JPS6157519A - 低粘性フコイダン含有溶液又はフコイダンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、海藻から抽出された高粘性のフコイダン含有
溶液に、β−１・３グルカナーゼ又は／及びプロテアー
ゼを添加して、不純物に出来すると思われる高粘性付与
物質を分解し、フコイダン溶液の粘度を低下させ、作業
性の改善、抽出率の向上及び抽出液より分離したフコイ
ダンの収率及び純度を向上させる方法に関する。

フコイダンは抗脂肪血症活性、抗凝血症活性等の医薬効
果のため、従来、種々の製造法、精製法が提案されてい
る。しかし、フコイダン抽出液は、新鮮な卵白様粘性を
有し、フコースとして０．０２％濃度でも、ワイゼンベ
ルグ効果が見られ、フコースとして０．０４％程度では
、ゴム様粘弾性を呈し、フコイダン抽出後の藻体の分離
、フコイダン抽出液の液移送や、フコイダンの凝集剤や
沈澱剤を添加混合する場合に作業性が悪かった。この作
業性について実例をあげると、フコイダン抽出に際し、
向流抽出や実施例３に示すような繰返し抽出を行う事は
困難であり、又抽出液の一過や、凝集剤等を添加混合す
る時は、更に抽出液に水を加え、原料海藻の６５倍位に
稀釈しなければならず、又フコイダン除去液のエキス化
に際しても、ｆ液の濃縮費が高くなる等、不合理な点が
多かった。

本発明人は、上記欠点を解決する為、種々検討した結果
、フコイダンを含む海藻よりフコイダンを抽出したフコ
イダン含有溶液中に、β−１・３グルカナーゼ又は／及
びプロテアーゼを、添加し溶存させる時は、粘度の低い
フコイダン含有溶液かえられる事、又、得られた低粘性
の溶液から、従来公知のフコイダンの凝集沈澱法、吸着
法等によって、フコイダンを単離する時は高収率で、高
純度の分離フコイダンを分離しうる事を見出し、本発明
を完成した。

次に本発明実施の態様につき、説明する。

原料とする海藻は、フコイダンを含む海藻であれば、特
に限定する必要はないが、フコイダンを多く含む海藻を
例示すれば、こんぶ、わかめ、はんだわら、ひばまた、
あらめ、かじめ、レツンニャ等の褐藻類があげられる。

抽出溶媒としては水、アルカリ溶液、酸溶液又はこれに
ア七トン、メタノール、エタノールを４０％（ｖ／ｖ　
）　以下の低濃度に含有させた溶液を海藻（乾物重に対
して）の４倍以上、通常５〜３０倍量を用いて、抽出す
ればよい。

次に、酵素製剤についてはβ−１・３グルカナーゼを主
成分とする商品として、キタラーゼが、プロテアーゼを
主成分とする商品としてプロテアーゼ「アマノ」が入手
しやすいので、これら酵素を入手する事により容易に実
施する事が出来る。本発明の実施は、上記商品に限定さ
れるのではなく、他の商品又は上記酵素を不純物として
含む他の酵素剤を使用しても、目的を達成出来るし、上
記酵素を生産する命生物、同磨砕物、同粉末又は酵素抽
出液を使用する事も出来る。上記酵素の使用量は、原料
海藻乾物重に対して０．００１重量％（以下単に％と記
す）以上の使用で有効であり、通常０．０１〜１％で十
分である。勿論１％以上使用しても不都合は生じない。

酵素添加の時期は、フコイダンを含む海藻より抽出され
るフコイダン含有溶液中に、添加された酵素が溶存する
ようにして、反応させればよい。

理解を深めるために、更に説明すると、フコイダン抽出
に際して、酵素を添加溶存させる時は、藻体又は／及び
その細片又は／及びその粉末に添加混合しておく方法、
抽出溶媒に添加溶存させておく方法、抽出中に添加溶存
させる方法、抽出終了後に添加溶存させる方法、フコイ
ダン抽出海藻残渣を分離した抽出液、又はこの抽出液を
真空濃縮するか、フコイダン沈澱法・吸着法で、フコイ
ダン区分を分離した後、再溶解するか、一度乾燥した後
再溶解するかして得られる、：れら溶液に添加溶存させ
る方法があり１、何れにしても抽出されたフコイダン含
有溶液に添加されたβ−１・３グルカナーゼ又は／及び
プロテアーゼが溶存すればよい。尚上記したフコイダン
沈澱法・吸着法で分離して、再び水に溶解した後、酵素
を添加して、フコイダンを再回収する方法は、フコイダ
ンの精製法として有効である。

酵素反応条件は、特に限定しないが、温度０〜７０℃、
好ましくは３０〜６５℃、反応時間は５分以上、好まし
くは１０分〜２時間で十分である。

粘度低下はフコイダン濃度の高い程、顕著であり、反応
前の粘度の一以下に達する場合がある。

フコイダン溶液の粘度低下は、高粘度のフコイダン抽出
液を１００℃３０分加熱したり、Ｐ　Ｈ２以下に放置し
て低粘性とした場合、エタノール儂度６０％（Ｖ／Ｖ　
）で凝集させても、モヤモヤした小塊状で、凝集という
より軽い沈澱という状態或は、このような少量の沈澱が
生ずる状態である。

エタノール４５％（Ｖ／Ｖ、）では更に沈澱しにく＼な
る。しかし、本発明の低粘性液は、エタノール濃度４５
％（ｖ／ｖ　）で糸状物のからまった状態、又は塊状に
凝集沈澱し、酵素添加しない高粘性液からの沈澱の場合
と同様の状態を示す。更４こ、分離採取したフコイダン
は、Ｌ−７コース含量から見て、純度が上って居り、且
つフコイダンとじて回収されたＬ−フコース収率が増加
する事から、フコイダンの解重合による粘度低下ではな
く、不純物として含まれる高粘性付与物質の分解による
粘度低下と推定される。

次に、酵素により粘度低下させた抽出液から、フコイダ
ンを分離する時は、フコイダン分離後残るエキスの有効
利用の面から、エタノールを使用するのが望ましく、純
度の高いフコイダンを得るためには、エタノール濃度４
０〜５５％（Ｖ／Ｖ　）として、凝集沈澱させる必要が
ある。６０％（Ｖ／Ｖ）以上では、フコイダン以外の不
純物も沈澱するので、純度低下の原因となる。エタノー
ルに準するものとしては、メタノールイソプロパツール
等極性溶剤の使用も可能である。その他公知のフコイダ
ン分離法としては、アセトン、イソプロパノール、鉄イ
オン、アルミニウムイオン、バリウムイオン、セチルピ
リジウムクロライドや、セチルトリメチルアンモニウム
ブロマイド等による沈澱法、イオン交換樹脂による吸着
の少くとも１つを用いる方法がある。

尚、海藻抽出液は血圧降下剤として知られるラミニンや
甲状腺ホルモンの構成要因として重要な法度その他ミネ
ラルアミノ酸と共に、フコイダンを含む抽出液であり、
保検飲料として飲用する時も解重合のない高分子フコイ
ダンを高濃度に含む状態で容易に飲用出来る等の利点が
得られる。

次に実施例を示す。

釧路厚葉１級こんぶ２に！ｉ＋を細切りし、これに５０
℃の水３０１を加え、時々攪拌しながら３時間抽出し、
残渣と分けてから、遠心分離して清澄な抽出液２１．４
ｋｇ（可溶性固形分３．５４％、フコース０．０８％）
を得た。

上記抽出液を用い、次の実験を行った。尚抽出液は新鮮
な卵白様粘性に加えてゴム様粘弾性があり、Ｂ型粘度計
で粘度測定を行うと、回転子に巻きついて更に回転軸に
添って巻き上るワイゼンベルグ効果が顕著で、測定不能
である。そこで、大穴（＄１．５ｍｍ）　ピペットｌ　
Ｑ　ｃｃを用いて、１Ｑｃｃ吸引し、５　ｃｃ流出する
時間を計測して、比較粘度として表わした。又Ｌ−７コ
ースは、システィン硫酸法により測定した。

実施例１ 抽出液２，０００ｇ（比較粘度１４０秒／　５　ｃｃ　
）に酵素キタラーゼ（β−１・３グル力ナーゼ主体）０
．３．ｌｉ’（対液０．０１５％）を加え、均一に攪拌
しつ一４５℃、９０分作用させた所、粘度は９．８Ｗ５
　ｃｃに低下した。これに９９．５％（Ｖ／Ｖ　）エタ
ノ−／ｕｌ、５８０ｃｃを加え、エタノール濃度４５％
（Ｖ／Ｖ　）として、フコイダンの凝集沈澱を作り、こ
れを液と分離した後ビーカーにとり、更番こ９９．５％
（Ｖ／Ｖ　）エタノール２０ＣＣを加えて、更Ｇこ脱水
した後、６０°０．２　Ｑ　ｈｒｓ乾燥して３．２ｇの
フコイダン（Ｌ−７コース３７．６２％）を得た。抽出
液２０００Ｆ中のし−７コース回収率は７５．２４％と
なる。別に、実施例１のエタノール濃度６０％（Ｖ／Ｖ
　）でフコイダンを凝集沈澱させたフコイタ。

ンはＬ−７コース含量２４．７０％であり、純度力（悪
かった。この時は抽出液２．ＯＯＯ，！ｉＩ中のＬ−７
コ一ス回収率は７７．２％であった。

比較例１ 実施例１に於いてキタラーゼを使用せず、高粘度のま＼
９９．５％（ｖ／ｖ）エタノール１．５８０　ｃｃを加
えて、同様にフコイダン乾燥を行い、３．５９９のフコ
イダン（Ｌ−フコース３３．４３％）ヲ得た、抽出液２
，０００　ｙ中のＬ−７コ一ス回収率は７５、０１％と
なる。

実施例２ 抽出液２，０００ｇ（比較粘度１４０秒／　５　ｃｃ　
）に、プロテアーゼ［アマノＡＪ２ｇ（対１０．１％）
を加え、均一に攪拌しつ＼４５℃、９０分作用させた所
、粘度は１３秒１５ｃｃであった。これに９９．５％（
ｖ／ｖ　）　エタノール１＋　５８０　ｃｃを加え、エ
タノール濃度４５％（Ｖ／Ｖ　’）として、フコイダン
の凝集沈澱を作り、以下、実施例１と同様にして乾燥し
て、３．４６．９のフコイダン（Ｌ−７コース３５．１
０％）を得た。抽出液２．００ｏＩ中のＬ−フコース回
収率は７５．９０％となる。

以上の実験よりキタラーゼ又はプロテアーゼを加えて反
応させる事により粘度が低下し、且つフコース収率の高
いフコイダンが得られる事がわかる。

実施例３ 細切こんぶ１１５．４Ｊを４５％（ｖ／ｖ　）　エタノ
ールで洗浄し、洗浄こんぶを作り、これを４等分して、
その１つを６２５１の６０℃の水に２時間浸漬攪拌し、
フコイダン抽出液と残渣を分離し、フコイダンを抽出し
た。２回目の抽出液は可成り高い粘性を示したので、キ
タラーゼ０．２１を加え、てフコイダンを抽出し、繰返
し４回抽出して比較粘度１３．４　秒７５　ｃｃのフコ
イダン抽出液２７０Ｉ（可溶性固形分９．８２％、Ｌ−
７コース０．４１％）を得た。これに９９．５％（Ｖ／
Ｖ　）エタノール２００−を加え、エコイダンを凝集分
離し、実施例１と同様にしてフコイダン乾物２．．４１
．Ｆ（Ｌ−フコース３５．１３％）を得た。抽出液中の
Ｌ−７コースの回収率は７６．５８％、フコイダンとし
て回収されたフコースは、海藻原料に対して０．７３％
の収率であり、フコイダンの収率及び純度が高いという
メリットが見出された。

比較例２ 実施例３に於て、キタラーゼを使わずに、他は全く同様
に繰返し４回の高粘性（比較粘度２７５秒／　５　ｃｃ
　）の抽出液２６１！ｉ（可溶性固形分９．９６％、Ｌ
−フコース０．３１％）を得た。これに９９．５％（Ｖ
／Ｖ　）のエタノール１９２ｍ１を加え、フコイダンの
凝集沈澱を分離し、実施例１と同様にしてフコイダン乾
物１．９５．９（Ｌ−７コース３０．２６％）を得た。

抽出液からのＬ−フコース回収率は７２．８５％、フコ
イダンとして回収されたＬ−７コースは、こんぶ原料に
対して０．５１％の収率であった。尚この比較例２の場
合抽出液が高粘性のため作業性が悪いという大きな欠点
があった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、フコイダンを含む海藻より得られるフコイダン含有
   溶液にβ−１・３グルカナーゼ又は／及びプロテアーゼ
   を溶存させ、粘度を低下させたフコイダン含有溶液を製
   造するか又は低粘性フコイダン含有溶液から常法により
   フコイダンを採取することを特徴とする低粘性フコイダ
   ン含有溶液又はフコイダンの製造法。 ２、粘度を低下させたフコイダン含有液にフコイダン凝
   集・沈澱剤を添加するか又は、フコイダンをイオン交換
   樹脂に吸着させてフコイダンを単離する特許請求範囲第
   １項記載の 製造法。 ３、粘度を低下させたフコイダン含有液に、凝集沈澱剤
   として、メタノール、エタノール、イソプロパノールを
   加え、容量％で４０〜５５％として、フコイダンを沈澱
   させ、純度を高めたフコイダンを単離する特許請求範囲
   第１項記載の製造法。