KR20130064814A - 길항성 인간 ｌｉｇｈｔ-특이적 인간 모노클로날 항체를 포함하는 제약 조성물 - Google Patents

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Abstract

hLIGHT 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어 완전 인간 항체를 본원에서 제공한다. hLIGHT 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어 완전 인간 항체를 코딩하는 단리된 핵산을 또한 제공한다. hLIGHT 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어 완전 인간 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주 세포를 추가로 제공한다. hLIGHT 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어 완전 인간 항체를 제조하는 방법을 또한 제공한다. 대상에게 hLIGHT 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어 완전 인간 항체를 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 hLIGHT-매개 질병을 치료하는 방법을 또한 본원에서 제공한다. 바람직한 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항-hLIGHT 항체는 생체 내에서 hLIGHT의 생물학적 활성 (예를 들어, hLIGHT 수용체를 발현하는 세포로부터 CCL20, IL-8 또는 RANTES의 hLIGHT-매개 생산 또는 분비)을 개선하거나, 중화하거나, 억제할 것이다. 샘플 내의 hLIGHT의 검출 방법, 및 예를 들어, hLIGHT 활성이 해로운 질환에 걸린 인간 대상에서 hLIGHT 활성을 개선하거나, 중화하거나, 억제하는 방법을 또한 제공한다.

Description

길항성 인간 ＬＩＧＨＴ-특이적 인간 모노클로날 항체를 포함하는 제약 조성물 {PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING ANTAGONISTIC HUMAN LIGHT-SPECIFIC HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES}
인간 LIGHT (hLIGHT) (림포톡신-유사, 유도가능 발현을 나타냄, T 림프구에 의해 발현되는 수용체인 HVEM에 대해 HSV 당단백질 D와 경쟁함) 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편 또는 다른 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 본원에서 제공한다. 일부 실시태양에서, 항체는 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 완전 인간 항체, 바람직하게는 완전 인간 모노클로날 항체이다. hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 코딩하는 단리된 핵산을 또한 제공한다. 본 발명은 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주 세포, 및 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 제조 방법을 추가로 제공한다. 생체 내에서 hLIGHT의 생물학적 활성을 억제하고/하거나 환자에서 hLIGHT-매개 질병을 치료하거나 달리 관리하기 위해 본원에서 제공되는 항-hLIGHT 항체를 사용하는 방법을 또한 제공한다.
LIGHT (림포톡신-유사, 유도가능 발현을 나타냄, T 림프구에 의해 발현되는 수용체인 HVEM에 대해 HSV 당단백질 D와 경쟁함)는 만성 염증성 자가면역 질병의 과정에 관여하는 하나의 잠재적인 시토킨 표적이다 (Mauri et al. 1998 Immunity 8 21-30). TNF 수퍼패밀리 (TNFSF)의 리간드의 멤버로서, LIGHT는 또한 TNFSF14 또는 CD258로서 공지되어 있다. LIGHT는 활성화 시에 4시간 내에 나타나고, 12-24시간에 피크이고, 48시간에 사라지는 엄격하게 조절되는 방식으로 T 세포의 표면 상에 발현된다 (Castellano et al. 2002 J Biol Chem 277 42841-51). 그러나, LIGHT는 또한 미성숙 수지상 세포의 표면 상에 (Tamada et al. 2000 J Immunol 164 4105-10) 및 창자의 T 세포 및 천연 킬러 (NK) 세포 상에 (Cohavy et al. 2005 J Immunol 174 646-53) 구성적으로 검출가능한 수준으로 존재한다. LIGHT는 림포톡신 β 수용체 (LTβR) ([Crowe et al. 1994 Science 264 707-10], [Browning et al. 1997 J Immunol 159 3288-98]), 헤르페스 바이러스 도입 매개체 (HVEM) (Montgomery et al. 1996 Cell 87(3) 427-36), 및 decoy 수용체 3 (DcR3) (Yu et al 1999 J Biol Chem 274 13733-6)을 포함한 3개의 TNF 수퍼패밀리 수용체에 결합함으로써 그의 생물학적 효과를 매개한다.
억제성 LTβR-Fc 융합 단백질을 사용하여 처리한 마우스에서는 CD4+ T 세포-매개 병리학인 대장염의 CD4+CD45RBhigh T 세포 전달 모델에서 염증 증상이 감소하였다 (Mackay et al. 1998 Gastroenterology 115 1464-75). LIGHT의 구성적 트랜스제닉 (transgenic) T 세포 특이적 발현은 또한 인간 염증성 장 질환 (IBD)을 닮은 자가면역-유사 병리학을 갖는 중증 장 염증을 일으키는 것으로 나타났다 ([Wang et al. 2005 J Immunol 174 8173-82], [Shaikh et al. 2001 J Immunol 167 6330-7], [Wang et al. 2001 J Immunol 167 5099-105], [Wang et al. 2004 J Clin Invest 113 826-35]). LIGHT 트랜스제닉 동물로부터의 장간막 림프절 세포를 RAG-/-에 전달할 때, LIGHT-발현 림프구는 IBD-유사 증상 (예를 들어, 인간 크론 (Crohn) 병의 시토킨 프로필, 균열상 (fissuring) 궤양, 회장염, 및 대장 IFN-γ 및 TNF의 증가)을 유도할 수 있다 (Wang et al 2005 J Immunol 174 8173-82). 인간 질병에서, 활성 크론병이 있는 환자에서 LIGHT 발현의 증가가 관찰되었다 ([Cohavy et al. 2005 J Immunol 174 646-53], [Wang et al. 2005 J Immunol 174 8173-82], [Wang et al. 2004 J Clin Invest 113 826-35], [Cohavy et al. 2004 J Immunol 173 251-8]). LIGHT는 또한 IBD 환자의 창자 T 세포에서 상승하는 것으로 입증되었다 (Cohavy et al. 2004 J Immunol 173 251-8). 유전적 증거는 또한 IBD에서 LIGHT에 대한 역할을 지지한다 ([Granger et al 2001 J Immunol 167 5122-8]; [Rioux et al. 2000 Am J Hum Genet 66 1863-70]; [Low et al 2004 Inflamm Bowel Dis 10 173-81]; [Bonen and Cho 2003 Gastroenterology 124 521-36]).
또한, CCL20-CCR6 신호전달이 IBD에 관여하는 것으로 나타났고, LIGHT는 인간 대장 상피 세포주 HT29.14s로부터 CCL20 분비를 유도한다. 인간 연구에서, 대장의 상피 세포는 IBD 환자에서 CCL20의 주 공급원인 것으로 밝혀졌고, CCL20 발현은 인간 IBD 환자에서 증가한다 ([Kwon et al 2002 Gut 51 818-26]; [Kaser et al 2004 J Clin Immunol 24 74-85]).
hLIGHT는 또한 이식편 대 숙주 질병 (GVHD)에서 관여되었다. 예를 들어, LIGHT는 B7-CD28 경로와 무관하게 Th1 시토킨의 증식 및 생산을 향상시키는, T 세포에 대한 강력한 공동자극 (costimulatory) 활성을 제공하는 것으로 나타났다 (예를 들어, [Tamada et al 2000 J. Immunol. 164 4105-4110] 참조). 항-HVEM 모노클로날 항체, HVEM-Ig, 또는 LTβR 융합 단백질에 의한 LIGHT-HVEM 공동자극의 차단은 동종이형의 T 세포 반응을 억제한다 (예를 들어, ([Tamada et al. 2000 J. Immunol. 164 4105-4110], [Harrop et al. 1998 J. Immunol. 161 1786]) 참조). 또한, LTβR-Ig 또는 쥐 (murine) 항-LIGHT 항체를 생체내 투여하면 쥐 급성 GVHD 모델에서 항-숙주 세포독성 T 림프구 (CTL) 반응을 억제한다 (Tamada et al. 2000 Nat. Med. 6 283-289).
상기 논의한 것과 같은 관찰은 염증성 질환, 예를 들어 IBD 또는 GVHD에서 LIGHT에 대한 역할을 나타내지만, 지금까지 인간 항-인간 LIGHT 항체가 생산되지 않았고, 임의의 인간 항-hLIGHT 항체 또는 모노클로날 항-hLIGHT 항체가 hLIGHT의 생물학적 활성에 길항성인 것으로 나타나지 않았다. 따라서, 인간에서 염증성 질환 치료에 유용한 요법, 예를 들어 항-LIGHT 요법의 확인이 계속 필요하였다. 본원에서 참조문의 인용 및 논의는 본 발명에 대한 선행 기술임을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어 완전 인간 항체를 본원에서 제공한다. hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어 완전 인간 항체를 코딩하는 단리된 핵산을 또한 제공한다. hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어 완전 인간 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주 세포를 추가로 제공한다. hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어 완전 인간 항체의 제조 방법을 또한 제공한다. hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어 완전 인간 항체를 투여하는 것을 포함하는, hLIGHT-매개 질병을 치료하는 방법을 또한 본원에서 제공한다. 바람직한 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항-hLIGHT 항체는 생체 내에서 hLIGHT의 생물학적 활성 (예를 들어, hLIGHT 리간드, 예를 들어 hLIGHT 수용체 (예를 들어, HVEM, LTβR 및/또는 DcR3)를 발현하는 세포로부터 CCL20, IL-8 또는 RANTES의 hLIGHT-매개 생산 또는 분비)을 개선하거나, 중화하거나, 달리 억제하는 길항제 항체이다. 본 발명의 항체는 전장 항체 또는 항원-결합 항체 단편일 수 있다. 본 발명의 항체는 또한 hLIGHT를 검출하기 위해, 및 예를 들어, hLIGHT 활성이 해로운 질환에 걸린 인간 대상에서 hLIGHT 활성을 개선하거나, 중화하거나, 달리 억제하기 위해 유용하다.
따라서, 한 측면에서, hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT), hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 단리된 항체를 본원에서 제공한다. 일부 실시태양에서, 항체는 (a) 삼량체 (또는 천연) hLIGHT 에피토프, (b) 단량체 (또는 변성) hLIGHT 에피토프, (c) 삼량체 hLIGHT 에피토프와 단량체 hLIGHT 에피토프 모두에 면역특이적으로 결합하거나, (d) 삼량체 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하지만 단량체 hLIGHT 에피토프에는 그렇지 않거나, (e) 단량체 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하지만, 삼량체 hLIGHT 에피토프에는 그렇지 않다. 바람직한 실시태양에서, 항체는 삼량체 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하지만, 인간 단량체 hLIGHT 에피토프에는 그렇지 않다. 바람직한 실시태양에서, 항체는 E1 항체, E13 항체, E63 항체, F19 항체, 또는 F23 항체이다.
각각의 E1, E13, E63, F19 및 F23 항체를 생산하는 하이브리도마를 부다페스트 조약 (Budapest Treaty)의 규정 하에 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (American Type Culture Collection: ATCC, 미국 20110-2209 버지니아주 매나싸스 유니버시티 불리바드 10801)에 2006년 7월 12일 (ATCC 기탁 번호: 각각 PTA-7729 (하이브리도마 124 E1) 및 PTA-7728 (하이브리도마 124 F23)), 2006년 8월 17일 (ATCC 기탁 번호: PTA-7818 (하이브리도마 124 E63) 및 PTA-7819 (하이브리도마 124 F19)) 및 2006년 8월 23일 (ATCC 기탁 번호 PTA-7842 (하이브리도마 124 E13))에 기탁하였고, 본원에 참고로 포함시킨다. 각각의 하이브리도마 124 E1, 124 E13, 124 E63, 124 F19 및 124 F23에 의해 생산된 항체를 또한 본원에서 각각 E1, E13, E63, F19, F23, 및/또는 각각 ATCC 기탁 번호: PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 및 PTA-7728로서 칭할 수 있다.
상기 항체, 하이브리도마, 상기 항체의 제조 방법, 및 상기 항체의 사용 방법은 모두 본 발명에 포함된다.
특정 실시태양에서, 본 발명의 항체는 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT), hLIGHT 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 대한 결합이 E1 항체, E13 항체 및/또는 E63 항체에 의해 경쟁적으로 차단되는 (예를 들어, 용량-의존 방식으로) 것이다. 다른 실시태양에서, 항체는 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT), hLIGHT 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 대한 결합에 대해 F19 항체 및/또는 F23 항체에 의해 경쟁적으로 차단된다 (예를 들어, 용량-의존 방식으로). 특정 실시태양에서, 항체는 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT), hLIGHT 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 대한 결합에 대해 E1 항체, E13 항체 및/또는 E63 항체에 의해 경쟁적으로 차단되지만 (예를 들어, 용량-의존 방식으로), F19 항체 및/또는 F23 항체에 의해서는 경쟁적으로 차단되지 않는다 (예를 들어, 용량-의존 방식으로). 다른 실시태양에서, 항체는 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT), hLIGHT 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 대한 결합에 대해 F19 항체 및/또는 F23 항체에 의해 경쟁적으로 차단되지만 (예를 들어, 용량-의존 방식으로), E1 항체, E13 항체 및/또는 E63 항체에 의해서는 경쟁적으로 차단되지 않는다 (예를 들어, 용량-의존 방식으로). 예시적인 경쟁적 차단 시험을 본원의 실시예에 제공한다.
hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT), hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 항체 단편을 또한 본원에서 제공한다. 특정 실시태양에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 E1, E13, E63, F19 또는 F23의 VH 사슬, VL 사슬, VH 도메인, VL 도메인, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 포함한다.
특정 실시태양에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 6개 미만의 CDR을 포함한다. 일부 실시태양에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3으로 이루어지는 군 중에서 선택된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 CDR을 포함하거나 그로 이루어진다. 특정 실시태양에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 E1, E13, E63, F19 또는 F23의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3으로 이루어지는 군 중에서 선택된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 CDR을 포함하거나 그로 이루어진다.
본 발명의 항-hLIGHT 항체, 예를 들어 E1, E13, E63, F19 또는 F23을 포함하는 제약 조성물을 또한 본원에서 제공한다.
특정 실시태양에서, 본 발명의 항체는 완전 인간 항체, 모노클로날 항체, 재조합 항체, 길항제 항체, 또는 이들의 임의의 조합물이다. 특정 실시태양에서, 항체는 hLIGHT에 면역특이적으로 결합하는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 바람직한 실시태양에서, 항체는 길항제 항체이다.
특정 실시태양에서, 항체는 hLIGHT 폴리펩티드, 예를 들어 세포 표면-발현된 hLIGHT 폴리펩티드 또는 가용형 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 대한 결합에 대해 HVEM, LTβR, DcR3 또는 그의 융합 단백질 (예를 들어, Fc:HVEM, Fc:LTβR 또는 Fc:DcR3)과 (예를 들어, 용량-의존 방식으로) 경쟁한다. 예시적인 경쟁적 차단 시험을 본원의 실시예에 제공한다.
제2 측면에서, hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT), hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 코딩하는 단리된 핵산을 본원에서 제공한다. 특정 실시태양에서, 핵산은 E1, E13, E63, F19 또는 F23의 VH 사슬, VL 사슬, VH 도메인, VL 도메인, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 코딩한다.
제3 측면에서, hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주 세포를 본원에서 제공한다.
제4 측면에서, hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 제조 방법을 본원에서 제공한다. 특정 실시태양에서, 항체는 hLIGHT 폴리펩티드의 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) 변이체, 예를 들어 214E-32S, 214K-32S, 214E-32L 및/또는 214K-32L에 면역특이적으로 결합한다. hLIGHT 폴리펩티드 또는 그의 SNP 변이체에 면역특이적으로 결합하는 항체를 생산하는 하이브리도마를 또한 본원에서 제공한다. 바람직한 실시태양에서, 하이브리도마는 E1, E13, E63, F19 또는 F23을 생산하는 하이브리도마이다.
제5 측면에서, 대상에게 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT)에 면역특이적으로 결합하는 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상 (예를 들어, 인간 대상)에서 hLIGHT-매개 질병의 하나 이상의 증상을 치료하거나 달리 경감시키는 방법을 본원에서 제공하고, 여기서 hLIGHT 활성은 항체에 의해 억제된다. 특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병은 IBD, 예를 들어 크론병 또는 궤양 대장염이다. 다른 실시태양에서, hLIGHT 매개 질병은 GVHD이다.
제6 측면에서, 대상에게 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT)에 면역특이적으로 결합하는 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상 (예를 들어, 인간 대상)에서 HVEM, LTβR 및/또는 DcR3에 대한 hLIGHT의 결합을 감소시키거나 억제하기 위한 방법을 본원에서 제공한다.
제7 측면에서, 대상에게 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 hLIGHT)에 면역특이적으로 결합하는 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상 (예를 들어, 인간 대상)에서 hLIGHT의 생물학적 활성, 예를 들어 CCL20, IL8 및/또는 RANTES의 분비를 감소시키거나 억제하기 위한 방법을 본원에서 제공하고, 여기서 hLIGHT의 생물학적 활성은 항체에 의해 감소 또는 억제된다.
제8 측면에서, 세포를 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT), 예를 들어 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 유효량과 접촉시키는 것을 포함하는, 세포 표면-발현된 hLIGHT를 갖는 세포에서 HVEM, LTβR 및/또는 DcR3에 대한 hLIGHT의 결합을 감소시키거나 억제하기 위한 방법을 본원에서 제공한다.
제9 측면에서, 세포를 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT, 또는 그의 SNP 변이체)에 면역특이적으로 결합하는 항체의 유효량과 접촉시키는 것을 포함하는, 세포 표면-발현된 hLIGHT 수용체 (예를 들어, HVEM, LTβR 및/또는 Dc3R)를 갖는 세포에서 hLIGHT의 생물학적 활성, 예를 들어 CCL20, IL8 및/또는 RANTES의 분비를 감소시키거나 억제하기 위한 방법을 본원에서 제공하고, 여기서 hLIGHT의 생물학적 활성은 항체에 의해 감소 또는 억제된다.
제10 측면에서, hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 본원에서 제공하고, 여기서 상기 항체는 검출가능한 태그 (tag)를 추가로 포함한다. 특정 실시태양에서, 검출가능한 태그를 포함하는 항-hLIGHT 항체는 샘플을 항-hLIGHT 항체와 접촉시키는 것을 포함하는, 샘플 내의 hLIGHT의 검출 방법에서 사용된다. 특정 실시태양에서, 샘플을 세포의 표면 상에 hLIGHT를 발현하는 세포를 포함한다.
제11 측면에서, hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 키트를 본원에서 제공한다.
용어
달리 규정하지 않으면, 본원에서 사용된 모든 기술 및 학술 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 모든 특허, 출원, 공개 출원 및 다른 공개문은 그 전문을 참고로 포함시킨다. 본원에서 용어에 대해 복수의 정의가 존재하는 경우에, 달리 진술하지 않으면 본 단락의 정의가 우선적으로 적용된다.
용어 "약" 또는 "대략"은 주어진 값 또는 범위의 20% 이내, 바람직하게는 10% 이내, 보다 바람직하게는 5% 이내 (또는 1% 이하)를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "투여하다" 또는 "투여"는 체외에 존재하는 바와 같은 물질 (예를 들어, 본원에서 제공되는 항-hLIGHT 항체)을 환자에게 예를 들어, 점막, 피부내, 정맥내, 근육내 전달 및/또는 본원에 기재되거나 당업계에 공지된 임의의 다른 물리적 전달 방법에 의해 주사하거나 달리 물리적으로 전달하는 행동을 나타낸다. 질병 또는 그의 증상이 치료되는 경우에, 물질의 투여는 대개 질병 또는 그의 증상의 발병 후에 일어난다. 질병 또는 그의 증상이 예방되는 경우에, 물질의 투여는 대개 질병 또는 그의 증상의 발병 전에 일어난다.
폴리펩티드의 맥락에서, 용어 "유사체"는 본원에서 사용될 때 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드의 단편 또는 항-hLIGHT 항체와 유사하거나 동일한 기능을 갖지만 반드시 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드의 단편 또는 항-hLIGHT 항체와 유사하거나 동일한 아미노산 서열을 포함하지는 않는, 또는 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드의 단편 또는 항-hLIGHT 항체의 유사하거나 동일한 구조를 갖는 폴리펩티드를 나타낸다. 유사한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드는 (a) 본원에 설명된 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 서열 52), hLIGHT 폴리펩티드의 단편 또는 항-hLIGHT 항체의 아미노산 서열에 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 및 바람직하게는 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 또는 가장 바람직하게는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드; (b) 적어도 5개의 아미노산 잔기, 적어도 10개의 아미노산 잔기, 적어도 15개의 아미노산 잔기, 적어도 20개의 아미노산 잔기, 적어도 25개의 아미노산 잔기, 적어도 40개의 아미노산 잔기, 적어도 50개의 아미노산 잔기, 적어도 60개의 아미노산 잔기, 적어도 70개의 아미노산 잔기, 적어도 80개의 아미노산 잔기, 적어도 90개의 아미노산 잔기, 적어도 100개의 아미노산 잔기, 적어도 125개의 아미노산 잔기, 또는 적어도 150개의 아미노산 잔기의, 엄격한 조건 하에 본원에 설명된 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드의 단편 또는 항-hLIGHT 항체 (또는 그의 VH 또는 VL 구역)을 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 혼성화하는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 폴리펩티드 (예를 들어, [Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY]; [Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY] 참조); 및 (c) 본원에 설명된 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드의 단편 또는 항-hLIGHT 항체 (또는 그의 VH 또는 VL 구역)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 및 바람직하게는 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 또는 가장 바람직하게는 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 폴리펩티드 중 적어도 하나를 만족하는 폴리펩티드를 나타낸다. 본원에 설명된 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드의 단편, 또는 항-hLIGHT 항체와 유사한 구조를 갖는 폴리펩티드는 본원에 설명된 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT의 단편, 또는 hLIGHT 항체의 유사한 2차, 3차 또는 4차 구조를 갖는 폴리펩티드를 나타낸다. 폴리펩티드의 구조는 X-선 결정학, 핵 자기 공명 및 결정학적 전자 현미경을 포함하고 이로 제한되지 않는, 당업자에게 공지된 방법에 의해 결정할 수 있다.
2개의 아미노산 서열 또는 2개의 핵산 서열의 % 동일성을 결정하기 위해, 서열을 최적 비교 목적을 위해 정렬시킨다 (예를 들어, 제2 아미노산 또는 핵산 서열과의 최적 정렬을 위해 제1 아미노산 또는 핵산 서열의 서열 내에 갭 (gap)을 도입할 수 있다). 이어서, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치에서 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교한다. 제1 서열 내의 위치가 제2 서열 내의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 의해 점령되면, 분자는 그 위치에서 동일하다. 2개의 서열 사이의 % 동일성은 서열들이 공유하는 동일한 위치의 수의 함수이다 (즉, % 동일성 = 동일한 겹치는 위치의 수/위치의 총 수 X 100%). 하나의 실시태양에서, 2개의 서열은 동일한 길이이다.
2개의 서열 (예를 들어, 아미노산 서열 또는 핵산 서열) 사이의 % 동일성의 결정은 또한 수학적 알고리즘을 사용하여 달성할 수 있다. 2개의 서열의 비교를 위해 사용되는 수학적 알고리즘의 바람직한 비제한적인 예는 문헌 [Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873 5877]에서와 같이 변형된 문헌 [Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:2264 2268]의 알고리즘이다. 상기 알고리즘은 문헌 [Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램 내로 포함된다. BLAST 뉴클레오티드 탐색은 본 발명의 핵산 분자에 상동성인 뉴클레오티드 서열을 얻기 위해 예를 들어, 스코어 (score)=100, 단어 길이 (wordlength)=12에 대한 NBLAST 뉴클레오티드 프로그램 파라미터 세트를 사용하여 수행할 수 있다. BLAST 단백질 탐색은 본 발명의 단백질 분자에 상동성인 아미노산 서열을 얻기 위해 예를 들어, 스코어 50, 단어 길이=3에 대한 XBLAST 프로그램 파라미터 세트를 사용하여 수행할 수 있다. 비교 목적을 위해 갭을 도입한 (gapped) 정렬을 얻기 위해, 문헌 [Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389 3402]에 설명된 바와 같이 Gapped BLAST를 사용할 수 있다. 별법으로, 분자들 사이에 먼 관계를 검출하는 반복된 탐색을 수행하기 위해 PSI BLAST를 사용할 수 있다 (상동). BLAST, Gapped BLAST 및 PSI Blast 프로그램을 사용할 때, 각각의 프로그램 (예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터가 사용될 수 있다 (예를 들어, 월드와이드웹 ncbi.nlm.nih.gov 상의 National Center for Biotechnology Information (NCBI) 참조). 서열의 비교에 사용되는 수학적 알고리즘의 다른 바람직한 비제한적인 예는 문헌 [Myers and Miller, 1988, CABIOS 4:11 17]의 알고리즘이다. 상기 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 일부인 ALIGN 프로그램 (버전 2.0) 내에 포함된다. 아미노산 서열을 비교하기 위해 ALIGN 프로그램을 사용할 때, PAM 120 중량 잔기표, 12의 갭 길이 패널티, 및 4의 갭 패널티를 사용할 수 있다.
2개의 서열 사이의 % 동일성은 갭을 허용하거나 허용하지 않으면서 상기 설명된 것과 유사한 기술을 사용하여 결정할 수 있다. % 동일성을 계산하는데 있어서, 대개 정확한 일치만을 계수한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, hLIGHT의 "길항제" 또는 "억제제"는 예를 들어 hLIGHT를 발현하는 세포에서 또는 hLIGHT 리간드, 예를 들어 hLIGHT 수용체를 발현하는 세포에서 hLIGHT의 하나 이상의 생물학적 활성을 억제 또는 달리 감소시킬 수 있는 분자를 나타낸다. 예를 들어, 특정 실시태양에서, 본 발명의 항체는 항체를 세포와 접촉시킬 때 세포 표면-발현된 hLIGHT 수용체 (예를 들어, HVEM, LTβR 및/또는 DcR3)를 갖는 세포에서 CCL20, IL-8 및/또는 RANTES의 분비를 억제 또는 달리 감소시키는 길항제 항체이다. 일부 실시태양에서, hLIGHT의 길항제 (예를 들어, 본 발명의 길항성 항체)는 예를 들어, hLIGHT 수용체를 발현하는 세포의 활성화 및/또는 세포 신호전달 경로를 억제 또는 달리 감소시켜, 길항제의 부재 하의 hLIGHT-매개 생물학적 활성에 비해 세포의 hLIGHT-매개 생물학적 활성을 억제함으로써 작용할 수 있다. 특정 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체는 완전 인간 길항성 항-hLIGHT 항체, 바람직하게는 완전 인간 모노클로날 길항성 항-hLIGHT 항체이다.
용어 "항체" 및 "면역글로불린" 또는 "Ig"는 본원에서 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 용어 "hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체", "hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체", "항-hLIGHT 항체" 및 유사한 용어는 또한 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, hLIGHT 폴리펩티드, 예를 들어 hLIGHT 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 단편을 나타낸다. hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 단편은 관련 항원과 교차-반응성일 수 있다. 바람직하게는, hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 단편은 다른 항원과 교차-반응하지 않는다. hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 단편은 예를 들어, 면역분석, BIAcore, 또는 당업자에게 공지된 다른 기술에 의해 확인할 수 있다. 항체 또는 그의 단편은 실험적 기술, 예를 들어 방사성 면역 분석 (RIA) 및 효소-결합 면역측정법 (ELISA)을 이용하여 결정할 때 임의의 교차-반응성 항원에 대한 것보다 더 큰 친화도로 hLIGHT 항원에 결합할 때 hLIGHT 항원에 특이적으로 결합한다. 일반적으로 특이적 또는 선택적 반응은 배경 신호 또는 소음의 적어도 2배일 것이고, 보다 일반적으로 배경의 10배 초과이다. 항체 특이성에 관한 논의에 대해서는 예를 들어 문헌 [Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York at pages 332-336]을 참조한다.
본 발명의 항체는 합성 항체, 모노클로날 항체, 재조합 방식으로 생산된 항체, 다중특이적 항체 (이중-특이적 항체 포함), 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 내부체 (intrabody), 단일쇄 Fvs (scFv) (예를 들어, 일특이적, 이중특이적 등 포함), 낙타화 (camelized) 항체, Fab 단편, F(ab') 단편, 디술피드-결합된 Fvs (sdFv), 항-개별특이형 (항-Id) 항체, 및 상기한 것 중 임의의 것의 에피토프-결합 단편을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 특히, 본 발명의 항체는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉, hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 항원 결합 도메인 또는 분자 (예를 들어, 항-hLIGHT 항체의 하나 이상의 상보성 결정 구역 (CDR))를 포함한다. 본 발명의 항체는 임의의 종류 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 임의의 클래스 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 IgA1 및 IgA2), 또는 임의의 서브클래스 (예를 들어, IgG2a 및 IgG2b)의 면역글로불린 분자일 수 있다. 바람직한 실시태양에서, hLIGHT 항체는 완전 인간, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 hLIGHT 항체이다. 특정 실시태양에서, 본 발명의 항체는 IgG 항체, 또는 그의 클래스 (예를 들어, 인간 IgG1 또는 IgG4) 또는 서브클래스이다.
용어 "항원 결합 도메인", "항원 결합 구역", "항원 결합 단편", 및 유사한 용어는 항원과 상호작용하고 결합제 상에 항원에 대한 그의 특이성 및 친화도를 제공하는 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 부분 (예를 들어, 상보성 결정 구역 (CDR))을 나타낸다. 항원 결합 구역은 임의의 동물 종, 예를 들어 설치류 (예를 들어, 토끼, 래트 또는 햄스터) 및 인간으로부터 유래할 수 있다. 바람직하게는, 항원 결합 구역은 인간 기원의 것일 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "조성물"은 특정 성분 (예를 들어, 본 발명의 항체)를 임의로 명시된 양으로 함유하는 제품, 및 임의로 명시된 양으로 명시된 성분들의 조합으로부터 직접 또는 간접적으로 생성하는 임의의 제품을 포함하도록 의도된다.
용어 "불변 구역" 또는 "불변 도메인"은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여하지 않지만 다양한 효과기 기능, 예를 들어 Fc 수용체와의 상호작용을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카르복시 말단 부분을 나타낸다. 상기 용어는 항원 결합 부위를 함유하는 면역글로불린의 다른 부분인 가변 도메인에 비해 더 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부분을 나타낸다. 불변 도메인은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 도메인, 및 경쇄의 CHL 도메인을 함유한다.
폴리펩티드의 맥락에서, 용어 "유도체"는 본원에서 사용될 때 아미노산 잔기 치환, 결손 또는 부가의 도입에 의해 변경된, hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드의 단편, 또는 hLIGHT 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합하는 항체의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 나타낸다. 용어 "유도체"는 본원에서 사용될 때 또한 예를 들어, 폴리펩티드에 임의의 종류의 분자의 공유 부착에 의해 화학적으로 변형된, hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드의 단편, 또는 hLIGHT 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합하는 항체를 나타낸다. 비제한적인 예를 들어, hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드의 단편, 또는 hLIGHT 항체는 예를 들어, 글리코실화, 아세틸화, 페길화 (pegylation), 인산화, 아미드화, 공지의 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백분해적 절단, 세포성 리간드 또는 다른 단백질에 대한 연결 등에 의해 화학적으로 변형될 수 있다. 유도체는 부착된 분자의 종류 또는 위치에 있어서 자연 발생 또는 출발 펩티드 또는 폴리펩티드와 상이한 방식으로 변형된다. 유도체는 추가로 펩티드 또는 폴리펩티드 상에 자연적으로 존재하는 하나 이상의 화학기의 결손을 포함한다. hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드의 단편, 또는 hLIGHT 항체의 유도체는 특이적 화학 절단, 아세틸화, 제제화, 투니카마이신의 대사적 합성 등을 포함하고 이로 제한되지 않는 당업자에게 공지된 기술을 이용하는 화학적 변형에 의해 화학적으로 변형될 수 있다. 또한, hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드의 단편, 또는 hLIGHT 항체의 유도체는 하나 이상의 비-전통적인 아미노산을 함유할 수 있다. 폴리펩티드 유도체는 본원에서 설명된 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드의 단편, 또는 hLIGHT 항체와 유사하거나 동일한 기능을 갖는다.
용어 "유효량"은 본원에서 사용될 때 주어진 질병 및/또는 그와 관련된 증상의 심도 및/또는 지속시간을 감소시키고/시키거나 개선하기에 충분한 요법제 (예를 들어, 본원에서 제공되는 항체 또는 제약 조성물)의 양을 나타낸다. 상기 용어는 또한 주어진 질병의 진전 또는 진행의 감소 또는 개선, 주어진 질병의 재발, 발생 또는 발병의 감소 또는 개선, 및/또는 다른 요법 (예를 들어, 본원에서 제공되는 항-hLIGHT 항체 이외의 요법)의 예방 또는 치료 효과(들)을 증진 또는 향상시키기 위해 필요한 양을 포함한다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 항체의 유효량은 약 0.1 mg/kg (mg 항체/kg 대상의 체중) 내지 약 100 mg/kg이다. 특정 실시태양에서, 본원에서 제공된 항체의 유효량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 80 mg/kg 약 90 mg/kg 또는 약 100 mg/kg (또는 그 내부의 범위)이다. 일부 실시태양에서, "유효량"은 본원에서 사용될 때 또한 명시된 결과 (예를 들어, 세포의 hLIGHT의 생물학적 활성의 억제, 예를 들어 세포로부터 CCL20, IL-8 또는 RANTES의 분비의 억제)를 달성하기 위한 본 발명의 항체의 양을 나타낸다.
용어 "에피토프"는 본원에서 사용될 때 항체의 하나 이상의 항원 결합 구역에 결합할 수 있고, 동물, 바람직하게는 포유동물에서, 가장 바람직하게는 인간에서 면역 반응을 일으킬 수 있는, 항원 활성 또는 면역원 활성을 갖는 항원 표면 상의 국소화된 구역, 예를 들어 hLIGHT 폴리펩티드 또는 hLIGHT 폴리펩티드 단편을 의미한다. 면역원 활성을 갖는 에피토프는 동물에서 항체 반응을 일으키는 폴리펩티드의 부분이다. 항원 활성을 갖는 에피토프는 당업계에 잘 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 본원에 설명된 면역분석에 의해 결정할 때 항체가 면역특이적으로 결합하는 폴리펩티드의 부분이다. 항원성 에피토프는 반드시 면역원성일 필요는 없다. 에피토프는 대체로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면기로 구성되고, 특이적 3차원 구조 특징부 및 특이적 전하 특징을 갖는다. 에피토프에 기여하는 폴리펩티드의 구역은 폴리펩티드의 인접 아미노산일 수 있거나, 에피토프는 폴리펩티드의 2개 이상의 비인접 구역으로부터 함께 형성될 수 있다. 에피토프는 항원의 3차원 표면 특징부일 수 있거나 아닐 수 있다. 특정 실시태양에서, hLIGHT 에피토프는 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, hLIGHT 폴리펩티드의 삼량체 형에서)의 3차원 표면 특징부이다. 다른 실시태양에서, hLIGHT 에피토프는 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, hLIGHT 폴리펩티드의 삼량체 형 또는 단량체 형에서)의 선형 특징부이다. 본원에서 제공되는 항체는 hLIGHT의 단량체 (변성) 형의 에피토프에, hLIGHT의 삼량체 (천연) 형의 에피토프에, 또는 hLIGHT의 단량체 (변성) 형과 삼량체 (천연) 형 모두에 면역특이적으로 결합할 수 있다. 특정 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체는 hLIGHT의 삼량체 형의 에피토프에 면역특이적으로 결합하지만, hLIGHT의 단량체 형의 에피토프에는 면역특이적으로 결합하지 않는다.
용어 "부형제"는 본원에서 사용될 때 약물에 대한 희석제, 비히클, 방부제, 결합제, 또는 안정화제로서 통상 사용되는 불활성 물질을 의미하고, 단백질 (예를 들어, 혈청 알부민 등), 아미노산 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 글라이신, 히스티딘 등), 지방산 및 인지질 (예를 들어, 알킬 술포네이트, 카프릴레이트 등), 계면활성제 (예를 들어, SDS, 폴리소르베이트, 비이온성 계면활성제 등), 사카라이드 (예를 들어, 수크로스, 말토스, 트레할로스 등) 및 폴리올 (예를 들어, 만니톨, 소르비톨 등)을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 또한 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA]을 참조한다.
펩티드 또는 폴리펩티드의 맥락에서, 용어 "단편"은 본원에서 사용될 때 전장 아미노산 서열보다 작은 서열을 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드를 의미한다. 상기 단편은 예를 들어 아미노산 서열로부터 아미노 말단에서의 말단 절단, 카르복시 말단에서의 말단 절단, 및/또는 잔기(들)의 내부 결손에 의해 발생할 수 있다. 단편은 예를 들어 선택적 RNA 스플라이싱 또는 생체내 프로테아제 활성에 의해 발생할 수 있다. 특정 실시태양에서, hLIGHT 단편은 hLIGHT 폴리펩티드, 또는 hLIGHT 폴리펩티드에 면역특이적으로 결합하는 항체의 아미노산 서열의 적어도 5개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 10개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 15개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 20개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 25개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 40개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 50개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 60개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 70개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 80개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 90개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 100개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 125개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 150개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 175개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 200개의 인접 아미노산 잔기, 또는 적어도 250개의 인접 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시태양에서, hLIGHT 폴리펩티드, 또는 hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체의 단편은 폴리펩티드 또는 항체의 적어도 1, 적어도 2, 또는 적어도 3개의 기능을 보유한다.
용어 "완전 인간 항체" 또는 "인간 항체"는 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 인간 가변 구역, 및 가장 바람직하게는 인간 불변 구역을 포함하는 항체를 의미한다. 특정 실시태양에서, 상기 용어는 인간 기원의 가변 구역 및 불변 구역을 포함하는 항체를 의미한다. 특정 실시태양에서, "완전 인간" 항-hLIGHT 항체는 hLIGHT 폴리펩티드에 결합하고 인간 생식세포 면역글로불린 핵산 서열의 천연 발생 체세포 변이체인 핵산 서열에 의해 코딩되는 항체도 포함할 수 있다. 특정 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항-hLIGHT 항체는 완전 인간 항체이다. 용어 "완전 인간 항체"는 카바트 (Kabat) 등에 의해 설명된 바와 같이 인간 생식세포 면역글로불린 서열에 대응하는 가변 및 불변 구역을 갖는 항체를 포함한다 (문헌 [Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조). 완전 인간 항체를 생산하는 예시적인 방법을 예를 들어 본원의 실시예에 제시하지만, 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용할 수 있다.
구문 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나, 단리된 인간 항체, 예를 들어 숙주 세포 내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 인간 면역글로불린 유전자에 대해 트랜스제닉 및/또는 트랜스크로모조멀 (transchromosomal)인 동물 (예를 들어, 마우스 또는 소)로부터 단리된 항체 (예를 들어, [Taylor, L. D. et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295] 참조) 또는 인간 면역글로불린 유전자 서열의 다른 DNA 서열에 대한 스플라이싱을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나, 단리된 항체를 포함한다. 상기 재조합 인간 항체는 인간 생식세포 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 및 불변 구역을 가질 수 있다 ([Kabat, E. A. et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조). 그러나, 특정 실시태양에서, 상기 재조합 인간 항체는 시험관내 돌연변이 유발 (또는, 인간 Ig 서열에 대해 트랜스제닉인 동물이 사용될 경우, 생체내 체세포 돌연변이 유발)에 적용되고, 따라서, 재조합 항체의 VH 및 VL 구역의 아미노산 서열은, 인간 생식세포 VH 및 VL 서열로부터 유도되고 이와 관련되지만 자연 상태에서는 생체 내에서 인간 항체 생식세포 레파토리 (repertoire) 내에 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
용어 "융합 단백질"은 본원에서 사용될 때 항체의 아미노산 서열 및 이종성 폴리펩티드 또는 단백질의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 나타내다 (즉, 폴리펩티드 또는 단백질은 정상적으로 항체의 일부가 아니다 (예를 들어, 비-항-hLIGHT 항원 항체)). 용어 hLIGHT 또는 항-hLIGHT 항체와 관련하여 사용될 때 "융합"은 펩티드 또는 폴리펩티드, 또는 그의 단편, 변이체 및/또는 유도체와 이종성 펩티드 또는 폴리펩티드의 연결을 의미한다. 바람직하게는, 융합 단백질은 hLIGHT 또는 항-hLIGHT 항체의 생물학적 활성을 보유한다. 특정 실시태양에서, 융합 단백질은 hLIGHT 항체 VH 도메인, VL 도메인, VH CDR (1, 2 또는 3개의 VH CDR), 및/또는 VL CDR (1, 2 또는 3개의 VL CDR)을 포함하고, 융합 단백질은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합한다.
항체에 대해 사용될 때 용어 "중쇄"는 중쇄 불변 도메인의 아미노산 서열을 기초로 하여 5개의 특유한 종류, 즉 알파 (α), 델타 (δ), 엡실론 (ε), 감마 (γ) 및 뮤 (μ)를 의미한다. 상기 특유한 종류의 중쇄는 잘 공지되어 있고, IgG의 4개의 서브클래스, 즉 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하여 항체의 5개의 클래스, 즉 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 형성한다. 바람직하게는, 중쇄는 인간 중쇄이다.
용어 "숙주"는 본원에서 사용될 때 동물, 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간을 나타낸다.
용어 "숙주 세포"는 본원에서 사용될 때 핵산 분자로 형질감염된 특정 대상 세포 및 상기 세포의 자손체 또는 잠재적인 자손체를 의미한다. 상기 세포의 자손체는 후속 세대에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경의 영향 또는 핵산 분자의 숙주 세포 게놈 내로의 통합 때문에 핵산 분자로 형질감염된 모 세포와 동일하지 않을 수 있다.
용어 "면역조정제" 및 면역조정제들을 포함하고 이로 제한되지 않는 변형 표현은 본원에서 사용될 때 숙주의 면역계를 조정하는 물질을 나타낸다. 특정 실시태양에서, 면역조정제는 면역억제제이다. 다른 특정 실시태양에서, 면역조정제는 면역자극제이다. 본 발명에 따르면, 본 발명의 조합 요법에 사용되는 면역조정제는 항-hLIGHT 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하지 않는다. 면역조정제는 소분자, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 융합 단백질, 항체, 무기 분자, 모방 물질 (mimetic agent), 및 유기 분자를 포함하고 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 다른 요법제 투여의 맥락에서 용어 "조합으로"는 2 이상의 요법제의 사용을 의미한다. 용어 "조합으로"의 사용이, 요법제가 감염된 대상에게 투여되는 순서를 제한하는 것은 아니다. 제1 요법제는 hLIGHT-매개 질병이 발병한 적이 있거나 발병된 상태이거나 발병에 취약한 대상에게 제2 요법제의 투여 전에 (예를 들어, 1분, 45분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주 또는 12주 전에), 투여와 동시에 또는 투여 후에 (예를 들어, 1분, 45분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 후에) 투여될 수 있다. 임의의 추가의 요법제가 다른 추가의 요법제와 함께 임의의 순서로 투여될 수 있다. 특정 실시태양에서, 본 발명의 항체는 하나 이상의 요법제 (예를 들어, hLIGHT-매개 질병의 예방, 치료, 관리 및/또는 개선을 위해 동시에 투여되는 본 발명의 항체가 아닌 요법제)와 조합 투여될 수 있다. 본 발명의 항체와 조합 투여될 수 있는 요법제의 비제한적인 예는 진통제, 마취제, 항생제, 또는 면역조정제 또는 미국 약전 (U.S. Pharmacopoeia) 및/또는 Physician's Desk Reference에 나열되어 있는 임의의 다른 물질을 포함한다.
본원에서 사용될 때 용어 "무기 염"은, 산 수소 또는 산의 일부 또는 전부를 금속 또는 금속처럼 작용하는 기로 치환함으로써 발생하고 생물학적 물질의 제약 조성물 및 제제 내의 긴장성 (tonicity) 조정 화합물로서 종종 사용되는, 탄소를 함유하지 않는 임의의 화합물을 의미한다. 가장 통상적인 무기 염은 NaCl, KCl, NaH2PO4 등이다.
"단리된" 또는 "정제된" 항체에는 항체가 유도되는 세포 또는 조직 공급원으로부터의 세포성 물질 또는 다른 오염 단백질이 실질적으로 존재하지 않거나, 또는 화학적으로 합성될 경우 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 존재하지 않는다. 용어 "세포성 물질이 실질적으로 존재하지 않는"은 그로부터 항체가 단리되는 세포의 세포성 성분으로부터 분리되거나 재조합 방식으로 생산된 항체의 제제를 포함한다. 따라서, 세포성 물질이 실질적으로 존재하지 않는 항체는 약 30%, 20%, 10%, 또는 5% 미만 (건조 중량 기준)의 이종성 단백질 (본원에서 "오염 단백질"로도 언급됨)을 갖는 항체의 제제를 포함한다. 항체가 재조합 방식으로 생산될 때, 배양 배지가 실질적으로 존재하지 않는 것이 또한 바람직하다. 즉, 배양 배지는 단백질 제제 부피의 약 20%, 10%, 또는 5% 미만을 나타낸다. 항체가 화학적 합성에 의해 생산될 때, 항체에 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 존재하지 않는 것이 바람직하다. 즉, 항체는 단백질 합성에 관련되는 화학적 전구체 또는 다른 화학물질로부터 분리된다. 따라서, 상기 항체 제제는 목적하는 항체 이외의 다른 화학적 전구체 또는 화합물을 약 30%, 20%, 10%, 5% 미만 (건조 중량 기준)으로 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 항체는 단리되거나 정제된 것이다.
"단리된" 핵산 분자는 핵산 분자의 천연 공급원에 존재하는 다른 핵산 분자로부터 분리된 것이다. 또한, "단리된" 핵산 분자, 예를 들어 cDNA 분자에는 재조합 기술에 의해 생산될 경우 다른 세포성 물질, 또는 배양 배지가 실질적으로 존재하지 않거나, 또는 화학적으로 합성될 때 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 존재하지 않을 수 있다. 특정 실시태양에서, 본 발명의 항체를 코딩하는 핵산 분자(들)는 단리되거나 정제된 것이다.
용어 "인간 LIGHT", "hLIGHT" 또는 "hLIGHT 폴리펩티드" 및 유사한 용어는 서열 52의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 ("폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 본원에서 상호교환가능하게 사용된다) 및 관련 폴리펩티드, 예를 들어 그의 SNP 변이체를 의미한다. 관련 폴리펩티드는 바람직하게는 hLIGHT 활성을 보유하고/하거나 항-hLIGHT 면역 반응을 생성시키기에 충분한 대립유전자 변이체 (예를 들어, SNP 변이체); 스플라이스 변이체; 단편; 유도체; 치환, 결손, 및 삽입 변이체; 융합 폴리펩티드; 및 종간 상동체를 포함한다. 예시적인 비-동의 (synonymous) SNP 변이체는 214E-32S (hLIGHT 폴리펩티드의 위치 214의 글루탐산 및 위치 32의 세린 (예를 들어, 서열 52에 제시된 hLIGHT 폴리펩티드)), 214K-32S, 214E-32L 및 214E-32L을 포함하는 hLIGHT 폴리펩티드를 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 또한, 항-hLIGHT 면역학적 반응을 생성시키기에 충분한 가용형의 hLIGHT (예를 들어, 서열 53 및 서열 54 참조)도 포함된다. 당업자가 이해할 바와 같이, 본 발명의 항-hLIGHT 항체는 hLIGHT 폴리펩티드, 폴리펩티드 단편, 항원, 및/또는 에피토프에 결합할 수 있고, 이것은 에피토프가 보다 큰 항원의 일부이고, 이 항원은 보다 큰 폴리펩티드 단편의 일부이고, 이 단편은 다시 보다 큰 폴리펩티드의 일부이기 때문이다. hLIGHT는 삼량체 (천연) 또는 단량체 (변성) 형으로 존재할 수 있다.
용어 "카바트 넘버링"은 당업계에서 승인되어 있고, 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 구역, 또는 그의 항원 결합 부분 내의 다른 아미노산 잔기보다 더 가변성 (즉, 초가변성)인 아미노산 잔기의 넘버링 시스템을 의미한다 ([Kabat et al. (1971) Ann. NY Acad. Sci. 190:382-391] 및 [Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242]). 중쇄 가변 구역에서, 초가변 구역은 전형적으로 CDR1에서 아미노산 위치 31 내지 35, CDR2에서 아미노산 위치 50 내지 65, 및 CDR3에서 아미노산 위치 95 내지 102에 해당한다. 경쇄 가변 구역의 경우, 초가변 구역은 전형적으로 CDR1에서 아미노산 위치 24 내지 34, CDR2에서 아미노산 위치 50 내지 56, 및 CDR3에서 아미노산 위치 89 내지 97에 해당한다.
항체와 관련하여 사용될 때, 용어 "경쇄"는 불변 도메인의 아미노산 서열을 기초로 하여 카파 (κ) 또는 람다 (λ)로 언급되는 2개의 특유한 종류를 의미한다. 경쇄 아미노산 서열은 당업계에 잘 공지되어 있다. 바람직한 실시태양에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "관리하다", "관리하는", 및 "관리"는 대상이 요법제 (예를 들어, 예방 또는 치료제)로부터 얻는, 감염을 치유하지는 않는 유익한 효과를 의미한다. 특정 실시태양에서, 질병의 진행 또는 악화를 방지하도록 hLIGHT-매개된 질병 (예를 들어, IBD 또는 GVHD), 그의 하나 이상의 증상을 "관리하기" 위해 대상에게 하나 이상의 요법제 (예를 들어, 예방 또는 치료제, 예를 들어 본 발명의 항체)를 투여한다.
용어 "모노클로날 항체"는 균일한 또는 실질적으로 균일한 항체 집단으로부터 얻은 항체를 의미하고, 각각의 모노클로날 항체는 전형적으로 항원 상의 단일 에피토프를 인식할 것이다. 바람직한 실시태양에서, 본원에서 사용되는 바와 같이 "모노클로날 항체"는 단일 하이브리도마 또는 다른 세포에 의해 생산된 항체이고, 상기 항체는 예를 들어 ELISA 또는 당업계에 공지되어 있거나 본원에 제시되는 실시예의 다른 항원 결합 또는 경쟁적 결합 분석에 의해 결정되는 바와 같이 hLIGHT 에피토프에만 면역특이적으로 결합한다. 용어 "모노클로날"은 항체를 제조하기 위한 임의의 특정 방법으로 제한되지 않는다. 예를 들어, 본 발명의 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al.; Nature, 256:495 (1975)]에 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조되거나 또는 예를 들어 본원에서 설명되는 기술을 사용하여 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 클로날 세포주 및 그에 의해 발현된 모노클로날 항체의 제조를 위한 다른 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다 (예를 들어, [Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York] 참조). 다른 모노클로날 항체를 생산하는 다른 예시적인 방법을 본원의 실시예에 제공한다.
생물학적 물질, 예를 들어 핵산 분자, 폴리펩티드, 숙주 세포 등과 관련하여 사용될 때 용어 "천연 발생" 또는 "천연"은 자연에서 발견되는 것으로서 인간에 의해 조작되지 않은 것을 의미한다.
용어 "제약상 허용되는"은 본원에서 사용될 때 미국 연방 또는 미국 주 정부의 감독 기관에 의해 승인되거나, 또는 미국 약전, 유럽 약전 또는 동물에서, 보다 특히 인간에서 사용하기 위한 일반적으로 인정되는 다른 약전에 나열되었음을 의미한다.
"폴리클로날 항체"는 본원에서 사용될 때 많은 에피토프를 갖는 단백질에 대한 면역원 반응에서 생성되는 항체 집단을 의미하고, 따라서 단백질 내의 동일한 및 상이한 에피토프에 대해 작용하는 다양한 상이한 항체를 포함한다. 폴리클로날 항체를 생산하는 방법은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, [Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York] 참조).
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "폴리뉴클레오티드", "뉴클레오티드", "핵산", "핵산 분자" 및 다른 유사한 용어는 상호 교환가능하게 사용되고, DNA, RNA, mRNA 등을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "예방하다", "예방하는" 및 "예방"은 본원에 제공된 요법제 또는 요법제 조합물 (예를 들어, 예방 또는 치료제, 예를 들어 본 발명의 항체의 조합물)의 투여에 의한, hLIGHT-매개 질병 및/또는 그와 관련된 증상의 발생, 재발, 발병 또는 확산의 완전한 또는 부분적인 억제를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "예방제"는 대상에서 hLIGHT-매개된 질병 및/또는 그와 관련된 증상의 발생, 재발, 발병 또는 확산을 완전히 또는 부분적으로 억제할 수 있는 임의의 물질을 나타낸다. 특정 실시태양에서, 용어 "예방제"는 본 발명의 항체를 나타낸다. 다른 특정 실시태양에서, 용어 "예방제"는 본 발명의 항체 이외의 다른 물질을 나타낸다. 바람직하게는, 예방제는 hLIGHT-매개 질병 및/또는 그와 관련된 증상을 예방하거나 또는 hLIGHT-매개 질병 및/또는 그와 관련된 증상의 발병, 발생, 진행 및/또는 심도를 지연시키기 위해 유용한 것으로 알려져 있거나, 사용되었거나, 현재 사용되고 있는 물질이다. 특정 실시태양에서, 예방제는 완전 인간 항-hLIGHT 항체, 예를 들어 완전 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체이다.
본 발명의 특정 실시태양에서, "예방 유효 혈청 역가"는 대상, 바람직하게는 인간에서 hLIGHT-매개 질병 및/또는 그와 관련된 증상의 발생, 재발, 발병 또는 확산을 완전히 또는 부분적으로 억제하는, 상기 대상에서의 혈청 역가이다.
용어 "hLIGHT 항원"은 항체가 면역특이적으로 결합하는 hLIGHT 폴리펩티드의 부분을 나타낸다. 또한, hLIGHT 항원은 항체가 면역특이적으로 결합하는 hLIGHT 폴리펩티드 또는 그의 단편의 유사체 또는 유도체를 나타낸다. 일부 실시태양에서, hLIGHT 항원은 단량체 hLIGHT 항원 또는 삼량체 hLIGHT 항원이다. 에피토프에 기여하는 hLIGHT 폴리펩티드의 구역은 폴리펩티드의 인접 아미노산일 수 있거나 또는 에피토프는 폴리펩티드의 2 이상의 비-인접 구역으로부터 함께 형성될 수 있다. 에피토프는 항원의 3차원 표면 특징부일 수 있거나 아닐 수 있다. 면역 반응을 일으킬 수 있는 hLIGHT 항원의 표면 상의 국소화된 구역이 hLIGHT 에피토프이다. 에피토프는 항원의 3차원 표면 특징부일 수 있거나 아닐 수 있다.
"hLIGHT-매개 질병" 및 "hLIGHT-매개 질환"은 상호교환가능하게 사용되고, 완전히 또는 부분적으로 hLIGHT에 의해 야기되거나 hLIGHT의 결과인 임의의 질병을 의미한다. 특정 실시태양에서, hLIGHT는 세포의 표면 상에 비정상적으로 (예를 들어, 고도로) 발현된다. 일부 실시태양에서, hLIGHT는 특정 세포 종류에서 비정상적으로 상향조절될 수 있다. 다른 실시태양에서, 정상적인, 비정상적인 또는 과도한 세포 신호전달은 hLIGHT 리간드에 대한 hLIGHT의 결합에 의해 야기된다. 특정 실시태양에서, hLIGHT 리간드는 예를 들어 세포, 예를 들어 대장 상피 세포의 표면 상에 발현되는 hLIGHT 수용체 (예를 들어, HVEM, LTβR, 또는 DCR3)이다. 특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병은 염증성 장 질환 (IBD), 예를 들어 크론병 (CD) 또는 궤양 대장염 (UC)이다. 다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병은 이식편 대 숙주 질병 (GVHD)이다.
"hLIGHT 리간드"는 hLIGHT와 결합하거나 달리 상호작용하는 분자를 의미한다. 바람직한 실시태양에서, hLIGHT 리간드는 hLIGHT 수용체이다.
용어 "hLIGHT 수용체" 또는 "hLIGHT 결합 수용체"는 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, hLIGHT에 결합하는 수용체 폴리펩티드를 의미한다. 특정 실시태양에서, hLIGHT 수용체는 HVEM, FcβR 또는 DcR3이다. 일부 실시태양에서, hLIGHT 수용체는 세포의 표면, 예를 들어 대장 상피 세포 상에서 발현된다.
용어 "사카라이드"는 본원에서 사용될 때 다가 알콜의 유도체인 분자의 클래스를 의미한다. 사카라이드는 탄수화물로서 일반적으로 칭하고, 상이한 양의 당 (사카라이드) 단위, 예를 들어, 단당류, 이당류 및 다당류를 포함할 수 있다.
용어 "혈청 역가"는 본원에서 사용될 때 적어도 10, 바람직하게는 적어도 20, 가장 바람직하게는 적어도 40 내지 약 100, 1000 또는 이를 초과하는 대상 집단에서의 평균 혈청 역가를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "부작용"은 요법제 (예를 들어, 예방 또는 치료제)의 원치 않는 및 유해한 효과를 포함한다. 원치 않는 효과가 반드시 유해한 것은 아니다. 요법제 (예를 들어, 예방 또는 치료제)의 유해한 효과는 유해하거나 불편하거나 위험한 것일 수 있다. 부작용의 예는 설사, 기침, 위장염, 천명, 오심, 구토, 식욕부진, 복부 경련, 열, 통증, 체중 감소, 탈수, 탈모, 호흡곤란, 불면, 현기증, 점막염, 신경 및 근육 효과, 피로, 구갈, 및 식욕 상실, 투여 부위의 발진 또는 팽윤, 독감 유사 증상, 예를 들어 열, 오한 및 피로, 소화관 장애 및 알레르기 반응을 포함한다. 환자가 경험하는 추가의 바람직하지 않은 효과는 많고, 당업계에 공지되어 있다. 많은 효과가 문헌 [Physician's Desk Reference (60th ed., 2006)]에 기재되어 있다.
용어 "소분자" 및 유사한 용어는 펩티드, 펩티드 모방체 (peptidomimetic), 아미노산, 아미노산 유사체, 폴리뉴클레오티드, 폴리뉴클레오티드 유사체, 뉴클레오티드, 뉴클레오티드 유사체, 분자량이 약 10,000 g/몰 미만인 유기 또는 무기 화합물 (즉, 이종유기 (heterorganic) 및 유기금속 (organometallic) 화합물 포함), 분자량이 약 5,000 g/몰 미만인 유기 또는 무기 화합물, 분자량이 약 1,000 g/몰 미만인 유기 또는 무기 화합물, 분자량이 약 500 g/몰 미만인 유기 또는 무기 화합물, 및 상기 화합물의 염, 에스테르, 및 다른 제약상 허용되는 형태를 포함하고, 이로 제한되지 않는다.
hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 액체 제제의 문맥에서 본원에서 사용될 때 용어 "안정성" 및 "안정한"은 주어진 제조, 조제, 수송 및 저장 조건 하에 열 및 화학적 비폴딩 (unfolding), 응집, 분해 또는 단편화에 대한 제제 내의 항체의 저항성을 의미한다. 본 발명의 "안정한" 제제는 주어진 제조, 조제, 수송 및 저장 조건 하에 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 또는 99.5% 이상의 생물학적 활성을 유지한다. 항체의 안정성은 참조 항체에 비해 감소된 모세관 겔 전기영동 (rCGE), 나트륨 도데실 술페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE) 및 HPSEC를 포함하여, 당업자에게 공지된 방법에 의한 응집, 분해 또는 단편화의 정도에 의해 평가될 수 있다. hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 제제의 전체 안정성은 hLIGHT의 특이적 에피토프를 사용하여, 예를 들어 ELISA 및 방사성 면역 분석을 포함하는 다양한 면역학적 분석에 의해 평가할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상" 및 "환자"는 상호교환가능하게 사용된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 대상은 바람직하게는 포유동물, 예를 들어 비-영장류 (예를 들어, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 등) 또는 영장류 (예를 들어, 원숭이 및 인간), 가장 바람직하게는 인간이다. 하나의 실시태양에서, 대상은 hLIGHT-매개 질병이 존재하는 포유동물, 바람직하게는 인간이다. 또다른 실시태양에서, 대상은 hLIGHT-매개 질병이 발생할 위험이 있는 포유동물, 바람직하게는 인간이다.
본원에서 사용될 때 "실질적으로 모든"은 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100%를 나타낸다.
용어 "계면활성제가 실질적으로 존재하지 않는"은 본원에서 사용될 때 hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체의 제제가 0.0005% 미만, 0.0003% 미만, 또는 0.0001% 미만의 계면활성제를 함유함을 나타낸다.
용어 "염이 실질적으로 존재하지 않는"은 본원에서 사용될 때 hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체의 제제가 0.0005% 미만, 0.0003% 미만, 또는 0.0001% 미만의 무기 염을 함유함을 나타낸다.
용어 "계면활성제"는 본원에서 사용될 때 양친매성 구조를 갖는 유기 물질을 의미한다. 즉, 계면활성제는 반대되는 용해도 경향을 갖는 기, 전형적으로 지용성 탄화수소 사슬 및 수용성 이온기로 이루어진다. 계면활성제는 표면-활성 모이어티의 전하에 따라 음이온성, 양이온성 및 비이온성 계면활성제로 분류될 수 있다. 계면활성제는 종종 생물학적 물질의 다양한 제약 조성물 및 제제의 습윤제, 유화제, 가용화제, 및 분산제로서 사용된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "태그"는 예를 들어 폴리펩티드 및/또는 hLIGHT 또는 hLIGHT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 부착된 임의의 종류의 모이어티를 나타낸다. 예를 들어, hLIGHT, hLIGHT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 예를 들어 검출가능한 모이어티 또는 친화도 정제를 돕는 모이어티를 코딩하는 하나 이상의 추가의 태그-코딩 뉴클레오티드 서열을 함유할 수 있다. 번역될 때, 태그 및 항체는 융합 단백질의 형태일 수 있다. 태그와 관련하여 용어 "검출가능한" 또는 "검출"은 임의의 태그가 가시화될 수 있거나 태그의 존재를 다른 방식으로 결정 및/또는 측정 (예를 들어, 정량화)할 수 있음을 나타낸다. 검출가능한 태그의 비제한적인 예는 형광 태그이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료제"는 hLIGHT-매개 질병 및/또는 그와 관련된 증상의 치료, 관리 또는 개선에 사용될 수 있는 임의의 물질을 나타낸다. 특정 실시태양에서, 용어 "치료제"는 본 발명의 항체를 의미한다. 다른 특정 실시태양에서, 용어 "치료제"는 본 발명의 항체 이외의 다른 물질을 나타낸다. 바람직하게는, 치료제는 hLIGHT-매개된 질병 또는 그와 관련된 하나 이상의 증상의 치료, 관리 또는 개선을 위해 유용한 것으로 공지되거나, 사용되었거나, 현재 사용되고 있는 물질이다. 특정 실시태양에서, 치료제는 완전 인간 항-hLIGHT 항체, 예를 들어 완전 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체이다.
요법제들의 조합물 (예를 들어, 예방 또는 치료제의 사용)은 임의의 2 이상의 단일 요법제의 상가적 효과보다 더 효과적이다. 예를 들어, 예방 및/또는 치료제의 조합물의 상승 효과는 hLIGHT-매개 질병이 존재하는 대상에 대한 하나 이상의 물질의 보다 낮은 투여량의 사용 및/또는 상기 물질의 보다 적은 투여 횟수를 허용한다. 예방 또는 치료 요법제의 보다 낮은 투여량의 이용 및/또는 상기 요법제의 보다 적은 투여 횟수는 hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 또는 개선시에 상기 요법제의 효능을 감소시키지 않으면서, 대상에 대한 상기 요법제의 투여와 관련된 독성을 감소시킨다. 또한, 상승 효과는 hLIGHT-매개 질병의 예방에서, 또는 관리, 치료 또는 개선에서 요법제의 효능을 개선할 수 있다. 마지막으로, 요법제 (예를 들어, 예방 또는 치료제)의 조합물의 상승 효과는 임의의 단일 요법의 사용과 관련된 유해하거나 원치 않는 부작용을 방지하거나 감소시킬 수 있다.
본 발명의 특정 실시태양에서, "치료 유효 혈청 역가"는 대상, 바람직하게는 인간에서 hLIGHT-매개 질병과 연관된 심도, 지속시간 및/또는 증상을 감소시키는, 상기 대상에서의 혈청 역가이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "요법"은 hLIGHT-매개 질병 (예를 들어, IBD 또는 GVHD)의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용될 수 있는 임의의 프로토콜, 방법 및/또는 물질을 의미한다. 특정 실시태양에서, 용어 "요법(들)"은 생물학적 요법, 지지 요법, 및/또는 당업자, 예를 들어 의료인에게 공지된, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 유용한 다른 요법을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 하나 이상의 요법제의 투여 (하나 이상의 예방 또는 치료제, 예를 들어 본 발명의 항체의 투여를 포함하고 이로 제한되지 않음)에 의한 hLIGHT-매개 질병 (예를 들어, IBD 또는 GVHD)의 진행, 심도, 및/또는 지속시간의 감소 또는 개선을 의미한다. 특정 실시태양에서, 상기 용어는 HVEM에 대한 hLIGHT의 결합의 감소 또는 억제, LTβR에 대한 hLIGHT의 결합의 감소 또는 억제, DcR3에 대한 hLIGHT의 결합의 감소 또는 억제, 대상의 hLIGHT 수용체를 발현하는 세포로부터 CCL20의 생산 또는 분비의 감소 또는 억제, 대상의 hLIGHT 수용체를 발현하는 세포로부터 IL-8의 생산 또는 분비의 감소 또는 억제, 대상의 hLIGHT 수용체를 발현하는 세포로부터 RANTES의 생산 또는 분비의 감소 또는 억제, 및/또는 hLIGHT-매개 질병, 예를 들어 IBD 또는 GVHD와 연관된 하나 이상의 증상의 억제 또는 감소를 의미한다. 특정 실시태양에서, 예방제는 완전 인간 항-hLIGHT 항체, 예를 들어 완전 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체이다.
용어 "가변 구역" 또는 "가변 도메인"은 경쇄 및 중쇄의 일부, 전형적으로 중쇄의 대략 아미노-말단의 120 내지 130개 아미노산 및 경쇄의 약 100 내지 110개 아미노산을 의미하고, 이것은 항체 사이에서 그 서열이 크게 상이하고, 그의 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 이용된다. 서열의 가변성은 상보성 결정 구역 (CDR)로 불리는 구역에 집중되고, 가변 도메인 내의 보다 고도로 보존된 구역은 프레임워크 구역 (FR)으로 불린다. 경쇄 및 중쇄의 CDR은 주로 항체와 항원의 상호작용을 책임진다. 본원에서 사용되는 아미노산 위치의 넘버링은 문헌 [Kabat et al. (1991) Sequences of proteins of immunological interest. (U.S. Department of Health and Human Services, Washington, D. C.) 5th ed. ("카바트 등")]에 기재된 바와 같은 EU 인덱스 (Index)에 따른다. 바람직한 실시태양에서, 가변 구역은 인간 가변 구역이다.
용어 "변이체"는 hLIGHT 또는 hLIGHT 항체와 관련하여 사용될 때 천연 또는 비변형된 서열에 비해 하나 이상 (예를 들어, 약 1 내지 약 25, 약 1 내지 약 20, 및 바람직하게는 약 1 내지 약 15, 보다 바람직하게는 약 1 내지 약 10, 가장 바람직하게는 약 1 내지 약 5개)의 아미노산 서열 치환, 결손, 및/또는 부가를 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드를 의미한다. 예를 들어, hLIGHT 변이체는 천연 hLIGHT의 아미노산 서열의 하나 이상 (예를 들어, 약 1 내지 약 25, 약 1 내지 약 20, 및 바람직하게는 약 1 내지 약 15, 가장 바람직하게는 약 1 내지 약 10, 가장 바람직하게는 약 1 내지 약 5개)의 변화에 의해 발생할 수 있다. 또한, 예로서, 항-hLIGHT 항체의 변이체는 천연 또는 사전에 변형되지 않은 항-hLIGHT 항체의 아미노산 서열의 하나 이상 (예를 들어, 약 1 내지 약 25, 약 1 내지 약 20, 및 바람직하게는 약 1 내지 약 15, 보다 바람직하게는 약 1 내지 약 10, 가장 바람직하게는 약 1 내지 약 5개)의 변화에 의해 발생할 수 있다. 변이체는 천연 발생 변이체, 예를 들어 대립유전자 또는 스플라이스 변이체일 수 있거나, 또는 인공적으로 제조할 수 있다. 폴리펩티드 변이체는 상기 변이체를 코딩하는 상응하는 핵산 분자로부터 제조될 수 있다. 바람직한 실시태양에서, hLIGHT 변이체 또는 hLIGHT 항체 변이체는 각각 hLIGHT 또는 hLIGHT 항체의 기능적 활성을 보유한다. 특정 실시태양에서, hLIGHT 항체 변이체는 hLIGHT에 면역특이적으로 결합하고/하거나 hLIGHT 활성에 대해 길항성이다. 특정 실시태양에서, 변이체는 hLIGHT의 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) 변이체에 의해 코딩된다. hLIGHT의 예시적인 SNP 변이체는 아미노산 위치 214에서 글루탐산 (E) 또는 라이신 (K)을 코딩한다. hLIGHT의 다른 예시적인 SNP 변이체는 아미노산 위치 32에서 세린 (S) 또는 류신 (L)을 코딩한다.
도 1A-1B는 인간 항-hLIGHT 항체를 사용한, 내인성으로 발현된 hLIGHT의 세포 측정 분석을 도시한 것이다. (A) 인간 T 세포주 II23.D7을 PMA 및 이노노마이신으로 밤새 활성화시키고, 다양한 항-hLIGHT 항체와 조합하여 활성화 마커 CD69에 대해 염색하였다. CD69 양성 세포를 게이팅 (gating)하고, 대조 인간 항-인플루엔자 IgG1 (점선)에 비해 hLIGHT 염색 (굵은 선), 또는 항-hLIGHT 항체를 사용한 비-활성화된 II23.D7 세포의 염색 (회색선)에 대해 분석하였다. 결합은 염소 항-인간 IgG-APC 2차 항체를 사용하여 검출하였다. (B) 인간 항-hLIGHT 항체를 사용한 활성화된 인간 T 세포주 II-23.D7의 염색은 포화가능하다. 활성화된 II-23.D7 세포를 인간 항-hLIGHT 항체로 다양한 농도에서 표지하고, 항-인간 IgG-APC로 검출하였다. 기하 평균 형광 강도 데이타의 플롯을 비-선형 회귀와 함께 도시한다.
도 2A-2B는 인간 항-hLIGHT 항체를 사용한 EL4-hLIGHT 세포주 상의 재조합 hLIGHT의 염색을 도시한 것이다. (A) 및 (B)에서, 차등 (graded) 양의 항-hLIGHT 항체를 사용하여 EL4-hLIGHT 세포를 염색하고, 항-인간 IgG-APC를 사용하여 검출하고, 유동 세포 분석 (flow cytometry)에 의해 분석하였다. 기하 평균 형광 강도 (MFI)를 결정하고, 비-선형 회귀 분석을 적용하였다. 모든 실험에서, 인간 항-인플루엔자 단백질 M2를 음성 대조군으로서 사용하였다. 상기 분석으로부터 얻은 데이타를 도 3에 나타낸다.
도 3은 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체의 특징을 도시한 것이다.
도 4는 ELISA에 의한 항체 교차-차단을 도시한 것이다. 상기 분석은 ELISA에 의해 hLIGHT에 대한 결합에 대한 경쟁에 기초하여 2개의 군을 규정한다. 개별 항체를 96 웰 플레이트의 웰 내에 코팅하였다. 가용형 FLAG-hLIGHT를 가용형 항-hLIGHT 항체와 함께 예비-인큐베이팅한 후, 코팅된 웰에 첨가하였다. 코팅된 항체에 대한 FLAG-hLIGHT의 결합을 항-FLAG IgG-HRP를 사용하여 검출하였다. 다음 식에서 각각의 샘플의 OD를 사용하여 % 억제를 결정하였다: % 억제 = (최대치 - 샘플/최대치 x 100.
도 5A-5B는 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체에 의한 세포 표면 상의 천연 hLIGHT에 대한 인간 HVEM:Fc 결합의 차단을 도시한 것이다. (A) 및 (B)에서, 차등 양의 항체를 EL4-hLIGHT 세포와 함께 인큐베이팅하고, 비오티닐화 인간 HVEM:Fc를 포화 미만 (sub-saturating) 농도로 첨가하고, SA-APC를 사용하여 검출하였다. (A)에 도시된 바와 같이, 인간 항-인플루엔자 M2 항체를 대조군으로서 사용하였다.
도 6A-6B는 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체에 의한 세포 표면 상의 천연 hLIGHT에 대한 인간 LTβR:Fc 결합의 차단을 도시한 것이다. (A)-(B)에서, 차등 양의 항체를 EL4-hLIGHT 세포와 함께 인큐베이팅하고, 폴리His 태깅된 인간 LTβR:Fc를 포화 미만 농도로 첨가하고, 항-His-APC를 사용하여 검출하였다. (A)에 도시된 바와 같이, 인간 항-인플루엔자 M2 항체를 대조군으로서 사용하였다.
도 7은 인간 대장 상피 세포로부터 hLIGHT-매개 CCL20 분비를 도시한 것이다. 재조합 가용형 hLIGHT를 HT29.14s 세포의 성장 배지에 증가하는 농도로 첨가하였다. 성장 배지를 처리 3일 후에 수거하고, CCL20의 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. 오류 막대 (error bar)는 2개의 독립적인 처리를 나타낸다.
도 8은 인간 대장 상피 세포로부터 hLIGHT-매개 IL-8 및 RANTES 분비를 도시한 것이다. 재조합 가용형 hLIGHT, TNF, LTα1β2 및 FLAG-BAP (음성 대조군으로서)를 HT29.14s 세포의 성장 배지에 첨가하였다. 성장 배지를 처리 1, 2 및 3일 후에 상이한 웰로부터 수거하였다. IL-8 및 RANTES의 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. FLAG 태깅된 세균 알칼린 포스파타제 (FLAG-BAP)를 태깅된 무관련 단백질 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 9A-9B는 인간 항-hLIGHT 항체가 인간 대장 상피 세포로부터 hLIGHT-매개된 CCL20 분비를 억제하는 것을 보여준다. (A) 재조합 가용형 hLIGHT (1 ㎍/ml)를 항-hLIGHT 항체와 함께 예비-인큐베이팅하고, HT29.14s 세포의 성장 배지에 첨가하였다. 성장 배지를 제3일에 각각의 처리로부터 2개의 웰로부터 수거하였다. CCL20의 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. 배지 단독, 가용형 hLIGHT 단독, 항-인플루엔자 M2 항체와 함께 인큐베이팅한 가용형 hLIGHT, 및 각각의 항-hLIGHT 항체 단독을 대조군으로서 포함시켰다. (B) 패널 A에 나타낸 데이타의 비-선형 회귀 분석.
도 10A-10B는 인간 항-hLIGHT 항체가 인간 대장 상피 세포로부터 세포 표면-발현된 hLIGHT-매개된 RANTES 분비를 억제하는 것을 보여준다. (A) 고정된 EL4-hLIGHT 세포를 항-hLIGHT 항체와 함께 예비-인큐베이팅하고, HT29.14s 세포의 성장 배지에 첨가하였다. 성장 배지를 제3일에 각각의 처리에 대해 2개의 웰로부터 수거하였다. RANTES의 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. 배지 단독, EL4-hLIGHT 세포 단독, 가용형 hLIGHT 단독, 및 각각의 항-hLIGHT 항체 단독을 대조군으로서 포함시켰다. (B) (A)에 제시된 데이타의 플롯.
도 11은 hLIGHT에 대한 결합에 대한 경쟁적 차단 실험의 결과를 도시한 것이다.
도 12는 293 hLIGHT 세포에 대한 HVEM:Fc 결합에 대한 항체의 차단 활성을 도시한 것이다. E1, E13, F19 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체, R&D mAb, 및 상업적으로 입수가능한 염소 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 (알&디 시스템즈 (R&D Systems)), 및 토끼 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 (이바이오사이언스 (eBioscience))를 hLIGHT를 발현하는 293 세포에 대한 HVEM:Fc의 결합을 차단하는 그들의 능력에 대해 시험하였다.
도 13은 293 hLIGHT 세포에 대한 LTβR:Fc 결합에 대한 항체의 차단 활성을 도시한 것이다. E1 및 E13 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체, R&D mAb, 및 상업적으로 입수가능한 염소 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 (알&디 시스템즈), 및 토끼 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 (이바이오사이언스)를 hLIGHT를 발현하는 293 세포에 대한 LTβR:Fc의 결합을 차단하는 그들의 능력에 대해 시험하였다.
도 14는 293 hLIGHT 세포에 대한 (A) LTβR:Fc 및 (B) HVEM:Fc 결합에 대한 항체의 차단 활성을 도시한 것이고, 도 12 및 13에 도시된 데이타의 그래프이다.
도 15A-15B는 천연 또는 변성 가용형 hLIGHT에 대한 다양한 항-hLIGHT 항체의 결합을 도시한 것이다. 5 ㎍의 가용형 인간 LIGHT를 2 x SDS 샘플 버퍼 내에서 끓이거나 (변성), 비처리한 (천연) 후, 둘 모두를 6x 증분으로 연속 희석하였다. 5 ㎕의 각각의 hLIGHT 희석액을 8 멀티-채널 피펫을 사용하여 수화된 0.2 ㎛ PVDF막 (인비트로겐 (Invitrogen, 미국 캘리포니아주 칼스바드)) 상으로 동시에 스폿팅하였다. 블롯을 공기 건조시킨 후 재수화하고, 차단하였다 (1 x TBST (Tris-완충 염수 Tween-20) + 2.5% 탈지유 + 0.02% 나트륨 아지드). 각각의 블롯을 5 ㎍/ml의 각각의 1차 항체로 프로빙하였다. 블롯을 1x TBST 내에서 3x, 이후 비오티닐화 2차 Ab (비오틴-염소 α인간 (벡터 랩스 (Vector Labs, 미국 캘리포니아주 벌링게임)), 비오틴-염소 α마우스 (잭슨 랩스 (Jackson labs, 미국 메인주 바 하버)), 비오틴-마우스 α염소 (시그마-알드리치 코프. (Sigma-Aldrich corp., 미국 미주리주 세이트 루이스)) 내에서 5 ㎍/ml로 세척하였다. 블롯을 1x TBST 내에서 3x, 이후 수퍼 SA-HRP (아머샴 바이오사이언시즈 (Amersham Biosciences, 미국 뉴저지주 피츠카타웨이))에서 세척하였다. 화학발광을 ECL 검출 키트 (아머샴 바이오사이언시즈)를 사용하는 검출을 위해 사용하였고, 신호는 X-OMAT AR 영상화 필름 (코닥 (Kodak, 미국 뉴욕주 로체스터))에 노출시켜 가시화하였다. (A) E1, E13, E63, F19, F23 인간 항-hLIGHT mAb, 또는 알&디 시스템즈 ("R&D 마우스 mAb") 및 압노바 (Abnova) ("압노바 마우스 mAb")로부터 상업적으로 입수가능한 2개의 쥐 항-hLIGHT 모노클로날 항체를 사용하는 도트 블롯 결과. 항-M2 (무관련 항원) 항체를 음성 대조군으로서 사용하였다. (B) 시판 염소 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 제제 (알&디 시스템즈 "R&D 염소 pAb") 또는 2개의 시판 토끼 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 제제 (이바이오사이언스 ("이바이오사이언스 토끼 pAb") 및 페프로테크 (Peprotech) ("페프로테크 토끼 pAb"))를 사용하는 도트 블롯 결과.
도 16은 천연 또는 변성 가용형 hLIGHT에 대한 다양한 항-hLIGHT 항체의 결합을 도시한 것이고, 도 15에 제시된 데이타를 표 형태로 요약한다.
도 17은 본 발명의 인간 항-LIGHT 항체가 인간 대장 상피 세포로부터 hLIGHT-매개된 CCL20 분비를 억제하는 반면, 상업적으로 입수가능한 마우스 항-hLIGHT 항체는 그렇지 않음을 보여준다. 재조합 가용형 인간 LIGHT (1 ㎍/ml)를 항-LIGHT 항체와 함께 예비-인큐베이팅하고, HT29.14s 세포의 성장 배지에 첨가하였다. 성장 배지를 제3일에 각각의 처리로부터 2개의 웰로부터 수거하였다. CCL20의 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. 배지 단독, 가용형 LIGHT 단독, 항-인플루엔자 M2 항체와 함께 인큐베이팅한 가용형 LIGHT, 비-차단 항-LIGHT Ab B12 및 각각의 항-LIGHT 항체 단독을 대조군으로서 포함시켰다. E1 및 F19는 각각의 교차-차단 에피토프기를 대표한다.
도 18은 본 발명의 인간 항-LIGHT 항체는 인간 대장 상피 세포로부터 hLIGHT-매개된 RANTES 분비를 억제하는 반면, 상업적으로 입수가능한 마우스 항-hLIGHT 항체는 그렇지 않음을 보여준다. 재조합 가용형 인간 LIGHT (1 ㎍/ml)를 항-LIGHT 항체와 함께 예비-인큐베이팅하고, HT29.14s 세포의 성장 배지에 첨가하였다. 성장 배지를 제3일에 각각의 처리로부터 2개의 웰로부터 수거하였다. RANTES의 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. 배지 단독, 가용형 LIGHT 단독, 항-인플루엔자 M2 항체와 함께 인큐베이팅한 가용형 LIGHT, 비-차단 항-LIGHT Ab B12 및 각각의 항-LIGHT 항체 단독을 대조군으로서 포함시켰다. E1 및 F19는 각각의 교차-차단 에피토프기를 대표한다.
도 19A-19B는 그들의 재조합 단일 카파쇄 항체 대응물에 비교한 인간 (A) E1 또는 (B) F19 항-hLIGHT 항체에 의한 세포 표면-발현된 hLIGHT 결합의 세포 측정 분석을 도시한 것이다. 안정한 hLIGHT 발현 293 세포를 증가하는 양의 범례에 표시된 항-LIGHT 항체와 함께 인큐베이팅하였다. 결합을 염소 항-인간 IgG-APC 2차 항체를 사용하여 검출하였다. 항체는 하이브리도마 배양액, 또는 중쇄 유전자와 쌍을 이룬 상이한 카파쇄 cDNA를 코딩하는 포유동물 발현 벡터로 일시적으로 형질감염시킨 293F 세포로부터 정제하였다. 기하 평균 형광 강도 데이타의 플롯을 비-선형 회귀와 함께 도시한다.
도 20은 단일 카파쇄 항체를 그들의 모 대응물에 대해 비교하는 ELISA에 의한 항체 교차-차단을 도시한 것이다. 상기 분석은 ELISA에 의해 hLIGHT에 결합에 대한 경쟁에 기초하여 2개의 군을 규정한다. 개별 항체를 96 웰 플레이트의 웰 내에 코팅하였다. 가용형 FLAG-hLIGHT를 가용형 항-hLIGHT 항체와 함께 예비-인큐베이팅한 후, 코팅된 웰에 첨가하였다. 코팅된 항체에 대한 FLAG-hLIGHT의 결합은 항-FLAG IgG-HRP를 사용하여 검출하였다. % 억제는 다음 식에서 각각의 샘플의 OD를 사용하여 결정하였다: % 억제 = (최대치 - 샘플/최대치) x 100.
도 21A-21B는 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체 및 그들의 단일 카파쇄 재조합 대응물에 의한 세포 표면 상의 천연 hLIGHT에 대한 (A) 인간 HVEM:Fc 또는 (B) 인간 LTβR:Fc 결합의 차단을 도시한 것이다. 차등 양의 항체를 EL4-hLIGHT 세포와 함께 인큐베이팅하고, 비오티닐화 인간 HVEM:Fc 또는 폴리His 표지된 인간 LTβR:Fc를 포화 미만 농도로 첨가한 후, SA-APC 또는 항-His-APC를 사용하여 검출하였다. 항체는 하이브리도마 배양액, 또는 중쇄 유전자와 쌍을 이룬 상이한 카파쇄 cDNA를 코딩하는 포유동물 발현 벡터로 일시적으로 형질감염시킨 293F 세포로부터 정제하였다.
도 22는 모 하이브리도마 생산된 항체에 비해 재조합 단일 카파쇄 인간 항-LIGHT 항체에 의한 인간 대장 상피 세포로부터 hLIGHT-매개된 CCL20 분비의 억제를 도시한 것이다. 재조합 가용형 인간 LIGHT (1 ㎍/ml)를 항-LIGHT 항체와 함께 예비-인큐베이팅하고, HT29.14s 세포의 성장 배지에 첨가하였다. 성장 배지를 제3일에 각각의 처리로부터 2개의 웰로부터 수거하였다. CCL20의 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. 배지 단독, 가용형 LIGHT 단독 (SHL), 항-인플루엔자 M2 항체와 함께 인큐베이팅한 가용형 LIGHT, 또는 가용형 LIGHT의 부재 하에 각각의 항체를 대조군으로서 포함시켰다. "E1k2"로서 칭하는 항체는 E1카파(B)를 포함하고, "F19k2"는 F19카파(B)를 포함한다.
도 23은 본 발명의 인간 항-LIGHT 항체가 인간 대장 상피 세포로부터 LIGHT-매개된 CCL20 분비를 억제하는 한편, 상업적으로 입수가능한 마우스 항-hLIGHT 항체는 억제하지 않거나 (압노바), 매우 높은 농도 (100 ㎍/ml)에서만 억제하는 (R&D) 것을 보여준다. 재조합 가용형 인간 LIGHT (1 ㎍/ml)를 항-LIGHT 항체와 함께 예비-인큐베이팅하고, HT29.14s 세포의 성장 배지에 첨가하였다. 성장 배지를 제3일에 각각의 처리로부터 2개의 웰로부터 수거하였다. CCL20의 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. 배지 단독, 가용형 LIGHT 단독 (SHL), 무관련 항-인플루엔자 M2 항체와 함께 인큐베이팅한 가용형 LIGHT, 항 인간 혈청 알부민, 또는 가용형 LIGHT의 부재 하에 각각의 항체를 대조군으로서 포함시켰다. E1 및 F19는 각각의 교차-차단 에피토프기를 대표한다.
도 24A-24B는 다양한 민족 집단에 걸쳐 (A) 아미노산 위치 214에서 글루탐산 (E) 또는 라이신 (K)를 코딩하는; 또는 (B) 아미노산 위치 32에서 류신 (L) 또는 세린 (S)를 코딩하는 특정 비-동의 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) hLIGHT 변이체의 대립유전자 빈도를 도시한 것이다.
도 25A-25D. 도 25A-25C는 인간 항-hLIGHT 항체 124F23 및 124E1카파(B)를 사용한, 인간 LIGHT의 비-동의 SNP 변이체를 발현하는 세포주의 염색의 용량 적정을 도시한 것이다. 차등 양의 항-hLIGHT 항체를 사용하여, SNP 변이체 (A) 214E-32S, (B) 214K-32S, 또는 (C) 214E-32L을 발현하는 EL4-hLIGHT 세포를 염색하고, 항-인간 IgG-APC를 사용하여 검출하고, 유동 세포 분석에 의해 분석하였다. (D)는 도 5에서와 같이 수행된 세포 표면-발현된 214K-32S LIGHT SNP 변이체에 대한 인간 HVEM:Fc (사각형) 또는 LTβR:Fc (삼각형) 결합의 인간 항-LIGHT 항체-매개된 차단의 용량 적정을 도시한 것이다. (A)-(D)에 대해, 기하 평균 형광 강도 (MFI)를 결정하고, 비-선형 회귀 분석을 적용하였다.
도 26A-26B는 인간 항-hLIGHT 항체를 사용하여 비-동의 SNP 변이체를 발현하는 세포주의 유동 세포 분석을 도시한 것이다. (A) EL4-LIGHT SNP 214E 세포주 및 (B) EL4 SNP 214K 세포주를 하나의 농도 (10 ㎍/ml)의 각각의 항-hLIGHT 항체로 염색하였다. 결합을 염소 항-인간 IgG-APC 2차 항체를 사용하여 검출하였다. 이소형 대조 인간 IgG를 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 27은 인간 대장 상피 세포로부터 세포 표면-발현된 hLIGHT SNP 변이체-매개된 RANTES 분비의 인간 항-hLIGHT 항체 억제를 도시한 것이다. 재조합 가용형 hLIGHT (SHL) (1 ㎍/ml) 또는 5x105 EL4-hLIGHT 214K 또는 214E SNP 변이체 세포를 항-hLIGHT 항체와 함께 예비-인큐베이팅하고, HT29.14s 세포의 성장 배지에 첨가하였다. 성장 배지를 제3일에 각각의 처리로부터 2개의 웰로부터 수거하였다. RANTES의 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. 배지 단독, EL4-hLIGHT 세포 단독, 가용형 hLIGHT 단독 및 각각의 항-hLIGHT 항체 단독을 대조군으로서 포함시켰다.
도 28은 급성 이종발생성 (xenogeneic) GVHD 모델의 개략도이다. SCID 마우스에게 IL2Rβ 항체 (TM-β1)을 제-2일에 주사하여 NK 세포를 고갈시켰다. 제-1일에, 마우스에게 2.5 Gy의 치사 미만 방사선을 조사하였다. 제0일에, 마우스에게 107개의 인간 PBMC를 복강내 주사에 의해 투여하고, 바로 직후에 인간 항-인간 LIGHT 또는 음성 대조군 항체를 정맥내 주사하였다. 마우스를 3-4일 간격으로 체중을 재고, 제12일에 마우스를 희생시키고, 육안 (gross) 병리학에 대해 평가하였다. 유동 세포 분석을 위해 비장을 제거하고, 조직학을 위해 맹장을 제거하고, 시토킨 및 항체 분석을 위해 혈청을 모은다.
도 29는 쥐 급성 이종발생성 GVHD 질병 모델에서 관찰된 육안 병리학 스코어를 도시한 것이다. 모노클로날 항체 주사 미실시 (원), 124F23 항-hLIGHT 모노클로날 항체 주사 (삼각형) 및 대조 인간 IgG1 모노클로날 항체 (사각형)에 대한 병리학 스코어를 나타내다. 스코어 0, 1, 2 또는 3 (각각 없음, 경증, 중등도 또는 중증)을 각각의 3개의 카테고리: 설사, 복막 염증/복수, 및 장 염증에 대해 할당하였다 (최대 총 스코어 9).
도 30은 쥐 급성 이종발생성 GVHD 질병 모델에서 관찰된 조직병리학 스코어를 도시한 것이다. MAb 주사 미실시 (원), 124F23 항-hLIGHT MAb 주사 (삼각형) 및 대조 hIgG1 MAb (사각형)에 대한 병리학 스코어를 나타낸다. 스코어 0, 1, 2, 또는 3 (각각 없음, 경증, 중등도 또는 중증)을 각각의 4개의 카테고리: 염증 심도, 염증 정도, 융모 손상/위축, 및 % 침습 (involvement)에 대해 할당하였다 (최대 총 스코어 12).
도 31A-31B는 GVHD 연구에서 마우스 맹장의 조직학적 헤마톡실린 및 에오신 (H&E) 염색된 절편을 도시한 것이다. (A) 항-LIGHT MAb 처리된 마우스 맹장 절편 및 (B) 대조 인간 IgG 처리된 마우스. 점막하층의 퇴화는 복수를 나타내고, 점 화살표는 혈액의 구역을 나타내고, 화살표는 림프구 침윤의 구역을 나타낸다.
도 32는 이종발생성 GVHD 연구 내에서 마우스의 비장 내의 총 T 세포 수를 도시한 것이다. 별표는 항-LIGHT MAb 처리된 동물 및 대조군 사이의 비교를 위한 0.05의 스튜던트 (student) t-테스트 값을 나타낸다.
hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 본원에서 제공한다. hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 코딩하는 단리된 핵산을 또한 제공한다. hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주 세포를 추가로 제공한다. hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 제조 방법을 또한 제공한다. hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 투여하는 것을 포함하는, hLIGHT-매개 질병을 치료하거나 관리하는 방법을 또한 본원에서 제공한다.
항체
본 발명의 항체는 합성 항체, 모노클로날 항체, 재조합 방식으로 생산된 항체, 다중특이적 항체 (이중-특이적 항체 포함), 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 내부체, 단일쇄 Fvs (scFv) (예를 들어, 일특이적, 이중특이적 등 포함), 낙타화 항체, Fab 단편, F(ab') 단편, 디술피드-결합된 Fvs (sdFv), 항-개별특이형 (항-Id) 항체, 및 상기한 것 중 임의의 것의 에피토프-결합 단편을 포함하고 이로 제한되지 않는다.
특히, 본원에서 제공되는 항체는 면역글로불린 분자, 및 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉, 분자 hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 포함한다. 본원에서 제공되는 면역글로불린 분자는 임의의 종류 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 클래스 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 서브클래스의 면역글로불린 분자일 수 있다. 특정 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체는 IgG 항체, 바람직하게는 IgG1 또는 IgG4 항체이다.
항체의 변이체 및 유도체는 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체 단편을 포함한다. 바람직한 단편은 Fab 단편 (항원 결합 도메인을 함유하고, 경쇄 및 디술피드 결합에 의해 가교된 중쇄의 일부를 포함하는 항체 단편); Fab' (Fab 및 힌지 구역을 통해 중쇄의 추가의 부분을 포함하는 단일 항-결합 도메인을 함유하는 항체 단편); F(ab')2 (중쇄의 힌지 구역에서 사슬내 디술피드 결합에 의해 연결된 2개의 Fab' 분자; Fab' 분자는 동일하거나 상이한 에피토프에 대해 지향될 수 있다); 이중특이적 Fab (각각 상이한 에피토프에 대해 지향될 수 있는 2개의 항원 결합 도메인을 갖는 Fab 분자); sFv로서도 공지된 가변 구역을 포함하는 단일쇄 Fab 사슬 (10-25개 아미노산의 사슬에 의해 함께 연결된 항체의 단일 경쇄 및 중쇄의 가변, 항원 결합 결정 구역); 디술피드-결합된 Fv, 또는 dsFv (디술피드 결합에 의해 연결된 항체의 단일 경쇄 및 중쇄의 가변, 항원 결합 결정 구역); 낙타화 VH (VH 계면 (interface)에서 일부 아미노산이 천연 발생 낙타 항체의 중쇄에서 발견되는 것인, 항체의 단일 중쇄의 가변, 항원 결합 결정 구역); 이중특이적 sFv (각각 상이한 에피토프에 대해 지향될 수 있는 2개의 항원 결합 도메인을 갖는 sFv 또는 dsFv 분자); 디아바디 (diabody) (제1 sFv의 VH 도메인이 제2 sFv의 VL 도메인과 조립하고, 제1 sFv의 VL 도메인이 제2 sFv의 VH 도메인과 조립할 때 형성된 이량체화 sFv; 디아바디의 2개의 항원 결합 구역은 동일하거나 상이한 에피토프에 대해 지향될 수 있다); 및 트라아바디 (triabody) (디아바디와 유사한 방식으로 형성되지만, 3개의 항원 결합 도메인이 단일 복합체 내에 생성되는 삼량체화 sFv; 3개의 항원 결합 도메인은 동일하거나 상이한 에피토프에 대해 지향될 수 있다)를 포함한다. 항체의 유도체는 또한 항체 결합 부위의 하나 이상의 CDR 서열을 포함한다. CDR 서열은 2개 이상의 CDR 서열이 존재할 때 스캐폴드 (scaffold) 상에서 함께 연결될 수 있다. 특정 실시태양에서, 본 발명에서 사용되는 항체는 단일쇄 Fv ("scFv")를 포함한다. scFv는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체 단편이고, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬 내에 존재한다. 일반적으로, scFv 폴리펩티드는 VH 및 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커 (linker)를 추가로 포함하고, 이는 scFv가 항원 결합을 위해 목적하는 구조를 형성할 수 있도록 한다. scFv의 내용에 대해서는 문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조한다.
본 발명의 항체는 새 및 포유동물 (예를 들어, 인간, 쥐, 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니아 피그, 낙타, 말 또는 닭)을 포함하는 임의의 동물 기원의 것일 수 있다. 특정 실시태양에서, 본 발명의 항체는 인간 또는 인간화 모노클로날 항체이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "인간" 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하고, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터 또는 인간 유전자로부터의 항체를 발현하는 마우스로부터 단리된 항체를 포함한다.
바람직한 실시태양에서, 본 발명의 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 완전 인간 항체이다. 상기 완전 인간 항체는 원치않거나 불필요한 부작용예를 들어, 대상에게 투여될 때 비-완전 인간 항체 (예를 들어, 다른 종으로부터 유래된 항-hLIGHT 항체)에 대해 지향된 면역 반응의 발생을 최소화하기 위해 완전 마우스 (또는 다른 완전 또는 부분 비-인간 종 항체), 인간화 항체, 또는 키메라 항체에 비해 유익할 것이다.
본 발명의 항체는 일특이적, 이중특이적, 삼중특이적 또는 보다 고차의 다중특이성일 수 있다. 다중특이적 항체는 hLIGHT 폴리펩티드의 상이한 에피토프에 대해 특이적일 수 있거나, hLIGHT 폴리펩티드 및 이종성 에피토프, 예를 들어 이종성 폴리펩티드 또는 고체 지지체 물질 모두에 대해 특이적일 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체는 hLIGHT 폴리펩티드의 주어진 에피토프에 일특이적이고, 다른 에피토프에 면역특이적으로 결합하지 않는다.
바람직한 실시태양에서, 항체를 포함하는 조성물 및 본 발명의 항체를 사용하는 방법의 항체는 E1, E13, E63, F19 또는 F23 항체 (ATCC 기탁 번호: 각각 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728)를 포함한다. E1, E13, E63, F19 또는 F23 항체 (ATCC 기탁 번호: 각각 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728) 및/또는 본원에서 설명되는 다른 항-hLIGHT 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마를 또한 본원에서 제공한다.
특정 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 단리된 항체를 본원에서 제공하고, 여기서 항체에 의한 hLIGHT 에피토프에 대한 결합은 (a) E1 항체, E13 항체 또는 E63 항체, 또는 (b) F19 항체 또는 F23 항체에 의해 경쟁적으로 차단되되 (예를 들어, 용량-의존 방식으로); hLIGHT 에피토프에 대한 결합이 (a) E1 항체와 F19 항체, (b) E1 항체와 F23 항체, (c) E13 항체와 F19 항체, (d) E13 항체와 F23 항체, (e) E63 항체와 F19 항체, 또는 (f) E63 항체와 F23 항체 둘 모두에 의해 차단되지는 않는다. 항체는 완전 인간 항체일 수 있거나 아닐 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 항체는 완전 인간 모노클로날 항-hLIGHT 항체, 훨씬 더 바람직하게는 완전 인간 모노클로날 길항제 항-hLIGHT 항체이다. 사용될 수 있는 예시적인 경쟁적 치단 시험을 본원의 실시예에 제공한다.
다른 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 단리된 항체, 바람직하게는 완전 인간 항체를 본원에서 제공하고, 여기서 항체에 의한 hLIGHT 에피토프에 대한 결합은 (a) E1 항체, E13 항체 또는 E63 항체, 또는 (b) F19 항체 또는 F23 항체에 의해 경쟁적으로 차단된다 (예를 들어, 용량-의존 방식으로). 항체는 완전 인간 항체일 수 있거나 아닐 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 항체는 완전 인간 모노클로날 항-hLIGHT 항체, 훨씬 더 바람직하게는 완전 인간 모노클로날 길항제 항-hLIGHT 항체이다. 사용될 수 있는 예시적인 경쟁적 차단 시험을 본원의 실시예에 제공한다.
일부 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체는 세포 표면-발현된 hLIGHT에 대한 결합에 대해 HVEM, LTβR 및/또는 DcR3 (또는 그의 융합 단백질(들))과 (예를 들어, 용량-의존 방식으로) 경쟁한다. 다른 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체는 가용형 hLIGHT에 대한 결합에 대해 HVEM, LTβR 및/또는 DcR3 (또는 그의 융합 단백질(들))과 (예를 들어, 용량-의존 방식으로) 경쟁한다. 사용될 수 있는 예시적인 경쟁적 결합 분석을 본원의 실시예에 제공한다. 하나의 실시태양에서, 항체는 세포 표면-발현된 hLIGHT, 예를 들어 hLIGHT에 대한 HVEM, LTβR 및/또는 DcR3의 결합을 부분적으로 또는 완전히 억제한다. 또다른 실시태양에서, 항체는 가용형 hLIGHT에 대한 HVEM, LTβR 및/또는 DcR3의 결합을 부분적으로 또는 완전히 억제한다. 일부 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체는 세포 표면-발현된 hLIGHT 리간드, 예를 들어 hLIGHT 수용체 (예를 들어, HVEM, LTβR 및/또는 DcR3)를 갖는 세포로부터 CCL20, IL-8 및/또는 RANTES의 분비를 부분적으로 또는 완전히 억제한다. 특정 실시태양에서, hLIGHT 수용체를 발현하는 세포는 대장 상피 세포이다.
본 발명의 항체는 E1 항체 (ATCC 기탁 번호 PTA-7729), E13 항체 (ATCC 기탁 번호 PTA-7842), 또는 E63 항체 (ATCC 기탁 번호 PTA-7818), F19 항체 (ATCC 기탁 번호 PTA-7819) 또는 F23 항체 (ATCC 기탁 번호 PTA-7728) 항체, 실시예 섹션, 및 본원에서 다른 곳의 항체 및 항원-결합 단편을 포함한다. 특정 실시태양에서, 본 발명의 항체는 E1, E13, E63, F19 또는 F23 항체이다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 항체는 E1, E13, E63, F19 또는 F23의 항원 결합 단편 (예를 들어, Fab 단편)을 포함한다.
바람직하게는, 본 발명의 항체는 hLIGHT에 면역특이적으로 결합하는 완전 인간 모노클로날 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 길항제 항체이다.
일부 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체는 (예를 들어, hLIGHT 폴리펩티드의 삼량체 형에서) hLIGHT 폴리펩티드의 3차원 표면 특징부인 hLIGHT 에피토프에 결합한다. 에피토프에 기여하는 hLIGHT 폴리펩티드의 구역은 폴리펩티드의 인접 아미노산일 수 있거나, 에피토프는 폴리펩티드의 2개 이상의 비-인접 구역으로부터 함께 형성될 수 있다. hLIGHT 에피토프는 (a) hLIGHT의 삼량체 형 ("삼량체 hLIGHT 에피토프"), (b) hLIGHT의 단량체 형 ("단량체 hLIGHT 에피토프"), (c) hLIGHT의 삼량체 및 단량체 형 모두 내에 존재할 수 있거나, (d) hLIGHT의 삼량체 형 내에 존재하지만 단량체 형 내에 존재하지 않거나, (e) hLIGHT의 단량체 형 내에 존재하지만 삼량체 형 내에 존재하지 않을 수 있다.
예를 들어, 일부 실시태양에서, 에피토프는 삼량체 (천연) 형 내에 존재하거나 항-hLIGHT 항체에 의한 결합을 위해 이용가능하지만, 단량체 (변성) 형 내에 존재하거나 결합을 위해 이용가능하지 않다. 다른 실시태양에서, hLIGHT 에피토프는 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, hLIGHT 폴리펩티드의 삼량체 형 또는 단량체 형에서)의 선형 특징부이다. 본원에서 제공되는 항체는 (a) hLIGHT의 단량체 형의 에피토프에, (b) hLIGHT의 삼량체 형의 에피토프에, (c) 삼량체 형은 아니고 hLIGHT의 단량체의 에피토프에, (d) 단량체 형은 아니고 hLIGHT의 삼량체의 에피토프에, 또는 (e) hLIGHT의 단량체 형과 삼량체 형 모두에 면역특이적으로 결합할 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체는 hLIGHT의 삼량체 형의 에피토프에 면역특이적으로 결합하지만, hLIGHT의 단량체 형의 에피토프에 면역특이적으로 결합하지 않는다.
특정 실시태양에서, 본 발명은 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23 항체의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체의 VH 사슬 및/또는 VL 사슬의 아미노산 서열을 갖는 VH 사슬 및/또는 VL 사슬을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체를 제공한다.
또다른 실시태양에서, 본 발명은 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23 항체의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체를 제공한다.
또다른 실시태양에서, 본 발명은 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23 항체의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 1, 2 또는 3개 이상의 CDR의 아미노산 서열을 갖는 1, 2 또는 3개 이상의 CDR을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 제공한다.
하나의 실시태양에서, 본 발명은 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체의 VH CDR 및/또는 VL CDR의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR 및/또는 VL CDR의 조합물을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체를 제공한다.
본 발명은 각각 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 VH 사슬 및/또는 VL 사슬의 아미노산 서열을 갖는 VH 사슬 및/또는 VL 사슬을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 제공하고, 여기서 항체에 의한 hLIGHT 에피토프에 대한 결합은 (a) E1, E13 또는 E63 항체, 또는 (b) F19 또는 F23 항체에 의해 용량-의존 방식으로 경쟁적으로 차단되되; hLIGHT 에피토프에 대한 결합이 (a) E1과 F19 항체, (b) E1과 F23 항체, (c) E13과 F19 항체, (d) E13과 F23 항체, (e) E63과 F19 항체, 또는 (f) E63과 F23 항체 둘 모두에 의해 차단되지는 않는다.
본 발명은 각각 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 VH 사슬 및/또는 VL 사슬의 아미노산 서열을 갖는 VH 사슬 및/또는 VL 사슬을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 완전 인간 항체를 또한 제공하고, 여기서 항체에 의한 hLIGHT 에피토프에 대한 결합은 (a) E1 항체, E13 항체 또는 E63 항체, 또는 (b) F19 항체 또는 F23 항체에 의해 용량-의존 방식으로 경쟁적으로 차단된다. 바람직하게는, 완전 인간 항체는 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
본 발명은 각각 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 제공하고, 여기서 항체에 의한 hLIGHT 에피토프에 대한 결합은 (a) E1, E13 또는 E63 항체, 또는 (b) F19 또는 F23 항체에 의해 용량-의존 방식으로 경쟁적으로 차단되되; hLIGHT 에피토프에 대한 결합이 (a) E1과 F19 항체, (b) E1과 F23 항체, (c) E13과 F19 항체, (d) E13과 F23 항체, (e) E63과 F19 항체, 또는 (f) E63과 F23 항체 둘 모두에 의해 차단되지는 않는다.
본 발명은 각각 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 완전 인간 항체를 또한 제공하고, 여기서 항체에 의한 hLIGHT 에피토프에 대한 결합은 (a) E1 항체, E13 항체 또는 E63 항체, 또는 (b) F19 항체 또는 F23 항체에 의해 용량-의존 방식으로 경쟁적으로 차단된다. 바람직하게는, 완전 인간 항체는 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
본 발명은 각각 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 1, 2 또는 3개의 VH CDR의 아미노산 서열을 갖는 1, 2 또는 3개의 VH CDR (즉, VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3)을 포함하는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 제공하고, 여기서 항체에 의한 hLIGHT 에피토프에 대한 결합은 (a) E1, E13 또는 E63 항체, 또는 (b) F19 또는 F23 항체에 의해 용량-의존 방식으로 경쟁적으로 차단되되; hLIGHT 에피토프에 대한 결합이 (a) E1과 F19 항체, (b) E1과 F23 항체, (c) E13과 F19 항체, (d) E13과 F23 항체, (e) E63과 F19 항체, 또는 (f) E63과 F23 항체 둘 모두에 의해 차단되지는 않는다.
본 발명은 각각 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 1, 2 또는 3개의 VH CDR의 아미노산 서열을 갖는 1, 2 또는 3개의 VH CDR (즉, VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3)을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 완전 인간 항체를 또한 제공하고, 여기서 항체에 의한 hLIGHT 에피토프에 대한 결합은 (a) E1 항체, E13 항체 또는 E63 항체, 또는 (b) F19 항체 또는 F23 항체에 의해 용량-의존 방식으로 경쟁적으로 차단된다. 바람직하게는, 완전 인간 항체는 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
본 발명은 각각 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 1, 2 또는 3개의 VL CDR의 아미노산 서열을 갖는 1, 2 또는 3개의 VL CDR (즉, VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3)을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 제공하고, 여기서 항체에 의한 hLIGHT 에피토프에 대한 결합은 (a) E1, E13 또는 E63 항체, 또는 (b) F19 또는 F23 항체에 의해 용량-의존 방식으로 경쟁적으로 차단되되; hLIGHT 에피토프에 대한 결합이 (a) E1과 F19 항체, (b) E1과 F23 항체, (c) E13과 F19 항체, (d) E13과 F23 항체, (e) E63과 F19 항체, 또는 (f) E63과 F23 항체 둘 모두에 의해 차단되지는 않는다.
본 발명은 각각 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 1, 2 또는 3개의 VL CDR의 아미노산 서열을 갖는 1, 2 또는 3개의 VL CDR (즉, VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3)을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 완전 인간 항체를 또한 제공하고, 여기서 항체에 의한 hLIGHT 에피토프에 대한 결합은 (a) E1 항체, E13 항체 또는 E63 항체, 또는 (b) F19 항체 또는 F23 항체에 의해 용량-의존 방식으로 경쟁적으로 차단된다. 바람직하게는, 완전 인간 항체는 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
본 발명은 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체의 VH CDR 중의 임의의 하나 (즉, VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3)의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR (즉, VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3); 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 또한 제공한다.
하나의 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체는 서열 1, 2, 3, 4 또는 5 중의 임의의 하나에 제시된 VH 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91 또는 10 중의 임의의 하나에 제시된 VL 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
특정 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체는 (a) 서열 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 서열 82, 6 또는 83 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; (b) 서열 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 서열 7에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; (c) 서열 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 서열 8에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; (d) 서열 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 서열 90, 9, 91 또는 92 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; 또는 (e) 서열 5에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 서열 10에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
또다른 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
특정 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체는 (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7729인 항체 (E1)의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729인 항체 (E1)의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7842인 항체 (E13)의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 ATCC 기탁 번호가 PTA-7842인 항체 (E13)의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; (c) ATCC 기탁 번호가 PTA-7818인 항체 (E63)의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 ATCC 기탁 번호가 PTA-7818인 항체 (E63)의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; (d) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819인 항체 (F19)의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 ATCC 기탁 번호가 PTA-7819인 항체 (F19)의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; 또는 (e) ATCC 기탁 번호가 PTA-7728인 항체 (F23)의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 ATCC 기탁 번호가 PTA-7728인 항체 (F23)의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 항체는 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나의 VH CDR1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1을 포함한다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 항체는 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나의 VH CDR2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2를 포함한다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 항체는 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나의 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함한다. 특정 실시태양에서, 본 발명의 항체는 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나에 제시된 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3으로부터 독립적으로 선택된 VH CDR1 및/또는 VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 포함한다.
본 발명은 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR 중의 임의의 하나 (즉, VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3)의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR (즉, VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3); 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 또한 제공한다.
특정 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체는 (1) (a) 각각 서열 11, 12 및/또는 13에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, (b) 각각 서열 14, 15 및/또는 16에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, (c) 각각 서열 17, 18 및/또는 19에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, (d) 각각 서열 20, 21 및/또는 22에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, 또는 (e) 각각 서열 23, 24 및/또는 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (2) (a) 서열 84, 26 또는 85 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; 서열 86, 27 또는 87 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및/또는 서열 88, 28 또는 89 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, (b) 각각 서열 29, 30 및/또는 31에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3, (c) 각각 서열 32, 33 및/또는 34에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3, (d) 서열 93, 35, 94 또는 95 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; 서열 96, 36, 97 또는 98 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및/또는 서열 99, 37, 100 또는 101 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 (e) 각각 서열 38, 39 및/또는 40에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
일부 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체는 (1) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7729인 항체 (E1)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7842인 항체 (E13)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, (c) ATCC 기탁 번호가 PTA-7818인 항체 (E63)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, (d) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819인 항체 (F19)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, 또는 (e) ATCC 기탁 번호가 PTA-7728인 항체 (F23)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (2) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7729인 항체 (E1)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3, (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7842인 항체 (E13)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3, (c) ATCC 기탁 번호가 PTA-7818인 항체 (E63)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3, (d) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819인 항체 (F19)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3, 또는 (e) ATCC 기탁 번호가 PTA-7728인 항체 (F23)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
특정 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체는 (1) (a) 각각 서열 11, 12 및/또는 13에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인, 및 (b) 서열 84, 26 또는 85 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; 서열 86, 27 또는 87 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및/또는 서열 88, 28 또는 89 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; (2) (a) 각각 서열 14, 15 및/또는 16에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인, 및 (b) 각각 서열 29, 30 및/또는 31에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3; (3) (a) 각각 서열 17, 18 및/또는 19에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인, 및 (b) 각각 서열 32, 33 및/또는 34에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; (4) (a) 각각 서열 20, 21 및/또는 22에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인, 및 (b) 서열 93, 35, 94 또는 95 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; 서열 96, 36, 97 또는 98 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및/또는 서열 99, 37, 100 또는 101 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; 또는 (5) (a) 각각 서열 23, 24 및/또는 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인, 및 (b) 각각 서열 38, 39 및/또는 40에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
일부 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체는 (1) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7729인 항체 (E1)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인, 및 (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7729인 항체 (E1)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; (2) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7842인 항체 (E13)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7842인 항체 (E13)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; (3) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7818인 항체 (E63)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7818인 항체 (E63)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; (4) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819인 항체 (F19)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 ATCC 기탁 번호가 PTA-7819인 항체 (F19)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; 또는 (5) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7728인 항체 (F23)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7728인 항체 (F23)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 항체는 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR1의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1을 포함한다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 항체는 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR2의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2를 포함한다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 항체는 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함한다. 특정 실시태양에서, 본 발명의 항체는 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나에 제시된; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3 중에서 독립적으로 선택된 VL CDR1 및/또는 VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 포함한다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 항체는 (1) (a) 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, (b) 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 또는 (c) 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3 중 하나 이상을 갖는 VH 도메인 또는 사슬; 및/또는 (2) (a) 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR1의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, (b) 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR2의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및/또는 (c) 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3 중 하나 이상을 갖는 VL 도메인 또는 사슬을 포함한다.
Figure pat00001
본 발명은 또한 표 1에 나열된 하나 이상의 VH CDR 및 하나 이상의 VL CDR을 포함하는 항체를 제공한다. 특히, 본 발명은 VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23) 및 VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23); VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH1 CDR1, VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38), VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39), 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38), VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39), 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38), VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39), 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); 또는 표 1에 나열된 VH CDR (서열 11-25) 및 VL CDR (서열 26-40)의 임의의 조합을 포함하는 항체를 제공한다. ATCC 기탁 번호 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 상응하는 VH CDR 및 VL CDR이 또한 상기 나열된 임의의 조합에서 사용될 수 있다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
본 발명은 hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 본원에서 설명되는 VH 도메인, VH CDR, VL 도메인, 및 VL CDR의 유도체를 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 또한 제공한다. 본 발명은 또한 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23의 유도체를 포함하는, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 본 발명의 분자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 내에 돌연변이를 도입하기 위해, 예를 들어, 부위-지정 돌연변이 유발 및 PCR-매개 돌연변이 유발을 포함하는 당업자에게 공지된 표준 기술을 사용할 수 있고, 이는 아미노산 치환을 일으킨다. 바람직하게는, 유도체는 원래의 분자에 비해 25개 미만의 아미노산 치환, 20개 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환, 또는 2개 미만의 아미노산 치환을 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 유도체는 하나 이상의 예측된 비-필수 아미노산 잔기에서 이루어지는 보존적 아미노산 치환을 갖는다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 전하를 갖는 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 교체되는 치환이다. 유사한 전하를 갖는 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당업계에 규정되었다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄 (예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 대전되지 않은 극성 측쇄 (예를 들어, 글라이신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 타이로신, 시스테인), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 타이로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 별법으로, 돌연변이는 예를 들어 포화 돌연변이 유발에 의해 코딩 서열의 전체 또는 일부를 따라 무작위로 도입될 수 있고, 생성되는 돌연변이체를 활성을 보유하는 돌연변이체를 확인하기 위해 생물학적 활성에 대해 스크리닝할 수 있다. 돌연변이 유발 후, 코딩된 단백질이 발현될 수 있고, 단백질 활성을 결정할 수 있다.
또다른 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체는 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23, 또는 그의 항원 결합 단편, 예를 들어 VH 도메인, VL 도메인, VH 사슬 또는 VL 사슬의 아미노산 서열에 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 하나의 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체는 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 아미노산 서열에 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체는 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 아미노산 서열에 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시태양에서, hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체는 서열 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25에 제시된 VH CDR 아미노산 서열 (VH CDR) 및/또는 서열 84, 26, 85, 86, 27, 87, 88, 28, 89, 2, 30, 31, 32, 33, 34, 93, 35, 94, 95, 96, 36, 97, 98, 99, 37, 100, 101, 38, 39 또는 40에 제시된 VL CDR 아미노산 서열에 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 VH CDR 및/또는 VL CDR 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시태양에서, 항체는 완전 인간 항-인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체이다. 완전 인간 항체는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 생산할 수 있다. 예시적인 방법은 hLIGHT 항원 (면역 반응을 일으킬 수 있고, 임의로 담체에 컨쥬게이팅된 임의의 hLIGHT 폴리펩티드)을 사용하여 내인성 면역글로불린 생산의 부재 하에 인간 항체의 레파토리를 생산할 수 있는 트랜스제닉 동물 (예를 들어, 마우스)을 면역화시키는 것을 포함한다 (예를 들어, [Jakobovits et al., (1993) Proc. Natl. Acad. ScL, 90:2551]; [Jakobovits et al., (1993) Nature, 362:255 258 (1993)]; [Bruggermann et al., (1993) Year in Immunol., 7:33] 참조). 완전 인간 항-hLIGHT 항체를 생산하는 다른 방법은 본원의 실시예에서 찾을 수 있다.
별법으로, 완전 인간 항체는 파지 디스플레이 항체 라이브러리의 시험관내 스크리닝을 통해 생성될 수 있다 (예를 들어, 본원에 참고로 포함시킨 문헌 ([Hoogenboom et al., J. Mol. Biol., 227:381 (1991)]; [Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]) 참조). 다양한 항체-함유 파지 디스플레이 라이브러리가 설명되었고, 당업자가 쉽게 제조할 수 있다. 라이브러리는 적절한 표적에 대해 스크리닝될 수 있는 다양한 인간 항체 서열, 예를 들어 인간 Fab, Fv 및 scFv 단편을 함유할 수 있다.
바람직한 실시태양에서, 본 발명의 방법에 따라 사용되는 항체는 hLIGHT 폴리펩티드, 또는 그의 폴리펩티드 단편 또는 에피토프에 높은 친화도를 갖는다. 하나의 실시태양에서, 본 발명의 방법에 따라 사용되는 항체는 공지의 항체 (예를 들어, 본원의 다른 곳에서 논의되는 상업적으로 입수가능한 모노클로날 항체)보다 hLIGHT에 대해 더 높은 친화도를 갖는다. 특정 실시태양에서, 본 발명의 방법에 따라 사용되는 항체는 본원에 설명되거나 당업자에게 공지된 기술 (예를 들어, BIAcore 분석)에 의해 측정할 때 공지의 항-hLIGHT 항체보다 hLIGHT 항원에 대해 2배 내지 10배 (이상) 더 높은 친화도를 갖는다. 상기 실시태양에 따라, 항체의 친화도는 하나의 실시태양에서 BIAcore 분석에 의해 평가된다.
특정 실시태양에서, hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체는 (1) 서열 41, 42, 43, 44 또는 45 (VH) 및/또는 서열 102, 46, 103, 47, 48, 104, 49, 105, 106 또는 50 (VL)에 제시된 임의의 하나의 VH 및/또는 VL 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 상보체 또는 (2) ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH 또는 VL 도메인 중의 임의의 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 상보체에 엄격한 조건 (예를 들어, 필터-결합된 DNA에 6x 염화나트륨/시트르산나트륨 (SSC) 내에서 약 45℃에서 혼성화한 후, 0.2xSSC/0.1% SDS 내에서 약 50-65℃에서 1회 이상 세척) 하에, 매우 엄격한 조건 (예를 들어, 필터-결합된 핵산에 6xSSC 내에서 약 45℃에서 혼성화한 후, 0.1xSSC/0.2% SDS 내에서 약 68℃에서 1회 이상 세척) 하에, 또는 당업자에게 공지된 다른 엄격한 혼성화 조건 (예를 들어, [Ausubel, F.M. et al., eds., 1989, Current Protocols in Molecular Biology. Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York at pages 6.3.1-6.3.6 and 2.10.3] 참조) 하에 혼성화하는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 VH 도메인의 아미노산 서열 및/또는 VL 도메인의 아미노산 서열을 포함한다.
또다른 실시태양에서, hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체는 (a) 서열 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25 (VH CDR) 및/또는 서열 84, 26, 85, 86, 27, 87, 88, 28, 89, 2, 30, 31, 32, 33, 34, 93, 35, 94, 95, 96, 36, 97, 98, 99, 37, 100, 101, 38, 39 또는 40 (VL CDR)에 제시된 임의의 하나의 VH CDR 및/또는 VL CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 상보체 또는 (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR 및/또는 VL CDR 중의 임의의 하나를 코딩하는 핵산 서열의 상보체에 엄격한 조건 (예를 들어, 필터-결합된 DNA에 6X SSC 내에서 약 45℃에서 혼성화한 후, 0.2X SSC/0.1% SDS 내에서 약 50-65℃에서 1회 이상 세척) 하에, 매우 엄격한 조건 (예를 들어, 필터-결합된 핵산에 6X SSC 내에서 약 45℃에서 혼성화한 후, 0.1X SSC/0.2% SDS 내에서 약 68℃에서 1회 이상 세척) 하에, 또는 당업자에게 공지된 다른 엄격한 혼성화 조건 (예를 들어, [Ausubel, F.M. et al., eds., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York at pages 6.3.1-6.3.6 and 2.10.3] 참조) 하에 혼성화하는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 VH CDR의 아미노산 서열 또는 VL CDR의 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 항체는 항체에 임의의 종류의 분자의 공유 부착에 의해 화학적으로 변형된 항체를 포함한다. 비제한적인 예를 들어, 항체 유도체는 예를 들어, 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지의 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백분해적 절단, 세포성 리간드 또는 다른 단백질에 대한 연결 등에 의해 화학적으로 변형된 항체를 포함한다. 임의의 많은 화학적 변형은 특이적 화학 절단, 아세틸화, 제제화, 투니카마이신의 대사적 합성 등을 포함하고 이로 제한되지 않는 공지의 기술에 의해 수행할 수 있다. 추가로, 항체는 하나 이상의 비-전통적인 아미노산을 함유할 수 있다.
본 발명은 또한 당업자에게 공지된 프레임워크 구역을 포함하는 hLIGHT 항원 (예를 들어, 인간 또는 비-인간 단편)에 면역특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 프레임워크 구역은 예를 들어, 천연 발생 또는 컨센서스 프레임워크 구역일 수 있다. 가장 바람직하게는, 본 발명의 항체의 프레임워크 구역은 인간 프레임워크 구역이다 (인간 프레임워크 구역에 대한 목록은 예를 들어, 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 [Chothia et al., 1998, J. Mol. Biol. 278:457-479] 참조). 또한 문헌 [Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (U.S. Department of Health and Human Services, Washington, D.C.) 5th ed]을 참조한다.
특정 실시태양에서, 본 발명은 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23 (즉, 서열 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25 (VH CDR) 또는 서열 84, 26, 85, 86, 27, 87, 88, 28, 89, 2, 30, 31, 32, 33, 34, 93, 35, 94, 95, 96, 36, 97, 98, 99, 37, 100, 101, 38, 39 또는 40 (VL CDR))의, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체의 하나 이상의 CDR의 아미노산 서열, 및 (a) 쥐 항체 프레임워크 (즉, 공여 항체 프레임워크)와 인간 항체 프레임워크 (즉, 수용 항체 프레임워크) 사이에서 상이한 희귀 (rare) 프레임워크 잔기; (b) 공여 항체 프레임워크와 수용 항체 프레임워크 사이에서 상이한 비니어 (Venier) 대역 잔기; (c) 공여 항체 프레임워크와 수용 항체 프레임워크 사이에서 상이한, VH/VL 계면에서 사슬내 패킹 (packing) 잔기; (d) 공여 항체 프레임워크와 수용 항체 프레임워크 서열 사이에서 상이한, 정규 (canonical) 잔기, 특히 정규 클래스의 쥐 항체 CDR 루프의 정의에 중요한 프레임워크 구역; (e) CDR에 인접한 잔기; (g) 항원과 상호작용할 수 있는 잔기; (h) CDR과 상호작용할 수 있는 잔기; 및 (i) VH 도메인과 VL 도메인 사이의 접촉 잔기 중 1, 2 또는 3개 이상의 잔기에서 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 프레임워크 구역을 포함하는, hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 특정 실시태양에서, 1, 2 또는 3개 이상의 상기 확인된 잔기에서 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 프레임워크 구역을 포함하는, hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체는 길항성 hLIGHT 항체이다.
본 발명은 프레임워크 구역 내에 돌연변이 (예를 들어, 하나 이상의 아미노산 치환)를 갖는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체의, 또는 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23 항체의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 또는 그의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 포함하는, hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 특정 실시태양에서, hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체는 VH 및/또는 VL 도메인의 프레임워크 구역 내에 하나 이상의 아미노산 잔기 치환을 갖는, E1, E13, E63, F19 및/또는 F23의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 또는 그의 항원-결합 단편의 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명은 또한 초가변 및 프레임워크 구역 내에 돌연변이 (예를 들어, 하나 이상의 아미노산 잔기 치환)를 갖는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체의, 또는 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23 항체의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인의 아미노산 서열을 포함하는, hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 바람직하게는, 초가변 및 프레임워크 구역 내의 아미노산 치환은 hLIGHT 항원에 대한 항체의 결합을 증진시킨다.
일부 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체는 HVEM, LTβR 및/또는 DcR3에 대한 hLIGHT의 결합을 감소시키거나 억제하고/하거나, 대상 (예를 들어, 인간 대상)에서 hLIGHT의 생물학적 활성, 예를 들어 CCL20, IL8 및/또는 RANTES의 분비를 감소시키거나 억제한다. 특정 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체, 예를 들어 인간 모노클로날 항-hLIGHT 항체는 HVEM 또는 LTβR에 대한 가용형 또는 세포 표면-발현된 hLIGHT의 결합을 감소시키거나 억제하고/하거나, 대상에서 가용형 또는 세포 표면-발현된 hLIGHT와 접촉한 후 CCL20 및/또는 RANTES의 분비를 감소시키거나 억제한다. 일부 실시태양에서, hLIGHT는 hLIGHT의 SNP 변이체, 예를 들어 214E-32S, 214K-32S, 214E-32L 또는 214K-32L이다. 본원에서 제공되는 항체의 HVEM, LTβR 및/또는 DCR3에 대한 hLIGHT 결합의 차단 활성은 실시예 1-4 중 임의의 하나에 설명된 분석을 사용하여 검출될 수 있다. 본원에서 제공되는 hLIGHT 항체에 의한 hLIGHT 수용체를 발현하는 세포의 생물학적 활성의 억제는 실시예 1-4 중 임의의 하나에 설명된 분석을 사용하여 검출될 수 있다.
다른 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체는 HVEM, LTβR 및/또는 DcR3에 대한 hLIGHT의 결합을 감소시키거나 억제하고/하거나, 세포 표면-발현된 hLIGHT 수용체 (예를 들어, HVEM, LTβR 및/또는 Dc3R)을 갖는 세포에서 hLIGHT의 생물학적 활성, 예를 들어 CCL20, IL8 및/또는 RANTES의 분비를 감소시키거나 억제한다. 특정 실시태양에서, 본원에서 제공되는 항체, 예를 들어 인간 모노클로날 항-hLIGHT 항체는 HVEM 또는 LTβR에 대한 가용형 또는 세포 표면-발현된 hLIGHT의 결합을 감소시키거나 억제하고/하거나, 가용형 또는 세포 표면-발현된 hLIGHT와 접촉한 후 세포 표면-발현된 hLIGHT 수용체를 갖는 세포에서 CCL20 및/또는 RANTES의 분비를 감소시키거나 억제한다. 일부 실시태양에서, hLIGHT는 hLIGHT의 SNP 변이체, 예를 들어 214E-32S, 214K-32S, 214E-32L 또는 214K-32L이다. 본원에서 제공되는 항체의 HVEM, LTβR 및/또는 DCR3에 대한 hLIGHT 결합의 차단 활성은 실시예 1-4 중 임의의 하나에 설명된 분석을 사용하여 검출될 수 있다. 본원에서 제공되는 hLIGHT 항체에 의한 hLIGHT 수용체를 발현하는 세포의 생물학적 활성의 억제는 실시예 1-4 중 임의의 하나에 설명된 분석을 사용하여 검출될 수 있다.
본 발명은 또한 hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 본원에서 제공되는 항체 및 이종성 폴리펩티드를 포함하는 융합 단백질을 제공한다. 일부 실시태양에서, 항체가 융합되는 이종성 폴리펩티드는 항체를 세포 표면-발현된 hLIGHT를 갖는 세포에 표적화하기 위해 유용하다.
본 발명은 또한 hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체의 패널 (panel)을 제공한다. 특정 실시태양에서, 본 발명은 상이한 결합 속도 상수, 상이한 해리 속도 상수, hLIGHT 항원에 대한 상이한 친화도, 및/또는 hLIGHT 항원에 대한 상이한 특이성을 갖는 항체의 패널을 제공한다. 본 발명은 약 10, 바람직하게는 약 25, 약 50, 약 75, 약 100, 약 125, 약 150, 약 175, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450, 약 500, 약 550, 약 600, 약 650, 약 700, 약 750, 약 800, 약 850, 약 900, 약 950, 또는 약 1000개 이상의 항체의 패널을 제공한다. 항체의 패널을 예를 들어 ELISA와 같은 분석을 위해 96 웰 또는 384 웰 플레이트에서 사용할 수 있다.
항체 컨쥬게이트 및 융합 단백질
일부 실시태양에서, 본 발명의 항체는 진단제, 검출가능한 물질 또는 치료제 또는 임의의 다른 분자에 컨쥬게이팅되거나 재조합 방식으로 융합된다. 컨쥬게이팅된 또는 재조합 방식으로 융합된 항체는 예를 들어, 특정 요법의 효능을 결정하는 것과 같은 임상 시험 절차의 일부로서 hLIGHT-매개 질병의 발병, 발생, 진행 및/또는 심도를 모니터링 또는 예측하기 위해 유용할 수 있다.
상기 진단 및 검출은 예를 들어 항체를 다양한 효소, 비제한적인 예를 들어 호스래디시 퍼옥시다제, 알칼린 포스파타제, 베타-갈락토시다제 또는 아세틸콜린에스테라제; 보조군, 비제한적인 예를 들어 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴; 형광 물질, 비제한적인 예를 들어 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린; 발광 물질, 비제한적인 예를 들어 루미놀; 생체발광 물질, 비제한적인 예를 들어 루시퍼라제, 루시페린 및 에쿠오린; 방사성 물질, 비제한적인 예를 들어 요오드 (131I, 125I, 123I 및 121I), 탄소 (14C), 황 (35S), 삼중수소 (3H), 인듐 (115In, 113In, 112In 및 111In), 테크네튬 (99Tc), 탈륨 (201Ti), 갈륨 (68Ga, 67Ga), 팔라듐 (103Pd), 몰리브덴 (99Mo), 제논 (133Xe), 불소 (18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn 및 117Sn; 및 다양한 양전자 방출 단층 촬영을 이용하는 양전자 방출 금속, 및 비-방사성 상자성 금속 이온을 포함하고 이로 제한되지 않는 검출가능한 물질에 커플링시켜 달성할 수 있다.
본 발명은 치료 모이어티 (또는 하나 이상의 치료 모이어티)에 컨쥬게이팅되거나 재조합 방식으로 융합된 본 발명의 항체의 용도를 추가로 포함한다. 항체는 치료 모이어티, 예를 들어 세포독소, 예를 들어, 세포증식 억제제 또는 세포파괴제, 치료제 또는 방사성 금속 이온, 예를 들어, 알파 방사체에 컨쥬게이팅되거나 재조합 방식으로 융합될 수 있다. 세포독소 또는 세포독성제는 세포에 해로운 임의의 물질을 포함한다. 치료 모이어티는 항대사체 (예를 들어, 메토트렉세이트, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 데카르바진); 알킬화제 (예를 들어, 메클로르에타민, 티오에파 클로람부실, 멜팔란, 카르무스틴 (BCNU) 및 로무스틴 (CCNU), 시클로토스파미드, 부술판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C 및 시스디클로로디아민 백금 (II) (DDP) 및 시스플라틴); 안트라시클린 (예를 들어, 다우노루비신 (이전에 다우노마이신) 및 독소루비신); 항생제 (예를 들어, 닥티노마이신 (이전에 액티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신 및 안트라마이신 (AMC)); 오리스타틴 분자 (예를 들어, 오리스타틴 PHE, 브리오스타틴 1 및 솔라스타틴 10; 모두 본원에 참고로 포함시킨 문헌 [Woyke et al., Antimicrob. Agents Chemother. 46:3802-8 (2002)], [Woyke et al., Antimicrob. Agents Chemother. 45:3580-4 (2001)], [Mohammad et al., Anticancer Drugs 12:735-40 (2001)], [Wall et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:76-80 (1999)], [Mohammad et al., Int. J. Oncol. 15:367-72 (1999)] 참조); 호르몬 (예를 들어, 글루코코르티코이드, 프로게스틴, 안드로겐 및 에스트로겐), DNA-복구 효소 억제제 (예를 들어, 에토포시드 또는 토포테칸), 키나제 억제제 (예를 들어, 화합물 ST1571, 이마티닙 메실레이트 (Kantarjian et al., Clin Cancer Res. 8(7):2167-76 (2002)); 세포독성제 (예를 들어, 파클리탁셀, 시토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 독소루비신, 다우노루비신, 디히드록시 안트라신 디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 액티노마이신 D, 1-데히드로테스토스테론, 글루코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀올 및 푸로마이신과 그의 유사체 또는 상동체, 및 미국 특허 6,245,759, 6,399,633, 6,383,790, 6,335,156, 6,271,242, 6,242,196, 6,218,410, 6,218,372, 6,057,300, 6,034,053, 5,985,877, 5,958,769, 5,925,376, 5,922,844, 5,911,995, 5,872,223, 5,863,904, 5,840,745, 5,728,868, 5,648,239, 5,587,459에 개시된 화합물; 파르네실 트랜스퍼라제 억제제 (예를 들어, R115777, BMS-214662 및 예를 들어 미국 특허 6,458,935, 6,451,812, 6,440,974, 6,436,960, 6,432,959, 6,420,387, 6,414,145, 6,410,541, 6,410,539, 6,403,581, 6,399,615, 6,387,905, 6,372,747, 6,369,034, 6,362,188, 6,342,765, 6,342,487, 6,300,501, 6,268,363, 6,265,422, 6,248,756, 6,239,140, 6,232,338, 6,228,865, 6,228,856, 6,225,322, 6,218,406, 6,211,193, 6,187,786, 6,169,096, 6,159,984, 6,143,766, 6,133,303, 6,127,366, 6,124,465, 6,124,295, 6,103,723, 6,093,737, 6,090,948, 6,080,870, 6,077,853, 6,071,935, 6,066,738, 6,063,930, 6,054,466, 6,051,582, 6,051,574 및 6,040,305에 개시된 것); 토포이소머라제 억제제 (예를 들어, 캄포테신; 이리노테칸; SN-38; 토포테칸; 9-아미노캄포테신; GG-211 (GI 147211); DX-8951f; IST-622; 루비테칸; 피라졸로아크리딘; XR-5000; 사인토핀; UCE6; UCE1022; TAN-1518A; TAN 1518B; KT6006; KT6528; ED-110; NB-506; ED-110; NB-506; 및 레베카미신); 불가레인; DNA 소 그루브 (minor groove) 바인더, 예를 들어 Hoescht 염료 33342 및 Hoechst 염료 33258; 니티딘; 파가로닌; 에피베르베린; 코랄린; 베타-라파콘; BC-4-1; 비스포스포네이트 (예를 들어, 알렌드로네이트, 시마드로네이트, 클로드로네이트, 틸루드로네이트, 에티드로네이트, 이반드로네이트, 네리드로네이트, 올판드로네이트, 리세드로네이트, 피리드로네이트, 파미드로네이트, 졸렌드로네이트), HMG-CoA 환원효소 억제제 (예를 들어, 로바스타틴, 심바스타틴, 아토르바스타틴, 프라바스타틴, 플루바스타틴, 스타틴, 세리바스타틴, 레스콜, 루피터, 로수바스타틴 및 아토르바스타틴); 안티센스 올리고뉴클레오티드 (예를 들어, 미국 특허 6,277,832, 5,998,596, 5,885,834, 5,734,033 및 5,618,709에 개시된 것); 아데노신 데아미나제 억제제 (예를 들어, 플루다라빈 포스페이트 및 2-클로로데옥시아데노신); 이브리투모맙 티욱세탄 (Zevalin(등록상표)); 토시투모맙 (Bexxar(등록상표)) 및 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물, 포접화합물 및 전구약물을 포함하고 이로 제한되지 않는다.
추가로, 본 발명의 항체는 주어진 생물학적 반응을 변형시키는 치료 모이어티 또는 약물 모이어티에 컨쥬게이팅되거나 재조합 방식으로 융합될 수 있다. 치료 모이어티 또는 약물 모이어티는 전통적인 화학 치료제로 제한되는 것으로 해석하지 않아야 한다. 예를 들어, 약물 모이어티는 목적하는 생물학적 활성을 갖는 단백질, 펩티드 또는 폴리펩티드이다. 상기 단백질은 예를 들어 독소, 예를 들어 아브린, 리신 A, 슈도모나스 (pseudomonas) 외독소, 콜레라 독소 또는 디프테리아 독소; 단백질, 예를 들어 종양 괴사 인자, γ-인터페론, α-인터페론, 신경 성장 인자, 혈소판 유래 성장 인자, 조직 플라스미노겐 활성화 인자, 세포자멸제, 예를 들어, TNF-γ, TNF-γ, AIM I (국제 특허 출원 공개 WO 97/33899 참조), AIM II (국제 특허 출원 공개 WO 97/34911 참조), Fas 리간드 (Takahashi et al., 1994, J. Immunol., 6:1567-1574) 및 VEGF (국제 특허 출원 공개 WO 99/23105 참조), 항-혈관신생제, 예를 들어, 안지오스타틴, 엔도스타틴 또는 응고 경로의 성분 (예를 들어, 조직 인자); 또는 생물학적 반응 변형제, 예를 들어 림포카인 (예를 들어, 인터페론 감마, 인터루킨-1 ("IL-1"), 인터루킨-2 ("IL-2"), 인터루킨-5 ("IL-5"), 인터루킨-6 ("IL-6"), 인터루킨-7 ("IL-7"), 인터루킨 9 ("IL-9"), 인터루킨-10 ("IL-IO"), 인터루킨-12 ("IL-12"), 인터루킨-15 ("IL-15"), 인터루킨-23 ("IL-23"), 과립구 포식세포 콜로니 자극 인자 ("GM-CSF") 및 과립구 콜로니 자극 인자 ("G-CSF")), 또는 성장 인자 (예를 들어, 성장 호르몬 ("GH")) 또는 응고제 (예를 들어, 칼슘, 비타민 K, 조직 인자, 비제한적인 예를 들어 Hageman 인자 (인자 XII), 고분자량 키니노겐 (HMWK), 프레칼리크레인 (PK), 응고 단백질-인자 II (프로트롬빈), 인자 V, XIIa, VIII, XIIIa, XI, XIa, IX, IXa, X, 인지질 및 피브린 단량체)를 포함할 수 있다.
본 발명은 융합 단백질을 생성하도록 이종성 단백질 또는 폴리펩티드 (또는 그의 단편, 바람직하게는 약 10, 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90 또는 약 100개 아미노산의 폴리펩티드)에 재조합 방식으로 융합되거나 화학적으로 컨쥬게이팅 (공유 또는 비-공유 컨쥬게이션)된 본 발명의 항체를 포함한다. 특히, 본 발명은 본 발명의 항체의 항원 결합 단편 (예를 들어, Fab 단편, Fd 단편, Fv 단편, F(ab)2 단편, VH 도메인, VH CDR, VL 도메인 또는 VL CDR) 및 이종성 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드를 포함하는 융합 단백질을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 항체가 융합되는 이종성 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드는 항체를 특정 세포 종류, 예를 들어 hLIGHT 또는 hLIGHT 수용체를 발현하는 세포에 표적화하기 위해 유용하다. 예를 들어, 특정 세포 종류 (예를 들어, 면역 세포)에 의해 발현된 세포 표면 수용체에 면역특이적으로 결합하는 항체는 본 발명의 변형된 항체에 융합되거나 컨쥬게이팅될 수 있다.
본 발명의 컨쥬게이팅된 또는 융합 단백질은 본원에 설명된 임의의 본 발명의 항체 및 이종성 폴리펩티드를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 본 발명의 컨쥬게이팅된 또는 융합 단백질은 E1, E13, E63, F19 또는 F23 항체, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23) 및 이종성 폴리펩티드를 포함한다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 컨쥬게이팅된 또는 융합 단백질은 E1, E13, E63, F19 또는 F23의, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 항원 결합 단편 및 이종성 폴리펩티드를 포함한다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 컨쥬게이팅된 또는 융합 단백질은 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH 도메인 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL 도메인 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인 및 이종성 폴리펩티드를 포함한다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 컨쥬게이팅된 또는 융합 단백질은 서열 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25에 제시된, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR 및 이종성 폴리펩티드를 포함한다. 또다른 실시태양에서, 컨쥬게이팅된 또는 융합 단백질은 서열 84, 26, 85, 86, 27, 87, 88, 28, 89, 2, 30, 31, 32, 33, 34, 93, 35, 94, 95, 96, 36, 97, 98, 99, 37, 100, 101, 38, 39 또는 40에 제시된, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR 및 이종성 폴리펩티드를 포함한다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 컨쥬게이팅된 또는 융합 단백질은 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5, 및 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 적어도 하나의 VH 도메인 및 적어도 하나의 VL 도메인, 및 이종성 폴리펩티드를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 본 발명의 컨쥬게이팅된 또는 융합 단백질은 각각 서열 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25, 및 서열 84, 26, 85, 86, 27, 87, 88, 28, 89, 2, 30, 31, 32, 33, 34, 93, 35, 94, 95, 96, 36, 97, 98, 99, 37, 100, 101, 38, 39 또는 40에 제시된, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 적어도 하나의 VH CDR 및 적어도 하나의 VL CDR, 및 이종성 폴리펩티드를 포함한다.
또한, 본 발명의 항체는 치료 모이어티, 예를 들어 방사성 금속 이온, 예를 들어 알파 방사체, 예를 들어 213Bi, 또는 131In, 131LU, 131Y, 131Ho, 131Sm을 포함하고 이로 제한되지 않는 방사성 금속 이온을 폴리펩티드에 컨쥬게이팅하기 위해 유용한 마크로시클릭 킬레이터에 컨쥬게이팅될 수 있다. 특정 실시태양에서, 마크로시클릭 킬레이터는 링커 분자를 통해 항체에 부착될 수 있는 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-N,N',N",N'"-테트라아세트산 (DOTA)이다. 상기 링커 분자는 당업계에 일반적으로 공지되어 있고, 각각 그 전문을 참고로 포함시킨 문헌 ([Denardo et al., 1998, Clin Cancer Res. 4(10):2483-90]; [Peterson et al., 1999, Bioconjug. Chem. 10(4):553-7]; 및 [Zimmerman et al., 1999, Nucl. Med. Biol. 26(8):943-50])에 설명되어 있다.
또한, 본 발명의 항체는 마커 서열, 예를 들어 정제를 용이하게 하기 위해 펩티드에 융합될 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 마커 아미노산 서열은 헥사-히스티딘 펩티드, 예를 들어 특히 pQE 벡터 (퀴아겐, 인크. (QIAGEN, Inc.)) 내에 제공된 태그이고, 이 중 많은 것은 상업적으로 입수가능하다. 예를 들어, 문헌 [Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824]에 기재된 바와 같이, 헥사-히스티딘은 융합 단백질의 간편한 정제를 제공한다. 정제에 유용한 다른 펩티드 태그는 헤마글루티닌 ("HA") 태그 (이는 인플루엔자 헤마글루티닌 단백질로부터 유래된 에피토프에 대응한다 (Wilson et al., 1984, Cell 37:767)) 및 "FLAG" 태그를 포함하고 이로 제한되지 않는다.
항체에 치료 모이어티 (폴리펩티드 포함)를 융합 또는 컨쥬게이팅하는 방법은 잘 공지되어 있고, 예를 들어, 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 문헌 ([Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985)]; [Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987)]; [Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985)]; ["Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al., (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985)], [Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58]; 미국 특허 5,336,603, 5,622,929, 5,359,046, 5,349,053, 5,447,851, 5,723,125, 5,783,181, 5,908,626, 5,844,095 및 5,112,946; EP 307,434; EP 367,166; EP 394,827; PCT 공개 WO 91/06570, WO 96/04388, WO 96/22024, WO 97/34631 및 WO 99/04813; [Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-10539, 1991]; [Traunecker et al., Nature, 331:84-86, 1988]; [Zheng et al., J. Immunol., 154:5590-5600, 1995]; [Vil et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:11337-11341, 1992])을 참조한다.
융합 단백질은 예를 들어, 유전자-셔플링 (shuffling), 모티프-셔플링, 엑손-셔플링 및/또는 코돈-셔플링 ("DNA 셔플링"으로서 총칭함)의 기술을 통해 생성할 수 있다. DNA 셔플링은 본 발명의 항체의 활성 (예를 들어, 보다 높은 친화도 및 보다 낮은 해리율을 갖는 항체)을 변경시키기 위해 사용될 수 있다. 일반적으로, 미국 특허 5,605,793, 5,811,238, 5,830,721, 5,834,252 및 5,837,458; 문헌 ([Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33]; [Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82]; [Hansson et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76]; 및 [Lorenzo and Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308-313])을 참조한다 (이들 특허 및 공개는 각각 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨다). 항체 또는 코딩된 항체는 재조합 전에 오류 빈발 (error-prone PCR), 랜덤 뉴클레오티드 삽입 또는 다른 방법에 의해 랜덤 돌연변이 유발됨으로써 변경될 수 있다. 본 발명의 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 이종성 분자의 하나 이상의 성분, 모티프, 섹션, 부분, 도메인, 단편 등과 재조합될 수 있다.
본 발명의 항체는 또한 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 미국 특허 4,676,980에 설명된 바와 같이 제2 항체에 컨쥬게이팅되어 항체 헤테로컨쥬게이트를 형성할 수 있다.
hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 본 발명의 항체에 컨쥬게이팅되거나 재조합 방식으로 융합된 치료 모이어티 또는 약물은 목적하는 예방 또는 치료 효과(들)을 달성하도록 선택되어야 한다. 특정 실시태양에서, 항체는 변형된 항체이다. 임상의 또는 다른 의료 관련자는 본 발명의 항체에 컨쥬게이팅되거나 재조합 방식으로 융합되는 치료 모이어티 또는 약물을 결정할 때 다음을 고려해야 한다: 질병의 성질, 질병의 심도, 및 대상의 상태.
본 발명의 항체는 또한 고체 지지체에 부착될 수 있고, 이는 표적 항원의 면역분석 또는 정제에 특히 유용하다. 상기 고체 지지체는 유리, 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 나일론, 폴리스티렌, 폴리비닐클로라이드 또는 폴리프로필렌을 포함하고 이로 제한되지 않는다.
제약 조성물
본 발명의 본원에서 제공되는 하나 이상의 항체를 함유하는 치료 제제는 목적하는 정도의 순도를 갖는 항체를 동결건조 제제 또는 수용액 형태로 선택적인 생리학상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제 (Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA)와 혼합함으로써 저장을 위해 제조할 수 있다. 허용가능한 담체, 부형제, 또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수여자에게 무독성이고, 버퍼, 예를 들어 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 및 메티오닌; 방부제 (예를 들어 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤조토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예를 들어 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레졸시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어 글라이신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신; 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이팅제, 예를 들어 EDTA; 당, 예를 들어 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염 형성 반대 이온, 예를 들어 나트륨; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예를 들어 TWEEN™, PLURONICS™ 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함한다.
본원에서 제공되는 본 발명의 항체는 또한 예를 들어 리포좀 내에 제제화될 수 있다. 목적하는 분자를 함유하는 리포좀은 문헌 ([Epstein et al (1985) Proc. Natl. Acad, Sci. USA 82:3688]; [Hwang et al. (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030]); 및 미국 특허 4,485,045 및 4,544,545에 설명된 것과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 제조된다. 순환 시간이 향상된 리포좀은 미국 특허 5,013,556에 개시되어 있다.
특히 유용한 면역리포좀은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE)을 함유하는 액체 조성물을 사용하는 역상 증발 방법에 의해 생성할 수 있다. 리포좀은 규정된 공극 크기의 필터를 통해 압출되어 목적하는 직경의 리포좀을 생성한다. 본원에서 제공되는 항체의 Fab' 단편은 문헌 [Martin et al. (1982) J. Biol. Chem. 257:286-288]에 설명된 바와 같이 디술피드 교환 반응을 통해 리포좀에 컨쥬게이팅될 수 있다. 화학치료제 (예를 들어 독소루비신)가 임의로 리포좀 내에 함유된다 ([Gabizon et al., (1989) J. National Cancer Inst. 81(19):1484] 참조).
또한, 본원에서 설명되는 것과 같은 제제는 치료되는 특정 적응증에 대해 필요할 때 2개 이상의 활성 화합물을 함유할 수 있다. 특정 실시태양에서, 제제는 본 발명의 항체 및 서로 불리한 영향을 미치지 않는 상보성 활성을 갖는 하나 이상의 활성 화합물을 포함한다. 상기 분자들은 적합하게는 의도되는 목적에 효과적인 양으로 조합하여 존재한다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 하나 이상의 다른 치료제와 조합될 수 있다. 상기 조합 요법은 환자에게 연속적으로 또는 동시에 또는 순서대로 투여될 수 있다.
본 발명의 항체는 또한 예를 들어, 액적 형성 기술 또는 계면 중합화에 의해 제조된 마이크로캡슐 내에, 예를 들어, 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐, 콜로이드성 약물 전달계 (예를 들어, 리포좀, 알부민 미세구, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노캡슐) 내에 또는 마크로에멀젼 내에 포획될 수 있다. 상기 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA]에 개시되어 있다.
생체내 투여를 위해 사용될 제제는 멸균될 수 있다. 이는 예를 들어, 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성된다.
지속-방출 제제를 또한 제조할 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 길항제를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트리스를 포함하고, 상기 매트리스는 성형된 용품, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐 형태로 존재한다. 지속-방출 매트리스의 예는 폴리에스테르, 히드로겔 (예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드 (미국 특허 3,773,919), L-글루탐산 및 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예를 들어 LUPRON DEPOT™ (락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤리드 아세테이트로 이루어진 주사가능 미세구) 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산을 포함한다. 에틸렌-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산과 같은 중합체는 100일이 넘는 동안 분자의 방출을 가능하게 하는 반면, 특정 히드로겔은 보다 짧은 시간 동안 단백질을 방출한다. 캡슐화된 항체가 장시간 동안 체내에 남아있으면, 37℃에서 습기에 노출된 결과로서 변성하거나 응집될 수 있어서, 생물학적 활성의 손실 및 면역원성의 가능한 변화를 일으킨다. 관여된 메카니즘에 따라 안정화를 위한 합리적인 전략이 고안될 수 있다. 예를 들어, 응집 메카니즘이 티오-디술피드 교환을 통한 분자간 S--S 결합 형성인 것으로 발견되면, 안정화는 술프히드릴 잔기를 변형시키고, 산성 용액으로부터 동결건조시키고, 적절한 첨가제를 사용하여 함습량을 제어하고, 특수한 중합체 매트릭스 조성물을 개발함으로써 달성될 수 있다.
본원에서 제공되는 제약 조성물은 치료 유효량의 본원에서 제공되는 하나 이상의 본 발명의 항체, 및 임의로 하나 이상의 추가의 예방제 또는 치료제를 제약상 허용되는 담체 내에 함유한다. 상기한 제약 조성물은 hLIGHT-매개 질병, 예를 들어 염증성 장 질환 또는 그의 하나 이상의 증상의 예방, 치료, 관리 또는 개선에 유용하다.
본원에서 제공된 화합물의 투여에 적합한 제약학적 담체는 특정 투여 방식에 적합한 것으로 당업자에게 공지된 임의의 그러한 담체를 포함한다.
또한, 본 발명의 항체는 조성물 내에 제약 활성 성분 단독으로서 제제화될 수 있거나, 다른 활성 성분 (예를 들어, 하나 이상의 다른 예방제 또는 치료제)과 조합될 수 있다.
조성물은 본 발명의 하나 이상의 항체를 함유할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 항체는 적합한 제약 제제, 예를 들어 경구 투여를 위해 용액, 현탁액, 정제, 분산가능 정제, 알약, 캡슐, 분말, 지속 방출 제제 또는 엘릭시르로 또는 비경구 투여를 위해 멸균 용액 또는 현탁액으로, 및 경피 패치 제제 및 건조 분말 흡입기 내로 제제화된다. 하나의 실시태양에서, 상기 설명된 항체는 당업계에 잘 공지된 기술 및 절차를 사용하여 제약 조성물로 제제화된다 (예를 들어, Ansel (1985) Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4th Ed., p.126 참조).
조성물 내에서, 유효 농도의 하나 이상의 항체 또는 그의 유도체는 적합한 제약학적 담체와 혼합된다. 조성물 내의 화합물의 농도는 투여 시에 hLIGHT-매개 질병 또는 그의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 개선하는 양의 전달을 위해 효과적이다.
하나의 실시태양에서, 조성물은 단일 용량 투여를 위해 제제화된다. 조성물을 제제화하기 위해, 화합물의 중량 분획을 치료되는 병태가 경감되거나, 예방되거나, 하나 이상의 증상이 개선되도록 유효 농도로 선택된 담체 내에 용해시키거나, 현탁시키거나, 분산시키거나, 또는 달리 혼합한다.
본 발명의 항체는 치료받는 환자에 대해 바람직하지 않은 부작용이 없이 치료상 유용한 효과를 발휘하기에 충분한 유효량으로 제약상 허용되는 담체 내에 포함된다. 치료 유효 농도를 일상적인 방법을 사용하여 화합물을 시험관내 및 생체내 시스템 내에서 시험한 후, 인간에 대한 투여량에 대해 그로부터 외삽함으로써 경험적으로 결정할 수 있다.
제약 조성물 내의 항체의 농도는 예를 들어, 항체의 물리화학적 특징, 투여량 스케쥴 및 투여되는 양과 당업자에게 공지된 다른 인자에 따를 것이다.
하나의 실시태양에서, 치료 유효 투여량은 약 0.1 ng/ml 내지 약 50-100 ㎍/ml의 항체 혈청 농도를 생성시킨다. 다른 실시태양에서, 제약 조성물은 약 0.001 mg 내지 약 2000 mg의 항체/kg 체중/일의 투여량을 제공한다. 제약학적 투여량 단위 형태는 약 0.01 mg, 0.1 mg 또는 1 mg 내지 약 500 mg, 1000 mg 또는 2000 mg 및 하나의 실시태양에서 약 10 mg 내지 약 500 mg의 항체 및/또는 다른 선택적인 필수 성분의 조합물/투여량 단위 형태를 제공하도록 제조될 수 있다.
항체는 1회 투여될 수 있거나, 시간 간격을 두고 투여되는 많은 보다 적은 용량으로 분할될 수 있다. 정확한 투여량 및 치료의 지속시간은 치료되는 질병의 함수이고, 공지의 시험 프로토콜을 사용하여 경험적으로 또는 생체내 또는 시험관내 시험 데이타로부터 외삽법에 의해 결정될 수 있음이 이해된다. 농도 및 투여량 값은 경감시킬 병태의 심도에 따라 또한 변할 수 있음을 알아야 한다. 임의의 특정 대상에 대해, 구체적인 투여량 용법은 개인의 필요 및 조성물을 투여하거나 투여를 감독하는 사람의 전문적인 판단에 따라 시간이 지남에 따라 조정될 수 있고, 본원에 기재된 농도 범위는 단지 예시적인 것이고 청구된 조성물의 범위 또는 실시를 제한하는 것으로 의도되지 않음을 또한 이해해야 한다.
항체의 혼합 또는 첨가 시에, 생성되는 혼합물은 용액, 현탁액, 에멀젼 등일 수 있다. 생성되는 혼합물의 형태는 의도된 투여 방식 및 선택된 담체 또는 비히클 내의 화합물의 용해도를 포함한 많은 인자에 따른다. 유효 농도는 치료되는 질병, 질환 또는 병태의 증상을 개선하기 위해 충분하고, 경험적으로 결정될 수 있다.
제약 조성물은 인간 및 동물에 투여하기 위해 적합한 양의 화합물 또는 제약상 허용되는 그의 유도체를 함유하는 단위 투여 형태, 예를 들어 정제, 캡슐, 알약, 분말, 과립, 멸균 비경구 용액 또는 현탁액, 및 경구 용액 또는 현탁액, 및 오일-물 에멀젼으로 제공된다. 하나의 실시태양에서, 항체는 단위 투여 형태 또는 다중 투여 형태로 제제화되고 투여된다. 본원에서 사용될 때 단위 투여 형태는 인간 및 동물 대상에 적합하고 당업계에 공지된 바와 같이 개별 포장된 물리적으로 구분되는 단위를 나타낸다. 각각의 단위 투여형은 필요한 제약학적 담체, 비히클 또는 희석제와 연합시킨 목적하는 치료 효과를 생성하기 위해 충분한 소정량의 항체를 함유한다. 단위 투여 형태의 예는 앰플 및 주사기 및 개별 포장된 정제 또는 캡슐을 포함한다. 단위 투여 형태는 그의 분획 또는 다수로 투여될 수 있다. 다중 투여 형태는 분리된 단위 투여 형태로 투여될 단일 용기 내에 포장된 복수의 동일한 단위 투여 형태이다. 다중 투여 형태의 예는 바이알, 정제 또는 캡슐의 병, 또는 파인트 또는 갤런의 병을 포함한다. 따라서, 다중 투여 형태는 포장 내에 분리되지 않은 다수의 단위 투여형이다.
바람직한 실시태양에서, 본 발명의 하나 이상의 항-hLIGHT 항체는 액체 제약 제제로 존재한다. 액체의 제약학적 투여가능 조성물은 예를 들어, 상기 규정된 바와 같은 활성 화합물 및 선택적인 제약학적 어쥬번트 (adjuvant)를, 예를 들어 물, 염수, 수성 덱스트로스, 글리세롤, 글리콜, 에탄올 등과 같은 담체 내에 용해시키거나, 분산시키거나, 달리 혼합하여 용액 또는 현탁액을 형성함으로써 제조할 수 있다. 원하는 경우에, 투여될 제약 조성물은 또한 미량의 무독성 보조 물질, 예를 들어 습윤제, 유화제, 가용화제, pH 완충제 등, 예를 들어 아세테이트, 시트르산나트륨, 시클로덱스트린 유도체, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 아세트산나트륨, 트리에탄올아민 올레에이트 및 다른 그러한 물질을 함유할 수 있다.
상기 투여 형태를 제조하는 실제 방법은 공지되어 있거나, 당업자에게 자명할 것이다 (예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA 참조).
0.005% 내지 100%의 범위의 항체와 나머지 범위의 무독성 담체를 함유하는 투여 형태 또는 조성물이 제조될 수 있다. 이들 조성물의 제조 방법은 당업자에게 공지되어 있다.
경구 제약학적 투여 형태는 고체, 겔 또는 액체이다. 고체 투여 형태는 정제, 캡슐, 과립 및 벌크 (bulk) 분말이다. 경구 정제의 예는 장용-코팅되거나, 당-코팅되거나, 필름-코팅될 수 있는 압축 츄어블 로젠지 (lozenge) 및 정제를 포함한다. 캡슐은 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐일 수 있는 한편, 과립 및 분말은 당업자에게 공지된 다른 성분들의 조합으로 비-발포형 또는 발포형으로 제공될 수 있다.
특정 실시태양에서, 제제는 고체 투여 형태이다. 특정 실시태양에서, 제제는 캡슐 또는 정제이다. 정제, 알약, 캡슐, 트로키 (troche) 등은 하나 이상의 다음 성분 또는 유사한 성질의 화합물을 함유할 수 있다: 바인더; 윤활제; 희석제; 유동화제 (glidant); 붕해제; 착색제; 감미제; 향미제; 습윤제; 최토제 코팅; 및 필름 코팅을 함유할 수 있다. 바인더의 예는 미세결정질 셀룰로스, 검 트라가칸트, 글루코스 용액, 아카시아 점액, 젤라틴 용액, 당밀, 폴리비닐피롤리딘, 포비돈, 크로스포비돈, 수크로스 및 전분 페이스트를 포함한다. 윤활제는 탈크, 전분, 스테아르산마그네슘 또는 스테아르산칼슘, 리코포듐 및 스테아르산을 포함한다. 희석제는 예를 들어 락토스, 수크로스, 전분, 카올린, 염, 만니톨 및 인산이칼슘을 포함한다. 유동화제는 콜로이드성 이산화규소를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 붕해제는 크로스카르멜로스 나트륨, 나트륨 전분 글리콜레이트, 알긴산, 옥수수 전분, 감자 전분, 벤토나이트, 메틸셀룰로스, 아가 및 카르복시메틸셀룰로스를 포함한다. 착색제는 예를 들어 임의의 승인 인증된 수용성 FD 및 C 염료, 그의 혼합물; 및 알루미나 수화물 상에 현탁된 수불용성 FD 및 C 염료를 포함한다. 감미제는 수크로스, 락토스, 만니톨 및 인공 감미제, 예를 들어 사카린 및 임의의 많은 분무 건조된 향료를 포함한다. 향미제는 과일과 같은 식물로부터 추출한 천연 향료 및 비제한적으로 박하 및 메틸 살리실레이트와 같은 즐거운 미각을 생성시키는 화합물의 합성 블렌드를 포함한다. 습윤제는 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트, 소르비탄 모노올레에이트, 디에틸렌 글리콜 모노라우레이트 및 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르를 포함한다. 최토제 코팅은 지방산, 지방, 왁스, 셀락 (shellac), 암모니아처리 셀락 및 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트를 포함한다. 필름 코팅은 히드록시에틸셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜 4000 및 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트를 포함한다.
본 발명의 항체는 위의 산성 환경으로부터 그를 보호하는 조성물 내에 제공될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 위에서 그의 완전성을 유지하고 장에서 활성 화합물을 방출하는 장용 코팅 내에 제제화될 수 있다. 조성물은 또한 제산제 또는 다른 그러한 성분과 조합으로 제제화될 수 있다.
투여 단위 형태가 캡슐일 때 상기한 종류의 물질에 추가로 액체 담체, 예를 들어 지방 오일을 함유할 수 있다. 또한, 투여 단위 형태는 투여 단위의 물리적 형태를 변형시키는 다양한 다른 물질, 예를 들어, 당 및 다른 장용제의 코팅을 함유할 수 있다. 화합물을 또한 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 (wafer), 스프링클 (sprinkle), 츄잉 검 등의 성분으로서 투여될 수 있다. 시럽은 활성 화합물에 추가로 감미제로서 수크로스 및 특정 방부제, 염료 및 착색제 및 향료를 함유할 수 있다.
항체는 또한 목적하는 작용을 저해하지 않는 다른 활성 물질, 또는 목적하는 작용을 보충하는 물질, 예를 들어 제산제, H2 차단제 및 이뇨제와 혼합될 수 있다. 활성 성분은 본원에서 설명된 항체 또는 그의 제약상 허용되는 유도체이다. 보다 고농도, 약 98 중량% 이하의 활성 성분이 포함될 수 있다.
모든 실시태양에서, 정제 및 캡슐 제제는 활성 성분의 분해를 변형 또는 지속시키기 위해 당업자에게 공지된 바와 같이 코팅될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 이들은 통상적인 장용 코팅, 예를 들어 페닐살리실레이트, 왁스 및 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트로 코팅될 수 있다.
바람직한 실시태양에서, 제제는 액체 투여 형태이다. 액체 경구 투여 형태는 수용액, 에멀젼, 현탁액, 용액 및/또는 비-발포성 과립으로부터 재구성된 현탁액 및 발포성 과립으로부터 재구성된 발포성 제제를 포함한다. 수용액은 예를 들어, 엘릭시르 및 시럽을 포함한다. 에멀젼은 수중유형 또는 유중수형이다.
엘릭시르는 투명한 감미 수성알콜 제제이다. 엘릭시르에 사용되는 제약상 허용되는 담체는 용매를 포함한다. 시럽은 당, 예를 들어 수크로스의 농축 수용액이고, 방부제를 함유할 수 있다. 에멀젼은 하나의 액체가 작은 구형으로 다른 액체 전체에 분산된 2상계이다. 에멀젼에 사용되는 제약상 허용되는 담체는 비-수성 액체, 유화제 및 방부제이다. 현탁액은 제약상 허용되는 현탁제 및 방부제를 사용한다. 액체 경구 투여 형태로 재구성되는 비-발포성 과립에 사용되는 제약상 허용되는 물질은 희석제, 감미료 및 습윤제를 포함한다. 액체 경구 투여 형태로 재구성되는 발포성 과립에 사용되는 제약상 허용되는 물질은 유기산 및 이산화탄소원을 포함한다. 착색제 및 향미제는 상기 투여 형태 모두에 사용된다.
용매는 글리세린, 소르비톨, 에틸 알콜 및 시럽을 포함한다. 방부제의 예는 글리세린, 메틸 및 프로필파라벤, 벤조산, 벤조산나트륨 및 알콜을 포함한다. 에멀젼에 사용되는 비-수성 액체의 예는 광유 및 면실유를 포함한다. 유화제의 예는 젤라틴, 아카시아, 트라가칸트, 벤토나이트 및 계면활성제, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 포함한다. 현탁제는 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 펙틴, 트라가칸트, 비검 (Veegum) 및 아카시아를 포함한다. 감미제는 수크로스, 시럽, 글리세린 및 인공 감미제, 예를 들어 사카린을 포함한다. 습윤제는 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트, 소르비탄 모노올레에이트, 디에틸렌 글리콜 모노라우레이트 및 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르를 포함한다. 유기산은 시트르산 및 타르타르산을 포함한다. 이산화탄소원은 중탄산나트륨 및 탄산나트륨을 포함한다. 착색제는 임의의 승인 인증된 수용성 FD 및 C 염료와 그의 혼합물을 포함한다. 향미제는 과일과 같은 식물로부터 추출한 천연 향료, 및 즐거운 미각을 생성시키는 화합물의 합성 블렌드를 포함한다.
고체 투여 형태를 위해, 예를 들어 프로필렌 카르보네이트, 식물유 또는 트리글리세리드 중의 용액 또는 현탁액은 하나의 실시태양에서 젤라틴 캡슐 내에 캡슐화된다. 상기 용액 및 그의 제조 및 캡슐화는 미국 특허 4,328,245; 4,409,239; 및 4,410,545에 개시되어 있다. 액체 투여 형태를 위해, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 중의 용액은 투여를 위해 쉽게 측정되도록 충분한 양의 제약상 허용되는 액체 담체, 예를 들어, 물로 희석될 수 있다.
별법으로, 액체 또는 반-고체 경구 제제는 활성 화합물 또는 염을 식물유, 글리콜, 트리글리세리드, 프로필렌 글리콜 에스테르 (예를 들어, 프로필렌 카르보네이트) 및 다른 그러한 담체에 용해 또는 분산시키고, 상기 용액 또는 현탁액을 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐 외피에 캡슐화함으로써 제조할 수 있다. 다른 유용한 제제는 미국 특허 RE28,819와 4,358,603에 기재된 것을 포함한다. 간단히 설명하면, 상기 제제는 본원에서 제공되는 화합물, 디알킬화 모노- 또는 폴리-알킬렌 글리콜, 비제한적인 예를 들어 1,2-디메톡시메탄, 디글라임, 트리글라임, 테트라글라임, 폴리에틸렌 글리콜-350-디메틸 에테르, 폴리에틸렌 글리콜-550-디메틸 에테르, 폴리에틸렌 글리콜-750-디메틸 에테르 (여기서 350, 550 및 750은 폴리에틸렌 글리콜의 대략적인 평균 분자량을 나타낸다) 및 하나 이상의 항산화제, 예를 들어 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 프로필 갈레이트, 비타민 E, 히드로퀴논, 히드록시쿠마린, 에탄올아민, 레시틴, 세팔린, 아스코르브산, 말산, 소르비톨, 인산, 티오디프로피온산과 그의 에스테르 및 디티오카르바메이트를 함유하는 것을 포함하고 이로 제한되지 않는다.
다른 제제는 제약상 허용되는 아세탈을 포함하는 수성 알콜 용액을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 상기 제제에 사용되는 알콜은 프로필렌 글리콜 및 에탄올을 포함하고 이로 제한되지 않는, 하나 이상의 히드록실기를 갖는 임의의 제약상 허용되는 수-혼화성 용매이다. 아세탈은 저급 알킬 알데히드의 디(저급 알킬) 아세탈, 예를 들어 아세트알데히드 디에틸 아세탈을 포함하고 이로 제한되지 않는다.
하나의 실시태양에서, 주사 (피하, 근육내 또는 정맥내)를 특징으로 하는 비경구 투여가 또한 본원에서 고려된다. 주사가능 물질은 통상적인 형태로 액체 용액 또는 현탁액, 주사 전에 액체 중의 용액 또는 현탁액에 적합한 고체형 또는 에멀젼으로서 제조될 수 있다. 주사가능 물질, 용액 및 에멀젼은 또한 하나 이상의 부형제를 함유한다. 적합한 부형제는 예를 들어 물, 염수, 덱스트로스, 글리세롤 또는 에탄올이다. 또한, 원하는 경우에, 투여될 제약 조성물은 또한 미량의 무독성 보조 물질, 예를 들어 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 안정화제, 용해도 강화제 및 다른 그러한 물질, 예를 들어 아세트산나트륨, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트 및 시클로덱스트린을 함유할 수 있다.
일정 수준의 투여량을 유지시키는 서방 또는 지속-방출 시스템 (예를 들어, 미국 특허 3,710,795 참조)의 이식이 또한 본원에서 고려된다. 간단히 설명하면, 본원에서 제공되는 화합물은 체액에 불용성인 외부 중합체 막, 예를 들어 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 에틸렌/프로필렌 공중합체, 에틸렌/에틸 아크릴레이트 공중합체, 에틸렌/비닐아세테이트 공중합체, 실리콘 고무, 폴리디메틸 실록산, 네오프렌 고무, 염소화 폴리에틸렌, 폴리비닐클로라이드, 비닐클로라이드의 비닐 아세테이트, 비닐리덴 클로라이드, 에틸렌 및 프로필렌과의 공중합체, 이오노머 폴리에틸렌 테레프탈레이트, 부틸 고무 에피클로로히드린 고무, 에틸렌/비닐 알콜 공중합체, 에틸렌/비닐 아세테이트/비닐 알콜 3원 공중합체 및 에틸렌/비닐옥시에탄올 공중합체에 의해 둘러싸인 고체 내부 매트릭스, 예를 들어 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리부틸메타크릴레이트, 가소성 또는 비가소성 폴리비닐클로라이드, 가소성 나일론, 가소성 폴리에틸렌테레프탈레이트, 천연 고무, 폴리이소프렌, 폴리이소부틸렌, 폴리부타디엔, 폴리에틸렌, 에틸렌-비닐아세테이트 공중합체, 실리콘 고무, 폴리디메틸실록산, 실리콘 카르보네이트 공중합체, 친수성 중합체, 예를 들어 아크릴산 및 메타크릴산의 에스테르의 히드로겔, 콜라겐, 가교결합된 폴리비닐알콜 및 가교결합된 부분적으로 가수분해된 폴리비닐 아세테이트 내에 분산된다. 항체는 방출 속도 제어 단계에 외부 중합체 막을 통해 확산한다. 상기 비경구 조성물 내에 함유된 항체의 양은 그의 구체적인 성질 및 화합물의 활성과 대상의 필요에 매우 의존적이다.
비경구 투여를 위한 제제는 즉시 주사하기 위한 멸균 용액, 사용 직전에 용매와 조합하기 위한 멸균 건조 가용성 산물, 예를 들어 동결건조 분말, 예를 들어 피하 정제, 즉시 주사하기 위한 멸균 현탁액, 사용 직전에 비히클과 조합하기 위한 멸균 건조 불용성 산물 및 멸균 에멀젼을 포함한다. 용액은 수성 또는 비수성일 수 있다.
정맥내 투여되는 경우에, 적합한 담체는 생리 염수 또는 포스페이트 완충 염수 (PBS), 및 농후제 및 가용화제, 예를 들어 글루코스, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜 및 그의 혼합물을 함유하는 용액을 포함한다.
비경구 제제에 사용되는 제약상 허용되는 담체는 수성 비히클, 비수성 비히클, 항미생물제, 등장제, 버퍼, 항산화제, 국소 마취제, 현탁 및 분산제, 유화제, 봉쇄 (sequestering) 또는 킬레이팅제 및 다른 제약상 허용되는 물질을 포함한다.
수성 비히클의 예는 염화나트륨 주사액, 링거 (Ringers) 주사액, 등장성 덱스트로스 주사액, 멸균수 주사액, 덱스트로스 및 유산 첨가 (lactated) 링거 주사액을 포함한다. 비수성 비경구 비히클은 식물 기원의 고정유, 면실유, 옥수수유, 참기름 및 땅콩유를 포함한다. 정균 또는 정진균 농도의 항미생물제가 다수-용량 용기에 포장된 비경구 제제에 첨가될 수 있고, 이는 페놀 또는 크레졸, 수은제, 벤질 알콜, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-히드록시벤조산 에스테르, 치메로살, 벤즈알코늄 클로라이드 및 벤조토늄 클로라이드를 포함한다. 등장제는 염화나트륨 및 덱스트로스를 포함한다. 버퍼는 포스페이트 및 시트레이트를 포함한다. 항산화제는 중황산나트륨을 포함한다. 국소 마취제는 염산프로카인을 포함한다. 현탁 및 분산제는 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스 및 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 유화제는 폴리소르베이트 (Polysorbate) 80 (TWEEN(등록상표) 80)을 포함한다. 금속 이온의 봉쇄 또는 킬레이팅제는 EDTA를 포함한다. 제약학적 담체는 또한 수혼화성 비히클을 위한 에틸 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜; 및 pH 조정을 위한 수산화나트륨, 염산, 시트르산 또는 락트산을 포함한다.
제약 활성 화합물의 농도는 주사가 목적하는 약물학적 효과를 제공하기 위해 유효량을 제공하도록 조정된다. 정확한 용량은 당업계에 공지된 바와 같이 환자 또는 동물의 연령, 체중 및 상태에 좌우된다.
단위 용량 비경구 제제는 앰플, 바이알 또는 바늘이 있는 주사기 내에 포장될 수 있다. 비경구 투여를 위한 모든 제제는 당업계에 공지되고 실시되는 바와 같이 멸균되어야 한다.
예시적으로, 활성 화합물을 함유하는 멸균 수용액의 정맥내 또는 동맥내 주입이 효과적인 투여 방식이다. 다른 실시태양은 목적하는 약물학적 효과를 생성하기 위해 필요한 만큼 주사되는 활성 물질을 함유하는 멸균 수용액 또는 유성 용액 또는 현탁액이다.
주사가능 물질은 국소 및 전신 투여를 위해 설계된다. 하나의 실시태양에서, 치료 유효 투여량은 처리된 조직(들)에 적어도 약 0.1% w/w 내지 약 90% w/w 이상, 특정 실시태양에서 1% w/w 이상의 활성 화합물의 농도를 함유하도록 제제화된다.
항체는 미소화 또는 다른 적합한 형태로 현탁될 수 있다. 생성되는 혼합물의 형태는 의도되는 투여 방식 및 선택된 담체 또는 비히클 내의 화합물의 용해도를 포함한 많은 인자에 의해 좌우된다. 효과적인 농도는 병태의 증상을 개선하기 위해 충분하고, 경험적으로 결정될 수 있다.
다른 실시태양에서, 제약학적 제제는 투여를 위해 용액, 에멀젼 및 다른 혼합물로서 재구성될 수 있는 동결건조 분말이다. 이들은 또한 고체 또는 겔로서 재구성되거나 제제화될 수 있다.
동결건조 분말은 본원에서 제공되는 항체 또는 제약상 허용되는 그의 유도체를 적합한 용매에 용해시킴으로써 제조된다. 일부 실시태양에서, 동결건조 분말은 무균이다. 용매는 안정성을 증진시키는 부형제 또는 분말, 또는 분말로부터 제조된 재구성된 용액의 다른 약물학적 성분을 함유할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는 덱스트로스, 소르비탈, 프룩토스, 옥수수 시럽, 자일리톨, 글리세린, 글루코스, 수크로스 또는 다른 적합한 물질을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 용매는 또한 버퍼, 예를 들어 시트레이트, 인산나트륨 또는 인산칼륨 또는 당업자에게 공지된 다른 그러한 버퍼를 하나의 실시태양에서 약 중성 pH에서 함유할 수 있다. 용액을 후속적으로 멸균 여과한 후, 당업자에게 공지된 표준 조건 하에 동결건조하여 목적하는 제제를 제공한다. 하나의 실시태양에서, 생성되는 용액은 동결건조를 위해 바이알 내로 배분된다. 각각의 바이알은 단일 투여량 또는 다중 투여량의 화합물을 함유할 것이다. 동결건조 분말은 적절한 조건, 예를 들어 약 4℃ 내지 실온 하에 저장될 수 있다.
주사용수를 사용하여 상기 동결건조 분말을 재구성하여 비경구 투여에 사용하기 위한 제제를 제공한다. 재구성을 위해, 동결건조 분말을 멸균수 또는 다른 적합한 담체에 첨가한다. 정확한 양은 선택된 화합물에 좌우된다. 상기 양은 경험적으로 결정될 수 있다.
국소 (topical) 혼합물은 국소 및 전신 투여를 위해 설명된 바와 같이 제조된다. 생성되는 혼합물은 용액, 현탁액, 에멀젼 등일 수 있고, 크림, 젤, 연고, 에멀젼, 용액, 엘릭시르, 로션, 현탁액, 팅크제 (tincture), 페이스트, 포움, 에어로졸, 세척액 (irrigation), 스프레이, 좌제, 밴드, 피부 패치 또는 국소 투여에 적합한 임의의 다른 제제로서 제제화될 수 있다.
본 발명의 항체는 예를 들어 흡입에 의한 국소 적용을 위한 에어로졸로서 제제화될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 4,044,126, 4,414,209 및 4,364,923 참조, 이는 염증성 질병, 특히 천식의 치료에 유용한 스테로이드의 전달을 위한 에어로졸을 설명한다). 기도로 투여하기 위한 이들 제제는 네뷸라이저 (nebulizer)용 에어로졸 또는 용액의 형태, 또는 통기법 (insufflation)을 위한 미세 분말로서 단독으로 또는 락토스와 같은 불활성 담체와 조합으로 존재할 수 있다. 상기한 경우에, 하나의 실시태양에서, 제제의 입자는 직경이 50 미크론 미만, 하나의 실시태양에서 10 미크론 미만일 것이다.
화합물은 국소 또는 국소 적용하기 위해, 예를 들어 예를 들어 눈에서 피부 및 점막에 국소 적용하기 위해 젤, 크림 및 로션의 형태로 및 눈에 적용하기 위해 또는 뇌수조내 또는 척수강내 적용을 위해 제제화될 수 있다. 국소 투여는 경피 전달을 위해 및 또한 눈 또는 점막에 투여하기 위해 또는 흡입 요법을 위해 고려된다. 활성 화합물 단독 또는 다른 제약상 허용되는 부형제와의 조합으로의 비강 용액이 또한 고려될 수 있다.
상기 용액, 특히 안과 용도로 의도되는 용액은 적절한 염을 사용하여 0.01% - 10% 등장성 용액, pH 약 5-7로서 제제화될 수 있다.
다른 투여 경로, 예를 들어 이온영동 및 전기영동 장치를 포함한 경피 패치 및 직장 투여가 또한 본원에서 고려된다.
이온영동 및 전기영동 장치를 포함한 경피 패치는 당업자에게 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 상기 패치는 미국 특허 6,267,983, 6,261,595, 6,256,533, 6,167,301, 6,024,975, 6,010715, 5,985,317, 5,983,134, 5,948,433 및 5,860,957에 개시되어 있다.
예를 들어, 직장 투여를 위한 제약학적 투여 형태는 전신 효과를 위한 직장 좌제, 캡슐 및 정제이다. 본원에서 사용되는 직장 좌제는 체온에서 용융하거나 연화되어 하나 이상의 약리학상 또는 치료상 활성 성분을 방출하는, 직장 내로 삽입하기 위한 고체를 의미한다. 직장 좌제에 사용되는 제약상 허용되는 물질은 베이스 (base) 또는 비히클 및 용융점을 상승시키는 물질이다. 베이스의 예는 코코아 버터 (코코아 오일 (theobroma oil)), 글리세린-젤라틴, 카르보왁스 (폴리옥시에틸렌 글리콜) 및 지방산의 모노-, 디- 및 트리글리세리드의 적절한 혼합물을 포함한다. 다양한 염기의 조합을 사용할 수 있다. 좌제의 용융점을 상승시키는 물질은 스퍼마세티 (spermaceti) 및 왁스를 포함한다. 직장 좌제는 압축법 또는 성형에 의해 제조할 수 있다. 하나의 실시태양에서 직장 좌제의 중량은 약 2 내지 3 g이다.
직장 투여를 위한 정제 및 캡슐은 경구 투여용 제제를 위한 것과 동일한 제약상 허용되는 물질을 사용하여 동일한 방법에 의해 제조될 수 있다.
본원에서 제공되는 항체 및 다른 조성물은 또한 치료되는 대상의 신체의 특정 조직, 수용체 또는 다른 영역에 표적화되도록 제제화될 수 있다. 많은 그러한 표적화 방법이 당업자에게 잘 공지되어 있다. 모든 그러한 표적화 방법이 본 발명의 조성물에서 사용하기 위해 본원에서 고려된다. 표적화 방법의 비제한적인 예에 대해서는 예를 들어, 미국 특허 6,316,652, 6,274,552, 6,271,359, 6,253,872, 6,139,865, 6,131,570, 6,120,751, 6,071,495, 6,060,082, 6,048,736, 6,039,975, 6,004,534, 5,985,307, 5,972,366, 5,900,252, 5,840,674, 5,759,542 및 5,709,874를 참조한다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 항-hLIGHT 항체는 예를 들어 IBD에 걸린 또는 걸릴 위험이 있는 환자에서 대장에 표적화된다 (또는 달리 투여된다).
하나의 실시태양에서, 조직-표적화 리포좀, 예를 들어 종양-표적화 리포좀을 포함하는 리포좀 현탁액이 또한 제약상 허용되는 담체로서 적합할 수 있다. 이들은 당업자에게 공지된 방법에 따라 제조할 수 있다. 예를 들어, 리포좀 제제는 미국 특허 4,522,811에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 간단히 설명하면, 리포좀, 예를 들어 다층판 소포 (multilamellar vesicle; MLV)는 플라스크의 내부 상에서 난 (egg) 포스파티딜 콜린과 뇌 포스파티딜 세린 (7:3 몰비)을 건조시킴으로써 형성할 수 있다. 2가 양이온이 결핍되는 포스페이트 완충 염수 (PBS) 내의 본원에서 제공되는 화합물의 용액을 첨가하고, 액체 필름이 분산될 때까지 플라스크를 진탕시킨다. 생성되는 소포를 세척하여 캡슐화되지 않은 화합물을 제거하고, 원심분리에 의해 펠렛화한 후, PBS 중에 재현탁한다.
투여 및 투약 방법
본 발명은 hLIGHT-매개 질병 (또는 그의 증상)의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 유용한 본 발명의 하나 이상의 항체를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다.
특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병, 예를 들어 IBD (예를 들어, 궤양 대장염 또는 크론병) 또는 그의 증상의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 유용한 본 발명의 하나 이상의 항체를 포함하는 조성물을 본원에서 제공한다. IBD 증상은 경증에서 중증까지 이를 수 있고, 일반적으로 관여된 장관의 부분에 의해 좌우된다. IBD의 예시적인 증상은 복부 경련 및 복통, 혈성 설사, 중증 배변 절박, 열, 식욕 상실, 체중 감소, 빈혈, 피로, 및/또는 하지, 발목, 종아리, 허벅지 및 팔의 궤양을 포함한다. IBD의 예시적인 장 합병증은 장의 궤양, 천공 또는 파열로부터 많은 출혈, 협착 및 폐쇄, 누공 (fistulae) (비정상 통로) 및 항문주위 질병, 독성 거대대장증 (예를 들어, 대장의 급성 비폐쇄성 확장) 및/또는 악성종양 (예를 들어, 대장 또는 소장의 암)을 포함한다. IBD의 예시적인 장외 합병증은 관절염, 피부 병태, 눈의 염증, 간 및 신장 질환 및/또는 뼈 손실을 포함한다. 이들 증상의 임의의 조합이 본원에 제공된 조성물 및 방법을 사용하여 예방되고/되거나 관리되고/되거나 치료되고/되거나 개선될 수 있다.
특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병, 예를 들어 GVHD 또는 그의 증상의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 유용한 본 발명의 하나 이상의 항체를 포함하는 조성물을 본원에서 제공한다. GVHD는 일반적으로 동종이형 또는 일치된 비관련 골수 이식 (BMT) 후 일어난다.
일부 실시태양에서, GVHD는 급성 GVHD이다. 급성 GVHD의 증상은 빠르게 일어날 수 있고, 경증 또는 중증일 수 있다. 특정한 경우에, 급성 GVHD는 이식 후 약 3개월 이내에, 예를 들어 이식 후 혈구수가 회복될 때 발병한다. 특정한 경우에, 급성 GVHD는 피부, 위장관 (GI) 및/또는 간에 침범한다. 예를 들어, 일부 환자에서, 급성 피부 GVHD는 예를 들어, 환자의 손바닥, 발바닥 또는 어깨에서 발진으로 시작한다. 그러나, 발진은 확산될 수 있고, 가렵고 아플 수 있고/있거나 물집이 생기고 벗겨질 수도 있다. 급성 간 GVHD는 간, 예를 들어 간 효소의 정상 기능을 해칠 수 있고, 이는 다시 황달을 일으킬 수 있다. 급성 간 GVHD는 또한 간이 팽대되면 환자의 복부를 팽창시키고 아프게 할 수 있다. 마지막으로, 급성 창자 GVHD (또는 소화계 GVHD)의 증상은 설사, 대변 내 점액 또는 혈액, 경련 또는 복통, 소화불량, 오심 및/또는 식욕 상실을 포함할 수 있다. 급성 GVHD의 다른 일반적인 증상은 빈혈, 미열 및/또는 감염 가능성 증가를 포함할 수 있다. 급성 GVHD의 이들 증상의 임의의 조합이 본원에 제공된 조성물 및 방법을 사용하여 예방되고/되거나 관리되고/되거나 치료되고/되거나 개선될 수 있다.
다른 실시태양에서, GVHD는 만성 GVHD이다. 만성 GVHD는 이식 후 약 3개월 내지 약 1년 또는 그 후 발생할 수 있다. 만성 GVHD는 경증 또는 중증일 수 있고, 일반적으로 급성 GVHD와 유사한 증상을 포함한다. 만성 GVHD는 피부 및 소화계, 예를 들어 간에 침범할 수 있지만, 또한 다른 장기 및 면역계 (예를 들어, 환자의 감염 가능성을 증가시킨다) 및/또는 결합 조직에 관련될 수 있다. 만성 피부 GVHD의 증상은 발진, 피부 건조, 피부 당김, 피부 가려움, 어두운 피부색, 피부 비후를 포함하고/하거나 모발 (예를 들어 탈모, 백발) 또는 손발톱 (예를 들어 딱딱하거나 부서지기 쉬운 손발톱)에 침범할 수 있다. 만성 창자 GVHD는 소화계, 입, 식도, 위 내벽 및/또는 장 내벽에 침범할 수 있고, 증상은 설사, 구갈 또는 구내염, 연하 통증, 위에 의한 영양 흡수 저하, 고창, 위 경련을 포함할 수 있다. 만성 간 GVHD는 간 손상 및 흉터형성 (경화증)을 일으킬 수 있다. 눈의 만성 GVHD는 눈물샘에 침범할 수 있어서, 눈을 건조하고 작열하고 아프게 하거나 밝은 빛에 견디기 어렵게 한다. 만성 폐 GVHD는 호흡 곤란, 천명, 지속적인 기침 및/또는 흉부 감염 가능성 증가를 일으킬 수 있다. 만성 GVHD는 근육을 뼈에 연결시키는 건 (예를 들어, 염증)에 침범할 수 있어서, 팔과 다리를 뻗거나 굽히기 어렵게 한다. 만성 GVHD의 이들 증상의 임의의 조합은 본원에 제공된 조성물 및 방법을 사용하여 예방되고/되거나 관리되고/되거나 치료되고/되거나 개선될 수 있다.
특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23 항체를 포함한다. 하나의 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)를 포함한다. 다른 특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23 항체의 항원 결합 단편을 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 항원 결합 단편을 포함한다.
또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH 도메인 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH 도메인을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 11, 14, 17, 20 또는 23에 제시된 (즉, 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH의 VH CDR1), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR1 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR1을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개된 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 12, 15, 18, 21 또는 24에 제시된 (즉, 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH의 VH CDR2), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR2 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR2를 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다. 바람직한 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 13, 16, 19, 22 또는 25에 제시된 (즉, 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH의 VH CDR3), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR3 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR3을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다.
또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL 도메인 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL 도메인을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 84, 26, 85, 29, 32, 93, 35, 94, 95 또는 38에 제시된 (즉, 각각 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL의 VL CDR1), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR1 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR1을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39에 제시된 (즉, 각각 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL의 VL CDR2); 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR2 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR2를 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다. 바람직한 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40에 제시된 (즉, 각각 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL의 VL CDR3); 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR3 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR3을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다.
또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH 도메인 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH 도메인, 및 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된, 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL 도메인 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL 도메인을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다.
또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 11, 14, 17, 20 또는 23에 제시된 (즉, 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH의 VH CDR1), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR1 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR1, 및 서열 84, 26, 85, 29, 32, 93, 35, 94, 95 또는 38에 제시된 (즉, 각각 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL의 VL CDR1), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR1 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR1을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 11, 14, 17, 20 또는 23에 제시된 (즉, 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH의 VH CDR1), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR1 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR1, 및 서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39에 제시된 임의의 하나의 VL CDR2 (즉, 각각 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL의 VL CDR2)의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR2을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 11, 14, 17, 20 또는 23에 제시된 (즉, 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH의 VH CDR1), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR1 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR1, 및 서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40에 제시된 (즉, 각각 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL의 VL CDR3), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR3 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR3을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다.
또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 12, 15, 18, 21 또는 24에 제시된 (즉, 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH의 VH CDR2), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR2 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR2, 및 서열 84, 26, 85, 29, 32, 93, 35, 94, 95 또는 38에 제시된 (즉, 각각 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL의 VL CDR1), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR1 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR1을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 12, 15, 18, 21 또는 24에 제시된 (즉, 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH의 VH CDR2), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR2 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR2, 및 서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39에 제시된 (즉, 각각 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL의 VL CDR2), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR2 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR2를 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 12, 15, 18, 21 또는 24에 제시된 (즉, 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH의 VH CDR2), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR2 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR2, 및 서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40에 제시된 (즉, 각각 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL의 VL CDR3), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR3 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR3을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다.
또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 13, 16, 19, 22 또는 25에 제시된 (즉, 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH의 VH CDR3), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR3 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR3, 및 서열 84, 26, 85, 29, 32, 93, 35, 94, 95 또는 38에 제시된 (즉, 각각 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL의 VL CDR1), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR1 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR1을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 13, 16, 19, 22 또는 25에 제시된 (즉, 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH의 VH CDR3), 또는 ATCC 기탁 번호 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR3 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR3, 및 서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39에 제시된 (즉, 각각 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL의 VL CDR2), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR2 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR2를 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 13, 16, 19, 22 또는 25에 제시된 (즉, 각각 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH의 VH CDR3), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR3 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VH CDR3, 및 서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40에 제시된 (즉, 각각 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL의 VL CDR3), 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR3 중의 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR3을 포함하는 하나 이상의 항체를 포함한다.
하나의 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 서열 1, 2, 3, 4 또는 5 중 임의의 하나에 제시된 VH 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91 또는 10 중 임의의 하나에 제시된 VL 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 (a) 서열 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 서열 82, 6 또는 83 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; (b) 서열 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 서열 7에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; (c) 서열 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 서열 8에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; (d) 서열 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 서열 90, 9, 91 또는 92 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; 또는 (e) 서열 5에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 서열 10에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
일부 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및/또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL 도메인의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7729인 항체 (E1)의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729인 항체 (E1)의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7842인 항체 (E13)의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 ATCC 기탁 번호가 PTA-7842인 항체 (E13)의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; (c) ATCC 기탁 번호가 PTA-7818인 항체 (E63)의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 ATCC 기탁 번호가 PTA-7818인 항체 (E63)의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; (d) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819인 항체 (F19)의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 ATCC 기탁 번호가 PTA-7819인 항체 (F19)의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인; 또는 (e) ATCC 기탁 번호가 PTA-7728인 항체 (F23)의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 ATCC 기탁 번호가 PTA-7728이 항체 (F23)의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
일부 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나의 VH CDR1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1을 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나의 VH CDR2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2를 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나의 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함한다. 특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나에 제시된 바와 같은 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3 중에서 독립적으로 선택된 VH CDR1 및/또는 VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 포함한다.
본 발명은 또한 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하는, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물을 제공하고, 상기 항체는 E1, E13, E63, F19 및/또는 F23의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR 중의 임의의 하나 (즉, VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3)의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 VL CDR (즉, VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3); 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 (1) (a) 각각 서열 11, 12 및/또는 13에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, (b) 각각 서열 14, 15 및/또는 16에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, (c) 각각 서열 17, 18 및/또는 19에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, (d) 각각 서열 20, 21 및/또는 22에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, 또는 (e) 각각 서열 23, 24 및/또는 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (2) (a) 서열 84, 26 또는 85 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; 서열 86, 27 또는 87 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및/또는 서열 88, 28 또는 89 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, (b) 각각 서열 29, 30 및/또는 31에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3, (c) 각각 서열 32, 33 및/또는 34에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3, (d) 서열 93, 35, 94 또는 95 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; 서열 96, 36, 97 또는 98 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및/또는 서열 99, 37, 100 또는 101 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 (e) 각각 서열 38, 39 및/또는 40에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
일부 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 (1) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7729인 항체 (E1)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7842인 항체 (E13)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, (c) ATCC 기탁 번호가 PTA-7818인 항체 (E63)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, (d) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819인 항체 (F19)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3, 또는 (e) ATCC 기탁 번호가 PTA-7728인 항체 (F23)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (2) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7729인 항체 (E1)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3, (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7842인 항체 (E13)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3, (c) ATCC 기탁 번호가 PTA-7818인 항체 (E63)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3, (d) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819인 항체 (F19)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3, 또는 (e) ATCC 기탁 번호가 PTA-7728인 항체 (F23)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 (1) (a) 각각 서열 11, 12 및/또는 13에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) 서열 84, 26 또는 85 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; 서열 86, 27 또는 87 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및/또는 서열 88, 28 또는 89 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; (2) (a) 각각 서열 14, 15 및/또는 16에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) 각각 서열 29, 30 및/또는 31에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; (3) (a) 각각 서열 17, 18 및/또는 19에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) 각각 서열 32, 33 및/또는 34에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; (4) (a) 각각 서열 20, 21 및/또는 22에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) 서열 93, 35, 94 또는 95 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; 서열 96, 36, 97 또는 98 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및/또는 서열 99, 37, 100 또는 101 중의 임의의 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; 또는 (5) (a) 각각 서열 23, 24 및/또는 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) 각각 서열 38, 39 및/또는 40에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
일부 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 (1) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7729인 항체 (E1)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7729인 항체 (E1)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; (2) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7842인 항체 (E13)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7842인 항체 (E13)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; (3) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7818인 항체 (E63)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7818인 항체 (E63)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; (4) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819인 항체 (F19)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819인 항체 (F19)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인; 또는 (5) (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7728인 항체 (F23)의 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 및 (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7728인 항체 (F23)의 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
일부 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR1의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1을 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR2의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2를 포함한다. 또다른 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함한다. 특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나에 제시된; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3 중에서 독립적으로 선택된 VL CDR1 및/또는 VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 포함한다.
일부 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하고, 상기 항체는 (1) 하나 이상의 (a) 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR1의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, (b) 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR2의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 또는 (c) 서열 1, 2, 3, 4 또는 5에 제시된 VH 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VH CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 갖는 VH 도메인 또는 사슬; 및/또는 (2) 하나 이상의 (a) 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR1의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, (b) 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR2의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및/또는 (c) 서열 82, 6, 83, 7, 8, 90, 9, 91, 92 또는 10에 제시된 VL 구역 중의 임의의 하나의; 또는 ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체 (각각 E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 VL CDR3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 갖는 VL 도메인 또는 사슬을 포함한다.
본 발명은 또한 hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공하고, 상기 항체는 표 I에 나열된 하나 이상의 VH CDR 및 하나 이상의 VL CDR을 포함한다. 특히, 본 발명은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함하는, hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 사용하기 위한 조성물을 제공하고, 상기 항체는 VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23) 및 VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38); VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38), VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR1 (서열 11, 14, 17, 20 또는 23), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38), VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); VH CDR2 (서열 12, 15, 18, 21 또는 24), VH CDR3 (서열 13, 16, 19, 22 또는 25), VL CDR1 (서열 84, 26, 85, 29, 32, 35 또는 38), VL CDR2 (서열 86, 27, 87, 30, 33, 96, 36, 97, 98 또는 39) 및 VL CDR3 (서열 88, 28, 89, 31, 34, 99, 37, 100, 101 또는 40); 또는 표 I에 나열된 VH CDR (서열 11-25) 및 VL CDR (서열 26-40)의 임의의 조합을 포함한다. ATCC 기탁 번호 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)의 상응하는 VH CDR 및 VL CDR이 또한 상기 나열된 임의의 조합으로 사용될 수 있다. 바람직하게는, 항체는 완전 인간 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 항체 및/또는 hLIGHT 길항제 항체이다.
본원의 다른 곳에서 보다 상세히 논의하는 바와 같이, 본 발명의 조성물은 단독으로 또는 다른 화합물 또는 조성물과 조합으로 사용될 수 있다. 또한, 항체는 추가로 N- 또는 C-말단에서 이종성 폴리펩티드에 재조합 방식으로 융합될 수 있거나, 폴리펩티드 또는 다른 조성물에 화학적으로 컨쥬게이팅될 수 있다 (공유 및 비-공유 컨쥬게이션 포함). 예를 들어, 본 발명의 항체는 검출 분석에서 표지로서 유용한 분자 및 효과기 분자, 예를 들어 이종성 폴리펩티드, 약물, 방사성 뉴클레오티드 또는 독소에 재조합 방식으로 융합되거나 컨쥬게이팅될 수 있다 (예를 들어, PCT 공개 WO 92/08495; WO 91/14438; WO 89/12624; 미국 특허 5,314,995; 및 EP 396,387 참조).
일부 실시태양에서, 대상에게 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT)에 면역특이적으로 결합하는 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상 (예를 들어, 인간 대상)에서 HVEM, LTβR 및/또는 DcR3에 대한 hLIGHT의 결합을 감소시키거나 억제하기 위한 방법을 본원에서 제공한다. 하나의 실시태양에서, hLIGHT는 hLIGHT의 SNP 변이체, 예를 들어 214E-32S, 214K-32S, 214E-32L 또는 214K-32L이다. 일부 실시태양에서, hLIGHT의 생물학적 활성, 예를 들어 CCL20, IL8 및/또는 RANTES의 분비가 또한 대상에서 감소 또는 억제된다.
특정 실시태양에서, 대상에게 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 hLIGHT)에 면역특이적으로 결합하는 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상 (예를 들어, 인간 대상)에서 hLIGHT의 생물학적 활성, 예를 들어 CCL20, IL8 및/또는 RANTES의 분비를 감소시키거나 억제하기 위한 방법을 본원에서 제공하고, 여기서 hLIGHT의 생물학적 활성은 항체에 의해 감소 또는 억제된다. 일부 실시태양에서, hLIGHT는 hLIGHT의 SNP 변이체, 예를 들어 214E-32S, 214K-32S, 214E-32L 또는 214K-32L이다.
다른 실시태양에서, 세포를 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT), 예를 들어 hLIGHT 폴리펩티드, hLIGHT 폴리펩티드 단편, 또는 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체의 유효량과 접촉시키는 것을 포함하는, 세포 표면-발현된 hLIGHT를 갖는 세포에서 HVEM, LTβR 및/또는 DcR3에 대한 hLIGHT의 결합을 감소시키거나 억제하기 위한 방법을 본원에서 제공한다. 특정 실시태양에서, hLIGHT는 hLIGHT의 SNP 변이체, 예를 들어 214E-32S, 214K-32S, 214E-32L 또는 214K-32L이다. 일부 실시태양에서, hLIGHT의 생물학적 활성, 예를 들어 CCL20, IL8 및/또는 RANTES의 분비가 또한 세포에서 감소 또는 억제된다.
특정 실시태양에서, 세포를 hLIGHT 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현된 또는 가용형 hLIGHT)에 면역특이적으로 결합하는 항체의 유효량과 접촉시키는 것을 포함하는, 세포 표면-발현된 hLIGHT 수용체 (예를 들어, HVEM, LTβR 및/또는 Dc3R)를 갖는 세포에서 hLIGHT의 생물학적 활성, 예를 들어 CCL20, IL8 및/또는 RANTES의 분비를 감소시키거나 억제하기 위한 방법을 본원에서 제공하고, 여기서 hLIGHT의 생물학적 활성은 항체에 의해 감소 또는 억제된다. 일부 실시태양에서, hLIGHT는 hLIGHT의 SNP 변이체, 예를 들어 214E-32S, 214K-32S, 214E-32L 또는 214K-32L이다.
본 발명의 항체는 예를 들어, 시험관내 및 생체내 진단 및 치료 방법 모두에서 hLIGHT 항원을 정제하고, 검출하고, 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 변형된 항체는 생물학적 샘플 내의 hLIGHT의 수준을 정성적 및 정량적으로 측정하기 위한 면역분석에서 사용된다 (예를 들어, 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 [Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988)] 참조).
본 발명은 또한 대상에게 유효량의 항체 또는 본 발명의 항체를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써, hLIGHT-매개 질병을 예방하고/하거나, 관리하고/하거나, 치료하고/하거나, 개선하는 방법을 제공한다. 한 측면에서, 항체는 실질적으로 정제된다 (즉, 그의 효과를 제한하거나 바람직하지 않은 부작용을 일으키는 물질이 실질적으로 없다). 바람직한 실시태양에서, 항체는 완전 인간 모노클로날 항체, 예를 들어 완전 인간 모노클로날 길항제 항체이다. 요법제가 투여되는 대상은 바람직하게는 포유동물, 예를 들어 비-영장류 (예를 들어, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 등) 또는 영장류 (예를 들어, 원숭이, 예를 들어 사이노몰거스 원숭이 또는 인간)이다. 바람직한 실시태양에서, 대상은 인간이다. 다른 바람직한 실시태양에서, 대상은 인간 유아 또는 인간 조산아이다. 또다른 실시태양에서, 대상은 hLIGHT-매개 질병에 걸린 인간이다.
리포좀, 마이크로입자, 마이크로캡슐 내의 봉입, 항체를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체-매개 세포내이입 (예를 들어 [Wu and Wu, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987)] 참조), 레트로바이러스 벡터 또는 다른 벡터의 일부로서 핵산의 제작 등을 포함하고 이로 제한되지 않는 다양한 전달계가 공지되어 있고, 예방 또는 치료제 (예를 들어, 본 발명의 항체)를 투여하기 위해 사용될 수 있다. 예방 또는 치료제 (예를 들어, 본 발명의 항체) 또는 제약 조성물을 투여하는 방법은 비경구 투여 (예를 들어, 피부내, 근육내, 복강내, 정맥내 및 피하), 경막외 및 점막 (예를 들어, 코 안 및 구강 경로)을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 특정 실시태양에서, 예방 또는 치료제 (예를 들어, 본 발명의 항체) 또는 제약 조성물은 코 안, 근육내, 정맥내 또는 피하 투여된다. 예방 또는 치료제 또는 조성물은 예를 들어 주입 또는 볼러스 주사에 의해, 상피 또는 점막피부 내층 (예를 들어 구강 점막, 코 안 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 임의의 편리한 경로로 투여될 수 있고, 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신 또는 국소일 수 있다. 또한, 예를 들어, 흡입기 또는 네뷸라이저, 및 에어로졸화제를 사용한 제제화의 사용에 의해 폐 투여가 또한 사용될 수 있다 (예를 들어 각각 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 미국 특허 6,019,968, 5,985,320, 5,985,309, 5,934,272, 5,874,064, 5,855,913, 5,290,540 및 4,880,078; 및 PCT 공개 WO 92/19244, WO 97/32572, WO 97/44013, WO 98/31346 및 WO 99/66903 참조).
특정 실시태양에서, 본 발명의 예방 또는 치료제 또는 제약 조성물을 치료를 요하는 영역에 국소로 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 이는 예를 들어 비제한적으로 국소 주입에 의해, 국소 투여에 의해 (예를 들어, 코 안 스프레이에 의해), 주사에 의해, 또는 임플란트 (implant) (상기 임플란트는 다공성, 비-다공성 또는 젤라틴성 물질, 예를 들어 실라스틱 (sialastic) 막과 같은 막, 또는 섬유로 이루어진다)에 의해 달성할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 항체를 투여할 때, 항체가 흡수되지 않는 물질을 사용하도록 주의해야 한다.
또다른 실시태양에서, 예방 또는 치료제, 또는 본 발명의 조성물은 소포, 특히 리포좀 내에서 전달될 수 있다 ([Langer, 1990, Science 249:1527-1533]; [Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-365 (1989)]; [Lopez-Berestein, 동일 문헌, pp. 317-327]; 일반적으로 동일 문헌 참조).
또다른 실시태양에서, 예방 또는 치료제, 또는 본 발명의 조성물은 제어 방출 또는 지속 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 하나의 실시태양에서, 제어 또는 지속 방출을 달성하기 위해 펌프 (pump)를 사용할 수 있다 ([Langer, 상기 문헌]; [Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20]; [Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507]; [Saudek ef al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574] 참조). 또다른 실시태양에서, 예방 또는 치료제 (예를 들어, 본 발명의 항체) 또는 본 발명의 조성물의 제어 또는 지속 방출을 달성하기 위해 중합체 물질을 사용할 수 있다 (예를 들어, [Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974)]; [Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984)]; [Ranger and Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61]; 또한 [Levy et al., 1985, Science 228:190]; [During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351]; [Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 7 1:105]); 미국 특허 5,679,377; 미국 특허 5,916,597; 미국 특허 5,912,015; 미국 특허 5,989,463; 미국 특허 5,128,326; PCT 공개 WO 99/15154; 및 PCT 공개 WO 99/20253 참조). 지속 방출 제제에 사용되는 중합체의 예는 폴리(2-히드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글리콜리드 (PLG), 폴리안히드라이드, 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(비닐 알콜), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리락티드 (PLA), 폴리(락티드-코-글리콜리드) (PLGA) 및 폴리오르쏘에스테르를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 바람직한 실시태양에서, 지속 방출 제제에서 사용되는 중합체는 불활성이고, 용출가능한 (leachable) 불순물이 없고, 저장 시에 안정하고, 무균성이고, 생분해성이다. 또 다른 실시태양에서, 제어 또는 지속 방출 시스템은 치료 표적, 즉, 비도 또는 폐에 근접하게 놓일 수 있어서, 전신 용량의 일부 분획만을 필요로 한다 (예를 들어, [Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)] 참조). 제어 방출 시스템은 문헌 [Langer, 1990, Science 249: 1527-1533]의 리뷰에서 논의된다. 본 발명의 하나 이상의 항체를 포함하는 지연 방출 제제를 제조하기 위해 당업자에게 공지된 임의의 기술을 사용할 수 있다 (예를 들어, 각각 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 미국 특허 4,526,938, PCT 공개 WO 91/05548, PCT 공개 WO 96/20698, [Ning et al., 1996, "Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel", Radiotherapy & Oncology 39: 179-189], [Song et al., 1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions", PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397], [Cleek et al., 1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application", Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854] 및 [Lam et al., 1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery", Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760] 참조).
특정 실시태양에서, 본 발명의 조성물이 예방 또는 치료제 (예를 들어, 본 발명의 항체)를 코딩하는 핵산인 경우에, 핵산은 그를 적절한 핵산 발현 벡터의 일부로서 제작하고, 예를 들어, 레트로바이러스 벡터 (미국 특허 4,980,286 참조)의 사용에 의해 또는 직접 주사에 의해 또는 마이크로입자 폭격 (예를 들어, 유전자 총 (gun); 비올리스틱 (Biolistic), 듀퐁 (Dupont))의 사용에 의해 또는 지질 또는 세포 표면 수용체 또는 형질감염제를 사용한 코팅 또는 핵 내로 도입하는 것으로 공지된 호메오박스 (homeobox)-유사 펩티드에 연결하여 투여함으로써 (예를 들어, [Joliot et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868] 참조) 등에 의해 그를 세포 내에 존재하도록 투여함으로써 그의 코딩된 예방 또는 치료제의 발현을 촉진하도록 생체내 투여될 수 있다. 별법으로, 핵산은 세포내 도입되고 상동성 재조합에 의해 발현을 위해 숙주 세포 DNA 내에 포함될 수 있다.
특정 실시태양에서, 본 발명의 조성물은 1 또는 2개 이상의 본 발명의 항체를 포함한다. 또다른 실시태양에서, 본 발명의 조성물은 1 또는 2개 이상의 본 발명의 항체 및 본 발명의 항체 이외의 예방 또는 치료제를 포함한다. 바람직하게는, 물질은 hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선을 위해 유용한 것으로 공지되거나 사용되었거나 현재 사용되고 있다. 예방 또는 치료제에 추가로, 본 발명의 조성물은 또한 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 단위 투여 형태의 제조에 사용될 수 있는 제약 조성물 (예를 들어, 대상 또는 환자에게 투여하기 적합한 조성물)의 제조에 유용한 벌크 약물 조성물을 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 조성물은 제약 조성물이다. 상기 조성물은 예방 또는 치료 유효량의 하나 이상의 예방 또는 치료제 (예를 들어, 본 발명의 항체 또는 다른 예방 또는 치료제) 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 바람직하게는, 제약 조성물은 대상에 대한 투여 경로에 적합하도록 제제화된다.
특정 실시태양에서, 용어 "담체"는 그와 함께 치료제가 투여되는 희석제, 어쥬번트 (예를 들어, 프로인트 (Freund) 어쥬번트 (완전 및 불완전)), 부형제 또는 비히클을 나타낸다. 상기 제약학적 담체는는 멸균 액체, 예를 들어 물 및 오일, 예를 들어 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것, 예를 들어 땅콩유, 대두유, 광유, 참기름 등일 수 있다. 물이 제약 조성물을 정맥내 투여할 때 바람직한 담체이다. 염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액을 또한 특히 주사가능 용액에 대한 액체 담체로서 사용할 수 있다. 적합한 제약학적 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 엿기름, 쌀, 밀가루, 호분 (chalk), 실리카겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 원하는 경우에, 조성물은 또한 소량의 습윤 또는 유화제 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다. 상기 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 알약, 캡슐, 분말, 지속-방출 제제 등의 형태를 취할 수 있다. 경구 제제는 표준 담체, 예를 들어 제약 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 나트륨 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등을 포함할 수 있다. 적합한 제약학적 담체의 예는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA]에 기재되어 있다. 상기 조성물은 예방 또는 치료 유효량의 항체를 바람직하게는 정제된 형태로 환자에 적합한 투여를 제공하도록 적합한 양의 담체와 함께 함유할 것이다. 제제는 투여 방식에 적합해야 한다.
바람직한 실시태양에서, 조성물은 인간에게 정맥내 투여하기에 적합한 제약 조성물으로서 일상적인 절차에 따라 제제화된다. 전형적으로, 정맥내 투여용 조성물은 멸균 등장성 수성 버퍼 중의 용액이다. 필요한 경우, 조성물은 또한 가용화제 및 주사 부위에서 통증을 완화시키기 위해 국소 마취제, 예를 들어 리그노카인을 포함할 수 있다. 그러나, 상기 조성물은 정맥내 이외의 경로로 투여될 수 있다.
일반적으로, 본 발명의 조성물의 성분들은 따로 또는 함께 혼합되어 단위 투여 형태로, 예를 들어 건조 동결건조 분말 또는 무수 농축물으로서 활성제의 양을 나타내는 밀폐 용기, 예를 들어 앰플 또는 샤세 (sachette) 내에 공급된다. 조성물이 주입에 의해 투여되어야 하는 경우에, 멸균 제약 등급의 물 또는 염수를 함유하는 주입병과 함께 분배할 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우, 투여 전에 성분들을 혼합할 수 있도록 주사용 멸균수 또는 염수의 앰플을 제공할 수 있다.
본 발명은 또한 항체의 양을 나타내는 밀폐 용기, 예를 들어 앰플 또는 샤세 내에 포장된 본 발명의 항체를 제공한다. 하나의 실시태양에서, 항체는 건조 멸균 동결건조 분말 또는 무수 농축물으로서 밀폐 용기 내에 공급되고, 예를 들어, 물 또는 염수를 사용하여 대상에 투여하기 적절한 농도로 재구성될 수 있다. 바람직하게는, 항체는 건조 멸균 동결건조 분말로서 밀폐 용기 내에 적어도 0.1 mg, 적어도 0.5 mg, 적어도 1 mg, 적어도 2 mg, 또는 적어도 3 mg, 보다 바람직하게는 적어도 5 mg, 적어도 10 mg, 적어도 15 mg, 적어도 25 mg, 적어도 30 mg, 적어도 35 mg, 적어도 45 mg, 적어도 50 mg, 적어도 60 mg, 적어도 75 mg, 적어도 80 mg, 적어도 85 mg, 적어도 90 mg, 적어도 95 mg 또는 적어도 100 mg의 단위 투여량으로 공급된다. 동결건조 항체는 그의 원래의 용기 내에서 2 내지 8℃에서 제장될 수 있고, 항체는 재구성된 후 12시간 내에, 바람직하게는 6시간 내에, 5시간 내에, 3시간 내에, 또는 1시간 내에 투여될 수 있다. 대안적 실시태양에서, 항체는 액체 형태로 항체의 양 및 농도를 나타내는 밀폐 용기 내에 공급된다. 바람직하게는, 액체 형태의 항체는 밀폐 용기 내에 적어도 0.1 mg/ml, 적어도 0.5 mg/ml, 또는 적어도 1 mg/ml, 보다 바람직하게는 적어도 5 mg/ml, 적어도 10 mg/ml, 적어도 15 mg/ml, 적어도 25 mg/ml, 적어도 30 mg/ml, 적어도 40 mg/ml, 적어도 50 mg/ml, 적어도 60 mg/ml, 적어도 70 mg/ml, 적어도 80 mg/ml, 적어도 90 mg/ml 또는 적어도 100 mg/ml로 공급된다.
본 발명의 조성물은 중성 또는 염 형태로서 제제화될 수 있다. 제약상 허용되는 염은 음이온과 함께 형성된 것, 예를 들어 염산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산 등으로부터 유래된 것 및 양이온과 함께 형성된 것, 예를 들어 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 수산화철, 이소프로필아민, 트리에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유래한 것을 포함한다.
hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선에 효과적일 예방 또는 치료제 (예를 들어, 본 발명의 항체), 또는 본 발명의 조성물의 양은 표준 임상 기술에 의해 결정할 수 있다.
따라서, 약 0.1 ㎍/ml 내지 약 450 ㎍/ml, 일부 실시태양에서 적어도 0.1 ㎍/ml, 적어도 0.2 ㎍/ml, 적어도 0.4 ㎍/ml, 적어도 0.5 ㎍/ml, 적어도 0.6 ㎍/ml, 적어도 0.8 ㎍/ml, 적어도 1 ㎍/ml, 적어도 1.5 ㎍/ml, 바람직하게는 적어도 2 ㎍/ml, 적어도 5 ㎍/ml, 적어도 10 ㎍/ml, 적어도 15 ㎍/ml, 적어도 20 ㎍/ml, 적어도 25 ㎍/ml, 적어도 30 ㎍/ml, 적어도 35 ㎍/ml, 적어도 40 ㎍/ml, 적어도 50 ㎍/ml, 적어도 75 ㎍/ml, 적어도 100 ㎍/ml, 적어도 125 ㎍/ml, 적어도 150 ㎍/ml, 적어도 200 ㎍/ml, 적어도 250 ㎍/ml, 적어도 300 ㎍/ml, 적어도 350 ㎍/ml, 적어도 400 ㎍/ml, 또는 적어도 450 ㎍/ml의 혈청 역가를 생성시키는 항체 또는 조성물의 투여량이 hLIGHT-매개 질병의 예방, 관리, 치료 및/또는 개선을 위해 인간에게 투여될 수 있다. 또한, 최적 투여량 범위의 확인을 돕기 위해 시험관내 분석을 임의로 사용할 수 있다. 제제에 사용될 정확한 용량은 또한 투여 경로 및 hLIGHT-매개 질병의 중대성에 따라 좌우될 것이고, 당업자의 판단 및 각각의 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다.
유효 용량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도된 용량-반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다.
본 발명의 항체에 대해, 환자에게 투여되는 투여량은 전형적으로 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg 환자 체중이다. 일부 실시태양에서, 환자에게 투여되는 투여량은 약 1 mg/kg 내지 약 75 mg/kg 환자 체중이다. 바람직하게는, 환자에게 투여되는 투여량은 1 mg/kg 내지 20 mg/kg 환자 체중, 보다 바람직하게는 1 mg/kg 내지 5 mg/kg 환자 체중이다. 일반적으로, 인간 항체는 외래 폴리펩티드에 대한 면역 반응때문에 다른 종으로부터의 항체보다 인체 내 반감기가 더 길다. 따라서, 보다 낮은 투여량의 인간 항체 및 덜 빈번한 투여가 종종 가능하다. 또한, 본 발명의 항체의 투여량 및 투여 빈도는 예를 들어, 지질화 (lipidation)와 같은 변형에 의해 항체의 섭취 및 조직 관통을 향상시킴으로써 감소시킬 수 있다.
하나의 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병을 관리하기 위해 대략 100 mg/kg 이하, 대략 75 mg/kg 이하, 대략 50 mg/kg 이하, 대략 25 mg/kg 이하, 대략 10 mg/kg 이하, 대략 5 mg/kg 이하, 대략 1 mg/kg 이하, 대략 0.5 mg/kg 이하 또는 대략 0.1 mg/kg 이하의 본 발명의 항체를 5회, 4회, 3회, 2회 또는 바람직하게는 1회 투여한다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 항체는 약 1-12회 투여되고, 용량은 의사가 결정할 때 필요한 만큼, 예를 들어, 매주, 격주, 매월, 격월, 3달마다 등으로 투여될 수 있다. 일부 실시태양에서, 보다 저용량 (예를 들어, 1-15 mg/kg)을 보다 빈번하게 (예를 들어, 3-6회) 투여할 수 있다. 다른 실시태양에서, 보다 고용량 (예를 들어, 25-100 mg/kg)을 덜 빈번하게 (예를 들어, 1-3회) 투여할 수 있다. 그러나, 당업자에게 명백할 바와 같이, 다른 투여량 및 스케쥴은 쉽게 결정될 수 있고, 본 발명의 범위 내에 있다.
특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병을 예방하고/하거나, 관리하고/하거나, 치료하고/하거나 개선하기 위해 지속 방출 제제 내의 대략 100 mg/kg, 대략 75 mg/kg 이하, 대략 50 mg/kg 이하, 대략 25 mg/kg 이하, 대략 10 mg/kg 이하, 대략 5 mg/kg 이하, 대략 1 mg/kg 이하, 대략 0.5 mg/kg 이하, 대략 0.1 mg/kg 이하의 본 발명의 항체를 대상, 바람직하게는 인간에게 투여한다. 다른 특정 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병을 예방하고/하거나, 관리하고/하거나, 치료하고/하거나 개선하기 위해 지속 방출 제제가 아닌 대략 100 mg/kg, 대략 75 mg/kg 이하, 대략 50 mg/kg 이하, 대략 25 mg/kg 이하, 대략 10 mg/kg 이하, 대략 5 mg/kg 이하, 대략 1 mg/kg 이하, 대략 0.5 mg/kg 이하, 또는 대략 0.1 mg/kg 이하의 볼러스의 본 발명의 항체를 대상, 바람직하게는 인간에게 투여하고, 특정 기간 후, 지속 방출 제제 내의 대략 100 mg/kg, 대략 75 mg/kg 이하, 대략 50 mg/kg 이하, 대략 25 mg/kg 이하, 대략 10 mg/kg 이하, 대략 5 mg/kg 이하, 대략 1 mg/kg 이하, 대략 0.5 mg/kg 이하, 또는 대략 5 mg/kg 이하의 본 발명의 항체를 상기 대상에게 (예를 들어, 코 안에 또는 근육내) 2, 3 또는 4회 (바람직하게는 1회) 투여한다. 본 실시태양에 따라, 특정 기간은 1 내지 5일, 1주, 2주 또는 1개월일 수 있다.
일부 실시태양에서, 단일 용량의 본 발명의 항체를 환자에게 hLIGHT-매개된 질병을 예방하고/하거나, 관리하고/하거나, 치료하고/하거나, 개선하기 위해 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12회, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 또는 26회로 격주 (예를 들어, 약 14일) 간격으로 1년에 걸쳐 투여하고, 여기서 용량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 약 100 mg/kg 또는 그의 조합으로 이루어지는 군 중에서 선택된다 (즉, 각각의 격주 용량은 동일할 수 있거나 동일하지 않을 수 있다).
또다른 실시태양에서, 단일 용량의 본 발명의 항체를 환자에게 hLIGHT-매개 질병을 예방하고/하거나, 관리하고/하거나, 치료하고/하거나, 개선하기 위해 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12회로 대략 1개월 (예를 들어, 약 30일) 간격으로 1년에 걸쳐 투여하고, 여기서 용량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 약 100 mg/kg 또는 그의 조합으로 이루어지는 군 중에서 선택된다 (즉, 각각의 매달 용량은 동일할 수 있거나 동일하지 않을 수 있다).
하나의 실시태양에서, 단일 용량의 본 발명의 항체를 환자에게 hLIGHT-매개 질병을 예방하고/하거나, 관리하고/하거나, 치료하고/하거나, 개선하기 위해 2, 3, 4, 5 또는 6회로 대략 격월 (예를 들어, 약 60일) 간격으로 1년에 걸쳐 투여하고, 여기서 용량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 약 100 mg/kg 또는 그의 조합으로 이루어지는 군 중에서 선택된다 (즉, 각각의 격월 용량은 동일할 수 있거나 동일하지 않을 수 있다).
일부 실시태양에서, 단일 용량의 본 발명의 항체를 환자에게 hLIGHT-매개 질병을 예방하고/하거나, 관리하고/하거나, 치료하고/하거나, 개선하기 위해 2, 3 또는 4회로 대략 3달 (예를 들어, 약 120일) 간격으로 1년에 걸쳐 투여하고, 여기서 용량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 약 100 mg/kg 또는 그의 조합으로 이루어지는 군 중에서 선택된다 (즉, 각각의 3달 용량은 동일할 수 있거나 동일하지 않을 수 있다).
특정 실시태양에서, 환자에게 본 발명의 항체의 용량의 투여 경로는 코 안, 근육내, 정맥내 또는 그의 조합이지만, 본원에서 설명되는 다른 경로도 또한 허용가능하다. 각각의 용량은 동일한 투여 경로로 투여될 수 있거나 투여되지 않을 수 있다. 일부 실시태양에서, 본 발명의 항체는 다수 투여 경로로 본 발명의 동일한 또는 상이한 항체의 다른 용량과 동시에 또는 후속적으로 투여될 수 있다.
특정 실시태양에서, 본 발명의 항체는 대상에게 예방상 또는 치료상 투여된다. 본 발명의 항체는 hLIGHT-매개 질병 또는 그의 증상을 예방하거나, 감소시키거나, 개선하도록 대상에게 예방상 또는 치료상 투여될 수 있다.
유전자 요법
특정 실시태양에서, 본 발명의 항체 또는 그의 기능적 유도체를 코딩하는 서열을 포함하는 핵산은 유전자 요법에 의해 hLIGHT-매개 질병을 예방하고/하거나, 관리하고/하거나, 치료하고/하거나, 개선하기 위해 투여된다. 유전자 요법은 발현된 또는 발현가능한 핵산을 대상에 투여하여 수행되는 요법을 나타낸다. 본 발명의 실시태양에서, 핵산은 그들의 코딩된 항체를 생산하고, 항체는 예방 또는 치료 효과를 매개한다.
당업계에 이용가능한 유전자 요법을 위한 임의의 방법을 본 발명에 따라 사용할 수 있다. 예시적인 방법을 아래에서 설명한다.
유전자 요법의 방법의 전반적인 리뷰에 대해서는 문헌 ([Goldspiel et al., 1993, Clinical Pharmacy 12:488-505]; [Wu and Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95]; [Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596]; [Mulligan, 1993, Science 260:926-932]; 및 [Morgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217; May, 1993, TIBTECH 11(5):155-215])을 참조한다. 사용할 수 있는 재조합 DNA 기술 분야에 일반적으로 공지된 방법은 문헌 ([Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993)]; 및 [Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)])에 기재되어 있다.
바람직한 실시태양에서, 본 발명의 조성물은 본 발명의 항체를 코딩하는 핵산을 포함하고, 상기 핵산은 적합한 숙주 내에서 항체 또는 키메라 단백질 또는 그의 중쇄 또는 경쇄를 발현하는 발현 벡터의 일부이다. 특히, 상기 핵산은 항체 코딩 구역에 작동가능하게 연결된 프로모터, 바람직하게는 이종성 프로모터를 갖고, 상기 프로모터는 유도성 또는 구성적이고, 임의로 조직-특이적이다. 또다른 특정 실시태양에서, 항체 코딩 서열 및 임의의 다른 목적하는 서열이 게놈 내의 목적하는 부위에서 상동성 재조합을 촉진하여 항체 코딩 핵산의 염색체내 발현을 제공하는 구역에 인접하는 핵산 분자가 사용된다 ([Koller and Smithies, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:8932-8935]; [Zijlstra et al., 1989, Nature 342:435-438]). 일부 실시태양에서, 발현된 항체 분자는 단일쇄 항체이고; 별법으로, 핵산 서열은 항체의 중쇄 및 경쇄 또는 그의 단편을 코딩하는 서열을 포함한다.
대상 내로 핵산의 전달은 직접적이거나 (이 경우에 대상은 핵산 또는 핵산-보유 벡터에 직접 노출된다), 간접적일 수 있다 (이 경우에 세포를 먼저 시험관 내에서 핵산으로 형질전환시킨 후, 대상에게 이식한다). 상기 2개의 방안은 각각 생체내 또는 생체외 유전자 요법으로서 공지되어 있다.
특정 실시태양에서, 핵산 서열은 생체 내에서 직접 투여되고, 여기서 서열은 발현하여 코딩된 산물을 생산한다. 이는 당업계에 공지된 임의의 많은 방법에 의해, 예를 들어, 이들을 적절한 핵산 발현 벡터의 일부로서 제작하고, 예를 들어, 손상 또는 약화 레트로바이러스 또는 다른 바이러스 벡터를 사용하는 감염에 의해 (미국 특허 4,980,286 참조), 또는 네이키드 (naked) DNA의 직접 주사에 의해, 또는 마이크로입자 폭격 (예를 들어, 유전자 총; 비올리스틱, 듀퐁)을 사용하거나, 지질 또는 세포 표면 수용체 또는 형질감염제로 코팅하거나, 리포좀, 마이크로입자 또는 마이크로캡슐 내의 봉입, 또는 이들을 핵 내로 도입하는 것으로 공지된 펩티드에 연결하여 투여함으로써, 또는 이들을 수용체-매개 세포내 이입되는 리간드에 연결하여 투여함으로써 (예를 들어, 문헌 [Wu and Wu, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432] 참조) (수용체를 특이적으로 발현하는 세포 종류를 표적화하기 위해 사용될 수 있는) 등에 의해 벡터를 투여하여, 서열이 세포 내에 존재하도록 함으로써 달성할 수 있다. 또다른 실시태양에서, 리간드가 엔도좀을 파괴하여 핵산이 리소좀에 의한 분해를 피하도록 융합형성 바이러스 펩티드를 포함하는 핵산-리간드 복합체를 형성할 수 있다. 또 다른 실시태양에서, 핵산은 특이적 수용체를 표적화함으로써 세포 특이적 섭취 및 발현을 위해 생체내 표적화될 수 있다 (예를 들어, PCT 공개 WO 92/06180; WO 92/22635; WO 92/20316; W093/14188, WO 93/20221 참조). 별법으로, 핵산은 세포내 도입되고 상동성 재조합에 의해 발현을 위해 숙주 세포 DNA 내에 포함될 수 있다 ([Koller and Smithies, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:8932-8935]; 및 [Zijlstra et al., 1989, Nature 342:435-438]).
특정 실시태양에서, 본 발명의 항체를 코딩하는 핵산 서열을 함유하는 바이러스 벡터가 사용된다. 예를 들어, 레트로바이러스 벡터가 사용될 수 있다 ([Miller et al., 1993, Meth. Enzymol. 217:581-599] 참조). 이들 레트로바이러스 벡터는 바이러스 게놈의 정확한 패키징 및 숙주 세포 DNA 내로의 통합을 위해 필요한 성분을 함유한다. 유전자 요법에 사용될 항체를 코딩하는 핵산 서열은 하나 이상의 벡터 내로 클로닝될 수 있고, 이는 대상 내로 유전자의 전달을 용이하게 한다. 레트로바이러스 벡터에 대한 보다 상세한 내용은 줄기 세포를 화학요법에 더 내성이 되도록 하기 위해 조혈 줄기 세포로 mdr 1 유전자를 전달하기 위해 레트로바이러스 벡터의 사용을 설명하는 문헌 [Boesen et al., 1994, Biotherapy 6:291-302]에서 찾을 수 있다. 유전자 요법에서 레트로바이러스 벡터의 사용을 설명하는 다른 참조문은 문헌 ([Clowes et al., 1994, J. Clin. Invest. 93:644-651]; [Klein et al., 1994, Blood 83:1467-1473]; [Salmons and Gunzberg, 1993, Human Gene Therapy 4:129-141]; 및 [Grossman and Wilson, 1993, Curr. Opin. in Genetics and Devel. 3: 110-114])이다.
아데노바이러스는 유전자 요법에서 사용될 수 있는 다른 바이러스 벡터이다. 아데노바이러스는 유전자를 호흡 상피에 전달하기 위해 특히 매력적인 비히클이다. 아데노바이러스는 자연에서 호흡 상피를 감염시키고, 경증 질병을 유발한다. 아데노바이러스-기반 전달계에 대한 다른 표적은 간, 중추신경계, 내피 세포 및 근육이다. 아데노바이러스는 비-분할 세포를 감염시킬 수 있는 잇점을 갖는다. 문헌 [Kozarsky and Wilson, 1993, Current Opinion in Genetics and Development 3:499-503]에서는 아데노바이러스-기반 유전자 요법의 리뷰를 제시한다. 문헌 [Bout et al., 1994, Human Gene Therapy 5:3-10]에서는 유전자를 붉은털 (rhesus) 원숭이의 호흡 상피에 전달하기 위해 아데노바이러스 벡터의 사용을 입증하였다. 유전자 요법에서 아데노바이러스의 사용의 다른 경우는 문헌 ([Rosenfeld et al., 1991, Science 252:431-434]; [Rosenfeld et al., 1992, Cell 68:143-155]; [Mastrangeli et al., 1993, J. Clin. Invest. 91:225-234]; PCT 공개 WO 94/12649; 및 [Wang et al., 1995, Gene Therapy 2:775-783])에서 찾을 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 아데노바이러스 벡터를 사용한다.
아데노-연관 바이러스 (AAV)가 또한 유전자 요법에서 사용하기 위해 제안되었다 ([Walsh et al., 1993, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 204:289-300]; 및 미국 특허 5,436,146).
유전자 요법에 대한 다른 방안은 전기천공, 리포펙션 (lipofection), 인산칼슘 매개 형질감염 또는 바이러스 감염과 같은 방법에 의해 유전자를 조직 배양액 내의 세포로 전달하는 것을 포함한다. 대체로, 전달 방법은 세포로 선택가능 마커의 전달을 포함한다. 이어서, 세포를 전달된 유전자를 섭취하고 발현하는 세포를 단리하기 위해 선택 하에 놓인다. 이어서, 이들 세포는 대상에게 전달된다.
상기 실시태양에서, 핵산은 생성되는 재조합 세포의 생체내 투여 전에 세포 내로 도입된다. 상기 도입은 형질감염, 전기천공, 마이크로주사, 핵산 서열을 함유하는 바이러스 벡터 또는 박테리오파지 벡터를 사용하는 감염, 세포 융합, 염색체-매개 유전자 전달, 미세세포-매개 유전자 전달, 세포벽 불완전 제거균 (spheroplast) 융합 등을 포함하고 이로 제한되지 않는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 수행할 수 있다. 세포 내로 외래 유전자의 도입을 위한 많은 기술이 당업계에 공지되어 있고 (예를 들어, [Loeffler and Behr, 1993, Meth. Enzymol. 217:599-618]; [Cohen et al., 1993, Meth. Enzymol. 217:618-644]; [Clin. Pharma. Ther. 29:69-92 (1985)] 참조), 수여 세포의 필수 발생 및 생리학적 기능이 파괴되지 않는다면 본 발명에 따라 사용할 수 있다. 기술은 핵산이 세포에 의해 발현가능하고, 바람직하게는 그의 세포 자손체에 의해 유전가능하고 발현가능하도록 세포로의 핵산의 안정한 전달을 제공해야 한다.
생성되는 재조합 세포는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 대상에게 전달될 수 있다. 재조합 혈액 세포 (예를 들어, 조혈 줄기 또는 전구 세포)는 바람직하게는 정맥내 투여된다. 사용을 위해 계획되는 세포의 양은 목적하는 효과, 환자 상태 등에 따르고, 당업자가 결정할 수 있다.
유전자 요법을 위해 핵산이 도입될 수 있는 세포는 임의의 목적하는 이용가능한 세포 종류를 포함하고, 상피 세포, 내피 세포, 각질세포, 섬유모세포, 근육 세포, 간세포; 혈액 세포, 예를 들어 T 림프구, B 림프구, 단핵구, 포식세포, 호중구, 호염기구, 거핵세포, 과립구; 다양한 줄기 또는 전구 세포, 특히 예를 들어, 골수, 제대혈, 말초혈, 태아 간으로부터 얻은 조혈 줄기 또는 전구 세포 등을 포함하고 이로 제한되지 않는다.
바람직한 실시태양에서, 유전자 요법에 사용되는 세포는 대상에 자가 유래성이다.
재조합 세포가 유전자 요법에서 사용되는 실시태양에서, 본 발명의 항체를 코딩하는 핵산 서열은 세포 또는 그들의 자손체에 의해 발현가능하도록 세포 내로 도입되고, 이어서, 재조합 세포는 치료 효과를 위해 생체 내에 투여된다. 특정 실시태양에서, 줄기 또는 전구 세포가 사용된다. 시험관 내에서 단리되고 유지될 수 있는 임의의 줄기 및/또는 전구 세포가 본 발명의 상기 실시태양에 따라 잠재적으로 사용될 수 있다 (예를 들어, PCT 공개 WO 94/08598; [Stemple and Anderson, 1992, Cell 7 1:973-985]; [Rheinwald, 1980, Meth. Cell Bio. 21A:229]; 및 [Pittelkow and Scott, 1986, Mayo Clinic Proc. 61:771] 참조).
특정 실시태양에서, 유전자 요법의 목적으로 도입되는 핵산은 전사의 적절한 유도인자의 존재 또는 부재를 제어함으로써 제어가능하도록 코딩 구역에 작동가능하게 연결된 유도성 프로모터를 포함한다.
항체의 진단 용도
hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 본 발명의 표지된 항체 및 그의 유도체 및 유사체는 hLIGHT-매개 질병을 검출하거나, 진단하거나, 모니터하기 위해 진단 목적을 위해 사용될 수 있다. 본 발명은 (a) hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 본 발명의 하나 이상의 항체를 사용하여 대상의 세포 또는 조직 샘플 내의 hLIGHT 항원의 발현을 분석하고; (b) hLIGHT 항원의 수준을 대조 수준, 예를 들어, 정상 조직 샘플 (예를 들어, hLIGHT-매개 질병에 걸리지 않은 환자로부터의, 또는 질병 발병 전의 동일한 환자로부터의) 내의 수준과 비교하는 것을 포함하는, hLIGHT-매개 질병의 검출 방법을 제공하고, 여기서 hLIGHT 항원의 대조 수준에 비해 분석된 hLIGHT 항원 수준의 증가는 hLIGHT-매개 질병의 지표이다.
본 발명은 (a) hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 본 발명의 하나 이상의 항체를 사용하여 개인의 세포 또는 조직 샘플 내의 hLIGHT 항원의 수준에 대해 분석하고; (b) hLIGHT 항원의 수준을 대조 수준, 예를 들어, 정상 조직 샘플 내의 수준과 비교하는 것을 포함하는, hLIGHT-매개 질병을 진단하기 위한 진단 분석을 제공하고, 여기서 hLIGHT 항원의 대조 수준에 비해 분석된 hLIGHT 항원 수준의 증가는 hLIGHT-매개 질병의 지표이다. hLIGHT-매개 질병을 보다 명확하게 진단하면, 의료 종사자는 예방 대책 또는 적극적 치료를 보다 일찍 사용하여 hLIGHT-매개 질병의 발생 또는 추가의 진행을 방지할 수 있다.
본 발명의 항체는 본원에서 설명되는 바와 같은 또는 당업자에게 공지된 전통적인 면역조직학적 방법을 이용하여 생물학적 샘플 내의 hLIGHT 항원 수준을 분석하기 위해 사용될 수 있다 (예를 들어, [Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol. 101:976-985]; 및 [Jalkanen et al., 1987, J. Cell. Biol. 105:3087-3096] 참조). 단백질 유전자 발현을 검출하기 위한 다른 항체-기반 방법은 면역분석, 예를 들어 효소 결합 면역측정법 (ELISA) 및 방사성 면역분석 (RIA)을 포함한다. 적합한 항체 분석 표지는 당업계에 공지되어 있고, 효소 표지, 예를 들어, 글루코스 산화효소; 방사성 동위원소, 예를 들어 요오드 (125I, 121I), 탄소 (14C), 황 (35S), 삼중수소 (3H), 인듐 (121In) 및 테크네튬 (99Tc); 발광 표지, 예를 들어 루미놀; 및 형광 표지, 예를 들어 플루오레세인 및 로다민, 및 비오틴을 포함한다.
본 발명의 한 측면은 인간에서 hLIGHT-매개된 질병의 검출 및 진단이다. 하나의 실시태양에서, 진단은 a) 대상에게 hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 표지된 항체의 유효량을 투여하고 (예를 들어, 비경구, 피하 또는 복강내); b) 표지된 항체가 대상에서 hLIGHT 항원이 발현되는 부위에 우선적으로 농축되도록 허용하기 위해 (및 비결합된 표지된 분자가 배경 수준으로 제거되도록 하기 위해)투여 후 일정 시간 간격 동안 기다리고; c) 배경 수준을 결정하고; d) 대상에서 표지된 항체를 검출하는 것을 포함하고, 여기서 배경 수준을 초과하는 표지된 항체의 검출은 대상이 hLIGHT-매개 질병에 걸린 것을 나타낸다. 배경 수준은 검출된 표지된 분자의 양을 특정 시스템에 대해 미리 결정된 표준 값에 비교하는 것을 포함하는 다양한 방법에 의해 결정할 수 있다.
대상의 크기 및 사용되는 영상 시스템이 진단적 영상을 생성하기 위해 필요한 영상화 모이어티의 양을 결정할 것임이 당업계에서 이해될 것이다. 인간 대상을 위한 방사성 동위원소 모이어티의 경우에, 주사된 방사성의 양은 보통 약 5 내지 20 밀리퀴리의 99Tc일 것이다. 이어서, 표지된 항체는 특정 단백질을 함유하는 세포의 위치에 우선적으로 축적될 것이다. 생체내 종양 영상화는 문헌 [S.W. Burchiel et al., "Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments." (Chapter 13 in Tumor Imaging: The Radiochemical Detection of Cancer, S. W. Burchiel and B.A. Rhodes, eds., Masson Publishing Inc. (1982)]에 설명되어 있다.
사용된 표지의 종류 및 투여 방식을 포함하는 몇몇 변수에 따라, 표지된 항체가 대상에서 부위에 우선적으로 농축되도록 허용하고 비결합된 표지된 항체가 배경 수준으로 제거되도록 하기 위한 투여 후 시간 간격은 6 내지 48시간 또는 6 내지 24시간 또는 6 내지 12시간이다. 또다른 실시태양에서, 투여 후 시간 간격은 5 내지 20일 또는 5 내지 10일이다.
하나의 실시태양에서, hLIGHT-매개 질병의 모니터링은 hLIGHT-매개 질병을 진단하는 방법을, 예를 들어 초기 진단 1개월 후, 초기 진단 6개월 후, 초기 진단 1년 후 등에 반복함으로써 수행한다.
표지된 분자의 존재를 생체내 스캐닝을 위한 당업계에 공지된 방법을 사용하여 대상에서 검출할 수 있다. 상기 방법은 사용된 표지의 종류에 의해 좌우된다. 숙련된 기술자는 특정 표지를 검출하기 위한 적절한 방법을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명의 진단 방법에서 사용할 수 있는 방법 및 장치는 컴퓨터 단층촬영 (CT), 전신 스캔, 예를 들어 양성자 방출 단층촬영 (PET), 자기 공명 영상 (MRI) 및 초음파 검사를 포함하고 이로 제한되지 않는다.
특정 실시태양에서, 분자는 방사성 동위원소로 표지되고, 방사선 반응성 외과 기구를 사용하여 환자에서 검출된다 (Thurston et al., 미국 특허 5,441,050). 또다른 실시태양에서, 분자는 형광 화합물로 표지하고, 형광 반응성 스캐닝 기구를 사용하여 환자에서 검출된다. 또다른 실시태양에서, 분자는 양전자 방출 금속으로 표지되고, 양전자 방출 단층촬영을 사용하여 환자에서 검출된다. 또 다른 실시태양에서, 분자는 상자성 표지로 표지되고, 자기 공명 영상 (MRI)을 이용하여 환자에서 검출된다.
항체를 생산하는 방법
항원에 면역특이적으로 결합하는 본 발명의 항체는 항체의 합성을 위해 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 특히, 화학적 합성 또는 바람직하게는 재조합 발현 기술에 의해 생산할 수 있다. 본 발명의 실시에는 달리 지시하지 않으면 분자 생물학, 미생물학, 유전자 분석, 재조합 DNA, 유기 화학, 생화학, PCR, 올리고뉴클레오티드 합성 및 변형, 핵산 혼성화 및 당업계의 기술 범위 내의 관련 분야의 통상적인 기술을 사용한다. 상기 기술은 본원에 인용한 참조문에 기재되어 있고 문헌에 충분히 설명되어 있다 (예를 들어, [Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press]; [Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY]; [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates)]; [Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates)]; [Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press]; [Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press]; [Birren et al. (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press] 참조).
항원에 면역특이적으로 결합하는 폴리클로날 항체는 당업계에 잘 공지된 다양한 절차에 의해 생산할 수 있다. 예를 들어, 인간 항원은 인간 항원에 특이적인 폴리클로날 항체를 함유하는 혈청의 생산을 유도하기 위해 비제한적으로 토끼, 마우스, 래트 등을 포함하는 다양한 숙주 동물에 투여될 수 있다. 다양한 어쥬번트가 숙주 종에 따라 면역학적 반응을 증가시키기 위해 사용될 수 있고, 프로인트 (완전 및 불완전), 광물젤, 예를 들어 수산화알루미늄, 표면 활성 물질, 예를 들어 리소레시틴, 플루로닉 (pluronic) 폴리올, 다중음이온, 펩티드, 오일 에멀젼, 키홀 림펫 헤모시아닌, 디니트로페놀 및 잠재적으로 유용한 인간 어쥬번트, 예를 들어 BCG (bacille Calmette-Guerin) 및 코리네박테리움 파르븀 (Corynebacterium parvum)을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 상기 어쥬번트는 또한 당업계에 잘 공지되어 있다.
모노클로날 항체는 하이브리도마, 재조합 및 파지 디스플레이 기술 또는 이들의 조합의 사용을 포함하는 당업계에 공지된 매우 다양한 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 모노클로날 항체는 당업계에 공지되고 예를 들어, 문헌 ([Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988)]; [Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hvbridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981)] (상기 참조문은 그 전문을 참고로 포함시킨다)]에 교시된 것을 포함하는 하이브리도마 기술을 사용하여 생산할 수 있다. 용어 "모노클로날 항체"는 본원에서 사용될 때 하이브리도마 기술을 통해 생산된 항체에 제한되지 않는다. 모노클로날 항체를 생산하는 다른 예시적인 방법은 예를 들어 KM 마우스™의 사용과 같은 본원의 다른 곳에서 논의된다. 모노클로날 항체를 생산하는 또다른 예시적인 방법은 본원의 실시예에 제공한다.
하이브리도마 기술을 이용하여 특이적 항체를 생산하고 스크리닝하기 위한 방법은 일상적이고 당업계에 잘 공지되어 있다. 간단히 설명하면, 마우스를 hLIGHT 항원을 사용하여 면역화시킬 수 있고, 일단 면역 반응이 검출되면, 예를 들어, hLIGHT 항원에 특이적인 항체가 마우스 혈청 내에 검출되면, 마우스 비장을 수거하고 비장세포를 단리한다. 이어서, 비장세포를 잘 공지된 기술에 의해 임의의 적합한 골수종 세포, 예를 들어 ATCC로부터 이용가능한 세포주 SP20으로부터의 세포에 융합시킨다. 하이브리도마는 제한 희석에 의해 선택하고 클로닝한다.
추가로, RIMMS (반복 면역화 다수 부위) 기술을 사용하여 동물을 면역화시킬 수 있다 (그 전문을 참고로 포함시킨 [Kilptrack et al., 1997 Hybridoma 16:381-9]). 이어서, 하이브리도마 클론을 당업계에 공지된 방법에 의해 본 발명의 폴리펩티드에 결합할 수 있는 항체를 분비하는 세포에 대해 분석한다. 일반적으로 고수준의 항체를 함유하는 복수액은 마우스를 양성 하이브리도마 클론으로 면역화시킴으로써 생성할 수 있다.
따라서, 본 발명은 본 발명의 변형된 항체를 분비하는 하이브리도마 세포를 배양함으로써 항체를 생성하는 방법을 제공하고, 여기서 바람직하게는 하이브리도마는 hLIGHT 항원으로 면역화시킨 마우스로부터 단리된 비장세포를 골수종 세포와 융합시킨 후, 융합으로부터 생성된 하이브리도마를 hLIGHT 항원에 결합할 수 있는 항체를 분비하는 하이브리도마 클론에 대해 스크리닝함으로써 생성된다.
특이적 hLIGHT 항원을 인식하는 항체 단편은 당업자에게 공지된 임의의 기술에 의해 생성할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 Fab 및 F(ab')2 단편은 효소, 예를 들어 파파인 (Fab 단편을 생산하기 위해) 또는 펩신 (F(ab')2 단편을 생산하기 위해)를 사용한 면역글로불린 분자의 단백분해적 절단에 의해 생산할 수 있다. F(ab')2 단편은 가변 구역, 경쇄 불변 구역 및 중쇄의 CH1 도메인을 함유한다. 추가로, 본 발명의 항체는 또한 당업계에 공지된 다양한 파지 디스플레이 방법을 사용하여 생성할 수 있다.
예를 들어, 항체는 또한 다양한 파지 디스플레이 방법을 이용하여 생성할 수 있다. 파지 디스플레이 방법에서, 기능적 항체 도메인은 그를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 보유하는 파지 입자의 표면 상에 디스플레이된다. 특히, VH 및 VL 도메인을 코딩하는 DNA 서열을 동물 cDNA 라이브러리 (예를 들어, 침범된 조직의 인간 또는 쥐 cDNA 라이브러리)로부터 증폭시킨다. VH 및 VL 도메인을 코딩하는 DNA를 PCR에 의해 scFv 링커와 함께 재조합하고, 파지미드 벡터 내로 클로닝한다. 벡터를 이. 콜라이 (E. coli) 내에서 전기천공하고, 이. 콜라이를 헬퍼 (helper) 파지로 감염시킨다. 상기 방법에 사용되는 파지는 대개 fd 및 M13을 포함하는 필라멘트성 파지이고, VH 및 VL 도메인은 대체로 파지 유전자 III 또는 유전자 VIII에 재조합 방식으로 융합된다. 특정 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 발현하는 파지는 항원, 예를 들어, 표지된 항원 또는 고체 표면 또는 비드에 결합되거나 포획된 항원을 사용하여 선택하거나 확인할 수 있다. 본 발명의 항체 제조에 사용할 수 있는 파지 디스플레이 방법의 예는 각각 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 문헌 ([Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50]; [Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods 184:177-186]; [Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958]; [Persic et al., 1997, Gene 187:9-18]; [Burton et al., 1994, Advances in Immunology 57:191-280]); PCT 특허 출원 PCT/GB91/01134; 국제 특허 출원 공개 WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/11236, WO 95/15982, WO 95/20401 및 WO 97/13844; 및 미국 특허 5,698,426, 5,223,409, 5,403,484, 5,580,717, 5,427,908, 5,750,753, 5,821,047, 5,571,698, 5,427,908, 5,516,637, 5,780,225, 5,658,727, 5,733,743 및 5,969,108에 개시된 것을 포함한다.
상기 참고문헌에 기재된 바와 같이, 파지 선택 후에, 파지로부터의 항체 코딩 구역을 단리하고 사용하여 인간 항체 또는 임의의 다른 목적하는 항원 결합 단편을 포함하는 전체 항체를 생성할 수 있고, 예를 들어, 아래 설명된 바와 같이 포유동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 효모 및 세균을 포함하는 임의의 목적하는 숙주 내에서 발현된다. 또한, Fab, Fab' 및 F(ab')2 단편을 재조합 방식으로 생산하는 기술은 그 전문을 참고로 포함시킨 PCT 공개 WO 92/22324; 문헌 ([Mullinax et al., 1992, BioTechniques 12(6):864-869]; [Sawai et al., 1995, AJRI 34:26-34]; 및 [Better et al., 1988, Science 240:1041-1043])에 기재된 것과 같은 당업계에 공지된 방법을 이용하여 사용할 수 있다.
전체 항체를 생성하기 위해, VH 또는 VL 뉴클레오티드 서열, 제한 부위, 및 제한 부위를 보호하기 위해 인접 서열을 포함하는 PCR 프라이머를 사용하여 scFv 클론 내에서 VH 또는 VL 서열을 증폭시킬 수 있다. 당업자에게 공지된 클로닝 기술을 이용하여, PCR 증폭된 VH 도메인을 VH 불변 구역, 예를 들어, 인간 감마 4 불변 구역을 발현하는 벡터 내로 클로닝할 수 있고, PCR 증폭된 VL 도메인을 VL 불변 구역, 예를 들어, 인간 카파 또는 람다 불변 구역을 발현하는 벡터 내로 클로닝할 수 있다. VH 및 VL 도메인은 또한 필요한 불변 구역을 발현하는 하나의 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 이어서, 중쇄 전환 벡터 및 경쇄 전환 벡터를 당업자에게 공지된 기술을 이용하여 세포주 내로 동시-형질감염시켜, 전장 항체, 예를 들어, IgG를 발현하는 안정한 또는 일시적인 세포주를 생성한다.
시험관내 검출 분석 및 인간 내에서 항체의 생체내 사용을 포함하는 일부 용도에 대해, 인간 또는 키메라 항체를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 인간 대상의 치료적 처치를 위해 완전 인간 항체가 특히 바람직하다. 인간 항체는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 항체 라이브러리를 사용하여 상기 설명된 파지 디스플레이 방법을 포함하는 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조할 수 있다 (또한 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 미국 특허 4,444,887 및 4,716,111; 및 국제 특허 출원 공개 WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 및 WO 91/10741 참조).
바람직한 실시태양에서, 인간 항체가 생산된다. 인간 항체 및/또는 완전 인간 항체는 본원에 제공된 실시예를 포함하는 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용하여 생산할 수 있다. 예를 들어, 기능적 내인성 면역글로불린을 발현할 수 없지만, 인간 면역글로불린 유전자를 발현할 수 있는 트랜스제닉 마우스를 이용할 수 있다. 예를 들어, 인간 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자 복합체를 무작위로 또는 상동성 재조합에 의해 마우스 배아 줄기 세포 내로 도입할 수 있다. 별법으로, 인간 가변 구역, 불변 구역 및 다양성 구역을 인간 중쇄 및 경쇄 유전자에 추가로 마우스 배아 줄기 세포 내로 도입할 수 있다. 마우스 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자는 따로 또는 상동성 재조합에 의한 인간 면역글로불린 로커스의 도입과 동시에 비기능적으로 될 수 있다. 특히, JH 구역의 동종접합성 결손은 내인성 항체 생산을 방지한다. 변형된 배아 줄기 세포를 팽창시키고, 포배 내로 마이크로주사하여 키메라 마우스를 생산한다. 이어서, 키메라 마우스를 번식시켜 인간 항체를 발현하는 동종접합 자손을 생성한다. 트랜스제닉 마우스를 정상적인 방식으로 선택된 항원, 예를 들어, 본 발명의 폴리펩티드의 전부 또는 일부를 사용하여 면역화시킨다. 항원에 대한 모노클로날 항체는 통상적인 하이브리도마 기술을 사용하여 면역화된 트랜스제닉 마우스로부터 얻을 수 있다. 트랜스제닉 마우스에 보유된 인간 면역글로불린 트랜스젠은 B 세포 분화 동안 재배열하고, 후속적으로 클래스 교체 및 체세포 돌연변이를 겪는다. 따라서, 상기 기술을 사용하여, 치료상 유용한 IgG, IgA, IgM 및 IgE 항체를 생산하는 것이 가능하다. 인간 항체를 생산하기 위한 상기 기술의 개요에 대해서는 문헌 [Lonberg and Huszar, 1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93]을 참조한다. 인간 항체 및 인간 모노클로날 항체를 생산하기 위한 상기 기술 및 상기 항체를 생산하기 위한 프로토콜의 상세한 논의에 대해서는, 예를 들어, 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 PCT 공개 WO 98/24893, WO 96/34096 및 WO 96/33735; 및 미국 특허 5,413,923, 5,625,126, 5,633,425, 5,569,825, 5,661,016, 5,545,806, 5,814,318 및 5,939,598을 참조한다. 다른 방법은 본원의 실시예에 설명되어 있다. 또한, 압제닉스, 인크 (Abgenix, Inc., 미국 캘리포니아주 프리몬트) 및 젠팜 (Genpharm, 미국 캘리포니아주 산 호세)과 같은 회사는 상기 설명된 것과 유사한 기술을 사용하여 선택된 항원에 대해 지정되는 인간 항체를 제공하기 위해 참여할 수 있다.
키메라 항체는 항체의 상이한 부분이 상이한 면역글로불린 분자로부터 유래되는 분자이다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 문헌 ([Morrison, 1985, Science 229:1202]; [Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214]; [Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202]); 및 미국 특허 5,807,715, 4,816,567, 4,816,397 및 6,331,415를 참조한다.
인간화 항체는 소정의 항원에 결합할 수 있고, 실질적으로 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 프레임워크 구역 및 실질적으로 비-인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 항체 또는 그의 변이체 또는 단편이다. 인간화 항체는 적어도 하나 및 전형적으로 2개의 가변 도메인 (Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, Fv)을 실질적으로 모두 포함하고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 구역은 비-인간 면역글로불린의 것 (즉, 공여 항체)에 대응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크 구역은 인간 면역글로불린 컨센서스 서열의 것이다. 바람직하게는, 인간화 항체는 또한 면역글로불린 불변 구역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 포함한다. 통상적으로, 항체는 경쇄 및 적어도 중쇄의 가변 도메인을 모두 함유할 것이다. 항체는 또한 중쇄의 CH1, 힌지, CH2, CH3 및 CH4 구역을 포함할 수 있다. 인간화 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함하는 임의의 클래스 및 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는 임의의 이소형의 면역글로불린으로부터 선택될 수 있다. 대체로, 불변 도메인은 인간화 항체가 세포독성 활성을 나타내는 것을 목적하는 경우에 보체 고정 불변 도메인이고, 클래스는 대개 IgG1이다. 상기 세포독성 활성이 요망되지 않는 경우에, 불변 도메인은 IgG2 클래스의 것일 수 있다. 본 발명의 특정 실시태양에서 사용될 수 있는 VL 및 VH 불변 도메인의 예는 문헌 [Johnson et al (1997) J. Infect. Dis. 176, 1215-1224]에 설명된 C-카파 및 C-감마-1 (nG1m) 및 미국 특허 5,824,307에 기재된 것을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 인간화 항체는 2 이상의 클래스 또는 이소형으로부터의 서열을 포함할 수 있고, 목적하는 효과기 기능을 최적화하기 위해 특정 불변 도메인을 선택하는 것은 당업계의 보통의 기술 내에 있다. 인간화 항체의 프레임워크 및 CDR 구역은 모 서열에 정확하게 대응할 필요가 없고, 예를 들어, 공여 CDR 또는 컨센서스 프레임워크는 돌연변이는 적어도 하나의 잔기의 치환, 삽입 또는 결손에 의해 돌연변이될 수 있어서, 그 부위에서 CDR 또는 프레임워크 잔기가 컨센서스 또는 도입 항체에 대응하지 않는다. 그러나, 상기 돌연변이는 광범하지 않을 것이다. 대체로, 인간화 항체 잔기의 적어도 75%, 보다 종종 90%, 가장 바람직하게는 95% 초과가 모 FR 및 CDR 서열의 잔기에 대응할 것이다. 인간화 항체는 CDR-그라프팅 (grafting) (유럽 특허 EP 239,400; 국제 특허 공개 WO 91/09967; 및 미국 특허 5,225,539, 5,530,101 및 5,585,089), 베니어링 (veneering) 또는 리서피싱 (resurfacing) (유럽 특허 EP 592,106 및 EP 519,596; 문헌 ([Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5): 489-498]; [Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6):805-814]; 및 [Roguska et al., 1994, PNAS 91:969-973]), 사슬 셔플링 (미국 특허 5,565,332), 및 예를 들어 미국 특허 6,407,213, 미국 특허 5,766,886, WO 9317105, 문헌 ([Tan et al., J. Immunol. 169:1119 25 (2002)], [Caldas et al., Protein Eng. 13(5):353-60 (2000)], [Morea et al., Methods 20(3):267 79 (2000)], [Baca et al., J. Biol. Chem. 272(16):10678-84 (1997)], [Roguska et al., Protein Eng. 9(10):895 904 (1996)], [Couto et al., Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s-5977s (1995)], [Couto et al., Cancer Res. 55(8):1717-22 (1995)], [Sandhu JS, Gene 150(2):409-10 (1994)] 및 [Pedersen et al., J. Mol. Biol. 235(3):959-73 (1994)])에 개시된 기술을 포함하고 이로 제한되지 않는 당업계에 공지된 다양한 기술을 이용하여 생산할 수 있다 (또한 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 미국 특허 공개 US 2005/0042664 A1 (2005년 2월 24일) 참조). 종종, 프레임워크 구역 내의 프레임워크 잔기는 항원 결합을 변경시키고, 바람직하게는 증진시키기 위해 CDR 공여 항체로부터의 상응하는 잔기로 치환될 것이다. 상기 프레임워크 치환은 당업계에 잘 공지된 방법에 의해, 예를 들어, 항원 결합에 중요한 프레임워크 잔기를 확인하기 위해 CDR 및 프레임워크 잔기의 상호작용의 모델링, 및 특정 위치에서 드문 프레임워크 잔기를 확인하기 위해 서열 비교에 의해 확인된다 (예를 들어, 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 미국 특허 5,585,089 (Queen et al); 및 [Reichmann et al., 1988, Nature 332:323] 참조)
단일 도메인 항체, 예를 들어, 경쇄가 결핍되는 항체는 당업계에 잘 공지된 방법에 의해 생산할 수 있다 (그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 문헌 ([Riechmann et al., 1999, J. Immunol. 231:25-38]; [Nuttall et al., 2000, Curr. Pharm. Biotechnol. 1(3):253-263]; [Muylderman, 2001, J. Biotechnol. 74(4): 277302]); 미국 특허 6,005,079; 및 국제 특허 출원 공개 WO 94/04678, WO 94/25591 및 WO 01/44301 참조).
또한, hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체는 다시 당업자에게 잘 공지된 기술을 사용하여 항원을 "모방하는" 항-개별특이형 항체를 생성하기 위해 이용될 수 있다 (예를 들어, [Greenspan & Bona, 1989, FASEB J. 7(5):437-444]; 및 [Nissinoff, 1991, J. Immunol. 147(8):2429-2438] 참조).
항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드
본 발명은 hLIGHT 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 본 발명의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명은 또한 예를 들어 상기 규정된 바와 같이 고 엄격성, 중간 또는 보다 낮은 엄격성 혼성화 조건 하에, 본 발명의 변형된 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 폴리뉴클레오티드를 얻을 수 있고, 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열을 결정할 수 있다. E1, E13, E63, F19 및 F223의 아미노산 서열이 공지되어 있으므로 (예를 들어, 서열 41, 42, 43, 44, 45, 102, 46, 103, 47, 48, 104, 49, 105, 106 및 50; 및 각각 본원에 참고로 포함시킨 ATCC 기탁 번호 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728 참조), 상기 항체 및 상기 항체의 변형된 버전을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 당업계에 잘 공지된 방법을 사용하여 결정할 수 있고, 즉, 특정 아미노산을 코딩하는 것으로 공지된 뉴클레오티드 코돈은 항체를 코딩하는 핵산을 생성하는 방식으로 조립된다. 항체를 코딩하는 상기 폴리뉴클레오티드는 화학적으로 합성된 올리고뉴클레오티드로부터 조립될 수 있고 (예를 들어, 문헌 [Kutmeier et al., 1994, BioTechniques 17:242]에 설명된 바와 같이), 이는 간단히 설명하면 항체, 단편 또는 그의 변이체를 코딩하는 서열의 일부를 함유하는 겹치는 올리고뉴클레오티드의 합성, 상기 올리고뉴클레오티드의 어닐링 (annealing) 및 라이게이팅 (ligating), 및 이어서 PCR에 의한 라이게이팅된 올리고뉴클레오티드의 증폭을 포함한다.
별법으로, 본 발명의 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 적합한 공급원으로부터의 핵산으로부터 생성될 수 있다 (예를 들어, ATCC 기탁 번호가 PTA-7729, PTA-7842, PTA-7818, PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마 (E1, E13, E63, F19 또는 F23)). 특정 항체를 코딩하는 핵산을 함유하는 클론이 이용가능하지 않지만 항체 분자의 서열이 공지되어 있으면, 면역글로불린을 코딩하는 핵산은 서열의 3' 및 5' 단부에 혼성화가능한 합성 프라이머를 사용하는 PCR 증폭에 의해, 또는 예를 들어, 항체를 코딩하는 cDNA 라이브러리로부터 cDNA 클론을 확인하기 위해 특정 유전자 서열에 특이적인 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여 클로닝함으로써 적합한 공급원으로부터 화학적으로 합성되거나 얻을 수 있다 (예를 들어, 항체 cDNA 라이브러리, 또는 핵산, 바람직하게는 poly A+ RNA로부터 생성되거나, 항체를 발현하는 임의의 조직 또는 세포, 예를 들어 본 발명의 항체를 발현하도록 선택된 하이브리도마 세포로부터 단리된 cDNA 라이브러리). 이어서, PCR에 의해 생성된 증폭된 핵산은 당업계에 잘 공지된 임의의 방법을 사용하여 복제가능한 클로닝 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
특정 실시태양에서, 본 발명의 핵산 분자는 서열 41, 42, 43, 44, 45 (VH를 코딩함) 및/또는 서열 102, 46, 103, 47, 48, 104, 49, 105, 106 또는 50 (VL을 코딩함) 중의 임의의 하나에 제시된 핵산 서열 또는 이들의 임의의 조합물을 포함하거나 이로 이루어진다 (예를 들어, 본 발명의 항체, 예를 들어 전장 항체, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 또는 본 발명의 단일쇄 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열로서).
항체의 재조합 발현
hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 본 발명의 항체 (예를 들어, 전장 항체, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 또는 본 발명의 단일쇄 항체)의 재조합 발현에서는 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터의 제작을 필요로 한다. 본 발명의 항체 분자, 항체의 중쇄 또는 경쇄 또는 그의 단편 (반드시는 아니지만 바람직하게는 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 함유하는)을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 얻어지면, 항체 분자의 생산을 위한 벡터는 당업계에 잘 공지된 기술을 이용하여 재조합 DNA 기술에 의해 생산할 수 있다. 따라서, 뉴클레오티드 서열을 코딩하는 항체를 함유하는 폴리뉴클레오티드를 발현함으로써 단백질을 제조하기 위한 방법은 본원에 설명되어 있다. 항체 코딩 서열 및 적절한 전사 및 번역 제어 신호를 함유하는 발현 벡터를 제작하기 위해 당업자에게 잘 공지된 방법을 사용할 수 있다. 상기 방법은 예를 들어 시험관내 재조합 DNA 기술, 합성 기술 및 생체내 유전자 재조합을 포함한다. 따라서, 본 발명은 프로모터에 작동가능하게 연결된 본 발명의 항체 분자, 항체의 중쇄 또는 경쇄, 항체 또는 그의 단편의 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인, 또는 중쇄 또는 경쇄 CDR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 복제가능한 벡터를 제공한다. 상기 벡터는 항체 분자의 불변 구역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있고 (예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 86/05807 및 WO 89/01036; 및 미국 특허 5,122,464 참조), 항체의 가변 도메인은 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄 및 경쇄 모두의 발현을 위해 상기 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
발현 벡터는 통상적인 기술에 의해 숙주 세포에 전달되고, 이어서 형질감염된 세포는 본 발명의 항체를 생산하기 위해 통상적인 기술에 의해 배양된다. 따라서, 본 발명은 이종성 프로모터에 작동가능하게 연결된 본 발명의 항체 또는 그의 단편, 또는 그의 중쇄 또는 경쇄 또는 그의 단편, 또는 본 발명의 단일쇄 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 숙주 세포를 포함한다. 이중쇄 항체의 발현을 위한 바람직한 실시태양에서, 중쇄 및 경쇄 모두를 코딩하는 벡터가 아래에 상세히 설명되는 바와 같이 전체 면역글로불린 분자의 발현을 위해 숙주 세포 내에서 동시-발현될 수 있다.
본 발명의 항체 분자를 발현하기 위해 다양한 숙주-발현 벡터 시스템을 사용할 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 5,807,715 참조). 상기 숙주-발현 시스템은 그에 의해 목적하는 코딩 서열을 생산하고 후속적으로 정제할 수 있는 비히클을 나타내지만, 또한 적절한 뉴클레오티드 코딩 서열을 사용하여 형질전환 또는 형질감염될 때 본 발명의 항체 분자를 계내에서 발현할 수 있는 세포를 나타낸다. 이들은 미생물, 예를 들어 항체 코딩 서열을 함유하는 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 세균 (예를 들어, 이. 콜라이 및 비. 섭틸리스 (B. subtilis)); 항체 코딩 서열을 함유하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모 (예를 들어, 사카로마이세스 피치아 (Saccharomyces Pichia)); 항체 코딩 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터 (예를 들어, 바큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 항체 코딩 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터 (예를 들어, 콜리플라워 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 감염되거나, 재조합 플라스미드 발현 벡터 (예를 들어, Ti 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템; 또는 포유동물 세포의 게놈으로부터 (예를 들어, 메탈로티오네인 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 (예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터; 우두 바이러스 7.5K 프로모터) 유래된 프로모터를 함유하는 재조합 발현 구성체를 보유하는 포유동물 세포 시스템 (예를 들어, COS, CHO, BHK, 293, NSO 및 3T3 세포)을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 바람직하게는, 세균 세포, 예를 들어 에스케리치아 콜라이, 보다 바람직하게는 진핵 세포 (특히 전체 재조합 항체 분자의 발현을 위해)가 재조합 항체 분자의 발현을 위해 사용된다. 예를 들어, 포유동물 세포, 예를 들어 차이니즈 햄스터 난소 세포 (CHO)는 벡터, 예를 들어 인간 사이토메갈로바이러스로부터의 주요 중간 초기 유전자 프로모터 요소와 함께 항체에 대한 효과적인 발현 시스템이다 ([Foecking et al., 1986, Gene 45:101]; 및 [Cockett et al., 1990, Bio/Technology 8:2]). 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 항체는 CHO 세포에서 생산된다. 특정 실시태양에서, hLIGHT 항원에 면역특이적으로 결합하는 본 발명의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 발현은 구성적 프로모터, 유도성 프로모터 또는 조직 특이적 프로모터에 의해 조절된다.
세균 시스템에서, 발현되는 항체 분자에 대해 의도되는 용도에 따라 많은 발현 벡터가 유리하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 항체 분자의 제약 조성물 생산을 위해 다량의 상기 항체가 생산되어야 할 때, 쉽게 정제되는 높은 수준의 융합 단백질 산물의 발현을 지시하는 벡터가 바람직할 수 있다. 상기 벡터는 이. 콜라이 발현 벡터 pUR278 (Ruther et al., 1983, EMBO 12:1791) (여기서 항체 코딩 서열은 융합 단백질이 생산되도록 lac Z 코딩 구역을 사용하여 인 프레임으로 벡터 내로 개별적으로 라이게이팅될 수 있다); pIN 벡터 ([Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109]; [Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509]) 등을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 글루타치온 5-트랜스퍼라제 (GST)와의 융합 단백질로서 외래 폴리펩티드를 발현하기 위해 pGEX 벡터가 또한 사용될 수 있다. 일반적으로, 상기 융합 단백질은 가용형이고, 매트릭스 글루타치온 아가로스 비드에 대한 흡착 및 결합 후 유리 글루타치온의 존재 하의 용출에 의해 용해된 세포로부터 쉽게 정제될 수 있다. pGEX 벡터는 클로닝된 표적 유전자 산물이 GST 모이어티로부터 방출될 수 있도록 트롬빈 또는 인자 Xa 프로테아제 절단 부위를 포함하도록 설계된다.
곤충 시스템에서, 오토그라파 칼리포르니카 (Autographa californica) 핵 다각 바이러스 (AcNPV)가 외래 유전자를 발현하기 위해 벡터로서 사용된다. 바이러스는 스포돕테라 프루기페르다 (Spodoptera frugiperda) 세포 내에서 성장한다. 항체 코딩 서열은 바이러스의 비-필수 구역 (예를 들어 폴리헤드린 유전자) 내로 개별적으로 클로닝되고, AcNPV 프로모터 (예를 들어 폴리헤드린 프로모터)의 제어 하에 놓일 수 있다.
포유동물 숙주 세포에서, 많은 바이러스-기반 발현 시스템이 사용될 수 있다. 아데노바이러스가 발현 벡터로서 사용되는 경우에, 목적하는 항체 코딩 서열은 아데노바이러스 전사/번역 제어 복합체, 예를 들어, 후기 프로모터 및 삼원 (tripartite) 리더 서열에 라이게이팅될 수 있다. 이어서, 상기 키메라 유전자는 시험관내 또는 생체내 재조합에 의해 아데노바이러스 게놈 내에 삽입될 수 있다. 바이러스 게놈의 비-필수 구역 (예를 들어, 구역 E1 또는 E3) 내의 삽입은 감염된 숙주 내에서 생존가능하고 항체 분자를 발현할 수 있는 재조합 바이러스를 생성시킬 것이다 (예를 들어, [Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8 1:355-359] 참조). 특이적 개시 신호가 또한 삽입된 항체 코딩 서열의 효율적인 번역을 위해 요구될 수 있다. 상기 신호는 ATG 개시 코돈 및 인접 서열을 포함한다. 또한, 전체 삽입물의 번역을 보장하기 위해 개시 코돈은 목적하는 코딩 서열의 판독 프레임과 동조하여야 한다. 상기 외인성 번역 제어 신호 및 개시 코돈은 천연 및 합성의 다양한 기원의 것일 수 있다. 발현의 효율은 적절한 전사 인핸서 요소, 전사 종결인자 (terminator) 등의 포함에 의해 향상될 수 있다 (예를 들어, [Bittner et al., 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544] 참조).
또한, 삽입된 서열의 발현을 조절하거나, 유전자 산물을 목적하는 특정 방식으로 변형하고 처리하는 숙주 세포 균주가 선택될 수 있다. 단백질 산물의 그러한 변형 (예를 들어, 글리코실화) 및 처리 (예를 들어, 절단)는 단백질의 기능을 위해 중요할 수 있다. 상이한 숙주 세포는 단백질 및 유전자 산물의 번역후 처리 및 변형을 위한 특징 및 특이적 메카니즘을 갖는다. 발현된 외래 단백질의 정확한 변형 및 처리를 보장하기 위해 적절한 세포주 또는 숙주 시스템이 선택될 수 있다. 이를 위해, 일차 전사체의 적절한 처리, 유전자 산물의 글리코실화 및 인산화를 위한 세포성 수단을 갖는 진핵 숙주 세포를 사용할 수 있다. 상기 포유동물 숙주 세포는 CHO, VERY, BHK, Hela, COS, MDCK, 293, 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O 및 T47D, NS0 (임의의 면역글로불린 사슬을 내인적으로 생산하지 않는 쥐 골수종 세포주), CRL7O3O 및 HsS78Bst 세포를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 바람직한 실시태양에서, 본 발명의 완전 인간 모노클로날 항-hLIGHT 항체는 포유동물 세포, 예를 들어 CHO 세포에서 생산된다.
재조합 단백질의 장기간의 고수율 생산을 위해, 안정한 발현이 바람직하다. 예를 들어, 항체 분자를 안정하게 발현하는 세포주를 공학처리할 수 있다. 바이러스 복제 기원을 함유하는 발현 벡터를 사용하는 대신에, 숙주 세포를 적절한 발현 제어 요소 (예를 들어, 프로모터, 인핸서 서열, 전사 종결인자, 폴리아데닐화 부위 등) 및 선택가능 마커에 의해 제어되는 DNA로 형질전환시킬 수 있다. 외래 DNA의 도입 후, 공학처리된 세포를 농축 배지 내에서 1-2일 동안 성장하도록 한 후, 선택 배지로 교체할 수 있다. 재조합 플라스미드 내의 선택가능 마커는 선택을 위한 내성을 부여하고, 세포가 플라스미드를 그들의 염색체 내로 안정하게 통합시키고 성장하여 다시 클로닝되고 세포주 내로 통합될 수 있는 점을 형성하도록 한다. 상기 방법은 항체 분자를 발현하는 세포주를 공학처리하기 위해 유리하게 사용될 수 있다. 상기 공학처리된 세포주는 항체 분자와 직접 또는 간접적으로 상호반응하는 조성물의 스크리닝 및 평가에 특히 유용할 수 있다.
단순 포진 바이러스 티미딘 키나제 (Wigler et al., 1977, Cell 11:223), 하이포잔틴구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제 (Szybalska & Szybalski, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:202) 및 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제 (Lowy et al., 1980, Cell 22:8-17) (유전자는 각각 tk-, hgprt- 또는 aprt-세포에서 사용될 수 있다)포함하고 이로 제한되지 않는 많은 선택 시스템이 사용될 수 있다. 또한, 항대사체 내성은 다음 유전자의 선택의 기초로서 사용될 수 있다: 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여하는 dhfr ([Wigler et al., 1980, Natl. Acad. Sci. USA 77:357]; [O'Hare et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527]); 미코페놀산에 대한 내성을 부여하는 gpt (Mulligan & Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072); 아미노글리코시드 G-418에 대한 내성을 부여하는 neo ([Wu and Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95]; [Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596]; [Mulligan, 1993, Science 260:926-932]; 및 [Morgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62: 191-217]; [May, 1993, TIB TECH 11(5):155-215)]; 및 히그로마이신에 대한 내성을 부여하는 hygro (Santerre et al., 1984, Gene 30: 147). 재조합 DNA 기술의 분야에 일반적으로 공지된 방법은 목적하는 재조합 클론을 선택하기 위해 일상적으로 적용될 수 있고, 상기한 방법은 예를 들어 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨 문헌 ([Ausubel et al (eds.), Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, NY (1993)]; [Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); 및 [Chapters 12 and 13, Dracopoli et al (eds.), Current Protocols in Human Genetics. John Wiley & Sons, NY (1994)]; [Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol. 150:1]에 설명되어 있다.
항체 분자의 발현 수준은 벡터 증폭에 의해 증가될 수 있다 (리뷰를 위해 문헌 [Bebbington and Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol.3 (Academic Press, New York, 1987)] 참조). 항체를 발현하는 벡터 시스템 내의 마커가 증폭가능할 때, 숙주 세포의 배양액 내에 존재하는 억제제 수준의 증가는 마커 유전자의 카피의 수를 증가시킬 것이다. 증폭된 구역은 항체 유전자와 연관되므로, 항체의 생산이 또한 증가할 것이다 (Crouse et al., 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257).
숙주 세포는 제1 벡터는 중쇄 유래된 폴리펩티드를 코딩하고 제2 벡터는 경쇄 유래된 폴리펩티드를 코딩하는 본 발명의 2개의 발현 벡터로 동시-형질감염될 수 있다. 2개의 벡터는 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 동등한 발현을 가능하게 하는 동일한 선택가능 마커를 함유할 수 있다. 별법으로, 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 모두를 코딩하고 발현할 수 있는 단일 벡터를 사용할 수 있다. 상기 상황에서, 과잉의 독성이 없는 중쇄를 피하기 위해 경쇄는 중쇄 앞에 놓여야 한다 ([Proudfoot, 1986, Nature 322:52]; 및 [Kohler, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:2197-2199]). 중쇄 및 경쇄에 대한 코딩 서열은 cDNA 또는 게놈 DNA를 포함할 수 있다.
본 발명의 항체 분자가 재조합 발현에 의해 생산되었으면, 면역글로불린 분자의 정제를 위해 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환, 친화도, 특히 단백질 A 후 특이적 항원에 대한 친화도 및 사이징 (sizing) 컬럼 크로마토그래피), 원심분리, 분별 용해 또는 단백질의 정제를 위한 임의의 다른 표준 기술에 의해 정제할 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 정제를 용이하게 하기 위해 본원에서 설명되거나 당업계에 공지된 이종성 폴리펩티드 서열에 융합될 수 있다.
키트
본 발명은 본 발명의 제약 조성물의 하나 이상의 성분, 예를 들어 본원에서 제공되는 하나 이상의 항체로 채워진 하나 이상의 용기를 포함하는 제약학적 팩 (pack) 또는 키트를 또한 제공한다. 제약학적 또는 생물학적 산물의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관 (governmental agency)에 의해 규정된 형태의 공지문 (notice)이 임의로 상기 용기(들)에 연합될 수 있고, 상기 공지문은 기관에 의한 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매의 승인을 반영한다.
본 발명은 상기 방법에서 사용될 수 있는 키트를 제공한다. 하나의 실시태양에서, 키트는 하나 이상의 용기 내에 본 발명의 항체, 바람직하게는 정제된 항체를 포함한다. 특정 실시태양에서, 본 발명의 키트는 대조군으로서 실질적으로 단리된 hLIGHT 항원을 함유한다. 바람직하게는, 본 발명의 키트는 hLIGHT 항원과 반응하지 않는 대조 항체를 추가로 포함한다. 다른 특정 실시태양에서, 본 발명의 키트는 hLIGHT 항원에 대한 변형된 항체의 결합을 검출하기 위한 수단을 함유한다 (예를 들어, 항체는 검출가능한 기질, 예를 들어 형광 화합물, 효소 기질, 방사성 화합물 또는 발광 화합물에 컨쥬게이팅될 수 있거나, 제1 항체를 인식하는 제2 항체가 검출가능한 기질에 컨쥬게이팅될 수 있다). 특정 실시태양에서, 키트는 재조합 방식으로 생산된 또는 화학적 합성된 hLIGHT 항원을 포함할 수 있다. 키트 내에 제공되는 hLIGHT 항원은 또한 고체 지지체에 부착될 수 있다. 보다 특정한 실시태양에서, 상기 설명된 키트의 검출 수단은 hLIGHT 항원이 부착되는 고체 지지체를 포함한다. 상기 키트는 또한 비-부착된 리포터 (reporter)-표지된 항-인간 항체를 포함할 수 있다. 상기 실시태양에서, hLIGHT 항원에 대한 항체의 결합은 상기 리포터-표지된 항체의 결합에 의해 검출될 수 있다.
다음 실시예는 예시를 위해 제시되는 것으로서 본 발명을 제한하지 않는다.
< 실시예 >
실시예 1 - 인간 항- hLIGHT 항체의 생성
본 실시예에서, 가용형 재조합 hLIGHT로 면역화된 트랜스크로모조멀 마우스 (KM 마우스™) (WO 02/43478, WO 02/092812, [Ishida and Lonberg, IBCs 11th Antibody Engineering Meeting. Abstract (2000)]; 및 [Kataoka, S. IBCs 13th Antibody Engineering Meeting. Abstract (2002)])를 사용한 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체의 생성이 설명된다. 여기서 설명되는 항체는 모 세포주가 아니라 hLIGHT로 안정하게 형질감염된 세포주 (EL4-hLIGHT 및 HEK 293-hLIGHT)를 특이적으로 염색하였다. 이와 유사하게, 항체는 활성화시에 인간 T 세포 하이브리도마 (II-23.D7)의 표면 상의 내인성으로 발현된 hLIGHT에 결합한다 (Ware et al. 1986 Lymphokine Res 5 313-24). 상기 데이타들은 항체가 hLIGHT에 면역특이적으로 결합함을 나타낸다. 단리된 항체는 아래에서 설명되는 교차-차단 실험에 의해 결정되는 바와 같이 hLIGHT 상의 2개의 에피토프 중 하나를 인식한다. 또한, 항체는 인간 HVEM과 LTβR 모두의 가용형 수용체-Fc 융합 형에 대한 세포 표면-발현된 hLIGHT 결합을 차단할 수 있었다. 가용형 hLIGHT는 인간 대장 상피 세포주 HT29.14s (ATCC HTB-38)로부터 케모카인 CCL20 및 RANTES의 분비를 용량 의존 방식으로 유도한다. 항-hLIGHT 항체와 함께 가용형 hLIGHT의 인큐베이션은 HT29.14s 세포로부터 CCL20과 RANTES 모두의 hLIGHT-매개된 분비를 차단한다. 또한, 상기 항-hLIGHT 항체와 함께 세포 표면-발현된 hLIGHT (EL4-hLIGHT)의 예비 인큐베이션은 HT29 세포로부터 막 결합된 hLIGHT-유도된 케모카인의 분비를 차단한다. 상기 결과들은 완전 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체의 기능 및 구조적 특징을 보여주고, hLIGHT-매개 질병의 치료에서 그의 유용성의 증거를 제공한다.
물질 및 방법
항원 제제: 완전 인간 항-hLIGHT 항체의 생성에서 면역화를 위해 사용된 항원은 아미노산 위치 66의 글라이신으로부터 발린 240까지의 세포외 구역만을 포함하도록 말단 절단되고 단백질의 아미노-말단에 FLAG 에피토프 태그를 함유하는 hLIGHT의 가용형 버전 (서열 54)이었다. 상기 분자의 생산은 문헌에 보고되어 있다 (Rooney et al 2000 J Biol Chem 275 14307-15).
전장 hLIGHT 아미노산 서열 (서열 52)을 코딩하는 핵산 (서열 51)은 역전사효소-PCR (Mauri et al. 1998 Immunity 8 21-30)에 의해 활성화된 II23.D7 T 세포 하이브리도마 세포로부터 클로닝하였다. II-23 세포주 (D7 서브클론)는 인간 CD4+ T 세포 하이브리도마이다 (Ware et al. 1986 Lymphokine Res 5 313-24). hLIGHT PCR 산물을 포유동물 발현 벡터 pcDNA3.1 (+) 내로 서브클로닝하여 pcDNA3.1-hLIGHT를 생성시켰다. 세포외 도메인 (Gly66 내지 Val240을 코딩)을, 제한 부위가 도입된 다음 프라이머를 사용하여 PCR에 의해 pcDNA3-hLIGHT로부터 증폭하였다:
정방향, 5'-GTAGGAGAGATGGTCACCCGCCT-3' (서열 80).
역방향, 5'-GGAACGCGAATTCCCACGTGTCAGACCCATGTCCAAT-3' (서열 81).
증폭된 hLIGHT PCR 산물을 EcoRI으로 소화시키고, VCAM1 리더 서열, 이어서 분비되는 N-말단 FLAG-태깅된 단백질 (서열 52)의 생산을 위한 FLAG 에피토프를 코딩하는 pCDNA3.1-VCAM-FLAG의 SnaB1 및 EcoRI 부위 내로 라이게이션시켰다.
가용형 hLIGHT의 생산을 위한 안정한 세포주를 만들기 위해, 인산칼슘 방법을 사용하여 HEK293 세포를 형질감염시키고, 안정한 클론을 G418 (인비트로겐, 코프.)로 선택하고, ELISA에 의해 hLIGHT 생산에 대해 스크리닝하였다. 1.0%의 규정된 소 태아 혈청 (하이클론 래보래토리스 (Hyclone Laboratories, 미국 유타주 로간))을 함유하는 DMEM 중에서 성장시킨 세포의 배양 상등액으로부터 가용형 hLIGHT를 정제하였다. 가용형 hLIGHT는 아가로스 비드에 커플링시킨 항-FLAG (M2) 항체를 사용하여 친화도 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 가용형 hLIGHT를 20 mM 글라이신, 150 mM NaCl (pH 3.0)을 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 50 mM Tris (pH 7.4) 내로 수거하여 pH를 중화하였다. 단백질 농도를 280 nm에서의 흡광도에 의해 결정하였다.
개시 코돈 (ATG)에서 정지 코돈 (TGA)까지의 hLIGHT의 뉴클레오티드 서열 (서열 51):
Figure pat00002
전장 hLIGHT 240 aa의 아미노산 서열 (서열 52):
Figure pat00003
가용형 FLAG-태깅된 hLIGHT의 뉴클레오티드 서열 (VCAM 리더 서열, 이어서 볼드체의 FLAG 코딩 서열이 제시됨) (서열 53)
Figure pat00004
가용형 FLAG-태깅된 hLIGHT 183 aa의 아미노산 서열 (FLAG를 볼드체로 표시) (서열 54):
Figure pat00005
EL4-hLIGHT 세포주의 생성을 위해 전장 hLIGHT를 코딩하는 cDNA를 함유하는 레트로바이러스로 EL4 (ATCC TIB-39) 세포를 안정적으로 형질도입하였다.
Fc 융합 단백질 제제: 인간 IgG1의 Fc 구역 및 인간 LTβR 및 인간 HVEM의 리간드-결합 도메인을 함유하는 가용형 수용체 융합 단백질의 클로닝, 발현, 및 정제는 문헌에 기재되어 있다 (Rooney et al. 2000 Methods Enzymol 322 345-63). 간단히 설명하면, HVEM 및 LTβR의 세포외 구역을 제한 엔도뉴클레아제 부위가 도입된 프라이머를 사용하는 중합효소 연쇄 반응에 의해 단리하고, 인간 Fc IgG1을 함유하는 바큘로바이러스 벡터 pVL1392 (파밍겐 (Pharmingen)) 내로 인 프레임으로 라이게이션시켰다. 트리코플루시아 나이 (Trichoplusia ni) High-Five BTI-TN-5b1-4 (Tn5) 곤충 세포 (인비트로겐 코프.)를 단백질 생산을 위해 LTβR:Fc 또는 HVEM:Fc 재조합 바큘로바이러스로 감염시켰다 (항체 및 단백질 정제 참조).
마우스: 인간 면역글로불린 구역을 코딩하는 인간 염색체 단편을 보유하는 인간 트랜스-염색체 KM 마우스™ (WO 02/43478, WO 02/092812, [Ishida and Lonberg, IBCs 11th Antibody Engineering Meeting. Abstract (2000)]; 및 [Kataoka, S. IBCs 13th Antibody Engineering Meeting. Abstract (2002)])를 기린 브루어리 코., 엘티디. (Kirin Brewery Co., Ltd., 일본)로부터 얻고, 제미니 사이언스 (Gemini Science, 미국 캘리포니아주 라 졸라)의 동물 시설에 수용하였다. 인간 항체를 생산하기 위한 기술의 개요는 문헌 [Lonberg and Huszar 1995 Int Rev Immunol 13 65-93]에 기재되어 있다. 내인성 면역글로불린을 발현하지 않는 하나 이상의 인간 면역글로불린 유전자 (카파 또는 람다)를 갖는 트랜스제닉 동물은 예를 들어 미국 특허 5,939,598에 기재되어 있다. 인간 항체 및 인간 모노클로날 항체를 생산하기 위한 추가의 방법도 문헌에 기재되어 있다 (예를 들어, WO 98/24893; WO 92/01047; WO 96/34096; WO 96/33735; 미국 특허 5,413,923; 5,625,126; 5,633,425; 5,569,825; 5,661,016; 5,545,806; 5,814,318; 5,885,793; 5,916,771; 및 5,939,598 참조). 인간 면역글로불린 유전자를 보유하는 소, 즉 TC 소의 개발은 이시다 (Ishida) 및 론버그 (Lonberg)에 의해 설명된 바 있다 ([Ishida 2000 11th Antibody Engineering Meeting], [Kuroiwa et al. 2004 Nat Genet 36 775-80], [Kuroiwa et al. 2002 Nat Biotechnol 20 889-94] 참조).
면역화: FLAG-태깅된 가용형 hLIGHT 재조합 단백질을 등부피의 완전 프로인트 어쥬번트 (CFA, 시그마 (Sigma))와 혼합하고, 에멀젼을 제조하였다. 10 내지 50 ㎍의 단백질을 피하 (s.c.) 주사하여 마우스를 면역화시키고, 2 내지 3회 부스트 (boost)를 위해 2-3주 간격으로 불완전 프로인트 어쥬번트 (IFA, 시그마)에 유화시킨 10 내지 20 ㎍의 단백질을 사용하여 s.c. 주사로 부스팅하였다. 최종적으로, 어쥬번트를 사용하지 않은 상태에서 10 ㎍의 FLAG-태깅된 가용형 hLIGHT를 융합 3일 전에 정맥내 (i.v.) 주사하였다.
하이브리도마 생산: hLIGHT 형질도입된 EL4 세포 대 EL4 모 세포를 사용하여 hLIGHT ELISA 및 FACS에 의해 결정시에 그 혈청 내에 가장 높은 항-hLIGHT IgG 특이적 항체 역가를 보이는 마우스를 모노클로날 항체 생산을 위해 선택하였다. 비장을 수거하고, 단일 세포 현탁액을 50% 폴리에틸렌 글리콜 (뵈링거 만하임 (Boehringer Mannheim), 미국 인디애나주 인디아나폴리스)과 5:1의 비율로 SP2/O-Ag14 골수종 세포주 (ATCC, 미국 버지니아주 매나서스)에 융합시켰다. 융합체를 완전 DMEM-1O 배지 (10% 소 태아 혈청 (FBS, 인비트로겐, 코프.), 1% 비-필수 아미노산, 2 mM L-글루타민, 100 U/ml 페니실린, 100 ㎍/ml 스트렙토마이신 술페이트 (모두 바이오휘태커 (BioWhittaker, 미국 메릴랜드주 워커스빌) 제품), HAT 보충제 (시그마), 및 10% 하이브리도마 클로닝 팩터 (Hybridoma Cloning Factor) (HCF, 바이오바리스 (Biovaris), 미국 캘리포니아주 샌 디에고)를 함유하는 둘베코 개질 이글 배지 (Dulbecco's Modified Engle's Medium))에 최적 밀도 (여기서 1x106/ml)로 96 웰 평저 플레이트 내에 도말하고, 10% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 배양하였다. 2개의 융합체에 대해 대략 2800개의 웰을 hLIGHT 특이적 항체를 함유하는 인간 카파에 대해 ELISA에 의해 스크리닝하였다. 인간 항-hLIGHT IgG 항체는 hLIGHT-EL4 세포 대 EL4 모 세포를 사용하여 유동 세포 분석에 의해 확인하였다. 양성 웰을 또한 EL4-hLIGHT 세포와 함께 조 하이브리도마 종결 배양 성장 배지의 예비-인큐베이션 및 반포화 HVEM:Fc 또는 LTβR:Fc를 사용한 염색에 의해 수용체 차단 활성에 대해 시험하였다. 양성 웰을 팽창시키고, 3 - 5 라운드의 제한 희석에 적용하여 모노클로날 항체를 얻었다.
항체 및 단백질 정제: 항체 정제를 위해, 하이브리도마를 2 리터 롤러 병에서 350 밀리리터 내지 1 리터/병으로 또는 초저 IgG 소 태아 혈청 (인비트로겐, 코프.)으로 보충된 하이브리도마-SFM 배지 (인비트로겐, 코프.)가 존재하는 1 리터 Integra 시스템 (인테그라 바이오사이언스, 인크. (INTEGRA Bioscience, Inc.), 미국 메릴랜드주 이잠스빌)으로 배양하였다.
인간 및 마우스 LTβR:Fc 및 HVEM:Fc 재조합 단백질의 생산은 문헌에 보고된 바 있고 (Rooney et al. 2000 Meth. Enzymol. 322:345-63), 1 리터의 현탁 Tn5 세포를 4일 동안 감염시켜 생성시켰다. 인간 모노클로날 항체 및 Fc 융합 단백질을 모두 재조합 단백질 A-Sepharose Fast Flow 젤 (아머샴 바이오사이언시즈)을 사용하여 배양 배지로부터 정제하였다. 롤러 병에 생성된 조건화 배지를 먼저 Ultrasette 접선 유동 (tangential flow) 시스템 (폴 코프. (Pall Corp.), 미국 뉴욕주 이스트 힐즈)을 사용하여 농축하였다. 조건화 배지를 0.22 ㎛ 진공 필터 장치 (밀리포어 (Millipore), 미국 매사추세츠주 베드포드)로 여과하고, 배지 내의 인간 항체의 양에 대해 적절한 크기의 단백질 A-Sepharose Fast Flow 컬럼 (아머샴 바이오사이언시즈) 상에 로딩하였다. 컬럼을 20 컬럼 부피의 PBS로 철저히 세척하고, 항체를 0.1 M Gly-HCl (pH 3.6), 0.15 M NaCl로 용출시키고, 1 M Tris-HCl (pH 8.0)로 중화시켰다. 반응액을 SDS-PAGE로 분석하고, 양성 분획을 모아서 원심분리 농축기 (Vivaspin, 50,000 MWCO: 자르토리우스 (Sartorius, 독일 케팅겐))로 농축하였다.
Sephadex G-25 탈염 컬럼 (NAP, 아머샴 바이오사이언시즈)을 사용하여 PBS (pH 7.4)로 버퍼를 교환하였다. 마지막으로, 0.22 ㎛ 세공 직경을 갖는 주사기 필터를 사용하여 항체를 필터 멸균하고, 항체 농도를 Lowry 방법에 의해 결정하였다. 발열원 (pyrogen) 함량은 Limulus Amebocyte Lysate (LAL) 분석 (어소시에이츠 오브 케이프 코드 (Associates of Cape Cod), 미국 매사추세츠주 팔마우쓰)을 사용하여 결정하였다. 상기 분석의 검출 한계는 0.06 EU/mg이다. 시험이 음성이면, 샘플은 내독소가 존재하지 않는 것으로 간주하였다.
인간 IgG 정량화 ELISA: 상등액 및 정제된 원액에 존재하는 인간 항체의 양을 결정하기 위해, 다음 프로토콜을 사용하였다. 염소 항-인간 Fcγ 특이적 항체 (잭슨 이뮤노리서치 래보래토리스 (Jackson Immunoresearch Laboratories, 미국 펜실베니아주 웨스트 그로브))를 0.5 ㎍/웰에서 1시간 동안 37℃에서 카르보네이트 버퍼 중에서 96웰 플레이트 (넝크 (Nunc), 덴마크)에 코팅하였다. 이어서, 플레이트를 수퍼 블록 (Super block) (피어스 (Pierce), 미국 일리노이주 록포드)으로 30분 동안 차단한 후, 샘플을 플레이트에 첨가하였다. 총 인간 IgG (시그마) 또는 정제된 인간 IgG1 또는 IgG4 (기린 브루어리 코. 엘티디)를 사용하여 표준 곡선을 작성하였다. 플레이트를 1시간 동안 37℃에서 인큐베이팅하고, PBS/1% BSA/0.1% Tween20 (시그마)으로 세척하고, 결합된 항체를 1시간 동안 37℃에서 호스래디시 퍼옥시다제 (HRP, 잭슨 이뮤노리서치 래보래토리스)에 컨쥬게이팅된 염소 항-인간 Fcγ 특이적 항체를 사용하여 검출하였다. TMB 기질 (시그마)을 10분 동안 첨가하고, 반응을 H2SO4 (랩켐 (LabChem), 미국 펜실베니아주 피츠버그)로 중지시켰다. OD는 마이크로플레이트 판독기로 450 nm에서 측정하였다.
포유동물 세포 배양: 인간 II-23 세포주 (D7 서브클론), CD4+ T 세포 하이브리도마주 (Ware et al. 1986 Lymphokine Res 5 313-24)를 10% FBS (하이클론 래보래토리스) 및 100 U/ml 페니실린/100 ㎍/ml 스트렙토마이신 (라이프 테크놀로지스 (Life Technologies, 미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드))을 함유하는 RPMI 1640에 유지시켰다. 인간 HT29.14s 세포주인 EL4-hLIGHT 세포주 및 293-hLIGHT 세포주는 모두 10% FBS (하이클론 래보래토리스)를 함유하는 DMEM에 유지시켰다. 모든 포유동물 세포를 5% CO2 가습 인큐베이터 내에서 37℃에서 배양하였다.
항- hLIGHT 항체 검출 ELISA: 항체 역가, 특이성, 및 하이브리도마에 의한 생산을 ELISA에 의해 결정하였다. 간단히 설명하면, 96웰 평저 플레이트를 카르보네이트 버퍼 (pH 9.4) 내에서 50 ㎕의 FLAG 태깅된 가용형 hLIGHT로 5 ㎍/ml에서 밤새 4℃에서 또는 37℃에서 1시간 동안 코팅하였다. PBS/0.1% Tween 20으로 2회 세척한 후, 플레이트를 PBS/1% BSA/0.1% Tween20으로 37℃에서 1시간 동안 차단하였다. 혈청, 상등액, 또는 정제된 항체를 차단 버퍼 내에 희석하고, 웰에 첨가하고, 플레이트를 1시간 동안 37℃에서 인큐베이팅하였다. 플레이트를 PBS/0.1% Tween 20으로 4회 세척하고, 퍼옥시다제 컨쥬게이팅된 양 항-인간 카파 검출 항체 (더 바인딩 사이트 (The Binding Site, 영국 버밍햄))를 1:2000의 희석율로 첨가하였다. 37℃에서 1시간 인큐베이션한 후, 플레이트를 세척하고, TMB (시그마) 기질을 첨가하고 실온에서 10 내지 30분 동안 인큐베이팅하였다. 반응을 H2SO4 (랩켐)로 정지시키고, 마이크로플레이트 판독기로 450 nm에서의 광학 밀도를 측정하였다.
유동 세포 분석: 항체 역가, 특이성, 및 상대적 결합 친화도는 hLIGHT 안정한 EL4 형질도입된 세포주 또는 6-15 hr PMA (40 ng/ml) + 이노노마이신 (500 ng/ml) 활성화된 II23.D7 T 세포주를 사용하여 유동 세포 분석에 의해 결정하였다. 세포를 염색 버퍼, 즉 PBS + 2% FBS + 0.01% NaN3 + 10 mM EDTA로 1회 세척한 후, 50 ㎕의 혈청, 상등액, 또는 정제된 항체에 재현탁시켰다. 세포를 항체와 함께 얼음 상에서 20분 동안 인큐베이팅하고, 염색 버퍼로 2회 세척한 후, 염소 항-인간 IgG-APC 표지된 2차 항체 (당나귀 항-인간-APC, 잭슨 이뮤노리서치 래보래토리스)에 재현탁시켰다. 얼음 상에서 20분 인큐베이션한 후, 세포를 1% 파라포름알데히드로 1회 세척하고, 10분 고정시키거나 또는 최종적으로 세척한 후, 세포를 염색 버퍼에 재현탁시키고, FACScan 또는 FACS Calibur 유동 세포 분석기 (벡톤 디킨슨 바이오사이언시즈 (Becton Dickinson Biosciences, 미국 캘리포니아주 팔로 알토))를 사용하여 샘플을 얻었다. 데이타를 CELLQUEST (벡톤 디킨슨 바이오사이언시즈) 또는 FLOW JO (트리스타, 인크. (TreeStar, Inc.), 미국 캘리포니아주 산 카를로스) 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.
항- hLIGHT 항체 교차-차단 분석: ELISA 프로토콜을 사용하여 항체가 동일한 hLIGHT 에피토프에 결합하는 지를 결정하였다. NUNC 96 웰 평저 ELISA 플레이트를 카르보네이트 버퍼 중의 인간 항-hLIGHT 항체로 2 ㎍/ml로 1시간 동안 37℃에서 코팅하였다. 플레이트를 세척한 후, PBS/1% BSA/Tween 20으로 차단시켰다. 이어서, 인간 항-hLIGHT 항체를 재조합 인간 FLAG-태깅된 가용형 hLIGHT와 함께 30분 동안 4℃에서 예비-인큐베이팅하였다. 항체-hLIGHT 단백질의 조합물을 플레이트에 첨가하고, 1시간 동안 4℃에서 인큐베이팅하였다. 3회 세척한 후, 결합된 hLIGHT를 퍼옥시다제 컨쥬게이팅된 M2-마우스 항-FLAG 에피토프 태그 Ig (시그마)를 사용하여 검출하였다. 억제율은 다음 식에서 각각의 샘플의 OD를 사용하여 결정하였다: %억제 = (최대치 - 샘플/최대치) x 100.
인간 시토킨 분석. 처리된 HT29.14s 세포의 성장 배지 중의 8개의 인간 시토킨을 복합적인 기술을 사용하여 제조사 (바이오-라드 래보래토리즈 (Bio-Rad Laboratories), 미국 캘리포니아주 허큘레스)의 지시에 따라 측정하였다. HT29.14s 세포의 배양 배지 중의 CCL20의 검출은 제조사의 지시에 따라 ELISA (알&디 시스템즈)에 의해 수행하였다.
가용형 수용체 Fc 융합 단백질에 대한 세포 표면-발현된 LIGHT 결합의 항체 매개 차단에 대한 시험관내 분석. 1e5 EL4 hLIGHT 세포를 차등 농도의 각각의 항체와 함께 30분 동안 4℃에서 인큐베이팅하였다. 이어서, 포화 미만의 양의 HVEM:Fc-비오틴 (3 ㎍/ml) 또는 LTβR:Fc-His (3 ㎍/ml) (알렉시스 바이오케미칼스 (Alexis Biochemicals))을 세포에 첨가하고, 30분 동안 4℃에서 인큐베이팅하였다. 이어서, 세포를 200 ㎕ FACS 버퍼 (1 x PBS 2% FBS + 0.02% 아지드)로 2회 세척하였다. HVEM:Fc-비오틴 또는 LTβR:Fc-His은 각각 2.5 ㎍/ml의 SA-APC와 함께 또는 항-His-HRP와 함께 30분 동안의 인큐베이션에 의해 검출하였다. 이어서, 세포를 FACScaliber (벡톤 디킨슨) 유동 세포 분석기로 분석하였다. 죽은 세포를 전방 산란 대 측방 산란 플롯으로부터 배제하고, 각각의 막대그래프의 기하 평균을 FLOWJO (트리스타, 미국 캘리포니아주 산 카를로스)를 사용하여 계산하였다.
인간 항- hLIGHT 항체 유전자의 단리. 각각 E63 (IgG3), F23 (IgG4), E1 (IgG1), E13 (IgG1) 및 F19 (IgG1) 항체를 생산하는 배양된 하이브리도마 세포 (124E63, 124F23, 124E1, 124E13 및 124F19)를 원심분리에 의해 수집하였다. 총 RNA를 제조사의 지시에 따라 RNEASY 키트 (퀴아겐 인크., 미국 캘리포니아주 발렌시아)를 사용하여 이들 세포로부터 정제하였다. SMART RACE cDNA 증폭 키트 (클론테크 코., 엘티디. (Clontech Co., Ltd.), 미국 캘리포니아주 팔로 알토)를 사용하여 총 하이브리도마 세포 RNA로부터 면역글로불린 유전자의 가변 구역을 코딩하는 cDNA를 코딩하였다. 간단히 설명하면, 제1 스트랜드 cDNA를 2 ㎍의 RNA로부터 역전사효소에 의해 제조하였다. 상기 cDNA를 중쇄 및 경쇄의 가변 구역 및 불변 구역의 일부 (각각 VH 및 VL)를 증폭하기 위한 중합효소 연쇄 반응 (PCR)을 위한 주형으로서 사용하였다. 5' RACE 반응에서 중쇄 및 경쇄 유전자의 증폭에 사용되는 3' 프라이머는 각각 HH-2 (서열 64) (H 사슬 불변 구역) 및 HK-2 (서열 65) (경쇄 불변 구역)이었다. 증폭된 서열은 또한 리더 서열을 함유하였다. 반응물은 다음과 같았다: 2.5 단위 PFU ULTRA DNA 중합효소 (스트라타젠 (Stratagene, 미국 캘리포니아주 라 졸라)); 0.2 μM 3' 프라이머 (중쇄의 경우: IgG1p, 경쇄의 경우: hk5, 표 2); 5' 말단에 대한 1X 유니버셜 (Universal) 프라이머 믹스 A (SMART RACE 키트에 포함된 UMP 프라이머 믹스 A); 200 μM dNTP 믹스; 1 mM MgCl2; Puff Ultra 버퍼 (최종 농도는 1x임); 및 cDNA 주형.
열순환 프로그램은 94℃ x 30 sec, 72℃ x 3 min의 5 사이클, 94℃ x 30 sec, 7O℃ x 30 sec, 72℃ x 3 min의 5 사이클, 94℃ x 30 sec, 68℃ x 30 sec, 72℃ x 3 min의 25 사이클, 이어서 72℃ x 7 min의 연장이었다. 증폭된 DNA 단편을 아가로스 겔 전기영동에 의해 모으고, QIAQUICK 겔 추출 키트 (퀴아겐 코., 엘티디. (Qiagen Co., Ltd.), 독일)에 의해 정제하였다. VH 및 LV의 정제된 DNA 단편을 Zero Blunt TOPO PCR 클로닝 키트 (인비트로겐)를 사용하여 PCR 4 Blunt-TOPO 벡터 내로 통합시키고, 각각의 구성체 플라스미드로 이. 콜라이를 형질전환시킨 후, 클로닝하였다. 구성체 플라스미드 내의 각각의 삽입체 (HV 및 LV)의 뉴클레오티드 서열을 특이적 유니버셜 벡터 프라이머 M13F (서열 58) 및 M13R (서열 59)을 사용하여 분석하였다. VH 및 VL로부터 얻은 서열을 기초로 하여, 올리고뉴클레오티드 프라이머가 각각의 VH 및 VL을 증폭하기 위해 설계되었다 (표 2 참조).
E63, F23, E1 및 F19 VH 및 VL을 코딩하는 cDNA를 PCR4 Blunt-TOPO 벡터로부터 IgG1 발현 벡터 내로 PCR 서브클로닝하였다. E13은 단일 카파쇄 (아래 참조) 하이브리도마를 갖는 IgG1 아형이기 때문에, 추가 분석을 위해 E13 cDNA를 IgG1 벡터 내로 서브클로닝할 필요가 없었다.
먼저, 중쇄의 가변 구역 (VH)을 PCR에 의해 증폭하기 위해 5'-SaII 및 3'-NheI 제한 효소 인식 부위를 함유하는 올리고뉴클레오티드 프라이머를 설계하였다. 예를 들어, E63VH의 경우에, PCR은 PFU ULTRA DNA 중합효소를 사용하여, 주형으로서 pTopoE63VH 미니-프렙 (mini-prep) DNA를, 프라이머로서 E63HF85 (서열 60) 및 E63HR38 (서열 61)을 사용하여 수행하였다 (표 2 참조). NheI 및 SalI을 사용한 소화 후에, PCR 산물을 NheI 및 SalI으로 미리 소화시킨 IgG1 발현 벡터 (이덱 파마슈티칼스 (IDEC Pharmaceuticals, 미국 캘리포니아주 샌 디에고), N5KG1-Val Lark (N5KG1의 변형된 벡터 (미국 특허 6,001,358)) 내로 서브클로닝하였다 (8.9 kb DNA 단편). VH의 존재는 제한 소화로 분석하였다.
이어서, 경쇄의 가변 구역 (VL)을 PCR에 의해 증폭하기 위해 5' BglII 및 3' BsiWI 제한 효소 인식 부위를 함유하는 올리고뉴클레오티드 프라이머를 설계하였다. 예를 들어, 상기한 바와 같은 E63VH의 서브클로닝 후에, DNA 벡터를 BglII 및 BsiWI로 소화시켜 E63VL을 N5KG1-Val Lark-VH 벡터 내로 삽입하였다. 이어서, 9.1 kb DNA 단편을 단리하였다. VH 구성체와 유사하게, VL의 PCR을 위한 프라이머 세트를 5'BglI 및 3'BsiWI의 인식 부위를 함유하도록 설계하였다. 상기 프라이머, E63LF84 (서열 62) 및 E63LR43 (서열 63)을 사용하여 pTopoE63VL 미니-프렙 플라스미드 DNA로부터 VL을 증폭하였다. PCR 산물을 BglII 및 BsiWI로 소화하고, 아가로스 겔 전기영동 및 겔 여과에 의해 단리하였다. E63VL을 함유하는 상기 단편을 T4 DNA 리가제를 사용하여 제조된 9.1 kb 벡터에 라이게이션시키고, Top10 세포 (인비트로겐)를 형질전환하기 위해 사용하였다. 양성 이. 콜라이 형질전환체를 선택하였다. 상기 발현 벡터 pG1K112E63을 정제하고, E63VL 및 E63VH 구역의 존재를 제한 분석에 의해 확인하였다.
재조합 F23G1, E1G1 및 F19G1 항체를 생산하기 위한 벡터의 제조를 E63G1과 본질적으로 동일한 방식으로 수행하였다. F23VH의 PCR 증폭은 F23HF86 (서열 66) 및 F23HR55 (서열 67)을 사용하여 수행하였다. F23VL 증폭 프라이머는 F23LF36 (서열 68) 및 F23LR43 (서열 69)이었다. E1VH의 PCR 증폭은 E1HFSalI (서열 70) 및 E1HRNheI (서열 71)을 사용하여 수행하였다. E1VL 카파(A), E1VL 카파(B) 및 E1VL 카파(C)의 PCR 증폭은 E1KR2BsiWI (서열 75) 또는 E1KR3BsiWI (서열 76)과 쌍을 이룬 E1KF2+3BglII (서열 74)를 사용하여 수행하였다. F19VH의 PCR 증폭은 F19HFSalI (서열 72) 및 F19HRNheI (서열 73)를 사용하여 수행하였다. F19L 카파(A) 및 F19L 카파(B)의 PCR 증폭은 F19KR1+2BsiWI (서열 77) 및 F19KF1+2+3BglII (서열 79)을 사용하여 수행하였다. F19L 카파(C)의 PCR 증폭은 F19KR3BsiWI (서열 78) 및 F19KF1+2+3BglII (서열 79)을 사용하여 수행하였다. 생성되는 벡터, 즉 pKLG1/F23, pKLG1/E1 및 pKLG1/F19도 제한 효소 소화 및 서열 결정에 의해 확인한다. F19L 카파(D)는 서열 분석에 의해 검출된, 항체의 C-말단 세그먼트를 생성시킨 해독 프레임쉬프트 (reading frameshift) 때문에 PCR에 의해 증폭되지 않았다.
E63 중쇄 가변 구역 (VH)의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 43):
Figure pat00006
E63 카파 경쇄 가변 구역 (VL)의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 48):
Figure pat00007
F23 중쇄 가변 구역의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 45):
Figure pat00008
F23 카파 경쇄 가변 구역의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 50):
Figure pat00009
E1 중쇄 가변 구역의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 41):
Figure pat00010
E1 카파 경쇄 가변 구역 #1의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 102):
Figure pat00011
E1 카파 경쇄 가변 구역 #2의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 46):
Figure pat00012
E1 카파 경쇄 가변 구역 #3의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 103):
Figure pat00013
E13 중쇄 가변 구역의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 42):
Figure pat00014
E13 카파 경쇄 가변 구역의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 47):
Figure pat00015
F19 중쇄 가변 구역의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 44):
Figure pat00016
F19 카파 경쇄 가변 구역 #1의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 104):
Figure pat00017
F19 카파 경쇄 가변 구역 #2의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 49):
Figure pat00018
F19 카파쇄 가변 구역 #3의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 105):
Figure pat00019
F19 카파쇄 가변 구역 #4의 cDNA의 뉴클레오티드 서열 (가변 구역의 개시 코돈 (ATG)으로부터 말단까지) (서열 106):
Figure pat00020
E63 중쇄 가변 구역의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 3):
Figure pat00021
E63 카파 경쇄 가변 구역의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 8):
Figure pat00022
F23 중쇄 가변 구역의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 5):
Figure pat00023
F23 카파 경쇄 가변 구역의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 10):
Figure pat00024
E1 중쇄 가변 구역의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 1):
Figure pat00025
E1 카파 경쇄 가변 구역 #1 (E1카파(A))의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 82):
Figure pat00026
E1 카파 경쇄 가변 구역 #2 (E1카파(B))의 cDNA의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 6):
Figure pat00027
E1 카파 경쇄 가변 구역 #3 (E1카파(C))의 cDNA의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 83):
Figure pat00028
E13 중쇄 가변 구역의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 2):
Figure pat00029
E13 카파 경쇄 가변 구역의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 7):
Figure pat00030
F19 중쇄 가변 구역의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 4):
Figure pat00031
F19 카파 경쇄 가변 구역 #1 (F19카파(A))의 cDNA의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 90):
Figure pat00032
F19 카파 경쇄 가변 구역 #2 (F19카파(B))의 cDNA의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 9):
Figure pat00033
F19 카파 경쇄 가변 구역 #3 (F19카파(C))의 cDNA의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 91):
Figure pat00034
F19 카파 경쇄 가변 구역 #4 (F19카파(D))의 cDNA의 아미노산 서열 (리더 서열 (볼드체) 및 가변 구역) (서열 92):
Figure pat00035
Figure pat00036
KM 마우스™는 예를 들어 각각 그 전부가 본원에 참고로 포함된 문헌 ([Fishwild et al. 1996, Nat. Biotechnol. 14:845-51]; [Lonberg et al. 2005 Nat. Biotechnol. 9:1117-1125]; [Tomizuka et al. 2000 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722-7]; [Tomizuka 1997 Nat Genet. 16:133-43])에 기재되어 있다. KM 마우스™의 특성 때문에 (예를 들어, 2 이상의 카파쇄 유전자는 카파 트랜스제닉 균주의 생성시에 쥐 게놈 내로 통합되었다), 클로날 하이브리도마로부터 발현된 2 이상의 카파 경쇄 cDNA를 가질 수 있다. 본 발명에서 그러한지 결정하기 위해서, 최소 10개의 cDNA 클론의 서열을 결정한다. 2 이상의 카파 경쇄 항체 cDNA가 단리된 경우에 (예를 들어, E1 및 F19), 각각의 카파 cDNA와 조합된 다양한 쌍의 중쇄 cDNA를 함유하는 몇개의 구성체를 생성시킨다. 293FECTIN (인비트로겐)을 사용하여 상기 발현 구성체로 293F 세포를 형질감염시켰다. 이어서, 72시간 배양 상등액을, hLIGHT에 면역특이적으로 결합하는 정확한 중쇄 및 경쇄쌍(들)을 확인하기 위해 항체 활성에 대해 시험한다 (예를 들어, 웨스턴 블롯, ELISA 또는 다른 유사한 방법에 의해). 다수의 카파쇄를 갖는 항체 (예를 들어, E1 및 F19)의 특성을 분석하는 예시적인 방법에 대해서는 하기 실시예 3을 참조한다.
293F 세포로부터 재조합 인간 항- hLIGHT 항체의 생산: 293F 세포의 현탁 배양액을 37℃에서 8% CO2 가습 인큐베이터 내에서 ~120 rpm/min으로 진탕하면서 Freestyle 293 발현 배지에 유지시켰다. 재조합 항체의 일시적인 발현을 위해, 3 x107의 293F 세포를 제조사의 지시에 따라 293-fectin (인비트로겐)을 사용하여 E63 또는 F23 항-hLIGHT 항체의 재조합 IgG1 버전을 코딩하는 30 ㎍의 각각의 플라스미드로 형질감염시켰다. 형질감염체를 정상적인 성장 조건 하에 5일 동안 30 ml의 FREESTYLE 293 발현 배지 중의 현탁액에서 성장시켰다. 성장 배지를 수거하고, 세포를 300 g의 속도로 원심분리한 후, 0.22 ㎛ 필터를 통한 여과에 의해 제거하였다. 상기 비정제된 물질에 존재하는 항체 농도를 hIgG ELISA로 결정하고, 서브클래스 교체된 항체의 기능적 특성을 평가하기 위해 시험관내 분석에 사용하였다.
결과
KM 마우스™를 CFA/IFA 중의 가용형 재조합 FLAG-태깅된 hLIGHT로 면역화시켰다. 몇 마리의 마우스는 항-hLIGHT 특이적 항체를 생성시켰고, 인간 IgG hLIGHT 특이적 역가 범위는 ELISA 및 hLIGHT-EL4 세포의 FACS 분석 염색으로 측정하였다. 가장 반응이 큰 마우스의 비장세포를 골수종 세포와 융합시켜 인간 항-hLIGHT 생산 하이브리도마를 생성시켰다. 개개의 하이브리도마에 의한 항-hLIGHT 항체의 생산은 항-hLIGHT ELISA에 의한 1차 스크리닝으로 결정하였다. 상기 스크리닝에서, FLAG 에피토프를 마스킹하고 항-FLAG 항체 생산 하이브리도마의 단리를 방지하기 위한 노력으로서 FLAG-태깅된 재조합 hLIGHT를 포획하기 위해 항-FLAG 항체를 플레이트에 코팅하였다. ELISA 양성 클론으로부터의 배지를, hLIGHT의 천연 형에 면역특이적으로 결합하는 항체의 종류를 확인하기 위해서 hLIGHT-EL4 세포주를 염색하는 유동 세포 분석에 의한 2차 스크리닝에 사용하였다.
하이브리도마에 의해 생산된 항체가 hLIGHT-EL4 세포에 대한 HVEM:Fc 및 LTβR:Fc 결합을 차단하는 능력을 평가함으로써 양성 하이브리도마를 길항 활성에 대해 시험하였다. 상기 차단 활성을 인간 IgG ELISA에 의해 결정된 항체 농도에 대해 표준화하였다. 상위 15개의 후보를 모노클로날 하이브리도마를 생성시키기 위해 제한 희석에 의해 클로닝하고, 나머지는 동결시켰다. 다음 기준을 기초로 한 추가의 특성 분석 및 평가를 위해 상기 15개 항체에 대한 종결 배양액 (<1 mg)으로부터 소규모 정제물을 생산하였다: hLIGHT에 대한 상대적 결합 친화도, hLIGHT-EL4 세포에 대한 인간 HVEM:Fc 및 LTβR:Fc 결합을 차단하는 능력, 상호 교차-차단, 및 대장 상피 세포주 HT29.14s로부터 가용형 및 세포 표면-발현된 hLIGHT-매개 케모카인 분비를 차단하는 능력. 상기 연구를 기초로 하여, 상위 5개의 선택된 후보 (E1, E13, E63, F23 및 F19)의 특성을 도 3에 제시한다.
E1, E13, E63, F23 및 F19 항-hLIGHT 모노클로날 항체는 각각 활성화된 인간 T 세포주 (II23.D7) 및 안정한 hLIGHT 발현 세포주 hLIGHT-EL4에 특이적으로 결합하지만, 모 EL4 또는 휴지기 II23.D7 세포에는 결합하지 않았다 (도 1A). 상기 인간 항-hLIGHT 항체의 결합은 포화에 도달하였다 (도 1B). 각각의 항체의 기능적 정상 상태 결합 친화도는 hLIGHT-EL4 세포의 표지에 필요한 항체의 양을 적정함으로써 결정하였다 (도 2A 및 2B). 비-선형 회귀 분석을 수행하여 각각의 후보에 대한 기능적 결합 친화도 또는 EC50을 결정하였다 (도 3). 일정 범위의 기능적 친화도가 관찰되었다. 포화시에 낮은 EC50 및 높은 수준의 염색 (평균 형광 강도 (MFI)) 모두가 평가 및 선택 과정 동안 이상적인 것으로 간주되었다.
가용형 hLIGHT에 대한 결합을 위해 서로 경쟁하는지를 결정하기 위해 항체를 ELISA로 시험하였다 (도 4). 2개의 hLIGHT 에피토프기가 상기 분석에서 확인되었다. "E 항체" (E1, E13, 및 E63)는 서로 교차차단하고, "F 항체" (F19 및 F223)는 서로 교차차단한다. 그러나, "E 항체"는 "F 항체"를 교차차단할 수 없고, 그 반대도 마찬가지다. 예상되는 바와 같이, 모든 항체는 상기 분석에서 스스로를 차단하였다.
유동 세포 분석에 기반한 분석을 사용하여 결정한 세포 표면-발현된 hLIGHT에 대한 인간 HVEM:Fc 및 LTβR:Fc 융합 단백질을 차단하는 E1, E13, E63, F23 및 F19의 능력을 각각 도 5A 및 5B, 및 도 6A 및 6B에 제시하였다. 상기 실험에서, 차등 양의 각각의 항체를 EL4-hLIGHT 세포주에 첨가한 후, 포화량 미만의 양의 수용체 융합 단백질을 첨가하였다. 수용체 융합 단백질은 His-태깅된 LTβR:Fc에 대한 항-His 항체 또는 비오티닐화 HVEM:Fc에 대한 스트렙타비딘-PE에 의해 검출되었다. 도시된 바와 같이, 각각의 항체는 Fc-수용체 결합에 대한 효과를 보이지 않은 완전 인간 항-인플루엔자 M2 항체 대조군과 대조적으로, 결합한 hLIGHT로부터 수용체 융합 단백질을 차단하였다. 각각의 실험에서, 모든 항체는 수용체 결합을 용량-의존 방식으로 차단하여, IC5O 용량을 결정하기 위한 비-선형 회귀에 의한 분석이 가능하였다 (도 3). 이들 값은 잠재적인 후보를 평가할 때 고려되었다.
본 발명의 길항성 항체가 hLIGHT-매개된 신호전달을 차단함을 직접적으로 입증하기 위해서, hLIGHT-매개 신호전달을 시험관 내에서 측정하는 분석을 확립하였다. 이를 위해, LTβR과 HVEM을 모두 발현하는 대장 상피 세포주 HT29.14s를 차등 양의 가용형 hLIGHT로 처리하고, 성장 배지를 수일의 시간 경로에 걸쳐서 분비된 시토킨의 존재에 대해 분석하였다. 표준 ELISA 및 현탁 어레이 복합 분석을 사용하여, hLIGHT가 CCL20, IL-8 및 RANTES를 용량 의존 방식으로 유도함이 결정되었다 (도 7 및 도 8A 및 8B). 도 7은 제3일에 수거된 가용형 hLIGHT의 용량 적정을 보여준다. 재조합 TNF를 TNF 수용체를 통한 케모카인 유도에 대한 양성 대조군으로서 사용하고, 림포톡신 (LTα1β2)을 LTβR을 통한 신호전달에 대한 양성 대조군으로서 사용하였다. FLAG 태깅된 세균 알칼린 포스파타제 (FLAG-BAP)를 태깅된, 관련되지 않은 단백질 음성 대조군으로서 사용하였다. 예상되는 바와 같이, 세포를 hLIGHT와 접촉시킴으로써 생산된 케모카인의 수준은 LTαβ에 의해 유도된 수준과 동등한 반면에, TNF는 CCL20 및 IL-8 유도시에는 보다 효과적이었지만, 유사한 수준의 RANTES를 유도하였다. 상기 세포성 반응 분석은 hLIGHT 신호전달을 측정하고 본 발명의 항체가 hLIGHT-매개 신호전달 사건을 시험관 내에서 차단하는 능력을 평가하기 위해 사용된다.
hLIGHT-매개 HT29.14s CCL20 유도 분석에서, 차등 양의 항-hLIGHT 항체를 일정한 양의 재조합 가용형 hLIGHT와 함께 예비-인큐베이팅한 후, HT29.14s 세포에 첨가하였다 (도 9). 케모카인 수준을 처리 후 제3 또는 4일에 분석하고, 가용형 hLIGHT 단독에 의해, 또는 이소형 대조군으로서 관련되지 않는 완전 인간 항-인플루엔자 M2 단백질과 함께 예비-인큐베이팅한 가용형 hLIGHT에 의해 유도된 수준과 비교하였다. 상기 분석에서, 본 실시예에서 시험된 본 발명의 항체는 가용형 hLIGHT-매개 CCL20 유도를 용량 의존 방식으로 차단하였다. 일부 경우에, 비-선형 회귀 분석을 통해 IC50 값을 얻었다.
임의의 특정 메카니즘 또는 이론에 매이기를 원하지 않지만, 다른 세포 상의 그의 동족 (cognate) 수용체에 대한 세포 표면 hLIGHT 결합에 의해 개시되는 신호전달이 HVEM 상호작용을 통한 관찰된 T 세포 공동-자극 활성의 발생에 또는 창자, 비장 또는 림프절의 기질 또는 상피 기원의 세포 상에 발현된 LTβR을 통한 증가된 케모카인 생산에 중요할 수 있다고 생각된다. 창자에서 CCL20의 유도는 가용형 인자보다는 상피 세포와 접촉하는 세포 상의 LTβR 리간드의 발현에 의해서 더 많이 조절되는 것으로 보인다 (Rumbo et al. 2004 Gastroenterology 127 213-23). 따라서, 세포 표면 hLIGHT를 차단하는 본 발명의 항체 능력을 평가하기 위해 세포 표면 hLIGHT 신호전달 분석을 개발하였다. 상기 분석에서, 가용형 hLIGHT 분석과 유사한 방식으로 HT29.14s 세포와 함께 인큐베이팅함으로써 케모카인을 유도하기 위해 포르말린 고정된 hLIGHT-EL4 세포를 사용하였다. 이들 세포는 CCL20 및 RANTES를 가용형 hLIGHT와 동등한 수준으로 유도하였다. 차등 양의 항-hLIGHT 항체를 고정된 hLIGHT-EL4 세포와 함께 예비-인큐베이팅할 때, RANTES의 유도는 hLIGHT 발현 세포를 첨가하지 않을 때 관찰된 수준으로 차단되었다 (도 10). 동일한 실험에서, CCL20도 유사하게 억제되었다. 상기 데이타들은 본 발명의 항체가 가용형 및 막 결합형 hLIGHT 신호전달을 시험관 내에서 차단할 수 있음을 나타낸다.
실시예 2- 상업적으로 입수가능한 마우스 항-인간 모노클로날 항체의 특성 분석
항체 교차-차단. 교차-차단 실험은 항체가 어떤 hLIGHT 에피토프에 결합하는지를 평가하기 위해 알&디 시스템즈 ("R&D 마우스 mAb") 및 압노바 ("압노바 마우스 mAb")로부터 입수가능한 마우스 항-hLIGHT 모노클로날 항체, 및 실시예 1에서 확인된 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체를 사용하여 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행하였다. 그 결과를 도 11에 제시하였다.
결과는 R&D 마우스 mAb가 인간 E1, E13, 및 E63 모노클로날 항체 ("인간 E 항체")와 동일한 에피토프에 결합하고, 또한 인간 F19 및 F223 모노클로날 항체 ("인간 F 항체")와 동일한 에피토프에 결합함을 보여준다. 따라서, 2개의 특유한 에피토프 중의 하나에만 면역특이적으로 결합하는 것으로 판명된, 실시예 1에서 확인된 인간 항-hLIGHT E & F 모노클로날 항체와 대조적으로, R&D 마우스 mAb는 두 hLIGHT 에피토프기 모두에 결합한다. 즉, 실시예 1에서 확인된 인간 E 항체 및 인간 F 항체는 서로 교차-차단하지 않았다. 인간 E 항체는 다른 인간 E 항체를 교차-차단하고, 인간 F 항체는 다른 인간 F 항체를 교차-차단한 반면에; 인간 E 항체 및 인간 F 항체 모두는 R&D 마우스 mAb를 교차-차단할 수 있었다. 이와 유사하게, R&D 마우스 mAb는 인간 E 항체 및 인간 F 항체를 교차-차단하였다.
또한, 결과는 압노바 마우스 mAb가 인간 E 항체 및 인간 F 항체에 의해 결합된 에피토프에 결합하지 않음을 보여준다. 즉, 압노바 마우스 mAb는 임의의 인간 E1, E13, E63, F19 또는 F23 항체에 의해 교차-차단되지 않고, 압노바 마우스 mAb는 임의의 인간 E1, E13, E63, F19 또는 F23 항체를 교차-차단할 수 없었다.
293 hLIGHT 세포에 대한 HVEM : Fc 의 결합에 대한 항체의 차단 활성. E1, E13 및 F19 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체, R&D 마우스 mAb, 상업적으로 입수가능한 염소 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 (알&디 시스템즈), 및 토끼 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 (이바이오사이언스)를, 실시예 1에 기재된 바와 같이 hLIGHT를 발현하는 293 세포에 대한 HVEM:Fc의 결합을 차단하는 그들의 능력에 대해 시험하였다. 그 결과를 도 12 및 도 14B에 제시하였다. 4개의 모든 모노클로날 항체는 FACS 분석에 의해 결정시에 결합을 용량-의존 방식으로 억제할 수 있었다. 또한, R&D 염소 폴리클로날 항체도 HVEM:Fc의 결합을 억제할 수 있는 반면에, 이바이오사이언스 토끼 폴리클로날 항체는 그렇지 않았다.
293 hLIGHT 세포에 대한 LT βR: Fc 의 결합에 대한 항체의 차단 활성. E1 및 E13 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체, R&D 마우스 mAb, 상업적으로 입수가능한 염소 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 (알&디 시스템즈), 및 토끼 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 (이바이오사이언스)를, 실시예 1에 기재된 바와 같이 hLIGHT를 발현하는 293 세포에 대한 LTβR:Fc의 결합을 차단하는 그들의 능력에 대해 시험하였다. 그 결과를 도 13 및 도 14B에 제시하였다. 4개의 모든 모노클로날 항체는 FACS 분석에 의해 결정시에 결합을 용량 의존 방식으로 억제할 수 있었다. 또한, R&D 염소 폴리클로날 항체도 LTβR:Fc의 결합을 억제할 수 있는 반면에, 토끼 이바이오사이언스 폴리클로날 항체는 그렇지 않았다.
천연 및 변성 hLIGHT 에 대한 결합. 5 ㎍의 가용형 인간 LIGHT를 2 x SDS 샘플 버퍼 내에서 끓이거나 (변성) 비처리한 (천연) 후, 둘 모두를 6x 증분으로 연속 희석하였다. 5 ㎕의 각각의 hLIGHT 희석액을 8 멀티-채널 피펫을 사용하여 수화된 0.2 ㎛ PVDF막 (인비트로겐) 상으로 동시에 스폿팅하였다. 블롯을 공기 건조시킨 후 재수화하고, 차단하였다 (1 x TBST (Tris-완충 염수 Tween-20) + 2.5% 탈지유 + 0.02% 나트륨 아지드). 각각의 블롯을 5 ㎍/ml의 각각의 1차 항체 (아래 참조)로 프로빙하였다. 블롯을 1x TBST 내에서 3x, 이후 비오티닐화 2차 Ab (비오틴-염소 α인간 (벡터 랩스), 비오틴-염소 α마우스 (잭슨 랩스), 비오틴-마우스 α염소 (시그마-알드리치 코프.) 내에서 5 ㎍/ml로 세척하였다. 블롯을 1x TBST 내에서 3x, 이후 수퍼 SA-HRP (아머샴 바이오사이언시즈)에서 세척하였다. ECL 검출 키트 (아머샴 바이오사이언시즈)를 사용한 검출을 위해 화학발광을 사용하였고, 신호는 X-OMAT AR 영상화 필름 (코닥)에 노출시켜 가시화하였다.
시험된 1차 항체는 E1, E13, E63, F19, F23 인간 항-hLIGHT mAb (실시예 1 참조), 알&디 시스템즈 ("R&D 마우스 mAb") 및 압노바 ("압노바 마우스 mAb")로부터 상업적으로 입수가능한 쥐 항-hLIGHT 모노클로날 항체, 염소 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 제제 (알&디 시스템즈 "R&D 염소 pAb") 및 2개의 토끼 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 제제 (이바이오사이언스 ("이바이오사이언스 토끼 pAb") 및 페프로테크 ("페프로테크 토끼 pAb"))이었다.
그 결과를 도 15 및 도 16에 제시하였다. 본 분석에서 시험된 본 발명의 인간 항-hLIGHT 모노클로날 "E 항체" (E1, E13 및 E63)는 가용형 hLIGHT의 천연 및 변성 형 모두에 면역특이적으로 결합한다 (도 15A 및 도 16). 항체 E63은 변성 hLIGHT (검출 하한은 139 ng 변성 hLIGHT임)보다 더 낮은 농도의 천연 hLIGHT (검출 하한은 3.9 ng 천연 hLIGHT임)에 면역특이적으로 결합한다. 또한, 항체 E1은 변성 hLIGHT (검출 하한은 139 ng 변성 hLIGHT임)에 비해 더 낮은 농도의 천연 hLIGHT (검출 하한은 23 ng 천연 hLIGHT임)에 면역특이적으로 결합한다. 항체 E13은 천연 및 변성 형의 hLIGHT에 면역특이적으로 결합하고, 천연 및 변성 형의 hLIGHT 모두에 대한 검출 하한은 0.64 ng이다.
인간 항-hLIGHT 모노클로날 "E 항체"와 대조적으로, 본 분석에서 시험된 본 발명의 인간 항-hLIGHT 모노클로날 "F 항체" (F19 및 F223)는 천연 형의 가용형 hLIGHT (검출 하한은 23 ng 천연 hLIGHT임)에 면역특이적으로 결합하지만, 변성 hLIGHT의 가장 높은 (>5000 ng) 농도에서도 변성 형에는 결합하지 않는다 (도 15A 및 도 16).
본 분석에서 시험된 각각의 상업적으로 입수가능한 마우스 항-hLIGHT 모노클로날 항체 (R&D 마우스 mAb 및 압노바 마우스 mAb)는 가용형 hLIGHT의 천연 및 변성 형 모두에 면역특이적으로 결합한다. R&D 마우스 mAb는 변성 hLIGHT (검출 하한은 139 ng 변성 hLIGHT임)에 비해 더 낮은 농도의 천연 hLIGHT (검출 하한은 23 ng 천연 hLIGHT임)에 면역특이적으로 결합한다. 압노바 마우스 mAb는 가용형 hLIGHT의 거의 동일한 농도의 천연 및 변성 형 모두와 면역특이적으로 결합한다 (검출 하한은 각각 0.64 ng 천연 또는 변성 hLIGHT임).
3개의 상업적으로 입수가능한 항-hLIGHT 폴리클로날 항체 제제 (R&D 염소 pAb, 이바이오사이언스 토끼 pAb, 및 페프로테크 토끼 pAb)는 각각 가용형 hLIGHT의 천연 및 변성 형 모두에 결합하였다. R&D 염소 pAb는 변성 hLIGHT (검출 하한은 0.13 ng 변성 hLIGHT임)에 비해 약간 더 낮은 농도의 천연 hLIGHT (검출 하한은 0.04 ng 천연 hLIGHT임)에 면역특이적으로 결합한다. 또한, 이바이오사이언스 토끼 pAb는 변성 hLIGHT (검출 하한은 1.2 ng 변성 hLIGHT임)에 비해 약간 더 낮은 농도의 천연 hLIGHT (검출 하한은 0.4 ng 천연 hLIGHT임)에 면역특이적으로 결합한다. 이와 유사하게, 페프로테크 토끼 pAb도 변성 hLIGHT (검출 하한은 0.13 ng 변성 hLIGHT임)에 비해 약간 더 낮은 농도의 천연 hLIGHT (검출 하한은 0.04 ng 천연 hLIGHT임)에 면역특이적으로 결합한다.
hLIGHT 수용체를 발현하는 세포의 생물학적 활성의 억제. 또한, 상업적으로 입수가능한 마우스 항-hLIGHT 모노클로날 항체가 HT29.14s 세포 상의 세포 표면-발현된 LTβR 및 HVEM에 대한 결합으로부터 가용형 hLIGHT를 경쟁적으로 차단할 수 있는지를 결정하기 위해서 실시예 1에 기재된 바와 같은 실험을 착수하였다. 그 결과를 도 17 (CCL20) 및 도 18 (RANTES)에 제시하였고, R&D 마우스 mAb 및 압노바 마우스 mAb 모두 상기 세포에 의한 hLIGHT-매개 CCL20 또는 RANTES 케모카인 생산을 억제할 수 없는 반면에, 인간 E13 및 인간 F23 mAb는 케모카인 분비를 배경 수준으로 감소시킬 수 있음을 보여주었다.
실시예 3 - F19 및 E1 인간 항- hLIGHT 항체의 카파쇄의 특성 분석
E1 및 F19 하이브리도마에 의해 생산된 항체의 바람직한 카파쇄-중쇄쌍을 발견하기 위해 실시예 1에서 논의된 절차를 사용하였다. 상기 실험 결과를 기초로 하여, E1카파(B) (서열 6)가 E1 하이브리도마에 의해 생산된 hLIGHT 항체의 바람직한 카파 경쇄이고, F19카파(B) (서열 9)가 F19 하이브리도마에 의해 생산된 hLIGHT 항체의 바람직한 카파 경쇄임이 밝혀졌다.
재조합 단일 카파쇄 항체는 모 하이브리도마 세포에 존재하는 각각의 개별적인 카파쇄 유전자와 쌍을 이룬 중쇄 유전자를 함유하는 포유동물 발현 벡터의 일시적인 형질감염에 의해 생성시켰다. 이어서, 이 물질을 각각의 모 하이브리도마로부터 생성된 정제된 항체와 동시에 시험하였다.
항체 결합 분석을 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행하였다. E1카파(B) 또는 F19카파(B)를 포함하는 카파쇄-중쇄 쌍은 hLIGHT로 안정하게 형질감염된 세포주 (HEK 293-hLIGHT)를, 각각의 모 하이브리도마에 의해 생산된 항체와 동등한 정도로 특이적으로 염색하였다 (도 19).
교차-차단 ELISA 실험을 실시예 1에 나타낸 바와 같이 수행하였고, 그 결과는 상기 재조합 항체가 그들의 모 하이브리도마 Ab와 동일한, hLIGHT 상의 에피토프를 인식함을 보여주었다 (도 20).
인간 HVEM과 LTβR 둘 모두의 가용형 수용체-Fc 융합 형에 대한 세포 표면-발현된 hLIGHT 결합을 차단하는 그들의 능력에 대해 단일 카파쇄 재조합 항체를 실시예 1에 기재된 바와 같이 추가로 시험하였다 (도 21). 차단 수준은 모 Ab와 동일하지 않았다.
마지막으로, HT29 대장 상피 세포로부터 LIGHT-매개 CCL20 분비를 억제하는 그들의 능력에 대해 재조합 단일 카파 항체를 실시예 1 및 2에 기재된 바와 같이 시험하였다 (도 22 및 도 23). 상기 실험에서, 항-hLIGHT 항체와 가용형 hLIGHT의 인큐베이션은 모 하이브리도마와 유사하게 HT29.14s 세포로부터 CCL20의 hLIGHT-매개 분비를 차단한다.
또한, 단일 카파쇄 재조합체는 천연 대 변성 LIGHT의 도트 (dot) 블롯 평가에서 모 하이브리도마에 의해 생산된 항체의 특이성을 유지하였다 (데이타 미제시).
상기 결과들은 E1카파(B) (서열 6)가 E1 중쇄 (서열 1)와 조합 사용하기 위한 바람직한 카파 경쇄이고, F19카파(B) (서열 9)가 F19 중쇄 (서열 4)와 조합 사용하기 위한 바람직한 카파 경쇄임을 나타낸다.
실시예 4 - 항체 결합 및 LIGHT 의 단일 뉴클레오티드 다형성 ( SNP ) 변이체에 대한 HVEM:FC 및 LTβR:FC 결합의 항체 매개 차단
적어도 2개의 비-동의 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) 변이체가 인간 LIGHT에 존재한다 (도 24). 한 SNP 변이체는 아미노산 위치 214에서 글루탐산 (E) 또는 라이신 (K)를 코딩하고, 다른 SNP 변이체는 아미노산 위치 32에서 세린 (S) 또는 류신 (L)을 코딩한다. 도 24A-24B에 도시된 바와 같이, 다양한 민족 집단에 걸쳐 각각의 SNP 변이체의 대립유전자 빈도는 변한다. 따라서, 주어진 SNP 변이체에 결합하는 hLIGHT 항체는 주어진 SNP 변이체의 발생율이 보다 높은 민족 집단에서 hLIGHT-매개 질병, 또는 그의 증상의 치료 또는 예방시에 보다 높은 효능을 보일 수 있다.
본 실시예에서, 본원에서 제공되는 hLIGHT 항체는 hLIGHT 세포외 및 세포질 도메인에 존재하는 비-동의 hLIGHT SNP 변이체에 결합하는 것으로 밝혀졌다. 또한, SNP 변이체에 대한 상기 항체의 결합은 hLIGHT SNP 변이체에 대한 HVEM:Fc 및 LTβR:Fc의 결합을 효과적으로 차단하고 또한 hLIGHT 수용체를 발현하는 세포의 생물학적 활성을 효과적으로 차단하는 항체의 능력과 상호 관련되었다.
항체 결합. 항체가 세포 표면-발현된 hLIGHT SNP 변이체에 결합하는지를 결정하기 위해, F23 및 E1카파(B) 항체의 용량 적정을 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행하였다. 본질적으로 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조된, 각각의 hLIGHT SNP 변이체를 안정적으로 표면-발현하는 EL4 세포주를 상기 실험에서 사용하였다. 각각 도 25A 및 25C에 도시된 바와 같이, 각각의 F23 및 E1카파(B) 항체는 214E-32S 및 214E-32L SNP 변이체 모두에 결합하였다. 그러나, 도 25B에 도시된 바와 같이, F23만이 214K-32S SNP 변이체를 인식하였고, E1카파(B) 항체는 인식하지 못하였다.
또한, SNP 변이체 중 어느 하나의 형태를 인식하는 능력의 차이가 "F 항체" 및 "E 항체" 사이에 존재하는 지를 결정하기 위해 F23 (IgG1), F19, E63 및 E1카파(B) 항체를 시험하였다. 도 26A 및 26B에 도시된 바와 같이, F23 및 F19 항체는 hLIGHT의 214E 및 214K SNP 형 모두에 결합한다. 그러나, E63 및 E1카파(B) 항체는 LIGHT 214E의 우세한 형에만 결합하고, 214K에는 결합하지 않는다 (도 26A 및 26B).
LIGHT SNP 변이체 214K-32S에 대한 HVEM : Fc 및 LT βR: Fc 의 결합에 대한 항체의 차단 활성. F23 항체는 LIGHT 변이체의 우세한 형 (214E)과 덜 우세한 형 (214K) 모두에 결합하기 때문에, 다음으로 F23 항체가 HVEM:Fc 또는 LTβR:Fc의 결합을 차단할 수 있는지를 결정하였다. 수용체 융합 단백질의 항체-매개 차단은 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행하였다. 간단히 설명하면, 세포주 EL4-214K-32S를 증가하는 양의 항-LIGHT 항체와 함께 인큐베이팅한 후, HVEM:Fc 또는 LTβR:Fc를 첨가하였다. 수용체 결합에 대한 상기 예비 인큐베이션의 효과를 실시예 1에 기재된 바와 같이 HVEM:Fc 또는 LTβR:Fc의 검출에 의해 평가하였다. 도 25D에 도시된 바와 같이, F23 항체는 LIGHT 214K-32S 변이체에 대한 HVEM:Fc와 LTβR:Fc 결합을 모두 효과적으로 차단하였다.
LIGHT 수용체를 발현하는 세포의 세포 표면 LIGHT SNP 변이체 -매개 생물학적 활성의 억제. 본 연구는 또한 214K와 214E hLIGHT SNP 변이체 모두에 결합하는 것으로 이전에 밝혀진 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체가 LTβR과 HVEM을 모두 발현하는 인간 대장 상피 세포인 HT29.14s에서 RANTES 분비를 세포 표면-발현된 hLIGHT 214E 또는 214K SNP 변이체, 또는 그의 가용형 hLIGHT SNP 변이체에 의해 효과적으로 차단할 수 있는지를 결정하기 위해 실시하였다. 세포 표면-발현된 hLIGHT-매개 HT29.14s RANTES 유도 분석에서, 차등 양의 항-hLIGHT 항체를 hLIGHT의 SNP 변이체 (214K 또는 214E)를 발현하는 일정한 수의 세포와 예비 인큐베이팅하였다. 처리 후 제3일에 케모카인 수준을 분석하고, 가용형 hLIGHT 단독, hLIGHT를 발현하는 세포 단독 또는 이소형 대조군 단백질로서 무관련 인간 IgG와 함께 예비 인큐베이팅한 세포에 의해 유도된 수준과 비교하였다.
상기 분석에서, 본원에서 제공되는 항체 (F19 및 F23)는 가용형 hLIGHT 및 세포 표면-발현된 hLIGHT SNP 변이체 (214E 또는 214K)-매개 RANTES 유도를 용량 의존 방식으로 차단하였다. 알&디 시스템즈로부터 상업적으로 입수가능한 마우스 항-hLIGHT 모노클로날 항체 (실시예 1에 기재된 바와 같은 R&D 마우스 mAb)는 SNP 변이체와 상관없이 가용형 또는 세포 표면-발현된 hLIGHT-매개 케모카인 분비를 차단할 수 없었다. 세포 표면-발현된 hLIGHT 변이체와 가용형 재조합 hLIGHT 양성 대조군 모두는 동등한 수준의 RANTES를 유도하였고, 음성 대조군 이소형 hIgG와 세포 표면-발현된 hLIGHT 변이체 또는 가용형 재조합 hLIGHT의 예비-인큐베이션은 RANTES 수준을 유의하게 감소시키지 않았다.
논의. hLIGHT 게놈 로커스 내의 30개 이상의 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) 중에서, 적어도 2개의 비-동의 hLIGHT가 존재하고, 그와 연관된 빈도 데이타가 제시된다 (도 24). 하나는 hLIGHT의 아미노산 위치 214에 글루탐산 (~0.9) 또는 라이신 (0.1)을 코딩하고, hLIGHT의 세포외 구역에 존재한다. 다른 하나는 아미노산 잔기 32에 세린 (0.99) 또는 류신 (0.011)을 코딩하고, hLIGHT의 세포질 구역에 존재한다. hLIGHT 게놈 로커스는 염증성 장 질환에 대한 감수성 로커스를 함유하는 염색체 구역인 ch19p13.3에 존재하고 (Rioux et al. (2000) Am J Hum Genet. 66: 1863-70), 따라서 SNP가 IBD 질병 빈도와 상관관계가 있을 수 있음을 제시한다. 따라서, 본원에서 제공되는 길항성 항-hLIGHT 항체가 hLIGHT의 비-동의 SNP 변이체를 인식할 수 있는지를 결정하는 것을 중요하였다.
본 실시예에서, 본 발명자들은 EL4 세포주의 표면 상에서 안정적으로 발현되는 hLIGHT SNP 변이체에 결합하는 항-hLIGHT 항체의 능력을 시험하였다. 도 25A 및 25B에 도시된 바와 같이, F23은 SNP 변이체 214E 및 214K 모두에 결합하지만, E1카파(B)는 우세한 형인 214E에만 결합한다. 마찬가지로, F23는 상기 세포에 대한 HVEM:Fc 또는 LTβR:Fc 결합을 차단한다 (도 25D). 예상되는 바와 같이, 세포질 SNP는 두 항체의 결합에 영향을 주는 것으로 보이지 않는다 (도 25C). "E 항체" 및 "F 항체"를 시험할 때, F 항체만이 214K 및 214E SNP 변이체 모두에 결합할 수 있었다 (도 26A 및 26B). 시판되는 R&D 마우스 mAb 항체도 두 SNP 변이체 모두에 결합할 수 있었다 (데이타 미제시).
시험관 내에서 LIGHT SNP 변이체에 대한 수용체의 가용형 버전의 항-hLIGHT 항체 차단 이외에, 세포 표면 hLIGHT SNP-매개 케모카인 유도도 본 발명의 항-hLIGHT 항체에 의해 억제되었다. 상기 분석에서, 214E 또는 214K hLIGHT SNP 변이체를 발현하는 EL4 세포주를 포르말린으로 고정시키고, HT29 대장 상피 세포주를 처리하기 위해 사용하였다. 도 27에 도시된 바와 같이, 이들 세포주는 단독으로 1 ㎍ 가용형 LIGHT와 유사한 수준의 RANTES를 유도하였다. 항-hLIGHT "F 항체"는 hLIGHT-발현 세포주를 차등 양의 항체와 함께 예비 인큐베이팅함으로써 시험하였고, 이소형 대조군 또는 상업적으로 입수가능한 R&D 마우스 mAb과 비교하였다. F23 및 F19카파(B) 모두는 SNP 변이체 발현 세포주에 의해 매개되는 RANTES 분비를 억제하였다. 그러나, R&D 마우스 mAb 및 인간 이소형 음성 대조군은 LIGHT SNP 변이체에 의한 RANTES 분비를 억제하지 않았다. 이것은 R&D 마우스 mAb가 두 SNP 변이체 모두에 결합할 수 있다는 사실에도 불구하고 사실이었다. 이러한 결과는 본 발명의 F23 및 F19카파(B) 항체가 LIGHT SNP 변이체에 의한 신호전달을 차단함을 입증할 뿐만 아니라, 시판되는 R&D 마우스 mAb보다 우수함을 보여준다.
실시예 5 - 급성 이종발생성 이식편 대 숙주 질병 모델에서
124F23의 생체내 효능 연구
본 실시예에서, 본원에서 제공되는 항-hLIGHT 항체의 생체내 효능을 쥐 급성 이종발생성 이식편 대 숙주 질병 모델 (GVHD)에서 평가하였다. F23 항체는 상기 모델에서 전체적인 육안 병리 상태 (설사, 복막 염증 및 복수, 및 장 염증) 및 조직병리 상태 (염증 심도, 염증 정도, 융모 손상/위축, 및 % 침습)를 감소시키고, 비장에서 T 세포의 수를 감소시키는 것으로 밝혀졌다.
전혈로부터 인간 PBMC의 정제: Scripps Green Hospital (미국 캘리포니아주 라 졸라)에서 정상 혈액 공여 프로그램에 의해 18 내지 50세의 건강한 공여자로부터 전혈을 수집하고, 응혈을 방지하기 위해 헤파린을 첨가하였다. 인종, 민족성, 또는 성별은 특정되지 않았다. 혈액을 PBS 중에 희석한 후, 그 아래에 FICOLL-PLAQUE Plus (아머샴 바이오사이언시즈)를 놓았다. 단핵 세포를 중단없이 1800 RPM에서 원심분리에 의해 혈청 및 혈소판으로부터 분리하였다. 이어서, PBMC를 함유하는 계면을 모으고, PBS로 2회 세척하였다.
급성 이식편 대 숙주 질병 생체내 모델: 급성 이종발생성 이식편 대 숙주 질병 모델을 사용하여, 본질적으로 도 28에 개략적으로 나타낸 바와 같이 F23 (124F23G1) 인간 항-인간 LIGHT 항체의 치료 능력을 생체 내에서 시험하였다 (Watanabe et al. 2006 1006. Clin Immunol. 120 247-59). 간단히 설명하면, 5-10주령의 중증 합병성 면역결핍 (SCID) 수컷 마우스에게 제-2일차에 20 ㎍의 래트 항-마우스 IL2 수용체-베타 (IL2Rβ) 사슬 항체 (TMβ1, [Tanaka et al. 1993 J Exp Med. 178 1103])를 주사하여 내인성 쥐 천연 킬러 세포를 고갈시켰다. 다음날 (제-1일), 마우스에게 세슘원을 사용하여 2.5 Gy의 치사-미만의 방사선을 조사하여 인간 세포를 장관으로 이동시켰다. 다음날 (제0일), 마우스에게 PBS 중의 1천만개의 총 인간 말초혈 단핵 세포를 복강내 주사에 의해 투여하고, 바로 인간 항-인간 LIGHT (124F23G1) 또는 음성 대조군 hIgG1 (항-디니트로페놀 (항-DNP), 기린 브루어리 코. 엘티디.) 항체를 100 ㎕ PBS 중의 100 ㎍의 용량으로 정맥 내로 주사하였다. 인간 T 세포는 팽창하고, 이식편 대 숙주 유사 질병 및 그의 증상을 유도하여, 예를 들어, 체중 감소, 혈뇨, 복수증, 간 및 장관에서 염증성 세포 침윤, 및 최종적으로 사망을 야기한다. 질병은 T 세포 단독의 전달이 유사한 증상을 유도하기 때문에 1차적으로 인간 T 세포에 의해 매개된다. 체중을 3-4일마다 측정하고, 마우스에게 항-IL2Rβ 항체를 매주 투여하였다. 제12일에, 마우스를 희생시키고, 육안 병리 상태 및 질병의 증상을 분석하고, 유동 세포 분석을 위해 비장을, 조직 검사를 위해 맹장을, 인간 시토킨 및 항체 분석을 위해 혈청을 수거하였다 (Watanabe et al. 1006. Clin Immunol. 120 247-59).
인간 항-인간 LIGHT 모노클로날 항체의 생체내 기능 분석. 제12일에 관찰된 육안 병리학에 대해 다음과 같이 스코어를 매겼다: 설사 (0 또는 1), 장 및 복강에서 출혈, 및 복막염 (0, 1, 2 또는 3을 각각 없음, 경증, 중등도 또는 중증으로 평가함). 모든 질병 증상의 총합을 사용하여 총 육안 병리학 스코어를 결정하였다. 도 29에 도시된 바와 같이, 대조 항체 또는 PBMC 단독을 투여한 마우스 (항체 주사 미실시)는 모두 GVHD의 증상을 보였고, 124F23G1 항-LIGHT 항체를 투여한 마우스보다 더 높은 병리학 스코어를 보였다.
조직병리학적 분석을 맹장의 H&E 절편에 대해 수행하고, 다음과 같이 스코어를 매겼다: 염증 심도, 염증 정도, 융모 손상/위축 및 % 침습 (0, 1, 2 또는 3을 각각 없음, 경증, 중등도 또는 중증으로 평가함). 최종 스코어는 각각의 카테고리의 합이었고, 각각의 마우스에 대한 최대 스코어는 12이었다. 도 30에 도시된 바와 같이, 대조 항체 또는 PBMC 단독을 투여한 마우스 (항체 주사 미실시)는 유사한 조직병리학을 보였고, 124F23G1을 주사한 마우스는 질병의 조직학적 징후를 보이지 않았다. 항-LIGHT 처리 동물에서 관찰된 맹장의 조직학의 예를 도 31A에 제시하였고, 이 도면은 균일한 융모 구조, 점막하층 및 근육층, 복수 또는 혈액의 결여를 보여준다. 이와 대조적으로, 대조 항체로 처리된 동물의 맹장 조직학은 질병의 현저한 특질, 예를 들어 복수로 채워진 점막하층, 적혈구 클러스터에 의해 나타내는 장 출혈의 징후 및 현저한 림프구 침윤을 보여주었다 (도 31B).
비장 분석은 육안 병리학 및 조직병리학과 일치하였다. 인간 T 세포는 대조 항체로 처리된 마우스의 비장에 존재하였지만, 124F23G1로 처리된 동물 내의 인간 T 세포의 수는 대조군 동물 내의 T 세포의 수보다 유의하게 더 작았다 (도 32).
후속 연구에서, 항-hLIGHT 항체의 T 세포 고갈 (IgG1) 및/또는 비-고갈 (IgG4PE) 버전을 사용하여 질병 개선의 메카니즘, 예를 들어 T 세포가 항체에 의해 차단되는지 또는 세포자멸을 겪는지의 여부를 평가할 수 있다.
논의: 급성 이식편 대 숙주 질병 (GVHD)은 동종이형의 조혈 줄기 세포 이식과 연관된 주요 합병증이다. GVHD는 일반적으로 공여자 T 세포에 의한 숙주 조직에 대한 넓은 공격으로 규정된다. 이식 후에, 전신 면역억제가 현재 GVHD를 예방하기 위한 방법이지만, 이는 병원체 기회 감염 및 백혈병 재발을 일으킬 수 있다. 따라서, T 세포 공동-자극 신호의 차단은 면역억제제에 대한 보다 유망한 대안 중의 하나이다. 최근의 보고에서는 T 세포의 LIGHT-HVEM 공동자극이 GVHD에서 중대한 발병 원인이 되는 것으로 나타났다 (Xu et al. (2007) 109:4097-4104). 따라서, 길항성 항-LIGHT 항체는 GVHD에 대해 치료 효능을 가질 수 있다. 급성 이종발생성 GVHD 모델에서 입증된 생체내 효능은 상기 가능성을 입증한다.
인간 PBMC가 치사-미만으로 방사선 조사된 SCID 마우스 내로 주사된 GVHD의 급성 이종발생성 모델에는 NK 세포가 고갈되었다 (도 28). 상기 모델에서, 방사선 조사는 장 손상을 개시시키고, T 세포가 질병의 장 염증을 매개한다. 동물은 PBMC를 주사한 후 대략 12일 내에 심각한 질병 징후를 보인다. 질병 특질은 출혈, 복수 및 융모 위축으로 명시되는 장 염증을 포함한다. 초기 연구에서, 100 ㎍의 항-LIGHT 항체 (124F23G1)를 사용한 마우스의 치료는 장에서 관찰된 육안 병리학을 감소시켰다 (도 29). 또한, 상기 감소는 항-LIGHT 항체 치료가 검출가능한 질병을 야기하지 않는다는, 맹장의 조직병리학에 대한 보다 정교한 분석에 의해 확실하게 입증된다 (도 30). 도 31A는 항-LIGHT 처리 동물로부터의 맹장의 대표적인 H&E 염색된 절편을 보여준다. 이와 대조적으로, 대조 항체 처리 동물의 맹장은 장에서 심한 염증의 특질, 예를 들어 출혈을 나타내는 세포의 붉은 반점, 전체적으로 뒤얽힌 유체 충전된 점막하층, 및 림프구 침윤을 보인다 (도 31B). 상기 모델에서, 전달된 인간 T 세포가 1차적으로 질병 유도에 관여되고, 비장 T 세포 수는 질병 심도와 상호 관련된다. 항-LIGHT 항체 치료는 비장에서 총 인간 T 세포 수를 유의하게 감소시켰다 (도 32). 따라서, 상기 데이타들은 항-LIGHT 항체가 상기 모델에서 생체내 효능을 보이고, 음성 대조군에 비해 질병의 징후를 유의하게 감소시킴을 나타낸다.
실시예 6 - 인간 LIGHT /항-인간 LIGHT 항체 (F23) 상호작용의 X선 결정학 분석
F23G1 항체 (또는 그의 Fab 단편)를 사용하여 천연 삼량체 hLIGHT의 우선적인 인식 특성을 평가한다. 항체에 의해 인식되는 입체형태적 에피토프를 추가로 규정하기 위해서 구조 분석을 통해 항-hLIGHT 항체와 hLIGHT 분자 사이의 특이적 접촉 아미노산 잔기를 확인할 수 있다. LIGHT-항-LIGHT Fab 복합체의 결정화는 시팅 드롭 (sitting drop) 증기 확산의 표준 방법에 의해 수행한다 (예를 들어, 문헌 [McRee 1993 In: Practical Protein Crystallography (Academic Press, San Diego, CA) at pp. 1-23]; [Rhodes 1993 In: Crystallography Made Crystal Clear (Academic Press) at pp. 8-10, 29-38] 참조). 결정은 SYNCHROTRON을 사용하여 분석하고, 데이타는 거대분자 결정구조 해석에 필요한 대부분의 계산을 망라하는 본질적으로 다른 일군의 프로그램인 CCP4 소프트웨어 세트 (Science & Technology Facilities Council, Computational Science and Engineering Department)를 사용하여 분석한다. 당업자가 이해할 수 있는 바와 같이, 본원에서 제공되는 다른 hLIGHT 항체가 hLIGHT 에피토프 결합 및 아미노산 접촉 잔기를 결정하기 위해서 유사하게 사용될 수 있다.
실시예 7 - 대장염 질병 모델에서 124F23의 생체내 효능 연구
대장염의 인간 T 세포 전달 모델. 문헌 [Morrissey et al. (1993) J Exp Med. 178 237]에 기재된 마우스 대장염의 CD4+/CD45Rbhi 전달 모델과 유사하게, RAG-/-마우스에게 인간 나이브 (naive) T 세포 (CD45RA+CD45RO-)를 주사한다. 상기 모델에서, 마우스 수여자 APC와 인간 공여자 T 세포 사이에 항체를 제시하기 위해서 인간 공여자의 HLA 타입에 일치하는 HLA 트랜스제닉 균주 (C57BL/6NTac-[KO]Abb-[Tg]DR-4)를 RAG-/- (B6.129S6-Rag2tm1FwaN12) 배경에 역교배시킨다. 상기 상호작용은 창자 미생물총의 T 세포 인식에 필요하고, 이것은 T 세포의 활성화 및 창자로의 유도를 책임지는 것으로 생각된다. 동물은 RAG-/-마우스에서 보이지 않은 장 염증과 함께 체중 감소 및 소모성 질병을 경험한다.
특정 군에서, 인간-항-hLIGHT 항체 (예를 들어, F23)를 인간 공여자 T 세포 투여와 동시에 동물당 100 ㎍ (또는, 예를 들어 2 ㎍ - 500 ㎍의 범위)의 용량으로 정맥내 주사한다. 특정 군에서, 항-hLIGHT 항체는 인간 공여자 T 세포 투여 전 및/또는 후에 다양한 시간 간격으로 투여된다. 항-LIGHT 항체는 활성화된 T 세포의 표면 상에 발현된 LIGHT에 결합되기 때문에, 질병의 증상이 예방되고/되거나 치료된다. 후속 연구에서, 항-hLIGHT 항체의 T 세포 고갈 (IgG1) 및/또는 비-고갈 (IgG4PE) 버전 모두가 질병 개선의 메카니즘을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, IgG4 항-LIGHT 항체는 T 세포 공동자극 및 생존을 차단할 수 있다.
실시예 8 - 인간 LIGHT 낙-인 ( knock - in ) 마우스에서 인간 질병의 IBD 모델
본원의 다른 곳에서 논의되는 바와 같이, LIGHT는 IBD 질병 병리학에 관련이 있는 것으로 이전에 보고된 바 있다 (예를 들어, 문헌 [Wang et al. 2005 J. Immunol. 174:8173-82]; [Wang et al. 2004 J. Clin. Invest. 113:826-35]; [Cohavy et al. 2005 J. Immunol. 174:646-53] 참조). 본 실시예에서, IBD의 hLIGHT 낙-인 마우스 모델을 생성시키고, 본 발명의 인간 항-hLIGHT 모노클로날 항체를 동물에게 투여하여, IBD 치료시에 상기 항체의 생체내 효능을 평가한다. 상기 항체는 hLIGHT 수용체 결합을 차단하고, hLIGHT의 생물학적 활성을 차단하고 (예를 들어, 실시예 1-4 참조), GVHD를 치료하는 것으로 (실시예 5) 이전에 밝혀졌기 때문에, 본 발명의 hLIGHT 항체도 IBD 치료에 효과적인 것으로 예상된다.
LIGHT 낙-인 생성. 인간 LIGHT 유전자가 표적화 삽입된, 마우스 LIGHT 유전자가 붕괴된 마우스를 상동성 재조합에 의해 유전자 표적화의 표준 방법을 사용하여 생성시킨다. 간단히 설명하면, 유전자-표적화된 마우스 ES 세포를 유전자-표적화 구성체의 야생형 ES 세포 내로의 전기천공에 의해 생성시킨다. ES 세포의 게놈과 인간 LIGHT 유전자에 인접한 표적화 벡터 내의 상동성 구역 사이의 상동 재조합은 마우스 LIGHT 유전자를 인간 LIGHT 유전자로 대체시킨다. 이어서, 포배를 가임신 (pseudo-pregnant) 암컷 내로 이식하여 키메라 마우스를 생성시킨다. 출산을 통해 상동성 LIGHT 낙-인 동물을 얻는다.
인간 질병의 IBD 모델. hLIGHT 낙-인 동물을 확립된 IBD 모델에 사용한다. 한 확립된 IBD의 모델은 음용수 중의 덱스트란 나트륨 술페이트 (DSS)의 투여를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Maehler et al. 1998 Am J Physiol. 274G544-51] 참조). 간단히 설명하면, 실험에 의한 대장염을 임의로 산성화된 음용수 중의 3.5% (w/v) DDS (분자량 36,100-45,000; 티비디 컨설턴시 (TbD Consultancy, 스웨덴 웁살라))를 5일 동안 투여하여 유도한다. 이어서, DDS 투여를 중단하고, 마우스에게 산성화된 음용수만을 16일 동안 투여한 후, 제21일에 부검한다. 상기 용량이 치사율을 최소화하면서 중등도 내지 중증 대장염을 유도하지만, 다른 용량도 사용될 수 있다. 이어서, 대장을 모으고, 맹장을 대장으로부터 분리한다. 이어서, 염증 및 병변의 심도를 결정하기 위해 표준 조직 고정 및 H&E 염색을 수행한다. 마우스를 병리학, 조직병리학, 소모 증후군 및/또는 사망에 대해 평가한다.
제2의 확립된 IBD 모델은 트리니트로벤젠 술폰산 (TNBS)의 직장 투여를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Neurath, et al. 1995 J Exp Med. 182 1281-90] 참조). 간단히 설명하면, 대장염을 유도하기 위해, 마우스를 모토판으로 짧게 마취시킨 후, 3.5F 카테터를 항문에 약 4 cm 근접하도록 대장 내로 조심스럽게 삽입한다. 대장염을 유도하기 위해, 50% 에탄올 중의 0.5 mg의 합텐 시약 TNBS (시그마) (장 장벽을 깨기 위해)을 1 ml 주사기에 설치된 카테터를 통해 대장 내강에 삽입한다. 대조 실험에서는, 마우스에게 50% 에탄올만을 투여한다. 총 주사 부피는 두 군 모두에서 100 ㎕이고, 이 부피는 TNBS 또는 에탄올이 맹장 및 충수를 포함하여 전체 대장에 도달하도록 하는 양이다. 이어서, 동물을 수직 자세로 30초 동안 유지시키고, 우리에 넣는다 (또는 마우스 대장염의 CD4+/CD45Rbhi 전달 모델 (예를 들어, 문헌 [Morrissey, et al. 1993 J Exp Med. 178 237-44] 참조). 이어서, 항-LIGHT 항체를 본질적으로 상기한 바와 같이 예를 들어 동물당 2-500 ㎍의 용량으로 확립된 질병의 치료 및 예방을 위해 사용될 수 있다. 이어서, 대장을 모으고, 맹장을 대장으로부터 분리한다. 그 후 다양한 시점에서, 장을 제거한 후, 염증 및 병변의 심도를 결정하기 위해 표준 조직 고정 및 H&E 염색을 수행한다. 마우스를 병리학, 조직병리학, 소모 증후군 및/또는 사망에 대해 평가한다.
제3의 확립된 IBD 모델은 마우스 대장염의 CD4+/CD45RBhi 전달 모델이다 (예를 들어, 문헌 [Morrissey, et al. 1993 J Exp Med. 178 237-44] 참조). 간단히 설명하면, 정제된 CD4+ 림프절 T 세포를 그의 CD45RB 발현에 따라 분류하고, hLIGHT 낙-인 마우스에 주사한다. 이어서, 염증 및 병변의 심도를 결정하기 위해 표준 조직 고정 및 H&E 염색을 수행한다. 마우스를 병리학, 조직병리학, 소모 증후군 및/또는 사망에 대해 평가한다.
항-LIGHT 항체 (예를 들어, 동물당 2-500 ㎍의 용량)를 본질적으로 상기한 바와 같이 IBD의 치료 및 예방시의 효능을 평가하기 위해서 상기한 바와 같은 임의의 IBD 모델에 사용할 수 있다. 상기 항체는 hLIGHT 수용체 결합을 차단하고, hLIGHT의 생물학적 활성을 차단하고 (예를 들어, 실시예 1-4 참조), GVHD를 치료하는 (실시예 5) 것으로 이전에 밝혀졌기 때문에, 본 발명의 hLIGHT 항체는 IBD 치료에도 효과적일 것으로 예상된다.
상기 설명된 본 발명의 실시태양은 단지 예시를 위한 것으로서, 당업자는 단지 통상적인 실험을 통해 본원에서 설명된 특정 절차에 대한 많은 동등물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 모든 동등물은 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 간주되고, 첨부되는 청구의 범위에 포함된다. 또한, 본 명세서와 청구의 범위에서 사용될 때, 단수형 ("a", "an") 및 그 ("the")는 내용상 분명하게 단수형을 나타내지 않으면 복수형을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "항체"의 언급은 2 이상의 상기 항체의 혼합물 등을 포함한다. 추가로, 통상의 숙련인은, 설명 및 특허 청구를 위해 작동 서열을 몇몇 특정 순서로 제시하여야 했지만, 본 발명이 그러한 특정 순서 이외의 다양한 변화를 고려함을 인식할 것이다.
본원에 설명된 모든 참조문의 내용은 본원에 참조로 포함된다.
다른 실시태양이 하기 청구의 범위에 포함된다
ATCC PTA7728 20060712 ATCC PTA7729 20060712 ATCC PTA7818 20060817 ATCC PTA7819 20060817 ATCC PTA7842 20060823
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<212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> cDNA of E13 kappa light chain variable region <400> 47 atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 180 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 240 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 300 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacccat gtacactttt 360 ggccagggga ccaagctgga gatcaaacga 390 <210> 48 <211> 378 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> cDNA of E63 kappa light chain variable region <400> 48 atgtcgccat cacaactcat tgggtttctg ctgctctggg ttccagcctc caggggtgaa 60 attgtgctga ctcagtctcc agactttcag tctgtgactc caaaggagaa agtcaccatc 120 acctgccggg ccagtcagag cattggtagt agcttacact ggtaccagca gaaaccagat 180 cagtctccaa agctcctcat caagtatgct tcccagtcct tctcaggggt cccctcgagg 240 ttcagtggca gtggatctgg gacagatttc accctcacca tcaatagcct 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ctttagcctg gtatcagcag 180 aaaccaggga aagctcctaa gctcctgatc tatgatgcct ccagtttgga aagtggggtc 240 ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagcctg 300 cagcctgaag attttgcaac ttattactgt caacagttta atagttaccc gctcactttc 360 ggcggaggga ccaaggtgga gatcaaa 387 <210> 51 <211> 723 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Nucleotide sequence of a hLIGHT <400> 51 atggaggaga gtgtcgtacg gccctcagtg tttgtggtgg atggacagac cgacatccca 60 ttcacgaggc tgggacgaag ccaccggaga cagtcgtgca gtgtggcccg ggtgggtctg 120 ggtctcttgc tgttgctgat gggggccggg ctggccgtcc aaggctggtt cctcctgcag 180 ctgcactggc gtctaggaga gatggtcacc cgcctgcctg acggacctgc aggctcctgg 240 gagcagctga tacaagagcg aaggtctcac gaggtcaacc cagcagcgca tctcacaggg 300 gccaactcca gcttgaccgg cagcgggggg ccgctgttat gggagactca gctgggcctg 360 gccttcctga ggggcctcag ctaccacgat ggggcccttg tggtcaccaa agctggctac 420 tactacatct actccaaggt gcagctgggc ggtgtgggct gcccgctggg cctggccagc 480 accatcaccc acggcctcta caagcgcaca ccccgctacc ccgaggagct ggagctgttg 540 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Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser 20 25 30 Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly 35 40 45 Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 50 55 60 Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser 100 105 110 Asn Trp His Pro Val Arg Pro Arg Asp Gln Gly Gly Asp Ser 115 120 125 <210> 93 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR1 of F19 light chain variable region #1 (F19 kappa(A)) <400> 93 Arg Val Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 94 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR1 of F19 light chain variable region #3 (F19 kappa(C)) <400> 94 Arg Met Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 95 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR1 of F19 light chain variable region #4 (F19 kappa(D)) <400> 95 Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 96 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR2 of F19 light chain variable region #1 (F19 kappa(A)) <400> 96 Ser Ala Ser Asn Leu Gln Ser 1 5 <210> 97 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR2 of F19 light chain variable region #3 (F19 kappa(C)) <400> 97 Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser 1 5 <210> 98 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR2 of F19 light chain variable region #4 (F19 kappa(D)) <400> 98 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 99 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR3 of F19 light chain variable region #1 (F19 kappa(A)) <400> 99 Gln Arg Thr Asn Ala Pro Pro Thr 1 5 <210> 100 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR3 of F19 light chain variable region #3 (F19 kappa(C)) <400> 100 Gln Gln Tyr Tyr Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 101 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR3 of F19 light chain variable region #4 (F19 kappa(D)) <400> 101 Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Pro 1 5 <210> 102 <211> 386 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> cDNA of E1 kappa light chain variable region #1 (E1 kappa(A)) <400> 102 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggcttctgc tgctctggct cccaggtgcc 60 agatgtgcca tccagttgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 120 gtcaccatca cttgccgggc aagtcagggc attagcagtg ctttagcctg gtatcagcag 180 aaaccaggga aagctcctaa gctcctgatc tatgatgcct ccagtttgga aagtggggtc 240 ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagcctg 300 cagcctgaag attttgcaac ttattactgt caacagttta atagttaccg tacacttttg 360 gccaggggac caagctggag atcaaa 386 <210> 103 <211> 384 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> cDNA of E1 kappa light chain variable region #3 (E1 kappa(C)) <400> 103 atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120 ctctcctaca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 180 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca acagggccac tggcatccca 240 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 300 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgtg gacgttcggc 360 caagggacca aggtggaaat caaa 384 <210> 104 <211> 387 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> cDNA of F19 kappa light chain variable region #1 (F19 kappa(A)) <400> 104 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctac tgctctgggt cccaggtgcc 60 agatgtgaca tccagttgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 120 gtcaccatca cttgccgggt gagtcagggc attagcagtt atttaaattg gtatcggcag 180 aaaccaggga aagttcctaa gctcctgatc tatagtgcat ccaatttgca atctggagtc 240 ccatctcggt tcagtggcag tggatctggg acagatttca ctctcactat cagcagcctg 300 cagcctgaag atgttgcaac ttattacggt caacggactt acaatgcccc tcccactttc 360 ggcggaggga ccaaggtgga gatcaaa 387 <210> 105 <211> 387 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> cDNA of F19 kappa chain variable region #3 (F19 kappa(C)) <400> 105 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60 agatgtgtca tctggatgac ccagtctcca tccttactct ctgcatctac aggagacaga 120 gtcaccatca gttgtcggat gagtcagggc attagcagtt atttagcctg gtatcagcaa 180 aaaccaggga aagcccctga gctcctgatc tatgctgcat ccactttgca aagtggggtc 240 ccatcaaggt tcagtggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagctgcctg 300 cagtctgaag attttgcaac ttattactgt caacagtatt atagtttccc gtacactttt 360 ggccagggga ccaagctgga gatcaaa 387 <210> 106 <211> 380 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> cDNA of F19 kappa chain variable region #4 (F19 kappa(D)) <400> 106 atggaagccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60 gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120 ctctcctgca gggccagtca gggtgttagc agctacttag cctggtacca gcagaaacct 180 ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 240 aggttcagtg gcagtgggcc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 300 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcatcccgt tcggccaagg 360 gaccaaggtg gagattcaaa 380

Claims (17)

  1. 인간 LIGHT에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 hLIGHT 활성은 항체 또는 그의 항원-결합 단편에 의해 억제되고, 항체에 의한 hLIGHT 에피토프에 대한 결합이 F19 항체 (ATCC 기탁 번호 PTA-7819)에 의해 완전히 차단되고, hLIGHT 에피토프에 대한 결합이 E1 항체 (ATCC 기탁 번호 PTA-7729)에 의해 차단되지 않는 것인, 염증성 장 질환을 치료하거나 또는 개선하기 위한 제약 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 염증성 장 질환이 크론병인 제약 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 염증성 장 질환이 궤양성 대장염인 제약 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 항체인 제약 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 항체가 세포 표면-발현된 hLIGHT 또는 가용형 hLIGHT에 대한 결합에 대해 헤르페스 바이러스 도입 매개체(herpes virus entry mediator; HVEM), 림포톡신 β 수용체(lymphotoxin β receptor; LTβR), 또는 그의 융합 단백질과 경쟁하는 것인 제약 조성물.
  6. 제1에 있어서, 항체가 (a) 서열 4의 아미노산 위치 20 내지 141의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 구역 (VH), 및 서열 90의 아미노산 위치 23 내지 129의 아미노산 서열, 서열 9의 아미노산 위치 23 내지 129의 아미노산 서열, 서열 91의 아미노산 위치 23 내지 129의 아미노산 서열 또는 서열 92의 아미노산 위치 21 내지 126의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 구역 (VL); 또는
    (b) 서열 5의 아미노산 위치 27 내지 143의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 서열 10의 아미노산 위치 23 내지 129의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 것인 제약 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 항체가 (a) 서열 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열 21에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 22에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 구역; 및 (b) 서열 93, 35, 94 또는 95에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 96, 36, 97 또는 98에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 99, 37, 100 또는 101에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 구역을 포함하는 것인 제약 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 항체가 (a) 서열 23에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 25에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 구역; 및 (b) 서열 38에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 39에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 40에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 구역을 포함하는 것인 제약 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 항체가 (a) 서열 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열 21에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열 22에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 구역; 및 (b) 서열 35에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열 36에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열 37에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 구역을 포함하는 것인 제약 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 항체가 (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체의 VH; 및 (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체의 VL을 포함하는 것인 제약 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 항체가 (a) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체의 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3; 및 (b) ATCC 기탁 번호가 PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산된 항체의 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3을 포함하는 것인 제약 조성물.
  12. 제1항에 있어서, 항체가 ATCC 기탁 번호가 PTA-7819 또는 PTA-7728인 하이브리도마에 의해 생산되는 것인 제약 조성물.
  13. 제1항에 있어서, 항체가 완전 인간 항체인 제약 조성물.
  14. 제1항에 있어서, 항체가 키메라 또는 인간화 항체인 제약 조성물.
  15. 제1항에 있어서, 항체가 모노클로날 항체인 제약 조성물.
  16. 제1항에 있어서, 항체가 재조합 항체인 제약 조성물.
  17. 제1항에 있어서, 항체가 Fab 단편, F(ab')2 단편, 단일쇄 Fv (scFv), 디아바디 (diabody), 트라아바디 (triabody), 또는 미니바디 (minibody)인 제약 조성물.
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