Relatório Descritivo da Patente de Invengáo para "DISPOSITIVO E SEU USO, E PROCESSO PARA DETERMINAQÁO SIMULTÁNEA DE ANTÍGENOS DE GRUPOS SANGÜÍNEOS". A presente invengáo refere-se a um dispositivo para testes de parámetros múltiplos, de fluxo lateral-diagonal, particularmente, no setor da serologia de grupos sangüíneos, para a determinagáo qualitativa ou quanti-tativa, simultánea, de diversos componentes de análise em urna amostra líquida, que compreende urna membrana com urna zona de distribuigáo para aplicagáo da amostra líquida, pelos menos duas zonas indicadoras, que po-dem entrar em agáo recíproca com o/os componente(s) de análise, e pelo menos urna regiáo de absorgáo, que absorve o líquido após a passagem pelas zonas indicadoras, sendo que as zonas indicadoras situam-se entre a zona de distribuigáo e urna regiáo de absorgáo, caracterizado pelo fato de que as diregóes de fluxo da zona de distribuigáo, pelas respectivas zonas indicadoras, para urna regiáo de absorgáo (vías de fluxo) sáo substancialmente paralelas e que pelo menos duas vias de fluxo diferentes estáo presentes. A invengáo refere-se, aínda, a um processo para determinagáo de diversos componentes de análise em urna amostra líquida, que compreende a aplicagáo da amostra sobre a zona de distribuigáo de urna membrana do dispositivo de acordo com a invengáo, sendo que essa amostra está presente em quantidade suficiente, para fazer com que o líquido da amostra corra em diregáo á regiáo de absorgáo, pelas zonas indicadoras, e para fazer com que os componentes de análise ou seus derivados no líquido de amostra formem um complexo ñas zonas indicadoras, particularmente, para a determinagáo simultánea de antígenos de grupos sangüíneos.
No diagnóstico serológico de grupos sangüíneos, sáo detectados, em geral, parámetros que sáo de importáncia, particularmente, em as-sociagáo com transfusóes ou com o Morbus Haemolyticus Neonatorum. Nesse caso, trata-se, dentre outros, da detecgáo de antígenos na superficie de eritrocitos, que sáo característicos para grupos sangüíneos. Outros sistemas de antígenos importantes também sáo encontrados em trombócitos, granulócitos, linfócitos, que também desempenham um papel na transfusáo e/ou no transplante.
Sabe-se que para determinagáo dos antígenos de grupos san-güíneos, os eritrocitos da pessoa a ser testada (doador ou receptor) sao reunidos com reagentes, que contém anticorpos específicos para grupos san-güíneos. Normalmente, trata-se de testes de líquido, nos quais por mistura de urna amostra que contém eritrocitos com urna amostra que contém anticorpos, que estáo voltados para urna determinada característica de grupos sangüíneos, é produzida urna preparagáo de teste. A preparagáo de teste é depois incubada por um período definido e sob condigóes definidas e, após o término da incubagáo ou diretamente na ou depois de urna etapa de centri-fugagáo, é examinada ou visualmente ou com métodos ópticos sobre urna eventual aglutinagáo ou adsorgáo dos eritrócitos. A medigao de ponto final predominante na serologia de grupos sangüíneos continua a ser a hemoa-glutinagáo. Para cada grupo sangüíneo determinado, é preciso pipetar urna preparagáo própria, isto é, a determinagáo dos 9 grupos sangüíneos mais importantes, A, B, D, C, c, E, e, Cw e K, requer 9 preparagóes separadas, sem controle.
Testes de fluxo lateral encontram atualmente múltipla aplicagáo como testes rápidos, por exemplo, como testes de gravidez, para determinagáo de marcadores de infecgáo ou como teste de drogas. Urna disposigáo de teste de fluxo lateral consiste, sabidamente, em um suporte fixo, sobre o qual está aplicada urna zona de distribuigáo para a amostra a ser examinada, urna membrana de separagáo, sobre a qual elementos de ligagáo, por exemplo, anticorpos ou antígenos recolhedores estáo ligados e na qual po-dem ser detectadas reagóes de ligagáo, e urna regíáo de absorgáo absorve-dora, que deixa a amostra a ser examinada correr pela membrana.
Membranas de teste de testes de fluxo lateral convencionais sáo descritas, em geral, com separagáo semelhante á cromatografía. O componente de análise na amostra liga-se específicamente aos elementos de ligagáo fixados em urna membrana, que, em geral, estáo dispostos em grupos dispostos um atrás do outro ou sobrepostos como zonas indicadoras. O complexo de ligagáo é tornado visível por partículas indicadoras, que, em geral, já existem na disposigáo, secados, em urna compressa de liberagáo de conjugado. A compressa de liberagáo de conjugado está montada, típicamente, entre zona de distribuigáo e membrana. As partículas indicadoras, coloridas, pré-revestidas, estáo revestidas, por exemplo, com um anticorpo voltado contra o componente de análise procurado. O formato do teste de fluxo lateral usual é o de um chamado "Sandwich Assay" (Teste de Sanduíche), no qual tanto a zona indicadora como também as partículas indicadoras estáo cobertas com ligantes volta-dos contra o componente de análise procurado, normalmente, um anticorpo. Nesse caso, o ligante (elemento de ligagáo) está imobilizado na membrana. O reagente detector, normalmente um anticorpo, que está ligado em partículas de poliestireno coloridas ou metáis coloidais, está depositado de modo removível por lavagem na compressa de liberagáo de conjugado. Esse complexo de ligagáo serve como partícula indicadora. Depois da aplicagáo da amostra a ser examinada, a mesma umedece muito rápidamente a compressa de liberagáo de conjugado, com o que as partículas indicadoras sáo mobilizadas. As partículas indicadoras migram com a parte frontal do líquido ao longo da membrana porosa. Um componente de análise que se encontra na amostra é ligado pelo anticorpo, que está acoplado á partícula indicadora. Quando a amostra passa pela zona indicadora, o complexo de componente de análise/partícula indicadora é imobilizado na zona indicadora por reagáo do componente de análise com o anticorpo ligado na zona indicadora, o que leva a um sinal visível.
Um outro formato de teste conhecido para componentes de análise pequeños, com apenas um único determinante de antígeno, que náo pode ligar simultáneamente dois anticorpos, é o chamado 'Teste de Compe-tigáo". O reagente detector ligado ás partículas indicadoras é, normalmente, urna molécula idéntica ou análoga á do componente de análise. As partículas indicadoras estáo depositadas na compressa de liberagáo de conjugado. As partículas indicadoras migram com a parte frontal do líquido ao longo da membrana porosa. Quando a amostra, que contém componente de análise, e as partículas indicadoras (que, efetivamente, também contém componente de análise) passam pela zona indicadora, íigam urna parte das moléculas do componente de análise na amostra e urna parte das partículas indicadoras. Quando mais componente de análise houver na amostra, tanto mais eficazmente ele irá competir com a ligagáo das partículas indicadoras, tanto mais fraco torna-se o sinal.
Sabidamente, essas partículas indicadoras sao predominantemente de ouro coloidal ou de poliestireno, que sao preparadas e revestidas com métodos conhecidos do técnico. Nos formados típicos de testes de fluxo lateral, os componentes de análise sao determinados indiretamente. Por determinagáo direta de um componente de análise é entendido, nesse caso, que o componente de análise já está ligado naturalmente na partícula indicadora (por exemplo, eritrocito). No caso mais comum da determinagáo indi-reta do componente de análise, a amostra a ser testada nao contém, em geral, um componente ligado celularmente, por exemplo, plasmático, como componente de análise e, além da amostra a ser testada, sao necessários dois componentes de reagente, a saber, partículas indicadoras de elemento de ligagáo. Na determinagáo indireta, o componente de análise liga-se, pri-meiramente, ás partículas indicadoras liberadas da compressa de liberagáo de conjugado, antes de esse complexo ser depois imobilizado por urna segunda reagáo com o elemento de ligagáo ñas zonas indicadoras.
No uso de testes de fluxo lateral convencionais com eritrocitos como partículas indicadoras, que tém ligados os componentes de análise a serem determinados, por exemplo, antígenos específicos para grupos san-güíneos, até o presente eram dispostos ñas zonas indicadoras anticorpos contra antígenos de grupo sangüíneo correspondentes, como elementos de ligagáo em grupos dispostos um atrás do outro ou sobrepostos de urna só vía de fluxo, tal como, por exemplo, anti-A, anti-B contra os antígenos de grupos sangüíneos A ou B ou anticorpos contra antígenos do sistema de grupos sangüíneos Rh. Nesse caso, testes de fluxo lateral convencionais apresentam a desvantagem de que os eritrocitos ligados aos anticorpos for-mam urna barreira de fluxo para os outros componentes de análise a serem examinados, por exemplo, outros antígenos associados a células, em urna amostra. Por aglutinagáo ou adsorgáo de células em um grupo de elementos de ligagao situados de modo proximal á zona de distribuigáo, outros componentes de análise, particularmente associados a células ou fragmentos de células, na amostra a ser examinada nao podem mais separar-se de modo livre e visível e, conseqüentemente, nao podem ser detectados de modo claro ou completo. Isso pode levar a um enfraquecimento ou eliminagáo do grupo B e do grupo D, por exemplo, em urna pessoa que tem o grupo san-güíneo AB Rh D positivo, o que poderia levar a urna interpretagáo errónea, no sentido de grupo sangüíneo A Rh negativo. Por esse motivo, até o presente nao podiam ser usados testes de fluxo lateral com mais de urna zona indicadora, especialmente no diagnóstico serológico de grupos sangüíneos. Para a medigáo de diversos parámetros de grupos sangüíneos, particularmente ligados a células e plasmáticos, até agora testes de parámetros individuáis precisam ser realizados separadamente. É tarefa da invengáo superar as desvantagens apresentadas com vistas ao estado da técnica, particularmente, as zonas indicadoras ou zonas de comprovagáo situadas urna atrás da outra ou sobrepostas de testes de fluxo lateral convencionais, para urna medigáo simultánea de diversos parámetros de teste, particularmente, de parámetros celulares ou plasmáticos. A tarefa é solucionada de acordo com a invengáo, por um lado, por um dispositivo para determinagóes qualitativas ou quantitativas simultáneas de um ou mais componentes de análise em urna amostra líquida ou em várias amostras líquidas, que compreende urna membrana, com urna zona de distribuigao, para aplicagáo da amostra líquida, pelo menos duas zonas indicadoras, que podem entrar em relagáo recíproca ou o/os componente, e pelo menos urna regiáo de absorgáo, que absorve o líquido, depois da pas-sagem pelas zonas indicadoras, sendo que as zonas indicadoras estáo situadas entre a zona de distribuigáo e urna regiáo de absorgáo, caracterizado pelo fato de que as diregóes de fluxo da zona de distribuigáo, pelas respectivas zonas indicadoras, para urna regiáo de absorgáo, que representam vías de fluxo, sao substancialmente paralelas e pelo menos duas vías de fluxo diferentes estao presentes.
As zonas indicadoras do dispositivo de acordo com a invengáo encontram-se sobre a membrana e compreendem elementos de ligagáo, que recolhem ou ligam oíos componente(s) de análise a ser determinado(s) na/nas amostra(s). Ñas zonas indicadoras sao detectadas as reagóes de ligagáo entre o componente de análise e o elemento de ligagáo.
Em urna forma de realizagáo da invengáo, as zonas indicadoras estao dispostas de tal modo que o líquido de amostra por via de fluxo nao passa por mais de urna zona indicadora. Por exemplo, as zonas indicadoras estao dispostas de modo alternado sobre a membrana. A disposigáo das zonas indicadoras, nesse caso, está configurada em urna fileira que se es-tende de proximal a distal ou inversamente diagonal. Formas de realizagáo especiáis sao em forma de V, em forma de W, M ou N ou em forma de V , em forma de W, M ou N invertida. Em urna outra forma de realizagáo, as zonas indicadoras estao dispostas de modo alternado, paralelamente, urna ao lado da outra, em urna fileira linear. A introdugáo de zonas indicadoras paralelamente alternadas, é que torna possível um teste de parámetros múltiplos com eritrocitos como partículas indicadoras em urna disposigáo lateral. A forma de realizagáo particularmente preferida de urna disposigáo diagonal tem a vantagem de que a designagáo dos resultados pode ser aplicada sobre a disposigáo de acordo com a invengáo de modo particularmente prático e fácilmente legível, urna vez que cada parámetro a ser detectado apresenta urna posigáo X e Y definida, considerando-se a disposigáo do dispositivo de acordo com a invengáo como um sistema de coordenadas, com ordenada (plano da diregáo de fluxo) e abscissa (plano da zona de aplicagáo).
As zonas indicadoras compreendem anticorpos ou fragmentos de anticorpos e/ou lecitinas ou fragmentos das mesmas, que recolhem ou ligam na amostra os antígenos dos grupos sangüíneos a ser determinados e, com os mesmos, as células que os contém. Como elementos de ligagáo preferidos, sáo dispostos na membrana porosa anticorpos ou fragmentos de anticorpos e/ou lecitinas ou fragmentos das mesmas contra antígenos de todos os sistemas de grupos sangüíneos possíveis, ñas zonas indicadoras. Preferivelmente, em urna zona indicadora, preferivelmente, em urna zona indicadora situada de modo distal a todas as zonas indicadoras restantes, é disposto um elemento de ligagáo de controle (controle = ctl), que indica como positiva a passagem da amostra pelas zonas indicadoras. O elemento de ligagao de controle é, preferivelmente, um anticorpo de antieritrócito policio-nal.
Em urna modalidade, nesse caso, respectivamente urna zona indicadora compreende um elemento de ligagao, preferivelmente, um anticorpo ou um fragmento de anticorpo contra um componente de análise a ser examinado. Modalidades de anticorpos ou fragmentos de anticorpos e/ou lecitinas ou fragmentos das mesmas ñas zonas indicadoras sao anticorpos ou lecitinas contra antígenos do sistema de grupo sangüíneo ABO-, do sistema de Rh, Kell, Lewis, Hh, Duffy, Kidd, MNS, Lutheran, P. Sao aínda preferidos como elementos de ligagao das zonas indicadoras anticorpos contra antígenos dos sistemas de grupos sangüíneos: Diego, Yt, Scianna, Dom-brock, Colton, Chido/Rodgers, Gerbich, Cromer, Knops, Landsteiner-Wiener, Xg, Kx, Indian, Ok, Raph, John Milton Hagen, Langereis e/ou Sid. Urna forma de realizagao particularmente preferida do dispositivo de acordo com a invengáo compreende zonas indicadoras com os elementos de ligagao de anticorpos anti-A, B, AB, D, D, C, c, E, e, Cw e/ou K ou de seus fragmentos de anticorpo, sendo que os dois anti-D sao dois anticorpos diferentes ou os fragmentos de anticorpo dos mesmos. Particularmente em pacientes, grávidas ou neonatos, os mesmos sao, preferivelmente, anticorpos monoclonais da classe de IgM, que nao detectam a categoría de DVI. Em doadores, os mesmos sao, preferivelmente, um anticorpo que detecta a categoría de DVI e um anticorpo que nao detecta a categoría de DVI.
Pelo dispositivo de acordo com a invengáo, para a determinagáo de grupos sangüíneos nao é mais preciso pipetar separadamente para cada determinagáo individual, mas em urna amostra pode ser terminado, de urna vez, simultáneamente, um grande número de antígenos desejados de siste- mas de grupos sanguíneos a ser examinados, por exemplo, as características de grupos sangüíneos mais importantes dos grupos sangüíneos ABO, Rh e Kell (A, B, AB, D, C, c, E, e, Cw, K). Isso representa urna racionaliza-gao extraordinária dos procedimentos de trabalho. Também a leitura dos resultados representados em disposigáo diagonal é substancialmente mais favorável. Além disso, no dispositivo de acordo com a invengáo, proprieda-des de AbO e Rh podem ser, por exemplo, determinadas e lidas urna ao lado da outra em um dispositivo. A associagáo dos resultados ao paciente correspondente é facilitada. O resultado plano, bidimensional, bem como o ponto final estável da reagáo favorecem tanto a leitura a olho nu como também urna leitura automática dos resultados com processos de análise de imagem usuais, tais como, por exemplo, cameras de CCD. A complexidade do trabalho é reduzida, mesmo no caso de trabalho manual. O dispositivo de acordo com a invengáo leva, além disso, a urna redugáo da agressao ao meio ambiente e a efeitos de baixo custo. Mesmo em situagóes de emergencia, com pressáo de tempo, em urna única disposigáo de teste, pode ser realizada, em pouco tempo, por exemplo, urna determinagáo completa de grupos sangüíneos ABO/subgrupos Rh. Pela tecnología de produgáo, a estrutura de flu-xo lateral-d¡agonal tem vantagens importantes em relagáo ao estado da técnica, urna vez que há um consumo consideravelmente menor dos reagentes utilizados e pela existencia de urna pluralidade de parámetros de teste em um único dispositivo.
Pelo dispositivo de acordo com a invengáo, é posto á disposigáo um teste de fluxo lateral, particularmente para o diagnóstico serológico de grupos sangüíneos, com o qual eritrocitos sáo usados como partículas indicadoras e em urna preparagáo de teste podem ser determinados, por amostra examinada, simultáneamente, diversos antígenos celulares, particularmente, eritrocitários, ou epítopos de antígeno, parámetros plasmáticos e/ou propriedades de células sangüíneas, particularmente, de componentes de sangue integral.
Além disso, com o mesmo é posto á disposigáo um sistema de testes, a ser produzido do modo mais simples possível e a ser manuseado de modo simples, particularmente com poucas séries de teste e sem preparado de amostras, e de baixo custo, com o qual podem ser determinados, simultáneamente, diversos parámetros celulares e/ou parámetros plasmáticos de urna amostra ou de várias amostras a ser examinadas, particularmente, características de grupos sangüíneos. A membrana do dispositivo de acordo com a invendo é urna membrana porosa. Materials de membrana preferidos sao, por exemplo, ni-trocelulose (por exemplo, UniSart de Sartorius, HiFlow de Millipore, What-man, AE99 ou FF85/100 de Schleicher & Schuell), polietileno (Lateral Fio de Porex Corporation) ou náilon (Novylon de CUNO). Preferivelmente, a membrana apresenta um tamanho de poros o maior possível, urna vez que urna alta porosidade da membrana favorece a penetragáo, particularmente, de componentes celulares da amostra a ser determinada, por exemplo, de eritrocitos, na estrutura porosa. É de especial vantagem o uso de membranas absorvedoras. Mas, o dispositivo de acordo com a invengáo nao está restrito a essas características. Sao preferidas membranas com urna alta velocidade de fluxo capilar (Capillary Speed), sendo que a velocidade de fluxo capilar é o tempo de que urna solugáo de corante precisa para percorrer 40 mm sobre urna determinada membrana. Sao particularmente preferidas membranas, cuja velocidade capital é <100.
Em urna modalidade da invengáo, está disposto sobre a membrana porosa, na diregáo de fluxo, atrás da zona de distribuigáo e antes das zonas indicadoras do dispositivo de acordo com a invengáo, um elemento de vedagáo. Sao usados elementos de vedagáo bi- ou tridimensionais, que sao colocados sobre a membrana porosa e com os quais é criada urna zona de aplicagáo de amostra, separada da superficie restante da membrana porosa. O elemento de vedagáo tem, de acordo com a invengáo, primariamente o efeito de urna barreira de líquido e permite a distribuigáo dirigida de líquido de amostra e regentes de teste na membrana porosa. Além disso, o elemento de vedagáo veda, de acordo com a invengáo, a zona de aplicagáo de a-mostra, para impedir urna passagem de líquido indesejável para as outras regióes da disposigáo de dispositivo de fluxo lateral.
Modalidade do elemento de vedagáo é a forma de nervura ou gamela ou de funil. A formagáo do elemento de vedagáo dá-se por procéseos de recorte do material usado para produgáo do elemento de vedagáo. No caso da forma de funil ou gamela, o elemento de vedagáo obtém urna abertura interna, cujas variantes de realizagáo preferidas sao formas redondas, quadradas ou retangulares, no caso da forma de funil, formas que se estreitam em diregáo ao lado inferior (lado de contato com a membrana) do elemento de vedagáo.
Materials preferidos para o elemento de vedagáo sáo materiais que nao sáo absorvedores de água (hidrófobos). Em urna forma de realizagáo especial, os materiais estáo revestidos unilateralmente com um filme de adesivo, por exemplo, um adesivo de acrilato sensível á pressáo ou auto-adesivo. Desse modo, o elemento de vedagáo pode ser colado diretamente sobre a superficie da membrana porosa. Alternativamente, o elemento de vedagáo pode estar unido, por exemplo, colado, com a carcaga de fluxo lateral, sendo que nessa forma de realizagáo, a carcaga de fluxo lateral comprime o elemento de vedagáo sobre a superficie da membrana porosa e, desse modo, sáo obtidas as fungóes do elemento de vedagáo.
Materiais preferidos para a formagáo de elementos de vedagáo bidimensionais sáo quaisquer formas de fitas adesivas ou filmes adesivos (por exemplo, Tesa 4124 de Beiersdorf Ag, ARcare 7815 de Adhesives Re-sarch).
Materiais preferidos para a formagáo de elementos de vedagáo tridimensionais sáo materiais elastoméricos flexíveis, de poros fechados ou materiais de silicone flexíveis, com diferentes espessuras de material, prefe-rivelmente, 3-5 mm (por exemplo, caucho celular EPDM140 DE Pitzner, caucho de silicone ou caucho macigo, dureza 40° ou menos, de Castan).
Por essa configuragáo de acordo com a invengáo, o dispositivo de acordo com a invengáo está em condigóes de absorver amostras líquidas, que contém células, tal como, |5or exemplo, sangue integral, sem, nesse caso, filtrar as células. Além disso, o elemento de vedagáo permite a aplica-gáo de grandes volumes de amostra sobre a membrana porosa (zona de distribuido), sem que a mesma seja inundada. Desse modo, o elemento de vedado apóia o aproveitamento das propriedades absorvedoras da membrana porosa. Alem disso, o elemento de vedado garante um fluxo de a-mostra dirigido. Mas, o dispositivo de acordo com a invengáo pode funcionar bem com ou sem elemento de vedagáo.
Para a regiao de absorgáo (compressa de absorgáo) do dispositivo de acordo com a invengáo sao preferidos materiais mecánicamente es-táveis, preferivelmente, com capacidades de absorgao de água de 20-30 g/100 cm2 (por exemplo, papel de pavio ("wicking papier"), Tipo 300, Schlei-cher & Schüll). O contato entre a compressa de absorgao e a membrana de fluxo lateral do dispositivo de acordo com a invengáo é produzido por com-pressáo e sobreposigáo com a membrana porosa. O posicionamento exato da compressa de absorgáo sobre a membrana é obtido por colagem da compressa de absorgáo com a camada de suporte que apóia a membrana de fluxo lateral (backing sheet).
Em urna outra forma de realizagáo, os componentes do dispositivo de acordo com a invengáo estáo dispostos sobre urna base ou camada de suporte, para fins do reforgo mecánico. Mas o dispositivo de acordo com a invengáo pode funcionar com ou em camada de suporte. Sao preferidos materiais mecánicamente estáveis e náo-absorvedores de água, preferivel-mente, com espessuras de material de 100 μηη ou mais, que estáo revestidos em um ou nos dois lados com um filme de adesivo, por exemplo, um adesivo de acrilato sensível á pressáo ou auto-adesivo (por exemplo, 0,005" poliéster W/GL-187, G&L). Sobre a camada de suporte sáo fixados a membrana porosa e a compressa de absorgáo. No caso da camada de suporte aderente nos dols lados, o segundo lado aderente é usado para fixagáo da pilha sobre outras áreas, por exemplo, dentro da carcaga de fluxo lateral.
Em urna outra forma de realizagáo, o dispositivo de acordo com a invengáo, com ou sem camada de suporte, sobre a qual estáo dispostos os componentes do dispositivo de acordo com a invengáo, está integrado em urna carcaga, com o que os componentes de membrana sáo comprimidos uns nos outros e a carcaga apóia a fungáo do elemento de vedagáo. Nesse caso, porém, o dispositivo de acordo com a invengáo funciona igualmente bem com ou sem carcaga.
Um outro objeto da invengáo é o uso do dispositivo de acordo com a invengáo para análise de sangue, particularmente, para a determina-gao simultánea de antígenos de grupos sangüíneos ou epítopos de antígeno de grupos sangüíneos de todos os sistemas de grupos sangüíneos possí-veis, preferivelmente, dos componentes de análise sobre a superficie dos glóbulos de sangue vermelhos. Os antígenos ou epítopos de antígenos a ser testados sao, por exemplo, aqueles do sistema de grupo sangüíneo ABO-, do sistema de Rh, Kell, Lewis, Hh, Duffy, Kidd, MNS, Lutheran, P, dos sistemas de grupos sangüíneos Diego, Yt, Scianna, Dombrock, Colton, Chi-do/Rodgers, Gerbich, Cromer, Knops, Landsteiner-Wiener, Xg, Kx, Indian, Ok, Raph, John Milton Hagen, Langereis e/ou Sid, particularmente, Α1, A2, B, D, C, c, E, e, Cw, K, k, Μ, N, S, s, Jk(a), Jk(b), Fy(a), Fy(b), Kp(a), Kp(b), Js(a), Js(b), Le(a) Le(b) Lu(a), Lu(b), P1, I, H, Xg(a), U, Vw, Wr(a), Lan.
Urna modalidade do dispositivo de acordo com a invengáo determina simultáneamente diversas características de grupos sangüíneos, por exemplo, A, B, AB, D, C, c, E, e, Cw e K. A amostra a ser examinada, por exemplo, sangue integral nativo ou anticoagulado, ou concentrados de eritrocitos ou suspensóes de eritrocitos diluidas, é aplicada sobre a zona de distribuigáo do dispositivo de acordo com a invengáo. Os eritrocitos contidos na amostra, que contém o componente de análise, servem, simultáneamente, como partículas indicadoras. A tarefa é solucionada de acordo com a invengáo, por outro lado, por um processo para determinagáo de diversos componentes de análise ou derivados dos mesmos em urna amostra líquida, que compreende a apli-cagáo da amostra sobre a zona de distribuigáo de urna membrana do dispositivo de acordo com a invengáo, sendo que essa amostra está presente em quantidade suficiente, para fazer com que o líquido da amostra corra em d¡-regáo á regiáo de absorgáo, pelas zonas indicadoras, e para fazer com que os componentes de análise ou seus derivados se liguem ás respectivas zonas indicadoras ou formem um complexo ñas zonas indicadoras.
No processo de acordo com a ¡nvengáo, no caso dos componentes de análise a ser determinados, trata-se, particularmente, de antígenos de grupos sangüíneos ou epítopos de antígenos de grupos sangüíneos de todos os sistemas de grupos sangüíneos, preferivelmente, daqueles que se encontram sobre a superficie dos glóbulos sangüíneos vermelhos. Os antígenos ou epítopos de antígenos a ser testados sao, por exemplo, aqueles do sistema de grupo sangüíneo ABO-, do sistema de Rh, Kell, Lewis, Hh, Duffy, Kidd, MNS, Lutheran, P, dos sistemas de grupos sangüíneos Diego, Yt, Sci-anna, Dombrock, Colton, Chido/Rodgers, Gerbich, Cromer, Knops, Landstei-ner-Wiener, Xg, Kx, Indian, Ok, Raph, John Milton Hagen, Langereis e/ou Sid, particularmente, A1, A2, B, D, C, c, E, e, Cw, K, k, Μ, N, S, s, Jk(a), Jk(b), Fy(a), Fy(b), Kp(a), Kp(b), Js(a), Js(b), Le(a) Le(b) Lu(a), Lu(b), P1, I, H, Xg(a), U, Vw, Wr(a), Lan.
Urna modalidade do processo de acordo com a invengao determina, simultáneamente, diversas características de grupos sangüíneos, por exemplo, A, B, AB, D, C, c, E, e, Cw e K. A amostra a ser examinada, por exemplo, sangue integral nativo ou anticoagulado, ou suspensóes de eritrocitos, com ou sem líquido de teste, tal como sangue de controle, é aplicada sobre a zona de distribuigao do dispositivo de acordo com a invengao. Os eritrocitos, que contém o/os componente(s) de análise, servem, simultáneamente, como partículas indicadoras. A seguir, a invengao é explicada mais detalhadamente por figuras e exemplos, sem limitara mesma. Mostram: Figura 1 - urna representagáo em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengao para testes de fluxo lateral, para a determinagao simultánea das características dos grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE;
Figura 2 - urna representagáo em explosáo do dispositivo de a-cordo com a invengao representado na Figura 1, para testes de fluxo lateral;
Figura 3 - urna representagáo em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características dos grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE, realizado com um elemento de vedagáo tridimensional em forma de nervura;
Figura 4 - urna representagáo em explosao do dispositivo de a-cordo com a invengáo representado na Figura 3, para testes de fluxo lateral;
Figura 5 - urna representagáo em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características dos grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE, realizado com um elemento de vedagáo em forma de gamela;
Figura 6 - urna representagáo em explosao do dispositivo de a-cordo com a invengáo representado na Figura 5, para testes de fluxo lateral;
Figura 7 - urna representagáo em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características dos grupos sangüíneos A, B, AB, D, C, c, E, e, Cw e K;
Figura 8 - urna representagáo em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, realizado como teste qualitativo rápido ("bedside"), para testar a ¡dentidade de ABO de receptor e conserva;
Figura 9 - urna representagáo em explosao do dispositivo de a-cordo com a invengáo para testes de fluxo representado na Figura 8.
Figura 10 - urna representagáo em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características dos grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE.
Figura 11 - urna representagáo em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características dos grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE.
Figura 12 - urna representagáo em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características dos grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE.
Figura 13 - urna representagáo em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características dos grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE.
Figura 14 - urna representagáo em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características dos grupos sanguíneos A, B, AB, D e CDE;
Figura 15 - urna representagáo em explosáo do dispositivo de acordo com a invengáo representado na Figura 14, para testes de fluxo lateral.
Na Figura 1 é mostrada, exemplificadamente, urna representagáo em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características de grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE. No presente exemplo, o dispositivo consiste em urna camada de suporte 1, na membrana porosa 2, na compressa de absorgáo 3 e no elemento de vedagáo 4 bidimensional, realizado na forma de nervura. Nesse caso, a membrana porosa 2 está fixada sobre a camada de suporte 1, dotada de um adesivo sensível á pressáo ou auto-adesivo. Do mesmo modo, a compressa de absorgáo 3 está fixada sobre a camada de suporte 1, sendo que urna parte da compressa de absorgáo 3 sobrepóe-se á membrana porosa 2. O elemento de vedagáo 4 fixado sobre o lado superior da membrana porosa 2 separa a zona de distribuigáo 5 da superficie de membrana restante e possibilita a distribuigáo dirigida de líquido de amostra e reagentes de teste na membrana porosa 2. Entre a zona de distribuigáo 5 e a regiáo da membrana porosa 2, que está em contato com a compressa de absorgáo 3, está disposta a regiáo das zonas indicadoras 6. A mesma é formada por zonas indicadoras I - VI, em forma de pontos, alternadas diagonalmente, dispostas em posigoes X e Y definidas, sendo que as zonas indicadoras consistem nos seguintes elementos de ligagáo: A zona indicadora VI é o controle (ctl) e contém anticorpos de antieritrócitos policlonais. Ela encontra-se disposta de modo distal a todas as zonas indicadoras restantes.
Na Figura 2 é mostrada urna representado em explosáo do dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, representado na Figura 1, que consiste nos componentes camada de suporte 1, membrana porosa 2, compressa de absorgáo 3 e elemento de vedagáo 4, que separa a zona de distribuigáo 5 da membrana restante, que, por sua vez, contém a regiáo de zonas indicadoras 5, com as zonas indicadoras l-VI dispostas alternadas diagonalmente, de proximal para distal.
Na Figura 3 é mostrada, exemplificadamente, urna representa-gao em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características de grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE. No presente exemplo, os componentes do dispositivo correspondem aos componentes do dispositivo representado na Figura 1,com excegáo do elemento de vedagáo 4, realizado em forma de nervura tridimensional, fixado sobre o lado superior da membrana porosa 2.
Na Figura 4 é mostrada urna representagáo em explosáo do dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, representado na Figura 3, com os componentes camada de suporte 1, membrana porosa 2, compressa de absorgáo 3 e elemento de vedagáo 4, realizado em forma de nervura tridimensional, que separa a zona de distribuigao 5 da membrana restante, que, por sua vez, contém a regiáo de zonas indicadoras 5, com as zonas indicadoras l-VI dispostas alternadas diagonalmente, de proximal para distal.
Na Figura 5 é mostrada, exemplificadamente, urna representagáo em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características de grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE. No presente exemplo, os componentes do dispositivo correspondem aos componentes do dispositivo representado na Figura 1, com excegáo do elemento de vedagáo 4, realizado em forma de gamela tridimensional, fixado sobre o lado superior da membrana porosa 2.
Na Figura 6 é mostrada urna representagáo em explosáo do dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, representado na Figura 5, com os componentes camada de suporte 1, membrana porosa 2, compressa de absorgáo 3 e elemento de vedagáo 4, realizado em forma de gamela tridimensional, que separa a zona de distribuigáo 5 da membrana restante, que, por sua vez, contém a regiáo de zonas indicadoras 6, com as zonas indicadoras l-VI, dispostas alternadas diagonalmente, de proximal para distal.
Na Figura 7 é mostrada, exemplificadamente, urna representa-gao em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características de grupos sangüíneos A, B, AB, D, C, c, E, e, Cw e K. No presente exemplo, o dispositivo consiste em urna camada de suporte 1, na membrana porosa 2, na compressa de absorgáo 3 e no elemento de vedagáo 4 bidimensional, realizado na forma de nervura. Nesse caso, a membrana porosa 2 está fixada sobre a camada de suporte 1, dotada de um adesivo sensível á pressáo ou auto-adesivo. Do mesmo modo, a compressa de absorgáo 3 está fixada sobre a camada de suporte 1, sendo que urna parte da compressa de absorgáo 3 sobrepóe-se á membrana porosa 2. O elemento de vedagáo 4 fixado sobre o lado superior da membrana porosa 2 separa a zona de distribuigáo 5 da superficie de membrana restante e possibilita a distribuigáo dirigida de líquido de amostra e reagentes de teste na membrana porosa 2. Entre a zona de distribuigáo 5 e a regiáo da membrana porosa 2, que está em contato com a compressa de absorgáo 3, está disposta a regiáo das zonas indicadoras 6. A mesma é formada por zonas indicadoras I - XI, em forma de pontos, alternadas diagonalmente, dispostas em posigoes X e Y definidas, sendo que as zonas indicadoras consistem nos seguintes elementos de ligagáo: A zona indicadora XI é o controle (ctl) e contém anticorpos de antieritrócitos policlonais. Ela encontra-se disposta de modo distal a todas as zonas indicadoras restantes.
Na Figura 8 é mostrada, exemplificadamente, urna representa-gao em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, realizada como teste qualitativo rápido, para testar a identi-dade de ABO de receptor e conserva. No presente exemplo, o dispositivo consiste em urna camada de suporte 1, na membrana porosa existente em execugáo dupla 2a e 2b, na compressa de absorgáo 3 e nos elementos de vedagáo 4a e 4b bidimensionais, realizados em forma de nervura. As duas membranas porosas 2a e 2b estáo fixadas sobre urna camada de suporte 1 dotada de um adesivo de acrilato sensível á pressáo ou auto-adesivo, paralelamente e no mesmo alinhamento. Do mesmo modo, a compressa de absorgáo 3 está fixada sobre a camada de suporte 1, sendo que urna parte da compressa de absorgáo 3 sobrepóe-se as duas membranas porosas 2a e 2b, na mesma distancia. Os elementos de vedagáo 4a e 4b, fixados sobre o lado superior das membranas porosas 2a e 2b, separam as respectivas zonas de distribuigáo 5a e 5b da superficie de membrana restante e possibili-tam a distribuigáo dirigida de líquido de amostra e reagentes de teste ñas membranas porosas 2a e 2b. Entre a zona de distribuigáo 5a ou 5b e as respectivas regióes das membranas porosas 2a e 2b, que estáo em contato com a compressa de absorgáo 3, estáo dispostas as regioes das zonas indicadoras 6a e 6b. As mesmas sáo formadas por zonas indicadoras la -Illa ou Ib - lllb, em forma de pontos, alternadas diagonalmente, dispostas em posi-góes X e Y definidas, sendo que as zonas indicadoras consistem nos seguin-tes elementos de ligagáo: As zonas indicadoras Illa e lllb sao os controles (ctl) e contém anticorpos de antieritrócitos policlonais. Elas encontram-se dispostas de modo distal a todas as zonas indicadoras restantes.
Na Figura 9 é mostrada urna representagáo em explosáo do dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, representado na Figura 8, com os componentes camada de suporte 1, membranas porosas 2a e 2b, compressa de absorgao 3 e elementos de vedagáo 4a e 4b, que separam, respectivamente, as zonas de distribuigáo 5a e 5b da membrana restante, que, por sua vez, contém a regiao de zonas indicadoras 6a e 6b, com as zonas indicadoras la - Illa e Ib - lllb, dispostas de modo alternado diagonalmente, de proximal para distal.
Na Figura 10 é mostrada, exemplificadamente, urna representa-gao em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características de grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE. O presente exemplo, representa um dispositivo de fluxo lateral para destros, e consiste em urna camada de suporte 1, na membrana porosa 2, na compressa de absorgao 3 e no elemento de vedagáo 4 bidimensional, realizado na forma de nervura. Nesse caso, a membrana porosa 2 está fixada sobre a camada de suporte 1, dotada de um adesivo sensível á pressao ou auto-adesivo. Do mesmo modo, a compressa de absorgao 3 está fixada sobre a camada de suporte 1, sendo que urna parte da compressa de absorgao 3 sobrepóe-se á membrana porosa 2. O elemento de vedagáo 4 fixado sobre o lado superior da membrana porosa 2 separa a zona de distribuigáo 5 da superficie de membrana restante e possi-bilita a distribuigáo dirigida de líquido de amostra e regentes de teste na membrana porosa 2. Entre a zona de distribuigáo 5 e a regiao da membrana porosa 2, que está em contato com a compressa de absorgao 3, está dispos- ta a regiáo das zonas indicadoras 6. A mesma é formada por zonas indicadoras I - VI, em forma de pontos, dispostas em urna fileira linear, alternadas paralelamente, urna ao lado da outra, dispostas em posigoes X e Y definidas, sendo que as zonas indicadoras consistem nos seguintes elementos de ligagáo: A zona indicadora VI é o controle (ctl) e contém anticorpos de antieritrócitos policlonais. Ela encontra-se disposta de modo distal a todas as zonas indicadoras restantes.
Na Figura 11 é mostrada, exemplificadamente, urna representa-gao em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengao para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características de grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE. O presente exemplo, representa um dispositivo de fluxo lateral para canhotos, e consiste em urna camada de suporte 1, na membrana porosa 2, na compressa de absorgáo 3 e no elemento de vedagáo 4 bidimensional, realizado na forma de nervura. Nesse caso, a membrana porosa 2 está fixada sobre a camada de suporte 1, dotada de um adesivo sensível á pressáo ou auto-adesivo. Do mesmo modo, a compressa de absorgáo 3 está fixada sobre a camada de suporte 1, sendo que urna parte da compressa de absorgáo 3 sobrepáe-se á membrana porosa 2. O elemento de vedagao 4 fixado sobre o lado superior da membrana porosa 2 separa a zona de distribuigáo 5 da superficie de membrana restante e possibilita a distribuigáo dirigida de líquido de amostra e regentes de teste na membrana porosa 2. Entre a zona de distribuigáo 5 e a regiáo da membrana porosa 2, que está em contato com a compressa de absorgáo 3, está disposta a regiáo das zonas indicadoras 6. A mesma é formada por zonas indicadoras I - VI, em forma de pontos, dispostas em urna fileira linear, alternadas paralelamente, urna ao lado da outra, dispostas em posigoes X e Y definidas, sendo que as zonas indicadoras consistem nos seguintes elementos de ligagáo: A zona indicadora VI é o controle (ctl) e contém anticorpos de antieritrócitos policlonais. Ela encontra-se disposta de modo distal a todas as zonas indicadoras restantes.
Na Figura 12 é mostrada, exemplificadamente, urna representa-gao em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagao simultánea das características de grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE. O presente exemplo, representa um dispositivo de fluxo lateral para destros, e consiste em urna camada de suporte 1, na membrana porosa 2, na compressa de absorgáo 3 e no elemento de vedagáo 4 bidimensional, realizado na forma de nervura. Nesse caso, a membrana porosa 2 está fixada sobre a camada de suporte 1, dotada de um adesivo sensível á pressáo ou auto-adesivo. Do mesmo modo, a compressa de absorgáo 3 está fixada sobre a camada de suporte 1, sendo que urna parte da compressa de absorgáo 3 sobrepoe-se á membrana porosa 2. O elemento de vedagáo 4 fixado sobre o lado superior da membrana porosa 2 separa a zona de distribuigáo 5 da superficie de membrana restante e possi-bilita a distribuigáo dirigida de líquido de amostra e regentes de teste na membrana porosa 2. Entre a zona de distribuigáo 5 e a regiáo da membrana porosa 2, que está em contato com a compressa de absorgáo 3, está disposta a regiáo das zonas indicadoras 6. A mesma é formada por zonas indicadoras I - VI, alongadas ou em forma de fita, dispostas de modo alternado, paralelamente urna ao lado da outra, dispostas em posigbes X e Y definidas, sendo que as zonas indicadoras consistem nos seguintes elementos de liga- gao: A zona indicadora VI é o controle (ctl) e contém anticorpos de antieritrócitos policlonais. Ela encontra-se disposta de modo distal a todas as zonas indicadoras restantes.
Na Figura 13 é mostrada, exemplificadamente, urna representa-gao em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagao simultánea das características de grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE. O presente exemplo, representa um dispositivo de teste de fluxo lateral para canhotos, e consiste em urna cama-da de suporte 1, na membrana porosa 2, na compressa de absorgáo 3 e no elemento de vedagáo 4 bidimensional, realizado na forma de nervura. Nesse caso, a membrana porosa 2 está fixada sobre a camada de suporte 1, dotada de um adesivo sensível á pressáo ou auto-adesivo. Do mesmo modo, a compressa de absorgáo 3 está fixada sobre a camada de suporte 1, sendo que urna parte da compressa de absorgáo 3 sobrep5e-se á membrana porosa 2. O elemento de vedagáo 4 fixado sobre o lado superior da membrana porosa 2 separa a zona de distribuigao 5 da superficie de membrana restante e possibilita a distribuigao dirigida de líquido de amostra e regentes de teste na membrana porosa 2. Entre a zona de distribuigao 5 e a regiáo da membrana porosa 2, que está em contato com a compressa de absorgáo 3, está disposta a regiáo das zonas indicadoras 6. A mesma é formada por zonas indicadoras I - VI, alongadas ou em forma de fita, dispostas de modo alternado, paralelamente urna ao lado da outra, dispostas em posigóes X e Y definidas, sendo que as zonas indicadoras consistem nos seguintes elementos de ligagáo: A zona indicadora VI é o controle (ctl) e contém anticorpos de antieritrócitos policlonais. Ela encontra-se disposta de modo distal a todas as zonas indicadoras restantes.
Na Figura 14 é mostrada, exemplificadamente, urna representa-gao em perspectiva de um dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, para a determinagáo simultánea das características de grupos sangüíneos A, B, AB, D e CDE. No presente exemplo, o dispositivo consiste em urna camada de suporte 1, na membrana porosa 2, ñas compres-sas de absorgáo 3a e 3b e nos elementos de vedagáo 4a e 4b bidimensio-nais, realizados na forma de nervura. Nesse caso, a membrana porosa 2 está fixada sobre a camada de suporte 1, dotada de um adesivo sensível á pressáo ou auto-adesivo. Do mesmo modo, as compressas de absorgáo 3a e 3b estáo fixados sobre a camada de suporte 1, sendo que urna parte das compressas de absorgáo 3a e 3b sobrepóem-se á membrana porosa 2. Os elementos de vedagáo 4a e 4b fixados sobre o lado superior da membrana porosa 2 separam a zona de distribuigáo 5, situada no centro da membrana, da superficie de membrana restante e possibilita a distribuigáo dirigida de líquido de amostra e regentes de teste na membrana porosa 2. Entre a zona de distribuigáo 5 e a regiáo da membrana porosa 2, que está em contato com as compressas de absorgáo 3a e 3b, estáo dispostas as regiáes das zonas indicadoras 6a e 6b. As mesmas sáo formadas por zonas indicadoras I - VI, em forma de ponto, dispostas de modo diagonalmente alternado, em posigoes X e Y definidas, sendo que as zonas indicadoras consistem nos seguintes elementos de ligagáo: As zonas indicadoras Via e Vlb sao os controles (ctl) e contém anticorpos de antieritrócitos policlonais. Elas encontram-se disposta de modo distal ás zonas indicadoras I - III ou IV - V.
Na Figura 15 é mostrada urna representagáo em explosao do dispositivo de acordo com a invengáo para testes de fluxo lateral, representado na Figura 14, com fluxo bidirecional, que consiste nos componentes camada de suporte 1, membrana porosa 2, compressas de absorgáo 3a e 3b e elementos de vedagáo 4a e 4b, que separam a zona de distribuigáo 5 situada centralmente da membrana restante, que, por sua vez, contém duas regióes de zonas indicadoras 6a e 6b, com as zonas indicadoras I, II, III, VIA ou IV, V, Vlb, dispostas de modo alternado diagonalmente, de proximal para distal.
EXEMPLOS
Exemplo 1: Determinagáo de grupos sanqüíneos Produgáo das tiras de teste: As tiras de teste consistem em urna zona de distribuigáo, urna regiáo de zonas indicadoras e urna regiáo de absorgáo. Membranas do tipo Millipore HiFlow Plus 065 sao recortadas em tiras, para um tamanho de 15 x 35 mm (largura/comprimento; x/y) para urna modalidade de 6 spots (pontos), ou para um tamanho de 26 x 40 mm, para urna modalidade de 11 spots (pontos) e coladas sobre urna camada de suporte (backing sheet, por exemplo, de G&L). De modo diagonalmente alterando ou, alternativamente, alterados em urna fileira linear na regiáo de zonas indicadoras, sao aplicados pontos de 0,2 μΙ de solugóes de diferentes anticorpos monoclonais, específicos pra grupos sangüíneos, sob uso de um agente de dispersáo, por exem- pío, AD3200 (Biodot): Clone de Anti-A Birma-1 (Serologicals, TLJ0105); Clone de Anti-B ES4 (Serologicals, NCA0201); Clones de Anti-AB AB6, AB26, AB92 (Me-dion Diagnostics, 010062); Clone de Anti-D LDM3 (SNBTS Z7180100); Clone de Anti-C MS-24 (Serologicals, nao formulado, KGK0212); Clone de Anti-c MS-33 (Serologicals, KNI0207); Clones de Anti-E MS-80 + MS-258 (Serologicals, KXE0201); Clones de Anti-e MS-21 + MS-63 (Serologicals, KLL0205 + KQK0205); Clone de Anti-Cw MS-110 (Serologicals, JPK0201); Clone de Anti-K MS-56 (Serologicals, KOA0201). O posicionamento do anticorpo de anti-A dá-se na posigao x=3/y=10 mm. Todos os outros anticorpos sao dispostos iterativamente em distancias de x=1,5/y=2,2 mm á posigao do anticorpo de anti-A. O anticorpo de controle específico de antieritrócitos (Rabbit IgG Gracion of anti Human RBC, Rockland, 209-4139) é aplicado em deslocamento de x=2/y=3,5 mm ao último spot da série dos anticorpos específicos para grupos sangüíneos. As diluigóes dos anticorpos dáo-se em 15 mM de tamponador de fosfato de potássio, pH 7,5, 10% (v/v) de metanol, tal como se segue: anticorpo de anti-A 1:3; anticorpo de anti-B 1:2; anticorpo de anti-AB 1:4; anticorpo de anti-D 1:4; anticorpo de anti-RBC 1:3. Todos as outras solugóes de anticorpos nao sao diluidas previamente, mas misturadas com metanol para 10% (v/v). A membrana é secada depois da distribuigáo dos anticorpos por 20 minutos, a 40°C, e, subseqüentemente, guardada, a urna umidade do ar constante, até a realizagáo do teste. Na extremidade distal á zona de distribuigáo, é colada urna compressa de absorgao de 15 x 10 mm ou 26 x 10 mm (Schleicher & Schüll, 300), sobreposta em 3 mm á membrana. A zona de distribuigáo é separada da membrana restante por aplicagáo de urna fita a-desiva com largura de 1-2 mm (Tesa 4124) na posigao y=5 mm, sobre toda a largura da membrana.
Preparagáo de teste: Como amostras de sangue sao usados sangues integráis anticoagulados. Para o teste em si, sao aplicados 100 μΙ de sangue diluido 1:6 em tamponador de diluigáo (Enlisstll, Medion Diagnostics ou Diluent 1, Dia- Med) (modalidade de 6 spots) ou 150μΙ (modalidade de 11 spots) na zona de distribuigáo. Quando o sangue tiver deixado a zona de distribu i gao, sao aplicados, com pipeta, por urna vez, 100 μΙ ou 150 μΙ de tamponador de diluigao ou, preferivelmente, 100 μΙ de tamponador de lavagem hipoosmótico (15 mM de tamponador de fosfato de potássio, pH 7,4, 0,3-0,45% (w/v) de NaCI) sobre a zona de distribuigáo, para remover, por lavagem, eritrocitos nao ligados da membrana. Alternativamente, porém, a aplicagáo da amostra tam-bém pode dar-se com 50 μΙ de sangue nao diluido ou diluido em 1:3. Nessa amostras, a membrana é lavada duas vezes com tamponador de diluigao e urna vez com tamponador de diluigao e, subseqüentemente, com tamponador de lavagem hipoosmótico.
Na diluigao de 1:6 escolhida, o controle de anti-RBC é visível depois de 2 minutos, como indicador de um teste realizado com sucesso. Com sangue nao diluido, o teste leva mais tempo.
Resultado: O teste é válido, quando o controle de anti-RBC mostra um sinal nítidamente positivo (ponto vermelho). Dependendo da presenga ou ausencia dos respectivos antígenos de grupos sanguíneos, aparecem ñas posi-góes correspondentes pontos vermelhos (positivo) ou a cor de fundo quase branca da membrana (negativo).
Exemolo 2: Teste de bedside Produgáo das tiras de teste: O teste qualidade rápida consiste em respectivamente duas membranas aplicadas sobre urna camada de suporte ("conserve", "receptor"), que consistem, respectivamente, em urna zona de distribuigáo, urna regiáo de zonas indicadoras e urna regiáo de absorgáo.
Membranas do tipo Millipore HiFlow Plus 065 sao recortadas em tiras para um tamanho de 12,5 x 30 mm (largura/comprimento; x/y). Respectivamente duas das mesmas sao coladas sobre urna camada de suporte (backing sheet, por exemplo, de G&L), á distáncia de 5 mm, de modo que a disposigao total tem um tamanho de 30 x 30 mm.
De modo diagonalmente alternado sao realizadas as seguintes aplicagóes, respectivamente iguais, sobre as duas membranas, sob uso de um distribuidor, por exemplo, AD3200 (Biodot): pontos de 0,2 μΙ de solugoes dos anticorpos de clone anti-A monoclonais Birma-1 (Serologicals, TLJ0105) na posigao x=4/y=12 mm; clone de anti-B ES-4 (Serologicals, NCA0201) na posigao x=7/y=14 mm. O anticorpo de controle específico de antieritrócitos (Rabbit IgG Fraction of anti Human RBC, Rockland, 209-4139) sao aplicados em deslocamento de x=3/y=4 mm ao spot de anti-B. As diluigóes dos anticorpos dáo-se em 15 mM de tamponador de fosfato de potássio, pH 7,5, 10% (v/v) de metanol, tal como segue: anticorpo de anti-A 1:3, anticorpo de anti-B 1:2, anticorpo de anti-RBC 1:3.
As membranas sao secadas depois da distribuigáo dos anticorpos por 20 minutos, a 40°C, e, subseqüentemente, guardadas, a urna umi-dade do ar constante, até a realizagáo do teste. Na extremidade distal á zona de distribuigáo, é colada urna compressa de absorgáo de 30 x 10 mm (Schleicher & Schüll, 300), sobreposta em 3 mm á membrana. A zona de distribuigáo é separada da membrana restante por aplicagáo de urna fita a-desiva com largura de 1-2 mm (Tesa 4124) na posigao y=5 mm, sobre toda a largura da membrana.
Preparagáo de teste: Como amostras sáo usados: para a membrana"conserva": concentrado de eritrocitos; para a membrana "receptor": sangue integral.
Para o teste em si sáo aplicados 50 μΙ de sangue integral sobre o lado "receptor" e 50 μΙ de concentrado de eritrocito sobre o lado "conserva" na respectiva zona de distribuigáo. Depois que o sangue tiver sido totalmente absorvido pela membrana, lava-se com, respectivamente, 2 x 100 μΙ de tamponador de diluigáo ou urna vez com tamponador de diluigáo e, subseqüentemente, com tamponador de lavagem hipoosmótico.
Resultado: O controle de anti-RBC como indicador de um teste realizado com sucesso é visível ñas duas membranas depois de aproximadamente 2 minutos. O teste é válido, quando o controle de anti-RBC mostra um sinal nítidamente positivo (ponto vermelho). Dependendo da presenga ou ausén-cia dos respectivos antígenos de grupos sangüíneos, aparecem ñas posi-góes correspondentes pontos vermelhos (positivo) ou a cor de fundo quase branca da membrana (negativo). Um quadro idéntico para "receptor" e "conserva" significa identidade de ABO entre receptor e conserva.
Exemplo 3: Determinagáo de grupos sangüíneos com teste de fluxo lateral bidirecional Produgáo das tiras de teste: As tiras de teste consistem em urna zona de distribuigao situada no centro da membrana, duas regioes de zonas indicadoras e duas regioes de absorgáo.
Membranas do tipo Millipore HiFlow Plus 065 sao recortadas em tiras para um tamanho de 15 x 50 mm (largura/comprimento; x/y) e coladas sobre urna camada de suporte (backing sheet, por exemplo, de G&L). De modo diagonalmente alternado ou, alternativamente, alternados em urna fileira linear, sao aplicados na regiao de zonas indicadoras pontos de 0,2 μΙ de solugoes de diferentes anticorpos monoclonais específicos para grupos sangüíneos. Nesse caso, o centro do comprimento da tira (y=0 mm) é o tamanho de referencia para o posicionamento das zonas indicadoras em dire-gáo y. Os seguintes anticorpos sao distribuidos sob uso de um distribuidor, por exemplo, AD3200 (Biodot): Clone de Anti-A Birma-1 (Serologicals, TLJ0105); Clone de Anti-B ES4 (Serologicals, NCA0201); Clones de Anti-AB AB6, AB26, AB92 (Me-dion Diagnostics, 010062); Clone de Anti-D LDM3 (SNBTS Z7180100); Clone de Anti-C MS-24 (Serologicals, nao formulado, KGK0212); Clones de An-ti-E MS-80 + MS-258 (Serologicals, KXE0201). Para a zona indicadora de anti-CDE, os anticorpos de anti-D e anti-C sao concentrados duas vezes, os anticorpos de anti-E, tres vezes,e misturados em partes em volume iguais.
Na forma de realizagáo da alternagáo diagonal das zonas indicadoras, a distribuigao do anticorpo de anti-A dá-se na posigao x=4/y=10 mm. O posicionamento dos anticorpos de anti-B e anti-AB dá-se iterativamente, em distancia de x=3,5/y=2 mm á posigao do anticorpo de anti-A. O anticorpo de controle específico de antieritrócitos (Rabbit IgG Fraction of anti Human RBC, Rockland, 209-4139) é aplicado em deslocamento de x=3,5/y=3,5 mm ao último spot da série dos anticorpos de anti-A, anti-B e anti-AB. A distribuigáo do anticorpo de anti-D dá-se na posigáo x=4/y=-10mm, a distribuigáo do anticorpo de anti-CDE, na distancia de x=3,5/y=-2 mm. O anticorpo de controle específico de antieritrócitos é aplicado em deslocamento de x=3,5/y=-3,5 mm ao spot dos anticorpos de anti-CDE. As dilui-goes dos anticorpos dáo-se em 15 mM de tamponador de fosfato de potás-sio, pH 7,5, 10% (v/v) de metanol), tal como se segue: anticorpo de anti-A 1:3; anticorpo de anti-B 1:2; anticorpo de anti-AB 1:4; anticorpo de anti-D 1:3; anticorpo de anti-RBC 1:3. A mistura de anticorpos de anti-CDE nao é diluida previamente, mas misturada com metanol para 10% (v/v).
As membranas sao secadas depois da distribuigáo dos anticorpos por 20 minutos, a 40°C, e, subseqüentemente, guardadas, a urna umi-dade do ar constante, até a realizagáo do teste. Na extremidade distal á zona de distribuigáo, sao coladas duas compressas de absorgáo de 15 x 10 mm (Schleicher & Schüll, 300), sobrepostas em 3 mm á membrana. A zona de distribuigáo é separada da membrana restante por aplicagáo de urna fita adesiva com largura de 1-2 mm (Tesa 4124) na posigáo y=3 mm ou y=-3 mm, sobre toda a largura da membrana.
Preparagáo de teste: Como amostras de sangue sáo usados sangues integráis anticoagulados. Para o teste em si sáo aplicados na zona de distribuigáo 100 μΙ de sangue diluida em 1:6 em tamponador de diluigáo (Enlisstll, Medion Di-agnostics). Quando o sangue tlver deixado a zona de distribuigáo, sáo aplicados, com pipeta, por urna vez, 100 μΙ de tamponador de diluigáo ou 100 μΙ de tamponador de lavagem hipoosmótico (15 mM de tamponador de fosfato de potássio, pH 7,4, 0,3-0,45% (w/v) de NaCI sobre a zona de distribuigáo, para remover, por lavagem, eritrocitos náo ligados da membrana. Alternativamente, porém, a aplicagáo da amostra também pode dar-se com 50 μΙ de sangue diluido em 1:3 ou náo diluido. Nessa amostras, a membrana é lavada duas vezes com tamponador de diluigáo e urna vez com tamponador de diiuigao e, subseqüentemente, com tamponador de lavagem hipoosmótico.
Na diluigáo de 1:6 escolhida, o controle de anti-RBC é visível depois de 2 minutos, como indicador de um teste realizado com sucesso. Com sangue nao diluido, o teste leva mais tempo.
Resultado: O teste é válido, quando o controle de anti-RBC mostra um sinal nítidamente positivo (ponto vermelho). Dependendo da presenga ou ausencia dos respectivos antígenos de grupos sangüíneos, aparecem ñas posi-góes correspondentes pontos vermelhos (positivo) ou a cor de fundo quase branca da membrana (negativo).
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