Chapoval et al., 2001]). 게다가, B7-H3 -/- 마우스에서의 심장 동종이식편을 이용한 생체 내 연구는 야생형 대조구와 비교하여 주요 사이토카인, 케모카인 및 케모카인 수용체 mRNA 전사체(예를 들어, IL-2, IFN-γ, 단구 주화성 단백질(monocyte chemoattractant protein; MCP-1) 및 IFN-유도성 단백질(IP)-10)의 생성 감소를 보여주었다(문헌[Wang et al., 2005]). 이와는 대조적으로, B7-H3 공동저해 기능이 예를 들어 마우스에서 관찰되었으며, 여기서, B7-H3 단백질은 T-세포 활성화 및 이펙터(effector) 사이토카인 생성을 저해하였다(문헌[Suh et al., 2003]). 인간 B7-H3에 대해서는 리간드가 확인되지 않았지만, 쥐과 B7-H3은 골수 세포 상에서 발현되는 트리거링 수용체(triggering receptor expressed on myeloid cells; TREM-) 유사 전사체 2(TLT-2)(적응성 및 선천성 면역 세포 반응의 조절자)에 결합하는 것으로 밝혀졌다. CD8+ T-세포 상의 TLT-2에의 쥐과 B7-H3의 결합은 T-세포 이펙터 기능, 예컨대 증식, 세포독성 및 사이토카인 생성을 향상시킨다(문헌[Hashiguchi et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. U.S.A. 105(30): 10495-500 (2008)]).
B7-H3은 많은 면역 세포(예를 들어, 자연 살해(NK) 세포, T-세포, 및 항원-제시 세포(APC))에서 항시적으로 발현되는 것이 아니며, 그의 발현은 유도될 수 있다. 또한, B7-H3의 발현은 면역 세포에 제한되지 않는다. B7-H3 전사체는 결장, 심장, 간, 태반, 전립선, 소장, 고환, 및 자궁을 포함하는 다양한 인간 조직과, 조골세포, 섬유아세포, 상피 세포, 및 기타 비-림프구계 세포에서 발현되며, 이는 잠재적으로 면역학적 및 비-면역학적 기능을 나타낸다(문헌[Nygren et al. Front Biosci. 3:989-93 (2011)]). 그러나, 정상 조직에서의 단백질 발현은 전형적으로 낮은 수준에서 유지되며, 따라서 전사 후 조절이 가해질 수 있다.
B7-H3은 또한 전립선암, 투명 세포형 신세포 암종, 신경교종, 흑색종, 폐암, 비소세포 폐암(NSCLC), 소세포 폐암, 췌장암, 위암, 급성 골수성 백혈병(AML), 비호지킨 림프종(NHL), 난소암, 결장직장암, 결장암, 신암, 간세포암종, 신장암, 두경부암, 하인두 편평 세포 암종, 교모세포종, 신경모세포종, 유방암, 자궁내막암, 및 요로상피 세포 암종을 포함하는 다양한 인간 암에서 발현된다. 암세포에서의 B7-H3의 역할은 불확실하지만, 이의 발현은 암세포를 선천성 및 적응성 면역 반응으로부터 보호할 수 있는 신호전달 이벤트(signaling event)를 조정할 수 있다. 예를 들어, B7-H3은 전립선의 고-등급 전립선 상피내 신생물 및 선암종에서 과발현되며, 이러한 암성 세포에서의 B7-H3의 고발현은 수술 후 암 진행의 위험성 증가와 연관된다(문헌[Roth et al. Cancer Res. 67(16): 7893-900 (2007)]). 또한, NSCLC에서의 종양 B7-H3 발현은 종양-침윤 림프구의 수와 역상관되며, 림프절 전이와 유의하게 상관되었다(문헌[Sun et al. Lung Cancer 53(2): 143-51 (2006)]). NSCLC 환자에서의 순환 용해성 B7-H3의 수준은 또한 더 높은 종양 병기, 종양 크기, 림프절 전이, 및 원위부 전이와 연관되었다(문헌[Yamato et al., Br. J. Cancer 101(10):1709-16 (2009)]).
B7-H3은 또한 맥락 의존적 방식으로 T-세포-매개 항종양 반응에서 중요한 역할을 할 수 있다. 예를 들어, B7-H3의 위암 종양 세포 발현은 생존 시간, 침윤 깊이, 및 조직 유형과 양의 상관관계가 있었다(문헌[Wu et al., World J. Gastroenterol. 12(3): 457-9 (2006)]). 또한, 췌장 종양 세포에서의 B7-H3의 높은 발현은 외과적 절제 후 환자 생존과 연관되었으며, 종양-침윤 CD8+ T-세포의 수와 유의하게 상관되었다(문헌[Loos et al., BMC Cancer 9:463 (2009)].
항체 약물 콘쥬게이트(ADC)는 화학적 링커를 통하여 세포독성 약물에 콘쥬게이션된 항체를 포함하는 상대적으로 새로운 부류의 치료제를 대표한다. ADC의 치료적 개념은 항체의 결합 능력을 약물과 조합한다는 것이며, 여기서, 항체는 종양 세포에서 과발현되는 표적 표면 항원을 포함하는 표적 표면 항원에의 결합에 의해 약물을 종양 세포로 전달하는 데 사용된다.
암의 치료에서의 치료적 목적에 사용될 수 있는 항-B7-H3 항체 및 항-B7-H3 ADC에 대한 필요성이 본 기술 분야에 여전히 남아있다.
특정 태양에서, 본 발명은 인간 B7-H3에 특이적으로 결합하는 항체 및 항체 약물 콘쥬게이트(ADC)를 제공한다. 특정 태양에서, 본 발명은 암세포, 예를 들어 B7-H3 발현 세포를 표적화하기 위하여 Bcl-xL 저해제를 선택적으로 전달할 수 있는 신규한 ADC를 제공한다.
일 태양에서, 본 발명은 인간 B7-H3(hB7-H3)에 결합하는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 여기서, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 140의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 136 또는 138 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 태양에서, 본 발명은 인간 B7-H3(hB7-H3)에 결합하는 항- B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 여기서, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 37의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 IgG 이소타입(isotype)이다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 IgG1 또는 IgG4 이소타입이다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 표면 플라스몬 공명에 의해 결정할 경우 1.5 x 10-8 이하의 KD를 갖는다.
일 태양에서, 본 발명은 hB7-H3에 결합하는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 서열 번호 10, 11, 및 12의 CDR 세트를 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 14, 7, 및 15의 CDR 세트를 포함하는 경쇄 가변 영역, 또는 (ii) 서열 번호 33, 34, 및 35의 CDR 세트를 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 37, 38, 및 39의 CDR 세트를 포함하는 경쇄 가변 영역 중 어느 하나를 포함한다.
일 태양에서, 본 발명은 인간 B7-H3(hB7-H3)에 결합하는 항-B7-H3 항체를 제공하며, 여기서, 상기 항체는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 서열 번호 140의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 136 또는 138 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 태양에서, 본 발명은 인간 B7-H3(hB7-H3)에 결합하는 항- B7-H3 항체를 제공하며, 여기서, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 37의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 IgG 이소타입이다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 IgG1 또는 IgG4 이소타입이다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 표면 플라스몬 공명에 의해 결정할 경우 1.5 x 10-8 이하의 KD를 갖는다.
일 태양에서, 본 발명은 hB7-H3에 결합하는 항-B7-H3 항체를 제공하며, 상기 항체는 (i) 서열 번호 10, 11, 및 12의 CDR 세트를 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 14, 7, 및 15의 CDR 세트를 포함하는 경쇄 가변 영역, 또는 (ii) 서열 번호 33, 34, 및 35의 CDR 세트를 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 37, 38, 및 39의 CDR 세트를 포함하는 경쇄 가변 영역 중 어느 하나를 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 인간화된다.
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 수용자 프레임워크를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 인간 수용자 프레임워크는 서열 번호 155,156, 164, 165, 166, 및 167의 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 인간 수용자 프레임워크는 적어도 하나의 프레임워크 영역 아미노산 치환을 포함한다. 일 실시 형태에서, 상기 프레임워크의 아미노산 서열은 상기 인간 수용자 프레임워크의 서열과 적어도 65% 동일하며, 상기 인간 수용자 프레임워크와 동일한 적어도 70개의 아미노산 잔기를 포함한다.
일 실시 형태에서, 인간 수용자 프레임워크는 주요 잔기에서의 적어도 하나의 프레임워크 영역 아미노산 치환을 포함하며, 상기 주요 잔기는 CDR에 인접한 잔기; 글리코실화 부위 잔기; 희귀 잔기; 인간 B7-H3과 상호작용할 수 있는 잔기; CDR과 상호작용할 수 있는 잔기; 표준 잔기(canonical residue); 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이의 접촉 잔기; 베르니에(Vernier) 구역 내의 잔기; 및 초티아(Chothia)-정의된 가변 중쇄 CDR1과 카바트(Kabat)-정의된 제1 중쇄 프레임워크 사이에서 중첩되는 영역에서의 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시 형태에서, 주요 잔기는 48H, 67H, 69H, 71H, 73H, 94H, 및 2L로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시 형태에서, 주요 잔기 치환은 가변 중쇄 영역에 있으며, M48I, V67A, I69L, A71V, K73R, 및 R94G로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시 형태에서, 주요 잔기 치환은 가변 경쇄 영역에 있으며, I2V이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 25, 26, 및 27의 CDR 세트를 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 29, 30, 및 31의 CDR 세트를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, hB7-H3에 결합하는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다. 일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 인간화된다. 일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 수용자 프레임워크를 추가로 포함한다.
일 실시 형태에서, 인간 수용자 프레임워크는 서열 번호 155 내지 158의 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 인간 수용자 프레임워크는 적어도 하나의 프레임워크 영역 아미노산 치환을 포함한다. 일 실시 형태에서, 상기 프레임워크의 아미노산 서열은 상기 인간 수용자 프레임워크의 서열과 적어도 65% 동일하며, 상기 인간 수용자 프레임워크와 동일한 적어도 70개의 아미노산 잔기를 포함한다. 일 실시 형태에서, 상기 프레임워크의 아미노산 서열은 인간 수용자 프레임워크와 적어도 85% 동일하거나, 90% 동일하거나, 95% 동일하거나, 96% 동일하거나, 97% 동일하거나, 98% 동일하거나, 99% 동일하며, 인간 수용자 프레임워크와 동일한 적어도 70개, 적어도 75개, 적어도 80개, 또는 적어도 85개의 아미노산 잔기를 포함한다.
일 실시 형태에서, 인간 수용자 프레임워크는 주요 잔기에서의 적어도 하나의 프레임워크 영역 아미노산 치환을 포함하며, 상기 주요 잔기는 CDR에 인접한 잔기; 글리코실화 부위 잔기; 희귀 잔기; 인간 B7-H3과 상호작용할 수 있는 잔기; CDR과 상호작용할 수 있는 잔기; 표준 잔기; 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이의 접촉 잔기; 베르니에 구역 내의 잔기; 및 쵸티아-정의된 가변 중쇄 CDR1과 카바트-정의된 제1 중쇄 프레임워크 사이에서 중첩되는 영역에서의 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시 형태에서, 주요 잔기는 69H, 46L, 47L, 64L, 및 71L로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시 형태에서, 주요 잔기 치환은 가변 중쇄 영역에 있으며, L69I이다. 일 실시 형태에서, 주요 잔기 치환은 가변 경쇄 영역에 있으며, L46P, L47W, G64V, 및 F71H로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 140에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 136 또는 138에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는 항-hB7-H3 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 33에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 34에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 35에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 37에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 38에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 39에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는 항-hB7-H3 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 139의 서열에 대하여 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열 번호 135의 서열에 대하여 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 137에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 139의 서열에 대하여 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열 번호 137의 서열에 대하여 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 147의 서열에 대하여 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열 번호 144의 서열에 대하여 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 140에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 136 또는 138에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는 항-hB7-H3 항체를 제공한다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 33에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 34에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 35에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 37에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 38에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 39에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는 항-hB7-H3 항체를 제공한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체는 서열 번호 139의 서열에 대하여 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열 번호 135의 서열에 대하여 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 137에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체는 서열 번호 139의 서열에 대하여 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열 번호 137의 서열에 대하여 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체는 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체는 서열 번호 147의 서열에 대하여 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열 번호 144의 서열에 대하여 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 항체 huAb13v1에 상응하는 중쇄 CDR 세트, 및 항체 huAb13v1에 상응하는 경쇄 CDR 세트를 포함한다. 일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 항체 huAb13v1에 상응하는 중쇄 가변 영역, 및 항체 huAb13v1에 상응하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 항체 huAb3v2.5에 상응하는 중쇄 CDR 세트, 및 항체 huAb3v2.5에 상응하는 경쇄 CDR 세트를 포함한다. 일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 항체 huAb3v2.5에 상응하는 중쇄 가변 영역, 및 항체 huAb3v2.5에 상응하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 시노몰구스 B7-H3에 결합한다.
일 실시 형태에서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 hB7-H3에 대한 해리 상수(KD)를 갖는다: 약 10-7 M 이하; 약 10-8 M 이하; 약 10-9 M 이하; 약 10-10 M 이하; 약 10-11 M 이하; 약 10-12 M 이하; 및 10-13 M 이하.
일 실시 형태에서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 IgM 불변 도메인, 인간 IgG1 불변 도메인, 인간 IgG2 불변 도메인, 인간 IgG3 불변 도메인, 인간 IgG4 불변 도메인, 인간 IgA 불변 도메인 또는 인간 IgE 불변 도메인의 중쇄 면역글로불린 불변 도메인을 포함한다.
일 실시 형태에서, 항체는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄인 4개의 폴리펩티드 사슬을 갖는 IgG이다.
일 실시 형태에서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 면역글로불린 불변 영역 도메인이 인간 IgG1 불변 도메인인 것을 포함한다. 일 실시 형태에서, 인간 IgG1 불변 도메인은 서열 번호 159 또는 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함한다.
일 태양에서, 본 발명은 인간 B7-H3(hB7-H3)에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 여기서, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 169의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 태양에서, 본 발명은 인간 B7-H3(hB7-H3)에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 여기서, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 170의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 태양에서, 본 발명은 인간 B7-H3(hB7-H3)에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 여기서, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 172의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일 실시 형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 Ig 카파 불변 도메인 또는 인간 Ig 람다 불변 도메인을 포함하는 경쇄 면역글로불린 불변 도메인을 추가로 포함한다.
일 실시 형태에서, 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 본원에 개시된 항-hB7-H3 항체들, 또는 이의 항원 결합 부분들 중 어느 하나의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분과 경쟁한다.
일 태양에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분, 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 링커를 통하여 약물에 콘쥬게이션된 본원에 개시된 항-hB7-H3 항체를 포함하는 항-hB7-H3 항체 약물 콘쥬게이트(ADC)를 제공한다. 일 실시 형태에서, 약물은 아우리스타틴 또는 피롤로벤조디아제핀(PBD)이다. 일 실시 형태에서, 약물은 Bcl-xL 저해제이다.
일 태양에서, 본 발명은 링커에 의해 항-인간 B7-H3(hB7-H3) 항체에 연결된 약물을 포함하는 항-hB7-H3 항체 약물 콘쥬게이트(ADC)를 제공하며, 여기서, 약물은 하기 구조 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId에 따른 Bcl-xL 저해제이다:
[화학식 IIa]
Figure pct00001
[화학식 IIb]
Figure pct00002
[화학식 IIc]
Figure pct00003
[화학식 IId]
Figure pct00004
여기서,
Ar1은
Figure pct00005
Figure pct00006
로부터 선택되며, 독립적으로 할로, 히드록시, 니트로, 저급 알킬, 저급 헤테로알킬, C1-4알콕시, 아미노, 시아노 및 할로메틸로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고;
Ar2는
Figure pct00007
Figure pct00008
, 또는 이들의 N-옥시드로부터 선택되며, 독립적으로 할로, 히드록시, 니트로, 저급 알킬, 저급 헤테로알킬, C1-4알콕시, 아미노, 시아노 및 할로메틸로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고, 여기서, R12-Z2b-, R'-Z2b-, #-N(R4)-R13-Z2b-, 또는 #-R'-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착되고; Z1는 N, CH, C-할로, C-CH3 및 C-CN으로부터 선택되고; Z2a 및 Z2b는 각각, 서로 독립적으로, 결합, NR6, CR6aR6b, O, S, S(O), S(O)2, -NR6C(O)-, -NR6aC(O)NR6b-, 및 -NR6C(O)O-로부터 선택되고;
R'은
Figure pct00009
이며, 여기서, R'에 부착되는 #은, 치환될 수 있는 임의의 R' 원자에서 R'에 부착되고; X'는 각각의 경우에 -N(R10)- , -N(R10)C(O)-, -N(R10)S(O)2-, -S(O)2N(R10)-, 및 -O-로부터 선택되고; n은 0 내지 3으로부터 선택되고; R10은 독립적으로 각각의 경우에 수소, 저급 알킬, 헤테로사이클, 아미노알킬, G-알킬, 및 -(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-NH2로부터 선택되고; G는 각각의 경우에 독립적으로 폴리올, 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고; SPa는 독립적으로 각각의 경우에 산소, ­S(O)2N(H)­, ­N(H)S(O)2­, ­N(H)C(O)­, ­C(O)N(H)­, ­N(H)­, 아릴렌, 헤테로사이클렌, 및 선택적으로 치환된 메틸렌으로부터 선택되고; 메틸렌은 ­NH(CH2)2G, NH2, C1-8알킬, 및 카르보닐 중 하나 이상으로 선택적으로 치환되고; m2는 0 내지 12로부터 선택되고; R1은 수소, 메틸, 할로, 할로메틸, 에틸, 및 시아노로부터 선택되고; R2는 수소, 메틸, 할로, 할로메틸 및 시아노로부터 선택되고; R3은 수소, 메틸, 에틸, 할로메틸 및 할로에틸로부터 선택되고; R4는 수소, 저급 알킬 및 저급 헤테로알킬로부터 선택되거나 또는 R13의 원자와 함께 3 내지 7개의 고리 원자를 갖는 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성하고; R6, R6a 및 R6b는 각각, 서로 독립적으로, 수소, 선택적으로 치환된 저급 알킬, 선택적으로 치환된 저급 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 시클로알킬 및 선택적으로 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나 또는 R4로부터의 원자 및 R13으로부터의 원자와 함께 3 내지 7개의 고리 원자를 갖는 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성하고; R11a 및 R11b는 각각, 서로 독립적으로, 수소, 할로, 메틸, 에틸, 할로메틸, 히드록실, 메톡시, CN, 및 SCH3으로부터 선택되고; R12는 선택적으로 R'이거나 또는 수소, 할로, 시아노, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 헤테로시클릴, 및 선택적으로 치환된 시클로알킬로부터 선택되고; R13은 선택적으로 치환된 C1-8 알킬렌, 선택적으로 치환된 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클렌, 및 선택적으로 치환된 시클로알킬렌으로부터 선택되고; #는 링커에 대한 부착점을 나타내고; 항-hB7-H3 항체는 약 1 x 10-6 M 이하의 해리 상수(Kd)로 B7-H3(서열 번호 149)에 결합한다. 추가 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고/하거나; 표면 플라스몬 공명에 의해 결정되는 바와 같이 약 1 x 10-6 M 이하의 해리 상수(Kd)로 B7-H3(서열 번호 149)에 결합하고/하거나; 생체 내 인간 소세포 폐암종(SCLC) 이종이식 분석에서 B7-H3에 특이적이지 않은 인간 IgG 항체에 비하여 적어도 약 50%의 종양 성장 저해율 %(TGI%)로 종양 성장을 저해하며, 여기서, 인간 IgG 항체는 SCLC 이종이식 분석에서 항-hB7-H3 항체와 동일한 용량 및 빈도로 투여된다.
일 실시 형태에서, ADC는 하기 구조 화학식 I에 따른 화합물이다:
[화학식 I]
Figure pct00010
여기서, D는 화학식 IIa, IIb, IIc 또는 IId의 Bcl-xL 저해제 약물이고; L은 링커이고; Ab는 항-hB7-H3 항체이고; LK는 링커(L)를 항-hB7-H3 항체(Ab)에 연결하는 공유적 연결체를 나타내고; m은 1 내지 20의 범위의 정수이다.
일 실시 형태에서, G는 각각의 경우에 염 또는 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티이다.
일 실시 형태에서, G는 각각의 경우에 카르복실레이트, 술포네이트, 포스포네이트, 또는 암모늄의 염이다.
일 실시 형태에서, G는 각각의 경우에 카르복실레이트, 술포네이트, 포스포네이트, 및 아민으로 이루어진 군으로부터 선택되는 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티이다.
일 실시 형태에서, G는 각각의 경우에 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 또는 폴리올을 함유하는 모이어티이다.
일 실시 형태에서, 폴리올은 당이다.
일 실시 형태에서, ADC는 화학식 IIa 또는 화학식 IId를 가지며, R'는 링커에의 부착에 적합한 적어도 하나의 치환가능 질소를 포함한다.
일 실시 형태에서, G는 각각의 경우에,
Figure pct00011
로부터 선택되며, 여기서, M은 수소 또는 양으로 하전된 반대이온이다.
일 실시 형태에서, R'는
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
로부터 선택되며, 여기서, #는 화학식 IIb 또는 화학식 IIc의 ADC의 Bcl-xL 저해제 약물 내의 수소 원자 또는 링커 L에 대한 화학식 IIa 또는 화학식 IId의 ADC의 Bcl-xL 저해제 약물 내의 부착점을 나타낸다.
일 실시 형태에서, Ar1은
Figure pct00018
로부터 선택되며, 독립적으로 할로, 시아노, 메틸, 및 할로메틸로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시 형태에서, Ar1은
Figure pct00019
이다.
일 실시 형태에서, Ar2는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된
Figure pct00020
이다.
일 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
로부터 선택되고; 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시 형태에서, Ar2는 하나 이상의 가용화 치환체로 치환된다.
일 실시 형태에서, 각각의 가용화 기는, 서로 독립적으로, 폴리올을 함유하는 모이어티, 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 염, 또는 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, Ar2는 하나 이상의 가용화 치환체로 치환된다.
일 실시 형태에서, 각각의 가용화 기는, 서로 독립적으로, 폴리올을 함유하는 모이어티, 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 염, 또는 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, Z1은 N이다.
일 실시 형태에서, Z2a는 O이다.
일 실시 형태에서, R1은 메틸 또는 클로로이다.
일 실시 형태에서, R2는 수소 또는 메틸이다.
일 실시 형태에서, R2는 수소이다.
일 실시 형태에서, Z2b는 O이다.
일 실시 형태에서, Z2b는 NH 또는 CH2이다.
일 실시 형태에서, ADC는 구조 화학식 IIa에 따른 화합물이다.
일 실시 형태에서, ADC는 구조 (C.1) 내지 구조 (C.21)로부터 선택되는 코어를 포함하는 구조 화학식 IIa에 따른 화합물이다:
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
일 실시 형태에서, ADC는 구조 화학식 IIa.1에 따른 화합물이다:
[화학식 IIa.1]
Figure pct00030
여기서, Y는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고; r은 0 또는 1이고; s는 1, 2 또는 3이다.
일 실시 형태에서, ADC는 구조 화학식 IIa.2에 따른 화합물이다:
[화학식 IIa.2]
Figure pct00031
여기서, U는 N, O 및 CH로부터 선택되되, 단, U가 O인 경우, Va 및 R21a가 부재하고; R20은 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고; R21a 및 R21b는 각각, 서로 독립적으로, 부재하거나 또는 H, C1-C4 알킬 및 G로부터 선택되며, G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고; Va 및 Vb는 각각, 서로 독립적으로, 부재하거나 또는 결합, 및 선택적으로 치환된 알킬렌으로부터 선택되고; R20은 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고; s는 1, 2 또는 3이다.
일 실시 형태에서, ADC는 구조 화학식 IIa.3에 따른 화합물이다:
[화학식 IIa.3]
Figure pct00032
여기서, Rb는 H, C1-C4 알킬 및 Jb-G로부터 선택되거나 또는 선택적으로 T의 원자와 함께 3 내지 7개의 원자를 갖는 고리를 형성하고; Ja 및 Jb는 각각, 서로 독립적으로, 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌 및 선택적으로 치환된 페닐렌으로부터 선택되고; T는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌, CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2, CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2 및 4 내지 10개의 에틸렌 글리콜 단위를 함유하는 폴리에틸렌 글리콜로부터 선택되고; G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고; s는 1, 2 또는 3이다.
일 실시 형태에서, ADC는 구조 화학식 IIb에 따른 화합물이다.
일 실시 형태에서, ADC는 구조 화학식 IIb.1에 따른 화합물이다:
[화학식 IIb.1]
Figure pct00033
여기서, Y는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고; G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고; r은 0 또는 1이고; s는 1, 2 또는 3이다.
일 실시 형태에서, ADC는 구조 화학식 IIc에 따른 화합물이다.
일 실시 형태에서, ADC는 구조 화학식 IIc.1에 따른 화합물이다:
[화학식 IIc.1]
Figure pct00034
여기서, Ya는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고; Yb는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고; R23는 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고; G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티이다.
일 실시 형태에서, ADC는 구조 화학식 IIc.2에 따른 화합물이다:
[화학식 IIc.2]
Figure pct00035
여기서, Ya는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고; Yb는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고; Yc는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고; R23은 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고; R25는 Yb-G이거나 또는 Yc의 원자와 함께 4 내지 6개의 고리 원자를 갖는 고리를 형성하고; G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, Bcl-xL 저해제는 구조 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId의 # 위치에 상응하는 수소가 존재하지 않아서 모노라디칼을 형성하지 않는다는 점에서 개질된 하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된다:
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({2-[2-(카르복시메톡시)에톡시]에틸}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
2-{[(2-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}에틸)술포닐]아미노}-2-데옥시-D-글루코피라노스;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
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2-({[4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐]술포닐}아미노)-2-데옥시-베타-D-글루코피라노스;
8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-{6-카르복시-5-[1-({3-[2-({2-[1-(베타-D-글루코피라누로노실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]에틸}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-일}-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린;
3-[1-({3-[2-(2-{[4-(베타-D-알로피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}에톡시)트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
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6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}에톡시)트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[L-알파-아스파르틸(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-{4-[({2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에틸}[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노)메틸]벤질}-2,6-언히드로-L-굴론산;
4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐 헥소피라노스이두론산;
6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-포스포노에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[D-알파-아스파르틸(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[1-(카르복시메틸)피페리딘-4-일]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
N-[(5S)-5-아미노-6-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)아미노}-6-옥소헥실]-N,N-디메틸메탄아미늄;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[피페리딘-4-일(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-포스포노프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[N-(2-카르복시에틸)-L-알파-아스파르틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[(2-아미노에틸)(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[5-(2-아미노에톡시)-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포-L-알라닐)(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에틸}(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(카르복시메톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-카르복시프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[L-알파-아스파르틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(1,3-디히드록시프로판-2-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[5-(2-아미노에톡시)-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸){2-[(2-술포에틸)아미노]에틸}아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로-2H-1,4-벤족사진-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-술포프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]피리딘-2-카르복실산;
(1
Figure pct00036
)-1-({2-[5-(1-{[3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-카르복시피리딘-2-일]-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-5-일}메틸)-1,5-언히드로-D-글루시톨;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-카르복시프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[4-(베타-D-글루코피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
3-(1-{[3-(2-{[4-(베타-D-알로피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[아제티딘-3-일(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[(3-아미노프로필)(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(N6,N6-디메틸-L-리실)(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[(3-아미노프로필)(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[아제티딘-3-일(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산;
N6-(37-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-L-리실-N-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]-L-알라닌아미드;
메틸 6-[4-(3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일]-6-데옥시-베타-L-글루코피라노시드;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5,6-디히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-{6-카르복시-5-[1-({3-[2-({3-[1-(베타-D-글루코피라누로노실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로필}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-일}-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린;
6-[7-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1H-인돌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-6-[3-(메틸아미노)프로필]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
5-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-5-데옥시-D-아라비니톨;
1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨;
6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)이소퀴놀린-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1,2-디데옥시-D-에리스로-펜티톨;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{[(2S,3S)-2,3,4-트리히드록시부틸]아미노}에톡시)트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2S,3S,4R,5R,6R)-2,3,4,5,6,7-헥사히드록시헵틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[({3-[(1,3-디히드록시프로판-2-일)아미노]프로필}술포닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-{[1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(3S)-3,4-디히드록시부틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}프로필 베타-D-글루코피라노스이두론산;
6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-옥시도이소퀴놀린-6-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]아세트아미도}트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-({2-[(2-술포에틸)아미노]에틸}술파닐)트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산; 및
6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{3-[(2-술포에틸)아미노]프로필}트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산.
일 실시 형태에서, 링커는 리소좀 효소에 의해 절단가능하다. 일 실시 형태에서, 리소좀 효소는 카텝신(Cathepsin) B이다.
일 실시 형태에서, 링커는 하기 구조 화학식 IVa, IVb, IVc, 또는 IVd에 따른 세그먼트를 포함한다:
[화학식 IVa]
Figure pct00037
[화학식 IVb]
Figure pct00038
[화학식 IVc]
Figure pct00039
[화학식 IVd]
Figure pct00040
여기서, 펩티드는 리소좀 효소에 의해 절단가능한 펩티드(N→C로 예시되며, 여기서, 펩티드는 아미노 및 카르복시 "말단"을 포함함)를 나타내고; T는 하나 이상의 에틸렌 글리콜 단위 또는 알킬렌 사슬, 또는 이들의 조합을 포함하는 중합체를 나타내고;
Ra는 수소, C1-6 알킬, SO3H 및 CH2SO3H로부터 선택되고; Ry는 수소 또는 C1-4 알킬-(O)r-(C1-4 알킬렌)s-G1 또는 C1-4 알킬-(N)-[(C1-4 알킬렌)-G1]2이고; Rz는 C1-4 알킬-(O)r-(C1-4 알킬렌)s-G2이고; G1은 SO3H, CO2H, PEG 4-32, 또는 당 모이어티이고; G2는 SO3H, CO2H, 또는 PEG 4-32 모이어티이고; r은 0 또는 1이고; s는 0 또는 1이고; p는 0 내지 5의 범위의 정수이고; q는 0 또는 1이고; x는 0 또는 1이고; y는 0 또는 1이고;
Figure pct00041
는 Bcl-xL 저해제에의 링커의 부착점을 나타내고; *는 링커의 나머지에의 부착점을 나타낸다.
일 실시 형태에서, 펩티드는 Val-Cit; Cit-Val; Ala-Ala; Ala-Cit; Cit-Ala; Asn-Cit; Cit-Asn; Cit-Cit; Val-Glu; Glu-Val; Ser-Cit; Cit-Ser; Lys-Cit; Cit-Lys; Asp-Cit; Cit-Asp; Ala-Val; Val-Ala; Phe-Lys; Lys-Phe; Val-Lys; Lys-Val; Ala-Lys; Lys-Ala; Phe-Cit; Cit-Phe; Leu-Cit; Cit-Leu; Ile-Cit; Cit-Ile; Phe-Arg; Arg-Phe; Cit-Trp; 및 Trp-Cit로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, 리소좀 효소는 β-글루쿠로니다아제 또는 β-갈락토시다아제이다.
일 실시 형태에서, 링커는 하기 구조 화학식 Va, Vb, Vc, Vd, 또는 Ve에 따른 세그먼트를 포함한다:
[화학식 Va]
Figure pct00042
[화학식 Vb]
Figure pct00043
[화학식 Vc]
Figure pct00044
[화학식 Vd]
Figure pct00045
[화학식 Ve]
Figure pct00046
여기서, q는 0 또는 1이고; r은 0 또는 1이고; X1은 CH2, O 또는 NH이고;
Figure pct00047
는 약물에의 링커의 부착점을 나타내고; *는 링커의 나머지에의 부착점을 나타낸다.
일 실시 형태에서, 링커는 하기 구조 화학식 VIIIa, VIIIb, 또는 VIIIc에 따른 세그먼트 또는 이의 가수분해 유도체를 포함한다:
[화학식 VIIIa]
Figure pct00048
[화학식 VIIIb]
Figure pct00049
[화학식 VIIIc]
Figure pct00050
여기서,
Rq는 H 또는 -O-(CH2CH2O)11-CH3이고; x는 0 또는 1이고; y는 0 또는 1이고; G3은 -CH2CH2CH2SO3H 또는 -CH2CH2O-(CH2CH2O)11-CH3이고; Rw는 -O-CH2CH2SO3H 또는 -NH(CO)-CH2CH2O-(CH2CH2O)12-CH3이고; *는 링커의 나머지에의 부착점을 나타내고;
Figure pct00051
는 항체에의 링커의 부착점을 나타낸다.
일 실시 형태에서, 링커는 1 내지 6개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 세그먼트를 포함한다.
일 실시 형태에서, m은 2, 3 또는 4이다.
일 실시 형태에서, 링커 L은 IVa 또는 IVb로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, 링커 L은 폐쇄 또는 개방 형태 중 어느 하나의 IVa.1-IVa.8, IVb.1-IVb.19, IVc.1-IVc.7, IVd.1-IVd.4, Va.1-Va.12, Vb.1-Vb.10, Vc.1-Vc.11, Vd.1-Vd.6, Ve.1-Ve.2, VIa.1, VIc.1-V1c.2, VId.1-VId.4, VIIa.1-VIIa.4, VIIb.1-VIIb.8, VIIc.1-VIIc.6으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, 링커 L은 IVb.2, IVc.5, IVc.6, IVc.7, IVd.4, Vb.9, VIIa.1, VIIa.3, VIIc.1, VIIc.4, 및 VIIc.5로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서, 각각의 링커의 말레이미드는 항체 Ab와 반응하여, 숙신이미드(폐쇄 형태) 또는 숙신아미드(개방 형태) 중 어느 하나로서의 공유적 부착을 형성하였다.
일 실시 형태에서, 링커 L은 IVb.2, IVc.5, IVc.6, IVd.4, VIIa.1, VIIa.3, VIIc.1, VIIc.4, VIIc.5로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서, 각각의 링커의 말레이미드는 항체 Ab와 반응하여, 숙신이미드(폐쇄 형태) 또는 숙신아미드(개방 형태) 중 어느 하나로서의 공유적 부착을 형성하였다.
일 실시 형태에서, 링커 L은 IVb.2, VIIa.3, IVc.6, 및 VIIc.1로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서,
Figure pct00052
는 약물 D에의 부착점이고, @는 LK에의 부착점이며, 링커가 하기에 나타낸 바와 같이 개방 형태로 존재할 때, @는 이것 바로 옆의 카르복실산의 α-위치 또는 β-위치 중 어느 하나에 있을 수 있다:
Figure pct00053
Figure pct00054
Figure pct00055
.
일 실시 형태에서, LK는 항-hB7H3 항체 Ab 상의 아미노 기에 의해 형성된 연결체이다.
일 실시 형태에서, LK는 아미드 또는 티오우레아이다.
일 실시 형태에서, LK는 항-hB7-H3 항체 Ab 상의 술프히드릴 기에 의해 형성된 연결체이다.
일 실시 형태에서, LK는 티오에테르이다.
일 실시 형태에서, LK는 아미드, 티오우레아 및 티오에테르로 이루어진 군으로부터 선택되며; m은 1 내지 8의 범위의 정수이다.
일 실시 형태에서, D는 본원에 개시된 바와 같은 Bcl-xL 저해제이고; L은 링커 IVa.1-IVa.8, IVb.1-IVb.19, IVc.1-IVc.7, IVd.1-IVd.4, Va.1-Va.12, Vb.1-Vb.10, Vc.1-Vc.11, Vd.1-Vd.6, Ve.1-Ve.2, VIa.1, VIc.1-V1c.2, VId.1-VId.4, VIIa.1-VIIa.4, VIIb.1-VIIb.8, 및 VIIc.1-VIIc.6으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서, 각각의 링커는 항체, Ab와 반응하여 공유적 부착을 형성하였고; LK는 티오에테르이고; m은 1 내지 8의 범위의 정수이다.
일 실시 형태에서, D는 구조 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId의 # 위치에 상응하는 수소가 존재하지 않아서 모노라디칼을 형성하지 않는다는 점에서 개질된 하기 화합물:
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산; 및
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(3S)-3,4-디히드록시부틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 Bcl-xL 저해제이고;
L은 링커 폐쇄 또는 개방 형태 중 어느 하나의 IVb.2, IVc.5, IVc.6, IVc.7, IVd.4, Vb.9, Vc.11, VIIa.1, VIIa.3, VIIc.1, VIIc.4, 및 VIIc.5로 이루어진 군으로부터 선택되고;
LK는 티오에테르이고;
m은 2 내지 4의 범위의 정수이다.
일 실시 형태에서, ADC는 하기 화학식 i 내지 vi로 이루어진 군으로부터 선택된다:
[화학식 i]
Figure pct00056
[화학식 ii]
Figure pct00057
[화학식 iii]
Figure pct00058
[화학식 iv]
Figure pct00059
[화학식 v]
Figure pct00060
및
[화학식 vi]
Figure pct00061
여기서, m은 1 내지 6의 정수이다. 일 실시 형태에서, Ab는 서열 번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 39에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3, 서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 37에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체이다. 일 실시 형태에서, Ab는 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체이다. 일 실시 형태에서, Ab는 서열 번호 160에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역 및/또는 서열 번호 161에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체이다. 일 실시 형태에서, Ab는 서열 번호 168에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 169에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다. 일 실시 형태에서, Ab는 서열 번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 140에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 136에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체이다. 일 실시 형태에서, Ab는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체이다. 일 실시 형태에서, Ab는 서열 번호 160에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역 및/또는 서열 번호 161에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체이다. 일 실시 형태에서, Ab는 서열 번호 170에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 171에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
일 실시 형태에서, m은 2 내지 6의 정수이다. 일 실시 형태에서, m은 2이다.
일 실시 형태에서, ADC는 서열 번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 140에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인; 서열 번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 136 또는 138에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체를 포함한다.
일 실시 형태에서, ADC는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함한다.
일 실시 형태에서, ADC는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 137에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함한다.
일 실시 형태에서, ADC는 서열 번호 39에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 37에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항체를 포함한다.
일 실시 형태에서, ADC는 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함한다.
일 실시 형태에서, ADC는 huAb3v2.5-CZ, huAb3v2.5-TX, huAb3v2.5-TV, huAb3v2.5-YY, huAb3v2.5-AAA, huAb3v2.5-AAD, huAb3v2.6-CZ, huAb3v2.6-TX, huAb3v2.6-TV, huAb3v2.6-YY, huAb3v2.6-AAD, huAb13v1-CZ, huAb13v1-TX, huAb13v1-TV, huAb13v1-YY, huAb13v1-AAA, huAb13v1-AAD로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서, CZ, TX, TV, YY, AAA, 및 AAD는 표 B에 개시된 신톤이고, 콘쥬게이션된 신톤은 개방 또는 폐쇄 형태 중 어느 하나로 존재한다.
일 태양에서, 본 발명은 유효량의 본원에 개시된 ADC, 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 복수의 본원에 개시된 ADC를 포함하는 ADC 혼합물과, 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
일 실시 형태에서, ADC 혼합물은 평균 약물:항체 비(drug to antibody ratio; DAR)가 1.5 내지 4이다.
일 실시 형태에서, ADC 혼합물은 각각이 1.5 내지 8의 DAR을 갖는 ADC들을 포함한다.
일 태양에서, 본 발명은 암의 치료 방법을 제공하며, 이는 치료적 유효량의 본원에 개시된 ADC를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 실시 형태에서, 암은 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 유방암, 난소암, 교모세포종, 전립선암, 췌장암, 결장암, 위암, 흑색종, 간세포암종, 두경부암, 신장암, 백혈병, 예를 들어, 급성 골수성 백혈병(AML), 및 림프종, 예를 들어, 비호지킨 림프종(NHL)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, 암은 편평 세포 암종이다. 일 실시 형태에서, 편평 세포 암종은 편평상피성 폐암 또는 편평상피성 두경부암이다.
일 실시 형태에서, 암은 삼중 음성 유방암이다.
일 실시 형태에서, 암은 비소세포 폐암이다.
일 실시 형태에서, 암은 활성화 EGFR 돌연변이를 갖는 것으로 특성화된다. 일 실시 형태에서, 활성화 EGFR 돌연변이는 엑손 19 결실 돌연변이, 엑손 21에서의 단일-점 치환 돌연변이 L858R, T790M 점 돌연변이, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 태양에서, 본 발명은 고형 종양을 갖는 대상체에서 고형 종양 성장을 저해하거나 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 고형 종양 성장이 저해되거나 감소되도록 유효량의 본원에 개시된 ADC를 고형 종양을 갖는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 실시 형태에서, 고형 종양은 비소세포 폐암종이다.
일 실시 형태에서, ADC는 추가 에이전트(agent) 또는 추가 요법제와 조합되어 투여된다.
일 실시 형태에서, 추가 에이전트는 항-PD1 항체(예를 들어 펨브롤리주맙), 항-PD-L1 항체(예를 들어, 아테졸리주맙), 항-CTLA-4 항체(예를 들어 이필리무맙), MEK 저해제(예를 들어 트라메티닙), ERK 저해제, BRAF 저해제(예를 들어 다브라페닙), 오시메르티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 소라페닙, CDK9 저해제(예를 들어 디나시클립), MCL-1 저해제, 테모졸로미드, Bcl-2 저해제(예를 들어 베네토클락스), Bcl-xL 저해제, 이브루티닙, mTOR 저해제(예를 들어 에베롤리무스), PI3K 저해제(예를 들어 부팔리십), 두벨리십, 이델랄리십, AKT 저해제, HER2 저해제(예를 들어 라파티닙), 탁산(예를 들어 도세탁셀, 파클리탁셀, 납-파클리탁셀(nab-paclitaxel)), 아우리스타틴을 포함하는 ADC, PBD를 포함하는 ADC(예를 들어 로발피투주맙 테시린), 메이탠시노이드를 포함하는 ADC(예를 들어 TDM1), TRAIL 작용제, 프로테아좀 저해제(예를 들어 보르테조밉), 및 니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라아제(NAMPT) 저해제로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 ADC는 소세포 폐암(SCLC) 치료를 위하여 인간 대상체에게 베네토클락스와 조합되어 투여된다.
일 실시 형태에서, 상기 추가 요법제는 방사선이다.
일 실시 형태에서, 상기 추가 에이전트는 화학요법제이다.
일 태양에서, 본 발명은 구조 화학식 I:
[화학식 I]
Figure pct00062
(여기서,
D는 본원에 개시된 바와 같은 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId의 Bcl-xL 저해제 약물이고;
L은 본원에 개시된 바와 같은 링커이고;
Ab는 huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 huAb13v1의 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는 hB7-H3 항체이고;
LK는 링커 L을 항체 Ab에 연결시키는 공유적 연결체를 나타내고;
m은 1 내지 20의 범위의 정수임)에 따른 ADC의 제조 방법을 제공하며;
상기 방법은
수성 용액 형태의 항체를 30 내지 40℃에서 15분 이상 동안 유효량의 디술피드 환원제로 처리하고, 그 후 상기 항체 용액을 20 내지 27℃까지 냉각시키는 단계;
환원된 항체 용액에 2.1 내지 2.176 (표 B)의 군으로부터 선택되는 신톤을 포함하는 물/디메틸 술폭시드의 용액을 첨가하는 단계;
상기 용액의 pH를 7.5 내지 8.5의 pH까지 조정하는 단계;
반응을 48 내지 80시간 동안 진행시켜 ADC를 형성하는 단계를 포함하며;
전기분무 질량 분광법으로 측정할 경우 숙신이미드의 숙신아미드로의 각각의 가수분해에 있어서 질량이 18 ± 2 amu만큼 변화되며;
ADC를 소수성 상호작용 크로마토그래피로 선택적으로 정제한다.
일 실시 형태에서, m은 2이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 상기에 개시된 바와 같은 방법에 의해 제조된 ADC를 제공한다.
도 1은 쥐과 항-B7-H3 하이브리도마 항체의 에피토프 그룹화(grouping)를 도표로 나타낸 것으로서, 이는 쌍별 결합 분석법에 의해 결정되는 바와 같다.
도 2는 항체의 환원, 티오숙신이미드 중간체를 제공하기 위한 말레이미드 유도체에 의한 개질, 및 티오숙신이미드 모이어티의 후속적인 가수분해를 도시한다.
도 3은 항체-말레이미도카프로일-vc-PABA-MMAE ADC의 구조를 도시한다.
도 4는 말레이미도카프로일-발린-알라닌 링커를 통하여 항체(Ab)에 콘쥬게이션된 PBD 이량체(SGD-1882)의 구조(SGD-1910으로 총칭됨)를 도시한다.
도 5는 1) 콘쥬게이션 전, 2) 티오숙신이미드 중간체를 제공하기 위한 말레이미드 유도체에의 콘쥬게이션 후 및 3) 티오숙신이미드 고리의 pH 8-매개된 가수분해 후 huAb13v1의 경쇄 및 중쇄의 MS 특성화를 도시한다.
본 발명의 다양한 태양은 항-B7-H3 항체 및 항체 단편, 항-B7-H3 ADC, 및 이의 제약 조성물과, 이러한 항체 및 단편을 제조하기 위한 핵산, 재조합 발현 벡터 및 숙주 세포에 관한 것이다. 인간 B7-H3의 검출, 인간 B7-H3 활성의 저해(시험관 내에서 또는 생체 내에서), 및 암의 치료를 위한 본원에 개시된 항체, 단편, 및 ADC의 사용 방법도 본 발명에 포함된다. 특정 실시 형태에서, 본 발명은 Bcl-xL 저해제를 포함하는 ADC를 포함하는 항-B7-H3 ADC, ADC의 합성에 유용한 신톤, ADC를 포함하는 조성물, ADC의 제조 방법, 및 ADC의 다양한 사용 방법을 제공한다.
당업자가 알고 있는 바와 같이, 본원에 개시된 ADC는 사실상 "모듈형"이다. 본 발명의 개시 내용 전체에 걸쳐, ADC의 합성에 유용한 신톤뿐만 아니라 ADC를 포함하는 다양한 "모듈"의 다양한 특정한 실시 형태도 개시된다. 특정한 비제한적 예로서, 항체, 링커, 및 ADC 및 신톤을 포함할 수 있는 Bcl-xL 저해제의 특정한 실시 형태가 개시된다. 개시된 모든 특정한 실시 형태는 마치 각각의 특정한 조합이 명백하게 개별적으로 기술된 것처럼 서로 조합될 수 있는 것으로 의도된다.
또한 당업자라면 본원에 개시된 다양한 ADC 및/또는 ADC 신톤이 염, 그리고 특정 실시 형태에서, 특히 제약상 허용가능한 염의 형태로 존재할 수 있음을 알 것이다. 충분히 산성이거나, 충분히 염기성이거나, 이들 둘 다인 작용기를 보유한 본 발명의 화합물은 임의의 다수의 무기 염기, 및 무기 및 유기 산과 반응하여 염을 형성할 수 있다. 대안적으로, 내재적으로 하전된 화합물, 예컨대 4차 질소를 갖는 것은 적절한 반대이온, 예를 들어 할라이드, 예컨대 브로마이드, 클로라이드, 또는 플루오라이드와 염을 형성할 수 있다.
산 부가염 형성에 일반적으로 이용되는 산은 무기 산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 인산 등, 및 유기 산, 예컨대 p-톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 옥살산, p-브로모페닐-술폰산, 탄산, 숙신산, 시트르산 등이다. 염기 부가염은 무기 염기, 예컨대 암모늄으로부터 유도된 것 및 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물, 탄산염, 중탄산염 등을 포함한다.
하기 개시 내용에서, 구조 도해 및 명칭 둘 다가 포함될 경우, 및 명칭이 구조 도해와 상충될 경우, 구조 도해가 좌우한다.
[발명을 실시하기 위한 구체적인 내용]의 개요가 하기에 제공된다:
I. 정의
II. 항-B7-H3 항체
II.A. 항-B7-H3 키메라 항체
II.B. 인간화 항-B7-H3 항체
III. 항-B7-H3 항체 약물 콘쥬게이트(ADC)
III.A. 항-B7-H3 / Bcl-xL 저해제 ADC
III.A.1. Bcl-xL 저해제
III.A.2 Bcl-xL 링커
절단성 링커
비-절단성 링커
링커를 항-B7-H3 항체에 부착하는 데 사용되는 기
링커 선택 상의 고려 사항
III.A.3. Bcl-xL ADC 신톤
III.A.4 Bcl-xL ADC의 합성 방법
III.A.5. Bcl-xL 저해제의 일반적인 합성 방법
III.A.6. 신톤의 일반적인 합성 방법
III.A.7. 항-B7-H3 ADC의 일반적인 합성 방법
III.B. 항-B7-H3 ADC: 콘쥬게이션을 위한 다른 예시적인 약물
III.C. 항-B7-H3 ADC: 다른 예시적인 링커
IV. 항-B7-H3 ADC의 정제
V. 항-B7-H3 항체 및 항-B7-H3 ADC의 용도
VI. 제약 조성물
I. 정의
본 발명이 더 쉽게 이해될 수 있게 하기 위하여, 먼저 특정 용어를 정의한다. 게다가, 파라미터의 값 또는 값들의 범위가 나열될 때마다, 나열된 값들에 대하여 중간에 있는 값들 및 범위들도 본 발명의 일부인 것으로 의도됨이 주지되어야 한다.
용어 "항-B7-H3 항체"는 B7-H3에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 관심 항원, 즉 B7-H3에 "결합하는" 항체는 항체가 그 항원을 발현하는 세포를 표적화하는 데 유용하기에 충분한 친화도로 그 항원에 결합할 수 있는 것이다. 바람직한 실시 형태에서, 항체는 인간 B7-H3(hB7-H3)에 특이적으로 결합한다. 항-B7-H3 항체의 예가 하기 실시예에 개시되어 있다. 달리 표시되지 않으면, 용어 "항-B7-H3 항체"는 야생형 B7-H3(예를 들어, B7-H3의 4IgB7-H3 이소형) 또는 임의의 B7-H3 변이체에 결합하는 항체를 지칭하려는 것이다. 야생형 인간 B7-H3의 아미노산 서열이 하기에 서열 번호 149로 제공되며, 여기서, 신호 펩티드(아미노산 잔기 1 내지 28)에는 밑줄이 그어져 있다.
Figure pct00063
따라서, 본 발명의 일 실시 형태에서, 항체 또는 ADC는 서열 번호 149에 정의된 바와 같은 인간 B7-H3에 결합한다. 인간 B7-H3의 세포외 도메인(ECD)은 서열 번호 152(His 태그를 포함함)에 제공되어 있다. 이와 같이, 본 발명의 일 실시 형태에서, ADC의 항체는 서열 번호 152의 ECD에서 설명된 바와 같은 인간 B7-H3의 ECD에 결합한다.
항체 또는 ADC와 제2 화학종의 상호작용과 관련하여 본원에서 사용되는 용어 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하는"은 상기 상호작용이 화학종 상의 특정 구조(예를 들어, 항원 결정기 또는 에피토프)의 존재에 의존적임을 의미하며; 예를 들어, 항체는 일반적으로 단백질보다는 특정 단백질 구조를 인식하고 이에 결합한다. 항체 또는 ADC가 에피토프 "A"에 특이적이면, 표지된 "A" 및 항체를 포함하는 반응에서 에피토프 A(또는 유리, 비표지 A)를 포함하는 분자의 존재는 항체 또는 ADC에 결합되는 표지된 A의 양을 감소시킬 것이다. 예로서, 항체는, 표지된 때의 항체가 상응하는 비-표지 항체에 의해 그의 표적으로부터 떨어져서 이와 경쟁할 수 있을 경우 표적에 "특이적으로 결합한다". 일 실시 형태에서, 항체는 표적에 대한 KD가 적어도 약 10-4 M, 10-5 M, 10-6 M, 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 10-12 M이거나 이보다 더 작을 경우(더 작다는 것은 10-12보다 더 작은 수, 예를 들어 10-13을 의미함) 표적, 예를 들어, B7-H3에 특이적으로 결합한다. 일 실시 형태에서, 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "B7-H3에의 특이적 결합" 또는 "B7-H3에 특이적으로 결합하다"는 B7-H3에 결합하고 해리 상수(KD)가 1.0 x 10-7 M 이하(표면 플라스몬 공명에 의해 결정할 경우)인 항체 또는 ADC를 지칭한다. 그러나, 항체 또는 ADC는 서열 면에서 관련된 2가지 이상의 항원에 특이적으로 결합하는 것이 가능할 수 있음이 이해될 것이다. 예를 들어, 일 실시 형태에서, 항체는 B7-H3의 인간 및 비-인간(예를 들어, 마우스 또는 비-인간 영장류) 오르토로그(ortholog) 둘 다에 특이적으로 결합할 수 있다.
용어 "항체"는 항원에 특이적으로 결합하고 중쇄(H chain)(들) 및 경쇄(L chain)(들)를 포함하는 면역글로불린 분자를 지칭한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 HCVR 또는 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 이루어져 있다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3으로 이루어져 있다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 LCVR 또는 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 이루어져 있다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인, Cl로 이루어져 있다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 지칭되는 더욱 보존된 영역 사이에 배치된 상보성 결정 영역(CDR)으로 지칭되는 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각 VH 및 VL은 하기의 순서로 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되어 있다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 항체는 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG 3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위클래스의 것일 수 있다.
용어 "항체"는 (하기에 정의된) 항체의 항원 결합 부분을 포함하는 것으로 의도되는 것은 아닌 반면, 특정 실시 형태에서, 중쇄(들)의 카르복시 말단으로부터의 소수의 아미노산 결실을 포함하는 것으로 의도된다. 일 실시 형태에서, 항체는 중쇄의 카르복시 말단으로부터의 1 내지 5개 아미노산의 결실을 갖는 중쇄를 포함한다. 일 실시 형태에서, 항체는 hB7-H3에 결합할 수 있는, 4개의 폴리펩티드 사슬, 즉 2개의 중쇄(H chain) 및 2개의 경쇄(L chain)를 갖는 IgG인 단클론 항체이다. 일 실시 형태에서, 항체는 람다 또는 카파 경쇄를 포함하는 단클론 IgG 항체이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 항체의 "항원 결합 부분" 또는 "항원 결합 단편"(또는 간단히 "항체 부분" 또는 "항체 단편")은 항원(예를 들어, hB7-H3)에 특이적으로 결합하는 능력을 유지하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원 결합 기능이 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있음이 밝혀졌다. 또한, 이러한 항체 실시 형태는 둘 이상의 상이한 항원에 특이적으로 결합하는 2특이성, 이중 특이성 또는 다중-특이성 형식일 수 있다. 용어 항체의 "항원 결합 부분"에 포함되는 결합 단편의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어져 있는 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 디술피드 가교에 의해 연결되는 2개의 Fab 단편을 포함하는 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어져 있는 Fd 단편, (iv) 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어져 있는 Fv 단편, (v) 단일 가변 도메인을 포함하는 dAb 단편(본원에 참고로 포함된 문헌[Ward et al., (1989) Nature 341:544-546], Winter 등의 국제 공개 제90/05144 A1호); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 더욱이, Fv 단편의 2개의 도메인, VL 및 VH가 개별 유전자에 의해 코딩되지만, 그들은, 재조합 방법을 이용하여, 그들을 VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자(단쇄 Fv(scFv)로 알려져 있음)를 형성하는 단일 단백질 사슬로 만들어질 수 있도록 하는 합성 링커에 의해 연결될 수 있다(예를 들어, 문헌[Bird et al. (1988) Science 242:423-426]; 및 문헌[Huston et al. (1988) Proc . Natl . Acad . Sci. USA 85:5879-5883]). 또한, 이러한 단쇄 항체는 용어 항체의 "항원 결합 부분"에 포함되는 것으로 의도된다. 본 발명의 특정 실시 형태에서, scFv 분자가 융합 단백질 내에 혼입될 수 있다. 다른 형태의 단쇄 항체, 예를 들어, 디아바디가 또한 포함된다. 디아바디는, VH 및 VL 도메인이 단일 폴리펩티드 사슬 상에서 발현되지만, 너무 짧아서 동일한 사슬 상의 2개의 도메인 간에 쌍을 이루지 못하게 하는 링커를 사용하여, 도메인이 또 다른 사슬의 상보성 도메인과 쌍을 이루게 하고, 2개의 항원 결합 부위를 생성하는, 2가, 2특이성 항체이다(예를 들어, 문헌[Holliger, P., et al. (1993) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90:6444-6448]; 문헌[Poljak, R.J., et al. (1994) Structure 2:1121-1123]). 이러한 항체 결합 부분은 본 기술 분야에 공지되어 있다(문헌[Kontermann and Dubel eds., Antibody Engineering (2001) Springer-Verlag. New York. 790 pp. (ISBN 3-540-41354-5)].
IgG는 Y자형으로 배열된 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 항체의 클래스이다. IgG 불변 도메인은 중쇄 또는 경쇄 불변 도메인을 지칭한다. 예시적인 인간 IgG 중쇄 및 경쇄 불변 도메인 아미노산 서열은 본 기술 분야에 공지되어 있으며, 하기 표 A에 나타낸다.
표 A:
Figure pct00064
본원에서 사용되는 바와 같이, "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다(예를 들어, B7-H3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 B7-H3 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 그러나, B7-H3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 항원, 예컨대 다른 종으로부터의 B7-H3 분자에 대하여 교차-반응성을 가질 수 있다. 게다가, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.
용어 "인간화 항체"는 비인간 종(예를 들어, 마우스) 유래의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하지만 VH 및/또는 VL 서열의 적어도 일부분은 "인간과 더 유사"해지도록, 즉, 인간 생식세포계열(germline) 가변 서열과 더 유사해지도록 변경된 항체를 지칭한다. 특히, 용어 "인간화 항체"는 관심 항원에 면역특이적으로 결합하며, 실질적으로 인간 항체의 아미노산 서열을 갖는 프레임워크(FR) 영역 및 실질적으로 비-인간 항체의 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 항체 또는 이의 변이체, 유도체, 유사체 또는 단편이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, CDR과 관련하여 용어 "실질적으로"는 비-인간 항체 CDR의 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 CDR을 지칭한다. 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인(Fab, Fab', F(ab')2, FabC, Fv)을 실질적으로 전부 포함하며, 여기서 전부의 또는 실질적으로 전부의 CDR 영역은 비-인간 면역글로불린(즉, 공여자 항체)의 것에 상응하며, 전부의 또는 실질적으로 전부의 프레임워크 영역은 인간 면역글로불린 콘센서스(consensus) 서열의 것이다. 바람직하게는, 인간화 항체는 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부분을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인간화 항체는 경쇄와, 적어도 중쇄의 가변 도메인 둘 다를 포함한다. 항체는 또한 중쇄의 CH1, 힌지, CH2, CH3, 및 CH4 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 인간화 항체는 단지 인간화 경쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인간화 항체는 단지 인간화 중쇄를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 인간화 항체는 단지 경쇄의 인간화 가변 도메인 및/또는 인간화 중쇄를 포함한다.
인간화 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함하는, 면역글로불린의 임의의 클래스, 및 제한 없이 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함하는 임의의 이소타입으로부터 선택될 수 있다. 인간화 항체는 하나 초과의 클래스 또는 이소타입으로부터의 서열을 포함할 수 있으며, 특정 불변 도메인은 본 기술 분야에 잘 알려져 있는 기술을 사용하여 요망되는 이펙터 기능을 최적화하도록 선택될 수 있다.
용어 "카바트 넘버링", "카바트 정의" 및 "카바트 표지화"는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 본 기술 분야에서 인식되는 이들 용어는 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 및 경쇄 가변 영역에서의 다른 아미노산 잔기보다 더욱 가변성인(즉, 초가변성인) 아미노산 잔기의 넘버링 시스템을 지칭한다(문헌[Kabat et al. (1971) Ann. NY Acad , Sci . 190:382-391] 및 문헌[Kabat, E.A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242]). 중쇄 가변 영역에 있어서, 초가변 영역은 CDR1의 경우 아미노산 위치 31 내지 35, CDR2의 경우 아미노산 위치 50 내지 65, 및 CDR3의 경우 아미노산 위치 95 내지 102의 범위이다. 경쇄 가변 영역에 있어서, 초가변 영역은 CDR1의 경우 아미노산 위치 24 내지 34, CDR2의 경우 아미노산 위치 50 내지 56, 및 CDR3의 경우 아미노산 위치 89 내지 97의 범위이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "CDR"은 항체 가변 서열 내의 상보성 결정 영역을 지칭한다. 중쇄(HC) 및 경쇄(LC)의 가변 영역 각각에 3개의 CDR이 있으며, 이는 가변 영역 각각에 있어서 CDR1, CDR2 및 CDR3(또는 구체적으로 HC CDR1, HC CDR2, HC CDR3, LC CDR1, LC CDR2, 및 LC CDR3)으로 표기된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "CDR 세트"는 항원에 결합할 수 있는 단일 가변 영역에 나타나는 3개의 CDR의 군을 지칭한다. 이들 CDR의 정확한 경계는 상이한 시스템에 따라 상이하게 정의되었다. 카바트에 의해 설명된 시스템(문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) and (1991)])은 항체의 임의의 가변 영역에 적용가능한 명백한 잔기 넘버링 시스템을 제공할 뿐만 아니라 3개의 CDR을 규정하는 정확한 잔기 경계도 제공한다. 이들 CDR은 카바트 CDR로 지칭될 수 있다. 초티아 및 동료(문헌[Chothia &Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)] 및 문헌[Chothia et al., Nature 342:877-883 (1989)])는 카바트 CDR 내의 특정한 하위-부분이 아미노산 서열의 수준에서 큰 다양성을 가짐에도 불구하고 거의 동일한 펩티드 백본 배좌를 채택한다는 것을 발견하였다. 이들 하위-부분은 L1, L2, 및 L3 또는 H1, H2, 및 H3으로 표기되었으며, 여기서 "L" 및 "H"는 각각 경쇄 및 중쇄 영역을 나타낸다. 이들 영역은 초티아 CDR로 지칭될 수 있으며, 이는 카바트 CDR과 중첩되는 경계를 갖는다. 카바트 CDR과 중첩되는 CDR을 규정하는 다른 경계는 파들란(Padlan)(문헌[FASEB J.9:133-139 (1995)]) 및 맥칼룸(MacCallum)(문헌[J Mol Biol 262(5):732-45 (1996)])에 의해 기재되어 있다. 또 다른 CDR 경계 정의는 상기 시스템 중 하나를 엄격하게 따르지 않을 수 있으나, 그럼에도 불구하고, 비록 특정 잔기 또는 잔기의 그룹 또는 심지어 전체 CDR이 항원 결합에 유의하게 영향을 주는 것은 아니라는 예측 또는 실험적 발견의 견지에서 단축될 수 있거나 길어질 수는 있지만, 카바트 CDR과 중첩될 것이다. 본원에서 사용된 방법은, 비록 바람직한 실시 형태가 카바트 또는 초티아 정의된 CDR을 사용한다고 해도, 이들 시스템 중 임의의 것에 따라 정의된 CDR을 이용할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "프레임워크" 또는 "프레임워크 서열"은 가변 영역에서 CDR을 제한 나머지 서열을 지칭한다. CDR 서열의 정확한 정의는 상이한 시스템에 의해 결정될 수 있으므로, 프레임워크 서열의 의미는 이에 상응하여 상이하게 해석된다. 6개의 CDR(경쇄의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3, 및 중쇄의 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3)은 또한 경쇄 및 중쇄 상의 프레임워크 영역을 각각의 사슬 상의 4개의 하위-영역(FR1, FR2, FR3 및 FR4)으로 나누며, 여기서 CDR1은 FR1과 FR2 사이에 위치되고, CDR2는 FR2와 FR3 사이에 위치되며, CDR3은 FR3과 FR4 사이에 위치된다. FR1, FR2, FR3 또는 FR4와 같은 특정 하위-영역을 명시하지 않고, 프레임워크 영역은 다른 이들에 의해 언급되는 바와 같이, 천연 발생 면역글로불린 단쇄의 가변 영역 내의 조합된 FR을 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 하나의 FR은 4개의 하위-영역 중 하나를 나타내고, FR들은 프레임워크 영역을 구성하는 4개의 하위-영역 중 2개 이상을 나타낸다.
인간화 항체의 프레임워크 및 CDR 영역은 모 서열에 정확하게 상응할 필요는 없으며, 예를 들어 공여자 항체 CDR 또는 콘센서스 프레임워크는 적어도 하나의 아미노산 잔기의 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해 돌연변이유발될 수 있어서 이러한 부위에서 CDR 또는 프레임워크 잔기가 공여자 항체 또는 콘센서스 프레임워크에 상응하지 않게 된다. 그러나, 바람직한 실시 형태에서, 이러한 돌연변이는 광범위하지 않을 것이다. 통상, 인간화 항체 잔기의 적어도 80%, 바람직하게는 적어도 85%, 더욱 바람직하게는 적어도 90%, 가장 바람직하게는 적어도 95%는 모 FR 및 CDR 서열의 잔기에 상응할 것이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "콘센서스 프레임워크"는 콘센서스 면역글로불린 서열 내의 프레임워크 영역을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "콘센서스 면역글로불린 서열"은 관련 면역글로불린 서열의 패밀리에서 가장 빈번히 나타나는 아미노산(또는 뉴클레오티드)으로부터 형성되는 서열을 지칭한다(예를 들어, 문헌[Winnaker, From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Germany 1987] 참조). 면역글로불린의 패밀리에서, 콘센서스 서열에서의 각각의 위치는 상기 패밀리에서 그 위치에 가장 빈번히 나타나는 아미노산이 차지한다. 2개의 아미노산이 동등하게 빈번히 나타나는 경우, 어느 하나가 콘센서스 서열 내에 포함될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "인간 수용자 프레임워크"는 인간 항체 또는 이의 항체 단편으로부터 유래된 VH 또는 VL 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항체 단편의 프레임워크 또는 비-인간 종 유래의 CDR이 혼입될 수 있는 인간 콘센서스 서열 프레임워크를 지칭하려는 것이다.
펩티드 또는 폴리펩티드 서열과 관련하여 "아미노산 서열 동일성 퍼센트(%)"는 최대 서열 동일성 퍼센트를 성취하기 위한 서열들의 정렬 및 갭의 도입(필요할 경우) 후, 그리고 서열 동일성의 일부로서 보존적 치환을 고려하지 않고서, 특정 펩티드 또는 폴리펩티드 서열에서의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에서의 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 서열 동일성 퍼센트를 결정하기 위한 정렬은 본 기술 분야의 기술 내에 있는 다양한 방법으로, 예를 들어 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 성취될 수 있다. 당업자라면 비교되는 서열들의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 성취하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하는 측정 정렬에 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 서열 번호 1 내지 148 중 어느 하나에 기재된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
용어 "다가 항체"는 본원에서 2개 이상의 항원 결합 부위를 포함하는 항체를 나타내는 데 사용된다. 특정 실시 형태에서, 다가 항체는 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖도록 엔지니어링될 수 있으며, 일반적으로 천연 발생 항체가 아니다.
용어 "다중특이성 항체"는 2가지 이상의 관련되지 않은 항원에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 2가지의 관련되지 않은 항원에 결합할 수 있는 2특이성 항체, 예를 들어, B7-H3 및 CD3에 결합하는 2특이성 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이다.
본원에서 상호교환가능하게 사용되는 바와 같이, 용어 "이중 가변 도메인" 또는 "DVD"는 2개 이상의 항원 결합 부위를 포함하는 항원 결합 단백질이며 4가 또는 다가 결합 단백질이다. 이러한 DVD는 단일특이성일 수 있거나(즉, 하나의 항원에 결합할 수 있음), 다중특이성일 수 있다(즉, 2가지 이상의 항원에 결합할 수 있음). 2개의 중쇄 DVD 폴리펩티드 및 2개의 경쇄 DVD 폴리펩티드를 포함하는 DVD 결합 단백질은 DVD Ig로 지칭된다. DVD Ig의 절반 각각은 중쇄 DVD 폴리펩티드 및 경쇄 DVD 폴리펩티드, 및 2개의 항원 결합 부위를 포함한다. 각각의 결합 부위는 항원 결합 부위마다 항원 결합에 연루된 총 6개의 CDR을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본원에 개시된 CDR은 항-B7-H3 DVD에서 사용된다.
용어 "키메라 항원 수용체" 또는 "CAR"은 적어도 (1) 항원 결합 영역, 예를 들어, 항체의 중쇄 또는 경쇄, (2) CAR을 T 세포 내에 고정시키기 위한 막관통 도메인, 및 (3) 하나 이상의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 재조합 단백질을 지칭한다.
용어 "활성"은 항원에 대한 항체 또는 ADC의, 예를 들어 hB7-H3 항원에 결합하는 항-hB7-H3 항체의 결합 특이성/친화성 및/또는 항체, 예를 들어 hB7-H3에의 결합이 hB7-H3의 생물학적 활성을 저해하는 항-hB7-H3 항체의 중화 능력(neutralizing potency), 예를 들어, B7-H3 발현 세포주, 예를 들어, 인간 H146 폐암종 세포, 인간 H1650 폐암종 세포, 또는 인간 EBC1 폐암종 세포의 증식의 저해와 같은 활성을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "비소세포 폐암종(NSCLC) 이종이식 분석법"은 항-B7-H3 항체 또는 ADC가 종양 성장(예를 들어, 추가 성장)을 저해하고/하거나 NSCLC 세포의 면역결핍 마우스 내로의 이식에 의해 생긴 종양 성장을 감소시킬 수 있는지를 결정하는 데 사용되는 생체 내 분석법을 지칭한다. NSCLC 이종이식 분석법은 종양이 요망되는 크기, 예를 들어 200 내지 250 mm3까지 성장하도록 NSCLC 세포를 면역결핍 마우스 내로 이식하는 것을 포함하며, 이때 항체 또는 ADC가 종양 성장을 저해하고/하거나 감소시킬 수 있는지를 결정하기 위하여 마우스에 투여된다. 특정 실시 형태에서, 항체 또는 ADC의 활성은 대조 항체, 예를 들어, 종양 세포에 특이적으로 결합하지 않는, 예를 들어, 암과 연관되지 않은 항원에 대하여 유도되거나 비암성인 소스(source)(예를 들어, 정상 인간 혈청)로부터 수득되는 인간 IgG 항체(또는 이의 컬렉션(collection))과 비교한 종양 성장 저해 퍼센트(%TGI)에 따라 결정된다. 그러한 실시 형태에서, 본 항체(또는 ADC) 및 대조 항체는 마우스에 동일 용량으로, 동일 빈도로, 그리고 동일 경로를 통하여 투여된다. 일 실시 형태에서, NSCLC 이종이식 분석법에서 사용되는 마우스는 중증 합병성 면역결핍(SCID) 마우스 및/또는 무흉선 CD-1 누드 마우스이다. NSCLC 이종이식 분석법에서 사용될 수 있는 NSCLC 세포의 예는 H1299 세포 (NCI-H1299[H-1299](ATCC® CRL-5803)), H1975 세포(NCI-H1975 세포[H1975](ATCC® CRL-5908™)), 및 EBC-1 세포를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "소세포 폐암종(SCLC) 이종이식 분석법"은 항-B7-H3 항체 또는 ADC가 종양 성장(예를 들어, 추가 성장)을 저해하고/하거나 SCLC 세포의 면역결핍 마우스 내로의 이식에 의해 생긴 종양 성장을 감소시킬 수 있는지를 결정하는 데 사용되는 생체 내 분석법을 지칭한다. SCLC 이종이식 분석법은 종양이 요망되는 크기, 예를 들어 200 내지 250 mm3까지 성장하도록 SCLC 세포를 면역결핍 마우스 내로 이식하는 것을 포함하며, 이때 항체 또는 ADC가 종양 성장을 저해하고/하거나 감소시킬 수 있는지를 결정하기 위하여 마우스에 투여된다. 특정 실시 형태에서, 항체 또는 ADC의 활성은 대조 항체, 예를 들어, 종양 세포에 특이적으로 결합하지 않는, 예를 들어, 암과 연관되지 않은 항원에 대하여 유도되거나 비암성인 소스(source)(예를 들어, 정상 인간 혈청)로부터 수득되는 인간 IgG 항체(또는 이의 컬렉션)과 비교한 종양 성장 저해 퍼센트(%TGI)에 따라 결정된다. 그러한 실시 형태에서, 본 항체(또는 ADC) 및 대조 항체는 마우스에 동일 용량으로, 동일 빈도로, 그리고 동일 경로를 통하여 투여된다. 일 실시 형태에서, NSCLC 이종이식 분석법에서 사용되는 마우스는 중증 합병성 면역결핍(SCID) 마우스 및/또는 무흉선 CD-1 누드 마우스이다. SCLC 이종이식 분석법에서 사용될 수 있는 SCLC 세포의 예는 H146 세포(NCI-H146 세포[H146](ATCC® HTB-173™)), 및 H847 세포(NCI-H847[H847](ATCC® CRL-5846™))를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 용어 "에피토프"는 항체 또는 ADC가 결합하는 항원의 영역을 지칭한다. 특정 실시 형태에서, 에피토프 결정기는 분자, 예컨대 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 술포닐의 화학적 활성 표면 그루핑(grouping)을 포함하며, 특정 실시 형태에서, 특정한 3차원 구조 특징 및/또는 특정한 전하 특징을 가질 수 있다.특정 실시 형태에서, 항체는, 단백질 및/또는 거대분자의 복합 혼합물 중 그의 표적 항원을 우선적으로 인식할 때 항원에 특이적으로 결합된다고 한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "표면 플라스몬 공명"은, 예를 들어, BIAcore 시스템(스웨덴 웁살라 및 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재의 Pharmacia Biosensor AB)을 사용하여 바이오센서 매트릭스 내에서 단백질 농도의 변화를 검출함으로써 실시간 생물특이적 상호작용 분석을 가능하게 하는 광학 현상을 지칭한다.
추가의 설명에 대해서는 문헌[Jonsson, U., et al. (1993) Ann. Biol . Clin . 51:19-26]; 문헌[Jonsson, U., et al. (1991) Biotechniques 11:620-627]; 문헌[Johnsson, B., et al. (1995) J. Mol . Recognit . 8:125-131]; 및 문헌[Johnnson, B., et al. (1991) Anal. Biochem . 198:268-277]을 참조한다. 일 실시 형태에서, 표면 플라스몬 공명은 실시예 2에 설명된 방법에 따라 결정된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 " kon" 또는 " ka"는 항체/항원 복합체를 형성하도록 항체가 항원에 회합되는 것에 대한 온 속도 상수를 지칭하는 것으로 의도된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "koff" 또는 " kd"는 항체/항원 복합체로부터의 항체의 해리에 대한 오프 속도 상수를 지칭하는 것으로 의도된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "KD"는 특정 항체-항원 상호작용(예를 들어, huAb13 항체 및 B7-H3)의 평형 해리 상수를 지칭하는 것으로 의도된다.
KD는 ka/kd로 계산된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "경쟁적 결합"은 제1 항체가 제3 분자, 예를 들어 항원 상의 결합 부위에 대하여 제2 항체와 경쟁하는 상황을 지칭한다. 일 실시 형태에서, 두 항체 사이의 경쟁적 결합은 FACS 분석을 이용하여 결정된다.
용어 "경쟁적 결합 분석법"은 둘 이상의 항체가 동일 에피토프에 결합하는지를 결정하는 데 사용되는 분석법이다. 일 실시 형태에서, 경쟁적 결합 분석법은, 표지된 항체의 형광 신호가 비-표지 항체의 도입으로 인하여 감소되는지를 결정함으로써 둘 이상의 항체가 동일 에피토프에 결합하는지를 결정하는 데 사용되는 경쟁 형광 활성화 세포 분류(FACS) 분석법으로서, 여기서, 동일 에피토프에 대한 경쟁은 형광 수준을 저하시킬 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "표지된 항체"는 결합 단백질, 예를 들어 항체의 확인을 제공하는 표지체가 혼입된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 지칭한다. 바람직하게는, 표지체는 검출 가능한 마커, 예를 들어 방사성표지된 아미노산의 혼입 또는 표시된 아비딘(예를 들어, 광학적 방법 또는 비색법에 의해 검출될 수 있는 형광 마커 또는 효소 활성을 포함하는 스트렙타비딘)에 의해 검출될 수 있는 비오티닐 모이어티의 폴리펩티드에의 부착이다. 폴리펩티드를 위한 표지체의 예는 다음을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다: 방사성 동위원소 또는 방사성 핵종(예를 들어, 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177Lu, 166Ho, 또는 153Sm); 형광 표지체(예를 들어, FITC, 로다민, 란탄족 인광체), 효소적 표지체(예를 들어, 서양고추냉이 퍼옥시다아제, 루시퍼라아제, 알칼리 포스파타아제); 화학발광 마커; 비오티닐 그룹; 이차 리포터(예를 들어, 류신 지퍼(zipper) 쌍 서열, 이차 항체의 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그)에 의해 인식되는 소정의 폴리펩티드 에피토프; 및 자성 제제(magnetic agent), 예컨대 가돌리늄 킬레이트.
용어 "항체-약물-콘쥬게이트" 또는 "ADC"는 선택적으로 치료제 또는 세포독성제일 수 있는 하나 이상의 화학적 약물(들)(본원에서 에이전트(들), 워헤드(warhead)(들), 및 페이로드(payload)(들)로도 칭해짐)에 화학적으로 연결된 결합 단백질, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭한다. 바람직한 실시 형태에서, ADC는 항체, 약물(예를 들어 세포독성 약물), 및 항체에의 약물의 부착 또는 콘쥬게이션을 가능하게 하는 링커를 포함한다. 전형적으로 ADC는 임의의 장소에서 항체에 콘쥬게이션된 1 내지 8가지의 약물을 가지며, 이는 2, 4, 6, 또는 8가지의 약물 로딩 종을 포함한다. ADC에 포함될 수 있는 약물의 비제한적 예로는 유사분열 저해제, 항종양 항생제, 면역조절제, 유전자 요법을 위한 벡터, 알킬화제, 항혈관신생제, 대사 길항 물질, 붕소 함유 제제(boron-containing agent), 화학보호제(chemoprotective agent), 호르몬, 항호르몬제, 코르티코스테로이드, 광활성 치료제, 올리고뉴클레오티드, 방사성 핵종 제제(radionuclide agent), 토포이소머라아제 저해제, 키나아제 저해제(예를 들어, TEC-패밀리 키나아제 저해제 및/또는 세린/트레오닌 키나아제 저해제), 및 방사선 증감제가 있다. 일 실시 형태에서, 약물은 Bcl-xL 저해제이다.
본원에서 상호교환가능하게 사용되는 용어 "항-B7-H3 항체 약물 콘쥬게이트" 또는 "항-B7-H3 ADC"는 항체가 하나 이상의 화학적 제제(들)에 콘쥬게이션된, B7-H3에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 ADC를 지칭한다. 일 실시 형태에서, 항-B7-H3 ADC는 아우리스타틴, 예를 들어, MMAE 또는 MMAF에 콘쥬게이션된 항체 huAb13v1, huAb3v2.5, 또는 huAb3v2.6을 포함한다. 일 실시 형태에서, 항-B7-H3 ADC는 Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션된 항체 huAb13v1, huAb3v2.5, 또는 huAb3v2.6을 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, 항-B7-H3 ADC는 인간 B7-H3(hB7-H3)에 결합한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "Bcl-xL 저해제"는 세포에서 Bcl-xL 활성을 길항하는 화합물을 지칭한다. 일 실시 형태에서, Bcl-xL 저해제는 Bcl-xL 활성을 저해함으로써 세포의 아폽토시스를 촉진한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "아우리스타틴"은 항유사분열제 패밀리를 지칭한다. 아우리스타틴 유도체도 용어 "아우리스타틴"의 정의 내에 포함된다. 아우리스타틴의 예는 아우리스타틴 E(AE), 모노메틸아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸아우리스타틴 F(MMAF), 및 합성 돌라스타틴 유사체를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체는 아우리스타틴에 콘쥬게이션되어 항-B7-H3 ADC를 형성한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "Ab-vcMMAE"는 말레이미도카프로일 발린 시트룰린 p-아미노벤질옥시카르바밀(PABA) 링커를 통하여 모노메틸아우리스타틴 E(MMAE)에 콘쥬게이션된 항체를 포함하는 ADC를 지칭하는 데 사용된다.
본원에서 사용되는 바와 같이 , 용어 "mcMMAF"는 말레이미도카프로일-모노메틸아우리스타틴 F(MMAF)의 링커/약물 조합을 지칭하는 데 사용된다.
용어 "약물 대 항체 비" 또는 "DAR"은 ADC의 항체에 부착된 약물, 예를 들어 Bcl-xL 저해제의 수를 지칭한다.
ADC의 DAR은 1 내지 8의 범위일 수 있지만, 더 큰 로드, 예를 들어 20도 항체 상의 결합 부위의 수에 따라 가능하다. 용어 DAR이 개별 항체 상에 로딩된 약물의 수와 관련하여 사용될 수 있거나, 대안적으로, ADC의 그룹의 평균(average 또는 mean) DAR과 관련하여 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "원하지 않는 ADC 종"은 상이한 약물 로드를 갖는, ADC 종과는 별개인 임의의 약물 로딩 종을 지칭한다. 일 실시 형태에서, 원하지 않는 ADC 종이라는 용어는 6 이상의 약물 로딩 종, 즉, DAR6, DAR7, DAR8, 및 8 초과의 DAR을 포함하여 6 이상의 DAR을 갖는 ADC(즉, 6, 7, 8, 또는 8 초과의 약물 로딩 종)를 지칭할 수 있다. 별개의 실시 형태에서, 원하지 않는 ADC 종이라는 용어는 8 이상의 약물 로딩 종, 즉, DAR8, 및 8 초과의 DAR을 포함하여 8 이상의 DAR을 갖는 ADC(즉, 8, 또는 8 초과의 약물 로딩 종)를 지칭할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "ADC 혼합물"은 ADC의 불균일한 DAR 분포를 포함하는 조성물을 지칭한다. 일 실시 형태에서, ADC 혼합물은 1 내지 8, 예를 들어, 1.5, 2, 4, 6, 및 8의 DAR의 분포를 갖는 ADC(즉, 2, 4, 6, 및 8의 약물 로딩 종)를 함유한다. 특히, 1, 3, 5, 및 7의 DAR이 또한 혼합물에 포함될 수 있도록 분해 생성물이 생성될 수 있다. 또한, 혼합물 내의 ADC도 8 초과의 DAR을 가질 수 있다. ADC 혼합물은 사슬간 디술피드 환원, 이어서 콘쥬게이션에 의해 생성된다. 일 실시 형태에서, ADC 혼합물은 4 이하의 DAR을 갖는 ADC(즉, 4 이하의 약물 로딩 종) 및 6 이상의 DAR을 갖는 ADC(즉, 6 이상의 약물 로딩 종) 둘 다를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "이종이식 분석법"은 인간 종양 이종이식 분석법을 지칭하며, 여기서, 인간 종양 세포는 피부 하에 또는 종양이 기원한 기관 타입 내로, 인간 세포를 거부하지 않는 면역손상된 마우스 내로 이식된다.
용어 "암"은 전형적으로 비조절된 세포 성장을 특징으로 하는 포유류에서의 생리학적 상태를 지칭하거나 설명하려는 것이다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병 또는 림프성 악성 종양을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 그러한 암의 더 특별한 예는 교모세포종, 급성 골수성 백혈병(AML), 비호지킨 림프종(NHL), 비소세포 폐암, 폐암, 결장암, 결장직장암, 두경부암, 유방암(예를 들어, 삼중 음성 유방암), 췌장암, 편평 세포 종양, 편평 세포 암종(예를 들어, 편평 세포 폐암 또는 편평 세포 두경부암), 항문암, 피부암, 및 외음부암을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 B7-H3을 과발현하는 종양(들)을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 B7-H3을 과발현할 가능성이 있는 고형 종양을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 편평 세포 비소세포 폐암(NSCLC)을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 진행성 고형 종양을 포함하는 고형 종양을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 전립선암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 비소세포 폐암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 교모세포종을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 결장암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 두경부암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 신장암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 투명 세포형 신세포 암종을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 신경교종을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 흑색종을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 췌장암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 위암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 난소암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 결장직장암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 신암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 소세포 폐암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 간세포암종을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 하인두 편평 세포 암종을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 신경모세포종을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 유방암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 자궁내막암을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 요로상피 세포 암종을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 급성 골수성 백혈병(AML)을 갖는 환자에게 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체 또는 ADC는 비호지킨 림프종(NHL)을 갖는 환자에게 투여된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "B7-H3 발현 종양"은 B7-H3 단백질을 발현하는 종양을 지칭한다. 일 실시 형태에서, 종양에서의 B7-H3 발현은 종양 세포막의 면역조직화학적 염색을 이용하여 결정되며, 여기서, 종양 샘플에서의 배경 수준보다 많은 임의의 면역조직화학적 염색은 종양이 B7-H3 발현 종양임을 나타낸다. 종양에서의 B7-H3의 발현의 검출 방법은 본 기술 분야에 공지되어 있으며, 면역조직화학적 분석법을 포함한다. 이와는 대조적으로, "B7-H3 음성 종양"은 면역조직화학적 기술에 의해 결정되는 바와 같이 종양 샘플에서의 배경보다 많은 B7-H3 막 염색이 부재하는 종양으로 정의된다.
용어 "과발현하다", "과발현", 또는 "과발현되다"는 대개 암세포에서 정상 세포와 비교하여 검출가능하게 더 큰 수준으로 전사되거나 번역되는 유전자를 지칭한다. 따라서 과발현은 (증가된 전사, 전사 후 프로세싱, 번역, 번역 후 프로세싱, 변경된 안정성, 및 변경된 단백질 분해로 인한) 단백질 및 RNA의 과발현과, 변경된 단백질 트래픽(traffic) 패턴(증가된 핵 위치화)으로 인한 국소적 과발현 둘 다, 및 예를 들어 기질의 효소 가수분해의 증가에서와 같은 증대된 기능적 활성을 지칭한다. 따라서, 과발현은 단백질 수준 또는 RNA 수준 중 어느 하나를 지칭한다. 과발현은 또한 정상 세포 또는 비교용 세포와 비교하여 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상일 수 있다. 특정 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체 또는 ADC는 B7-H3을 과발현할 가능성이 있는 고형 종양의 치료에 사용된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유전자 증폭"은 DNA의 임의의 특정 조각의 다수의 카피(copy)의 생성을 특징으로 하는 세포 과정을 지칭한다. 예를 들어, 종양 세포는 세포 신호 및 때때로 환경적 이벤트의 결과로서 염색체 절편을 증폭시키거나 복제할 수 있다. 유전자 증폭 과정은 그 유전자의 추가 카피의 생성을 초래한다. 일 실시 형태에서, 유전자는 B7-H3이며, 즉, "B7-H3 증폭"이다. 일 실시 형태에서, 본원에 개시된 조성물 및 방법은 B7-H3 증폭 암을 갖는 대상체의 치료에 사용된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "투여하는"은 치료 목적(예를 들어, B7-H3-연관 장애의 치료)의 성취를 위한 물질(예를 들어, 항-B7-H3 항체 또는 ADC)의 전달을 지칭하려는 것이다. 투여 양식은 비경구 투여, 장 투여 및 국소 투여일 수 있다. 비경구 투여는 대개 주사에 의한 것이며, 제한 없이, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 관절낭내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 치료적 방법(예를 들어, 치료 방법)의 맥락에서 용어 "병용 요법" 또는 "병용"은 2가지 이상의 치료 물질, 예를 들어 항-B7-H3 항체 또는 ADC 및 추가 치료제의 투여를 지칭한다. 상기 추가 치료제는 항-B7-H3 항체 또는 ADC의 투여와 함께, 상기 투여 전에, 또는 상기 투여 후에 투여될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 장애, 예를 들어 암, 또는 이의 하나 이상의 증상의 중증도 및/또는 지속 기간을 감소 또는 완화시키거나, 장애의 진행을 방지하거나, 장애의 퇴행을 유발하거나, 장애와 연관된 하나 이상의 증상의 재발, 발생, 발병, 또는 진행을 방지하거나, 장애를 검출하거나, 또 다른 요법제(예를 들면, 예방제 또는 치료제)의 예방적 또는 치료적 효과(들)를 향상시키거나 개선시키기에 충분한 약물, 예를 들어 항체 또는 ADC의 양을 지칭한다. 유효량의 항체 또는 ADC는 예를 들어 종양 성장을 저해하고/하거나(예를 들어, 종양 부피의 증가를 저해하고/하거나), 종양 성장을 감소시키고/시키거나(예를 들어, 종양 부피를 감소시키고/시키거나), 암세포의 수를 감소시키고/시키거나, 암과 연관된 증상 중 하나 이상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 유효량은 예를 들어 무병 생존율(disease free survival; DFS)을 향상시키거나, 전체 생존율(overall survival; Os)을 개선시키거나, 재발 가능성을 감소시킬 수 있다.
다양한 화학 치환체가 하기에 정의되어 있다. 일부 경우에, 치환체 (예컨대, 알킬, 알카닐, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 및 아릴) 내의 탄소 원자의 수는 접두어 "Cx-Cy" 또는 "Cx-y"로 표시되며, 여기서, x는 탄소 원자의 최소 개수이고 y는 최대 개수이다.
따라서, 예를 들어, "C1-C6 알킬"은 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 알킬을 지칭한다. 추가로 예시하면, "C3-C8 시클로알킬"은 3 내지 8개의 탄소 고리 원자를 함유하는 포화 히드로카르빌 고리를 의미한다. 치환체가 "치환된" 것으로 기재되는 경우, 탄소 또는 질소 상의 수소 원자가 비-수소 기로 대체된다. 예를 들어, 치환된 알킬 치환체는 알킬 상의 적어도 하나의 수소 원자가 비-수소 기로 대체된 알킬 치환체이다. 예시하기 위해, 모노플루오로알킬은 하나의 플루오로 라디칼로 치환된 알킬이고, 디플루오로알킬은 2개의 플루오로 라디칼로 치환된 알킬이다. 치환체 상에 하나를 초과하는 치환이 존재하는 경우, (달리 언급되지 않는 한) 각각의 치환은 동일하거나 상이할 수 있는 것으로 인식되어야 한다. 치환체가 "선택적으로 치환된"으로 기재되는 경우, 치환체는 (1) 치환되지 않을 수 있거나 (2) 치환될 수 있다. 가능한 치환체는 C1­C6 알킬, C2­C6 알케닐, C2­C6 알키닐, 아릴, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 할로겐, C1­C6 할로알킬, 옥소, ­CN, NO2, ­ORxa, ­OC(O)Rxz, ­OC(O)N(Rxa)2, ­SRxa, ­S(O)2Rxa, ­S(O)2N(Rxa)2, ­C(O)Rxa, ­C(O)ORxa, ­C(O)N(Rxa)2, ­C(O)N(Rxa)S(O)2Rxz, ­N(Rxa)2, ­N(Rxa)C(O)Rxz, ­N(Rxa)S(O)2Rxz, ­N(Rxa)C(O)O(Rxz), ­N(Rxa)C(O)N(Rxa)2, ­N(Rxa)S(O)2N(Rxa)2, ­(C1­C6 알킬레닐)­CN, ­(C1­C6 알킬레닐)­ORxa, ­(C1­C6 알킬레닐)­OC(O)Rxz, ­(C1­C6 알킬레닐)­OC(O)N(Rxa)2, ­(C1­C6 알킬레닐)­SRxa, ­(C1­C6 알킬레닐)­S(O)2Rxa, ­(C1­C6 알킬레닐)­S(O)2N(Rxa)2, ­(C1-C6 알킬레닐)­C(O)Rxa, ­(C1­C6 알킬레닐)­C(O)ORxa, ­(C1­C6 알킬레닐)­C(O)N(Rxa)2, ­(C1­C6 알킬레닐)­C(O)N(Rxa)S(O)2Rxz, ­(C1­C6 알킬레닐)­N(Rxa)2, ­(C1­C6 알킬레닐)­N(Rxa)C(O)Rxz, ­(C1­C6 알킬레닐)­N(Rxa)S(O)2Rxz, ­(C1­C6 알킬레닐)­N(Rxa)C(O)O(Rxz), ­(C1­C6 알킬레닐)­N(Rxa)C(O)N(Rxa)2, 또는 ­(C1­C6 알킬레닐)­N(Rxa)S(O)2N(Rxa)2를 포함하지만 이에 한정되지 않으며; 여기서, Rxa는, 각각의 경우에, 독립적으로 수소, 아릴, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 헤테로아릴, C1­C6 알킬, 또는 C1­C6 할로알킬이고; Rxz는, 각각의 경우에, 독립적으로 아릴, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 헤테로아릴, C1­C6 알킬 또는 C1­C6 할로알킬이다.
다양한 ADC, 신톤 및 ADC 및/또는 신톤을 포함하는 Bcl-xL 저해제가 치환체를 포함하는 구조 화학식을 참고하여 일부 실시 형태에서 본원에서 개시된다. 원자가 및 안정성이 허용하는 대로, 치환체를 포함하는 다양한 기들이 조합될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명에 의해 구상되는 치환체 및 변수의 조합은 오직 안정한 화합물의 형성을 야기하는 것들이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "안정한"은 제조를 허용하기에 충분한 안정성을 지니며 본 명세서에 상세하게 설명된 목적에 유용하기에 충분한 기간 동안 화합물의 완전성을 유지하는 화합물을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 하기 용어들은 하기 의미를 갖도록 의도된다:
용어 "알콕시"는 화학식 -ORxa의 기를 지칭하며, 여기서, Rxa는 알킬 기이다. 대표적인 알콕시 기는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, tert-부톡시 등을 포함한다.
용어 "알콕시알킬"은 알콕시 기로 치환된 알킬 기를 지칭하며 일반식 -RbORxa (여기서, Rb는 알킬렌 기이고 Rxa는 알킬 기임)로 표시될 수 있다.
그 자체 또는 또 다른 치환체의 일부로서의 용어 "알킬"은 모(parent) 알칸, 알켄 또는 알킨의 단일 탄소 원자로부터 하나의 수소 원자를 제거하여 유도되는 포화 또는 불포화 분지형, 직쇄형 또는 환형 1가 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 전형적인 알킬 기는 메틸; 에타닐, 에테닐, 에티닐과 같은 에틸; 프로판-1-일, 프로판-2-일, 시클로프로판-1-일, 프로프-1-엔-1-일, 프로프-1-엔-2-일, 프로프-2-엔-1-일, 시클로프로프-1-엔-1-일, 시클로프로프-2-엔-1-일, 프로프-1-인-1-일, 프로프-2-인-1-일 등과 같은 프로필; 부탄-1-일, 부탄-2-일, 2-메틸-프로판-1-일, 2-메틸-프로판-2-일, 시클로부탄-1-일, 부트-1-엔-1-일, 부트-1-엔-2-일, 2-메틸-프로프-1-엔-1-일, 부트-2-엔-1-일, 부트-2-엔-2-일, 부타-1,3-디엔-1-일, 부타-1,3-디엔-2-일, 시클로부트-1-엔-1-일, 시클로부트-1-엔-3-일, 시클로부타-1,3-디엔-1-일, 부트-1-인-1-일, 부트-1-인-3-일, 부트-3-인-1-일 등과 같은 부틸 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 특정 포화 수준이 의도되는 경우, 하기에 정의되는 바와 같이 명칭 "알카닐", "알케닐" 및/또는 "알키닐"이 사용된다. 용어 "저급 알킬"은 1 내지 6개의 탄소를 갖는 알킬 기를 지칭한다.
그 자체 또는 또 다른 치환체의 일부로서의 용어 "알카닐"은 모 알칸의 단일 탄소 원자로부터 하나의 수소 원자를 제거하여 유도되는 포화 분지형, 직쇄형 또는 환형 알킬을 지칭한다. 전형적인 알카닐 기는 메틸; 에타닐; 프로판-1-일, 프로판-2-일 (이소프로필), 시클로프로판-1-일 등과 같은 프로파닐; 부탄-1-일, 부탄-2-일 (sec-부틸), 2-메틸-프로판-1-일 (이소부틸), 2-메틸-프로판-2-일 (t-부틸), 시클로부탄-1-일 등과 같은 부타닐 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
그 자체 또는 또 다른 치환체의 일부로서의 용어 "알케닐"은 모 알켄의 단일 탄소 원자로부터 하나의 수소 원자를 제거하여 유도되는, 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 불포화 분지형, 직쇄형 또는 환형 알킬을 지칭한다. 전형적인 알케닐 기는 에테닐; 프로프-1-엔-1-일, 프로프-1-엔-2-일, 프로프-2-엔-1-일, 프로프-2-엔-2-일, 시클로프로프-1-엔-1-일, 시클로프로프-2-엔-1-일과 같은 프로페닐; 부트-1-엔-1-일, 부트-1-엔-2-일, 2-메틸-프로프-1-엔-1-일, 부트-2-엔-1-일, 부트-2-엔-2-일, 부타-1,3-디엔-1-일, 부타-1,3-디엔-2-일, 시클로부트-1-엔-1-일, 시클로부트-1-엔-3-일, 시클로부타-1,3-디엔-1-일 등과 같은 부테닐 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
그 자체 또는 또 다른 치환체의 일부로서의 용어 "알키닐"은 모 알킨의 단일 탄소 원자로부터 하나의 수소 원자를 제거하여 유도되는, 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 불포화 분지형, 직쇄형 또는 환형 알킬을 지칭한다. 전형적인 알키닐 기는 에티닐; 프로프-1-인-1-일, 프로프-2-인-1-일 등과 같은 프로피닐; 부트-1-인-1-일, 부트-1-인-3-일, 부트-3-인-1-일 등과 같은 부티닐 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
용어 "알킬아민"은 화학식 -NHRxa의 기를 지칭하고 "디알킬아민"은 화학식 -NRxaRxa의 기를 지칭하며, 여기서, 각각의 Rxa는, 서로 독립적으로, 알킬 기이다.
용어 "알킬렌"은 2개의 말단 탄소 원자의 각각으로부터 하나의 수소 원자를 제거하여 유도되는, 2개의 말단 1가 라디칼 중심을 갖는 알칸, 알켄 또는 알킨 기를 지칭한다. 전형적인 알킬렌 기는 메틸렌; 및 포화 또는 불포화 에틸렌; 프로필렌; 부틸렌 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 용어 "저급 알킬렌"은 1 내지 6개의 탄소를 갖는 알킬렌 기를 지칭한다.
용어 "헤테로알킬렌"은 하나 이상의 -CH2- 기가 티오, 옥시, 또는 -NRx3- (여기서, Rx3은 수소, 저급 알킬 및 저급 헤테로알킬로부터 선택됨)으로 대체된 2가 알킬렌을 지칭한다. 헤테로알킬렌은 선형, 분지형, 환형, 이환식, 또는 이들의 조합일 수 있으며 최대 10개의 탄소 원자 및 최대 4개의 헤테로원자를 포함할 수 있다. 용어 "저급 헤테로알킬렌"은 1 내지 4개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 알킬렌 기를 지칭한다.
용어 "아릴"은 6 내지 14개의 탄소 고리 원자를 함유하는 방향족 카르보시클릴을 의미한다. 아릴은 단환식일 수 있거나 또는 다환식일 수 있다(즉 하나를 초과하는 고리를 함유할 수 있다). 다환식 방향족 고리의 경우, 다환식 시스템 중 오직 하나의 고리만 방향족일 필요가 있는 한편, 나머지 고리(들)는 포화, 부분 포화 또는 불포화일 수 있다. 아릴의 예는 페닐, 나프탈레닐, 인데닐, 인다닐, 및 테트라히드로나프틸을 포함한다.
용어 "아릴렌"은 2개의 고리 탄소의 각각으로부터 하나의 수소 원자를 제거하여 유도되는, 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는 아릴 기를 지칭한다. 예시적인 아릴렌 기는 페닐렌이다.
알킬 기는 "카르보닐"로 치환될 수 있으며, 이는 단일 알카닐렌 탄소 원자로부터의 2개의 수소 원자가 제거되고 산소 원자에 대한 이중 결합으로 대체됨을 의미한다.
접두어 "할로"는 이 접두어를 포함하는 치환체가 하나 이상의 독립적으로 선택되는 할로겐 라디칼로 치환됨을 나타낸다. 예를 들어, 할로알킬은 적어도 하나의 수소 라디칼이 할로겐 라디칼로 대체된 알킬 치환체를 의미한다. 전형적인 할로겐 라디칼은 클로로, 플루오로, 브로모 및 요오도를 포함한다. 할로알킬의 예는 클로로메틸, 1-브로모에틸, 플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 및 1,1,1-트리플루오로에틸을 포함한다. 치환체가 하나를 초과하는 할로겐 라디칼로 치환되는 경우, (달리 언급되지 않는 한) 그러한 할로겐 라디칼들은 동일하거나 상이할 수 있는 것으로 인식되어야 한다.
용어 "할로알콕시"는 화학식 -ORc (여기서, Rc는 할로알킬임)의 기를 지칭한다.
용어 "헤테로알킬", 용어 "헤테로알카닐", 용어 "헤테로알케닐", 용어 "헤테로알키닐" 및 용어 "헤테로알킬렌"은 각각, 하나 이상의 탄소 원자, 예컨대, 1, 2 또는 3개의 탄소 원자가 각각 독립적으로 동일하거나 상이한 헤테로원자 또는 헤테로원자성 기로 대체된 알킬, 알카닐, 알케닐, 알키닐, 및 알킬렌 기를 지칭한다. 탄소 원자를 대체할 수 있는 전형적인 헤테로원자 및/또는 헤테로원자성 기는 -O-, -S-, -S-O-, -NRc-, -PH, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)NRc-, -S(O)2NRc- 등 (이들의 조합을 포함함)을 포함하지만 이에 한정되지 않으며, 여기서, 각각의 Rc는 독립적으로 수소 또는 C1-C6 알킬이다. 용어 "저급 헤테로알킬"은 1 내지 4개의 탄소 원자 및 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 것을 지칭한다.
용어 "시클로알킬" 및 "헤테로시클릴"은 각각 "알킬" 및 "헤테로알킬" 기의 환형 버전을 지칭한다. 헤테로시클릴 기의 경우, 헤테로원자는 분자의 나머지에 부착되는 위치를 차지할 수 있다. 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리는 단일-고리(단환식)일 수 있거나 2개의 고리를 가질 수 있다(이환식 또는 다환식).
단환식 시클로알킬 및 헤테로시클릴 기는 전형적으로 3 내지 7개의 고리 원자, 더 전형적으로 3 내지 6개의 고리 원자, 더욱 더 전형적으로 5 내지 6개의 고리 원자를 함유할 것이다. 시클로알킬 기의 예는 시클로프로필; 시클로부타닐 및 시클로부테닐과 같은 시클로부틸; 시클로펜타닐 및 시클로펜테닐과 같은 시클로펜틸; 시클로헥사닐 및 시클로헥세닐과 같은 시클로헥실 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 단환식 헤테로시클릴의 예는 옥세탄, 푸라닐, 디히드로푸라닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 티오페닐 (티오푸라닐), 디히드로티오페닐, 테트라히드로티오페닐, 피롤릴, 피롤리닐, 피롤리디닐, 이미다졸릴, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 피라졸릴, 피라졸리닐, 피라졸리디닐, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 옥사졸릴, 옥사졸리디닐, 이소옥사졸리디닐, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 티아졸리닐, 이소티아졸리닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 티오디아졸릴, 옥사디아졸릴 (1,2,3-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴 (푸라자닐), 또는 1,3,4-옥사디아졸릴을 포함함), 옥사트리아졸릴 (1,2,3,4-옥사트리아졸릴 또는 1,2,3,5-옥사트리아졸릴을 포함함), 디옥사졸릴 (1,2,3-디옥사졸릴, 1,2,4-디옥사졸릴, 1,3,2-디옥사졸릴, 또는 1,3,4-디옥사졸릴을 포함함), 1,4-디옥사닐, 디옥소티오모르폴리닐, 옥사티아졸릴, 옥사티올릴, 옥사티올라닐, 피라닐, 디히드로피라닐, 티오피라닐, 테트라히드로티오피라닐, 피리디닐 (아지닐), 피페리디닐, 디아지닐 (피리다지닐 (1,2-디아지닐), 피리미디닐 (1,3-디아지닐), 또는 피라지닐 (1,4-디아지닐)을 포함함), 피페라지닐, 트리아지닐 (1,3,5-트리아지닐, 1,2,4-트리아지닐, 및 1,2,3-트리아지닐을 포함함), 옥사지닐 (1,2-옥사지닐, 1,3-옥사지닐, 또는 1,4-옥사지닐을 포함함), 옥사티아지닐 (1,2,3-옥사티아지닐, 1,2,4-옥사티아지닐, 1,2,5-옥사티아지닐, 또는 1,2,6-옥사티아지닐을 포함함), 옥사디아지닐 (1,2,3-옥사디아지닐, 1,2,4-옥사디아지닐, 1,4,2-옥사디아지닐, 또는 1,3,5-옥사디아지닐을 포함함), 모르폴리닐, 아제피닐, 옥세피닐, 티에피닐, 디아제피닐, 피리도닐 (피리드-2(1H)-오닐 및 피리드-4(1H)-오닐을 포함함), 푸란-2(5H)-오닐, 피리미도닐 (피라미드-2(1H)-오닐 및 피라미드-4(3H)-오닐을 포함함), 옥사졸-2(3H)-오닐, 1H-이미다졸-2(3H)-오닐, 피리다진-3(2H)-오닐, 및 피라진-2(1H)-오닐을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
다환식 시클로알킬 및 헤테로시클릴 기는 하나를 초과하는 고리를 함유하고, 이환식 시클로알킬 및 헤테로시클릴 기는 2개의 고리를 함유한다. 고리들은 가교된 배향, 융합된 배향 또는 스피로 배향일 수 있다. 다환식 시클로알킬 및 헤테로시클릴 기는 가교된 고리, 융합된 고리 및/또는 스피로 고리의 조합을 포함할 수 있다. 스피로시클릭 시클로알킬 또는 헤테로시클릴에서는, 하나의 원자가 2개의 상이한 고리들에 공통으로 있다. 스피로시클로알킬의 예로는 스피로[4.5]데칸이 있고 스피로헤테로시클릴의 예는 스피로피라졸린이 있다.
가교된 시클로알킬 또는 헤테로시클릴에서, 고리들은 적어도 2개의 공통 비-인접 원자를 공유한다. 가교된 시클로알킬의 예는 아다만틸 및 노르보르나닐 고리를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 가교된 헤테로시클릴의 예는 2-옥사트리시클로[3.3.1.13,7]데카닐을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
융합 고리 시클로알킬 또는 헤테로시클릴에서는, 2개의 고리가 하나의 공통 결합을 공유하도록 2개의 고리가 함께 융합된다. 융합 고리 시클로알킬의 예는 데칼린, 나프틸렌, 테트랄린, 및 안트라센을 포함한다. 2개 또는 3개의 고리를 함유하는 융합 고리 헤테로시클릴의 예는 이미다조피라지닐 (이미다조[1,2-a]피라지닐을 포함함), 이미다조피리디닐 (이미다조[1,2-a]피리디닐을 포함함), 이미다조피리다지닐 (이미다조[1,2-b]피리다지닐을 포함함), 티아졸로피리디닐 (티아졸로[5,4-c]피리디닐, 티아졸로[5,4-b]피리디닐, 티아졸로[4,5-b]피리디닐, 및 티아졸로[4,5-c]피리디닐을 포함함), 인돌리지닐, 피라노피롤릴, 4H-퀴놀리지닐, 퓨리닐, 나프티리디닐, 피리도피리디닐 (피리도[3,4-b]-피리디닐, 피리도[3,2-b]-피리디닐, 또는 피리도[4,3-b]-피리디닐을 포함함), 및 프테리디닐을 포함한다. 융합 고리 헤테로시클릴의 다른 예는 벤조-융합된 헤테로시클릴, 예컨대 디히드로크로메닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 인돌릴, 이소인돌릴 (이소벤즈아졸릴, 슈도이소인돌릴), 인돌레니닐 (슈도인돌릴), 이소인다졸릴 (벤즈피라졸릴), 벤즈아지닐 (퀴놀리닐 (1-벤즈아지닐) 또는 이소퀴놀리닐 (2-벤즈아지닐)을 포함함), 프탈아지닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 벤조디아지닐 (신놀리닐 (1,2-벤조디아지닐) 또는 퀴나졸리닐 (1,3-벤조디아지닐)을 포함함), 벤조피라닐 (크로마닐 또는 이소크로마닐을 포함함), 벤족사지닐 (1,3,2-벤족사지닐, 1,4,2-벤족사지닐, 2,3,1-벤족사지닐, 또는 3,1,4-벤족사지닐을 포함함), 벤조[d]티아졸릴, 및 벤즈이속사지닐 (1,2-벤즈이속사지닐 또는 1,4-벤즈이속사지닐을 포함함)을 포함한다.
용어 "시클로알킬렌"은 2개의 고리 탄소의 각각으로부터 하나의 수소 원자를 제거하여 유도되는, 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는 시클로알킬을 지칭한다.
예시적인 시클로알킬렌 기는
Figure pct00065
를 포함한다.
용어 "헤테로아릴"은 5 내지 14개의 고리 원자를 함유하는 방향족 헤테로시클릴을 지칭한다. 헤테로아릴은 단일 고리 또는 2 내지 3개의 접합 고리일 수 있다. 헤테로아릴의 예는 피리딜, 피라질, 피리미디닐, 피리다지닐, 및 1,3,5-, 1,2,4- 또는 1,2,3-트리아지닐과 같은 6원 고리; 트리아졸릴, 피롤릴, 이미다질, 푸라닐, 티오페닐, 피라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 1,2,3-, 1,2,4-, 1,2,5-, 또는 1,3,4-옥사디아졸릴 및 이소티아졸릴과 같은 5원 고리 치환체; 이미다조피라지닐 (이미다조[1,2-a]피라지닐을 포함함), 이미다조피리디닐 (이미다조[1,2-a]피리디닐을 포함함), 이미다조피리다지닐 (이미다조[1,2-b]피리다지닐을 포함함), 티아졸로피리디닐 (티아졸로[5,4-c]피리디닐, 티아졸로[5,4-b]피리디닐, 티아졸로[4,5-b]피리디닐, 및 티아졸로[4,5-c]피리디닐을 포함함), 벤조[d]티아졸릴, 벤조티오푸라닐, 벤즈이속사졸릴, 벤족사졸릴, 퓨리닐, 및 안트라닐릴과 같은 6/5원 접합 고리 치환체; 및 벤조피라닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 신놀리닐, 퀴나졸리닐, 및 벤족사지닐과 같은 6/6원 접합 고리를 포함한다. 헤테로아릴은 또한 피리도닐 (피리드-2(1H)-오닐 및 피리드-4(1H)-오닐을 포함함), 피리미도닐 (피라미드-2(1H)-오닐 및 피라미드-4(3H)-오닐을 포함함), 피리다진-3(2H)-오닐 및 피라진-2(1H)-오닐과 같은, 방향족 (4N+2 pi 원자) 공명 공여체(resonance contributor)를 갖는 헤테로사이클일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "술포네이트"는 술폰산의 염 또는 에스테르를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "메틸 술포네이트"는 술폰산 기의 메틸 에스테르를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "카르복실레이트"는 카르복실산의 염 또는 에스테르를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "폴리올"은, 독립적으로 또는 단량체 단위의 일부분으로서 2개 초과의 히드록실 기를 함유하는 기를 의미한다. 폴리올은 환원된 C2-C6 탄수화물, 에틸렌 글리콜, 및 글리세린을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
"G1"과 관련하여 사용될 때 용어 "당"은 단당류 및 이당류 부류의 O-글리코시드, N-글리코시드, S-글리코시드 및 C-글리코시드 (C-글리코실) 탄수화물 유도체를 포함하며 천연 공급원으로부터 유래된 것일 수 있거나 근본적으로 합성된 것일 수 있다. 예를 들어 "G1"과 관련하여 사용될 때 "당"은 특히 글루쿠론산, 갈락투론산, 갈락토스, 및 글루코스로부터 유도된 것들과 같은 그러나 그에 한정되지 않는 유도체를 포함한다. 적합한 당 대체물은 히드록실, 아민, 카르복실산, 술폰산, 포스폰산, 에스테르, 및 에테르를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
용어 "NHS 에스테르"는 카르복실산의 N-히드록시숙신이미드 에스테르 유도체를 의미한다.
용어 "아민"은 환형 버전을 비롯한 1차, 2차 및 3차 지방족 아민을 포함한다.
"또는 이들의 염"과 관련하여 사용될 때 용어 '염'은, 알칼리 금속 염을 형성하는 데 그리고 유리 산 또는 유리 염기의 부가염을 형성하는 데 통상 사용되는 염을 포함한다. 일반적으로, 이들 염은 전형적으로, 예를 들어, 적절한 산 또는 염기를 본 발명의 화합물과 반응시킴으로써 통상적인 수단에 의해 제조될 수 있다.
염이 (예를 들어, 시험관 내에서 사용되는 것과 대조적으로) 환자에 투여되도록 의도되는 경우, 염은 바람직하게는 제약상 허용가능하고/하거나 생리학적으로 상용성이다. 용어 "제약상 허용가능한"은 이 특허 출원에서, 수식된 명사가 의약품으로 또는 의약품의 일부로 사용하기에 적절함을 의미하도록 형용사로 사용된다. 용어 "제약상 허용가능한 염"은 알칼리 금속 염을 형성하는 데 그리고 유리 산 또는 유리 염기의 부가염을 형성하는 데 통상 사용되는 염을 포함한다. 일반적으로, 이들 염은 전형적으로, 예를 들어, 적절한 산 또는 염기를 본 발명의 화합물과 반응시킴으로써 통상적인 수단에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 다양한 태양이 하기 하위섹션에서 더 상세하게 기재된다.
II. 항-B7-H3 항체
본 발명의 일 태양은 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 키메라 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다. 또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 본원에 개시된 항-B7-H3 항체, 및 Bcl-xL 저해제 또는 아우리스타틴과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 적어도 하나의 약물(들)을 포함하는 항체 약물 콘쥬게이트(ADC)를 특징으로 한다. 본 발명의 항체 또는 ADC는 시험관 내에서의 야생형 인간 B7-H3에의 결합, B7-H3을 발현하는 종양 세포 상의 야생형 인간 B7-H3에의 결합, 및 마우스 모델에서의 이종이식 종양 성장의 감소 또는 저해를 포함하지만 이에 한정되지 않는 특성을 갖는다.
본 발명의 일 태양은 링커를 통하여 약물에 콘쥬게이션된 항-hB7-H3 항체를 포함하는 항-인간 B7-H3 (항-hB7-H3) 항체 약물 콘쥬게이트(ADC)를 특징으로 하며, 여기서, 약물은 Bcl-xL 저해제이다. ADC에서 사용될 수 있는 예시적인 항-B7-H3 항체 (및 이의 서열)가 본원에 개시된다.
본원에 개시된 항-B7-H3 항체는 이 항체에 부착된 세포독성 Bcl-xL 약물이 B7-H3-발현 세포, 특히 B7-H3 발현 암세포로 전달될 수 있도록 B7-H3에 결합하는 능력을 갖는 본 발명의 ADC를 제공한다.
용어 "항체"가 전체적으로 사용되지만, 항체 단편(즉, 항-B7-H3 항체의 항원 결합 부분)이 본 발명에 또한 포함되고, 전체적으로 기술된 실시 형태(방법 및 조성물)에 포함될 수 있음이 주지되어야 한다. 예를 들어, 항-B7-H3 항체 단편은 본원에 개시된 Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션될 수 있다. 따라서, 특정 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체의 항체 단편이 링커(하기 섹션 III.A에 기술된 것을 포함함)를 통하여 Bcl-xL 저해제(하기 섹션 III.A에 기술된 것을 포함함)에 콘쥬게이션된 것은 본 발명의 범주 내에 있다. 특정 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체 결합 부분은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 디술피드 연결된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 또는 디아바디이다.
II.A . 항-B7-H3 키메라 항체
키메라 항체는 항체의 상이한 부분이 상이한 동물 종으로부터 유래된 분자, 예컨대 쥐과 단클론 항체로부터 유래된 가변 영역 및 인간 면역글로불린 불변 영역을 갖는 항체이다. 키메라 항체의 생성 방법은 본 기술 분야에 공지되어 있다. 예를 들어 문헌[Morrison, Science 229:1202 (1985)]; 문헌[Oi et al., BioTechniques 4:214 (1986)]; 문헌[Gillies et al., (1989) J. Immunol . Methods 125:191-202]; 미국 특허 제5,807,715호; 미국 특허 제4,816,567호; 및 미국 특허 제4,816,397호를 참조하는데, 이들은 본원에 그 전체가 참고로 포함된다. 게다가, 적절한 생물학적 활성의 인간 항체 분자로부터의 유전자와 함께 적절한 항원 특이성의 마우스 항체 분자로부터의 유전자의 스플라이싱에 의한 "키메라 항체"의 생성용으로 개발된 기술(각각이 본원에 그 전체가 참고로 포함된 문헌[Morrison et al., 1984, Proc . Natl . Acad . Sci. 81:851-855]; 문헌[Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608]; 문헌[Takeda et al., 1985, Nature 314:452-454])이 이용될 수 있다.
실시예 3에 기술된 바와 같이, 인간 및 시노몰구스 B7-H3에 대하여 높은 특이적 결합 활성을 갖는 18가지의 항-B7-H3 쥐과 항체가 확인되었다. 인간 면역글로불린 불변 영역의 맥락에서 키메라 항체가 이러한 18가지의 항체로부터 생성되었다.
따라서, 일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 1, 9, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 87, 95, 101, 또는 108에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는 서열 번호 5, 13, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 91, 98, 105, 또는 112에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 1에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 5에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 2에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 3에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 4에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 6에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 8에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 9에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 13에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 11에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 14에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 16에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 20에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 17에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 18에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 19에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 21에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 22에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 23에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 24에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 28에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 25에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 26에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 27에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 29에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 30에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 31에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 32에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 36에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 33에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 34에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 35에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 37에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 38에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 182에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 40에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 44에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 41에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 42에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 43에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 45에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 46에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 47에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 48에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 52에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 49에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 50에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 51에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 53에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 54에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 55에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 56에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 60에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 57에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 58에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 59에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 61에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 62에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 63에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 64에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 68에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 65에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 66에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 67에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 69에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 70에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 71에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 72에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 76에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 73에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 74에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 75에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 77에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 78에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 79에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 80에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 84에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 81에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 82에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 83에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 85에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 86에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 87에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 91에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 88에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 89에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 90에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 92에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 93에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 94에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 95에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 98에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 49에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 96에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 97에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 99에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 93에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 100에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 101에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 105에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 102에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 103에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 104에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 106에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 46에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 107에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 108에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 112에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 109에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 110에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 111에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 113에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 114에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 115에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
II.B . 인간화 항-B7-H3 항체
본원에 개시된 키메라 항체는 인간화 항-B7-H3 항체의 생성에서 사용될 수 있다. 예를 들어, 키메라 항-B7-H3 항체 chAb1-chAb18의 생성 및 특성화 후, 항체 chAb3, chAb13, 및 chAb18이 인간화용으로 선택되었다. 구체적으로, 6가지의 상이한 인간화 항체가 chAb3을 기반으로 하여 생성되었으며(본원에서 huAb3v1, huAb3v2, huAb3v3, huAb3v4, huAb3v5, 및 huAb3v6으로 지칭됨(실시예 12 및 실시예 13 참조), 9가지의 상이한 인간화 항체가 chAb13을 기반으로 하여 생성되었으며(본원에서 huAb13v1, huAb13v2, huAb13v3, huAb13v4, huAb13v5, huAb13v6, huAb13v7, huAb13v8, huAb13v9로 지칭됨), 10가지의 상이한 인간화 항체가 chAb18을 기반으로 하여 생성되었다(본원에서 huAb18v1, huAb18v2, huAb18v3, huAb18v4, huAb18v5, huAb18v6, huAb18v7, huAb18v8, huAb18v9, 및 huAb18v10으로 지칭됨(실시예 9 및 실시예 10 참조)). 표 8, 12, 16, 18, 및 19는 각각 인간화 chAb3, chAb13, 및 chAb18의 CDR, VH 및 VL 영역의 아미노산 서열을 제공한다.
일반적으로, 인간화 항체는 비-인간 종으로부터의 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR) 및 인간 면역글로불린 분자로부터의 프레임워크 영역을 갖는 요망되는 항원에 결합하는 비-인간 종 항체로부터의 항체 분자이다. 알려져 있는 인간 Ig 서열이 예를 들어, 각각 전부가 본원에 참고로 포함된 www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez- /query.fcgi; www.atcc.org/phage/hdb.html; www.sciquest.com/; www.abcam.com/; www.antibodyresource.com/onlinecomp.html; www.public.iastate.edu/.about.pedro/research_tools.html; www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html; www.whfreeman.com/immunology/CH- 05/kuby05.htm; www.library.thinkquest.org/12429/Immune/Antibody.html; www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/; www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/m- ikeimages.html; www.antibodyresource.com/; mcb.harvard.edu/BioLinks/Immuno- logy.html.www.immunologylink.com/; pathbox.wustl.edu/.about.hcenter/index.- html; www.biotech.ufl.edu/.about.hcl/; www.pebio.com/pa/340913/340913.html- ; www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/; www.m.ehime-u.acjp/.about.yasuhito- /Elisa.html; www.biodesign.com/table.asp; www.icnet.uk/axp/facs/davies/lin- ks.html; www.biotech.ufl.edu/.about.fccl/protocol.html; www.isac-net.org/sites_geo.html; aximtl.imt.uni-marburg.de/.about.rek/AEP- Start.html; baserv.uci.kun.nl/.about.jraats/linksl.html; www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/; www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/pu- blic/INTRO.html; www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html; imgt.cnusc.fr:8104/; www.biochem.ucl.ac.uk/.about.martin/abs/index.html; antibody.bath.ac.uk/; abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html; www.unizh.ch/.about.honegger/AHOsem- inar/Slide01.html; www.cryst.bbk.ac.uk/.about.ubcg07s/; www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm; www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/h- umanisation/TAHHP.html; www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html; www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html; www.cryst.bioc.cam.ac.uk/.abo- ut.fmolina/Web-pages/Pept/spottech.html; www.jerini.de/fr roducts.htm; www.patents.ibm.com/ibm.html.문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983)]에 개시되어 있다. 이러한 임포트된 서열을 사용하여, 본 기술 분야에 알려져 있는 바와 같이 면역원성을 감소시키거나, 결합성, 친화성, 온-속도, 오프-속도, 친화력, 특이성, 반감기 또는 임의의 다른 적합한 특징을 감소시키거나, 향상시키거나, 변경시킬 수 있다.
인간 프레임워크 영역 내의 프레임워크 잔기를 CDR 공여자 항체로부터의 상응하는 잔기로 치환하여, 항원 결합을 변경시킬 수 있으며, 바람직하게는 이를 개선시킬 수 있다. 이러한 프레임워크 치환은 본 기술 분야에 잘 알려진 방법에 의해, 예를 들어, 항원 결합에 중요한 프레임워크 잔기를 확인하기 위한 CDR 및 프레임워크 잔기의 상호작용의 모델링 및 특정 위치에서의 특이한 프레임워크 잔기의 확인을 위한 서열 비교에 의해 확인된다. (예를 들어, 퀸(Queen) 등의 미국 특허 제No. 5,585,089호; 문헌[Riechmann et al., Nature 332:323 (1988)](이들은 본원에 그 전체가 참고로 포함됨) 참조). 3차원 면역글로불린 모델이 일반적으로 이용 가능하며, 이는 당업자에게 친숙하다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 배좌 구조를 예시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램이 이용 가능하다. 이들 디스플레이의 검토에 의해, 후보 면역글로불린 서열의 기능에서의 잔기의 가능한 역할의 분석, 즉, 후보 면역글로불린의 항원에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석이 가능하게 된다. 이러한 방식으로, FR 잔기를 선택하고 콘센서스 및 임포트 서열로부터 조합하여, 요망되는 항체 특징, 예컨대 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화성이 달성되게 할 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기는 항원 결합에 영향을 미치는데 직접적으로, 그리고 가장 상당하게 연루된다. 항체는 다음에 기술된 것과 같은 그러나 이에 한정되지 않는, 본 기술 분야에 알려져 있는 다양한 기술을 이용하여 인간화될 수 있다: 문헌[Jones et al., Nature 321:522 (1986)]; 문헌[Verhoeyen et al., Science 239:1534 (1988)], 문헌[Sims et al., J. Immunol. 151: 2296 (1993)]; 문헌[Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901 (1987)], 문헌[Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:4285 (1992)]; 문헌[Presta et al., J. Immunol. 151:2623 (1993)], 문헌[Padlan, Molecular Immunology 28(4/5):489-498 (1991)]; 문헌[Studnicka et al., Protein Engineering 7(6):805-814 (1994)]; 문헌[Roguska. et al. , PNAS 91:969-973 (1994)]; 국제 공개 제91/09967호, PCT/: US98/16280, US96/18978, US91/09630, US91/05939, US94/01234, GB89/01334, GB91/01134, GB92/01755; 국제 공개 제90/14443호, 국제 공개 제90/14424호, 국제 공개 제90/14430호, 유럽 특허 제229246호, 유럽 특허 제592,106호; 유럽 특허 제519,596호, 유럽 특허 제239,400호, 미국 특허 제5,565,332호, 미국 특허 제5,723,323호, 미국 특허 제5,976,862호, 미국 특허 제5,824,514호, 미국 특허 제5,817,483호, 미국 특허 제5814476호, 미국 특허 제5763192호, 미국 특허 제5723323호, 미국 특허 제5,766886호, 미국 특허 제5,714,352호, 미국 특허 제6,204,023호, 미국 특허 제6,180,370호, 미국 특허 제5,693,762호, 미국 특허 제5,530,101호, 미국 특허 제5,585,089호, 미국 특허 제5,225,539호; 미국 특허 제4,816,567호(각각 전부가 본원에 참고로 포함됨)(그 안에 인용된 참고 문헌을 포함함).
chAb3으로부터 유도된 인간화 항-B7-H3 항체
chAb3을 기반으로 하는 6가지의 인간화 항체가 생성되었다. 각각의 서열은 다음과 같다:
A) huAb3v1 (서열 번호 125에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 11, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 128에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 14, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
B) huAb3v2 (서열 번호 127에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 11, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 128에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 14, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
C) huAb3v3 (서열 번호 126에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 11, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 129에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 14, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
D) huAb3v4 (서열 번호 125에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 11, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 130에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 14, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
E) huAb3v5 (서열 번호 127에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 11, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 130에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 14, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열); 및
F) huAb3v6 (서열 번호 126에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 11, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 130에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 14, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열).
chAb3의 상기 6가지 인간화 버전 중, huAb3v2가 경쇄 CDR1에서의 또는 중쇄 CDR2에서의 잠재적인 탈아미드화 또는 이성질체화 부위의 제거를 위하여 추가 변경용으로 선택되었다. 인간화 항체 huAb3v2의 9가지의 변이체가 생성되었으며, 이는 본원에서 huAb3v2.1, huAb3v2.2, huAb3v2.3, huAb3v2.4, huAb3v2.5, huAb3v2.6, huAb3v2.7, huAb3v2.8, 및 huAb3v2.9로 지칭된다(CDR 및 가변 도메인 서열은 표 16에 제공됨). huAb3v2 항체의 상기 9가지의 변이체는 다음을 포함한다:
A) huAb3v2.1 (서열 번호 131에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 132, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 133에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 134, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
B) huAb3v2.2 (서열 번호 131에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 132, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 135에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 136, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
C) huAb3v2.3 (서열 번호 131에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 132, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 137에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 138, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
D) huAb3v2.4 (서열 번호 139에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 140, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 133에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 134, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
E) huAb3v2.5 (서열 번호 139에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 140, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 135에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 136, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
F) huAb3v2.6 (서열 번호 139에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 140, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 137에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 138, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열;
G) huAb3v2.7 (서열 번호 141에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 142, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 133에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 134, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
H) huAb3v2.8 (서열 번호 141에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 142, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 135에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 136, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열); 및
I) huAb3v2.9 (서열 번호 141에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 10, 142, 및 12에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 137에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 138, 7, 및 15에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열).
따라서, 일 태양에서, 본 발명은 chAb3으로부터 유도된 인간화 항체로부터의 가변 및/또는 CDR 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 Ab3으로부터 유도된 항-B7-H3 항체가 개선된 특징, 예를 들어, 단리된 B7-H3 단백질에의 개선된 결합 친화성 및 B7-H3 발현 세포에의 개선된 결합성을 가짐을 특징으로 하며, 이는 하기 실시예에 기술된 바와 같다. 이러한 신규 항체는 본원에서 "Ab3 변이 항체"로 총칭된다. 일반적으로, Ab3 변이 항체는 Ab3과 동일한 에피토프 특이성을 지닌다. 다양한 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 B7-H3의 생물학적 기능을 조절할 수 있다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 125, 126, 127, 131, 139, 또는 141에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는 서열 번호 128, 129, 130, 133, 135, 또는 137에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명의 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것으로서 이는 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 11, 132, 140, 또는 142에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 14, 134, 136, 또는 138에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 125에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 128에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 127에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 128에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 126에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 129에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 125에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 130에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 127에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 130에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 126에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 130에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 11에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 14에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 131에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 133에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 132에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 134에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 131에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 132에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 136에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 131에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 137에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 132에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 138에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 139에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 133에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 140에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 134에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 139에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 140에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 136에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 170의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 ? 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 139에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 137에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 140에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 138에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 서열 번호 172의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 ? 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다. 일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 141에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 133에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 142에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 134에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 141에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 142에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 136에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 141에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 137에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 142에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 138에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
chAb13으로부터 유도된 인간화 항-B7-H3 항체
chAb13을 기반으로 하여 생성된 9가지의 상이한 인간화 항체는 다음을 포함한다:
A) huAb13v1 (서열 번호 147에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 33, 34, 및 35에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 144에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 37, 38, 및 39에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
B) huAb13v2 (서열 번호 146에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 33, 34, 및 35에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 143에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 37, 38, 및 39에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
C) huAb13v3 (서열 번호 146에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 33, 34, 및 35에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 144에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 37, 38, 및 39에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
D) huAb13v4 (서열 번호 146에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 33, 34, 및 35에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 145에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 37, 38, 및 39에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
E) huAb13v5 (서열 번호 147에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 33, 34, 및 35에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 143에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 37, 38, 및 39에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
F) huAb13v6 (서열 번호 147에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 33, 34, 및 35에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 145에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 37, 38, 및 39에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열;
G) huAb13v7 (서열 번호 148에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 33, 34, 및 35에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 143에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 37, 38, 및 39에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
H) huAb13v8 (서열 번호 148에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 33, 34, 및 35에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 144에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 37, 38, 및 39에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
I) huAb13v9 (서열 번호 148에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 33, 34, 및 35에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 145에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 37, 38, 및 39에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열).
이와 같이, 일 태양에서, 본 발명은 chAb13으로부터 유도된 인간화 항체로부터의 가변 및/또는 CDR 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 chAb13으로부터 유도된 항-B7-H3 항체가 개선된 특징, 예를 들어, 단리된 B7-H3 단백질에의 개선된 결합 친화성 및 B7-H3 발현 세포에의 개선된 결합성을 가짐을 특징으로 하며, 이는 하기 실시예에 기술된 바와 같다. 이러한 신규 항체는 본원에서 "Ab13 변이 항체"로 총칭된다. 일반적으로, Ab13 변이 항체는 Ab13과 동일한 에피토프 특이성을 지닌다. 다양한 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 B7-H3의 생물학적 기능을 조절할 수 있다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 146, 147, 또는 148에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는 서열 번호 143, 144, 또는 145에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명의 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것으로서 이는 서열 번호 33에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 34에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 35에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 37에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 38에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 39에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 147에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 huAb13v1의 가변 영역에서의 기재된 CDR 서열들(서열 번호 144 및 147)을 포함하는 항-B7H3 항체를 제공한다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 169의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 146에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 143에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 146에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 146에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 145에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 147에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 143에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 147에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 145에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 148에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 143에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 148에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 148에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 145에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
chAb18로부터 유도된 인간화 항-B7-H3 항체
chAb18을 기반으로 하여 생성된 10가지의 상이한 인간화 항체는 다음을 포함한다:
A) huAb18v1 (서열 번호 116에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 25, 26, 및 27에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 120에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 29, 30, 및 31에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
B) huAb18v2 (서열 번호 118에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 25, 119, 및 27에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 120에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 29, 30, 및 31에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
C) huAb18v3 (서열 번호 117에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 25, 26, 및 27에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 121에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 29, 30, 및 31에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
D) huAb18v4 (서열 번호 118에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 25, 119, 및 27에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 121에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 29, 30, 및 31에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
E) huAb18v5 (서열 번호 116에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 25, 26, 및 27에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 123에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 29, 30, 및 31에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
F) huAb18v6 (서열 번호 118에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 25, 119, 및 27에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 123에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 29, 30, 및 31에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열;
G) huAb18v7 (서열 번호 118에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 25, 119, 및 27에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 124에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 29, 30, 및 31에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
H) huAb18v8 (서열 번호 117에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 25, 26, 및 27에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 122에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 29, 30, 및 31에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열);
I) huAb18v9 (서열 번호 117에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 25, 26, 및 27에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 124에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 29, 30, 및 31에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및
J) huAb18v10 (서열 번호 118에 기재된 VH 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 25, 119, 및 27에 기재된 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열; 및 서열 번호 122에 기재된 VL 아미노산 서열 및 각각 서열 번호 29, 30, 및 31에 기재된 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3 아미노산 서열).
이와 같이, 일 태양에서, 본 발명은 chAb18로부터 유도된 인간화 항체로부터의 가변 및/또는 CDR 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 Ab18로부터 유도된 항-B7-H3 항체가 개선된 특징, 예를 들어, 단리된 B7-H3 단백질에의 개선된 결합 친화성 및 B7-H3 발현 세포에의 개선된 결합성을 가짐을 특징으로 하며, 이는 하기 실시예에 기술된 바와 같다. 이러한 신규 항체는 본원에서 "Ab18 변이 항체"로 총칭된다. 일반적으로, Ab18 변이 항체는 Ab18과 동일한 에피토프 특이성을 지닌다. 다양한 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 B7-H3의 생물학적 기능을 조절할 수 있다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 116, 117, 또는 118에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는 서열 번호 120, 121, 122, 123 또는 124에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명의 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것으로서 이는 서열 번호 25에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 26 또는 119에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 27에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 29에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 30에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 31에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 116에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 120에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 25에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 26에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 27에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 29에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 30에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 31에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 118에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 120에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 (a) 서열 번호 25에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 119에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 27에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 29에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 30에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 31에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 117에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 118에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 121에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 116에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 123에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 118에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 123에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 118에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 124에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 117에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 117에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 124에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 118에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 122에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
일 태양에서, 본 발명은 서열 번호 116, 117, 118, 146, 147, 148, 125, 126, 127, 131, 139, 또는 141에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는 서열 번호 120, 121, 122, 123, 124, 143, 144, 145, 128, 129, 130, 133, 135, 또는 137에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 인간화 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명의 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것으로서 이는 서열 번호 10, 25, 또는 33에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 11, 26, 34, 119, 132, 140, 또는 142에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 12, 27, 또는 35에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 14, 29, 37, 134, 136, 또는 138에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 7, 30, 또는 38에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 15, 31 또는 39에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 태양에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은, 항-B7-H3 항체 또는 이의 단편과 특이적으로 경쟁하는 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서, 상기 경쟁은 상기 항체, 인간 B7-H3 폴리펩티드, 및 항-B7-H3 항체 또는 이의 단편을 사용하여 경쟁적 결합 분석에서 탐지될 수 있다.
특정 실시 형태에서, 경쟁 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 huAb13v1과 경쟁하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 B7-H3의 세포외 도메인(서열 번호 152)에 약 1 x 10-6 M 이하의 해리 상수(KD)로 결합하며, 이는 표면 플라스몬 공명으로 결정되는 바와 같다. 대안적으로, 본 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 약 1 x 10-6 M 내지 약 1 x 10-11 M의 KD로 인간 B7-H3에 결합하며, 이는 표면 플라스몬 공명으로 결정되는 바와 같다. 추가 대안에서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 약 1 x 10-6 M 내지 약 1 x 10-7 M의 KD로 인간 B7-H3에 결합하며, 이는 표면 플라스몬 공명으로 결정되는 바와 같다. 대안적으로, 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 약 1 x 10-6 M 내지 약 5 x 10-11 M, 약 1 x 10-6 M 내지 약 5 x 10-10 M의 KD; 약 1 x 10-6 M 내지 약 1 x 10-9 M의 KD; 약 1 x 10-6 M 내지 약 5 x 10-9 M의 KD; 약 1 x 10-6 M 내지 약 1 x 10-8 M의 KD; 약 1 x 10-6 M 내지 약 5 x 10-8 M의 KD; 약 1 x 10-7 M 내지 약 3.4 x 10-11 M의 KD; 약 5.9 x 10-7 M 내지 약 2.2 x 10-7 M의 KD로 인간 B7-H3에 결합하며, 이는 표면 플라스몬 공명으로 결정되는 바와 같다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 약 1 x 10-6 M 이하의 KD로 인간 B7-H3(서열 번호 149)에 결합하며, 이는 표면 플라스몬 공명으로 결정되는 바와 같다. 대안적으로, 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 약 8.2 x 10-9 M 내지 약 6.3 x 10-10 M의 KD; 약 8.2 x 10-9 M 내지 약 2.0 x 10-9 M의 KD; 약 2.3 x 10-9 M 내지 약 1.5 x 10-10 M의 KD로 인간 B7-H3(서열 번호 149)에 결합하며, 이는 표면 플라스몬 공명으로 결정되는 바와 같다.
전술한 것은 본 발명에 따라 단리되고 본원에 제공된 서열 표에 열거된 CDR 서열을 포함하는 항원 결합 폴리펩티드를 포함하는 신규한 패밀리의 B7-H3 결합 단백질을 확립한다.
본원에 제공된 항-B7-H3 항체는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있으며, 여기서, 이러한 CDR 서열들 중 하나 이상은 본원에 개시된 항체(예를 들어, huAb13v1 또는 huAb3v2.5)를 기반으로 한 특정된 아미노산 서열, 또는 이의 보존적 변경을 포함하고, 항체는 본원에 개시된 항-B7-H3 항체의 원하는 기능적 특성을 지닌다. 따라서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있으며, 여기서, (a) 중쇄 가변 영역 CDR3 서열은 서열 번호 12 또는 35의 서열, 및 이의 보존적 변경, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4 또는 1 내지 5개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고; (b) 경쇄 가변 영역 CDR3 서열은 서열 번호 15 또는 39의 서열, 및 이의 보존적 변경, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4 또는 1 내지 5개의 보존적 아미노산 치환을 포함하며; (c) 항체는 B7-H3에 특이적으로 결합하고, (d) 항체는 본원에 개시된 다음의 기능적 특성들 중 1, 2, 3, 4, 5, 6가지 또는 이들 전부, 예를 들어 용해성 인간 B7-H3에의 결합성을 나타낸다. 일 실시 형태에서, 중쇄 가변 영역 CDR2 서열은 서열 번호 140 또는 34의 서열, 및 이의 보존적 변경, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4 또는 1 내지 5개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고; 경쇄 가변 영역 CDR2 서열은 서열 번호 7 또는 38의 서열, 및 이의 보존적 변경, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4 또는 1 내지 5개의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시 형태에서, 중쇄 가변 영역 CDR1 서열은 서열 번호 10 또는 33의 서열, 및 이의 보존적 변경, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4 또는 1 내지 5개의 보존적 아미노산 치환을 포함하고; 경쇄 가변 영역 CDR1 서열은 서열 번호 136, 138, 또는 37의 서열, 및 이의 보존적 변경, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4 또는 1 내지 5개의 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
보존적 아미노산 치환은 또한 CDR 이외의 항체 부분에서, 또는 CDR 외에도 항체 부분에서 이루어질 수 있다. 예를 들어, 보존적 아미노산 변경은 프레임워크 영역에서 또는 Fc 영역에서 이루어질 수 있다. 가변 영역 또는 중쇄 또는 경쇄는 본원에 제공된 항-B7-H3 항체 서열에 비하여 1, 2, 3, 4, 5, 1 내지 2, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25, 또는 1 내지 50개의 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 특정 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 보존적 아미노산 변경과 비-보존적 아미노산 변경의 조합을 포함한다.
hB7-H3과 관련하여 바람직한 B7-H3 결합 및/또는 중화 활성을 갖는 CDR을 생성 및 선발하기 위하여, 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 생성, 및 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 B7-H3 결합 및/또는 중화 특성을 평가하기 위한 본 기술 분야에 공지된 표준 방법이 사용될 수 있으며, 이는 본원에 구체적으로 기술된 것을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
특정 실시 형태에서, 항체는 중쇄 불변 영역, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 IgG 불변 도메인, 인간 IgM 불변 도메인, 인간 IgE 불변 도메인, 및 인간 IgA 불변 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 면역글로불린 불변 도메인을 포함한다. 추가 실시 형태에서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 IgG1 중쇄 불변 영역, IgG2 중쇄 불변 영역, IgG3 불변 영역, 또는 IgG4 중쇄 불변 영역을 갖는다. 바람직하게는 중쇄 불변 영역은 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 IgG4 중쇄 불변 영역이다. 더욱이, 항체는 카파 경쇄 불변 영역 또는 람다 경쇄 불변 영역 중 어느 하나인 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 항체는 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다. 대안적으로, 항체 부분은 예를 들어, Fab 단편 또는 단쇄 Fv 단편일 수 있다.
특정 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체 결합 부분은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 디술피드 연결된 Fv, scFv, 단일 도메인 항체, 또는 디아바디이다.
특정 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 다중특이성 항체, 예를 들어 2특이성 항체이다.
항체 이펙터 기능의 변경을 위한 Fc 부분에서의 아미노산 잔기의 대체가 개시되었었다(본원에 참고로 포함된 윈터(Winter) 등의 미국 특허 제5,648,260호 및 미국 특허 제5,624,821호). 항체의 Fc 부분은 몇몇의 중요한 이펙터 기능, 예를 들어, 사이토카인 유도, ADCC, 포식작용, 보체 의존적 세포독성(CDC) 및 항체 및 항원-항체 복합체의 반감기/제거 속도를 매개한다. 일부 경우에, 이들 이펙터 기능은 치료적 항체에 대해 바람직하지만, 다른 경우에는, 치료 목적에 따라, 불필요하거나 심지어 해로울 수 있다. 특정 인간 IgG 이소타입, 특히, IgG1 및 IgG3은 각각 FcγR 및 보체 C1q에의 결합을 통해 ADCC 및 CDC를 매개한다. 신생아 Fc 수용체(FcRn)는 항체의 순환 반감기를 결정하는 중요한 구성요소이다. 또 다른 실시 형태에서, 적어도 하나의 아미노산 잔기가 항체의 이펙터 기능이 변경되도록 항체의 불변 영역, 예를 들어, 항체의 Fc 영역에서 대체된다.
본 발명의 일 실시 형태는 본원에 개시된 항체의 결합 영역, 예를 들어 huAb13v1의 중쇄 및/또는 경쇄 CCR을 포함하는 재조합 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한다. 본원에 개시된 바와 같은 재조합 CAR은 인간 백혈구 항원(HLA)-독립적 방식으로 항원에 대한 T 세포 특이성을 방향 전환하는 데 사용될 수 있다. 이와 같이, 본 발명의 CAR은 인간 대상체의 종양을 인식하여 공격하도록 상기 대상체 그 자신의 면역 세포를 엔지니어링하는 것을 돕기 위하여 면역요법에서 사용될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제6,410,319호; 미국 특허 제8,389,282호; 미국 특허 제8,822,647호; 미국 특허 제8,906,682호; 미국 특허 제8,911,993호; 미국 특허 제8,916,381호; 미국 특허 제8,975,071호; 및 미국 특허 출원 공개 제20140322275호(이들 각각은 CAR 기술과 관련하여 본원에 참고로 포함됨) 참조). 이러한 유형의 면역요법은 입양 세포 전달(adoptive cell transfer; ACT)로 칭해지며, 필요로 하는 대상체에서의 암 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 항-B7-H3 CAR은 바람직하게는 B7-H3에 특이적인 세포외 항원-결합 도메인, CAR을 T 세포 내에 고정시키는 데 사용되는 막관통 도메인, 및 하나 이상의 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 본 발명의 일 실시 형태에서, CAR은 T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 사슬, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 및 Cd154로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 막관통 도메인을 포함하는 막관통 도메인을 포함한다. 본 발명의 일 실시 형태에서, CAR은 공동자극 도메인, 예를 들어 OX40, CD2, CD27, CD28, CD5, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (Cd137)로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질의 기능성 신호전달 도메인을 포함하는 공동자극 도메인을 포함한다. 본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 본원에 개시된 CDR 또는 가변 영역, 예를 들어, huAb13v1 항체 유래의 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 scFv, 막관통 도메인, 공동자극 도메인(예를 들어, CD28 또는 4-1BB 유래의 기능성 신호전달 도메인), 및 CD3(예를 들어, CD3-제타) 유래의 기능성 신호전달 도메인을 포함하는 신호전달 도메인을 포함한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 본원에 개시된 항체 또는 본원에 개시된 scFv의 항원 결합 영역, 예를 들어 CDR을 포함하는 CAR을 포함하는 T 세포(CAR T 세포로도 지칭됨)를 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 서열 번호 10, 25, 또는 33에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 11, 26, 34, 119, 132, 140, 또는 142에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 12, 27, 또는 35에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 14, 29, 37, 134, 136, 또는 138에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 7, 30, 또는 38에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 15, 31 또는 39에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 11에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 14에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 132에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 134에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 132에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 136에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 132에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 138에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 140에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 134에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 140에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 136에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 140에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 138에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 142에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 134에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 142에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 136에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 (a) 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 142에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 138에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 서열 번호 33에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 34에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 35에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 37에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 38에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 39에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 서열 번호 25에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 26 또는 119에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 27에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 29에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인; 서열 번호 30에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인; 및 서열 번호 31에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 (a) 서열 번호 25에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 26에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 27에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 29에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 30에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 31에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, CAR은 (a) 서열 번호 25에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 119에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 27에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 영역; 및 (a) 서열 번호 29에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR1; (b) 서열 번호 30에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 및 (c) 서열 번호 31에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 일 실시 형태는 표지된 항-B7-H3 항체, 또는 이의 항체 일부를 포함하며, 여기서, 항체는 하나 이상의 기능성 분자(들)(예를 들어, 또 다른 펩티드 또는 단백질)에 연결되거나 유도체화된다. 예를 들어, 표지된 항체는 본 발명의 항체 또는 항체 부분을 (화학적 커플링, 유전자 융합, 비공유적 회합 또는 다른 것에 의해) 하나 이상의 다른 분자 엔티티, 예컨대 또 다른 항체(예를 들어, 2특이성 항체 또는 디아바디), 검출제(detectable agent), 약제(pharmaceutical agent), 항체 또는 항체 부분과, 또 다른 분자(예컨대 스트렙타비딘 코어 영역 또는 폴리히스티딘 태그)의 회합을 매개할 수 있는 단백질 또는 펩티드, 및/또는 유사분열 저해제, 항종양 항생제, 면역조절제, 유전자 요법을 위한 벡터, 알킬화제, 항혈관신생제, 대사 길항 물질, 붕소 함유 제제, 화학보호제, 호르몬, 항호르몬제, 코르티코스테로이드, 광활성 치료제, 올리고뉴클레오티드, 방사성 핵종 제제, 토포이소머라아제 저해제, 키나아제 저해제, 방사선 증감제, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포독성제 또는 치료제에 기능적으로 연결시킴으로써 유도될 수 있다.
항체 또는 이의 항체 부분이 유도체화될 수 있는 유용한 검출제는 형광 화합물을 포함한다. 예시적인 형광 검출제는 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 5-디메틸아민-1-나프탈렌술포닐 클로라이드, 피코에리트린 등을 포함한다. 항체는 또한 검출가능한 효소, 예를 들어, 알칼리 포스파타아제, 서양 고추냉이 퍼옥시다아제, 글루코스 옥시다아제 등으로 유도체화될 수 있다. 항체가 검출가능한 효소로 유도체화되는 경우, 이는 검출가능한 반응 생성물을 생성하도록 효소가 사용하는 추가의 시약을 첨가함으로써 검출된다. 예를 들어, 검출제인 서양 고추냉이 퍼옥시다아제가 존재하는 경우, 과산화수소 및 디아미노벤지딘의 첨가는 검출가능한 유색 반응 생성물을 초래한다. 항체는 또한 비오틴으로 유도체화되고, 아비딘 또는 스트렙타비딘 결합의 간접적 측정을 통해 검출될 수 있다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 조영제에 콘쥬게이션된다. 본원에 개시된 조성물 및 방법에서 사용될 수 있는 조영제의 예는 방사성 표지(예를 들어, 인듐), 효소, 형광 표지, 발광 표지, 생체발광 표지, 자기 표지, 및 비오틴을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일 실시 형태에서, 항체 또는 ADC는 인듐(111In)과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 방사성 표지에 연결된다. 111인듐은 B7-H3 양성 종양의 확인에 사용하기 위한 본원에 개시된 항체 및 ADC의 표지에 사용될 수 있다. 특정 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 (또는 ADC)는 2작용성 시클로헥실 디에틸렌트리아민펜타아세트산(DTPA) 킬레이트인 2작용성 킬레이팅제를 통하여 111I로 표지된다(각각이 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제5,124,471호; 미국 특허 제5,434,287호; 및 미국 특허 제5,286,850호 참조).
본 발명의 또 다른 실시 형태는 글리코실화 결합 단백질을 제공하며, 여기서, 항-B7-H3 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 탄수화물 잔기를 포함한다. 초기 생체 내 단백질 생성은 번역 후 변형으로 알려진 추가의 프로세싱을 겪을 수 있다. 특히, 당(글리코실) 잔기가 글리코실화로 알려진 과정에 의해 효소적으로 부가될 수 있다. 공유적으로 결합된 올리고당 측쇄류를 갖는 생성된 단백질은 글리코실화된 단백질 또는 당단백질로 알려져 있다. 항체는 Fc 도메인과 가변 도메인에 하나 이상의 탄수화물 잔기를 갖는 당단백질이다. Fc 도메인의 탄수화물 잔기는 Fc 도메인의 이펙터 기능에 중대한 영향을 미치며, 항체의 항원 결합 또는 반감기에는 최소한의 영향을 미친다(문헌[R. Jefferis, Biotechnol . Prog. 21 (2005), pp. 11-16]). 이와는 대조적으로, 가변 도메인의 글리코실화는 항체의 항원 결합 활성에 영향을 미칠 수 있다. 가변 도메인에서의 글리코실화는 아마도 입체 장애로 인하여, 항체 결합 친화성에 부정적인 영향을 미칠 수 있거나(문헌[Co, M.S., et al., Mol . Immunol. (1993) 30:1361- 1367]), 또는 항원에 대한 친화성의 증가로 이어질 수 있다(문헌[Wallick, S.C., et al., Exp . Med. (1988) 168:1099-1109]; 문헌[Wright, A., et al., EMBO J. (1991) 10:2717-2723]).
본 발명의 일 태양은 결합 단백질의 O- 또는 N-결합된 글리코실화 부위가 돌연변이된 글리코실화 부위 돌연변이체의 생성에 관한 것이다. 당업자는 표준의 잘 알려진 기술을 이용하여 이러한 돌연변이체를 생성할 수 있다. 생물학적 활성은 보유하지만 증가되거나 감소된 결합 활성을 갖는 글리코실화 부위 돌연변이체가 본 발명의 또 다른 목적이다.
또 다른 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체 또는 항원 결합 부분의 글리코실화가 변형된다. 예를 들어, 글리코실화되지 않은 항체가 제조될 수 있다(즉, 항체에 글리코실화가 결여된다). 글리코실화는, 예를 들어, 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키기 위해 변경될 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어, 항체 서열 내의 하나 이상의 글리코실화 부위를 변경함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 글리코실화 부위를 제거함으로써 그 부위에서 글리코실화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 이러한 비글리코실화는 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시킬 수 있다. 이러한 접근법은 국제 공개 제2003016466A2호, 및 미국 특허 제5,714,350호 및 미국 특허 제6,350,861호(이들 각각은 그 전체가 본원에 참고로 포함됨)에 더 상세하게 기술되어 있다.
추가적으로 또는 대안적으로, 변경된 글리코실화 유형을 갖는 본 발명의 변형된 항-B7-H3 항체, 예컨대 감소된 양의 푸코실 잔기를 갖는 저푸코실화 항체 또는 증가된 이분 GlcNAc 구조를 갖는 항체가 제조될 수 있다. 이러한 변경된 글리코실화 패턴은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 입증되었다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어, 변경된 글리코실화 기구를 갖는 숙주 세포에서 항체를 발현함으로써 달성될 수 있다. 변경된 글리코실화 기구를 갖는 세포는 본 기술 분야에 기술되어 있으며, 본 발명의 재조합 항체를 발현함으로써 변경된 글리코실화를 갖는 항체를 생성하기 위한 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 각각이 그 전체가 본원에 참고로 포함된 문헌[Shields, R. L. et al. (2002) J. Biol . Chem. 277:26733-26740]; 문헌[Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17:176-1]과, 유럽 특허 제1,176,195호; 국제 공개 제03/035835호; 국제 공개 제99/54342 80호를 참조한다.
단백질 글리코실화는 관심 단백질의 아미노산 서열 및 단백질이 발현되는 숙주 세포에 의존적이다. 상이한 유기체는 상이한 글리코실화 효소(예를 들어, 글리코실트랜스퍼라아제 및 글리코시다아제)를 생성할 수 있고, 이용가능한 상이한 기질(뉴클레오티드 당)을 가질 수 있다. 이러한 요인으로 인하여, 단백질 글리코실화 패턴 및 글리코실 잔기의 조성은 특정 단백질이 발현되는 숙주 시스템에 따라 상이할 수 있다. 본 발명에 유용한 글리코실 잔기는, 글루코스, 갈락토스, 만노스, 푸코스, n-아세틸글루코사민 및 시알산을 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는, 글리코실화된 결합 단백질은 글리코실화 패턴이 인간 패턴이 되게 하는 글리코실 잔기를 포함한다.
단백질 글리코실화가 상이하면 단백질 특성이 상이해질 수 있다. 예를 들어, 미생물 숙주, 예컨대 효모에서 생성되고 효모 내인성 경로를 이용하여 글리코실화된 치료 단백질의 효능은 포유동물 세포, 예컨대 CHO 세포주에서 발현된 동일한 단백질의 효능과 비교하여 감소될 수 있다. 이러한 당단백질은 또한 인간에서 면역원성이고 투여 후 감소된 생체 내 반감기를 나타낼 수 있다. 인간 및 다른 동물에서의 특정 수용체가 특정 글리코실 잔기를 인식하고 혈류로부터의 단백질의 신속한 제거를 촉진할 수 있다. 다른 부작용은 단백질 폴딩, 용해도, 프로테아제에 대한 민감성, 트래피킹(trafficking), 수송, 구획화, 분비, 다른 단백질 또는 인자에 의한 인식, 항원성 또는 알러지항원성의 변화를 포함할 수 있다. 따라서, 실시자는 글리코실화의 특정 조성 및 패턴, 예를 들어, 인간 세포 또는 의도되는 대상체 동물의 종-특이적 세포에서 생성되는 것과 동일하거나 적어도 유사한 글리코실화 조성 및 패턴을 갖는 치료 단백질을 선호할 수 있다.
숙주 세포의 글리코실화 단백질과 상이한 글리코실화 단백질의 발현은 이종 글리코실화 효소를 발현하도록 숙주 세포를 유전적으로 변형시킴으로써 달성될 수 있다. 재조합 기술을 이용하여, 실시자는 인간 단백질 글리코실화를 나타내는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 생성할 수 있다. 예를 들어, 효모 주를, 이들 효모 주에서 생성되는 글리코실화된 단백질(당단백질)이 동물 세포, 특히, 인간 세포의 것과 동일한 단백질 글리코실화를 나타내도록, 비-천연 발생 글리코실화 효소를 발현하도록 유전자 변형되었다(미국 특허 공개 제20040018590호 및 미국 특허 공개 제20020137134호 및 국제 공개 제2005100584 A2호).
항체는 임의의 다수의 기술에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 표준 기술에 의해 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 발현 벡터(들)로 형질감염시킨 숙주 세포로부터의 발현. 용어 "형질감염"의 다양한 형태는 외인성 DNA를 원핵 또는 진핵 숙주 세포로 도입하기 위해 일반적으로 이용되는 매우 다양한 기술, 예를 들어, 전기천공, 인산칼슘 침전, DEAE-덱스트란 형질감염 등을 포함하는 것으로 의도된다. 항체를 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 발현하는 것이 가능하기는 하지만, 진핵 세포에서 항체를 발현하는 것이 바람직하며, 포유동물 숙주 세포에서가 가장 바람직한데, 이는, 이러한 진핵 세포(및 특히 포유동물 세포)가 적절하게 폴딩되고 면역학적으로 활성인 항체를 조립하고 분비할 가능성이 원핵 세포보다 더 크기 때문이다.
본 발명의 재조합 항체를 발현시키기에 바람직한 포유동물 숙주 세포는 중국 햄스터 난소 세포(CHO 세포)(dhfr- CHO 세포를 포함하고, 문헌[Urlaub and Chasin, (1980) Proc . Natl . Acad . Sci. USA 77:4216-4220]에 기술되고, DHFR 선발가능 마커와 함께 사용됨(예를 들어, 문헌[R.J. Kaufman and P.A. Sharp (1982) Mol . Biol. 159:601-621]에 기술된 바와 같음)), NS0 골수종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 항체 유전자를 코딩하는 재조합 발현 벡터를 포유동물 숙주 세포 내로 도입하는 경우, 항체는 숙주 세포에서 항체의 발현 또는 더 바람직하게는 숙주 세포가 성장하는 배양 배지 내로의 항체의 분비를 허용하기에 충분한 기간 동안 숙주 세포를 배양함으로써 생성된다. 항체는 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 배양 배지로부터 회수될 수 있다.
숙주 세포는 또한 Fab 단편 또는 scFv 분자와 같은 기능성 항체 단편을 생성하는 데 사용될 수 있다. 상기 절차에서의 변형이 본 발명의 범주 내에 있음이 이해될 것이다. 예를 들어, 숙주 세포를 본 발명의 항체의 경쇄 및/또는 중쇄의 기능성 단편을 코딩하는 DNA로 형질감염시키는 것이 바람직할 수 있다. 또한, 재조합 DNA 기술을 이용하여 관심 항원에에의 결합에 필요하지 않은 경쇄 및 중쇄 중 어느 하나 또는 이들 둘 다를 코딩하는 DNA 중 일부 또는 상기 DNA 전부를 제거할 수 있다. 이러한 절두된(truncated) DNA 분자로부터 발현된 분자가 또한 본 발명의 항체에 포함된다. 게다가, 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄가 본 발명의 항체이고, 본 발명의 항체를 표준 화학적 가교결합 방법에 의해 제2 항체에 가교결합시킴으로써 다른 중쇄 및 경쇄가 관심 항원 이외의 항원에 대해 특이적인 2기능성 항체를 생성할 수 있다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 재조합적 발현에 바람직한 시스템에서, 항체 중쇄 및 항체 경쇄 둘 다를 코딩하는 재조합 발현 벡터는 dhfr- CHO 세포 내로 인산칼슘-매개된 형질감염에 의해 도입된다. 재조합 발현 벡터 내에서, 항체 중쇄 및 경쇄 유전자는 각각 CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소에 작동적으로 연결되어 유전자의 높은 수준의 전사를 유도한다. 재조합 발현 벡터는 또한 메토트렉세이트 선발/증폭을 이용하여 벡터로 형질감염된 CHO 세포의 선발을 허용하는 DHFR 유전자를 갖고 있다. 선발된 형질전환 숙주 세포를 배양하여, 항체 중쇄 및 경쇄의 발현을 허용하고, 온전한 항체를 배양 배지로부터 회수한다. 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 재조합 발현 벡터를 제조하고, 숙주 세포를 형질감염시키며, 형질전환체를 선발하고, 숙주 세포를 배양하며, 항체를 배양 배지로부터 회수한다. 또 추가로, 본 발명은 재조합 항체가 합성될 때까지 숙주 세포를 적합한 배양 배지에서 배양함으로써 본 발명의 재조합 항체를 합성하는 방법을 제공한다. 본 발명의 재조합 항체는 본원에 개시된 아미노산 서열에 상응하는 핵산 분자를 이용하여 생성될 수 있다. 본 방법은 재조합 항체를 배양 배지로부터 단리하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 항체 폴리펩티드 사슬의 N- 및 C-말단은 일반적으로 관찰되는 번역 후 변형으로 인하여 예상 서열과는 상이할 수 있다. 예를 들어, C-말단 라이신 잔기가 종종 항체 중쇄에 없다. 문헌[Dick et al. (2008) Biotechnol. Bioeng. 100:1132]. N-말단 글루타민 잔기, 및 더 적은 정도로, 글루타메이트 잔기는 치료용 항체의 경쇄 및 중쇄 상의 피로글루타메이트 잔기로 빈번하게 전환된다. 문헌[Dick et al. (2007) Biotechnol. Bioeng. 97:544]; 문헌[Liu et al. (2011) JBC 28611211]; 문헌[Liu et al. (2011) J. Biol. Chem. 286:11211].
III. 항-B7-H3 항체 약물 콘쥬게이트 ( ADC )
본원에 개시된 항-B7-H3 항체는 약물 모이어티에 콘쥬게이트되어 항-B7-H3 항체 약물 콘쥬게이트(ADC)을 형성할 수 있다. 항체-약물 콘쥬게이트(ADC)는, ADC가 하나 이상의 약물 모이어티(들)를 표적 조직, 예컨대 종양-연관 항원, 예를 들어 B7-H3 발현 종양으로 선택적으로 전달하는 능력으로 인하여, 질환, 예를 들어 암의 치료에서 항체의 치료 효능을 증가시킬 수 있다. 따라서, 특정 실시 형태에서, 본 발명은 치료적 사용을 위한, 예를 들어 암의 치료를 위한 항-B7-H3 ADC를 제공한다.
본 발명의 항-B7-H3 ADC는 하나 이상의 약물 모이어티에 연결된 항-B7-H3 항체, 즉, B7-H3에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. ADC의 특이성은 항체, 즉, 항-B7-H3의 특이성에 의해 정의된다. 일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 B7-H3을 발현하는 형질전환 암세포로 내부적으로 전달되는 하나 이상의 세포독성 약물(들)에 연결된다.
본 발명의 항-B7-H3 ADC에서 사용될 수 있는 약물의 예가 하기에 제공되어 있으며, 이는 항체 및 상기 하나 이상의 약물(들)을 콘쥬게이션시키는 데 사용될 수 있는 링커가 그러한 바와 같다. 용어 "약물", "에이전트" 및 "약물 모이어티"는 본원에서 상호교환 가능하게 사용된다. 또한, 용어 "연결된" 및 "콘쥬게이션된"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되며, 항체 및 모이어티가 공유적으로 결합됨을 나타낸다.
일부 실시 형태에서, ADC는 하기 화학식(화학식 I)을 갖는다:
[화학식 I]
Figure pct00066
여기서, Ab는 항체, 예를 들어, 항-B7-H3 항체 huAb13v1, huAb3v2.5, 또는 huAb3v2.6이며, (L)은 링커이며, (D)는 약물이며, LK는 링커 L을 항체 Ab에 연결시키는 공유적 연결체를 나타내며; m은 1 내지 20의 범위의 정수이다. D는 예를 들어, 표적 세포, 예를 들어 B7-H3을 발현하는 세포에 대한 세포 증식 억제 활성, 세포독성 활성, 또는 달리 치료적 활성을 갖는 약물 모이어티이다. 일부 실시 형태에서, m은 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 2 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 2, 1.5 내지 8, 1.5 내지 7, 1.5 내지 6, 1.5 내지 5, 1.5 내지 4, 2 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 2, 또는 2 내지 4의 범위이다. ADC의 DAR은 화학식 I에서 언급된 "m"과 등가이다. 일 실시 형태에서, ADC는 Ab-(LK-L-D)m의 화학식을 가지며, 여기서, Ab는 항-B7-H3 항체, 예를 들어huAb13v1, huAb3v2.5, 또는 huAb3v2.6이며, L은 링커이며, D는 약물, 예를 들어, Bcl-xL 저해제 또는 아우리스타틴, 예컨대 MMAF 또는 MMAE이며, m은 2 내지 4(2 내지 4의 DAR과 등가임)이다. 본 발명의 ADC에서 사용될 수 있는 약물(화학식 I의 D) 및 링커(화학식 I의 L)와, 대안적인 ADC 구조에 관한 추가의 상세 사항이 하기에 기술되어 있다.
III. A. 항-B7-H3 ADC : Bcl - xL 저해제, 링커, 신톤 , 및 이의 제조 방법
이상조절된 아폽토시스 경로가 또한 암의 병상(pathology)에 연루되었다. 하향 조절된 아폽토시스 (및 더 구체적으로 Bcl-2 패밀리의 단백질)가 암성 악성종양의 발병에 연루되어 있다는 암시는 이러한 여전히 힘든 질환을 표적화하는 신규한 방법을 보여주었다. 연구에 의하면 예를 들어, 항-아폽토시스 단백질인 Bcl 2 및 Bcl-xL이 많은 암세포 유형에서 과발현됨이 밝혀졌다. 문헌[Zhang, 2002, Nature Reviews/Drug Discovery 1:101]; 문헌[Kirkin et al., 2004, Biochimica Biophysica Acta 1644:229-249]; 및 문헌[Amundson et al., 2000, Cancer Research 60:6101-6110]을 참조한다. 이러한 조절해제의 효과는 변경된 세포의 생존인데, 상기 세포는 달리, 정상 상태에서는 아폽토시스를 겪었을 것이다. 비조절된 증식과 연관된 이러한 결함의 반복은 암성 진전의 출발점인 것으로 생각된다.
본 발명의 태양은 링커를 통하여 약물에 콘쥬게이션된 항-hB7-H3 항체를 포함하는 항-hB7-H3 ADC에 관한 것이며, 여기서, 약물은 Bcl-xL 저해제이다. 특정 실시 형태에서, ADC는 하기 구조 화학식 I에 따른 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염이며, 여기서, Ab는 항-hB7-H3 항체를 나타내며, D는 Bcl-xL 저해제 약물(즉, 하기에 나타낸 바와 같이 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId의 화합물)을 나타내며, L은 링커를 나타내며, LK는 링커(L)를 항-hB7-H3 항체(Ab)에 연결시키는 공유적 연결체를 나타내며, m은 항체에 연결된 D-L-LK 단위의 수를 나타내는데, 이는 1 내지 20의 범위의 정수이다. 특정 실시 형태에서, m은 2, 3 또는 4이다. 일부 실시 형태에서, m은 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 2 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 2 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 2의 범위이거나, 1이다.
[화학식 I]
Figure pct00067
다양한 Bcl-xL 저해제 그 자체, 및 다양한 Bcl-xL 저해제(D), 링커(L) 및 항-B7-H3 항체(Ab)(본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있음)와, ADC에 연결된 Bcl-xL 저해제의 수의 특정 실시 형태가 하기에 더 상세하게 기술되어 있다.
본 발명의 항-B7-H3 ADC에서 사용될 수 있는 Bcl-xL 저해제의 예가 하기에 제공되어 있으며, 이는 항체 및 상기 하나 이상의 Bcl-xL 저해제(들)를 콘쥬게이션시키는 데 사용될 수 있는 링커가 그러한 바와 같다. 또한, 용어 "연결된" 및 "콘쥬게이션된"은 본원에서 상호교환 가능하게 사용되며, 항체 및 모이어티가 공유적으로 결합됨을 나타낸다.
III.A .1. Bcl - xL 저해제
본 발명의 일 태양은 낮은 세포 투과성을 갖는 Bcl-xL 저해제에 관한 것이다. 본 화합물은 일반적으로 사실상 복소환식이며 화합물에 높은 수용해도 및 낮은 세포 투과성을 부여하는 하나 이상의 가용화 기를 포함한다. 가용화 기는 일반적으로, 쌍극자-쌍극자 상호작용을 형성하는 수소 결합이 가능하고/하거나 1 내지 30개의 단위를 함유하는 폴리에틸렌 글리콜 중합체, 하나 이상의 폴리올, 하나 이상의 염, 또는 생리학적 pH에서 하전되는 하나 이상의 기를 포함하는 기이다.
Bcl-xL 저해제는 본원에 개시된 다양한 방법에서 화합물 또는 염 그 자체로 사용될 수 있거나, ADC의 성분 부분으로서 포함될 수 있다.
콘쥬게이션되지 않은 형태로 사용될 수 있거나, ADC의 일부로서 포함될 수 있는 Bcl-xL 저해제의 특정 실시 형태는 구조 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId에 따른 화합물을 포함한다. 본 발명에서, Bcl-xL 저해제가 ADC의 일부로서 포함되는 경우, 하기 구조 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId에 나타나 있는 #은 링커에 대한 부착 부위를 나타내며, 이는 모노라디칼 형태로 표시됨을 나타낸다.
[화학식 IIa]
Figure pct00068
[화학식 IIb]
Figure pct00069
[화학식 IIc]
Figure pct00070
[화학식 IId]
Figure pct00071
또는 이의 제약상 허용가능한 염, 여기서, Ar1은
Figure pct00072
Figure pct00073
로부터 선택되며, 독립적으로 할로, 히드록시, 니트로, 저급 알킬, 저급 헤테로알킬, C1- 4알콕시, 아미노, 시아노 및 할로메틸로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고;
Ar2는
Figure pct00074
Figure pct00075
로부터 선택되며, 독립적으로 할로, 히드록시, 니트로, 저급 알킬, 저급 헤테로알킬, C1-4알콕시, 아미노, 시아노 및 할로메틸로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고, 여기서, R12-Z2b-, R'-Z2b-, #-N(R4)-R13-Z2b-, 또는 #-R'-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착되고;
Z1은 N, CH, C-할로, C-CH3 및 C-CN으로부터 선택되고;
Z2a 및 Z2b는 각각, 서로 독립적으로, 결합, NR6, CR6aR6b, O, S, S(O), S(O)2, -NR6C(O)-,-NR6aC(O)NR6b-, 및 -NR6C(O)O-로부터 선택되고;
R'는 폴리올, 4 내지 30개의 에틸렌 글리콜 단위를 함유하는 폴리에틸렌 글리콜, 염, 및 생리학적 pH에서 하전되는 기로부터 선택되는 기 및 이들의 조합을 함유하는 가용화 모이어티로 하나 이상의 탄소 또는 헤테로원자에서 독립적으로 치환된, 알킬렌, 헤테로알킬렌, 시클로알킬렌, 헤테로사이클렌, 아릴 또는 헤테로아릴이고, R'에 부착되는 #은 치환될 수 있는 임의의 R' 원자에서 R'에 부착되고;
R1은 수소, 메틸, 할로, 할로메틸, 에틸, 및 시아노로부터 선택되고;
R2는 수소, 메틸, 할로, 할로메틸 및 시아노로부터 선택되고;
R3은 수소, 메틸, 에틸, 할로메틸 및 할로에틸로부터 선택되고;
R4는 수소, 저급 알킬 및 저급 헤테로알킬로부터 선택되거나 또는 R13의 원자와 함께 3 내지 7개의 고리 원자를 갖는 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성하고;
R6, R6a 및 R6b는 각각, 서로 독립적으로, 수소, 선택적으로 치환된 저급 알킬, 선택적으로 치환된 저급 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 시클로알킬 및 선택적으로 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나 또는 R4로부터의 원자 및 R13으로부터의 원자와 함께 3 내지 7개의 고리 원자를 갖는 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성하고;
R11a 및 R11b는 각각, 서로 독립적으로, 수소, 할로, 메틸, 에틸, 할로메틸, 히드록실, 메톡시, CN, 및 SCH3으로부터 선택되고;
R12는 선택적으로 R'이거나 또는 수소, 할로, 시아노, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 헤테로시클릴, 및 선택적으로 치환된 시클로알킬로부터 선택되고;
R13은 선택적으로 치환된 C1-8 알킬렌, 선택적으로 치환된 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클렌, 및 선택적으로 치환된 시클로알킬렌으로부터 선택되고;
#는 링커 L에 대한 부착점을 나타낸다.
콘쥬게이션되지 않은 형태로 사용될 수 있거나 ADC의 일부로서 포함될 수 있는 Bcl-xL 저해제의 일 실시 형태는 구조 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId에 따른 화합물을 포함한다:
[화학식 IIa]
Figure pct00076
[화학식 IIb]
Figure pct00077
[화학식 IIc]
Figure pct00078
[화학식 IId]
Figure pct00079
또는 이의 제약상 허용가능한 염, 여기서,
Ar1은
Figure pct00080
Figure pct00081
로부터 선택되며, 독립적으로 할로, 히드록시, 니트로, 저급 알킬, 저급 헤테로알킬, C1- 4알콕시, 아미노, 시아노 및 할로메틸로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고;
Ar2는
Figure pct00082
Figure pct00083
또는 이들의 N-옥시드로부터 선택되며, 독립적으로 할로, 히드록시, 니트로, 저급 알킬, 저급 헤테로알킬, C1-4알콕시, 아미노, 시아노 및 할로메틸로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고, 여기서, R12-Z2b-, R'-Z2b-, #-N(R4)-R13-Z2b-, 또는 #-R'-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착되고;
Z1은 N, CH, C-할로, C-CH3 및 C-CN으로부터 선택되고;
Z2a 및 Z2b는 각각, 서로 독립적으로, 결합, NR6, CR6aR6b, O, S, S(O), S(O)2, -NR6C(O)-,-NR6aC(O)NR6b-, 및 -NR6C(O)O-로부터 선택되고;
R'은
Figure pct00084
이고, 여기서 R'에 부착되는 #은 치환될 수 있는 임의의 R' 원자에서 R'에 부착되고;
X'는 각각의 경우에 -N(R10)- , -N(R10)C(O)-, -N(R10)S(O)2-, -S(O)2N(R10)-, 및 -O-로부터 선택되고;
n은 0 내지 3으로부터 선택되고;
R10은 독립적으로 각각의 경우에 수소, 저급 알킬, 헤테로사이클, 아미노알킬, G-알킬, 및 -(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-NH2로부터 선택되고;
G는 각각의 경우에 독립적으로 폴리올, 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
SPa는 독립적으로 각각의 경우에 산소, ­S(O)2N(H)­, ­N(H)S(O)2­, ­N(H)C(O)­, ­C(O)N(H) ­, ­N(H)­, 아릴렌, 헤테로사이클렌, 및 선택적으로 치환된 메틸렌으로부터 선택되고; 메틸렌은 ­NH(CH2)2G, NH2, C1- 8알킬, 및 카르보닐 중 하나 이상으로 선택적으로 치환되고;
m2는 0 내지 12로부터 선택되고;
R1은 수소, 메틸, 할로, 할로메틸, 에틸, 및 시아노로부터 선택되고;
R2는 수소, 메틸, 할로, 할로메틸 및 시아노로부터 선택되고;
R3은 수소, 메틸, 에틸, 할로메틸 및 할로에틸로부터 선택되고;
R4는 수소, 저급 알킬 및 저급 헤테로알킬로부터 선택되거나 또는 R13의 원자와 함께 3 내지 7개의 고리 원자를 갖는 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성하고;
R6, R6a 및 R6b는 각각, 서로 독립적으로, 수소, 선택적으로 치환된 저급 알킬, 선택적으로 치환된 저급 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 시클로알킬 및 선택적으로 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나 또는 R4로부터의 원자 및 R13으로부터의 원자와 함께 3 내지 7개의 고리 원자를 갖는 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성하고;
R11a 및 R11b는 각각, 서로 독립적으로, 수소, 할로, 메틸, 에틸, 할로메틸, 히드록실, 메톡시, CN, 및 SCH3으로부터 선택되고;
R12는 선택적으로 R'이거나 또는 수소, 할로, 시아노, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 헤테로시클릴, 및 선택적으로 치환된 시클로알킬로부터 선택되고;
R13은 선택적으로 치환된 C1-8 알킬렌, 선택적으로 치환된 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클렌, 및 선택적으로 치환된 시클로알킬렌으로부터 선택되고;
#는 링커 L에 대한 부착점을 나타낸다.
구조 화학식 IIa 내지 IId의 Bcl-xL 저해제가 ADC의 성분이 아닌 경우, 화학식 IIa 내지 IId에서 #은 수소 원자에 대한 부착점을 나타낸다. Bcl-xL 저해제가 ADC의 성분인 경우, 화학식 IIa 내지 IId에서 #은 링커에 대한 부착점을 나타낸다. Bcl-xL 저해제가 ADC의 성분인 경우, ADC는, 동일하거나 상이할 수 있으나 전형적으로 동일한 하나 이상의 Bcl-xL 저해제를 포함할 수 있다.
특정 실시 형태에서, R'은 염 및/또는 생리학적 pH에서 하전되는 기를 함유하는 하나 이상의 모이어티로 치환된 C2-C8 헤테로알킬렌이다. 염은, 예를 들어, 카르복실레이트, 술포네이트, 포스포네이트, 및 암모늄 이온의 염으로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 염은 카르복실레이트, 술포네이트 또는 포스포네이트의 나트륨 또는 칼륨 염 또는 암모늄 이온의 클로라이드 염일 수 있다. 생리학적 pH에서 하전되는 기는, 예로서 그러나 제한 없이, 쯔비터이온성 기를 포함하는, 생리학적 pH에서 하전되는 임의의 기일 수 있다. 특정 실시 형태에서 염인 기는, 피리딘 및 퀴놀린과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 소정 헤테로시클릴을 포함하는 아민의 N-옥시드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 2극성 모이어티이다. 특정한 실시 형태에서 생리학적 pH에서 하전되는 기는 독립적으로 각각의 경우에, 카르복실레이트, 술포네이트, 포스포네이트, 및 아민으로부터 선택된다.
특정 실시 형태에서, R'는 디올 또는 당 모이어티와 같은 폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리올을 함유하는 하나 이상의 모이어티로 치환된 C2-C8 헤테로알킬렌이다.
특정 실시 형태에서, R'는 가용화 모이어티 이외의 기로 치환될 수 있다. 예를 들어, R'는 하나 이상의 동일하거나 상이한 알킬, 헤테로알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 또는 할로 기로 치환될 수 있다.
특정 실시 형태에서, R'은 하기 화학식으로 표시된다:
Figure pct00085
또는 이의 제약상 허용가능한 염, 여기서,
X'는 각각의 경우에 -N(R10)- 및 -O-로부터 선택되고;
n은 1 내지 3으로부터 선택되고;
R10은 개별적으로 각각의 경우에 수소, 알킬, 헤테로사이클, 아미노알킬, G-알킬, 및 -(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-NH2로부터 선택되고;
G는 각각의 경우에 독립적으로 폴리올, 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 (본원에서 PEG4-30으로 지칭됨), 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
SPa는 독립적으로 각각의 경우에 산소, 술폰아미드, 아릴렌, 헤테로사이클렌, 및 선택적으로 치환된 메틸렌으로부터 선택되고; 메틸렌은 -NH(CH2)2G, 아민 및 카르보닐 중 하나 이상으로 선택적으로 치환되고;
m2는 0 내지 6으로부터 선택되고;
R'의 치환가능한 질소 원자에서 링커 또는 수소 원자에 부착되는 R'에 적어도 하나의 치환가능한 질소가 존재한다.
특정 실시 형태에서, R'은
Figure pct00086
이고;
X'는 각각의 경우에 -N(R10)-, -N(R10)C(O)-, -N(R10)S(O)2-, -S(O)2N(R10)-, 및 -O-로부터 선택되고;
n은 0 내지 3으로부터 선택되고;
R10은 독립적으로 각각의 경우에 수소, 알킬, 헤테로사이클, 아미노알킬, G-알킬, 및 -(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-NH2로부터 선택되고;
G는 각각의 경우에 독립적으로 폴리올, 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
SPa는 독립적으로 각각의 경우에 산소, ­S(O)2N(H)­, ­N(H)S(O)2­, ­N(H)C(O)­, ­C(O)N(H) ­, ­N(H)­, 아릴렌, 헤테로사이클렌, 및 선택적으로 치환된 메틸렌으로부터 선택되고; 메틸렌은 ­NH(CH2)2G, 아민, 알킬, 및 카르보닐 중 하나 이상으로 선택적으로 치환되고;
m2는 0 내지 12로부터 선택되고;
R'에 부착되는 #은 치환될 수 있는 임의의 R' 원자에서 R'에 부착되고;
특정 실시 형태에서, G는 각각의 경우에 염 또는 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티이다.
특정 실시 형태에서, G는 각각의 경우에 카르복실레이트, 술포네이트, 포스포네이트, 또는 암모늄의 염이다.
특정 실시 형태에서, G는 각각의 경우에 카르복실레이트, 술포네이트, 포스포네이트, 및 아민으로 이루어진 군으로부터 선택되는 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티이다.
특정 실시 형태에서, G는 각각의 경우에 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 또는 폴리올을 함유하는 모이어티이다.
특정 실시 형태에서, 폴리올은 당이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 또는 IId의 R'은 링커에의 부착에 적합한 적어도 하나의 치환가능한 질소를 포함한다.
특정 실시 형태에서, G는 독립적으로 각각의 경우에,
Figure pct00087
Figure pct00088
로부터 선택되며, 여기서, M은 수소 또는 양으로 하전된 반대이온이다. 특정 실시 형태에서, M은 Na+, K+ 또는 Li+이다. 특정 실시 형태에서, M은 수소이다. 특정 실시 형태에서, G는 SO3H이다.
특정 실시 형태에서, G는 독립적으로 각각의 경우에,
Figure pct00089
로부터 선택되며, 여기서, M은 수소 또는 양으로 하전된 반대이온이다. 특정 실시 형태에서, M은 수소이다. 특정 실시 형태에서, G는 SO3H이다.
특정 실시 형태에서, R'은
Figure pct00090
Figure pct00091
Figure pct00092
Figure pct00093
, 또는 이들의 염으로부터 선택된다. 이 실시 형태의 Bcl-xL 저해제가 ADC에 포함되는 경우, ADC의 링커는 이용가능한 1차 또는 2차 아민 기의 질소 원자에 연결된다.
특정 실시 형태에서, R'은
Figure pct00094
Figure pct00095
Figure pct00096
Figure pct00097
Figure pct00098
또는 이들의 염으로부터 선택된다. 이 실시 형태의 Bcl-xL 저해제가 ADC에 포함되는 경우, ADC의 링커는 이용가능한 1차 또는 2차 아민 기의 질소 원자에 연결된다.
특정 실시 형태에서, R'은
Figure pct00099
Figure pct00100
Figure pct00101
Figure pct00102
Figure pct00103
Figure pct00104
로부터 선택되며, 여기서, #는 화학식 IIb 또는 화학식 IIc의 ADC의 Bcl-xL 저해제 약물 내의 수소 원자 또는 링커 L에 대한 화학식 IIa 또는 화학식 IId의 ADC의 Bcl-xL 저해제 약물 내의 부착점을 나타낸다.
특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 화학식 IId의 Ar1은
Figure pct00105
Figure pct00106
로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 화학식 IId의 Ar1은
Figure pct00107
Figure pct00108
로부터 선택되고 독립적으로 할로, 시아노, 메틸, 및 할로메틸로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다. 특정 실시 형태에서, Ar1은
Figure pct00109
이다.
특정 실시 형태에서, Ar2는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된
Figure pct00110
이며, 여기서 R12-Z2b-, R'-Z2b-, #-N(R4)-R13-Z2b-, 또는 #-R'-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00111
Figure pct00112
Figure pct00113
로부터 선택되고 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며, 여기서 R12-Z2b-, R'-Z2b-, #-N(R4)-R13-Z2b-, 또는 #-R'-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다. 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00114
Figure pct00115
Figure pct00116
로부터 선택되고 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며, 여기서 R12-Z2b-, R'-Z2b-, #-N(R4)-R13-Z2b-, 또는 #-R'-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다. 특정 실시 형태에서, Ar2는 하나 이상의 가용화 기로 치환된다. 특정 실시 형태에서, 각각의 가용화 기는, 서로 독립적으로, 폴리올을 함유하는 모이어티, 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 염, 또는 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택된다.
특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 IId의 Z1은 N이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 IId의 Z2a는 O이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 IId의 Z2a는 CR6aR6b이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 IId의 Z2a는 S이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 IId의 Z2a는 -NR6C(O)-이다. 특정 실시 형태에서, R6은 수소이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 IId의 Z2b는 O이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 IId의 Z2b는 NH 또는 CH2이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 IId의 R1은 메틸 및 클로로로부터 선택된다.
특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 IId의 R2는 수소 및 메틸로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, R2은 수소이다.
특정 실시 형태에서 Bcl-xL 저해제는 화학식 IIa의 화합물이다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa의 화합물인 특정 실시 형태에서, 화합물은 구조 화학식 IIa.1을 갖는다:
[화학식 IIa.1]
Figure pct00117
또는 이들의 염, 여기서,
Ar1, Ar2, Z1, Z2a, Z2b, R1, R2, R11a, R11b, R12, G 및 #는 상기와 같이 정의되고;
Y는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
r은 0 또는 1이고;
s는 1, 2 또는 3이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, r은 0이고 s는 1이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, r은 0이고 s는 2이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, r은 1이고 s는 2이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2a는 O, NH, CH2 및 S로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2a는 O이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.1의 Z2a는 ­CR6aR6b­이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.1의 Z2a는 CH2이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.1의 Z2a는 S이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.1의 Z2a는 ­NR6C(O)­이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Y는 에틸렌, 프로필렌 및 부틸렌으로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Y는 에틸렌 및 프로필렌으로부터 선택된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, G는
Figure pct00118
로부터 선택되며, 여기서 M은 수소 또는 양으로 하전된 반대이온이다. 특정 실시 형태에서, G는
Figure pct00119
이다. 특정 실시 형태에서, G는 SO3H이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00120
로부터 선택되고, 여기서, R12-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00121
로부터 선택되고, 여기서, R12-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00122
이다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00123
이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2b-R12는 H, F, CN, OCH3, OH, NH2, OCH2CH2OCH3, N(CH3)C(=O)CH3, CH2N(CH3)C(=O)CH3SCH3, C(=O)N(CH3)2 및 OCH2CH2N(CH3)(C(=O)CH3)으로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2b-R12는 H, F 및 CN으로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2b-R12는 H이다.
Z2b-R12가 히드록실 (OH)로 치환되는 특정 실시 형태에서, 산소는 링커에 대한 부착점의 역할을 할 수 있다 (섹션 4.4.1.1 참조).
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar1은
Figure pct00124
이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, 아다만탄 고리에 결합된 기
Figure pct00125
는:
Figure pct00126
로부터 선택된다.
특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.1의 화합물은 화학식 IIa.1.1의 화합물로 전환될 수 있으며, 여기서 n은 1 내지 3으로부터 선택된다:
[화학식 IIa.1.1]
Figure pct00127
특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.1.1의 화합물은 화학식 IIa.1.2의 화합물로 전환될 수 있으며, 여기서 L은 링커를 나타내고 LK는 링커 L 상의 반응성 작용기와 항체 상의 상보적 작용기 사이에 형성된 결합을 나타낸다.
[화학식 IIa.1.2]
Figure pct00128
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa의 화합물인 특정 실시 형태에서, 화합물은 구조 화학식 IIa.2를 갖는다:
[화학식 IIa.2]
Figure pct00129
, 또는 이들의 염, 여기서,
Ar1, Ar2, Z1, Z2a, Z2b, R1, R2, R11a, R11b, R12 및 #는 상기와 같이 정의되고;
U는 N, O 및 CH로부터 선택되되, 단, U가 O인 경우, Va 및 R21a는 부재하고;
R20은 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고;
R21a 및 R21b는 각각, 서로 독립적으로, 부재하거나 또는 H, C1-C4 알킬 및 G로부터 선택되며, G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
Va 및 Vb는 각각, 서로 독립적으로, 부재하거나 또는 결합, 및 선택적으로 치환된 알킬렌으로부터 선택되고;
R20은 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고;
s는 1, 2 또는 3이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, s는 2이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2a는 O, NH, CH2 및 S로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2a는 O이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.2의 Z2a는 ­CR6aR6b­이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.2의 Z2a는 CH2이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.2의 Z2a는 S이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.2의 Z2a는 ­NR6C(O)­이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, U는 N 및 O로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, U는 O이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Va는 결합이고, R21a는 C1-C4 알킬 기이고, Vb는 메틸렌 및 에틸렌으로부터 선택되고 R21b는 G이다. 특정 실시 형태에서, Va는 결합이고, R21a는 메틸 기이고 Vb는 메틸렌 및 에틸렌으로부터 선택되고 R21b는 G이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Va는 메틸렌 및 에틸렌으로부터 선택되고, R21a는 G이고, Vb는 메틸렌 및 에틸렌으로부터 선택되고 R21b는 G이다. 특정 실시 형태에서, Va는 에틸렌이고, R21a는 G이고, Vb는 메틸렌 및 에틸렌으로부터 선택되고 R21b는 G이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, G는
Figure pct00130
로부터 선택되며, 여기서 M은 수소 또는 양으로 하전된 반대이온이다. 특정 실시 형태에서, G는
Figure pct00131
이다. 특정 실시 형태에서, G는 SO3H이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, R20은 수소 및 메틸 기로부터 선택된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00132
로부터 선택되고, 여기서, R12-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00133
로부터 선택되고, 여기서, R12-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00134
이고, 여기서, R12-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2b-R12는H, F, CN, OCH3, OH, NH2, OCH2CH2OCH3, N(CH3)C(=O)CH3, CH2N(CH3)C(=O)CH3SCH3, C(=O)N(CH3)2 및 OCH2CH2N(CH3)(C(=O)CH3)으로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2b-R12는 H, F 및 CN으로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2b-R12는 H이다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar1은
Figure pct00135
이다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00136
이고, 여기서, R12-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa의 화합물인 특정 실시 형태에서, 화합물은 구조 화학식 IIa.3을 갖는다:
[화학식 IIa.3]
Figure pct00137
또는 이들의 염, 여기서,
Ar1, Ar2, Z1, Z2a, Z2b, R1, R2, R11a, R11b, R12 및 #는 상기와 같이 정의되고;
Rb는 H, C1-C4 알킬 및 Jb-G로부터 선택되거나 선택적으로 T의 원자와 함께 3 내지 7개의 원자를 갖는 고리를 형성하고;
Ja 및 Jb는 각각, 서로 독립적으로, 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌 및 선택적으로 치환된 페닐렌으로부터 선택되고;
T는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌, CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2, CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2, 및 4 내지 10개의 에틸렌 글리콜 단위를 함유하는 폴리에틸렌 글리콜로부터 선택되고;
G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
s는 1, 2 또는 3이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, s는 1이다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, s는 2이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2a는 O, CH2 및 S로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2a는 O이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.3의 Z2a는 CR6aR6b이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.3의 Z2a는 CH2이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.3의 Z2a는 S이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.3의 Z2a는 -NR6C(O)-이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ja는 메틸렌 및 에틸렌으로부터 선택되고 Rb는 Jb-G이며, 여기서, Jb는 메틸렌 또는 에틸렌이다. 일부 그러한 실시 형태에서, T는 에틸렌이다. 다른 그러한 실시 형태에서, T는 CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2이다. 다른 그러한 실시 형태에서, T는 4 내지 10 개의에틸렌 글리콜 단위를 함유하는 폴리에틸렌 글리콜이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ja는 메틸렌 및 에틸렌으로부터 선택되고 Rb는 T의 원자와 함께 4 내지 6개의 고리 원자를 갖는 고리를 형성한다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ja는 메틸렌 및 에틸렌으로부터 선택되고 Rb는 H 또는 알킬이다. 일부 그러한 실시 형태에서, T는 에틸렌이다. 다른 그러한 실시 형태에서, T는 CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, G는
Figure pct00138
로부터 선택되며, 여기서 M은 수소 또는 양으로 하전된 반대이온이다. 특정 실시 형태에서, G는
Figure pct00139
이다. 특정 실시 형태에서, G는 SO3H이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, R20은 수소 및 메틸 기로부터 선택된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00140
로부터 선택되고, 여기서, R12-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00141
이고, 여기서, R12-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00142
로부터 선택되고, 여기서, R12-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00143
이고, 여기서, R12-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2b-R12는 H, F, CN, OCH3, OH, NH2, OCH2CH2OCH3, N(CH3)C(=O)CH3, CH2N(CH3)C(=O)CH3SCH3, C(=O)N(CH3)2 및 OCH2CH2N(CH3)(C(=O)CH3)으로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2b-R12는 H, F 및 CN으로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2b-R12는 H이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar1은
Figure pct00144
이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, 기
Figure pct00145
는:
Figure pct00146
로부터 선택된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIa.3의 화합물인 특정 실시 형태에서, 기
Figure pct00147
는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00148
특정 실시 형태에서 Bcl-xL 저해제는 화학식 IIb의 화합물이다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb의 화합물인 특정 실시 형태에서, 화합물은 구조 화학식 IIb.1을 갖는다::
[화학식 IIb.1]
Figure pct00149
또는 이들의 염, 여기서,
Ar1, Ar2, Z1, Z2a, Z2b, R1, R2, R4, R11a, R11b 및 #는 상기과 같이 정의되고;
Y는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
r은 0 또는 1이고;
s는 1, 2 또는 3이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, s는 1이다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, s는 2이다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, s는 3이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2a는 O, CH2, NH 및 S로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2a는 O이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIb.1의 Z2a는 CR6aR6b이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIb.1의 Z2a는 CH2이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIb.1의 Z2a는 S이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIb.1의 Z2a는 -NR6C(O)-이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2b는 O, CH2, NH, NCH3 및 S로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2b는 O이다. 특정 실시 형태에서, Z2b는 NH이다. 특정 실시 형태에서, Z2b는 NCH3이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Y는 에틸렌이고 r은 0이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Y는 에틸렌이고 r은 1이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, R4는 H 또는 메틸이다. 특정 실시 형태에서, R4는 메틸이다. 다른 실시 형태에서, R4는 H이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, R4는 Y의 원자와 함께 4 내지 6개의 고리 원자를 갖는 고리를 형성한다. 특정 실시 형태에서, 고리는 시클로부탄 고리이다. 다른 실시 형태에서, 고리는 피페라진 고리이다. 다른 실시 형태에서, 고리는 모르폴린 고리이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, G는
Figure pct00150
로부터 선택되며, 여기서 M은 수소 또는 양으로 하전된 반대이온이다. 특정 실시 형태에서, G는
Figure pct00151
이다. 다른 실시 형태에서, G는 SO3H이다. 특정 실시 형태에서, G는 NH2이다. 다른 실시 형태에서, G는 PO3H2이다. 특정 실시 형태에서, G는 NH2이다. 특정 실시 형태에서, G는 C(O)OH이다. 특정 실시 형태에서, G는 폴리올이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00152
로부터 선택되고, G-(CH2)s-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00153
이고, G-(CH2)s-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00154
로부터 선택되고, G-(CH2)s-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00155
이고, G-(CH2)s-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar1은
Figure pct00156
이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, 기
Figure pct00157
는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00158
.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, 기
Figure pct00159
는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00160
.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIb.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, 기
Figure pct00161
는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00162
.
특정 실시 형태에서 Bcl-xL 저해제는 화학식 IIc의 화합물이다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc의 화합물인 특정 실시 형태에서, 화합물은 구조 화학식 IIc.1을 갖는다:
[화학식 IIc.1]
Figure pct00163
또는 이들의 염, 여기서,
Ar1, Ar2, Z1, Z2a, Z2b, R1, R2, R4, R11a , R11b 및 #는 상기와 같이 정의되고;
Ya는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
Yb는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
R23은 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고;
G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2a는 O, CH2, NH 및 S로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2a는 O이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIc.1의 Z2a는 CR6aR6b이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIc.1의 Z2a는 S이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIc.1의 Z2a는 -NR6C(O)-이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2b는 O, CH2, NH, NCH3 및 S로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2b는 O이다. 특정 실시 형태에서, Z2b는 NH이다. 특정 실시 형태에서, Z2b는 NCH3이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2b는 결합이다. 일부 그러한 실시 형태에서 Ya는 메틸렌 또는 에틸렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2b는 O이다. 일부 그러한 실시 형태에서 Ya는 메틸렌, 에틸렌, 또는 프로필렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2b는 NR6이고, 여기서, R6은 상기와 같이 정의된다. 일부 그러한 실시 형태에서, R6은 Ya로부터의 원자와 함께 3 내지 7개의 고리 원자를 갖는 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성한다. 일부 그러한 실시 형태에서, 고리는 5개의 원자를 갖는다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ya는 에틸렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ya는 메틸렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ya는 프로필렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, R4는 H 또는 메틸이다. 특정 실시 형태에서, R4는 H이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Yb는 에틸렌 또는 프로필렌이다. 특정 실시 형태에서, Yb는 에틸렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, R23은 메틸이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, R23은 H이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, G는
Figure pct00164
로부터 선택되며, 여기서 M은 수소 또는 양으로 하전된 반대이온이다. 특정 실시 형태에서, G는
Figure pct00165
이다. 특정 실시 형태에서, G는 SO3H이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00166
로부터 선택되고, #-N(R4)-Ya-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00167
이고, #-N(R4)-Ya-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00168
로부터 선택되고, #-N(R4)-Ya-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00169
이고, #-N(R4)-Ya-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar1은
Figure pct00170
이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, 기
Figure pct00171
는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00172
.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.1의 화합물인 다른 실시 형태에서, 기
Figure pct00173
는 다음으로부터 선택된다:
.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc의 화합물인 특정 실시 형태에서, 화합물은 구조 화학식 IIc.2를 갖는다:
[화학식 IIc.2]
Figure pct00175
또는 이들의 염, 여기서,
Ar1, Ar2, Z1, Z2a, Z2b, R1, R2, R4, R11a , R11b 및 #는 상기와 같이 정의되고;
Ya는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
Yb는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
Yc는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
R23은 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고;
R25는 Yb-G이거나 Yc의 원자와 함께 4 내지 6개의 고리 원자를 갖는 고리를 형성하고;
G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2a는 O, CH2, NH 및 S로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2a는 O이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIc.2의 Z2a는 CR6aR6b이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIc.2의 Z2a는 S이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIc.2의 Z2a는 -NR6C(O)-이다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2b는 O, CH2, NH, NCH3 및 S로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2b는 O이다. 특정 실시 형태에서, Z2b는 NH이다. 특정 실시 형태에서, Z2b는 NCH3이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2b는 결합이다. 일부 그러한 실시 형태에서 Ya는 메틸렌 또는 에틸렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2b는 NR6이고, 여기서, R6은 상기와 같이 정의된다. 일부 그러한 실시 형태에서, R6은 Ya로부터의 원자와 함께 3 내지 7개의 고리 원자를 갖는 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성한다. 일부 그러한 실시 형태에서, 고리는 5개의 원자를 갖는다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ya는 에틸렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ya는 메틸렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, R4는 H 또는 메틸이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Yb는 에틸렌 또는 프로필렌이다. 특정 실시 형태에서, Yb는 에틸렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Yc는 에틸렌 또는 프로필렌이다. 특정 실시 형태에서, Yb는 에틸렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, R25는 Yc의 원자와 함께 4 내지 5개의 고리 원자를 갖는 고리를 형성한다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, R23은 메틸이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, G는
Figure pct00176
로부터 선택되며, 여기서 M은 수소 또는 양으로 하전된 반대이온이다. 특정 실시 형태에서, G는
Figure pct00177
이다. 특정 실시 형태에서, G는 SO3H이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00178
로부터 선택되고, #-N(R4)-Ya-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00179
이고, #-N(R4)-Ya-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00180
로부터 선택되고, #-N(R4)-Ya-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00181
이고, #-N(R4)-Ya-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar1은
Figure pct00182
이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IIc.2의 화합물인 특정 실시 형태에서, 기
Figure pct00183
는 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00184
.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId의 화합물인 특정 실시 형태에서, 화합물은 구조 화학식 IId.1을 갖는다:
[화학식 IId.1]
Figure pct00185
또는 이들의 염, 여기서,
Ar1, Ar2, Z1, Z2a, Z2b, R1, R2, R11a , R11b 및 #는 상기와 같이 정의되고;
Ya는 선택적으로 치환된 알킬렌이고;
Yb는 선택적으로 치환된 알킬렌이고;
R23은 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고;
Ga는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
Gb는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, s는 1이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, s는 2이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2a는 O, NH, CH2 및 S로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2a는 O이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IIa.2의 Z2a는 ­CR6aR6b­이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IId.1의 Z2a는 S이다. 특정 실시 형태에서, 화학식 IId.1의 Z2a는 -NR6C(O)-이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Z2b는 O, NH, CH2 및 S로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Z2b는 O이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ya는 에틸렌, 프로필렌 및 부틸렌으로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Y는 에틸렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ya는 에틸렌, 프로필렌 및 부틸렌으로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, Y는 에틸렌이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ga는
Figure pct00186
로부터 선택되며, 여기서 M은 수소 또는 양으로 하전된 반대이온이다. 특정 실시 형태에서, Ga는
Figure pct00187
이다. 특정 실시 형태에서, Ga는 SO3H이다. 특정 실시 형태에서, Ga는 CO2H이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Gb는
Figure pct00188
로부터 선택되며, 여기서 M은 수소 또는 양으로 하전된 반대이온이다. 특정 실시 형태에서, Gb는
Figure pct00189
이다. 특정 실시 형태에서, Gb는 SO3H이다. 특정 실시 형태에서, Gb는 CO2H이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, R23은 메틸이다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00190
로부터 선택되고, 여기서 Ga-Ya-N(#)-(CH2)s-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00191
이며, 여기서, Ga-Ya-N(#)-(CH2)s-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00192
로부터 선택되고, 여기서 Ga-Ya-N(#)-(CH2)s-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다. Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar2는
Figure pct00193
이며, 여기서, Ga-Ya-N(#)-(CH2)s-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착된다.
Bcl-xL 저해제가 화학식 IId.1의 화합물인 특정 실시 형태에서, Ar1은
Figure pct00194
이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 IId의 R11a 및 R11b는 동일하다. 특정 실시 형태에서, R11a 및 R11b는 각각 메틸이다.
특정 실시 형태에서, 화학식 IIa 내지 IId의 화합물은 하기 코어 (C.1) 내지 (C.21) 중 하나를 포함한다:
Figure pct00195
Figure pct00196
Figure pct00197
Figure pct00198
Figure pct00199
Figure pct00200
콘쥬케이션되지 않은 형태로 본원에 개시된 방법에 사용될 수 있고/있거나 본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 구조 화학식 IIa 내지 IId에 따른 예시적인 Bcl-xL 저해제는 하기 화합물, 및/또는 이들의 염을 포함한다:
Figure pct00201
Figure pct00202
Figure pct00203
특히, 본원의 Bcl-xL 저해제가 콘쥬게이션된 형태인 경우, 구조 화학식 IIa 내지 IId의 # 위치에 상응하는 수소는 존재하지 않아서, 모노라디칼을 형성하지 않는다. 예를 들어, 화합물 W2.01 (실시예 1.1)은 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({2-[2-(카르복시메톡시)에톡시]에틸}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산이다.
이것이 콘쥬게이션되지 않은 형태인 경우, 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00204
구조 화학식 IIa 또는 IIb에 나타난 바와 같이 동일한 화합물이 ADC에 포함되는 경우, # 위치에 상응하는 수소는 존재하지 않아서, 모노라디칼을 형성하지 않는다.
Figure pct00205
특정 실시 형태에서, 구조 화학식 IIa 내지 IId에 따른 Bcl-xL 저해제는 W2.01, W2.02, W2.03, W2.04, W2.05, W2.06, W2.07, W2.08, W2.09, W2.10, W2.11, W2.12, W2.13, W2.14, W2.15, W2.16, W2.17, W2.18, W2.19, W2.20, W2.21, W2.22, W2.23, W2.24, W2.25, W2.26, W2.27, W2.28, W2.29, W2.30, W2.31, W2.32, W2.33, W2.34, W2.35, W2.36, W2.37, W2.38, W2.39, W2.40, W2.41, W2.42, W2.43, W2.44, W2.45, W2.46, W2.47, W2.48, W2.49, W2.50, W2.51, W2.52, W2.53, W2.54, W2.55, W2.56, W2.57, W2.58, W2.59, W2.60, W2.61, W2.62, W2.63, W2.64, W2.65, W2.66, W2.67, W2.68, W2.69, W2.70, W2.71, W2.72, W2.73, W2.74, W2.75, W2.76, W2.77, W2.78, W2.79, W2.80, W2.81, W2.82, W2.83, W2.84, W2.85, W2.86, W2.87, W2.88, W2.89, W2.90, 및 W2.91, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 링커에 의해 항체에 연결된 약물을 포함하며, 약물은 W2.01, W2.02, W2.03, W2.04, W2.05, W2.06, W2.07, W2.08, W2.09, W2.10, W2.11, W2.12, W2.13, W2.14, W2.15, W2.16, W2.17, W2.18, W2.19, W2.20, W2.21, W2.22, W2.23, W2.24, W2.25, W2.26, W2.27, W2.28, W2.29, W2.30, W2.31, W2.32, W2.33, W2.34, W2.35, W2.36, W2.37, W2.38, W2.39, W2.40, W2.41, W2.42, W2.43, W2.44, W2.45, W2.46, W2.47, W2.48, W2.49, W2.50, W2.51, W2.52, W2.53, W2.54, W2.55, W2.56, W2.57, W2.58, W2.59, W2.60, W2.61, W2.62, W2.63, W2.64, W2.65, W2.66, W2.67, W2.68, W2.69, W2.70, W2.71, W2.72, W2.73, W2.74, W2.75, W2.76, W2.77, W2.78, W2.79, W2.80, W2.81, W2.82, W2.83, W2.84, W2.85, W2.86, W2.87, W2.88, W2.89, W2.90, 및 W2.91로 이루어진 군으로부터 선택되는 Bcl-xL 저해제이다.
특정 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, Bcl-xL 저해제는 구조 화학식 IIa, IIb,IIc, 또는 IId의 # 위치에 상응하는 수소가 존재하지 않아서 모노라디칼을 형성하지 않는다는 점에서 개질된 하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된다:
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({2-[2-(카르복시메톡시)에톡시]에틸}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
2-{[(2-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}에틸)술포닐]아미노}-2-데옥시-D-글루코피라노스;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(4-{[(3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일]메틸}벤질)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2,3-디히드록시프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
2-({[4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐]술포닐}아미노)-2-데옥시-베타-D-글루코피라노스;
8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-{6-카르복시-5-[1-({3-[2-({2-[1-(베타-D-글루코피라누로노실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]에틸}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-일}-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린;
3-[1-({3-[2-(2-{[4-(베타-D-알로피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}에톡시)트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-포스포노에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}에톡시)트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[L-알파-아스파르틸(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-{4-[({2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에틸}[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노)메틸]벤질}-2,6-언히드로-L-굴론산;
4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐 헥소피라노스이두론산;
6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-포스포노에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[D-알파-아스파르틸(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[1-(카르복시메틸)피페리딘-4-일]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
N-[(5S)-5-아미노-6-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)아미노}-6-옥소헥실]-N,N-디메틸메탄아미늄;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[피페리딘-4-일(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-포스포노프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[N-(2-카르복시에틸)-L-알파-아스파르틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[(2-아미노에틸)(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[5-(2-아미노에톡시)-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포-L-알라닐)(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에틸}(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(카르복시메톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-카르복시프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[L-알파-아스파르틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(1,3-디히드록시프로판-2-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[5-(2-아미노에톡시)-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸){2-[(2-술포에틸)아미노]에틸}아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로-2H-1,4-벤족사진-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-술포프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]피리딘-2-카르복실산;
(1
Figure pct00206
)-1-({2-[5-(1-{[3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-카르복시피리딘-2-일]-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-5-일}메틸)-1,5-언히드로-D-글루시톨;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-카르복시프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[4-(베타-D-글루코피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
3-(1-{[3-(2-{[4-(베타-D-알로피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[아제티딘-3-일(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[(3-아미노프로필)(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(N6,N6-디메틸-L-리실)(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[(3-아미노프로필)(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산;
3-{1-[(3-{2-[아제티딘-3-일(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산;
N6-(37-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-L-리실-N-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]-L-알라닌아미드;
메틸 6-[4-(3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일]-6-데옥시-베타-L-글루코피라노시드;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5,6-디히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-{6-카르복시-5-[1-({3-[2-({3-[1-(베타-D-글루코피라누로노실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로필}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-일}-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린;
6-[7-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1H-인돌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-6-[3-(메틸아미노)프로필]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
5-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-5-데옥시-D-아라비니톨;
1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨;
6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)이소퀴놀린-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1,2-디데옥시-D-에리스로-펜티톨;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{[(2S,3S)-2,3,4-트리히드록시부틸]아미노}에톡시)트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2S,3S,4R,5R,6R)-2,3,4,5,6,7-헥사히드록시헵틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[({3-[(1,3-디히드록시프로판-2-일)아미노]프로필}술포닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-{[1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(3S)-3,4-디히드록시부틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}프로필 베타-D-글루코피라노스이두론산;
6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-옥시도이소퀴놀린-6-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]아세트아미도}트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-({2-[(2-술포에틸)아미노]에틸}술파닐)트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산; 및
6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{3-[(2-술포에틸)아미노]프로필}트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
및 이의 제약상 허용가능한 염.
Bcl-xL 저해제가 항-아폽토시스 Bcl-xL 단백질에 결합하고 그를 저해하여 아폽토시스를 유도한다. Bcl-xL에 결합하여 Bcl-xL 활성을 저해하는 구조 화학식 IIa 내지 IId에 따른 특정 Bcl-xL 저해제는, 예를 들어, 문헌[Tao et al., 2014, ACS Med. Chem. Lett., 5:1088-1093]에 개시된 TR-FRET Bcl-xL 결합 분석법을 포함하는 표준 결합 및 활성 분석법에서 확인될 수 있다. Bcl-xL 결합을 확인하는 데 사용될 수 있는 특정 TR-FRET Bcl-xL 결합 분석법이 하기 실시예 4에서 제공된다. 전형적으로, 저해제 그 자체로서 그리고 본원에 개시된 ADC에서 유용한 Bcl-xL 저해제는 실시예 5의 결합 분석법에서 약 1nM 미만의 Ki를 나타낼 것이지만, 현저히 더 낮은 Ki, 예를 들어 약 1, 0.1, 또는 심지어 0.01 nM 미만의 Ki를 나타낼 수 있다.
Bcl-xL 저해 활성은 또한 문헌[Tao et al., 2014, ACS Med. Chem. Lett., 5:1088-1093]에 기재된 FL5.12 세포 및 Molt-4 세포독성 분석법과 같은 표준 세포-기반 세포독성 분석법에서 확인될 수 있다. 세포막을 투과할 수 있는 특정 Bcl-xL 저해제의 Bcl-xL 저해 활성을 확인하는 데 사용될 수 있는 특정 Molt-4 세포 세포독성 분석법이 하기 실시예 5 및 실시예 6에 제공되어 있다. 전형적으로, 그러한 세포-투과성 Bcl-xL 저해제는 실시예 5 및 실시예 6의 Molt-4 세포독성 분석법에서 약 500nM 미만의 EC50을 나타낼 것이나, 현저히 더 낮은 EC50, 예를 들어 약 250, 100, 50, 20, 10 또는 심지어 5nM 미만의 EC50을 나타낼 수 있다.
가용화 기의 존재로 인해, 본원에 개시된 다수의 Bcl-xL 저해제는 낮거나 매우 낮은 세포 투과성을 나타내며, 따라서 화합물이 세포막을 가로지를 수 없기 때문에, 실시예 5 및 실시예 6의 Molt-4 세포 독성 분석법을 포함하는 특정 세포 분석법에서는 현저한 활성을 얻을 수 없을 것으로 예상된다. 세포막을 자유롭게 가로지를 수 없는 화합물의 Bcl-xL 저해 활성은 투과되는 세포를 사용한 세포 분석법에서 확인될 수 있다. 미토콘드리아 외부막 투과(mitochondrial outer-membrane permeabilization; MOMP)는 Bcl-2 패밀리 단백질에 의해 제어된다. 특히, MOMP는 프로-아폽토시스 Bcl-2 패밀리 단백질 Bax 및 Bak에 의해 촉진되며, 이는, 활성화 시에 외부 미토콘드리아 막에서 올리고머화되고 기공을 형성하여, 사이토크롬c(cytc)의 방출을 야기한다. cytc의 방출은 아폽토좀의 형성을 유발하며, 이는 한편 카스파제 활성화 및 세포가 프로그래밍된 세포 사멸을 거치게 하는 다른 사건을 야기한다(문헌[Goldstein et al., 2005, Cell Death and Differentiation 12:453-462] 참조). Bax 및 Bak의 올리고머화 작용은 Bcl-2 및 Bcl-xL을 포함하는 항-아폽토시스 Bcl-2 패밀리 구성원에 의해 길항된다. Bcl-xL 저해제는, 생존을 위해 Bcl-xL에 의존하는 세포에서, Bax 및/또는 Bak의 활성화, MOMP, cytc의 방출 및 아폽토시스로 이어지는 하류 사건을 야기할 수 있다. cytc 방출의 과정은 세포의 미토콘드리아 분획 및 사이토졸 분획 둘 모두의 웨스턴 블롯을 통해 측정될 수 있으며 세포에서 아폽토시스의 프록시 측정으로서 사용될 수 있다.
낮은 세포 투과성을 갖는 Bcl-xL 저해제에 대한 Bcl-xL 저해 활성과 결과적으로 cytc의 방출을 검출하는 수단으로서, 세포는 플라즈마에서 선택적인 기공 형성을 야기하는 제제로 처리될 수 있지만, 미토콘드리아 막은 아니다. 특히, 콜레스테롤/포스포리피드 비는 미토콘드리아 막보다 원형질 막에서 훨씬 더 높다. 결과로서, 낮은 농도의 콜레스테롤-지향 세제 디기토닌을 사용한 짧은 인큐베이션은 미토콘드리아 막에 현저한 영향을 주지 않고서 선택적으로 원형질 막을 투과한다. 이러한 제제는 콜레스테롤과 함께 불용성 복합체를 형성하여 정상 포스포리피드 결합 부위로부터 콜레스테롤의 분리로 이어진다. 이러한 작용은, 결국, 지질 이중층에서 약 40 내지 50 Å 폭의 구멍의 형성을 야기한다. 일단 원형질 막이 투과되면, 아폽토시스 세포에서 미토콘드리아로부터 사이토졸로 방출된 사이토크롬 C를 포함하는, 디기토닌-형성된 구멍을 통과할 수 있는 사이토졸 성분이 씻겨 나갈 수 있다(문헌[Campos, 2006, Cytometry A 69(6):515-523]).
전형적으로, 화합물이 현저히 더 낮은 EC50, 예를 들어, 약 5, 1, 또는 심지어 0.5 nM 미만을 나타낼 수 있더라도, Bcl-xL 저해제는 실시예 5 및 실시예 6의 Molt-4 세포 투과 cytc 분석법에서 약 10 nM 미만의 EC50을 산출할 것이다. 실시예 6에 입증된 바와 같이, 비-투과 세포를 사용한 표준 Molt-4 세포 독성 분석법에서 활성을 나타내지 않는, 낮거나 더 낮은 세포 투과성을 갖는 Bcl-xL 저해제는, 투과 세포를 사용한 세포 세포독성 분석법에서 cytc의 방출에 의해 측정되는 바와 같이, 강력한 기능적 활성을 나타낸다. 사이토크롬 c 방출에 더하여, 아폽토시스를 거치는 미토콘드리아는 종종 그의 막관통 미토콘드리아 막 전위를 손실한다(문헌[Bouchier-Hayes et al., 2008, Methods 44(3): 222-228]). JC-1은 미토콘드리아에 축적되는 양이온성 카르보시아닌 염료이며 미토콘드리아가 건강한 경우 형광 적색이고 미토콘드리아 막이 손상된 경우 손실된다 (탈분극 백분율; 문헌[Smiley et al., 1991, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 88: 3671-3675]; 문헌[Reers et al., 1991: Biochemistry, 30: 4480-4486]). 신호의 손실은 형광계 (여기 545 nm 및 방출 590 nm)를 사용하여 투과 세포에 의해 검출될 수 있으며, 따라서 완전히 정량적이어서, 재현성 및 처리량 둘 모두를 향상시킨다. 전형적으로, 화합물이 현저히 더 낮은 EC50, 예를 들어, 약 5, 1, 0.5 또는 심지어 0.05 nM 미만을 나타낼 수 있더라도, Bcl-xL 저해제는 실시예 5 및 실시예 6의 Molt-4 세포 투과 JC-1 분석법에서 약 10 nM 미만의 EC50을 산출할 것이다. 실시예 6에 입증된 바와 같이, 비-투과 세포를 사용한 표준 Molt-4 세포 독성 분석법에서 활성을 나타내지 않는, 낮거나 더 낮은 세포 투과성을 갖는 Bcl-xL 저해제는, 투과 세포를 사용한 세포 세포독성 분석법에서 JC-1 분석법에서 막관통 미토콘드리아 막 전위의 손실에 의해 측정되는 바와 같이, 강력한 기능적 활성을 나타낸다. 저투과성 Bcl-xL 저해제는 ADC의 형태의 세포에 투여될 때 또한 강력한 활성을 나타낸다 (예컨대, 실시예 8 참조).
구조 화학식 IIa 내지 IId의 Bcl-xL 저해제 중 다수가 다른 항-아폽토시스 Bcl-2 패밀리 단백질보다 Bcl-xL을 선택적으로 또는 특이적으로 저해하지만, Bcl-xL의 선택적인 및/또는 특이적인 저해는 필수적이지 않다. 화합물을 포함하는 Bcl-xL 저해제 및 ADC는 또한, Bcl-xL을 저해하는 데 더하여, 예를 들어, Bcl-2와 같은, 하나 이상의 다른 항-아폽토시스 Bcl-2 패밀리 단백질을 저해한다. 일부 실시 형태에서, Bcl-xL 저해제 및/또는 ADC는 Bcl-xL에 대해 선택적이고/이거나 특이적이다 특이적 또는 선택적이란, 특정 Bcl-xL 저해제 및/또는 ADC가 동등한 분석 조건 하에서 Bcl-2보다 더 큰 정도로 Bcl-xL에 결합하거나 그를 억제함을 의미한다. 특정한 실시 형태에서, Bcl-xL 저해제 및/또는 ADC는 결합 분석법에서 Bcl-2보다 Bcl-xL에 대해 약 10배, 100배, 또는 심지어 그 초과의 범위의 특이성 또는 선택성을 나타낸다.
III.A .2. Bcl - xL 링커
본원에 개시된 ADC에서, Bcl-xL 저해제는 링커에 의해 항체에 연결된다. Bcl-xL 저해제를 ADC의 항체에 연결하는 링커는 짧거나, 길거나, 소수성이거나, 친수성이거나, 가요성이거나 강성일 수 있거나, 또는 링커가 상이한 특성을 갖는 세그먼트를 포함할 수 있도록, 전술된 특징들 중 하나 이상을 각각 독립적으로 갖는 세그먼트들로 구성될 수 있다. 링커는 하나를 초과하는 Bcl-xL 저해제를 항체 상의 단일 부위에 공유 결합시키도록 다가일 수 있거나, 단일 Bcl-xL 저해제를 항체 상의 단일 부위에 공유 결합시키도록 1가일 수 있다.
당업자가 알고 있는 바와 같이, 링커는 한 위치에서 Bcl-xL 저해제에 대한 공유적 연결체를 형성하고 또 다른 위치에서 항체에 대한 공유적 연결체를 형성함으로써 Bcl-xL 저해제를 항체에 연결한다. 공유적 연결체는 링커 상의 작용기와 저해제 및 항체 상의 작용기 사이의 반응에 의해 형성된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "링커"라는 표현은 (i) 링커를 Bcl-xL 저해제에 공유적으로 연결할 수 있는 작용기 및 링커를 항체에 공유적으로 연결할 수 있는 작용기를 포함하는 링커의 콘쥬게이션되지 않은 형태; (ii) 링커를 항체에 공유적으로 연결할 수 있으며 Bcl-xL 저해제에 공유적으로 연결된, 또는 그 반대인 작용기를 포함하는 링커의 부분 콘쥬게이션된 형태; 및 III Bcl-xL 저해제 및 항체 둘 모두에 공유적으로 연결된 링커의 완전 콘쥬게이션된 형태를 포함하도록 의도된다. 본원에 개시된 중간체 신톤 및 ADC의 일부 특정 실시 형태에서, 링커 상의 작용기 및 링커와 항체 사이에 형성된 공유적 연결체를 포함하는 모이어티는 각각 Rx 및 LK로 구체적으로 표시된다.
링커는 세포 밖의 조건에 대해 바람직하게는 화학적으로 안정하지만 그렇지 않아도 되며, 세포 내부에서 절단, 희생 및/또는 달리 특이적으로 분해되도록 설계될 수 있다. 대안적으로, 세포 내부에서 특이적으로 절단 또는 분해되도록 설계되지 않은 링커가 사용될 수 있다. ADC의 맥락에서 항체에 약물을 연결하는 데 유용한 매우 다양한 링커가 본 기술 분야에 공지되어 있다. 이들 링커 중 임의의 것뿐만 아니라 다른 링커가 Bcl-xL 저해제를 본원에 개시된 ADC에 연결하는 데 사용될 수 있다.
다수의 Bcl-xL 저해제를 항체에 연결하는 데 사용될 수 있는 예시적인 다가 링커가, 예를 들어, 미국 특허 제8,399,512호; 미국 특허 출원 공개 제2010/0152725호; 미국 특허 제8,524,214호; 미국 특허 제8,349,308호; 미국 특허 출원 공개 제2013/189218호; 미국 특허 출원 공개 제2014/017265호; 국제 공개 제2014/093379호; 국제 공개 제2014/093394호; 국제 공개 제2014/093640호에 기술되어 있으며, 이들의 내용은 전체적으로 본원에 참고로 포함된다. 예를 들어, Mersana 등에 의해 개발된 Fleximer® 링커 기술이 양호한 물리화학 특성을 갖는 고-DAR ADC를 가능하게 할 가능성이 있다. 하기에 나타난 바와 같이, Fleximer® 링커 기술은 에스테르 결합의 서열을 통해 가용화 폴리-아세탈 골격 내에 약물 분자를 통합시키는 데 기초한다. 이 방법론은 양호한 물리화학 특성을 유지하면서 고도로 로딩된 ADC (DAR 최대 20)를 제공한다. 이 방법론은 하기 반응식에 도시된 바와 같이 Bcl-xL 저해제와 함께 이용될 수 있다.
Figure pct00207
상기 반응식에 도시된 Fleximer® 링커 기술을 이용하기 위해, 지방족 알코올은 Bcl-xL 저해제 내에 존재하거나 도입될 수 있다. 이어서 알코올 모이어티는 알라닌 모이어티에 콘쥬게이션되고, 이는 이어서 Fleximer® 링커 내로 합성적으로 통합된다. 시험관 내 ADC의 리포좀 과정은 모 알코올-함유 약물을 방출한다.
수지상(dendritic) 유형 링커의 추가의 예는 미국 특허 출원 공개 제2006/116422호; 미국 특허 출원 공개 제2005/271615호; 문헌[de Groot et al., (2003) Angew . Chem . Int . Ed. 42:4490-4494]; 문헌[Amir et al., (2003) Angew . Chem . Int. Ed. 42:4494-4499]; 문헌[Shamis et al., (2004) J. Am. Chem. Soc. 126:1726-1731]; 문헌[Sun et al., (2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215]; 문헌[Sun et al., (2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768]; 문헌[King et al., (2002) Tetrahedron Letters 43:1987-1990]에서 찾을 수 있다.
사용될 수 있는 예시적인 1가 링커는, 예를 들어, 문헌[Nolting, 2013, Antibody-Drug Conjugates, Methods in Molecular Biology 1045:71-100]; 문헌[Kitson et al., 2013, CROs / CMOs - Chemica Oggi - Chemistry Today 31(4): 30-36]; 문헌[Ducry et al., 2010, Bioconjugate Chem . 21:5-13]; 문헌[Zhao et al., 2011, J. Med. Chem. 54:3606-3623]; 미국 특허 제7,223,837호; 미국 특허 제8,568,728호; 미국 특허 제8,535,678호; 및 국제 공개 제2004010957호에 기술되어 있으며, 이들 각각의 내용은 본원에 전체적으로 참고로 포함된다.
예로서 그리고 제한 없이, 본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 일부 절단성 및 비절단성 링커가 하기에 기술된다.
절단성 링커
특정 실시 형태에서, 선택된 링커는 시험관 내 및 생체 내에서 절단가능하다. 절단성 링커는 화학적으로 또는 효소적으로 불안정한 또는 분해가능한 연결체를 포함할 수 있다. 절단성 링커는 일반적으로 약물을 유리시키는 세포 내부의 과정, 예컨대 세포질에서의 환원, 리소좀에서 산성 조건에의 노출, 또는 특이적 프로테아제 또는 내부 내부의 다른 효소에 의한 절단에 의존한다. 절단성 링커는 일반적으로 화학적으로 또는 효소적으로 절단가능한 하나 이상의 화학 결합을 포함하는 한편, 링커의 나머지는 비절단가능하다.
특정 실시 형태에서, 링커는 히드라존 및/또는 디술피드 기와 같은 화학적으로 불안정한(labile) 기를 포함한다. 화학적으로 불안정한 기를 포함하는 링커는 혈장과 일부 세포질 구획 사이의 차등적 특성을 이용한다. 히드라존 함유 링커를 위한 약물 방출을 용이하게 하기 위한 세포내 조건은 엔조좀 및 리소좀의 산성 조건인 한편, 디술피드 함유 링커는 높은 티올 농도, 예컨대, 글루타티온을 함유하는 사이토졸에서 환원된다. 특정 실시 형태에서, 화학적으로 불안정한 기를 포함하는 링커의 혈장 안정성은 화학적으로 불안정한 기 근처에서 치환체를 사용하여 입체 장애를 유도함으로서 증가될 수 있다.
히드라존과 같이 산-불안정한 기는, 혈액의 중성 pH 환경 (pH 7.3 내지 7.5)에서는 체순환 동안 그대로 유지되고, 일단 ADC가 세포의 중간 산성 엔도좀 (pH 5.0 내지 6.5) 및 리소좀 (pH 4.5 내지 5.0) 구획 내로 내재화되면, 가수분해되고 약물을 방출한다. 이러한 pH 의존성 방출 메커니즘은 약물의 비특이적 방출과 관련되었다. 링커의 히드라존 기의 안정성을 증가시키기 위해, 링커는 화학 개질, 예컨대, 치환에 의해 변화되어, 순환의 최소 손실로 리소좀에서 더 효율적인 방출을 달성하도록 조정될 수 있다.
히드라존-함유 링커는 추가 산-불안정한 절단 부위 및/또는 효소적으로 불안정한 절단 부위와 같은 추가 절단 부위를 함유할 수 있다. 예시적인 히드라존-함유 링커를 포함하는 ADC는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00208
여기서, D 및 Ab는 각각 약물 및 Ab을 나타내고, n은 항체에 연결된, 약물-링커의 수를 나타낸다. 링커 (Ig)와 같은 특정 링커에서, 링커는 2개의 절단성 기 - 디술피드 및 히드라존 모이어티를 포함한다. 그러한 링커의 경우, 개질되지 않은 유리 약물의 효과적인 방출은 산성 pH, 또는 디술피드 환원과 산성 pH를 필요로 한다. (Ih) 및 (Ii)와 같은 링커는 단일 히드라존 절단 부위에 효과적인 것으로 나타났다.
링커에 포함될 수 있는 다른 산-불안정한 기는 시스-아코니틸-함유 링커를 포함한다. 시스-아코니틸 화학은 아미드 결합에 병치된 카르복실산을 사용하여 산성 조건 하에서 아미드 가수분해를 가속한다.
절단성 링커는 디술피드 기를 또한 포함할 수 있다. 디술피드는 생리학적 pH에서 열역학적으로 안정하며, 세포 내부에서 내재화 시에 약물을 방출하도록 설계되고, 여기서, 사이토졸은 세포 외부 환경과 비교하여 현저히 더 환원적 환경을 제공한다. 디술피드 결합의 절단은 일반적으로, 디술피드-함유 링커가 순환에서 적절히 안정하여, 사이토졸 내에 약물을 선택적으로 방출하도록, (환원된) 글루타티온 (GSH)과 같은 세포질 티올 보조인자의 존재를 필요로 한다. 세포 내 효소 단백질 디술피드 이성질화효소, 또는 디술피드 결합을 절단할 수 있는 유사한 효소는 또한 세포 내부의 디술피드 결합의 우선적인 절단에 기여할 수 있다. GSH는 대략 5 μM에서의 순환에서 GSH 또는 가장 풍부한 저분자량 티올인 시스테인의 상당히 더 낮은 농도와 비교하여 0.5 내지 10 mM의 농도 범위로 세포에 존재하는 것으로 보고되어 있다. 불규칙적인 혈류가 저산소 상태를 야기하는 종양 세포는 환원성 효소의 향상된 활성 및 따라서 훨씬 더 높은 글루타티온 농도를 가져온다. 특정 실시 형태에서, 디술피드-함유 링커의 생체 내 안정성은 링커의 화학적 개질, 예컨대, 디술피드 결합에 인접한 입체 장애의 사용에 의해 향상될 수 있다.
예시적인 디술피드-함유 링커를 포함하는 ADC는 하기 구조를 포함한다:
Figure pct00209
여기서, D 및 Ab는 각각 약물 및 항체를 나타내고, n은 항체에 연결된, 약물-링커의 수를 나타내고 R은 독립적으로 각각의 경우에 예를 들어 수소 또는 알킬로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, 디술피드 결합에 인접한 입체 장애를 증가시키는 것은 링커의 안정성을 증가시킨다. (Ij) 및 (Il)와 같은 구조는 하나 이상의 R 기가 메틸과 같은 저급 알킬로부터 선택될 때 증가된 생체 내 안정성을 나타낸다.
사용될 수 있는 또 다른 유형의 링커는 효소에 의해 특이적으로 절단되는 링커이다. 그러한 링커는 전형적으로 펩티드계이거나, 효소에 대한 기질로서 작용하는 펩티드 영역을 포함한다. 펩티드계 링커는 화학적으로 불안정한 링커보다 세포질 및 세포 외부 환경에서 더 안정한 경향이 있다. 내인성 저해제로 인해 그리고 리소좀과 비교하여 혈액의 불리하게 높은 pH 값으로 인해, 리소좀 단백질분해 효소가 혈액에서 매우 낮은 활성을 갖기 때문에 펩티드 결합은 일반적으로 양호한 혈청 안정성을 갖는다. 항체로부터의 약물의 방출은 리소좀 프로테아제, 예컨대, 카텝신 및 플라스민의 작용으로 인해 특이적으로 일어난다. 이들 프로테아제는 소정 종양 조직에서 상승된 수준으로 존재할 수 있다. 특정 실시 형태에서, 링커는 리소좀 효소에 의해 절단가능하다. 특정 실시 형태에서, 링커는 리소좀 효소에 의해 절단가능하고, 리소좀 효소는 카텝신B이다. 특정 실시 형태에서, 링커는 리소좀 효소에 의해 절단가능하고, 리소좀 효소는 β-글루쿠로니다아제 또는 β-갈락토시다아제이다. 특정 실시 형태에서, 링커는 리소좀 효소에 의해 절단가능하고, 리소좀 효소는 β-글루쿠로니다아제이다. 특정 실시 형태에서, 링커는 리소좀 효소에 의해 절단가능하고, 리소좀 효소는 β-갈락토시다아제이다.
당업자는, 세포질에 안정하지만 리소좀 효소에 의해 용이하게 절단되는 절단성 링커의 중요성을 알 것이다. 특정 실시 형태에서, 개선된 세포질 안정성 및 소분자 약물의 감소된 비특이적 방출을 나타내는, 리소좀 효소 β-글루쿠로니다아제 또는 β-갈락토시다아제에 의해 절단가능한 링커가 본원에 개시된다.
예시적인 실시 형태에서, 절단성 펩티드는 Gly-Phe-Leu-Gly, Ala-Leu-Ala-Leu와 같은 테트라펩티드 또는 Val-Cit, Val-Ala, 및 Phe-Lys와 같은 디펩티드로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, 디펩티드는 더 긴 펩티드의 소수성으로 인해 더 긴 폴리펩티드에 비해 바람직하다.
항체에 독소루비신, 미토마이신, 캄프토테신, 탈리소마이신 및 아우리스타틴/아우리스타틴 패밀리 구성원과 같은 약물을 연결하는 데 유용한 다양한 디펩티드계 절단성 링커가 개시되어 있다(문헌[Dubowchik et al., 1998, J. Org . Chem . 67:1866-1872]; 문헌[Dubowchik et al., 1998, Bioorg . Med . Chem . Lett . 8:3341-3346]; 문헌[Walker et al., 2002, Bioorg . Med . Chem . Lett . 12:217-219]; 문헌[Walker et al., 2004, Bioorg . Med . Chem . Lett .14:4323-4327; 및 문헌[Francisco et al., 2003, Blood 102:1458-1465] 참조, 이들 각각의 내용은 본원에 참고로 포함됨). 이들 디펩티드 링커, 또는 이들 디펩티드 링커의 개질된 변형 모두가 본원에 개시된 ADC에 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 다른 디펩티드 링커는 Seattle Genetics' Brentuximab Vendotin SGN-35 (Adcetris™), Seattle Genetics SGN-75 (항-CD-70, MC-모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF), Celldex Therapeutics glembatumumab (CDX-011) (항-NMB, Val-Cit-모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 및 Cytogen PSMA-ADC (PSMA-ADC-1301) (항-PSMA, Val-Cit-MMAE)와 같은 ADC에서 찾을 수 있는 것들을 포함한다.
효소적 절단성 링커는 효소 절단 부위로부터 약물을 공간적으로 이격하기 위한 자가-희생성(self-immolative) 스페이서를 포함할 수 있다. 펩티드 링커에 대한 약물의 직접 부착은 약물의 아미노산 부가물의 단백질 분해 방출을 야기하여, 그의 활성을 떨어뜨릴 수 있다. 자가-희생성 스페이서의 사용은 아미드 결합 가수분해 시에 완전히 활성인, 화학적으로 개질되지 않은 약물의 제거를 허용한다.
한 가지 자가-희생성 스페이서는, 아민 함유 약물이 카르바메이트 작용기를 통해 링커의 벤질성 히드록실 기에 부착될 수 있는 (p-아미도벤질카르바메이트, PABC를 제공함) 동안, 아미노 기를 통해 펩티드에 연결되어, 아미드 결합을 형성하는 2작용성 파라-아미노벤질 알코올 기이다. 생성되는 전구약물은 프로테아제-매개 절단 시에 활성화되어, 개질되지 않은 약물, 탄소 디옥시드 및 링커 기의 나머지를 방출하는 1,6-제거 반응을 야기한다. 하기 반응식은 p-아미도벤질 카르바메이트의 단편화 및 약물의 방출을 도시한다:
Figure pct00210
여기서, X-D는 개질되지 않은 약물을 나타낸다. 이러한 자가-희생성 기의 복소환식 변이체가 또한 기술되어 있다. 미국 특허 제7,989,434호를 참조한다.
특정 실시 형태에서, 효소적 절단성 링커는 β-글루쿠론산계 링커이다. 약물의 손쉬운 방출은 리소좀 효소 β-글루쿠로니다아제에 의한 β-글루쿠로니드 글리코시딕 결합의 절단을 통해 실현될 수 있다. 이 효소는 리소좀 내에 풍부하게 존재하며 일부 종양 유형에서 과발현되지만, 세포 밖에서의 효소 활성은 낮다. β-글루쿠론산계 링커는 ADC가 β-글루쿠로니드의 친수성 속성으로 인해 응집을 겪는 경향을 피하는 데 사용될 수 있다. 특정 실시 형태에서, β-글루쿠론산계 링커는 소수성 약물에 연결된 ADC를 위한 링커로서 바람직하다. 하기 반응식은 β-글루쿠론산계 링커를 함유하는 ADC로부터의 약물의 방출을 도시한다:
Figure pct00211
항체에 아우리스타틴, 캄프토테신 및 독소루비신 유사체, CBI 작은-홈(minor-groove) 결합제, 및 사임베린(psymberin)과 같은 약물을 연결하는 데 유용한 다양한 절단성 β-글루쿠론산계 링커가 기술되어 있다(문헌[Jeffrey et al., 2006, Bioconjug . Chem . 17:831-840; 문헌[Jeffrey et al., Bioorg . Med . Chem . Lett . 17:2278-2280]; 및 문헌[Jiang et al., 2005, J. Am. Chem . Soc . 127:11254-11255]을 참조하며, 이들 각각의 내용은 본원에 참고로 포함된다). 이들 β-글루쿠론산계 링커 모두가 본원에 개시된 ADC에 사용될 수 있다. 특정 실시 형태에서, 효소적 절단성 링커는 β-갈락토시드계 링커이다. β-갈락토시드는 리소좀 내에 충분하게 존재하는 한편, 세포 밖에서의 효소 활성은 낮다. 추가로, 페놀 기를 함유하는 Bc1-xL 저해제는 페놀성 산소를 통해 링커에 공유 결합될 수 있다. 미국 특허 출원 공개 제2009/0318668호에 개시된 한 가지 그러한 링커는, 디아미노-에탄 "스페이스링크(SpaceLink)"가 전통적인 "PABO"계 자가-희생성 기와 컨쥬게이션으로 사용되어 페놀을 전달하는 방법론에 의존한다. 본 발명의 Bcl-xL 저해제를 사용하는 링커의 절단은 하기에 반응식적으로 도시된다.
Figure pct00212
절단성 링커는 비-절단성 부분 또는 세그먼트를 포함할 수 있고/있거나, 절단성 세그먼트 또는 부분이 그렇지 않으면 비-절단성인 링커에 포함되어 그를 절단성으로 만들 수 있다. 오직 예시로서, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 관련 중합체는 중합체 골격에 절단성 기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 또는 중합체 링커는 디술피드, 히드라존 또는 디펩티드와 같은 하나 이상의 절단성 기를 포함할 수 있다.
링커에 포함될 수 있는 다른 분해성 연결체는 PEG 카르복실산 또는 활성화된 PEG 카르복실산과 생물학적 활성제 상의 알코올 기 사이의 반응에 의해 형성되는 에스테르 연결체를 포함하며, 그러한 에스테르 기는 일반적으로 생리학적 조건 하에서 가수분해 되어 생물학적 활성제를 방출한다. 가수분해적 분해성 연결체는, 중합체의 말단, 및 올리고뉴클레오티드의 5' 히드록실 기를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 데에, 카르보네이트 연결체; 아민과 알데히드의 반응으로부터 생성되는 이민 연결체; 알코올과 포스페이트 기의 반응에 의해 형성되는 포스페이트 에스테르 연결체; 알데히드와 알코올의 반응 생성물인 아세탈 연결체; 프로메이트와 알코올의 반응 생성물인 오르토에스테르 연결체; 및 포스포라미디트 기에 의해 형성되는 올리고뉴클레오티드 연결체를를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
특정 실시 형태에서, 링커는 효소적 절단성 펩티드 모이어티를 포함하며, 예를 들어, 구조 화학식 IVa, IVb, IVc 또는 IVd를 포함하는 링커를 포함한다:
[화학식 IVa]
Figure pct00213
[화학식 IVb]
Figure pct00214
[화학식 IVc]
Figure pct00215
[화학식 IVd]
Figure pct00216
또는 이의 제약상 허용가능한 염, 여기서,
펩티드는 리소좀 효소에 의해 절단 가능한 펩티드 (N→C로 나타냄, 여기서, 펩티드는 아미노 및 카르복시 "말단"을 포함함)를 나타내고;
T는 하나 이상의 에틸렌 글리콜 단위 또는 알킬렌 사슬, 또는 이들의 조합을 포함하는 중합체를 나타내고;
Ra는 수소, C1-6 알킬, SO3H 및 CH2SO3H로부터 선택되고;
Ry는 수소 또는 C1-4 알킬-(O)r-(C1-4 알킬렌)s-G1 또는 C1-4 알킬-(N)-[(C1-4 알킬렌)-G1]2이고;
Rz는 C1-4 알킬-(O)r-(C1-4 알킬렌)s-G2이고;
G1은 SO3H, CO2H, PEG 4-32, 또는 당 모이어티이고;
G2는 SO3H, CO2H, 또는 PEG 4-32 모이어티이고;
r은 0 또는 1이고;
s는 0 또는 1이고;
p는 0 내지 5의 범위의 정수이고;
q는 0 또는 1이고;
x는 0 또는 1이고;
y는 0 또는 1이고;
Figure pct00217
는 Bcl-xL 저해제에 대한 링커의 부착점을 나타내고;
*는 링커의 나머지에 대한 부착점을 나타낸다.
특정 실시 형태에서, 링커는 효소적 절단성 펩티드 모이어티를 포함하며, 예를 들어, 구조 화학식 IVa, IVb, IVc 또는 IVd, 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 포함하는 링커를 포함한다:
특정 실시 형태에서, 펩티드는 트리펩티드 또는 디펩티드로부터 선택된다. 특정 실시 형태에서, 디펩티드는 Val-Cit; Cit-Val; Ala-Ala; Ala-Cit; Cit-Ala; Asn-Cit; Cit-Asn; Cit-Cit; Val-Glu; Glu-Val; Ser-Cit; Cit-Ser; Lys-Cit; Cit-Lys; Asp-Cit; Cit-Asp; Ala-Val; Val-Ala; Phe-Lys; Lys-Phe; Val-Lys; Lys-Val; Ala-Lys; Lys-Ala; Phe-Cit; Cit-Phe; Leu-Cit; Cit-Leu; Ile-Cit; Cit-Ile; Phe-Arg; Arg-Phe; Cit-Trp; 및 Trp-Cit; 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로부터 선택된다.
본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 구조 화학식 IVa에 따른 링커의 예시적인 실시 형태는 하기에 예시된 링커를 포함한다 (예시된 바와 같이, 링커는 항체에 링커를 공유적으로 연결하기에 적합한 기를 포함함):
[화학식 IVa.1]
Figure pct00218
[화학식 IVa.2]
Figure pct00219
[화학식 IVa.3]
Figure pct00220
[화학식 IVa.4]
Figure pct00221
[화학식 IVa.5]
Figure pct00222
[화학식 IVa.6]
Figure pct00223
[화학식 IVa.7]
Figure pct00224
[화학식 IVa.8]
Figure pct00225
본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 구조 화학식 구조 화학식 IVb, IVc, 또는 IVd에 따른 링커의 예시적인 실시 형태는 하기에 예시된 링커를 포함한다 (예시된 바와 같이, 링커는 항체에 링커를 공유적으로 연결하기에 적합한 기를 포함함):
Figure pct00226
Figure pct00227
Figure pct00228
Figure pct00229
Figure pct00230
Figure pct00231
Figure pct00232
Figure pct00233
Figure pct00234
특정 실시 형태에서, 링커는 효소적 절단성 당 모이어티를 포함하며, 예를 들어, 구조 화학식 (Va), (Vb), (Vc), (Vd), 또는 (Ve)을 포함하는 링커를 포함한다:
Figure pct00235
Figure pct00236
또는 이의 제약상 허용가능한 염, 여기서,
q는 0 또는 1이고;
r은 0 또는 1이고;
X1은 CH2, O 또는 NH이고;
Figure pct00237
는 약물에 대한 링커의 부착점을 나타내고;
*는 링커의 나머지에 대한 부착점을 나타낸다.
본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 구조 화학식 Va에 따른 링커의 예시적인 실시 형태는 하기에 예시된 링커를 포함한다 (예시된 바와 같이, 링커는 항체에 링커를 공유적으로 연결하기에 적합한 기를 포함함):
Figure pct00238
Figure pct00239
Figure pct00240
Figure pct00241
Figure pct00242
Figure pct00243
본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 구조 화학식 Vb에 따른 링커의 예시적인 실시 형태는 하기에 예시된 링커를 포함한다 (예시된 바와 같이, 링커는 항체에 링커를 공유적으로 연결하기에 적합한 기를 포함함):
Figure pct00244
Figure pct00245
Figure pct00246
Figure pct00247
본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 구조 화학식 Vc에 따른 링커의 예시적인 실시 형태는 하기에 예시된 링커를 포함한다 (예시된 바와 같이, 링커는 항체에 링커를 공유적으로 연결하기에 적합한 기를 포함함):
Figure pct00248
Figure pct00249
Figure pct00250
Figure pct00251
본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 구조 화학식 Vd에 따른 링커의 예시적인 실시 형태는 하기에 예시된 링커를 포함한다 (예시된 바와 같이, 링커는 항체에 링커를 공유적으로 연결하기에 적합한 기를 포함함):
Figure pct00252
Figure pct00253
본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 구조 화학식 Ve에 따른 링커의 예시적인 실시 형태는 하기에 예시된 링커를 포함한다 (예시된 바와 같이, 링커는 항체에 링커를 공유적으로 연결하기에 적합한 기를 포함함):
Figure pct00254
비-절단성 링커
절단성 링커가 특정 이점을 제공할 수 있지만, 본원에 개시된 ADC를 포함하는 링커가 절단성일 필요는 없다. 비절단성 링커의 경우, 약물 방출은 혈장과 일부 세포질 구획 사이의 차등적 특성에 의존하지 않는다. 약물의 방출은 항원-매개 엔도시토시스를 통한 ADC의 내재화, 및 항체가 세포내 단백질분해성 분해를 통해 아미노산의 수준까지 분해되는 리소좀 구획으로의 전달 후에 일어나는 것으로 가정된다. 이러한 과정은 약물에 의해 형성되는 약물 유도체, 링커, 및 링커가 공유적으로 부착되는 아미노산 잔기를 방출한다. 비절단성 링커를 갖는 콘쥬게이트로부터의 아미노산 약물 대사산물은 더 친수성이며 일반적으로 덜 막 투과성이고, 이는 절단성 링커와의 콘쥬게이트와 비교하여 더 적은 방관자 효과 및 더 적은 비특이적 독성을 야기한다. 일반적으로, 비절단성 링커를 갖는 ADC는 절단성 링커를 갖는 ADC보다 순환에서 더 큰 안정성을 갖는다. 비-절단성 링커는 알킬렌 사슬일 수 있거나, 예를 들어, 폴리알킬렌 글리콜 중합체, 아미드 중합체에 기초한 것과 같은, 사실상 중합체성일 수 있거나, 알킬렌 사슬, 폴리알킬렌 글리콜 및/또는 아미드 중합체의 세그먼트를 포함할 수 있다. 특정 실시 형태에서, 링커는 1 내지 6개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜를 포함한다.
항체에 약물을 연결하는 데 사용되는 다양한 비-절단성 링커가 개시되었다.(문헌[Jeffrey et al., 2006, Bioconjug . Chem . 17;831-840]; 문헌[Jeffrey et al., 2007, Bioorg . Med . Chem . Lett . 17:2278-2280]; 및 문헌[Jiang et al., 2005, J. Am . Chem . Soc . 127:11254-11255]을 참조하며, 이들의 내용은 본원에 참고로 포함된다). 이들 링커 모두가 본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있다.
특정 실시 형태에서, 링커는 생체 내에서 비-절단성이며, 예를 들어 구조 화학식 VIa, VIb, VIc 또는 VId에 따른 링커이다 (예시된 바와 같이, 링커는 링커를 항체에 공유적으로 결합하는 데 적합한 기를 포함함):
Figure pct00255
또는 이의 제약상 허용가능한 염, 여기서,
Ra은 수소, 알킬, 술포네이트 및 메틸 술포네이트로부터 선택되고;
R x 는 링커를 항체에 공유적으로 연결할 수 있는 작용기를 포함하는 모이어티이고;
Figure pct00256
는 Bcl-xL 저해제에 대한 링커의 부착점을 나타낸다.
본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 구조 화학식 VIa 내지 VId에 따른 링커의 예시적인 실시 형태는 하기에 예시된 링커를 포함한다 (예시된 바와 같이, 링커는 항체에 링커를 공유적으로 연결하기에 적합한 기를 포함하고, "
Figure pct00257
"는 Bcl-xL 저해제에 대한 부착점을 나타냄):
Figure pct00258
링커를 항-B7-H3 항체에 부착하는 데 사용되는 기
부착 기는 사실상 친전자성일 수 있고, 말레이미드 기, 활성화된 디술피드, NHS 에스테르 및 HOBt 에스테르와 같은 활성 에스테르, 할로포르메이트, 산 할라이드, 할로아세트아미드와 같은 알킬 및 벤질 할라이드를 포함할 수 있다. 하기에 논의된 바와 같이, 본 발명에 따라 사용될 수 있는 "자가-안정화"(self-stabilizing) 말레이미드 및 "가교하는 디술피드"와 관련된 기술이 또한 부상하고 있다.
ADC로부터의 약물-링커의 소실이 알부민, 시스테인 또는 글루타티온과의 말레이미드 교환 과정의 결과로서 관찰되었다(문헌[Alley et al., 2008,Bioconjugate Chem . 19: 759-769]). 이는 특히 콘쥬게이션의 고도로 용매-접근가능한 부위에서 우세한 한편, 특히 부분적으로 접근가능하며 양으로 하전된 환경을 갖는 부위는 말레이미드 고리 가수분해를 촉진한다(문헌[Junutula et al., 2008, Nat. Biotechnol. 26: 925-932]). 인식되는 해결책은 콘쥬게이션으로부터 형성되는 숙신이미드를 가수분해하는 것이며, 이는 항체로부터 디콘쥬게이션(deconjugation)에 대해 저항성이어서 ADC를 혈청에서 안정하게 만들기 때문이다. 숙신이미드 고리가 알칼리 조건 하에서 가수분해를 겪는다는 것이 이전에 보고되었다(문헌[Kalia et al., 2007, Bioorg. Med . Chem . Lett . 17: 6286-6289]). 항체 콘쥬게이션 조건 하에서 자발적으로 가수분해되어 개선된 안정성을 갖는 ADC 종을 제공하는 "자가-안정화" 말레이미드 기의 일례가 하기 반응식에 도시되어 있다. 미국 특허 출원 공개 제2013/0309256호, 국제 공개 제2013/173337호, 문헌[Tumey et al., 2014, Bioconjugate Chem. 25: 1871-1880], 및 문헌[Lyon et al., 2014, Nat. Biotechnol. 32: 1059-1062]을 참조한다. 따라서, 말레이미드 부착 기는 항체의 술프히드릴과 반응되어 중간체 숙신이미드 고리를 제공한다. 부착 기의 가수분해된 형태는 혈장 단백질의 존재 하에서 디콘쥬게이션에 저항성이다.
Figure pct00259
상기에 나타난 바와 같이, 링커의 말레이미드 고리는 항체 Ab와 반응하여, 숙신이미드 (폐쇄 형태) 또는 숙신아미드 (개방 형태) 중 어느 하나로서 공유 부착을 형성한다.
Polytherics는 본래의 힌지 디술피드 결합의 환원으로부터 유도되는 한 쌍의 술프히드릴 기를 가교하는 방법을 개시하였다. 문헌[Badescu et al., 2014, Bioconjugate Chem . 25:1124-1136]을 참조한다. 반응이 하기 반응식에 도시되어 있다. 이 방법론의 이점은 (4 쌍의 술프히드릴을 제공하도록) IgG의 완전한 환원 후에 4 당량의 알킬화제와의 반응에 의해 균질한 DAR4 ADC를 합성하는 능력이다. "가교된 디술피드"를 함유하는 ADC는 또한 증가된 안정성을 갖는다고 주장된다.
Figure pct00260
유사하게, 하기에 도시된 바와 같이, 한 쌍의 술프히드릴 기를 가교할 수 있는 말레이미드 유도체가 개발되었다. 미국 특허 출원 공개 제2013/0224228호를 참조한다.
Figure pct00261
특정 실시 형태에서 부착 모이어티는 구조 화학식 VIIa, VIIb, 또는 VIIc를 포함한다:
Figure pct00262
또는 이의 제약상 허용가능한 염, 여기서,
Rq는 H 또는 -O-(CH2CH2O)11-CH3이고;
x는 0 또는 1이고;
y는 0 또는 1이고;
G3은 -CH2CH2CH2SO3H 또는 -CH2CH2O-(CH2CH2O)11-CH3이고;
Rw는 -O-CH2CH2SO3H 또는 -NH(CO)-CH2CH2O-(CH2CH2O)12-CH3이고;
*는 링커의 나머지에 대한 부착점을 나타낸다.
특정 실시 형태에서, 링커는 구조 화학식 VIIIa, VIIIb, 또는 VIIIc에 따른 세그먼트를 포함한다:
Figure pct00263
또는 가수분해된 유도체 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 여기서,
Rq는 H 또는 -O-(CH2CH2O)11-CH3이고;
x는 0 또는 1이고;
y는 0 또는 1이고;
G3은 -CH2CH2CH2SO3H 또는 -CH2CH2O-(CH2CH2O)11-CH3이고;
Rw는 -O-CH2CH2SO3H 또는 -NH(CO)-CH2CH2O-(CH2CH2O)12-CH3이고;
*는 링커의 나머지에 대한 부착점을 나타내고;
Figure pct00264
는 항체에 대한 링커의 부착점을 나타낸다.
본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 구조 화학식 VIIa 및 VIIb에 따른 링커의 예시적인 실시 형태는 하기에 예시된 링커를 포함한다 (예시된 바와 같이, 링커는 항체에 링커를 공유적으로 연결하기에 적합한 기를 포함함):
Figure pct00265
Figure pct00266
Figure pct00267
Figure pct00268
Figure pct00269
Figure pct00270
Figure pct00271
본원에 개시된 ADC에 포함될 수 있는 구조 화학식 VIIc에 따른 링커의 예시적인 실시 형태는 하기에 예시된 링커를 포함한다 (예시된 바와 같이, 링커는 항체에 링커를 공유적으로 연결하기에 적합한 기를 포함함):
Figure pct00272
Figure pct00273
Figure pct00274
특정 실시 형태에서, L은 폐쇄 형태 또는 개방 형태 중 어느 하나의 IVa.1-IVa.8, IVb.1-IVb.19, IVc.1-IVc.7, IVd.1-IVd.4, Va.1-Va.12, Vb.1-Vb.10, Vc.1-Vc.11, Vd.1-Vd.6, Ve.1-Ve.2, VIa.1, VIc.1-V1c.2, VId.1-VId.4, VIIa.1-VIIa.4, VIIb.1-VIIb.8, VIIc.1-VIIc.6, 및 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시 형태에서, L은 IVb.2, IVc.5, IVc.6, IVc.7, IVd.4, Vb.9, VIIa.1, VIIa.3, VIIc.1, VIIc.4, 및 VIIc.5 (여기서, 각각의 링커의 말레이미드는 항체 Ab와 반응되어, 숙신이미드 (폐쇄 형태) 또는 숙신아미드 (개방 형태) 중 어느 하나로서의 공유 부착을 형성하였음), 및 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시 형태에서, L은 IVb.2, IVc.5, IVc.6, IVd.4, VIIa.1, VIIa.3, VIIc.1, VIIc.4, VIIc.5 (여기서, 각각의 링커의 말레이미드는 항체 Ab와 반응되어, 숙신이미드 (폐쇄 형태) 또는 숙신아미드 (개방 형태) 중 어느 하나로서의 공유 부착을 형성하였음), 및 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시 형태에서, L은 IVb.2, VIIa.3, IVc.6, 및 VIIc.1로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서,
Figure pct00275
는 약물 D에의 부착점이고, @는 Lk에의 부착점이다(여기서, 링커가 하기에 나타낸 바와 같이 개방 형태로 존재할 때, @는 이것 바로 옆의 카르복실산의 α-위치 또는 β-위치 중 어느 하나에 있을 수 있다:
Figure pct00276
Figure pct00277
Figure pct00278
.
Bcl-xL 링커 선택 상의 고려 사항
당업자가 알고 있는 바와 같이, 특정 ADC를 위해 선택된 링커는 항체에의 부착 부위 (예컨대, lys, cys 또는 다른 아미노산 잔기), 약물작용발생단(pharmacophore)의 구조적 제약 및 약물의 친지질성을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 다양한 요인에 의해 영향을 받을 수 있다. ADC를 위해 선택된 특정 링커는 특정 항체/약물 조합에 대해 이들 상이한 요인의 균형을 이루도록 하여야 한다. ADC 내의 링커의 선택에 의해 영향을 받는 요인들의 검토를 위해, 문헌[Nolting, Chapter 5 "Linker Technology in Antibody-Drug Conjugates", Antibody-Drug Conjugates: Methods in Molecular Biology, vol. 1045, pp. 71-100, Laurent Ducry (Ed.), Springer Science & Business Medica, LLC, 2013]을 참조한다.
예를 들어, ADC는 항원-양성 종양 세포 근처에 존재하는 방관자 항원-음성 세포의 사멸을 달성하는 것으로 관찰되었다. ADC에 의한 방관자 세포 사멸의 메커니즘은, ADC의 세포내 처리 동안 형성되는 대사산물이 역할을 할 수 있음을 나타내었다. 항원-양성 세포에서 ADC의 대사에 의해 생성되는 중성 세포독성 대사산물은 방관자 세포 사멸에서 역할을 하는 것으로 보이지만, 하전된 대사산물은 막을 가로질러 매질 내로 확산하는 것이 방지될 수 있고 따라서 방관자 사멸에 영향을 줄 수 없다. 특정 실시 형태에서, 링커는 ADC의 세포 대사산물에 의해 유발되는 방관자 사멸 효과를 약화시키도록 선택된다. 특정 실시 형태에서, 링커는 방관자 사멸 효과를 증가시키도록 선택된다.
링커의 특성은 또한 사용 및/또는 저장 조건 하에서의 ADC의 응집에 영향을 줄 수 있다. 전형적으로, 문헌에 보고된 ADC는 항체 분자당 3 내지 4개 이하의 약물 분자를 함유한다 (예컨대, 문헌[Chari, 2008, Acc Chem Res 41:98-107] 참조). 더 높은 약물-대-항체 비("DAR")를 얻으려는 시도는, ADC의 응집 때문에, 특히 약물 및 링커 둘 모두가 소수성인 경우에, 종종 실패하였다(문헌[King et al., 2002, J Med Chem 45:4336-4343; 문헌[Hollander et al., 2008, Bioconjugate Chem 19:358-361]; 문헌[Burke et al., 2009 Bioconjugate Chem 20:1242-1250] 참조). 많은 경우에, 3 내지 4보다 높은 DAR이 효력을 증가시키는 수단으로서 유리할 수 있다. Bcl-xL 저해제가 사실상 소수성인 경우에, ADC 응집을 감소시키는 수단으로서 비교적 친수성인 링커를 선택하는 것이, 특히 3 내지 4 초과의 DAR이 요구되는 경우, 바람직할 수 있다. 따라서, 특정 실시 형태에서, 링커는 저장 및/또는 사용 동안 ADC의 응집을 감소시키는 화학적 모이어티를 포함한다. 링커는 ADC의 응집을 감소시키기 위해, 하전된 기 또는 생리학적 pH에서 하전되는 기와 같은 극성 또는 친수성 기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 링커는 생리학적 pH에서, 예컨대, 카르복실레이트를 탈양성자화하거나, 또는 예컨대, 아민을 양성자화하는 기 또는 염과 같은 하전된 기를 포함할 수 있다.
많은 Bcl-xL 저해제를 항체에 연결하는 데 사용될 수 있는, 20만큼 높은 DAR을 산출하는 것으로 보고된 예시적인 다가 링커가 미국 특허 제8,399,512호; 미국 특허 출원 공개 제2010/0152725호; 미국 특허 제8,524,214호; 미국 특허 제8,349,308호;미국 특허 출원 공개 제2013/189218호; 미국 특허 출원 공개 제2014/017265호; 국제 공개 제2014/093379호; 국제 공개 제2014/093394호; 국제 공개 제2014/093640호에 기술되어 있으며, 이들의 내용은 전체적으로 본원에 참고로 포함된다.
특정 실시 형태에서, 저장 또는 사용 동안 ADC의 응집은 크기-배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 결정할 때 약 40% 미만이다. 특정 실시 형태에서, 저장 또는 사용 동안 ADC의 응집은 크기-배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 결정할 때 35% 미만, 예컨대 약 30% 미만, 예컨대 약 25% 미만, 예컨대 약 20% 미만, 예컨대 약 15% 미만, 예컨대 약 10% 미만, 예컨대 약 5% 미만, 예컨대 약 4% 미만이거나, 또는 훨씬 더 적다.
III.A .3. Bcl - xL ADC 신톤
항체-약물 콘쥬게이트 신톤은 ADC를 형성하는 데 사용되는 합성 중간체이다. 신톤은 일반적으로 구조 화학식 III에 따른 화합물이다:
[화학식 III]
Figure pct00279
또는 이의 제약상 허용가능한 염, 여기서, D는 앞서 기재된 바와 같이 Bcl-xL 저해제이고, L은 앞서 기재된 바와 같은 링커이고, R x 는 신톤을 항체에 연결하는 데 적합한 반응성 기이다.
특정한 실시 형태에서, 중간체 신톤은 하기 구조 화학식 IIIa, IIIb, IIIc 및 IIId에 따른 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이고, 여기서, 다양한 치환체 Ar1, Ar2, Z1, Z2a, Z2b, R', R1, R2, R4, R11a, R11b, R12 및 R13은 각각 구조 화학식 IIa, IIb, IIc 및 IId에 대해 앞서 정의된 바와 같고, L은 앞서 정의된 바와 같은 링커이고, R x 는 전술된 바와 같은 작용기이다:
[화학식 IIIa]
Figure pct00280
[화학식 IIIb]
Figure pct00281
[화학식 IIIc]
Figure pct00282
[화학식 IIId]
Figure pct00283
ADC를 합성하기 위해, 작용기 R x 가 항체 상의 "상보적" 작용기, Fx와 반응하여, 공유 연결체를 형성하는 조건 하에서, 구조 화학식 III에 따른 중간체 신톤, 또는 이의 염을 관심 항체와 접촉시킨다.
Figure pct00284
기 R x 및 기 F x 의 실체는 신톤을 항체에 연결하는 데 사용되는 화학에 의존할 것이다. 일반적으로, 사용되는 화학은 항체의 완전성, 예를 들어 그의 표적에 결합하는 그의 능력을 변경하지 않아야 한다. 바람직하게는, 콘쥬게이션된 항체의 결합 특성은 콘쥬게이션되지 않은 항체의 결합 특성과 매우 유사할 것이다. 분자를 항체와 같은 생물학적 분자에 콘쥬게이션하는 다양한 화학 및 기술이 본 기술 분야에 공지되어 있으며 특히 항체에 대한 것이 잘 알려져 있다. 예컨대, 문헌[Amon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", Monoclonal Antibodies And CancerTherapy, Reisfeld et al. Eds., Alan R. Liss, Inc., 1985]; 문헌[Hellstrom et al., "Antibodies ForDrugDelivery", Controlled Drug Delivery, Robinson et al., Eds., Marcel Dekker, Inc., 2nd Ed. 1987]; 문헌[Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al., Eds., 1985]; 문헌["Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody In CancerTherapy", Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al., Eds., Academic Press, 1985]; 문헌[Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58]; 국제 공개 제89/12624호를 참조한다. 이들 화학 중 임의의 것이 신톤을 항체에 연결하는 데 사용될 수 있다.
전형적으로, 신톤은, 예를 들어, 접근가능한 리신 잔기의 일차 아미노 기 또는 접근가능한 시스테인 잔기의 술프히드릴 기를 포함하는, 항체의 아미노산 잔기의 측쇄에 연결된다. 자유 술프히드릴 기는 사슬내 디술피드 결합을 환원시킴으로써 얻어질 수 있다. 특정 실시 형태에서, LK는 항-hB7-H3 항체 Ab 상의 아미노기에 의해 형성된 연결체이다. 특정 실시 형태에서, LK는 아미드, 티오에테르, 또는 티오우레아이다. 특정 실시 형태에서, LK는 아미드 또는 티오우레아이다. 특정 실시 형태에서, LK는 항-hB7-H3 항체 Ab 상의 술프히드릴 기에 의해 형성된 연결체이다. 특정 실시 형태에서, LK는 티오에테르이다. 특정 실시 형태에서, LK는 아미드, 티오에테르, 또는 티오우레아이고; m은 1 내지 8의 범위의 정수이다.
신톤을 접근가능한 리신 잔기에 연결하는 데 유용한 다수의 작용기 R x 및 화학이 공지되어 있으며, 예로서 그리고 제한 없이 NHS-에스테르 및 이소티오시아네이트를 포함한다.
신톤을 시스테인 잔기의 접근가능한 유리 술프히드릴 기에 연결하는 데 유용한 다수의 작용기 R x 및 화학이 알려져 있으며, 예로서 그리고 제한 없이 할로아세틸 및 말레이미드를 포함한다.
그러나, 콘쥬게이션 화학은 이용가능한 측쇄 기에 제한되지 않는다. 아민과 같은 측쇄는 적절한 소분자를 아민에 연결함으로써 히드록실과 같은 다른 유용한 기로 전환될 수 있다. 이러한 전략은 다작용성 소분자를 항체의 접근가능한 아미노산 잔기의 측쇄에 콘쥬게이션함으로써, 항체 상의 이용가능한 연결 부위의 수를 증가시키는 데 사용될 수 있다. 신톤을 이들 "전환된" 작용기에 공유적으로 연결시키기에 적합한 작용기 R x 는 신톤에 포함된다.
항체는 또한 콘쥬게이션을 위한 아미노산 잔기를 포함하도록 가공될 수 있다. ADC의 맥락에서 약물을 콘쥬게이션하기에 유용한 비-유전자적으로 코딩된 아미노산 잔기를 포함하도록 항체를 조작하기 위한 접근법이 문헌[Axup et al., 2003, Proc Natl Acad Sci 109:16101-16106] 및 문헌[Tian et al., 2014, Proc Natl Acad Sci 111:1776-1771]에 기술되어 있으며, 신톤을 비-코딩된 아미노산에 연결하기에 유용한 화학 및 작용기도 그러하다.
본원에 개시된 ADC를 제조하는 데 유용한 예시적인 신톤은 표 B에서 하기에 열거된 다음의 신톤을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
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특정 실시 형태에서, 신톤은 신톤 실시예 2.1, 2.2, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 2.10, 2.11, 2.12, 2.13, 2.14, 2.15, 2.16, 2.17, 2.18, 2.19, 2.20, 2.21, 2.22, 2.23, 2.24, 2.25, 2.26, 2.27, 2.28, 2.29, 2.30, 2.31, 2.32, 2.33, 2.34, 2.35, 2.36, 2.37, 2.38, 2.39, 2.40, 2.41, 2.42, 2.43, 2.44, 2.45, 2.46, 2.47, 2.48, 2.49, 2.50, 2.51, 2.52, 2.53, 2.54, 2.55, 2.56, 2.57, 2.58, 2.59, 2.60, 2.61, 2.62, 2.63, 2.64, 2.65, 2.66, 2.67, 2.68, 2.69, 2.77, 2.78, 2.79, 2.80, 2.81, 2.82, 2.83, 2.84, 2.85, 2.86, 2.87, 2.88, 2.89, 2.90, 2.91, 2.92, 2.93, 2.94, 2.95, 2.96, 2.97, 2.98, 2.101, 2.102, 2.103, 2.104, 2.105, 2.106, 2.107, 2.108, 2.109, 2.110, 2.111, 2.112, 2.113, 2.114, 2.115, 2.116, 2.117, 2.118, 2.119, 2.120, 2.121, 2.122, 2.123, 2.124, 2.125, 2.126, 2.127, 2.128, 2.129, 2.130, 2.131, 2.132, 2.133, 2.134, 2.135, 2.136, 2.137, 2.138, 2.139, 2.140, 2.141, 2.142, 2.143, 2.144, 2.145, 2.146, 2.147, 2.148, 2.149, 2.150, 2.151, 2.152, 2.153, 2.154, 2.155, 2.156, 2.157, 2.158, 2.159, 2.160, 2.161, 2.162, 2.163, 2.164, 2.166, 2.167, 2.168, 2.169, 2.170, 2.171, 2.172, 2.173, 2.174, 2.175, 및 2.176, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 이들 신톤의 화합물명이 하기에 제공된다:
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-술포프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[{2-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에톡시]에틸}(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
메틸 6-[4-(3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N5-카르바모일-L-오르니틸}아미노)벤질]옥시}카르보닐)아미노}프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일]-6-데옥시-베타-L-글루코피라노시드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-(4-{[([2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]{3-[1-(베타-D-글루코피라누로노실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로필}카르바모일) 옥시]메틸}페닐)-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[(2R)-1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)아미노}-1-옥소-3-술포프로판-2-일]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][4-(베타-D-글루코피라노실옥시)벤질]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[4-(베타-D-알로피라노실옥시)벤질][2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-포스포노에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-포스포노에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[(2R)-1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1-옥소-3-술포프로판-2-일]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[{2-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에톡시]에틸}(3-포스포노프로필)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[{2-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에톡시]에틸}(3-포스포노프로필)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-L-알라닌아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2S)-3-카르복시-2-({[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}프로파노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}아미노)프로파노일](메틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][4-(베타-D-글루코피라누로노실옥시)벤질]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-포스포노에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N5-카르바모일-N-{4-[({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[(2R)-1-{[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)아미노}-1-옥소-3-술포프로판-2-일]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[(2R)-1-{[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)아미노}-1-옥소-3-술포프로판-2-일]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N5-카르바모일-N-{4-[({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2R)-3-카르복시-2-({[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}프로파노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}아미노)프로파노일](메틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][1-(카르복시메틸)피페리딘-4-일]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
(S)-6-((2-((3-((4-(6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)(메틸)아미노)-5-((((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)아미노)-N,N,N-트리메틸-6-옥소헥산-1-아미늄 염;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-포스포노프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N5-카르바모일-N-{4-[({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N5-카르바모일-N-{4-[({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-오르니틴아미드;
N-{6-[(클로로아세틸)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(카르복시메톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(2-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)아미노}에틸)(2-카르복시에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({(2S)-2-[{[(4-{[(2S)-5-(카르바모일아미노)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}펜타노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}(2-카르복시에틸)아미노]-3-카르복시프로파노일}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2S)-2-({[(4-{[(2S)-5-(카르바모일아미노)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}펜타노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}아미노)-3-카르복시프로파노일](2-술포에틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-카르복시프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(카르복시메톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(2-{[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-(6-카르복시-5-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-5-일]옥시}에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(2-{[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-(6-카르복시-5-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-5-일]옥시}에틸)(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(2-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)아미노}에틸)(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-{6-[(클로로아세틸)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로-2H-1,4-벤족사진-6-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(2-{[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-(6-카르복시-5-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-5-일]옥시}에틸)(2-카르복시에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-술포프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2S)-2-({[(4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-3-[(3-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}프로파노일)아미노]벤질)옥시]카르보닐}아미노)-3-술포프로파노일](메틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-포스포노프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)({[(2E)-3-(4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-3-[(3-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}프로파노일)아미노]페닐)프로프-2-엔-1-일]옥시}카르보닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸){[(4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-2-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]벤질)옥시]카르보닐}아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
N-[6-(에테닐술포닐)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
4-[(1E)-3-{[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
4-[(1E)-3-{[(4-{[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-3-술포-L-알라닐}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-(2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일](2-술포에틸)아미노}에톡시)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일](2-술포에틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{[1-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-21-옥소-22-(2-술포에틸)-3,6,9,12,15,18-헥사옥사-22-아자테트라코산-24-일]옥시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{[1-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-21-옥소-22-(2-술포에틸)-3,6,9,12,15,18,25-헵타옥사-22-아자헵타코산-27-일]옥시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[6-(에테닐술포닐)헥사노일](2-술포에틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[{6-[(클로로아세틸)아미노]헥사노일}(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-카르복시프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-{6-[(브로모아세틸)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-카르복시프로필)카르바모일}옥시)메틸]-3-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
4-({[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-카르복시프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)-3-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](3-술포프로필)카르바모일}옥시)메틸]-3-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)아미노}아제티딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{[26-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-8,24-디옥소-3-(2-술포에틸)-11,14,17,20-테트라옥사-3,7,23-트리아자헥사코스-1-일]옥시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)아미노}프로필)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-{6-[(요오도아세틸)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-{6-[(에테닐술포닐)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-{6-[(에테닐술포닐)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-{[6-(에테닐술포닐)헥사노일]아미노}프로필)(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
N-[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸){[(2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-4-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]벤질)옥시]카르보닐}아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-3-술포-L-알라닐-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{[(43S,46S)-43-({[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}프로파노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}아미노)-46-메틸-37,44,47-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사-38,45,48-트리아자펜타콘탄-50-일]옥시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸){[(2-{[(2R,3S,4R,5R,6R)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-4-[2-(2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}에톡시)에톡시]벤질)옥시]카르보닐}아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-6-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-6-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5,6-디히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1H-인돌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[{3-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-(6-카르복시-5-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일]프로필}(메틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-(6-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}헥사노일)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][3-(베타-L-글루코피라누로노실옥시)프로필]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)이소퀴놀린-6-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-알파-글루타밀-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-알파-글루타밀-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-D-발릴-N5-카르바모일-D-오르니틸}아미노)벤질]옥시}카르보닐)아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-옥시도이소퀴놀린-6-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-{(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]프로파노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-{(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]프로파노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산;
3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-(4-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}부틸)-2-(베타-D-글루코피라누로노실옥시)벤질]옥시}카르보닐)아미노}프로필 베타-D-글루코피라노스이두론산;
N-{[(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-(메톡시메틸)-2-옥소피롤리딘-1-일]아세틸}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산;
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-(4-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}부틸)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[4-({(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]프로파노일}아미노)부틸]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산;
6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)에틸)-4-((S)-2-((S)-2-(2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-((2-술포에톡시)메틸)피롤리딘-1-일)아세트아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산;
6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-4-(4-(2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-((2-술포에톡시)메틸)피롤리딘-1-일)아세트아미도)부틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산;
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[4-({(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]프로파노일}아미노)부틸]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-(4-카르복시부틸)페닐}-L-알라닌아미드;
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-(3-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}프로필)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[({[2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-4-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)벤질]옥시}카르보닐)(3-{[1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)-3-(1-((3-(2-((((2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-4-(4-(2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-((2-술포에톡시)메틸)피롤리딘-1-일)아세트아미도)부틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산;
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]카르바모일}옥시)메틸]-5-(3-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}프로필)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
N-({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘트-52-인-53-일)페닐}-L-알라닌아미드;
N-({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘탄-53-일)페닐}-L-알라닌아미드;
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일}옥시)메틸]-5-(3-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}프로필)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)-2-(베타-D-글루코피라누로노실옥시)벤질]옥시}카르보닐)아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨;
1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)-2-(베타-D-글루코피라누로노실옥시)벤질]옥시}카르보닐)아미노}-1,2-디데옥시-D-에리스로-펜티톨;
N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-[27-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-일)-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트리아콘탄-30-일]페닐}-L-알라닌아미드;
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2S)-3-[3,4-비스(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산;
N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일)-베타-알라닐-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘탄-53-일)페닐}-L-알라닌아미드;
N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일)-베타-알라닐-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-[27-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-일)-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트리아콘탄-30-일]페닐}-L-알라닌아미드;
N-{(3S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-{(3R)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({[(2-{2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]에틸}-4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}프로파노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}[(3R,4S,5R)-3,4,5,6-테트라히드록시헥실]아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({[(2-{2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]에틸}-4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)아미노]-3-메틸부타노일}아미노)프로파노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}[(3R,4S,5R)-3,4,5,6-테트라히드록시헥실]아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일)-베타-알라닐-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산;
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산;
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{(3S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산;
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{(3R)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산;
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{(3S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(3-술포프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산;
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{(3R)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(3-술포프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산;
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-[2-(2-술포에톡시)에틸]-베타-알라닐-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산;
6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-[1-({3-[2-({[(2-{2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시옥산-2-일]에틸}-4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-{4-[(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일)옥시]페닐}프로파노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}프로파노일]아미노}페닐)메톡시]카르보닐}[(3R,4S,5R)-3,4,5,6-테트라히드록시헥실]아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
4-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}[(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일)옥시]메틸}-3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세트아미도]에톡시}에톡시)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
2,6-언히드로-8-[2-({[{2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)-5-{[(79S,82S)-74-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-82-메틸-77,80,83-트리옥소-79-(프로판-2-일)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사-74,78,81-트리아자트리옥타콘탄-83-일]아미노}페닐]-7,8-디데옥시-L-글리세로-L-굴로-옥톤산;
6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3-{2-[{[(4-{[(2S,5S)-2-[3-(카르바모일아미노)프로필]-10-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-4,7-디옥소-5-(프로판-2-일)-15-술포-13-옥사-3,6,10-트리아자펜타데카난-1-오일]아미노}페닐)메톡시]카르보닐}(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)에틸)-4-((S)-2-((S)-2-(2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-((2-술포에톡시)메틸)피롤리딘-1-일)아세트아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산;
2,6-언히드로-8-(2-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}[(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일)옥시]메틸}-5-{[(2S)-2-({(2S)-2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세트아미도]-3-메틸부타노일}아미노)프로파노일]아미노}페닐)-7,8-디데옥시-L-글리세로-L-굴로-옥톤산;
2-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}[(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일)옥시]메틸}-5-{4-[2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세트아미도]부틸}페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3-{2-[{[(4-{[(2S)-5-(카르바모일아미노)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}펜타노일]아미노}페닐)메톡시]카르보닐}(2-술포에틸)아미노]아세트아미도}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}술파닐)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(3-{3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}프로필)(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N 5-카르바모일-L-오르니틴아미드;
2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일}옥시)메틸]-5-{4-[({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)아미노]부틸}페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
2,6-언히드로-8-[2-({[{2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)-5-{[N-({(3R,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-L-알라닐]아미노}페닐]-7,8-디데옥시-L-글리세로-L-굴로-옥톤산;
2,6-언히드로-8-{2-({[{2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)-5-[(N-{[(3R,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-(41-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카옥사-42-아자트리테트라콘탄-43-일)피롤리딘-1-일]아세틸}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}-7,8-디데옥시-L-글리세로-L-굴로-옥톤산;
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일)-b-알라닐-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산; 및
(6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-[2-(2-술포에톡시)에틸]-b-알라닐-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산.
특정 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염,
D는 구조 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId의 # 위치에 상응하는 수소가 존재하지 않아서 모노라디칼을 형성하지 않는다는 점에서 개질된 하기 화합물:
W2.01, W2.02, W2.03, W2.04, W2.05, W2.06, W2.07, W2.08, W2.09, W2.10, W2.11, W2.12, W2.13, W2.14, W2.15, W2.16, W2.17, W2.18, W2.19, W2.20, W2.21, W2.22, W2.23, W2.24, W2.25, W2.26, W2.27, W2.28, W2.29, W2.30, W2.31, W2.32, W2.33, W2.34, W2.35, W2.36, W2.37, W2.38, W2.39, W2.40, W2.41, W2.42, W2.43, W2.44, W2.45, W2.46, W2.47, W2.48, W2.49, W2.50, W2.51, W2.52, W2.53, W2.54, W2.55, W2.56, W2.57, W2.58, W2.59, W2.60, W2.61, W2.62, W2.63, W2.64, W2.65, W2.66, W2.67, W2.68, W2.69, W2.70, W2.71, W2.72, W2.73, W2.74, W2.75, W2.76, W2.77, W2.78, W2.79, W2.80, W2.81, W2.82, W2.83, W2.84, W2.85, W2.86, W2.87, W2.88, W2.89, W2.90, 및 W2.91, 및 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 Bcl-xL 저해제이며;
L은 링커 IVa.1-IVa.8, IVb.1-IVb.19, IVc.1-IVc.7, IVd.1-IVd.4, Va.1-Va.12, Vb.1-Vb.10, Vc.1-Vc.11, Vd.1-Vd.6, Ve.1-Ve.2, VIa.1, VIc.1-V1c.2, VId.1-VId.4, VIIa.1-VIIa.4, VIIb.1-VIIb.8, VIIc.1-VIIc.6으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서, 각각의 링커는 항체, Ab와 반응하여 공유적 부착을 형성하였고;
LK는 티오에테르이고;
m은 1 내지 8의 범위의 정수이다.
특정 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염,
D는 구조 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId의 # 위치에 상응하는 수소가 존재하지 않아서 모노라디칼을 형성하지 않는다는 점에서 개질된 하기 화합물:
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(3S)-3,4-디히드록시부틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
및 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
L은 폐쇄 형태 또는 개방 형태 중 어느 하나의 링커 IVb.2, IVc.5, IVc.6, IVc.7, IVd.4, Vb.9, Vc.11, VIIa.1, VIIa.3, VIIc.1, VIIc.4, 및 VIIc.5 및 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
LK는 티오에테르이고;
m은 2 내지 4의 범위의 정수이다.
ADC를 형성하기 위해, 신톤 (예를 들어, 표 B에 열거된 신톤)의 말레이미드 고리는 항체 Ab와 반응하여, 숙신이미드 (폐쇄 형태) 또는 숙신아미드(개방 형태) 중 어느 하나로서 공유 부착을 형성할 수 있다. 유사하게, 다른 작용기, 예컨대 아세틸 할라이드 또는 비닐 술폰이 항체, Ab와 반응하여, 공유 부착을 형성할 수 있다.
특정 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 AbA-CZ, AbA-TX, AbA-TV, AbA-YY, AbA-AAA, AbA-AAD, AbB-CZ, AbB-TX, AbB-TV, AbB-YY, AbB-AAD, AbG-CZ, AbG-TX, AbG-TV, AbG-YY, AbG-AAA, AbG-AAD, AbK-CZ, AbK-TX, AbK-TV, AbK-YY, AbK-AAA, AbK-AAD로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서, CZ, TX, TV, YY, AAA, 및 AAD는 표 B에 개시된 신톤이고, 콘쥬게이션된 신톤은 개방 형태 또는 폐쇄 형태 중 어느 하나로 존재한다.
일 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 하기 화학식의 것이다:
[화학식 i]
Figure pct00375
여기서, m은 2이며, Ab는 서열 번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 39에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 37에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 168에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 169에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
일 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 하기 화학식의 것이다:
[화학식 i]
Figure pct00376
여기서, m은 2이며, Ab는 서열 번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 140에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 136에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 170에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 171에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
일 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 하기 화학식의 것이다:
[화학식 ii]
Figure pct00377
여기서, m은 2이며, Ab는 서열 번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 39에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 37에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 168에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 169에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
일 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 하기 화학식의 것이다:
[화학식 ii]
Figure pct00378
여기서, m은 2이며, Ab는 서열 번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 140에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 136에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 170에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 171에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
일 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 하기 화학식의 것이다:
[화학식 iii]
Figure pct00379
여기서, m은 2이며, Ab는 서열 번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 39에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 37에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 168에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 169에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
일 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 하기 화학식의 것이다:
[화학식 iii]
Figure pct00380
여기서, m은 2이며, Ab는 서열 번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 140에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 136에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 170에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 171에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
일 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 하기 화학식의 것이다:
[화학식 iv]
Figure pct00381
여기서, m은 2이며, Ab는 서열 번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 39에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 37에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 168에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 169에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
일 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 하기 화학식의 것이다:
[화학식 iv]
Figure pct00382
여기서, m은 2이며, Ab는 서열 번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 140에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 136에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 170에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 171에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
일 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 하기 화학식의 것이다:
[화학식 v]
Figure pct00383
여기서, m은 2이며, Ab는 서열 번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 39에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 37에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 168에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 169에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
일 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 하기 화학식 v의 것이다:
[화학식 v]
Figure pct00384
여기서, m은 2이며, Ab는 서열 번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 140에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 136에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 170에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 171에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
일 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 하기 화학식의 것이다:
[화학식 vi]
Figure pct00385
여기서, m은 2이며, Ab는 서열 번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 39에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 37에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 168에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 169에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
일 실시 형태에서, ADC, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 하기 화학식의 것이다:
[화학식 vi]
Figure pct00386
여기서, m은 2이며, Ab는 서열 번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 140에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인과; 서열 번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인, 및 서열 번호 136에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-hB7-H3 항체; 또는 서열 번호 170에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 171에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체이다.
워헤드 및 신톤을 포함하는 Bcl-xL 저해제, 및 이의 제조 방법은 본원에 참고로 포함된 미국 특허 출원 공개 제2016/0339117호 (AbbVie Inc.)에 개시되어 있다.
III.A .4. Bcl - xL ADC의 합성 방법
본원에 개시된 Bcl-xL 저해제 및 신톤은 표준의 공지된 유기 화학 기술을 이용하여 합성될 수 있다. 그대로 사용될 수 있거나, 본원에 개시된 Bcl-xL 저해제 및 신톤의 전 범주를 합성하도록 변경될 수 있는 Bcl-xL 저해제 및 신톤의 합성에 대한 일반적인 반응식이 하기에 제공되어 있다. 지침에 유용할 수 있는 예시적인 Bcl-xL 저해제 및 신톤의 합성을 위한 구체적인 방법이 실시예 섹션에 제공되어 있다. ADC가 마찬가지로 표준 방법, 예컨대 문헌[Hamblett et al., 2004, "Effects of Drug Loading on the Antitumor Activity of a Monoclonal Antibody Drug Conjugate", Clin . Cancer Res. 10:7063-7070]; 문헌[Doronina et al., 2003, "Development of potent and highly efficacious monoclonal antibody auristatin conjugates for cancer therapy," Nat. Biotechnol. 21(7):778-784]; 및 문헌[Francisco et al., 2003, Blood 102:1458-1465]에 기술된 것과 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 항체당 4가지 약물을 포함하는 ADC는 과량의 환원 시약, 예컨대 DTT 또는 TCEP를 이용하여 37℃에서 30분 동안 항체를 부분적으로 환원시켜 제조될 수 있으며, 그 후 완충제를 DPBS 중 1 mM DTPA를 이용하여 SEPHADEX® G-25 수지를 통한 용출에 의해 교환하였다. 용출제를 추가 DPBS로 희석시키고, 항체의 티올 농도를 5,5'-디티오비스(2-니트로벤조산) [엘만 시약(Ellman's reagent)]을 사용하여 측정할 수 있다. 과량의, 예를 들어 5배의 링커-약물 신톤을 4℃에서 1시간 동안 첨가하고, 콘쥬게이션 반응을 상당한 과량의, 예를 들어 20배의 시스테인의 첨가에 의해 켄칭할 수 있다. 생성된 ADC 혼합물을 PBS에서 평형시킨 SEPHADEX G-25에서 정제하여 미반응 신톤을 제거하고, 원할 경우 탈염시키고, 크기 배제 크로마토그래피로 정제할 수 있다. 그 후 생성된 ADC를 예를 들어 0.2 μm 필터를 통하여 살균 여과하고, 원할 경우 보관을 위하여 동결건조시킬 수 있다. 특정 실시 형태에서, 사슬간 시스테인 디술피드 결합 전부를 링커-약물 콘쥬게이트로 대체한다. 일 실시 형태는 ADC의 제조 방법에 관한 것으로서, 이는 본원에 개시된 신톤을, 항체에 신톤을 공유적으로 연결시키는 조건 하에 항체와 접촉시키는 단계를 포함한다.
전술한 Bcl-xL 저해제, 링커, 및 이들의 신톤의 예와, 이들의 제조 방법이 미국 특허 공개 제2016/0339117호에서 발견될 수 있는데, 이의 전체 내용은 본원에 참고로 포함된다.
본원에 개시된 전 범위의 ADC를 합성하는 데 사용될 수 있는 예시적인 ADC의 구체적인 합성 방법이 실시예 섹션에 제공되어 있다.
III.A .5. Bcl - xL 저해제의 일반적인 합성 방법
하기 반응식에서, 다양한 치환체 Ar1, Ar2, Z1, R4, R10, R11a 및 R11b는 '발명을 실시하기 위한 구체적인 내용' 섹션에 정의된 바와 같다.
5.1.1. 화합물 ( 6)의 합성
[반응식 1]
Figure pct00387
중간체 (6)의 합성이 반응식 1에 기술되어 있다. 화합물 (1)을 BH3·THF로 처리하여 화합물 (2)를 제공한다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (2)을 시아노메틸렌트리부틸포스포란의 존재 하에
Figure pct00388
로 처리하여 화합물 (3)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 승온에서 톨루엔과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (3)을 트리에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 에탄-1,2-디올로 처리하여 화합물 (4)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 승온에서 수행하며, 반응은 마이크로파 조건 하에 수행할 수 있다. 화합물 (4)을 n-부틸리튬과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 강염기로 처리한 후에 요오도메탄을 첨가하여, 화합물 (5)을 제공할 수 있다. 첨가 및 반응은 전형적으로 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서, 워크 업(work up)을 위해 주위 온도까지 가온 전에 감소된 온도에서 수행한다. 화합물 (5)을 N-요오도숙신이미드로 처리하여 화합물 (6)을 제공한다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
5.1.2. 화합물 ( 12)의 합성
[반응식 2]
Figure pct00389
중간체 (12)의 합성이 반응식 2에 기술되어 있다. 화합물 (3)을 ZnCl2·Et2O 또는 N, N'-아조이소부티로니트릴 (AIBN)의 존재 하에 트리-n-부틸-알릴스타난으로 처리하여 화합물 (10)을 제공할 수 있다(문헌[Yamamoto et al.,1998, Heterocycles 47:765-780]). 반응은 전형적으로 -78℃에서 디클로로메탄과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (10)을 히드로붕소화/산화를 위해 본 기술 분야에 공지된 표준 조건 하에 처리하여 화합물 (11)을 제공할 수 있다. 예를 들어, 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 BH3·THF와 같은 시약으로 처리한 후에 중간체 알킬보란 부가물을, 화합물 (10)을, 수산화나트륨과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에, 과산화수소와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 산화제로 처리하는 것은 화합물 (11)을 제공할 것이다(문헌[Brown et al., 1968, J. Am. Chem . Soc. 86:397] 참조). 전형적으로 BH3·THF의 첨가는 주위 온도까지 가온 전에 저온에서 수행하고, 그 후에 과산화수소 및 수산화나트륨을 첨가하여 알코올 생성물을 생성한다. 화합물 (6)에 대해 앞서 기재된 바와 같이, 반응식 1에 따라 화합물 (12)을 생성할 수 있다.
5.1.3. 화합물 ( 15)의 합성
[반응식 3]
Figure pct00390
중간체 (15)의 합성이 반응식 3에 기술되어 있다. 화합물 (3)을 100℃에서 아세트산과 48% HBr 수용액의 용매 혼합물 중에서 티오우레아와 반응시켜 중간체를 수득할 수 있고, 이를 후속하여 물 중 20% v/v 에탄올과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 혼합물 중에서 수산화나트륨으로 처리하여 화합물 (13)을 제공할 수 있다. 화합물 (13)을 소듐 에톡시드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 2-클로로에탄올과 반응시켜 화합물 (14)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도 또는 승온에서 에탄올과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (6)에 대해 앞서 기재된 바와 같이, 반응식 1에 따라 화합물 (15)을 생성할 수 있다.
5.1.4. 화합물 ( 22)의 합성
[반응식 4]
Figure pct00391
화합물 (22)의 합성이 반응식 4에 기술되어 있다. 화합물 (16)을 탄산칼륨과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 요오도메탄과 반응시켜 화합물 (17)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도 또는 승온에서 아세톤 또는 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (17)을 광화학 조건 하에서 벤조페논의 존재 하에 토실 시아니드와 반으시켜 화합물 (18)을 제공할 수 있다(문헌[Kamijo et al., 2011, Org . Lett., 13:5928-5931] 참조). 반응은 전형적으로 Riko 100W 중압 수은등을 광원으로서 사용하여 주위 온도에서 아세토니트릴 또는 벤젠과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 진행된다. 화합물 (18)을 물과 테트라히드로푸란 또는 물과 메탄올의 혼합물과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 시스템 중에서 수산화리튬과 반응시켜 화합물 (19)을 제공할 수 있다. 화합물 (19)을 BH3·THF로 처리하여 화합물 (20)을 제공한다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (20)을 시아노메틸렌트리부틸포스포란의 존재 하에
Figure pct00392
로 처리하여 화합물 (21)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 승온에서 톨루엔과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (21)을 N-요오도숙신이미드로 처리하여 화합물 (22)을 제공한다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
5.1.5. 화합물 ( 24)의 합성
[반응식 5]
Figure pct00393
피라졸 화합물 (24)의 합성이 반응식 5에 기술되어 있다. 화합물 (22)을 디에틸 에테르 또는 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수소화알루미늄리튬과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 환원제로 처리하여 화합물 (23)을 제공할 수 있다. 전형적으로 반응은 주위 온도 또는 승온까지 가온 전에 0℃에서 수행한다. 화합물 (23)을 본원에 또는 문헌에 개시된 표준 조건 하에서 디-tert-부틸 디카르보네이트와 반응시켜 화합물 (24)을 제공할 수 있다.
5.1.6. 화합물 (24a)의 합성
[반응식 6]
Figure pct00394
중간체 (24a)의 합성이 반응식 6에 기술되어 있다. 화합물 (22a)을 문헌에 개시된 조건 하에 가수분해하여 화합물 (23a)을 제공할 수 있다. 전형적으로 반응은 수산화칼륨의 존재 하에 승온에서 에틸렌 글리콜과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 진행한다(문헌[Roberts et al., 1994, J. Org . Chem. 59:6464-6469]; 문헌[Yang et al, 2013, Org . Lett.,15:690-693] 참조). 화합물(24a)은 문헌에 기재된 조건 하에서 커티우스 자리옮김(Curtius rearrangement)에 의해 화합물 (23a)로부터 제조할 수 있다. 예를 들어, 화합물 (23a)을 테트라부틸암모늄 브로마이드, 아연(II) 트리플레이트 및 디-tert-부틸 디카르보네이트의 존재하에 소듐 아지드와 반응시켜 화합물 (24a)을 제공할 수 있다(문헌[Lebel et al., Org . Lett., 2005, 7:4107-4110] 참조). 전형적으로 반응은 승온에서, 바람직하게는 40 내지 50℃에서, 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
5.1.7. 화합물 ( 29)의 합성
[반응식 7]
Figure pct00395
반응식 7에 나타난 바와 같이, 화학식 (25)의 화합물을 N,N-디이소프로필에틸아민, 또는 트리에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 tert-부틸 3-브로모-6-플루오로피콜리네이트 (26)와 반응시켜 화학식 (27)의 화합물을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 불활성 분위기 하에서 승온에서 디메틸 술폭시드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화학식 (27)의 화합물을 본원에 또는 문헌에 개시된 보릴화 조건 하에서 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (28)과 반응시켜 화학식 (29)의 화합물을 제공할 수 있다.
5.1.8. 화합물 ( 38)의 합성
[반응식 8]
Figure pct00396
반응식 8은 t-부틸 에스테르로서 보호된 아다만탄 및 피콜리네이트에 테더링된 -Nu (친핵체)를 함유하는 중간체를 제조하는 방법을 기술한다. 화합물 (30)을 본원에 또는 문헌에 개시된 스즈키 커플링(Suzuki Coupling) 조건 하에 화합물 (31)와 반응시켜 메틸 화합물 (32)을 제공할 수 있다. 화합물 (32)을 트리에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기로 처리한 후에, 메탄술포닐 클로라이드로 처리하여 화합물 (33)을 제공할 수 있다. 첨가는 전형적으로 디클로로메탄과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 주위 온도까지 가온 전에 저온에서 수행한다. 화합물 (33)을 화학식 (34)의 친핵체 (Nu)와 반응시켜 화합물 (35)을 제공할 수 있다. 친핵제의 예는 소듐 아지드, 메틸아민, 암모니아 및 디-tert-부틸 이미노디카르보네이트를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 화합물 (17)을 수산화리튬과 반응시켜 화합물 (36)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 테트라히드로푸란, 메탄올, 물, 또는 이들의 혼합물과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (36)을 본원에 개시되거나 문헌에서 용이하게 이용가능한 아미드화 조건 하에서 화합물 (37)과 반응시켜 화학식 (38)의 화합물을 제공할 수 있다.
5.1.9. 화합물 (42) 및 ( 43)의 합성
[반응식 9]
Figure pct00397
반응식 9는 안정화된 Bcl-xL 저해제를 제조하는 데 사용되는 대표적인 방법을 나타낸다. Bcl-xL 저해제는 1차 아민을 가용화 기로 개질하고 이어서 생성되는 2차 아민을 이하의 반응식에 기술된 바와 같이 링커에 부착시키는 일반적인 접근법을 사용하여 합성할 수 있다. 예를 들어, 화합물 (39)을 화합물 (40)과 반응시켜 화합물 (41)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (41)을 트리플루오로아세트산과 반응시켜 화합물 (43)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 디클로로메탄과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 반응식 9에 도시된 또 다른 예는, 화합물 (39)을 디에틸 비닐포스포네이트와 반응시킨 후에, 브로모트리메틸실란 및 알릴트리메틸실란과 반응시켜 화합물 (42)을 제공하는 것이다. 본원에 개시된 Bcl-xL 저해제 상에 가용화 기를 도입하는 다른 예는 환원성 아민화 반응, 알킬화, 및 아미드화 반응을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
5.1.10. 화합물 ( 47)의 합성
[반응식 10]
Figure pct00398
반응식 10은 아미드화 반응에 의한 가용화 기의 도입을 나타낸다. Bcl-xL 저해제는 1차 또는 2차 아민을 가용화 기로 개질하고 이어서 생성되는 아민을 이하의 반응식에 기술된 바와 같이 링커에 부착시키는 일반적인 접근법을 사용하여 합성할 수 있다. 예를 들어, 화합물 (45)을 순차적으로 HATU 및 화합물 (44)로 처리하여 화합물 (46)을 제공할 수 있다. 화합물 (46)을 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 디에틸아민으로 처리하여 화합물 (47)을 제공할 수 있다.
5.1.11. 화합물 ( 51)의 합성
[반응식 11]
Figure pct00399
반응식 11은 안정화된 Bcl-xL 저해제를 제조하기 위한 대표적인 방법을 나타낸다. Bcl-xL 저해제는 1차 아민을 스페이서로 개질하여 차등적으로 보호된 디아민을 제공하는 일반적인 접근법을 사용하여 합성할 수 있다. 보호되지 않은 2차 아민을 가용화 기로 개질할 수 있다. 그 후에 보호된 아민의 탈보호는 이후의 반응식에 기술된 바와 같이 링커 부착 부위를 드러낸다. 예를 들어, 화합물 (39)을 본 기술 분야에 공지된 조건 하에 tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (48)와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 시약으로 환원적으로 알킬화시켜 2차 아민 (49)을 제공할 수 있다. 화합물 (49)을 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (40)과 반응시켜 화합물 (50)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (40)을 트리플루오로아세트산과 반응시켜 화합물 (51)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 디클로로메탄과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
5.1.12. 화합물 ( 61)의 합성
[반응식 12]
Figure pct00400
반응식 12는 안정화된 Bcl-xL 저해제를 합성하기 위한 방법을 기술한다. 화합물 (52)을, 트리에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 메탄술포닐 클로라이드와 반응시켜 화합물 (53)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 저온에서 디클로로메탄과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (53)을 메탄올 중에서 암모니아로 처리하여 화합물 (54)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 승온에서 수행하며, 반응은 마이크로파 조건 하에 수행할 수 있다. 화합물 (55)을 N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 반응시켜 화합물 (56)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (56)을 디-t-부틸디카르보네이트 및 4-(디메틸아미노)피리딘으로 처리하여 화합물 (57)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (57)을 본원에 또는 문헌에 개시된 스즈키 커플링 조건 하에 화학식 (58)의 보로네이트 에스테르 (또는 등가의 보론산)과 반응시켜 화합물 (59)을 제조할 수 있다. 비스(2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카르보네이트를 화합물 (37)과 반응시킨 후에, 화합물 (59)과 반응시켜, 화합물 (60)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 아세토니트릴과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (60)을 트리플루오로아세트산과 반응시켜 화합물 (61)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 디클로로메탄과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
5.1.13. 화합물 ( 70)의 합성
[반응식 13]
Figure pct00401
반응식 13은 5-히드록시 테트라히드로이소퀴놀린 중간체의 합성을 기술한다. 화합물 (62)을 N-브로모숙신이미드로 처리하여 화합물 (63)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (63)을 탄산칼륨과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 벤질 브로마이드와 반응시켜 화합물 (64)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 승온에서 아세톤과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (64)을, 트리에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기, 및 화합물 (65)과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 촉매의 존재 하에 일산화탄소 및 메탄올로 처리할 수 있다. 반응은 전형적으로 승온에서 불활성 분위기 하에서 수행한다. 화합물 (65)을 디옥산 중에서 염산과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 산으로 처리하여 화합물 (66)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (66)을 트리에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 tert-부틸 3-브로모-6-플루오로피콜리네이트과 반응시켜 화합물 (67)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 불활성 분위기 하에서 승온에서 디메틸 술폭시드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (67)을 본원에 또는 문헌에 개시된 스즈키 커플링 조건 하에 화학식 (68) (여기서, Ad는 본 발명의 화합물 (예컨대, 화학식 IIa 내지 IId의 화합물)의 메틸아다만탄 모이어티임)의 보론산과 반응시켜, 화합물 (69)을 제공할 수 있다. 화합물 (69)을 Pd(OH)2의 존재 하에 수소와 반응시켜 화합물 (70)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 승온에서 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
5.1.14. 화합물 ( 75)의 합성
[반응식 14]
Figure pct00402
반응식 14는 안정화된 Bcl-xL 저해제를 제조하는 데 사용되는 대표적인 방법을 나타낸다. Bcl-xL 저해제는 Ar2 치환체를 가용화 기로 개질하고 이어서 아민을 이하의 반응식에 기술된 바와 같이 링커에 부착시키는 일반적인 접근법을 사용하여 합성할 수 있다. 예를 들어, 화합물 (71)을, N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 탄산칼륨과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 tert-부틸 2-브로모아세테이트와 반응시킬 수 있다. 화합물 (72)을 메탄올, 테트라히드로푸란 또는 이들의 혼합물과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수산화리튬 수용액으로 처리하여 화합물 (73)을 제공할 수 있다. 앞서 기재된 조건 하에서 화합물 (73)을 화합물 (37)로 아미드화하여 화합물 (74)을 얻을 수 있다. 화합물 (74)을 트리플루오로아세트산 또는 HCl과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 산으로 처리하여, 화학식 (75)의 Bcl-xL 저해제를 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 디클로로메탄 또는 1,4-디옥산과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
III.A .6. Bcl - xL 신톤의 일반적인 합성 방법
하기 반응식에서, 다양한 치환체 Ar1, Ar2, Z1, Y, G, R11a 및 R11b는 '발명을 실시하기 위한 구체적인 내용' 섹션에 정의된 바와 같다.
5.2.1. 화합물 ( 89)의 합성
[반응식 15]
Figure pct00403
반응식 15에 나타난 바와 같이, 화학식 (77) (여기서, PG는 적절한 염기 불안정한 보호 기이고 AA(2)는 Cit, Ala, 또는 Lys임)의 화합물을 본원에 개시되거나 문헌에서 용이하게 이용가능한 아미드화 조건 하에서 4-(아미노페닐)메탄올 (78)과 반응시켜, 화합물 (79)을 제공할 수 있다. 화합물 (79)을 디에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기와 반응시켜 화합물 (80)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (81) (여기서, PG는 적절한 염기 또는 산 불안정한 보호 기이고 AA(1)은 Val 또는 Phe임)을 본원에 개시되거나 문헌에서 용이하게 이용가능한 아미드화 조건 하에서 화합물 (80)과 반응시켜, 화합물 (82)을 제공할 수 있다. 화합물 (82)을 적절한 대로 디에틸아민 또는 트리플루오로아세트산으로 처리하여 화합물 (83)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 디클로로메탄과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (84) (여기서, Sp는 스페이서임)을 화합물 (83)과 반응시켜 화합물 (85)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (85)을 N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (86)와 반응시켜, 화합물 (87)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (87)을 N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 화합물 (88)과 반응시켜, 화합물 (89)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
5.2.2. 화합물 (94) 및 ( 96)의 합성
[반응식 16]
Figure pct00404
반응식 16은 디펩티드 신톤에의 대안적인 mAb-링커 부착의 설치를 기술한다. 화합물 (88)을 N,N-디이소프로필아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 화합물 (90)과 반응시켜 화합물 (91)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (91)을 디에틸아민과 반응시켜 화합물 (92)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (93) (여기서, X1은 Cl, Br, 또는 I임)을 본원에 개시되거나 문헌에서 용이하게 이용가능한 아미드화 조건 하에서 화합물 (92)과 반응시켜 화합물 (94)을 제공할 수 있다. 화합물 (92)을 본원에 개시되거나 문헌에서 용이하게 이용가능한 아미드화 조건 하에서 화학식 (95)의 화합물과 반응시켜 화합물 (96)을 제공할 수 있다.
5.2.3. 화합물 ( 106)의 합성
[반응식 17]
Figure pct00405
반응식 17은 비닐 글루쿠로니드 링커 중간체 및 신톤의 합성을 기술한다. (2R,3R,4S,5S,6S)-2-브로모-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (97)를 산화은으로 처리한 후에, 4-브로모-2-니트로페놀 (98)로 처리하여 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-브로모-2-니트로페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (99)를 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 아세토니트릴과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-브로모-2-니트로페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (99)를, 탄산나트륨과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기, 및 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (Pd2(dba)3)과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 촉매의 존재 하에, (E)-tert-부틸디메틸((3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)알릴)옥시)실란 (100)과 반응시켜, (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-((E)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로프-1-엔-1-일)-2-니트로페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (101)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 승온에서 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-((E)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로프-1-엔-1-일)-2-니트로페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (101)를, 염산과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 산의 존재 하에 아연과 반응시켜, (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-아미노-4-((E)-3-히드록시프로프-1-엔-1-일)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (102)를 제조할 수 있다. 첨가는 전형적으로, 테트라히드로푸란, 물, 또는 이들의 혼합물과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서, 주위 온도까지 가온 전에 저온에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-아미노-4-((E)-3-히드록시프로프-1-엔-1-일)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (102)를, N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에, (9H-플루오렌-9-일)메틸 (3-클로로-3-옥소프로필)카르바메이트 (103)와 반응시켜, (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-4-((E)-3-히드록시프로프-1-엔-1-일)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (104)를 제공할 수 있다. 첨가는 전형적으로 디클로로메탄과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 주위 온도까지 가온 전에 저온에서 수행한다. 화합물 (88)을 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-4-((E)-3-히드록시프로프-1-엔-1-일)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (104)과 반응시킨 후에, 워크 업하고 N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 화합물 (105)과 반응시켜 화합물 (106)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
5.2.4. 화합물 ( 115)의 합성
[반응식 18]
Figure pct00406
반응식 18은 대표적인 2-에테르 글루쿠로니드 링커 중간체 및 신톤의 합성을 기술한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-브로모-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (97)를 탄산은의 존재 하에 2,4-디히드록시벤즈알데히드 (107)와 반응시켜 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-포르밀-3-히드록시페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (108)를 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 승온에서 아세토니트릴과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-포르밀-3-히드록시페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (108)을 수소화붕소나트륨으로 처리하여 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-히드록시-4-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (109)를 제공할 수 있다. 첨가는 전형적으로, 테트라히드로푸란, 메탄올, 또는 이들의 혼합물과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서, 주위 온도까지 가온 전에 저온에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-히드록시-4-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (109)를 이미다졸의 존재 하에 tert-부틸디메틸실릴 클로라이드와 반응시켜 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-히드록시페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (110)를 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 저온에서 디클로로메탄과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-히드록시페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (110)를, 트리페닐포스핀, 및 디-tert-부틸 디아젠-1,2-디카르복실레이트과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 아조디카르복실레이트의 존재 하에 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(2-히드록시에톡시)에틸)카르바메이트와 반응시켜 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (111)를 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 톨루엔과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (111)를 아세트산으로 처리하여 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-4-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (112)를 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 물, 테트라히드로푸란, 또는 이들의 혼합물과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-4-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (112)를 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트와 반응시켜, (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (113)를 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (113)를 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 화합물 (88)로 처리한 후에, 수산화리튬으로 처리하여 화합물 (114)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드, 테트라히드로푸란, 메탄올, 또는 이들의 혼합물과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (114)을 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 화합물 (84)과 반응시켜 화합물 (115)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
5.2.5. 화합물 ( 119)의 합성
[반응식 19]
Figure pct00407
반응식 19는 제2 가용화 기를 당 링커에 도입하는 것을 기술한다. 화합물 (116)을 본원에 개시되거나 문헌에서 용이하게 이용가능한 아미드화 조건 하에서 (R)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-술포프로판산(117)과 반응시킨 후에, 디에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기로 처리하여, 화합물 (118)을 제공할 수 있다. 화합물 (118)을 본원에 개시되거나 문헌에서 용이하게 이용가능한 아미드화 조건 하에서 화합물 (84) (여기서, Sp는 스페이서임)과 반응시켜 화합물 (119)을 제공할 수 있다.
5.2.6. 화합물 ( 129)의 합성
[반응식 20]
Figure pct00408
반응식 20은 4-에테르 글루쿠로니드 링커 중간체 및 신톤의 합성을 기술한다. 2,4-디히드록시벤즈알데히드 (120)를 탄산칼륨과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 1-브로모-2-(2-브로모에톡시)에탄 (121)와 반응시켜 4-(2-(2-브로모에톡시)에톡시)-2-히드록시벤즈알데히드 (122)를 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 승온에서 아세토니트릴과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 4-(2-(2-브로모에톡시)에톡시)-2-히드록시벤즈알데히드 (122)를 소듐 아지드로 처리하여 4-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-2-히드록시벤즈알데히드 (123)를 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 4-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-2-히드록시벤즈알데히드 (123)를 산화은의 존재 하에 (3R,4S,5S,6S)-2-브로모-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (124)와 반응시켜 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-2-포르밀페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (125)를 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 아세토니트릴과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. Pd/C의 존재 하에 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-2-포르밀페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (125)의 수소화는 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-2-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (126)를 제공할 것이다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-2-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (126)를 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 (9H-플루오렌-9-일)메틸 카르보노클로리데이트로 처리하여 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-2-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (127)를 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 저온에서 디클로로메탄과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (88)을, N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-2-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (127)와 반응시킨 후에, 수산화리튬으로 처리하여 화합물 (128)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 저온에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (128)을 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 화합물 (84)과 반응시켜 화합물 (129)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
5.2.7. 화합물 ( 139)의 합성
[반응식 21]
Figure pct00409
반응식 21은 카르바메이트 글루쿠로니드 중간체 및 신톤의 합성을 기술한다. 2-아미노-5-(히드록시메틸)페놀 (130)을 수소화나트륨으로 처리하고, 이어서 2-(2-아지도에톡시)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (131)와 반응시켜 (4-아미노-3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)페닐)메탄올 (132)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 승온에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (4-아미노-3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)페닐)메탄올 (132)을 이미다졸의 존재 하에 tert-부틸디메틸클로로실란과 반응시켜 2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)아닐린 (133)을 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)아닐린 (133)을 트리에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 포스젠으로 처리한 후에, 트리에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 (3R,4S,5S,6S)-2-히드록시-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (134)와 반응시켜, 2S,3R,4S,5S,6S)-2-(((2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)페닐)카르바모일)옥시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (135)를 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 톨루엔과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행하며, 첨가는 전형적으로, 포스젠 첨가 후에 주위 온도까지 가온하고 (3R,4S,5S,6S)-2-히드록시-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (134) 첨가 후에 승온에서 가열하기 전에, 저온에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(((2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)페닐)카르바모일)옥시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (135)를 p-톨루엔술폰산 일수화물과 반응시켜 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(((2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-4-(히드록시메틸)페닐)카르바모일)옥시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (136)를 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 메탄올과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(((2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-4-(히드록시메틸)페닐)카르바모일)옥시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (136)를 N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 비스(4-니트로페닐)카르보네이트와 반응시켜, (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(((2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)카르바모일)옥시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (137)를 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(((2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)카르바모일)옥시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (137)를 N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 화합물과 반응시킨 후에, 수산화리튬 수용액으로 처리하여, 화합물 (138)을 제공할 수 있다. 제1 단계는 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행하며, 제2 단계는 전형적으로 저온에서 메탄올과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (138)을 트리스(2-카르복시에틸))포스핀 히드로클로라이드로 처리한 후에, N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 화합물 (84)과 반응시켜, 화합물 (139)을 제공할 수 있다. 트리스(2-카르복시에틸))포스핀 히드로클로라이드와의 반응은 전형적으로 주위 온도에서 테트라히드로푸란, 물, 또는 이들의 혼합물과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행하며, N-숙신이미딜 6-말레이미도헥사노에이트와의 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
5.2.8. 화합물 ( 149)의 합성
[반응식 22]
Figure pct00410
반응식 22는 갈락토시드 링커 중간체 및 신톤의 합성을 기술한다. (2S,3R,4S,5S,6R)-6-(아세톡시메틸)테트라히드로-2H-피란-2,3,4,5-테트라일 테트라아세테이트 (140)를 아세트산 중 HBr로 처리하여 (2R,3S,4S,5R,6S)-2-(아세톡시메틸)-6-브로모테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (141)를 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 질소 분위기 하에 수행한다. (2R,3S,4S,5R,6S)-2-(아세톡시메틸)-6-브로모테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (141)를 4-히드록시-3-니트로벤즈알데히드 (142)이 존재 하에 산화은(I)으로 처리하여 (2R,3S,4S,5R,6S)-2-(아세톡시메틸)-6-(4-포르밀-2-니트로페녹시)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (143)를 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 아세토니트릴과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2R,3S,4S,5R,6S)-2-(아세톡시메틸)-6-(4-포르밀-2-니트로페녹시)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (143)를 수소화붕소나트륨으로 처리하여 (2R,3S,4S,5R,6S)-2-(아세톡시메틸)-6-(4-(히드록시메틸)-2-니트로페녹시)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (144)를 제공할 수있다. 반응은 전형적으로 저온에서 테트라히드로푸란, 메탄올, 또는 이들의 혼합물과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2R,3S,4S,5R,6S)-2-(아세톡시메틸)-6-(4-(히드록시메틸)-2-니트로페녹시)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (144)를 염산의 존재 하에 아연으로 처리하여 (2R,3S,4S,5R,6S)-2-(아세톡시메틸)-6-(2-아미노-4-(히드록시메틸)페녹시)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (145)를 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 저온에서, 질소 분위기 하에, 테트라히드로푸란과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2R,3S,4S,5R,6S)-2-(아세톡시메틸)-6-(2-아미노-4-(히드록시메틸)페녹시)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (145)를 N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (3-클로로-3-옥소프로필)카르바메이트 (103)와 반응시켜, (2S,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-4-(히드록시메틸)페녹시)-6-(아세톡시메틸)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (146)를 제조할 수 있다. 반응은 전형적으로 저온에서 디클로로메탄과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-4-(히드록시메틸)페녹시)-6-(아세톡시메틸)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (146)를 N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 비스(4-니트로페닐)카르보네이트와 반응시켜, (2S,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(아세톡시메틸)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (147)를 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 저온에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. (2S,3R,4S,5S,6R)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(아세톡시메틸)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (147)을 N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 화합물 (88)과 반응시킨 후에, 수산화리튬으로 처리하여, 화합물 (148)을 제공할 수 있다. 제1 단계는 전형적으로 저온에서, N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행하며, 제2 단계는 전형적으로 주위 온도에서, 메탄올과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다. 화합물 (148)을 N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 염기의 존재 하에 화합물 (84) (여기서, Sp는 스페이서임)로 처리하여 화합물 (149)을 제공할 수 있다. 반응은 전형적으로 주위 온도에서 N,N-디메틸포름아미드와 같은 그러나 이에 한정되지 않는 용매 중에서 수행한다.
III.A .7. 항-B7-H3 ADC의 일반적인 합성 방법
본 발명은 또한 하기 구조 화학식 I에 따른 항-B7-H3 ADC를 제조하는 방법을 개시한다:
[화학식 I]
Figure pct00411
여기서, D, L, LK, Ab 및 m은 상세한 설명 섹션에서 정의된 바와 같다. 상기 방법은 수성 용액 형태의 항체를 30 내지 40℃에서 15분 이상 동안 유효량의 디술피드 환원제로 처리하고, 그 후 상기 항체 용액을 20 내지 27℃까지 냉각시키는 단계;
환원된 항체 용액에 2.1 내지 2.176 (표 B)의 군으로부터 선택되는 신톤을 포함하는 물/디메틸 술폭시드의 용액을 첨가하는 단계;
상기 용액의 pH를 7.5 내지 8.5의 pH까지 조정하는 단계;
반응을 48 내지 80시간 동안 진행시켜 ADC를 형성하는 단계를 포함하며;
전기분무 질량 분광법으로 측정할 경우 숙신이미드의 숙신아미드로의 각각의 가수분해에 있어서 질량이 18 ± 2 amu만큼 변화되며;
ADC를 소수성 상호작용 크로마토그래피로 선택적으로 정제한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 hB7-H3 항체이며, hB7-H3 항체는 huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 huAb13v1의 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
본 발명은 또한 상술한 방법에 의해 제조된 항-B7-H3 ADC에 관한 것이다.
일부 실시 형태에서, 본원에서 개시된 항-B7-H3 ADC는 hB7-H3 세포 표면 수용체 또는 종양 세포상에 발현된 종양 연관 항원에 결합하는 항체를, 약물-링커 신톤이 화학식 IIe 및 IIf에 나타낸 말레이미드 모이어티를 통해 또는 IIg에 나타낸 아세틸 할라이드를 통해 또는 IIh에 나타낸 비닐 술폰을 통해 항체에 공유적으로 연결되는 조건 하에서, 약물-링커 신톤과 접촉시킴으로써 형성된다.
[화학식 IIe]
Figure pct00412
[화학식 IIf]
Figure pct00413
[화학식 IIg]
Figure pct00414
[화학식 IIh]
Figure pct00415
여기서, D는 상기에 개시된 구조 화학식 IIa, IIb, IIc 또는 IId에 따른 Bcl-xL 저해제 약물이며, L1은 항체에의 신톤의 부착시에 말레이미드, 아세틸 할라이드 또는 비닐 술폰으로부터 형성되지 않은 링커의 부분이며; 약물-링커 신톤은 신톤 실시예 2.1 내지 2.176(표 B) 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시 형태에서, 접촉 단계는 항-B7-H3 ADC가 2, 3 또는 4의 DAR을 갖도록 하는 조건 하에서 수행된다.
III.B. 항-B7-H3 ADC: 콘쥬게이션을 위한 다른 예시적인 약물
항-B7-H3 항체는 관심 세포, 예를 들어, B7-H3을 발현하는 암세포로 하나 이상의 약물(들)을 표적화하기 위해 ADC에서 사용될 수 있다. 본 발명의 항-B7-H3 ADC는 하나 이상의 약물(들)이 특정 세포로 전달되므로, 예를 들어, 항암 치료법에서 종종 보여지는 부작용을 감소시킬 수 있는 표적화된 치료법을 제공한다.
아우리스타틴
본 발명의 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, 또는 huAb3v2.6 항체는 적어도 하나의 아우리스타틴에 콘쥬게이션될 수 있다. 아우리스타틴은 일반적으로 미세소관 동역학 및 GTP 가수분해를 방해하여 세포 분열을 저해함으로써 항암 활성을 보유하는 것으로 나타난 돌라스타틴 유사체의 그룹을 나타낸다. 예를 들어, 아우리스타틴 E(미국 특허 제5,635,483호)는 항암 약물 빈크리스틴과 동일한 튜불린상의 부위에 결합함으로써 튜불린 중합화를 저해하는 화합물인 해양 천연 산물 톨라스타틴 10의 합성 유사체이다(문헌[G. R. Pettit, Prog. Chem. Org. Nat. Prod, 70: 1-79(1997)]). 돌라스타틴 10, 아우리스타틴 PE, 및 아우리스타틴 E는 4개의 아미노산을 갖는 선형 펩티드이며, 그 중 3개는 돌라스타틴 클래스의 화합물에 유일하다. 유사분열 저해제의 아우리스타틴 서브클래스의 예시적인 실시 형태는 모노메틸 아우리스타틴 D(MMAD 또는 아우리스타틴 D 유도체), 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE 또는 아우리스타틴 E 유도체), 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF 또는 아우리스타틴 F 유도체), 아우리스타틴 F 페닐렌디아민(AFP), 아우리스타틴 EB(AEB), 아우리스타틴 EFP(AEFP), 및 5-벤조일발레르산-AE 에스테르(AEVB)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 아우리스타틴 유도체의 합성 및 구조는 미국 특허 출원 공개 제2003-0083263호, 제2005-0238649호 및 제2005-0009751호; 국제 공개 제04/010957호, 국제 공개 제02/088172호, 및 미국 특허 제6,323,315호; 제6,239,104호; 제6,034,065호; 제5,780,588호; 제5,665,860호; 제5,663,149호; 제5,635,483호; 제5,599,902호; 제5,554,725호; 제5,530,097호; 제5,521,284호; 제5,504,191호; 제5,410,024호; 제5,138,036호; 제5,076,973호; 제4,986,988호; 제4,978,744호; 제4,879,278호; 제4,816,444호; 및 제4,486,414호에 개시되며, 그 각각은 참고로 본원에 포함된다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, 또는 huAb3v2.6은 적어도 하나의 MMAE(모노-메틸 아우리스타틴 E)에 콘쥬게이션된다. 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE, 베도틴)는 튜불린의 중합화를 차단함으로써 세포 분열을 저해한다. 하지만, 그의 높은 독성으로 인하여, 아우리스타틴 E는 약물 자체로서 사용될 수 없다. 아우리스타틴 E는 암세포에서 특정 마커 발현을 인식하며 MMAE를 암세포로 보낼 수 있는 단클론 항체(mAb)에 연결될 수 있다. 일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체에 MMAE를 연결하는 링커는 세포외 유체(즉, 배지 또는 세포에 대해 외부인 환경)에서 안정하지만, ADC가 특정 암세포 항원에 결합하고 암세포로 들어가면 카텝신에 의해 절단되어, 독성 MMAE를 방출하고 강력한 항-유사분열 기전을 활성화시킨다.
일 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, 또는 huAb3v2.6은 적어도 하나의 MMAF(모노메틸아우리스타틴 F)에 콘쥬게이션된다. 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF)는 튜불린의 중합화를 차단함으로써 세포 분열을 저해한다. 이것은 그의 비하전 대응 MMAE에 비하여 그의 세포독성 활성을 약화시키는 하전된 C-말단 페닐알라닌 잔기를 가진다. 하지만, 그의 높은 독성으로 인하여, 아우리스타틴 F는 약물 자체로서 사용될 수 없으나, 그것을 암세포로 보내는 단클론 항체(mAb)에 연결될 수 있다. 일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체에의 링커는 세포외 유체에서 안정하지만, 콘쥬게이트가 종양 세포로 들어가면 카텝신에 의해 절단되어, 항-유사분열 기전을 활성화시킨다.
MMAF 및 MMAE의 구조는 하기에 제공된다.
Figure pct00416
huAb13v1, huAb3v2.5, 또는 huAb3v2.6-vcMMAE의 예가 또한 도 3에서 제공된다. 특히, 도 3은 항체(예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, 또는 huAb3v2.6)가 단일 약물에 결합되고, 따라서 1의 DAR을 갖는 상황을 개시한다. 일부 실시 형태에서, ADC는 2 내지 8의 DAR, 또는 대안적으로 2 내지 4의 DAR을 가질 것이다.
콘쥬게이션을 위한 다른 약물
ADC에서 사용될 수 있는 약물, 즉, 본 발명의 항-B7-H3 항체에 콘쥬게이션될 수 있는 약물의 예가 하기에 제공되며, 유사분열 저해제, 항종양 항생제, 면역조절제, 유전자 치료 벡터, 알킬화제, 항혈관신생제, 대사길항물질, 붕소-함유 제제, 화학보호제, 호르몬제, 글루코코르티코이드, 광활성 치료제, 올리고뉴클레오티드, 방사성 동위원소, 방사선 증감제, 토포이소머라아제 저해제, 키나아제 저해제 및 그 조합을 포함한다.
1. 유사분열 저해제
일 태양에서, 항-B7-H3 항체는 암의 치료를 위한 ADC를 형성하기 위하여 하나 이상의 유사분열 저해제(들)에 콘쥬게이션될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유사분열 저해제"는 암세포에 특히 중요한 생물학적 과정인 유사분열 또는 세포 분열을 차단하는 세포독성 및/또는 치료 제제를 말한다. 유사분열 저해제는 종종 미세소관 중합화(예를 들어, 미세소관 중합화를 저해) 또는 미세소관 해중합(예를 들어, 해중합에 대해 미세소관 세포골격을 안정화)을 일으킴으로써, 세포 분열이 방지되도록 미세소관을 파괴한다. 따라서, 일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체는 튜불린 중합화를 저해함으로써 미세소관 형성을 파괴하는 하나 이상의 유사분열 저해제(들)에 콘쥬게이션된다. 다른 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체는 미세소관 세포골격을 해중합으로부터 안정화시키는 하나 이상의 유사분열 저해제(들)에 콘쥬게이션된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 ADC에 사용되는 유사분열 저해제는 Ixempra(익사베필론)이다. 본 발명의 항-B7-H3 ADC에서 사용될 수 있는 유사분열 저해제의 예는 하기에 제공된다. 상기에 개시된 아우리스타틴은 유사분열 저해제 속에 포함된다.
a. 돌라스타틴
본 발명의 항-B7-H3 항체는 ADC를 형성하기 위하여 적어도 하나의 돌라스타틴에 콘쥬게이션될 수 있다. 돌라스타틴은 인도양 군소 돌라벨라 아우리쿨라리아(Dolabella auricularia)로부터 분리된 짧은 펩티드 화합물이다(문헌[Pettit et al., J. Am. Chem. Soc., 1976, 98, 4677] 참조). 돌라스타틴의 예는 돌라스타틴 10 및 돌라스타틴 15를 포함한다. 돌라스타틴 15는 돌라벨라 아우리쿨라리아로부터 유래된 7-서브유닛 뎁시펩티드이며, 동일한 유기체로부터 수득된 5-서브유닛 펩티드인 항튜불린 제제 돌라스타틴 10과 구조적으로 관련된 강력한 항유사분열제이다. 따라서, 일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 ADC는 본원에서 개시된 바와 같은 항-B7-H3 항체 및 적어도 하나의 돌라스타틴을 포함한다. 상기에 개시된 아우리스타틴은 돌라스타틴 10의 합성 유도체이다.
b. 메이탄시노이드
본 발명의 항-B7-H3 항체는 ADC를 형성하기 위하여 적어도 하나의 메이탄시노이드에 콘쥬게이션될 수 있다. 메이탄시노이드는 일부 이끼 종뿐만 아니라, 고등 식물 노박덩굴과(Celastraceae), 갈매나무과(Rhamnaceae), 및 대극과(Euphorbiaceae)의 구성원으로부터 분리된 강력한 항종양 제제이다(문헌[Kupchan et al, J. Am. Chem. Soc. 94:1354-1356 [1972]]; 문헌[Wani et al, J. Chem. Soc. Chem. Commun. 390: [1973]]; 문헌[Powell et al, J. Nat. Prod. 46:660-666 [1983]]; 문헌[Sakai et al, J. Nat. Prod. 51 :845-850 [1988]]; 및 문헌[Suwanborirux et al, Experientia 46:117-120 [1990]]). 증거는 메이탄시노이드가 미세소관 단백질 튜불린의 중합화를 저해하여 미세소관의 형성을 방지함으로써 유사분열을 저해함을 제안한다(예를 들어, 미국 특허 제6,441,163호 및 문헌[Remillard et al., Science, 189, 1002-1005(1975)] 참조). 메이탄시노이드는 세포 배양 모델을 이용한 시험관 내 및 실험 동물 시스템을 이용한 생체 내에서 종양 세포 성장을 저해하는 것으로 나타났다. 또한, 메이탄시노이드의 세포독성은 예를 들어, 메토트렉세이트, 다우노루비신 및 빈크리스틴과 같은 종래의 화학요법제보다 1,000-배 더 크다(예를 들어, 미국 특허 제5,208,020호 참조).
메이탄시노이드는 메이탄신, 메이탄시놀, 메이탄시놀의 C-3 에스테르 및 다른 메이탄시놀 유사체 및 유도체를 포함한다(예를 들어, 미국 특허 제5,208,020호 및 제6,441,163호를 참조하며, 그 각각은 참고로 본원에 포함됨). 메이탄시놀의 C-3 에스테르는 자연 발생하거나 합성에 의해 유도될 수 있다. 또한, 자연 발생 및 합성 C-3 메이탄시놀 에스테르는 단순 카르복실산을 가진 C-3 에스테르 또는 N-메틸-L-알라닌의 유도체를 가진 C-3 에스테르로서 분류될 수 있으며, 후자는 전자보다 더욱 세포독성이다. 합성 메이탄시노이드 유사체는 예를 들어, 문헌[Kupchan et al., J. Med. Chem., 21, 31-37(1978)]에 개시된다.
본 발명의 ADC에서 사용하기에 적합한 메이탄시노이드는 천연 공급원으로부터 분리되거나, 합성으로 생산되거나, 반합성으로 생산될 수 있다. 또한, 메이탄시노이드는 결과적인 콘쥬게이트 분자에서 충분한 세포독성이 보존되는 한, 임의의 적합한 방식으로 변형될 수 있다. 이와 관련하여, 메이탄시노이드는 항체가 연결될 수 있는 적합한 작용기가 부족하다. 바람직하게는 연결 모이어티가 메이탄시노이드를 항체에 연결시켜 콘쥬게이트를 형성하기 위하여 이용되며, 연결 모이어티는 하기의 링커 섹션에서 상세히 개시된다. 예시적인 메이탄시노이드, 메르탄신(DM1)의 구조가 하기에 제공된다.
Figure pct00417
메이탄시노이드의 대표적인 예는 DM1(N2'-데아세틸-N2'-(3-메르캅토-1-옥소프로필)-메이탄신; 메르탄신, 약물 메이탄시노이드 1로도 불림; ImmunoGen, Inc.; 또한 문헌[Chari et al.(1992) Cancer Res 52:127] 참조), DM2, DM3(N2'-데아세틸-N2'-(4-메르캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신), DM4(4-메틸-4-메르캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신), 및 메이탄시놀(합성 메이탄시노이드 유사체)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 메이탄시노이드의 다른 예는 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제8,142,784호에 개시된다.
안사미토신은 다양한 세균 공급원으로부터 분리된 메이탄시노이드 항생제 그룹이다. 이들 화합물은 강력한 항종양 활성을 가진다. 대표적인 예는 안사미토신 P1, 안사미토신 P2, 안사미토신 P3, 및 안사미토신 P4를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 DM1에 콘쥬게이션된다. 일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 DM2에 콘쥬게이션된다. 일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 DM3에 콘쥬게이션된다. 일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 DM4에 콘쥬게이션된다.
d. 식물 알칼로이드
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 식물 알칼로이드, 예를 들어, 탁산 또는 빈카 알칼로이드에 콘쥬게이션될 수 있다. 식물 알칼로이드는 일부 식물 타입으로부터 유래된 화학요법 치료제이다. 빈카 알칼로이드는 페리윙클 식물(카타란투스 로세(catharanthus rosea))로부터 제조되는 반면, 탁산은 주목속(Pacific Yew) 나무(주목)의 나무껍질로부터 만들어진다. 빈카 알칼로이드와 탁산 둘 모두는 또한 항미세소관 제제로 알려지며, 하기에 보다 상세히 개시된다.
탁산
본원에 개시된 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 탁산에 콘쥬게이션될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "탁산"은 미세소관 작용의 기전을 가지며 탁산 고리 구조 및 세포분열저해 활성에 요구되는 입체특이적 측쇄를 포함하는 구조를 가진 항신생물제 클래스를 말한다. 또한 친수성 유도체 및 소수성 유도체를 비롯한 다양한 공지의 유도체가 용어 "탁산"에 포함된다. 탁산 유도체는 국제 공개 제99/18113호에 개시된 갈락토스 및 만노스 유도체; 국제 공개 제99/14209호에 개시된 피페라지노 및 다른 유도체; 국제 공개 제99/09021호, 국제 공개 제98/22451호, 및 미국 특허 제5,869,680호에 개시된 탁산 유도체; 국제 공개 제98/28288호에 개시된 6-티오 유도체; 미국 특허 제5,821,263호에 개시된 설펜아미드 유도체; 및 미국 특허 제5,415,869호에 개시된 탁솔 유도체를 포함하지만 이에 한정되지 않으며, 그 각각은 참고로 본원에 포함된다. 탁산 화합물은 또한 이전에 미국 특허 제5,641,803호, 제5,665,671호, 제5,380,751호, 제5,728,687호, 제5,415,869호, 제5,407,683호, 제5,399,363호, 제5,424,073호, 제5,157,049호, 제5,773,464호, 제5,821,263호, 제5,840,929호, 제4,814,470호, 제5,438,072호, 제5,403,858호, 제4,960,790호, 제5,433,364호, 제4,942,184호, 제5,362,831호, 제5,705,503호, 및 제5,278,324호에서 개시되었으며, 이 모두는 명백하게 참고로 포함된다. 탁산의 추가 예는 도세탁셀(Taxotere; Sanofi Aventis), 파클리탁셀(Abraxane 또는 Taxol; Abraxis Oncology), 카르바지탁셀, 테세탁셀, 오팍시오, 라로탁셀, 탁소프렉신, BMS-184476, 홍도우샨 A, 홍도우샨 B, 및 홍도우샨 C, 및 나노입자 파클리탁셀(ABI-007/Abraxene; Abraxis Bioscience)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 도세탁셀 분자에 콘쥬게이션된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 파클리탁셀 분자에 콘쥬게이션된다.
빈카 알칼로이드
일 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 빈카 알칼로이드에 콘쥬게이션된다. 빈카 알칼로이드는 튜불린에 작용하고 미세소관의 형성을 방지함으로써 암세포가 분열하는 능력을 저해함으로써 작용하는 세포-사이클-특이적 약물 클래스이다. 본 발명의 ADC에서 사용될 수 있는 빈카 알칼로이드의 예는 빈데신 술페이트, 빈크리스틴, 빈블라스틴 및 비노렐빈을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
2. 항종양 항생제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 암의 치료를 위하여 하나 이상의 항종양 항생제(들)에 콘쥬게이션될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항종양 항생제"는 DNA를 방해함으로써 세포 성장을 차단하며 미생물로부터 만들어지는 항신생물약을 의미한다. 종종, 항종양 항생제는 DNA 쇄를 파괴하거나 DNA 합성을 늦추거나 중단시킨다. 본 발명의 항-B7-H3 ADC에 포함될 수 있는 항종양 항생제의 예는 하기에 보다 상세히 개시되는 악티노마이신(예를 들어, 피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀), 안트라사이클린, 칼리케미신, 및 듀오카르마이신을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
a. 악티노마이신
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 악티노마이신에 콘쥬게이션될 수 있다. 악티노마이신은 스트렙토마이세스(Streptomyces) 속의 세균으로부터 분리된 항종양 항생제의 서브클래스이다. 대표적인 악티노마이신의 예는 악티노마이신 D(Cosmegen[악티노마이신, 닥티노마이신, 악티노마이신 IV, 악티노마이신 C1로도 알려짐], Lundbeck, Inc.), 안트라마이신, 치카마이신 A, DC-81, 마제트라마이신, 네오트라마이신 A, 네오트라마이신 B, 포로트라마이신, 프로트라카르신 B, SG2285, 시바노미신, 시비로마이신 및 토메이마이신을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 피롤로벤조디아제핀(PBD)에 콘쥬게이션된다. PBD의 예는 안트라마이신, 치카마이신 A, DC-81, 마제트라마이신, 네오트라마이신 A, 네오트라마이신 B, 포로트라마이신, 프로트라카르신 B, SG2000(SJG-136), SG2202(ZC-207), SG2285(ZC-423), 시바노미신, 시비로마이신 및 토메이마이신을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 따라서, 일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 악티노마이신, 예를 들어, 악티노마이신 D, 또는 적어도 하나의 PBD, 예를 들어, 피롤로벤조디아제핀(PBD) 이량체에 콘쥬게이션된다.
PBD의 구조는 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제2013/0028917호 및 제2013/0028919호, 및 국제 공개 제2011/130598호 A1에서 찾을 수 있으며, 그 각각은 그 전체가 참고로 본원에 포함된다. PBD의 일반 구조는 하기에 제공된다.
Figure pct00418
PBD는 치환기의 수, 타입 및 위치에서, 그들의 방향족 A 고리 및 피롤로 C 고리 둘 모두에서, 그리고 C 고리의 포화도에서 상이하다. B-고리에서는, 일반적으로 DNA를 알킬화시키는데 책임이 있는 친전자성 중심인 N10-C11 위치에 이민(N=C), 카르비놀아민(NH-CH(OH)), 또는 카르비놀아민 메틸 에테르(NH-CH(OMe))가 있다. 모든 공지의 천연 산물은 키랄 C11α 위치에서(S)-형태를 가지며 이것은 C 고리로부터 A 고리를 향해 볼때 오른손방향 비틀림을 그들에게 제공한다. 본 발명에서 제공되는 PBD 예는 본 발명의 항-B7-H3 항체에 콘쥬게이션될 수 있다. 본 발명의 항-B7-H3 항체에 콘쥬게이션될 수 있는 PBD의 추가 예는 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제2013/0028917호 A1 및 제2013/0028919호 A1, 미국 특허 제7,741,319호 B2, 및 국제 공개 제2011/130598호 A1 및 국제 공개 제2006/111759호 A1에서 찾을 수 있으며, 그 각각은 그 전체가 참고로 본원에 포함된다.
하기 화학식 XXX을 갖는 대표적인 PBD 이량체가 본 발명의 항-B7-H3 항체에 콘쥬게이션될 수 있다:
[화학식 XXX]
Figure pct00419
여기서:
R30은 화학식 XXXI:
[화학식 XXXI]
Figure pct00420
이며;
상기에서 A는 C5-7 아릴 기이고, X는 ―O―, ―S―, ―C(O)O―, ―C(O)―, ―NH(C=O)―, 및 ―N(RN)―으로 이루어지는 군으로부터 선택된 링커 유닛에 콘쥬게이션된 기이며, 이때 RN은 H, C1-4 알킬 및(C2H4O)mCH3로 이루어지는 군으로부터 선택되며 이때 s는 1 내지 3이며, 그리고
(i) Q1은 단일 결합이고, Q2는 단일 결합 및 ―Z―(CH2)n―으로 이루어지는 군으로부터 선택되며, 이때 Z는 단일 결합, O, S 및 NH로 이루어지는 군으로부터 선택되며 n은 1 내지 3이거나; 또는
(ii) Q1은 ―CH=CH―이고, Q2는 단일 결합이며;
R130은 할로, 니트로, 시아노, C1-12 알콕시, C3-20 헤테로시클로알콕시, C5-20 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, 알킬알콕시, 아릴알콕시, 알킬아릴옥시, 헤테로아릴알콕시, 알킬헤테로아릴옥시, C1-7 알킬, C3-7 헤테로시클릴 및 비스-옥시-C1-3 알킬렌으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 치환된 C5-10 아릴 기이고;
R31 및 R33은 독립적으로 H, Rx, OH, ORx, SH, SRx, NH2, NHRx, NRxRxx′, 니트로, Me3Sn 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되며;
이때 R 및 R′은 선택적으로 치환된 C1-12 알킬, C3-20 헤테로시클릴 및 C5-20 아릴 기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;
R32는 H, Rx, OH, ORx, SH, SRx, NH2, NHRx, NHRxRxx, 니트로, Me3Sn 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되며;
(a) R34는 H이고, R11은 OH, ORxA이며, 이때 RxA는 C1-4 알킬이거나;
(b) R34 및 R35는 질소와 그들이 결합되는 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중 결합을 형성하거나; 또는
(c) R34는 H이고 R35는 SOzM이며, 이때 z는 2 또는 3이며;
Rxxx는 C3-12 알킬렌기이며, 이 쇄는 O, S, NH, 및 방향족 고리로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 헤테로 원자에 의해 방해될 수 있으며;
Yx 및 Yx′은 O, S, 및 NH로 이루어지는 군으로부터 선택되며;
R31', R32′, R33'은 각각 R31, R32 및 R33과 동일한 기로부터 선택되며 R34′및 R35′은 R34 및 R35와 동일하며, 각각의 M은 1가의 제약상 허용가능한 양이온이거나 두 M 기 모두가 함께 2가의 제약상 허용가능한 양이온이다.
C1-12 알킬: 본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "C1-12 알킬"은 1 내지 12개 탄소 원자를 가진 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득된 1가 모이어티에 관련되며, 이것은 지방족이거나 지환족일 수 있으며, 포화되거나 불포화(예를 들어, 부분적으로 불포화, 완전 불포화)될 수 있다. 따라서, 용어 "알킬"은 하기에 토의된 바와 같이, 서브클래스 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 등을 포함한다.
포화된 알킬 기의 예는 메틸(C1), 에틸(C2), 프로필(C3), 부틸(C4), 펜틸(C5), 헥실(C6) 및 헵틸(C7)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
포화된 선형 알킬 기의 예는 메틸(C1), 에틸(C2), n-프로필(C3), n-부틸(C4), n-펜틸(아밀)(C5), n-헥실(C6) 및 n-헵틸(C7)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
포화된 분지형 알킬 기의 예는 이소-프로필(C3), 이소-부틸(C4), sec-부틸(C4), tert-부틸(C4), 이소-펜틸(C5), 및 네오-펜틸(C5)을 포함한다.
C3-20 헤테로시클릴: 본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "C3-20 헤테로시클릴"은 헤테로시클릭 화합물의 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득된 1가 모이어티에 관련되며, 이 모이어티는 3 내지 20개 고리 원자를 가지며, 그 중 1 내지 10개는 고리 헤테로원자이다. 바람직하게는, 각 고리는 3 내지 7개 고리 원자를 가지며, 그 중 1 내지 4개는 고리 헤테로원자이다.
이 맥락에서, 접두어(예를 들어, C3-20, C3-7, C5-6, 등)는 탄소 원자이건 헤테로원자이건, 고리 원자의 수, 또는 고리 원자의 수의 범위를 나타낸다. 예를 들어, 본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "C5-6헤테로시클릴"은 5 또는 6개 고리 원자를 가진 헤테로시클릴기에 관련된다.
단환식 헤테로시클릴기의 예는 하기로부터 유래된 것을 포함하지만 이에 한정되지 않는다:
N1: 아지리딘(C3), 아제티딘(C4), 피롤리딘(테트라하이드로피롤)(C5), 피롤린(예를 들어, 3-피롤린, 2,5-디하이드로피롤)(C5), 2H-피롤 또는 3H-피롤(이소피롤, 이소아졸)(C5), 피페리딘(C6), 디하이드로피리딘(C6), 테트라하이드로피리딘(C6), 아제핀(C7); O1: 옥시란(C3), 옥세탄(C4), 옥솔란(테트라하이드로푸란)(C5), 옥솔(디하이드로푸란)(C5), 옥산(테트라하이드로피란)(C6), 디하이드로피란(C6), 피란(C6), 옥세핀(C7); S1: 티란(C3), 티에탄(C4), 티오란(테트라하이드로티오펜)(C5), 티안(테트라하이드로티오피란)(C6), 티에판(C7); O2: 디옥솔란(C5), 디옥산(C6), 및 디옥세판(C7); O3: 트리옥산(C6); N2: 이미다졸리딘(C5), 피라졸리딘(디아졸리딘)(C5), 이미다졸린(C5), 피라졸린(디하이드로피라졸)(C5), 피페라진(C6); N1O1: 테트라하이드로옥사졸(C5), 디하이드로옥사졸(C5), 테트라하이드로이속사졸(C5), 디하이드로이속사졸(C5), 모르폴린(C6), 테트라하이드로옥사진(C6), 디하이드로옥사진(C6), 옥사진(C6); N1S1: 티아졸린(C5), 티아졸리딘(C5), 티오모르폴린(C6); N2O1: 옥사디아진(C6); O1S1: 옥사티올(C5) 및 옥사티안(티옥산)(C6); 및, N1O1S1: 옥사티아진(C6).
치환된 단환식 헤테로시클릴기의 예는 시클릭 형태의 당류, 예를 들어, 푸라노스(C5), 예를 들어, 아라비노푸라노스, 릭소푸라노스, 리보푸라노스 및 자일로푸라노스, 및 피라노스(C6), 예를 들어, 알로피라노스, 알트로피라노스, 글루코피라노스, 만노피라노스, 굴로피라노스, 이도피라노스, 갈락토피라노스 및 탈로피라노스로부터 유래된 것을 포함한다.
C5-20 아릴: 본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "C5-20 아릴"은 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득된 1가 모이어티에 관련되며, 이 모이어티는 3 내지 20개 고리 원자를 가진다. 바람직하게는, 각 고리는 5 내지 7개 고리 원자를 가진다.
이 맥락에서, 접두어(예를 들어, C3-20, C5-7, C5-6, 등)는 탄소 원자이건 헤테로원자이건, 고리 원자의 수, 또는 고리 원자의 수의 범위를 나타낸다. 예를 들어, 본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "C5-6 아릴"은 5 또는 6개 고리 원자를 가진 아릴 기에 관련된다.
일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체는 하기 화학식 XXXIa를 가진 PBD 이량체에 콘쥬게이션될 수 있다:
[화학식 XXXIa]
Figure pct00421
여기서, 상기 구조는 PBD 이량체 SG2202(ZC-207)를 개시하며 링커 L을 통해 본 발명의 항-B7-H3 항체에 콘쥬게이션된다. SG2202(ZC-207)는 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제2007/0173497호에 개시되며, 이것은 그 전체가 참고로 본원에 포함된다.
다른 실시 형태에서, PBD 이량체, SGD-1882는 도 4에 도시된 대로, 약물 링커를 통해 본 발명의 항-B7-H3 항체에 콘쥬게이션된다. SGD-1882는 문헌[Sutherland et al.(2013) Blood 122(8):1455] 및 미국 특허 출원 공개 제2013/0028919호에 개시되며, 이들은 그 전체가 참고로 본원에 포함된다. 도 4에 개시된 대로, PBD 이량체 SGD-1882는 mc-val-ala-디펩티드 링커를 통해 항체에 콘쥬게이션될 수 있다(도 4에서 총체적으로 SGD-1910으로 불림). 일부 실시 형태에서, 본원에서 개시된 항-B7-H3 항체는 도 4에 개시된 PBD 이량체에 콘쥬게이션된다. 따라서, 추가 실시 형태에서, 본 발명은 도 4에 개시된 대로, mc-val-ala-디펩티드 링커를 통해 PBD 이량체에 콘쥬게이션된, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명은 도 4에 개시된 PBD 이량체를 포함하지만 이에 한정되지 않는 PBD에 콘쥬게이션된, 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인, 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-B7-H3 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명은 도 4에 개시된 PBD 이량체를 포함하지만 이에 한정되지 않는 PBD에 콘쥬게이션된, 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인, 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인, 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-B7-H3 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명은 도 4에 개시된 PBD 이량체를 포함하지만 이에 한정되지 않는 PBD에 콘쥬게이션된, 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인, 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인, 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열 번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-B7-H3 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명은 서열 번호 147에 개시된 아미노산 서열에 의해 정의된 huAb13v1, 또는 서열 번호 139에 개시된 아미노산 서열에 의해 정의된 huAb3v2.5 또는 huAb3v2.6의 중쇄 가변 영역, 및 각각 huAb13v1, huAb3v2.5, 또는 huAb3v2.6에 해당하는 서열 번호 144, 135, 또는 137의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-B7-H3 항체를 포함하며, 항체는 도 4의 예시적인 PBD 이량체와 같은 그러나 이에 제한되지 않는 PBD에 콘쥬게이션된다.
b. 안트라사이클린
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 안트라사이클린에 콘쥬게이션될 수 있다. 안트라사이클린은 스트렙토마이세스 속의 세균으로부터 분리된 항종양 항생제의 서브클래스이다. 대표적인 예는 다우노루비신(Cerubidine, Bedford Laboratories), 독소루비신(Adriamycin, Bedford Laboratories; 독소루비신 하이드로클로라이드, 하이드록시다우노루비신 및 Rubex로도 불림), 에피루비신(Ellence, Pfizer), 및 이다루비신(Idamycin; Pfizer Inc.)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 따라서, 일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 안트라사이클린, 예를 들어, 독소루비신에 콘쥬게이션된다.
c. 칼리케미신
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 칼리케미신에 콘쥬게이션될 수 있다. 칼리케미신은 토양 유기체 마이크로모노스포라 에치노스포라(Micromonospora echinospora)로부터 유래된 에네딘 항생제 패밀리이다. 칼리케미신은 DNA의 마이너 그루브에 결합하며 이중쇄 DNA 손상을 유도하여, 다른 화학요법제에 비하여 100배 증가된 세포 사멸을 야기한다(문헌[Damle et al.(2003) Curr Opin Pharmacol 3:386]). 본 발명에서 약물 콘쥬게이트로서 사용될 수 있는 칼리케미신의 제조는 개시되었으며, 미국 특허 제5,712,374호; 제5,714,586호; 제5,739,116호; 제5,767,285호; 제5,770,701호; 제5,770,710호; 제5,773,001호; 및 제5,877,296호를 참조한다. 사용될 수 있는 칼리케미신의 구조적 유사체는 γ 1 I , α2 I , α3 I , N-아세틸-γ 1 I , PSAG 및 θ I 1 을 포함하지만 이에 한정되지 않는다(문헌[Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342(1993)], 문헌[Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928(1998)] 및 전술한 미국 특허 제5,712,374호; 제5,714,586호; 제5,739,116호; 제5,767,285호; 제5,770,701호; 제5,770,710호; 제5,773,001호; 및 제5,877,296호). 따라서, 일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 칼리케미신에 콘쥬게이션된다.
d. 두오카르마이신
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 두오카르마이신에 콘쥬게이션될 수 있다. 두오카르마이신은 스트렙토마이세스 속의 세균으로부터 분리된 항종양 항생제의 서브클래스이다(문헌[Nagamura and Saito(1998) Chemistry of Heterocyclic Compounds, Vol. 34, No. 12] 참조). 두오카르마이신은 DNA의 마이너 그루브에 결합하고 N3 위치에서 핵염기 아데닌을 알킬화한다(문헌[Boger(1993) Pure and Appl Chem 65(6):1123]; 및 문헌[Boger and Johnson(1995) PNAS USA 92:3642]). 두오카르마이신의 합성 유사체는 아도젤레신, 비젤레신 및 카르젤레신을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 따라서, 일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 두오카르마이신에 콘쥬게이션된다.
e. 다른 항종양 항생제
전술한 것에 더하여, 본 발명의 항-B7-H3 ADC에서 사용될 수 있는 추가의 항종양 항생제는 블레오마이신(Blenoxane, Bristol-Myers Squibb), 미토마이신, 및 플리카마이신(미트라마이신으로도 알려짐)을 포함한다.
3. 면역조절제
일 태양에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 면역조절제에 콘쥬게이션될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "면역조절제"는 면역 반응을 자극하거나 변형할 수 있는 제제를 말한다. 일 실시 형태에서, 면역조절제는 개체의 면역 반응을 향상시키는 면역자극제이다. 다른 실시 형태에서, 면역조절제는 개체의 면역 반응을 방지하거나 감소시키는 면역억제제이다. 면역조절제는 골수성 세포(단핵구, 대식세포, 수지상 세포, 거핵구 및 과립구) 또는 림프계 세포(T 세포, B 세포 및 천연 킬러(NK) 세포) 및 임의의 그의 추가 분화 세포를 조절할 수 있다. 대표적인 예는 바실러스 칼메트 게랭(BCG) 및 레바미솔(Ergamisol)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 ADC에서 사용될 수 있는 면역조절제의 다른 예는 암 백신, 사이토카인 및 면역조절 유전자 치료법을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
a. 암 백신
본 발명의 항-B7-H3 항체는 암 백신에 콘쥬게이션될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "암 백신"은 종양-특이적 면역 반응을 유발하는 조성물(예를 들어, 종양 항원 및 사이토카인)을 말한다. 반응은 암 백신을 투여함으로써, 또는 본 발명의 경우에는 항-B7-H3 항체 및 암 백신을 포함하는 ADC를 투여함으로써 개체 자신의 면역계로부터 유발된다. 바람직한 실시 형태에서, 면역 반응은 신체에서 종양 세포(예를 들어, 원발성 또는 전이성 종양 세포)의 박멸을 야기한다. 암 백신의 사용은 일반적으로 예를 들어, 특정 암세포의 표면에 존재하거나 또는 암 형성을 촉진하는 것으로 나타난 특정 감염성 제제의 표면에 존재하는 특정 항원 또는 항원 그룹의 투여에 관련된다. 일부 실시 형태에서, 암 백신의 사용은 예방 목적인 반면, 다른 실시 형태에서는 그 사용은 치료 목적이다. 본 발명의 항-B7-H3 ADC에서 사용될 수 있는 암 백신의 비제한적인 예는 재조합 2가 인간 파필로마바이러스(HPV) 백신 타입 16 및 18 백신(Cervarix, GlaxoSmithKline), 재조합 4가 인간 파필로마바이러스(HPV) 타입 6, 11, 16, 및 18 백신(Gardasil, Merck & Company), 및 시푸류셀-T(Provenge, Dendreon)를 포함한다. 따라서, 일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 항체는 면역자극제이거나 면역억제제인 적어도 하나의 암 백신에 콘쥬게이션된다.
b. 사이토카인
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 사이토카인에 콘쥬게이션될 수 있다. 용어 "사이토카인"은 일반적으로 세포간 매개자로서 다른 세포에서 작용하는 하나의 세포 집단에 의해 방출되는 단백질을 말한다. 사이토카인은 종양 부위에서 면역 이펙터 세포 및 기질 세포를 직접 자극하며 세포독성 이펙터 세포에 의한 종양 세포 인식을 향상시킨다(문헌[Lee and Margolin(2011) Cancers 3:3856]). 많은 동물 종양 모델 연구는 사이토카인이 광범위한 항-종양 활성을 가짐을 입증하였으며 이것은 암 치료법을 위한 많은 사이토카인-기반 접근으로 전환되었다(문헌[Lee and Margoli, supra]). 최근에는 GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18 및 IL-21을 비롯한 많은 사이토카인이 진행된 암을 가진 환자를 위한 임상 시험에 들어갔다(문헌[Lee and Margoli, supra]).
본 발명의 ADC에서 사용될 수 있는 사이토카인의 예는 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 릴랙신; 프로릴랙신; 당단백질 호르몬, 예를 들어, 난포 자극 호르몬(FSH), 갑상선 자극 호르몬(TSH), 및 황체형성 호르몬(LH); 간 성장 인자; 섬유아세포 성장 인자; 프로락틴; 태반 락토겐; 종양 괴사 인자; 뮐러관-저해 물질; 마우스 성선자극호르몬-연합 펩티드; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴(TPO); NGF와 같은 신경 성장 인자; 혈소판-성장 인자; 형질전환 성장 인자(TGF); 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴(EPO); 골유도성 인자; 인터페론 α, β 및 γ와 같은 인터페론, 콜로니 자극 인자(CSF); 과립구-대식세포-C-SF(GM-CSF); 및 과립구-CSF(G-CSF); 인터루킨(IL), 예를 들어, IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12; 종양 괴사 인자; 및 LIF 및 kit 리간드(KL)를 비롯한 다른 폴리펩티드 인자를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 사이토카인은 천연 공급원으로부터 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연 서열 사이토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다. 따라서, 일 실시 형태에서, 본 발명은 본원에서 개시된 항-B7-H3 항체 및 사이토카인을 포함하는 ADC를 제공한다.
c. 콜로니-자극 인자(CSF)
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 콜로니 자극 인자(CSF)에 콘쥬게이션될 수 있다. 콜로니 자극 인자(CSF)는 백혈구 생산에서 골수를 보조하는 성장 인자이다. 일부 암 치료(예를 들어, 화학요법)는 백혈구(감염과 싸우는 것을 도움)에 영향을 줄 수 있으며; 따라서, 콜로니-자극 인자가 백혈구 수준을 지원하는 것을 돕고 면역계를 강화하기 위하여 도입될 수 있다. 콜로니-자극 인자는 또한 새로운 골수가 백혈구를 생산하기 시작하는 것을 돕기 위하여 골수 이식 후 이용될 수 있다. 본 발명의 항-B7-H3 ADC에서 사용될 수 있는 CSF의 대표적인 예는 에리트로포이에틴(Epoetin), 필그라스팀(Neopogen(과립구 콜로니-자극 인자(G-CSF)로도 알려짐); Amgen, Inc.), 사르그라모스팀(류킨(과립구-대식세포 콜로니-자극 인자 및 GM-CSF); Genzyme Corporation), 프로메가포이에틴 및 Oprelvekin(재조합 IL-11; Pfizer, Inc.)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 따라서, 일 실시 형태에서, 본 발명은 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 및 CSF를 포함하는 ADC를 제공한다.
4. 유전자 치료법
본 발명의 항-B7-H3 항체는 유전자 치료법을 위하여 적어도 하나의 핵산에(직접적으로 또는 캐리어를 통해 간접적으로) 콘쥬게이션될 수 있다. 유전자 치료법은 일반적으로 세포내로 유전 물질을 도입하는 것을 말하며 유전 물질은 질병을 치료하기 위하여 설계된다. 이것이 면역조절제에 관련될 경우, 유전자 치료법은 암세포 증식을 저해하거나 암세포를 사멸시키는 개체의 자연 능력을 자극하기 위해 사용된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 ADC는 암과 연합된 돌연변이되거나 다르게는 기능이상인(예를 들어, 절단된) 유전자를 대체하기 위하여 사용되는 기능성의 치료 유전자를 코딩하는 핵산을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 본 발명의 항-B7-H3 ADC는 암을 치료하기 위한 치료 단백질을 코딩하거나 치료 단백질의 생산을 제공하는 핵산을 포함한다. 치료 유전자를 코딩하는 핵산은 직접적으로 항-B7-H3 항체에 콘쥬게이션될 수 있거나, 또는 대안적으로, 캐리어를 통해 항-B7-H3 항체에 콘쥬게이션될 수 있다. 유전자 치료법을 위한 핵산을 전달하기 위해 사용될 수 있는 캐리어의 예는 바이러스 벡터 또는 리포좀을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
5. 알킬화제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 하나 이상의 알킬화제(들)에 콘쥬게이션될 수 있다. 알킬화제는 DNA에 알킬 기를 부착시키는 항신생물 화합물 클래스이다. 본 발명의 ADC에서 사용될 수 있는 알킬화제의 예는 알킬 술포네이트, 에틸렌이민, 메틸아민 유도체, 에폭시드, 질소 머스타드, 니트로소우레아, 트리아진, 및 하이드라진을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
a. 알킬 술포네이트
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 알킬 술포네이트에 콘쥬게이션될 수 있다. 알킬 술포네이트는 일반 화학식 R-SO2-O-R1을 가진 알킬화제 서브클래스이며, 이때 R과 R1은 전형적으로 알킬 또는 아릴 기이다. 알킬 술포네이트의 대표적인 예는 부술판(Myleran, GlaxoSmithKline; Busulfex IV, PDL BioPharma, Inc.)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
b. 질소 머스타드
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 질소 머스타드에 콘쥬게이션될 수 있다. 항암 화합물의 이 서브클래스의 대표적인 예는 클로람부실(Leukeran, GlaxoSmithKline), 시클로포스파미드(Cytoxan, Bristol-Myers Squibb; Neosar, Pfizer, Inc.), 에스트라무스틴(에스트라무스틴 포스페이트 소듐 또는 Estracyt), Pfizer, Inc.), 이포스파미드(Ifex, Bristol-Myers Squibb), 메클로르에타민(Mustargen, Lundbeck Inc.), 및 멜팔란(Alkeran 또는 L-Pam 또는 페닐알라닌 머스타드; GlaxoSmithKline)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
c. 니트로소우레아
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 니트로소우레아에 콘쥬게이션될 수 있다. 니트로소우레아는 지질 가용성인 알킬화제의 서브클래스이다. 대표적인 예는 카르무스틴(BCNU [BiCNU, N,N-비스(2-클로로에틸)-N-니트로소우레아, 또는 1,3-비스(2-클로로에틸)-l-니트로소우레아로도 알려짐], Bristol-Myers Squibb), 포테무스틴(Muphoran으로도 알려짐), 로무스틴(CCNU 또는 1-(2-클로로-에틸)-3-시클로헥실-1-니트로소우레아, Bristol-Myers Squibb), 니무스틴(ACNU로도 알려짐), 및 스트렙토조신(Zanosar, Teva Pharmaceuticals)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
d. 트리아진 및 하이드라진
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 트리아진 또는 하이드라진에 콘쥬게이션될 수 있다. 트리아진 및 하이드라진은 질소-함유 알킬화제의 서브클래스이다. 일부 실시 형태에서, 이들 화합물은 자발적으로 분해되거나 또는 대사되어 핵산, 펩티드 및/또는 폴리펩티드로의 알킬 기의 전달을 촉진하는 알킬 디아조늄 중간체를 생산하여 돌연변이원성, 발암성 또는 세포독성 효과를 야기할 수 있다. 대표적인 예는 다카르바진(DTIC-Dome, Bayer Healthcare Pharmaceuticals Inc.), 프로카르바진(Mutalane, Sigma-Tau Pharmaceuticals, Inc.), 및 테모졸로미드(Temodar, Schering Plough)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
e. 다른 알킬화제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 에틸렌이민, 메틸아민 유도체, 또는 에폭시드에 콘쥬게이션될 수 있다. 에틸렌이민은 전형적으로 적어도 하나의 아지리딘 고리를 함유하는 알킬화제 서브클래스이다. 에폭시드는 단지 3개의 고리 원자를 가진 시클릭 에테르로 특징지어지는 알킬화제 서브클래스를 나타낸다.
에틸렌이민의 대표적인 예는 티오페타(Thioplex, Amgen), 디아지쿠온(아지리디닐 벤조퀴논(AZQ)으로도 알려짐), 및 미토마이신 C를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 미토마이신 C는 아지리딘 고리를 함유하며 DNA 가교를 통해 세포독성을 유도하는 것으로 나타나는 천연 산물이다(문헌[Dorr RT, et al. Cancer Res. 1985;45:3510]; 문헌[Kennedy KA, et al Cancer Res. 1985;45:3541]). 메틸아민 유도체 및 그 유사체의 대표적인 예는 헥사메틸아민 및 헥사스타트로도 알려진 알트레타민(Hexalen, MGI Pharma, Inc.)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 항암 화합물의 이 클래스의 에폭시드의 대표적인 예는 디언하이드로갈락티톨을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 디언하이드로갈락티톨(1,2:5,6-디언하이드로둘시톨)은 화학적으로 아지리딘에 관련되며 일반적으로 상술한 것과 유사한 기전을 통해 알킬 기의 전달을 촉진한다. 디브로모둘시톨은 디언하이드로갈락티톨로 가수분해되고 따라서 에폭시드의 전구-약물이다(문헌[Sellei C, et al. Cancer Chemother Rep. 1969;53:377]).
6. 항혈관신생제
일 태양에서, 본원에서 개시된 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 항혈관신생제에 콘쥬게이션된다. 항혈관신생제는 새로운 혈관의 성장을 저해한다. 항혈관신생제는 다양한 방식으로 그들의 효과를 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 이들 제제는 성장 인자가 그의 표적에 도달하는 능력을 방해한다. 예를 들어, 혈관 내피 성장 인자(VEGF)는 세포 표면 상의 특정 수용체에 결합함으로써 혈관신생을 시작하는데 관련된 주요 단백질 중 하나이다. 따라서, 그의 짝 수용체와 VEGF의 상호작용을 방지하는 일부 항혈관신생제는 VEGF가 혈관신생을 시작하는 것을 방지한다. 다른 실시 형태에서, 이들 제제는 세포내 시그널링 캐스캐이드를 방해한다. 예를 들어, 일단 세포 표면 상의 특정 수용체가 촉발되면, 다른 화학적 신호의 캐스캐이드가 시작되어 혈관의 성장을 촉진한다. 따라서, 예를 들어, 세포 증식에 기여하는 세포내 시그널링 캐스캐이드를 촉진하는 것으로 알려진 일부 효소, 예를 들어, 일부 티로신 키나아제는 암 치료를 위한 표적이다. 다른 실시 형태에서, 이들 제제는 세포간 시그널링 캐스캐이드를 방해한다. 하지만, 다른 실시 형태에서, 이들 제제는 세포 성장을 활성화 및 촉진하는 특정 표적을 무능하게 하거나 또는 혈관 세포의 성장을 직접 방해한다. 혈관신생 저해 특성은 많은 직접 및 간접 저해 효과를 가진 300가지가 넘는 물질에서 발견되었다.
본 발명의 ADC에서 사용될 수 있는 항혈관신생제의 대표적인 예는 안지오스타틴, ABX EGF, C1-1033, PKI-166, EGF 백신, EKB-569, GW2016, ICR-62, EMD 55900, CP358, PD153035, AG1478, IMC-C225(Erbitux, ZD1839(Iressa), OSI-774, 에를로티닙(tarceva), 안지오스타틴, 아레스틴, 엔도스타틴, BAY 12-9566 및 플루오로우라실 또는 독소루비신과 함께, 칸스타틴, 카르복시아미도트리오졸 및 파클리탁셀과 함께, EMD121974, S-24, 비탁신, 디메틸잔테논 아세트산, IM862, 인터루킨-12, 인터루킨-2, NM-3, HuMV833, PTK787, RhuMab, 안지오자임(리보자임), IMC-1C11, 네오바스타트, 마림스타트, 프리노마스타트, BMS-275291,COL-3, MM1270, SU101, SU6668, SU11248, SU5416, 파클리탁셀과 함께, 젬시타빈 및 시스플라틴과 함께, 그리고 이리노테칸 및 시스플라틴과 함께 그리고 방사선과 함께, 테코가란, 테모졸로미드 및 PEG 인터페론 α2b, 테트라티오몰리브데이트, TNP-470, 탈리도미드, CC-5013 및 탁소테레와 함께, 툼스타틴, 2-메톡시에스트라디올, VEGF 트랩, mTOR 저해제(데포롤리무스, 에베롤리무스(Afinitor, Novartis Pharmaceutical Corporation), 및 템시롤리무스(Torisel, Pfizer, Inc.)), 키나아제 저해제(예를 들어, 에를로티닙(Tarceva, Genentech, Inc.), 이마티닙(Gleevec, Novartis Pharmaceutical Corporation), 제피티닙(Iressa, AstraZeneca Pharmaceuticals), 다사티닙(Sprycel, Brystol-Myers Squibb), 수니티닙(Sutent, Pfizer, Inc.), 닐로티닙(Tasigna, Novartis Pharmaceutical Corporation), 라파티닙(Tykerb, GlaxoSmithKline Pharmaceuticals), 소라페닙(Nexavar, Bayer and Onyx), 포스포이노시티드 3-키나아제(PI3K), 오시메르티닙, 코비메티닙, 트라메티닙, 다브라페닙, 디나시클립)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
7. 대사길항물질
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 대사길항물질에 콘쥬게이션될 수 있다. 대사길항물질은 세포내의 정상 물질과 매우 유사한, 화학요법 치료의 타입이다. 세포가 대사길항물질을 세포 대사내로 통합할 경우, 결과는 세포에 대해 부정적이며, 예를 들어, 세포는 분열할 수 없다. 대사길항물질은 그들이 방해하는 물질에 따라 분류된다. 본 발명의 ADC에서 사용될 수 있는 대사길항물질의 예는 하기에서 보다 상세히 개시되는 엽산 길항제(예를 들어, 메토트렉세이트), 피리미딘 길항제(예를 들어, 5-플루오로우라실, 폭스우리딘, 시타라빈, 카페시타빈 및 젬시타빈), 퓨린 길항제(예를 들어, 6-메르캅토퓨린 및 6-티오구아닌) 및 아데닌 데아미나아제 저해제(예를 들어, 클라드리빈, 플루다라빈, 넬라라빈 및 펜토스타틴)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
a. 항엽산제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 항엽산제에 콘쥬게이션될 수 있다. 항엽산제는 구조적으로 엽산과 유사한 대사길항물질 서브클래스이다. 대표적인 예는 메토트렉세이트, 4-아미노-엽산(아미노프테린 및 4-아미노프테로산으로도 알려짐), 로메트렉솔(LMTX), 페메트렉세드(Alimpta, Eli Lilly and Company), 및 트리메트렉세이트(Neutrexin, Ben Venue Laboratories, Inc.)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다
b. 퓨린 길항제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 퓨린 길항제에 콘쥬게이션될 수 있다. 퓨린 유사체는 퓨린으로 알려진 화합물 그룹과 구조적으로 유사한 대사길항물질 서브클래스이다. 퓨린 길항제의 대표적인 에는 아자티오프린(Azasan, Salix; Imuran, GlaxoSmithKline), 클래드리빈(Leustatin [2-CdA로도 알려짐], Janssen Biotech, Inc.), 메르캅토퓨린(Purinethol [6-메르캅토에탄올로도 알려짐], GlaxoSmithKline), 플루다라빈(Fludara, Genzyme Corporation), 펜토스타틴(Nipent, 2'-데옥시코포르마이신(DCF)으로도 알려짐), 6-티오구아닌(Lanvis [티오구아닌으로도 알려짐], GlaxoSmithKline)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
c. 피리미딘 길항제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 피리미딘 길항제에 콘쥬게이션될 수 있다. 피리미딘 길항제는 퓨린으로 알려진 화합물 그룹과 구조적으로 유사한 대사길항물질 서브클래스이다. 피리미딘 길항제의 대표적인 예는 아자시티딘(Vidaza, Celgene Corporation), 카페시타빈(Xeloda, Roche Laboratories), 시타라빈(시토신 아라비노시드 및 아라비노실시토신으로도 알려짐, Bedford Laboratories), 데시타빈(Dacogen, Eisai Pharmaceuticals), 5-플루오로우라실(Adrucil, Teva Pharmaceuticals; Efudex, Valeant Pharmaceuticals, Inc), 5-플루오로-2'-데옥시우리딘 5'-포스페이트(FdUMP), 5-플루오로우리딘 트리포스페이트, 및 젬시타빈(Gemzar, Eli Lilly and Company)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다
8. 붕소-함유 제제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 붕소 함유 제제에 콘쥬게이션될 수 있다. 붕소-함유 제제는 세포 증식을 방해하는 암 치료 화합물 클래스를 포함한다. 붕소 함유 제제의 대표적인 에는 보로피신 및 보르테조밉(Velcade, Millenium Pharmaceuticals)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
9. 화학보호제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 화학보호제에 콘쥬게이션될 수 있다. 화학보호약은 화학요법의 특정 독성 효과로부터 신체를 보호하는 것을 돕는 화합물 클래스이다. 화학보호제는 화학요법 약의 독성 효과로부터 건강한 세포를 보호하기 위하여 다양한 화학요법과 투여될 수 있는 한편, 동시에 암세포가 투여된 화학요법제로 치료되도록 한다. 대표적인 화학보호제는 시스플라틴, 덱스라족산(Totect, Apricus Pharma; Zinecard)의 축적 용량과 연합된 신장 독성을 감소시키기 위하여, 안트라사이클린(Totect)의 투여에 의해 야기된 혈관외유출의 치료를 위해, 그리고 항종양 항생제 독소루비신(Zinecard)의 투여에 의해 야기된 심장-관련 합병증의 치료를 위해 이용되는 아미포스틴(Ethyol, Medimmune, Inc.), 및 이폭파미드를 이용한 화학요법 치료동안 출혈성 방광염을 방지하기 위하여 이용되는 메스나(Mesnex, Bristol-Myers Squibb)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
10. 호르몬제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 호르몬제와 콘쥬게이션될 수 있다. 호르몬제(합성 호르몬 포함)는 내분비계의 내인성으로 생산된 호르몬의 생산 또는 활성을 방해하는 화합물이다. 일부 실시 형태에서, 이들 화합물은 세포 성장을 방해하거나 세포독성 효과를 생산한다. 비제한적인 예는 안드로겐, 에스트로겐, 메드록시프로게스테론 아세테이트(Provera, Pfizer, Inc.), 및 프로게스틴을 포함한다.
11. 항호르몬제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 항호르몬제에 콘쥬게이션될 수 있다. "항호르몬"제는 일부 내인성 호르몬의 생산을 저해하고/하거나 기능을 방지하는 제제이다. 일 실시 형태에서, 항호르몬제는 안드로겐, 에스트로겐, 프로게스테론 및 성선자극호르몬-방출 호르몬을 포함하는 군으로부터 선택된 호르몬의 활성을 방해하여, 다양한 암세포의 성장을 방해한다. 항호르몬제의 대표적인 예는 아미노글루테티미드, 아나스트로졸(Arimidex, AstraZeneca Pharmaceuticals), 비칼루타미드(Casodex, AstraZeneca Pharmaceuticals), 시프로테론 아세테이트(Cyprostat, Bayer PLC), 데가렐릭스(Firmagon, Ferring Pharmaceuticals), 엑세메스탄(Aromasin, Pfizer Inc.), 플루타미드(Drogenil, Schering-Plough Ltd), 풀베스트란트(Faslodex, AstraZeneca Pharmaceuticals), 고세렐린(Zolodex, AstraZeneca Pharmaceuticals), 레트로졸(Femara, Novartis Pharmaceuticals Corporation), 류프롤리드(Prostap), 루프론, 메드록시프로게스테론 아세테이트(Provera, Pfizer Inc.), 메게스트롤 아세테이트(Megace, Bristol-Myers Squibb Company), 타목시펜(Nolvadex, AstraZeneca Pharmaceuticals), 및 트립토렐린(Decapetyl, Ferring)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
12. 코르티코스테로이드
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 코르티코스테로이드에 콘쥬게이션될 수 있다. 코르티코스테로이드는 염증을 감소시키기 위하여 본 발명의 ADC에서 사용될 수 있다. 코르티코스테로이드의 예는 글루코코르티코이드, 예를 들어, 프레드니손(Deltasone, Pharmacia & Upjohn Company, a division of Pfizer, Inc.)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
13. 광활성 치료제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 광활성 치료제에 콘쥬게이션될 수 있다. 광활성 치료제는 특정 파장의 전자기 방사선에 노출시에 처리된 세포를 사멸시키기 위하여 이용될 수 있는 화합물을 포함한다. 치료적으로 관련된 화합물은 조직을 침투하는 파장에서 전자기 방사선을 흡수한다. 바람직한 실시 형태에서, 화합물은 충분한 활성화시에 세포 또는 조직에 독성인 광화학 효과를 생산할 수 있는 비독성 형태로 투여된다. 다른 바람직한 실시 형태에서, 이들 화합물은 암성 조직에 의해 보유되고 정상 조직으로부터 쉽게 소거된다. 비제한적인 예는 다양한 크로마젠과 염료를 포함한다.
14. 올리고뉴클레오티드
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 올리고뉴클레오티드에 콘쥬게이션될 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 유전 정보의 프로세싱을 방해함으로서 작용하는 짧은 핵산 쇄로 만들어진다. 일부 실시 형태에서, ADC에서 사용하기 위한 올리고뉴클레오티드는 비변형 단일쇄 및/또는 이중쇄 DNA 또는 RNA 분자인 한편, 다른 실시 형태에서, 이들 치료 올리고뉴클레오티드는 화학적으로 변형된 단일쇄 및/또는 이중쇄 DNA 또는 RNA 분자이다. 일 실시 형태에서, ADC에서 사용되는 올리고뉴클레오티드는 상대적으로 짧으며(19-25 뉴클레오티드) 세포에 존재하는 핵산 표적의 전체 집단에서 유일한 핵산에 하이브리드화한다. 중요한 올리고뉴클레오티드 기술 중 일부는 안티센스 올리고뉴클레오티드(RNA 간섭(RNAi) 포함), 압타머, CpG 올리고뉴클레오티드 및 리보자임을 포함한다.
a. 안티센스 올리고뉴클레오티드
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 안티센스 올리고뉴클레오티드에 콘쥬게이션될 수 있다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 왓슨-크릭 하이브리드화를 통해 RNA에 결합하도록 설계된다. 일부 실시 형태에서 안티센스 올리고뉴클레오티드는 B7-H3의 영역, 도메인, 부분 또는 세그먼트를 코딩하는 뉴클레오티드에 상보적이다. 일부 실시 형태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 약 5 내지 약 100 뉴클레오티드, 약 10 내지 약 50 뉴클레오티드, 약 12 내지 약 35, 그리고 약 18 내지 약 25 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 올리고뉴클레오티드는 B7-H3 유전자의 영역, 부분, 도메인 또는 세그먼트에 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 적어도 100% 상동성이다. 일부 실시 형태에서 B7-H3 유전자의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 또는 100 연속 뉴클레오티드에 걸쳐서 상당한 서열 상동성이 있다. 바람직한 실시 형태에서, 이들 안티센스 올리고뉴클레오티드의 크기는 12 내지 25 뉴클레오티드 길이이고, 대부분의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 18 내지 21 뉴클레오티드 길이이다. 일단 올리고뉴클레오티드가 표적 RNA에 결합하면 RNA의 기능을 저해하기 위해 이용될 수 있는 다수의 기전이 있다(문헌[Crooke ST.(1999). Biochim. Biophys. Acta, 1489, 30-42]). 가장 잘 규명된 안티센스 기전은 RNase H와 같은 내인성 세포 뉴클레아제 또는 RNA 간섭 기전과 연합된 뉴클레아제에 의해 표적화된 RNA의 절단을 야기한다. 하지만, 스플라이싱의 조절 또는 번역 정지와 같은 비촉매적 기전에 의해 표적 유전자의 발현을 저해하는 올리고뉴클레오티드 또한 유전자 기능의 강력하고 선택적인 조절자일 수 있다.
최근에 많은 관심을 받은 다른 RNase-의존성 안티센스 기전은 RNAi이다(문헌[Fire et al.(1998). Nature, 391, 806-811.]; 문헌[Zamore PD.(2002). Science, 296, 1265-1269.]). RNA 간섭(RNAi)은 이중쇄 RNA가 서열 특이적 방식으로 유전자 발현을 저해하는 전사후 과정이다. 일부 실시 형태에서, RNAi 효과는 상대적으로 더 긴 이중쇄 RNA(dsRNA)의 도입을 통해 이루어지는 한편, 바람직한 실시 형태에서, 이 RNAi 효과는 더 짧은 이중쇄 RNA, 예를 들어, 작은 간섭 RNA(siRNA) 및/또는 microRNA(miRNA)의 도입에 의해 이루어진다. 또 다른 실시 형태에서, RNAi는 또한 표적 유전자에 상보성인 dsRNA를 생성하는 플라스미드를 도입함으로써 이루어질 수 있다. 전술한 실시 형태의 각각에서, 이중쇄 RNA는 세포내의 특정 표적 서열의 유전자 발현을 방해하도록 설계된다. 일반적으로, 기전은 리보뉴클레아제를 상동성 mRNA 표적으로 보내는 짧은 RNA로 dsRNA를 전환시키는 것에 관련되며(요약됨, 문헌[Ruvkun, Science 2294:797(2001)]), 이것은 이어서 상응하는 내인성 mRNA를 분해하여, 유전자 발현의 조절을 야기한다. 특히, dsRNA는 항-증식 특성을 갖는 것으로 보고되었으며, 이것은 치료 응용도 예상하는 것을 가능하게 한다(문헌[Aubel et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA 88:906(1991)]). 예를 들어, 합성 dsRNA는 마우스에서 종양 성장을 저해하는 것으로 나타났으며(문헌[Levy et al.Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 62:357-361(1969)]), 백혈병 마우스의 치료에서 활성이며(문헌[Zeleznick et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 130:126-128(1969)]), 마우스 피부에서 화학적으로 유도된 종양발생을 저해한다(문헌[Gelboin et al., Science 167:205-207(1970)]). 따라서, 바람직한 실시 형태에서, 본 발명은 유방암의 치료를 위한 ADC에서 안티센스 올리고뉴클레오티드의 용도를 제공한다. 다른 실시 형태에서, 본 발명은 안티센스 올리고뉴클레오티드 치료를 시작하기 위한 조성물과 방법을 제공하며, 이때 dsRNA는 mRNA 수준에서 B7-H3의 표적 세포 발현을 방해한다. dsRNA는 상기에서 사용된 바와 같이, 자연-발생 RNA, 부분 정제된 RNA, 재조합적으로 생산된 RNA, 합성 RNA, 및 비-표준 뉴클레오티드, 비-뉴클레오티드 물질, 뉴클레오티드 유사체(예를 들어, 잠긴 핵산(LNA)), 데옥시리보뉴클레오티드 및 임의의 그 조합의 포함에 의해 자연-발생 RNA와 상이한 변경된 RNA를 말한다. 본 발명의 RNA는 그것이 본원에 개시된 안티센스 올리고뉴클레오티드-기반 조절을 매개하는 능력을 가지도록 천연 RNA에 충분히 유사하기만 하면 된다.
b. 압타머
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 압타머에 콘쥬게이션될 수 있다. 압타머는 다른 분자에 결합하는 그의 능력에 기초하여 랜덤 집단으로부터 선택된 핵산 분자이다. 항체처럼, 압타머는 뛰어난 친화성과 특이성으로 표적 분자에 결합할 수 있다. 많은 실시 형태에서, 압타머는 그들이 표적 단백질과 상호작용하도록 하는 복잡하고, 서열-의존적이며, 삼차원의 형상을 가지며, 항체-항원 상호작용과 유사한 단단히 결합된 복합체를 야기하여, 상기 단백질의 기능을 방해한다. 압타머가 단단히 그리고 특이적으로 그들의 표적 단백질에 결합하는 특정 능력은 표적화된 분자 치료로서의 그들의 잠재성을 강조한다.
c. CpG 올리고뉴클레오티드
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 CpG 올리고뉴클레오티드에 콘쥬게이션될 수 있다. 세균 및 바이러스 DNA는 인간에서 선천적 및 특이적 면역 둘 모두의 강한 활성인자인 것으로 알려져 있다. 이들 면역 특징은 세균 DNA에서 발견되는 비메틸화 CpG 디뉴클레오티드 모티프와 관련되었다. 이들 모티프가 인간에서 드물다는 사실 덕분에, 인간 면역계는 감염의 초기 징후로서 이들 모티프를 인식하고 후속하여 면역 반응을 시작하는 능력을 발달시켰다. 따라서, 이 CpG 모티프를 함유하는 올리고뉴클레오티드는 항종양 면역 반응을 시작하기 위해 이용될 수 있다.
d. 리보자임
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 리보자임에 콘쥬게이션될 수 있다. 리보자임은 약 40 내지 155 뉴클레오티드 범위 길이의 촉매 RNA 분자이다. 리보자임이 특정 RNA 분자를 인식하고 절단하는 능력은 그들을 치료제의 잠재적 후보로 만든다. 대표적인 예는 안지오자임을 포함한다.
15. 방사성핵종 제제(방사성 동위원소)
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 방사성핵종 제제에 콘쥬게이션될 수 있다. 방사성핵종 제제는 방사성 붕괴를 진행할 수 있는 불안정한 핵을 특징으로 하는 제제를 포함한다. 성공적인 방사성핵종 치료를 위한 기초는 충분한 농도 및 암세포에 의한 방사성핵종의 연장된 보유에 의존한다. 고려할 다른 인자는 방사성핵종 반감기, 방출된 입자의 에너지 및 방출된 입자가 이동할 수 있는 최대 범위를 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, 치료제는 111In, 177Lu, 212Bi, 213Bi, 211At, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 90Y, 125I, 131I, 32P, 33P, 47Sc, 111Ag, 67Ga, 142Pr, 153Sm, 161Tb, 166Dy, 166Ho, 186Re, 188Re, 189Re, 212Pb, 223Ra, 225Ac, 59Fe, 75Se, 77As, 89Sr, 99Mo, 105Rh, I09Pd, 143Pr, 149Pm, 169Er, 194Ir, 198Au, 199Au, 및 211Pb로 이루어지는 군으로부터 선택된 방사성핵종이다. 오제-방출(Auger-emitting) 입자를 가지고 실질적으로 붕괴하는 방사성핵종 또한 바람직하다. 예를 들어, Co-58, Ga-67, Br-80m, Tc-99m, Rh-103m, Pt-109, In-111 1, Sb-119, I-125, Ho-161, Os-189m 및 Ir-192. 유용한 베타-입자-방출 핵종의 붕괴 에너지는 바람직하게는 Dy-152, At-211, Bi-212, Ra-223, Rn-219, Po-215, Bi-211, Ac-225, Fr-221, At-217, Bi-213 및 Fm-255이다. 유용한 알파-입자-방출 방사성핵종의 붕괴 에너지는 바람직하게는 2,000-10,000 keV, 더욱 바람직하게는 3,000-8,000 keV, 그리고 가장 바람직하게는 4,000-7,000 keV이다. 사용할 추가의 잠재적 방사성동위원소는 11C, 13N, 150, 75Br, 198Au, 224Ac, 126I, 133I, 77Br, 113mIn, 95Ru, 97Ru, 103Ru, 105Ru, 107Hg, 203Hg, 121mTe, 122mTe, 125mTe, 165Tm, I67Tm, 168Tm, 197Pt, 109Pd, 105Rh, 142Pr, 143Pr, 161Tb, 166Ho, 199Au, 57Co, 58Co, 51Cr, 59Fe, 75Se, 201Tl, 225Ac, 76Br, 169Yb, 및 기타를 포함한다.
16. 방사선 증감제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 방사선 증감제에 콘쥬게이션될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "방사선 증감제"는 전자기 방사선에 방사선민감화되도록 세포의 민감성을 증가시키고/시키거나 전자기 방사선으로 치료가능한 질병의 치료를 촉진하기 위하여 치료적 유효량으로 동물에게 투여되는 분자, 바람직하게는 저분자량 분자로 정의된다. 방사선 증감제는 암세포를 방사선 치료법에 더욱 민감하게 만드는 한편, 전형적으로는 정상 세포에 대해서는 훨씬 적은 효과를 갖는 제제이다. 따라서, 방사선 증감제는 방사성라벨링된 항체 또는 ADC와 조합되어 사용될 수 있다. 방사선 증감제의 추가는 방사성라벨링된 항체 또는 항체 단편 단독을 이용한 치료에 비하여 향상된 효능을 야기할 수 있다. 방사선 증감제는 문헌[D. M. Goldberg(ed.), Cancer Therapy with Radiolabeled Antibodies, CRC Press(1995)]에서 개시된다. 방사선 증감제의 예는 젬시타빈, 5-플루오로우라실, 탁산 및 시스플라틴을 포함한다.
방사선 증감제는 X-선의 전자기 방사선에 의해 활성화될 수 있다. X-선 활성화된 방사선 증감제의 대표적인 예는 하기를 포함하지만 이에 한정되지 않는다: 메트로니다졸, 미소니다졸, 데스메틸미소니다졸, 피모니다졸, 에타니다졸, 니모라졸, 미토마이신 C, RSU 1069, SR 4233, E09, RB 6145, 니코틴아미드, 5-브로모데옥시우리딘(BUdR), 5-이오도데옥시우리딘(IUdR), 브로모데옥시시티딘, 플루오로데옥시우리딘(FUdR), 하이드록시우레아, 시스플라틴, 및 이들의 치료적으로 효과적인 유사체 및 유도체. 대안적으로, 방사선 증감제는 광역동 치료법(PDT)을 이용하여 활성화될 수 있다. 광역동 방사선 증감제의 대표적인 예는 헤마토포르피린 유도체, 포토프린(r), 벤조포르피린 유도체, NPe6, 주석 에티오포르피린(SnET2), 페오보르비드 a, 박테리오클로로필 a, 나프탈로시아닌, 프탈로시아닌, 아연 프탈로시아닌, 및 그의 치료적으로 효과적인 유사체 및 유도체를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
16. 토포이소머라아제 저해제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 토포이소머라아제 저해제에 콘쥬게이션될 수 있다. 토포이소머라아제 저해제는 정상 세포 사이클동안 DNA 쇄의 포스포디에스테르 백본의 붕괴 및 재결합을 촉매함으로써 DNA 구조에서의 변화를 제어하는 효소인 토포이소머라아제 효소(토포이소머라아제 I 및 II)의 작용을 방해하도록 설계된 화학요법제이다. DNA 토포이소머라아제 I 저해제의 대표적인 예는 캄프토테신 및 그의 유도체 이리노테칸(CPT-11, Camptosar, Pfizer, Inc.) 및 토포테칸(Hycamtin, GlaxoSmithKline Pharmaceuticals)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. DNA 토포이소머라아제 II 저해제의 대표적인 예는 암사크린, 다우노루비신, 독소트루비신, 에피포도필로톡신, 엘립티신, 에피루비신, 에토포시드, 라족산 및 테니포시드를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
17. 키나아제 저해제
본 발명의 항-B7-H3 항체는 적어도 하나의 키나아제 저해제에 콘쥬게이션될 수 있다. 단백질 키나아제가 기능하는 능력을 차단함으로써, 종양 성장이 저해될 수 있다. 본 발명의 ADC에서 사용될 수 있는 키나아제 저해제의 예는 악시티닙, 보수티닙, 세디라닙, 다사티닙, 에를로티닙, 제피티닙, 이마티닙, 라파티닙, 레스타우르티닙, 닐로티닙, 세막사닙, 수니티닙, 오시메르티닙, 코비메티닙, 트라메티닙, 다브라페닙, 디나시클립 및 반데타닙을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
18. 다른 제제
본 발명의 ADC에서 사용될 수 있는 다른 제제의 예는 아브린(예를 들어, 아브린 A 쇄), 알파 독소, 유동(Aleurites fordii) 단백질, 아마톡신, 크로틴, 쿠르신, 디안틴 단백질, 디프테리아 독소(예를 들어, 디프테리아 A 쇄 및 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편), 데옥시리보뉴클레아제(Dnase), 젤로닌, 미토젤린, 모데신 A 쇄, 여주(momordica charantia) 저해제, 네오마이신, 온코나아제, 페노마이신, 미국자리공(Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 미국자리공(pokeweed) 항바이러스 단백질, 슈도모나스 내독소, 슈도모나스 외독소(예를 들어, 외독소 A 쇄(슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터)), 레스트릭토신, 리신 A 쇄, 리보뉴클레아제(Rnase), 사파오나리아 오피시나리스(sapaonaria officinalis) 저해제, 사포린, 알파-사르신, 스타필로코커스 장독소-A, 파상풍 독소, 시스플라틴, 카르보플라틴, 및 옥살리플라틴(Eloxatin, Sanofi Aventis), 프로테아좀 저해제(예를 들어, PS-341[보르테조밉 또는 Velcade]), HDAC 저해제(보리노스타트(Zolinza, Merck & Company, Inc.)), 벨리노스타트, 엔티노스타트, 모세티노스타트 및 파노비노스타트), COX-2 저해제, 치환된 우레아, 열충격 단백질 저해제(예를 들어, 젤다나마이신 및 그의 많은 유사체), 부신피질 억제제, 및 트리코테센을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.(예를 들어, 국제 공개 제93/21232호 참조). 다른 제제는 또한 아스파라기나아제(Espar, Lundbeck Inc.), 하이드록시우레아, 레바미솔, 미토탄(Lysodren, Bristol-Myers Squibb), 및 트레티노인(Renova, Valeant Pharmaceuticals Inc.)을 포함한다.
III.C. 항-B7-H3 ADC: 다른 예시적인 링커
전술된 링커에 더하여, 다른 예시적인 링커는 6-말레이미도카프로일, 말레이미도프로파노일 ("MP"), 발린-시트룰린 ("val-cit" 또는 "vc"), 알라닌-페닐알라닌 ("ala-phe"), p-아미노벤질옥시카르보닐 (a "PAB"), N-숙신이미딜 4-(2-피리딜티오) 펜타노에이트 ("SPP"), 및 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1 카르복실레이트 ("MCC")를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
일 태양에서, 항-B7-H3 항체는 말레이미도카프로일 ("mc"), 발린 시트룰린 (val-cit 또는 "vc"), 및 PABA을 포함하는 링커("mc-vc-PABA 링커"로 지칭됨)를 통해 약물(예를 들어 아우리스타틴, 예컨대, MMAE)에 콘쥬게이션된다. 말레이미도카프로일은 항-B7-H3 항체에의 링커로서 작용하며 절단가능하지 않다. Val-cit는 링커의 아미노산 단위인 디펩티드이며, 프로테아제, 특히 프로테아제 카텝신 B에 의한 링커의 절단을 허용한다. 따라서, 링커의 val-cit 성분은 세포내 환경에 노출 시에 ADC로부터 아우리스타틴을 방출하기 위한 수단을 제공한다. 링커 내에서, p-아미노벤질알코올(PABA)은 스페이서로서 작용하며 자가-희생성이어서, MMAE의 방출을 허용한다. mc-vc-PABA-MMAE 링커의 구조가 도 3에 제공되어 있다.
전술한 바와 같이, 적합한 링커는, 예를 들어, 절단성 및 비-절단성 링커를 포함한다. 링커는 약물의 방출을 용이하게 하는 "절단성 링커"일 수 있다. 비제한적인 예시적인 절단성 링커는 산-불안정한 링커(예컨대, 히드라존을 포함함), 프로테아제-민감성 (예컨대, 펩티다아제-민감성) 링커, 광불안정한 링커, 또는 디술피드-함유 링커를 포함한다(문헌[Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992)]; 미국 특허 제5,208,020호). 절단성 링커는 전형적으로 세포내 조건 하에서 쉽게 절단된다. 적합한 절단성 링커는, 예를 들어, 세포내 프로테아제, 예를 들어 리소좀 프로테아제 또는 엔도좀 프로테아제에 의해 절단가능한 펩티드 링커를 포함한다. 예시적인 실시 형태에서, 링커는 디펩티드 링커, 예를 들어 발린-시트룰린 (val-cit) 또는 페닐알라닌-리신 (phe-lys) 링커일 수 있다.
링커는 바람직하게는 치료적으로 유효하기에 충분한 방식으로 세포외에서 안정하다. 세포 내로 수송 또는 전달 전에, ADC는 바람직하게는 안정하며 그대로 유지된다, 즉 항체가 약물 모이어티에 콘쥬게이션된 채로 유지된다. 표적 세포 밖에서 안정한 링커는 일단 세포 내부에서는 어느 정도 효과적인 속도로 절단될 수 있다. 따라서, 효과적인 링커는: (i) 항체의 특이적 결합 특성을 유지하고; (ii) 약물 모이어티의 전달, 예컨대, 세포내 전달을 허용하고; (iii) 약물 모이어티의 치료적 효과, 예컨대, 세포독성 효과를 유지할 것이다.
일 실시 형태에서, 링커는 세포내 조건 하에서 절단가능하여, 링커의 절단은 세포내 환경에서 항체로부터 약물을 충분히 방출하여 치료적으로 효과적이다. 일부 실시 형태에서, 절단성 링커는 pH-민감성이며, 즉, 특정 pH 값에서 가수분해에 민감성이다. 전형적으로, pH-민감성 링커는 산성 조건 하에서 가수분해가능하다. 예를 들어, 리소좀에서 가수분해가능한 산-불안정한 링커(예컨대, 히드라존, 세미카르바존, 티오세미카르바존, 시스-아코니트산, 오르토에스테르, 아세탈, 케탈 등)이 사용될 수 있다. (예를 들어, 미국 특허 제5,122,368호; 제5,824,805호; 제5,622,929호; 문헌[Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661] 참조) 그러한 링커는, 혈액 중에서와 같은 중성 pH 조건 하에서 비교적 안정하지만, 리소좀의 대략적인 pH인, pH 5.5 또는 5.0 미만에서는 불안정하다. 특정 실시 형태에서, 가수분해성 링커는 티오에테르 링커(예컨대, 아실히드라존 결합을 통해 치료제에 부착된 티오에테르)이다 (예컨대, 미국 특허 제5,622,929호 참조).
다른 실시 형태에서, 링커는 환원 조건 하에서 절단가능하다(예컨대, 디술피드 링커). 예를 들어, SATA (N-숙신이미딜-5-아세틸티오아세테이트), SPDP (N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트), SPDB (N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)부티레이트) 및 SMPT (N-숙신이미딜oxy카르보닐-알파-메틸-알파-(2-피리딜-디티오)톨루엔), SPDB 및 SMPT를 사용하여 형성될 수 있는 것들을 포함하는, 다양한 디술피드 링커가 본 기술 분야에 알려져 있다. (예컨대, 문헌[Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931]; 문헌[Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987. See also U.S. Pat. No. 4,880,935] 참조).
일부 실시 형태에서, 링커는 세포내 환경 (예컨대, 리소좀 또는 엔도솜 또는 카베올라)에 존재하는 절단제, 예컨대, 효소에 의해 절단가능하다. 링커는, 예컨대, 리소좀 또는 엔도솜 프로테아제를 포함하지만, 이에 한정되지 않는, 세포내 펩티다아제 또는 프로테아제 효소에 의해 절단되는 펩티딜 링커일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 펩티딜 링커는 적어도 2개의 아미노산 길이 또는 적어도 3개의 아미노산 길이이다. 절단제는 카텝신 B 및 D 및 플라스민을 포함할 수 있으며, 이들 모두는 표적 세포 내부 활성 약물의 방출을 야기하는 디펩티드 약물 유도체를 가수분해하는 것으로 알려져 있다 (예컨대, 문헌[Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123] 참조). B7-H3-발현 세포에 존재하는 효소에 의해 절단가능한 펩티딜 링커가 가장 전형적이다. 그러한 링커의 예가, 예컨대, 모든 목적을 위해 전체적으로 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제6,214,345호에 기술된다. 특정 실시 형태에서, 세포내 프로테아제에 의해 절단가능한 펩티딜 링커는 Val-Cit 링커 또는 Phe-Lys 링커이다 (예컨대, val-cit 링커를 갖는 독소루비신의 합성을 기술하는 미국 특허 제6,214,345호 참조). 치료제의 세포내 단백질분해성 방출을 사용하는 것의 한 가지 이점은, 제제가 전형적으로 콘쥬게이션 시에 약화되며 콘쥬게이트의 혈청 안정성이 전형적으로 높다는 점이다.
다른 실시 형태에서, 링커는 말로네이트 링커(문헌[Johnson et al., 1995, Anticancer Res. 15:1387-93]), 말레이미도벤조일 링커(문헌[Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1299-1304]), 또는 3'-N-아미드 유사체(문헌[Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10): 1305-12])이다.
또 다른 실시 형태에서, 링커 단위는 절단가능하지 않으며 약물은, 예를 들어, 항체 분해에 의해 방출된다. 본원에 전체적으로 참고로 포함된 미국 특허 출원 공개 제20050238649호를 참조한다. 비-절단성 링커를 포함하는 ADC는, ADC가 실질적으로 세포 밖에서 유지되고 표적 세포 표면 상의 특정 수용체와 상호작용하여, ADC의 결합이 특정 세포 신호전달 경로를 개시하도록 (또는 방지하도록) 설계될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 링커는 실질적으로 친수성 링커 (예컨대, PEG4Mal 및 술포-SPDB)이다. 친수성 링커는 약물이 MDR(다약제내성) 또는 기능적으로 유사한 수송체를 통해 저항성 암 세포 밖으로 펌핑될 수 있는 정도를 감소시키도록 사용될 수 있다.
다른 실시 형태에서, 절단 시, 링커는 세포 성장 및/또는 세포 증식을 직접 또는 간접 저해하도록 기능한다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, 링커는, 절단 시에, 삽입성 제제(intercalating agent)로서 기능하여, 거대분자 생합성(예컨대 DNA 복제, RNA 전사, 및/또는 단백질 합성)을 저해할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 링커는 이웃 세포로의 링커-약물 및/또는 약물 단독의 확산을 통한 방관자 사멸 (이웃 세포의 사멸)을 용이하게 하도록 설계된다. 다른 실시 형태에서, 링커는 세포 내재화를 촉진한다.
입체 장애 디술피드의 존재는 특정 디술피드 결합의 안정성을 증가시켜, ADC의 효력을 증진시킬 수 있다. 따라서, 일 실시 형태에서, 링커는 입체 장애 디술피드 연결체를 포함한다. 입체 장애 디술피드는 특정 분자 환경 내에 존재하는 디술피드 결합을 지칭하며, 여기서, 이 환경은, 디술피드 결합의 환원을 방지하거나 적어도 부분적으로 저해하는, 전형적으로 동일 분자 또는 화합물 내의, 원자들의 특정 공간 배열 및 배향에 의해 특징지어진다. 따라서, 디술피드 결합에 근접한 부피가 큰 (또는 입체 장애) 화학 모이어티 및/또는 부피가 큰 아미노산 측쇄의 존재는 디술피드 결합이 디술피드 결합의 환원을 야기하는 잠재적인 상호작용을 하는 것을 방지하거나 적어도 부분적으로 저해한다.
특히, 전술한 링커 유형들은 상호 배타적이지 않다. 예를 들어, 일 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 ADC에 사용되는 링커는 세포 내재화를 촉진하는 비-절단성 링커이다.
일부 실시 형태에서, 링커 성분은 항체를 또 다른 링커 성분에 또는 약물 모이어티에 연결하는 "스트레처(stretcher) 단위"를 포함한다. 예시적인 스트레처 단위는 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제8,309,093호에 기술되어 있다. 특정 실시 형태에서, 스트레처 단위는 항-B7-H3 항체 단위의 황 원자와 스트레처 단위의 황 원자 사이의 디술피드 결합을 통해 항-B7-H3 항체에 연결된다. 이 실시 형태의 대표적인 스트레처 단위는 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제8,309,093호에 개시되어 있다. 또 다른 실시 형태에서, 스트레처는 항체의 1차 또는 2차 아미노 기와 결합을 형성할 수 있는 반응성 부위를 함유한다. 이들 반응성 부위의 예에는 활성화된 에스테르, 예를 들어 숙신이미드 에스테르, 4 니트로페닐 에스테르, 펜타플루오로페닐 에스테르, 테트라플루오로페닐 에스테르, 무수물, 산 클로라이드, 술포닐 클로라이드, 이소시아네이트 및 이소티오시아네이트가 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 실시 형태의 대표적인 스트레처 단위는 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제8,309,093호에 개시되어 있다.
일부 실시 형태에서, 스트레처는 항체 상에 존재할 수 있는 개질된 탄수화물의 (―CHO) 기에 반응성인 반응성 분위를 함유한다. 예를 들어, 탄수화물은 과요오드산나트륨과 같은 제제를 사용하여 약간 산화될 수 있고 산화된 탄수화물의 생성되는 (―CHO) 단위는, 문헌[Kaneko et al., 1991, Bioconjugate Chem. 2:133-41]에 기재된 것들과 같은, 히드라지드, 옥심, 1차 또는 2차 아민, 히드라진, 티오세미카르바존, 히드라진 카르복실레이트, 및 아릴히드라지드와 같은 작용기를 함유하는 스트레처와 축합될 수 있다. 이 실시 형태의 대표적인 스트레처 단위는 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제8,309,093호에 개시되어 있다.
일부 실시 형태에서, 링커 성분은 "아미노산 단위"를 포함한다. 일부 그러한 실시 형태에서, 아미노산 단위는 프로테아제에 의한 링커의 절단을 허용하여, 세포내 프로테아제, 예를 들어 리소좀 효소에 노출 시 면역콘쥬게이트로부터의 약물의 방출을 용이하게 한다.(문헌[Doronina et al. (2003) Nat. Biotechnol. 21:778-784]). 예시적인 아미노산 단위에는 디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드, 및 펜타펩티드가 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 예시적인 디펩티드에는 발린-시트룰린 (vc 또는 val-cit), 알라닌-페닐알라닌 (af 또는 ala-phe); 페닐알라닌-리신 (fk or phe-lys); 페닐알라닌-호모리신 (phe-homolys); 및 N-메틸-발린-시트룰린 (Me-val-cit)이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 예시적인 트리펩티드에는 글리신-발린-시트룰린 (gly-val-cit) and 글리신-글리신-글리신 (gly-gly-gly)이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 아미노산 단위는 천연 아미노산 잔기 및/또는 마이너 아미노산 및/또는 비-천연 아미노산 유사체, 예를 들어 시트룰린을 포함할 수 있다. 아미노산 단위는 특정 효소, 예를 들어, 종양-연관 프로테아제, 카텝신 B, C 및 D, 또는 프라스민 프로테아제에 의한 효소적 절단을 위해 설계 및 최적화될 수 있다.
일 실시 형태에서, 아미노산 단위는 발린-시트룰린(vc 또는 val-cit)이다. 또 다른 태양에서, 아미노산 단위은 페닐알라닌-리신 (즉, fk)이다. 아미노산 단위의 또 다른 태양에서, 아미노산 단위는 N-메틸발린-시트룰린이다. 또 다른 태양에서, 아미노산 단위는 5-아미노발레르산, 호모 페닐알라닌 리신, 테트라이소퀴놀린카르복실레이트 리신, 시클로헥실알라닌 리신, 이소니페코트산 리신, 베타-알라닌 리신, 글리신 세린 발린 글루타민 및 이소니페코트산이다.
대안적으로, 일부 실시 형태에서, 아미노산 단위는, 스트레처 단위 및 스페이서 단위가 존재하는 경우 스트레처 단위를 스페이서 단위에 연결하고, 스페이서 단위가 부재하는 경우 스트레처 단위를 약물 모이어티에 연결하고, 스트레처 단위 및 스페이서 단위가 부재하는 경우 링커 단위를 약물에 연결하는, 글루쿠로니드 단위에 의해 대체된다. 글루쿠로니드 단위는 β-글루쿠로니다아제 효소에 의해 절단될 수 있는 부위를 포함한다 (본원에 참고로 포함되는 미국 특허 출원 공개 제2012/0107332호 참조). 일부 실시 형태에서, 글루쿠로니드 단위는 글리코시드 결합(―O'―)을 통해 하기에 도시된 바와 같은 화학식의 자가-희생성 기 (Z)에 연결되는 당 모이어티 (Su)를 포함한다 (본원에 참고로 포함되는 미국 특허 출원 공개 제2012/0107332호 참조).
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글리코시드 결합(―O'―)은 전형적으로 β-글루쿠로니다아제-절단성 부위, 예를 들어 인간, 리소좀 β-글루쿠로니다아제에 의해 절단가능한 결합이다. 글루쿠로니드 단위의 맥락에서, 용어 "자가-희생성 기"는 2개 또는 3개의 이격된 화학 모이어티들 (즉, (글리코시드 결합을 통해) 당 모이어티, (직접 또는 간접적으로 스페이서 단위를 통해) 약물 모이어티, 및, 일부 실시 형태에서, 링커 (직접 또는 간접적으로 스트레처 단위를 통해) 링커)을 안정한 분자 내에 공유적으로 연결할 수 있는 2작용성 또는 3작용성 화학 모이어티를 지칭한다. 자가-희생성 기는 당 모이어티에의 그의 결합이 절단되는 경우 제1 화학 모이어티 (예컨대, 스페이서 또는 약물 단위)로부터 자발적으로 분리될 것이다.
일부 실시 형태에서, 당 모이어티(Su)는 환형 헥소스, 예컨대 피라노스, 또는 환형 펜토스, 예를 들어 푸라노스이다. 일부 실시 형태에서, 피라노스는 글루쿠로니드 또는 헥소스이다. 당 모이어티는 보통 β-D 배열이다. 특정 실시 형태에서, 피라노스는 β-D-글루쿠로니드 모이어티 (즉, β-D-글루쿠론산은 β-글루쿠로니다아제에 의해 절단가능한 글리코시드 결합을 통해 자가-희생성 기 ―Z―에 연결된다)이다. 일부 실시 형태에서, 당 모이어티는 비치환된다 (예컨대, 천연 환형 헥소스 또는 환형 펜토스). 다른 실시 형태에서, 당 모이어티는 치환된 β-D-글루쿠로니드 (즉, 수소, 히드록실, 할로겐, 황, 질소 또는 저급 알킬과 같은 하나 이상의 기로 치환된 글루쿠론산)일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 글루쿠로니드 단위는 본 명세서에 참고로 포함된 미국 특허 제2012/0107332호에 개시된 바와 같은 화학식 중 하나를 갖는다.
일부 실시 형태에서, 링커는 스페이서 단위 (―Y―)를 포함하며, 이는, 존재하는 경우, 아미노산 단위 (또는 글루쿠로니드 단위, 또한 본원에 참고로 포함된 미국 특허 출원 공개 제2012/0107332호 참조)를, 아미노산 단위가 존재하는 경우 약물 모이어티에 연결한다. 대안적으로, 아미노산 단위가 부재하는 경우 스페이서 단위는 스트레처 단위를 약물 모이어티에 연결한다. 아미노산 단위 및 스트레처 단위 모두가 부재하는 경우 스페이서 단위는 또한 약물 단위를 항체 단위에 연결할 수 있다.
스페이서 단위는 2가지 일반적인 유형: 비 자가-희생성 또는 자가-희생성이다. 비 자가-희생성 스페이서 단위는, 항체-약물 콘쥬게이트로부터 아미노산 단위 (또는 글루쿠로니드 단위)의, 특히 효소적, 절단 후에 스페이서 단위의 일부 또는 전부가 약물 모이어티에 결합된 채로 유지되는 단위이다. 비 자가-희생성 스페이서 단위는 (글리신-글리신) 스페이서 단위 및 글리신 스페이서 단위 (본원에 참고로포함된 미국 특허 제8,309,093호 참조))를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 자가-희생성 스페이서의 다른 예는 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체(문헌[Hay et al., 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237]) 및 오르토 또는 파라-아미노벤질아세탈과 같은 PAB 기와 전자적으로 유사한 방향족 화합물을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 치환된 및 비치환된 4-아미노부티르산 아미드(문헌[Rodrigues et al., 1995, Chemistry Biology 2:223]), 적절히 치환된 비시클로[2.2.1] 및 비시클로[2.2.2] 고리 시스템(문헌[Storm et al., 1972, J. Amer. Chem. Soc. 94:5815]) 및 2-아미노페닐프로피온산 아미드(문헌[Amsberry et al., 1990, J. Org. Chem. 55:5867] 참조). 글리신의 α-위치에서 치환된 아민-함유 약물의 제거(문헌[Kingsbury et al., 1984, J. Med. Chem. 27:1447])가 또한 자가-희생성 스페이서의 예이다.
자가-희생성 스페이서의 다른 예는 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체(예컨대, 문헌[Hay et al., 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237]) 및 오르토 또는 파라-아미노벤질아세탈과 같은 PAB 기와 전자적으로 유사한 방향족 화합물을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 치환된 및 비치환된 4-아미노부티르산 아미드(예컨대, 문헌[Rodrigues et al., 1995, Chemistry Biology 2:223] 참조), 적절히 치환된 비시클로[2.2.1] 및 비시클로[2.2.2] 고리 시스템(예컨대, 문헌[Storm et al., 1972, J. Amer. Chem. Soc. 94:5815] 참조) 및 2-아미노페닐프로피온산 아미드(예컨대, 문헌[Amsberry et al., 1990, J. Org. Chem. 55:5867] 참조). 글리신의 α-위치에서 치환된 아민-함유 약물의 제거(예컨대, 문헌[Kingsbury et al., 1984, J. Med. Chem. 27:1447])가 또한 자가-희생성 스페이서의 예이다.
다른 적합한 스페이서 단위가 미국 특허 출원 공개 제2005-0238649호에 개시되며, 이의 개시 내용은 본원에 참고로 포함된다.
ADC의 생성을 위한 또 다른 접근법은 항-B7-H3 항체를 약물 모이어티에 연결하는 헤테로2작용성 가교결합제의 사용을 포함한다. 사용될 수 있는 가교결합제의 예에는 N-숙신이미딜 4-(5-니트로-2-피리딜디티오)-펜타노에이트 또는 고도로 수용해성 유사체 N-술포숙신이미딜 4-(5-니트로-2-피리딜디티오)-펜타노에이트, N-숙신이미딜-4-(2-피리딜디티오) 부티레이트 (SPDB), N-숙신이미딜-4-(5-니트로-2-피리딜디티오) 부티레이트 (SNPB), 및 N-술포숙신이미딜-4-(5-니트로-2-피리딜디티오) 부티레이트 (SSNPB), N-숙신이미딜-4-메틸-4-(5-니트로-2-피리딜디티오)펜타노에이트 (SMNP), N-숙신이미딜-4-(5-N,N-디메틸카르복사미도-2-피리딜디티오) 부티레이트 (SCPB) 또는 N-술포숙신이미딜4-(5-N,N-디메틸카르복사미도-2-피리딜디티오) 부티레이트 (SSCPB))가 포함된다. 본 발명의 항체는 가교결합제 N-숙신이미딜 4-(5-니트로-2-피리딜디티오)-펜타노에이트로 개질될 수 있으며, 이어서 N-술포숙신이미딜 4-(5-니트로-2-피리딜디티오)-펜타노에이트, SPDB, SNPB, SSNPB, SMNP, SCPB, 또는 SSCPB는 티올 모이어티를 함유하는 적은 과량의 특정 약물과 반응하여 탁월한 수율의 ADC를 제공할 수 있다. 바람직하게는, 가교결합제는 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제6,913,748호에 도시된 바와 같은 화학식의 화합물이다.
일 실시 형태에서, 하전된 링커(전구-하전된(pro-charged) 링커로도 지칭됨)가 항-B7-H3 항체를 약물에 콘쥬게이션하여 ADC를 형성하는 데 사용된다. 하전된 링커는 세포 처리 후에 하전되는 링커를 포함한다. 세포 처리 후 특정 ADC의 링커에서의 또는 약물 상의 하전된 기(들)의 존재는 (i) ADC의 더 큰 수용해도, (ii) 수용액 중의 더 높은 농도에서 작동하는 능력, (iii) 항체당 더 많은 수의 약물 분자를 연결하여, 잠재적으로 더 높은 효력을 야기하는 능력, (iv) 하전된 콘쥬게이트 종이 표적 세포 내부에 유지되어, 더 높은 효력을 야기할 가능성, 및 (v) 하전된 약물 종을 세포로부터 내보낼 수 없는, 다중약물 저항 세포의 개선된 민감도와 같은 몇몇 이점을 제공한다. 일부 적합한 하전된 또는 전구-하전된 가교결합제 및 그의 합성의 예가, 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제8,236, 319호의 도 1 내지 도 10에 도시되어 있다. 바람직하게는, 하전된 또는 전구-하전된 가교결합제는, 특히 2 내지 20개의 콘쥬게이션된 약물을 갖는 ADC의 경우, ADC의 용해도를 현저히 증가시키는 술포네이트, 포스페이트, 카르복실 또는 4차 아민 치환체를 함유하는 것들이다. 전구-하전된 모이어티를 함유하는 링커로부터 제조되는 컨쥬게이트는 콘쥬게이트가 세포에서 대사된 후에 하나 이상의 하전된 모이어티를 생성할 것이다.
조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 링커의 추가의 예는 발린-시트룰린; 말레이미도카프로일; 아미노 벤조산; p-아미노벤질카르바모일 (PAB); 리소좀 효소-절단성 링커; 말레이미도카프로일-폴리에틸렌 글리콜 (MC(PEG)6-OH); N-메틸-발린 시트룰린; N-숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트 (SMCC); N-숙신이미딜 4-(2-피리딜디티오)부타노에이트 (SPDB); 및 N-숙신이미딜 4-(2-피리딜티오)펜타노에이트 (SPP)를 포함한다 (또한 미국 특허 출원 공개 제2011/0076232호 참조). 본 발명에 사용하기 위한 또 다른 링커는 아비딘-비오틴 연결체를 포함하여 아비딘-비오틴-함유 ADC를 제공하며 (또한 미국 특허 제4,676,980호, 국제 공개 제1992/022332A2호, 국제 공개 제1994/016729A1호, 국제 공개 제1995/015770A1호, 국제 공개 제1997/031655A2호, 국제 공개 제1998/035704A1호, 국제 공개 제1999/019500A1호, 국제 공개 제2001/09785A2호, 국제 공개 제2001/090198A1호, 국제 공개 제2003/093793A2호, 국제 공개 제2004/050016A2호, 국제 공개 제2005/081898A2호, 국제 공개 제2006/083562A2호, 국제 공개 제2006/089668A1호, 국제 공개 제2007/150020A1호, 국제 공개 제2008/135237A1호, 국제 공개 제2010/111198A1호, 국제 공개 제2011/057216A1호, 국제 공개 제2011/058321A1호, 국제 공개 제2012/027494A1호, 및 유럽 특허 제77671B1호 참조), 여기서, 일부 그러한 링커는 비오티니다아제 절단에 저항성이다. 본 발명에 사용될 수 있는 추가 링커는 코헤신/도케린 쌍을 포함하여 코헤신-도케린-함유 ADC를 제공한다(국제 공개 제2008/097866A2호, 국제 공개 제2008/097870A2호, 국제 공개 제2008/103947A2호, 및 국제 공개 제2008/103953A2호 참조).
본 발명에 사용하기 위한 추가 링커는 비-펩티드 중합체을 함유할 수 있다 (예는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸화 폴리올, 폴리비닐 알코올, 다당류, 덱스트란, 폴리비닐 에틸 에테르, PLA (폴리(락트산)), PLGA (폴리(락트산-글리콜산)), 및 이들의 조합을 포함하지만, 이에 한정되지 않으며, 여기서, 바람직한 중합체는 폴리에틸렌 글리콜임) (또한 국제 공개 제2011/000370호 참조). 추가 링커는 또한 국제 공개 제2004-010957호, 미국 특허 출원 공개 제20060074008호, 미국 특허 출원 공개 제20050238649호, 및 미국 특허 출원 공개 제20060024317호에 기술되어 있으며, 이들 각각은 전체적으로 본원에 참고로 포함된다.
메이탄시노이드를 포함하는 ADC의 경우, 메이탄시노이드 상의 다수의 위치는 연결 모이어티를 화학적으로 연결하는 위치의 역할을 할 수 있다. 일 실시 형태에서, 반응성 화학 기를 포함하는 연결 모이어티를 포함하는 메이탄시노이드는, 연결 모이어티가 디술피드 결합을 함유하고 화학 반응성 기가 N-숙신이미딜 또는 N-술포숙신이미딜 에스테르를 포함하는, 메이탄시놀의 C-3 에스테르 및 그의 유사체이다. 예를 들어, 히드록실 기를 갖는 C-3 위치, 히드록시메틸로 개질된 C-14 위치, 히드록시로 개질된 C-15 위치, 및 히드록시 기를 갖는 C-20 위치가 모두 유용하다. 연결 모이어티는 가장 바람직하게는 메이탄시놀의 C-3 위치에 연결된다.
링커를 통한 항체에의 약물의 콘쥬게이션은 본 기술 분야에 공지된 임의의 기술에 의해 달성될 수 있다. 다수의 상이한 반응이 항체에의 약물 및 링커의 공유 부착을 위해 이용가능하다. 이는 리신의 아민 기, 글루탐산 및 아스파르트산의 유리 카르복실산 기, 시스테인의 술프히드릴 기, 및 방향족 아미노산의 다양한 모이어티를 포함하는, 항체의 아미노산 잔기의 반응에 의해 달성될 수 있다. 공유 부착의 가장 일반적으로 사용되는 비특이적 방법 중 하나는 화합물의 카르복시 (또는 아미노) 기를 항체의 아미노 (또는 카르복시) 기에 연결하는 카르보디이미드 반응이다. 추가로, 디알데히드 또는 이미도에스테르와 같은 2작용성 제제가 화합물의 아미노 기를 항체의 아미노 기에 연결하는 데 사용되었다. 쉬프(Schiff) 염기 반응이 약물을 항체에 부착하기 위해 또한 이용가능하다. 이 방법은 글리콜 또는 히드록시 기를 함유하는 약물의 퍼요오데이트 산화를 포함하므로, 알데히드를 형성하고, 이는 이어서 결합제와 반응한다. 부착은 항체의 아미노기를 갖는 쉬프 염기의 형성을 통해 일어난다. 이소티오시아네이트는 항체에 약물을 공유적으로 부착하기 위한 커플링제로서 또한 사용될 수 있다. 다른 기술이 당업자에게 공지되어 있으며 본 발명의 범주 내에 있다.
특정 실시 형태에서, 링커의 전구체인 중간체는 적절한 조건 하에서 약물과 반응된다. 특정 실시 형태에서, 반응성 기는 약물 또는 중간체 상에서 사용된다. 약물과 중간체 사이의 반응의 생성물, 또는 유도체화된 약물은 후속하여 적절한 조건 하에서 항-B7-H3 항체와 반응된다. 예시적인 링커, 스트레처 단위, 아미노산 단위, 자가-희생성 스페이서 단위의 합성 및 구조가 미국 특허 출원 공개 제20030083263호, 제20050238649호 및 제20050009751호에 기술되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다.
ADC의 안정성은 질량 분석법, HPLC, 및 분리/분석 기술 LC/MS와 같은 표준 분석 기술에 의해 측정될 수 있다.
IV. 항-B7-H3 ADC의 정제
ADC의 정제는 특정 DAR을 갖는 ADC를 수집하는 방식으로 달성될 수 있다. 예를 들어, HIC 수지는 최적 약물 대 항체 비(DAR), 예를 들어 4 이하의 DAR을 갖는 ADC로부터 고 약물 로딩 ADC를 분리하는 데 사용될 수 있다. 일 실시 형태에서, 소수성 수지가 ADC 혼합물에 첨가되어, 원치않은 ADC, 즉, 더 고 약물 로딩 ADC가 수지에 결합하고 혼합물로부터 선택적으로 제거될 수 있다. 특정 실시 형태에서, ADC의 분리는 ADC 혼합물(예를 들어, 4종 이하의 ADC의 약물 로딩 종을 포함하는 혼합물 및 6종 이상의 ADC의 약물 로딩 종)를 소수성 수지와 접촉시킴으로써 달성될 수 있으며, 수지의 양은 ADC 혼합물로부터 제거되는 약물 로딩 종의 결합을 가능하게 하기에 충분하다. 수지 및 ADC 혼합물은, 제거되는 ADC 종(예를 들어, 6종 이상의 약물 로딩 종)이 수지에 결합하고 ADC 혼합물 중의 다른 ADC 종으로부터 분리될 수 있도록 함께 혼합된다. 이 방법에 사용되는 수지의 양은 제거되는 종과 수지 사이의 중량 비에 기초하며, 사용되는 수지의 양은 원하는 약물 로딩 종의 유의미한 결합을 허용하지 않는다. 따라서, 방법은 평균 DAR을 4 미만까지 감소시키는 데 사용될 수 있다. 추가로, 본원에 개시된 정제 방법은 임의의 원하는 범위의 약물 로딩 종, 예를 들어, 4종 이하의 약물 로딩 종, 3종 이하의 약물 로딩 종, 2종 이하의 약물 로딩 종, 1종 이하의 약물 로딩 종을 갖는 ADC를 단리하는 데 사용될 수 있다.
특정 분자 종(들)은 종과 소수성 수지 사이의 소수성 상호작용에 기초하여 표면에 결합한다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 방법은 소수성 수지와 ADC 혼합물의 혼합에 의존하는 정제 공정을 지칭하며, 여기서, 혼합물에 첨가되는 수지의 양에 따라 어느 종(예를 들어, 6종 이상의 DAR을 갖는 ADC)이 결합될지 결정된다. 발현 시스템(예를 들어, 포유동물 발현 시스템)으로부터 항체의 생성 및 정제 후에, 항체는 환원되고 콘쥬게이션 반응을 통해 약물에 커플링된다. 생성된 ADC 혼합물은 종종 소정 범위, 예를 들어, 1 내지 8의 DAR을 갖는 ADC를 함유한다. 일 실시 형태에서, ADC 혼합물은 4종 이하의 약물 로딩 종 및 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함한다. 본 발명의 방법에 따르면, ADC 혼합물은, 4종 이하의 약물 로딩 종을 갖는 ADC가 더 높은 약물 로딩을 갖는 ADC(예를 들어, 6종 이상의 약물 로딩 종을 갖는 ADC)로부터 선택되고 분리되도록, 배치식 공정과 같은 그러나 이에 한정되지 않는 공정을 사용하여 정제될 수 있다. 특히, 본원에 개시된 정제 방법은 임의의 원하는 범위의 DAR, 예를 들어, 4 이하의 DAR, 3 이하의 DAR, 또는 2 이하의 DAR을 갖는 ADC를 단리하는 데 사용될 수 있다.
따라서, 일 실시 형태에서, 4종 이하의 약물 로딩 종 및 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하는 ADC 혼합물은 소수성 수지와 접촉되어 수지 혼합물을 형성할 수 있으며, 여기서, ADC 혼합물과 접촉되는 소수성 수지의 양은 수지에의 6종 이상의 약물 로딩 종의 결합을 허용하지만 4종 이하의 약물 로딩 종의 유의미한 결합을 허용하지 않기에 충분하고; 소수성 수지를 ADC 혼합물로부터 제거하여, ADC를 포함하는 조성물이 얻어지고, 이 조성물은 15% 미만의 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하고, ADC는 Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션된 항체를 포함한다. 개별 실시 형태에서, 본 발명의 방법은 4종 이하의 약물 로딩 종 및 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하는 ADC 혼합물을 소수성 수지와 접촉시켜 수지 혼합물을 형성하는 단계 (여기서, ADC 혼합물과 접촉되는 소수성 수지의 양은 수지에의 6종 이상의 약물 로딩 종의 결합을 허용하지만 4종 이하의 약물 로딩 종의 유의미한 결합을 허용하지 않기에 충분함); 및 소수성 수지를 ADC 혼합물로부터 제거하여, ADC를 포함하는 조성물을 얻는 단계를 포함하며, 이 조성물은 15% 미만의 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하고, ADC는 Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션된 항체를 포함하며, 소수성 수지 중량은 ADC 혼합물 내의 6종 이상의 약물 로딩 종의 중량의 3 내지 12배이다.
본원에 개시된 ADC 분리 방법은 배치식 정제 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 배치식 정제 공정은 일반적으로 용기 내에서 소수성 수지에 ADC 혼합물을 첨가하는 단계, 혼합하는 단계, 및 후속하여 상청액으로부터 수지를 분리하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 배치식 정제의 맥락에서, 소수성 수지를 원하는 평형화 완충제 중에서 제조할 수 있거나 평형화할 수 있다. 소수성 수지의 슬러리가 또한 얻어질 수 있다. 이어서, ADC 혼합물을 슬러리와 접촉시켜 소수성 수지에 의해 분리될 ADC(들)의 특정 종을 흡착할 수 있다. 이어서, 소수성 수지 물질에 결합하지 않는 원하는 ADC를 포함하는 용액을, 예를 들어, 여과에 의해, 또는 슬러리를 가라앉히고 상청액을 제거함으로써 슬러리로부터 분리할 수 있다. 생성된 슬러리는 하나 이상의 세척 단계를 거칠 수 있다. 결합된 ADC를 용출시키기 위해, 염 농도를 감소시킬 수 있다. 일 실시 형태에서, 본 발명에 사용되는 공정은 50 g 이하의 소수성 수지를 포함한다.
따라서, 배치식 방법을 사용하여, 4종 이하의 약물 로딩 종 및 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하는 ADC 혼합물을 소수성 수지와 접촉시켜 수지 혼합물을 형성할 수 있으며, 여기서, ADC 혼합물과 접촉되는 소수성 수지의 양은 수지에의 6종 이상의 약물 로딩 종의 결합을 허용하지만 4종 이하의 약물 로딩 종의 유의미한 결합을 허용하지 않기에 충분하고; 소수성 수지를 ADC 혼합물로부터 제거하여, ADC를 포함하는 조성물이 얻어지고, 이 조성물은 15% 미만의 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하고, ADC는 Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션된 항체를 포함한다. 개별 실시 형태에서, 배치식 방법을 사용하여, 4종 이하의 약물 로딩 종 및 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하는 ADC 혼합물을 소수성 수지와 접촉시켜 수지 혼합물을 형성하며, 여기서, ADC 혼합물과 접촉되는 소수성 수지의 양은 수지에의 6종 이상의 약물 로딩 종의 결합을 허용하지만 4종 이하의 약물 로딩 종의 유의미한 결합을 허용하지 않기에 충분하고; 소수성 수지를 ADC 혼합물로부터 제거하여, ADC를 포함하는 조성물이 얻어지고, 이 조성물은 15% 미만의 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하고, ADC는 Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션된 항체를 포함하고, 소수성 수지 중량은 ADC 혼합물 내의 6종 이상의 약물 로딩 종의 중량의 3 내지 12배이다.
대안적으로, 개별 실시 형태에서, 정제는, 수지를 용기 내에 패킹하고 분리될 특정 ADC 종(들)이 제거될 때까지 ADC 혼합물을 소수성 수지 층에 통과시키는 순환 공정을 사용하여 수행될 수 있다. 이어서 (원하는 ADC 종을 함유하는) 상청액을 용기로부터 펌핑하고, 수지 층은 세척 단계를 거치게 할 수 있다.
순환 공정을 사용하여, 4종 이하의 약물 로딩 종 및 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하는 ADC 혼합물을 소수성 수지와 접촉시켜 수지 혼합물을 형성할 수 있으며, 여기서, ADC 혼합물과 접촉되는 소수성 수지의 양은 수지에의 6종 이상의 약물 로딩 종의 결합을 허용하지만 4종 이하의 약물 로딩 종의 유의미한 결합을 허용하지 않기에 충분하고; 소수성 수지를 ADC 혼합물로부터 제거하여, ADC를 포함하는 조성물이 얻어지고, 이 조성물은 15% 미만의 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하고, ADC는 Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션된 항체를 포함한다. 개별 실시 형태에서, 순환 공정을 사용하여, 4종 이하의 약물 로딩 종 및 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하는 ADC 혼합물을 소수성 수지와 접촉시켜 수지 혼합물을 형성하며, 여기서, ADC 혼합물과 접촉되는 소수성 수지의 양은 수지에의 6종 이상의 약물 로딩 종의 결합을 허용하지만 4종 이하의 약물 로딩 종의 유의미한 결합을 허용하지 않기에 충분하고; 소수성 수지를 ADC 혼합물로부터 제거하여, ADC를 포함하는 조성물이 얻어지고, 이 조성물은 15% 미만의 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하고, ADC는 Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션된 항체를 포함하고, 소수성 수지 중량은 ADC 혼합물 내의 6종 이상의 약물 로딩 종의 중량의 3 내지 12배이다.
대안적으로, 플로우 쓰루(flow through) 공정을 사용하여, 특정의 원하는 DAR을 갖는 ADC의 대부분을 포함하는 조성에 도달하도록 ADC 혼합물을 정제할 수 있다. 플로우 쓰루 공정에서는, 수지를 용기, 예를 들어, 칼럼 내에 패킹하고, 원하는 ADC 종은 수지에 실질적으로 결합하지 않고 수지를 통해 유동하고, 원치않는 ADC 종은 수지에 결합되도록, ADC 혼합물을 패킹된 수지에 통과시킨다. 플로우 쓰루 공정은 (관심 ADC 종이 용기의 수지를 통한 단일 통과의 결과로서 얻어지는) 단일 통과 모드로, 또는 (관심 ADC 종이 용기의 수지를 통한 다회 통과의 결과로서 얻어지는) 다회 통과 모드로 수행될 수 있다. 플로우 쓰루 공정은, 선택된 중량의 수지가 원치 않는 ADC 집단에 결합하고, 원하는 ADC(예를 들어, DAR 2 내지 4)가 수지 위로 유동하고 1회 또는 다회 통과 후에 플로우 쓰루에서 수집되도록 수행된다.
플로우 쓰루 공정을 사용하여, 4종 이하의 약물 로딩 종 및 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하는 ADC 혼합물을 소수성 수지와 접촉시키며, 여기서, ADC 혼합물과 접촉되는 소수성 수지의 양은 수지에의 6종 이상의 약물 로딩 종의 결합을 허용하지만 4종 이하의 약물 로딩 종의 유의미한 결합을 허용하지 않기에 충분하고, 이때 4종 이하의 약물 로딩 종은 수지를 통과하며 1회 또는 다회 통과 후에 실질적으로 수집되어, 원하는 ADC(예를 들어 DAR 2 내지 4)를 포함하는 조성물이 얻어지고, 이 조성물은 15% 미만의 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하고, ADC는 Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션된 항체를 포함한다. 개별 실시 형태에서, 플로우 쓰루 공정을 사용하여, 4종 이하의 약물 로딩 종 및 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하는 ADC 혼합물을, ADC 혼합물을 수지에 통과시킴으로써, 소수성 수지와 접촉시키고, 여기서, ADC 혼합물과 접촉되는 소수성 수지의 양은 수지에의 6종 이상의 약물 로딩 종의 결합을 허용하지만 4종 이하의 약물 로딩 종의 유의미한 결합을 허용하지 않기에 충분하고; 이때 4종 이하의 약물 로딩 종은 수지를 통과하며 실질적으로 수집되어, ADC를 포함하는 조성물이 얻어지고, 이 조성물은 15% 미만의 6종 이상의 약물 로딩 종을 포함하고, ADC는 약물, 예를 들어, Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션된 항체를 포함하고, 소수성 수지 양은 ADC 혼합물 내의 6종 이상의 약물 로딩 종의 중량의 3 내지 12배이다.
플로우 쓰루 공정 후에, (세척 여과액에서 나타나는) 원하는 DAR 범위를 갖는 ADC를 추가로 회수하기 위해 수지를 하나 이상의 세척액으로 세척할 수 있다. 예를 들어, 감소하는 전도도를 갖는 복수의 세척액을 사용하여 관심 DAR을 갖는 ADC를 추가로 회수할 수 있다. 관심 DAR을 갖는 ADC의 개선된 회수를 위해, 수지의 세척으로부터 얻어지는 용출 물질을 플로우 쓰루 공정으로부터 생성되는 여과액과 실질적으로 조합할 수 있다.
전술한 배치식 공정, 순환 공정, 및 플로우 쓰루 공정 정제 방법은 소수성 수지를 사용하여 ADC의 고 약물 로딩 종 대비 저 약물 로딩을 분리하는 데에 기초한다. 소수성 수지는 ADC의 소수성 특성과 상호작용하는 소수성 기를 포함한다. ADC 상의 소수성 기는 소수성 수지 내의 소수성 와 상호작용한다. 단백질이 더 소수성일수록 단백질은 소수성 수지와 더 강하게 상호작용할 것이다.
소수성 수지는 소수성 리간드(예를 들어, 알킬 또는 아릴 기)가 커플링된 베이스 매트릭스(예를 들어, 가교결합된 아가로스 또는 합성 공중합체 물질)를 보통 포함한다. 다수의 소수성 수지가 구매가능하다. 예에는, 낮은 치환 또는 높은 치환을 갖는 Phenyl SepharoseTM 6 Fast Flow(Pharmacia LKB Biotechnology, AB, 스웨덴); Phenyl SepharoseTM High Performance (Pharmacia LKB Biotechnology, AB, 스웨덴); Octyl SepharoseTM High Performance (Pharmacia LKB Biotechnology, AB, 스웨덴); FractogelTM EMD Propyl 또는 FractogelTM EMD Phenyl 칼럼 (E. Merck, 독일); Macro-PrepTM Methyl 또는 Macro-PrepTM. t-Butyl Supports (Bio-Rad, 미국 캘리포니아주); WP HI-Propyl (C3)TM (J. T. Baker, 미국 뉴저지주); 및 ToyopearlTM 에테르, 헥실, 페닐 또는 부틸 (TosoHaas, PA)이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 일 실시 형태에서, 소수성 수지는 부틸 소수성 수지이다. 또 다른 실시 형태에서, 소수성 수지는 페닐 소수성 수지이다. 또 다른 실시 형태에서, 소수성 수지는 헥실 소수성 수지, 옥틸 소수성 수지, 또는 데실 소수성 수지이다. 일 실시 형태에서, 소수성 수지는 n-부틸 리간드를 갖는 메타크릴 중합체(예를 들어 TOYOPEARL® Butyl-600M)이다.
ADC 혼합물을 정제하여 원하는 DAR을 갖는 조성물을 얻는 추가의 방법이 본원에 전체적으로 참고로 포함된, 미국 특허 출원 제14/210,602호 (미국 특허 출원 공개 제2014/0286968호)에 기술된다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, DAR2를 갖는 본원에 개시된 ADC는 더 높거나 더 낮은 DAR을 갖는 ADC로부터 정제된다. 그러한 정제된 DAR2 ADC은 본원에서 "E2"로 지칭된다. E2 항-B7-H3 ADC를 갖는 조성물을 달성하기 위한 정제 방법. 일 실시 형태에서, 본 발명은 ADC 혼합물을 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서, 적어도 75%의 ADC는 DAR2를 갖는 (본원에 개시된 것들과 같은) 항-B7H3 ADC이다. 또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 ADC 혼합물을 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서, 적어도 80%의 ADC는 DAR2를 갖는 (본원에 개시된 것들과 같은) 항-B7H3 ADC이다. 또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 ADC 혼합물을 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서, 적어도 85%의 ADC는 DAR2를 갖는 (본원에 개시된 것들과 같은) 항-B7H3 ADC이다. 또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 ADC 혼합물을 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서, 적어도 90%의 ADC는 DAR2를 갖는 (본원에 개시된 것들과 같은) 항-B7H3 ADC이다.
V. 항-B7-H3 항체 및 항-B7-H3 ADC의 용도
본 발명의 항체 및 ADC는 바람직하게는 시험관내 및 생체내 모두에서 인간 B7-H3 활성을 중화시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 그러한 항체 및 ADC는, 예를 들어, hB7-H3을 함유하는 세포 배양물에서, 인간 대상체에서 또는 본 발명의 항체와 교차-반응하는 B7-H3을 갖는 다른 포유동물 대상체에서 hB7-H3 활성을 억제하는데 사용될 수 있다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 hB7-H3 활성이 억제되도록 hB7-H3과 본 발명의 항체 또는 ADC를 접촉시키는 단계를 포함하는, hB7-H3 활성을 억제하기 위한 방법을 제공한다. 예를 들어, hB7-H3을 함유하거나 또는 이를 함유하는 것으로 의심되는 세포 배양물에서 본 발명의 항체 또는 항체 부분은 배양물 중의 hB7-H3 활성을 억제하도록 배양 배지에 첨가될 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 대상체에서, 유리하게는 B7-H3 활성이 유해한 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체로부터 hB7-H3 활성을 감소시키는 방법을 제공한다. 본 발명은 그러한 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체에서 B7-H3 활성을 감소시키는 방법을 제공하며, 당해 방법은 대상체에서 B7-H3 활성이 감소되도록 본 발명의 항체 또는 ADC를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하게는, B7-H3은 인간 B7-H3이며, 대상체는 인간 대상체이다. 대안적으로, 대상체는 본 발명의 항체가 결합할 수 있는 B7-H3을 발현하는 포유동물일 수 있다. 추가로, 대상체는 B7-H3이(예를 들어, B7-H3의 투여 또는 B7-H3 전이유전자의 발현에 의해) 도입된 포유동물일 수 있다. 본 발명의 항체 또는 ADC는 치료 목적으로 인간 대상체에게 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 항체 또는 ADC는 수의학적 목적으로 또는 인간 질환의 동물 모델로서 항체가 결합할 수 있는 B7-H3을 발현하는 비-인간 포유동물에게 투여될 수 있다. 인간 질환의 동물 모델과 관련하여, 그러한 동물 모델은 본 발명의 항체의 치료 효능의 평가(예를 들어, 투여 용량 및 시간 경과의 시험)에 유용할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "B7-H3 활성이 유해한 장애"는 장애를 앓고 있는 대상체에서 B7-H3의 존재가 장애의 병리생리학에 책임이 있거나 장애의 악화에 기여하는 인자인 것으로 밝혀지거나 이로 의심되는 질환 및 다른 장애를 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 본 발명의 ADC는 B7-H3을 발현하는 표적 종양 세포에 사용될 수 있다. 예를 들어, huAb13v1을 포함하는, 본 발명의 ADC로 치료될 수 있는 장애의 비제한적인 예에는, 소세포 폐암, 비소세포 폐암(NSCLC), 유방암, 난소암, 폐암, 신경교종, 전립선암, 췌장암, 결장암, 두경부암, 백혈병, 예를 들어, 급성 골수성 백혈병 (AML), 림프종, 예를 들어, 비호지킨 림프종 (NHL), 및 신장암을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 다양한 암이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 본원에 개시된 조성물 및 방법을 사용하여 치료될 수 있는 암의 다른 예에는 편평 세포 암종(예를 들어, 편평상피성 폐암 또는 편평상피성 두경부암), 삼중 음성 유방암, 비소세포 폐암, 결장직장암, 및 중피종이 포함된다. 일 실시 형태에서, 본원에 개시된 항체 또는 ADC는, B7-H3을 과발현하거나 B7-H3 양성인 고형 종양을 치료하는 데, 예를 들어 고형 종양의 성장을 저해하거나 크기를 감소시키는데 사용된다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 B7-H3 발현과 관련된 편평상피성 폐암의 치료에 관한 것이다. 또 다른 실시 형태에서, 본원에 개시된 항체 및 ADC는 삼중 음성 유방암 (TNBC)을 치료하는 데 사용된다. 본원에 개시된 질환 및 장애는 본 발명의 항-B7-H3 항체 또는 ADC뿐만 아니라, 그러한 항-B7-H3 항체 또는 ADC를 포함하는 제약 조성물에 의해 치료될 수 있다.
특정 실시 형태에서, 암은 EGFR 과발현을 갖는 것으로 특성화될 수 있다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 ADC는 활성화 EGFR 돌연변이와 관련된 암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 그러한 돌연변이의 예에는, 엑손 19 결실 돌연변이, 엑손 21에서의 단일-점 치환 돌연변이 L858R, T790M 점 돌연변이, 및 이들의 조합이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다.
특정 실시 형태에서, 본원에 개시된 항체 또는 ADC는 B7-H3의 상승된 수준을 나타낼 것 같은 진행성 고형 종양 유형을 치료하기 위해 그를 필요로 하는 대상체에 투여된다. 그러한 종양의 예에는, 소세포 폐암, 유방암, 난소암, 두경부 편평 세포 암종, 비소세포 폐암, 삼중 음성 유방암, 결장직장 암종, 및 다형성 교모세포종이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 고형 종양을 갖는 대상체에서 고형 종양 성장을 저해하거나 감소시키는 방법을 포함하며, 상기 방법은 고형 종양 성장이 저해되거나 감소되도록 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 ADC를 고형 종양을 갖는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시 형태에서, 고형 종양은 비소세포 폐암 또는 교모세포종이다. 추가의 실시 형태에서, 고형 종양은 B7-H3-발현 고형 종양이다. 추가의 실시 형태에서, 고형 종양은 B7-H3 과발현 고형 종양이다. 특정 실시 형태에서 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 ADC는 단독으로 또는 추가 제제, 예를 들어, 방사선 및/또는 테모졸로미드와 병용하여 다형성 교모세포종을 갖는 대상체에 투여된다.
특정 실시 형태에서 본원에 개시된 항-B7-H3 ADC는 단독으로 또는 추가 제제, 예를 들어, ABT-199 (베네토클락스)와 병용하여 소세포 폐암을 갖는 대상체에 투여된다.
특정 실시 형태에서 본원에 개시된 항-B7-H3 ADC는 단독으로 또는 추가 제제, 예를 들어, 탁산과 병용하여 비소세포 폐암을 갖는 대상체에 투여된다. 특정 실시 형태에서 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 ADC는 단독으로 또는 추가 제제, 예를 들어, 탁산과 병용하여 유방암을 갖는 대상체에 투여된다. 특정 실시 형태에서 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 ADC는 단독으로 또는 추가 제제, 예를 들어, 탁산과 병용하여 난소암을 갖는 대상체에 투여된다.
본 발명에 포함되는 다른 병용 요법은 항-B7-H3 ADC와, 항-PD1 항체(예를 들어 펨브롤리주맙), 항-PD-L1 항체(예를 들어, 아테졸리주맙), 항-CTLA-4 항체(예를 들어 이필리무맙), MEK 저해제(예를 들어 트라메티닙), ERK 저해제, BRAF 저해제(예를 들어 다브라페닙), 오시메르티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 소라페닙, CDK9 저해제(예를 들어 디나시클립), MCL-1 저해제, 테모졸로미드, Bcl-xL 저해제, Bcl-2 저해제(예를 들어 베네토클락스), 이브루티닙, mTOR 저해제(예를 들어 에베롤리무스), PI3K 저해제(예를 들어 부팔리십), 두벨리십, 이델랄리십, AKT 저해제, HER2 저해제(예를 들어 라파티닙), 탁산(예를 들어, 도세탁셀, 파클리탁셀, nab-파클리탁셀), 베네토클락스, 아우리스타틴을 포함하는 ADC, PBD를 포함하는 ADC(예를 들어 로발피투주맙 테시린), 메이탠시노이드를 포함하는 ADC(예를 들어 TDM1), TRAIL 작용제, 프로테아좀 저해제(예를 들어 보르테조밉), 및 니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라아제(NAMPT) 저해제로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제의 투여이다.
병용 요법은 전술된 것들을 포함하는 추가 치료제의 투여 전에, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 본 발명의 ADC의 투여를 포함한다.
특정 실시 형태에서, 본 발명은 B7-H3 발현 또는 B7-H3 발현 종양으로서 확인된 고형 종양을 갖는 대상체에서 고형 종양 성장을 저해하거나 감소시키는 방법을 포함하며, 상기 방법은 고형 종양 성장이 저해되거나 감소되도록 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 ADC를 고형 종양을 갖는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. B7-H3 발현 종양(예를 들어, B7-H3 과발현 종양)을 확인하는 방법은 본 기술 분야에 공지되어 있으며, FDA-승인된 시험 및 확인 분석법을 포함한다. 예를 들어, B7-H3 분석법은 조직학적 평가를 위해 루틴하게 고정된(routinely-fixed) 정상 및 신생물 조직에서 B7-H3 발현을 확인하는 데 사용되는 정성적 면역조직화학 (IHC) 키트 시스템이다. 또한, PCR-기반 분석법은 또한 B7-H3 과발현 종양을 확인하는 데 사용될 수 있다. 증폭된 PCR 생성물을, 예를 들어, 본 기술 분야에 공지된 표준 방법을 사용하여 겔 전기영동에 의해 후속 분석하여 PCR 생성물의 크기를 결정할 수 있다. 그러한 시험은 본원에 개시된 방법 및 조성물로 치료할 수 있는 종양을 확인하는 데 사용될 수 있다.
본 기술 분야에서 이용 가능한 유전자 요법에 대한 임의의 방법이 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 유전자 요법의 방법의 일반적인 검토를 위해, 문헌[Goldspiel et al., 1993, Clinical Pharmacy 12:488-505; Wu and Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95]; 문헌[Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596; Mulligan, Science 260:926- 932 (1993)]; 및 문헌[Morgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217]; 문헌[May, 1993, TIBTECH 11(5):155-215]을 참조한다. 사용될 수 있는 재조합 DNA 기술의 분야에 일반적으로 공지된 방법이 문헌[Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley &Sons, NY (1993)]; 및 문헌[Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)]에 기술되어 있다. 유전자 요법의 다양한 방법에 대한 상세한 설명이 본원에 참고로 포함된 미국 특허 출원 공개 제20050042664 A1호에 제공된다.
또 다른 태양에서, 본 출원은 대상체에서 B7-H3-연관 장애를 치료(예를 들어, 치유, 억제, 개선, 이의 발병을 지연 또는 예방, 또는 이의 재발 또는 악화를 예방)하거나 예방하는 방법을 특징으로 한다. 상기 방법은 B7-H3 결합제, 예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 항-B7-H3 항체 또는 그의 단편을 B7-H3-연관 장애를 치료 또는 예방하기에 충분한 양으로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. B7-H3 길항제, 예를 들어, 항-B7-H3 항체 또는 그의 단편은 대상체에게 단독으로 또는 본원에 개시된 다른 치료 양상과 병용하여 투여될 수 있다.
본 발명의 항체 또는 ADC, 또는 그의 항원-결합 부분은 이러한 질환을 치료하기 위해 단독으로 또는 병용하여 사용될 수 있다. 본 발명의 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 단독으로 또는 추가 제제, 예를 들어, 치료제와 병용하여 사용될 수 있음이 이해되어야 하며, 상기 추가 제제는 의도된 목적을 위해 당업자에 의해 선택된다. 예를 들어, 추가 제제는 본 발명의 항체에 의해 치료되는 질환 또는 병태를 치료하는데 유용한 것으로 본 기술 분야에서 인식되는 치료제일 수 있다. 추가 제제는 또한 치료 조성물에 유리한 특성을 부여하는 제제, 예를 들어, 조성물의 점도에 영향을 미치는 제제일 수 있다.
추가로, 본 발명에 포함될 조합물은 그의 의도된 목적에 유용한 조합물인 것으로 이해되어야 한다. 하기에 기술된 제제는 예시적인 것이며 제한하려는 것이 아니다. 본 발명의 일부인 조합물은 본 발명의 항체 및 하기 목록으로부터 선택되는 적어도 하나의 추가 제제일 수 있다. 조합물은 또한 형성된 조성물이 그의 의도된 기능을 수행할 수 있도록 조합이 이루어지는 경우 하나 초과의 추가 제제, 예를 들어, 2개 또는 3개의 추가 제제를 포함할 수 있다.
병용 요법은 하나 이상의 추가 치료제, 예를 들어, 본원에 더욱 개시된 바와 같은, 하나 이상의 사이토카인 및 성장 인자 저해제, 면역억제제, 항염증제(예를 들어, 전신 항염증제), 항-섬유증제, 대사 저해제, 효소 저해제 및/또는 세포독성제 또는 세포증식억제제, 유사분열 저해제, 항종양 항생제, 면역조절제, 유전자 요법용 벡터, 알킬화제, 항혈관형성제, 항대사물질, 붕소-함유 제제, 화학보호제, 호르몬, 항호르몬제, 코르티코스테로이드, 광활성 치료제, 올리고뉴클레오티드, 방사성핵종 제제, 토포이소머라아제 저해제, 키나아제 저해제, 또는 방사성민감제와 함께 제형화되고/되거나 공동-투여되는 하나 이상의 B7-H3 길항제, 예를 들어 항-B7-H3 항체 또는 그의 단편을 포함할 수있다.
특정 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 결합 단백질, 예를 들어, 항-B7-H3 항체는 항암제 또는 항신생물제와 병용하여 사용된다. 용어 "항암제" 및 "항신생물제"는 암 성장과 같은 악성 종양을 치료하는 데 사용되는 약물을 지칭한다. 약물 요법은 단독으로 또는 수술이나 방사선 요법과 같은 다른 치료와 병용하여 사용될 수 있다. 관련된 기관의 성질에 따라 몇몇 부류의 약물이 암치료에 사용될 수 있다. 예를 들어, 유방암은 일반적으로 에스트로겐에 의해 자극되며, 성 호르몬을 불활성화하는 약물로 치료될 수 있다. 유사하게, 전립선암은 남성 호르몬인 안드로겐을 불활성화하는 약물로 치료될 수 있다. 본 발명의 항-B7-H3 항체 또는 ADC와 함께 사용될 수 있는 항암제에는, 특히, 항-PD1 항체(예를 들어, 펨브롤리주맙), 항-PD-L1 항체(예를 들어, 아테졸리주맙), 항-CTLA-4 항체(예를 들어, 이필리무맙), MEK 저해제(예를 들어, 트라메티닙), ERK 저해제, BRAF 저해제(예를 들어, 다브라페닙), 오시메르티닙 (AZD9291), 에를로티닙, 게피티닙, 소라페닙, CDK9 저해제(예를 들어, 디나시클립), MCL-1 저해제, 테모졸로미드, Bcl-xL 저해제, Bcl-2 저해제(예를 들어, 베네토클락스), 이브루티닙, mTOR 저해제(예를 들어, 에베롤리무스), PI3K 저해제(예를 들어, 부팔리십), 두벨리십, 이델랄리십, AKT 저해제, HER2 저해제(예를 들어, 라파티닙), Herceptin, 탁산(예를 들어, 도세탁셀, 파클리탁셀, nab-파클리탁셀), 아우리스타틴을 포함하는 ADC, PBD를 포함하는 ADC(예를 들어, 로발피투주맙 테시린), 및 메이탠시노이드를 포함하는 ADC(예를 들어, TDM1), TRAIL 작용제, 프로테아좀 저해제(예를 들어, 보르테조밉), 및 니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라아제 (NAMPT) 저해제뿐만 아니라 하기 제제가 포함된다:
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상기 항암제에 더하여, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 및 ADC는 본원에 개시된 제제와 병용하여 투여될 수 있다. 추가로, 전술한 항암제는 본 발명의 ADC에 사용될 수 있다.
특정 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체 또는 ADC는 B7-H3 활성과 관련된 질환을 치료하기 위해 단독으로 또는 상기 항체와 함께 작용하거나 상승적으로 작용하는 다른 항암제와 함께 투여될 수 있다. 그러한 항암제에는, 예를 들어, 본 기술 분야에 잘 알려진 제제(예를 들어, 세포독소, 화학요법제, 소분자 및 방사선)이 포함된다. 항암제의 예에는 Panorex (Glaxo-Welcome), Rituxan (IDEC/Genentech/Hoffman la Roche), Mylotarg (Wyeth), Campath (Millennium), Zevalin (IDEC and Schering AG), Bexxar (Corixa/GSK), Erbitux (Imclone/BMS), Avastin (Genentech) 및 Herceptin (Genentech/Hoffman la Roche)이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 다른 항암제에는 미국 특허 제7,598,028호 및 국제 공개 제2008/100624호에 개시된 것들이 포함되지만, 이에 한정되지 않으며, 이들의 내용은 본원에 참고로 포함된다. 하나 이상의 항암제가 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 투여와 동시에, 또는 투여 전에, 또는 투여 후에 투여될 수 있다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 ADC는 대상체에서 백혈병과 같은 암을 치료하기 위해 아폽토시스제, 예를 들어 Bcl-xL 저해제 또는 Bcl-2 (B-세포 림프종 2) 저해제(예를 들어, ABT-199 (베네토클락스))와 함께 병용 요법으로 사용될 수 이다. 일 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 ADC는 암을 치료하기 위해 Bcl-xL 저해제와 함께 병용 요법으로 사용될 수 있다. 일 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 ADC는 암을 치료하기 위해 베네토클락스와 함께 병용 요법으로 사용될 수 있다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 ADC는 이를 필요로 하는 대상체를 치료하기 위해 NAMPT의 저해제 (본원에 참고로 포함된 AbbVie, Inc.의 미국 특허 출원 공개 제2013/0303509호의 저해제의 예 참조)와 함께 병용 요법으로 사용될 수 있다. NAMPT (프리-B-세포-결장성-향상 인자(PBEF) 및 비스파틴으로도 알려져 있음)는 니코틴아미드의 포스포리보실화를 촉매하는 효소이며 NAD를 구제하는 두 경로 중 하나에서 속도 제한 효소이다. 본 발명의 일 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 및 ADC는 대상체에서 암의 치료를 위해 NAMPT 저해제와 병용하여 투여된다.
본 발명의 특정 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 ADC는 토포이소머라아제 저해제 이리노테칸의 활성 대사산물인 SN-38과 함께 병용 요법으로 사용될 수 있다.
본 발명의 다른 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 ADC는 유방암, 난소암 및 비소세포 폐암을 포함하는 암을 치료하기 위해 PARP (폴리 ADP 리보스 폴리머라아제) 저해제, 예를 들어, 벨리파립과 함께 병용 요법으로 사용될 수 있다.
본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 항-B7-H3 ADC와 함께 공동-투여되고/되거나 제형화될 수 있는 추가적인 치료제의 추가의 예에는 흡입식 스테로이드; 베타-작용제, 예를 들어, 단기-작용 또는 장기-작용 베타-작용제; 류코트리엔 또는 류코트리엔 수용체의 길항제; ADVAIR과 같은 복합 약물; IgE 저해제, 예를 들어, 항-IgE 항체(예를 들어, XOLAIR®, 오말리주맙); 포스포디에스테라아제 저해제(예를 들어, PDE4 저해제); 잔틴; 항콜린작용성 약물; 비만 세포-안정제, 예를 들어 크로몰린; IL-4 저해제; IL-5 저해제; 에오탁신/CCR3 저해제; 히스타민 또는 H1, H2, H3, 및 H4를 포함하는 그의 수용체의 길항제, 및 프로스타글란딘 D 또는 그의 수용체 (DP1 및 CRTH2)의 길항제 중 하나 이상이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 그러한 조합물은, 예를 들어, 천식 및 다른 호흡기 장애를 치료하는 데 사용될 수 있다. 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 항-B7-H3 ADC와 함께 공동-투여되고/되거나 제형화될 수 있는 추가적인 치료제의 다른 예에는 항-PD1 항체(예를 들어, 펨브롤리주맙), 항-PD-L1 항체(예를 들어, 아테졸리주맙), 항-CTLA-4 항체(예를 들어, 이필리무맙), MEK 저해제(예를 들어, 트라메티닙), ERK 저해제, BRAF 저해제(예를 들어, 다브라페닙), 오시메르티닙 (AZD9291), 에를로티닙, 게피티닙, 소라페닙, CDK9 저해제(예를 들어, 디나시클립), MCL-1 저해제, 테모졸로미드, Bcl-xL 저해제, Bcl-2 저해제(예를 들어, 베네토클락스), 이브루티닙, mTOR 저해제(예를 들어, 에베롤리무스), PI3K 저해제(예를 들어, 부팔리십), 두벨리십, 이델랄리십, AKT 저해제, HER2 저해제(예를 들어, 라파티닙), Herceptin, 탁산(예를 들어, 도세탁셀, 파클리탁셀, nab-파클리탁셀), 아우리스타틴을 포함하는 ADC, PBD를 포함하는 ADC(예를 들어, 로발피투주맙 테시린), 및 메이탠시노이드를 포함하는 ADC(예를 들어, TDM1), TRAIL 작용제, 프로테아좀 저해제(예를 들어, 보르테조밉), 및 니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라아제 (NAMPT) 저해제 중 하나 이상이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 하나 이상의 항-B7-H3 항체 또는 이의 단편과 함께 공동-투여되고/되거나 제형화될 수 있는 치료제의 추가의 예에는 TNF 길항제(예를 들어, TNF 수용체의 용해성 단편, 예를 들어, p55 또는 p75 인간 TNF 수용체 또는 이의 유도체, 예를 들어, 75 kD TNFR-IgG(75 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질, ENBREL)); TNF 효소 길항제, 예를 들어, TNF 전환 효소(TACE) 억제제; 무스카린 수용체 길항제; TGF-베타 길항제; 인터페론 감마; 퍼페니돈; 화학요법제, 예를 들어, 메토트렉세이트, 레플루노미드, 또는 시롤리무스(라파마이신) 또는 그의 유사체, 예를 들어, CCI-779; COX2 및 cPLA2 억제제; NSAID; 면역조절제; p38 억제제, TPL-2, MK-2 및 NFkB 억제제 중 하나 이상이 포함된다.
다른 바람직한 조합물은 사이토카인 억제성 항염증 약물(들)(CSAID); 다른 인간 사이토카인 또는 성장 인자, 예를 들어, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, IL-18, IL-21, IL-31, 인터페론, EMAP-II, GM-CSF, FGF, EGF, PDGF, 및 엔도텔린-1뿐만 아니라 이들 사이토카인 및 성장 인자의 수용체에 대한 항체 또는 이의 길항제이다. 본 발명의 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 세포 표면 분자, 예를 들어, CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90, CTLA, CTLA-4, PD-1, 또는 CD154를 포함한 그들의 리간드(gp39 또는 CD40L)에 대한 항체와 조합될 수 있다.
치료제들의 바람직한 조합은 염증 케스케이드의 상이한 지점에서 방해할 수 있으며; 바람직한 예는 키메라, 인간화된 또는 인간 TNF 항체, 아달리무맙, (HUMIRA:D2E7; 국제 공개 제97/29131호 및 미국 특허 제6,090,382호; 본 명세서에 참고로 포함됨), CA2(RemicadeTM), CDP 571, 및 용해성 p55 또는 p75 TNF 수용체, 그의 유도체, (p75TNFR1gG(EnbrelTM) 또는 p55TNFR1gG(Lenercept), 및 또한 TNF 전환 효소(TACE) 억제제와 같은 TNF 길항제를 포함하고; 유사하게 IL-1 억제제(인터류킨-1 전환 효소 억제제, IL-1RA 등)가 동일한 이유로 효과적일 수 있다. 다른 바람직한 조합은 인터류킨 4를 포함한다.
본 발명의 제약 조성물은 "치료적 유효량" 또는 "예방적 유효량"의 본 발명의 항체 또는 항체 부분을 포함할 수 있다. "치료적 유효량"은 요망되는 치료 결과를 달성하기 위해 필요한 용량에서 및 기간 동안 유효한 양을 지칭한다. 항체 또는 항체 부분의 치료적 유효량은 당업자에 의해 결정될 수 있고, 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중과 같은 인자, 및 개체에서 요망되는 반응을 유도하는 항체 또는 항체 부분의 능력에 따라 달라질 수 있다. 또한, 치료적 유효량은, 항체 또는 항체 부분의 임의의 독성 또는 유해 효과보다 치료적으로 유리한 효과가 더 큰 양이다. "예방적 유효량"은 요망되는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 용량에서 및 기간 동안 유효한 양을 지칭한다. 전형적으로, 예방적 용량은 질환 전에 또는 질환의 초기 단계에 대상체에게 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다.
투여 섭생법은 최적의 요망되는 반응(예를 들어, 치료적 또는 예방적 반응)을 제공하도록 조정될 수 있다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있거나, 수개의 분할된 용량이 시간에 걸쳐 투여될 수 있거나, 용량은 치료적 상황의 긴급성에 의해 나타나는 바와 같이 비례하여 감소되거나 증가될 수 있다. 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위하여 용량 단위 형태로 비경구 조성물을 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본 명세서에 사용되는 용량 단위 형태는 치료될 포유동물 대상체를 위한 단위 용량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며; 각 단위는 요구되는 제약 담체와 관련하여 요망되는 치료적 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 용량 단위 형태에 대한 설명은, (a) 활성 화합물의 독특한 특징 및 달성될 특정 치료적 또는 예방적 효과, 및 (b) 개체에서의 감수성 치료를 위해 이러한 활성 화합물을 배합하는 것에 대한 본 기술 분야에 내재된 한계에 의해 좌우되고, 이들에 직접적으로 의존한다.
본 발명의 ADC, 항체 또는 항체 부분의 치료적 또는 예방적 유효량에 대한 예시적인, 비제한적인 범위는 0.1 내지 20 mg/kg, 더 바람직하게는 1 내지 10 mg/kg이다. 일 실시 형태에서, 본원에 기술된 항체 또는 ADC의 투여량은 1 내지 6 mg/kg (그 안에 열거되는 개별 투여량 포함), 예를 들어, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 및 6 mg/kg이다. 또 다른 실시 형태에서, 본원에 기술된 항체 또는 ADC의 투여량은 1 내지 200 μg/kg (그 안에 열거되는 개별 투여량 포함), 예를 들어, 1 μg/kg, 2 μg/kg, 3 μg/kg, 4 μg/kg, 5 μg/kg, 10 μg/kg, 20 μg/kg, 30 μg/kg, 40 μg/kg, 50 μg/kg, 60 μg/kg, 80 μg/kg, 100 μg/kg, 120 μg/kg, 140 μg/kg, 160 μg/kg, 180 μg/kg 및 200 μg/kg이다. 완화될 질환의 유형 및 중증도에 따라 투여량 값이 변할 수 있음에 주목해야 한다. 임의의 특정 대상체에 대해 특정 투여 섭생법은 개체의 요구 및 조성물을 투여하거나 투여를 감독하는 인간의 전문적 판단에 따라 시간에 걸쳐 조정되어야 하며, 본원에 제시된 용량 범위는 단지 예시적인 것이고, 청구된 조성물의 범주 또는 실시를 제한하고자 하는 것은 아님을 추가로 이해해야 한다.
일 실시 형태에서, 항체 huAb13v1, huAb3v2.5, 또는 huAb3v2.6을 포함하는 ADC를 포함하는 항-B7-H3 ADC는, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, 0.1 내지 30 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 또 다른 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 이의 항원 결합 부분은, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, ADC로서 1 내지 15 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 또 다른 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 이의 항원 결합 부분은, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, ADC로서 1 내지 10 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 또 다른 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 이의 항원 결합 부분은, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, ADC로서 2 내지 3 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 또 다른 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 이의 항원 결합 부분은, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, ADC로서 1 내지 4 mg/kg의 투여량으로 투여된다.
일 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 ADC, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, huAb3v2.6은, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, ADC로서 1 내지 200 μg/kg의 투여량으로 투여된다. 또 다른 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 이의 항원 결합 부분은, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, ADC로서 5 내지 150 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 또 다른 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 이의 항원 결합 부분은, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, ADC로서 5 내지 100 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 또 다른 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 이의 항원 결합 부분은, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, ADC로서 5 내지 90 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 또 다른 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 이의 항원 결합 부분은, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, ADC로서 5 내지 80 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 또 다른 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 이의 항원 결합 부분은, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, ADC로서 5 내지 70 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 또 다른 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 이의 항원 결합 부분은, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, ADC로서 5 내지 60 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 또 다른 실시 형태에서, 항-B7-H3 항체, 예를 들어, huAb13v1, huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 이의 항원 결합 부분은, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 갖는 대상체에, ADC로서 10 내지 80 mg/kg의 투여량으로 투여된다.
전술된 투여량은 본원에 개시된 항-B7-H3 ADC 또는 항체 중 어느 하나의 투여를 위해 유용할 수 있다.
또 다른 태양에서, 본 출원은 시험관내에서 샘플(예를 들어, 혈청, 혈장, 조직, 생검체와 같은 생물학적 샘플) 중의 B7-H3의 존재를 검출하는 방법을 제공한다. 대상 방법은 장애, 예를 들어, 암을 진단하는데 사용될 수 있다. 상기 방법은 (i) 샘플 또는 대조군 샘플을 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 그의 단편과 접촉시키는 단계; 및 (ii) 항-B7-H3 항체 또는 그의 단편과 샘플 또는 대조군 샘플 사이의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함하며, 대조군 샘플과 비교하여 샘플에서의 복합체 형성의 통계학적으로 유의미한 변화가 샘플에서의 B7-H3의 존재를 나타낸다.
인간 B7-H3에 결합하는 능력을 고려해 볼 때, 본 발명의 항-인간 B7-H3 항체 또는 그의 부분은 통상의 면역분석, 예를 들어, 효소 연결된 면역흡착 분석(ELISA), 방사선면역분석(RIA) 또는 조직 면역조직화학을 사용하여, (예를 들어, 생물학적 샘플, 예를 들어, 혈청 또는 혈장에서) 인간 B7-H3을 검출하는데 사용될 수 있다. 일 태양에서, 본 발명은 생물학적 샘플을 본 발명의 항체 또는 항체 부분과 접촉시키는 단계 및 인간 B7-H3에 결합된 항체(또는 항체 부분) 또는 결합되지 않는 항체(또는 항체 부분)를 검출하여 생물학적 샘플 중의 인간 B7-H3을 검출하는 단계를 포함하는, 생물학적 샘플 중의 인간 B7-H3의 검출 방법을 제공한다. 항체는 결합되거나 결합되지 않은 항체의 검출을 용이하게 하도록 검출 가능한 물질로 직접적으로 또는 간접적으로 표지된다. 적합한 검출 가능한 물질은 다양한 효소, 보결분자단(prosthetic group), 형광 물질, 발광 물질 및 방사능 물질을 포함한다. 적합한 효소의 예는 서양고추냉이(horseradish) 퍼옥시다아제, 알칼리성 포스파타아제, b-갈락토시다아제 또는 아세틸콜린에스테라아제를 포함하며; 적합한 보조군 복합체의 예는 스트렙트아비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴을 포함하며; 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린을 포함하며; 발광 물질의 예는 루미놀을 포함하며; 적합한 방사능 물질의 예는 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177Lu, 166Ho, 또는 153Sm을 포함한다.
항체 표지화에 대한 대안으로, 인간 B7-H3은 검출 가능한 물질로 표지된 rhB7-H3 표준물질 및 비표지된 항-인간 B7-H3 항체를 사용하는 경쟁적 면역분석에 의해 생물학적 유체에서 분석될 수 있다. 이러한 분석에서는, 생물학적 샘플, 표지된 rhB7-H3 표준물질 및 항-인간 B7-H3 항체를 조합하며, 비표지된 항체에 결합된 표지된 rhB7-H3 표준물질의 양을 측정한다. 생물학적 샘플 중 인간 B7-H3의 양은 항-B7-H3 항체에 결합된 표지된 rhB7-H3 표준물질의 양에 반비례한다. 유사하게, 인간 B7-H3을 또한 검출 가능한 물질로 표지된 rhB7-H3 표준물질 및 비표지된 항-인간 B7-H3 항체를 이용하는 경쟁적 면역분석에 의해 생물학적 유체에서 분석할 수 있다.
또 다른 태양에서, 본 출원은 생체내에서 B7-H3의 존재를 검출하는 방법(예를 들어, 대상체에서의 생체내 영상화)을 제공한다. 대상 방법은 장애, 예를 들어, B7-H3-연관 장애를 진단하는데 사용될 수 있다. 상기 방법은 (i) 본원에 개시된 항-B7-H3 항체 또는 그의 단편을 B7-H3에의 항체 또는 단편의 결합을 가능하게 하는 조건 하에 대상체 또는 대조군 대상체에게 투여하는 단계; 및 (ii) 항체 또는 단편과 B7-H3 사이의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함하며, 대조군 대상체와 비교하여 대상체에서의 복합체 형성의 통계적으로 유의미한 변화가 B7-H3의 존재를 나타낸다.
VI. 제약 조성물
본 발명은 또한 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 부분, 또는 ADC 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본 발명의 항체 또는 ADC를 포함하는 제약 조성물은, 장애의 진단, 검출 또는 모니터링, 장애 또는 그의 하나 이상의 증상의 예방, 치료, 관리 또는 개선, 및/또는 연구에 사용되지만 이에 한정되지 않는다. 특정 실시 형태에서, 조성물은 본 발명의 하나 이상의 항체를 포함한다. 또 다른 실시 형태에서, 제약 조성물은 본 발명의 하나 이상의 항체 또는 ADC 및 B7-H3 활성이 유해한 장애를 치료하기 위한 본 발명의 항체 또는 ADC 이외의 하나 이상의 예방제 또는 치료제를 포함한다. 바람직하게는, 장애 또는 그의 하나 이상의 증상을 예방, 치료, 관리 또는 개선하는데 유용한 것으로 알려진 또는 이에 사용되어 온 또는 현재 사용되고 있는 예방제 또는 치료제를 포함한다. 이들 실시 형태에 따라, 조성물은 담체, 희석제 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 항체 및 항체-부분 또는 ADC는 대상체에게 투여하기에 적합한 제약 조성물 내로 혼입될 수 있다. 전형적으로, 제약 조성물은 본 발명의 항체 또는 항체 부분 및 제약상 허용가능한 담체를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 "제약상 허용가능한 담체"는, 생리학적으로 적합한, 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅물, 항균제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 제약상 허용가능한 담체의 예로는, 물, 염수, 인산염 완충 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등, 및 이들의 조합 중 하나 이상이 포함된다. 많은 경우에, 등장화제, 예를 들어, 당, 폴리알콜, 예컨대, 만니톨, 소르비톨, 또는 염화나트륨을 조성물에 포함하는 것이 바람직할 것이다. 제약상 허용가능한 담체는 항체 또는 항체 부분 또는 ADC의 저장 수명 또는 유효성을 향상시키는 미량의 보조 물질, 예컨대, 습윤제 또는 유화제, 보존제 또는 완충제를 추가로 포함할 수 있다.
다양한 전달 시스템이 공지되어 있으며, 본 발명의 하나 이상의 항체 또는 ADC 또는 본 발명의 하나 이상의 항체의 조합 및 장애 또는 그의 하나 이상의 증상을 예방하거나 관리하거나 치료하거나 개선하는데 유용한 예방제 또는 치료제를 투여하는데 사용될 수 있고, 예를 들어, 리포좀 내의 캡슐화, 마이크로입자, 마이크로캡슐, 항체 또는 항체 단편을 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체-매개된 엔도시토시스(예를 들어, 문헌[Wu and Wu, J.Biol.Chem.262:4429-4432 (1987)] 참조), 레트로바이러스 또는 다른 벡터의 일부로서의 핵산 작제 등이 있다. 본 발명의 예방제 또는 치료제를 투여하는 방법으로는 비경구 투여(예를 들어, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내 및 피하), 경막외 투여, 종양내 투여, 및 점막 투여(예를 들어, 비강내 및 경구 경로)가 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 또한, 폐 투여는, 예를 들어, 흡입기 또는 네불라이저, 및 에어로졸화제와의 제형을 사용함으로써 이용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제6,019,968호, 제5,985,320호, 제5,985,309호, 제5,934,272호, 제5,874,064호, 제5,855,913호, 제5,290,540호, 및 제4,880,078호; 및 국제 공개 제92/19244호, 국제 공개 제97/32572호, 국제 공개 제97/44013호, 국제 공개 제98/31346호, 및 국제 공개 제99/66903호를 참조하며, 이들 각각은 전체적으로 본원에 참고로 포함된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 항체, 병용 요법 또는 본 발명의 조성물은 Alkermes AIR® 폐 약물 전달 기술(미국 매사추세츠주 캠브리지 소재의 Alkermes, Inc.)을 이용하여 투여된다. 특정 실시 형태에서, 본 발명의 예방제 또는 치료제는 근육내, 정맥내, 종양내, 경구, 비강내, 폐 또는 피하 투여된다. 예방제 또는 치료제는 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들어, 주입 또는 볼루스 주사에 의해, 상피 또는 점막피부 라이닝(예를 들어, 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있고, 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신 또는 국소 투여일 수 있다.
특정 실시 형태에서, 치료를 필요로 하는 영역에 본 발명의 예방제 또는 치료제를 국소로 투여하는 것이 바람직할 수 있고; 이것은, 예를 들어, 그리고 제한 없이, 국소 주입에 의해, 주사에 의해, 또는 임플란트 수단에 의해 달성될 수 있고, 상기 임플란트는 멤브레인 및 매트릭스, 예를 들어, 시알라스틱 멤브레인, 중합체, 섬유상 매트릭스(예를 들어, Tissuel®) 또는 콜라겐 매트릭스를 포함하는, 다공성 또는 비-다공성 물질이다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 하나 이상의 항체 길항제의 유효량을 대상체의 환부에 국소적으로 투여하여 장애 또는 그의 증상을 예방하고/하거나, 치료하고/하거나, 관리하고/하거나 개선한다. 또 다른 실시 형태에서, 본 발명의 하나 이상의 항체의 유효량을, 본 발명의 항체 이외의 하나 이상의 요법제(예를 들어, 하나 이상의 예방제 또는 치료제)의 유효량과 병용하여 대상체의 환부에 국소적으로 투여하여 장애 또는 그의 하나 이상의 증상을 예방하고/하거나, 치료하고/하거나, 관리하고/하거나 개선한다.
또 다른 실시 형태에서, 본 발명의 예방제 또는 치료제는 제어 방출 또는 지속 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 일 실시 형태에서, 펌프를 사용하여 제어 방출 또는 지속 방출을 달성할 수 있다(문헌[Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20]; 문헌[Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574] 참조). 또 다른 실시 형태에서, 중합체 물질을 사용하여 본 발명의 요법제의 제어 방출 또는 지속 방출을 달성할 수 있다(예를 들어, 문헌[Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Fla. (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984)]; 문헌[Ranger and Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61] 참조; 또한 문헌[Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 7 1:105)]; 미국 특허 제5,679,377호; 미국 특허 제5, 916,597호; 미국 특허 제5,912,015호; 미국 특허 제5,989,463호; 미국 특허 제5,128,326호; 국제 공개 제99/15154호; 및 국제 공개 제99/20253호 참조). 지속 방출 제형에 사용되는 중합체의 예에는 폴리(2-히드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글리콜리드(PLG), 폴리언하이드리드, 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(비닐 알코올), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리락티드(PLA), 폴리(락티드-코-글리콜리드)(PLGA), 및 폴리오르토에스테르가 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 바람직한 실시 형태에서, 지속 방출 제형에 사용되는 중합체는 불활성이고, 여과 가능한 불순물을 포함하지 않고, 저장시 안정하고, 멸균 상태이고, 생분해성이다. 또 다른 실시 형태에서, 제어 또는 지속 방출 시스템은 예방 또는 치료 표적 부근에 위치될 수 있으므로, 전신 용량의 단지 소정의 분율만을 필요로 한다(예를 들어, 문헌[Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol.2, pp.115-138 (1984)] 참조).
제어 방출 시스템은 Langer에 의한 검토에서 논의된다(문헌[1990, Science 249:1527-1533]) 당업자에게 공지된 임의의 기술을 이용하여 본 발명의 하나 이상의 치료제를 포함하는 지속 방출 제형을 생성할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,526,938호, 국제 공개 제91/05548호, 국제 공개 제96/20698호, 문헌[Ning et al., 1996, "Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel," Radiotherapy & Oncology 39:179-189], 문헌[Song et al., 1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long- Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397], 문헌[Cleek et al., 1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application," Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854, and Lam et al., 1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery," Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759- 760을 참조하며, 이들 각각은 전체적으로 본원에 참고로 포함된다.
특정 실시 형태에서, 본 발명의 조성물이 예방제 또는 치료제를 코딩하는 핵산인 경우, 핵산은 이를 적합한 핵산 발현 벡터의 부분으로 작제하고 세포내에 있도록 이를 투여함으로써, 예를 들어, 레트로바이러스 벡터의 사용에 의해(미국 특허 제4,980,286호 참조), 또는 직접 주사에 의해, 또는 마이크로입자 충격(예를 들어, 유전자 건; Dupont의 Biolistic)에 의해, 또는 지질 또는 세포-표면 수용체 또는 트랜스펙션제로의 코팅에 의해, 또는 이를 핵에 유입되는 것으로 알려진 호메오박스-유사 펩티드에 연결하여 투여함으로써, 코딩된 예방제 또는 치료제의 발현을 촉진시키도록 생체내에서 투여될 수 있다(예를 들어, 문헌[Joliot et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868] 참조). 대안적으로, 핵산은 세포내로 도입되고 상동성 재조합에 의한 발현을 위해 숙주 세포 DNA 내로 혼입될 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 의도된 투여 경로에 적합하도록 제형화한다. 투여 경로의 예로는 비경구, 예를 들어, 정맥내, 피내, 피하, 경구, 비강내(예를 들어, 흡입), 경피(예를 들어, 국소), 경점막, 및 직장 투여가 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 특정 실시 형태에서, 조성물은 통상적 절차에 따라 인간에게 정맥내, 피하, 근육내, 경구, 비강내 또는 국소 투여하기 위해 적당한 제약 조성물로서 제형화된다. 전형적으로, 정맥내 투여를 위한 조성물은 멸균 등장성 수성 완충제 중의 용액이다. 또한, 필요한 경우, 조성물은 가용화제 및 국소 마취제, 예를 들어, 리그노카인을 포함하여 주사 부위의 통증을 줄일 수 있다.
본 발명의 방법이 조성물의 비강내 투여를 포함하는 경우, 조성물은 에어로졸 형태, 분무, 미스트로 제형화되거나 또는 점적액의 형태로 제형화될 수 있다. 특히, 본 발명에 따라 사용하기 위한 예방제 또는 치료제는, 적합한 추진제(예를 들어, 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체)를 사용하여, 가압된 팩으로부터의 에어로졸 분무 프레젠테이션 또는 네불라이저의 형태로 편리하게 전달될 수 있다. 가압된 에어로졸의 경우, 용량 단위는, 계측된 양을 전달하기 위한 밸브를 제공함으로써 측정될 수 있다. 흡입기 또는 취입기에서 사용하기 위한 캡슐 및 카트리지(예를 들어, 젤라틴으로 이루어짐)는 화합물의 분말 믹스 및 적합한 분말 기제, 예를 들어, 락토스 또는 전분을 함유하여 제형화될 수 있다.
본 발명의 방법이 경구 투여를 포함하는 경우, 조성물은 정제, 캡슐제, 카쉐제(cachet), 젤 캡, 용액, 현탁액 등의 형태로 경구 제형화될 수 있다. 정제 또는 캡슐제는 제약상 허용가능한 부형제, 예를 들어, 결합제(예를 들어, 프리젤라틴화된 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈, 또는 히드록시프로필 메틸셀룰로오스); 충전제(예를 들어, 락토스, 미세결정질 셀룰로오스, 또는 인산수소칼슘); 윤활제(예를 들어, 마그네슘 스테아레이트, 활석, 또는 실리카); 붕해제(예를 들어, 감자 전분 또는 나트륨 전분 글리콜레이트); 또는 습윤제(예를 들어, 나트륨 라우릴 설페이트)를 사용하는 통상의 방법에 의해 제조될 수 있다. 정제는 본 기술 분야에 널리 공지되어 있는 방법에 의해 코팅될 수 있다. 경구 투여를 위한 액체 제제는 용액, 시럽 또는 현탁액의 형태를 취할 수 있지만, 이에 한정되지 않거나, 또는 그들은 사용 전에 물 또는 다른 적합한 비히클을 사용한 구성을 위한 건조 생성물로서 제시될 수 있다. 그러한 액체 제제는 제약상 허용가능한 첨가제, 예를 들어, 현탁화제(예를 들어, 소르비톨 시럽, 셀룰로오스 유도체 또는 수소화된 식용 지방); 유화제(예를 들어, 레시틴 또는 아카시아); 비-수성 비히클(예를 들어, 아몬드 오일, 오일 에스테르, 에틸 알코올 또는 분획된 식물성 오일); 및 보존제(예를 들어, 메틸 또는 프로필-p-히드록시벤조에이트 또는 소르브산)를 사용하는 통상의 방법에 의해 제조될 수 있다. 또한, 제제는 완충염, 향미제, 착색제, 및 감미제를 적절하게 함유할 수 있다. 경구 투여를 위한 제제는 예방제(들) 또는 치료제(들)의 느린 방출, 제어 방출, 또는 지속 방출에 적합하게 제형화될 수 있다.
본 발명의 방법은, 예를 들어, 흡입기 또는 네불라이저의 사용에 의한, 에어로졸화제로 제형화된 조성물의 폐 투여를 포함할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제6,019,968호, 제5,985,320호, 제5,985,309호, 제5,934,272호, 제5,874,064호, 제5,855,913호, 제5,290,540호, 및 제4,880,078호; 및 국제 공개 제92/19244호, 국제 공개 제97/32572호, 국제 공개 제97/44013호, 국제 공개 제98/31346호, 및 국제 공개 제99/66903호를 참조하며, 이들 각각은 전체적으로 본원에 참고로 포함된다. 특정 실시 형태에서, 본 발명의 항체, 병용 요법, 및/또는 본 발명의 조성물은 Alkermes AIR® 폐 약물 전달 기술(미국 매사추세츠주 캠브리지 소재의 Alkermes, Inc.)을 이용하여 투여된다.
본 발명의 방법은, 주사(예를 들어, 볼루스 주사 또는 연속 주입)에 의한 비경구 투여를 위해 제형화된 조성물의 투여를 포함할 수 있다. 주사를 위한 제형은 첨가되는 보존제와 함께 단위 투여형으로(예를 들어, 앰플로 또는 다중-용량 용기로) 제시될 수 있다. 조성물은 오일 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 에멀젼과 같은 형태를 취할 수 있고, 제형화제, 예를 들어, 현탁화제, 안정화제 및/또는 분산제를 포함할 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 사용 전에 적합한 비히클(예를 들어, 멸균 발열원-비함유 물)을 사용한 구성을 위한 분말 형태로 존재할 수 있다.
본 발명의 방법은 추가로 데포(depot) 제제로서 제형화된 조성물의 투여를 포함할 수 있다. 그러한 장기 작용 제형은 이식(예를 들어, 피하 또는 근육내)에 의해 또는 근육내 주사에 의해 투여될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 조성물은 적합한 중합체 또는 소수성 물질과 함께(예를 들어, 허용가능한 오일 중의 에멀젼으로서) 또는 이온 교환 수지와 함께, 또는 난용성 유도체로서(예를 들어, 난용성 염으로서) 제형화될 수 있다.
본 발명의 방법은 중성 또는 염 형태로서 제형화된 조성물의 투여를 포함한다. 제약상 허용가능한 염에는 음이온, 예를 들어, 염산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산 등으로부터 유도된 음이온과 함께 형성된 염, 및 양이온, 예를 들어, 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 수산화철, 이소프로필아민, 트리에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유도된 양이온과 함께 형성된 염이 포함된다.
일반적으로, 조성물의 성분은 별도로 제공되거나 단위 투여형으로, 예를 들어, 활성제의 양을 표시한, 용봉된 용기, 예를 들어, 앰플 또는 사쉐(sachette) 내의 동결건조된 분말 또는 물 비함유 농축물로서 함께 혼합된다. 투여 방식이 주입인 경우, 조성물은 멸균 제약 등급의 물 또는 염수를 포함하는 주입병으로 제공될 수 있다. 투여 방식이 주사에 의한 경우, 성분들이 투여 전에 혼합될 수 있도록 주사용 멸균수 또는 염수의 앰플이 제공될 수 있다.
특히, 본 발명은 또한, 본 발명의 예방제 또는 치료제 중 하나 이상 또는 제약 조성물이 제제의 양을 표시한, 용봉된 용기, 예를 들어, 앰플 또는 사쉐에 포장되는 것을 제공한다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 예방제 또는 치료제 중 하나 이상 또는 제약 조성물은, 용봉된 용기 내의 건조 멸균된 동결건조 분말 또는 물 비함유 농축물로서 공급되고, (예를 들어, 물 또는 염수를 사용하여) 대상체에게 투여하기 위한 적절한 농도로 재구성될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 예방제 또는 치료제 중 하나 이상 또는 제약 조성물은, 용봉된 용기 내의 건조 멸균 동결건조된 분말로서, 적어도 5 ㎎, 적어도 10 ㎎, 적어도 15 ㎎, 적어도 25 ㎎, 적어도 35 ㎎, 적어도 45 ㎎, 적어도 50 ㎎, 적어도 75 ㎎, 또는 적어도 100 ㎎의 단위 용량으로 공급된다. 본 발명의 동결건조된 예방제 또는 치료제 또는 제약 조성물은 그의 원래의 용기에서 2℃ 내지 8℃에서 저장되어야 하고, 본 발명의 예방제 또는 치료제 또는 제약 조성물은 재구성된 후 1주 내에, 5일 내에, 72시간 내에, 48시간 내에, 24시간 내에, 12시간 내에, 6시간 내에, 5시간 내에, 3시간 내에 또는 1시간 내에 투여되어야 한다. 대안적인 실시 형태에서, 본 발명의 예방제 또는 치료제 중 하나 이상 또는 제약 조성물은 제제 양 및 농도를 표시한 용봉된 용기에 액체 형태로 공급된다. 바람직하게는, 투여되는 조성물의 액체 형태는 용봉된 용기에 적어도 0.25 ㎎/㎖, 적어도 0.5 ㎎/㎖, 적어도 1 ㎎/㎖, 적어도 2.5 ㎎/㎖, 적어도 5 ㎎/㎖, 적어도 8 ㎎/㎖, 적어도 10 ㎎/㎖, 적어도 15 ㎎/㎖, 적어도 25 ㎎/㎖, 적어도 50 ㎎/㎖, 적어도 75 ㎎/㎖ 또는 적어도 100 ㎎/㎖으로 공급된다. 액체 형태는 그의 원래의 용기에서 2℃ 내지 8℃에서 저장되어야 한다.
본 발명의 항체 및 항체-부분은 비경구 투여에 적합한 제약 조성물 내로 혼입될 수 있다. 바람직하게는, 항체 또는 항체-부분은 0.1 내지 250 ㎎/㎖의 항체를 함유하는 주사 가능한 용액으로서 제조될 것이다. 주사 가능한 용액은 플린트(flint) 또는 앰버 바이알, 앰플 또는 사전-충전된 주사기 내의 액체 또는 동결건조된 투여형으로 구성될 수 있다. 완충제는 pH 5.0 내지 7.0(최적으로 pH 6.0)에서 최적으로 5 내지 10 mM의 L-히스티딘(1 내지 50 mM)일 수 있다. 다른 적합한 완충제에는 숙신산나트륨, 시트르산나트륨, 인산나트륨 또는 인산칼륨이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 염화나트륨을 사용하여 0 내지 300 mM(액체 투여형에 대해 최적으로 150 mM)의 농도에서 용액의 독성을 변경할 수 있다. 동결보호제, 주로 0 내지 10%(최적으로는 0.5 내지 1.0%)의 수크로스가 동결건조된 투여형에 대해 포함될 수 있다. 다른 적합한 동결보호제로는 트레할로스 및 락토스가 포함된다. 증량제(bulking agent), 주로 1 내지 10%(최적으로는 2 내지 4%)의 만니톨이 동결건조된 투여형에 대해 포함될 수 있다. 안정화제, 주로 1 내지 50 mM(최적으로는 5 내지 10 mM)의 L-메티오닌이 액체 및 동결건조된 투여형 둘 모두에 사용될 수 있다. 다른 적합한 증량제로는 글리신, 아르기닌이 포함되고, 0 내지 0.05%(최적으로는 0.005 내지 0.01%)의 폴리소르베이트-80으로서 포함될 수 있다. 추가의 계면활성제로는 폴리소르베이트 20 및 BRIJ 계면활성제가 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 비경구 투여를 위한 주사 가능한 용액으로서 제조되는 본 발명의 항체 및 항체-부분을 포함하는 제약 조성물은 보조제로서 유용한 제제, 예를 들어, 치료학적 단백질(예를 들어, 항체)의 흡수 또는 분산을 증가시키기 위해 사용되는 제제를 추가로 포함할 수 있다. 특히 유용한 보조제는 히알루로니다아제, 예를 들어, Hylenex®(재조합 인간 히알루로니다아제)이다. 주사 가능한 용액에의 히알루로니다아제의 첨가는 비경구 투여, 특히, 피하 투여 이후의 인간 생체이용률을 개선한다. 또한, 이는 통증 및 불편을 감소시키고 주사 부위 반응의 발생률을 최소화시키면서 더 큰 주사 부위 부피(즉, 1 ㎖ 초과)를 가능하게 한다. (본원에 참고로 포함된 국제 공개 제2004078140호, 미국 특허 출원 공개 제2006104968호 참조)
본 발명의 조성물은 다양한 형태로 존재할 수 있다. 이들로는, 예를 들어, 액체, 반-고체 및 고체 투여형, 예를 들어, 액체 용액(예를 들어, 주사 가능한 용액 및 주입 가능한 용액), 분산액 또는 현탁액, 정제, 환제, 산제, 리포좀 및 좌제가 포함된다. 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료학적 적용에 의존한다. 전형적인 바람직한 조성물은 주사 가능한 용액 또는 주입 가능한 용액의 형태로 존재하고, 예를 들어, 다른 항체로의 인간의 수동적 면역화에 사용되는 것과 유사한 조성물이다. 바람직한 투여 방식은 비경구(예를 들어, 정맥내, 피하, 복강내, 근육내)이다. 바람직한 실시 형태에서, 항체는 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다. 또 다른 바람직한 실시 형태에서, 항체는 근육내 또는 피하 주사에 의해 투여된다.
치료적 조성물은 전형적으로 멸균되어야 하고 제조 및 저장 조건 하에서 안정해야 한다. 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 분산액, 리포좀 또는 고농도 약물에 적합한 다른 정렬된 구조로서 제형화될 수 있다. 멸균 주사 가능한 용액은, 적절한 용매 중에 활성 화합물(즉, 항체 또는 항체 부분)을 필요량으로, 필요에 따라 상기 열거된 성분 중 하나 또는 조합과 함께 혼입시킨 후 여과 멸균함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은, 활성 화합물을 기초 분산 매질 및 상기 열거된 성분으로부터의 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클에 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사 가능한 용액의 제조를 위한 멸균, 동결건조된 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은, 사전에 멸균-여과된 용액으로부터 활성 성분 및 임의의 추가의 요망되는 성분의 분말을 제공하는 진공 건조 및 분무-건조이다. 용액의 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅의 사용에 의해, 분산액의 경우에는 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 주사 가능한 조성물의 장기 흡수는 조성물에 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어, 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 포함시킴으로써 제조될 수 있다.
다수의 치료적 적용의 경우 투여의 바람직한 경로/방식은 피하 주사, 정맥내 주사 또는 주입이지만, 본 발명의 항체 또는 항체-부분 또는 ADC는 본 기술 분야에 공지된 다양한 방법에 의해 투여될 수 있다. 당업자에게 이해되는 바와 같이, 투여의 경로 및/또는 방식은 요망되는 결과에 따라 달라질 것이다. 특정 실시 형태에서, 활성 화합물은, 신속한 방출에 대해 화합물을 보호할 담체, 예를 들어, 임플란트, 경피 패치, 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함하는, 제어 방출 제형을 이용하여 제조될 수 있다. 생분해성의 생체적합성 중합체, 예를 들어, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리언히드리드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산을 사용할 수 있다. 그러한 제형의 다수의 제조 방법은 특허를 받았거나, 일반적으로 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978]을 참조한다.
실시예
실시예 1: 예시적인 Bcl-xL 저해제의 합성
이 실시예는 예시적인 Bcl-xL 저해 화합물 W2.01 내지 W2.91에 대한 합성 방법을 제공한다. ACD/Name 2012 release (Build 56084, 2012년 4월 5일, Advanced Chemistry Development Inc., 캐나다 온타리오 토론토 소재), ACD/Name 2014 release (Build 66687, 2013년 10월 25일, Advanced Chemistry Development Inc., 캐나다 온타리오 토론토 소재), ChemDraw Ver. 9.0.7 (CambridgeSoft, 미국 매사추세츠주 캠브릿지 소재), ChemDraw Ultra Ver. 12.0 (CambridgeSoft, 미국 매사추세츠주 캠브릿지 소재), 또는 ChemDraw Professional Ver. 15.0.0.106을 사용하여, Bcl-xL 저해제 (W2.01 내지 W2.91) 및 신톤 (실시예 2.1 내지 실시예 2.176)을 명명하였다. ACD/Name 2012 release (Build 56084, 2012년 4월 5일, Advanced Chemistry Development Inc., 캐나다 온타리오 토론토 소재), ACD/Name 2014 release (Build 66687, 2013년 10월 25일, Advanced Chemistry Development Inc., 캐나다 온타리오 토론토 소재), ChemDraw Ver. 9.0.7 (CambridgeSoft, 미국 매사추세츠주 캠브릿지 소재), ChemDraw Ultra Ver. 12.0 (CambridgeSoft, 미국 매사추세츠주 캠브릿지 소재), 또는 ChemDraw Professional Ver. 15.0.0.106을 사용하여, Bcl-xL 저해제 및 신톤 중간체를 명명하였다.
1.1 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({2-[2-(카르복시메톡시)에톡시]에틸}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.01)의 합성
1.1.1 3-브로모-5,7-디메틸아다만탄카르복실산
0℃에서 50 mL 둥근바닥 플라스크에, 브로민 (16 mL)을 첨가하였다. 철 분말 (7 g)을 첨가하고, 반응물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 3,5-디메틸아다만탄-1-카르복실산 (12 g)을 첨가하였다. 혼합물을 실온까지 가온하고 3일 동안 교반하였다. 얼음과 진한 HCl의 혼합물을 반응 혼합물에 부었다. 생성된 현탁액을 Na2SO3 (200 mL 물 중50 g)으로 2회 처리하고 디클로로메탄으로 3회 추출하였다. 합한 유기물을 1N HCl 수용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.1.2 3-브로모-5,7-디메틸아다만탄메탄올
테트라히드로푸란 (200 mL) 중 실시예 1.1.1 (15.4 g)의 용액에 BH3 (테트라히드로푸란 중 1 M, 150 mL)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 이어서 메탄올을 적가하여 반응 혼합물을 주의 깊게 켄칭(quenching)하였다. 이어서 혼합물을 진공 하에서 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 (500 mL)와 2N HCl 수용액 (100 mL) 사이에서 균형을 이루게 하였다. 수성 층을 추가로 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 합한 유기 추출물을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 용매를 증발시켜 표제 화합물을 제공하였다.
1.1.3 1-((3-브로모-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸)-1H-피라졸
톨루엔 (60 mL) 중 실시예 1.1.2 (8.0 g)의 용액에 1H-피라졸 (1.55 g) 및 시아노메틸렌트리부틸포스포란 (2.0 g)을 첨가하고, 혼합물을 90℃에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (10:1 헵탄:에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 324.2 (M+H)+.
1.1.4 2-{[3,5-디메틸-7-(1 H -피라졸-1-일메틸)트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]옥시}에탄올
에탄-1,2-디올 (12 mL) 중 실시예 1.1.3 (4.0 g)의 용액에 트리에틸아민 (3 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 150℃에서 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합한 유기 추출물을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 용매를 증발시켜 잔사를 얻었고, 이를 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트 후에 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 305.2 (M+H)+.
1.1.5 2-({3,5-디메틸-7-[(5-메틸-1 H -피라졸-1-일)메틸]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에탄올
테트라히드로푸란 (100 mL) 중 실시예 1.1.4 (6.05 g)의 냉각된 (-78℃) 용액에 n-BuLi (헥산 중 40 mL, 2.5M)을 첨가하고, 혼합물을 -78℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 주사기를 통해 요오도메탄 (10 mL)을 첨가하고, 혼합물을 -78℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 NH4Cl 수용액으로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 합한 유기 추출물을 물 및 염수로 세척하였다. 황산나트륨으로 건조시킨 후에, 용액을 여과하고 농축하고, 잔사를 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 319.5 (M+H)+.
1.1.6 1-({3,5-디메틸-7-[2-(히드록시)에톡시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-4-요오도-5-메틸-1H-피라졸
N,N-디메틸포름아미드 (30 mL) 중 실시예 1.1.5 (3.5 g)의 용액에 N-요오도숙신이미드 (3.2 g)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (600 mL)로 희석하고 NaHSO3 수용액, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 445.3 (M+H)+.
1.1.7 1-((3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-4-요오도-5-메틸-1H-피라졸
Tert-부틸디메틸실릴 트리플루오로메탄술포네이트 (5.34 mL)를 -40℃에서 디클로로메탄 (125 mL) 중 실시예 1.1.6 (8.6 g) 및 2,6-루티딘 (3.16 mL)의 용액에 첨가하고, 반응물을 하룻밤 실온까지 가온되게 두었다. 혼합물을 농축하고, 잔사를 헵탄 중 5 내지 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 523.4 (M+H)+.
1.1.8 1-((3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸
n-부틸리튬 (8.42 mL, 헥산 중 2.5M)을 -78℃에서 120 mL 테트라히드로푸란 중 실시예 1.1.7 (9.8 g)에 첨가하고 반응물을 1분 동안 교반하였다. 트리메틸 보레이트 (3.92 mL)를 첨가하고, 반응물을 5분 동안 교반하였다. 피나콜 (6.22 g)을 첨가하고, 반응물을 실온까지 가온되게 두고 2시간 교반하였다. 반응물을 pH 7 완충제로 켄칭하고, 혼합물을 에테르에 부었다. 층을 분리하고, 유기 층을 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 1 내지 25% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.1.9 6-플루오로-3-브로모피콜린산
400 mL 1:1 디클로로메탄/클로로포름 중 6-아미노-3-브로모피콜린산 (25 g)의 슬러리를 1시간에 걸쳐 5℃에서 디클로로메탄 (100 mL) 중 니트로소듐 테트라플루오로보레이트 (18.2 g)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 또 다른 30분 동안 교반하고, 이어서 35℃까지 가온하고 하룻밤 교반하였다. 생성물을 실온까지 냉각하고, 이어서 NaH2PO4 수용액으로 pH 4로 조정하였다. 생성된 용액을 디클로로메탄으로 3회 추출하고, 합한 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.1.10 Tert-부틸 3-브로모-6-플루오로피콜리네이트
파라-톨루엔술포닐 클로라이드 (27.6 g)를 0℃에서 디클로로메탄 (100 mL) 및 tert-부탄올 (80 mL) 중 실시예 1.1.9 (14.5 g) 및 피리딘 (26.7 mL)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 15분 동안 교반하고, 이어서 실온까지 가온하고, 하룻밤 교반하였다. 용액을 농축하고 에틸 아세테이트와 Na2CO3 수용액 사이에서 분배시켰다. 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 합하고, Na2CO3 수용액 및 염수으로 헹구고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.1.11 메틸 2-(5-브로모-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
디메틸 술폭시드 (100 mL) 중 메틸 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트 히드로클로라이드 (12.37 g) 및 실시예 1.1.10 (15 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (12 mL)을 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헥산 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 448.4 (M+H)+.
1.1.12 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
1,4-디옥산 (25 mL) 및 물 (25 mL) 중 실시예 1.1.11 (3.08 g), 실시예 1.1.8 (5 g), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (126 mg), 1,3,5,7-테트라메틸-8-테트라데실-2,4,6-트리옥사-8-포스파아다만탄 (170 mg), 및 K3PO4 (3.65 g)의 혼합물을 2시간 동안 90℃까지 가열하였다. 혼합물을 냉각하고 1:1 디에틸 에테르:에틸 아세테이트에 부었다. 층을 분리하고, 유기물을 NaH2PO4 포화 수용액, 물 (2x), 및 염수로 세척하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 1 내지 25% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 799.6 (M+H)+.
1.1.13 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산
실시예 1.1.12 (5 g) 및 수산화리튬 일수화물 (0.276 g)을 2일 동안 70℃에서 테트라히드로푸란 (50 mL), 메탄올 (5 mL) 및 물 (15 mL)의 용매 혼합물 중에서 함께 교반하였다. 반응물을 냉각하고, 1 M HCl 수용액으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄 (100 mL) 중에 용해시키고, -40℃에서 냉각하고, 2,6-루티딘 (1.8 mL) 및 tert-부틸디메틸실릴 트리플루오로메탄술포네이트 (3.28 g)를 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온되게 두고 2시간 교반하였다. 혼합물을 에테르로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기 층을 농축하였다. 잔사를 테트라히드로푸란 중에 용해시키고 K2CO3 포화 수용액으로 1시간 동안 처리하였다. 이 혼합물을 진한 HCl로 산성화시키고 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 10 내지 100% 에틸 아세테이트, 이어서 에틸 아세테이트 중 5% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 785.6 (M+H)+.
1.1.14 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
10분 동안 0℃에서 7 mL N,N-디메틸포름아미드 중에서 실시예 1.1.13 (970 mg), N,N-디이소프로필에틸아민 (208 mg), 및 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) (970 mg)를 교반하였다. 벤조[d]티아졸-2-아민 (278 mg)을 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각하고 에틸 아세테이트로 희석하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 테트라히드로푸란 (50 mL) 중에 용해시키고, 테트라부틸 암모늄 플루오라이드 (10 mL, 테트라히드로푸란 중 1 M)를 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트에 붓고 pH 7 완충제 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 10 내지 100% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 803.7 (M+H)+.
1.1.15 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-옥소에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (1.3 mL) 중 실시예 1.1.14 (100 mg)의 주위 온도 용액(ambient solution)에 데스-마틴(Dess-Martin) 페리오디난 (58.1 mg)을 한꺼번에 첨가하였다. 반응물을 0.5시간 동안 교반하고, 추가의 데스-마틴 페리오디난 (8 mg)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고 약 10% NaOH 수용액 및 디클로로메탄을 첨가하여 켄칭하였다. 층을 분리하고, 유기 층을 약 10% NaOH 수용액으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 고체로 농축하였고, 이를 추가 정제 없이 후속 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 801.3 (M+H)+.
1.1.16 2-(2-(2-((2-((3-((4-(6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-2-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)아미노)에톡시)에톡시)아세트산
메탄올 (1.3 mL) 중 2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)아세트산 (22 mg) 및 실시예 1.1.15 (100 mg)의 주위 온도 용액에 MP-CNBH3 (65 mg, 2.49 mmol/g 로딩)을 첨가하였다. 반응물을 하룻밤 가볍게 진탕하고 0.4 마이크로미터 필터를 통해 여과하였다. 조질(crude) 물질을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 948.3 (M+H)+.
1.1.17 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((2-(2-(카르복시메톡시)에톡시)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
디클로로메탄 (1 mL) 중 실시예 1.1.16 (15 mg)의 주위 온도 용액을 트리플루오로아세트산 (1 mL)에 첨가하였다. 반응물을 16시간 동안 교반하고 이어서 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.70 (bs, 2H), 8.29 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.537.42 (m, 3H), 7.407.32 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (bs, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.90 (t, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.68 (t, 2H), 3.633.54 (m, 6H), 3.173.04 (m, 4H), 3.00 (t, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.451.40 (m, 2H), 1.361.20 (m, 4H), 1.210.96 (m, 7H), 0.910.81 (m, 6H). MS (ESI) m/e 892.3 (M+H)+.
1.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.02)의 합성
1.2.1 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
아세토니트릴 (30 mL) 중 실시예 1.1.11 (2.25 g) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)(205 mg)의 용액에 트리에틸아민 (3 mL) 및 피나콜보란 (2 mL)을 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 환류에서 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헥산 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.2.2 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
테트라히드로푸란 (30 mL) 및 물 (10 mL) 중 실시예 1.2.1 (2.25 g)의 용액에 실시예 1.1.6 (2.0 g), 1,3,5,7-테트라메틸-6-페닐-2,4,8-트리옥사-6-포스파아다만탄 (329 mg), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (206 mg) 및 제삼인산칼륨 (4.78 g)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 환류시키고, 냉각하고, 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하였다. 생성된 혼합물을 물 및 염수로 세척하고, 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트 후에 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.2.3 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3,5-디메틸-7-(2-((메틸술포닐)옥시)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
빙조(bath) 내의 디클로로메탄 (100 mL) 중 실시예 1.2.2 (3.32 g)의 차가운 용액에 순차적으로 트리에틸아민 (3 mL) 및 메탄술포닐 클로라이드 (1.1 g)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.2.4 메틸 2-(5-(1-((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (120 mL) 중 실시예 1.2.3 (16.5 g)의 용액에 소듐 아지드 (4.22 g)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 가열하고, 냉각하고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.2.5 2-(5-(1-((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산
테트라히드로푸란 (60 mL), 메탄올 (30 mL) 및 물 (30 mL)의 혼합물 중 실시예 1.2.4 (10 g)의 용액에 수산화리튬 일수화물 (1.2g)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하고 2% HCl 수용액으로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 (800 mL) 중에 용해시키고, 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.2.6 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트
N,N-디메틸포름아미드 (20 mL) 중 실시예 1.2.5 (10 g), 벤조[d]티아졸-2-아민 (3.24 g), 플루오로-N,N,N',N'-테트라메틸포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트 (5.69 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (5.57 g)의 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 가열하고, 냉각하고 에틸 아세테이트로 희석하였다. 생성된 혼합물을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 디클로로메탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.2.7 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트
테트라히드로푸란 (30 mL) 중 실시예 1.2.6 (2.0 g)의 용액에 Pd/C (10%, 200 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 수소 분위기 하에서 하룻밤 교반하였다. 불용성 물질을 여과하여 제거하고, 여과액을 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.2.8 tert -부틸 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1 H )-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[(2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일)옥시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1 H -피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (8 mL) 중 실시예 1.2.7 (500 mg)의 용액에 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (334 mg)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하고 메틸아민 (0.3 mL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 20분 동안 교반하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 50 내지 100% 아세토니트릴로 용출시키는, Analogix 시스템을 사용하는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.2.9 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (5 mL) 중 실시예 1.2.8 (200 mg)을 트리플루오로아세트산 (2.5 mL)으로 하룻밤 처리하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (s, 1H), 8.32 (s, 2H), 8.02 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.40-7.49 (m, 2H), 7.31-7.39 (m, 2H), 7.27 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.94 (s, 2H), 3.87 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.15-3.25 (m, 2H), 3.03-3.13 (m, 2H), 3.00 (t, 2H), 2.79 (t, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.39 (s, 2H), 1.22-1.34 (m, 4H), 0.94-1.18 (m, 6H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 854.1 (M+H)+.
1.3 2-{[(2-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}에틸)술포닐]아미노}-2-데옥시-D-글루코피라노스 (화합물 W2.03)의 합성
1.3.1 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
디클로로메탄 (2.5 mL) 중 실시예 1.2.7 (200 mg)을 트리플루오로아세트산 (2.5 mL)으로 하룻밤 처리하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 746.2 (M+H)+.
1.3.2 (3R,4R,5S,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-(비닐술폰아미도)테트라히드로-2H-피란-2,4,5-트리일 트리아세테이트
0℃에서 디클로로메탄 (100 mL) 중 (3R,4R,5S,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-아미노테트라히드로-2H-피란-2,4,5-트리일 트리아세테이트 (7.7 g)의 현탁액에 2-클로로에탄술포닐 클로라이드 (4.34 g)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 트리에틸아민 (12.1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 실온까지 가온하고, 2일 동안 교반하였다. 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.3.3 N-((3R,4R,5S,6R)-2,4,5-트리히드록시-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-3-일)에텐술폰아미드
메탄올 (150 mL) 중 실시예 1.3.2 (6.74 g)의 용액에 트리에틸아민 (10 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 4일 동안 교반하고 농축하였다. 잔사를 메탄올 중에 용해시키고, 용액이 중성으로 될 때까지 Dowex HCR-5로 처리하였다. 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하였다. 잔사를, 메탄올로 용출시키는, Sephadex LH-20 (100 g)의 컬럼을 사용하는 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.3.4 2-{[(2-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}에틸)술포닐]아미노}-2-데옥시-D-글루코피라노스
N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 및 물 (0.3 mL) 중 실시예 1.3.1 (23.5 mg), 실시예 1.3.3 (42.4 mg), 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (55 L)의 혼합물을 5일 동안 교반하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.55-7.66 (m, 1H), 7.46-7.54 (m, 2H), 7.42-7.47 (m, 1H), 7.33-7.40 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 2.97-3.14 (m, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.44 (s, 2H), 1.22-1.39 (m, 4H), 0.97-1.20 (m, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1015.3 (M+H)+.
1.4 이 단락은 의도적으로 비워 두었다.
1.5 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(4-{[(3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일]메틸}벤질)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.05)의 합성
1.5.1 [4-((3S,4R,5R,6R)-3,4,5-트리스-메톡시메톡시-6-메톡시메톡시메틸-테트라히드로-피란-2-일메틸)-페닐]-메탄올
표제 화합물을 문헌[J. R. Walker et al., Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 3038-3048]에 따라 제조하였다.MS (ESI) m/e 478 (M+NH4)+.
1.5.2 4-((3S,4R,5R,6R)-3,4,5-트리스-메톡시메톡시-6-메톡시메톡시메틸-테트라히드로-피란-2-일메틸)-벤즈알데히드
실시예 1.5.1 (1.000 g)을 디클로로메탄 (25 mL) 중에 용해시키고, 데스-마틴 페리오디난 (1.013 g)을 첨가하였다. 용액을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 디에틸 에테르 (25 mL)로 희석하고 2 M 탄산나트륨 수용액 (25 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 디에틸 에테르로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후에, 용액을 감압 하에 농축하고, 헵탄 중 50 내지 70% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 476 (M+NH4)+.
1.5.3 아세트산 (2R,3R,4R,5S)-3,4,5-트리아세톡시-6-(4-포르밀-벤질)-테트라히드로-피란-2-일메틸 에스테르
실시예 1.5.2 (660 mg)를 메탄올 (145 mL) 중에 용해시켰다. 6 M 염산 (8 mL)을 첨가하고, 용액을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 에틸 아세테이트와 함께 3회 공비시켰다. 이 물질을 진공 하에서 4일 동안 건조시켰다. 이 물질을 N,N-디메틸포름아미드 (50 mL) 중에 용해시켰다. 아세트산 무수물 (12 mL), 피리딘 (6 mL), 및 N,N-디메틸피리딘-4-아민 (10 mg)을 순차적으로 첨가하고, 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 물 (150 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (50 mL)로 3회 추출하였다. 유기물을 합하고, 물로 세척하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후에, 용액을 감압 하에 농축하고, 헵탄 중 40 내지 50% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 상에서의 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 제공하였다.
1.5.4 (2R,3R,4R,5S)-2-(아세톡시메틸)-6-(4-(((2-((3-((4-(6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-2-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)아미노)메틸)벤질)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
10분 동안 실온에서 디클로로메탄 (1 mL) 중에서 실시예 1.5.7 (40 mg) 및 실시예 1.5.3 (22.5 mg)을 교반하였다. 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (14 mg)를 첨가하고, 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이 물질을, 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 용출시키는, 실리카겔 상에서의 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1236 (M+H)+.
1.5.5 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1 H )-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(4-{[(3 R ,4 R ,5 S ,6 R )-3,4,5-트리히드록시-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2 H -피란-2-일]메틸}벤질)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1 H -피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.5.4 (68 mg)을 메탄올 (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 수산화리튬 수용액 (2M, 1 mL)을 첨가하고, 용액을 실온에서 4.5시간 동안 교반하였다. 아세트산 (0.1 mL)을 첨가하고, 용매를 진공 하에서 제거하였다. 이어서 이 물질을 트리플루오로아세트산 (2 mL) 중에 용해시키고 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 진공 하에서 농축하였다. 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는, 150 x 30 mm C18 컬럼을 갖는 Gilson PLC 2020을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (bs, 1H), 8.68 (bs, 2H), 8.04 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.51-7.43 (m, 3H), 7.39-7.24 (m, 6H), 6.96 (d, 1H), 5.23 (t, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.56 (d, 1H), 4.42 (dd, 1H), 4.11 (m, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.61-3.56 (m, 3H), 3.39 (dd, 1H), 3.22 (t, 1H), 3.15 (t, 1H), 3.09 (d, 1H), 3.01 (m, 6H), 2.89 (t, 1H), 2.60 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.43 (s, 2H), 1.30 (q, 4H), 1.14 (m, 4H), 1.03 (q, 2H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1012 (M+H)+.
1.6 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.06)의 합성
1.6.1 3-((2-((3-((4-(6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-2-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)아미노)프로판-1-술폰산
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 실시예 1.2.7 (100 mg), 1,2-옥사티올란 2,2-디옥시드 (13 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (19.07 L)의 혼합물을 50℃까지 하룻밤 가열하였다. 반응물을 냉각하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 HPLC (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 924.1 (M+H)+.
1.6.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (2.5 mL) 중 실시예 1.6.1 (40 mg)을 트리플루오로아세트산 (2.5 mL)으로 하룻밤 처리하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (s, 1H), 8.52 (s, 2H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.41-7.55 (m, 3H), 7.32-7.39 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.49-3.58 (m, 2H), 2.94-3.12 (m, 6H), 2.56-2.64 (m, 2H), 1.88-1.99 (m, 2H), 1.41 (s, 2H), 1.22-1.36 (m, 4H), 0.96-1.20 (m, 6H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 868.3 (M+H)+.
1.7 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2,3-디히드록시프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.07)의 합성
디클로로메탄 (3 mL) 중 실시예 1.2.7 (30 mg)의 용액에 2,3-디히드록시프로파날 (3.6 mg) 및 수지 상 NaCNBH3 (200 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 잔사를 디메틸 술폭시드/메탄올 (1:1, 3 mL) 중에 용해시키고, 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 8.27 (s, 2H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (t, 1H), 7.33-7.54 (m, 6H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 3H), 3.72-3.89 (m, 8H), 3.25-3.64 (m, 6H), 2.99-3.10 (m, 4H), 2.11 (s, 3H), 1.00-1.52 (m, 8H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 820.3 (M+H)+.
1.8 2-({[4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐]술포닐}아미노)-2-데옥시-베타-D-글루코피라노스 (화합물 W2.08)의 합성
1.8.1 (2R,3S,4S,5R,6S)-6-(아세톡시메틸)-3-(4-포르밀페닐술폰아미도)테트라히드로-2H-피란-2,4,5-트리일 트리아세테이트
4-포르밀벤젠-1-술포닐 클로라이드 (100 mg) 및 (2S,3R,4R,5S,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-아미노테트라히드로-2H-피란-2,4,5-트리일 트리아세테이트 히드로클로라이드 (563 mg)를 1,2-디클로로에탄 (4 mL)에 첨가하였다. N,N-디이소프로필에틸아민 (0.51 mL)을 첨가하고, 용액을 55℃에서에서 3일 동안 가열하였다. 용액을 감압 하에 농축하고, 헵탄 중 70% 에틸 아세테이트로 용출시키는, 실리카겔 상에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 이 물질을 아세톤 (4 mL) 중에 용해시켰다. 염산 (1 M, 4 mL)을 첨가하고, 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서 용액을 헵탄 중 70% 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후에, 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 514 (M+H)+.
1.8.2 (2R,3S,4S,5R,6S)-6-(아세톡시메틸)-3-(4-(((2-((3-((4-(6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-2-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)아미노)메틸)페닐술폰아미도)테트라히드로-2H-피란-2,4,5-트리일 트리아세테이트
실시예 1.5.4에서 실시예 1.5.3을 실시예 1.8.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1301 (M+H)+.
1.8.3 2-({[4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐]술포닐}아미노)-2-데옥시-베타-D-글루코피라노스
실시예 1.5.5에서 실시예 1.5.4를 실시예 1.8.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (bs, 1H), 8.87 (bs, 2H), 8.04 (d, 1H), 7.91 (d, 2H), 7.79 (d, 1H), 7.70-7.55 (m, 3H), 7.52-7.42 (m, 3H), 7.39-7.33 (m, 2H), 7.29 (m, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (bs, 2H), 4.85 (dd, 1H), 4.62-4.52 (m, 2H), 4.32 (m, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.70-3.35 (m, 10H), 3.02 (m, 4H), 2.91 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.44 (bs, 2H), 1.37-1.22 (m, 4H), 1.18-0.98 (m, 6H), 0.93-0.82 (m, 6H). MS (ESI) m/e 1075 (M+H)+.
1.9 8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-{6-카르복시-5-[1-({3-[2-({2-[1-(베타-D-글루코피라누로노실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]에틸}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-일}-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린 (화합물 W2.09)의 합성
1.9.1 (2R,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(2-히드록시에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
t-부탄올 (8 mL) 및 물 (4 mL) 중 (2R,3R,4S,5S,6S)-2-아지도-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (720 mg)의 용액에 부트-3-인-1-올 (140 mg), 황산구리(II) 오수화물 (5.0 mg) 및 아스코르브산나트륨 (40 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 20분간 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 430.2 (M+H)+.
1.9.2 (2S,3S,4S,5R,6R)-2-(메톡시카르보닐)-6-(4-(2-옥소에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
-78℃에서 디클로로메탄 (10 mL) 중 디메틸 술폭시드 (0.5 mL)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (0.2 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 20분간 -78℃에서 교반하고, 디클로로메탄 (10 mL) 중 (2R,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(2-히드록시에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (233 mg)의 용액을 주사기를 통해 첨가하였다. 20분 후에, 트리에틸아민 (1 mL)을 혼합물에 첨가하고, 온도가 실온까지 상승하게 두면서 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 조질 생성물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 429.2 (M+H)+.
1.9.3 8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-{6-카르복시-5-[1-({3-[2-({2-[1-(베타-D-글루코피라누로노실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]에틸}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-일}-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린
디클로로메탄 (10 mL) 중 실시예 1.3.1 (150 mg)의 용액에 실시예 1.9.2 (86 mg) 및 수지 상 NaBH3CN (2.49 mmol/g, 200 mg)을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 여과하고 농축하였다. 잔사를 테트라히드로푸란/메탄올/H2O (2:1:1, 12 mL) 중에 용해시키고 수산화리튬 일수화물 (50 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를, 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 8.48 (s, 2H), 8.20 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.32-7.53 (m, 5H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 5.66 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.00 (d, 1H), 3.76-3.92 (m, 6H), 3.22-3.26 (m, 2H), 2.96-3.15 (m, 8H), 2.10 (s, 3H), 0.99-1.52 (m, 14H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1028.3 (M+H)+.
1.10 3-[1-({3-[2-(2-{[4-(베타-D-알로피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.10)의 합성
1.10.1 2-(2-((3-((1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에톡시)에탄올
에탄-1,2-디올을 2,2'-옥시디에탄올로 대체하여 실시예 1.1.4에서와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 349.2 (M+H)+.
1.10.2 2-(2-((3,5-디메틸-7-((5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)아다만탄-1-일)옥시)에톡시)에탄올
실시예 1.1.4를 실시예 1.10.1로 대체하여 실시예 1.1.5에서와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 363.3 (M+H)+.
1.10.3 2-(2-((3-((4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에톡시)에탄올
실시예 1.1.5를 실시예 1.10.2로 대체하여 실시예 1.1.6에서와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 489.2 (M+H)+.
1.10.4 2-(2-((3-((4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에톡시)에틸 메탄술포네이트
디클로로메탄 (100 mL) 중 실시예 1.10.3 (6.16 g)의 냉각된 용액에 트리에틸아민 (4.21 g) 후에 메탄술포닐 클로라이드 (1.6 g)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 이어서 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (600 mL)로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 황산나트륨으로 건조시킨 후에, 용액을 여과하고 농축하고, 잔사를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 567.2 (M+H)+.
1.10.5 2-(2-((3-((4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에톡시)에탄아민
메탄올 중 7 N 암모니아 (15 mL) 중 실시예 1.10.4 (2.5 g)의 용액을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 100℃에서 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 (400 mL)로 희석하고 NaHSO3 수용액, 물 및 염수로 세척하였다. 황산나트륨으로 건조시킨 후에, 용액을 여과하고 농축하고, 잔사를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 488.2 (M+H)+.
1.10.6 tert-부틸 (2-(2-((3-((4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에톡시)에틸)카르바메이트
테트라히드로푸란 (30 mL) 중 실시예 1.10.5 (2.2 g)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트 (1.26 g) 및 4-디메틸아미노피리딘 (100 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하였다. 용액을 NaHCO3 포화 수용액, 물 (60 mL) 및 염수 (60 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 588.2 (M+H)+ .
1.10.7 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
실시예 1.1.6을 실시예 1.10.6으로 대체하여 실시예 1.2.2에서와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 828.5 (M+H)+.
1.10.8 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산
실시예 1.2.4를 실시예 1.10.7로 대체하여 실시예 1.2.5에서와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 814.5 (M+H)+.
1.10.10 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.2.5를 실시예 1.10.8로 대체하여 실시예 1.2.6에서와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 946.2 (M+H)+ .
1.10.11 3-(1-((3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 1.1.16을 실시예 1.10.9로 대체하여 실시예 1.1.17에서와 같이 표제 화합물을 제조하였다.
1.10.12 3-[1-({3-[2-(2-{[4-(베타-D-알로피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (1.5 mL) 중 실시예 1.10.10 (88 mg) 및 트리에틸아민 (0.04 mL)의 용액에 4-(((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤즈알데히드 (27.7 mg), 메탄올 (1 mL), MP-CNBH3 (2.49 mmol/g, 117 mg) 및 아세트산 (18 L)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 반응물을 여과하고, 여과액을 농축하였다. 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 7.99 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.40-7.50 (m, 2H), 7.29-7.39 (m, 6H), 6.96 (d, 2H), 6.76 (d, 1H), 5.11 (d, 2H), 4.92 (s, 2H), 3.83-3.96 (m, 4H), 3.77 (s, 2H), 3.60-3.72 (m, 4H), 3.01 (d, 2H), 2.80 (t, 2H), 2.09 (s, 3H), 0.98-1.32 (m, 14H), 0.82 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1058.3 (M+H)+.
1.11 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}에톡시)트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.11)의 합성
1.11.1 tert-부틸 3-(1-((3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트
실시예 1.10.9 (6.8 g)를 디클로로메탄 중 50% 트리플루오로아세트산 (10 mL) 중에 용해시키고 20분 동안 교반하고, 용매를 진공 하에서 제거하였다. 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 790.2(M+H)+.
1.11.2 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-(2-((2-(페녹시술포닐)에틸)아미노)에톡시)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
0℃에서 테트라히드로푸란 (3 mL) 중 실시예 1.11.1 (200 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (146 L)의 용액에 페닐 에텐술포네이트 (46 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 서서히 실온까지 가온하고, 하룻밤 교반하고, 농축하여, 표제 화합물을 제공하였다.
1.11.3 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-(2-((2-(페녹시술포닐)에틸)아미노)에톡시)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
디클로로메탄 (5 mL) 중 실시예 1.11.2 (100 mg)의 용액을 트리플루오로아세트산 (2.5 mL)으로 하룻밤 처리하고 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 974.9 (M+H)+.
1.11.4 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}에톡시)트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산
테트라히드로푸란 (3 mL) 및 메탄올 (2 mL) 중 실시예 1.11.3 (195 mg)의 용액에 1 M 수산화나트륨 수용액 (2 mL)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하고, NaOH 펠렛 (0.5 g)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 40℃에서 3시간 동안 가열하고, 냉각하고 농축하였다. 농축물을, 10 mM NH4OAc 수용액 중 10 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.41-7.51 (m, 3H), 7.32-7.39 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.88 (d, 1H), 4.93 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.60-3.66 (m, 4H), 3.13-3.19 (m, 2H), 3.05-3.10 (m, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.79 (t, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.34 (s, 2H), 1.26 (s, 4H), 0.96-1.22 (m, 6H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 898.2 (M+H)+.
1.12 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-포스포노에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.12)의 합성
1.12.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((2-(디에톡시포스포릴)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
테트라히드로푸란 (5 mL) 중 실시예 1.2.7 (307 mg)의 용액에 물 (2 mL) 중 디에틸 비닐포스포네이트 (176 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 3일 동안 교반하고, 몇 방울의 아세트산을 첨가하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 966.8 (M+H)+.
1.12.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-포스포노에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (2.5 mL) 중 실시예 1.12.1 (170 mg)의 용액에 브로모트리메틸실란 (82 L) 및 알릴트리메틸실란 (50.4 L)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 하룻밤 교반하고 물 (0.02 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 하룻밤 교반하고 농축하였다. 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.35 (s, 2H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.41-7.53 (m, 3H), 7.33-7.40 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.09 (s, 4H), 3.01 (t, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.85-2.00 (m, 2H), 1.43 (s, 2H), 1.19-1.37 (m, 4H), 1.14 (s, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (APCI) m/e 854.4 (M+H)+.
1.13 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.13)의 합성
1.13.1 2-({3-[(4-요오도-5-메틸-1 H -피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸 메탄술포네이트
디클로로메탄 (100 mL) 중 실시예 1.1.6 (6.16 g)의 냉각된 용액에 트리에틸아민 (4.21 g) 후에 메탄술포닐 클로라이드 (1.6 g)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (600 mL)로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 황산나트륨으로 건조시킨 후에, 용액을 여과하고 농축하고, 잔사를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 523.4 (M+H)+ .
1.13.2 1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-4-요오도-5-메틸-1H-피라졸
메탄올 중 2M 메틸아민 (15 mL) 중 실시예 1.13.1 (2.5 g)의 용액을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 100℃에서 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 (400 mL)로 희석하고 NaHSO3 수용액, 물 및 염수로 세척하였다. 황산나트륨으로 건조시킨 후에, 용액을 여과하고 농축하고, 잔사를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 458.4 (M+H)+.
1.13.3 tert -부틸 [2-({3-[(4-요오도-5-메틸-1 H -피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]메틸카르바메이트
테트라히드로푸란 (30 mL) 중 실시예 1.13.2 (2.2 g)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트 (1.26 g) 및 촉매량의 4-디메틸아미노피리딘을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하였다. 용액을 NaHCO3 포화 수용액, 물 (60 mL) 및 염수 (60 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 558.5 (M+H)+.
1.13.4 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7- 디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
테트라히드로푸란 (60 mL) 및 물 (20 mL) 중 실시예 1.2.1 (4.94 g)의 용액에 실시예 1.13.3 (5.57 g), 1,3,5,7-테트라메틸-8-테트라데실-2,4,6-트리옥사-8-포스파아다만탄 (412 mg), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (457 mg), 및 K3PO4 (11 g)를 첨가하고, 혼합물을 환류에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각하고 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 799.1 (M+H)+.
1.13.5 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7- 디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산
테트라히드로푸란 (60 mL), 메탄올 (30 mL) 및 물 (30 mL) 중 실시예 1.13.4 (10 g)의 용액에 수산화리튬 일수화물 (1.2 g)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 2% HCl 수용액으로 중화시키고 진공 하에서 농축하였다. 잔사를, 에틸 아세테이트 (800 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 785.1 (M+H)+.
1.13.6 tert -부틸 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1 H )-일]-3-{1-[(3-{2-[( tert -부톡시카르보닐)(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1 H -피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (20 mL) 중 실시예 1.13.5 (10 g)의 용액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (3.24 g), 플루오로-N,N,N',N'-테트라메틸포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트 (5.69 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (5.57 g)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (800 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발, 및 디클로로메탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는, 잔사의 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 915.5 (M+H)+.
1.13.7 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (20 mL) 중 실시예 1.13.6 (5 g)의 용액에 트리플루오로아세트산 (10 mL)을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 용매를 진공 하에서 증발시키고, 잔사를 디메틸 술폭시드/메탄올 (1:1, 10 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을, Analogix 시스템 및 C18 컬럼 (300 g)을 사용하고 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴 및 0.1% 트리플루오로아세트산으로 용출시키는 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.13.8 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
(R)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-술포프로판산 (0.020 g), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.045 mL) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 0.020 g)의 용액을 실온에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.75 mL) 중에서 함께 교반하였다. 30분 동안 교반한 후에, 실시예 1.13.7 (0.039 g)을 첨가하고, 반응물을 추가로 1시간 동안 교반하였다. 디에틸아민 (0.027 mL)을 반응물에 첨가하고 3시간 동안 교반을 계속하였다. 반응물을 물 (0.75 mL) 및 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)로 희석하고, 트리플루오로아세트산 (0.039 mL)으로 중화시키고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.89 (s, 1H), 8.11-8.02 (m, 4H), 7.84 (d, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.60-7.45 (m, 3H), 7.45-7.36 (m, 2H), 7.34 (d, 1H), 7.00 (dd, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.57-4.40 (m, 1H), 3.93 (t, 2H), 3.90-3.84 (m, 2H), 3.58-3.43 (m, 2H), 3.41-3.21 (m, 2H), 3.18-3.02 (m, 3H), 2.95-2.85 (m, 2H), 2.76 (td, 2H), 2.14 (d, 3H), 1.51-0.85 (m, 18H). MS (ESI) m/e 911.2 (M+H)+.
1.14 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.14)의 합성
1.14.1 디-tert-부틸 (3-히드록시프로필)포스포네이트
NaH (광유 중 60%, 400 mg)를 N,N-디메틸포름아미드 (30 mL) 중 디-tert-부틸포스포네이트 (1.93 g)에 첨가하고, 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. (3-브로모프로폭시)(tert-부틸)디메틸실란 (2.1 g)을 첨가하고, 반응물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 디에틸 에테르 (300 mL)로 희석하고, 용액을 물로 3회, 및 염수로 세척하고, 이어서 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 20 mL 테트라히드로푸란 중에 용해시키고, 테트라부틸 암모늄 플루오라이드 (TBAF, 테트라히드로푸란 중 1 M, 9 mL)를 첨가하였다. 용액을 20분 동안 교반하고, 이어서 pH 7 완충제 (50 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 디에틸 에테르 중에 용해시키고, 분리하고, 유기 층을 염수로 세척하고, 이어서 농축하였다. 조질 생성물을, 헵탄 중 10 내지 100% 에틸 아세테이트 후에, 에틸 아세테이트 중 5% 메탄올을 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여, 표제 화합물을 제공하였다.
1.14.2 디-tert-부틸 (3-옥소프로필)포스포네이트
디클로로메탄 (5 mL) 중에서 2시간 동안 실시예 1.14.1 (200 mg) 및 데스-마틴 페리오디난 (370 mg)을 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 1 M NaOH 수용액으로 2회, 및 염수로 세척하고, 이어서 농축하였다. 조질 생성물을, 헵탄 중 50 내지 100% 에틸 아세테이트 후에, 에틸 아세테이트 중 10% 메탄올을 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여, 표제 화합물을 제공하였다.
1.14.3 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((3-(디에톡시포스포릴)프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.10.10 및 4-(((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤즈알데히드를 각각 실시예 1.2.7 및 실시예 1.14.2로 대체하여 실시예 1.10.11에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (APCI) m/e 980.9 (M+H)+.
1.14.5 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.12.1을 실시예 1.14.3으로 대체하여 실시예 1.12.2에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.37 (s, 2H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.42-7.53 (m, 3H), 7.33-7.40 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.86-3.93 (m, 2H), 3.52-3.59 (m, 2H), 2.93-3.06 (m, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.71-1.89 (m, 2H), 1.53-1.65 (m, 2H), 1.43 (s, 2H), 1.23-1.37 (m, 4H), 0.96-1.19 (m, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (APCI) m/e 868.3 (M+H)+.
1.15 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.15)의 합성
(R)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-술포프로판산(0.050 g) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (0.049 g)의 용액을 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)에 용해시키고 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.102 mL)을 첨가하였다. 15분 동안 교반한 후에, 실시예 1.3.1 (0.100 g)을 첨가하고, 반응물을 추가로 3시간 동안 교반하였다. 디에틸아민 (0.061 mL)을 반응물에 첨가하고 교반을 하룻밤 계속하였다. 반응물을 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.090 mL)으로 중화시키고 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 및 물 (1 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (s, 1H), 8.63 (t, 1H), 8.15-8.01 (m, 4H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.56-7.41 (m, 3H), 7.40-7.33 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.08-3.97 (m, 1H), 3.89 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.42-3.31 (m, 2H), 3.28-3.17 (m, 1H), 3.16-3.06 (m, 1H), 3.01 (t, 2H), 2.97 (dd, 1H), 2.76 (dd, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.39 (s, 2H), 1.32-1.20 (m, 4H), 1.19-1.07 (m, 4H), 1.07-0.95 (m, 2H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 897.2 (M+H)+.
1.16 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}에톡시)트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.16)의 합성
1.16.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-(2-((3-(디-tert-부톡시포스포릴)프로필)아미노)에톡시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.10.10 (338 mg) 및 실시예 1.14.2 (120 mg)를 에탄올 (20 mL) 중에 용해시키고, 용액을 농축하였다. 잔사를 다시 에탄올 (20 mL) 중에 용해시키고 농축하였다. 이어서 잔사를 디클로로메탄 (10 mL) 중에 용해시키고 여기에 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (119 mg)를 첨가하고, 반응물을 하룻밤 교반하였다. 조질 혼합물을, 95:5 에틸 아세테이트/메탄올 중 1% 트리에틸아민을 사용하여, 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여, 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) 1080.3 (M+H)+.
1.16.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}에톡시)트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산
2일 동안 디클로로메탄 (3 mL) 및 트리플루오로아세트산 (3 mL) 중에서 실시예 1.16.1 (22 mg)을 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 40 g C18 컬럼을 사용하고 0.1% 트리플루오로아세트산/물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는 Biotage Isolera One (Biotage Isolera One) 시스템에서 역상으로 크로마토그래피하여 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.62 (bs, 1H), 8.10 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.54 (dd, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.02 (d, 1H), 5.02 (s, 2H), 3.94 (m, 2H), 3.97 (m, 2H), 3.68 (m, 2H), 3.55 (m, 2H), 3.15 (m, 1H), 3.09 (m, 4H), 2.55 (m, 4H), 2.15 (s, 3H), 1.86 (m, 1H), 1.66 (m, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.31 (m, 4H), 1.19 (m, 4H), 1.08 (m, 2H), 0.90 (s, 6H). MS (ESI) 912.2 (M+H)+.
1.17 3-{1-[(3-{2-[L-알파-아스파르틸(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.17)의 합성
1.17.1 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1 H )-일]-3-{1-[(3-{2-[{(2 S )-4- tert -부톡시-2-[( tert -부톡시카르보닐)아미노]-4-옥소부타노일}(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1 H -피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.13.7 (0.060 g), (S)-4-tert-부틸 1-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)숙시네이트 (0.034 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민의 용액을 디클로로메탄 (1 mL) 중에서 함께 교반하였다. 하룻밤 교반한 후에, 반응물을 실리카겔 상에 로딩하고 0.5 내지 5% 메탄올/디클로로메탄의 구배를 사용하여 용출시켜 표제 화합물을 제공하였다.
1.17.2 3-{1-[(3-{2-[L-알파-아스파르틸(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (1 mL) 중 실시예 1.17.1 (0.049 g)의 용액을 트리플루오로아세트산 (0.5 mL)으로 처리하고, 반응물을 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고, N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 및 물 (0.5 mL) 중에 용해시키고, 이어서, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 8.15 (d, 3H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.55-7.41 (m, 3H), 7.36 (td, 2H), 7.29 (d, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.55 (s, 1H), 3.92-3.86 (m, 2H), 3.60-3.47 (m, 2H), 3.47-3.37 (m, 2H), 3.32-3.21 (m, 1H), 3.09-2.97 (m, 4H), 2.92-2.72 (m, 3H), 2.67-2.53 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.46-0.94 (m, 12H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 875.2 (M+H)+.
1.18 6-{4-[({2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에틸}[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노)메틸]벤질}-2,6-언히드로-L-굴론산 (화합물 W2.18)의 합성
1.18.1 (2S,3S,4R,5S)-3,4,5-트리아세톡시-6-(4-브로모메틸-벤질)-테트라히드로-피란-2-카르복실산 메틸 에스테르
표제 화합물을 문헌[ J. R. Walker et al., Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 3038-3048]에 기재된 바와 같이 제조하였다. MS (ESI) m/e 518, 520 (M+NH4)+.
1.18.2 (2S,3S,4R,5S)-3,4,5-트리아세톡시-6-(4-포르밀-벤질)-테트라히드로-피란-2-카르복실산 메틸 에스테르
실시예 1.18.1 (75 mg) 및 피리딘 N-옥시드 (14 mg)를 아세토니트릴 (0.75 mL)에 첨가하였다. 이 용액에 산화은(I) (24 mg)을 첨가하고, 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 무수 황산나트륨 (5 mg)을 첨가하고, 용액을 5분 동안 교반하였다. 용액을 여과하고 농축하였다. 조질 물질을, 헵탄 중 50 내지 70% 에틸 아세테이트로 용출시키는, 실리카겔 상에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 제공하였다.
1.18.3 (3R,4S,5R,6R)-2-(4-(((2-((3-((4-(6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-2-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)아미노)메틸)벤질)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
실시예 1.5.4에서 실시예 1.5.3을 실시예 1.18.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1222 (M+H)+.
1.18.4 {2-[2-(2-옥소-에톡시)-에톡시]-에틸}-카르밤산 tert-부틸 에스테르
실시예 1.5.2에서 실시예 1.5.1을 {2-[2-(2-히드록시-에톡시)-에톡시]-에틸}-카르밤산 tert-부틸 에스테르로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다.
1.18.5 (3R,4S,5R,6R)-2-(4-(2-(2-((3-((4-(6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-2-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)-14,14-디메틸-12-옥소-5,8,13-트리옥사-2,11-디아자펜타데실)벤질)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
실시예 1.5.4에서 실시예 1.2.7을 실시예 1.18.3으로 대체하고 실시예 1.5.3을 실시예 1.18.4로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1453 (M+H)+.
1.18.6 6-{4-[({2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에틸}[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노)메틸]벤질}-2,6-언히드로-L-굴론산
실시예 1.5.5에서 실시예 1.5.4를 실시예 1.18.5로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.38 (bs, 1H), 8.05 (dd, 1H), 7.90-7.68 (m, 6H), 7.62 (m, 2H), 7.53-7.27 (m, 8H), 6.94 (d, 1H), 4.96 (bs, 1H), 4.38 (bs, 4H), 3.91-3.57 (m, 11H), 3.37-3.11 (m, 14H), 2.98 (m, 6H), 2.61 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.44 (bs, 2H), 1.26 (m, 4H), 1.18-0.90 (m, 6H), 0.87 (bs, 6H). MS (ESI) m/e 1157 (M+H)+.
1.19 4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐 헥소피라노스이두론산 (화합물 W2.19)의 합성
1.19.1 (2R,3S,4R,5R,6R)-2-(4-포르밀페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
아세토니트릴 (30 mL) 중 (2R,3R,4S,5S,6S)-2-브로모-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (2.42 g)의 용액에 산화은(I) (1.4 g) 및 4-히드록시벤즈알데히드 (620 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하고 여과하였다. 여과액을 농축하고, 잔사를, 헵탄 중 5 내지 50% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 439.2 (M+H)+.
1.19.2 4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐 헥소피라노스이두론산
테트라히드로푸란 (2 mL) 및 아세트산 (0.2 mL) 중 실시예 1.2.7 (36 mg)의 용액에 실시예 1.19.1 ( 21 mg) 후에 MgSO4 (60 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반한 후에 수지 상 NaBH3CN (153 mg)을 첨가하였다. 이어서 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 수산화리튬 일수화물 (20 mg)을 여과액에 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 트리플루오로아세트산으로 산성화시키고, 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 HPLC (Gilson 시스템)으로 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (s, 1H), 8.57-8.72 (m, 2H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.34-7.53 (m, 6H), 7.08 (t, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.10 (d, , 1H), 4.96 (s, 2H), 4.06-4.15 (m, 4H), 3.83-3.97 (m, 6H), 3.26-3.42 (m, 8H), 2.93-3.10 (m, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.43 (s, 2H), 1.24-1.38 (m, 6H), 0.97-1.16 (m, 4H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1028.3 (M+H)+.
1.20 6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-포스포노에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.20)의 합성
1.20.1 2-((3,5-디메틸-7-((5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)메틸)아다만탄-1-일)옥시)에탄올
아세토니트릴 (60 mL) 중 실시예 1.1.6 (9 g) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) 디클로로메탄 (827 mg)의 용액에 트리에틸아민 (10 mL) 및 피나콜보란 (6 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 환류에서 하룻밤 교반하고, 냉각하고 다음 단계에 직접 사용하였다. MS (ESI) m/e 445.4 (M+H)+.
1.20.2 tert-부틸 6-클로로-3-(1-((3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
테트라히드로푸란 (60 mL) 및 물 (30 mL) 중 tert-부틸 3-브로모-6-클로로피콜리네이트 (5.92 g)의 용액에 조질 실시예 1.20.1 (4.44 g), 1,3,5,7-테트라메틸-6-페닐-2,4,8-트리옥사-6-포스파아다만탄 (1.5 g), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (927 mg) 및 K3PO4(22 g)를 첨가하였다. 혼합물을 환류에서 하룻밤 교반하고, 냉각하고, 에틸 아세테이트 (800 mL)로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트 후에 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 531.1 (M+H)+.
1.20.3 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-클로로피콜리네이트
N,N-디메틸포름아미드 (20 mL) 중 실시예 1.20.2 (3.2 g)의 용액에 이미다졸 (0.62 g) 및 클로로 t-부틸디메틸실란 (1.37 g)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하고, 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 645.4 (M+H)+.
1.20.4 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)피콜리네이트
1,4-디옥산 (10 mL) 및 물 (5 mL) 중 7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린 (507 mg)의 용액에 실시예 1.20.3 (1.25 g), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)디클로라이드 (136 mg), 및 플루오르화세슘 (884 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파 합성기 (Biotage, Initiator)에서 20분 동안 120℃에서 가열하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트 후에 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 741.5 (M+H)+.
1.20.5 tert-부틸 6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)-3-(1-(3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
아세토니트릴 (10 mL) 중 비스(2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카르보네이트 (295 mg)의 현탁액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (173 mg)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 아세토니트릴 (10 mL) 중 실시예 1.20.4 (710 mg)의 용액을 첨가하고, 현탁액을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후에, 유기 층을 농축하고, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 917.2 (M+H)+.
1.20.6 tert-부틸 6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)-3-(1-((3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
테트라히드로푸란 (10 mL) 중 실시예 1.20.5 (1.4 g)의 용액에 테트라부틸 암모늄 플루오라이드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M, 6 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 803.4 (M+H)+.
1.20.7 tert-부틸 6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-((메틸술포닐)옥시)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (20 mL) 및 트리에틸아민 (2 mL) 중 실시예 1.20.6 (1.2 g)의 냉각된 (0℃) 용액에 메탄술포닐 클로라이드 (300 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 881.3 (M+H)+.
1.20.8 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)피콜리네이트
N,N-디메틸포름아미드 (20 mL) 중 실시예 1.20.7 (1.5 g)의 용액에 소듐 아지드 (331 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 48시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트 (20.0 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 디클로로메탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 828.4 (M+H)+.
1.20.9 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)피콜리네이트
테트라히드로푸란 (30 mL) 중 실시예 1.20.8 (1.5 g)의 용액에 Pd/C (10%, 200 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 수소 분위기 하에서 하룻밤 교반하였다. 반응물을 여과하고, 여과액을 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 802.4 (M+H)+.
1.20.10 tert-부틸 6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)-3-(1-((3-(2-((2-(디에톡시포스포릴)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.2.7을 실시예 1.20.9로 대체하여 실시예 1.12.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다.
1.20.11 6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-포스포노에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.12.1을 실시예 1.20.10으로 대체하여 실시예 1.12.2에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.40 (s, 2H), 8.02 (d, 1H), 7.74-7.89 (m, 3H), 7.47 (s, 2H), 7.38 (t, 1H), 7.30 (d, 1H), 7.23 (t, 1H), 3.96 (s, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.53-3.64 (m, 2H), 3.03-3.18 (m, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.87-2.02 (m, 4H), 1.46 (s, 2H), 1.26-1.38 (m, 4H), 1.12-1.23 (m, 4H), 0.99-1.11 (m, 2H), 0.89 (s, 6H). MS (ESI) m/e 854.1 (M+H)+.
1.21 6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.21)의 합성
1.21.1 tert-부틸 (2-((3,5-디메틸-7-((5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)메틸)아다만탄-1-일)옥시)에틸)(메틸)카르바메이트
1,4-디옥산 중 실시예 1.13.3 (1.2 g)의 용액에 비스(벤조니트릴)팔라듐(II) 클로라이드 (0.04 g), 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (0.937 mL) 및 트리에틸아민 (0.9 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 환류에서 하룻밤 가열하고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 (60 mL) 및 염수 (60 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.21.2 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-클로로피콜리네이트
실시예 1.1.11 및 실시예 1.1.8을 각각 tert-부틸 3-브로모-6-클로로피콜리네이트 및 실시예 1.21.1로 대체하여 실시예 1.1.12에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (APCI) m/e 643.9 (M+H)+.
1.21.3 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)피콜리네이트
1,4-디옥산 (12 mL) 및 물 (5 mL) 중 실시예 1.21.2 (480 mg), 7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린 (387 mg), 디클로로비스(트리페닐포스핀)-팔라듐(II) (78 mg) 및 플루오르화세슘 (340 mg)의 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 가열하였다. 반응물을 냉각하고 에틸 아세테이트로 희석하였다. 생성된 혼합물을 물 및 염수로 세척하고, 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 50% 에틸 아세테이트로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 740.4 (M+H)+.
1.21.4 tert-부틸 6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)-3-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
아세토니트릴 (5 mL) 중 벤조[d]티아졸-2-아민 (114 mg)의 용액에 비스(2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카르보네이트 (194 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 아세토니트릴 (5 mL) 중 실시예 1.21.3 (432 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 50% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.21.5 6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-(메틸아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
디클로로메탄 (5 mL) 중 실시예 1.2.4 (200 mg)를 트리플루오로아세트산 (2.5 mL)으로 하룻밤 처리하였다. 혼합물을 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.40 (s, 1H), 8.30 (s, 2H), 8.02 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.74-7.83 (m, 2H), 7.42-7.53 (m, 2H), 7.38 (t, 1H), 7.30 (d, 1H), 7.23 (t, 1H), 3.93-4.05 (m, 2H), 3.52-3.62 (m, 2H), 2.97-3.10 (m, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.56 (t, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.88-2.00 (m, 2H), 1.45 (s, 2H), 1.25-1.39 (m, 4H), 1.12-1.22 (m, 4H), 1.00-1.09 (m, 2H), 0.89 (s, 6H). MS (ESI) m/e 760.1 (M+H)+.
1.21.6 6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)-3-(1-((3-(2-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-N-메틸-3-술포프로판아미도)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (1.5 ml) 중 (R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-술포프로판산(70.9 mg) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 65 mg)를 빙조에서 냉각하고, N,N-디이소프로필에틸아민 (68.9 L)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 및 실온에서 8시간 동안 교반하였다. N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (60 L) 중 실시예 1.21.5 (100 mg)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 하룻밤 교반하고, 농축하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.21.7 6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (3 mL) 중 실시예 1.21.6 (80 mg)을 트리플루오로아세트산 (1.5 mL)으로 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 4 mM 암모늄 아세테이트 수용액 중 0 내지 50% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공한다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.57 (s, 1H), 7.59-7.67 (m, 3H), 7.54 (d, 1H), 7.46-7.51 (m, 1H), 7.30 (d, 1H), 7.08-7.17 (m, 2H), 6.90 (t, 1H), 3.91-4.10 (m, 3H), 3.84 (s, 2H), 3.04 (s, 2H), 2.75-2.83 (m, 4H), 2.59-2.70 (m, 2H), 2.27-2.39 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.81-1.93 (m, 2H), 1.74 (s, 9H), 1.42 (s, 2H), 0.96-1.33 (m, 10H), 0.86 (s, 3H). MS (ESI) m/e 909.2 (M-H)-.
1.22 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.22)의 합성
1.22.1 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트
실시예 1.2.5 (560 mg) 및 티아졸로[5,4-b]피리딘-2-아민 (135 mg)을 디클로로메탄 (12 mL) 중에 용해시켰다. N,N-디메틸피리딘-4-아민 (165 mg) 및 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드 (260 mg)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 조질 잔사를 65/35 디클로로메탄/에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 829.1 (M+H)+.
1.22.2 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트
실시예 1.2.7에서 실시예 1.2.6을 실시예 1.22.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 803.2 (M+H)+.
1.22.3 tert -부틸 3-[1-({3,5-디메틸-7-[(2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일)옥시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1 H -피라졸-4-일]-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4- b ]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1 H )-일]피리딘-2-카르복실레이트
디클로로메탄 (1 mL) 중 실시예 1.22.2 (70 mg) 및 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (48 mg)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.06 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고, 조질 잔사를, 디클로로메탄 중 1 내지 4% 메탄올의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1249.2 (M+H)+.
1.22.4 2-((2-((3-((4-(2-(tert-부톡시카르보닐)-6-(8-(티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)아미노)에탄술폰산
테트라히드로푸란 (0.25 mL) 중 실시예 1.22.3 (70 mg)의 용액을 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (60 μL, 테트라히드로푸란 중 1.0M 용액)에 첨가하고, 반응물을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 반응물을 농축하고, 잔사를, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다. MS (ESI) m/e 911.1 (M+H)+.
1.22.5 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.9에서 실시예 1.2.8을 실시예 1.22.4로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.00 (s, 1H), 8.52 (dd, 2H), 8.33 (br s, 2H), 8.16 (dd, 1H), 7.62 (m, 1H), 7.53 (m, 2H), 7.45 (d, 1H), 7.38 (m, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.98 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.88 (m, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.54 (m, 2H), 3.22 (m, 2H), 3.10 (m, 2H), 3.02 (t, 2H), 2.80 (t, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.41 (s, 2H), 1.28 (m, 4H), 1.14 (m, 4H), 1.02 (m, 2H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 855.2 (M+H)+.
1.23 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.23)의 합성
1.23.1 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트
실시예 1.22.1에서 티아졸로[5,4-b]피리딘-2-아민을 티아졸로[4,5-b]피리딘-2-아민으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 855.2 (M+H)+.
1.23.2 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트
실시예 1.2.7에서 실시예 1.2.6을 실시예 1.23.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 803.2 (M+H)+.
1.23.3 tert -부틸 3-[1-({3,5-디메틸-7-[(2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일)옥시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1 H -피라졸-4-일]-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5- b ]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1 H )-일]피리딘-2-카르복실레이트
실시예 1.22.3에서 실시예 1.22.2를 실시예 1.23.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1249.2 (M+H)+.
1.23.4 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.9에서 실시예 1.2.8을 실시예 1.23.3으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.20 (br s, 1H), 8.61 (dd, 1H), 8.56 (dd, 1H), 8.33 (br s, 2H), 7.56 (d, 1H) 7.52 (d, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.39 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.98 (d, 1H), 4.98 (s, 2H), 3.88 (m, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.54 (m, 2H), 3.22 (m, 2H), 3.10 (m, 2H), 3.02 (t, 2H), 2.80 (t, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.41 (s, 2H), 1.30 (m, 4H), 1.12 (m, 4H), 1.02 (m, 2H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 855.1 (M+H)+.
1.24 6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.24)의 합성
1.24.1 tert -부틸 6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[(2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일)옥시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1 H -피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
실시예 1.2.7을 실시예 1.20.9로 대체하여 실시예 1.2.8에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다.
1.24.2 6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.8을 실시예 1.24.1로 대체하여 실시예 1.2.9에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.26-8.46 (m, 3H), 8.02 (d, 1H), 7.89 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.75-7.79 (m, 1H), 7.47 (s, 2H), 7.37 (t, 1H), 7.30 (d, 1H), 7.22 (t, 1H), 3.96 (s, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.54-3.61 (m, 2H), 3.18-3.29 (m, 2H), 3.07-3.15 (m, 2H), 2.78-2.92 (m, 4H), 2.23 (s, 3H), 1.87-2.02 (m, 2H), 1.44 (s, 2H), 1.32 (q, 4H), 1.12-1.25 (m, 4H), 1.00-1.11 (m, 2H), 0.88 (s, 6H). MS (ESI) m/e 854.0 (M+H)+.
1.25 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (W2.25)의 합성
1.25.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디에틸 비닐포스포네이트를 tert-부틸 아크릴레이트로 대체하여 실시예 1.12.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (APCI) m/e 930.6 (M+H)+.
1.25.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.6.1을 실시예 1.25.1로 대체하여 실시예 1.6.2에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.03 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.39-7.50 (m, 2H), 7.32-7.38 (m, 3H), 7.23 (s, 1H), 6.73 (d, 1H), 4.88 (s, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 2.99 (t, 2H), 2.86-2.93 (m, 2H), 2.50-2.58 (m, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.35 (d, 2H), 1.01-1.30 (m, 10H), 0.86 (s, 6H). MS (APCI) m/e 819.0 (M+H)+.
1.26 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.26)의 합성
1.26.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-(((1r,3r)-3-(2-((1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실온에서 디클로로메탄 (0.5 mL) 중에서 실시예 1.2.7 (0.020 g), tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (4.79 mg) 및 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (7 mg)의 용액을 교반하였다. 반응물을 하룻밤 교반하고, 디클로로메탄 중 0 내지 10% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 워크업(workup) 없이 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ELSD) m/e 985.4 (M+H)+.
1.26.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (1 mL) 중 실시예 1.26.1 (0.108 g), 실시예 1.14.2 (0.030 g) 및 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (0.035 g)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 트리플루오로아세트산 (1 mL)을 반응물에 첨가하고, 교반을 하룻밤 계속하였다. 반응물을 농축하고, N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 및 물 (0.5 mL) 중에 용해시키고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.83 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.04 (d, 2H), 7.80 (d, 2H), 7.63 (d, 2H), 7.56-7.42 (m, 5H), 7.37 (tt, 3H), 7.30 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.44 (d, 6H), 3.31-3.16 (m, 6H), 3.09-2.98 (m, 2H), 2.98-2.85 (m, 1H), 2.18 (d, 2H), 2.10 (s, 3H), 2.00-1.74 (m, 4H), 1.71-1.57 (m, 2H), 1.51-0.97 (m, 12H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 951.2 (M+H)+.
1.27 3-{1-[(3-{2-[D-알파-아스파르틸(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.27)의 합성
1.27.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-(메틸아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.10.9를 실시예 1.13.6으로 대체하여 실시예 1.11.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다.
1.27.2 3-{1-[(3-{2-[D-알파-아스파르틸(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (1 mL) 중 실시예 1.27.1 (0.074 g), 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로포스페이트(V) (0.038 g), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.048 mL) 및 (R)-4-(tert-부톡시)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-4-옥소부탄산 (0.029 g)의 용액을 2시간 동안 교반하였다. 트리플루오로아세트산 (0.5 mL)을 첨가하고, 교반을 하룻밤 계속하였다. 반응물을 농축하고, N,N-디메틸포름아미드 (1.5 mL) 및 물 (0.5 mL) 중에 용해시키고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.88 (s, 1H), 8.16 (s, 3H), 8.04 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.55-7.42 (m, 3H), 7.41-7.33 (m, 2H), 7.33-7.27 (m, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.63-4.49 (m, 1H), 3.89 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.61-3.37 (m, 4H), 3.10-2.97 (m, 4H), 2.89-2.73 (m, 2H), 2.67-2.52 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.45-0.95 (m, 12H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 875.3 (M+H)+.
1.28 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[1-(카르복시메틸)피페리딘-4-일]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.28)의 합성
실온에서 디클로로메탄 (0.5 mL) 중에서 실시예 1.2.7 (0.055 g,), tert-부틸 2-(4-옥소피페리딘-1-일)아세테이트 (0.014 g) 및 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (0.019 g)의 용액을 교반하였다. 2시간 동안 교반 후에, 트리플루오로아세트산 (0.5 mL)을 반응물에 첨가하고, 교반을 하룻밤 계속하였다. 반응물을 농축하고, N,N-디메틸포름아미드 (1.5 mL) 및 물 (0.5 mL) 중에 용해시키고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 8.80 (s, 2H), 8.03 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.55-7.41 (m, 3H), 7.36 (q, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.07 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.66-3.55 (m, 4H), 3.30 (s, 1H), 3.08 (s, 4H), 3.02 (t, 2H), 2.22 (d, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.97-1.78 (m, 2H), 1.44 (s, 2H), 1.31 (q, 4H), 1.20-0.96 (m, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 887.3 (M+H)+.
1.29 N-[(5S)-5-아미노-6-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)아미노}-6-옥소헥실]-N,N-디메틸메탄아미늄 (화합물 W2.29)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 Fmoc-N-ε-(트리메틸)-L-리신 히드로클로라이드 (0.032 g), 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로포스페이트(V) (0.028 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.034 mL)의 용액을 5분 동안 교반하였다. 반응물을 실시예 1.13.7 (0.050 g)에 첨가하고, 교반을 실온에서 하룻밤 계속하였다. 디에틸아민 (0.069 mL)을 반응물에 첨가하고, 교반을 추가로 2시간 동안 계속하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL), 물 (0.5 mL), 및 트리플루오로아세트산 (0.101 mL)으로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.87 (s, 1H), 8.13 (s, 3H), 8.04 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.54-7.42 (m, 3H), 7.42-7.34 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.42-4.24 (m, 1H), 3.89 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.29-3.16 (m, 2H), 3.08-3.00 (m, 15H), 2.87 (s, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.84-1.60 (m, 4H), 1.42-0.97 (m, 15H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 930.3 (M+H)+.
1.30 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[피페리딘-4-일(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.30)의 합성
1.30.1 tert-부틸 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-({13-[1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일]-2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일}옥시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실레이트
디클로로메탄 (1 mL) 중 실시예 1.2.8 (0.111 g), tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (0.021 g) 및 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (0.028 g)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 아세트산 (7.63 L)을 첨가하고, 교반을 하룻밤 계속하였다. 추가의 tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (0.021 g), 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (0.028 g) 및 아세트산 (8 L)을 반응물에 첨가하고, 교반을 추가로 4시간 동안 계속하였다. 반응물을 실리카겔 상에 직접 로딩하고, 디클로로메탄 중 0.5 내지 4% 메탄올의 구배로 용출시켜 표제 화합물을 제공하였다.
1.30.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[피페리딘-4-일(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (1 mL) 중 실시예 1.30.1 (0.078 g)의 용액에 트리플루오로아세트산 (0.5 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고 N,N-디메틸포름아미드 (1.5 mL) 및 물 (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.89 (s, 1H), 9.31 (s, 1H), 8.75 (d, 1H), 8.36-8.19 (m, 1H), 8.08 (d, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.55-7.45 (m, 2H), 7.40 (td, 2H), 7.34 (s, 1H), 6.99 (d, 1H), 5.00 (s, 2H), 3.93 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.49 (d, 6H), 3.39-3.31 (m, 2H), 3.01 (m, 6H), 2.15 (s, 6H), 1.94 (s, 2H), 1.58-0.99 (m, 12H), 0.91 (s, 6H). MS (ESI) m/e 937.3 (M+H)+.
1.31 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-포스포노프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.31)의 합성
1.31.1 tert-부틸 8-브로모-5-히드록시-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (150 mL) 중 tert-부틸 5-히드록시-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (9 g)의 용액에 N-브로모숙신이미드 (6.43 g)를 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하고 물 (200 mL)로 켄칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 증발시켜 표제 화합물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS(ESI) m/e 329.2 (M+H)+.
1.31.2 tert-부틸 5-(벤질옥시)-8-브로모-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트
아세톤 (200 mL) 중 실시예 1.31.1 (11.8 g)의 용액에 벤질 브로마이드 (7.42 g) 및 K2CO3(5 g)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 (600 mL)와 물 (200 mL) 사이에서 분배하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 10% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 418.1 (M+H)+.
1.31.3 2-tert-부틸 8-메틸 5-(벤질옥시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2,8(1H)-디카르복실레이트
500 mL 스테인리스 강 압력 반응기에서 실시예 1.31.2 (10.8 g) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (0.48 g)에 메탄올 (100 mL) 및 트리에틸아민 (9.15 mL)을 첨가하였다. 용기에 아르곤을 수회 살포하였다. 반응기를 일산화탄소로 가압하고 60 psi의 일산화탄소 하에서 2시간 동안 100℃에서 교반하였다. 냉각 후에, 조질 반응 혼합물을 진공 하에 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트 (500 mL) 및 물 (200 mL)에 첨가하였다. 유기 층을 물 및 염수로 추가로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 10 내지 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 398.1 (M+H)+.
1.31.4 메틸 5-(벤질옥시)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트 히드로클로라이드
테트라히드로푸란 (20 mL) 중 실시예 1.31.3 (3.78 g)의 용액에 1,4-디옥산 중 4N HCl (20 mL)을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축하여 표제 화합물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS(ESI) m/e 298.1 (M+H)+.
1.31.5 메틸 5-(벤질옥시)-2-(5-브로모-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
디메틸 술폭시드 (50 mL) 중 실시예 1.31.4 (3.03 g)의 용액에 실시예 1.1.10 (2.52 g) 및 트리에틸아민 (3.8 mL)을 첨가하고, 혼합물을 질소 하에 하룻밤 60℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 553.1 (M+H)+.
1.31.6 tert-부틸 (2-((3,5-디메틸-7-((5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)메틸)아다만탄-1-일)옥시)에틸)(메틸)카르바메이트
아세토니트릴 (30 mL) 중 실시예 1.13.3 (2.6 g) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) 디클로로메탄 (190 mg)의 용액에 트리에틸아민 (2.0 mL) 및 피나콜보란 (1.4 mL)을 첨가하고, 혼합물을 환류에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 워크업 없이 다음 반응에 직접 사용하였다. MS (ESI) m/e 558.4 (M+H)+.
1.31.7 메틸 5-(벤질옥시)-2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
테트라히드로푸란 (40 mL) 및 물 (20 mL) 중 실시예 1.31.5 (2.58 g)의 용액에 실시예 1.31.6 (2.66 g), 1,3,5,7-테트라메틸-6-페닐-2,4,8-트리옥사-6-포스파아다만탄 (341 mg), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (214 mg), 및 K3PO4 (4.95 g)를 첨가하고, 혼합물을 환류에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 디클로로메탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 904.5 (M+H)+.
1.31.8 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-5-히드록시-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
250 mL 스테인리스 강 압력병에서 Pd(OH)2 (0.6 g, Degussa #E101NE/W, 탄소 상 20%, 49% 물 함량)에 테트라히드로푸란 (60 mL) 중 실시예 1.31.7 (3.0 g)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 30 psi의 수소 가스 하에 16시간 동안 진탕하였다. 혼합물을 나일론 막을 통해 여과하고, 용매를 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 815.1(M+H)+.
1.31.9 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-5-(3-(디-tert-부톡시포스포릴)프로폭시)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
테트라히드로푸란 (10 mL) 중 실시예 1.31.8 (163 mg)의 용액에 실시예 1.14.1 (50.5 mg), 트리페닐포스핀 (52.5 mg) 및 디-tert-부틸아조디카르복실레이트 (46.2 mg)를 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트 후에 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1049.2 (M+H)+.
1.31.10 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-5-(3-(디-tert-부톡시포스포릴)프로폭시)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산
테트라히드로푸란 (20 mL), 메탄올 (10 mL) 및 물 (10 mL) 중 실시예 1.31.9 (3 g)의 용액에 수산화리튬 일수화물 (30 mg)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 2% HCl 수용액으로 중화시키고 진공 하에서 농축하였다. 잔사를, 에틸 아세테이트 (800 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1034.5 (M+H)+.
1.31.11 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-포스포노프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 실시예 1.31.10 (207 mg)의 용액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (45.1 Mg, 0.3 mmol), 플루오로-N,N,N',N'-테트라메틸포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트 (79 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (150 mg)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트 후에 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 농축 후에, 이 물질을 디클로로메탄과 트리플루오로아세트산 (1:1, 6 mL)의 혼합물 중에 용해시키고 실온에서 하룻밤 정치시켰다. 용매를 증발시키고, 잔사를 디메틸 술폭시드/메탄올 (1:1, 9 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (501 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.27 (s, 2H), 8.02 (d, 1H), 7.76 (dd, 2H), 7.43-7.56 (m, 2H), 7.32-7.37 (m, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.00 (dd, 2H), 5.02 (s, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.88-3.93 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.50-3.59 (m, 4H), 2.95-3.08 (m, 2H), 2.78-2.87 (m, 2H), 2.51-2.55 (m, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.90-2.01 (m, 2H), 1.65-1.75 (m, 2H), 1.41 (s, 2H), 1.22-1.36 (m, 6H), 0.98-1.18 (m, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 898.2 (M+H)+.
1.32 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[N-(2-카르복시에틸)-L-알파-아스파르틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.32)의 합성
1.32.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((S)-4-(tert-부톡시)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-4-옥소부탄아미도)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 (S)-4-(tert-부톡시)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-4-옥소부탄산 (136 mg) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 179 mg)의 차가운 (0℃) 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (165 L)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하고, N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 실시예 1.2.7 (252 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 50 내지 100% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.32.2 3-(1-((3-(2-((S)-2-아미노-3-카르복시프로판아미도)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
디클로로메탄 (3 mL) 중 실시예 1.32.1 (100 mg)을 트리플루오로아세트산 (2.5 mL)으로 하룻밤 처리하였다. 반응 혼합물을 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.32.3 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((S)-2-((3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)아미노)-3-카르복시프로판아미도)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (1.5 mL) 중 실시예 1.32.2 (102 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.21 mL)의 혼합물에 tert-부틸 아크릴레이트 (80 mg) 및 물 (1.5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 24시간 동안 가열하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 989.1 (M+H)+.
1.32.4 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[N-(2-카르복시에틸)-L-알파-아스파르틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산
실시예 1.6.1을 실시예 1.32.3으로 대체하여 실시예 1.6.2에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (s, 3H), 8.62-9.21 (m, 2H), 8.52 (t, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.42-7.53 (m, 3H), 7.33-7.41 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.04-4.19 (m, 1H), 3.89 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.32-3.41 (m, 2H), 3.16-3.27 (m, 2H), 3.10 (t, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.83 (d, 2H), 2.66 (t, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.39 (s, 2H), 1.20-1.32 (m, 4H), 0.94-1.16 (m, 6H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 933.2 (M+H)+.
1.33 3-{1-[(3-{2-[(2-아미노에틸)(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.33)의 합성
1.33.1 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에틸)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
실시예 1.2.9 (188 mg), tert-부틸 (2-옥소에틸)카르바메이트 (70.1 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (384 L)의 용액에 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (140 mg)를 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. NaCNBH3 (13.83 mg)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 메탄올 (1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.33.2 3-{1-[(3-{2-[(2-아미노에틸)(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 1.6.1을 실시예 1.33.1로 대체하여 실시예 1.6.2에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.87 (s, 2H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.41-7.56 (m, 3H), 7.33-7.40 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.29-3.40 (m, 4H), 3.19 (s, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.94 (t, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.43 (s, 2H), 1.25-1.37 (m, 4H), 0.98-1.19 (m, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 897.2 (M+H)+.
1.34 6-[5-(2-아미노에톡시)-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.34)의 합성
1.34.1 메틸 5-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)에톡시)-2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
테트라히드로푸란 (9 mL) 중 실시예 1.31.8 (500 mg), 벤질 (2-히드록시에틸)카르바메이트 (180 mg) 및 트리페닐 포스핀 (242 mg)의 혼합물에 (E)-디-tert-부틸 디아젠-1,2-디카르복실레이트 (212 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 50 내지 100% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 991.1 (M+H)+.
1.34.2 5-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)에톡시)-2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산
테트라히드로푸란 (10 mL) 및 메탄올 (5 mL) 중 실시예 1.34.1 (480 mg)의 용액에 1 M 수산화리튬 (1.94 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 하룻밤 가열하고, 냉각하고, 10% HCl 수용액으로 pH 3으로 산성화시키고, 농축하였다. 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 40 내지 99% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 977.4 (M+H)+.
1.34.3 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-5-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)에톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 실시예 1.34.2 (245 mg), 벤조[d]티아졸-2-아민 (151 mg) 및 플루오로-N,N,N',N'-테트라메틸포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트 (TFFH) (132 mg)의 혼합물에에 N,N-디이소프로필에틸아민 (876 L)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 24시간 동안 가열하고, 냉각하고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 0 내지 80% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 1109.5 (M+H)+.
1.34.4 6-[5-(2-아미노에톡시)-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (0.5 mL) 중 실시예 1.34.3 (100 mg)을 트리플루오로아세트산 (10 mL)으로 하룻밤 처리하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.75 (s, 2H), 8.27 (s, 2H), 7.89-8.09 (m, 4H), 7.77 (s, 2H), 7.44-7.53 (m, 2H), 7.35 (t, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.02 (dd, 2H), 5.02 (s, 2H), 4.27 (t, 2H), 3.87-3.97 (m, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.50-3.58 (m, 2H), 3.00 (s, 2H), 2.88-2.96 (m, 2H), 2.52-2.60 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.42 (s, 2H), 1.23-1.36 (m, 4H), 0.98-1.19 (m, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 819.3 (M+H)+.
1.35 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.35)의 합성
1.35.1 tert-부틸 6-클로로-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-옥소에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
-78℃에서 디클로로메탄 (20 mL) 중 옥살릴 클로라이드 (8 mL, 디클로로메탄 중 2.0 M)의 용액에, 디클로로메탄 (10 mL) 중 디메틸 술폭시드 (1 mL)를 20분에 걸쳐 적가하였다. 용액을 30분 동안 아르곤 하에서 교반하고, 디클로로메탄 (30 mL) 중의 용액으로서의 실시예 1.20.2 (3.8 g)를 10분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 추가로 60분 동안 교반하였다. 트리에틸아민 (2 mL)을 -78℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 60분 동안 교반하였다. 냉각조를 제거하고, 반응물을 하룻밤 실온까지 가온되게 두었다. 물 (60 mL)을 첨가하였다. 수성 층을 1% HCl 수용액으로 산성화시키고 디클로로메탄으로 추출하였다. 합한 유기 층을 1% HCl 수용액, NaHCO3 수용액, 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 527.9 (M+H)+.
1.35.2 2,2,2-트리플루오로-1-(p-톨릴)에틸 3-요오도프로판-1-술포네이트
표제 화합물을 문헌[J. Org. Chem., 2013, 78, 711-716]에 보고된 절차에 따라 제조하였다.
1.35.3 2,2,2-트리플루오로-1-(p-톨릴)에틸 3-아미노프로판-1-술포네이트
메탄올 중 7 N 암모니아 (20 mL) 중 실시예 1.35.2 (2.0 g)의 용액을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 45분 동안 80℃까지 가열하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 (300 mL) 중에 용해시켰다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여, 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 312.23 (M+H)+.
1.35.4 tert-부틸 6-클로로-3-(1-(((3,5-디메틸-7-(2-((3-((2,2,2-트리플루오로-1-(p-톨릴)에톡시)술포닐)프로필)아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로에탄 (30 mL) 중 실시예 1.35.3 (1.96 g)의 용액에 실시예 1.35.1 (3.33 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 메탄올 (8 mL) 중 NaBH4 (1.2 g)의 현탁액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하였다. 유기 층을 2N NaOH 수용액, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 테트라히드로푸란 (30 mL) 중에 용해시키고, 디-tert-부틸 디카르보네이트 (2 g)를 첨가한 후에 촉매량의 4-디메틸아미노피리딘을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 924,42 (M+H)+.
1.35.5 7-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(3-((2,2,2-트리플루오로-1-(p-톨릴)에톡시)술포닐)프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1-나프토산
1,4-디옥산 (10 mL) 및 물 (5 mL)의 혼합물 중 메틸 7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-나프토에이트 (203 mg)의 용액에 실시예 1.35.4 (600 mg), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)디클로라이드 (45.6 mg), 및 플루오르화세슘 (296 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 30분 동안 120℃에서 가열하고, 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 에스테르 중간체를 제공하였다. 잔사를 테트라히드로푸란 (8 mL), 메탄올 (4 mL) 및 물 (4 mL)의 혼합물 중에 용해시키고, 수산화리튬 일수화물 (200 mg)로 3시간 동안 처리하였다. 반응물을 1N HCl 수용액으로 pH 4로 산성화시키고 에틸 아세테이트 (400 mL)로 희석하였다. 생성된 혼합물을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1060.24 (M+H)+.
1.35.6 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (10 mL) 중 실시예 1.35.5 (405 mg)의 용액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (57.4 mg), 1-에틸-3-[3-(디메틸아미노)프로필]-카르보디이미드 히드로클로라이드 (146 mg) 및 4-(디메틸아미노)피리딘 (93 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하고, 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄 (3 mL) 중에 용해시키고 트리플루오로아세트산 (3 mL)으로 하룻밤 처리하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴의 구배로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.08 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.53 (s, 2H), 8.36 (dd, 1H), 8.26-8.13 (m, 3H), 8.06 (dd, 1H), 8.04-7.97 (m, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.69 (dd, 1H), 7.51-7.43 (m, 2H), 7.40-7.31 (m, 1H), 7.19 (d, 0H), 3.88 (s, 2H), 3.54 (t, 2H), 3.16-2.91 (m, 4H), 2.68-2.55 (m, 2H), 2.29 (s, 0H), 2.22 (s, 3H), 1.93 (p, 2H), 1.43 (s, 2H), 1.38-1.23 (m, 4H), 1.10 (dq, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 863.2 (M+H)+.
1.36 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.36)의 합성
1.36.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-(((1r,3r)-3-(2-((3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)(1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (1 mL) 중 실시예 1.25.1 (0.086 g), tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (0.037 g), 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (0.039 g) 및 아세트산 (11 L)의 용액을 실온에서 교반하였다. 하룻밤 교반한 후에, 반응물을 실리카겔 상에 로딩하고 디클로로메탄 중 0.5 내지 5% 메탄올의 구배를 사용하여 용출시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ELSD) m/e 1113.5 (M+H)+.
1.36.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (0.5 mL) 중 실시예 1.36.1 (0.050)의 용액을 트리플루오로아세트산 (0.5 mL)으로 처리하고, 반응물을 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고, 디메틸 술폭시드 및 메탄올 (1:1) 중에 용해시켰다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.55-7.42 (m, 3H), 7.41-7.33 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.73-3.54 (m, 3H), 3.53-3.34 (m, 4H), 3.34-3.25 (m, 2H), 3.02 (t, 2H), 2.99-2.85 (m, 2H), 2.78 (t, 2H), 2.23-2.04 (m, 5H), 1.92-1.76 (m, 2H), 1.43 (s, 2H), 1.39-1.23 (m, 4H), 1.23-0.96 (m, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 901.3 (M+H)+.
1.37 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포-L-알라닐)(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.37)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 (R)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-술포프로판산(0.011 g) 및 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로포스페이트(V) (10.80 mg)의 용액을 5분 동안 교반하였다. 이 용액을 실시예 1.2.9 (0.025 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.014 mL)에 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후에, 디에틸아민 (0.013 mL)을 반응물에 첨가하고, 교반을 추가로 1시간 동안 계속하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 및 물로 희석하고 트리플루오로아세트산으로 켄칭하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 8.03 (dd, 4H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.54 (dd, 1H), 7.51-7.41 (m, 2H), 7.36 (td, 2H), 7.33 (s, 1H), 6.98 (dd, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.42 (dd, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.73 (ddd, 2H), 3.57-3.38 (m, 2H), 3.31 (dt, 1H), 3.08 (dd, 1H), 3.02 (t, 2H), 2.87 (tt, 1H), 2.81-2.54 (m, 2H), 2.10 (d, 3H), 1.51-0.91 (m, 12H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1005.2 (M+H)+.
1.38 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에틸}(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.38)의 합성
1.38.1 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((2-((3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)아미노)에틸)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
실시예 1.32.2를 실시예 1.33.2로 대체하여 실시예 1.32.3에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다.
1.38.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에틸}(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.6.1을 실시예 1.38.1로 대체하여 실시예 1.6.2에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (501 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.87 (s, 1H), 8.68 (s, 2H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.42-7.50 (m, 2H), 7.33-7.40 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 3H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.66 (t, 2H), 3.31-3.53 (m, 8H), 3.18 (t, 2H), 3.02 (t, 2H), 2.95 (t, 2H), 2.67 (t, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.43 (s, 2H), 1.22-1.37 (m, 6H), 0.98-1.19 (m, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (APCI) m/e 971.0 (M+H)+.
1.39 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.39)의 합성
1.39.1 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((3-(디-tert-부톡시포스포릴)프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트
실시예 1.23.2 (520 mg) 및 실시예 1.14.2 (175 mg)를 디클로로메탄 (6 mL) 중에 용해시키고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 메탄올 (1 mL) 중 소듐 보로히드리드 (32 mg)의 현탁액을 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3 포화 수용액에 첨가하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 농축 후에, 디클로로메탄 중 0.5 내지 5.0% 메탄올의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의한 정제에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1037.3 (M+H)+.
1.39.2 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.9에서 실시예 1.2.8을 실시예 1.39.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.60 (dd, 1H), 8.52 (dd, 1H), 8.41 (br s, 2H), 7.65 (d, 1H) 7.48 (d, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.38 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.97 (d, 1H), 4.97 (s, 2H), 3.89 (m, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.56 (m, 2H), 3.02 (m, 6H), 2.11 (s, 3H), 1.81 (m, 2H), 1.61 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.43 (s, 2H), 1.30 (m, 4H), 1.14 (m, 4H), 1.04 (m, 2H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 869.2 (M+H)+.
1.40 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.40)의 합성
1.40.1 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((3-(디-tert-부톡시포스포릴)프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트
실시예 1.39.1에서 실시예 1.23.2를 실시예 1.22.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1037.3 (M+H)+.
1.40.2 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.9에서 실시예 1.2.8을 실시예 1.40.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.52 (dd, 2H), 8.41 (br s, 2H), 8.17 (dd, 1H), 7.63 (m, 1H), 7.53 (m, 2H), 7.46 (d, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.98 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.88 (m, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.56 (t, 2H), 3.00 (m, 6H), 2.11 (s, 3H), 1.81 (m, 2H), 1.60 (m, 2H), 1.43 (s, 2H), 1.31 (m, 4H), 1.14 (m, 4H), 1.04 (m, 2H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 869.2 (M+H)+.
1.41 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(카르복시메톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.41)의 합성
1.41.1 메틸 5-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에톡시)-2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 실시예 1.31.8 (163 mg)의 용액에 tert-부틸 2-브로모아세테이트 (58.6 mg), 및 K2CO3 (83 mg)을 첨가하고, 반응물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 929.2 (M+H)+.
1.41.2 5-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에톡시)-2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산
테트라히드로푸란 (20 mL), 메탄올 (10 mL) 및 물 (10 mL) 중 실시예 1.41.1 (3 g)의 용액에 수산화리튬 일수화물 (300 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 2% HCl 수용액으로 중화시키고 진공 하에서 농축하였다. 잔사를, 에틸 아세테이트 (800 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 914.5 (M+H)+.
1.41.3 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(카르복시메톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 실시예 1.41.2 (183 mg)의 용액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (45.1 mg), 플루오로-N,N,N',N'- 테트라메틸포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트 (79 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.203 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 디클로로메탄/트리플루오로아세트산 (1:1, 10 mL) 중에 용해시키고 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.73 (s, 1H), 8.30 (s, 2H), 7.99-8.07 (m, 1H), 7.75-7.79 (m, 1H) , 7.70 (d, 1H), 7.44-7.56 (m, 2H), 7.30-7.39 (m, 2H) , 7.30 (s, 1H) , 7.03 (t, 1H), 6.87-6.93 (m, 1H), 4.98-5.18 (m, 4H), 4.84 (s, 3H), 3.78-4.01 (m, 4H), 3.55 (t, 2H). 2.77-3.07 (m, 4H), 2.53-2.61 (m, 3H), 2.04-2.16 (m, 3H), 1.41 (s, 2H), 1.02-1.34 (m, 6H), 0.83-0.91 (m, 6H). MS (ESI) m/e 834.2 (M+H)+.
1.42 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-카르복시프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.42)의 합성
1.42.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-(((1r,3r)-3-(2-((1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일)(4-메톡시-4-옥소부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실온에서 디클로로메탄 (2 mL) 중에서 실시예 1.26.1 (0.169 g), 메틸 4-옥소부타노에이트 (0.024 g) 및 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (0.055 g)의 용액을 교반하였다. 2시간 후에, 반응물을 디클로로메탄 (50 mL)으로 희석하고 중탄산나트륨 포화 수용액 (10 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 0.5 내지 5% 메탄올/암모니아를 함유하는 디클로로메탄의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ELSD) m/e 1085.5 (M+H)+.
1.42.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-카르복시프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (0.5 mL) 중 실시예 1.42.1 (0.161 g)의 용액을 트리플루오로아세트산 (0.5 mL)으로 처리하고, 반응물을 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고, 메탄올 (0.6 mL) 중에 용해시키고, 물 (0.5 mL) 중의 용액으로서의 수산화리튬 일수화물 (0.124 g)로 처리하였다. 1.5시간 교반한 후에, 반응물을 트리플루오로아세트산 (0.229 mL)으로 켄칭하고 N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.89-8.79 (m, 1H), 8.57-8.41 (m, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.55-7.41 (m, 3H), 7.41-7.32 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.44 (d, 2H), 3.26 (s, 2H), 3.22-3.11 (m, 2H), 3.09-2.85 (m, 6H), 2.34 (t, 2H), 2.19 (d, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.95-1.71 (m, 5H), 1.44 (s, 2H), 1.39-1.27 (m, 4H), 1.22-0.96 (m, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 915.3 (M+H)+.
1.43 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.43)의 합성
1.43.1 tert-부틸 3-(1-((3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(메톡시카르보닐)나프탈렌-2-일)피콜리네이트
1,4-디옥산 (40 mL) 및 물 (20 mL) 중 메틸 7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-나프토에이트 (2.47 g)의 용액에 실시예 1.20.2 (4.2 g), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)디클로라이드 (556 mg), 및 플루오르화세슘 (3.61 g)을 첨가하고, 반응물을 환류에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (400 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트 후에, 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 680.7 (M+H)+.
1.43.2 tert-부틸 3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-((메틸술포닐)옥시)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(메톡시카르보닐)나프탈렌-2-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (10 mL) 및 트리에틸아민 (0.5 mL) 중 실시예 1.43.1 (725 mg)의 냉각된 (0℃) 용액에 메탄술포닐 클로라이드 (0.249 mL)를 첨가하고, 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제의 생성물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 759.9 (M+H)+.
1.43.3 tert-부틸 3-(1-(((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(메톡시카르보닐)나프탈렌-2-일)피콜리네이트
N,N-디메틸포름아미드 (30 mL) 중 실시예 1.43.2 (4.2 g)의 용액에 소듐 아지드 (1.22 g)를 첨가하고, 혼합물을 96시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (600 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 705.8 (M+H)+.
1.43.4 7-(5-(1-((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일)-1-나프토산
테트라히드로푸란/메탄올/물 (2:1:1, 30 mL) 중 실시예 1.43.3 (3.5 g)의 용액에 수산화리튬 일수화물 (1.2 g)을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 1N HCl 수용액으로 산성화시키고 에틸 아세테이트 (600 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 691.8 (M+H)+.
1.43.5 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)피콜리네이트
N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 실시예 1.43.4 (870 mg)의 용액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (284 mg), 플루오로-N,N,N',N'- 테트라메틸포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트 (499 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (488 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 824.1 (M+H)+.
1.43.6 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)피콜리네이트
테트라히드로푸란 (30 mL) 중 실시예 1.43.5 (890 mg)의 용액에 Pd/C (90 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 1 기압의 수소 하에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 촉매를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 용매를 증발시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 798.1 (M+H)+.
1.43.7 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
N,N-디메틸포름아미드 (6 mL) 중 실시예 1.43.6 (189 mg)의 용액에 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (106 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 4일 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발 후에, 잔사를 트리플루오로아세트산 (10 mL) 중에 용해시키고 하룻밤 정치시켰다. 트리플루오로아세트산을 진공 하에서 증발시키고, 잔사를 디메틸 술폭시드/메탄올 (1:1, 6 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.09 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.31-8.43 (m, 3H), 8.16-8.26 (m, 3H), 7.93-8.08 (m, 3H), 7.82 (d, 1H), 7.66-7.75 (m, 1H), 7.46-7.55 (m, 2H), 7.37 (t, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.17-3.28 (m, 2H), 3.07-3.16 (m, 2H), 2.82 (t, 2H), 2.24 (s, 3H), 1.44 (s, 2H), 0.99-1.37 (m, 12H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 849.1 (M+H)+.
1.44 3-{1-[(3-{2-[L-알파-아스파르틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.44)의 합성
1.44.1 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((S)-4-(tert-부톡시)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-4-옥소-N-(2-술포에틸)부탄아미도)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 (S)-4-(tert-부톡시)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-4-옥소부탄산 (40.7 mg) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, 40.1 mg,)의 차가운 (0℃) 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (98 L)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 실시예 1.2.9 (60 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 1.5시간 동안 교반하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1123.4 (M-H)-.
1.44.2 3-{1-[(3-{2-[L-알파-아스파르틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (5 mL) 중 실시예 1.44.1 (100 mg)을 트리플루오로아세트산 (1.5 mL)으로 하룻밤 처리하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 2H), 8.11-8.22 (m, 3H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.41-7.54 (m, 3H), 7.32-7.39 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.95 (s, 2H), 4.80 (s, 1H), 3.89 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.55-3.71 (m, 2H), 3.01 (t, 4H), 2.74-2.86 (m, 1H), 2.57-2.73 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 0.91-1.46 (m, 13H), 0.84 (s, 6H). MS (ESI) m/e 969.2 (M+H)+.
1.45 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(1,3-디히드록시프로판-2-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.45)의 합성
1.45.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-(옥세탄-3-일아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실온에서 디클로로메탄 (1 mL) 중에서 실시예 1.2.7 (0.095 g), 옥세탄-3-온 (10 mg) 및 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (0.038 g)의 용액을 교반하였다. 하룻밤 교반한 후에, 반응 혼합물을 실리카겔 상에 직접 로딩하고 암모니아를 함유하는 디클로로메탄 중 0.5 내지 5% 메탄올의 구배를 사용하여 용출시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ELSD) m/e 858.4 (M+H)+.
1.45.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(1,3-디히드록시프로판-2-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.45.1을 디클로로메탄 (0.5 mL) 중에 용해시키고 트리플루오로아세트산 (0.5 mL)으로 처리하고 하룻밤 교반하였다. 반응물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 8.19 (s, 2H), 8.02 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.53-7.40 (m, 3H), 7.40-7.31 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 4.95 (s, 2H), 3.87 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.67-3.62 (m, 4H), 3.22-3.14 (m, 1H), 3.14-3.06 (m, 2H), 3.00 (t, 4H), 2.09 (s, 3H), 1.41 (s, 2H), 1.37-1.20 (m, 4H), 1.20-0.95 (m, 6H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 820.2 (M+H)+.
1.46 6-[5-(2-아미노에톡시)-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.46)의 합성
1.46.1 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}에톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1 H )-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[(2,2,7,7,13-펜타메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일)옥시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1 H -피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.7을 실시예 1.35로 대체하여 실시예 1.2.8에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다.
1.46.2 6-[5-(2-아미노에톡시)-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.34.3을 실시예 1.46.1로 대체하여 실시예 1.34.4에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.74 (s, 2H), 8.96 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.94 (s, 3H), 7.72-7.81 (m, 2H), 7.53 (d, 1H), 7.47 (t, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.02 (t, 2H), 5.03 (s, 2H), 4.26 (t, 2H), 3.92 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.23-3.38 (m, 4H), 3.13-3.25 (m, 1H), 2.82-3.00 (m, 4H), 2.78 (d, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.23-1.50 (m, 6H), 0.95-1.21 (m, 6H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 927.2 (M+H)+.
1.47 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.47)의 합성
1.47.1 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-[(2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일)옥시]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1 H )-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1 H -피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.7을 실시예 1.46.2로 대체하여 실시예 1.2.8에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다.
1.47.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (5 mL) 중 실시예 1.47.1 (100 mg)을 트리플루오로아세트산 (5 mL)으로 하룻밤 처리하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm m 12.74 (s, 1H), 8.96 (d, 1H), 8.64 (s, 2H), 8.02 (d, 1H), 7.76 (dd, 2H), 7.41-7.57 (m, 2H), 7.24-7.40 (m, 2H), 7.02 (t, 2H), 5.03 (s, 2H), 4.23-4.42 (m, 2H), 3.90 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.25-3.40 (m, 6H), 3.12-3.24 (m, 2H), 2.81-3.01 (m, 6H), 2.78 (d, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.22-1.47 (m, 6H), 0.97-1.21 (m, 6H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1035.3 (M+H)+.
1.48 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸){2-[(2-술포에틸)아미노]에틸}아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.48)의 합성
1.48.1 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{[2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-16-(2-술포에틸)-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13,16-디아자-3-실라옥타데칸-18-일]옥시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.7을 실시예 1.33.2로 대체하여 실시예 1.2.8에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다.
1.48.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸){2-[(2-술포에틸)아미노]에틸}아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.47.1을 실시예 1.48.1로 대체하여 실시예 1.47.2에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.87 (s, 3H), 8.55 (s, 4H), 8.04 (d, 2H), 7.79 (d, 2H), 7.62 (d, 1H), 7.40-7.56 (m, 3H), 7.32-7.40 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 2H), 4.96 (s, 3H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.47 (d, 2H), 3.36 (s, 2H), 3.18-3.30 (m, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.94 (t, 2H), 2.82 (t, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.26-1.49 (m, 6H), 0.96-1.20 (m, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1005.2 (M+H)+.
1.49 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.49)의 합성
1.49.1 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-5-(2-((3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)아미노)에톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-(메틸(2-술포에틸)아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
실시예 1.32.2를 실시예 1.46.2로 대체하여 실시예 1.32.3에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다.
1.49.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.6.1을 실시예 1.49.1로 대체하여 실시예 1.6.2에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.75 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.59 (s, 2H), 8.03 (d, 1H), 7.72-7.82 (m, 2H), 7.54 (d, 1H), 7.43-7.51 (m, 2H), 7.35 (t, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.02 (dd, 2H), 5.02 (s, 2H), 4.34 (s, 2H), 3.93 (s, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.62 (s, 2H), 2.84-3.01 (m, 4H), 2.78 (d, 3H), 2.65-2.75 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.20-1.45 (m, 7H), 0.95-1.21 (m, 6H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 999.2 (M+H)+.
1.50 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.50)의 합성
1.50.1 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((1-(tert-부톡시카르보닐)피페리딘-4-일)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트
실시예 1.23.2 (205 mg)를 디클로로메탄 (2.4 mL) 중에 용해시키고, tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (51 mg) 및 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (75 mg)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 추가의 디클로로메탄을 첨가하고, 반응물을 NaHCO3 포화 수용액에 부었다. 유기 층을 염수로 세척하고 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 농축 후에, 잔사를, 디클로로메탄 중 0.5 내지 5.0% 메탄올의 구배로 용출시키는, Grace Reveleris Amino 카트리지 상에서의 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 986.3(M+H)+.
1.50.2 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 1.50.1 (94 mg)을 디클로로메탄 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 실시예 1.14.2 (25 mg) 및 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (30 mg)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 트리플루오로아세트산 (1.5 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.82 (br s, 1H) 8.60 (dd, 1H), 8.52 (dd, 1H), 8.50 (br s, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.38 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 6.97 (d, 1H), 4.98 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H) 3.69 (m, 2H), 3.61 (m, 1H), 3.44 (m, 2H) 3.23 (m, 4H), 3.02 (t, 2H), 2.93 (m, 2H), 2.18 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.92 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.64 (m, 2H), 1.44 (s, 2H), 1.31 (m, 4H), 1.14 (m, 4H), 1.04 (m, 2H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 952.3 (M+H)+.
1.51 6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로-2H-1,4-벤족사진-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.51)의 합성
1.51.1 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-클로로피콜리네이트
N,N-디메틸포름아미드 (20 mL) 중 실시예 1.20.2 (3.2 g)의 용액에 이미다졸 (0.616 g) 및 클로로 t-부틸디메틸실란 (1.37 g)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 조질 생성물을 얻었고, 이를 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 645.4 (M+H)+.
1.51.2 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)피콜리네이트
1,4-디옥산 (10 mL) 및 물 (5 mL) 중 6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진 (507 mg)의 용액에 실시예 1.51.1 (1.25 g), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)디클로라이드 (136 mg), 및 플루오르화세슘 (884 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 20분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트 후에, 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 744.1 (M+H)+.
1.51.3 tert-부틸 6-(4-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-3-(1-((3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
아세토니트릴 (10 mL) 중 비스(2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카르보네이트 (295 mg)의 주위 온도 현탁액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (173 mg)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 아세토니트릴 (10 mL) 중 실시예 1.51.2 (710 mg)의 용액을 첨가하고, 현탁액을 하룻밤 격렬히 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 920.2 (M+H)+.
1.51.4 tert-부틸 6-(4-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-3-(1-((3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
테트라히드로푸란 (10 mL) 중 실시예 1.51.3 (1.4 g)의 용액에 테트라부틸 암모늄 플루오라이드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M, 6 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제의 생성물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 806.0 (M+H)+.
1.51.5 tert-부틸 6-(4-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-((메틸술포닐)옥시)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (20 mL) 및 트리에틸아민 (2 mL) 중 실시예 1.51.4 (1.2 g)의 냉각된 (0℃) 용액에 메탄술포닐 클로라이드 (300 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제의 생성물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 884.1 (M+H)+.
1.51.6 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(4-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)피콜리네이트
N,N-디메틸포름아미드 (20 mL) 중 실시예 1.51.5 (1.5 g)의 용액에 소듐 아지드 (331 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 디클로로메탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 831.1 (M+H)+.
1.51.7 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(4-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)피콜리네이트
테트라히드로푸란 (30 mL) 중 실시예 1.51.6 (1.5 g)의 용액에 Pd/C (10%, 200 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 1 기압의 수소 하에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 진공 하에 농축하여 조질 생성물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 805.1 (M+H)+.
1.51.8 6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로-2H-1,4-벤족사진-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.5 mL) 중 실시예 1.51.7 (164 mg)의 용액에 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (91 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 테트라히드로푸란 (2 mL) 중에 용해시켰다. 테트라부틸 암모늄 플루오라이드 (1 mL, 테트라히드로푸란 중 1 M)를 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고, 잔사를 디클로로메탄/트리플루오로아세트산 (1:1, 6 mL) 중에 용해시키고, 이를 하룻밤 정치시켰다. 용매의 증발 후에, 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.74 (s, 1H), 8.35 (s, 2H), 7.94-8.00 (m, 1H), 7.86 (s, 1H) , 7.71-7.82 (m, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.34-7.44 (m, 2H), 7.24 (t, 1H), 7.02 (d, 1H), 4.28-4.39 (m, 2H), 4.10-4.19 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.55-3.61 (m, 4H), 3.21-3.30 (m, 3H) , 3.07-3.16 (m, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.44 (s, 2H), 0.98-1.37 (m, 9H), 0.89 (s, 6H). MS (ESI) m/e 856.1 (M+H)+.
1.52 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-술포프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.52)의 합성
1.52.1 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-5-(3-((2,2,2-트리플루오로-1-(p-톨릴)에톡시)술포닐)프로폭시)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 실시예 1.31.8 (460 mg)의 용액에 2,2,2-트리플루오로-1-(p-톨릴)에틸 3-요오도프로판-1-술포네이트 (239 mg, 문헌[J. Org. Chem., 2013, 78, 711-716]에 따라 제조함) 및 K2CO3 (234 mg)을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1018.5 (M+H)+.
1.52.2 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-5-(3-((2,2,2-트리플루오로-1-(p-톨릴)에톡시)술포닐)프로폭시)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산.
테트라히드로푸란 (4 mL), 메탄올 (3 mL) 및 물 (3 mL) 중 실시예 1.52.1 (176 mg)의 용액에 수산화리튬 일수화물 (60 mg)을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 이어서 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 1N HCl 수용액, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제의 생성물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 1095.2 (M+H)+.
1.52.3 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-((2,2,2-트리플루오로-1-(p-톨릴)에톡시)술포닐)프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (6 mL) 중 실시예 1.52.2 (117 mg)의 용액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (19.27 mg), 1-에틸-3-[3-(디메틸아미노)프로필]-카르보디이미드 히드로클로라이드 (37 mg) 및 4-(디메틸아미노)피리딘 (23.5 mg)을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제의 생성물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1226.1 (M+H)+.
1.52.4 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-술포프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 1.52.3 (130 mg)을 디클로로메탄/트리플루오로아세트산 (1:1, 6 mL) 중에 용해시키고 하룻밤 교반하였다. 용매의 증발 후에, 잔사를 N,N-디메틸포름아미드/물 (1:1, 12 mL) 중에 용해시키고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 HPLC (Gilson)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.68 (s, 1H), 8.13-8.32 (m, 2H), 8.01 (d, 1H) , 7.75 (dd, 2H), 7.42-7.56 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.28-7.34 (m, 1H), 7.00 (dd, 2H), 5.03 (s, 2H), 4.19 (t, 2H), 3.83 (s, 3H) , 3.50-3.57 (m, 4H), 2.95-3.05 (m, 2H), 2.81 (t, 2H), 2.52-2.65 (m, 4H), 1.39 (s, 2H), 0.96-1.32 (m, 12H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 898.3 (M+H)+.
1.53 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.53)의 합성
1.53.1 tert-부틸 6-클로로-3-(1-((3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.51.3을 실시예 1.51.1로 대체하여 실시예 1.51.4에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다.
1.53.2 tert-부틸 6-클로로-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-((메틸술포닐)옥시)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (30 mL) 및 트리에틸아민 (3 mL) 중 실시예 1.53.1 (1.89 g)의 냉각된 (0℃) 용액에 메탄술포닐 클로라이드 (1.03 g)를 첨가하고, 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제의 생성물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
1.53.4 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-클로로피콜리네이트
실시예 1.53.2 (2.2 g)를 메탄올 중 7 N 암모니아 (40 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 2시간 동안 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다.
1.53.5 tert-부틸 6-클로로-3-[1-({3,5-디메틸-7-[(2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일)옥시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (30 mL) 중 실시예 1.53.3 (1.59 g)의 용액에 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (1.6 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (1 mL)을 첨가하고, 혼합물을 4일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (400 mL) 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제의 생성물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 976.8 (M+H)+.
1.53.6 tert-부틸 3-{1-[(3-{[13-(tert-부톡시카르보닐)-2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일]옥시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-클로로피리딘-2-카르복실레이트
테트라히드로푸란 (50 mL) 중 실시예 1.53.4 (2.93 g)의 용액에 디-t-부틸디카르보네이트 (0.786 g) 및 4-(디메틸아미노)피리딘 (100 mg)을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 (300 mL) 중에 용해시키고, 1N HCl 수용액, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1076.9 (M+H)+.
1.53.7 tert-부틸 3-{1-[(3-{[13-(tert-부톡시카르보닐)-2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일]옥시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-(1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)피리딘-2-카르복실레이트
1,4-디옥산 (10 mL) 및 물 (5 mL) 중 7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린(65 mg)의 용액에 실시예 1.53.5 (220 mg), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)디클로라이드 (7 mg), 및 플루오르화세슘 (45.6 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 120℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1173.9 (M+H)+.
1.53.8 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산
아세토니트릴 (10 mL) 중 비스(2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카르보네이트 (48.2 mg)의 주위 온도 현탁액에 티아졸로[4,5-b]피리딘-2-아민 (34 mg)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 아세토니트릴 (5 mL) 중 실시예 1.53.6 (220 mg)의 용액을 첨가하고, 현탁액을 하룻밤 격렬히 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 트리플루오로아세트산 (10 mL) 중에 용해시키고 하룻밤 교반하였다. 용매의 증발 후에, 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 8.42-8.48 (m, 1H), 8.31-8.40 (m, 4H), 8.03 (d, 1H), 7.89 (d, 1H), 7.80 (d, 1H) , 7.47 (s, 1H), 7.26-7.37 (m, 2H), 3.93-4.02 (m, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.52-3.60 (m, 3H), 3.17-3.26 (m, 2H), 3.05-3.14 (m, 2H), 2.76-2.89 (m, 5H), 2.23 (s, 3H), 1.90-2.01 (m, 2H), 1.44 (s, 2H), 1.27-1.37 (m, 4H), 0.99-1.22 (m, 5H), 0.88 (s, 6H). MS (ESI) m/e 855.1 (M+H)+.
1.54 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.54)의 합성
1.54.1 tert-부틸 3-{1-[(3-{[13-(tert-부톡시카르보닐)-2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일]옥시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(메톡시카르보닐)나프탈렌-2-일]피리딘-2-카르복실레이트
실시예 1.53.6에서 7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린을 메틸 7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-나프토에이트로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1226.6 (M+H)+.
1.54.2 7-[6-(tert-부톡시카르보닐)-5-{1-[(3-{[13-(tert-부톡시카르보닐)-2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10λ 6 -티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일]옥시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-일]나프탈렌-1-카르복실산
테트라히드로푸란 (4 mL), 메탄올 (3 mL) 및 물 (3 mL) 중 실시예 1.54.1 (79 mg)의 용액에 수산화리튬 일수화물 (60 mg)을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 1N HCl 수용액, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제의 생성물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS (ESI) m/e 1211.6 (M+H)+.
1.54.3 3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (4 mL) 중 실시예 1.54.2 (60 mg)의 용액에 티아졸로[4,5-b]피리딘-2-아민 (7.56 mg), 1-에틸-3-[3-(디메틸아미노)프로필]-카르보디이미드 히드로클로라이드 ( 19 mg) 및 4-(디메틸아미노)피리딘 (12.2 mg)을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제의 생성물을 얻었고, 이를 디클로로메탄/트리플루오로아세트산 (1:1, 6 mL) 중에 용해시키고 하룻밤 교반하였다. 용매의 증발 후에, 잔사를 N,N-디메틸포름아미드/물 (1:1, 12 mL) 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.42 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.51-8.69 (m, 2H), 8.31-8.41 (m, 2H), 8.18-8.26 (m, 4H), 8.06 (d, 1H), 7.97 (d, 1H), 7.68-7.79 (m, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.40 (dd, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.18-3.29 (m, 3H), 3.07-3.15 (m, 2H), 2.82 (t, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.44 (s, 2H), 0.97-1.37 (m, 10H), 0.88 (s, 6H). MS (ESI) m/e 850.1 (M+H)+.
1.55 (1ξ)-1-({2-[5-(1-{[3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-카르복시피리딘-2-일]-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-5-일}메틸)-1,5-언히드로-D-글루시톨 (화합물 W2.55)의 합성
1.55.1 (2R,3R,4S,5R)-3,4,5-트리스(메톡시메톡시)-2-((메톡시메톡시)메틸)-6-메틸렌테트라히드로-2H-피란
표제 화합물을 문헌[J. R. Walker et al., Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 3038-3048]에 따라 제조하였다. MS (ESI) m/e 370 (M+NH4)+.
1.55.2 4-브로모-3-시아노메틸-벤조산 메틸 에스테르
테트라히드로푸란 (6 mL) 중 트리메틸실란카르보니트릴 (3.59 mL)의 용액에 1 M 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (26.8 mL, 테트라히드로푸란 중 1 M)를 30분에 걸쳐 적가하였다. 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 메틸 4-브로모-3-(브로모메틸)벤조에이트 (7.50 g)를 아세토니트릴 (30 mL) 중에 용해시키고 첫 번째 용액에 30분에 걸쳐 적가하였다. 용액을 30분 동안 80℃까지 가열하고 냉각하였다. 용액을 감압 하에 농축하고, 잔사를 헵탄 중 20 내지 30% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.55.3 3-(2-아미노에틸)-4-브로모벤조산 메틸 에스테르
실시예 1.55.2 (5.69 g)를 테트라히드로푸란 (135 mL) 중에 용해시키고, 1 M 보란 (테트라히드로푸란 중, 24.6 mL)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하고 메탄올 및 1 M 염산 수용액으로 천천히 켄칭하였다. 4 M 염산 수용액 (150 mL)을 첨가하고, 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하고, 고체 탄산칼륨을 사용하여 pH를 11 내지 12 사이로 조정하였다. 이어서 용액을 디클로로메탄 (3 x 100 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용액을 여과하고 감압 하에 농축하고, 잔사를, 디클로로메탄 중 10 내지 20% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 258, 260 (M+H)+.
1.55.4 4-브로모-3-[2-(2,2,2-트리플루오로아세틸아미노)-에틸]-벤조산 메틸 에스테르
실시예 1.55.2 (3.21 g)를 디클로로메탄 (60 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 0℃까지 냉각하고, 트리에틸아민 (2.1 mL)을 첨가하였다. 트리플루오로아세트산 무수물 (2.6 mL)을 적가하였다. 용액을 0℃에서 10분 동안 교반하고, 냉각조를 제거하였다. 1시간 후에, 물 (50 mL)을 첨가하고, 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하였다. 1 M 염산 수용액을 첨가하고 (50 mL), 유기 층을 분리하고, 1 M 염산 수용액으로 세척하고, 염수로 세척하였다. 용액을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 371, 373 (M+H)+.
1.55.5 5-브로모-2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산 메틸 에스테르
실시예 1.55.4 (4.40 g) 및 파라포름알데히드 (1.865 g)를 플라스크에 넣고 진한 황산 (32 mL)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 차가운 물 (120 mL)을 첨가하고, 용액을 에틸 아세테이트 (3x 100 mL)로 추출하였다. 추출물을 합하고, 중탄산나트륨 포화 수용액 (100 mL) 및 물 (100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨로 건조시켰다. 혼합물을 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20 내지 30% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 366, 368 (M+H)+.
1.55.6 메틸 2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-5-(((3S,4R,5R,6R)-3,4,5-트리스(메톡시메톡시)-6-((메톡시메톡시)메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)메틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
실시예 1.55.1 (242 mg)를 테트라히드로푸란 (7 mL) 중에 용해시키고 9-보라비시클로[3.3.1]노난 (3.0 mL)을 적가하였다. 용액을 4.5시간 동안 환류시키고 실온까지 냉각되게 두었다. 인산칼륨 (3M, 0.6 mL)을 첨가하고, 용액을 10분 동안 교반하였다. 이어서 용액을 탈기시키고 질소로 3회 플러싱하였다. 별도로, 실시예 1.55.5 (239 mg) 및 디클로로[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐 (II) 디클로로메탄 부가물 (39 mg)을 N,N-디메틸포름아미드 (7 mL) 중에 용해시키고, 용액을 탈기시키고 질소로 3회 플러싱하였다. N,N-디메틸포름아미드 용액을 테트라히드로푸란 용액에 적가하고, 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. HCl 용액 (0.1 M 수용액, 25 mL)을 첨가하고, 용액을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 30 내지 50% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. MS (ESI) m/e 710 (M+NH4)+.
1.55.7 메틸 5-(((3S,4R,5R,6R)-3,4,5-트리스(메톡시메톡시)-6-((메톡시메톡시)메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)메틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
실시예 1.55.6 (247 mg)를 메탄올 (1 mL), 테트라히드로푸란 (1 mL), 및 물 (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 탄산칼륨 (59 mg)을 첨가하고, 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 희석하고 중탄산나트륨 포화 수용액 (1 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 수득하였다. MS (ESI) m/e 600 (M+H)+.
1.55.8 메틸 2-(5-브로모-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일)-5-(((3S,4R,5R,6R)-3,4,5-트리스(메톡시메톡시)-6-((메톡시메톡시)메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)메틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
실시예 1.1.11에서 메틸 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트를 실시예 1.55.7로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 799, 801 (M-tert-부틸)+.
1.55.9 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-일)-5-(((3S,4R,5R,6R)-3,4,5-트리스(메톡시메톡시)-6-((메톡시메톡시)메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)메틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
실시예 1.2.1에서 실시예 1.1.11을 실시예 1.55.8로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 903 (M+H)+, 933 (M+MeOH-H)-.
1.55.10 2-((3-((4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에탄아민
실시예 1.10.5에서 실시예 1.10.4를 실시예 1.13.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 444 (M+H)+.
1.55.11 tert-부틸 (2-((3-((4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)카르바메이트
실시예 1.10.6에서 실시예 1.10.5를 실시예 1.55.10으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 544 (M+H)+, 488 (M-tert-부틸)+, 542 (M-H)-.
1.55.12 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-5-(((3R,4S,5S,6S)-3,4,5-트리스(메톡시메톡시)-6-((메톡시메톡시)메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)메틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
실시예 1.13.4에서 실시예 1.2.1을 실시예 1.55.9로 대체하고 실시예 1.13.3을 실시예 1.55.11로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1192 (M+H)+.
1.55.13 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-5-(((3R,4S,5S,6S)-3,4,5-트리스(메톡시메톡시)-6-((메톡시메톡시)메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)메틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산
실시예 1.2.5에서 실시예 1.2.4를 실시예 1.55.12로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1178 (M+H)+, 1176 (M-H)-.
1.55.14 Tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-5-(((3R,4S,5S,6S)-3,4,5-트리스(메톡시메톡시)-6-((메톡시메톡시)메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)메틸)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.52.3에서 실시예 1.52.2를 실시예 1.55.13으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1310 (M+H)+, 1308 (M-H)-.
1.55.15 (1ξ)-1-({2-[5-(1-{[3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-카르복시피리딘-2-일]-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-5-일}메틸)-1,5-언히드로-D-글루시톨
실시예 1.52.4에서 실시예 1.52.3을 실시예 1.55.14로 대체하고 트리플루오로아세트산을 4M 염산 수용액으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 7.96 (d, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.58 (bs, 3H), 7.46 (d, 1H), 7.43-7.39 (m, 2H), 7.30 (d, 1H), 7.27-7.25 (m, 2H), 6.88 (d, 1H), 4.90 (q, 2H), 3.76 (m, 4H), 3.51 (m, 1H), 3.21 (d, 2H), 3.18 (d, 1H), 3.12 (m, 2H), 3.02 (m, 4H), 2.93 (m, 4H), 2.83 (m, 2H), 2.59 (m ,2H), 2.03 (s, 3H), 1.44 (s, 1H), 1.34 (s, 2H), 1.23 (q, 4H), 1.07 (m, 4H), 0.97 (q, 2 H), 0.80 (s, 6H). MS (ESI) m/e 922 (M+H)+, 920 (M-H)-.
1.56 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-카르복시프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.56)의 합성
1.56.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((4-(tert-부톡시)-4-옥소부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (0.5 mL) 중 실시예 1.2.7 (0.103 g) 및 tert-부틸 4-브로모부타노에이트 (0.032 g)의 용액에, 밀봉된 호박색 바이알에서 하룻밤 50℃에서 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.034 mL)을 첨가하였다. 반응물을 농축하고, 디메틸 술폭시드/메탄올 (1:1, 2 mL) 중에 용해시키고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 5 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 944.6 (M+1).
1.56.1 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-카르복시프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.56.1 (0.049 g)의 용액을 디클로로메탄 (1 mL) 중에 용해시키고 트리플루오로아세트산 (0.5 mL)으로 처리하고 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고, (1:1) N,N-디메틸포름아미드 /물 혼합물 (2 mL) 중에 용해시키고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 5 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.09- 12.32 (m, 2H), 8.31 (s, 2H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.54- 7.40 (m, 3H), 7.40- 7.32 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.55 (d, 2H), 3.02 (q, 4H), 2.92 (q, 2H), 2.33 (t, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.80 (p, 2H), 1.43 (s, 2H), 1.30 (q, 4H), 1.21- 0.95 (m, 6H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 832.3 (M+H)+.
1.57 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.57)의 합성
1.57.1 tert-부틸 3-(1-((3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(메톡시카르보닐)나프탈렌-2-일)피콜리네이트
1,4-디옥산 (40 mL) 및 물 (20 mL) 중 메틸 7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-나프토에이트 (2.47 g)의 용액에 실시예 1.20.2 (4.2 g), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)디클로라이드 (556 mg), 및 플루오르화세슘 (3.61 g)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 환류시키고, 에틸 아세테이트 (400 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 디클로로메탄 중 20% 에틸 아세테이트 후에 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 680.84 (M+H)+.
1.57.2 tert-부틸 3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-((메틸술포닐)옥시)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(메톡시카르보닐)나프탈렌-2-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (10 mL) 및 트리에틸아민 (0.5 mL) 중 실시예 1.57.1 (725 mg)의 냉각된 (0℃) 용액에 메탄술포닐 클로라이드 (0.249 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 758.93 (M+H)+.
1.57.3 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(메톡시카르보닐)나프탈렌-2-일)피콜리네이트
N,N-디메틸포름아미드 (30 mL) 중 실시예 1.57.2 (4.2 g)의 용액에 소듐 아지드 (1.22 g)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 96시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트 (600 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 704.86 (M+H)+.
1.57.4 7-(5-(1-((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일)-1-나프토산
테트라히드로푸란/메탄올/H2O (2:1:1, 30 mL) 중 실시예 1.57.3 (3.5 g)의 용액에 수산화리튬 일수화물 (1.2 g)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 1N HCl 수용액으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트 (600 mL)로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 691.82 (M+H)+.
1.57.5 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아지도에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)피콜리네이트
N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 실시예 1.57.4 (870 mg)의 용액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (284 mg), 플루오로-N,N,N'N'-테트라메틸포름아미듐 헥사플루오로포스페이트 (499 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (488 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 824.02 (M+H)+.
1.57.6 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)피콜리네이트
테트라히드로푸란 (30 mL) 중 실시예 1.57.5 (890 mg)의 용액에 Pd/C (90 mg, 5%)를 첨가하였다. 혼합물을 수소 분위기 하에 실온에서 하룻밤 교반하고, 여과하였다. 여과액을 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 798.2 (M+H)+.
1.57.7 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (6 mL) 중 실시예 1.57.6 (137 mg)의 용액에 실시예 1.14.2 (43 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 메탄올 (2 mL) 중 NaBH4 (26 mg)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 2N NaOH 수용액, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄 (5 mL) 중에 용해시키고 트리플루오로아세트산 (5 mL)으로 하룻밤 처리하였다. 반응 혼합물을 농축하였다. 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴의 구배로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.03 (s, 1H), 8.48-8.35 (m, 3H), 8.29-8.16 (m, 3H), 8.08 (dd, 1H), 8.03 (dd, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.71 (dd, 1H), 7.53-7.47 (m, 2H), 7.38 (td, 1H), 4.81-0.53 (m, 89H). MS (ESI) m/e 863.2 (M+H)+.
1.58 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[4-(베타-D-글루코피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.58)의 합성
테트라히드로푸란 (2 mL) 및 아세트산 (0.2 mL) 중 실시예 1.3.1 (44.5 mg)의 용액에 4-(((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤즈알데히드 (17 mg) 및 MgSO4 (300 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후에, 수지 상 소듐 시아노보로히드리드 (300 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하고 여과하였다. 여과액물을 농축하고, 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 용액을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴의 구배로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1015.20 (M+H)+.
1.59 3-(1-{[3-(2-{[4-(베타-D-알로피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.59)의 합성
테트라히드로푸란 (2 mL) 및 아세트산 (0.2 mL) 중 실시예 1.3.1 (44.5 mg)의 용액에 4-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤즈알데히드 (17 mg) 및 MgSO4 (300 mg)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후에, 수지 상 소듐 시아노보로히드리드 (300 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하고 여과하였다. 여과액물을 농축하고, 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴의 구배로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1015.20 (M+H)+.
1.60 3-{1-[(3-{2-[아제티딘-3-일(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.60)의 합성
1.60.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((1-(tert-부톡시카르보닐)아제티딘-3-일)(2-((4-(tert-부틸디페닐실릴)히드록시-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (0.5 mL) 중 실시예 1.2.8 (0.075 g), tert-부틸 3-옥소아제티딘-1-카르복실레이트 (0.021 g) 및 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (0.025 g)의 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응물을 실리카겔 상에 로딩하고 디클로로메탄 중 0 내지 10% 메탄올로 용출시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1403.9 (M+1).
1.60.2 3-{1-[(3-{2-[아제티딘-3-일(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (1 mL) 중 실시예 1.60.1 (0.029 g)의 용액을 트리플루오로아세트산 (1 mL)으로 처리하고 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고, 1:1디메틸 술폭시드/메탄올 (2 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (s, 1H), 8.81 (s, 2H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.50- 7.46 (m, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.40- 7.33 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.37 (q, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.11 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.58- 3.54 (m, 2H), 3.32 (t, 2H), 3.24 (s, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.48- 0.97 (m, 12H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 909.2 (M+H)+.
1.61 3-{1-[(3-{2-[(3-아미노프로필)(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.61)의 합성
1.61.1 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로필)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
tert-부틸 (2-옥소에틸)카르바메이트를 tert-부틸 (3-옥소프로필)카르바메이트로 대체하여, 실시예 1.33.1에 대한 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1011.5 (M+H).
1.61.2 3-{1-[(3-{2-[(3-아미노프로필)(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 1.6.1을 실시예 1.61.1로 대체하여 실시예 1.6.2에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.87 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.88-7.67 (m, 4H), 7.62 (d, 1H), 7.57-7.40 (m, 3H), 7.36 (td, 2H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.05-3.78 (m, 4H), 3.41-3.08 (m, 3H), 2.94 (tt, 6H), 2.11 (s, 3H), 1.92 (t, 2H), 1.53-0.95 (m, 11H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 911.3 (M+H).
1.62 6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (화합물 W2.62)의 합성
1.62.1 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-클로로피콜리네이트
에탄올 (10 mL) 중 실시예 1.53.3 (521 mg)의 주위 온도 용액에 트리에틸아민 (3 mL) 후에 tert-부틸 아크릴레이트 (2 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 이어서 건조 상태까지 건조시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트 (200 mL) 중에 용해시키고, 용액을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 657.21 (M+H)+.
1.62.2 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)(tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-클로로피콜리네이트
테트라히드로푸란 (10 mL) 중 실시예 1.62.1 (780 mg)의 용액에 디-tert-부틸 디카르보네이트 (259 mg) 후에 촉매량의 4-디메틸아미노피리딘을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 이어서 건조 상태까지 건조시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트 (200 mL) 중에 용해시키고, 용액을 NaHCO3 포화 수용액, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는, 실리카겔 상에서의 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 757.13 (M+H)+.
1.62.3 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)(tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)피콜리네이트
1,4-디옥산 (10 mL) 및 물 (5 mL) 중 7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린 (234 mg)의 용액에 실시예 1.62.2 (685 mg), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)디클로라이드 (63.2 mg), 및 플루오르화세슘 (410 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파 조사 (Biotage Initiator)에 의해 120℃에서 30분 동안 가열하였다. 에틸 아세테이트 및 물의 첨가에 의해 반응물을 켄칭하였다. 층을 분리하고, 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는, 실리카겔 상에서의 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 854.82 (M+H)+.
1.62.4 tert-부틸 6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)-3-(1-((3-(2-((3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)(tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
아세토니트릴 (10 mL) 중 비스(2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카르보네이트 (150 mg)의 주위 온도 현탁액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (88 mg)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 아세토니트릴 (2 mL) 중 실시예 1.62.3 (500 mg)의 용액을 첨가하고, 현탁액을 하룻밤 격렬히 교반하였다. 에틸 아세테이트 및 물의 첨가에 의해 반응물을 켄칭하였다. 층을 분리하고, 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 디클로로메탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는, 실리카겔 상에서의 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1030.5 (M+H)+.
1.62.5 6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
디클로로메탄 (0.53 mL) 중 실시예 1.62.4 (110 mg)의 주위 온도 용액을 트리플루오로아세트산 (0.53 mL)에 첨가하였다. 반응물을 하룻밤 교반하고 점성 오일로 농축하였다. 잔사를 디메틸 술폭시드/메탄올 (1:1, 2 mL) 중에 용해시키고, 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 10 내지 55% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 13.10 (s, 3H), 8.37 (s, 1H), 8.26 (s, 2H), 7.98 (d, 1H), 7.86-7.71 (m, 3H), 7.44 (s, 1H), 7.39-7.31 (m, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.19 (t, 1H), 3.92 (d, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.55 (t, 2H), 3.17-3.00 (m, 4H), 2.80 (t, 2H), 2.62 (t, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.95-1.88 (m, 2H), 1.43 (s, 2H), 1.33-1.25 (m, 4H), 1.18-1.11 (m, 4H), 1.09-0.97 (m, 2H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 818.0 (M+H)+.
1.63 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(N6,N6-디메틸-L-리실)(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (W2.63)의 합성
N,N-디이소프로필아민 (0.035 mL)과 N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중에서 (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-6-(디메틸아미노)헥산산 (0.029 g) 및 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (0.028 g)의 용액을 함께 교반하였다. 5분 동안 교반한 후에, 용액을 실시예 1.13.7 (0.051 g)에 첨가하고, 교반을 실온에서 하룻밤 계속하였다. 반응물에 디에틸아민 (0.070 mL)을 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL), 물 (0.5 ml), 및 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.103 ml)으로 희석하고, 이어서 10% 내지 90% 아세토니트릴/물의 구배를 사용하는 역상 HPLC를 통해 정제하였다. 생성물 함유 분획들을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.59 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.12 (t, 3H), 8.01 (d, 1H), 7.85 (dd, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.77 (dd, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.30 (d, 1H), 7.22 (t, 1H), 3.97 (t, 2H), 3.89 (s, 2H), 3.49 (dt, 4H), 3.06 (s, 2H), 2.99 (q, 2H), 2.88 (s, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.75 (d, 6H), 2.22 (s, 3H), 2.00-1.90 (m, 2H), 1.84-1.52 (m, 4H), 1.48-0.95 (m, 14H), 0.87 (d, 6H). MS (ESI) m/e 916.2 (M+H)+.
1.64 3-{1-[(3-{2-[(3-아미노프로필)(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산 (W2.64)의 합성
1.64.1 6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)-3-(1-((3-(2-((3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로필)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
디클로로메탄 (3 mL) 중 실시예 1.21.5 (100 mg), N,N-디이소프로필에틸아민 (68.9 L) 및 tert-부틸 (3-옥소프로필)카르바메이트 (68.4 mg)의 용액을 주위 온도에서 2시간 동안 교반하고, NaCNBH4 (8.27 mg)를 첨가하였다. 반응물을 주위 온도에서 하룻밤 교반하였다. 메탄올 (1 mL) 및 물 (0.2 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 10분 동안 교반하고 농축하였다. 잔사를 디메틸 술폭시드 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산 수용액 중 30 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다. MS (ESI) m/e 459.4 (M+2H)2+.
1.64.2 3-{1-[(3-{2-[(3-아미노프로필)(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산
0℃ 에서 디클로로메탄 (4 mL) 중 실시예 1.64.1 (100 mg)을 트리플루오로아세트산 (1 mL)으로 1시간 동안 처리하고, 혼합물을 농축하였다. 잔사를, 0.1% 트리플루오로아세트산 수용액 중 10 내지 60% 아세토니트릴의 구배로 용출시키는 역상 HPLC (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.38 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.90-7.69 (m, 6H), 7.44 (s, 2H), 7.35 (td, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.22-7.16 (m, 1H), 3.94 (d, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.64 (t, 2H), 3.28-2.98 (m, 4H), 2.87-2.70 (m, 8H), 2.19 (s, 3H), 1.90 (dp, 4H), 1.43 (s, 2H), 1.36 1.22 (m, 4H), 1.15 (s, 4H), 1.08-0.95 (m, 2H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 817.6 (M+H)+.
1.65 3-{1-[(3-{2-[아제티딘-3-일(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산 (W2.65)의 합성
1.65.1 6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일)-3-(1-((3-(2-((1-(tert-부톡시카르보닐)아제티딘-3-일)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
tert-부틸 (3-옥소프로필)카르바메이트를 tert-부틸 3-옥소아제티딘-1-카르복실레이트로 대체하여, 실시예 1.64.1에 기재된 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 915.3 (M+H)+.
1.65.2 3-{1-[(3-{2-[아제티딘-3-일(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 1.64.1을 실시예 1.65.1로 대체하여, 실시예 1.64.2에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.01 (s, 2H), 8.37 (s, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.86-7.70 (m, 3H), 7.44 (s, 2H), 7.34 (td, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.23-7.15 (m, 1H), 4.22 (s, 4H), 4.07 (s, 2H), 3.93 (t, 2H), 3.58 (t, 2H), 3.11 (s, 2H), 2.80 (t, 2H), 2.68 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 1.92 (p, 2H), 1.42 (s, 2H), 1.30 (s, 4H), 1.15 (s, 4H), 1.09-0.96 (m, 2H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 815.5 (M+H)+.
1.66 N6-(37-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-L-리실-N-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]-L-알라닌아미드 (W2.66)의 합성
1.66.1 (S)-6-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥산산
빙조에서 냉각된, 5% NaHCO3 수용액 (300 mL) 및 디옥산 (40 mL)의 혼합물 중 (S)-6-아미노-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥산산 (8.5 g)의 용액에, 디옥산 (40 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 피롤리딘-1-일 카르보네이트 (11.7 g)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온되게 두고 24시간 교반하였다. 3개의 추가의 바이알을 상기에 기재된 바와 같이 설정하였다. 반응이 완료된 후에, 전체 4개의 반응 혼합물을 합하고, 유기 용매를 진공 하에서 제거하였다. 수성 잔사를 염산 수용액 (1N)으로 pH 3으로 산성화시키고, 이어서 에틸 아세테이트 (3 × 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하여 조질 화합물을 얻었고, 이를 메틸 tert-부틸 에테르로부터 재결정화하여 표제 화합물을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 11.05 (br. s., 1H), 7.76 (d, 2H), 7.59 (d, 2H), 7.45 - 7.27 (m, 4H), 6.52 - 6.17 (m, 1H), 5.16 - 4.87 (m, 1H), 4.54 - 4.17 (m, 4H), 3.26 - 2.98 (m, 2H), 1.76 - 1.64 (m, 1H), 1.62 - 1.31 (m, 14H).
1.66.2 tert-부틸 17-히드록시-3,6,9,12,15-펜타옥사헵타데칸-1-오에이트
톨루엔 (800 mL) 중 3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1,14-디올 (40 g)의용액에 포타슘 tert-부톡시드 (20.7 g)을 나누어 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. Tert-부틸 2-브로모아세테이트 (36 g)를 혼합물에 적가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 2개의 추가의 바이알을 상기에 기재된 바와 같이 설정하였다. 반응이 완료된 후에, 전체 3개의 반응 혼합물을 합하였다. 합한 혼합물에 물 (500 mL)을 첨가하고, 혼합물을 1 L로 농축하였다. 혼합물을 디클로로메탄으로 추출하고 1N 포타슘 tert-부톡시드 수용액 (1 L)으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축하여 조질 생성물을 얻었고, 이를 디클로로메탄:메탄올 50:1로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 4.01 (s, 2H), 3.75 - 3.58 (m, 21H), 1.46 (s,9H).
1.66.3 tert-부틸 17-(토실옥시)-3,6,9,12,15-펜타옥사헵타데칸-1-오에이트
디클로로메탄 (500 mL) 중 실시예 1.66.2 (30 g)의 용액에 질소 분위기 하에서 0℃에서 디클로로메탄 (500 mL) 중 4-메틸벤젠-1-술포닐 클로라이드 (19.5 g) 및 트리에틸아민 (10.3 g)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고 물 (100 mL)에 부었다. 용액을 디클로로메탄 (3 × 150 mL)으로 추출하고, 유기 층을 염산 (6N, 15 mL), 이어서 NaHCO3 (5% 수용액, 15 mL) 후에 물 (20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축하여 잔사를 얻었고, 이를 석유 에테르:에틸 아세테이트 10:1 내지 디클로로메탄:메탄올 5:1로 용출시키는, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.79 (d, 2H), 7.34 (d, 2H), 4.18 - 4.13 (m, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.72 - 3.56 (m, 18H), 2.44 (s, 3H), 1.47 (s, 9H).
1.66.4 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-오익 산
테트라히드로푸란 (300 mL) 중 2,5,8,11,14,17-헥사옥사노나데칸-19-올 (32.8 g)의 용액에 0℃에서 수소화나트륨 (1.6 g)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 테트라히드로푸란 (300 mL) 중 실시예 1.66.3 (16 g)의 용액을 실온에서 반응 혼합물에 적가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고 이어서 물 (20 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 또 다른 3시간 동안 교반하여, tert-부틸 에스테르 가수분해를 완료하였다. 최종 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 유기 용매를 제거하였다. 수성 잔사를 디클로로메탄 (2 × 150 mL)으로 추출하였다. 수성 층을 pH 3으로 산성화시키고 이어서 에틸 아세테이트 (2 × 150 mL)로 추출하였다. 수성 층을 농축하여 조질 생성물을 얻었고, 이를 석유 에테르:에틸 아세테이트 1:1 내지 디클로로메탄:메탄올 5:1의 구배로 용출시키는, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 4.19 (s, 2H), 3.80 - 3.75 (m, 2H), 3.73 - 3.62 (m, 40H), 3.57 (dd, 2H), 3.40 (s, 3H).
1.66.5 (43S,46S)-43-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-46-메틸-37,44-디옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사-38,45-디아자헵타테트라콘탄-47-오익 산
표준 Fmoc 고체상 펩티드 합성 절차 및 2-클로로트리틸 수지를 사용하여 실시예 1.66.5를 합성하였다. 무수, 체-건조된(sieve-dried) 디클로로메탄 (100 mL) 중 2-클로로트리틸 수지 (12 g, 100 mmol), (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판산 (10 g, 32.1 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (44.9 mL, 257 mmol)을 14℃에서 24시간 동안 진탕하였다. 혼합물을 여과하고 케이크를 디클로로메탄 (3 × 500 mL), 디메틸포름아미드 (2 × 250 mL) 및 메탄올 (2 × 250 mL)로 세척하였다 (각각의 단계에 대해 5분간). 상기 수지에 20% 피페리딘/디메틸포름아미드 (100 mL)를 첨가하여 Fmoc 기를 제거하였다. 혼합물을 질소로 15분 동안 버블링하고 이어서 여과하였다. 수지를 20% 피페리딘/디메틸포름아미드 (100 mL)로 또 다른 5분 동안 세척하고 (각각의 단계에 5분간), 디메틸포름아미드 (5 × 100 mL)로 세척하여, 탈보호된, L-Ala 로딩된 수지를 제공하였다.
N,N-디메틸포름아미드 (50 mL) 중 실시예 1.66.1 (9.0 g)의 용액에 히드록시벤조트리아졸 (3.5 g), 2-(6-클로로-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸아미늄 헥사플루오로포스페이트 (9.3 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (8.4 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 30분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 D-Ala 로딩된 수지에 첨가하고, 실온에서 90분 동안 질소로 버블링하여 혼합하였다. 혼합물을 여과하고 수지를 디메틸포름아미드로 세척하였다 (각각의 단계에 5분간). 상기 수지에 대략 20% 피페리딘/ N,N-디메틸포름아미드 (100 mL)를 첨가하여 Fmoc 기를 제거하였다. 혼합물을 질소로 15분 동안 버블링하고 여과하였다. 수지를 20% 피페리딘/디메틸포름아미드 (100 mL)로 또 다른 5분 동안 세척하고 (각각의 단계에 5분간), 마지막으로 디메틸포름아미드 (5 × 100 mL)로 세척하였다.
N,N-디메틸포름아미드 (50 mL) 중 실시예 1.66.4 (11.0 g)의 용액에 히드록시벤조트리아졸 (3.5 g), 2-(6-클로로-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸아미늄 헥사플루오로포스페이트 (9.3g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (8.4 mL)을 첨가하고, 혼합물을 수지에 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 질소로 버블링하여 혼합하였다. 혼합물을 여과하고 잔사를 디메틸포름아미드 (5 × 100 mL), 디클로로메탄 (8 × 100 mL)으로 세척하였다 (각각의 단계에 5분간).
최종 수지에 1% 트리플루오로아세트산/디클로로메탄 (100 mL)을 첨가하고 질소를 5분 동안 버블링하였다. 혼합물을 여과하고 여과액을 수집하였다. 절단 작업을 4회 반복하였다. 합한 여과액을 NaHCO3에 의해 pH 7로 만들고 물로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 얻었다. 1H NMR (400MHz, 메탄올-d 4 ) δ 4.44 - 4.33 (m, 1H), 4.08 - 4.00 (m, 1H), 3.98 (s, 2H), 3.77 - 3.57 (m, 42H), 3.57 - 3.51 (m, 2H), 3.36 (s, 3H), 3.25 (t, 2H), 1.77 (br. s., 1H), 1.70 - 1.51 (m, 4H), 1.44 (s, 9H), 1.42 - 1.39 (m, 3H).
1.66.6 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(((43S,46S)-43-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-46-메틸-37,44,47-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사-38,45,48-트리아자펜타콘탄-50-일)옥시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.66.5 (123 mg, 0.141 mmol)를, N-메틸-2-피롤리돈 (1 mL) 중 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (58.9 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.049 mL)과 10분 동안 혼합하고, 이어서 N-메틸-2-피롤리돈 (1.5 mL) 중 실시예 1.2.7 (142 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.049 mL)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 조질 반응 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 5 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 및 C18 25 x 100 mm 컬럼을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 분획들을 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC/MS) m/e 1695.5 (M+H)+.
1.66.7 3-(1-((3-(((43S,46S)-43-아미노-46-메틸-37,44,47-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사-38,45,48-트리아자펜타콘탄-50-일)옥시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 1.66.6 (82 mg)을 1 mL의 트리플루오로아세트산으로 실온에서 30분 동안 처리하였다. 용매를 질소의 온화한 스트림 하에서 증발시키고, 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 5 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 및 C18 25 x 100 mm 컬럼을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 분획들을 동결건조시켜 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.86 (s, 1H), 8.04 (dd, 4H), 7.64 (dt, 2H), 7.55-7.41 (m, 3H), 7.36 (q, 2H), 6.95 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.40-4.27 (m, 1H), 3.93-3.72 (m, 7H), 3.59-3.47 (m, 42H), 3.33-3.27 (m, 3H), 3.23 (s, 5H), 3.05 (dt, 5H), 2.10 (s, 3H), 1.72-1.64 (m, 2H), 1.48-1.36 (m, 4H), 1.35-1.16 (m, 10H), 1.16-0.94 (m, 6H), 0.84 (d, 6H). MS (ESI) m/e 751.8 (2M+H)2+.
1.67 메틸 6-[4-(3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일]-6-데옥시-베타-L-글루코피라노시드 (W2.67)의 합성
1.67.1 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-(펜트-4-인-1-일아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
테트라히드로푸란 (2 mL) 중 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트 (85 mg)의 용액에 펜트-4-인알 (8.7 mg), 아세트산 (20 mg, 0.318) 및 무수 황산나트륨 (300 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (45 mg)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 조질 생성물을 얻었고, 이를 디클로로메탄 (5 mL) 및 트리플루오로아세트산 (3 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 용매의 증발 후에, 잔사를 디메틸 술폭시드/메탄올 (1:1, 3 mL) 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 812.2 (M+H)+.
1.67.2 메틸 6-[4-(3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일]-6-데옥시-베타-L-글루코피라노시드
t-BuOH (2 mL) 및 물 (1 mL) 중 (2R,3R,4S,5S,6S)-2-아지도-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (8.63 mg)의 용액에 실시예 1.67.1 (20 mg), 황산구리 (II) 오수화물 (2.0 mg) 및 아스코르브산나트륨 (5 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 20분 동안 100℃에서 가열하였다. LiOH H2O (50 mg)를 혼합물에 첨가하고, 이를 실온에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 트리플루오로아세트산으로 중화시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 1032.2 (M+H)+.
1.68 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산의 합성
1.68.1 2-((3,5-디메틸-7-((5-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일)메틸)아다만탄-1-일)옥시)에탄올 (W2.68)
아세토니트릴 (120 mL) 중 2-((3-((4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에탄올 (8.9 g) 및 PdCl2(dppf)-CH2Cl2 부가물 (([1,1′-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (1:1), 818 mg)의 용액에 트리메틸아민 (10 mL) 및 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (12.8 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 환류에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각하고 추가 워크업 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 467.3 (M+Na)+.
1.68.2 tert-부틸 6-클로로-3-(1-((3-(2-히드록시에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
테트라히드로푸란 (100 mL) 및 물 (20 mL) 중 tert-부틸 3-브로모-6-클로로피콜리네이트 (6.52 g)의 용액에 실시예 1.68.1 (9.90 g), (1S,3R,5R,7S)-1,3,5,7-테트라메틸-8-테트라데실-2,4,6-트리옥사-8-포스파아다만탄 (0.732 g), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (Pd2(dba)3, 1.02 g), 및 K3PO4 (23.64 g)를 첨가하였다. 혼합물을 환류에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 (500 mL) 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 조질 생성물을 얻었고, 이를 디클로로메탄 중 20% 내지 40% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 530.3 (M+H)+.
1.68.3 tert-부틸 6-클로로-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-((메틸술포닐)옥시)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (30 mL) 및 트리에틸아민 (6 mL) 중 실시예 1.68.2 (3.88 g)의 냉각된 (0℃) 용액에 메탄술포닐 클로라이드 (2.52 g)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (400 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 조질 생성물 (4.6 g)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 608.1 (M+H)+.
1.68.4 tert-부틸 3-{1-[(3-{2-[비스(tert-부톡시카르보닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-클로로피리딘-2-카르복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 실시예 1.68.3 (151 mg)의 용액에 디-tert-부틸 이미노디카르복실레이트 (54 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS (ESI) m/e 729.4 (M+H)+.
1.68.5 7-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1-나프토산
1,4-디옥산 (10 mL) 및 물 (5 mL) 중 메틸 7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-나프토에이트 (257 mg)의 용액에 실시예 1.68.4 (600 mg), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (57.8 mg), 및 CsF (375 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 120℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 조질 생성물을 얻었고, 이를 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 디-에스테르 중간체를 제공하였다. 잔사를 테트라히드로푸란 (10 mL), 메탄올 (5 mL) 및 물 (5 mL) 중에 용해시키고 LiOH H2O (500 mg)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 2N HCl 수용액으로 산성화시키고, 400 mL의 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 765.3 (M+H)+.
1.68.6 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)피콜린산
디클로로메탄 (10 mL) 중 실시예 1.68.5 (500 mg)의 용액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (98 mg), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 (251 mg) 및 4-디메틸아미노피리딘 (160 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (400 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 디클로로메탄 및 트리플루오로아세트산 (10 mL, 1:1) 중에 용해시켰다. 하룻밤 교반한 후에, 용액을 감압 하에 농축하였다. 잔사를, N,N-디메틸포름아미드 (12 mL) 중에 용해시키고, (0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 및 C18 컬럼을 사용하는) 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 741.2 (M+H)+.
1.68.7 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 실시예 1.68.6 (35 mg)의 용액에 tert-부틸 아크릴레이트 (120 mg) 및 H2O (138 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (400 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 디클로로메탄 및 트리플루오로아세트산 (10 mL, 1:1) 중에 용해시켰다. 16시간 후에, 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔사를, N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.08 (s, 1H), 8.99 (d, 1H), 8.43-8.24 (m, 4H), 8.24-8.11 (m, 3H), 8.04 (d, 1H), 7.99 (d, 1H), 7.90 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.74-7.62 (m, 1H), 7.53-7.43 (m, 2H), 7.35 (q, 1H), 3.87 (s, 2H), 3.08 (dp, 4H), 2.62 (t, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.43 (s, 2H), 1.29 (q, 4H), 1.14 (s, 4H), 1.03 (q, 2H), 0.85 (s, 6H).
1.69 6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산의 합성
1.69.1 메틸 3-브로모퀴놀린-5-카르복실레이트 (W2.69)
메탄올 (30 mL) 중 3-브로모퀴놀린-5-카르복실산 (2 g)의 용액에 진한 H2SO4 (5 mL)를 첨가하였다. 용액을 환류에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트 (300 mL) 중에 용해시키고 Na2CO3 수용액, 물 및 염수로 세척하였다. 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후에, 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 266 (M+H)+.
1.69.2 메틸 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)퀴놀린-5-카르복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 실시예 1.69.1 (356 mg)의용액에 PdCl2(dppf)-CH2Cl2 부가물 ([1,1′-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (1:1), 55 mg) 아세트산칼륨 (197 mg) 및 비스(피나콜레이토)디보론 (510 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각하고 추가 워크업 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 339.2 (M+Na)+.
1.69.3 메틸 3-[5-{1-[(3-{2-[비스(tert-부톡시카르보닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일]퀴놀린-5-카르복실레이트
1,4-디옥산 (10 mL) 및 물 (5 mL) 중 실시예 1.69.2 (626 mg)의 용액에 실시예 1.68.4 (1.46 g), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (140 mg), 및 CsF (911 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 120℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트 (1 L)로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 880.3 (M+H)+.
1.69.4 3-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)퀴놀린-5-카르복실산
테트라히드로푸란 (10 mL), 메탄올 (5 mL) 및 물 (5 mL) 중 실시예 1.69.3 (1.34 g)의 용액에 LiOH H2O (120 mg)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 2N HCl 수용액으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트 (400 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 766.3 (M+H)+.
1.69.5 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(5-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일)피콜린산
디클로로메탄 (10 mL) 중 실시예 1.69.4 (200 mg)의 용액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (39.2 mg), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 (50 mg) 및 4-디메틸아미노피리딘 (32 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄 및 트리플루오로아세트산 (10 mL, 1:1) 중에 용해시키고, 반응물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를, N,N-디메틸포름아미드 (12 mL) 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 742.1 (M+H)+.
1.69.6 6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 실시예 1.69.5 (36 mg)의 용액에 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (22 mg) 및 H2O (0.3 mL))를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 및 트리플루오로아세트산 (10 mL, 1:1)으로 희석하고 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를, N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.19 (s, 2H), 9.70 (d, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.31 (d, 2H), 8.16 (d, 1H), 8.06 (d, 1H), 8.01 (d, 1H), 7.98-7.88 (m, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.52-7.43 (m, 2H), 7.37 (q, 1H), 3.89 (s, 2H), 3.22 (p, 2H), 3.10 (q, 2H), 2.80 (t, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.43 (s, 2H), 1.30 (q, 4H), 1.23-1.10 (m, 4H), 1.04 (q, 2H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 850.2 (M+H)+.
1.70 6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (W2.70)의 합성
1.70.1 에틸 6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)퀴놀린-4-카르복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 에틸 6-브로모퀴놀린-4-카르복실레이트 (140 mg)의 용액에 PdCl2(dppf)-CH2Cl2 부가물 (([1,1′-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (1:1), 20.42 mg), 아세트산칼륨 (147 mg) 및 비스(피나콜레이토)디보론 (190 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각하고 추가 워크업 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 328.1(M+H)+.
1.70.2 에틸 6-[5-{1-[(3-{2-[비스(tert-부톡시카르보닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일]퀴놀린-4-카르복실레이트
1,4-디옥산 (10 mL) 및 물 (5 mL) 중 실시예 1.70.1 (164 mg)의 용액에 실시예 1.68.4 (365 mg), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (35 mg), 및 CsF (228 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 120℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트 (1 L)로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 894.3 (M+H)+.
1.70.3 6-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)퀴놀린-4-카르복실산
테트라히드로푸란 (20 mL), 메탄올 (10 mL) 및 물 (10 mL) 중 실시예 1.70.2 (3.1 g)의 용액에 LiOH H2O(240 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 2N HCl 수용액으로 산성화시키고 에틸 아세테이트 (400 mL)로 희석하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 766.3 (M+H)+.
1.70.4 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(4-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-6-일)피콜린산
디클로로메탄 (30 mL) 중 실시예 1.70.3 (4.2 g)의 용액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (728 mg), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 (1.40 g) 및 4-디메틸아미노피리딘 (890 mg)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 디클로로메탄 및 트리플루오로아세트산 (10 mL, 1:1) 중에 용해시키고, 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를, N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 742.2 (M+H)+.
1.70.5 6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 실시예 1.70.4 (111 mg)의 용액에 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸에텐술포네이트 (67 mg), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.2 mL) 및 H2O (0.3 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 및 트리플루오로아세트산 (10 mL, 1:1)으로 희석하고 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를, N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.31 (s, 1H), 9.10 (d, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.58 (dd, 1H), 8.47-8.16 (m, 4H), 8.06 (dd, 1H), 7.99-7.89 (m, 2H), 7.79 (d, 1H), 7.53-7.43 (m, 2H), 7.42-7.31 (m, 1H), 3.87 (s, 2H), 3.53 (d, 1H), 3.20 (p, 2H), 3.07 (p, 2H), 2.78 (t, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.40 (s, 2H), 1.28 (q, 4H), 1.21-1.07 (m, 4H), 1.02 (q, 2H), 0.84 (s, 6H). MS (ESI) m/e 850.1 (M+H)+.
1.71 6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (W2.71)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 실시예 1.69.5 (140 mg)의 용액에 tert-부틸 아크릴레이트 (242 mg), 및 H2O (0.3 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 주말 내내 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 및 트리플루오로아세트산 (10 mL, 1:1)으로 희석하고 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를, N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.17 (s, 2H), 9.69 (d, 1H), 9.37 (d, 1H), 8.30 (dd, 3H), 8.15 (dd, 1H), 8.04 (dd, 1H), 7.99-7.88 (m, 2H), 7.79 (d, 1H), 7.53-7.40 (m, 2H), 7.34 (td, 1H), 3.88 (s, 2H), 3.55 (t, 2H), 3.08 (dt, 4H), 2.62 (t, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.43 (s, 2H), 1.29 (q, 4H), 1.14 (s, 4H), 1.03 (q, 2H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 814.2 (M+H)+.
1.72 6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5,6-디히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (W2.72)의 합성
1.72.1 에틸 7-(5-브로모-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일)-5,6,7,8-테트라히드로이미다조[1,5-a]피라진-1-카르복실레이트
실시예 1.1.11에서 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트 히드로클로라이드를 에틸 5,6,7,8-테트라히드로이미다조[1,5-a]피라진-1-카르복실레이트 히드로클로라이드로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 451, 453 (M+H)+, 395, 397 (M-tert-부틸)+.
1.72.2 에틸 7-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-일)-5,6,7,8-테트라히드로이미다조[1,5-a]피라진-1-카르복실레이트
실시예 1.2.1에서 실시예 1.1.11을 실시예 1.72.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 499 (M+H)+, 443 (M- tert-부틸)+, 529 (M+CH3OH-H)-.
1.72.3 에틸 7-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-5,6,7,8-테트라히드로이미다조[1,5-a]피라진-1-카르복실레이트
실시예 1.13.4에서 실시예 1.2.1을 실시예 1.72.2로 대체하고 실시예 1.13.3을 실시예 1.55.11로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 760 (M+H)+, 758 (M-H)-.
1.72.4 7-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-5,6,7,8-테트라히드로이미다조[1,5-a]피라진-1-카르복실산
실시예 1.1.13에서 실시예 1.1.12를 실시예 1.72.3으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 760 (M+H)+, 758 (M-H)-.
1.72.5 tert-부틸 6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-5,6-디히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일)-3-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.52.3에서 실시예 1.52.2를 실시예 1.72.4로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 892 (M+H)+, 890 (M-H)-.
1.72.6 3-(1-{[3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5,6-디히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 1.1.17에서 실시예 1.1.16을 실시예 1.72.5로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 736 (M+H)+, 734 (M-H)-.
1.72.7 6-(1-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-5,6-디히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일)-3-(1-((3-(2-((2-(((4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2-메틸부탄-2-일)옥시)술포닐)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
실시예 1.2.8에서 실시예 1.2.7을 실시예 1.72.6으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다.
1.72.8 6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5,6-디히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.9에서 실시예 1.2.8을 실시예 1.72.7로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 8.36 (bs, 2H), 8.03 (bs, 1H), 7.99 (d, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.46 (t, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.33 (t, 1H), 7.17 (d, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.28 (t, 2H), 4.11 (t, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.56 (t, 2H), 3.24 (m, 2H), 3.11 (m, 2H), 2.82 (t, 2H), 2.15 (s, 3H), 1.42 (s, 2H), 1.32 (q, 4H), 1.17 (q, 4, H), 1.03 (m, 2H), 0.88 (s, 6H). MS (ESI) m/e 844 (M+H)+, 842 (M-H)-.
1.73 8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-{6-카르복시-5-[1-({3-[2-({3-[1-(베타-D-글루코피라누로노실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로필}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-일}-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린 (W2.73)의 합성
t-CH3OH (2 mL) 및 물 (1 mL) 중 (2R,3R,4S,5S,6S)-2-아지도-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (8.63 mg)의 용액에 실시예 1.67.1 (20 mg), 황산구리(II) 오수화물 (2.0 mg) 및 아스코르브산나트륨 (5 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 20분 동안 100℃에서 교반하였다. LiOH H2O (50 mg)를 혼합물에 첨가하고, 교반을 하룻밤 계속하였다. 혼합물을 트리플루오로아세트산으로 중화시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 987.3 (M+H)+.
1.74 6-[7-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1H-인돌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (W2.74)의 합성
1.74.1 메틸 2-[5-{1-[(3-{2-[비스(tert-부톡시카르보닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일]-1H-인돌-7-카르복실레이트
실시예 1.1.12에서 실시예 1.2.1을 메틸 2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-인돌-7-카르복실레이트로 대체하고 실시예 1.1.6을 실시예 1.68.4로 대체하여 실시예 1.74.1을 제조하였다. MS (ESI) m/e 866.3 (M-H)-.
1.74.2 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1H-인돌-7-카르복실산
실시예 1.1.13에서 실시예 1.1.12를 실시예 1.74.1로 대체하여 실시예 1.74.2를 제조하였다. MS (ESI) m/e 754.4 (M+H)+.
1.74.3 tert-부틸 6-(7-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1H-인돌-2-일)-3-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.1.14에서 실시예 1.1.13을 실시예 1.74.2로 대체하여 실시예 1.74.3을 제조하였다. MS (ESI) m/e 886.5 (M+H)+.
1.74.4 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(7-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-1H-인돌-2-일)피콜린산
실시예 1.1.17에서 실시예 1.1.16을 실시예 1.74.3으로 대체하여 실시예 1.74.4를 제조하였다. MS (ESI) m/e 730.2 (M+H)+.
1.74.5 6-[7-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1H-인돌-2-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[(2,2,7,7-테트라메틸-10,10-디옥시도-3,3-디페닐-4,9-디옥사-10l6-티아-13-아자-3-실라펜타데칸-15-일)옥시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.8에서 실시예 1.2.7을 실시예 1.74.4로 대체하여 실시예 1.74.5를 제조하였다. MS (ESI) m/e 1176.7 (M+H)+.
1.74.6 6-[7-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1H-인돌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.9에서 실시예 1.2.8을 실시예 1.74.5로 대체하여 실시예 1.74.6을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δ ppm 11.32 (d, 1H), 8.23 (dd, 1H), 8.18 (d, 1H), 7.93-7.82 (m, 3H), 7.71 (d, 1H), 7.62 (s, 3H), 7.57-7.51 (m, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.22 (t, 1H), 4.86 (t, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.47 (t, 2H), 3.08 (t, 2H), 2.88 (p, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.37 (s, 2H), 1.32-1.20 (m, 4H), 1.14 (q, 4H), 1.07-0.94 (m, 2H), 0.84 (s, 6H). MS (ESI) m/e 838.2 (M+H)+.
1.75 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-6-[3-(메틸아미노)프로필]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (W2.75)의 합성
1.75.1 메틸 3-브로모-5-(브로모메틸)벤조에이트
아조비스이소부티로니트릴 (1.79 g)을 350 mL 아세토니트릴 중 메틸 3-브로모-5-메틸벤조에이트 (50 g) 및 N-브로모숙신이미드 (44.7 g)에 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 환류시켰다. 추가 11 g의 N-브로모숙신이미드 및 0.5 g의 아조비스이소부티로니트릴을 첨가하고, 환류를 3시간 동안 계속하였다. 혼합물을 농축하고, 500 mL 디에틸 에테르 중에 용해시키고, 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 생성된 용액을 농축하였다. 조질 생성물을, 헵탄 중 10% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.75.2 메틸 3-브로모-5-(시아노메틸)벤조에이트
테트라부틸암모늄 시아니드 (50 g)를 300 mL 아세토니트릴 중 실시예 1.75.1 (67.1 g)에 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 70℃까지 가열하였다. 혼합물을 냉각하고, 디에틸 에테르에 붓고, 물 및 염수로 헹구었다. 이어서 혼합물을 농축하고, 헵탄 중 2 내지 20% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.75.3 메틸 3-(2-아미노에틸)-5-브로모벤조에이트
보란-THF 복합체 (126 mL, 1 M 용액)를 200 mL 테트라히드로푸란 중 실시예 1.75.2 (16 g)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 반응물을 메탄올 (50 mL)로 주의 깊게 켄칭하고, 이어서 50 mL 부피로 농축하였다. 혼합물을 120 mL 메탄올 / 120 mL 4M HCl / 120 mL 디옥산 중에용해시키고, 하룻밤 교반하였다. 유기물을 감압 하에 제거하고, 잔사를 디에틸 에테르로 2회 추출하였다. 추출물을 폐기하였다. 유기 층을 고체 K2CO3으로 염기성화시키고, 이어서 에틸 아세테이트, 및 디클로로메탄 (2x)으로 추출하였다. 추출물을 합하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.75.4 메틸 3-브로모-5-(2-(2,2,2-트리플루오로아세트아미도)에틸)벤조에이트
트리플루오로아세트산 무수물 (9.52 mL)을 0℃에서 200 mL 디클로로메탄 중 실시예 1.75.3 (14.5 g) 및 트리메틸아민 (11.74 mL)의 혼합물에 적가하였다. 첨가 시에 혼합물을 실온까지 가온되게 두고 3일 동안 교반하였다. 혼합물을 디에틸 에테르에 붓고, NaHCO3 용액 및 염수로 세척하였다. 혼합물을 농축하고, 헵탄 중 5 내지 30% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.75.5 메틸 6-브로모-2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
용액 (40 mL)으로 될 때까지 황산을 실시예 1.75.4 (10 g)에 첨가하였고, 이때 파라포름알데히드 (4.24 g)를 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 이어서 용액을 400 mL 얼음에 붓고, 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3x)로 추출하고, 합한 추출물을 NaHCO3 용액 및 염수로 세척하고, 이어서 농축하였다. 조질 생성물을, 헵탄 중 2 내지 15% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.75.6 메틸 6-(3-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
50℃에서 50 mL 디옥산 중에서 실시예 1.75.5 (5.1 g), tert-부틸 메틸(프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (2.71 g), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (PdCl2(PPh3)2, 0.49 g), CuI (0.106 g), 및 트리에틸아민 (5.82 mL)의 용액을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 헵탄 중 10 내지 50% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.75.7 메틸 6-(3-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)프로필)-2-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
250 mL 압력병 내에서 실시예 1.75.6 (4.2 g), 테트라히드로푸란 (20 mL) 및 메탄올 (20.00 mL)을 첨가하여 20% Pd(OH)2/C (3 g)을 습윤시키고 50 psi의 압력 및 50℃에서 12시간 동안 진탕하였다. 용액을 여과하고 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.75.8 메틸 2-(5-브로모-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일)-6-(3-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)프로필)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
60 mL 테트라히드로푸란, 25 mL 메탄올, 및 10 mL 물 중에서 실시예 1.75.7 (4.22 g), 및 탄산칼륨 (1.53 g)을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고 60 mL N,N-디메틸포름아미드를 첨가하였다. 이어서 여기에 실시예 1.1.9 (3.05 g) 및 트리에틸아민 (5 mL)을 첨가하고, 반응물을 60℃에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각하고, 에틸 아세테이트 (600 mL)에 붓고, 물 (3x) 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 및 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 5 내지 50% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 618.2 (M+H)+.
1.75.9 메틸 6-(3-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)프로필)-2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
25 mL 아세토니트릴 중 실시예 1.75.8 (3.7 g), 트리에틸아민 (2.50 mL) 및 PdCl2(dppf) (([1,1′-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (1:1), 0.29 g)의 용액에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (1.74 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 5시간 동안 75℃까지 가열하고, 이어서 60℃에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 헵탄 중 5 내지 50% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 666.4 (M+H)+.
1.75.10 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 2-((2-((3-((4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)아미노)에탄술포네이트
45℃에서 30 mL N,N-디메틸포름아미드 중에서 실시예 1.55.10 (2.39 g), 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (2.41 g), 및 트리에틸아민 (1.51 mL)을 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각하고, 디에틸 에테르 (400 mL)에 붓고, 디에틸 에테르 용액을 물 (3x) 및 염수로 세척하고, 농축하였다. 조질 생성물을, 1% 트리에틸아민이 첨가된, 헵탄 중 2 내지 50% 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 890.6 (M+H)+.
1.75.11 6-(6-(3-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)프로필)-8-(메톡시카르보닐)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((2-((4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
실시예 1.75.9 (1.777 g), 실시예 1.75.10 (1.98 g), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.102 g), 1,3,5,7-테트라메틸-8-테트라데실-2,4,6-트리옥사-8-포스파아다만탄 (0.918 g), 및 인산칼륨 (1.889 g)을 25 mL 디옥산 / 10 mL 물에 첨가하고, 용액을 수회 진공화/질소 충전하였다. 반응물은 투명하였고, 이를 70℃에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 냉각하고 에틸 아세테이트 (200 mL)에 붓고, 물 및 염수로 세척하였다. 혼합물을 농축하고, 헵탄 중 5 내지 50% 에틸 아세테이트 후에, 1% 트리에틸아민을 갖는 에틸 아세테이트 중 10% 메탄올로 크로마토그래피하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1301.4 (M+H)+.
1.75.12 6-(3-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)프로필)-2-(5-(1-((3-(2-((2-((4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-카르복시피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산
45℃에서 15 mL 테트라히드로푸란 및 3 mL 물 중에서 실시예 1.75.11(1.5 g) 및 LiOH-H2O (0.096 g)를 10일 동안 교반하였다. 혼합물을 200 mL 에틸 아세테이트 / 20 mL NaH2PO4 용액에 붓고, pH가 3에 도달할 때까지 진한 HCl 용액을 첨가하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 농축하였다. 잔사를, 에틸 아세테이트 중 0 내지 5% 메탄올을 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1287.3 (M+H)+.
1.75.13 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-6-(3-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)프로필)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((2-((4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
실시예 1.2.5를 실시예 1.75.12로 대체하여 실시예 1.2.6에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다.MS (ESI) m/e 1419.5 (M+H)+.
1.75.14 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-6-[3-(메틸아미노)프로필]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.8을 실시예 1.75.13으로 대체하여 실시예 1.2.9에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.90 (bs, 1H), 8.33 (m, 2H), 8.02 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.66 (m, 1H), 7.47 (m, 3H), 7.35 (m, 3H), 7.25 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 4.95 (s, 2H), 4.28 (t, 2H), 4.11 (t, 2H), 3.95 (m, 2H), 3.20 (m, 2H), 3.08 (m, 2H), 2.96 (m, 2H), 2.89 (m, 2H), 2.78 (m, 2H), 2.65 (m, 2H), 2.55 (t, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.95 (m, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.25 (m, 6H), 1.12 (m, 6H), 0.93 (s, 3H), 0.85 (s, 6H). MS (ESI) m/e 926.8 (M+H)+.
1.76 5-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-5-데옥시-D-아라비니톨 (W2.76)의 합성
1.76.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-((((4R,4'R,5R)-2,2,2',2'-테트라메틸-[4,4'-비(1,3-디옥솔란)]-5-일)메틸)아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.2.7 (75 mg) 및 (4R,4'R,5S)-2,2,2',2'-테트라메틸-[4,4'-비(1,3-디옥솔란)]-5-카르브알데히드 (22 mg)를 디클로로메탄 (1 mL) 중에 용해시켰다. 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (40 mg)를 첨가하고, 용액을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 용액을 감압 하에 농축하고, 이 물질을, 디클로로메탄 중 5 내지 10% 메탄올로 용출시키는, 실리카겔 상에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1016 (M+H)+, 1014 (M-H)-.
1.76.2 5-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-5-데옥시-D-아라비니톨
실시예 1.76.1 (45 mg)을 트리플루오로아세트산 (1 mL) 및 물 (0.2 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 실온에서 5일 동안 혼합하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 이 물질을 메탄올 (2 mL) 중에 용해시켰다. 이 물질을, Luna 컬럼: C18(2), 100 A, 250 x 30 mm이 구비된 Grace Reveleris 상에서 30분에 걸쳐 물(w/0.1% TFA) 중 25 내지 75% 아세토니트릴을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 분획들을 풀링(pooling)하고, 동결시키고, 및 동결건조시켜 표제 화합물을 비스 트리플루오로아세트산 염으로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.85 (bs, 2H), 8.31 (m, 1H), 8.16 (m, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.51-7.43 (m, 3H), 7.37 (q, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.69 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.04 (t, 2H), 3.89 (m, 2H), 3.59 (m, 3H), 3.49 (m, 4H), 3.42 (dd, 2H), 3.22 (dd, 2H), 3.06 (m, 2H), 3.02 (m, 4H), 2.10 (s, 3H), 1.43 (s, 2H), 1.30 (q, 4H), 1.14 (t, 4H), 1.04 (q, 2H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 880 (M+H)+, 878 (M-H)­.
1.77 1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨 (W2.77)의 합성
1.77.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-(((3R,4S,5R)-3,4,5,6-테트라히드록시헥실)아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
(4R,5S,6R)-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2,4,5-트리올 (15 mg)을 디메틸 술폭시드 (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 실시예 1.2.7 (88 mg)을 첨가한 후에, 소듐 시아노보로히드리드 (27 mg)를 첨가하였다. 아세트산 (82 mg)을 적가하고, 용액을 60℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응물을 냉각하고, 1 mL의 메탄올로 희석하고, Luna 컬럼: C18(2), 100 A, 250 x 30 mm이 구비된 Grace Reveleris 상에서 60분에 걸쳐 물(w/0.1% TFA) 중 25 내지 75% 아세토니트릴을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 분획들을 풀링하고, 동결시키고, 및 동결건조시켜 표제 화합물을 비스 트리플루오로아세트산 염으로서 수득하였다. MS (ESI) m/e 950 (M+H)+, 948 (M-H)-.
1.77.2 1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨
실시예 1.77.1 (39 mg)을 디클로로메탄 (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 트리플루오로아세트산 (740 mg)을 첨가하고, 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔사를 N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중에 용해시키고 1 M 수산화나트륨 수용액 (0.5 mL)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 트리플루오로아세트산 (0.25 mL)을 첨가하고, 이 물질을, Luna 컬럼: C18(2), 100 A, 150 x 60 mm이 구비된 Grace Reveleris 상에서 30분에 걸쳐 물(w/0.1% TFA) 중 20 내지 75% 아세토니트릴을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 분획들을 풀링하고, 동결시키고, 및 동결건조시켜 표제 화합물을 비스 트리플루오로아세트산 염으로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δppm 12.86 (s, 1H), 12.74 (bs, 1H), 8.28 (bs, 1H), 8.20 (bs, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.51-7.43 (m, 3H), 7.37 (q, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.53 (bs, 3H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.77 (d, 1H), 3.60 (dd, 2H), 3.56 (t, 2H), 3.48 (m, 2H), 3.15 (d, 1H), 3.02 (m, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.84 (m, 1H), 1.69 (m, 1H), 1.43 (s, 2H), 1.31 (q, 4H), 1.14 (t, 4H), 1.05 (q, 2H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 894 (M+H)+, 892 (M-H)-.
1.78 6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)이소퀴놀린-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (W2.78)의 합성
1.78.1 메틸 6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)이소퀴놀린-4-카르복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (30 mL) 중 메틸 6-브로모이소퀴놀린-4-카르복실레이트 (1.33 g)의 용액에 PdCl2(dppf)-CH2Cl2 부가물 (([1,1′-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (1:1), 204 mg), 아세트산칼륨 (1.48 g) 및 비스(피나콜레이토)디보론 (1.92 g)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각하고 추가 워크업 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (APCI) m/e 313.3 (M+H)+.
1.78.2 메틸 6-[5-{1-[(3-{2-[비스(tert-부톡시카르보닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일]이소퀴놀린-4-카르복실레이트
1,4-디옥산 (20 mL) 및 물 (10 mL) 중 실시예 1.68.4 (1.2 g)의 용액에 실시예 1.78.1 (517 mg), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (58 mg), 및 CsF (752 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 환류에서 하룻밤 교반하였다. LC/MS는 예상 생성물을 주요 피크로서 나타내었다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 디클로로메탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 880.8 (M+H)+.
1.78.3 6-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)이소퀴놀린-4-카르복실산
테트라히드로푸란 (20 mL), 메탄올 (10 mL) 및 물(10 mL) 중 실시예 1.78.2 (3.1 g)의 용액에 LiOH H2O (240 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 2N HCl 수용액으로 산성화시키고 에틸 아세테이트 (400 mL)로 희석하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 766.4 (M+H)+.
1.78.4 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(4-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)이소퀴놀린-6-일)피콜린산
디클로로메탄 (20 mL) 중 실시예 1.78.3 (1.2 g)의 용액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (0.236 g), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 (451 mg), 및 4-디메틸아미노피리딘 (288 mg)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 디클로로메탄 및 트리플루오로아세트산 (10 mL, 1:1) 중에 용해시키고, 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를, N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 742.1 (M+H)+.
1.78.5 6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)이소퀴놀린-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
N,N-디메틸포름아미드 (6 mL) 중 실시예 1.78.4 (55 mg)의 용액에 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (34 mg), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.6 mL) 및 H2O (0.6 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 및 트리플루오로아세트산 (10 mL, 1:1)으로 희석하고 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를, N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.25 (s, 2H), 9.58 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.52 (dd, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.35 (d, 2H), 8.26 (d, 1H), 8.11-8.03 (m, 1H), 8.01 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.52-7.44 (m, 2H), 7.41-7.28 (m, 1H), 3.89 (s, 2H), 3.55 (t, 2H), 3.22 (t, 2H), 3.09 (s, 2H), 2.80 (t, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.43 (s, 2H), 1.30 (q, 4H), 1.23-1.11 (m, 4H), 1.04 (q, 2H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI+) m/e 850.1 (M+H)+.
1.79 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (W2.79)의 합성
1.79.1 2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-카르브알데히드
디클로로메탄 (10 mL) 중 피리디늄 클로로크로메이트 (1.1 g) 및 규조토 (10 g)의 교반된 현탁액에, 디클로로메탄 (3 mL) 중의 용액으로서의 (2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메탄올 (0.5 g)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 현탁액을 규조토를 통해 여과하고 에틸 아세테이트로 세척하였다. 조질 생성물을 실리카겔을 통해 여과하고 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (501 MHz, 클로로포름-d) δ 9.89 (s, 1H), 4.28-4.17 (m, 4H), 2.42-2.32 (m, 1H), 1.49 (s, 3H), 1.39 (s, 3H). MS (ESI) m/e 305.9 (2M+NH4)+.
1.79.2 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-(((2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (1 mL) 중 실시예 1.2.7 (100 mg) 및 실시예 1.79.1 (20 mg)의 용액에 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (40 mg)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 디클로로메탄으로 희석하고 중탄산나트륨 포화 용액으로 세척하였다. 수성 층을 디클로로메탄으로 역추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 내지 100% 에틸 아세테이트/에탄올 (3:1)로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 930.3 (M+H)+.
1.79.3 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.9에서 실시예 1.2.8을 실시예 1.79.2로 대체하여 실시예 1.79.3을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.82 (s, 1H), 8.13 (s, 2H), 8.00 (dd, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.49-7.38 (m, 3H), 7.37-7.29 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 6.92 (d, 1H), 4.92 (s, 4H), 3.85 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.53 (t, 2H), 3.47 (dd, 2H), 3.00 (dt, 7H), 2.07 (s, 3H), 1.93 (p, 1H), 1.38 (s, 2H), 1.32-1.19 (m, 4H), 1.16-0.91 (m, 6H), 0.83 (s, 7H). MS (ESI) m/e 834.3 (M+H)+.
1.80 1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1,2-디데옥시-D-에리스로-펜티톨 (W2.80)의 합성
실시예 1.77.1에서 (4R,5S,6R)-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2,4,5-트리올을 (4S,5R)-테트라히드로-2H-피란-2,4,5-트리올로 대체하고 실시예 1.2.7을 실시예 1.3.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.85 (bs, 1H), 12.72 (bs, 1H), 8.21 (bs, 2H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.52-7.42 (m, 3H), 7.37 (q, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.56 (m, 2H), 3.38 (m, 2H), 3.32 (m, 2H), 3.24 (m, 2H), 3.03 (m, 5H), 2.10 (s, 3H), 1.89 (m, 1H), 1.67 (m, 1H), 1.44 (s, 2H), 1.31 (q, 4H), 1.14 (t, 4H), 1.05 (q, 2H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 864 (M+H)+, 862 (M-H)-.
1.81 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{[(2S,3S)-2,3,4-트리히드록시부틸]아미노}에톡시)트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (W2.81)의 합성
1.81.1 탄산 tert-부틸 에스테르 (4S,5S)-5-히드록시메틸-2,2-디메틸-[1,3]디옥솔란-4-일메틸 에스테르
((4S,5S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4,5-디일)디메탄올 (1000 mg)을 N,N-디메틸포름아미드 (50 mL) 중에 용해시켰다. 수소화나트륨 (광유 중 60%, 259 mg)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 15분 동안 혼합하였다. 디-tert-부틸 디카르보네이트 (1413 mg)를 천천히 첨가하였다. 용액을 30분 동안 혼합하고, 반응물을 암모늄 클로라이드 포화 수용액으로 켄칭하였다. 용액을 물 (150 mL)로 희석하고 헵탄 중 70% 에틸 아세테이트를 사용하여 2회 추출하였다. 유기 부분을 합하고 물 (100 mL)로 추출하고, 염수 (50 mL)로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용액을 감압 하에 농축하고, 이 물질을, 헵탄 중 30% 에틸 아세테이트로 용출시키는, 실리카겔 상에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 284 (M+Na)+.
1.81.2 탄산 tert-부틸 에스테르 (4S,5R)-5-포르밀-2,2-디메틸-[1,3]디옥솔란-4-일메틸 에스테르
실시예 1.81.1 (528 mg)을 디클로로메탄 (20 mL) 중에 용해시켰다. 데스-마틴 페리오디난 (896 mg)을 첨가하고, 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용액을 감압 하에 농축하고, 이 물질을, 헵탄 중 20% 내지 50% 에틸 아세테이트로 용출시키는, 실리카겔 상에서의 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 제공하였다.
1.81.3 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4S,5S)-5-(((tert-부톡시카르보닐)옥시)메틸)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.76.1에서 (4R,4'R,5S)-2,2,2',2'-테트라메틸-[4,4'-비(1,3-디옥솔란)]-5-카르브알데히드를 실시예 1.81.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다.
1.81.4 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{[(2S,3S)-2,3,4-트리히드록시부틸]아미노}에톡시)트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산
실시예 1.76.2에서 실시예 1.76.1을 실시예 1.81.3으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.86 (bs, 2H), 8.28 (bs, 1H), 8.18 (bs, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.51-7.43 (m, 3H), 7.36 (q, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (m, 3H), 3.46 (m, 4H), 3.40 (m, 4H), 3.08-2.96 (m, 6H), 2.10 (s, 3H), 1.43 (s, 2H), 1.30 (q, 4H), 1.14 (t, 4H), 1.04 (q, 2H), 0.87 (s, 6H). MS (ESI) m/e 850 (M+H)+, 848 (M-H)-.
1.82 6-[8 -(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2S,3S,4R,5R,6R)-2,3,4,5,6,7-헥사히드록시헵틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (W2.82)의 합성
실시예 1.77.1에서 (4R,5S,6R)-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2,4,5-트리올을 (2R,3R,4S,5R,6R)-2,3,4,5,6,7-헥사히드록시헵타날로 대체하고 실시예 1.2.7을 실시예 1.3.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.86 (bs, 1H), 8.34-8.08 (m, 2H), 8.05 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.54-7.43 (m, 3H), 7.37 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.93 (m, 2H), 3.90 (m, 4H), 3.83 (s, 2H), 3.47 (m, 4H), 3.41 (m, 4H), 3.18-3.08 (m, 7H), 3.03 (t, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.46 (s, 2H), 1.28 (q, 4H), 1.15 (t, 4H), 1.05 (q, 2H), 0.89 (s, 6H). MS (ESI) m/e 940 (M+H)+.
1.83 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[({3-[(1,3-디히드록시프로판-2-일)아미노]프로필}술포닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (W2.83)의 합성
1.83.1 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-(3-((1,3-디히드록시프로판-2-일)아미노)프로필술폰아미도)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (1 mL) 중 실시예 1.2.7 (31 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (60 L)의 냉각된 (빙조) 용액에 3-클로로프로판-1-술포닐 클로라이드 (5 L)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축하고, N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중에 용해시키고, 2 mL 마이크로파 튜브로 옮기고 2-아미노프로판-1,3-디올 (70 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 130℃에서 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 90분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 100% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 997.2 (M+H)+.
1.83.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[({3-[(1,3-디히드록시프로판-2-일)아미노]프로필}술포닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.9에서 실시예 1.2.8을 실시예 1.83.1로 대체하여 실시예 1.83.2를 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.84 (s, 1H), 8.40 (s, 2H), 8.05-7.98 (m, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.51-7.39 (m, 3H), 7.38-7.30 (m, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.13 (t, 1H), 6.93 (d, 1H), 4.94 (s, 2H), 3.61 (qd, 4H), 3.36 (t, 2H), 3.16-2.93 (m, 10H), 2.08 (s, 3H), 2.00 (p, 2H), 1.38 (s, 2H), 1.25 (q, 4H), 1.15-0.92 (m, 6H), 0.84 (s, 6H). MS (ESI) m/e 941.2 (M+H)+.
1.84 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-{[1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (W2.84)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (6 mL) 중 tert-부틸 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트 (55 mg)의 용액에 N-(1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일)아크릴아미드 (73.4 mg), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.2 mL) 및 H2O (0.2 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4일간 교반하였다. LC/MS는 예상 생성물을 주요 피크로서 나타내었다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 디클로로메탄 및 트리플루오로아세트산 (10 mL, 1:1) 중에 용해시키고, 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를, N,N-디메틸포름아미드 (8 mL) 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 8.45 (s, 2H), 8.01 (d, 4H), 7.78 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.53-7.39 (m, 3H), 7.39-7.30 (m, 2H), 7.27 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 4.94 (s, 2H), 4.14 (s, 2H), 3.87 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.52 (d, 4H), 3.19 (s, 3H), 3.13-2.97 (m, 5H), 2.75 (t, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.42 (s, 2H), 1.29 (q, 4H), 1.12 (s, 4H), 1.09-0.99 (m, 2H), 0.85 (s, 7H). MS (ESI) m/e 921.2 (M+H)+.
1.85 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(3S)-3,4-디히드록시부틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (W2.85)의 합성
디클로로메탄 (2 mL) 중 실시예 1.2.7 (213 mg)의 용액에 (S)-2-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)아세트알데히드 (42 mg)를 첨가하였다. 실온에서 30분 동안 교반한 후에, 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (144 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고, 교반을 하룻밤 계속하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 5 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.86 (s, 1H), 8.22 (d, 2H), 8.05-8.01 (m, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.53-7.41 (m, 3H), 7.36 (td, 2H), 7.28 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.95 (s, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.26-2.94 (m, 7H), 2.10 (s, 3H), 1.84-1.75 (m, 1H), 1.52-1.63 (m, 1H), 1.45-1.23 (m, 6H), 1.19-0.96 (m, 7H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 834.3 (M+H)+.
1.86 4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (W2.86)의 합성
테트라히드로푸란 (2 mL) 및 아세트산 (0.2 mL) 중 3-(1-((3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산 (36 mg)의 용액에 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-포르밀페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (21 mg) 후에 MgSO4 (60 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후에, MP-시아노보로히드리드 (Biotage, 153 mg, 2.49 mmol/g)를 첨가하였다. 이어서 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, LiOH H2O (20 mg)를 여과액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 트리플루오로아세트산으로 산성화시켰다. 용액을, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1028.3 (M+H)+.
1.87 3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}프로필 베타-D-글루코피라노스이두론산 (W2.87)의 합성
1.87.1 (2R,3R,5S,6S)-2-(3-히드록시프로폭시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
톨루엔 (60 mL) 중 (2R,3R,5S,6S)-2-브로모-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (3.98 g)의 교반된 용액에 프로판-1,3-디올 (15.22 g)을 첨가하였다. 혼합물을 75℃에서 교반하고, Ag2CO3 (5.52 g)을 3시간의 기간에 걸쳐 3부분으로 나누어 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반한 후에, 현탁액을 여과하였다. 여과액을 농축하고, 잔사를, 헵탄 중 50% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 409.9 (M+NH4)+.
1.87.2 (2S,3S,5R,6R)-2-(메톡시카르보닐)-6-(3-옥소프로폭시)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
-78℃에서 디클로로메탄 (10 mL) 중 디메틸 술폭시드 (0.5 mL)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (0.2 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 20분간 -78℃에서 교반하고, 디클로로메탄 (10 mL) 중 실시예 1.87.1 (393 mg)의 용액을 주사기를 통해 첨가하였다. 20분 후에, 트리에틸아민 (1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, 온도를 실온까지 상승되게 두었다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 표제 화합물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. MS (DCI) m/e 408.1 (M+NH4)+.
1.87.3 3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}프로필 베타-D-글루코피라노스이두론산
디클로로메탄 (10 mL) 중 실시예 1.68.6 (171 mg)의 용액에 실시예 1.87.2 (90 mg), 및 NaBH(OAc)3 (147 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 2% HCl 수용액, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를 테트라히드로푸란 (6 mL), 메탄올 (3 mL) 및 물 (3 mL) 중에 용해시키고 LiOH H2O (100 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 트리플루오로아세트산으로 산성화시키고 감압 하에 농축하였다. 잔사를 디메틸 술폭시드/메탄올 (1:1, 12 mL) 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸술폭시드-d 6) δ ppm 13.07 (s, 2H), 8.99 (s, 1H), 8.34 (dd, 1H), 8.29-8.11 (m, 5H), 8.06-8.02 (m, 1H), 7.99 (d, 1H), 7.90 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.68 (dd, 1H), 7.55-7.40 (m, 2H), 7.34 (td, 1H), 4.23 (d, 1H), 3.87 (s, 2H), 3.76 (dt, 1H), 3.60 (d, 1H), 3.53 (dt, 3H), 3.29 (t, 1H), 3.15 (t, 1H), 3.06-2.91 (m, 6H), 2.20 (s, 3H), 1.83 (p, 2H), 1.44 (s, 2H), 1.30 (q, 4H), 1.14 (s, 4H), 1.03 (q, 2H), 0.85 (s, 7H). MS (ESI) m/e 975.2(M+H)+.
1.88 6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-옥시도이소퀴놀린-6-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산 (W2.88)의 합성
1.88.1 메틸 6-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)이소퀴놀린-4-카르복실레이트
1,4-디옥산 (20 mL) 및 물 (10 mL) 중 실시예 1.78.1 (0.73 g)의 용액에 tert-부틸 3-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-클로로피콜리네이트 (1.5 g), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (82 mg), 및 CsF (1.06 g)를 첨가하고, 반응물을 환류에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트 (1 L)로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 794.8 (M+H)+.
1.88.2 6-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)이소퀴놀린-4-카르복실산
테트라히드로푸란 (6 mL), 메탄올 (3 mL) 및 물 (3 mL) 중 실시예 1.88.1 (300 mg)의 용액에 LiOH H2O (100 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 2N HCl 수용액으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하여 표제 화합물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. MS (ESI) m/e 781.2 (M+H)+.
1.88.3 tert-부틸 6-(4-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)이소퀴놀린-6-일)-3-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (10 mL) 중 실시예 1.88.2 (350 mg)의 용액에 벤조[d]티아졸-2-아민 (67.5 mg), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 (129 mg), 및 4-디메틸아미노피리딘 (82 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 912.3 (M+H)+.
1.88.4 4-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-6-(6-카르복시-5-(1-((3,5-디메틸-7-(2-(메틸아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)이소퀴놀린 2-옥시드
디클로로메탄 (6 mL) 중 실시예 1.88.3 (100 mg)의 용액에 m-클로로퍼옥시벤조산(19 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액, 물, 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 디클로로메탄/트리플루오로아세트산 (10 mL, 1:1) 중에 용해시키고, 실온에서 하룻밤 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔사를, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.32 (s, 2H), 9.21 (d, 1H), 8.71 (d, 1H), 8.49 (dd, 1H), 8.36-8.19 (m, 4H), 8.12 (dd, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.96 (dd, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.56 - 7.46 (m, 3H), 7.42-7.35 (m, 1H), 3.90 (d, 3H), 3.56 (td, 3H), 3.02 (p, 3H), 2.55 (t, 4H), 2.29-2.19 (m, 4H), 1.45 (d, 3H), 1.37-1.26 (m, 5H), 1.16 (d, 6H), 1.10-1.01 (m, 3H), 0.88 (d, 8H). MS (ESI) m/e 772.1 (M+H)+.
1.89 6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]아세트아미도}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (W2.89)의 합성
1.89.1 1-((3-브로모-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸
테트라히드로푸란 (30 mL) 중 실시예 1.1.3 (500 mg)의 냉각된 (-30℃) 용액에 n-부틸리튬 (9.67 mL)을 첨가하고, 혼합물을 -30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 메틸 요오다이드 (1.934 mL)를 -30℃에서 적가하였다. 첨가의 완료 후에, 혼합물을 -30℃에서 추가 2시간 동안 교반하였다. pH가 6에 도달할 때까지, 온도가 0℃ 미만으로 유지되도록, 얼음물 중 1N HCl 수용액을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 얼음물 (10 mL) 및 에틸 아세테이트 (20 mL)로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 15/1 내지 10/1 석유/에틸 아세테이트로 용출시키는 플래시 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 337, 339 (M+H)+.
1.89.2 1-(3,5-디메틸-7-((5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)아다만탄-1-일)우레아
실시예 1.89.1 (2.7 g) 및 우레아 (4.81 g)를 혼합하고 140℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각하고 메탄올 (200 mL x 2) 중에 현탁시켰다. 불용성 물질을 여과에 의해 제거하였다. 여과액을 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 317.3 (M+H) +.
1.89.3 3,5-디메틸-7-((5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)아다만탄-1-아민
물 중 20% 에탄올 (20 mL) 중 실시예 1.40.2 (2.53 g)의 용액에 수산화나트륨 (12.79 g)을 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 및 140℃에서 또 다른 16시간 동안 교반하였다. pH 6까지 6N HCl 수용액을 첨가하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를 메탄올 (200 mL) 중에 현탁시켰다. 불용성 물질을 여과하여 제거하였다. 여과액을 농축하여 표제 화합물을 HCl 염으로서 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 273.9 (M+H)+.
1.89.4 tert-부틸 (2-((3,5-디메틸-7-((5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)아다만탄-1-일)아미노)-2-옥소에틸)카르바메이트
N,N-디메틸포름아미드 (100 mL) 중 실시예 1.89.3 (2.16 g)의 용액에 트리에틸아민 (3.30 mL), 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)아세트산 (1.799 g) 및 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (3.90 g)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 물 (40 mL)을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (70 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 3/1 내지 2/1 석유/에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 430.8 (M+H)+.
1.89.5 tert-부틸 (2-((3-((4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)아미노)-2-옥소에틸)카르바메이트
N,N-디메틸포름아미드 (20 mL) 중 실시예 1.89.4 (1.7 g)의 주위 온도 용액에 NIS (N-요오도숙신이미드, 1.066 g)를 나누어 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 얼음물 (10 mL) 및 Na2S2O3 포화 수용액 (10 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 3/1 내지 2/1 석유/에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 556.6 (M+H)+ .
1.89.6 메틸 2-(5-브로모-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
디메틸 술폭시드 (100 mL) 중 메틸 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트 히드로클로라이드 (12.37 g) 및 실시예 1.1.10 (15 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (12 mL)을 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헥산 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 448.4 (M+H)+.
1.89.7 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
아세토니트릴 (30 mL) 중 실시예 1.89.6 (2.25 g) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)(205 mg)의 용액에 트리에틸아민 (3 mL) 및 피나콜보란 (2 mL)을 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 환류에서 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헥산 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.89.8 메틸 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)아세트아미도)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
실시예 1.1.6을 실시예 1.89.5로 대체하여, 실시예 1.2.2에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 797.4 (M+H)+.
1.89.9 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)아세트아미도)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산
실시예 1.2.4를 실시예 1.89.8로 대체하여, 실시예 1.2.5에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 783.4 (M+H)+.
1.89.10 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)아세트아미도)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.2.5를 실시예 1.89.9로 대체하여, 실시예 1.2.6에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 915.3 (M+H)+.
1.89.11 3-(1-{[3-(2-아미노아세트아미도)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.8을 실시예 1.89.10으로 대체하여, 실시예 1.2.9에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.82 (s, 1H), 8.00 (dd, 1H), 7.90-7.79 (m, 4H), 7.76 (d, 1H), 7.59 (dd, 1H), 7.49-7.38 (m, 3H), 7.37-7.29 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 6.92 (d, 1H), 4.92 (s, 2H), 3.85 (t, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.40 (q, 2H), 2.98 (t, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.63 (s, 2H), 1.57-1.38 (m, 4H), 1.15-0.93 (m, 6H), 0.80 (s, 6H). MS (ESI) m/e 759.2 (M+H)+.
1.89.12 6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]아세트아미도}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
N,N-디메틸포름아미드 (6 mL) 중 실시예 1.89.11 (102 mg)의 용액에 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (60 mg)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 주말 내내 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 디클로로메탄/트리플루오로아세트산 (10 mL, 1:1) 중에 용해시키고, 실온에서 하룻밤 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔사를, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.83 (s, 1H), 8.57 (s, 2H), 8.02 (d, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.52-7.37 (m, 3H), 7.39-7.29 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 4.94 (s, 2H), 3.87 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.16 (q, 2H), 2.99 (t, 2H), 2.77 (t, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.64 (s, 2H), 1.55 (d, 2H), 1.45 (d, 2H), 1.21-0.95 (m, 6H), 0.82 (s, 6H). MS (ESI) m/e 867.2 (M+H)+.
1.90 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-({2-[(2-술포에틸)아미노]에틸}술파닐)트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (W2.90)의 합성
1.90.1 3-((1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-티올
아세트산 중 33% (w/w) HBr (50 mL) 중 실시예 1.1.3 (2.8 g) 및 티오우레아 (15.82 g)의 혼합물을 110℃에서 16시간 동안 교반하고 감압 하에 농축하여 잔사를 얻었다. 잔사를 물 중 20% 에탄올 (v/v: 200 mL) 중에 용해시키고, 수산화나트륨 (19.06 g)을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하고 농축하였다. 잔사를 물 (60 mL) 중에 용해시키고, 6 N HCl 수용액으로 pH 5 내지 pH 6로 산성화시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 319.1 (M+H)+.
1.90.2 2-((-3-((1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)티오)에탄올
에탄올 (120 mL) 중 실시예 1.90.1 (3.3 g)의 용액에 소듐 에톡시드 (2.437 g)를 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고, 2-클로로에탄올 (1.80 mL)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하고 1 N HCl 수용액으로 pH 7로 중화시켰다. 혼합물을 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 (200 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 6/1에서 2/1까지 석유 에테르 /에틸 아세테이트로 용출시키는, 실리카겔 상에서의 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 321.2 (M+H)+.
1.90.3 2-((-3,5-디메틸-7-((5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)아다만탄-1-일)티오)에탄올
테트라히드로푸란 (60 mL) 중 실시예 1.90.2 (2.3 g)의 용액에 n-부틸리튬 (14.35 mL, 헥산 중 2M)을 -20℃에서 질소 하에 적가하였다. 혼합물을 이 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물에 -20℃에서 메틸 요오다이드 (4.49 mL)를 첨가하고, 혼합물을 -20℃에서 2시간 동안 교반하였다. -20℃에서 NH4Cl 포화 수용액의 적가에 의해 반응물을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 10분 동안 교반하고 1 N HCl 수용액으로 pH 5로 산성화시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 335.3 (M+H)+.
1.90.4 2-((-3-((4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)티오)에탄올
N,N-디메틸포름아미드 (90 mL) 중 실시예 1.90.3 (3.65 g)의 용액에 N-요오도숙신이미드 (3.68 g)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 얼음물 (8 mL) 및 NaS2O3 포화 수용액 (8 mL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 혼합물을 추가 10분 동안 교반하고 에틸 아세테이트 (30 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 석유 에테르/에틸 아세테이트 (6/1에서 3/1까지)로 용출시키는, 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 461.2 (M+H)+.
1.90.5 디-tert-부틸 [2-({3-[(4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일}술파닐)에틸]-2-이미도디카르보네이트
디클로로메탄(100 mL) 중 실시예 1.90.4 (3 g)의 차가운 용액 (0℃ 조)에 트리에틸아민 (1.181 mL) 및 메실 클로라이드 (0.559 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 얼음물 (30 mL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 혼합물을 추가 10분 동안 교반하고 디클로로메탄 (50 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를 아세토니트릴 (100 mL) 중에 용해시키고 NH(Boc)2 (1.695 g) 및 Cs2CO3 (4.24 g)을 첨가하였다. 혼합물을 85℃에서 16시간 동안 교반하고, 얼음물 (20 mL)을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고 에틸 아세테이트 (40 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 10/1에서 6/1까지 석유 에테르/에틸 아세테이트로 용출시키는, 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 660.1 (M+H)+.
1.90.6 메틸 2-[5-(1-{[3-({2-[비스(tert-부톡시카르보닐)아미노]에틸}술파닐)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일]-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
실시예 1.1.6을 실시예 1.90.5으로 대체하여, 실시예 1.2.2에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 900.2 (M+H)+.
190.7A 2-(6-(tert-부톡시카르보닐)-5-(1-((3-((2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에틸)티오)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산
실시예 1.2.4를 실시예 1.90.6으로 대체하여 실시예 1.2.5에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 786.2 (M+H)+.
190.7B tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-((2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에틸)티오)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.2.5를 실시예 1.90.7A로 대체하여 실시예 1.2.6에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 918.8 (M+H)+.
1.90.8 tert-부틸 3-(1-((3-((2-아미노에틸)티오)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (5 mL) 중 실시예 1.90.7B (510 mg)의 용액에 트리플루오로아세트산 (5 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 중탄산나트륨 포화 수용액을 첨가하여 반응물을 켄칭하고 디클로로메탄으로 3회 세척하였다. 합한 유기물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제의 생성물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 818.1 (M+H)+.
1.90.9 3-(1-((3-((2-아미노에틸)티오)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 1.90.8의 제조 동안 실시예 1.90.9를 단리하였다. MS (ESI) 762.2 (M+H)+.
1.90.10 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-((2-((2-((4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에틸)아미노)에틸)티오)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.90.8 (235 mg) 및 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (150 mg)를 디클로로메탄 (1 mL) 중에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민 (140 L)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 6일 동안 교반하였다. 반응물을, 디클로로메탄 중 0.5 내지 3.0% 메탄올의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 직접 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
1.90.11 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-((2-((2-술포에틸)아미노)에틸)티오)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
실시예 1.2.9에서 실시예 1.2.8을 실시예 1.90.10으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 8.39 (br s, 2H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.51 (d, 1H),7.47 (ddd, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.37 (d, 1H), 7.35 (ddd, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.22 (m, 2H), 3.06 (br m, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.79 (t, 2H), 2.74 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.51 (s, 2H), 1.37 (m, 4H), 1.15 (m, 4H), 1.05 (m, 2H), 0.83 (s, 6H). MS (ESI) m/e 870.1 (M+H)+.
1.91 6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{3-[(2-술포에틸)아미노]프로필}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (W2.91)의 합성
1.91.1 1-((3-알릴-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-1H-피라졸
톨루엔 (5 mL) 중 실시예 1.1.3 (0.825 g, 2.55 mmol)의 용액에 N, N'-아조이소부티로니트릴 (AIBN, 0.419 g, 2.55 mmol) 및 알릴트리부틸스탄난 (2.039 ml, 6.38 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 스트림으로 15분 동안 퍼징하고, 80℃에서 8시간 동안 가열하고 농축하였다. 잔사를, 석유 에테르 중 5% 에틸 아세테이트로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.MS (ESI) m/e 285.2 (M+H) +.
1.91.2 1-((3-알릴-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸
N2 하에 -78℃에서 테트라히드로푸란 (5 ml) 중 실시예 1.91.1 (200 mg, 0.703 mmol)의 용액에 n-부틸리튬 (2.81 mL, 7.03 mmol)을 첨가하였다. 온도가 -20℃로 증가하는 동안 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 이어서 -20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 요오도메탄 (0.659 ml, 10.55 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 0.5시간 동안 -20℃에서 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 299.2 (M+H) +.
1.91.3 3-(3,5-디메틸-7-((5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)아다만탄-1-일)프로판-1-올
질소 분위기 하에서, 무수 테트라히드로푸란 (42.5 mL) 중 실시예 1.91.2 (2.175 g, 7.29 mmol)의 용액을 0℃로 냉각하였다. BH3·THF (15.30 mL, 15.30 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 0℃로 냉각하였다. 반응 혼합물에 10 N NaOH 수용액 (5.03 mL, 50.3 mmol)을 적가한 후에, 30% H2O2 (16.52 mL, 146 mmol) 수용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온까지 가온하고 90분 동안 교반하였다. 반응물을 10% 염산 (35 mL)으로 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고 수성 층을 에틸 아세테이트 (2 x 60 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (3 x 60 mL)로 세척하고 빙조에서 냉각하였다. 아황산나트륨의 포화 수용액 (15 mL)을 주의 깊게 첨가하고 혼합물을 수분 동안 교반하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축하였다. 잔사를, 석유 에테르/에틸 아세테이트 (3:1에서 1:1까지)로 용출시키는, 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 317.3 (M+H) +.
1.91.4 3-(3-((4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)프로판-1-올
N,N-디메틸포름아미드 (7.5 mL) 중 실시예 1.91.3 (1.19 g, 3.76 mmol) 및 1-요오도피롤리딘-2, 5-디온 (1.015 g, 4.51 mmol)의 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 포화 Na2SO3으로 켄칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 포화 Na2SO3, 포화 Na2CO3, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 석유 에테르/에틸 아세테이트 (3:1에서 1:1까지)로 용출시키는, 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 443.1 (M+H) +.
1.91.5 3-(3-((4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)프로필 메탄술포네이트
0℃에서 CH2Cl2 (20 mL) 중 실시예 1.91.4 (1.55 g, 3.50 mmol)의 용액에 (CH3CH2)3N (0.693 mL, 4.98 mmol) 및 메실 클로라이드 (0.374 mL, 4.80 mmol)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 3.5시간 동안 20℃에서 교반하고 CH2Cl2로 희석하고, 포화 NH4Cl, NaHCO3 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 521.1 (M+H) +.
1.91.6 디-tert-부틸 (3-{3-[(4-요오도-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일}프로필)-2-이미도디카르보네이트
20℃에서 CH3CN (40 ml) 중 실시예 1.91.5 (1.92 g, 3.69 mmol)의 용액에 디-tert-부틸 이미노디카르보네이트 (0.962 g, 4.43 mmol) 및 Cs2CO3 (2.404 g, 7.38 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 교반하고 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 석유 에테르/에틸 아세테이트 (10:1)로 용출시키는, 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 642.3 (M+H) +.
1.91.7 메틸 2-[5-{1-[(3-{3-[비스(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로필}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-(tert-부톡시카르보닐)피리딘-2-일]-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실레이트
실시예 1.1.6을 실시예 1.91.6으로 대체하여, 실시예 1.2.2에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 882.2 (M+H)+.
1.91.8 2-[6-(tert-부톡시카르보닐)-5-{1-[(3-{3-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로필}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-일]-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-8-카르복실산
실시예 1.2.4를 실시예 1.91.7로 대체하여, 실시예 1.2.5에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 768.4 (M+H)+.
1.91.9 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로필)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.2.5를 실시예 1.91.8로 대체하여, 실시예 1.2.6에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 901.1 (M+H)+.
1.91.10 tert-부틸 3-(1-((3-(3-아미노프로필)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜리네이트
디클로로메탄 (5 mL) 중 실시예 1.91.9 (500 mg)의 용액에 트리플루오로아세트산 (5 mL)를 첨가하고 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 중탄산나트륨 포화 수용액을 첨가하여 반응물을 켄칭하고 디클로로메탄으로 3회 세척하였다. 합한 유기물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제의 생성물을 제공하였다.
1.91.11 3-(1-((3-(3-아미노프로필)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
디클로로메탄 (5 mL) 중 실시예 1.91.9 (350 mg)의 용액에 트리플루오로아세트산 (5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.86 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 4H), 7.47 (dt, 3H), 7.36 (q, 2H), 7.27 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.95 (s, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.72 (q, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.45 (t, 2H), 1.18-1.05 (m, 9H), 1.00 (d, 6H), 0.80 (s, 6H). MS (ESI) m/e 744.2 ( M+H)+.
1.91.12 tert-부틸 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(3-((2-((4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에틸)아미노)프로필)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜리네이트
실시예 1.2.7을 실시예 1.91.10으로 대체하여, 실시예 1.2.8에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.
1.91.13 6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1 H )-일}-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{3-[(2-술포에틸)아미노]프로필}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1 H -피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 1.2.8을 실시예 1.91.12로 대체하여, 실시예 1.2.9에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (501 MHz, DMSO-d 6) δ 12.85 (s, 1H), 8.02 (dd, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.54-7.39 (m, 3H), 7.38-7.31 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 4.94 (s, 2H), 3.87 (t, 2H), 3.15 (p, 2H), 3.00 (t, 2H), 2.86 (dq, 2H), 2.76 (t, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.47 (td, 2H), 1.08 (d, 9H), 0.99 (d, 7H), 0.79 (s, 7H). MS (ESI) m/e 852.2 (M+H)+.
실시예 2: 예시적인 신톤의 합성
이 실시예는 ADC를 제조하는 데 유용한 예시적인 신톤에 대한 합성 방법을 제공한다.
2.1 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 CZ)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (7 mL) 중 실시예 1.2.9 (100 mg) 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (Synchem으로부터 구매함, 114 mg)를 물-빙조에서 냉각하고, N,N-디이소프로필에틸아민 (0.15 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 및 이어서 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 8.04 (t, 2H), 7.75-7.82 (m, 2H), 7.40-7.63 (m, 6H), 7.32-7.39 (m, 2H), 7.24-7.29 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.01 (s, 1H), 4.83-5.08 (m, 4H), 4.29-4.48 (m, 1H), 4.19 (t, 1H), 3.84-3.94 (m, 2H), 3.80 (d, 2H), 3.14-3.29 (m, 2H), 2.87-3.06 (m, 4H), 2.57-2.69 (m, 2H), 2.03-2.24 (m, 5H), 1.89-2.02 (m, 1H), 1.53-1.78 (m, 2H), 1.26-1.53 (m, 8H), 0.89-1.27 (m, 12H), 0.75-0.88 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1452.2 (M+H)+.
2.2 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-술포프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 DH)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.6.2로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.83 (s, 1H), 9.98 (s, 1H), 8.04 (t, 2H), 7.75-7.81 (m, 2H), 7.54-7.64 (m, 3H), 7.40-7.54 (m, 3H), 7.32-7.39 (m, 2H), 7.24-7.31 (m, 3H), 6.93-7.01 (m, 3H), 4.86-5.03 (m, 4H), 4.32-4.48 (m, 2H), 4.13-4.26 (m, 2H), 3.31-3.45 (m, 4H), 3.24 (d, 4H), 2.88-3.07 (m, 4H), 2.30-2.39 (m, 2H), 2.04-2.24 (m, 5H), 1.86-2.03 (m, 1H), 0.89-1.82 (m, 27H), 0.74-0.88 (m, 13H). MS (ESI) m/e 1466.3 (M+H)+.
2.3 이 단락은 의도적으로 비워 두었다.
2.4 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[{2-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에톡시]에틸}(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 EP)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.11.4로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 10.00 (s, 1H), 8.01-8.10 (m, 2H), 7.79 (dd, 2H), 7.55-7.65 (m, 3H), 7.41-7.53 (m, 3H), 7.32-7.38 (m, 2H), 7.25-7.30 (m, 3H), 6.97-7.02 (m, 2H), 6.96 (d, 1H), 6.03 (s, 1H), 4.90-5.03 (m, 4H), 4.31-4.46 (m, 1H), 4.20 (s, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 2.97-3.06 (m, 2H), 2.88-2.98 (m, 1H), 2.58-2.68 (m, 2H), 2.05-2.22 (m, 5H), 1.92-2.02 (m, 1H), 0.89-1.75 (m, 23H), 0.77-0.87 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1496.3 (M+H)+.
2.5 메틸 6-[4-(3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N 5 -카르바모일-L-오르니틸}아미노)벤질]옥시}카르보닐)아미노}프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일]-6-데옥시-베타-L-글루코피라노시드 (신톤 EF)의 합성
2.5.1 펜트-4-이날
-78℃에서 디클로로메탄 (200 mL) 중에 용해된 옥살릴 클로라이드 (9.12 mL)의 용액에 디클로로메탄 (40 mL) 중에 용해된 디메틸 술폭시드 (14.8 mL)를 20분에 걸쳐 첨가하였다. 용액을 추가로 30분 동안 교반한 후에, 디클로로메탄 (80 mL) 중에 용해된 4-펜티놀 (8.0 g)을 10분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 추가로 60분 동안 교반하였다. 트리에틸아민 (66.2 mL)을 -78℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 60분 동안 교반하고, 이어서 추가로 1시간에 걸쳐 10℃까지 가온되게 하였다. 물 (200 mL)을 첨가하고, 두 층을 분리하였다. 수성 층을 1% HCl 수용액으로 산성화시키고 이어서 디클로로메탄 (3x 100 mL)으로 역추출하였다. 합한 유기 층을 1% HCl 수용액, 및 NaHCO3 수용액으로 세척하였다. 수성 추출물을 디클로로메탄 (2x 100 mL)으로 역추출하고, 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후에, 용매를 회전 증발 (30℃ 수조)에 의해 제거하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.5.2 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-(펜트-4-인-1-일아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
테트라히드로푸란 (2 mL) 중 실시예 1.2.7 (85 mg)의 용액에 펜트-4-이날 (8.7 mg), 아세트산 (20 mg) 및 황산나트륨 (300 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 소듐 트리아세톡시보로히드리드 (45 mg)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하고, 이어서 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 용매의 증발에 의해 잔사를 얻었고, 이를 디메틸 술폭시드/메탄올 (1:1, 3 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을, 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 812.1 (M+H)+.
2.5.3 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-((3-(1-(((2S,3R,4R,5S,6S)-3,4,5-트리히드록시-6-메톡시테트라히드로-2H-피란-2-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)프로필)아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
t-부탄올 (2 mL) 및 물 (1 mL) 중 (2S,3S,4R,5S,6S)-2-(아지도메틸)-6-메톡시테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (8.63 mg)의 용액에 실시예 2.5.2 (20 mg), 황산구리(II) 오수화물 (2.0 mg) 및 아스코르브산나트륨 (5 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 20분간 100℃에서 교반하였다. 수산화리튬 일수화물 (50 mg)을 혼합물에 첨가하고, 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 트리플루오로아세트산으로 중화시키고, 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1032.2 (M+H)+.
2.5.4 메틸 6-[4-(3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N 5 -카르바모일-L-오르니틸}아미노)벤질]옥시}카르보닐)아미노} 프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일]-6-데옥시-베타-L-글루코피라노시드
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 4-니트로페닐 카르보네이트 (7.16 mg) 및 실시예 2.5.3 (10 mg)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하고, 이어서 트리플루오로아세트산으로 산성화시키고, 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.65 (s, 1H), 7.97 (d, 1H) , 7.76 (d, 1H), 7.64-7.72 (m, 2H), 7.53-7.63 (m, 3H), 7.38-7.51 (m, 4H), 7.30-7.37 (m, 2H), 7.22-7.27 (m, 3H), 6.84-6.98 (m, 3H), 4.97 (d, 4H), 4.65 (dd, 1H), 4.50 (d, 1H), 4.36-4.46 (m, 1H), 4.25-4.32 (m, 1H), 4.10-4.20 (m, 1H), 3.85-3.95 (m, 2H), 3.79 (s, 2H) , 3.66-3.73 (m, 2H), 2.99-3.03 (m, 7H), 2.57 (t, 3H), 2.12-2.22 (m, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.99-2.05 (m, 2H), 1.70-1.88 (m, 4H) , 1.39-1.67 (m, 8H), 1.35 (s, 3H), 0.92-1.28 (m, 14H), 0.80-0.88 (m, 16H). MS (ESI) m/e 1629.5 (M+H)+.
2.6 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-(4-{[([2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]{3-[1-(베타-D-글루코피라누로노실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로필}카르바모일) 옥시]메틸}페닐)-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 EG)의 합성
2.6.1 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((3-(1-((2R,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
t-부탄올 (2 mL) 및 물 (1 mL) 중 (2R,3R,4S,5S,6S)-2-아지도-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (8.63 mg)의 용액에 실시예 2.5.2 (20 mg), 황산구리(II) 오수화물 ( 2.0 mg) 및 아스코르브산나트륨 (5 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파 조건 (Biotage Initiator) 하에 20분간 100℃에서 교반하였다. 수산화리튬 일수화물 (50 mg)을 혼합물에 첨가하고, 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 트리플루오로아세트산으로 중화시키고, 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1032.1 (M+H)+.
2.6.2 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-(4-{[([2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]{3-[1-(베타-D-글루코피라누로노실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로필}카르바모일)옥시]메틸}페닐)-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드
실시예 2.5.4에서 실시예 2.5.3을 실시예 2.6.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.64 (s, 1H), 7.98 (d, 1H) , 7.90 (s, 1H), 7.76 (d, 1H) , 7.68 (s, 1H), 7.52-7.62 (m, 3H), 7.20-7.50 (m, 9H), 6.84-6.98 (m, 3H), 5.56 (d, 1H), 4.98 (d, 4H), 4.36-4.49 (m, 2H), 4.11-4.23 (m, 2H), 3.96 (d, 2H), 3.74-3.91 (m, 7H), 3.51-3.58 (m, 5H), 3.35-3.49 (m, 10H), 2.97-3.02 (m, 6H), 2.57-2.66 (m, 3H), 2.12-2.24 (m, 2H) , 2.08 (s, 3H), 1.69-2.01 (m, 3H), 1.35-1.65 (m, 9H), 0.93-1.28 (m, 10H), 0.81-0.89 (m, 10H). MS (ESI) m/e 1629.4 (M+H)+ .
2.7 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[(2R)-1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)아미노}-1-옥소-3-술포프로판-2-일]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 EH)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.75 mL) 중 실시예 1.13.8 (0.018 g) 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (0.015 g, 0.023 mmol)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.015 mL)을 첨가하였다. 하룻밤 교반한 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (0.75 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (s, 1H), 9.93 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.84-7.76 (m, 2H), 7.61 (d, 1H), 7.57 (d, 2H), 7.53 (dd, 1H), 7.47 (t, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.39-7.30 (m, 4H), 7.26 (d, 2H), 6.99 (s, 2H), 6.97 (dd, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.90 (t, 2H), 4.75-4.65 (m, 1H), 4.46-4.33 (m, 2H), 4.17 (dd, 2H), 3.66-3.47 (m, 4H), 3.36 (t, 4H), 3.12 (s, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.85-2.60 (m, 4H), 2.25-2.05 (m, 5H), 2.05-1.90 (m, 1H), 1.58-0.76 (m, 32H). MS (ESI) m/e 1423.2 (M+H)+.
2.8 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸][4-(베타-D-글루코피라노실옥시)벤질]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드(신톤 ER)의 합성
2.8.1 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-((4-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
테트라히드로푸란 (2 mL) 및 아세트산 (0.2 mL) 중 실시예 1.2.7 (44.5 mg)의 용액에 4-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤즈알데히드 (17 mg) 및 MgSO4 (300 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반한 후에, 수지 상 소듐 시아노보로히드리드 (300 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 용매를 증발시켰다. 잔사를 디메틸 술폭시드/메탄올 (1:1, 4 mL) 중에 용해시키고, 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1015.2 (M+H)+.
2.8.2 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸][4-(베타-D-글루코피라노실옥시)벤질]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드
실시예 2.5.4에서 실시예 2.5.3을 실시예 2.8.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.87 (s, 1H), 10.00 (s, 1H), 7.96-8.14 (m, 2H) , 7.79 (d, 2H), 7.55-7.68 (m, 3H), 7.09-7.52 (m, 11H), 6.91-7.01 (m, 5H), 5.09 (d, 1H), 4.95 (dd, 4H) , 4.35-4.47 (m, 4H), 4.14-4.23 (m, 3H), 3.86-3.94 (m, 6H), 3.31-3.46 (m, 8H), 3.16-3.25 (m, 3H), 2.90-3.04 (m, 4H), 2.59 (s, 1H), 1.88-2.24 (m, 6H), 0.88-1.75 (m, 24H), 0.76-0.90 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1613.7 (M+H)+.
2.9 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[4-(베타-D-알로피라노실옥시)벤질][2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 ES)의 합성
2.9.1 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3,5-디메틸-7-(2-((4-(((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)아미노)에톡시)아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
테트라히드로푸란 (2 mL) 및 아세트산 (0.2 mL) 중 실시예 1.2.7 (44.5 mg)의 용액에 4-(((2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,5-트리히드록시-6-(히드록시메틸)테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤즈알데히드 (17 mg) 및 MgSO4 (300 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반한 후에, 수지 상 소듐 시아노보로히드리드 (300 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 용매를 증발시켰다. 잔사를 디메틸 술폭시드/메탄올 (1:1, 4 mL) 중에 용해시키고, 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1015.2 (M+H)+.
2.9.2 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[4-(베타-D-알로피라노실옥시)벤질][2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드
실시예 2.5.4에서 실시예 2.5.3을 실시예 2.9.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (s, 1H), 10.00 (s, 1H) , 7.96-8.11 (m, 2H), 7.79 (d, 2H), 7.53-7.65 (m, 3H), 7.08-7.52 (m, 10H) , 6.91-7.00 (m, 5H), 5.09 (d, 1H), 4.99 (d, 4H), 4.35-4.48 (m, 3H), 4.13-4.23 (m, 2H), 3.82-3.96 (m, 8H), 3.32-3.50 (m, 10H), 3.12-3.25 (m, 3H), 2.90-3.06 (m, 5H), 1.89-2.19 (m, 6H), 0.88-1.75 (m, 22H), 0.76-0.88 (m, 11H). MS (ESI) m/e 1612.5 (M+H)+.
2.10 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-포스포노에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 EQ)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.12.2로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.99 (s, 1H), 8.01-8.09 (m, 2H), 7.76-7.81 (m, 2H), 7.56-7.64 (m, 3H), 7.41-7.53 (m, 3H), 7.36 (q, 2H), 7.25-7.30 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.94 (d, 1H), 5.98 (s, 1H), 4.89-5.07 (m, 4H), 4.38 (s, 1H), 4.19 (t, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.80 (d, 2H), 2.89-3.08 (m, 5H), 2.04-2.24 (m, 5H), 1.89-2.02 (m, 1H), 1.76-1.87 (m, 2H), 0.89-1.72 (m, 23H), 0.78-0.88 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1452.2 (M+H)+.
2.11 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-포스포노에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 EU)의 합성
실시예 1.2.9 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트를 각각 실시예 1.12.2 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트로 대체하여, 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.93 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.72-7.83 (m, 2H), 7.54-7.65 (m, 3H), 7.41-7.54 (m, 3H), 7.31-7.40 (m, 2H), 7.24-7.30 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.94 (d, 1H), 4.87-5.11 (m, 3H), 4.11-4.45 (m, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.79 (d, 2H), 2.97-3.05 (m, 2H), 2.63-2.70 (m, 1H), 2.29-2.37 (m, 1H), 2.03-2.20 (m, 5H), 1.73-2.00 (m, 5H), 1.39-1.55 (m, 4H), 0.88-1.38 (m, 19H), 0.72-0.89 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1364.5 (M-H)-.
2.12 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 EV)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.14.4로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.98 (s, 1H), 8.04 (t, 2H), 7.78 (t, 2H), 7.61 (t, 3H), 7.39-7.54 (m, 3H), 7.32-7.39 (m, 2H), 7.25-7.30 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.01 (s, 1H), 4.97 (d, 4H), 4.29-4.47 (m, 2H), 4.14-4.23 (m, 2H), 3.85-3.93 (m, 2H), 3.32-3.42 (m, 2H), 3.24 (s, 2H), 2.88-3.09 (m, 3H), 1.87-2.23 (m, 6H), 0.91-1.74 (m, 27H), 0.72-0.89 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1466.3 (M+H)+.
2.13 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[(2R)-1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1-옥소-3-술포프로판-2-일]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 EW)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.15 (0.020 g) 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (0.017 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.017 mL)을 첨가하였다. 반응물을 하룻밤 교반하고 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL), 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 9.93 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.86-7.76 (m, 3H), 7.63-7.41 (m, 7H), 7.39-7.32 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.30-7.21 (m, 2H), 6.99 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.93 (s, 2H), 4.49-4.33 (m, 2H), 4.18 (dd, 2H), 4.15-4.08 (m, 2H), 3.90-3.86 (m, 2H), 3.36 (t, 2H), 3.34-3.27 (m, 1H), 3.18-3.04 (m, 2H), 3.04-2.96 (m, 2H), 2.89-2.61 (m, 2H), 2.27-2.05 (m, 5H), 2.03-1.87 (m, 1H), 1.59-1.42 (m, 4H), 1.42-0.91 (m, 18H), 0.91-0.76 (m, 11H). MS (-ESI) m/e 1407.5 (M-H)-.
2.14 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[{2-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에톡시]에틸}(3-포스포노프로필)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 EX)의 합성
2 mL N,N-디메틸포름아미드 중 실시예 1.16.2 (59 mg), 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (48 mg), 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.056 mL)의 혼합물을 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을, 0.1% 트리플루오로아세트산/물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, 40 g C18 컬럼을 사용하는 Biotage Isolera One 시스템에서의 역상 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 원하는 분획들을 농축하고 생성물을 물 및 1,4-디옥산으로부터 동결건조시켜 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다. 1H NMR (400MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.97 (bs, 1H), 8.04 (m, 2H), 7.79 (d, 2H), 7.59 (m, 3H), 7.46 (m, 3H), 7.36 (m, 2H), 7.27 (m, 2H), 6.99 (s, 2H), 6.94 (d, 1H), 4.97 (m, 4H), 4.40 (m, 2H), 4.17 (dd, 2H), 3.50-4.10 (m, 6H), 3.45 (m, 2H), 3.40 (m, 2H), 3.26 (m, 2H), 3.01 (m, 2H), 2.95 (s, 2H), 2.79 (s, 2H), 2.15 (m, 2H), 2.09 (s, 2H), 1.68 (m, 2H), 1.60 (m, 1-2H), 1.35-1.50 (m, 6H), 1.25 (m, 4H), 1.17 (m, 2H), 1.10 (m, 2H), 0.97 (m, 1-2H), 0.84 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1510.4 (M+H)+.
2.15 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[{2-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에톡시]에틸}(3-포스포노프로필)카르바모일]옥시}메틸) 페닐]-L-알라닌아미드 (신톤 EY)의 합성
2 mL N,N-디메틸포름아미드 중 실시예 1.16.2 (59 mg), 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (42 mg), 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.042 mg)의 혼합물을 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을, 0.1% 트리플루오로아세트산/물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, 40 g C18 컬럼을 사용하는 Biotage Isolera One 시스템에서의 역상 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 분획들을 농축하고 생성물을 물 및 1,4-디옥산으로부터 동결건조시켜 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다. MS (ESI) m/e 1422.6 (M-H)+.
2.16 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 EZ)의 합성
2 mL N,N-디메틸포름아미드 중 실시예 1.14.4 (50 mg), 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (38 mg), 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.050 mL)의 혼합물을 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을, 0.1% 트리플루오로아세트산/물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, 40 g C18 컬럼을 사용하는 Biotage Isolera One 시스템에서의 역상 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 원하는 분획들을 농축하고 생성물을 물 및 1,4-디옥산으로부터 동결건조시켜 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다. 1H NMR (400MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.94 (bs, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.80 (d, 2H), 7.61 (m, 3H), 7.47 (m, 3H), 7.36 (m, 2H), 7.29 (m, 2H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 4.97 (m, 4H), 4.40 (m, 2H), 4.16 (dd, 2H), 3.50-4.10 (m, 6H), 3.68 (m, 2H), 3.55 (m, 2H), 3.25 (m, 4H), 3.02 (m, 2H), 2.94 (s, 2H), 2.79 (s, 2H), 2.15 (m, 1H), 2.08 (s, 2H), 1.65 (m, 2H), 1.40-1.50 (m, 6H), 1.20-1.30 (m, 6H), 1.08-1.19 (m, 4H), 0.97 (m, 1-2H), 0.76-0.89 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1380.3 (M+H)+.
2.17 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2S)-3-카르복시-2-({[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}프로파노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}아미노)프로파노일](메틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (신톤 FD)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 실시예 1.17 (0.040 g) 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (0.034 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.035 mL)을 첨가하였다. 반응물을 하룻밤 교반하고 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 9.92 (s, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 2H), 7.62 (d, 1H), 7.57 (d, 2H), 7.54-7.41 (m, 3H), 7.40-7.32 (m, 2H), 7.31-7.23 (m, 4H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (dd, 1H), 5.01-4.89 (m, 4H), 4.78 (dq, 1H), 4.45-4.30 (m, 1H), 4.23-4.11 (m, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.80 (s, 2H), 3.42-3.26 (m, 6H), 3.06 (s, 1H), 3.01 (t, 2H), 2.80 (s, 2H), 2.76-2.62 (m, 1H), 2.46-2.36 (m, 1H), 2.25-2.05 (m, 5H), 2.05-1.92 (m, 1H), 1.58-1.42 (m, 4H), 1.42-0.91 (m, 20H), 0.91-0.78 (m, 9H). MS (ESI) m/e 1387.4 (M+H)+.
2.18 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸][4-(베타-D-글루코피라누로노실옥시)벤질]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 FS)의 합성
실시예 2.5.4에서 실시예 2.5.3을 실시예 1.19.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (s, 1H), 10.00 (s, 1H) , 7.97-8.14 (m, 2H), 7.79 (d, 2H), 7.07-7.65 (m, 13H), 6.87-7.01 (m, 4H), 5.92-6.08 (m, 1H), 4.87-5.07 (m, 4H), 4.33-4.48 (m, 3H), 4.13-4.26 (m, 1H), 3.74-3.94 (m, 6H), 3.14-3.34 (m, 8H), 2.84-3.05 (m, 6H), 1.87-2.25 (m, 6H), 0.89-1.73 (m, 21H), 0.76-0.87 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1626.4 (M+H)+.
2.19 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-포스포노에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 FI)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.20.11로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 10.00 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.07 (d, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.84-7.90 (m, 1H), 7.79 (dd, 3H), 7.55-7.66 (m, 2H), 7.46 (s, 2H), 7.37 (t, 1H), 7.29 (t, 3H), 7.18-7.25 (m, 1H), 6.99 (s, 2H), 5.99 (s, 1H), 5.00 (d, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.13-4.24 (m, 1H), 3.96 (s, 2H), 3.87 (d, 2H), 2.88-3.08 (m, 4H), 2.84 (q, 2H), 2.04-2.26 (m, 5H), 1.89-2.01 (m, 3H), 1.75-1.88 (m, 2H), 1.63-1.74 (m, 1H), 0.91-1.63 (m, 21H), 0.76-0.89 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1450.5 (M-H)-.
2.20 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N 5 -카르바모일-N-{4-[({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-오르니틴아미드 (신톤 FV)의 합성
실시예 2.1에서 실시예 1.2.9를 실시예 1.22.5로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.00 (v br s, 1H), 10.00 (s, 1H), 8.52 (dd, 1H), 8.16 (dd, 1H), 8.06 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.59 (br m, 2H), 7.53 (m, 2H), 7.45 (d, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.30 (s, 1H) 7.27 (d, 2H), 6.99 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 4.98 (m, 4H), 4.39 (m, 1H), 4.19 (br m, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.80 (br d, 2H), 3.44, 3.36 (br m, m, total 6H), 3.24 (m, 2H), 2.94-3.01 (m, 4H), 2.63 (br m, 2H), 2.14 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.97 (br m, 1H), 1.68 (br m, 1H), 1.58 (br m, 1H), 1.34-1.47 (m, 8H), 1.08-1.23 (m 10H), 0.95 (br m, 2H), 0.85-0.80 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1451.4 (M-H)-.
2.21 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[(2R)-1-{[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)아미노}-1-옥소-3-술포프로판-2-일]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 GC)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.21.7로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.98 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.07 (d, 1H), 8.01 (dd, 1H), 7.89 (t, 1H), 7.74-7.84 (m, 3H), 7.58 (d, 2H), 7.47 (s, 2H), 7.37 (t, 1H), 7.19-7.33 (m, 5H), 7.00 (s, 2H), 4.91 (q, 2H), 4.64-4.76 (m, 2H), 4.33-4.43 (m, 2H), 4.15-4.24 (m, 2H), 3.92-4.03 (m, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.32-3.50 (m, 6H), 3.10-3.22 (m, 2H), 2.89-3.07 (m, 2H), 2.70-2.89 (m, 4H), 2.60-2.70 (m, 1H), 2.05-2.28 (m, 5H), 1.90-2.03 (m, 3H), 1.64-1.77 (m, 1H), 1.53-1.65 (m, 1H), 0.92-1.53 (m, 21H), 0.77-0.92 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1507.3 (M-H)-.
2.22 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[(2R)-1-{[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)아미노}-1-옥소-3-술포프로판-2-일]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 GB)의 합성
실시예 1.2.9 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트를 각각 실시예 1.21.7 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트로 대체하여, 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.93 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.01 (dd, 1H), 7.88 (t, 1H), 7.74-7.84 (m, 3H), 7.57 (d, 2H), 7.46 (s, 2H), 7.37 (t, 1H), 7.17-7.33 (m, 5H), 6.99 (s, 2H), 4.91 (d, 2H), 4.65-4.76 (m, 1H), 4.30-4.51 (m, 1H), 4.13-4.21 (m, 1H), 3.92-4.00 (m, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.29-3.46 (m, 4H), 2.93-3.21 (m, 3H), 2.68-2.88 (m, 4H), 2.58-2.68 (m, 1H), 2.04-2.26 (m, 5H), 1.89-2.02 (m, 3H), 1.37-1.54 (m, 6H), 0.92-1.34 (m, 15H), 0.75-0.91 (m, 12H). MS (ESI) m/e (M+H)+.
2.23 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N 5 -카르바모일-N-{4-[({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-오르니틴아미드 (신톤 FW)의 합성
실시예 2.1에서 실시예 1.2.9를 실시예 1.23.4로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.38 (v br s, 1H), 10.00 (s, 1H), 8.66 (m, 2H), 8.06 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.59 (br m, 2H), 7.53 (m, 1H), 7.47 (m 2H), 7.37 (t, 1H), 7.30 (s, 1H) 7.27 (d, 2H), 6.99 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 4.98 (m, 4H), 4.39 (m, 1H), 4.19 (br m, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.80 (br d, 2H), 3.40 (br m, 6H), 3.24 (m, 2H), 2.98 (m, 4H), 2.63 (m, 2H), 2.16 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.97 (br m, 1H), 1.68 (br m, 1H), 1.58 (br m, 1H), 1.34-1.47(m, 8H), 1.08-1.23 (m, 10H), 0.95 (br m, 2H), 0.85-0.80 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1451.5 (M-H)-.
2.24 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 GD)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.24.2로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 10.00 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.07 (d, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.85-7.92 (m, 1H), 7.73-7.85 (m, 3H), 7.55-7.65 (m, 2H), 7.46 (s, 2H), 7.37 (t, 1H), 7.28 (t, 3H), 7.22 (t, 1H), 6.99 (s, 2H), 6.00 (s, 1H), 4.99 (d, 1H), 4.28-4.50 (m, 1H), 4.19 (s, 1H), 3.77-4.03 (m, 4H), 3.31-3.41 (m, 2H), 3.20-3.29 (m, 2H), 2.87-3.08 (m, 3H), 2.83 (t, 2H), 2.63 (d, 2H), 2.05-2.25 (m, 5H), 1.88-2.01 (m, 3H), 1.69 (t, 1H), 1.53-1.63 (m, 1H), 1.31-1.53 (m, 8H), 1.04-1.29 (m, 11H), 0.89-1.02 (m, 2H), 0.77-0.88 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1450.4 (M-H)-.
2.25 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 GK)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.25.2로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 9.98 (s, 1H), 8.04 (t, 2H), 7.75-7.82 (m, 2H), 7.60 (t, 3H), 7.41-7.53 (m, 3H), 7.32-7.39 (m, 2H), 7.24-7.29 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.94 (d, 3H), 5.97 (s, 1H), 4.88-5.04 (m, 4H), 4.38 (d, 1H), 4.12-4.24 (m, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.75-3.84 (m, 2H), 3.32-3.40 (m, 2H), 3.28 (d, 2H), 2.90-3.05 (m, 4H), 2.42-2.49 (m, 2H), 2.05-2.22 (m, 5H), 1.87-2.01 (m, 1H), 0.90-1.76 (m, 22H), 0.74-0.88 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1414.5 (M-H)-.
2.26 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 GJ)의 합성
실시예 1.2.9 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트를 각각 실시예 1.25.2 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트로 대체하여, 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.78 (s, 1H), 9.93 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.75-7.83 (m, 2H), 7.54-7.65 (m, 3H), 7.41-7.52 (m, 3H), 7.32-7.40 (m, 2H), 7.24-7.29 (m, 3H), 6.98 (s, 2H), 6.94 (d, 1H), 4.90-5.04 (m, 4H), 4.32-4.45 (m, 2H), 4.12-4.21 (m, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.79 (d, 2H), 3.31-3.46 (m, 4H), 3.23-3.31 (m, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.46 (t, 2H), 2.04-2.22 (m, 5H), 1.87-2.02 (m, 1H), 1.40-1.60 (m, 4H), 0.91-1.37 (m, 17H), 0.76-0.88 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1328.4 (M-H)-.
2.27 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2R)-3-카르복시-2-({[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}프로파노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}아미노)프로파노일](메틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (신톤 GW)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.27 (0.043 g)의 용액에 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (0.042 g) 후에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.038 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 교반하였다. 16시간 동안 교반한 후에, 반응물을 물 (0.5 mL) 및 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.05 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.26 (d, 1H), 8.02 (d, 2H), 7.95-7.77 (m, 4H), 7.77-7.63 (m, 3H), 7.63-7.54 (m, 2H), 7.54-7.46 (m, 3H), 7.22 (s, 2H), 7.18 (dd, 1H), 5.17 (d, 4H), 5.01 (dq, 1H), 4.61 (p, 1H), 4.39 (t, 1H), 4.11 (t, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.64-3.49 (m, 2H), 3.29 (s, 1H), 3.24 (t, 2H), 3.03 (s, 2H), 2.92 (dt, 1H), 2.73-2.61 (m, 4H), 2.35 (d, 4H), 2.18 (dt, 1H), 1.71 (h, 4H), 1.65-1.13 (m, 18H), 1.13-1.01 (m, 13H). MS (ESI) m/e 1387.3 (M+H)+.
2.28 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸][1-(카르복시메틸)피페리딘-4-일]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 HF)의 합성
실온에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중에서 실시예 1.28 (0.0449 g), 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (0.049 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.044 mL)의 용액을 함께 교반하였다. 반응 혼합물을 하룻밤 교반하고 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 8.04 (t, 2H), 7.78 (t, 2H), 7.65-7.58 (m, 3H), 7.54-7.41 (m, 3H), 7.38 (d, 1H), 7.34 (d, 1H), 7.32-7.24 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.97 (s, 1H), 5.01 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.38 (q, 1H), 4.23-4.14 (m, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.80 (s, 2H), 3.36 (t, 2H), 3.26-2.86 (m, 8H), 2.27-2.02 (m, 6H), 2.02-1.86 (m, 2H), 1.86-1.75 (m, 2H), 1.75-1.54 (m, 2H), 1.54-0.90 (m, 24H), 0.89-0.72 (m, 14H). MS (ESI) m/e 1485.2 (M+H)+.
2.29 (S)-6-((2-((3-((4-(6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)옥시)에틸)(메틸)아미노)-5-((((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)아미노)-N,N,N-트리메틸-6-옥소헥산-1-아미늄 염 (신톤 HG)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.250 mL) 중 실시예 1.29 (8 mg), 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (8.24 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (7.50 l, 0.043 mmol)의 용액을 실온에서 교반하였다. 3시간 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1.25 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 9.96 (s, 1H), 8.04 (t, 2H), 7.83-7.76 (m, 2H), 7.66-7.56 (m, 3H), 7.53-7.42 (m, 4H), 7.41-7.32 (m, 2H), 7.31-7.23 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.04-4.87 (m, 4H), 4.44-4.33 (m, 2H), 4.24-4.12 (m, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.50-3.13 (m, 9H), 3.11-2.92 (m, 14H), 2.80 (s, 1H), 2.25-2.04 (m, 5H), 2.03-1.89 (m, 1H), 1.75-0.91 (m, 28H), 0.91-0.77 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1528.5 (M+H)+.
2.30 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 HP)의 합성
4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트를 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트로 대체하여, 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.83 (s, 1H), 9.94 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 2H), 7.40-7.63 (m, 6H), 7.32-7.39 (m, 2H), 7.24-7.30 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 4.90-5.03 (m, 4H), 4.31-4.47 (m, 1H), 4.09-4.24 (m, 1H), 3.84-3.93 (m, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.30-3.39 (m, 2H), 3.20-3.28 (m, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.57-2.65 (m, 2H), 2.05-2.22 (m, 5H), 1.87-2.02 (m, 2H), 1.41-1.58 (m, 4H), 1.22 (d, 18H), 0.74-0.89 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1364.5 (M-H)-.
2.31 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 HR)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.30.2 (0.038 g), 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (0.035 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.032 mL)의 용액을 실온에서 교반하였다. 3시간 동안 교반한 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1.25 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.98 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.10-8.00 (m, 2H), 7.79 (d, 2H), 7.64-7.56 (m, 3H), 7.53 (d, 1H), 7.47 (t, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.39-7.32 (m, 2H), 7.29 (d, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.00 (s, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.48-4.32 (m, 2H), 4.27-4.15 (m, 2H), 4.11 (d, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.40-3.33 (m, 4H), 3.24-3.11 (m, 2H), 3.11-2.72 (m, 8H), 2.26-2.04 (m, 4H), 2.04-1.80 (m, 3H), 1.80-0.92 (m, 26H), 0.92-0.77 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1535.4 (M+H)+.
2.32 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-포스포노프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 HU)의 합성
실시예 2.5.4에서 실시예 2.5.3을 실시예 1.31.11로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.98 (s, 1H) , 8.03 (dd, 2H), 7.70-7.84 (m, 3H), 7.59 (d, 2H), 7.48 (dd, 2H), 7.23-7.37 (m, 4H) , 6.93-7.02 (m, 4H), 4.99 (d, 4H), 4.12-4.21 (m, 8H), 3.88-3.96 (m, 4H), 3.75-3.84 (m, 4H), 3.23-3.49 (m, 7H), 2.73-3.07 (m, 8H), 1.89-2.21 (m, 9H), 0.91-1.77 (m, 25H), 0.77-0.91 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1496.3 (M+H)+.
2.33 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 HT)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.26.2 (0.040 g), 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (0.030 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.020 mL)의 용액을 실온에서 교반하였다. 3시간 동안 교반한 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1.25 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.98 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 8.06 (d, 1H), 8.05-8.01 (m, 1H), 7.79 (d, 2H), 7.62 (d, 1H), 7.61-7.57 (m, 2H), 7.52-7.42 (m, 3H), 7.38 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 7.32-7.26 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.01 (s, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.96 (s, 3H), 4.44-4.33 (m, 2H), 4.18 (dd, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.71-3.61 (m, 2H), 3.53 (t, 2H), 3.36 (t, 2H), 3.07-2.66 (m, 8H), 2.28-2.06 (m, 6H), 2.05-1.92 (m, 2H), 1.92-1.80 (m, 2H), 1.78-0.95 (m, 32H), 0.92-0.77 (m, 14H). MS (ESI) m/e 1549.5 (M+H)+.
2.34 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 HV)의 합성
실시예 2.5.4에서 실시예 2.5.3을 실시예 1.14.4로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.98 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.32-8.45 (m, 1H), 8.12-8.27 (m, 3H), 7.98-8.09 (m, 3H), 7.93 (d, 1H), 7.66-7.83 (m, 4H), 7.54-7.64 (m, 2H), 7.46-7.50 (m, 2H), 7.24-7.40 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 5.93-6.09 (m, 1H), 4.99 (s, 3H), 4.33-4.49 (m, 3H), 4.15-4.20 (m, 3H), 3.19-3.50 (m, 10H), 2.86-3.07 (m, 3H), 1.87-2.27 (m, 7H), 0.91-1.77 (m, 26H), 0.76-0.89 (m, 10H). MS (ESI) m/e 1461.1 (M+H)+ .
2.35 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 HZ)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.36.2 (0.031 g), 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트(0.025 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.016 mL)의 용액을 실온에서 교반하였다. 3시간 동안 교반한 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1.25 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 9.98 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.05 (dd, 2H), 7.79 (d, 2H), 7.70-7.53 (m, 2H), 7.53-7.24 (m, 6H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.00 (s, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.37 (q, 2H), 4.25-4.15 (m, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.69-3.61 (m, 2H), 3.44-3.30 (m, 4H), 3.08-2.90 (m, 4H), 2.90-2.72 (m, 4H), 2.27-2.04 (m, 5H), 2.04-1.89 (m, 2H), 1.77-0.94 (m, 28H), 0.91-0.78 (m, 14H). MS (ESI) m/e 1499.5 (M+H)+.
2.36 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N 5 -카르바모일-N-{4-[({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-오르니틴아미드 (신톤 IA)의 합성
실시예 2.1에서 실시예 1.2.9를 실시예 1.39.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.98 (s, 1H), 8.60 (dd, 1H), 8.52 (dd, 1H), 8.06 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.59 (br m, 2H), 7.50 (m, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.38 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.27 (d, 2H), 6.99 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 5.98 (br s, 1H), 4.98 (s, 4H), 4.39 (m, 1H), 4.19 (br m, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.80 (br d, 2H), 3.36 (br m, 3H), 3.24 br (m, 4H), 2.98 (m, 4H), 2.16 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.95 (br m, 1H), 1.67 (br m, 3H), 1.34-1.47 (m, 9H), 1.08-1.23 (m, 11H), 0.95 (br m, 2H), 0.85-0.80 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1465.5 (M-H)-.
2.37 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N 5 -카르바모일-N-{4-[({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-오르니틴아미드 (신톤 IF)의 합성
실시예 2.1에서 실시예 1.2.9를 실시예 1.40.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.98 (s, 1H), 8.52 (dd, 1H), 8.16 (dd, 1H), 8.05 (br d, 1H), 7.78 (br d, 1H), 7.62 (m, 1H), 7.58 (br m, 2H), 7.52 (m, 2H), 7.44 (d, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.29 (s, 1H) 7.27 (d, 2H), 6.99 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.39 (m, 1H), 4.19 (br m, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.80 (br d, 2H), 3.36 (br m, 3H), 3.24 br (m, 4H), 2.98 (m, 4H), 2.16 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.95 (br m, 1H), 1.67 (br m, 3H), 1.47-1.34 (m, 9H), 1.08-1.23 (m, 11H), 0.95 (br m, 2H), 0.85-0.80 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1451.5 (M-H)-.
2.38 N-{6-[(클로로아세틸)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 IG)의 합성
2.38.1 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 실시예 1.2.9 (0.050 g), (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (0.039 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.027 mL)의 용액을 실온에서 교반하였다. 하룻밤 교반한 후에, 디에틸아민 (0.027 mL)을 반응물에 첨가하고, 교반을 2시간 동안 계속하였다. 반응물을 트리플루오로아세트산으로 켄칭하고, 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 5 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1499.5 (M+H)+.
2.38.2 N-{6-[(클로로아세틸)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-L-알라닌아미드
N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 6-(2-클로로아세트아미도)헥산산 (6 mg) 및 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로포스페이트(V) (0.011 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.015 mL)을 첨가하고, 반응물을 5분 동안 교반하였다. 이 용액을 실시예 2.38.1 (0.022 g)에 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.83 (s, 1H), 9.93 (s, 1H), 8.20-8.10 (m, 2H), 8.04 (d, 1H), 7.83-7.76 (m, 2H), 7.64-7.55 (m, 3H), 7.55-7.50 (m, 1H), 7.50-7.41 (m, 2H), 7.40-7.32 (m, 2H), 7.32-7.24 (m, 3H), 6.96 (d, 1H), 5.07-4.92 (m, 3H), 4.39 (p, 1H), 4.18 (dd, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.92-3.76 (m, 6H), 3.54-3.32 (m, 4H), 3.25 (t, 2H), 3.13-2.93 (m, 4H), 2.72-2.58 (m, 2H), 2.29-2.12 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.05-1.92 (m, 1H), 1.58-0.89 (m, 18H), 0.89-0.77 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1362.2 (M+H)+.
2.39 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(카르복시메톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 IJ)의 합성
실시예 2.5.4에서 실시예 2.5.3을 실시예 1.41.3으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 10.03 (s, 1H) , 9.96 (s, 1H), 8.26-8.34 (m, 1H), 7.95-8.11 (m, 2H), 7.73-7.82 (m, 2H), 7.22-7.70 (m, 11H) , 6.95-7.05 (m, 3H), 6.89 (d, 1H), 5.23 (s, 1H), 4.98 (d, 3H), 4.83 (s, 1H), 4.33-4.43 (m, 1H), 4.11-4.23 (m, 1H), 3.74-3.95 (m, 3H), 3.22-3.39 (m, 10H), 2.78-3.06 (m, 12H), 1.91-2.22 (m, 8H) , 0.93-1.68 (m, 20H), 0.77-0.88 (m, 10H). MS (ESI) m/e 1432.2 (M+H)+.
2.40 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(2-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)아미노}에틸)(2-카르복시에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 IJ)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.38.2로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.04 (t, 2H), 7.73-7.85 (m, 2H), 7.61 (t, 3H), 7.41-7.55 (m, 3H), 7.26-7.39 (m, 5H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.00 (s, 1H), 4.99 (d, 4H), 4.34-4.45 (m, 2H), 4.19 (dd, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.36 (t, 4H), 2.85-3.09 (m, 5H), 2.06-2.22 (m, 4H), 1.89-2.02 (m, 1H), 0.94-1.77 (m, 20H), 0.77-0.90 (m, 11H). MS (ESI) m/e 1567.4 (M+H)+.
2.41 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({(2S)-2-[{[(4-{[(2S)-5-(카르바모일아미노)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}펜타노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}(2-카르복시에틸)아미노]-3-카르복시프로파노일}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산 (신톤 IK)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.32.4로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1592.4 (M-H)-.
2.42 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2S)-2-({[(4-{[(2S)-5-(카르바모일아미노)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}펜타노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}아미노)-3-카르복시프로파노일](2-술포에틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (신톤 IL)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.44.2로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.82 (s, 1H), 9.96 (s, 1H), 8.03 (t, 2H), 7.77 (d, 2H), 7.39-7.62 (m, 7H), 7.30-7.39 (m, 2H), 7.22-7.29 (m, 3H), 6.98 (s, 2H), 6.92-6.96 (m, 1H), 5.97 (s, 1H), 4.83-5.05 (m, 3H), 3.83-3.92 (m, 1H), 3.79 (s, 1H), 3.00 (s, 2H), 2.03-2.22 (m, 8H), 1.94 (s, 2H), 1.34 (d, 30H), 0.69-0.90 (m, 13H). MS (ESI) m/e 1565.5 (M-H)-.
2.43 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-카르복시프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 IM)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.42.2 (0.045 g), 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (0.035 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.038 mL)의 용액을 실온에서 교반하였다. 3시간 동안 교반한 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1.25 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.76 (s, 1H), 9.91 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.98 (dd, 2H), 7.72 (d, 2H), 7.68-7.47 (m, 3H), 7.47-7.00 (m, 7H), 6.96-6.83 (m, 3H), 5.93 (s, 1H), 4.91 (d, 3H), 4.30 (q, 1H), 4.17-3.97 (m, 4H), 3.96-3.53 (m, 4H), 3.34-2.65 (m, 12H), 2.25 (t, 2H), 2.16-1.67 (m, 12H), 1.67-0.88 (m, 26H), 0.84-0.70 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1513.6 (M+H)+.
2.44 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(카르복시메톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 IO)의 합성
2.44.1 (E)-tert-부틸디메틸((3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)알릴)옥시)실란
질소 분위기 하에서 tert-부틸디메틸(프로프-2-인-1-일옥시)실란 (5 g) 및 디클로로메탄 (14.7 mL)로 충전된 플라스크에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (3.94 g)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 1분 동안 교반하고 이어서 캐뉼라를 통해 Cp2ZrClH (클로리도비스(η5-시클로펜타디에닐)히드리도지르코늄, 슈바르츠 시약(Schwartz's Reagent)) (379 mg)이 담긴 질소-살포된 플라스크로 옮겼다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (15 mL)로 주의 깊게 켄칭하고, 이어서 디에틸 에테르 (3x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 물 (15 mL)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 0 내지 8% 에틸 아세테이트/헵탄의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/z 316.0 (M+NH4)+.
2.44.2 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-브로모-2-니트로페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
(2R,3R,4S,5S,6S)-2-브로모-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (5 g)를 아세토니트릴 (100 mL) 중에 용해시켰다. Ag2O (2.92 g)를 용액에 첨가하고, 반응물을 5분 동안 실온에서 교반하였다. 4-브로모-2-니트로페놀 (2.74 g)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 은 염 잔사를 규조토를 통해 여과하고, 여과액을 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 10 내지 70% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI+) m/z 550.9 (M+NH4)+.
2.44.3 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-((E)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로프-1-엔-1-일)-2-니트로페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
실시예 2.44.2 (1 g), 탄산나트륨 (0.595 g), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (Pd2(dba)3) (0.086 g), 및 1,3,5,7-테트라메틸-6-페닐-2,4,8-트리옥사-6-포스파아다만탄 (0.055 g)을 환류 응축기가 구비된 3구 50-mL 둥근 바닥 플라스크에서 배합하고 시스템을 질소로 탈기시켰다. 별도로, 테트라히드로푸란 (15 mL) 중 실시예 2.44.1 (0.726 g)의 용액을 30분 동안 질소로 탈기시켰다. 후자의 용액을 캐뉼라를 통해 고체 시약이 담긴 플라스크 내로 옮긴 후에, 탈기된 물 (3 mL)을 주사기를 통해 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 60℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (3x 30 mL)과 물 (30 mL) 사이에서 분배하였다. 합한 유기상을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 0 내지 35% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI+) m/z 643.1 (M+NH4)+.
2.44.4 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-아미노-4-((E)-3-히드록시프로프-1-엔-1-일)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
균압 첨가 깔때기가 구비된 500-mL 3구의, 질소-플러싱된 플라스크를 아연 가루 (8.77 g)로 충전하였다. 테트라히드로푸란 (67 mL) 중 실시예 2.44.3 (8.39 g)의 탈기된 용액을 캐뉼라를 통해 첨가하였다. 생성된 현탁액을 빙조에서 냉각하고, 반응물의 내부 온도가 35℃를 넘지 않도록 하는 속도로 첨가 깔때기를 통해 6N HCl (22.3 mL)을 적가하였다. 첨가가 완료된 후에, 반응물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 규조토의 패드를 통해 여과하고, 물 및 에틸 아세테이트로 헹구었다. 수층이 더 이상 산성이 아닐 때까지 여과액을 NaHCO3 포화 수용액으로 처리하고, 혼합물을 여과하여 생성된 고형물을 제거하였다. 여과액을 분별 깔때기로 옮기고, 층을 분리하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (3x 75 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 물 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 디에틸 에테르와 배산(triturating)시키고 고형물을 여과에 의해 수집하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI+) m/z 482.0 (M+H)+.
2.44.5 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (3-클로로-3-옥소프로필)카르바메이트
디클로로메탄 (53.5 mL) 중 3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판산 (5.0 g)의 용액에 아황산 디클로라이드 (0.703 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각하고 농축하여 표제 화합물을 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
2.44.6 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-4-((E)-3-히드록시프로프-1-엔-1-일)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
실시예 2.44.4 (6.78 g)를 디클로로메탄 (50 mL) 중에 용해시키고 용액을 빙조에서 0℃까지 냉각하였다. N,N-디이소프로필에틸아민 (3.64 g)을 첨가한 후에, 디클로로메탄 (50 mL) 중 실시예 2.44.5 (4.88 g)의 용액을 적가하였다. 반응물을 16시간 동안 교반하여 빙조가 실온으로 되게 하였다. NaHCO3 포화 수용액 (100 mL)을 첨가하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 디클로로메탄 (2 x 50 mL)으로 추가로 추출하였다. 추출물을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 5 내지 95% 에틸 아세테이트/헵탄의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 출발 아닐린과 원하는 생성물의 분리할 수 없는 혼합물을 제공하였다. 혼합물을 1N HCl 수용액 (40 mL)과 디에틸 에테르 및 에틸 아세테이트의 1:1 혼합물 (40 mL) 사이에서 분배하고, 이어서 수성 상을 에틸 아세테이트 (2x 25 mL)로 추가로 추출하였다. 유기상을 합하고, 물 (2x 25 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI+) m/z 774.9 (M+H)+.
2.44.7 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-4-((E)-3-(((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)프로프-1-엔-1-일)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
실시예 2.44.6 (3.57 g)을 디클로로메탄 (45 mL) 중에 용해시키고 비스(4-니트로페닐)카르보네이트 (2.80 g)를 첨가한 후에, N,N-디이소프로필에틸아민 (0.896 g)을 적가하였다 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 실리카겔 (20 g)을 반응 용액에 첨가하고, 조 온도를 25℃ 이하에서 유지하면서 감압 하에 혼합물을 건조 상태까지농축하였다. 실리카 잔사를 컬럼 맨 위에 로딩하고, 생성물을, 0 내지 100% 에틸 아세테이트-헵탄의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 니트로페놀로 오염된, 부분적으로 정제된 생성물을 제공하였다. 이 물질을 메틸 tert-부틸 에테르 (250 mL)와 배산시키고, 생성된 슬러리를 1시간 동안 정치시켰다. 여과에 의해 생성물을 수집하였다. 유사한 방식으로 3개의 연속 수확물을 수집하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI+) m/z 939.8 (M+H)+.
2.44.8 3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)페닐)알릴)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-5-(카르복시메톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 실시예 2.44.7(19.7 mg) 및 실시예 1.41.3 (18.5 mg)의 차가운 (0℃) 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.054 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온까지 천천히 가온하고 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물에 물 (2 mL) 및 수산화리튬 일수화물 (50 mg)을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 트리플루오로아세트산으로 산성화시키고 여과하였다. 혼합물을, 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1273.2 (M+H)+.
2.44.9 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(카르복시메톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 실시예 2.44.8 (10 mg) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트 (2.3 mg)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.054 mL)을 첨가하였다. 반응물을 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 메탄올 (2 mL)로 희석하고 트리플루오로아세트산으로 산성화시켰다. 혼합물을, 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC (Gilson 시스템)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.70 (s, 1H) , 9.03 (s, 1H) , 8.25 (s, 1H) , 8.01 (d, 1H), 7.87 (t, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.41-7.55 (m, 2H), 7.23-7.38 (m, 2H), 6.79-7.16 (m, 7H) , 6.56 (d, 1H), 6.09-6.25 (m, 1H), 4.96-5.07 (m, 3H), 4.84 (s, 3H), 4.64 (d, 3H), 3.87-3.97 (m, 5H), 3.24-3.47 (m, 12H), 2.77-2.95 (m, 6H), 1.94-2.08 (m, 6H), 0.92-1.56 (m, 20H), 0.74-0.86 (m, 6H). MS (ESI) m/e 1487.3 (M+Na)+.
2.45 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 IP)의 합성
실시예 2.5.4에서 실시예 2.5.3을 실시예 1.43.7로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.09 (s, 1H) , 9.99 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.30-8.40 (m, 3H), 7.93-8.25 (m, 6H), 7.23-7.86 (m, 10H), 6.92-7.05 (m, 2H) , 4.99 (d, 2H), 4.36-4.44 (m, 2H), 4.14-4.23 (m, 2H), 2.87-3.35 (m, 12H) , 2.81 (t, 2H), 2.59-2.70 (m, 2H), 1.84-2.28 (m, 8H), 0.97-1.77 (m, 20H), 0.77-0.88 (m,10H). MS (ESI) m/e 1448.3 (M+Na)+.
2.46 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(2-{[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-(6-카르복시-5-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-5-일]옥시}에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 IS)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.46.2로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.69 (s, 1H), 9.97 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.04 (dd, 2H), 7.78 (d, 2H), 7.71 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.44-7.54 (m, 3H), 7.26-7.37 (m, 4H), 6.96-7.03 (m, 4H), 5.97 (s, 1H), 4.99 (d, 4H), 4.31-4.45 (m, 1H), 4.18 (dd, 1H), 4.09 (s, 2H), 3.85-3.93 (m, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.39-3.47 (m, 2H), 3.24-3.39 (m, 4H), 3.12-3.24 (m, 2H), 2.75-3.07 (m, 9H), 2.06-2.23 (m, 5H), 1.90-2.01 (m, 1H), 1.54-1.75 (m, 2H), 1.24-1.52 (m, 12H), 0.91-1.24 (m, 8H), 0.77-0.88 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1525.4 (M+H)+.
2.47 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(2-{[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-(6-카르복시-5-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-5-일]옥시}에틸)(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 IU)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.47.2로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.70 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.04 (dd, 2H), 7.78 (d, 2H), 7.71 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.43-7.55 (m, 2H), 7.28-7.37 (m, 4H), 6.94-7.07 (m, 4H), 6.05 (s, 1H), 4.93-5.11 (m, 4H), 4.31-4.46 (m, 2H), 4.12-4.26 (m, 4H), 3.80-3.95 (m, 4H), 3.40-3.50 (m, 2H), 3.24-3.40 (m, 6H), 3.13-3.24 (m, 2H), 2.74-3.08 (m, 9H), 2.63-2.73 (m, 2H), 2.05-2.23 (m, 5H), 1.96 (s, 1H), 1.52-1.77 (m, 2H), 1.23-1.53 (m, 12H), 0.97-1.22 (m, 8H), 0.77-0.89 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1631.5 (M-H)-.
2.48 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(2-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)아미노}에틸)(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 IV)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.48.2로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.82 (s, 1H), 10.00 (s, 1H), 9.29-9.57 (m, 1H), 8.05 (t, 2H), 7.79 (d, 2H), 7.51-7.63 (m, 4H), 7.40-7.50 (m, 2H), 7.27-7.39 (m, 5H), 6.93-7.02 (m, 3H), 4.99 (d, 3H), 4.30-4.47 (m, 1H), 4.19 (t, 1H), 3.79-3.92 (m, 3H), 3.60-3.74 (m, 2H), 3.01 (s, 9H), 2.70 (d, 4H), 2.05-2.23 (m, 6H), 1.96 (d, 2H), 1.53-1.78 (m, 3H), 1.22-1.54 (m, 13H), 0.89-1.22 (m, 9H), 0.75-0.89 (m, 13H). MS (ESI) m/e 1603.3 (M+H)+.
2.49 N-{6-[(클로로아세틸)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 IZ)의 합성
2.49.1 3-(1-(((1r,3r)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실온에서 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중에서 실시예 1.2.9 (0.045 g) (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (0.043 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.041 mL)의 용액을 함께 교반하였다. 하룻밤 교반한 후에, 디에틸아민 (0.024 mL)을 반응물에 첨가하고, 교반을 2시간 동안 계속하였다. 반응물을 트리플루오로아세트산으로 켄칭하고, 이어서, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다.
2.49.2 N-{6-[(클로로아세틸)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 6-(2-클로로아세트아미도)헥산산 (6.43 mg) 및 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로포스페이트(V) (0.012 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.019 mL)을 첨가하고, 반응물을 5분 동안 교반하였다. 이 용액을 실시예 2.49.1 (0.026 g)에 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 8.18 (q, 1H), 8.08 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.84-7.76 (m, 2H), 7.64-7.56 (m, 3H), 7.56-7.50 (m, 1H), 7.47 (t, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.37 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.27 (d, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.05-4.91 (m, 4H), 4.48-4.33 (m, 1H), 4.26-4.14 (m, 1H), 4.02 (s, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.81 (d, 2H), 3.25 (t, 2H), 3.14-2.98 (m, 6H), 2.98-2.87 (m, 2H), 2.74-2.59 (m, 2H), 2.27-2.05 (m, 6H), 2.04-1.92 (m, 1H), 1.78-1.65 (m, 1H), 1.65-1.53 (m, 1H), 1.53-0.90 (m, 22H), 0.90-0.73 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1448.2 (M+H)+.
2.50 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로-2H-1,4-벤족사진-6-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 JD)의 합성
실시예 2.5.4에서 실시예 2.5.3을 실시예 1.51.8로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.56 (s, 1H), 8.51-8.59 (m, 1H), 7.89 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.69-7.77 (m, 2H), 7.34-7.62 (m, 7H) , 7.16-7.34 (m, 4H), 6.95 (dd, 1H), 5.95-6.05 (m, 1H), 4.95 (s, 2H) , 4.06-4.44 (m, 6H), 3.85 (s, 3H), 3.39-3.59 (m, 7H), 2.61-2.74 (m, 3H), 2.19 (s, 3H), 1.88-2.16 (m, 3H), 0.96-1.75 (m, 22H), 0.71-0.89 (m, 13H). MS (ESI) m/e 1454.2 (M+Na)+.
2.51 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(2-{[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-(6-카르복시-5-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-5-일]옥시}에틸)(2-카르복시에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 JF)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.49.2로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.71 (s, 1H), 10.00 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.08 (d, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.78 (d, 2H), 7.72 (d, 1H), 7.60 (d, 2H), 7.52 (d, 1H), 7.44-7.50 (m, 1H), 7.27-7.39 (m, 4H), 6.96-7.06 (m, 3H), 5.98 (s, 1H), 5.01 (d, 4H), 4.31-4.46 (m, 1H), 4.18 (s, 3H), 3.79-3.95 (m, 4H), 3.67-3.76 (m, 2H), 3.12-3.39 (m, 6H), 2.73-3.07 (m, 8H), 2.04-2.24 (m, 4H), 1.87-2.02 (m, 1H), 1.22-1.75 (m, 12H), 0.96-1.20 (m, 7H), 0.76-0.90 (m, 10H). MS (ESI) m/e 1597.4 (M+H)+.
2.52 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-술포프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 JK)의 합성
실시예 2.5.4에서 실시예 2.5.3을 실시예 1.52.4로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.97 (s, 1H), 7.96-8.11 (m, 2H), 7.67-7.82 (m, 3H), 7.59 (d, 2H), 7.42-7.52 (m, 2H), 7.23-7.36 (m, 4H), 6.91-7.08 (m, 4H), 4.99 (d, 4H), 4.33-4.47 (m, 1H), 4.14-4.23 (m, 4H), 3.86-3.95 (m, 6H), 3.21-3.45 (m, 15H), 2.75-3.07 (m, 9H), 2.56-2.69 (m, 2H), 1.93-2.20 (m, 8H), 0.88-1.72 (m, 20H), 0.74-0.89 (m, 11H). MS (ESI) m/e 1496.3 (M+Na)+.
2.53 N-[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 JJ)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 2.49.1 (0.030 g), 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노에이트 (6.34 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.012 mL)의 용액을 실온에서 교반하였다. 1시간 후에 반응물을 N,N-디메틸포름아미드:물의 3:1 혼합물 (1.5 mL)로 켄칭하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 8.18 (q, 1H), 8.12-8.00 (m, 2H), 7.86-7.75 (m, 2H), 7.65-7.55 (m, 3H), 7.53 (dd, 1H), 7.47 (t, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.36 (q, 2H), 7.33-7.23 (m, 3H), 6.95 (d, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.03-4.92 (m, 4H), 4.39 (q, 1H), 4.24-4.14 (m, 1H), 4.02 (s, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.81 (d, 2H), 3.39-3.16 (m, 2H), 3.14-2.86 (m, 10H), 2.68-2.60 (m, 2H), 2.25-2.04 (m, 6H), 2.03-1.90 (m, 1H), 1.78-1.65 (m, 1H), 1.64-1.54 (m, 1H), 1.54-0.90 (m, 20H), 0.89-0.75 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1410.1 (M+H)+.
2.54 N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 JL)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 2.49.1 (0.039 g), 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세테이트 (7.81 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.016 mL)의 용액을 실온에서 교반하였다. 1시간 후에 반응물을 N,N-디메틸포름아미드:물의 3:1 혼합물 (1.5 mL)로 켄칭하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 10.00 (d, 1H), 8.24 (d, 2H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.59 (q, 3H), 7.53 (dd, 1H), 7.47 (t, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.36 (td, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.27 (d, 2H), 7.07 (s, 2H), 6.96 (d, 1H), 5.04-4.85 (m, 4H), 4.39 (q, 2H), 4.26 (dd, 2H), 4.13 (s, 2H), 3.86-3.17 (m, 8H), 3.07-2.81 (m, 4H), 2.63 (t, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.03-1.79 (m, 1H), 1.75-1.51 (m, 2H), 1.51-1.03 (m, 12H), 1.01-0.76 (m, 16H). MS (ESI) m/e 1394.4 (M-H)-.
2.55 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2S)-2-({[(4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-3-[(3-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}프로파노일)아미노]벤질)옥시]카르보닐}아미노)-3-술포프로파노일](메틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (신톤 FE)의 합성
2.55.1 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-포르밀-2-니트로페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
아세토니트릴 (100 mL) 중 (2R,3R,4S,5S,6S)-2-브로모-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (4 g)의 용액에 산화은(I) (10.04 g) 및 4-히드록시-3-니트로벤즈알데히드 (1.683 g)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고 여과하였다. 여과액을 농축하고, 잔사를, 헵탄 중 5 내지 50% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e (M+18)+.
2.55.2 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(히드록시메틸)-2-니트로페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
클로로포름 (75 mL) 및 이소프로판올 (18.75 mL)의 혼합물 중 실시예 2.55.1 (6 g)의 용액에 0.87 g의 실리카겔을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃까지 냉각하고, NaBH4 (0.470 g)를 첨가하고, 생성된 현탁액을 0℃에서 45분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 (100 mL)으로 희석하고 규조토를 통해 여과하였다. 여과액을 물 및 염수로 세척하고 농축하여 조질 생성물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. MS (ESI) m/e (M+NH4)+:
2.55.3 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-아미노-4-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
에틸 아세테이트 (81 mL) 중 실시예 2.55.2 (7 g)의 교반된 용액을, 12시간 동안 촉매로서 10% Pd/C (1.535 g)를 사용하여 1 기압 H2 하에 20℃에서 수소화하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를, 95/5 디클로로메탄/메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.55.4 3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판산
3-아미노프로판산 (4.99 g)을 500 mL 플라스크에서 10% Na2CO3 수용액 (120 mL) 중에 용해시키고 빙조를 사용하여 냉각하였다. 생성된 용액에, 1,4-디옥산 (100 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 카르보노클로리데이트 (14.5 g)를 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고 이어서 물 (800 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물로부터 수성상 층을 분리하고 디에틸 에테르 (3 x 750 mL)로 세척하였다. 수성 층을 2N HCl 수용액으로 2의 pH 값까지 산성화시키고 에틸 아세테이트 (3 x 750 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하고 농축하여 조질 생성물을 얻었다. 조질 생성물을 에틸 아세테이트: 헥산 1:2의 혼합 용매 (300 mL) 중에서 재결정화하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.55.5 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (3-클로로-3-옥소프로필)카르바메이트
디클로로메탄(160 mL) 중 실시예 2.55.4의 용액에 아황산 디클로라이드 (50 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각하고 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.55.6 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-4-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
디클로로메탄 (480 mL) 중 실시예 2.55.3 (6 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (4.60 mL)을 첨가하였다. 실시예 2.55.5 (5.34 g)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 중탄산나트륨 포화 수용액에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 추출물을 물 및 염수로 세척하고 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 농축에 의해 잔사를 얻었고, 이를, 석유 에테르 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용하는 방사형 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.55.7 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
N,N-디메틸포름아미드 (200 mL) 중 실시예 2.55.6 (5.1 g)의 혼합물에 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (4.14 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (1.784 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하고 감압 하에 농축하였다. 조질 물질을 디클로로메탄 중에 용해시키고 1 mm 방사형 Chromatotron 플레이트 상에 직접 흡인시키고 헥산 중 50 내지 100% 에틸 아세테이트로 용출시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI)m/e (M+H)+.
2.55.8 3-(1-((3-(2-((R)-2-((((3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)아미노)-N-메틸-3-술포프로판아미도)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (1.5 mL) 중에서 실시예 1.13.7 (0.055 g) 및 실시예 2.55.7 (0.055 g)의 용액을 함께 교반하고 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.053 mL)을 첨가하였다. 3시간 동안 교반한 후에, 반응물을 에틸 아세테이트 (75 mL)로 희석하고 물 (20 mL) 및 염수 (25 mL)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 메탄올 (1 mL) 중에 용해시키고 물 (0.6 mL) 중 수산화리튬 수화물 (0.025 g)로 처리하였다. 2시간 교반한 후에, 반응물을 트리플루오로아세트산 (0.047 mL)으로 켄칭하고 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다.
2.55.9 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2S)-2-({[(4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-3-[(3-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}프로파노일)아미노]벤질)옥시]카르보닐}아미노)-3-술포프로파노일](메틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산
N,N-디이소프로필에틸아민 (7.90 L) 중에서 실시예 2.55.8 (0.013 g) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트 (3.07 mg)의 용액을 교반하고 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)를 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고 N,N-디메틸포름아미드 및 물로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.89 (t, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.56-7.50 (m, 1H), 7.47 (t, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.39-7.32 (m, 2H), 7.31 (s, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 7.04-6.92 (m, 4H), 5.00-4.79 (m, 5H), 4.73-4.64 (m, 1H), 3.94-3.78 (m, 4H), 3.57-2.84 (m, 12H), 2.84-2.56 (m, 6H), 2.14-1.73 (m, 5H), 1.57-0.89 (m, 22H), 0.84 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1516.2 (M-H)-.
2.56 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 GG)의 합성
2.56.1 3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)페닐)알릴)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 1.22.5 (48 mg)를 디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중에 용해시키고, 실시예 2.44.7 (55 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (90 L)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고, 잔사를 메탄올 (1 mL) 중에 용해시키고 1.94N LiOH 수용액 (0.27 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다. MS (ESI-) m/e 1291.4 (M-H)-.
2.56.2 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.1에서 실시예 1.2.9를 실시예 1.56.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.00 (v br s, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.53 (dd, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.16 (dd, 1H), 7.90 (br s, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.54 (d, 1H) 7.52 (d, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.11 (br d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 6.58 (m, 1H), 6.15 (m,1H), 4.96 (s, 2H), 4.88 (br m, 1 H), 4.64 (br m, 2H), 3.88 (m, 3H), 3.79 (br m, 2H), 3.27-3.48 (m, 14H), 3.01 (m, 2H), 2.67 (br m, 2H), 2.54 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.03 (t, 2H), 1.45 (m, 6H), 1.37 (br m, 2H), 1.28-0.90 (m, 10H), 0.77-0.82 (m, 6H). MS (ESI) m/e 1484.4 (M-H)-.
2.57 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 GM)의 합성
2.57.1 3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)페닐)알릴)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.56.1에서 실시예 1.22.5를 실시예 1.23.4로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1291.4 (M-H)-.
2.57.2 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.1에서 실시예 1.2.9를 실시예 1.57.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.03 (s, 1H), 8.72 (d, 1H), 8.66 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.89 (br m, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.52 (br m, 2H), 7.46 (d, 1H), 7.39 (t, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.11 (br d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 6.58 (m, 1H), 6.15 (m,1H), 4.96 (s, 2H), 4.88 (br m, 1 H), 4.64 (br m, 2H), 3.88 (m, 3H), 3.79 (br m, 2H), 3.27-3.48 (m, 14H), 3.01 (m, 2H), 2.67 (br m, 2H), 2.54 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.03 (t, 2H), 1.45 (m, 6H), 1.37 (br m, 2H), 1.28-0.90 (m, 10H), 0.77-0.82 (m, 6H). MS (ESI) m/e 1484.4 (M-H)-.
2.58 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 HD)의 합성
2.58.1 3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)페닐)알릴)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.56.1에서 실시예 1.22.5를 실시예 1.2.9로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI-) m/e 1290.2 (M-H)-.
2.58.2 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.56.2에서 실시예 1.56.1을 실시예 1.58.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.03 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.89 (br m, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.53 (br m, 1H), 7.46 (m, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.32 (s, 1H), 7.11 (br d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 6.58 (m, 1H), 6.15 (m,1H), 4.96 (s, 2H), 4.88 (br m, 1 H), 4.64 (br m, 2H), 3.88 (m, 3H), 3.79 (br m, 2H), 3.27-3.48 (m, 14H), 3.01 (m, 2H), 2.67 (br m, 2H), 2.54 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.03 (t, 2H), 1.45 (m, 6H), 1.37 (br m, 2H), 1.28-0.90 (m, 10H), 0.77-0.82 (m, 6H). MS (ESI-) m/e 1483.3 (M-H)-.
2.59 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 HS)의 합성
2.59.1 3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)페닐)알릴)옥시)카르보닐)(3-포스포노프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.56.1에서 실시예 1.22.5를 실시예 1.40.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI-) m/e 1305.4 (M-H)-.
2.59.2 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.56.2에서 실시예 1.56.1을 실시예 1.59.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.03 (s, 1H), 8.53 (dd, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.16 (dd, 1H), 7.90 (br s, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.54 (d, 1H) 7.52 (d, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.11 (br d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 6.56 (m, 1H), 6.16 (m,1H), 4.96 (s, 2H), 4.86 (br m, 1 H), 4.64 (br d, 2H), 3.88 (m, 3H), 3.79 (br m, 2H), 3.27-3.44 (m, 14H), 3.01 (m, 2H), 2.54 (m, 2H), 2.08 (s, 3H), 2.03 (t, 2H), 1.46 (m, 6H), 1.37 (br m, 2H), 1.28-0.90 (m, 10H), 0.77-0.82 (m, 6H). MS (ESI) m/e 1498.4 (M-H)-.
2.60 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-포스포노프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 HW)의 합성
2.60.1 3-(1-(((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)페닐)알릴)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-포스포노프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.56.1에서 실시예 1.22.5를 실시예 1.31.11로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1336.2 (M+Na)+.
2.60.2 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-포스포노프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.56.2에서 실시예 1.56.1을 실시예 1.60.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.03 (s, 1H) 8.25 (s, 1H), 8.01 (d, 1H), 7.83-7.91 (m, 1H), 7.75 (dd, 2H), 7.42-7.58 (m, 2H), 7.34 (t, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.93-7.15 (m, 6H), 6.56 (d, 1H), 6.09-6.24 (m, 1H), 5.01 (s, 3H), 4.80-4.92 (m, 2H), 4.57-4.69 (m, 3H), 4.12-4.21 (m, 6H), 3.86-3.94 (m, 7H), 3.28-3.47 (m, 12H), 2.77-2.96 (m, 6H), 2.52-2.58 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.90-2.05 (m, 4H) , 1.65-1.78 (m, 2H), 0.90-1.53 (m, 16H), 0.80 (m, 6H). MS (ESI) m/e 1529.5 (M+H)+.
2.61 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 HX)의 합성
2.61.1 3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)페닐)알릴)옥시)카르보닐)(3-포스포노프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.56.1에서 실시예 1.22.5를 실시예 1.14.4로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1304.3 (M-H)-.
2.61.2 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.56.2에서 실시예 1.56.1을 실시예 1.61.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.03 (s, 1H), 8.25 (br s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.89 (br m, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.53 (br m, 1H), 7.46 (m, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.11 (br d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 6.56 (m, 1H), 6.17 (m,1H), 4.96 (s, 2H), 4.86 (br m, 1 H), 4.64 (br d, 2H), 3.88 (m, 3H), 3.79 (br m, 2H), 3.27-3.44 (m, 14H), 3.01 (m, 2H), 2.54 (m, 2H), 2.08 (s, 3H), 2.03 (t, 2H), 1.46 (m, 6H), 1.37 (br m, 2H), 1.28-0.90 (m, 10H), 0.77-0.82 (m, 6H). MS (ESI-) m/e 1497.4 (M-H)-.
2.62 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 HY)의 합성
2.62.1 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-포르밀-3-히드록시페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
2,4-디히드록시벤즈알데히드 (15 g) 및 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-브로모-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (10 g)를 아세토니트릴 중에 용해시킨 후에 탄산은 (10 g)을 첨가하고 반응물을 49℃까지 가열하였다. 4시간 동안 교반한 후에, 반응물을 냉각하고, 여과하고, 농축하였다. 조질의 표제 화합물을 디클로로메탄 중에 현탁시키고, 규조토를 통해 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 1 내지 100% 에틸 아세테이트/헵탄으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.62.2 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-히드록시-4-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
테트라히드로푸란 (200 mL) 및 메탄올 (200 mL) 중 실시예 2.62.1 (16.12 g)의 용액을 0℃로 냉각하고 수소화붕소나트륨 (1.476 g)을 나누어 첨가하였다. 반응물을 20분 동안 교반하고 물:중탄산나트륨 포화 수용액의 1:1 혼합물 (400 mL)로 켄칭하였다. 생성된 고형물을 여과하여 제거하고 에틸 아세테이트로 세척하였다. 상을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 4회 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 조질의 표제 화합물을, 1 내지 100% 에틸 아세테이트/헵탄으로 용출시키는, 실리카겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 473.9 (M+NH4)+.
2.62.3 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-히드록시페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
-5℃에서 디클로로메탄 (168 mL) 중 실시예 2.62.2 (7.66 g) 및 tert-부틸디메틸실릴 클로라이드 (2.78 g)에 이미다졸 (2.63 g)을 첨가하고 반응물을 하룻밤 교반하여 반응물의 내부 온도가 12℃까지 가온되게 하였다. 반응 혼합물을 암모늄 클로라이드 포화 수용액에 붓고 디클로로메탄으로 4회 추출하였다. 합한 유기물을 염수로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 조질의 표제 화합물을, 1 내지 50% 에틸 아세테이트/헵탄으로 용출시키는, 실리카겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 593.0 (M+Na)+.
2.62.4 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
톨루엔 (88 mL) 중 실시예 2.62.3 (5.03 g) 및 트리페닐포스핀 (4.62 g)에 디-tert-부틸-아조디카르복실레이트 (4.06 g)를 첨가하고 반응물을 30분 동안 교반하였다. (9H-플루오렌-9-일)메틸 (2-(2-히드록시에톡시)에틸)카르바메이트를 첨가하고 반응물을 추가 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 실리카겔 상에 직접 로딩하고 1 내지 50% 에틸 아세테이트/헵탄으로 용출시켜 표제 화합물을 제공하였다.
2.62.5 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-4-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
아세트산:물:테트라히드로푸란의 3:1:1 용액 (100 mL) 중에서 실시예 2.62.4 (4.29 g)를 하룻밤 교반하였다. 반응물을 중탄산나트륨 포화 수용액에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 조질의 표제 화합물을, 1 내지 50% 에틸 아세테이트/헵탄으로 용출시키는, 실리카겔 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.62.6 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(3-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 실시예 2.62.5 (0.595 g) 및 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (0.492 g)의 용액에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.212 mL)을 첨가하였다. 1.5시간 후에, 반응물을 고진공 하에서 농축하였다. 반응물을 실리카겔 상에 직접 로딩하고 1 내지 50% 에틸 아세테이트/헵탄을 사용하여 용출시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 922.9 (M+Na)+.
2.62.7 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.2.9 (0.073 g) 및 실시예 2.62.6 (0.077 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.066 mL)을 첨가하고, 반응물을 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고, 잔사를 테트라히드로푸란 (0.5 mL) 및 메탄올 (0.5 mL) 중에 용해시키고, 물 (0.5 mL) 중의 용액으로서의 수산화리튬 일수화물 (0.047 g)로 처리하였다. 1시간 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 및 물로 희석하고, 트리플루오로아세트산 (0.116 mL)을 첨가하여 켄칭하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다.
2.62.8 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
N,N-디메틸포름아미드 (0.75 mL) 중 실시예 2.62.7 (0.053 g), 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노에이트 (0.012 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.033 mL)의 용액을 실온에서 교반하였다. 1시간 동안 교반한 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 및 물로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 8.04 (d, 2H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.54 (d, 1H), 7.51-7.40 (m, 2H), 7.40-7.31 (m, 3H), 7.20 (d, 1H), 7.00-6.94 (m, 3H), 6.73-6.57 (m, 2H), 5.06 (t, 1H), 5.01-4.91 (m, 4H), 3.96-3.85 (m, 2H), 3.85-3.78 (m, 2H), 3.78-3.69 (m, 2H), 3.59 (t, 2H), 3.53-3.34 (m, 6H), 3.34-3.21 (m, 4H), 3.17 (q, 2H), 3.02 (t, 2H), 2.66 (t, 2H), 2.33 (t, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.44-0.90 (m, 16H), 0.83 (d, 6H). MS (-ESI) m/e 1432.4 (M-H)-.
2.63 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 IB)의 합성
2.63.1 3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)페닐)알릴)옥시)카르보닐)(3-포스포노프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.56.1에서 실시예 1.22.5를 실시예 1.39.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다.
2.63.2 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.56.2에서 실시예 1.56.1을 실시예 2.63.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.03 (s, 1H), 8.61 (d, 1H), 8.55 (d, 1H), 8.25 (br s, 1H), 7.89 (br m, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.50 (br d, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.39 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.11 (br d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 6.56 (m, 1H), 6.17 (m,1H), 4.97 (s, 2H), 4.86 (br m, 1 H), 4.64 (br d, 2H), 3.88 (m, 3H), 3.79 (br m, 2H), 3.27-3.44 (m, 14H), 3.01 (m, 2H), 2.54 (m, 2H), 2.08 (s, 3H), 2.03 (t, 2H), 1.46 (m, 6H), 1.37 (br m, 2H), 1.28-0.90 (m, 10H), 0.77-0.82 (m, 6H). MS (ESI) m/e 1498.3 (M-H)-.
2.64 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)({[(2E)-3-(4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-3-[(3-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}프로파노일)아미노]페닐)프로프-2-엔-1-일]옥시}카르보닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 IE)의 합성
2.64.1 3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)페닐)알릴)옥시)카르보닐)(2-카르복시에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산, 트리플루오로아세트산 염
N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 실시예 1.25.2 (0.050 g) 및 실시예 2.44.7 (0.061 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.047 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고, 잔사를 메탄올 (0.5 mL) 및 테트라히드로푸란 (0.5 mL) 중에 용해시키고 물 (0.5 mL) 중 수산화리튬 수화물 (0.034 g)의 용액으로 처리하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 트리플루오로아세트산 (0.083 mL)으로 켄칭하고 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다.
2.64.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)({[(2E)-3-(4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-3-[(3-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}프로파노일)아미노]페닐)프로프-2-엔-1-일]옥시}카르보닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 2.64.1 (0.042 g) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트 (10 mg)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.027 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.87 (t, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.54-7.40 (m, 3H), 7.40-7.31 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.10 (d, 1H), 7.04 (d, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 6.24-6.11 (m, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.86 (t, 1H), 4.65 (d, 2H), 3.95-3.84 (m, 2H), 3.84-3.75 (m, 4H), 3.44-3.24 (m, 10H), 3.01 (t, 2H), 2.62-2.52 (m, 4H), 2.09 (s, 3H), 2.03 (t, 2H), 1.46 (h, 4H), 1.40-1.31 (m, 2H), 1.30-0.88 (m, 14H), 0.87-0.75 (m, 6H). MS (ESI) m/e 1447.5 (M-H)-.
2.65 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸){[(4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-2-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]벤질)옥시]카르보닐}아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 II)의 합성
2.65.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(2-카르복시에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 실시예 1.25.2 (0.055 g), 실시예 2.62.6 (0.060 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.052 mL)의 용액을 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고, 잔사를 테트라히드로푸란 (0.5 mL), 메탄올 (0.5 mL) 중에 용해시키고, 이어서 물 (0.5 mL) 중의 용액으로서의 수산화리튬 수화물 (0.037 g)로 처리하였다. 1시간 교반한 후에, 반응물을 트리플루오로아세트산 (0.091 mL)으로 켄칭하고 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다.
2.65.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸){[(4-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-2-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]벤질)옥시]카르보닐}아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실온에서 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중에서 실시예 2.65.1의 트리플루오로아세트산 염 (0.043), 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노에이트 (10 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.028 mL)의 용액을 함께 교반하였다. 1시간 동안 교반한 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 5 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.00 (t, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.54-7.41 (m, 3H), 7.36 (td, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.19 (d, 1H), 6.97 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.67 (d, 1H), 6.60 (dd, 1H), 5.14-5.03 (m, 1H), 4.96 (d, 4H), 4.08 (tt, 4H), 3.89 (q, 4H), 3.84-3.77 (m, 2H), 3.71 (t, 2H), 3.59 (t, 2H), 3.52-3.35 (m, 6H), 3.28 (dq, 4H), 3.17 (q, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.46 (d, 1H), 2.33 (t, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.45-0.90 (m, 12H), 0.82 (d, 6H). MS (ESI) m/e 1396.4 (M-H)-.
2.66 N-[6-(에테닐술포닐)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 KY)의 합성
2.66.1 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 실시예 1.2.9 (57 mg) 및 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (54 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (103 L)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하고, 디에틸아민 (61.5 L)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 4시간 동안 교반하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 및 C18 컬럼을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1257.4 (M-H).
2.66.2 N-[6-(에테닐술포닐)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드
실시예 1.2.9 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2-클로로아세트아미도)헥사노에이트를 각각 실시예 2.66.1 및 실시예 2.82.5로 대체하여, 실시예 2.83에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.88 (s, 0H), 9.99 (s, 1H), 8.05 (t, 2H), 7.80 (t, 2H), 7.60 (q, 3H), 7.36 (td, 2H), 7.28 (d, 3H), 7.01-6.89 (m, 2H), 6.29-6.15 (m, 2H), 6.02 (s, 1H), 4.97 (d, 4H), 4.40 (td, 1H), 4.20 (t, 1H), 4.00-3.77 (m, 4H), 3.55-3.33 (m, 4H), 3.25 (d, 2H), 3.14-2.88 (m, 6H), 2.62 (t, 2H), 2.09 (s, 4H), 1.82-0.90 (m, 10H), 0.84 (dd, 13H). MS (ESI) m/e 1447.2 (M+H).
2.67 4-[(1E)-3-{[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 IW)의 합성
2.67.1 3-(1-((3-(2-((1-((((E)-3-(3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)페닐)알릴)옥시)카르보닐)피페리딘-4-일)(3-포스포노프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 실시예 1.26.2 (0.045 g) 및 실시예 2.44.7 (0.053 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민(0.041 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고, 잔사를 메탄올 (0.5 mL) 및 테트라히드로푸란 (0.5 mL) 중에 희석하고, 실온에서 물 (0.5 mL) 중 수산화리튬 일수화물 (0.030 g)의 용액으로 처리하였다. 1시간 교반한 후에, 반응물을 트리플루오로아세트산 (0.073 mL)으로 켄칭하고 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다.
2.67.2 4-[(1E)-3-{[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 실시예 2.67.1 (0.040 g) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트 (9.84 mg)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.023 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 및 물 (1 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.28 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.87 (t, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (dd, 1H), 7.55-7.40 (m, 3H), 7.36 (td, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.11 (dd, 1H), 7.05 (d, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.59 (d, 1H), 6.20 (t, 1H), 6.16 (t, 0H), 4.96 (s, 2H), 4.88 (d, 1H), 4.66 (d, 2H), 4.14 (d, 2H), 3.96-3.86 (m, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.54 (t, 7H), 3.48-3.28 (m, 12H), 3.01 (t, 2H), 2.84 (s, 2H), 2.55 (t, 2H), 2.10 (s, 3H), 2.07-1.95 (m, 4H), 1.88 (s, 2H), 1.73-1.54 (m, 4H), 1.54-1.38 (m, 6H), 1.39-1.26 (m, 4H), 1.26-0.93 (m, 8H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1582.4 (M+H)+.
2.68 4-[(1E)-3-{[(4-{[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 IY)의 합성
2.68.1 3-(1-((3-(2-((1-((((E)-3-(3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)페닐)알릴)옥시)카르보닐)피페리딘-4-일)(3-포스포노프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.56.1에서 실시예 1.44.7을 실시예 1.50.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1388.5 (M-H)-.
2.68.2 4-[(1E)-3-{[(4-{[2-({3-[(4-{2-카르복시-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-포스포노프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.56.2에서 실시예 1.56.1을 실시예 1.68.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.03 (s, 1H), 8.61 (d, 1H), 8.50 (d, 1H), 8.25 (br s, 1H), 7.89 (t, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.36 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.11 (br d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 6.58 (m, 1H), 6.17 (m,1H), 4.97 (s, 2H), 4.88 (d, 1 H), 4.65 (br d, 2H), 3.88 (m, 3H), 3.79 (br m, 2H), 3.66 (br m, 2H), 3.27-3.44, (m, 14H), 3.01 (m, 2H), 2.85 (br m, 2H), 2.54 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 2.03 (t, 2H), 1.98 (br m, 2H), 1.89 (m, 1H), 1.62 (m, 4H), 1.46 (m, 6H), 1.31 (m, 4H), 1.15 (m, 6H), 1.04 (m, 2H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1581.4 (M-H)-.
2.69 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 JA)의 합성
2.69.1 3-(1-((3-(2-(((((E)-3-(3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)페닐)알릴)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)피콜린산
실시예 2.56.1에서 실시예 2.44.7을 실시예 1.43.7로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1309.1 (M+Na)+.
2.69.2 4-[(1E)-3-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)프로프-1-엔-1-일]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.56.2에서 실시예 2.56.1을 실시예 2.69.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.09 (s, 1H), 9.02 (s, 2H), 8.35 (d, 1H), 8.13-8.29 (m, 4H), 7.86-8.09 (m, 5H), 7.81 (d, 1H) , 7.66-7.75 (m, 1H), 7.44-7.55 (m, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.09-7.18 (m, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.48-6.62 (m, 1H), 6.07-6.22 (m, 1H), 4.81-4.92 (m, 1H), 4.58-4.74 (m, 2H), 3.80-3.93 (m, 3H), 3.27-3.37 (m, 5H), 2.53-2.68 (m, 4H), 2.15-2.23 (m, 3H), 2.03 (t, 2H), 1.36-1.53 (m, 6H) , 0.97-1.33 (m, 24H), 0.81 (d, 6H). MS (ESI) m/e 1478.3(M-H)-.
2.70 이 단락은 의도적으로 비워 두었다.
2.71 이 단락은 의도적으로 비워 두었다.
2.72 이 단락은 의도적으로 비워 두었다.
2.73 이 단락은 의도적으로 비워 두었다.
2.74 이 단락은 의도적으로 비워 두었다.
2.75 이 단락은 의도적으로 비워 두었다.
2.76 이 단락은 의도적으로 비워 두었다.
2.77 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-3-술포-L-알라닐}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산 (신톤 FA)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.15 (0.023 g) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트 (9.12 mg)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.012 mL)을 첨가하고, 반응물을 하룻밤 교반하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 및 물 (0.5 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.90 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.65-7.57 (m, 2H), 7.54 (d, 1H), 7.51-7.41 (m, 2H), 7.40-7.31 (m, 3H), 7.01-6.96 (m, 3H), 4.96 (s, 2H), 4.34-4.28 (m, 3H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.37 (t, 2H), 3.29 (t, 2H), 3.16-2.95 (m, 4H), 2.80 (dd, 1H), 2.70 (dd, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.06 (t, 2H), 1.47 (tt, 4H), 1.40-0.92 (m, 12H), 0.84 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1090.3 (M+H)+.
2.78 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-(2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일](2-술포에틸)아미노}에톡시)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산 (신톤 FJ)의 합성
실시예 1.2.9 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트를 각각 실시예 1.11.4 및 퍼플루오로페닐 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트로 대체하여, 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.52 (dd, 1H), 7.42-7.49 (m, 2H), 7.33-7.39 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.96 (d, 1H), 4.95 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.46-3.56 (m, 4H), 3.31-3.46 (m, 10H), 3.01 (t, 2H), 2.61-2.68 (m, 1H), 2.55-2.60 (m, 1H), 2.21-2.32 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.40-1.51 (m, 4H), 1.37 (d, 2H), 0.91-1.30 (m, 12H), 0.83 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1091.2 (M+H)+.
2.79 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일](2-술포에틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (신톤 FK)의 합성
4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트를 퍼플루오로페닐 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트로 대체하여, 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.52 (dd, 1H), 7.41-7.49 (m, 2H), 7.32-7.39 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 6.93-6.98 (m, 3H), 4.95 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.32-3.38 (m, 2H), 3.21-3.27 (m, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.61-2.67 (m, 2H), 2.53-2.58 (m, 2H), 2.33-2.39 (m, 1H), 2.20-2.29 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.40-1.51 (m, 4H), 1.34 (s, 2H), 0.93-1.27 (m, 13H), 0.83 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1047.2 (M+H)+.
2.80 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{[1-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-21-옥소-22-(2-술포에틸)-3,6,9,12,15,18-헥사옥사-22-아자테트라코산-24-일]옥시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 FQ)의 합성
4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트를 퍼플루오로페닐 1-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3,9,12,15,18-펜타옥사헤니코산-21-오에이트로 대체하여, 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.42-7.54 (m, 3H), 7.33-7.38 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 6.95 (dd, 1H), 4.95 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.07-3.53 (m, 24H), 3.01 (t, 2H), 2.61-2.69 (m, 1H), 2.54-2.60 (m, 1H), 2.09 (s, 3H), 1.96 (d, 2H), 0.92-1.39 (m, 13H), 0.84 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1269.4 (M+H)+.
2.81 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{[1-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-21-옥소-22-(2-술포에틸)-3,6,9,12,15,18,25-헵타옥사-22-아자헵타코산-27-일]옥시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 FR)의 합성
실시예 1.2.9 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트를 각각 실시예 1.11.4 및 퍼플루오로페닐 1-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3,6,9,12,15,18-헥사옥사헤니코산-21-오에이트로 대체하여, 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.84 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.41-7.50 (m, 2H), 7.33-7.39 (m, 2H), 7.31 (s, 1H), 7.01 (d, 2H), 6.97 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.31-3.60 (m, 30H), 3.01 (t, 2H), 2.64-2.71 (m, 1H), 2.53-2.61 (m, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.38 (s, 2H), 1.20-1.31 (m, 4H), 1.12-1.18 (m, 2H), 0.91-1.12 (m, 4H), 0.84 (s, 6H).
2.82 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[6-(에테닐술포닐)헥사노일](2-술포에틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (신톤 JE)의 합성
2.82.1 에틸 6-((2-히드록시에틸)티오)헥사노에이트
에탄올 (100 mL) 중 에틸 6-브로모헥사노에이트 (3 g), 2-메르캅토에탄올 (0.947 mL) 및 K2CO3 (12 g)의 혼합물을 하룻밤 교반하고 여과하였다. 여과액을 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄 (100 mL) 중에 용해시키고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.82.2 6-((2-히드록시에틸)티오)헥산산
에탄올 (30 mL) 중 실시예 2.82.1 (12 g) 및 3 M NaOH 수용액 (30 mL)의 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 유기물을 감압 하에 제거하였다. 잔류 수성상을 에틸 아세테이트로 세척하고, HCl로 pH 5까지 산성화시키고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 추출물을 합하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.82.3 6-((2-히드록시에틸)술포닐)헥산산
물 (40 mL) 및 1,4-디옥산 (160 mL)의 혼합물 중 실시예 2.82.2 (4 g)의 교반된 용액에 Oxone (38.4 g)을 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하였다. 잔류 수성 층을 디클로로메탄으로 추출하였다. 추출물을 합하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.82.4 6-(비닐술포닐)헥산산
디클로로메탄 (10 mL) 중 실시예 2.82.3 (1 g)의 차가운 (0℃) 용액에 트리에틸아민 (2.8 mL)을 첨가한 후에, 아르곤 하에서 메탄술포닐 클로라이드 (1.1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.82.5 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(비닐술포닐)헥사노에이트
디클로로메탄 (10 ml) 중 실시예 2.82.4 (0.88 g)의 교반된 용액에 1-히드록시피롤리딘-2,5-디온 (0.54 g) 및 N,N'-메탄디일리덴디시클로헥사namine (0.92 g)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하고 여과하였다. 여과액을 농축하고, 석유 중 10 내지 25% 에틸 아세테이트로 용출시키는, 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 304.1 (M+1).
2.82.6 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[6-(에테닐술포닐)헥사노일](2-술포에틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2-클로로아세트아미도)헥사노에이트를 실시예 2.82.5로 대체하여, 실시예 2.83에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.53 (dd, 1H), 7.42-7.49 (m, 2H), 7.33-7.40 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 6.88-7.00 (m, 2H), 6.17-6.25 (m, 2H), 4.95 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.38 (dd, 2H), 3.25 (t, 2H), 3.04-3.12 (m, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.62-2.69 (m, 1H), 2.56 (dd, 1H), 2.27 (q, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.53-1.62 (m, 2H), 1.43-1.51 (m, 2H), 1.28-1.38 (m, 4H), 1.20-1.27 (m, 4H), 0.92-1.19 (m, 6H), 0.84 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1042.2 (M+H)+.
2.83 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[{6-[(클로로아세틸)아미노]헥사노일}(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 JM)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (1.5 mL) 중 실시예 1.2.9 (12.5 mg) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2-클로로아세트아미도)헥사노에이트 (6.7 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (26 L)을 첨가하였다. 혼합물을 10일 동안 교반하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 및 C18 컬럼을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δ ppm 12.83 (s, 1H), 8.15-8.21 (m, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.52 (dd, 1H), 7.41-7.49 (m, 2H), 7.32-7.39 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 6.96 (dd, 1H), 4.95 (s, 2H), 4.01 (d, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.39 (d, 2H), 3.25 (t, 2H), 2.98-3.10 (m, 5H), 2.62-2.70 (m, 1H), 2.56-2.61 (m, 1H), 2.23-2.30 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.33-1.52 (m, 5H), 1.19-1.30 (m, 6H), 0.91-1.18 (m, 6H), 0.84 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1043.2 (M+H)+.
2.84 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-카르복시프로필)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 LE)의 합성
실온에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중에서 실시예 1.56 (0.020 g), 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (0.022 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.018 mL)의 혼합물을 함께 교반하였다. 5시간 동안 교반한 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 및 물의 1:1 혼합물 (2 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δppm 12.82 (s, 1H), 9.97 (s, 1H), 8.10-7.98 (m, 2H), 7.84-7.72 (m, 2H), 7.67-7.54 (m, 3H), 7.54-7.41 (m, 3H), 7.40-7.32 (m, 2H), 7.30-7.23 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.94 (d, 1H), 5.99 (s, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.45-4.35 (m, 2H), 4.19 (dd, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.82-3.76 (m, 2H), 3.47-3.31 (m, 4H), 3.28-3.19 (m, 4H), 3.07-2.89 (m, 4H), 2.21-2.11 (m, 4H), 2.09 (s, 2H), 2.02-1.89 (m, 1H), 1.77-1.63 (m, 2H), 1.62-1.27 (m, 10H), 1.27-0.90 (m, 13H), 0.88-0.78 (m, 12H); MS (ESI) m/e 1430.3 (M+1)+.
2.85 N-{6-[(브로모아세틸)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 LH)의 합성
2.85.1 1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-1-일 6-(2-브로모아세트아미도)헥사노에이트
N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 6-(2-브로모아세트아미도)헥산산 (105 mg) 및 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBOP, 325 mg)의 용액에 트리에틸아민 (87 L)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 0.1% TFA 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson HPLC 시스템 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 368.7 (M+H).
2.85.2 N-{6-[(브로모아세틸)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드
N,N-디메틸포름아미드 (0.3 mL) 중 실시예 2.66.1 (6.6 mg) 및 실시예 2.85.2 (3.6 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (2.52 L)을 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반하고, 디메틸 술폭시드로 희석하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 및 C18 컬럼을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.99 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.08 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.80 (dd, 2H), 7.60 (q, 3H), 7.56-7.50 (m, 1H), 7.50-7.41 (m, 2H), 7.36 (q, 2H), 7.32-7.25 (m, 3H), 6.96 (d, 1H), 4.98 (d, 4H), 4.39 (q, 1H), 4.20 (dd, 1H), 3.92-3.68 (m, 6H), 3.42 (dd, 1H), 3.25 (t, 2H), 3.09-2.87 (m, 6H), 2.64 (s, 2H), 2.25-1.87 (m, 5H), 1.79-0.89 (m, 17H), 0.88-0.67 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1492.5 (M-H).
2.86 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-카르복시프로필)카르바모일}옥시)메틸]-3-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 LJ)의 합성
2.86.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(3-카르복시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 실시예 1.56 (0.024 g) 및 실시예 2.62.6 (0.030 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.025 mL)을 첨가하고, 반응물을 하룻밤 교반하였다. 반응물을 농축하고, 잔사를 테트라히드로푸란 (0.5 mL) 및 메탄올 (0.5 mL) 중에 용해시키고, 물 (0.5 mL) 중의 용액으로서의 수산화리튬 수화물 (0.018 g)로 처리하였다. 1시간 동안 교반한 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)로 희석하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1262.7 (M+H)+.
2.86.2 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-카르복시프로필)카르바모일}옥시)메틸]-3-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
N,N-디메틸포름아미드 (0.8 mL) 중 실시예 2.86.1 (0.0173 g) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노에이트 (4.38 mg)의 용액에 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노에이트 (4.38 mg)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드:물의 1:1 혼합물 (1 mL)로 희석하고, 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δ ppm 12.77 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.99 (t, 1H), 7.77 (d,1H), 7.62 (d, 1H), 7.55-7.41 (m, 3H), 7.40-7.32 (m, 2H), 8.28 (s, 1H), 7.23-7.17 (m, 1H), 6.97 (s, 2H), 6.94 (d, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.60 (dd, 1H), 5.07 (m, 1H), 5.00-4.91 (m, 4H), 4.17-4.02 (m, 2H), 3.96-3.85 (m, 2H), 3.85-3.76 (m, 2H), 3.71 (t, 2H), 3.64-3.56 (m, 4H), 3.34-3.12 (m, 10H), 3.01 (, 2H), 2.33 (t, 2H), 2.24-2.12 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.70 (p, 2H), 1.45-0.88 (m, 12H), 0.88-0.77 (m, 6H); MS (ESI) m/e 1434.2 (M+Na)+.
2.87 4-({[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-카르복시프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)-3-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 MA)의 합성
2.87.1 3-(1-((3-(2-((1-(((2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)피페리딘-4-일)(3-카르복시프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.42 (0.050 g) 및 실시예 2.62.6 (0.050 g)의 용액을 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.042 mL)으로 처리하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축하고, 잔사를 메탄올 (0.5 mL) 및 테트라히드로푸란 (0.5 mL) 중에 용해시키고, 물 (0.5 mL) 중의 용액으로서의 수산화리튬 수화물 (0.031 g)로 처리하였다. 반응물을 1.5시간 동안 교반하고 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1345.7 (M+H)+.
2.87.2 4-({[(4-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-카르복시프로필)아미노}피페리딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)-3-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 2.87.1 (0.047 g) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노에이트 (0.011 g)의 용액을 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.031 mL)으로 처리하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드:물의 1:1 혼합물 (2 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δ ppm 12.87 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.15-8.07 (m, 2H), 7.88 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.62-7.50 (m, 3H), 7.50-7.45 (m, 1H), 7.45-7.42 (m, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.33-7.27 (m, 1H), 7.07 (s, 2H), 7.07-7.02 (m, 1H), 6.80-6.74 (m, 1H), 6.72-6.66 (m, 1H), 5.23-5.14 (m, 1H), 5.13-5.00 (m, 4H), 4.27-4.12 (m, 4H), 4.06-3.95 (m, 4H), 3.92 (s, 2H), 3.83-3.78 (m, 2H), 3.57-3.32 (m, 10H), 3.32-3.14 (m, 4H), 3.14-3.06 (m, 2H), 2.90 (s, 2H), 2.49-2.37 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 2.12-2.01 (m, 2H), 2.02-1.88 (m, 2H), 1.74-1.57 (m, 2H), 1.52 (s, 2H), 1.45-1.30 (m, 4H), 1.30-1.05 (m, 6H), 0.95 (s, 6H); MS (ESI) m/e 1495.4 (M+H)+.
2.88 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-술포프로필)카르바모일}옥시)메틸]-3-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 MD)의 합성
2.88.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(3-술포프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.6 (0.039 g) 및 실시예 2.62.6 (0.041 g)의 용액을 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.035 mL)으로 처리하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축하고, 잔사를 메탄올 (0.5 mL) 및 테트라히드로푸란 (0.5 mL) 중에 용해시키고, 물 (0.5 mL) 중의 용액으로서의 수산화리튬 수화물 (0.025 g)로 처리하였다. 반응물을 1.5시간 동안 교반하고 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1297.8 (M+H)+.
2.88.2 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](3-술포프로필)카르바모일}옥시)메틸]-3-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 2.88.1 (0.024 g) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노에이트 (6.40 mg)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.016 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드:물의 1:1 혼합물 (2 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.87 (s, 1H), 8.09-8.02 (m, 2H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.52 (dd, 1H), 7.50-7.42 (m, 2H), 7.40-7.33 (m, 2H), 7.31 (s, 1H), 7.20 (t, 1H), 6.98 (s, 3H), 6.66 (s, 1H), 6.60 (dd, 1H), 5.06 (t, 1H), 4.96 (s, 4H), 4.10 (dq, 4H), 3.81 (d, 4H), 3.71 (t, 2H), 3.59 (t, 2H), 3.51-3.35 (m, 4H), 3.26 (td, 6H), 3.17 (q, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.35 (dt, 4H), 2.10 (d, 3H), 1.75 (d, 2H), 1.44-0.88 (m, 12H), 0.82 (d, 6H); MS (ESI) m/e 1446.4 (M-H)-.
2.89 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)아미노}아제티딘-1-일)카르보닐]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 MG)의 합성
3시간 동안 실온에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.8 mL) 중에서 실시예 1.60 (0.026 g), 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (0.024 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.022 mL)의 용액을 함께 교반하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드:물의 1:1 혼합물 (2 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz,디메틸 술폭시드-d6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 8.06 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (dd, 2H), 7.60 (dd, 3H), 7.55-7.41 (m, 3H), 7.36 (td, 2H), 7.29 (t, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.04-4.92 (m, 4H), 4.37 (q, 1H), 4.34-4.24 (m, 1H), 4.24-4.10 (m, 4H), 3.88 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.40-3.29 (m, 4H), 3.01 (t, 2H), 2.99-2.91 (m, 1H), 2.87 (t, 2H), 2.25-2.06 (m, 5H), 1.95 (dt, 1H), 1.68 (s, 1H), 1.60 (s, 1H), 1.54-1.24 (m, 12H), 1.24-0.94 (m, 9H), 0.90-0.78 (m, 12H); MS (ESI) m/e 1507.4 (M+H)+.
2.90 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{[26-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-8,24-디옥소-3-(2-술포에틸)-11,14,17,20-테트라옥사-3,7,23-트리아자헥사코스-1-일]옥시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 MS)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.8 mL) 중 실시예 1.61.2 (15 mg) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 1-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-옥소-7,10,13,16-테트라옥사-4-아자노나데칸-19-오에이트 (16.91 mg)의 혼합물에 0℃에서 N,N-디이소프로필에틸아민 (28.8 L)을 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 및 C18 컬럼을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.87 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.08-7.92 (m, 3H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.57-7.41 (m, 3H), 7.36 (td, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.04-6.92 (m, 3H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.48 (d, 4H), 3.44-3.17 (m, 3H), 3.18-2.83 (m, 10H), 2.38-2.24 (m, 4H), 2.11 (s, 3H), 1.78 (m, 2H), 1.50-0.94 (m, 12H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1309.3(M-H).
2.91 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)아미노}프로필)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 MR)의 합성
0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.61.2 (12.8 mg) 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트 (10.4 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (24.54 L)을 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 및 C18 컬럼을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 9.97 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.04 (t, 2H), 7.79 (dd, 2H), 7.65-7.40 (m, 7H), 7.36 (td, 3H), 7.28 (d, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.98 (s, 1H), 4.95 (d, 4H), 4.49-4.30 (m, 1H), 4.24-4.11 (m, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.36 (t, 3H), 3.18-2.84 (m, 9H), 2.25-1.88 (m, 5H), 1.85-0.90 (m, 14H), 0.91-0.75 (m, 13H). MS (ESI) m/e (M+H).
2.92 N-{6-[(요오도아세틸)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 MQ)의 합성
빙조에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.3 mL) 중 실시예 1.2.9 (8.2 mg) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2-요오도아세트아미도)헥사노에이트 (4.7 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (3 L)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 디메틸 술폭시드로 희석하고, 혼합물을, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 및 C18 컬럼을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.87 (s, 1H), 10.00 (s, 1H), 8.21 (d, 1H), 8.06 (dd, 2H), 7.81 (dd, 2H), 7.60 (t, 3H), 7.48 (ddd, 3H), 7.36 (td, 2H), 7.28 (d, 3H), 6.95 (d, 1H), 4.97 (d, 4H), 4.39 (q, 1H), 4.19 (t, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.80 (d, 2H), 3.25 (d, 2H), 2.97 (dq, 6H), 2.63 (s, 2H), 2.25-1.88 (m, 5H), 1.78-0.70 (m, 29H). MS (ESI) m/e 1538.4 (M-H).
2.93 N-{6-[(에테닐술포닐)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 MZ)의 합성
2.93.1 메틸 6-(비닐술폰아미도)헥사노에이트
0℃에서 디클로로메탄 중 6-메톡시-6-옥소헥산-1-아미늄 클로라이드 (0.3 g) 및 트리에틸아민 (1.15 mL)의 용액에 에텐술포닐 클로라이드 (0.209 g)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온하고 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 471.0 (2M+H)+.
2.93.2 6-(비닐술폰아미도)헥산산
테트라히드로푸란 (1 mL) 및 물 (1 mL)의 혼합물 중 실시예 2.93.1 (80 mg) 및 수산화리튬 일수화물 (81 mg)의 용액을 2시간 동안 교반하고, 이어서 물 (20 mL)로 희석하고, 디에틸 에테르 (10 mL)로 세척하였다. 수성 층을 1N HCl 수용액으로 pH 4로 산성화시키고 디클로로메탄 (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 염수 (5 mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여, 표제 화합물을 제공하였다.
2.93.3 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(비닐술폰아미도)헥사노에이트
디클로로메탄 (8 mL) 중 실시예 2.93.2 (25 mg), 1-에틸-3-[3-(디메틸아미노)프로필]-카르보디이미드 히드로클로라이드 (43.3 mg) 및 1-히드록시피롤리딘-2,5-디온 (15.6 mg)의 혼합물을 하룻밤 교반하고, 암모늄 클로라이드 포화 수용액 및 염수로 세척하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.93.4 N-{6-[(에테닐술포닐)아미노]헥사노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드
실시예 1.2.9 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2-클로로아세트아미도)헥사노에이트를 각각 실시예 2.66.1 및 실시예 2.93.3으로 대체하여, 실시예 2.83에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 9.98 (s, 1H), 8.05 (dd, 2H), 7.79 (d, 2H), 7.60 (t, 3H), 7.55-7.40 (m, 3H), 7.36 (td, 2H), 7.27 (d, 3H), 7.19 (t, 1H), 6.95 (d, 1H), 6.66 (dd, 1H), 6.09-5.90 (m, 2H), 4.97 (d, 4H), 4.39 (q, 1H), 4.20 (t, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.80 (d, 2H), 3.25 (d, 2H), 2.97 (dt, 4H), 2.78 (q, 2H), 2.64 (q, 2H), 2.22-1.86 (m, 6H), 1.77-0.89 (m, 16H), 0.89-0.72 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1460.6 (M-H).
2.94 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[3-({6-[(요오도아세틸)아미노]헥사노일}아미노)프로필](2-술포에틸)아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산 (신톤 NA)의 합성
실시예 1.2.9 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2-클로로아세트아미도)헥사노에이트를 각각 실시예 2.61.2 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2-요오도아세트아미도)헥사노에이트로 대체하여, 실시예 2.83에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.87 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.20 (t, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.91 (t, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.50-7.41 (m, 2H), 7.36 (td, 2H), 7.29 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.06 (dt, 8H), 2.89 (t, 2H), 2.17-1.99 (m, 5H), 1.76 (s, 2H), 1.56-0.93 (m, 14H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1190.3 (M-H).
2.95 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-{[6-(에테닐술포닐)헥사노일]아미노}프로필)(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 NB)의 합성
실시예 1.2.9 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2-클로로아세트아미도)헥사노에이트를 각각 실시예 1.61.2 및 실시예 2.82.5로 대체하여, 실시예 2.83에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.87 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.92 (t, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.51-7.41 (m, 2H), 7.36 (td, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.01-6.90 (m, 2H), 6.29-6.16 (m, 2H), 4.96 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.45-3.19 (m, 2H), 3.19-2.95 (m, 8H), 2.89 (t, 2H), 2.16-1.98 (m, 5H), 1.84-1.66 (m, 2H), 1.64-1.21 (m, 13H), 1.08 (dq, 6H), 0.86 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1199.3 (M+H).
2.96 N-[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 NP)의 합성
2.96.1 (S)-(9H-플루오렌-9-일)메틸 (1-((4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)카르바메이트
(S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-5-우레이도펜탄산 (40 g)을 디클로로메탄 (1.3L) 중에 용해시켰다. (4-아미노페닐)메탄올 (13.01 g), 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로포스페이트(V) (42.1 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.035 L)을 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 생성물을 여과에 의해 수집하고 디클로로메탄으로 헹구었다. 합한 고형물을 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. MS (ESI) m/e 503.3 (M+H)+.
2.96.2 (S)-2-아미노-N-(4-(히드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드
실시예 2.96.1 (44 g)을 N,N-디메틸포름아미드 (300 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 디에틸아민 (37.2 mL)으로 처리하고 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 용매를 감압 하에 농축하였다. 조질 생성물을, 에틸 아세테이트 중 0 내지 30% 메탄올의 구배로 용출시키는, 염기성 알루미나 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 281.2 (M+H)+.
2.96.3 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
(S)-2-(Tert-부톡시카르보닐아미노)-3-메틸부탄산 (9.69 g)을 N,N-디메틸포름아미드 (200 mL) 중에 용해시켰다. 이 용액에 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로포스페이트(V) (18.65 g)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 실시예 2.96.2 (12.5 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (15.58 mL)을 첨가하고 반응 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 농축하고, 잔사를, 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 480.2 (M+H)+.
2.96.4 (S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(히드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드
실시예 2.96.3 (31.8 g)을 디클로로메탄 (650 mL) 중에 용해시키고 트리플루오로아세트산 (4.85 mL)을 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 농축하여 조질의 표제 화합물 및 4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 2,2,2-트리플루오로아세테이트의 혼합물을 수득하였다. 조질 물질을 1:1 디옥산/수용액 (300 mL) 중에 용해시키고 이 용액에 수산화나트륨 (5.55 g)을 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 진공 하에 농축하고, 조질 생성물을, 0.05% v/v 암모늄 히드록시드를 함유하는 물 중 5 내지 60% 아세토니트릴의 구배로 용출시키는, CombiFlash 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 380.2 (M+H)+.
2.96.5 (S)-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(히드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드
N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 실시예 2.96.4 (38 mg)의 용액에 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노에이트 (26.7 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴의 구배로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 531.06 (M+H)+.
2.96.6 4-((S)-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트
N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 실시예 2.96.5 (53.1 mg)의 용액에 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (60.8 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 85% 아세토니트릴의 구배로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 696.2 (M+H)+.
2.96.7 N-[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드
실시예 1.2.9 및 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트를 각각 실시예 1.24.2 및 실시예 2.96.6으로 대체하여, 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.91 (s, 1H), 9.80 (s, 2H), 8.33 (s, 2H), 7.96 (s, 2H), 7.81 (d, 4H), 7.61 (s, 2H), 7.43 (d, 10H), 7.34-7.02 (m, 14H), 5.92 (s, 8H), 4.94-4.70 (m, 6H), 4.18 (d, 11H), 3.85 (s, 8H), 3.05-2.66 (m, 8H), 2.30-2.13 (m, 14H), 2.03-1.49 (m, 2H), 0.92-0.63 (m, 40H). MS (ESI) m/e 1408.3 (M-H)+.
2.97 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸){[(2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-4-[2-(2-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}에톡시)에톡시]벤질)옥시]카르보닐}아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 NN)의 합성
2.97.1 4-(2-(2-브로모에톡시)에톡시)-2-히드록시벤즈알데히드
아세토니트릴 (30 mL) 중 2,4-디히드록시벤즈알데히드 (1.0 g), 1-브로모-2-(2-브로모에톡시)에탄 (3.4 g) 및 탄산칼륨 (1.0 g)의 용액을 2일 동안 75℃까지 가열하였다. 반응물을 냉각하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하고, 물 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 5 내지 30% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ELSD) m/e 290.4 (M+H)+.
2.97.2 4-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-2-히드록시벤즈알데히드
N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 중 실시예 2.97.1 (1.26 g)의 용액에 소듐 아지드 (0.43 g)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응물을 디에틸 에테르 (100 mL)로 희석하고, 물 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 5 내지 30% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ELSD) m/e 251.4 (M+H)+.
2.97.3 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-2-포르밀페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
아세토니트릴 (15 mL) 중에서 실시예 2.97.2 (0.84 g), (3R,4S,5S,6S)-2-브로모-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (1.99 g) 및 산화은(I) (1.16 g)의 용액을 함께 교반하였다. 하룻밤 교반한 후에, 반응물을 디클로로메탄 (20 mL)으로 희석하였다. 규조토를 첨가하고, 반응물을 여과하고 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 5 내지 75% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.97.4 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)-2-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
메탄올 (5 mL) 및 테트라히드로푸란 (2 mL) 중 실시예 2.97.3 (0.695 g)의 용액을 0℃까지 냉각하였다. 수소화붕소나트륨 (0.023 g)을 첨가하고, 반응물을 실온까지 가온하였다. 총 1시간 동안 교반한 후에, 반응물을 에틸 아세테이트 (75 mL) 및 물 (25 mL)의 혼합물에 붓고, 중탄산나트륨 포화 수용액 (10 mL)을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 염수 (50 mL)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 5 내지 85% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ELSD) m/e 551.8 (M-H2O)-.
2.97.5 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-2-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
50 mL 압력병에서 테트라히드로푸란 (20 mL) 중 실시예 2.97.4 (0.465 g)에 5% Pd/C (0.1 g)를 첨가하고, 혼합물을 30 psi 수소 하에서 16시간 동안 진탕하였다. 반응물을 여과하고 농축하여 표제 화합물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. MS (ELSD) m/e 544.1 (M+H)+.
2.97.6 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-2-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
디클로로메탄 (8 mL) 중 실시예 2.97.5 (0.443 g)의 용액을 0℃까지 냉각하고, 이어서 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.214 mL) 및 (9H-플루오렌-9-일)메틸 카르보노클로리데이트 (0.190 g)를 첨가하였다. 1시간 후에, 반응물을 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 5 내지 95% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ELSD) m/e 748.15 (M-OH)-.
2.97.7 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(2-(2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)에톡시)에톡시)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 실시예 2.97.6 (0.444 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.152 mL) 및 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (0.353 g)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 교반하였다. 5시간 후에, 반응물을 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 5 내지 90% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.97.8 3-(1-((3-(2-((((4-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(2-카르복시에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산, 트리플루오로아세트산 염
N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 실시예 1.25 (0.070 g) 및 실시예 2.97.7 (0.070 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.066 mL)을 첨가하였다. 하룻밤 교반한 후에, 반응물을 농축하였다. 잔사를 테트라히드로푸란 (0.75 mL) 및 메탄올 (0.75 mL) 중에 용해시키고, 수산화리튬 일수화물 (0.047 g)을 물 (0.75 mL) 중의 용액으로서 첨가하였다. 3시간 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)로 희석하고 트리플루오로아세트산 (0.116 mL)으로 켄칭하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다.
2.97.9 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-4-(2-(2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)에톡시)에톡시)벤질)옥시)카르보닐)(2-카르복시에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
1시간 동안 N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중에서 실시예 2.97.8 (0.027 g), 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노에이트 (7.92 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.017 mL)의 용액을 함께 교반하였다. 반응물을 물 및 N,N-디메틸포름아미드의 1:1 혼합물 (2 mL)로 켄칭하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δ ppm 12.81 (s, 1H), 8.03 (d, 2H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.54-7.40 (m, 3H), 7.36 (td, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.18 (d, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.69 (d, 1H), 6.60 (d, 1H), 5.03 (d, 3H), 4.96 (s, 2H), 4.05 (s, 2H), 3.93 (d, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.80 (d, 2H), 3.75-3.67 (m, 2H), 3.59 (t, 6H), 3.29 (q, 6H), 3.17 (q, 2H), 3.01 (t, 2H), 2.47 (d, 2H), 2.33 (t, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.44-0.88 (m, 12H), 0.82 (d, 6H); MS (ESI) m/e 1396.5 (M-H)-.
2.98 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-3-술포-L-알라닐-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 NO)의 합성
2.98.1 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-카르복시에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.25.2 (0.059 g), (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (0.053 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.055 mL)의 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 디에틸아민 (0.066 mL)을 반응물에 첨가하고 30분 동안 교반을 계속하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 및 물의 1:1 혼합물 (2 mL)로 희석하고, 트리플루오로아세트산 (0.073 mL)을 첨가하여 켄칭하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1223.8 (M+H)+.
2.98.2 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((R)-2-아미노-3-술포프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-카르복시에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산, 트리플루오로아세트산 염
N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 (R)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-술포프로판산(0.021 g), O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (0.020 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.031 mL)의 용액을 3분 동안 교반하였다. 이 용액을 N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중의 용액으로서의 실시예 2.98.1 (0.043 g)에 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후에, 물 (0.5 mL) 중 수산화리튬 일수화물 (0.022 g)의 용액을 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 N,N-디메틸포름아미드 및 물의 1:1 혼합물 (2 mL)로 희석하고, 트리플루오로아세트산 (0.054 mL)을 첨가하여 켄칭하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1376.5 (M+1).
2.98.3 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((2-카르복시에틸)(((4-((S)-2-((S)-2-((R)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-술포프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 실시예 2.98.2 (0.025 g), 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트 (7.77 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.015 mL)의 용액을 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 및 N,N-디메틸포름아미드의 1:1 혼합물 (2 mL)로 희석하였다. 혼합물을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 10 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δ ppm 12.85 (s, 1H), 9.46 (s, 1H), 8.20 (d, 1H), 8.07 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.69 (d, 2H), 7.61 (d, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.49-7.45 (m, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.36 (td, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.25 (d, 2H), 6.97 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.73 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 4.03 (dd, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.51-3.32 (m, 6H), 3.28 (t, 2H), 3.09 (dd, 1H), 3.06-2.94 (m, 4H), 2.89 (dd, 1H), 2.46 (d, 2H), 2.16 (dd, 1H), 2.09 (d, 4H), 1.74 (s, 2H), 1.62-1.29 (m, 8H), 1.29-0.92 (m, 12H), 0.92-0.78 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1566.6 (M-H)-.
2.99 대조군 신톤 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)메틸]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 H)의 합성
2.99.1 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-포르밀-2-니트로페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
아세토니트릴 (100 mL) 중 (2R,3R,4S,5S,6S)-2-브로모-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (4 g)의 용액에 산화은(I) (10.04 g) 및 4-히드록시-3-니트로벤즈알데히드 (1.683 g)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고 여과하였다. 여과액을 농축하고, 잔사를, 헵탄 중 5 내지 50% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e (M+18)+.
2.99.2 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(4-(히드록시메틸)-2-니트로페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
클로로포름 (75 mL) 및 이소프로판올 (18.75 mL)의 혼합물 중 실시예 2.99.1 (6 g)의 용액에 0.87 g의 실리카겔을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃까지 냉각하고, NaBH4 (0.470 g)를 첨가하고, 생성된 현탁액을 0℃에서 45분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 (100 mL)으로 희석하고 규조토를 통해 여과하였다. 여과액을 물 및 염수로 세척하고 농축하여 조질 생성물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. MS (ESI) m/e (M+NH4)+:
2.99.3 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-아미노-4-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
에틸 아세테이트 (81 mL) 중 실시예 2.99.2 (7 g)의 교반된 용액을, 12시간 동안 촉매로서 10% Pd/C (1.535 g)를 사용하여 1 기압 H2 하에 20℃에서 수소화하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를, 95/5 디클로로메탄/메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.99.4 3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판산
3-아미노프로판산 (4.99 g)을 500 mL 플라스크에서 10% Na2CO3 수용액 (120 mL) 중에 용해시키고 빙조를 사용하여 냉각하였다. 생성된 용액에, 1,4-디옥산 (100 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 카르보노클로리데이트 (14.5 g)를 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고 이어서 물 (800 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물로부터 수성상 층을 분리하고 디에틸 에테르 (3 x 750 mL)로 세척하였다. 수성 층을 2N HCl 수용액으로 2의 pH 값까지 산성화시키고 에틸 아세테이트 (3 x 750 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하고 농축하여 조질 생성물을 얻었다. 조질 생성물을 에틸 아세테이트: 헥산 1:2의 혼합 용매 (300 mL) 중에서 재결정화하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.99.5 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (3-클로로-3-옥소프로필)카르바메이트
디클로로메탄(160 mL) 중 실시예 2.99.4의 용액에 아황산 디클로라이드 (50 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각하고 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.99.6 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-4-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
디클로로메탄 (480 mL) 중 실시예 2.99.3 (6 g)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (4.60 mL)을 첨가하였다. 실시예 2.99.5 (5.34 g)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 중탄산나트륨 포화 수용액에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 추출물을 물 및 염수로 세척하고 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 및 농축에 의해 잔사를 얻었고, 이를, 석유 에테르 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트를 이동상으로 사용하는 방사형 크로마토그래피를 통해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.99.7 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
N,N-디메틸포름아미드 (200 mL) 중 실시예 2.99.6 (5.1 g)의 혼합물에 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (4.14 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (1.784 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하고 감압 하에 농축하였다. 조질 물질을 디클로로메탄 중에 용해시키고 1 mm 방사형 Chromatotron 플레이트 상에 직접 흡인시키고 헥산 중 50 내지 100% 에틸 아세테이트로 용출시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI)m/e (M+H)+.
2.99.8 3-(1-((3-(2-((((3-(3-아미노프로판아미도)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(메틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (9 mL) 중 실시예 1.13.7 (325 mg) 및 실시예 2.99.7(382 mg)의 용액에 N,N-디이소프로필아민 (49.1 mg)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 5시간 동안 교반하고, 아세트산 (22.8 mg)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 테트라히드로푸란 (10 mL) 및 메탄올 (5 mL)의 혼합물 중에 용해시켰다. 0℃에서 이 용액에 1 M 수산화리튬 수용액 (3.8 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 아세트산으로 산성화시키고, 농축하였다. 농축물을 동결건조시켜 분말을 제공하였다. 분말을 N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 중에 용해시키고, 빙조에서 냉각하고, 0℃에서 피페리딘 (1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하고 1.5 mL의 아세트산을 첨가하였다. 용액을, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 30 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템을 사용하는 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1172.2 (M+H)+.
2.99.9 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)메틸]-2-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 실시예 2.99.8 (200 mg)에 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트 (105 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.12 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 실온까지 가온하고, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 30 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, 100g C18 컬럼을 사용하는 Gilson 시스템에서 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δ ppm 12.85 (s, 2H) 9.07 (s, 1H) 8.18 (s, 1H) 8.03 (d, 1H) 7.87 (t, 1H) 7.79 (d, 1H) 7.61 (d, 1H) 7.41-7.53 (m, 3H) 7.36 (q, 2H) 7.28 (s, 1H) 7.03-7.09 (m, 1H) 6.96-7.03 (m, 3H) 6.94 (d, 1H) 4.95 (s, 4H) 4.82 (t, 1H) 3.88 (t, 3H) 3.80 (d, 2H) 3.01 (t, 2H) 2.86 (d, 3H) 2.54 (t, 2H) 2.08 (s, 3H) 2.03 (t, 2H) 1.40-1.53 (m, 4H) 1.34 (d, 2H) 0.90-1.28 (m, 12H) 0.82 (d, 6H). MS (ESI) m/e 1365.3 (M+H)+.
2.100 대조군 신톤 4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)메틸]-2-({N-[19-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-17-옥소-4,7,10,13-테트라옥사-16-아자노나데칸-1-오일]-베타-알라닐}아미노)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 I)의 합성
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트를 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 1-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-옥소-7,10,13,16-테트라옥사-4-아자노나데칸-19-오에이트로 대체하여, 실시예 2.99.9에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δ ppm 8.95 (s, 1H) 8.16 (s, 1H) 7.99 (d, 1H) 7.57-7.81 (m, 4H) 7.38-7.50 (m, 3H) 7.34 (q, 2H) 7.27 (s, 1H) 7.10 (d, 1H) 7.00 (d, 1H) 6.88-6.95 (m, 2H) 4.97 (d, 4H) 4.76 (d, 2H) 3.89 (t, 2H) 3.84 (d, 2H) 3.80 (s, 2H) 3.57-3.63 (m, 4H) 3.44-3.50 (m, 4H) 3.32-3.43 (m, 6H) 3.29 (t, 2H) 3.16 (q, 2H) 3.02 (t, 2H) 2.87 (s, 3H) 2.52-2.60 (m, 2H) 2.29-2.39 (m, 3H) 2.09 (s, 3H) 1.37 (s, 2H) 1.20-1.29 (m, 4H) 1.06-1.18 (m, 4H) 0.92-1.05 (m, 2H) 0.83 (s, 6H). MS (ESI) m/e 1568.6 (M-H)-.
2.101 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{[(43S,46S)-43-({[(4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}프로파노일]아미노}벤질)옥시] 카르보닐}아미노)-46-메틸-37,44,47-트리옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사-38,45,48-트리아자펜타콘탄-50-일]옥시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 OK)의 합성
실시예 1.13.8을 실시예 1.66.7로 대체하여 실시예 2.7에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.85 (s, 1H), 8.21-7.97 (m, 4H), 7.79 (d, 4H), 7.71-7.32 (m, 15H), 7.28 (t, 4H), 7.02-6.91 (m, 3H), 4.95 (d, 5H), 4.33-4.12 (m, 3H), 3.98-3.76 (m, 11H), 3.41-3.21 (m, 22H), 3.21-2.90 (m, 12H), 2.24-2.05 (m, 7H), 1.81-0.90 (m, 46H), 0.90-0.78 (m, 17H). MS (ESI) m/e 2014.0 (M+H)+, 1007.5 (M+2H)2+, 672.0 (M+3H)3+.
2.102 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 OW)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.62.5로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다.1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.95 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.88-7.68 (m, 4H), 7.57 (d, 2H), 7.42 (s, 2H), 7.34 (t, 1H), 7.25 (dd, 3H), 7.19 (t, 1H), 6.95 (s, 2H), 5.96 (s, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.35 (q, 1H), 4.15 (dd, 1H), 3.93 (t, 2H), 3.83 (d, 2H), 3.32 (t, 2H), 3.27 (d, 1H), 2.93 (dtd, 1H), 2.80 (t, 2H), 2.47 (p, 19H), 2.24-2.02 (m, 5H), 1.91 (p, 3H), 1.74-1.25 (m, 8H), 1.27-0.89 (m, 10H), 0.79 (dd, 13H). MS (ESI) m/e 1414.4 (M+H)+.
2.103 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 PC)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.68.7로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.07 (s, 1H), 9.95 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.33 (dd, 1H), 8.25-8.09 (m, 3H), 8.12-7.95 (m, 3H), 7.90 (d, 1H), 7.76 (dd, 2H), 7.73-7.63 (m, 1H), 7.56 (s, 3H), 7.41-7.29 (m, 1H), 6.95 (s, 2H), 5.97 (s, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.35 (d, 2H), 4.15 (dd, 1H), 3.50-3.22 (m, 10H), 2.92 (dtd, 3H), 2.29-2.00 (m, 6H), 1.92 (q, 1H), 1.75-0.88 (m, 24H), 0.79 (dd, 15H). MS (ESI) m/e 1409.5 (M+H)+.
2.104 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸){[(2-{[(2R,3S,4R,5R,6R)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-4-[2-(2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}에톡시)에톡시]벤질)옥시] 카르보닐}아미노] 에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 PI)의 합성
2.104.1 3-(1-((3-(2-((((4-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-2-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(2-카르복시에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 실시예 2.97.7 (26.9 mg) 및 실시예 1.68.7 (23.5 mg)의 차가운 (0℃) 혼합물에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.043 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온까지 천천히 가온하고 하룻밤 교반하였다. LC/MS는 예상 생성물을 주요 피크로서 나타내었다. 반응 혼합물에 물 (1 mL) 및 LiOH H2O (20 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 N,N-디메틸포름아미드 (2 mL)로 희석하고, 여과하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1242.2 (M-H)-.
2.104.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸){[(2-{[(2R,3S,4R,5R,6R)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-4-[2-(2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}에톡시)에톡시]벤질)옥시]카르보닐}아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 2.97.8을 실시예 2.104.1로 대체하고, 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노에이트를 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트로 대체하여, 실시예 2.97.9에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.06 (s, 2H), 8.99 (s, 1H), 8.34 (dd, 1H), 8.25-8.10 (m, 3H), 8.04 (d, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.90 (d, 1H), 7.78 (d, 2H), 7.72-7.63 (m, 1H), 7.50-7.42 (m, 2H), 7.34 (t, 1H), 7.16 (d, 1H), 6.94 (s, 2H), 6.65 (d, 1H), 6.56 (dd, 1H), 4.02 (t, 2H), 3.90 (d, 1H), 3.83 (s, 2H), 3.66 (t, 3H), 3.28 (q, 4H), 3.15 (q, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.99 (t, 2H), 1.51-1.30 (m, 6H), 1.28-0.88 (m, 11H), 0.81 (d, 6H). MS (ESI) m/e 1433.4 (M+H)+.
2.105 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 PJ)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.69.6으로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.23 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 9.73 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.33 (t, 2H), 8.18 (d, 1H), 8.07 (dd, 2H), 8.02 (dd, 1H), 7.97 (dd, 1H), 7.80 (t, 2H), 7.65-7.55 (m, 2H), 7.53-7.44 (m, 2H), 7.37 (t, 1H), 7.27 (d, 2H), 6.98 (s, 2H), 4.98 (d, 2H), 4.38 (d, 1H), 4.18 (d, 1H), 3.56-3.31 (m, 3H), 3.26 (d, 2H), 3.08-2.89 (m, 2H), 2.64 (t, 2H), 2.23 (d, 3H), 2.12 (dp, 2H), 1.95 (s, 1H), 1.68 (s, 1H), 1.62-1.29 (m, 7H), 1.29-0.90 (m, 9H), 0.90-0.74 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1446.3 (M-H)-.
2.106 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-6-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 PU)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.70으로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.97 (s, 1H), 9.12 (d, 1H), 8.93 (s, 1H), 8.60 (dd, 1H), 8.24 (dd, 2H), 8.05 (dd, 2H), 7.99-7.87 (m, 2H), 7.78 (dd, 2H), 7.67-7.51 (m, 3H), 7.43-7.31 (m, 1H), 7.26 (d, 2H), 6.97 (s, 2H), 5.98 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.37 (d, 2H), 4.17 (dd, 1H), 3.49-3.22 (m, 11H), 2.95 (ddd, 3H), 2.20 (s, 4H), 2.19-1.86 (m, 3H), 1.74-0.89 (m, 22H), 0.81 (dd, 15H). MS (ESI) m/e 1410.4 (M-H)-.
2.107 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-6-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 PV)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.70.5으로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.96 (s, 1H), 9.11 (d, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.60 (dd, 1H), 8.23 (dd, 2H), 8.12-7.97 (m, 2H), 7.98-7.92 (m, 2H), 7.77 (dd, 2H), 7.56 (t, 2H), 7.51-7.42 (m, 2H), 7.42-7.31 (m, 1H), 7.24 (d, 2H), 6.95 (s, 2H), 4.95 (d, 2H), 4.36 (q, 1H), 3.90-3.80 (m, 3H), 3.52-3.27 (m, 3H), 3.23 (t, 2H), 3.06-2.83 (m, 2H), 2.67-2.58 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.09 (dp, 2H), 1.93 (d, 1H), 1.72-1.25 (m, 7H), 1.27-0.88 (m, 10H), 0.88-0.70 (m, 13H). MS (ESI) m/e 1446.3 (M-H)-.
2.108 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-카르복시에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 PW)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.71로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.97 (s, 1H), 9.70 (d, 1H), 9.40 (d, 1H), 8.31 (dd, 2H), 8.16 (d, 1H), 8.05 (t, 2H), 8.01-7.91 (m, 2H), 7.78 (dd, 2H), 7.59 (d, 3H), 7.52-7.44 (m, 2H), 7.36 (t, 1H), 7.26 (d, 2H), 6.96 (s, 2H), 5.99 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.37 (d, 2H), 4.16 (dd, 1H), 3.53-3.20 (m, 9H), 2.94 (dtd, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.17-1.85 (m, 3H), 1.71-0.89 (m, 22H), 0.81 (dd, 14H). MS (ESI) m/e 1410.4 (M-H)-.
2.109 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5,6-디히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 QW)의 합성
실시예 2.1에서 실시예 1.2.9를 실시예 1.72.8로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드 d6) δ ppm 11.07 (bs, 1H), 10.00 (bs, 1H), 8.27 (bs, 1H), 8.12 (m, 2H), 8.07 (d, 1H), 7.99 (d, 1H), 7.84-7.74 (m, 2H), 7.65 (d, 1H), 7.59 (m, 2H), 7.54-7.44 (m, 1H), 7.42-7.31 (m, 2H), 7.28 (m, 2H), 7.21 (q, 1H), 7.00 (m, 1H) 6.94-6.92 (m, 2H), 6.04 (bs, 1H), 5.14 (s, 2H), 4.99 (m, 3H), 4.39 (m, 2H), 4.30 (bs, 2H), 4.20 (m, 2H), 4.12 (bs, 2H), 3.70-3.64 (m, 2H), 3.50 (m, 2H), 3.44-3.35 (m, 2H), 3.27 (m, 2H), 3.02 (m, 2H), 2.95 (m, 2H), 2.68 (t, 2H), 2.14 (m, 4H), 1.96 (m, 1H), 1.69 (m, 1H), 1.58 (m, 1H), 1.47 (m, 4H), 1.36 (m, 2H), 1.30-1.02 (m, 8H), 0.98 (m, 2H), 0.85-0.80 (m, 16 H).
2.110 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[7-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1H-인돌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 RM)의 합성
실시예 2.1에서 실시예 1.2.9를 실시예 1.74.6으로 대체하여 실시예 2.110을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δ ppm 11.30 (s, 1H), 9.93 (s, 1H), 8.26 (d, 1H), 8.17 (d, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.92-7.84 (m, 3H), 7.76 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.54 (d, 3H), 7.47 (s, 1H), 7.35 (dd, 2H), 7.22 (t, 3H), 7.08 (t, 1H), 6.93 (s, 2H), 4.90 (s, 2H), 4.84 (t, 2H), 4.33 (q, 1H), 4.16-4.09 (m, 1H), 3.32 (t, 4H), 2.99 (m, 6H), 2.21 (s, 3H), 2.09 (m, 2H), 1.91 (m, 1H), 1.71-0.71 (m, 25H). MS (ESI) m/e 1434.4 (M-H)-.
2.111 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[{3-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-(6-카르복시-5-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일]프로필}(메틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 RR)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.75.14으로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.60 (bs, 1H), 9.98 (s, 1H), 8.33 (m, 2H), 8.02 (d, 2H), 7.75 (d, 2H), 7.55 (d, 2H), 7.49 (m, 3H), 7.29 (m, 1H), 7.25 (s, 4H), 6.99 (d, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.90 (m, 1H), 5.42 (m, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.90 (m, 2H), 4.35 (t, 1H), 4.18 (t, 1H), 3.85 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 3.52 (m, 2H), 3.35 (m, 4H), 3.22 (m, 4H), 3.08 (m, 2H), 2.99 (m, 2H), 2.92 (m, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.79 (t, 2H), 2.52 (m, 1H), 2.15 (m, 1H), 2.09 (s, 3H), 1.94 (m, 1H), 1.88 (m, 1H), 1.68 (m, 1H), 1.54 (m, 1H), 1.42 (m, 4H), 1.38 (m, 4H), 1.27 (m, 4H), 1.13 (m, 4H), 1.02 (m, 2H), 0.85 (s, 6H), 0.78 (m, 6H). MS (ESI) m/e 1523.3 (M+H)+, 1521.6 (M-H)-.
2.112 N-(6-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}헥사노일)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 SJ)의 합성
2.112.1 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 실시예 1.2.9, 트리플루오로아세트산 염 (390 mg), tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (286 mg) 및 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (185 mg)을 빙조에서 냉각하고 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.35 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 그리고 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 디메틸 술폭시드로 10 mL까지 희석하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 680.1 (M+2H)2+.
2.112.2 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
0℃에서 10 mL의 디클로로메탄 중 실시예 2.112.1 (300 mg)을 트리플루오로아세트산 (4 mL)으로 30분 동안 처리하고 혼합물을 농축하였다. 잔사를 아세토니트릴 및 물의 혼합물 중에 용해시키고 동결건조하여 원하는 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. MS (ESI) m/e 1257.4 (M-H)-.
2.112.3 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((4-((13S,16S)-13-이소프로필-2,2-디메틸-4,11,14-트리옥소-16-(3-우레이도프로필)-3-옥사-5,12,15-트리아자헵타데칸아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 실시예 2.112.2 (트리플루오로아세트산 염, 385 mg) 및 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (140 mg)을 얼음-수조에서 냉각하였다. N,N-디이소프로필에틸아민 (226 L)을 적가한 후에, 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥사노에이트 (127 mg)를 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 혼합물을, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1470.2 (M-H)-.
2.112.4 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-(6-아미노헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.112.1을 실시예 2.112.3으로 대체하여, 실시예 2.112.2에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1370.5 (M-H)-.
2.112.5 N-(6-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}헥사노일)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드
N,N-디메틸포름아미드 (0.3 mL) 중 실시예 2.112.4 (25 mg) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세테이트 (9.19 mg)를 0℃에서 30분 동안 N,N-디이소프로필에틸아민 (25.4 L)로 처리하였다. 반응 혼합물을, 4 mM 암모늄 아세테이트 물 혼합물 중 35 내지 65% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 암모늄 염으로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.81 (s, 1H), 9.94 (s, 1H), 8.01 (dd, 2H), 7.75 (d, 2H), 7.56 (s, 3H), 7.51-7.45 (m, 1H), 7.45-7.37 (m, 2H), 7.36-7.28 (m, 2H), 7.24 (t, 3H), 7.17 (s, 2H), 7.05 (s, 3H), 7.04 (s, 2H), 6.92 (s, 3H), 5.93 (s, 1H), 5.36 (s, 2H), 5.05-4.85 (m, 4H), 4.36 (q, 1H), 4.16 (dd, 1H), 3.95 (s, 2H), 3.85 (t, 2H), 3.76 (d, 2H), 3.22 (d, 1H), 3.05-2.81 (m, 6H), 2.68-2.53 (m, 2H), 2.09 (d, 4H), 1.76-0.86 (m, 14H), 0.86-0.71 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1507.5 (M-H)-.
2.113 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸][3-(베타-L-글루코피라누로노실옥시)프로필]카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 SM)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.87.3으로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.08 (s, 1H), 9.96 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.35 (dd, 1H), 8.24-8.13 (m, 3H), 8.09-8.02 (m, 2H), 8.00 (d, 1H), 7.91 (d, 1H), 7.77 (dd, 2H), 7.71-7.64 (m, 1H), 7.58 (t, 2H), 7.49-7.44 (m, 2H), 7.39-7.32 (m, 1H), 7.26 (d, 2H), 6.96 (s, 2H), 5.97 (s, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.37 (d, 1H), 4.22-4.12 (m, 2H), 3.84 (s, 1H), 3.37-3.20 (m, 6H), 3.15 (t, 1H), 3.04-2.81 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.11 (dp, 2H), 1.99-1.88 (m, 1H), 1.71 (q, 2H), 1.62-1.26 (m, 8H), 1.29-0.88 (m, 11H), 0.80 (dd, 14H). MS (ESI) m/e 1571.4 (M-H)-.
2.114 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)이소퀴놀린-6-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 SN)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.78.5로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.95 (s, 1H), 9.61 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.54 (dd, 1H), 8.43 (d, 1H), 8.24 (d, 1H), 8.08-7.95 (m, 3H), 7.77 (dd, 2H), 7.63-7.51 (m, 2H), 7.50-7.42 (m, 2H), 7.40-7.31 (m, 1H), 7.24 (d, 2H), 6.95 (s, 2H), 6.00 (s, 1H), 4.95 (d, 2H), 4.36 (q, 1H), 4.15 (t, 1H), 3.27 (dt, 4H), 3.10-2.79 (m, 2H), 2.68-2.56 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.98-1.84 (m, 1H), 1.72-0.87 (m, 19H), 0.79 (dd, 13H). MS (ESI) m/e 1446.4 (M-H)-.
2.115 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-알파-글루타밀-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 SS)의 합성
2.115.1 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((4-((6S,9S,12S)-6-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)-9-이소프로필-2,2-디메틸-4,7,10-트리옥소-12-(3-우레이도프로필)-3-옥사-5,8,11-트리아자트리데칸아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (3 mL) 중 실시예 2.112.2 (85 mg), 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (41.3 mg), 및 (S)-5-tert-부틸 1-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)펜탄디오에이트 (54.0 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (118 L)을 적가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 35 내지 100% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 773.4 (M+2H)2+.
2.115.2 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((S)-2-아미노-4-카르복시부탄아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
0℃에서 디클로로메탄 (11 mL) 중 실시예 2.115.1 (100 mg)을 트리플루오로아세트산 (4 mL)으로 처리하였다. 혼합물을 0℃에서 3.5시간 동안 교반하고 농축하였다. 잔사를, 0.1% 트리플루오로아세트산 물 혼합물 중 5 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.115.3 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-알파-글루타밀-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드
0℃에서 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (2.87 mg), 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트 (5.77 mg) 및 실시예 2.115.2 (13 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (13.08 L)을 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.83 (s, 1H), 9.99 (s, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.02 (dd, 1H), 7.97 (d, 1H), 7.80-7.74 (m, 1H), 7.64 (t, 1H), 7.61-7.48 (m, 4H), 7.47-7.38 (m, 2H), 7.38-7.30 (m, 2H), 7.29-7.23 (m, 3H), 6.96 (s, 2H), 6.93 (d, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.06-4.88 (m, 5H), 4.37 (q, 1H), 4.28 (q, 1H), 4.18 (dd, 1H), 3.86 (t, 2H), 3.78 (d, 2H), 3.34 (t, 3H), 3.23 (d, 2H), 2.99 (t, 3H), 2.97-2.85 (m, 1H), 2.62 (dt, 1H), 2.26-2.15 (m, 2H), 2.16-2.00 (m, 5H), 2.01-1.79 (m, 1H), 1.75-1.50 (m, 3H), 1.50-0.87 (m, 17H), 0.81 (dd, 14H). MS (ESI) m/e 1579.6 (M-H)-.
2.116 N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-알파-글루타밀-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 TA)의 합성
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트를 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세테이트로 대체하여, 실시예 2.115.3에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 10.02 (s, 1H), 8.38 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.82 (dd, 2H), 7.60 (t, 3H), 7.55-7.40 (m, 3H), 7.35 (td, 2H), 7.31-7.24 (m, 3H), 7.07 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 4.97 (d, 4H), 4.37 (ddd, 2H), 4.23-4.05 (m, 3H), 3.88 (t, 6H), 3.80 (d, 2H), 3.25 (d, 2H), 3.09-2.88 (m, 4H), 2.64 (s, 2H), 2.22 (dd, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.02-1.49 (m, 5H), 1.47-0.89 (m, 12H), 0.83 (dd, 12H). MS (ESI) m/e 1523.5 (M-H)-.
2.117 1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-D-발릴-N 5 -카르바모일-D-오르니틸}아미노)벤질]옥시}카르보닐)아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨 (신톤 TW)의 합성
실시예 2.1에서 실시예 1.2.9를 실시예 1.77.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.85 (bs, 1H), 9.98 (s, 1H), 8.06 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.78 (t, 2H), 7.60 (m, 3H), 7.52-7.42 (m, 4H), 7.36 (q, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.27 (d, 2H), 6.99 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 5.97 (bs, 1H), 5.00 (m, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.39 (m, 1H), 4.19 (m, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.79 (m, 4H), 3.58 (m, 4H), 3.46-3.33 (m, 10H), 3.26 (m, 4H), 3.01 (m, 2H), 2.94 (m, 1H), 2.14 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.96 (m, 1H), 1.69 (m, 2H), 1.59 (m, 1H), 1.47 (m, 4H), 1.35 (m, 4H), 1.28-1.03 (m, 10H), 0.95 (m, 2H), 0.82 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1493 (M+H)+, 1491 (M-H)-.
2.118 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-옥시도이소퀴놀린-6-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 ST)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.88.4로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.29 (s, 2H), 9.95 (s, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.57-8.36 (m, 1H), 8.29-7.87 (m, 4H), 7.77 (dd, 2H), 7.56 (d, 2H), 7.53-7.41 (m, 2H), 7.24 (d, 2H), 6.95 (s, 2H), 5.95 (s, 1H), 4.94 (s, 2H), 4.35 (q, 1H), 4.15 (dd, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.28 (dt, 4H), 3.06-2.77 (m, 3H), 2.19 (d, 3H), 2.17-1.80 (m, 3H), 1.74-0.88 (m, 22H), 0.79 (dd, 13H). MS (ESI) m/e 1368.4 (M-H)-.
2.119 N-({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 ZL)의 합성
2.119.1 (3R,7aS)-3-페닐테트라히드로피롤로[1,2-c]옥사졸-5(3H)-온
톨루엔 (300 mL) 중 (S)-5-(히드록시메틸)피롤리딘-2-온 (25g), 벤즈알데히드 (25.5g) 및 파라-톨루엔술폰산 일수화물 (0.50 g)의 혼합물을, 16시간 동안 건조 튜브 하에서 딘-스타크(Dean-Stark) 트랩을 사용하여 가열하여 환류시켰다. 반응물을 실온으로 냉각하고, 용매를 불용성 물질로부터 경사분리(decant)하였다. 유기 층을 포화 수성 중탄산나트륨 혼합물 (2x) 및 염수 (1x)로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 35/65 헵탄/에틸 아세테이트로 용출시키는, 실리카겔 상에서의 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 204.0 (M+H)+.
2.119.2 (3R,6R,7aS)-6-브로모-3-페닐테트라히드로피롤로[1,2-c]옥사졸-5(3H)-온
테트라히드로푸란 (670 mL) 중 실시예 2.119.1 (44.6 g)의 차가운 (-77℃) 혼합물에 Trxn< ­73℃을 유지하면서 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (헥산 중 1.0M, 250 mL)를 40분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 ­77℃에서 2시간 동안 교반하고, Trxn< ­64℃를 유지하면서 브로민 (12.5 mL)을 20분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 ­77℃에서 75분 동안 교반하고 150 mL의 차가운 10% 수성 소듐 티오술페이트 혼합물을 ­77℃ 반응물에 첨가하여 켄칭하였다. 반응물을 실온으로 가온하고 반-포화 수성 암모늄 클로라이드 혼합물 및 에틸 아세테이트 사이에서 분배시켰다. 층을 분리하고, 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 80/20, 75/25, 및 70/30 헵탄/에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 299.0 및 301.0 (M+NH3+H)+.
2.119.3 (3R,6S,7aS)-6-브로모-3-페닐테트라히드로피롤로[1,2-c]옥사졸-5(3H)-온
실시예 2.119.2로부터 부산물로서 표제 화합물을 단리하였다. MS (DCI) m/e 299.0 및 301.0 (M+NH3+H)+.
2.119.4 (3R,6S,7aS)-6-아지도-3-페닐테트라히드로피롤로[1,2-c]옥사졸-5(3H)-온
N,N-디메틸포름아미드 (100 mL) 중 실시예 2.119.2 (19.3 g)의 혼합물에 소듐 아지드 (13.5 g)를 첨가하였다. 반응물을 2.5시간 동안 60℃까지 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각하고 물 (500 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)를 첨가하여 켄칭하였다. 층을 분리하고 유기 층을 염수로 세척하였다. 합한 수성 층을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 역추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 78/22 헵탄/에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 262.0 (M+NH3+H)+.
2.119.5 (3R,6S,7aS)-6-아미노-3-페닐테트라히드로피롤로[1,2-c]옥사졸-5(3H)-온
테트라히드로푸란 (500 mL) 및 물 (50 mL) 중 실시예 2.119.4 (13.5 g)의 혼합물의 혼합물에 중합체-지지된 트리페닐포스핀(55 g)을 첨가하였다. 반응물을 하룻밤 실온에서 기계적으로 교반하였다. 에틸 아세테이트 및 톨루엔으로 용출시켜, 반응물을 규조토를 통해 여과하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하고, 디클로로메탄 (100 mL) 중에 용해시키고, 황산나트륨으로 건조시키고, 이어서 여과하고 농축하여 표제 화합물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다. MS (DCI) m/e 219.0 (M+H)+.
2.119.6 (3R,6S,7aS)-6-(디벤질아미노)-3-페닐테트라히드로피롤로[1,2-c]옥사졸-5(3H)-온
N,N-디메틸포름아미드 (100 mL) 중 실시예 2.119.5 (11.3 g)의 혼합물에 탄산칼륨 (7.0 g), 요오드화칼륨 (4.2 g), 및 벤질 브로마이드 (14.5 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하고, 물 및 에틸 아세테이트를 첨가하여 켄칭하였다. 층을 분리하고 유기 층을 염수로 세척하였다. 합한 수성 층을 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 10 내지 15% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 고형물을 얻었고 이를 헵탄과 배산시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 399.1 (M+H)+.
2.119.7 (3S,5S)-3-(디벤질아미노)-5-(히드록시메틸)피롤리딘-2-온
테트라히드로푸란 (130 mL) 중 실시예 2.119.6 (13 g)의 혼합물에 파라-톨루엔 술폰산 일수화물 (12.4 g) 및 물 (50 mL)을 첨가하고, 반응물을 6일 동안 65℃까지 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각하고 중탄산나트륨 포화 수용액 및 에틸 아세테이트를 첨가하여 켄칭하였다. 층을 분리하고 유기 층을 염수로 세척하였다. 합한 수성 층을 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 왁스질 고형물을 헵탄 (150 mL)과 배산시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 311.1 (M+H)+.
2.119.8 (3S,5S)-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-(디벤질아미노)피롤리딘-2-온
N,N-디메틸포름아미드 중 실시예 2.119.7 (9.3 g) 및 1H-이미다졸 (2.2 g)의 혼합물에 tert-부틸클로로디메틸실란 (11.2 mL, 톨루엔 중 50 중량%)을 첨가하고, 반응 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 물 및 에틸 에테르의 첨가에 의해 반응 혼합물을 켄칭하였다. 층을 분리하고 유기 층을 염수로 세척하였다. 합한 수성 층을 디에틸 에테르로 역추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 35% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 425.1 (M+H)+.
2.119.9 tert-부틸 2-((3S,5S)-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-(디벤질아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
테트라히드로푸란 (45 mL) 중 실시예 2.119.8 (4.5 g)의 차가운 (0℃) 혼합물에 95% 수소화나트륨 (320 mg)을 두 부분으로 나누어 첨가하였다. 차가운 혼합물을 40분 동안 교반하고, tert-부틸 2-브로모아세테이트 (3.2 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온까지 가온하고 하룻밤 교반하였다. 물 및 에틸 아세테이트를 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 층을 분리하고 유기 층을 염수로 세척하였다. 합한 수성 층을 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 5 내지 12% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 539.2 (M+H)+.
2.119.10 tert-부틸 2-((3S,5S)-3-(디벤질아미노)-5-(히드록시메틸)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
테트라히드로푸란 (25 mL) 중 실시예 2.119.9 (5.3 g)의 혼합물에 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (11 mL, 95/5 테트라히드로푸란/물 중 1.0M)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 포화 수성 암모늄 클로라이드 혼합물, 물 및 에틸 아세테이트를 첨가하여 켄칭하였다. 층을 분리하고 유기 층을 염수로 세척하였다. 합한 수성 층을 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 35% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 425.1 (M+H)+.
2.119.11 tert-부틸 2-((3S,5S)-5-((2-((4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에톡시)메틸)-3-(디벤질아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
디메틸 술폭시드 (14 mL) 중 실시예 2.119.10 (4.7 g)의 혼합물에 디메틸 술폭시드 (14 mL) 중 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (14.5 g)의 혼합물을 첨가하였다. 탄산칼륨 (2.6 g) 및 물 (28 L)을 첨가하고, 반응물을 질소 하에 1일 동안 60℃에서 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각하고, 이어서 염수 혼합물, 물 및 디에틸 에테르를 첨가하여 켄칭하였다. 층을 분리하고 유기 층을 염수로 세척하였다. 합한 수성 층을 디에틸 에테르로 역추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 15 내지 25% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI+) m/e 871.2 (M+H)+.
2.119.12 tert-부틸 2-((3S,5S)-3-아미노-5-((2-((4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에톡시)메틸)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
실시예 2.119.11 (873 mg)을 에틸 아세테이트 (5 mL) 및 메탄올 (15 mL) 중에 용해시키고, 탄소 상 수산화팔라듐, 20 중량% (180 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기 (30 psi) 하에 실온에서 30시간 동안 교반하고, 이어서 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온까지 냉각하고, 여과하고, 농추갛여 원하는 생성물을 제공하였다. MS (ESI+) m/e 691.0 (M+H)+.
2.119.13 4-(((3S,5S)-1-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-5-((2-((4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에톡시)메틸)-2-옥소피롤리딘-3-일)아미노)-4-옥소부트-2-엔산
말레산 무수물 (100 mg)을 디클로로메탄 (0.90 mL) 중에 용해시키고, 디클로로메탄 (0.90 mL) 중 실시예 2.119.12 (650 mg)의 혼합물을 적가하고, 이어서 40℃에서 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을, 0.2% 아세트산을 함유하는 디클로로메탄 중 1.0 내지 2.5% 메탄올의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 직접 정제하였다. 생성물-함유 분획을 농축한 후에, 톨루엔 (10 mL)을 첨가하고, 혼합물을 다시 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI-) m/e 787.3 (M-H)-.
2.119.14 tert-부틸 2-((3S,5S)-5-((2-((4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에톡시)메틸)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
실시예 2.119.13 (560 mg)를 톨루엔 (7 mL) 중에서 슬러리화하고, 트리에틸아민 (220 L) 및 황산나트륨 (525 mg)을 첨가하였다. 반응물을 6시간 동안 질소 분위기 하에 환류에서 가열하고, 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응물을 여과하고, 고형물을 에틸 아세테이트로 헹구었다. 용출액을 감압 하에 농축하고, 잔사를, 45/55 헵탄/에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.119.15 2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-((2-술포에톡시)메틸)피롤리딘-1-일)아세트산
실시예 2.119.14 (1.2 g)를 트리플루오로아세트산 (15 mL) 중에 용해시키고 질소 하에 하룻밤 65 내지 70℃까지 가열하였다. 트리플루오로아세트산을 감압 하에 제거하였다. 잔사를 아세토니트릴 (2.5 mL) 중에 용해시키고, 30분에 걸쳐 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 5 내지 75% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 Luna C18(2) AXIA 컬럼 (250 x 50 mm, 10 μm 입자 크기) 상에서 분취형 역상 액체 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI-) m/e 375.2 (M-H)-.
2.119.16 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)피콜린산
실시예 2.49.1에서 실시예 1.2.9를 실시예 1.43.7로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI-) m/e 1252.4 (M-H)-.
2.119.17 N-({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드
실시예 2.119.15 (7 mg)을 N,N-디메틸포름아미드 (0.15 mL) 중에 용해시키고,O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (9 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (7 μL)을 첨가하였다. 혼합물을 3분 동안 실온에서 교반하고, N,N-디메틸포름아미드 (0.15 mL) 중 실시예 2.119.16 (28 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (15 μL)의 혼합물에 첨가하였다. 1시간 후에, 반응물을 N,N-디메틸포름아미드/물 1/1 (1.0 mL)로 희석하고, 0.1% TFA 물 중 5 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 크로마토그래피 (C18 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 9.95 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.37 (d, 1H), 8.22 (m, 2H), 8.18 (m, 2H), 8.08 (m, 2H), 8.03 (m, 1H), 7.96 (br d, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.70 (t, 1H), 7.61 (br m, 3H), 7.48 (m, 2H), 7.37 (t, 1H), 7.27 (br m, 2H), 7.08 (s, 2H), 4.99 (br d, 3H), 4.68 (t, 1H), 4.39 (m, 1H), 4.20 (m, 2H), 4.04 (m, 1H), 3.87 (br d, 2H), 3.74 (br m, 1H) 3.65 (br t, 2H), 3.48 (br m, 4H), 3.43 (br m, 2H), 3.26 (br m, 2H), 3.00 (br m, 2H), 2.80 (m, 1H), 2.76 (m, 1H), 2.66 (br m, 2H), 2.36 (br m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.00 (m, 1H), 1.87 (m, 1H), 1.69 (br m, 1H), 1.62 (br m, 1H), 1.40 (br m, 4H), 1.31-1.02 (m, 10 H), 0.96 (m, 2H), 0.85 (m, 12H). MS (ESI-) m/e 1610.3 (M-H)-.
2.120 N-{(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]프로파노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 SX)의 합성
2.120.1 (S)-메틸 3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노에이트
아세토니트릴 (1.5 L) 중 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일 4-메틸벤젠술포네이트 (82.48 g) 및 탄산칼륨 (84.97 g)의 혼합물에 (S)-메틸 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(4-히드록시페닐)프로파노에이트 (72.63 g)를 첨가하고, 반응 혼합물을 30℃에서 12시간 동안 교반하였다. LC/MS에 의해, 시재료가 소모되었고 주 생성물이 원하는 생성물인 것으로 나타난 후에, 반응물을 여과하고, 여과액을 농축하여 조질 생성물을 얻었고, 이를 prep-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI): m/e 811 (M+H2O)+.
2.120.2 3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판산
테트라히드로푸란 (1.5 L) 및 물 (500 mL) 중 실시예 2.120.1 (90.00 g)의 혼합물에 수산화리튬 일수화물 (14.27 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 12시간 동안 교반하였고, LC/MS에 의해, 시재료가 소모되었고 주 생성물이 원하는 생성물인 것으로 나타났다. HCl 수용액을 사용하여 반응 혼합물을 pH=6까지 조정하고, 혼합물을 농축하여 조질의 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI): m/e 778.3 (M-H)-.
2.120.3 3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐)-2-아미노프로판산
디클로로메탄 (1.5 L) 중 실시예 2.120.2 (88.41 g)의 혼합물에 N2 하에 25℃에서 트리플루오로아세트산 (100 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 12시간 동안 교반하였다. LC/MS에 의해, 시재료가 소모되었고 주 생성물이 원하는 생성물인 것으로 나타났다. 혼합물을 농축하여 조질 생성물을 얻었고, 이를 prep-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.20 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.93 (d, J=8.2 Hz, 2H), 4.22 (dd, J=5.5, 7.4 Hz, 1H), 4.14-4.06 (m, 2H), 3.84 - 3.79 (m, 2H), 3.68-3.50 (m, 40H), 3.33 (s,3H), 3.21 (d, J=5.5 Hz, 1H), 3.12-3.05 (m,1H). MS (ESI) m/e 680.1 (M+H)+.
2.120.4 4-((2-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐)-1-카르복시에틸)아미노)-4-옥소부트-2-엔산
디옥산 (1 L) 중 실시예 2.120.3 (80.00 g)의 혼합물에 푸란-2, 5-디온 (35 g)을 첨가하고, 반응 혼합물을 120℃에서 4시간 동안 교반하였다. LC/MS에 의해, 시재료가 소모되었고 주 생성물이 원하는 생성물인 것으로 나타났다. 혼합물을 농축하여 조질의 표제 화합물을 얻얻고, 이를 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS (ESI) m/e 795.4 (M+H)+.
2.120.5 (S)-3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로판산
톨루엔 (1.5 L) 중 실시예 2.120.4 (96 g, 조질)의 혼합물에 트리에틸아민 (35.13 g)을 첨가하고, 반응 혼합물을 120℃에서 4시간 동안 교반하였다. LC/MS에 의해, 시재료가 소모되었고 주 생성물이 원하는 생성물인 것으로 나타났다. 반응물을 여과하여 유기상을 단리하고, 유기물을 농축하여 조질 생성물을 얻었고, 이를 prep-HPLC (기기: Shimadzu LC-20AP 분취형 HPLC, 컬럼: Phenomenex Luna (2) C18 250*50mm i.d. 10u, 이동상: H2O (0.09% 트리플루오로아세트산)에 대한 A 및 CH3CN에 대한 B, 구배: 20분에 15%로부터 43%까지의 B, 유량: 80 ml/minute, 파장: 220 & 254 nm, 주입량: 주입당 1 그램)에 의해 정제한 후에, SFC-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 6.98 (d, 2H), 6.74 (d, 2H), 6.56 (s, 2H), 4.85 (dd, 1H), 4.03 (t, 2H), 3.84 - 3.76 (m, 2H), 3.71 - 3.66 (m, 2H), 3.65 - 3.58 (m, 39H), 3.55 - 3.50 (m, 2H), 3.41 - 3.30 (m, 4H). MS (ESI) m/e 760.3 (M+H)+.
2.120.6 N-{(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]프로파노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드
실시예 2.119.17에서 실시예 2.119.15를 실시예 2.120.5로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 10.03 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.37 (d, 1H), 8.22 (m, 3H), 8.16 (d, 1H), 8.12 (br m, 1H), 8.07 (d, 1H), 8.01 (d, 1H), 7.96 (br d, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.70 (t, 1H), 7.59 (br m, 2H), 7.48 (m, 2H), 7.37 (t, 1H), 7.28 (d, 2H), 7.02 (d, 2H), 6.89 (s, 2H), 6.77 (d, 2H), 4.98 (br d, 2H), 4.79 (dd, 1H), 4.39 (br m, 1H), 4.23 (br m, 2H), 3.99 (br m, 2H), 3.88 (br m, 2H), 3.69 (br m, 4H), 3.55 (m, 4H), 3.50 (s, 32H), 3.42 (m, 4H), 3.27 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 3.20 (m, 1H), 3.03 (br m, 1H), 2.98 (m, 1H), 2.65 (br t, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.97 (br m, 1H), 1.69 (br m, 1H), 1.61 (br m, 1H), 1.39 (m, 4H), 1.31-0.91 (m, 12H), 0.85 (m, 9H), 0.77 (d, 3H). MS (ESI) m/e 1993.7 (M-H)-.
2.121 N-({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 SW)의 합성
실시예 2.119.17에서 실시예 2.119.16을 실시예 2.49.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 9.96 (s, 1H), 8.17 (br d, 1H), 8.03 (d, 2H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (m, 3H), 7.55 (d, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.37 (m, 3H), 7.27 (d, 2H), 7.08 (s, 2H), 6.98 (d, 1H), 4.97 (m, 4H), 4.68 (t, 1H), 4.37 (br m, 1H), 4.22 (br s, 1H), 4.17 (d, 1H), 4.03 (d, 1H), 3.89 (br t, 2H), 3.83 (br d, 2H), 3.74 (br m, 1H), 3.65 (t, 2H), 3.49 (m, 3H), 3.40 (br m, 4H), 3.25 (br m, 2H), 3.02 (br m, 4H), 2.80 (m, 2H), 2.67 (br m, 2H), 2.37 (br m, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.99 (m, 1H), 1.86 (m, 1H), 1.69 (br m, 1H), 1.61 (br m, 1H), 1.52-0.91 (m, 16H), 0.85 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1615.4 (M-H)-.
2.122 N-{(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]프로파노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 TV)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.8 mL) 중 실시예 2.120.5 (19.61 mg), 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (9.81 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (27.7 L)을 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반하고, 0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 2.112.2의 차가운 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 40분 동안 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.99 (s, 1H), 8.19 (d, 1H), 8.14-8.04 (m, 1H), 8.00 (dd, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.62-7.52 (m, 3H), 7.49 (d, 1H), 7.46-7.37 (m, 2H), 7.36-7.29 (m, 2H), 7.28-7.21 (m, 3H), 6.99 (d, 2H), 6.92 (d, 1H), 6.85 (s, 2H), 6.79-6.71 (m, 2H), 4.94 (d, 3H), 4.76 (dd, 1H), 4.35 (d, 1H), 4.20 (t, 1H), 3.96 (dd, 2H), 3.85 (t, 2H), 3.77 (d, 2H), 3.66 (dd, 2H), 3.52 (dd, 2H), 3.50-3.47 (m, 2H), 3.39 (dd, 2H), 3.20 (s, 4H), 2.97 (t, 3H), 2.60 (t, 2H), 2.13-2.01 (m, 3H), 1.93 (s, 1H), 1.61 (d, 2H), 1.49-0.88 (m, 10H), 0.87-0.59 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1998.7 (M-H)-.
2.123 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 SZ)의 합성
2.123.1 (3R,4S,5R,6R)-3,4,5-트리스(벤질옥시)-6-(벤질옥시메틸)-테트라히드로피란-2-온
0℃에서 디메틸 술폭시드 (400 mL) 중 (3R,4S,5R,6R)-3,4,5-트리스(벤질옥시)-6-((벤질옥시)메틸)테트라히드로-2H-피란-2-올 (75 g)의 혼합물에 아세트산 무수물 (225 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃까지 냉각되기 전에 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 다량의 물을 첨가하고, 교반을 중지하여, 반응 혼합물을 3시간 동안 가라앉게 두었다 (조질 락톤이 플라스크의 바닥으로 이동하였다). 상청액을 제거하고, 조질 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물로 3회 세척하고, NaHCO3의 포화 수성 혼합물로 중화시키고, 물로 다시 2회 세척하였다. 이어서 유기 층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 561 (M+Na)+.
2.123.2 (3R,4S,5R,6R)-3,4,5-트리스(벤질옥시)-6-(벤질옥시메틸)-2-에티닐-테트라히드로-2H-피란-2-올
질소 하에서 그리고 드라이아이스/아세톤 조 (내부 온도 -65℃)에서 냉각된, 테트라히드로푸란 (400 mL) 중 에티닐트리메틸실란 (18.23 g)의 혼합물에, 온도를 -60℃ 미만으로 유지하면서, 헥산 (55.7 mL) 중 2.5M BuLi를 적가하였다. 혼합물을 냉각조에서 40분 동안 교반한 후에, 얼음-수조 (내부 온도가 0.4℃까지 상승하였음)에서 40분 동안 교반하고, 마지막으로 다시 -75℃까지 냉각하였다. 내부 온도를 -70℃ 미만으로 유지하면서 테트라히드로푸란 (50 mL) 중 실시예 2.123.1 (50 g)의 혼합물을 적가하였다. 혼합물을 드라이아이스/아세톤 조에서 추가 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 NaHCO3 혼합물 (250 mL)로 켄칭하였다. 혼합물을 실온까지 가온되게 하고, 에틸 아세테이트 (3x 300 mL)로 추출하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축하여, 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 659 (M+Na)+.
2.123.3 트리메틸(((3S,4R,5R,6R)-3,4,5-트리스(벤질옥시)-6-(벤질옥시메틸)-테트라히드로-2H-피란-2-일)에티닐)실란
얼음-소금 조에서 -15℃에서 아세토니트릴 (450 mL) 및 디클로로메탄(150 mL) 중 실시예 2.123.2 (60 g)의 혼합된 혼합물에 트리에틸실란 (81 mL)을 적가한 후에, 내부 온도가 -10℃를 초과하지 않도록 하는 속도로 삼불화붕소 디에틸 에테르 복합체 (40.6 mL)를 첨가하였다. 이어서 혼합물을 -15℃에서 -10℃까지 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 NaHCO3 혼합물 (275 mL)로 켄칭하고 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 이어서 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 550 mL)로 추출하였다. 추출물을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 0% 내지 7% 에틸 아세테이트/석유 에테르의 구배로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 643 (M+Na)+.
2.123.4 (2R,3R,4R,5S)-3,4,5-트리스(벤질옥시)-2-(벤질옥시메틸)-6-에티닐-테트라히드로-2H-피란
디클로로메탄(200 mL) 및 메탄올 (1000 mL) 중 실시예 2.123.3 (80 g)의 혼합된 혼합물에 1N 수성 NaOH 혼합물 (258 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하였다. 이어서 잔사를 물과 디클로로메탄 사이에서 분배시켰다. 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 571 (M+Na)+.
2.123.5 (2R,3R,4R,5S)-2-(아세톡시메틸)-6-에티닐-테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
얼음/수조에 의해 냉각된 아세트산 무수물 (500 mL) 중 실시예 2.123.4 (66 g)의 혼합물에 삼불화붕소 디에틸 에테르 복합체 (152 mL)를 적가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 얼음/수조로 냉각하고, 포화 수성 NaHCO3 혼합물로 중화시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3x500 mL)로 추출하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축하였다. 잔사를, 0% 내지 30% 에틸 아세테이트/석유 에테르의 구배로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 357 (M+H)+.
2.123.6 (3R,4R,5S,6R)-2-에티닐-6-(히드록시메틸)-테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리올
메탄올 (440 mL) 중 실시예 2.123.5 (25 g)의 혼합물에 소듐 메탄올레이트 (2.1 g)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 디옥산 중 4M HCl로 중화시켰다. 용매를 제거하고, 잔사를 실리카겔 상에 흡착시키고 실리카겔 컬럼 상에 로딩하였다. 컬럼을 0 내지 100% 에틸 아세테이트/석유 에테르 후에 0% 내지 12% 메탄올/에틸 아세테이트의 구배로 용출시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 211 (M+Na)+.
2.123.7 (2S,3S,4R,5R)-6-에티닐-3,4,5-트리히드록시-테트라히드로-2H-피란-2-카르복실산
3구 둥근 바닥 플라스크를 실시예 2.123.6 (6.00 g), KBr (0.30 g), 테트라부틸암모늄 브로마이드 (0.41 g) 및 60 mL의 포화 수성 NaHCO3 혼합물로 충전하였다. 60 mL 디클로로메탄 중 TEMPO ((2,2,6,6-테트라메틸피페리딘-1-일)옥실, 0.15 g)를 첨가하였다. 혼합물을 격렬하게 교반하고, 얼음-소금 조에서 -2℃ 내부 온도까지 냉각하였다. 내부 온도가 2℃ 미만으로 유지되도록, 염수 (12 mL), 수성 NaHCO3 혼합물 (24 mL) 및 NaOCl (154 mL)의 혼합물을 적가하였다. 고체 Na2CO3을 첨가하여 반응 혼합물의 pH를 8.2 내지 8.4 범위에서 유지하였다. 총 6시간 후에, 반응 혼합물을 3℃ 내부 온도까지 냉각하고 에탄올 (약 20 mL)을 적가하였다. 혼합물을 약 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 분별 깔때기로 옮기고, 디클로로메탄 층을 폐기하였다. 1 M HCl 수용액을 사용하여 수성 층의 pH를 2 내지 3으로 조정하였다. 이어서 수성 층을 건조 상태까지 농축하여 고형물을 얻었다. 메탄올 (100 mL)을 건조 고형물에 첨가하고, 슬러리를 약 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 규조토의 패드로 여과하고, 깔때기 내의 잔사를 약 100 mL의 메탄올로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 얻었다.
2.123.8 (2S,3S,4R,5R)-메틸 6-에티닐-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-카르복실레이트
500 mL 3구 둥근 바닥 플라스크를 메탄올 (96 mL) 중 실시예 2.123.7 (6.45 g)의 현탁액으로 충전하고 -1℃의 내부 온도를 갖는 얼음-소금 조에서 냉각하였다. 니트(neat) 티오닐 클로라이드 (2.79 mL)를 주의 깊게 첨가하였다. 첨가 내내 내부 온도가 계속 상승하였지만 10℃를 넘지 않았다. 반응물을 2.5시간에 걸쳐 15 내지 20℃까지 천천히 가온되게 두었다. 2.5시간 후에, 반응물을 농축하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.123.9 (3S,4R,5S,6S)-2-에티닐-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
N,N-디메틸포름아미드 (75 mL) 중의 혼합물로서의 실시예 2.123.8 (6.9 g)에 4-(디메틸아미노)피리딘 (0.17 g) 및 아세트산 무수물 (36.1 mL)을 첨가하였다. 현탁액을 빙조에서 냉각하고 주사기를 통해 15분에 걸쳐 피리딘 (18.04 mL)을 첨가하였다. 반응물을 하룻밤 실온까지 가온되게 두었다. 추가 아세트산 무수물 (12 mL) 및 피리딘 (6 mL)을 첨가하고 추가 6시간 동안 교반을 계속하였다. 반응물을 빙조에서 냉각하고 250 mL의 포화 수성 NaHCO3 혼합물을 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 물 (100 mL)을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 포화 CuSO4 혼합물로 2회 세척하고, 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 50% 에틸 아세테이트/석유 에테르로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 메탄올-d 4 ) δ ppm 5.29 (t, 1H), 5.08 (td, 2H), 4.48 (dd, 1H), 4.23 (d, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.04 (d, 1H), 2.03 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.98 (s, 4H).
2.123.10 2-요오도-4-니트로벤조산
질소 분위기 하에 자석 교반기, 온도 탐침 및 첨가 깔때기가 구비된 3L 전체 재킷형(fully jacketed) 플라스크를 2-아미노-4-니트로벤조산 (69.1 g, Combi-Blocks) 및 황산, 1.5 M 수용액 (696 mL)으로 충전하였다. 생성된 현탁액을 0℃ 내부 온도로 냉각하고, 물 (250 mL) 중 아질산나트륨 (28.8 g)의 혼합물을 1℃ 미만으로 유지된 온도로 43분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 약 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 물 (250 mL) 중 요오드화칼륨 (107 g)의 혼합물을 1℃ 미만으로 유지된 내부 온도로 44분에 걸쳐 적가하였다 (초기 첨가는 발열성이었고 가스 발생이 있었다). 반응물을 0℃에서 1시간 교반하였다. 온도를 20℃까지 상승시키고 이어서 주위 온도에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물이 현탁액으로 되었다. 반응 혼합물을 여과하고, 수집된 고형물을 물로 세척하였다. 습윤 고형물 (약 108 g)을 10% 아황산나트륨 (350 ml, 약 200 mL의 물이 고형물 세척에 사용됨) 중에서 30분 동안 교반하였다. 현탁액을 진한 염산 (35 mL)으로 산성화시키고, 여과에 의해 고형물을 수집하고 물로 세척하였다. 고형물을 물 (1L) 중에 슬러리화하고 재여과하고, 고형물을 깔때기 내에서 하룻밤 건조 상태까지 두었다. 이어서 고형물을 진공 오븐에서 2시간 동안 60℃에서 건조시켰다. 생성된 고형물을 디클로로메탄 (500 mL)과 배산시키고, 현탁액을 여과하고 추가 디클로로메탄으로 세척하였다. 고형물을 공기 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다.
2.123.11 (2-요오도-4-니트로페닐)메탄올
화염-건조된 3 L 3구 플라스크를 실시예 2.123.10 (51.9 g) 및 테트라히드로푸란 (700 mL)으로 충전하였다. 혼합물을 빙조에서 0.5℃까지 냉각하고, 보란-테트라히드로푸란 복합체 (443 mL, THF 중 1 M)를 50분에 걸쳐 적가하여 (가스 발생), 1.3℃의 최종 내부 온도에 도달하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반하고, 빙조를 제거하였다. 반응물을 30분에 걸쳐 주위 온도로 되게 두었다. 가열 맨틀을 설치하고, 반응물을 3시간 동안 65.5℃의 내부 온도까지 가열하고, 이어서 하룻밤 교반하면서 실온으로 냉각되게 두었다. 반응 혼합물을 빙조에서 0℃까지 냉각하고 메탄올 (400 mL)을 적가하여 켄칭하였다. 짧은 인큐베이션 기간 후에, 가스 발생과 함께 온도가 2.5℃까지 빠르게 상승하였다. 처음 100 mL를 약 30분에 걸쳐 첨가한 후, 천가는 더 이상 발열성이 아니었고, 가스 발생이 멈추었다. 빙조를 제거하고, 혼합물을 하룻밤 질소 하에 주위 온도에서 교반하였다. 혼합물을 고형물까지 농축하고, 디클로로메탄/메탄올 중에 용해시키고, 실리카겔 (약 150 g) 상에 흡착시켰다. 잔사를 실리카겔 (3000 mL)의 플러그 상에 로딩하고, 디클로로메탄으로 용출시켜 표제 화합물을 제공하였다.
2.123.12 (4-아미노-2-요오도페닐)메탄올
기계적 교반기, JKEM 온도 탐침에 의해 제어되는 가열 맨틀 및 응축기가 구비된 5 L 플라스크를 실시예 2.123.11 (98.83 g) 및 에탄올 (2 L)로 충전하였다. 반응물을 빠르게 교반하고, 철 (99 g)을 첨가한 후에, 물 (500 mL) 중 암모늄 클로라이드 (20.84 g)의 혼합물을 첨가하였다. 반응물을 20분에 걸쳐 80.3℃의 내부 온도까지 가열하였고, 이때 격렬하게 환류하기 시작하였다. 환류가 진정될 때까지 맨틀을 강하시켰다. 그 후에, 혼합물을 1.5시간 동안 80℃까지 가열하였다. 반응물을 막 필터를 통해 뜨거운 채로 여과하고, 철 잔사를 뜨거운 50% 에틸 아세테이트/메탄올 (800 mL)로 세척하였다. 용출액을 규조토 패드에 통과시키고, 여과액을 농축하였다. 잔사를 50% 염수 (1500 mL)와 에틸 아세테이트 (1500 mL) 사이에서 분배시켰다. 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (400 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 표제 화합물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
2.123.13 4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-요오도아닐린
기계적 교반기가 구비된 5 L 플라스크를 실시예 2.123.12 (88 g) 및 디클로로메탄 (2 L)으로 충전하였다. 현탁액을 빙조에서 2.5℃의 내부 온도까지 냉각하고, tert-부틸클로로디메틸실란 (53.3 g)을 8분에 걸쳐 나누어 첨가하였다. 10분 후에, 1H-이미다졸 (33.7 g)을 차가운 반응물에 나누어 첨가하였다. 내부 온도가 15℃까지 상승하면서 반응물을 90분간 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (3 L) 및 디클로로메탄 (1 L)로 희석하였다. 층을 분리하고, 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 오일로 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 0 내지 25% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는, 실리카겔 크로마토그래피 (1600 g 실리카겔)에 의해 정제하여 표제 화합물을 오일로서 제공하였다.
2.123.14 (S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판산
디메톡시에탄 (40 mL) 중 (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄산 (6.5 g)의 혼합물에 물 (40 mL) 중 (S)-2-아미노프로판산 (1.393 g) 및 중탄산나트륨 (1.314 g)를 첨가하였다. 테트라히드로푸란 (20 mL)을 첨가하여 용해도에 도움을 주었다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 시트르산 수용액 (15%, 75 mL)을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 중 10% 2-프로판올 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 층에서 침전물이 형성되었다. 합한 유기 층을 물 (2 x 150 mL)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에 농축하고 이어서 디에틸 에테르 (80 mL)와 배산시켰다. 짧은 초음파 처리 후에, 표제 화합물을 여과에 의해 수집하였다. MS (ESI) m/e 411 (M+H)+.
2.123.15 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-요오도페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
디클로로메탄 (70 mL) 및 메탄올 (35.0 mL)의 혼합물 중 실시예 2.123.13 (5.44 g) 및 실시예 2.123.14 (6.15 g)의 혼합물에 에틸 2-에톡시퀴놀린-1(2H)-카르복실레이트 (4.08 g)를 첨가하고, 반응물을 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고 실리카겔 상에 로딩하여, 에틸 아세테이트 중 10% 내지 95% 헵탄 후에 디클로로메탄 중 5% 메탄올의 구배로 용출시켰다. 생성물 함유 분획들을 농축하고, 디클로로메탄 중 0.2% 메탄올 (50 mL) 중에 용해시키고, 실리카겔 상에 로딩하고, 디클로로메탄 중 0.2% 내지 2% 메탄올의 구배로 용출시켰다. 생성물 함유 분획들을 수집하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 756.0 (M+H)+.
2.123.16 (2S,3S,4R,5S,6S)-2-((5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)페닐)에티닐)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
바이알에서 실시예 2.123.9 (4.500 g), 실시예 2.123.15 (6.62 g), 구리(I) 요오다이드 (0.083 g) 및 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (0.308 g)의 혼합물을 합하고 탈기시켰다. N,N-디메틸포름아미드 (45 mL) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (4.55 mL)을 첨가하고, 반응 용기를 질소로 플러싱하고 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응물을 물 (100 mL)과 에틸 아세테이트 (250 mL) 사이에서 분배시켰다. 층을 분리하고, 유기 층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 5% 내지 95% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는, 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획들을 수집하고, 농축하고, 디클로로메탄 중 0.25 내지 2.5% 메탄올의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 970.4 (M+H)+.
2.123.17 (2S,3S,4R,5S,6S)-2-(5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)페네틸)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
50 mL 압력병에서 실시예 2.123.16 (4.7 g) 및 테트라히드로푸란 (95 mL)을 5% Pt/C (2.42 g, 습윤)에 첨가하고 50 psi의 수소 하에 실온에서 90분 동안 진탕하였다. 반응물을 여과하고 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 974.6 (M+H)+.
2.123.18 (2S,3S,4R,5S,6S)-2-(5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(히드록시메틸)페네틸)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
테트라히드로푸란 (7 mL), 물 (7 mL) 및 빙초산 (21 mL) 중 실시예 2.123.17 (5.4 g)의 혼합물을 하룻밤 실온에서 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고 물 (100 mL), 포화 수성 NaHCO3 혼합물 (100 mL), 염수 (100 mL)로 세척하고, 황산마그네슘로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 디클로로메탄 중 0.5% 내지 5% 메탄올의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 860.4 (M+H)+.
2.123.19 (2S,3S,4R,5S,6S)-2-(5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페네틸)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
아세토니트릴 (80 mL) 중 실시예 2.123.18 (4.00 g) 및 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (2.83 g)의 혼합물에 실온에서 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (1.22 mL)을 첨가하였다. 하룻밤 교반한 후에, 반응물을 농축하고, 디클로로메탄 (250 mL) 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3 혼합물 (4 x 150 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 생성된 폼(foam)을, 헥산 중 5% 내지 75% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1025.5 (M+H)+.
2.123.20 3-(1-((3-(2-((((4-((R)-2-((R)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)에틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 실시예 2.123.19 (70 mg) 및 실시예 1.2.9 (58.1 mg)의 차가운 (0℃) 혼합물에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.026 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온까지 천천히 가온하고 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물에 물 (1 mL) 및 LiOH H2O (20 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 트리플루오로아세트산으로 산성화시키고, 여과하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1564.4 (M-H)-.
2.123.21 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산
실시예 2.49.1을 실시예 2.123.20으로 대체하여 실시예 2.54에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.86 (s, 1H), 9.92 (d, 1H), 8.35-8.19 (m, 2H), 8.04 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.57-7.32 (m, 8H), 7.28 (s, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.08 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.12-4.91 (m, 5H), 4.39 (t, 1H), 4.32-4.19 (m, 1H), 4.12 (s, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.80 (d, 2H), 3.14 (t, 1H), 3.06-2.87 (m, 4H), 2.69-2.58 (m, 4H), 2.37 (p, 1H), 2.09 (d, 4H), 2.04-1.91 (m, 4H), 1.54 (d, 1H), 1.40-0.99 (m, 20H), 0.99-0.74 (m, 16H). MS (ESI) m/e 1513.5 (M-H)-.
2.124 3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-(4-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}부틸)-2-(베타-D-글루코피라누로노실옥시)벤질]옥시}카르보닐)아미노}프로필 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 ZM)의 합성
2.124.1A (9H-플루오렌-9-일)메틸 부트-3-인-1-일카르바메이트
디클로로메탄(70 mL) 중에서 부트-3-인-1-아민 히드로클로라이드 (9 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (44.7 mL)의 혼합물을 교반하고 0℃까지 냉각하였다. 디클로로메탄 (35 mL) 중 (9H-플루오렌-9-일)메틸 카르보노클로리데이트 (22.06 g)의 혼합물을 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축하고, 잔사를, 에틸 아세테이트 중 석유 에테르(10% 내지 25%)로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 314 (M+Na)+.
2.124.1B (3R,4S,5S,6S)-2-(2-포르밀-5-요오도페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
아세토니트릴 (10 ml) 중 2-히드록시-4-요오도벤즈알데히드 (0.95 g)의 교반된 용액에 (3R,4S,5S,6S)-2-브로모-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트 (2.5 g) 및 산화은 (2 g)을 첨가하였다. 혼합물을 알루미늄 포일로 덮고 실온에서 하룻밤 교반하였다. 규조토를 통해 여과 후에, 여과액을 에틸 아세테이트로 세척하고, 용액을 농축하였다. 반응 혼합물을, 15 내지 30% 에틸 아세테이트/헵탄 (유량: 60ml/min)로 용출시키는, ISCO CombiFlash 시스템, SF40-80g 컬럼을 사용하는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 586.9 (M+Na)+.
2.124.2 (2S,3S,4S,5R,6S)-메틸 6-(5-(4-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐아미노)부트-1-이닐)-2-포르밀페녹시)-3,4,5-트리아세톡시-테트라히드로-2H-피란-2-카르복실레이트
실시예 2.124.1B (2.7 g), 실시예 2.124.1A (2.091 g), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드 (0.336 g) 및 구리(I) 요오다이드 (0.091 g)를 바이알에 칭량해 넣고 질소의 스트림으로 플러싱하였다. 트리에틸아민 (2.001 mL) 및 테트라히드로푸란 (45 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 교반하였다. 16시간 동안 교반한 후에, 반응물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고 물 (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척하였다. 유기 층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 에틸 아세테이트 중 석유 에테르 (10% 내지 50%)로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 750 (M+Na)+.
2.124.3 (2S,3S,4S,5R,6S)-메틸 6-(5-(4-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐아미노)부틸)-2-포르밀페녹시)-3,4,5-트리아세톡시-테트라히드로-2H-피란-2-카르복실레이트
100 mL 압력병에서 실시예 2.124.2 (1.5 g) 및 테트라히드로푸란 (45 mL)를 10% Pd-C (0.483 g)에 첨가하고 1 atm 하에 H2 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 여과하고 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 754 (M+Na)+.
2.124.4 (2S,3S,4S,5R,6S)-메틸 6-(5-(4-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐아미노)부틸)-2-(히드록시메틸)페녹시)-3,4,5-트리아세톡시-테트라히드로-2H-피란-2-카르복실레이트
테트라히드로푸란 (7.00 mL) 및 메탄올 (7 mL) 중 실시예 2.124.3 (2.0 g)의 혼합물을 0℃까지 냉각하고 NaBH4 (0.052 g)를 한꺼번에 첨가하였다. 30분 후에, 반응물을 에틸 아세테이트 (150 mL) 및 물 (100 mL)로 희석하였다. 유기 층을 분리하고, 염수 (100 mL)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 에틸 아세테이트 중 석유 에테르 (10% 내지 40%)로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 756 (M+Na)+.
2.124.5 (2S,3S,4S,5R,6S)-메틸 6-(5-(4-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐아미노)부틸)-2-(((4-니트로페녹시)카르보닐옥시)메틸)페녹시)-3,4,5-트리아세톡시-테트라히드로-2H-피란-2-카르복실레이트
0℃에서 건조 아세토니트릴 (70 mL) 중 실시예 2.124.4 (3.0 g) 및 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (2.488 g)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (1.07 mL)을 첨가하였다. 실온에서 16시간 동안 교반한 후에, 반응물을 농축하여 잔사를 얻었고, 이를 에틸 아세테이트 중 석유 에테르(10% 내지 50%)로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 921 (M+Na)+.
2.124.6 3-(1-((3-(2-((((4-(4-아미노부틸)-2-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(3-(((2S,3S,4R,5R,6R)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 실시예 2.124.5 (44 mg) 및 실시예 1.87.3 (47.4 mg)의 차가운 (0℃) 혼합물에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.026 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온까지 천천히 가온하고 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물에 물 (1 mL) 및 LiOH H2O (20 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 트리플루오로아세트산으로 산성화시키고, 여과하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1564.4 (M-H)-.
2.124.7 3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-(4-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}부틸)-2-(베타-D-글루코피라누로노실옥시)벤질]옥시}카르보닐)아미노}프로필 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.5.3을 실시예 2.124.6으로 대체하여 실시예 2.5.4에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.06 (s, 2H), 8.99 (s, 1H), 8.34 (dd, 1H), 8.25-8.09 (m, 3H), 8.08-8.02 (m, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.89 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.66 (q, 2H), 7.50-7.41 (m, 2H), 7.37-7.31 (m, 1H), 7.14 (t, 1H), 6.94 (s, 2H), 6.90 (s, 1H), 6.82 (d, 1H), 5.14-5.02 (m, 2H), 4.97 (d, 1H), 4.19 (d, 1H), 3.85 (dd, 3H), 3.37-3.23 (m, 9H), 3.14 (t, 1H), 3.04-2.92 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 1.96 (t, 2H), 1.73 (s, 2H), 1.55-0.87 (m, 21H), 0.81 (d, 6H). MS (ESI) m/e 1564.4 (M-H)-.
2.125 N-{[(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-(메톡시메틸)-2-옥소피롤리딘-1-일]아세틸}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 SV)의 합성
2.125.1 tert-부틸 2-((3S,5S)-3-(디벤질아미노)-5-(메톡시메틸)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
N,N-디메틸포름아미드 (5 mL) 중 실시예 2.119.10 (1.4 g)의 혼합물에 요오도메탄 (0.8 mL)을 첨가하였다. 반응물을 0℃까지 냉각하고, 95% 수소화나트륨 (80 mg)을 첨가하였다. 5분 후에 냉각조를 제거하고, 반응물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 물 (20 mL) 및 에틸 아세테이트 (40 mL)를 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 층을 분리하고 유기 층을 염수로 세척하였다. 합한 수성 층을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 역추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 80/20 헵탄/에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 439.2 (M+H)+.
2.125.2 tert-부틸 2-((3S,5S)-3-아미노-5-(메톡시메틸)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
2,2,2-트리플루오로에탄올 (10 mL) 중 실시예 2.125.1 (726 mg)의 혼합물에 탄소 상 수산화팔라듐 (20 중량%, 150 mg)를 첨가하였다. 반응물을 수소 분위기 (50 psi) 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 여과하고 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 259.0 (M+H)+.
2.125.3 4-(((3S,5S)-1-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-5-(메톡시메틸)-2-옥소피롤리딘-3-일)아미노)-4-옥소부트-2-엔산
실시예 2.119.13에서 실시예 2.119.12를 실시예 2.125.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (DCI) m/e 374.0 (M+NH3+H)+.
2.125.4 tert-부틸 2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-(메톡시메틸)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
실시예 2.119.14에서 실시예 2.119.13을 실시예 2.125.3으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (DCI) m/e 356.0 (M+NH3+H)+.
2.125.5 2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-(메톡시메틸)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세트산
디클로로메탄 (8 mL) 중 실시예 2.125.4 (120 mg)의 혼합물에 트리플루오로아세트산 (4 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 90분 동안 교반하고 이어서 감압 하에 농축하였다. 잔사를 아세토니트릴 (4 mL) 중에 용해시키고, 30분에 걸쳐 물 중 0.1% 트리플루오로아세트산 중 5 내지 75% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 Luna C18(2) AXIA 컬럼 (250 x 50 mm, 10 μ 입자 크기)을 갖는 분취형 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 300.0 (M+NH3+H)+.
2.125.6 N-{[(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-(메톡시메틸)-2-옥소피롤리딘-1-일]아세틸}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드
실시예 2.119.17에서 실시예 2.119.15를 실시예 2.125.5로 대체하고 실시예 2.119.16을 실시예 2.49.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 9.98 (s, 1H), 8.19 (br d, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (m, 3H), 7.55 (d, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.37 (m, 2H), 7.32 (s, 1H), 7.27 (d, 2H), 7.08 (s, 2H), 6.96 (d, 1H), 5.00 (m, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.69 (t, 1H), 4.39 (br m, 1H), 4.28 (m, 1H), 4.20 (d, 1H), 3.88 (t, 3H), 3.81 (br m, 3H), 3.46 (m, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.26 (br m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.01 (m, 3H), 2.96 (m,1H), 2.65 (t, 2H), 2.36 (br m, 1H), 2.10 (s, 3H), 2.00 (m, 1H), 1.94 (m, 1H), 1.69 (br m, 1H), 1.59 (br m, 1H), 1.49-0.92 (m, 16H), 0.88 (d, 3H), 0.83 (m, 9H). MS (ESI) m/e 1521.5 (M-H)-.
2.126 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 SY)의 합성
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세테이트를 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트로 대체하여 실시예 2.123.21에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.83 (s, 1H), 9.87 (s, 1H), 8.09 (d, 1H), 8.05-7.95 (m, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.59 (d, 1H), 7.55-7.31 (m, 7H), 7.28 (s, 1H), 7.20 (d, 1H), 6.97 (s, 2H), 6.94 (d, 1H), 5.08-4.84 (m, 5H), 4.36 (p, 1H), 3.78 (d, 2H), 3.54 (t, 1H), 3.48-3.28 (m, 9H), 3.21 (s, 2H), 3.12 (t, 2H), 3.02-2.84 (m, 4H), 2.81-2.54 (m, 6H), 2.19-1.84 (m, 9H), 1.63-1.39 (m, 6H), 1.35 (s, 1H), 1.29-0.86 (m, 18H), 0.80 (td, 15H). MS (ESI) m/e 1568.4 (M-H)-.
2.127 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-(4-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}부틸)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 TK)의 합성
2.127.1 3-(1-((3-(2-((((4-(4-아미노부틸)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.2.9 (0.030 g), 실시예 2.124.5 (0.031 g) 및 1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-1-올 수화물 (5 mg)의 혼합물에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.017 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 테트라히드로푸란 (0.4 mL) 및 메탄올 (0.4 mL) 중에 용해시키고, 물 (0.5 mL) 중의 혼합물로서의 수산화리튬 수화물 (0.020 g)로 추출하였다. 1시간 후에, 반응물을 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.072 mL)으로 켄칭하고, N,N-디메틸포름아미드:물 (1:1) (1 mL)로 희석하고, 5% 내지 75% 아세토니트릴/물의 구배로 용출시키는, Gilson PLC 2020 시스템을 사용하는 분취형 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획들을 합하고 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1251.7 (M+H)+.
2.127.2 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-(4-{[3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]아미노}부틸)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 실시예 2.127.1 (0.027 g) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노에이트 (6.32 mg)의 혼합물에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.017 mL)을 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응물을 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.038 mL), 물 (1.5 mL) 및 N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL)의 혼합물로 켄칭하고, 5% 내지 75% 아세토니트릴/물의 구배를 사용하는, Gilson 2020 시스템에서의 분취형 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획들을 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.84 (s, 1H), 8.03 (dd, 1H), 7.91-7.85 (m, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.61 (dd, 1H), 7.52 (dd, 1H), 7.50-7.40 (m, 2H), 7.39-7.31 (m, 2H), 7.31 (s, 1H), 7.17 (dd, 1H), 6.99-6.90 (m, 4H), 6.83 (d, 1H), 5.15-5.04 (m, 2H), 5.05-4.96 (m, 1H), 4.95 (s, 2H), 3.91-3.83 (m, 4H), 3.81 (d, 3H), 3.58 (t, 2H), 3.42 (td, 3H), 3.33-3.24 (m, 5H), 3.00 (q, 4H), 2.68 (dt, 2H), 2.29 (t, 2H), 2.09 (d, 3H), 1.49 (d, 3H), 1.34 (td, 5H), 1.21 (dd, 5H), 1.15-1.07 (m, 2H), 1.07 (s, 4H), 0.95 (q, 1H), 0.82 (d, 6H). MS (ESI) m/e 1402.1 (M+H)+.
2.128 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[4-({(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]프로파노일}아미노)부틸]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 TR)의 합성
5분 동안 N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중에서 실시예 2.120.5 (0.035 g), O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (0.015 g) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.015 mL)의 혼합물을 교반하였다. 혼합물을 N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 실시예 2.127.1 (0.030 g) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.015 mL)의 혼합물에 첨가하고 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (1.5 mL), N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 및 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.034 mL)의 혼합물로 희석하고, 5% 내지 85% 아세토니트릴/물의 구배를 사용하는 Gilson 2020 시스템에서의 분취형 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획들을 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.83 (s, 1H), 8.04-7.93 (m, 2H), 7.76 (d, 1H), 7.58 (dd, 1H), 7.53-7.36 (m, 3H), 7.37-7.25 (m, 3H), 7.15 (d, 1H), 6.97-6.88 (m, 4H), 6.87 (d, 2H), 6.85-6.77 (m, 1H), 6.76-6.69 (m, 2H), 5.13-4.96 (m, 3H), 4.92 (s, 2H), 3.95 (dd, 2H), 3.84 (d, 2H), 3.78 (s, 8H), 3.69-3.60 (m, 2H), 3.47 (d, 38H), 3.48-3.35 (m, 6H), 3.20 (s, 8H), 3.10 (dd, 2H), 2.98 (t, 2H), 2.69-2.60 (m, 2H), 2.50 (d, 1H), 2.06 (s, 3H), 1.49 (t, 2H), 1.35 (s, 4H), 1.21 (d, 4H), 1.05 (s, 6H), 0.79 (d, 6H). MS (ESI) m/e 1991.6 (M-H)-.
2.129 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 TY)의 합성
5분 동안 N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중에서 실시예 2.120.5 (0.033 g), O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (0.014 g) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.015 mL)의 혼합물을 교반하였다. 이 혼합물을 N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 실시예 2.123.20 (0.032 g) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.015 mL)의 혼합물에 첨가하고 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (1.5 mL), N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 및 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.033 mL)의 혼합물로 희석하고, 5% 내지 85% 아세토니트릴/물의 구배를 사용하는 Gilson 2020 시스템에서의 분취형 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획들을 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.90 (d, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.12 (m, 1), 8.01 (m, 1H), 1.78 (m, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.53-7.40 (m, 4H), 7.43-7.30 (m, 4H), 7.27 (s, 1H), 7.18 (d, 2H), 7.06 (s, 1H), 7.00 (d, 2H), 6.97-6.91 (m, 2H), 6.87 (s, 2H), 6.76 (d, 2H), 5.02-4.92 (m, 4H), 4.77 (dd, 1H), 4.20 (t, 1H), 3.98 (dd, 2H), 3.86 (t, 2H), 3.78 (d, 2H), 3.70-3.65 (m, 2H), 3.54 (s, 2H), 3.55-3.45 (m, 38H), 3.45-3.37 (m, 2H), 3.35-3.25 (m, 2H), 3.21 (s, 4H), 3.17-3.06 (m, 2H), 2.99 (t, 2H), 2.73 (s, 2H), 2.61 (s, 4H), 2.07 (d, 4H), 2.01 (s, 2H), 1.94 (s, 2H), 1.54 (s, 2H), 1.27 (d, 4H), 1.22 (s, 2H), 1.11 (s, 6H), 1.08-0.99 (m, 2H), 0.90-0.79 (m, 6H), 0.76 (d, 6H). MS (ESI) m/e 705.6 (M-3H)3-.
2.130 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)에틸)-4-((S)-2-((S)-2-(2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-((2-술포에톡시)메틸)피롤리딘-1-일)아세트아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (신톤 TX)의 합성
실시예 2.119.17에서 실시예 2.119.16을 실시예 2.123.20으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 9.85 (s, 1H), 8.17 (br d, 1H), 8.01 (d, 2H), 7.77 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.43 (m, 4H), 7.34 (m, 3H), 7.19 (d, 1H), 7.06 (s, 2H), 6.96 (d, 1H), 4.99 (m, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.63 (t, 1H), 4.36 (t, 1H), 4.19 (br m, 1H), 4.16 (d, 1H), 3.98 (d, 1H), 3.87 (br t, 2H), 3.81 (br d, 2H), 3.73 (brm, 1H), 3.63 (t, 2H), 3.53 (m, 2H), 3.44 (m, 4H), 3.31 (t, 2H), 3.21 (br m, 2H), 3.17 (m, 2H), 3.00 (m, 2H), 2.92 (br m, 1H), 2.75 (m, 3H), 2.65 (br m, 3H), 2.35 (br m, 1H), 2.07 (s, 3H), 1.98 (br m, 2H), 1.85 (m, 1H), 1.55 (br m, 1H), 1.34 (br m, 1H), 1.26 (br m, 6H), 1.09 (br m, 7H), 0.93 (br m, 1H), 0.87, 0.83, 0.79 (all d, total 12H). MS (ESI) m/e 1733.4 (M-H)-.
2.131 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-4-(4-(2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-((2-술포에톡시)메틸)피롤리딘-1-일)아세트아미도)부틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (신톤 TZ)의 합성
실시예 2.119.17에서 실시예 2.119.16을 실시예 2.127.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 8.02 (d, 1H), 7.82 (br t, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.53 (br d, 1H), 7.45 (ddd, 1H), 7.42 (d, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.33 (m, 1H), 7.15 (d, 1H), 7.05 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.83 (d, 1H), 5.07 (br m, 2H), 5.00 (d, 1H), 4.95 (s, 2H), 4.69 (t, 1H), 4.04 (d, 2H), 3.87 (m, 3H), 3.82 (m, 3H), 3.73 (br m, 1H), 3.61 (m, 2H), 3.47 (br m, 3H), 3.40 (m, 4H), 3.29 (m, 4H), 3.06 (br m, 2H), 3.00 (t, 2H), 2.73 (br m, 2H) 2.69 (br m, 2H), 2.52 (br t, 2H), 2.35 (br m, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.81 (m, 1H), 1.53 (br m, 2H), 1.40 (m, 2H), 1.35 (br m, 2H), 1.29-0.88 (br m, 10H), 0.82, 0.80 (both s, total 6H). MS (ESI-) m/e 1607.5 (M-H)-.
2.132 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 UA)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 실시예 2.127.1 (0.032 g)의 혼합물에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.025 mL)을 첨가하고, 혼합물을 0℃까지 냉각하였다. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세테이트 (8.86 mg)를 한꺼번에 첨가하고 0℃에서 45분 동안 교반하였다. 반응물을 물 (1.5 mL), N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 및 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.036 mL)의 혼합물로 희석하고, 5% 내지 75% 아세토니트릴/물의 구배를 사용하는 Gilson 2020 시스템에서의 분취형 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획들을 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.86 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.02 (dd, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.60 (dd, 1H), 7.51 (dd, 1H), 7.49-7.39 (m, 2H), 7.38-7.28 (m, 3H), 7.17 (dd, 1H), 7.06 (d, 2H), 6.98-6.89 (m, 2H), 6.83 (d, 1H), 5.13-5.03 (m, 2H), 5.04-4.96 (m, 1H), 4.94 (s, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.90-3.77 (m, 6H), 3.50 (s, 1H), 3.50-3.41 (m, 2H), 3.41 (dt, 3H), 3.28 (dt, 4H), 3.06-2.96 (m, 4H), 2.66 (dt, 2H), 2.51 (s, 2H), 2.08 (d, 3H), 1.52 (s, 2H), 1.42-1.32 (m, 4H), 1.23 (d, 4H), 1.11 (q, 2H), 1.06 (s, 4H), 0.81 (d, 6H). MS (ESI) m/e 1388.0 (M+H)+.
2.133 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 UZ)의 합성
2.133.1 3-(1-((3-(2-((((4-(4-아미노부틸)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)피콜린산
디메틸 술폭시드 (0.5 mL) 중 실시예 2.124.5 (0.060 g), 실시예 1.43.7 (0.056 g) 및 1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-1-올 (8 mg)의 혼합물에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.056 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (1 mL) 중 수산화리튬 수화물 (0.026 g)의 혼합물로 처리하고 30분 동안 교반하였다. 메탄올 (0.5 mL)을 반응물에 첨가하고 교반을 30분 동안 계속하였다. 디에틸아민 (0.033 mL)을 반응물에 첨가하고 교반을 하룻밤 계속하였다. 반응물을 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.120 mL)로 켄칭하고, 5% 내지 75% 아세토니트릴/물의 구배를 사용하는, Gilson 2020 시스템에서의 분취형 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획들을 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1247.7 (M+H)+.
2.133.2 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
N,N-디메틸포름아미드 (0.400 mL) 중 실시예 2.133.1 (0.030 g)의 혼합물에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.023 mL)을 첨가하고 혼합물을 0℃까지 냉각시켰다. 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세테이트 (8.34 mg)를 한꺼번에 첨가하고 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 물 (1.5 mL), N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 및 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.034 mL)의 혼합물로 희석하고, 5% 내지 75% 아세토니트릴/물의 구배를 사용하는 Gilson 2020 시스템에서의 분취형 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획들을 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 13.08 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.39-8.31 (m, 1H), 8.25-8.11 (m, 3H), 8.06 (d, 2H), 7.99 (d, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.68 (t, 1H), 7.51-7.42 (m, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.22-7.13 (m, 1H), 7.06 (d, 2H), 6.93 (d, 1H), 6.83 (d, 1H), 5.15-5.00 (m, 2H), 4.99 (d, 1H), 3.97 (s, 2H), 3.86 (d, 3H), 3.42 (d, 4H), 3.29 (d, 5H), 3.03 (p, 2H), 2.72-2.62 (m, 2H), 2.51 (d, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.51 (q, 2H), 1.37 (q, 4H), 1.24 (d, 4H), 1.10 (s, 5H), 0.83 (d, 6H), 0.61 (s, 2H). MS (ESI) m/e 1383.0 (M+H)+.
2.134 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[4-({(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]프로파노일}아미노)부틸]페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 UK)의 합성
5분 동안 N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중에서 실시예 2.120.5 (0.028 g), O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (0.013 g) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.015 mL)의 혼합물을 교반하였다. 혼합물을 N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 실시예 2.133.1 (0.030 g) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.015 mL)의 혼합물에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (1.5 mL), N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 및 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.042 mL)의 혼합물로 희석하고, 5% 내지 75% 아세토니트릴/물의 구배를 사용하는 Gilson 2020 시스템에서의 분취형 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획들을 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.01 (s, 1H), 8.35 (dd, 1H), 8.27-8.13 (m, 3H), 8.06 (d, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.73-7.64 (m, 1H), 7.53-7.43 (m, 2H), 7.42-7.32 (m, 1H), 7.17 (d, 1H), 7.06 (s, 1H), 7.04-6.91 (m, 3H), 6.89 (d, 2H), 6.83 (d, 1H), 6.74 (d, 1H), 5.16-4.93 (m, 4H), 4.63 (dd, 2H), 3.96 (t, 2H), 3.86 (d, 4H), 3.66 (s, 4H), 3.55-3.46 (m, 36H), 3.45-3.35 (m, 8H), 3.35-3.24 (m, 6H), 3.21 (s, 2H), 3.11 (s, 2H), 2.99 (d, 2H), 2.83-2.59 (m, 3H), 2.52 (d, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.57-0.86 (m, 14H), 0.83 (d, 4H). MS (ESI) m/e 1986.6 (M-H)-.
2.135 N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-(4-카르복시부틸)페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 UU)의 합성
2.135.1 메틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-요오도벤조에이트
3-요오도-4-(메톡시카르보닐)벤조산 (9 g)을 tert-부탄올 (100 mL) 중에 용해시키고, 디페닐 포스포르아지데이트 (7.6 mL) 및 트리에틸아민 (4.9 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 83℃ (내부 온도)까지 가열하였다. 혼합물을 건조 상태까지 농축하고, 헵탄 중 0% 내지 20% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 377.9 (M+H)+.
2.135.2 메틸 4-아미노-2-요오도벤조에이트
1.5시간 동안 실온에서 디클로로메탄 (30 mL) 및 트리플루오로아세트산 (10 mL) 중에서 실시예 2.135.1 (3 g)을 교반하였다. 반응물을 건조 상태까지 농축하고, 물 (염산으로 pH 1로 조정함)과 디에틸 에테르 사이에서 분배시켰다. 층을 분리하고, 수성 층을 수성 중탄산나트륨 혼합물로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 건조 상태까지 농축하였다. 생성된 고형물을 톨루엔과 배산시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 278.0 (M+H)+.
2.135.3 메틸 4-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-요오도벤조에이트
플라스크를 실시예 2.135.2 (337 mg) 및 실시예 2.123.14 (500 mg)로 충전하였다. 에틸 아세테이트 (18 mL)를 첨가한 후에 피리딘 (0.296 mL)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 빙조에서 냉각시키고, 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥시드 (에틸 아세테이트 중 50% 혼합물, 1.4 mL)를 적가하였다. 교반을 0℃에서 45분 동안 계속하고, 반응물을 -20℃ 냉동기에 하룻밤 넣어 두었다. 반응물을 실온까지 가온되게 두고 물로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 합한 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄 중에 용해시키고 디에틸 에테르로 희석하여 표제 화합물을 침전시켰고, 이를 여과에 의해 수집하였다. MS (ESI) m/e 669.7 (M+H)+.
2.135.4 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-요오도페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
실시예 2.54.3 (1 g)을 테트라히드로푸란 (15 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 얼음-아세톤 조에서 ­15℃까지 냉각시켰다. 이어서 -10℃ 미만의 온도를 유지하면서 리튬 알루미늄 수소화물 (테트라히드로푸란 중 1N, 3 mL)을 적가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고 10% 시트르산 (25 mL)으로 주의 깊게 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를 실리카겔 상에 흡착시키고, 디클로로메탄 중 5% 내지 6% 메탄올의 구배로 용출시키는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 664.1 (M+H)+.
2.135.5 메틸 5-(5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(히드록시메틸)페닐)펜트-4-이노에이트
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 메틸 펜트-4-이노에이트 (50 mg), 실시예 2.135.4 (180 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.15 mL)의 교반된 혼합물에 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (20 mg) 및 구리 요오다이드 (5 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 질소로 3회 퍼징하고 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물 및 염수로 세척하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 역추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 0.1% v/v 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 90% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템에서의 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 분획들을 합하고 동결 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 608.0 (M-H2O)+.
2.135.6 메틸 5-(5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(히드록시메틸)페닐)펜타노에이트
테트라히드로푸란 (5 mL) 중 실시예 2.135.5 (0.084 g) 및 10% Pd/C (0.02 g)의 혼합물을 1시간 동안 50 psi H2의 분위기 하에 20℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 612.0 (M-H2O)+.
2.135.7 메틸 5-(5-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)펜타노에이트
실시예 2.55.7에서 실시예 2.55.6을 실시예 2.135.7로 대체하여 실시예 2.135.7을 제조하였다. MS (ESI) m/e 795.4 (M+H)+.
2.135.8 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(4-카르복시부틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.49.1에서 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 실시예 2.135.7로 대체하여 실시예 2.135.8을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1271.4 (M-H)-.
2.135.9 N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-(4-카르복시부틸)페닐}-L-알라닌아미드
실시예 2.54에서 실시예 2.49.1을 실시예 2.135.8로 대체하여 실시예 2.135.9를 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δ ppm 9.88 (d, 1H), 8.3 - 8.2 (m, 2H), 8.01 (dd, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.59 (dd, 1H), 7.52 (dd, 1H), 7.47-7.29 (m, 8H), 7.23-7.18 (m, 1H), 7.05 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.00 (d, 2H), 4.94 (s, 2H), 4.37 (p, 1H), 3.51-3.28 (m, 5H), 3.26-3.14 (m, 2H), 2.99 (t, 2H), 2.65 (t, 2H), 2.57 (s, 2H), 2.26-2.17 (m, 3H), 2.07 (d, 3H), 1.94 (dd, 1H), 1.61-0.69 (m, 35H). MS (ESI) m/e 1408.5 (M-H)+.
2.136 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-(3-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}프로필)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 UV)의 합성
2.136.1 (3R,4S,5S,6S)-2-(5-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로프-1-인-1-일)-2-포르밀페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
실시예 2.124.2에서 실시예 2.124.1A를 (9H-플루오렌-9-일)메틸 프로프-2-인-1-일카르바메이트로 대체하여 실시예 2.136.1을 제조하였다. MS (ESI) m/e 714.1 (M+H)+.
2.136.2 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로필)-2-포르밀페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
실시예 2.124.3에서 실시예 2.124.2를 실시예 2.136.1로 대체하여 실시예 2.136.2를 제조하였다. MS (ESI) m/e 718.5 (M+H)+.
2.136.3 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로필)-2-(히드록시메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
실시예 2.124.4에서 실시예 2.124.3을 실시예 2.136.2로 대체하여 실시예 2.136.3을 제조하였다. MS (ESI) m/e 742.2 (M+Na)+.
2.136.4 (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(5-(3-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)프로필)-2-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페녹시)-6-(메톡시카르보닐)테트라히드로-2H-피란-3,4,5-트리일 트리아세테이트
실시예 2.124.5에서 실시예 2.124.4를 실시예 2.136.3으로 대체하여 실시예 2.136.4를 제조하였다. MS (ESI) m/e 885.2 (M+Na)+.
2.136.5 3-(1-((3-(2-((((4-(3-아미노프로필)-2-(((3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.49.1에서 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 실시예 2.136.4로 대체하여 실시예 2.136.5를 제조하였다. MS (ESI) m/e 1237.7 (M+H)+.
2.136.6 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-(3-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}프로필)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.54에서 실시예 2.49.1을 실시예 2.136.5로 대체하여 실시예 2.136.6을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 8.14 (d, 1H), 8.01 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.53-7.39 (m, 4H), 7.38-7.28 (m, 3H), 7.22-7.15 (m, 2H), 7.13-6.91 (m, 5H), 6.84 (d, 1H), 5.17-4.91 (m, 5H), 3.35-3.2 (m, 4H), 3.10-2.90 (m, 4H), 2.75-2.65 (m, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.65 (s, 2H), 1.39-0.71 (m, 21H). MS (ESI) m/e 1372.3 (M-H)-.
2.137 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[({[2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-4-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)벤질]옥시}카르보닐)(3-{[1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 UZ)의 합성
2.137.1 3-(1-((3-(2-((((4-(4-아미노부틸)-2-(((2R,3S,4R,5R,6R)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(3-((1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일)아미노)-3-옥소프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 1.87.3을 실시예 1.84로 대체하여 실시예 2.124.6에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1319.4 (M-H)-.
2.137.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[({[2-{[(2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]옥시}-4-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)벤질]옥시}카르보닐)(3-{[1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산
실시예 2.49.1을 실시예 2.137.1로 대체하여 실시예 2.54에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.83 (s, 2H), 8.12 (s, 0H), 8.06 (s, 1H), 8.03-7.99 (m, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.72 (s, 0H), 7.60 (d, 1H), 7.52-7.39 (m, 3H), 7.34 (td, 2H), 7.26 (s, 1H), 7.21-7.11 (m, 2H), 7.05 (s, 2H), 6.93 (d, 2H), 6.83 (d, 1H), 5.09 (d, 2H), 5.00 (d, 1H), 4.94 (s, 2H), 4.12 (t, 1H), 3.97 (s, 2H), 3.87 (q, 4H), 3.79 (d, 2H), 3.29 (q, 2H), 3.12-2.93 (m, 5H), 2.47-2.23 (m, 1H), 2.07 (d, 3H), 1.50 (d, 3H), 1.36 (d, 5H), 1.31-0.85 (m, 9H), 0.81 (d, 7H). MS (ESI) m/e 1568.4 (M-H)-.
2.138 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)-3-(1-((3-(2-((((2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-4-(4-(2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-((2-술포에톡시)메틸)피롤리딘-1-일)아세트아미도)부틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (신톤 VB)의 합성
실시예 2.119.17에서 실시예 2.119.16을 실시예 2.133.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 8.99 (s, 1H), 8.34 (dd, 1H), 8.19 (d, 1H), 8.17 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.97 (d, 1H), 7.93 (d, 1H), 7.80 (br t, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.67 (dd, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.45 (dd, 1H), 7.34 (dd, 1H), 7.14 (d, 1H), 7.03 (s, 2H), 6.93 (s, 1H), 6.82 (br d, 1H), 5.06 (br m, 2H), 4.98 (d, 1H), 4.67 (t, 1H), 4.02 (d, 2H), 3.85 (m, 3H), 3.71 (br m, 1H), 3.59 (t, 2H), 3.45 (br m, 3H), 3.41 (m, 4H), 3.27 (m, 4H), 3.03 (m, 2H), 2.70 (m, 2H) 2.65 (br m, 2H), 2.50 (br t, 2H), 2.31 (br m, 1H), 2.19 (s, 3H), 1.80 (m, 1H), 1.52 (br m, 2H), 1.38 (m, 2H), 1.35 (br m, 2H), 1.29-0.88 (br m, 10H), 0.82 (s, 3H), 0.80 (s, 3H). MS (ESI) m/e 1602.4 (M-H)-.
2.139 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸][3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]카르바모일}옥시)메틸]-5-(3-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}프로필)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 VC)의 합성
2.139.1 3-(1-((3-(2-((((4-(3-아미노프로필)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)(3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.49.1에서 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 실시예 2.136.4로 대체하고 실시예 1.2.9를 실시예 1.79.3으로 대체하여 실시예 2.139.1을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1217.7 (M+H)+.
2.139.2 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]카르바모일}옥시)메틸]-5-(3-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}프로필)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.54에서 실시예 2.49.1을 실시예 2.139.1로 대체하여 실시예 2.139.1을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.84 (s, 2H), 8.11 (t, 1H), 8.00 (dd, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.62-7.56 (m, 1H), 7.50-7.37 (m, 3H), 7.37-7.29 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.16 (d, 1H), 7.04 (s, 2H), 6.96-6.88 (m, 2H), 6.82 (d, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.98 (d, 1H), 4.92 (s, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.44-3.18 (m, 11H), 3.07-2.90 (m, 4H), 2.05 (s, 3H), 1.80 (s, 1H), 1.64 (p, 2H), 1.38-0.67 (m, 19H). (m, 21H). MS (ESI) m/e 1352.5 (M-H)-.
2.140 N-({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘트-52-인-53-일)페닐}-L-알라닌아미드(신톤 VS)의 합성
2.140.1 2-요오도-4-니트로벤조산
2-아미노-4-니트로벤조산 (50 g)을 0℃에서 진한 H2SO4 (75 mL) 및 물 (750 mL)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 혼합물에 0℃에서 물 (300 mL) 중 아질산나트륨 (24.62 g)의 혼합물을 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 물 (300 mL) 중 요오드화나트륨 (65.8 g)의 혼합물을 상기 혼합물에 천천히 첨가하였다. 첨가의 완료 후에, 생성된 혼합물을 0℃에서 2시간 동안, 이어서 실온에서 16시간 동안 및 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 실온까지 냉각하고, 얼음-물 (300 mL)로 희석하였다. 고형물을 여과에 의해 수집하고, 물 (100 mL x 5)로 세척하고, 공기 중에서 16시간 동안 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 291.9 (M-H)-.
2.140.2 메틸 2-요오도-4-니트로벤조에이트
메탄올 (1000 mL) 및 황산 (23.65 mL)의 혼합물 중 실시예 2.140.1 (130 g)의 혼합물을 85℃에서 16시간 동안 혼합하고 건조 상태까지 농축하였다. 잔사를 메탄올 (100 mL)과 배산시키고 현탁액을 10분 동안 교반하였다. 고형물을 여과에 의해 수집하고, 물 (200 mL x 3) 및 메탄올 (20 mL)로 헤척하고, 16시간 동안 공기 건조하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 308.0 (M+H)+ .
2.140.3 메틸 4-아미노-2-요오도벤조에이트
에탄올 (1000 mL) 및 물 (100 mL) 중 암모늄 클로라이드 (122 g) 및 철 (38.2 g)의 혼합물에 실시예 2.140.2 (70 g)를 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 교반하고 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 여과액을 감압 하에 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트 (1000 mL) 중에 용해시키고 물 (500 mL)로 세척하였다. 수성상을 에틸 아세테이트 (1000 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 278.0 (M+H)+.
2.140.4 (4-아미노-2-요오도페닐)메탄올
테트라히드로푸란 (800 mL) 중 실시예 2.140.3 (40 g)의 혼합물에 1 M 디이소부틸알루미늄 수소화물 (505 mL)를 -50℃에서 적가하였다. 혼합물을 -50℃에서 3시간 동안 교반하고 -20℃까지 냉각하였다. 얼음-물 (180 mL)을 (0℃ 미만의 온도를 유지하면서) 혼합물에 적가하였다. 얼음-물의 첨가 후에, 혼합물을 10분 동안 교반하고 여과하였다. 여과액을 농축하고, 잔사를 에틸 아세테이트 (800 mL) 및 물 (200 mL) 중에 용해시켰다. 수성상을 에틸 아세테이트 (300 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 250.0 (M+H)+.
2.140.5 4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-요오도아닐린
디클로로메탄(600 mL) 및 테트라히드로푸란 (150 mL) 중 실시예 2.140.4 (40 g) 및 이미다졸 (21.87 g)의 혼합물에 tert-부틸디메틸클로로실란 (29.0 g)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고 여과하여 고형물을 제거하였다. 여과액에 얼음-물 (50 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고 물 (100 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 디클로로메탄 (500 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 15/1 내지 10/1 석유 에테르/에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 364.0 (M+H)+ .
2.140.6 (S)-tert-부틸 (1-((4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-요오도페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트
0℃에서 디클로로메탄 (600 mL) 중 (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판산 (15.62 g) 및 실시예 2.140.5 (30 g)의 혼합된 혼합물에 POCl3 (15.39 mL)을 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 얼음-물 (60 mL)을 (온도를 5℃ 미만으로 유지하면서) 혼합물에 주의 깊게 적가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고 농축하여 디클로로메탄을 제거하였다. 잔사를 에틸 아세테이트 (500 mL) 및 물 (100 mL) 중에 현탁시켰다. 현탁액을 여과하였다. 유기상을 물 (200 mL x 2) 및 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고 농축하여, 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 533.0 (M-H) +.
2.140.7 (S)-tert-부틸 (1-((4-(히드록시메틸)-3-요오도페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)카르바메이트
테트라히드로푸란 (600 mL) 중 실시예 2.140.6 (60 g)의 혼합물에 0℃에서 테트라히드로푸란 (120 mL) 중 테트라부틸 암모늄 플루오라이드 (28.2 g)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고 여과하였다. 여과액에 물 (100 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고 이어서 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트 (800 mL) 및 물 (300 mL)로 희석하였다. 수성상을 에틸 아세테이트 (200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔사를, 3/1 내지 1/1 석유 에테르/에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 443.0 (M+Na)+ .
2.140.8 (S)-2-아미노-N-(4-(히드록시메틸)-3-요오도페닐)프로판아미드
디클로로메탄 (80 mL) 및 트리플루오로아세트산 (40 mL)의 혼합물 중 실시예 2.140.7 (20 g)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄 (80 mL) 중에 용해시키고 트리에틸아민 (16.95 mL)를 첨가하여 pH를 8로 조정하였다. 디클로로메탄 중의 유리 염기로서 표제 화합물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. MS (LC-MS) m/e 321.1 (M+H)+.
2.140.9 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-요오도페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
디클로로메탄 (250 mL) 중 (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄산 (6.79 g), 트리에틸아민 (9.58 mL) 및 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (5.26 g)의 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을, 0℃에서 디클로로메탄 (100 mL) 중 실시예 2.140.8 (10 g) 및 1-에틸-3-[3-(디메틸아미노)프로필]-카르보디이미드 히드로클로라이드 (6.59 g)의 혼합물에 적가하였다. 첨가의 완료 후에, 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 얼음-물 (200 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 유기상을 중탄산나트륨 포화 수성 혼합물 (100 mL x 2), 물 (100 mL x 2) 및 염수 (100 mL)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 3/1 내지 1/1 석유 에테르/에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LC-MS m/e 542.1 (M+Na)+.
2.140.10 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘트-52-인-53-일)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 실시예 2.140.9 (50 mg), 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘트-52-인 (149 mg), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (27.0 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.05 mL)의 혼합물에 구리(I) 요오다이드 (3.67 mg)를 첨가하였다. 반응물을 질소 가스의 스트림으로 10분 동안 퍼징하고 하룻밤 교반하였다. 반응물을 디메틸 술폭시드로 희석하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 1164.2 (M-H)-.
2.140.11 tert-부틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘트-52-인-53-일)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
N,N-디메틸포름아미드 (0.2 mL) 중 실시예 2.140.10 (80 mg) 및 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (31.3 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.06 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 35 내지 75% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.140.12 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘트-52-인-53-일)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (2.5 mL) 중 실시예 1.2.9 (95 mg), 실시예 2.140.11 (148 mg) 및 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (68.1 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (97 L)을 첨가하였다. 혼합물을 3.5시간 동안 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 35 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다.
2.140.13 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘트-52-인-53-일)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
디클로로메탄 (4 mL) 중 실시예 2.140.12 (135 mg)의 차가운 (0℃) 혼합물을 트리플루오로아세트산 (1 mL)으로 5시간 동안 처리하였다. 혼합물을 농축하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 60% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 973.4 (M+2H)2+.
2.140.14 N-({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘트-52-인-53-일)페닐}-L-알라닌아미드
N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 실시예 2.119.15 (20.88 mg) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (21.1 mg)의 혼합물을 N,N-디이소프로필에틸아민 (16.2 L)으로 7분 동안 처리하고, N,N-디메틸포름아미드 (0.6 mL) 중 실시예 2.140.13 (60 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (32.3 L)의 혼합물을 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δ 10.01 (d, 1H), 8.22 (d, 1H), 8.02 (t, 2H), 7.90-7.75 (m, 2H), 7.66-7.50 (m, 3H), 7.50-7.39 (m, 3H), 7.35 (q, 3H), 7.05 (s, 2H), 7.00 (d, 1H), 5.08 (d, 2H), 4.97 (s, 2H), 4.65 (t, 1H), 4.47-4.31 (m, 4H), 4.23-4.14 (m, 2H), 3.90-3.69 (m, 5H), 3.68-3.58 (m, 4H), 3.57-3.53 (m, 2H), 3.52-3.43 (m, 57H), 3.42-3.33 (m, 4H), 3.22 (s, 5H), 3.01 (t, 2H), 2.49 (p, 3H), 2.09 (d, 3H), 2.04-1.77 (m, 1H), 1.40-1.17 (m, 6H), 1.06 (dd, 6H), 0.97-0.63 (m, 11H). MS (ESI) m/e 1153.3 (M+2H)2+.
2.141 N-({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘탄-53-일)페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 VT)의 합성
2.141.1 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사도펜타콘탄-52-일)-4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
테트라히드로푸란 (20 mL) 중 실시예 2.140.10 (304 mg) 및 10% Pd/C (90 mg, 건조)의 혼합물을 압력병에서 50 psi의 수소 가스 하에 2시간 동안 진탕하였다. 불용성 물질을 여과하여 제거하고, 여과액을 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1168.3 (M-H)­.
2.141.2 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사도펜타콘탄-52-일)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
실시예 2.140.10을 실시예 2.141.1로 대체하여, 실시예 2.140.11에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.
2.141.3 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘탄-53-일)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산
실시예 2.140.11을 실시예 2.141.2로 대체하여, 실시예 2.140.12에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.
2.141.4 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘탄-53-일)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.140.12를 실시예 2.141.3으로 대체하여, 실시예 2.140.13에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1948.8 (M-H)-.
2.141.5 N-({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘탄-53-일)페닐}-L-알라닌아미드
실시예 2.140.13을 실시예 2.141.4로 대체하여, 실시예 2.140.14에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.87 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 8.18 (d, 1H), 8.03 (dd, 2H), 7.78 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.45 (ddd, 4H), 7.40-7.32 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.07 (s, 2H), 6.96 (d, 1H), 5.01 (d, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.64 (t, 1H), 4.38 (t, 1H), 4.24-4.12 (m, 2H), 4.00 (d, 1H), 3.88 (t, 2H), 3.78 (t, 3H), 3.64 (ddt, 2H), 3.49 (dd, 62H), 3.43-3.37 (m, 6H), 3.23 (s, 3H), 3.01 (t, 2H), 2.84-2.68 (m, 1.5H), 2.63 (dd, 4H), 2.36 (d, 0.5H), 2.08 (d, 3H), 1.74 (t, 2H), 1.25 (dt, 6H), 1.17-1.00 (m, 6H), 0.99-0.72 (m, 11H). MS (ESI) m/e 1153.0 (M-2H)2-.
2.142 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸][(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일}옥시)메틸]-5-(3-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}프로필)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 VY)의 합성
2.142.1 3-(1-((3-(2-((((4-(3-아미노프로필)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.49.1에서 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 실시예 2.136.4로 대체하고 실시예 1.2.9를 실시예 1.85로 대체하여 실시예 2.142.1을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1217.3 (M+H)+.
2.142.2 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일}옥시)메틸]-5-(3-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}프로필)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.54에서 실시예 2.49.1을 실시예 2.142.1로 대체하여 실시예 2.142.2를 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d6) δ ppm 8.14 (d, 1H), 8.03 (dt, 1H), 7.81-7.76 (m, 1H), 7.61 (dd, 1H), 7.53-7.41 (m, 3H), 7.38-7.32 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.06 (d, 2H), 6.97-6.92 (m, 2H), 6.85 (dd, 1H), 5.10 (q, 2H), 5.01 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.48-3.18 (m, 12H), 3.06 (q, 2H), 3.00 (t, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.77-0.66 (m, 16H). MS (ESI) m/e 1352.5 (M-H)-.
2.143 1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)-2-(베타-D-글루코피라누로노실옥시)벤질]옥시}카르보닐)아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨 (신톤 WI)의 합성
2.143.1 3-(1-((3-(2-((((4-(4-아미노부틸)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)((3R,4S,5R)-3,4,5,6-테트라히드록시헥실)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.97.8에서 실시예 1.25를 실시예 1.77.2로 대체하고 실시예 2.97.7을 실시예 2.124.5로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1291 (M+H)+, 1289 (M-H)-.
2.143.2 1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)-2-(베타-D-글루코피라누로노실옥시)벤질]옥시}카르보닐) 아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨
실시예 2.54에서 실시예 2.49.1을 실시예 2.143.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 8.04 (d, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.54-7.43 (m, 3H), 7.41-7.35 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.18 (m, 1H), 7.03 (s, 2H), 6.97 (d, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.86 (d, 1H), 5.18-5.05 (m, 3H), 5.03 (d, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.91 (d, 1H), 3.87 (t, 2H), 3.83 (m, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.67 (m, 2H), 3.59 (dd, 2H), 3.50-3.27 (m, 16H), 3.14 (d, 2H), 3.04 (m, 4H), 2.09 (s, 3H), 1.68 (m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.44-1.31 (m, 4H), 1.26-1.14 (m, 4H), 1.10 (m, 4H), 0.98 (q, 2H), 0.85 (m, 6H). MS (ESI) m/e 1428 (M+H)+, 1426 (M-H)-.
2.144 1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)-2-(베타-D-글루코피라누로노실옥시)벤질]옥시} 카르보닐)아미노}-1,2-디데옥시-D-에리스로-펜티톨 (신톤 WK)의 합성
2.144.1 3-(1-((3-(2-((((4-(4-아미노부틸)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)((3S,4R)-3,4,5-트리히드록시펜틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.97.8에서 실시예 1.25를 실시예 1.80으로 대체하고 실시예 2.97.7을 실시예 2.124.5로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1261 (M+H)+, 1259 (M-H)-.
2.144.2 1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]({[4-(4-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}부틸)-2-(베타-D-글루코피라누로노실옥시)벤질]옥시} 카르보닐)아미노}-1,2-디데옥시-D-에리스로-펜티톨
실시예 2.54에서 실시예 2.49.1을 실시예 2.144.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 8.08 (t, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.62 (d, 1H), 7.53-7.42 (m, 3H), 7.38-7.33 (m, 2H), 7.20 (s, 1H), 7.17 (m, 1H), 7.07 (s, 2H), 6.97-6.93 (m, 2H), 6.85 (d, 1H), 5.17-5.05 (m, 3H), 5.02 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.98 (s, 2H), 3.88 (m, 4H), 3.80 (m, 4H), 3.67 (m, 2H), 3.42 (m, 4H), 3.36-3.23 (m, 13H), 3.08-2.99 (m, 5H), 2.09 (s, 3H), 1.86 (m, 1H), 1.53 (m, 2H), 1.38 (m, 4H), 1.25 (m, 4H), 1.11 (m, 4H), 0.96 (m, 2H), 0.83 (m, 6H). MS (ESI) m/e 1398 (M+H)+, 1396 (M-H)-.
2.145 N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-[27-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-일)-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트리아콘탄-30-일]페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 WP)의 합성
2.145.1 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(3-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)프로프-1-인-1-일)-4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
N,N-디메틸포름아미드 (6 mL) 중 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)-3-요오도페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (0.5 g)의 혼합물에 벤질 프로프-2-인-1-일카르바메이트 (0.182 g), CuI (9.2 mg), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 디클로라이드 (35 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (1.0 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 진공 하에서 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트 (300 mL) 중에 용해시키고, 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 용매의 증발, 및 디클로로메탄 중 30% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의한 잔사의 정제에 의해 표제 화합물을 제공하였다. MS (APCI) m/e 581.2 (M-H)-.
2.145.2 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(3-아미노프로필)-4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
에탄올 (30 mL) 중 실시예 2.145.1 (1.7g)의 혼합물에 5% Pd/C (0.3 g) 및 시클로헥센 (매우 과량)을 첨가하였다. 반응물을 100℃에서 45분 동안 교반하였다. 반응물을 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔사를 N,N-디메틸포름아미드 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 451.1(M-H)-.
2.145.3 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(27-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-일)-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트리아콘탄-30-일)-4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
디클로로메탄 (4 mL) 중 실시예 2.145.2 (45 mg)의 혼합물에 2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-알 (79 mg)을 첨가한 후에 NaH(OAc)3 (63.5 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고 이어서 감압 하에 농축하였다. 잔사를 N,N-디메틸포름아미드 중에 용해시키고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1212.1 (M-H)-.
2.145.4 tert-부틸 ((S)-1-(((S)-1-((3-(27-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-일)-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트리아콘탄-30-일)-4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시) 메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 실시예 2.145.3 (80 mg)의 혼합물에 비스(4-니트로페닐) 카르보네이트 (26 mg)를 첨가한 후에 N,N-디이소프로필아민 (0.012 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 직접 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1376.97 (M-H)-.
2.145.5 3-(1-((3-(2-((((2-(27-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-일)-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트리아콘탄-30-일)-4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도) 벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 중 실시예 2.145.4 (30 mg)의 혼합물에 실시예 1.43 (18.68 mg)을 첨가한 후에 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (3.4 mg) 및 N,N-디이소프로필아민 (3.84 uL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 트리플루오로아세트산 (0.55 mL)을 혼합물에 첨가하고 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1986.6 (M-H)-.
2.145.6 N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-[27-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-일)-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트리아콘탄-30-일]페닐}-L-알라닌아미드
실시예 2.123.20을 실시예 2.145.5로 대체하여 실시예 2.123.21에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 13.10 (s, 1H), 9.92 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.37 (dd, 1H), 8.30-8.14 (m, 5H), 8.07 (d, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.74-7.68 (m, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.52-7.45 (m, 2H), 7.42-7.34 (m, 2H), 7.28 (d, 1H), 7.08 (s, 2H), 5.05 (d, 2H), 4.39 (t, 1H), 4.21 (dd, 1H), 4.12 (s, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.49 (d, 55H), 3.34 (s, 200H), 3.23 (s, 5H), 3.13 (d, 4H), 2.79-2.65 (m, 5H), 2.23 (s, 3H), 1.94 (d, 8H), 1.47-0.94 (m, 15H), 0.92-0.76 (m, 12H).
2.146 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2S)-3-[3,4-비스(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 XD)의 합성
2.146.1 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(3,4-디히드록시페닐)프로판산
디옥산 (5.00 L) 및 물 (5.00 L) 중 (S)-2-아미노-3-(3,4-디히드록시페닐)프로판산(1.00 kg) 및 NaHCO3 (1.28 kg)의 혼합물에 벤질 카르보노클로리데이트 (1.04 k)를 적가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 6 N HCl 수용액을 첨가하여 반응 혼합물을 pH = 3.0 내지 4.0으로 조정하고 에틸 아세테이트 (25 L)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축하여 표제 화합물을 얻었다. 1H NMR (400MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 8.73 (s, 1H), 7.54-7.26 (m, 8H), 6.64-6.45 (m, 3H), 4.98 (s, 2H), 4.49 (s, 1H), 2.87 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 2.68-2.62 (m, 1H).
2.146.2 (S)-벤질 2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(3,4-디히드록시페닐)프로파노에이트
실시예 2.146.1 (800.00 g) 및 Cs2CO3 (1.18 kg)의 혼합물에 20℃에서브로모메틸벤젠 (259.67 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였고, TLC에 의하면 반응이 완료된 것으로 나타났다. 잔사를 H2O (5 L)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3회 5 L)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (5 L)로 세척하고, Na2SO4 (150 g)로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100:1 내지 1:1)에 의해 2회 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.77 - 3.02 (m, 2 H), 4.47 (br. s., 1 H), 4.61 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 5.01 - 5.17 (m, 4 H), 5.35 - 5.47 (m, 1 H), 6.32 (br. s., 1 H), 6.38 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 6.51 (s, 1 H), 6.65 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 7.17 - 7.42 (m, 9 H).
2.146.3 (S)-벤질 2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(3,4-비스(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐)프로파노에이트
N,N-디메틸포름아미드 (150 mL) 중 K2CO3 (27.04 g) 및 KI (5.95 g)의 혼합물에 디메틸포름아미드 (150 mL) 중 실시예 2.146.2 (8.12 g) 및 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일 4-메틸벤젠술포네이트 (27.00 g)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 75℃에서 12시간동안 교반하였다. 2개의 추가의 바이알을 상기에 기재된 바와 같이 설정하였다. 정제를 위해 3개 모두의 반응 혼합물을 합하였다. 혼합물을 NH4Cl 수성 혼합물 (9 L)에 붓고, 에틸 아세테이트 (900 mL로 5회)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (1500 mL)로 세척하고, Na2SO4 (150 g)로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 조질 잔사를 얻었다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄/메탄올=100/1 내지 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물을 정제하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2.95 - 3.08 (m, 2 H), 3.38 (s, 6 H), 3.57 - 3.68 (m, 80 H), 3.78 (t, J=4.85 Hz, 2 H), 3.83 (t, J=5.29 Hz, 2 H), 4.01 (t, J=5.07 Hz, 2 H), 4.10 (t, J=5.07 Hz, 2 H), 4.58 - 4.70 (m, 1 H), 5.09 (s, 2 H), 5.14 (d, J=3.53 Hz, 2 H), 6.55 (d, J=8.38 Hz, 1 H), 6.62 (d, J=1.76 Hz, 1 H), 6.74 (d, J=7.94 Hz, 1 H), 7.27 - 7.49 (m, 10 H).
2.146.4 (S)-2-아미노-3-(3,4-비스(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐)프로판산
메탄올 (200 mL) 중 실시예 2.146.3 (16.50 g)의 혼합물에 Pd/C (9.00 g)를 첨가하고, 혼합물을 H2 (50 psi) 하에 16시간 동안 50℃에서 교반하였다. 추가의 반응물을 상기에 기재된 바와 같이 설정하였다. LC/MS에 의하면 반응이 완료된 것으로 나타났고, 정제를 위해 둘 모두의 반응 혼합물을 합하였다. 혼합물을 여과하고 농축하였다. 조질의 표제 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
2.146.5 (S)-3-(3,4-비스(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로판산
H2O (60.00 mL) 중 실시예 2.146.4 (5.94 g)의 혼합물에 Na2CO3 (790.67 mg) 및 메틸 2,5-디옥소피롤-1-카르복실레이트 (1.19 g)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 4개의 추가의 반응물을 상기에 기재된 바와 같이 설정하였다. 정제를 위해 5개 모두의 반응 혼합물을 합하였다. 4M HCl 수용액을 첨가하여 pH를 2로 조정하였다. 합한 혼합물을 분취형 역상 HPLC (트리플루오로아세트산 조건)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3.35 - 3.40 (m, 6 H), 3.51 - 3.58 (m, 4 H), 3.58 - 3.75 (m, 78 H), 3.81 (q, J=4.70 Hz, 4 H), 4.11 (dt, J=10.14, 5.07 Hz, 4 H), 4.91 (dd, J=11.47, 5.29 Hz, 1 H), 6.53 - 6.69 (m, 3 H), 6.71 - 6.89 (m, 2 H). MS (ESI) m/e6 38.0 (M+H)+.
2.146.6 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2S)-3-[3,4-비스(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일옥시)페닐]-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로파노일]-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산
5분 동안 N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중에서 실시예 2.146.5 (0.020 mL), O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (0.014 g) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.020 mL)의 혼합물을 교반하였다. 혼합물을 N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 실시예 2.123.20(0.042 g) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.020 mL)의 혼합물에 첨가하고 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (1.5 mL), N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 및 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.054 mL)의 혼합물로 희석하고, 5% 내지 85% 아세토니트릴/물의 구배를 사용하는 Gilson 2020 시스템에서의 분취형 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획들을 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.86 (s, 4H), 9.92 (s, 2H), 8.26 (d, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.02 (dd, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.54-7.49 (m, 1H), 7.49-7.39 (m, 2H), 7.39-7.31 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.20 (d, 1H), 6.94 (d, 1H), 6.87 (s, 2H), 6.77 (d, 1H), 6.60-6.53 (m, 1H), 5.05-4.91 (m, 5H), 4.80 (dd, 2H), 4.37 (t, 2H), 4.21 (t, 2H), 3.97 (dt, 3H), 3.86 (t, 3H), 3.78 (d, 3H), 3.68 (dt, 4H), 3.65-3.28 (m, 102H), 3.20-3.08 (m, 2H), 2.99 (t, 2H), 2.92 (d, 2H), 2.68 (dd, 2H), 2.07 (d, 4H), 1.54 (s, 2H), 1.37-0.71 (m, 16H). MS (ESI) m/e 2631.2 (M-H)-.
2.147 N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일)-베타-알라닐-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘탄-53-일)페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 XK)의 합성
2.147.1 벤질 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사-35-아자옥타트리아콘탄-38-오에이트
N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 및 물 (3 mL) 중 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-아민 (1 g)의 혼합물에 벤질 아크릴레이트 (0.377 g)를 적가하였다. 반응 혼합물을 하룻밤 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 678.4 (M+H)+.
2.147.2 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사-35-아자옥타트리아콘탄-38-오익 산
테트라히드로푸란 (10 mL) 중 실시예 2.147.1 (220 mg) 및 10% Pd/C (44 mg, 건조)를 압력병에서 50 psi의 수소 가스 하에 1시간 동안 진탕하였다. 반응물을 여과하고, 여과액을 농축하였다. 잔사를 고진공 하에 건조하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 588.3 (M+H)+.
2.147.3 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 35-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사-35-아자옥타트리아콘탄-38-오에이트
N,N-디메틸포름아미드 (3mL) 중 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세테이트 (566 mg), 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (229 mg), 1-히드록시피롤리딘-2,5-디온 (86 mg) 및 실시예 2.147.2 (440 mg)의 차가운 (0℃) 혼합물을 N,N-디이소프로필에틸아민 (785 L)으로 25분 동안 처리하였다. 반응물을 디메틸 술폭시드로 희석하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 5 내지 55% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 822.3 (M+H)+.
2.147.4 N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일)-베타-알라닐-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-헵타데카옥사트리펜타콘탄-53-일)페닐}-L-알라닌아미드
N,N-디메틸포름아미드 (0.8 mL) 중 실시예 2.141.4 (28 mg), 실시예 2.147.3 (27.1 mg) 및 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (6.6 mg)의 차가운 (0℃) 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민-2 (20.1 L)를 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 30 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.81 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 8.21-7.86 (m, 2H), 7.75 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.52-7.28 (m, 7H), 7.27-7.15 (m, 2H), 7.04 (d, 2H), 6.91 (d, 1H), 4.94 (d, 4H), 4.36 (dt, 3H), 4.19 (dt, 1H), 3.84 (t, 2H), 3.75 (d, 2H), 3.63 (d, 1H), 3.46 (dd, 104H), 3.36 (s, 2H), 3.19 (s, 5H), 2.97 (t, 2H), 2.57 (t, 5H), 2.42-2.26 (m, 1H), 2.03 (s, 7H), 2.00-1.83 (m, 1H), 1.70 (t, 2H), 1.38-0.96 (m, 13H), 0.96-0.69 (m, 13H). MS (ESI) m/e 1327.7 (M-2H)2-.
2.148 N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일)-베타-알라닐-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 XL)의 합성
실시예 2.141.4를 실시예 2.112.2로 대체하여, 실시예 2.147.4에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.83 (s, 1H), 9.96 (d, 1H), 8.18-7.85 (m, 3H), 7.75 (d, 1H), 7.64-7.37 (m, 7H), 7.32 (td, 2H), 7.28-7.20 (m, 3H), 7.04 (s, 2H), 6.92 (d, 1H), 5.17-4.79 (m, 4H), 4.59-4.31 (m, 3H), 4.21 (dt, 1H), 3.84 (t, 2H), 3.77 (d, 2H), 3.52 (s, 4H), 3.39 (d, 2H), 3.19 (s, 5H), 2.94 (dt, 4H), 2.60 (t, 3H), 2.43-2.27 (m, 1H), 2.05 (s, 4H), 1.60 (d, 2H), 1.44-0.57 (m, 22H). MS (ESI) m/e 1964.8 (M-H)-.
2.149 N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-[27-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-일)-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트리아콘탄-30-일]페닐}-L-알라닌아미드 (신톤 YJ)의 합성
2.149.1 3-(1-((3-(2-((((2-(27-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-일)-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트리아콘탄-30-일)-4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 1.43을 실시예 1.2.9로 대체하여 실시예 2.145.5에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1991.4 (M-H)-.
2.149.2 N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-3-[27-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-일)-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트리아콘탄-30-일]페닐}-L-알라닌아미드
실시예 2.145.5를 실시예 2.149.1로 대체하여 실시예 2.145에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 12.83 (s, 1H), 9.90 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.24 (d, 2H), 8.01 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.67-7.29 (m, 8H), 7.26 (s, 2H), 7.06 (s, 2H), 6.93 (d, 1H), 5.03 (d, 2H), 4.93 (s, 2H), 4.37 (t, 1H), 4.19 (dd, 1H), 4.11 (s, 2H), 3.86 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.70-3.26 (m, 226H), 3.21 (s, 6H), 3.11 (s, 5H), 2.99 (t, 2H), 2.66 (d, 4H), 2.08 (s, 3H), 1.89 (s, 8H), 1.44-0.90 (m, 14H), 0.89-0.68 (m, 11H).
2.150 N-{(3S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 YQ)의 합성
2.150.1 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)펜트-4-인산
테트라히드로푸란 (30 mL) 중 3-아미노펜트-4-인산 트리플루오로아세트산 염 (1.9 g)의 혼합물에 메틸 2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-카르복실레이트 (1.946 g)을 첨가한 후에, N,N-디이소프로필에틸아민 (8.04 mL)을 신속 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 건조 상태까지 농축하였다. 잔사를, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 194 (M+H). 1H-NMR (디메틸 술폭시드-d 6 , 400 MHz) δ 2.92-3.07 (m, 2H), 3.38 (d, 1H), 5.07-5.12 (m, 1H), 7.08 (s, 2H), 12.27 (bs, 0.6H).
2.150.2 3-(1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로판산
t-부탄올/H2O, (2:1, 15 mL)의 혼합물 중 실시예 2.150.1 (700 mg)에 37-아지도-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄 (2123 mg)을 첨가하였다. 소듐 (R)-2-((S)-1,2-디히드록시에틸)-4-히드록시-5-옥소-2,5-디히드로푸란-3-올레이트 (71.8 mg) 및 황산구리(II) (28.9 mg)를 순차적으로 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고 농축하였다. 잔사를, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ3.24 (s, 3H), 3.15-3.28 (m, 2H), 3.41-3.52 (m, 44H), 3.79 (t, 2H), 4.48 (t, 2H), 5.56-5.60 (m, 1H), 7.05 (s, 2H), 8.03 (s, 1H). MS (LC-MS) m/e 779 (M+H)+.
2.150.3 N-{(3S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드
0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.3 mL) 중 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (8.45 mg), 및 실시예 2.150.2 (20 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (22.19 L)을 천천히 첨가하고, 반응 혼합물을 1분 동안 교반하였다. N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 중 실시예 2.112.2 (20 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (22 L)의 차가운 (0℃) 혼합물을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 10분 동안 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. (3-위치의 절대 배치는 임의로 지정되었다.) 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.95 (s, 1H), 8.07 (d, 3H), 8.04-7.96 (m, 2H), 7.77 (d, 1H), 7.64-7.53 (m, 3H), 7.50 (s, 1H), 7.48-7.39 (m, 2H), 7.34 (q, 2H), 7.30-7.23 (m, 3H), 6.98 (s, 2H), 6.93 (d, 1H), 5.61 (t, 1H), 4.96 (d, 4H), 4.54-4.27 (m, 3H), 4.14 (t, 1H), 3.86 (t, 2H), 3.77 (q, 4H), 3.43 (d, 71H), 3.21 (s, 6H), 3.00 (d, 5H), 2.61 (s, 2H), 2.07 (d, 3H), 1.92 (s, 1H), 1.60 (d, 2H), 1.47-0.86 (m, 10H), 0.85-0.67 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1010.6 (M-2H)2-.
2.151 N-{(3R)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N 5 -카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 YR)의 합성
실시예 2.150.3의 제조 동안 실시예 2.151을 단리하였다. (3-위치의 절대 배치는 임의로 지정되었다.) 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.91 (s, 1H), 8.11 (dd, 2H), 8.04-7.99 (m, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.58 (t, 3H), 7.54-7.39 (m, 2H), 7.39-7.31 (m, 2H), 7.31-7.24 (m, 3H), 7.00 (s, 2H), 6.94 (d, 1H), 5.61 (dd, 1H), 5.08-4.79 (m, 4H), 4.40 (dt, 3H), 4.16 (s, 1H), 3.86 (t, 2H), 3.82-3.73 (m, 4H), 3.51-3.30 (m, 46H), 3.21 (s, 7H), 3.05-2.87 (m, 3H), 2.62 (t, 2H), 2.07 (d, 3H), 1.95 (s, 2H), 1.69 (s, 1H), 1.51-0.86 (m, 10H), 0.88-0.70 (m, 13H). MS (ESI) m/e 1010.6 (M-2H)2-.
2.152 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({[(2-{2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]에틸}-4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}프로파노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}[(3R,4S,5R)-3,4,5,6-테트라히드록시헥실]아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산 (신톤 YS)의 합성
2.152.1 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)에틸)벤질)옥시)카르보닐)((3R,4S,5R)-3,4,5,6-테트라히드록시헥실)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.97.8에서 실시예 1.25를 실시예 1.77.2로 대체하고 실시예 2.97.7을 실시예 2.123.19로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1417 (M+H)+, 1415 (M-H)+.
2.152.2 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({[(2-{2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]에틸}-4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}프로파노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}[(3R,4S,5R)-3,4,5,6-테트라히드록시헥실]아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산
실시예 2.54에서 실시예 2.49.1을 실시예 2.152.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 9.85 (m, 1H), 8.18 (t, 2H), 7.96 (d, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.46-7.25 (m, 8H), 7.21 (s, 1H), 7.15 (d, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.99 (d, 1H), 6.88 (d, 1H), 4.95 (bs, 2H), 4.88 (s, 2H), 4.32 (m, 1H), 4.15 (t, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.82 (t, 2H), 3.72 (m, 4H), 3.58-3.29 (m, 6H), 3.19 (m, 4H), 3.11-3.00 (m, 6H), 2.97 (t, 2H), 2.91 (t, 2H), 2.72 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 2.04 (s, 3H), 2.02-1.85 (m, 3H), 1.54 (m, 4H), 1.44 (s, 1H), 1.33 (bs, 1H), 1.22 (m, 6H), 1.04 (m, 6H), 0.86 (m, 2H), 0.77 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1554 (M+H)+, 1552 (M-H)-.
2.153 6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({[(2-{2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일]에틸}-4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)아미노]-3-메틸부타노일}아미노)프로파노일]아미노}벤질)옥시]카르보닐}[(3R,4S,5R)-3,4,5,6-테트라히드록시헥실]아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산 (신톤 YY)의 합성
실시예 2.119.15 (11 mg)를 N,N-디메틸포름아미드 (0.1 mL) 중에 용해시켰다. 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로포스페이트(V) (11 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (7.4 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 N,N-디메틸포름아미드 (0.2 mL) 중 실시예 2.152.1 (34 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (16.3 mg)의 또 다른 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 60분 동안 실온에서 교반하고 트리플루오로아세트산 (36 mg)으로 켄칭하였다. 혼합물을 물 (0.75 mL) 및 디메틸 술폭시드 (0.75 mL)로 희석하고, Luna 컬럼: C18(2), 100 A, 150 x 30 mm이 구비된 Grace Reveleris 상에서 30분에 걸쳐 물 (w/0.1% TFA) 중 10 내지 75% 아세토니트릴을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물 분획들을 풀링하고, 동결시키고, 및 동결건조시켜 표제 화합물을 트리플루오로아세트산 염으로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 9.85 (m, 1H), 8.18 (d, 1H), 8.05 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.53-7.39 (m, 8H), 7.36 (q, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.96 (d, 1H),5.18 (bs, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.65 (t, 1H), 4.37 (t, 1H), 4.19 (t, 1H), 4.16 (s, 1H), 4.01 (d, 2H), 3.89 (t, 2H), 3.78 (m, 4H), 3.73 (m, 2H), 3.49-3.44 (m, 4H), 3.40-3.20 (m, 8H), 3.24 (m, 4H), 3.17-3.07 (m, 4H), 3.02 (t, 2H), 2.95 (t, 2H), 2.76 (m, 4H), 2.62 (m, 1H), 2.37 (m, 1H), 2.09 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.86 (q, 1H), 1.62 (m, 4H), 1.38 (bs, 2H), 1.28 (m, 6H), 1.18-1.02 (m, 6H), 0.96 (m, 2H), 0.91-0.79 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1773 (M-H)-.
2.154 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일)-베타-알라닐-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 YT)의 합성
2.154.1 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)에틸)벤질)옥시)카르보닐)(2-술포에틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 중 실시예 1.2.9 (200 mg), 실시예 2.123.19 (288 mg), 및 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (50.2 mg)의 혼합물을 빙조에서 냉각하고, N,N-디이소프로필에틸아민 (143 L)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하고 농축하였다. 테트라히드로푸란 (0.5 mL) 및 메탄올 (0.5 mL)을 잔사에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 빙조에서 냉각하고 물 (2.5 mL) 중 수산화리튬 수화물 (147 mg)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 빙조에서 냉각하였다. pH가 6에 도달할 때까지 트리플루오로아세트산 (361 L)을 적가하였다. 혼합물을, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 35 내지 45% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 1375.5 (M-H)-.
2.154.2 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일)-베타-알라닐-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산
0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 중 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (5.22 mg), 실시예 2.154.1 (23.5 mg) 및 실시예 2.147.3 (24 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (23.84 L)을 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 35 내지 50% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.83 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 8.23-8.04 (m, 2H), 8.02 (dd, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.55-7.30 (m, 7H), 7.27 (s, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.07 (d, 2H), 6.93 (d, 1H), 5.07-4.88 (m, 4H), 4.47-4.32 (m, 3H), 4.22 (dt, 1H), 3.97-3.73 (m, 4H), 3.62-3.45 (m, 35H), 3.31 (t, 3H), 3.21 (s, 3H), 3.06 (d, 2H), 2.83-2.54 (m, 5H), 2.47-2.29 (m, 1H), 2.13-1.84 (m, 5H), 1.52 (d, 1H), 1.43-0.69 (m, 26H). MS (ESI) m/e 1043.0 (M-2H)2-.
2.155 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 YU)의 합성
2.155.1 3-(1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)프로판산
실시예 2.150.1을 2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)펜트-4-인산으로 대체하여, 실시예 2.150.2에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.
2.155.2 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산
실시예 2.150.2 및 실시예 2.112.2를 각각 실시예 2.155.1 및 실시예 2.154.1로 대체하여, 실시예 2.150.3에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.83 (s, 1H), 9.87 (d, 1H), 8.25-8.06 (m, 2H), 8.00 (d, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.54-7.28 (m, 6H), 7.25 (s, 1H), 7.18 (d, 1H), 6.98-6.85 (m, 3H), 5.09-4.89 (m, 4H), 4.76 (ddd, 1H), 4.36 (ddd, 3H), 4.17 (q, 1H), 3.84 (t, 2H), 3.76 (d, 2H), 3.72-3.66 (m, 2H), 3.49-3.44 (m, 37H), 3.20 (s, 5H), 3.01-2.82 (m, 3H), 2.13-1.81 (m, 5H), 1.52 (s, 1H), 1.39-0.50 (m, 23H). MS (ESI) m/e 1069.7 (M+2H)2+.
2.156 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{(3S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 YV)의 합성
실시예 2.155.2의 제조 동안 실시예 2.156을 순수한 부분입체이성체로서 단리하였다. (3-위치에서의 절대 배치의 지정은 임의적이다.) 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.82 (s, 1H), 9.85 (s, 1H), 8.08 (d, 2H), 8.03-7.95 (m, 2H), 7.75 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.51-7.29 (m, 6H), 7.24 (s, 1H), 7.18 (d, 1H), 6.95 (s, 2H), 6.91 (d, 1H), 5.59 (dd, 1H), 5.06-4.86 (m, 4H), 4.43 (dt, 2H), 4.32 (t, 1H), 4.11 (t, 1H), 3.84 (t, 2H), 3.75 (t, 3H), 3.55-3.41 (m, 43H), 3.41-3.36 (m, 2H), 3.19 (s, 5H), 3.10 (t, 1H), 3.03-2.86 (m, 3H), 2.59 (s, 3H), 2.13-1.82 (m, 6H), 1.52 (s, 1H), 1.37-0.65 (m, 26H). MS (ESI) m/e 1067.8 (M-2H)2-.
2.157 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{(3R)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 YW)의 합성
실시예 2.155.2의 제조 동안 실시예 2.157을 순수한 부분입체이성체로서 단리하였다. (3-위치에서의 절대 배치의 지정은 임의적이다.) 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.81 (s, 1H), 9.81 (s, 1H), 8.10 (d, 2H), 8.00 (d, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.51-7.28 (m, 6H), 7.24 (s, 1H), 7.18 (d, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.91 (d, 1H), 5.59 (t, 1H), 5.06-4.87 (m, 4H), 4.46-4.26 (m, 2H), 4.12 (d, 1H), 3.84 (t, 2H), 3.75 (d, 3H), 3.46 (d, 27H), 3.40-3.36 (m, 2H), 3.19 (s, 5H), 3.01-2.85 (m, 3H), 2.60 (s, 3H), 1.99 (d, 4H), 1.52 (s, 1H), 1.35-0.65 (m, 23H). MS (ESI) m/e 1067.8 (M-2H)2-.
2.158 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{(3S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(3-술포프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 ZB)의 합성
2.158.1 소듐 3-아지도프로판-1-술포네이트
물 (25 mL) 중 소듐 아지드 (3.25 g)의 혼합물에 아세톤 (25mL) 중 1, 2-옥사티올란 2,2-디옥시드 (6.1 g)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하고 건조 상태까지 농축하였다. 고형물을 디에틸 에테르 (100 mL) 중에 현탁시키고 환류에서 1시간 동안 교반하였다. 현탁액을 실온까지 냉각하고, 여과에 의해 고형물을 수집하고, 아세톤 및 디에틸 에테르로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 얻었다. MS (LC-MS) m/e 164 (M-H)-.
2.158.2 이소프로필 3-아지도프로판-1-술포네이트
진한 HCl (90 mL) 중 실시예 2.158.1 (6.8 g)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 건조 상태까지 농축하였다. 잔사를 디클로로메탄(350 mL) 중에 용해시키고, 트리이소프로폭시메탄 (42.0 mL)을 혼합물에 한꺼번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고 건조 상태까지 농축하였다. 조질 잔사를, 10/1 석유 에테르/에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): 1.42 (s, 3H), 1.44 (s, 3H), 2.08-2.15 (m, 2H), 3.17 (t, 2H), 3.51 (t, 2H), 4.95-5.01 (m, 1H).
2.158.3 3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-(1-(3-술포프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)프로판산
t-부탄올/H2O (2:1, 9 mL) 중 실시예 2.150.1 (450 mg)의 혼합물에 실시예 2.158.2 (483 mg)를 첨가한 후에 황산구리(II) (18.59 mg) 및 소듐 (R)-2-((S)-1,2-디히드록시에틸)-4-히드록시-5-옥소-2,5-디히드로푸란-3-올레이트 (46.2 mg)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 혼합물을 건조 상태까지 농축하였다. 잔사를, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H-NMR (디메틸 술폭시드-d 6 , 400 MHz): 2.06-2.10 (m, 2H), 2.45-2.48 (m, 2H), 3.21-3.23 (m, 2H), 4.40-4.44 (m, 2H), 5.55-5.59 (m, 1H), 7.05 (s, 2H), 8.10 (s, 1H). MS (LCMS) m/e 359 (M+H)+.
2.158.4 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{(3S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(3-술포프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산
실시예 2.150.2 및 실시예 2.112.2를 각각 실시예 2.158.3 및 실시예 2.154.1로 대체하여, 실시예 2.150.3에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 화합물을 순수한 부분입체이성체로서 단리하였다. (3-위치의 절대 배치는 임의로 지정되었다.) 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 10.14-9.66 (m, 1H), 8.07 (d, 2H), 8.04-7.96 (m, 2H), 7.75 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.52-7.29 (m, 7H), 7.26 (s, 1H), 7.18 (d, 1H), 6.92 (d, 3H), 5.58 (t, 1H), 5.09-4.84 (m, 4H), 4.35 (dt, 3H), 4.15-4.02 (m, 1H), 3.89-3.65 (m, 4H), 3.28 (d, 1H), 3.21 (dd, 2H), 3.14-3.02 (m, 2H), 3.01-2.86 (m, 4H), 2.62 (d, 3H), 2.37 (t, 2H), 2.29 (s, 0H), 2.02 (dt, 5H), 1.52 (s, 1H), 1.40-0.59 (m, 24H). MS (ESI) m/e 1715.3 (M-H)-.
2.159 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-[(N-{(3R)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-[1-(3-술포프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로파노일}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 ZC)의 합성
실시예 2.158의 제조 동안 실시예 2.159를 순수한 부분입체이성체로서 단리하였다. (3-위치의 절대 배치는 임의로 지정되었다.) 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.97 (d, 1H), 8.21 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.04-7.96 (m, 2H), 7.75 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.55-7.37 (m, 4H), 7.36-7.25 (m, 3H), 7.17 (d, 1H), 6.98 (s, 2H), 6.93 (d, 1H), 5.58 (t, 1H), 4.94 (d, 4H), 4.50-4.26 (m, 3H), 4.10 (s, 1H), 3.98-3.73 (m, 3H), 3.51 (d, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.34-3.01 (m, 6H), 3.01-2.83 (m, 4H), 2.63 (d, 4H), 2.42 (d, 1H), 2.18-1.80 (m, 8H), 1.53 (s, 1H), 1.39-0.68 (m, 27H). MS (ESI) m/e 1715.4 (M-H)-.
2.160 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-[2-(2-술포에톡시)에틸]-베타-알라닐-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 ZJ)의 합성
2.160.1 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 2-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에톡시)에탄술포네이트
20℃에서 디메틸 술폭시드 (0.9 mL) 중 tert-부틸 (2-히드록시에틸)카르바메이트 (433 mg)의 혼합물에 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 에텐술포네이트 (500 mg) 및 K2CO3 (210 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃까지 가온하고 뚜껑 닫힌 병에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 페트롤 에테르/ 에틸 아세테이트 (10:1 내지 2:1)로 융출시키는, 실리카겔 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 630.3 (M+Na) +.
2.160.2 4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부틸 2-(2-아미노에톡시)에탄술포네이트
20℃에서 무수 디클로로메탄 (100 mL) 중 실시예 2.160.1 (1.5 g)의 혼합물에 브롬화아연(II) (0.445 g)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 추가의 브롬화아연(II) (278 mg)을 상기 혼합물에 첨가하고, 반응물을 추가로 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 1 M 수성 Na2CO3 혼합물(5 mL)로 켄칭하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 디클로로메탄/메탄올 (10:1)로 용출시키는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 508.2 (M+H)+.
2.160.3 tert-부틸 3-((2-(2-((4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에톡시)에틸)아미노)프로파노에이트
N, N-디메틸포름아미드 (5.5 mL) 및 물 (0.55 mL) 중 실시예 2.160.2 (0.365 g)의 혼합물에 tert-부틸 아크릴레이트 (0.105 mL) 및 트리에틸아민 (10.02 L)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 30시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하였다. 잔사를 1 M 수성 Na2CO3 혼합물 (5 mL)과 혼합하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 디클로로메탄/ 에틸 아세테이트( 3:1) 및 디클로로메탄 /메탄올 (10:1)로 용출시키는, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 636.3 (M+H)+.
2.160.4 tert-부틸 3-(N-(2-(2-((4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에톡시)에틸)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세트아미도)프로파노에이트
0℃에서 N, N-디메틸포름아미드 (1.75 mL) 중 실시예 2.160.3 (557.5 mg), 2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세트산 (272 mg) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (667 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.459 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl 혼합물과 혼합하고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 잔사를, 석유 에테르/ 에틸 아세테이트 (2/1)로 용출시키는, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 795.3 (M+Na) +.
2.160.5 3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N-(2-(2-술포에톡시)에틸)아세트아미도)프로판산
디클로로메탄 (4 mL) 중 실시예 2.160.4 (230 mg)의 혼합물에 트리플루오로아세트산 (3 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하고 농축하였다. 잔사를, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 80% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (LC-MS) m/e 379.0 (M+Na)+.
2.160.6 2-(2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N-(3-((2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-3-옥소프로필)아세트아미도)에톡시)에탄-1-술폰산
N,N-디메틸포름아미드 중 1-히드록시피롤리딘-2,5-디온 (16.43 mg), 실시예 2.160.5 (30 mg), 1-에틸-3-[3-(디메틸아미노)프로필]-카르보디이미드 히드로클로라이드 (45.6 mg)의 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 2 내지 30% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 475.9(M+H)+.
2.160.7 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-[2-(2-술포에톡시)에틸]-베타-알라닐-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산
0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.8 mL) 중 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (4.45 mg), 실시예 2.160.6 (8.97 mg) 및 실시예 2.154.1 (20 mg)의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (20 L 적가)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 30 내지 55% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 12.87 (s, 1H), 9.88 (d, 1H), 8.28-8.10 (m, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.56-7.31 (m, 7H), 7.28 (s, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.06 (d, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.06-4.90 (m, 4H), 4.38 (q, 3H), 4.28-4.11 (m, 1H), 3.87 (t, 2H), 3.79 (d, 2H), 3.71-3.49 (m, 5H), 3.21 (d, 2H), 3.12 (q, 2H), 2.97 (dt, 3H), 2.84-2.57 (m, 6H), 2.38 (dd, 1H), 2.13-1.86 (m, 5H), 1.55 (s, 1H), 1.39-0.64 (m, 25H). MS (ESI) m/e 867.6 (M-2H)2-.
2.161 6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-[1-({3-[2-({[(2-{2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시옥산-2-일]에틸}-4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[(2S)-2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3-{4-[(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일)옥시]페닐}프로파노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}프로파노일]아미노}페닐)메톡시]카르보닐}[(3R,4S,5R)-3,4,5,6-테트라히드록시헥실]아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산 (신톤 ZE)의 합성
실시예 2.153에서 실시예 2.119.15를 실시예 2.120.5로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 12.84 (bs, 2H), 9.92 (m, 1H), 8.26 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.52-7.41 (m, 4H), 7.36 (m, 3H), 7.27 (s, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.02 (d, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.89 (s, 2H), 6.78 (d, 2H), 5.02 (bs, 4H), 4.96 (s, 2H), 4.59 (dd, 1H), 4.38 (m, 2H), 4.21 (t, 1H), 3.99 (t, 2H), 3.88 (t, 2H), 3.79 (m, 2H), 3.69 (t, 2H), 3.64 (m, 1H), 3.57 (m, 4H), 3.53 (m, 4H), 3.50 (s, 40H), 3.42 (m, 2H), 3.38 (m, 1H), 3.30 (m, 2H), 3.23 (s, 6H), 3.20-3.08 (m, 6H), 3.01 (t, 2H), 2.94 (t, 1H), 2.76 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 2.06-1.92 (m, 2H), 1.67-1.52 (m, 3H), 1.38 (m, 1H), 1.32-1.22 (m, 6H), 1.18-1.01 (m, 6H), 0.92 (m, 2H), 0.84 (m, 6H), 0.78 (m, 6H). MS (ESI) m/e 1078 (M-2H)-.
2.162 4-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일)옥시]에틸}[(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일)옥시]메틸}-3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세트아미도]에톡시}에톡시)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 ZS)의 합성
2.162.1 3-(1-((3-(2-((((2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.49.1에서 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 실시예 2.62.6으로 대체하고 실시예 1.2.9를 실시예 1.85로 대체하여 실시예 2.162.1을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1261.4 (M-H)-.
2.162.2 4-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}[(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일)옥시]메틸}-3-(2-{2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세트아미도]에톡시}에톡시)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.54에서 실시예 2.49.1을 실시예 2.162.1로 대체하여 실시예 2.162.2를 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 8.18 (t, 1H), 8.00 (dd, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.58 (dd, 1H), 7.50-7.29 (m, 6H), 7.26 (s, 1H), 7.17 (d, 1H), 7.03 (s, 2H), 6.92 (d, 1H), 6.64 (d, 1H), 6.57 (dd, 1H), 4.94 (d, 4H), 4.08 (hept, 2H), 4.00 (s, 2H), 3.92-3.68 (m, 8H), 3.51-3.13 (m, 12H), 2.98 (t, 2H), 2.06 (s, 3H), 1.65 (s, 1H), 1.43-0.66 (m, 18H). MS (ESI) m/e 1398.5 (M-H)-.
2.163 2,6-언히드로-8-[2-({[{2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일)옥시]에틸}(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)-5-{[(79S,82S)-74-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-82-메틸-77,80,83-트리옥소-79-(프로판-2-일)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사-74,78,81-트리아자트리옥타콘탄-83-일]아미노}페닐]-7,8-디데옥시-L-글리세로-L-굴로-옥톤산 (신톤 ZW)의 합성
2.163.1 벤질 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53, 56,59,62, 65,68,71-테트라코사옥사-74-아자헵타헵타콘탄-77-오에이트
2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-아민을 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사트리헵타콘탄-73-아민으로 대체하여, 실시예 2.147.1에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 625.9 (M+2H)2+.
2.163.2 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59, 62,65,68,71-테트라코사옥사-74-아자헵타헵타콘탄-77-오익 산
실시예 2.147.1을 실시예 2.163.1로 대체하여, 실시예 2.147.2에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1160.7 (M+H)+.
2.163.3 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 74-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44, 47,50,53, 56,59,62,65,68,71-테트라코사옥사-74-아자헵타헵타콘탄-77-오에이트
실시예 2.147.2를 실시예 2.163.2로 대체하여, 실시예 2.147.3에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 698.1(M+2H)2+.
2.163.4 2,6-언히드로-8-[2-({[{2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)-5-{[(79S,82S)-74-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-82-메틸-77,80,83-트리옥소-79-(프로판-2-일)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38, 41,44,47,50,53,56, 59,62,65,68,71-테트라코사옥사-74,78,81-트리아자트리옥타콘탄-83-일]아미노}페닐]-7,8-디데옥시-L-글리세로-L-굴로-옥톤산
실시예 2.147.3 및 실시예 2.141.4를 각각 실시예 2.163.3 및 실시예 2.154.1로 대체하여, 실시예 2.147.4에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.86 (s, 1H), 8.23-7.87 (m, 3H), 7.76 (d, 1H), 7.58 (dd, 1H), 7.53-7.25 (m, 7H), 7.19 (d, 1H), 7.05 (d, 2H), 6.92 (d, 1H), 5.07-4.85 (m, 4H), 4.49-4.30 (m, 3H), 4.20 (dt, 1H), 3.52 (d, 8H), 3.46-3.26 (m, 7H), 3.20 (s, 4H), 3.15-2.82 (m, 4H), 2.61 (s, 3H), 2.38 (dq, 1H), 2.11-1.82 (m, 5H), 1.53 (s, 1H), 1.39-0.66 (m, 24H). MS (ESI) m/e 1326.9 (M-2H)2-.
2.164 6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3-{2-[{[(4-{[(2S,5S)-2-[3-(카르바모일아미노)프로필]-10-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-4,7-디옥소-5-(프로판-2-일)-15-술포-13-옥사-3,6,10-트리아자펜타데카난-1-오일]아미노}페닐)메톡시]카르보닐}(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 ZX)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (0.3 mL) 중 1-히드록시피롤리딘-2,5-디온 (2.74 mg), 1-에틸-3-[3-(디메틸아미노)프로필]-카르보디이미드 히드로클로라이드 (4.26 mg) 및 실시예 2.160.5 (9.01 mg)의 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 혼합물을 빙조에서 냉각하였다. 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (3.65 mg) 및 실시예 2.112.2 (20 mg)와 N,N-디이소프로필에틸아민 (22.19 L)의 혼합물을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하고, 0.1% 트리플루오로아세트산 물 중 30% 내지 55% 아세토니트릴로 용출시키는, 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.95 (d, 1H), 8.18-7.89 (m, 3H), 7.76 (d, 1H), 7.57 (d, 3H), 7.52-7.21 (m, 8H), 7.04 (d, 2H), 6.92 (d, 1H), 4.94 (d, 4H), 4.37 (d, 2H), 4.19 (d, 1H), 3.85 (t, 2H), 3.77 (d, 2H), 3.22 (d, 2H), 2.96 (dt, 4H), 2.73 (dt, 2H), 2.66-2.55 (m, 2H), 2.36 (s, 1H), 2.06 (s, 3H), 1.91 (s, 1H), 1.61 (d, 3H), 1.47-0.86 (m, 11H), 0.80 (ddd, 12H). MS (ESI) m/e 1617.5 (M-H)-.
2.165 이 단락은 의도적으로 비워 두었다.
2.166 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)에틸)-4-((S)-2-((S)-2-(2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-((2-술포에톡시)메틸)피롤리딘-1-일)아세트아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (신톤 AAA)의 합성
실시예 2.119.17에서 실시예 2.119.16을 실시예 2.167.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 9.86 (br d, 1H), 8.17 (br d, 1H), 8.04 (m, 2H), 7.78 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.51 (br d, 1H), 7.49-7.39 (m, 4H), 7.36 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.07 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.64 (t, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.19 (m, 1H), 4.16 (d, 1H), 4.01 (d, 1H), 3.88 (br t, 2H), 3.82 (br m, 3H), 3.75 (br m, 1H), 3.64 (t, 2H), 3.54 (d, 2H), 3.47 (m, 4H), 3.43 (br m, 4H), 3.23 (br m, 5H), 3.13 (t, 1H), 3.10 (br m, 1H), 3.01 (br m, 2H), 2.93 (t, 1H), 2.83-2.68 (m, 3H), 2.37 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.99 (br m, 2H), 1.85 (m, 1H), 1.55 (br m, 1H), 1.37 (br m, 1H), 1.28 (br m, 6H), 1.10 (br m, 7H), 0.93 (br m, 1H), 0.88-0.69 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1713.6 (M-H)-.
6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)에틸)-4-((S)-2-((S)-2-(2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-((2-술포에톡시)메틸)피롤리딘-1-일)아세트아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (신톤 AAA)의 대안적인 합성
2.166.1 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)에틸)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 중 실시예 1.85 (0.065 g), 1-히드록시벤조트리아졸 (0.013 g) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.06 mL)의 교반된 용액에 실시예 2.123.19 (0.085 g)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에 농축하였다. 잔사를 메탄올 (0.5 mL) 및 테트라히드로푸란 (0.5 mL)의 용매 혼합물 중에 용해시키고, 수산화리튬 일수화물 (30 mg)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 주위 온도에서 교반한 후에, 반응물을 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 0.1 mL 트리플루오로아세트산을 함유하는 메탄올/물 (1:1, 1 ML) 중에 용해시켰다. 샘플을, 40분에 걸쳐 0.01% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 100% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 HPLC (Phenomenex Luna C18 250 x 50 mm 컬럼, 100 mL/min)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획들을 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/z 1357.5 (M+H)+.
2.166.2 6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)-3-(1-((3-(2-((((2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)에틸)-4-((S)-2-((S)-2-(2-((3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-((2-술포에톡시)메틸)피롤리딘-1-일)아세트아미도)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피콜린산 (신톤 AAA)
N,N-디메틸포름아미드 (200 L) 중 실시예 2.119.15 (16 mg)의 용액에 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (16 mg, HATU) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (17 L)을 첨가하였다. 반응물을 5분 동안 교반하고, N,N-디메틸포름아미드 (200 L) 중 실시예 2.166.1 (48 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (20 L)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고,N,N-디메틸포름아미드/물 (1/1, 1.5 mL)의 혼합물로 희석하였다. 샘플을, 40분에 걸쳐 0.01% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중 20 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는 역상 HPLC (Phenomenex Luna C18 250 x 50 mm 컬럼, 100 mL/min)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획들을 동결건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.86 (br d, 1H), 8.17 (br d, 1H), 8.04 (m, 2H), 7.78 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.51 (br d, 1H), 7.49-7.39 (m, 4H), 7.36 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.07 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.64 (t, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.19 (m, 1H), 4.16 (d, 1H), 4.01 (d, 1H), 3.88 (br t, 2H), 3.82 (br m, 3H), 3.75 (br m, 1H), 3.64 (t, 2H), 3.54 (d, 2H), 3.47 (m, 4H), 3.43 (br m, 4H), 3.23 (br m, 5H), 3.13 (t, 1H), 3.10 (br m, 1H), 3.01 (br m, 2H), 2.93 (t, 1H), 2.83-2.68 (m, 3H), 2.37 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.99 (br m, 2H), 1.85 (m, 1H), 1.55 (br m, 1H), 1.37 (br m, 1H), 1.28 (br m, 6H), 1.10 (br m, 7H), 0.93 (br m, 1H), 0.88-0.69 (m, 12H). MS (ESI) m/z 1713.6 (M-H)-.
2.167 2,6-언히드로-8-(2-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}[(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일)옥시]메틸}-5-{[(2S)-2-({(2S)-2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세트아미도]-3-메틸부타노일}아미노)프로파노일]아미노}페닐)-7,8-디데옥시-L-글리세로-L-굴로-옥톤산 (신톤 AAD)의 합성
2.167.1 3-(1-((3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)-2-(2-((2S,3R,4R,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)에틸)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.49.1에서 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 실시예 2.123.19으로 대체하고 실시예 1.2.9를 실시예 1.85로 대체하여 실시예 2.167.1을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1355.5 (M-H)-.
2.167.2 2,6-언히드로-8-(2-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}[(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일)옥시]메틸}-5-{[(2S)-2-({(2S)-2-[2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세트아미도]-3-메틸부타노일}아미노)프로파노일]아미노}페닐)-7,8-디데옥시-L-글리세로-L-굴로-옥톤산
실시예 2.54에서 실시예 2.49.1을 실시예 2.167.1로 대체하여 실시예 2.167.2를 제조하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 9.90 (d, 1H), 8.25 (m, 2H), 8.01 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.51-7.40 (m, 4H), 7.40-7.31 (m, 3H), 7.26 (s, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.05 (s, 2H), 6.93 (d, 1H), 4.96 (d, 4H), 4.36 (t, 1H), 4.22-4.06 (m, 3H), 3.85 (t, 2H), 3.26-3.17 (m, 4H), 3.14-2.88 (m, 5H), 2.78-2.55 (m, 2H), 2.10-1.88 (m, 5H), 1.69-1.49 (m, 2H), 1.39-0.73 (m, 28H). MS (ESI) m/e 1492.5 (M-H)-.
2.168 2-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}[(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일)옥시]메틸}-5-{4-[2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세트아미도]부틸}페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 AAE)의 합성
2.168.1 3-(1-((3-(2-((((4-(4-아미노부틸)-2-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-카르복시-3,4,5-트리히드록시테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)벤질)옥시)카르보닐)((S)-3,4-디히드록시부틸)아미노)에톡시)-5,7-디메틸아다만탄-1-일)메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-(8-(벤조[d]티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피콜린산
실시예 2.49.1에서 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 실시예 2.124.5로 대체하고 실시예 1.2.9를 실시예 1.85로 대체하여 실시예 2.168.1을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1229.5 (M-H)-.
2.168.2 2-{[({2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}[(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일)옥시]메틸}-5-{4-[2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세트아미도]부틸}페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산
실시예 2.54에서 실시예 2.49.1을 실시예 2.168.1로 대체하여 실시예 2.168.2를 제조하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ 8.07 (s, 1H), 8.01 (dt, 1H), 7.77 (dt, 1H), 7.63-7.57 (m, 1H), 7.51-7.39 (m, 3H), 7.38-7.31 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 7.16 (d, 1H), 7.05 (s, 2H), 6.93 (d, 2H), 6.84-6.80 (m, 1H), 5.14-4.98 (m, 3H), 4.94 (s, 2H), 3.79 (d, 2H), 3.48-3.19 (m, 10H), 3.08-2.96 (m, 4H), 2.52 (s, 4H), 2.07 (s, 2H), 1.77-0.72 (m, 14H). MS (ESI) m/e 1366.5 (M-H)-.
2.169 6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3-{2-[{[(4-{[(2S)-5-(카르바모일아미노)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]아미노}-3-메틸부타노일]아미노}펜타노일]아미노} 페닐)메톡시]카르보닐}(2-술포에틸)아미노]아세트아미도}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산 (신톤 ABG)의 합성
실시예 2.49.1을 실시예 1.89.12로 대체하여 실시예 2.54에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (501 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6) δ ppm 9.95 (d, 1H), 8.10-7.96 (m, 1H), 7.75 (t, 2H), 7.57 (dd, 3H), 7.51-7.18 (m, 8H), 6.95 (d, 3H), 6.92 (s, 0H), 5.03-4.86 (m, 4H), 4.36 (d, 1H), 3.85 (t, 2H), 3.78-3.67 (m, 4H), 3.42 (s, 2H), 3.33 (t, 2H), 3.04-2.86 (m, 4H), 2.63 (d, 2H), 2.13 (dd, 1H), 2.07 (s, 3H), 1.98-1.87 (m, 0H), 1.71-1.23 (m, 10H), 1.24-0.85 (m, 6H), 0.78 (t, 11H). MS (ESI) m/e 1463.5 (M-H)-.
2.170 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-{4-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}술파닐)에틸](2-술포에틸)카르바모일}옥시)메틸]페닐}-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 ABL)의 합성
실시예 2.1에서 실시예 1.2.9를 실시예 1.90.11로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 10.0 (s, 1H), 8.08 (br s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.81 (br s, 1H) 7.78 (d, 1H), 7.60 (m, 3H) 7.52 (t, 1H), 7.47 (t, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.37 (d, 1H), 7.34 (d, 1H) 7.32 (s, 1H), 7.28 (d, 2H), 6.99 (s, 1H), 6.96 (d, 2H), 5.00 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.39 (m, 1H), 4.18 (m, 2H), 3.88 (m, 2H), 3.82 (s, 1H), 3.77 (s, 1H), 3.46 (br m, 2H), 3.58 (t, 2H), 3.29 (v br m, 2H), 3.01 (br m, 3H), 2.95 (br m, 1H), 2.47 (m, 2H), 2.61 (br m, 2H) 2.16 (m, 1H), 2.10 (m, 4H), 1.96 (br m, 1H), 1.69 (v br m, 1H), 1.59 (v br m, 1H), 1.53-1.40 (m, 7H), 1.39-1.22 (m, 5H), 1.17 (m, 3H), 1.13-0.88 (m, 6H), 0.87-0.77 (m, 9H), 0.75 (s, 3H). MS (ESI) m/e 1466.5 (M-H)-.
2.171 N-[6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일]-L-발릴-N-[4-({[(3-{3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}프로필)(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-N5-카르바모일-L-오르니틴아미드 (신톤 ABN)의 합성
실시예 1.2.9를 실시예 1.91.13으로 대체하여 실시예 2.1에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (501 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.83 (s, 1H), 9.96 (s, 1H), 8.03 (t, 2H), 7.77 (d, 2H), 7.64-7.52 (m, 3H), 7.45 (ddd, 3H), 7.34 (td, 2H), 7.29-7.21 (m, 3H), 7.03-6.91 (m, 3H), 4.95 (d, 4H), 4.37 (q, 1H), 4.17 (s, 1H), 3.86 (t, 2H), 3.45-3.29 (m, 4H), 3.10 (t, 2H), 2.95 (dt, 4H), 2.61 (q, 2H), 2.15 (td, 2H), 2.07 (s, 3H), 2.00-1.89 (m, 1H), 1.74-1.24 (m, 10H), 1.25-0.87 (m, 13H), 0.88-0.70 (m, 12H). MS (ESI) m/e 1450.2 (M+H)+.
2.172 2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일}옥시)메틸]-5-{4-[({(3S,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)아미노]부틸}페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산 (신톤 AAF)의 합성
실시예 2.119.16을 실시예 2.168.1로 대체하여, 실시예 2.119.17에 기재된 바와 같이 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 8.03 (d, 1H), 7.84 (br t, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.50 (br d, 1H), 7.45 (dd, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.36 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.17 (br m, 1H), 7.06 (s, 2H), 6.95 (m, 2H), 6.85 (d, 1H), 5.08 (s, 2H), 5.02 (d, 1H), 4.96 (s, 2H), 4.70 (t, 1H), 4.06 (d, 2H), 3.88 (m, 4H), 3.81 (m, 2H), 3.73 (br m, 1H), 3.62 (m, 2H), 3.47 (br m, 4H), 3.40 (m, 4H), 3.35 (m, 2H), 3.29 (m, 4H), 3.07 (m, 2H), 3.00 (t, 2H), 2.73 (m, 2H), 2.54 (m, 2H), 2.36 (br m, 1H), 2.09 (s, 3H), 1.83 (m, 1H), 1.71 (br m, 1H), 1.55 (br m, 2H), 1.40 (br m, 5H), 1.24 (br m, 4H), 1.10 (br m, 5H), 0.94 (br m, 1H), 0.83, 0.81 (both s, total 6H). MS (ESI) m/e 1587.5 (M-H)-.
2.173 2,6-언히드로-8-[2-({[{2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)-5-{[N-({(3R,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-L-알라닐]아미노}페닐]-7,8-디데옥시-L-글리세로-L-굴로-옥톤산 (신톤 ABO)의 합성
2.173.1 (3R,6R,7aS)-6-아지도-3-페닐테트라히드로피롤로[1,2-c]옥사졸-5(3H)-온
실시예 2.119.4에서 실시예 2.119.2를 실시예 2.119.3으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (DCI) m/e 262.0 (M+NH4)+.
2.173.2 (3R,6R,7aS)-6-아미노-3-페닐테트라히드로피롤로[1,2-c]옥사졸-5(3H)-온
실시예 2.119.5에서 실시예 2.119.4를 실시예 2.173.1로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (DCI) m/e 219.0 (M+H)+.
2173.3 (3R,6R,7aS)-6-(디벤질아미노)-3-페닐테트라히드로피롤로[1,2-c]옥사졸-5(3H)-온
실시예 2.119.6에서 실시예 2.119.5를 실시예 2.173.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (DCI) m/e 399.1 (M+H)+.
2.173.4 (3R,5S)-3-(디벤질아미노)-5-(히드록시메틸)피롤리딘-2-온
반응물을 6일이 아니라 1일 동안 65℃까지 가열한 점을 제외하고는 실시예 2.119.7에서 실시예 2.119.6을 실시예 2.173.3으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (DCI) m/e 311.1 (M+H)+.
2.173.5 (3R,5S)-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-(디벤질아미노)피롤리딘-2-온
실시예 2.119.8에서 실시예 2.119.7을 실시예 2.173.4로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 표제 화합물을 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS (DCI) m/e 425.2 (M+H)+.
2.173.6 tert-부틸 2-((3R,5S)-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-3-(디벤질아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
실시예 2.119.9에서 실시예 2.119.8을 실시예 2.173.5로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 표제 화합물을 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS (DCI) m/e 539.3 (M+H)+.
2.173.7 tert-부틸 2-((3R,5S)-3-(디벤질아미노)-5-(히드록시메틸)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
실시예 2.119.10에서 실시예 2.119.9를 실시예 2.173.6으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (DCI) m/e 425.2 (M+H)+.
2.173.8 tert-부틸 2-((3R,5S)-5-((2-((4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에톡시)메틸)-3-(디벤질아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
실시예 2.119.11에서 실시예 2.119.10을 실시예 2.173.7로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다.
2.173.9 tert-부틸 (S)-2-(2-((2-((4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에톡시)메틸)-5-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
실시예 2.119.12에서 실시예 2.119.11을 실시예 2.173.8로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 691.1 (M+H)+.
2.173.10 4-(((3R,5S)-1-(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)-5-((2-((4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에톡시)메틸)-2-옥소피롤리딘-3-일)아미노)-4-옥소부트-2-엔산
실시예 2.119.13에서 실시예 2.119.12를 실시예 2.173.9로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 789.0 (M+H)+.
2.173.11 tert-부틸 2-((3R,5S)-5-((2-((4-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸부톡시)술포닐)에톡시)메틸)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세테이트
실시예 2.119.14에서 실시예 2.119.13을 실시예 2173.10으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다.
2.173.12 2-((3R,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-((2-술포에톡시)메틸)피롤리딘-1-일)아세트산
실시예 2.119.15에서 실시예 2.119.14를 실시예 2.173.11로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 377.0 (M+H)+.
2.173.13 2,6-언히드로-8-[2-({[{2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)-5-{[N-({(3R,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-[(2-술포에톡시)메틸]피롤리딘-1-일}아세틸)-L-발릴-L-알라닐]아미노}페닐]-7,8-디데옥시-L-글리세로-L-굴로-옥톤산
실시예 2.119.17에서 실시예 2.119.16을 실시예 2.123.20으로 대체하고 실시예 2.119.15를 실시예 2.173.12로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 9.94 (d, 1H), 8.28 (br d, 1H), 8.01 (d, 2H), 7.77 (d, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.43 (m, 4H), 7.34 (m, 3H), 7.19 (d, 1H), 7.06 (s, 2H), 6.96 (d, 1H), 4.99 (m, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.78 (t, 1H), 4.36 (t, 1H), 4.19 (br m, 1H), 4.16 (d, 1H), 3.98 (d, 1H), 3.87 (br t, 2H), 3.81 (br d, 2H), 3.73 (brm, 1H), 3.63 (t, 2H), 3.53 (m, 2H), 3.44 (m, 4H), 3.31 (t, 2H), 3.21 (br m, 2H), 3.17 (m, 2H), 3.00 (m, 2H), 2.92 (br m, 1H), 2.75 (m, 3H), 2.65 (br m, 3H), 2.35 (br m, 1H), 2.16 (m, 1H), 2.07 (s, 3H), 1.98 (br m, 2H), 1.55 (br m, 1H), 1.34 (br m, 1H), 1.26 (br m, 6H), 1.09 (br m, 7H), 0.93 (br m, 1H), 0.87, 0.83, 0.79 (all d, total 12H). MS (ESI) m/e 1733.3 (M-H)-.
2.174 2,6-언히드로-8-{2-({[{2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1H-피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)옥시]에틸}(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)-5-[(N-{[(3R,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-(41-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카옥사-42-아자트리테트라콘탄-43-일)피롤리딘-1-일]아세틸}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}-7,8-디데옥시-L-글리세로-L-굴로-옥톤산 (신톤 ABM)의 합성
2.174.1 tert-부틸 [(3R,5S)-5-{[비스(tert-부톡시카르보닐)아미노] 메틸}-3-(디벤질아미노)-2-옥소피롤리딘-1-일]아세테이트
디클로로메탄 (15 mL) 중 실시예 2.173.7 (1.6 g)의 차가운 (0℃) 용액에 트리에틸아민 (0.70 mL) 및 메탄술포닐 클로라이드 (0.39 mL)를 적가하였다. 빙조를 제거하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 중탄산나트륨 포화 수용액을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 층을 분리하고 유기 층을 염수로 세척하였다. 합한 수성 층을 디클로로메탄으로 역추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 중간체 메실레이트 (1.9 g)를 제공하였다. 잔사를 아세토니트릴 (15 mL) 중에 용해시키고, 디-tert-부틸-이미노디카르복실레이트 (1.0 g) 및 탄산세슘 (2.4 g)를 첨가하였다. 반응물을 질소 하에 1일 동안 환류까지 가열하였다. 반응물을 냉각하고 물 및 디에틸 에테르를 첨가하여 켄칭하였다. 층을 분리하고 유기물을 염수로 세척하였다. 합한 수성 층을 디에틸 에테르로 역추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 잔사를, 헵탄 중 20% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 624.3 (M+H)+.
2.174.2 tert-부틸 [(3R,5S)-3-아미노-5-{[비스(tert-부톡시카르보닐) 아미노]메틸}-2-옥소피롤리딘-1-일]아세테이트
에틸 아세테이트 (6 mL) 및 메탄올 (18 mL) 중 실시예 2.174.1 (1.0 g)의 용액에 탄소 상 수산화팔라듐 (100 mg, 20 중량%)을 첨가하였다. 반응물을 1일 동안 실온에서 수소 벌룬 하에 교반하였다. 에틸 아세테이트로 용출시켜, 반응물을 규조토를 통해 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축하고, 디클로로메탄 (10 mL) 중에 용해시키고, 주사기-팁 Teflon 40 마이크로미터 필터를 통해 여과하였다. 여과액을 감압 하에 농축하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (DCI) m/e 444.1 (M+H)+.
2.174.3 4-{[(3R,5S)-5-{[비스(tert-부톡시카르보닐)아미노]메틸}-1-(2-tert-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소피롤리딘-3-일]아미노}-4-옥소부트-2-엔산
실시예 2.119.13에서 실시예 2.119.12를 실시예 2.174.2로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 540.2 (M-H)-.
2.174.4 tert-부틸 [(3R,5S)-5-{[비스(tert-부톡시카르보닐)아미노] 메틸}-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소피롤리딘-1-일]아세테이트
실시예 2.119.14에서 실시예 2.119.13을 실시예 2.174.3으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (DCI) m/e 541.1 (M+NH4)+.
2.174.5 2-((3R,5S)-5-(아미노메틸)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소피롤리딘-1-일)아세트산
디클로로메탄 (10 mL) 중 실시예 2.174.4 (284 mg)의 용액에 트리플루오로아세트산 (5 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고 감압 하에 농축하였다. 잔사를 물/아세토니트릴 7/3 (5 mL) 중에 용해시키고, 동결하고 동결건조하여 표제 화합물을 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에서 사용하였다. MS (ESI) m/e 266.1 (M-H)-.
2.174.6 2-((3R,5S)-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-2-옥소-5-(41-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카옥사-42-아자트리테트라콘탄-43-일)피롤리딘-1-일)아세트산
N,N-디메틸포름아미드 (1.0 mL) 중 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카옥사헨테트라콘탄-41-오익 산 (160 mg)의 용액에 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (85 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (130 μL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 3분 동안 실온에서 교반하고, N,N-디메틸포름아미드 (1.0 mL) 중 실시예 2.174.5 (70 mg) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (130 μL)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하고 N,N-디메틸포름아미드/물 1/1 (3.5 mL)로 희석하였다. 용액을, 0.1% TFA 물 중 20 내지 70% 아세토니트릴로 용출시키는, Gilson 시스템 (C18 컬럼)에서의 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. MS (ESI) m/e 880.4 (M-H)-.
2.174.7 2,6-언히드로-8-{2-({[{2-[(3-{[4-(6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1 H )-일}-2-카르복시피리딘-3-일)-5-메틸-1 H -피라졸-1-일]메틸}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.1 3,7 ]데칸-1-일)옥시]에틸}(2-술포에틸)카르바모일]옥시}메틸)-5-[( N -{[(3 R ,5 S )-3-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1 H -피롤-1-일)-2-옥소-5-(41-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-트리데카옥사-42-아자트리테트라콘탄-43-일)피롤리딘-1-일]아세틸}-L-발릴-L-알라닐)아미노]페닐}-7,8-디데옥시-L- 글리세로 -L-굴로 -옥톤산
실시예 2.119.17에서 실시예 2.119.15를 실시예 2.174.6으로 대체하고 실시예 2.119.16을 실시예 2.123.20으로 대체하여 표제 화합물을 제조하였다.1H NMR (500 MHz, 디메틸 술폭시드-d 6 ) δ ppm 9.93 (br d, 1H), 8.28 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.02 (br s, 1H), 7.91 (br d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.51 (br d, 1H), 7.49-7.42 (m, 3H), 7.40 (br d, 1H), 7.36 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.06 (s, 2H), 6.95 (d, 1H), 5.00 (br d, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.70 (t, 1H), 4.39 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 4.00 (dd, 2H), 3.88 (br m, 2H), 3.85 (br m, 1H), 3.80 (br m, 2H), 3.62 (t, 2H), 3.50 (s, 44H), 3.48 (d, 4H), 3.43 (br m, 2H), 3.34 (br m, 2H), 3.23 (s, 3H), 3.21 (v br m, 2H), 3.14 (t, 2H), 3.10 (v br m, 1H), 3.00 (t, 2H), 2.94 (br m, 1H), 2.76 (v br m, 1H), 2.64 (v br m, 3H), 2.34 (br t, 2H), 2.32 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 2.09 (br d, 3H), 2.00 (br m, 1H), 1.56 (br m, 1H), 1.39-1.19 (br m, 8H), 1.19-0.92 (br m, 8H), 0.88 (br d, 3H), 0.87 (br m, 1H), 0.82 (br d, 6H), 0.79 (br s, 3H). MS (ESI) m/e 1119.2 [(M-2H)/2]-.
2.175 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-운데카옥사테트라트리아콘탄-34-일)-b-알라닐-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 ABU)의 합성
실시예 2.147.4를 실시예 2.167.1로 대체하여, 실시예 2.141.4에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 1033.4 (M+2H)2+.
2.176 (6S)-2,6-언히드로-6-(2-{2-[({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸][(3S)-3,4-디히드록시부틸]카르바모일}옥시)메틸]-5-({N-[(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)아세틸]-N-[2-(2-술포에톡시)에틸]-b-알라닐-L-발릴-L-알라닐}아미노)페닐}에틸)-L-굴론산 (신톤 ABV)의 합성
실시예 2.154.1을 실시예 2.167.1로 대체하여, 실시예 2.160.7에서의 절차를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI) m/e 859.4 (M+2H)2+.
실시예 3: 마우스 하이브리도마 기술에 의한 마우스 항-B7-H3 단클론 항체의 생성
B7-H3 특이적 항체를 마우스 하이브리도마 기술을 이용하여 발생시켰다. 구체적으로, 재조합 인간 또는 마우스 B7-H3-ECD-인간 Fc 융합 단백질뿐만 아니라 전장 인간 B7-H3을 발현하는 마우스 섬유모세포 세포주(3T12)도 면역원으로 사용하였으며, 이들의 서열은 표 1에 제공되어 있다. 인간 B7-H3을 발현하는 인간 HCT116 세포주를 항-혈청 역가의 결정 및 항원-특이적 항체의 스크리닝에 사용하였다. 세포주를 면역화 전에 대략 3000 mREM의 감마 방사선원에 노출시켰다. 일차 및 부스트 면역화 둘 다를 위하여 Gerbu MM 아쥬반트(미국 캘리포니아주 밸리 센터 소재의 Cooper-Casey Corporation)의 존재 하에 주사당 마우스당 5 x 106개의 세포 또는 주사당 마우스당 10 ug의 단백질을 함유하는 투약형을 이용하여 마우스의 2가지 상이한 주를 비절에서 면역화하였다. 마우스 B7-H3에 대한 면역 반응을 증가시키기 위하여, 최종 부스트를 위하여 인간 및 마우스 B7-H3-ECD-인간 Fc 단백질의 혼합물로 마우스를 추가로 부스트하였다. 간략하게는, 항원을 다음과 같이 PBS에서 제조하였다: 200 x 106개의 세포/mL 또는 400 ug/mL의 단백질. 계산된 부피의 항원을 살균 마이크로원심분리 튜브로 옮기고, 그 후 동일 부피의 Gerbu Mm을 첨가하였다. 상기 용액을 1분 동안 부드럽게 와동시킴으로써 혼합하였다. 그 후, 아쥬반트-항원 용액을 동물 주사를 위한 적당한 주사기 내로 뽑아냈다. 총 25 μL의 상기 혼합물을 마우스의 각각의 다리의 비절 내로 주사하였다. 각각의 동물을 군에 대하여 혈청 역가를 결정하기 전에 3회 부스트하였다. 융합 전에 아쥬반트 중 마우스 B7-H3-ECD-인간 Fc 및 인간 B7-H3-ECD-인간 Fc 단백질의 동등 혼합물을 이용하여 2회의 추가 부스트를 모든 동물에게 주었다.
[표 1]
Figure pct00427
Figure pct00428
하이브리도마 융합 및 스크리닝
쥐과 골수종 세포주(NS-0, ECACC 번호 85110503)의 세포를 배양하여 대수기 단계에 도달한 직후 융합하였다. 슬와 및 서혜부 림프절을 각각의 마우스로부터 제거하고, 단일 세포 현탁물을 살균 제조하였다. 림프구를 골수종 세포와 융합하였다(문헌[E. Harlow, D. Lane, Antibody: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1998]; 문헌[Kohler G. and Milstein C., "Continuous cultures of fused cell secreting antibody of predefined specificity,"Nature, 256:495-497 (1975)]; 문헌[BTX Harvard Apparatus (Holliston, MA, US) ECM 2001 technical manual)]). 융합된 하이브리드 세포를 DMEM/10%FBS/HAT 배지에서 96웰 플레이트 내로 분배하였다. 생존 하이브리도마 콜로니로부터의 상청액을 재조합 인간 B7-H3을 발현하는 인간 세포주를 사용하여 세포-기반 스크리닝하였다. 간략하게는, 인간 B7-H3을 발현하는 인간 세포주를 해동시키고, 성장 배지 중 웰당 50,000개의 세포로 96웰(영상화를 위하여 바닥이 투명한 블랙) 내로 직접적으로 분배하고, 37℃에서 2일 동안 인큐베이션하여 50% 밀집도(confluency)에 도달하였다. 하이브리도마 상청액(50 μL/웰)을 각각의 플레이트로 옮기고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 배지를 각각의 웰로부터 제거하고, 염소 항-마우스 IgG-AF488 (Invitrogen, 번호 A11029, 미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드 소재)을 InCell Analyzer 2000 (Ge)을 사용한 검출에 사용하였다. 히트(hit)들을 확장시키고, 검출을 위한 인간 B7-H3 및 염소 항-마우스 IgG-PE를 발현하는 상이한 인간 세포주 또는 마우스 세포주를 사용하여 FACS로 결합을 확인하였다. 하기 절차에 따라 ELISA 포맷을 이용하여 종 특이성을 결정하였다. ELISA 플레이트를 실온에서 하룻밤 인간 B7-H3-ECD-인간 Fc, 시노몰로구스 B7-H3-ECD-his, 또는 마우스 B7-H3-ECD-인간 Fc 단백질로 코팅하였다. 플레이트를 세척하고, 하이브리도마 수프(sup) (100 μL)를 각각의 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척하고, 당나귀 항-마우스 IgG-HRP (Jackson Immunochemicals, 번호 115-035-071, 미국 펜실베이니아주 웨스트 그로브 소재)를 검출에 사용하고, 결합 OD를 650 nm에서 관찰하였다.
히트를 선발한 것을, 웰당 단일 세포를 96웰 세포 배양 플레이트 내에 둠으로써 MoFlo (Beckman, 미국 인디애나주 인디애나폴리스 소재)를 이용하여 서브클로닝하여 세포주의 클론성을 보장하였다. 생성된 콜로니를 인간 B7-H3, 시노몰로구스 B7-H3 또는 마우스 B7-H3을 발현하는 마우스 3T12 섬유모세포 세포주를 사용하여 FACS에 의해 특이성에 대하여 스크리닝하였다. 각각의 단클론 항체의 이소타입을 Mouse Monoclonal Isostyping Kit (Roche, 번호 11-493-027-001, 미국 인디애나주 인디애나폴리스 소재)를 사용하여 결정하였다. 인간 및 시노몰구스 B7-H3 항원에 대하여 높은 특이적 결합 활성을 나타내는 항체를 생산하는 하이브리도마 클론을 서브클로닝하고 정제하였다(표 2).
[표 2]
Figure pct00429
실시예 4: 항-B7-H3 마우스 단클론 항체의 시험관 내에서의 특성화.
정제된 항-B7-H3 단클론 항체의 결합 친화성을 표면 플라즈마 공명에 의해 결정하였다. 표 3은 인간 B7-H3 및 시노 B7-H3의 용해성 ECD에 일련의 마우스 하이브리도마 유래된 항-B7-H3 단클론 항체(mAb)가 결합하는 것에 있어서의 결합 속도 상수(k a), 해리 속도 상수(k d) 및 평형 해리 상수(K D)를 나타낸다. 결합 반응 속도(binding kinetics)를 Biacore T200 기기 및 mAb 포착 접근법을 이용하여 SPR 측정치로부터 유도하였다(이는 하기 재료 및 방법에 기술된 바와 같음).
[표 3]
Figure pct00430
Biacore T200 SPR 기기에서 수행한 쌍별 결합 분석법을 이용하여 쥐과 항-B7-H3 mAb에 있어서의 상대적인 에피토프 그루핑을 결정하였으며, 이는 하기 방법에서 기술된 바와 같았다. 도 1은 에피토프 그루핑에 대한 묘사를 나타내며, 이는 상대적인 인간 B7-H3 에피토프 다양성 및 본원에서 확인된 일련의 항-B7-H3 mAb들의 겹침을 설명한다. 에피토프 군은 개별 타원으로 표시되며, 이들 중 일부는 서로 겹쳐진다. 상이한 에피토프 군들의 항체는 B7-H3에 동시에 결합할 수 있으며, 상이한 에피토프들에 결합할 가능성이 있을 수 있는 한편 주어진 에피토프 군 내의 항체들은 B7-H3에 동시에 결합할 수 없고 중첩 에피토프들에 결합할 가능성이 없을 수 있다. 그루핑 정보는 재료 및 방법에서 설명된 바와 같이 동시적 결합 분석법으로부터 유래되었다. Ab3,Ab4, Ab5, Ab11, Ab12, 및 Ab8 그루핑은 불명확하였다.
재료 및 방법: 결합 반응 속도
Biacore T200 SPR 기기를 이용하여 다양한 mAb (리간드)에의 인간 B7-H3 (피분석물) 결합의 결합 반응 속도를 측정하였다. 분석 포맷은 고정된 항-마우스 (Fc) (Pierce 31170) 또는 고정된 항-인간 (Fc) (Pierce 31125)를 통한 Fc-기반 포착이었다. 표준 아민 커플링 프로토콜을 이용하여 포착 시약을 일차 아민을 통하여 CM5 센서칩 (Biacore)의 카르복시-메틸 (CM) 덱스트란 표면에 고정시키고; 포착 항체를 대략 5000RU의 수준까지 커플링시켰다. 결합 반응 속도 측정에 있어서, 분석용 완충제는 HBS-EP+ (Biacore): 10 mM Hepes, pH7.4, 150mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 폴리소르베이트 20이었다. 상기 분석 동안, 모든 측정치는 포착 표면 단독에 대하여 언급되었다. 각각의 분석 사이클은 하기 단계로 이루어졌다: 1) 대략 50RU까지의 리간드의 포착; 2) 기준 및 테스트 표면 둘 다의 위에의 피분석물의 주입 (80 μL/분으로 240 μL), 그 후 해리를 80 μL/분으로 900초 동안 모니터링함; 3) 저 pH 글리신을 이용한 포착 표면의 재생. 동역학적 결정에 있어서, 피분석물 주입은 3점, 9배 희석 시리즈의 900 nM, 100 nM 및 11.11 nM이었으며, 완충제만 주입하는 것을 이차 기준용으로 포함시켰다. 데이터를 Biacore T200 평가 소프트웨어를 이용하여 처리하여 1:1 결합 모델에 피팅시켜서 결합 반응 속도 상수, k a (온-속도) 및 k d (오프-속도), 및 평형 해리 상수 (친화도, K D )를)를 결정하였다.
재료 및 방법: 에피토프 그루핑
Biacore T200 SPR 기기에서 수행한 쌍별 결합 분석법을 이용하여 일련의 항-B7-H3 mAb들에 있어서의 상대적인 에피토프 그루핑을 결정하였다. 분석 포맷은 고정된 항-마우스 (Fc) (Pierce 31170) 또는 고정된 항-인간 (Fc) (Pierce 31125)를 통한 Fc-기반 포착이었다. 표준 아민 커플링 프로토콜을 이용하여 포착 시약을 일차 아민을 통하여 CM5 센서칩 (Biacore)의 카르복시-메틸 (CM) 덱스트란 표면에 고정시키고; 포착 항체를 대략 2000RU의 수준까지 커플링시켰다. 에피토프 그루핑 측정을 12℃ (낮은 온도는 빠른 오프-속도 mAb에 대한 그루핑 정보를 허용함)에서 행하였으며, 분석용 완충제는 HBS-EP+ (Biacore): 10 mM Hepes, pH7.4, 150mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 폴리소르베이트 20이었다. 각각의 분석 사이클은 4개 플로우셀 시스템(four flowcell system)에서 하기 단계로 이루어졌다: 1) 별개의 테스트 mAb들을 플로우셀 2, 3 및 4 (플로우셀 1은 기준용으로서, 테스트 mAb가 없음)에서 포착함; 2) 그 후 모든 4개의 플로우셀을 이소타입 대조 mAb 또는 이소타입 mAb 칵테일 (50 μg/mL)의 주입에 의해 차단함; 3) 그 후 모든 4개의 플로우셀에 항원 또는 완충제 단독을 주입함 (완충제 단독은 이중 기준용이며, 이는 개별적으로 각각의 mAb 쌍에 대하여 행해짐); 4) 그 후 모든 4개의 플로우셀에 제2 테스트 mAb (10 μg/mL)를 주입함; 5) 그 후 모든 4개의 플로우셀을 글리신 (pH1.5)으로 재생함. 상기 분석을 역방향(reciprocal orientation)의 각각의 테스트 mAb 쌍에 대하여 행하였다. 동시 결합을 Ag 반응에 대한 제2 테스트 mAb 반응의 비(RUmAb2/RUAg)를 조사하여 평가하였으며; 이 비가 0.2 이상일 경우, 상호작용을 동시 결합자로서 스코어링하였다. 이러한 쌍별 결합 분석 데이터로부터 "벤(venn)" 스타일 다이아그램을 수동으로 구축하여 상대적인 에피토프 그루핑을 묘사하였다.
실시예 5: 항-hB7-H3 키메라 항체의 생성
마우스 항-B7-H3 하이브리도마 항체의 확인 후, 분비된 항체에 상응하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역(VH 및 Vl)을 세포로부터 역전사효소-폴리머라아제 연쇄 반응(RT-PCR)을 이용하여 결정하였다. 쥐과 가변 영역을 인간 면역글로불린 불변 영역의 맥락에서 포유동물 숙주 세포에서 발현시켜 키메라 항체를 제공하였다. 하기 표 4는 마우스 키메라화 하이브리도마의 가변 영역 아미노산 서열을 제공한다.
[표 4]
Figure pct00431
Figure pct00432
Figure pct00433
Figure pct00434
Figure pct00435
Figure pct00436
Figure pct00437
Figure pct00438
실시예 6: 키메라 항-B7-H3 항체의 결합의 특성화
정제된 키메라 항체를 생성하기 위하여, 60%:40%의 비의 경쇄:중쇄 구축물로 HEK293 6E 현탁 세포 배양물을 발현 벡터로 일시적으로 형질감염시켰다. 1 mg/ml의 폴리에틸렌이민(PEI) 또는 2.6 μL/mL의 엑스피펙타민(Expifectamine)을 사용하여 세포를 형질감염시켰다. 세포 상청액을 진탕 플라스크에서 5일 후 수확하고, 스핀 다운시켜 세포를 펠렛화하고, 0.22 μm 필터를 통하여 여과시켜 IgG를 배양 오염물로부터 분리하였다. 항체-함유 상청액을 단백질 A mAb SelectSure를 사용하여 Akta Pure에서 정제하였다. 컬럼을 PBS (pH 7.4)에서 평형화하고, 그 후 상청액을 컬럼에 통과시키고, PBS (pH 7.4)를 이용하여 세척을 수행하였다. IgG를 0.1 M 아세트산 (pH 3.5)으로 용출시키고, 몇 개의 분취물로 수집하였다. IgG를 함유하는 분획을 풀링하고(pooled), PBS에서 4℃에서 하룻밤 투석시켰다. 성공적으로 발현된 항-B7-H3 키메라 항체를 하기에 설명한 방법을 이용하여 FACS에 의해 B7-H3 과발현 인간 비소세포폐암 세포주 NCI-H1650 (ATCC® 번호 CRL-5883)에 결합하는 능력에 대하여 특성화하였다. 표 5에는 키메라 항-B7-H3 항체의 결합 특성이 요약되어 있다.
[표 5]
Figure pct00439
결합에 대한 FACS의 방법
Gibco®Cell 해리용 완충제를 이용하여 대략 80% 밀집도일 때 세포를 플라스크로부터 수확하였다. 세포를 PBS/1% FBS (FACS용 완충제)에서 1회 세척하고, 그 후 FACS용 완충제에 2.5x106개의 세포/mL로 재현탁시켰다. 100 μL의 세포/웰을 둥근 바닥 96웰 플레이트에 첨가하였다. 10 μL의 10배 농도의 mAb/ADC (최종 농도는 도면에 표시되어 있음). 웰을 FACS용 완충제로 2회 세척하고, FACS용 완충제에서 희석시킨 이차 Ab (AlexaFluor 488) 50 μL에 재현탁시켰다. 상기 플레이트를 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션하고, FACS용 완충제로 2회 세척하였다. 세포를 100 μL의 PBS/1% 포름알데히드에 재현탁시키고, Becton Dickinson LSRII 유동 세포 분석기에서 분석하였다. 데이터를 WinList 유동 세포 분석 소프트웨어를 이용하여 분석하였다.
실시예 7: Bcl-xL 저해 항체 약물 콘쥬게이트로서의 키메라 항-B7-H3 항체의 특성화
9가지의 항-B7-H3 키메라 항체를 하기에 설명한 콘쥬게이션 방법 A를 이용하여 Bcl-xL 저해 (Bcl-xLi) 신톤 CZ (실시예 2.1)에 콘쥬게이션시켰다. 생성된 ADC (신톤 CZ에 콘쥬게이션된 항-B7-H3 항체)를 (실시예 6에 기술된 바와 같이) FACS에 의해 세포 표면 인간 B7-H3에 결합하는 것에 대하여, 그리고 B7-H3을 발현하는 세포주에서 세포의 세포독성에 대하여 테스트하였다. 9가지의 항체 중 3가지의 항체 (chAb2, chAb6, 및 chAb16)는 신톤 Cz에의 콘쥬게이션 후 침전되었으며, 인간 B7-H3을 발현하는 세포에서 약한 세포독성을 나타냈다. 표 6은 인간 B7-H3을 발현하는 유방암 세포 HCC38에 대한 항-B7-H3 키메라 ADC의 세포 표면 결합 및 세포독성 활성을 제공한다.
[표 6]
Figure pct00440
재료 및 방법: Bcl-xL 저해 ADC의 콘쥬게이션
ADC를 하기에 설명한 방법 중 하나를 이용하여 합성하였다. 하기에 설명된 9가지의 예시적인 방법 중 하나를 이용하여 예시적인 ADC를 합성하였다.
방법 A . Bond-Breaker™ 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP) 용액 (10 mM, 0.017 mL)의 용액을 37℃까지 예열한 항체의 용액 (10 mg/mL, 1 mL)에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 37℃에서 1시간 동안 유지하였다. 환원된 항체의 용액을 신톤의 용액 (3.3 mM, 0.160 mL (DMSO 중))에 첨가하고, 30분 동안 부드럽게 혼합하였다. 상기 반응액, 이어서 DPBS (3 mL)를 탈염 컬럼 (PD10, 둘베코 인산염-완충 염수(Dulbecco's phosphate-buffered saline) [DPBS]로 3회 세척한 후 사용) 상에 로딩하였다. 정제된 ADC 용액을 0.2 마이크론의 저 단백질-결합성 13 mm 시린지-필터를 통하여 여과시키고, 4℃에서 보관하였다.
방법 B. Bond-Breaker™ 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP) 용액 (10 mM, 0.017 mL)의 용액을 37℃까지 예열한 항체의 용액 (10 mg/mL, 1 mL)에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 37℃에서 1시간 동안 유지하였다. 환원된 항체의 용액을 보릭 완충제(boric buffer) (0.05 mL, 0.5 M, pH8)를 첨가하여 pH=8까지 조정하고, 신톤의 용액 (3.3 mM, 0.160 mL (DMSO 중))에 첨가하고, 4시간 동안 부드럽게 혼합하였다. 상기 반응액, 이어서 DPBS (1.6 mL)를 탈염 컬럼 (PD10, DPBS로 3회 세척한 후 사용) 상에 로딩하고, 추가 DPBS (3 mL)로 용출시켰다. 정제된 ADC 용액을 0.2 마이크론의 저 단백질-결합성 13 mm 시린지-필터를 통하여 여과시키고, 4℃에서 보관하였다.
방법 C . I235/96 팁 ModuLar Dispense Technology (MDT), 그리퍼 아암(gripper arm) (파트 7400358)을 포함하는 일회용 헤드 (파트 70243540), 및 확장 덱 상의 8-팁 Varispan 피펫팅 아암 (파트 7002357)이 갖추어진 PerkinElmer Janus (파트 AJL8M01) 로봇식 액체 처리 시스템을 사용하여 콘쥬게이션을 수행하였다. PerkinElmer Janus 시스템을 WinPREP 버전 4.8.3.315 소프트웨어를 이용하여 제어하였다.
Pall Filter 플레이트 5052를 MDT를 사용하여 100 μL 1x DPBS로 사전 습윤시켰다. 진공을 10초 동안 필터 플레이트에 적용하고, 이어서 5초간 통기시켜 DPBS를 필터 플레이트로부터 제거하였다. DPBS 중 단백질 A 수지 (GE MabSelect Sure)의 50% 슬러리를 자기볼(magnetic ball)이 갖추어진 8웰 저장소에 붓고, 저장 플레이트 아래에서 이동 자석을 통과시킴으로써 상기 수지를 혼합하였다. 1 mL 전도성 팁이 갖추어진 8 팁 Varispan 아암을 사용하여 수지 (250 μL)를 흡인하고, 96웰 필터 플레이트로 옮겼다. 진공을 2 사이클 적용하여 대부분의 상기 완충제를 제거하였다. MDT를 사용하여, 150 μL의 1xPBS를 흡인하고, 상기 수지가 담긴 96웰 필터 플레이트로 분배하였다. 진공을 적용하여 완충제를 수지로부터 제거하였다. 헹굼/진공 사이클을 3회 반복하였다. 2 mL, 96웰, 수집용 플레이트를 Janus 덱에 장착하고, MDT에 의해 450 μL의 5x DPBS를 상기 수집용 플레이트로 옮겼다(이후의 사용을 위하여). (200 μL) DPBS 중 용액으로서의 환원된 항체 (2 mg)를 조건 A용으로 상기에 설명된 바와 같이 제조하고, 96웰 플레이트 내로 예비로딩하였다. 환원된 항체의 용액들을 수지를 포함하는 필터 플레이트 웰로 옮기고, 혼합물을 사이클당 45초 동안 웰 내에서의 100 μL 부피의 반복된 흡인/분배에 의해 MDT와 혼합하였다. 흡인/분배 사이클을 5분의 코스에 걸쳐 총 5회 반복하였다. 진공을 상기 필터 플레이트에 2 사이클 동안 적용함으로써 여분의 항체를 제거하였다. MDT 팁을 5 사이클 동안 물로 헹구었다 (200 μL, 1 mL의 총 부피). MDT에 의해 150 μL의 DPBS를 수지-결합 항체를 포함하는 필터 플레이트 웰에 흡인하여 분배하고, 진공을 2 사이클 동안 적용하였다. 세척 및 진공의 순서를 2회 더 반복하였다. 마지막 진공 사이클 후, 100 μL의 1x DPBS를 수지-결합 항체를 포함하는 웰에 분배하였다. 그 후 MDT에 의해 96웰 포맷으로 플레이팅된 각각의 신톤의 3.3 mM 디메틸 술폭시드 용액 30 μL를 수집하고, 이것을 DPBS 중 수지-결합 항체를 포함하는 필터 플레이트에 분배하였다. 상기 콘쥬게이션 혼합물을 포함하는 웰을 사이클당 45초 동안 상기 웰 내에서의 100 μL 부피의 반복된 흡인/분배에 의해 MDT를 이용하여 혼합하였다. 흡인/분배 순서를 5분의 코스에 걸쳐 총 5회 반복하였다. 진공을 2 사이클 적용하여 여분의 신톤을 제거하여 폐기하였다. MDT 팁을 5 사이클 동안 물로 헹구었다 (200 μL, 1 mL의 총 부피). MDT에 의해 DPBS (150 μL)를 흡인하여 이를 콘쥬게이션 혼합물에 분배하고, 진공을 2 사이클 동안 적용하였다. 세척 및 진공의 순서를 2회 더 반복하였다. 그 후 MDT 그리퍼에 의해 필터 플레이트 및 칼라(collar)를 보유 스테이션 쪽으로 이동시켰다. MDT에 의해 진공 매니폴드 내부에 450 μL의 10x DPBS를 포함하는 2 mL 수집 플레이트를 넣었다. MDT는 필터 플레이트 및 칼라의 배치에 의해 진공 매니폴드를 재조립하였다. MDT 팁을 5 사이클 동안 물로 헹구었다 (200 μL, 1 mL의 총 부피). MDT에 의해 100 μL의 IgG Elution Buffer 3.75 (Pierce)를 흡인하여 콘쥬게이션 혼합물에 분배하였다. 1분 후, 진공을 2 사이클 적용하고, 450 μL의 5x DPBS를 포함하는 수용 플레이트에서 용출제를 포착하였다. 흡인/분배 순서를 추가 3회 반복하여 DPBS 중 1.5 내지 2.5 mg/mL (pH 7.4)의 범위의 농도를 갖는 ADC 샘플을 전달하였다.
방법 D . I235/96 팁 ModuLar Dispense Technology (MDT), 그리퍼 아암 (파트 7400358)을 포함하는 일회용 헤드 (파트 70243540), 및 확장 덱 상의 8-팁 Varispan 피펫팅 아암 (파트 7002357)이 갖추어진 PerkinElmer Janus (파트 AJL8M01) 로봇식 액체 처리 시스템을 사용하여 콘쥬게이션을 수행하였다. PerkinElmer Janus 시스템을 WinPREP 버전 4.8.3.315 소프트웨어를 이용하여 제어하였다.
Pall Filter 플레이트 5052를 MDT를 사용하여 100 μL 1x DPBS로 사전 습윤시켰다. 진공을 10초 동안 필터 플레이트에 적용하고, 이어서 5초간 통기시켜 DPBS를 필터 플레이트로부터 제거하였다. DPBS 중 단백질 A 수지 (GE MabSelect Sure)의 50% 슬러리를 자기볼이 갖추어진 8웰 저장소에 붓고, 저장 플레이트 아래에서 이동 자석을 통과시킴으로써 상기 수지를 혼합하였다. 1 mL 전도성 팁이 갖추어진 8 팁 Varispan 아암을 사용하여 수지 (250 μL)를 흡인하고, 96웰 필터 플레이트로 옮겼다. 진공을 필터 플레이트에 2 사이클 적용하여 대부분의 상기 완충제를 제거하였다. MDT에 의해 150 μL의 DPBS를 흡인하여 이를 수지를 포함하는 필터 플레이트 웰에 분배하였다. 세척 및 진공의 순서를 2회 더 반복하였다. 2 mL, 96웰, 수집용 플레이트를 Janus 덱에 장착하고, MDT에 의해 450 μL의 5x DPBS를 상기 수집용 플레이트로 옮겼다(이후의 사용을 위하여). (200 μL) DPBS 중 용액으로서의 환원된 항체 (2 mg)를 조건 A용으로 상기에 설명된 바와 같이 제조하고, 96웰 플레이트 내로 분배하였다. 그 후 MDT에 의해 96웰 포맷으로 플레이팅된 각각의 신톤의 3.3 mM 디메틸 술폭시드 용액 30 μL를 수집하고, 이것을 DPBS 중 환원 항체가 로딩된 플레이트에 분배하였다. 상기 혼합물을 상기 웰 내에서 100 μL의 부피의 2회의 반복된 흡인/분배에 의해 MDT를 이용하여 혼합하였다. 5분 후, 콘쥬게이션 반응 혼합물 (230 μL)을 상기 수지를 포함하는 96웰 필터 플레이트로 옮겼다. 상기 콘쥬게이션 혼합물 및 수지를 포함하는 웰을 사이클당 45초 동안 상기 웰 내에서의 100 μL 부피의 반복된 흡인/분배에 의해 MDT를 이용하여 혼합하였다. 흡인/분배 순서를 5분의 코스에 걸쳐 총 5회 반복하였다. 진공을 2 사이클 적용하여 여분의 신톤 및 단백질을 제거하여 폐기하였다. MDT 팁을 5 사이클 동안 물로 헹구었다 (200 μL, 1 mL의 총 부피). MDT에 의해 DPBS (150 μL)를 흡인하여 이를 콘쥬게이션 혼합물에 분배하고, 진공을 2 사이클 동안 적용하였다. 세척 및 진공의 순서를 2회 더 반복하였다. 그 후 MDT 그리퍼에 의해 필터 플레이트 및 칼라(collar)를 보유 스테이션 쪽으로 이동시켰다. MDT에 의해 진공 매니폴드 내부에 450 μL의 10x DPBS를 포함하는 2 mL 수집 플레이트를 넣었다. MDT는 필터 플레이트 및 칼라의 배치에 의해 진공 매니폴드를 재조립하였다. MDT 팁을 5 사이클 동안 물로 헹구었다 (200 μL, 1 mL의 총 부피). MDT에 의해 100 μL의 IgG Elution Buffer 3.75 (P)를 흡인하여 콘쥬게이션 혼합물에 분배하였다. 1분 후, 진공을 2 사이클 적용하고, 450 μL의 5x DPBS를 포함하는 수용 플레이트에서 용출제를 포착하였다. 흡인/분배 순서를 추가 3회 반복하여 DPBS 중 1.5 내지 2.5 mg/mL (pH 7.4)의 범위의 농도를 갖는 ADC 샘플을 전달하였다.
방법 E . Bond-Breaker™ 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP) 용액 (10 mM, 0.017 mL)의 용액을 실온에서 항체의 용액 (10 mg/mL, 1 mL)에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 75분 동안 37℃까지 가열하였다. 환원된 항체의 용액을 실온까지 냉각시키고, 신톤의 용액 (10 mM, 0.040 mL (DMSO 중))에 첨가하고, 이어서 보릭 완충제 (0.1 mL, 1 M, pH 8)를 첨가하였다. 상기 반응액을 실온에서 3일 동안 정치시키고, 이것, 이어서 DPBS (1.6 mL)를 탈염 컬럼 (PD10, DPBS (3x5mL)로 세척한 후 사용) 상에 로딩하고, 추가 DPBS (3 mL)로 용출시켰다. 정제된 ADC 용액을 0.2 마이크론의 저 단백질-결합성 13 mm 시린지-필터를 통하여 여과시키고, 4℃에서 보관하였다.
방법 F . Tecan Freedom Evo 로봇식 액체 처리 시스템을 사용하여 콘쥬게이션을 수행하였다. 항체의 용액 (10 mg/mL)을 37℃까지 예열하고, 가열된 96 딥웰(deep-well) 플레이트로 웰당 3 mg의 양 (0.3 mL)으로 분취하고, 37℃에서 유지하였다. Bond-Breaker™ 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP) 용액의 용액 (1 mM, 0.051 mL/웰)을 항체에 첨가하고, 반응 혼합물을 37℃에서 75분 동안 유지하였다. 환원된 항체의 용액을 비가열 96 딥웰 플레이트로 옮겼다. 상응하는 신톤 용액 (5 mM, 0.024 mL (DMSO 중))을 환원된 항체를 포함하는 웰에 첨가하고, 15분 동안 처리하였다. 상기 반응액, 이어서 DPBS (0.3 mL)를 탈염 컬럼 (NAP5, DPBS로 4회 세척한 후 사용)의 플랫폼 (8 x 12) 상에 로딩하고, 추가 DPBS (0.8 mL)로 용출시켰다. 정제된 ADC 용액을 분석을 위하여 추가로 분취하고, 4℃에서 보관하였다.
방법 G . Tecan Freedom Evo 로봇식 액체 처리 시스템을 사용하여 콘쥬게이션을 수행하였다. 항체의 용액 (10 mg/mL)을 37℃까지 예열하고, 가열된 96 딥웰 플레이트로 웰당 3 mg의 양 (0.3 mL)으로 분취하고, 37℃에서 유지하였다. Bond-Breaker™ 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP) 용액의 용액 (1 mM, 0.051 mL/웰)을 항체에 첨가하고, 반응 혼합물을 37℃에서 75분 동안 유지하였다. 환원된 항체의 용액을 비가열 96 딥웰 플레이트로 옮겼다. 상응하는 신톤 용액 (5 mM, 0.024 mL/웰 (DMSO 중))을 환원된 항체를 포함하는 웰에 첨가하고, 이어서 보릭 완충제 (pH=8, 0.03 mL/웰)를 첨가하고, 3일 동안 처리하였다. 상기 반응액, 이어서 DPBS (0.3 mL)를 탈염 컬럼 (NAP5, DPBS로 4회 세척한 후 사용)의 플랫폼 (8 x 12) 상에 로딩하고, 추가 DPBS (0.8 mL)로 용출시켰다. 정제된 ADC 용액을 분석을 위하여 추가로 분취하고, 4℃에서 보관하였다.
방법 H . Bond-Breaker™ 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP) 용액의 용액 (10 mM, 0.17 mL)을 실온에서 항체의 용액 (10 mg/mL, 10 mL)에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 75분 동안 37℃까지 가열하였다. 신톤의 용액 (10 mM, 0.40 mL (DMSO 중))을 실온까지 냉각시킨 환원된 항체의 용액에 첨가하였다. 상기 반응액을 실온에서 30분 동안 정치시켰다. ADC의 용액을 약간 탁한 용액이 형성될 때까지 포화 황산암모늄 용액 (대략 2 내지 2.5 mL)으로 처리하였다. 이 용액을 상 A 중 30% 상 B로 평형시킨 부틸 세파로스 컬럼 (5 mL의 부틸 세파로스) 상에 로딩하였다 (상 A: 1.5 M 황산암모늄, 25 mM 포스페이트; 상 B: 25 mM 포스페이트, 25% 이소프로판올 (v/v)). DAR2 ("E2"로도 지칭됨) 및 DAR4 ("E4"로도 지칭됨)를 포함하는 개별적인 분획이 A/B에서 75% 상 B까지의 구배의 적용시에 용출되었다. 각각의 ADC 용액을 농축시키고, 완충제를 더 큰 규모를 위하여 원심분리 농축기 또는 TFF를 사용하여 바꾸었다. 정제된 ADC 용액을 0.2 마이크론의 저 단백질-결합성 13 mm 시린지-필터를 통하여 여과시키고, 4℃에서 보관하였다.
방법 I . Bond-Breaker™ 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP) 용액의 용액 (10 mM, 0.17 mL)을 실온에서 항체의 용액 (10 mg/mL, 10 mL)에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 75분 동안 37℃까지 가열하였다. 신톤의 용액 (10 mM, 0.40 mL (DMSO 중))을 실온까지 냉각시킨 환원된 항체의 용액에 첨가하였다. 상기 반응액을 실온에서 30분 동안 정치시켰다. ADC의 용액을 약간 탁한 용액이 형성될 때까지 포화 황산암모늄 용액 (대략 2 내지 2.5 mL)으로 처리하였다. 이 용액을 상 A 중 30% 상 B로 평형시킨 부틸 세파로스 컬럼 (5 mL의 부틸 세파로스) 상에 로딩하였다 (상 A: 1.5 M 황산암모늄, 25 mM 포스페이트; 상 B: 25 mM 포스페이트, 25% 이소프로판올 (v/v)). DAR2 ("E2"로도 지칭됨) 및 DAR 4 ("E4"로도 지칭됨)를 포함하는 개별적인 분획이 A/B에서 75% 상 B까지의 구배의 적용시에 용출되었다. 각각의 ADC 용액을 농축시키고, 완충제를 더 큰 규모를 위하여 원심분리 농축기 또는 TFF를 사용하여 바꾸었다. ADC 용액을 보릭 완충제 (0.1 mL, 1 M, pH8)로 처리하였다. 상기 반응액을 실온에서 3일 동안 정치시키고, 그 후 이것, 이어서 DPBS (1.6 mL)를 탈염 컬럼 (PD10, DPBS (3x5mL)로 세척한 후 사용) 상에 로딩하고, 추가 DPBS (3 mL)로 용출시켰다. 정제된 ADC 용액을 0.2 마이크론의 저 단백질-결합성 13 mm 시린지-필터를 통하여 여과시키고, 4℃에서 보관하였다.
ADC의 DAR 및 응집
합성한 ADC의 DAR 및 응집 백분율을 각각 LC-MS 및 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)로 결정하였다.
LC-MS에 대한 일반적인 방법
Agilent LC/MSD TOF 6220 ESI 질량 분광계에 인터페이스된(interfaced) Agilent 1100 HPLC 시스템을 사용하여 LC-MS 분석을 수행하였다. ADC를 5 mM (최종 농도) Bond-Breaker® TCEP 용액 (Thermo Scientific, 미국 일리노이주 록포드 소재)으로 환원시키고, Protein Microtrap (Michrom Bioresorces, 미국 캘리포니아주 오번 소재) 상에 로딩하고, 주위 온도에서 10% B에서 75% B까지 (0.2분 내에)의 구배를 이용하여 용출시켰다. 이동상 A는 0.1% 포름산 (FA)을 포함하는 H20이고, 이동상 B는 0.1% FA를 포함하는 아세토니트릴이고, 유량은 0.2 mL/분이었다. 공동용출 경쇄 및 중쇄의 전기분무-이온화 비행 시간 질량 스펙트럼(Electrospray-ionization time-of-flight mass spectrum)을 Agilent MassHunterTM 획득 소프트웨어를 사용하여 획득하였다. 추출된 강도 대 m/z 스펙트럼을 MassHunter 소프트웨어의 최대 엔트로피 특징(Maximum Entropy feature)을 이용하여 디컨폴루션하여(deconvolute) 각각의 환원된 항체 단편의 질량을 결정하였다. 경쇄 및 중쇄에 대한 네이키드(naked) 및 변형 피크의 강도를 합함으로써 디컨볼루션된 스펙트럼으로부터 DAR을 계산하고, 강도에 부착 약물의 수를 곱함으로써 이를 정규화하였다. 합해지고 정규화된 강도들을 강도들의 합으로 나누었으며, 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄에 대한 합해진 결과는 전체 ADC에 대한 최종 평균 DAR 값을 생성하였다.
바이오콘쥬게이트의 티오숙신이미드 가수분해를 전기분무 질량 분광법으로 모니터링할 수 있으며, 그 이유는 상기 콘쥬게이트에의 물의 부가가 18 달톤에서 콘쥬게이트의 관찰가능한 분자량까지의 증가로 이어지기 때문이다. 콘쥬게이트가 완전히 인간 IgG1 항체의 사슬간 디술피드를 환원시키고 말레이미드 유도체를 생성된 시스테인 각각에 콘쥬게이션시킴으로써 제조될 때, 항체의 각각의 경쇄는 단일 말레이미드 변경을 포함할 것이고 각각의 중쇄는 3개의 말레이미드 변경을 포함할 것이며, 이는 도 2에 설명된 바와 같다. 생성된 티오숙신이미드의 완전한 가수분해시에, 경쇄의 질량이 그에 따라 18 달톤만큼 증가하는 한편, 각각의 중쇄의 질량은 54 달톤만큼 증가할 것이다. 이것은 도 5에 예시되어 있으며, 이때 예시적인 말레이미드 약물-링커(신톤 TX, 분자량: 1736 Da)는 완전 환원 huAb13v1 항체에 콘쥬게이션되어 후속적으로 가수분해된다.
크기 배제 크로마토그래피에 대한 일반적인 방법
크기 배제 크로마토그래피를 15% IPA 및 0.25 mM 염화칼륨을 포함하는 0.2 M 인산칼륨 (pH 6.2)에서 Shodex KW802.5 컬럼을 사용하여 수행하였다 (유량: 0.75 ml/분). 280 nm에서의 피크 영역 흡광도를, 곡선 하 면적의 적분에 의해 고분자량 용출물 및 단량체성 용출물 각각에 대하여 결정하였다. 콘쥬게이트 샘플의 응집물 분획 %는, 고분자량 용출물의 280 nM에서의 피크 영역 흡광도를 고분자량 용출물 및 단량체성 용출물의 280 nM에서의 피크 영역 흡광도들의 합으로 나누고 여기에 100%를 곱함으로써 결정하였다.
시험관 내에서의 세포 생존성의 분석 방법
종양 세포주 HCC38 (유방암), NCI-H1650 (NSCLC) 및 NCI-H847 (소세포 폐암 세포주)을 American Type Culture Collection (ATCC)으로부터 획득하였다. 세포를 권장된 성장 배지를 이용하여 96웰 배양 플레이트에서 웰당 5 x 103 (HCC38) 또는 20 x 103 (NCI-H847) 또는 40 x 103 (NCI-H1650)의 밀도로 하룻밤 성장시켰다. 다음날, 신선 배지 중 처리제들의 첨가에 의해 웰을 삼중화하였다. 5일 후, CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay 키트 (Promega)를 이용하여 세포 생존성을 결정하였으며, 이는 제조업자의 프로토콜에서 지시된 바와 같았다. 세포 생존성을 대조 비처리 세포의 백분율로서 평가하였다.
실시예 8: 항-B7-H3 항체 약물 콘쥬게이트의 생체 내에서의 효능
CZ 신톤에 콘쥬게이션된, 시험관 내에서 테스트한 9가지의 키메라 항체 중 4가지는 나노몰 미만의(subnanomolar) 세포독성을 나타냈다 (표 6). chAb3-CZ, chAb18-CZ, 및 chAb13-CZ는 2.6 내지 4.2의 범위의 DARS를 달성하였으며 (표 7 참조), 하기에 설명된 방법을 이용하여 인간 기원의 마우스 소세포 폐암 세포주 이종 이식 모델 NCI-H146에서의 항종양 활성에 대하여 평가하였다. 항체 MSL109 (사이토메갈로바이러스(CMV) 당단백질 H에 결합하는 IgG1 항체)를 대조구로서, 네이키드 항체 및 ADC (chAb3, chAb18, 및 chAb13 항체와 동일한 신톤(CZ)에 콘쥬게이션됨) 둘 다로서 사용하였다. MSL109는 이소타입 매칭된 비-표적화 대조구이다. 이러한 이종이식 분석 방법은 하기에 설명되어 있다. 그 결과가 표 7에 제시되어 있다. 결과는, 항-B7-H3 Bcl-xL 저해 ADC가 네이키드 항체 대조구 (MSL109) 또는 비-표적 특이적 Bcl-xL ADC 대조구 (MSL109-CZ)에 비하여 종양 성장을 유의하게 저해할 수 있었음을 보여준다.
[표 7]
Figure pct00441
이종이식 모델에서의 효능의 평가 방법
NCI-H146 세포, NCI-1650 세포, 및 EBC-1 세포를 American Type Culture Collection (ATCC, 미국 버지니아주 매너서스 소재)으로부터 획득하였다. 세포를 10% 소 태아 혈청 (FBS, Hyclone, 미국 유타주 로건 소재)이 보충된 RPMI-1640 (NCI-H146, NCI-H1650) 또는 MEM (EBC-1) 배양 배지 (미국 캘리포니아주 칼스바드 소재)에서 단층으로 배양하였다. 이종이식편을 생성하기 위하여, 5x106개의 생존성 세포를 각각 면역 결핍 암컷 SCID/bg 마우스 (Charles River Laboratories, 미국 매사추세츠주 윌밍턴 소재)의 우측 옆구리 내에 피하 접종하였다. 주사 부피는 0.2 mL이고, S MEM과 Matrigel (BD, 미국 뉴저지주 프랭클린 레이크스 소재)의 1:1 혼합물로 구성되었다. 종양은 대략 200 mm3로 크기 매칭되었다. 항체 및 콘쥬게이트를 주사를 위하여 0.9% 염화나트륨에서 제형화하고, 복강내 주사하였다. 주사 부피는 200 μL를 초과하지 않았다. 치료법을 종양의 크기 매칭 후 24시간 내에 시작하였다. 마우스는 치료법의 시작시에 대략 22 g으로 칭량되었다. 종양 부피를 매주 2 내지 3회 추산하였다. 종양의 길이 (L) 및 폭 (W)의 측정치를 전자 캘리퍼스를 통하여 취하고, 부피를 하기 등식에 따라 계산하였다: V = L x W2/2. 종양 부피가 3,000 mm3에 도달하거나 피부 궤양이 나타났을 때 마우스를 안락사시켰다. 케이지당 8마리의 마우스를 수용하였다. 먹이 및 물은 무제한으로 이용가능하였다. 실험 시작 전 적어도 1주일의 기간 동안 마우스를 동물 시설에 적응시켰다. 동물을 12시간의 광의 광 단계: 12시간의 암(dark)의 스케줄로 테스트하였다 (06:00에 불을 켬). 상기에 설명된 바와 같이, 인간 IgG 대조 항체 (MSL109)를 음성 대조 에이전트로서 사용하였다.
치료제의 효능을 언급하기 위하여, 치료 반응의 지속성 (TGD), 크기 (TGImax)의 파라미터를 사용한다. TGImax는 실험 동안의 최대 종양 성장 저해율이다. 종양 성장 저해율은 100*(1-Tv/Cv)로 계산되며, 여기서, Tv 및 Cv는 각각 처리군 및 대조군의 평균 종양 부피이다. TGD 또는 종양 성장 지연은 대조군에 비하여 처리된 종양이 1 cm3의 부피에 도달하는 데 필요한 시간의 연장이다. TGD는 100*(Tt/Ct-1)으로 계산되며, 여기서, Tt 및 Ct는 각각 처리군 및 대조군의 1 cm3에 도달하는 중위 시간 기간이다.
실시예 9: 항-B7-H3 항체 chAb18의 인간화
항-B7-H3 키메라 항체 chAb18을 그의 결합 특성 및 ADC로서의 유리한 특성 (Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션된 때의 그의 특성을 포함함)(상기에 예시적인 콘쥬게이트 Cz로 기술됨)을 기반으로 하여 인간화용으로 선택하였다.
인간화 항체를 chAb18의 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL) CDR 서열을 기반으로 하여 생성하였다. 구체적으로, 인간 생식세포 계열 서열을 CDR-그래프팅된 인간화 chAb18 항체의 구축용으로 선택하였으며, 여기서, VH 및 VL 사슬의 CDR 도메인을 상이한 인간 중쇄 및 경쇄 수용자 서열 상에 그래프팅하였다. 단클론 항체 chAb18의 VH 및 VL 서열과의 정렬을 기반으로 하여, 하기 인간 서열을 수용자로서 선택하였다:
● 중쇄 수용자 서열을 구축하기 위한 IGHV1-69*06 및 IGHJ6*01
● 경쇄 수용자 서열을 구축하기 위한 IGKV1-9*01 및 IGKJ2*01
● 경쇄를 구축하기 위한 백업(backup) 수용자로서의 IGKV6-21*01 및 IGKJ2*01
따라서, chAb18의 VH 및 VL CDR을 상기 수용자 서열 내에 그래프팅하였다.
인간화 항체를 생성하기 위하여, 프레임워크 역돌연변이를 확인하고, CDR-그래프팅 항체 서열 내로 도입하였다 (가변 도메인의 드노보(de novo) 합성, 또는 돌연변이 유발 올리고뉴클레오티드 프라이머 및 폴리머라아제 연쇄 반응에 의해, 또는 이들 둘 다에 의해(본 기술 분야에 잘 알려진 방법에 의해)). 역돌연변이 및 기타 돌연변이의 상이한 조합을 하기에 기술된 바와 같이 CDR-그래프트 각각에 대하여 구축하였다. 이러한 돌연변이를 위한 잔기 번호는 카바트(Kabat) 넘버링 시스템을 기반으로 한다.
중쇄 huAb18VH.1에 있어서, 하기 베르니에 및 VH/VL 인터페이싱 잔기들 중 하나 이상을 다음과 같이 역돌연변이시켰다: L46P, L47W, G64V, F71H. 추가 돌연변이는 다음을 포함한다: Q1E, N60A, K64Q, D65G. 경쇄 huAb18VL.1에 있어서, 하기 베르니에 및 VH/VL 인터페이싱 잔기들 중 하나 이상을 다음과 같이 역돌연변이시켰다: A43S, L46P, L47W, G64V, G66V, F71H. 경쇄 huAb18VL.2에 있어서, 하기 베르니에 및 VH/VL 인터페이싱 잔기들 중 하나 이상을 다음과 같이 역돌연변이시켰다: L46P, L47W, K49Y, G64V, G66V, F71H.
인간화 항체의 가변 영역 및 CDR 아미노산 서열이 하기 표 8에 기술되어 있다.
[표 8]
Figure pct00442
Figure pct00443
Figure pct00444
쥐과 단클론 Ab18 (상기에 기술됨)의 인간화 가변 영역을 기능적 특성화를 위하여 IgG 발현 벡터에 클로닝하였다:
● 인간화 Ab18VH.1 (huAb18VH.1)은 IGHV1-69*06 및 IGHJ6*01 프레임워크 서열을 포함하는 CDR-그래프팅된 인간화 Ab18 VH이다. 이것은 또한 피로글루타메이트 형성을 방지하기 위한 Q1E 변화를 포함한다. huAb18VH.1의 가변 서열 및 CDR 서열이 표 8에 기술되어 있다.
● 인간화 Ab18VH1.a (huAb18VH.1a)는 huAb18VH.1을 기반으로 하는 인간화 디자인이며, 다음의 4개의 제안된 프레임워크 역돌연변이를 포함한다: M48I, V67T, L69I, K73R. huAb18VH.1a의 가변 서열 및 CDR 서열이 표 8에 기술되어 있다.
● 인간화 Ab18VH1.b (huAb18VH.1b)는 huAb18VH.1 및 huAb18VH.1a를 기반으로 하는 인간화 디자인이며, 1개의 제안된 프레임워크 역돌연변이 L69I 및 3개의 HCDR2 생식세포 계열 변화 N60A, K64Q, D65G를 포함한다. huAb18VH.1b의 가변 서열 및 CDR 서열이 표 8에 기술되어 있다.
● 인간화 Ab18VL.1 (huAb18VL.1)은 IGKV1-9*01 및 IGKJ2*01 프레임워크 서열을 포함하는 CDR-그래프팅된 인간화 Ab18 VL이다. huAb18VL.1의 가변 서열 및 CDR 서열이 표 8에 기술되어 있다.
● 인간화 Ab18VL.1a (huAb18VL.1a)는 huAb18VL.1을 기반으로 하는 인간화 디자인이며, 다음의 6개의 제안된 프레임워크 역돌연변이를 포함한다: A43S, L46P, L47W, G64V, G66V, F71H. huAb18VL.11의 가변 서열 및 CDR 서열이 표 8에 기술되어 있다.
● 인간화 Ab18VL.1b (huAb18VL.1b)는 huAb18VL.1을 기반으로 하는 인간화 디자인이며, huAb18VL.1a는 다음의 4개의 제안된 프레임워크 역돌연변이를 포함한다: L46P, L47W, G64V, F71H. huAb18VL.1b의 가변 서열 및 CDR 서열이 표 8에 기술되어 있다.
● 인간화 Ab18VL.2 (huAb18VL.2)는 IGKV6-21*01 및 IGKJ2*01 프레임워크 서열을 포함하는 CDR-그래프팅된 인간화 Ab18 VL이다. huAb18VL.2의 가변 서열 및 CDR 서열이 표 8에 기술되어 있다.
● 인간화 Ab18VL.2a (huAb18VL.2a)는 huAb18VL.2를 기반으로 하는 인간화 디자인이며, 다음의 6개의 제안된 프레임워크 역돌연변이를 포함한다: L46P, L47W, K49Y, G64V, G66V, F71H. huAb18VL.2a의 가변 서열 및 CDR 서열이 표 8에 기술되어 있다.
따라서, chAb18의 인간화에 의해 huAb18v1, huAb18v2, huAb18v3, huAb18v4, huAb18v5, huAb18v6, huAb18v7, huAb18v8, huAb18v9, 및 huAb18v10을 포함하는 10가지의 인간화 항체를 생성하였다. Ab18의 이러한 인간화 버전 각각에 대한 가변, 중쇄 경쇄가 하기에 제공된다:
[표 9]
Figure pct00445
실시예 10: 항-B7-H3chAb18 인간화 변이체의 시험관 내에서의 특성화
chAb18의 인간화는 FACS (이의 방법은 상기 실시예 6에서 설명함)에 의해 평가할 경우 인간 및 시노 B7-H3에의 결합성을 보유한 10가지의 변이체 (상기 표 9에 기술됨)를 생성하였다. 이러한 변이체를 SPR에 의해 결합성에 대하여 추가로 특성화하고, 방법 A (상기에 설명됨)를 사용하여 Bcl-xL 저해제 신톤 Cz에 성공적으로 콘쥬게이션시키고, 실시예 7에서 설명한 바와 같이 세포의 세포독성에 대하여 평가하였다. 표 10에는 시험관 내에서의 다양한 인간화 Ab18 변이체의 특성이 요약되어 있다. 또한 모 chAb18 (이로부터 변이체를 유도함)을 비교자로서 테스트하였다. 모든 인간화 변이체는 biacore에 의해 평가할 경우 유사한 결합 특성을 갖고, CZ 신톤을 포함하는 콘쥬게이트로서 발현될 경우 세포 표면에의 결합 활성을 보유하였다. CZ 신톤으로서의 변이체들 전부의 세포독성은 chAb18 (이로부터 상기 변이체가 유도됨)과 유사하였다.
[표 10]
Figure pct00446
인간화 chAb18 변이체를 CZ 신톤에 콘쥬게이션시키고, HCC38 세포주에서의 세포독성에 대하여 테스트하였다. 표 10에 기술된 바와 같이, 대부분의 인간화 항체는 효력있는 세포독성을 나타냈으며, 이는 대조 항체 chAb18에서 관찰된 것과 유사하였다.
실시예 11: Bcl-xL 저해제 ADC로서의 인간화 Ab18 변이체의 생체 내에서의 효능
인간화 chAb18 변이체들 중 6가지를 실시예 10에서 설명한 시험관 내에서의 세포독성 결과를 기반으로 하여 선택하였다. 구체적으로, 항체 huAb18v1, huAb18v3, huAb18v4, huAb18v6, huAb18v7, 및 huAb18v9 각각을 실시예 8에 기술된 바와 같이 소세포폐암의 생체 내 이종이식 모델(NCI-H146 세포를 사용함)에서의 평가를 위하여 (항-B7-H3 CZ ADC를 형성하도록) CZ 신톤에 콘쥬게이션시켰다. 종양 보유 마우스의 단회 용량 처리는 종양 성장 저해 및 종양 성장 지연으로 이어졌으며, 그 결과는 표 11에 요약되어 있다. Ab095를 IgG의 투여 효과에 대한 음성 대조구로서 사용하였으며, 그 이유는 이것이 파상풍 톡소이드에 대하여 유도된 이소타입 매칭 표적 비-특이적 항체이기 때문이다. 문헌[Larrick et al., 1992, Immunological Reviews 69-85]을 참조한다. 마우스에게 6 mg/kg의 ADC를 Qdx1로 복강내 투여하였다.
[표 11]
Figure pct00447
표 11에 기술된 바와 같이, 테스트한 인간화 항체 각각은 마우스 이종이식 모델에서 종양 성장을 저해할 수 있었다.
실시예 12: 항-B7-H3 항체 chAb3의 인간화
항-B7-H3 키메라 항체 chAb3을 Bcl-xL 저해 (Bcl-xLi) 콘쥬게이트로서의 그의 유리한 특성을 기반으로 하여 인간화용으로 선택하였다. 인간화 항체를 chAB3의 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL) CDR 서열을 기반으로 하여 생성하였다. 구체적으로, 인간 생식세포 계열 서열을 CDR-그래프팅된 인간화 chAb3 항체의 구축용으로 선택하였으며, 여기서, chAb3의 VH 및 VL 사슬의 CDR 도메인을 상이한 인간 중쇄 및 경쇄 수용자 서열 상에 그래프팅하였다. 단클론 항체 chAb3의 VH 및 VL 서열과의 정렬을 기반으로 하여 하기 인간 서열을 수용자로서 선택하였다:
● 중쇄 수용자 서열을 구축하기 위한 IGHV1-69*06 및 IGHJ6*01
● 경쇄 수용자 서열을 구축하기 위한 IGKV2-28*01 및 IGKJ4*01
Figure pct00448
chAb3의 상응하는 VH 및 VL CDR을 상기 수용자 서열 내에 그래프팅함으로써, CDR-그래프팅, 인간화, 및 변경 VH 및 VL 서열을 제조하였다. 잠재적인 프레임워크 역돌연변이를 갖는 인간화 항체를 생성하기 위하여, 상기 돌연변이를 확인하고, CDR-그래프팅 항체 서열 내로 도입하였다 (가변 도메인의 드노보 합성, 또는 돌연변이 유발 올리고뉴클레오티드 프라이머 및 폴리머라아제 연쇄 반응, 또는 이들 둘 다에 의해). 역돌연변이 및 기타 돌연변이의 상이한 조합을 다음과 같이 CDR-그래프트 각각에 대하여 구축한다. 이러한 돌연변이를 위한 잔기 번호는 카바트 넘버링 시스템을 기반으로 한다.
다양한 인간화 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열이 하기 표 12에 기술되어 있다.
중쇄 huAb3VH.1에 있어서, 하기 베르니에 및 VH/VL 인터페이싱 잔기들 중 하나 이상을 다음과 같이 역돌연변이시켰다: M48I, V67A, I69L, A71V, K73R, M80V, Y91F, R94G. 경쇄 huAb31 VL.1에 있어서, 하기 베르니에 및 VH/VL 인터페이싱 잔기들 중 하나 이상을 다음과 같이 역돌연변이시켰다: I2V, Y87F.
쥐과 단클론 chAb3 항체의 하기 인간화 가변 영역을 기능적 특성화를 위하여 IgG 발현 벡터에 클로닝하였다:
● 인간화 Ab3 VH.1 (huAb3VH.1)은 IGHV1-69*06 및 IGHJ6*01 프레임워크 서열을 포함하는 CDR-그래프팅된 인간화 Ab3 VH이다. 이것은 또한 피로글루타메이트 형성을 방지하기 위한 Q1E 변화를 포함한다.
● 인간화 Ab3 VH.1a (huAb3VH.1a)는 huAb3VH.1을 기반으로 하는 인간화 디자인이며, 다음의 8개의 제안된 프레임워크 역돌연변이를 포함한다: M48I, V67A, I69L, A71V, K73R, M80V, Y91F, R94G.
● 인간화 Ab3 VH.1b (huAb3VH.1b)는 huAb3VH.1과 huAb3VH.1a 사이의 인간화 디자인이며, 다음의 6개의 제안된 프레임워크 역돌연변이를 포함한다: M48I, V67A, I69L, A71V, K73R, R94G.
● 인간화 Ab3 VL.1 (huAb3VL.1)은 IGKV2-28*01 및 IGKJ4*01 프레임워크 서열을 포함하는 CDR-그래프팅된 인간화 Ab3 VL이다.
● 인간화 Ab3 VL.1a (huAb3VL.1a)는 huAb3VL.1을 기반으로 하는 인간화 디자인이며, 다음의 2개의 제안된 프레임워크 역돌연변이를 포함한다: I2V, Y87F.
● 인간화 Ab3 VL.1b (huAb3VL.1b)는 다음의 1개의 제안된 프레임워크 역돌연변이만을 포함하는 인간화 디자인이다: I2V.
전술한 인간화 항체의 가변 영역 및 CDR 아미노산 서열이 하기 표 12에 기술되어 있다.
[표 12]
Figure pct00449
Figure pct00450
따라서, chAb3의 인간화에 의해 huAb3v1, huAb3v2, huAb3v3, huAb3v4, huAb18v5, 및 huAb3v6을 포함하는 6가지의 인간화 항체를 생성하였다. Ab18의 이러한 인간화 버전 각각에 대한 가변, 중쇄 경쇄가 하기 표 13에 제공된다.
[표 13]
Figure pct00451
실시예 13: chAb3 인간화 변이체의 시험관 내에서의 특성화
chAb3의 인간화는 FACS (실시예 6에서 설명한 바와 같음)에 의해 평가할 경우 인간 B7-H3에의 결합성을 보유한 6가지의 변이체 (표 13에 기술됨)를 생성하였다. 이러한 변이체를 SPR에 의해 결합성에 대하여 추가로 특성화하였으며, 이는 Bcl-xL 저해제 신톤(링커 워헤드) CZ에 콘쥬게이션된 ADC로서 특성화되었다. 또한 인간화 Ab3 항체를 세포의 세포독성에 대하여 평가하였다 (상기 실시예 7에서 설명한 분석법을 이용함). 표 14에는 시험관 내에서의 chAb3 인간화 변이체의 특성이 요약되어 있다. 신톤 CZ에 콘쥬게이션된 chAb3을 포함하는 ADC를 대조구로 사용하였다.
[표 14]
Figure pct00452
실시예 14: Bcl-xL ADC로서의 chAb3 인간화 변이체의 생체 내에서의 효능
인간화 변이체들 중 2가지 (huAb3v2 및 huAb3v6)를 실시예 8에서의 재료 및 방법에 기술된 바와 같이 소세포폐암 세포 (NCI-H146 세포)의 생체 내 쥐과 이종이식 모델에서의 평가를 위하여 허용가능한 응집 특성 및 CZ 콘쥬게이트로서의 효력있는 시험관 내 세포독성을 기반으로 하여 선택하였다. 종양 보유 마우스의 단회 용량 처리는 예시적인 Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션된 인간화 항체들 둘 다에 있어서 종양 성장 저해 및 종양 성장 지연으로 이어졌으며, 그 결과는 표 15에 요약되어 있다.
[표 15]
Figure pct00453
실시예 15: 인간화 변이 항체 huAb3v2의 CDR의 변경
huAb3v2는 유리한 결합 및 세포 사멸 특성을 나타냈다. 그러나, huAb3v2의 가변 영역 아미노산 서열의 조사는 잠재적인 탈아미드화 및/또는 이성질체화 부위를 보여주었다.
huAb3 가변 영역의 아미노산 서열이 하기에 기술되어 있으며, 이는 경쇄 (huAb3VL1) 및 중쇄 (huAb3VH1b)를 포함한다. VH (아미노산 "ds"에서의 CDR2) 및 VL (아미노산 "ng"에서의 CDR1)의 CDR에서의 잠재적인 탈아미드화 및/또는 이성질체화 부위는 이탤릭체로 되어 있으며, 따라서 항체 제조가 개선되도록 엔지니어링되었다. CDR은 하기 서열에서 소문자로 기술되어 있다.
이러한 잠재적인 탈아미드화 및/또는 이성질체화 부위가 결여된 huAb3v2 변이체를 제조하기 위하여, 하기에 나타낸 아미노산들 (x 및 z; VL의 CDR1 및 VH의 CDR2에서의 잠재적인 부위를 나타냄) 각각을 돌연변이 유발하였다. 생성된 30가지의 VL 변이체가 원래의 huAb3v2 VH와 쌍을 이루게 하고, 상기 변이체를 결합에 대하여 테스트하였다. 생성된 29가지의 VH 변이체가 원래의 huAb3v2 VL과 쌍을 이루게 하고, 상기 변이체를 결합에 대하여 테스트하였다. 성공적인 VH 변이체들을 조합하고, LCDR1에서의 변화를 갖는 생산적 VL 변이체를 이용하여 테스트하여, CDR에서의 잠재적인 탈아미드화 및/또는 이성질체화 부위가 결여된 최종 인간화 변이체를 제조하였다. 변이체의 아미노산 서열은 하기 표 16에 제공되어 있다. huAb3v2 변이체, huAb3v2.5의 중쇄 및 경쇄의 전장 아미노산 서열이 각각 서열 번호 170 및 171에 제공되어 있다. huAb3v2 변이체, huAb3v2.6의 중쇄 및 경쇄의 전장 아미노산 서열이 각각 서열 번호 172 및 173에 제공되어 있다.
Figure pct00454
여기서 (VL 및 VH 둘 다에 있어서),
x = 다음을 제외한 모든 아미노산: M, C, N, D, 또는 Q.
z = 다음을 제외한 모든 아미노산: M, C, G, S, N, 또는 P.
제안된 프레임워크 역돌연변이에는 밑줄이 그어져 있다 (실시예 12 참조).
[표 16]
Figure pct00455
Figure pct00456
Figure pct00457
Figure pct00458
Figure pct00459
실시예 16: huAb3v2 변이체의 시험관 내에서의 특성화
(실시예 15에 기술된) 잠재적인 탈아미드화 및/또는 이성질체화 부위의 제거는 (실시예 6의 방법에 기술된 바와 같이) FACS에 의해 평가할 경우 마우스 3T12 섬유모세포 상에서 외인성으로 발현되는 인간 및 시노 B7-H3 둘 다에의 결합성을 보유한 단지 6가지의 변이체를 생성하였다.
이러한 새로운 항-B7-H3 항체를 추가로 SPR에 의해 결합성에 대하여 특성화하고, Bcl-xLi 신톤 CZ에 콘쥬게이션시키고, 세포의 세포독성에 대하여 평가하였다 (실시예 7에 기술된 방법을 사용함). 표 17은 6가지의 huAb3v2 인간화 변이체의 시험관 내에서의 특성을 제공한다.
[표 17]
Figure pct00460
표 17에 기술된 바와 같이, 결과에 의하면 모든 6가지의 huAb3v2 변이체가 모 huAb3v2와 비교하여 인간 또는 시노B7-H3을 발현하는 세포에 대한 결합 특성이 유사함이 밝혀졌다. 6가지의 huAb3v2 변이체 중, 4가지 항체 (huAb3v2.5, huAb3v2.6, huAb3v2.8, huAb3v2.9)는 예시적인 Bcl-xLi 신톤 CZ에 콘쥬게이션될 때 H847 세포에서 효력있는 세포독성을 나타냈다.
실시예 17: 항-B7-H3 항체 chAb13의 인간화
항-B7-H3 키메라 항체 chAb13을 그의 결합 특성 및 ADC로서의 유리한 특성 (Bcl-xL 저해제에 콘쥬게이션될 경우)을 기반으로 하여 인간화용으로 선택하였다.
인간화 전에, 경쇄 CDR3 (QQYNSYPFT (서열 번호 182); 잠재적인 탈아미드화 부위는 잔기 "NS"(이탤릭체)로 표시됨))에서 잠재적인 탈아미드화를 최소화하기 위하여 chAb13을 변경시켰다. chAb13의 경쇄 CDR3 내의 "N" 및/또는 "S"에 상응하는 아미노산 위치에서의 점돌연변이를 도입하여 30가지의 변이체를 생성하였다. 그 후, 이러한 CDR3 경쇄 변이체를 포함하는 항체를 chAb13의 결합 특성을 보유하는 그의 능력에 대하여 스크리닝하였다. "NS" 모티프에서 세린 "S" 대신 트립토판 (W) 점돌연변이를 갖는 CDR3을 포함하는 변이체 (즉, QQYNWYPFT (서열 번호 39))는 모 chAb13 항체의 결합 특징을 보유하였다. CDR3 내에서의 S 잔기의 W 잔기에 의한 치환은, 세린과 트립토판 사이의 구조적 차이와, CDR3이 항원 결합에서 하는 상당한 역할을 고려해 볼 때 놀라운 것이었다.
인간화 항체를 chAb13의 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL) CDR 서열을 기반으로 하여 생성하였으며, 이는 "NW" 경쇄 CDR3을 포함한다. 구체적으로, 인간 생식세포 계열 서열을 CDR-그래프팅된 인간화 chAb13 항체의 구축용으로 선택하였으며, 여기서, VH 및 VL 사슬의 CDR 도메인을 상이한 인간 중쇄 및 경쇄 수용자 서열 상에 그래프팅하였다. 단클론 항체 chAb13의 VH 및 VL 서열과의 정렬을 기반으로 하여, 하기 인간 서열을 수용자로서 선택하였다:
● 중쇄 수용자 서열을 구축하기 위한 IGHV4-b*01(0-1) 및 IGHJ6*01
● 경쇄 수용자 서열을 구축하기 위한 IGKV1-39*01 및 IGKJ2*01
Figure pct00461
"NW" 경쇄 CDR3 및 chAb13의 남아있는 5가지의 상응하는 VH 및 VL CDR을 상기 수용자 서열 내에 그래프팅함으로써, CDR-그래프팅, 인간화, 및 변경 VH 및 VL 서열을 제조하였다. 잠재적인 프레임워크 역돌연변이를 갖는 인간화 항체를 생성하기 위하여, 돌연변이를 확인하고, CDR-그래프팅 항체 서열 내로 도입하였다 (가변 도메인의 드노보 합성, 또는 돌연변이 유발 올리고뉴클레오티드 프라이머 및 폴리머라아제 연쇄 반응에 의해, 또는 이들 둘 다에 의해(본 기술 분야에 잘 알려진 방법에 의해)). 역돌연변이 및 기타 돌연변이의 상이한 조합을 다음과 같이 CDR-그래프트 각각에 대하여 구축하였다. 이러한 돌연변이를 위한 잔기 번호는 카바트 넘버링 시스템을 기반으로 한다.
쥐과 단클론 chAb13 항체의 하기 인간화 가변 영역을 기능적 특성화를 위하여 IgG 발현 벡터에 클로닝하였다:
● 인간화 Ab13 VH.1 (huAb13VH.1)은 IGHV4-b*01(0-1) 및 IGHJ6*01 프레임워크 서열을 포함하는 CDR-그래프팅된 인간화 Ab13 VH이다. 이것은 또한 피로글루타메이트 형성을 방지하기 위한 Q1E 변화를 포함한다.
● 인간화 Ab13 VH.1 (huAb13 VH.1a)은 huAb13VH.1을 기반으로 하는 인간화 디자인이며, 다음의 9개의 제안된 프레임워크 역돌연변이(들)를 포함한다: S25T, P40F, K43N, I48M, V67I, T68S, V71R, S79F, R94G.
● 인간화 Ab13 VH.1b (huAb13VH.1b)는 huAb13VH.1과 huAb13VH.1a 사이의 중간 디자인이며, 다음의 4개의 제안된 프레임워크 역돌연변이(들)를 포함한다: K43N, I48M, V67I, V71R.
● 인간화 Ab13 VL.1 (huAb13VL.1)은 IGKV1-39*01 및 IGHJ6*01 프레임워크 서열을 포함하는 CDR-그래프팅된 인간화 Ab13 VL이다.
● 인간화 Ab13 VL.1a (huAb13VL.1a)는 huAb13VL.1을 기반으로 하는 인간화 디자인이며, 다음의 4개의 제안된 프레임워크 역돌연변이(들)를 포함한다: A43S, L46A, T85E, Y87F.
● 인간화 Ab13 VL.1b (huAb13VL.1b)는 huAb13VL.1과 huAb13VL.1a 사이의 중간 디자인이며, 다음의 1개의 제안된 프레임워크 역돌연변이(들)를 포함한다: Y87F.
전술한 것의 가변 영역 및 CDR 아미노산 서열이 하기 표 18에 기술되어 있다.
[표 18]
Figure pct00462
Figure pct00463
실시예 18: huAb13 변이체의 생성
표 18에 기술된 인간화 Ab13 변이체의 3가지 VH 및 3가지 VL 영역 아미노산 서열을 함께 쌍을 이루게 하여, 표 19에 기술된 9가지의 huAb13 변이체를 생성하였다. huAb13v1 변이체, huAb13v1의 중쇄 및 경쇄의 전장 아미노산 서열이 각각 서열 번호 168 및 169에 제공되어 있다.
[표 19]
Figure pct00464
Figure pct00465
Figure pct00466
Figure pct00467
Figure pct00468
Figure pct00469
실시예 19: huAb13VL.1a 인간화 변이체의 특성화
실시예 17 및 실시예 18에 기술된 9가지의 huAb13 변이체를 생성하고, (실시예 6에 기술된 방법에 따라) FACS에 의해 B7-H3에의 결합에 대하여 테스트하였다. 6가지의 변이체는 인간 B7-H3에 결합하지 않았다. 남아있는 3가지 변이체를 SPR에 의해 결합에 대하여 특성화하고, Bcl-xL 저해제 (구체적으로 링커 워헤드 (또는 신톤) Cz)에 콘쥬게이션시키고 (방법 A를 통하여), 세포의 세포독성에 대하여 평가하였다 (실시예 7에 기술된 방법에 따라). 표 20은 이러한 변이체의 시험관 내에서의 특성을 제공한다.
[표 20]
Figure pct00470
HuAb13v1을 추가 연구용으로 선택하였으며, 이는 부분적으로, H847 세포에 대한 그의 효력있고 탁월한 세포독성 및 chAb13 (이로부터 HuAb13v1이 유도됨)과 유사한 결합 특성으로 인한 것이었다. 이와는 대조적으로, huAb13v5 및 huAb13v6은 Biacore 실험에서 불량한 피트의 동역학적 특성을 나타냈으며, 이는 이들의 결합 특성이 huAb13v1보다 더 chAb13과 다르고, 세포 사멸 분석에서 감소된 활성을 가짐을 시사하는 것이었다.
실시예 20: 예시적인 Bcl-xL 저해제 링커 워헤드 (신톤)를 갖는 선택된 인간화 B7-H3 항체의 시험관 내에서의 효력
인간화 항체 huAb13v1, huAb3v2.5 및 huAb3v2.6을 선택하여, 방법 A, E 또는 G를 이용하여 3 mg 규모의 몇몇 Bcl-xL 저해제 페이로드 (또는 신톤)와 콘쥬게이션시켰으며, 이는 실시예 7에 기술된 바와 같았다. 이러한 ADC의 항-종양 활성을 실시예 7에 기술된 바와 같이 NCI-H1650 비소세포 폐암 세포주를 사용하여 세포독성 분석에서 테스트하였다. 대조구로서, Bcl-xL 저해제 페이로드 (또는 신톤)에 콘쥬게이션된 비-표적화 항체 MSL109 (CMV 당단백질 H에 결합하는 단클론 항체)를 포함하는 ADC의 시험관 내에서의 항-종양 활성을 또한 평가하였다. 그 결과가 표 21에 기술되어 있다.
[표 21]
Figure pct00471
Figure pct00472
Bcl-xL 저해제 페이로드에 콘쥬게이션된 비-표적화 항체 MSL109를 포함하는 ADC가 나타내는 낮은 항-종양 활성과는 대조적으로, B7-H3-표적화 ADC는 더 큰 종양 세포 사멸을 나타냈으며, 이는 B7-H3-발현 종양 세포로의 B7-H3-표적화 ADC의 항원-의존성 전달을 반영한다.
이러한 ADC들 중 2가지의 항-종양 활성을 실시예 7에 기술된 바와 같이 NCI-H146 소세포 폐암 세포주를 사용하여 세포독성 분석에서 테스트하였다. 그 결과가 표 22에 기술되어 있다.
[표 22]
Figure pct00473
huAb13v1-AAA E2 및 huAb13v1-WD E2를 H146 세포를 사용하여 세포독성에 대하여 테스트하였다. 둘 다의 콘쥬게이트는 효력있고 비견되는 세포독성을 나타낸다.
실시예 21: 항-B7-H3 ADC의 생체 내에서의 분석
인간화 항-B7-H3 항체 huAb13v1, huAb3v2.5 및 huAb3v2.6을 선택하여 몇몇 Bcl-xL 저해제 페이로드와 콘쥬게이션시키고, 다수의 Bcl-xL 저해제 워헤드 (신톤)를 사용한 콘쥬게이트로서 소세포 폐암의 이종이식 모델 (H146)에서 평가하였다 (실시예 7 및 실시예 8에 기술된 방법을 사용함). 그 결과가 표 23 및 표 24에 요약되어 있다.
[표 23]
Figure pct00474
[표 24]
Figure pct00475
인간화 항-B7-H3 항체 huAb13v1을 Bcl-xL 저해제 신톤 WD와 콘쥬게이션시키고, 콘쥬게이트로서 B7-H3-양성 소세포 폐암의 이종이식 모델 (H1650)에서 평가하였다 (실시예 7 및 실시예 8에서 기술된 방법을 사용함). 대조구로서, 비-표적화 IgG 이소타입 매칭 항체 (Ab095)의 생체 내에서의 항-종양 활성을 또한 평가하였다. 그 결과가 표 25에 요약되어 있다.
[표 25]
Figure pct00476
표 24 및 표 25에 나타낸 바와 같이, 비-표적화 IgG 이소타입-매칭 항체 Ab095를 사용하여 관찰된 활성의 결여와는 대조적으로, B7-H3-표적화 Bcl-xL ADC는 종양 성장 저해 (TGI) 및 종양 성장 지연 (TGD)을 나타냈으며, 이는 이러한 이종이식 마우스 모델에서 Bcl-xL 저해제를 B7-H3-발현 종양 세포로 전달하는 B7-H3-표적화 ADC의 항원-의존성 전달을 반영하는 것이었다. 추가 대조구로서, Bcl-xL 저해제 신톤과 콘쥬게이션된 비-표적화 항체 MSL109를 포함하는 ADC의 생체 내에서의 항-종양 활성을 B7-H3-양성 소세포 폐암의 이종이식 모델 (H1650)에서 평가하였다. 이러한 ADC의 활성을, 대조구로서 비-표적화 IgG 이소타입 매칭 항체, Ab095의 것과 비교하였다. 표 26에 나타낸 바와 같이, Bcl-xL 저해제 신톤에 콘쥬게이션된 비-표적화 항체 MSL109를 포함하는 ADC는 매우 보통인 종양 성장 저해 및 낮거나 전혀 없는 종양 성장 지연을 나타냈다. 이와는 대조적으로, B7-H3-표적화 Bcl-xL ADC (표 25에 나타낸 바와 같음)는 훨씬 더 큰 종양 성장 저해 (TGI) 및 종양 성장 지연 (TGD)을 나타냈으며, 이는 이러한 마우스 이종이식 모델에서의 B7-H3-발현 세포로의 이러한 ADC의 항원-의존성 전달을 반영하는 것이었다.
[표 26]
Figure pct00477
실시예 22: B7-H3 병용 요법
정제된 DAR2 (E2) 콘쥬게이트로서의 CZ 또는 TX 콘쥬게이트로서의 huAb13v1의 항-종양 활성을 실시예 8에 기술된 방법을 사용하여 인간 기원의 비소세포 폐암의 이종이식 모델 (H1650, H1299, H1975, 및 EBC1)에서 특성화하였다. 항-종양 활성을 단일요법제 및 도세탁셀과의 조합물로 평가하였다 (H1650, H1299, H1975, 및 EBC1). 그 결과가 표 27에 제시되어 있다.
[표 27]
Figure pct00478
Figure pct00479
표 27에 제시된 결과는 CZ, TX, WD 또는 AAA 정제 DAR2 (E2) 콘쥬게이트로서의 상기 huAb13v1이 단일요법제로서 모든 4가지 NSCLC 이종이식 모델의 성장을 저해하였음을 입증한다. 게다가, CZ, TX, WD 또는 AAA 정제 DAR2 (E2) 콘쥬게이트로서의 huAb13v1은 효과적으로 도세탁셀과 조합되어 더 지속되는 종양 성장 저해를 생성하였다. 이것은 H1650 이종이식 모델에서 가장 극적으로 예시되며, 여기서, 병용 요법은 467%와 >717% 사이의 TGD로 이어졌고, 반면에 개별 단일요법제들은 67% 내지 158%의 범위의 TGD로 이어졌다. 이러한 결과는 화학요법제와 조합되어 투약될 Bcl-xL 저해제 (Bcl-xLi) ADC의 임상적 유용성을 지지한다.
Figure pct00480
Figure pct00481
Figure pct00482
Figure pct00483
Figure pct00484
Figure pct00485
Figure pct00486
Figure pct00487
Figure pct00488
Figure pct00489
Figure pct00490
Figure pct00491
Figure pct00492
Figure pct00493
Figure pct00494
Figure pct00495
Figure pct00496
Figure pct00497
Figure pct00498
Figure pct00499
Figure pct00500
참고로 포함시킴
본 출원 전체에 걸쳐 인용된 모든 참고 문헌, 특허, 계류 중인 특허 출원 및 공개 특허의 내용은 명백하게 본원에 참고로 포함된다.
등가물
당업자라면 겨우 일상적인 실험을 이용하여 본원에 개시된 본 발명의 특정 실시 형태에 대한 많은 등가물을 확인할 수 있거나 인식할 것이다. 그러한 등가물을 하기 청구범위에 포함시키고자 한다.
SEQUENCE LISTING <110> ABBVIE INC. <120> ANTI-B7-H3 ANTIBODIES AND ANTIBODY DRUG CONJUGATES <130> 117813-12620 <150> US 62/347,476 <151> 2016-06-08 <150> US 62/366,511 <151> 2016-07-25 <160> 182 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: chAb2 VH amino acid sequence <400> 1 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile His Pro Asp Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Arg Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Val Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: chAb2 VH CDR1 amino acid sequence 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Sequence <220> <223> Synthetic: huAb18VH.1, huAb18v1, and huAb18v5 VH amino acid sequence <400> 116 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Asn Ser Arg Asn Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Thr Pro Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 117 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb18VH.1a, huAb18v3, huAb18v8, and huAb18v9 VH amino acid sequence <400> 117 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Asn Ser Arg Asn Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Thr Thr Leu Thr Ala Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Thr Pro Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 118 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb18VH.1b, huAb18v2, huAb18v4, huAb18v6, huAb18v7, and huAb18v10 VH amino acid sequence <400> 118 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Asn Ser Arg Asn Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 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<213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb18VL.1a, huAb18v3, and huAb18v4 VL amino acid sequence <400> 121 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Val Ser 50 55 60 Val Ser Gly Thr Glu His Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 122 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb18VL.1b, huAb18v8, and huAb18v10 VL amino acid sequence <400> 122 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Val Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu His Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 123 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb18VL.2, huAb18v5, and huAb18v6 VL amino acid sequence <400> 123 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Lys 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 124 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb18VL.2a, huAb18v7, and huAb18v9 VL amino acid sequence <400> 124 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Val Ser 50 55 60 Val Ser Gly Thr Asp His Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 125 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3VH.1, huAb3v1, and huAb3v4 VH amino acid sequence <400> 125 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Leu Ile His Pro Asp Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser 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huAb3v5 VH amino acid sequence <400> 127 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile His Pro Asp Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 128 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3VL.1, huAb3v1, and huAb3v2 VL amino acid sequence <400> 128 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asp Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 129 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3VL.1a and huAb3v3 VL amino acid sequence <400> 129 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asp Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 130 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3VL.1b, huAb3v4, huAb3v5, and huAb3v6 VL amino acid sequence <400> 130 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asp Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 131 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3v2.1, huAb3v2.2, and huAb3v2.3 VH amino acid sequence <400> 131 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile His Pro Trp Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 132 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3v2.1, huAb3v2.2, and huAb3v2.3 VH CDR2 amino acid sequence <400> 132 Leu Ile His Pro Trp Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 133 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3v2.1, huAb3v2.4, and huAb3v2.7 VL amino acid sequence <400> 133 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Ser Gly Asp Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 136 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3v2.2, huAb3v2.5, and huAb3v2.8 VL CDR1 amino acid sequence <400> 136 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Arg Asp Thr Tyr Leu Arg 1 5 10 15 <210> 137 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3v2.3, huAb3v2.6, and huAb3v2.9 VL amino acid sequence <400> 137 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gln Asp Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 138 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3v2.3, huAb3v2.6, and huAb3v2.9 VL CDR1 amino acid sequence <400> 138 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gln Asp Thr Tyr Leu Arg 1 5 10 15 <210> 139 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3v2.4, huAb3v2.5, and huAb3v2.6 VH amino acid sequence <400> 139 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile His Pro Glu Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 140 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3v2.4, huAb3v2.5, and huAb3v2.; VH CDR2 amino acid sequence <400> 140 Leu Ile His Pro Glu Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 141 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3v2.7, huAb3v2.8, and huAb3v2.9 VH amino acid sequence <400> 141 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile His Pro Ile Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 142 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb3v2.7, huAb3v2.8, and huAb3v2.9 VH CDR2 amino acid sequence <400> 142 Leu Ile His Pro Ile Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 143 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb13VL.1, huAb13v2, huAb13v5, and huAb13v7 VL amino acid sequence <400> 143 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Phe Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Trp Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 144 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: huAb13VL.1a, huAb13v1, huAb13v3, and huAb13v8 VL amino acid sequence <400> 144 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Phe Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln 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Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe 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Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Arg Asp Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 172 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Amino acid sequence of huAb3v2.6 heavy chain <400> 172 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile His Pro Glu Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 173 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Amino acid sequence of huAb3v2.6 light chain <400> 173 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gln Asp Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 174 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IGHV1-69*06_IGHJ6 <220> <221> misc_feature <222> (99)..(106) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; this section represents the CDR-H3 region <400> 174 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 175 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IGKV2-28*01_IGKJ4 <220> <221> misc_feature <222> (94)..(102) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid ; this section represents the CDR-L3 region <400> 175 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Xaa Xaa Xaa 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 176 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IGHV4-b_IGHJ6 <220> <221> misc_feature <222> (99)..(105) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; this section represents the CDR-H3 region <400> 176 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Ser Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 177 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: IGKV1-39_IGKJ2 <220> <221> misc_feature <222> (89)..(97) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid; this section represents the CDR-L3 region <400> 177 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 85 90 95 Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 178 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Amino acid sequence of huAb3 VL1 variants <220> <221> misc_feature <222> (33)..(33) <223> X can be any naturally occurring amino acid, except M, C, N, D or Q <400> 178 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Xaa Gly Asp Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 179 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Amino acid sequence of huAb3 VL1 variants <220> <221> misc_feature <222> (34)..(34) <223> X can be any naturally occurring amino acid except M, C, G, S, N, or P <400> 179 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Xaa Asp Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 180 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Amino acid sequence of huAb3 VH1b variants <220> <221> misc_feature <222> (54)..(54) <223> X can be any naturally occurring amino acid, except M, C, N, D or Q <400> 180 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile His Pro Xaa Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 181 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Amino acid sequence of huAb3 VH1b variants <220> <221> misc_feature <222> (55)..(55) <223> X can be any naturally occurring amino acid except M, C, G, S, N, or P <400> 181 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile His Pro Asp Xaa Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Glu Met Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Gly Gly Arg Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 182 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: chAb13 VL CDR3 amino acid sequence <400> 182 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5

Claims (137)

  1. 인간 B7-H3(hB7-H3)에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 12의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  2. 제1항에 있어서, 서열 번호 140의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 서열 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 136 또는 138 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  4. 인간 B7-H3에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 35의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 39의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  5. 제4항에 있어서, 서열 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 38의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 서열 번호 33의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 37의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, IgG 이소타입(isotype)인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  8. 제7항에 있어서, IgG1 또는 IgG4 이소타입인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 표면 플라스몬 공명에 의해 결정할 경우 KD가 1.5 x 10-8 이하인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  10. hB7-H3에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은
    서열 번호 10, 11, 및 12의 CDR 세트를 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 14, 7, 및 15의 CDR 세트를 포함하는 경쇄 가변 영역, 또는
    서열 번호 33, 34, 및 35의 CDR 세트를 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 37, 38, 및 39의 CDR 세트를 포함하는 경쇄 가변 영역 중 어느 하나를 포함하는, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  11. 제10항에 있어서, 인간화된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  12. 제11항에 있어서, 인간 수용자 프레임워크(acceptor framework)를 추가로 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  13. 제12항에 있어서, 상기 인간 수용자 프레임워크는 서열 번호 155, 156, 164, 165, 166, 및 167로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  14. 제13항에 있어서, 상기 인간 수용자 프레임워크는 하나 이상의 프레임워크 영역 아미노산 치환을 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  15. 제14항에 있어서, 프레임워크의 아미노산 서열은 상기 인간 수용자 프레임워크의 서열과 65% 이상 동일하며, 상기 인간 수용자 프레임워크와 동일한 70개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 인간 수용자 프레임워크는 주요 잔기에서의 하나 이상의 프레임워크 영역 아미노산 치환을 포함하며, 상기 주요 잔기는
    CDR에 인접한 잔기;
    글리코실화 부위 잔기;
    희귀 잔기;
    인간 B7-H3과 상호작용할 수 있는 잔기;
    CDR과 상호작용할 수 있는 잔기;
    표준 잔기(canonical residue);
    중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이의 접촉 잔기;
    베르니에(Vernier) 구역 내의 잔기; 및
    초티아(Chothia)-정의된 가변 중쇄 CDR1과 카바트(Kabat)-정의된 제1 중쇄 프레임워크 사이에서 중첩되는 영역에서의 잔기로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  17. 제16항에 있어서, 상기 주요 잔기는 48H, 67H, 69H, 71H, 73H, 94H, 및 2L로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  18. 제17항에 있어서, 주요 잔기 치환은 가변 중쇄 영역에 있으며, M48I, V67A, I69L, A71V, K73R, 및 R94G로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 주요 잔기 치환은 가변 경쇄 영역에 있으며 I2V인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  20. hB7-H3에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 서열 번호 25, 26, 및 27의 CDR 세트를 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 29, 30, 및 31의 CDR 세트를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  21. 제20항에 있어서, 인간화된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  22. 제21항에 있어서, 인간 수용자 프레임워크를 추가로 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  23. 제22항에 있어서, 상기 인간 수용자 프레임워크는 서열 번호 155 내지 158로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 인간 수용자 프레임워크는 하나 이상의 프레임워크 영역 아미노산 치환을 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  25. 제24항에 있어서, 프레임워크의 아미노산 서열은 상기 인간 수용자 프레임워크의 서열과 65% 이상 동일하며, 상기 인간 수용자 프레임워크와 동일한 70개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  26. 제24항 또는 제25항에 있어서, 상기 인간 수용자 프레임워크는 주요 잔기에서의 하나 이상의 프레임워크 영역 아미노산 치환을 포함하며, 상기 주요 잔기는
    CDR에 인접한 잔기;
    글리코실화 부위 잔기;
    희귀 잔기;
    인간 B7-H3과 상호작용할 수 있는 잔기;
    CDR과 상호작용할 수 있는 잔기;
    표준 잔기;
    중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이의 접촉 잔기;
    베르니에 구역 내의 잔기; 및
    초티아-정의된 가변 중쇄 CDR1과 카바트-정의된 제1 중쇄 프레임워크 사이에서 중첩되는 영역에서의 잔기로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  27. 제26항에 있어서, 상기 주요 잔기는 69H, 46L, 47L, 64L, 및 71L로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  28. 제27항에 있어서, 주요 잔기 치환은 가변 중쇄 영역에 있으며 L69I인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  29. 제27항 또는 제28항에 있어서, 주요 잔기 치환은 가변 경쇄 영역에 있으며, L46P, L47W, G64V, 및 F71H로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  30. 서열 번호 10에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 140에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 12에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 136 또는 138에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 7에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 15에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  31. 서열 번호 33에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 34에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 35에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 37에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 38에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 39에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  32. 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  33. 서열 번호 139의 서열에 대하여 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열 번호 135의 서열에 대하여 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  34. 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 137에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  35. 서열 번호 139의 서열에 대하여 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열 번호 137의 서열에 대하여 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  36. 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  37. 서열 번호 147의 서열에 대하여 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열 번호 144의 서열에 대하여 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 시노 B7-H3에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 hB7-H3에 대한 해리 상수(KD)를 갖는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분: 약 10-7 M 이하; 약 10-8 M 이하; 약 10-9 M 이하; 약 10-10 M 이하; 약 10-11 M 이하; 약 10-12 M 이하; 및 10-13 M 이하.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 IgM 불변 도메인, 인간 IgG1 불변 도메인, 인간 IgG2 불변 도메인, 인간 IgG3 불변 도메인, 인간 IgG4 불변 도메인, 인간 IgA 불변 도메인 또는 인간 IgE 불변 도메인의 중쇄 면역글로불린 불변 도메인을 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄인 4개의 폴리펩티드 사슬을 갖는 IgG인 항체.
  42. 제41항에 있어서, 인간 IgG1 불변 도메인은 서열 번호 159 또는 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 Ig 카파 불변 도메인 또는 인간 Ig 람다 불변 도메인을 포함하는 경쇄 면역글로불린 불변 도메인을 추가로 포함하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분과 경쟁하는 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 항-hB7-H3 항체, 또는 이의 항원 결합 부분, 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
  46. 링커를 통하여 약물에 콘쥬게이션된(conjugated) 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 항-hB7-H3 항체를 포함하는 항-hB7-H3 항체 약물 콘쥬게이트(Antibody Drug Conjugate; ADC).
  47. 제46항에 있어서, 약물은 아우리스타틴 또는 피롤로벤조디아제핀(PBD)인 ADC.
  48. 제46항에 있어서, 약물은 Bcl-xL 저해제인 ADC.
  49. 링커에 의해 항-인간 B7-H3(hB7-H3) 항체에 연결된 약물을 포함하는 항-hB7-H3 항체 약물 콘쥬게이트(ADC)로서, 약물은 하기 구조 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId에 따른 Bcl-xL 저해제인, ADC:
    [화학식 IIa]
    Figure pct00501

    [화학식 IIb]
    Figure pct00502

    [화학식 IIc]
    Figure pct00503

    [화학식 IId]
    Figure pct00504

    (여기서,
    Ar1은
    Figure pct00505
    Figure pct00506
    로부터 선택되며, 독립적으로 할로, 히드록시, 니트로, 저급 알킬, 저급 헤테로알킬, C1-4알콕시, 아미노, 시아노 및 할로메틸로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고;
    Ar2는
    Figure pct00507

    Figure pct00508

    Figure pct00509
    또는 이들의 N-옥시드로부터 선택되며, 독립적으로 할로, 히드록시, 니트로, 저급 알킬, 저급 헤테로알킬, C1-4알콕시, 아미노, 시아노 및 할로메틸로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고, 여기서, R12-Z2b-, R'-Z2b-, #-N(R4)-R13-Z2b-, 또는 #-R'-Z2b- 치환체는 치환될 수 있는 임의의 Ar2 원자에서 Ar2에 부착되고;
    Z1은 N, CH, C-할로, C-CH3 및 C-CN으로부터 선택되고;
    Z2a 및 Z2b는 각각, 서로 독립적으로, 결합, NR6, CR6aR6b, O, S, S(O), S(O)2, -NR6C(O)-,-NR6aC(O)NR6b-, 및 -NR6C(O)O-로부터 선택되고;
    R'은
    Figure pct00510
    이며, 여기서, R'에 부착되는 #은, 치환될 수 있는 임의의 R' 원자에서 R'에 부착되고;
    X'는 각각의 경우에 -N(R10)- , -N(R10)C(O)-, -N(R10)S(O)2-, -S(O)2N(R10)-, 및 -O-로부터 선택되고;
    n은 0 내지 3으로부터 선택되고;
    R10은 독립적으로 각각의 경우에 수소, 저급 알킬, 헤테로사이클, 아미노알킬, G-알킬, 및 (CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-NH2로부터 선택되고;
    G는 각각의 경우에 독립적으로 폴리올, 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
    SPa는 독립적으로 각각의 경우에 산소, ­S(O)2N(H)­, ­N(H)S(O)2­, ­N(H)C(O)­, ­C(O)N(H) ­, ­N(H)­, 아릴렌, 헤테로사이클렌, 및 선택적으로 치환된 메틸렌으로부터 선택되고; 메틸렌은 ­NH(CH2)2G, NH2, C1-8알킬, 및 카르보닐 중 하나 이상으로 선택적으로 치환되고;
    m2는 0 내지 12로부터 선택되고;
    R1은 수소, 메틸, 할로, 할로메틸, 에틸, 및 시아노로부터 선택되고;
    R2는 수소, 메틸, 할로, 할로메틸 및 시아노로부터 선택되고;
    R3은 수소, 메틸, 에틸, 할로메틸 및 할로에틸로부터 선택되고;
    R4는 수소, 저급 알킬 및 저급 헤테로알킬로부터 선택되거나 또는 R13의 원자와 함께 3 내지 7개의 고리 원자를 갖는 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성하고;
    R6, R6a 및 R6b는 각각, 서로 독립적으로, 수소, 선택적으로 치환된 저급 알킬, 선택적으로 치환된 저급 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 시클로알킬 및 선택적으로 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나 또는 R4로부터의 원자 및 R13으로부터의 원자와 함께 3 내지 7개의 고리 원자를 갖는 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리를 형성하고;
    R11a 및 R11b는 각각, 서로 독립적으로, 수소, 할로, 메틸, 에틸, 할로메틸, 히드록실, 메톡시, CN, 및 SCH3으로부터 선택되고;
    R12는 선택적으로 R'이거나 또는 수소, 할로, 시아노, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 헤테로알킬, 선택적으로 치환된 헤테로시클릴, 및 선택적으로 치환된 시클로알킬로부터 선택되고;
    R13은 선택적으로 치환된 C1-8 알킬렌, 선택적으로 치환된 헤테로알킬렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클렌, 및 선택적으로 치환된 시클로알킬렌으로부터 선택되고;
    #는 링커에 대한 부착점을 나타냄).
  50. 제49항에 있어서, 하기 구조 화학식 I에 따른 화합물인 ADC:
    [화학식 I]
    Figure pct00511

    (여기서,
    D는 화학식 IIa, IIb, IIc 또는 IId의 Bcl-xL 저해제 약물이고;
    L은 링커이고;
    Ab는 항-hB7-H3 항체이고;
    LK는 링커 (L)를 항-hB7-H3 항체 (Ab)에 연결시키는 공유적 연결체를 나타내고;
    m은 1 내지 20의 범위의 정수임).
  51. 제49항 또는 제50항에 있어서, G는 각각의 경우에 염 또는 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티인 ADC.
  52. 제49항 또는 제50항에 있어서, G는 각각의 경우에 카르복실레이트, 술포네이트, 포스포네이트, 또는 암모늄의 염인 ADC.
  53. 제49항 또는 제50항에 있어서, G는 각각의 경우에 카르복실레이트, 술포네이트, 포스포네이트, 및 아민으로 이루어진 군으로부터 선택되는 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티인 ADC.
  54. 제49항 또는 제50항에 있어서, G는 각각의 경우에 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 또는 폴리올을 함유하는 모이어티인 ADC.
  55. 제54항에 있어서, 폴리올은 당인 ADC.
  56. 제49항 또는 제50항에 있어서, R'는 링커에의 부착에 적합한 하나 이상의 치환가능 질소를 포함하는 화학식 IIa 또는 화학식 IId의 ADC.
  57. 제56항에 있어서, G는 각각의 경우에
    Figure pct00512

    로부터 선택되며, 여기서, M은 수소 또는 양으로 하전된 반대이온인 ADC.
  58. 제49항 또는 제50항에 있어서, R'는
    Figure pct00513

    Figure pct00514

    Figure pct00515

    Figure pct00516

    Figure pct00517
    로부터 선택되며, 여기서, #는 화학식 IIb 또는 화학식 IIc의 ADC의 Bcl-xL 저해제 약물 내의 수소 원자 또는 링커 L에 대한 화학식 IIa 또는 화학식 IId의 ADC의 Bcl-xL 저해제 약물 내의 부착점을 나타내는 ADC.
  59. 제49항 또는 제50항에 있어서, Ar1은
    Figure pct00518
    및
    Figure pct00519
    로부터 선택되며, 독립적으로 할로, 시아노, 메틸, 및 할로메틸로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 ADC.
  60. 제59항에 있어서, Ar1은
    Figure pct00520
    인 ADC.
  61. 제49항 또는 제50항에 있어서, Ar2는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된
    Figure pct00521
    인 ADC.
  62. 제49항 또는 제50항에 있어서, Ar2는
    Figure pct00522

    Figure pct00523

    Figure pct00524
    로부터 선택되고; 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 ADC.
  63. 제61항에 있어서, Ar2는 하나 이상의 가용화 기로 치환된 ADC.
  64. 제63항에 있어서, 각각의 가용화 기는, 서로 독립적으로, 폴리올을 함유하는 모이어티, 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 염, 또는 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되는 ADC.
  65. 제62항에 있어서, Ar2는 하나 이상의 가용화 기로 치환된 ADC.
  66. 제65항에 있어서, 각각의 가용화 기는, 서로 독립적으로, 폴리올을 함유하는 모이어티, 4 내지 30개의 반복 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜, 염, 또는 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되는 ADC.
  67. 제49항 또는 제50항에 있어서, Z1은 N인 ADC.
  68. 제49항 또는 제50항에 있어서, Z2a는 O인 ADC.
  69. 제49항 또는 제50항에 있어서, R1은 메틸 또는 클로로인 ADC.
  70. 제49항 또는 제50항에 있어서, R2는 수소 또는 메틸인 ADC.
  71. 제49항 또는 제50항에 있어서, R2는 수소인 ADC.
  72. 제49항 또는 제50항에 있어서, Z2b는 O인 ADC.
  73. 제49항 또는 제50항에 있어서, Z2b는 NH 또는 CH2인 ADC.
  74. 제49항 또는 제50항에 있어서, 구조 화학식 IIa에 따른 화합물인 ADC.
  75. 제74항에 있어서, 구조 (C.1) 내지 구조 (C.21)로부터 선택되는 코어를 포함하는 ADC:
    Figure pct00525

    Figure pct00526

    Figure pct00527

    Figure pct00528

    Figure pct00529

    Figure pct00530
  76. 제74항에 있어서, 하기 구조 화학식 IIa.1에 따른 화합물인 ADC:
    [화학식 IIa.1]
    Figure pct00531

    (여기서,
    Y는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
    r은 0 또는 1이고;
    s는 1, 2 또는 3임).
  77. 제74항에 있어서, 하기 구조 화학식 IIa.2에 따른 화합물인 ADC:
    [화학식 IIa.2]
    Figure pct00532

    (여기서,
    U는 N, O 및 CH로부터 선택되되, 단, U가 O인 경우, Va 및 R21a가 부재하고;
    R20은 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고;
    R21a 및 R21b는 각각, 서로 독립적으로, 부재하거나 또는 H, C1-C4 알킬 및 G로부터 선택되며, G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
    Va 및 Vb는 각각, 서로 독립적으로, 부재하거나 또는 결합, 및 선택적으로 치환된 알킬렌으로부터 선택되고;
    R20은 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고;
    s는 1, 2 또는 3임).
  78. 제74항에 있어서, 하기 구조 화학식 IIa.3에 따른 화합물인 ADC:
    [화학식 IIa.3]
    Figure pct00533

    (여기서,
    Rb는 H, C1-C4 알킬 및 Jb-G로부터 선택되거나 또는 선택적으로 T의 원자와 함께 3 내지 7개의 원자를 갖는 고리를 형성하고;
    Ja 및 Jb는 각각, 서로 독립적으로, 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌 및 선택적으로 치환된 페닐렌으로부터 선택되고;
    T는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌, CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2, CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2 및 4 내지 10개의 에틸렌 글리콜 단위를 함유하는 폴리에틸렌 글리콜로부터 선택되고;
    G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
    s는 1, 2 또는 3임).
  79. 제49항 또는 제50항에 있어서, 구조 화학식 IIb에 따른 화합물인 ADC.
  80. 제79항에 있어서, 하기 구조 화학식 IIb.1에 따른 화합물인 ADC:
    [화학식 IIb.1]
    Figure pct00534

    (여기서,
    Y는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
    G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택되고;
    r은 0 또는 1이고;
    s는 1, 2 또는 3임).
  81. 제49항 또는 제50항에 있어서, 구조 화학식 IIc에 따른 화합물인 ADC.
  82. 제81항에 있어서, 하기 구조 화학식 IIc.1에 따른 화합물인 ADC:
    [화학식 IIc.1]
    Figure pct00535

    (여기서,
    Ya는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
    Yb는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
    R23은 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고;
    G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택됨).
  83. 제81항에 있어서, 하기 구조 화학식 IIc.2에 따른 화합물인 ADC:
    [화학식 IIc.2]
    Figure pct00536

    (여기서,
    Ya는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
    Yb는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
    Yc는 선택적으로 치환된 C1-C8 알킬렌이고;
    R23은 H 및 C1-C4 알킬로부터 선택되고;
    R25는 Yb-G이거나 또는 Yc의 원자와 함께 4 내지 6개의 고리 원자를 갖는 고리를 형성하고;
    G는 폴리올, PEG4-30, 염 및 생리학적 pH에서 하전되는 모이어티로부터 선택됨).
  84. 제49항 또는 제50항에 있어서, Bcl-xL 저해제는 구조 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId의 # 위치에 상응하는 수소가 존재하지 않아서 모노라디칼을 형성하지 않는다는 점에서 개질된 하기 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 ADC:
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3-[2-({2-[2-(카르복시메톡시)에톡시]에틸}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
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    3-[1-({3-[2-(2-{[4-(베타-D-알로피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}에톡시)트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-포스포노에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}에톡시)트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3-{2-[L-알파-아스파르틸(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-{4-[({2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에틸}[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노)메틸]벤질}-2,6-언히드로-L-굴론산;
    4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐 헥소피라노스이두론산;
    6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-포스포노에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(3-술포-L-알라닐)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3-{2-[D-알파-아스파르틸(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[1-(카르복시메틸)피페리딘-4-일]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
    N-[(5S)-5-아미노-6-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸](메틸)아미노}-6-옥소헥실]-N,N-디메틸메탄아미늄;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[피페리딘-4-일(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-포스포노프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[N-(2-카르복시에틸)-L-알파-아스파르틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3-{2-[(2-아미노에틸)(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-[5-(2-아미노에톡시)-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-술포-L-알라닐)(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에틸}(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[5,4-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(카르복시메톡시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-카르복시프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3-{2-[L-알파-아스파르틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(1,3-디히드록시프로판-2-일)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[5-(2-아미노에톡시)-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸){2-[(2-술포에틸)아미노]에틸}아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[메틸(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)(피페리딘-4-일)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로-2H-1,4-벤족사진-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5-(3-술포프로폭시)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-([1,3]티아졸로[4,5-b]피리딘-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]피리딘-2-카르복실산;
    (1
    Figure pct00537
    )-1-({2-[5-(1-{[3-(2-아미노에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-카르복시피리딘-2-일]-8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-5-일}메틸)-1,5-언히드로-D-글루시톨;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-카르복시프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(3-포스포노프로필)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[4-(베타-D-글루코피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
    3-(1-{[3-(2-{[4-(베타-D-알로피라노실옥시)벤질]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3-{2-[아제티딘-3-일(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3-{2-[(3-아미노프로필)(2-술포에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(N6,N6-디메틸-L-리실)(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3-{2-[(3-아미노프로필)(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산;
    3-{1-[(3-{2-[아제티딘-3-일(메틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}-6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-7-일]피리딘-2-카르복실산;
    N6-(37-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사헵타트리아콘탄-37-일)-L-리실-N-[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]-L-알라닌아미드;
    메틸 6-[4-(3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}프로필)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일]-6-데옥시-베타-L-글루코피라노시드;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[5-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)퀴놀린-3-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-5,6-디히드로이미다조[1,5-a]피라진-7(8H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-{6-카르복시-5-[1-({3-[2-({3-[1-(베타-D-글루코피라누로노실)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일]프로필}아미노)에톡시]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-일}-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린;
    6-[7-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-1H-인돌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-6-[3-(메틸아미노)프로필]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    5-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-5-데옥시-D-아라비니톨;
    1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨;
    6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)이소퀴놀린-6-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
    1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1,2-디데옥시-D-에리스로-펜티톨;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-(2-{[(2S,3S)-2,3,4-트리히드록시부틸]아미노}에톡시)트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(2S,3S,4R,5R,6R)-2,3,4,5,6,7-헥사히드록시헵틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[({3-[(1,3-디히드록시프로판-2-일)아미노]프로필}술포닐)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(3-{[1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일]아미노}-3-옥소프로필)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(3S)-3,4-디히드록시부틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산;
    4-({[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}메틸)페닐 베타-D-글루코피라노스이두론산;
    3-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}프로필 베타-D-글루코피라노스이두론산;
    6-[4-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-2-옥시도이소퀴놀린-6-일]-3-[1-({3,5-디메틸-7-[2-(메틸아미노)에톡시]트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}메틸)-5-메틸-1H-피라졸-4-일]피리딘-2-카르복실산;
    6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]아세트아미도}트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3,5-디메틸-7-({2-[(2-술포에틸)아미노]에틸}술파닐)트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산; 및
    6-{8-[(1,3-벤조티아졸-2-일)카르바모일]-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일}-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{3-[(2-술포에틸)아미노]프로필}트리시클로[3.3.1.13,7]데칸-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산.
  85. 제49항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 리소좀 효소에 의해 절단가능한 ADC.
  86. 제85항에 있어서, 리소좀 효소는 카텝신(Cathepsin) B인 ADC.
  87. 제49항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 하기 구조 화학식 IVa, IVb, IVc, 또는 IVd에 따른 세그먼트를 포함하는 ADC:
    Figure pct00538

    Figure pct00539

    (여기서,
    펩티드는 리소좀 효소에 의해 절단가능한 펩티드(N→C로 예시되며, 여기서, 펩티드는 아미노 및 카르복시 "말단"을 포함함)를 나타내고;
    T는 하나 이상의 에틸렌 글리콜 단위 또는 알킬렌 사슬, 또는 이들의 조합을 포함하는 중합체를 나타내고;
    Ra는 수소, C1-6 알킬, SO3H 및 CH2SO3H로부터 선택되고;
    Ry는 수소 또는 C1-4 알킬-(O)r-(C1-4 알킬렌)s-G1 또는 C1-4 알킬-(N)-[(C1-4 알킬렌)-G1]2이고;
    Rz는 C1-4 알킬-(O)r-(C1-4 알킬렌)s-G2이고;
    G1은 SO3H, CO2H, PEG 4-32, 또는 당 모이어티이고;
    G2는 SO3H, CO2H, 또는 PEG 4-32 모이어티이고;
    r은 0 또는 1이고;
    s는 0 또는 1이고;
    p는 0 내지 5의 범위의 정수이고;
    q는 0 또는 1이고;
    x는 0 또는 1이고;
    y는 0 또는 1이고;
    Figure pct00540
    는 Bcl-xL 저해제에의 링커의 부착점을 나타내고;
    *는 링커의 나머지에의 부착점을 나타냄).
  88. 제87항에 있어서, 펩티드는 Val-Cit; Cit-Val; Ala-Ala; Ala-Cit; Cit-Ala; Asn-Cit; Cit-Asn; Cit-Cit; Val-Glu; Glu-Val; Ser-Cit; Cit-Ser; Lys-Cit; Cit-Lys; Asp-Cit; Cit-Asp; Ala-Val; Val-Ala; Phe-Lys; Lys-Phe; Val-Lys; Lys-Val; Ala-Lys; Lys-Ala; Phe-Cit; Cit-Phe; Leu-Cit; Cit-Leu; Ile-Cit; Cit-Ile; Phe-Arg; Arg-Phe; Cit-Trp; 및 Trp-Cit로 이루어진 군으로부터 선택되는 ADC.
  89. 제85항에 있어서, 리소좀 효소는 β-글루쿠로니다아제 또는 β-갈락토시다아제인 ADC.
  90. 제49항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 하기 구조 화학식 Va, Vb, Vc, Vd, 또는 Ve에 따른 세그먼트를 포함하는 ADC:
    Figure pct00541

    Figure pct00542

    (여기서,
    q는 0 또는 1이고;
    r은 0 또는 1이고;
    X1은 CH2, O 또는 NH이고;
    Figure pct00543
    는 약물에의 링커의 부착점을 나타내고;
    *는 링커의 나머지에의 부착점을 나타냄).
  91. 제49항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 하기 구조 화학식 VIIIa, VIIIb, 또는 VIIIc에 따른 세그먼트 또는 이의 가수분해 유도체를 포함하는 ADC:
    Figure pct00544

    (여기서,
    Rq는 H 또는 -O-(CH2CH2O)11-CH3이고;
    x는 0 또는 1이고;
    y는 0 또는 1이고;
    G3은 -CH2CH2CH2SO3H 또는 -CH2CH2O-(CH2CH2O)11-CH3이고;
    Rw는 -O-CH2CH2SO3H 또는 -NH(CO)-CH2CH2O-(CH2CH2O)12-CH3이고;
    *는 링커의 나머지에의 부착점을 나타내고;
    Figure pct00545
    는 항체에의 링커의 부착점을 나타냄).
  92. 제49항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 1 내지 6개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜 세그먼트를 포함하는 ADC.
  93. 제50항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, m은 2, 3 또는 4인 ADC.
  94. 제86항에 있어서, 링커 L은 IVa 또는 Ivb로부터 선택되는 ADC.
  95. 제49항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 L은 폐쇄 또는 개방 형태 중 어느 하나의 IVa.1-IVa.8, IVb.1-IVb.19, IVc.1-IVc.7, IVd.1-IVd.4, Va.1-Va.12, Vb.1-Vb.10, Vc.1-Vc.11, Vd.1-Vd.6, Ve.1-Ve.2, VIa.1, VIc.1-V1c.2, VId.1-VId.4, VIIa.1-VIIa.4, VIIb.1-VIIb.8, VIIc.1-VIIc.6으로 이루어진 군으로부터 선택되는 ADC.
  96. 제50항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 L은 IVb.2, IVc.5, IVc.6, IVc.7, IVd.4, Vb.9, VIIa.1, VIIa.3, VIIc.1, VIIc.4, 및 VIIc.5로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서, 각각의 링커의 말레이미드는 항체 Ab와 반응하여, 숙신이미드(폐쇄 형태) 또는 숙신아미드(개방 형태) 중 어느 하나로서의 공유적 부착을 형성한 ADC.
  97. 제49항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 L은 IVb.2, IVc.5, IVc.6, IVd.4, VIIa.1, VIIa.3, VIIc.1, VIIc.4, VIIc.5로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서, 각각의 링커의 말레이미드는 항체 Ab와 반응하여, 숙신이미드(폐쇄 형태) 또는 숙신아미드(개방 형태) 중 어느 하나로서의 공유적 부착을 형성한 ADC.
  98. 제49항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 L은 IVb.2, VIIa.3, IVc.6, 및 VIIc.1로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서,
    Figure pct00546
    는 약물 D에의 부착점이고, @는 LK에의 부착점이며, 링커가 하기에 나타낸 바와 같이 개방 형태로 존재할 때, @는 이것 바로 옆의 카르복실산의 α-위치 또는 β-위치 중 어느 하나에 있을 수 있는 ADC:
    Figure pct00547

    Figure pct00548

    Figure pct00549
  99. 제50항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, LK는 항-hB7H3 항체 Ab 상의 아미노 기에 의해 형성된 연결체인 ADC.
  100. 제98항에 있어서, LK는 아미드 또는 티오우레아인 ADC.
  101. 제50항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, LK는 항-hB7-H3 항체 Ab 상의 술프히드릴 기에 의해 형성된 연결체인 ADC.
  102. 제101항에 있어서, LK는 티오에테르인 ADC.
  103. 제50항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서,
    LK는 아미드, 티오우레아 및 티오에테르로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    m은 1 내지 8의 범위의 정수인 ADC.
  104. 제50항에 있어서,
    D는 제84항에 정의된 Bcl-xL 저해제이고;
    L은 링커 IVa.1-IVa.8, IVb.1-IVb.19, IVc.1-IVc.7, IVd.1-IVd.4, Va.1-Va.12, Vb.1-Vb.10, Vc.1-Vc.11, Vd.1-Vd.6, Ve.1-Ve.2, VIa.1, VIc.1-V1c.2, VId.1-VId.4, VIIa.1-VIIa.4, VIIb.1-VIIb.8, 및 VIIc.1-VIIc.6으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서, 각각의 링커는 항체, Ab와 반응하여 공유적 부착을 형성하였고;
    LK는 티오에테르이고;
    m은 1 내지 8의 범위의 정수인 ADC.
  105. 제50항에 있어서,
    D는 구조 화학식 IIa, IIb, IIc, 또는 IId의 # 위치에 상응하는 수소가 존재하지 않아서 모노라디칼을 형성하지 않는다는 점에서 개질된 하기 화합물:
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-{1-[(3-{2-[(2-카르복시에틸)아미노]에톡시}-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)나프탈렌-2-일]-3-{1-[(3,5-디메틸-7-{2-[(2-술포에틸)아미노]에톡시}트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일)메틸]-5-메틸-1H-피라졸-4-일}피리딘-2-카르복실산;
    1-{[2-({3-[(4-{6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-2-카르복시피리딘-3-일}-5-메틸-1H-피라졸-1-일)메틸]-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일}옥시)에틸]아미노}-1,2-디데옥시-D-아라비노-헥시톨;
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산; 및
    6-[8-(1,3-벤조티아졸-2-일카르바모일)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일]-3-(1-{[3-(2-{[(3S)-3,4-디히드록시부틸]아미노}에톡시)-5,7-디메틸트리시클로[3.3.1.13,7]데스-1-일]메틸}-5-메틸-1H-피라졸-4-일)피리딘-2-카르복실산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 Bcl-xL 저해제이고;
    L은 폐쇄 또는 개방 형태 중 어느 하나의 링커 IVb.2, IVc.5, IVc.6, IVc.7, IVd.4, Vb.9, Vc.11, VIIa.1, VIIa.3, VIIc.1, VIIc.4, 및 VIIc.5로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    LK는 티오에테르이고;
    m은 2 내지 4의 범위의 정수인 ADC.
  106. 제50항에 있어서, huAb3v2.5-CZ, huAb3v2.5-TX, huAb3v2.5-TV, huAb3v2.5-YY, huAb3v2.5-AAA, huAb3v2.5-AAD, huAb3v2.6-CZ, huAb3v2.6-TX, huAb3v2.6-TV, huAb3v2.6-YY, huAb3v2.6-AAD, huAb13v1-CZ, huAb13v1-TX, huAb13v1-TV, huAb13v1-YY, huAb13v1-AAA, huAb13v1-AAD로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서, CZ, TX, TV, YY, AAA, 및 AAD는 표 B에 개시된 신톤이고, 콘쥬게이션된 신톤은 개방 또는 폐쇄 형태 중 어느 하나로 존재하는 ADC.
  107. 제50항에 있어서, 하기 화학식 i 내지 vi로 이루어진 군으로부터 선택되는 ADC:
    [화학식 i]
    Figure pct00550

    [화학식 ii]
    Figure pct00551

    [화학식 iii]
    Figure pct00552

    [화학식 iv]
    Figure pct00553

    [화학식 v]
    Figure pct00554
    및
    [화학식 vi]
    Figure pct00555

    (여기서, m은 1 내지 6의 정수임).
  108. 제107항에 있어서, m은 2 내지 6의 정수인 ADC.
  109. 제49항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 항-hB7-H3 항체는 서열 번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 140에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인 및 서열 번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인; 서열 번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인 및 서열 번호 136 또는 138에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인을 포함하는 ADC.
  110. 제49항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 135에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 ADC.
  111. 제49항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 서열 번호 139에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 137에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 147에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 144에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 중 어느 하나를 포함하는 ADC.
  112. 제49항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 서열 번호 39에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 38에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 도메인 및 서열 번호 37에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 도메인; 및 서열 번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 도메인, 서열 번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 도메인 및 서열 번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 도메인을 포함하는 ADC.
  113. 제49항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄인 4개의 폴리펩티드 사슬을 갖는 IgG인 ADC.
  114. 유효량의 제46항 내지 제113항 중 어느 한 항에 따른 ADC, 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
  115. 복수의 제46항 내지 제113항 중 어느 한 항의 ADC를 포함하는 ADC 혼합물, 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
  116. 제115항에 있어서, ADC 혼합물은 평균 약물:항체 비(drug to antibody ratio; DAR)가 1.5 내지 4인 제약 조성물.
  117. 제115항에 있어서, ADC 혼합물은 각각이 2의 DAR을 갖는 75% 이상의 ADC들을 포함하는 제약 조성물.
  118. 암을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제46항 내지 제113항 중 어느 한 항의 ADC를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  119. 제118항에 있어서, 암은 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 유방암, 난소암, 교모세포종, 전립선암, 췌장암, 결장암, 위암, 흑색종, 간세포암종, 두경부암, 급성 골수성 백혈병(AML), 비호지킨 림프종(NHL), 및 신장암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  120. 제119항에 있어서, 암은 편평 세포 암종인 방법.
  121. 제120항에 있어서, 편평세포암종은 편평상피성 폐암 또는 편평상피성 두경부암인 방법.
  122. 제119항에 있어서, 암은 삼중 음성 유방암인 방법.
  123. 제119항에 있어서, 암은 비소세포 폐암인 방법.
  124. 고형 종양을 갖는 대상체에서 고형 종양 성장을 저해하거나 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 고형 종양 성장이 저해되거나 감소되도록 유효량의 제46항 내지 제114항 중 어느 한 항의 ADC를 고형 종양을 갖는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  125. 제124항에 있어서, 고형 종양은 비소세포 폐암종인 방법.
  126. 제119항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, ADC는 추가 에이전트(agent) 또는 추가 요법제와 조합되어 투여되는 방법.
  127. 제126항에 있어서, 상기 추가 에이전트는 항-PD1 항체(예를 들어 펨브롤리주맙), 항-PD-L1 항체(예를 들어, 아테졸리주맙), 항-CTLA-4 항체(예를 들어 이필리무맙), MEK 저해제(예를 들어 트라메티닙), ERK 저해제, BRAF 저해제(예를 들어 다브라페닙), 오시메르티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 소라페닙, CDK9 저해제(예를 들어 디나시클립), MCL-1 저해제, 테모졸로미드, Bcl-xL 저해제, Bcl-2 저해제(예를 들어 베네토클락스), 이브루티닙, mTOR 저해제(예를 들어 에베롤리무스), PI3K 저해제(예를 들어 부팔리십), 두벨리십, 이델랄리십, AKT 저해제, HER2 저해제(예를 들어 라파티닙), 탁산(예를 들어 도세탁셀, 파클리탁셀, 납-파클리탁셀(nab-paclitaxel)), 베네토클락스, 아우리스타틴을 포함하는 ADC, PBD를 포함하는 ADC(예를 들어 로발피투주맙 테시린), 메이탠시노이드를 포함하는 ADC(예를 들어 TDM1), TRAIL 작용제, 프로테아좀 저해제(예를 들어 보르테조밉), 및 니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라아제(NAMPT) 저해제로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  128. 제125항에 있어서, 상기 추가 요법제는 방사선인 방법.
  129. 제125항에 있어서, 상기 추가 에이전트는 화학요법제인 방법.
  130. 인간 B7-H3(hB7-H3)에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 169의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  131. 인간 B7-H3(hB7-H3)에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 170의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  132. 인간 B7-H3(hB7-H3)에 결합하는 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 172의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 단리된 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  133. 제118항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 활성화 EGFR 돌연변이를 갖는 것으로 특성화된 방법.
  134. 제133항에 있어서, 활성화 EGFR 돌연변이는 엑손 19 결실 돌연변이, 엑손 21에서의 단일-점 치환 돌연변이 L858R, T790M 점 돌연변이, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  135. 하기 구조 화학식 I:
    [화학식 I]
    Figure pct00556

    (여기서,
    D는 화학식 IIa, IIb, IIc 또는 IId의 Bcl-xL 저해제 약물이고;
    L은 링커이고;
    Ab는 huAb3v2.5, huAb3v2.6, 또는 huAb13v1의 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는 hB7-H3 항체이고;
    LK는 링커 L을 항체 Ab에 연결시키는 공유적 연결체를 나타내고;
    m은 1 내지 20의 정수임)에 따른 ADC의 제조 방법으로서,
    상기 방법은
    수성 용액 형태의 항체를 30 내지 40℃에서 15분 이상 동안 유효량의 디술피드 환원제로 처리하고, 그 후 상기 항체 용액을 20 내지 27℃까지 냉각시키는 단계;
    환원된 항체 용액에 2.1 내지 2.176 (표 B)의 군으로부터 선택되는 신톤을 포함하는 물/디메틸 술폭시드의 용액을 첨가하는 단계;
    상기 용액의 pH를 7.5 내지 8.5의 pH까지 조정하는 단계;
    반응을 48 내지 80시간 동안 진행시켜 ADC를 형성하는 단계를 포함하며;
    전기분무 질량 분광법으로 측정할 경우 숙신이미드의 숙신아미드로의 각각의 가수분해에 있어서 질량이 18 ± 2 amu만큼 변화되며;
    ADC를 소수성 상호작용 크로마토그래피로 선택적으로 정제하는, 방법.
  136. 제135항에 있어서, m은 2인 방법.
  137. 제135항 또는 제136항의 방법에 의해 제조된 ADC.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021006619A1 (ko) * 2019-07-09 2021-01-14 주식회사 와이바이오로직스 B7-h3에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2019526529A (ja) * 2016-06-08 2019-09-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
CN109963591B (zh) * 2017-08-04 2023-04-04 江苏恒瑞医药股份有限公司 B7h3抗体-药物偶联物及其医药用途
WO2019225787A1 (ko) * 2018-05-24 2019-11-28 에이비엘바이오 주식회사 항-b7-h3 항체 및 그 용도
MX2020012674A (es) 2018-05-29 2021-02-09 Bristol Myers Squibb Co Porciones autoinmolantes modificadas para usarse en profarmacos y conjugados y metodos de uso y fabricacion.
BR112021002278A2 (pt) * 2018-08-08 2021-07-20 Dragonfly Therapeutics, Inc. proteínas que ligam nkg2d, cd16 e um antígeno associado a tumor
CN114957475B (zh) * 2018-09-26 2023-06-20 福州拓新天成生物科技有限公司 抗b7-h3的单克隆抗体及其在细胞治疗中的应用
JP2022512796A (ja) * 2018-10-26 2022-02-07 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド Ｉ型インターフェロンシグネチャー及び使用方法
EP3883970A4 (en) * 2018-11-22 2022-03-30 Suzhou Kanova Biopharmaceutical Co., Ltd. ANTI-B7-H3 ANTIBODIES
WO2020140094A1 (en) * 2018-12-27 2020-07-02 Gigagen, Inc. Anti-b7-h3 binding proteins and methods of use thereof
CN109912718B (zh) * 2019-03-20 2020-12-11 北京善科生物科技有限公司 B7-h3抗原结合结构域的分离的结合蛋白、核酸、载体、car-t细胞及其应用
CN111808057B (zh) * 2019-04-10 2023-05-09 四川大学 利用α-O-烯基砜作为亲电试剂的铃木反应及其应用
EP3972651A2 (en) 2019-05-20 2022-03-30 Novartis AG Mcl-1 inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use
WO2021003075A1 (en) * 2019-07-03 2021-01-07 Crystal Bioscience Inc. Anti-b7-h3 antibody and methods of use thereof
CN111454357B (zh) * 2019-08-14 2022-03-15 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种含有抗体的肿瘤治疗剂的开发和应用
CN110893236A (zh) * 2019-10-09 2020-03-20 中山大学 溶酶体靶向的抗体药物偶联物及其应用
JP2023502990A (ja) * 2019-11-18 2023-01-26 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 抗ｂ７－ｈ３モノクローナル抗体およびその使用方法
WO2021150792A1 (en) 2020-01-21 2021-07-29 Micurx Pharmaceuticals, Inc. Novel compounds and composition for targeted therapy of kidney-associated cancers
CN113527487A (zh) * 2020-04-22 2021-10-22 复星凯特生物科技有限公司 抗人b7-h3的单克隆抗体及其应用
EP4171655A1 (en) * 2020-06-26 2023-05-03 Intocell, Inc. Antibody-drug conjugates comprising anti-b7-h3 antibodies
WO2022104692A1 (en) * 2020-11-20 2022-05-27 Bliss Biopharmaceutical (Hangzhou) Co., Ltd. Engineered antibody, antibody-drug conjugate, and use thereof
KR20230143605A (ko) 2020-11-24 2023-10-12 노파르티스 아게 Bcl-xl 억제제 항체-약물 접합체 및 그의 사용 방법
JP2023550533A (ja) * 2020-12-18 2023-12-01 シャンハイ フダン－チャンジャン バイオ－ファーマシューティカル カンパニー リミテッド Ｂ７－ｈ３を標的とする抗体薬物複合体、その製造方法と使用
AU2021407023A1 (en) * 2020-12-23 2023-07-20 Innovent Biologics (Singapore) Pte. Ltd. Anti-b7-h3 antibody and uses thereof
CN114763381A (zh) * 2021-01-13 2022-07-19 博生吉医药科技(苏州)有限公司 B7-h3嵌合抗原受体修饰的t细胞及其应用
CN114763382A (zh) * 2021-01-13 2022-07-19 博生吉医药科技(苏州)有限公司 靶向人cd276的单克隆抗体及其应用
CN114763388A (zh) * 2021-01-13 2022-07-19 博生吉医药科技(苏州)有限公司 靶向b7-h3的car-t细胞及其在急性髓系白血病治疗中的应用
UY39610A (es) 2021-01-20 2022-08-31 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
KR20230145038A (ko) * 2021-02-09 2023-10-17 메디링크 테라퓨틱스 (쑤저우) 컴퍼니, 리미티드 생물활성 물질 접합체, 이의 제조방법 및 이의 용도
CN113358866B (zh) * 2021-04-22 2023-06-23 四川大学华西医院 基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法及应用
EP4329819A1 (en) * 2021-04-26 2024-03-06 The Regents of the University of California Combination therapy for treating glioblastoma
CN113274502B (zh) * 2021-05-05 2023-01-03 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） 用于特定型三阴乳腺癌免疫治疗的组合物
WO2023051663A1 (zh) * 2021-09-30 2023-04-06 百奥泰生物制药股份有限公司 抗b7-h3抗体及其应用
WO2023160376A1 (en) * 2022-02-25 2023-08-31 Nanjing Probio Biotech Co., Ltd. Antibodies and variants thereof against human b7-h3
CN115073311B (zh) * 2022-03-23 2023-05-23 河南大学 一种高效制备n,n′-二（2羟乙基）苯胺的合成方法
WO2023198884A1 (en) * 2022-04-14 2023-10-19 Debiopharm Research & Manufacturing S.A. Ligand-drug-conjugates with improved pharmacokinetic and drug release properties
WO2023223097A1 (en) 2022-05-20 2023-11-23 Novartis Ag Antibody drug conjugates
WO2023225359A1 (en) 2022-05-20 2023-11-23 Novartis Ag Antibody-drug conjugates of antineoplastic compounds and methods of use thereof
WO2024036961A1 (zh) * 2022-08-19 2024-02-22 北京三秀生物医药科技有限公司 一种抗衰老相关疾病的前药及其使用方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6180370B1 (en) * 1988-12-28 2001-01-30 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins and methods of making the same
US20020081305A1 (en) * 1996-02-15 2002-06-27 Tadanori Mayumi Altering the properties of cells or of particles with menbranes derived from cells by means of lipid-modified proteinaceous molecules
WO2004001381A2 (en) * 2002-06-19 2003-12-31 Raven Biotechnologies, Inc. Novel raag10 cell surface target and a family of antibodies recognizing that target
WO2008066691A2 (en) * 2006-11-08 2008-06-05 Macrogenics West, Inc. Tes7 and antibodies that bind thereto
US20120294796A1 (en) * 2010-03-04 2012-11-22 Macrogenics, Inc. Antibodies Reactive with B7-H3 and Uses Thereof
KR20130010117A (ko) * 2010-03-04 2013-01-25 마크로제닉스, 인크. Ｂ７―ｈ３에 반응성인 항체, 면역학적으로 활성인 이들의 단편 및 이들의 사용법
KR20140033018A (ko) * 2011-04-25 2014-03-17 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항 ｂ７-ｈ３항체
WO2016094505A1 (en) * 2014-12-09 2016-06-16 Abbvie Inc. Antibody drug conjugates with cell permeable bcl-xl inhibitors

Family Cites Families (255)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4434150A (en) 1981-10-19 1984-02-28 Ortho Diagnostic Systems, Inc. Immunological reagents employing polymeric backbone possessing reactive functional groups
DE3378250D1 (en) 1982-04-22 1988-11-24 Ici Plc Continuous release formulations
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
US4510245A (en) 1982-11-18 1985-04-09 Chiron Corporation Adenovirus promoter system
US4486414A (en) 1983-03-21 1984-12-04 Arizona Board Of Reagents Dolastatins A and B cell growth inhibitory substances
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
US6492107B1 (en) 1986-11-20 2002-12-10 Stuart Kauffman Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique
GB2183661B (en) 1985-03-30 1989-06-28 Marc Ballivet Method for obtaining dna, rna, peptides, polypeptides or proteins by means of a dna recombinant technique
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US4968615A (en) 1985-12-18 1990-11-06 Ciba-Geigy Corporation Deoxyribonucleic acid segment from a virus
DE3600905A1 (de) 1986-01-15 1987-07-16 Ant Nachrichtentech Verfahren zum dekodieren von binaersignalen sowie viterbi-dekoder und anwendungen
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4880935A (en) 1986-07-11 1989-11-14 Icrf (Patents) Limited Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
FR2601675B1 (fr) 1986-07-17 1988-09-23 Rhone Poulenc Sante Derives du taxol, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
US4816444A (en) 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
IL106992A (en) 1988-02-11 1994-06-24 Bristol Myers Squibb Co Noble hydrazonic history of anthracycline and methods for their preparation
US5157049A (en) 1988-03-07 1992-10-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services Method of treating cancers sensitive to treatment with water soluble derivatives of taxol
US4942184A (en) 1988-03-07 1990-07-17 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Water soluble, antineoplastic derivatives of taxol
EP0428534B1 (en) 1988-06-14 1995-03-29 Cetus Oncology Corporation Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US5076973A (en) 1988-10-24 1991-12-31 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 3
ES2052027T5 (es) 1988-11-11 2005-04-16 Medical Research Council Clonacion de secuencias de dominio variable de inmunoglobulina.
US4978744A (en) 1989-01-27 1990-12-18 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 10
US4960790A (en) 1989-03-09 1990-10-02 University Of Kansas Derivatives of taxol, pharmaceutical compositions thereof and methods for the preparation thereof
AU652539B2 (en) 1989-05-16 1994-09-01 Medical Research Council Co-expression of heteromeric receptors
CA2016842A1 (en) 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
US4879278A (en) 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
CA2016841C (en) 1989-05-16 1999-09-21 William D. Huse A method for producing polymers having a preselected activity
US4986988A (en) 1989-05-18 1991-01-22 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptides dolastatin 13 and dehydrodolastatin 13
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
AU6430190A (en) 1989-10-10 1991-05-16 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2071867A1 (en) 1989-11-06 1991-05-07 Edith Mathiowitz Method for producing protein microspheres
US5138036A (en) 1989-11-13 1992-08-11 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Isolation and structural elucidation of the cytostatic cyclodepsipeptide dolastatin 14
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
SG48759A1 (en) 1990-01-12 2002-07-23 Abgenix Inc Generation of xenogenic antibodies
US5124471A (en) 1990-03-26 1992-06-23 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Bifunctional dtpa-type ligand
US5407683A (en) 1990-06-01 1995-04-18 Research Corporation Technologies, Inc. Pharmaceutical solutions and emulsions containing taxol
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
EP0544809B1 (en) 1990-08-24 1998-12-16 Ixsys, Inc. Methods of synthesizing oligonucleotides with random codons
US5278324A (en) 1990-08-28 1994-01-11 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Water soluble derivatives of taxol
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
ATE177782T1 (de) 1990-12-20 1999-04-15 Ixsys Inc Optimierung von bindenden proteinen
US5399363A (en) 1991-01-25 1995-03-21 Eastman Kodak Company Surface modified anticancer nanoparticles
CA2109528A1 (en) 1991-05-01 1992-11-02 Gregory A. Prince A method for treating infectious respiratory diseases
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
US6287792B1 (en) 1991-06-17 2001-09-11 The Regents Of The University Of California Drug delivery of antisense oligonucleotides and peptides to tissues in vivo and to cells using avidin-biotin technology
FR2678833B1 (fr) 1991-07-08 1995-04-07 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouvelles compositions pharmaceutiques a base de derives de la classe des taxanes.
IE922437A1 (en) 1991-07-25 1993-01-27 Idec Pharma Corp Recombinant antibodies for human therapy
AU665025B2 (en) 1991-09-23 1995-12-14 Cambridge Antibody Technology Limited Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
DE69233745D1 (de) 1991-12-02 2008-10-23 Cambridge Antibody Tech Herstellung von Autoantikörpern auf Phagenoberflächen ausgehend von Antikörpersegmentbibliotheken
GB9126094D0 (en) 1991-12-09 1992-02-12 Immune Systems Ltd In vitro antibody production
ES2202310T3 (es) 1991-12-13 2004-04-01 Xoma Corporation Metodos y materiales para la preparacion de dominios variables de anticuerpos modificados y sus usos terapeuticos.
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
GB9201755D0 (en) 1992-01-28 1992-03-11 British Bio Technology Compounds
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
CA2132711C (en) 1992-03-23 2005-02-08 Aquilar Rahman Liposome encapsulated paclitaxel and a method of using the same
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
GB9213077D0 (en) 1992-06-19 1992-08-05 Erba Carlo Spa Polymerbound taxol derivatives
CA2086874E (en) 1992-08-03 2000-01-04 Renzo Mauro Canetta Methods for administration of taxol
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
FR2696458B1 (fr) 1992-10-05 1994-11-10 Rhone Poulenc Rorer Sa Procédé de préparation de dérivés du taxane.
FR2697752B1 (fr) 1992-11-10 1995-04-14 Rhone Poulenc Rorer Sa Compositions antitumorales contenant des dérivés du taxane.
FR2698543B1 (fr) 1992-12-02 1994-12-30 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouvelles compositions à base de taxoides.
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US6034065A (en) 1992-12-03 2000-03-07 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide phenethylamides of dolastatin 10
US5380751A (en) 1992-12-04 1995-01-10 Bristol-Myers Squibb Company 6,7-modified paclitaxels
US5410024A (en) 1993-01-21 1995-04-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
WO1994016729A1 (en) 1993-01-28 1994-08-04 Neorx Corporation Targeted nitric oxide pathway or nitric oxide synthase modulation
US5750106A (en) 1993-01-28 1998-05-12 Novartis Ag Human monoclonal antibodies to cytomegalovirus
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
WO1994018219A1 (en) 1993-02-02 1994-08-18 The Scripps Research Institute Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
US5433364A (en) 1993-02-19 1995-07-18 Dynetics Engineering Corporation Card package production system with burster and carrier verification apparatus
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5415869A (en) 1993-11-12 1995-05-16 The Research Foundation Of State University Of New York Taxol formulation
WO1995015770A1 (en) 1993-12-09 1995-06-15 Neorx Corporation Pretargeting methods and compounds
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
IT1275043B (it) 1994-07-21 1997-07-29 Agerbioss Snc Di Zanin R & C Metodo e relativo prodotto per la difesa delle piante dai parassiti vegetali
US5530097A (en) 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5504191A (en) 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5521284A (en) 1994-08-01 1996-05-28 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides and esters
US5554725A (en) 1994-09-14 1996-09-10 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Synthesis of dolastatin 15
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
AU4755696A (en) 1995-01-05 1996-07-24 Board Of Regents Acting For And On Behalf Of The University Of Michigan, The Surface-modified nanoparticles and method of making and using same
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
US5840929A (en) 1995-04-14 1998-11-24 Bristol-Myers Squibb Company C4 methoxy ether derivatives of paclitaxel
CA2219361C (en) 1995-04-27 2012-02-28 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5705503A (en) 1995-05-25 1998-01-06 Goodall; Brian Leslie Addition polymers of polycycloolefins containing functional substituents
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6127977A (en) 1996-11-08 2000-10-03 Cohen; Nathan Microstrip patch antenna with fractal structure
WO1997007788A2 (en) 1995-08-31 1997-03-06 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
US6331431B1 (en) 1995-11-28 2001-12-18 Ixsys, Inc. Vacuum device and method for isolating periplasmic fraction from cells
PT871490E (pt) 1995-12-22 2003-07-31 Bristol Myers Squibb Co Ligantes de hidrazona ramificada
HU230515B1 (hu) 1996-02-09 2016-10-28 Abbvie Biotechnology Ltd Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai
IT1282692B1 (it) 1996-02-27 1998-03-31 San Raffaele Centro Fond Citochine modificate per l'uso in terapia
ATE508733T1 (de) 1996-03-04 2011-05-15 Penn State Res Found Materialien und verfahren zur steigerung der zellulären internalisierung
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
WO1998008833A1 (en) 1996-08-26 1998-03-05 Bristol-Myers Squibb Company Sulfenamide taxane derivatives
US5773464A (en) 1996-09-30 1998-06-30 Bristol-Myers Squibb Company C-10 epoxy taxanes
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
AU4966597A (en) 1996-11-19 1998-06-10 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Taxol derivatives
EP2305027B1 (en) 1996-12-03 2014-07-02 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and Vkappa regions and antibodies produced therefrom
US5977386A (en) 1996-12-24 1999-11-02 Bristol-Myers Squibb Company 6-thio-substituted paclitaxels
WO1998031346A1 (en) 1997-01-16 1998-07-23 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
CN1254293A (zh) 1997-02-13 2000-05-24 骨疗国际公司 靶向治疗性给药维生素d化合物
US6239104B1 (en) 1997-02-25 2001-05-29 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear and cyclo-depsipeptides dolastatin 16, dolastatin 17, and dolastatin 18
ATE200679T1 (de) 1997-04-14 2001-05-15 Micromet Ag Neues verfahren zur herstellung von anti-humanen antigenrezeptoren und deren verwendungen
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
EP1007967A2 (en) 1997-08-04 2000-06-14 Ixsys, Incorporated Methods for identifying ligand specific binding molecules
US7288665B1 (en) 1997-08-18 2007-10-30 Florida State University Process for selective derivatization of taxanes
JPH1192468A (ja) 1997-09-17 1999-04-06 Yakult Honsha Co Ltd 新規なタキサン誘導体
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
CA2305399A1 (en) 1997-10-08 1999-04-15 Bio Research Corporation Of Yokohama Taxoid derivatives and process for producing the same
US6555367B1 (en) 1997-10-10 2003-04-29 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Complex of biotinylated viral vector and ligand for targeted gene delivery
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
ATE238768T1 (de) 1998-06-24 2003-05-15 Advanced Inhalation Res Inc Grosse poröse partikel ausgestossen von einem inhalator
AU2472400A (en) 1998-10-20 2000-05-08 City Of Hope CD20-specific redirected T cells and their use in cellular immunotherapy of CD20+ malignancies
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
DK2270147T4 (da) 1999-04-09 2020-08-31 Kyowa Kirin Co Ltd Fremgangsmåde til at kontrollere aktiviteten af immunologisk funktionelt molekyle
CN1269087C (zh) 1999-07-31 2006-08-09 朴奎珍 使用数字音频和字幕数据的学习方法和装置
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
WO2001090198A1 (en) 2000-05-24 2001-11-29 Ludwig Institute For Cancer Research Multicomponent conjugates which bind to target molecules and stimulate cell lysis
US7449308B2 (en) 2000-06-28 2008-11-11 Glycofi, Inc. Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes
ES2330330T3 (es) 2000-06-28 2009-12-09 Glycofi, Inc. Procedimiento de produccion de glucoproteinas modificadas.
EP1243276A1 (en) 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
WO2003016466A2 (en) 2001-08-17 2003-02-27 Eli Lilly And Company ANTI-Aβ ANTIBODIES
CN100423777C (zh) 2001-10-25 2008-10-08 杰南技术公司 糖蛋白组合物
US20040028687A1 (en) 2002-01-15 2004-02-12 Waelti Ernst Rudolf Methods and compositions for the targeted delivery of therapeutic substances to specific cells and tissues
AU2003234327B2 (en) 2002-05-01 2008-05-29 Trellis Bioscience, Inc. Binary or polynary targeting and uses thereof
HUE027549T2 (hu) 2002-07-31 2016-10-28 Seattle Genetics Inc Hatóanyagot tartalmazó konjugátumok és alkalmazásuk rák, autoimmun betegség vagy fertõzéses betegség kezelésére
JP2006500364A (ja) 2002-08-16 2006-01-05 イムノージェン インコーポレーテッド 高い反応性と溶解度を有する架橋剤および小分子薬物の標的化送達用コンジュゲートの調製におけるそれらの使用
AU2003256038A1 (en) 2002-08-30 2004-03-19 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Self-immolative dendrimers releasing many active moieties upon a single activating event
JP2006507322A (ja) 2002-11-14 2006-03-02 シンタルガ・ビーブイ 多重自己脱離放出スペーサーとして構築されたプロドラッグ
US7388079B2 (en) 2002-11-27 2008-06-17 The Regents Of The University Of California Delivery of pharmaceutical agents via the human insulin receptor
CA2516455C (en) 2003-02-20 2012-05-01 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
MXPA05009429A (es) 2003-03-05 2005-12-12 Halozyme Inc Glicoproteina hialuronidasa soluble (shasegp), proceso para preparar la misma, usos y composiciones farmaceuticas que la comprenden.
EP1660534A2 (en) 2003-08-22 2006-05-31 MedImmune, Inc. Humanization of antibodies
KR101192496B1 (ko) 2003-11-06 2012-10-18 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
WO2005081898A2 (en) 2004-02-20 2005-09-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Binding peptidomimetics and uses of the same
JP5064037B2 (ja) 2004-02-23 2012-10-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド 複素環式自壊的リンカーおよび結合体
PT2270010E (pt) 2004-03-01 2012-03-12 Spirogen Ltd Derivados de 11-hidroxi-5h-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin- 5-ona como intermediários chave para a preparação de pirrolobenzodiazepinas substituídas em c2
US20050226882A1 (en) 2004-04-08 2005-10-13 Awdalla Essam T Method and multicomponent conjugates for treating cancer
CA2562772A1 (en) 2004-04-15 2005-10-27 Glycofi, Inc. Production of galactosylated glycoproteins in lower eukaryotes
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
CN114053429A (zh) 2004-06-01 2022-02-18 健泰科生物技术公司 抗体-药物偶联物和方法
AU2005294214A1 (en) 2004-10-07 2006-04-20 Emory University Multifunctional nanoparticles conjugates and their use
CA2587766A1 (en) 2004-11-10 2007-03-01 Macrogenics, Inc. Engineering fc antibody regions to confer effector function
EP1695717A1 (en) 2005-02-23 2006-08-30 Ludwig-Maximilians-Universität Transport of nano-and macromolecular structures into cytoplasm and nucleus of cells
US7964089B2 (en) 2005-04-15 2011-06-21 Agamatrix, Inc. Analyte determination method and analyte meter
WO2006111759A1 (en) 2005-04-21 2006-10-26 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines
HUE035853T2 (en) 2005-07-18 2018-05-28 Seattle Genetics Inc Beta-glucuronide-linker-drug conjugates
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP1800695A1 (en) 2005-12-21 2007-06-27 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Immuno-RNA-constructs
JP5346589B2 (ja) 2006-02-02 2013-11-20 シンタルガ・ビーブイ 水溶性ｃｃ−１０６５類似体及びその接合体
EP2041175A4 (en) 2006-06-23 2011-03-16 Augmenta Biolog Llc TARGETED IMMUNOJUGATE
GB0615662D0 (en) 2006-08-07 2006-09-13 Affitech As Antibody
US7598028B2 (en) 2006-11-28 2009-10-06 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for detecting and treating prostate disorders
EP2527363A1 (en) 2007-02-02 2012-11-28 Baylor Research Institute Vaccines based on targeting antigen to dcir expressed on antigen-presenting cells
TWI422594B (zh) 2007-02-02 2014-01-11 Baylor Res Inst 經由樹狀細胞去唾液酸糖蛋白受體（ｄｃ-ａｓｇｐｒ）接合抗原呈現細胞之藥劑
ES2431940T3 (es) 2007-02-16 2013-11-28 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Anticuerpos contra la ERBB3 y usos de los mismos
BRPI0807613A2 (pt) 2007-02-23 2014-06-10 Baylor Res Inst Ativação de antígeno humano presente em células através de clec-6
EP3489260B1 (en) 2007-02-23 2020-12-02 Baylor Research Institute Activation of human antigen-presenting cells through dendritic cell lectin-like oxidized ldl receptor-1 (lox-1)
US8389282B2 (en) 2007-03-30 2013-03-05 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Constitutive expression of costimulatory ligands on adoptively transferred T lymphocytes
EP2152736B1 (en) 2007-05-03 2017-07-05 Lysomab GmbH Complement factor h-derived short consensus repeat-antibody constructs
BRPI0820229A2 (pt) 2007-11-28 2017-05-09 A Stevenson Cheri conjugados de análogos de fumagilina biodegradáveis biocompatíveis
JP5470817B2 (ja) 2008-03-10 2014-04-16 日産自動車株式会社 電池用電極およびこれを用いた電池、並びにその製造方法
US9029508B2 (en) 2008-04-29 2015-05-12 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
AU2009243010B2 (en) 2008-04-30 2015-02-05 Immunogen, Inc. Cross-linkers and their uses
SG189817A1 (en) 2008-04-30 2013-05-31 Immunogen Inc Potent conjugates and hydrophilic linkers
US20090285757A1 (en) 2008-05-16 2009-11-19 Northeastern University Methods of targeting cells for diagnosis and therapy
WO2010025177A1 (en) 2008-08-26 2010-03-04 City Of Hope Method and compositions for enhanced anti-tumor effector functioning of t cells
US20100152725A1 (en) 2008-12-12 2010-06-17 Angiodynamics, Inc. Method and system for tissue treatment utilizing irreversible electroporation and thermal track coagulation
JP5770102B2 (ja) 2008-12-19 2015-08-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド 複素環化合物と使用方法
CN102448486A (zh) 2009-03-06 2012-05-09 艾更斯司股份有限公司 结合于24p4c12蛋白的抗体药物偶联物(adc)
CN102378766A (zh) 2009-03-23 2012-03-14 夸克医药公司 治疗癌症和纤维化疾病的化合物组合物和方法
JP2012528240A (ja) 2009-05-28 2012-11-12 メルサナ セラピューティックス， インコーポレイテッド 可変速度放出リンカーを含むポリアル−薬物コンジュゲート
DE102009026075A1 (de) 2009-06-30 2011-01-05 Röhm Gmbh Bohrvorrichtung
US20110076232A1 (en) 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
US9149544B2 (en) 2009-11-06 2015-10-06 The Penn State Research Foundation Bioconjugation of calcium phosphosilicate nanoparticles for selective targeting of cells in vivo
GB0919751D0 (en) 2009-11-11 2009-12-30 King S College Hospital Nhs Fo Conjugate molecule
LT3279215T (lt) * 2009-11-24 2020-04-10 Medimmune Limited Tiksliniai surišantys agentai prieš b7-h1
US20110217363A1 (en) 2010-03-05 2011-09-08 Bionanox Two-step targeted tumor therapy with prodrug encapsulated in nanocarrier
EP2553019A1 (en) 2010-03-26 2013-02-06 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
MX2012011900A (es) 2010-04-15 2013-03-21 Seattle Genetics Inc Conjugados de pirrolobenzodiazepina diana.
PE20130342A1 (es) 2010-04-15 2013-04-20 Spirogen Sarl Pirrolobenzodiacepinas y conjugados de las mismas
WO2012027494A1 (en) 2010-08-24 2012-03-01 Regents Of The University Of Minnesota Bispecific targeting reagents
SG10201510092QA (en) 2010-12-09 2016-01-28 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
DE102010064282B4 (de) 2010-12-28 2012-09-06 GLOBALFOUNDRIES Dresden Module One Ltd. Liability Company & Co. KG Transistor mit eingebetteten sigma-förmigen sequenziell hergestellten Halbleiterlegierungen
TWI571466B (zh) * 2011-10-14 2017-02-21 艾伯維有限公司 用於治療癌症及免疫與自體免疫疾病之細胞凋亡誘發劑
KR20140125351A (ko) 2011-11-23 2014-10-28 이제니카 바이오테라퓨틱스, 인크. 항-cd98 항체 및 이의 사용 방법
CN104244718A (zh) 2011-12-05 2014-12-24 伊格尼卡生物治疗公司 抗体-药物缀合物以及相关化合物、组合物和方法
IN2014MN01488A (ko) 2011-12-23 2015-04-17 Mersana Therapeutics Inc
WO2013170115A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Abbvie Inc. Pyridazine and pyridine derivatives as nampt inhibitors
EA037203B1 (ru) 2012-05-15 2021-02-18 Сиэтл Джинетикс, Инк. Конъюгаты антитело-лекарственное средство с самостабилизирующимися линкерами
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
US20140017265A1 (en) 2012-07-05 2014-01-16 Mersana Therapeutics, Inc. Terminally Modified Polymers and Conjugates Thereof
KR102417310B1 (ko) * 2012-10-11 2022-07-05 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 글리신아미드 화합물의 제조 방법
EP2928504B1 (en) 2012-12-10 2019-02-20 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
EP2928503B1 (en) 2012-12-10 2019-02-20 Mersana Therapeutics, Inc. Conjugates of auristatin compounds
WO2014093640A1 (en) 2012-12-12 2014-06-19 Mersana Therapeutics,Inc. Hydroxy-polmer-drug-protein conjugates
US20140199319A1 (en) 2012-12-14 2014-07-17 Abbvie, Inc. Methods for increasing the efficiency of hybridoma generation
WO2014100762A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Biolliance C.V. Hydrophilic self-immolative linkers and conjugates thereof
JP6136279B2 (ja) 2013-01-15 2017-05-31 株式会社ジェイテクト 転がり軸受装置
KR102313997B1 (ko) 2013-02-20 2021-10-20 노파르티스 아게 인간화 항-EGFRvIII 키메라 항원 수용체를 사용한 암의 치료
SG10201800313UA (en) 2013-03-15 2018-02-27 Abbvie Inc Antibody drug conjugate (adc) purification
TWI503850B (zh) 2013-03-22 2015-10-11 Polytronics Technology Corp 過電流保護元件
TWI510996B (zh) 2013-10-03 2015-12-01 Acer Inc 控制觸控面板的方法以及使用該方法的可攜式電腦
CA2942101A1 (en) 2014-03-21 2015-09-24 Abbvie Inc. Anti-egfr antibodies and antibody drug conjugates
JP2017114763A (ja) 2014-03-26 2017-06-29 第一三共株式会社 抗ｃｄ９８抗体−薬物コンジュゲート
WO2016064749A2 (en) 2014-10-20 2016-04-28 Igenica Biotherapeutics, Inc. Novel antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods of use
US20160339117A1 (en) * 2014-12-09 2016-11-24 Abbvie Inc. BCL-XL Inhibitory Compounds Having Low Cell Permeability and Antibody Drug Conjugates Including the Same
WO2016094517A1 (en) 2014-12-09 2016-06-16 Abbvie Inc. Bcl-xl inhibitory compounds and antibody drug conjugates including the same
CA3027047A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
CA3027103A1 (en) * 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
US20200147235A1 (en) 2016-06-08 2020-05-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
MX2018015280A (es) 2016-06-08 2019-08-12 Abbvie Inc Conjugados de anticuerpo y farmaco anti-egfr.
JP2019526529A (ja) * 2016-06-08 2019-09-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
JP2019521106A (ja) 2016-06-08 2019-07-25 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート
EP3888689A1 (en) 2016-06-08 2021-10-06 AbbVie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
AU2017277914A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-CD98 antibodies and antibody drug conjugates
US9816280B1 (en) 2016-11-02 2017-11-14 Matthew Reitnauer Portable floor

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6180370B1 (en) * 1988-12-28 2001-01-30 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins and methods of making the same
US20020081305A1 (en) * 1996-02-15 2002-06-27 Tadanori Mayumi Altering the properties of cells or of particles with menbranes derived from cells by means of lipid-modified proteinaceous molecules
WO2004001381A2 (en) * 2002-06-19 2003-12-31 Raven Biotechnologies, Inc. Novel raag10 cell surface target and a family of antibodies recognizing that target
WO2008066691A2 (en) * 2006-11-08 2008-06-05 Macrogenics West, Inc. Tes7 and antibodies that bind thereto
US20120294796A1 (en) * 2010-03-04 2012-11-22 Macrogenics, Inc. Antibodies Reactive with B7-H3 and Uses Thereof
KR20130010117A (ko) * 2010-03-04 2013-01-25 마크로제닉스, 인크. Ｂ７―ｈ３에 반응성인 항체, 면역학적으로 활성인 이들의 단편 및 이들의 사용법
KR20140033018A (ko) * 2011-04-25 2014-03-17 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항 ｂ７-ｈ３항체
WO2016094505A1 (en) * 2014-12-09 2016-06-16 Abbvie Inc. Antibody drug conjugates with cell permeable bcl-xl inhibitors

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Mol Pharm, 12(6), 1717-29(2015.04.23.) 1부.* *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021006619A1 (ko) * 2019-07-09 2021-01-14 주식회사 와이바이오로직스 B7-h3에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
EP4364754A2 (en) 2024-05-08
RU2764651C2 (ru) 2022-01-19
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HRP20210170T1 (hr) 2021-03-19
WO2017214335A1 (en) 2017-12-14
IL263600B1 (en) 2023-03-01
US20170355769A1 (en) 2017-12-14
AU2017279550A1 (en) 2019-01-03
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ES2861499T3 (es) 2021-10-06
EP3458479A1 (en) 2019-03-27
RU2018146948A (ru) 2020-07-14
CN109963870A (zh) 2019-07-02
CL2019002250A1 (es) 2019-10-25
LT3458479T (lt) 2021-02-25
PE20190177A1 (es) 2019-02-01
CL2018003520A1 (es) 2019-03-15
TWI762487B (zh) 2022-05-01
SG10201914119TA (en) 2020-02-27
WO2017214335A4 (en) 2018-03-08
EP3835322A2 (en) 2021-06-16
TW202304996A (zh) 2023-02-01
ZA201900059B (en) 2022-11-30
IL263600B2 (en) 2023-07-01
TW201809003A (zh) 2018-03-16
EP3835322A3 (en) 2021-10-06
EP3458479B1 (en) 2020-11-04
SI3458479T1 (sl) 2021-08-31
CR20180603A (es) 2019-07-29
UA124198C2 (uk) 2021-08-04
CN109963870B (zh) 2023-07-28
PT3458479T (pt) 2021-03-01
DK3458479T3 (da) 2021-02-08
DOP2018000276A (es) 2018-12-31
PH12018502601A1 (en) 2019-09-30
MX2018015271A (es) 2019-08-12
PL3458479T4 (pl) 2021-07-26
JP2021006527A (ja) 2021-01-21
HUE053356T2 (hu) 2021-06-28
CA3027045A1 (en) 2017-12-14
JP2019528240A (ja) 2019-10-10
KR102434626B1 (ko) 2022-08-24
SG11201811193TA (en) 2019-01-30
BR112018075626A2 (pt) 2019-03-19
UY37278A (es) 2018-01-31
IL300274A (en) 2023-04-01
IL263600A (en) 2019-01-31
RU2018146948A3 (ko) 2021-06-17
RS61828B1 (sr) 2021-06-30
ECSP19000282A (es) 2019-01-31
US10640563B2 (en) 2020-05-05
CY1123783T1 (el) 2022-05-27
CO2018013471A2 (es) 2018-12-28

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