KR20060034221A

KR20060034221A - 테크토리게닌의 이소플라본 유도체, 이의 제조 및 이를유효 성분으로 포함하는 항바이러스 의약

Info

Publication number: KR20060034221A
Application number: KR1020057021814A
Authority: KR
Inventors: 수에민 수; 총준 유안; 지아 왕; 상빈 퀴; 하이 인; 얀밍 젱
Original assignee: 쳉두 디캉 파마슈티칼 인스티튜트; 시츄안 디캉 에스씨아이-테크 파마슈티칼 코포레이션 엘티디.
Priority date: 2003-05-15
Filing date: 2004-05-14
Publication date: 2006-04-21
Also published as: KR101099967B1; US7902253B2; EP1630160A4; CN1594308A; EP1630160A1; RU2332410C2; WO2004111027A1; US20070123566A1; RU2005138163A; JP2007515389A; CN1285586C; ATE427944T1; JP4654187B2; DE602004020463D1; EP1630160B1

Abstract

본 발명은 화학식 (Ⅱ)로 표시되는 테크토리게닌(tectorigenin)의 이소플라본 유도체, 이것의 제조 방법 및 이것을 유효 성분으로 포함하는 항바이러스 의약에 관한 것이다. 화합물 구조는 다음과 같이 표시된다:

여기에서, R₁은 H, NH₂ 또는 SO₃M이고; R₂는 OR'이며; R₃는 H 또는 -CH₂NR"임; 여기에서 R'는 H, -CH₂COONa 또는 -CH₂CH₂NMe2이고; NR"는

또는 -NMe₂이며; M은 H, Na, K 또는 N⁺H(CH₂CH₂OH)₃이다.

Description

테크토리게닌의 이소플라본 유도체, 이의 제조 및 이를 유효 성분으로 포함하는 항바이러스 의약{An isoflavone derivative of tectorigenin, the preparation thereof and the antiviral medicine containing the same as an effective constituent}

본 발명은 테크토리게닌(tectorigenin) 화합물의 유도체에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 본 발명은 화학명이 5,7,4'-트리하이드록시-6-메톡실 이소플라본인 테크토리게닌 화합물의 유도체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 본 발명의 화합물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 본 발명의 화합물을 유효 성분으로 함유하는 항바이러스 의약에 관한 것이다.

인플루엔자 바이러스 및 다른 많은 바이러스 감염에 의해 야기되는 상부 기도 감염 및 바이러스성 폐렴과 같은 질환은 매우 일반적이며 많은 질환이 죽음에 이를 수 있다. 그러한 기도 감염성 질환을 치료하기 위하여 화학요법제가 아직 많이 사용된다. 그러나, 약물-저항성 박테리아 종 및 약물-저항성 바이러스 종의 성장 속도가 화학 항미생물 의약의 발달보다 종종 앞선다는 것이 무시할 수 없는 사항이 되었다. 이러한 분야에서 천연 전통 중국 의약의 이점을 사용하고 많이 이용하려는 의도가 점점 주목받고 있으며, 특히 천연 의약으로부터 유효 약학 성분을 추출 및 분리하고 및/또는 이러한 기초에서 그들을 새로운 약학 화합물로 추가적으로 개발 및 변형하기 위한 주의가 기울여지고 있다.

Sun Yuanbi et al. (Bulletin of the traditional Chinese medicine 1984, 9 (5)), Cheng Fangqun (Science of Chinese traditional and herbal drugs 1990, 22 (2)), Xu Yunlong (Plant research in Yunnan 1999, 21, (1)), Ji Wenliang et al. (Overseas medicineplant medicine part " 2000, 15 (2) 및 Chinese medical crop 2000, 23 (8))와 같은 많은 연구 보고서 및 문헌에서 보고되고 있는 바와 같이, 화학식 (I)로 표시되는 테크토리게닌 화합물은 전통 중국 의약, 즉, Iris tectorum Maxim, Belamcanda chinensis (L.) DC, Iris dichotoma pall., Iris japonica 및 I. Iris tectorum과 같은 항바이러스, 항박테리아 및 항염증 기능을 가진 I ridaceae 과 식물 내에 널리 존재하는 많은 플라본 화합물 성분들 중 하나의 이소플라본이다.

(I)

상기 언급된 문헌들과 같은 많은 문헌 내의 연구 결과는 전통 중국 의약-Iris tectorum Maxim 내 포함된 이소플라본 성분이 명백한 항바이러스 및 항염증 기능을 가진다는 것을 보여준다. 테크토리딘(tectoridin)은 Iris tectorum maxim의 주 유효 성분이다(그것의 함량의 약 5 %임). 그것의 문헌 보고서 및 약리저거 연구 는 그것이 다소 강한 항바이러스 및 항-염증 기능을 가진다는 것을 나타낸다. 앞서 언급된 화학식 (I)로 표현되는 테크토리게닌의 문헌 및 약리 연구는 그것인 테크토리딘의 가수분해 산물로 더 강한 항바이러스 및 항-염증 기능을 가진다는 것을 보여준다. 그러나, 테크토리딘 및 테크토리게닌은 나쁜 친수성을 가지며 그것의 임상 적용은 제한되어 있어서, 첫 번째로 해결되어야 하는 문제는 그것의 친수성을 개선 및 증가시키는 것이다. 실험 결과는 그들의 약학 효과를 유지 및 심지어 증가시키는 조건하에서 그들의 친수성을 증가시키고, 그들의 치료 효과를 증가시키며, 그들의 의약 제제로의 적용가능성을 확대하기 위하여는 제조 방법(preparation method)을 통하여 그것의 친수성을 증가시키는 것은 이상적이지 않고 테크토리딘 및 테크토리게닌의 화학적 변형을 통하여 그들의 화학 구조를 변화시키는 것만이 가능성 있는 수단이라는 것을 나타낸다.

본 발명은 상기 화학식 (I)로 나타나는 테크토리게닌 화합물에 기초하여 화학적 변형을 가해 얻어질 수 있는 일련의 유도체를 제공하며, 본 발명의 화합물들의 친수성은 테크토리게닌의 원래의 항박테리아, 항바이러스, 항-염증 및 항-발열성-&-진통성 효과를 적어도 유지하는 조건하에서 매우 개선되고 증가될 수 있다. 그러므로, 본 발명은 테크토리게닌 화합물의 약학 및 임상 적용 범위를 확장하는데 매우 유용하다.

첨가적으로, 본 발명은 유효 성분으로 본 발명의 화합물을 포함하는 항바이러스 의약을 제공하고, 특히 본 발명의 화합물을 함유하는 주사-타입 의약 제제를 제공한다.

본 발명의 테크토리게닌 유도체, 즉 화학명이 5,7,4'-트리하이드록시-6-메톡실 이소플라본 유도체는 화학식 (Ⅱ)로 표현된다:

(Ⅱ)

여기에서, R₁은H, NH₂ 또는 SO₃M이고;

R₂는 OR'이며;

R₃는 H 또는 -CH₂NR"이고;

여기에서, R'는 H, -CH₂COONa 또는 -CH₂CH₂NMe₂이고;

NR"는

또는 -NMe₂이며;

M은 H, Na, K 또는 N⁺H(CH₂CH₂OH)₃임.

위에서 언급된 일반 화학식 (Ⅱ)로 표시되는 화합물 중 전형적인 화합물은 R₁이 SO₃M"이고, 여기에서 M"이 H, Na, K 또는 -N⁺H(CH₂CH₂OH)₃일 수 있는 설펀 산 화합물이며, 그것의 구조는 화학식 (Ⅲ)으로 표시된다:

(Ⅲ)

상기 언급된 일반 화학식 (Ⅲ)으로 표시되는 화합물 중 전형적인 화합물은 설폰 산 또는 설포네이트 화합물, 즉 SO₃M"의 M"이 H, Na 또는 K인 화합물이며 그것의 구조는 화학식 (Ⅳ)로 표시된다:

(Ⅳ)

상기 언급된 일반 화학식 (Ⅲ)으로 표시되는 화합물 중 다른 전형적인 화합물은 R₁이 -SO₃ ^-N⁺H(CH₂CH₂OH)₃인 설폰 산 그룹이며, 그것의 구조는 화학식 (Ⅴ)로 표시된다:

(Ⅴ)

본 발명에서 언급된 일반 화학식 (Ⅱ)는 또한 R₁이 NH₂, R₂가 OH이며 R₃가 H인 전형적인 화합물을 포함하며 그것의 구조는 화학식 (Ⅵ)으로 표시된다:

(Ⅵ)

본 발명의 일반 화학식 (Ⅱ)에서 언급된 또 다른 전형적인 화합물은 R₁이 H, R₂가 -OCH₂COONa이며 R₃가 H이며, 그것의 구조는 화학식 (Ⅶ)으로 표시된다:

(Ⅶ)

부가적으로, 본 발명에서 상기 언급된 일반 화학식 (Ⅱ)에 언급된 또 다른 전형적인 화합물은 화학식 (Ⅱ)의 구조에서 R₁ 및R₃가 H이고 R₂가 OCH₂CH₂NMe₂이며, 그것의 구조는 화학식 (Ⅷ)로 표시된다:

(Ⅷ)

부가적으로, 본 발명에서 상기 언급된 일반 화학식 (Ⅱ)의 또 다른 전형적인 화합물은 R₁이 H이고, R₂가 OH이며, R₃가 -CH₂NR"이고, 여기에서 NR"은

이며, 그것의 구조는 화학식 (Ⅸ)로 표시된다:

(Ⅸ)

또한, 본 발명에서 상기 언급된 일반 화학식 (Ⅱ)의 또 다른 전형적인 화합물은 R₁이 H이고, R₂가 OH이며, R₃가 -CH₂NMe₂이고, 그것의 구조는 화학식 (Ⅹ)로 표시된다:

(Ⅹ)

상기 언급된 전형적인 화합물들 중에서 화학식 (Ⅵ), (Ⅷ), (Ⅸ) 및 (Ⅹ)로 표시되는 화합물들은 또한 약학적으로 허용가능한 염 화합물들일 수 있고, 예를 들어, 가장 일반적으로 사용되는 대응 하이드로클로라이드 화합물이다.

원료 물질로 화학식 (I)로 표시되는 테크토리게닌의 이소플라본 화합물을 취하여, 본 발명 내 다른 구체적인 치환 그룹들 및/또는 치환 위치들의 상기 언급된 화학식 (Ⅱ)로 표시되는 모든 화합물들이 알려진 유사한 치환 화합물 제조 원칙 및 방법을 사용하여 제조될 수 있다.

예를 들어, 본 발명의 화학적 변형을 위해 원료 물질로 사용된 전구체 화합물들, 즉 상기 화학식 (I)로 표시되는 테크토리게닌 이소플라본 화합물들은 지금까지 보고된 많은 방법을 사용하여 상기 언급된 Iridaceae 과(family)의 많은 의약 식물로부터 편리하고 용이하게 추출 및 분리될 수 있고, 또 그것은 새로운 합성에 의해서도 제조될 수 있다. 예를 들어, 참고적으로 사용될 수 있는 추출방법은 다음과 같다:

원료 의약 물질인 Iris tectorum Maxim이 건조되고, 분쇄되고, 넓은 체로 체과되고(#20 메쉬(mesh)에 의해), 추출기에 놓이고, 70% 에탄올(약물 중량의 4배 중량 이용)로 가열되고, 각각 3회(회마다 한 시간 지속) 반복된 후, 그것이 가열된 상태에서 여과되고, 그것의 여과물이 모아진다. 에탄올이 감압으로 회수된 후, 1.2 g/ml (50℃)의 특정 중량을 가진 갈색 추출물-유사 추출물(extractum-like extract)이 얻어지고, 그것의 수율은 원료 의약 물질의 49-51 %(중량비)이다. 상기 언급된 추출물이 95% 에탄올을 그 위에 첨가한 후에 고르게 진탕되고, 현탁액은 침전되고 여과되고, 여과물은 그 안에 95% 에탄올이 다시 첨가된 후에 고르게 진탕되고, 이러한 조작은 여과물이 거의 무색이 될 때까지 두 번 반복되고, 조(crude) 테크토리딘이 얻어진다. 이것은 가열되고, 그 안에 70% 에탄올이 첨가된 후에 재순환(recycle)되고, 정치 상태로 유지되고, 옅은 노란색 침전물이 생성되고, 여과되고, 70% 에탄올로 재결정되고, 무색의 결정성 파우더상의 테크토리딘이 얻어지고, 그것의 수율은 원료 의약 물질 양의 4.5 %이다.

200 g의 테크토리딘의 둥근 바닥 플라스크에 놓여지고, 그 안에 50% 에탄올 2,000 ml가 첨가된 후에 고르게 진탕되고, 고르게 흔들어지고, 가열되고 200 ml 농축 염산이 첨가된 후 2시간 동안 재순환되고, 그것이 가열된 동안 여과되고, 그 후 정치된 상태로 유지되고, 옅은 노란색의 얇고 가느다란 바늘모양의 결정이 생성된다. 그것은 여과되고, 400 ml의 95% 에탄올에 용해되고, 800 ml의 끓는 물에 부어지고, 냉각되고, 옅은 노란색 얇고 가느다란 바늘모양의 결정이 생성된다. 그것은 여과 후에 다시 재결정되고, 감압 60℃에서 건조된다. 화학식 (I)으로 표시되는 테크토리게닌의 123 g의 정제된 이소플라본 화합물(옅은 노란색의 얇고 가느다란 바늘모양의 결정)이 얻어지고, 그것의 수율은 약물량의 3 %이고, 그것의 함량은 98 % 이상이다.

R₁이 SO₃H인 치환된 프로덕트인 화학식 (Ⅲ)으로 표시되는 유도체는 일반적으로 화학식 (I)로 표시되는 이소플라본 화합물을 황산을 사용하여 설폰화 반응(sulfonating reaction)시킴으로써 얻어질 수 있다. 그것의 최적 방법들 중 하나는 다음과 같다: 1.0 g의 테크토리게닌이 취해지고, 4.0 g의 농축 황산이 첨가된 후에 그것이 용해될 때까지 교반되고, 그것은 실온에서 1.5~2 시간 동안 반응하고, 전체 반응 프로세스는 물이 없는 상태에서 진행되고, M"가 H인 화학식 (Ⅲ)으로 표시되는 설포닉 산 유도체 프로덕트가 얻어진다.

그것은 NaCl 또는 KCl 등과 같은 포화 생리 수용액으로 추가 처리된 후, 위에서 언급된 화학식 (Ⅳ)으로 표시되는 대응 소디움 설포네이트 또는 포타시움 설포네이트 화합물이 얻어진다. 그것의 두 단계 합성 라인은 다음과 같다:

상기 언급된 화학식 (Ⅴ)로 표시되는 테크토리게닌 화합물의 제조를 위한 방법은 다음과 같다: 화학식 (I)로 표시되는 테크토리게닌의 이소플라본 화합물이 원료 물질로 사용되고, 농축 황산과 혼합되고, 가열되고, 40℃ 내지 90℃(최적 온도 60℃)에서 교반되고, 냉각된 후 포화 소디움 클로라이드, 다른 알칼리 금속 하이드로클로라이드, 하이드로브로메이트 또는 니트레이트 용액에 부어지고, 3'-소디움 설포네이트 중간체 프로덕트가 얻어지고, 그것은 에탄올 용액에 현탁되고, 강-산 양이온 수지가 그것에 첨가되고, 그것이 실온에서 완전히 용해될 때까지 진탕되고, 그것에 트리에탄올아민이 첨가되고, 용매가 감압으로 증발되고, 화학식 (Ⅴ)로 표시되는 화합물이 얻어지며, 그것의 합성 라인은 다음과 같다:

상기 언급된 화학식 (Ⅵ)으로 표시되는 테크토리게닌 화합물의 제조를 위한 방법은 다음과 같다: 화학식 (I)로 표시되는 테크토리게닌의 이소플라본 화합물이 원료 물질로 사용되고, 3'-니트로 중간체 화합물이 그것이 얼음 수조에서 냉각되는 동안 질산과 농축 황산의 혼합물과 혼합된 에탄올 용액(즉, (질산 + 황산)/에탄올))을 점적하여 첨가함으로써 얻어지고, 그 후 그것은 메탄올에 용해되고, 3'-아미노-치환 화합물 (Ⅵ)이 대기압 하에서 수소 촉매 환원에 의해 얻어지고, 화학식 (Ⅵ)으로 표시되는 대응 염 화합물이 약학적으로 허용가능한 산과 반응시켜 추가로 얻어질 수 있고, 그것의 합성 라인은 다음과 같다:

상기 언급된 화학식 (Ⅵ)으로 표시되는 테크토리게닌 화합물이 제조될 때, 화학식 (I)로 표시되는 테크토리게닌의 이소플라본 화합물이 원료 물질로 취해질 수 있고, 부타논(butanone) 및 DMF가 혼합된 용매와 에틸 클로로아세테이트에 함께 용해되고, 물 없는 K₂CO₃ 및 촉매 량의 NaI가 그것에 첨가되고, 혼합물은 교반되고, 재순환되고, 실온으로 냉각되고, 그것의 용해되지 않는 물질이 여과되어 제거되고, 여과물은 감압으로 농축되고, 잔여물은 적당한 양의 물에 용해되고, 에틸 아세테이트로 추출되고, 그 후 물-세척되고, 용매는 건조 후에 감압으로 농축되고, 4'-에스테-에테르 중간체 프로덕트가 플래쉬 컬럼 분리로 얻어지고, 그것은 메탄올에 용해되고 그것이 교반되는 동안 NaOH 수용액이 점적으로 첨가된 후 정상 대기 온도에서 완전히 가수분해되고, 그것의 pH 값이 pH 3~4로 산으로 조절되고, 응집된(flocculated) 침전물이 감압하에서 메탄올을 증발 제거하여 얻어지고 화합물 (Ⅶ) (소디움 염)이 물 세척 후에 NaHCO₃와 반응시켜 얻어지고, 그것의 합성 라인은 다음과 같다:

상기 언급된 화학식 (Ⅷ)로 표시되는 테크토리게닌 화합물을 제조하기 위하여, β-디메틸아미노에탄올이 먼저 디클로로설폭사이드에 점적으로 첨가되고 0℃에서 강렬하게 교반되고, 혼합물이 교반되고 적하(dropping) 후에 35~50℃에서 반응하고, 그 후 물 없는 에탄올을 사용하여 재결정되고, 중간체 프로덕트- β-디메틸아미노클로라이드 하이드로클로라이드 A가 얻어진다. 화학식 (I)로 표시되는 테크토리게닌의 이소플라본 화합물이 원료 물질로 취해지고, 부타논, 아세톤, DMF, THF 또는 디옥산과 같은 용매에 용해되고, 그것에 물이 제거된 K₂CO₃ 또는Na₂CO₃, DMF 및 촉매 양의 NaI가 첨가되고, 그 후 그것은 재순화될 때까지 가열되고, 상기 언급된 중간체 프로덕트 A가 매 30분 마다 다섯 배취(batch)로 나누어서 그것에 첨가될 수 있고, 그것은 약 80℃에서 재순환되고, 얇은 라미네이트의 사용으로 체크되고, 냉각된 후 여과되고, 점착물(stickum)이 회전 증발기(rotary evaporator) 내 감압으로 여과 농축하여 얻어지고, 적당한 양의 물(중량으로 약 10배의 물)로 희석된 후에 에틸 아세테이트로 추출되고, 추출물은 물 세척 후에 건조되고, 용매는 증발 제거되고, 화합물 (Ⅷ)은 얻어지고, 그것의 대응 염 화합물은 약학적으로 허용가능한 산과 반응시켜 얻어질 수 있고, 그것의 합성 라인은 다음과 같다:

상기 언급된 화학식 (Ⅸ)로 표시되는 테크토리게닌 화합물의 제조를 위한 방법은 다음과 같다: 화학식 (I)로 표시되는 테크토리게닌의 이소플라본 화합물이 원료 물질로 사용될 수 있고, 37% (중량비) 포름알데히드 용액, 피페리딘, 디옥산, THF, 메탄올 또는 에탄올과 같은 용매 중 하나와 혼합되고, 그 후 화합물 (Ⅸ)은 그것을 냉각하고 재순환 반응 후에 여과함으로써 얻어진다. 게다가, 화학식 (Ⅲ)으로 표시되는 대응 염 화합물은 약학적으로 허용가능한 산과 반응시켜 얻을 수 있고 그것의 합성 라인은 다음과 같다:

실험 결과는 상기-언급된 반응의 위치 선택성이 화학 구조의 써클 A 상의 반응 프로덕트를 완전히 달성하는데 특이적이며 그것은 문헌에서 보고되고 전에 설계된 (써클 C 상) 위치와 다르다는 것을 보여준다. 따라서 본 발명은 테크토리게닌 이소플라본의 화학 구조의 써클 A 상에 선택적인 유도체를 얻는 방법을 제공하며, 그것은 다양한 방법으로 활성에 대한 그것의 구조의 혁신의 영향을 평가하는데 유리하다. 그러나, 유도체는 다른 반응으로 대부분 써클 C 상에 생성된다. 상기 언급된 화학식 (Ⅹ)로 표시되는 테크토리게닌 화합물은 이러한 기초에서 유사한 방법을 사용하여 얻어질 수 있다. 예를 들어, 다음과 같다: 화학식 (I)으로 표시되는 테크토리게닌의 이소플라본 화합물들이 원료 물질로 사용되고, 37% (중량비) 포름알데히드 용액, 디메틸아미노하이드로클로라이드 및 디옥산, THF, 메탄올 또는 에탄올과 같은 용매들 중 하나와 혼합되고, 재순환 반응 후에 냉각되고, 화합물 (Ⅹ)가 여과를 통하여 얻어지고, 잔여물이 모아지고, 화합물 (Ⅲ)로 표시되는 대응 염 화합물이 약학적으로 허용가능한 산과 반응하여 추가로 얻어질 수 있고, 그것의 합성 라인은 다름과 같다:

항바이러스 기능을 갖는 대응 약학적 조성물은 현재의 통상적인 제조방법으로 상기 화학식(Ⅱ)로 표시되는 유효한 용량의 테크토리게닌 화합물의 유도체 및 약학적으로 허용가능한 보조 첨가성분으로부터 제조될 수 있다. 전술된 항바이러스 조성물의 경우, 상기 염 화합물은 만족스러운 친수성을 가질 수 있기 때문에, 특히 항바이러스 기능을 갖는 주사-타입 의약으로 제조하기에 적합하고, 또한 경구용 제제로도 일반적으로 얻어질 수 있다. 예를 들어, 상기 전형적인 화합물의 비교 테스트가 Chinese Pharmacopeia, 2권, 2000 edition의 페이지 X의 실시예에 있는 용해도 테스트에 따라 수행된다: 미세하게 분쇄된 분말 비교 샘플을 취해서 25℃±2℃의 특정 량의 용매에 넣고 30분 동안 매 5분마다 강하게 흔들어주고 상기 테스트를 Pharmacopeia에 있는 다양한 용해 수행 정의에 따라 판단한다. 상기 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

용해 수행 비교 테스트 결과
화합물	용질: 물(mg/ml)
화합물(Ⅰ)	0.1 mg/ml
화합물(Ⅳ)	67 mg/ml
화합물(Ⅴ)	70 mg/ml
화합물(Ⅵ)	8 mg/ml
화합물(Ⅶ)	15 mg/ml
화합물(Ⅷ)	10 mg/ml
화합물(Ⅸ)	8 mg/ml
화합물(Ⅹ)	9 mg/ml

상기 표 1의 결과는 많은 용이하게 염화된 및/또는 친수성 그룹의 도입 때문에, 본 발명에서 많은 구조 형태에 해당하는 테크토리게닌 유도체(Ⅱ)의 화학적으로 변형된 이소플라본 화합물의 용해도가 증가된 것을 보여주며, 이러한 것이 약학적 및 임상적 적용에 유용하고 또한 그것의 in vivo 흡수 및 생체이용률을 증가시키는데 바람직하다.

추가적으로 주사제 내의 상기 화학식(Ⅱ)로 표시되는 테크토리게닌 화합물 유도체의 용액 안정성을 보장하고 증가시키기 위해, 주사 의약으로 허용가능한 가용화 성분 또한 상기 주사-형태의 약학 제제가 제조될 때, 허용된 양만큼 사용될 수 있다. 참고문헌으로 사용될 수 있고 상기 테스트 결과에 의해 효과적인 것으로 증명된 최적의 편리한 방법 중 하나는 총 주사량의 2~15%의 무게/부피 비율을 갖는 글루코스가 가용화제로서 상기 주사-형태 제제에 첨가되고, 수소결합은 화학식(Ⅱ)로 표시되는 이소플라본과 글루코스 내 폴리하이드록시의 구조적 연합에 의해 형성된다.

상기 화학식(Ⅳ)로 표시되는 테크토리게닌 소디움 설포네이트는 예로 설명하면, 그것의 물-용해도는 실온에서 단지 20 mg/ml(2%)이고 약학적 농도에 도달할 수 없다; 그것의 물에서의 용해도는 60~100℃에서 가열 후 50~60 mg/ml로 증가될 수 있고 침전물은 실온에서 냉각 후 다시 방출된다. 그러나, 그것은 실온 및 낮은 온도 (0℃~5℃)에서 맑게 유지될 수 있고, 또한 물 또는 당 생리식염수에 의해 선택적으로 희석되고, 4% 글루코스가 상기 주사제에 첨가된 후에도 탁해 지지 않는다. 따라서, 그것이 당 및/또는 생리식염수에 첨가될 때, 근육 내 주사제뿐만 아니라 정맥 주사제로도 사용될 수 있다. 이것은 글루코스가 상기 화학식(Ⅳ)로 표시되는 테크토리게닌 소디움 설포네이트의 주사가능한 친수성을 위해 약학 제제의 안정성을 상당히 증가시킬 수 있다는 것을 보여준다.

예를 들어, 약학적 구성 성분으로 테크토리게닌(Ⅱ)의 상기 이소플라본 유도체를 포함하는 상기 주사 의약의 제조를 위한 실시예들 중에서 방법 하나는 다음과 같다: 테크토리게닌 유도체(Ⅱ)의 5~80 중량부 및 주사용 글루코스의 20~150 중량부가 주사용 정제수의 700~800 중량부에 용해되고, 완전히 용해시킨 후 총 부피가 1,000 중량부에 다다를 때까지 주사용 정제수가 거기에 첨가되고, 2~15% 글루코스 및 5~80 mg/ml의 유효한 약학 구성성분(즉, 화합물(Ⅱ))을 포함하는 옅은 노랑의 투명한 액상 주사제는 G4 소결된 유리 깔때기로 여과하고, 통상적인 포장 및 멸균한 다음 얻게 된다.

본 발명은 다음의 구체적 실시예들로 상세히 설명될 것이다. 그러나 본 발명은 다음의 실시예들에 의해 한정된다고 이해되어서는 안 된다. 본 발명이 속한 분야에서 일반적인 기술 지식 및 통상의 수단을 통한 다양한 치환 및 변형 또한 본 발명의 전술한 기술적 사상으로부터 벗어남 없이 본 발명의 범위에 모두 포함된다.

도 1은 화학식(Ⅲ)로 표시되는 테크토리게닌 소디움 설포네이트의 IR 스펙트럼을 나타낸 것이다.

도 2는 화학식(Ⅲ)로 표시되는 테크토리게닌 소디움 설포네이트의 1H NMR 스펙트럼을 나타낸 것이다.

<실시예 1> 화합물 (Ⅳ)의 제조

화학식 (Ⅱ)로 표시되는 테크토리게닌 120 g 및 농축 황산 480 ml를 혼합하고 완전히 용해될 때까지 휘젓고, 휘저은 용액이 정치되고 1.5시간 동안 반응시킨 후, 그 후 포화 염화나트륨 5000 ml를 저으면서 상기 용액을 천천히 붇고, 백색 침전물이 생성되고 여과된다. 정제수 3000 ml를 상기 침전물에 첨가하고 상기 침전물이 완전히 용해될 때까지 수욕조에서 가열하고, 뜨거울 때 여과하여, 노란색의 평편한 결정을 결정 방출 및 여과에 의해 얻는다. 1000 ml의 물이 상기 졀정에 첨가되고, 혼합물은 해당 결정이 완전히 용해될 때까지 가열되고, 그것이 가열된 동안 여과되고, 결정은 방출되고 여과된다. 침전물은 60℃에서 감압으로 건조되고, 화학식 (Ⅳ)로 표시되는 150 g의 테크토리게닌의 정제된 소디움 설포네이트 프로덕트가 얻어지고, 그것은 옅은 노란색 얇고 가느다른 결정이며, 그것의 함량은 98% 이상이다.

화학식(Ⅳ)로 표시되는 테크토리게닌의 얻어진 소디움 설포네이트의 분광계 데이터는 다음과 같다:

IR(KBr 압축 정제，cm^-1): 3465(s), 1654(s), 1622(s), 1575(s), 1494, 1465(s), 1436, 1367, 1340, 1278, 1165(s), 1095(s)，1070，1031(s)，993，833，815，767，731，667，632，567，543，509，459;

1HNMR (용매 D₂O，내부 기준물질 TMS，δHppm): 7.88(s,1H), 7.74(s,1H), 7.25(d,1H), 6.94(d,1H), 6.21(s,1H), 3.70(s,3H).

<실시예 2> 화합물 (Ⅴ)의 제조

테크토리게닌 이소플라본 (Ⅰ)(이후, 원료 물질로 칭함) 300g을 농축 황산 5 ml와 섞고, 상기 혼합물을 가열하고 60℃에서 3시간 동안 휘저은 다음, 냉각시키고 포화 염화나트륨 용액 20ml에 붓는다. 상기 용액을 가만히 놔두고 여과한 다음, 여기서 얻은 고체 물질을 5% 염화나트륨 용액을 사용하여 재결정화하고, 옅은 노란색의 결정인 283g의 중간 생성물을 70%의 수득률로 얻는다.

전술한 중간 생성물의 150 mg(0.294 mmol)을 에탄올 5 ml에 현탁시키고, 미리 처리된 강산 양이온 레진을 상기 현탁액에 과량으로 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 휘젓고 현탁된 고체 물질을 완전히 용해한다. 상기 혼합물을 여과하고 상기 레진을 아세톤으로 세척한다. 티에탄올아민 55 mg을 여과액에 첨가하고 상기 용매를 감압하여 증발시키고, 가루의 고체 물질 화합물 (Ⅴ)을 디클로로메탄 및 아세톤을 첨가함으로써 얻으며, 이것의 수득률은 90%이고 녹는점은 155~159℃이다. 물에서의 용해도는 50 ml/ml 이상이다.

1H NMR(400 MHz, D₂O) δ: 7.92(s, 1H), 7.78(s, 1H), 7.32(d, J=7.2 Hz, 1H), 7.00(d, J=8.0 Hz, 1H), 6.27(s, 1H), 3.96(t, J=5.2 Hz, 6H), 3.74(s, 3H), 3.47 (t, J=5.2Hz, 6H).

13C NMR(100 MHz, D₂O) δ： 182.4, 159.0, 156.5, 155.7, 155.0, 154.1, 135.8, 133.2, 130.3, 124.1, 123.2, 119.6, 106.9, 96.9, 62.8, 57.8, 57.5.

IR cm^-1(KBr)：3356(OH, NH), 3151, 1655(C=O), 1612, 144, 1291, 1168, 1090。

ESI MS：379.1 [M-NH(CH₂CH₂OH)₃]^－.

원소 분석： C₂₂H₂₇NO₁₂S(%)：C 49.84, H 5.22, N 2.71; 계산된 값：C 49.90, H 5.14, N 2.65.

<실시예 3> 화합물 (Ⅵ)의 제조

테크토리게닌 이소플라본 (Ⅰ)(이후 원료 물질로 칭함) 300 g을 에탄올 5 ml에 용해하고, 질산 210 mg(68%) 및 농축 황산 500 ml과 혼합된 에탄올 용액(3ml)을 얼음물 욕조에서 냉각시키면서 상기 용액에 적가하고, 상기 혼합물을 24시간 동안 휘젓는다. 질소처리된(nitrified) 생성물 170 mg을 여과한 후 얻고 이것의 수득률은 49%이다.

녹는점：> 200℃.

ESI MS: 346.1 (M+1)^＋; 344.1 (M-1)^－.

전술된 질소 화합물 150 mg을 메탄올 4 ml에서 용해하고, 10%의 Pd/C 30mg을 상기 용액에 첨가하고 상기 화합물을 대기(5h)에서 완전히 수소화시킨다. 상기 생성물을 여과한 다음, 에틸 아세테이트 5 ml에 용해시키고, 감압하여 메탄올을 제거 하고, 상기 에틸 아세테이트 HCl 용액을 산성(pH=2~3)화 될 때까지 첨가한다. 화학식 (Ⅵ)로 표시되는 상기 염산염 생성물은 여과 후 얻고, 그것의 수득률은 80%이며 녹는점은 > 250℃이다. 물에서의 용해도는 1 mg/ml 이상이다.

상기 구조 테스트 데이터:

1H NMR(400 MHz, DMSO) δ: 12.94(s, 1H), 10.78(br.s, 1H), 10.58(br.s, 1H), 8.34(s, 1H), 7.48(s, 1H), 7.25(d, J=8.4Hz, 1H), 7.03(d, J=8.4Hz, 1H), 6.55(s, 1H), 3.76 (s, 3H).

13C NMR(100 MHz, DMSO) δ： 180.5, 157.9, 154.7, 153.4, 152.9, 150.4, 131.7, 128.0, 123.6, 122.0, 121.6, 121.2, 116.0, 105.0, 94.2, 60.2.

IR cm^-1(KBr): 3421(OH, NH), 3079, 1645(C=O), 1619, 1518, 1474, 1284.

ESI MS：316.1 (M+1)^＋; 314.1 (M-1)^－.

원소 분석: C₁₆H₁₄ClNO₆(%)：C 54.35, H 4.15, N 4.35; 계산된 값：C 54.63, H 4.01, N 3.98.

<실시예 4> 화합물 (Ⅶ)의 제조

원료 물질 300 mg(1 mmol), 에틸 클로로아세테이트 135 mg(0.1 mmol), 부타논 8 mg 및 소량의 5 부피% DMF를 혼합하고 무수 K₂CO₃ 207.3 mg(1.5 mmol) 및 촉매량의 NaI(약 5 mol%)을 상기 혼합물에 첨가하고, 이 혼합물을 섞으면서 재순환하였 다. 실온으로 냉각시키고, 불용성 물질을 여과하여 제거하고, 상기 여과액을 감압하여 농축시키고, 상기 잔여물을 적절한 양의 물로 용해시키고 에틸 아세테이트로 추출한 다음, 물로 두 번 세척하고 건조하고, 상기 용매를 감압하여 농축시킨 후, 빠른 크로마토그래피 컬럼으로 분리시키고 옅은 노란색의 고체 중간 생성물을 얻으며, 그것의 수득률은 39.3%이다. 녹는점은 164~167℃이다.

1H NMR(400 MHz, CDCl₃) δ： 12.85(s, 1H), 7.89(s, 1H), 7.36(d, J=8.4Hz, 2H), 6.86(d, J=8.4Hz, 2H), 6.35(s, 1H), 5.51(s, 1H), 4.81(s, 2H), 4.31(q, J= 7.2Hz, 2H), 3.98 s, 3H), 1.33(t, J= 7.2Hz, 3H).

ESI MS：387.2 (M+1)^＋.

중간 생성물의 125 mg(0.32 mmol)을 메탄올 4 ml에 용해시키고, NaOH 64.8 mg(1.6 mmol)을 수용액(1 mmol/ml)으로 제조하고, 그것을 상기 메탄올 용액에 휘저으면서 적가한 다음, 완전히 가수분해할 때까지 정규 대기 온도에서 24시간 동안 반응시키고, 상기 용액 pH 값이 pH 3~4가 될 때까지 희석된 염산으로 조절한 후, 상기 메탄올을 감압하여 증발시키고, 여기서 생겨난 백색의 응집된 침전물을 에틸 아세테이트에서 용해시키고, 물로 세척하고, 건조시키고 농축시킨 다음, 화학식 (Ⅶ)로 표시되는 소디움 염을 형성하기 위해 NaHCO₃로 반응시키고, 이것의 수득률은 80%이고 녹는점은 >250℃이며, 물에서 용해도는 2 mg/ml 이상이다.

1H NMR(400 MHz, DMSO) δ： 9.24(s, 1H), 10.58(br.s, 1H), 8.32(s, 1H), 7.24(d, J=8.4 Hz, 2H), 6.72(d, J=8.4 Hz, 2H), 6.47(s, 1H), 4.38(s, 2H), 3.78(s, 3H).

13C NMR(50 MHz, DMSO) δ：180.7, 170.3, 158.9, 158.2, 154.2, 152.9, 152.6, 132.2, 130.0, 122.3, 120.7, 115.4, 105.5, 92.2, 68.5, 60.1.

IR cm^-1(KBr)： 3420(OH), 1655(C=O), 1614, 1422, 1290, 1176.

ESI MS：359.1(M-Na+2)^＋, 357.0 (M-Na)^－.

원소 분석: C₁₈H₁₃NaO₈(%)：C 56.82, H 3.32; 계산된 값: C 56.85, H 3.45.

<실시예 5> 화합물 (Ⅷ)의 제조

디클로로설폭사이드 14.5 ml(0.12 mmol)을 건조된 둥근바닥 플라스크에 넣고, β-디메틸아미노에탄올을 얼음물 욕조에서 냉각시키면서 적가용 깔때기를 사용하여 적가한 다음, 상기 용액을 강하게 휘젓는다. 첨가한 후 얻은 갈색의 접착물을 35~50℃에서 1시간 동안 휘저은 다음, 무수 에탄올 50 ml을 적가함으로써 재결정하여 β-디메틸아미노클로라이드 하이드로클로라이드 중간 생성물을 얻는다. 적절한 양의 무수 에탄올 및 에틸 에테르로 세척하고 밀봉 봉인된 상태로 저장한다.

원료 물질 150 mg(0.5 mmol)을 부타논 15 ml에 용해시키고 무수 K₂CO 3214 mg(1.55 mmol), DMF 0.5ml 및 촉매 량의 (약 5 mol%) NaCl을 상기 용액에 첨가시키고, 상기 혼합물을 재순환될 때까지 가열하고, 상기 중간 생성물 115.3 mg(0.8 mmol)을 상기 혼합물에 배치(batch)별로(5 배치로 매 30분 동안)로 첨가하고, 후자 를 48시간 동안 약 80℃에서 재순환시키고 냉각시키고, 불용성 물질을 여과하여 제거하고, 상기 여과액이 건조될 때까지 감압으로 회전 증발기에서 농축시키고 접착물을 얻는다. 에틸 에스테르로 추출하고 물로 세척한 다음, 건조하고 적절한 양(무게비로 10배)의 물로 희석한 후 농축시켜 노란색의 고체 생성물인 화합물 (Ⅷ)을 얻으며, 이것의 수득률은 46.5%이다. 하이드로클로라이드를 통상적인 방법으로 제조한다. 그것의 녹는점은 (부드러워 질 때) 190℃이고 (분해될 때) 235℃이다. 그것의 물 용해도는 2 mg/ml 이상이다.

1H NMR(400MHz, DMSO) δ： 12.98(s, 1H), 10.57(br.s, 1H), 9.69(s, 1H), 8.49(s, 1H), 7.41(d, J=8.4 Hz, 2H), 6.94(s, 1H), 6.84(d, J=8.1 Hz, 2H), 4.54 (t, J=5.2 Hz, 2H), 3.78(s, 3H), 3.58(t, J=4.8 Hz, 2H), 2.89(s, 6H).。

13C NMR(50m MHz, DMSO) δ：180.9, 157.8, 157.2, 157.0, 154.8, 153.0, 132.2, 130.3, 122.4, 121.1, 115.4, 106.5, 92.4, 64.4, 60.5, 55.2, 43.2.

IR cm^-1(KBr)： 3418(OH, NH), 1656(C=O), 1614, 1515, 1460, 1272.

ESI MS： 372.1(M+1)^＋.

원소 분석： C₂₀H₂₂ClNO₆ (%)：C 58.85, H 5.78, N 3.64; 계산된 값: C 58.90, H 5.44, N 3.43.

<실시예 6> 화합물 (Ⅸ)의 제조

원료 물질 300 mg(0.1 mmol), 함량이 37 중량%인 포름알데하이드 용액 81 mg(0.1 mmol), 피페리딘(2 당량) 및 디옥산 5 ml을 혼합하고 3시간 동안 재순환시킨다. 냉각 후 여과한 다음 옅은 노란색의 고체 생성물인 화합물 (Ⅸ)을 얻는다. 적절한 양의 농축 염산을 첨가하여 상기 대응하는 하이드로클로라이드를 얻고, 이것의 수득률은 90%이며, 녹는점은 (분해될 때) 245℃이고, 물에서의 용해도는 1 mg/ml 이하이다.

1H NMR(400 MHz, DMSO) δ： 13.43(s, 1H), 11.26(s, 1H), 10.03(br.s, 1H), 9.74(s, 1H), 8.42(s, 1H), 7.38(d, J=8.4Hz, 2H), 6.86(d, J=8.4Hz, 2H), 4.30(s, 2H), 3.82(s, 3H), 3.45-3.38(m, 2H), 2.97(m, 2H), 1.78-1.63(m, 4H), 1.38-1.36(m, 1H), 1.07-1.04(m, 1H).

13C NMR(50 MHz, DMSO) δ：181.0, 157.9, 157.1, 154.3, 152.4, 131.1, 130.2, 122.1, 120.9, 115.4, 105.0, 95.5, 80.5, 56.2, 52.1, 48.2, 22.4, 21.2, 18.8.

IR cm^-1(KBr)：3197(OH, NH), 2954, 1652(C=O), 1585, 1515, 1458, 1374, 1226.

ESI MS：398.0(M+1)^＋; 396.2 (M-1)^－.

원소 분석： C₂₂H₂₄ClNO₆ (%)：C 60.50, H 5.74, N 3.54; Calculated value：C 60.90, H 5.58, N 3.23.

<실시예 7> 화합물 (Ⅹ)의 제조

원료 물질 150 mg(0.5 mmol), 함량이 37 중량%인 포름알데하이드 용액 40.5 mg(0.5 mmol), 디메틸아민 하이드로클로라이드 61.2 mg(0.75 mmol) 및 디옥산 2 ml을 혼합하고 10시간 동안 70~80℃에서 재순환 시키고, 냉각하고 여과한 다음 불용성 물질을 수집한 후 화합물 (Ⅹ)을 얻는다. 상기 생성물인 하이드로클로라이드를 산 조건(염산 pH 2~3)하에서 에탄올로 재결정화 후 얻고, 그것의 수득률은 38.7%이며, 녹는점은 248℃이고, 물에서의 용해도는 2 mg/ml 이상이다. 상기 생성물의 위치 선택성은 전술한 화합물 (Ⅶ)의 위치 선택성과 동일하다.

1H NMR(400 MHz, DMSO) δ： 13.40(s, 1H), 11.32(br.s, 1H), 10.23(br.s, 1H), 9.74(s, 1H), 8.40(s, 1H), 7.38(d, J=8.4Hz, 2H), 6.85(d, J=8.4Hz, 2H), 4.34(S, 1H), 3.81(s, 3H), 2.77(s, 6H).

13C NMR(100MHz, DMSO) δ： 181.0, 157.9, 156.9, 154.3, 154.2, 152.3, 131.1, 130.2, 122.2, 120.9, 115.4, 105.0, 95.9, 60.6, 48.6, 42.3.

IR cm^-1(KBr)：3145(OH, NH), 1656(C=O), 1577, 1462, 1379, 1223.

ESI MS： 357.9(M+1)^＋; 356.2(M-1)^－.

원소 분석： C₁₉H₂₀ClNO₆(%)：C 57.99, H 5.11, N 3.85; 계산된 값: C 57.95, H 5.12, N 3.56.

<실시예 8> 다양한 투여량-형태 의약의 제조

1. 주사액 제조

총 주사량의 중량/부피 비율로 2~15 %인 글루코스를 가용화제로 첨가하여, 수소 결합이 이소플라본기와 글루코스 내 폴리하이드록시의 결합의 의해 형성되기 때문에 그것의 물에서 용해도는 증가한다.

테크토리게닌 소디움 설포네이트을 예로 들면, 그것의 물에서 용해도는 실온에서 단지 20 mg/ml(2%)이고, 치료 농도에는 도달할 수 없고, 그것의 물에서 용해도는 60-100℃까지 가열한 후 50-60 mg/ml(5-6%)로 증가될 수 있으며, 상기 침전물은 실온으로 냉각한 후 다시 방출된다. 그러나 2~15% 글루코스가 상기 주사액에 첨가된 후, 실온 및 낮은 온도(0℃~5℃)에서 투명하게 유지될 수 있고, 정제수 또는 당 생리식염수에 의해 임의로 희석될 수 있으며 다시 탁해지지 않는다. 따라서, 당 및/또는 생리식염수에 첨가될 때, 근육내 주사용뿐만 아니라, 정맥주사용으로 사용될 수 있다. 이것은 테크토리게닌 소디움 설포네이트 수 용해도가 글루코스에 의해 증가될 때 동시에 주사용 제제 의약 안정성 또한 상당히 증가될 수 있다는 것을 나타낸다.

테크토리게닌 소디움 설포네이트 100 g 및 주사용 글루코스 150 g을 주사용 정제수 1500 ml에 용해시키고, 상기 혼합물이 완전히 용해된 후 주사용 상기 정제수를 2000 ml 부피까지 첨가하고, 상기 여과액을 앰플병에 포장하고 G4 소결유리관을 사용하여 여과한 후 통상적인 방법으로 멸균한다. 상기 얻은 주사액은 옅은 노란색의 맑은 액체이다.

화학식 (Ⅴ)로 표시되는 화합물 100 g 및 주사용 글루코스 100 g을 주사용 정제수 1500 ml에 용해시키고, 상기 혼합물이 완전히 용해된 후 주사용 상기 정제 수를 2000 ml 부피까지 첨가하고, 상기 여과액을 G4 소결유리관을 사용하여 여과한 후 앰플병에 포장하고 통상적인 방법으로 멸균한다. 상기 얻은 주사액은 옅은 노란색의 맑은 액체이다.

테크토리게닌 소디움 설포네이트 100 g 및 주사용 글루코스 80 g을 주사용 정제수 1500 ml에 용해시키고, 상기 혼합물이 완전히 용해된 후 주사용 상기 정제수를 2000 ml 부피까지 첨가하고, 상기 여과액을 앰플병에 포장하고 G4 소결 유리관을 사용하여 여과한 후 통상적인 방법으로 멸균한다. 상기 얻은 주사액은 옅은 노란색의 맑은 액체이며, 15~28시간 동안 냉동건조실에서 냉동건조하여, 냉동건조된 노란색의 주사용 파우더를 얻는다.

2. 구강용 제제의 제조

상기 구강용 제제는: 정제, 파우더, 과립, 캡슐, 환제, 적하-환제(dripping-pill), 미니-환제, 다양한 용액 등을 포함한다.

상기 파우더는 본 출원인들에 의해 합성된 모든 유도체들은 옅은 노랑색 및 노란 고체이고 건조하고 곱게 분쇄(상기 고운 파우더는 #5 체를 통과하고 #6을 통과할 수 있는 95% 이상을 포함하는 파우더를 의미함)하여 얻기 때문에, 고체 경구 제제로서 다양한 제형의 기초가 된다. 상기 파우더를 체를 통과시키고, 그것의 유동성과 포장성을 좋게 하기 위해 적절한 양의 탈크 파우더 보조 물질을 추가한 후, 상기 파우더를 얻는다.

과립 제조: 상기 약물 및 보조 물질을 분쇄 후 완전히 혼합한 다음, 적절한 결합제를 상기 혼합물에 첨가 후 과립화하고, 건조시킨 후, 과립-분류화하여 포장 한다,

캡슐 제조: 상기 캡슐은 연질과 경질 캅셀로 분류된다. 상기 경질 캡슐은 약물 파우더 또는 과립 캡슐화에 의해 제조되며, 상기 연질 캡슐은 구형 및 부드러운 캡슐 물질에 채워지는 약물 용액에 의해 제조된다. 적절한 물질-건조 젤라틴을 상기 연질 캡슐 껍데기로 사용하기 위해 1:0.4 비율의 글리세린-물에서 글리세린 및 정제수와 함께 혼합하며, 상기 용액 약물 pH 값을 4.5-7.5로 조절하고 상기 연질 캡슐을 또한 적하 또는 압축 과정에 의해 #80 메쉬를 통과하여야 하는 고체 약물 파우더로부터 제조할 수 있다.

또한, 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체(EVA)와 폴리프로필렌과 같은 다양한 보조 물질 등을 선택하여, 보통 제조 과정에 따라 지연-방출 및 조절-방출을 위한 지지체를 만들기 위해 사용할 수 있다. 예를 들어, 상기 테크토리게닌 유도체 약물은 미니-캡슐화에 의해 필요 되는 것과 같이 방출된 생성물이 될 수 있고, 그것이 비어있는 일반적인 캡슐에 채워진다.

적하-환제 또는 미니-환제: 상기 적하-환제의 이점은 빠른 효과, 높은 생체이용률, 적은 부작용, 액체 약물로부터 제조된 고체 환제의 편리한 약물-복용 및 수송, 약물 안정성 증가, 간단한 생산 장비, 쉬운 조작성, 작은 중량 편차, 적은 제조비용 및 적은 먼지가 있으며, 많은 형태의 적하-환제는 구강용 약물, 외부 사용, 지연 방출, 조절 방출, 국부 치료 등을 위해 제조될 수 있다.

약물 용액을 폴리에틸렌 글리콜 및 스테릭 산과 같은 의약 기질(상기 기질은 가열됨)과 함께 균등하게 혼합하고, 상기 혼합물을 열 보존 상태에서 적하-환제 기 계에 넣고 적절한 농축 약제에 있는 저장소에 적하하고, 건조시킨 다음, 농축 약제를 세척한 후 분류하고 품질관리 후 포장한다.

정제:

상기 정제는 보통 압축 정제, 저작정, 발포정, 다중 압축 정제, 방출 지연 정제, 조절-방출된 정제, 코팅된(당-코팅, 필름-코팅 및 장-코팅) 정제, 분산 정제, 구강 정제 및 설하 정제 등을 포함한다.

테크토리게닌 유도체 50 g 및 전분과 파우더 당분 950 g을 분쇄 후 고르게 혼합한 다음, 원료 및 보조 물질을 체에 거른 다음, 균일하게 혼합하고, 적절한 양의 결합제를 부드러운 물질로 형성시키기 위해 상기 혼합물에 첨가한 다음, 체에 통과시키고, 과립화하고 건조시킨 다음, 분류하고, 상기 혼합물에 붕해제 및 윤활제를 첨가한 후 완전히 혼합하고 압축하고, 코팅하고 품질관리 후 포장한다.

지연-방출 및 조절-방출 정제

테크토리게닌 유도체 50 g을 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌 골격과 균등하게 혼합하고 압축하여 보통 제조 과정에 따라 1000 지연-방출 정제로 제조한다. 상기 약은 천천히 방출하고 상기 골격은 약물 방출 후 디젝터(dejecture)와 함께 방출된다.

3. 외부 사용을 위한 제제의 제조

이들은 로션, 점안약, 스프레이, 안연고, 겔, 좌약, 도포제, 연고, 점비약, 귀물약, 필름제, 경피 스티커 등을 포함한다.

안 연고: 원료 물질(raw material)로서, 상기 유도체를 고운 파우더로 만들 고(모든 파우더는 #7인 체를 통과하고 #8을 통과할 수 있는 파우더 95% 이상을 포함하는 것을 의미함), 적절한 기질을 첨가한 후 눈 사용을 위한 겔로 제조되거나 안 연고로 제조된다.

외부 사용을 위해 상기 파우더의 원료 및 보조 물질을 매우 미세한 파우더로 만든다(이는 모든 파우더는 #6인 체를 통과할 수 있고, #7인 체를 통과할 수 있는 파우더 95% 이상을 포함함). 외용제용 상기 파우더는 통상적으로 바이러스를 죽이거나 바이러스 감염을 예방하기 위해 사용될 수 있다.

점안약: 원료 물질로 테크토리게닌 유도체 20 g은 점안약으로 제조되고, 이것의 pH 값은 인산염 버퍼 용액 pH 값 조절제를 첨가함으로써 5.9~8.0으로 조절하고, 그것의 삼투압은 적절한 양의 글루코스 삼투압 조절제를 첨가함으로써 0.6~1.5%의 염화나트륨 삼투압에 상응하도록 조절한다. 상기 용액을 적은 양의 점성 조절제(폴리에틸렌 글리콜) 및 정제수 980 g을 첨가한 후 여과하고, 상기 여과액을 멸균 후 무균 상태에서 병에 포장할 수 있다.

스프레이, 점비약 및 귀물약의 제조 방법은 비슷하나, 이들의 삼투압 및 pH값 요구량은 절대적인 것은 아니다.

연고 및 도포제

테크토리게닌 유도체 40 g을 매우 미세한 파우더로 만들고 960 g의 친수성 기질 폴리옥시에틸렌 글리콜 600 및 2000(4:6 비율)에서 용해하고, 상기 혼합물을 열처리하고 균등하게 혼합한 후 포장하여, 품질관리 및 외부 사용을 위한 특정 두께를 갖는 반고형 제제를 얻을 수 있다.

겔

테크토리게닌 유도체 40 g을 매우 미세한 파우더로 만들고 정제수에서 용해한다. 친수성 기질 카보폴(Carbopol)을 하이드로겔 기질로 만든 다음, 이를 상기 약제와 혼합하고, 정제수가 1000 ml가 될 때까지 첨가한다. 투명하거나 반투명 겔을 품질관리 및 포장 후 얻을 수 있다.

좌약

테크토리게닌 유도체 40 g을 매우 미세한 파우더로 만들고 960 g의 친수성 기질 폴리옥시에틸렌 글리콜 600 및 18000(4:6 비율)에서 용해하고, 상기 혼합물을 열처리하고 균등하게 혼합한 후 유동 파라핀으로 코팅된 거푸집에 부은 다음, 좌약의 약정에 맞는 녹는 시간 제한을 갖고 외부 사용을 위해 냉각되고, 형태화 되며, 품질 관리 및 포장된 고체 제제를 얻을 수 있다.

필름 코팅제

테토리게닌 유도체 및 고분자 필름 물질인 폴리에틸렌 포름알데하이드와 아세트알데하이드 농축물(4:96 비율)을 에탄올에서 용해하여 외부 사용을 위한 필름 코팅 제제를 얻을 수 있다.

경피 접착제

테크토리게닌 유도체 60 g을 우선 곱게 빻고 정제수에 용해한 다음, 친수성 폴리머 PVA 또는 PVP를 물로 균일하게 혼합 후 겔 풀(pool)을 형성하기 위해 약용 수양액으로 혼합한다. 후자 물질을 품질 관리하여 1회 분 씩 담아, 첩착층을 뒷면 물질(폴리프로필렌)상에 감압 글루(glue)를 코팅함으로써 얻을 수 있고 상기 층은 을 양용 풀보다 더 큰 부분으로 나누고 나서, 겔 풀과 혼합한다. 정전기 방지(anti-sticking) 물질(폴리에틸렌 고중합체)층을 접착제 표면에 적용시켜 경피 접착제를 완성한다.

<실시예 9> 테크토리게닌 소디움 설포네이트의 급성 독성 테스트 및 항바이러스 효과 테스트

다음의 테스트를 실험용 샘플로서 상기 화학식 (Ⅳ)로 표시되는 테크토리게닌(50 mg/ml)의 소디움 설포네이트 주사제를 이용하여 수행한다:

1. 급성 독성 테스트

무게가 18~20 g인 수컷 및 암컷 쥐(반씩)를 실험용 동물로서 선택하고, 각각 근육 내, 정맥 내 및 복강 내 주사로 투여한다. 0.2 ml/10 g(500 mg/Kg) 투여량을 쥐의 뒷다리 근육 양쪽에 각각 근육 내 주사(im)로 주입한다; 정맥 내 주사용인 모든 그룹의 꼬리 정맥에 투여량을 841.5 mg/Kg, 781.25 mg/Kg, 725.25 mg/Kg, 673.25 mg/Kg 및 580.2 mg/Kg으로 하여 각각 투여한다; 복강 내 주사용(ip) 투여량은 0.4 mg/10g(예를 들어, 1000 mg/Kg에 상당함)이다. 상기 실험용 동물 독성 반응 및 모든 그룹에서 투여 후 사망은 14일 동안 하루에 한번 개별적으로 관찰된다. 일단 동물이 사망하면, 즉각 해부한다. 반치사량은 중간유효량 확률 단위 방법(가중 선형 회귀방법)을 사용하여 측정된다. 실험결과: ① 근육내 주사에 의해 투여된 실험용 동물의 정신 상태, 털 상태, 식이, 음용 및 발육과 같은 반응에서 비정상이 발견되고 주사 후 14일 안에 20마리의 쥐가 모두 사망하지 않아서, 근육내 주사로 투여된 쥐의 최대 내성 투여량은 500 mg/Kg이고 그들의 반치사량은 500 mg/Kg이상 이 되어야 한다. ② 정맥 내 주사에 의해 투여된 실험용 쥐의 반 치사량은 LD50=725.81이고 그들의 95% 신뢰 한계는 669.92 mg/Kg~785.53 mg/Kg이다; 예비 테스트 생성물에서 순차방법에 의해 측정된 반치사량은 LD50=868.2 mg/Kg이고 LD50 95% 신뢰 한계는 798.2~944.4 mg/Kg이다. ③ 복강내 주사에 의해 투여된 어떠한 실험용 쥐도 14일 안에 사망하지 않고 복강내 주사로 한번 투여된 쥐의 최대 내성 용량은 1000 mg/Kg이다.

3가지 투여에 의해 수행된 상기 급성 독성 테스트의 결과는 테스트 샘플로서 사용된 전술한 항바이러스 주사가 낮은 독성을 갖고 있음을 교시하고, LD50은 im 및 ip에 의해 투여한 경우에 측정되지 않고, 최대 내성 용량은 각각 500 mg/Kg 및 1000 mg/Kg이다; LD50은 iv에 의해 투여한 경우 725.81 mg/Kg 및 868.2 mg/Kg이다.

2. in vitro 항바이러스 테스트

상기 테스트 약물은 본 발명의 상기 주사용 샘플이며, 상기 대조 약물은 주사용 칼륨 나트륨 디하이드로안드로안드로그래폴라이드 숙신산(상표명: Chuanhunging for injection, 40mg/ml(lot №:000501, produced by Chengdu Pharmaceutical Factory №3, 화학 구조:

)이며, 상기 공 통제(blank control)는 Hanks liquor(virus laboratory, laboratory section, Sichuan Provincial People's Hospital에 의해 제공됨)이다.

실험용 균주는: Hep-2 및 HL16C 세포(이러한 것들은 세포 엔지니어링 조사 과, Shantou Huaying Bioengineering Application and Research Institute에 의해 모두 제공됨)이다. 상기 바이러스 균주는 아데노바이러스 ADV3 형태 및 ADV7 형태, 호흡기세포융합바이러스(RSV), 인플렌자 바이러스(Flu V) 형태 A1 및 형태 A3의 혼합된 세포 균주이고 콕사키 바이러스 그룹 B(CoxBV)(이러한 바이러스들은 Capital Research Institute of Pediatrics, the virus research institute of China's Preventive Medical Scienc Research Institute 및 Sichuan Provincial Sanitary 및 Anti-epidemic Station 에 의해 제공됨) 및 TCID50은 앞의 테스트로 측정된다.

테스트 방법:

(1) 세포 독성 테스트

상기 테스트 샘플 주사 및 주사용 Chuanhuning을 배수비례의 법칙에 따라 10 mg/ml로부터 Hanks액으로 각각 희석하고, 희석한 후 두 용액은 10 mg/ml, 5 mg/ml, 2.5 mg/ml 및 1.25 mg/ml이다. 4가지의 다른 농도를 갖는 상기 두 약제를 Hep-2 및 Z-HL16C로 각각 종두하고, 상기 세포 대조군을 동시에 공급하고, 독수리 장딴지 혈청 2%의 유지 배지(2% calf blood serum Eagles maintenance media)를 첨가하고 온도조절기에서 37℃로 유지시킨 다음 매일 상기 세포 독성 반응을 관찰한다. 상기 독성 테스트 결과는 하기 표 2에 나타내었다.

약물	바이러스	농도(mg/ml)				바이러스대조군	세포 대조군
약물	바이러스	10	5	2.5	1.25	바이러스대조군	세포 대조군
테스트 샘플	Hep -2 Z-HL16C	-	-	-	-	-	-
테스트 샘플	Hep -2 Z-HL16C	-	-	-	-	-	-
Chuanhuning	Hep -2 Z-HL16C	-	-	-	-	-	-
Chuanhuning	Hep -2 Z-HL16C	-	-	-	-	-	-
공대조군 (Hanks액)	Hep -2 Z-HL16C	-	-	-	-	-	-
공대조군 (Hanks액)	Hep -2 Z-HL16C	-	-	-	-	-	-
주의: "-"은 어떠한 독성 반응도 세포에서 발생하지 않았음을 의미함.

표 2에서 결과에서는 시험 시료 용액, 대조군 약물인 추앙후닝(Chuanhuning), 및 블랭크 대조군(행크스 액체(Hanks liquor))은 Hep-2 및 Z-HL16C 세포에 대해 어떠한 독성 반응도 나타내지 않았다.

(2) 항-바이러스 시험

100TCID50 ADV3, ADV7, FluㆍV-형 A1 및 A3, CoxBV, 및 RSV 바이러스들은 Hep-2 및 Z-HL16C 세포에 각각 백신 접종하고(FluㆍV-형 A1 및 A3은 Z-HL16C 세포에 백신 접종함), 상기 바이러스 용액을 30분 이내의 흡수 이후에 세척하였으며, 시험 시료 및 추앙후닝 비-독성 리미트 용액(limit solution)을 상기 용액에 각각 첨가하고(예를 들어, 10 ㎎/㎖, 5 ㎎/㎖, 2.5 ㎎/㎖ 및 1.25 ㎎/㎖), 상기 바이러스 대조군, 세포 대조군 및 블랭크 대조군(행크스 액체)을 상기 약물들과 함께 동시에 제조하였다. 상기 세포 유지 배지는 2% 우혈청 이글스 배지(calf blood serum Eagles medium)이며, 상기 배지는 배양기에서 37℃로 유지되며, 상기 Hep-2 및 Z-HL16C 세포 병리학적 변화를 관측하고, 모든 그룹에서의 상기 세포 병리학적 변화를 매일 기록하였다. RSV 내성 시험에 있어서, 상기 바이러스 및 비-독성 리미트 약제(limit drug)를 백신 접종한 후, 상기 용액을 37℃에서 24시간 동안 배양기에 수평으로 놓고, 이어 회전 배양기(12회/분)로 35℃에서 제거하고, 상기 세포 병리학적 변화를 매일 관측한다. 시험관에서 pH 값이 배양 감소하는 경우, 상기 용액을 즉시 교체해야 한다. 상기 세포는 정상이고 상기 시험에서 세포 대조군에서는 잘 자라는 반면, 2+ 내지 3+의 병리학적 변화가 바이러스 대조군에서 나타나면, 시험을 중단해야 한다. 시험 결과는 표 3에 나타나 있다.

표 3에서의 결과에서, 본 발명의 10㎎/㎖ 시험 시료 주사액은 ADV3, ADV7, CoxBV, FluㆍV-형 A1 및 RSV 세포발병에 대한 억제 효과를 갖고 있으며, FluㆍV-형 A3에 대해 부분적인 억제효과를 갖는 것으로 증명된다. 본 발명의 상기 5㎎/㎖ 용액은 FluㆍV-형 A1 및 RSV 세포발병에 대해 억제효과를 갖고 있고, ADV3 및 CoxBV에 대해 부분적인 억제효과를 갖는다. 2.5㎎/㎖ 용액은 FluㆍV A1에 대해 억제효과를 갖는다. 10㎎/㎖ 추앙후닝 용액은 ADV3 및 7, CoxBV, FluㆍV A1 및 RSV 세포발병에 대한 억제 효과를 갖는다. 모든 시험관에서 기타 농도를 갖는 용액 및 블랭크 대조군은 세포 병리학적 변화를 억제할 수 없다. 하기 표 3에 항-바이러스 시험 결과를 나타내었다.

(주석: "-"는 상기 세포에서 어떠한 병리학적 변화도 없음을 의미한다. 1+ 내지 3+는 세포 병리학적 변화 정도를 나타낸다.)

상술한 시험 결과에서는, 10 ㎎/㎖ 농도의 상기 시험 시료의 주사액은 100TCID50 바이러스 감염의 경우에 ADV3, ADV7, CoxBV, FluㆍV-형 A1 및 A3, 및 RSV에 대해 상이한 정도의 억제효과를 갖고 있고, FluㆍV-형 A1 및 RSV에 대해 우수한 억제효과를 갖는 것으로 나타난다. 10㎎/㎖ 추앙후닝(대조군 약제) 용액은 ADV3, ADV7, CoxBV, FluㆍV-형 A1 및 A3, 및 RSV에 대해 억제효과를 갖는다. 상기 시험결과에서는, FluㆍV-형 A1 및 RSV에 대한 본 발명의 상기 시험 시료 주사액의 억제효과는 현재 주사액으로 사용되는 추앙후닝보다 양호할 수 있는 것으로 교시하고 있다.

<실시예 10> 항-바이러스 효과 시험

하기의 약학 효과 시험은 상기 시험 시료로서 상기 실시예에서의 전형적인 테크토리게닌(Tectorigenin) 유도체를 채택함으로써 수행된다.

1. 항바이러스 시험

상기 시험 약제들로는 본 발명의 유도체로부터 제조되는 주사용 시료, 경구용 캡슐, 과립, 정제, 용제뿐만 아니라, 점안약(eye drops), 리니멘트(liniment), 크림, 로션 및 점이액(ear drops)이 있다. 상기 대조군 약제는 주사액용 포타슘 소듐 데하이드로안드로안드로그래폴라이드 숙시네이트(Potassium Sodium Dehydroandroandrographolide Succinate)(상품명: 주사액용 추앙후닝, 40㎎/㎖, Chengdu Pharmaceutical Factory No3에 의해 제조됨)이다. 비라졸(virazole) 블랭크 대조군은 행크스 액체(시추앙성 인민 병원(Sichuan Provincial Peoples Hospital) 실험 부서(laboratory section)의 바이러스 실험실에서 제공함)이다.

실험용 세포 균주는 Hep-2 및 Z-HL16C 세포(둘 모두는 Military Medical University No4의 세포 엔지니어링 부서(cell engineering section)에서 제공함)이다. 상기 바이러스 균주는 아데노바이러스 ADV3, ADV7, 호흡기 다핵체 바이러스(respiratory syncytial virus, RSV), 인플루엔자 바이러스(FluㆍV) A1 및 A3, 및 콕사키 바이러스 그룹 B(CoxBV)(Chinas Preventive Medical Science Research Institute의 바이러스 연구소 및 Sichuan Provincial Sanitary and Anti-epidemic Station에서 각각 제공됨)의 완전 혼합 균주이고, TCID50은 시험 이전에 각각 측정된다.

시험 방법:

(1) 세포 독성 시험

상기 시험 시료 주사액, 경구 캡슐, 과립, 정제, 환제, 점안약, 안연고 및 외부 용도의 기타 제제를 용해시키고, 목적하는 농도로 제형화하고, 주사액용 추앙후닝을 배수의 법칙에 따라 10㎎/㎖에서부터 행크스 액체로 희석하며, 희석 이후의 이러한 용액은 10㎎/㎖, 5㎎/㎖, 2.5㎎/㎖ 및 1.25㎎/㎖이다. 4개의 상이한 농도를 갖는 상기 2종의 약제는 Hep-2 및 Z-HL16C 세포에 백신 접종하고, 상기 세포 대조군도 동시에 준비하고, 2% 우혈청 이글스 유지 배지를 충분히 첨가하며, 이들은 37℃의 항온 배양기에 방치하고, 상기 세포 독성반응을 매일 관찰한다. 상기 세포 독성 시험결과는 표 4에 나열되어 있다. 하기 표 4에 세포 독성 시험결과를 나타내었다.

(주석:"-"는 상기 세포에서 어떠한 독성 반도 발생하지 않음을 의미한다.)

표 4에서의 결과에서, 상기 시험 시료 용액, 대조군 약제 추앙후닝 및 블랭크 대조군(행크스 액체)은 모든 투여군에서 Hep-2 및 Z-HL16C 세포에 대해 어떠한 독성 반응도 나타내지 않는 것으로 나타난다.

(2) 항-바이러스 시험

100TCID50, ADV3, ADV7, FluㆍV-형 A1 및 A3, CoxBV, 및 RSV 바이러스들은 Hep-2 및 Z-HL16C 세포에서 각각 백신 접종되고(FluㆍV-형 A1 및 A3은 Z-HL16C 세포에 백신 접종됨), 상기 바이러스 용액은 30분 이내의 흡수 이후에 세척되고, 상기 시험 시료 및 추앙후닝 비-독성 리미트 용액을 여기에 각각 첨가하고(예를 들어, 8㎎/㎖, 5㎎/㎖, 2.5㎎/㎖ 및 1.25㎎/㎖), 상기 바이러스 대조군, 세포 대조군 및 블랭크 대조군(행크스 액체)을 상기 약제와 함께 동시에 준비한다. 상기 세포 유지 배지는 2% 우혈청 이글스 배지이고, 상기 배지는 37℃에서 배양기에 놓고, 상기 Hep-2 및 Z-HL16C 세포 병리학적 변화를 관측하고, 모든 그룹에서의 세포 병리학적 변화를 매일 기록한다. RSV 내성 시험에 있어서, 상기 바이러스 및 비-독성 리미트 약제를 백신 접종한 후, 상기 용액을 37℃에서 배양기에 수평으로 놓고, 이어 35℃에서 회전 배양기(12회/분)로 제거하고, 상기 세포 병리학적 변화를 매일 관측한다. 시험관에서 pH 값이 감소하는 경우, 상기 용액을 즉시 교체해야 한다. 상기 세포는 정상이고 상기 시험에서 세포 대조군에서는 잘 자라는 반면, 2+ 내지 3+의 병리학적 변화가 바이러스 대조군에서 나타나면, 시험을 중단해야 한다. 시험 결과는 표 5-1 및 5-2에 나타나 있다.

표 5에서의 결과에서, 본 발명의 10㎎/㎖의 시험 시료 주사용액은 ADV3, ADV7, CoxBV, FluㆍV-형 A1, 및 RSV 세포발병에 대해 억제효과를 갖고 있으며, FluㆍV-형 A3에 대해 부분적인 억제효과를 갖는 것으로 증명된다. 5㎎/㎖ 용액은 FluㆍV-형 A1, 및 RSV 세포발병에 대해 억제효과를 갖고 있으며, ADV3 및 CoxBV에 대해 부분적인 억제효과를 갖는다. 2.5㎎/㎖ 용액은 FluㆍV-형 A1에 대해 억제효과를 갖는다. 8㎎/㎖ 추앙후닝 용액은 ADV3 및 7, CoxBV, FluㆍV-형 A1, 및 RSV 세포발병에 대해 억제효과를 갖는다. 모든 시험관에서 기타 농도를 갖는 용액 및 블랭크 대조군은 세포 병리학적 변화를 억제할 수 없다. 하기 표 5에 항-바이러스 시험결과를 나타내었다.

(주석:"-"는 상기 세포에서 어떠한 병리학적 변화도 없음을 의미한다. 1+ 내지 3+는 세포 병리학적 변화 정도를 나타낸다.)

상술한 시험 결과에서는, 10㎎/㎖의 농도를 갖는 본 발명의 상기 시험 시료 주사액은 아데노바이러스 3형(ADV3), 아데노바이러스 7형(ADV7), 콕사키 바이러스 그룹 B(CoxBV), 인플루엔자 바이러스 A1형(FluㆍV A1) 및 A3형 (FluㆍV A3), 및 호흡기 다핵체 바이러스(RSV)에 대해 상이한 정도의 억제효과를 갖고, 인플루엔자 바이러스 A1형 및 A3형에 대해 우수한 억제효과를 가지며, 100TCID50의 환경하에서 호흡기 다핵체 바이러스가 감염되는 것으로 증명된다. 10㎎/㎖의 농도를 갖는 상기 대조군 약제인 추앙후닝 용액은 아데노바이러스 3형, 아데노바이러스 7형, 콕사키 바이러스 그룹 B, 인플루엔자 바이러스 A1형 및 A3형, 및 호흡기 다핵체 바이러스(RSV)에 대해 억제효과를 갖는다. 상기 시험 결과에서는, 인플루엔자 바이러스 A1형 및 호흡기 다핵체 바이러스에 대한 본 발명의 상기 시험 시료의 억제효과는 현재 주사용으로 사용되는 추앙후닝 및 리바비린(ribavirin)보다 양호할 수 있는 것으로 교시하고 있다.

(3) SARS 바이러스 내성 시험

Vero-E6 세포에 대한 테크토리게닌 유도체의 독성, 및 Vero-E6 세포에서 코로나바이러스에 대한 이의 억제 효과의 연구는 베이징에서의 SARS 확산 도중에 환자의 폐조직으로부터 분리된 바이러스 균수 BJ01, 및 Vero-E6 세포를 사용함으로써 수행된다.

(3.1) 실험 재료

1) 시험된 약제: 상술한 테크토리게닌 유도체는 주사액, 예를 들어 Sichuan Dikang Sci.-Tech Pharmaceutical Co., Ltd에 의해 제공되는 디강(Dikang) 항-바이러스 주사액(50㎎/㎖)(로트 번호: 20030301)으로 제형화된다.

2) 양성 대조군 약제: Shangdong Xinhua Pharmaceutical Co., Ltd에 의해 제공되는 0.1g/㎖의 리바비린(비라졸) 주사액(승인된 기록 번호: H19993063, 및 로트 번호: 02100020). 이의 임상 응용: 호흡기관 세포 바이러스에 의해 야기되는 바이러스성 폐렴 및 기관지염을 치료하기 위해 사용된다. 이의 1일 임상 투여량은 성인의 경우에 0.5g씩 1일 2회이다.

3) 세포: Vero-E6, 이는 중국 세포은행에 보관되어 있다(ATCC CRL-1586).

4) 바이러스 균주: 베이징에서 ASRS의 확산 도중에 2003년 2월에 환자의 폐 조직으로부터 분리된 코로나바이러스이고, 이는 균주 BJ01로 명명되었다.

5) 시약: Gibcol1BRL Company에 의해 제조된 DMEM 배양 배지 및 우태아 혈청, 이의 로트 번호는 각각 31600-026 및 16000-36으로 명명되었다.

6) 기기: Coming Company에 의해 제조된 96-다공성 세포 배양판, 및 Chongqing Optical Instrument Factory에 의해 제조된 비오틱 역상 현미경(biotic inverted microscope).

(3.2) 방법 및 결과

1) 약제의 제형 방법

시험된 약제: 상기 테크토리게닌 유도체는 연황색 액체이고, 냉장고에서 4℃로 저장된다. 양성 대조군 약제는 10㎎/㎖의 모액으로 제형화된다. 상기 약제는 세포 성장-촉진 배지의 사용에 의해 이의 사용시에 목적하는 농도를 갖도록 제형화된다.

2) 세포에 대한 테크토리게닌 유도체의 독성 시험

300,000~400,000 Vero-E6 세포/㎖을 96-다공성 세포 배양판에서 각각의 공극 단위로 0.1㎖씩 백신 접종하고, 상기 배양판을 5% CO₂ 배양기에서 37℃로 18시간 동안 방치하고, 상이한 농도를 갖는 시험 약제를 여기에 첨가하며, 각각의 농도를 갖는 상기 약제를 4개의 공극 단위로 첨가하며, 0.4㎖이 각각의 공극에 존재하고, 약제가 없는 세포 대조군도 동시에 준비한다. 이어, 세포 병릭학적 변화(CPE)를 관측하기 위해 4 내지 5일 동안 배양하고, 상기 CPE는 비오틱 역상 현미경으로 5일째에 지수로서 관측되며, 완전한 병리학적 변화는 4이고, 75% 병리학적 변화는 3이며, 50% 병리학적 변화는 2이고, 25% 병리학적 변화는 1이며, 병리학적 변화가 없는 경우에는 0이다. 상기 시험은 2회 반복한다. 상기 배지 독성 농도(TD50) 및 최대 비-독성 농도(TD0)는 REED-MUENCH 방법을 사용하여 산정되며, 그 결과는 표 6에 나타나 있다. 하기 표 6에 Vero-R6 세포에 대한 테크토리게닌 유도체 주사액의 독성 결과를 나타내었다.

표 6에서의 산정치로부터 Vero-E6 세포에 대한 본 발명의 항-바이러스 주사액의 최대 비-독성 농도(TD0)가 1㎎/㎖이고, 평균 독성 농도(TD50)가 2.34㎎/㎖임을 알 수 있다. 이는, 본 발명의 테크토리게닌 유도체가 Vero-E6에 대한 독성이 낮고 보다 안전하다는 것을 의미한다.

(4) 테크토리게닌 유도체의 코로나바이러스-억제 시험(세포 병리학적 변화 방법)

상기 Vero-E6 세포를 96-다공성 배양판에 백신 접촉하고, 37℃에서 단일층이 형성될 때까지 배양하고, 성장 촉진 배지를 폐기한다. 4세대의 코로나바이러스 BJ01 균주의 바이러스 용액을 DMEM 유지 배지로 100 TCID50/0.1㎖이 되도록 희석한 후, 이의 0.1㎖을 각각의 공극 단위로 VeroE6 세포에 백신 접종하고, 2시간 동안 흡수시킨 후, 상기 바이러스 용액을 폐기한다. 정상 세포 대조군, 바이러스 대조군 및 양성 약제 대조군을 준비한다. 상기 세포를 5% CO₂ 배양기에서 37℃로 동안 방치하고, 이의 병리학적 변화를 총 5일 동안 매일 관측하고, CPE를 기록하며, 상기 시험을 2회 반복하며, 그 결과는 근본적으로 동일하다. 평균 억제 농도(IC50) 및 치료지수(TI)는 REED-MUENCH 방법을 이용하여 산정되며, 그 결과는 표 7에 나타나 있다. 하기 표 7에 테크토리게닌 유도체의 코로나바이러스-억제 효과 결과를 나타내었다.

표 7에서의 산정치로부터 0.976㎎/㎖의 농도를 갖는 상기 테크토리게닌 유도체는 코로나바이러스에 대해 억제효과를 갖는다는 것을 알 수 있다.

결론은 하기와 같다:

하기 표 8에 Vero E6 세포에 대한 테크토리게닌 유도체의 독성 및 이의 코로나바이러스-억제효과의 요약 결과를 나타내었다.

상술한 시험 결과는 하기와 같다:

1) Vero-E6에 대한 본 발명의 테크토리게닌 유도체의 독성: 상기 테크토리게닌 유도체를 Vero-E6 세포에 첨가하고, 상기 Vero-E6 세포를 5일 동안 배양하며, 상기 세포 병리학적 변화가 지수로서 채택되는 경우에 이의 평균 독성 농도(TD50)는 2.34㎎/㎖이고, 최대 비-독성 농도(TD0)는 1㎎/㎖이다.

2) 상기 테크토리게닌 유도체는 Vero-E6 세포에서 코로나바이러스에 대해 억제효과를 갖는다: 상기 테크토리게닌 유도체 주사액을 Vero-E6 세포에 첨가하고, 이들 5일 동안 배양한 결과, 이의 평균 억제효과 농도(IC50)는 0.0976㎎/㎖이고, 코로나바이러스에 대한 상기 테크토리게닌 유도체 주사액의 최소 치료지수는 23.98이다.

(5) 조류 인플루엔자 H5N1 및 H9N2 아형 바이러스-살해 효과 시험

시험 약제로서 상기 실시예에서 언급된 테크토리게닌 유도체들을 채택하는 경우에 시험관내 조류 인플루엔자 바이러스(AIV)-살해 시험은 하기와 같다.

(5.1) 재료 및 방법

1) 시험된 약제

상기 실시예에서의 상기 테크토리게닌 유도체 용액(1㎖ 당 30㎎의 천연 약제를 함유하는 연황색 액체).

2) 조류 인플루엔자 바이러스

상기 바이러스 균주는 A/Goose/Guandong/1/96(H5N1) 및 A/Chicken/Shangdong/6/96(H9N2)이고, 이들은 Chinese Academy of Agricultural Science 산하의 Harbin Veterinary Medicine Research Institute가 신뢰하는 Agricultural Ministrys Key Animal Influenza Open Laboratory에 저장되어 있다.

3) 병아리 배아

Chinese Academy of Agricultural Science 산하의 Harbin Veterinary Medicine Research Institute의 실험용 동물 센터에서 제공된 10일된 SPF 병아리 배아.

4) 제조용 시험

a. 바이러스 EID50 측정

상기 조류 인플루엔자 바이러스 아형 H5 및 H9를 10배씩 희석하고, 10일된 SPF 병아리 배아에 백신 접종하며, 5개의 배아(0.1㎖/배아)에 대해 각각 희석하고, 상기 바이러스 평균 감염량(EID50)을 측정한다.

b. 시험된 약제 모액의 조정

상술한 테크토리게닌 유도체를 1㎖ 당 30㎎의 천연 약제를 함유하는 상기 모액으로서 채택한다.

c. 병아리 배아에 대한 상기 시험된 약제의 최대 비-독성 투여량

1㎖ 당 30㎎, 15㎎, 7.5㎎, 3.75㎎, 1.875㎎, 0.9375㎎, 0.46875㎎, 0.234375㎎ 및 0.1171875㎎의 상기 시험된 천연 약제 용액을 10일된 SPF 병아리 배아에 각각 백신 접종하고, 첫 번째 희석액을 갖는 용액을 5개의 병아리 배아(0.1㎖/배아)에 백신 접종한다. 상기 백신 접종된 병아리 배아를 37℃의 항온 배양기에 넣고 96시간 동안 배양한다. 24시간 이내에 사멸한 상기 병아리 배아는 폐기하고, 이들의 사멸율을 기록한다.

5) 시험된 약제의 바이러스-살해율의 시험

Klein-Dofors 현탁법을 이용하여 시험된 약제로 2종(강한 종 및 약한 종)의 조류 인플루엔자 바이러스에 대한 살해 시험을 수행하며, 상기 시험된 약제는 멸균 생리식염수로 10배씩 희석한 후, 감염된 병아리 배아를 체크한다.

a. 바이러스 현탁액의 제조

상기 조류 인플루엔자 바이러스 아형 H5 및 H9를 107.63 EID50/0.1㎖ 및 108.17 EID50/0.1㎖의 바이러스 현탁액으로 제조한다.

b. 시험된 약제 모액의 조정

상기 살해 시험 도중에 천연재료로서 상술한 테크토리게닌 유도체를 멸균 생리식염수로 필요한 농도까지 희석한다.

c. Klein-Dofors 현탁액의 살해 시험

107.63 EID50 조류 인플루엔자 아형 H5 바이러스 현탁액 및 108.17 EID50H9 아형 바이러스 현탁액을 1:9의 비율로 1㎖ 당 30㎎, 15㎎, 7.5㎎, 3.75㎎, 3.0㎎, 1.875㎎, 1.5㎎, 0.75㎎ 및 0.375㎎ 천연 약제의 농도가 되도록 테크토리게닌 유도체와 각각 혼합하고, 20±1℃에서 5분 동안 반응시킨 후에 생리 식염수를 사용하여 10배씩 희석한다. 대조군에서는 상기 멸균된 생리 식염수를 멸균된 바이러스 현탁액으로 치환함으로써 유사한 처리를 수행하며, 상기 희석된 용액을 10일된 병아리 배아에 백신 접종하고, 각각의 농도를 갖는 상기 용액을 5개의 병아리 배아(0.1㎖/배아)에 백신 접종한다. 상기 백신 접종된 병아리 배아를 배양을 위해 배양기에서 37℃로 유지하고, 상기 병아리 배아의 사멸율을 기록한다. 24시간 이내에 죽은 병아리 배아를 기록하고, 24시간 이후에 죽은 병아리 배아를 선별하고, 모든 병아리 태아는 96시간 이내에 선별하며, 이들의 요막강액(allantoic fluid)을 HA 시험을 위해 차례로 샘플링하고, HA 시험에서 양성으로 입증된 병아리 배아를 감염된 배아로서 판정한다.

시험군 및 대조군에서의 상기 병아리 배아의 양성 감염률, 시료중의 EID50 함량, 및 살해율을 병아리 배아 감염 결과 및 하기 등식에 따라 산정한다.

양성 감염률 = HA 시험에서 양성으로 입증된 병아리 배아의 양/백신 접종된 병아리 배아의 양;

시료중의 EID의 로그 = L - d(S - 0.5)

(L은 최소 희석 배율의 로그이고, d는 희색액 사이의 로그차이고, S는 각각의 희석액 컬럼에서의 양성 감염률의 총량이다.)

바이러스 사멸율 = (대조군 시료중의 EID50 함량 - 시험군 시료중의 EID50 함량/대조군 시료 중의 EID50 함량 × 100%)

(5.2) 시험 결과

1) 병아리 배아에 대한 시험된 약제의 최대 비-독성 투여량

멸균된 생리 식염수로 희석되고 1㎖ 당 30㎎, 15㎎, 7.5㎎, 3.75㎎, 1.875㎎, 0.9375㎎, 0.46875㎎, 0.234375㎎ 및 0.1171875㎎의 천연 약제를 함유하는 상기 테크토리게닌 유도체 용액을 병아리 배아에 주사한 결과, 상기 시험 결과에서는 상이한 농도로 투여된 상기 약제는 이들을 주사한 후에 상기 병아리 배아를 살해한 것으로 증명되었고, 이는 시험된 약제의 원액, 및 상이한 농도를 갖는 약제가 상기 병아리 배아에 대해 가시적인 독성 효과가 없음을 나타낸다. 상기 결과는 표 9에 나타나 있다. 하기 표 9에 병아리 배아에 대한 시험된 약제의 최대 비-독성 투여량 결과를 나타내었다.

(주석: 분자는 죽은 배아의 양이고, 분모는 백신 접종된 배아의 양이다.)

2) 조류 인플루엔자 바이러스에 대한 시험된 약제의 살해 효과

멸균된 생리 식염수로 희석되고 1㎖ 당 30㎎, 15㎎, 7.5㎎, 3.75㎎, 3.0㎎, 1.875㎎, 1.5㎎, 0. 75㎎, 및 0.375㎎을 함유하는 상기 테크토리게닌 유도체를 5분 동안 107.63 EID50 조류 인플루엔자 H5 아형 바이러스 용액과 반응시키고, 이의 바이러스-살해 효과를 각각 측정하고, 상이한 농도를 갖는 상기 테크토리게닌 유도체를 108.17 EID50 조류 인플루엔자 바이러스 아형 H9와 5분 동안 반응시키고, 이의 바이러스-살해율을 각각 측정한다. 상기 결과는 표 10에 나타나 있다. 하기 표 10에 아형 H5N1 및 H9N2 바이러스에 대한 상이한 농도의 테크토리게닌 유도체의 살해 효과 결과를 나타내었다.

상술한 시험 결과는, 상기 테크토리게닌 유도체(상이한 농도를 가짐)가 상기 조류 인플루엔자 바이러스 H5N1 및 H5N2(9:1)와 시험관 내에서 5분 동안 각각 직접 접촉하는 경우에 Klein-Defors 현탁액 살해 및 감염 시험법을 이용함으로써 조류 인플루엔자 바이러스에 대한 상기 시험된 약제의 살해 효과에 대한 연구가 수행된다는 것을 보여준다. 상기 결과에서는 1㎖ 당 3.0㎎의 천연 약제를 함유하는 테크토리게닌 유도체가 5분 동안 상기 조류 바이러스에 작용하는 경우에 특정 바이러스-살해 효과가 있으며, 1㎖ 당 3.75 내지 30㎎의 천연 약제를 함유하는 테크토리게닌 유도체가 5분 동안 상기 조류 바이러스에 작용하는 경우에는 우수한 바이러스-세포 살해 효과를 가지며, 이의 바이러스-세포 살해률은 95%를 초과하는 것으로 증명된다.

이의 안전성 시험에서는, 병아리 배아에서의 일련의 모액 희석액의 백신 접종이 상기 병아리 배아를 죽이지 않는 것으로 나타났고, 이는 시험된 약제 모액 및 원액의 다양하게 희석된 약제가 실질적으로 어떠한 독성 효과도 나타내지 않음을 보여준다.

화학식 Ⅱ에 도시된 바와 같은 본 발명에서의 화학적 변형에 의해 달성된 상기 테크토리게닌 화합물 유도체는 이의 전구체 물질, 예를 들어 초기에 추출된 테크토리게닌 화합물의 효과와 동일한 항-바이러스성 및 항-염증성 효과를 유지하는 예비조건하에서 이의 수용성 및 화학적 안정성을 크게 향상시킬 수 있으며, 이의 제조 방법은 간단하여 비용이 절감되며, 안전하며 신뢰할 수 있으며, 임의의 특정 기기가 요구되지 않으며, "3종의 폐기물"(예를 들어, 폐 기체, 폐수 및 산업폐기물)에 의해 야기되는 오염이 발생하지 않는다. 중국의 전통 의약품의 구성성분은 매우 복잡하고, 이의 품질 안정성을 조절하기 어렵기 때문에, 본 발명에서 제공되는 테크토리게닌 화합물의 이소플라본 유도체는 이의 약학 및 임상 적용 범위의 확장이란 견지에서, 특히 항-바이러스성 및 항-염증성 주사액의 제조라는 견지에서 이의 중요성이 매우 명확하며 이의 개발에 대한 전망도 또한 밝다.

본 발명에 관한 상기 상세한 설명은 본 발명에 제한되지 않으며, 본 발명 분야에서의 기술은 본 발명에 기초하여 다양하게 변형 및 변경될 수 있으며, 또한 이러한 변형 및 변경은 본 발명의 진의에서 벗어나지 않은 한, 본 발명에서 첨부된 특허청구범위에 모두 포함되어야 한다.

Claims

하기 화학식 (Ⅱ)로 표시되는, 화학적으로 5,7,4'-트리하이드록시-6-메톡실(methoxyl) 이소플라본으로 명명되는 테크토리게닌 화합물 유도체:

(Ⅱ)

여기에서, R₁은H, NH₂ 또는 SO₃M이고;

R₂는 OR'이며;

R₃는 H 또는 -CH₂NR"이고;

여기에서, R'는 H, -CH₂COONa 또는 -CH₂CH₂NMe₂이고;

NR"는
또는 -NMe₂이며;

M은 H, Na, K 또는 N⁺H(CH₂CH₂OH)₃임.
제1항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅱ) 내에 표시되는 R₁이 SO₃M"이고, 여기에서 M"이 H, Na, K 또는 -N⁺H(CH₂CH₂OH)₃인 것을 특징으로 하는, 그 구조가 하기 화학식 (Ⅲ)으로 표시되는 테크토리게닌 화합물 유도체:

(Ⅲ).
제2항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅲ) 내에 표시된 M"가 Na인 것을 특징으로 하는, 그 구조가 하기 화학식 (Ⅳ)로 표시되는 테크토리게닌 화합물 유도체:

(Ⅳ).
제2항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅲ) 내에 표시된 R₁이 -SO₃ ^-N⁺H(CH₂CH₂OH)₃인 것을 특징으로 하는, 그 구조가 하기 화학식 (Ⅴ)로 표시되는 테크토리게닌 화합물 유도체:

(Ⅴ).
제1항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅱ) 내에 표시된 R₁이 NH₂이고, R₂가 OH이며, R₃가 H인 것을 특징으로 하는, 그 구조가 하기 화학식 (Ⅵ)으로 표시되는 테크토리게닌 화합물 유도체:

(Ⅵ).
제1항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅱ) 내에 표시된 R₁이 H이고, R₂가 -OCH₂COONa이며, R₃가 H인 것을 특징으로 하는, 그 구조가 하기 화학식 (Ⅶ)으로 표시되는 테크토리게닌 화합물 유도체:

(Ⅶ).
제1항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅱ) 내에 표시된 R₁ 및R₃가 H이고, R₂가 OCH₂CH₂NMe₂인 것을 특징으로 하며, 그 구조가 하기 화학식 (Ⅷ)로 표시되는 테크토리게닌 화합물 유도체:

(Ⅷ).
제1항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅱ) 내에 표시된 R₁이 H이고, R₂가 OH이며, R₃가 -CH₂NR"이고, 여기에서 NR"은
인 것을 특징으로 하며, 그 구조가 하기 화학식 (Ⅸ)로 표시되는 테크토리게닌 화합물 유도체:

(Ⅸ).
제1항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅱ) 내에 표시된 R₁이 H이고, R₂가 OH이며, R₃가 -CH₂NMe₂인 것을 특징으로 하며, 그 구조가 하기 화학식 (Ⅹ)로 표시되는 테크토리게닌 화합물 유도체:

(Ⅹ).
제5항, 제7항, 제8항 또는 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유도체는 그들의 약학적으로 허용가능한 염인 것을 특징으로 하는 테크토리게닌 화합물 유도체.
제10항에 있어서, 상기 염 화합물은 하이드로클로라이드인 것을 특징으로 하는 테크토리게닌 화합물 유도체.
다음의 단계를 포함하는 R₁이 설포닉 산 또는 설포네이트인 화학식 (Ⅲ)의 테크토리게닌 화합물 유도체를 제조하는 방법:

M"이 H인 화학식 (Ⅲ)로 표시되는 설포닉 산 유도체 프로덕트는 화학식 (I)로 표시되는 테크토리게닌의 이소플라본 화합물을 원료 물질로 사용하여 황산을 사 용한 설폰화 반응(sulfonating reaction)을 통하여 얻어지고, 화학식 (Ⅳ)로 표시되는 대응 소디움 설포네이트 또는 포타시움 설포네이트 화합물은 NaCl 또는 KCl 포화 염 용액으로 처리하여 추가적으로 얻을 수 있고,

그 합성 라인(line)은 다음과 같음:

.
다음의 단계를 포함하는 화학식 (Ⅴ)의 테크토리게닌 화합물을 제조하는 방법:

화학식 (I)의 테크토리게닌의 이소플라본 화합물이 원료 물질로 사용되고, 농축 황산과 혼합되고, 가열되고 및 40~90℃에서 진탕되고, 냉각된 후 포화 소디움 클로라이드, 다른 알칼리 금속 하이드로클로라이드, 하이드로브로메이트 또는 니트레이트 용액에 부어지고, 3'-소디움 설포네이트 중간체 프로덕트가 얻어지고, 그것은 에탄올 용액에 현탁되고, 강-산 양이온 수지가 그것에 첨가되고, 그것이 실온에서 완전히 용해될 때까지 진탕되고, 그 후 그것에 트리에탄올아민이 첨가되고, 용매가 감압으로 증발되고, 화학식 (Ⅴ)로 표시되는 화합물이 얻어지며,

그것의 합성 라인은 다음과 같음:

.
다음의 단계를 포함하는 화학식 (Ⅵ)의 테크토리게닌 화합물을 제조하는 방법:

화학식 (I)의 테크토리게닌의 이소플라본 화합물이 원료 물질로 사용되고, 그것이 얼음 수조에서 냉각되는 동안 질산 및 농축 황산의 혼합된 에탄올 용액을 점적하고, 3'-니트로 중간체 프로덕트가 얻어지고, 그 후 그것은 메탄올에 용해되고, 3'-아미노-치환 화합물 (Ⅵ)이 대기압 하에서 수소 촉매 환원에 의해 얻어지고, 화학식 (Ⅵ)으로 표시되는 대응 염 화합물이 약학적으로 허용가능한 산과 반응시켜 추가적으로 얻어질 수 있고,

그것의 합성 라인은 다음과 같음:

.
다음의 단계를 포함하는 화학식 (Ⅶ)의 테크토리게닌 화합물을 제조하는 방법:

화학식 (I)의 테크토리게닌의 이소플라본 화합물이 원료 물질로 사용되고, 이것이 부타논(butanone) 및 DMF가 혼합된 용매에 에틸 클로로아세테이트에 함께 용해되고, 물 없는 K₂CO₃ 및 촉매 량의 NaI가 그것에 첨가되고, 혼합물은 교반되고 재순환된 후 실온으로 냉각되고, 용해되지 않는 물질이 여과되어 제거되고, 여과물은 감압으로 농축되고, 잔여물은 적당한 양의 물에 용해되고, 그 후 에틸 아세테이트로 추출되고, 물-세척되고, 용매는 건조 후에 감압으로 농축되고, 플래쉬 컬럼으로 분리되고, 4'-에스테-에테르 중간체 프로덕트가 얻어지고, 그것은 메탄올에 용해되고 그것이 교반되는 동안 NaOH 수용액이 점적으로 첨가된 후 정상 대기 온도에서 완전히 가수분해되고, 그 후 그것의 pH 값이 pH 3~4로 산으로 조절되고, 응집된(flocculated) 침전물이 얻어지고, 감압하에서 메탄올을 증발 제거한 후에 그것은 에틸 아세테이트에 용해되고, 그 후 화합물 (Ⅶ)의 소디움 염이 응집된 침전물을 물-세척, 건조 및 농축한 후에 NaHCO₃와 반응시켜 얻어지고,

그것의 합성 라인은 다음과 같음:

.
다음의 단계를 포함하는 화학식 (Ⅷ)의 테크토리게닌 화합물을 제조하는 방법:

β-디메틸아미노에탄올이 먼저 디클로로설폭사이드에 0℃에서 점적으로 첨가되고, 강렬하게 교반되고, 그 후 그것이 교반되는 동안 35~50℃에서 반응하고, 중간체 프로덕트- β-디메틸아미노클로라이드 하이드로클로라이드 A가 얻어지고, 물 없는 에탄올을 사용하여 재결정되고, 원료 물질인 화학식 (I)의 테크토리게닌의 이소플라본 화합물이 부타논, 아세톤, DMF, THF 또는 디옥산에 용해되고, 그것에 물이 제거된 K₂CO₃ 또는Na₂CO₃와 DMF 및 촉매 양의 NaI가 첨가되고, 그것은 재순화될 때까지 가열되고, 상기 언급된 중간체 프로덕트 A가 배취(batch)로 나누어서 그것에 첨가되고, 그것은 약 80℃에서 재순환되고, 냉각된 후 여과되고, 점착물(stickum)이 여과 농축하여 얻어지고, 점착물은 적당한 양의 물로 희석된 후에 에틸 아세테이트로 추출되고, 추출물은 물 세척 후에 건조되고, 용매는 제거되고, 화합물 (Ⅷ)은 얻어지고, 그것의 대응 염 화합물은 약학적으로 허용가능한 산과 반응시켜 얻어질 수 추가적으로 얻어질 수 있고,

그것의 합성 라인은 다음과 같음:

.
다음의 단계를 포함하는 화학식 (Ⅸ)의 테크토리게닌 화합물을 제조하는 방법:

화학식 (I)의 테크토리게닌의 이소플라본 화합물이 원료 물질로 사용되고, 37% (중량비) 포름알데히드 용액, 피페리딘 및 디옥산, THF, 메탄올 또는 에탄올 중 하나와 혼합되고, 화합물 (Ⅸ)은 그것을 냉각하고 재순환 반응 후에 여과함으로써 얻어지고, 그것의 대응 염 화합물은 약학적으로 허용가능한 산과 반응시켜 추가적으로 얻을 수 있고,

그것의 합성 라인은 다음과 같음:

.
다음의 단계를 포함하는 화학식 (Ⅹ)의 테크토리게닌 화합물을 제조하는 방 법:

화학식 (I)의 테크토리게닌의 이소플라본 화합물들이 원료 물질로 사용되고, 37% (중량비) 포름알데히드 용액, 디메틸아미노하이드로클로라이드 및 디옥산, THF, 메탄올 또는 에탄올 중 하나와 혼합되고, 재순환(recycling) 후에 냉각되고, 화합물 (Ⅹ)가 여과를 통하여 얻어지고, 잔여물이 모아지고, 그것의 대응 염 화합물은 약학적으로 허용가능한 산과 반응하여 추가적으로 얻어질 수 있고,

그것의 합성 라인은 다음과 같음:

.
유효 약학 성분으로 화학식 (Ⅱ)의 테크토리게닌 화합물 유도체의 유효한 투여량 및 약학적으로 허용가능한 추가 부가 성분을 포함하는 항바이러스 의약.
제19항에 있어서, 상기 의약은 주사-타입 제제인 것을 특징으로 하는 항바이러스 의약.
다음의 단계를 포함하는 화학식 (Ⅱ)의 테크토리게닌 화합물 유도체가 유효 약학 성분으로 포함된 주사 의약을 제조하는 방법:

테크토리게닌 유도체 (Ⅱ) 5-80 중량부 및 주사용 글루코스 20-150 중량부가 700-800 중량부의 주사용 물에 용해되고, 완전히 용해한 후 주사용 물이 그것에 첨가되어 총 부피가 1000 중량부가 되고, G4 규화(sintered) 유리 깔대기를 이용하여 여과하여 옅은 노란색 투명 액상 주사제을 제조하고, 통상적인 포장 및 멸균과정을 하고, 그것 내 글루코스 함량이 2-15 %이고, 유효 약학 구성 성분의 함량이 5-80 mg/ml임.