KR20170109535A

KR20170109535A - 질병 치료에 사용하기 위한 cd3 엡실론(epsilon) 및 bcma에 대응하는 양특이성 항체

Info

Publication number: KR20170109535A
Application number: KR1020177017812A
Authority: KR
Inventors: 민 디엠 부; 크라우스 스트레인; 에리히 훈지커
Original assignee: 잉맵 에스에이알엘
Priority date: 2014-12-03
Filing date: 2015-12-02
Publication date: 2017-09-29
Also published as: EP4282484A3; WO2016087531A1; EP3227333A1; AU2015357122A1; EP3227333B1; CN107406505A; EP4282484A2; CA2969560A1; ES2959635T3; SG11201704572UA; AU2021221695A1; JP2018508462A; EP3029068A1; AU2015357122B2; US20200385471A1; JP2021120374A; US20170327580A1

Abstract

본 발명은 질환의 치료에 사용하기 위한 CD3ε 및 BCMA에 대한 이중 특이적 항체에 관한 것이다. 본 발명은 이러한 치료에 대한 환자의 반응성을 결정하는 방법을 제공하고 진단 분석에 관한 것이다.

Description

질환 치료에 사용하기 위한 CD3엡실론(EPSILON) 및 BCMA에 대응하는 이중 특이적 항체 {BISPECIFIC ANTIBODIES AGAINST CD3EPSILON AND BCMA FOR USE IN TREATMENT OF DISEASES}

본 발명은 질환의 치료에 사용하기 위한 CD3ε(CD3엡실론) 및 BCMA에 대응하는 이중 특이적 항체에 관한 것이다. 본 발명은 그러한 치료 및 관련 진단 검사에 대한 환자의 반응을 결정하는 방법을 제공한다.

인간 B 세포 성숙 표적(BCMA라고도 함)인 TR17_HUMAN, TNFRSF17(UniProt Q02223)은 분화된 혈장 세포에서 우선적으로 발현되는 종양 괴사 수용체 슈퍼패밀리의 한 구성원이다[Laabi et al. 1992; Madry et al. 1998]. BCMA는 B 세포의 성숙, 성장 및 생존에 관여하는 비(non) 글리코실화 III형 막 횡단 단백질이다. BCMA는 TNF 슈퍼패밀리의 두 가지 리간드에 대한 수용체이다: BCMA에 대한 고-친화성 리간드인 APRIL(증식 유도 리간드) 및 BCMA에 대한 낮은 친화도 리간드인 B 세포 활성화 인자 BAFF(THANK, BlyS, B 림프구 자극기, TALL-1 및 zTNF4). APRIL 및 BAFF는 구조적 유사성 및 중첩성을 보여주지만 그렇다 하더라도 뚜렷이 구별되는 수용체 결합 특이성을 나타낸다. 음성 조절자 TACI는 또한 BAFF 및 APRIL 양자에 모두 결합한다. BCMA 및/또는 TACI에 대한 APRIL 및 BAFF의배위 결합은 전사 인자 NF-κB를 활성화시키고 생존-유도 Bcl-2 패밀리 구성원(예를 들어, Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w, Mcl-1, A1)의 발현과 세포사멸-유도 인자(예컨대, Bid, Bad, Bik, Bim 등)의 억제조절을 증가시켜서, 세포 사멸을 억제하고 생존을 촉진한다. 이러한 결합 작용은 B 세포 분화, 증식, 생존 및 항체 생산을 촉진한다(Rickert RC et al., Immunol Rev (2011) 244 (1): 115-133).

Novak AJ 외. BLOOD, 103, (2004) 689-694는 다발성 골수종 세포 상의 BCMA, TACI, 및 BAFF-R의 발현 및 성장 메커니즘에 관한 것이다. Li 등, Med Oncol 27 (2010) 439-445는 BCMA가 형질세포 상에서 발현된다는 것을 언급하고 있다. Dispenzieri et al., Mayo Clin Proc 82 (3), (2007), 323-341은 Mayo Stratification of Myeloma and Risk-Adapted Therapy(mSMART) 분류에 근거한 다발성 골수종의 치료와 관련이 있다. Schaumann D.(Thesis, Berlin 2006)는 BCMA가 장기-생존 형질세포의 생존에 필수적인 것으로 밝혀졌으며 장기-생존 형질세포는 자가면역 질환에서 작동체 세포(effector cells)라고 보고했다(O'Connor et al., J Exp Med.199, (2004) 91-98). WO 2012143498은 다발성 골수종(MM) 환자의 분류 방법에 관한 것이다. WO 200932058은 전신 홍반성 루푸스(SLE)와 같은 자가 면역 활동과 관련된 장애를 가진 개인의 생활 상태를 예측하는 것에 관한 것이다.

Sanchez E 등, Br J Hematology 158, 727-38(2012) 및 WO 2014089335는 건강한 대상보다 다발성 골수종(MM) 환자의 골수 단핵구 세포배양 상등액에서의 BCMA 농도가 더 높음을 보고하고 있고 혈청 BCMA 수준은 MM 환자의 질환 상태 및 전반적인 생존을 모니터링하기 위한 바이오마커(biomarker)일 수 있다.

T-림프구의 TCR/CD3 복합체는 CD3 표지된 감마(γ), 델타(δ), 엡실론(ε), 제타(ζ) 및 에타(η)의 불변 서브유닛으로 세포 표면에서 동시 발현되는 TCR 알파(α)/베타(β) 또는 TCR 감마(γ)/델타(δ) 이종이합체로 구성된다. 인간 CD3ε은 UniProt P07766 (CD3E_HUMAN)에 기재되어있다. 최신 기술분야에 기재된 항 CD3ε 항체는 SP34이다(Yang SJ, The Journal of Immunology (1986) 137; 1097-1100). SP34는 영장류와 인간 CD3 모두와 반응한다. SP34는 PharMingen에서 구입할 수 있다. 최신 기술분야에 기재된 또다른 항 CD3 항체는 UCHT-1이다(WO2000041474 참조). 최신 기술분야에 기재된 또다른 항 CD3 항체는 BC-3(Fred Hutchinson 암 연구소; Transplantation 54: 844 (1992), Anasetti 등, GvHD 의 상 Ⅰ/Ⅱ 실험에서 사용됨)이다.

최근에 매우 다양한 재조합 이중 특이적 항체 포맷, 예를 들어, 용융에 의한, IgG 항체 포맷 및 단일 사슬 도메인(Kontermann RE, mAbs 4: 2, (2012) 1-16 참조)이 개발되었다.

BCMA에 대한 항체는 예를 들어 그라스 M-P. et al. Int Immunol. 7 (1995) 1093-1106, WO200124811, WO200124812, WO2010104949 및 WO2012163805에 기재되어 있다. BCMA에 대한 항체 및 림프종 및 다발성 골수종의 치료를 위한 그 용도는 예를 들어, WO2002066516 및 WO2010104949에 기재되어있다. WO2013154760은 BCMA 인식 모이어티(moiety) 및 T-세포 활성화 모이어티를 포함하는 키메릭 항원 수용체 (CAR(Chimeric Antigen Receptors))에 관한 것이다. Ryan, MC et al., Mol. Cancer Ther. 6 (2007) 3009-3018은 다발성 골수종 세포(MM 세포)의 표면상의 혈장세포 악성종양 및 BCMA의 발현에 대한 BCMA의 표적화에 관한 것이다. CD3 및 BCMA에 대응하는 이중 특이적 항체는 WO2007117600, WO2009132058, WO2012066058, WO2012143498 및 WO2013072415, WO2014122143 및 WO2014122144에 언급되어있다. WO2013072406 및 WO2014140248은 몇몇 도면 및 예시에서 E:T 비율을 언급하지만 각각의 사멸 분석 실험에서 1개의 표적 세포(targeting cell)(환자 샘플이 아닌 세포주(cell line))에 대해 10개의 작동체 세포(effector cell)가 사용되었다는 것만이 보고된 바 있다. 따라서 이 E:T 비율은 진짜가 아니고 골수종 환자 골수 샘플에서는 어떠한 E:T 비율도 보이지 않거나 항체 치료에 대한 E:T 비율의 관계에 대한 어떠한 힌트도 없다.

WO2012143498은 악성 B세포가 그들의 표면 상에 BCMA 단백질을 발현하는 경우 다발성 골수종(MM) 환자의 항체기반 다발성 골수종(MM) 치료를 층화, 진단, 또는 선별하는 방법을 언급하고 있다.

형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 개선된 치료가 필요하다.

발명의 요약

T 세포 이중 특이적 항체는 예를 들어, 표적세포의 근처에서 직접 T 세포의 활성화에 의한 표적세포를 효과적으로 죽이기 위한 강력한 화합물이다. 예를 들어 전신성 홍반성 루푸스 또는 류마티스 관절염의 경우 다발성 골수종 세포 또는 항핵 항체 분비-형질전환 세포의 경우 악성 형질세포 표면 상의 BCMA에 결합하는 T-세포 이중 특이적 항체는 이들 형질세포를 사멸시키기 위해 의도적으로 투여될 수 있다. 본 발명자들은 형질세포의 사멸에 영향을 미치는 특정 파라미터(parameter)를 알아내었다. 이러한 파라미터들은 적절한 유동세포 분석법에 의해 측정된 BCMA 발현의 양(magnitude), 가용성 BCMA의 특정 농도의 존재, 악성 형질세포에 대한 T 세포의 비율 및 가용성 BCMA 리간드 APRIL의 특정 농도의 존재이다. 발명자들의 발견은 예를 들어, 치료 의사가 개별 환자에 대한 BCMA-T-세포 이중 특이적 항체로 치료를 맞춤화하기 위한 중요한 안내(guidance)를 제공하고 또한 상기 파라미터들을 측정하기 위한 시험 키트(test kit)에 대한 과학적 기초를 제공한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 치료에 사용하기 위한 인간 BCMA의 세포외 도메인(추가로 "BCMA"로도 명명됨) 및 인간 CD3ε(추가로 "CD3"로도 명명됨)에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것이고, CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서, 상기 CD138+ CD38+ 세포에 대한 BCMA 발현으로, 항-BCMA 항체를 사용하여 측정된 Kd값은 상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배이고, Relative Medianor Mean Fluorescence Intensity MFI로 결정된 기준선 이상으로 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 300 이상이다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 치료에 사용하기 위해 인간 BCMA의 세포외 도메인 및 인간 CD3에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것이고, 상기 질환은 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 특징지어지고, 상기 CD138+ CD38+ 세포에 대한 BCMA 발현으로, 항-BCMA 항체를 사용하여 측정된 Kd값은 상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배이고, Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI로 결정된 기준선 이상으로 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 300 이상이다.

바람직하게는, 본 발명은 본 발명에 따른 사용을 위한 이중 특이적 항체에 관한 것으로, 상기 이중 특이적 항체 및 상기 항-BCMA 항체는 BCMA 결합에 대해 1가임을 특징으로 한다. 바람직하게는 상기 항-BCMA 항체(상기 이중 특이적 항체의 일부)의 Kd값은 100nM 이하이다.

바람직하게는, 본 발명은 본 발명에 따른 사용을 위한 이중 특이적 항체에 관한 것으로, 상기 이중 특이적 항체 및 상기 항-BCMA 항체는 BCMA 결합에 대해 2가인 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 본 발명은 본 발명에 따른 사용을 위한 이중 특이적 항체에 관한 것으로, 상기 이중 특이적 항체 및 상기 항-BCMA 항체는 BCMA 결합에 대해 3가인 것을 특징으로 한다.

바람직하게는 본 발명은 본 발명에 따른 사용을 위한 이중 특이적 항체에 관한 것으로, 상기 이중 특이적 항체는 그의 중쇄(heavy chain) 및 경쇄(light chain) CDR로서, 상기 항-BCMA 항체와 동일한 아미노산 서열의 CDR을 포함하는 것을 특징으로 한다.

바람직하게는 본 발명은 본 발명에 따른 사용을 위한 이중 특이적 항체에 관한 것으로, 상기 이중 특이적 항체는 그의 중쇄 및 경쇄 가변영역으로서, 상기 항-BCMA 항체와 동일한 아미노산 서열의 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 치료에 사용하기 위한, 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것이고, 이로써 상기 환자의 분리된 체액 샘플 내에서 표적세포에 대한 T 세포(작동체 세포)의 비율(E:T 비율)은 0.35:1 이고, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 더욱 바람직하게는 5:1 이상, 더욱 바람직하게는 10:1 이상이다. 바람직하게는 E:T 비율은 CD138+ CD38+ 세포에 대한 CD3+의 비율로서 측정되고, 바람직하게는 CD138+ CD38+ CD45+ CD19- CD56+ 세포에 대한 CD45+ CD19- CD56-T 의 CD3+ 세포 서브세트(subset)의 비율로서 측정된다. 환자가 다발성 골수종에 걸린 경우, 그 표적세포는 다발성 골수종 세포이다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 치료에 사용하기 위한, 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것이고, 상기 질환은 상기 환자의 분리된 체액 샘플 내에서 표적세포에 대한 T 세포(작동체 세포)의 비율(E:T 비율)은 0.35:1 이상인 것을 특징으로 하고, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 더욱 바람직하게는 5:1 이상, 바람직하게는 10:1 이상 및 바람직하게는 0.35:1 내지 22:1이다. 샘플이 효과적으로 치료될 수 있는 환자의 샘플 내에서 발견되는 E:T 비율은 0.35 이상으로 발견되었다. 0.35:1 내지 11:1의 E:T 비율을 가진 샘플이 각각 테스트되었다. 22:1까지의 E:T 비율 또한 환자의 샘플에서 검출되었다(테스트하지 않음). 이러한 발견들에 기초하여 본 발명자들은 그러한 샘플들 또는 보다 높은 E:T 값을 갖는 샘플을 갖는 환자들이 또한 본 발명에 따른 이중 특이적 항체로 효과적으로 치료될 수 있다는 것을 인식하였다. 바람직하게는 E:T 비율은 CD138+ CD38+ 세포에 대한 CD3+의 비율로서 측정되고, 바람직하게는 CD138+ CD38+ CD45+ CD19- CD56+ 세포에 대한 CD45+ CD19- CD56-T 세포의 CD3+ 세포 서브세트(subset)의 비율로서 측정된다. 환자가 다발성 골수종에 걸린 경우, 그 표적세포는 다발성 골수종 세포이다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 치료에 사용하기 위한, 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것이고, 상기 치료는 연속적으로

i) 상기 환자로부터 체액 샘플을 분리하는 단계,

ii) 상기 샘플에서 가용성 BCMA의 양을 측정하는 단계, 및

iii) 상기 샘플에서 가용성 BCMA의 양이 2.5 ng/mL 이상인 경우, 및

iv) 상기 환자 샘플에서 상기 가용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 특이적으로 결합하는 경우, 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체로 보다 높은 투여량 및/또는 보다 빈번한 치료 계획으로 치료하는 단계

를 포함한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 치료에 사용하기 위한, 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것이고, 상기 질환은 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 가용성 BCMA의 양이 2.5 ng/mL 이상인 것을 특징으로 하고, 상기 환자 샘플에서의 상기 가용성 BCMA는 상기 이중 특이적 항체에 특이적으로 결합하며, 상기 이중 특이적 항체에 의한 상기 환자의 상기 치료는 1.5배 내지 10배의 주당(per week) 투여량으로 수행되는 것 및/또는 투여량 관리 사이의 시간 간격이 표준 투여량에 비해 1주일에 1회 투여에서 1일에 1회로 단축된다는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 상기 치료하는 것은 표준 투여량에 비해 1.5배 내지 2.0배인 주당 투여량으로 수행된다. 바람직하게는 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 상기 치료하는 것은 투여량 관리 사이의 시간 간격이 표준 투여량에 비해 1주일에 1회 투여에서 1주일에 2회로 단축된다는 점에서 수행된다.

i) 상기 환자로부터 체액 샘플을 분리하는 단계,

ii) 상기 샘플에서 가용성 BCMA의 양을 측정하는 단계, 및

iv) 상기 환자 샘플에서 상기 가용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 특이적으로 결합하는 경우, 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체로 제1 투여에 대해 보다 높은 투여량으로 치료하거나 또는 상기 이중 특이적 항체의 제1 투여와 제2 투여 사이의 보다 짧은 주기로 또는 상기 이중 특이적 항체의 제1 투여와 제3 투여 사이의 보다 짧은 주기의 더 빈번한 치료 계획으로 치료하는 단계,

를 포함한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 치료에 사용하기 위한, 인간 BCMA 수용체에 대해 결합하기 위해 가용성 BCMA와 경쟁하고 및/또는 NF-κB의 APRIL 매개된 활성화를 차단하는 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것이고, 상기 치료는 연속적으로

i) 상기 환자로부터 형질세포 및 T 세포를 포함하는 체액 샘플을 분리하는 단계,

ii) 상기 샘플에서 APRIL의 양을 측정하는 단계, 및

iii) 상기 환자 샘플에서 APRIL의 양이 100 ng/mL 이상인 경우, 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체로 보다 높은 투여량 및/또는 더 빈번한 치료 계획으로 치료하는 단계,

를 포함한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 치료에 사용하기 위한, 인간 BCMA 수용체에 대해 결합하기 위해 가용성 BCMA와 경쟁하고 및/또는 NF-κB의 APRIL 매개된 활성화를 차단하는 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것이고, 상기 질환은 상기 환자로부터 분리된 체액 샘플에서 APRIL의 양이 10 ng/mL 이상 100 ng/mL 이하인 것을 특징으로 하고, 상기 환자의 상기 이중 특이적 항체에 의한 상기 치료는 1주일에 1.5배 내지 20배의 투여량으로 수행되는 것 또는/및 투여량 관리 사이의 시간 간격이 표준 투여량에 비해 1주일에 1회 투여에서 1일에 1회로 단축되는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체로 상기 치료를 하는 것은 표준 투여량에 비해 1.5 내지 3.0배인 주당 투여량으로 수행된다. 바람직하게는 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체로 상기 치료하는 것은 투여량 관리 사이의 시간 간격이 표준 투여량에 비해 1주일에 1회 투여에서 1주일에 3회까지 단축된다는 점에서 수행된다.

본 발명은 인간 BCMA 수용체에 결합하기 위해 가용성 BCMA와 경쟁하는 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것으로, 상기 항체는 BCMA에 결합하기 위해 APRIL과 경쟁하고, 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 치료에 사용하기 위해 상기 항체는 BCMA에 대해 결합하기 위해 APRIL과 경쟁하고 및/또는 NF-κB의 APRIL 매개 활성화를 차단하고, 상기 치료는 연속적으로

ii) 상기 샘플에서 APRIL의 양을 측정하는 단계, 및

iii) 상기 환자 샘플에서 APRIL의 양이 100 ng/mL 이상인 경우, 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체로 100 ng/mL의 APRIL 농도에서 2배 높은 투여량 및 80배까지 높은 추가로 증가된 투여량으로 치료하고, APRIL 농도가 100 ng/mL 미만의 가용성 APRIL 농도를 갖는 환자에게 권장되는 투여량에 비해 1000 ng/mL까지 증가하는 경우 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체의 임의의 두 투여량 사이의 단축된 주기로 상기 더 높은 투여량에 도달하는 각각의 보다 빈번한 치료 계획으로 치료하는 단계,

를 포함한다.

본 발명은 인간 BCMA 수용체에 결합하기 위해 가용성 BCMA와 경쟁하는 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것으로, 상기 항체는 BCMA에 결합하기 위해 APRIL과 경쟁하며, 상기 항체는 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 치료에 사용하기 위해 BCMA에 결합하기 위해 APRIL과 경쟁하고 및/또는 NF-κB의 APRIL 매개 활성화를 차단하고, 상기 질환은 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서, APRIL의 양이 100 ng/mL 이상인 것을 특징으로 하고, 100 ng/mL 미만의 가용성 APRIL 농도를 갖는 환자를 위해 권장되는 투여량에 비해 1000 ng/mL 까지 APRIL 농도가 증가하는 경우에는 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체로 100 ng/mL의 APRIL 농도에서 2배 높은 투여량 및 80배 더 높은 추가의 증가된 투여량으로 치료하는 것 또는 상기 이중 특이적 항체의 임의의 2회 투여량 사이의 보다 짧은 주기로 상기 더 높은 투여량에 도달하기 위한 각각의 보다 빈번한 치료 계획으로 상기 환자를 치료하는 것을 특징으로 한다.

APRIL의 양은 바람직하게는 ELISA 방법을 사용하여 측정된다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플에서 BCMA 단백질 발현을 알아내는 방법에 관한 것으로,

Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여 상기 CD138+ CD38+ 세포상의 BCMA 발현을 측정하는 단계(여기서 Kd값은 상기 환자의 치료에 사용하기 위한 의도인 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배), 및 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI가 80 이상인지, 바람직하게는 100 이상인지, 바람직하게는 200 이상인지, 더욱 바람직하게는 기준치에 비해 300 이상인지 여부를 유동세포 분석법에 의해 결정하는 단계를 포함한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로,

Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여 상기 CD138+ CD38+ 세포 상의 BCMA 발현에 대해 상기 환자로부터 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플을 분석하는 단계(여기서 Kd값은 상기 환자의 치료에 사용하기 위한 의도인 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배), 및 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI가 80 이상, 바람직하게는 기준치에 비해 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 300이상인 경우, 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체로 치료하는 단계를 포함한다.

바람직하게는 본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자에게 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 것이며, 여기서 상기 환자의 분리된 체액 샘플은 80 이상의 BCMA에 대한 MFI, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 기준치에 비해 300 이상이다.

본 발명은 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로의 치료에 반응하기 위해, 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 가능성을 예측하는 방법에 관한 것이지만, CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서의 발현에서, 항-BCMA 항체를 사용해 측정된 Kd값은 상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.7 내지 1.3배로, 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 상기 치료에 반응할 상기 환자의 가능성을 예측하는 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI 기준치에 비해 300 이상이다.

본 발명은 분리된 체액 샘플에서의 세포-표면 BCMA 발현을 결정하는 시험관 방법에 관한 것으로, 상기 CD138+ CD38+ 세포에 대한 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI가 존재하는지를 결정하는 것을 포함하고, 항-BCMA 항체를 사용한 Kd값은 BCMA 및 CD3ε와 특이적으로 결합하는 치료상의 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배로, 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 기준치에 비해 300 이상이다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자를 치료하는데 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 시험관 방법에 관한 것으로, 상기 환자를 위해 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플에서의 세포-표면 BCMA 발현에 의하여, 항-BCMA 항체를 사용하여 측정된 Kd값은 치료상의 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배로서, 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI 로 결정된 기준치에 비하여 300 이상이고, 이에 따라 치료 계획은 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료상의 이중 특이적 항체의 용도를 포함한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자를 치료하기 위한 치료 방법을 선택하는 방법에 관한 것으로,

i) CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플에서의 세포-표면 BCMA 발현으로, 항-BCMA 항체를 사용하여 측정된 Kd값이 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료상의 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배로, 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI로 결정된 기준치에 비하여 300 이상인 경우, 상기 환자를 상기 치료용 항체로 치료하는 단계, 또는

ii) CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플에서의 세포-표면 BCMA 발현으로, 항-BCMA 항체를 사용하여 측정된 Kd값이 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료상의 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배로, 100 이하, 바람직하게는 50 이하, 더욱 바람직하게는 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI로 결정된 기준치에 비하여 10 이하인 경우, 상기 환자를 상기 치료용 항체로 치료하지 않는 단계,

를 포함한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖고 있는 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD138+ CD38+ 에 대한 CD3+ 세포의 비율이 0.35:1 인지, 바람직하게는 0.5:1 이상인지, 바람직하게는 1:1 이상인지, 보다 바람직하게는 5:1 이상인지, 더욱 바람직하게는 10:1 이상인지 측정하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖고있는 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD138+ CD38+ 세포에 대한 CD3+ 세포의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 더욱 바람직하게는 10:1 이상인지를 분석하는 것을 포함한다.

바람직하게는 본 발명은 CD138+ CD38+ 세포에 대한 CD3+ 세포의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 더욱 바람직하게는 10:1 이상을 나타내는 환자에게 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 것에 관한 것이다.

바람직하게는 본 발명은 환자에게 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 것에 관한 것으로,

i) 상기 환자의 체액 샘플 중 CD138+ CD38+ 세포에 대한 CD3+ 세포의 비가 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 더욱 바람직하게는 10:1 이상인 경우, 단일 요법에서 BCMA 및 CD3ε에 특이 적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체로 상기 환자를 치료하는 단계,

ii) 상기 환자의 분리된 체액 샘플 중 CD138+ CD38+ 세포에 대한 CD3+ 세포의 비율이 0.5:1 이하, 바람직하게는 0.25:1 이하인 경우, 상기 환자를 T 세포 증식 치료 또는 T 세포 화학유인 치료와 병행하여 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체로 치료하는 단계,

이다.

본 발명은 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로 치료하는 것에 대해 반응하기 위해 형질세포를 수반하는 질환을 갖고 있는 환자의 가능성을 예측하는 방법에 관한 것으로, 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD138+ CD38+ 세포에 대한 CD3+ 세포의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 더욱 바람직하게는 5:1 이상, 더욱 바람직하게는 10:1 이상인지의 여부를 측정함으로써, 치료에 대해 반응할 환자의 가능성을 예측할 수 있다.

본 발명은 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율이 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 더욱 바람직하게는 10:1 이상인지의 여부를 형질세포를 수반하는 질환을 갖고 있는 환자의 분리된 체액 샘플에서 측정하는 시험관 방법에 관한 것이다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자를 치료하는데 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 시험관 방법에 관한 것으로, 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율은 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 더욱 바람직하게는 10:1 이상으로 결정되고 치료 계획은 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 사용을 포함한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자에 대해 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로의 치료를 선택하는 방법에 관한 것으로,

i) 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비가 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 더욱 바람직하게는 10:1 이상인 경우, 상기 치료용 항체로 상기 환자를 치료하는 단계, 또는

ii) 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비가 0.35:1 이하, 바람직하게는 0.5:1 이하, 바람직하게는 0.25:1 이하인 경우, T 세포 증식 치료 또는 T 세포 화학유인 치료를 병행하여 BCMA 및 CD3에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로 상기 환자를 치료하는 단계,

를 포함한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플에서 상기 샘플의 가용성 BCMA 양이 2.5 ng/mL 이상, 바람직하게는 10 ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50 ng/mL 이상, 더욱 바람직하게는 250 ng/mL 이상인지의 여부를 결정하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖고 있는 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로, 체액 샘플에서의 가용성 BCMA 양이 2.5 ng/mL 이상, 바람직하게는 10 ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50 ng/mL 이상, 더욱 바람직하게는 250 ng/mL 이상인지의 여부를 결정하는 단계를 포함한다.

바람직하게는 본 발명은 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 기준치에 비해 300 이상의 BCMA에 대한 MFI를 보이는 환자에 대해 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 것에 대한 발명이다. 본 발명은 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로 치료하는 것에 대해 반응하기 위해, 형질세포를 수반하는 질환을 갖고있는 환자의 가능성을 예측하기 위한 방법에 관한 것으로, 2.5 ng/mL 이상, 바람직하게는 10 ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50 ng/mL 이상, 더욱 바람직하게는 250 ng/mL 이상의 상기 체액 샘플에서의 가용성 BCMA 양은 치료에 반응하는 환자의 가능성을 예측한다.

본 발명은 분리된 체액 샘플에서 상기 샘플에서의 가용성 BCMA 양이 2.5 ng/mL 이상, 바람직하게는 10 ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50 ng/mL 이상, 보다 더 바람직하게는 250 ng/mL 이상인지를 결정하는 시험관 방법에 관한 것이다.

바람직하게는 본 발명은 2.5 ng/mL 이상, 바람직하게는 10 ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50 ng/mL 이상, 더욱 바람직하게는 250 ng/mL 이상의 용해성 BCMA 양을 보이는 환자에게 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 것에 관한 것이다.

본 발명은 상기 샘플에서 가용성 BCMA 양이 2.5 ng/mL 이상, 바람직하게는 10 ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50 ng/mL 이상, 더욱 바람직하게는 250 ng/mL 이상인지를 결정함으로써 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자를 치료하는데 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 시험관 방법에 관한 것으로, 치료 계획은 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체의 사용을 포함한다.

본 발명은 혈장 세포를 수반하는 질환을 갖는 환자를 치료하기 위한 치료법을 선택하는 방법에 관한 것으로서,

i) 상기 샘플에서 가용성 BCMA 양이 2.5 ng/mL 이하인 경우, 상기 환자를 상기 치료용 항체로 치료하는 단계,

ii) 상기 샘플에서 가용성 BCMA 양이 2.5 ng/mL 이상인 경우, 및 상기 환자 샘플에서의 상기 가용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 결합하지 않는 경우, 상기 환자를 상기 치료용 항체로 치료하는 단계, 또는

iii) 상기 샘플에서 가용성 BCMA 양이 2.5 ng/mL 이상, 바람직하게는 10 ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50 ng/mL 이상, 더욱 바람직하게는 250 ng/mL 이상인 경우, 및 상기 환자 샘플에서의 상기 가용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 특이적으로 결합하는 경우, 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체로 보다 높은 투여량 및/또는 더 빈번한 치료 계획으로 치료하는 단계를 포함한다.

바람직하게는, 본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자를 치료하기 위한 치료법을 선택하는 방법에 관한 것으로서,

ii) 상기 샘플에서 가용성 BCMA의 양이 2.5 ng/mL 이상인 경우, 및 상기 환자 샘플에서의 상기 가용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 결합하지 않는 경우, 상기 환자를 상기 치료용 항체로 치료하는 단계, 또는

iii) 상기 샘플에서 가용성 BCMA의 양이 2.5 ng/mL 이상, 바람직하게는 10 ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50 ng/mL 이상, 더욱 바람직하게는 250 ng/mL 이상인 경우, 및 상기 환자 샘플에서 상기 가용성 BCMA가 특이적으로 상기 이중 특이 적 항체에 결합하는 경우, 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 상기 제1 투여량에 대해 더 높은 투여량으로 또는 상기 이중 특이적 항체의 제1 투여 및 제2 투여 사이의 단축된 주기로 보다 빈번한 치료 계획으로 또는 상기 이중 특이적 항체의 제1 투여 및 제3 투여 사이의 단축된 주기로 치료하는 단계를 포함한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자의 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플에서 상기 샘플 중의 가용성 APRIL의 양이 100 ng/mL 이상, 바람직하게는 1000 ng/mL 이상인지를 결정하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자를 치료하는 방법에 관한 것으로 상기 환자의 분리된 체액 샘플 중의 가용성 APRIL의 양은 BCMA와 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체와 함께 100 ng/mL 이상, 바람직하게는 1000 ng/mL 이상인 것으로 진단된다.

바람직하게는 본 발명은 100 ng/mL 이상, 바람직하게는 1000 ng/mL 이상의 가용성 APRIL의 양을 나타내는 환자에게 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 것에 관한 것이다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자가 BCMA 및 CD3ε에 특이 적으로 결합하는 이중 특이적 항체로 치료에 반응할 가능성을 예측하는 방법에 관한 것으로, 100 ng/mL, 바람직하게는 1000 ng/mL 이상의 상기 샘플에서의 가용성 APRIL의 양은 치료에 반응할 환자의 가능성을 예측한다.

본 발명은 분리된 체액 샘플에서, 상기 샘플에서의 가용성 APRIL의 양이 100 ng/mL 이상, 바람직하게는 1000 ng/mL 이상인지를 결정하는 시험관 방법에 관한 것이다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자를 치료하는데 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 시험관 방법에 관한 것으로서, 상기 샘플에서의 가용성 APRIL의 양은 100 ng/mL 이상, 바람직하게는 1000 ng/mL 이상이고, 상기 치료 계획은 APRIL 경쟁적 이중 특이적 항체 또는 APRIL 비-경쟁적 이중 특이적 항체의 사용을 포함한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자를 치료하기 위한 치료법을 선택하는 방법에 관한 것으로서,

i) 상기 샘플에서 가용성 APRIL의 양이 100 ng/mL 이하, 바람직하게는 20 ng/mL 이하인 경우, 상기 치료용 항체로 상기 환자를 치료하는 단계,

ii) 상기 샘플에서의 가용성 APRIL의 양이 100 ng/mL 이상, 바람직하게는 1000 ng/mL 이상인 경우, 상기 환자를 APRIL 비-경쟁적 이중 특이적 항체로 치료하는 단계, 또는

iii) 상기 샘플에서 가용성 APRIL의 양이 100 ng/mL 이상, 바람직하게는 1000 ng/mL 이상인 경우, 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체로 보다 높은 투여량 및/또는 더 빈번한 치료 계획으로 치료하는 단계,

를 포함한다.

ii) 상기 샘플에서 가용성 APRIL의 양이 100 ng/mL 이상, 바람직하게는 1000 ng/mL 이상인 경우, 상기 환자를 BCMA 리간드 경쟁적 이중 특이적 항체로 치료하는 단계, 또는

iii) 상기 환자 샘플에서 APRIL의 양이 100 ng/mL 이상인 경우, 100 ng/mL의 APRIL 농도에서 2배 높은 투여량 및 80배까지 높은 추가의 증가된 투여량에서 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 치료하는 단계, 가용성 APRIL 농도가 100 ng/mL 이하인 환자에게 권장되는 투여량에 비해 APRIL 농도가 1000 ng/mL까지 증가하는 경우, 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체의 임의의 두 투여 사이의 단축된 주기로 상기 높아진 투여량에 도달하기 위해 보다 빈번한 치료로 상기 환자를 치료하는 단계,

를 포함한다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 환자에게 가장 효과적인 치료 계획을 결정하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 갖는 신규 환자를 위한 치료 계획을 결정하는 방법에 관한 것으로,

상기 신규 환자의 BCMA 관련 형질세포 상태를 조사하기 위해 적어도 하나의 방법을 이용하는 것을 제공하는 단계;

적어도 하나의 유사한 표현으로 동일한 질환을 갖는 이전 환자에 대한 이전 치료 계획에 대해, 적어도 하나의 방법의 결과를 이용하는 것을 검색하는 단계; 및

적어도 하나의 이전 치료계획의 정보에 기초하여 신규 환자의 치료를 개선하는 방법을 결정하기 위해 이전 환자에 대한 이전 치료계획을 검토하는 단계;

를 포함한다.

본 발명은 환자에서 형질세포를 수반하는 질환을 진단 및 치료하는 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 CD138+ CD38+ 세포상의 상기 환자 BCMA 발현의 분리된 체액 샘플을 분석하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 환자는 상기 질환을 가진 것으로 진단되고, 상기 BCMA 발현이 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI로 결정된 기준치에 비하여 300 이상인 경우, 진단된 환자에 대하여 본 발명에 따른 이중 특이적 항체로 치료를 관리하는 단계를 포함한다.

본 발명은 환자에서 형질세포를 수반하는 질환을 진단 및 치료하는 방법에 관한 것으로, 분리된 체액 샘플에서 T 세포(작동체 세포) 대 표적세포의 비율(E:T 비율)을 분석하는 단계를 포함하고 여기서 환자는 상기 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상인 경우 상기 질환으로 진단받고, 진단받은 환자에 대해 본 발명에 따른 이중 특이적 항체로 치료를 관리하는 단계를 포함한다.

본 발명은 환자의 형질세포를 수반하는 질환을 진단하고 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 수용성 BCMA가 2.5 ng/mL 이상이고, 상기 환자 샘플에서의 상기 가용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 특이적으로 결합한 경우, 환자가 상기 질환으로 진단되는 본 발명에 따라 분리된 체액 샘플 환자에서 본 발명에 따른 가용성 BCMA의 양을 분석하는 단계를 포함하고, 본 발명에 따른 이중 특이적 항체로 진단된 환자에게 보다 높은 투여량 및/또는 더 빈번한 치료 계획으로의 치료를 관리하는 단계를 포함한다.

본 발명은 환자의 형질세포를 수반하는 질환을 진단 및 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 수용성 BCMA가 2.5 ng/mL이고, 상기 환자 샘플에서의 상기 가용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 특이적으로 결합한 경우 환자가 상기 질환으로 진단된 본 발명에 따른 가용성 BCMA의 양을 분리된 체액 샘플 환자에서 분석하는 단계, 및 진단된 환자에게 본 발명에 따른 이중 특이적 항체로의 치료가 제1 투여량에 대해 보다 높은 투여량으로 또는 상기 이중 특이적 항체의 제1 투여와 제2 투여 사이의 보다 짧은 기간 또는 상기 이중 특이적 항체의 제1 투여와 제3 투여 사이의 보다 짧은 주기로 수행되는 것을 관리하는 단계를 포함한다.

본 발명은 환자의 형질세포를 수반하는 질환을 진단 및 치료하는 방법에 관한 것으로, APRIL의 양이 100 ng/mL 이상인 경우 상기 환자가 상기 질환으로 진단되는 본 발명에 따른 APRIL의 양을 분리된 체액 샘플 환자에서 분석하는 단계, 및 상기 진단된 환자에게 본 발명에 따른 이중 특이적 항체로의 치료가 인간 BCMA 수용체에 결합하기 위해 가용성 BCMA와 경쟁하고 높아진 투여량 및/또는 보다 빈번한 치료 계획에서 NF-κB의 APRIL 매개된 활성화를 차단하는 상기 이중 특이적 항체로 수행되는 것을 관리하는 단계를 포함한다.

본 발명은 환자의 형질세포를 수반하는 질환을 진단 및 치료하는 방법에 관한 것으로, 형질세포 및 T 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플 환자에서 APRIL의 양이 100 ng/mL 이상인 경우 상기 환자가 상기 질환으로 진단되는 본 발명에 따른 APRIL의 양을 분리된 체액 샘플 환자에서 분석하는 단계, 상기 진단된 환자에게 본 발명에 따른 이중 특이적 항체로의 치료가 인간 BCMA 수용체에 결합하기 위해 APRIL과 경쟁하고 및/또는 100 ng/mL 이하의 용해성 APRIL 농도의 환자에게 권장되는 투여량과 비교하여, APRIL 농도가 1000 ng/mL 까지 증가하는 경우 100 ng/mL 의 APRIL 농도에서 2배 높은 투여량 및 80배까지 높은 추가의 증가된 투여량으로 NF-κB의 APRIL 매개된 활성화를 차단하는 상기 이중 특이적 항체로 수행되는 것을 관리하는 단계, 또는 상기 이중 특이적 항체의 임의의 두 투여 사이의 짧아진 주기로 상기 높아진 투여량에 도달하기 위해 각각의 보다 빈번한 치료 계획으로 상기 환자를 치료하는 단계를 포함한다.

바람직하게는, 상기 질환(질환)은 다발성 골수종, 전신 홍반성 루푸스, 및 류마티스성 관절염으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

바람직하게는 원자가는 진단용 항체와 치료용 항체 간에 유사해야 한다(예: BCMA 결정을 위한 1가 항체는 scFV-기반 BiTE 분자와 같은 악성세포에서 종양 표적에 1가로 결합하여 BCMA 항체 치료를 위한 환자 분류에 사용되어야 한다). 보다 더 바람직하게는 BCMA 항체 치료의 BCMA 결합제(binder)와 동일한 BCMA 결정을 위한 BCMA 항체를 사용하는 것이다.

바람직하게는 상기 이중 특이적 항체의 인간 BCMA에 대한 친화성은 200 nM 이하이고, 친화성 설정 표면 플라스몬(plasmon) 공명 분석에서 500 nM 이하의 농도로 인간 BCMA Fc 융합체의 존재하에 25 nM의 항체 농도에서 측정되었다.

바람직하게는 상기 이중 특이적 항체의 BCMA-양성 H929 세포(ATCC CRL-9068)를 사멸시키는 효능(EC50)은 LDH를 사멸시키는 방향수정된 T-세포 방출 분석에서, 24시간 동안 10:1의 E:T 비율에서 인간 PBCMs 및 H929 세포의 존재 하에 100 nM 이하의 농도로 사용되는 경우, 2 nM 이하로 측정된다.

바람직하게는, 인간 IgG1 유형의 항체로 측정된 상기 BCMA 결합 부분의 인간 BCMA에 대한 친화성은 친화성 설정 표면 플라스몬 공명 분석에서 500 nM 이하의 농도에서 인간 BCMA Fc 융합체의 존재 하에 25 nM의 항체 농도에서 200 nM 이하이다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는 cynomolgus BCMA에도 특이적으로 결합하는 것을 추가적인 특징으로 한다.

바람직하게는 IgG1 하위분류의 일정한 중질 영역 CH2/CH3를 포함하는 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 FcR 및 C1q 결합 및 ADCC/CDC를 최소화하는 것을 피하기 위해 돌연변이 L234A, L235A 및 P239G(Kabat에 따른 번호 매김)를 포함하는 것을 특징으로 한다. 장점은 본 발명의 항체가 T-세포 방향수정/활성화의 강력한 메커니즘에 의해 종양세포 사멸 성능을 순수하게 매개한다는 것이다. 보체 시스템 및 FcgammaR을 발현하는 작동체 세포에 대한 효과와 같은 추가의 작용 메커니즘은 회피되고 부작용의 위험이 감소된다.

바람직하게는 본 발명에 따른 항체는 1주일에 2회 또는 1주일에 1회 정맥내(i.v.) 또는 피하(s.c.) 또는 복강내(i.p.)로 투여되는 1 mg/kg 체중(BW), 바람직하게는 1주일에 2회 또는 1주일에 1회 i.v. 또는 i.p. 또는 s.c.로 투여되는 0.5 mg/kg BW, 바람직하게는 1주일에 2회 또는 1주일에 1회 i.v. 또는 i.p. 또는 s.c.로 투여되는 0.1 mg/kg BW, 바람직하게는 1주일에 2회 또는 1주일에 1회 i.v. 또는 i.p. 또는 s.c.로 투여되는 5 μg/kg BW 에서, 다발성 골수종 이종 이식 모델(예를 들어, NCI-H929 세포 또는 RPMI8226 세포 또는 U266B1 세포 또는 L-363 세포를 갖는 이종 이식)에서 70% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 바람직하게는 100% 에 가까운 종양 성장 억제를 나타내는 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는 쥐(mice)에서의 제거 반감기에 의해 특징지어지고, 바람직하게는 24시간 이상의 시노몰구스 원숭이(cynomolgus monkey), 바람직하게는 3일 이상, 바람직하게는 반감기가 주 2회 또는 주 1회 투여의 이종 이식 모델에서 효과적인 투여량에 대해 측정된다.

종양세포에 대한 표적 및 CD3에 결합하고 분자 형태(scFv)₂를 갖는 이중 특이적 항체는 1 내지 4 시간의 매우 짧은 제거 반감기를 갖는다. (scFv)₂ 이중 특이적 CD19xCD3 항체 blinatumomab로의 임상 시험에서, 이 화합물은 수주 및 수개월 동안 환자에 의해 운반되는 펌프를 통해 투여되어야 했다(Topp 등, J Clin Oncol 2011; 29(18): 2493-8). 주 2회 또는 주 1회 iv 또는 sc 투여와 비교하여, 펌프를 통해 투여된 치료는 환자에게 훨씬 편리하지 않고 훨씬 더 위험하다(예를 들어, 펌프의 고장, 카테터(catheter: 체내에 삽입하여 소변 등을 뽑아내는 도관)와 관련된 문제).

바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는 500 nM 이하의 NCI-H929 세포(ATCC® CRL-9068™)에 결합하기 위한 EC50 값, 바람직하게는 350 nM 이하의 EC50 값, 바람직하게는 100 nM 이하의 EC50 값을 나타내는 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는 1 nM, 바람직하게는 0.5 nM, 바람직하게는 0.1 nM 이하 보다 낮은 EC50을 갖는 인간 T 세포의 존재 하에 NCI-H929 종양 세포의 방향수정된 사멸을 유도하는 그 능력을 특징으로 한다.

바람직하게는 본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 인간 T 세포의 존재 하에 다발성 골수종 환자의 1차성 골수종 세포의 방향수정된 사멸을 유도하는 그 능력을 특징으로 한다.

본 발명의 추가의 실시예는 진단용 항-BCMA 항체 및 본 발명에 따른 BCMA 및 CD3에 대한 치료용 이중 특이적 항체를 포함하는 키트(kit)이다.

본 발명의 추가의 실시예는 항-BCMA 항체 및 BCMA 및 CD3에 대응하는 이중 특이적 항체를 포함하는 키트로서, 항-BCMA 항체는 상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 것을 특징으로 하고, 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI 및 사용지침(특히 본 발명의 방법을 수행하는 방법으로서의 지시)로 결정된 기준치를 초과하여 300 이상이다. 바람직하게는 상기 항-BCMA 항체 및 BCMA 및 CD3에 대한 상기 이중 특이적 항체는 모두 1가, 2가 또는 3가이고, 바람직하게는 동일한 CDRs 또는 VH 및 VL 서열을 갖는다.

본 발명의 키트는 적어도 하나의 용기 및 용기 상에 또는 용기와 결합된 라벨 또는 패키지 인서트(package insert)를 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어, 병, 바이알(vial), 주사기 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 상기 용기는 치료제를 추출하기 위한 무균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어, 상기 용기는 피하 주사 바늘에 의해 관통 가능한 마개를 갖는 정맥 내 수액백(solution bag) 또는 바이알 일 수 있다). 라벨 또는 패키지 인서트는 조성물이 MM, SLE, RA 또는 형질세포를 수반하는 다른 질환의 치료에 사용됨을 나타낼 수 있다.

또한, 키트는 주사를 위한 정균 물(BWFI: bacteriostatic water for injection), 인산염 완충 식염수, 링거액 및 덱스트로스 용액과 같이 약학적으로 허용가능한 완충액을 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 포함하여 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.

바람직하게는 키트는;

1) 세포-표면 BCMA 발현의 측정: 악성 PC상의 BCMA를 측정하기 위해 표지된 항체(바람직하게는 4개의 항체, CD138, CD38, CD19 및 (본 발명에 따른 특성을 갖는) BCMA에 특이적으로 결합하는 항체)로 미리 설치된 바이알 또는 튜브; 이소 타입 컨트롤 항체가 있는 튜브;

2) E:T 비율의 측정: 악성 PC 및 T 세포(바람직하게는 4개의 항체, CD138, CD38, CD19, 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항체)를 검출하기 위해 표지된 항체로 미리 설치된 바이알 또는 튜브; 이소 타입 컨트롤 항체가 있는 튜브;

3) 가용성 BCMA 측정: 마이크로타이터 플레이트(microtiter plate), 캡쳐 항체(다클론 BCMA 항체), 비오틴-결합 검출 항체((본 발명에 따른 특성을 갖는) BCMA에 특이적으로 결합함), 질량-보정된 표준물질, 스트렙타비딘-HRP 또는 스트렙타비딘-ALP, 상세한 프로토콜(protocol), PBS, 세정 완충액-0.05% Tween 20 in PBS, pH 7.2-7.4, 시약 희석액 1-1% BSA5 in PBS, 기질 용액-색 시약 A(H₂0₂) 및 색 시약 B(Tetramethylbenzidine)의 1:1 혼합, 정지 용액-2 N H₂SO₄을 포함하는 ELISA 키트;

4) 가용성 APRIL 측정: 마이크로타이터 플레이트(microtiter plate), 캡쳐 항체(항-인간 APRIL 항체), 비오틴-결합 검출 항체(항-인간 APRIL 항체), 질량-보정된 표준물질, 스트렙타비딘-HRP 또는 스트렙타비딘-ALP, 상세한 프로토콜(protocol), PBS, 세정 완충액-0.05% Tween 20 in PBS, pH 7.2-7.4, 시약 희석액 1-1% BSA5 in PBS, 기질 용액-색 시약 A(H₂0₂) 및 색 시약 B(Tetramethylbenzidine) 의 1:1 혼합, 정지 용액 - 2 N H₂SO₄을 포함하는 ELISA 키트;

를 포함한다.

도 1. 유동세포 분석법에 의해 검출되고 relative mean or median fluorescence intensity로 정의된 환자 악성 형질세포의 BCMA 발현. 대표적인 FACS 막대그래프는 유동세포 분석법(MFI)에 의해 검출된 환자 골수종 세포에서의 (A) 중상 정도의 BCMA 발현, (B) 중간 정도의 BCMA 발현 및 (C) 낮은 BCMA 발현을 도시한다. 음성 대조군(T 세포에 게이트된 APC-접합 BCMA-1 항체)과 비교할 때, 환자 골수종 세포에서 양성 BCMA 발현에 상응하는 x축의 오른쪽으로의 명확한 이동이 있다. 상대적인 MFI 값을 기준으로, 골수종 환자는 그들의 악성 형질세포에서 BCMA를 발현하지만 BCMA 발현은 낮은 발현(상대적 MFI 값 < 10³)에서 중등도 발현(10³ ~ 0.3 x 10⁴), 중상도 발현(0.3 x 10⁴~10⁴)까지 다양하다(실시예 1.1 참조).
도 2. BCMA-TCB의 사멸 성능은 표적세포 표면의 BCMA 발현에 영향을 받는다: BCMA^hi-발현 H929 대 BCMA^med ^/ ^lo-발현 U266 골수종 세포. 일대일 비교에서 수행된 경우 BCMA-2-TCB는 115 pM의 EC50으로 BCMA^hi-발현 H929 골수종 세포의 사멸 및 최대 60%의 사멸을 유도하였지만, 동일한 BCMA-TCB항체는 370 pM의 EC50으로 BCMA^med ^/ ^lo-발현 U266 골수종 표적 세포를 사멸시킬 수 있었고 최대 18% 사멸시키는 것만이 가능하였다(실시예 1.3 참조).
도 2a. BCMA 발현 골수종 세포주(cell lines)(BCMA^hi-발현 H929, BCMA^mid ^/ ^lo-발현 L363 및 BCMA^lo-발현 RPMI-8226 MM 세포)의 사멸을 유도하기 위한 BCMA-1-TCB의 효능을 시험하고 비교하였다. 일대일 비교에서 수행된 경우 BCMA-1-TCB는 8.49 pM의 EC50으로 (A)BCMA^hi-발현 H929 골수종 세포의 사멸 및 82.8%의 최대 사멸을 유도하였지만, 동일한 BCMA-1-TCB 항체는 (B) 12.6 pM의 EC50으로 BCMA^med ^/ ^lo-발현 L363 골수종 표적세포를 최대 67.1% 사멸시키거나 (C) 229.3 pM의 EC50으로 BCMA^lo-발현 RPMI-8226을 최대 28.1% 사멸시키는 것만이 가능하였다(실시예 1.3).
도 3. 유동세포 분석법에 의해 검출되고 상대적인 평균 또는 중간 형광 강도로 정의된 인간 골수종 세포주에서의 BCMA 발현.
도 4. 인산 유동세포 분석법(phosphoflow cytometry)에 의한 APRIL-유도 NF-κB 활성화에 대한 APRIL-경쟁 BCMA-TCB 항체의 영향. (A) APRIL 경쟁 J6M0-TCB가 H929 세포에서 APRIL(1000 ng/mL) 매개 NF-κB 활성화에 미치는 영향. 인산 유동세포 분석법에 의한 세포 내 인산화된 NF-κB의 검출(실시예 4.2.1 참조).
도 5. 비색(colorimetric) LDH 방출 분석에 의해 검출된 BCMA-양성 H929 골수종 세포의 T-세포 방향수정된 사멸을 유도하는 APRIL-경쟁 BCMA-TCB 항체에 대한 가용성 APRIL의 영향. 외인성 가용성 APRIL의 부재 및 외인성 가용성 APRIL의 100 ng/mL 또는 1000 ng/mL의 존재 하의 APRIL 차단/경쟁 J6M0-TCB. E:T 비율은 10 PBMC:1 H929 세포로 사용되었다; 세포는 LDH 방출 측정 전에 24시간 동안배양되었다. APRIL 차단/경쟁 J6M0-TCB는 외인성 APRIL의 부재 하에 낮은 피코몰라 효능 (EC50_APRIL0=5.8pM)을 갖는 BCMA-양성 H929 골수종의 농도-의존성 사멸을 유도하였다. APRIL 100 ng/mL이 배양액에 첨가되었을 때, 이러한 리간드 농도는 EC50에서 2.4배 증가한 것(EC50_APRIL100=14.2 pM)으로 나타난 바와 같이, J6M0-TCB에 의해 매개된 사멸 성능에 오직 최소한으로 영향을 미쳤다. 그러나, APRIL 1000 ng/mL이 배양액에 첨가되었을 때, J6M0-TCB에 의해 매개된 사멸 성능은 84.3배의 EC50 증가 (EC50_APRIL1000 = 488.9 pM)에 의해 반영됨에 따라 크게 감소되었다(실시예 4.2.2 참조).
도 6. 유동세포 분석법에 의해 측정된 T-세포 활성화를 유도하는 APRIL-경쟁 BCMA-TCB 항체에 대한 가용성 APRIL의 영향. 초기 활성화 마커 CD69(B, D), 및 배양 48시간 후 CD4+ 및 CD8+ T-세포에 대한 후기 활성화 마커 CD25(A, C)의 발현 수준(두 번의 독립적인 실험의 대표 결과). APRIL-경쟁/차단 J6M0-TCB 항체는 외인성 용해성 APRIL(square)의 부재하의 BCMA-양성 표적세포의 존재하에 농도-의존적 및 특이적 방식으로 CD69 및 CD25 활성화 마커의 상향 조절을 유도하였다. 가용성 APRIL 100 ng/mL을 배양액에 첨가하는 경우, CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 활성화 마커 CD69 및 CD25 모두 농도-반응 곡선의 오른쪽으로 약간의 이동이 관찰되었다. 가용성 APRIL 1,000 ng/mL를 배양액에 첨가하는 경우, CD4+ 및 CD8+ T 세포 모두에서 T-세포 활성화가 명백하게 감소한다. 인간 PBMC가 DP47-TCB 대조군 항체로 치료됐을 때 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 활성화는 관찰되지 않았고, 이는 T 세포에서 CD3에 결합함에도 불구하고 T-세포 활성화는 TCB 항체가 BCMA-양성 표적세포에 결합하지 않을 때에는 발생하지 않음을 제시한다(데이터 미도시). 이 결과는 BCMA-TCB가 종양표적 및 T 세포에 결합하자마자, 특히 BCMA-TCB가 APRIL과 경쟁할 때, 가용성 APRIL의 높은 수준이 T-세포 활성화를 유도하기 위해 BCMA-TCB 항체의 효능을 감소시킨다는 것을 명확하게 암시한다(실시예 4.3 참조).
도 7. 자가 골수 침윤성 T 세포에 의한 환자 골수 악성 형질세포의 사멸을 유도하기 위한 BCMA-TCB의 효능에 대한 BCMA 발현 및 E:T 비율의 영향. BCMA-1-TCB는 단지 24 시간의 배양 후에 이미 환자 C1(A) 및 환자 C8(B) 모두로부터 악성 형질세포의 농도 의존적 특이성 사멸을 유도하였다. 그러나, 골수종 세포의 사멸은 환자 C1 골수 샘플에서 환자 C8 골수 샘플에서보다 더 두드러졌다. 이는 바람직하지 않은 0.5:1의 E:T 비율 및 골수종 세포에 대한 보다 약한 BCMA 발현(즉, 1489의 상대 MFI 값)을 갖는 환자 C8 골수 샘플보다 환자 C1 골수 샘플에서 더 바람직한 11:1의 E;T 비율 및 BCMA 발현(즉, 2636의 상대 MFI 값)로 기인될 수 있다. 이 결과는 환자 골수에서의 E:T 비율 측정과 함께 악성 형질세포에 대한 BCMA 발현의 측정은 골수종 환자가 BCMA-TCB 치료에 반응할 수 있는지 여부를 더 정확하게 예측할 수 있다는 것을 암시한다.

본 발명자는 형질세포를 수반하는 질환, 특히 다발성 골수종, 전신 홍반성 루푸스, 및/또는 류마티스성 관절염이 여러가지 하위유형으로 분류(분할)될 수 있음을 알아내었다. 그 하위유형은 다음과 같다.

1. Kd값이 상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배, 즉 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI 로 측정된 기준선 이상으로 80 이상, 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 보다 더욱 바람직하게는 300 이상인 항-BCMA 항체를 사용하여 측정된 상기 CD138+ CD38+ 세포상의 BCMA 발현을 특징으로 하는, 분리된 체액 샘플에서 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 환자.

2. 분리된 체액 샘플에서, 분리된 체액 샘플에서의 T 세포(작동체 세포) 대 표적세포(E:T 비율)의 비율이 0.35:1 이상, 바람직하게는 0.5:1 이상인 환자.

3. 분리된 체액 샘플에서 가용성 BCMA의 양이 2.5 ng/mL 이상인 환자.

4. 분리된 체액 샘플에서 APRIL의 양이 100 ng/mL 이상인 환자.

5. Kd값이 상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배, 즉 Relative Median 또는 Mean Fluorescence Intensity MFI로 측정된 기준선 이상으로 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 보다 더욱 바람직하게는 300 이상인 항-BCMA 항체를 사용하여 측정된 상기 CD138+ CD38+ 세포상의 BCMA 발현을 특징으로 하는, 분리된 체액에서 CD138+ CD38+ 세포를 포함하고 상기 분리된 체액 샘플에서 T 세포(작동체 세포) 대 표적세포(E:T 비율)의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상인 환자.

BCMA 수용체는 골수종 환자의 골수에 많이 존재하는 리간드 APRIL 및 BAFF에 결합함으로써 정상 및 악성 형질세포(즉, 골수종 세포)의 생존에 결정적인 역할을하며 골수종 세포에서의 BCMA 발현은 mRNA 수준과 표면 단백질 수준 모두에서 많은 군에 의해 검출되었다(O'Connor et al. J Exp Med 2004, 199(1):91-8; Novak et al. Blood 2004, 103(2):689-94; Ryan et al. Mol Cancer Ther 2007, 6(11):3009-18; Quinn et al. Blood 2011, 117(3):890; Carpenter et al. Blood 2013, 19 (8):2048-60; Frigyesi et al, Blood 2014, 123(9):1336-40; Claudio et al. Blood 2002,100(6):2175-86, Tai et al. Cancer Res 2006, 123(20):3128-38; Moreaux et al., Blood 2004, 103(8):3148-57; Ju et al. Clin Biochem 2009, 42(4-5):387-99; Moreaux et al. Eur J Haematol 2009, 83(2):119-29). 따라서 골수종 환자에서 BCMA는 악성 혈장 세포에서 발현된다. 그러나, 발명자들은 유동세포 분석법에 의한 최적 측정에 의해 검출된 바와 같이, 중/상에서 중간이나 낮은 정도의 범위의 상이한 발현 수준 외에 골수종 환자가 세포 표면에서 BCMA를 발현하는 것을 발견하였고, 본 발명자들은 환자의 분류에 대한 BCMA 발현의 검출을 위한 차선의 기술 또는 방법의 사용(예를 들어, 인간 BCMA에 대응하는 낮은 친화성 결합을 갖는 BCMA 항체의 사용)은 골수종 환자의 악성 형질세포에서의 BCMA의 낮은 발현을 검출할 수 없었고, 이러한 경우 임상의사에게 잘못된 정보를 주어 이러한 골수종 환자들은 그들이 반응할 수 있더라도 BCMA 항체 요법에 반응하지 않는다는 것을 발견하였다.

T 세포 이중 특이적(TCB) 항체는 세포 사멸에서 매우 높은 농도/종양-세포-수용체-점유 의존성 효능을 갖고(예를 들어, 하위- 또는 낮은 피코몰라 범위에서의 시험관 세포 사멸 분석에서의 EC50; Dreier et al. Int J Cancer 2002), T-세포 이중 특이적 항체(TCB)는 기존의 단일 특이성 항체보다 훨씬 낮은 용량으로 투여된다. 예를 들어, 급성 림프성 백혈병의 치료를 위한 5 내지 15 μg/m²/일(즉, 오직 0.035 내지 0.105 mg/m2/주) 또는 비호지킨 림프종(Non Hodgkin Lymphoma)의 치료를 위한 60 μg/m2/일의 지속적인 정맥내 투여되고, 이러한 투여들에서의 혈청 농도는 0.5 내지 4 ng/mL의 범위에 있다(Klinger et al., Blood 2012; Topp et al., J Clin Oncol 2011; Goebeler et al. Ann Oncol 2011). TCB의 낮은 투여량이 환자에게 높은 효능을 발휘할 수 있기 때문에, 본 발명에 따른 항체에 대하여 임상적 설정(바람직하게는 0.25 내지 2.5 mg/㎡/주 투여량 범위에서) 내에서 피하 투여가 가능하고 선호되는 것이 예상된다. 이러한 낮은 농도/투여량/수용체 점유에서도, TCB는 상당한 부작용 보고를 야기할 수 있다(Klinger et al., Blood 2012). 따라서 종양 세포 점유율/적용범위를 제어하는 것이 중요하다. 그러므로 TCB로 치료하기 위한 투여량은 환자 분류를 위한 효과적인 방법에 근거하여 선택되어야 한다.

따라서, 환자 골수종 세포에서의 BCMA 발현을 위한 최적의 측정 방법이 필요하다. BCMA 발현을 위한 이러한 최적의 측정 방법은 측정을 위한 적절한 BCMA 항체를 이용한 유동세포 분석법을 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 환자 분류를 위한 골수종 세포에서의 BCMA 측정의 용도를 위해, 본 발명에 따라, BCMA 항체는 인간 BCMA와 유사한 친화도 범위(예를 들어, 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 측정 됨)를 갖는 검출을 위해 BCMA 항체 요법으로 사용된다. 더욱 바람직한 것은 검출용 BCMA 항체와 BCMA 항체 요법 사이에서 항체 원자가는 동일해야 한다는 것이다(BCMA 검출을 위한 1가 항체는 scFV-기반 BiTE 분자의 경우와 같은 악성 세포 상의 종양 표적과의 1가 결합으로 BCMA 항체 요법을 위한 환자 분류에 사용되어야 한다). 더욱 바람직한 것은 결합활성 범위(SPR에 의해 측정됨)가 검출용 BCMA 항체와 BCMA 항체 요법 사이에서 유사한 것이다. 더욱 바람직한 것은 BCMA 항체 요법의 BCMA 결합제와 동일한 측정을 위해 BCMA 항체를 사용하는 것이다.

본 명세서에서 사용된 용어 "표적(target)"은 BCMA 또는 CD3를 의미한다.용어 "제1 표적 및 제2 표적"은 제1 표적으로서의 CD3 및 제2 표적으로서의 BCMA 또는 제1 표적으로서의 BCMA 및 제2 표적으로서의 CD3를 의미한다.

본 명세서에서 사용된 용어 "BCMA"는 BCMA로도 알려진, 인간 B세포 성숙 표적과 관련되고; TR17_HUMAN, TNFRSF17(UniProt Q02223)은 분화된 형질세포에서 우선적으로 발현되는 종양 괴사 수용체 슈퍼 패밀리의 구성원이다. BCMA의 세포외 도메인은 아미노산 1-54(또는 5-51)의 UniProt에 따라 구성된다. 본 명세서에서 사용된 용어 "BCMA에 대한 항체, 항 BCMA 항체"는 BCMA에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것이다.

본 명세서에서 사용된 용어 "CD3ε 또는 CD3"은 UniProt P07766 (CD3E_HUMAN)에 기술된 인간 CD3ε에 관한 것이다. 용어 "CD3에 대한 항체, 항 CD3 항체"는 CD3ε에 결합하는 항체에 관한 것이다. 바람직하게는, 항체는 각각의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3로서 SEQ ID NO:3, 4 및 5의 중쇄 CDRs를 포함하는 가변 도메인 VH 및 각각의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3로서 SEQ ID NO:6, 7 및 8의 경쇄 CDRs를 포함하는 가변 도메인 VL을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 SEQ ID NO:1(VH) 및 SEQ ID NO:2(VL)의 가변 도메인들을 포함한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "CD3에 대한 항체, 항 CD3 항체"는 CD3ε에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것이다.

"CD3 또는 BCMA에 또는 CD3ε 또는 BCMA에 특이적으로 결합"은 항체가 CD3 또는 BCMA를 표적하는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화성을 가지고 인간 CD3ε 또는 인간 BCMA의 세포외 도메인(표적)에 결합할 수 있는 항체를 의미한다. 일부 실시예에서는, 항-CD3 또는 BCMA 항체가 관련 없는, 비-CD3 또는 비-BCMA 단백질에 결합하는 정도는, 예를 들어 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance, SPR), 예를 들어 Biacore®, 효소-결합 면역흡착 검사(ELISA) 또는 유동세포 분석법(FACS)에 의해 측정된 상기 항체의 CD3 또는 BCMA와의 결합과 비교했을 때, 약 10배, 바람직하게는 >100배 이하이다. 바람직하게는 CD3 또는 BCMA에 결합하는 항체는 10^-8M 또는 그 이하의, 바람직하게는 10^-8M부터 10^-13M까지의, 바람직하게는 10^-9M부터 10^-13M까지의 해리상수(Kd)를 갖는다. 바람직하게는 항-CD3 및/또는 항-BCMA는 다른 종으로부터의, 바람직하게는 인간 및 시노몰구스 중에, CD3 및/또는 BCMA 중에 보존된(conserved) CD3 및/또는 BCMA의 항원결정기에 결합한다. "CD3 및 BCMA에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체" 또는 "본 발명에 따른 항체"는 두 개의 표적 모두에 결합하는 것에 대한 개별 정의를 뜻한다. BCMA(또는 BCMA 및 CD3)에 특이적으로 결합하는 항체는 그 외 인간 항원에는 결합하지 않는다. 그러므로 ELISA에서, 그러한 관련 없는 표적에 대한 0D 값은 특정 분석의 검출한계와 동일하거나 그 이하일 것이며, 바람직하게는 > 0.3 ng/mL, 또는 플레이트-바운드(plate-bound)-BCMA 없이 또는 핵산전달감염되지 않은(untransfected) HEK293 세포를 가진 대조 샘플의 0D 값과 동일하거나 그 이하일 것이다.

본 명세서에서 사용된 "CD3ε 또는 CD3 결합 부분"이란 용어는 CD3에 특이적으로 결합하는 항체의 Fab 단편에 둘러싸인 VH 및 CH1으로 이루어진 항체 중쇄 및 VL 및 CL로 이루어진 항체 경쇄의 조합과 관련된 것이다.

본 명세서에서 사용된 "BCMA 결합 부분"이란 용어는 BCMA에 특이적으로 결합하는 항체의 Fab 단편에 둘러싸인 VH 및 CH1으로 이루어진 항체 중쇄 및 VL 및 CL로 이루어진 항체 경쇄의 조합과 관련된 것이다.

"BCMA 및 CD3 또는 TCB 또는 BCMA 및 CD3에 대한 항체에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체"란 용어는 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것이다. 이러한 항체는 WO2013072406, WO2013072415 및 WO2014140248에서 언급된 단일 사슬 항체로서, BCMA에 대해 1가일 수 있고, 또는 예를 들어 WO2014122143, WO2014122144에 기재된 것과 같이 2가 또는 3가일 수 있다. WO2013072406 및 WO2014140248은 일부 도면 및 예시에서 E:T 비율을 언급하고; 그러나 각각의 사멸 분석 실험에서 1개의 표적세포(환자 샘플이 아닌 세포주)에 대해 10개의 작동체 세포가 사용되었다고 보고된 바 있다. 따라서 이 E:T 비율은 인공적이며 골수종 환자 골수 샘플에서는 어떠한 E:T 비율도 보이지 않거나 항체 치료에 대한 E:T 비율의 관계에 대한 어떠한 힌트가 주어지지 않았다. 바람직하게는 이중 특이적 항체는 CD3 결합 부분의 CDR로서 SEQ ID NO:2 내지 4 및 6 내지 8의 CDR 및 바람직하게는 SEQ ID NO:1 및 5의 VL 및 VH 도메인을 포함한다. 바람직하게는 이중 특이적 항체는 BCMA 결합 부분의 CDR로서 CDR 또는 바람직하게는 표 1에 열거된 VH 및 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는 이중 특이적 항체는 BCMA 결합 부분의 CDR로서 SEQ ID NO:10 내지 12 및 14 내지 16의 CDR 또는 바람직하게는 SEQ ID NO:9 및 13의 VL 및 VH 도메인을 포함한다. 바람직하게는 이중 특이적 항체는 BCMA 결합 부분의 CDR로서 SEQ ID NO:18 내지 20 및 22 내지 24의 CDR 또는 바람직하게는 SEQ ID NO:17 및 21의 VL 및 VH 도메인을 포함한다. 항체 J6M0은 WO2012163805에 기술되어 있다. J6M0을 포함하는 TCB는 CD3 결합 부분의 CDR로서 SEQ ID NO:2 내지 4 및 6 내지 8의 CDR 및 바람직하게는 SEQ ID NO:1 및 5의 VL 및 VH 도메인을 포함한다.

"APRIL 비경쟁 이중 특이적 항체"란 용어는 이중 특이적 항체에 관한 것으로, APRIL없이 인간 BCMA에 대응하는 상기 항체의 결합과 비교하여 상기 항체의 결합이 ELISA 분석에서 측정된 20% 이상 100 ng/mL APRIL 까지 감소되지 않는다는 것을 특징으로 한다. "APRIL 비경쟁 항-BCMA 항체"라는 용어는 항-BCMA 항체에 관한 것으로, APRIL없이 인간 BCMA에 대응하는 상기 항체의 결합과 비교하여 상기 항체의 결합이 ELISA 분석에서 측정된 20% 이상 100 ng/mL APRIL 까지 감소되지 않는다는 것을 특징으로 한다. 이러한 항체는 WO2014122143, WO2014122144, EP14179705 및 EP14194151에 기재되어 있다.

항체	SEQ ID NO:
	VL	CDRL1	CDRL2	CDRL3	VH	CDRH1	CDRH2	CDRH3
CH2527 (CD3)	1	2	3	4	5	6	7	8
83A10 (BCMA)	9	10	11	12	13	14	15	16
pSCHLI372 (BCMA)	17	18	19	20	21	22	23	24

"치료용 항체"란 용어는 다발성 골수종을 앓고 있는 환자에서 악성 형질세포를 고갈시키는 BCMA 및 CD3에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체를 의미한다. 상기 치료용 항체는 특히 T-세포 활성화를 유도하고 이어서 퍼포린(perforin) 및 그랜자임 B를 포함하는 T-세포 매개 세포사멸을 유도함으로써, 세포독성 효과 또는 세포 용해를 매개한다.

바람직하게 본 발명에 따른 치료용 항체는 NCI-H929 세포(ATCC® CRL-9068™)에 결합하는 것에 대해 500nM 또는 그 이하의 EC50 값을, 바람직하게는 350nM 및 그 이하의 EC50 값을, 바람직하게는 100nM 및 그 이하의 EC50 값을 보이는 것을 특징으로 한다.

바람직하게, 본 발명에 따른 치료용 항체는 U266(ATCC® TIB-196^TM) 세포에 결합할 수 있는 능력을 특징으로 한다.

바람직한 한 실시예에서, 본 발명에 따른 치료용 항체는 인간 T 세포에 결합할 수 있는 능력을 특징으로 한다.

바람직하게, 본 발명에 따른 치료용 항체는 HEK-세포에 일시적으로 발현하는 시노몰구스 원숭이 BCMA에 결합할 수 있는 능력을 특징으로 한다.

바람직한 실시예에서, 본 발명에 따른 치료용 항체는 BCMA를 발현하는 종양 세포가 있을 때 CD4⁺ 및 CD8⁺ T-세포 활성화를 유도시키는 능력을 특징으로 한다.

바람직하게 본 발명에 따른 치료용 항체는 인간 T 세포가 있을 때 1nM 이하의, 바람직하게는 0.5nM, 바람직하게는 0.1nM 및 그 이하의 EC50으로 NCI-H929 종양세포의 전가된 사멸을 유도시키는 능력을 특징으로 한다.

"진단용 항체"란 용어는 BCMA의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 항체를 의미한다. 본 발명에 따르면 상기 진단용 항체는, 세포-표면 BCMA 발현이 측정되면, 환자의 치료를 위해 사용되는 치료용 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체이다. 바람직하게는 항체는 상기 치료용 이중 특이적 항체의 BCMA 결합 부분으로부터 유도되고 바람직하게는 상기 치료용 항체의 상기 BCMA 결합 부분과 동일한 CDR 또는 VH 및 VL 도메인을 포함한다. 본 발명에 따르면 상기 진단용 항체는, MFI가 측정되는 경우, 바람직하게는 표지된 항체이다. 본 발명에 따르면 상기 진단용 항체는, 가용성 BCMA가 측정된 경우 ELISA에 유용한 항체이다.

"표지된 항체"라는 용어는 검출 가능한 표지가 부착된 항체를 의미한다. 바람직하게는 검출 가능한 표지는 FACS가 분석을 위해 사용될 때의 형광물질이다. 다른 분석 방법에 대해서도 모든 다른 공지된 표지가 사용될 수 있다 (참조, 예를 들어, Harlow and Lane, eds. (Antibodies: A Laboratory Manual(1988) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.)). 바람직한 형광물질의 예는 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 알렉사 플루오르, R-피코에리트린(PE), 알로피코시아닌(APC), PerCP, 탠덤 복합체(예를 들어 PE-시아닌, PerCP-시아닌), 로다민(테트라메틸 로다민 이소티오시아네이트, TRITC) 녹색 형광 단백질(GFPs), 및 피코빌리프로틴(phycobiliproteins)이 있다.

본 명세서에서 사용된 "항체"라는 용어는 단일클론 항체를 뜻한다. 항체는 두 쌍의 "경쇄"(LC) 및 "중쇄"(HC)(이러한 경쇄(LC)/중쇄 쌍은 본 명세서에서 LC/HC로 표기하였다)로 이루어진다. 그러한 항체의 경쇄 및 중쇄는 여러 개의 도메인으로 이루어진 폴리펩티드이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변영역(본 명세서에서 HCVR 또는 VH로 줄여 썼다) 및 중쇄 불변(constant) 영역을 포함한다. 중쇄 불변영역은 중쇄 불변 도메인 CH1, CH2 및 CH3(항체의 급(class) IgA, IgD, 및 IgG) 및 선택적으로 중쇄 불변 도메인 CH4(항체의 급 IgE 및 IgM)를 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 도메인 VL 및 경쇄 불변 도메인 CL을 포함한다. 가변 도메인 VH 및 VL은 상보성 결정 영역(CDR)이라 일컬어지는 고변이 영역으로 더 세분화될 수 있고, 골격 부위(framework regions)(FR)라 일컬어지는 더 보존된 영역이 그 사이사이에 배치된다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 다음의 순서로 배열된 세 개의 CDR 및 네 개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 "불변 도메인"은 항체가 표적에 결합하는 것에 직접적으로 관련되진 않지만 다양한 작용기 기능을 보인다.

본 명세서에 사용된 "항체의 경쇄"는 N-말단으로부터 C-말단으로의 방향에, VL-CL로 줄여 쓰는, 경쇄 가변 도메인(VL), 및 경쇄 불변 도메인(CL)을 포함하는 폴리펩티드이다. 본 명세서에 사용된 "항체의 중쇄"는 N-말단으로부터 C-말단으로의 방향에 중쇄 가변 도메인(VH) 및 중쇄 불변 도메인 1(CH1)을 포함하는 폴리펩티드이다.

"항체"라는 용어는, 예를 들어, 쥐 항체, 인간 항체, 키메라(chimeric) 항체, 인간화(humanized) 항체 그리고, 특유의 성질을 유지하는 한, 유전자 공학에 의해 생성된 항체(변이 또는 돌연변이 항체)를 포함한다. 특히 바람직한 것은 인간 또는 인간화 항체이고, 특히 재조합 인간 또한 인간화 항체이다. 본 명세서에 사용된 "단일클론 항체" 또는 "단일클론 항체 조성물"이란 용어는 하나의 아미노산 조성물의 항체 분자의 제제를 뜻한다.

본 명세서에 사용된 "이중 특이적 항체" 및 "본 발명에 따른 항체"는 두 쌍의 중쇄 및 경쇄(HC/LC) 중 하나는 BCMA에 특이적으로 결합하고 다른 하나는 CD3에 또는 바람직하게는 CD3 및 BCMA에 특이적으로 결합하는 항체를 뜻한다. 본 명세서에 사용된 "-가(價)(valent)"는 항체 분자에 있는 특정 수의 결합 부위가 있음을 의미한다. 본 발명에 따른 2가항체는 두 개의 결합 부위, CD3을 위해 하나, BCMA를 위해 하나를 가진다. 그런 의미로, "3가(trivalent)"란 용어는 본 발명에 따른 항체에 세 개의 결합 부위가 있음을 나타내고, 이중 둘은 BCMA를 위한 결합 부위이고 하나는 CD3를 위한 결합 부위이다.

포유류 항체 중쇄의 유형이 다섯 개 있고, 이는 다음의 그리스 문자로 표시된다: α, δ, ε, γ, 및 μ(Janeway CA, Jr et al (2001). Immunobiology. 5th ed., Garland Publishing). 존재하는 중쇄의 유형은 항체의 급을 정의한다; 이러한 사슬은 각자 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 항체에서 발견된다(Rhoades RA, Pflanzer RG (2002). Human Physiology, 4th ed., Thomson Learning). 특유의 중쇄는 크기 및 구성에 대해 다르다; α 및 γ는 약 450개의 아미노산을 포함하고, μ 및 ε는 약 550개의 아미노산을 가진다. 각각의 중쇄는 두 개의 영역, 불변영역 및 가변영역을 가진다. 불변영역은 같은 아이소타입의 항체에서 모두 동일하지만, 다른 아이소타입의 항체에선 다르다. 중쇄 γ, α 및 δ는 세 개의 불변 도메인 CH1, CH2, 및 CH3(일렬로)으로 이루어진 불변영역, 및 부가적인 유연성을 위한 경첩부위를 가진다(Woof J, Burton D Nat Rev Immunol 4 (2004) 89-99); 중쇄 μ 및 ε은 네 개의 불변 도메인 CH1, CH2, CH3, 및 CH4로 이루어진 불변영역을 가진다(Janeway CA, Jr et al (2001). Immunobiology. 5th ed., Garland Publishing). 중쇄의 가변영역은 각각 다른 B 세포에 의해 생산된 항체에서 다르지만, 하나의 B 세포 또는 B 세포 클론에 의해 생산된 항체 전부에 대해서는 동일하다. 각각의 중쇄의 가변영역은 길이가 약 110개의 아미노산이고 하나의 항체 도메인으로 이루어진다.

포유류엔 두 가지 유형의 경쇄가 있고, 이는 람다(λ) 및 카파(κ)로 불린다. 경쇄는 두 개의 연속적인 도메인을 가진다: 하나의 불변 도메인 CL 및 하나의 가변 도메인 VL. 경쇄의 대략적인 길이는 211 내지 217 아미노산이다. 바람직하게는 경쇄가 카파(κ) 경쇄고, 그리고 불변 도메인 CL은 바람직하게는 카파(κ) 경쇄(불변 도메인 CK)로부터 유도된다. 바람직하게는 본 발명에 따른 항체의 중쇄 및 경쇄 불변 도메인은 인간 도메인이다.

본 발명에 따른 "항체"는 어느 급(예: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 바람직하게는 IgG 또는 IgE), 또는 아강(예: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2, 바람직하게는 IgG1)의 것일 수 있고, 이에 의해 본 발명에 따른 2가 이중 특이적 항체가 유도되는 항체 모두 동일한 아강(예: IgG1, IgG4 및 기타 같은 종류의 것, 바람직하게는 IgG1)의 Fc 부분을 가지고, 바람직하게는 동일한 동종이형(예: 백인종(Caucasian))의 것이다.

본 명세서에 사용된 "항체의 Fab 단편"은 항원에 결합하는 항체에 있는 단편이다. 항체의 Fab 단편은 두 쌍의 도메인으로 이루어진다. 야생형 항체에서 이는 각각의 중쇄(CH1 및 VH) 및 경쇄(CL 및 VL)의 하나의 불변 도메인 및 하나의 가변 도메인으로 구성된다. 본 발명에 따르면 야생형 항체에서 Fab 단편의 중쇄 및 경쇄 도메인 쌍의 도메인은 화학적으로 연결되지 않았고, 그러므로 scFv(단쇄 가변 단편)가 아니다.

"항체의 Fc 부분"이란 표현은 본 기술분야의 숙련자에게는 잘 알려진 표현이고 항체의 파파인 절단을 기반으로 정의된다. 본 발명에 따른 항체는 Fc 부분, 바람직하게는 인간 근원으로부터 그리고 바람직하게는 인간 불변영역의 그 외 모든 부분으로부터 유도된 Fc 부분을 포함한다. 항체의 Fc 부분은 보체활성화, C1q 결합, C3 활성화 및 Fc 수용체 결합에 직접적으로 관련된다. 항체가 보체계에 미치는 영향은 특정 조건에 의해 결정되고, C1q와의 결합은 Fc 부분에서의 정의된 결합부위에 의해 야기된다. 그러한 결합부위는 선행기술에 공지되어있고, 예를 들어 Lukas, TJ., et al., J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560; Brunhouse, R., and Cebra, J.J., MoI. Immunol. 16 (1979) 907-917; Burton, D.R., et al., Nature 288 (1980) 338-344; Thommesen, J.E., et al., MoI. Immunol. 37 (2000) 995-1004; Idusogie, E.E., et al., J. Immunol. 164 (2000) 4178-4184; Hezareh, M., et al., J. Virol. 75 (2001) 12161-12168; Morgan, A., et al., Immunology 86 (1995) 319-324; 및 EP 0 307 434에 의해 기술된다. 그러한 결합부위는, 예를 들어 L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331 및 P329이다(카바트의 EU 인덱스에 따른 번호표기, 아래 참조). 아강 IgG1, IgG2 및 IgG3의 항체는 보통 보체활성화, C1q 결합 및 C3 활성화를 보이는 반면, IgG4는 보체계를 활성화시키지 않고, C1q를 결합시키지 않고 그리고 C3을 활성화시키지 않는다. 바람직하게는 Fc 부분은 인간 Fc 부분이다. 바람직하게 Fc 부분은 인간 IgG1Fc 부분이다. 바람직하게 본 발명에 따른 항체는 인간 IgG1 Fc 부분에서 Pro329의 글리신 또는 아르기닌으로의 아미노산 치환 및/또는 L234A 및 L235A 치환, 바람직하게는 Pro329의 글리신으로의 그리고 L234A 및 L235A 치환을 포함한다.

바람직하게 본 발명에 따른 항체는 Fc 부분으로서 야생형 인간 IgG Fc 영역의 Fc 변이를 포함하고, 상기 Fc 변이는 위치 Pro329에서의 아미노산 치환 및 적어도 하나의 아미노산 치환을 더 포함하고, 여기에서 잔기는 카바트의 EU 인덱스에 따라 번호가 표기되고, 그리고 상기 항체가, 야생형 IgG Fc 영역을 포함하는 항체와 비교했을 때, 인간 FcγRIIIA 및/또는 FcγRIIA 및/또는 FcγRIA에 대해 감소된 친화성을 보이고, 그리고 항기 항체에 의해 유도된 ADCC가 적어도 야생형 인간 IgG Fc 영역을 포함하는 항체에 의해 유도된 ADCC의 20%로 감소된다. 특정 구체예에서 본 발명에 따른 항체에 있는 야생형 인간 Fc 영역의 Pro329는 글라이신 또는 아르기닌 또는, Fc의 프롤린329 및 FcγRIII의 트립토판 잔기 Trp 87 및 Tip 110 사이에 형성된 Fc/Fcγ 수용체 경계면 내의 프롤린 샌드위치를 파괴하기 충분하게 큰 아미노산 잔기로 치환된다(Sondermann et al.: Nature 406, 267-273 (20 July 2000)). 본 발명의 더 나아간 측면에서는 Fc 변이에서 더 나아간 적어도 하나의 아미노산 치환은 S228P, E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D, 또는 P331S이고, 그리고 또 다른 실시예는 더 나아간 적어도 하나의 아미노산 치환은 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A(류신 234가 알라닌으로 치환됨을 나타냄) 및 L235A 또는 인간 IgG4 Fc 영역의 S228P 및 L235E이라 한다. 그러한 Fc 변이는 WO2012130831에 상세하게 기술된다. 본 발명에 따른 항체의 이점은 Fc 부분을 포함하는 것에 근거하고, 이는 제거 반감기를 12일까지 또는 그 이상 증가시키고, 그리고 Fc 부분을 가지지 않은 TCB와 비교했을 때, 일주일에 한번 또는 두번의 투여할 수 있는 기회를 제공한다.

"키메라 항체"라는 용어는 일반적으로 재조합 DNA 기법에 의해 조제된, 하나의 근원 또는 종(species)으로부터의 가변영역을, 즉 결합영역을, 그리고 다른 근원 또는 종으로부터 유도된 적어도 일부의 불변영역을 포함하는 항체를 뜻한다. 쥣과(murine) 가변영역 및 인간 불변영역을 포함하는 키메라 항체가 바람직하다. 본 발명에 의해 포함되는 "키메라 항체"의 다른 바람직한 형태는 불변영역이, 특히 C1q 결합 및/또는 Fc 수용체(FcR) 결합에 대한, 본 발명에 따른 성질을 생성하기 위해 원래의 항체로부터 변형되거나 또는 변경된 것이다. 그러한 키메라 항체는 "클래스-전환(class-switched) 항체"라고도 불린다. 키메라 항체는 면역글로불린 가변영역을 부호화하는 DNA 조각 및 면역글로불린 불변영역을 부호화하는 DNA 조각을 포함하는 발현된 면역글로불린 유전자의 산물이다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 본 발명의 기술분야에 공지된 종래의 재조합 DNA 및 유전자 전달감염 기법을 수반한다. 예를 들어, Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 (1984) 6851-6855; US Patent Nos. 5,202,238 and 5,204,244 참조.

"인간화 항체"란 용어는 부모(parent) 면역글로불린의 것과 비교했을 때 다른 특이성의 면역글로불린의 CDR을 포함하도록 골격 또는 "상보성 결정영역"(CDR)이 변형된 항체를 뜻한다. 바람직한 실시예에서, "인간화 항체"를 조제하기 위해 뮤린 CDR이 인간 항체의 골격 부위 안으로 이식된다. 예를 들어, Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327; and Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270 참조. 특히 바람직한 CDR은 키메라 항체에 대해 앞서 기재된 표적을 인식하는 서열을 나타내는 것과 일치한다. 본 발명에 의해 포함되는 "인간화 항체"의 다른 형태는 불변영역이, 특히 C1q 결합 및/또는 Fc 수용체(FcR) 결합에 대한, 본 발명에 따른 성질을 생성하기 위해 원래의 항체로부터 추가적으로 변형되거나 또는 변경된 것이다.

본 명세서에 사용된 "인간 항체"란 용어는 인간 생식세포계열(germ line) 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변영역 및 불변영역을 가진 항체를 포함하도록 의도되었다. 인간 항체는 본 발명이 속한 기술분야에 공지되었다(van Dijk, M.A., and van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374). 인간 항체는, 면역조치를 했을 때, 내인 면역글로불린 생산의 부재에서 인간 항체의 전체 레퍼토리 또는 셀렉션(selection)을 생산할 수 있는 유전자 이식(transgenic) 동물(예: 쥐)에서도 생산될 수 있다. 그러한 생식세포계열 돌연변이 쥐에서의 인간 생식세포계열 면역글로불린 유전자배열(gene array)의 이식은 표적 접종(target challenge)을 했을 때 인간 항체의 생산을 야기한다(예: Jakobovits, A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 2551-2555; Jakobovits, A., et al., Nature 362 (1993) 255-258; Bruggemann, M., et al., Year Immunol. 7 (1993) 33-40 참조). 인간 항체는 파지 디스플레이 라이브러리(phage display libraries)에서도 생산될 수 있다(Hoogenboom, H.R., and Winter, G., J. MoI. Biol. 227 (1992) 381-388; Marks, J.D., et al., J. MoI. Biol. 222 (1991) 581-597). 인간 단일클론 항체의 조제를 위한 Cole et al. and Boerner et al.의 기법 또한 사용 가능하다(Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); and Boerner, P., et al., J. Immunol. 147 (1991) 86-95). 본 발명에 따른 키메라 항체 및 인간화 항체에 대해 이미 언급된 바와 같이, 본 명세서에서 사용된 "인간 항체"라는 용어는 불변영역이, 특히 C1q 결합 및/또는 FcR 결합에 대한, 본 발명에 따른 성질을 생성하기 위해, 예를 들어 "클래스 전환"에 의해, 즉 Fc 부분의 변경 또는 돌연변이(예를 들어 IgG1으로부터 IgG4로 및/또는 IgG1/IgG4 돌연변이)에 의해 변형된 항체 또한 포함한다.

본 명세서에서 사용된 "재조합 인간 항체"란 용어는, NSO 또는 CHO 세포 또는 인간 면역글로불린 유전자에 대한 유전자 이식 동물의 세포와 같은 숙주 세포로부터 분리된 항체 또는 숙주세포 내로 핵산전달 감염된 재조합 발현 벡터를 사용해 발현된 항체와 같이, 재조합 방법에 의해 조제, 발현, 생성, 또는 분리된 모든 인간 항체를 포함하도록 의도되었다. 그러한 재조합 인간 항체는 재배열된 형태의 가변영역 및 불변영역을 가진다. 본 발명에 따른 재조합 인간 항체는 체내 체세포 초돌연변이를 겪었다. 그러므로 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식세포계열 VH 및 VL 서열로부터 유도되고 그리고 그에 관련된데 반하여, 체내 인간 항체 생식세포계열 레퍼토리에 자연적으로 존재하지 않을 수 있다.

본 명세서에 사용된 "가변 도메인"(경쇄의 가변 도메인(VL), 중쇄의 가변영역(VH))은 항체를 표적에 결합시키는데에 직접적으로 관련된 각각의 경쇄 및 중쇄 쌍을 나타낸다. 가변 인간 경쇄 및 중쇄의 도메인은 동일한 일반 구조를 가지고 그리고 각각의 도메인은, 서열이 폭넓게 보존되고, 세 개의 "고변이 부위"(또는 상보성 결정 영역, CDR)에 의해 연결된 네 개의 골격(FR) 부위를 포함한다. 골격 부위는 β-시트 입체형태를 채용하고 그리고 CDR은 β-시트 구조를 연결하는 루프(loop)를 형성할 수 있다. 각각의 체인에 있는 CDR은 골격 부위에 의해 3차원 구조로 유지되고, 그리고 다른 사슬의 CDR과 함께 표적 결합부위를 형성한다. 항체 중쇄 및 경쇄 CDR3 영역은 본 발명에 따른 항체의 결합 특이성/친화성에 특히 중요한 역할을 하고, 그러므로 더 나아간 본 발명의 목적을 제공한다.

본 명세서에서 사용된 "고변이 부위" 또는 "항체의 표적-결합 영역"은 표적-결합의 원인이 있는 항체의 아미노산 잔기를 뜻한다. 고변이 부위는 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. "골격(framework)" 또는 "FR" 부위는 본 명세서에 정의된 고변이 부위 외의 가변 도메인 영역이다. 그러므로 항체의 경쇄 및 중쇄는 N-말단으로부터 C-말단까지 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4를 포함한다. 각각의 사슬에 있는 CDR은 그러한 골격 아미노산에 의해 나뉜다. 특히, 중쇄의 CDR3는 표적 결합에 가장 많이 기여하는 영역이다. CDR 및 FR 부위는 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)의 표준 정의에 따라 결정된다.

"항원결정기"란 용어는 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 어느 폴리펩티드 결정인자(determinant)를 포함한다. 특정 실시예에서, 항원결정기 결정인자는 아미노산, 설탕(sugar) 곁사슬, 포스포릴, 또는 술포닌과 같은 분자의 화학적 활성 표면 분류를 포함하고, 그리고 어떤 구체예에서는, 특정 3차원 구조적 특징, 및 또는 특정 전하 특성을 가질 수 있다. 항원결정기는 항체에 의해 결합된 표적의 영역이다.

본 명세서에서 사용된 대로 "발현"은 핵산이 mRNA 안으로 전사되는(transcribed) 과정 및/또는 전사된 mRNA(전사물(transcript)로도 불림)가 그 뒤에 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질로 번역되는(translated) 과정을 뜻한다. 전사물 및 부호화된 폴리펩티드는 종합적으로 유전자 산물이라 불린다. 폴리뉴클레오티드가 유전체 DNA로부터 유도된다면, 진핵세포에서의 발현은 mRNA의 스플라이싱(splicing)을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 이중 특이적 항체는 바람직하게는 재조합 방법에 의해 생산된다. 그러한 방법은 선행기술에 공지되어 있고, 그리고 원핵 세포 및 진핵 세포에서의 단백질 발현과 그 다음 항체 폴리펩티드의 분리 및 보통 약학적으로 허용가능한 순도로 정제하는 것을 포함한다. 단백질 발현을 위해, 경쇄 및 중쇄 또는 그의 단편을 부호화하는 핵산은 표준 방법에 의해 발현 벡터 안으로 삽입된다. 발현은 CHO 세포, NSO 세포, SP2/0 세포, HEK293 세포, COS 세포, 이스트, 또는 대장균 세포, 및 세포(상청(supernatant) 또는 용해 뒤의 세포)로부터 회수된 항체와 같은 적절한 원핵 및 진핵 숙주 세포에서 실시된다. 이중 특이적 항체는 전체 세포에, 세포 용해질에, 또는 부분적으로 정제된 또는 실질적으로 순수한 형태에 있을 수 있다. 정제는 알칼리/SDS 처리, 칼럼 크로마토그래피 및 본 발명이 속한 기술분야에 공지된 그 외 방법을 포함한 표준 기법으로 다른 세포의 구성요소 또는 다른 오염물을, 예를 들어 다른 세포 핵산 또는 단백질을, 제거하기 위해 실시된다. Ausubel, F., et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987) 참조.

CD19xCD3 T-세포 이중 특이적(TCB) 항체 블리나투모맙에 있어서 재발/난치성 급성 림프성 백혈병(ALL)을 가진 환자에서 80%까지의 반응률이 나타났다. ALL에 대해, 다발성 골수종 및 그 외 형질세포 질환에 대해서는 아직 많은 의학수요(medical need)가 있다. 오늘날 할 수 있는 모든 치료에도 불구하고, 다발성 골수종 환자의 약 60%는 첫 진단으로부터 5년 후 이미 사망한 후다. 다발성 골수종 환자를 위한 효과적인 치료가 아직 필요한 실정이다.

"형질세포를 수반하는 질환"이란 용어는 단일클론 면역글로불린 단백질(M-단백질)인 그의 상응하는 생성물의 혈청/혈장 수준이 증가된 질환을 의미한다. M-단백질은 중쇄 및 경쇄 모두 또는 단일 유형의 사슬만으로 구성될 수 있다. 형질세포 질환은 다발성 골수종 또는 BCMA를 발현하는 그 외의 B-세포 질환이다. 다발성 골수종은 골수 구획(compartment)에서의 단일클론 증식 및 이상 혈장 세포의 축적을 특징으로 하는 B-세포 악성 종양(malignancy)이다. 다발성 골수종은 동일한 IgG 유전자 재배열 및 체세포 초돌연변이를 가진 순환 클론(circulating clonal) B 세포와도 관련된다. 다발성 골수종은 미결정유의성 단일클론성 감마글로불린혈증(MGUS)이라 불리는 무증상의 전암상태에서 발생하고, 저수치(low levels)의 골수 형질세포 및 단일클론 단백질을 특징으로 한다. 다발성 골수종 세포(MM 세포)는 저율로 증식한다. 다발성 골수종은 복수의 구조적 염색체 변화(multiple structural chromosomal changes)(예: 불균형 전위)의 점진적 발생(progressive occurrence)으로부터 야기된다. 다발성 골수종은 악성 형질세포 및 골수 미세환경(예: 정상 골수 간질세포)의 상호작용을 수반한다. 활성(active) 다발성 골수종의 임상증상은 단일클론 항체 스파이크(spike), 골수에 과잉 밀집하는 혈장 세포, 골용해 병변 및 파골세포의 과자극으로부터 야기된 골파괴를 포함한다(Dimopulos & Terpos, Ann Oncol 2010; 21 suppl 7: vii143-150). 혈장 세포를 수반하는, 즉 BCMA를 발현하는, 또 다른 B-세포 질환은 루푸스로도 알려진 전신성 홍반성 루푸스(SLE)이다. SLE는 신체 어느 부분이라도 영향을 미칠 수 있는 전신성 자가면역 질환이고, 면역 체계가 신체 자신의 세포 및 조직을 공격하여 만성 염증 및 조직 손상을 야기하는 것으로 나타난다. 이는 항체-면역 복합체가 촉발시키고 면역 반응을 더 일으키게 야기하는 제3형 과민 반응이다(Inaki & Lee, Nat Rev Rheumatol 2010; 6: 326-337).

본 발명은 바람직하게는 다발성 골수종의 치료에 관한 것이다. 본 발명은 추가의 실시예에서 형질세포를 수반하는 다른 B-세포 질환의 치료에 관한 것이다. BCMA를 발현하는 형질세포가 수반된 그러한 질환은 전신성 홍반성 루푸스(SLE)이며, 또한 루푸스(lupus)로도 알려져 있다. BCMA를 발현하는 형질세포가 수반되는 추가 질환은 항-핵 항체(항-dsDNA 항체), 루푸스 신염, 및 RA, 제1형 자가 면역성 간염의 생성을 수반하는 질환이다. 형질세포 질환은 또한 http://www.merckmanuals.com에 따라 분류된다.

형질세포 질환의 분류
증상	설명	실시예
미결정유의성 단일클론성 감마글로불린혈증^*
무증상, 일반적으로 진행되지 않는 명백히 건강한 사람들에게서 발생	비림프세망 종양과 관련됨	유방, 담도계, 위장관, 신장, 및 전립선 암종
	만성 염증성 및 감염성 질환과 관련됨	만성 담낭염, 골수염, 신우신염, RA, 결핵
	다양한 다른 질환과 관련됨	가족성 고콜레스테롤혈증, 고셔병(Gaucher disease), 카포시 육종, 점액수종성태선, 간 질환, 중증 근무력증, 악성 빈혈, 갑상선 중독증
악성 형질세포 질환
증상, 진행성	IgM의 과잉 생산	매크로글로불린혈증
	대부분의 경우 IgG, IgA, 또는 경쇄(Bence Jones)만	다발성 골수종
	보통의 경우 경쇄(Bence Jones)만, 다만 때때로 온전한 면역글로불린 분자(IgG, IgA, IgM, IgD)	비유전성 1차 전신성 아밀로이드증
	중쇄 질환	IgG 중쇄 (γ-사슬) 질환 (때로는 양성) IgA 중쇄 (α-사슬) 질환 IgM 중쇄 (μ-사슬) 질환 IgD 중쇄 (δ-사슬) 질환

*연령-관련 발생률.

다발성 골수종은 다발성 골수종에 대한 국제 스테이징 시스템 에 따라 스테이지(stage)될 수 있다(http://www.cancer.org). 이 시스템은 골수종을 혈청 베타-2 마이크로글로불린과 혈청 알부민 수준만을 기준으로 3단계로 나눈다.

1단계: 혈청 베타-2 마이크로글로불린이 3.5(mg/L) 이하이고 알부민 수준이 3.5(g/L) 이상이다.

2단계: 1단계 또는 3단계 중 어느 것도 아니며, 베타-2 마이크로글로불린 수준이 3.5와 5.5 사이(임의의 알부민 수준)이거나, 알부민이 3.5 미만이고 베타-2 마이크로글로블린이 3.5 이하이다.

3단계: 혈청 베타-2 마이크로글로불린이 5.5 이상이다.

그러나 이 스테이징 시스템은 환자가 BCMA와 CD3에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체를 이용한 치료를 받기 쉽다는 것을 암시하지 않는다. 또한, BCMA는 형질세포 분화 동안 선택적으로 유도되고 악성 형질세포에서 높은 수준으로 발현되므로(Ryan, MC et al., Mol. Cancer Ther. 6 (2007) 3009-3018; Novak AJ et al., Blood 2004 Jan 15;103(2):689-94. Epub 2003 Sep 25.; Maus MV 및 June CH, Clin Cancer Res 2013;19:2048-60), MM 세포의 표면에 BCMA를 발현하는 환자는 BCMA 및 CD3에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체를 이용한 치료에 감수성이 있어 효과적인 치료법으로는 충분하지 않다. 본 발명자들은 상이한 환자의 MM 세포가 CD3 및 BCMA에 대한 이중 특이적 항체를 이용하는 것을 치료법에 대해 상이한 감수성을 갖는다는 것을 인식하였다. 다음 특징 중 적어도 하나는 성공적인 치료와 관련이 있다:

- BCMA 발현 및 치료용 항체 측정을 위한 진단용 항체는 특정 정도(MFI)와 관련이 있고,

- 다발성 골수종에 대한 E:T 비율,

- 환자가 SLE 또는 RA를 앓는 경우, 환자가 다발성 골수종 및 활액(synovial fluid)을 앓는 경우, 체액 샘플, 특히 골수 흡인 샘플에서 가용성 BCMA 및/또는 APRIL의 양.

바람직하게는 2개, 3개 또는 4개 모두의 특징이 결합된다. 바람직하게는 2개, 3개 또는 4개 모두의 특징의 결정이 치료방법, 치료법 선택, 치료 계획 선택, 및 본 발명에 따른 가능성 예측을 위해 결합된다.

"표준 투여량"이란 용어는 다발성 골수종, 홍반성 루푸스 및 류마티스성 관절염으로 이루어진 군으로부터 선택된 각각의 형질세포 질환의 치료를 위해 FDA가 승인한 매주 투여량을 의미한다. FDA가 승인한 복용량이 다른 주마다 다른 경우, "표준 투여량"이란 각각의 주의 투여량을 의미한다.

"더 높은 투여량 및/또는 보다 빈번한 치료 계획"이란 용어는, BCMA 및 CD3에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체(바람직하게는 FDA 승인된 용량)로 치료된 이전 환자에 대한 인정된/승인된 치료 계획부터 시작하여, 투여량을 1.5 내지 2.0배, 2.0배 또는 10배 및 그 이상까지 증가시키고 및/또는 투여-투여 사이의 시간 간격을 주 1회 투여에서 주 2회 또는 주 3회 또는 하루에 한번으로도 단축시킨다.

APRIL 농도가 100 이상이고 1000ng/mL에 이르는 80배까지는, BCMA 경쟁 BCMA-T-세포 이중 특이적 항체에 대응하는 APRIL의 결합이 치료에 사용되는 경우, 투여량 증가가 바람직하다(표 9 및 도 5 참조). 추가의 바람직한 실시예에서 투여-투여 사이의 시간 간격은 주 1회 투여에서 주 2회 또는 주 3회로도 또는 하루에 1회로도 단축된다. 바람직한 치료 계획은 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 가용성 BCMA의 양이 2.5ng/mL 또는 그 이하, 및/또는 APRIL 농도가 100ng/mL 이하인 것을 기반으로 선택된 환자에서 확립된 계획이다. 100ng/mL 이상의 APRIL 및/또는 2.5ng/mL 이상의 가용성 BCMA 환자에서 BCMA와 CD3에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체를 사용하기 위한 바람직한 치료법은 투여량 또는 투여간격을 조정하는 것이다. 이는 100ng/mL APRIL에서 2.4배로 표 9에서 APRIL 경쟁적 이중 특이적 항체로 종양세포를 사멸시키는 EC50 값에 의해 확인되었다.

"치료 계획"이라는 용어는 표준화된 치료 계획을 의미한다. 본 특허출원의 맥락에서, 측정된 파라미터 BCMA 발현(MFI), 가용성 BCMA, APRIL, 및 E:T 비율에 대하여 투여량 및 투여간격을 적응시키는 것에 관한 것이다. 주어진 지침은 다음과 같다:

- MFI가 50 이하인 경우 TCB로 치료하지 마십시오,

- 가용성 BCMA가 2.5ng/mL 이상인 경우 투여량/투여 스케줄을 조정하십시오,

- APRIL이 100ng/mL 이상인 경우 투여량/투여 스케줄을 조정하고 비-경쟁 BCMA-TCB를 복용하십시오,

- E:T가 0.5:1 미만인 경우 T 세포 확장/증대 요법과 병용하십시오.

"기준치 이상으로 MFI가 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 및 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 300 이상인 환자에게 가장 효과적인 치료 계획의 선택"이란 용어는, 형질세포를 수반하는 질환을 앓고있는 신규 환자를 위한 치료 계획을 선택하기 위한 방법을 의미하는 것으로서,

상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여, 상기 환자의 CD138+ CD38+ 세포에서 BCMA 발현을 결정하는 단계,

MFI가 기준치 이상으로 80 이상, 바람직하게는 100 이상으로 나타나는 경우, 유사한(바람직하게는 동일한) 표현을 갖는 동일한 질환을 앓고있는 이전 환자에 대한 상기 결정 방법의 결과를 검색하고 이용하는 것을 단계, 및

이전 치료 계획의 정보에 기초하여 신규 환자의 치료를 개선하는 방법을 결정하기 위해 이전 환자의 이전 치료 계획을 검토하는 단계,

를 포함한다.

"기준치 이상으로 MFI가 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 300 이상인 환자에게 가장 효과적인 치료 계획의 선택"이란 용어는, 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 신규 환자를 위한 치료 계획을 선택하기 위한 방법을 의미하는 것으로서,

상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여, 상기 환자의 CD138+ CD38+ 세포에서 BCMA 발현을 결정하는 단계를 포함하고, 그리고 MFI가 기준치 이상으로 80 이상, 바람직하게는 100 이상으로 나타나는 경우, 환자를 BCMA-T-세포 이중 특이적 항체 요법으로 치료하지만, 기준치보다 100 미만, 바람직하게는 50 미만, 보다 바람직하게는 10 미만인 경우, 치료하지 않는 것을 고려해야 한다.

"E:T 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상인 환자에게 가장 효과적인 치료 계획의 선택"이란 형질세포를 포함하는 질환을 앓고 있는 신규 환자의 치료 계획을 선택하는 방법을 의미하는 것으로서,

상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율 (추가로 E:T 비율로 또한 명명됨)이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상인지 여부를 결정하는 단계;

유사한(바람직하게는 동일한) 표현을 갖는 동일한 질환을 앓고있는 이전 환자에 대한 상기 결정 방법의 결과를 검색하고 이용하는 것을 단계; 및

이전 치료 계획의 정보에 기초하여 새로운 환자의 치료를 개선하는 방법을 결정하기 위해 이전 환자의 이전 치료 계획을 검토하는 단계;

를 포함한다.

"E:T 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상인 환자에게 가장 효과적인 치료 계획의 선택"이란 용어는 바람직하게는 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 신규 환자에 대한 치료 계획을 선택하는 방법을 의미하는 것으로서, 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포(추가로 E:T 비율로 또한 명명됨)의 비가 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상인지 여부를 결정하는 단계를 포함하고, 비율이 0.35:1 미만, 바람직하게는 0.5:1인 경우 T-세포 증식성 또는 T 세포 화학주성(chemoattract) 요법과의 병용을 고려해야 한다.

"2.5ng/mL 이상의 가용성 BCMA 값을 나타내는 환자에게 가장 효과적인 치료 계획의 선택"이란 용어는 형질세포를 수반하는 질병을 앓고 있는 신규 환자를 위한 치료 계획을 선택하는 방법을 의미하는 것으로서,

상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 가용성 BCMA의 양이 2.5ng/mL 이상인지를 결정하는 단계:

이전 치료 계획의 정보에 기초하여 신규 환자의 치료를 개선하는 방법을 결정하기 위해 이전 환자의 이전 치료 계획을 검토하는 단계;

를 포함한다.

"2.5ng/mL 이상의 가용성 BCMA 값을 나타내는 환자에게 가장 효과적인 치료 계획의 선택"이란 용어는 바람직하게는 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 신규 환자를 위한 치료 계획을 선택하는 방법으로서, 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서의 가용성 BCMA의 양이 2.5ng/mL 이상인지를 결정하는 단계를 포함하고, 더 높은 투여량 및/또는 보다 빈번한 치료 스케줄로 전환하는 것을 고려해야 한다.

"APRIL 값이 100ng/mL 이상인 환자에게 가장 효과적인 치료 계획의 선택"이란 용어는 형질세포를 포함하는 질환을 앓고 있는 신규 환자를 위한 치료 계획을 선택하는 방법을 의미하는 것으로서,

상기 환자의 분리된 체액 샘플 내의 APRIL의 양이 100ng/mL 이상인지 여부를 결정하는 단계;

유사한(바람직하게는 동일한) 표현을 갖는 동일한 질환을 앓고있는 이전 환자에 대한 상기 결정 방법의 결과를 검색하고, 이용하는 것을 단계; 및

를 포함한다.

"APRIL 값이 100ng/mL 이상인 환자에게 가장 효과적인 치료 계획의 선택"이란 용어는 바람직하게는 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 신규 환자를 위한 치료 계획을 선택하는 방법을 의미하는 것으로서, 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 APRIL의 양이 100ng/mL 이상인지를 결정하는 단계를 포함하고, BCMA와의 결합을 위해 APRIL과 경쟁하지 않는 BCMA-T-세포 이중 특이적 항체를 사용하거나 더 높은 투여량 및/또는 보다 빈번한 치료 계획으로 전환하는 것을 고려해야 한다.

"환자의 BCMA 관련 형질세포 상태의 조사"라는 용어는 다음과 같은 군에서 선택된 1개, 2개, 3개 또는 모든 4개 방법에 의한 상기 형질세포의 조사에 관한 것이다:

MFI가 기준치 이상으로 80 이상, 바람직하게는 100 이상으로 나타나는 경우, 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율(추가로 E:T 비율로 또한 명명됨)이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상인지를 결정하는 단계,

상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 가용성 BCMA의 양이 2.5ng/mL 이상인지를 결정하는 단계, 및

상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 APRIL의 양이 100ng/mL 이상인지를 결정하는 단계.

"T-세포 증식성 치료"라는 용어는 예를 들어 재조합 시토카인(예를 들어, 인터페론(IFN) IFN-감마, IFN-알파; 인터루킨 (IL) IL-1, IL-2, IL-7, IL-9, IL-15, IL-16, IL- 21), 공자극 분자에 대한 길항성 항체, 체크포인트 억제제(예를 들어 항-PD-1, 항-PD-L1)와 같이 T 세포의 증식 또는 팽창을 유도하는 치료 처리 또는 생물학적 치료를 의미하고, 바람직하게는 T 세포의 증식 또는 확장은 종양 부위에 특이적이다.

"T-세포 화학주성 요법"이란 용어는 예를 들어 케모카인(예: CCL1, CCL2, CCL22, CCL17, IP-10)와 같은 T 세포의 화학주성을 종양 부위에 유도하는 치료 처리 또는 생물학적 치료를 의미한다.

"체액 샘플"이란 용어는 인간 환자의 분리된 체액을 의미한다. 본 발명에 따른 바람직한 체액은 골수 흡인물, 혈액, 혈청, 혈장, 소변, 타액, 활액 및 척수액이다.

"골수 흡인물"이란 용어는 생체검사(trephine biopsy) 또는 생체검사로 채취한 샘플을 의미한다. 골수 흡인 및 생체검사는 대개 좌골 뒤쪽 또는 장골능 뒤쪽에서 수행된다. 흡인은 또한 흉골(breastbone)에서 얻을 수 있다. 골수 흡인은 경골 (shinbone)에서도 수행될 수 있다. 다발성 골수종의 악성 세포와 같이, 형질세포를 수반하는 질병을 앓고있는 환자의 경우, 혈액 및 골수 흡인물이 바람직한 체액 샘플이다. 다발성 골수종을 앓고있는 환자의 경우 골수 흡인물을 본 발명에 따라 사용하는 것이 특히 바람직하다.

용어 "혈액 샘플"은 세포(즉, 적혈구(red blood cells), 백혈구(white blood cells), 혈소판(platelets)) 및 혈장을 포함하는 혈액 샘플을 의미한다.

SLE 또는 RA을 앓고 있는 환자의 경우, 혈액 샘플 및 바람직하게는 활액(염증 관절을 둘러싸는 유체)이 본 발명에 따라 사용되는 바람직한 체액 샘플이다.

루푸스 신염 및 유형1 자가면역 간염을 앓고 있는 환자의 경우, 혈액 샘플이 본 발명에 따라 사용되는 바람직한 체액 샘플이다.

"CD138+ CD38+ 세포"라는 용어는 건강한 사람과 다발성 골수종 환자의 형질세포를 의미한다. 악성 형질세포는 대개 골수종 환자의 골수에서 정상 형질세포보다 빈도가 높기 때문에 CD138+ CD38+ 세포는 다발성 골수종 환자에게 이 발현 프로파일(profile)의 골수종 세포로 간주 될 수 있다. CD38은 형질세포에서 발현되는 항원이다. 형질세포는 CD138을 발현하는 골수에서 유일한 세포이기 때문에(즉, syndecan-1), 이 마커를 사용하여 이 개체군을 확인하고 분리할 수 있다. 골수종 세포의 면역 표현형은 치료받지 않은 환자와 치료받은 환자 사이에 현저한 차이가 없기 때문에, CD138 항원을 두 환자군 모두에서 분석에 사용할 수 있다. 바람직하게는 CD138+ 세포가 초기에 게이팅된(gated) 후 CD38을 사용하여 후속적으로 선별한다. "정상" 형질세포 및 "악성" 형질세포(즉, 골수종 세포)를 구별하기 위해, CD56 및 CD19 항원은 면역 표현형 분석에 포함시키는 유용한 마커이다. 유동세포 분석법에 의해 CD138+ CD38+로 확인된 형질세포 개체군에서, CD19+ CD56-를 이용한 세포의 재-게이팅(re-gating)은 정상 형질세포를 의미하고 CD19- CD56+를 이용한 재게이팅은 악성 형질세포를 의미한다(Rawstron AC, et al. Report of the European Myeloma Network on multiparametric flow cytometry in multiple myeloma and related disorders. Haematologica. 2008;93:431-438, and Tae-Dong Jeong et al., Korean J Hematol. Dec 2012; 47(4): 260-266).

"표적 세포"라는 용어는 표면에 BCMA를 발현하는 세포를 의미한다. 환자가 다발성 골수종을 앓고 있는 경우, 상기 세포는 다발성 골수종 형질세포이다. 환자가 SLE 또는 RA를 앓는 경우, 상기 세포는 항-핵 항체를 분비하는 세포, 바람직하게는 항-핵 항체를 분비하는 형질세포이다. 바람직하게는 표적 세포는 CD138+ CD38+ 세포이다.

"작동체 세포"라는 용어는 세포독성, 세포 사멸 또는 종양세포의 세포 사멸을 유도할 수 있는 세포 또는 세포 군을 의미하고, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 바람직하게는 CD3+ T 세포를 의미한다.

용어 "CD3+ 세포 또는 CD3+ T 세포"는 CD3 양성인 세포를 의미한다. T 세포는 또한 T-세포 수용체(TCR)에 대해 양성이고 또한 TCR의 표면 발현에 의해 확인될 수 있다. T 세포는 또한 CD45에 대해 양성이며 CD19 및 CD56에 대해 음성이어서 CD45의 표면 발현의 측정 및 CD19(음성) 및 CD56(음성)에 대한 음성에 의해 확인될 수 있다. 작동체 세포는 또한 CD3+ CD4+ 도움 T 세포, CD3+ CD8+ 세포독성 T 세포, CD3+ CD45RA+ CD197- 비접촉 T 세포, CD3+ CD45RA+ CD197-CD4+ 비접촉 CD4 T 세포, CD3+ CD45RA+ CD197- CD8+ 비접촉 CD8 T 세포, CD3+ CD45RA- 기억 T 세포, CD3+ CD45RA- CD4+ 기억　CD4 T 세포, CD3+ CD45RA- CD8+ 기억　CD8 T 세포, CD3+ CD45RA- CD197+ 중심 기억 T 세포, CD3+ CD45RA- CD197+ CD4+ 중심 기억 CD4 T 세포, CD3+ CD45RA- CD197+ CD8+ 중심 기억 CD8, CD3+ CD45RA- CD197- 작동체 기억 T 세포, CD3+ CD45RA- CD197- CD4+ 작동체 기억 CD4 T 세포;　CD3+ CD45RA- CD197- CD8+ 작동체 기억 CD8 T, CD3+ CD45RA+ CD197- 작동체 T 세포,　CD3+ CD45RA+ CD197- CD4+ 작동체 CD4 T 세포,　CD3+ CD45RA+ CD197- CD8+ 작동체 CD8 T 세포,　CD3+ CD4+ CD25hi CD127lo 조절 T 세포, CD3+ PD-1- non-exhausted T 세포, 및 CD3+ PD-1- Tim-3- non-exhausted T 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 CD3+ 세포로 확인될 수 있다.

"Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI로 측정된 기준치"이라는 용어는 본 발명에 따른 측정에 사용된 FACS 장치에 대해 정의된 기준치에 관한 것이다. 기준치는 참조용 T-세포의 MFI에 의해 정의된다.

"가용성 BCMA"라는 용어는 환자의 체액 샘플에 존재하는 BCMA를 의미한다. 바람직하게는 효소-결합 면역흡착 검사(ELISA)가 체액 샘플, 바람직하게는 혈청, 바람직하게는 혈장 중의 BCMA 농도를 측정하는데에 사용된다. 바람직하게는 이 검사는 인간 APRIL, BAFF, BAFF-R 또는 TACI와 교차 반응하지 않는다.

"가용성 APRIL의 양을 측정하는"이란 용어는 바람직하게는 ELISA 방법을 사용하는 것을 의미한다.

또다른 실시예에서, 본 발명은 자가면역 질환의 치료에 사용하기 위한 CD3ε 및 BCMA에 대한 이중 특이적 항체에 관한 것이다. 본 발명은 이러한 치료 및 관련 진단 검사에 대한 환자의 반응성을 결정하는 방법을 제공한다.

또다른 실시예에서, 본 발명은 다발성 골수종의 치료에 사용하기 위한 CD3ε 및 BCMA에 대한 이중 특이적 항체에 관한 것이다. 본 발명은 이러한 치료 및 관련 진단 검사에 대한 환자의 반응성을 결정하는 방법을 제공한다.

본 발명의 모든 실시예는 인간의 치료 및 진단에 관한 것이다.

본 발명의 특정 실시예가 아래에 열거되었다:

1. 본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, 인간 BCMA("BCMA"로 또한 명명됨)의 세포외 도메인 및 인간 CD3ε("CD3"으로 또한 명명됨)에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것으로서, CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서, Kd값이 상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 항-BCMA 항체를 사용하여 측정된 상기 CD138+ CD38+ 세포에 대한 BCMA 발현은, Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI로 결정된 기준치 이상으로 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 보다 바람직하게는 300 이상인 것을 특징으로 하는 항체.

2. 실시예 1에 따른 용도에 있어서, 상기 이중 특이적 항체 및 상기 항-BCMA 항체는 BCMA 결합에 대해 1가인 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.

3. 실시예 1에 따른 용도에 있어서, 상기 이중 특이적 항체 및 상기 항-BCMA 항체는 BCMA 결합에 대해 2가인 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.

4. 실시예 1에 따른 용도에 있어서, 상기 이중 특이적 항체 및 상기 항-BCMA 항체는 BCMA 결합에 대해 3가인 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.

5. 실시예 1 내지 4의 어느 하나에 따른 용도에 있어서, 상기 이중 특이적 항체가 중쇄 및 경쇄 CDR로서, 상기 항-BCMA 항체와 동일한 아미노산 서열의 CDR을 포함하는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.

6. 실시예 1 내지 5 중 어느 하나에 따른 용도에 있어서, 상기 이중 특이적 항체가 중쇄 및 경쇄 가변영역으로서, 가변영역은 상기 항-BCMA 항체와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.

7. 본 발명은 형질세포를 수반하는 질병을 앓고있는 환자의 치료에 사용하기 위한, 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 상기 환자의 분리된 체액 샘플의 T 세포 대 작동체 세포의 비율(E:T 비율)은 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상인 것을 특징으로 하는 항체.

8. 본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 앓고있는 환자의 치료에 사용하기 위한, 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 상기 치료는 연속적으로

i) 상기 환자로부터 체액 샘플을 분리하는 단계,

ii) 상기 샘플에서 가용성 BCMA의 양을 측정하는 단계, 및

iii) 상기 샘플에서 가용성 BCMA의 양이 2.5ng/mL 이상이고,

iv) 상기 환자 샘플에서 상기 가용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 특이적으로 결합하는 경우, 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 제1 투여량에 대해 더 높은 투여량으로 또는 상기 이중 특이적 항체의 제1 투여 및 제2 투여 사이의 단축된 주기로 보다 빈번한 치료 계획으로 또는 상기 이중 특이적 항체의 제1 투여 및 제3 투여 사이의 단축된 주기로 치료하는 단계,

를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.

9. 본 발명은 인간 BCMA 수용체에 결합하기 위해 가용성 BCMA와 경쟁하는 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체에 관한 것으로, 상기 항체는 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위해 BCMA에 결합하기 위해 APRIL과 경쟁하고 및/또는 NF-κB의 APRIL 매개 활성화를 차단하고, 상기 치료는 연속적으로

ii) 상기 샘플에서 ELISA 방법을 사용하여 APRIL의 양을 측정하는 단계, 및

iii) 상기 환자 샘플에서 APRIL의 양이 100ng/mL 이상인 경우, 100ng/mL 미만의 가용성 APRIL 농도를 갖는 환자에게 권장되는 투여량에 비해 2배 및 80배 까지 높은 100ng/mL 내지 1000ng/mL APRIL 농도 및 1000ng/mL 이상의 APRIL 농도의 50% 내지 100% 높은 투여량으로 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체로 치료하는 단계 또는 상기 이중 특이적 항체의 임의의 두 투여 사이의 단축된 주기로 상기 높아진 투여량에 도달하기 위한 각각의 보다 빈번한 치료 계획으로 상기 환자를 치료하는 단계,

를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.

10. 본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 앓고있는 환자의 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액에서 BCMA 단백질 발현을 측정하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 환자의 치료에 사용하기 위한 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여 상기 CD138+ CD38+ 세포상의 BCMA 발현을 측정하는 단계, 및 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI가 기준치 이상으로 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 보다 바람직하게는 300 이상인지의 여부를 결정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

11. 본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법으로서, 상기 환자의 치료에 사용하기 위한 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여 상기 CD138+ CD38+ 세포상의 BCMA 발현에 대해 상기 환자로부터의 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플을 분석하는 단계, 및 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI가 80 이상, 바람직하게는 기준치 이상으로 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 보다 바람직하게는 300 이상인 경우 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 치료하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

12. 본 발명은 형질세포를 수반하는 질병을 앓고 있는 환자에게 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 방법으로서, 상기 환자의 분리된 체액 샘플은 BCMA에 대한 MFI가 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 기준치 이상으로 300 이상인 것을 특징으로 하는 방법.

13. 본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자가 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로의 치료에 대한 반응에 대해 가능성을 예측하는 방법으로서, 상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여 측정되는, CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서의 세포-표면 BCMA 발현이, 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 보다 더욱 바람직하게는 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI로 결정된 기준치 이상으로 300 이상으로서, 상기 치료에 대한 반응에 대한 환자의 가능성을 예측할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.

14. 분리된 체액 샘플에서 세포-표면 BCMA 발현을 측정하는 시험관 방법으로서, BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여 상기 CD138+ CD38+ 세포에 대한 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI를 결정하는 단계를 포함하고, 80 이상, 바람직하게는 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 더욱 바람직하게는 기준치 이상으로 300 이상인 것을 특징으로 하는 방법.

15. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자를 치료하는데에 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 시험관 방법으로서, BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여 측정되는, CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플에서의 세포-표면 BCMA 발현이 상기 환자에 대하여, 80 이상, 바람직하게는 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI로 결정된 기준치 이상으로 100 이상이고, 상기 치료 계획이 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 용도를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

16. 형질세포를 수반하는 질병을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 치료법을 선택하는 방법으로서,

i) BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여 측정되는, CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플에서의 세포-표면 BCMA 발현이, 100 이상, 바람직하게는 200 이상, 보다 더욱 바람직하게는 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI로 결정된 기준치 이상으로 300 이상인 경우, 상기 환자를 상기 치료용 항체로 치료하는 단계, 또는

ii) BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여 측정되는, CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플 또는 분리된 혈액 샘플에서의 세포-표면 BCMA 발현이, 100 미만, 바람직하게는 50 미만, 더욱 바람직하게 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI로 결정된 기준치 이상으로 10 미만인 경우, 상기 환자를 상기 치료용 항체로 치료하지 않는 단계,

를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

17. 형질세포를 수반하는 질병을 앓고 있는 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 보다 더욱 바람직하게는 10:1 이상인지를 측정하는 것을 특징으로 하는 방법.

18. 형질세포를 수반하는 질병을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법으로, 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 보다 더욱 바람직하게는 10:1 이상인지를 분석하는 단계를 포함하고, 상기 치료는 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 용도를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

19. 형질세포를 수반하는 질병을 앓고 있는 환자에게 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 방법으로, 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 보다 더욱 바람직하게는 10:1 이상으로 나타나고, 상기 치료 계획은 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 용도를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

20. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자에게 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 방법으로서,

i) 상기 환자의 분리된 체액 샘플 중의 CD3+ 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 보다 더욱 바람직하게는 10:1 이상인 경우, 단일요법에서 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체로 상기 환자를 치료하는 단계, 또는

ii) 상기 환자의 분리된 체액 샘플 중의 CD3+ 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1, 바람직하게는 0.25:1 미만인 경우, T-세포 증식 요법 또는 T-세포 화학주성 요법과 병행하여 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체로 상기 환자를 치료하는 단계.

21. 본 발명은 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자가 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로의 치료에 대한 반응에 대해 가능성을 예측하는 방법으로서, 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 보다 더욱 바람직하게는 10:1 이상인지를 측정함으로써, 치료에 대한 반응에 대해 환자의 가능성을 예측할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.

22. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 보다 더욱 바람직하게는 10:1 이상인지를 측정하는 것을 특징으로 하는 시험관 방법.

23. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 시험관 방법으로서, 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 보다 더욱 바람직하게는 10:1 이상으로 측정되고 이 치료 계획은 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 용도를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

24. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자에 대해 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로의 치료를 선택하는 방법으로서,

i) 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율이 0.35:1, 바람직하게는 0.5:1 이상, 바람직하게는 1:1 이상, 보다 바람직하게는 5:1 이상, 보다 더욱 바람직하게는 10:1 이상인 경우, 상기 치료용 항체로 상기 환자를 치료하는 단계, 또는

ii) 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비율이 0.35:1 미만, 바람직하게는 0.5:1, 바람직하게는 0.25:1 미만인 경우, T-세포 증식 요법 또는 T-세포 화학주성 요법과 병행하여 상기 환자를 치료하는 단계,

를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

25. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자의 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플에서 상기 샘플 중의 가용성 BCMA 양이 2.5ng/mL 이상, 바람직하게는 10ng/mL 이상인지, 보다 바람직하게는 50ng/mL 이상, 보다 더욱 바람직하게는 250ng/mL 이상인지를 측정하는 것을 특징으로 하는 방법.

26. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법으로서, 분리된 체액 샘플에서의 가용성 BCMA의 양이 2.5ng/mL 이상, 바람직하게는 10ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50ng/mL 이상, 보다 더욱 바람직하게는 250ng/mL 이상인지를 결정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

27. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자가 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로의 치료에 대해 반응에 대한 가능성을 예측하는 방법으로서, 2.5ng/mL 이상, 바람직하게는 10ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50ng/mL 이상, 보다 더욱 바람직하게는 250ng/mL 이상의 분리된 체액 샘플에서의 가용성 BCMA의 양이 치료에 대한 반응에 대해 환자의 가능성을 예측할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.

28. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자의 분리된 체액 샘플에서, 상기 샘플에서 가용성 BCMA의 양이 2.5ng/mL 이상, 바람직하게는 10ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50ng/mL 이상, 보다 더욱 바람직하게는 250ng/mL 이상인지를 결정하는 것을 특징으로 하는 시험관 방법.

29. 분리된 체액 샘플에서 2.5ng/mL 이상, 바람직하게는 10ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50ng/mL 이상, 보다 더욱 바람직하게는 250ng/mL 이상의 가용성 BCMA 양 형질세포를 수반하는 질환을 앓고있는 환자의 환자에 대한 가장 효과적인 치료를 선택하는 방법으로서, 이 치료법은 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체의 용도를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

30. 분리된 체액 샘플에서 가용성 BCMA의 양이 2.5ng/mL 이상, 바람직하게는 10ng/mL 이상, 보다 바람직하게는 50ng/mL 이상, 보다 더욱 바람직하게는 250 ng/mL 이상인지를 결정함으로써, 형질세포를 수반하는 질환으로 고통받는 환자를 치료하는데에 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 시험관 방법으로서, 이 치료 계획은 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체의 용도를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

31. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 치료법을 선택하는 방법으로서,

i) 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서 가용성 BCMA의 양이 2.5ng/mL 미만인 경우, 상기 환자를 상기 치료용 항체로 치료하는 단계,

ii) 상기 샘플의 가용성 BCMA의 양이 2.5ng/mL 이상이고, 그리고 상기 환자 샘플의 상기 가용성 BCMA의 양이 상기 이중 특이적 항체에 결합하지 않는 경우, 상기 환자를 상기 치료용 항체로 치료하는 단계, 또는

iii) 상기 샘플의 가용성 BCMA의 양이 2.5ng/mL 이상이고, 그리고 상기 환자 샘플의 상기 가용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 특이적으로 결합하는 경우, 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 제1 투여량에 대해 더 높은 투여량으로 또는 상기 이중 특이적 항체의 제1 투여 및 제2 투여 사이의 단축된 주기의 보다 빈번한 치료 계획으로 또는 상기 이중 특이적 항체의 제1 투여 및 제3 투여 사이의 단축된 주기로 치료하는 단계,

를 포함하는 것을 특징으로 하는 치료법.

32. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자의 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 샘플에서, 상기 샘플의 가용성 APRIL의 양이 100ng/mL 이상, 바람직하게는 1000ng/mL 이상인지를 결정하는 것을 특징으로 하는 방법.

33. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있고 상기 환자의 분리된 체액 샘플의 가용성 APRIL의 양이 100ng/mL 이상, 바람직하게는 1000ng/mL 이상으로 진단된 환자를 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로 치료하는 방법으로서, BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체의 용도를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

34. 분리된 체액 샘플에서 100ng/mL 이상의 가용성 APRIL의 양을 나타내는 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자에게 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 방법으로서, 상기 치료 계획은 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체의 용도을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

35. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자가 BCMA 및 CD3에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로의 치료에 대해 반응에 대한 가능성을 예측하는 방법으로서, 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서의 100ng/mL 이상의 가용성 APRIL의 양이 치료에 대한 반응에 대해 환자의 가능성을 예측할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.

36. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자의 분리된 체액 샘플에서, 상기 샘플 중의 가용성 APRIL의 양이 100ng/mL 이상, 바람직하게는 1000ng/mL 이상인지를 결정하는 것을 특징으로 하는 시험관 방법.

37. 상기 샘플에서 가용성 APRIL의 양이 100ng/mL 이상, 바람직하게는 1000ng/mL 이상인지를 결정함으로써, 형질세포를 수반하는 질환으로 고통받는 환자를 치료하는데에 가장 효과적인 치료 계획을 선택하는 시험관 방법으로서, 이 치료 계획은 APRIL 경쟁적 이중 특이적 항체 또는 APRIL 비-경쟁적 이중 특이적 항체의 용도를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

38. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 치료법을 선택하는 방법으로서,

i) 상기 환자의 분리 된 체액 샘플에서 가용성 APRIL의 양이 100ng/mL 이하인 경우, 상기 환자를 APRIL 경쟁적 이중 특이적 항체 또는 APRIL 비-경쟁적 이중 특이적 항체로 치료하는 단계, 또는

ii) 상기 샘플에서 가용성 APRIL의 양이 100ng/mL 이상인 경우, 상기 환자를 APRIL 비-경쟁적 이중 특이적 항체로 치료하는 단계,

를 포함하는 것을 특징으로 하는 치료법.

39. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법으로서, 상기 환자 샘플에서의 APRIL의 양은 100ng/mL 이상이고, 100ng/mL 이하의 가용성 APRIL 농도로 환자에게 권장된 투여량에 비해, 100ng/mL의 APRIL 농도에서 2배 높은 투여량 및 APRIL 농도가 1000ng/mL까지 증가하는 경우 추가로 80배까지 증가한 투여량에서 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 치료하는 단계, 또는 상기 이중 특이적 항체의 임의의 두 투여 사이의 단축된 주기로 상기 높아진 투여량에 도달하기 위한 각각의 보다 빈번한 치료 계획으로 상기 환자를 치료하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

40. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 환자의 치료에서의 사용을 위해, 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 상기 환자 샘플에서 APRIL의 양이 100ng/mL 이상이고, 100ng/mL 미만의 가용성 APRIL 농도를 갖는 환자에게 권장되는 투여량에 비해, 100ng/mL 의 APRIL 농도에서 2배 높은 투여량 및 APRIL 농도가 1000ng/mL까지 증가하는 경우 추가로 80배까지 증가한 투여량에서 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 치료하는 단계, 또는 상기 이중 특이적 항체의 임의의 두 투여 사이의 단축된 주기로 상기 높아진 투여량에 도달하기 위한 각각의 보다 빈번한 치료 계획으로 상기 환자를 치료하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

41. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 신규 환자에 대한 치료 계획을 결정하기 위한 방법으로서,

상기 신규 환자의 BCMA 연관 형질세포 상태를 조사하기 위한 최소한 하나의 방법을 이용하는 것을 제공하는 단계;

최소한 하나의 유사한 표현으로 동일한 질환을 앓고 있는 이전 환자에 대한 이전 치료 계획에 대해, 최소한 하나의 방법의 결과를 이용하는 것을 탐색하는 단계; 및

적어도 하나의 이전 치료 계획의 정보에 기초하여 새로운 환자의 치료를 개선하는 방법을 결정하기 위해 이전 환자에 대한 이전 치료 계획을 검토하는 단계, 여기서 상기 치료 계획은 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체의 용도, 투여량, 및 상기 이중 특이적 항체의 최소한 제1 투여 및 제2 투여 사이의 주기 동안의 치료 계획을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

42. 세포-표면 BCMA 발현의 측정용 키트로서, CD138, CD38, CD19, 및 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체에 특이적으로 결합하는, 4개의 표지된-항체로 미리 장입된 바이알 또는 튜브를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.

43. E:T 비율의 측정용 키트로서, CD138, CD38, CD19, 및 CD3에 특이적으로 결합하는 악성 PC 및 T 세포를 검출하기 위한 4개의 표지된 항체로 미리 장입된 바이알 또는 튜브를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.

44. 가용성 BCMA의 측정용 키트로서, 캡쳐 항체로서의 다클론 항-BCMA 항체, 및 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체의 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체의 검출을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.

45. 형질세포를 수반하는 질환을 앓고 있는 신규 환자에 대한 치료 계획을 결정하는 방법으로서, 상기 신규 환자의 BCMA 매개 형질세포 상태의 최소한 하나의 방법을 이용하는 것을 제공하고, 이를 바탕으로 인정된/승인된 치료법을 BCMA-T-세포 이중 특이적 항체를 투여 또는 치료 스케줄에 적용시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.

46. 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위해 인간 B-세포 성숙 항원("BCMA"로 또한 명명됨) 및 인간 CD3ε("CD3"로 또한 명명됨)의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 상기 질환은 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서, 상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체를 사용하여 측정된, 상기 CD138+ CD38+ 세포 상의 BCMA 발현이 Relative Median or Mean Fluorescence Intensity MFI로 측정된 기준치 이상으로 80 이상인 것을 특징으로 한다.

47. 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위해 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 상기 질환은 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서의 T 세포(작동체 세포) 대 표적세포의 비율(E:T 비율) 0.35:1인 것을 특징으로 한다.

48. 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위해 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 상기 질환은 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서, 수용성 BCMA 양이 2.5ng/mL 이상이고, 상기 환자 샘플에서의 상기 가용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하고, 상기 이중 특이적 항체로의 상기 환자의 상기 치료는 더 높은 투여량 및/또는 보다 빈번한 치료 계획으로 수행되는 것을 특징으로 한다.

49. 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위해 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 상기 질환은 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서, 가용성 BCMA 양이 2.5ng/mL 이상이고 상기 환자 샘플에서의 상기 가용성 BCMA는 상기 이중 특이적 항체에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하고, 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 상기 치료하는 것은 제1 투여량에 비해 더 높은 투여량 또는 상기 이중 특이적 항체의 제1 투여 및 제2 투여 사이의 단축된 주기 또는 상기 이중 특이적 항체의 제1 투여 및 제3 투여 사이의 단축된 주기로 보다 빈번한 치료 계획으로 수행되는 것을 특징으로 한다.

50. 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위해 인간 BCMA 수용체에 대한 결합에 대해 가용성 BCMA와 경쟁하고 및/또는 NF-κB의 APRIL 매개 활성화를 차단하는 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 상기 질환은 상기 환자로부터 분리된 체액 샘플에서 APRIL의 양이 100ng/mL 이상이고, 상기 이중 특이적 항체에 의한 상기 환자의 치료가 더 높은 투여량 및/또는 보다 빈번한 치료 계획으로 수행되는 것을 특징으로 한다.

51. 인간 BCMA 수용체에 결합하기 위해 가용성 BCMA와 경쟁하는 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 여기서 상기 항체는 BCMA와 결합하기 위해 APRIL과 경쟁하고, 상기 항체는 BCMA와 결합하기 위해 APRIL과 경쟁하고 및/또는 다발성 골수종 질환을 앓고있는 환자의 치료에 사용하기 위한 NF-κB의 APRIL 매게 활성화를 차단하고, 상기 질환은 형질세포 및 T 세포를 포함하는 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서, APRIL의 양이 100ng/mL 이상인 것을 특징으로 하고, 100ng/mL 미만의 가용성 APRIL 농도를 갖는 환자에게 권장되는 투여량에 비해, 100ng/mL 의 APRIL 농도에서 2배 높은 투여량 및 APRIL 농도가 1000ng/mL까지 증가하는 경우 추가로 80배까지 증가한 투여량에서 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 치료하는 단계, 또는 상기 이중 특이적 항체의 임의의 두 투여 사이의 단축된 주기로 상기 높아진 투여량에 도달하기 위한 각각의 보다 빈번한 치료 계획으로 상기 환자를 치료하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.

52. 다발성 골수종을 앓는 환자의 치료에 사용하기 위해 인간 B-세포 성숙 항원("BCMA"로 또한 명명됨) 및 인간 CD3ε("CD3"로 또한 명명됨)의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 상기 질환은 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서, 상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배의 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여 측정된 상기 CD138+ CD38+ 세포 상의 BCMA 발현이 Relative Median or Mean Flourescence Intensity MFI로 결정된 기준치 이상으로 80 이상인 것을 특징으로 한다.

53. 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 상기 환자의 분리된 체액 샘플에서의 T 세포(작동체 세포) 대 표적세포의 비율(E:T 비율)이 0.35:1 이상인 것을 특징으로 한다.

54. 실시예 53에 따른 용도에 있어서, E:T 비가 0.35:1 내지 22:1인 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.

55. 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위해 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 상기 질환은 상기 환자로부터 분리된 체액 샘플에서 가용성 BCMA 양이 2.5ng/mL 이상이고, 상기 환자 샘플에서의 상기 가용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하고, 상기 이중 특이적 항체에 의한 상기 환자의 상기 치료는 1.5배에서 10배까지인 주당 투여량 또는/및 표준 투여량에 비해 주 1회 투여에서 일 1회까지 단축된 투여-투여 사이의 시간 간격에서 수행되는 것을 특징으로 한다.

56. 실시예 55에 따른 용도에 있어서, 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 상기 치료하는 것이 표준 투여량에 비해 1.5배에서 2.0배까지인 주당 투여량으로 수행되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.

57. 실시예 55에 따른 용도에 있어서, 상기 이중 특이적 항체로 상기 환자를 치료하는 것이 표준 투여량에 비해 주 1회 투여에서 주 2회까지 단축된 투여-투여 사이의 시간 간격에서 수행되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.

58. 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위해 인간 BCMA 수용체에 결합하기 위해 가용성 BCMA와 경쟁하고 및/또는 NF-B의 APRIL 매게 활성화를 차단하는 BCMA 및 CD3에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 상기 질환은 상기 환자로부터 분리된 체액 샘플에서 APRIL의 양이 10ng/mL보다 높고 100ng/mL 이하인 것을 특징으로 하고, 표준 투여량에 비해 1.5배에서 20배까지의 투여량으로 주당 또는/및 주 1회 투여에서 일 1회까지 단축된 투여-투여 사이의 시간 간격에서 수행되는 것을 특징으로 한다.

59. 실시예 58에 따른 용도에 있어서, 상기 이중 특이적 항체로 환자를 치료하는 것이 표준 투여량에 비해 1.5배에서 3.0배까지의 주당 투여량으로 수행되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.

60. 실시예 58에 따른 용도에 있어서, 상기 이중 특이적 항체로 환자를 치료하는 것이 표준 투여량에 비해 주 1회 투여에서 주 3회까지 단축된 투여-투여 사이의 시간 간격에서 수행되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.

재료 및 일반적인 방법

세포배양 기술

Current Protocols in Cell Biology (2000), Bonifacino, J. S., Dasso, M., Harford, J.B., Lippincott-Schwartz, J. 및 Yamada, K.M. (eds.), John Wiley & Sons, Inc.에 기술된 바와 같이 표준 세포배양 기술이 사용된다.

PBMC로부터 원발성 인간 pan T 세포 분리

말초혈액단핵세포(PBMC)는 현지 혈액은행 또는 건강한 인간 헌혈자의 신선혈로부터 얻은 강화된 림프구 제제(백혈구연층)를 Histopaque 밀도 원심 분리하는 것으로 조제되었다. 간단하게, 혈액은 무균 PBS로 희석되었고 Histopaque 구배(gradient)(Sigma, H8889) 위에 조심스럽게 레이어되었다(layered). 상온에서 450 x g로 30분동안 원심 분리한 후(브레이크 스위치 꺼짐), PBMC 위에 간기를 함유한 혈장의 일부는 폐기되었다. PBMC는 새로운 50ml 팔콘 튜브로 이동되었고, 튜브는 PBS로 총 용량 50ml까지 채워진다. 혼합물은 상온에서 10분동안 400 x g로 원심 분리되었다(브레이크 스위치 켜짐). 상청액은 폐기되었고 PBMC 펠릿(pellet)은 무균 PBS로 두 차례 세척되었다(4에서 10분동안 350 x g 원심 분리 단계). 결과적인 PBMC 모집단은 자동적으로 산출되었고(ViCell) 그리고 분석이 시작될 때까지 37, 5% C0₂인큐베이터 안에 10% FCS 및 1% L-알라닐-L-글루타민을 함유한 RPMI1640 매체에 보관된다.

PBMC의 T 세포 강화는 Pan T 세포 분리 키트 II(Miltenyi Biotec #130-091-156)를 제조자의 설명서에 따라 사용하는 것으로 실행되었다. 간단하게, 세포 펠릿은 1천만 세포당 40 콜드 완충제(cold buffer)(0.5% BSA, 2 mM EDTA를 가진 PBS, 무균 여과)로 희석되었고, 1천만 세포당 10 비오틴-항체 혼합체에 4에서 10분동안배양되었다. 1천만 세포당 30 콜드 완충제 및 20 항-비오틴 자기구슬이 첨가되었고, 혼합물은 4에서 15분동안 더 배양되었다. 세포는 현재 용량의 10-20x을 더한 뒤 300 x g로 10분의 원심 분리 단계에 의해 세척되었다. 1백만 세포까지 500 완충제에 재부유되었다. 라벨되지 않은(unlabeled) 인간 pan T 세포의 자기 분리는 LS 칼럼(Miltenyi Biotec #130-042-401)을 제조자의 설명서에 따라 사용하는 것으로 실행되었다. 결과적인 T 세포 모집단은 자동으로 산출되었고(ViCell) 그리고 분석이 시작될 때까지(24시간 이내) 37, 5% C0₂인큐베이터 안에 AIM-V배지에 보관된다.

PBMC로부터 원발성 인간 미접촉(naive) T 세포 분리

말초혈액단핵세포(PBMC)는 현지 혈액은행 또는 건강한 인간 헌혈자의 신선혈로부터 얻은 강화된 림프구 제제(백혈구연층)를 Histopaque 밀도 원심 분리하는 것으로 조제되었다. PBMC의 T 세포 강화는 Miltenyi Biotec의 미접촉 CD8⁺T 세포 분리 키트(#130-093-244)를 제조자의 설명서에 따라 사용하되, CD8⁺T 세포의 마지막 분리 단계를 건너뛰는 것으로 실행되었다(원발성 인간 pan T 세포의 분리에 대한 설명 또한 참조).

BCMA -양성 인간 골수종 세포주

BCMA-양성 인간 골수종 세포주(NCI-H929, RPMI-8226, U266B1 및 L-363)를 사용하였다. NCI-H929 세포((H929) ATCC CRL-9068)는 10-20% 열-비활성화된 FCS가 있는 80-90% RPMI 1640에서 배양되었고 2mM L-글루타민, 1mM 피루브산 나트륨 및 50M 메르캅토에탄올을 함유하였다. RPMI-8226 세포((RPMI) ATCC CCL-155)는 90% RPMI 1640 및 10% 열-비 활성화된 FCS를 함유하는배지에서 배양되었다. U266B1((U266)ATCC TIB-196) 세포는 2mM L-글루타민, 10mM HEPES, 1mM 피루브산 나트륨, 4500mg/L 글루코스, 및 1500mg/L 중탄산 나트륨 및 15% 열-비활성화 FCS를 함유하도록 변형된 RPMI-1640 배지에서 배양되었다. L-363 세포주(Leibniz Institute DSMZ - German collection of microorganisms and cell cultures; DSMZ No. ACC 49)는 85% RPMI 1640 및 15% 열-비활성화 FCS에서 배양되었다.

실시예

실시예 1: 환자 골수종 세포상의 BCMA 발현의 최적화된 측정

실시예 1.1: 유동세포 분석법(평균 형광 강도)에 의해 검출된 환자 골수종 세포상의 BCMA 발현의 정성적 측정

지역 윤리 위원회 지침 및 헬싱키 선언에 따라, 사전 동의를 얻은 후 다발성 골수종 환자로부터 혈액 및 골수 흡인물을 채취하였다. BCMA의 정량적 발현은 유동세포 분석법으로 골수 흡인물로부터 환자 골수종 세포의 세포 표면에서 측정되었다. 표면 플라즈몬 공명에 의해 검출되는 인간 BCMA에 대해 10.92.7nM의 친화력을 갖는 APC-결합된 2가 BCMA-1 항체를 사용하여 평균 형광 강도(MFI)를 결정하였다.

환자 골수 골수종 세포에서 BCMA 수용체의 발현을 측정하기 위해, 새로 분리된 골수 흡인물을 이용하여 면역표현형 분석을 수행하였다. 적혈구-용해된 K₃-EDTA(ethylenediaminetetraacetic acid) 항응고된 전체 골수 샘플을 면역표현형 분석에 사용하였다. CD138+ CD38+ CD45+ CD56+ CD19-로 확인된 악성 형질세포의 특이적 결합 및 면역표현형 특성화를 목표로 한 직접 면역형광법과 다색염색법을 사용하여 튜브 당 총 210⁶ 세포를 염색하였다. 이어서, 빛으로부터 보호된, 얼음상에서 20 내지 30분 동안 최소한 CD138-APCC750/CD38-FITC/CD56-PE/CD19-PerCP-Cy7/CD45-V450/BCMA-APC를 포함하는 형광 표지된 항체의 패널을 사용하여 골수세포를 염색하였다. 사용된 형광 표지된 항체는 BD Biosciences(San Jose, CA) 및 Caltag Laboratories(San Francisco CA)에서 구입하였다. APC-결합된 2가 항-인간 BCMA-1 항체를 면역 표현형 분석에 사용하였다. 획득은 다색 유동세포 분석법 및 설치된 소프트웨어(예를 들어 CellQUEST 소프트웨어를 사용하여 FACS Diva 소프트웨어 또는 FACS Calibur 유동세포 분석법을 가동하는 CantoII 장치)를 사용하여 수행하였다. Paint-A-Gate PRO 프로그램(BD Biosciences)을 데이터 분석에 사용하였다. BCMA 발현은 악성 형질세포 모집단을 게이팅하여 측정하였고, 평균 형광 강도 값을 결정하고 골수종 환자에서 비교하였다. 골수종 세포에서의 BCMA 발현의 상대적 MFI 값은 골수종 세포에 게이팅된 APC-결합 BCMA-1 항체의 절대 MFI 값으로부터 CD138+ CD38+ CD45+ CD56- 골수종 세포에 게이팅된 APC-결합된 동위원소 대조군 항체 또는 CD3+ T 세포(BCMA-음성으로 알려져있는)에 게이팅된 APC-결합된 BCMA-1 항체의 절대적 MF 값을 빼서 계산하였다. 도 1은 유동세포 분석법(MFI)에 의해 검출되는 환자 골수종 세포에서 (A) 중상 BCMA 발현, (B) 중간 BCMA 발현 및 (C) 낮은 BCMA 발현의 대표적인 FACS 히스토그램 플롯을 도시한다. 도 1에 도시된 바와 같이, 음성 대조군(T 세포에 게이팅된 APC-결합된 BCMA-1 항체)과 비교할 때, 환자 골수종 세포에서의 양성 BCMA 발현에 상응하는 명확한 변화가 있다. 상대적 MFI 값을 기준으로, 모든 골수종 환자는 악성 형질세포에서 BCMA를 발현하지만 BCMA 발현은 낮은 발현(상대적 MFI 값 < 10³)에서 중간 발현(10³-0.3x10⁴)까지 중상 발현(0.3x10⁴~10⁴)까지 다양하다. 조사된 환자 골수 샘플에서 10⁴ 이상의 상대적 MFI 값을 갖는 BCMA 발현은 관찰되지 않았다. 표 3은 환자 골수 골수종 세포에서 발현되는 BCMA의 상대적 MFI 값을 요약한 것이다.

환자 번호	상대적 MFI 값	BCMA 발현
A1	2636	중간
A2	3199	중상
A3	557	낮음
A4	342	낮음
A5	880	낮음
A6	1387	중간
A7	235	낮음
A8	1489	중간
A9	93	낮음
A10	88	낮음
A11	1415	중간
A12	2396	중간
A13	356	낮음
A14	1964	중간
A15	541	낮음
A16	858	낮음
A17	1574	중간
A18	1147	중간
A19	1847	중간
A20	913	낮음
A21	3422	중상
A22	547	낮음
A23	136	낮음

표 3:골수 내 환자 골수종 세포상의 BCMA 발현: 상대적 평균 형광 강도

실시예 1.2: 유동세포 계측법(특정 항원 결합능 )에 의해 검출되는 환자 골수종 세포상의 BCMA 의 정량적 측정

BCMA의 정량적 발현, 즉 BCMA의 특정 항원 결합능(SABC) 또한 유동세포 분석법을 사용하여 환자 골수종 세포의 세포 표면에서 측정되었다. Qifikit (Dako) 방법을 사용하여 H929 인간 골수종 세포주와 비교하여 환자의 골수 골수종 세포의 세포 표면에서 BCMA 항원 복제 수 또는 특정 항원 결합능을 정량화하였다. 골수 흡인물을 수집하고 세포를 FACS 완충액(100/well; 350g for 5 min)으로 세척하고 1Mio cells/ml.로 조정하였다. 세포 현탁액 50(=0.5 Mio cells)는 96 둥근 바닥 웰 플레이트(96 round bottom well plate)의 각 웰(well)에 옮겼다. 그 다음, FACS 완충액(PBS, 0.1% BSA)에서 25g/ml의 최종 농도(또는 포화 농도)로 희석된 쥐 항-인간 BCMA IgG(BioLegend #357502) 또는 쥐 IgG2a 동위원소 대조군(BioLegend #401501) 50l를 포화 농도)를 첨가하고 암실에서 4에서 30분 동안 염색하였다. 다음으로, 100의 Set-up or Calibration Beads를 별도의 웰에 넣고 비드(beads)뿐만 아니라 세포를 FACS 완충액으로 두번 세척하였다. Qifikit에서 제공되는 플루오레세인(fluorescein) 결합된 항-쥐 2차 항체(포화 농도에서)를 함유한 25 FACS 완충액에서 세포와 비드를 재현탁시켰다. 세포와 비드는 4에서 45분 동안 암실에서 염색되었다. 세포를 한번 세척하고 모든 샘플을 100 FACS 완충액에서 재현탁시켰다. 샘플을 다색 유동세포 분석법 및 설치된 소프트웨어(예를 들어 CellQUEST 소프트웨어를 사용하여 FACS Diva 소프트웨어 또는 FACS Calibur 유동세포 분석법을 가동하는 CantoII 장치)에 분석하였다. Paint-A-Gate PRO 프로그램(BD Biosciences)을 데이터 분석에 사용하였다. 표 4는 특정 항원 결합능(SABC)으로 측정한 환자의 골수 골수종 세포에서의 정량적 BCMA 발현을 요약한 것이다.

환자 번호	SABC 값	BCMA 발현
B3	679	낮음
B4	145	낮음
B5	957	낮음
B6	969	낮음
B7	554	낮음
B8	4479	중간
B9	350	낮음
B10	414	낮음
B11	2756	중간
B12	2911	중간
B13	1267	중간
B14	3453	중간
B15	1006	중간
B16	1097	중간
B17	1622	중간
B18	429	낮음
B19	1684	중간
B20	383	낮음
B21	1602	중간
B22	799	낮음
B23	204	낮음
H929	38000	매우 높음

표 4:골수 내 환자 골수종 세포에 대한 BCMA 발현: 특정 항원 결합능

실시예 1.3: BCMA - TCB 의 사멸 성능은 표적세포 표면상의 BCMA 발현에 의해 영향을 받는다: BCMA ^hi -발현 H929 대 BCMA ^med ^/ ^lo -발현 U266 대 BCMA ^med ^/ ^lo -발현 L363 대 BCMA ^lo -발현 RPMI -8226 골수종 세포들

BCMA-TCB 항체의 효능은 골수종 세포의 세포 표면에서의 BCMA의 발현 수준에 영향을 받을 수 있다. BCMA-TCB의 사멸 성능은 표적세포로서 상이한 인간 골수종 세포주, 즉 BCMA^hi-발현 H929 대 BCMA^med/lo-발현 U266 골수종 세포를 사용하는 전가된 T-세포 세포독성 분석에서 측정되었다.

간략하게, 인간 BCMA^hi-발현 H929 또는 BCMA^med/lo-발현 U266 다중 골수종 표적세포를 세포 해리 완충액으로 수거하고, 세척하고 10% 소태아혈청(Invitrogen)이 추가된 RPMI에 재현탁시켰다. 대략, 30,000cells/well이 둥근-바닥 96-웰 플레이트에 플레이팅하고 원하는 최종 농도를 위해 TCB 구성체의 각각의 희석액을 첨가하였다(3회로); BCMA-TCB의 최종 농도는 0.1pM 내지 10nM 범위이다. 적절한 비교를 위해, 모든 TCB 구성체 및 대조군을 동일한 몰농도로 조정하였다. 인간 PBMCs(작동체)를 웰에 첨가하여 10:1의 최종 E:T 비율을 얻었다. 음성 대조군은 작동체 또는 표적세포로만 나타났다. 인간 pan T 세포의 활성화에 대한 양성 대조군으로서, 1g/ml PHA(Sigma #L8902)를 사용하였다. 정상화를 위해, BCMA^hi-발현 H929 또는 BCMA^med/lo-발현 U266 골수종 표적세포의 최대 용해(=100%)는 표적세포를 최종 농도 1% Triton X-100으로 배양하여 세포 사멸을 유도함으로써 측정하였다. 최소 용해(=0%)는 작동체 세포와만 함께 배양된 표적세포, 즉 어떠한 T 세포의 이중 특이적 항체도 나타내지 않았다. 37, 5% CO₂에서 24시간배양한 후, LDH 검출 키트(Roche Applied Science)를 사용하여 세포사멸/괴사 BCMA^hi-발현 H929 또는 BCMA^med/lo-발현 U266 골수종 표적세포로부터 상등액으로의 LDH 방출을 측정하였다. 농도-반응 곡선에서 항-BCMA/항-CD3 T 세포 이중 특이적 항체의 농도에 대해 LDH 방출의 백분율을 도시하였다. Prism 소프트웨어(GraphPad)를 사용하여 EC50 값을 측정하고 최대 LDH 방출의 50%를 초래하는 TCB 항체 농도로서 측정하였다. 도 2에 도시된 바와 같이, BCMA-2-TCB는 115pM의 EC50 및 60%의 최대 사멸로 BCMA^hi-발현 H929 골수종 세포의 사멸을 유도하였지만, 1:1로 비교하였을 때, 동일한 BCMA-TCB 항체는 370pM의 EC50 및 18%의 최대 사멸로 BCMA^med ^/ ^lo-발현 U266 골수종 표적세포만을 사멸시킬 수 있었다. 표 5는 BCMA^hi-발현 H929 또는 BCMA^lo-발현 U266 골수종 표적세포를 사멸시키기 위한 BCMA-2-TCB의 EC50 값 및 최대 사멸을 요약한 것이다.

BCMA 발현 골수종 세포주(BCMA^hi-발현 H929, BCMA^mid ^/ ^lo-발현 L363 및 BCMA^lo-발현 RPMI-8226 MM 세포)의 사멸을 유도하기 위한 또 다른 BCMA-TCB 항체인 BCMA-1-TCB의 효능 또한 유사한 실험 조건을 사용하여 시험되었다.

도 2a에 도시된 바와 같이, BCMA-1-TCB는 (A) 8.49pM의 EC50 및 82.8%의 최대 사멸로 BCMA^hi-발현 H929 골수종 세포의 사멸을 유도하였지만, 1:1로 비교하였을 때, 동일한 BCMA-1-TCB 항체는 (B) 12.6pM의 EC50 및 67.1%의 최대 사멸로 BCMA^med/lo-발현 L363 골수종 표적세포 또는 (C) 229.3pM의 EC50 및 28.1%의 최대 사멸로 BCMA^lo-발현 RPMI-8226만을 사멸시킬 수 있었다. 표 5.1은 BCMA^hi-발현 H929, BCMA^med/lo-발현 L363 또는 BCMA^lo-발현 RPMI-8226 골수종 표적세포를 사멸시키기 위한 BCMA-1-TCB의 EC50 값 및 최대 사멸을 요약한 것이다.

인간 세포주	사멸 성능 EC50 (pM)	최대 사멸
BCMA^hi-발현 H929	115	60%
BCMA^med ^/ ^lo-발현 U266	370	18%

표 5: BCMA 발현 골수종 세포주를 사멸시키는 BCMA-2-TCB의 효능은 표적세포에서의 BCMA 발현에 의해 영향을 받는다.

[표 5.1]

표 5.1:BCMA 발현 골수종 세포주를 사멸시키는 BCMA-1-TCB의 효능은 표적세포에서의 BCMA 발현에 의해 영향을 받는다.

실시예 2: 골수종 환자 골수 흡인물에서의 작동체 세포 대 종양 세포(E:T) 비율의 측정

BCMA 항체의 효능은 골수종 세포의 세포 표면에서 BCMA의 발현 수준에 영향을 받을 수 있다. 그러나, BCMA-TCB 항체의 경우 표면의 BCMA를 높은 수준으로 발현하는 균등 세포의 사멸 성능 또한 다발성 골수종 환자에서 관찰되는 현저하게 다른 E:T 비율에 따라 영향을 받을 수 있다.

실시예 2.1: 유동세포 분석법에 의한 골수종 환자 골수 흡인물에서 CD3 + T 세포 대 CD138 + CD38 + 골수종 세포(E:T) 비율의 측정

실시예 2.1.1: 골수종 환자 골수 흡인물에서 골수종 세포의 측정

골수종 환자의 골수 침윤 악성 형질세포의 퍼센트와 절대계수를 측정하기 위해, 새로 분리된 골수 흡인물을 사용하여 면역표현형 분석을 수행하였다. 적혈구-용해된 K₃-EDTA(ethylenediaminetetraacetic acid) 항응고된 전체 골수 샘플을 면역 표현형 분석에 사용하였다. CD138+ CD38+ CD45+ CD56+ CD19-로 확인된 악성 형질세포의 특이적 결합 및 면역표현형 특성화를 목표로 한 직접 면역형광법과 다색염색법을 사용하여 튜브 당 총 2x10⁶ 세포를 염색하였다. 이어서, 빛으로부터 보호된, 얼음상에서 20 내지 30분 동안 최소한 CD138-APCC750/CD38-FITC/CD56-PE/CD19-PerCP-Cy7/CD45-V450을 포함하는 형광 표지된 항체의 패널을 사용하여 골수세포를 염색하였다. 사용된 형광 표지된 항체는 BD Biosciences(San Jose, CA) 및 Caltag Laboratories(San Francisco CA)에서 구입하였다. 획득은 다색 유동세포 분석법 및 설치된 소프트웨어(예를 들어 CellQUEST 소프트웨어를 사용하여 FACS Diva 소프트웨어 또는 FACS Calibur 유동세포 분석법을 가동하는 CantoII 장치)를 사용하여 수행하였다. Paint-A-Gate PRO 프로그램(BD Biosciences)을 데이터 분석에 사용하였다. 악성 형질세포의 퍼센트는 CD138+ CD38+ CD45+ CD56+ CD19- 모집단을 게이팅하여 결정하였다. 악성 형질세포의 절대계수를 계산하기 위해, 악성 형질세포의 퍼센트에, 예를 들어, 혈액 분석기(Advia 120 System, Siemens)를 사용하여 측정한 골수 흡인물 샘플의 부피를 곱하였다. 일부 실험에서, Trucount^TM 튜브(BD Biosciences, San Jose CA USA)를 사용하여 혈액 중 백혈구의 절대계수를 측정하였다.

실시예 2.1.2: 골수종 환자 골수 흡인물에서 T 세포 및 T 세포 서브세트( subset ) 측정

BCMA-TCB의 경우, 작동체 세포는 주로 많은 T-세포 서브세트를 포함하는 T 세포이다. T 세포 및 T-세포 서브세트의 퍼센트 및 절대계수를 측정하기 위해, 신선하게 분리된 골수 흡인물을 사용하여 면역표현형 분석을 수행하였다. 적혈구-용해된 K₃-EDTA(ethylenediaminetetraacetic acid) 항응고된 전체 골수 샘플을 면역 표현형 분석에 사용하였다. CD45+ CD3+ CD56- 또는 CD3+ 또는 CD45+ CD19- CD56- 로 확인된 T 세포의 특이적 결합 및 면역표현형 특성화를 목표로 한 직접 면역형광법과 다색염색법을 사용하여 튜브당 총 2x10⁶ 세포를 염색하였다. 이어서, 빛으로부터 보호된, 얼음상에서 20 내지 30분 동안 CD138-APCC750/CD38-FITC/CD56-PE/CD19-PerCP-Cy7/CD45-V450을 포함하는 형광 표지된 항체의 패널을 사용하여 골수세포를 염색하였다. 사용된 형광 표지된 항체는 BD Biosciences(San Jose, CA) 및 Caltag Laboratories(San Francisco CA)에서 구입하였다. 획득은 다색 유동세포 분석법 및 설치된 소프트웨어(예를 들어 CellQUEST 소프트웨어를 사용하여 FACS Diva 소프트웨어 또는 FACS Calibur 유동세포 분석법을 가동하는 CantoII 장치)를 사용하여 수행하였다. Paint-A-Gate PRO 프로그램(BD Biosciences)을 데이터 분석에 사용하였다. 침윤 T 세포의 퍼센트는 CD45+ CD19- CD56- 모집단을 게이팅하여 결정하였다. T 세포의 절대계수를 계산하기 위해, T 세포의 퍼센트에 골수 흡인물 샘플의 부피를 곱하였다.

총 T 세포 또는 T-세포 서브세트를 나타내는 작동체 세포는 또한 형광 표지된 항체인 CD3+ T 세포, CD3+ CD4+ 도움 T 세포, CD3+ CD8+ 세포독성 T 세포, CD3+ CD45RA+ CD197- 미접촉 T 세포, CD3⁺CD45RA⁺CD197^-CD4 미접촉 CD4 T 세포, CD3⁺ CD45RA⁺CD197^- CD8⁺ 미접촉 CD8 T 세포, CD3 CD45RA^-기억 T 세포, CD3⁺CD45RA^-CD4⁺기억 CD4 T 세포, CD3⁺ CD45RA^- CD8⁺기억 CD8 T 세포, CD3⁺ CD45RA^-CD197⁺중앙 기억 T 세포, CD3⁺ CD45RA^- CD197⁺CD4⁺중앙 기억 CD4 T 세포, CD3⁺ CD45RA^-CD197⁺ CD8+ 중앙 기억 CD8, CD3+ CD45RA- CD197^- 작동체 기억 T 세포, CD3⁺ CD45RA^- CD197^- CD4⁺ 작동체 기억 CD4 T 세포; CD3⁺ CD45RA^-CD197^-CD8⁺작동체 기억 CD8 T, CD3⁺CD45RA⁺CD197^-작동체 T 세포, CD45RA⁺CD197^-CD4⁺작동체 CD4 T 세포,　CD3⁺CD45RA⁺CD197^- CD8⁺ 작동체 CD8 T 세포, CD3⁺ CD4⁺ CD25^hi CD127^lo 조절 T 세포, CD3⁺PD-1^-non-exhausted T 세포, CD3⁺ PD-1^- Tim-3^- non-exhausted T 세포로 골수종 환자 골수 세포를 염색하여 측정한다. T-세포 서브세트의 절대계수를 계산하기 위해, T-세포 서브세트의 퍼센트에 골수 흡인물 샘플의 부피를 곱한다.

순환하는 T 세포가 골수에 침투하여 E:T 비율에 영향을 줄 수 있기 때문에, 순환하는 T 세포의 퍼센트 및 절대계수도 측정된다. 헤파린화된 튜브를 사용하거나 구연산 소다를 함유한 혈액을 환자에게서 수집한다. 이어서, 빛으로부터 보호된, 얼음상에서 20분 동안 CD3에 대한 형광 표지된 항체를 사용하여 전혈을 염색하였다. 그 다음 적혈구를 용해 완충액(BD Bioscience)으로 용해시키고 세포를 세척 완충액으로 두 번 세척한다. 획득은 다색 유동세포 분석법 및 설치된 소프트웨어(예를 들어 CellQUEST 소프트웨어를 사용하여 FACS Diva 소프트웨어 또는 FACS Calibur 유동세포 분석법을 가동하는 CantoII 장치)를 사용하여 수행하였다. Paint-A-Gate PRO 프로그램(BD Biosciences)을 데이터 분석에 사용하였다. 순환 T 세포의 퍼센트는 CD3+ 모집단을 게이팅하여 결정하였다. T 세포의 절대계수를 계산하기 위해, T 세포의 퍼센트에 혈액 샘플의 부피를 곱하였다.

골수종 환자의 골수 흡인물에서 측정된 침윤 골수종/악성 형질세포(즉, 종양세포) 및 T 세포(예를 들어 작동체 세포)의 퍼센트를 이용하여, E:T 비율을 측정할 수 있었다. 표 6에서 볼 수 있듯이, E:T 비율(T 세포 대 골수종 세포)은 다발성 골수종 환자에서 상당히 다양할 수 있다.

T-세포 서브세트 CD4+ 및 CD8+의 값도 또한 측정되었다. 세포 현탁액을 처리되지 않은 골수 흡인물 배양액(24시간 이하)으로부터 수집하고, 인간 CD4 및 인간 CD8에 대한 형광 표지된 항체로 염색하였다(BD Bioscience, San Jose CA). 표 6.1.은 다발성 골수종 환자에서 E:T 비율(CD4+ T 세포 대 골수종 세포)을 보여주고 및 표 6.2.는 다발성 골수종 환자에서 E:T 비율(CD8+ T 세포 대 골수종 세포)을 보여준다.

non-exhausted CD4+ 및 CD8+ T 세포의 E:T 비율은 또한 세포 표면에서 PD-1 또는 TIM-3를 발현하는 CD4 또는 CD8 T-세포 서브세트의 퍼센트를 측정하여 평가 하였다. 세포 현탁액을 처리되지 않은 골수 흡인물 배양액으로부터 수집하고, 인간 PD-1 및 인간 TIM-3에 대한 형광 표지된 항체로 염색하였다(BD Bioscience, San Jose CA). 표 6.3.은 다발성 골수종 환자에서 E:T 비율(CD4+ PD-1- T 세포 대 골수종 세포)을 보여주고 표 6.4.는 다발성 골수종 환자에서 E:T 비율(CD8+ PD-1- T 세포 대 골수종 세포)을 보여준다. 표 6.5는 다발성 골수종 환자에서 E:T 비율(CD4+ TIM-3- T 세포 대 골수종 세포)을 보여주고 표 6.6은 다발성 골수종 환자에서 E:T 비율(CD8+ TIM-3- T 세포 대 골수종 세포)을 보여준다.

환자 번호	골수-침윤된 골수종 세포(%)	골수-침윤된 T 세포 (%)	골수에서의 E:T 비율
C1	2.0	21.89	11:1 (11.0)
C2	3.3	7.07	2:1 (2.0)
C3	2.74	18.09	7:1 (7.0)
C4	2.0	11.32	6:1 (6.0)
C5	20.18	9.12	0.5:1 (0.5)
C6	0.40	8.88	22:1 (22.0)
C7	4.37	15.75	3.6:1 (3.6)
C8	20.0	10.34	0.5:1 (0.5)
C9	8.20	8.38	1.02
C10	2.60	8.52	3.28
C11	18.00	6.59	0.37
C12	22	7.7	0.35
C13	12.40	6.72	0.54
C14	4.20	12.21	2.91
C15	1.76	7.16	4.07
C16	31.30	13.62	0.44
C17	12	10.43	0.87
C18	10	27.89	2.79
C19	2.30	5.53	2.40
C20	7.00	2.9	0.41
C21	6.5	6.67	1.03
C22	6.10	8.23	1.35
C23	5.00	14.77	2.95

표 6:처리되지 않은 다발성 골수종 환자에서의 작동체 세포(T 세포) 대 종양 세포(E:T)의 비율

[표 6.1]

표 6.1:처리되지 않은 다발성 골수종 환자 골수 흡인물에서 작동체 세포(CD4+ T 세포) 대 종양 세포(E:T)의 비율

[표 6.2]

표 6.2:처리되지 않은 다발성 골수종 환자 골수 흡인물에서 작동체 세포(CD8+ T 세포) 대 종양 세포(E:T)의 비율

[표 6.3]

표 6.3:처리되지 않은 다발성 골수종 환자 골수 흡인물에서 작동체 세포(CD4+ PD-1 ^- T 세포) 대 종양 세포(E:T)의 비율

[표 6.4]

표 6.4: 처리되지 않은 다발성 골수종 환자 골수 흡인물에서 작동체 세포(CD8+ PD-1 ^- T 세포) 대 종양 세포(E:T)의 비율

[표 6.5]

표 6.5:처리되지 않은 다발성 골수종 환자 골수 흡인물에서 작동체 세포(CD4+ TIM-3 ^- T 세포) 대 종양 세포(E:T)의 비율

[표 6.6]

표 6.6:처리되지 않은 다발성 골수종 환자 골수 흡인물에서 작동체 세포(CD8+ TIM-3 ^- T 세포) 대 종양 세포(E:T)의 비율

실시예 2.2: BCMA - TCB 의 사멸 성능은 H929 골수종 표적세포의 표면에서 높은 BCMA 발현이 검출되었음에도 불구하고 E:T 비율에 의해 영향을 받는다

BCMA-1-TCB의 사멸 성능은 세포 표면에서 BCMA 발현의 높은 수준 대 낮은 수준을 갖는 상이한 E:T 비율 및 인간 골수종 세포주를 사용하는 전가된 T-세포 세포독성 분석에서 측정되었다.

실시예 2.2.1: 유동세포 분석법(평균 형광 강도)에 의해 검출된 인간 골수종 세포주에서 BCMA 의 정성적 측정

BCMA의 정성적 발현은 유동세포 분석법을 사용하여 H929 및 U266 골수종 표적세포의 세포 표면에서 먼저 측정되었다. 간단히 말하면, 세포를 채취하고, 세척하고, 생존력을 계산하고, 96-웰 둥근바닥 플레이트의 50,000 세포/웰에서 재현탁시키고, 4°C에서 30분 동안 10μg/ml로 항-인간 BCMA 항체(Abcam, #ab54834, 쥐 IgG1)와배양하였다(내재화를 방지하기 위해). 쥐 IgG1을 이소타입 대조군(BD Biosciences, #554121)으로 사용하였다. 그 다음 세포를 원심분리(350xg에서 5분)하고, 두 번 세척하고 4℃에서 30분 동안 FITC-결합 항-마우스 2차 항체와 함께배양하였다. 배양기의 말에, 세포를 원심분리(350xg에서 5분)하고, FACS 완충액으로 2회 세척하고, 100ul FACS 완충액에서 재현탁하고 FACS Diva 소프트웨어를 가동하는 CantoII 장치로 분석하였다. 도 3은 H929 및 U266 골수종 세포에서의 BCMA 발현을 나타낸다. BCMA^hi-발현 세포인 H929 세포 및 BCMA^med ^/ ^lo-발현 세포인 U266 모두에 대한 인간 골수종 세포주 대조군에 대한 음성에 비해 오른쪽으로의 명백한 변화가 있었다.

실시예 2.2.2: 유동세포 분석법에 의해 검출된 인간 골수종 세포주에서 BCMA의 정성적 측정

BCMA의 정량적 발현, 즉 BCMA의 특정 항원 결합능(SABC)은 또한 유동세포 계측법을 사용하여 인간 골수종 세포주의 세포 표면에서 측정되었다. H929(ATCC® CRL-9068™) 및 U266(ATCC® TIB-196TM) 인간 골수종 세포주의 세포 표면에서 BCMA 항원 카피 수를 정량화하기 위해 Qifikit(Dako, #K0078) 방법을 사용하였다. 세포를 FACS 완충액(100㎕/웰, 350×g, 5분)으로 한번 세척하고 1 Mio 세포/ml로 조정 하였다. 세포 현탁액 50㎕(=0.5 Mio 세포)를 지시된 바와 같이 96 둥근바닥 웰 플레이트의 각 웰에 옮긴다. 그런 다음 FACS 완충액(PBS, 0.1% BSA)에서 25μg/ml의 최종 농도로 희석된 마우스 항-인간 BCMA IgG(BioLegend #357502) 또는 마우스 IgG2a 이소타입 대조군(BioLegend #401501) 50μl 포화농도)를 첨가하고 4℃에서 30분 동안 염색한다. 다음으로 100㎕의 Set-up 또는 Calibration Beads를 별도의 웰에 넣고 세포와 FACS buffer로 두번 세척한다. 세포와 구슬을 Qifikit에서 제공하는 플루오르세인 콘쥬게이트 항-마우스 2차 항체(fluorescein conjugated anti-mouse secondary antibody)(포화 농도에서)가 포함된 25μl FACS 완충액에 재현탁한다. 세포와 구슬은 암실에서 4°C에서 45분 동안 염색된다. 세포를 한번 세척하고 모든 샘플을 100μl FACS 완충액에 재현탁한다. 샘플을 다색 유동세포 계측기 및 설치된 소프트웨어(예: FACS Diva 소프트웨어를 실행하는 Canto II 장치 또는 CellQUEST 소프트웨어를 사용하여 FACSCalibur 유동세포 계측기)에서 분석한다. 표 7에 나타낸 바와 같이, H929 세포는 다른 골수종 세포주보다 5배 내지 6배 이상 높은 밀도를 갖는 인간 BCMA를 발현하였으며, BCMA(med/lo)-발현하는 골수종 세포로 정의된 U266과 대조적으로 BCMAhi-발현 H929로 정의되었다. BCMA 정량적 발현 (SABC)은 BCMA 질적 발현(상대 MFI)과 잘 일치했다.

표 7: 유동세포 계측법(특정 항원 결합능 SABC)에 의해 검출된 인간 골수종 세포주에서 BCMA 발현의 정량적 측정

[표 7.1]

표 7.1: 유동세포 계측법(specific antigen binding capacity SABC)에 의해 검출된 인간 골수종 세포주에서 BCMA 발현의 정량적 측정

실시예 1.3: 재조합 T 세포 세포독성 분석에서 BCMA-TCB의 역가는 E:T 비율에 의해 영향을 받는다.

BCMA-TCB 항체의 킬링 역가에 대한 E:T 비율의 영향을 시험하였다. 간략하게, 인간 BCMA(hi) 발현 H929 및 BCMA(mid/lo) 발현 U266 다중 골수종 표적 세포를 세포 해리 완충액으로 수거하고, 세척하고 10% 태아 소혈청(Invitrogen)이 보충된 RPMI에 재현탁시켰다. 약 30,000 세포/웰을 둥근바닥 96-웰 플레이트에 플레이팅하고, 구조물의 각각의 희석물을 목적하는 최종 농도(3 중으로)를 위해 첨가하였다; 최종 농도는 0.1pM 내지 100nM 범위이다. 적절한 비교를 위해, 모든 TCB 구조 및 대조군을 동일한 몰 농도로 조정하였다. 인간 전체 T 세포(작동체)를 웰에 첨가하여 5:1의 최종 E:T 비율을 얻었다. 인간 PBMC는 10:1, 2.5:1, 1:1을 포함하는 상이한 E:T 비율에서 작동체 세포로서 사용되었다. 음성 대조군은 작동체 또는 표적 세포로만 나타났다. 인간 팬(pan) T 세포의 활성화에 대한 양성 대조군으로서, 1μg/ml PHA-M (Sigma #L8902)을 사용하였다. 정상화를 위해, H929 MM 표적 세포(=100%)의 최대 용해는 1% 트리톤 X-100의 최종 농도로 표적 세포를 배양하여 세포 사멸을 유도함으로써 결정하였다. 최소의 용해(=0%)는 작동체 세포와 함께 단지 배양된 표적 세포, 즉 어떠한 T 세포의 이중 특이적 항체도 나타내지 않았다. 37℃, 5% CO2에서 24시간 배양한 후, 아폽토시스성 골수종 표적 세포에서 상등액으로의 LDH 방출을 제조자의 지시에 따라 LDH 검출 키트(Roche Applied Science)로 측정 하였다. LDH 방출의 백분율은 농도-반응 곡선에서 BCMA-TCB 항체의 농도에 대해 플롯되었다. Prism 소프트웨어(GraphPad)를 사용하여 EC50 값을 측정하고 최대 LDH 방출의 50%를 초래하는 TCB 항체 농도로서 결정하였다. 표 8에 나타낸 바와 같이, BCMA(hi) 발현 H929 세포 및 BCMA(mid/lo) 발현 U266 세포를 사멸시키는 BCMA-1-TCB의 효능은 E:T 비율이 감소함에 따라 BCMA-1-TCB의 살균 역가가 감소됨을 의미한다. 사멸 성능의 감소(EC50 값의 증가)는 BCMA(mid/lo) 발현 U266 세포주에서 더 현저하였고, BCMA-1-TCB 사멸 능력은 E:T 비율이 10:1에서 2.5:1로 감소될 때 상실되었다.

결과에 기초할 때, 1) E:T 비율은 다발성 골수종 환자에서 상당히 다양할 수 있고, 2) BCMA-TCB의 사멸 능력은 E:T 비율에 영향을 받을 수 있고, 골수증 환자처럼 BCMA-TCB를 갖는 치료가 필요하기 전에 ㄸ:T 비율 측정을 포함한 환자 층화 방법이 BCMA-TCB 치료에 반응하는 기회가 더 많고, E:T 비율이 낮은 환자는 BCMA-TCB 치료에 반응할 기회가 적게 될 것이다.

"Not Measurable(측정 불가)"는 최소의 사멸로 인해 측정 불가

표 8: BCMA 발현 골수종 세포주를 죽이는 BCMA-1-TCB(EC50 값)의 효능은 표적 세포에서 상이한 E:T 비율 및 BCMA 발현에 의해 영향을 받는다.

실시예 3: ELISA-기초 방법에 의한 골수종 환자 혈청/혈장 및 골수 흡인물에서 수용성 BCMA의 검출

수용성 BCMA의 높은 수치는 건강한 개체와 비교하여 치료받지 않은 다발성 골수종 환자의 혈청에서 발견될 수 있으며, 일부 환자에서는 용해 수준이 120 ng/mL까지 상승하는 것으로 측정될 수 있다(Sanchez et al. Brit J Haematol 2012). T 세포 이중 특이적 항체는 시험관내 세포 기반 분석법에서 펨토몰라에서 피코 몰 극성의 효능을 가진 매우 강력한 분자이기 때문에 환자에게 매우 낮은 용량으로 효과적인 용량을 투여할 것으로 기대된다(Bargou et al. Science 2008; 321 (5891); 974-7). 그리고, 그런 골수종 환자에서의 수용성 BCMA는 골수종 세포의 세포 표면에서 BCMA와 결합하여 BCMA에 결합되는 것을 예방한으로써 BCMA-TCB 항체의 결합력에 영향을 미치고, 그다음 악성 혈장 세포의 재설정된 T 세포 사멸이 예방된다.

실시예 3.1: 골수종 환자 혈청/혈장 및 골수 흡인 중 수용성 BCMA 측정

말초 혈액 및 골수 흡인은 현지 윤리위원회 지침 및 헬싱키 선언에 따라 정보에 입각한 동의를 얻은 후 다발성 골수종 환자에게서 수집된다. Corvac(TM) 혈청 분리기 튜브(Becton Dickinson)의 혈청을 원심분리로 분리하고 사용할 때까지 -80°C에서 보관한다. 골수 흡인액 또는 혈액을 헤파린 튜브에 모으고 원심분리하고 상등액을 수집하여 사용할 때까지 -80°C에서 보관한다. 일부 실험에서, 환자 골수 흡인액은 가용성 BCMA 측정을 위해 분석되기 전에 최대 48시간 동안 배양된다. 혈장, 혈장 및 상청액 샘플은 BCMA 효소결합 면역흡착 분석법(ELISA)(R&D Systems, 카탈로그 #DY193E)에 의해 분석된다. 혈청/혈장/골수 샘플을 1:50으로 희석하고 BCMA ELISA 분석을 제조자의 프로토콜에 따라 수행하였다. ELISA 플레이트를 450nm로 설정된 플레이트 판독기를 사용하여 분석한다. 값은 각 표본의 세 가지 샘플의 평균을 나타낸다. 특히,이 특정 BCMA ELISA 키트는 재조합 인간 APRIL 또는 BAFF, 재조합 인간 TACI/Fc 또는 재조합 마우스 BCMA/Fc 또는 마우스 BCMA와 교차 반응하지 않는다. 골수종 환자로부터의 BCMA 항원 표준 또는 혈청/혈장/골수(1:50 희석)를 BCMA ELISA에서 제공되는 쥐 단일 클론 항-인간 BCMA 항체(카탈로그 #WH0000608M1; 시그마-알드리치) 또는 다클론 캡쳐 항체를 사용하여 배양한다. 그 후, 샘플을 BCMA ELISA 프로토콜에 따라 분석한다. 표 8.1은 배양 중 치료되지 않은 골수종 환자의 골수 흡인액(약 48시간)의 상등액에서 측정된 가용성 BCMA의 수준을 요약한 것이다.

[표 8.1]

실시예 3.2: BCMA-TCB 항체가 골수종 환자 혈청/혈장 및 골수 흡인에서 수용성 BCMA에 결합하는지 여부

이전에 수집되어 -80°C에서 보관된 수용성 BCMA를 함유하는 골수종 환자 혈청/혈장 및 골수 흡인 상등액 샘플은 캡쳐 항체로 사용되는 인간 BCMA ECD 및 검출 항체로서 BCMA-TCB 이중 특이적 항체의 BCMA 결합제를 나타내는 BCMA 항체에 대향하여 다클론성 BCMA 항체를 갖는 캡쳐 샌드위치 ELISA 방법을 사용하여 BCMA-TCB 항체에 대한 결합 여부를 테스트한다. 간단히 말해, 폴리클로날 캡쳐 BCMA 항체는 탄산염/중탄산염 완충액(pH 9.6)에서 1-10 μg/mL의 농도로 PVC 마이크로티터 플레이트에 고정화된다. 그 다음 플레이트를 접착성 플라스틱으로 덮고 4°C에서 밤새 배양한다. 이어서, 코팅 용액을 제거하고 플레이트를 200㎕ PBS로 웰을 채워 두번 세척 하였다. 용액 또는 세제는 싱크대 위로 플레이트를 튀기면 제거된다. 남아있는 방울들은 판을 종이 타월에 가볍게 두드림으로써 제거된다. 코팅된 웰에 남아있는 단백질 결합 사이트는 웰마다 차단 버퍼, 5% 비지방 건조우유/PBS 200μl를 추가하여 차단된다. 그런 다음 플레이트를 접착성 플라스틱으로 덮고 실온에서 1~2 시간 동안 또는 4°C에서 밤새 배양한다. 수용성 BCMA 함유 골수종 환자 혈청/혈장 및 골수 흡인 상등액 시료로부터 적절하게 희석된 시료 100㎕를 각 웰에 2중으로 첨가한다. 표준과 블랭크는 각 플레이트와 함께 실행된다. 그런 다음 마이크로 플레이트를 37℃에서 90분 동안 배양한다. 그후 시료를 제거하고 200μl PBS로 웰을 채워 플레이트를 두번 세척한다. BCMA-TCB 이중 특이적 항체의 BCMA 결합제를 나타내는 BCMA 항체로 구성된 희석된 비오틴-결합 검출 항체 100㎕를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 접착성 플라스틱으로 덮고 실온에서 2시간 동안 항온 처리한다. 플레이트를 PBS로 4회 세척하였다. 세척 후, 말 무렵 과산화 효소(HRP) 또는 알칼리 포스파타아제(ALP)에 결합된 스트렙트아비딘 100㎕를 웰에 첨가하였다. HRP 또는 ALP가 결합된 스트렙트아비딘은 사용 직전에 차단 완충액에서 최적의 농도로 희석된다. 플레이트를 접착성 플라스틱으로 덮고 실온에서 1-2시간 동안 항온 처리한다. 플레이트를 PBS로 4회 세척한다. pNPP(p-니트로페닐-인산염)를 ALP 기질로 사용하여 웰에 첨가하고 실온에서 15-30분간 배양한다. 이어서, 같은 부피의 0.75M NaOH를 첨가하여 반응을 정지시킨다. 플레이트는 플레이트 판독기를 사용하여 405nm에서 측정한다. HRP 기판의 경우 과산화수소를 사용하고 450nm에서 최적 밀도를 읽는다. 이어서, X축(로그 스케일)에 대한 농도와 Y축 상의 흡광도(선형)를 갖는 연속 희석액으로부터 생성된 데이터로부터의 표준 곡선을 준비한다.

실시예 4: 골수종 환자 혈청/혈장 및 골수에서의 수용성 APRIL 또는 BAFF의 검출

다발성 골수종과 같은 특정 혈액학 악성 종양에서 순환하는 BCMA-리간드 APRIL 및 BAFF의 수준은 상승될 수 있다(Moreaux et al., 2004; Blood 103(8): 3148-3157). 따라서, 본 발명자들은 혈청/혈장 중의 높은 수준의 리간드가 종양 세포상의 BCMA 수용체에 대한 BCMA-TCB 항체의 결합을 간섭할 수 있다는 것을 인식한다. 건강한 기증자와 비교하여 다발성 골수종 환자 혈액에서 순환하는 APRIL(BCMA에 대한 고밀도 리간드)의 수준은 ~100ng/mL 대 ~10ng/mL이다. BAFF (BCMA에 대한 낮은 친화성 리간드)의 경우, 건강한 공여자에서 ~3ng/mL와 비교하여 1~1000ng/mL의 수준에서 변동할 수 있다. 종양 세포 근처, 즉 다발성 골수종 환자의 골수 미세 환경(골수는 APRIL이 풍부하게 구성되어있는 기관임)에서 APRIL/BAFF 농도는 혈청에서 측정된 수준보다 매우 높을 수 있다. 더 중요한 것은, APRIL은 악성 골수종 세포에 중요한 생존 요인이 되고 골수 전구세포에 의해 주로 생산되고 분비되는 골수 미세 환경에서 지속적으로 발현된다(Matthes et al. Blood 2011, 118(7): 1838-1844). 따라서 골수종 환자의 골수에서 APRIL의 농도는 1000ng/mL 또는 그 이상의 높은 양이 될 것으로 예상되며,이 부분과 관련하여 높은 관련성이 있다. 전신성 홍 반성 루푸스와 같은 특정자가 면역 질환에서 순환하는 APRIL 수치는 ~85ng/mL로 상승한다(Koyama 외 2005, Ann Rheum Dis 64: 1065-1067).

BCMA 수용체에 결합하는 수용성 APRIL(높은 친화도를 갖는 BCMA 리간드)과 경쟁하는 BCMA-TCB 항체의 경우, 특히 높은 수용성의 APRIL은 특히 BCMA-TCB 항체의 임상적 유효 농도가 그들이 강력한 분자들이기 때문에 낮을 것으로 예상될 때, 그 효능에 영향을 줄 수 있다. 따라서, 다발성 골수종 환자의 혈액/혈청/혈장 또는 골수 흡인 시료에서 수용성 APRIL을 측정할 필요가 있다.

실시예 4.1: 용해성 APRIL의 다양한 수준은 ELISA-기초 방법에 의해 골수종 환자의 혈청/혈장 또는 골수 흡인물에서 측정될 수 있다.

말초 혈액 및 골수 흡인은 현지 윤리위원회 지침 및 헬싱키 선언에 따라 정보에 입각한 동의를 얻은 후 다발성 골수종 환자에게서 수집된다. Corvac(TM) 혈청 분리기 튜브(Becton Dickinson)의 혈청을 원심분리로 분리하고 사용할 때까지 -80°C에서 보관한다. 골수 흡인과 혈액을 헤파린 튜브에 모아 원심분리하고 상등액을 수집하여 사용할 때까지 -80°C에서 보관한다. 일부 실험에서는 환자 골수 흡인액을 수용성 APRIL 측정을 위해 분석하기 전에 최대 48시간 동안 배양한다. 혈청, 혈장 및 골수 상청액 시료를 APRIL 효소결합 면역흡착 분석법(ELISA)(R&D Systems, 카탈로그 #DY884B)으로 분석한다. 혈청 샘플을 1:50으로 희석하고 APRIL ELISA 분석을 제조자의 프로토콜에 따라 수행하였다. ELISA 플레이트를 450nm로 설정된 플레이트 판독기를 사용하여 분석한다. 값은 각 표본에 대한 중복 또는 3중 샘플의 평균을 나타낸다. APRIL 항원 표준 또는 혈청/혈장 또는 골수 흡인 상등액(1:50 희석)을 APRIL ELISA 키트에 제공된 캡쳐 항체를 사용하여 배양한다. 이어서, 샘플을 APRIL ELISA 프로토콜에 따라 분석한다.

실시예 4.2: 수용성 APRIL은 BCRI-양성 골수종 표적 세포를 사멸시키는 APRIL-경쟁/차단 BCMA-TCB 항체의 효력에 영향을 미친다.

APRIL 차단/경쟁 BCMA-TCB 항체의 사멸 성능이 수용성 APRIL에 의해 영향을 받는지 여부를 확인하기 위해, 다발성 골수종 환자에서 발견되는 용해성 APRIL의 상승된 농도의 존재 하에서(즉, 100ng/mL 내지 1000ng/mL) 세포상의 BCMA에 대한 항원 결합 성분의 결합을 통하여 구조물의 가교 결합시 APRIL 차단/경쟁 BCMA-TCB 항체가 BCMA-양성 골수종 표적 세포의 T 세포 매개성 사멸을 유도할 가능성이 있는지 분석하였다. APRIL은 BAFF가 수용체에 결합하는 것보다 1000배 더 높은 친화성으로 인간 BCMA에 결합하기 때문에 가용성 APRIL의 고농도는 용해성 BAFF의 것보다 더 관련이 있다. 높은 수준의 가용성 APRIL은 TCB 항체의 효능에 영향을 미칠 가능성이 가장 높다(특히, Bargou et al. Science 2008; 321(5891); 974-7). 따라서, 다음과 같은 실험을 수행하였다.

실시예 4.2.1: APRIL-차단/경쟁 J6M0-TCB 항체는 세포내 인산화된 NF-κB (유동세포 계측법)에 의해 검출된 APRIL-의존성 NF-κB 활성화를 차단한다.

BCMA 결합제로서 APRIL/BAFF 경쟁 J6M0(Tai YT 외, Blood 2014 123(29): 3128-28)으로 제조된 BCMA-TCB 이중 특이적 항체인 J6M0-TCB의 사멸 성능에 대한 수용성 APRIL의 효과를 재설정된 T 세포 사멸 분석에서 시험하였지만, 그 전에 J6M0-TCB가 실제로 APRIL을 차단하고 경쟁한다는 것을 확인하기 위한 실험을 수행하였다. J6M0-TCB는 APRIL-의존성 NF-κB 활성화를 차단하기 위해 시험하였다. 세포내 인산화된 NF-κB의 검출은 Lafarge et al. BMC Molecular Biol 2007; 8:64에 기술된 바와 같이 유동세포 계측법에 의해 측정되었다. 이 포스포(phospho) 유동세포 계측법은 충분히 민감하지 않을 수도 있는 ELISA 기반 발광 분석법에 의한 NF-κB 활성화 검출에 대한 대안으로, 힘든 단계들을 포함한다(Perez and Nolan, Nat Biotechnol 2002; 20(2): 155-62). BCMA 양성 H929 골수종 세포에 대한 J6M0-TCB의 결합이 BCMA 수용체 하류의 공지된 핵 인자 신호전달 경로인 APRIL-의존성 NF-κB 활성화를 차단하는지 여부를 평가하였다. 간략하게, H929 세포는 37℃에서 24시간 동안 세포 배양기에서 FCS없이 RPMI1640에서 아사하였다. 기아 상태가 끝나면 세포를 수확하고 계수하고 세포 생존력을 ViCell을 사용하여 평가한다. 생존 세포를 BSA 함유 FACS Stain Buffer(BD Biosciences)에서 1x106 세포/ml로 조정하였다. 이 세포 현탁액 100㎕를 추가로 둥근바닥 96-웰 플레이트에 웰마다 부분 표본하고, 포화농도 400nM(77㎍/ml)의 J6M0-TCB 항체 또는 이소형 대조군 항체 25㎕로 20분 동안 37°C에서 항온 배양하고, 100ng/mL 또는 1μg/mL 재조합 마우스 -APRIL(R&D Systems Europe)을 37 ℃에서 15 분간 추가로 직접 배양하였다. 음성 대조군으로서, 세포를 처리하지 않고 방치하거나 상응하는 IgG 이소타입 대조군 항체 400nM(77μg/ml)로 37℃에서 총 45분 동안 배양하였다. 양성 대조군으로, 세포를 100ng/mL 또는 1μg/mL 재조합 마우스 -APRIL 단독(R&D Systems Europe)과 함께 37℃에서 15분 동안 배양하였다. 자극이 끝나면 세포를 원심분리하고(360xg, 4분), 세포 펠렛을 즉시 예열된 Cytofix 완충액(BD Biosciences, #554655)에 고정하고 37°C에서 10분간 배양하였다. 그후 세포를 원심분리하고 상등액을 제거하고 세포 펠릿을 와류로 파쇄시켰다. 이어서 세포를 얼음으로 차가운 Phosflow Perm Buffer III(BD Biosciences, #558050)에서 얼음 위에서 30분 동안 투과처리 하였다. 그후 세포를 원심분리하고 상등액을 제거하고 세포 펠릿을 와류로 파쇄시켰다. 세포를 100μL Phosflow Perm Buffer III에 재현탁시키고 투과된 세포를 항-NF-κB p65 (pS529) 항체(BD Biosciences, #558423) 또는 이소형 대조 항체(마우스 IgG2b, κ, BD Biosciences #555058)로 염색하였다. 빛으로부터 보호된 실온에서 60분 동안. 염색 기간후, 세포를 유동세포 계측법 분석전에 PBS + PBS 내의 0.1% BSA + 0.1% BSA로 세척하였다. 상기한 바와 같이 처리된 H929 세포로부터 수득한 상대적인 중간 형광 강도를 측정하였다. 이소타입 대조군의 존재하에 -APRIL의 결합시에 얻은 중앙 형광강도(MFI) 신호는 1로 설정되었다; 다른 신호들은 그것에 정규화되었다. 도 4에 나타낸 바와 같이, J9M0-TCB 항체와 APRIL 경쟁 BCMA 결합 암(arm)의 효과를 H929 세포에서 1000ng/mL APRIL 매개 NF-κB 활성화에 대해 시험하였다. H929 세포에 수용성 APRIL을 첨가하여 NF-κB 활성화를 유도하였다. H929 세포가 APRIL 경쟁 BCMA 결합 암(arm) J6M0-TCB에 노출되었을 때, NF-κB 활성화 신호에서 적어도 79.3%의 감소가 포스포 유동세포 측정법으로 측정되었다. J6M0 항-BCMA 항체 (WO2012163805)는 APRIL-유도된 NF-κB 활성화를 차단하는 것으로 보고되었다. 현재 결과는 J6M0이 BCMA에 결합하기 위해 APRIL과 경쟁하고 APRIL 다운스트림 시그널링을 차단하는 항-BCMA 항체임을 확인한다.

실시예 4.2.2: 수용성 수준이 높은 APRIL은 BCRI-발현 H929 골수종 세포를 사멸시키는 APRIL 경쟁 BCMA-TCB 항체의 성능에 영향을 미친다(비색 LDH 방출 분석)

BCMA 결합제로서 APRIL/BAFF 경쟁 J6M0(Tai YT 외, Blood 2014 123(29): 3128-28)으로 제조된 BCMA-TCB 이중 특이적 항체인 J6M0-TCB의 사명 성능에 대한 수용성 APRIL의 영향을 재설정된 T 세포 사멸 분석에서 시험하였다. 간략하게, 인간 BCMA 양성 H929 다발 골수종 표적 세포를 세포 해리 완충액으로 수거하고, 세척하고 10% 태아 혈청(Invitrogen)이 보충된 RPMI에 재현탁시켰다. 대략 30,000 세포/웰을 둥근바닥 96-웰 플레이트에 플레이팅하고 원하는 최종 농도를 위해 TCB 구조물의 각각의 희석액을 첨가하였다(3 중으로); 100ng/mL 또는 1000ng/mL의 최종 농도에서 APRIL의 존재 또는 부재하에 J6M0-TCB 항체의 최종 농도는 0.1pM 내지 10nM 범위이다. 적절한 비교를 위해, 모든 TCB 구조 및 대조군을 동일한 몰 농도로 조정하였다. 인간 PBMCs(작동체)를 웰에 첨가하여 10:1의 최종 E:T 비율을 얻었다. 음성 대조군은 작동체 또는 표적 세포로만 나타났다. 인간 팬(pan) T 세포의 활성화에 대한 양성 대조군으로서, 1μg/mL PHA(Sigma #L8902)를 사용하였다. 정상화를 위해, H929 MM 표적 세포(=100%)의 최대 용해는 1% 트리톤 X-100의 최종 농도로 표적 세포를 배양하여 세포 사멸을 유도함으로써 결정하였다. 최소의 용해(=0%)는 작동체 세포와 함께 단지 배양된 표적 세포, 즉 어떠한 T 세포의 이중 특이적 항체도 나타내지 않았다. 37℃, 5% CO2에서 24 간 배양한 후, 제조자 지시에 따라 LDH 검출 키트(Roche Applied Science)를 사용하여 아폽토시스/괴사성 H929 골수종 표적 세포에서 상청액으로의 LDH 방출을 측정하였다. LDH 방출의 백분율은 농도-반응 곡선에서 J6M0-TCB 항체의 농도에 대해 플롯되었다. Prism 소프트웨어(GraphPad)를 사용하여 EC50 값을 측정하고 최대 LDH 방출의 50%를 초래하는 TCB 항체 농도로서 결정하였다. 도 5에 나타낸 바와 같이, J6M0-TCB 항체는 외인성 수용성 APRIL의 존재 또는 부재하에 BCMA 양성 H929 골수종 세포를 사멸시켰다. 도 5에 도시된 바와 같이, APRIL 차단/경쟁 J6M0-TCB는 외인성 APRIL 부재 하에서 낮은 피코몰라 성능(EC50APRIL0=5.8pM)을 갖는 BCMA-양성 H929 골수종의 농도-의존적 사멸을 유도 하였다. 100ng/mL의 APRIL을 배양물에 첨가하였을 때, 이러한 리간드 농도는 J6M0-TCB에 의해 매개되는 사멸 성능에 최소한으로 영향을 미쳤다(EC50APRIL100=14.2pM). 그러나, 1000ng/mL의 APRIL을 배양물에 첨가했을 때, J6M0-TCB에 의해 매개되는 사멸 성능은 84.3배의 EC50에서의 증가(EC50APRIL1000=488.9pM)에 반영됨에 따라 크게 감소되었다. 표 9는 외인성 APRIL 부재 및 존재시 APRIL 차단/경쟁 J6M0-TCB의 EC50 값을 요약한 것이다.

시험결과는 APRIL 차단/경쟁 BCMA-TCB 항체가 골수 미세 환경 또는 다발성 골수종 환자의 혈액에 잘 존재할 수 있는 수용성 APRIL의 고농도에 의해 영향을 받을 수 있음을 시사한다. 이러한 관찰을 임상 상황으로 해석하면 골수 또는 혈액에서 APRIL 수준이 높은 환자에서 J6M0-TCB와 같은 BCMA-TCB의 주어진 치료 용량이 낮으면 골수종 세포가 죽지 않고, 높은 수준의 수용성 APRIL을 가진 환자에게서 항종양 효과가 잘 상실될 수 있다는 것을 의미한다.

표 9: APRIL/BAFF 경쟁 BCMA-TCB에 의한 H929 골수종 세포를 사멸시키는 성능(EC50)는 높은 수준의 수용성 APRIL에 의해 감소된다.

실시예 4.3: 수용성 APRIL은 APRIL-경쟁/차단 BCMA-TCB 항체가 T-세포 활성화를 유도하는 성능에 영향을 미친다.

T 세포 활성화를 유도하는 APRIL-경쟁/차단 J6M0-TCB의 효능에 대한 수용성 APRIL의 효과 또한 유동세포 계측법에 의해 시험되었다. T 세포 활성화는 초기 활성화 마커 CD69의 표면 발현 또는 인간 BCMA-발현 MM 세포의 존재 또는 부재하에 CD4+ 및 CD8+ T 세포상의 후기 활성화 마커 CD25를 평가함으로써 측정하였다. 간략하게, BCMA-양성 H929 세포를 세포해리 완충액으로 수거하고 계수하고 생존력을 검사하였다. 세포를 수정된 RPMI-1640 배지에서 ml 당 0.3x106 (생존 가능한) 세포로 조절하고,이 세포 현탁액 100μl를 둥근바닥 96-웰 플레이트(표시된 바와 같이)에 웰마다 피펫팅 하였다. 50μl의 (희석된) APRIL-경쟁/차단 J6M0-TCB 항체를 세포 함유 웰에 첨가하여 0.3pM 내지 30nM의 최종 농도를 수득하였다. 인간 PBMC 효과기 세포를 건강한 공여자의 신선한 혈액으로부터 분리하고, 변형된 RPMI-1640 배지에서 ml 당 6x106 (생존 가능한) 세포로 조절하였다. 이 세포 현탁액 50μl를 분석 플레이트의 웰마다 첨가하여 PBMC 대 골수종 종양 세포의 최종 E:T 비를 10:1로 수득하였다. APRIL-경쟁/차단 J6M0-TCB 항체가 T 인간 BCMA를 발현하는 표적 세포의 존재하에 특이적으로 T 세포를 활성화할 수 있는지를 분석하기 위하여, PBMC뿐만 아니라 3nM의 J6M0-TCB 항체를 함유하지만 표적 세포는 포함되지 않은 웰들을 포함시켰다. 37°C, 5% CO2에서 15-28시간 (CD69) 또는 24-48시간 (CD25) 동안 배양한 후 세포를 원심분리(5분, 350xg)하고 0.1% BSA. CD4 (마우스 IgG1, K, 클론 RPA-T4), CD8 (마우스 IgG1, K, 클론 HIT8a, BD #555635), CD69 (마우스 IgG1, 클론 L78, BD #340560) 및 CD25 (마우스 IgG1, K; 클론 M-A251; BD #555434)을 공급업자의 제안에 따라 4℃에서 30분 동안 수행하였다. 세포를 0.1% BSA를 함유한 150㎕/웰 PBS로 2회 세척하고, 100㎕/웰 고정 완충액(BD #554655)을 사용하여 4℃에서 15분간 고정시켰다. 원심분리 후, 샘플을 0.1% BSA를 함유한 PBS 200㎕/웰에 재현탁하고, FACS CantoII 장치(Software FACS Diva)를 사용하여 분석하였다. 도 6은 48시간의 배양후 CD4+ 및 CD8+ T 세포에 대한 초기 활성화 마커 CD69(B, D) 및 후기 활성화 마커 CD25(A, C)의 발현 수준을 나타낸다(두 번의 독립적인 실험에서의 대표 결과). APRIL-경쟁/차단 J6M0-TCB 항체는 외인성 용해성 APRIL(사각형)의 부재하에 BCMA-양성 표적 세포의 존재하에 농도-의존성 및 특이적 방식으로 CD69 및 CD25 활성화 마커의 상향 조절을 유도하였다. 100ng/mL의 수용성 APRIL을 배양물에 첨가하면 CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 활성화 표지자 CD69 및 CD25 모두 농도-반응 곡선 오른쪽으로 약간의 이동이 관찰되었다. 1,000ng/mL의 수용성 APRIL을 배양물에 첨가하면 CD4+ 및 CD8+ T 세포 모두에서 T 세포 활성화가 명백하게 감소하였다. 인간 PBMC를 DP47-TCB 대조군 항체로 처리했을 때 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 활성화는 관찰되지 않았으므로 T 세포에서 CD3에 결합함에도 불구하고 T 세포 활성화는 TCB 항체가 BCMA-양성 표적 세포에 결합되지 않을 때 일어나지 않는다는 것을 제시한다(데이터 미도시). 시험결과는 높은 수용성의 APRIL이 특히 BCMA-TCB가 APRIL과 경쟁할 때 BCMA-TCB 항체가 종양 표적 및 T 세포에 결합하자마자 T 세포 활성화를 유도하는 능력을 감소시킨다는 것을 명확하게 제시한다.

실시예 5: 골수종 환자의 악성 혈장 세포를 사멸하기 위한 BCMA-1-TCB 항체의 성능은 악성 혈장 세포에서 더 큰 E:T 비율 및 더 큰 BCMA 발현(상대 MFI)을 갖는 환자 골수 샘플에서 더욱 두드러진다.

골수 흡인은 현지 윤리위원회 지침 및 헬싱키 선언에 따라 정보에 입각한 동의를 얻은 후 다발성 골수종 환자에게서 수집된다. 골수 침윤성자가 조직 T 세포에 의한 골수 침윤형 악성 혈장 세포의 재설정된 T 세포 사멸을 유도하기 위한 BCMA-1-TCB 항체의 성능을 평가하기 위해 골수종 환자 및 BCMA-1-TCB 항체를 전체 골수 샘플에 직접 첨가하였다. 간략하게, 전체 골수 샘플 200㎕를 96개의 심층 플레이트에 옮겼다. BCMA-1-TCB 항체 및 대조군 항체 희석물을 멸균 PBS에서 제조하고, 각 웰에 0.03pM 내지 30nM 범위의 최종 농도로 제조물을 첨가하였다. 전체 골수 항체 현탁액을 부드럽게 섞어서 혼합한 후 37℃, 5% CO2에서 24시간 동안 배양하고 파라핀 필름으로 밀봉하였다. 배양기간 후, 세포 현탁액 샘플을 K3-EDTA(에틸렌-디아민 테트라 아세트산)로 적혈구-용해시키고 세포 표본을 면역 표현형 분석을 위해 준비 하였다. CD5-BV510/CD56-PE/CD19-PerCP-Cy7/CD45-V450/BCMA-APC/Annexin-V-50-CD를 포함하는 항체-패널에 기초하여 제조된 상응하는 FACS 항체 용액 20㎕를, PerCP-Cy5.5를 96-U-바닥 플레이트에 첨가하였다. 플루오로크롬-표식된 항체는 BD Biosciences(San Jose, CA)와 Caltag Laboratories(San Francisco CA)에서 구입하였고, 사내 APC-접합 항-인간 BCMA 항체를 사용 하였다. 그후 샘플을 실온에서 어두운 곳에서 15분 동안 배양하고 멀티레이져 유동세포 측정법을 사용하여 획득하고 분석하였다. 골수종 세포 사멸은 악성 혈장 세포 집단 CD138+ CD38+ CD45+ CD19-CD56+에 게이팅된 아넥신-V 양성 발현을 평가함으로써 결정되었다. 그런 다음 각 농도의 BCMA-1-TCB 이중 특이적 항체에서 골수종 세포 사멸 백분율을 측정하였다. 도 7에 도시된 바와 같이, BCMA-1-TCB는 잠복 24시간 후에 이미 환자 C1(A) 및 환자 C8(B) 모두로부터의 악성 혈장 세포의 농도 의존적 특이적 사멸을 유도하였다. 그러나, 골수종 세포의 사멸은 환자 C1 골수 샘플에서 환자 C8 골수 샘플보다 더 두드러졌다. 이것은 바람직하지 않은 E:T 비율이 0.5:1이고 골수종 세포에 대한 약한 BCMA 발현을 갖는 환자 C8 골수 샘플보다 환자 C1 골수 샘플에서 11:1 및 BCMA 발현(즉, 2636의 상대 MFI 값)이 보다 유리한 E:T 비율에 기인할 수 있다.(즉 상대 MFI 값 1489). 시험결과는 환자 골수에서 E:T 비율을 측정함과 동시에 악성 혈장 세포에서 BCMA 발현을 측정하는 것이 골수종 환자가 BCMA-TCB 치료에 반응할 수 있는지 여부를 더 정확하게 예측할 수 있다는 것을 제시한다.

실시예 6: BCMA-1-TCB에 대한 환자 골수 샘플의 반응성에 대한 환자 생물학적 파라미터(골수종 세포에서의 BCMA 상대 발현, E:T 비율, 수용성 APRIL 및 수용성 BCMA)

중등도의 상대 MFI(1000~5000 범위)는 71.4%(5/7)의 약물에 반응하며, BCA의 발현이 낮은(상대적 MFI<1000) 샘플은 약물에 대해 33.3%(1/3) 반응한다. 유리한 E:T 비율(E:T>1)을 가진 환자 샘플은 약물에 대해 66.7%(4/6) 반응한다. 불리한 E:T 비율 <1 인 환자 샘플은 약물에 대해 60%(3/5) 반응한다. 적어도 두 가지 생물학적 파라미터의 조합이 평가되었다. 골수종 세포에서 유리한 BCMA 발현과 유리한 E:T 비율이 모두 약물 반응 예측에 사용되었을 때 75%(3/4)의 상관 관계가 발견되었다.

표 10: BCMA-1-TCB에 대한 환자 골수 샘플의 반응성과 관련한 환자 생물학적 파라미터(골수종 세포에 대한 BCMA 상대적 발현, E:T 비율, 수용성 APRIL 및 수용성 BCMA)

SEQUENCE LISTING <110> ENGMAB AG <120> BISPECIFIC ANTIBODIES AGAINST CD3EPSILON AND BCMA <130> TCBCLC-PCT <150> EP14194151.8 <151> 2014-11-20 <160> 39 <170> BiSSAP 1.3 <210> 1 <211> 125 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> CH2527-VL7 VH <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe 100 105 110 Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 2 <211> 109 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> CH2527-VL7 VL <400> 2 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> CH2527-VL7 CDR1H <400> 3 Thr Tyr Ala Met Asn 1 5 <210> 4 <211> 19 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> CH2527-VL7 CDR2H <400> 4 Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 5 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> CH2527-VL7 CDR3H <400> 5 His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 6 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> CH2527-VL7 CDRL1 <400> 6 Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn 1 5 10 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> CH2527-VL7 CDR2L <400> 7 Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> CH2527-VL7 CDR3L <400> 8 Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val 1 5 <210> 9 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 9 aagcttggat ccatgttgca gatggctggg cagtgctcc 39 <210> 10 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 10 gaattcgcgg ccgctcatcc tttcactgaa ttggtcacac ttgcattac 49 <210> 11 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 11 acgttagatc tccactcagt cctgcatctt gttccagtta ac 42 <210> 12 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 12 aacgttgcgg ccgctagttt cacaaacccc agg 33 <210> 13 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 13 gaattcaagc ttgccaccat gttgcagatg gctgggcagt gctcc 45 <210> 14 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 14 gaattctcta gattacctag cagaaattga tttctctatc tccgtagc 48 <210> 15 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> pSCHLI333 VH <400> 15 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Met Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Val Gly Gln Gly Thr Trp Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Ser Tyr Pro Pro Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 16 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> pSCHLI372 VH <400> 16 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser 20 25 30 Gly Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly His Ile Arg Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Thr Gly Gly Ser Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 17 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> pSCHLI373 VH <400> 17 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Thr Ile Arg Gln Lys Thr Tyr Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Thr Gly Gly Leu Phe Gly Tyr Trp Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Gly Tyr Met Phe Ser Ser Phe Gly Met Ser 1 5 10 <210> 19 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser Gly Met Ile 1 5 10 <210> 20 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Gly Phe Ser Phe Ser Asn Ser Trp Met Asn 1 5 10 <210> 21 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Trp Ile Tyr Pro Val Gly Gln Gly Thr Trp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 22 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 His Ile Arg Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 23 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Thr Ile Arg Gln Lys Thr Tyr Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 24 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Val Ser Tyr Pro Pro Ser His Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 25 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Gly Gly Ser Gly Ser Phe Asp Tyr 1 5 <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Gly Gly Leu Phe Gly Tyr Trp Asp Tyr 1 5 <210> 27 <211> 688 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pSCHLI333 VH_CH1 x CD3 VH_CH1 Fc knob LALA PG <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Met Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Val Gly Gln Gly Thr Trp Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Ser Tyr Pro Pro Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly 210 215 220 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser 225 230 235 240 Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 245 250 255 Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln 260 265 270 Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr 275 280 285 Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr 290 295 300 Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser 305 310 315 320 Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn 325 330 335 Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 340 345 350 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 355 360 365 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 370 375 380 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 385 390 395 400 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 405 410 415 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 420 425 430 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 435 440 445 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 450 455 460 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 465 470 475 480 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 485 490 495 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 500 505 510 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 515 520 525 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 530 535 540 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 545 550 555 560 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr 565 570 575 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 580 585 590 Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys 595 600 605 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 610 615 620 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 625 630 635 640 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 645 650 655 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 660 665 670 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 675 680 685 <210> 28 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pSCHLI333 HC hole LALA PG <400> 28 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Met Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Val Gly Gln Gly Thr Trp Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Ser Tyr Pro Pro Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser 355 360 365 Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 29 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD3 LC (CLC) <400> 29 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro 100 105 110 Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 115 120 125 Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro 130 135 140 Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala 145 150 155 160 Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 165 170 175 Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg 180 185 190 Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 195 200 205 Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 215 <210> 30 <211> 688 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> pSCHLI372 VH_CH1 x CD3 VH_CH1 Fc knob LALA PG <400> 30 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser 20 25 30 Gly Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys 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Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser 355 360 365 Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 39 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> linker <400> 39 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10

Claims

인간 B-세포 성숙 항원( "BCMA"으로도 명명함) 및 인간 CD3ε( "CD3"으로도 명명함)의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 것으로, 상기 질환은, 상기 환자의 고립된 체액 샘플에서, Kd값이 상기 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배이고, 상대 중간값(Relative Median) 또는 평균 형광 강도(Mean Fluorescence Intensity: MFI)로 측정된 기준선보다 80 이상인 항-BCMA 항체를 사용하여 측정된, CD138+ CD38+ 세포, 상기 CD138+ CD38+ 세포상의 BCMA 발현을 포함하는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 것으로, 상기 질환은, 상기 환자의 고립된 체액 샘플에서, T 세포(작동체 세포) 대 표적 세포의 비율 (E:T 비율)이 0.35:1 이상인 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
제2항에 있어서, 상기 E:T 비가 0.35:1 내지 22:1인 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 것으로, 상기 질환은, 상기 환자의 고립된 체액 샘플에서, 수용성 BCMA가 2.5ng/mL 이상이고, 상기 환자 샘플에서의 상기 수용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 특이적으로 결합하고, 상기 이중 특이적 항체를 갖는 상기 환자의 치료가 주당 1.5배 내지 10배까지의 복용량으로 실시되고, 및/또는 복용량-투여 사이의 시간 간격이 표준 투여량에 비해 일주일에 1회 투여에서 하루에 1회 투여로 단축되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
제4항에 있어서, 상기 이중 특이적 항체를 갖는 상기 환자의 치료가 표준 투여 량과 비교하여 1.5배 내지 2.0배인 주당 투여량으로 수행되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
제4항에 있어서, 상기 이중 특이적 항체를 갖는 상기 환자의 치료가 복용량-투여 사이의 시간 간격이 표준 투여량에 비해 일주일에 1회 투여에서 일주일에 2회 투여로 단축되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
인간 BCMA 수용체에 결합하기 위한 수용성 BCMA와 경쟁하고 및/또는 NF-κB의 APRIL 매개된 활성화를 차단하고, BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 것으로, 상기 질환은, 상기 환자의 고립된 체액 샘플에서, APRIL의 양이 10 ng/mL보다 높고 100 ng/mL 이하이며, 상기 이중 특이적 항체를 갖는 상기 환자의 치료가 주당 1.5배 내지 20배까지의 복용량으로 실시되고, 및/또는 복용량-투여 사이의 시간 간격이 표준 투여량에 비해 일주일에 1회 투여에서 하루에 1회 투여로 단축되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
제7항에 있어서, 상기 이중 특이적 항체를 갖는 상기 환자의 치료가 표준 투여 량과 비교하여 1.5배 내지 3.0배인 주당 투여량으로 수행되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
제7항에 있어서, 상기 이중 특이적 항체를 갖는 상기 환자의 치료가 복용량-투여 사이의 시간 간격이 표준 투여량에 비해 일주일에 1회 투여에서 일주일에 3회 투여로 단축되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
인간 BCMA 수용체에 결합하기 위한 수용성 BCMA와 경쟁하고, 그럼으로써 BCMA에 결합하기 위해 APRIL과 경쟁하고, 및/또는 NF-κB의 APRIL 매개된 활성화를 차단하고, BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 다발성 골수종 질환을 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 것으로, 상기 질환은, 상기 환자의 고립된 체액 샘플에서, 형질세포와 T 세포를 포함하고, APRIL의 양은 적어도 100 ng/mL 내지 1000 ng/mL이고, 상기 이중 특이적 항체를 갖는 상기 환자의 치료가 주당 1.5배 내지 80배까지의 복용량으로 실시되고, 및/또는 복용량-투여 사이의 시간 간격이 표준 투여량에 비해 일주일에 1회 투여에서 하루에 1회 투여로 단축되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
제10항에 있어서, 상기 이중 특이적 항체를 갖는 상기 환자의 치료가 표준 투여 량과 비교하여 1.5배 내지 10배인 주당 투여량으로 수행되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
제10항에 있어서, 상기 이중 특이적 항체를 갖는 상기 환자의 치료가 복용량-투여 사이의 시간 간격이 표준 투여량에 비해 일주일에 1회 투여에서 하루에 1회 투여로 단축되는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 혈장 세포를 포함하는 장애를 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 것으로, 상기 질환은, 상기 환자의 고립된 체액 샘플에서, Kd값이 상기 이중 특이적 항체의 0.70 내지 1.3배이고, 상대 중간값(Relative Median) 또는 평균 형광 강도(Mean Fluorescence Intensity: MFI)로 측정된 기준선보다 80 이상인 항-BCMA 항체를 사용하여 측정된, CD138+ CD38+ 세포, 상기 CD138+ CD38+ 세포상의 BCMA 발현을 포함하는 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
제1항 내지 제13항의 어느 한 항에 있어서, 상기 이중 특이적 항체는 그의 중쇄 및 경쇄 CDR로서 상기 항-BCMA 항체와 동일한 아미노산 서열의 CDR들을 포함하는 것을 특징으로하는 이중 특이적 항체.
인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 혈장 세포를 포함하는 장애를 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 것으로, T 세포(작동체 세포) 대 표적 세포의 비율 (E:T 비율)이 0.35:1 이상인 것을 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 혈장 세포를 포함하는 장애를 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 것으로, 상기 치료가 연속적으로,
i) 상기 환자로부터 체액 샘플을 분리하는 단계,
ii) 상기 샘플에서 수용성 BCMA의 양을 측정하는 단계, 및
iii) 상기 샘플에서 수용성 BCMA의 양이 2.5 ng/mL 이상인 경우, 및
ⅳ) 상기 환자 샘플에서의 상기 수용성 BCMA가 상기 이중 특이적 항체에 특이 적으로 결합하는 경우, 표준투여량의 1.5 내지 10배 또는 1.5 내지 2.0배의 1주당 투여량으로 및/또는 복용량-투여 사이의 시간 간격이 표준 투여량에 비해 일주일에 1회 투여에서 일주일에 2회 또는 3회 또는 하루에 1회 투여로 단축시켜서 상기 환자를 치료하는 단계,
를 포함하는 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
인간 BCMA 수용체에 결합하기 위한 수용성 BCMA와 경쟁하고, 그럼으로써 BCMA에 결합하기 위해 APRIL과 경쟁하고, 및/또는 NF-κB의 APRIL 매개된 활성화를 차단하고, BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체로서, 혈장 세포를 포함하는 장애를 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 것으로, 상기 치료가 연속적으로,
i) 상기 환자로부터 혈장 세포 및 T 세포를 포함하는 체액 샘플을 분리하는 단계,
ii) ELISA 방법을 사용하여 상기 샘플에서 APRIL의 양을 측정하는 단계, 및
iii) 상기 환자 샘플에서의 APRIL의 양이 10 ng/ml보다 크고 100 ng/ml 이하인 경우, 상기 환자를 상기 이중 특이적 항체로 2배 이상의 높은 주간 투여량으로 처리하고, APRIL 농도가 10 ng/mL 미만인 환자에게 권장되는 복용량과 비교하여 APRIL 농도가 1000 ng/ml까지 증가하는 경우 추가로 최대 80배 높은 복용량으로 처리하고, 또는 상기 이중 특이적 항체의 임의의 두 복용량 사이에서 더 짧은 주기를 갖는 상기 더 높은 복용량에 도달하도록 보다 빈번한 치료 스케줄로 상기 환자를 치료하는 단계,
를 포함하는 특징으로 하는 이중 특이적 항체.
CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 시료에서, 혈장 세포를 포함하는 질환을 앓고 있는 환자의 BCMA 단백질 발현을 측정하는 방법으로, 상기 방법은,
상기 환자의 치료에 사용하기 위하여, 인간 BCMA 및 인간 CD3ε의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여 상기 CD138+ CD38+ 세포상의 BCMA 발현을 측정하는 단계, 및
상대 중간값(Relative Median) 또는 평균 형광 강도(Mean Fluorescence Intensity: MFI)로 측정된 기준선보다 80 이상인지의 여부를 측정하는 단계,
를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
분리된 체액 샘플에서 세포 표면 BCMA 발현을 측정하는 시험관내 방법으로, 상기 방법은, BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70배 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 항-BCMA 항체를 사용하여, CD138+ CD38+ 세포에 대한 상대 중간값 또는 평균 형광 강도(MFI)가 기준선보다 80 이상인지를 측정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
혈장 세포를 포함하는 질환을 앓고 있는 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비가 0.35:1 이상인지의 여부를 측정하는 방법.
혈장 세포를 포함하는 질환을 앓고 있는 환자의 분리된 체액 샘플에서 CD3+ 세포 대 CD138+ CD38+ 세포의 비가 0.35:1 이상인지의 여부를 측정하는 시험관내 방법.
혈장 세포를 포함하는 질환을 앓고 있는 환자의 CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 시료에서 상기 시료 중의 수용성 BCMA 양이 2.5 ng/mL 이상인지를 결정하는 방법.
혈장 세포를 포함하는 장애를 앓고 있는 환자의 분리된 체액 샘플에서 상기 샘플에서의 수용성 BCMA의 양이 2.5 ng/mL 이상인지 여부를 결정하는 시험관내 방법.
혈장 세포를 포함하는 장애를 앓고있는 환자의, CD138+ CD38+ 세포를 포함하는 분리된 체액 시료에서, 상기 시료 중의 수용성 APRIL의 양이 80 ng/mL 이상인지를 결정하는 방법.
CD138에 특이적으로 결합된 하나의 항체, CD38에 특이적으로 결합된 하나의 항체, CD19에 특이적으로 결합된 하나의 항체, 및 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70배 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 하나의 항-BCMA 항체의 4개의 표지된 항체들로 미리 적재된 바이알(vials) 또는 튜브(tubes)를 포함하는 것을 특징으로 하는 세포 표면 BCMA 발현 측정용 키트.
악성 PC 및 T 세포를 검출하기 위하여 CD138에 특이적으로 결합된 하나의 항체, CD38에 특이적으로 결합된 하나의 항체, CD19에 특이적으로 결합된 하나의 항체, 및 CD3에 특이적으로 결합된 하나의 항체의 4개의 표지된 항체들로 미리 적재된 바이알(vials) 또는 튜브(tubes)를 포함하는 것을 특징으로 하는 E:T 비율 측정 용 키트.
캡쳐 항체로서의 폴리클로날 항-BCMA 항체, 및 BCMA 및 CD3ε에 특이적으로 결합하는 치료용 이중 특이적 항체의 항-BCMA 항체 부분의 Kd값의 0.70배 내지 1.3배인 Kd값을 갖는 검출 항-BCMA 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 BCMA의 측정용 키트.