JPH0278934A - 液体試料の成分を分析測定するためのテスト担体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 「産業上の利用分野」 本発明は、テスト坦体上で行われる一連の反応を用いる
特に病気の診断用の液体試料の成分を分析測定するため
のテスト坦体に関する。テスト坦体は多層の試験層を有
する。これには基底層が属するが、この基底層上に相並
んで試料装入部及び評価部が存在する。液体移送帯域は
試料装入部から評価部に延びている。更にテスト坦体は
発色層を有するが、この発色層で発色試薬系（その中小
なくとも１種類の発色試薬が発色層中に存在する）によ
って発色反応に基すいて測定すべき成分に特異的な光学
的に検出可能な変化が起こる。

病気の診断で定性又は定量的な分析測定のために最近い
わゆる坦体と結合したテストがますます用いられるよう
になっている。この場合には試薬を固体テスト坦体の適
当な層に埋め込み、それと試料を接触させる。試料は大
抵は血液又は尿である。しかし先行する試験工程、例え
ば溶離剤と便試料との接触によって得られる液体を用い
ることもできる。

液体試料と試薬との反応によって検出可能な信号が得ら
れるが、その際、本発明は、発色層で起こる測定すべき
成分に特異的な色変化を生じさせる場合に関する。色変
化を肉眼によってか、又は適切な装置、大抵は反射光度
計を用いで評価する。

「従来の技術」 多数の異なる試薬が関与する多数の反応工程から成る種
々の発色反応が使用される。これらは纏めて発色−試薬
系と総称される。これらの系の少なくとも１種類の発色
試薬が発色層中に存在し、色変化を起こす反応工程に関
与している。

テスト坦体は多種多様な形態で公知である。

テスト坦体はしばしば、細長い基底層上に１個又は数個
の試１験区域を有するテスト条片の形を有する。この試
験区域はそれ自体しばしば、１つの試験区域上に載せら
れた試料液体が試験層の表面に垂直にこれを透過するよ
うに、同じ大きさで上下に配置されている数層の試験層
から成る。この場合には液体移送は専ら試験層表面に（
及び基底層に）対して横方向で起こるので、この種の「
横移送−テスト坦体」と呼ぶことができる。

本発明は「縦移送のテスト坦体」に関する。

この坦体は一般に試料装入部及び評価部を分けることが
できる細長い基底層を有する。この種のテスト坦体では
試料は試料装入部に載せられ、次いで基底層に平行に延
びている液体移送帯域に添って評価部に運び込まれる。

この種のテスト坦体は専ら上下に配置された試験層を有
する横移送テスト坦体に対して著しい利点を有し、特に
免疫学的分析法に好適である。液体移送は毛細管作用に
よるが、その際液体移送帯域は例えば紙又はフリースの
ような吸収性材料から成毛 る１層又は数層の試験層及び悪細管作用によって完全に
吸収されるスリットによって形成されていてよい。縦移
送を有するテスト坦体は、例Ｌｋ’！西Ｙイツ特許（Ｄ
Ｅ−Ａ）第！１４４５８１６号、第３＜５３８６５４号
及び第３６４３５１６号明細書に記載されている。

分析−テスト坦体の精度及び確実な作用に重要なことは
、全体の試験層が十分に試料液体で湿潤されることであ
る。その他に一取扱を簡単にするために一試料液体量を
試験支持体上に装入する前に正確に秤取する必要をなく
すべきである。

公知テスト坦体では一般に試料を過剰に装入し、テスト
坦体が完全に十分吸収し終わるまで待つ。これがどの時
点で或はどの時点まで実際にかかるのかは大抵の場合に
調整することができない。使用指針に基すき使用者はた
だ一定の時間待ち、その後試料の過剰分を例えば拭き取
るか又は洗浄することによって除去すべきである。　　
゛ 欧州特許（ＥＰ−Ａ）第２５６８０６号明細書には、横
移送−テスト担体が記載されているが、その坦体の場合
には試験分野の下の基底層が開口部を有する。試料は他
の場所から試験区域に装入される。開口部は試験区域の
背面を反射測光法により観察するために役立つ。これに
よって試験区域が完全に湿潤されるまでの時点を確認す
ることができるはずである。しかしこの方法は横移送−
テスト坦体に限定される。試験層面での液体の拡散は開
口部が存在する小さな部分範囲においてのみ調整するこ
とができるにすぎず、調整可能性は試料液体が着色して
おり、直ちに検出することができる場合に限定される。

最初に記載したような縦移送を有するテスト坦体におい
てはたして又はどの時点まで発色層までテスト坦体の試
験層が順序ただしく湿潤されているのかを調整すること
ができ、それによって坦体上への試料の配量を改善する
ために、本発明によれば評価部分に発色層の基底層と反
対の面上に、テスト坦体の出発状態では不透明であるの
で発色層の色が見えないような被覆層が配置されている
。その際被覆層が液体移送帯域と液体接触しており、被
覆層及び発色層が、この二つの層が試料液体によって湿
潤されている場合に発色試薬の色が可視性になるように
作られている。

出発状態とは試料を装入する前のテスト坦体の「乾燥」
状態である。

概念「液体接触」（英語：　ｆｌｕｉｄ　ｃｏｎｔａｃ
ｔ　）は、２層の試験層が大抵は試験層の吸収作用によ
って２層間の液体交換が可能であるように配置されてい
るというテスト坦体技術で一般的となった名称である。

その際、試験層は相互に直接接触していてもよいし、液
体接触が間接的に例えば中間的に存在する吸収性層を介
して生じてもよい。

被覆層は吸収性材料からなる。繊維材料（織物、フリー
ス）又は多孔性プラスチック層が好適である。

この種の材料はその中を液体が毛細管力によって移送さ
れるスリット又は孔を有する。

被覆層と発色層との間には平板状の平らな接触が存在す
る。それによって液体交換が障害となる程は影響されな
い限りは、両方の層は相互に結合していてもよい。しか
し有利にはこれらはルーズな状態で重なり合って載って
いて、好適な方法で、例えば押え層によって相互に押し
付けられている。

液体の縦移送と縦移送が完了した時点の可視性になるこ
ととの相互作用が本発明では重要である。試料装入部分
のテスト坦体が試料と接触すると、これはテスト坦体に
添って検出部分まで流れる。この過程は全試験層を完全
に湿潤するために充分である限りは装入される試料量と
完全に無関係である。さて本発明によりテスト坦体の完
全な充填時点が信号で通報される。それによって完全な
機能の調節が可能になるだけではなく、液体配量の再現
性の改善も達成される。

被覆層と発色層が試料液体によって湿潤されている場合
には、発色層の色が可視性になるようにするために、発
色試薬が液体によって湿潤する際にこの液体中に溶ける
か又は分散し、それによって液体状態に変わるように発
色層を作るのが有利である。発色試薬はそれによって被
覆層中に浸入するので、その色が可視性となる。

この場合に発色反応は有利には主として被覆層中で起こ
るので、色の変化をよく観察し、反射光度測定法により
測定することができる。

易溶性の発色試薬を有する発色層は坦体基質を注入する
ことによって製造することができる。

試料液体は先ず被覆層中で横に（層表面に平行に）拡散
するので、その際もちろん素早く溶ける発色試薬が進行
する液体前線で濃度が増し、それによって不均一な発色
が生ずることになるという問題が惹起される恐れがある
。

これを避けるために、先ず液体が被覆層中に拡散し、発
色反応が実質的にその後に起こるように、被覆層におけ
る液体移送速度及び発色層における発色反応の時間的開
始を相互に調整しておくべきである。

これに基すき有利ては発色層は発色試薬が遅れて遊離す
るように作られている。これは発色試薬の遅くらされた
熔解性によって生じさせることができる。しかし有利に
は遅延性の遊離は、発色試薬が、坦体上にシート又は織
物の形で存在する遅延溶解性のフィルム層中て包埋され
ていることによって達成される。

その際、その他の特に有利な態様では発色試薬自体がそ
れが包埋されているフィルム層よりも迅速に溶解する。

それによって発色試薬が信号形成層から遊離される場合
に液相で迅速に均一に反応することが達成される。

発色反応の遅延にも拘らずこの反応が液体がまだ被覆層
で拡散している間に既に僅かな程度始まることは明白で
ある。しかし発色反応が「実質的に」という意味で液体
拡散後に起これば十分全信号形成層上で均一な信号形成
が行われる。

望ましい遅延性の溶解状態を生じるために、高 発色層は有利には膨潤性の区内分子及び／又は疎水性の
フィルム形成剤を含有する。

高 ここで膨潤性巨大分子は・・イドロコロイｒとも呼ばれ
る。これは水に可溶性であるか及び膨高 潤可能である桓大分子量の親水性物質である。

これには特に多糖類、例えば浸出物（例えばアラビアイ
ム）、種子粉（例えばイナゴマメ穀粉、澱粉）、植物か
らの抽出物（例えばペクチン、アラヤネート）、微生物
多糖類（例えばキサンタンビム）及び化学的に変性され
た多糖類（例えばセルロース−誘導体）が属する。

特定な蛋白質、例えばスクレロプロテイン及びその加水
分解物（例えばコラ−ダン、クロティンＣ）、難溶性貯
蔵蛋白質（例えばゼイン、沈降カゼイン）及び適切な高
い濃度の疎水性乾燥蛋白質（例えば血清アルブミン）も
この物質群に含まれる。

本発明で疎水性フィルム形成剤とは、乾燥させる場合に
水溶液から重合体の接着作用によってフィルム内容物を
強化し、結合する遅延可溶性フィルムを生じる水溶性重
合体である。

この種のフィルムの溶解性は重合体の選択によって広い
範囲で調整することができる。これには、例えば、西ド
イツフランクフルト在ヘキスト社（Ｈｏｅｃｈｓｔ　Ａ
Ｇ　）から商標名１モヴイオール（Ｍｏｗｉｏｌ　）　
’として市販されているポリビニルアルコール、例えば
米国ニューヨーク在ユニオン　力へバイト社（Ｕｎｉｏ
ｎ　Ｃａｒｂｉｄｅ　Ｃｏｒｐ、）から°ポリオクス（
Ｐｏ１ｙｏｘ　）　’の商標名で市販されているポリエ
チレンオキシド又は西ドイツダルムシュタット在し−ム
社（Ｆｉｒｍａ　Ｒｏｅｍ）から商標名°オウドラジド
（Ｅｕｄｒａｇｉｄ　）　”で入手されるアクリル樹脂
が属す。

発色試薬の色を被覆層によって充分に可視性にするため
の二番目の有利な手段は、乾燥状態で不透明であるが、
湿った状態では透明である材料から被覆層を製造するこ
とである。その際“不透明“という概念は層が非常に不
透明であるので発色層の色が全くか又は極めて僅かしか
見分けられないことを表す。乾燥状態と湿潤状態との間
の透過性の著しい相違が確認されるべきであることが重
要である。

被覆層用の特に良好な材料はプラスチック膜、微細多孔
性プラスチック層が有利であると判明した。例えば米国
特許第４６１８５３１号明細書に記載されているような
親水性のポリビニリデンジフルオライドが湿潤状態及び
乾燥状態の透過性に関する著しい相違を示す。しかしこ
の記載に基すき、当業者は前記の条件を満たすその池の
材料及び特別なプラスチック膜を選択することができる
。その際、プラスチックの屈折率が重要な役割を演じる
であろう。その屈折率が試料液体の屈折率に近い材料は
湿潤状態で透明になる特性を有すると考えられる。

湿潤状態で透明な被覆層を可溶性の発色層から被覆層に
移動する発色試薬と組み合わせて使用する場合が特に有
利である。

本発明は特に下記に添付図面で略示した態様により詳説
するように、免疫学的測定を実施するためのテスト坦体
に特に好適である。添付図面の第１図は本発明によるテ
スト坦体の斜視図を表し、第２図は第１図の詳細図を表
す。

図に記載のテスト坦体１は基底層２を有するが、この基
底層上に残りの試験層が固定されて合体層８及び液体移
送層９が基底層２上に溶融接着剤１０によって相互に固
定されている。層８は次の層９にこれらの間でできる限
り良好な液体接触が確実になされるように軽く重なりあ
っている。層８及び９は試料装入部及び予備反を形成す
る。

前記実施例では試料を結合体層８に載せるが、その際、
この層は同時に最初の反応段階を実施するために役立つ
。試料装入部４は同時に予備反応部としても役立つ。

評１曲部６では基底層２上に、第２図で明かであるよう
に、発色層１１、被覆層７及び押え層１２が上下に重な
っているのが判る。押え層１２は、比較的強直なプラス
チックシートからなる。押え層は、発色層１１及び被覆
層７の全厚にほぼ相応する距離を保って基底層に平行に
存在するように、大きな層厚に相応した溶融接着テープ
１３によって基底層２に固定されている。

押え層１２は、押え層と基底層２の間に存在する層をこ
れらの間の良好な液体接触が保証されるように押さえつ
けるために充分な剛性を有する。

前記した有利な態様では、基底層２の長手方向に試料装
入部４と反対の面上（従って第１図で発色層１１の右側
）に、発色層の他にその他の吸収性層は具備されていな
い。従って発色層１１は液体移送帯域８，９．７の液体
移送方向の最後の部分と液体接触している。

発色層１１は前記の有利な態様では坦体シート１５及び
その上に存在する発色試薬を含有する遅延可溶性のフィ
ルムシート１６からなる。

図に記載のテスト坦体は晩に記載したように、特に免疫
学的測定に好適である。この種の測定には、結合成分と
呼ぶことのできる異なる種の間の高゛特異性の結合反応
が必要である。免疫学的結合成分は特に一つは抗体であ
り、一つは抗原又はハプテンである。

分析物として試料中に含有される抗原ＡＧを測定すべき
である場合には、例えば次の試験経過が代表的である。

試料を複合体層８に載せる。複合体層は、ＡＧと特異的
に結合することができる抗体ＡＫと酵素Ｅとの可溶性複
合体ＡＫＥを含有する。この特異的な結合反応によって
複合体Ａ　Ｇ　−ＡＫＥが生成される。

過剰のＡＫＥは、Ａ　Ｏ−ＡＫＥ複合体と一緒に液体輸
送層９に達する。これは坦体に固定された形の抗原ＡＧ
Ｆを含有する。ＡＧＦ’は試料抗原と同じであるか又は
これと似ている、即ち複合体層８中に含有されるＡＫＥ
と特異的に結合することができる。

ここで、過剰の遊離ＡＫＥは層９中に固定された抗原と
の特異的な結合反応に基すき、坦体に固定される。この
機能に関して、層９上の固定された抗原の負荷密度が実
際に過剰の全ての複合体がそれと結合させられるように
充分高いことが大切である。従って、層９は「固定層」
と呼ぶこともできる。遊離のＡ　Ｇ　、、７　ＡＫＥ複
合体だけが評価帯域６に達する。それによって評価帯域
６に達したＡ　Ｃ）　−ＡＫＥ複合体の量（従って標識
酵素の量）が分析物の量に相応する。

ＡＧ−へＫＪ複合体を有する試料液体は更に被覆層７中
に流入し、実質的に層１１で発色試薬との発色反応が始
まる前にこれを完全に満たす。

発色反応の遅延性開始は前記のように特に層１１が遅れ
て溶けることによって達成される。

被覆層７は、図２で特に明かに判るように、固定層９と
一体で製造されている、即ち二つの層は同じ層材料の条
片からなる。これは有利ではあるが、必ず必要というわ
けではない。被覆層７は、任意の方法で液体移送帯域８
，９と液体接触している別個の層であってもよい。

液体は、層表面に垂直に図２で斜線で表した液体交換面
１７を通って発色層１１中に浸入する。発色層１１は酵
素Ｅ用の基質を含有する。

酵素の濃度により色変化がおこるが、これは分析物の濃
度の尺度である。

色変化の肉眼又は装置を用いる評価は被覆層側から行う
。この被覆層が乾燥している限りは、発色層の色は隠さ
れている。これに対して被覆層が液体で満たされ、発色
層が少なくとも表面が湿潤されると、色が可視性になる
。これは前記したように発色層１１からの発色試薬が液
相に変わり、更に被覆層７に達する。付加的にか又は代
わりに被覆層が液体状態で半透明になる材料から成って
いてもよい。

実際の実施例では発色試薬は出発状態で黄色に着色して
いる。被覆層は不透明な白色であるので、観察者用の評
価部は評価側から白く見える。被覆層が液体試料で湿潤
されるや否や、黄色が可視性になる。それによって観察
者は充分な試料が装入され、テスト坦体において試料液
移 体の縦長手方向惨送が完全に行われたことを知ることが
できる。この色変化は装置によっても検出することがで
きる。それによってテスト条片の正しい機能を完全に自
動的に調整することができる。色変化は測定工程を導入
させるために使用することができる。

この調整機能は試料液体の色変化に左右されない。これ
は本質的に無色の液体、例えば尿又は血漿を分析すべき
である場合に特に重要である。

被覆層用の及び場合によって同じ材料から一体で製造さ
れた固定層９用の材料としては特に薄いプラスチック膜
が好適である。材料の厚さは有利には１ｍπより下、特
に有利には０．３朋より下であるべきである。例えば次
の材料が好適である： 米国ニュウヨーク、グレンコープ在 パール（Ｐａｌｌ）社のビオダイン （Ｂｉｏｄｙｎｅ）　ＢＮＲ（）　　　　　　　　　　
　１５０μｍ西ドイツｒツチン在サルトリウス社 （Ｆａ、５ａｒｔｏｒｉｕｓ　）の５Ｍ１１９　　　　
１４０μｍ米国カルフォルニア州リッチモンド 在バイオラド社（Ｆａ　、Ｂｉｏｒａｄ）のニトロセル
ロース（Ｎｉ　ｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）　　　　ｉ
５Ｑμｍ西ドイツダツセル在シュライヒヤー 及びジュール社（Ｆａ、５ｃｈｌｅｉｃｈｅｒ　ｕｎｄ
Ｓｃｈｕｌｌ）　ＮＣ１５０μｍ 乾燥状態では透明な白色であり、湿潤状態では無色透明
である次の材料が特に有利である：ジュラボール（Ｄｕ
ｒａｐｏｒｅ　）及びイモケロン（Ｉｍｍｏ−ｂｉｌｏ
ｎ）　、これは両方とも米国ペラげフォード在ミリボー
レ社（Ｆａ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）製である。

テスト坦体の機能方法を、例として抗原を測定すべきで
ある場合について詳説した。同様の試験経過が抗体を測
定するためにも可能であり、その際抗原複合体を層８に
及び坦体に固定された同様の抗体を層９に装入すべきで
あろう。

一般に本発明によるテスト坦体は、反応経過が、可動性
複合体（例ではＡ　Ｇ　−ＡＫＥ）を生成する測定すべ
き成分の濃度に関係した第１結合成分（例ではＡＧ）と
標識付けされた第２結合成分（例ではＡＫＥ　）との間
の特異的結合反応及び第２結合成分（例では再びＡＫＥ
　）及び第１結合成分と類似の坦体に固定された第３結
合成分（例ではＡＧＦ　）との間のその他の特異的結合
反応を包含するような測定に特に好適である。その際、
第２及び第３結合成分は各々液体の流れ方向に関してテ
スト坦体でその検出部分の前に配置されている。それに
よって、分析物に特異的な遊離複合体が検出部分に達す
る前に特異的な結合反応が完結する。

前記の免疫学的試験経過は一各発叫の詳細は論外として
一西ドイツ特許（ＤＥ−Ａ）第３６３８６５４号明細書
に記載されているものと同じである。従ってこの刊行物
を引用する。

本発明によるテスト坦体は、１９８７年６月２７日の西
ドイツ特許出願ｐ３７１６８９１号明細書に記載されて
いるように、便中の分析物ユニット を測定するための試験道具用の検出！％椀として特に好
適である。この試験道具は、便試料からられた試料液体
を有利に本発明によるテスト坦体を用いて検査すること
ができる。

次の実施例は、分析物として便試料から溶離されたもの
であり、便中の血液の存在の指示薬であるヒトの血清ア
ルブミン（ｈｓＡ）を測定するようなテスト坦体に関す
る。

例　　１ 第１図及び第２図によるテスト坦体は次のようにして製
造する： ａ）複合体層８： ＩｇＧ＜ヒトの血清アルブミン〉をβ−がラクトシダー
ゼと共有績きさせる。この複合体をがラス繊維フリース
中に浸漬し、乾燥させる。テスト坦体上の試験層の大き
さは２０Ｘ６ｍｍである。

ｂ）固定層９及び被覆層７： 商標名イモピロンＡＶとして市販されているミリボール
社（ベツドフォード、ＵＳＡ）の親水性ポリビニリデン
ジフルオライド（ＰＶＤＦ　）から成る膜にｈｓＡを共
有結合させる。表面濃度を浸漬工程に使用される緩衝剤
中の濃度を介して２０μｇｈＳＡ／ｃｒＩＬ３に調整す
る。層の大きさは２０Ｘ６１＋１１１である。

Ｃ）信号形成層１１： フィルム形成性被覆材料は西ドイツハンブルク在ケルコ
社（Ｆａ、Ｋｅｌｃｏ　）のケトロール（ｋｅｔｒｏｌ
）Ｆ　Ｄ、６　％を基に西ｒイツノ・イデルベルク在セ
ルバ社（Ｆａ、５ｅｒｖａ　）のメチルセルロース１５
２．５係を添加して製造する。これは１２ｍＭクロルフ
ェノールロート−β−がラクトシト（ＣｈｌｏｒＰｈｅ
ｎｏＬＲｏｔ−β−Ｇａｌａｋｔｏｓｉｄ　）　（ＣＰ
ＲＧ　）を含有し、ＨＥＰＥＳ中で緩衝されている。被
覆材料をフィルム層厚２００μｍで西ドイツバイル／Ｒ
ｈ、在ロンデ社（Ｆａ、Ｌｏｎｚａ　）のポカＣｌ７（
Ｐｏｋａｌｏｎ　）製の厚さ１００μｍの坦体シート上
に被覆する。層の大きさは６×６餞である。

ｄ）押え層１２ これは厚さ１４０μｍのポカロンシートから成る。

基底層として西ドイツフラクフルト在ＩＣＩ社（Ｆｉｒ
ｍａ　ＩＣＩ　）のポリエステルシート“メリネツクス
（Ｍｅｌｉｎｅｘ　）　”を使用する。成分の接着は西
ドイツトロイスドルフ在デイナミート　ノベル社（Ｆａ
、　Ｄｙｎａｍｉｄ　Ｎｏｂｅｌ　寛熔融接着剤ダイナ
ポール（Ｄｙｎｐｏｌ　）　Ｓを用いて行う。

液体前線は層９，７中で比較的緩慢に移動するので、層
７中に完全に拡散するまでに約３分必要である。基質層
１１の遅延性の溶解状態によってｈＳＡ−濃度に依存し
て完全に均一な発色が達成され、この濃度の非常に正確
な測定が可能となる。

テスト担体の被覆層は最初は白色である。液体前線が被
覆層に達した場合に（これには約１８０秒かかる）初め
て黄色への色変化が起こり、　　、これによって使用者
は試料液体がテスト担体中に完全に拡散したことが判る
。そこで使用者は被覆層を通して発色の経過を観察する
ことができる。実施例では限界値以上の量のヒトの血清
アルブミンが試料中に含有されていた場合には、更に約
１８０秒以内に赤色への色変化が起こる。

【図面の簡単な説明】

添付第１図は、本発明によるテスト担体の斜視図であり
、第２図は第１図の部分を詳細に示した図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、基底層（２）、その上に相並んで存在する試料装入
   部（４）及び評価部（６）、試料装入部（４）から評価
   部（６）にのびる液体移送帯域及び発色層（１１）より
   成り、そこで発色試薬系（その中少なくとも１種類の発
   色試薬が発色層（１１）中に存在する）による発色反応
   が起こり、測定すべき成分に特徴的な光学的に検出可能
   な変化が起こるテスト坦体上で進行する一連の反応によ
   り液体試料の成分を分析測定するためのテスト坦体にお
   いて、評価部（６）内に発色層（１１）の基底層（２）
   と反対の面上にテスト坦体の出発状態では極めて不透明
   であるので発色層の色が見えない吸収性被覆層（７）が
   配置されており、被覆層（７）が液体移送帯域と液体接
   触しており、被覆層（７）と発色層（１１）が発色試薬
   の色が両方の層が試料液体により湿潤されると可視性に
   なるように作られていることを特徴とする、液体試料の
   成分を分析測定するためのテスト坦体。 ２、一連の反応が、測定すべき成分の濃度と関連した第
   １結合成分と標識付けされた第２結合成分との間の可動
   性複合体の形成下に行われる特異的な結合反応及び第２
   結合成分と第１結合成分と類似の坦体に固定された第３
   結合成分との間の固定された複合体の形成下に行われる
   特異的結合反応を包含し、発色反応が発色試薬と遊離複
   合体との間の反応を包含することを特徴とする、請求項
   １に記載のテスト坦体。