KR20200124590A

KR20200124590A - 개다래 추출물을 포함하는 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 조성물

Info

Publication number: KR20200124590A
Application number: KR1020190147340A
Authority: KR
Inventors: 박수진; 호성현
Original assignee: 주식회사 지앤피바이오사이언스
Priority date: 2019-04-24
Filing date: 2019-11-18
Publication date: 2020-11-03

Abstract

본 발명은 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 개다래 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 자외선에 의한 피부장벽 손상에 의해 발생하는 피부 수분량 감소 및 이로 인한 피부 건조, 피부 탄력 감소, 피부 거칠기를 개선시킬 수 있으므로, 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 식품 조성물, 나아가 건강기능식품 또는 약학 조성물, 사료 조성물, 동물용 약학 조성물, 화장료 조성물로 활용될 수 있다.

Description

개다래 추출물을 포함하는 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 조성물 {Composition for alleviating skin damage or moisturizing skin comprising Actinidia polygama extract}

본 발명은 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 개다래 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 식품 조성물, 특히 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 건강기능식품, 자외선에 의한 피부 손상 치료용 사료 조성물, 자외선에 의한 피부 손상 치료용 경구용 약학 조성물, 자외선에 의한 피부 손상 치료용 동물용 경구용 약학 조성물, 또는 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습용 화장료 조성물에 관한 것이다. 또한 상기 조성물을 투여하는 자외선에 의한 피부 손상의 치료방법, 그리고 자외선에 의한 피부 손상 치료용 의약, 또는 동물용 의약 제조를 위한 개다래 추출물의 신규 용도에 관한 것이다.

피부는 신체를 둘러싼 가장 큰 조직으로 외부 자극과 세균 침입으로부터 신체를 방어하고 체온 조절, 감각기능 및 노폐물 배출 등을 통해 우리 몸을 보호하는 역할을 한다.

피부도 다른 신체 기관과 마찬가지로 노화가 진행되는데 피부의 노화는 나이를 먹음에 따라 인체기능의 저하와 호르몬 등의 생리적 기능이 변화되어 나타나는 내인성 노화와 자외선을 비롯한 여러 환경적 요인에 지속적으로 노출이 됐을 때 나타나는 외인성 노화로 나뉜다. 그중 자외선으로 인한 광노화는 가장 직접적인 외인성 노화의 원인이며, 피부 장벽 손상으로 인한 피부 수분량 감소 및 그에 따른 피부 건조, 피부 탄력 감소, 피부 거칠기, 색소 침착, 표피두께 증가 등 피부 손상에 의한 여러 가지 현상을 유발한다.

위와 같은 자외선으로 인한 광노화, 즉 자외선에 의한 피부 장벽 손상을 개선하기 위해서 일반적으로 이용되는 방법은 자외선 차단제, 보습제 등을 포함하는 화장품이나 연고 같은 피부 외용제의 도포를 통하여 수분 및 유분을 보충하는 방법이다. 그러나 이런 피부 외용제는 진피층까지 흡수되지 못하고 표피에만 작용하므로 피부 보습 효과가 일시적이라는 한계가 있었다.

따라서 피부 외용 제품이 가지는 한계를 극복하고, 전신적인 피부 장벽 손상 개선 효과를 달성하기 위해 이너 뷰티, 즉 미용 식품에 관한 연구가 증대되고 있다. 한국공개특허 제2006-0119384호에는 대두 추출물 분말과 홍삼 농축액 분말을 포함하는 경구용 피부 미용 개선용 조성물이 개시되어 있고, 한국공개특허 제 2009-0054723호에는 커큐민을 유효성분으로 포함하는 경구용 피부 미용 조성물이 개시되어 있으며, 피부 보습 개선용 미용 식품 조성물이 개시되어 있으며, 한국공개특허 제2016-0035219호에는 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 건강기능식품이 개시되어 있다.

개다래(Actinidia polygama)는 한국, 중국 동북부, 러시아 동북부, 일본이 원산지로서, 이와 유사한 종으로 다래나무(Actinidia) 속에 30종 이상의 식물이 보고되어 있고, 대표적인 것으로 다래(Actinidia arguta), 쥐다래(Actinidia kolomikta), 섬다래(Actinidia rupa) 등이 있으며, 일반적으로 키위로 알려진 참다래(Actinidia chinensis) 역시 다래 속에 속하는 식물이다. 그러나 다래 속에 속하는 모든 식물이 동일하거나 유사한 생리활성이나 기능성을 나타내는 것은 아니다.

한국공개특허 제2017-0056979호에는 생체 외 티로시나아제 활성 억제 효과 및 엘라스타아제 활성 억제 효과를 제시하면서 개다래(Actinidia polygama) 추출물 및 쥐다래(Actinidia kolomikta)을 유효성분으로 하는 피부 미백용 조성물 및 주름 개선용 조성물을 개시하고 있으나, 자외선에 의한 피부 장벽 손상이 개선될 수 있는지 개시하고 있지 않다.

또한, 한국공개특허 제2018-0041282호에는 생체 외 MMPs (matrix metalloproteinases) 발현 억제 효과를 제시하면서 미후도(Actinidia arguta), 복분자 및 행인 혼합 추출물을 유효성분으로 하는 피부노화 방지 또는 개선용 화장료 조성물을 개시하고 있으나, 개다래(Actinidia polygama)와는 식물 종에 차이가 있고, 미후도(Actinidia arguta) 단독에서는 MMPs 발현 억제 효과가 미미한 것으로 기재되어 있고, 자외선에 의한 피부 장벽 손상이 개선될 수 있는지 개시하고 있지 않다.

한국공개특허 제2006-0119384호 한국공개특허 제 2009-0054723호 한국공개특허 제2016-0035219호 한국공개특허 제2017-0056979호 한국공개특허 제2018-0041282호

Sand, M., et al., Journal of dermatological science, 2009. 53(3): p.169-175 El-Domyati, M., et al., Experimental dermatology, 2002. 11(5): p.398-405 Lee, J.Y., et al., Journal of dermatological science, 2008. 50(2): p.99-107

본 발명이 해결하고자 하는 과제는 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 사료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 치료 또는 예방용 동물용 약학 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 또 다른 과제는 인간, 또는 인간을 제외한 동물에게 상기 조성물을 투여하는 자외선에 의한 피부 손상의 치료방법을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 또 다른 과제는 자외선에 의한 피부 손상 치료용 의약, 또는 동물용 의약 제조를 위한 개다래(Actinidia polygama) 추출물의 신규 용도를 제공하는 것이다.

본 발명은 상기 과제를 달성하기 위하여, 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 자외선에 의한 피부 손상은 피부 건조, 피부 탄력 감소 또는 피부 거칠기일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물은 개다래 열매의 추출물일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 그들의 혼합 용매에 의한 추출물일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 식품 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 엑스제, 젤리 제형, 티백 제형 또는 음료 제형일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 식품 조성물은 자외선에 의한 피부 손상 개선용 건강기능식품일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 식품 조성물은 피부 보습용 건강기능식품일 수 있다.

또한 본 발명은 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 사료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 치료 또는 예방용 동물용 약학 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 인간, 또는 인간을 제외한 동물에게 상기 조성물을 투여하는 자외선에 의한 피부 손상의 치료방법을 제공한다.

또한 본 발명은 자외선에 의한 피부 손상 치료용 의약, 또는 동물용 의약 제조를 위한 개다래(Actinidia polygama) 추출물의 신규 용도를 제공한다.

본 발명의 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 자외선에 의한 피부장벽 손상에 의해 발생하는 피부 수분량 감소 및 이로 인한 피부 건조, 피부 탄력 감소, 피부 거칠기를 개선 시킬 수 있으므로, 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 식품 조성물, 나아가 건강기능식품, 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 사료 조성물, 피부 손상 치료용 약학 조성물, 피부 손상 치료용 동물용 약학 조성물, 또는 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 화장료 조성물로 활용될 수 있다.

도 1은 실험예 1에서 다래 종에 차이가 있는 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2의 농도별로 DPPH 라디칼 소거능을 비교한 그래프이다.
도 2는 실험예 1에서 다래 종에 차이가 있는 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2의 농도별로 ABTS 라디칼 소거능을 비교한 그래프이다.
도 3은 실험예 1에서 인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에 자외선을 처리한 후, 다래 종에서 차이가 있는 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2를 처리하여 MMP1 유전자 발현 정도를 정상대조군 및 유발대조군과 비교한 그래프이다.
도 4는 실험예 1에서 인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에 자외선을 처리한 후, 다래 종에서 차이가 있는 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2를 처리하여 MMP3 유전자 발현 정도를 정상대조군 및 유발대조군과 비교한 그래프이다.
도 5는 실험예 1에서 인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에 자외선을 처리한 후, 다래 종에서 차이가 있는 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2를 처리하여 Collagen type I alpha 1(COL1A1) 유전자 발현 정도를 정상대조군 및 유발대조군과 비교한 그래프이다.
도 6은 실험예 1에서 LPS로 염증반응이 유도된 마우스 유래 대식세포 RAW264.7에 다래 종에서 차이가 있는 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2를 처리하여 산화질소 분비 정도를 정상대조군 및 유발대조군과 비교한 그래프이다.
도 7은 실험예 1에서 랫드 유래 비만세포 RBL-2H3 세포에서 다래 종에서 차이가 있는 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2를 처리하여 인터류킨-4 분비 정도를 정상대조군 및 유발대조군과 비교한 그래프이다.
도 8은 실험예 2에서 인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에 자외선을 처리한 후, 개다래 식물 부위에서 차이가 있는 실시예 1, 2 및 3을 50 ㎍/mL 처리하여 세포 사멸 억제 효과를 정상대조군 및 유발대조군과 비교한 그래프이다.
도 9는 실험예 2에서 인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에 자외선을 처리한 후, 개다래 식물 부위에서 차이가 있는 실시예 1, 2 및 3을 100 ㎍/mL 처리하여 세포 사멸 억제 효과를 처리하여 세포 사멸 억제 효과를 정상대조군 및 유발대조군과 비교한 그래프이다.
도 10은 실험예 2에서 인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에 자외선을 처리한 후, 개다래 식물 부위에서 차이가 있는 실시예 1, 2 및 3을 처리하여 MMP1 유전자 발현 정도를 비교한 정상대조군 및 유발대조군과 그래프이다.
도 11은 실험예 2에서 랫드 유래 비만세포 RBL-2H3 세포에서 개다래 식물부위에서 차이가 있는 실시예 1, 2 및 3을 처리하여 인터류킨-4 분비 정도를 정상대조군 및 유발대조군과 비교한 그래프이다.
도 12는 실험예 3에서 자외선 처리로 피부손상 유발 개시 후 4주차에 폴리스코프(Folliscope)를 이용하여 정상대조군(Normal), 유발대조군(Saline), 실시예 1(APWE) 및 비교예 3(HU-018)의 근접하게 피부의 상태를 촬영한 사진이다.
도 13은 실험예 3에서 자외선 처리로 피부손상 유발 개시 후 6주차에 폴리스코프(Folliscope)를 이용하여 정상대조군(Normal), 유발대조군(Saline), 실시예 1(APWE) 및 비교예 3(HU-018)의 근접하게 피부의 상태를 촬영한 사진이다.
도 14는 실험예 3에서 자외선 처리로 피부손상 유발 개시 후 4주차에 프리모스라이트(PRIMOS^LITE)를 이용하여 정상대조군(Normal), 유발대조군(Saline), 실시예 1(APWE) 및 비교예 3(HU-018)의 3차원 이미지 및 피부 거칠기 이미지를 나타낸 것이다.
도 15는 실험예 3에서 자외선 처리로 피부손상 유발 개시 후 6주차에 프리모스라이트(PRIMOS^LITE)를 이용하여 정상대조군(Normal), 유발대조군(Saline), 실시예 1(APWE) 및 비교예 3(HU-018)의 3차원 이미지 및 피부 거칠기 이미지를 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 발명자들은 개다래(Actinidia polygama) 추출물이 다래(Actinidia arguta) 추출물 및 참다래(Actinidia chinensis) 추출물에 비해서 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습 효능이 우수함을 확인하였다. 상세하게는 개다래(Actinidia polygama) 추출물은 다래(Actinidia arguta) 추출물 및 참다래(Actinidia chinensis) 추출물에 비해서 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능이 현저히 우수하고, 인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에서 자외선에 의한 세포 사멸을 억제하는 효과가 우수하며, 자외선에 의한 HaCaT 세포의 MMP1 및 MMP3 유전자 발현을 현저히 감소시키며, COL1A1 유전자 발현은 현저히 증가시키고, 마우스 유래 대식세포 RAW264.7로부터 LPS 처리에 의한 산화질소 분비를 억제하는 효과가 현저히 우수하며, 랫드 유래 비만세포 RBL-2H3 세포에서 인터류킨-4의 분비를 억제하는 효과가 현저히 우수함을 확인하였다.

또한 본 발명의 발명자들은 자외선에 의해 피부 장벽 손상이 유발된 무모쥐(hairless mouse) 동물 모델에서 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 경구 투여하여, 피부 수분 함유량 및 수분 손실량, 피부 거칠기 정도, 피부 두께, 피부 탄력 등을 평가한 결과, 개다래 추출물의 경구 투여에 의한 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습 효능을 확인하였다.

본 발명은 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 조성물에 관한 것이다.

상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물은 다래(Actinidia arguta) 추출물, 쥐다래(Actinidia kolomikta) 추출물 및 참다래(Actinidia chinensis) 추출물 등 다른 다래(Actinidia)속 식물들에 비해, 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습 효능이 현저히 뛰어나다.

또한 상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물은 개다래(Actinidia polygama)의 잎, 줄기, 열매 또는 이를 포함하는 전초의 추출물일 수 있으나, 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습 효능은 개다래 열매 추출물에서 현저히 뛰어나다. 상세하게는 인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에서 자외선에 의한 세포 사멸을 억제하는 효과가 우수하며, 자외선에 의한 HaCaT 세포의 MMP1 유전자 발현을 현저히 감소시키며, 랫드 유래 비만세포 RBL-2H3 세포에서 인터류킨-4의 분비를 억제하는 효과가 개다래(Actinidia polygama) 잎, 줄기 및 열매 추출물 250 ㎍/mL에서 모두 나타났지만, 그중에서도 개다래(Actinidia polygama) 열매 추출물의 감소 효과가 가장 탁월한 것으로 나타났다.

또한 상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 그들의 혼합 용매에 의한 추출물일 수 있다.

상기 물은 식품 제조에 적합할 경우 특별히 한정할 필요는 없으나 예를 들어 지하수, 정제수, 증류수, 탈이온수 등이 이용될 수 있다.

상기 탄소수 1 내지 4의 알코올은 특별히 한정할 필요는 없으나 예들 들어 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올 또는 노말-부탄올 등이 이용될 수 있고, 바람직하게는 에탄올이다.

상기 혼합 용매는 특별히 한정할 필요는 없으나 예를 들어 물과 에탄올의 혼합 용매인 경우 5 내지 95 중량% 에탄올 수용액, 10 내지 90 중량% 에탄올 수용액, 20 내지 80 중량% 에탄올 수용액, 30 내지 70 중량% 에탄올 수용액이 이용될 수 있다.

상기 물 추출물의 제조는 특별히 한정할 필요는 없으나 개다래를 10 내지 100 ℃의 물로 2 내지 60시간 동안 추출하여 제조할 수 있다.

상기 알코올 추출물, 또는 물과 알코올의 혼합 용매의 추출물의 제조는 특별히 한정할 필요는 없으나 예를 들어 개다래를 30 내지 70 중량%의 에탄올 수용액으로 20 내지 70 ℃에서 2 내지 48 시간 추출하여 제조한다.

상기 개다래(Actinidia polygama)의 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 그들의 혼합 용매에 의한 추출물은, 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 그들의 혼합 용매에 의한 추출물을 유기용매로 재분획한 분획물을 포함한다. 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 헥산, 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름 및 디에틸에테르 등에서 선택되는 하나 이상의 유기용매일 수 있고, 바람직하게는 헥산 또는 에틸아세테이트일 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 '추출물'은 상기 용매를 이용하여 개다래(Actinidia polygama)에 포함된 성분을 추출한 추출물, 이들로부터 분획한 분획물, 이들 추출물 또는 분획물을 추가적으로 농축한 농축물, 이를 정제 또는 분리한 정제물도 포함하고, 상기 추출물, 분획물, 농축물 또는 정제물을 건조한 건조물 또는 그를 분쇄한 분말을 포함하는 의미로 사용된다.

상기 정제물의 제조를 위해 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시키거나, 또는 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 부가할 수 있다.

본 발명의 조성물은 유효성분으로 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 포함하여, 자외선에 의한 피부 장벽 손상으로 인한 피부 수분 손실량 증대, 피부 수분 함유량 감소, 피부 거칠기 증대, 피부 탄력 감소 등 여러 가지 피부 손상 중 하나 이상을 개선할 수 있다. 또, 본 발명의 식품 조성물은 유효성분으로 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 포함하여 피부 수분 손실량 증대 및 피부 수분 함유량 감소 중의 어느 하나 이상의 개선을 통해 피부 보습을 개선할 수 있다.

상기 피부 수분 손실량 증대는 테와미터(Tewameter)로 측정한 경피 수분 손실량(g/m²h)이 정상대조군에 비해 10%, 20%, 30%, 40%, 50% 또는 60% 이상 증대된 상태이고, 상기 피부 수분 손실량 증대가 개선되었다는 것은 자외선에 의해 피부 수분 손실량이 증대된 유발대조군에 비해 피부 수분 손실량이 10%, 20%, 30%, 40%, 50% 또는 60% 이상 감소되는 것 또는 정상대조군의 피부 수분 손실량의 90 내지 120%, 바람직하게는 95 내지 110%의 범위에 드는 것을 의미한다.

상기 피부 수분 함유량 감소는 코네오미터(Corneometer)로 측정한 피부 수분 함유량(A.U.)이 정상대조군에 비해 10%, 20%, 30%, 40%, 50% 또는 60% 이상 감소된 상태이고, 상기 피부 수분 함유량 감소가 개선되었다는 것은 자외선에 의해 피부 수분 함유량이 감소된 유발대조군에 비해 피부 수분 함유량이 10%, 15%, 20%, 25%, 30% 또는 35% 이상 증가되는 것 또는 정상대조군의 피부 수분 함유량의 80 내지 110%, 바람직하게는 90 내지 105%의 범위에 드는 것을 의미한다.

상기 피부 거칠기 증대는 피부 표면에 약간의 높이 차이가 있는 평행전송 프린지를 굴절시켜 피부 미세구조 및 높낮이를 통해 피부 거칠기를 정량적으로 측정하는 프리모스라이트(PRIMOS^LITE)를 이용하여 Ra(피부 거칠기 평균값), Rmax(피부 거칠기 최대값: 전체 측정값을 5구역으로 균등하고 나누고 각 구역의 높이 차이를 측정한 후 그중 가장 큰 값) 및 Rt(피부 거칠기 최대값: 전체 측정 값 중 피부 표면이 가장 높은 최고점과 가장 낮은 최저점의 차이) 중에서 하나 이상을 측정하였을 때 Ra, Rmax 및 Rt 중에서 어느 하나가 정상대조군에 비해 5%, 10%, 15%, 20%, 25% 또는 30% 이상 증대된 상태이고, 상기 피부 거칠기가 개선되었다는 것은 자외선에 의해 피부 거칠기가 증대된 유발대조군에 비해 피부 거칠기가 5%, 10%, 15%, 20%, 25% 또는 30% 이상 감소되는 것 또는 정상대조군의 피부 거칠기의 80 내지 110%, 바람직하게는 90 내지 105%의 범위에 드는 것을 의미한다.

상기 피부 탄력 감소는 큐토미터(Cutometer)로 측정한 피부 견고도(skin firmness, R7)가 정상대조군에 비해 10%, 15%, 20%, 25%, 30% 또는 35% 이상 감소된 상태이고, 상기 피부 탄력이 개선되었다는 것은 자외선에 의해 피부 탄력이 감소된 유발대조군에 비해 피부 탄력이 10%, 15%, 20%, 25%, 30% 또는 35% 이상 증가되는 것 또는 정상대조군의 피부 탄력의 80 내지 110%, 바람직하게는 90 내지 105%의 범위에 드는 것을 의미한다. 또는 피부 탄력 감소는 발리스토미터(Ballistometer)로 측정한 알파(alpha)값이 정상대조군에 비해 10%, 20%, 30%, 40%, 50% 또는 60% 이상 증가된 상태이고, 상기 피부 탄력이 개선되었다는 것은 자외선에 의해 피부 탄력이 감소된 유발대조군에 비해 피부 탄력이 10%, 15%, 20%, 25%, 30% 또는 35% 이상 증가되는 것 또는 정상대조군의 피부 탄력의 100 내지 200%, 바람직하게는 150 내지 200%의 범위에 드는 것을 의미한다.

본 발명은 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 식품 조성물에 관한 것이다.

상기 '식품 조성물'은 유효성분으로 개다래(Actinidia polygama) 추출물 이외에, 식품 제조에 통상적으로 사용되는 식품의 기준 및 규격('식품공전')에 기재된 식품으로 사용 가능한 식품 원료, 식품첨가물 공전에 기재된 식품첨가물을 포함한다.

특별히 한정할 필요는 없으나 예를 들어 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상기 탄수화물은 단당류, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 이당류, 예를 들어 말토스, 설탕, 유당 등; 올리고당 또는 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 물엿, 사이클로덱스트린 등; 당알코올, 예를 들어 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등을 사용할 수 있다. 상기 향미제는 천연 향미제[타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.

상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 식품 조성물을 제조하는 경우 개다래(Actinidia polygama) 추출물은 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습 효능을 나타내는 함량이면 특별히 한정할 필요는 없으나, 예를 들어 0.1 내지 99 중량%, 0.5 내지 95 중량%, 1 내지 90 중량%, 2 내지 80 중량%, 3 내지 70 중량%, 4 내지 60 중량%, 5 내지 50 중량%로 포함될 수 있다.

상기 식품 조성물에서 유효성분인 개다래(Actinidia polygama) 추출물은 섭취자의 상태, 체중, 질병의 유무나 정도 및 기간에 따라 다르지만, 통상의 기술자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예들 들어 1일 투여량을 기준으로 1 내지 5,000 mg, 바람직하게는 5 내지 2,000 mg, 더욱 바람직하게는 10 내지 1,000 mg, 더더욱 바람직하게는 20 내지 800 mg, 가장 바람직하게는 50 내지 500 mg일 수 있고, 투여 횟수는 특별히 한정할 필요는 없으나 1일 3회 내지 1주일에 1회의 범위 내에서 통상의 기술자가 조절할 수 있다. 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있다.

상기 식품 조성물은 특별히 한정할 필요는 없으나 예를 들어 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 엑스제, 젤리 제형, 티백 제형 또는 음료 제형일 수 있다.

또한 일반 식품에 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습 기능성을 부여하기 위하여 상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 첨가할 수 있으며, 첨가가 가능한 식품은, 특별히 한정할 필요는 없으나 예를 들어 식품위생법 제7조에 따른 식품의 기준 및 규격('식품공전')에 예시된 과자류, 빵 또는 떡류, 코코아가공품류 또는 초콜릿류, 식육 또는 알가공품, 어육가공품, 두부류 또는 묵류, 면류, 다류, 커피, 음료류, 특수용도식품, 장류, 조미식품, 드레싱류, 김치류, 젓갈류, 절임식품, 조림식품, 주류, 건포류, 기타 식품류 등에 첨가될 수 있다. 또한 축산물위생관리법 제4조에 따른 축산물의 가공기준 및 성분규격('축산물공전')에 예시된 유가공품, 식육가공품 및 포장육, 알가공품에 첨가될 수 있다.

한편 상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 하는 식품 조성물은 단독으로 "자외선에 의한 피부손상 피부 건강을 유지하는데 도움을 주는 건강기능식품"으로 이용될 수 있고, 또는 "피부 보습에 도움을 주는 건강기능식품"으로 이용될 수 있다.

상기 '건강기능식품'은 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 법적 기준에 따라 제조(가공을 포함)한 식품(건강기능식품에 관한 법률 제3조 제1호)을 말한다. 상기 '건강기능식품'은 국가마다 용어나 범위에 차이가 있을 수 있으나, 미국의 '식이 보충제(Dietary Supplement)', 유럽의 '식품 보충제(Food Supplemnet)', 일본의 '보건기능식품' 또는 '특정보건용식품(Food for Special Health Use, FoSHU)', 중국의 '보건식품' 등에 해당할 수 있다.

상기 식품 조성물 또는 건강기능식품은 식품첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, 식품첨가물로서의 적합여부는 다른 규정이 없는 한 '식품첨가물공전'의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 따른다.

또한 상기 건강기능식품에는 상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물과 함께 "자외선에 의한 피부손상 피부 건강을 유지하는데 도움을 주는 건강기능식품" 또는 "피부 보습에 도움을 주는 건강기능식품"에 사용되는 '기능성 원료'로 고시된 원료 또는 개별인정된 원료로서, 허니부쉬추출발효분말, 소나무껍질추출물 등 복합물, 홍삼ㅇ사상자ㅇ산수유 복합추출물, 핑거루트추출분말, 프로바이오틱스 HY7714, 곤약감자추출물(분말), 쌀겨추출물, 지초추출분말, AP 콜라겐 효소분해펩타이드, 민들레 등 추출복합물, Collactive 콜라겐펩타이드., 저분자콜라겐펩타이드, 옥수수배아 추출물, 콩ㅇ보리 발효복합물, 밀배유추출물, 석류농축액NAG(엔에이지, N-아세틸글루코사민, N-Acetylglucosamine), 스피루리나, 엽록소 포함 식물, 클로렐라, 포스파티딜세린, 히알루론산, 알로에 겔 등의 피부건강과 관련된 건강기능식품 소재를 복합하여 사용할 수 있다.

본 발명은 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 사료 조성물에 관한 것이다.

상기 '사료 조성물'은 유효성분으로 개다래(Actinidia polygama) 추출물 이외에, 식품의 기준 및 규격('식품공전')에 기재된 식품으로 사용가능한 식품 원료, 식품첨가물 공전에 기재된 식품첨가물을 사용할 수 있고, 식품으로 사용가능한 식품 원료 또는 식품첨가물이 아니더라도 '사료 등의 기준 및 규격' 별표 1의 단미사료의 범위에 해당하는 원료, 별표 2의 보조사료의 범위에 해당하는 원료를 사용할 수 있다.

상기 '사료 조성물'은 '사료 등의 기준 및 규격'에 따른 보조사료 중 추출제일 수 있고, 상기 보조사료를 포함하는 배합사료일 수 있다.

상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 사료 조성물을 제조하는 경우 개다래(Actinidia polygama) 추출물은 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습 효능을 나타내는 함량이면 특별히 한정할 필요는 없으나, 예를 들어 0.1 내지 99 중량%, 0.5 내지 95 중량%, 1 내지 90 중량%, 2 내지 80 중량%, 3 내지 70 중량%, 4 내지 60 중량%, 5 내지 50 중량%로 포함될 수 있다.

상기 사료 조성물에서 유효성분인 개다래(Actinidia polygama) 추출물은 섭취 동물의 상태, 체중, 질병의 유무나 정도 및 기간에 따라 다르지만, 통상의 기술자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예들 들어 1일 투여량을 기준으로 1 내지 5,000 mg, 바람직하게는 5 내지 2,000 mg, 더욱 바람직하게는 10 내지 1,000 mg, 더더욱 바람직하게는 20 내지 800 mg, 가장 바람직하게는 50 내지 500 mg일 수 있고, 투여 횟수는 특별히 한정할 필요는 없으나 1일 3회 내지 1주일에 1회의 범위 내에서 통상의 기술자가 조절할 수 있다. 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있다.

본 발명은 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 치료 또는 예방용 약학 조성물에 관한 것이다.

또한 본 발명은 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 치료 또는 예방용 동물용 약학 조성물에 관한 것이다.

상기 '약학 조성물', '의약', '동물용 약학 조성물' 또는 '동물용 의약'은 유효성분으로 개다래(Actinidia polygama) 추출물 이외에, 약학 조성물 등의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

상기 '담체'는 세포 또는 조직 내로의 화합물의 부가를 용이하게 하는 화합물이다. 상기 '희석제'는 대상 화합물의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐만 아니라, 화합물을 용해시키게 되는 물에서 희석되는 화합물이다.

상기 담체, 부형제 및 희석제로는 특별히 한정할 필요는 없으나 예를 들어, 유당, 포도당, 설탕, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다.

상기 약학 조성물, 의약, 동물용 약학 조성물 또는 동물용 의약의 사용량은 환자 또는 치료대상 동물의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 무엇보다도, 치료대상 개체의 상태, 치료 대상 질환의 특정한 카테고리 또는 종류, 투여 경로, 사용되는 치료제의 속성에 의존적일 것이다.

상기 약학 조성물, 의약, 동물용 약학 조성물 또는 동물용 의약은 체내에서 활성성분의 흡수도, 배설속도, 환자 또는 치료대상 동물의 연령 및 체중, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증정도 등에 따라 적절히 선택되나, 일반적으로 1일 0.1 내지 1,000mg/kg, 바람직하게는 1 내지 500mg/kg, 더욱 바람직하게는 5 내지 250mg/kg, 가장 바람직하게는 10 내지 100mg/kg으로 투여하는 것이 바람직하다. 이렇게 제형화 된 단위 투여형 제제는 필요에 따라 일정시간 간격으로 수회 투여할 수 있다.

상기 약학 조성물, 의약, 동물용 약학 조성물 또는 동물용 의약은 개별적으로 예방제 또는 치료제로서 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다.

상기 약학조성물, 의약, 동물용 약학 조성물 또는 동물용 의약은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 트로키제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 그리고 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등의 비경구 제형으로 제형화하여 사용될 수 있다.

제형화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.

경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 설탕 또는 유당, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌 글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명은 개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습용 화장료 조성물에 관한 것이다.

상기 화장료 조성물은 영양크림, 아이크림, 마사지크림, 클렌징 크림과 같은 크림류, 팩류, 영양로션과 같은 로션류, 에센스류, 유연화장수, 영양 화장수와 같은 화장수류, 파우더류, 파운데이션류 및 메이크업 베이스류 등이고, 본 발명의 목적을 달성하기 위하여 이러한 제형 중 어떠한 형태로도 제조되어 상용화될 수 있으며, 상기 예들에 한정되지 않는다. 또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물에는 통상의 화장료 제조 방법으로 제형화할 수 있다.

상기 화장료의 제형으로 특별히 한정할 필요는 없으나, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 마스크팩, 마스크시트, 각질제거제, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형을 가지는 것일 수 있다.

상기 화장료 조성물에서 개다래(Actinidia polygama) 추출물의 유효 함량은 특별히 제한되지 않으며, 조성물 전체 중량에 대하여 0.0001 내지 20 중량%로 포함되는 것일 수 있다. 상기 화장료 조성물은 개다래(Actinidia polygama) 추출물에 더하여 부형제, 담체 등 기타 첨가제를 포함할 수 있으며, 일반 피부 화장료에 배합되는 보통의 성분을 필요한 만큼 적용 배합하는 것이 가능하다.

상기 화장료 조성물은 경피 침투 강화제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용어, 경피 침투 강화제란 피부의 혈관세포 내로 원하는 성분이 높은 흡수율로 침투할 수 있게 해주는 조성물이다. 바람직하게는 레시틴 화장품에 사용되는 다른 인지질 성분, 리포좀 성분 등이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.

또한, 유상 성분으로서 주로 사용될 수 있는 오일로는 식물성 오일, 광물성 오일, 실리콘유 및 합성유 중에서 선택된 하나 이상을 사용할 수 있다. 보다 구체적으로, 미네랄오일, 사이크로메치콘, 스쿠알란, 옥틸도데실 미리스테이트, 올리브오일, 비티스 비니페라 씨드 오일, 마카다미아너트오일, 글리세릴옥타노에이트, 캐스터오일, 에칠헥실 이소노나노에이트, 디메치콘, 사이크로펜타실록산 및 선플라워씨드 오일 등을 사용할 수 있다.

또한, 유화 능력을 보강하기 위하여 계면활성제, 고급 알콜 등을 0.1 내지 5 중량% 첨가할 수 있다. 이러한 계면활성제로는 비이온 계면활성제, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 양성 계면활성제, 인지질 등과 같은 통상적인 계면활성제를 사용할 수 있으며, 구체적으로, 소르비탄세스퀴놀리에이트, 폴리솔베이트 60, 글리세릴 스테아레이트, 친유형 글리세릴스테아레이트, 소르비탄 올리에이트, 소르비탄 스테아레이트, 디이에이-세틸포스페이트, 소르비탄스테아레이트/ 슈크로스코코에이트, 글리세릴스테아레이트/폴리에틸렌글라이콜-100 스테아레이트, 세테아레스-6 올리베이트, 아라키딜알코올/ 베헤닐알코올/아라키딜 글루코사이드, 폴리프로필렌글라이콜-26-부테스-26/ 폴리에틸렌글라이콜-40 하이드로제네이티드 캐스터오일 등을 사용할 수 있다. 고급 알콜로는 탄소수가 12 내지 20인 알코올, 예컨대 세틸알코올, 스테아릴 알코올, 옥틸도데칸올, 이소스테아릴 알코올 등을 단독으로 또는 1종 이상 혼합하여 사용할 수 있다.

수상 성분은 수상의 점도 또는 경도를 조절하기 위하여 카보머, 잔탄검, 벤토나이트, 마그네슘알루미늄실리케이트, 셀룰로오스검, 덱스트린 팔미테이트 등과 같은 1종 이상의 점증제를 0.001 내지 5 중량% 더 첨가할 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에는 필요에 따라 고급 지방산, 비타민 등의 약효 성분과 자외선 차단제, 산화방지제(부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산, 토코페릴아세테이드, 부틸레이티드하이드록시톨루엔 등), 방부제(메칠파라벤, 부틸파라벤, 프로필파라벤, 페녹시에탄올, 이미다졸리디닐우레아, 클로르페네신 등), 착색제, pH 조절제(트리에탄올아민, 씨트릭애씨드, 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등), 보습제(글리세린, 솔비톨, 프로필렌 글라이콜, 부틸렌 글라이콜, 헥실렌 글라이콜, 디글리세린, 베타인, 글리세레스-26, 메칠글루세스-20 등), 윤활제 등의 성분을 더 첨가할 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 피부에 필수 영양소를 보조적으로 제공할 수 있는 물질을 추가로 포함하는데, 바람직하게는 천연향, 화장품향, 또는 한약재가 포함되지만 이들에 국한되지 않는 보조제를 함유할 수 있다.

상기 자외선에 의한 피부 손상의 치료방법은 인간, 또는 인간을 제외한 동물, 특히 포유동물에게 상기 조성물을 투여하는 것으로, 바람직하게는 자외선에 의한 피부 손상을 가진 치료대상 개체에게 상기 조성물을 경구 투여하는 것이다.

상기 자외선에 의한 피부손상을 가진 치료대상 개체 여부는, 전술한 피부 수분 손실량 증대, 피부 수분 함유량 감소, 피부 거칠기 증대, 피부탄력 감소된 경우 일 수 있다.

상기 치료를 위한 투여량, 투여 방법 및 투여 횟수는 상기 약학 조성물, 의약, 동물용 약학 조성물 또는 동물용 의약의 투여량, 투여 방법 및 투여 횟수를 참고할 수 있다.

이하, 바람직한 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이에 의하여 제한되지 않는다는 것은 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 자명할 것이다.

제조예: 추출물의 제조

건조된 개다래 열매, 건조된 다래 열매, 건조된 참다래 열매, 건조된 개다래 잎 및 건조된 개다래 줄기 각각 3.2 kg에 중량 대비 12 내지 14배수의 정제수를 투입하여 85±5℃에서 3 내지 5시간 추출하고 추출물을 1 ㎛ 필터로 여과한 다음, 진공농축기를 사용하여 65℃ 이하에서 고형분이 40 내지 50 중량%가 되도록 농축하였다. 농축된 추출물은 1 ㎛ 필터로 여과한 다음, 85±5℃에서 30 내지 60분간 살균을 거친 후 병에 포장하고 이를 냉장 보관하면서 실험에 사용하였다.

제조된 개다래(Actinidia polygama) 열매 추출물(실시예 1, APWE)는 갈색의 연조엑스로 고형분 함량은 45.9 중량%이었다. 또한 제조된 다래(Actinidia arguta) 열매 추출물(비교예 1), 참다래(Actinidia chinensis) 열매 추출물(비교예 2), 개다래(Actinidia polygama) 잎 추출물(실시예 2) 및 개다래(Actinidia polygama) 줄기 추출물(실시예 3)의 고형분 함량은 각각 42.5 중량%, 17 중량%, 4.15 중량% 및 1.62 중량%이었다.

실험예 1: 다래나무 ( Actinidia ) 속 이종 식물 비교

제조예의 개다래(Actinidia polygama) 열매 추출물(실시예 1, APWE)과 동속 이종 식물의 열매를 이용하여 동일하게 추출한 다래(Actinidia arguta) 열매 추출물(비교예 1) 및 참다래(Actinidia chinensis) 열매 추출물(비교예 2)의 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습 효과를 비교하기 위하여, DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능, 인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에서 자외선에 의한 MMP1 및 MMP3 유전자 발현 감소 및 COL1A1 유전자 발현 증대 효과, 마우스 유래 대식세포 RAW264.7로부터 LPS 처리에 의한 산화질소 분비 억제 효과 및 랫드 유래 비만세포 RBL-2H3 세포에서 인터류킨-4의 분비 억제 효과를 확인하였다.

1. DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능 측정

DPPH [2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl]는 자유라디칼 물질로 유기용매에 용해되어 520-540 nm에서 최대 흡광도를 가지는 보라색 화합물이다. 이러한 DPPH 화합물은 용해되어 보라색의 DPPH 라디칼(DPPHㅇ)로 존재하게 되며, 항산화제로부터 전자를 공여 받아 DPPH로 환원되어 탈색된다. 따라서 항산화 활성을 DPPH radical이 탈색되는 비율로 산출하여 비교할 수 있다. 실험은 에탄올에 용해된 0.36 mM의 DPPH 용액 50 μL 과 시험물질을 50 μL를 1:1로 혼합하여 암소에서 30분 동안 상온에서 반응시켜 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

다래 종에서 차이가 있는 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2를 농도별로 DPPH 라디칼 소거능을 측정된 흡광도를 이용하여 계산하여 도 1에 나타내었고, 이를 이용하여 Half-maximal inhibitory concentration (IC₅₀)를 산출한 후 표 1에 나타내었다.

ABTS [2,2-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)]는 증류수에 용해되어 연한 청록색을 띄며 potassium persulfate와 1:1 혼합 시 산화에 의해 진한 청록색으로 732 nm에서 최대 흡광도를 나타낸다. 실험은 7.4 mM 2,2-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)와 2.6 mM potassium persulfate각각 증류수에 용해하여 1:1로 혼합한 후 실온인 암소에서 24시간 동안 ABTS+을 형성시킨다. 24 시간이 지난 후 ABTS의 용액을 정제수로 희석하여 732 nm에서 흡광도가 0.7이 되도록 맞춘 뒤 ABTS 용액 190 μL에 시험물질 10 μL를 가하여 10분 동안 암소에서 반응시켜 732 nm에서 흡광도를 측정하였다.

다래 종에서 차이가 있는 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2를 농도별로 ABTS 라디칼 소거능을 측정된 흡광도를 이용하여 계산하여 도 2에 나타내었고, IC₅₀은 표 1에 나타내었다.

구분	DPPH 라디칼 IC₅₀	구분	ABTS 라디칼 IC₅₀
L-ascorbic acid	0.03±0.01	Trolox	0.10±0.01
실시예 1	2.33±0.06^***	실시예 1	1.31±0.03^***
비교예 1	16.41±2.10^**	비교예 1	13.40±1.54^**
비교예 2	11.98±2.00^**	비교예 2	21.20±2.16^**

** p<0.01; *** p<0.001 vs L-ascorbic acid, Trolox (단위, mg/mL)

DPPH 라디칼 소거능에서 개다래 열매 추출물(실시예 1)은 농도가 증가할수록 라디칼 소거능이 증가하는 경향을 나타냈으며, 1-4 mg/mL으로 처리했을 때, 39-64%으로 높은 활성을 나타냈다. 반면에 다래 열매 추출물(비교예 1)과, 참다래 열매 추출물(비교예 2)은 1-2 mg/mL으로 처리했을 때, 농도가 증가할수록 라디칼 소거능이 증가하는 경향을 확인할 수 없었으며, 4 mg/mL으로 처리했을 때, 각각 21%, 14%로 비교적 낮은 활성을 나타냈다. 또한 50%의 라디칼소거능을 나타내는 농도인 IC₅₀에서도 실시예 1, 비교예 1 및 2는 각각 2.33, 16.41, 11.98 mg/mL으로 실시예 1이 가장 낮은 값을 나타내어 가장 우수한 라디칼 소거능을 보여주었다.

또한 ABTS 라디칼소거능에서도 DPPH 라디칼소거능와 유사한 결과를 나타내었다. 실시예 1은 처리농도 125-4000 μg/mL에서 7.0-93.0%의 라디칼소거능을 나타내었으나, 비교예 1 및 2는 각각 2.1-13.8%, 0.5-8.5%으로 낮은 활성을 나타냈다. IC₅₀을 통해 확인한 ABTS 라디칼소거능은 실시예 1이 1.31 mg/mL으로 가장 낮은 수준으로 나타났으며, 비교예 1 및 2는 각각 13.40, 21.20 mg/mL으로 매우 높게 나타나 실시예 1의 ABTS 라디칼소거능이 가장 뛰어난 것으로 확인되었다.

2. 인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에서 자외선에 의한 피부손상 억제 효과 측정

실험세포는 피부 손상과 관련된 시험결과의 해석과 평가가 용이한 Human keratinocyte cell line인 HaCaT 세포를 ㈜성균바이오텍에서 분양받아 이용하였다. 배양환경은 온도 37℃, CO2 5%로 설정된 incubator에서 배양을 진행했다. 배지는 10 % fetal bovine serum (FBS), 1% L-glutamine, 1% HEPES, 100 units/mL penicillin 및 100 μg/mL streptomycin 첨가된 Dulbecco's Minimum Essential Medium (DMEM)을 사용하였고 75 cm² flask로하여 1 X 10⁷ cells/flask로 배양하였다. 배지는 3일에 한 번씩 신선한 배지로 교환하여 주었다.

자외선(UVB)은 30 mJ/cm²세기로 HaCaT 세포에 조사하였다. VL-215.LM (Vilber Lourmat, France)를 사용하여 UVB를 시료 처리 전 조사하여 HaCaT 세포의 손상을 유발시켰다. 자외선 조사 후 개다래 열매 추출물(실시예 1), 다래 열매 추출물(비교예 1) 및 참다래 열매 추출물(비교예 2)을 세포에 처리하였다. 이때 정상대조군은 배지만 교체하면서 UVB를 처리하지 않았고, 유발대조군은 배지를 교체하면서 UVB를 조사하였다.

유전자 발현량 분석을 위해 6 well cell culture plate에 HaCaT 세포를 1 X 10⁶ cells/well의 수로 분주한 뒤 배양시켰다. 각 well에 1 X PBS를 채워주고 30 mJ/cm²의 세기로 UVB를 조사하였다. UVB 조사 후 세포에 시험물질이 희석된 배지를 2 mL씩 넣어 준 후 37 ℃에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양 후 RNA를 수득하여 LaboPass cDNA synthesis Kit 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성한 cDNA를 이용하여 HaCaT 세포의 MMP1, MMP3 및 COL1A1의 유전자 발현량을 Real-time PCR을 이용하여 확인하여 그 결과를 분석하였다.

인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에 자외선을 처리한 후, 다래 종에서 차이가 있는 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2을 처리하여 MMP1 유전자 발현 정도를 정상대조군 및 유발대조군과 비교한 그래프를 도 3에, MMP3 유전자 발현 정도를 비교한 그래프를 도 4에, 그리고 COL1A1 유전자 발현 정도를 비교한 그래프를 도 5에 나타내었다.

도 3에서 MMP1 유전자 발현량은 다래 종별 추출물 중 개다래 열매 추출물(실시예 1)에서 유발대조군 대비 약 87%의 가장 많은 감소를 보였고 다음으로 다래 열매 추출물(비교예 1)에서 47% 감소, 참다래 열매 추출물(비교예 2)에서 37% 감소하였다.

도 4에서 MMP3 유전자 발현량은 다래 종별 추출물 중 개다래 열매 추출물(실시예 1)이 약 93%로 가장 많은 감소를 보였고, 다음으로 다래 열매 추출물(비교예 1)에서 58% 감소, 참다래 열매 추출물(비교예 3)에서 45% 감소하였다.

도 5에서 COL1A1 유전자 발현량은 다래 종별 추출물 중에서 개다래 열매 추출물(실시예 1)이 유발대조군 대비 396%의 가장 높은 발현 증가를 보였고, 다음으로 다래 열매 추출물(비교예 1)에서 177%의 증가, 참다래 열매 추출물(비교예 2)에서 128% 증가하였다.

인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에 자외선을 처리한 후, 다래 종에서 차이가 있는 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2을 처리하여 MMP1, MMP3 및 COL1A1 유전자 발현량을 분석한 결과 다래 종 중에서 개다래 열매 추출물이 가장 뛰어난 피부 보호 효과를 나타내는 것으로 확인되었다.

3. 마우스 유래 대식세포 RAW264.7로부터 LPS 처리에 의한 산화질소 분비 억제 효과 측정

마우스 유래 대식세포인 RAW264.7 세포는 American Type Culture Collection (ATCC, USA)에서 구입하여 배양하였다. 세포의 배양을 위하여 10% 열처리 비활성 fetal bovine serum (FBS), 1% L-glutamine, 1% HEPES, 100 units/mL penicillin 및 100 μg/mL streptomycin이 포함된 RPMI-1640 Medium (Sigma, USA) 배지에 5% CO₂, 37ㅀC 습윤한 환경에서 배양하였다. 세포의 증식에 따른 과밀도 현상을 해소하기 위하여 cell scraper를 이용하여 세포를 부유시킨 후 계대 배양하였으며, 계대 수는 6-9인 것을 실험에 사용하였다.

마우스 대식세포인 RAW264.7 세포를 이용하여 추출물 처리에 의한 항염증 효과를 평가하기 위해 24 -well plate에 3ㅧ10⁵ cells/well 세포수로 분주하여 18시간 동안 배양하였다. 배양배지를 제거한 후 serum free media에 희석한 추출물을 250 μg/mL 농도로 처리하였다. 이와 동시에 serum free media에 희석한 LPS를 최종농도 500 ng/mL로 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 배양액은 원심분리(5,000 rpm, 3분, 4℃)하여 부유세포를 제거하고 상등액을 이용하여 LPS에 의해 분비된 염증 매개물질인 산화질소(nitric oxide, NO)의 분비량을 측정하였다.

산화질소 분비량 측정은 96-well plate에 50 μL Griess's reagent와 50 μL의 상등액을 혼합하여 15 분 동안 상온에서 반응시킨 후 microplate reader를 이용해 540 nm에서 흡광도를 측정하여 정량하여 도 6에 나타내었다.

대식세포에 LPS를 처리하면 세균성 자극에 의해 Toll-유사 수용체(Toll-like receptor)가 활성화되면서 신호전달과정 중 NF-κB가 활성화되고 이로 인해 유도성 산화질소생성효소(iNOS)의 발현이 증가되면서 결과적으로 L-arginine으로부터 염증 매개체인 산화질소 생성이 증가 된다. 그 결과, 500 ng/mL LPS 처리에 의해 유도된 염증반응에 의해 유발대조군에서 산화질소 분비량이 36 μM로 측정되었으며, 실시예 1, 비교예1 및 2를 최종농도 250 μg/mL가 되도록 처리했을 때, 각각 38, 7 및 26%로 나타나 실시예 1의 산화질소 분비 억제 효과가 가장 높았다.

따라서 LPS로 염증반응이 유도된 RAW264.7를 이용하여 비교했을 때, 산화질소의 분비 억제 효과가 탁월한 개다래 열매 추출물이 다른 다래 종에 비해 현저히 우수한 염증 억제 효과를 나타내는 것으로 확인되었다.

4. 랫드 유래 비만세포 RBL-2H3 세포에서 인터류킨-4의 분비 억제 효과 측정

랫드 유래 비만세포(mast cell) RBL-2H3 (rat mast cell line) 세포는 American Type Culture Collection (ATCC, USA)에서 구입하여 배양하였다. 세포 배양을 위해 15％ 열처리 비활성화된 FBS, 100 units/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin을 첨가한 Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM, ATCC, USA)배지를 이용하여 5% CO₂, 37ㅀC 습윤한 환경에서 배양하였다. 세포의 증식에 따른 과밀도 현상을 해소하기 위하여 0.05% trypsin-EDTA solution을 처리하여 세포를 부유시킨 후 계대 배양하였으며, 계대 수는 4-5인 것을 실험에 사용하였다.

RBL-2H3 세포에서 시료 처리에 따른 세포 생존율 및 IL-4 분비량을 측정하기 위해 24-well plate에 2ㅧ10⁵ cells/well 세포수로 분주하여 24시간 동안 배양하였다. 배양배지를 제거한 후 serum free media에 희석한 시료를 농도별로 처리하였다. 이와 동시에 A23187 1 μM, PMA 50 nM으로 18시간 동안 처리하여 비만세포를 감작시켰다. 배양 후 배양액을 원심분리(5,000 rpm, 3분, 4℃)하여 분비된 인터류킨-4 (IL-4)을 ELISA Kit (KOMA BIOTECH Co., Korea)를 이용하여 정량하여 도 7에 나타내었다.

IL-4의 분비량이 유발대조군에서 10.5 pg/mL로 나타났으며, 시료 처리 농도가 증가함에 따라 분비량이 감소되는 것을 확인할 수 있었다. IL-4 분비 억제 효과는 250 μg/mL로 처리했을 때, 실시예 1, 비교예1 및 2에서 각각 72, 26, 47%로 나타났으며, 실시예 1의 IL-4의 분비 억제 효과가 높게 나타냈다.

따라서 랫드 유래 비만세포 RBL-2H3 세포에서 IL-4의 분비 억제 효과가 탁월하여 개다래 열매 추출물이 다른 다래 종에 비해 현저히 우수한 IL-4의 분비 억제 효과를 나타내는 것으로 확인되었다.

실험예 2: 개다래( Actinidia polygama ) 식물부위별 비교

제조예의 개다래(Actinidia polygama) 열매 추출물(실시예 1, APWE), 개다래 잎 추출물(실시예 2) 및 개다래 줄기 추출물(실시예 3)의 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습 효과를 비교하기 위하여, 인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에서 자외선에 의한 세포 사멸 억제, 및 MMP1 유전자 발현 감소 효과, 및 랫드 유래 비만세포 RBL-2H3 세포에서 인터류킨-4의 분비 억제 효과를 확인하였다.

1. 인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에서 자외선에 의한 피부손상 억제 효과 측정

인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포의 준비 및 UVB 유도, MMP1 유전자 발현량 분석은 실험예 1의 2.와 동일하게 하였다.

인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포 생존율 측정은 37 ℃에서 24 시간 동안 각각 50 ㎍/mL 및 100 ㎍/mL로 시료가 희석된 배양 배지에 배양하여 MTT assay를 실시하였다. 시료 처리 후 24 시간 뒤 시료가 희석된 배양 배지를 모두 제거하고 500 μg/mL의 농도로 배지에 희석된 MTT 용액을 100 μL씩 처리하여 37 ℃에서 4시간동안 배양하였다. 그 뒤 100 % DMSO를 처리하여 녹인 후 540 nm에서 흡광도를 측정하여 각각 도 8 및 도 9에 나타내었다.

도 8 및 도 9에 따르면 정상대조군 대비 유발대조군에서 UVB에 의한 세포독성이 약 15% 확인되었고 실시예 1, 2 및 3 모두 세포보호 효능을 나타내었다. 시료 중 유발대조군 대비 개다래 열매 추출물(실시예 1)과 개다래 잎 추출물(비교예 3)에서 비슷한 세포보호 효과를 나타내는 것을 확인하였다. 이는 실시예 1, 2 및 3의 개다래 열매, 잎 및 줄기 추출물이 UVB 조사에 대한 세포 보호 효과를 나타내는 것으로 판단되었다.

인간 각질형성세포주인 HaCaT 세포에 자외선을 처리한 후, 개다래(Actinidia polygama) 식물 부위에 차이가 있는 실시예 1, 2 및 3을 처리하여 MMP1 유전자 발현 정도를 정상대조군 및 유발대조군과 비교한 그래프를 도 10에 나타내었다.

도 10에서 MMP1 유전자 발현량은 개다래 부위별 추출물 중에서도 개다래 열매 추출물(실시예 1)에서 유발대조군 대비 약 90%의 가장 많은 감소를 보였고, 다음으로 개다래 잎 추출물(실시예 2)에서 72% 감소, 개다래 줄기 추출물(실시예 3) 50% 감소하였다. 개다래 부위별 추출물 중 개다래 열매 추출물이 가장 좋은 피부 보호 효과를 나타내는 것으로 확인되었다.

2. 랫드 유래 비만세포 RBL-2H3 세포에서 인터류킨-4의 분비 억제 효과 측정

랫드 유래 비만세포 RBL-2H3 세포의 준비 및 IL-4의 분비량 분석은 실험예 1의 4.와 동일하게 하였다.

도 11에서 IL-4의 분비량이 유발대조군에서 13.2 pg/mL로 나타났으며, 시료 처리 농도가 증가함에 따라 분비량이 감소되는 것을 확인할 수 있었다.

개다래 잎 추출물(실시예 2) 및 개다래 줄기 추출물(실시예 3)을 최종농도 125 μg/mL로 처리했을 때는 IL-4 분비억제 효과를 나타내지 않았으며, 개다래 열매 추출물(실시예 1)은 69%의 억제 효과를 나타내었다.

개다래 열매 추출물(실시예 1)을 최종농도 250 μg/mL로 처리했을 때는 IL-4 분비 억제효과가 78%로 매우 높게 나타났고, 개다래 잎 추출물(실시예 2) 및 개다래 줄기 추출물(실시예 3)은 상대적으로 낮은 각각 40% 및 17%의 억제 효과를 나타내었다.

따라서 개다래 부위 별 추출물 중 개다래 열매 추출물의 랫드 유래 비만세포에서 IL-4 분비 억제 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

실험예 3: 자외선 피부 손상 동물모델 시험

1. 실험동물 및 시료의 준비

양성대조군으로 자외선에 의한 피부손상 피부 건강을 유지하는데 도움을 주는 2등급 건강기능식품 소재로 인정받은 "허니부쉬발효추출분말"(HU-018, ㈜휴온스내츄럴)을 구입하여 사용하였다. 상기 허니부쉬발효추출분말은 갈색의 분말로 부형제를 제외한 허니부쉬발효추출분말 고형분 함량은 50 중량%이었다.

실험동물은 라온바이오 (yongin, Korea)에서 SKH -1 무모쥐(hairless mice) [6주령 , female] 를 공급받아 사용하였다. 실험 당일까지 고형사료 (항생제 무첨가 )와 물을 충분히 공급하고 온도 23 ± 2 ℃, 습도 55 ± 10%, 12 시간-12 시간(light-dark cycle)의 환경에서 1주간 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 모든 동물실험 과정은 NIH (National Institutes of Health)의 실험동물관리 규정 (Principle of Laboratory Animal Care)을 준수하고 중앙대학교 동물실험윤리위원회의 승인을 받아 수행하였다.

자외선 조사에 의한 피부 손상 유도는 임 등의 연구에서 사용된 방법을 변형하여 사용하였다[Im, A. R., et al., BMC complementary and alternative medicine, 2014. 14(1): p.424]. 마우스를 군당 8마리씩 총 4군으로 무작위로 배정하고 이들 중 3군에 대해서는 BIO-SPECTRA (Vilber Lourmat, France)를 사용하여 UVB를 주 3회씩 총 6주 동안 50 mJ/cm² (1 MED, minimal erythemal dose)부터 70 mJ/cm²까지 2주 간격으로 세기를 증가시키면서 조사하여 피부손상을 유발시켰다. 자외선 조사 개시와 동시에 개다래 열매 추출물(실시예 1, APWE)과 허니부쉬발효추출분말(비교예 3, HU-018)을 각각 유효성분을 기준으로 100mg/kg/day의 용량으로 1일 1회씩 6주간 존데를 이용하여 경구 투여하였다. 이때 유발대조군에는 생리식염수를 투여하였다.

구분	설명
정상대조군	자외선 조사 없음, 생리식염수 투여(Normal)
유발대조군	자외선 조사, 생리식염수 투여(UVB+Saline)
실시예 1	자외선 조사, 개다래 열매 추출물 투여(UVB+APWE, 100mg/kg/day)
비교예 3	자외선 조사, 허니부쉬발효추출분말 투여(UVB+HU-018, 100mg/kg/day)

2. 체중 측정

피부손상 유발개시 후 4주차와 6주차의 체중을 측정하였다. 그 결과 4주차에서 통계학적 유의성은 나타나지 않았으나, 정상대조군에 비하여 유발대조군, 실시예 1 및 비교예 3에서 모두 체중이 감소하는 경향이 나타났다. 이런 감소하는 경향은 비록 통계적으로 유의하진 않았으나 6주차에도 모든 자외선 조사군에서 체중이 감소하는 경향을 보였으며, 이는 자외선 조사에 따른 영향으로 판단되었다.

3. 경피 수분 손실량(TEWL) 측정

피부손상 유발개시 후 4, 6, 8주에 경피수분손실량 측정을 위해 수분손실량(g/m²h)을 테와미터(Tewameter, Courage Khazaka Electronic GmbH, Cologne, Germany)를 이용하여 측정하였다. 측정 장소는 실내 온도 22 내지 24℃, 습도 50 내지 60%가 유지되는 조건이어야 하며, 측정결과는 TEWL 수치 중 초기값을 제외한 TEWL 평균 중 편차가 가장 작은 값의 평균을 기록하였다.

유발대조군의 4주차 경피 수분 손실량이 15.6 g/m²h 였던 데 비하여 실시예 1은 13.1 g/m²h 로 유의한 감소효과를 보였다(p=0.021). 비교예 3의 경우 실시예 1보다 감소폭은 작으나 14.3 g/m²h로 역시 유발대조군 대비 유의적인 감소를 보였다(p=0.045). 또, 유발대조군의 6주차 경피 수분 손실량은 16.0 g/m²h로 4주차보다 약간 증가된 반면, 실시예 1 및 비교예 3은 각각 10.8 g/m²h과 13.3 g/m²h로 유발대조군 대비 유의한 감소를 보였으며(p=0.0002, p=0.007), 특히 실시예 1의 경피 수분 손실량 감소 효과는 비교예 3보다 2배 가까이 큰 것으로 확인되었다.

구분	경피수분손실량	(TEWL, g/m²h)
구분	4주	6주
정상대조군	12.8±2.55^*	9.9±1.45^***
유발대조군	15.6±0.82	16.0±2.16
실시예 1	13.1±2.60^*	10.8±1.99^***
비교예 3	14.3±1.45^*	13.3±0.92^**

* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001

4. 피부 수분 함유량 측정

피부 수분 함유량 또한 코네오미터(Corneometer, Courage Khazaka Electronic GmbH, Cologne, Germany)를 이용해 경피 수분 손실량과 동일한 방법으로 측정하였다.

피부 수분 함유량은, 4주차에서는 비록 통계적인 유의성은 나타나지 않았으나 유발대조군에 비하여 실시예 1 및 비교예 3 모두 피부 수분 함유량이 증가하는 경향을 보였으며, 6주차에서는 유발대조군의 피부 수분 함유량이 28.2 A.U.로 정상대조군(43.5 A.U.)보다 약 35% 감소한 데 반해, 비교예 3은 35.3 A.U., 실시예 1은 38 A.U.로 유의한 상승을 나타냈다(p=0.035, p=0.010).

구분	피부수분함유량	(A.U.)
구분	4주	6주
정상대조군	40.4±3.58^**	43.5±6.06^***
유발대조군	34.1±4.59	28.2±6.56
실시예 1	37.9±6.15	35.3±5.49^*
비교예 3	36.6±3.58	35.3±5.49^*

* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001

5. 피부 거칠기 측정

피부손상 유발개시 후 4, 6, 8주에 육안평가를 실시하였다. 시험동물의 마취 (Zoletil+Rompun: 0.008cc/10g(40mg/kg)+0.002cc/10g(5mg/kg)는 생리식염수에 10배 희석하였으며, 마취된 시험 동물은 폴리스코프(Folliscope)를 이용하여 근접하게 피부의 상태를 촬영하였다.

4주차에서 정상대조군에 비하여 모든 자외선 조사군에 피부 거칠기가 증대된 것을 확인하였으나, 실시예 1 및 비교예 3의 경우 유발대조군 대비하여 피부 거칠기가 개선되는 경향을 보였다. 또한, 6주차에서도 유발대조군 대비 뚜렷한 피부 거칠기 개선 효과가 실시예 1 및 비교예 3에서 확인되었다(도 12 및 도 13 참조).

프리모스라이트(PRIMOS^LITE)는 표면에 약간의 높이 차이가 있는 평행전송 프린지를 굴절시켜 정성 및 정량 분석이 가능한 기기로 피부 미세구조 및 거칠기에 대한 조사가 가능하다. 피부손상 유발 개시 후 4주차 및 6주차에 3D 시스템을 사용하여 3차원 이미지 및 피부 거칠기 이미지를 확인하여 도 14 및 도 15에 나타내었다. 또한 Ra(피부 거칠기 평균값), Rmax(피부 거칠기 최대값: 전체 측정값을 5구역으로 균등하고 나누고 각 구역의 높이 차이를 측정한 후 그중 가장 큰 값) 및 Rt(피부 거칠기 최대값: 전체 측정 값 중 피부 표면이 가장 높은 최고점과 가장 낮은 최저점의 차이)를 측정하여 각각 표 5, 표 6 및 표 7에 나타내었다.

자외선에 의한 피부손상 유발 개시 후 4주차의 Ra 값 측정 결과, 시험군 간 통계적으로 유의한 차이는 나타나지 않았다. 그러나 6주차 결과에서 유발대조군에 비하여 실시예 1의 Ra 값이 통계적으로 유의하게 감소된 것으로 관찰되었다(p=0.010)[표 5 참조]. 피부 거칠기의 또 다른 지표로서 4주차의 Rmax와 Rt 값을 관찰한 결과, 시험군 간 유의한 차이는 나타나지 않았다. 반면, 6주차의 Rmax와 Rt 값 측정 결과, Ra값과 마찬가지로 실시예 1만이 유발대조군 대비 통계적으로 유의한 Rmax와 Rt 값 감소효과를 보였다(p=0.016, p=0.009)[표 6 및 표 7 참조]. Ra, Rmax, Rt값 모두에서 비교예 3의 유의한 피부 거칠기 감소 효과는 나타나지 않았다.

구분	Ra
구분	4주	6주
정상대조군	22.69±1.42	21.84±1.21^*
유발대조군	23.42±3.34	24.96±3.01
실시예 1	24.45±2.49	21.54±1.21^*
비교예 3	23.69±2.93	23.77±2.27

* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001

구분	Rmax
구분	4주	6주
정상대조군	152.95±10.12	156.12±10.69^*
유발대조군	167.13±27.23	180.23±25.52
실시예 1	173.54±22.02	154.16±8.64^*
비교예 3	167.40±23.86	169.06±24.92

* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001

구분	Rt
구분	4주	6주
정상대조군	165.13±11.63	166.04±11.12^*
유발대조군	177.46±26.98	192.34±26.53
실시예 1	184.15±123.49	161.88±9.77^**
비교예 3	177.54±24.08	177.51±26.52

* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001

6. 피부 탄력 측정

피부탄력은 자외선에 의한 피부손상 유발 개시 후 4, 8주차에 2종의 탄력측정기 (Cutometer, Ballistometer)를 이용하여 측정하였다. Cutometer dual MPA 580 (Courage and Khazaka Electronic GmbH, Cologne, Germany)는 지속적인 음압으로 측정시간동안 probe속으로 피부가 빨려 들어간 뒤 음압이 제거되면 피부는 원래의 모습으로 돌아가는 원리를 이용하여 진피층의 탄력도를 측정한다. 측정값은 R(R0~R9), F(F1~F4), Q(Q0~Q3) 파라미터가 있다.

Ballistometer (Dia-Stron Ltd., Andover, UK)는 진동에너지를 가했을 때 파형이 유지되는 모양을 분석하여 피험체의 탄력특성, 회복력특성, Firmness, Softness, 부종 등을 측정할 수 있는 장비로 기존의 탄력측정기가 측정하기 어려운 좁은 부위, 굴곡이 있는 부위를 측정할 수 있는 피부 탄력/회복력 측정기이다.

Cutometer MPA 580을 이용하여 피부의 견고함을 나타내는 R7 값을 측정한 결과, 4주차에서는 모든 시험군간에 통계적으로 유의한 차이가 없었으나, 6주차에서는 유발대조군보다 실시예 1의 R7값이 약 43%의 증가하여 유의적인 차이를 나타냈다(p=0.041)[표 8 참조].

한편, Ballistometer를 이용하여 피부탄력에 대한 parameter 중 alpha 값을 측정한 결과, 자외선 조사 4주차에서는 정상대조군을 제외한 모든 시험군에서 통계적으로 유의한 alpha 값 차이가 없었다. 반면, 6주차에서는 유발대조군에 비하여 실시예 1과 비교예 3 모두 alpha 값을 통계적으로 유의하게 감소시키는 것으로 확인되었다(p=0.013, p=0.001)[표 9 참조].

구분	피부견고함	(Cutometer R7)
구분	4주	6주
정상대조군	0.095±0.058	0.101±0.011
유발대조군	0.105±0.020	0.075±0.039
실시예 1	0.110±0.021	0.107±0.011^*
비교예 3	0.089±0.050	0.097±0.009

* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001

구분	피부 탄력	(Ballistometer alpha)
구분	4주	6주
정상대조군	0.020±0.005^*	0.017±0.002^***
유발대조군	0.036±0.008	0.041±0.003
실시예 1	0.034±0.010	0.033±0.004^**
비교예 3	0.037±0.004	0.034±0.005^*

* p<0.05; ** p<0.01; *** p<0.001

7. 통계분석

실험 결과는 mean ± standard error mean (S.E.M)으로 나타내고, 유의성 검정은 One way analysis of variance (ANOVA)로 수행하며, 집단 간 사후검정은 Turkey's HDS법을 이용하였다. P 값이 0.05 이하를 통계학적으로 유의한 것으로 간주하였다.

아래에 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1: 산제의 제조

제조예의 개다래 열매 추출물 분말 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2: 정제의 제조

제조예의 개다래 열매 추출물 분말 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3: 캡슐제의 제조

제조예의 개다래 열매 추출물 분말 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4: 과립제의 제조

제조예의 개다래 열매 추출물 분말 1,000 mg

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 mg

비타민 B1 0.13 mg

비타민 B2 0.15 mg

비타민 B6 0.5 mg

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 mg

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 mg

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 mg

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 mg

산화아연 0.82 mg

탄산마그네슘 25.3 mg

제1인산칼륨 15 mg

제2인산칼슘 55 mg

구연산칼륨 90 mg

탄산칼슘 100 mg

염화마그네슘 24.8 mg

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 5: 음료 제형의 제조

제조예의 개다래 열매 추출물 분말 1,000 mg

구연산 1,000 mg

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 mL

통상의 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 기능성 음료 조성물 제조에 사용한다.

제제예 6: 사료 조성물의 제조

제조예의 개다래 열매 추출물 분말 0.1 kg, 옥수수 25.5 kg, 소맥 15.04 kg, 소맥분 8.15 kg, 미강 7.4 kg, 대두박 18 kg, 옥구르텐 1kg, 닭부산물 14 kg, 동물성유지 9 kg, 가공염 0.3 kg, 인산제삼칼슘 0.3 kg, 석회석 1 kg, 염화콜린 0.01 kg, 비타민 0.05 kg, 미네랄 0.05 kg 및 소화효소제 0.1 kg을 혼합하여 동물(개, 애완견) 사료 조성물을 제조하였다.

제제예 7: 영양 화장수의 제조

제조예의 개다래 열매 추출물 분말 0.05 중량%

와셀린 2.0 중량%

세스퀴올레인산소르비탄 0.8 중량%

폴리옥시에틸렌올레일에틸 1.2 중량%

파라옥시안식향산메칠 적량

프로필렌글리콜 5.0 중량%

에탄올 3.2 중량%

카르복시비닐폴리머 18.0 중량%

수산화칼륨 0.1 중량%

색소 적량

향 적량

통상의 영양 화장수 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하여 영양 화장수를 제조하였다.

제제예 8: 마스크 팩의 제조

제조예의 개다래 열매 추출물 분말 0.05 중량%

글리세린 5.0 중량%

프로필렌글리콜 4.0 중량%

폴리비닐알코올 15.0 중량%

에탄올 8.0 중량%

폴리옥시에틸렌올레일에칠 1.0 중량%

파라옥시안식향산메칠 0.2 중량%

색소 적량

향 적량

통상의 마스크 팩 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하여 마스크 팩을 제조하였다.

제제예 9: 에센스의 제조

제조예의 개다래 열매 추출물 분말 0.2 중량%

프로필렌글리콜 10.0 중량%

글리세린 10.0 중량%

히아루론산나트륨수용액(1%) 5.0 중량%

에탄올 5.0 중량%

폴리옥시에틸렌경화피마자유 1.0 중량%

파라옥시안식향산메칠 0.1 중량%

향 적량

정제수 잔량

통상의 에센스 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하여 에센스를 제조하였다.

Claims

개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 식품 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 자외선에 의한 피부 손상은 피부 건조, 피부 탄력 감소 또는 피부 거칠기인 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습용 식품 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물은 개다래 열매의 추출물인 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 식품 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개다래(Actinidia polygama) 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 그들의 혼합 용매에 의한 추출물인 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 식품 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 식품 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 엑스제, 젤리 제형, 티백 제형 또는 음료 제형인 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 식품 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 자외선에 의한 피부 손상 개선용 건강기능식품인 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 피부 보습용 건강기능식품인 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선용 또는 피부 보습용 사료 조성물.
개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 치료 또는 예방용 약학 조성물.
개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 치료 또는 예방용 동물용 약학 조성물.
개다래(Actinidia polygama) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 개선 또는 피부 보습용 화장료 조성물.