KR20020070834A - 폴리히드록시알카노에이트와, 그 생산방법, 및ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산과 그 생산방법 - Google Patents

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Abstract

고 반응성의 디에닐기를 측쇄에 가진 신규한 3-히드록시-디오알칸산을 함유한 PHA와 그 생산방법을 제공한다. 특히, 이하의 화학식 [4]로 표시된 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산과 이하의 화학식 [5]로 표시된 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산을 제공한다. 또한, 발레르산 또는 헥산산을 함유하는 배지에서 배양된 미생물의 균체로부터 PHA를 수집하는 단계를 포함하는 PHA의 생산방법 및 이하의 화학식 [1]로 표시된 신규한 PHA의 제조방법을 제공한다.
(n은 1 내지 9의 정수)

Description

폴리히드록시알카노에이트와, 그 생산방법, 및 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산과 그 생산방법{POLYHYDROXYAIKANOATE AND METHOD OF PRODUCING SAME, AND ω-(2-THIENYLSULFANYL) ALKANOIC ACID AND METHOD OF PRODUCING SAME}
본 발명의 신규한 유형의 폴리에스테르의 폴리히드록시 알카노에이트 (PHA)에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 미생물의 균체내에 PHA를 생산하여 축적가능한 미생물을 사용하여 PHA를 생산하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 미생물의 배양을 위해 적절하게 사용되는 화합물에 관한 것이다.
지금까지, 다수의 미생물이, 폴리-3-히드록시 부티르산 (PHB)과 기타 PHA를 생산하고, 그 균체내에 축적하는 것이 보고되어 있다(문헌「"생분해성 플라스틱 핸드북", 생분해성 플라스틱 연구회편, (주) 엔 티이 에스, P178-197 (1995)」. 이들 폴리머는, 종래의 플라스틱과 마찬가지로, 용융가공 등에 의해 각종 제품의 생산을 위해 이용할 수 있다. 또한, 이들 폴리머는, 생분해성이 있기 때문에 자연계에서 미생물에 의해 완전분해된다고하는 이점이 있고, 따라서 종래의 다수의 합성고분자 화합물의 경우에서와 같이 자연환경에 그대로 잔류하여 오염을 발생하게 하는 가능성이 없다. 이들 생분해성 고분자화합물은 우수한 생체적합성을 가지고, 또한 의료용 연질부재 등으로서 이들의 응용도 기대되고 있다.
이 미생물생산PHA는, PHA의 생산에 이용되는 미생물의 종류, 배양조성, 배양조건 등에 의해 다양한 조성과 구조를 가질 수 있는 것이 알려져 있고, 주로 PHA의 특성의 개량이라고 하는 관점에서 미생물의 조성과 구조의 제어에 대한 연구가 이루어지고 있다.
[1] 우선, 3-히드록시 부티르산 (이하, 3HB로 칭함) 등의 상대적으로 단순한 구조를 가진 모노머유닛을 고중합화함으로써, 얻은 생합성 PHA는,
(a) 3HB 및 3-히드록시 발레르산 (이하, 3HV로 칭함)을 함유하는 PHA (일본국 특공평 6-15604호 공보, 동 7-14352호 공보, 동 8-19227호 공보 및 일본국 특개평 5-7492호 공보)와;
(b) 3HB 및 3-히드록시 헥산산 (이하, 3HHx로 칭함)를 함유하는 PHA (일본국 특개평 5-93049호 공보 및 동 7-265065호 공보)
(c) 3HB 및 4-히드록시 부티르산 (이하, 4HB)를 함유하는 PHA (일본국 특개평 9-191893)와;
(d) 6 내지 12개의 탄소원자를 가진 3-히드록시 알카노에이트를 함유한 PHA (일본국 특허번호 제 2642937호)와;
(e) 탄소원으로서 단일의 지방산을 사용하여 생합성한 PHA ( 이 생산물은 상기 항목 (d)와 거의 동일함) (문헌「Appl. Environ. Microbiol, 58 (2), 746 (1992))
을 포함한다.
이들은 모두, 당류로부터의 지방산의 합성 즉, "통상의 PHA" 또는 미생물에 의한 탄화수소의 β산화에 의해 합성되고 측쇄에 알킬기를 각각 가진 모노머유닛으로 구성된다.
[2] 그러나, 이 미생물생산PHA의 넓은 적용범위를 고려하면, 기능의 폴리머로서의 적용예에 대해서는, 측쇄에 도입된 알킬기이외의 치환기를 가진 PHA 즉, "통상의 PHA"가 매우 유용하다는 것이 기대된다. 치환기의 예로서는 방향환 (페닐기 페녹시기 등), 불포화 탄화수소, 에스테르기, 알릴기, 시아노기, 할로겐화 탄화수소 및 에폭사이드를 함유하는 기가 있다. 이들 중에서, 특히 방향환을 가진 PHA가 집중적으로 연구되고 있다.
(a) 페닐기 또는 부분치환를 가진 PHA.
매트릭스로서 5-페닐 발레르산을 사용하여, 슈도모나스 올레오보란이 3-히드록시-5-페닐 발레르산을 유닛으로서 함유하는 PHA를 생산하는 것에 대하여, 문헌「Macromol. Chem., 191, 1957-1965 (1990) and Macromolecules, 24, 5256-5260 (1991)」에 보고되어 있다.
매트릭스로서 5-(4'-토릴) 발레르산을 사용하여, 슈도모나스 올레오보란이 3-히드록시-5-(4'-토릴) 발레르산을 유닛으로서 함유하는 PHA를 생산하는 것에 대하여, 문헌「Macromolecules, 29, 1762-1766 (1996)」에 보고되어 있다.
매트릭스로서 5-(2', 4'-디니트로페닐) 발레르산을 사용하여, 슈도모나스 올레오보란이 3-히드록시-5-(2', 4'-디니트로페닐) 발레르산과 3-히드록시-5-(4'-니트로페닐) 발레르산을 유닛으로서 함유하는 PHA를 생산하는 것에 대하여, 문헌「Macromolecules, 32, 2889-2895 (1999)」에 보고되어 있다.
(b) 페녹시기 또는 부분치환페녹시기를 함유한 PHA.
매트릭스로서 11- 페녹시 운데실산을 사용하여, 슈도모나스 올레오보란이 3-히드록시-5-페녹시 발레르산과 3-히드록시-9-페녹시 노난산의 PHA공중합체를 생산하는 것에 대하여, 문헌「Macromol. Chem. Phys.,195, 1665-1672 (1994)」에 보고되어 있다.
일본국 특허 제 2989175호에는, 3-히드록시-5-(모노플루오르페녹시) 펜타노에이트 (3H5(MFP)P) 유닛 또는 3-히드록시-5-(디플루오르페녹시)펜타노에이트(3H5(DFP)P)유닛으로 구성된 단독중합체 및 적어도 3H5(MFP)P 유닛 또는 3H5(DFP)P 유닛을 적어도 함유하는 공중합체와; 이들 중합체를 합성하는 슈도모나스 푸티다와; 슈도모나스를 사용하여 상기 설명한 중합체를 생산하는 방법에 관한 발명이 개시되어 있고, 또한 그 효과로서, 치환기를 가진 장쇄의 지방산은, 측쇄단이 1 또는 2개의 불소원자로 치환되고 페녹시기를 가진 중합체를 합성하도록 동화시킬 수 있고, 또한 입체규칙성과 발수성은 고융점과 양호한 처리성을 유지하면서 부여된다.
불소기로 치환된 상기 물질이외에 시아노기와 니트로기로 치환되는 물질에 관한 연구가 행해지고 있다.
매트릭스로서 옥탄산과 p-시아노페녹시 헥산산 또는 p-니트로페녹시 헤산산을 사용하여, 3-히드록시-p-시아노페녹시 헥산산 또는 3-히드록시-p-니트로페녹시 헥산산을 모노모로서 함유하는 PHA를 생산하기 위해, 슈도모나스 올레오보란 ATCC 29347 및 슈도모나스 푸티다 KT 2442 스트레인이 사용되는 것에 대하여 문헌「Can. J. Microbiol., 41, 32-43 (1995) and Polymer International, 39, 205-213 (1996)」에 보고되어 있다.
상기 보고된 PHA의 각각은, 알킬기를 측쇄로서 가진 통상의 PHA와 달리 방향환을 측쇄로서 각각 가지고 또한 PHA로부터 유래하는 특성을 가진 중합체를 얻는데 있어 유용하다.
[3] 또한, 신규한 범주로서, 적절한 작용기를 측쇄에 가진 PHA를 생산하는것을 목적으로 하고 또한 특성을 단지 변경하는 것을 초월하여 신규한 기능을 생성하는 작용기를 사용하는 것을 목적으로 하여 연구가 행하고 있다.
측쇄단에 비닐기를 가진 유닛을 함유하는 PHA를 합성한 후에, 산화제로 에폭시화함으로써, 측쇄단에서 고 반응성을 가진 에폭시기를 함유하는 PHA를 합성할 수 있는 것에 대하여, 문헌「Macromolecules, 31, 1480-1486 (1996) and Journal of Polymer Science: Part A: Polymer Chemistry, 36, 2381-2387 (1998)」에 보고되어 있다.
또한, 고반응성을 가진 것으로 기대되는 다이오에테르를 가진 유닛을 함유한 PHA의 합성예로서는, 11-(페닐설파닐) 발레르산을 매트릭스로서 사용하여, 슈도모나스 푸티다 27N01 스트레인이 3-히드록시-5-(페닐설파닐) 발레르산과 3-히드록시-7-(페닐설파닐) 헵탄산의 PHA 공중합체를 생산하는 것에 대하여, 문헌「Macromolecules, 32, 8315-8318 (1999)」에 보고되어 있다.
상기 PHA 중에서 측쇄에 S원자를 가진 3-히드록시-(페닐설파닐) 알칸산 유닛을 함유하는 PHA에 대해서는, 앞으로는 고반응성의 관점에서 기능적인 PHA을 개발하는 데 연구를 더욱 집중하여야 할 것으로 기대된다. 그러나, 이러한 유형의 PHA에 대한 연구가 별로 없었으므로, 이와 같은 PHA에 관해 보고된 건은 상기한 건에 불과하다. 또한, 이와 같이 얻은 PHA의 측쇄를 화학적으로 수정함으로써 기능적인 PHA를 개발하기 위해서는, PHA가 디에닐기 등의 페닐기보다 높은 반응성을 지닌 측쇄를 가지는 것이 바람직하지만, 상기 PHA의 생산의 어떤 경우도 아직 보고되어 있지 않다.
본 발명의 목적은, 상기 문제점에 비추어, 신규한 PHA와 그 제조방법을 제공하는 데 있다.
도 1은 제 1실시예에서 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산의 합성에 대한 처음부분(1/2)의 상세 흐름도.
도 2는 제 1실시예에서 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산의 합성에 대한 나중부분(2/2)의 상세 흐름도.
도 3은 제 1실시예에서 얻은 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산의1H-NMR 스펙트럼을 도시하는 도면.
도 4는 제 2실시예에서 얻은 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산의1H-NMR 스펙트럼을 도시하는 도면.
도 5는 제 3실시예에서 얻은 폴리머의1H-NMR 스펙트럼을 도시하는 도면.
도 6은 제 6실시예에서 얻은 폴리머의1H-NMR 스펙트럼을 도시하는 도면.
본 발명자는 상기한 문제점을 해결하고 다음의 발명을 달성하기 위한 연구가 집중적으로 이루어졌다. 특히, 본 발명의 제 1측면은,
다음의 화학식 [1]로 표시한 유닛을 가지고;
여기서 n은 1 내지 9의 정수를 나타내는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시 알카노에이트 자체이다.
또한, 본 발명의 폴리히드록시알카노에이트는, 상기 화학식 [1]로 표시한 유닛이외의 유닛은,
여기서, m은 0 내지 8의 정수를 나타내고, 상기 화학식 [2]로 표시한 유닛과;
여기서, l은 3 또는 5를 나타내고, 상기 화학식 [12]로 표시한 유닛 중의 적어도 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트이다.
본 발명에 의해 얻은 폴리히드록시알카노에이트는, 10,000 내지 1,000,000의 범위내의 수평균 분자량을 가진 폴리히드록시알카노에이트이다.
또한, 본 발명에 의해 얻은 폴리히드록시알카노에이트는, 다수의 잠재적인 입체이성질체를 설명하는 화학식 [1], [2] 및 [12]에 도시된 바와 같이 비대칭 탄소원자를 가진다.
그러나, 본 발명에 의한 제조방법은, 미생물을 사용하여 폴리히드록시알카노에이트를 생산하고, 또한 3-히드록시알칸산 모노머 유닛이 모두 R형상인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 제 2측면은, 하기의 화학식 [3]으로 표시된 화합물을 함유하는 배지에서 미생물이 배양되고,
여기서 k는 3 내지 11의 정수를 나타내는 것을 특징으로 하는 상기 설명한 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법이다.
보다 상세하게는,
상기의 화학식 [4]로 표시된 5-(2-디에틸설파닐) 발레르산, 또는
상기의 화학식 [5]로 표시된 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산을 함유하는 배지에서 미생물이 배양되는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법이다.
본 발명의 제 3측면은, 하기의 화학식 [11]에 의해 표시되는 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산으로서,
여기서 k는 4 내지 11의 정수를 나타내고, 본 발명의 폴리히드록시알카노에이트의 생산을 위해 필요한 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산 자체이다.
본 발명에서 사용되고 하기의 화학식 [11] (이 화학식중에서, k는 4내지 11을 나타냄)으로 표시하는 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산을 제조하는 방법으로서,
브로모알칸산, 브로모알칸산 에스테르 (브로모알카노에이트로 칭함)유도체, 브로모알칸올, 디브로모알칸 및 락톤 중의 어느 하나를 다이오핀-2-다이올과 반응하는 단계를 포함한다.
본 발명에서 사용되는 미생물 및 그 배양방법에 대하여 이하 설명한다.
(미생물)
본 발명의 방법에서 사용되는 미생물은, 화학식 [1]에 의해 표시된 유닛을 함유하는 폴리히드록시알카노에이트를 생산하기 위해 화학식 [3]으로 표시된 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산을 함유하는 배지에서 배양되면 어떤 미생물이어도 되지만, 그 일례로서 슈도모나스 속 (Pseudomonas sp)에 속하는 미생물이 있다. 보다 상세하게는, 이들 미생물은 슈도모나스 치코라이 YN2주 (Pseudomonas cichorii YN2; FERM BP-7375), 슈도모나스 치코라이 H45주 (Pseudomonas cichorrii H45; FERM BP-7374), 슈도모나스 제세나이 P161주 (Pseudomonas jessenii P161; FERM BP-7376)을 포함한다. 이들 3유형의 미생물은 산업기술종합연구소(AIST)의 국제기탁기관(IPOD)(통상산업성 공업기술원 생명공학공업 기술연구소)에 기탁되어 있고, 또한 일본국 특개평 2001-178484호 공보에 설명되어 있다.
YN2주, H45주 및 P161주에 관한 상세가 이하 제공된다.
[YN2주의 균학적 성질]
(1) 형태학적 성질
세포의 형태 및 크기: 로드, 0.8㎛ × 1.5 내지 2.0㎛
세포의 다형성: 음성
운동성: 양성
홀씨형성: 음성
그램염색: 음성
콜로니형상: 원형; 가장자리전체가 매끄러움; 낮은 볼록형상; 매끄러 운 표면; 광택; 반투명
(2) 생리학적 성질
카탈라제: 양성
옥시다제: 양성
O/F시험: 비발효성
니트레이트 환원: 음성
인돌산생: 양성
글루코우스로부터의 산의 생산: 음성
아르기닌 디하드롤라제: 음성
요소분해요소: 음성
에스쿨린 가수분해: 음성
젤라틴 가수분해: 음성
β갈락토시다제: 음성
King's B 한천에서의 형광색산생: 양성
4%NaCl에서의 생육: 양성(약)
폴리-p-하이드록시부티레이트의 축적: 음성(*)
Tween 80의 가수분해: 양성
(*) 영양한천 위에 배양된 콜로니를 수단블랙으로 염색하여 판정하였다.
(3) 기질자화능
글루코우스: 양성
L-아라비노스: 양성
D-마노스: 음성
D-마니톨: 음성
N-아세틸-D-글루코사민: 음성
말토우스: 음성
포타슘 글루코네이트: 양성
n-카프레이트: 양성
아디페이트: 음성
dl-말레이트: 양성
소듐 시트레이트: 양성
페닐 아세테이트: 양성
[H45주의 균학적 성질]
(1) 형태학적 성질
세포의 형태 및 크기: 로드, 0.8㎛ × 1.0 내지 1.2㎛
세포의 다형성: 음성
운동성: 양성
홀씨형성: 음성
그램염색: 음성
콜로니형상: 원형; 가장자리전체가 매끄러움; 낮은 볼록형상; 매끄러 운 표면; 광택; 크림색
(2) 생리학적 성질
카탈라제: 양성
옥시다제: 양성
O/F시험: 비발효성
니트레이트 환원: 음성
인돌생산: 음성
글루코우스로부터의 산의 생산: 음성
아르기닌 디하드롤라제: 음성
요소분해요소: 음성
에스쿨린 가수분해: 음성
젤라틴 가수분해: 음성
β갈락토시다제: 음성
King's B 한천에서의 형광색생산: 양성
4%NaCl에서의 생육: 음성
폴리-β-하이드록시부티레이트의 축적: 음성
(3) 기질자화능
글루코우스: 양성
L-아라비노스: 음성
D-마노스: 양성
D-마니톨: 양성
N-아세틸-D-글루코사민: 양성
말토스: 음성
포타슘 글루코네이트: 양성
n-카프레이트: 양성
아디페이트: 음성
dl-말레이트: 양성
소듐 시트레이트: 양성
페닐 아세테이트: 양성
[P161주의 균학적 성질]
(1) 형태학적 성질
세포의 형태 및 크기: 구형상, Φ0.6㎛ 로드, 0.6㎛× 1.5 내지 2.0pm
세포의 다형성: 연장된 형상
운동성: 양성
홀씨형성: 음성
그램염색: 음성
콜로니형상: 원형; 가장자리전체가 매끄러움; 낮은 볼록형상; 매끄러 운 표면; 광택; 페일 옐로우
(2) 생리학적 성질
카탈라제: 양성
옥시다제: 양성
O/F시험: 비발효성
니트레이트 환원: 양성
인돌생산: 음성
글루코우스로부터의 산의 생산: 음성
아르기닌 디하드롤라제: 양성
요소분해요소: 음성
에스쿨린 가수분해: 음성
젤라틴 가수분해: 음성
β갈락토시다제: 음성
King's B 한천에서의 형광색생산: 양성
(3) 기질자화능
글루코우스: 양성
L-아라비노스: 음성
D-마노스: 양성
D-마니톨: 양성
N-아세틸-D-글루코사민: 양성
말토스: 음성
포타슘 글코네이트: 양성
n-카프레이트: 양성
아디페이트: 음성
dl-말레이트: 양성
소듐 시트레이트: 양성
페닐 아세테이트: 양성
(배양처리)
본 발명에 의한 PHA의 생산방법에 사용하는 미생물의 정상배양에 대해서는, 예를들면 PHA의 생산 및 활성상태에 필요한 셀의 수를 보장하는 증식 및 군체균주의 준비, 사용될 미생물의 증식을 위해 필요한 성분을 함유하는 배양지를 적절하게 선택된다. 미생물의 성장 및 생존에 악영향을 주지 않는 경우에는, 예를 들면, 영양원을 내부에 첨가된 일반적인 자연 배지(부용배지, 이스트추출물 등) 및 합성배지 등의 어떤 유형의 배지를 사용하여도 된다. 온도, 탄산가스포화(aeration) 및 교반 등의 배양조건은 사용된 미생물에 따라서 적절하게 선택된다.
상기한 바와 같은 PHA생산의 미생물을 사용하여 소망의 폴리히드록시알카노에이트를 생산하기 위해서는, 모노머 유닛에 대응하고 상기 화학식 [3]으로 표시되는 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산을 적어도 함유하는 베이설 솔트 배지 (basal salt medium)와 PHA의 생산에 필요한 소스재료로서 미생물의 성장을 위한 카본의 소스 등이 사용될 수 있다. 배지에서 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산의 함유량은 0.01 내지 1%(w/v) 이고 바람직하게는 0.02 내지 0.2%인 것이 바람직하다.
수용성의 알칸산은 그다지 좋지는 않지만, 본 발명의 미생물을 사용하는 한,현탁되는 경우에도 어떤 문제점도 나타나지 않는다. 또한, 어떤 경우에는, 1-헥사데신 또는 n-헥사데칸 등의 용매에 용해되거나 현탁되는 형태로 배양지에 함유될수 있다. 이 경우에는 배지용액의 상기 용매의 농도는 38%이하로 되어야 한다.
성장을 위한 카본의 소스에 대해서는, 이스트 추출물, 폴리펩톤 및 미트추출물(meat extract) 등의 영양물이 사용될 수 있고, 적절한 화합물은, 사용될 균주의 매트릭스로서 유용한 관점에서, 당류, TCA 사이클의 매개자로서 생산되는 유기산 및 단일 또는 두 단계의 생화학반응을 통하여 생산된 유기산 또는 그 염, 4 내지 12 카본원자를 가진 선형 알칸산 또는 그 염으로부터 적절하게 선택될 수 있다.
그 중에서, 당류에 대해서는, 글리세로알데히드, 에리드로스, 아라비노스, 자일로스, 포도당, 갈락토우스, 마노우스, 과당 등의 알도스류와;
글리세롤, 에리드리톨, 자일리톨 등의 알디톨류와;
글루콘산 등의 알돈산류와;
글루쿠론산과 갈락투론산 등의 우론산류와;
맥아당, 수크로오스, 젖당 및 셀로바이오스 등의 이당류
로부터 선택된 한 개 이상의 화합물을 적절하게 사용될 수 있다.
또한, 유기산 또는 그 염에 대해서는, 적적한 예로서, 피루르산, 옥살라세트산, 시트르산, 이소시트르산, 케토글루타르산, 숙신산, 푸마르산, 말산, 유산 등이 있고, 또는 그 염으로부터 선택된 한 개 이상의 화합물을 적절하게 사용하여도 된다.
또한, 아미노산 또는 그 염에 대해서는, 글루탐산, 아스파르트산 및 그 염으로부터 선택된 한 개 이상의 화합물이 적절하게 사용될 수 있다.
이들 중에서, 폴리펩톤과 당류를 바람직하게 사용할 수 있고, 또한 당류중에서, 포도당, 과당 및 마노우스로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 한 종류의 당류가 보다 바람직하다. 각각의 배지의 상기 매트릭스의 함유량은 일반적으로 0.1 내지 5%(w/v)인 것은 바람직하고, 0.2% 내지 2%(w/v)인 것은 더욱 바람직하다.
일예를 들면, 화학식 [3]등으로 표시된 대략 0.01 내지 1.0%의 ω-(2-디에눌설파닐) 알칸산과 대략 0.1 내지 0.5%의 D-글루코우스를 함유하는 무기배지에서 미생물이 배양되고 또한 대수적인 성장 페이스로부터 정지 페이스까지의 기간 동안 균체가 수집됨으로써, 소망의 PHA가 추출될 수 있다. 동일양의 이스트 추출물이 D-글루코우스 대신에 제공될 수 있다.
미생물이 PHA를 생산하여 축적하는 방법에 대해서는, 미생물의 성장이 충분히 완료된 후, 낮은 레벨로 제한되는 염화암모늄 등의 질소원의 함량을 가진 다른 배지로 균체를 옮기고, 소망의 유닛을 가진 소망의 매트릭스를 형성하는 화합물로 미생물을 재배하는 경우, 생산성이 개선될 수 있다. 특히, 다단계의 연결된 상기한 처리를 가진 다단계 방법이 채택될 수 있다. 예를 들면, 대수적인 성장 페이스로부터 정지 페이스까지의 기간 동안 화학식 [3]으로 표시된 대략 0.01 내지 10%의 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산과 대략 0.1 내지 5.0%의 D-글루코우스를 함유하는 무기 배지에서 미생물을 배양하는 방법이 있고, 셀은 원심분리 등에 의해 수집된 다음 낮은 레벨 또는 0 레벨로 제한된 질소원의 함량을 가지고 화학식 [3]으로 표시된 대략 0.01 내지 10%의 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산을 함유하는 무기 배지에서 미생물을 배양한다.
배양 온도는 상기한 균주가 적절하게 성장될 수 있으면 어떤 온도로 되어도되고, 또한 적절한 온도는 예를 들면 15 내지 40℃이고, 바람직하게는 20 내지 35℃이고, 더욱 바람직하게는 20 내지 30℃이다.
미생물이 성장하여 PHA를 생산하게 하는 액체 배양과 고체 배양 등의 어떤 배양 방법도, 배양을 위해 사용하여도 된다. 또한 어떤 유형의 배양도 배치 배양(batch culture), 페드배치 배양(fed-batch culture), 반계속 배양, 계속 배양을 사용할 수 있다. 액체 배양의 형태에 대해서는, 진동 플라스크로 진동하여 산소를 공급하는 방법과 자 퍼멘터 (jar fermenter)에 의해 교반용 탄산가스포화처리 시스템 (stirring aeration system)을 사용하여 산소를 공급하는 방법이 있다.
상기한 방법에 사용되는 베이설 솔트 배지 (basal salt medium)는 인의 소스 (즉, 인산염 등), 질소의 소스 (즉, 암모늄 솔트, 질산염 등) 등으로서 미생물의 성장에 필요한 성분을 함유한 어떤 매체이어도 되고, 이와같은 배지의 예는 예를 들면 MSB 배지와 M9배지를 포함한다.
본 발명의 한 방법에 사용된 미너럴 배지(M9배지)의 구성은 다음과 같다.
[M9 배지]
Na2HPO46.2g
KH2PO43.0g
NaCl 0.5g
NH4CL 1.0g
(배지의 리터당 pH 7.0)
또한, PHA의 바람직한 성장과 생산에 대하여는, 이하 나타낸 소수의 성분 용액의 약 0.3%를 첨가할 필요가 있다.
[소수의 성분 용액]
니트릴로트리아세트산: 1.5; MgSO4: 3.0;
MnSO4: 0.5; NaCl: 1.0; FeSO4: 0.1;
CaCl2: 0.1; CoCl2: 0.1; ZnSO4: 0.1;
CuSO4: 0.1; AlK(SO4)2: 0.1
H3BO3: 0.1; Na2MoO4: 0.1; NiCl2: 0.1
(배지의 리터당, pH 7.0)
본 발명에 의한 배양용액으로부터 PHA를 얻기 위하여, 일반적으로 사용되는 방법이 적용된다. PHA가 배양용액으로 분비되는 경우에는 PHA를 배양액으로부터 추출하여 정화하는 방법이 사용되고, 또한 PHA가 셀에 축적되는 경우에는 PHA를 셀로부터 추출하여 세정하는 방법이 사용된다. 예를 들면, 미생물의 배양된 균체로부터 PHA를 수집하기 위해서는, 일반적으로 수행되는 클로로포름 등의 유기용매에 의한 추출이 가장 편리하지만, 디옥산, 테트라히드로푸란, 아세토니트릴 또는 아세톤을 클로로포름대신에 사용하여도 된다. 또한, 어떤 유기용매의 사용도 바람직하지 않은 환경에서는, SDA 등의 표면활성제에 의한 처리, 라이소자임 등의 효소에 의한 처리 또는 균체의 성분을 제거하는 EDTA 등의 시약에 의한 처리를 사용하여 PHA이외의 균체성분을 제거하는 방법을 채택함으로써, PHA만을 수집할 수 있다.
(카르복실산 유도체)
본 발명에 사용되는 카르복실산 유도체에 대하여는, 화학식 [3]으로 표시된 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산이 사용된다. 카르복실산 유도체 중에서, 화학식 [11]로 표시된 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산은 신규한 화합물이다.
화학식 [11]에서 k=ω(ω는 4 내지 11의 정수)를 가진 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산의 생산방법은 다음을 포함한다.
1-1. 다이오핀-2-다이올을 ω-브로모 알칸산과 반응하여 화학식 [11]로 표시된 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산을 얻는 방법.
1-2. 다이오핀-2-다이올을 ω브로모 알칸산 에스테르("알카노에이트"로 칭함)와 반응하여 ω-(2-디에닐설파닐) 알카노에이트를 합성한 다음에, 에스테르를 가수분해함으로써, 화학식 [11]로 표시된 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산을 얻는 방법.
1-3. 다이오핀-2-다이올을 ω-브로모-1-알칸올과 반응하여 ω-(2-디에닐설파닐)-1-알칸올을 합성한 다음에 이를 산화함으로써, 화학식 [11]로 표시된 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산을 얻는 방법.
1-4. 다이오핀-2-다이올을 1,ω-다이브로모알칸과 반응하여 2-[(ω-브로모알킬) 설파닐] 다이오핀을 합성한 다음에, 금속마그네슘을 사용하여 그리그나드 시약 (Grignard reagent)을 준비하고, 탄산가스를 첨가함으로써, 화학식 [11]로 표시된ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산을 얻는 방법.
1-5. 다이오핀-2-다이올을 락톤과 반응하여 화학식 [11]로 표시된 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산을 얻는 방법.
상기 설명한 방법에 대하여 명확하게 설명한다.
우선, 화학식 [4]로 표시된 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산의 생산방법에 대하여 이하 설명한다.
2-1. 다이오핀-2-다이올을 5-브로모 발레르산과 반응하여 화학식 [4]로 표시된 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산을 얻는 방법.
2-2. 다이오핀-2-다이올을 5-브로모 발레레이트와 반응한 다음에, 에스테르를 가수분해함으로써, 화학식 [4]로 표시된 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산을 얻는 방법.
2-3. 다이오핀-2-다이올을 5-브로모-1-펜탄올과 반응하여 5-(2-디에닐설파닐)-1-펜탄올을 합성한 다음에, 이를 산화함으로써, 화학식 [4]로 표시된 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산을 얻는 방법.
2-4. 다이오핀-2-다이올을 1,4-다이브로모부탄과 반응하여 2-[(4-브로모부틸) 설파닐] 다이오핀을 합성한 다음에, 금속 마그네슘을 사용하여 그리그나드 시약을 준비하고 탄산가스를 첨가함으로써, 화학식 [4]로 표시된 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산을 얻는 방법.
2-5. 다이오핀-2-다이올을 δ-발레롤락톤과 반응하여 화학식 [4]로 표시된 5-(2-디에닐설파닐) 발레르 산을 얻는 방법.
화학식 [5]로 표시된 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산의 제조방법에 대하여 이하 설명한다.
3-1. 다이오핀-2-다이올을 6-브로모 헥산산과 반응하여 화학식 [5]로 표시된 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산을 얻는 방법.
3-2. 다이오핀-2-다이올을 6-브로모 헥사노에이트와 반응하여 6-(2-디에닐설파닐)헥사노에이트를 합성한 다음에, 이를 산화함으로써, 화학식 [5]로 표시된 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산을 얻는 방법.
3-3. 다이오핀-2-다이올을 6-브로모-1-핵산올과 반응하여 6-(2-디에닐설파닐)-1-헥산올을 합성한 다음에, 이를 산화함으로써, 화학식 [5]로 표시된 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산을 얻는 방법.
3-4. 다이오핀-2-다이올을 1,5-다이브로모펜탄과 반응하여 2-[(5-브로모펜틸) 설파닐] 다이오핀을 합성한 다음에, 금속마그네슘을 사용하여 그리그나드 시약을 준비하고 탄산가스를 첨가함으로써, 화학식 [5]로 표시된 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산을 얻는 방법.
3-5. 다이오핀-2-다이올을 ε-카프롤락톤과 반응하여 화학식 [5]로 표시된 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산을 얻는 방법.
또한, 본 발명에 의한 미생물의 배양, 본 발명의 미생물에 의한 PHA의 생산 및 셀에서의 PHA의 축적, 본 발명의 셀로부터의 PHA의 수집 및 화학식 [11]로 표시된 카르복실산 유도체의 생산은 상기한 방법에 제한되는 것은 아니다.
이하 실시예에 대해 설명한다. 또한, 다음의 설명에 기재된 "%"는 별도의명세가 없는 한 중량 %를 말한다.
(실시예)
(제 1 실시예) 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산
5-(2-디에닐설파닐) 발레르산의 합성에 대해서는, 다이오핀-2-다이올을 에틸 5-브로모발레레이트와 반응하여 에틸 5-(2-디에닐설파닐) 발레레이트를 합성한 다음에, 단부에서 에틸 에스테르를 가수분해함으로써, 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산을 얻었다. 이 반응의 상세에 대해서는 도 1과 도 2에 도시된 합성 흐름 시트에 따라서 반응을 행하였다. 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 39g를 다이오핀-2-다이올 24.3g로부터 수집하고, 그 수율은 83%이었다. 이와 같이 얻은 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산의 구조는1H-NMR (FT-NMR: 브루커 DPX 400;1H 공명주파수: 400 MHz; 측정된 핵종:1H; 사용된 용매: CDCl3; 레퍼런스: TMS/CDCl3를 함유한 모세관; 측정온도: 실온)에 의해 결정되었다.1H-NMR 스펙트럼 차트를 도3에 도시한다. 또한, 이하의 화학식 [6]에 표시된 각 수소원자의 귀속을 표 1에 나타낸다(1H-NMR).
1H-NMR의 귀속결과
ppm 적분치 분열 귀속
1.64-1.80 4H m b,c
2.35-2.39 2H t a
2.78-2.82 2H t d
6.96-6.98 1H d,t f
7.11-7.12 1H d,d e
7.33-7.35 1H d,d g
(제 2 실시예) 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산
네 개의 포트를 가진 둥근 플래스크에 탈수된 아세톤 240mL을 넣고, 여기에 탄산칼륨 15.21g(0.11몰)를 첨가한 다음에 질소 분위기에서 교반하였다. 이 용액에 요오드화 나트륨 9.00g(0.06몰)과 다이오핀-2-다이올 8.14g(0.07몰)을 첨가한 다음에, 질소 분위기에서의 실온에서 적절하게 교반하였다. 또한 여기에 에틸 6-브로모헥사노에이트13.39g(0.06몰)를 첨가한 다음 19시간동안 65℃에서 가열 환류를 행하였다.
반응 후에, 회전식 증발기를 사용하여 아세톤을 증발시키고 클로로포름으로 추출을 행하고 물을 첨가하여 용액을 페이스로 분류하고 유기 페이스를 무수 황산마그네슘으로 탈수한 다음에, 회전식 증발기를 사용하여 클로로포름을 증발하고 진공펌프로 건조하여 조야의 에틸 6-(2-디에닐설파닐) 헥사노이트 17.56g를 얻었다.
이와 같이 얻은 조야의 에틸 6-(2-디에닐설파닐)을 정제하지 않고 다음의 가수반응을 행하였다.
이와 같이 얻은 조야의 에스테르 17.56g를 에탄올과 물을 1:9의 체적비로 혼합한 혼합물 300mL에 용해하고 수산화칼륨 10배몰을 첨가하고 4시간동안 빙욕으로 반응을 행하였다.
반응용액을 대략 0.1M 염산수용액2L에 부어넣어서 산성화 하였다. 톨루엔으로 추출을 행하고 유기 페이스를 무수 황산마그네슘으로 탈수한 다음에, 회전식 증발기를 사용하여 톨루엔을 증발하였다. 이와 같이 얻은 조야의 6-(2-다디에닐다이오) 헥산산을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(현상용매: 클로로포름 : 메탄올 = 20 : 1)에 의해 정제하여 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산 7.21g를 얻었다.
전체 생산량은 에틸 6-브로모헥사노에이트의 주성분에 대해서 52.2%이었다.
이와 같이 얻은 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산의 구조는1H-NMR (FT-NMR: 브루커 DPX 400;1H 공명주파수: 400 MHz; 측정된 핵종:1H; 사용된 용매: CDCl3; 레퍼런스: TMS/CDCl3를 함유한 모세관; 측정온도: 실온)에 의해 결정되었다.1H-NMR 스펙트럼 차트를 도 4에 도시한다. 또한, 이하의 화학식 [7]에 표시된 각 수소원자의 귀속을 표 2에 나타낸다(1H-NMR).
1H-NMR의 귀속결과
ppm 적분치 분열 귀속
1.47 2H m c
1.63 4H m b,d
2.36 2H t a
2.79 2H t e
6.98 1H d,t g
7.11 1H d,d f
7.34 1H d,d h
(제 3 실시예)
제 1 실시에서 얻은 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 0.1%와 폴리펩톤 0.5%를 함유한 M9 배양배지 200mL에 한천 판 위의 YN2 균주의 콜로니를 식균하고, 30시간 동안 30℃에서 체적 500mL의 진동 플라스크에서 배양하였다. 배양 후에, 원심분리에 의해 배양균체를 집균하고 메탄올로 세정한 다음에 동결 건조하였다. 건조된 균체 중량을 평량한 다음에 클로로포름을 첨가하고 실온(23℃)에서 72시간동안 교반하고, 이에 의해 폴리머를 추출하였다. 폴리머가 추출된 클로로포름을 필터링하고 증발기에 의해 농축한 다음에, 냉 메탄올에 의해 침전 고화된 부분을 수집하고 이를 감압하에서 건조하여 소망의 폴리머를 얻었다. 건조된 균체의 중량은 153mg이고 이와 같이 얻은 폴리머의 중량은 92mg이었다.
이와 같이 얻은 폴리머의 분자량은, 겔 퍼미에이션 크로마토그래피(GPC)에 의해 측정하였다(도소 HLC-8220 GPC, 컬럼: 도소 TSK-GEL Super HM-H, 용매: 클로로포름, 폴리스티렌 환산). 이와 같이 얻은 폴리머에 대한 결과는 Mn=196,000 및 Mw=570,000이었다.
이와 같이 얻은 폴리머의 구조는1H-NMR (FT-NMR: 브루커 DPX 400;1H 공명주파수: 400 MHz; 측정된 핵종:1H; 사용된 용매: CDCl3; 레퍼런스: TMS/CDCl3를 함유한 모세관; 측정온도: 실온)에 의해 결정되었다.1H-NMR 스펙트럼 차트를 도 5에 도시한다. 또한, 이하의 화학식 [8]에 표시된 각 수소원자의 귀속을 표 3에 나타낸다(1H-NMR).
1H-NMR의 귀속결과
ppm 적분치 분열 귀속
1.86-1.91 2H m c
2.44-2.58 2H m a
2.68-2.80 2H m d
5.23-5.29 1H m b
6.94-6.96 1H d,t f
7.11-7.12 1H d,d e
7.31-7.33 1H d,d g
1H-NMR의 귀속결과는, 상기 소개된 3-히드록시-5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 적어도 80%이었다.
(제 4 실시예)
5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 0.05%와 포도당 0.5%를 함유한 M9 배양배지200mL에 한천 판 위의 YN2 균주의 콜로니를 식균하고, 45시간 동안 30℃에서 체적 500mL의 진동 플라스크에서 배양하였다. 배양 후에, 원심분리에 의해 배양균체를 집균하고, NH4CL의 성분을 함유하지 않은 M9 배양배지에 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 0.05%와 포도당 0.5%를 첨가함으로써 준비된 배양배지로 이동하고, 여기서 48시간 동안 30℃에서 배양하였다. 배양 후에, 원심분리에 의해 배양균체를 집균하고, 메탄올에 의해 세정한 다음에 동결 건조하였다. 건조된 균체 중량을 평량한 다음에 클로로포름을 첨가하고 60℃에서 24시간동안 교반하고, 이에 의해 폴리머를 추출하였다. 폴리머가 추출된 클로로포름을 필터링하고 증발기에 의해 농축한 다음에, 냉 메탄올에 의해 침전 고화된 부분을 수집하고 이를 감압하에서 건조하여 소망의 폴리머를 얻었다. 건조된 균체의 중량은 332mg이고 이와 같이 얻은 폴리머의 중량은 202mg이었다.
이와 같이 얻은 폴리머의 분자량은, 겔 퍼미에이션 크로마토그래피(GPC)에 의해 측정하였다(도소 HLC-8220 GPC, 컬럼: 도소 TSK-GEL Super HM-H, 용매: 클로로포름, 폴리스티렌 환산). 그 결과는 Mn=212,000 및 Mw=564,000이었다.
이와 같이 얻은 폴리머의 구조는1H-NMR (FT-NMR: 브루커 DPX 400;1H 공명주파수: 400 MHz; 측정된 핵종:1H; 사용된 용매: CDCl3; 레퍼런스: TMS/CDCl3를 함유한 모세관; 측정온도: 실온)에 의해 결정되었다. 그 결과는, 상기 소개된 3-히드록시-5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 유닛의 양은 모든 성분의 것의 퍼센트로서 적어도 89%인 양을 나타내었다.
(제 5 실시예)
포도당 대신에 소디움 파이루베이트(sodium pyruvate)를 사용한 것을 제외하고는 제 4 실시예의 방식을 사용하여 폴리머를 얻었다. 건조된 균체의 중량은 325mg이고 이와 같이 얻은 폴리머의 중량은 210mg이었다. 이와 같이 얻은 폴리머의 분자량은, 겔 퍼미에이션 크로마토그래피(GPC)에 의해 측정하였다(도소 HLC-8220 GPC, 컬럼: 도소 TSK-GEL Super HM-H, 용매: 클로로포름 폴리스티렌 환산). 그 결과는 Mn=260,000 및 Mw=763,000이었다.
이와 같이 얻은 폴리머의 구조는1H-NMR (FT-NMR: 브루커 DPX 400;1H 공명주파수: 400 MHz; 측정된 핵종:1H; 사용된 용매: CDCl3; 레퍼런스: TMS/CDCl3를 함유한 모세관; 측정온도: 실온)에 의해 결정되었다. 그 결과는, 상기 소개된 3-히드록시-5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 적어도 91%인 것을 나타내었다.
(제 6실시예)
H45 균주를 균주로서 사용한 것을 제외하고는, 제 3실시예의 방식을 사용하여 폴리머를 얻었다. 건조된 균체의 중량은 111mg이고 이와 같이 얻은 폴리머의 중량은 52mg이었다. 이와 같이 얻은 폴리머의 분자량은, 겔 퍼미에이션 크로마토그래피(GPC)에 의해 측정하였다(도소 HLC-8220 GPC, 컬럼: 도소 TSK-GEL Super HM-H, 용매: 클로로포름 폴리스티렌 환산). 그 결과는 Mn=203,000 및 Mw=518,000이었다.
이와 같이 얻은 폴리머의 구조는1H-NMR (FT-NMR: 브루커 DPX 400;1H 공명주파수: 400 MHz; 측정된 핵종:1H; 사용된 용매: CDCl3; 레퍼런스: TMS/CDCl3를 함유한 모세관; 측정온도: 실온)에 의해 결정되었다. 그 결과는, 상기 소개된 3-히드록시-5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 유닛의 양은 모든 성분의 것의 퍼센트로서 적어도 93%인 것을 나타내었다.
(제 7실시예)
P161 균주를 균주로서 사용한 것을 제외하고는, 제 3실시예의 방식을 사용하여 폴리머를 얻었다. 건조된 균체의 중량은 98mg이고 이와 같이 얻은 폴리머의 중량은 46mg이었다. 이와 같이 얻은 폴리머의 분자량은, 겔 퍼미에이션 크로마토그래피(GPC)에 의해 측정하였다(도소 HLC-8220 GPC, 컬럼: 도소 TSK-GEL Super HM-H, 용매: 클로로포름, 폴리스티렌 환산). 이와 같이 얻은 폴리머에 대한 결과는 Mn=187,000 및 Mw=539,000이었다.
이와 같이 얻은 폴리머의 구조는1H-NMR (FT-NMR: 브루커 DPX 400;1H 공명주파수: 400 MHz; 측정된 핵종:1H; 사용된 용매: CDCl3; 레퍼런스: TMS/CDCl3를 함유한 모세관; 측정온도: 실온)에 의해 결정되었다. 그 결과는, 상기 소개된 3-히드록시-5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 적어도 93%인 것을 나타내었다.
(제 8실시예)
5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 대신에 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산을 사용한 것을 제외하고는, 제 3실시예의 방식을 사용하여 폴리머를 얻었다. 건조된 균체의 중량은 199mg이고 이와 같이 얻은 폴리머의 중량은 94mg이었다. 이와 같이 얻은 폴리머의 분자량은, 겔 퍼미에이션 크로마토그래피(GPC)에 의해 측정하였다(도소 HLC-8220 GPC, 컬럼: 도소 TSK-GEL Super HM-H, 용매: 클로로포름, 폴리스티렌 환산). 그 결과는 Mn=32,000 및 Mw=101,000이었다.
다음에, 이와 같이 얻은 폴리머의 구조에 대해1H-NMR의 측정을 행하였다(FT-NMR: 브루커 DPX 400;1H 공명주파수: 400 MHz; 측정된 핵종:1H; 사용된 용매: CDCl3; 레퍼런스: TMS/CDCl3를 함유한 모세관; 측정온도: 실온). 또한 이하의 화학식 [9],[10]에 각각 도시된 수소 원자의 귀속은 표 4에 나타낸다(1H-NMR).
1H-NMR의 귀속 결과
ppm 적분치 분열 귀속
1.57-1.71 2H m c,d
2.45-2.78 2H m a,a',e
2.96-3.01 2H m c'
5.14-5.17 (1H)* m b
5.23-5.29 (1H)* m b'
6.93-6.69 4H m g,g'
7.08-7.09 (1H)* t f
7.13-7.15 (1H)* t f'
7.30-7.31 1H M h,h'
적분치는 포리머를 구성하는 상기 유닛의 비율에 의해 증가하거나 감소한다.
그 결과는, 상기 소개된 3-히드록시-6-(2-디에닐설파닐) 헥산산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 46%이상이고, 상기 도입된 3-히드록시-4-(2-디에닐설파닐) 브티르산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 36%이상인 것을 나타내었다.
(제 9실시예)
5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 대신에 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산을 사용한 것을 제외하고는, 제 4실시예의 방식을 사용하여 폴리머를 얻었다. 건조된 균체의 중량은 235mg이고 이와 같이 얻은 폴리머의 중량은 119mg이었다. 이와 같이 얻은 폴리머의 분자량은, 겔 퍼미에이션 크로마토그래피(GPC)에 의해 측정하였다(도소 HLC-8220 GPC, 컬럼: 도소 TSK-GEL Super HM-H, 용매: 클로로포름, 폴리스티렌 환산). 그 결과는 Mn=29,000 및 Mw=82,000이었다.
이와 같이 얻은 폴리머의 구조는1H-NMR (FT-NMR: 브루커 DPX 400;1H 공명주파수: 400 MHz; 측정된 핵종:1H; 사용된 용매: CDCl3; 레퍼런스: TMS/CDCl3를 함유한 모세관; 측정온도: 실온)에 의해 결정되었다. 그 결과는, 상기 소개된 3-히드록시-6-(2-디에닐설파닐) 헥산산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 29%이상이고, 상기 도입된 3-히드록시-4-(2-디에닐설파닐) 브티르산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 62%이상인 것을 나타내었다.
(제 10실시예)
5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 대신에 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산을 사용한 것을 제외하고는, 제 5실시예의 방식을 사용하여 폴리머를 얻었다. 건조된 균체의 중량은 215mg이고 이와 같이 얻은 폴리머의 중량은 114mg이었다. 이와 같이 얻은 폴리머의 분자량은, 겔 퍼미에이션 크로마토그래피(GPC)에 의해 측정하였다(도소 HLC-8220 GPC, 컬럼: 도소 TSK-GEL Super HM-H, 용매: 클로로포름, 폴리스티렌 환산). 그 결과는 Mn=37,000 및 Mw=109,000이었다.
이와 같이 얻은 폴리머의 구조는1H-NMR (FT-NMR: 브루커 DPX 400;1H 공명주파수: 400 MHz; 측정된 핵종:1H; 사용된 용매: CDCl3; 레퍼런스: TMS/CDCl3를 함유한 모세관; 측정온도: 실온)에 의해 결정되었다. 그 결과는, 상기 소개된 3-히드록시-6-(2-디에닐설파닐) 헥산산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 40%이상이고, 상기 소개된 3-히드록시-4-(2-디에닐설파닐) 브티르산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 49%이상인 것을 나타내었다.
(제 11실시예)
5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 대신에 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산을 사용한 것을 제외하고는, 제 6실시예의 방식을 사용하여 폴리머를 얻었다. 건조된 균체의 중량은 118mg이고 이와 같이 얻은 폴리머의 중량은 33mg이었다. 이와 같이 얻은 폴리머의 분자량은, 겔 퍼미에이션 크로마토그래피(GPC)에 의해 측정하였다(도소 HLC-8220 GPC, 컬럼: 도소 TSK-GEL Super HM-H, 용매: 클로로포름, 폴리스티렌 환산). 그 결과는 Mn=26,000 및 Mw=59,000이었다.
이와 같이 얻은 폴리머를 종래의 방식에 따라서 메탄올리시스화한 다음에, 가스 크로마토그래피 매스 스펙트로미터에 의해 폴리머의 중량분석을 행하였다(GC-MS, 시마쯔 QP-5050, EI 방법). 그 결과, 메틸에스테르는, 3-히드록시-6-(2-디에닐설파닐) 헥산산 유닛과 3-히드록시-4-(2-디에닐설파닐) 브티르산 유닛 이외에 선형 알킬쇄를 측쇄에 가진 3-히드록시 알칸산 유닛의 각각인 것이 확인 되었다. GC-MS에 의해 확인된 모노머 유닛의 유형과 면적비(%)는 표 5에 나타낸다.
모노모 유닛 면적비
3-히드록시 브티르산 0.1%
3-히드록시 옥탄산 0.2%
3-히드록시 데칸산 0.3%
3-히드록시-6-(2-디에닐설파닐)브티르산 70.5%
3-히드록시-6-(2-디에닐설파닐)헥산산 28.9%
다음에, 이와 같이 얻은 폴리머의 구조는1H-NMR (FT-NMR: 브루커 DPX 400;1H 공명주파수: 400 MHz; 측정된 핵종:1H; 사용된 용매: CDCl3; 레퍼런스:TMS/CDCl3를 함유한 모세관; 측정온도: 실온)에 의해 결정되었다. 그 결과는, 상기 소개된 3-히드록시-6-(2-디에닐설파닐) 헥산산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 28%이상이고, 상기 소개된 3-히드록시-4-(2-디에닐설파닐) 브티르산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 63%이상인 것을 나타내었다.
(제 12실시예)
5-(2-디에닐설파닐) 발레르산 대신에 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산을 사용한 것을 제외하고는, 제 7실시예의 방식을 사용하여 폴리머를 얻었다. 건조된 균체의 중량은 93mg이고 이와 같이 얻은 폴리머의 중량은 21mg이었다. 이와 같이 얻은 폴리머의 분자량은, 겔 퍼미에이션 크로마토그래피(GPC)에 의해 측정하였다(도소 HLC-8220 GPC, 컬럼: 도소 TSK-GEL Super HM-H, 용매: 클로로포름 폴리스티렌 환산). 그 결과는 Mn=23,000 및 Mw=46,000이었다.
이와 같이 얻은 폴리머의 구조는1H-NMR (FT-NMR: 브루커 DPX 400;1H 공명주파수: 400 MHz; 측정된 핵종:1H; 사용된 용매: CDCl3; 레퍼런스: TMS/CDCl3를 함유한 모세관; 측정온도: 실온)에 의해 결정되었다. 그 결과는, 상기 소개된 3-히드록시-6-(2-디에닐설파닐) 헥산산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 21%이상이고, 상기 소개된 3-히드록시-4-(2-디에닐설파닐) 브티르산 유닛의 양은 모든 성분의 양의 퍼센트로서 67%이상인 것을 나타내었다.
본 발명의 방법에 의한 신규한 물질인 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산, 신규한 물질인 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산, 및 디에닐기를 측쇄에 가진 폴리히드록시알카노에이트, 및 그 방법이 제공된다.
본 발명에 의하면, 상기 PHA 중에서 측쇄에 S원자를 가진 3-히드록시-(페닐설파닐) 알칸산 유닛을 함유하는 PHA가 고반응성의 관점에서 기능적인 PHA을 개발하였고, 또한 PHA의 측쇄를 화학적으로 수정함으로써 기능적인 PHA를 개발하여, PHA가 디에닐기 등의 페닐기보다 높은 반응성을 지닌 측쇄를 가진다.

Claims (27)

  1. 다음의 화학식 [1]로 표시한 유닛을 가지고;
    여기서, n은 1 내지 9의 정수를 나타내는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 화학식 [1]로 표시한 유닛은,
    여기서, m은 0 내지 8의 정수를 나타내고, 상기 화학식 [2]로 표시한 유닛과;
    여기서 l은 3 또는 5를 나타내고, 상기 화학식 [12]로 표시한 유닛 중의 적어도 하나를 함유하는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트.
  3. 제 1항에 있어서, n은 2인 것을 특징으로 하는 폴리히드록시 알카노에이트.
  4. 제 1항에 있어서, n은 1과 3 중의 적어도 하나인 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 폴리히드록시알카노에이트는 10,000 내지 1,000,000의 범위내의 수평균분자량을 가지는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트.
  6. 3히드록시 알칸산 모노머 유닛은 모두 R형상인 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트.
  7. 여기서, k는 3 내지 11의 정수를 나타내고, 상기 화학식 [3]으로 표시된 화합물을 함유하는 배지에서 미생물을 배양함으로써,
    여기서, n은 1 내지 9의 정수를 나타내고, 상기 화학식 [1]로 표시된 유닛을 가지는 폴리히드록시알카노에이트를 생산하는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법.
  8. 제 7항에 있어서, 화학식 [1]로 표시된 유닛이외의 폴리히드록시알카노에이트의 유닛은,
    여기서, m은 0 내지 8의 정수를 나타내고, 상기 화학식 [2]로 표시한 유닛과;
    여기서, l은 3 또는 5를 나타내고, 상기 화학식 [12]로 표시한 유닛 중의 적어도 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법.
  9. 제 8항에 있어서, 화학식 [3] (k=4)으로 표시된 화합물을 함유하는 배지에서미생물을 배양함으로써, 화학식 [1] (n=2)로 표시된 유닛과, 화학식 [2]와 화학식 [12]로 표시된 유닛 중의 적어도 하나와를 함유하는 폴리히드록시알카노에이트를 생산하는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법.
  10. 제 8항에 있어서, 화학식 [3] (k=5)로 표시된 화합물을 함유하는 배지에서 미생물을 배양함으로써, 화학식 [1] (n=1)로 표시된 유닛과, 화학식 [1] (n=3)으로 표시된 유닛 중의 적어도 하나와, 화학식 [2]와 화학식 [12]로 표시된 유닛 중의 적어도 하나와를 함유하는 폴리히드록시알카노에이트를 생산하는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법.
  11. 제 7항에 있어서, 폴리히드록시알카노에이트는 10,000 내지 1,000,000의 범위내의 수평균분자량을 가지는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법.
  12. 제 7항에 있어서, 배지는 펩타이드, 유기산, 아미노산 및 당류 중의 적어도 하나를 함유하는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법.
  13. 제 12항에 있어서, 펩타이드는 폴리펩톤인 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에트의 생산방법.
  14. 제 12항에 있어서, 유기산은 피루브산, 옥살아세트산, 시트르산, 이소시트르산, 케토글루타르산, 숙신산, 푸마르산, 말산, 락트산 및 그 염으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 유기산 또는 그 염인 것을 특징으로 하는 폴리히록시알카노에이트의 생산방법.
  15. 제 12항에 있어서, 아미노산은, 글루탐산, 아스파르트산 및 그 염으로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 또는 그 염인 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법.
  16. 제 12항에 있어서, 상기 당류는 포도당, 과당, 마노스, 말토우스, 셀로바이오스, 젖당 및 수크로우스로부터 선택된 하나이상의 당류인 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법.
  17. 제 7항에 있어서, 배지에서 배양된 미생물의 셀로부터 폴리히드록시알카노에이트를 수집하는 단계를 부가하여 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법.
  18. 제 7항에 있어서, 미생물은 슈도모나스 속(Pseudomonas sp)에 속하는 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법.
  19. 제 18항에 있어서, 미생물은 슈도모나스 치코라이 YN2주(Pseudomonas cichorii YN2; FERM BP-7375)인 것을 특징으로 하는 폴리하이드록시 알카노에이트의 생산방법.
  20. 제 18항에 있어서, 미생물은 슈도모나스 치코라이 H45주(Pseudomonas cichorii H45; FERM BP-7374)인 것을 특징으로 하는 폴리히드록시알카노에이트의 생산방법.
  21. 제 18항에 있어서, 미생물은 슈도모나스 제세니이P161주(Pseudomonas jessenii P161; FERM BP-7376)인 것을 특징으로 하는 폴리하이드록시알카노에이트의 제조방법.
  22. ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산은,
    여기서,k는 4 내지 11의 정수를 나타내고, 상기 화학식 [11]에 의해 표시되는 것을 특징으로 하는 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산.
  23. 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산은,
    상기의 화학식 [4]로 표시된 것을 특징으로 하는 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산.
  24. 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산은,
    상기 화학식 [5]에 의해 표시된 것을 특징으로 하는 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산.
  25. 여기서, k는 4 내지 11의 정수를 나타내고, 상기 화학식 [11]에 의해 표시되는 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산을 생산하는 방법으로서,
    브로모알칸산, 브로모알카노에이트 유도체, 브로모알칸올, 디브로모알칸 및 락톤 중의 어느 하나를 다이오핀-2-다이올과 반응하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산의 생산방법.
  26. 제 25항에 있어서, 브로모알칸산, 브로모알카노에이트 유도체, 브로모알칸올, 디브로모알칸 및 락톤 중의 어느 하나는, 화학식 [4]에 의해 표시된, 5-브로모발레르산, 5-브로모발레레이트, 5-브로모-1-펜탄올, 1,4-디브로모부탄 및 δ-발레롤락톤, 및 5-(2-디에닐설파닐) 발레르산으로 구성된 그룹으로부터 선택된 화합물인 것을 특징으로 하는 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산의 생산방법.
  27. 제 25항에 있어서, 브로모알칸산, 브로모알카노에이트 유도체, 브로모알칸올, 디브로모알칸 및 락톤 중의 어느 하나는, 화학식 [5]에 의해 표시된, 6-브로모헥산산, 6-브로모헥사노에이트, 6-브로모-1-헥산올, 1,5-디브로모펜탄 및 ε-카프로락톤, 및 6-(2-디에닐설파닐) 헥산산으로 구성된 그룹으로부터 선택된 화합물인 것을 특징으로 하는 ω-(2-디에닐설파닐) 알칸산의 제조방법.
KR10-2002-0010517A 2001-03-01 2002-02-27 폴리히드록시알카노에이트와, 그 생산방법, 및 ω-(2-티에닐설파닐)알칸산과 그 생산방법 KR100485119B1 (ko)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100497475B1 (ko) * 2001-04-27 2005-07-01 캐논 가부시끼가이샤 폴리히드록시알카노에이트로 구성된 마이크로캡슐화안료를 함유하는 컬러필터용 착색조성물

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3673711B2 (ja) * 1999-12-27 2005-07-20 キヤノン株式会社 ポリヒドロキシアルカノエートおよび微生物を利用するその製造方法
US6911521B2 (en) 2001-05-31 2005-06-28 Canon Kabushiki Kaisha Polyhydroxyalkanoate that comprises unit having substituted or unsubstituted (phenylmethyl) sulfanyl structure in side chain thereof and process for producing the same
US6869782B2 (en) * 2001-07-10 2005-03-22 Canon Kabushiki Kaisha Polyhydroxyalkanoate that comprises unit having (methylsulfanyl) phenoxy structure in side chain thereof and process for producing the same
JP3689697B2 (ja) * 2002-02-15 2005-08-31 キヤノン株式会社 アミド基及びスルホン酸基を有する新規なポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法、新規なポリヒドロキシアルカノエートを含有する荷電制御剤、トナーバインダーならびにトナー及び該トナーを用いた画像形成方法および画像形成装置
JP3754956B2 (ja) 2002-02-15 2006-03-15 キヤノン株式会社 側鎖にブロモ基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体及びその製造方法
JP2003319792A (ja) * 2002-02-28 2003-11-11 Canon Inc 側鎖にフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造を有する残基を含むユニットを分子中に含むポリヒドロキシアルカノエートの分子量制御方法、およびポリヒドロキシアルカノエート
JP2003310292A (ja) 2002-04-26 2003-11-05 Canon Inc 分子中に芳香環を含む残基を有するアルカンからのポリヒドロキシアルカノエートの製造方法
JP3880566B2 (ja) * 2002-10-24 2007-02-14 キヤノン株式会社 側鎖に（フェニルメチル）オキシ構造を有するユニットを含む新規なポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法
JP4502363B2 (ja) * 2002-10-24 2010-07-14 キヤノン株式会社 側鎖にビニル基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体、側鎖にカルボキシル基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体、及びそれらの製造方法
JP4429105B2 (ja) * 2003-08-19 2010-03-10 キヤノン株式会社 有機物固定化構造体及びその製造方法、ペプチド及びｄｎａ
US7964344B2 (en) * 2003-09-17 2011-06-21 Canon Kabushiki Kaisha Stable hybrid
JP4508632B2 (ja) * 2003-12-25 2010-07-21 キヤノン株式会社 核酸検出方法及び液組成物
JP2005204609A (ja) 2004-01-26 2005-08-04 Canon Inc 有機物固定化用キット、有機物固定化構造体及びその製造方法
CN1946741B (zh) * 2004-03-31 2012-09-05 佳能株式会社 金结合蛋白及其用途
US8535914B2 (en) * 2005-01-21 2013-09-17 Canon Kabushiki Kaisha Probe, probe set and information acquisition method using the same
JP2006204255A (ja) 2005-01-31 2006-08-10 Canon Inc アセチル−ＣｏＡアシルトランスフェラーゼ遺伝子破壊ポリヒドロキシアルカノエート生産菌、またこれを利用したポリヒドロキシアルカノエート生産方法
JP2006204258A (ja) * 2005-01-31 2006-08-10 Canon Inc 新規ポリヒドロキシアルカノエート合成微生物及びそれを用いたポリヒドロキシアルカノエートの製造方法
JP2006204257A (ja) 2005-01-31 2006-08-10 Canon Inc ポリヒドロキシアルカノエート合成酵素遺伝子の破壊されたポリヒドロキシアルカノエート生産菌の同質遺伝子系統、またこれを利用したポリヒドロキシアルカノエート生産方法
JP2006322741A (ja) * 2005-05-17 2006-11-30 Canon Inc プローブアレイを用いたハイブリダイゼーションデータ処理方法
US7989219B2 (en) 2005-05-31 2011-08-02 Canon Kabushiki Kaisha Bispecific capturing molecule
US7875465B2 (en) 2005-05-31 2011-01-25 Canon Kabushiki Kaisha Target substance capturing molecule
JP2006333825A (ja) * 2005-06-03 2006-12-14 Canon Inc 標的物質捕捉用タンパク質の製造方法及びその構成材料の選択方法
JP5142458B2 (ja) * 2005-06-30 2013-02-13 キヤノン株式会社 標的物質捕捉分子、標的物質捕捉用の素子、これらを用いた標的物質検出用の装置及びキット、並びに、標的物質の検出方法
US20090130776A1 (en) * 2005-09-01 2009-05-21 Canon Kabushiki Kaisha Binding protein molecule
JP2007163185A (ja) * 2005-12-09 2007-06-28 Canon Inc 酵素電極
JP2007163268A (ja) * 2005-12-13 2007-06-28 Canon Inc 酵素電極
WO2007077952A1 (en) * 2005-12-28 2007-07-12 Canon Kabushiki Kaisha Method and device for determining a nucleic acid allele or base sequence
US7932100B2 (en) * 2006-03-31 2011-04-26 Canon Kabushiki Kaisha Method for detecting target substance and target-substance detection kit
JP2007278748A (ja) * 2006-04-04 2007-10-25 Canon Inc 標的物質検出素子、検出材料、及び検出キット
US7811829B2 (en) 2006-06-08 2010-10-12 Canon Kabushiki Kaisha Measuring probe and production process thereof
JP2008054521A (ja) * 2006-08-29 2008-03-13 Canon Inc 細胞培養処理装置及び細胞培養処理方法
JP5247106B2 (ja) * 2006-10-13 2013-07-24 キヤノン株式会社 タンパク質、タンパク質の固定方法、構造体、バイオセンサー、核酸、ベクター及び標的物質検出用キット
US20090035767A1 (en) * 2006-11-28 2009-02-05 Canon Kabushiki Kaisha Primer for bacterium genome amplification reaction
US20080227664A1 (en) * 2007-03-16 2008-09-18 Canon Kabushiki Kaisha Cell array structural body and cell array
US20110009593A1 (en) * 2007-10-03 2011-01-13 President And Fellows Of Harvard College Polymeric Bioplastics
US8093060B2 (en) * 2008-02-28 2012-01-10 Canon Kabushiki Kaisha Multisite phosphorylated peptide (protein) recognizing compound and detection method, imaging method, alzheimer's disease diagnosing method and reagent kit using the same
EP2370111B1 (en) 2008-12-25 2014-11-05 Canon Kabushiki Kaisha Probe for a biological specimen and labelling method and screening method using the probe
US8491908B2 (en) 2010-06-01 2013-07-23 Canon Kabushiki Kaisha Composite particle, contrast agent for photoacoustic imaging, and method for producing the composite particle

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2911498A1 (de) 1979-03-23 1980-10-02 Stihl Maschf Andreas Tragbare motorkettensaege
DE3168826D1 (en) 1980-11-18 1985-03-21 Ici Plc Polymer blends
NL8603073A (nl) 1986-12-02 1988-07-01 Rijksuniversiteit Werkwijze voor het bereiden van polyesters door fermentatie; werkwijze voor het bereiden van optisch actieve carbonzuren en esters; polyester omvattende voortbrengselen.
US4876331A (en) 1987-08-18 1989-10-24 Mitsubishi Kasei Corporation Copolyester and process for producing the same
JP3151482B2 (ja) 1991-09-13 2001-04-03 旭化成株式会社 電池の検査方法
JP2777757B2 (ja) 1991-09-17 1998-07-23 鐘淵化学工業株式会社 共重合体およびその製造方法
JPH0814967B2 (ja) 1993-02-15 1996-02-14 九州日立マクセル株式会社 ディスククリーナ
JPH07265065A (ja) 1994-03-29 1995-10-17 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd 共重合体の合成遺伝子による形質転換体および共重合体の製造方法
JPH0819227A (ja) 1994-06-30 1996-01-19 Toshiba Corp コイルブロックの切断方法およびその切断装置
JPH09191893A (ja) 1996-01-22 1997-07-29 Taisei Corp ヒドロキシアルカン酸共重合体の製造方法
JP2001178484A (ja) 1999-12-27 2001-07-03 Canon Inc ポリヒドロキシアルカン酸の製造方法
JP3689700B2 (ja) * 2002-02-28 2005-08-31 キヤノン株式会社 側鎖にビニルフェニル構造を含んでなるユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体及びその製造方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100497475B1 (ko) * 2001-04-27 2005-07-01 캐논 가부시끼가이샤 폴리히드록시알카노에이트로 구성된 마이크로캡슐화안료를 함유하는 컬러필터용 착색조성물

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