KR20030069991A - 항상성 유지제 - Google Patents

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KR20030069991A
KR20030069991A KR10-2003-7003697A KR20037003697A KR20030069991A KR 20030069991 A KR20030069991 A KR 20030069991A KR 20037003697 A KR20037003697 A KR 20037003697A KR 20030069991 A KR20030069991 A KR 20030069991A
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사가와히로아끼
히노후미쯔구
모리하라에쯔꼬
사까이다까시
오야시끼하루오
가또이꾸노신
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다카라 바이오 가부시키가이샤
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Abstract

본 발명은 푸코이단, 그 분해물 또는 그것들의 염을 이용한 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 생체의 항상성 유지제, 식품, 음료 또는 사료를 제공한다.
또, 본 발명은 착색이 적고, 쓴맛이나 요오드 함량이 경감되어 상쾌감이 있는 풍미가 개선된 푸코이단 및 해조류 추출물, 해당 푸코이단 및/또는 해조류 추출물을 함유하는 식품, 음료, 조미료, 사료, 화장료 또는 의약 및, 이들의 효율적인 제조방법을 제공한다.

Description

항상성 유지제{HOMEOSTASIS-MAINTAINING AGENTS}
해조류에는 갈조류, 녹조류, 홍조류 등이 있다. 이 중 갈조류에는 다시마, 미역, 큰실말, 녹미채 등 맛도 좋고 건강에도 좋은 해조가 많아 오래전부터 인류의 음식물로 대량으로 이용되어 왔다. 이들 갈조류는 매일 많은 양을 섭취해도 뚜렷한 장애가 일어나지 않기 때문에 식품으로서의 안전성은 매우 높다. 또, 갈조류는 중국에서 암 치료약으로 사용되어 많은 연구자가 갈조류로부터 항암 작용을 나타내는 물질을 동정하고자 시도하였다. 갈조류로부터의 열수 추출물중에 존재하는 푸코이단은 황산화 푸코오스를 함유하는 황산화 다당의 일종이다. 천연 푸코이단은 분자량이 수십만 또는 그 이상으로 친수성이 높은 황산기와, 소수성이 높은 메틸기 등 상반되는 성질의 화학구조를 겸비하기 때문에, 해조에 함유된 다양한 성분이 흡수되기 쉬워 정제가 매우 곤란한 물질이다. 최근, 푸코이단의생리기능으로서 항암 작용, 아포토시스 유발 작용, 혈압 저하 작용, 항알레르기 작용 등이 밝혀지고 있는 점에서 그 유용성은 높아지고 있어 의약품 및 건강식품으로서의 용도개발이 기대되고 있다. 또, 푸코이단은 식품, 음료, 사료, 화장료 또는 의약의 유효성분으로서 이들 생리기능을 충분히 발휘하는 관점에서 간편하며 고효율적이며 고순도의 푸코이단 제조방법의 개발이 요구되고 있다.
또, 해조류는 식품재료나 조미료의 국물내는 용도로서 일반에게 다용되고 있다. 예컨대, 식용으로 근다시마를 가볍게 물세정하고, 수중에 넣어 12 시간 정도 추출하여 다시마의 엑스가 우러 나온 다시마물로 사용하거나, 또 다시마국물을 내기 위해 온수에서 끊여 맛이 좋은 글루타민산이 풍부한 국물을 만든다. 해조류는 아미노산, 미네랄류나 점질 다당을 함유하고, 이들 성분을 추출하여 식품이나 조미료로 이용하고 있다. 그러나, 해조류에는 쓴맛성분이 함유되어 있어 물이나 온수 추출에 의해 용액으로 용출된다. 또, 이외에도 해조류에 특유한 향성분이나 맛성분이 있고, 또 끓여 우려 낼 때 착색성분이 더욱 증가한다. 해조류의 추출은 냉수 및 온수에서도 점질 다당, 미네랄류나 요오드분 및 해조냄새가 추출액으로 이행되어 쓴맛이나 지나치게 요오드가 추출되어, 식품재료로 사용할 때도 해조냄새가 요구되지 않는 식품이나 조미료로는 사용하기 어렵다. 현대인의 건강에는 점질 다당이나 미네랄류를 섭취하는 것이 중요하여, 해수 음료가 즐겨 음용되고 있는데, 기호 면에서는 쓴맛을 경감시키는 것이 중요하며 특히 해조냄새를 방지한 식품, 음료 및 조미료의 개발이 요망되고 있다.
쓴맛, 떫은맛 및 과도한 착색성분의 제거는 일반적으로 사용되고 있는 화학반응에 의한 이온 교환수지나 물리적 흡착에 의한 활성탄 처리 등이 범용되어 효과를 나타내지만, 이들 방법은 해조류 본래의 향미성분까지 지나치게 제거되고 착색의 색채도 변화된다. 따라서, 수작업에 의한 해조류의 액추출물이나 우려 낸 국물의 향미와 동떨어진 품질, 풍미가 된다. 그 결과, 순수한 수작업풍의 본격적인 해조류 추출액이 얻어지지 않고, 그것을 살린 식품, 음료, 조미료 또는 사료도 알려져 있지 않다.
발명의 개시
본 발명은 푸코이단의 새로운 생리 작용을 발견하는 것에 있고, 그 목적은 푸코이단, 그 분해물 또는 그것들의 염을 이용한 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 생체의 항상성 유지제, 식품, 음료 또는 사료를 제공하는 것에 있다.
또, 본 발명의 목적은 착색이 적고, 쓴맛이나 요오드 함량이 경감되어 상쾌감이 있는, 풍미가 개선된 푸코이단 및 해조류 추출물, 해당 푸코이단 및/또는 해조류 추출물을 함유하는 식품, 음료, 조미료, 사료, 화장료 또는 의약 및, 이들의 효율적인 제조방법을 제공하는 것에 있다.
즉, 본 발명의 요지는
[1] 푸코이단, 그 분해물 및 그것들의 염으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 이상을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 생체의 항상성 유지제,
[2] 푸코이단, 그 분해물 및 그것들의 염으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 이상을 함유하는 것을 특징으로 하는 생체의 항상성 유지용 식품, 음료 또는 사료,
[3] 해조류를 환원성 물질 존재하에서 추출하여 얻어지는 푸코이단,
[4] 해조류를 환원성 물질 존재하에서 추출하여 얻어지는 해조류 추출물,
[5] 상기 [3] 에 기재된 푸코이단 및/또는 상기 [4] 에 기재된 해조류 추출물을 함유하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 식품, 음료, 조미료 또는 사료,
[6] 상기 [3] 에 기재된 푸코이단 및/또는 상기 [4] 에 기재된 해조류 추출물을 함유하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 화장료,
[7] 상기 [3] 에 기재된 푸코이단 및/또는 상기 [4] 에 기재된 해조류 추출물을 유효성분으로 함유하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 의약,
[8] 해조류를 환원성 물질 존재하에서 추출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 푸코이단의 제조방법,
[9] 해조류를 환원성 물질 존재하에서 추출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 해조류 추출물의 제조방법,
[10] 상기 [8] 에 기재된 공정 및/또는 상기 [9] 에 기재된 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 식품, 음료, 조미료 또는 사료의 제조방법,
[11] 상기 [8] 에 기재된 공정 및/또는 상기 [9] 에 기재된 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료의 제조방법 및,
[12] 상기 [8] 에 기재된 공정 및/또는 상기 [9] 에 기재된 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 의약의 제조방법
에 관한 것이다.
본 발명은, 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 의약, 식품, 음료 또는 사료에 관한 것이다.
또, 본 발명은 풍미가 개선된 푸코이단 및 해조류 추출물, 해당 푸코이단 및/또는 해조류 추출물을 함유하는 식품, 음료, 조미료, 사료, 화장료 또는 의약 및 이들의 제조방법에 관한 것이다.
도 1 은 개다시마 유래 푸코이단의 DEAE-셀룰로파인 A-800 칼럼 용출 패턴을 나타내는 도면이다.
도 2 는 푸코이단에 의한 식후에 래트의 혈당값 상승억제 작용을 나타내는 도면이다.
도 3 은 푸코이단에 의한 식후에 래트의 혈중 중성 지방값 상승억제 작용을 나타내는 도면이다.
발명을 실시하기 위한 최선의 형태
본 발명의 제 1 양태는, 푸코이단, 그 분해물 및 그것들의 염으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 이상을 유효성분으로 함유하는 것을 하나의 큰 특징으로 하는, 생체의 항상성 유지제, 생체의 항상성 유지용 식품, 음료 및 사료를 제공하는 것이다. 본 발명의 원하는 효과의 발현은 본 발명자들이 발견한 해당 유효성분에 의해 발휘되는 생체의 항상성 유지 작용에 기초하는 것이다.
본 명세서에서, 이러한 생체의 항상성 유지 작용이란, 즉 생체를 유지하기 위해 생명유지의 기능을 일정한 상태로 유지하는 작용을 말하는 것으로, 특히 간기능의 항상성 유지 작용 및 혈액의 항상성 유지 작용을 말한다. 이들 작용의 상세한 것에 대해서는 후술한다. 또한, 유지에는 일정한 상태를 유지한다는 의미 외에, 일정한 상태를 유지하도록 조절한다는 의미도 포함한다.
본 발명에서 유효성분으로 사용하는 푸코이단이란 황산화 푸코오스를 구성성분으로 함유하는 황산화 푸코오스 함유 다당으로 생체의 항상성 유지 작용을 갖고 있으면 되고, 특별히 한정되지 않는다. 예컨대, 조류 즉 개다시마(Kjellmaniella crassifolia), 토로로 다시마 (Kjellmaniella gyrata), 미역, 쿠로메 (Ecklonia kurome), 대황 (Eisenia bicyclis), 감태 (Ecklonia cava), 자이언트 켈프 (giant kelp), 레소니아 니그레센스 (Lessonia nigrescens), 큰실말, 오끼나와 큰실말, 모자반, 아스코필럼 노도섬 (Ascophyllum nodosum) 등의 다시마목 (Laminariales), 민가지말목, 모자반목 등의 갈조류에 속하는 해조는 특히 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 푸코이단을 많이 함유하고 있어 원료로서 바람직하다. 또, 원료로는 극피동물, 예컨대 해삼, 성게, 불가사리 등을 사용할 수도 있고, 그것들에 유래되는 푸코이단도 바람직하게 사용할 수 있다. 그 중에서도 다시마목의 해조는 우수한 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 푸코이단을 많이 함유하고 있어 원료로서 보다 바람직하다. 따라서, 본 발명의 유효성분으로 사용되는 푸코이단으로는 조류 유래 또는 극피동물 유래인 것이 바람직하고, 갈조류 유래인 것이 보다 바람직하다.
이들 푸코이단의 제조는 각각 공지된 방법으로 실시하면 되고, 비정제 조제물, 정제물 또는 몇가지 분자종으로 나눈 푸코이단 등을 본 발명에 사용할 수 있다.
예컨대 개다시마로부터 푸코이단을 제조하고, 이 푸코이단을 글루쿠론산 함유 푸코이단 (U-푸코이단이라고 함) 과 글루쿠론산 비함유 푸코이단 (F-푸코이단이라고 함) 으로 분리할 수 있고, 본 발명의 유효성분으로서 각각의 푸코이단을 사용할 수 있다. 또한 개다시마로부터 황산화 푸코갈락탄 (이하, G-푸코이단이라고 함) 을 제조하여 본 발명에 사용할 수 있다.
U-푸코이단 및 F-푸코이단은 예컨대 개다시마로부터 푸코이단을 제조후, 음이온 교환수지, 계면활성제 등을 이용하여 분리된다. 개다시마 유래 U-푸코이단 및 F-푸코이단의 존재비는 약 1:2 이며, U-푸코이단은 푸코오스, 만노오스, 갈락토오스, 글루쿠론산 등을 함유하고, 황산 함량은 약 20%, F-푸코이단은 푸코오스와 갈락토오스를 함유하고, 황산 함량은 약 50%, 분자량은 양 물질 모두 약 20 만을 중심으로 분포되어 있다 (제 18 회 당질 심포지움 요지집, 제 159 페이지, 1996년).
예컨대 개다시마로 제조한 푸코이단 용액을 DEAE-셀룰로파인 A-800 칼럼에 적용한 후, 염화나트륨 함유 완충액으로 농도구배법에 의해 용출시킴으로써, U-푸코이단과 F-푸코이단으로 분리할 수 있다. 도 1 에 그 일례를 나타낸다. 즉, 도 1 은 U-푸코이단과 F-푸코이단의 분리를 나타내는 도면으로, 도면에서 전피크가 U-푸코이단, 후피크가 F-푸코이단이다.
또 예컨대 큰실말 유래 푸코이단, 오끼나와 큰실말 유래 푸코이단, 미역 유래 푸코이단, 미역 기부 유래 푸코이단, 모자반 유래 푸코이단도 각각 공지된 방법으로 제조하여 본 발명에 사용할 수 있다.
푸코이단을 함유하는 해삼으로는, 일본 공개특허공보 평4-91027호에 기재된 해삼이 있고, 해당 공보 기재된 방법으로 해삼으로부터 푸코이단을 제조할 수 있다. 또, 시판되고 있는 푸코이단을 사용할 수도 있다. 또, 상기 푸코이단은 필요에 따라 적절하게 황산화하여 사용할 수도 있으며, 황산화 방법은 공지된 방법에 따르면 된다.
본 발명에서 유효성분으로 사용하는 푸코이단 분해물 (이하, 본 발명의 분해물이라고도 함) 은 효소학적 방법, 화학적 방법, 물리적 방법 등의 공지된 방법으로 푸코이단을 분해하여 생체의 항상성 유지 작용을 지표로 하여 필요한 분해물을 선택함으로써 얻을 수 있다. 또, 본 발명에서 사용하는 푸코이단 분해물은 필요에 따라 적절하게 황산화하여 사용할 수도 있으며, 황산화 방법은 공지된 방법에 따르면 된다.
본 발명에서 사용하는 푸코이단 분해물의 제조 방법으로는, 예컨대 산분해법 이 있고, 해당 푸코이단을 산분해함으로써 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 분해물을 제조할 수 있다.
본 발명에서 사용하는 푸코이단의 산분해 조건은 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 분해물이 생성되는 조건이면 특별히 한정되지 않는다. 예컨대 푸코이단을 산수용액 등에 용해 또는 현탁하고 산분해반응시킴으로써 본 발명의 분해물이 생성된다. 또 반응시에 가열함으로써 본 발명의 분해물 생성에 필요한 시간이 단축된다. 푸코이단의 산분해에 사용할 수 있는 산으로는 특별히 한정되지 않고, 염산, 황산, 질산 등의 무기산, 시트르산, 포름산, 아세트산, 락트산, 아스코르브산 등의 유기산, 또한 양이온 교환수지, 양이온 교환섬유, 양이온 교환막 등의 고체산을 사용할 수 있다.
산의 농도도 특별히 한정되지는 않고, 바람직하게는 0.0001 내지 5 규정, 보다 바람직하게는 0.01 내지 1 규정 정도의 농도로 사용할 수 있다. 또한, 반응온도도 특별히 한정되지는 않지만, 바람직하게는 0 내지 200℃, 보다 바람직하게는20 내지 130℃ 로 설정하면 된다.
또한, 반응시간도 특별히 한정되지는 않지만, 바람직하게는 수초 내지 수일로 설정하면 된다. 산의 종류와 농도, 반응온도 및 반응시간은 본 발명의 분해물의 생성량, 분해물의 중합도에 따라 적절히 선택하면 된다. 예컨대 본 발명의 분해물의 제조시에는 시트르산, 락트산, 말산 등의 유기산을 사용하고, 산의 농도는 수 10mM 내지 수 M, 가열온도는 50 내지 110℃, 바람직하게는 70 내지 95℃, 가열시간은 수분 내지 24 시간의 범위에서 적절히 선택함으로써 본 발명의 분해물을 제조할 수 있다. 푸코이단의 산분해물로는 개다시마 유래 푸코이단의 산분해물이 예시되고, 해당 분해물은 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 식물섬유로도 사용할 수 있다.
본 발명의 분해물은 생체의 항상성 유지 작용을 지표로 하여 분획할 수 있고, 예컨대 산분해물을 겔여과법, 분자량 분획막에 의한 분획법 등에 의해 분자량 분획할 수 있다.
겔여과법의 예로는 셀룰로파인 GCL-300 (생화학공업사 제조) 을 사용하고, 예컨대 분자량 25000 초과, 분자량 25000 내지 10000 초과, 분자량 10000 내지 5000 초과, 분자량 5000 이하 등의 임의의 분자량 획분을 제조할 수 있고, 셀룰로파인 GCL-25 (생화학공업사 제조) 를 사용하여 예컨대 분자량 5000 이하의 획분을 분자량 5000 내지 3000 초과, 분자량 3000 내지 2000 초과, 분자량 2000 내지 1000 초과, 분자량 1000 내지 500 초과, 분자량 500 이하 등의 임의의 분자량 획분으로 제조할 수 있다.
또, 본 발명의 분해물은 한외여과막을 사용하여 공업적으로 분자량 분획을 실시할 수 있고, 예컨대 다이셀사 제조 FE10-FUSO382 를 사용함으로써 분자량 30000 이하의 획분을 제조할 수 있고, 동 FE-FUS-T653 을 사용함으로써 분자량 6000 이하의 획분을 제조할 수 있다. 또한 나노필터막을 사용함으로써 분자량 500 이하의 획분을 얻을 수도 있고, 이들 겔여과법, 분자량 분획법을 조합함으로써 임의의 분자량 획분을 제조할 수 있다.
본 발명에서 사용할 수 있는 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 푸코이단의 분해물로는 하기 화학식 (I) 내지 (Ⅳ) 로 표시되는 화합물이 예시되고, 이들 화합물은 국제공개 제97/26896호 팜플렛, 국제공개 제99/41288호 팜플렛, 국제공개 제00/50464호 팜플렛에 기재된 방법으로 제조할 수 있다. 또 본 발명의 분해물로는 국제공개 제97/26896호 팜플렛, 국제공개 제99/41288호 팜플렛, 국제공개 제00/50464호 팜플렛에 기재된 푸코이단의 분해물도 예시된다.
(상기 식에서, R 은 OH 또는 OSO3H 이다.)
(상기 식에서, R 은 OH 또는 OSO3H 이다.)
(상기 식에서, R 은 OH 또는 OSO3H 이다.)
(상기 식에서, R 은 OH 또는 OSO3H 이다.)
또한, 화학식 (I) 로 표시되는 화합물의 예로는 후술하는 화학식 (Ⅴ) 로 표시되는 화합물을, 화학식 (Ⅱ) 로 표시되는 화합물의 예로는 후술하는 화학식 (Ⅵ)및 화학식 (Ⅶ) 로 표시되는 화합물을, 화학식 (Ⅲ) 으로 표시되는 화합물의 예로는 후술하는 화학식 (Ⅷ) 로 표시되는 화합물을 들 수 있다.
식 (Ⅰ) 로 표시되는 화합물은 예컨대 이미 언급한 F-푸코이단을 알테로모나스 종 SN-1009 (FERM BP-5747) 가 생산하는 엔도형 황산화 다당 분해효소 (F-푸코이단 특이적 분해효소) 로 분해하고, 얻어진 분해물로부터 정제함으로써 얻을 수 있다. 당해 화합물중의 황산기의 함량, 부위에 대해서는 그 분해물중으로부터 임의의 것을 정제할 수 있다. 또 당해 분해물중에는 화학식 (I) 로 표시되는 화합물의 다량체도 함유되어 있어 목적에 따라 분리, 정제할 수 있다.
화학식 (II), 화학식 (Ⅲ) 으로 표시되는 화합물은 이미 언급한 U-푸코이단을, 플라보박테리움 종 SA-0082 (FERM BP-5402) 가 생산하는 엔도형 황산화 다당 분해효소 (U-푸코이단 특이적 분해효소) 를 사용하여 분해하고, 얻어진 분해물로부터 정제함으로써 얻을 수 있다. 당해 화합물중의 황산기의 함량, 부위에 대해서는 그 분해물중으로부터 임의의 것을 정제할 수 있다. 또 분해물중에는 각각 화학식 (II) 또는 (Ⅲ) 으로 표시되는 화합물을 기본골격으로 하는, 그 다량체도 함유되어 있어 목적에 따라 분리, 정제할 수 있다.
개다시마 유래의 푸코이단을 알테로모나스 종 SN-1009 (FERM BP-5747) 가 생산하는 F-푸코이단 특이적 분해효소 및 플라보박테리움 종 SA-0082(FERM BP-5402) 가 생산하는 U-푸코이단 특이적 분해효소로 분해하고, 얻어진 분해물을 정제하여 이미 언급한 G-푸코이단을 정제할 수 있다.
상기 플라보박테리움 종 SA-0082 (FERM BP-5402) 는 이 G-푸코이단을 특이적으로 분해하는 엔도형 황산화 다당 분해효소 (G-푸코이단 특이적 분해효소) 도 생산한다. 당해 G-푸코이단 특이적 분해효소를 G-푸코이단에 작용시킴으로써 당해 G-푸코이단 분해물을 제조하여 목적에 따라 분해물을 정제하고, 해당 분해물중으로부터 본 발명에서 유효성분으로 사용할 수 있는 분해물을 제조할 수도 있다. 화학식 (Ⅳ) 로 표시되는 화합물은 그 예이다. 당해 화합물중의 황산기의 함량, 부위에 대해서는 그 분해물중으로부터 임의의 것을 정제할 수 있다. 또, 당해 분해물중에는 화학식 (Ⅳ) 로 표시되는 화합물을 기본골격으로 하는, 그 다량체도 함유되어 있어 목적에 따라 분리, 정제할 수 있다.
또한, 상기 각 효소에 대해서는 국제공개 제97/26896호 팜플렛 또는 국제공개 제00/50464호 팜플렛에 기재되어 있다. 또, 상기 F-푸코이단 특이적 분해효소, U-푸코이단 특이적 분해효소, G-푸코이단 특이적 분해효소는 각각 공지된 방법으로 이들 유전자를 단리하고, 재조합체를 제작하고 효소를 제조하여 사용할 수도 있다. 예컨대, F-푸코이단 특이적 분해효소 및 U-푸코이단 특이적 분해효소에 대해서는 국제공개 제99/11797호 팜플렛에 기재된 방법으로 재조합체로부터 제조하여 사용할 수도 있다.
상기 푸코이단의 특정 분획물, 특히 F-푸코이단, U-푸코이단, G-푸코이단은 그 기본구조가 비로소 명확해진 푸코이단 분획물로, 각 분획물에 특이적으로 작용하는 효소를 사용하여 제조되는 각 분해물, 특히 그 분해물의 분획물, 예컨대 상기 화학식 (Ⅰ) 내지 화학식 (Ⅳ) 등의 화합물은 푸코이단과 비교하여 분자량이 작고, 또한 푸코이단과 동등한 생리활성을 갖는다는 점에서, 구조, 조성, 물성이 불명확한 단순히 분리된 푸코이단 또는 푸코이단 함유물에 비해 현저하게 우수하다.
본 발명에서 유효성분으로 사용되는 푸코이단 또는 그 분해물의 염으로는, 예컨대 알칼리 금속염, 알칼리토류 금속염, 유기 염기 등과의 염을 예시할 수 있다. 예컨대 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 또는 디에탄올아민, 에틸렌디아민 등과의 염을 들 수 있다. 이들 염은 예컨대 푸코이단 등에 존재하는 황산기나 카르복실기를 공지된 방법으로 염으로 변환함으로써 얻어진다. 이러한 염으로는 약리학적으로 허용될 수 있는 염이 바람직하다.
또한, 본 발명의 제 1 양태에서는 후술하는 본 발명의 제 2 양태의 설명에서 상세하게 기재하는, 본 발명의 해조류 추출물의 제조방법에 따라 얻을 수 있는 것으로서, 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 푸코이단 및, 그 분해물 및 그것들의 염을 유효성분으로 바람직하게 사용할 수 있다. 해당 푸코이단은 원하는 원료로부터 환원성 물질 존재하에 추출하는 것에 의한, 고순도이며 고수율인 푸코이단의 제조방법에 의해 얻어지는 것으로, 종래 푸코이단의 제조방법에 의해 얻어지는 푸코이단과 비교하여 외관 색이 흐리고 해조냄새도 저감된다는 성질을 갖고 있어 본 발명의 양태에서의 유효성분으로 보다 바람직한 것이다. 해당 푸코이단의 제조방법은, 원료로서 상기한 바와 같은 푸코이단을 함유하는 것으로 알려져 있거나, 또는 푸코이단을 함유할 것으로 생각되는 해조류 (바람직하게는 갈조류) 를 사용하는 것을 제외하고, 원료의 처리조건이나 원료로부터의 목적물질의 추출조건 등은 후술하는 해조류 추출물의 제조방법과 동일한다. 해당 푸코이단 (이하, 환원 추출 푸코이단이라고도 함) 및 그 제조방법은 본 발명에 포함된다.
또한, 본 발명의 유효성분의 생체의 항상성 유지 작용의 발현은 후술하는 실시예에 기재된 방법으로 평가할 수 있다. 예컨대, 간기능의 항상성 유지 작용에 대해서는 실시예 1 내지 4 에 기재된 방법으로 평가할 수 있다. 또, 혈액의 항상성 유지 작용에 대해서는 실시예 5 내지 6 에 기재된 방법으로 평가할 수 있다.
본 발명의 제 1 양태에서의, 의약으로서의 생체의 항상성 유지제는 생체의 항상성의 변조에 의해 생기는 질환이나 병태 (또는 생체의 항상성 유지를 필요로 하는 질환이나 병태) 를, 상기 유효성분의 생체의 항상성 유지 작용에 의해 예방 또는 치료하는 의약 등, 해당 작용에 기초하여 약리효과를 발휘하는 모든 의약을 포함하는 것이다. 그 중에서도 해당 유효성분은 간기능의 항상성 유지 작용 및 혈액의 항상성 유지 작용이 우수하며, 본 발명의 양태에서 바람직하게는 간기능 장애의 치료제 또는 예방제로서의, 또는 혈액의 항상성 유지제로서의, 생체의 항상성 유지제가 제공된다.
본 발명의 유효성분이 갖는 간기능의 항상성 유지 작용이란, 구체적으로는 간기능 장애의 치료 또는 예방 작용을 말하는 것으로, 따라서 본 발명의 항상성 유지제는 간기능의 항상성의 변조에 의해 생기는 질환이나 병태, 특히 간기능 장애의 치료 또는 예방에 유효하다.
간기능 장애의 치료제 또는 예방제로서의, 본 발명의 항상성 유지제 (이하, 본 발명의 간기능 장애의 치료제 또는 예방제라고도 함) 의 치료 또는 예방의 대상이 되는 간기능 장애로는 특별히 한정되지 않지만, 예컨대 급성 간염, 극증 간염,알콜성 간염, 만성 간염, 간경변, 간암 등이 예시되며, 바람직하게는 간선유화를 동반하는 질환인 만성 간염, 알콜성 간염 또는 간경변이 예시된다. 또한, 이들 장애를 거쳐 발증하는 간암도 간선유화를 동반하는 질환으로 포함된다.
간선유화는 만성 간염, 알콜성 간염, 간경변에서 관찰되는 간장에 콜라겐 등의 결합조직의 증생 및 축적을 초래한 병태이다. 따라서, 간선유화를 억제함으로써 상기 질환을 치료 또는 예방할 수 있다. 한편, 만성 간염, 간경변이 악화되면 간암으로 진행될 위험율이 높아진다. 이러한 관점에서 간선유화를 억제하는 것은 간암의 치료 또는 예방에서도 매우 유용하다.
또, 이들 간기능 장애의 원인인자로는 특별히 한정되지 않고, 바이러스, 자기면역, 약물, 알콜, 영양 장애, 선천성 대사이상, 순환 장애 등의 원인인자가 있고, 이들 중 어떤 원인에 의한 간기능 장애에 대해서나 본 발명의 항상성 유지제를 사용할 수 있다. 또, 본 발명의 유효성분은 후술하는 실시예 3 및 4 에 나타내는 바와 같이 알콜성 간기능 장애에 대해서도 특히 유용하다.
한편, 본 발명의 유효성분이 갖는 혈액의 항상성 유지 작용이란, 예컨대 생활습관병 (특히 당뇨병, 비만증, 고지혈증) 의 원인이 되는 혈당값이나 혈중 중성 지방값의 상승을 억제하거나, 또는 상승한 혈당값이나 혈중 중성 지방값을 저하시키는 등의 작용, 즉 혈당값 상승억제 작용이나 혈중 중성 지방값 상승억제 작용 등을 말하는 것이다. 또한, 억제에는 조절의 의미를 포함한다. 본 발명의 유효성분은 특히 혈액의 항상성 유지 작용으로서 구체적으로 기재된 상기 작용이 우수하며, 따라서 본 발명에 의해 이들 작용을 갖는 생체의 항상성 유지제가 제공된다. 해당 항상성 유지제에 의하면, 혈당값이나 혈중 중성 지방값의 상승을 억제하거나, 또는 상승한 혈당값이나 혈중 중성 지방값을 저하시켜 생활습관병, 특히 당뇨병, 비만증, 고지혈증을 예방 또는 치료할 수 있다. 또, 본 발명의 유효성분은 식사후의 혈당값 및 혈중 중성 지방값의 상승을 억제하는 작용도 갖고 있고, 그로 인해 본 발명에 의해 식사후의 혈액의 항상성 유지제로서의 생체의 항상성 유지제가 제공된다. 이러한 항상성 유지제는 식사가 제한되는 당뇨병 환자, 비만증 환자, 고지혈증 환자의 치료 또는 예방에 있어서 매우 유용하다. 또한, 본 명세서에서 중성 지방으로는 모노글리세리드, 디글리세리드 및 트리글리세리드 등이 예시된다.
이어서, 본 발명의 항상성 유지제의 제조방법에 대해 설명한다. 본 발명의 생체의 항상성 유지제는 푸코이단, 그 분해물 및 그것들의 염으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 이상을 유효성분으로 하고, 이것을 공지된 의약용 담체와 조합하여 제제화하면 된다. 해당 제제의 제조는 일반적으로는, 본 발명의 유효성분을 약학적으로 허용할 수 있는 액상 또는 고체상의 담체와 배합하고, 또 필요에 따라 용제, 분산제, 유화제, 완충제, 안정제, 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제 등을 첨가하여, 정제, 과립제, 산제, 분말제, 캡슐제 등의 고형제, 통상 액제, 현탁제, 유제 등의 액제로 할 수 있다. 또, 이것을 사용하기 전에 적당한 담체의 첨가에 의해 액상으로 할 수 있는 건조품이나, 외용제로 할 수도 있다.
의약용 담체는 본 발명의 항상성 유지제의 투여형태 및 제형에 따라 선택할 수 있고, 경구제의 경우에는, 예컨대 전분, 젖당, 백당, 만니톨, 카르복시메틸셀룰로오스, 옥수수전분, 무기염 등이 이용된다. 또, 경구제의 제조에 있어서는 결합제, 붕괴제, 계면활성제, 윤택제, 유동성 촉진제, 교미제, 착색제, 향료 등을 배합할 수도 있다.
한편, 비경구제의 경우에는, 통상의 방법에 따라 본 발명의 유효성분을 희석제로서의 주사용 증류수, 생리식염수, 포도당 수용액, 주사용 식물유, 참기름, 땅콩유, 대두유, 옥수수유, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜 등에 용해 내지 현탁시키고, 필요에 따라 살균제, 안정제, 등장화제, 무통화제 등을 첨가하여 제조할 수 있다.
외용제로는 경피투여용 고체, 반고체 또는 액상의 제제가 포함된다. 또 좌제 등도 포함된다. 예컨대, 유제, 로션제 등의 유탁제, 외용 팅크제 등의 액상 제제, 오일성 연고, 친수성 연고 등의 연고제, 필름제, 테이프제, 파프제 등의 경피투여용 부착제 등으로 할 수도 있다.
본 발명의 항상성 유지제는 적절하게 제약분야에서의 공지된 방법에 따라 제조할 수 있다. 이 항상성 유지제에서의 유효성분의 함유량은 투여형태, 투여방법 등을 고려하고, 해당 제제를 사용하여 바람직하게는 후술하는 투여량 범위로 해당 유효성분을 투여할 수 있는 양이면 특별히 한정되지 않는다.
본 발명의 생체의 항상성 유지제는 제제형태에 따른 적당한 투여경로로 투여할 수 있다. 투여방법도 특별히 한정되지 않고, 내용, 외용 및 주사에 의한 것이 가능하다. 주사제는, 예컨대 정맥내, 근육내, 피하, 피내 등에 투여할 수 있고, 외용제에는 좌제 등도 포함된다.
본 발명의 생체의 항상성 유지제의 투여량은 그 제형형태, 투여방법, 사용목적 및 이것에 적용되는 환자의 연령, 체중, 증상 등에 따라 적절히 설정되고, 일정하지는 않지만, 일반적으로는 제제중에 함유되는 유효성분의 양으로 바람직하게는 성인 1 일당 바람직하게는 0.1 내지 2000㎎/㎏ 이다. 물론, 투여량은 다양한 조건에 따라 변동되므로, 상기 투여량보다 적은 양으로 충분한 경우도 있고, 또는 범위를 초과하여 필요한 경우도 있다. 본 발명의 항상성 유지제는 그대로 경구투여하는 것 외에, 임의의 음식품에 첨가하여 일상적으로 섭취시킬 수도 있다. 또, 푸코이단, 그 분해물 및/또는 그것들의 염을 생체의 항상성 유지용 음식품의 원료로 사용해도 된다.
또, 본 발명의 유효성분으로 사용하는, 푸코이단, 그 분해물 및/또는 그것들의 염은 그 생체의 항상성 유지 작용에 의해 생체의 항상성 유지에 관한, 예컨대 간기능 장애의 발생, 혈당값 상승 또는 혈중 중성 지방값 상승억제의 메커니즘의 연구나, 간기능 개선제, 혈당값 상승억제제, 혈중 중성 지방값 상승억제제의 스크리닝에도 유용하다.
또, 본 발명의 다른 양태로서, 본 발명의 상기 유효성분을 개체에 투여하는, 생체의 항상성 유지방법을 제공한다. 이러한 방법은 간기능 장애의 치료 또는 예방, 또는 혈액의 항상성 유지에 있어서 특히 유용하다. 개체에 투여하는 푸코이단으로는 조류 유래 또는 극피동물 유래인 것이 바람직하고, 조류로는 갈조류인 것이 바람직하다. 또, 특히 상기 환원 추출 푸코이단을 투여하는 것이 바람직하다. 또한, 개체란 포유동물, 그 중에서도 인간이다.
이러한 방법은 예컨대 생체의 항상성 유지가 필요할 것으로 예상되거나 또는 그 필요한 인간에 대해 상기 유효성분을, 바람직하게는 본 발명의 항상성 유지제로서 투여하여 실시할 수 있다. 유효성분의 투여방법, 투여량 등은 해당 유효성분의 투여에 사용하는 본 발명의 항상성 유지제의 투여방법, 투여량 등에 따르면 된다. 또한, 본 양태에서는 후술하는 식품, 음료 또는 사료를 사용할 수도 있다.
이어서, 본 발명의 유효성분을 함유하여 이루어지는 본 발명의 식품, 음료 또는 사료 (이하, 본 발명의 생체의 항상성 유지용 식품, 음료 또는 사료라고도 함) 를 설명한다. 본 발명의 식품, 음료 또는 사료는 유효성분이 갖는 생체의 항상성 유지 작용에 의해 해당 유효성분에 감수성을 나타내는 생체의 항상성 유지에 유효하며, 따라서 항상성 유지를 필요로 하는 질환의 개선, 예방에 매우 유용하다. 본 발명에 의해 상기 항상성 유지제와 동일한 작용 및 효과를 갖는 식품, 음료 또는 사료가 제공된다. 바람직한 양태에 대해서도 상기 항상성 유지제와 동일하다.
또한, 본 발명의 식품, 음료 또는 사료에서 말하는「함유」라는 용어는, 함유, 첨가, 희석의 의미를 포함하는 것으로, 함유란, 식품, 음료 또는 사료중에 본 발명에서 사용되는 유효성분이 함유되는 양태를, 첨가란, 식품, 음료 또는 사료의 원료에 본 발명에서 사용되는 유효성분을 첨가하는 양태를, 희석이란, 본 발명에서 사용되는 유효성분에 식품, 음료 또는 사료의 원료를 첨가하는 양태를 말하는 것이다.
본 발명의 생체의 항상성 유지용 식품 또는 음료의 제조법은 특별히 한정되지 않고, 조리, 가공 및 일반적으로 사용되고 있는 식품 또는 음료의 제조법에 의한 제조를 들 수 있고, 제조된 식품 또는 음료에 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 푸코이단, 그 분해물 및/또는 그것들의 염의 유효성분으로 함유, 첨가 및/또는 희석되어 있으면 된다.
본 발명의 생체의 항상성 유지용 식품 또는 음료란 특별히 한정되지 않지만, 예컨대 곡물 가공품 (소맥분 가공품, 전분류 가공품, 프리믹스 가공품, 면류, 마카로니류, 빵류, 팥소류, 메밀류, 밀기울, 쌀국수, 당면, 및 포장떡 등), 유지 가공품 (가소성 유지, 튀김기름, 샐러드유, 마요네즈류, 및 드레싱 등), 대두 가공품 (두부류, 된장, 및 대두발효품 등), 식육 가공품 (햄, 베이컨, 압축햄, 및 소시지 등), 수산제품 (냉동 다진 어육, 어묵, 관 모양의 어묵, 다진 어육, 기름에 튀긴 어육, 어육 볼, 시뉴 (sinew), 어육 햄 및 소시지, 가다랭이포, 어란 가공품, 수산 통조림, 및 해산물을 간장으로 조린 반찬 (쯔꾸다니) 등), 유제품 (원유, 크림, 요구르트, 버터, 치즈, 연유, 분유, 및 아이스크림 등), 야채 및 과일 가공품 (페이스트류, 잼류, 절임채소류, 과일음료, 야채음료, 및 믹스음료 등), 과자류 (쵸컬릿, 비스켓류, 과자빵류, 케이크, 떡과자, 및 쌀과자류 등), 알콜 음료 (정종, 중국술, 와인, 위스키, 일본 증류주 (소주), 보드카, 브랜디, 진, 럼주, 맥주, 청량 알콜 음료, 과일주, 및 리큐어 등), 기호 음료 (녹차, 홍차, 우롱차, 커피, 청량음료, 및 유산음료 등), 조미료 (간장, 소스, 식초, 및 미림 등), 통조림, 병조림 또는 포장 식품 (쇠고기 야채 덮밥, 쇠고기 야채 솥밥, 팥밥, 카레라이스, 및 기타각종 조리식품 등), 반건조 또는 농축 식품 (리버 페이스트 및 기타 스프레드, 메밀국수 또는 우동의 국물 및 농축 수프류), 건조 식품 (즉석 면류, 즉석 카레, 인스턴트 커피, 분말 쥬스, 분말 수프, 즉석 된장국 (미소), 및 조리식품, 조리음료, 조리수프 등), 냉동 식품 (스키야끼, 차완무시 (일식 계란찜), 장어구이, 햄버그 스테이크, 슈마이, 교자 (만두), 각종 스틱, 및 후루츠 칵테일 등), 고형 식품, 액체 식품 (수프) 등), 향신료류 등을 함유하는 농산 및 임산 가공품, 축산 가공품, 수산 가공품 등을 들 수 있다.
본 발명의 식품 또는 음료에서의 본 발명의 유효성분의 함유량은 특별히 한정되지 않고, 그 관능과 작용발현의 관점에서 적절하게 선택할 수 있는데, 예컨대 식품 100 중량부 당 바람직하게는 0.0001 중량부 이상, 보다 바람직하게는 0.001 내지 10 중량부이며, 예컨대 음료 100 중량부 당 바람직하게는 0.0001 중량부 이상, 보다 바람직하게는 0.001 내지 10 중량부이다.
또, 본 발명에 의해 본 발명의 유효성분을 함유, 첨가 및/또는 희석하여 이루어지는 생물용 사료가 제공된다. 또, 본 발명의 다른 일 양태로서 상기 유효성분을 생물에 투여하는 것을 특징으로 하는 생물의 사육방법이 제공된다. 또한, 본 발명의 다른 일 양태로서 상기 유효성분을 함유하는 것을 특징으로 하는 생물 사육용제가 제공된다.
이들 발명에서 생물이란 예컨대 양식동물, 페트동물 등이며, 양식동물로는 가축, 실험동물, 가금, 어류, 갑각류 또는 패류가 예시된다. 사료로는 컨디션의 유지 및/또는 개선용 사료가 예시된다. 생물 사육용제로는 침지용제, 사료첨가제, 음료용 첨가제가 예시된다.
이들 발명에 의하면, 이들을 적용하는 상기 예시한 바와 같은 생물에서 본 발명의 유효성분을 갖는 생체의 항상성 유지 작용에 기초하여 본 발명의 상기 항상성 유지제와 동일한 효과를 기대할 수 있다.
본 발명의 사료에서, 본 발명에서 사용되는 상기 유효성분은 통상, 대상생물의 체중 1㎏, 1 일당 0.01 내지 2000㎎ 이 투여된다. 투여는 예컨대 해당 유효성분을 인공배합 사료의 원료중에 첨가 혼합하여 제조한 사료를 사용하여 실시하거나, 또는 인공배합 사료의 분말원료와 혼합한 후, 그 외의 원료와 추가로 첨가 혼합하여 제조한 사료를 사용하여 실시할 수 있다. 생물용 사료중의 본 발명의 유효성분의 함유량은 특별히 한정되지 않고, 목적에 따라 설정하면 되는데, 바람직하게는 0.001 내지 15 중량% 의 비율이 적당하다.
인공배합 사료로는, 어분, 카세인, 오징어 분말 등의 동물성 원료, 대두박 (大豆粕), 소맥분, 전분 등의 식물성 원료, 사료용 효모 등의 미생물 원료, 대구 간유, 오징어 간유 등의 동물성 유지, 대두유, 채종유 등의 식물성 유지, 비타민류, 미네랄류, 아미노산, 항산화제 등을 원료로 하는 인공배합 사료를 들 수 있다. 또, 어육 민스 등의 어류용 사료를 들 수 있다.
본 발명의 사료의 제조방법에 특별히 제한은 없고, 일반 사료의 제법에 준하여 제조할 수 있고, 제조된 사료중에 본 발명의 유효성분의 유효량이 함유, 첨가 및/또는 희석되어 있으면 된다.
또, 본 발명의 유효성분을 풀, 수조, 유지 탱크 또는 사육영역의 물, 해수등에 직접 첨가하여 대상생물을 침지함으로써 투여할 수도 있다. 이 침지방법은 대상생물의 사료 섭취량이 저하되었을 때 특히 유효하다. 본 발명의 유효성분의 물 또는 해수중의 농도는 특별히 한정되지 않고, 목적에 따라 사용하면 되는데, 바람직하게는 0.00001 내지 1 중량% 의 비율이 적당하다.
또 본 발명의 유효성분을 함유하는 음료를 사육용 음료로 대상생물에 섭취시켜도 된다. 음료중의 본 발명의 유효성분의 농도는 특별히 한정되지 않고, 목적에 따라 적절하게 사용하면 되는데, 바람직하게는 0.0001 내지 1 중량% 의 비율이 적당하다. 본 발명의 유효성분을 함유하여 이루어지는 생물사육용제, 예컨대 침지용제, 사료첨가제, 음료용 첨가제는 그 자체 공지된 방법으로 제조하면 된다. 이 생물사육용제에서의 유효성분의 함유량은 본 발명의 원하는 효과를 얻을 수 있으면 특별히 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 사료 등을 적용할 수 있는 생물에는 제한은 없지만, 상기 양식동물로는, 말, 소, 돼지, 양, 산양, 낙타, 라마 등의 가축, 마우스, 래트, 몰모트, 토끼 등의 실험동물, 닭, 오리, 칠면조, 타조 등의 가금, 참돔, 돌돔, 광어, 가자미, 방어, 새끼방어, 부시리, 다랑어, 발구지, 은어, 연어ㆍ송어류, 자지복, 민물장어, 미꾸라지, 메기 등의 어류, 참새우, 블랙타이거, 장수새우, 꽃게 등의 갑각류 등, 전복, 소라, 가리비, 굴 등의 패류, 페트동물로는 개, 고양이 등을 들 수 있고, 육상·수중동물에 폭넓게 적용할 수 있다.
본 발명에 의해 제공되는 본 발명의 유효성분을 생물에 투여하는 생물의 사육방법은, 예컨대 상기 사료 및/또는 생물용 사육용제를, 사육방법들에 의해 본 발명의 원하는 효과를 얻을 수 있도록 투여대상의 생물에 대해 투여하여 실시할 수 있다.
본 발명의 사료를 섭취시키거나, 또는 본 발명의 유효성분의 함유액에 대상생물을 침지시킴으로써, 가축, 실험동물, 가금, 어류, 갑각류, 패류, 페트동물 등의 컨디션을 양호하게 유지하거나 개선시킬 수 있다.
본 발명의 생체의 항상성 유지용 식품, 음료 또는 사료로는, 유효성분으로서의 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 푸코이단, 그 분해물 및/또는 그것들의 염이 함유, 첨가 및/또는 희석되어 있고, 그 작용을 발현시키기 위한 필요량이 함유되어 있으면 특별히 그 형상에 한정은 없고, 태블릿상, 과립상, 캡슐상 등의 경구적으로 섭취할 수 있는 형상물도 포함한다. 또한, 본 발명의 유효성분은 생체의 항상성 유지 작용과 식물섬유기능을 겸비한 건강식품 소재로서 식품, 음료 또는 사료의 제조소재로 매우 유용하다.
또한, 본 발명의 일 양태로서 생체의 항상성 유지를 위한 약제를 제조하기 위한 푸코이단, 그 분해물 및 그것들의 염으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 이상의 사용을 제공한다.
본 발명의 제 2 양태는 착색이 적고, 쓴맛이나 요오드 함량이 경감되어 상쾌감이 있는 풍미가 개선된 푸코이단 및 해조류 추출물, 해당 푸코이단 및/또는 해조류 추출물을 함유하는 식품, 음료, 조미료, 사료, 화장료 또는 의약 및, 이들의 효율적인 제조방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 양태에서 식품, 음료, 조미료, 사료, 화장료 또는 의약에 사용되는 푸코이단 및 해조류 추출물은 본 발명에 의해제공되는, 푸코이단 또는 해조류 추출물의 제조방법에 의해 얻을 수 있는 것이다. 해당 푸코이단 및 해조류 추출물은 해조냄새의 원인이 되는 성분, 색소, 단백질 등이 저감 또는 제거된 것으로, 각각 바람직하게는 무취성 또는 해조냄새가 저감된 푸코이단 및 해조류 추출물, 또는 무색성 또는 해조 본래의 녹갈색이 저감된 푸코이단 및 해조류 추출물로서 제공되고, 원료 소재로서 다른 성분과 혼합하여 사용하는 경우에 고농도로 사용해도 풍미 등에 영향이 없어 다른 성분의 특징을 살릴 수 있다. 또, 후술하는 바와 같이, 본 발명의 푸코이단 또는 해조류 추출물의 제조방법에서 프로테아제를 사용하는 경우, 얻어지는 본 발명의 푸코이단 또는 해조류 추출물은 알레르겐이 될 수 있는 단백질이 현저하게 저감 또는 제거되어 알레르기반응을 회피시킨 식품, 음료, 조미료, 사료, 화장료 또는 의약의 소재로서도 특히 유용하다. 또한, 본 발명의 푸코이단 및 해조류 추출물은 요오드 (요소) 함량이 저감되어 요오드의 과잉섭취는 몸에 좋지 않다고 하는 점에서 식품, 음료, 조미료, 사료, 화장료 또는 의약의 소재로서 유용하다. 또, 해당 푸코이단을 본 발명의 제 1 양태에 기재된 푸코이단과 동일하게 분해하여 푸코이단의 분해물로서 해당 푸코이단과 동일하게 사용할 수 있다.
또, 본 발명의 푸코이단 및 해조류 추출물은 불순물이 적어 재가공이나 다른 성분과의 효소 및/또는 화학반응을 실시할 경우에도 그 정제공정에서 단백질 제거나 불순물에 의한 부생성물의 제거를 경감 또는 생략할 수 있으므로, 선구물질로서도 사용이 우수하다. 예컨대, 효소나 산에 의한 수해 (水解) 에 의한 올리고당 생성 및 화학합성으로의 사용에 바람직하다. 또한, 원료 소재로서의 불순물이적으므로 보존중에 성분간의 화학변화가 잘 생기지 않아 성분품질의 안정화가 도모된다.
본 발명의 푸코이단 또는 해조류 추출물의 색, 단백질 함량 및 요오드 함량은 구체적으로는 후술하는 실시예 7 또는 14 에 기재되는 바와 같이 하여 측정할 수 있다. 색으로는 파장 660㎚ 에서의 흡광도가 0.001 내지 0.03 이 바람직하고, 0.01 내지 0.02 가 보다 바람직하다. 단백질 함량으로는 0.01 내지 8g/100g 이 바람직하고, 0.1 내지 7g/100g 이 보다 바람직하다. 요오드 함량으로는 0.1 내지 5.5㎎%(w/v) 가 바람직하고, 0.2 내지 5㎎%(w/v) 가 보다 바람직하다.
또한, 본 발명의 양태에서 제공되는 푸코이단은 화합물 그 자체로서, 또는 푸코이단 획분, 즉 푸코이단과 다른 성분을 일부 함유하는 조성물로서 제공된다. 또, 푸코이단, 해조류 추출물 및 그 원료의 양을 말하는 경우, 특별한 사정이 없는 한 건조 중량을 말한다.
또한, 본 발명의 푸코이단 및 해조류 추출물은 그것들에 대해 알려지는 다양한 생리 작용을 갖는 것으로, 예컨대 아포토시스 유발 작용, 간세포 증식인자 산생증강 작용, 사이토카인 산생조절 작용, 육모 작용, 콜레스테롤 저하 작용, 혈액청징 작용, 항혈액 응고 작용, 항암 작용, 항에이즈 바이러스 작용 및 항종양 작용 등을 발현할 수 있다. 특히, 해당 푸코이단 및 해조류 추출물은 그 콜레스테롤 저하 작용, 혈액 청징 작용, 항혈액 응고 작용, 항암 작용, 항에이즈 바이러스 작용 및 항종양 작용이 우수하다.
따라서, 이와 같은 본 발명의 푸코이단 및/또는 해조류 추출물을 함유하여 이루어지는, 본 발명에 의해 제공되는 식품, 음료, 조미료, 사료, 화장료 또는 의약 (이하, 본 발명의 식품 등이라고도 함) 은 다양한 점에서 인간에 대한 적용성이 우수한 것으로, 푸코이단 및/또는 해조류 추출물의 각종 작용, 특히 콜레스테롤 저하 작용, 혈액 청징 작용, 항혈액 응고 작용, 항암 작용, 항에이즈 바이러스 작용 및 항종양 작용에 기초하여, 예컨대 본 발명의 의약에 의하면, 상기 작용에 감수성을 나타내는 질환의 증상 개선 또는 완화효과나, 해당 질환의 치료 또는 예방효과를 기대할 수 있다. 따라서, 본 발명의 의약으로는 바람직하게는 콜레스테롤 저하용 의약, 혈액 청징용 의약, 항혈액 응고용 의약, 항암용 의약, 항에이즈 바이러스용 의약 또는 항궤양용 의약이 제공된다.
본 발명의 식품 등에는 전술한 환원 추출 푸코이단이 사용된다. 또, 본 발명에 의해 제공되는 해조류 추출물에서 얻어지는 푸코이단을 사용할 수도 있다. 한편, 본 발명의 식품 등에 사용되는 해당 해조류 추출물은 구체적으로는 이하에 나타내는 방법에 의해 얻을 수 있는 것이며, 해당 해조류 추출물 및 그 제조방법은 본 발명에 포함된다.
본 발명의 해조류 추출물의 제조방법은 해조류를 환원성 물질 존재하에서 추출하는 공정을 포함하는 것을 하나의 큰 특징으로 하는 것이다.
원료로서의 해조류는 조류이면 어떠한 것이어도 되며, 예컨대 모자반목(Fucales), 딕티오타목(Dictyotales), 다시마목(Laminariales), 스포로크나목(Sporochnales), 스파셀라리아목(Sphacelariales),쿠틀레이라목(Cutleriales), 딕티오시포나목(Dictyosiphonales), 스시토시포나목(Scytosiphonales), 코르다리아목(Chordariales), 랄프시아목(Ralfsiales), 엑토카르파목(Ectocarpales) 등의 갈조류 (Phaeophyta), 비단풀목(Ceramiales), 로디메니아목(Rhodymeniales), 국수나물목(Nemaliales), 돌가사리목(Gigartinales), 지누아리목(Cryptonemiales), 팔마리아목(Palmariales), 우뭇가사리목(Gelidiales) 등의 홍조류 (Rhodophyta), 코디아목(Codiales), 다시클라다목(Dasycladales), 갈파래목(Ulvales), 카울레르파목(Caulerpales) 의 녹조류 (Chlorophyta) 등을 들 수 있다. 특히 갈조류가 바람직하고, 갈조류를 본 발명에 사용한 경우, 기능성 성분인 푸코이단을 함유하는 해조류 추출물을 얻을 수 있고, 또한 해당 해조류 추출물로부터 환원 추출 푸코이단을 고순도, 고수율로 얻을 수도 있다. 이 중, 다시마목의 다시마과 및 미역과가 특히 바람직하다. 다시마과로는 예컨대 참다시마, 오호츠크다시마, 애기다시마, 미츠이시다시마 (Laminaria Angustata), 개다시마 등을 사용할 수 있다. 또, 미역과로는 예컨대 미역, 히로메 (Undaria Undarioides), 넓미역 (Undaria Peterseniana) 등을 이용할 수 있다. 또한, 미역은 엽상체와 기부 (포자엽) 중 어느 하나, 또는 모두 사용할 수 있다.
본 발명의 해조류 추출물의 제조방법에서 추출전의 원료의 전처리 방법은 특별히 한정되지 않지만, 간단한 물세정, 볶기, 달임, 찜을 통상적인 방법에 따라 실시해도 되고, 후술하는 바와 같이 프로테아제 처리를 실시해도 되며, 또 이들을 조합해도 된다. 전처리후의 해조류 형상은 특별히 한정되지 않지만, 입자상, 플레이크상, 세편 (細片), 입방체로 자르거나 또는 박편, 그대로 사용하면 된다.
본 발명에 사용하는 환원성 물질은 특별히 한정되지 않지만, 식용에 이용되는 것이 바람직하고, 환원의 효과나 맛에 미치는 영향의 관점에서 아스코르브산, 아스코르브산염, 에리소르브산, 에리소르브산염, 시스테인 및 글루타티온으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 이상을 사용하는 것이 바람직하다. 여기에서, 아스코르브산염 및 에리소르브산염은 나트륨, 칼륨, 칼슘 등의 염이 바람직하다. 사용하는 환원성 물질의 양은 특별히 한정되지 않지만, 추출에 사용하는 용매 100 중량부에 대해 바람직하게는 0.005 내지 1.0 중량부, 보다 바람직하게는 0.01 내지 0.1 중량부이다.
또, 생산효율의 관점에서 해조류로부터의 해조류 추출물의 추출은 환원성 물질 존재하에서 온수 또는 용제를 사용하여 실시하는 것이 바람직하고, 또한 해조류를 미리 프로테아제 처리한 후에 환원성 물질 존재하에서 온소 또는 용제 추출하거나, 또는 해조류를 환원성 물질 존재하에서 프로테아제 처리하면서 온수 또는 용제추출하는 것이 보다 바람직하다. 또한, 온수의 온도로는 후술하는 추출온도내인 것이 바람직하다.
추출방법은 특별히 한정되지 않고, 조작성의 관점에서 공지된 온수 침지법, 온수 산수법, 또는 온수 순환법이 바람직하지만, 그 외에 초임계 추출법에 의해 추출할 수도 있다.
본 발명에서의 추출조건은 특별히 한정되는 것은 아니며, 예컨대 상기 추출방법에서 공지된 조건에 준하여 추출할 수 있다.
바람직한 양태에서는 원료로 사용하는 해조류 (건조물) 의 중량은 추출에 사용하는 용매 및 해당 해조류 건조물의 합계 100 중량부에 대해, 생산효율의 관점에서 바람직하게는 0.5 이상 25 중량부 미만이며, 향미의 관점에서 보다 바람직하게는 1 내지 10 중량부이다. 또한, 0.5 내지 25 중량부의 범위에서 추출후, 얻어진 해조류 추출물을 농축하여 함유물의 농도를 상승시켜 사용할 수도 있고, 또는 분말화시켜도 된다. 또한, 희석하여 사용해도 된다. 추출에 사용하는 용매는 특별히 한정되지 않고, 무독이라면 마실 수 있는 것이어도 된다. 예컨대, 물 또는 용제를 적절하게 사용할 수 있다. 용제로는 유기 및 무기인 것을 사용할 수 있고, 예컨대 에틸알콜이나 에틸알콜 수용액 등을 들 수 있다. 또, 예컨대 초임계 추출을 실시하는 경우에는 탄산가스 등을 들 수 있다. 취급 용이성의 관점에서는 물을 용매로 바람직하게 사용할 수 있다. 추출에 사용하는 물은 특별히 한정되지 않고, 음용에 이용되는 것이 바람직한데, 그 중에서도 탈염수, 증류수가 바람직하며, 수돗물도 사용할 수 있다.
추출온도는 추출효율의 관점에서 바람직하게는 30 내지 130℃ 이며, 보다 바람직하게는 75 내지 130℃ 이며, 특히 바람직하게는 50 내지 100℃ 이다. 또, 해조류 추출물의 관능적 품질의 관점에서 80 내지 100℃ 가 더욱 바람직하다. 추출시간은 생산효율의 관점에서 바람직하게는 5 분간 내지 32 시간, 보다 바람직하게는 0.2 내지 24 시간, 더욱 바람직하게는 0.5 내지 5 시간이다. 이 때 추출액의 pH 는 3 내지 7 이 바람직하다. 또, 추출후의 pH 는 3 내지 6 전후가 보존과 향미유지의 관점에서 바람직하다. 해조류로부터의 추출물을 함유하는추출액과 추출 잔류물의 고액 분리의 방법은 특별히 한정되지 않지만, 통상적인 여과분리, 원심분리, 또는 바구니형상의 철망안에 원료를 넣고 추출후, 추출 잔류물을 회수할 수도 있다. 고액 분리후의 정제는 추출액에 가용화되어 있는 고분자성분을 저온하 (바람직하게는 10℃ 이하 0℃ 이상) 에서 냉각하고, 이들 성분을 통상적인 방법의 감물이나 찌꺼기침전제를 사용하여 응집, 침전시켜 여과함으로써 청징액을 얻을 수 있다. 여과는 바람직하게는 1㎛φ 또는 0.45㎛φ포아사이즈 멤블렌필터를 사용하여 여과하면 된다.
프로테아제 처리, 즉 원료인 해조류의 프로테아제에 의한 분해를 실시하는 경우에 사용하는 프로테아제는 특별히 한정되지 않고, 동물, 식물 및 미생물 기원인 것을 사용할 수 있고, 예컨대 동물기원인 것으로 키모트립신, 트립신, 펩신 및 키모신을 들 수 있고, 식물기원인 것으로 파파인 및 브로멜라인을 들 수 있고, 미생물기원인 것으로 세균, 방선균, 누룩곰팡이, 곰팡이 및 담자균 유래의 산성, 중성 및 알칼리성 프로테아제를 들 수 있다. 또, 콜라게나아제, 에스테라아제 및 케라티나아제도 여기에서 말하는 프로테아제에 포함된다. 또, 카르복시펩티다아제, 아미노펩티다아제, 리파아제, 펙티나아제, 셀룰라아제, 헤미셀룰라아제 중 적어도 하나 이상과 프로테아제를 병용해도 된다.
해조류를 전처리로 프로테아제 처리하는 경우, 프로테아제의 사용량은 특별히 한정되지 않지만, 사용 해조류 건조물 100 중량부 당 바람직하게는 0.01 내지 10 중량부, 보다 바람직하게는 0.05 내지 5 중량부이다. 용매는 원하는 효소반응을 실시할 수 있는 것이면 특별히 한정되지 않지만, 물 또는 에틸알콜 수용액 (에틸알콜농도, 0 내지 50 용량%) 을 바람직하게 사용할 수 있다. 또, 반응온도는 사용효소에 따라 특별히 한정되지 않고, 바람직하게는 30 내지 120℃ 이지만, 작업상 50 내지 100℃ 가 보다 바람직하다. 반응시간은 반응온도에 따라 적절하게 설정할 수 있지만, 바람직하게는 0.1 내지 32 시간, 보다 바람직하게는 0.2 내지 24 시간이다.
한편, 추출과정에서 프로테아제를 첨가하여 프로테아제 처리하면서 추출하는 경우, 프로테아제의 사용량은 특별히 한정되지 않지만, 사용 해조류 건조물 100 중량부 당 바람직하게는 0.01 내지 10 중량부, 보다 바람직하게는 0.05 내지 5 중량부이다.
얻어진 해조류 추출물은 예컨대 120℃, 20 초간 살균 가열후, 농축, 그대로 또는 물로 희석하고 또한 무균 여과하여 용기에 담는다. 이 때 질소가스 충전을 실시해도 되고, 그 후 90℃, 1 분 동안 가열 살균하여 제품으로 할 수 있다.
본 발명의 추출물의 형상으로는 특별히 한정되지 않지만, 액상, 건조물 등의 고형상, 분말상이어도 된다.
또한 본 발명의 해조류 추출물로부터 공지된 방법으로 환원 추출 푸코이단을 고수율로 분리할 수 있다. 해조류 추출물로부터의 해당 푸코이단의 분리방법은 특별히 한정되지 않고, 공지된 고분자성분의 분리방법이면 된다. 예컨대, 해조류를 환원성 물질 존재하에서 프로테아제 처리후, 열수 또는 용제추출하여 필터프레스로 고액 분리한다. 액부를 한외필터로 농축ㆍ탈염한 후, 규소토에 의해 여과한다. 이어서, 여과액을 농축기로 농축하고 살균을 오토클레이브를 사용하여121℃ 에서 15 분 동안 실시한다. 이 농축액을 동결건조시켜 본 발명의 환원 추출 푸코이단을 얻을 수 있다.
또한, 얻어진 푸코이단을 공지된 방법에 의해 분해하여 해당 푸코이단의 분해물을 얻을 수 있다. 예컨대, 국제공개 제97/26896호 팜플렛, 국제공개 제99/41288호 팜플렛, 국제공개 제00/50464호 팜플렛에 기재된 방법에 의해 푸코이단의 분해물을 제조하여 본 발명의 해조류 추출물 또는 푸코이단과 동일하게 사용할 수 있다. 이들 푸코이단 분해물도 본 발명에 포함된다.
본 발명의 제 2 양태에서 제공되는 식품, 음료, 조미료, 사료 및, 의약의 제조방법 및 그 사용양태는 특별히 한정되지 않고, 각각 예컨대 상기 본 발명의 제 1 양태에 기재된 식품, 음료, 사료 및, 항상성 유지제에 준하면 된다. 한편, 동일하게 제공되는 화장료는 유효성분으로 함유하는 푸코이단 및/또는 해조류 추출물의 공지된 생리 작용, 예컨대 피부의 보습성이나 탄력성의 향상 작용, 피부의 노화방지 작용, 항알레르기 작용 등을 갖고 있고, 해당 화장료에 의하면 주름 개선ㆍ예방, 피부의 탄력성 향상ㆍ유지, 피부비만 개선ㆍ예방 등의 효과를 기대할 수 있다. 그 제조방법 및 사용양태는 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예컨대 이하의 양태를 들 수 있다.
해당 화장료에서의, 본 발명의 푸코이단 및/또는 해조류 추출물의 함유량은 통상 바람직하게는 0.0001 내지 20 중량%, 보다 바람직하게는 0.001 내지 5 중량%, 더욱 바람직하게는 0.03 내지 3 중량% 이다.
또, 그 외의 성분으로서 화장료 분야에서 공지된 각종 성분을 필요에 따라함유시킬 수 있다. 이러한 성분으로는 예컨대 피롤리돈카르복시산염 등의 보습제, 유동파라핀, 바셀린 등의 피부연고제, 비타민 E 등의 비타민류, 프로필렌글리콜모노스테아레이트 등의 계면활성제, 스테아릴알콜 등의 유화 안정제, 방부제, 안료, 항산화제, 자외선 흡수제 등을 들 수 있다. 이들 성분은 본 발명의 원하는 효과의 발현을 저해하지 않는 범위에서, 필요에 따라 해당 성분의 효과가 기대될 수 있는 양으로 함유시키면 된다.
본 발명의 화장료의 형상으로는 특별히 한정되지 않고, 예컨대 로션류, 에멀션류, 크림류, 팩류, 목욕용제, 세안제, 목욕용 비누, 목용용 세제 또는 연고가 바람직하다.
해당 화장료는 본 발명의 푸코이단 및/또는 해조류 추출물 및 필요에 따라 상기 그 외의 성분을 원료로 사용하고, 화장품 분야에서의 공지된 방법에 따라 적절하게 제조할 수 있다. 또, 화장료의 형상에 따라 적절하게 원하는 효과를 얻을 수 있도록 사용하면 된다. 예컨대 로션류이면, 예컨대 사람의 안면 전체에 적용하는 경우, 1 회 사용 당 상기 유효성분의 양으로 바람직하게는 0.01 내지 5g 정도 사용하면 피부에 생기나 광택을 주어 고운 살결의 효과를 얻을 수 있다.
또한, 본 발명은 본 발명의 식품 등의 바람직한 제조방법을 제공한다. 즉, 본 발명의 푸코이단의 제조방법에서의, 해조류를 환원성 물질 존재하에서 추출하는 공정 및/또는 본 발명의 해조류 추출물의 제조방법에서의, 해조류를 환원성 물질 존재하에서 추출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는, 식품, 음료, 조미료 또는 사료의 제조방법, 화장료의 제조방법 및 의약 (바람직하게는 콜레스테롤저하용 의약, 혈액 청징용 의약, 항혈액 응고용 의약, 항암용 의약, 항에이즈 바이러스용 의약 또는 항궤양용 의약) 의 제조방법을 제공한다. 이러한 방법은 식품, 화장료, 의약품 등의 공지된 제조공정에서의 어느 한 단계에서, 본 발명의 푸코이단 및/또는 해조류 추출물의 제조공정을 포함하는 것이다. 상기 식품 등의 원료로서 유효성분으로 작용하는 푸코이단 및/또는 해조류 추출물의 제조로부터 최종 제품형태인 식품 등의 제조를 연속적으로 실시함으로써 본 발명의 식품 등의 보다 효율적인 제조가 가능해진다.
또한, 본 발명에 사용하는, 특히 생체의 항상성 유지 작용을 갖는 푸코이단, 그 분해물 및/또는 그것들의 염 및, 해조류 추출물은 래트에 대한 경구투여에서 2g/㎏ 을 경구 단회 투여해도 사망례는 관찰되지 않는다.
이하, 실시예를 들어 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들의 기재에 전혀 한정되는 것은 아니다. 또한, 특별한 사정이 없는 한 실시예에서의 % 는 중량% 를 의미한다.
제조예 1
(1) 개다시마를 충분히 건조시킨 후, 건조물 20㎏ 을 자유 분쇄기 (Nara Kikai Seisakusho 제조) 에 의해 분쇄하였다.
수돗물 900ℓ에 염화칼슘 이수화물 (Nippon Soda Co., Ltd. 제조) 7.3㎏ 을 용해하고, 이어서 개다시마 분쇄물 20㎏ 을 혼합하였다. 액온이 12℃ 에서 90℃ 가 될 때까지 수증기 분무에 의해 40 분 동안 승온시키고, 이어서 교반하에 90내지 95℃ 에서 1 시간 보온하고, 이어서 냉각하여 냉각물 1100ℓ를 얻었다.
이어서, 고액 분리장치 (West Farrier Separator 제조, CNA 형) 를 사용하여, 냉각물의 고액 분리를 실시하여 약 900ℓ의 고액 분리 상청액을 제조하였다.
고액 분리 상청액 360ℓ를 다이셀사 제조 FE10-FC-FUS0382 (분획 분자량: 30,000) 를 사용하여 20ℓ까지 농축하였다. 이어서, 수돗물을 20ℓ첨가하고, 다시 20ℓ까지 농축을 5 회 실시하고, 탈염 처리를 실시하여 개다시마 유래의 추출액 25ℓ를 제조하였다.
이 용액 1ℓ를 동결건조시켜 개다시마 유래 푸코이단 건조물 13g 을 얻었다.
(2) 제조예 1-(1) 에 기재된 푸코이단 건조물 7g 을 50mM 의 염화나트륨과 10% 의 에탄올을 함유하는 20mM 의 이미다졸 완충액 (pH 8.0) 700㎖ 에 용해하고 원심분리에 의해 불용물을 제거하였다. 동일 완충액으로 평형화시킨 DEAE-셀룰로파인 A-800 칼럼 (φ11.4㎝ ×48㎝) 상에 원심분리 상청액을 적용한 후, 동일 완충액으로 세정하고, 염화나트륨 50mM 로부터 1.95M 의 농도구배에 의해 용출시켰다 (분획 당 250㎖). 페놀 황산법 및 카르바졸 황산법으로 총 당 함량 및 우론산 함량을 측정하고, 용출순으로 분획 43 내지 49, 분획 50 내지 55, 분획 56 내지 67 의 분획을 얻었다. 이어서, 이들 분획을 전기투석에 의해 탈염한 후, 동결건조시켜 분획 43 내지 49 에서 Ⅰ 획분 (340㎎), 분획 50 내지 55 에서 Ⅱ 획분 (870㎎), 분획 56 내지 67 에서 Ⅲ 획분 (2.64g) 을 각각 제조하였다.
도 1 에 개다시마 유래 푸코이단의 DEAE-셀룰로파인 A-800 칼럼 용출패턴을 나타낸다. 도 1 에서 종축은 카르바졸 황산법에 의한 530㎚ 의 흡광도 (도식중 흑색 원), 페놀 황산법에 의한 480㎚ 에서의 흡광도 (도식 중 백색 원) 및, 전도도 (mS/cm: 도식 중 백색 사각), 횡축은 분획 번호를 나타낸다. 도식 중 전피크가 U-푸코이단, 후피크가 F-푸코이단이다.
(3) 개다시마로부터 황산화 푸코오스 함유 다당 획분을 제조하였다. 즉, 시판되고 있는 건조 개다시마 2㎏ 을 구멍 직경 1㎜ 의 스크린을 장착한 커터밀 (Masuko Sangyo 제조) 을 사용하여 파쇄하고, 20ℓ의 80% 에탄올중에 현탁후, 25℃ 에서 3 시간 동안 교반한 후, 여과지로 여과하였다. 얻어진 잔류물을 40ℓ의 10mM 의 염화나트륨을 함유하는 30mM, 인산나트륨 완충액 (pH 6.5) 에 현탁하고, 95℃ 에서 2 시간 동안 처리한 후, 구멍 직경 106㎛ 의 스테인리스제 철망으로 여과하였다. 얻어진 여과액에 200g 의 활성탄, 4.5ℓ의 에탄올, 12,000U 의 알긴산 리아제 K (나가세 생화학공업사 제조) 를 첨가하여 25℃ 에서 20 시간 동안 교반한 후, 원심분리하였다. 얻어진 상청액을 배제분자량 100,000 의 홀로파이버를 장착한 한외여과기에 의해 4ℓ로 농축한 후, 원심분리에 의해 불용물을 제거하고 5℃ 에서 24 시간 동안 방치하였다. 형성된 침전물을 원심분리에 의해 제거하고, 얻어진 상청액을 한외여과기에 의해 용매 교환하여 100mM 염화나트륨 용액으로 하였다. 이 용액을 4℃ 이하로 냉각한 후, 염산에 의해 pH 를 2.0 으로 하고, 형성된 침전을 원심분리에 의해 제거하였다. 얻어진 상청액의 pH 를 수산화나트륨에 의해 8.0 으로 하고, 4ℓ로 농축한 후, 한외여과기에 의해 20mM 염화나트륨으로 용매 교환하였다. 이 용액중의 불용물을 원심분리에 의해 제거한 후, 동결건조시켜 개다시마 유래 푸코이단의 건조물 76g 을 얻었다.
제조예 2
(1) 알테로모나스 종 SN-1009 (FERM BP-5747) 를 글루코오스 0.25%, 펩톤 1.0% 및, 효모 엑스 0.05% 를 함유하는 인공 해수 (Jamarin Laboratory 제조) pH 8.2 를 함유하는 배지 600㎖ 를 분주하여 살균한 (120℃, 20 분 동안) 2ℓ의 삼각 플라스크에 접종하고, 25℃ 에서 26 시간 동안 배양하여 종배양액으로 하였다. 펩톤 1.0%, 효모 엑스 0.02%, 하기 제조예 2-(2) 에 기재된 푸코이단 0.2% 및, 소포제 (Shin-Etsu Chemical Co., Ltd. 제조, KM70) 0.01% 를 함유하는 인공 해수 (pH 8.0) 로 이루어지는 배지 20ℓ를 30ℓ용량의 자르 (jar) 발효기에 채우고, 120℃ 에서 20 분 동안 살균하였다. 냉각후, 상기의 종배양액 600㎖ 를 접종하고, 24℃ 에서 24 시간, 분 당 10ℓ의 통기량과 250rpm 의 교반속도의 조건에서 배양하였다. 배양종료 후, 배양액을 원심분리하여 균체 및 배양 상청액을 얻었다. 얻어진 배양 상청액을 배제분자량 10,000 의 홀로파이버 (holofiber) 를 장착시킨 한외여과기 (ultrafilter) 에 의해 농축한 후, 85% 포화 황산암모늄으로 염석하고, 형성된 침전물을 원심분리에 의해 수합하여, 1/10 농도의 인공 해수를 함유하는 20mM 트리스-염산 완충액 (pH 8.2) 에 대해 충분히 투석하여, 황산화 다당에 선택적으로 작용하는 엔도형 황산화 다당 분해효소 (F-푸코이단 특이적 분해효소) 액 600㎖ 를 제조하였다.
(2) 건조시킨 개다시마 2㎏ 을 직경 1㎜ 의 스크린을 장착시킨 커터밀 (Masuko Sangyo 제조) 에 의해 분쇄하고, 얻어진 다시마의 칩을 20ℓ의 80% 에탄올중에 현탁하고, 현탁액을 25℃ 에서 3 시간 동안 교반하고, 여과지로 여과한 후,잔류물을 충분히 세정하였다. 얻어진 잔류물을 95℃ 로 가온한 40ℓ의 50mM 염화나트륨을 함유하는 pH 6.5 의 20mM 인산나트륨 완충액으로 현탁하고, 현탁액을 여러 차례 교반하면서 95℃ 에서 2 시간 동안 처리하여 황산화 다당을 추출하였다.
추출액중의 현탁물을 여과하여 여과액을 제조한 후, 여과 잔류물을 3.5ℓ의 100mM 염화나트륨에 의해 세정하여 다시 여과액을 얻었다.
양쪽 여과액을 합한 후, 30℃ 까지 온도를 낮추고, 3000U 의 알긴산 리아제 (나가세 생화학공업사 제조) 를 첨가한 후, 에탄올을 4ℓ를 첨가하여 25℃ 에서 24 시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 원심분리하여, 얻어진 상청액을 배제분자량 100,000 의 홀로파이버를 장착한 한외여과기에 의해 4ℓ로 농축하고, 다시 10% 의 에탄올을 함유하는 100mM 염화나트륨에 의해 착색성 물질이 여과되지 않을 때까지 한외여과를 계속하였다.
비여과액중에 형성된 침전물을 원심분리에 의해 제거하고, 이 상청액을 5℃ 까지 온도를 낮추고, 0.5N 염산에 의해 pH 를 2.0 으로 조정한 후, 형성된 단백질 등의 침전물을 원심분리에 의해 제거하고, 얻어진 상청액을 신속히 1N 수산화나트륨에 의해 pH 를 8.0 으로 조정하였다.
이어서, 배제분자량 100,000 의 홀로파이버를 장착시킨 한외여과기에 의해 한외여과를 실시하고, 용매를 pH 8.0 인 20mM 염화나트륨에 의해 완전히 치환한 후, 다시 pH 를 8.0 으로 조정하여 원심분리한 후, 동결건조를 실시하여 약 95g 의 황산화 다당을 제조하였다.
(3) 건조시킨 개다시마 2㎏ 을 직경 1㎜ 의 스크린을 장착시킨 커터밀에 의해 분쇄하고, 얻어진 다시마의 칩을 20ℓ의 80% 에탄올중에 현탁하고, 25℃ 에서 3 시간 동안 교반하고, 여과지로 여과한 후, 잔류물을 충분히 세정하였다. 얻어진 잔류물을 30㎖ 의 상기 제조예 2-(1) 에서 제조한 F-푸코이단 특이적 분해효소액, 10% 의 에탄올, 100mM 의 염화나트륨, 50mM 의 염화칼슘 및, 50mM 의 이미다졸을 함유하는 20ℓ의 완충액 (pH 8.2) 에 현탁하고, 25℃ 에서 48 시간 동안 교반하였다. 이 현탁액을 그물코의 직경 32㎛ 의 스테인리스 철망으로 여과하고, 잔류물을 50mM 의 염화칼슘을 함유하는 10% 의 에탄올로 세정하였다. 또한, 그 잔류물을 10ℓ의 50mM 염화칼슘을 함유하는 10% 에탄올중에 현탁하고, 현탁액을 3 시간 동안 교반한 후, 스테인리스 철망으로 여과하고, 세정하였다. 또한, 그 잔류물을 동일 조건하에 현탁한 후, 16 시간 동안 교반하고, 직경 32㎛ 의 스테인리스 철망으로 여과하고, 잔류물을 세정하였다.
이렇게 하여 얻어진 여과액 및 세정액을 수합하여 배제분자량 3000 의 홀로파이버를 장착시킨 한외여과기에 의해 한외여과함으로써, 여과액과 비여과액으로 분리하였다. 이 여과액을 회전증발기로 약 3ℓ로 농축한 후, 원심분리하여 상청액을 얻었다. 얻어진 상청액을 배제분자량 300 의 막을 장착시킨 전기투석기에 의해 탈염하고, 이 용액에 0.1M 이 되도록 아세트산 칼슘을 첨가하여, 형성된 침전물을 원심분리에 의해 제거하였다. 얻어진 상청액을 미리 50mM 의 아세트산 칼슘에 의해 평형화시킨 DEAE-셀룰로파인 칼럼 (수지량: 4ℓ) 에 넣고, 50mM 의 아세트산 칼슘 및 50mM 의 염화나트륨으로 충분히 세정한 후, 50mM 내지 800mM 의 염화나트륨의 농도구배에 의해 용출시켰다. 이 때의 수합량은 분획 당 500㎖이었다. 수합한 분획을 셀룰로오스 아세테이트막 전기영동법 [Analytical Biochemistry, 제 37 권, 197∼202 페이지 (1970)] 에 의해 분석한 결과, 염화나트륨 농도가 약 0.4M 로 용출되는 황산화 당 (분획 번호 63 부근) 이 균일하였다. 그러므로, 우선 분획 번호 63 의 용액을 150㎖ 로 농축한 후, 농도가 4M 이 되도록 염화나트륨을 첨가하고, 미리 4M 의 염화나트륨에 의해 평형화시킨 페닐-셀룰로파인 칼럼 (수지량: 200㎖) 에 넣고, 4M 의 염화나트륨에 의해 충분히 세정하였다. 비흡착성의 황산화 당분획을 수합하여 배제분자량 300 의 막을 장착시킨 전기투석기에 의해 탈염하여, 탈염액 505㎖ 를 얻었다. 얻어진 탈염액중 40㎖ 를 10% 의 에탄올을 함유하는 0.2M 의 염화나트륨에 의해 평형화시킨 셀룰로파인 GCL-90 의 칼럼 (4.1㎝ ×87㎝) 에 넣어 겔여과를 실시하였다. 수합은 분획 당 9.2㎖ 로 실시하였다. 모든 분획에 대하여 총 당 함량의 분석을 페놀 황산법 [Analytical Chemistry, 제 28 권, 제 350 페이지 (1956)] 에 의해 실시하였다.
그 결과, 황산화 당은 단일 피크를 형성하였기 때문에, 그 피크의 중앙부분인, 분획 번호 63 내지 70 을 수합하고, 배제분자량 300 의 막을 장착시킨 전기투석기에 의해 탈염한 후, 동결건조시켜 112㎎ 의 하기 화학식 (Ⅴ) 로 표시되는 화합물의 건조품을 얻었다. 이 화합물을 7-12SFd-F 라고 칭한다.
(4) 충분히 건조시킨 개다시마를 자유 분쇄기 (Nara Kikai Seisakusho 제조) 에 의해 분쇄하였다. 분쇄된 개다시마를 95℃, 2 시간 동안 열수 추출후, 디캔터에서 고액 분리하고, 이어서 배제한계 분자량 30,000 의 한외여과막에 의해 농축하여 푸코이단 추출액을 얻었다.
(5) 국제공개 제99/11797호 팜플렛에 기재된 엔도형 황산화 다당 분해효소 (F-푸코이단 특이적 분해효소) 를 함유하는 대장균 BL21 (DE3)/pEFDAII103 의 배양액을 분획 분자량 10,000 의 한외여과막에 의해 농축하고, 얻어진 농축액을 F-푸코이단 특이적 분해효소액으로 하였다. 50mM 염화칼슘 및 300mM 염화나트륨을 함유하는 25mM 붕산/수산화 나트륨 완충액 (pH 7.5) 에 제조예 2-(4) 에 기재된 푸코이단 추출액 및, F-푸코이단 특이적 분해효소액을 첨가하여 37℃ 에서 19 시간 동안 반응시켰다.
반응액을 배제한계 분자량 10,000 의 한외여과막에 의해 농축하고, 이어서여과액을 역침투 농축장치 (도레 제조) 에 의해 더욱 농축하였다. 얻어진 농축액을 전기투석기 (아사히카세이 제조) 로 탈염하였다.
얻어진 탈염액을 DE52 (와트만 제조), DEAE-세파로오스 칼럼 (아마샴 팔마시아 바이오테크 제조), 폴리에틸렌이민 겔 칼럼 (야마젠 제조) 에 부하하여 순차 크로마토그래피를 실시하였다.
얻어진 황산화 당 획분을 전기투석기로 탈염하고, 이어서 멸균여과, 동결건조를 실시하여 상기 화학식 (Ⅴ) 로 표시되는 화합물 7-12SFd-F 건조 표품을 얻었다.
(6) 제조예 1-(2) 에 기재된 방법으로 제조한 F-푸코이단 98㎎ 을 5㎖ 의 DMSO 에 용해시켜 실온에서 피페리딘황산 980㎎ 을 첨가한 후, 80℃ 에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응액을 냉각후, 분자량 1000 컷의 투석막으로 2 일 동안 투석하였다. 얻어진 투석내 액을 양이온 교환칼럼 [앰버라이트 IRA-120 (Na+)] 에 이용한 후, 감압 건고시켜 F-푸코이단의 고황산화체 98㎎ 을 제조하였다.
(7) 제조예 2-(3) 에 기재된 방법으로 제조한 7-12SFd-F 34㎎ 을 4㎖ 의 DMSO 에 용해시키고, 그 후 제조예 2-(6) 과 동일한 조작으로 7-12SFd-F 의 고황산화체 34㎎ 을 제조하였다.
제조예 3
(1) 건조시킨 개다시마 2㎏ 을 구멍 직경 1㎜ 의 스크린을 장착한 커터밀(Masuko Sangyo 제조) 을 사용하여 파쇄하고, 파쇄물을 20ℓ의 80% 에탄올중에서 25℃ 에서 3 시간 동안 교반한 후, 여과하고, 세정하였다. 얻어진 잔류물을 50mM 의 염화칼슘, 100mM 의 염화나트륨, 10% 의 에탄올 및, 제조예 2-(1) 에서 제조한 알테로모나스 종 SN-1009 유래 F-푸코이단 특이적 분해효소를 함유하는 20ℓ의 30mM 이미다졸 완충액 (pH 8.2) 중에 현탁하고, 25℃ 에서 2 일 동안 교반하고, 이어서 구멍 직경 32㎛ 의 스테인리스 철망으로 여과하고, 세정하였다. 얻어진 잔류물을 100mM 의 염화나트륨, 10% 의 에탄올 및, 4g 의 알긴산 리아제 (나가세 생화학공업사 제조) 를 함유하는 40ℓ의 인산나트륨 완충액 (pH 6.6) 중에 현탁하고, 25℃ 에서, 4 일간 교반한 후, 원심분리하여 상청액을 얻었다. 얻어진 상청액중에 함유되는 알긴산의 저분자 생성물을 제거하기 위해, 배제분자량 100,000 의 홀로파이버를 장착한 한외여과기에 의해 2ℓ로 농축한 후, 10% 의 에탄올을 함유하는 100mM 의 염화나트륨으로 용매 교환하였다. 이 용액에 등량의 400mM 아세트산칼슘을 첨가 교반한 후, 원심분리하고, 얻어진 상청액을 빙냉하에 1N 의 염산으로 pH 2 로 조정하였다. 형성된 침전물을 원심분리에 의해 제거하고, 얻어진 상청액을 1N 의 수산화나트륨에 의해 pH 8.0 으로 조정하였다. 이 용액을 한외여과에 의해 1ℓ로 농축한 후, 100mM 의 염화나트륨으로 용매 교환하였다. 이 때 형성된 침전물을 원심분리에 의해 제거하였다. 얻어진 상청액중의 소수성 물질을 제거하기 위해, 상청액이 1M 이 되도록 염화나트륨을 첨가하고, 1M 의 염화나트륨으로 평형화시킨 3ℓ의 페닐-셀룰로파인 칼럼 (생화학공업사 제조) 에 넣어 용출 분획을 수합하였다. 이 분획을 한외여과기에 의해 농축한 후, 20mM의 염화나트륨으로 용매 교환하여 동결건조시켰다 동결건조물의 중량은 29.3g 이었다.
(2) 상기의 동결건조물 15g 을 400mM 의 염화나트륨 및 국제공개 제97/26896호 팜플렛에 기재된 플라보박테리움 종 SA-0082 (FERM BP-5402) 를 배양하고, 이 배양물로부터 얻어진 엔도형 황산화 다당 분해효소 (U-푸코이단 특이적 분해효소) 를 9U 함유하는 1.5ℓ의 50mM 트리스 염산 완충액중에 용해하고, 25℃ 에서 6 일간 반응시킨 후, 증발기로 약 300㎖ 로 농축하였다. 농축액을 배제분자량 3500 의 투석 튜브에 넣어 철저히 투석하고, 투석 튜브내에 남은 용액을 50mM 염화나트륨으로 평형화시킨 4ℓ의 DEAE-셀룰로파인 A-800 칼럼에 적용시키고, 50mM 염화나트륨으로 충분히 세정한 후, 50 내지 650mM 의 염화나트륨의 농도 구배에 의한 용출을 실시하였다. 또한, 동일 칼럼을 650mM 의 염화나트륨으로 충분히 용출시켰다. 용출 분획중, 650mM 의 염화나트륨으로 용출한 분획을 황산화 푸코갈락탄 분획으로 수합하고, 배제분자량 100,000 의 한외여과기에 의해 농축한 후, 10mM 의 염화나트륨으로 용액을 치환하고, 동결건조시켜 황산화 푸코갈락탄의 동결건조물을 0.85g 얻었다. 얻어진 황산화 푸코갈락탄 (G-푸코이단) 은 구성 당으로서 갈락토오스 및 푸코오스를 함유하고, 그 몰비는 약 2:1 이었다.
제조예 4
제조예 1-(3) 에서 얻어진 개다시마 유래의 푸코이단에 제조예 3-(2) 에 기재된 U-푸코이단 특이적 분해효소를 작용시켜 분해물을 제조하였다.
즉, 2.5% 의 푸코이단 수용액 16㎖ 와 50mM 인산 완충액 (pH 7.5) 12㎖ 와 4M 염화나트륨 4㎖ 와 32mU/㎖ 의 상기 U-푸코이단 특이적 분해효소의 수용액 8㎖ 를 혼합하여 25℃ 에서 48 시간 동안 반응시켰다.
반응액을 셀룰로파인 GCL-300 (생화학공업사 제조) 의 칼럼에 의해 분자량 분획하여 분자량 2000 이하의 획분을 수합하였다. 이 획분을 전기투석장치 G3 (아사히카세이사 제조) 에 의해 탈염한 후, DEAE-세파로오스 FF 의 칼럼에 의해 3 개의 획분으로 분리하고 탈염한 후, 동결건조시켜 각각 41㎎, 69㎎ 및 9.6㎎ 의 정제물을 얻었다. 질량분석에 의해 이들을 각각 분자량이 564, 724, 1128 로 NMR 분석에 의해 하기 화학식 (Ⅵ), (Ⅶ), (Ⅷ) 로 표시되는 화합물임을 확인하였다. 이들을 각각 3-1S, 3-3S, 6-2SFd-U 라고 한다.
제조예 5
시판되고 있는 미역 기부의 건조물 1㎏ 을 구멍 직경 1mm 의 스크린을 장착시킨 커터밀에 의해 파쇄후, 10ℓ의 80% 에탄올중에 현탁하여 3 시간 동안 교반후, 여과지에 의해 여과하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 50mM 의 염화나트륨을 함유하는 40mM 의 인산 완충액 (pH 6.5) 20ℓ중에 현탁하고 95℃ 에서 2 시간 동안 처리하였다. 처리액을 37℃ 까지 냉각한 후, 10% 가 되도록 에탄올을 첨가하고, 시판되고 있는 알긴산 리아제 K (나가세 생화학공업사 제조) 를 12000U 첨가한 후, 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 얻어진 처리액을 원심분리하여, 그 상청액을 배제분자량 100,000 의 홀로파이버를 장착시킨 한외여과기에 의해 2ℓ로 농축한 후, 형성된 침전을 원심분리에 의해 제거하였다. 얻어진 상청액을 5℃ 로 냉각한 후, 0.5N 의 염산을 첨가하여 pH 를 2.0 으로 한 후, 30 분 동안 교반하여 형성된 침전을 원심분리에 의해 제거하였다. 상청의 pH 를 0.5N 의 수산화나트륨에 의해 8.0 으로 하고, 용액을 한외여과에 의해 20mM 의 염화나트륨으로 치환하였다. 얻어진 용액의 pH 를 8.0 으로 한 후, 원심분리하여 얻어진 상청액을 동결건조시켜 90.5g 의 미역 기부 유래 푸코이단을 얻었다.
제조예 6
제조예 1-(1) 에 기재된 방법으로 제조한 개다시마 유래 푸코이단 2g 을 100㎖ 의 물에 용해하여 그 pH 를 시트르산으로 pH 3 으로 조정후, 100℃ 에서 3 시간 동안 처리하여 해당 푸코이단의 산분해물을 제조하였다. 이 가수분해물을 셀룰로파인 GCL-300, 또는 셀룰로파인 GCL-25 에 의한 겔여과로 분자량 분획하고, 분자량 25000 초과 (A 분획), 25000 내지 10000 초과 (B 분획), 10000 내지 5000 초과 (C 분획), 5000 내지 2000 초과 (D 분획), 2000 내지 500 초과 (E 분획), 500 이하 (F 분획) 으로 분획하였다. 또한 이들 획분 및 산분해물을 각각 탈염한 후 동결건조를 실시하여 산분해물의 각 분획물 및 산분해물을 제조하였다.
제조예 7
시판되고 있는 염장큰실말 5㎏ 을 가위로 잘게 절단하여 20ℓ의 에탄올과 혼합하였다. 하룻밤동안 방치한 후, 여과지로 여과하여 얻어진 잔류물을 12.5ℓ의 물에 현탁하여 95℃ 에서 2 시간 동안 처리하였다. 처리액을 여과지에 의해 여과후, 350mM 의 염화나트륨을 함유하는 2.5% 의 염화세틸피리디늄 용액을 2600㎖ 첨가하여 3 일간 방치하였다. 상청부분을 폐기하고 침전부분을 원심분리하여 그 상청도 폐기하였다. 얻어진 침전에 2.5ℓ의 350mM 염화나트륨을 첨가후, 호모게니저로 균일하게 하여 원심분리하였다. 이 세정조작을 3 회 반복하였다. 얻어진 침전에 400㎖ 의 400mM 염화나트륨을 첨가후, 호모게니저로 균일하게 하고 80% 가 되도록 에탄올을 첨가하여 30 분 동안 교반후 여과지로 여과하였다. 얻어진 잔류물에 500㎖ 의 염화나트륨 포화 80% 에탄올을 첨가후, 호모게니저로 균일하게 하고, 1ℓ가 되도록 염화나트륨 포화 에탄올을 첨가하여 30 분 동안 교반후 여과지로 여과하였다. 이 세정조작을 여과액의 260nm 의 흡광도가 0 이 될 때까지 반복하였다 (통상 5 회). 얻어진 잔류물을 1.5ℓ의 2M 염화나트륨에 용해후, 불용물을 원심분리에 의해 제거하고, 미리 2M 의 염화나트륨에 의해 평형화시킨 100㎖ 의 DEAE-셀룰로파인 A-800 의 칼럼에 통과시켰다. 통과 분획을 배제분자량 100,000 의 홀로파이버를 장착시킨 한외여과기에 의해 2ℓ로 농축한 후, 한외여과에 의해 용액을 2mM 의 염화나트륨으로 치환하였다. 이 용액을 원심분리하여 얻어진 상청액을 동결건조시켜 22.9g 의 큰실말 유래 푸코이단을 얻었다.
제조예 8
참해삼을 5㎏ 해체하여 내장을 제거하고 체벽을 모았다. 체벽 습중량 200g 당 500㎖ 의 아세톤을 첨가하여 호모게니저로 처리한 후 여과하고, 잔류물을 더 이상 착색물질이 나오지 않을 때까지 아세톤으로 세정하였다. 이 잔류물을 흡인건조시켜 140g 의 건조물을 얻었다. 이 건조물에 0.4M 의 식염수 2.8ℓ를 첨가하여 100℃ 에서 1 시간 동안 처리후 여과하고, 잔류물을 0.4M 의 식염수로 충분히 세정하여 추출액 3.7ℓ를 얻었다. 이 추출액에 5% 의 세틸피리디늄 클로리드를 침전이 생기지 않을 때까지 첨가하여, 형성된 침전을 원심분리로 모았다. 이 침전을 0.4M 의 식염수에 현탁후 다시 원심분리하고, 얻어진 침전에 1ℓ의 4M 식염수를 첨가하여 호모게니저로 처리후, 교반하면서 4ℓ의 에탄올을 첨가하고, 1 시간 동안 교반후 여과하여 침전을 얻었다. 이 침전에 대해 80% 에탄올에 현탁후 여과라는 공정을 상청액의 260nm 의 흡광도가 0 이 될 때까지 반복하였다. 얻어진 침전을 2ℓ의 2M 식염수에 현탁하여 불용물을 원심분리에 의해 제거하였다. 상청액을 배제분자량 30,000 의 막을 구비한 한외여과장치에 의해 한외여과하여 완전하게 탈염한 후, 동결건조시켜 3.7g 의 해삼 유래 푸코이단을 얻었다.
제조예 9
시판되고 있는 염장 오끼나와 큰실말 625g 을 4375㎖ 의 30mM 의 인산나트륨완충액 (pH 6.0) 에 현탁하여 호모게니저로 8000 회전/분, 5 분 처리후, 95℃, 1 시간 동안 처리하고 원심분리에 의해 상청액을 얻었다. 얻어진 상청액에 10g 의 활성탄을 첨가후 30 분 동안 교반하고, 원심분리에 의해 상청액을 얻었다. 얻어진 상청액을 배제분자량 100,000 의 홀로파이버를 장착시킨 한외여과기에 의해 2ℓ로 농축한 후, 20mM 의 염화나트륨으로 용매 치환하고 동결건조시켜 10.9g 의 오끼나와 큰실말 유래 푸코이단 획분의 건조물을 얻었다.
제조예 10
분쇄한 모자반 (Fucus vesiculosus) 의 건조물 1㎏ 을 10ℓ의 80% 에탄올중에 현탁하여 3 시간 동안 교반후, 여과지에 의해 여과하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 100mM 의 염화나트륨을 함유하는 30mM 의 인산 완충액 (pH 6.0) 30ℓ에 현탁하여 95℃ 에서 2 시간 동안 처리하였다. 처리액을 37℃ 까지 냉각후, 100g 의 활성탄을 첨가하여 30 분 동안 교반하였다. 시판되고 있는 알긴산 리아제 K 를 3000U 첨가후, 10% 가 되도록 에탄올을 첨가하여 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 얻어진 처리액을 원심분리하여 그 상청액을 배제분자량 100,000 의 홀로파이버를 장착시킨 한외여과기에 의해 2ℓ로 농축한 후, 형성된 침전을 원심분리에 의해 제거하였다. 이 상청액에 100mM 의 염화나트륨을 함유하는 30mM 의 인산 완충액 (pH 6.0) 을 첨가하면서 한외여과하여 색소를 제거하였다. 얻어진 비여과액을 5℃ 로 냉각후, 0.5N 의 염산을 첨가하여 pH 를 2.0 으로 한 후 30 분 동안 교반하여, 형성된 침전을 원심분리에 의해 제거하였다. 상청액의pH 를 0.5N 의 수산화나트륨에 의해 8.0 으로 하고, 한외여과에 의해 용매를 20mM 의 염화나트륨으로 치환하였다. 얻어진 용액의 pH 를 8.0 으로 조정후, 원심분리하여 얻어진 상청액을 동결건조시켜 71g 의 모자반 유래 푸코이단을 얻었다.
실시예 1
푸코이단의 간선유화 억제 효과
생후 7 주된 수컷 SD 계 래트에 돼지 혈청 (GIBCO 사) 을 주 2 회, 0.5㎖/래트의 용량으로 10 주간 복강내 투여함으로써 간선유 모델을 제작하였다. 제조예 1-(1) 에 기재된 개다시마 유래 푸코이단의 용액은 수돗물로 0.5% 로 조정하고, 실험개시 5 주후부터 음료수로 주었다. 대조군에는 수돗물을 주었다. 정상 대조군에는 돼지 혈청 대신에 생리 식염수를 동일하게 투여하였다.
간선유화의 평가는 콜라겐의 주요 구성 아미노산인 하이드록시프롤린량의 증가를 지표로 하여 나타내었다. 즉, 적출한 간조직의 하이드록시프롤린량을 측정하고, 간조직중 하이드록시프롤린량을 간중량 1g 당의 농도 (㎍/g 간) 및 간장 전체의 하이드록시프롤린량 (㎎/간 전체) 으로 나타냈다. 그 결과, 대조군에 비하여 개다시마 유래 푸코이단 투여군에서는 간조직중의 하이드록시프롤린량은 유의적으로 감소하였다. 또한, 대조군에 있어서의 콜라겐의 축적에 의한 간중량의 증가 및 간/체중비의 상승에 대해서도, 개다시마 유래 푸코이단 투여군에서는 유의적으로 억제되었다. 이들 결과를 표 1 및 표 2 에 나타낸다. 또한, 적출한 간조직을 관찰한 결과, 대조군에서는 선유화에 의하여 간 표면의 광택이 소실되고 요철이 명료한데 반해, 푸코이단 투여군에서는 정상 대조군과 마찬가지로 선유화는 보이지 않았다.
하이드록시프롤린량*
n ㎍/g 간 ㎎/간 전체
대조군푸코이단 투여군정상 대조군 10104 702 ±94336 ±31**164 ±9 11.7 ±1.84.9 ±0.5**2.2 ±0.0
* : 평균값 ±표준오차
** : p＜0.01 vs 대조군
n 체중(g) 간중량(g) 간/체중비(%)
대조군푸코이단 투여군정상 대조군 10104 463 ±9461 ±11458 ±14 16.5 ±0.714.6 ±0.4*13.2 ±0.6 3.5 ±0.13.2 ±0.1**2.9 ±0.1
평균값 ±표준오차
* : p＜0.05 vs 대조군
** : p＜0.01 vs 대조군
실시예 2 7-12SFd-F 의 간선유화 억제 효과
생후 7 주된 수컷 SD 계 래트에 돼지 혈청 (GIBCO 사) 을 주 2 회, 0.5㎖/래트의 용량으로 8 주간 복강내 투여함으로써 선유간 모델을 제작하였다. 제조예 2-(4) 에서 제조한 7-12SFd-F 건조 표품을 증류수로 희석하고, 100 또는 30㎎/5㎖/㎏ 의 용량으로 실험개시 4 주후부터 연일 강제 경구투여하였다. 대조군에는 증류수를 동일하게 투여하였다. 정상 대조군에는 돼지 혈청 대신에 생리 식염수를 동일하게 투여하였다.
간선유화의 평가는 적출한 간장의 하이드록시프롤린량을 측정하여 실시하였다. 이들 결과를 표 3 에 나타낸다.
그 결과, 돼지 혈청의 8 주간 투여에 의하여, 간선유화 (간장으로의 콜라겐의 축적) 가 진행되어, 간조직중 하이드록시프롤린량 및 단위 간중량 당 농도는 정상 간의 약 4 배까지 상승하였다. 한편, 7-12SFd-F 를 돼지 혈청 투여의 4 주째부터 100 또는 30㎎/㎏ 의 용량으로 연일 경구투여함으로써, 간조직중의 하이드록시프롤린량 및 단위 간중량 당 하이드록시프롤린의 농도는 대략 4 주째 시점의 값으로 유지되었다.
이상의 결과로부터, 7-12SFd-F 가 간선유화의 진행을 억제함을 알 수 있었다.
또한, 적출한 간조직을 관찰한 결과, 대조군에서는 선유화에 의하여 간 표면의 광택이 소실되고 요철이 명료한데 반해, 7-12SFd-F 투여군에서는 명백히 선유화가 억제되어 있었다.
하이드록시프롤린량*
n ㎍/g 간 ㎎/간 전체
대조군 (8 주간)대조군 (4 주간) 118 286 ±40193 ±11 4.83 ±0.712.70 ±0.17
7-12SFd-F 투여군
100㎎/㎏30㎎/㎏정상대조군 885 199 ±43199 ±3477 ±5 3.11 ±0.793.08 ±0.531.14 ±0.11
* : 평균값 ±표준오차
실시예 3 푸코이단의 알코올 섭취 간장애 억제 효과
생후 5 주된 수컷 Crj : CD (SD) 계 래트 (일본 찰스ㆍ리버사) 를 구입하고, 음료는 액체사료 (일본 쿠레아사 제조) 를 사용하였다. 제조예 1-(1) 에 기재된 개다시마 유래 푸코이단을 수돗물에 용해시켜 경구투여하였다 (투여량은 표 4 에 나타낸다). 대조군에는 수돗물을 주었다. 개다시마 유래 푸코이단 공여 개시일을 제 0 일째로 하여, 제 7 일째부터 CE-2 사료에 에탄올을 최종농도 5% 가 되도록 첨가하고, 알코올식으로서 섭취시켰다.
간장애 억제화의 평가는 혈청 생화학 검사에 의하여 실시하였다. 즉, 제 35 일째에 채혈을 하고 헤파린 처리후, 원심분리로 혈장을 얻고, 혈청 생화학 검사에 의하여 혈중 마커 (GOT, GPT, γGTP) 를 측정하였다. 또한, 간장을 적출하여 10% 중성 포르말린 완충액으로 고정시키고, 파라핀에 싸서 헤마톡실린ㆍ에오신 염색하여 병리학적 관찰을 실시하였다. GOT, GPT 및 γGTP 의 측정시약은 각각 S.TA-HRⅡ GOT 7070, S.TA-HRⅡ GPT 7070 및 L 타입 와코-γGTP (모두 와코준야쿠 공업사) 측정 키트를 사용하였다. 또한, 제 35 일째에 채혈후 절식시키고, 제 36 일째에 에테르 마취하에 복부 대동맥에서 채혈하여 헤파린 처리를 하였다. 원심분리후 혈청을 얻고, 혈청 생화학 검사에 의하여 혈중 마커 (HDL, LDL, VLDL) 를 측정하였다. HLD, LDL 및 VLDL 의 측정은 전기영동법에 의하여 실시하였다. 또한, 시험기간중 사료섭취량 및 음료수량의 각 군간 차이는 없었다.
그 결과, 개다시마 유래 푸코이단의 경구투여에 의하여 알코올에 의한 GOT, GPT 및 γGTP 의 상승이 억제되고, 또한 혈중 콜레스테롤중에서 소위 악성 콜레스테롤이라 불리는 VLDL 의 비율의 증가가 억제되고, 순성 콜레스테롤이라 불리는 HDL 의 비율의 감소가 억제되었다. 또한, 간장의 병리 소견으로부터, 간세포의 손상ㆍ괴사ㆍ비만성 증식이 명백히 억제됨을 알 수 있었다. 이들 결과를 표 4 에 나타낸다.
이상의 결과로부터, 개다시마 유래 푸코이단이 알코올에 의한 간장애를 억제함을 알 수 있었다.
개다시마 유래 푸코이단의 래트에 있어서의 알코올 섭취 간장애 억제 효과
마커 개다시마 유래 푸코이단(㎎/rat/day)
0 0.5 5
GOT(IU/ℓ)GPT(IU/ℓ)γGTP(IU/ℓ)HDL(%)LDL(%)VLDL(%)비만성 간세포 증식비만성 간세포 괴사 108 ±1263 ±8.51.7 ±0.3960 ±1.821 ±2.016 ±1.62/92/9 93 ±5.551 ±6.41.4 ±0.1662 ±2.323 ±3.611 ±0.750/80/8 84 ±4.237 ±6.71.0 ±0.3570 ±7.415 ±6.513 ±2.80/71/7
평균값 ±표준오차 (P＜0.05)
실시예 4 푸코이단의 알코올 섭취 간장애 억제 효과
제 35 일째까지 실시예 3 과 동일한 방법으로 사육하고 그 후 절식하여, 제 36 일째에 에테르 마취하에 복부대동맥에서 채혈하여 헤파린 처리하였다. 원심분리후 혈청을 얻고, 혈청 생화학 검사에 의하여 트리글리세리드값을 측정하였다. 트리글리세리드값의 측정은 트리글리세리드 E-테스트 와코 (와코쥰야쿠 공업사 제조) 를 사용하여 측정하였다. 또한, 시험기간중 사료섭취량 및 물섭취량의 각군간의 차이는 없었다.
그 결과, 트리글리세리드값은 대조군에 비하여 저하 경향이 크게 나타났다. 이 결과를 표 5 에 나타낸다.
이상의 결과로부터, 개다시마 유래 푸코이단이 알코올에 의한 간장애를 억제함을 알 수 있었다.
마커 개다시마 유래 푸코이단(㎎/rat/day)
0 0.5 5 50
트리글리세리드값 25.5 ±3.55 19.8 ±3.1 22.5 ±3.14 15.1 ±1.86
평균값 ±표준오차 (P＜0.05)
실시예 5 푸코이단의 혈당값 상승억제 효과
일본 찰스ㆍ리버 주식회사로부터 생후 5 주된 수컷 Crj : CD (SD) 계 래트 (SPF 동물) 를 구입하였다. 제조예 1-(1) 에 기재된 푸코이단을 수돗물에 녹여 푸코이단 용액을 제조하여 래트에 자유롭게 섭취시켰다. 이 때, 푸코이단 용액의 농도는 0.005%, 0.05%, 0.5% 를 설정하였다. 또한, 대조군에는 수돗물을 주었다. 사육후 10 일째에, 전날부터 18 내지 20 시간 절식한 동물에게 액체사료 (글루코오스 2g/㎏) 만을 경구투여하였다. 채혈은 사료 투여전, 투여 0.5, 1, 2 및 3 시간후에 꼬리정맥에서 실시하여 헤파린 처리하였다. 그 후, 원심분리에 의하여 혈장을 얻고 혈당량을 측정하였다. 그 결과를 도 2 에 나타낸다. 또한, 혈당량은 글루코오스 투여전 대상 래트의 혈당량을 100% 로 하여 산출하였다. 도 2 는 푸코이단에 의한 식후 래트의 혈당값 상승억제 작용을 나타내는 도면으로, 종축은 혈당량 (%), 횡축은 경과시간 (시간) 을 나타낸다. 이로써, 푸코이단 경구투여에 의한 혈당값 상승억제 작용이 확인되었다.
또한, 동일하게 하여 6 시간까지의 총 혈당량에 대하여 비교한 결과, 푸코이단 투여군 쪽이 대조에 비하여 명백히 혈당값의 상승이 억제되었다.
실시예 6 푸코이단의 혈중 중성 지방값 상승억제 효과
실시예 5 와 동일한 방법으로, 사육 19 일째에 올리브 오일 첨가 액체사료를 올리브 오일이 5㎖/㎏ 이 되도록 경구투여하고, 사료 투여전, 투여 1, 2 시간후에 채혈하여 트리글리세리드량을 측정하였다. 그 결과를 도 3 에 나타낸다. 또한, 트리글리세리드량은 올리브 오일 첨가 액체사료 투여전의 대조 래트의 트리글리세리드량을 100% 로 하여 산출하였다. 도 3 은 푸코이단에 의한 식후 래트의 혈중 중성 지방값 상승억제 작용을 나타내는 도면으로, 종축은 트리글리세리드량 (%), 횡축은 경과시간 (시간) 을 나타낸다. 이로써, 푸코이단 경구투여에 의한 혈중 중성지방값 상승억제 작용이 확인되었다.
또한, 동일하게 하여 6 시간까지의 혈중 총 트리글리세리드량에 대하여 비교한 결과, 푸코이단 투여군 쪽이 대조군에 비하여 명백히 혈중 총 트리글리세리드량의 상승이 억제되었다.
실시예 7
미역 기부 (건조품, 5㎜φ패스까지 파쇄) 30g 을 탈염수 970g 에 넣고, 환원제로서 아스코르브산 Na 를 0.005%w/w, 0.01%w/w, 0.02%w/w, 0.05%w/w, 0.08%w/w, 0.1%w/w, 0.5%w/w, 1.0%w/w 가 되도록 첨가하였다. 대조군은 아스코르브산 Na 무첨가로 하였다. 추출은 95℃ 에서 1 시간, 때때로 느리게 교반하여 실시하였다. 고액분리는 여과 보조제 (셀라이트) 를 2% 첨가후, 필터 페이퍼 No. 2 (도요 로시) 추가로 0.45㎛φ포어 사이즈 멤브레인 필터를 사용하는 여과에 의하여 실시하여 미역 기부 추출액을 얻었다.
얻어진 추출액에 대하여, 요오드 함량 측정 및 관능평가를 실시하였다.
그 결과를 표 6 에 나타낸다. 관능평가는 10 명의 패널 멤버로, 5 단계 (1 양호 ∼ 5 불량) 로 실시하여 그 평가값으로 표시하였다.
미역 기부 추출액의 요오드 함량 및 관능평가
첨가환원제(아스코르브산 Na, %w/w)
항목 0 대조 0.005 0.01 0.02 0.05 0.08 0.1 0.5 1.0
요오드 함량(㎎%,w/v) 5.8 5.5 5.4 5.4 4.9 4.6 4.5 4.4 5.0
이행률(%) 100 95 93 91 84 79 78 76 86
관능평가
향 3.0 2.4 2.3 2.1 1.9 2.0 2.0 2.2 2.3
맛 3.2 2.7 2.4 1.8 1.7 1.9 1.9 2.0 3.2
색 3.5 3.2 3.1 3.0 3.1 3.2 3.3 3.2 3.2
종합 3.3 2.8 2.5 2.3 2.2 2.4 2.4 2.5 2.5
평 해조냄새가 강함, 쓴맛이 강함 해조냄새 일부 감소, 약간 쓴맛 있음 해조냄새 약간 약함, 쓴맛 약함 해조냄새를 포함하여 전체적으로냄새가 적음, 쓴맛 없음, 깔끔한 맛, 뒷맛 양호 좌동 좌동, 상쾌감이 약간 낮음 좌동, 상쾌감이 약간 낮음 좌동, 상쾌감이 적음 해조냄새와는 다른 냄새 발생, 쓴맛 없음, 단조로운 맛, 상쾌감이 적음
표 6 으로부터, 환원제를 첨가하여 추출한 미역 기부 추출액은 환원제를 첨가하지 않은 대조에 비하여, 첨가량 0.02%w/w 내지 1.0%w/w 에서는 특히 해조냄새가 경감되고 쓴맛이 현저히 경감되어 깔끔하게 뒷맛이 개선되었다.
관능평가의 비교로부터 향, 맛, 색의 종합에서는 아스코르브산 Na 0.005%w/w 내지 1.0%w/w 첨가로 대조군 3.3 에 대하여 2.8 내지 2.2 였다. 또한, 종합평가값이 2.5 이하를 나타내는 환원제 아스코르브산 Na 농도는 0.01%w/w 내지 1.0%w/w 였다. 이들 결과로부터, 바람직한 환원제 첨가량은 0.005%w/w 내지 1.0%w/w 이며, 더욱 관능적으로 바람직하게는 0.01%w/w 내지 0.1%w/w 임을 알 수 있었다. 색에 대해서는, 모두 대조의 녹갈색에 비하여 엷거나 또는 무색이었다. 또한, 요오드 함량은 환원제를 넣음으로써 추출액으로의 이행이 적어져, 환원제 무첨가를 100% 로 하면 환원제 0.005% 첨가로 5% 의 요오드의 이행을, 환원제 0.01% 이상에서는 7% 이상의 요오드의 이행을 경감할 수 있었다 (표 중, 이행률 참조). 이 결과는 쓴맛의 경감과 상관되어 있는 것으로 추측된다.
실시예 8
미역 기부 (건조품, 5㎜φ패스까지 파쇄) 9g 을 탈염수 201g 에 넣고, 환원제로서 아스코르브산 Na 를 0.02%w/w 첨가하고 추출시간을 1 시간으로 설정하여 다양한 온도 75, 80, 90, 95, 100, 120 및 130℃ 에서 추출하였다. 얻어진 여과액에 대해서는 실시예 7 과 동일하게 처리하여 관능평가를 실시하였다. 그 결과를 표 7 에 나타낸다.
추출온도의 검토
추출온도(℃) 관능평가 평
향 맛 색 종합
75 2.6 2.7 2.7 2.7 해조냄새가 일부 감소,농후감이 약간 부족
80 2.4 2.2 2.9 2.5 해조냄새가 상당히 감소,쓴맛 감소, 농후감이 있음
90 2.3 1.8 3.0 2.3 해조냄새를 포함하여 전체적으로 냄새가 적음, 쓴맛 감소, 깔끔, 뒷맛 좋음
95 2.1 1.8 3.0 2.3 해조냄새를 포함하여 전체적으로 냄새가 적음, 쓴맛 감소, 깔끔, 뒷맛 좋음
100 2.1 1.8 3.0 2.3 상동
120 2.1 2.2 3.1 2.5 해조냄새가 적음,쓴맛이 약간 남아 있음
130 2.4 2.4 3.3 2.7 해조냄새 이외의 냄새가 생성됨,쓴맛이 약간 남아 있음
표 7 로부터, 미역 기부 추출의 온도는 75℃ 내지 100℃ 까지는 관능평가에 의한 높은 종합 평가값이 얻어졌다. 또한, 100℃ 초과에서는 오히려 관능평가에 의한 종합평가값은 저하되어, 130℃ 추출에서는 종합 평가값은 75℃ 와 동일한 수준이 되었다. 따라서, 추출온도의 범위는 75℃ 내지 130℃ 가 바람직하며, 관능적 품질에 있어서는 80℃ 내지 100℃ 가 더욱 바람직함을 알 수 있었다.
실시예 9
미역 기부 (건조품, 5㎜φ패스까지 파쇄) 9g 을 탈염수 201g 에 넣고, 환원제로서 아스코르브산 Na 를 0.02%w/w 첨가하고, 추출온도를 95℃ 로 설정하고, 추출시간을 0.5, 1, 3, 5 시간으로 하였다. 얻어진 여과액에 대해서는 실시예 7 과 동일하게 처리하여 관능평가를 하였다. 그 결과를 표 8 에 나타낸다.
추출시간의 검토
추출시간(시간) 관능평가 평
향 맛 색 종합
0.5135 2.42.12.12.5 2.01.81.82.5 3.03.03.23.2 2.52.32.42.7 해조냄새가 적음, 좋은맛 양호,쓴맛이 약간 남아 있음해조냄새를 포함하여 전체적으로 냄새가 적음,쓴맛 감소, 깔끔, 뒷맛 좋음,상동해조냄새 이외의 냄새가 약간 생성됨,약간 껄끄러운감이 입에 남아 있음
표 8 로부터, 미역 기부 추출시간에 있어서 해조냄새가 적고, 좋은맛 양호, 쓴맛이 약간 남는 효과를 보이는 것은 0.5 시간 추출이었다. 또한, 1 시간 추출에서 관능효과의 종합수치는 가장 우수하였고, 다시 추출하니 그 수치가 높아졌는데, 5 시간 추출에서도 해조냄새의 저감효과가 확인되었다. 따라서, 추출시간은 0.5 시간 내지 5 시간이 적합함을 알 수 있었다.
실시예 10
pH 의 영향에 대하여 조사하였다. 실시예 9 에 준하여, 추출용매의 pH 를 3.0, 4.0, 5.0, 6.0 및 7.0 으로 시트르산 또는 탄산수소나트륨으로 조정하고, 95℃ 에서 1 시간 추출하였다. 그 결과, 얻어진 추출액의 해조냄새는 모두에서 감소함을 확인하였다. 맛에 대해서는, 첨가 시트르산이나 탄산수소나트륨의 영향이 나타나기 때문에 비교하지 않았다. 따라서, 추출시의 pH 는 해조냄새의 저감에 있어서는 pH 3.0 내지 7.0 이 적합함을 알 수 있었다.
실시예 11
미역 기부 (건조품, 5㎜φ패스까지 파쇄) 0.6㎏ 을 탈염수 20ℓ에 넣고, 환원제로서 아스코르브산 Na 를 탈염수에 대하여 0.02%w/w 가 되도록 첨가하였다. 대조는 환원제 무첨가로 하였다. 교반하면서 가온하여 95℃ 로 유지하고, 1 시간후 실온까지 냉각시켰다. 여과는 여과지 (ADVANTEC #327) 를 사용하고, 프리코트로서 여과 보조제 (Silika #600S, 20g) 를 사용하고, 보디피드로서 여과 보조제 (Celite #545, 45g) 를 사용하여 통상적인 방법에 따라 실시한 후, 1㎛φ포어 사이즈 멤브레인 필터로 여과하였다. 여과액은 19.4ℓ를 얻었다. 살균은 120℃ 에서 60 초간 실시하고, 얻어진 살균액을 감압농축 (40℃, 750㎜Hg) 시켜 2.6ℓ(7.58 배)(22.7%) 의 농축액을 얻었다. 농축액의 일부 (1ℓ) 를 동결건조시켜 9g 의 분말을 얻었다. 이 조작을 5 회 실시하였다. 얻어진 농축액의 분석값을 표 9 에 나타낸다.
농축액의 분석
항목 본 발명품 대조품
pH산도(0.1N NaOH㎖/10㎖)포르몰(formol)모양 질소(㎎%, w/v)전체 질소(㎎%, w/v)직접 환원당(㎎%, w/v)전체 환원당(㎎%, w/v)푸코이단(%, w/v)NaCl(%, w/v)요오드(㎎%, w/v) 5.350.24109.4222.50.241.782.883.484.15 5.360.23110.0231.00.241.8023.414.95
7.7 배 희석에서의 관능평가(농축액 1 에 대하여 증류수 6.7 용량비) 해조냄새가 적음쓴맛을 느낄 수 없음,상쾌감 있음 해조냄새가 강함,쓴맛 강함
표 9 로부터, 본 발명의 미역 기부로부터의 추출액의 농축액은 대조에 비하면 일반적인 분석값은 대략 동일 수준의 값을 나타냈으나, 요오드에 관해서는 함량이 대조의 84% 가 되어 15% 이상의 감소 효과가 얻어졌다. 증류수로 7.7 배로 희석한 액의 관능평가에서는, 본 발명품이 대조품에 비하여 해조냄새가 적고 상쾌감이 있으며, 쓴맛이 느껴지지 않게 된다는 향미의 점에서 현저한 효과가 얻어졌다.
실시예 12
개다시마, 참다시마 및 미역 엽상체 (각각 건조품, 5㎜φ패스까지 파쇄) 9g 을 각각 탈염수 201g 에 넣고, 환원제로서 아스코르브산 Na 를 0.02%w/w 첨가하고 추출온도를 95℃ 로 설정하여 추출시간 1 시간으로 추출하였다. 대조품은 아스코르브산 Na 를 첨가하지 않은 것을 동일하게 처리하였다. 얻어진 여과액에 대해서는 실시예 7 과 동일하게 처리하여 관능평가를 하였다. 그 결과를 표 10 에 나타낸다.
관능평가
향 맛 색 종합 평
개다시마참다시마미역 엽상체 본 발명품대조품본 발명품대조품본 발명품대조품 2.83.32.73.42.43.0 2.73.82.53.22.43.2 3.13.62.73.32.93.5 2.93.62.63.32.63.2 해조냄새가 적고, 쓴맛이 없음해조냄새와 쓴맛 있음해조냄새 경감, 좋은맛이 뚜렷함해조냄새와, 약간 쓴맛이 남아 있음해조냄새가 적고, 쓴맛이 없음해조냄새가 있고, 쓴맛이 있음
표 10 으로부터, 개다시마, 참다시마 및 미역 엽상체에 있어서도 미역 기부와 마찬가지로, 환원물질의 존재하에서의 추출에서는 해조냄새가 경감되고 쓴맛도 제거할 수 있으므로 향미 모두 개선되어 상쾌감이 있었다. 본 발명품은 해조의 종류에 상관없이, 식재로서 기호에 맞는 적합한 추출물이었다.
실시예 13
갈조류의 개다시마 4g (건조품, 5㎜φ패스까지 파쇄) 에 염화칼슘 100mmol/ℓ을 포함하는 탈염수를 넣고, 환원제로서 아스코르브산 Na 를 0.01%w/w, 0.05%w/w, 0.10%w/w, 0.20%w/w 또는 0.50%w/w 첨가하고 95℃ 에서 2 시간 추출후, 필터 페이퍼 No. 2 (도요 로시) 로 여과하였다. 여과액중의 푸코이단 함량을 시스테인-황산법에 의하여 L-푸코오스를 측정하는 방법을 이용하여 측정하였다. 대조는 아스코르브산 Na 를 첨가하지 않은 것을 사용하였다. 그 결과를 표 11 에 나타낸다.
푸코이단 함량
아스코르브산 Na(%w/w) 푸코이단 농도(㎎/㎖ 여과액)
무첨가 (대조)0.010.050.100.200.50 0.89 (100%)1.11 (125%)1.33 (149%)1.33 (149%)1.44 (161%)1.45 (162%)
표 11 로부터, 아스코르브산 0.01 내지 0.50%w/w 까지는 푸코이단의 추출률이 향상되었으며, 대조의 1.6 배까지 상승하여 환원제인 아스코르브산 존재하에 푸코이단 추출효율이 향상되었다.
다음으로, 프로테아제 처리와의 조합을 검토하였다. 즉, 갈조류의 개다시마 4g (건조품, 5㎜φ패스까지 파쇄) 및 프로테아제로서 식물 기원의 파파인 (나가세 생화학공업), 또는 고초균 기원 SP-15FG (나가세 생화학공업) 를 각 40㎎, 100mmol/ℓ의 염화칼슘을 포함하는 탈염수 100㎖ 를 혼합하고, 12℃ 에서 95℃ 까지 2 시간에 서서히 승온시켜 산소처리하고, 그 후 환원제인 아스코르브산 Na 를 0.10%w/w 가 되도록 각각 첨가하였다. 대조는 산소만 첨가하지 않은 것을 사용하였다. 추출은 95℃ 에서 2 시간 동안 실시하고, 추출후 필터 페이퍼 No. 2 (도요 로시) 를 사용하여 여과하였다. 이 여과액중 4㎖ 를 한외여과막 (분자량 10,000 커트) 으로 0.1㎖ 까지 탈염농축시켰다. 이 탈염농축액에 탈염수 4㎖ 를 각각 첨가하고, 다시 0.1㎖ 까지 농축시키고, 농축액에 탈염수를 첨가하여 1㎖ 로 하였다. 이 액에 대하여 푸코이단 함량 및 켈달 질소 함량을 측정하였다. 또한, 이 측정결과로부터 원료인 개다시마 중량 당 푸코이단 수율(%) (푸코이단 수율(%) = (농축액 1㎖ 중의 푸코이단 중량(g) ×25)/원료 개다시마 중량(g)) ×100) 을 구하였다. 그 결과를 표 12 에 나타냈다.
푸코이단 함량, 질소 함량 및 푸코이단 수율
산소 푸코이단 함량(g/ℓ) 전체 질소(㎎/ℓ) 비탁도(非濁度)*660㎚/㎝ 셀 푸코이단 수율(%)
대조프로테아제SP-15FG파파인 6.058.428.29 64.347.829.9 0.1580.0890.108 3.785.265.18
* ; 필터 페이퍼 No. 2 (도요 로시) 여과액을 사용하여 측정
표 12 로부터, 산소 프로테아제 처리와 아스코르브산 Na 의 추출을 조합했을 때 푸코이단의 추출효율은 더욱 향상됨을 확인 할 수 있었으며, 또한 개다시마 유래 단백질도 저분자화 (분자량 10,000 이하) 되어 한외여과로 제거하여 저감시킬 수 있으며, 파파인의 경우에서 대조의 1/2 이하가 되었다. 또한, 대조의 추출액의 탁도는 효소 프로테아제 처리에 의하여 청징화되었다. 이들 결과로부터, 효소 프로테아제 처리와 아스코르브산 Na 추출에 의한 푸코이단 추출에 의하여, 수율의 향상 및 단백질의 저감이 가능하게 되고, 고순도의 푸코이단을 얻을 수 있었다.
실시예 14
(1) 갈조류의 개다시마 40kg (건조품, 5㎜φ패스까지 파쇄), 염화칼슘 15㎏, 효소 파파인 400g (나가세 생화학공업), 아스코르브산 Na 1㎏ 을 탈염수에 혼합하여 1000ℓ로 하였다. 효소처리 및 추출은 80 분 동안에 걸쳐 15℃ 에서 60℃ 까지 승온시키고, 60℃ 에서 60 분 동안 반응 및 추출을 실시하였다. 다시, 추출은 80 분 동안에 걸쳐 60℃ 에서 95℃ 까지 승온시켜 95℃ 에서 120 분 동안 추출하였다. 그 후, 24 시간에 걸쳐 9℃ 로 냉각시켜 본 발명 추출처리물로 하였다. 이 추출처리물의 푸코이단 함량을 측정하고, 원료인 개다시마 당 푸코이단 수율 (%) (푸코이단 수율(%) = (추출처리물중의 푸코이단 중량 (㎏)/원료 개다시마 중량(㎏)) ×100) 을 구하였다. 또한, 대조는 환원제 아스코르브산 Na 및 효소파파인을 첨가하지 않고 동일하게 처리하여 얻었다. 측정결과를 표 13 에 나타낸다.
추출처리물중의 푸코이단 함량
본 발명 추출처리물 대조 추출처리물
푸코이단 중량(㎏)푸코이단 수율(%) 2.075.18 1.814.53
(2) 계속해서 실시예 14-(1) 에서 얻어진 본 발명 추출처리물의 고액분리를 필터 프레스를 사용하여 실시하여 800ℓ의 압착여과액을 얻었다. 다음으로 한외여과처리 및 탈염처리를 하여 80ℓ까지 농축시켰다. 이 농축액을 여과지 및 규조토를 이용하는 여과기로 여과하여 여과액 77ℓ를 얻었다. 다시 여과액을 농축기 (에버폴, CEP-30S, 가열온도 90℃, 품온 40 내지 45℃) 를 사용하여 농축시켜 6.8ℓ의 농축액을 얻고, 121℃ 에서 15 분 동안 오토클레이브에서 살균시켰다. 그 살균액을 동결건조시켜 푸코이단 780g 을 얻었다. 대조는 환원제 아스코르브산 Na 및 효소 파파인을 첨가하지 않고 동일하게 처리하여 얻었다. 본 발명품 및 대조의 동결건조품 및 이들의 1%w/v 수용액 (푸코이단 용액) 의 분석값을 각각 표 14, 표 15 에 나타낸다.
동결건조품의 분석값
본 발명품 대조
수분 (g/100g)단백질a(g/100g)지질 (g/100g)회분 (g/100g) 0.42.60.131.8 0.99.00.229.4
a ; 켈달 질소 ×6.25 (단백질 계수)
푸코이단 용액
본 발명품 대조
푸코이단 (mM)전체 당 (mM, 푸코오스 환산)황산기 (mM) 21.427.834.2 20.023.528.5
표 14 로부터, 효소 프로테아제 처리와 아스코르브산 Na 추출의 조합에 의하여 푸코이단의 추출효과가 향상되었음을 확인할 수 있었다. 또한, 표 14 로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명품의 단백질 함량은 현저히 감소하였다. 또한, 표 15 로부터 본 발명의 방법에 의하여 고순도의 푸코이단을 얻을 수 있었다.
또한, 본 발명품의 외관의 색에 대하여 조사한 결과, 본 발명품은 대조인 녹갈색에 비하여 색이 엷고 흰색을 띤 녹갈색이 되었다. 즉, 본 발명품 및 대조품을 증류수로 푸코이단 함량 2g/ℓ가 되도록 제조하고, 그 660nm 의 흡광도를 측정한 결과, 본 발명품과 대조는 각각 0.017 과 0.036 으로, 본 발명품은 녹색의 착색성분이 저감되어 있음을 알 수 있었다.
또한, 본 발명품의 해조냄새의 정도에 대하여 조사한 결과, 본 발명품은 대조에 비하여 해조냄새가 저감되어 있었다. 즉, 얻어진 대조를 20℃ 증류수를 사용하여 0.5%w/v 용액을 제조하고, 그와 동등한 냄새강도를 보이는 본 발명품의 용액농도를 5 명의 패널 멤버로 구한 결과, 본 발명품에서는 2.6% 로, 본 발명품은 대조에 비하여 해조냄새가 저감되어 있음을 알 수 있었다.
실시예 15
실시예 11 의 본 발명 및 대조인 미역 기부 추출액의 농축액을 사용하여, 표16 에 나타내는 배합표의 미역 기부 추출 음료를 제조하였다.
미역 기부 추출 음료
본 발명품 (%) 대조품 (%)
환원제 처리 미역 기부 추출액 (농축)환원제 무처리 미역 기부 추출액 (농축)트레할로오스1/5 사과 과즙1/5 레몬 과즙비타민 C물 1802.51.70.130.04잔부 0182.51.70.130.04잔부
pH산도 0.1N NaOH/20㎖브릭스 4.03.725.5 4.03.725.5
pH 는 시트르산으로 조정
표 16 의 배합에 의하여 얻어진 각각의 음료는 200㎖ 용량 캔에 충진하고, 15℃ 에서 15 분 동안 가열살균하여 캔제품을 제조하였다. 관능평가는 실시예 7 과 동일하게 하여 실시하였다. 패널 멤버는 10 명으로 5 단계 평가 (1 양호 ∼ 5 불량) 를 이용하여 평균값을 구하였다. 그 결과를 표 17 에 나타낸다.
관능평가
본 발명품 대조품
맛향색조종합 2.62.42.62.5 3.33.42.93.2
표 17 로부터, 본 발명품의 미역 기부 추출물의 농축물을 이용한 음료는 대조품에 비하여 해조냄새가 적고 쓴맛이 없으므로 단맛, 신맛 및 좋은맛의 밸런스가 양호하며, 뒷맛이 깔끔하여 신규한 향미의 해조 음료가 되었다. 대조품은 미역 기부 유래의 해조냄새가 심하고 또한 쓴맛이 혀에 남아 향미 밸런스가 흐트러지고 뒷맛도 나빴다. 또한, 본 발명품은 대조품에 비하여 색조도 양호하였다.
실시예 16
미역 기부의 추출액을 이용한 수프를 제조하였다. 미역 기부 추출액 (농축) 은 실시예 11 의 3% 미역 기부의 추출액을 7.58 배로 농축시킨 것 (22.7% 미역 기부 추출액에 상당) 을 이용하고, 본 발명품은 환원처리한 것, 대조품에는 무처리한 것을 이용하였다. 표 18 에 미역 기부 추출액 (농축) 을 넣은 수프의 배합을 나타낸다. 이 배합에 따라 수프를 제조하고, 200㎖ 캔에 충진하여 120℃, 15 분 동안 가열살균하여 캔 제품으로 하였다. 관능평가는 실시예 7 과 동일하게 하여 실시하였다. 패널 멤버는 10 명으로 5 단계 평가 (1 양호 ∼ 5 불량) 를 이용하여 평균값을 구하였다. 그 결과를 표 19 에 나타낸다.
미역 기부 (농축) 수프의 배합
본 발명품 (%) 대조품 (%)
환원제 처리 미역 기부 추출액(농축)환원제 미처리 미역 기부 추출액(농축)저강도 한천*유청 미네랄포크 엑스설탕후추비타민 C물 1000.250.600.130.100.00050.02잔부 0100.250.600.130.100.00050.02잔부
pH 5.0 5.0
* 이나 식품공업사 제조
pH 는 시트르산 또는 시트르산 나트륨으로 조정
관능평가
수프 항목 종합
맛 향 색조
본 발명품대조품 2.93.6 2.73.7 3.03.3 2.93.5
표 19 로부터, 본 발명품은 대조에 비하여 뒷맛이 좋고 산뜻한 맛으로 마무리되며, 미역 기부 추출액의 향미가 포크 엑스와 잘 어울려, 포크 엑스 단독으로는 맛볼 수 없는 신규한 맛이 되어, 전체의 향미 밸런스를 맞추었다. 대조품은 해조냄새가 남아 포크 엑스와 조화가 흐트러지고, 또한 쓴맛이 약간 남아 향미 전체의 밸런스를 무너뜨리는 경향이 있었다. 이와 같이, 조리 면에서 볼 때, 본 발명품의 미역 기부 추출물은 이 향미의 특성으로 인하여 조미료로서 우수함이 판명되었다. 또한, 색조도 본 발명품은 대조품에 비하여 양호하였다.
실시예 17
뿌려먹는 조미료로서 어분 2.4㎏, 식염 0.5㎏, 글루타민산 소다 0.3㎏ 을 혼합 (합계 3.2㎏) 하고, 본 발명품 및 대조로서 실시예 11 에서 얻어진 미역 기부 추출물의 동결건조물을 상기 뿌려먹는 조미료 1㎏ 당 5g 을 각각 첨가하고, 및 첨가하지 않고 통상적인 방법에 따라 조립하였다. 이들 각각의 조립품 약 3.2㎏ 에 대하여 깨 1.2㎏ 을 잘 혼합하여 제조하였다. 이들 뿌려먹는 조미료를 쌀밥에 뿌리고, 관능평가를 실시예 7 과 동일하게 하여 실시하였다. 그 결과, 본 발명품은 대조에 비하여 어분이나 깨의 향미와 좋은맛이 조화를 이루어, 조미료로서 기능을 가짐을 알 수 있었다. 대조품은 해조냄새가 약간 남아 어분 및 깨의 향의 밸런스를 무너뜨리고, 또한 쓴맛이 입에 약간 남았다. 본 발명품은 종합하여, 뿌려먹는 조미료의 품질을 향상시킴을 알 수 있었다.
실시예 18
뿌려먹는 조미료로서 어분 2.4㎏, 식염 0.5㎏, 글루타민산 소다 0.3㎏ 을 혼합 (합계 3.2㎏) 하고, 본 발명품 및 대조로서의 실시예 11 에서 얻어진 미역 기부 추출물의 동결건조품을 상기 뿌려먹는 조미료 1㎏ 당 5g 을 각각 첨가하고, 및 실시예 14 에서 얻어진 개다시마 유래 푸코이단 1g 을 본 발명품에만 첨가하였다. 이들 뿌려먹는 조미료를 쌀밥에 뿌리고, 관능평가를 실시예 7 과 동일하게 하여 실시하였다. 그 결과, 본 발명품은 대조에 비하여 어분이나 깨의 향미와 좋은맛이 조화를 이루어, 대조품에 비하여 균형잡힌 풍미로, 미역 풍미가 두드러졌다. 양자를 조합하여 뿌려먹는 조미료의 품질이 더욱 향상되었다.
실시예 19
표 20 의 배합으로, 타정기를 이용하여 타정시의 압력 3000㎏/㎠ 로 통상적인 방법에 따라 정과 (錠菓) 를 제작하였다. 본 발명품에는 실시예 14 에서 얻어진 프로테아제 처리 환원 추출 푸코이단을 이용하고, 대조는 실시예 14 에서 얻어진 대조의 푸코이단을 이용하였다. 그 결과, 본 발명품은 입에 머금었을 때 다시마 냄새가 없고, 전체적인 맛의 밸런스가 향상되어 혀의 촉감이 매끄러웠다.
배합표
본 발명품 대조품
대조 푸코이단 (㎎)본 발명 푸코이단 (㎎)덱스트린 (㎎)환원 맥아당 물엿 (㎎)유당 (㎎)카카오 파우더 (㎎)향료 (㎎)자당 지방산 에스테르 (㎎) 0100100715223781965 1000100715223781965
기탁된 생물재료
(1) 기탁기관의 명칭ㆍ수신인명
독립행정법인 산업기술종합연구소 특허생물기탁센터
일본 이바라키켄 츠쿠바시 히가시 1쵸메 1반치 1주오 다이6 (우편번호 305-8566)
(2) 기탁된 미생물
(ⅰ) 알테로모나스 (Alteromonas) 종 SN-1009
원기탁일: 1996 년 2 월 13 일
국제기탁에 대한 이관 청구일: 1996 년 11 월 15 일
수탁번호: FERM BP-5747
(ⅱ) 플라보박테리움 (Flavobacterium) 종 SA-0082
원기탁일: 1995 년 3 월 29 일
국제기탁에 대한 이관 청구일: 1996 년 2 월 15 일
수탁번호: FERM BP-5402
본 발명에 의해 푸코이단, 그 분해물 및 그것들의 염으로 이루어지는 군에서선택되는 1 개 이상을 유효성분으로 함유하는 생체의 항상성 유지제가 제공된다. 이 의약은 상기 유효성분에 의해 생체의 항상성 유지 작용을 발휘하여 간기능 장애의 치료제 또는 예방제, 혈액의 항상성 유지제로 유용하다. 또, 본 발명에 의해 상기 유효성분이 갖는 생체의 항상성 유지 작용을 이용한 식품, 음료 또는 사료가 제공된다.
또한 본 발명은 해조냄새가 저감된 식품 등의 원료로서 유용한 푸코이단 및 해조류 추출물, 고순도이며 고수율의 푸코이단의 제조방법 및 해조류 추출물의 제조방법 및, 그것들의 푸코이단 및/또는 해조류 추출물을 함유하여 이루어지는 식품, 음료, 조미료, 사료, 화장료 및 의약을 제공한다.

Claims (50)

  1. 푸코이단, 그 분해물 및 그의 염으로 이루어지는 군에서 선택되는 1개 이상을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 생체의 항상성 유지제.
  2. 제 1 항에 있어서, 간기능 장애의 치료제 또는 예방제인 생체의 항상성 유지제.
  3. 제 2 항에 있어서, 간기능 장애가 간선유화를 동반하는 질환인 생체의 항상성 유지제.
  4. 제 1 항에 있어서, 혈액의 항상성 유지제인 생체의 항상성 유지제.
  5. 제 4 항에 있어서, 혈당값 상승억제 작용을 갖는 생체의 항상성 유지제.
  6. 제 4 항에 있어서, 혈중 중성 지방값 상승억제 작용을 갖는 생체의 항상성 유지제.
  7. 제 4 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 식사 후에 혈액의 항상성 유지 작용을 갖는 생체의 항상성 유지제.
  8. 푸코이단, 그 분해물 및 그의 염으로 이루어지는 군에서 선택되는 1개 이상을 함유하는 것을 특징으로 하는 생체의 항상성 유지용 식품, 음료 또는 사료.
  9. 제 8 항에 있어서, 간기능 장애의 개선 또는 예방용인 식품, 음료 또는 사료.
  10. 제 9 항에 있어서, 간기능 장애가 간선유화를 동반하는 질환인 식품, 음료 또는 사료.
  11. 제 8 항에 있어서, 혈액의 항상성 유지용 식품, 음료 또는 사료인 식품, 음료 또는 사료.
  12. 제 11 항에 있어서, 혈당값 상승억제 작용을 갖는 식품, 음료 또는 사료.
  13. 제 11 항에 있어서, 혈중 중성 지방값 상승억제 작용을 갖는 식품, 음료 또는 사료.
  14. 제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 식사 후에 혈액의 항상성 유지 작용을 갖는 식품, 음료 또는 사료.
  15. 해조류를 환원성 물질 존재하에서 추출하여 얻어지는 푸코이단.
  16. 제 15 항에 있어서, 환원성 물질이 아스코르브산, 아스코르브산염, 에리소르브산, 에리소르브산염, 시스테인 및 글루타티온으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 이상의 환원성 물질인 푸코이단.
  17. 제 15 항 또는 제 16 항에 있어서, 추출이 온수 또는 용제를 사용하여 실시되는 것인 푸코이단.
  18. 제 15 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 추출이 30℃ 내지 130℃ 에서 5 분간 내지 32 시간 실시되는 것인 푸코이단.
  19. 제 15 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서, 해조류가 미리 프로테아제 처리된 것, 및/또는 추출공정에서 프로테아제 처리되는 것인 푸코이단.
  20. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 푸코이단이 제 15 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 기재된 푸코이단인 생체의 항상성 유지제.
  21. 제 8 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 푸코이단이 제 15 항 내지제 19 항 중 어느 한 항에 기재된 푸코이단인 식품, 음료 또는 사료.
  22. 해조류를 환원성 물질 존재하에서 추출하여 얻어지는 해조류 추출물.
  23. 제 22 항에 있어서, 푸코이단을 함유하여 이루어지는 해조류 추출물.
  24. 제 22 항 또는 제 23 항에 있어서, 환원성 물질이 아스코르브산, 아스코르브산염, 에리소르브산, 에리소르브산염, 시스테인 및 글루타티온으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 이상의 환원성 물질인 해조류 추출물.
  25. 제 22 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서, 추출이 온수 또는 용제를 사용하여 실시되는 것인 해조류 추출물.
  26. 제 22 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 추출이 30℃ 내지 130℃ 에서 5 분간 내지 32 시간 실시되는 것인 해조류 추출물.
  27. 제 22 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서, 해조류가 미리 프로테아제 처리된 것, 및/또는 추출공정에서 프로테아제 처리되는 것인 해조류 추출물.
  28. 제 15 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 기재된 푸코이단 및/또는 제 22 항내지 제 27 항 중 어느 한 항에 기재된 해조류 추출물을 함유하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 식품, 음료, 조미료 또는 사료.
  29. 제 15 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 기재된 푸코이단 및/또는 제 22 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 기재된 해조류 추출물을 함유하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 화장료.
  30. 제 15 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 기재된 푸코이단 및/또는 제 22 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 기재된 해조류 추출물을 유효성분으로 함유하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 의약.
  31. 제 30 항에 있어서, 콜레스테롤 저하용 의약, 혈액 청징용 의약, 항혈액 응고용 의약, 항암용 의약, 항에이즈 바이러스용 의약 또는 항궤양용 의약인 의약.
  32. 해조류를 환원성 물질 존재하에서 추출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 푸코이단의 제조방법.
  33. 제 32 항에 있어서, 환원성 물질이 아스코르브산, 아스코르브산염, 에리소르브산, 에리소르브산염, 시스테인 및 글루타티온으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 이상의 환원성 물질인 푸코이단의 제조방법.
  34. 제 32 항 또는 제 33 항에 있어서, 추출을 온수 또는 용제를 사용하여 실시하는 푸코이단의 제조방법.
  35. 제 32 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서, 추출을 30℃ 내지 130℃ 에서 5 분간 내지 32 시간 실시하는 푸코이단의 제조방법.
  36. 제 32 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서, 해조류를 미리 프로테아제 처리, 및/또는 추출공정에서 프로테아제 처리하는 푸코이단의 제조방법.
  37. 해조류를 환원성 물질 존재하에서 추출하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 해조류 추출물의 제조방법.
  38. 제 37 항에 있어서, 해조류 추출물이 푸코이단을 함유하여 이루어지는 것인 해조류 추출물의 제조방법.
  39. 제 37 항 또는 제 38 항에 있어서, 환원성 물질이 아스코르브산, 아스코르브산염, 에리소르브산, 에리소르브산염, 시스테인 및 글루타티온으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 이상의 환원성 물질인 해조류 추출물의 제조방법.
  40. 제 37 항 내지 제 39 항 중 어느 한 항에 있어서, 추출을 온수 또는 용제를 사용하여 실시하는 해조류 추출물의 제조방법.
  41. 제 37 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항에 있어서, 추출을 30℃ 내지 130℃ 에서 5 분간 내지 32 시간 실시하는 해조류 추출물의 제조방법.
  42. 제 37 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서, 해조류를 미리 프로테아제 처리, 및/또는 추출공정에서 프로테아제 처리하는 해조류 추출물의 제조방법.
  43. 제 32 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 기재된 공정 및/또는 제 37 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항에 기재된 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 식품, 음료, 조미료 또는 사료의 제조방법.
  44. 제 32 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 기재된 공정 및/또는 제 37 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항에 기재된 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료의 제조방법.
  45. 제 32 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 기재된 공정 및/또는 제 37 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항에 기재된 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 의약의 제조방법.
  46. 제 45 항에 있어서, 의약이 콜레스테롤 저하용 의약, 혈액 청징용 의약, 항혈액 응고용 의약, 항암용 의약, 항에이즈 바이러스용 의약 또는 항궤양용 의약인 의약의 제조방법.
  47. 제 15 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 무취성 또는 해조냄새가 저감된 푸코이단.
  48. 제 15 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 무색성 또는 해조 유래의 녹갈색이 저감된 푸코이단.
  49. 제 22 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서, 무취성 또는 해조냄새가 저감된 해조류 추출물.
  50. 제 22 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서, 무색성 또는 해조 유래의 녹갈색이 저감된 해조류 추출물.
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