CN110396077B

CN110396077B - 一种射干苷元磺酸钠的制备方法

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Publication number: CN110396077B
Application number: CN201910319278.8A
Authority: CN
Inventors: 袁崇均; 陈帅; 罗森; 谭正怀; 王笳
Original assignee: Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences SACMS
Current assignee: Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences SACMS
Priority date: 2019-04-19
Filing date: 2019-04-19
Publication date: 2021-02-12
Anticipated expiration: 2039-04-19
Also published as: CN110396077A

Abstract

本发明公开了一种制备射干苷元磺酸钠的方法，所述方法包括以下步骤：将射干苷加入硫酸中，反应，然后将体系加入氯化钠的水溶液中，搅拌，析出沉淀，过滤，取固体，即得。该方法合成路线简单、设备要求低、成本低、收率高，适合工业化生产，具有广泛的应用前景。

Description

一种射干苷元磺酸钠的制备方法

技术领域

本发明涉及药物合成领域，具体涉及一种射干苷元磺酸钠的制备方法。

背景技术

射干苷元磺酸钠，又称射干苷元-5′-磺酸钠、鸢尾苷元-5′-磺酸钠或鸢尾苷元磺酸钠，化学名为4′,5,7-三羟基-6-甲氧基异黄酮-5′-磺酸钠，分子式C₁₆H₁₁O₉SNa，分子量402.31，为淡黄色结晶或结晶性粉末，其结构式如(Ⅰ)所示：

射干苷元磺酸钠为新型的抗病毒药物，其具有抗病毒、抗炎、解热和镇痛作用，可用于治疗急性上呼吸道感染和病毒性肺炎。

目前，得到射干苷元磺酸钠的主要方法为：(1)通过分离中药的化学成分，得到射干苷元，再将射干苷元与硫酸通过磺化反应生成水溶性的钠盐；(2)从中药川射干中分离出有效成分射干苷，再将射干苷用盐酸水解为射干苷元，射干苷元与硫酸通过磺化反应生成水溶性的钠盐，化学反应式如下：

但是，由于中药成分中苷元含量很低，采用方法(1)存在成本高、收率低的问题。而方法(2)中，需要将射干苷水解得到射干苷元，这一操作需要在加热条件下进行，反应时需要搪瓷反应釜、搅拌器及加热设备等特殊设备，不适合工业化大生产，因此该方法也存在成本高、收率低的问题。

所以，现在急需一种路线简单、设备要求低、成本低、收率高的方法来制备射干苷元磺酸钠。

发明内容

本发明的目的在于提供一种路线简单、设备要求低、成本低、收率高的制备射干苷元磺酸钠的方法。

本发明提供了一种制备射干苷元磺酸钠的方法，所述方法包括以下步骤：将射干苷加入硫酸中，反应，然后将体系加入氯化钠的水溶液中，搅拌，析出沉淀，过滤，取固体，即得。

进一步地，所述硫酸的浓度为70％～99％，优选为95％～98％。

进一步地，所述氯化钠的水溶液为饱和氯化钠水溶液。

进一步地，所述射干苷、硫酸、氯化钠的水溶液的质量体积比为1kg：(2-6)L：(20-60)L，优选为1kg：4L：40L。

进一步地，所述反应时间为1-5小时，反应温度为20～40℃；优选地，所述反应时间为2小时，反应温度为室温。

进一步地，所述步骤中，还包括：将所述固体提纯，提纯工艺为：取固体，在水中加热溶解，趁热过滤，保留液体，静置，析晶。

进一步地，所述提纯工艺的操作次数为1-3次。

通过试验证明，本发明提供了一种制备射干苷元磺酸钠的简便方法，该方法合成路线简单、设备要求低、成本低、收率高，适合工业化生产，具有广泛的应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为射干苷元磺酸钠对照品的紫外图谱。

图2为实施例1制备的射干苷元磺酸钠的紫外图谱。

图3为对照例1制备的射干苷元磺酸钠的紫外图谱。

图4为射干苷元磺酸钠对照品的红外图谱。

图5为实施例1制备的射干苷元磺酸钠的红外图谱。

图6为对照例1制备的射干苷元磺酸钠的红外图谱。

图7为射干苷元磺酸钠对照品的质谱。

图8为实施例1制备的射干苷元磺酸钠的质谱。

图9为对照例1制备的射干苷元磺酸钠的质谱。

图10为射干苷元磺酸钠对照品的H谱。

图11为实施例1制备的射干苷元磺酸钠的H谱。

图12为对照例1制备的射干苷元磺酸钠的H谱。

图13为射干苷元磺酸钠对照品的C谱。

图14为实施例1制备的射干苷元磺酸钠的C谱。

图15为对照例1制备的射干苷元磺酸钠的C谱。

图16为射干苷元磺酸钠对照品的HPLC图。

图17为实施例1制备的射干苷元磺酸钠的HPLC图。

图18为对照例1制备的射干苷元磺酸钠的HPLC图。

图19为磺化反应过程的HPLC监控图；左列为实验例2中对射干苷元磺化反应的HPLC监控结果，其中编号为1、2、3、4、5的HPLC图谱分别为反应5.0min、30.0min、1.0、2.0、12.0h的结果，A峰为射干苷元，B峰为射干苷元磺酸钠；右列为实验例2中对射干苷磺化反应的HPLC监控结果，其中编号为1′、2′、3′、4′、5′的HPLC图谱分别为反应5min、30.0min、1.0、2.0、12.0h的结果，A峰为射干苷元，B峰为射干苷元磺酸钠、E峰为射干苷。

具体实施方式

本发明所用原料与试剂均为已知产品，通过购买市售产品所得。

其中:射干苷为自制(制备方法参见发明专利，专利号：ZL201610939889.9实例1)，含量98.52％。；射干苷元磺酸钠对照品为自制(制备方法参见申请专利，申请号：2018105810925实例3)，含量99.65％

实施例1、利用本发明的方法制备射干苷元磺酸钠

取射干苷1kg，加4L硫酸，搅拌溶解，反应2小时，倾入40LNaCl饱和水溶液中，边加边搅拌，析出大量沉淀，放置过夜，过滤，沉淀用水煮沸溶解，趁热过滤，放置，析晶，过滤，取沉淀，再用水重结晶一次，过滤，60℃减压干燥，得射干苷元磺酸钠790g，纯度98.74％，收率(以射干苷计)91.37％，为淡黄色结晶性粉末。化学反应式如下：

对照例1利用对照方法制备射干苷元磺酸钠

步骤(1)：取射干苷1kg，置于10L圆底烧瓶中，加50％乙醇5L，搅拌均匀，再加浓盐酸500ml，摇匀。加热回流3～5小时，待薄层检查无射干苷斑点存在时停止水解反应。取出，趁热过滤，静置过夜，析出淡黄色细长针晶。过滤，用水洗涤结晶至流出液pH近中性，结晶用2L95％乙醇加热溶解，过滤，滤液趁热倾入4.5L沸水中，静置过夜，析晶，过滤，60℃减压干燥，得射干苷元600g，为淡黄色粉末。

步骤(2)：取步骤(1)制得的射干苷元600g，加2.4L硫酸，搅拌溶解，反应2小时，倾入24LNaCl饱和水溶液中，边加边搅拌，析出大量沉淀，放置过夜，过滤，沉淀用水煮沸溶解，趁热过滤，放置，析晶，过滤，沉淀再用水重结晶一次，过滤，60℃减压干燥，得射干苷元磺酸钠700g，纯度98.42％，收率(以射干苷计)81.38％，为淡黄色结晶性粉末。

以下通过实验例证明本发明的有益效果。

实验例1、质量检测

1、实验方法

分别取射干苷元磺酸钠对照品、实施例1制备的射干苷元磺酸钠、对照例1制备的射干苷元磺酸钠，进行HPLC、紫外、红外、质谱、H谱、C谱测定，图谱见图1～18。

2、实验结果

检测结果显示三者为同一化合物。

实验例2、利用HPLC检测磺化反应过程

1、实验方法

照高效液相色谱法(中国药典2015版四部通则0512)测定。

(1)仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪

(2)参数设置：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/L磷酸二氢钠水溶液(3.12g NaH₂PO4.2H₂O溶于1000ml水中，H₃PO₄调PH值到3.0)为流动相(A)，以乙腈为流动相(B)，按照A:B＝55:45比例混合洗脱；流速：1ml/min；检测波长为263nm，柱温35℃；理论板数按射干苷元磺酸钠峰计算，应不低于2000。将各样品适量注入液相色谱仪中，测定，即得。

(3)制样与测试：分别取射干苷元、射干苷，加硫酸进行磺化反应，并在不同时间利用HPLC监控其反应体系的组成。具体如下：

取射干苷元1.0g，加硫酸4ml，搅拌溶解，放置反应，分别于5.0min、30.0min、1.0h、2.0h、12.0h分别取样，进行HPLC分析，结果见图19(图中编号为1、2、3、4、5的HPLC图谱分别为反应5.0min、30.0min、1.0、2.0、12.0h的样品，A峰为射干苷元，B峰为射干苷元磺酸钠)。

取射干苷1.0g，加硫酸4ml，搅拌溶解，放置反应，分别于5min、30min、1.0h、2.0h、12.0h分别取样，进行HPLC分析，结果见图19(图中编号为1′、2′、3′、4′、5′的HPLC图谱分别为反应5min、30.0min、1.0、2.0、12.0h的样品，A峰为射干苷元，B峰为射干苷元磺酸钠、E峰为射干苷)。

2、实验结果

从图19中可以看出，射干苷元的磺化反应，直接生成射干苷元磺酸钠(B峰)及另一未知峰(C峰)成分，随着反应进行(2h)，射干苷元(A峰)及C峰成分均消失，生成单一的B峰成分，即射干苷元磺酸钠，但此时另一杂质峰即D峰成分开始生成，若反应12h时，D峰成分明显，推测D峰可能为射干苷元二磺酸钠或射干苷元多磺酸钠。

射干苷的磺化反应，反应生成极性很大的F峰成分(此时几无射干苷成分)，推测F峰可能为射干苷磺酸钠，然后再逐渐转化为B峰成分即射干苷元磺酸钠(图中A、C、F峰均消失)，与射干苷元磺化反应一样，反应2h后，生成单一的射干苷元磺酸钠，同时杂质峰D峰开始生成。

由上可知，射干苷元磺化反应为直接生成射干苷元磺酸钠，而射干苷磺化反应先生成射干苷磺酸钠，再脱葡萄糖生成射干苷元磺酸钠。

实验例3、射干苷元磺酸钠雌激素样作用评价

1、实验方法

为了减少内源性雌激素的分泌对试验结果产生的影响，本试验小鼠选用的是初断乳、性未成熟的雌性小鼠(昆明种小鼠30只，雌性，出生后21d(断乳鼠)，体重9～12g，购自四川省中医药科学院实验动物中心)。阳性药物为雌二醇注射液(E₂)，2mg/mL，上海通用药业股份有限公司生产，用植物油配制成35μg/mL的悬浊液。

实验动物按体重随机分为3组：阴性对照组、阳性对照组、射干苷元磺酸钠组，每组10只。实验动物适应性饲养6d后，称重，阴性对照组给予等体积植物油；阳性对照组按0.35mg/(kg·d)给予E₂；射干苷元磺酸钠按35mg/(kg·d)给予，早、晚各灌胃1次，连续4d。各组动物于最后1次给药后第2天，称重，脱臼处死，分离子宫并称重，计算小鼠子宫系数(即：子宫湿重/体重×100％)及小鼠体重增幅。结果见表1、表2。

2、实验结果

表1射干苷元磺酸钠对小鼠子宫系数的影响

组别	体重(g)	子宫湿重(g)	子宫系数(％)
				阴性对照组	18.563±1.264	0.018±0.003	0.098±0.006
E<sub>2</sub>组	21.438±1.161	0.124±0.015<sup>*</sup>	0.575±0.054<sup>*</sup>
				射干苷元磺酸钠组	21.246±1.207	0.121±0.014<sup>*</sup>	0.570±0.046<sup>*</sup>

备注：*与阴性对照组比较，P<0.05

表2射干苷元磺酸钠对小鼠体重的影响

组别	增重(g)	用药前后体重增幅(％)
			阴性对照组	4.982±1.175	26.81±3.682
E<sub>2</sub>组	7.503±0.887<sup>*</sup>	34.953±2.869<sup>*</sup>
			射干苷元磺酸钠组	7.228±0.842<sup>*</sup>	34.046±2.445<sup>*</sup>

备注：*与阴性对照组比较，P<0.05

从上述结果可见，用药后，射干苷元磺酸钠组动物体重增幅显著高于阴性对照组，说明射干苷元磺酸钠有生长促进作用，这与射干苷元磺酸钠具有雌激素样作用有关。由此说明，射干苷元磺酸钠具有雌激素样药理活性。

实例4射干苷元磺酸钠对H₂O₂诱导PC₁₂细胞损伤的保护作用

1、实验方法

取对数生长期的PC₁₂细胞以1×10⁵个/L接种于96孔板，每孔加入100μL，于37℃、5％CO₂培养箱中培养24h，分别加入最终浓度为0μg/mL、0.01μg/mL、0.1μg/mL、1.0μg/mL的本发明药物预处理24h，除了空白对照组，其余各组(包括阳性药水溶性V_E对照组)分别再加入最终浓度为60μmol/L的H₂O₂继续培养20h后，每孔加入MTT(5mg/mL)20μL，继续培养4h，吸除上层液体，每孔加入DMSO100μL，37℃培养15min，待蓝紫色结晶物完全溶解后，酶标仪检测各组细胞在490nm下的吸光值。照前法计算细胞存活率，结果见表3。

2、实验结果

表3射干苷元磺酸钠对H₂O₂诱导PC₁₂细胞损伤的保护作用(

n＝6)

备注：①与空白组比较，^ΔP<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

②通过试验，H₂O₂诱导PC₁₂细胞损伤有效作用浓度为60μmol/L，而射干苷元磺酸钠有效作用浓度范围为0.01～1.0μg/mL。

上述MTT实验显示，H₂O₂组OD值明显降低，细胞存活率显著低于正常对照组(P<0.0l)；而不同浓度射干苷元磺酸钠细胞存活率比H₂O₂损伤组显著提高，有显著性差异，且呈剂量相关性；射干苷元磺酸钠细胞存活率与阳性药(水溶性V_E)对照组比较，相当或更好。所以，上述实验结果表明射干苷元磺酸钠对H₂O₂诱导PC₁₂细胞损伤有显著的保护作用。

综上，本发明提供了一种新的制备射干苷元磺酸钠的方法，该方法路线简单、设备要求低、成本低、收率高，适合工业化生产，具有广泛的应用前景。此外，本发明进一步证明了射干苷元磺酸钠具有新的药理活性，即雌激素样作用、并对H₂O₂诱导PC12细胞损伤有显著的保护作用，因此，射干苷元磺酸钠在制备治疗雌激素依赖性肿瘤(如乳腺癌、子宫内膜癌等)、阿尔茨海默病的药物上具有良好的应用前景。

Claims

1.一种制备射干苷元磺酸钠的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：将射干苷加入硫酸中，反应，然后将体系加入氯化钠的水溶液中，搅拌，析出沉淀，过滤，取固体，即得；

所述硫酸的浓度为95％～98％；所述射干苷元磺酸钠的结构为：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述氯化钠的水溶液为饱和氯化钠水溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述射干苷、硫酸、氯化钠的水溶液的质量体积比为1kg：(2-6)L：(20-60)L。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述射干苷、硫酸、氯化钠的水溶液的质量体积比为1kg：4L：40L。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反应时间为1-5小时，反应温度为20～40℃。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述反应时间为2小时，反应温度为室温。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤中，还包括：将所述固体提纯，提纯工艺为：取固体，在水中加热溶解，趁热过滤，保留液体，静置，析晶。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述提纯工艺的操作次数为1-3次。