KR101214620B1 - 혈액형 항원을 동시에 결정하는 장치 및 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치에 관한 것이다. 상기 장치는, 액체 샘플을 투입하는 투입 지대(5)와, 피분석물과 상호작용할 수 있는 적어도 두 개의 인디케이터 존의 적어도 하나의 그룹 및 상기 인디케이터 존을 통과한 후에 상기 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역(3)을 갖는 막(membrane)(2)을 포함하되, 상기 인디케이터 존은 상기 투입 지대(5)와 상기 흡수 영역(3) 사이에 위치하며, 상기 투입 지대(5)로부터 하나의 그룹의 각각의 인디케이터 존을 통하여 흡수 영역(3)까지의 흐름방향이 실질적으로 평행하며, 적어도 두 개의 서로 다른 유로가 존재한다.
투입 지대, 흡수 영역, 인디케이터 존, 혈액형

Description

혈액형 항원을 동시에 결정하는 장치 및 방법{Device and method for simultaneously identifying blood group antigens}
본 발명은 측면 대각선 흐름(lateral-diagonal-flow) 멀티파라미터 테스트를 특히, 혈액형 혈청 영역 상에서 액체 샘플 내의 다수의 피분석물(analyte)을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치에 관한 것으로, 보다 상세하기로는, 피분석물과 상호작용할 수 있는 적어도 두 개의 인디케이터 존의 적어도 하나의 그룹; 및 상기 인디케이터 존을 통과한 후에 상기 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역을 갖는 막을 포함하되, 상기 인디케이터 존은 상기 투입 지대와 상기 흡수 영역 사이에 위치하며, 상기 투입 지대로부터 하나의 그룹의 각각의 인디케이터 존을 통하여 흡수 영역까지의 흐름방향이 실질적으로 평행하며, 적어도 두 개의 서로 다른 유로가 존재하는 장치에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 결정하는 방법에 관한 것으로, 보다 상세하기로는, 본 발명에 따른 장치의 막의 투입 지대 상에 샘플을 투입하는 단계를 포함하며, 상기 샘플은, 상기 샘플은, 상기 액체 샘플을 발생하기 위하여 흡수 영역의 방향으로 인디케이터 존을 통과해 흐르게 하고, 상기 액체 샘플 내의 피분석물 또는 이의 유도체가 상기 인디케이터 존 내에 복합체를 형성하도록 하기에 충분한 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는, 특히, 혈액형 항원을 동시 에 결정하는 방법에 관한 것이다.
혈액형 혈청 진단에서, 특히 수혈 내지 질병 용혈 신생아와 관련하여 중요한 일반적인 파라미터가 입증된다. 이때, 무엇보다도, 혈액형을 특징짓는 적혈구의 표면 상에서의 항원의 입증이 중요하다. 또한, 마찬가지로 수혈 및/또는 이식에서 역할을 수행하는 혈소판, 과립 백혈구, 림프구에 대한 중요한 항원 체계가 존재한다.
주지하는 바와 같이, 혈액형 항원을 결정하기 위해서, 테스트할 사람 (기증자 또는 수혈자)의 적혈구는 특정 혈액형의 항체를 포함하는 시약을 사용하여 마련된다. 일반적으로, 액체 테스트가 중요하다. 상기 액체 테스트에서는, 적혈구를 포함하는 샘플을, 소정의 혈액형 특징에 대항하는 항체를 포함하는 샘플과 혼합함으로써 테스트 샘플이 제조된다. 그 후, 상기 테스트 샘플은 소정의 시간동안 소정의 조건 하에서 배양된다. 상기 배양기간이 종료된 후에 또는 직접 또는 원심분리단계 후에 시각적이거나 광학적 방법에 의해 최종적인 응집 또는 적혈구의 흡착이 검사된다. 혈액형 혈청 내의 우세한 종료점 측정은 여전히 혈구응집이다. 결정할 혈액형 각각에 대해서, 자신의 샘플이 흡액되는데, 즉, 예를 들어, 9가지 가장 중요한 혈액형인 A, B, D, C, c, E, e, Cw 및 K를 결정할 때 9개의 분리된 샘플의 대조구(control)가 필요 없다.
측면 흐름 테스트(lateral-flow-test)는 현재, 여러 번 적용하는 것을, 전염성 마커(marker)를 결정하기 위하여 예를 들어, 임신 확인 검사 또는 마약적격 검사와 같은 신속 테스트로서 적용된다. 측면 흐름 테스트 구조는, 주지하는 바와 같이, 검사할 샘플의 투입지대가 형성되는 고정 지지대, 결합요소, 예를 들어, 포획자 항체 또는 항원이 결합되고 결합반응이 검출되는 분리 막, 및 검사할 샘플이 상기 분리 막을 통과하여 흐를 수 있는 흡수성의 흡수영역으로 이루어진다.
종래의 측면 흐름 테스트의 테스트 막은 일반적으로 크로마토 그래피와 유사한 분리와 함께 기재되어 있다. 샘플 내의 분석은, 일반적으로 차례차례 놓여지거나 중첩되어 있는 밴드(band) 내에서 인디케이터 존(indicator zone)으로서 존재하는 막에 고정된 결합요소에 특수하게 결합된다. 상기 결합복합체는 인디케이터 입자를 통해 볼 수 있게 만들어지며, 상기 인디케이터 입자는 일반적으로 결합분리 패드(pad)는 전형적으로 투입지대와 막 사이에 투입된다. 미리 코팅된 유색의 인디케이터 입자는 예를 들어, 원하는 피분석물에 대항한 항체에 의해 코팅된다.
상기 일반적인 측면 흐름 테스트 포맷은 소위 "샌드위치 분석"으로, 이 분석에서는 상기 인디케이터 존 및 상기 인디케이터 입자는 일반적으로 항체에 대해 테스트된 피분석물을 목적으로 하는 배위자(ligand)로 코팅된다. 이때, 상기 배위자(결합요소)는 상기 막에 고정된다. 검출기 시약, 일반적으로, 채색된 폴리스티롤 입자 또는 콜로이드 금속에 결합된 항체는 결합분리 패드 내에서 씻어낼 수 있게 침착된다. 상기 결합복합체는 인디케이터 입자로서 작용한다. 검사할 샘플을 도포한 후에, 상기 인디케이터 입자는 매우 신속하게 상기 결합분리 패드를 적심으로써, 상기 인디케이터 입자가 활성화된다. 상기 인디케이터 입자는 다공막을 따라서 액체 전면과 함께 이동한다. 상기 샘플에 존재하는 피분석물은 상기 인디케이터 입자에 결합된 항체에 의해 결합된다. 상기 샘플이 상기 인디케이터 존을 통과할 때, 상기 인디케이터 존 내의 피분석물/인디케이터 입자 복합체는 상기 인디케이터 존에서 결합된 항체와 상기 피분석물의 반응에 의해 고정되는데, 이는 볼 수 있는 신호를 유도한다.
동시에 두 개의 항체를 결합할 수 있는 단일의 항원 결정인자만을 포함하는 작은 피분석물에 대한 또다른 종래의 테스트 포맷은 소위 경쟁 분석(competition assay)이다. 상기 인디케이터 입자에 결합된 검출기 시약은 일반적으로, 상기 피분석물과 동일하거나 유사한 분자이다. 상기 인디케이터 입자는 상기 결합분리 패드 내에 침착된다. 상기 인디케이터 입자는 상기 다공막을 따라서 상기 액체전면과 함께 이동한다. 상기 샘플이 피분석물을 함유하고, 상기 인디케이터 입자(마찬가지로 효율적인 피분석물을 포함하는)가 상기 인디케이터 존을 통과할 때, 상기 샘플 내의 피분석물 분자의 일부 및 상기 인디케이터 입자의 일부가 결합된다. 상기 샘플 내의 피분석물이 많이 존재할수록, 상기 피분석물은 보다 효율적으로 상기 인디케이터 입자의 결합을 보상하며, 상기 신호는 더 약화된다.
주지하는 바와 같이, 상기 인디케이터 입자는 대개 콜로이드 금 또는 폴리스티롤로 이루어지며 당업자에게 잘 알려진 방법으로 제조되며 코팅된다. 상기 일반적인 측면 흐름 테스트 포맷에서, 상기 피분석물이 간접적으로 결정된다. 피분석물을 직접적으로 결정함으로써, 상기 피분석물은 이미 상기 인디케이터 입자(예를 들어, 적혈구)에 자연적으로 결합되는 것을 알 수 있다. 상기 피분석물을 간접적으로 결정하는 경우에, 테스트할 샘플은 일반적으로 비세포적으로 연결된, 예를 들어, 형질(plasma) 성분을 피분석 목적물로서 포함하며, 상기 테스트할 샘플 외에도 두 개 의 시약 성분, 즉, 인디케이터 입자 및 결합요소가 필요하다. 상기 간접적 결정에서, 상기 복합체가 제2 반응에 의하여 상기 결합 요소로 상기 인디케이터 존에 고정되기 전에, 상기 피분석물은 우선 상기 결합분리 패드로부터 분해된 인디케이터 입자에 결합된다.
결정할 피분석물, 예를 들어, 혈액형 특정 항원을 연결하는 인디케이터 입자로서 적혈구를 포함하는 종래의 측면 흐름 테스트 사용시, 현재까지 상기 인디케이터 존 내에는 항체들이 결합요소로서 상응하는 혈액형 항원에 대한, 예를 들어, Rh 혈액형 체계에 대한 안티-A, 안티-B와 같은 단독 흐름 트랙에서 차례로 놓여지거나 중첩되어 있는 밴드에 배치된다. 이때, 종래의 측면 흐름 테스트는, 샘플 내에서 예를 들어, 항원에 결합된 세포에 대해 테스트되는 피분석물에 대항한 흐름 장벽으로부터 적혈구가 항체에 결합되는 단점을 갖는다. 투입지대에 근접하게 위치한 결합요소의 밴드 내의 세포의 응집 또는 흡착은 또다른 피분석물, 특히, 검사할 샘플이 제약없이 볼 수 있게 분리되는 세포 또는 세포 단편에 결합된 피분석물은 따라서 명백히 또는 완전히 입증될 수 없다. 이로 인해, 예를 들어, 혈액형 AB Rh D 양성인 사람에게서 B 밴드 및 D 밴드는 약화되거나 제거되는데, 이는, 혈액형 A Rh 음성에서 볼 때 잘못된 해석을 유발할 수 있다. 따라서, 현재까지, 혈액형 혈청 진단에서 특별하게 측면 흐름 테스트는 더 이상 인디케이터 존에서 사용될 수 없었다. 다수의, 특히 세포적으로 결합되고 형질적인 혈액형 파라미터를 측정하기 위해서, 현재까지 단일 파라미터 테스트가 개별적으로 수행될 필요가 있다.
본 발명의 목적은, 특히, 차례로 놓여지거나 중첩되어 있는 종래의 측면 흐름 테스트의 인디케이터 존 또는 테스트 존(test zone)이 서로 다른 샘플 파라미터, 특히, 세포적이고 형질적인 파라미터를 동시에 측정하기 위해서 종래기술에서의 단점을 극복하는 데에 있다.
본 발명에 따르면, 상기 과제는, 상기 액체 샘플을 투입하는 투입 지대(application zone), 상기 피분석물과 상호작용할 수 있는 적어도 두 개의 인디케이터 존, 및 상기 인디케이터 존을 통과한 후에 상기 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역을 포함하는 막(membrane)을 포함하며, 상기 인디케이터 존은 상기 투입 지대와 상기 흡수 영역 사이에 위치하며, 상기 투입 지대로부터 각각의 인디케이터 존을 통과한 흡수 영역(유로; flow path)까지의 흐름방향이 실질적으로 평행하며, 적어도 두 개의 서로 다른 유로가 존재하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치에 의해서 달성된다.
본 발명에 따른 장치의 인디케이터 존은 상기 막 위에 존재하며, 결정할 피분석물을 상기 샘플 내에서 포획하거나 결합하는 결합요소를 포함한다. 상기 인디케이터 존 내에서 피분석물과 결합요소 사이의 결합반응이 입증된다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 인디케이터 존은, 유로 당 액체 샘플이 더 이상 인디케이터 존으로서 관류하지 않도록 배치된다. 예를 들어, 상기 인디케이터 존은 상기 막으로 엇갈려 배치된다. 이때, 상기 인디케이터 존의 구조는 바람직하게는, 거의 근위(proximal)로부터 원위(distal)로 또는 반대로 경사져 연장된 열에서 형성된다. 바람직한 실시예에 따르면, 상기 인디케이터 존은 V자형, W자형, M자형, N자형 또는 전복된 V자형, W자형, M자형 또는 N자형으로 형성된다. 또다른 실시예에서, 상기 인디케이터 존은 선형 열에 단계적으로 평행하게 엇갈려 배치된다.
평행하게 엇갈려 배치된 인디케이터 존의 도입으로 인해, 인디케이터 입자로서 적혈구를 포함하는 멀티파라미터 테스트가 측면 구조에서 비로소 수행될 수 있다. 경사진 구조의 특히 바람직한 실시예는, 결과의 표시가 특히 실용적이고 쉽게 읽을 수 있게 본 발명에 따른 구조에 적용될 수 있는 장점을 갖는다. 이는 각각의 테스트되는 파라미터가 소정의 X위치 및 Y위치를 포함하고 본 발명에 따른 장치의 구조의 배열은 종좌표(흐름방향의 평면) 및 횡좌표(투입지대의 평면)를 포함하는 좌표계로서 간주할 수 있기 때문이다.
상기 인디케이터 존은 항체 또는 항체 단편(fragment) 및/또는 렉틴(lectin) 또는 이의 단편(fragment)을 포함한다. 상기 인디케이터 존은 결정할 혈액형 항원 및 상기 항원을 운반하는 세포들을 상기 샘플 내에서 포획하거나 결합한다. 바람직한 결합요소는 항체 또는 항체 단편 및/또는 렉틴 또는 이의 단편은 모든 생각할 수 있는 혈액형 체계의 항원에 대항하여 상기 인디케이터 존 내에서 다공막에 배치된다. 바람직하게는, 인디케이터 존, 바람직하게는, 모든 잔여 인디케이터 존 중의 말단의 인디케이터 존 내에는 대조구 결합요소(대조구 = ctl)가 배치된다. 상기 대조구 결합요소는 상기 샘플이 상기 인디케이터 존을 통과한 관류를 양성으로 표시한다. 상기 대조구 결합요소는 바람직하게는 다중 클론(polyclonal)의 안티-적혈구 항체이다.
이때, 바람직한 실시예에 따르면, 각각 인디케이터 존은 검사할 피분석물에 대한 결합요소, 바람직하게는, 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 상기 인디케이터 존 내에서의 항체 또는 항체 단편 및/또는 렉틴 또는 이의 단편의 바람직한 실시예는 ABO 혈액형 체계, Rh, 켈(Kell), 레비스(Lewis), Hh, 듀피(Duffy), 키드(Kidd), MNS, 루더란(Lutheran) 및 P 체계의 항원에 대한 항체 또는 렉틴이다. 또한, 바람직하게는, 상기 인디케이터 존의 결합요소로서, 혈액형 체계인 디에고(Diego), Yt, 사이아나(Scianna), 돔 브록(Dombrock), 콜톤(Colton), 히도/로저스(Chido/Rogers), 게르비히(Gerbich), 크로머(Cromer), 크놉스(Knops), 란트슈타이너-비에너(Landsteiner-Wiener), Xg, Kx, 인디안(Indian), Ok, 라프(Raph), 존 밀턴 하겐(John Milton Hagen), 랑거라이스(Langereis), 및/또는 시드(Sid)의 항원에 대한 항체이다. 본 발명에 따른 장치의 특히 바람직한 실시예는, 결합요소인 안티-A, 안티-B, 안티-AB, 안티-D, 안티-D, 안티-C, 안티-c, 안티-E, 안티-e, 안티-Cw, 및/또는 안티-K 항체 또는 항체 단편을 포함하는 인디케이더 존을 포함한다. 이때, 상기 두 개의 안티 -D는 두 개의 서로 다른 항체 또는 이의 항체 단편이다. 특히, 환자, 임산부 또는 신생아에게서, 이는 바람직하게는, DVI 카테고리를 포함하지 않는 IgM 부류(class)의 단일 클론의 항체이다. 기증자에게서, 이는 바람직하게는 상기 DVI 카테고리를 검출하는 항체이며 DVI 카테고리를 포함하지 않는 항체이다.
본 발명에 따른 장치에 의하여, 상기 혈액형 결정을 위해서 더 이상 각각의 개별 결정을 위해서 개별적으로 흡액되는 것이 아니라 샘플에서, 검사할 혈액형 체계의 동시에 원하는 다수의 항원들, 예를 들어, ABO, Rh 및 켈(Kell)(A, B, AB, D, C, c, E, e, Cw, K)의 가장 중요한 특징들을 한번에 결정할 수 있다. 이는, 공정의 예외적인 합리화를 나타낸다. 또한, 경사진 패턴으로 표현되는 결과의 독출도 실질적으로 더 적합하다. 또한, 본 발명에 따른 장치에서, 예를 들어, ABO 및 Rh 특성은 하나의 장치에서 나란히 결정되며 독출될 수 있다. 관련 환자에 대한 결과의 배치가 용이해진다. 상기 2차원적인 평면 결과 및 반응의 안정적인 종료점은, 눈으로 독출하는 것뿐만 아니라 예를 들어, CCD 카메라와 같은 이용가능한 이미지 분석방법을 포함하는 결과의 자동화된 독출을 가능케한다. 상기 작업비용은 수동작업에서도 줄어든다. 또한, 본 발명에 따른 장치는 환경 부담을 줄이고 비용적절한 효과를 유발한다. 시간압박이 있는 어려운 상황에서도, 단 시간 내에 단일의 시도장치에서 예를 들어, 완전한 ABO 혈액형/Rh 하부그룹 결정이 수행될 수 있다. 제조기술적으로, 상기 측면 진단 흐름 구조는, 사용한 시약의 소비를 현저히 줄이고 하나의 단일 장치에 다수의 테스트 파라미터를 준비함으로써 종래기술에 비해 실질적인 장점을 갖는다.
본 발명에 따른 장치에 의하여, 측면 흐름 테스트, 특히, 혈액형 혈청 진단을 위한 측면 흐름 테스트가 제공된다. 상기 테스트에서는 적혈구가 인디케이터 입자로서 사용되며, 테스트 샘플 내에서 동시에 다수의 세포적, 특히, 적혈구 항원 또는 항원 에피토프, 형질 파라미터 및/또는 혈액세포 특성, 특히 모든 성분을 함유한 혈액의 혈액세포 특성이 검사할 샘플로 결정될 수 있다. 여기서, 적어도 한 종류가 적혈구인 적어도 두 종류의 인디케이터 입자가 사용된다. 또한, 가능한한 간단하게 제조되며 특히, 적은 일련의 실험을 가지고 샘플준비없이 조작되며 비용적합한 테스트 시스템이 제공되며, 상기 테스트 시스템을 사용함으로써, 동시에 하나의 샘플 또는 검사할 다수의 샘플의 다양한 세포적 파라미터 및/또는 형질 파라미터, 특히, 혈액형 특징이 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 장치의 막(membrane)은 다공성 막이다. 바람직하게는, 막 물질은 예를 들어, 니트로셀룰로오스(예를 들어, Sartorius의 UniSart, Millipore의 HiFlow, Whatman, AE99 또는 Schleicher & Schuell의 FF85 /100), 폴리에틸렌(Porex Corporation의 Lateral Flo) 또는 나일론(CUNO의 Novylon)이다. 바람직하게는, 상기 막은 가능한한 큰 구멍 크기를 포함하는데, 이는 상기 막의 높은 다공성이 테스트되는 샘플, 예를 들어, 적혈구의 세포적 성분의 유입을 가능하게 하기 때문이다. 흡수성 막이 바람직하게 사용된다. 그러나, 본 발명에 따른 장치는 상기 특성에 제한되지 않는다. 바람직하게는, 모든 막은 높은 모세관 흐름 속도(capillary speed)(이때, 상기 모세관 흐름 속도는 색채 용해를 필요로 하는 시간이다)를 가지며, 상기 모세관 흐름 속도는 주어진 막 위에서 40mm를 이동하기 위해 염색 용액에 의해 요구되는 시간을 표현한다. 특히 바람직하게는, 막의 모세관 흐름 속도는 100보다 작다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 상기 투입 지대 아래의 다공성 막 상에 적어도 하나의 밀폐요소가 제공된다. 2차원적 또는 3차원적 밀폐요소가 도포된다. 상기 밀폐요소는 상기 다공성 막 상에서 위치하며 상기 밀폐요소에 의하여 상기 다공성 막의 잔여 면으로부터 분리된 샘플 투입지대가 형성된다. 본 발명에 따르면, 상기 밀폐요소는 우선적으로 액체장벽의 효과를 가지며 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막에 적절하게 분할가능케 한다. 또한, 본 발명에 따르면, 원하지 않게 액체가 상기 측면 흐름 장치구조의 또다른 영역으로 범람하는 것을 방지하기 위하여, 상기 밀폐요소는 상기 샘플 투입지대를 밀폐한다.
상기 밀폐요소의 바람직한 실시예는 웹(web) 또는 통(tough) 또는 깔때기 형태이다. 상기 밀폐요소를 제조하는 데에 사용된 물질로 이루어진 절개공정에 의하여 상기 밀폐요소가 완성된다. 상기 깔때기 또는 통 형태의 경우, 상기 밀폐요소는 내부 개구부를 포함한다. 상기 내부 개구부의 바람직한 실시 변형예는 원형, 정방형 또는 사각형이며, 상기 깔때기 형태의 경우, 상기 밀폐요소의 하측(막 접촉측)으로 좁아지는 형태이다.
상기 밀폐요소에 대한 바람직한 물질은 소수성(hydrophobic) 물질이다. 바람직한 실시예에서, 상기 물질은 일측으로 접착제 막, 예를 들어, 아크릴계 점착제(Pressure Sensitive Adhesive; PSA) 또는 자착식(self adhesive) 아크릴 접착제로 코팅된다. 따라서, 상기 밀폐요소는 직접 상기 다공성 막의 표면 상으로 접착될 수 있다. 대안적으로, 상기 밀폐요소는 측면 흐름 케이스에 연결, 예를 들어, 접착될 수 있다. 이때, 상기 실시예에서 상기 측면 흐름 하우징은 상기 밀폐요소를 상기 다공성 막의 표면 상으로 압박함으로써 상기 밀폐요소의 기능이 수행된다.
2차원적 밀폐요소를 형성하기 위한 바람직한 물질은 접착 테잎 또는 접착 호일(예를 들어, Beiersdorf AG의 Tesa 4124, Adhesives Research의 Arcare 7815)의 각각의 형태이다.
3차원적 밀폐요소를 형성하기 위한 바람직한 물질은 가요성, 폐쇄형 구멍의 엘라스토머(elastomer) 물질 또는 서로 다른 물질강도, 바람직하게는 3-5mm(예를 들어, Pitzner의 탄성고무 EPDM140, Castan의 경도 40° 이하의 실리콘 탄성고무 또는 완전 탄성고무)를 갖는 가요성 실리콘 물질이다.
본 발명에 따른 상기 실시예를 통하여, 본 발명에 따른 장치는 세포, 예를 들어, 모든 성분을 함유한 혈액을 포함하는 액체 샘플을 상기 세포를 여과하지 않고 수용할 수 있다. 또한, 상기 밀폐요소로 인해, 상기 액체가 범람하지 않고 큰 체적의 샘플을 상기 다공성 막(투입 지대) 상에 투입할 수 있다. 따라서, 상기 밀폐요소는 상기 다공성 막의 흡수 특성의 이용을 지지한다. 또한, 상기 밀폐요소는 샘플 흐름을 보장한다. 그러나, 본 발명에 따른 장치는 밀폐요소를 사용하거나 사용하지 않고 양호하게 작동할 수 있다.
본 발명에 따른 장치의 흡수 영역(흡수 패드)에서는, 기계적으로 안정적인 물질이 유리한데, 바람직하게는, 20-30g/100㎠(예를 들어, 심지 재료지(wicking paper), type 300, Schleicher und Schuell)의 수분 흡수능력을 갖는 물질이다. 본 발명에 따른 장치의 상기 흡수 패드와 상기 측면 흐름 막 사이의 접촉은 반동력 및 상기 다공성 막과의 중첩에 의해 수행된다. 상기 흡수 패드를 상기 측면 흐름 막을 운반하는 캐리어 층(백킹 쉬트; backing sheet)에 접착함으로써 상기 흡수 패드는 상기 막 상에 정확히 위치된다.
또다른 실시예에 따르면, 본 발명에 따른 장치의 구성요소들은 기계적 강화목적으로 베이스(base) 또는 캐리어 층 상에 도포된다. 그러나, 본 발명에 따른 장치는 캐리어 층을 사용하거나 사용하지 않고 작동될 수 있다. 바람직하게는, 기계적으로 안정하고 비수용성 흡수 물질(non-water absorbent material)은 일측 또는 두 측면에 접착제 막, 예를 들어, 아크릴계 PSA 또는 자착식 아크릴계 접착제를 포함하는 100㎛ 이상의 물질 강도를 갖는 물질로 코팅된다(예를 들어, 0.005 폴리에스터 W/ GL-187, G & L). 상기 캐리어 층 상에는 상기 다공성 막 및 상기 흡수 패드가 고정된다. 이중 측면으로 접착되는 캐리어 층의 경우, 상기 접착되는 제2 측면은, 스테이플(staple)을 또다른 면, 예를 들어, 상기 측면 흐름 케이스 내부에 고정하기 위해서 사용된다.
또다른 실시예에 따른 본 발명에 따른 장치는 상기 장치의 구성요소들이 배치되는 캐리어 층을 사용하거나 사용하지 않고 케이스에 통합된다. 이에 따라서, 상기 막 구성요소는 서로 압박되고 상기 케이스는 상기 밀폐요소의 작용을 지지한다. 그러나, 이때, 본 발명에 따른 장치는 케이스를 사용하거나 사용하지 않고 양호하게 작동할 수 있다.
본 발명의 또다른 주제는, 혈액을 분석, 특히, 혈액형 항원 또는 모든 가능한 혈액형 체계의 혈액형 항원 또는 항원 에피토프, 바람직하게는, 붉은 혈액의 표면 상의 각각의 피분석물을 결정하는 본 발명에 따른 장치의 사용이다. 테스트할 항원 또는 항원 에피토프는 예를 들어, ABO 혈액형 체계, Rh, 켈(Kell), 루비스(Lewis), Hh, 듀피(Duffy), 키드(Kidd), MNS, 루더란(Lutheran) 및 P 체계, 디에고(Diego), Yt, 사이아나(Scianna), 돔 브록(Dombrock), 콜톤(Colton), 히도/로저스(Chido/Rogers), 게르비히(Gerbich), 크로머(Cromer), 크놉스(Knops), 란트슈타이너-비에너(Landsteiner-Wiener), Xg, Kx, 인디안(Indian), Ok, 라프(Raph), 존 밀턴 하겐(John Milton Hagen), 랑거라이스(Langereis), 및/또는 시드(Sid)의 혈액형 체계, 특히, A1, A2, B, D, C, c, E, e, Cw, K, k, M, N, S, s, Jk(a), Jk(b), Fy(a), Fy(b), Kp(a), Kp(b), Js(a), Js(b), Le(a), Le(b), Lu(a), Lu(b), P1, I, H, Xg(a), U, Vw, Wr(a), Lan이다.
본 발명에 따른 장치의 바람직한 실시예에 따르면, 동시에 다수의 혈액형 특징들, 예를 들어, A, B, AB, D, C, c, E, e, Cw, 및 K를 결정한다. 검사할 샘플, 예를 들어 음성 또는 응고되지 않은 혈액 또는 적혈구 응축물 또는 희석된 적혈구 현탁액은 본 발명에 따른 장치의 투입 지대 상에 투입된다. 상기 피분석물을 운반하는 상기 샘플에 포함된 적혈구는 동시에 인디케이터 입자로서 사용된다.
본 발명에 따르면, 상기 과제는 다른 한 편으로는, 액체 샘플 내의 다수피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법에 의해 달성된다. 상기 방법은 본 발명에 따른 장치의 막의 투입 지대(application zone) 상에 샘플을 투입하는 단계를 포함하며, 상기 샘플은, 상기 액체 샘플을 발생하기 위하여 흡수 영역의 방향으로 인디케이터 존을 통과해 흐르게 하고, 상기 액체 샘플 내의 피분석물 또는 이의 유도체가 상기 인디케이터 존 내에 복합체를 형성하도록 하기에 충분한 양으로 존재한다.
본 발명에 따른 방법에 따르면, 상기 결정할 피분석물에서, 특히, 바람직하게는 붉은 혈액의 표면 상에 존재하는 전체 혈액형 체계의 혈액형 항원 또는 항원 에피토프가 중요하다. 테스트할 항원 또는 항원 에피토프는, 예를 들어, ABO 혈액형 체계, Rh, 켈(Kell), 루비스(Lewis), Hh, 듀피(Duffy), 키드(Kidd), MNS, 루더란(Lutheran) 및 P 체계, 디에고(Diego), Yt, 사이아나(Scianna), 돔 브록(Dombrock), 콜톤(Colton), 히도/로저스(Chido/Rogers), 게르비히(Gerbich), 크로머(Cromer), 크놉스(Knops), 란트슈타이너-비에너(Landsteiner-Wiener), Xg, Kx, 인디안(Indian), Ok, 라프(Raph), 존 밀턴 하겐(John Milton Hagen), 랑거라이스(Langereis), 및/또는 시드(Sid)의 혈액형 체계, 특히, A1, A2, B, D, C, c, E, e, Cw, K, k, M, N, S, s, Jk(a), Jk(b), Fy(a), Fy(b), Kp(a), Kp(b), Js(a), Js(b), Le(a), Le(b), Lu(a), Lu(b), P1, I, H, Xg(a), U, Vw, Wr(a), Lan이다.
본 발명에 따른 방법의 바람직한 실시예에 따르면, 동시에 다수의 혈액형 특징들, 예를 들어, A, B, AB, D, C, c, E, e, Cw, 및 K를 결정한다. 검사할 샘플, 예를 들어 음성 또는 응고되지 않은 혈액 또는 대조구 혈액과 같은 테스트 액체를 포함하거나 포함하지 않은 적혈구 현탁액은 본 발명에 따른 장치의 투입 지대 상에 투입된다. 상기 피분석물을 운반하는 상기 샘플에 포함된 적혈구는 동시에 인디케이터 입자로서 사용된다.
도 1은 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도이다.
도 2는 도 1에 도시된 본 발명에 따른 측면 흐름 테스트용 장치의 분해도이다.
도 3은 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도로서, 웹 형태의 3차원 밀폐요소에 의해 구현된다.
도 4는 도 3에 도시된 본 발명에 따른 측면 흐름 테스트용 장치의 분해도이다.
도 5는 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도로서, 통 형태의 3차원 밀폐요소에 의해 구현된다.
도 6은 도 5에 도시된 본 발명에 따른 측면 흐름 테스트용 장치의 분해도이다.
도 7은 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D, C, c, E, e, Cw 및 K를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도이다.
도 8은 수혈자 및 저장혈액의 ABO 동질성(identity)을 검사하기 위한 베드사이드(bedside; 침대 곁) 테스트로서 본 발명에 따른 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도이다.
도 9는 도 8에 도시된 본 발명에 따른 측면 흐름 테스트용 장치의 분해도이다.
도 10은 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도이다.
도 11은 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도이다.
도 12는 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도이다.
도 13은 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도이다.
도 14는 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도이다.
도 15는 도 14에 도시된 본 발명에 따른 측면 흐름 테스트용 장치의 분해도 이다.
이하, 본 발명은 첨부된 도면 및 실시예를 참조로 하여 설명할 것이다.
도 1에는, 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도가 예시적으로 도시되어 있다. 전술한 예에서, 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(membrane)(2), 흡수패드(3), 및 웹(web) 형태로 실현된 2차원 밀폐요소(4)로 이루어진다. 이때, 상기 다공성 막(2)은 아크릴계 점착제(Pressure Sensitive Adhesive; PSA) 또는 자착식(self adhesive) 아크릴 접착제를 구비하는 지지층(1) 위에 고정된다. 여기서, 상기 흡수패드(3)의 일부는 상기 다공성 막(2)에 중첩된다. 상기 다공성 막(2)의 표면 상에 고정된 밀폐요소(4)는 투입지대(5)를 상기 잔여 막 면으로부터 분리하며 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막(2)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(6)은 경사져 엇갈려 배열되고, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(I-VI)에서 형성된다. 여기서, 상기 인디케이터 존은 하기 표 1과 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 1.
인디케이터 존 결합요소 사양
I 항체 안티-A (단일 클론)
II 항체 안티-B (단일 클론)
III 항체 안티-AB (단일 클론)
IV 항체 안티-D (단일 클론)
V 항체 안티-CDE (단일 클론)
VI 항체 안티-적혈구 (다중 클론)
인디케이터 존(VI)은 대조구(ctl)이며 다중 클론은 안티-적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존(VI)은 모든 잔여 인디케이터 존에 대해 원위에 존재한다.
도 2에는, 도 1에 도시된 본 발명에 따른 측면 흐름 테스트용 장치의 분해도가 도시되어 있다. 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(membrane)(2), 흡수패드(3), 및 밀폐요소(4)의 구성요소들로 이루어진다. 상기 밀폐요소(4)는 상기 투입지대(5)를 상기 잔여 막으로부터 분리하며, 상기 막(2)은 다시금 근위로부터 원위로 경사져 엇갈린 인디케이터 존(I-VI)을 포함하는 상기 인디케이터 존 영역(6)을 포함한다.
도 3에는, 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도가 예시적으로 도시되어 있다. 전술한 예에서, 상기 장치의 구성요소들은, 상기 다공성 막(2)의 표면 상에 고정된, 웹 형태로 실현된 3차원 밀폐요소(4)를 제외하고는, 도 1에 도시된 장치의 구성요소들에 해당한다.
도 4에는, 도 3에 도시된 본 발명에 따른 측면 흐름 테스트용 장치의 분해도가 도시되어 있다. 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(membrane)(2), 흡수패드(3), 및 웹 형태로 실현된 3차원 밀폐요소(4)의 구성요소들로 이루어진다. 상기 밀폐요소(4)는 투입지대(5)를 상기 잔여 막으로부터 분리하며, 상기 막(2)은 다시금 근위로 부터 원위로 경사져 엇갈린 인디케이터 존(I-VI)을 포함하는 상기 인디케이터 존 영역(6)을 포함한다.
도 5에는, 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도가 예시적으로 도시되어 있다. 전술한 예에서, 상기 장치의 구성요소들은, 상기 다공성 막(2)의 표면 상에 고정된, 통 형태로 실현된 3차원 밀폐요소(4)를 제외하고는, 도 1에 도시된 장치의 구성요소들에 해당한다.
도 6에는, 도 5에 도시된 본 발명에 따른 측면 흐름 테스트용 장치의 분해도가 도시되어 있다. 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(membrane)(2), 흡수패드(3), 및 통 형태로 실현된 3차원 밀폐요소(4)의 구성요소들로 이루어진다. 상기 밀폐요소(4)는 투입지대(5)를 상기 잔여 막으로부터 분리하며, 상기 막(2)은 다시금 근위로부터 원위로 경사져 엇갈린 인디케이터 존(I-VI)을 포함하는 상기 인디케이터 존 영역(6)을 포함한다.
도 7에는, 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D, C, c, E, e, Cw 및 K를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도가 예시적으로 도시되어 있다. 전술한 예에서, 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(2), 흡수패드(3), 및 웹 형태로 실현된 2차원 밀폐요소(4)로 이루어진다. 이때, 상기 다공성 막(2)은 압력에 민감하거나 점착되는 아크릴 접착제를 구비하는 지지층(1) 위에 고정된다. 마찬가지로, 상기 흡수패드(3)는 상기 지지층(1) 상에 고정되며, 이때, 상기 흡수패드(3)의 일부는 상기 다공성 막(2)에 중첩된다. 상기 다공성 막(2)의 표면 상에 고정된 밀 폐요소(4)는 투입지대(5)를 상기 잔여 막 면으로부터 분리하며 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막(2)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(6)은 경사져 엇갈려 배열되고, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(I-XI)에서 형성된다. 여기서, 상기 인디케이터 존은 하기 표 2와 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 2.
인디케이터 존 결합요소 사양
I 항체 안티-A (단일 클론)
II 항체 안티-B (단일 클론)
III 항체 안티-AB (단일 클론)
IV 항체 안티-D (단일 클론)
V 항체 안티-C (단일 클론)
VI 항체 안티-c (단일 클론)
VII 항체 안티-E (단일 클론)
VIII 항체 안티-e (단일 클론)
IX 항체 안티-Cw (단일 클론)
X 항체 안티-K (단일 클론)
XI 항체 안티-적혈구 (다중 클론)
인디케이터 존(XI)은 대조구(ctl)이며 다중 클론은 안티-적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존(XI)은 모든 잔여 인디케이터 존의 원위에 존재한다.
도 8에는, 수혈자 및 저장혈액의 ABO 동질성(identity)을 검사하기 위한 베드사이드(bedside; 침대 곁) 테스트로서 본 발명에 따른 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도가 예시적으로 도시되어 있다. 전술한 예에서, 상기 장치는 지지층(1), 이중으로 구현되어 존재하는 다공성 막(2a, 2b), 흡수패드(3), 및 웹 형태로 실현된 2차원 밀폐요소(4a, 4b)로 이루어진다. 상기 두 개의 다공성 막(2a, 2b)은 아크릴계 PSA 점착제층을 구비하는 지지층(1) 위에 평행하게 그리고 동일한 방향으로 고정된다. 마찬가지로, 상기 흡수패드(3)는 상기 지지층(1) 상에 고정된다. 이때, 상기 흡수패드(3)의 일부는 동일 간격으로 상기 두 개의 다공성 막(2a, 2b)에 중첩된다. 상기 다공성 막(2a, 2b)의 표면 상에 고정된 밀폐요소(4a, 4b)는 각각의 투입지대(5a, 5b)를 상기 잔여 막 면으로부터 분리하며 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막(2a, 2b)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5a, 5b)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2a, 2b)의 각각의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6a, 6b)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(6a, 6b)은 경사져 엇갈려 배열되고, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(Ia-IIIa)또는 (Ib-IIIb)에서 형성된다. 여기서, 상기 인디케이터 존은 하기 표 3과 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 3.
인디케이터 존 결합요소 사양
Ia, Ib 항체 안티-A (단일 클론)
IIa, IIb 항체 안티-B (단일 클론)
IIIa, IIIb 항체 안티-적혈구 (다중 클론)
인디케이터 존(IIIa, IIIb)은 대조구(ctl)이며 다중 클론은 안티-적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존(IIIa, IIIb)은 모든 잔여 인디케이터 존의 원위에 배치되어 존재한다.
도 9에는, 도 8에 도시된 본 발명에 따른 측면 흐름 테스트용 장치의 분해도가 도시되어 있다. 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(membrane)(2a, 2b), 흡수패드(3), 및 밀폐요소(4a, 4b)의 구성요소들로 이루어진다. 상기 밀폐요소(4a, 4b)는 투입지대(5a, 5b)를 상기 잔여 막으로부터 분리하며, 상기 막(2a, 2b)은 다시금 근위로부터 원위로 경사져 엇갈려 배치된, 인디케이터 존(Ia-IIIa) 및 (Ib-IIIb)을 포함하는 상기 인디케이터 존 영역(6a 또는 6b)을 포함한다.
도 10에는, 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도가 예시적으로 도시되어 있다. 전술한 예는 오른손잡이를 위한 측면 흐름 테스트 장치를 나타낸다. 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(membrane)(2), 흡수패드(3), 및 웹(web) 형태로 실현된 2차원 밀폐요소(4)로 이루어진다. 이때, 상기 다공성 막(2)은 아크릴계 PSA 점착제를 구비하는 지지층(1) 위에 고정된다. 마찬가지로, 상기 흡수패드(3)는 상기 지지층(1) 위에 고정된다. 여기서, 상기 흡수패드(3)의 일부는 상기 다공성 막(2)에 중첩된다. 상기 다공성 막(2)의 표면 상에 고정된 밀폐요소(4)는 투입지대(5)를 상기 잔여 막 면으로부터 분리하며 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막(2)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(6)은 평행하게 선형 열로 엇갈린 관계로 단계적으로 배열되며, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(I-VI)에서 형성된다. 여기서, 상기 인디케이터 존은 하기 표 4와 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 4.
인디케이터 존 결합요소 사양
I 항체 안티-A (단일 클론)
II 항체 안티-B (단일 클론)
III 항체 안티-AB (단일 클론)
IV 항체 안티-D (단일 클론)
V 항체 안티-CDE (단일 클론)
VI 항체 안티-적혈구 (다중 클론)
인디케이터 존(VI)은 대조구(ctl)이며 다중 클론은 안티-적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존(VI)은 모든 잔여 인디케이터 존의 원위에 존재한다.
도 11에는, 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도가 예시적으로 도시되어 있다. 전술한 예는 왼손잡이를 위한 측면 흐름 테스트 장치를 나타낸다. 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(membrane)(2), 흡수패드(3), 및 웹(web) 형태로 실현된 2차원 밀폐요소(4)로 이루어진다. 이때, 상기 다공성 막(2)은 아크릴계 PSA 점착제를 구비하는 지지층(1) 위에 고정된다. 마찬가지로, 상기 흡수패드(3)는 상기 지지층(1) 위에 고정된다. 여기서, 상기 흡수패드(3)의 일부는 상기 다공성 막(2)에 중첩된다. 상기 다공성 막(2)의 표면 상에 고정된 밀폐요소(4)는 투입지대(5)를 상기 잔여 막 면으로부터 분리하며 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막(2)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(6)은 평행하게 선형 열로 엇갈린 관계로 단계적으로 배열되며, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점 형태의 인디케이터 존(I-VI)에서 형성된다. 여기서, 상기 인디케이터 존은 하기 표 5와 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 5.
인디케이터 존 결합요소 사양
I 항체 안티-A (단일 클론)
II 항체 안티-B (단일 클론)
III 항체 안티-AB (단일 클론)
IV 항체 안티-D (단일 클론)
V 항체 안티-CDE (단일 클론)
VI 항체 안티-적혈구 (단일 클론)
인디케이터 존(VI)은 대조구(ctl)이며 다중 클론은 안티-적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존(VI)은 모든 잔여 인디케이터 존의 원위에 배치되어 존재한다.
도 12에는, 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도가 예시적으로 도시되어 있다. 전술한 예는 오른손잡이를 위한 측면 흐름 테스트 장치를 나타낸다. 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(membrane)(2), 흡수패드(3), 및 웹(web) 형태로 실현된 2차원 밀폐요소(4)로 이루어진다. 이때, 상기 다공성 막(2)은 아크릴계 PSA 점착제를 구비하는 지지층(1) 위에 고정된다. 마찬가지로, 상기 흡수패드(3)는 상기 지지층(1) 위에 고정된다. 여기서, 상기 흡수패드(3)의 일부는 상기 다공성 막(2)에 중첩된다. 상기 다공성 막(2)의 표면 상에 고정된 밀폐요소(4)는 투입지대(5)를 상기 잔여 막 면으로부터 분리하며 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막(2)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(6)은 평행하게 선형 열로 엇갈린 관계로 단계적으로 배열되며, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(I-VI)에서 형성된다. 여기서, 상기 인디케 이터 존은 하기 6과 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 6.
인디케이터 존 결합요소 사양
I 항체 안티-A (단일 클론)
II 항체 안티-B (단일 클론)
III 항체 안티-AB (단일 클론)
IV 항체 안티-D (단일 클론)
V 항체 안티-CDE (단일 클론)
VI 항체 안티-적혈구 (다중 클론)
인디케이터 존(VI)은 대조구(ctl)이며 다중 클론은 안티-적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존(VI)은 모든 잔여 인디케이터 존의 원위에 배치되어 존재한다.
도 13에는, 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도가 예시적으로 도시되어 있다. 전술한 예는 왼손잡이를 위한 측면 흐름 테스트 장치를 나타낸다. 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(membrane)(2), 흡수패드(3), 및 웹(web) 형태로 실현된 2차원 밀폐요소(4)로 이루어진다. 이때, 상기 다공성 막(2)은 아크릴계 PSA 점착제를 구비하는 지지층(1) 위에 고정된다. 마찬가지로, 상기 흡수패드(3)는 상기 지지층(1) 위에 고정된다. 여기서, 상기 흡수패드(3)의 일부는 상기 다공성 막(2)에 중첩된다. 상기 다공성 막(2)의 표면 상에 고정된 밀폐요소(4)는 투입지대(5)를 상기 잔여 막 면으로부터 분리하며 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막(2)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(6)은 평행하게 선형 열로 엇갈린 관계로 단계적으로 배열되며, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(I-VI)에서 형성된다. 여기서, 상기 인디케이터 존은 하기 표 7과 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 7.
인디케이터 존 결합요소 사양
I 항체 안티-A (단일 클론)
II 항체 안티-B (단일 클론)
III 항체 안티-AB (단일 클론)
IV 항체 안티-D (단일 클론)
V 항체 안티-CDE (단일 클론)
VI 항체 안티-적혈구 (단일 클론)
인디케이터 존(VI)은 대조구(ctl)이며 다중 클론은 안티-적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존(VI)은 모든 잔여 인디케이터 존의 원위에 배치되어 존재한다.
도 14에는, 본 발명에 따른 혈액형 특징 A, B, AB, D 및 CDE를 동시에 결정하는 측면 흐름 테스트용 장치의 사시도가 예시적으로 도시되어 있다. 전술한 예에서, 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(membrane)(2), 흡수패드(3a, 3b), 및 웹(web) 형태로 실현된 2차원 밀폐요소(4a, 4b)로 이루어진다. 이때, 상기 다공성 막(2)은 아크릴계 PSA 점착제를 구비하는 지지층(1) 위에 고정된다. 마찬가지로, 상기 흡수패드(3a, 3b)는 상기 지지층(1) 위에 고정된다. 여기서, 상기 흡수패드(3a, 3b)의 일부는 상기 다공성 막(2)에 중첩된다. 상기 다공성 막(2)의 표면 상에 고정된 밀폐요소(4a, 4b)는 투입지대(5)를 상기 잔여 막 면으로부터 분리하며 액체샘플 및 테스트 시약을 상기 다공성 막(2)에 분할할 수 있게 한다. 상기 투입지대(5)와, 상기 흡수패드(3)와 접촉하는 상기 다공성 막(2)의 영역 사이에는 인디케이터 존 영역(6a, 6b)이 배치된다. 상기 인디케이터 존 영역(6a, 6b)은 평행하게 선형 열 로 엇갈린 관계로 단계적으로 배열되며, 소정의 X위치 및 Y위치에 배치된, 점(point) 형태의 인디케이터 존(I-VI)에서 형성된다. 여기서, 상기 인디케이터 존은 하기 표 8과 같은 결합요소들로 이루어진다.
표 8.
인디케이터 존 결합요소 사양
I 항체 안티-A (단일 클론)
II 항체 안티-B (단일 클론)
III 항체 안티-AB (단일 클론)
IV 항체 안티-D (단일 클론)
V 항체 안티-CDE (단일 클론)
VIa, VIb 항체 안티-적혈구 (다중 클론)
인디케이터 존(VIa, VIb)은 대조구(ctl)이며 다중 클론은 안티-적혈구 항체를 포함한다. 상기 인디케이터 존(VIa, VIb)은 상기 인디케이터 존(I-III 또는 IV-V)의 원위에 배치되어 존재한다.
도 15에는, 도 14에 도시된 본 발명에 따른 측면 흐름 테스트용 장치의 분해도가 도시되어 있다. 상기 장치는 지지층(1), 다공성 막(membrane)(2), 흡수패드(3a, 3b), 및 밀폐요소(4a, 4b)의 구성요소들로 이루어진다. 상기 밀폐요소(4a, 4b)는 상기 투입지대(5)를 상기 잔여 막으로부터 분리하며, 상기 막(2)은 근위로부터 원위로 경사져 엇갈려 배열된 인디케이터 존(I, II, III, VIa 또는 IV, V, VIb)을 포함하는 두 개의 인디케이터 존 영역(6a, 6b)을 포함한다.
실시예
제1 실시예: 혈액형 결정
테스트 스트립의 생산:
테스트 스트립(test strip)은 투입지대, 인디케이터 존 영역, 및 흡수영역으로 이루어진다. Millipore HiFlow Plus 065 종류의 막은 줄에서 6 스팟(spot) 실현을 위해서 15x35mm(폭/길이; x/y)의 크기로 또는 11 스팟 실현을 위해서 26x40mm 크기로 절개되며 캐리어 층(예를 들어, G&L의 백킹 쉬트)에 부착된다. 경사져 엇갈리거나, 대안적으로 선형 라인으로 엇갈려, 예를 들어, AD3200(바이오 도트)와 같은 분산액을 사용하여 상기 인디케이터 존 영역에는 서로 다른 특정한 혈액형의 단일 클론 항체의 용액의 0.2 ㎕ 점(point)이 투입된다:
안티-A-클론 Birma-1 (Serologicals, TLJ0105); 안티-B-클론 ES-4 (Serologicals, NCA0201); 안티-AB-클론 AB6, AB26, AB92 (Medion Diagnostics, 010062); 안티-D-클론 LDM3 (SNBTS, Z7180100); 안티-C-클론 MS-24 (Serologicals, 공식화되지않음(un-formulated), KGK0212); 안티-c-클론 MS-33 (Serologicals, KNI0207); 안티-E-클론 MS-80 + MS-258 (Serologicals, KXE0201); 클론 안티-e MS-21+MS-63 (Serologicals, KLL0205+KQK0205); 안티-Cw-클론MS-110 (Serologicals, JPK0201); 안티-K-클론 MS-56, (Serologicals, KOA0201).
상기 안티-A 항체의 위치결정은 위치(x=3/y=10mm)에서 수행된다. 모든 다른 항체들은 상기 안티-A 항체의 위치에 대하여 x=1.5/y=2.2mm의 간격을 두고 반복적으로 분산된다. 적혈구 특정 제어항체(래빗 IgG 분류 항인 RBC, 로크랜드, 209-4139)는 상기 특정한 일련의 혈액형 항체의 마지막 스팟에 대해서 x=2/y=3.5mm로 엇갈려 투입된다. 상기 항체의 희석은 15mM 칼륨 인산염 완충액(kalium phosphate buffer) pH 7.5, 10% (v/v) 메탄올로 다음과 같이 수행된다: 안티-A 항체 1:3, 안 티-B 항체 1:2, 안티-AB 항체 1:4, 안티-D 항체 1:4, 안티-RBC 항체 1:3. 모든 다른 항체 용액은 예비희석되지 않으며 메탄올을 사용하여 10%(v/v)로 혼합된다.
상기 막은 상기 항체의 분산 후에 20분간 40℃에서 건조되며 이어서, 일정한 습도에서 테스트 수행까지 보관된다. 상기 투입지대의 원위에는 상기 막에 의해 대략 3mm로 중첩되는 15x10mm 또는 26x10mm 크기의 흡수패드(Schleicher & Schuell, 300)가 부착된다. 상기 투입지대는 1-2mm 폭의 접착 줄(Tesa 4124)을 y=5mm 위치에서 부착함으로써 전체 막 너비로 상기 잔여 막으로부터 분리된다.
테스트 배치:
응고되지 않은 모든 성분을 포함하는 혈액이 혈액 샘플로서 사용된다. 실질적인 테스트를 위해서 100 ㎕ 1:6 희석 완충액(EnlisstII, Medion 진단 또는 Diluent 1, DiaMed)으로 희석된 혈액(6 스팟 실현) 또는 150 ㎕ (11 스팟 실현)이 상기 투입지대로 투입된다. 상기 혈액이 상기 투입지대를 떠났다면, 결합되지 않은 적혈구를 상기 막으로부터 세척하기 위해서, 100 ㎕ 또는 150 ㎕ 희석 완충액 또는 바람직하게는 100 ㎕ 저삼투압 세척 완충액(15mM 칼륨 인산염 완충액 pH 7.4, 0.3-0.45% (w/v) NaCl)이 한번 상기 투입지대로 흡액된다. 그러나, 대안적으로, 상기 샘플 오더는 50 ㎕ 1:3 희석되거나 희석되지 않은 혈액을 사용하여 수행될 수도 있다. 상기 샘플에서, 상기 막은 두 번 희석 완충액을 사용하거나 한번은 희석 완충액을 사용하고 이어서 저삼투압 세척 완충액을 사용하여 세척된다.
상기 선택된 1:6 희석에서, 상기 안티-RBC 제어는 성공적으로 수행된 테스트의 인디케이터로서 2분 후에 볼 수 있다. 희석되지 않은 혈액을 사용하면, 상기 테스트 를 수행하는 데 시간이 더 걸린다.
결과:
상기 안티-RBC 대조구가 명백히 양성인 신호(붉은 점)를 나타내는 경우에 상기 테스트는 유효하다. 상기 각각의 혈액형 항원의 존재여부에 따라서, 상응하는 위치에서 붉은 점이 나타나거나(양성) 상기 막은 거의 흰색으로 배경이 채색된다(음성).
제2 실시예: 베드사이드(bedside; 침대 곁) 테스트
테스트 줄의 형성:
상기 베드사이드 테스트는 지지층(백킹 쉬트) 위에 고정된 두 개의 막("저장혈액", "수혈자")으로 이루어진다. 상기 막은 각각 투입지대, 인디케이터 존 영역 및 흡수영역으로 이루어진다.
Millipore HiFlow Plus 065 종류의 막은 줄에서 12.5x30mm(폭/길이; x/y)의 크기로 절개된다. 항상 두 개의 막은 지지층(예를 들어, G&L의 백킹 쉬트)에 5mm의 간격을 두고 부착되므로, 상기 전체 조립체는 30x30mm의 크기를 갖는다.
경사져 엇갈린 상기 두 개의 막 위에는 예를 들어, AD3200(바이오 도트)와 같은 분산액을 사용하여 하기와 같은 항상 동일한 투입이 수행된다: 위치(x=4/y=12mm)에서 단일 클론 항체 안티-A 클론 Birma-1(Serologicals, TLJ0105) 용액의 0.2 ㎕ 점(point)이 투입되고, 위치(x=7/y=14mm)에서 단일 클론 항체 안티-B 클론 ES-4(Serologicals, NCA0201) 용액의 0.2 ㎕ 점(point)이 투입된다. 적혈구 특정 제어항체(래빗 IgG 분류 항인 RBC, 로크랜드, 209-4139)는 anti-B 스팟에 대해서 x=3/y=4mm로 이전되어 투입된다. 상기 항체의 희석은 15mM 칼륨 인산염 완충액 pH 7.5, 10% (v/v) 메탄올로 다음과 같이 수행된다: 안티-A 항체 1:3, 안티-B 항체 1:2, 안티-RBC 항체 1:3. 상기 막은 상기 항체의 분산 후에 20분간 40℃에서 건조되며 이어서, 일정한 습도에서 테스트 수행까지 보관된다. 상기 투입지대의 원위에는 상기 두 개의 막에 의해 대략 3mm로 중첩되는 30x10mm 크기의 흡수패드(Schleicher & Schuell, 300)가 부착된다. 상기 투입지대는 테스트 줄(Tesa 4124) 당 1-2mm 폭의 접착 줄(Tesa 4124)을 y=5mm 위치에서 부착함으로써 전체 막 너비로 상기 잔여 막으로부터 분리된다.
테스트 배치:
샘플로서 하기와 같이 사용된다. 즉, "저장혈액"막에는 적혈구 응축물이 사용되고, "수혈자" 막에는 모든 성분을 포함하는 혈액이 사용된다.
실질적인 테스트를 위해서 50㎕ 혈액이 "수혈자" 막 측에 그리고 50㎕ 적혈구 응축물이 "저장혈액" 측에 각각의 투입지대로 투입된다. 상기 혈액이 상기 막으로부터 완전히 흡액된 후에, 항상 2x100㎕ 희석 완충액을 사용하거나 한번은 희석 완충액을 사용하고 이어서 저삼투압 세척 완충액을 사용하여 세척된다.
결과:
상기 안티-RBC 대조구는 성공적으로 수행된 테스트의 인디케이터로서 두 개의 막에서 대략 2분 후에 볼 수 있다.
상기 안티-RBC 대조구가 명백히 양성인 신호(붉은 점)를 나타내는 경우에 상기 테스트는 유효하다. 상기 각각의 혈액형 항원의 존재여부에 따라서, 상응하는 위치에서 붉은 점이 나타나거나(양성) 상기 막은 거의 흰색으로 배경이 채색된다(음성). "수혈자" 및 "저장혈액"의 동일한 이미지는 수혈자와 저장혈액 사이의 ABO 동질성을 의미한다.
제3 실시예: 혈액형 결정
테스트 스트립의 형성:
테스트 스트립은 막의 중간에 놓인 하나의 투입지대, 두 개의 인디케이터 존 영역, 및 두 개의 흡수영역으로 이루어진다. Millipore HiFlow Plus 065 종류의 막은 줄에서 15x50mm(폭/길이; x/y)의 크기로 절개되며 지지층(예를 들어, G&L의 백킹 쉬트)에 부착된다. 경사져 엇갈리거나 대안적으로 선형 열로 엇갈린 상기 인디케이터 존 영역에는 서로 다른 특정한 혈액형의 단일 클론 항체의 용액의 0.2 ㎕ 점(point)이 투입된다. 이때, 상기 줄 길이(y=0mm)의 중간은 y방향으로 상기 인디케이터 존의 위치결정을 위한 참조크기이다. 하기의 항체들이 예를 들어, AD3200 (바이오 도트)를 사용하여 분산된다: 안티-A-클론 Birma-1 (Serologicals, TLJ0105); 안티-B-클론 ES-4 (Serologicals, NCA0201); 안티-AB-클론 AB6, AB26, AB92 (Medion Diagnostics, 010062); 안티-D-클론 LDM3 (SNBTS, Z7180100); 안티-C-클론 MS-24 (Serologicals, 공식화되지않음(un-formulated), KGK0212); 안티-E-클론 MS-80 + MS-258 (Serologicals, KXE0201).
상기 인디케이터 존의 경사져 엇갈린 실시예에서, 상기 안티-A 항체의 분산은 위치(x=4/y=10mm)에서 수행된다. 안티-B 및 안티-AB 항체의 위치결정은 상기 안티-A 항체의 위치에 대하여 x=3.5/y=2mm의 간격을 두고 반복적으로 수행된다. 적혈구 특정 대조구 항체(래빗 IgG 분류 항인 RBC, 로크랜드, 209-4139)는 상기 특정한 일 련의 안티-A, 안티-B 및 안티-AB 항체의 마지막 스팟에 대해서 x=3.5/y=3.5mm로 이전되어 투입된다. 안티-D 항체의 분산은 위치(x=4/y=-10mm)에서 수행되고, 안티-CDE의 분산은 x=3.5/y=-2mm의 간격을 두고 수행된다. 적혈구 특정 대조구 항체는 안티-CDE 항체의 마지막 스팟에 대해서 x=3.5/y=-3.5mm로 엇갈려 투입된다. 상기 항체의 희석은 15mM 칼륨 인산염 완충액 pH 7.5, 10% (v/v) 메탄올로 다음과 같이 수행된다: 안티-A 항체 1:3, 안티-B 항체 1:2, 안티-AB 항체 1:4, 안티-D 항체 1:4, 안티 -RBC 항체 1:3. 항체혼합 안티-CDE는 예비희석되지 않으며 메탄올을 사용하여 10%(v/v)로 혼합된다.
상기 막은 상기 항체의 분산 후에 20분간 40℃에서 건조되며 이어서, 일정한 습도에서 테스트 수행까지 보관된다. 상기 투입지대에 대한 말단에는 상기 막에 의해 대략 3mm로 중첩되는 15x10mm 크기의 두 개의 흡수패드(Schleicher & Schuell, 300)가 부착된다. 상기 투입지대는 1-2mm 폭의 두 개의 접착 줄(Tesa 4124)을 y=3mm 또는 y=-3mm 위치에서 부착함으로써 전체 막 너비로 상기 잔여 막으로부터 분리된다.
테스트 샘플:
응고되지 않은 모든 성분을 포함하는 혈액이 혈액 샘플로서 사용된다. 실질적인 테스트를 위해서 100 ㎕ 1:6 희석 완충액(EnlisstII, Medion 진단)으로 희석된 혈액이 상기 투입지대로 투입된다. 상기 혈액이 상기 투입지대를 떠났다면, 결합되지 않은 적혈구를 상기 막으로부터 세척하기 위해서, 100 ㎕ 희석 완충액 또는 100 ㎕ 저삼투압 세척 완충액(15mM 칼륨 인산염 완충액 pH 7.4, 0.3-0.45% (w/v) NaCl)이 한번 상기 투입지대로 흡액된다. 그러나, 대안적으로, 상기 샘플 오더는 50 ㎕ 1:3 희석되거나 희석되지 않은 혈액을 사용하여도 수행된다. 상기 샘플에서, 상기 막은 두 번 희석 완충액을 사용하거나 한번은 희석 완충액을 사용하고 이어서 저삼투압 세척 완충액을 사용하여 세척된다.
상기 선택된 1:6 희석에서, 상기 안티-RBC 대조구는 성공적으로 수행된 테스트의 인디케이터로서 2분 후에 볼 수 있다. 희석되지 않은 혈액을 사용하면, 상기 테스트를 수행하는 데 시간이 더 걸린다.
결과:
상기 안티-RBC 제어가 명백히 양성인 신호(붉은 점)를 나타내는 경우에 상기 테스트는 유효하다. 상기 각각의 혈액형 항원의 존재여부에 따라서, 상응하는 위치에서 붉은 점이 나타나거나(양성) 상기 막은 거의 흰색으로 배경이 채색된다(음성).
상술한 바와 같이 본 발명에 따르면 액체 샘플 내의 다수의 피분석물(analyte)을 동시에 질적 또는 양적으로 결정할 수 있다.

Claims (20)

  1. 액체 샘플을 투입하는 투입 지대(5);
    피분석물과 상호작용할 수 있는 적어도 두 개의 인디케이터 존; 및
    상기 인디케이터 존을 통과한 후에 상기 액체를 흡수하는 적어도 하나의 흡수 영역(3)을 갖는 막(membrane)(2)을 포함하되,
    상기 인디케이터 존은 상기 투입 지대(5)와 상기 흡수 영역(3) 사이에 위치하며,
    상기 투입 지대(5)로부터 각각의 인디케이터 존을 통하여 흡수 영역(3)까지의 흐름방향이 평행하며, 적어도 두 개의 서로 다른 유로가 존재하는 것을 특징으로 하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  2. 제1 항에 있어서,
    상기 인디케이터 존은, 유로 당 액체 샘플이 하나 이상의 상기 인디케이터 존을 관류하지 않도록 배열되는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  3. 제1 항에 있어서,
    상기 인디케이터 존은 경사진 V자형, W자형, M자형, N자형 또는 선형 열로 배열되는 것을 특징으로 하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  4. 제1 항에 있어서,
    상기 인디케이터 존은 항체 또는 항체 단편(fragment) 또는 렉틴(lectin), 항체 또는 항체 에피토프 또는 세포 또는 세포 파편을 포함하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  5. 제1 항에 있어서,
    상기 인디케이터 존은 안티-A, 안티-B, 안티-AB, 안티-D, 안티-D, 안티-C, 안티-c, 안티-E, 안티 -e, 안티-Cw, 또는 K 항체 또는 항체 단편을 포함하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  6. 제1 항에 있어서,
    상기 막(2)은 폴리에틸렌, 니트로셀룰로오스 또는 나일론으로 이루어지는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  7. 제1 항에 있어서,
    상기 투입 지대(5)의 아래로 그리고 상기 인디케이터 존의 위로 상기 막(2) 상에 적어도 하나의 밀폐요소(4)가 배치되는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  8. 제1 항에 있어서,
    상기 장치의 구성요소는 기계적 보강을 위하여 지지층(1) 상에 배치된 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  9. 제1 항에 있어서,
    상기 장치의 구성요소는 케이스로 통합되는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물을 동시에 질적 또는 양적으로 결정하는 장치.
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 제1 항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 장치의 막(2)의 투입 지대(5) 상에 액체 샘플을 투입하는 단계를 포함하며,
    상기 액체 샘플은, 액체가 인디케이터 존을 통과해 흡수 영역(3)의 방향으로 흐르게 하고, 상기 액체 샘플 내의 피분석물 또는 이의 유도체가 상기 인디케이터 존 내에 복합체를 형성할 수 있는 양으로 존재하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  13. 제12 항에 있어서,
    상기 피분석물은 혈액형 항원 또는 항원 에피토프인 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  14. 제12 항에 있어서,
    상기 피분석물은 A 혈액형 항원, B 혈액형 항원, AB 혈액형 항원, D 혈액형 항원, C 혈액형 항원, c 혈액형 항원, E 혈액형 항원, e 혈액형 항원, Cw 혈액형 항원, K 혈액형 항원, 또는 항원 에피토프를 포함하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  15. 제12 항에 있어서,
    상기 A 혈액형 항원, B 혈액형 항원, AB 혈액형 항원, D 혈액형 항원, C 혈액형 항원, c 혈액형 항원, E 혈액형 항원, e 혈액형 항원, Cw 혈액형 항원, K 혈액형 항원, 또는 항원 에피토프는 동시에 결정되는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  16. 제12 항에 있어서,
    적혈구는 인디케이터 입자로서 사용되는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  17. 제12 항에 있어서,
    상기 막(2)은 적혈구를 투입한 후에 세척 용액을 이용하여 세척되는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  18. 제17 항에 있어서,
    상기 세척 용액은 저삼투성인 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  19. 제12 항에 있어서,
    상기 액체 샘플은 혈액 또는 혈액 성분을 포함하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
  20. 제19 항에 있어서,
    상기 액체 샘플이 모든 성분을 포함하는 혈액, 적혈구 응축물 또는 대조구 혈액(control blood)에서 선택된 테스트 액체를 포함하는 액체 샘플 내의 다수의 피분석물 또는 이의 유도체를 결정하는 방법.
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