KR20080003431A - 반-정량적 면역크로마토그래피 장치 - Google Patents

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폴 이. 골덴바움
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백톤 디킨슨 앤드 컴퍼니
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Abstract

본 발명은 측방향 유동을 제공할 수 있는 하나 이상의 지지체 물질을 포함하는 장치를 제공한다. 하나 이상의 지지체 물질은 목표 분석물을 함유하는 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 목표 분석물과 착물을 형성할 수 있는, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 갖는 영역, 착물과 특이적으로 결합할 수 있는, 소정량의 고정식 포획제를 갖는 제 1 포획 영역, 고정식 포획제를 갖는 제 2 포획 영역, 및 용해제를 함유한다. 전형적으로, 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 갖는 영역, 제 1 포획 영역 및 제 2 포획 영역은, 샘플이 이러한 영역을 통해 순차적으로 측방향 유동할 수 있도록, 하나 이상의 지지체 물질 내에 배열된다.
반-정량적, 면역크로마토그래피, 측방향 유동, 지지체 물질, 목표 분석물

Description

반-정량적 면역크로마토그래피 장치 {SEMI-QUANTITATIVE IMMUNOCHROMATOGRAPHIC DEVICE}
관련 출원
본 발명은 2005년 4월 20일자로 출원된 미국 가출원 제 60/673218 호를 근거로 우선권을 주장한다. 그 내용은 본원에서 참고로 인용된다.
본 발명은 목표 분석물을 위한 샘플의 반-정량적 분석을 위한 장치 및 방법에 관한 것이다.
하기 내용에서는, 특정 물품 및 방법이 배경기술 및 서론으로서 기술될 것이다. 본원에 함유된 어떤 것도 종래 기술을 "인정"하는 것으로 해석되지 않는다. 출원인은, 적당하다면, 본원에서 언급된 물품 및 방법이, 적용가능한 법률상 규정 하에서 종래 기술을 구성하지 않는다는 것을 입증할 권리를 명백히 갖는다.
다양한 면역학적 반응이 분석 기술로서 유용하다고 밝혀졌다. 면역화학적 분석은 일반적으로 수많은 상이한 카테고리에 속한다. 가장 흔히 접해지는 유형들 중 두 가지는 경합적 분석 및 샌드위치 분석이다. 경합적 분석에서는, 제한된 양의 결합 물질을, 분석물 및 공지된 농도의 표지된 분석물을 함유하는 용액과 접촉시킨다. 표지된 분석물과 표지되지 않은 분석물은 결합 물질 상의 결합 부위를 두 고 경합한다. 결합 물질에 결합된 표지된 분석물의 양을 시험 용액 내에 존재하는 분석물의 농도와 상관시킬 수 있다. 정량을 전형적으로, 보정 곡선을 참조하거나, 반응에 의해 초래된 색상 변화 정도를 시각적으로 비교하거나, 시험 장치를 사용하여 평가함으로써, 수행한다.
샌드위치 분석은, 결합 물질을, 분석물을 함유하는 용액과 접촉시킴으로써 분석물이 결합 물질과 결합하도록 함을 포함한다. 이어서 이러한 착물을, 결합된 분석물과 반응하는, 표지된 결합 물질, 일반적으로는 항체와 접촉시킨다. 따라서 결합되고 표지된 결합 물질의 양은 결합된 분석물의 양에 정비례한다. 정량을 전형적으로, 반응에 의해 초래된 색상 변화를 표준물 또는 기준물과 비교하거나, 보정 곡선을 참조하거나, 시험 장치를 사용하여 검사함으로써, 수행한다.
그러나 통상적인 기술, 및 이러한 기술에 의존하는 장치는 다양한 결점을 나타내었다. 예를 들면, 비교적 단순한 시험 스트립 장치가 개발되었지만, 이것은 흔히 분석 결과를 적어도 즉각적으로 정량하는 능력을 갖지 않는다. 이와 관련하여, 이러한 많은 장치는 단순히, 분석물이 선택된 문턱값보다 많게 존재하는지 또는 적게 존재하는지에 대해 양성 또는 음성의 결과만을 보여줄 뿐이다. 더욱이, 이러한 장치는 전형적으로 세척 단계를 필요로 하거나, 하나 이상의 시약과 샘플을 혼합하는 단계를 필요로 한다. 이러한 세척 또는 혼합 단계가 필요함으로 인해, 분석이 바람직하지 못하게도 복잡해지며, 따라서 보통 사람 또는 보다 낮은 수준의 의학적으로 훈련된 사람이 사용하기에 바람직하지 못하다.
이러한 시험의 개선 및 신규한 용도가 요망된다.
발명의 요약
첫번째 양태에 따르면, 본 발명은 측방향 유동을 제공할 수 있는 하나 이상의 지지체 물질을 포함하는 장치를 제공한다. 하나 이상의 지지체 물질은 목표 분석물을 함유하는 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 목표 분석물과 착물을 형성할 수 있는, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 갖는 영역, 착물에 특이적으로 결합할 수 있는 소정량의 고정식 포획제(capture reagent)를 갖는 제 1 포획 영역, 고정식 포획제를 갖는 제 2 포획 영역 및 용해제를 함유한다. 전형적으로, 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 갖는 영역, 제 1 포획 영역 및 제 2 포획 영역은, 샘플이 이러한 영역을 통해 순차적으로 측방향 유동할 수 있도록, 하나 이상의 지지체 물질 내에 배열된다.
또다른 양태에 따르면, 목표 분석물은 CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원이다. 따라서, 하나 이상의 지지체 물질은 CD4 항원과 착물을 형성할 수 있는, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 갖는 영역, 착물과 특이적으로 결합할 수 있는, 소정량의 고정식 포획제를 갖는 제 1 포획 영역, 및 고정식 포획제를 갖는 제 2 포획 영역을 함유한다. 전형적으로, 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 갖는 영역, 제 1 포획 영역 및 제 2 포획 영역은, 샘플이 이러한 영역을 통해 순차적으로 측방향 유동할 수 있도록, 하나 이상의 지지체 물질 내에 배열된다.
본 발명은 추가로 이러한 장치를 사용하는 방법을 제공한다.
본 발명의 상기 및 기타 특징, 양태 및 이점을, 아래에 간단하게 기술되는 하기 발명의 상세한 설명, 첨부된 청구항 및 도면에 도시된 예시적인 실시양태로부터 명백하게 알게 될 것이다. 달리 언급이 없는 한, 유사한 요소들은 동일한 도면부호를 갖는다는 것을 유념하도록 한다.
도 1은 본 발명의 원칙에 따라 구성된 장치의 투시도이다.
도 2는 본 발명의 대안적 실시양태에 따라 구성된 장치의 투시도이다.
도 3A 내지 도 3D는 본 발명의 추가의 실시양태에 따라 구성된 장치의 투시도이다.
도 4는 본 발명의 원칙에 따라 구성된 장치의 또다른 실시양태이다.
본 발명의 원칙은, 위에서 언급된 도면을 참조로, 특정 예시적인 실시양태의 하기 논의에 의해 추가로 기술될 것이다. 본원에서 달리 언급이 없는 한, 동일한 도면부호 또는 문자는 여러 도면에서 동일하거나 유사한 요소들을 나타내기 위해 사용되었다.
본원에서 사용된 "분석물"이라는 용어는 시험 샘플 내에서 검출 또는 측정되는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 분석물은 항체 또는 이것의 면역학적 반응성 단편이 인식할 수 있는 하나 이상의 항원결합부위(epitope)를 가질 것이다. 분석물은 임의의 항원성 물질, 합텐, 항체 및 이것들의 조합을 포함할 수 있다. 분석에서 관심 있는 목표 분석물은 예를 들면 단백질, 펩티드, 아미노산, 핵산, 호르몬, 스테로이드, 비타민, 다클론성 및/또는 단클론성 항체를 생성할 수 있는 병원성 미생물, 천연 또는 합성 화학 물질, 오염물, 치료적 목적으로 투여되는 약물 뿐만 아니라 불법적 목적으로 투여되는 약물을 포함하는 약물, 및 상기 임의의 물질의 대사산물 또는 항체일 수 있다. 이러한 용어에 의해 이해될 수 있는 한 구체적인 예는 CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원이다.
본원에서 사용되는 "생물학적 샘플"이라는 용어는 검출을 위한 분석물을 함유하는 임의의 샘플을 지칭한다. 바람직하게는, 생물학적 샘플은 액체 형태이거나 액체 형태로 변형될 수 있다. 생물학적 샘플은 전혈, 뇨, 타액 또는 기타 신체 유체 및 분비물을 포함할 수 있다. 생물학적 샘플이라는 용어는 그것의 공급원에 대해서는 구체적으로 명기되지 않는다. 따라서 샘플은 인간 또는 기타 포유동물과 같은 임의의 공급원으로부터 수득될 수 있다.
본원에서 사용된 "샘플 수용 영역"이라는 용어는 생물학적 샘플과 최초로 접촉하는, 즉 문제의 분석물을 위해 시험되는 샘플을 수용하는 분석 장치 부분을 의미한다.
"측방향 유동"이라는 용어는 샘플의 성분을 물질을 통해 측방향으로 운반하는 유동을 지칭한다. 예를 들면, 분석 장치가 시트 또는 스트립의 형태일 때, 측방향은 장치의 주표면에 의해 한정되는 평면에 대해 평행하다.
본원에서 사용된 "물질"이라는 용어는 측방향 유동을 제공할 수 있는 임의의 물질을 지칭한다. 이것은 셀룰로스 에스테르, 니트로셀룰로스, 폴리에스테르 또는 셀룰로스와 니트로셀룰로스의 블렌드, 미처리 종이, 다공질 종이, 다공질 폴리에틸렌, 다공질 폴리프로필렌, 레이온, 유리섬유, 아크릴로니트릴 공중합체 또는 나일론을 포함한다. 해당 분야의 숙련자라면 측방향 유동을 허용하는 기타 다공질 물질을 알 것이다.
본원에서 사용된 "이동식"이라는 용어는 확산적으로 또는 비-확산적으로 부착 또는 함침됨을 의미한다. 이동식 물질 또는 시약은 샘플과 함께 분산되고 측방향 유동에 의해 운반될 수 있다.
본원에서 사용된 "고정식"이라는 용어는, 액체 샘플의 측방향 유동이 물질 내의 고정식 입자의 위치에 영향을 주지 않도록 지지체 물질에 부착된 물질 또는 시약을 지칭한다. 이러한 부착은 예를 들면 공유결합 또는 이온성 수단을 통한 것일 수 있다. 해당 분야의 숙련자라면 다양한 물질 또는 시약을 고정화시키는 부착 수단을 알 것이다.
본원에서 사용된 "검출자 리간드"라는 용어는, 검출가능한 신호를 생성할 수 있는 임의의 물질과 화학적, 공유결합적, 비-공유결합적, 이온적 또는 비-이온적으로 부착되거나 공액화되거나 결합된, 문제의 분석물을 인식하거나 이것과 결합된 임의의 입자, 단백질 또는 분자를 지칭한다. 검출가능한 신호를 생성할 수 있는 이러한 물질은 색소원, 촉매, 형광 화합물, 콜로이드성 금속성 및/또는 비-금속성 입자, 염료 입자, 효소 또는 물질, 유기 중합체, 라텍스 입자, 리포좀 및 본원에서 전문이 참고로 인용된 미국특허 4,703,017 호에 기술된 유형의 신호-생성 물질을 포함한다. 분석물을 인식하는 입자 또는 분자는 천연 또는 비-천연일 수 있다. 예시적인 실시양태에 따르면, 검출자 리간드는 콜로이드성 금 입자 또는 가시적 염료를 함유하는 리포좀에 공액화된 리간드를 포함한다.
본원에서 사용된 "검출가능한 신호"라는 용어는 육안에 의해 보이는 임의의 표시기 및/또는 이러한 가시적 표시기로 변환될 수 있는 광학적 판독 장치를 지칭한다. "육안에 의해 보이는"은 보정 렌즈 및 확대 수단을 사용함을 포함한다. 검출가능한 신호는 즉각적으로 및 지속적으로 보일 수 있거나, 또다른 시약과의 반응 시에만 보일 수 있다. 예를 들면 금과 같은 콜로이드성 금속은 전형적으로 즉각적으로 및 지속적으로 보일 수 있다. 대안적으로, 신호를 생성할 수 있는 물질은 효소와 같은 제 1 시약을 포함할 수 있고, 제 2 시약이 별도의 영역 내에 제공될 수 있어서, 효소가 별도의 영역으로 이동 시, 화학반응이 일어나서 별도 영역에서 색상 변화가 일어난다.
본원에서 사용된 "검출자 리간드 영역"이라는 용어는 이동식 검출자 리간드가 위치한 장치의 영역을 지칭한다.
본원에서 사용된 "조절제"라는 용어는 리간드 검출자와 결합할 수 있지만 목표 분석물을 인식하거나 이것과 결합하지 않는 임의의 입자 또는 분자를 지칭한다. 예를 들면 검출자 리간드는 신호를 생성할 수 있는 물질에 공액화된 리간드일 수 있다. 조절제는 분석물이 검출자 리간드와 결합되지 않을 때 검출자 리간드의 리간드 부분을 인식하거나 이것과 결합하는 입자 또는 분자이다. 바람직하게는, 조절제는 리간드를 인식하는 단클론성 또는 다클론성 항체이다. 조절제는 고정식이다. 따라서 일단 이것이 미결합 표지 물질(labeling reagent)과 결합하고 나면, 이것은 표지 물질을 고정화시키고 그것이 측방향 유동을 계속하는 것을 저해한다.
본원에서 사용된 "조절 라인"이라는 용어는 조절제가 고정화된 장치의 영역을 지칭한다.
본원에서 사용된 "포획제"라는 용어는 관심 있는 분석물 또는 분석물과 결합된 검출자 리간드를 인식하거나 이것과 결합하는 임의의 입자 또는 분자를 지칭한다. 포획제는 고정식이어서, 일단 포획제가 분석물-검출자 리간드 착물과 결합하고 나면, 이것은 착물이 측방향 유동을 계속하는 것을 저해한다. 포획제는 항체, 팹(fab), 펩티드, 앱타머(aptamer) 등과 같은 임의의 적합한 리간드를 포함할 수 있다. 한 예시적인 실시양태에 따르면, 포획제는 CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원에 대한 항체를 포함한다.
본원에서 사용된 "포획 영역"이라는 용어는 포획제가 물질 내에 고정화된 장치의 영역을 지칭한다.
본원에서 사용된 "특이적으로 결합하는"이라는 용어는, 수용체, 포획제 등을 통해 일어나는, 특정 시약 또는 물질하고만 선택적으로 커플링되는 결합 메카니즘을 지칭한다.
본 발명의 원칙에 따라 구성된 제 1 실시양태가 지금부터 도 1 및 도 2를 참고하여 기술될 것이다. 장치(10)는 일반적으로, 화살표 LF의 방향으로 유동하는 측방향 유동을 생성할 수 있는 지지체 물질(15)을 포함한다.
도 1에 도시된 바와 같이, 지지체 물질(15)은 스트립 형태를 가질 수 있고, 하기 설명에서 언급될 것이다. 대안적으로, 지지체 물질(15)은, 특정한 형태가 본원에서 기술된 다양한 기능을 허용하는 한, 다양한 형상 또는 형태로 제공될 수 있다.
이러한 지지체(15)는, 전술된 측방향 유동 기능을 허용하는 수많은 상이한 적합한 물질로부터 형성될 수 있다. 예를 들면, 이러한 물질은 유리섬유, 셀룰로스 에스테르, 나일론, 가교된 덱스트란 등을 포함할 수 있다. 한 실시양태에 따르면, 물질은 니트로셀룰로스를 포함한다. 하기 예에서 명시된 바와 같이, 지지체는 단일 스트립 외에도 하나 이상의 개별적인 지지체 물질을 포함할 수 있다.
예시된 장치(10)에서, 생물학적 샘플 수용 영역(20)이 스트립(15) 상에 제공된다. 예시된 실시양태에서는 단 하나의 샘플 수용 영역(20)이 스트립(15)의 끝에 위치한 것으로 도시되지만, 다수의 샘플 수용 영역이 제공될 수 있다는 것이 본 발명에 의해 이해됨을 알아야 한다. 더욱이, 샘플 수용 영역은 예시된 실시양태의 것과 상이한 위치를 가질 수 있다. 장치(10)는 검출자 리간드를 함유하는 영역(25)을 추가로 포함한다. 검출자 리간드는 이동식이도록 영역(25) 내에 함유된다. 다른 말로 하자면, 검출자 리간드는 전술된 측방향 유동에 의해 영역(25)으로부터 운반되어 나올 수 있다. 예시적인 비-제한적인 예에 따르면, 3 내지 7 ㎕, 바람직하게는 5 ㎕의 검출자 리간드가 영역(25) 내에서 cm 너비 당 도포되고, 건조된다. 검출자 리간드는 바람직하게는, 10 내지 100 ㎚, 바람직하게는 40 ㎚의 콜로이드성 금 입자의 현탁액 1 ㎖ 당 공액화된 항체 10 내지 200 ㎍, 바람직하게는 50 ㎍를 포함한다. 예시된 실시양태에서, 검출자 리간드를 함유하는 영역(25) 및 생물학적 샘플 수용 영역(20)은 스트립(15) 상의 분리된 개별적인 영역으로서 도시되어 있다. 그러나 이러한 두 영역들이 스트립(15)의 개별적이지 않은 단일 영역을 한정하도록 결합되는 것도 본 발명의 범주 내에 속한다.
임의적 조절 라인(30)이 스트립(15) 상에 제공될 수도 있다. 조절 라인(30)이 존재할 때, 조절 라인(30)은 조절제를 함유하는 영역을 한정한다. 조절 라인(30) 내에 함유된 조절제는 고정식이다. 예시적인 비-제한적 예에 따르면, 0.1 내지 10 ㎍, 바람직하게는 1 ㎍의 조절제가 조절 라인(30) 내 cm 너비 당 위치한다.
제 1 포획 영역(35)이 예시된 실시양태에 제공되며, 스트립(15)의 전술된 영역들과 측방향 유동 소통한다. 제 1 포획 영역(35)은 포획제를 함유한다. 포획제는 제 1 포획 영역(35) 내에 고정식으로 함유된다. CD4 결정에 유용한 실시양태에서, cm 너비 당 2 ng의 포획제가 제 1 포획 영역(35) 내에 위치한다(세포 당 60,000 CD4 분자, 100 ㎕의 혈액 샘플, ㎕ 당 100 CD4 세포로서 포화된 포획 영역, 5 ㎜의 스트립 너비, 150,000 g/mol의 항체 몰질량을 가정).
본 발명의 또다른 임의적 양태에 따르면, 용해제가 다양한 위치에서 스트립 물질(15)에 첨가될 수 있다. 예를 들면, 용해제는 샘플 수용 영역(20) 내 또는 샘플 수용 영역(20)과 제 1 포획 영역(35) 사이에 위치한 스트립(15)의 임의의 영역 내에 함유될 수 있다. 적합한 용해제는 예를 들면 즈위터전트(zwittergent) 3-10 및 3-14, 사포닌, 트리톤(Triton) X100, 트윈(Tween) 20, SDS(소디움 도데실 술페이트) 및 CTAB를 포함한다.
예시된 실시양태에 따르면, 제 2, 제 3 및 제 4 포획 영역(각각 40, 45 및 50)이 추가로 스트립(15) 상에 제공된다. 그러나, 스트립(15)이 하나 이상의 포획 영역을 함유하는 것도 본 발명의 범주에 속한다는 것을 이해해야 한다. 추가의 실시양태에 따르면, 스트립(15)은 둘 이상의 포획 영역을 포함할 수 있다. 추가의 실시양태에 따르면, 스트립(15)은 넷 이상의 포획 영역을 포함할 수 있다.
예시된 실시양태에 따르면, 포획 영역은 측방향 유동 LF의 방향으로 개별적이고 서로 분리되어 있다. 그러나, 하나 이상의 포획 영역이 결합되고/되거나 달리 병합될 수 있다는 것이 본 발명에 의해 이해된다. 또한, 포획 영역의 위치, 형상, 크기 및 구조는 예시된 실시양태의 것과 다를 수 있다.
도 2에 도시된 실시양태는 본질적으로 도 1의 실시양태에 상응하지만, 임의적 하우징(55)을 추가로 포함한다. 하우징(55)은 임의의 적합한 물질로써 형성될 수 있다. 예를 들면, 하우징은 마일라(Mylar)와 같은 플라스틱 물질로써 형성될 수 있다. 하우징(55)은 스트립(15)을 적어도 부분적으로 감싸거나 둘러싼다. 도 2에 도시된 바와 같이, 하우징은 샘플 수용 영역 윈도우(60), 조절 라인 윈도우(62) 및 포획 영역 윈도우(65)를 가질 수 있다. 예시된 실시양태에 따르면, 검출자 리간드를 함유하는 영역은 하우징(55) 때문에 사용자의 눈에는 보이지 않는다. 물론 검출자 리간드를 함유하는 영역은 하우징을 통해 사용자의 눈에 보일 수도 있다는 것도 이해된다. 더욱이, 하우징(55)은 투명 또는 반투명 플라스틱 물질로부터 형성될 수 있다.
하우징(55)은 임의적으로, 장치(10)에 의해 생물학적 샘플 내에 존재하는 것으로 결정된 목표 분석물의 농도의 다양한 감소를 나타내는 표지(70)를 가질 수 있다. 도 2에 예시된 표지(70)로부터 명백히 알 수 있는 바와 같이, 본원에서 추가로 상세히 기술되는 바와 같이, 특정 값의 범위에서, 생물학적 샘플 내에 존재하는 분석물의 농도를 확인할 수 있다.
도 3A 내지 3D에 예시된 실시양태는 도 1 및 도 2에 예시된 실시양태와 관련하여 기술된 많은 양태를 함유한다. 일반적으로 말하자면, 도 3에 예시된 실시양태는, 각각의 스트립이 문턱 농도 수준의 목표 분석물을 표시하기 위한 단일 포획 영역을 함유한다는 점에서, 전술된 실시양태와 상이하다. 특정한 예정된 농도의 분석물이 생물학적 샘플 내에 존재하는 경우에만, 양성 표시가 포획 영역에 주어진다.
따라서, 전술된 내용 뿐만 아니라 후술되는 내용이 도 3A 내지 3D에 예시된 스트립에 동일하게 적용된다.
도 3A의 예시된 실시양태에 따르면, 장치(100a)가 일반적으로 스트립으로서 형성된 지지체 물질(115a)에 의해 제공된다. 스트립(115a)은 샘플 수용 영역(120a), 검출자 리간드를 함유하는 영역(125a), 및 임의적 조절 라인(130a)을 포함한다. 영역(125a) 내에 함유된 검출자 리간드는 이동식이어서, 측방향 유동에 의해 영역(125a)로부터 운반되어 나올 수 있다. 조절 라인(130a)은 하나 이상의 조절제를 함유하는 영역을 한정한다. 조절제는 조절 라인(130a) 내에 고정식으로 함유된다. 제 1 포획 영역(134a)은 스트립(115a)의 전술된 영역들과 분리된 것으로 예시되어 있지만 이것들과 측방향 유동 소통한다. 물론, 전술된 실시양태와 관련해 설명된 바와 같이, 스트립(115a)의 다양한 영역들의 위치, 개수 및 배열은 예시된 실시양태의 것과 상이하게 다양할 수 있다. 따라서, 도 1 및 도 2와 관련한 전술된 내용을 참조하도록 한다. 포획 영역(140a)은 예정된 특정량으로 제공된 고정식 포획제를 함유한다.
도 3B 및 도 3D에 예시된 바와 같이, 스트립(115b 내지 115d)은 각각 제 1 포획 영역(134b 내지 134d) 및 제 2 포획 영역(140b 내지 140d)을 가질 수 있다. 포획 영역(134b 내지 134d)에 제공된 일정량의 포획제는 생물학적 샘플 내에 함유된 예정된 특정량의 목표 분석물을 포획하는데에 사용된다. 제 1 포획 영역(134b 내지 134d)은 샘플 내에 함유된 목표 분석물의 양과 관련하여 그 자체로 임의의 표시를 제공하는데 사용되지 않는다. 예시된 실시양태에 따르면, 제 2 포획 영역(140b 내지 140d)은 이러한 목적을 위해 제공된다. 제 2 포획 영역(140b 내지 140d)은 특정한 소정량의 포획제를 함유한다. 포획제는 또한 제 2 포획 영역(140b 내지 140d) 내에 고정식으로 함유된다. 그러나, 포획 영역의 개수, 위치 및 배열은 다양할 수 있다는 것은 본 발명의 범주에 속한다.
도 4는 장치(100)가 도 3A 내지 3D의 실시양태와 관련하여 전술된 것과 동일한 양태를 갖지만, 추가로 임의적 하우징 부재(155)를 함유하는 본 발명의 추가의 실시양태를 예시한다. 하우징(155)은 임의의 적합한 물질로 구성될 수 있다. 예를 들면, 하우징(155)은 마일라와 같은 플라스틱 물질로써 구성될 수 있다. 임의적 하우징(155)은 샘플 수용 영역 윈도우(160), 조절 라인 윈도우(162), 포획 영역 윈도우(165) 및 표지(170)를 가질 수 있다. 예시된 실시양태에 따르면, 제 1 포획 영역은 하우징(155) 때문에 눈에 보이지 않는다. 제 1 포획 영역(134)이 생물학적 샘플 내에 함유된 분석물의 양과 관련하여 유용한 표시를 제공하지 않는 경우, 이러한 영역이 반드시 사용자의 눈에 보일 필요는 없다. 그러나, 적어도 스트립(115)의 이러한 추가적인 영역이 사용자의 눈에 보일 수 있도록 하우징(155)을 개조할 수 있다는 것은 이해된다. 대안적으로, 하우징(155)은 투명 또는 반투명 플라스틱 물질로부터 형성될 수 있다.
해당 분야의 숙련자에게 친숙한 기술을 사용하여, 전술된 장치를 구성할 수 있다. 전술된 시약은 임의적으로, 지지체 물질 내로 및/또는 지지체 물질 상으로의 침착을 위해 액체 형태로 제조된다. 액체 시약은 일단 지지체 물질과 접촉하고 나면, 액체 시약은 건조되어 지지체 물질에 부착된다. 원한다면, 통상적인 충전제, 결합제, 계면활성제 등이 액체 시약 내로 혼입될 수 있다. 또한, 지지체 물질에의 부착을 용이하게 하기 위해서, 결합제 물질이 액체 시약 조성물 내로 혼입될 수도 있다.
임의의 특정한 영역에서 지지체 물질 내로 혼입된 시약의 부피를 정확하게 조절하는 것이 바람직하다. 따라서, 혼입되는 시약의 부피를 조절하는데에 피펫, 마이크로피펫 등을 사용하는 것이 본 발명에 의해 이해된다. 또한, 특정 시약이 혼입되는 영역을 단리시키거나 달리 한정하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 영역을 해당 분야의 숙련자에게 공지된 기술에 따라 조절할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 스트립의 전술된 하나 이상의 영역이, 비-흡수성 및/또는 소수성인 영역에 의해 분리될 수 있다는 것은 본 발명의 범주 내에 속한다. 이러한 중간 영역 내의 지지체 물질을 처리함으로써, 또한 대안적으로는, 이러한 원하는 성질을 부여하는 상이한 물질의 부분 또는 단편을 혼입시킴으로써, 이러한 분리를 수행할 수 있다.
도 1 내지 도 4에 도시된 실시양태에 대한 전술된 내용으로부터 명백히 알 수 있는 바와 같이, 특정 시약을 고정식으로 지지체 물질 내로 혼입시키는 것이 바람직하다. 증착, 흡착, 공유결합 또는 면역학적 고정화와 같은 임의의 통상적인 기술을 사용하여, 고정화를 수행할 수 있다. 이러한 기술은 예를 들면 본원에서 전문이 참고로 인용된 미국특허 제 4,517,288 호 및 제 4,186,146 호에 보다 상세하게 기술되어 있다. 특정 시약을 이동식으로 지지체 물질 내로 혼입시키는 것도 바람직하다. 소량의 액체 시약 용액을 원하는 영역에 단순히 피펫으로 첨가함으로써, 이를 수행할 수 있다. 이러한 기술은 해당 분야의 숙련자에게 친숙하다.
본 발명의 추가의 양태에 따라, 목표 분석물을 분석하기 위한 방법 또는 기술이 지금부터 기술될 것이다. 예시를 목적으로, 도 1 내지 도 4의 예시적인 실시양태를 참조할 것이다. 그러나, 본 발명의 방법 및 기술이 반드시 도 1 내지 도 4에 예시된 실시양태의 물리적 구조 및 배열로만 제한될 필요는 없다는 것을 이해해야 한다.
본 발명의 원칙에 따라 수행되는 분석의 예시적인 실시양태는 하기와 같이 보다 상세하게 기술될 것이며, 샌드위치형 분석으로서 예시를 목적으로 기술될 것이다. 그러나, 본원에 기술된 교시를 숙지한 해당 분야의 보통 숙련자가, 경합형 및/또는 저해형 분석의 수행을 통해 동일한 목적을 달성할 수 있다는 것이 본 발명에 의해 이해된다. 따라서, 본 발명의 방법은 반드시 샌드위치형 분석으로만 제한되는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 발명에 따라 수행되는 분석은 적당한 생물학적 샘플을 수집하는 것으로부터 시작된다(단지 편의상, 도 1 및 도 3B를 참조하도록 함). 적당한 샘플 부피는 다양할 수 있다. 예를 들면 1 내지 100 ㎕의 샘플이 사용될 수 있다. 본 발명의 한 실시양태에 따르면, 생물학적 샘플은 전혈을 포함한다. 생물학적 샘플을 시험 스트립(15, 115b)의 샘플 수용 영역(20, 120b)에 첨가한다. 시험 스트립 물질은 물질 내의 생물학적 샘플의 측방향 유동(LF)을 촉진한다. 생물학적 샘플은 검출자 리간드(25, 125b)를 함유하는 영역 내로 유동해 들어간다. 검출자 리간드는 검사되는 특정 목표 분석물과 특이적으로 결합하도록 디자인된다. 따라서, 목표 분석물이 검출자 리간드 함유 영역을 통해 측방향 유동을 통해 이동함에 따라, 목표 분석물은 검출자 리간드와 특이적으로 결합하여, 착물로서 전술된 영역을 빠져나간다.
임의적으로, 전술된 착물을 함유하는 생물학적 샘플은 측방향 유동에 의해 조절제를 함유하는 조절 라인 영역(30, 130b) 내로 운반되어 들어간다. 이러한 영역에서, 조절 라인 영역은 내부 절차를 조절하는 역할을 하고, 이러한 영역 내의 신호의 검출은 모세관 유동이 일어나며 장치의 기능적 일체성이 유지된다는 것을 검증한다.
이어서 생물학적 샘플 및 여기에 함유된 착물은 제 1 포획 영역(35, 134b)으로 측방향 유동한다. 제 1 포획 영역은 목표 분석물을 함유하는 착물과 특이적으로 결합하도록 구성된 고정식 포획제를 함유한다. 따라서, 착물이 제 1 포획 영역을 통해 이동함에 따라, 이것은 포획제와 고정식으로 결합하게 된다. 생물학적 샘플이 제 1 포획 영역 내에 함유된 포획제의 용량을 초과하는 양의 목표 분석물을 함유하는 정도로, 임의의 이러한 과량의 목표 분석물 및 이것에 의해 형성된 착물은 측방향 유동의 영향 하에서 이동을 계속함으로써, 하나 이상의 임의적으로 제공된 추가의 포획 영역에 도달한다.
전술된 내용으로부터 명백하게 알 수 있는 바와 같이, 제 1 포획 영역 내에 함유된 포획제의 양을 조절함으로써, 생물학적 샘플 내에 함유된 일정 양 또는 농도의 목표 분석물이 통과할 수 없는 장벽을 한정할 수 있다. 이러한 최소의 문턱값이 초과되는 정도로, 과량의 목표 분석물은 측방향 유동 하에서, 분석되는 목표 분석물의 최소 문턱값을 다시 증가시키는 하나 이상의 포획 영역으로 자유롭게 이동한다. 이와 관련하여, 각 포획 영역 내에 제공된 포획제의 양은 서로 동일한 양일 수 있다. 대안적으로 각 포획 영역 내에 함유된 포획제의 양은 점점 증가하거나 감소할 수 있다. 비-제한적인 예시적인 예에 따르면, 2 ng의 포획제가 제 1 포획 영역 내에 제공될 수 있고, 2 ng의 포획제가 제 2 포획 영역 내에 제공될 수 있고, 4 ng의 포획제가 제 3 포획 영역 내에 제공될 수 있고, 8 ng의 포획제가 제 4 포획 영역 내에 제공될 수 있다.
전술된 하나 이상의 포획 영역 내에, 충분한 양의 목표 분석물, 목표 분석물과 검출자 리간드로부터 형성된 착물이 존재한다는 것은 검출가능한 신호의 생성에 의해 표시된다. 이러한 검출가능한 신호는 해당 분야의 숙련자에게 친숙한 수많은 상이한 방법들에 의해 발생될 수 있다. 한 예에 따르면, 검출자 리간드는 육안에 즉각적으로 및 지속적으로 보이는 물질을 포함할 수 있다. 따라서, 단지, 하나 이상의 포획 영역에서 목표 분석물과 검출자 리간드 사이에 형성된 착물의 물리적 존재는 원하는 검출가능한 신호를 생성하기에 충분하다. 대안적으로, 검출자 리간드는 목표 분석물로써 형성된 착물과 결합될 수 있지만 눈에 보이지 않는 제 1 시약을 포함할 수 있다. 이어서, 제 1 시약과 결합 및 상호작용 시 검출가능한 신호를 생성하는 제 2 시약이 하나 이상의 포획 영역 내에 제공될 수 있다. 검출가능한 신호는 육안에 보일 수 있거나, 분광분석기, 형광분석기, 현미경 등과 같은 별도의 장치의 도움을 받아 판독 또는 분석될 수 있다. 본 발명의 원칙에 따라 수행되는 분석의 추가의 임의적 양태로서, 용해제가 스트립 물질 내로 혼입될 수 있는데, 이것은 생물학적 샘플과 상호작용함으로써 목표 분석물을 방출시킨다. 용이하게 명백하게 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 장치 및 방법은 수많은 상이한 용도에서 및 수많은 상이한 목적에 유용하다. 일반적으로, 본 발명의 장치 및 방법은, 단순하고 정확하고 빠르고 비용-효과적인 방식으로 확인하는 것이 바람직한 경우에, 생물학적 샘플 내에 함유된 목표 분석물의 양을 반-정량적 분석하는데에 유용하다. 적합한 비-제한적 용도는 혈 글루코스 모니터링 뿐만 아니라, HIV/AIDS와 같은 바이러스성 질환의 진단 및 치료를 포함할 수 있다. CD4 세포 개수의 감소는 HIV의 효과이고, CD4 세포 고갈은 면역결핍을 나타낸다는 것으로 관찰되었다. 이와 관련하여, 질병관리센터(CDC)는 CD4 세포 개수의 임상적 중요성을 강조하는 HIV 감염에 대한 분류 체계를 고안하였다. CDC의 분류 체계는 생명을 위협하는 기회감염 질병의 발달과 CD4 세포 개수 간의 강한 연관 관계를 보여주는 연구를 근거로 한다. 이와 관련하여, CD4 세포 개수가 감소함에 따라, 기회감염 질병의 위험 및 중증도는 증가한다. 따라서 CD4 세포 개수는 HIV-감염된 사람의 임상적 및 치료적 관리의 지침이 된다. CDC는 CD4 개수가 500 세포/㎕ 미만인 모든 사람에 대해서는 항레트로바이러스 요법을 고려하고, CD4 세포 개수가 200 세포/㎕ 미만인 모든 환자에 대해서는 주폐포자충 폐렴(PCP)에 대한 예방 처치를 권유한다고 제안한다.
CD4 림프구 세포 개수에 대한 세 가지 CDC 카테고리는 하기와 같다:
카테고리 1: 500 세포/㎕ 이상
카테고리 2: 200 내지 499 세포/㎕
카테고리 3: 200 세포/㎕ 미만
전술된 내용으로부터 용이하게 명백하게 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 장치 및 기술을 사용하여 환자의 CD4 세포 개수가 어떤 CDC 카테고리에 속하는지를 결정할 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따라, 생물학적 샘플 내에 존재하는 CD4 세포 개수가 약 100 세포/㎕ 이상일 때에만 검출가능한 신호가 제 1 포획 영역 내에서 생성되도록 특정량의 포획제를 제 1 포획 영역에 제공할 수 있다. CD4 세포 농도가 약 200 세포/㎕ 이상일 때에만 검출가능한 신호가 제 2 포획 영역 내에서 생성되도록 제 2 포획 영역을 제공할 수 있다. 생물학적 샘플 내에 약 400 CD4 세포/㎕의 CD4 세포가 존재할 때에만 검출가능한 신호가 제 3 포획 영역 내에서 생성되도록 적당량의 포획제를 제 3 포획 영역에 제공할 수 있다. 약 800 CD4 세포/㎕의 CD4 세포가 존재할 때에만 검출가능한 신호가 생성되도록 적당량의 포획제를 제 4 포획 영역에 제공할 수 있다. 특정 진단 목적을 달성하기 위해, 제공된 포획 영역의 특정 농도 및/또는 개수를 원하는 대로 변경시킬 수 있다는 것도 본 발명의 범주 내에 속한다. CD4 세포 개수는, 언제 환자가 항바이러스 요법을 받기 시작할지를 결정하는 과정에서 중요한 진단 도구로서 뿐만 아니라, 이러한 항바이러스 요법의 효능 및 효과를 모니터링하는데 있어서 중요한 도구로서 널리 인식된다. 따라서 자주 CD4 세포 개수를 결정해야 한다. 본 발명의 장치 및 방법은 CD4 세포 개수를 반-정량적 방식으로 자주 결정하게 해 주는 단순하고 정확하고 빠르고 비용-효과적인 수단을 제공한다.
본 발명의 원칙에 의해 이해되는 특정한 비-제한적 예가, 본 발명의 개념을 추가로 예시하기 위해, 지금부터 기술될 것이다.
실시예 1
본 실시예에서는, 인간 혈액을 CD4 림프구의 반-정량적 양에 대해 시험할 수 있다. 시험 대상의 손가락에 채혈침을 찔러 한 방울의 혈액을 채취하고, 이것을 측방향 유동 장치 상의 생물학적 샘플 수용 영역에 도포한다. 이어서 측방향 유동을 촉진하기 위해 인산염 완충된 식염수와 같은 적합한 완충제 두 방울을 수용 영역에 첨가한다. 장치는 혈액 샘플을 수용하는 패드, 예를 들면 레이온 또는 유리섬유로 이루진다. 용해제를 패드에 함침시켜 혈액 세포를 용해시킨다. 이러한 패드 내에는 콜로이드성 금에 공액화된 검출자 항체(CD4 항원에 특이적인 단클론성 항체)가 존재한다. 이러한 패드 아래에는, 전형적으로 너비가 5 ㎜이고 길이가 30 ㎜인 니트로셀룰로스의 스트립이 존재한다. 패드는 이러한 스트립의 한 쪽 맨 끝에 위치한다. 스트립의 다른 쪽 맨 끝에서는, 흡수성 패드가 스트립과 접촉하여 액체의 모세관 유동을 용이하게 하고 유지한다. 혈액 샘플 내의 유체는 모세관 작용의 결과로 스트립의 위쪽으로("상류로") 이동할 것이다. CD4-검출자 착물과 샌드위치 착물을 형성할 수 있는 포획 항체의 네 개의 대역이 본 실시예의 니트로셀룰로스 스트립에 고정식으로 침착된다. 샘플 침착 영역에 가장 가까운 포획 대역은 샘플 ㎕ 당 100 CD4 림프구의 동등물로부터 CD4 항원으로써 포화되기에 충분한 포획 항체를 함유한다. 제 2, 제 3 및 제 4 포획 대역은 마찬가지로, 각각 샘플 ㎕ 당 200, 400 및 800 CD4 림프구의 동등물로써 포화되는 포획 항체를 함유한다. 스트립을 15분 동안 전개시키고, 이 때 스트립 상의 눈에 보이는 띠의 개수를 계수한다. 혈액 샘플 후 세척액을 도포하여 헤모글로빈에 의해 초래된 임의의 배경 색상을 없앰으로써, 시험 스트립의 판독성을 향상시킬 수 있다. 띠의 개수는 혈액 샘플 내 CD4 세포의 개수를 표시한다. 제 1 띠만이 관찰된 경우, CD4 세포의 수준은 50 내지 100 세포/㎕이다. 제 1 띠 및 제 2 띠만이 관찰된 경우, CD4 세포의 수준은 약 200 세포/㎕이다. 최초 세 가지 띠가 관찰된 경우, CD4 세포의 수준은 약 400 세포/㎕이고, 네 가지 띠가 모두 관찰된 경우, CD4 세포의 수준은 800 세포/㎕ 초과이다.
본 발명의 바람직한 실시양태와 관련하여 상세하게 기술된 바와 같이, 본 발명은 많은 상이한 형태의 실시양태에 의해 충족되지만, 본 발명의 개시 내용은 본 발명의 원칙을 예시하기 위한 것이지 본원에서 예시되고 기술된 특정 실시양태로만 본 발명을 제한하기 위한 것은 아니라는 것을 이해하도록 한다. 해당 분야의 숙련자가 본 발명의 개념에서 벗어나지 않게 다양한 변형양태를 고안할 수 있다.

Claims (57)

  1. 목표 분석물을 함유하는 생물학적 샘플을 수용하는 영역;
    목표 분석물과 착물을 형성할 수 있는, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역(여기서 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역과 생물학적 샘플을 수용하는 영역은 분리된 영역, 동일한 영역, 또는 부분적으로 동일한 영역일 수 있음);
    착물과 특이적으로 결합할 수 있는, 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 제 1 포획 영역;
    고정식 포획제를 포함하는 제 2 포획 영역; 및
    용해제를 포함하는, 측방향 유동을 제공할 수 있는 하나 이상의 지지체 물질을 포함하는 장치.
  2. 제 1 항에 있어서, 샘플이 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역, 제 1 포획 영역 및 제 2 포획 영역을 통해 순차적으로 측방향 유동할 수 있도록, 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역, 제 1 포획 영역 및 제 2 포획 영역이 하나 이상의 지지체 물질 내에 배열된 장치.
  3. 제 1 항에 있어서, 하나 이상의 지지체 물질이 셀룰로스 에스테르, DEAE, 유 리, 나일론, 입상 실리카, 폴리스티렌, 폴리에틸렌, 폴리아미드, 폴리아크릴아미드, 폴리비닐, 폴리프로필렌, 셀룰로스 아가로스 또는 덱스트란을 포함하는 장치.
  4. 제 1 항에 있어서, 하나 이상의 지지체 물질이, 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역, 제 1 포획 영역, 제 2 포획 영역 및 용해제를 포함하는 단일 스트립을 포함하는 장치.
  5. 제 1 항에 있어서, 목표 분석물이 CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원인 장치.
  6. 제 1 항에 있어서, 고정식 포획제가 CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원과 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 포함하는 장치.
  7. 제 1 항에 있어서, 검출자 리간드가 항체에 공액화된 콜로이드성 금을 포함하는 장치.
  8. 제 1 항에 있어서, 제 1 포획 영역 내에 존재하는 포획제의 소정량이 특정 수준에서 착물과 결합하기에 충분한 장치.
  9. 제 8 항에 있어서, 제 2 포획 영역이 제 2 특정 수준에서 착물과 결합하기에 충분한 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 장치.
  10. 제 9 항에 있어서, 제 2 포획 영역이, 샘플 내에 존재하는 목표 분석물의 적어도 제 2의 양의 존재를 표시할 수 있는 장치.
  11. 제 10 항에 있어서, 하나 이상의 지지체 물질이 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 제 3 포획 영역을 추가로 포함하는 장치.
  12. 제 11 항에 있어서, 하나 이상의 지지체 물질이 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 제 4 포획 영역을 추가로 포함하는 장치.
  13. 제 12 항에 있어서, 제 3 포획 영역이 샘플 내에 존재하는 목표 분석물의 적어도 제 3의 양의 존재를 표시할 수 있고, 제 4 포획 영역이 샘플 내에 존재하는 목표 분석물의 적어도 제 4의 양의 존재를 표시할 수 있고, 제 3의 양은 제 2의 양보다 많고, 제 4의 양은 제 3의 양보다 많은 장치.
  14. 제 1 항에 있어서, 고정식 조절제를 함유하는 조절 라인을 추가로 포함하는 장치.
  15. 제 13 항에 있어서, 목표 분석물이 CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원이고, 이동식으로 함유된 검출자 리간드가 CD4 항원과 착물을 형성할 수 있고, 고정식 포획제가 이 착물과 특이적으로 결합하고, 제 1 영역이 샘플 내의 적어도 약 100 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 장치.
  16. 제 15 항에 있어서, 제 2 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 200 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 장치.
  17. 제 16 항에 있어서, 제 3 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 400 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 장치.
  18. 제 17 항에 있어서, 제 4 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 800 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 장치.
  19. 제 1 항에 있어서, 하나 이상의 지지체 물질을 적어도 부분적으로 덮는 하우징을 추가로 포함하는 장치.
  20. 제 1 항에 있어서, 용해제가 샘플 수용 영역 내에 위치한 장치.
  21. 제 1 항에 있어서, 용해제가 샘플 수용 영역과 제 1 포획 영역 사이에 측방향으로 위치함으로써, 샘플 수용 영역으로부터 측방향으로 유동하는 샘플이 제 1 포획 영역에 도달하기 전에 용해제에 노출되는 장치.
  22. CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원을 함유하는 생물학적 샘플을 수용하는 영역;
    CD4 항원과 착물을 형성할 수 있는, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역(여기서 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역과 생물학적 샘플을 수용하는 영역은 분리된 영역, 동일한 영역, 또는 부분적으로 동일한 영역일 수 있음);
    착물과 특이적으로 결합할 수 있는, 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 제 1 포획 영역; 및
    고정식 포획제를 포함하는 제 2 포획 영역을 함유하는, 측방향 유동을 제공할 수 있는 하나 이상의 지지체 물질을 포함하는 장치.
  23. 제 22 항에 있어서, 샘플이 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역, 제 1 포획 영역 및 제 2 포획 영역을 통해 순차적으로 측방향 유동할 수 있도록, 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역, 제 1 포획 영역 및 제 2 포획 영역이 하나 이상의 지지체 물질 내에 배열된 장치.
  24. 제 22 항에 있어서, 하나 이상의 지지체 물질이 셀룰로스 에스테르, DEAE, 유리, 나일론, 입상 실리카, 폴리스티렌, 폴리에틸렌, 폴리아미드, 폴리아크릴아미드, 폴리비닐, 폴리프로필렌, 셀룰로스 아가로스 또는 덱스트란을 포함하는 장치.
  25. 제 22 항에 있어서, 하나 이상의 지지체 물질이, 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역, 제 1 포획 영역 및 제 2 포획 영역을 포함하는 단일 스트립을 포함하는 장치.
  26. 제 22 항에 있어서, 고정식 포획제가 CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원과 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 포함하는 장치.
  27. 제 22 항에 있어서, 검출자 리간드가 CD4 항원을 인식하는 항체에 공액화된 콜로이드성 금을 포함하고 고정식 포획제 및 CD4 항원과 샌드위치 착물을 형성할 수 있는 장치.
  28. 제 22 항에 있어서, 제 2 포획 영역이 소정량의 고정식 포획제를 포함하고, 샘플 내에 존재하는 CD4 항원의 적어도 제 2의 양의 존재를 표시할 수 있는 장치.
  29. 제 28 항에 있어서, 하나 이상의 지지체 물질이 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 제 3 포획 영역을 추가로 포함하는 장치.
  30. 제 29 항에 있어서, 하나 이상의 지지체 물질이 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 제 4 포획 영역을 추가로 포함하는 장치.
  31. 제 30 항에 있어서, 제 3 포획 영역이 샘플 내에 존재하는 CD4 항원의 적어도 제 3의 양의 존재를 표시할 수 있고, 제 4 포획 영역이 샘플 내에 존재하는 CD4 항원의 적어도 제 4의 양의 존재를 표시할 수 있고, 제 3의 양은 제 2의 양보다 많고, 제 4의 양은 제 3의 양보다 많은 장치.
  32. 제 22 항에 있어서, 고정식 조절제를 함유하는 조절 라인을 추가로 포함하는 장치.
  33. 제 22 항에 있어서, 제 1 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 100 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 장치.
  34. 제 28 항에 있어서, 제 2 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 200 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 장치.
  35. 제 31 항에 있어서, 제 3 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 400 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 장치.
  36. 제 35 항에 있어서, 제 4 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 800 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 장치.
  37. 제 22 항에 있어서, 하나 이상의 지지체 물질을 적어도 부분적으로 덮는 하우징을 추가로 포함하는 장치.
  38. 생물학적 샘플을 수용하는 영역;
    목표 분석물과 착물을 형성할 수 있는, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역(여기서 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역과 생물학적 샘플을 수용하는 영역은 분리된 영역, 동일한 영역, 또는 부분적으로 동일한 영역일 수 있음);
    착물과 특이적으로 결합할 수 있는, 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 제 1 포획 영역;
    고정식 포획제를 포함하는 제 2 포획 영역; 및 용해제를 포함하는, 측방향 유동을 제공할 수 있는 하나 이상의 지지체 물질을 포함하는 장치를 제공하는 단계;
    생물학적 샘플을 수용하는 영역 상에 샘플을 놓는 단계; 및
    검출자 리간드에 의해 제공된 가시적 표시기를 사용하여 샘플 내의 목표 분석물의 양과 관련된 정보를 결정하는 단계를 포함하는, 생물학적 샘플 내의 목표 분석물의 양을 결정하는 방법.
  39. 제 38 항에 있어서, 생물학적 샘플이 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역, 제 1 포획 영역 및 제 2 포획 영역을 통해 순차적으로 측방향 유동하도록, 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역, 제 1 포획 영역 및 제 2 포획 영역이 하나 이상의 지지체 물질 내에 배열된 것인 방법.
  40. 제 38 항에 있어서, 목표 분석물이 CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원이고, 포획제가 CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원과 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 포함하는 것인 방법.
  41. 제 38 항에 있어서, 제 1 포획 영역 내에 존재하는 포획제의 소정량이 특정 수준에서 착물과 결합하기에 충분한 것인 방법,
  42. 제 38 항에 있어서, 제 2 포획 영역이 제 2 특정 수준에서 착물과 결합하기에 충분한 소정량의 고정식 포획제를 포함하고, 검출자 리간드가 제 2 포획 영역에서 샘플 내에 존재하는 목표 분석물의 적어도 제 2의 양의 존재를 표시하는 것인 방법.
  43. 제 42 항에 있어서, 하나 이상의 지지체 물질이 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 제 3 포획 영역을 추가로 포함하고, 하나 이상의 지지체 물질이 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 제 4 영역을 추가로 포함하고, 제 3 포획 영역이 샘플 내에 존재하는 목표 분석물의 적어도 제 3의 양의 존재를 표시할 수 있고, 제 4 포획 영역이 샘플 내에 존재하는 목표 분석물의 적어도 제 4의 양의 존재를 표시할 수 있고, 제 3의 양은 제 2의 양보다 많고, 제 4의 양은 제 3의 양보다 많은 것인 방법.
  44. 제 38 항에 있어서, 목표 분석물이 CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원이고, 이동식으로 함유된 검출자 리간드가 CD4 항원과 착물을 형성할 수 있고, 고정식 포획제가 상기 착물과 특이적으로 결합하고, 제 1 영역이 샘플 내의 적어도 약 100 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 것인 방법.
  45. 제 44 항에 있어서, 제 2 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 200 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 것인 방법.
  46. 제 45 항에 있어서, 제 3 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 400 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 것인 방법.
  47. 제 46 항에 있어서, 제 4 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 800 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 것인 방법.
  48. 생물학적 샘플을 수용하는 영역; CD4 림프구 상의 CD4 항원과 착물을 형성할 수 있는, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역(여기서 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역과 생물학적 샘플을 수용하는 영역은 분리된 영역, 동일한 영역, 또는 부분적으로 동일한 영역일 수 있음); 착물과 특이적으로 결합할 수 있는, 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 제 1 포획 영역; 및 고정식 포획제를 포함하는 제 2 포획 영역을 함유하는, 측방향 유동을 제공할 수 있는 하나 이상의 지지체 물질을 포함하는 장치를 제공하는 단계;
    생물학적 샘플을 수용하는 영역 상에 샘플을 놓는 단계; 및
    검출자 리간드에 의해 제공된 가시적 표시기를 사용하여 샘플 내의 CD4 림프구의 양과 관련된 정보를 결정하는 단계를 포함하는, 생물학적 샘플 내의 CD4 림프구의 양을 결정하는 방법.
  49. 제 38 항에 있어서, 생물학적 샘플이 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역, 제 1 포획 영역 및 제 2 포획 영역을 통해 순차적으로 측방향 유동할 수 있도록, 생물학적 샘플을 수용하는 영역, 이동식으로 함유된 검출자 리간드를 포함하는 영역, 제 1 포획 영역 및 제 2 포획 영역이 하나 이상의 지지체 물질 내에 배열된 것인 방법.
  50. 제 38 항에 있어서, 목표 분석물이 CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원이고, 포획제가 CD4 림프구 내에 존재하는 CD4 항원과 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 포함하는 것인 방법.
  51. 제 48 항에 있어서, 제 1 포획 영역 내에 존재하는 포획제의 소정량이 특정 수준에서 착물과 결합하기에 충분한 것인 방법,
  52. 제 48 항에 있어서, 제 2 포획 영역이 제 2 특정 수준에서 착물과 결합하기에 충분한 소정량의 고정식 포획제를 포함하고, 검출자 리간드가 제 2 포획 영역에서 샘플 내에 존재하는 CD 림프구의 적어도 제 2의 양의 존재를 표시하는 것인 방법.
  53. 제 52 항에 있어서, 하나 이상의 지지체 물질이 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 제 3 포획 영역을 추가로 포함하고, 하나 이상의 지지체 물질이 소정량의 고정식 포획제를 포함하는 제 4 영역을 추가로 포함하고, 제 3 포획 영역이 샘플 내에 존재하는 CD 림프구의 적어도 제 3의 양의 존재를 표시할 수 있고, 제 4 포획 영역이 샘플 내에 존재하는 CD 림프구의 적어도 제 4의 양의 존재를 표시할 수 있고, 제 3의 양은 제 2의 양보다 많고, 제 4의 양은 제 3의 양보다 많은 것인 방법.
  54. 제 48 항에 있어서, 제 1 영역이 샘플 내의 적어도 약 100 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 것인 방법.
  55. 제 52 항에 있어서, 제 2 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 200 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 것인 방법.
  56. 제 55 항에 있어서, 제 3 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 400 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 것인 방법.
  57. 제 56 항에 있어서, 제 4 포획 영역이 샘플 내의 적어도 약 800 CD4 세포/㎕의 존재를 표시할 수 있는 것인 방법.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101270512B1 (ko) * 2011-05-27 2013-06-03 아주대학교산학협력단 정량분석이 가능한 측방 유동 검정 스트립
KR101422700B1 (ko) * 2012-11-29 2014-07-28 재단법인대구경북과학기술원 C-반응성 단백질 검출용 합성항체

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8669052B2 (en) * 2008-06-10 2014-03-11 Rapid Pathogen Screening, Inc. Lateral flow nucleic acid detector
US8614101B2 (en) * 2008-05-20 2013-12-24 Rapid Pathogen Screening, Inc. In situ lysis of cells in lateral flow immunoassays
EP2067045B1 (en) * 2006-09-28 2020-08-05 The Macfarlane Burnet Institute for Medical Research and Public Health Limited Method for determining the cd4+ t-cell count and kit therefor
JP2010510525A (ja) * 2006-11-22 2010-04-02 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー 流体の抗体を含有する装置及び方法
US8012761B2 (en) 2006-12-14 2011-09-06 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Detection of formaldehyde in urine samples
US7935538B2 (en) 2006-12-15 2011-05-03 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Indicator immobilization on assay devices
US8377379B2 (en) * 2006-12-15 2013-02-19 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Lateral flow assay device
US7846383B2 (en) 2006-12-15 2010-12-07 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Lateral flow assay device and absorbent article containing same
CN101021526B (zh) * 2007-03-16 2012-01-25 艾博生物医药(杭州)有限公司 一种直观显示检测结果的装置和方法
CN101078724B (zh) * 2007-06-08 2012-01-04 艾博生物医药(杭州)有限公司 一种用于检测被分析物质的检测装置和方法
US20090104630A1 (en) * 2007-10-19 2009-04-23 Reiter Paul C Semi-quantitative immunochromatographic device and method for the determination of HIV/AIDS immune-status via measurement of soluble CD40 ligand/CD 154, A CD4+T cell equivalent
US20090258343A1 (en) * 2007-10-19 2009-10-15 Reiter Paul C Semi-quantitative immunochromatographic device and method for the determination of HIV/AIDS immune-status via measurement of soluble CD40 Ligand/CD154, A CD4+ T cell equivalent and the simultaneous detection of HIV infection via HIV antibody detection
WO2009075894A1 (en) * 2007-12-13 2009-06-18 Beckman Coulter, Inc Device and methods for detecting a target cell
EP2279403B1 (en) * 2008-05-05 2016-03-16 Los Alamos National Security, LLC Highly simplified lateral flow-based nucleic acid sample preparation and passive fluid flow control
US9910036B2 (en) 2008-05-20 2018-03-06 Rapid Pathogen Screening, Inc. Method and device for combined detection of viral and bacterial infections
US8815609B2 (en) 2008-05-20 2014-08-26 Rapid Pathogen Screening, Inc. Multiplanar lateral flow assay with diverting zone
US9068981B2 (en) 2009-12-04 2015-06-30 Rapid Pathogen Screening, Inc. Lateral flow assays with time delayed components
US8609433B2 (en) 2009-12-04 2013-12-17 Rapid Pathogen Screening, Inc. Multiplanar lateral flow assay with sample compressor
US9797898B2 (en) 2008-05-20 2017-10-24 Rapid Pathogen Screening, Inc. Methods and devices for using mucolytic agents including N-acetyl cysteine (NAC)
US20130196310A1 (en) 2008-05-20 2013-08-01 Rapid Pathogen Screening, Inc. Method and Device for Combined Detection of Viral and Bacterial Infections
US8962260B2 (en) 2008-05-20 2015-02-24 Rapid Pathogen Screening, Inc. Method and device for combined detection of viral and bacterial infections
US20110086359A1 (en) * 2008-06-10 2011-04-14 Rapid Pathogen Screening, Inc. Lateral flow assays
EP2313775A4 (en) * 2008-07-15 2012-03-14 Rapid Pathogen Screening Inc LYSE IN SITU OF CELLS IN LATERAL FLOW IMMUNOLOGICAL ANALYSIS
US8900850B2 (en) * 2009-09-17 2014-12-02 Michael J. Lane Lateral flow based methods and assays for rapid and inexpensive diagnostic tests
CN105229468A (zh) * 2013-06-04 2016-01-06 普默特株式社 具有可变对照线的用于快速检测的条带以及使用该条带的诊断试剂盒
US10808287B2 (en) 2015-10-23 2020-10-20 Rapid Pathogen Screening, Inc. Methods and devices for accurate diagnosis of infections
WO2018138139A1 (en) 2017-01-24 2018-08-02 Gentian As Method for assessing cell surface receptors of blood cells

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4703017C1 (en) * 1984-02-14 2001-12-04 Becton Dickinson Co Solid phase assay with visual readout
US5342790A (en) * 1992-10-30 1994-08-30 Becton Dickinson And Company Apparatus for indirect fluorescent assay of blood samples
US5891623A (en) * 1992-11-09 1999-04-06 Consorzio Per Le Biotecnologie Diagnosis and treatment of AIDS onset
WO1996036878A1 (en) * 1995-05-19 1996-11-21 Universal Healthwatch, Inc. Rapid self-contained assay format
US5798273A (en) * 1996-09-25 1998-08-25 Becton Dickinson And Company Direct read lateral flow assay for small analytes
US6924153B1 (en) * 1997-03-06 2005-08-02 Quidel Corporation Quantitative lateral flow assays and devices
US6258548B1 (en) * 1997-06-05 2001-07-10 A-Fem Medical Corporation Single or multiple analyte semi-quantitative/quantitative rapid diagnostic lateral flow test system for large molecules
US6183972B1 (en) * 1998-07-27 2001-02-06 Bayer Corporation Method for the determination of analyte concentration in a lateral flow sandwich immunoassay exhibiting high-dose hook effect
JP2002303629A (ja) * 2001-04-06 2002-10-18 Matsushita Electric Ind Co Ltd 免疫クロマトデバイス及びそれを用いた被検物質測定方法
US20030092090A1 (en) * 2001-11-14 2003-05-15 Kiamars Hajizadeh Rapid prion-detection device, system, and test kit

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101270512B1 (ko) * 2011-05-27 2013-06-03 아주대학교산학협력단 정량분석이 가능한 측방 유동 검정 스트립
KR101422700B1 (ko) * 2012-11-29 2014-07-28 재단법인대구경북과학기술원 C-반응성 단백질 검출용 합성항체

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Publication number Publication date
BRPI0609981A2 (pt) 2010-05-18
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JP2008537145A (ja) 2008-09-11

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