JP2001056341A

JP2001056341A - 血液型判定方法

Info

Publication number: JP2001056341A
Application number: JP11233765A
Authority: JP
Inventors: Jun Suzuoki; 純鈴置; Shinjiro Matsuda; 真次郎松田
Original assignee: Wako Pure Chemical Industries Ltd
Current assignee: Fujifilm Wako Pure Chemical Corp
Priority date: 1999-08-20
Filing date: 1999-08-20
Publication date: 2001-02-27

Abstract

(57)【要約】【課題】操作が簡便で且つ血液型の判定を迅速に行え
る血液型判定方法、及びこれに用いる血液型判定用試験
用具、並びに試薬キットを提供することを目的とする。【解決手段】赤血球が毛管現象により浸透可能な多孔
体の上面に固定化された、血液型物質に特異的に結合す
る物質に、赤血球を含む液体試料を上方から滴下接触さ
せ、その結果生じる当該特異的結合物と当該赤血球との
結合の有無により当該試料の血液型を判定する方法、及
びこれに用いる血液型判定用試験用具並びに試薬キッ
ト。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、赤血球表面に存在
する血液型物質に基づいた血液型判定方法、及びこれに
用いる血液型判定用試験用具並びに試薬キットに関す
る。

【０００２】

【従来の技術】血液型には、ＡＢＯ式血液型、Ｒｈ式血
液型、ＨＬＡ血液型等多くの種類が存在する。なかで
も、ＡＢＯ式血液型の判定は、輸血時の供血者と受血者
の適合性（輸血副作用）等の問題から特に重要であり、
一般に広く行われている。

【０００３】ＡＢＯ式血液型は、赤血球の表面に存在す
る血液型物質であるＡ抗原、Ｂ抗原の有無による分類
で、Ａ型のヒトはその赤血球表面にＡ抗原、その血清中
に抗Ｂ抗体を、またＢ型のヒトはその赤血球表面にＢ抗
原、その血清中に抗Ａ抗体を夫々保有している。

【０００４】従って、ＡＢＯ式血液型の判定は、赤血球
表面の血液型物質（血液型抗原）を検査する表試験の結
果と、血清中の抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体を検査する裏試験の
結果を照合して行われる。

【０００５】また、Ｒｈ式血液型の不適合が輸血副作用
や新生児溶血症疾患等の原因となることから、臨床上重
要な血液型として知られており、Ｒｈ式血液型の判定
も、一般に広く行われている。

【０００６】Ｒｈ式血液型は、アカゲザルの血液をウサ
ギに注射して得られた抗血清がヒトの赤血球を凝集する
ことを発見し、このようなヒトをＲｈ陽性、また赤血球
が凝集しないヒトをＲｈ陰性と分類した。その後、ヒト
由来の抗体の検出によりＲｈ式血液型が確立し、現在で
は40種類以上のＲｈ抗体が発見されている。

【０００７】これらのＡＢＯ式血液型の表試験やＲｈ式
血液型の判定には、２〜５％生食液浮遊血球（試料）と
血液型判定用抗体（血液型物質への特異的抗体）溶液と
を試験管内で混合した後、遠心分離処理（3000rpm、15
秒）し、血球沈渣をほぐしながら凝集の有無を観察する
試験管法や、５〜10％生食液浮遊血球（試料）と血液型
判定用抗体溶液とをスライドグラス上で混合して凝集の
有無を観察するスライドグラス法等が知られているが、
これらの方法は、凝集の有無による判定であるため、熟
練が必要であり、判定精度が低いという問題点や、ＡＢ
Ｏ式血液型の場合、抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体の２種類、Ｒｈ
式血液型の場合、抗Ｃ抗体、抗ｃ抗体、抗Ｄ抗体、抗Ｅ
抗体、抗ｅ抗体の５種類の判定用抗体溶液を用いて凝集
の有無を夫々観察する必要があり、操作が煩雑であると
いう問題点等があった。

【０００８】これらの方法の問題点を解決するために、
所謂イムノクロマト法と呼ばれる方法に基づくラテラル
フロー型の試験用具を用いる判定方法が開発されてい
る。この方法は、例えば抗Ａ抗体（Ａ型判定部）及び／
又は抗Ｂ抗体（Ｂ型判定部）を固定化したニトロセルロ
ース膜等でできた多孔体（展開膜）をポリ塩化ビニルシ
ート等の支持体上に貼り付けた試験用具の先端（液体試
料滴下部）に、赤血球を含む液体試料を滴下し、当該赤
血球を毛管現象により判定部へ水平に移動させ、判定部
での結合の有無を調べることにより当該試料の血液型を
判定するというものである。しかしながら、当該試料中
の赤血球が展開膜を展開して判定部に移動するまでに約
10分程度を要するため、迅速な判定ができないという問
題点があり、更なる改良が望まれていた。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記した如
き状況に鑑みなされたもので、操作が簡便であり、且つ
例えば１分以内という極めて短時間で判定可能な血液型
判定方法、及びこれに用いる血液型判定用試験用具並び
に試薬キットを提供することを目的とする。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明は、赤血球が毛管
現象により浸透可能な多孔体の上面に固定化された、血
液型物質に特異的に結合する物質に、赤血球を含む液体
試料を上方から滴下接触させ、その結果生じる当該特異
的結合物質と当該赤血球との結合の有無により当該試料
の血液型を判定する方法の発明である。

【００１１】また、本発明は、血液型物質に特異的に結
合する物質が上面に固定化された、赤血球が毛管現象に
より浸透可能な多孔体からなる血液型判定用試験用具の
発明である。

【００１２】更に、本発明は、血液型物質に特異的に結
合する物質が上面に固定化された、赤血球が毛管現象に
より浸透可能な多孔体からなることを特徴とする、血液
型判定用試薬キットの発明である。

【００１３】即ち、発明者等は、操作が簡便であり且つ
迅速に判定可能な血液型物質に基づいた血液型判定方法
を開発すべく鋭意研究を行った結果、赤血球が毛管現象
により浸透可能な多孔体の上面に固定化された、血液型
物質に特異的に結合する物質に、赤血球を含む液体試料
を上方から滴下接触させ、その結果生じる当該特異的結
合物質と当該赤血球との結合の有無により当該試料の血
液型判定を行えば、従来の血液型判定方法に於ける上記
した如き問題を解決して、簡便な操作により、血液型を
極めて短時間で判定し得ることを見出し、本発明を完成
するに至った。

【００１４】本発明に於いて用いられる、赤血球が毛管
現象により浸透可能な多孔体（以下、本発明に係る多孔
体と略記する。）としては、毛管現象が生じ得る性質を
有するものであり、且つ赤血球を含む液体試料を接触さ
せた場合に、その毛管現象により赤血球が浸透可能であ
るようなものであれば何れでもよく、例えば多孔性のシ
ート状乃至膜状物、フォーム（発泡体）、織布状物、不
織布状物、編物状物等が挙げられる。また、その孔径と
しては、例えば、通常３〜100μm、好ましくは５〜80μ
m、より好ましくは８〜50μmである。これらの素材とし
ては、天然、半合成又は合成の繊維状等が挙げられ、こ
れら素材を、抄紙、製膜、発泡成型、編製、織製等の常
法により成型することにより得ることができる。これら
素材の具体例としては、例えば綿、麻、絹、セルロー
ス、ロックウール、獣毛、ニトロセルロース、セルロー
スアセテート、ガラス繊維、カーボン繊維、ボロン繊
維、ポリアミド、アラミド、ポリビニルアルコール、ポ
リビニルアセテート、レーヨン、ポリエステル、ポリア
クリル酸、ポリアクリル酸エステル、ポリプロピレン、
ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン等
が挙げられる。尚、これら多孔体に更にアミノ基、カル
ボキシル基等の官能基を導入した、所謂活性基修飾多孔
体も本発明の多孔体に包含される。また、該多孔体の形
状は、特に限定されないが、矩形乃至方形や円形乃至楕
円形が一般的である。

【００１５】本発明に於いて用いられる血液型物質に特
異的に結合する物質（以下、血液型特異的結合物質と略
記する。）としては、血液型物質（血液型抗原）に特異
的に結合する物質なら何れでもよく、例えば抗体、レク
チン等が挙げられる。

【００１６】当該抗体としては、例えば抗Ａ抗体，抗Ｂ
抗体等のＡＢＯ式血液型抗原に対する抗体、例えば抗Ｄ
抗体，抗Ｃ抗体，抗ｃ抗体，抗Ｅ抗体，抗ｅ抗体等のＲ
ｈ式血液型抗原に対する抗体、例えば抗Ｍ抗体，抗Ｎ抗
体，抗Ｓ抗体，抗ｓ抗体等のＭＮＳｓ血液型抗原に対す
る抗体、例えば抗Ｐ¹抗体，抗Ｐ^k抗体，抗ＰＰ¹Ｐ^k抗体
等のＰ式血液型抗原に対する抗体、例えば抗Ｌｅ^a抗
体，抗Ｌｅ^b抗体等のＬｅｗｉｓ式血液型抗原に対する
抗体、例えば抗Ｋ抗体，抗ｋ抗体等のＫｅｌｌ式血液型
抗原に対する抗体、例えば抗Ｆｙ^a抗体，抗Ｆｙ^b抗体等
のＤｕｆｆｙ式血液型抗原に対する抗体、例えば抗Ｊｋ
^a抗体，抗Ｊｋ^b抗体等のＫｉｄｄ式血液型抗原に対する
抗体、例えば抗Ｄｉ^a抗体，抗Ｄｉ^b抗体等のＤｉｅｇｏ
式血液型抗原に対する抗体等が挙げられる。

【００１７】該抗体はポリクローナル抗体でもモノクロ
ーナル抗体でもよいが、均一な性質を有する抗体の得易
さ等を考慮すると、ポリクローナル抗体よりもモノクロ
ーナル抗体の方が好ましい。

【００１８】これらの抗体は、市販品を用いてもよい
し、例えば、兎、馬、羊、山羊、ラット、マウス等の動
物抗血清から公知の方法〔例えば、「免疫実験学入門、
第２刷、松橋直等、（株）学会出版センター(1981)」に
記載の方法、「タンパク質精製法、Robert.K.Scopes
著、シュプリンガー・フェアラーク東京（株）、1985
年、37頁〜179頁」に記載された方法等。〕で取得され
るポリクローナル抗体、或いは細胞融合技術や遺伝子組
み換え技術等を利用した公知の方法〔Nature, vol. 25
6, 498(1975)に記載の方法、Eur. J. Immunol, 6, 511
(1976)に記載の方法等。〕で取得されるモノクローナル
抗体を用いてもよい。尚、これらを単独で用いても適宜
組み合わせて用いてもよい。

【００１９】また、本発明に於いて用いられる血液型特
異的結合物質としての抗体には、上記の抗体の一部、例
えば、当該抗体をパパイン等で部分分解して得られるF
(ab') ₂フラグメント、F(ab')₂フラグメントを還元して
得られるFab'フラグメント等の、所謂抗体フラグメント
も包含される。

【００２０】また、上記のレクチンとしては、例えば抗
Ａ１レクチン（ヒマラヤフジマメ由来）、抗Ｈレクチン
（ハリエニシダ由来）等が挙げられる。

【００２１】これらレクチンは、市販品を用いてもよい
し、例えば公知の方法〔例えば、「日本臨床衛生検査技
師会ライブラリー XII 輸血検査の実際、改訂第１
版、「日本臨技輸血検査標準法」改訂委員会著、（社）
日本臨床衛生検査技師会、1996年、171頁」に記載の方
法等。〕で取得されるものを用いてもよい。

【００２２】本発明に於いて、血液型特異的結合物質を
本発明に係る多孔体に固定化させる方法としては、通常
この分野で用いられる方法であれば何れでもよく、例え
ば上記の本発明に係る多孔体に上記した如き血液型特異
的結合物質を含有する溶液を、例えば塗布、滴下或いは
噴霧等した後、これを乾燥して物理的吸着により固定化
させる方法、本発明に係る多孔体中の例えばアミノ基、
カルボキシル基等の官能基を利用して化学的に血液型特
異的結合物質を固定化させる方法、目的の免疫反応に関
与しないタンパク質を血液型特異的結合物質と結合させ
た後、例えば塗布、滴下或いは噴霧等した後、これを乾
燥して物理的吸着により固定化させる方法等が挙げられ
る。

【００２３】このようにして得られた血液型特異的結合
物質が固定化された本発明に係る多孔体は、非特異的な
吸着による測定への影響を防止するために、所謂ブロッ
キング処理を施しておくことが望ましい。このようなブ
ロッキング処理は、通常この分野で行われる方法、例え
ば上記の多孔体を例えばアルブミン、グロブリン、カゼ
イン、ポリビニルアルコール、界面活性剤等のブロッキ
ング剤（但し、測定への影響のないものを選択して使用
する。）を含有する適当な緩衝液（例えば、ｐＨが５〜
９程度で、10〜500ｍMの例えばトリス緩衝液、リン酸緩
衝液、ベロナール緩衝液、ホウ酸緩衝液、グッド緩衝液
等）中に適当な時間浸漬した後に乾燥する方法等により
行えばよい。

【００２４】血液型特異的結合物質の本発明に係る多孔
体への固定量は、測定対象物質（即ち、血液型物質）の
種類や、検出限界等をどの程度に設定するかによって変
動するが、例えば本発明に係る多孔体の血液型特異的結
合物質が固体化される部分の単位面積（cm²）当たりの
固定量として、通常0.01μg〜1mg、好ましくは0.1μg〜
100μg、より好ましくは1μg〜10μgである。

【００２５】本発明の判定方法は、例えば以下の如く行
えばよい。

【００２６】赤血球が毛管現象により浸透可能な多孔体
の上面に固定化された血液型特異的結合物質に、赤血球
を含む液体試料を上方から滴下接触させ、要すれば、該
多孔体の血液型判定部に結合した赤血球に由来する着色
と、多孔体上面に残存しているその他の赤血球に由来す
る着色との誤認を避けるため、例えば生理食塩水、リン
酸緩衝生理食塩水（PBS）等の等張液を更に上方から滴
下して当該多孔体を洗浄し、その結果生じる当該特異的
結合物質と当該赤血球との結合の有無により当該試料の
血液型の判定を行う。尚、余分な赤血球を含む液体試料
等を当該多孔体から効率よく除去し、多孔体に残存して
いるだけの赤血球に由来する着色による誤認を避けるた
めに、当該多孔体の下面に吸収体を密着させて余分な当
該試料を吸収させるか、或いは当該多孔体を、例えば目
皿付きロート、ガラスフィルター等の吸収処理を行える
器具上に置いて、適当な時期に余分な液体試料を下面か
ら吸引除去することが望ましい。当該多孔体が液体試料
を充分吸収するだけの厚みを有していない場合は、特に
このような対策が望まれる。

【００２７】即ち、このような操作を行うと当該赤血球
が当該血液型特異的結合物質と結合する場合には、当該
箇所に赤血球が集積される結果、この赤血球の赤色（以
下、「赤血球の結合に由来する着色」という場合もあ
る。）を認識することができるようになるので、このよ
うな現象の有無を確認することで血液型の判定が可能と
なる。尚、判定までに要する時間は15〜30秒程度、長く
ても１分以内である。

【００２８】判定は、目視で行っても、また、例えばプ
レテスター RM-405、プレテスターRM-505〔何れも和光
純薬工業（株）製〕等の尿試験紙用のテスター、例えば
デンシトメーター等の機器を用いて行ってもよい。

【００２９】図１に判定原理を示す。

【００３０】本発明に係る多孔体の下面に吸収体を密着
させる場合、これらは、相互間に毛管現象が生じるよう
に接着されていればよい。

【００３１】このような目的で使用される吸収体として
は、余分な液体試料を効率よく吸収することのできるも
のなら何れでもよく、例えば多孔性のシート状乃至膜状
物、フォーム（発泡体）、織布状物、不織布状物、編物
状物等が挙げられる。また、その孔径としては、通常８
μm以上であればよい。これらの素材としては、天然、
半合成又は合成の繊維状等が挙げられ、これら素材を、
抄紙、製膜、発泡成型、編製、織製等の常法により成型
することにより得ることができる。これら素材の具体例
としては、例えば綿、麻、絹、セルロース、ロックウー
ル、獣毛、ニトロセルロース、セルロースアセテート、
ガラス繊維、カーボン繊維、ボロン繊維、ポリアミド、
アラミド、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセテー
ト、レーヨン、ポリエステル、ポリアクリル酸、ポリア
クリル酸エステル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポ
リ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン等が挙げられる。ま
た、当該吸収体への吸水量を増加させるために、紙おむ
つ等の吸水性樹脂を内包したものでもよい。さらに、該
多孔体の形状は、特に限定されないが、矩形乃至方形や
円形乃至楕円形が一般的である。

【００３２】本発明の判定方法に於いて、種類の異なる
血液型特異的結合物質が複数種固定された多孔体を用い
てこれを行えば、血液型の判定を一回の操作で行うこと
ができる。本発明に係る多孔体に、種類の異なる血液型
特異的結合物質を複数種固定化させるに当たっては、通
常、当該多孔体の異った特定の領域に夫々別々に適当な
形状（直線状、円形状、方形状等）で固定化すればよい
が、なかでも直線状に平行して固定化させるのが好まし
い。

【００３３】例えば、血液型特異的結合物質として抗Ａ
抗体及び抗Ｂ抗体を用いて本発明の判定方法を行えば、
ＡＢＯ式血液型の判定、即ち、Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型又は
Ｏ型の判定を一回の操作で行うことができる。

【００３４】即ち、図２に示すように、本発明に係る多
孔体に固定化された抗Ａ抗体と抗Ｂ抗体に、赤血球を含
む液体試料を上方から滴下接触させ、その結果生じる当
該抗Ａ抗体と抗Ｂ抗体の固定部位（判定部）に於ける赤
血球の結合に由来する着色をもとに当該試料の血液型の
判定を行えばよい。尚、図２で用いた液体試料はＡ型赤
血球を含有するものである。

【００３５】そして、上記ＡＢＯ式血液型の判定に於い
て、抗Ａ抗体固定部位（Ａ型判定部）にのみ赤血球に由
来する着色が認められた場合、試料中の赤血球にはＡ型
の抗原のみが存在していることから、血液型はＡ型と判
定され、抗Ｂ抗体固定部位（Ｂ型判定部）にのみ赤血球
の結合に由来する着色が認められた場合、試料中の赤血
球にはＢ型の抗原のみが存在していることから、血液型
はＢ型と判定される。また、抗Ａ抗体固定化部位（Ａ型
判定部）及び抗Ｂ抗体固定部位（Ｂ型判定部）の両方に
赤血球に由来する着色が認められた場合、試料中の赤血
球にはＡ型とＢ型の両方の抗原が存在していることか
ら、血液型はＡＢ型と判定され、抗Ａ抗体固定部位（Ａ
型判定部）及び抗Ｂ抗体固定部位（Ｂ型判定部）の何れ
にも赤血球の結合に由来する着色が認められない場合、
試料中の赤血球にはＡ型とＢ型の両方の抗原が存在して
いないことから、血液型はＯ型と判定される。

【００３６】また、例えば抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体、抗Ｄ抗
体を用いて本発明の判定方法を行えば、ＡＢＯ式血液型
の判定のみならずＲｈ式血液型のうち最も重要であるＤ
型の判定、即ち、Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型又はＯ型の判定と
Ｄ型陽性又はＤ型陰性の判定とを一回の操作で同時に行
うことができる。

【００３７】即ち、図３に示すように、本発明に係る多
孔体に固定化された抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体及び抗Ｄ抗体
に、赤血球を含む液体試料を上方から滴下接触させ、そ
の結果生じる当該抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体、抗Ｄ抗体の固定
部位（判定部）に於ける赤血球の結合に由来する着色を
もとに当該試料の血液型の判定を行えばよい。尚、図３
で用いた液体試料はＡＢＯ式血液型がＡ型であって、Ｄ
型陽性である赤血球を含有するものである。

【００３８】そして、上記ＡＢＯ式血液型とＤ型の同時
判定に於いて、ＡＢＯ式血液型の判定は先に述べたとお
りである。また、Ｄ型の判定は、抗Ｄ抗体固定部位（Ｄ
型判定部）に赤血球の結合に由来する着色が認められた
場合、試料中の赤血球にはＤ型の抗原が存在しているこ
とから、Ｄ型陽性と判定され、抗Ｄ抗体固定部位に赤血
球の結合に由来する着色が認められない場合、試料中の
赤血球にはＤ型の抗原が存在していないことから、Ｄ型
陰性と判定される。

【００３９】更に、例えば抗Ｄ抗体、抗Ｃ抗体、抗Ｅ抗
体、抗ｃ抗体及び抗ｅ抗体を用いて本発明の判定方法を
行えば、Ｒｈ式血液型を判定することができる。即ち、
Ｄ型、Ｃ型、Ｅ型、ｃ型又はｅ型の判定を一回の操作で
同時に行うことができる。

【００４０】即ち、図４に示すように、本発明に係る多
孔体に固定化された抗Ｄ抗体、抗Ｃ抗体、抗Ｅ抗体、抗
ｃ抗体及び抗ｅ抗体に、赤血球を含む液体試料を上方か
ら滴下接触させ、その結果生じる当該抗Ｄ抗体、抗Ｃ抗
体、抗Ｅ抗体、抗ｃ抗体及び抗ｅ抗体の固定部分（判定
部）に於ける赤血球の結合に由来する着色をもとに当該
試料の血液型の判定を行えばよい。尚、図４で用いた液
体試料はＲｈ式血液型がＥ型である赤血球を含有するも
のである。

【００４１】尚、上記Ｒｈ式血液型の判定に於いては、
その重要性から、Ｄ型の判定が、Ｃ型、Ｅ型、ｃ型及び
ｅ型の判定に先立って行われる場合が多いので、このよ
うな場合には、Ｃ型、Ｅ型、ｃ型及びｅ型の判定と同時
にＤ型の判定を行う必要はない。従って、上記のＲｈ式
血液型判定方法には、抗Ｃ抗体、抗Ｅ抗体、抗ｃ抗体及
び抗ｅ抗体のみを用いたものも包含される。

【００４２】即ち、上記Ｒｈ式血液型の判定に於いて、
抗Ｄ抗体固定部位に赤血球の結合に由来する着色が認め
られた場合、試料中の赤血球にはＤ型の抗原が存在して
いることから、Ｒｈ式血液型がＤ型と判定され、抗Ｃ抗
体固定部位（Ｃ型判定部）に赤血球の結合に由来する着
色が認められた場合、試料中の赤血球にはＣ型の抗原が
存在していることから、Ｒｈ式血液型がＣ型と判定さ
れ、抗Ｅ抗体固定部位（Ｅ型判定部）に赤血球の結合に
由来する着色が認められた場合、試料中の赤血球にはＥ
型の抗原が存在していることから、Ｒｈ式血液型はＥ型
と判定される。また、抗ｃ抗体固定部位（ｃ型判定部）
に赤血球の結合に由来する着色が認められた場合、試料
中の赤血球にはｃ型の抗原が存在していることから、Ｒ
ｈ式血液型はｃ型と判定され、抗ｅ抗体固定部位（ｅ型
判定部）に赤血球の結合に由来する着色が認められた場
合、試料中の赤血球にはｅ型の抗原が存在していること
から、Ｒｈ式血液型はｅ型と判定される。

【００４３】本発明に於ける液体試料としては、赤血球
を含むものであればよいが、例えば、血液、これから分
離して得られた赤血球、或いはこれらを適当な等張緩衝
液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水等）、生理食塩水等
で希釈或いは懸濁させて得られる液体試料等が挙げられ
る。

【００４４】また、当該液体試料中の赤血球濃度として
は、通常0.1〜80％、好ましくは0.5〜50％、より好まし
くは1〜50％である。

【００４５】本発明の血液型判定用試験用具及び血液型
判定用試薬キットは、上述した如き本発明の血液型判定
方法に使用されるもので、血液型特異的結合物質が上面
に固定化された、赤血球が毛管現象により浸透可能な多
孔体からなるものであり、要すれば、下面に吸収体を接
触させてもよい。

【００４６】尚、本発明の試験用具又はキットは単一の
本発明に係る多孔体からなるものであっても、複数の本
発明に係る多孔体を組み合わせて一体に構成したもので
あってもよい。

【００４７】また、本発明の試験用具又はキットの主要
構成要素である血液型特異的結合物質や本発明に係る多
孔体の好ましい態様や具体例は上で述べた通りである。

【００４８】本発明の血液型判定用試薬キットの好まし
い態様としては、上記した如き本発明の血液型判定用具
と、例えば陽性コントロール又は／及び陰性コントロー
ル、血液希釈用等張液（例えば生理食塩水、リン酸緩衝
生理食塩水（PBS）等）を適宜組み合わせたもの等が挙
げられる。

【００４９】本発明の試験用具の態様の例を図５〜９に
示す。尚、図７はＡＢＯ式血液型の判定に用いられる試
験用具の好ましい態様の一つ、図８はＡＢＯ式血液型の
判定とＤ型の判定を同時に行う際に用いられる試験用具
の好ましい態様の一つ、図９はＲｈ式血液型の判定に用
いられる試験用具の好ましい態様の一つをそれぞれ示
す。

【００５０】図５に於いて各数字は夫々以下のものを示
す。１：本発明に係る多孔体２：血液型特異的結合物質固定部分（判定部）

【００５１】図６に於いて各数字は夫々以下のものを示
す。１：非吸収体２：本発明に係る多孔体３：吸収体４：血液型特異的結合物質固定部分（判定部）

【００５２】図７に於いて各数字は夫々以下のものを示
す。１：非吸収体２：本発明に係る多孔体３：吸収体４：抗Ａ抗体固定部分（Ａ型判定部）５：抗Ｂ抗体固定部分（Ｂ型判定部）

【００５３】図８に於いて各数字は夫々以下のものを示
す。１：非吸収体２：本発明に係る多孔体３：吸収体４：抗Ａ抗体固定部分（Ａ型判定部）５：抗Ｂ抗体固定部分（Ｂ型判定部）６：抗Ｄ抗体固定部分（Ｄ型判定部）

【００５４】図９に於いて各数字は夫々以下のものを示
す。１：非吸収体２：本発明に係る多孔体３：吸収体 (４) ：抗Ｄ抗体固定部分（Ｄ型判定部）５：抗Ｃ抗体固定部分（Ｃ型判定部）６：抗Ｅ抗体固定部分（Ｅ型判定部）７：抗ｃ抗体固定部分（ｃ型判定部）８：抗ｅ抗体固定部分（ｅ型判定部）

【００５５】尚、前述した如く、Ｒｈ式血液型の判定に
於いては、その重要性から、Ｄ型の判定が、Ｃ型、Ｅ
型、ｃ型及びｅ型の判定に先立って行われる場合が多い
ので、このような場合には、Ｃ型、Ｅ型、ｃ型及びｅ型
の判定と同時にＤ型の判定を行う必要はない。従って、
上記の本発明に係るＲｈ式血液型の判定に用いられる試
験用具には、抗Ｃ抗体、抗Ｅ抗体、抗ｃ抗体及び抗ｅ抗
体のみを固定化させた本発明に係る多孔体からなるＲｈ
式血液型判定用試験用具も包含される。

【００５６】上記した如き例えば図６乃至図９で示され
る本発明の試験用具を調製するに当たっては、先ず、血
液型特異的結合物質（例えば、抗Ａ抗体、抗Ｂ抗体、抗
Ｄ抗体、抗Ｃ抗体、抗Ｅ抗体、抗ｃ抗体、抗ｅ抗体等）
が固定化された判定部を有する本発明に係る多孔体を作
製した後、要すれば、その下面に吸収体を接着し、液体
試料を効率よく吸収し得るようにする。

【００５７】更に、上方より滴下された液体試料が本発
明に係る多孔体の表面全体に急速に広がり、赤血球が判
定部位以外の表面からも浸透することで該多孔体に固定
化された血液型特異的結合物質と接触する量が少なくな
り、判定部での着色が薄くなって判定が困難となるのを
防止する目的で、本発明に係る多孔体の上面に、血液型
特異的結合物質が固定化された判定部分を含むように、
中央をくり抜いた非吸収体（打ち抜き部を有する非吸収
体）を接着させ、液体試料を判定部位とが充分接触し得
るようにしてもよい。

【００５８】これら非吸収体としては、例えばポリプロ
ピレン，ポリエチレン，ポリ塩化ビニル，ポリ塩化ビニ
リデン，ポリスチレン等の材質からなるシート状乃至膜
状物が挙げられる。

【００５９】以下に実施例を挙げ、本発明を更に具体的
に説明するが、本発明はこれらによって何等限定される
ものではない。

【００６０】

【実施例】実施例．１（１）抗体固定多孔体（展開膜）の作成血液型抗Ａ抗体〔モノクローナル抗Ａワコー：和光純薬
工業（株）〕を多孔体であるニトロセルロース膜（孔
径：12μm、ワットマン社製）（1.5cm×0.8cm）に対し
て塗布機（リノマート：カマグ社製）により下端より0.
45cmの位置に線塗布した（0.5μl/cm²）Ａ型判定部位を
作製し、同じ多孔体上面の別の部位（下端より0.75cm）
に血液型抗Ｂ抗体〔モノクローナル抗Ｂワコー：和光純
薬工業（株）〕を塗布機により線塗布して（0.5μl/c
m²）Ｂ型判定部位を作製し、更に同じ多孔体上面の別の
部位（下端より1.05cm）に血液型抗Ｄ抗体〔モノクロー
ナル抗Ｄワコー：和光純薬工業（株）〕を塗布機により
線塗布して（0.5μl/cm²）Ｄ型判定部位を作製し、抗Ａ
型抗体、抗Ｂ型抗体及び抗Ｄ型抗体の３本の判定部を作
製した。該多孔体を乾燥させた後、50mM リン酸緩衝液
（１％ショ糖及び１％ BSA含有、ｐＨ7.2）中に30分間
浸し、次いで、50mM リン酸緩衝液〔１％ショ糖及び１
％ポリ（ビニルピロリドン）−コ−ビニル酢酸含有、
ｐＨ7.2〕により洗浄した後、乾燥させて、判定部位を
有する多孔体を作製した。

【００６１】（２）試験用具の組立吸収体である脱脂綿（２cm×２cm）の上に、多孔体を密
着するように乗せ、その上に多孔体が有する判定ライン
を塗布した部分に相当する部分が液体試料滴下部となる
ような打ち抜きを設けた不透明な非吸収性接着シート
（2cm×2cm）を乗せて、多孔体を脱脂綿に固定し、図10
に示す試験用具を作製した。

【００６２】図10に於いて各数字は以下のものを示す。１：非吸収性シート２：本発明に係る多孔体３：抗Ａ抗体固定部分（Ａ型判定部）４：抗Ｂ抗体固定部分（Ｂ型判定部）５：抗Ｄ抗体固定部分（Ｄ型判定部）６：吸収体７：打ち抜き部

【００６３】（３）血液型判定方法（２）で作製した試験用具の液体試料滴下部に、液体試
料（例えば血液又は血球浮遊液）１滴を滴下し、10数秒
放置して、該液体試料が展開膜に吸収された後、洗浄液
（例えば生理食塩水）を３滴滴下し、これが吸収された
後に判定部の着色を観察した。この結果、液体試料にＡ
型の血液を用いた場合には、Ａ型判定部のみに赤血球に
由来する着色が認められ、Ｂ型判定部には着色は認めら
れず、液体試料にＢ型の血液を用いた場合には、Ｂ型判
定部のみに赤血球に由来する着色が認められ、Ａ型判定
部には着色は認められなかった。また、液体試料にＡＢ
型の血液を用いた場合には、Ａ型判定部及びＢ型判定部
共に赤血球に由来する着色が認められた。液体試料にＯ
型の血液を用いた場合には、Ａ型判定部及びＢ型判定部
の何れにも赤血球に由来する着色は認められなかった。
また液体試料にＲｈ陽性の血液を用いた場合には、Ｄ型
判定部に赤血球に由来する着色が認められ、液体試料に
Ｒｈ陽性の血液を用いた場合にはＤ型判定部に赤血球に
由来する着色は認められなかった。

【００６４】これらの結果より、本発明の試験用具を用
いて血液型の判定を行えば、ＡＢＯ型の判定（表試験）
が一回の操作で15〜30秒程度で簡単に行え、更にはＲｈ
陽性・陰性の判定も同時に行えることが判る。

【００６５】

【発明の効果】以上述べた如く、本発明は、簡便で、高
精度な血液型判定方法、及びこれに用いる血液型判定用
試験用具並びに試薬キットを提供するものであり、本発
明を利用することにより、簡便に、精度良く生体由来試
料の血液型を判定することができ、更には血液型を１回
の操作で例えば１分以内という極めて短時間で判定する
ことができるという効果を奏する。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の血液型判定方法の好ましい態様の原理
を模式的に示す図である。

【図２】本発明の血液型判定方法の好ましい態様の原理
を模式的に示す図である。

【図３】本発明の血液型判定方法の好ましい態様の原理
を模式的に示す図である。

【図４】本発明の血液型判定方法の好ましい態様の原理
を模式的に示す図である。

【図５】本発明の血液型判定用試験用具の態様の一例を
示す図である。

【図６】本発明の血液型判定用試験用具の好ましい態様
の一つを示す図である。

【図７】本発明の血液型判定用試験用具の好ましい態様
の一つを示す図である。

【図８】本発明の血液型判定用試験用具の好ましい態様
の一つを示す図である。

【図９】本発明の血液型判定用試験用具の好ましい態様
の一つを示す図である。

【図１０】本発明の血液型判定用試験用具の好ましい態
様の一つを示す図である。

【符号の説明】

図５に於いて各数字は夫々以下のものを示す。１：本発明に係る多孔体２：血液型特異的結合物質固定部分（判定部）図６に於いて各数字は夫々以下のものを示す。１：非吸収体２：本発明に係る多孔体３：吸収体４：血液型特異的結合物質固定部分（判定部）図７に於いて各数字は夫々以下のものを示す。１：非吸収体２：本発明に係る多孔体３：吸収体４：抗Ａ抗体固定部分（Ａ型判定部）５：抗Ｂ抗体固定部分（Ｂ型判定部）図８に於いて各数字は夫々以下のものを示す。１：非吸収体２：本発明に係る多孔体３：吸収体４：抗Ａ抗体固定部分（Ａ型判定部）５：抗Ｂ抗体固定部分（Ｂ型判定部）６：抗Ｄ抗体固定部分（Ｄ型判定部）図９に於いて各数字は夫々以下のものを示す。１：非吸収体２：本発明に係る多孔体３：吸収体 (４) ：抗Ｄ抗体固定部分（Ｄ型判定部）５：抗Ｃ抗体固定部分（Ｃ型判定部）６：抗Ｅ抗体固定部分（Ｅ型判定部）７：抗ｃ抗体固定部分（ｃ型判定部）８：抗ｅ抗体固定部分（ｅ型判定部）図10に於いて各数字は夫々以下のものを示す。１：非吸収性シート２：本発明に係る多孔体３：抗Ａ抗体固定部分（Ａ型判定部）４：抗Ｂ抗体固定部分（Ｂ型判定部）５：抗Ｄ抗体固定部分（Ｄ型判定部）６：吸収体７：打ち抜き部

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】赤血球が毛管現象により浸透可能な多孔
体の上面に固定化された、血液型物質に特異的に結合す
る物質に、赤血球を含む液体試料を上方から滴下接触さ
せ、その結果生じる当該特異的結合物質と当該赤血球と
の結合の有無により当該試料の血液型を判定する方法。
【請求項２】血液型物質に特異的に結合する物質が、
抗Ａ型抗体、抗Ｂ型抗体及び抗Ｄ型抗体からなる群より
選ばれた少なくとも1種以上である、請求項１に記載の
方法。
【請求項３】血液型物質に特異的に結合する物質が、
抗Ｃ型抗体、抗ｃ型抗体、抗Ｅ型抗体、抗ｅ型抗体及び
抗Ｄ型抗体からなる群より選ばれた少なくとも1種以上
である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】多孔体が、３〜100μmの孔径を有するも
のである、請求項１〜３の何れかに記載の方法。
【請求項５】血液型物質に特異的に結合する物質が上
面に固定化された、赤血球が毛管現象により浸透可能な
多孔体からなる血液型判定用試験用具。
【請求項６】その下面に吸収体が接触している多孔体
からなる、請求項５に記載の試験用具。
【請求項７】血液型物質に特異的に結合する物質が、
抗Ａ型抗体、抗Ｂ型抗体及び抗Ｄ型抗体からなる群より
選ばれた少なくとも１種以上である、請求項５及び６に
記載の試験用具。
【請求項８】血液型物質に特異的に結合する物質が、
抗Ｃ型抗体、抗ｃ型抗体、抗Ｅ型抗体、抗ｅ型抗体及び
抗Ｄ型抗体からなる群より選ばれた少なくとも1種以上
である、請求項５及び６に記載の試験用具。
【請求項９】多孔体が、３〜100μmの孔径を有するも
のである、請求項５〜８の何れかに記載の試験用具。
【請求項１０】血液型物質に特異的に結合する物質が
上面に固定化された、赤血球が毛管現象により浸透可能
な多孔体からなることを特徴とする、血液型判定用試薬
キット。
【請求項１１】その多孔体の下面に接触している吸収体
とからなることを特徴とする、請求項１０に記載のキッ
ト。
【請求項１２】血液型物質に特異的に結合する物質
が、抗Ａ型抗体、抗Ｂ型抗体及び抗Ｄ型抗体からなる群
より選ばれた少なくとも1種以上である、請求項１０及
び１１に記載のキット。
【請求項１３】血液型物質に特異的に結合する物質
が、抗Ｃ型抗体、抗ｃ型抗体、抗Ｅ型抗体、抗ｅ型抗体
及び抗Ｄ型抗体からなる群より選ばれた少なくとも１種
以上である、請求項１０及び１１に記載のキット。
【請求項１４】多孔体が、３〜100μmの孔径を有する
ものである、請求項１０〜１３の何れかに記載のキッ
ト。