KR20070069204A - 이상 단백질 제거용 조성물 - Google Patents

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KR20070069204A
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abnormal protein
ultraviolet ray
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에리카 오노
사토시 미야타
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가부시키가이샤환케루
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Abstract

효과 높은 이상 단백질 제거용 조성물의 제공, 또한 단백질 분해 이상에 의한 질환의 예방 및 치료 등에 기여하는 조성물, 제(agent), 식품을 제공하기 위한, 대두 사포닌 B 그룹을 주요 성분으로 하는 이상 단백질 제거용 조성물.
이상 단백질, 대두 사포닌 B 그룹, 단백질 분해 이상, 단백질 제거용 조성물

Description

이상 단백질 제거용 조성물{Abnormal protein removing composition}
본 발명은 이상 단백질 제거용 조성물 및 이상 단백질 축적을 수반하는 질병을 예방하는 조성물에 관한 것이다.
이상 단백질은 연령과 함께 증가하여, 생체 내에 축적된 단백질 분해 이상에 의한 질환 또는 장애(알츠하이머병, 파킨슨병, 루이 소체병(dementia with Lewy bodies), 트리플렛 리피트병(triplet repeat disease), 근위축성 측색 경화증, 백내장, 동맥경화, 당뇨병성 신증, 피부의 광노화, 피부의 주름 등) 등, 많은 질병에 관여하는 것이 명확해졌다(비특허문헌 BIO Clinica, 11권, 제5호, 1996년). 또한, 나이가 젊더라도 과도한 스트레스·자외선 등에 의해 생체 내에 만성적으로 활성 산소가 다량 발생하고 있는 경우, 이상 단백질의 축적은 가속된다. 현재는 단백질 분해 이상에 기인하는 질병의 예방 및 치료가 커다란 과제로 되어 있는데, 종래, 이상 단백질의 생체 내 축적 방어에 관해서는 단백질의 산화 수식을 방어하는 연구가 이루어져 왔다. 즉, 산화 스트레스에 의해 생체 방어 메커니즘으로 대응할 수 없을 정도까지 생성된 활성 산소를, 항산화물질을 섭취함으로써 소거하여 단백질의 산화를 억제한다고 하는 시도이다. 대표적인 항산화물질로서는 토코페롤류나 카로테노이드류, 그리고 다종의 식물에 포함되는 플라보노이드류가 있다.
그러나, 항산화물질의 섭취는 생체 내에서 발생하는 활성 산소의 소거에 기여하지만, 이미 축적되어 있는 이상 단백질의 제거에는 조금도 기여하지 않는다. 따라서, 나이를 먹음에 따라 생체 내에 축적된 이상 단백질이 관여하는 각종 질환의 예방 및 치료에는 이상 단백질의 제거가 필수가 된다.
한편, 본 발명자 등은 대두 사포닌의 작용 메커니즘에 대해 착안하고 계속해서 탐구하여, 이상 단백질 제거기능(특허문헌 1 : 일본국 특허공개 제2002-179592호 공보, 특허문헌 2 : 일본국 특허공개 제2004-115438호 공보), 자외선상해 예방 또는 개선기능이 있는 것(특허문헌 3 : 일본국 특허공개 제2004-131431호 공보) 등을 이미 제안하고 있다.
또 다른 한편, 본 발명자 등은 이상 단백질을 제거하는 성분을 탐색한 결과, 대두 사포닌 이외에 케일(특허문헌 4 : 일본국 특허공개 제2004-91398호 공보)에 그 효과를 발견하고 있다.
이상 단백질이 관여하는 나이를 먹음에 따른 각종 질환의 예방 및 치료를 목적으로 상기 대두 사포닌을 사용하면, 통상의 섭취량으로서 부담량이 많아지는 것이 판명되어, 적은 양으로 더욱 효과가 높은 성분의 개발 탐구를 행하여 왔다.
특허문헌 1 : 일본국 특허공개 제2002-179592호 공보
특허문헌 2 : 일본국 특허공개 제2004-115438호 공보
특허문헌 3 : 일본국 특허공개 제2004-131431호 공보
특허문헌 4 : 일본국 특허공개 제2004-91398호 공보
발명의 개시
발명이 해결하고자 하는 과제
본 발명의 목적은 대두 사포닌에 착안하여, 효과 높은 이상 단백질 제거용 조성물을 특정하여 제공하는 것, 또한 단백질 분해 이상에 의한 질환의 예방 및 치료 등에 기여하는 조성물, 제(agent), 식품을 제공하는 것이다.
과제를 해결하기 위한 수단
본 발명자 등은 상기 목적을 달성하기 위해, 대두 사포닌의 분획물을 사용해서 이상 단백질을 제거하는 성분을 탐색하였다. 그 결과, 고순도 대두 사포닌 B 그룹에 요구하는 효과를 발견하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명의 주된 구성은 이하와 같다.
(1) 대두 사포닌 B 그룹을 주요 성분으로 하는 것을 특징으로 하는 이상 단백질 제거용 조성물.
(2) (1)에 있어서, 대두 사포닌 B 그룹은 대두 추출물 100 중량부 중, 대두 사포닌 B 그룹을 40~100 중량부 함유하는 대두 추출물인 것을 특징으로 하는 이상 단백질 제거용 조성물.
(3) (1) 또는 (2)에 있어서, 대두 사포닌 B 그룹이 SoyasaponinI, II, III, IV, V 또는 그들의 아세틸체, 대두 사포닌 A 그룹이 Soyasaponin A1, A2, A3, A4, A5, A6, Ac, Ad 또는 그들의 아세틸체, 또는 그들의 혼합물인 이상 단백질 제거용 조성물.
(4) (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 있어서, 콜라겐, 젤라틴, 콜라겐 가수분해물, 젤라틴 가수분해물로부터 선택되는 어느 1종 이상 및/또는 실리마린(silymarin)을 포함하는 것을 특징으로 하는 이상 단백질 제거용 조성물.
(5) (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 이상 단백질 제거용 조성물을 함유하는 자외선장애 예방·개선제용 조성물.
(6) (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 (5)의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 항노화식품.
(7) (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 (5)의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 거무칙칙함 억제 또는 주름 억제 또는 보습용 식품.
(8) (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 (5)의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 항노화 화장료.
(9) (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 (5)의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 거무칙칙함 억제 또는 주름 억제 또는 보습용 화장료.
(10) (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 (5)의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 항노화 사료 또는 동물약.
(11) (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 (5)의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 거무칙칙함 억제 또는 주름 억제 또는 보습용 사료 또는 동물약.
(12) (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 (5)의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 항노화 페트 동물용 화장료.
(13) (1) 내지 (4) 중 어느 하나의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 (5)의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 거무칙칙함 억제 또는 주름 억제 또는 보습용 페트 동물용 화장료.
발명의 효과
이상 단백질 제거용 유효성분으로서 고순도 대두 사포닌 B 그룹을 제공함으로써, 지금까지의 대두 사포닌에 비해 더욱 높은 효과가 얻어져, 통상의 섭취량으로서 부담이 없는 기준량을 설정할 수 있다.
본 발명의 이상 단백질 제거용 조성물을 사용하면 축적된 이상 단백질을 제거할 수 있다. 따라서, 본 발명의 제제는 단백질 분해 이상에 의한 질환 또는 장애(알츠하이머병, 파킨슨병, 루이 소체병, 트리플렛 리피트병, 근위축성 측색 경화증, 백내장, 동맥경화, 당뇨병성 신증, 피부의 광노화, 피부의 주름 등) 등 단백질 분해 이상에 의한 질병의 예방 또는 치료에 있어서 유효하다. 또한, 항노화용 화장료나 식품으로서도 유용하다.
구체적으로는, 항노화효과, 거무칙칙함 억제 효과, 주름 억제 효과, 보습 효과, 자외선장애 예방·개선작용에 대해서 효과를 기대할 수 있다.
구체적인 이용 형태로서 의약, 식품, 화장료, 사료 등에 이용할 수 있다.
도면의 간단한 설명
도 1은 UV 조사 시험에 있어서의 사포닌 투여량과 피부 수분량의 관계를 나타낸 도면이다.
도 2는 UV 조사 시험에 있어서의 사포닌 투여량과 피부 탄력성의 관계를 나타낸 도면이다.
도 3은 UV 조사 시험에 있어서의 사포닌 투여량과 카르보닐화 단백질의 관계를 나타낸 도면이다.
도 4는 파라쿼트(Paraquat) 부하시에 있어서의 사포닌 투여량과 피부 카르보닐화 단백질의 관계를 나타내는 도면이다.
도 5는 파라쿼트 부하시에 있어서의 사포닌 투여량과 간장 카르보닐화 단백질의 관계를 나타낸 도면이다.
도 6은 파라쿼트 부하시에 있어서의 사포닌 투여량과 적혈구 카르보닐화 단백질의 관계를 나타낸 도면이다.
발명을 실시하기 위한 최선의 형태
이하에 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명에 있어서 이상 단백질이란, 일반적으로 나이를 먹음에 따라 산화 또는 당화 또는 알데히드 수식을 받은 단백질을 말한다.
대두 유래의 사포닌은 대두 종자 중의 종피(種皮), 자엽(子葉), 배축(胚軸) 또는 대두 식물체의 잎, 줄기, 뿌리 등에 넓게 분포한다. 구조적으로는 글리시리진(glycyrrhizin)과 유사한 구조이지만, 트리테르페노이드(triterpenoid) 골격에 2~5개의 당으로 되는 당쇄를 갖는다. 대두 사포닌은 아글리콘(aglycone)(비당부)의 구조에 따라 4개의 그룹(A, B, E 및 DDMP 그룹)으로 분류되고, 모든 그룹의 사포닌이 다종 다양한 당쇄구조를 갖는다. 현재까지 Soyasapogenol A, B, E 및 DDMP를 각각 아글리콘으로 하는 8종류의 A 그룹, 2종류의 E 그룹, 5종류의 B 그룹, 6종류의 DDMP 그룹이 동정(同定)되어 있다(비특허문헌 Agric Biol Chem, 55 315-322(1991))(비특허문헌 Agric Biol Chem, 55 911-917(1991))(비특허문헌 Agric Biol Chem, 57 546-550(1993)).
A 그룹 사포닌은 Soyasapogenol A의 C-3과 C-22 위치의 2개소에 당쇄가 결합된 비스데스모사이드형 사포닌(bisdesmoside saponin)으로 대두의 종자 배축에만 분포하고 있어 불쾌한 맛(쓴맛, 수렴미(收斂味))의 주된 원인이다. 현재 A 그룹 사포닌에 관해서는 두 가지 명명이 있어, Soyasaponin A1과 Soyasaponin Ab는 동일 화합물이고, 마찬가지로 A2는 Af, A3는 Ah, A4는 Aa, A5는 Ae, A6는 Ag로 되어 있다. Ac 및 Ad는 별명이 알려져 있지 않다(비특허문헌 BBB62(12) 2291-2299, 1998).
이에 대해 B 그룹 및 E 그룹 사포닌은 C-3 위치에만 당쇄가 한 가닥 결합된 모노데스모사이드형 사포닌(monodesmoside saponin)이다. DDMP 그룹 사포닌은 온화한 조건하에서 추출을 행하면 정제할 수 있지만(비특허문헌 Agric Biol Chem, 57 546-550(1993)), 가열 조건하 및 알칼리 조건하에 있어서 B 그룹 사포닌으로 변환된다. 따라서 대두 중에 존재하는 사포닌은 그 대부분이 A 그룹 사포닌 및 DDMP 그룹 사포닌으로, B 그룹 사포닌은 적으며, B 그룹 사포닌은 그 대부분이 추출시에 DDMP 그룹 사포닌으로부터 생성되는 아티팩트(artifact) 성분인 것으로 추정되고 있다. B 그룹 사포닌은 대두 배축이나 자엽에 많이 존재하고, 현재 B 그룹 사포닌에 관해서는 두 가지 명명이 있어, SoyasaponinI과 SoyasaponinBb는 동일 화합물이고, 마찬가지로 II는 Bc, III는 Bb', IV는 Bc', V는 Ba로 되어 있다(비특허문헌 BBB 62(12) 2291-2299, 1998).
또한, 지금까지 대두 사포닌의 흡수 동태에 대해서는 불명확했지만 SoyasaponinI는 사람의 장에서는 그대로 흡수되지 않고, 장내 세균에 의해 아글리콘인 SoyasapogenolB로 분해되어, 농도 의존적으로 흡수되는 것이 추측되고 있고, 다른 B 그룹 사포닌에 대해서도 아글리콘형으로서 흡수되는 것이 시사되어 있다(비특허문헌 J Nutr 134 1687-1873(2004)). 따라서, 식품으로서 B 그룹 사포닌을 섭취하는 경우, 그 조성(배당체 또는 아글리콘 또는/및 그의 유도체 등) 여하에 상관없이 아글리콘형으로서 동일하게 흡수되는 것으로 추정할 수 있다.
일반적으로, 사포닌은 용혈성(溶血性)을 나타내는 것이 많다. 그러나, 대두 사포닌은 용혈성을 거의 갖지 않는다고 보고되어 있다(비특허문헌 기초와 임상 Vol.15 No.5 1981). 또한, 본 발명자 등이 대두로부터 얻어지는 대두 사포닌류의 집토끼 2% 혈액 부유액에 대한 용혈지수를 측정한 바, 당근 사포닌과 마찬가지로 100 이하로서, 다른 보고와 마찬가지로 용혈성을 갖지 않는 것이 판명되었다.
또한, 본 발명자 등이 대두 사포닌 B 그룹의 안전성을 조사하기 위해, 변이 원성 및 급성 독성에 대해서 시험한 바 모두 이상 없어, 그 안전성이 높은 것이 증명되었다.
본 발명의 고함유 대두 사포닌 B 그룹은 이하의 공정에서 얻을 수 있다.
[사포닌의 추출]
원료 대두 배축은 유기 용매 등으로 미리 탈지한 것, 하지 않은 것 모두 사용 가능하지만, 사포닌의 추출 효율로부터 탈지한 것이 유리하다. 원료 대두 배축으로부터 사포닌을 추출하는 방법은, 실온으로부터 80℃에 있어서 원료에 대해 5~10배 용량의 추출 용매를 첨가하여 교반하는 것이 일반적인 방법이지만, 사포닌을 충분히 추출할 수 있는 조건이라면 특별히 한정되지 않는다.
본 발명에 있어서의 이온 교환 수지는 3급 아민을 포함하는 약염기성 음이온 교환 수지라면 특별히 제한은 없고, 입경(粒徑)이 불균일한 수지, 예를 들면 미쯔비시 가세이제 다이아이온 WA-30 등도 이용 가능하지만, 평균 입경±10%의 범위에 90% 이상의 입도분포를 갖는 균일 입경인 것이 바람직하다.
[사포닌의 용출·정제]
상기 사포닌 추출액으로부터 증류 조작에 의해 용매를 증류 제거하고, 물로 희석한 사포닌 용액을 상기 이온 교환 수지에 흡착시킨 후, 물, 알코올 또는 함수 알코올로 수지를 세정한 후, 산 또는 알칼리를 사용하여 수지에 흡착시킨 사포닌을 용출한다. 용출된 사포닌 용액을 그대로 건조하여 얻어지는 대두 사포닌 조정제물은 순도 20~50 중량%로 낮고, 사포닌 이외의 불순물이 많으며, 생리활성이 높은 대두 사포닌 B 그룹의 비율도 20~30 중량% 정도로 낮은 것이다.
사포닌의 순도를 높이기 위해, 용출된 사포닌을 그대로 물로 희석하고, 무극성 합성 흡착제에 사포닌을 흡착시킨다. 무극성 합성 흡착제로서는, 스티렌·디비닐벤젠형 수지 등이 있고, 예를 들면, 미쯔비시 가가쿠제, 다이아이온 HP-20이나 롬·앤드·하스사제의 앰버라이트 XAD-2 등이 사용 가능하다. 합성 흡착제에 흡착시킬 때에 사용하는 함수 알코올 중의 알코올 농도는 알코올의 종류에 따라 다르지만, 메탄올의 경우는 0~50 중량%, 에탄올의 경우는 0~30 중량%가 바람직하다. 다음으로, 물 또는 함수 에탄올로 수지를 세정한 후, 세정시 보다 알코올 농도가 높은 함수 알코올로 용출시켜서 사포닌 고순도 용액을 얻을 수 있다.
[후처리]
얻어진 사포닌 고순도 용액을 필요에 따라 pH 조정제를 사용하여 pH를 조정한 후, 가열건조, 감압 가열건조, 스프레이 드라이, 동결건조 등의 방법으로 건조함으로써 고순도 대두 사포닌 분말을 얻을 수 있다.
이상의 공정에서 효율적으로 저렴하게, 순도 70 중량% 이상의 고순도 대두 사포닌을 얻을 수 있고, 또한 활성이 높은 대두 사포닌 B 그룹을 50 중량% 이상의 농도로 농축할 수 있을 뿐 아니라, 총 사포닌 중의 대두 사포닌 B 그룹 비율을 70 중량% 이상으로 높이는 것도 가능하다.
수지에 의한 정제를 행하는 순서로서는 음이온 교환 수지에 의한 처리를 행한 후에, 무극성 합성 흡착제에 의한 정제를 행한다. 합성 흡착제로 먼저 처리한 경우, 저극성 물질 등이 합성 흡착제에 강하게 흡착되어, 알칼리 처리 등, 통상의 수지 재생처리를 행하더라도 수지의 열화(劣化)가 일어나 수지의 능력이 서서히 저하되는데, 이에 대해 먼저 음이온 교환 수지로 대두 사포닌을 조정제함으로써, 대두 이소플라본(soybean isoflavone)이나 올리고당 외에 저극성 물질을 제거할 수 있으며, 계속되는 무극성 합성 흡착제의 처리능력이 향상되어, 열화가 일어나기 어려워지는 것이다. 그 때는 음이온 교환 수지는 알칼리에 의한 처리에 의해 여러번 반복해서 사용할 수 있다.
대두 사포닌 B 그룹을 풍부하게 조정한 조성물에는 이상 단백질 제거작용, 자외선장애 예방·개선작용, 항노화작용, 거무칙칙함 억제작용, 주름 억제작용 및 보습작용이 우수한 작용효과가 있는 것을 확인할 수 있었다.
이러한 작용효과를 이용하는 형태로서는 의약, 식품, 음료, 서플리먼트(supplement), 식품 첨가제, 화장료, 사료, 사료 첨가제, 동물약 등이다. 경구 또는 비경구 모두 제공 가능하다.
고순도 대두 사포닌 B 그룹은 그대로도 여러 용도로 사용할 수 있지만, 목적에 따라 미리 여러 다른 성분과 혼합, 또는 식품이나 사료 또는 동물약에 첨가할 수 있다.
식품으로서는 직접, 또는 각종 영양성분을 첨가하여 사용할 수 있다. 예를 들면, 전분, 유당, 맥아당, 식물유지분말, 카카오버터, 스테아르산 등의 적당한 보조제를 첨가한 후, 관용의 수단을 사용하여 식용에 적합한 형태, 예를 들면 과립상, 입상, 정제, 캡슐, 페이스트 등으로 성형하여 건강 보조식품, 보건 기능식품 등으로서 식용에 제공해도 되고, 또한 각종 식품, 예를 들면 햄, 소시지 등의 식육가공식품, 어묵(fishcake)의 다양한 형태의 수산가공식품, 빵, 과자, 버터, 분유, 발효유제품에 첨가해서 사용해도 되고, 물, 과즙, 우유, 청량음료 등의 음료에 첨가해서 사용해도 된다. 이러한 제, 식품은 통상 채용되고 있는 제제화 기술에 의해 제조할 수 있다.
화장료로서는 직접 또는 소맥배아유 또는 올리브유 등에 첨가하여 화장료 성분으로서 사용하고, 이들을 사용해서 화장료를 제조할 수 있다.
의약으로서의 적용방법은 경구투여 또는 비경구투여 모두 채용할 수 있다. 투여시에는 유효성분을 경구투여, 직장내 투여, 주사 등의 투여방법에 적합한 고체 또는 액체의 의약용 무독성 담체와 혼합하여, 관용의 의약제제의 형태로 투여할 수 있다.
비경구 적용 조성물은 예를 들면 수용액, 유제, 유액, 현탁액 등의 액제, 겔, 크림 등의 반고형제, 분말, 과립, 캡슐, 마이크로캡슐, 고형 등의 고형제의 형태로 적용 가능하다. 종래부터 공지의 방법으로 이들 형태로 조제하고, 로션제, 유제, 겔제, 크림제, 연고, 경고, 파프제, 에어졸제, 좌제, 주사제, 분말제 등의 각종 제형으로 할 수 있다. 이들을 신체에 도포, 첩부(貼付), 분무 등에 의해 적용할 수 있다. 특히 이들 제형 중에서 로션제, 유제, 크림제, 연고제, 경고제, 파프제, 에어졸제 등이 피부외용제에 적합하다. 화장료로서는 화장수, 유액, 크림, 팩 등의 피부화장료, 메이크업 베이스 로션, 메이크업 크림, 유액상 또는 크림상 또는 연고형 파운데이션, 립스틱, 아이 컬러, 치크 컬러 등의 메이크업 화장료, 핸드크림, 레그크림, 바디로션 등의 신체용 화장료 등으로 할 수 있다.
증량제와 혼합한 조성물의 형태로 해두면 편리하게 사용할 수 있다. 증량제로서는 글루코오스, 락토오스, 말토오스, 수크로오스 등의 당류, 소르비톨 등의 알코올, 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 가공 전분, 소맥전분, 콘스타치 등의 전분류, 카제인, 대두 단백질 등의 단백질, 아라비아 고무, 알긴산 나트륨, 카제인 나트륨, 젤라틴, 펙틴, 분말 셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스 등의 고분자 안정제, 레시틴, 수크로오스 지방산 에스테르, 프로필렌글리콜 지방산 에스테르, 글리세린 지방산 에스테르 등의 유화제, 칼슘 분말 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 이상 단백질 제거용 조성물은 상기 고순도 대두 사포닌 B 그룹 외에 항산화작용을 갖는 화합물을 함유시킬 수 있다. 항산화작용을 나타내는 화합물은 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들면 각종 비타민류, 실리마린 등의 각종 폴리페놀류, 토코트리페놀, 보효소 Q10 및 그들을 함유하는 천연성분 등을 들 수 있다.
본 발명의 이상 단백질 제거용 조성물은 상기 고순도 대두 사포닌 B 그룹 외에 생체 콜라겐 합성 촉진제를 갖는 화합물을 함유시킬 수 있다. 생체 콜라겐 합성 촉진작용을 나타내는 화합물은 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들면 콜라겐 및 젤라틴의 분해물, N 말단에 글리신을 포함하는 트리펩티드를 함유하는 펩티드 혼합물 등을 들 수 있다.
콜라겐은 소, 돼지, 물고기 등의 동물의 피부, 뼈 및 힘줄 등의 결합 조직으로부터 추출한 것, 또는 콜라겐을 열변성한 젤라틴 등 모든 것이 사용 가능하다. 콜라겐 및/또는 젤라틴의 분해물로서 분자량이 400 이하인 것을 함유하는 폴리펩티드를 사용하는 것이 바람직하다. 보다 바람직하게는, 평균 분자량이 200~300 부근인 것을 고함유하는 폴리펩티드가 바람직하다. 분자량이 400 이하인 것, 보다 바람직하게는 평균 분자량이 200~300 부근인 것을 고함유하는 폴리펩티드는, 아미노산의 분자량이 100 전후인 것으로부터 트리펩티드를 고함유하는 폴리펩티드에 상당한다. 분자량이 400 이하인 콜라겐 및/또는 젤라틴의 분해물은 정제한 것이어도 되지만, 정제하지 않더라도 지장 없다. 예를 들면 다른 콜라겐 및/또는 젤라틴의 분해물 등의 혼합물이어도 된다.
이에 대해 콜라겐 및/또는 젤라틴의 분해물은 특정 유효성분으로서 분자량으로 약 400 이하의 펩티드를 포함함으로써, 그 가수분해처리에 의해 생체 내에서의 콜라겐 합성 촉진활성을 향상시키는 것에 기여할 수 있다.
실리마린(Silymarin; CAS No. 65666-07-1)은 국화과 마리아 엉겅퀴(silybum marianum)(별명 레이디 엉겅퀴(Lady's thistle), 우유 엉겅퀴(milk thistle); CAS No. 84604-20-6)로부터 추출되는 플라보노리그난의 총칭으로, 확인되어 있는 주요 성분은 실리빈(Silybin; CAS No. 22888-70-6), 실리디아닌(Silydianin; CAS No. 29782-68-1), 실리크리스틴(Silychristin; CAS No. 33889-69-9), 이소실리빈(Isosilybin; CAS No. 72581-71-6) 등이 있다(천연약물사전, 오쿠다 다쿠오편). 실리마린은 예부터 유럽에서 간장질환의 예방 및 치료를 목적으로 사용되고 있다. 또한, 산화방지제로서 널리 알려져 있다. 피부에 대해 유용한 조성물로서 건선 및 아토피성 피부염 치료제제(특허문헌; 일본국 특허공개 제(평)5-286864호 공보), 플라보노리그난과 인지질과의 착체를 활성 성분으로서 포함하고, 홍반, 화상, 피부 또는 점막의 디스트로피상태, 피부염 등의 치료, 피부의 노화방지 및 방사선, 바람, 태양 등의 외부 환경으로부터의 자극 보호에 유용한 조성물(특허문헌; 일본국 특허 제2948818호), 표피 투과 배리어 강화제(특허문헌; 일본국 특허공개 제2000-169328) 피지 분비 억제제(특허문헌; 일본국 특허공개 제2000-169332) 등이 알려져 있다. 실리마린은 통상 마리아 엉겅퀴의 종실(種實)로부터 에탄올 추출하고, 스프레이 드라이에 의해 건조 분말로서 얻어지는 추출물 원료로서 시판되고 있다. 본 발명에 사용하는 실리마린은 시판되고 있는 실리마린을 그대로 사용할 수 있다. 또한, 마리아 엉겅퀴로부터 실리빈, 실리디아닌, 실리크리스틴, 이소실리빈 등의 실리마린의 구성성분을 단리, 정제한 화합물을 사용할 수 있다.
본 발명의 이상 단백질 제거용 조성물은 항노화용, 항자외선장애용으로서 사용할 수 있다. 또한, 이상 단백질 제거작용을 나타내는 화합물과 항산화작용을 갖는 화합물 또는 생체 콜라겐 합성 촉진작용을 갖는 화합물과 함께 함유하는 조성물은, 항노화작용을 가지고, 이상 단백질의 축적 방어 및 이상 단백질 제거기능을 갖는 항노화용 조성물을 제공할 수 있다.
이상 단백질 제거작용을 갖는 화합물은 화장료로서 사용할 수 있고, 그 화장료는 항노화용, 항거무칙칙함용, 항주름용, 보습용의 용도를 갖는다. 본 발명의 조성물은 경구 또는 용혈성이 없는 것은 주사제로서 투여하는 등, 비경구로 투여할 수 있다. 경구로 투여하는 경우, 건강식품, 미용식품과 같은 식품의 형태로 투여해도 된다.
본 발명의 조성물은 예를 들면 수용액, 유제(油劑), 유액(乳液), 현탁액 등의 액제, 겔, 크림 등의 반고형제, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제 등의 고형제의 형태로 적용 가능하다. 종래부터 공지의 방법으로 이들 형태로 조제하여 각종 제형으로 할 수 있다. 로션제, 유제, 크림제, 연고제, 경고제, 파프제, 에어졸제 등은 피부외용제로서 적합하다.
본 발명의 화장료에는 식물유와 같은 유지류, 고급지방산, 고급 알코올, 실리콘, 음이온 계면활성제, 양이온 계면활성제, 양성 계면활성제, 비이온계 계면활성제, 방부제, 당류, 금속이온 봉쇄제, 수용성 고분자와 같은 고분자, 증점제, 분체성분, 자외선흡수제, 자외선차단제, 히알루론산과 같은 보습제, 향료, pH 조정제 등을 함유시킬 수 있다. 비타민류, 피부부활제, 혈행촉진제, 상재균 조절제, 활성 산소 소거제, 항염증제, 항암제, 미백제, 살균제 등의 다른 약효성분, 생리활성성분을 함유시키는 것도 가능하다.
화장료로서는 화장수, 유액, 크림, 팩 등의 피부화장료, 메이크업 베이스 로션, 메이크업 크림, 유액상 또는 크림상 또는 연고형 파운데이션, 핸드크림, 레그크림, 바디로션 등의 신체용 화장료 등, 입욕제, 모발화장료로 할 수 있다. 통상, 화장료에 있어서 사용되는 제제화방법에 따라, 이들 제형으로서 제조할 수 있다. 립스틱, 아이 컬러, 칙 컬러 등의 메이크업 화장료로 할 수 있다.
본 발명의 이상 단백질 제거용 조성물은 고순도 대두 사포닌 B 그룹을 주요 유효성분으로서 함유할 뿐 아니라, 필요에 따라 약학적으로 허용되는 희석제 또는 담체 등의 첨가제를 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 필요에 따라 약학적으로 활성인 다른 약효성분을 함유할 수 있다.
현재, 축적된 이상 단백질이 알츠하이머병, 파킨슨병, 루이 소체병, 트리플렛 리피트병, 근위축성 측색 경화증, 백내장, 동맥경화, 당뇨병성 신증, 피부의 광노화, 거무칙칙함 또는 피부의 주름 등의 질환에 관여하는 것이 알려져 있다. 따라서, 본 발명의 이상 단백질 제거용 조성물을 섭취함으로써 상기 질환을 예방 또는 치료하는 것이 가능해질 것으로 생각된다(비특허문헌 The FASEB Journal, 9권, 1173~1182페이지, 1995년).
본 발명의 조성물은 노화방지 및 노화방지용 화장료 또는 건강식품, 안티에이징 화장료 또는 미용식품, 산화 예방 및 산화방지 화장료 또는 건강식품으로서 유용하다. 본 발명의 이상 단백질 제거용 조성물은 포유동물에 대해 우수한 작용을 나타내고, 안전성이 높다.
본 발명의 조성물은 자외선에 폭로되거나 또는 폭로된 생체 조직, 특히 피부에 대해 자외선에 의한 상해를 예방 또는 개선할 수 있는 자외선상해 예방 또는 개선용 조성물로서 유용하다. 자외선 폭로에 의해 발생한 활성 산소에 의해 생산된 세포 내의 변성 단백질(이상 단백질)을 효율적으로 분해하여, 자외선 폭로에 의한 세포상해를 억제한다.
기타, 용도나 제형에 따라 다음과 같은 것을 첨가할 수 있다.
유지류로서는 예를 들면 동백유, 달맞이꽃유, 마카데미아넛트유, 올리브유, 유체유, 옥수수유, 참기름, 호호바유, 배아유, 소맥배아유, 트리옥탄산 글리세린 등의 액체유지, 카카오버터, 야자유, 경화 야자유, 팜유, 팜핵유, 목랍, 목랍핵유, 경화유, 경화피마자유 등의 고체유지, 밀랍, 칸데릴라왁스(candelilla Wax), 면왁스, 쌀겨왁스, 라놀린, 초산 라놀린, 액상 라놀린, 사탕수수왁스 등의 왁스류를 들 수 있다.
탄화수소류로서는 예를 들면 유동파라핀, 스쿠알렌, 스쿠알란, 마이크로크리스탈린왁스 등을 들 수 있다.
고급지방산으로서 예를 들면 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 올레산, 리놀산, 리놀레산, 도코헥사엔산(DHA), 에이코펜타엔산(EPA) 등을 들 수 있다.
고급 알코올로서 예를 들면 라우릴 알코올, 스테아릴 알코올, 세틸 알코올, 세토스테아릴 알코올 등의 직쇄 알코올, 모노스테아릴 글리세린 에테르, 라놀린 알코올, 콜레스테롤, 피토스테롤, 옥틸도데칸올 등의 분지쇄 알코올 등을 들 수 있다.
실리콘으로서 예를 들면, 사슬상 폴리실록산의 디메틸 폴리실록산, 메틸페닐 폴리실록산 등, 환상(環狀) 폴리실록산의 데카메틸시클로펜타실록산 등을 들 수 있다.
음이온 계면활성제로서 예를 들면, 라우르산나트륨 등의 지방산염, 라우릴황산나트륨 등의 고급 알킬황산 에스테르염, POE 라우릴황산트리에탄올아민 등의 알킬에테르황산 에스테르염, N-아실사르코신산, 설포숙신산염, N-아실아민산염 등을 들 수 있다.
양이온 계면활성제로서 예를 들면, 염화스테아릴트리메틸암모늄 등의 알킬트리메틸암모늄염, 염화벤잘코늄, 염화벤제토늄 등을 들 수 있다.
양성 계면활성제로서 예를 들면, 알킬베타인, 아미드베타인 등의 베타인계 계면활성제 등을 들 수 있다.
비이온 계면활성제로서 예를 들면, 소르비탄 모노올레에이트 등의 소르비탄 지방산 에스테르류, 경화피마자유 유도체를 들 수 있다.
방부제로서 예를 들면, 메틸파라벤, 에틸파라벤 등을 들 수 있다.
금속 이온 봉쇄제로서 예를 들면 에틸렌디아민 사초산 이나트륨, 에데트산, 에데트산나트륨염 등의 에데트산염을 들 수 있다.
고분자로서 예를 들면 아라비아 고무, 트래거캔스 고무(tragacanth gum), 갈락탄(galactan), 구아검(guar Gum), 카라기난(carrageenan), 펙틴, 한천, 퀸스시드(quince seed), 덱스트란, 풀루란, 카르복시메틸 전분, 콜라겐, 카제인, 젤라틴, 메틸셀룰로오스, 메틸히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨(CMC), 알긴산나트륨, 카르복시비닐폴리머(CARBOPOL 등) 등의 비닐계 고분자 등을 들 수 있다.
증점제로서 예를 들면 카라기난, 트래거캔스 고무, 퀸스시드, 카제인, 덱스트린, 젤라틴, CMC, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시비닐폴리머, 구아검, 산탄검(xanthan gum), 벤토나이트 등을 들 수 있다.
분말 성분으로서는 예를 들면, 탈크, 카올린, 운모, 실리카, 제올라이트, 폴리에틸렌 분말, 폴리스티렌 분말, 셀룰로오스 분말, 무기 백색안료, 무기 적색계안료, 산화 티탄코티드 마이카(titanium oxide coated mica), 산화 티탄코티드 탈크, 착색 산화 티탄코티드 마이카 등의 펄안료, 적색 201호, 적색 202호 등의 유기 안료를 들 수 있다.
자외선 흡수제로서는 예를 들면, 파라아미노안식향산, 살리실산페닐, 파라메톡시계피산 이소프로필, 파라메톡시계피산 옥틸, 2,4-디히드록시벤조페논 등을 들 수 있다.
자외선 차단제로서 예를 들면, 산화티탄, 탈크, 카르민(carmine), 벤토나이트, 카올린, 산화아연 등을 들 수 있다.
보습제로서 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 디프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 1,2-펜탄디올, 글리세린, 디글리세린, 폴리글리세린, 크실리톨, 말티톨, 말토오스, 소르비톨, 포도당, 과당, 콘드로이친 황산나트륨, 히알루론산 나트륨, 유산 나트륨, 피롤리돈카르복실산, 시클로덱스트린 등을 들 수 있다.
약효성분으로서는 예를 들면, 비타민 A유, 레티놀 등의 비타민 A류, 리보플라빈 등의 비타민 B2류, 피리독신염산염 등의 B6류, L-아스코르브산, L-아스코르브산 인산 에스테르, L-아스코르브산 모노팔미트산 에스테르, L-아스코르브산 디팔미트산 에스테르, L-아스코르브산-2-글루코시드 등의 비타민 C류, 판토텐산 칼슘 등의 판토텐산류, 비타민 D2, 콜레칼시페롤(cholecalciferol) 등의 비타민 D류; α-토코페롤, 초산토코페롤, 니코틴산 DL-α-토코페롤 등의 비타민 E류 등의 비타민류를 들 수 있다.
플라센타(placenta) 추출물, 글루타티온, 범위귀 추출물 등의 미백제, 로얄젤리, 너도밤나무 추출물 등의 피부부활제, 캡사이신, 진게론, 칸타리스 팅크(cantharidis tincture), 이크타몰(ichthammol), 카페인, 탄닌산, γ-오리자놀(γ-oryzanol) 등의 혈행촉진제, 글리시리진산(glycyrrhizinic acid) 유도체, 글리시레틴산(glycyrrhetinic acid) 유도체, 아즐렌(azulene) 등의 소염제, 아르기닌, 세린, 류신, 트립토판 등의 아미노산류, 상재균 조절제의 말토오스 수크로오스 축합물, 염화리소자임 등을 들 수 있다.
또한, 카밀레 추출물, 파슬리 추출물, 너도밤나무 추출물, 와인효모 추출물, 그레이프프루트 추출물, 인동덩굴 추출물(Japanese honeysuckle extract), 쌀 추출물, 포도 추출물, 호프 추출물, 쌀겨 추출물, 비파 추출물(Japanese mandolin extract), 황벽 추출물(cork tree bark extract), 의이인 추출물(coix seed extract), 쓴풀 추출물(Swertia japonica extract), 멜리옷 추출물(melilot extract), 박달나무 추출물(birch extract), 감초 추출물, 작약 추출물, 비누풀 추출물, 수세미외 추출물, 고추 추출물, 레몬 추출물, 용담뿌리 추출물(gentian root extract), 차조기 추출물, 알로에 추출물, 로즈마리 추출물, 샐비어 추출물, 백리향 추출물, 차 추출물, 해조 추출물, 오이 추출물, 정향나무 추출물, 당근 추출물, 마로니에 추출물, 하마멜리스 추출물(hamamelis extract), 뽕나무 추출물 등의 각종 추출물을 들 수 있다.
이하, 실시예에 의해 본 발명을 더욱 상세하게 설명하는데, 본 발명은 이들 실시예 등에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
누드 마우스(hairless mouse)에 대두 사포닌을 70일간 경구 섭취시키고, UVA 및 UVB를 조사하여, 고순도 대두 사포닌 B 그룹의 유용성에 대해서 검토를 행하였다.
[고순도 대두 사포닌 B 그룹의 UV 조사 마우스의 피부로의 효과시험]
도입시 6주령의 누드 마우스(Hos: HR-1 ♂)를 사용하여 이하의 조건에서 시험을 행하였다.
1) 시험 대상물의 조제 및 투여
누드 마우스의 군 나누기는 투여 개시일에, 일반상태가 양호한 동물을 체중에 따라 군 사이에서의 차가 없도록 1군 5마리로 배분하였다. 또한, 각각의 개체는 1게이지/군으로 사육하는 것으로 하였다. 대두 사포닌 크루드(대두 사포닌 A 그룹: 14.9%, 대두 사포닌 B 그룹: 25.8%)는 증류수에 현탁해서 체중당 총사포닌량을 50 ㎎/㎏으로 하여((a) 크루드 원료로서 123 ㎎/㎏), 대두 사포닌 B 그룹(대두 사포닌 A 그룹: 9.5%, 대두 사포닌 B 그룹: 69.4%)은 증류수에 현탁해서 체중당 사포닌 B 그룹량을 50 ㎎/㎏으로 하여((b) 사포닌 B 원료로서 72 ㎎/㎏) 각각 1일 1회 10주간, 위관(stomach tube)를 사용한 강제 경구투여로 섭취시켰다. UV 조사를 실시한 날은 조사 2시간 후에 투여를 행하였다. 사육 조건을 표 1에 나타낸다.
Figure 112007035923777-PCT00001
2) 피부 수분량의 측정
수분량의 측정은 모이스쳐 체커를 사용하여 등의 꼬리부분으로부터 머리쪽으로 2 ㎝, 요추로부터 우측으로 0.5 ㎝ 부위를 3회 측정하여 평균을 구하였다. 측정일은 시험 개시일, 중간 관찰일 및 해부일로 하였다.
3) 피부 탄력성의 측정
피부 탄력 측정장치(비특허문헌 Cutometer SEM 575/Electronic Gmbh co.제)를 사용하여, 등의 꼬리부분으로부터 머리쪽으로 2 ㎝, 요추로부터 우측으로 0.5 ㎝ 부위를 3회 측정하여 평균을 구하였다. 측정일은 해부일로 하였다.
4) 산화 단백질의 측정
산화 단백질, 즉 카르보닐화 단백질은 산화장애에 의해 생성된 단백질의 카르보닐기에 특이적으로 결합하는 2,4-디니트로페닐히드라진(DNPH)을 사용해서 카르보닐화 단백질을 표지 후, DNPH에 특이적으로 결합하는 항DNPH 항체를 사용해서 검출하였다. 구체적인 방법은 이하와 같다. UV 조사부위의 피부 1 ㎠를 잘라내고, 0.1 M 트리스 버퍼(pH 7.5) 1 ㎖를 첨가하여 호모게나이즈하고, 10000 rpm×15분간 원심하여, 그 상청을 필터 여과 후 해석을 행하였다. 단백질의 디니트로페닐히드라진(DNPH)화는 공지의 방법(비특허문헌 Nakamura 외, Journal of Biochemistry, 119권, 768~774페이지, 1996년)으로 행하였다. DNPH화한 단백질을 SDS-PAGE에 의해 분리하고, 단백질 전사장치를 사용해서 폴리비닐리덴 디플루오라이드(PVDF)막에 전사하였다. 전사 후의 막은 2시간 이상, 5% 스킴 밀크를 포함하는 PBS(-) 용액 중에서 블로킹하고, 세정 후 항DNPH 항체와 2시간 반응시키며, 세정 후, 비오틴화 항토끼 이뮤노글로불린 G와 1시간 반응시켰다. 세정 후, 형광 검출 키트(ECL PLUS)를 사용해서 PVDF 막을 감광하고, 의료용 자동현상장치로 화상을 전사하였다. 화상 해석은 덴시토미터(densitometer)를 사용해서 행하였다.
5) UV 조사
UV 조사시에는 동물을 전용 PC 케이지로 옮기고, 1군씩 UVB 20 mj/㎠ 및 UVA 14 j/㎠를 조사하였다. 조사는 월, 수 및 금의 주 3일 사이클로 10주간 실시하였다.
6) 해부
각 군, 본 사육기간 종료 다음 날부터 18시간 절식 후, 넴부탈(Nembutal)(40 ㎎/㎏) 복강 내 투여에 의해 마취를 도입하고 해부를 실시하였다. 이 조사량, 기간으로 사람의 광노화와 동일한 피부의 주름이 형성되는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 J of Dermatological Science 27519-525(2001)).
7) 통계 처리
시험결과는 평균값±표준오차로 나타내고, 엑셀 통계 Student's-t test에 의해 유의차 검정을 행하였다.
1. 일반상태 관찰
제4주째 경부터 UV 조사 동물에 있어서 두부(頭部) 피부의 가벼운 정도의 갈변화나 경부(頸部)의 주름 깊이 및 후지배부(後肢背部)의 주름이 UV 비조사 동물과 비교하여 두드러지게 되었다.
해부시의 외관 관찰에서는, UV 조사 동물에서 얼굴, 경부 및 후지배부의 주름이 명료하게 확인되었지만, UV 조사·BR>에 있어서도 대두 사포닌 크루드 및 대두 사포닌 B 그룹 섭취 동물은 그 증상은 가벼운 정도이고, 특히 대두 사포닌 B 그룹 섭취 동물의 주름의 심도가 얕아, 육안적으로는 주름의 색이 엷게 관찰되었다. 또한, 대두 사포닌 B 그룹 섭취 동물은 대조군과 비교하여 피부에 촉촉한 느낌이 있고, 특히 UV + 대두 사포닌 B 그룹 섭취 동물에서 그 증상은 현저히 느낄 수 있었다.
2. 체중 추이
체중 추이는 각 군에 커다란 차이는 인정되지 않았다.
3. 섭취량
섭취량에 대해서도 체중 추이와 마찬가지로 커다란 차이는 인정되지 않았다.
4. 간장 중량
간장 중량에 대해서도 커다란 차이는 인정되지 않고 이상한 증상은 관찰되지 않았다. 또한, 다른 장기에 대해서도 이상은 인정되지 않았다.
5. 피부 수분량
피부 수분량은 그 수치가 높을수록 피부 중의 수분이 높은 것, 즉 보습력이 높은 것을 추측할 수 있다. UV 조사에 의해 피부의 수분량이 저하되는 것이 일반적으로 알려져 있고, 본 시험에서도 중간 관찰일, 해부일의 수분량은 대조군과 비교하여 UV 조사군에서는 낮아져 있다. 피부 수분량의 측정에서는 중간 관찰일에서 UV 조사군과 비교하여 UV 조사 + 대두 사포닌 섭취 동물은 2군 모두 높은 값을 나타내었다. 해부일의 측정에 있어서는 UV 조사군과 비교하여 UV 조사 + 대두 사포닌 크루드군이 낮은 값을 나타내었지만, UV 조사 + 대두 사포닌 B 그룹군에서는 평균값에 있어서 높은 값을 나타내, 대조군과 동일 정도의 값이었다. 결과를 도 1에 나타낸다.
6. 피부 탄력성
피부 탄력성은 그 수치가 높을수록 피부의 탄력성이 높은 것을 추측할 수 있다. UV 조사에 의해 피부의 탄력성이 저하되는 것이 일반적으로 알려져 있다. 이 결과를 도 2에 나타낸다. UV 비조사군에 있어서, 대두 사포닌 B 그룹 투여군은 대두 사포닌 크루드군과 비교하여 탄력성이 유의하게 높았다.
7. 산화 단백질량
이 결과를 도 3에 나타낸다. 산화 단백질량은 카르보닐화 단백질량으로서 검출된다. 카르보닐화 단백질은 그 수치가 낮을수록 장기에 있어서의 축적량이 적은 것을 나타낸다. 도 3으로부터 명확한 바와 같이, 산화 단백질량은 UV 조사에 의해비조사에 비해 현저하게 증가되지만, UV 조사와 병행하여 대두 사포닌 B 그룹을 투여한 군에서는 유의하게 감소되어, 고순도 대두 사포닌 B 그룹의 산화 단백질 제거효과를 나타내었다.
특히, 대두 사포닌 크루드군에서는 UV 조사군과 동일 정도였던 것에 비해, 대두 사포닌 B 그룹에서는 명확하게 감소하고 있어, 대두 사포닌 B의 작용이 발휘되고 있는 것이 나타내어져 있다.
이상의 결과로부터, 고순도 대두 사포닌 B 그룹은 통상의 대두 사포닌 크루드나 대조군에 비해, 자외선 조사에 의한 피부 스트레스에 대해서는 수분량의 감소를 억제하고, 또한 버석거림이나 주름 등의 생성을 예방하는 효과를 나타내는 물질인 것이 확인되었다. 또한, 고순도 대두 사포닌 B 그룹은 산화 단백질량을 대두 사포닌 크루드나 대조군에 비해 현저히 감소시켜, 고순도 대두 사포닌 B 그룹의 산화 단백질 제거효과의 유효성을 나타내었다.
또한, 고순도 사포닌 B 그룹 투여에 의해 피부 탄력성이 높아지는 것이 명확해졌다. 고순도 대두 사포닌 B 그룹 50 ㎎/㎏의 마우스로의 투여는, 체표면적 환산식 y=(3√x)2을 이용해서 사람으로의 투여량으로 환산하면 약 450 ㎎/일/60 ㎏ 체중에 상당하여, 식품으로서 무리 없이 섭취하는 것이 가능한 양이다.
실시예 2
[고순도 대두 사포닌 B 그룹의 파라쿼트 스트레스 부하 랫트로의 효과시험]
도입시 6주령의 랫트(Wistar/Cri ♂)를 사용해서 이하의 조건으로 시험을 행하였다.
1) 시험 대상물의 조제 및 투여
Wistar계 랫트의 군 나누기는 투여 개시일에 일반상태가 양호한 동물을 체중에 따라 군 사이에서의 차가 없도록 1군 5마리로 배분하였다. 또한, 각각의 개체는 단독 사육으로 하였다. 대두 사포닌 크루드(대두 사포닌 A 그룹: 14.9%, 대두 사포닌 B 그룹: 25.8%)는 혼합사료를 공급하는 것으로 하여, 오리엔탈 효모사제 MF 사료에 섞어, 체중당 총사포닌 섭취량이 15 ㎎/㎏이 되도록 사료를 공급하였다. 대두 사포닌 B 그룹(대두 사포닌 A 그룹: 9.5%, 대두 사포닌 B 그룹: 69.4%)에 대해서도 혼합사료를 공급하는 것으로 하여, 오리엔탈 효모사제 MF 사료에 섞어, 체중당 대두 사포닌 B 그룹 섭취량이 15 ㎎/㎏이 되도록 사료를 공급하였다. 파라쿼트는 파라쿼트 1000 ㎎을 500 ㎖의 생리식염수에 용해한 주사용액을, 체중당 10 ㎎/㎏의 Dose로 주 1회, 2개월간 복강 내에 주사투여를 행하였다. 사육 조건을 표 2에 나타낸다.
Figure 112007035923777-PCT00002
2) 해부
각 군, 본 사육기간 종료 다음 날부터 18시간 절식 후, 넴부탈(40 ㎎/㎏) 복강 내 투여에 의해 마취를 도입하고 해부를 실시하였다.
3) 통계 처리
시험 결과를 도 4~6에 나타낸다.
1. 일반상태 관찰
파라쿼트는 급성 중독도 일으키는 강력한 농약이기 때문에, 투여 직후에는 동물 개체의 체온 저하나 원기 활력의 저하 및 연변화(軟便化)가 관찰된다. 그러나, 파라쿼트 + 대두 사포닌 투여군에서는 그 증상은 가벼워, 투여 후 2일째에는 대조군 레벨로 상태가 회복되어 있었다. 그 중에서도 파라쿼트 + 대두 사포닌 B 그룹 섭취 동물의 증상은 가벼운 정도이고, 투여 기간의 후반에서도 동일하였다.
2. 체중 추이
체중 추이는 각 군에 커다란 차이는 인정되지 않았다.
3. 섭취량
섭취량에 대해서도 체중 추이와 마찬가지로 커다란 차이는 인정되지 않았다.
4. 산화 단백질량의 측정(피부/적혈구/간장)
섭취한 각 샘플(피부 1 ㎠/혈액 100 ㎕/간장 100 ㎎)에 0.1 M 트리스 버퍼(pH 7.5) 1 ㎖를 첨가하여 호모게나이즈하고, 10000 rpm×15분간 원심하여, 그 상청을 필터 여과 후 해석을 행하였다. 단백질의 디니트로페닐히드라진(DNPH)화는 공지의 방법(비특허문헌 Nakamura 외, Journal of Biochemistry, 119권, 768~774페이지, 1996년)으로 행하였다. DNPH화한 단백질을 SDS-PAGE에 의해 분리하고, 단백질 전사장치를 사용하여 폴리비닐리덴 디플루오라이드(PVDF)막에 전사하였다. 전사 후의 막은 2시간 이상, 5% 스킴 밀크를 포함하는 PBS(-) 용액 중에서 블로킹하고, 세정 후 항DNPH 항체와 2시간 반응시켜서 세정 후, 비오틴화 항토끼 이뮤노글로불린 G와 1시간 반응시켰다. 세정 후, 형광 검출 키트(ECL PLUS)를 사용하여 PVDF 막을 감광하고, 의료용 자동 현상장치로 화상을 전사하였다. 화상 해석은 덴시토미터를 사용해서 행하였다.
이 결과를 도 4~6에 나타낸다. 산화 단백질량은 카르보닐화 단백질량으로서 검출된다. 도 4~6에서 명확한 바와 같이, 산화 단백질량은 파라쿼트 투여에 의해 현저히 증가하지만, 파라쿼트 + 고순도 대두 사포닌 B 그룹 투여군에서 그 증가는 유의하게 억제되고, 그 효과는 대두 사포닌 크루드와 비교하여 우수하였다. 이 사실로부터 고순도 대두 사포닌 B 그룹의 산화 단백질 제거효과가 나타내어졌다.
이상의 결과로부터, 고순도 대두 사포닌 B는 일반적인 대두 사포닌 크루드나 대조군에 비해, 파라쿼트 투여에 의한 피부, 간장, 적혈구 중의 산화 단백질량을 현저히 감소시키고, 고순도 대두 사포닌 B의 산화 단백질 제거효과의 유효성을 나타내었다. 고순도 대두 사포닌 B 그룹 15 ㎎/㎏의 랫트로의 투여는 체표면적 환산식 y=(3√x)2을 이용해서 사람으로의 투여량으로 환산하면 약 134 ㎎/일/60 ㎏ 체중에 상당하여, 식품으로서 무리 없이 섭취하는 것이 가능한 양이다.
처방예 1
[캡슐제]
조성
대두 사포닌(대두 사포닌 B 50% 함유) … 50 ㎎
토코트리에탄올 … 30 ㎎
밀랍 … 10 ㎎
포도씨 오일 … 110 ㎎
상기 성분을 혼합하고, 젤라틴 및 글리세린을 혼합한 캡슐기제 중에 충전하여, 연(軟)캡슐을 얻었다.
처방예 2
[정제]
조성
대두 사포닌(대두 사포닌 B 50% 함유) … 25 ㎎
마리아 엉겅퀴(실리마린 65% 함유) … 20 ㎎
콜라겐 가수분해물 … 50 ㎎
셀룰로오스 … 40 ㎎
전분 … 20 ㎎
수크로오스 지방산 에스테르 … 2 ㎎
상기 성분을 혼합, 타정(打錠)하여 정제를 얻었다.
처방예 3
[쥬스]
Figure 112007035923777-PCT00003
처방예 4
[크림]
Figure 112007035923777-PCT00004
상기 성분(1)~(11)을 80℃로 가열 용해하여 유상(oil-phase)으로 한다. 성분(12)~(14)를 70℃로 가열 용해하여 수상(water-phase)으로 한다. 유상에 수상을 서서히 첨가하여 유화하고, 교반하면서 40℃까지 냉각하며, 추가로 30℃까지 교반 냉각하여 크림을 얻었다.

Claims (13)

  1. 대두 사포닌 B 그룹을 주요 성분으로 하는 것을 특징으로 하는 이상 단백질 제거용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 대두 사포닌 B 그룹은 대두 추출물 100 중량부 중, 대두 사포닌 B 그룹을 40~100 중량부 함유하는 대두 추출물인 것을 특징으로 하는 이상 단백질 제거용 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 대두 사포닌 B 그룹이 SoyasaponinI, II, III, IV, V 또는 그들의 아세틸체, 대두 사포닌 A 그룹이 Soyasaponin A1, A2, A3, A4, A5, A6, Ac, Ad 또는 그들의 아세틸체, 또는 그들의 혼합물인 이상 단백질 제거용 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 콜라겐, 젤라틴, 콜라겐 가수분해물, 젤라틴 가수분해물로부터 선택되는 어느 1종 이상 및/또는 실리마린을 포함하는 것을 특징으로 하는 이상 단백질 제거용 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 이상 단백질 제거용 조성물을 함유하는 자외선장애 예방·개선제용 조성물.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 제5항의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 항노화식품.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 제5항의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 거무칙칙함 억제 또는 주름 억제 또는 보습용 식품.
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 제5항의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 항노화 화장료.
  9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 제5항의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 거무칙칙함 억제 또는 주름 억제 또는 보습용 화장료.
  10. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 제5항의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 항노화 사료 또는 동물약.
  11. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 제5항의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 거무칙칙함 억제 또는 주름 억제 또 는 보습용 사료 또는 동물약.
  12. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 제5항의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 항노화 페트 동물용 화장료.
  13. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 이상 단백질 제거용 조성물 또는 제5항의 자외선장애 예방·개선제용 조성물을 함유하는 거무칙칙함 억제 또는 주름 억제 또는 보습용 페트 동물용 화장료.
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