MXPA06000345A - Dispositivo y metodo para realizar simultaneamente determinacion de grupo sanguineo, contraprueba serica y prueba para deteccion de anticuerpos. - Google Patents

Abstract

La invencion se relaciona con un dispositivo para la determinacion simultanea cualitativa o cuantitativa de varios analitos en una muestra liquida, comprendiendo una membrana (2) con una zona (5) de carga para la aplicacion de una muestra liquida, al menos dos zonas de indicador que pueden entrar en reaccion reciproca con el/ los analito (s) y al menos una region (3) de absorcion que absorbe el fluido despues de pasar por la zonas de indicador, siendo que las zonas de indicador se ubican entre la zona (5) de carga y la region (3) de absorcion, caracterizado porque la direccion de flujo (pista de flujo) se extienden esencialmente en sentido paralelo de la zona (5) de aplicacion, pasando por cada zona de indicador de la region (3) de absorcion al menos dos diferentes pistas de flujo estan presentes. La invencion se relaciona ademas con un metodo para determinar varios analitos o derivados de estos en una muestra liquida comprendiendo: la aplicacion de la muestra en la zona (5) de carga de una membrana del dispositivo segun las reivindicaciones 1 a 8 precedentes, siendo que la muestra referida es presente en cantidades suficientes para permitir que la muestra de fluido fluya en la direccion de la region (3) de absorcion a traves de la zona de indicador y para permitir que el analito o derivados de este en la muestra liquida formen un complejo en la zona de indicador.

Description

DISPOSITIVO Y MÉTODO PARA REALIZAR SIMULTÁNEAMENTE DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO, CONTRAPRUEBA SÉRICA Y • PRUEBA PARA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención se relaciona con un dispositivo para pruebas de parámetros múltiples de flujo lateral-diagonal, en particular en los campos de la hematología inmunológica y la serología de infecciones, para la determinación simultánea cualitativa y cuantitativa de varios analitos en una muestra líquida, comprendiendo al una membrana con zona de carga para aplicar la muestra líquida, al menos dos zonas de indicadores que pueden entrar en reacción recíproca con el/los analito(s) y al menos una región de absorción que absorbe el liquido después de pasar la zona de indicadores, siendo que las zonas de indicadores se ubican entre la zona de carga y la zona de absorción, caracterizado porque la dirección de flujo de la zona de carga por las respectivas zonas de indicadores a la zona de absorción (pistas de flujo) son esencialmente paralelas y que existen al menos dos pistas de flujo diferentes. La invención se relaciona, además, con un método para determinar varios analitos en una muestra líquida comprendiendo la aplicación de la muestra en la zona de carga de una membrana del dispositivo inventivo, siendo que esta muestra está pres.enta en un volumen suficiente para hacer que el liquido de muestra fluya en dirección de la región de absorción a través de las zonas de indicador y para hacer que los analitos o sus derivados en el liquido de muestra formen un complejo, en particular para la determinación simultánea de parámetros celulares o plasmáticos, preferentemente para la realización simultánea de la determinación de grupo sanguíneo y contraprueba sérica y/o prueba de detección de anticuerpos, así como para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo y de determinación de marcadores serológicos de infecciones relevantes para transfusiones, así como para la realización simultanea de determinación de grupo sanguíneo y determinación de anticuerpos que actúan contra células sanguíneas diferentes de eritrocitos, en particular anticuerpos de anti-trombocitos y de anti-linfocitos . Con la finalidad de prevenir riesgos de complicaciones, por ejemplo, durante una transfusión, en particular incompatibilidad de grupos sanguíneos, contaminaciones virales y/o bacterianas, se llevan a cabo -como es de conocimiento público'. - varias pruebas de laboratorio en la sangre de donador y paciente para ofrecer componentes que con compatibles con la serología de grupo sanguíneo de recipiente y libres de patógenos transmisibles conocidos. Los respectivos análisis serológicos comprenden usualmente la determinación del grupo sanguíneo en el donador y receptor, en particular de grupos sanguíneos de los sistemas de grupos sanguíneos ABO, Rh y Kell, contraprueba sérica en donador y receptor, así como identificación de anticuerpos en el receptor en caso de presencia de anticuerpos irregulares. La prueba de presencia de anticuerpos contra trombocitos y/o linfocitos se realiza también en el contexto de transfusiones y trasplantaciones . Análisis serológicos de infecciones en el donador comprenden - como se sabe -' la detección rutinaria de anticuerpos particularmente contra HIV-1, HIV-2, contra HVC, contra Treponema pallidum (sífilis) así como la detección del antigen superficial de hepatitis B (=HbsAg: Hepatitis surface Antigen) . En el diagnóstico serológico de grupos sanguíneos se detectan generalmente parámetros que son importantes en particular en relación con transfusiones respectivamente la enfermedad hemolítica del recién nacido (Mhn, por sus siglas en inglés) . Esto se refiere a, entre otros factores, la detección de antígenos en la superficie de los eritrocitos que son característicos para los grupos sanguíneos (determinación de grupos sanguíneos) . Otros sistemas antigénicos importantes se encuentran también en trombocitos, granulocitos, linfocitos, que también tienen un papel en la transfusión y trasplantación. En el caso de incompatibilidad antigénica . de trombocitos y granulocitos entre madre y feto pueden presentarse cuadros clínicos en el recién nacido comparables a Mhn. Se refiere además a la detección de anticuerpos de grupos sanguíneos regulares (isoaglutininas) y a la detección de anticuerpos de grupos sanguíneos irregulares séricos o en plasma. Las isoaglutininas o anticuerpos regulares son adquiridos tempranamente después del nacimiento por todos los humanos y corresponden al respectivo grupo sanguíneo del sistema ABO. Son dirigidos contra aquellos antígenos de grupo sanguíneo A respectivamente B que le faltan al individuo mismo, es decir, personas con el grupo sanguíneo A tienen isoaglutininas tipo anti-B, personas con el grupo sanguíneo B las tienen del tipo anti-A, personas con grupo sanguíneo 0 del tipo anti-A y anti-B; personas con grupo sanguíneo AB no tienen ningunas, Los anticuerpos regulares se denominan también "completos" porque pueden aglutinar los eritrocitos directamente en el ambiente NaCl. Los anticuerpos irregulares o aloanticuerpos son adquiridos, a diferencia de las isoaglutininas, mediante inmunización posterior, sobre todo por transfusión o embarazo. Por esta razón, la mayoría de los humanos no tienen anticuerpos de grupos sanguíneos irregulares. Los anticuerpos irregulares relevantes para las transfusiones son generalmente termorreactivos y pertenecen, en su mayor parte, a la clase IgG. A diferencia de los anticuerpos regulares no son capaces dé-., aglutinar eritrocitos en el ambiente NaCl. Como se sabe, se juntan para la determinación de grupos sanguíneos los eritrocitos de las personas que deben someterse al análisis (donador o receptor) con reactivos que contienen anticuerpos específicos de grupos sanguíneos. Usualmente son análisis de líquidos en que se produce una carga de análisis mediante mezcla de una muestra conteniendo eritrocitos que son dirigidos contra una característica determinada de grupo sanguíneo. La carga de análisis se incuba entonces durante un período de tiempo definido y se verifica en una etapa de centrífuga definida o bien en forma visual o con métodos ópticos respecto a la presencia de aglutinaciones eventuales o la adsorción de eritrocitos. La medición de punto final predominante en la serología de grupos sanguíneos sigue- siendo la hemaglutinación. Para cada grupo sanguíneo, que debe ser determinado, se tiene pipetear una preparación separada, es decir, la determinación - por ejemplo - de los 9 grupos sanguíneos más importantes, A, B, D, C, c, E, C y K, requiere - sin control - de 9 preparaciones separadas. Para la contraprueba sérica se emplean, conocidamente, reactivos celulares con grupo sanguíneo ABO conocido (Al, A2, B, 0) que son incubados con el suero o plasma de la persona por analizar. Después de una etapa de centrifugación se verifica de modo visual o con métodos ópticos la presencia de una aglutinación eventual de los eritrocitos . Para una contraprueba sérica con las 4 células de análisis mencionadas, deben pipetearse usualmente 4 preparaciones . Para la detección de anticuerpos irregulares, se usan - como se sabe - paneles consistiendo de 2 o 3 células del grupo sanguíneo 0 cuyo perfil de antigenos combinado comprende los antigenos más importantes, en particular de los sistemas de grupo sanguíneo Rh, Kell, Duffy, Kidd, MNS, P, Lewis, Lutheran. El reactivo celular es puesto en contacto con el suero o plasma de la persona que debe someterse a análisis, se incuba y se verifica, después de una etapa de centrifugación, en forma visual o con métodos ópticos respecto a la eventual presencia de aglutinaciones de eritrocitos. Para el examen de un análisis por paciente se requiere pipetear 2 a 3 preparaciones. Para la identificación de anticuerpos irregulares, que se realiza usualmente después de un examen positivo de anticuerpos, '-se usan paneles consistiendo de hasta 16 células del grupo sanguíneo 0 cuyos perfiles antigénicos cubren los antígenos más importantes, en particular los sistemas de grupos sanguíneos Rh, Kell, Duffy, Kidd, MNS, Pr Lewis, Lutheran de manera precisamente coordinada. El reactivo, celular es puesto en contacto con el suero o plasma de la persona que debe someterse a análisis, se incuba y se. verifica visualmente o con métodos ópticos respecto a la eventual . presencia de aglutinaciones de los eritrocitos. Para la verificación de una muestra de paciente se deben pipetear hasta 16 preparaciones. Como la mayoría de los anticuerpos irregulares relevantes para transfusiones son del tipo IgG y, por lo tanto, incompletos, es normalmente necesario reforzar las reacciones descritas, para la búsqueda e identificación de anticuerpos, para poder determinar el punto final de la hemaglutinación . El reactivo más usual para esto es un reactivo de anticuerpo de anti-globulina humana, al que se adiciona frecuentemente un anticuerpo de anti-complemento (típicamente anti-C3d y/o anti-C3b) . ün método usual para la comprobación de anticuerpos de trombocitos es la así llamada prueba de MAIPA (Monoclonal Antibody · Immobilisation of Platelet Antigens - inmovilización de antígenos de plaquetarios con anticuerpos monoclonales, por sus siglas en inglés) . Para esto se incuban trombocitos de ensayo con el suero por analizar. Después de una etapa de lavado se incuba con un anticuerpo monoclonal, por ejemplo de ratón, que es específico para una glicoproteína de trombocito determinada. A continuación, los trombocitos son lisados y el lisado diluido es pyesto en un vaso reactivo de una placa de microtiter revestido con anticuerpos, por ejemplo de cabra contra ratón. El anticuerpo de cabra contra ratón liga el anticuerpo de ratón y" el complejo anticuerpo humano de glicoproteína de trombocitos que se encuentra en él. El anticuerpo humano es detectado mediante la adición de una enzima anti-IgG humano conjugada de cabra. Con los análisis diagnósticos convencionales sólo pueden determinarse parámetros celulares o de plasma. Para determinar compuestos sanguíneos tienen que separarse, por principio, primeramente las células y el plasma. Ensayos de flujo lateral se emplean hoy en día frecuentemente como análisis rápidos, por ejemplo como prueba de embarazo, para detectar marcadores de infecciones o como filtro de drogas. Un arreglo de análisis de flujo lateral consiste, como se sabe, de un portador sólido en que encuentra una zona de carga para la muestra por analizar, un membrana de separación en que están ligados unos elementos de liga, por ejemplo, anticuerpos respectivamente antígenos captores y en que pueden comprobarse reacciones de liga, y una región de absorción con capacidad de absorber que permite el flujo lineal de la muestra por analizar a través de la membrana de separación. Membranas de análisis para análisis de flujo lateral convencionales se describen usualmente con una separación similar a la cromatografía. El analito en la muestra liga específicamente a un elemento de liga fijado en la membrana, siendo que éstos se encuentran usualmente en bandas dispuestas una tras otra respectivamente encima una de la otra como zona- de indicador. El complejo de liga es visualizado mediante partículas . indicadoras que normalmente están ya presentes en el arreglo en forma secada en una almohadilla de liberación de conjugado. La almohadilla de liberación de conjugado se ubica entre la zona de carga y la membrana. Las partículas indicadoras de color previamente revestidas están revestidas, por ejemplo, con un anticuerpo dirigido contra el analito buscado. El formato de análisis de flujo lateral usual tiene la forma de una así llamado "patrón de sándwich" en que tanto la zona de indicador como también las partículas indicadoras están cargadas con ligandos dirigidos contre el analito buscado, normalmente unos anticuerpos. El ligando (elemento de liga) está, sujetado normalmente en forma inmóvil en la membrana. El reactivo de detección, normalmente un anticuerpo que es ligado con una partícula teñida de poliestirol o a metales coloidales, es depositado en forma lavable en la almohadilla de liberación de conjugado. Este complejo de liga sirve como partícula indicadora. La aplicación de la muestra por analizar huiriidifica muy rápidamente la almohadilla de liberación de conjugado, lo que moviliza las partículas indicadoras. Las partículas indicadoras emigran con el frente de líquido a lo largo de la membrana porosa, ün analito que se encuentra en la muestra es ligado por el anticuerpo que es acoplado a la partícula indicadora. .Cuando la muestra pasa por la zona de indicador, el complejo de analito/partícula indicadora es inmovilizada en la zona de indicador mediante reacción del analito con el anticuerpo ligado en la zona de indicador, lo que produce una señal visible. Otro formato de examen conocido para analitos pequeños que tienen sólo un determinante antigénico único, que no puede ligar simultáneamente dos anticuerpos, es el así llamado "análisis competitivo". El reactivo detector ligado a la partícula indicadora es normalmente una molécula idéntica o análoga al analito. Las partículas indicadoras se encuentran depositadas en la almohadilla de liberación de conjugado. Las partículas indicadoras migran junto con el frente de líquido a lo largo de la membrana porosa. Cuando la muestra -conteniendo el analito y las partículas indicadoras (que efectivamente contienen también el analito) pasan por la zona de indicador, una parte de las moléculas de analito liga con la muestra y una parte con las partículas indicadoras . Tanto mayor cantidad de analito se encuentra en la muestra, tanto más efectivamente competirá éste con la unión de las partículas indicadoras, tanto más débil se vuelve la señal. Como se sabe, estas partículas indicadoras son en su mayor parte de oro coloidal o de poliestirol, que son producidos' y revestidos con métodos conocidos para el perito. En los formatos típicos de análisis de flujo lateral, los analitos se detectan de manera indirecta. Por detección directa de un analito se entiende aquí que el analito es ligado ya en forma natural en la partícula indicadora (por ejemplo, un eritrocito) . En el caso más usual de la detección indirecta del analito, la muestra por analizar contiene usualmente un componente no ligado en forma celular, por ejemplo -plasmática, como analito y se requieren, adicionalmente a la muestra por analizar, dos componentes reactivos y a saber una partícula indicadora y un elemento de liga. En la detección indirecta, el analito liga primeramente con la partícula indicadora liberada de la almohadilla de liberación de conjugado, antes de que este complejo sea inmovilizado mediante una segunda reacción con el elemento de liga en las zonas de indicador. Cuando se usan análisis de flujo lateral convencionales con eritrocitos como partículas indicadoras que han ligado los analitos por detectar, por ejemplo antígenos específicos de grupos sanguíneos, entonces se disponen hasta ahora · los anticuerpos contra los antígenos de grupos sanguíneos correspondientes en las zonas de indicador como elementos de liga en bandas una tras otra respectivamente una encima de la otra, tal como por ejemplo anti-A, anti-B contra antígenos de grupos sanguíneos A respectivamente B o anticuerpos contra antígenos del sistema de grupos sanguíneos' Rh. Análisis de flujo lateral convencionales tienen para esto la desventaja de que los eritrocitos ligados por los anticuerpos forman, en un análisis, una barrera al- flujo de los analitos que todavía tienen que analizarse, por ejemplo respecto a otros antígenos asociados a células. Debido a la aglutinación o adsorción de células en una banda de elementos de liga que tiene una ubicación proximal con relación a la zona de carga, no es posible que los demás analitos, en particular células respectivamente fragmentos de células en la muestra por analizar sigan su separación sin inhibición y visiblemente y a consecuencia no pueden detectarse de manera unívoca respectivamente completa. Esto puede tener la consecuencia, por ejemplo, en el caso de una persona que es de grupo sanguíneo AB Rh D positivo, que se debilite respectivamente elimine la banda B y D, lo que podría producir una interpretación errónea en el sentido de grupo sanguíneo A Rh negativo. Por lo tanto no ha sido posible, hasta ahora, usar el análisis de flujo lateral, especialmente en el diagnóstico serológico de grupos sanguíneos, que tengan más de una zona de indicador. Para la medición de varios parámetros de grupos sanguíneos, en particular de naturaleza celular o plasmática, es necesario, hasta ahora, llevar a cabo análisis de parámetros individuales por separado. El objetivo de la invención es superar las desventajas mencionadas, con relación a. la tecnología previa, en particular aquellas, de los análisis de zonas de indicador respectivamente., detección ubicadas' una tras otra respectivamente una encima de la otra de los análisis de flujo lateral convencionales, para la medición simultánea de diferentes parámetros de muestra, en particular de parámetros celulares y plasmáticos. El objetivo se logra inventivamente mediante un dispositivo para la determinación cualitativa y cuantitativa simultánea de uno o varios analitos en una muestra líquida o en varias muestras líquidas, que comprende al menos una membrana con una zona de carga para aplicar la muestra líquida, al menos un grupo con al menos dos zonas de indicador que pueden entrar en reacción recíproca con los analitos .y. una región de absorción que absorbe el líquido después de pasar por las zonas de indicador, siendo que las zonas de indicador se ubican entre la zona de carga y la región de absorción, caracterizado porque la dirección de flujo de la zona de carga, a través de las respectivas zonas de indicador de un grupo a una región de absorción que representan pistas de flujo es esencialmente paralela y porque existen al menos dos pistas de flujo diferentes. Las zonas de indicador del dispositivo inventivo se ubican en la membrana y comprenden elementos de liga que interceptan respectivamente ligan los analitos en la muestra que deben ser detectados. En las zonas de indicador se detectan las reacciones de. liga entre analito y elemento de liga. Como elementos de liga particularmente preferidos se aplican en la membrana porosa anticuerpos respectivamente fragmentos de anticuerpos, lectinas, antigenos respectivamente epitopos de antigenos y/o células respectivamente fragmentos · .de células. Las zonas de indicador comprenden, preferentemente, en cada caso un elemento de liga para un analito por analizar. En una modalidad de la invención, las zonas de indicador están dispuestas de manera tal que el liquido de muestra por pista de flujo no pasa por más que una zona de indicador. A guisa de ejemplo, las zonas de indicador están dispuestas en la membrana en forma desplazada. El arreglo de las zonas de indicador se configura, en esto, preferentemente extendiéndose en diagonal en una hilera de proximal a distal o en sentido inverso. Modalidades especiales tienen forma de v, W, M o N, o en sentido inverso de V, W, M o N. En otra modalidad, las zonas de indicador están dispuestas en una hilera lineal paralelamente desplazada una junto a la otra. La introducción de zonas de indicador desplazadas es lo que primeramente permite un análisis de parámetros múltiples con eritrocitos como partículas indicadoras. La modalidad particularmente preferida de una disposición en diagonal tiene la ventaja de que la designación de los resultados puede aplicarse en el arreglo inventivo en forma particularmente práctica y .dé . fácil lectura, ya que cada uno de los parámetros que . debe determinarse tiene una posición X e Y definida, si se considera el arreglo del dispositivo inventivo como un sistema de coordenadas con ordenada (plano de la dirección de flujo) y abscisa (plano de la zona de carga) . En otra modalidad de la invención, más de una hilera así de zonas de indicador se encuentran dispuestas, preferentemente en cada caso de proximal a distal o en sentido inverso, con orientación diagonal o, por ejemplo, también en forma de V, W, M o N o de V, W, M o N invertida, una atrás de otra en dirección de flujo y/o desplazadas lateralmente y las zonas de indicador de las diferentes hileras están dispuestas entre sí para coincidir con intersticios, de manera que el líquido de análisis de cada pista de flujo no pasa por más de una zona de indicador, o dispuestos entre si para no coincidir con intersticios, de manera que el liquido de análisis pasa por pista de flujo por más de una zona de indicador. Más de una zona asi. de indicador, por ejemplo dos hileras de zonas de indicador con distancia diferente a la zona de carga, son ventajosas en particular si se deben determinar, de una muestra de sangre completa, parámetros celulares y plasmáticos. En una modalidad, a guisa de ejemplo en una carga de. análisis con sangre completa como muestra, se seleccionan los elementos de liga de manera tal que los analitos contenidos en el plasma, por ejemplo cualquier tipo de anticuerpos que fluyen por el" dispositivo desde la zona de carga a la región de absorción a través de las zonas de indicador, .ligan en la hilera de zonas de indicador dispuesta en posición proximal con relación a la zona de carga. Los elementos de liga para detectar los analitos ligados en forma celular, por ejemplo antigenos de eritrocitos, en cambio son seleccionados de manera tal, éstos ligan a los elementos de liga en la hilera de zonas de indicador dispuesta en ubicación distal con relación a la zona de carga. En esta modalidad preferida se trabaja preferentemente con otro tipo de partículas indicadores en adición a los eritrocitos, preferentemente de oro coloidal o poliestirol o eritrocitos fijados. Estas partículas de indicador se emplean en particular para hacer visibles analitos no ligados a eritrocitos, por ejemplo anticuerpos que se encuentran libremente en el plasma, en el complejo de liga en una zona de indicador. Si se usan, por ejemplo dos tipos de partículas indicadoras, de las que uno no son eritrocitos, entonces las .zónas de indicador no pueden estar dispuestas entre sí no en forma que coincidan con intersticio, respectivamente, en una pista de flujo una tras otra. En este caso es ventajosa la disposición en que los analitos detectados en el plasma son detectados en las zonas de indicador proximales y en que los analitos ligados con eritrocitos son detectados en las zonas de indicador distales. Una modalidad ce la invención comprendiendo más de una hilera de zonas dé indicador, tal como se describe en lo precedente, en que reaccionan respectivamente ligan los elementos de liga de cada hilera con eritrocitos como partículas indicadoras, las hileras de zonas de indicador están dispuestas entre sí para coincidir con intersticios, respectivamente una tras otra en una pista de flujo. (1) En una modalidad adicional y particularmente preferida de la invención, más que una hilera así de zonas de indicador están dispuestas, preferentemente en una hilera que se extiende de proximal a distal o en sentido inverso con orientación diagonal o, por ejemplo, en forma de V, , M o N o V, W, o N invertida, o por ejemplo también de extensión paralela desplazadas una junto a la otra, en ambas direcciones (por ejemplo con un ángulo de 180°) con relación a una zona de carga central. Semejante arreglo es ventajoso sobre todo cuando se deben determinar de una muestra de sangre completa parámetros celulares y plasmáticos. En una modalidad, por ejemplo una carga de análisis con sangre completa como muestra, los elementos de liga se seleccionan de manera tal que los analitos contenidos en el plasma, por ejemplo todo tipo de anticuerpos que fluyen a través del dispositivo de la zona de carga a la región de absorción a través - de la zona de indicador, ligan a los elementos de liga en un lado de la hilera dispuesta proximal con relación a la zona de carga. Los elementos de liga para comprobar los analitos ligados en forma celular, por ejemplo antigenos de eritrocitos, a cambio son seleccionados de manera tal que éstos ligan a los elementos de liga en la hilera de zonas de indicador dispuesta en el lado opuesto con relación a la zona de carga. En esta modalidad preferida se -trabaja preferentemente con otro tipo de partículas indicadoras adicional a los eritrocitos, preferentemente oro coloidal o poliestirol. Estas partículas indicadoras se emplean en particular para hacer visibles analitos no ligados a eritrocitos, por ejemplo anticuerpos que se encuentran libremente en el plasma, en el complejo de liga en una zona de indicador. ' · En . una modalidad preferida, la zona de carga comprende además dos membranas diferentes con porosidad diferente. En esta modalidad preferida se trabaja preferentemente con otro tipo de partículas indicadores en adición a los eritrocitos, preferentemente de oro coloidal o poliestirol o eritrocitos fijados. Estas partículas de indicador se emplean en particular para hacer visibles analitos no ligados a eritrocitos, por ejemplo anticuerpos que se encuentran libremente en el plasma, en el complejo de liga en una zona de indicador. En una modalidad particularmente preferida, la zona de carga comprende una membrana o dos membranas diferentes de porosidad diferente y una almohadilla de conjugado. En esta modalidad preferida, se trabaja preferentemente con otro tipo de partículas indicadores en adición a los eritrocitos, preferentemente de oro coloidal o poliestirol o eritrocitos fijados. Estas partículas de indicador se emplean en particular para hacer visibles analitos no ligados a eritrocitos, por ejemplo anticuerpos que se encuentran libremente ' en el plasma, en el complejo de liga en una zona de indicador. Este tipo de partículas indicadoras, empleadas en adición a los eritrocitos, se ubica preferentemente en forma secada en la almohadilla de conjugado. La almohadilla de conjugado tiene además el efecto de retardar el flujo de los eritrocitos. Esto tiene la consecuencia de que, en el caso de la disposición bidireccional con una única zona de carga común se ofrecen in una dirección condiciones optimizadas para la detección de propiedades celulares y en la otra condiciones optimizadas para la detección de propiedades plasmáticas. Con el dispositivo inventivo se ofrece un análisis de flujo lateral, en particular para el diagnóstico serológico de grupos sanguíneos que emplea eritrocitos como partículas indicadoras y que permite detectar en una sola carga de análisis simultáneamente varios parámetros celulares, en particular antígenos de eritrocitos respectivamente epitopos antigénicos, parámetros plasmáticos . y/o propiedades de células sanguíneas, en particular de componentes de sangre completa, para cada muestra .por analizar. Además se ofrece un sistema de análisis, fácil de producir y económico, en particular de manejo sencillo con pocas series de ensayos y sin preparación de muestras, que permite determinar simultáneamente ' diferentes parámetros celulares y/o parámetros plasmáticos de una muestra o de varias muestras por analizar. Estas ventajas, las ofrece el dispositivo inventivo en cualquier campo de diagnóstico médico en que se deben determinar simultáneamente diferentes parámetros celulares y parámetros plasmáticos, en particular también en el campo de la serologia de grupos sanguíneos y de infecciones, en particular cualquier diagnóstico en el marco de la medicina de transfusión, por ejemplo para la realización simultánea de determinación de grupos sanguíneos, siendo que se detectan en particular antígenos ligados a eritrocitos respectivamente epitopos de antígenos y contrapruebas séricas., ..siendo que se detectan en particular anticuerpos regulares (isoaglutininas ) , y/o análisis de detección de anticuerpos, siendo que se determinan en particular anticuerpos irregulares, así como para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo y la determinación de marcadores de serologia de infecciones relevantes para la transfusión, a guisa de ejemplo anticuerpos cont s HTV-1, HIV-2, HCV, · treponema pallidum, así como el antígeno superficial del virus de hepatitis B (HbsAb) , así como para la realización simultánea de determinación de grupos sanguíneos y la determinación de anticuerpos contra otras células sanguíneas diferentes de eritrocitos, en particular anticuerpos de anti-trombocitos y anti-linfocitos . Para lo anterior puede usarse sangre completa anticoagulada o nativa en que no es necesario antes del análisis separar de manera complicada los eritrocitos y fracciones de suero respectivamente plasma. La determinación puede realizarse en forma manual que es completamente autosuficiente sin equipo (incluyendo corriente eléctrica) . En una modalidad preferida del dispositivo inventivo, las zonas de indicador comprenden -preferentemente en una hilera de zonas de indicador dispuestas en sentido distal con relación a la zona de carga - que interceptan respectivamente ligan los antigenos de grupos sanguíneos por detectar de todos los sistemas de grupos sanguíneos imaginables y con esto las células que las portan. Como elementos de liga preferidos se aplican anticuerpos respectivamente fragmentos de' anticuerpos respectivamente lectinas contra antígenos o epitopos de antígenos, en particular de los sisteias de grupos sanguíneos ABO, Rh, Kell, a guisa de ejemplo anti-A, anti-B, anti-D y anti-K, en ¦ las zonas de indicador en la membrana porosa, preferentemente en una hilera dispuesta en sentido distal con relación a las otras hileras de zonas de indicador. Preferentemente se coloca en uná zona de indicador de esta hilera de zonas de indicador, preferentemente en una zona de indicador ubicada en posición distal con relación a todas las demás zonas de indicador de esta hilera, un elemento de liga de control (control = ctl) , que indica de modo positivo el paso de la muestra por las zonas de indicador. El elemento de liga de control es preferentemente u ' anticuerpo de anti-eritrocito policlonal. Esta modalidad preferida del dispositivo inventivo comprende en una hilera de zonas de indicador adicional, dispuesta preferentemente proximal con relación a la zona de carga, antigenos respectivamente epitopos de antigenos que interceptan respectivamente ligan anticuerpos regulares en la muestra. Como elementos de liga preferentes se aplican para esto en la membrana porosa antigenos respectivamente epitopos de antígenos de grupos sanguíneos Al, A2, B, 0, por ejemplo membranas de eritrocitos de grupos sanguíneos definidos por eritrocitos (Al, A2, B, 0) o sustancias de grupos sanguíneos producidos sintéticamente. Preferentemente se aplican en una zona de' indicador de esta hilera de zonas de indicador, preferentemente en un zona, de indicador de ubicación distal con relación con todas las demás zonas de indicador, un elemento de liga de control (control = ctl) , que indica positivamente el paso de la muestra por las zonas de indicador. El elemento de liga de control es preferentemente un anticuerpo anti-IgG. Esta modalidad preferida del dispositivo inventivo puede interceptar respectivamente comprender, en una hilera de zonas de indicador adicional, preferentemente de disposición distal con relación a la zona de carga, unos antígenos respectivamente , epitopos de antigenos que interceptan respectivamente ligan anticuerpos irregulares en la muestra, respectivamente fragmentos de éstos. Como elementos de liga preferidos se colocan en la membrana porosa para esto las membranas celulares de diferentes preparaciones de eritrocitos del grupo sanguíneo 0 cuyo perfil antigénico combinado cubre aquellos antígenos que son dirigidos contra los anticuerpos irregulares más importantes relevantes para la transfusión. Preferentemente se aplican en una zona de indicador de esta hilera de zonas de indicador, preferentemente en una zona de indicador de ubicación distal con relación con todas las demás zonas de indicador, un elemento de liga de control (control = ctl) , que indica positivamente el paso de la muestra por las zonas de indicador. El elemento de liga de control es preferentemente un anticuerpo anti-IgG. En otra modalidad preferida del dispositivo inventivo, las zonas de indicador comprenden, preferentemente en una hilera de zonas de indicador con ubicación distal con relación con la zona de carga, unos anticuerpos respectivamente fragmentos de anticuerpos respectivamente lectinas que interceptan respectivamente ligan los antígenos de grupo sanguíneo por determinar y con esto las células que los portan.. Como elementos de liga preferidos se aplican anticuerpos respectivamente fragmentos de anticuerpos respectivamente lectinas contra antigenos o epitopos .de . antigenos del sistema de grupos sanguíneos ABO, a guisa, de ejemplo anti-A, anti-B, anti-A y anti-B, en las zonas de indicador de la membrana porosa, preferentemente en una hilera dispuesta en ubicación distal con relación a la zona de carga y las otras hileras de zonas de indicador. Preferentemente se aplican en una zona de indicador de esta hilera de zonas de indicador, preferentemente en una zona de indicador de ubicación distal con relación con todas las demás zonas de indicador, un elemento de liga de control (control = ctl) , que indica positivamente el paso de la muestra por las zonas de indicador. El elemento de liga de control es preferentemente un anticuerpo anti-eritrocito policlonal. Esta modalidad preferida del dispositivo inventivo comprende en una hilera de zonas de indicador adicional, preferentemente en ubicación proximal con relación a la zona de carga, unas membranas de trombocitos y/o linfocitos respectivamente componentes de membrana como elementos de liga para detectar anticuerpos de anti-trombocitos/linfocitos . En cuanto a la técnica de producción, la construcción de flujo lateral-diagonal tiene ventajas esenciales con relación a la tecnología previa, siendo que se tiene un consumo considerablemente menor de reactivos usados y gracias al ofrecimiento en un sólo dispositivo de una multiplicidad de ..parámetros de análisis que, hasta ahora, debían ser analizados por separado.. Gracias al dispositivo inventivo se ofrece un análisis de flujo lateral, en particular para el diagnóstico inmunohematológico y serológico de infecciones que permite detectar, para cada muestra por analizar, en una carga de análisis simultáneamente varios parámetros celulares, en particular antígenos de eritrocitos respectivamente epitopos de antígenos, plasmáticos ¦ y/o propiedades de sangre, en particular de componentes de sangre completa, siendo que se usan al menos dos tipos de partículas indicadoras de las que al menos un tipo es de eritrocitos. Adicional ente, se ofrece de esta manera un sistema de análisis que es fácil de producir y económico y de manejo sencillo, particularmente con pocas series de. ensayos y sin preparación de muestras, que permite la determinación simultánea de diferentes parámetros celulares y/o parámetros plasmáticos de una muestra, en particular también características de grupos sanguíneos la detección de anticuerpos regulares e irregulares, anticuerpos contra trombocitos y/o linfocitos y/o marcadores serológicos de infecciones, en particular aquellos de relevancia para la medicina de transfusiones. La membrana del dispositivo inventivo es una membrana porosa. Materiales . preferidos pára la membrana son, por ejemplo, nitr.ocelulcsa (por ejemplo UniSart de Sartorius, HiFlow .de .' .Millipore, Whatman, AE99 respectivamente FF85/100 de Schleicher & Schuell) , polietileno {Lateral Fio de Porex Corporation) o Nylon {Novylon de CUNO) . Preferentemente, la membrana tiene un tamaño de poros tan alta como sea posible, ya que una alta porosidad de la membrana facilita la penetración en la estructura porosa, en particular, de componentes celulares de la muestra por analizar, por ejemplo de eritrocitos. Particularmente ventajoso es el uso de membranas absorbentes. El dispositivo inventivo, sin embargo,- no está restringido a estas características. Se prefieren todas las membranas que tengan una alta tasa de flujo capilar (Capillary Speed) , siendo que la tasa de flujo capilar es el tiempo que una solución de teñido requiere para avanzar 40 mm en una membrana determinada. Se prefieren en particular membranas con üna tasa de flujo capilar < 100. En la modalidad bidireccional, con dos membranas diferentes, una de las membranas tiene preferentemente una alta tasa de flujo capilar, preferentemente < 100, la otra membrana preferentemente una tasa de flujo capilar menor, preferentemente > 100.

En una modalidad preferida de la invención, en dirección de flujo detrás de la zona de carga del dispositivo inventivo, se encuentra un elemento de obturación dispuesto en la..membrana poro'sa. Se aplican elementos de obturación de bi o tridimensionales que se colocan sobra la membrana porosa y con los cuales se genera una zona de carga de muestra separada del resto de la superficie de la membrana porosa. El elemento de obturación tiene, inventivamente, en primer lugar el efecto de una barrera de liquido y permite la distribución dirigida del liquido de muestra y de los reactivos de análisis en la membrana porosa. Además, el elemento de obturación sella inventivamente la zona de aplicación de muestra para impedir un paso indeseable de liquido a las otras áreas del arreglo de dispositivo de flujo lateral. Modalidades preferidas del elemento de obturación tienen forma de nervio, de tina respectivamente de embudo. La conformación del elemento de obturación se realiza mediante procesos de corte del material empleado para la producción del elemento de obturación. En el caso de la forma de embudo o de tina, el elemento de obturación comprende una abertura interna cuyas variantes preferidas de modalidades son formas redondas, cuadradas o rectangulares, en el caso de forma de embudo, disminuyendo hacia el lado inferior (lado de contacto de la membrana) del elemento de obturación. Materiales preferidos para el elemento de obturación son materiales que no absorben el agua (hidrofóbreos) . En una modalidad particular los materiales están revestidos unilateralmente con una película adhesiva, por ejemplo un adhesivo, de ' acrilato sensible a presión respectivamente autoadherente. De esta manera, el elemento de obturación puede pegarse directamente sobre la superficie de la membrana porosa. Como alternativa, el elemento de obturación puede unirse con la caja de flujo lateral, por ejemplo, pegado, siendo que en esta modalidad la caja de flujo lateral presiona el elemento de obturación sobre la superficie de la membrana porosa, estableciéndose de esta manera el funcionamiento del elemento de obturación. Materiales preferidos para la conformación de elementos de obturación bidimensionales son cualquier forma de cintas adhesivas u hojas adhesivas (por ejemplo, Tesa 4124 de Beiersdorf AG, ARcare 7815 de Adhesive Research) . Materiales preferidos para la conformación de elementos de obturación tridimensionales sor materiales de elastómeros flexibles con poros cerrados o materiales de silicón flexibles con diferentes espesores de material, preferentemente 3-5 mm (por ejemplo, caucho celular EPDM140 de Pitzner, caucho de silicón o caucho entero, dureza 40° o menos, de Castan) . Gracias a este acondicionamiento inventivo, el dispositivo inventivo puede recibir muestras liquidas conteniendo células, como por ejemplo sangre completa, sin separar las células en el procedimiento. Además, el elemento de obturación permite la aplicación de grandes volúmenes de muestra en la .membrana porosa (zona de carga) sin que ésta se inunde. El elemento de obturación ayuda de esta manera el aprovechamiento de las propiedades absorbentes de la membrana porosa. Además, el elemento de obturación garantiza un flujo dirigido de muestra. El dispositivo inventivo puede, sin embargo, funcionar bien con o sin elemento de obturación. Para la región de absorción (almohadilla de absorción) del dispositivo inventivo se prefieren materiales mecánicamente estables, preferentemente con capacidades de absorción de agua de 20-30g/100cm2 (por ejemplo papel Wicking, tipo 300, Schleicher und Schüll) . El contacto entre la almohadilla de absorción y la membrana de flujo . lateral - del dispositivo inventivo es producido mediante contacto a presión o solape con la membrana porosa. La colocación precisa de la almohadilla de absorción en la membrana se logra mediante pegado de la almohadilla de absorción con la capa portadora que porta la membrana de flujo lateral (backing sheet) .

La almohadilla . de conjugado consiste preferentemente de fibra de vidrio o. celulosa y tiene, preferentemente, la propiedad de retrasar el flujo de eritrocitos nativos. En otra modalidad, los componentes del dispositivo inventivo están fijados en. un soporte respectivamente una capa portadora con la finalidad de proveer un refuerzo mecánico, , -Paro el dispositivo inventivo puede funcionar con o sin capa portadora. Se prefieren materiales mecánicamente estables y que no absorben agua, preferentemente con espesores de material de 100 µp? o más, que están revestidos en una o ambas caras con una película de adherente, por ejemplo un adhesivo de acrilato sensible a presión respectivamente autoadherente (por ejemplo, 0.005" poliéster W/ GL-187, G & L). En la capa portadora se fijan la membrana porosa y la ' almohadilla de absorción. En el caso de una capa portadora adherente en ambas caras, la segunda cara adherente es empleada para fijar el arreglo en otras superficies, por ejemplo en el interior de la caja de flujo lateral. En otra modalidad, el dispositivo inventivo está integrado con o sin capa portadora, en que se encuentran fijados los componentes del dispositivo inventivo, en una caja, lo que prensa los componentes de la membrana el uno contra el otro y la caja apoya, de esta manera, la función de elemento de obturación. El dispositivo inventivo puede funcionar, sin embargo, igual de bien con o sin caja. Otro objeto de la invención es el uso del dispositivo inventivo para el análisis de sangre, en particular para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo y contraprueba sérica y/o prueba de detección de anticuerpos y/o para la realización simultánea de la determinación de grupos sanguíneos y de la detección de anticuerpos contra agentes infecciosos, en particular bacterianos y/o virales respectivamente fragmentos de éstos o de antígenos de agentes infecciosos y/o para la realización simultánea de determinación de grupos sanguíneos y de la detección de anticuerpos contra otras células sanguíneas, diferentes de eritrocitos, en particular anticuerpos de anti-trombocitos o anti-linfocitos, respectivamente fragmentos de éstos. El objetivo se logra, por otro lado, mediante un método para la determinación de varios analitos o de sus derivados en una muestra líquida que comprende la aplicación de la muestra en la zona de carga de una membrana del dispositivo inventivo, siendo que esta muestra está presenta en un volumen suficiente para hacer que el líquido de muestra fluya en dirección de la región de absorción a través de las zonas de indicador y para hacer que los analitos o sus derivados en el líquido de muestra se liguen con las respectivas zonas de indicador respectivamente formen un complejo en las zonas de indicador. Una modalidad particular del método inventivo realiza simultáneamente una determinación de grupo sanguíneo y una contraprueba sérica y/o una prueba de detección de anticuerpos. A guisa de ejemplo se aplica sangre completa o una dilución de ésta en la zona de carga del dispositivo. Todos los componentes penetran en la membrana porosa, guiados por el elemento de obturación, y pasan durante la migración hacia la almohadilla de absorción primeramente por la región de indicador para la contraprueba sérica, que comprende fragmentos de las células Al, ?2, B, 0 así como la zona de indicador de control con anti-IgG/IgM. La isoaglutinina presente en el suero liga con los antígenos ligados en las células correspondientes. IgG sérico liga con el elemento de liga de control (contraprueba sérica: sensibilización) . Los antígenos ligados en células continúan su migración hacia la región de zonas de indicador para la determinación de grupo sanguíneo de ubicación distal con relación a la región de zonas de indicador, siendo que en cada zona de indicador e encuentra inmovilizado un anticuerpo contra otra característica de grupo sanguíneo (por ejemplo, anti-A, anti-B, anti-AB) . La zona de Indicador más distal con relación a la zona de carga de esta región tiene, a guisa de ejemplo, anticuerpos de antieritrocitos policlonales como elementos de liga. En esta región de zonas de indicador, los eritrocitos ligan con los elementos de liga que corresponden con las respectivas características de grupo sanguíneo. Con el elemento de liga de control se ligan los eritrocitos de cualquier grupo sanguíneo (determinación de grupo sanguíneo) . En una etapa .. de lavado seguida se elimina materia no ligada de la membrana . En la etapa de detección siguiente se hacen visibles las isoaglutininas y los anticuerpos de control inmovilizados en los elementos de liga de la hilera proximal de zonas de indicador con la ayuda de partículas sintéticas que están revestidas con anti-IgG/IgM (contraprueba sérica: detección) . En otra modalidad del método inventivo para la determinación simultánea de grupo sanguíneo y contraprueba sérica y/o prueba de detección de anticuerpos se determinan directamente las características de grupo sanguíneo, tal como se describe en lo precedente, pero la contraprueba sérica y/o la prueba de detección de anticuerpos se realiza como análisis competitivo. A guisa de ejemplo, se aplica sangre completa o una dilución de esta en la zona de carga del dispositivo.

Todos los componentes penetran en la membrana porosa, guiados por el elemento de obturación, y pasan durante la migración en dirección hacia la almohadilla primeramente la región de zonas de indicador, para la contraprueba sérica que comprende fragmentos de células de los grupos sanguíneos A B, así como la zona de indicador de control que comprende células del grupo sanguíneo 0. Las isoaglutininas presentes en el suero ligan con los antígenos correspondientes .ligados en células (contraprueba sérica: sensibilización) . Los antígenos Mgatíos en células continúan su migración hacia la región de zonas de indicador para la determinación de grupos sanguíneos de ubicación distal con relación a la región de zonas de indicador para la contraprueba sérica, siendo que en cada zona de indicador se encuentra inmovilizado un anticuerpo contra otra característica de grupo sanguíneo (por ejemplo, anti-A, anti-B, anti-D) . La zona de indicador más distal con relación a la zona de carga de esta región tiene, a guisa de ejemplo, anticuerpos de anti-eritrocitos policlonales como elementos de liga. En esta región de zona de indicador, los eritrocitos ligan con los elementos de liga que corresponden a las respectivas características de grupo sanguíneo. En el elemento de liga de control ligan los eritrocitos de cualquier grupo sanguíneo (determinación de grupo sanguíneo) . En una etapa de lavado siguiente se elimina material sin ligar de la membrana. En la siguiente etapa se aplica en la zona de carga una suspensión de partículas sintéticas, que están cubiertas con anti-A, anti-B y anti-H. Las partículas pueden ligar sólo con aquellos elementos de liga en la región de zonas de indicador para contraprueba sérica, que no habían estado en contacto en la etapa de sensibilización con las isoaglutininas séricas, es decir, una banda de teñido muestra en este baso la ausencia de la xsoaglutinina correspondiente. A guisa de ejemplo, en el caso de un grupo sanguíneo A (personas con isoaglutininas anti-B) , los fragmentos celulares de las células B son bloqueados por las isoaglutininas, lo que tiene la consecuencia de que los fragmentos celulares de las células A son teñidos por la mezcla, aplicada a continuación, de partículas sintéticas debido a las partículas anti-A presentes en éstas. Los fragmentos del grupo sanguíneo 0 son teñidos en todas las constelaciones imaginables, ya que no son bloqueados por isoaglutininas y son siempre libres, debido a ló anterior, para una reacción con las .partículas anti-H teñidas, lo que ofrece también en la variante del análisis competitivo un elemento de control (contraprueba sérica: detección) . En otra modalidad del método inventivo para la determinación de grupos sanguíneos y la contraprueba sérica y/o el análisis de detección de anticuerpos simultáneos comprendiendo determinación directa de las características de grupo sanguíneo y determinación de la contraprueba sérica y/o el análisis de detección de anticuerpos como análisis competitivo, se procede como sigue: Se aplica sangre completa o una dilución de ésta en la zona de carga asimétrica del dispositivo con dos diferentes membranas porosas. Una membrana porosa tiene en esto una tasa de flujo capilar menor que la otra membrana. En ésta, entre el elemento de obturación y las zonas de indicador, se encuentra fijada una almohadilla de conjugado conteniendo - partículas anti-A/anti-B/anti-H secadas. Todos los componentes penetran en ambas membranas porosas, guiados por el elemento de obturación, lo que causa el siguiente comportamiento de flujo: "Lado-sólo-membrana" : Todos los componentes pasan durante su migración hacia la almohadilla de absorción asociada por la región de zonas de indicador para la determinación de grupo sanguíneo en que se encuentre inmovilizado en cada zona de indicador un anticuerpo contra otra característica de grupo sanguíneo (por ejemplo, anti-A, anti-B, anti-D) . La zona de indicador más distal con relación a la zona de carga de esta región tiene, a guisa de ejemplo, anticuerpos de anti-eritrocitos policlonales como elemento de liga. En esta región de zonas de indicador, los eritrocitos ligan con los elementos de liga que corresponden con las respectivas características de grupo sanguíneo. Con el elemento de liga de control ligan los eritrocitos de cualquier grupo sanguíneo. "Lado de membrana/almohadilla de conjugado": Todos los componentes hacen contacto con la almohadilla de conjugado, una vez penetrados en la membrana y habiendo pasado por el elemento de obturación, siendo que componentes celulares son sujetados respectivamente retrasados y los componentes líquidos (plasma) pueden continuar su flujo sin obstáculo. Éstos disuelven las partículas anti-A/anti-B/anti-H de la almohadilla de conjugado. La región de zonas de indicador para la contraprueba sérica comprende fragmentos de células de los grupos sanguíneos A y B, así como - a modo de elemento de control - fragmentos de células del grupo sanguíneo 0. Las isoaglutininas presentes en el suero ligan con los antígenos ligados en las células correspondientes y compiten, con esto, por una liga de las partículas teñidas anti-A, anti-B. Esto significa que las partículas pueden ligar sólo, si la respectiva isoaglutinina no está presente. Por ejemplo, una persona con grupo sanguíneo A tiene anti-B isoaglutininas, lo que tiene la consecuencia de que los fragmentos del grupo sanguíneo B son bloqueados en la región de zonas de indicador y sólo los fragmentos del grupo sanguíneo A pueden ser teñidos por las partículas anti-A teñidas. El elemento de control, contra el cual no existen isoaglutininas, por lo tanto siempre queda sin bloqueo y es teñido en todos los casos por las partículas anti-H contenidas en la mezcla de partículas de la almohadilla de conjugado como banda visible. Otra modalidad especial del método inventivo realiza simultáneamente una determinación de grupo sanguíneo y una determinación de anti-trombocitos y/o anti-linfocitos, respectivamente, fragmentos de estos. A guisa de ejemplo, las zonas de indicador para la determinación de los anticuerpos de anti-trombocitos comprenden en la región preximal con relación a la zona de carga unos fragmentos de trombocitos como elementos de liga, con los que ligan - en caso de estar presentes en la muestra - los anticuerpos de anti-trombocitos contenidos en el suero. El resto del método es idéntico con aquel descrito en la modalidad precedente del método inventivo, en particular, la determinación de grupo sanguíneo se realiza tal como se describe allí. Otra modalidad particular del método inventivo realiza simultáneamente una determinación de grupo sanguíneo y una determinación de marcadores de serología de infecciones relevantes para transfusión.

A guisa de ejemplo, las zonas de indicador de la primera región de zonas de indicador proximal para la determinación de los marcadores de infección comprenden como elementos de liga unos péptidos sintéticos y/o proteínas recom inantes que corresponden a secuencias de proteínas de agentes virales o bacterianos (determinación de anticuerpos contra marcadores de infección, por ejemplo, anti-HIV-1) , así como anticuerpos que son dirigidos contra proteínas de marcadores de infección (determinación de antígenos, por ejemplo, HbsAg) . Anticuerpos contenidos en el suero, respectivamente antígenos ligan en la primera etapa con los antígenos correspondientes respectivamente anticuerpos. El resto del método es tal como se describe para la modalidad precedente del método inventivo, en particular la determinació-? del grupo sanguíneo se realiza tal como allí se describe. En el método inventivo, los analitos por determinar son en particular antígenos de grupos sanguíneos respectivamente epitopos de antígenos, preferentemente aquellos de los sistemas de grupos sanguíneos ABO, Rh, Kell, anticuerpos dirigidos contra antígenos de grupos sanguíneos o epitopos de antígenos, respectivamente fragmentos de éstos, ' preferentemente anticuerpos regulares, anticuerpos irregulares, anticuerpos contra agentes de infección, antígenos (superficiales) de agentes de infección y/o anticuerpos de anti-trombocitos o anti-linfocitos, respectivamente fragmentos de éstos. La muestra por analizar, por ejemplo sangre completa nativa o anticoagulada o concentrados de eritrocitos o suspensiones diluidos de eritrocitos, componentes de sangre o liquidos de análisis, tales como suero de control o células de control, se aplica sobre la zona de carga del dispositivo inventivo. Los eritrocitos contenidos en la muestra que portan el/los analito(s) sirven simultáneamente como partículas indicadoras. Se usan en particular dos grupos de partículas indicadoras. La una es representada sólo por eritrocitos para la detección directa de analitos ligados con eritrocitos. El otro grupo . consiste de partículas de todo tipo y de toda combinación imaginable que permiten la detección de reacciones de sliga,, preferentemente partículas de oro coloidal o de poliestirol o de eritrocitos fijados. En una modalidad preferida, se usan por corrida de análisis diferentes partículas indicadoras, de las que al menos un tipo son eritrocitos nativos. A continuación se explica la invención mediante figuras y ejemplos con más detalle, sin limitarla a ellos. En las figuras se muestra: Fig. 1 una representación en perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo y contraprueba sérica; Fig. 2 una representación de despiece del dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral, representado en Fig. 1; Fig. 3 una representación en perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo y contraprueba sérica, realizado con un elemento de obturación tridimensional en forma de nervio; Fig. 4 una representación de despiece del dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral, representado en Fig. 3; Fig. 5 una representación en perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea ... de determinación de grupo sanguíneo y contraprueba sérica, realizado con un elemento de obturación tridimensional en forma de tina; Fig. 6 una representación de despiece del dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral, representado en Fig. 5; Fig. 7 una representación en perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo y contraprueba sérica y análisis de detección de anticuerpos para receptor; Fig. 8 una representación en perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo y contraprueba sérica y análisis de detección de anticuerpos para donador ; Fig. 9 una representación en perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación, de grupo sanguíneo y la detección de marcadores de infección; Fig. 10 una representación en perspectiva de un dispositivo . inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo y la detección de anticuerpos contra antígenos de trombocitos . Fig. 11 muestra una representación en perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral con flujo bidireccionai para la determinación simultánea de determinación de grupo sanguíneo y contraprueba sérica; Fig. 12 muestra una representación de despiece del dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral, representado en Fig. 11. En Fig. 1 se muestra, a guisa de ejemplo, una representación en perspectiva de un dispositivo inventivo para el análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo y contraprueba sérica. En el presente ejemplo, el dispositivo consiste de una capa 1 portadora, de la membrana 2 porosa, la almohadilla 3 de absorción y el elemento 4 de obturación bidimensional, realizado en forma de nervio. La membrana 2 porosa está fijada, en esto, en la capa 1 portadora provista de un adhesivo de acrilato sensible a presión. La almohadilla 3 de absorción solapa, por otro lado, con la membrana 2 porosa. El elemento 4 de obturación fijado en la cara superior de la membrana 2 porosa separa la zona 5 de carga del resto de la superficie de membrana y permite la distribución dirigida de líquido de análisis y reactivos de análisis en la membrana 2 porosa. Entre la zona 5 de carga y la región de la membrana 2 porosa que hace contacto con la almohadilla 3 de absorción, se encuentra dispuesto la región 6 de zonas de indicador. Esta es formada por zonas I-IX de indicador puntiformes, desplazadas en diagonal, dispuestas en posiciones X e Y definidas, siendo que las zonas de indicador I-V comprenden la región de zona de indicador "contraprueba sérica" y las zonas de indicador VI-IX la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" y consisten de los siguientes elementos de liga: zonas de indicador elemento de liga especificación región de zonas de indicador: contraprueba sérica I eritrocitos fantasmas grupo sanguíneo Al II eritrocitos fantasmas grupo sanguíneo A2 III eritrocitos fantasmas grupo sanguíneo B IV eritrocitos fantasmas grupo sanguíneo 0 V anticuerpo anti-IgG/IgM humano región de zonas de indicador: determinación de grupo sanguíneo VI anticuerpos anti-A (monoclonal) VII anticuerpos anti-B (monoclonal) VIII anticuerpos anti-AB (monoclonal) IX anticuerpos anti-eritrocitos (policlonal) La zona de indicador V es el control (ctl) para la contraprueba sérica y contiene anticuerpos de anti-IgG/IgM humano. La zona de indicador IX es el control (ctl) para la determinación de grupo sanguíneo y contiene anticuerpos de anti-eritrocitos policlonales . Se encuentra en disposición distal con relación a todas las demás zonas de indicador. En Fig. 2 se muestra una representación de despiece del dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral representado en Fig. 1, que consiste de los componentes capa 1 portadora, membrana 2 porosa, almohadilla 3 de absorción y elemento 4 de obturación que separa la zona 5 de carga del resto de la membrana, misma que consiste a su vez de la región 6 de zonas de indicador, consistiendo de las regiones de · zonas de indicador "contraprueba sérica" y "determinación de grupo sanguíneo" con las zonas I-IX de indicador dispuestas en forma diagonalmente desplazada. En Fig. 3 se muestra, a guisa de ejemplo, una representación en perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo y contraprueba- sérica. En el presente ejemplo, los componentes del dispositivo se corresponden con los componentes del dispositivo representado en Fig. 1, con excepción del elemento 4 de obturación realizado en forma de nervio tridimensional, fijado en la cara superior de la membrana 2 porosa. En Fig. 4 se muestra una representación de despiece del dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral representado en Fig. 3 con los componentes capa 1 portadora, membrana 2 porosa, almohadilla 3 de absorción y elemento 4 de obturación realizado en forma de nervio tridimensional, que separa la zona 5 de carga del resto de la membrana, misma que nuevamente contiene la región 6 de zonas de indicador consistiendo de las regiones de zonas de indicador "contraprueba sérica" y "determinación de grupo sanguíneo" con las zonas I-IX de indicador dispuestas en forma desplazada en diagonal. En Fig. 5 se muestra, a guisa de ejemplo, una representación de perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo y contraprueba sérica. En el presente ejemplo, los componentes del dispositivo se corresponden con los componentes del dispositivo representado en Fig. 1, con excepción del elemento 4 de obturación realizado en forma de tina- tridimensional, fijado en la cara superior de la membrana 2 porosa. En Fig. 6 se muestra una representación de despiece del dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral representado en Fig. 5 con los componentes capa 1 portadora, membrana 2 porosa, almohadilla 3 de absorción y elemento 4 de obturación realizado en forma de tina tridimensional, que separa la zona 5 de carga del resto de la membrana, misma que nuevamente contiene la región 6 de zonas de indicador consistiendo de las regiones de zonas de indicador "contraprueba sérica" y "determinación de grupo sanguíneo" con las zonas I-IX de indicador dispuestas en forma desplazada en diagonal. En Fig. 7 se muestra, a guisa de ejemplo, una representación de perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo, contraprueba sérica y análisis de detección de anticuerpos en receptores. En el presente ejemplo, el dispositivo consiste de una capa 1 portadora, la membrana 2 porosa, la almohadilla 3 de absorción y el elemento 4 de obturación bidimensional realizado en forma de nervio. La membrana 2 porosa está fijada, en esto, en la capa 1 portadora provista con un adhesivo de acrilato sensible a presión. También la almohadilla 3 de absorción está fijada en la capa 1 portadora., siendo que una parte de la almohadilla 3 de absorción solapa la membrana 2 porosa. El elemento 4 de obturación, fijado en la cara superior de la membrana 2 porosa, separa la zona 5 de carga del resto de la superficie de membrana y permite una distribución dirigida de líquido de muestra y reactivos de análisis a la membrana 2 porosa. Entre la zona 5 de carga y la región de la membrana 2 porosa que hace contacto con la almohadilla 3 de absorción, se encuentra dispuesto la región 6 de zonas de indicador. Esta es formada por zonas 1-XII puntiformes, siendo que las zonas I-VIII comprenden la región de zonas de indicador "contraprueba sérica/análisis de detección de anticuerpos" y las zonas IX-XII de indicador la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" y que consisten de los siguientes elementos de liga: La zona VIII de indicador es el control (ctl) para la contraprueba sérica y el análisis de detección de anticuerpo y contiene anticuerpos anti-IgG/IgM humano. La zona XII de indicador es el control (ctl) para la determinación de grupo sanguíneo y contiene anticuerpos de anti-eritrocitos policlonales . Se encuentra en posición distal con relación a todas las demás zonas de indicador. En Fig. 8 se muestra, a guisa de ejemplo, una representación de perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo, contraprueba sérica y análisis de detección de anticuerpos en donadores de sangre. En el presente ejemplo, el dispositivo consiste de una capa 1 portadora, la membrana 2 porosa, la almohadilla 3 de absorción y el elemento 4 de obturación bidimensional realizado en forma de nervio. La membrana 2 porosa está fijada, en esto, en la capa 1 portadora provista con un adhesivo de acrilato sensible a presión. También la almohadilla 3 de absorción está fijada en la capa 1 portadora, siendo que una parte de la almohadilla 3 de absorción solapa la membrana 2 porosa. El elemento 4 de obturación, fijado en la cara superior de la membrana 2 porosa, separa la zona 5 de carga del resto de la superficie de membrana y permite una distribución dirigida de líquido de muestra y reactivos de análisis a la membrana 2 porosa. Entre la zona 5 de carga y la región de la membrana 2 porosa que hace contacto con la almohadilla 3 de absorción, se encuentra dispuesto la región 6 de zonas de indicador. Esta es formada por zonas I-X puntiformes, desplazadas en diagonal, dispuestos en posiciones X e Y definidas, siendo que las zonas I-VI comprenden la región de zonas de indicador "contraprueba sérica/análisis de detección de anticuerpos" y las zonas VII-X de indicador la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" y que consisten de los siguientes elementos de liga: zonas de indicador elemento de liga especificación región de zonas de indicador: contraprueba sérica/detección de anticuerpo I eritrocitos fantasmas grupo sanguíneo Al II eritrocitos fantasmas grupo sanguíneo A2 III eritrocitos fantasmas grupo sanguíneo B IV eritrocitos fantasmas grupo sanguíneo 0 V eritrocitos fantasmas grupo sanguíneo 0, conjunto de cel.busc. 1,2,3 (véase descripción VI anticuerpo anti-IgG/IgM humano región de zonas de indicador: determinación de grupo sangidneo VII anticuerpos anti-A (monoclonal) VIII anticuerpos anti-B (monoclonal) IX anticuerpos anti-AB (monoclonal) X anticuerpos anti-eritrocitos (policlonal) Zona VI de indicador es el control (ctl) para la contraprueba sérica y el análisis de detección de anticuerpos y contiene anticuerpos anti-IgG/IgM humano. La zona X de indicador es el control (ctl) para la determinación de grupo sanguíneo y contiene anticuerpos de anti-eritrocitos policlonales . Se encuentra en posición distal con relación a todas las demás zonas de indicador. En Fig. 9 se muestra, a guisa de ejemplo, una representación de perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo y la detección de marcadores de infección. En el presente ejemplo, el dispositivo consiste de una capa 1 portadora, la membrana 2 porosa, la almohadilla 3 de absorción y el elemento 4 de' obturación bidimensional realizado en forma de nervio. La membrana 2 porosa está fijada, en esto, en la capa 1 portadora provista con un adhesivo de acrilato sensible a presión. También la almohadilla 3 de absorción está fijada en la capa 1 portadora, siendo que una parte de la almohadilla 3 de absorción solapa la membrana 2 porosa. El elemento 4 de obturación, fijado en la cara superior de la membrana 2 porosa, separa la zona 5 de carga del resto de la superficie de membrana y permite una distribución dirigida de líquido de muestra y reactivos de análisis a la membrana 2 porosa. Entre la zona 5 de carga y la región de la membrana 2 porosa que hace contacto con la almohadilla 3 de absorción, se encuentra dispuesto la región 6 de zonas de indicador. Esta es formada por zonas I-XII puntiformes, desplazadas en diagonal, dispuestos en posiciones X e Y definidas, siendo que las zonas I-VI comprenden la región de zonas de indicador "detección de marcadores de infección" y las zonas VII-XII de indicador la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" y que consisten de los siguientes elementos de liga: zonas de indicador elemento de liga especificación región de zonas de indicador: detección de marcadores de infección I péptidos sintéticos HIV-1 (gp-14, gp-41) II péptidos sintéticos HIV-2 (gp-36) III anticuerpo anti-HBsAg (monoclonal) IV antígeno recombinante HCV (C-100, C-200, C33c, C22) V antígeno recombinante sífilis (TpN 15, TpN 17, TpN 47) VI anticuerpo anti-IgG/IgM humano región de zonas de indicador: determinación de grupo sanguíneo VII anticuerpos anti-A (monoclonal) VIII anticuerpos anti-B (monoclonal) IX anticuerpos anti-AB (monoclonal) X anticuerpos anti-D (monoclonal) XI anticuerpos anti-CDE (monoclonal) XII anticuerpos anti-eritrocitos (policlonal) Zona VI de indicador es el control (ctl) para la determinación de anticuerpos contra agentes infecciosos y contiene anticuerpos anti-IgG/IgM humano. La zona XII de indicador es el control (ctl) para la determinación de grupo sanguineo y contiene anticuerpos de anti-eritrocitos policlonales . Se encuentra en posición distal con relación a todas las demás zonas de indicador. En Fig. 10 se muestra, a guisa de ejemplo, una representación de perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo, y la detección de anticuerpos contra antígenos de trombocitos. En el presente ejemplo, el dispositivo consiste de una capa 1 portadora, la membrana 2 porosa, la almohadilla 3 de absorción y el elemento 4 de obturación bidimensional realizado en forma de nervio. La membrana 2 porosa está fijada, en esto, en la capa 1 portadora provista con un adhesivo de acrilato sensible a presión. También la almohadilla 3 de absorción está fijada en la capa 1 portadora, siendo que una parte de la almohadilla 3 de absorción solapa la membrana 2 porosa. El elemento 4 de obturación, fijado en la cara superior de la membrana 2 porosa, separa la zona 5 de carga del resto de la superficie de membrana y permite una distribución dirigida de líquido de muestra y reactivos de análisis a la membrana 2 porosa. Entre la zona 5 de carga y la región de la membrana 2 porosa que hace contacto con la almohadilla 3 de absorción, se encuentra dispuesto la región 6 de zonas de indicador. Esta es formada por zonas I-IX puntiformes, desplazadas en diagonal, dispuestos en posiciones X e Y definidas, siendo que las zonas I-III comprenden la región de zonas de indicador "detección de anticuerpos contra antígenos de trombocitos" y las zonas IV-IX de indicador la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" y gue consisten de los siguientes elementos de liga: zonas de indicador elemento de liga especificación región de zonas de indicador: detección de anticuerpos contra antígenos de trombocitos I proteínas de membrana trombocitos, HPA Ibb3aa5bb II proteínas de membrana trombocitos, HPA Iaa3bb5aa III proteínas de membrana anti-IgG/IgM humano región de zonas de indicador: determinación de grupo sanguíneo IV anticuerpos anti-A (monoclonal) V anticuerpos anti-B (monoclonal) VI anticuerpos anti-AB (monoclonal) VII anticuerpos anti-D (monoclonal) VIII anticuerpos anti-CDE (monoclonal) IX anticuerpos anti-eritrocitos (poiiclonal) Zona III de indicador es el control (ctl) para la detección de anticuerpos contra antígenos de trombocitos y contiene anticuerpos anti-IgG/IgM humano. La zona XII de indicador es el control (ctl) para la determinación de grupo sanguíneo y contiene anticuerpos de anti-eritrocitos policlonales . Se encuentra en posición distal con relación a todas las demás zonas de indicador. En Fig. 11 se muestra, a guisa de ejemplo, una representación de perspectiva de un dispositivo inventivo para análisis de flujo bidireccional para la realización simultánea de determinación de grupo sanguíneo, y contraprueba sérica. En el presente ejemplo, el dispositivo consiste de una capa 1 portadora, la membrana 2a porosa para la determinación de grupo sanguíneo, una membrana 2b, que se diferencia de la membrana 2a, para la contraprueba sérica, las almohadillas 3a y 3b de absorción, el elemento 4 de obturación tridimensional realizado en forma de tina y una almohadilla 6 de conjugado. Las membranas 2a y 2b porosas están fijadas, en esto, en la capa 1 portadora provista con un adhesivo de acrilato sensible a presión. También las almohadillas 3a y 3b de absorción están fijadas en la capa 1 portadora, siendo que una parte de las almohadilla 3a y 3b de absorción solapa las membranas 2a y 2b porosas. El elemento 4 de obturación, fijado en la cara superior de las membranas 2a y 2b porosas, separa las zonas 5a respectivamente 5b de carga del resto de las superficies de membrana y permite una distribución dirigida de liquido de muestra y reactivos de análisis a las membranas 2a y 2b porosas. Entre las zonas 5a de carga y la región de la membrana 2a porosa que hace contacto con la almohadilla 3a de absorción, se encuentra dispuesto la región 7a de zonas de indicador (determinación de grupo sanguíneo) . Esta es formada por zonas I-VI puntiformes, desplazadas en diagonal, dispuestos en posiciones X e Y definidas, siendo que las zonas 7a de indicador consisten de los siguientes elementos de liga: región de zonas de indicador: determinación de grupo sanguíneo I anticuerpos anti-A (monoclonal) II anticuerpos anti-B (monoclonal) III anticuerpos anti-AB (monoclonal) IV anticuerpos anti-D (monoclonal) V anticuerpos anti-CDE (monoclonal) VI anticuerpos anti-eritrocitos (policlonal) Zona VI de indicador es el control (ctl) para la determinación de grupo sanguíneo y contiene anticuerpos de anti-eritrocitos policlonales . Se encuentra en posición distal con relación a las zonas de. indicador I-V. Entre la zona de carga 5b y la región de la membrana 2b porosa que hace contacto con la almohadilla de absorción 3b se encuentra la región 7b de zonas de indicador (contraprueba sérica) . Esta es formada por zonas VII de indicador puntiforines, desplazados diagonalmente, dispuestas en posiciones X e Y definidas, siendo que las zonas de indicador de la región 7b de indicador consisten de los siguientes elementos de liga: zonas de indicador elemento de liga especificación VII eritrocitos fantasmas grupo sanguíneo A VIII eritrocitos fantasmas grupo sanguíneo B IX eritrocitos fantasmas grupo sanguíneo 0 En Fig. 18 se muestra una representación de despiece del dispositivo inventivo para análisis de flujo lateral con flujo bidireccional, se compone de los componentes capa 1 portadora, la membrana 2a porosa para la determinación de grupo sanguíneo, una membrana 2b, que se diferencia de la membrana 2a, para la contraprueba sérica, las almohadillas 3a y 3b de absorción, el elemento 4 de obturación tridimensional realizado en forma de tina y una almohadilla 6 de conjugado. Las membranas 2a y 2b porosas están fijadas, en esto, en la capa 1 portadora provista con un adhesivo de acrilato sensible a presión. También las almohadillas 3a y 3b de absorción están fijadas en la capa 1 portadora, siendo que una parte de las almohadilla 3a y 3b de absorción solapa las membranas 2a y 2b porosas. El elemento 4 de obturación, fijado en la cara superior de las membranas 2a y 2b porosas, separa las zonas 5a respectivamente 5b de carga del resto de las superficies de membrana. La membrana 2a contiene la región 7a de indicador con las zonas I-VI dispuestas en forma desplazada diagonalmente de proximal a distal, mientras que la membrana 2b contiene la región 7b de zona de indicador con las zonas VI1-IX dispuestas en forma desplazada diagonalmente de proximal a distal. Ej emplos Ejemplo 1: determinación de grupo sanguíneo (análisis directo) y contraprueba sérica (análisis directo de liga) simultáneas Preparación de las tiras de análisis Las tiras de análisis consisten de una zona de carga, una región de zonas de indicador y una región de absorción. Unas membranas del tipo Millipore HiFlow Plus 065 se cortan para formar tiras con un tamaño de 15 mm x 35 mm (anchura/longitud; x/y) y se pegan en una capa portadora (Backing sheet, por ejemplo G&L) . Se aplican en la región de zonas de indicador, que se divide en regiones de zonas de indicador "contraprueba sérica" (dispuesta proximal con relación a la zona de carga) y "determinación de grupo sanguíneo" (distal con relación a la zona de carga) , desplazadas diagonalmente, unos puntos de respectivamente 0.2 µ? de los diferentes elementos de liga con la ayuda de un dispensador, por ejemplo AD 3200 (Biodot) : Regió de zonas de indicador "contraprueba sérica" - suspensión de eritrocitos fantasmas de la especificación de grupos sanguíneos Al, grupo sanguíneo A2, grupo sanguíneo B y grupo sanguíneo 0 (producidos de concentrados de eritrocitos) , así como anticuerpos anti-IgG/Ig humano (cabra anti-igG humano, cabra anti-Ig humano, Sigma, 1-3382, 1-0759) como control; región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" -anticuerpo anti-A - Clon Birma-1 (Serologicals, TLJ0105); anticuerpo anti-B - Clon ES-4 (Serologicals, NCA0201) ; anticuerpo anti-AB - clones AB6, AB26, AB92 (Medion Diagnostics, 010062).; anticuerpos anti-eritrocitos (Rabbit fracción IgG de anti-RBC humano, Rockland, 209-4139) . El posicionamiento de los elementos de liga de la región de zonas de indicador "contraprueba sérica" inicia con fantasmas de eritrocitos de la especificación grupo sanguíneo Al en posición x = 2.5 mm/ y = 10 mm. Todos los demás elementos de liga so dispensados en forma iterativa a distancias de x = 2.5 mm/y = 1.5 mm con relación a la posición de los fantasmas de eritrocitos como suspensión de 0.1 a 0.5% (v/v) en 15 mM de tampón de fosfato potásico, pH 7.5, 10% (v/v) metanol, los anticuerpos anti-IgG/IgM humano como mezcla 1:1 en concentración de 50 µg/ml en- 15 mM de tampón de fosfato potásico, pH 7.5,. 10% (v/v) de metanol. El posicionamiento de. los elementos de liga de la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" inicia con el anticuerpo anti-A en posición x = 3 mm/ y = 20 mm. Todos los demás elementos de liga son dispensados en forma iterativa a distancias de x = 2.5 mm/y = 1.5 mm con relación a la posición del anticuerpo anti-A. las diluciones de los anticuerpos se realizan en 25 mM de tampón de fosfato potásico, pH 7.5, 10% (v/v) metanol, como sigue: anticuerpo anti-A 1:3, anticuerpo anti-B 1:2, anticuerpo anti-AB 1:4, anticuerpo anti-RBC 1:3. Las membranas son secadas, después de dispensar los elementos de liga, durante 20 min a 40°C y a continuación se guardan bajo humedad atmosférica constante hasta realizar los análisis. En el extremo distal con relación a la zona de carga se adhiere una almohadilla de absorción, que solapa la membrana en 3 mrii, con las medidas 15 x 15 mm (Schleicher & Schüll, 300) . La zona de carga es separada del resto de la membrana mediante adhesión, por toda la anchura de membrana, de una tira adherente con anchura de 1-2 mm (Tesa 4124) en posición y = 5 mm. Carga de análisis: Como muestras de sangre se usa sangre completa anticoagulada . Para el análisis en sí se aplican 100 µ? de sangre sin diluir, respectivamente sangre diluida a 1:3 o 1:6 en tampón de dilución (EnlisstII, Medion Diagnostics o Diluent 1, Dia ed) en zona de carga. Cuando la sangre haya salido de la zona de carga, se lava dos veces con 100 µ? de EnlisstII para eliminar eritrocitos sin ligar de la membrana. A continuación se aplican 50 µ? de partículas de oro conjugadas anti-IgG/A/M (20 a 40 nm, Arista Biologicals, CGIGA-0800, CGIGG-0800m CGIGM-0800) , diluidas 1:10 (v/v) en TBS, 0.08% gelatina, 0.5% albúmina en la zona de carga. En lugar de las partículas de oro pueden usarse también 100 a 400 nm partículas de poliestirol, por ejemplo, de Merck Aurolab France/Estapor . Cuando las partículas de oro hayan salido de la zona de carga, la membrana vuelve a lavarse una o dos veces con 100 µ? de Enllsstll. Resultado: (a) controles: El análisis es válido si el control anti-RBC (zona de indicador IX, región de zona de indicador "determinación de grupo sanguíneo") muestra una señal claramente positivo (punto rojo) y si los controle anti-IgG/IgM (zona de indicador V, región de zona de indicador "contraprueba sérica") está teñida característicamente con color púrpura (partículas de oro) o con el color de las partículas de poliestirol usadas. (b) resultados del análisis: Dependiendo de la presencia o ausencia de los respectivos antigenes de grupo sanguíneo, parecen puntos rojos (positivo) en las posiciones correspondientes en la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" o el color de fondo casi blanco de la membrana (negativo) . Las isoaglutininas correspondientes pueden reconocerse en la región de zonas de indicador "contraprueba sérica" por el característico púrpura de las partículas de oro como puntos color púrpura o en el color de . las partículas de poliestirol usadas. En caso de ausencia de una isoaglutinina no se pueden detectar señales en estas posiciones que resalten del fondo. Ejemplo 2: Determinación simultánea de grupos sanguíneos (análisis directo) y contraprueba sérica (análisis competitivo) Preparación de las tiras de análisis: Las tiras de análisis consisten de una zona de carga, dos regiones de zonas de indicador en ambos lados de la zona de carga y dos regiones de absorción. Membranas del tipo Millipore HiFlow 065 y HiFlow Plus 140 son cortadas un tamaño de 15 mm x 20 mm (ancho/longitud; x/y) y se pegan una junto a la otra en una capa portadora (Backing · Sheet, por ejemplo de G&L) . En la membrana de HiFlow Plus 140 se aplica además una almohadilla de conjugado, en que se encuentran secadas partículas de oro conjugadas anti-A/anti-B/anti-H, de manera tal que se encuentra entre el elemento de obturación (tira adhesiva) y zonas de indicador. En lugar de partículas de oro pueden usarse también partículas teñidas de poliestirol, por ejemplo de Merck Eurolab France/Estapor. Desplazados diagonalmente, se aplican en la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" que se encuentra en la membrana HiFlow Plus 065, puntos de respectivamente 0.2 µ? de los siguientes elementos de liga usando un dispensador, por ejemplo, AD3200 (Biodot) : anticuerpos anti-A - clon Birma-1 (Serologicals, TLJ0105) ; anticuerpos anti-B - clon ES-4 (Serologicals, NCA0201) ; anticuerpos anti-AB - clones AB6, AB26, AB92 (Medion Diagnostics, 010062), anticuerpos anti- eritrocitos (Rabbit IgG, Fraction of anti Human RBC, Rockland, 209-4139) . De la misma manera se aplican en la región de zonas de indicador "contraprueba sérica", que es encuentra en la membrana HiFlow Plus 140, unas suspensiones de fantasmas de eritrocitos del grupo sanguíneo A, grupo sanguíneo B y grupo sanguíneo 0 (producidos de concentrados de eritrocitos) . El posicionamiento de los elementos de liga de la región de zonas de indicador "contraprueba sérica" inicia con fantasmas de eritrocitos de la especificación grupo sanguíneo A en posición x = 3 iran/ y = 10 m. Todos los demás elementos de liga son dispensados en forma iterada a distancias de x = 3 mm/y = 1.5 mm con relación a la posición de los fantasmas de eritrocitos de la especificación grupo, sanguíneo A. Los fantasmas de eritrocitos son dispensados como suspensiones de 0.1-.05% (v/v) en 15 mM tampón de fosfato potásico, pH 7.5, 10% (v/v) metanol . El posicionamiento de los elementos de liga de la región, de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" inicia con el anticuerpo anti-? en posición x -2.5 mm/ y = 20 mm. Todos los demás elementos de liga son dispensados en forma iterativa a distancias de x = 2 mm/y = 1.5 mm con relación a la posición del anticuerpo anti-A.

Las diluciones de los anticuerpos se realizan en 15 mM de tampón de fosfato potásico, pH 7 . 5 , 10% (v/v) metanol, como sigue: anticuerpo anti-A 1 : 3 , anticuerpo anti-B 1 : 2 , anticuerpo anti-AB 1 : 4 , anticuerpo anti-RBC 1 : 3. Las membranas son secadas, después de dispensar los elementos de liga, durante 20 min a 40 °C y a continuación se guardan bajo humedad atmosférica constante hasta realizar los análisis. En el extremo distal con relación a la zona de carga se adhiere una almohadilla de absorción, que solapa la membrana en 3 mm, con las medidas 15 x 15 mi (Schleicher & Schüll, 300 ) . La zona de carga es separada del resto de la membrana mediante adhesión, por toda la anchura de membrana, de una. tira adherente con anchura de 1-2 mm (Tesa 4124 ) en posición y = 5 mm. Carga de análisis: Como muestras de sangre se usa sangre completa anticoagulada . Para el análisis en si se aplican 100 µ? de sangre sin diluir, respectivamente sangre diluida a 1 : 3 o 1 : 6 en tampón de dilución (EnlisstII, Medion Diagnostics o Diluent 1 , DiaMed) en zona de carga. Cuando la sangre haya salido de la zona de carga, se lava dos veces con 100 µ? de EnlisstII para eliminar eritrocitos sin ligar de la membrana. Resultado: (a) controles: El análisis es válido si el control anti-RBC (región de zona de indicador "determinación de grupo sanguíneo") muestra una señal claramente positivo (punto rojo) y si los controle anti-IgG/IgM (región de zona de indicador "contraprueba sérica") está teñida característicamente con color púrpura (partículas de, oro) o con el color de las partículas de poliestirol usadas. (b) resultados del análisis: Dependiendo de la presencia o ausencia de los respectivos antigenes de grupo sanguíneo, parecen puntos rojos (positivo) en las posiciones correspondientes en la región de. zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" o el color de fondo casi blanco de la membrana (negativo) . Las isoaglutininas correspondientes son caracterizadas en la región de zonas de indicador "contraprueba sérica" por la ausencia de la banda correspondiente.- Al estar ausente una isoaglutinina, la banda correspondiente está teñida característicamente. Ej emplo 3 : Determinación de grupo sanguíneo, contraprueba sérica y análisis de detección de anticuerpos en receptores Preparación de las tiras de análisis: Las tiras de análisis consisten de una zona de carga, una región de zonas de indicador y una región de absorción. Unas membranas del tipo íllipore HiFlow Plus 065 se cortan para formar tiras con un tamaño de 20 mm x 35 mm (anchura/longitud; x/y) y se pegan en una capa portadora (Backing sheet, por ejemplo G&L) . Se aplican en la región de zonas de indicador, que se divide en regiones de zonas de indicador "contraprueba sérica/detección de anticuerpos" (dispuesta proximal con relación a la zona de carga) y "determinación de grupo sanguíneo" (distal con relación a la zona de carga), desplazadas diagonalmente, unos puntos de respectivamente 0.2 µ? de los diferentes elementos de liga con la ayuda de un dispensador, por ejemplo AD 3200 (Biodot) : Región de zonas de indicador "contraprueba sérica/detección de anticuerpos" - suspensión de fantasmas de eritrocitos de la especificación grupo sanguíneo Al, grupo sanguíneo A2, grupo sanguíneo B, grupo sanguíneo 0, grupo sanguíneo 0 fórmula Rh RiRi" (célula de búsqueda 1) , grupo sanguíneo 0 fórmula Rh R2R2 (célula de búsqueda 2) , grupo sanguíneo 0, fórmula Rh R1R1 (célula de búsqueda 3) , así como anti-IgG/Ig humano (Goat anti human IgG, Goat anti human IgM, Sigma, 1-3382, 1-0759) como control; región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" -anticuerpo anti-A - clon Birma-1 (Serologicals, TLJ0105) ; anticuerpos anti-B -· clon ES-4 (Serologicals, NCA0201) ; anticuerpos anti-AB - clones ??ß, AB26, AB92 ( edion Diagnostics, 010062) , anticuerpos anti-eritrocitos (Rabbit IgG, Fraction of anti Human RBC, Rockland, 209-4139) .

El posicionamiento de los elementos de liga de la región de zonas de indicador "contraprueba sérica" inicia con fantasmas de eritrocitos de la especificación grupo sanguíneo A en posición x = 3 rnrn/ y = 10 mm, siendo que el posicionamiento de los fantasmas de eritrocitos con la especificación grupo sanguíneo A2, B, 0 sigue en forma iterada a distancias de x = 2 mm/y = 1.5 mm. El posicionamiento de los fantasmas de eritrocitos de la célula de búsqueda 1 se realiza en posición x = llmm/ y = 10 mm, el posicionamiento de los fantasmas de eritrocitos de las células de búsqueda 2 y 3, así como del IgG/IgM humano en forma iterada a distancias de x = 2 mm/ y = 1.5 mm. Los fantasmas de eritrocitos son dispensados como suspensión de 0.1-0.5% (v/v) en 15 mM tampón de fosfato potásico, pH 7.5, 10% (v/v) metanol, los anticuerpos de anti-IgG/IgM humano como mezcla 1:1 en concentraciones de 50 µg/ml in 15 mM de tampón de fosfato potásico, pH 7.5, 10% (v/v) metanol. El posicionamiento de los elementos de liga de la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" inicia con el anticuerpo anti-A en posición x = 4 mm/y = 20 mm. Todos los demás elementos de liga son dispensados en forma iterada con distancias de x = 4 mm/y = 1.5 mm con relación a la posición del anticuerpo anti-A. Las diluciones de los anticuerpos se realizan en 15 mM de tampón de fosfato potásico, pH 7.5, 10% (v/v) metanol, como sigue: anticuerpo anti-A 1:3, anticuerpo anti-B 1:2, anticuerpo anti-AB 1:4, anticuerpo anti-RBC 1:3. Las membranas son secadas, después de dispensar los elementos de liga, durante 20 min a 40°C y a continuación se guardan bajo humedad atmosférica constante hasta realizar los análisis. En el extremo distal con relación a la zona de carga se adhiere una almohadilla de absorción, que solapa la membrana en 3 mm, con las medidas 15 x 15 mm (Schleicher & Schüll, 300) . La zona de carga es separada del resto de la membrana mediante adhesión, por toda la anchura de membrana, de una tira adherente con anchura de 1-2 mm. (Tesa 4124) en posición y = -5 mm. Carga de análisis: Como muestras de sangre se usa sangre completa anticoagulada . Para el análisis en si se aplican 120 µ? de sangre sin diluir, respectivamente sangre diluida a 1:3 o 1:6 en tampón de dilución (EnlisstII, Medion Diagnostics o Diluent 1, DiaMed) en zona de carga. Cuando la sangre haya salido de la zona de carga, se lava dos veces con 120 µ? de EnlisstII para eliminar eritrocitos sin ligar de la membrana. A continuación se aplican 75 µ? de partículas de oro conjugadas ' anti-IgG/A/M (20 a 40 nm, Arista Biologicals, CGIGA-0800, CGIGG-0800m CGIGM-0800), diluidas 1:10 (v/v) en TBS, 0.08% gelatina, 0.5% albúmina en la zona de carga. En lugar de las partículas de oro pueden usarse también 100 a 400 nm partículas de poliestirol, por ejemplo, de. Merck Aurolab France/Estapor. Cuando las partículas de oro hayan salido de la zona de carga, la membrana vuelve a lavarse una o dos veces con 120 µ? de EnlisstII. Resultado: (a) controles: El análisis es válido si el control anti-RBC (zona de indicador XII, región de zona de indicador "determinación de grupo sanguíneo") muestra una señal claramente positivo (punto rojo) y si los controle anti-IgG/IgM (zona de indicador VIII, región de zona de indicador "contraprueba sérica") está teñida característicamente con color púrpura (partículas de oro) o con el color de las partículas de poliestirol usadas. El control anti-IgG/IgM debe estar teñido en todo caso, de manera que para una persona con grupo sanguíneo i¾B, que no tiene anticuerpos irregulares, el teñido de esta zona de indicador con ausencia total de otras señales en la región de zonas de indicador "contraprueba sérica/detección de anticuerpos" indica una conducción correcta del análisis. La zona de indicador IV (fantasma de eritrocito grupo sanguíneo 0) es un control negativo para isoaglutininas . Un teñido de esta zona de indicador significa que, además de isoaglutininas, debe haber presencia también de anticuerpos irregulares, es decir, al menos una de las tres zonas de indicador V, VI, VII debe estar teñida también. Si esto no es el caso, entonces el análisis no es válido. (b) resultados' del análisis: Dependiendo de la presencia o ausencia de los respectivos antigenes de grupo sanguíneo, parecen puntos rojos (positivo) en las posiciones correspondientes en la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" o el color de fondo casi blanco de la membrana (negativo) . Las isoaglutininas correspondientes son caracterizadas en la región de zonas de indicador "contraprueba sérica" por la ausencia de la banda correspondiente. Al estar ausente una isoaglutinina, no es posible detectar señales que sobresalgan del fondo en estas posiciones. Al estar presentes señales distintivas, una, dos o las tres zonas de indicador con los fantasmas de eritrocitos de las células de búsqueda 1, 2 o 3 están teñidas por el púrpura característico de las partículas de oro o detectables por el color de las partículas de poliestirol usadas. Ejemplo 4: Determinación de grupo sanguíneo, contraprueba sérica y análisis de detección de anticuerpos para el donador Preparación de las tiras de análisis: La construcción básica de las tiras de análisis corresponde a la construcción de tira de análisis según el ejemplo 2. El formato de la membrana illipore HiFlow 065 es de 15 mm x 35 mm (ancho/longitud; x/y) . Las zonas de indicador de la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" corresponden al ejemplo 2. En la región de zonas de indicador "contraprueba sérica/detección de anticuerpo" se dispensan por cada punto 0.2 µ? de los siguientes elementos de liga, usando un dispensador, por ejemplo 'AD3200 (Biodot) : Suspensión de fantasmas de eritrocitos de la especificación grupo sanguíneo Al, grupo sanguíneo A2, grupo sanguíneo B, grupo sanguíneo 0, grupo sanguíneo 0 fórmula Rh RiRi" (célula de búsqueda 1), grupo sanguíneo 0 fórmula Rh R2 2 (célula de búsqueda 2) , grupo sanguíneo 0, fórmula Rh R3R1 (célula de búsqueda 3) , así como anti-IgG/IgM humano (Goat anti human IgG, Goat anti human IgM, Sigma, 1-3382, 1-0759) como control. El posicionamiento de los elementos de liga de la región de zonas de indicador "contraprueba sérica/detección de anticuerpos" inicia con fantasmas de eritrocitos de la especificación grupo sanguíneo A en posición x = 2.5 mm/ y = 10 mm, siendo que el posicionamiento de los fantasmas de eritrocitos con la especificación grupo sanguíneo A2, B, 0 sigue en forma iterada a distancias de x = 2 mm/y = 1.5 mm. El posicionamiento de los fantasmas de eritrocitos de la mezcla de células de búsqueda 1-3 se realiza en posición x = 10.5 mm/ y = 13 mm, aquel del IgG/IgM humano en posición x = 12.5 mm/ y = 14.5 mm. Los fantasmas de eritrocitos son dispensados como suspensión de 0.1-0.5% (v/v) en 15 mM tampón de fosfato potásico, pH 7.5, 10% (v/v) metanol, los anticuerpos de anti-IgG/IgM humano como mezcla 1:1 en concentraciones de 50 µg/ml in 15 mM de tampón de fosfato potásico, pH 7.5, 10% (v/v) metanol. El posicionamiento de los elementos de liga de la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" inicia con el anticuerpo anti-A en posición x = 3 mm/y = 20 mm. Todos los demás elementos de liga son dispensados en forma iterada con distancias de x = 3 mm/y = 1.5 mm con relación a la posición del anticuerpo anti-A. Las diluciones de los anticuerpos se realizan en 15 mM de tampón de fosfato potásico, pH 7.5, 10% (v/v) metanol, como sigue: anticuerpo anti-A 1:3, anticuerpo anti-B 1:2, anticuerpo anti-AB 1:4, anticuerpo anti-RBC 1:3. Las membranas son secadas, después de dispensar los elementos de liga, durante 20 min a 40°C y a continuación se guardan bajo humedad atmosférica constante hasta realizar los análisis. En el extremo distal con relación a la zona de carga se adhiere una almohadilla de absorción, que solapa la membrana en 3 mm, con las medidas 15 x 15 mm (Schleicher & Schüll, 300) . La zona de carga es separada del resto de la membrana mediante adhesión, por toda la anchura de membrana, de una tira adherente con anchura de 1-2 mm (Tesa 4124) en posición y = 6 mm. - Carga de análisis: La carga de análisis corresponde a la carga según el ejemplo 1. Resultado : (a) controles: El análisis es válido sí el control anti-RBC (zona de indicador X, región de zona de indicador "determinación de grupo sanguíneo") muestra una señal claramente positivo (punto rojo) y si los controle anti-IgG/IgM (zona de indicador VI, región de zona de indicador "contraprueba sérica") está teñida característicamente con color púrpura (partículas de oro) o con el color de las partículas de poliestirol usadas. El control anti-IgG/IgM debe estar teñido en todo caso, de manera que para una persona con grupo sanguíneo AB, que no tiene anticuerpos irregulares, el teñido de esta zona de indicador con ausencia total de otras señales en la región de zonas de indicador "contraprueba sérica/detección de anticuerpos" indica una conducción correcta del análisis. La zona de indicador IV (fantasma de eritrocito grupo sanguíneo 0) es un control negativo para isoaglutininas . Un teñido de esta zona de indicador significa que, además de isoaglutininas, debe haber presencia también de anticuerpos irregulares, es decir, al menos una de las tres zonas de indicador V, VI, VII debe estar teñida también. Si esto no es el caso, entonces el análisis no es válido. (b) resultados del análisis: Dependiendo de la presencia o ausencia de los respectivos antigenes de grupo sanguíneo, parecen puntos rojos (positivo) en las posiciones, correspondientes en la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" o el color de fondo casi blanco de la membrana (negativo) . Las isoaglutininas correspondientes son caracterizadas en la región de zonas de indicador "contraprueba sérica" por la ausencia de la banda correspondiente. Al estar ausente una isoaglutinina, no es posible detectar señales que sobresalgan del fondo en estas posiciones. Al estar presentes señales distintivas, una, dos o las tres zonas de indicador con los fantasmas de eritrocitos de las células de búsqueda 1, 2 o 3 están teñidas por el púrpura característico de las partículas de oro o detectables por el color de las partículas de poliestirol usadas. Ejemplo 5: Determinación de grupo sanguíneo y detección de marcadores de infección simultáneas Preparación de las tiras de análisis: Las tiras de análisis consisten de una zona de carga, una región de zonas de indicador y una región de absorción. Unas membranas del tipo Millipore HiFlow Plus 065 se cortan para formar tiras con un tamaño de 15 mm x 35 mm (anchura/longitud; x/y) y se pegan en una capa portadora (Backing sheet, por ejemplo G&L) . Se aplican en la región de zonas de indicador, que se divide en regiones de zonas de indicador "detección de marcadores de infección" (dispuesta proximal con relación a la zona de carga) y "determinación de grupo sanguíneo" (distal con relación a la zona de carga) , desplazadas diagonalmente, unos puntos de respectivamente 0.2 µ? de los diferentes elementos de liga con la ayuda de un dispensador, por ejemplo AD 3200 (Biodot) : Región de zonas de indicador "detección de marcadores. de infección" - soluciones de antígenos recombinantes (sífilis, TpN 15, TpN 17, TpN 47), de péptido sintéticos de secuencias de glicoproteínas gp-14, gp-41 (HIV-l;HIV-0) y gp-36 (HIV-2) , antígenos recombinantes de HCV (C-100, C-200, C33c, C22) , anticuerpos rnonoclonales (HBsAg) así como anti-IgG/IgM humano (Goat anti human IgG, Goat anti human IgM, Sigma, 1-3382, 1-0759) como control; región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" anticuerpo anti-A - clon Birma-1 (Serologicals , TLJ0105) ; anticuerpos anti-B - clon ES-4 (Serologicals, NCA0201) ; anticuerpos anti-AB - clones AB6, AB26, AB92 (Medion Diagnostics, 010062), anticuerpos anti-eritrocitos (Rabbit IgG, Fraction of anti Human RBC, Rockland, 209-4139) .

El posicionamiento de los elementos de liga de la región de zonas de indicador detección de marcadores de infección" inicia con péptidos sintéticos de la especificación HIV-1 (gp-14, gp-41) en posición x = 2.5 mm/ y = 10 mm. Todos los demás elementos de liga se dispensan en forma iterada a distancias de x = 2 mm/y = 1.5 mm con relación a la posición de la zona de indicador I. Los elementos de liga de las zonas de indicador I-V son dispensados en concentraciones apropiados en 15 mM de tampón de fosfato potásico, pH 7.5, 10% (v/v) metanol, los anticuerpos de anti-IgG/IgM humano en una concentración de 50 µg/ml en 15 mM de tampón de fosfato potásico, pH 7.5 (v/v) metanol. El posicionamiento de los elementos de liga de la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" inicia con el anticuerpo anti-A en posición x = 2.5 mm/ y = 20 mm. Todos los demás elementos de liga se dispensan en forma iterada a distancias de x = 2 mm/y = 1.5 mm con relación a la posición del anticuerpo anti-A. Las diluciones de los anticuerpos se realizan en 15 mM de tampón de fosfato potásico, pH 7.5, 10% (v/v) metanol, como sigue: anticuerpo anti-A 1:3, anticuerpo anti-B 1:2, anticuerpo anti-AB 1:4, anticuerpo anti-RBC 1:3. Las membranas son secadas, después de dispensar los elementos de liga, durante 20 min a 40°C y a continuación se guardan bajo humedad atmosférica constante hasta realizar los análisis. En el extremo distal con relación a la zona de carga se adhiere una almohadilla de absorción, que solapa la membrana en 3 mm, con las medidas 15 x 15 mm (Schleicher & Schüll, 300) . La zona de carga es separada del resto de la membrana mediante adhesión, por toda la anchura de membrana, de una tira adherente con anchura de 1-2 mm (Tesa 4124) en posición y = 6 mm. Carga de análisis: Como muestras de sangre se usa sangre completa anticoagulada. Para el análisis en si se aplican 100 µ? de sangre sin diluir, respectivamente sangre diluida a 1:3 o 1:6 en tampón de dilución (EnlisstII, Medion Diagnostics o Diluent 1, DiaMed) en zona de carga. Cuando la sangre haya salido de la zona de carga, se lava dos veces con 100 µ? de EnlisstII para eliminar eritrocitos sin ligar de la membrana . A continuación se aplican 75 µ? de partículas de oro conjugadas anti-IgG/A/M (20 a 40 nm, Arista Biologicals, CGIGA-0800, CGIGG-0800m CGIGM-0800) , diluidas 1:10 (v/v) en TBS, 0.08% gelatina, 0.5% albúmina en la zona de carga. En lugar de las partículas de oro pueden usarse también 100 a 400 nm partículas de poliestirol, por ejemplo, de Merck Aurolab France/Estapor . Cuando las partículas de oro hayan salido de la zona de carga, la membrana vuelve a lavarse una o dos veces con 100 µ? de EnlisstII . Resultado : El análisis es válido, si el control anti-RBC (zona de indicador XII, región de zona de indicador "determinación de grupo sanguíneo") muestra una señal claramente positivo (punto rojo) y si los controle anti-IgG/IgM (zona de indicador VI, región de zona de indicador "detección de marcadores de infecciones") está teñida característicamente con color púrpura (partículas de oro) o con el color de las partículas de poliestirol usadas. Dependiendo de la presencia o ausencia de los respectivos antígenos de grupos sanguíneos aparecen, en las posiciones correspondientes, puntos rojos (positivo) o el teñido casi blanco de fondo de la membrana (negativo) . Al estar presentes anticuerpos contra HIV-1, HIV-2, sífilis respectivamente el antígeno de superficie de hepatitis B (HBsAg) , la respectiva posición es teñida por el púrpura característica para partículas de oro y detectable como punto color púrpura. Si se usan partículas de poliestirol como partículas indicadoras, la respectiva posición es teñida con el color de la partícula de poliestirol usado. En el caso por mucho más frecuente y a saber de una reacción negativa para todos los marcadores de infección se tiña sólo el control anti-IgG/Ig (zona de indicador VI, región de zonas de indicador "detección de marcadores de infección") . Ejemplo 6: Determinación de grupo sanguíneo y detección de anticuerpos contra antígenos de trombocitos Producción de las tiras de análisis: La construcción básica y el formato de la tira de análisis se corresponden con la construcción de tira de análisis según el ejemplo 4. La región de zonas de indicador se subdivide en las regiones de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" y "detección de anticuerpos contra antígenos de trombocitos". Se dispensan por cada punto 0.2 µ? de los siguientes elementos de liga usando ¦ un . dispensador, por ejemplo AD3200 (Biodot) : Región de zonas de indicador "detección de anticuerpos contra antígenos de trombocitos" - proteínas de membrana de trombocitos del grupo sanguíneo 0 con perfiles de antígenos de HPA característicos como HPA Ibb3aa5bb y HPA Iaa3bb5aa, así como anti-IgG/IgM humano (Goat anti human IgG, Goat anti human IgM, Sigma, 1-3382, 1-0759) como control; región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" - anticuerpo anti-A - clon Birma-1 (Serologicals, TLJ0105) ; anticuerpos anti-B - clon ES-4 (Serologicals, NCA0201) ; anticuerpos anti-AB - clones AB6, AB26, AB92 (Medion Diagnostics, 010062) , anticuerpos anti-eritrocitos (Rabbit IgG, Fraction of anti Human RBC, Rockland, 209-4139) . Como alternativa a las proteínas de membrana de los trombocitos pueden aplicarse también antígenos recombinantes con las expresiones de características correspondientes (perfiles de antígenos de HPA) . El posicionamiento de los elementos de liga de la región de zonas de indicador "detección de anticuerpos contra' antígenos de trombocitos" inicia con el anticuerpo anti-A en posición x = 4 mm/y = 10 mm. Todos los demás elementos de liga son dispensados en forma iterada con distancias de x = 3.5 mm/y = 2 mm con relación a la posición de la zona de indicador I. Los elementos de liga de las zonas de indicador I y II son dispensados en concentraciones apropiadas de tampón de fosfato potásico, pH 7.5 10% (v/v) metanol, los anticuerpos anti-IgG/IgM humano en una concentración de 50 µg/ml en 15 mM de tampón de fosfato potásico, pH 7.5 10% (v/v) metanol. El posicionamiento de los elementos de liga de la región de zonas de indicador "determinación de grupo sanguíneo" correspondo a aquel del ejemplo 4. Las membranas son secadas, después de dispensar los elementos de liga, durante 20 min a 40°C y a continuación se guardan bajo humedad atmosférica constante hasta realizar los análisis. En el extremo distal con relación a la zona de carga se adhiere una almohadilla de absorción, que solapa la membrana en 3 mm, con las medidas 15 x 15 mm (Schleicher & Schüll, 300) . La zona de carga es ¦ separada del resto de la membrana mediante adhesión, por toda la anchura de membrana, de una tira adherente con anchura de 1-2 mm (Tesa 4124) en posición y = 6 mm.

Carga de análisis: Como muestras de sangre se usa sangre completa anticoagulad . Para el análisis en si se aplican 100 µ? de sangre sin diluir, respectivamente sangre diluida a 1:3 o 1:6 en tampón de dilución (EnlisstII, Medion Diagnostics o Diluent 1, DiaMed) en zona de carga. Cuando la sangre haya salido de la zona de carga, se lava dos veces con 100 µ? de EnlisstII para eliminar eritrocitos sin ligar de la membrana. ? continuación se aplican 50 µ? de partículas de oro conjugadas anti-IgG/A/ (20 a 40 nm, Arista Biologicals, CGIGA-0800, CGIGG-0800m CGIGM-0800), diluidas 1:10 (v/v) en TBS, 0.08% gelatina, 0.5% albúmina en la zona de carga. En lugar de las . partículas de oro pueden usarse también 100 a 400 nm partículas de poliestirol, por ejemplo, de Merck Aurolab France/Estapo . Cuando las partículas de oro hayan salido de la zona de carga, la membrana vuelve a lavarse una o dos veces con 100 µ? de EnlisstII.

Resultado : El análisis es válido, si el control anti-RBC (zona de indicador IX, región de zona de indicador "determinación de grupo sanguíneo") muestra una señal claramente positivo (punto rojo) y si los controle anti-IgG/IgM (zona de indicador III, región de zona de indicador detección de anticuerpos contra antígenos de trombocxtos") está teñida característicamente con color púrpura (partículas de oro) o con el color de las partículas de poliestirol usadas. Dependiendo de la presencia o ausencia de los respectivos antígenos de grupos sanguíneos aparecen, en las. posiciones- correspondientes, puntos rojos (positivo) o el teñido casi blanco de fondo de la membrana (negativo) . Al estar presentes anticuerpos contra antígenos de trombocitos, la respectiva posición es teñida por el púrpura característica para partículas de oro y detectable como punto color púrpura. Si se usan partículas de poliestirol como partículas indicadoras, la respectiva posición es teñida con el color de la partícula de poliestirol usado.

Claims (9)

REIVINDICACIONES

1. Dispositivo para la determinación simultánea y cualitativa o cuantitativa de varios analitos en una muestra liquida, comprendiendo al menos una membrana que comprende - una zona de carga para aplicar la muestra liquida, - al menos un grupo de al menos dos zonas de indicador que pueden entrar en reacción reciproca con el/los analito(s) y - al menos una región de absorción que absorbe el liquido después de pasar por las zonas de indicador, siendo que las zonas de indicador se ubican entre la zona de carga y la región de absorción, caracterizado porque las direcciones de flujo de la zona de carga, pasando por las respectivas zonas de indicador de un grupo a una región de absorción (pistas de flujo) son esencialmente paralelas y al menos dos pistas de flujo diferentes existen.

2. Dispositivo según la reivindicación 1, caracterizado . porque las zonas de indicador están dispuestas de manera tal que el liquido de muestra de cada pista de flujo no pasa por más de una zona de indicador.

3. Dispositivo según la reivindicación 1, caracterizado porque las zonas de indicador están dispuestas en una hilera diagonal, en forma de V, W, M, N o lineal. . Dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque al menos dos hileras de zonas de indicador están dispuestas una atrás . de la otra en dirección de flujo y/o desplazadas lateralmente y las zonas de indicador . de las diferentes" hileras están dispuestas entre si para coincidi ' con intersticios, de manera que el liquido de muestra de cada pista de flujo no pasa por más de una zona de indicador. 5. Dispositivo según la reivindicación 1 o 3, caracterizado porque al menos dos hileras de zonas de indicador están dispuestas una atrás de la otra en dirección de flujo y/o lateralmente y las zonas de indicador de las diferentes hileras no están dispuestas para coincidir con intersticios, de manera que el liquido de muestra de cada pista de flujo pasa por más de una zona de indicador. 6. Dispositivo según la reivindicación 1 a 3, caracterizado porque al menos 2 grupos de zonas de indicador están dispuestas gue se ubican ' en diferentes direcciones de flujo, vistas desde la zona dé carga. 7. Dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque las zonas de indicador comprenden anticuerpos · respectivamente fragmentos de anticuerpos, respectivamente lectinas, antigenos respectivamente epitopos de antigenos y/o células respectivamente fragmentos de células. 8. Dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque las zonas de indicador comprenden en particular anticuerpos respectivamente fragmentos de anticuerpos. · contra antigenos de grupos sanguíneos respectivamente epitopos de antígenos y membranas respectivamente fragmentos ¦ de células de eritrocitos del grupo sanguíneo Al, A2, B y/o 0. . 9. Dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque las zonas de indicador comprenden en particular anticuerpos respectivamente fragmentos de anticuerpos contra antígenos de grupos sanguíneos respectivamente epitopos de antígenos y péptidos sintéticos, antígenos recombinantes y/o anticuerpos respectivamente fragmentos de anticuerpos contra marcadores infecciosos. 10. Dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque las zonas de indicador comprenden en particular anticuerpos respectivamente fragmentos de anticuerpos ' ^contra antígenos de grupos sanguíneos respectivamente ; epitopos de antígenos y fragmentos de trombocitos y/o linfocitos. , 11. Dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque- la membrana o las membranas consiste (n) preferentemente de polietileno, nitrocelulosa o nylon. 12. Dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque después de la zona de carga y antes de las zonas de indicador se encuentra, dispuesto en la membrana, al menos un elemento de obturación. 13. Dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque, después del al menos un elemento de obturación y antes de las zonas de indicador, se encuentra fijado al menos una almohadilla de conjugado. 1

4. Dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque los componentes del dispositivo están fijados en una capa portadora como refuerzo mecánico. 1

5. Dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado porque los componentes del dispositivo están integrados en una caja. 1

6. Uso del dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 11 para el análisis de sangre, en particular para la realización simultánea de la determinación de grupo sanguíneo y de la contraprueba sérica y/o del análisis de detección de anticuerpos. 1

7. Uso del dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 11 para el análisis de sangre, en particular para la realización simultánea de la determinación de grupo sanguíneo y de la detección de marcadores serológicos de infecciones respectivamente de fragmentos de éstos. 1

8. Uso del dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 11 para el análisis de sangre, en particular para la realización simultánea de la determinación de grupo÷ sanguíneo y de la. detección de anticuerpos contra células.- sanguíneas, . en particular anticuerpos de anti-trombocitos o anti-linfocitos, respectivamente fragmentos de éstos. 1

9. Método para ' la determinación de varios analitos o de sus derivados en una muestra líquida, comprendiendo: la aplicación de la muestra en la zona de carga de al menos una membrana del dispositivo según una de las reivindicaciones 1 a 15 precedentes, siendo que esta muestra está presente en un volumen apropiado para inducir el líquido de muestra a fluir en dirección a la región de absorción pasando por las zonas de indicador y para inducir los analitos o sus derivados en el líquido de muestra a formar un complejo en las zonas de indicador. 20. Método según la reivindicación 19, caracterizado porque los analitos o los derivados de éstos son ant'ígenos de grupos sanguíneos respectivamente epitopos de antígenos, anticuerpos dirigidos contra antígenos de grupos sanguíneos respectivamente fragmentos de éstos, anticuerpos dirigidos contra trombocitos o leucocitos respectivamente fragmentos de éstos o anticuerpos dirigidos contra agentes infecciosos respectivamente fragmentos de éstos o antigenos de agentes infecciosos respectivamente epitopos de antigenos. 21. Método según una de las reivindicaciones 19 o 20, caracterizado porque los analitos o... sus derivados comprenden en particular antígénos respectivamente epitopos de antigenos de los sistemas .de grupos sanguíneos ABO, Rh y Kell. .·;.;. 22. Método según una de las reivindicaciones 19 o 20, caracterizado porque los analitos o sus derivados comprenden en particular anticuerpos respectivamente fragmentos de éstos contra trombocitos y/o linfocitos. 23. Método según una de las reivindicaciones 19 o 20, caracterizado porque los analitos o sus derivados comprenden en particular anticuerpos respectivamente fragmentos de éstos contra agentes bacterianos y/o virales o antígenos bacterianos respectivamente epitopos de antígenos. 24. Método según una de las reivindicaciones 19 a 23, caracterizado porque las muestras líquidas consisten preferentemente de sangre completa, de concentrado de células sanguíneas, suero, . plasma y/o líquido de análisis, por ejemplo suero de control o células de control. 25. Método según una de las reivindicaciones 19 a 24, caracterizado porque se emplean al menos dos tipos de partículas indicadoras, siendo que de éstos al menos un tipo son eritrocitos. RESUMEN La invención se relaciona con un dispositivo para la determinación simultánea cualitativa o cuantitativa de varios analitos en una muestra liquida, comprendiendo una membrana (2) con una zona (5) de carga para la aplicación de una muestra liquida, , al menos dos zonas de indicador que pueden entrar en reacción reciproca con el/los analito(s) y al menos una región (3) de absorción que absorbe el fluido después de pasar por la zonas.de indicador, siendo que las zonas de indicador se ubican - entre la zona (5) de carga y la región (3) de absorción, caracterizado porque la dirección de flujo (pistas de flujo) se extienden esencialmente en sentido paralelo de la zona (5) de aplicación, pasando por cada zona de indicador a la región (3) de absorción al menos dos diferentes pistas de flujo están presentes. La invención se relaciona además con un método para determinar varios analitos o derivados de estos en una muestra liquida comprendiendo: la aplicación de la muestra en la zona (5) de carga de una membrana del dispositivo según las reivindicaciones 1 a 8 precedentes, siendo que la muestra referida es presente en cantidades suficientes para permitir qüe la muestra de fluido fluya en la dirección de la región (3) de absorción a través de la zona de indicador y para permitir que el analito o derivados de éste en la muestra liquida formen un complej en la zona de indicador.