KR20060091288A - 혈액형 결정, 혈청 상호비교 및 항체 검출 테스트를 동시에수행하는 장치 및 방법 - Google Patents

혈액형 결정, 혈청 상호비교 및 항체 검출 테스트를 동시에수행하는 장치 및 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치에 관한 것이다. 액체 샘플을 투입하는 투입 지대와, 피분석물과 상호작용할 수 있는 적어도 두 개의 인디케이터 존의 적어도 하나의 그룹 및 상기 인디케이터 존을 통과한 후에 상기 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역을 포함하는 막을 포함하되, 상기 인디케이터 존은 상기 투입 지대와 상기 흡수 영역 사이에 위치하며, 상기 투입 지대로부터 각각의 인디케이터 존의 그룹을 통과한 흡수 영역까지의 흐름방향이 실질적으로 평행하며, 적어도 두 개의 서로 다른 유로가 존재하는 것을 특징으로 한다. 또한, 본 발명은 다수의 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법에 관한 것이다.
투입지대, 흡수 영역, 인디케이터 존, 항체 검출, 혈액형

Description

혈액형 결정, 혈청 상호비교 및 항체 검출 테스트를 동시에 수행하는 장치 및 방법{Device and method for simultaneous carrying out of blood group determination, serum cross-check and antibody detection test}
본 발명은 측면 대각선 흐름(lateral-diagonal-flow) 멀티파라미터 테스트 장치에 관한 것으로서, 특히, 혈액형 혈청 영역 상에서 액체 샘플 내의 다수의 피분석물(analyte)을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치에 관한 것으로, 보다 상세하기로는, 액체 샘플을 투입하는 투입 지대(5), 피분석물과 상호작용할 수 있는 적어도 두 개의 인디케이터 존(indicator zone)의 적어도 하나의 그룹 및 상기 인디케이터 존을 통과한 후에 상기 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역을 포함하는 막을 포함하되, 상기 인디케이터 존은 상기 투입 지대와 상기 흡수 영역 사이에 위치하며, 상기 투입 지대로부터 각각의 인디케이터 존의 그룹을 통과한 흡수 영역(3)(유로)까지의 흐름방향이 실질적으로 평행하며, 적어도 두 개의 서로 다른 유로가 존재하는 장치에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 결정하는 방법에 관한 것으로, 보다 상세하기로는, 본 발명에 따른 장치의 막의 투입 지대(charging zone) 상에 샘플을 도포하는 단계를 포함하며, 상기 샘플은 상기 액체 샘플이 상기 인디케이터 존을 통과하여 상기 흡수 영역 방향으로 흐르게 하고, 상기 액체 샘플 에서 상기 피분석물 또는 이의 유도체가 상기 인디케이터 존에서 복합체를 형성하도록 하기에 충분한 양으로 존재하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법에 관한 것이다.
예를 들어, 수혈시 특히 혈액형 불일치, 바이러스 및/또는 세균성 오염 등과 같은 합병증 위험을 예방하기 위하여, 주지하는 바와 같이, 수용자에게 혈액형 혈청적으로 적합하고 종래의 전이가능한 병인성이 없는 구성요소들을 제공하도록 기증자 및 환자 혈액에 대한 다양한 실험실 테스트가 수행된다. 일반적으로, 상기 각각의 혈청 테스트는 기증자 및 수취인에 대한 혈액형 결정, 특히 AB0, Rh 및 Kell 혈액형 체계의 혈액형 결정, 기증자 및 수취인에 대한 혈청 상호비교, 기증자 및 수취인에 대한 불규칙적인 항체에 관한 항체 검출 테스트, 및 불규칙적인 항체가 존재할 경우에 수취인의 항체 결정을 포함한다. 혈소판 및/또는 림프구에 대한 항체의 검출은 마찬가지로 수혈 및 이식과 관련하여 수행된다.
기증자에 대한 감염성 테스트는 주지하는 바와 같이, 항체, 특히, HIV-1, HIV-2에 대한 항체, HCV에 대한 항체, 매독균(treponema pallidum) (매독)에 대한 항체의 결정, 및 B형 간염 표면 항원(=HbsAg: 간염 표면 항원)의 결정을 포함한다.
혈액형 혈청 진단에서, 특히 수혈 또는 질병 용혈 신생아(morbus haemolyticus neonatorum; Mhn)와 관련하여 중요한 일반적인 파라미터가 테스트된다. 이때, 무엇보다도, 혈액형을 특징짓는 적혈구의 표면 상에서의 항원의 테스트가 중요하다. 또한, 마찬가지로 수혈 및/또는 이식에서 역할을 수행하는 혈소판, 과립 백혈구, 림프구에 대한 중요한 항원 체계가 존재한다. 어머니와 모체 사이의 혈소판 및 과립 백혈구 항체 이질성이 있는 경우, Mhn에 대해 비교가능한 병상이 신생아에게 나타난다. 또한, 규칙적인 혈액형 항체(동종응집소)의 검출 및 항체 또는 형질(plasma) 내에서의 불규칙적인 혈액형 항체의 검출이 중요하다.
동종응집소 또는 규칙적인 항체는 모든 사람에게서 출생 후 일찍 획득되며 ABO 체계의 각각의 혈액형에 해당한다. 상기 동종응집소 또는 규칙적인 항체는 개인 자신이 결여돼 있는 A 또는 B 혈액형 항원을 나타낸다. 즉, A형인 사람은 안티-B를 갖고, B형인 사람은 안티-A를 갖고, O형인 사람은 안티-A 및 안티-B를 가지며, AB형인 사람은 동종응집소를 갖지 않는다. 상기 규칙적인 항체는 또한, 적혈구를 NaCl 배지에서 직접 응집할 수 있기 때문에 완전한"(complete)" 것으로 알려져 있다.
불규칙적이거나 변이항체는 상기 동종응집소와는 달리 추후의 면역작용에 의하여, 특히, 수혈이나 임신에 의해 획득된다. 따라서, 대부분의 사람들은 불규칙적인 혈액형 항체를 갖고 있지 않다. 일반적으로, 수혈에 관련된 불규칙적인 항체는 열에 반응하며 주로 IgG 부류(class)에 속한다. 상기 불규칙적인 항체는 규칙적인 항체와는 달리, NaCl 환경에서 적혈구를 직접 응집할 수 없다.
주지하는 바와 같이, 혈액형 항원을 검출하기 위해서, 테스트할 사람 (기증자 또는 수취인)의 적혈구는 혈액형의 특정 항체를 포함하는 시약과 함께 마련된다. 일반적으로, 이 테스트는 액상으로 수행된다. 상기 액체 테스트에서는, 적혈구를 포함하는 샘플을, 소정의 혈액형 특징에 대항하는 항체를 포함하는 샘플과 혼 합함으로써 테스트 샘플이 제조된다. 그 후, 상기 테스트 배치는 소정의 시간동안 소정의 조건 하에서 배양되며, 상기 배양기간이 종료된 후에 직접 또는 원심분리단계 후에 시각적이거나 광학적 방법에 의해 최종적인 응집 또는 적혈구의 흡착이 검사된다. 혈액형 혈청 내의 우세한 종료점 측정은 여전히 혈구 응집 테스트이다. 결정할 혈액형 각각에 대해서, 각각의 배치가 흡액된다. 즉, 예를 들어, 9가지 가장 중요한 혈액형인 A, B, D, C, c, E, e, Cw 및 K를 결정에는 9개의 분리된 배치가 필요하며, 대조구(control)는 필요하지 않다.
혈청 상호비교를 위해서, 주지하는 바와 같이, 종래의 ABO 혈액형(A1, A2, B, O)을 포함하는 세포 시약이 통상의 방법으로 사용된다. 상기 세포 시약은 테스트할 사람의 혈청 또는 형질을 갖고 배양된다. 원심분리단계 후에, 시각적으로 또는 광학적 방법을 사용하여 적혈구의 응집 가부가 테스트된다. 4개의 전술한 테스트 세포를 포함하는 혈청 상호비교를 위해서, 일반적으로 4개의 샘플 흡액이 필요하다.
불규칙적인 항체를 검출하기 위해서, 주지하는 바와 같이, 일반적으로 패널(panel)이 두 개 또는 세 개의 혈액형 O-세포를 포함하여 사용된다. 상기 패널의 결합된 항원 프로필은 가장 중요한 항원, 특히, 혈액형 체계인 Rh, Kell, Duffy, Kidd, MNS, P, Lewis, Lutheran을 포함한다. 상기 세포 시약은 테스트할 사람의 혈청 또는 형질을 갖고 배양되며 원심분리단계 후에, 시각적으로 또는 광학적 방법을 사용하여 적혈구의 최종적인 응집이 검사된다. 한명의 환자 샘플을 테스트하기 위해서, 두 개 내지 세 개의 배치가 흡액되어야 한다.
일반적으로 양성의 항체 검출 테스트 후에 불규칙적인 항체의 결정을 위해, 16개까지의 혈액형 O-세포를 포함하는 패널이 사용된다. 상기 패널의 항원 프로필은 가장 중요한 항원, 특히, 혈액형 체계인 Rh, Kell, Duffy, Kidd, MNS, P, Lewis, Lutheran을 미리 정확히 정하여진 방법으로 커버(cover)한다. 상기 세포 시약은 테스트할 사람의 혈청 또는 형질을 갖고 함께 마련되고 배양되며, 시각적으로 또는 광학적 방법을 사용하여 적혈구의 최종적인 응집이 검사된다. 환자 샘플을 테스트하기 위해서, 16개까지의 샘플이 흡액되어야 한다.
대부분의 수혈에 관련된 불규칙적인 항체는 IgG-타입이라 불완전하므로, 항체 검출 및 결정을 위한 반응은, 혈구응집 말단점을 검출하기 위해서, 일반적으로 강화되어야 한다. 이러한 목적으로 가장 많이 통용되는 시약은 다중 클론 안티-휴먼글로불린(Humanglobulin) 시약으로, 상기 시약에는 때때로 안티 구성요소 항체가 부가된다(일반적으로, 안티-C3d 및/또는 안티-C3b).
혈소판 항체를 입증하는 사용가능한 방법은 소위, MAIPA(Monoclonal Antibody Immobilisation of Platelet Antigens; 혈소판 항원의 다중 클론 항체 고정)-테스트이다. 여기서, 테스트 혈소판은 테스트할 혈청과 함께 배양된다. 세척단계 후에, 단일 클론, 예를 들어, 소정의 혈소판-글리코단백질에 대해서 특징적인 쥐 항체로 배양이 이루어진다. 상기 혈소판은 세포용해되며, 상기 희석된 용해세포는 예를 들어, 마이크로 적정 패널(microtitration panel)의 염소 안티-쥐 항체로 코팅된 시약 용기로 부여된다. 상기 염소 안티-쥐 항체는 쥐 항체 및 그에 부착된 혈소판 글리코단백질-인체항체-복합체를 결합한다. 상기 인체항체는 효소결 합된 염소 안티-휴먼 IgG(enzyme-conjugated goat anti-human IgG)를 부여함으로써 테스트된다.
종래의 진단 테스트를 사용하여 단지 세포적이거나 형질적인 파라미터를 결정할 수 있다. 혈액형 구성요소를 결정하기 위하여, 근본적으로 사전에 세포가 형질(plasma)로부터 분리되어야 한다.
측면 흐름 테스트(lateral-flow-test)는 현재, 여러 번 적용하는 것을, 감염 마커(marker)를 결정하기 위하여 또는 약물 스크린을 위해 임신 테스트와 같은 신속 테스트에 적용된다. 통상의 측면 흐름 테스트 장치는, 테스트되는 샘플의 투입 지대가 제공되는 고정 지지물(rigid support); 결합요소, 예를 들어, 포획자 항체 또는 항원이 결합되고 결합반응이 검출되는 분리 막; 및 검사할 샘플이 상기 분리 막을 통과하여 선형으로 흐르도록 하는 흡수영역을 생성하는 흡입관(suction)을 포함한다.
종래의 측면 흐름 테스트의 테스트 막은 일반적으로 크로마토 그래피와 유사한 분리와 함께 기술된다. 샘플 내의 분석은, 일반적으로 차례차례 놓여지거나 중첩되어 있는 밴드(band) 내에서 인디케이터 존(indicator zone)으로서 존재하는 막에 고정된 결합요소에 특수하게 결합된다. 상기 결합복합체는 인디케이터 입자를 통해 볼 수 있게 만들어지며, 상기 인디케이터 입자는 일반적으로 결합분리 패드(pad)에서 탈수소화된 형태로 상기 장치에 이미 존재한다. 상기 결합분리 패드는 투입지대와 막 사이에 제공된다. 미리 코팅된 유색의 인디케이터 입자는 예를 들어, 원하는 피분석물에 대항한 항체에 의해 코팅된다.
상기 일반적인 측면 흐름 테스트 포맷은 소위 "샌드위치 분석"으로, 이 분석에서는 상기 인디케이터 존 및 상기 인디케이터 입자는 일반적으로 항체에 대해 테스트된 피분석물을 목적으로 하는 배위자(ligand)로 코팅된다. 이때, 상기 배위자(결합요소)는 상기 막에 고정된다. 검출기 시약, 일반적으로, 채색된 폴리스티롤 입자 또는 콜로이드 금속에 결합된 항체는 결합분리 패드 내에서 씻어낼 수 있게 침착된다. 상기 결합복합체는 인디케이터 입자로서 작용한다. 검사할 샘플을 도포한 후에, 상기 인디케이터 입자는 매우 신속하게 상기 결합분리 패드를 적심으로써, 상기 인디케이터 입자가 활성화된다. 상기 인디케이터 입자는 다공막을 따라서 액체 전면과 함께 이동한다. 상기 샘플에 존재하는 피분석물은 상기 인디케이터 입자에 결합된 항체에 의해 결합된다. 상기 샘플이 상기 인디케이터 존을 통과할 때, 상기 인디케이터 존 내의 피분석물/인디케이터 입자 복합체는 상기 인디케이터 존에서 결합된 항체와 상기 피분석물의 반응에 의해 고정되는데, 이는 볼 수 있는 신호를 유도한다.
동시에 두 개의 항체를 결합할 수 있는 단일의 항원 결정인자만을 포함하는 작은 피분석물에 대한 또다른 종래의 테스트 포맷은 소위 "경쟁 분석(competition assay)"이다. 상기 인디케이터 입자에 결합된 검출기 시약은 일반적으로, 상기 피분석물과 동일하거나 유사한 분자이다. 상기 인디케이터 입자는 상기 결합분리 패드 내에 침착된다. 상기 인디케이터 입자는 상기 다공막을 따라서 상기 액체전면과 함께 이동한다. 상기 샘플이 피분석물을 함유하고, 상기 인디케이터 입자(마찬가지로 효율적인 피분석물을 포함하는)가 상기 인디케이터 존을 통과할 때, 상기 샘플 내의 피분석물 분자의 일부 및 상기 인디케이터 입자의 일부가 결합된다. 상기 샘플 내의 피분석물이 많이 존재할수록, 상기 피분석물은 보다 효율적으로 상기 인디케이터 입자의 결합을 보상하며, 상기 신호는 더 약화된다.
주지하는 바와 같이, 상기 인디케이터 입자는 대개 콜로이드 금 또는 폴리스티롤로 이루어지며 당업자에게 잘 알려진 방법으로 제조되며 코팅된다. 상기 일반적인 측면 흐름 테스트 포맷에서, 상기 피분석물이 간접적으로 결정된다. 피분석물을 직접적으로 결정함으로써, 상기 피분석물은 이미 상기 인디케이터 입자(예를 들어, 적혈구)에 자연적으로 결합되는 것을 알 수 있다. 상기 피분석물을 간접적으로 결정하는 경우에, 테스트할 샘플은 일반적으로 비세포적으로 연결된, 예를 들어, 형질(plasma) 성분을 피분석 목적물로서 포함하며, 상기 테스트할 샘플 외에도 두 개의 시약 성분, 즉, 인디케이터 입자 및 결합요소가 필요하다. 상기 간접적 결정에서, 상기 복합체가 제2 반응에 의하여 상기 결합 요소로 상기 인디케이터 존에 고정되기 전에, 상기 피분석물은 우선 상기 결합분리 패드로부터 분해된 인디케이터 입자에 결합된다.
결정할 피분석물, 예를 들어, 혈액형 특정 항원을 연결하는 인디케이터 입자로서 적혈구를 포함하는 종래의 측면 흐름 테스트 사용시, 현재까지 상기 인디케이터 존 내에는 항체들이 결합요소로서 상응하는 혈액형 항원에 대한, 예를 들어, Rh 혈액형 체계에 대한 안티-A, 안티-B와 같은 단독 흐름 트랙에서 차례로 놓여지거나 중첩되어 있는 밴드에 배치된다. 이때, 종래의 측면 흐름 테스트는, 샘플 내에서 예를 들어, 항원에 결합된 세포에 대해 테스트되는 피분석물에 대항한 흐름 장벽으 로부터 적혈구가 항체에 결합되는 단점을 갖는다. 투입지대에 근접하게 위치한 결합요소의 밴드 내의 세포의 응집 또는 흡착은 또다른 피분석물, 특히, 검사할 샘플이 제약없이 볼 수 있게 분리되는 세포 또는 세포 단편에 결합된 피분석물은 따라서 명백히 또는 완전히 입증될 수 없다. 이로 인해, 예를 들어, 혈액형 AB Rh D 양성인 사람에게서 B 밴드 및 D 밴드는 약화되거나 제거되는데, 이는, 혈액형 A Rh 음성에서 볼 때 잘못된 해석을 유발할 수 있다. 따라서, 현재까지, 혈액형 혈청 진단에서 특별하게 측면 흐름 테스트는 더 이상 인디케이터 존에서 사용될 수 없었다. 다수의, 특히 세포적으로 결합되고 형질적인 혈액형 파라미터를 측정하기 위해서, 현재까지 단일 파라미터 테스트가 개별적으로 수행될 필요가 있다.
본 발명의 목적은, 특히, 차례로 놓여지거나 중첩되어 있는 종래의 측면 흐름 테스트의 인디케이터 존 또는 테스트 존(testing zone) 지대가 서로 다른 샘플 파라미터, 특히, 세포적이고 형질적인 파라미터를 동시에 측정하기 위해서 종래기술에서의 단점을 극복하는 데에 있다.
본 발명에 따르면, 상기 목적은 상기 액체 샘플을 투입하는 투입 지대(application zone), 상기 피분석물과 상호작용할 수 있는 적어도 두 개의 인디케이터 존의 적어도 하나의 그룹, 및 상기 인디케이터 존을 통과한 후에 상기 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역을 포함하는 막(membrane)을 포함하며, 상기 인디케이터 존은 상기 투입 지대와 상기 흡수 영역 사이에 위치하며, 상기 투입 지대로부터 각각의 인디케이터 존을 통과한 흡수 영역까지의 흐름방향이 실질적으로 평행하며, 적어도 두 개의 서로 다른 유로가 존재하는 액체 샘플 내의 하나 또는 그 이상의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치에 의해서 달성된다.
본 발명에 따른 장치의 인디케이터 존은 상기 막 위에 존재하며, 결정할 피분석물을 상기 샘플 내에서 포획하거나 결합하는 결합요소를 포함한다. 상기 인디케이터 존 내에서 피분석물과 결합요소 사이의 결합반응이 검출된다. 특히 바람직한 결합요소로서, 항체 또는 항체 단편, 렉틴(lectin), 항원 또는 항원 에피토프 및/또는 세포 또는 세포 단편이 상기 다공성 막에 배치된다. 상기 인디케이터 존은 바람직하게는, 테스트되는 하나의 피분석물에 대한 각각 하나의 결합요소를 포함한다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 인디케이터 존은, 유로당 샘플 액체가 하나 이상의 인디케이터 존을 관류하지 않도록 배치된다. 예를 들어, 상기 인디케이터 존은 상기 막 상에 지그재그 형으로 제공된다. 이때, 상기 인디케이터 존의 구조는 바람직하게는, 거의 근위(proximal)로부터 원위(distal)로 또는 반대로 경사져 연장된 열에서 형성된다. 바람직한 실시예에 따르면, 상기 인디케이터 존은 V자형, W자형, M자형, N자형 또는 전복된 V자형, W자형, M자형 또는 N자형으로 형성된다. 또다른 실시예에서, 상기 인디케이터 존은 선형 열에 단계적으로 평행하게 엇갈려 배치된다.
평행하게 엇갈려 배치된 인디케이터 존의 도입으로 인해, 인디케이터 입자로서 적혈구를 포함하는 멀티파라미터 테스트가 측면 구조에서 비로소 수행될 수 있다. 경사진 구조의 특히 바람직한 실시예는, 결과의 표시가 특히 실용적이고 쉽게 읽을 수 있게 본 발명에 따른 구조에 적용될 수 있는 장점을 갖는다. 이는 각각의 테스트되는 파라미터가 소정의 X위치 및 Y위치를 포함하고 본 발명에 따른 장치의 구조의 배열은 종좌표(흐름방향의 평면) 및 횡좌표(투입지대의 평면)를 포함하는 좌표계로서 간주할 수 있기 때문이다.
본 발명의 또 다른 실시예에 따르면, 이러한 하나 이상 열의 인디케이터 존은, 바람직하게는, 각각 근위에서 원위로 또는 반대로 경사져 연장되거나, 예를 들어, V자형, W자형, M자형 또는 N자형으로 흐름방향으로 차례대로 그리고/또는 측면으로 엇갈려 연장되며, 상기 서로 다른 열의 인디케이터 존은 서로 간격을 두고 배치되므로 유로 당 액체 샘플이 단독 인디케이터 존을 초과하여 관류하지 않거나, 서로 접촉하여 배치되므로 유로 당 액체 샘플이 하나 이상의 인디케이터 존으로 관류한다.
이러한 하나 이상 열, 예를 들어 두 개 열의 인디케이터 존은 상기 투입지대에 대한 서로 다른 간격을 가지며, 온전한 혈액샘플로부터 세포 및 형질 파라미터가 결정되어야 하는 경우에 특히 바람직하다. 실시예에서, 예를 들어, 모든 성분을 포함하는 혈액을 함유하는 테스트 배치에서, 형질에 포함된 피분석물, 예를 들어, 상기 장치를 사용하여 상기 투입지대로부터 상기 흡수영역까지 상기 인디케이터 존을 통과해 흐르는 각각의 항체는 상기 투입지대에 근접하게 배치된 열의 인디케이터 존이 상기 결합요소에 결합되도록 선택된다. 이와는 달리, 상기 세포적으로 결합된 피분석물, 예를 들어, 적혈구 항원을 검출하기 위한 결합요소는, 상기 결합요소가 상기 투입지대에 대해서 원위에 배치된 열의 인디케이터 존에서 상기 결합요소에 결합되도록 선택된다. 상기 바람직한 실시예에서, 바람직하게는, 상기 적혈구에 부가적으로 또다른 종류의 상기 인디케이터 입자를 사용하여, 바람직하게는, 콜로이드 금 또는 폴리스티롤 또는 고정 적혈구가 처리된다. 상기 인디케이터 입자는 특히, 적혈구적으로 연결되지 않은 피분석물, 예를 들어, 형질 내에서 자유로이 발생하는 항체를 인디케이터 존의 결합복합체에서 볼 수 있게 만드는 데에 사용된다. 예를 들어, 적혈구가 아닌 두 종류의 인디케이터 입자가 사용되면, 상기 두 개 열의 인디케이터 존은 서로 간격을 두지 않거나 단독 유로에 차례대로 배치될 수 있다. 여기서, 바람직하게는, 상기 구조에서, 상기 형질로부터 검출된 피분석물이 인디케이터 존 근위에서 검출되고 적혈구에 결합된 피분석물이 인디케이터 존 원위에서 검출된다. 전술한 각각의 열의 상기 결합요소가 인디케이터 입자로서 적혈구에 반응하거나 결합되는 하나 이상의 열을 갖는 인디케이터 존을 포함하는 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 인디케이터 존의 열은 서로 간격을 두거나 단독 유로 내에 배치되며, 차례대로 배치되지 않는다.
본 발명의 또다른, 특히 바람직한 실시예에서, 하나 이상 열의 인디케이터 존은, 바람직하게는, 근위에서 원위로 또는 반대로 경사져 연장된 열에, 또는 예를 들어, 대각선, V자형, W자형, M자형, N자형 또는 전복된 V자형, W자형, M자형 또는 N자형으로 연장된 열에, 또는 예를 들어, 평행하게 엇갈려 배치된 열에 중앙 투입지대에 대해서 양방향으로(예를 들어, 180° 각도에 대해서) 배치된다. 이러한 구조는, 온전한 혈액 샘플로부터 세포적이며 형질적인 파라미터가 검출되어야 하는 경우에 특히 바람직하다.
일 실시예에서, 예를 들어, 혈액을 샘플로서 사용하는 테스트 배치에서, 상기 결합요소는, 상기 형질에 함유된 피분석물, 예를 들어, 상기 투입지대로부터 상기 흡수영역으로 상기 인디케이터 존을 통과해 흐르는 각각의 항체가 상기 투입지대의 한 변에 제공된 인디케이터 존 열에서 상기 결합요소에 결합되도록 선택된다. 상기 세포적으로 결합된 피분석물을 검출하기 위한 결합요소는, 예를 들어, 적혈구 항원을 입증하기 위한 결합요소는, 상기 결합요소가 상기 투입지대의 원위에 배치된 열의 인디케이터 존에서 상기 결합요소에 결합되도록 선택된다. 상기 바람직한 실시예에서, 바람직하게는, 상기 적혈구에 부가적으로 또다른 종류의 상기 인디케이터 입자를 사용하여, 바람직하게는, 콜로이드 금 또는 폴리스티롤 또는 고정 적혈구가 처리된다. 상기 인디케이터 입자는 특히, 적혈구에 연결되지 않은 피분석물, 예를 들어, 형질 내에서 자유로이 발생하는 항체를 인디케이터 존의 결합복합체에서 볼 수 있게 만드는 데에 사용된다.
바람직한 실시예에서 하나의 투입지대는 서로 다른 다공성의 두 개의 다른 막을 포함단다. 상기 바람직한 실시예에서 바람직하게는, 상기 적혈구에 부가적으로 또다른 종류의 상기 인디케이터 입자를 사용하여, 바람직하게는, 콜로이드 금 또는 폴리스티롤 또는 고정 적혈구가 처리된다. 상기 인디케이터 입자는 특히, 적혈구적으로 연결되지 않은 피분석물, 예를 들어, 형질 내에서 자유로이 발생하는 항체를 인디케이터 존의 결합복합체에서 볼 수 있게 만드는 데에 사용된다.
특히 바람직한 실시예에서, 상기 하나의 투입지대는 하나의 막 또는 서로 다른 다공성의 두 개의 서로 다른 막을 포함한다. 또한, 막의 하나는 밀폐 요소 및 인디케이터 존 사이에 배치된 결합 패드를 포함한다. 상기 바람직한 실시예에서, 바람직하게는, 상기 적혈구에 부가적으로 또다른 종류의 상기 인디케이터 입자를 사용하여, 바람직하게는, 콜로이드 금 또는 폴리스티롤 또는 고정 적혈구가 처리된다. 상기 인디케이터 입자는 특히, 적혈구적으로 연결되지 않은 피분석물, 예를 들어, 형질 내에서 자유로이 발생하는 항체를 인디케이터 존의 결합복합체에서 볼 수 있게 만드는 데에 사용된다. 적혈구에 부가하여 사용된 상기 또다른 종류의 인디케이터 입자는 바람직하게는 결합 패드의 결합 형상으로 존재한다. 또한, 결합 패드는 적혈구의 흐름 속도가 감소하도록 제어한다. 이는 단독 공통 투입 지대를 포함하는 양방향 배치에서 최적화된 조건이 세포 특성의 검출을 위해 한 방향이 유지되며, 상기 최적화된 조건이 형질적 특성을 검출하기 위해 반대 방향으로 유지되도록 한다.
본 발명에 따른 장치에 의하여, 측면 흐름 테스트, 특히, 혈액형 혈청 진단을 위한 측면 흐름 테스트가 제공된다. 상기 테스트에서는 적혈구가 인디케이터 입자로서 사용될 수 있으며, 단독 테스트 배치 내에서 동시에 다수의 세포적, 특히, 적혈구 항원 또는 항원 에피토프(epitope), 형질 파라미터 및/또는 혈액세포 특성, 특히 온전한 혈액의 혈액세포 특성이 테스트되는 샘플에서 결정될 수 있다. 또한, 따라서, 가능한한 간단하게 제조되며 간단하며 특히, 적은 일련의 실험을 가지고 샘플준비없이 조작되며 비용적합한 테스트 시스템이 제공되며, 상기 테스트 시스템을 사용함으로써, 동시에 하나의 샘플 또는 검사할 다수의 샘플의 다양한 세포적 파라미터 및/또는 형질 파라미터, 특히, 혈액형 특징이 결정될 수 있다.
상기 장점은 본 발명에 따른 장치를 각각의 의학 진단 영역 상에 제공한다. 상기 장치에서, 동시에 서로 다른 세포적 파라미터 및 형질적 파라미터가 결정되어야 하며, 특히, 상기 영역 상에서 혈액형 및 감염성 혈청, 특히, 수혈 진단의 범위에서 각각의 진단을 위해서, 예를 들어, 혈액형 결정을 동시에 수행되어야 한다. 여기서, 특히 적혈구에 결합된 항원 또는 항원 에피토프가 결정되며, 혈청 상호비교, 특히, 규칙적인 항체(isoagglutinine, 동종 응집소) 및/또는 항체 검출 테스트가 결정되며, 특히 불규칙적인 항체가 결정되고, 혈액형 결정 및 수혈에 관한 감염성 혈청 마커, 예를 들어, HIV-1, HIV-2, HCV, 매독균에 대한 항체의 결정이 동시에 수행되며, B형 간염 표면 항원(=HbsAg) 및 혈액형 결정 및 적혈구로서 또다른 혈액세포에 대한 항체, 특히, 안티 혈소판 및 안티 림프구 항체의 검출이 동시에 수행된다.
이를 위해, 항응고 처리된 또는 천연 혈액이 사용될 수 있다. 그것이 필요하지 않은 경우, 상기 혈액에서 테스트에 앞서 비용 적합한 방식으로 적혈구 및 혈청 또는 형질 단편이 서로 분리되어야 한다. 상기 결정은 수동 포맷으로 수행될 수 있으며, 상기 포맷은 장치(전류 포함)를 사용하지 않고 완전하게 수행될 수 있다.
본 발명에 따른 장치의 바람직한 실시예에서 상기 인디케이터 존은, 바람직하게는, 상기 투입지대의 원위에 배치된 인디케이터 존의 열에서, 모든 생각할 수 있는 혈액형 체계의 결정할 혈액형 항원 및 동시에 상기 항원을 운반하는 세포들을 상기 샘플 내에서 포획하거나 결합하는 항체 또는 항체 단편 또는 렉틴(lectin)을 포함한다. 바람직한 결합요소로서, 항체 또는 항체 단편 또는 렉틴은 항체 또는 항체 에피토프, 특히, 혈액형 체계 ABO, Rh, 및 Kell, 예를 들어, 안티-A, 안티-B, 안티-D, 및 안티-K의 항원에 대항하여 상기 인디케이터 존 내에서 다공막에 배치되는데, 바람직하게는, 다른 인디케이터 존 열의 원위 열에 배치된다.
바람직하게는, 인디케이터 존, 바람직하게는, 모든 잔여 인디케이터 존 중의 원위의 인디케이터 존 내에는 대조구 결합요소(대조구 = ctl)가 배치된다. 상기 대조구 결합요소는 상기 샘플이 상기 인디케이터 존을 통과한 관류를 양성으로 표시한다. 상기 대조구 결합요소는 바람직하게는 다중 클론(polyclonal)의 항적혈구(anti-erythrocyte) 항체이다.
본 발명에 따른 장치의 바람직한 실시예에 따르면, 바람직하게는, 상기 투입지대 근위에 배치된 또다른 열의 인디케이터 존에는 상기 샘플에서 규칙적인 항체를 포획하거나 결합하는 항원 또는 항원 에피토프를 포함한다. 이를 위해, 바람직한 결합요소로서, A1, A2, B, O 혈액형 항원 또는 항원 에피토프, 예를 들어, 적혈구에 의해 정의된 혈액형(A1, A2, B, O)의 적혈구 막 또는 합성적으로 제조된 혈액형 물질이 상기 다공성 막에 배치된다. 바람직하게는, 상기 열의 인디케이터 존, 예를 들어, 모든 잔여 인디케이터 존의 원위의 인디케이터 존에는 대조구 결합요소(대조구 = ctl)가 배치된다. 상기 대조구 결합요소는 상기 샘플이 상기 인디케이터 존을 통과하여 흐를 때 양성으로 표시된다. 상기 대조구 결합요소는 바람직하게는 안티-IgG 항체이다.
본 발명에 따른 장치의 바람직한 실시예에 따르면, 바람직하게는, 상기 투입지대의 근위에 또다른 열의 인디케이터 존에는 상기 샘플에서 불규칙적인 항체 또는 이의 단편을 포획하거나 결합하는 항원 또는 항원 에피토프를 포함한다. 이를 위해, 바람직한 결합요소로서, 다양한 혈액형 O 적혈구 샘플(상기 샘플의 결합된 항체 프로필은 동일한 항원을 커버하며 상기 항원은 가장 중요한 수혈에 관련된 불규칙적 항체에 대한 것이다)의 세포막이 상기 다공성 막에 배치된다. 바람직하게는, 상기 열의 인디케이터 존, 예를 들어, 모든 잔여 인디케이터 존에 대해서 원위에 배치된 인디케이터 존에는 대조구 결합요소(대조구 = ctl)가 배치된다. 상기 대조구 결합요소는 상기 샘플이 상기 인디케이터 존을 통과하여 흐를 때 양성으로 표시된다. 상기 대조구 결합요소는 바람직하게는 안티-IgG 항체이다.
본 발명에 따른 장치의 또다른 바람직한 실시예에 따르면, 상기 투입지대의 원위에 배치된 열의 인디케이터 존은, 혈액형 체계의 결정할 혈액형 항원 및 동시에 상기 항원을 운반하는 세포들을 상기 샘플 내에서 포획하거나 결합하는 항체 또는 항체 단편 또는 렉틴(lectin)을 포함한다. 바람직한 결합요소로서, 항체 또는 항체 단편 또는 렉틴은 항체 또는 항체 에피토프, 특히, 혈액형 체계 ABO, 예를 들어, 안티-A, 안티-B, 안티-A, 및 안티-B의 항원에 대항하여 상기 인디케이터 존 내에서 다공막에 배치되는데, 바람직하게는, 인디케이터 존의 원위에 배치된 열에 배치된다.
바람직하게는, 인디케이터 존, 바람직하게는, 모든 잔여 인디케이터 존의 원위의 인디케이터 존 내에는 대조구 결합요소(대조구 = ctl)가 배치된다. 상기 대조구 결합요소는 상기 샘플이 상기 인디케이터 존을 통과한 관류를 양성으로 표시한다. 상기 대조구 결합요소는 바람직하게는 다중 클론의 항적혈구 항체이다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따른 장치는, 상기 투입지대 근위의 또다른 열의 인디케이터 존에 혈소판 및/또는 림프구 막 또는 막 성분을 안티 혈소판/림프구 항체를 검출하기 위한 결합요소로서 포함한다.
본 발명에 따른 장치의 또다른 바람직한 실시예에 따르면, 상기 인디케이터 존은, 바람직하게는 혈액형 체계의 결정할 혈액형 항원 및 동시에 상기 항원을 운반하는 세포들을 상기 샘플 내에서 포획하거나 결합하는 항체 또는 항체 단편 또는 렉틴(lectin)을 포함한다. 바람직한 결합요소로서, 항체 또는 항체 단편 또는 렉틴은 항체 또는 항체 에피토프, 특히, 혈액형 체계 ABO, 예를 들어, 안티-A, 안티-B, 안티-A, 및 안티-B의 항원에 대항하여 상기 인디케이터 존 내에서 다공막에 배치되는데, 바람직하게는, 투입지대의 원위의 인디케이터 존 열에 배치된다.
바람직하게는, 인디케이터 존, 바람직하게는, 모든 잔여 인디케이터 존 중의 인디케이터 존 근위에는 대조구 결합요소(대조구 = ctl)가 배치된다. 상기 대조구 결합요소는 상기 샘플이 상기 인디케이터 존을 통과한 관류를 양성으로 표시한다. 상기 대조구 결합요소는 바람직하게는 다중 클론의 항적혈구 항체이다.
본 발명에 따른 장치의 바람직한 실시예에 따르면, 상기 투입지대의 근위의 또다른 열의 인디케이터 존에는 감염성 인자를 검출하기 위한 결합요소, 특히, 합성적으로 제조된 펩타이드 또는 재결합된 DNA방법으로 재결합된 항원, 즉, 진단적으로 중요한 각각의 마커의 표면 단백질 순서를 포함하는(항체 검출) 항원, 또는 (표면)단백질에 대해 감염성 작용인자(항원 검출)가 대항하는 항체가 포함된다.
본 발명에 따른 장치에 의하여, 샘플로부터 세포적 그리고 형질적 파라미터를 동시에 결정하기 위해서 더 이상 각각의 개별 결정을 위해서 개별적으로 흡액되는 것이 아니라 샘플에서 동시에 전체의 원하는 파라미터를 결정하는데, 특히, 혈액형 결정 및 혈청 상호비교(cross-check) 및/또는 항체 검출 테스트를 동시에 수행하고, 혈액형 결정 및 수혈에 관한 감염성 혈청 마커(marker)의 결정을 동시에 수행될 수 있다. 여기서, 상기 각각의 감염성 마커의 검출을 이용한 혈액형 결정이 결합될 수 있으며, 적혈구로서 또다른 혈액세포에 대한 항체, 특히, 안티 혈소판 및 안티 림프구 항체의 결정을 수행될 수 있다.
이는, 공정의 예외적인 합리화를 나타낸다. 여기서, 다수의 혈청 파라미터의 동시결정의 장점 외에도, 종래의 테스트와 비교하여 상기 샘플 준비가 실제적으로 완전히 생략할 수 있는 점을 언급할 수 있다. 또한, 경사진 패턴으로 표현되는 결과의 독출도 실질적으로 더 유리하다. 또한, 본 발명에 따른 장치에서, 예를 들어, 혈액형, 특히, ABO 및 또다른 면역 혈액학적 파라미터, 특히, 안티 혈소판 및/또는 안티 림프구 항체 또는 이의 단편, 또는 혈액형, 특히 ABO 특성 및 감염성 마커, 특히, 세균성 및/또는 바이러스 작용인자 또는 이의 단편에 대한 항체, 또는 바이러스 또는 세균성 항원 또는 항원 에피토프가 하나의 장치에서 나란히 결정되며 독출될 수 있다.
상기 2차원적인 평면 결과 및 반응의 안정적인 종료점은, 눈으로 독출하는 것뿐만 아니라 예를 들어, CCD 카메라와 같은 이용가능한 이미지 분석방업을 포함하는 결과의 자동화된 독출을 가능케한다. 상기 작업비용은 수동작업에서도 줄어든다. 또한, 본 발명에 따른 장치는 환경 부담을 줄이고 비용적절한 효과를 유발한다. 시간압박이 있는 어려운 상황에서도, 단 시간 내에 단일의 검출장치에서 예를 들어, 완전한 ABO 혈액형 결정이 불규칙적 항체에 따라 혈청 상호비교 및 항체 검출 테스트를 사용하여 수행될 수 있는데, 예를 들어, 감염성 혈청 마커 결정 또는 안티 혈소판/림프구 항체 검출을 사용하여 완전한 ABO 혈액형 결정이 수행될 수 있다. 제조기술적으로, 상기 측면 진단 흐름 구조는, 사용한 시약의 소비를 현저히 줄이고 하나의 단일 장치에, 지금까지 개별적으로 수행되어야만 하는 다수의 테스트 파라미터를 준비함으로써 종래기술에 비해 실질적인 장점을 갖는다.
본 발명에 따른 장치에 의하여, 측면 흐름 테스트, 특히, 혈액형 혈청 진단을 위한 측면 흐름 테스트가 제공된다. 상기 테스트에서는 적혈구가 인디케이터 입자로서 사용되며, 테스트 샘플 내에서 동시에 다수의 세포적, 특히, 적혈구 항원 또는 항원 에피토프, 형질 파라미터 및/또는 혈액세포 특성, 특히 모든 성분을 함유한 혈액의 혈액세포 특성이 검사할 샘플로 결정될 수 있다. 여기서, 적어도 한 종류가 적혈구인 적어도 두 종류의 인디케이터 입자가 사용된다. 또한, 가능한한 간단하게 제조되며 특히, 적은 일련의 실험을 가지고 샘플준비없이 조작되며 비용적합한 테스트 시스템이 제공되며, 상기 테스트 시스템을 사용함으로써, 동시에 하나의 샘플 또는 검사할 다수의 샘플의 다양한 세포적 파라미터 및/또는 형질 파라미터, 특히, 혈액형 특징이 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 장치의 막(membrane)은 다공성 막이다. 바람직하게는, 막 물질은 예를 들어, 니트로셀룰로오스(예를 들어, Sartorius의 UniSart, Millipore의 HiFlow, Whatman, AE99 또는 Schleicher & Schuell의 FF85 /100), 폴리에틸렌(Porex Corporation의 Lateral Flo) 또는 나일론(CUNO의 Novylon)이다. 바람직하게는, 상기 막은 가능한한 큰 구멍 크기를 포함하는데, 이는 상기 막의 높은 다공성이 테스트되는 샘플, 예를 들어, 적혈구의 세포적 성분의 유입을 가능하게 하기 때문이다. 흡수성 막이 바람직하게 사용된다. 그러나, 본 발명에 따른 장치는 상기 특성에 제한되지 않는다. 바람직하게는, 모든 막은 높은 모세관 흐름 속도(capillary speed)(이때, 상기 모세관 흐름 속도는 색채 용해를 필요로 하는 시간이다)를 가지며, 상기 모세관 흐름 속도는 주어진 막 위에서 40mm를 이동하기 위해 염색 용액에 의해 요구되는 시간을 표현한다. 특히 바람직하게는, 막의 모세관 흐름 속도는 100보다 작다.
두 개의 서로 다른 막을 포함하는 양방향 실시예에서, 상기 막중 하나의 막은 바람직하게는, 높은 모세관 흐름 속도, 바람직하게는, 100보다 작으며, 또다른 막은 바람직하게는, 보다 낮은 모세관 흐름 속도, 바람직하게는 100보다 크다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 상기 투입 지대 아래의 다공성 막 상에 적어도 하나의 밀폐요소가 제공된다. 2차원적 또는 3차원적 밀폐요소가 도포된다. 상기 밀폐요소는 상기 다공성 막 상에서 위치하며 상기 밀폐요소에 의하여 상기 다공성 막의 잔여 면으로부터 분리된 샘플 투입지대가 형성된다. 본 발명에 따르면, 상기 밀폐요소는 우선적으로 액체장벽의 효과를 가지며 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막에 적절하게 분할가능케 한다. 또한, 본 발명에 따르면, 원하지 않게 액체가 상기 측면 흐름 장치구조의 또다른 영역으로 범람하는 것을 방지하기 위하여, 상기 밀폐요소는 상기 샘플 투입지대를 밀폐한다. 상기 밀폐요소의 바람직한 실시예는 웹(web) 또는 통 또는 깔때기 형태이다. 상기 밀폐요소의 형상은 상기 밀폐요소를 제조하는 데에 사용된 물질로 이루어진 절개로 이루어진다. 상기 깔때기 또는 통 형태의 경우, 상기 밀폐요소는 내부 개구부를 포함한다. 상기 내부 개구부의 바람직한 실시 변형예는 원형, 정방형 또는 사각형이며, 상기 깔때기 형태의 경우, 상기 밀폐요소의 하측(막 접촉측)으로 좁아지는 형태이다.
상기 밀폐요소에 대한 바람직한 물질은 소수성(hydrophobic) 물질이다. 바람직한 실시예에서, 상기 물질은 일측으로 접착제 막, 예를 들어, 아크릴계 점착제(Pressure Sensitive Adhesive; PSA) 또는 자착식(self adhesive) 아크릴 접착제로 코팅된다. 따라서, 상기 밀폐요소는 직접 상기 다공성 막의 표면 상으로 접착될 수 있다. 대안적으로, 상기 밀폐요소는 측면 흐름 케이스에 연결, 예를 들어, 접착될 수 있다. 이때, 상기 실시예에서 상기 측면 흐름 하우징은 상기 밀폐요소를 상기 다공성 막의 표면 상으로 압박함으로써 상기 밀폐요소의 기능이 수행된다.
2차원적 밀폐요소를 형성하기 위한 바람직한 물질은 접착 테잎 또는 접착 호일(예를 들어, Beiersdorf AG의 Tesa 4124, Adhesives Research의 Arcare 7815)의 각각의 형태이다.
3차원적 밀폐요소를 형성하기 위한 바람직한 물질은 가요성, 폐쇄형 구멍의 엘라스토머(elastomer) 물질 또는 서로 다른 물질강도, 바람직하게는 3-5mm(예를 들어, Pitzner의 탄성고무 EPDM140, Castan의 경도 40° 이하의 실리콘 탄성고무 또는 완전 탄성고무)를 갖는 가요성 실리콘 물질이다.
본 발명에 따른 상기 실시예를 통하여, 본 발명에 따른 장치는 세포, 예를 들어, 모든 성분을 함유한 혈액을 포함하는 액체 샘플을 상기 세포를 여과하지 않고 수용할 수 있다. 또한, 상기 밀폐요소로 인해, 상기 액체가 범람하지 않고 큰 체적의 샘플을 상기 다공성 막(투입 지대) 상에 투입할 수 있다. 따라서, 상기 밀폐요소는 상기 다공성 막의 흡수 특성의 이용을 지지한다. 또한, 상기 밀폐요소는 샘플 흐름을 보장한다. 그러나, 본 발명에 따른 장치는 밀폐요소를 사용하거나 사용하지 않고 양호하게 작동할 수 있다.
본 발명에 따른 장치의 흡수 영역(흡수 패드)에서는, 기계적으로 안정적인 물질이 유리한데, 바람직하게는, 20-30g/100㎠(예를 들어, 심지 재료지(wicking paper), type 300, Schleicher und Schuell)의 수분 흡수능력을 갖는 물질이다. 본 발명에 따른 장치의 상기 흡수 패드와 상기 측면 흐름 막 사이의 접촉은 반동력 및 상기 다공성 막과의 중첩에 의해 수행된다. 상기 흡수 패드를 상기 측면 흐름 막을 운반하는 캐리어 층(백킹 쉬트; backing sheet)에 접착함으로써 상기 흡수 패드는 상기 막 상에 정확히 위치된다.
상기 결합 패드는 바람직하게는, 유리 섬유 또는 셀룰로오스로 이루어지며, 바람직하게는, 음성 적혈구의 흐름을 지연하는 특성을 갖는다.
또다른 실시예에 따르면, 본 발명에 따른 장치의 구성요소들은 기계적 강화목적으로 베이스(base) 또는 캐리어 층 상에 도포된다. 그러나, 본 발명에 따른 장치는 캐리어 층을 사용하거나 사용하지 않고 작동될 수 있다. 바람직하게는, 기계적으로 안정하고 비수용성 흡수 물질(non-water absorbent material)은 일측 또는 두 측면에 접착제 막, 예를 들어, 아크릴계 PSA 또는 자착식 아크릴계 접착제를 포함하는 100㎛ 이상의 물질 강도를 갖는 물질로 코팅된다(예를 들어, 0.005" 폴리에스터 W/ GL-187, G & L). 상기 캐리어 층 상에는 상기 다공성 막 및 상기 흡수 패드가 고정된다. 이중 측면으로 접착되는 캐리어 층의 경우, 상기 접착되는 제2 측면은, 스테이플(staple)을 또다른 면, 예를 들어, 상기 측면 흐름 케이스 내부에 고정하기 위해서 사용된다.
또다른 실시예에 따른 본 발명에 따른 장치는 상기 장치의 구성요소들이 배치되는 캐리어 층을 사용하거나 사용하지 않고 케이스에 통합된다. 이에 따라서, 상기 막 구성요소는 서로 압박되고 상기 케이스는 상기 밀폐요소의 작용을 지지한다. 그러나, 이때, 본 발명에 따른 장치는 케이스를 사용하거나 사용하지 않고 양호하게 작동할 수 있다.
본 발명의 또다른 주제는, 혈액을 분석, 특히, 혈액형 결정 및 혈청 상호비교(cross-check) 및/또는 항체 검출 테스트를 동시에 수행하거나 혈액형 결정 및 감염 혈청 마커 또는 이의 단편의 검출을 동시에 수행하거나 혈액형 결정 및 혈액세포, 특히, 안티 혈소판 또는 안티 림프구 항체 또는 이의 각각의 단편의 검출을 동시에 수행하는 장치의 사용이다.
본 발명에 따르면, 상기 과제는 다른 한 편으로 액체 샘플 내의 다수 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법에 의해 달성된다. 상기 방법은 본 발명에 따른 장치의 막의 투입 지대(charging zone) 상에 샘플을 투입하는 단계를 포함하며, 상기 샘플은, 상기 액체 샘플을 발생하기 위하여 흡수 영역의 방향으로 인디케이터 존을 통과해 흐르며 상기 액체 샘플 내의 피분석물 또는 이의 유도체를 발생하여 상기 인디케이터 존 내에 복합체를 형성하기에 충분한 양으로 존재한다.
본 발명에 따른 방법의 실시예에 따르면, 혈액형 결정 및 혈청 상호비교 및/또는 항체 검출 테스트가 동시에 수행된다.
예를 들어, 혈액 또는 이의 희석액이 상기 장치의 상기 투입지대에 투입된다. 모든 구성요소가 상기 밀폐요소를 통해 안내되어 상기 다공성 막으로 진입하며, 이동시 흡수패드 방향으로 우선적으로 세포 A1, A2, B, O의 단편의 상기 인디케이터 존 영역 혈청 상호비교를 통과하며 안티-IgG/IgM을 포함하는 대조구 인디케이터 존을 통과한다. 상기 혈청 내에 존재하는 동종 응집소는 상응하는 세포적으로 결합된 항원에 결합된다. 혈청-IgG는 상기 대조구 결합요소에 결합된다(혈청 상호비교: 감각화).
상기 세포적으로 결합된 항원은 계속해서 상기 인디케이터 존 영역 혈청 상호비교를 위해 마련된 혈액형 결정의 인디케이터 존 영역의 원위로 이동한다. 상기 인디케이터 존 영역에서는 각각의 인디케이터 존에는 또다른 혈액형 특징에 대한 항체가 고정된다(예를 들어, 안티-A, 안티-B, 안티-AB). 상기 투입지대의 원위의 상기 영역의 인디케이터 존은 예를 들어, 다중 클론의 안티 적혈구 항체를 결합요소로서 갖는다. 상기 인디케이터 존 영역에는 상기 적혈구가 상기 결합요소에 결합되며, 상기 결합요소는 상기 각각의 혈액형 특징에 해당한다. 상기 결합요소에는 모든 혈액형의 적혈구가 결합된다(혈액형 결정).
하기 세척단계에서, 결합되지 않은 물질이 상기 막으로부터 세척된다. 추후 검출단계에서, 안티-IgG/IgM로 코팅된 합성 입자가 사용되며, 상기 합성 입자는 상기 인디케이터 존의 근위 열의 결합요소에 고정된 동종 응집소 및 대조구 항체를 볼 수 있도록 한다(혈청 상호비교: 검출).
본 발명에 따른 혈액형 결정 및 혈청 상호비교 및/또는 항체 검출 테스트를 동시에 수행하는 방법의 또다른 실시예에 따르면, 전술한 바와 같은 혈액형 특징들이 직접 결정된다. 이와는 달리, 혈청 상호비교 및/또는 항체 검출 테스트는 경쟁 테스트로서 수행된다.
예를 들어, 온전한 혈액 또는 이의 희석액이 상기 장치의 상기 투입지대에 투입된다. 모든 구성요소가 상기 밀폐요소를 통해 안내되어 상기 다공성 막으로 진입하며 흡수패드 방향으로 이동시 우선적으로 혈액형 A 및 B 세포의 단편을 포함하는 혈청 상호비교를 위한 상기 인디케이터 존 영역을 통과하며 혈액형 O 세포의 단편을 포함하는 대조구 인디케이터 존을 통과한다. 상기 혈청 내에 존재하는 동종 응집소는 상응하는 세포적으로 결합된 항원에 결합된다(혈청 상호비교: 감각화).
상기 세포적으로 결합된 항원은 계속해서 상기 원위로 상기 인디케이터 존 영역 혈청 상호비교를 위해 마련된 혈액형 결정의 인디케이터 존 영역으로 이동한다. 상기 인디케이터 존 영역에서는 각각의 인디케이터 존에는 또다른 혈액형 특징에 대한 항체가 고정된다(예를 들어, 안티-A, 안티-B, 안티-D). 상기 투입지대의 원위인 상기 영역의 인디케이터 존은 예를 들어, 다중 클론의 안티 적혈구 항체를 결합요소로서 갖는다. 상기 인디케이터 존 영역에는 상기 적혈구가 상기 결합요소에 결합되며, 상기 결합요소는 상기 각각의 혈액형 특징에 해당한다. 상기 결합요소에는 모든 혈액형의 적혈구가 결합된다(혈액형 결정).
하기 세척단계에서, 결합되지 않은 물질이 상기 막으로부터 세척된다. 추후 검출단계에서, 안티-A, 안티-B 및 안티-H로 코팅된 합성 입자가 사용되며 상기 투입지대 위로 투입된다. 상기 입자는 혈청 상호비교를 위해 각각 상기 인디케이터 존 영역의 동일한 결합요소에만 결합된다. 상기 결합요소는 감각화 단계에서 상기 혈청 동종 응집소와 접촉하지 않는데, 즉, 유색 밴드는 이 경우 해당하는 동종 응집소가 부재함을 나타낸다. 예를 들어, 혈액형 A(동종 응집소 안티-B를 갖는 사람)의 경우, B 세포의 세포 단편들은 상기 동종 응집소에 의해 차단된다. 이에 따라, A 세포의 세포 단편들은 추후에 투입될 합성 입자의 혼합물을 사용하여 그 안에 존재하는 안티-A 입자를 통해서 염색된다. 혈액형 O 단편들은 모든 생각할 수 있는 상황에서 염색된다. 이는, 상기 단편들이 동종 응집소에 의해 차단되지 않으므로 상기 염색된 안티-H 입자와의 반응에 대해 항상 자유롭기 때문에, 경쟁 분석의 변형에서도 대조구 부재가 마련되기 때문이다(혈청 상호비교: 검출).
본 발명의 또다른 실시예에 따른 혈액형 결정 및 혈청 상호비교 및/또는 항체 검출 테스트를 동시에 수행하는 방법은, 혈액형 특징을 직접 결정하고 항체 상호비교를 결정하거나 항체 검출 테스트를 경쟁 테스트로서 하기와 같이 수행된다.
혈액 또는 이의 희석액이 상기 장치의 상기 비대칭 투입지대에 두 개의 서로 다른 다공성 막으로 투입된다. 이때, 하나의 다공성 막은 또다른 막보다 낮은 모세관 흐름 속도를 갖는다. 후자에서, 상기 밀폐요소와 상기 인디케이터 존 사이에서 결합패드, 즉, 건조된 안티-A/안티-B/안티-H 입자를 포함하는 결합패드가 상기 막 위에 투입된다. 모든 구성요소가 상기 밀폐요소를 통하여 안내되어 두 개의 다공성 막으로 진입하며, 이는 하기 흐름방식에 영향을 끼친다.
"막 측에서만(only membrane side)": 모든 구성요소는 혈액형 결정을 위해 이동시 그에 속하는 흡수패드의 방향으로 상기 인디케이터 존을 통과한다. 여기서, 각각의 인디케이터 존에서 또다른 혈액형 특징에 대한 항체가 고정된다(예를 들어, 안티-A, 안티-B, 안티-D). 상기 투입지대에 대해 가장 먼 원위의 상기 영역의 인디케이터 존은 예를 들어, 다중 클론 안티-적혈구-항체를 결합요소로서 갖는다. 상기 인디케이터 존 영역에서, 상기 적혈구는 상기 결합요소에 결합된다. 상기 결합요소는 각각의 혈액형 특징에 해당한다. 상기 대조구 결합요소에는 모든 혈액형의 적혈구가 결합된다.
"막/결합패드 측": 모든 구성요소는 상기 막으로 진입한 후 상기 밀폐요소를 통과한 후에 상기 결합패드와 접촉한다. 여기서, 상기 세포적 구성요소는 보류되거나 지연되며 상기 액체 구성요소(플라즈마; 형질)는 방해받지 않고 계속적으로 흐를 수 있다. 후자는 안티-A/안티-B/안티-H 입자를 상기 결합패드로부터 분리한다. 상기 혈청 상호비교의 인디케이터 존 영역은 상기 혈액형 A와 B 세포의 단편들을 포함하고 혈액형 O 세포의 단편들을 대조구 부재로서 포함한다. 상기 혈청에 존재하는 동종 응집소는 상기 해당하는 세포적으로 결합된 항원에 결합되며 동시에 유색의 안티-A, 안티-B 결합과 경쟁한다. 이는, 상기 입자는 각각의 동종 응집소가 존재하지 않는 경우에만 결합되는 것을 의미한다. 예를 들어, 혈액형이 A인 사람은 안티-B 동종 응집소를 갖는다. 이에 따라, 상기 혈액형 B 단편들은 상기 인디케이터 존 영역 내에서 차단되며 상기 혈액형 A 단편들은 상기 유색의 안티-A 입자에 의해 염색될 수 있다. 작은 동종 응집소에 대항하여 존재하는 상기 대조구 부재는 항상 차단되지 않은 채로 남아 있으며, 모든 경우에 상기 결합패드의 입자 혼합물에 포함된 안티-H 입자에 의해 볼 수 있는 밴드로서 염색된다.
본 발명에 따른 방법의 또다른 실시예에 따르면, 동시에 혈액형을 결정하고 안티-적혈구 및/또는 안티-림프구 항체 또는 이의 단편들을 결정한다.
예를 들어, 상기 안티 혈소판 항체의 결정을 위해서, 상기 투입지대에 근접한 영역 내의 인디케이터 존은 혈소판 단편들을 결합요소로서 포함하고 (상기 샘플에 존재하는 경우에) 상기 혈청에 함유된 안티 혈소판 항체에 결합된다. 남은 단계는 본 발명에 따른 전술한 실시예에서와 동일하게 수행된다. 특히, 상기 혈액형 결정은 전술한 실시예에 기재된 바와 같이 수행된다.
본 발명에 따른 방법의 또다른 실시예에 따르면, 동시에 혈액형을 결정하고 수혈에 관련된 감염성 마커를 결정한다.
예를 들어, 감염성 마커의 결정을 위해서, 상기 제1 근접한 인디케이터 존 영역의 인디케이터 존은 결합요소로서, 바이러스 또는 세균성 작용인자의 단백질의 순서에 해당하는(감염성 마커, 예를 들어, 안티-HIV-1에 대한 항체의 결정) 합성 펩티드 및/또는 재결합된 단백질 및, 상기 감염성 마커의 단백질에 대항하는(항원, 예를 들어, HbsAg의 결정) 항체를 포함한다. 혈청 내에 함유된 항체 또는 항원은 제1 단계에서 상기 해당하는 항원 또는 항체에 결합된다. 남은 단계는 본 발명에 따른 전술한 실시예에서와 동일하게 수행된다. 특히, 상기 혈액형 결정은 전술한 실시예에 기재된 바와 같이 수행된다.
본 발명에 따른 방법에서, 결정할 피분석물에서 특히 혈액형 항원 또는 항원 에피토프, 예를 들어, 혈액형 체계 ABO, Rh, Kell, 혈액형 항원 또는 항원 에피토프에 대한 항체 또는 이의 단편, 예를 들어, 규칙적인 항체, 불규칙적인 항체, 감염성 작용인자에 대한 항체, 감염성 작용인자의 (표면)항체 및/또는 안티-적혈구 또는 안티-림프구 항체 또는 이의 단편이 중요하다.
검사할 샘플, 예를 들어, 음성 또는 응고되지 않은 혈액 또는 적혈구 응축물 또는 희석된 적혈구 현탁액, 혈액 성분 또는 대조구 혈청 또는 대조구 세포와 같은 테스트 액체는 본 발명에 따른 장치의 투입 지대 상에 투입된다. 상기 샘플에 함유된, 피분석물을 운반하는 적혈구는 동시에 인디케이터 입자로서 사용된다.
특히, 두 개의 그룹의 인디케이터 입자가 사용될 수 있다. 그 중 하나의 그룹은 단지 적혈구를 통해서만 적혈구에 결합된 피분석물을 직접 입증하기 위해서 표시된다. 또다른 그룹은 모든 생각할 수 있는 종류의 입자 및 결합으로 이루어진다. 상기 입자에 의해서 결합반응이 입증될 수 있다. 바람직하게는 입자는 콜로이드 금 또는 폴리스티롤 또는 고정 적혈구로 이루어진다. 바람직한 실시예에 따르면, 테스트 시간 당 다양한 인디케이터 입자가 사용되며, 이 중 적어도 한 종류는 천연 적혈구이다.
도 1은 본 발명에 따른 혈액형 결정과 혈청 상호 비교를 동시에 수행하기 위한 측면 흐름 테스트를 실시하는 장치의 사시도이다.
도 2는 도 1에 도시된 측면 흐름 테스트를 위한 본 발명의 장치의 분해도이다.
도 3은 본 발명에 따른 혈액형 결정과 혈청 상호 비교를 동시에 수행하기 위한 삼차원의 밀폐요소로 웹(web) 형태로 형성된 측면 흐름 테스트를 실시하는 장치의 사시도이다.
도 4는 도 3에 도시된 본 발명의 측면 흐름 테스트 장치의 분해도이다.
도 5는 본 발명에 따른 혈액형 결정과 혈청 상호 비교를 동시에 수행하기 위한 측면 흐름 테스트를 실시하는 장치가 3차원의 밀폐요소와 통 모양으로 형성된 사시도이다.
도 6은 도 5에 도시된 본 발명의 측면 흐름 테스트 장치의 분해도이다.
도 7은 본 발명에 따른 혈액수혈자를 위한 혈액형의 결정, 혈청의 상호 비교 및 항체 검출 테스트를 동시에 수행하기 위한 측면 흐름 테스트를 실시하는 장치에 대한 사시도이다.
도 8은 본 발명에 따른 혈액형 결정, 혈청의 상호 비교 및 항체 검출 테스트를 동시에 수행하기 위한 측면 흐름 테스트 장치의 사시도이다.
도 9는 본 발명에 따른 혈액형 결정과 감염 마커의 검출을 동시에 수행하기 위한 측면 흐름 테스트를 위한 장치의 사시도이다.
도 10은 혈액형 결정과 혈소판 항원에 대항하는 항체의 검출을 동시에 수행하기 위한 측면 흐름 테스트를 위한 장치의 사시도이다.
도 11은 혈액형 결정과 혈청 상호 비교를 동시에 수행하기 위한 양방향 흐름 을 가진 측면 흐름 테스트를 위한 장치의 사시도이다.
도 12는 도 11에 도시된 측면 흐름 테스트를 위한 장치의 분해도이다.
이하, 본 발명은 첨부된 도면 및 실시예를 참조로 하여 설명할 것이다.
도 1에서는 예시적으로 혈액형 결정과 혈청 검증의 동시 실시를 위한 측면 흐름 테스트의 사시도를 보여준다. 본 실시예의 장치는 지지층(1), 다공성 막(2), 흡수패드(3), 그리고 및 2차원이고 작은 조각(strip) 모양으로 형성된 밀폐요소(4)로 이루어진다. 다공성 막(2)은 아크릴계 PSA 점착제를 구비하는 지지층(1)에 고정되어 있다. 흡수패드(3)도 마찬가지로 지지층(1)에 고정되어 있는데, 흡수패드(3)의 한 부분은 상기 다공성 막(2)과 중첩되어 있다. 다공성 막(2)의 상면에 고정된 밀폐요소(4)는 투입지대(5)를 잔여 막 면으로부터 분리하고 액체 샘플 및 테스트 시약을 다공성 막(2)에 분할할 수 있게 한다. 투입지대(5)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6)이 배치된다. 후자는 소정의 X위치 및 Y위치에 배치되며, 경사져 교대로 배열된 점 형상의 인디케이터 존(I-IX)에 의해 형성된다. 여기서 인디케이터 존(I-V)은 "혈청 교차 비교"의 인디케이터 존 영역을 표시하며, 인디케이터 존(VI-IX)은 혈액형 결정의 인디케이터 존 영역을 표시하며, 하기 표 1과 같은 결합 요소를 포함한다.
표 1.
인디케이터 존 결합요소 사양
인디케이터 존 영역: 혈청 교차 비교
I 적혈구 고스트 (ghost) 혈액형 A1
II 적혈구 고스트 혈액형 A2
III 적혈구 고스트 혈액형 B
IV 적혈구 고스트 혈액형 0
V 항체 안티 - 휴먼 IgG / IgM
인디케이터 존 영역:혈액형 결정
VI 항체 안티 -A (단일 클론)
VII 항체 안티 -B (단일 클론)
VIII 항체 안티 -AB (단일 클론)
IX 항체 안티 -적혈구 (다중 클론)
인디케이터 존(V)은 혈청 교차 비교를 위한 대조구(ctl)이며 안티-휴먼 IgG/IgM 항체를 포함한다. 인디케이터 존(IX)은 혈액형 결정을 위한 대조구(ctl)이며 다중 클론 안티 적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존은 모든 잔여 인디케이터 존의 원위에 존재한다.
도 2는 도 1에 도시된 측면 흐름 테스트를 위한 본 발명의 장치의 분해도이다. 본 장치는 지지층(1), 다공성 막(2), 흡수패드(3), 그리고 밀폐요소(4)로 구성되어 있는데, 상기 밀폐요소(4)는 상기 투입지대(5)를 잔여 막으로부터 분리하고, 상기 막은 다시 상기 인디케이터 존 영역인 "혈청 상호 비교" 와 "혈액형 결정"으로 경사져 엇갈려 배치된 인디케이터 존(I-IX)을 포함하는 인디케이터 존 영역(6)을 포함한다.
도 3은 본 발명의 예시적인 혈액형 결정과 혈청 교차 비교의 동시 수행 위한 측면 흐름 테스트를 위한 장치에 대한 사시도이다. 본 실시예에서 구성요소는 도 1 에 도시된 장치와 동일하며 예외는 상기 다공성 막(2)의 상면에 고정된, 3차원 패턴의 밀폐요소(4)이다.
도 4에서는 도3에 도시된 측면 흐름 테스트를 위한, 지지층(1), 다공성 막(2), 흡수패드(3), 그리고 3차원 패턴의 밀폐요소(4)를 구비하는 본 발명의 장치가 도시 되어있는데, 상기 밀폐요소(4)는 상기 투입지대(5)를 잔여 막으로부터 분리하고, 상기 막은 다시 상기 인디케이터 존 영역인 "혈청 교차 비교" 와 "혈액형 결정"으로 경사져 엇갈려 배치된 인디케이터 존(I-IX)을 구성되는 인디케이터 존 영역(6)을 포함한다.
도 5는 예시적으로 혈액형 결정과 혈청 교차 비교를 동시에 수행하기 위한 측면 흐름 테스트를 위한 본 발명의 장치를 도시하고 있다. 상기 실시예에서 본 장치의 구성요소는 도 1에 도시된 장치와 동일하며 예외는 상기 다공성막(2)의 상면에 고정된, 3차원의 통(trough) 모양으로 형성된 밀폐요소(4)이다.
도 6에서는 도 5에 도시된 측면 흐름 테스트를 위한 장치를 보여준다. 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(2), 흡수패드(3), 그리고 3차원의 통모양으로 형성된 밀폐요소(4)를 구비하는데, 상기 밀폐요소(4)는 상기 투입지대(5)를 잔여 막으로부터 분리하고 상기 막은 다시 경사져 엇갈려 배치된 인디케이터 존(I-IX)을 포함하며, " 혈청 교차 비교" 와 " 혈액형 결정"의 인디케이터 존 영역으로 구성된 상기 인디케이터 존 영역(6)을 포함한다.
도 7은 혈액형 결정, 혈청 교차 비교 및 수혈자(recipient)에 대한 항체검출 테스트의 동시 실행을 위한 측면 흐름 테스트의 예시적인 사시도이다. 상기 실시예 의 장치는 지지층(1), 상기 다공성 막(2), 상기 흡수패드(3) 그리고 상기 2차원의 웹 모양으로 형성된 밀폐요소(4)로 이루어진다. 상기 다공성막(2)은 하나의 아크릴계 PSA 점착제를 구비하는 지지층(1) 위에 고정되어 있다. 마찬가지로 상기 흡수패드(3)은 상기 지지층(1)에 고정되어 있으며, 상기 흡수패드(3)의 한 부분은 상기 다공성 막(2)과 중첩되어있다. 상기 다공성막(2)의 상면에 고정된 상기 밀폐요소(4)는 상기 투입지대(5)를 잔여 막면으로부터 분리하고 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막(2)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(6)은 경사져 엇갈려 배치된, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(I-XII)에서 형성된다. 여기서, 상기 인디케이터 존(I-VIII)은 상기 인디테이터존 영역 "혈청 교차 비교/항체검출테스트"를 포함하고 상기 인디케이터 존(IX-XII)은 상기 "혈액형 결정"인디케이터 존을 포함하며 하기 표 2와 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 2
인디케이터 존 결합요소 사양
인디케이터 존 영역: 혈청 교차 비교/항체검출
I 적혈구 고스트 혈액형 A1
II 적혈구 고스트 혈액형 A2
III 적혈구 고스트 혈액형 B
IV 적혈구 고스트 혈액형 0
V 적혈구 고스트 검출셀 1, 혈액형 0, Rh 식 R 1 R 1 W
VI 적혈구 고스트 검출셀 2, 혈액형 0, Rh 식 R 2 R 2
VII 적혈구 고스트 검출셀 3, 혈액형 0, Rh 식 R 1 R 1
VIII 항체 안티 - 휴먼 IgG / IgM
인디케이터 존 영역: 혈액형 결정
IX 항체 안티-A (단일 클론)
X 항체 안티-B (단일 클론)
XI 항체 안티-AB (단일 클론)
XII 항체 안티-적혈구 (다중 클론)
인디케이터 존(VIII)은 상기 혈청 교차 비교와 항체 검출 테스트를 위한 대조구(ctl)이며 안티-휴먼 IgG/IgM 항체를 구비한다. 인디케이터 존(XII)은 혈액형 결정을 위한 대조구(ctl)이며 다중 클론 안티 적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존은 모든 잔여 인디케이터 존의 원위에 배치되어 존재한다.
도 8은 헌혈자들의 혈액형 결정, 혈청 교차 비교, 그리고 항체 검출테스트를 위한 측면 흐름 테스트를 위한 본 발명의 장치의 사시도이다. 상기 실시예의 장치는 지지층(1), 상기 다공성 막(2), 상기 흡수패드(3) 그리고 상기 2차원의 웹 모양으로 형성된 밀폐요소(4)로 이루어진다. 상기 다공성막(2)은 하나의 아클릴계 PSA 점착제를 구비하는 지지층(1) 위에 고정되어 있다. 마찬가지로 상기 흡수패드(3)은 상기 지지층(1)에 고정되어 있으며, 상기 흡수패드(3)의 한 부분은 상기 다공성 막(2)과 중첩되어있다. 상기 다공성막(2)의 상면에 고정된 상기 밀폐요소(4)는 상기 투입지대(5)를 잔여 막면으로부터 분리하고 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막(2)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(6)은 경사져 엇갈려 배열되며, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(I-XII)에서 형성된다. 여기서, 상기 인디케이터 존(I-VI)은 상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교/항체검출테스트"를 포함하고 상기 인디케이터 존(VII-X)은 상기 인디케이터 존 영역"혈액형 결정"인디케이터 존을 포함하며 하기 표 3과 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 3.
인디케이터 존 결합요소 사양
인디케이터 존 영역: 혈청 교차 비교/항체검출
I 적혈구 고스트 혈액형 A1
II 적혈구 고스트 혈액형 A2
III 적혈구 고스트 혈액형 B
IV 적혈구 고스트 혈액형 0
V 적혈구 고스트 혈액형 0, 검출셀 1, 2, 3 풀 (도 8의 기재 참조)
VI 항체 안티 - 휴먼 IgG / IgM
인디케이터 존 영역: 혈액형 결정
VII 항체 Anti-A (단일 클론)
VIII 항체 Anti-B (단일 클론)
IX 항체 Anti-AB (단일 클론)
X 항체 Anti-적혈구 (다중 클론)
인디케이터 존 VI는 혈청 교차 비교와 항체검출테스트를 위한 대조구(ctl)이며 안티-휴먼 IgG/IgM 항체를 포함한다. 인디케이터 존 X은 혈액형 결정을 위한 대조구(ctl)이며 다중 클론 안티 적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존은 모든 잔여 인디케이터 존의 원위에 배치되어 존재한다.
도 9는 본 발명에 따른 혈액형 결정과 감염 마커의 검출을 동시에 수행하기 위한 측면 흐름 테스트를 위한 장치의 사시도이다. 상기 실시예에서 본 장치는 지지층(1), 상기 다공성 막(2), 상기 흡수패드(3) 그리고 상기 2차원 형상의 밀폐요소(4)로 이루어진다. 상기 다공성막(2)은 하나의 아클릴계 PSA 점착제를 구비하는 지지층(1) 위에 고정되어 있다. 마찬가지로 상기 흡수패드(3)은 상기 지지층(1)애 고정되어 있으며, 상기 흡수패드(3)의 한 부분은 상기 다공성 막(2)과 중첩되어있다. 상기 다공성막(2)의 상면에 고정된 상기 밀폐요소(4)는 상기 투입지대(5)를 잔여 막면으로부터 분리하고 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막(2)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(6)은 경사져 엇갈려 배열되며, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(I-XII)에서 형성된다. 여기서, 상기 인디케이터 존 I-VI 은 상기 인디테이터존영역 "혈청 교차 비교/항체검출테스트"를 포함하고 상기 인디케이터 존(VII-XII)은 상기 인디케이터 존 영역"혈액형 결정"인디케이터 존을 포함하며 하기 표 4와 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 4.
인디케이터 존 결합요소 사양
인디케이터 존 영역: 감염발생특질의 입증
I 합성 펩티드 HIV-1 ( gp -14, gp -41)
II 합성 펩티드 HIV-2 ( gp -36)
III 항체 안티 - HBsAg (단일 클론)
IV 재결합 항원 HCV (C-100, C-200, C33c , C22 )
V 재결합 항원 매독 ( TpN 15, TpN 17, TpN 47)
VI 항체 안티 - 휴먼 IgG / IgM
인디케이터 존 영역: 혈액형 결정
VII 항체 안티-A (단일 클론)
VIII 항체 안티-B (단일 클론)
IX 항체 안티-AB (단일 클론)
X 항체 안티-D (단일 클론)
XI 항체 안티-CDE (단일 클론)
XII 항체 안티-적헐구(다중 클론)
인디케이터 존(VI)은 감염성 작용인자 에 대항하는 항체의 결정을 위한 대조구(ctl)이며 안티-휴먼 IgG/IgM 항체를 포함한다. 인디케이터 존(XII)은 혈액형결정을 위한 대조구(ctl)이며 다중 클론 안티 적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존은 모든 잔여 인디케이터 존의 원위에 존재한다.
도 10은 혈액형 결정식과 항체 혈소판에 대항하는 항원의 입증을 동시에 수행하기 위한 측면 흐름 테스트의 예시적인 사시도이다. 상기 실시예에서 본 장치는 지지층(1), 상기 다공성 막(2), 상기 흡수패드(3) 그리고 상기 2차원의 웹 모양으로 형성된 밀폐요소(4)로 이루어진다. 상기 다공성막(2)은 하나의 아클릴계 PSA 점착제를 구비하는 지지층(1) 위에 고정되어 있다. 마찬가지로 상기 흡수패드(3)은 상기 지지층(1)애 고정되어 있으며, 상기 흡수패드(3)의 한 부분은 상기 다공성 막(2)과 중첩되어있다. 상기 다공성막(2)의 상면에 고정된 상기 밀폐요소(4)는 상기 투입지대(5)를 잔여 막면으로부터 분리하고 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막(2)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(6)은 경사져 엇갈려 배열되고, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(I-XII)에서 형성된다. 여기서, 상기 인디케이터 존(I-III)은 "항체 혈소판에 대항하는 항원의 검출"하는 인디케이터 존 영역을 포함하고 상기 인디케이터 존(IV-IX)은 "혈액형 결정"하는 인디케이터 존 영역을 포함하며 하기 표 5와 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 5.
인디케이터 존 결합요소 사양
인디케이터 존 영역: 혈소판 항원에 대항하는 항체의 검출
I 막단백질 혈소판, HPA 1 bb3aa5bb
II 막단백질 혈소판, HPA 1 aa3bb5aa
III 항체 안티 - 휴먼 IgG / IgM
인디케이터 존 영역: 혈액형 결정
IV 항체 안티 -A (단일 클론)
V 항체 안티 -B (단일 클론)
VI 항체 안티 -AB (단일 클론)
VII 항체 안티 -D (단일 클론)
VIII 항체 안티 - CDE (단일 클론)
IX 항체 안티 -적혈구 (다중 클론)
인디케이터 존(III)은 혈소판 항원에 대항하는 항체의 입증을 위한 대조구(ctl)이며 안티-휴먼 IgG/IgM 항체를 포함한다. 인디케이터 존(IX)은 혈액형 결정을 위한 대조구(ctl)이며 다중 클론 안티 적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존은 모든 잔여 인디케이터 존의 원위에 존재한다.
도 11은 헌혈자들의 혈액형 결정과 혈청 교차 비교를 위한 양방향으로 흐르는 측면 흐름 테스트를 위한 본 발명의 장치의 사시도이다. 상기 실시예의 장치는 지지층(1), 다공성 막(2a)와 상기 다공성 막(2a)와 구분되는 다공성 막(2b), 상기 흡수영역들(3a)와 (3b), 상기 3차원의 통 모양으로 형성된 밀폐요소(4), 그리고 결합패드(6)로 이루어진다. 상기 다공성막들(2a)(2b)은 하나의 아클릴계 PSA 점착제를 구비하는 지지층(1) 위에 고정되어 있다. 마찬가지로 상기 흡수영역들(3a)(3b)은 상기 지지층(1)애 고정되어 있으며, 상기 흡수영역들(3a)(3b)의 각 한 부분은 상기 다공성 막들(2a)(2b)과 중첩되어있다. 상기 다공성막들(2a)(2b)의 상면에 고정된 상기 밀폐요소(4)는 상기 투입지대들(5a)(5b)를 잔여 막면들로부터 분리하고 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막들(2a)(2b)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5a)와, 상기 흡수패드(3a)와 접촉하는 상기 다공성 막(2a)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(7a)(혈액형 결정)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(7a)은 경사져 엇갈려 배열되고, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(I-IV)에서 형성된다. 여기서, 인디케이터 존 영역(7a)의 상기 인디케이터 존들은 하기 표 6과 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 6.
인디케이터 존 결합요소 사양
I 항체 안티-A (단일 클론)
II 항체 안티-B (단일 클론)
III 항체 안티-AB (단일 클론)
IV 항체 안티-D (단일 클론)
V 항체 안티-CDE (단일 클론)
VI 항체 안티-적혈구 (다중 클론)
인디케이터 존(VI)은 혈액형 결정을 위한 대조구(ctl)이며 다중 클론 안티적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존은 모든 잔여 인디케이터 존의 원위에 존재한다.
상기 투입지대(5b)와, 상기 흡수패드(3b)와 접촉하는 상기 다공성 막(2b)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(7b)(혈액형 결정)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(7b)은 소정의 X위치 및 Y위치에서 경사져 전복된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(VII-IX)에서 형성된다. 여기서, 인디케이터 존 영역(7b)의 상기 인디케이터 존들은 하기 표 7과 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 7.
인디케이터 존 결합요소 사양
VII 적혈구 고스트 혈액형 A
VIII 적혈구 고스트 혈액형 B
IX 적혈구 고스트 혈액형 0 (대조구)
도 12는 도 11에 도시된 측면 흐름 테스트를 위한 장치의 분해도이다. 본 발명의 장치는 캐리어 층(1), 혈액형 결정을 위한 다공성 막(2a)과 상기 다공성 막(2a)과 구분되는, 혈청 교차 비교를 위한 다공성 막(2b), 상기 흡수영역들(3a, 3b), 상기 3차원의 통 모양으로 형성된 밀폐요소(4), 그리고 결합 패드(6)로 이루어진다. 상기 샘플 투입지대는 상기 막(2a)의 샘플 투입지대(5a)와 상기 막(2b)의 샘플투입지대(5b)의 양 다공성 막의 영역을 넘어서고 통모양으로 형성된 밀폐요소 (4)에 의해서 다공성 막 (2a, 2b)의 잔여면으로부터 분리된다. 상기 막(2a)은 근위 로부터 원위에까지 경사져 엇갈려 배열된 인디케이터 존(I-VI)을 가진 상기 인디케이터 존 영역(7a)을 포함하는 한편 상기 막(2b)은 근위로부터 원위로에까지 경사져 엇갈려 연장된 인디케이터 존(VII-IX)를 가진 인디케이터 영역(7b)을 포함한다.
실시예
실시예1: 동시 혈액형 결정(직접 분석) 및 혈청 교차 비교(직접 결합분석)
테스트 스트립의 제조
테스트 스트립(test strip)은 투입지대, 인디케이터 존 영역, 그리고 흡수영역을 포함한다. Millipore HiFlow 065 타입의 막은 작은 조각으로 15mm x 35mm 사이즈(폭/길이, x/y)로 잘라져서 하나의 캐리어 층(예를 들면 G&L사의 배킹 시트)에 접착된다. 인디케이터 존 영역들인 "혈청 교차 비교"(투입지대의 근위)와 혈액형 결정(투입지대의 원위)으로 나뉘어지는 상기 인디케이터 존 영역에는 경사져 엇갈려 배치된 0.2 ㎕의 여러 결합 요소가 투입된다.
인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교" - 세분 혈액형 A1, 혈액형, 혈액형, 혈액형의 적혈구 고스트의 현탁액(적혈구 농축액으로부터 제조) 및 안티-휴먼 IgG/IgM 항체 (Goat 안티-휴먼 IgG, Goat 안티-휴먼 IgM, 시그마 I-3382, I-0759)를 대조구로 사용; 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"- 안티 A 항체-클론 Birma-1 (Serologiclas, TLJ0105); 안티-B 항체 - 클론 ES-4 (Serologicals, NCA0201); 안티 AB 항체 - 클론 AB6, AB26, AB92 (Medion Diagnotics, 010062); 안티 적혈구 항체 (Rabbit IgG Fraction of anti-human RBC, Rockland, 209-4139).
상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교"의 결합요소들의 배치는 x=2,5mm/ y=10mm 인 위치의 세분 혈액형 A1의 적혈구 고스트와 시작한다. 다른 모든 결합요소들은 반복적으로 x=2.5 mm / y=10mm 인 거리에서 세분 혈액형 A1의 적혈구 고스트의 위치로 분산된다. 상기 적혈구 고스트는 0.1-0.5 % (v/v)의 현탁액 15 mM 칼륨인산염완충액 pH 7.5, 10 % (v/v) 메탄올, 상기 안티휴먼 IgG/IgM 항체 1:1로 혼합된 농축액 50 μg/ml의 15mM 칼륨완충액 pH 7.5, 10 % (v/v) 메탄올로 분산된다.
상기 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"의 결합요소들의 배치는 x= 3 mm/ y= 20 mm 인 위치의 항 A 항체와 시작한다. 다른 모든 결합요소들은 반복적으로 x= 3 mm / y= 1,5 mm 인 거리에서 항 A 항체의 위치로 분산된다. 항체의 희석은 다음과 같이 한다: 15mM 칼륨인산염완충액 pH 7.5, 10% (v/v) 메탄올: 안티 A 항체 1:3, 안티 B 항체 1:2, 안티 AB 항체 1:4, 안티 RBC 항체 1:3.
상기 막들은 상기 결합요소들의 분산 후 20분간 40℃에서 건조되고 그 다음 일정 공기습도에서 검사실시까지 보존된다. 투입지대의 원위에는 상기막과 약 3 mm 중첩되는 15 x 15 mm 크기의 흡수영역(Schleicher & Schuell, 300) 이 접착된다. 상기 투입지대는 1-2 mm 폭의 접착테이프(Tesa 4124)로서 y= 5 mm 인 위치에서 총 막의 폭을 넘어 잔여 막들로부터 분리된다.
테스트 배치:
혈액샘플로는 항응고 온전한 혈액이 사용된다. 적절한 테스트를 위해서 100 ㎕ 희석되지않은 또는 1:3 또는 1:6으로 희석 완충액(EnlisstII, Medion Diagnostics 또는 Diluent 1, Diamed)에서 희석된 혈액이 상기 투입지대로 투입된다. 상기 혈액이 투입지대를 벗어나면 결합되지 않은 적혈구를 막으로부터 격리하 기 위하여 두번 Enlisst II 100 ㎕ 로 세척된다. 이와 연결하여 50 ㎕ 의 안티 IgG/A/M 결합된 금 입자(20~40 nm, Arista Biologicals, CGIGA-0800, CGIGG-0800. CGIGM-0800), 1:10 (v/v) 로 TBS로 희석된, 8.08% 젤라틴 및 0.5 % 알부민이 상기 투입지대에 투입된다. 금 입자 대신에 색이 있는 100-400 nm의 폴리스트롤입자, 예를 들면 머크사의 Eurolab France/Estapor 가 사용할 수도 있다. 상기 금 입자가 상기 투입지대를 벗어나면, 상기 막은 다시 한번 또는 두 번 Enlisst II 100 ㎕ 로 세척된다.
결과:
(a) 대조구: 본 실험은 상기 항 RBC 대조구 (인디케이터 존 IX, 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정")가 분명한 양성 신호 (붉은 점)를 나타내고 상기 항 IgG/IgM 대조구(인디케이터 존 V, 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교")가 특징적으로 자주색 (금입자) 또는 사용된 폴리스트롤입자의 색으로 염색되었을 경우에 유효하다.
(b) 테스트 결과: 각 혈액형항원의 유무에 따라 상기 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"의 해당 위치에는 붉은 점(양성) 또는 막의 거의 백색의 배경염색(음성)이 나타난다. 상응하는 동종응집소는 상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교"에서 상기 특징적인 금 입자의 자주색을 통해 자주색의 점 또는 사용된 폴리스트롤입자의 색으로 알 수 있다. 동종응집소가 없을 경우에는 배경으로는 구분되지 않는 신호들이 상기 위치에서 나타나지 않는다.
실시예 2:
상기 테스트 스트립은 투입지대, 상기 투입지대의 양쪽의 두개의 인디케이터 존 영역, 그리고 두개의 흡수영역으로 구성된다. Millipore HiFlow Plus 065와 HiFlow Plus 140 타입의 막은 작은 조각으로 15mm x 20mm 사이즈(폭/길이, x/y)로 잘라져서 하나의 캐리어층(배킹 시트, 예를 들면 G&L사의)에 접착된다. 상기 HiFlow Plus 140에는 추가적으로 밀폐요소(접착지)와 인디케이터 존 사이에 그 안에서 항A/항B/항H와 결합되는 급입자가 건조되는 결합영역(Konjugat Pad)가 위치한다. 상기 금 입자 대신에 색이 있는 100 ~ 400 nm인 예를 들어 머크사의 Eurolab France/Estapor와 같은 폴리스트롤입자가 사용될 수 있다. HiFlow 065 막에 위치하는 상기 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"에는 각 0.2 ㎕ 의 다음의 결합요소들이 경사져 엇갈려 배열된다: 안티 A 항체 - 클론 버마-1 (Serologiclas, TLJ0105); 안티-B 항체 - 클론 ES-4 (Serologicals, NCA0201); 안티 AB 항체 - 클론 AB6, AB26, AB92 (Medion Diagnotics, 010062); 항 적혈구 항체 (Rabbit IgG Fraction of 안티휴먼 RBC, Rockland, 209-4139).
마찬가지의 방식으로 HiFlow 065 막에 위치하는 상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교"에는 혈액형 A, 혈액형 B, 그리고 혈액형 0 (적혈구농축액으로 제조)의 적혈구 고스트의 현탁액이 투입한다.
상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교"의 상기 결합요소들의 배치는 x=3mm/y=10nm 의 위치의 세분 혈액형 A의 적혈구 고스트에 의해 수행한다. 다른 모든 결합요소들은 반복적으로 x= 3 mm / y= 1.5 mm 인 거리에서 세분 혈액형 A의 적혈구 고스트의 위치로 분산된다. 상기 적혈구 고스트는 = 2 mm / y=1,5 mm 인 거 리에 0.1-0.5 % (v/v)의 현탁액 15 mM 칼륨인산염완충액 pH 7,5, 10 % (v/v) 메탄올, 상기 안티휴먼 IgG/IgM 항체 1:1로 혼합된 농축액 50 μg/ml의 15mM 칼륨완충액 pH 7,5, 10 % (v/v) 메탄올로 분산된다.
상기 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"의 결합요소의 배치는 x= 2,5 mm / y=20 mm 의 위치의 항 A 항체와 시작한다. 다른 모든 결합요소들은 반복적으로 x=2 mm / y=1,5 mm 인 거리에서 세분 혈액형 A의 적혈구 고스트의 위치로 분산된다. 상기 항체의 희석은 다음과 같다: 15mM 칼륨인산염완충액 pH 7.5, 10% (v/v) 메탄올: 안티- A 항체 1:3, 안티 B 항체 1:2, 안티 AB 항체 1:4, 안티 RBC 항체 1:3.
상기 막들은 상기 결합요소들의 분산 후 20분간 40℃에서 건조되고 그 다음 일정 공기습도에서 검사실시까지 보존된다. 투입지대의 원위의 양쪽에는 상기 막과 약 3 mm 중첩되는 15 x 15 mm 크기의 흡수영역(Schleicher & Schuell, 300)이 접착된다. 상기 투입지대는 1-2 mm 폭의 접착테이프(Tesa 4124)로서 y= 5 mm 인 위치에서 전체 막의 폭을 넘어 잔여 막들로부터 분리된다.
테스트 배치:
혈액샘플로는 응고되지 않은 온전한 혈액이 사용된다. 원래의 테스트를 위해서 100 ㎕ 희석되지않은 또는 1:3 또는 1:6으로 희석완충액(EnlisstII, Medion Diagnostics 또는 Diluent 1, Diamed)에서 희석된 혈액이 상기 투입지대로 투입된다. 상기 혈액이 투입지대를 벗어나면 결합되지 않은 적혈구를 막으로부터 격리하기 위하여 두번 Enlisst II 100 ㎕로 세척된다.
결과:
(a) 대조구: 본 실험은 상기 항 RBC 대조구 (인디케이터 존 영역 "혈액형 결정")가 분명한 양성 신호(붉은 점)를 나타내고 상기 적혈구 혈액형 0 제어 (인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교") 가 특징적으로 자주색 (금 입자) 또는 사용된 폴리스트롤입자의 색으로 염색되었을 경우에 유효하다.
(b) 실험결과: 각 혈액형항원의 유무에 따라 상기 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"의 해당 위치에는 붉은 점(양성) 또는 막의 거의 백색의 배경염색(음성)이 나타난다. 상응하는 동종응집소는 상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교"에서 상기 특징적인 금 입자의 자주색을 통해 자주색의 점 또는 사용된 폴리스트롤입자의 색으로 알 수 있다. 동종응집소가 없을 경우에는 배경으로는 구분되지 않는 신호들이 상기 위치에서 나타나지 않는다.
실시예 3:
테스트 스트립의 제조
상기 테스트 스트립은 투입지대, 인디케이터 존 영역, 그리고 흡수영역으로 구성된다. Millipore HiFlow 065 타입의 막은 작은 조각으로 20mm x 35mm 사이즈(폭/길이, x/y)로 잘라져서 하나의 캐리어층(배킹 시트, 예를 들면 G&L사의)에 접착된다. 인디케이터 존 영역들인 "혈청 교차 비교"(상기 투입지대에 근접)와 혈액형 결정(투입지대의 원위)로 나뉘어지는 상기 인디케이터 존 영역에는 경사져 엇갈려 배치된 서로 다른 결합요소가 0.2 ㎕ 씩 AD3200(바이오 도트)와 같은 분산액을 사용하여 투입된다.
인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교" - 세분 혈액형 A1, 혈액형 B, 혈액형 0, 혈액형 0 Rh-Formal R1R1 W (검출셀 1). 혈액형 0 Rh-Formel R2R2 (검출셀 2), 혈액형 0 Rh-타입 R1R1 (검출셀3)의 적혈구 고스트의 현탁액(적혈구 농축액으로 제조) 및 안티휴먼 IgG/IgM 항체 (Goat 안티 휴먼 IgG, Goat 안티휴먼 IgM, 시그마 I-3382, I-0759)를 대조구로 사용; 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"- 안티 A 항체- 클론 Birma-1 (Serologicals, TLJ0105); 안티-B 항체 - 클론 ES-4 (Serologicals, NCA0201); 안티 AB 항체 - 클론 AB6, AB26, AB92 (Medion Diagnotics, 010062); 안티 적혈구 항체 (Rabbit IgG Fraction of 안티-휴먼 RBC, Rockland, 209-4139).
상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교"의 결합요소들의 배치는 x= 3mm/ y= 10mm 인 위치의 세분 혈액형 A1의 적혈구 고스트와 시작한다. 세분화 혈액형 A2, B, 0의 상기 적혈구 고스트의 배치는 반복적으로 x= 2 mm / y=1.5 mm 인 거리에 따른다. 검출셀1의 상기 적혈구 고스트의 배치는 x = 11 mm / y=10 mm 인 위치에서 이루어지고, 검출셀 2와 3의 적혈구 고스트 및 휴먼 IgG/IgM의 배치는 반복적으로 = 2 mm / y=1.5 mm 인 거리에서 수행된다. 상기 적혈구 고스트는 0.1-0.5 % (v/v)의 현탁액 15 mM 칼륨인산염완충액 pH 7,5, 10 % (v/v) 메탄올, 상기 안티휴먼 IgG/IgM 항체 1:1로 혼합된 농축액 50 μg/ml의 15mM 칼륨완충액 pH 7,5, 10 % (v/v) 메탄올로 분산된다.
상기 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"의 결합요소의 배치는 x= 4 mm / y=20 mm 의 위치의 안티-A 항체와 시작한다. 다른 모든 결합요소들은 반복적으로 x=4 mm / y=1,5 mm 인 거리에서 세분 혈액형 A의 적혈구 고스트의 위치로 분산된다. 상기 항체의 희석은 다음과 같이 15mM 칼륨인산염완충액 pH 7.5, 10% (v/v) 메탄올: 안티-A 항체 1:3, 안티-B 항체 1:2, 안티-AB 항체 1:4, 안티-RBC 항체 1:3.
상기 막들은 상기 결합요소들의 분산 후 20분간 40℃에서 건조되고 그 다음 일정 공기습도에서 검사실시까지 보존된다. 투입지대의 원위의 양쪽에는 상기 막과 약 3 mm 중첩되는 20 x 15 mm 크기의 흡수영역(Schleicher & Schuell, 300) 이 접착된다. 상기 투입지대는 1-2 mm 폭의 접착테이프(Tesa 4124)로서 y= 5 mm 인 위치에서 전체 막의 폭을 넘어 잔여 막들로부터 분리된다.
혈액샘플로는 응고되지 않은 순수혈액이 사용된다. 원래 테스트를 위해서 120 ㎕ 희석되지 않은 또는 1:3 또는 1:6으로 희석완충액(EnlisstII, Medion Diagnostics 또는 Diluent 1, DiaMed)에서 희석된 혈액이 상기 투입지대로 투입된다. 상기 혈액이 투입지대를 벗어나면 결합되지 않은 적혈구를 막으로부터 격리하기 위하여 두 번 Enlisst II 120 ㎕로 세척된다. 이와 연결하여 75 ㎕ 의 안티-IgG/A/M 결합된 금 입자(20-40 nm, Arista Biologicals, CGIGA-0800, CGIGG-0800. CGIGM-0800), 1:10 (v/v) 로 TBS로 희석된, 0.08% 젤라틴 및 0.5 % 알부민이 상기 투입지대에 투입된다. 금 입자 대신에 색이 있는 100 ~ 400 nm의 폴리스트롤입자, 예를 들면 머크사의 Eurolab France/Estapor 가 사용할 수도 있다. 상기 금 입자가 상기 투입지대를 벗어나면, 상기 막은 다시 한번 또는 두 번 Enlisst II 120 μl 로 세척된다.
결과:
(a) 대조구: 본 실험은 상기 항 RBC 대조구(인디케이터 존 IX, 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정")가 분명한 양성 신호(붉은 점)를 나타내고 상기 항 IgG/IgM 대조구 (인디케이터 존 V, 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교") 가 특징적으로 자주색 (금 입자) 또는 사용된 폴리스트롤입자의 색으로 염색되었을 경우에 유효하다. 상기 안티 IgG/IgM 대조구는 모든 경우 염색되어져 있어야 한다/ 비정상적인 항체를 가지지 않은 AB형의 사람의 경우 상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교/항체검출" 에서 다른 신호가 있을 때에 상기 인디케이터 존의 염색이 올바른 실험실시를 나타내기 위한 것이다. 상기 인디케이터 존 IV (적혈구 고스트 혈액형 0)은 동종 응집소를 위한 음성 대조구이다. 상기 인디케이터 존의 염색이 의미하는 것은 동종 응집소 외에 비정상 항체가 존재해야 한다는 것, 다시 말해서 세 개의 인디케이터 존(V, VI, VII)중에서 하나는 역시 염색되어져야 한다는 것이다. 이런 경우가 아니라면 본 실험은 무효이다.
(b) 실험결과: 각 혈액형항원의 유무에 따라 상기 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"의 해당 위치에는 붉은 점(양성) 또는 막의 거의 백색의 배경염색(음성)이 나타난다. 상응하는 동종응집소는 상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교"에서 상기 특징적인 금 입자의 자주색을 통해 자주색의 점 또는 사용된 폴리스트롤입자의 색으로 알 수 있다. 동종 응집소가 없을 경우에는 배경으로는 구분되지 않는 신호들이 상기 위치에서 나타나지 않는다. 비정상 항체가 있을 경우 검출셀 1,2 또는 3의 상기 적혈구 고스트들을 구비한 한 개, 두 개의 또는 세 개의 인디케이터 존은 금 입자의 특징적인 자주색으로 염색되었거나 사용된 폴리스트롤입자의 색으로 알 수 있다.
실시예 4: 기증자의 혈액형 결정, 혈청 교차 비교(역 그룹핑), 항체검출테스트의 동시실행
테스트 스트립의 제조
테스트 스트립의 기본 설계는 상기 실시예 2에 대응한다. Millipore HiFlow Plus 065의 포맷은 15mm x 35 mm 사이즈(폭/길이, x/y)이다. 상기 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"의 상기 인디케이터 존들은 상기 실시예 2에 해당한다. 상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교/항체 검출" 은 다음과 같은 결합요소의 0,2 ㎕ 점 (point)마다 예를 들면 AD3200(바이오 도트)와 같은 분산액을 사용하여 분산된다:
세분화 혈액형 A1, 혈액형 A2, 혈액형 B, 혈액형 0, 검출셀 1-3 (실시예 2 참조)의 혼합으로 이뤄진 적혈구 고스트의 현탁액, 안티 휴먼 IgG/IgM (Goat 안티휴먼 IgG, Goat 안티휴먼 IgM, 시그마, I-3382, I-0759)가 대조구로 사용된다.
상기 인디케이터영역 "혈청 교차 비교/항체검출"의 결합요소의 배치는 x=2.5 mm/ y=10 mm 의 위치의 세분화 혈액형 A1의 적혈구 고스트와 시작한다. 세분화 혈액형 A2, B, 0의 적혈구 고스트의 배치는 x= 2 mm/ y= 1.5mm 의 거리에서 반복적. 검출셀 1-3의 혼합의 적혈구 고스트의 배치는 x=10.5 mm/y=13 mm의 위치에서 이루어지고 휴먼 IgG/IgM 의 배치는 x=12.5 mm / y = 14.5 mm 에서 이루어진다. 상기 적혈구 고스트는 0.1-0.5 % (v/v) 현탁액 15 mM 칼륨인산염완충액 pH 7.5, 10% (v/v) 메탄올, 상기 안티 휴먼 IgG/IgM 항체 1:1 농축 혼합 50 μg/ml 15mM 칼륨인 산염완충액 pH 7,5, 10 % (v/v) 메탄올로 분산된다.
상기 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"의 결합요소들의 배치는 x= 3 mm/ y= 20 mm 인 위치의 안티-A 항체와 시작한다. 다른 모든 결합요소들은 반복적으로 x= 3 mm / y= 1,5 mm 인 거리에서 안티-A 항체의 위치로 분산된다. 항체의 희석은 다음과 같다: 15mM 칼륨 인산염 완충액 pH 7.5, 10% (v/v) 메탄올: 안티 A 항체 1:3, 안티 B 항체 1:2, 안티 AB 항체 1:4, 안티 RBC 항체 1:3.
상기 막들은 상기 결합요소들의 분산 후 20분간 40℃에서 건조되고 그 다음 일정 공기습도에서 검사실시까지 보존된다. 투입지대의 원위에는 상기막과 약 3 mm 중첩되는 15 x 15 mm 크기의 흡수영역(Schleicher & Schuell, 300 이 접착된다. 상기 투입지대는 1-2 mm 폭의 접착테이프(Tesa 4124)로서 y= 5 mm 인 위치에서 전체 막의 폭을 넘어 잔여 막들로부터 분리된다.
테스트 배치:
실시예 1에 대응한다.
결과:
(a) 대조구: 본 실험은 상기 항 RBC 제어 (인디케이터 존 X, 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정")가 분명한 양성 신호(붉은 점)를 나타내고 상기 항 IgG/IgM 대조구 (인디케이터 존 VI, 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교") 가 특징적으로 자주색 (금 입자) 또는 사용된 폴리스트롤입자의 색으로 염색되었을 경우에 유효하다. 상기 안티 IgG/IgM 제어는 모든 경우 염색되어져 있어야 한다. 상적인 항체를 가지지 않은 AB형의 사람의 경우 상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교/항체검 출" 에서 다른 신호가 있을 때에 상기 인디케이터 존의 염색이 올바른 실험실시를 나타내기 위한 것이다. 인디케이터 존 IV (적혈구 고스트 혈액형 0)은 동종 응집소를 위한 음성 대조구이다. 상기 인디케이터 존의 염색이 의미하는 것은 동종 응집소 외에 비정상 항체가 존재해야한다는 것, 다시 말해서 세 개의 인디케이터 존 V, VI, VII 중에서 하나는 역시 염색되어져야 한다는 것이다. 이런 경우가 아니라면 본 실험은 무효이다.
(b) 실험결과: 각 혈액형항원의 유무에 따라 상기 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"의 해당 위치에는 붉은 점(양성) 또는 막의 거의 백색의 배경염색(음성)이 나타난다. 상응하는 동종응집소가 상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교"에서 상기 특징적인 금 입자의 자주색을 통해 자주색의 점 또는 사용된 폴리스트롤입자의 색으로 알 수 있다. 동종응집소가 없을 경우에는 배경으로는 구분되지 않는 신호들이 상기 위치에서 나타나지 않는다. 비정상 항체가 있을 경우 검출셀 1,2 또는 3의 상기 적혈구 고스트들을 구비한 한 개, 두 개의 또는 세 개의 인디케이터 존은 금 입자의 특징적인 자주색으로 염색되었거나 사용된 폴리스트롤입자의 색으로 알 수 있다.
실시예 5: 혈액형 결정 및 감염 마커 검출의 동시 수행
테스트 스트립의 제조:
테스트 스트립은 하나의 투입지대, 인디케이터 존 영역, 그리고 흡수영역으로 구성된다. Millipore HiFlow 065 타입의 막은 작은 조각으로 15mm x 35mm 사이즈(폭/길이, x/y)로 잘라져서 하나의 캐리어층(배킹 시트, 예를 들면 G&L사의)에 접착된다. 인디케이터 존 영역들인 "감염발생특질의 증거"(상기 투입지대에 근위)와 "혈액형 결정"(투입지대의 원위)로 나뉘어지는 상기 인디케이터 존 영역에는 경사져 엇갈려 배치된 결합요소가 0,2 ㎕씩 AD3200(Biodot)와 같은 분산제를 사용하여 투입된다.
인디케이터 존 영역 "감염발생특질의 증거" - 재결합 항원의 용액 (시필리스; TpN 15, TpN 17, TpN 47), 글리코단백질 gp-14, gp-41 (HIV-1;HIV-O) 와 gp-36 (HIV-2), 재결합 HCV 항원 (C-100, C-200, C33c, C22)의 순서로 된 합성 펩티드 및 안티-휴먼 IgG/OgM (염소 안티휴먼 IgG, Goat 안티-휴먼 IgM, 시그마, I-3382, I-0759) 제어로, 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정" - 안티-A 항체 - 클론 Birma-1 (Serologicals, TLJ0105); 안티-B 항체 - 클론 ES-4 (Serologicals, NCA0201); 안티-AB 항체 - 클론 AB6, AB26, AB92 (Medion Diagnotics, 010062); 안티-D 항체 - 클론 LDM3/ESD1 (SNBTS), 항 CDE 항체 - 클론 MS-24/MS-201/MS 20/MS-258 (Serologicals), 안티-적혈구 항체 (Rabbit IgG Fraction of anti Human RBC, Rockland, 209-4139).
상기 인디케이터 존 영역 "감염 발생특질의 증거"의 결합요소들의 배치는 x= 2.5 mm/ y= 10 mm 인 위치의 특성 HIV-1 (gp-14, gp-41)의 합성 펩티드와 시작한다. 다른 모든 결합요소들은 반복적으로 x= 2 mm / y= 1.5 mm 인 거리에서 세분 혈액형 A의 적혈구 고스트의 위치로 분산된다. 상기 인디케이터 I-V의 결합요소들은 적정 농축에서는 x= 2 mm / y=1.5 mm 인 거리에 0.1-0.5 % (v/v)의 현탁액 15 mM 칼륨인산염완충액 pH 7,5, 10 % (v/v) 메탄올, 상기 안티휴먼 IgG/IgM 농축액 50 μg/ml의 15mM 칼륨완충액 pH 7,5, 10 % (v/v) 메탄올로 분산된다.
상기 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"의 결합요소들의 배치는 x= 2,5 mm/ y= 20 mm 인 위치의 항 A 항체와 시작한다. 다른 모든 결합요소들은 반복적으로 x= 2 mm / y= 1,5 mm 인 거리에서 항 A 항체의 위치로 분산된다. 항체의 희석은 다음과 같다: 15mM 칼륨인산염완충액 pH 7.5, 10% (v/v) 메탄올: 안티 A 항체 1:3, 안티 B 항체 1:2, 안티 AB 항체 1:4, 안티 RBC 항체 1:3.
상기 막들은 상기 결합요소들의 분산 후 20분간 40℃에서 건조되고 그 다음 일정 공기습도에서 검사실시까지 보존된다. 투입지대의 원위에는 상기막과 약 3 mm 중첩되는 15 x 15 mm 크기의 흡수영역(Schleicher & Schuell, 300) 이 접착된다. 상기 투입지대는 1-2 mm 폭의 접착테이프(Tesa 4124)로서 y= 6 mm 인 위치에서 전체 막의 폭을 넘어 잔여 막들로부터 분리된다.
테스트 배치:
혈액샘플로는 항응고 순수혈액이 사용된다. 원래의 테스트를 위해서 100 ㎕ 희석되지않은 또는 1:3 또는 1:6으로 희석완충액(EnlisstII, Medion Diagnostics 또는 Diluent 1, Diamed)에서 희석된 혈액이 상기 투입지대로 투입된다. 상기 혈액이 투입지대를 벗어나면 결합되지 않은 적혈구를 막으로부터 격리하기 위하여 두 번 Enlisst II 100 ㎕ 로 세척된다.
이와 연결하여 50 ㎕ 의 항 IgG/A/M 결합된 금 입자(20-40 nm, Arista Biologicals, CGIGA-0800, CGIGG-0800. CGIGM-0800), 1:10 (v/v) 로 TBS로 희석된, 0.08% 젤라틴, 0.5 % 알부민, 및 항 HbsAg 변형 금 입자 (Arista Biologicals, ABHBS-0500)가 상기 투입지대에 적정 희석으로 투입된다. 금 입자 대신에 색이 있는 100 ~ 400 nm의 폴리스트롤입자, 예를 들면 머크사의 Eurolab France/Estapor가 사용할 수도 있다. 상기 금 입자가 상기 투입지대를 벗어나면, 상기 막은 다시 한번 또는 두번 Enlisst II 100 ㎕ 로 세척된다.
결과:
본 실험은 상기 항 RBC 대조구 (인디케이터 존 XII, 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정")가 분명한 양성 신호(붉은 점)를 나타내고 상기 안티-IgG/IgM 대조구 (인디케이터 존 VI, 인디케이터 존 영역 " 감염 발생특질의 증거") 가 특징적으로 자주색 (금 입자) 또는 사용된 폴리스트롤입자의 색으로 염색되었을 경우에 유효하다. 각 혈액형항원의 유무에 따라 해당 위치에는 붉은 점(양성) 또는 막의 거의 백색의 배경염색(음성)이 나타난다. 비정상적인 항체를 가지지 않은 AB형의 사람의 경우 상기 인디케이터 존 영역 "혈청 교차 비교/항체검출" 에서 다른 신호가 있을 때에 상기 인디케이터 존의 염색이 올바른 실험실시를 나타내기 위한 것이다. 상기 인디케이터 존 IV (적혈구 고스트 혈액형 0)은 동종 응집소를 위한 음성 대조구이다. 상기 인디케이터 존의 염색이 의미하는 것은 Isoagglutine 외에 비정상 항체가 존재해야한다는 것, 다시 말해서 세 인디케이터 존 V, VI, VII 중에서 하나는 역시 염색되어져야한다는 것이다. 이런 경우가 아니라면 본 실험은 무효이다.
HIV-1, HIV-2, 매독 및 B형 간염 면 항원 (HBsAg) 에 대한 항체가 있을 경우 각 위치는 금 입자를 위한 특징적인 자주색으로 염색되고 자주색의 점으로 알아볼 수 있다. 폴리스트롤입자가 인디케이터 입자로 사용되는 경우 사용된 폴리스트롤입 자의 색으로 각 위치는 염색된다. 이보다 훨씬 자주. 즉 모든 감염 발생특질의 음성 반응의 경우 단지 항 IgG/IgM 대조구(인디케이터 존 VI, 인디케이터 존 영역 "감염발생특질의 증거")만이 염색된다.
실시예 6: 혈액형 결정과 혈소판 항원에 대항하는 항체 검출의 동시 수행
테스트 스트립의 제조:
기본설계와 테스트 스트립의 포맷은 실시예 4에 대응한다. 인디케이터 존 영역은 인디케이터 존 "혈액형 결정"과 "혈소판 항원에 대항하는 항체의 입증"으로 세분된다. 다음의 결합요소들의 각 0.2 ㎕ 점은 예를 들어 AD3200 (바이오 도트)와 같은 분산액을 사용하여 분산된다:
인디케이터 존 영역 - "혈소판에 대항하는 항체의 입증" - 혈액형 0의 혈소판 막단백질/ HPA 1bb3aa5bb 와 HPA 1aa3bb5aa 및 안티-휴먼 IgG/IgM (염소 안티휴먼 IgG, Goat 안티휴먼 IgM, 시그마, I-3382, I-0759)의/HPA-항원프로필의 특징을 가진/ 제어로; 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정" - 안티-A 항체 - 클론 버마-1 (Serologicals, TLJ0105); 안티-B 항체 - 클론 ES-4 (Serologicals, NCA0201); 안티-AB 항체 - 클론 AB6, AB26, AB92 (Medion Diagnotics, 010062); 안티-D 항체 - 클론 LDM3/ESD1 (SNBTS), 안티-CDE 항체 - 클론 M-24/M-201/MS 80/MS-258 (Serologicals), 안티-적혈구 항체(Rabbit IgG Fraction of 안티-휴먼 RBC, Rockland, 209-4139). 혈소판의 막 단백질 대안으로 해당 특징이 찍혀진(HPA-항원특성) 재결합 항원이 투입될 수도 있다.
상기 인디케이터 존 영역 "혈소판 항원에 대항하는 항체의 입증"의 상기 결 합요소들의 위치/배치는 x=4 mm/ y=10 mm 의 위치의 막 단백질 항원특성 HPA 1bb3aa5bb 와 시작한다. 다른 모든 결합요소들은 반복적으로 x= 3.5 mm / y= 2 mm 인 거리에서 인디케이터(I) 의 위치로 분산된다. 인디케이터 존(I)과 Iidml 결합요소들은 적정 농축액에서 15 mM의 칼륨인산염완충액 pH 7,5, 10% (v/v) 메탄올, 상기 안티 휴먼 IgG/IgM 항체 1:1 농축 혼합 50 μg/ml 15mM 칼륨인산염완충액 pH 7.5, 10 % (v/v) 메탄올로 분산된다.
인디케이터 존 영역 "혈액형 결정"의 결합요소의 배치는 실시예 4에 대응한다.
상기 막들은 상기 결합요소들의 분산 후 20분간 40℃에서 건조되고 그 다음 일정 공기습도에서 검사실시까지 보존된다. 투입지대의 원위에는 상기막과 약 3 mm 중첩되는 15 x 15 mm 크기의 흡수영역(Schleicher & Schuell, 300)이 접착된다. 상기 투입지대는 1-2 mm 폭의 접착테이프(Tesa 4124)로서 y= 5 mm 인 위치에서 전체 막의 폭을 넘어 잔여 막들로부터 분리된다.
테스트 배치:
혈액샘플로는 응고되지않은 순수혈액이 사용된다. 적절한 테스트를 위해서 100 μl 희석되지않은 또는 1:3 또는 1:6으로 희석완충액(EnlisstII, Medion Diagnostics 또는 Diluent 1, Diamed)에서 희석된 혈액이 상기 투입지대로 투입된다. 상기 혈액이 투입지대를 벗어나면 결합되지 않은 적혈구를 막으로부터 격리하기 위하여 두 번 Enlisst II 100 ㎕ 로 세척된다.
이와 연결하여 50 ㎕의 항 IgG/A/M 결합된 금 입자(20-40 nm, Arista Biologicals, CGIGA-0800, CGIGG-0800. CGIGM-0800), 1:10 (v/v) 로 TBS로 희석된, 8.08% 젤라틴, 0.5 % 알부민이 상기 투입지대에 투입된다. 금 입자 대신에 색이 있는 100 ~ 400 nm의 폴리스트롤입자, 예를 들면 머크사의 Eurolab France/Estapor 가 사용할 수도 있다. 상기 금 입자가 상기 투입지대를 벗어나면, 상기 막은 다시 한번 또는 두 번 Enlisst II 100 ㎕ 로 세척된다.
결과:
본 실험은 상기 항 RBC 대조구 (인디케이터 존 IX, 인디케이터 존 영역 "혈액형 결정")가 분명한 양성 신호(붉은 점)를 나타내고 상기 안티-IgG/IgM 제어 (인디케이터 존 III, 인디케이터 존 영역 "혈소판 항원에 대항하는 항체의 검출")가 특징적으로 자주색 (금 입자) 또는 사용된 폴리스트롤입자의 색으로 염색되었을 경우에 유효하다. 각 혈액형항원의 유무에 따라 해당 위치에는 붉은 점(양성) 또는 막의 거의 백색의 배경염색(음성)이 나타난다. 혈소판 항원에 대항하는 항체가 존재할 때 각 위치는 금 입자를 통해 특징적인 자주색으로 염색되고 자주색의 점으로 알아 볼 수 있다. 폴리스트롤입자가 인디케이터 입자로 사용될 때 사용된 폴리스트롤입자의 색에서 각 위치는 염색된다.
본 발명에 따르면 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 용이하게 결정할 수 있다.

Claims (25)

  1. 액체 샘플을 투입하는 투입 지대(5);
    피분석물과 상호작용할 수 있는 적어도 두 개의 인디케이터 존의 적어도 하나의 그룹; 및
    상기 인디케이터 존을 통과한 후에 상기 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역(3)을 포함하는 막(2)을 포함하되,
    상기 인디케이터 존은 상기 투입 지대(5)와 상기 흡수 영역(3) 사이에 위치하며,
    상기 투입 지대(5)로부터 각각의 인디케이터 존의 그룹을 통과한 흡수 영역(3)(유로)까지의 흐름방향이 실질적으로 평행하며, 적어도 두 개의 서로 다른 유로가 존재하는 것을 특징으로 하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  2. 제1 항에 있어서,
    상기 인디케이터 존은 유로 당 액체 샘플이 하나 이상의 상기 인디케이터 존을 관류하지 않는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  3. 제1 항에 있어서,
    상기 인디케이터 존은 경사진 V자형, W자형, M자형, N자형 또는 선형 열로 배열되는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  4. 제1 항 내지 제3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 적어도 두 개 열의 인디케이터 존은 흐름방향으로 차례대로 및/또는 측면으로 엇갈려 배치되며, 상기 서로 다른 열의 인디케이터 존은 서로 간격을 두고 배치되어 유로 당 상기 액체 샘플이 하나 이상의 상기 인디케이터 존을 관류하지 않는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  5. 제1 항 또는 제3 항에 있어서,
    적어도 두 개 열의 인디케이터 존은 흐름방향으로 차례대로 및/또는 측면으로 엇갈려 배치되며,상기 서로 다른 열의 인디케이터 존은 서로 간격을 두지 않고 배치되어 유로 당 상기 액체 샘플이 하나 이상의 인디케이터 존을 관류하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  6. 제1 항 내지 또는 제3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 두 개 그룹의 인디케이터 존이 배치되며, 상기 인디케이터 존은 상기 투입지대로부터 서로 다른 흐름방향으로 시작하도록 위치하는 액체 샘플 내의 다수 의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  7. 제1 항 내지 제6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 인디케이터 존은 항체 또는 항체 단편 또는 렉틴, 항체 또는 항체 에피토프 및/또는 세포 또는 세포 단편을 포함하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  8. 제1 항 내지 제7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 인디케이터 존은 특히 혈액형 항원 또는 항원 에피토프에 대한 항체 또는 항체 단편 및 막 또는 혈액형 A1, A2, B 및/또는 O 적혈구의 세포 단편을 포함하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  9. 제1 항 내지 제7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 인디케이터 존은 특히 혈액형 항원 또는 항원 에피토프에 대한 항체 또는 항체 단편 및 합성 펩티드, 재결합된 항원 및/또는 감염성 마커에 대한 항체 또는 항체 단편을 포함하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  10. 제1 항 내지 제7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 인디케이터 존은 특히 혈액형 항원 또는 항원 에피토프에 대한 항체 또는 항체 단편 및 혈소판 및/또는 림프구의 단편을 포함하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  11. 제1 항 내지 제10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 막(2)은 바람직하게는 폴리에틸렌, 니트로셀룰로오스 또는 나일론으로 이루어지는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  12. 제1 항 내지 제11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투입 지대(5)의 아래로 및 상기 인디케이터 존의 위로 상기 막(2) 상에 적어도 하나의 밀폐요소(4)가 제공되는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  13. 제1 항 내지 제12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 적어도 하나의 밀폐부재(4) 아래로 및 상기 인디케이터 존 위로 적어도 하나의 결합패드가 배치되는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  14. 제1 항 내지 제13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 장치의 구성요소는 기계적 보강을 위하여 지지층(1) 상에 배치되는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  15. 제1 항 내지 제14 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 장치의 구성요소는 케이스에 통합되는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  16. 혈액을 분석, 특히, 혈액형 결정 및 혈청 상호비교(cross-check) 및/또는 항체 검출 테스트를 동시에 수행하는 제1 항 내지 제11 항 중 어느 한 항에 따른 장치의 용도.
  17. 혈액을 분석, 특히, 혈액형 결정 및 감염 혈청 마커 또는 이의 단편의 검출을 동시에 수행하는 제1 항 내지 제11 항 중 어느 한 항에 따른 장치의 용도.
  18. 혈액을 분석, 특히, 혈액형 결정 및 혈액세포, 특히, 안티 혈소판 또는 안티 림프구 항체 또는 이의 각각의 단편의 검출을 동시에 수행하는 제1 항 내지 제11 항 중 어느 한 항에 따른 장치의 용도.
  19. 제1 항 내지 제15 항 중 어느 한 항에 따른 장치의 적어도 하나의 막(2)의 투입 지대(5) 상에 샘플을 투입하는 단계를 포함하며,
    상기 샘플은 상기 액체 샘플이 상기 인디케이터 존을 통과하여 상기 흡수 영역(3) 방향으로 흐르게 하고, 상기 액체 샘플에서 상기 피분석물 또는 이의 유도체가 상기 인디케이터 존에서 복합체를 형성하도록 하기에 충분한 양으로 존재하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  20. 제19 항에 있어서,
    상기 피분석물 또는 이의 유도체는 혈액형 항원 또는 항원 에피토프, 혈액형 항원에 대한 항체 또는 이의 단편, 혈소판 또는 백혈구에 대한 항체 또는 이의 단편 또는 감염성 작용인자에 대한 항체 또는 이의 단편 또는 항원 감염성 작용인자 또는 항원 에피토프인 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  21. 제19 항 또는 제20 항에 있어서,
    상기 피분석물 또는 이의 유도체는 특히, 혈액형 체계 ABO, Rh 및 Kell의 항원 또는 항원 에피토프를 포함하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  22. 제19 항 또는 제20 항에 있어서,
    상기 피분석물 또는 이의 유도체는 특히,혈소판 및/또는 림프구에 대한 항체 또는 이의 단편을 포함하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  23. 제19 항 또는 제20 항에 있어서,
    상기 피분석물 또는 이의 유도체는 특히, 세균성 및/또는 바이러스 작용인자에 대한 항체 또는 이의 단편 또는 바이러스 또는 세균성 항원 또는 항원 에피토프를 포함하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  24. 제19 항 내지 제23 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 액체 샘플은 혈액 또는 혈액성분, 바람직하게는, 모든 성분을 포함하는 혈액, 혈액세포 응축물, 혈청, 형질 및/또는 대조구 혈청 또는 대조구 혈액과 같은 테스트 액체로 이루어지는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  25. 제19 항 내지 제24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 두 종류의 인디케이터 입자가 사용되며, 이 중 적어도 하나의 종류는 적혈구인 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
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