KR102645714B1 - Pcsk9 발현의 조절제 - Google Patents
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Abstract
본 발명의 구현예는 PCSK9와 관련된 질병을 치료하거나, 예방하거나, 개선시키는 데 유용할 수 있는 PCSK9 발현을 억제하는 데 유용한 방법, 화합물 및 조성물을 제공한다.
Description
서열 목록
본 출원은 전자 형식의 서열 목록과 함께 출원된다. 서열 목록은 431 kb 크기의 2018년 2월 16일에 생성된 200615-WO-PCT-SequenceListing.txt라는 제목의 파일로 제공된다. 서열 목록의 전자 형식의 정보는 전체내용이 참조로서 본원에 포함된다.
분야
본 발명의 구현예는 프로단백질 전환효소 섭틸리신/켁신 타입 9(PCSK9) 발현을 억제하고, 특정 예에서, PCSK9과 관련된 질병을 치료하거나, 예방하거나, 개선시키는 데 유용할 수 있는 세포 또는 동물에서 PCSK9 단백질의 양을 감소시키는 데 유용한 방법, 화합물 및 조성물을 제공한다.
프로단백질 전환효소 섭틸리신/켁신 타입 9(PCSK9)은 지질단백질 대사에서 중요한 역할을 하는 효소이다. PCSK9에서의 드문 기능 획득(gain-of-function) 돌연변이는 높은 LDL-C 수준 및 조기 관상동맥 심장병을 발생시키는 반면, 기능 손실(loss-of-function) 변형은 낮은 LDL-C 수준 및 관상동맥 심장병의 감소된 발생률을 발생시켰다(문헌[Zhao et al., Am. J. Hum. Genet. 2006, 79: 514-523; Horton et al., J. Lipid Res. 2009, 50: Suppl: S172-S177]). 따라서, PCSK9은 LDL-콜레스테롤-저하 요법에 대한 잘 검증된 표적이다(문헌[Hooper et al., Expert Opin. Biol. Ther. 2013, 13: 429-435]).
PCSK9을 차단하는 항체인 알리로쿠맙(Alirocumab) 및 에볼로쿠맙(Evolocumab)은 순환하는 PCSK9 수준을 감소시키고, LDL-콜레스테롤 수준을 낮추는 것으로 입증되었으나, 짧은 작용 기간을 가져 빈번한 피하 주사를 필요로 한다(문헌[ang et al., BMC Med. 2015, 13: 123; Navarese et al., Ann. Intern. Med. 2015, 163: 40-51]).
본원의 목적은 심혈관 질환, 이상지질혈증, 혼합 이상지질혈증 및 고콜레스테롤혈증과 같은 질병의 개선된 치료를 위한 화합물, 방법 및 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
PCSK9 mRNA의 양 또는 활성을 감소시키고, 특정 구현예에서, 세포 또는 동물에서 PCSK9 단백질의 양을 감소시키기 위한 화합물 및 방법이 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 동물은 심혈관 질환을 갖는다. 특정 구현예에서, 질병은 이상지질혈증이다. 특정 구현예에서, 질병은 혼합 이상지질혈증이다. 특정 구현예에서, 질병은 고콜레스테롤혈증이다. 본원에 제공된 특정 화합물은 동물에서 LDL-콜레스테롤을 감소시키는 화합물 및 조성물에 관한 것이다.
본원에 제공된 특정 구현예는 심혈관 질환을 치료하거나, 예방하거나, 개선시키거나, 진행을 늦추는 데 유용할 수 있는 PCSK9 발현을 억제하는 데 유용한 강력하고 용인되는 화합물 및 조성물에 관한 것이다. 본원에 제공된 특정 구현예는 공개적으로 개시된 화합물보다 더 강력하거나, 더 큰 치료적 가치를 갖는 화합물 및 조성물에 관한 것이다.
상기 일반적 설명 및 하기의 상세한 설명 둘 모두는 단지 예시적이고 설명을 위한 것으로, 청구되는 바와 같은 구현예를 제한하지 않음이 이해되어야 한다. 본원에서, 단수의 사용은 달리 명백히 언급하지 않는 한 복수를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 "또는"의 사용은 달리 언급하지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 또한, 용어 "포함하는" 뿐만 아니라 다른 형태, 예를 들어, "포함하다" 및 "포함된"의 사용은 제한적이지 않다.
본원에서 사용되는 섹션 제목은 단지 구성적 목적을 위한 것으로, 기재된 주제를 제한하는 것으로 해석되어선 안된다. 특허, 특허 출원, 논물, 서적, 보고서, 및 GenBank 및 NCBI 참조 서열 기록을 포함하나 이에 제한되지는 않는 본 출원에서 인용된 모든 문서 또는 문서의 일부는 본원에서 논의된 문서의 일부뿐만 아니라 이의 전체내용이 참조로서 본원에 명백히 포함된다.
본원에 포함된 실시예에서 각각의 SEQ ID NO에 기재된 서열은 당 모이어티, 뉴클레오시드간 결합 또는 핵염기에 대한 임의의 변형과 독립적인 것이 이해된다. 이와 같이, SEQ ID NO에 의해 정의된 화합물은 독립적으로 당 모이어티, 뉴클레오시드간 결합 또는 핵염기에 대한 하나 이상의 변형을 포함할 수 있다. ISIS 번호에 의해 기재된 화합물은 핵염기 서열, 화학적 변형 및 모티프의 조합을 나타낸다.
정의
달리 명시되지 않는 한, 하기 용어는 하기 의미를 갖는다:
"2'-데옥시뉴클레오시드"는 천연 발생 데옥시리보핵산(DNA)에서 발견되는 바와 같은 2'-H(H) 푸라노실 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드를 의미한다. 특정 구현예에서, 2'-데옥시뉴클레오시드는 변형된 핵염기를 포함할 수 있거나, RNA 핵염기(우라실)를 포함할 수 있다.
"2'-O-메톡시에틸"(또한, 2'-MOE 및 2'-O(CH2)2-OCH3)은 푸라노실 고리의 2' 위치에서의 O-메톡시-에틸 변형을 나타낸다. 2'-O-메톡시에틸 변형된 당이 변형된 당이다.
"2'-MOE 뉴클레오시드"(또한, 2'-O-메톡시에틸 뉴클레오시드)는 2'-MOE 변형된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드를 의미한다.
"2'-치환된 뉴클레오시드" 또는 "2-변형된 뉴클레오시드"는 2'-치환되거나 2'-변형된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드를 의미한다. 당 모이어티와 관련하여 본원에서 사용되는 "2'-치환된" 또는 "2-변형된"은 H 또는 OH가 아닌 적어도 하나의 2'-치환기를 포함하는 당 모이어티를 의미한다.
"3' 표적 부위"는 특정 화합물의 가장 3'의 뉴클레오티드에 상보적인 표적 핵산의 뉴클레오티드를 나타낸다.
"5' 표적 부위"는 특정 화합물의 가장 5'의 뉴클레오티드에 상보적인 표적 핵산의 뉴클레오티드를 나타낸다.
"5-메틸시토신"은 5 위치에 부착된 메틸기를 갖는 시토신을 의미한다.
"약"은 값의 ±10% 이내를 의미한다. 예를 들어, "화합물이 PCSK9의 약 70% 억제에 영향을 미쳤다"라고 언급되는 경우, PCSK9 수준이 60% 내지 80%의 범위 내에서 억제되는 것을 의미한다.
"투여" 또는 "투여하는"은 본원에 제공된 화합물 또는 조성물을 이의 의도된 기능을 수행하기 위해 개체에 도입시키는 경로를 나타낸다. 이용될 수 있는 투여 경로의 예는 비경구 투여, 예를 들어, 피하, 정맥내 또는 근내 주사 또는 주입을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"개선"은 관련 질병, 장애 또는 질환의 적어도 하나의 지표, 징후 또는 증상의 개선 또는 감소를 나타낸다. 특정 구현예에서, 개선은 질환 또는 질병의 하나 이상의 지표의 진행 또는 중증도에서의 지연 또는 늦춤을 포함한다. 지표의 진행 또는 중증도는 당업자에게 공지된 주관적 또는 객관적 척도에 의해 결정될 수 있다.
"동물"은 마우스, 랫트, 토끼, 개, 고양이, 돼지 및 비-인간 영장류, 비제한적인 예로, 원숭이 및 침팬지를 포함하나 이에 제한되지는 않는 인간 또는 비-인간 동물을 나타낸다.
"안티센스 활성"은 안티센스 화합물의 이의 표적 핵산으로의 하이브리드화에 기여할 수 있는 임의의 검출 가능하고/하거나 측정 가능한 활성을 의미한다. 특정 구현예에서, 안티센스 활성은 표적에 대한 안티센스 화합물의 부재하에서의 표적 핵산 수준 또는 표적 단백질 수준에 비한 표적 핵산 또는 상기 표적 핵산에 의해 인코딩된 단백질의 양 또는 발현에서의 감소이다.
"안티센스 화합물"은 올리고뉴클레오티드 및 선택적으로 하나 이상의 추가 특징부, 예를 들어, 컨쥬게이트 기 또는 말단 기를 포함하는 화합물을 의미한다. 안티센스 화합물의 예는 단일 가닥 및 이중 가닥 화합물, 예를 들어, 올리고뉴클레오티드, 리보자임, siRNA, shRNA, ssRNA 및 점유-기반 화합물을 포함한다.
"안티센스 억제"는 안티센스 화합물의 부재하에서의 표적 핵산 수준에 비해 표적 핵산에 상보적인 안티센스 화합물의 존재하에서의 표적 핵산 수준의 감소를 의미한다.
"안티센스 메커니즘"은 화합물과 표적 핵산의 하이브리드화를 수반하는 모든 메커니즘이며, 하이브리드화의 결과 또는 효과는, 예를 들어, 전사 또는 스플라이싱을 수반하는 세포 기구의 동반하는 스톨링(stalling)과 함께 표적 분해 또는 표적 점유이다.
"안티센스 올리고뉴클레오티드"는 표적 핵산 또는 이의 영역 또는 세그먼트에 상보적인 핵염기 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드를 의미한다. 특정 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 표적 핵산 또는 이의 영역 또는 세그먼트에 특이적으로 하이브리드화 가능하다.
"바이사이클릭 뉴클레오시드" 또는 "BNA"는 바이사이클릭 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드를 의미한다. "바이사이클릭 당" 또는 "바이사이클릭 당 모이어티"는 2개의 고리를 포함하는 변형된 당 모이어티를 의미하며, 제2 고리는 제1 고리 내의 원자 중 2개를 연결함으로써 바이사이클릭 구조를 형성시키는 브릿지를 통해 형성된다. 특정 구현예에서, 바이사이클릭 당 모이어티의 제1 고리는 푸라노실 모이어티이다. 특정 구현예에서, 바이사이클릭 당 모이어티는 푸라노실 모이어티를 포함하지 않는다.
"분지 기"는 적어도 3개의 기에 대한 공유 결합을 형성할 수 있는 적어도 3개의 위치를 갖는 원자의 기를 의미한다. 특정 구현예에서, 분지 기는 컨쥬게이트 링커 및/또는 절단 가능한 모이어티를 통해 올리고뉴클레오티드에 테더링된 리간드(tethered ligand)를 연결하기 위한 복수의 반응 부위를 제공한다.
"세포-표적화 모이어티"는 특정 세포 유형 또는 특정 세포 유형들에 결합할 수 있는 컨쥬게이트 기 또는 컨쥬게이트 기의 일부를 의미한다.
"cEt" 또는 "구속된 에틸"은 4'-탄소 및 2'-탄소를 연결하는 브릿지를 포함하는 바이사이클릭 푸라노실 당 모이어티를 의미하며, 브릿지는 식 4'-CH(CH3)-O-2'을 갖는다.
"cEt 뉴클레오시드"는 cEt 변형 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드를 의미한다.
화합물에서의 "화학적 변형"은 화합물 내의 임의의 단위의 본래 상태에 비한 화합물 내의 임의의 단위의 화학 반응을 통한 치환 또는 변화를 기재한다. "변형된 뉴클레오시드"는 변형된 당 모이어티 및/또는 변형된 핵염기를 독립적으로 갖는 뉴클레오시드를 의미한다. "변형된 올리고뉴클레오티드"는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오시드간 결합, 변형된 당 및/또는 변형된 핵염기를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
"화학적으로 별개의 영역"은 동일한 화합물의 또 다른 영역과 일부 방식에 있어서 화학적으로 상이한 화합물의 영역을 나타낸다. 예를 들어, 2'-O-메톡시에틸 뉴클레오티드를 갖는 영역은 2'-O-메톡시에틸 변형이 없는 뉴클레오티드를 갖는 영역과 화학적으로 구별된다.
"키메라 안티센스 화합물"은 적어도 2개의 화학적으로 별개의 영역을 갖는 안티센스 화합물을 의미하며, 각각의 위치는 복수의 서브유닛을 갖는다.
"절단 가능한 결합"은 분할될 수 있는 임의의 화학 결합을 의미한다. 특정 구현예에서, 절단 가능한 결합은 아미드, 폴리아미드, 에스테르, 에테르, 포스포디에스테르의 하나 또는 둘 모두의 에스테르, 포스페이트 에스테르, 카르바메이트, 디설파이드 또는 펩티드로부터 선택된다.
"절단 가능한 모이어티"는 생리학적 조건하, 예를 들어, 세포, 동물 또는 인간 내부에서 절단되는 결합 또는 원자의 기를 의미한다.
올리고뉴클레오티드와 관련하여 "상보적인"은 상기 올리고뉴클레오티드 또는 이의 하나 이상의 영역의 핵염기 서열이 2개의 핵염기 서열이 반대 방향으로 정렬되는 경우에 또 다른 올리고뉴클레오티드 또는 핵산 또는 이의 하나 이상의 영역의 핵염기 서열과 일치하는 것을 의미한다. 본원에 기재된 바와 같은 핵염기 일치 또는 상보적 핵염기는 달리 명시되지 않는 한 아데닌(A) 및 티민(T), 아데닌(A) 및 우라실(U), 시토신(C) 및 구아닌(G), 및 5-메틸 시토신(mC) 및 구아닌(G)의 쌍으로 제한된다. 상보적 올리고뉴클레오티드 및/또는 핵산은 각각의 뉴클레오시드에서 핵염기 상보성을 가질 필요는 없으며, 하나 이상의 핵염기 불일치를 포함할 수 있다. 대조적으로, 올리고뉴클레오티드와 관련하여 "완전히 상보적" 또는 "100% 상보적"은 상기 올리고뉴클레오티드가 어떠한 핵염기 불일치 없이 각각의 뉴클레오시드에서 핵염기 일치를 갖는 것을 의미한다.
"컨쥬게이트 기"는 올리고뉴클레오티드에 부착되는 원자의 기를 의미한다. 컨쥬게이트 기는 컨쥬게이트 모이어티 및 컨쥬게이트 모이어티를 올리고뉴클레오티드에 부착시키는 컨쥬게이트 링커를 포함한다.
"컨쥬게이트 링커"는 올리고뉴클레오티드에 컨쥬게이트 모이어티를 연결시키는 적어도 하나의 결합을 포함하는 원자의 기를 의미한다.
"컨쥬게이트 모이어티"는 컨쥬게이트 링커를 통해 올리고뉴클레오티드에 부착되는 원자의 기를 의미한다.
올리고뉴클레오티드의 문맥에서 "인접한(contiguous)"은 서로 바로 인접하여 존재하는 뉴클레오시드, 핵염기, 당 모이어티 또는 뉴클레오시드간 결합을 나타낸다. 예를 들어, "인접한 핵염기"는 서열 내의 서로 바로 인접한 핵염기를 의미한다.
"설계하는" 또는 "설계된"은 선택된 핵산 분자와 특이적으로 하이브리드화되는 화합물을 설계하는 과정을 나타낸다.
"상이하게 변형된"은 변형의 부재를 포함하는 서로 상이한 화학적 변형 또는 화학적 치환기를 의미한다. 따라서, 예를 들어, MOE 뉴클레오시드 및 변형되지 않은 DNA 뉴클레오시드는 DNA 뉴클레오시드가 변형되지 않더라도 "상이하게 변형"된다. 마찬가지로, DNA 및 RNA는 둘 모두가 천연 발생의 변형되지 않은 뉴클레오시드인데도 "상이하게 변형"된다. 동일하나, 상이한 핵염기를 포함하는 뉴클레오시드는 상이하게 변형되지 않는다. 예를 들어, 2'-OMe 변형된 당 및 변형되지 않은 아데닌 핵염기를 포함하는 뉴클레오시드 및 2'-OMe 변형된 당 및 변형되지 않은 티민 핵염기를 포함하는 뉴클레오시드는 상이하게 변형되지 않는다.
"이중 가닥 안티센스 화합물"은 서로 상보적이고 듀플렉스를 형성하는 2개의 올리고머 화합물을 포함하는 안티센스 화합물을 의미하며, 2개의 상기 올리고머 화합물 중 하나는 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
"유효량"은 화합물을 필요로 하는 개체에서 원하는 생리학적 결과를 달성하기에 충분한 화합물의 양을 의미한다. 유효량은 치료되는 개체의 건강 및 신체 상태, 치료되는 개체의 분류학적 그룹, 조성물의 제형화, 개체의 의학적 상태의 평가 및 다른 관련 요인에 따라 개체마다 가변적일 수 있다.
"효능"은 원하는 효과를 생성시키는 능력을 의미한다.
"발현"은 유전자의 코딩된 정보가 세포 내에 존재하고 세포 내에서 작동하는 구조로 전환되는 모든 기능을 포함한다. 상기 구조는 전사 및 번역의 생성물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"갭머"는 하나 이상의 뉴클레오시드를 갖는 외부 영역 사이에 위치된 RNase H 절단을 지지하는 복수의 뉴클레오시드를 갖는 내부 영역을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 의미하며, 내부 영역을 포함하는 뉴클레오시드는 외부 영역을 포함하는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오시드들과 화학적으로 구별된다. 내부 영역은 "갭"으로 언급될 수 있으며, 외부 영역은 "윙"으로 언급될 수 있다.
"하이브리드화"는 올리고뉴클레오티드 및/또는 핵산의 어닐링을 의미한다. 특정 메커니즘으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 하이브리드화의 가장 일반적인 메커니즘은 상보적 핵염기 사이의 왓슨-크릭(Watson-Crick), 후그스틴(Hoogsteen) 또는 역전된 후그스틴 수소 결합일 수 있는 수소 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 상보적 핵산 분자는 안티센스 화합물 및 핵산 표적을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 구현예에서, 상보적 핵산 분자는 올리고뉴클레오티드 및 핵산 표적을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"바로 인접한"은 동일 종류의 바로 인접한 요소들 사이에서 사이에 존재하는 요소가 없음을 의미한다(예를 들어, 바로 인접한 핵염기 사이에서 사이에 존재하는 핵염기가 없음).
"개체"는 치료 또는 요법을 위해 선택된 인간 또는 비-인간 동물을 의미한다.
"발현 또는 활성을 억제하는"은 미처리 또는 대조군 샘플에서의 활성의 발현에 비한 발현 또는 활성의 감소 또는 차단을 나타내며, 반드시 발현 또는 활성의 전체 제거를 나타내지는 않는다.
"뉴클레오시드간 결합"은 올리고뉴클레오티드 내의 인접한 뉴클레오시드 사이에서 공유 결합을 형성하는 기 또는 결합을 의미한다. "변형된 뉴클레오시드간 결합"은 천연 발생의 포스페이트 뉴클레오시드간 결합이 아닌 임의의 뉴클레오시드간 결합을 의미한다. 비-포스페이트 결합은 본원에서 변형된 뉴클레오시드간 결합으로 언급된다.
"연장된 올리고뉴클레오티드"는 본원에 개시된 올리고뉴클레오티드, 예를 들어, 모(parent) 올리고뉴클레오티드에 비해 하나 이상의 추가 뉴클레오시드를 갖는 올리고뉴클레오티드이다.
"연결된 뉴클레오시드"는 뉴클레오시드간 결합에 의해 함께 연결된 인접한 뉴클레오시드를 의미한다.
"링커-뉴클레오시드"는 올리고뉴클레오티드를 컨쥬게이트 모이어티에 연결시키는 뉴클레오시드를 의미한다. 링커-뉴클레오시드는 화합물의 컨쥬게이트 링커 내에 위치된다. 링커-뉴클레오시드는 이들이 올리고뉴클레오티드와 인접한 경우에도 화합물의 올리고뉴클레오티드 부분의 일부로 간주되지 않는다.
"불일치" 또는 "비-상보적"은 제1 및 제2 올리고뉴클레오티드가 정렬되는 경우 제2 올리고뉴클레오티드 또는 표적 핵산의 상응하는 핵염기에 상보적이지 않은 제1 올리고뉴클레오티드의 핵염기를 의미한다. 예를 들어, 보편적 핵염기, 이노신 및 하이포잔틴을 포함하나 이에 제한되지는 않는 핵염기는 적어도 하나의 핵염기와 하이브리드화될 수 있으나, 하이브리드화되는 핵염기와 관련하여 여전히 불일치하거나 비-상보적이다. 또 다른 예로서, 제1 및 제2 올리고뉴클레오티드가 정렬되는 경우 제2 올리고뉴클레오티드 또는 표적 핵산의 상응하는 핵염기와 하이브리드화될 수 없는 제1 올리고뉴클레오티드의 핵염기는 불일치 또는 비-상보적 핵염기이다.
"조절하는"은 세포, 조직, 기관 또는 유기체에서 특징을 변화시키거나 조정하는 것을 나타낸다. 예를 들어, PCSK9 RNA를 조절하는 것은 세포, 조직, 기관 또는 유기체에서 PCSK9 RNA 및/또는 PCSK9 단백질의 수준을 증가시키거나 감소시키는 것을 의미할 수 있다. "조절자"는 세포, 조직, 기관 또는 유기체에서 변화를 초래한다. 예를 들어, PCSK9 화합물은 세포, 조직, 기관 또는 유기체에서 PCSK9 RNA 및/또는 PCSK9 단백질의 양을 감소시키는 조절자일 수 있다.
"MOE"는 메톡시에틸을 의미한다.
"단량체"는 올리고머의 단일 유닛을 나타낸다. 단량체는 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"모티프"는 올리고뉴클레오티드에서 변형되지 않고/않거나 변형된 당 모이어티, 핵염기 및/또는 뉴클레오시드간 결합의 패턴을 의미한다.
"천연" 또는 "천연 발생"은 천연에서 발견되는 것을 의미한다.
"비-바이사이클릭 변형 당" 또는 "비-바이사이클릭 변형 당 모이어티"는 제2의 고리를 형성시키기 위해 당의 2개의 원자 사이에 브릿지를 형성하지 않는 치환기와 같은 변형을 포함하는 변형된 당 모이어티를 의미한다.
"핵산"은 단량체 뉴클레오티드로 구성된 분자를 나타낸다. 핵산은 리보핵산(RNA), 데옥시리보핵산(DNA), 단일 가닥 핵산 및 이중 가닥 핵산을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"핵염기"는 또 다른 핵산의 염기와 쌍을 이룰 수 있는 헤테로사이클릭 모이어티를 의미한다. 본원에서 사용되는 "천연 발생 핵염기"는 아데닌(A), 티민(T), 시토신(C), 우라실(U) 및 구아닌(G)이다. "변형된 핵염기"는 화학적으로 변형되는 천연 발생 핵염기이다. "보편적 염기" 또는 "보편적 핵염기"는 천연 발생 핵염기 및 변형된 핵염기가 아닌 핵염기이며, 임의의 핵염기와 쌍을 이룰 수 있다.
"핵염기 서열"은 임의의 당 또는 뉴클레오시드간 결합과 독립적인 핵산 또는 올리고뉴클레오티드에서 인접한 핵염기의 순서를 의미한다.
"뉴클레오시드"는 핵염기 및 당 모이어티를 포함하는 화합물을 의미한다. 핵염기 및 당 모이어티는 각각 독립적으로 변형되지 않거나 변형된다. "변형된 뉴클레오시드"는 변형된 핵염기 및/또는 변형된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드를 의미한다. 변형된 뉴클레오시드는 핵염기가 결여된 무염기 뉴클레오시드를 포함한다.
"올리고머 화합물"은 단일 올리고뉴클레오티드 및 선택적으로 하나 이상의 추가 특징부, 예를 들어, 컨쥬게이트 기 또는 말단 기를 포함하는 화합물을 의미한다.
"올리고뉴클레오티드"는 각각 서로 독립적으로 변형되거나 변형되지 않을 수 있는 연결된 뉴클레오시드의 중합체를 의미한다. 달리 명시되지 않는 한, 올리고뉴클레오티드는 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된다. "변형된 올리고뉴클레오티드"는 적어도 하나의 당, 핵염기 또는 뉴클레오시드간 결합이 변형된 올리고뉴클레오티드를 의미한다. "변형되지 않은 올리고뉴클레오티드"는 임의의 당, 핵염기 또는 뉴클레오시드간 변형을 포함하지 않는 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
"모 올리고뉴클레오티드"는 유사한 서열이나 상이한 길이, 모티프 및/또는 화학적 성질을 갖는 더 많은 올리고뉴클레오티드에 대한 설계의 기초로서 서열이 사용되는 올리고뉴클레오티드를 의미한다. 새로이 설계된 올리고뉴클레오티드는 모 올리고뉴클레오티드와 동일하거나 중복되는 서열을 가질 수 있다.
"비경구 투여"는 주사 또는 주입을 통한 투여를 의미한다. 비경구 투여는 피하 투여, 정맥내 투여, 근내 투여, 동맥내 투여, 복막내 투여 또는 두개내 투여, 예를 들어, 수막강내 또는 뇌실내 투여를 포함한다.
"약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제"는 개체에 투여하는 데 사용하기에 적합한 임의의 물질을 의미한다. 예를 들어, 약학적으로 허용되는 담체는 멸균 수용액, 예를 들어, PBS 또는 주사용수일 수 있다.
"약학적으로 허용되는 염"은 화합물, 예를 들어, 올리고머 화합물 또는 올리고뉴클레오티드의 생리학적 및 약학적으로 허용되는 염, 즉, 모 화합물의 원하는 생물학적 활성을 보유하고, 원하지 않는 독성학적 영향을 주지 않는 염을 의미한다.
"약학적 제제"는 개체에 투여되는 경우 치료 이익을 제공하는 화합물을 의미한다.
"약학적 조성물"은 개체에 투여하기에 적합한 물질의 혼합물을 의미한다. 예를 들어, 약학적 조성물은 하나 이상의 화합물 또는 이의 염 및 멸균 수용액을 포함할 수 있다.
"포스포로티오에이트 결합"은 비-브릿징 산소 원자 중 하나가 황 원자로 대체된 변형된 포스페이트 결합을 의미한다. 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합은 변형된 뉴클레오시드간 결합이다.
"인 모이어티"는 인 원자를 포함하는 원자의 기를 의미한다. 특정 구현예에서, 인 모이어티는 모노-, 디- 또는 트리-포스페이트, 또는 포스포로티오에이트를 포함한다.
"일부"는 핵산의 인접한(즉, 연결된) 핵염기의 정의된 수를 의미한다. 특정 구현예에서, 일부는 표적 핵산의 인접한 핵염기의 정의된 수이다. 특정 구현예에서, 일부는 올리고머 화합물의 인접한 핵염기의 정의된 수이다.
"예방하다"는 수분에서 무기한의 기간 동안 질병, 장애 또는 질환의 발병, 발달 또는 진행을 지연시키거나 방해하는 것을 나타낸다.
"프로드러그"는 개체에 투여되는 경우 신체 또는 이의 세포 내에서 또 다른 형태로 대사되는 신체 외부의 형태의 화합물을 의미한다. 특정 구현예에서, 대사된 형태는 화합물(예를 들어, 약물)의 활성, 또는 더욱 활성의 형태이다. 전형적으로, 신체 내에서의 프로드러그의 전환은 세포 또는 조직에 존재하는 효소(들)(예를 들어, 내인성 또는 바이러스 효소) 또는 화학물질(들)의 작용 및/또는 생리학적 조건에 의해 의해 촉진된다.
"감소시키다"는 더 작은 범위, 크기, 양 또는 숫자로 줄이는 것을 의미한다.
"RefSeq 번호"는 서열이 특정 표적 전사체(예를 들어, 표적 유전자)에 대한 것임을 나타내기 위해 서열에 할당된 문자 및 숫자의 독특한 조합이다. 상기 서열 및 표적 유전자(집합적으로, 유전자 기록)에 관한 정보는 유전 서열 데이터베이스에서 발견될 수 있다. 유전 서열 데이터베이스는 NCBI 참조 서열 데이터베이스(NCBI Reference Sequence database), 유전자은행(GenBank), 유럽 뉴클레오티드 보관소(the European Nucleotide Archive) 및 일본 DNA 데이터 은행(DNA Data Bank of Japan)(후자의 3개는 국제 뉴클레오티드 서열 데이터베이스 협력(International Nucleotide Sequence Database Collaboration 또는 INSDC)을 형성함)을 포함한다.
"영역"은 적어도 하나의 확인 가능한 구조, 기능 또는 특징을 갖는 표적 핵산의 일부로 정의된다.
"RNAi 화합물"은 적어도 부분적으로 RISC 또는 Ago2를 통해 작용하고, RNase H를 통해서는 작용하지 않아, 표적 핵산 및/또는 표적 핵산에 의해 인코딩된 단백질을 조절하는 안티센스 화합물을 의미한다. RNAi 화합물은 이중 가닥 siRNA, 단일 가닥 RNA(ssRNA) 및 마이크로RNA, 예를 들어, 마이크로RNA 모방체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"세그먼트"는 핵산 내의 영역의 더 작은 부분 또는 하위 부분으로 정의된다.
"부작용"은 원하는 효과가 아닌 치료로 인한 생리학적 질병 및/또는 질환을 의미한다. 특정 구현예에서, 부작용은 주사 부위 반응, 간 기능 검사 이상, 신장 기능 이상, 간 독성, 신장 독성, 중추신경계 이상, 근육병증 및 권태를 포함한다. 예를 들어, 혈청에서의 증가된 아미노트랜스페라제 수준은 간 독성 또는 간 기능 이상을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 증가된 빌리루빈은 간 독성 또는 간 기능 이상을 나타낼 수 있다.
화합물과 관련하여 "단일 가닥"은 화합물이 단지 하나의 올리고뉴클레오티드를 갖는 것을 의미한다. "자가 상보적"은 적어도 부분적으로 자체적으로 하이브리드화되는 올리고뉴클레오티드를 의미한다. 화합물의 올리고뉴클레오티드가 자가-상보적인 하나의 올리고뉴클레오티드로 구성된 화합물은 단일 가닥 화합물이다. 단일 가닥 화합물은 상보적 화합물에 결합하여 듀플렉스를 형성할 수 있다.
"부위"는 표적 핵산 내의 독특한 핵염기 위치로 정의된다.
"특이적으로 하이브리드화 가능한"은 올리고뉴클레오티드와 표적 핵산 사이에 충분한 정도의 상보성을 가져 비-표적 핵산에 대해 최소의 효과를 나타내거나 효과를 나타내지 않으면서 원하는 효과를 유도하는 올리고뉴클레오티드를 나타낸다. 특정 구현예에서, 특이적 하이브리드화는 생리학적 조건하에서 발생한다.
표적 핵산과 관련하여 "특이적으로 억제하는"은 비-표적 핵산에 대해 더 적은 효과 또는 최소의 효과를 나타내거나 효과를 나타내지 않으면서 표적 핵산의 발현을 감소시키거나 차단하는 것을 의미한다. 감소는 표적 핵산의 발현의 완전한 제거를 반드시 나타내는 것은 아니다.
"표준 세포 검정"은 실시예에 기재된 검정(들) 및 이의 합리적인 변형을 의미한다.
"표준 생체 내 실험"은 실시예(들)에 기재된 절차(들) 및 이의 합리적인 변형을 의미한다.
"당 모이어티"는 변형되지 않은 당 모이어티 또는 변형된 당 모이어티를 의미한다. "변형되지 않은 당 모이어티" 또는 "변형되지 않은 당"은 RNA에서 발견되는 바와 같은 2'-OH(H) 푸라노실 모이어티("변형되지 않은 RNA 당 모이어티"), 또는 DNA에서 발견되는 바와 같은 2'-H(H) 모이어티("변형되지 않은 DNA 당 모이어티")를 의미한다. 변형되지 않은 당 모이어티는 1', 3' 및 4' 위치 각각에서 하나의 수소, 3' 위치에서 산소 및 5' 위치에서 2개의 수소를 갖는다. "변형된 당 모이어티" 또는 "변형된 당"은 변형된 푸라노실 당 모이어티 또는 당 대용물을 의미한다. "변형된 푸라노실 당 모이어티"는 변형되지 않은 당 모이어티의 적어도 하나의 수소 대신에 비-수소 치환기를 포함하는 푸라노실 당을 의미한다. 특정 구현예에서, 변형된 푸라노실 당 모이어티는 2'-치환된 당 모어어티이다. 상기 변형된 푸라노실 당 모이어티는 바이사이클릭 당 및 비-바이사이클릭 당을 포함한다.
"당 대용물"은 핵염기를 올리고뉴클레오티드 내의 또 다른 기, 예를 들어, 뉴클레오시드간 결합, 컨쥬게이트 기 또는 말단 기에 연결시킬 수 있는 푸라노실 모이어티가 아닌 것을 갖는 변형된 당 모어이티를 의미한다. 당 대용물을 포함하는 변형된 뉴클레오시드는 올리고뉴클레오티드 내의 하나 이상의 위치에 혼입될 수 있으며, 상기 올리고뉴클레오티드는 상보적 화합물 또는 핵산에 하이브리드화될 수 있다.
"PCSK9"은 PCSK9의 임의의 핵산 또는 단백질을 의미한다. "PCSK9 핵산"은 PCSK9을 인코딩하는 임의의 핵산을 의미한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, PCSK9 핵산은 PCSK9을 인코딩하는 DNA 서열, PCSK9을 인코딩하는 DNA로부터 전사된 RNA 서열(인트론 및 엑손을 포함하는 유전체 DNA를 포함함) 및 PCSK9을 인코딩하는 mRNA 서열을 포함한다. "PCSK9 mRNA"는 PCSK9 단백질을 인코딩하는 mRNA를 의미한다. 표적은 대문자 또는 소문자로 언급될 수 있다.
"PCSK9 특이적 억제제"는 분자 수준에서 PCSK9 RNA 및/또는 PCSK9 단백질 발현 또는 활성을 특별히 억제할 수 있는 임의의 제제를 나타낸다. 예를 들어, PCSK9 특이적 억제제는 핵산(안티센스 화합물을 포함함), 펩티드, 항체, 소분자, 및 PCSK9 RNA 및/또는 PCSK9 단백질의 발현을 억제할 수 있는 다른 제제를 포함한다.
"표적 유전자"는 표적을 인코딩하는 유전자를 나타낸다.
"표적화"는 원하는 효과를 유도하기 위한 표적 핵산에 대한 화합물의 특이적 하이브리드화를 의미한다.
"표적 핵산", "표적 RNA", "표적 RNA 전사체" 및 "핵산 표적"은 모두 본원에 기재된 화합물에 의해 표적화될 수 있는 핵산을 의미한다.
"표적 영역"은 하나 이상의 화합물이 표적으로 하는 표적 핵산의 일부를 의미한다.
"표적 세그먼트"는 화합물이 표적으로 하는 표적 핵산의 뉴클레오티드의 서열을 의미한다. "5' 표적 부위"는 표적 세그먼트의 가장 5'의 뉴클레오티드를 나타낸다. "3' 표적 부위"는 표적 세그먼트의 가장 3'의 뉴클레오티드를 나타낸다.
"말단 기"는 올리고뉴클레오티드의 말단에 공유적으로 연결되는 화학기 또는 원자의 기를 의미한다.
"치료적 유효량"은 개체에게 치료적 이익을 제공하는 화합물, 약학적 제제 또는 조성물의 양을 의미한다.
"치료하다"는 동물에서 질병, 장애 또는 질환의 변경 또는 개선을 달성하기 위해 동물에게 화합물 또는 약학적 조성물을 투여하는 것을 나타낸다.
특정
구현예
특정 구현예는 PCSK9 발현을 억제하기 위한 방법, 화합물 및 조성물을 제공한다.
특정 구현예는 PCSK9 핵산을 표적으로 하는 화합물을 제공한다. 특정 구현예에서, PCSK9 핵산은 RefSeq 또는 GENBANK 등록 번호 NM_174936.3 및 뉴클레오티드 55036001 내지 55068000이 트렁케이션된 GENBANK 등록 번호 NC_000001.11에 기재된 서열(참조로서 포함되며, 각각 SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:2로 본원에 개시됨)을 갖는다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 단일 가닥이다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이다.
특정 구현예는 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 단일 가닥이다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예는 9개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 9개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 단일 가닥이다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예는 10개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 10개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 단일 가닥이다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예는 11개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 11개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 단일 가닥이다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 11개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예는 12개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 12개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 단일 가닥이다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 12개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예에서, 화합물은 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다.
특정 구현예는 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 단일 가닥이다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 14개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예는 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 단일 가닥이다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이다.
특정 구현예는 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:2의 핵염기 6356 내지 6371, 12843 내지 12947, 12905 내지 12948, 17681 내지 17700, 19653 내지 19673, 27626 내지 27669, 27895 내지 27949 및 28105 내지 28136 내에서 상보적인 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공하며, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 SEQ ID NO:2와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100% 상보적이다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 단일 가닥이다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예는 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:2의 핵염기 6356 내지 6371, 12843 내지 12947, 12905 내지 12948, 17681 내지 17700, 19653 내지 19673, 27626 내지 27669, 27895 내지 27949 및 28105 내지 28136의 동일 길이 부분과 상보적인 적어도 8개의 인접한 핵염기의 일부를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공하며, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 SEQ ID NO:2와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100% 상보적이다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 단일 가닥이다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9 핵산의 영역을 표적으로 한다. 특정 구현예에서, PCSK9 핵산의 영역을 표적으로 하는 상기 화합물은 상기 영역의 동일 길이의 핵염기 부분과 상보적인 인접한 핵염기 부분을 갖는다. 예를 들어, 상기 부분은 본원에 언급된 영역의 동일 길이 부분과 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 인접한 핵염기 부분일 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 화합물은 SEQ ID NO:2의 다음 뉴클레오티드 영역을 표적으로 한다: 6356 내지 6371, 12843 내지 12947, 12905 내지 12948, 17681 내지 17700, 19653 내지 19673, 27626 내지 27669, 27895 내지 27949 및 28105 내지 28136. 특정 구현예에서, 이들 화합물은 안티센스 화합물, 올리고머 화합물 또는 올리고뉴클레오티드이다.
특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:2의 뉴클레오티드 6356 내지 6371, 12909 내지 12924, 17685 내지 17700, 19658 내지 19673, 27643 내지 27658, 27906 내지 27921, 27916 내지 27931, 27917 내지 27932 및 28107 내지 28122 내의 동일 길이 부분과 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개의 인접한 핵염기 부분을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:2의 뉴클레오티드 6356 내지 6371, 12909 내지 12924, 17685 내지 17700, 19658 내지 19673, 27643 내지 27658, 27906 내지 27921, 27916 내지 27931, 27917 내지 27932 및 28107 내지 28122 내와 상보적인 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16개의 인접한 핵염기 부분을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나로 구성된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
특정 구현예에서, PCSK9을 표적으로 하는 화합물은 ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이다. 하기 실시예 섹션에 기재된 바와 같이 스크리닝된 1540개가 넘는 화합물 중, ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이 상위 선도 화합물로 나타났다. 특히, ISIS 863633은 1540개가 넘는 화합물 중 효능 및 용인성 측면에서 최적의 특성 조합을 나타내었다.
특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드 중 임의의 변형된 올리고뉴클레오티드는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오시드간 결합, 적어도 하나의 변형된 당 및/또는 적어도 하나의 변형된 핵염기를 포함한다.
특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드 중 임의의 변형된 올리고뉴클레오티드는 적어도 하나의 변형된 당을 포함한다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 변형된 당은 2'-O-메톡시에틸기를 포함한다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 변형된 당은 바이사이클릭 당, 예를 들어, 4'-CH(CH3)-O-2' 기, 4'-CH2-O-2' 기 또는 4'-(CH2)2-O-2' 기이다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오시드간 결합, 예를 들어, 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합을 포함한다.
특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드 중 임의의 변형된 올리고뉴클레오티드는 적어도 하나의 변형된 핵염기, 예를 들어, 5-메틸시토신을 포함한다.
특정 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드 중 임의의 변형된 올리고뉴클레오티드는,
연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하며;
여기서, 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 위치되고, 각각의 윙 세그먼트의 각각의 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나에 기재된 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나에 기재된 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나에 기재된 서열로 구성된 핵염기 서열을 갖는 14개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나에 기재된 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 16개 내지 80개의 연결된 핵염기 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하거나, 이로 구성되며, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는,
10개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하며;
여기서, 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 위치되고, 각각의 윙 세그먼트의 각각의 뉴클레오시드는 cEt 당을 포함하고; 각각의 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고, 각각의 시토신은 5-메틸시토신이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 16개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 16개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된다.
특정 구현예에서, 화합물은 하기 화학 구조를 갖는 ISIS 863633 또는 이의 염을 포함하거나 이로 구성된다:
.
특정 구현예에서, 화합물은 하기 화학 구조를 갖는 ISIS 863633 또는 이의 염을 포함하거나 이로 구성된다:
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특정 구현예에서, 화합물은 하기 화학 구조를 갖는 ISIS 863633의 나트륨 염을 포함하거나 이로 구성된다:
.
상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물 또는 올리고뉴클레오티드는 PCSK9을 인코딩하는 핵산과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 상보적일 수 있다.
상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 단일 가닥일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 데옥시리보뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이며, 리보뉴클레오티드를 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물일 수 있다.
상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 8 내지 80, 10 내지 30, 12 내지 50, 13 내지 30, 13 내지 50, 14 내지 30, 14 내지 50, 15 내지 30, 15 내지 50, 16 내지 30, 16 내지 50, 17 내지 30, 17 내지 50, 18 내지 22, 18 내지 24, 18 내지 30, 18 내지 50, 19 내지 22, 19 내지 30, 19 내지 50, 또는 20개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 올리고뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성된다.
특정 구현예에서, 화합물은 본원에 기재된 변형된 올리고뉴클레오티드 및 컨쥬게이트 기를 포함한다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 변형된 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에서 변형된 올리고뉴클레오티드에 연결된다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 변형된 올리고뉴클레오티드의 3' 말단에서 변형된 올리고뉴클레오티드에 연결된다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 적어도 1개의 N-아세틸갈락토사민(GalNAc), 적어도 2개의 N-아세틸갈락토사민(GalNAc) 또는 적어도 3개의 N-아세틸갈락토사민(GalNAc)을 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 화합물 또는 조성물은 변형된 올리고뉴클레오티드의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다. 특정 구현예에서, 염은 나트륨 염이다. 특정 구현예에서, 염은 칼륨 염이다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 조성물은 5 μM 미만, 4.5 μM 미만, 4 μM 미만, 3.5 μM 미만, 3 μM 미만, 2.5 μM 미만, 2 μM 미만, 1.5 μM 미만, 1 μM 미만, 0.9 μM 미만, 0.8 μM 미만, 0.7 μM 미만, 0.6 μM 미만, 0.5 μM 미만, 0.4 μM 미만, 0.3 μM 미만, 0.2 μM 미만, 또는 0.1 μM 미만의 시험관 내 IC50 중 적어도 하나를 가짐으로써 활성이다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 조성물은 염수 처리 동물에 비한 4배, 3배 또는 2배 이하의 알라닌 트랜스아미나제(ALT) 또는 아스파테이트 트랜스아미나제(AST) 값의 증가 또는 대조군 처리 동물에 비한 30%, 20%, 15%, 12%, 10%, 5% 또는 2% 이하의 간, 비장 또는 신장 중량의 증가 중 적어도 하나를 가짐으로써 입증되는 바와 같이 매우 용인 가능하다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 조성물은 대조군 처리 동물에 비한 ALT 또는 AST의 증가를 갖지 않음으로써 입증되는 바와 같이 매우 용인 가능하다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 조성물은 대조군 동물에 비한 간, 비장 또는 신장 중량에서 증가를 갖지 않음으로써 입증되는 바와 같이 매우 용인 가능하다.
특정 구현예는 상기 언급된 구현예 중 임의의 구현예의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 및 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제 중 적어도 하나를 포함하는 조성물을 제공한다. 특정 구현예에서, 조성물은 약 40 센티푸아즈(cP) 미만, 약 30 센티푸아즈(cP) 미만, 약 20 센티푸아즈(cP) 미만, 약 15 센티푸아즈(cP) 미만, 또는 약 10 센티푸아즈(cP) 미만의 점도를 갖는다. 특정 구현예에서, 상기 언급된 점도 중 임의의 점도를 갖는 조성물은 약 100 ㎎/㎖, 약 125 ㎎/㎖, 약 150 ㎎/㎖, 약 175 ㎎/㎖, 약 200 ㎎/㎖, 약 225 ㎎/㎖, 약 250 ㎎/㎖, 약 275 ㎎/㎖, 또는 약 300 ㎎/㎖의 농도의 본원에 제공된 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 언급된 점도 및/또는 화합물 농도 중 임의의 것을 갖는 조성물은 실온 또는 약 20℃, 약 21℃, 약 22℃, 약 23℃, 약 24℃, 약 25℃, 약 26℃, 약 27℃, 약 28℃, 약 29℃, 또는 약 30℃의 온도를 갖는다.
특정 적응증
본원에 제공된 특정 구현예는 PCSK9을 표적으로 하는 화합물의 투여에 의해 개체에서 PCSK9과 관련된 질병을 치료하거나, 예방하거나, 개선시키는 데 유용할 수 있는 PCSK9 발현을 억제하는 방법에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9 특이적 억제제일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 안티센스 화합물, 올리고머 화합물 또는 올리고뉴클레오티드일 수 있다.
본원에 제공된 방법으로 치료 가능하고/하거나, 예방 가능하고/하거나, 개선 가능한 PCSK9과 관련된 질병의 예는 심혈관 질환, 이상지질혈증, 혼합 이상지질혈증, 고콜레스테롤혈증, LDL 콜레스테롤 감소 및 죽종형성 아포지질단백질(a)[Lp(a)]의 감소를 포함한다.
특정 구현예에서, 개체에서 PCSK9과 관련된 질병을 치료하거나, 예방하거나, 개선시키는 방법은 PCSK9 특이적 억제제를 포함하는 화합물을 개체에 투여함으로써 질병을 치료하거나, 예방하거나, 개선시키는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 개체는 PCSK9과 관련된 질병을 갖거나 가질 위험이 있는 것으로 확인된다. 특정 구현예에서, 질병은 심혈관 질환이다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 안티센스 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나로 구성된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 개체에 비경구적으로 투여된다. 특정 구현예에서, 화합물을 투여하는 것은 LDL-콜레스테롤 수준을 감소시키고, Lp(a) 수준을 감소시키고, LDL 수용체(LDL-R) 활성을 유도하고, LDL 수용체-LDL-콜레스테롤 항상성을 조절한다.
특정 구현예에서, 심혈관 질환을 치료하거나, 예방하거나, 개선시키는 방법은 PCSK9 특이적 억제제를 포함하는 화합물을 개체에 투여함으로써 심혈관 질환을 치료하거나, 예방하거나, 개선시키는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 심혈관 질환은 이상지질혈증 또는 고콜레스테롤혈증이다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 안티센스 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나로 구성된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 개체에 비경구적으로 투여된다. 특정 구현예에서, 화합물을 투여하는 것은 LDL-콜레스테롤 수준을 감소시킨다. 특정 구현예에서, 화합물을 투여하는 것은 Lp(a) 수준을 감소시킨다. 특정 구현예에서, 화합물을 투여하는 것은 LDL 수용체(LDL-R) 활성을 유도한다. 특정 구현예에서, 화합물을 투여하는 것은 LDL 수용체-LDL-콜레스테롤 항상성을 조절한다.
특정 구현예에서, PCSK9과 관련된 질병을 갖거나 가질 위험이 있는 개체에서 PCSK9의 발현을 억제하는 방법은 PCSK9 특이적 억제제를 포함하는 화합물을 개체에 투여함으로써 개체에서 PCSK9의 발현을 억제하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물을 투여하는 것은 간에서 PCSK9의 발현을 억제한다. 특정 구현예에서, 질병은 심혈관 질환이다. 특정 구현예에서, 개체는 이상지질혈증을 갖거나, 가질 위험이 있다. 특정 구현예에서, 개체는 고콜레스테롤혈증을 갖거나, 가질 위험이 있다. 특정 구현예에서, 개체는 혼합 이상지질혈증을 갖거나, 가질 위험이 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 안티센스 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나로 구성된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 개체에 비경구적으로 투여된다. 특정 구현예에서, 화합물을 투여하는 것은 LDL-콜레스테롤 수준을 감소시킨다. 특정 구현예에서, 화합물을 투여하는 것은 Lp(a) 수준을 감소시킨다. 특정 구현예에서, 화합물을 투여하는 것은 LDL 수용체(LDL-R) 활성을 유도한다. 특정 구현예에서, 화합물을 투여하는 것은 LDL 수용체-LDL-콜레스테롤 항상성을 조절한다.
특정 구현예에서, 세포에서 PCSK9의 발현을 억제하는 방법은 세포와 PCSK9 특이적 억제제를 포함하는 화합물을 접촉시킴으로써 세포에서 PCSK9의 발현을 억제하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 간세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 간에 존재한다. 특정 구현예에서, 세포는 심혈관 질환을 갖거나, 가질 위험이 있는 개체의 간에 존재한다. 특정 구현예에서, 세포는 이상지질혈증을 갖거나, 가질 위험이 있는 개체의 간에 존재한다. 특정 구현예에서, 세포는 혼합 이상지질혈증을 갖거나, 가질 위험이 있는 개체의 간에 존재한다. 특정 구현예에서, 세포는 고콜레스테롤혈증을 갖거나, 가질 위험이 있는 개체의 간에 존재한다. 특정 구현예에서, 화합물을 투여하는 것은 간에서 PCSK9의 발현을 억제한다. 특정 구현예에서, 개체는 심혈관 질환을 갖거나, 가질 위험이 있다. 특정 구현예에서, 개체는 이상지질혈증을 갖거나, 가질 위험이 있다. 특정 구현예에서, 개체는 혼합 이상지질혈증을 갖거나, 가질 위험이 있다. 특정 구현예에서, 개체는 고콜레스테롤혈증을 갖거나, 가질 위험이 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 안티센스 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나로 구성된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물일 수 있다.
특정 구현예에서, PCSK9과 관련된 질병을 갖거나, 가질 위험이 있는 개체의 간에서 LDL-콜레스테롤 수준을 감소 또는 억제하거나, Lp(a) 수준을 감소 또는 억제하거나, LDL 수용체(LDL-R) 활성을 유도하거나, LDL 수용체-LDL-콜레스테롤 항상성을 조절하는 방법은 PCSK9 특이적 억제제를 포함하는 화합물을 개체에 투여함으로써 개체의 간에서 LDL-콜레스테롤 및 Lp(a) 수준을 감소 또는 억제하고, LDL 수용체(LDL-R) 활성을 유도하고, LDL 수용체-LDL-콜레스테롤 항상성을 조절하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 개체는 심혈관 질환을 갖거나, 가질 위험이 있다. 특정 구현예에서, 개체는 이상지질혈증을 갖거나, 가질 위험이 있다. 특정 구현예에서, 개체는 혼합 이상지질혈증을 갖거나, 가질 위험이 있다. 특정 구현예에서, 개체는 고콜레스테롤혈증을 갖거나, 가질 위험이 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 안티센스 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나로 구성된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 개체에 비경구적으로 투여된다. 특정 구현예에서, 개체는 PCSK9과 관련된 질병을 갖거나 가질 위험이 있는 것으로 확인된다.
특정 구현예는 PCSK9과 관련된 질병을 치료하는 데 사용하기 위한 PCSK9 특이적 억제제를 포함하는 화합물에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 질병은 심혈관 질환이다. 특정 구현예에서, 질병은 이상지질혈증이다. 특정 구현예에서, 질병은 혼합 이상지질혈증이다. 특정 구현예에서, 질병은 고콜레스테롤혈증이다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 안티센스 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나로 구성된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 개체에 비경구적으로 투여된다.
특정 구현예는 심혈관 질환을 갖거나 가질 위험이 있는 개체의 LDL-콜레스테롤을 감소 또는 억제하고, Lp(a) 수준을 감소 또는 억제하고, LDL 수용체(LDL-R) 활성을 유도하고, LDL 수용체-LDL-콜레스테롤 항상성을 조절하는 데 사용하기 위한 PCSK9 특이적 억제제를 포함하는 화합물에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 심혈관 질환은 이상지질혈증 또는 고콜레스테롤혈증이다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 안티센스 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나로 구성된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물일 수 있다.
특정 구현예는 PCSK9과 관련된 질병을 치료하기 위한 약제의 제조 또는 조제를 위한 PCSK9 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 용도에 관한 것이다. 특정 구현예는 PCSK9과 관련된 질병을 치료하기 위한 약제의 조제를 위한 PCSK9 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 용도에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 질병은 심혈관 질환이다. 특정 구현예에서, 질병은 이상지질혈증이다. 특정 구현예에서, 질병은 혼합 이상지질혈증이다. 특정 구현예에서, 질병은 고콜레스테롤혈증이다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 안티센스 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나로 구성된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물일 수 있다.
특정 구현예는 심혈관 질환을 갖거나 가질 위험이 있는 개체의 LDL-콜레스테롤 수준을 감소 또는 억제하고, Lp(a) 수준을 감소 또는 억제하고, LDL 수용체(LDL-R) 활성을 유도하고, LDL 수용체-LDL-콜레스테롤 항상성을 조절하기 위한 약제의 제조 또는 조제를 위한 PCSK9 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 용도에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 심혈관 질환은 이상지질혈증 또는 고콜레스테롤혈증이다. 특정 구현예는 심혈관 질환을 갖거나 가질 위험이 있는 개체의 LDL-콜레스테롤 수준을 감소 또는 억제하고, Lp(a) 수준을 감소 또는 억제하고, LDL 수용체(LDL-R) 활성을 유도하고, LDL 수용체-LDL-콜레스테롤 항상성을 조절하기 위한 약제의 조제를 위한 PCSK9 특이적 억제제를 포함하는 화합물의 용도에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 심혈관 질환은 이상지질혈증 또는 고콜레스테롤혈증이다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 안티센스 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 PCSK9을 표적으로 하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540의 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열의 적어도 8개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 14개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나로 구성된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물일 수 있다.
상기 방법 또는 용도 중 임의의 방법 또는 용도에서, 화합물은 PCSK9를 표적으로 할 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 변형된 올리고뉴클레오티드, 예를 들어, 8개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이, 10개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이, 12개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이, 또는 20개의 연결된 뉴클레오시드 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 SEQ ID NO:1, 2, 1545 내지 1550에 기재된 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오시드간 결합, 적어도 하나의 변형된 당 및/또는 적어도 하나의 변형된 핵염기를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합이고, 변형된 당은 바이사이클릭 당 또는 2'-O-메톡시에틸이고, 변형된 핵염기는 5-메틸시토신이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하며, 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 바로 인접하여 위치되고, 각각의 윙 세그먼트의 각각의 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함한다.
상기 구현예 중 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 12 내지 30, 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 24, 16 내지 24, 17 내지 24, 18 내지 24, 19 내지 24, 20 내지 24, 19 내지 22, 20 내지 22, 16 내지 20, 또는 17 또는 20개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 SEQ ID NO:1, 2, 1545 내지 1550에 기재된 핵염기 서열 중 임의의 핵염기 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 상보적이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오시드간 결합, 적어도 하나의 변형된 당 및/또는 적어도 하나의 변형된 핵염기를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합이고, 변형된 당은 바이사이클릭 당 또는 2'-O-메톡시에틸이고, 변형된 핵염기는 5-메틸시토신이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 연결된 2'-데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하며, 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 바로 인접하여 위치되고, 각각의 윙 세그먼트의 각각의 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함한다.
상기 방법 또는 용도 중 임의의 방법 또는 용도에서, 화합물은 14개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나를 포함하는 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성되며, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는,
연결된 2'-데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하며;
여기서, 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 위치되고, 각각의 윙 세그먼트의 각각의 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함한다.
상기 방법 또는 용도 중 임의의 방법 또는 용도에서, 화합물은 SEQ ID NO:1016, 1528, 763, 1071, 1147, 1149, 1016, 955, 1195 및 353 중 어느 하나에 기재된 서열을 포함하거나 이로 구성되는 핵염기 서열을 갖는 16개 내지 80개의 연결된 핵염기 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하거나, 이로 구성되며, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는,
10개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트를 포함하며;
여기서, 갭 세그먼트는 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 위치되고, 각각의 윙 세그먼트의 각각의 뉴클레오시드는 cEt 당을 포함하고; 각각의 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고; 각각의 시토신은 5-메틸시토신이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 16개 내지 80개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 16개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다.
상기 방법 또는 용도 중 임의의 방법 또는 용도에서, 화합물은 하기 화학 구조를 갖는 ISIS 863633 또는 이의 염을 포함하거나 이로 구성된다:
.
상기 방법 또는 용도 중 임의의 방법 또는 용도에서, 화합물은 하기 화학 구조를 갖는 ISIS 863633 또는 이의 염을 포함하거나 이로 구성된다:
.
상기 방법 또는 용도 중 임의의 방법 또는 용도에서, 화합물은 하기 화학 구조를 갖는 ISIS 863633의 나트륨 염을 포함하거나 이로 구성된다:
.
상기 방법 또는 용도 중 임의의 방법 또는 용도에서, 화합물은 비경구로 투여될 수 있다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 화합물은 주사 또는 주입을 통해 투여될 수 있다. 비경구 투여는 피하 투여, 정맥내 투여, 근내 투여, 동맥내 투여, 복막내 투여 또는 두개내 투여, 예를 들어, 수막강내 또는 뇌실내 투여를 포함한다.
특정 화합물
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 안티센스 화합물일 수 있다. 특정 구현예에서, 안티센스 화합물은 올리고머 화합물을 포함하거나 이로 구성된다. 특정 구현예에서, 올리고머 화합물은 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 표적 핵산의 핵염기 서열과 상보적인 핵염기 서열을 갖는다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하거나, 이로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 표적 핵산의 핵염기 서열과 상보적인 핵염기 서열을 갖는다.
특정 구현예에서, 화합물 또는 안티센스 화합물은 단일 가닥이다. 상기 단일 가닥 화합물 또는 안티센스 화합물은 올리고머 화합물을 포함하거나, 이로 구성된다. 특정 구현예에서, 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드 및 선택적으로 컨쥬게이트 기를 포함하거나 이로 구성된다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 안티센스 올리고뉴클레오티드이다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 변형된다. 특정 구현예에서, 단일 가닥 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물의 올리고뉴클레오티드는 자가-상보적 핵염기 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥이다. 상기 이중 가닥 화합물은 표적 핵산과 상보적인 영역을 갖는 제1의 변형된 올리고뉴클레오티드 및 제1의 변형된 올리고뉴클레오티드와 상보적인 영역을 갖는 제2의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 RNA 올리고뉴클레오티드이다. 상기 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드 내의 티민 핵염기는 우라실 핵염기로 대체된다. 특정 구현예에서, 화합물은 컨쥬게이트 기를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드 중 하나가 컨쥬게이션된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드 둘 모두가 컨쥬게이션된다. 특정 구현예에서, 제1의 변형된 올리고뉴클레오티드가 컨쥬게이션된다. 특정 구현예에서, 제2의 변형된 올리고뉴클레오티드가 컨쥬게이션된다. 특정 구현예에서, 제1의 변형된 올리고뉴클레오티드는 12개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, 제2의 변형된 올리고뉴클레오티드는 12개 내지 30개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드 중 하나는 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 임의의 것의 적어도 8개의 인접한 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
특정 구현예에서, 안티센스 화합물은 이중 가닥이다. 상기 이중 가닥 안티센스 화합물은 표적 핵산과 상보적인 영역을 갖는 제1의 올리고머 화합물 및 제1의 올리고머 화합물과 상보적인 영역을 갖는 제2의 올리고머 화합물을 포함한다. 상기 이중 가닥 안티센스 화합물의 제1의 올리고머 화합물은 전형적으로 변형된 올리고뉴클레오티드 및 선택적으로 컨쥬게이트 기를 포함하거나 이로 구성된다. 상기 이중 가닥 안티센스 화합물의 제2의 올리고머 화합물의 올리고뉴클레오티드는 변형되거나 변형되지 않을 수 있다. 이중 가닥 안티센스 화합물의 올리고머 화합물 중 하나 또는 둘 모두는 컨쥬게이트 기를 포함할 수 있다. 이중 가닥 안티센스 화합물의 올리고머 화합물은 비-상보적 오버행잉(overhanging) 뉴클레오시드를 포함할 수 있다.
단일 가닥 및 이중 가닥 화합물의 예는 올리고뉴클레오티드, siRNA, 마이크로RNA 표적화 올리고뉴클레오티드 및 단일 가닥 RNAi 화합물, 예를 들어, 작은 헤어핀 RNA(shRNA), 단일 가닥 siRNA(ssRNA) 및 마이크로RNA 모방체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 5'에서 3' 방향으로 기재하는 경우 표적화되는 표적 핵산의 표적 세그먼트의 역 상보체를 포함하는 핵염기 서열을 갖는다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 10개 내지 30개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 12개 내지 30개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 12개 내지 22개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 14개 내지 30개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 14개 내지 20개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화1합물은 15개 내지 30개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 15개 내지 20개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 16개 내지 30개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 16개 내지 20개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 17개 내지 30개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 17개 내지 20개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 18개 내지 30개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 18개 내지 21개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 18개 내지 20개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 20개 내지 30개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 달리 말하면, 상기 올리고뉴클레오티드는 각각 12개 내지 30개의 연결된 서브유닛, 14개 내지 30개의 연결된 서브유닛, 14개 내지 20개의 서브유닛, 15개 내지 30개의 서브유닛, 15개 내지 20개의 서브유닛, 16개 내지 30개의 서브유닛, 16개 내지 20개의 서브유닛, 17개 내지 30개의 서브유닛, 17개 내지 20개의 서브유닛, 18개 내지 30개의 서브유닛, 18개 내지 20개의 서브유닛, 18개 내지 21개의 서브유닛, 20개 내지 30개의 서브유닛, 또는 12개 내지 22개의 연결된 서브유닛 길이이다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 14개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 16개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 17개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 18개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 19개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 20개의 연결된 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 8개 내지 80개, 12개 내지 50개, 13개 내지 30개, 13개 내지 50개, 14개 내지 30개, 14개 내지 50개, 15개 내지 30개, 15개 내지 50개, 16개 내지 30개, 16개 내지 50개, 17개 내지 30개, 17개 내지 50개, 18개 내지 22개, 18개 내지 24개, 18개 내지 30개, 18개 내지 50개, 19개 내지 22개, 19개 내지 30개, 19개 내지 50개, 또는 20개 내지 30개의 연결된 서브유닛의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정한 상기 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 또는 80개의 연결된 서브유닛 길이, 또는 상기 값 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위의 서브유닛 길이의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 연결된 서브유닛은 뉴클레오티드, 뉴클레오시드 또는 핵염기이다.
특정 구현예에서, 화합물은 올리고뉴클레오티드에 부착된 추가의 특징부 또는 요소, 예를 들어, 컨쥬게이트 기를 추가로 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 화합물은 안티센스 화합물이다. 특정 구현예에서, 상기 화합물은 올리고머 화합물이다. 컨쥬게이트 기가 뉴클레오시드(즉, 컨쥬게이트 기를 올리고뉴클레오티드에 연결시키는 뉴클레오시드)를 포함하는 경우, 컨쥬게이트 기의 뉴클레오시드는 올리고뉴클레오티드의 길이에 계산되지 않는다.
특정 구현예에서, 화합물은 단축되거나 트렁케이션될 수 있다. 예를 들어, 단일 서브유닛은 5' 말단(5' 트렁케이션), 또는 대안적으로 3' 말단(3' 트렁케이션)으로부터 결실될 수 있다. PCSK9 핵산에 표적화된 단축되거나 트렁케이션된 화합물은 화합물의 5' 말단으로부터 결실된 2개의 서브유닛을 가질 수 있거나, 대안적으로 3' 말단으로부터 결실된 2개의 서브유닛을 가질 수 있다. 대안적으로, 결실된 뉴클레오시드는 화합물 전체에 걸쳐 분산될 수 있다.
하나의 추가 서브유닛이 연장된 화합물에 존재하는 경우, 추가 서브유닛은 화합물의 5' 또는 3' 말단에 위치될 수 있다. 2개 이상의 추가 서브유닛이 존재하는 경우, 첨가된 서브유닛은, 예를 들어, 화합물의 5' 말단(5' 첨가), 또는 대안적으로 3' 말단(3' 첨가)에 첨가된 2개의 서브유닛을 갖는 화합물에서 서로 인접하여 존재할 수 있다. 대안적으로, 첨가된 서브유닛은 화합물 전체에 걸쳐 분산될 수 있다.
활성을 제거함이 없이 화합물, 예를 들어, 올리고뉴클레오티드의 길이를 증가 또는 감소시키고/시키거나, 불일치 염기를 도입하는 것이 가능하다(문헌[Woolf et al. Proc . Natl . Acad . Sci . USA 1992, 89:7305-7309]; 문헌[Gautschi et al. J. Natl . Cancer Inst . March 2001, 93:463-471]; 문헌[Maher and Dolnick Nuc . Acid. Res. 1998, 16:3341-3358]). 그러나, 외관상 올리고뉴클레오티드 서열, 화학 및 모티프에서의 작은 변화가 임상 개발에 필요한 많은 특성 중 하나 이상에서 큰 차이를 만들 수 있다(문헌[Seth et al. J. Med . Chem . 2009, 52, 10]; 문헌[Egli et al. J. Am. Chem . Soc . 2011, 133, 16642]).
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 이중 가닥 RNA 화합물(짧은 간섭 RNA 또는 siRNA로도 언급됨) 및 단일 가닥 RNAi 화합물(또는 ssRNA)을 포함하는 간섭 RNA 화합물(RNAi)이다. 상기 화합물은 적어도 부분적으로 표적 핵산을 분해하고/하거나 격리시키기 위해 RISC 경로를 통해 작용한다(따라서, 마이크로RNA/마이크로RNA-모방체 화합물을 포함한다). 본원에서 사용되는 용어 siRNA는 서열 특이적 RNAi를 매개할 수 있는 핵산 분자, 예를 들어, 짧은 간섭 RNA(siRNA), 이중 가닥 RNA(dsRNA), 마이크로-RNA(miRNA), 짧은 헤어핀 RNA(shRNA), 짧은 간섭 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 핵산, 짧은 간섭 변형 올리고뉴클레오티드, 화학적으로 변형된 siRNA, 전사후 유전자 침묵 RNA(ptgsRNA) 등을 기재하기 위해 사용되는 다른 용어와 동등한 것을 의미한다. 또한, 본원에서 사용되는 용어 "RNAi"는 서열 특이적 RNA 간섭, 예를 들어, 전사후 유전자 침묵, 번역 억제 또는 후생유전학을 기재하기 위해 사용되는 다른 용어와 동등한 것을 의미한다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 본원에 기재된 PCSK9을 표적으로 하는 올리고뉴클레오티드 서열 중 임의의 올리고뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 이중 가닥일 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 인접한 핵염기 부분을 포함하는 제1 가닥 및 제2 가닥을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열을 포함하는 제1 가닥 및 제2 가닥을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 제1 가닥이 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나에서 티미딘(T) 대신에 우라실(U)을 갖는 리보뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 (i) SEQ ID NO:3 내지 1540 중 임의의 것이 표적으로 하는 PCSK9 상의 부위에 상보적인 핵염기 서열을 포함하는 제1 가닥, 및 (ii) 제2 가닥을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 당 내의 2' 위치가 할로겐(예를 들어, 플루오르 기; 2'-F)을 함유하거나 알콕시기(예를 들어, 메톡시기; 2'-OMe)를 함유하는 하나 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 적어도 하나의 2'-F 당 변형 및 적어도 하나의 2'-OMe 당 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 2'-F 당 변형 및 적어도 하나의 2'-OMe 당 변형은 dsRNA 화합물의 가닥을 따라 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 인접한 핵염기에 대해 교대 패턴으로 배열된다. 특정 구현예에서, 화합물은 인접한 뉴클레오티드 사이에 천연 발생 포스포디에스테르 결합이 아닌 하나 이상의 결합을 포함한다. 상기 결합의 예는 포스포르아미드, 포스포로티오에이트 및 포스포로디티오에이트 결합을 포함한다. 화합물은 또한 미국 특허 번호 6,673,661호에 교시된 바와 같은 화학적으로 변형된 핵산 분자일 수 있다. 다른 구현예에서, 화합물은, 예를 들어, 2000년 4월 19일에 출원된 WO 00/63364호에 개시된 바와 같은 1개 또는 2개의 캡핑된 가닥을 함유한다.
특정 구현예에서, 화합물의 제1 가닥은 siRNA 가이드 가닥이고, 화합물의 제2 가닥은 siRNA 패신저 가닥이다. 특정 구현예에서, 화합물의 제2 가닥은 제1 가닥에 상보적이다. 특정 구현예에서, 화합물의 각각의 가닥은 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 또는 23개의 연결된 뉴클레오시드 길이이다. 특정 구현예에서, 화합물의 제1 또는 제2 가닥은 컨쥬게이트 기를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 본원에 기재된 PCSK9을 표적으로 하는 올리고뉴클레오티드 서열 중 임의의 올리고뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 단일 가닥이다. 특정 구현예에서, 상기 화합물은 단일 가닥 RNAi(ssRNAi) 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 인접한 핵염기 부분을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나의 핵염기 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 어느 하나에서 티민(T) 대신에 우라실(U)이 존재하는 리보뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 SEQ ID NO:3 내지 1540 중 임의의 것이 표적으로 하는 PCSK9 상의 부위에 상보적인 핵염기 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 당 내의 2' 위치가 할로겐(예를 들어, 플루오르 기; 2'-F)을 함유하거나 알콕시기(예를 들어, 메톡시기; 2'-OMe)를 함유하는 하나 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 적어도 하나의 2'-F 당 변형 및 적어도 하나의 2'-OMe 당 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 2'-F 당 변형 및 적어도 하나의 2'-OMe 당 변형은 화합물의 가닥을 따라 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 인접한 핵염기에 대해 교대 패턴으로 배열된다. 특정 구현예에서, 화합물은 인접한 뉴클레오티드 사이에 천연 발생 포스포디에스테르 결합이 아닌 하나 이상의 결합을 포함한다. 상기 결합의 예는 포스포르아미드, 포스포로티오에이트 및 포스포로디티오에이트 결합을 포함한다. 화합물은 또한 미국 특허 번호 6,673,661호에 교시된 바와 같은 화학적으로 변형된 핵산 분자일 수 있다. 다른 구현예에서, 화합물은, 예를 들어, 2000년 4월 19일에 출원된 WO 00/63364호에 개시된 바와 같은 캡핑된 가닥을 함유한다. 특정 구현예에서, 화합물은 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 또는 23개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된다. 특정 구현예에서, 화합물은 컨쥬게이트 기를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정한 변형된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 비대칭 중심을 가지며, 따라서 절대 입체화학과 관련하여 (R) 또는 (S), 당 아노머에 대해서와 같은 α 또는 β, 또는 아미노산에 대해서와 같은 (D) 또는 (L) 등으로 정의될 수 있는 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체 및 기타 입체이성질체 형태를 발생시킨다. 달리 명시되지 않는 한, 모든 상기 가능한 이성질체, 예를 들어, 이들의 라세미체 및 광학적으로 순수한 형태가 본원에서 제공되는 변형된 올리고뉴클레오티드에 포함된다. 마찬가지로, 모든 시스-이성질체 및 트랜스-이성질체 및 토토머 형태가 또한 포함된다.
본원에 기재된 화합물은 하나 이상의 원자가 표시된 원소의 비-방사성 동위원소 또는 방사성 동위원소로 대체된 변형을 포함한다. 예를 들어, 수소 원자를 포함하는 본원의 화합물은 1H 수소 원자 각각에 대한 모든 가능한 중수소 치환을 포함한다. 본원의 화합물에 포함되는 동위원소 치환은 1H 대신 2H 또는 3H, 12C 대신 13C 또는 14C, 14N 대신 15N, 16O 대신 17O 또는 18O, 및 32S 대신 33S, 34S, 35S 또는 36S를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 구현예에서, 비-방사성 동위원소 치환은 치료 또는 연구 도구로서 사용하기에 이로운 화합물에 대한 새로운 특성을 부여할 수 있다. 특정 구현예에서, 방사성 동위원소 치환은 화합물을 영상화 검정과 같은 연구 또는 진단 목적에 적합하게 만들 수 있다.
특정 메커니즘
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성된다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 안티센스 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 올리고머 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 표적 핵산에 하이브리드화되어 적어도 하나의 안티센스 활성을 발생시킬 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 하나 이상의 표적 핵산에 선택적으로 영향을 미친다. 상기 화합물은 하나 이상의 표적 핵산에 하이브리드화되어 하나 이상의 원하는 안티센스 활성을 발생시키고, 하나 이상의 비-표적 핵산에 하이브리드화되지 않거나, 유의한 원하지 않는 안티센스 활성을 발생시키는 방식으로 하나 이상의 비-표적 핵산에 하이브리드화되지 않는 핵염기 서열을 포함한다.
특정한 안티센스 활성에서, 표적 핵산에 대한 본원에 기재된 화합물의 하이브리드화는 표적 핵산을 절단하는 단백질의 모집을 발생시킨다. 예를 들어, 특정한 본원에 기재된 화합물은 표적 핵산의 RNase H 매개 절단을 발생시킨다. RNase H는 RNA:DNA 듀플렉스의 RNA 가닥을 절단하는 세포 엔도뉴클레아제이다. 상기 RNA:DNA 듀플렉스 내의 DNA는 변형되지 않은 DNA일 필요는 없다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 RNase H 활성을 유도하기에 충분히 "DNA-유사"하다. 또한, 특정 구현예에서, 갭머의 갭 내의 하나 이상의 비-DNA-유사 뉴클레오시드가 허용된다.
특정한 안티센스 활성에서, 본원에 기재된 화합물 또는 화합물의 일부는 RNA-유도 침묵 복합체(RISC)에 로딩되어 궁극적으로 표적 핵산의 절단을 발생시킨다. 예를 들어, 특정한 본원에 기재된 화합물은 아르고너트(Argonaute)에 의해 표적 핵산의 절단을 발생시킨다. RISC에 로딩되는 화합물은 RNAi 화합물이다. RNAi 화합물은 이중 가닥(siRNA)이거나 단일 가닥(ssRNA)일 수 있다.
특정 구현예에서, 표적 핵산에 대한 본원에 기재된 화합물의 하이브리드화는 표적 핵산을 절단하는 단백질의 모집을 발생시키지 않는다. 특정한 상기 구현예에서, 표적 핵산에 대한 화합물의 하이브리드화는 표적 핵산의 스플라이싱의 변경을 발생시킨다. 특정 구현예에서, 표적 핵산에 대한 화합물의 하이브리드화는 표적 핵산과 단백질 또는 다른 핵산 사이의 결합 상호작용의 억제를 발생시킨다. 특정한 상기 구현예에서, 표적 핵산에 대한 화합물의 하이브리드화는 표적 핵산의 번역의 변경을 발생시킨다.
안티센스 활성은 직접적 또는 간접적으로 관찰될 수 있다. 특정 구현예에서, 안티센스 활성의 관찰 또는 검출은 표적 핵산 또는 상기 표적 핵산에 의해 인코딩되는 단백질의 양에서의 변화, 핵산 또는 단백질의 스플라이스 변이체의 비에서의 변화 및/또는 세포 또는 동물에서의 표현형 변화의 관찰 또는 검출을 포함한다.
표적 핵산, 표적 영역 및 뉴클레오티드 서열
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 표적 핵산에 상보적인 영역을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성된다. 특정 구현예에서, 표적 핵산은 내인성 RNA 분자이다. 특정 구현예에서, 표적 핵산은 단백질을 인코딩한다. 특정한 상기 구현예에서, 표적 핵산은 mRNA 및 인트론, 엑손 및 비번역 영역을 포함하는 프리-mRNA로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 표적 RNA는 mRNA이다. 특정 구현예에서, 표적 핵산은 프리-mRNA이다. 특정한 상기 구현예에서, 표적 영역은 전체적으로 인트론 내에 존재한다. 특정 구현예에서, 표적 영역은 인트론/엑손 접합부에 걸쳐 있다. 특정 구현예에서, 표적 영역은 인트론 내에 적어도 50%가 존재한다.
PCSK9을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은 RefSEQ 번호 GENBANK 등록 번호 NM_174936.3(SEQ ID NO:1), 뉴클레오티드 55036001 내지 55068000이 트렁케이션된 GENBANK 등록 번호 NC_000001.11(SEQ ID NO:2), GENBANK 등록 번호 AK124635.1(SEQ ID NO:1545), 뉴클레오티드 25475000 내지 25504000이 트렁케이션된 GENBANK 등록 번호 NT_032977.8(SEQ ID NO:1546), GENBANK 등록 번호 DA092236.1(SEQ ID NO:1547), GENBANK 등록 번호 DA803830.1(SEQ ID NO: 1548), GENBANK 등록 번호 DC352135.1(SEQ ID NO:1549) 및 GENBANK 등록 번호 NR_110451.1(SEQ ID NO:1550)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
하이브리드화
일부 구현예에서, 하이브리드화는 본원에 개시된 화합물과 PCSK9 핵산 사이에서 발생한다. 하이브리드화의 가장 일반적인 메커니즘은 핵산 분자의 상보적 핵염기 사이의 수소 결합(예를 들어, 왓슨-크릭, 후그스틴 또는 역 후그스틴 수소 결합)을 포함한다.
하이브리드화는 다양한 조건하에서 발생할 수 있다. 하이브리드화 조건은 서열 의존적이며, 하이브리드화되는 핵산 분자의 특성 및 조성에 의해 결정된다.
서열이 표적 핵산에 특이적으로 하이브리드화될 수 있는지의 여부를 결정하는 방법은 당 분야에 널리 공지되어 있다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 화합물은 PCSK9 핵산과 특이적으로 하이브리드화될 수 있다.
상보성
올리고뉴클레오티드는 상기 올리고뉴클레오티드 또는 이의 하나 이상의 영역의 핵염기 서열이 2개의 핵염기 서열이 반대 방향으로 정렬되는 경우에 또 다른 올리고뉴클레오티드 또는 핵산 또는 이의 하나 이상의 영역의 핵염기 서열과 일치하는 경우에 또 다른 핵산과 상보적인 것으로 언급된다. 본원에 기재된 바와 같은 핵염기 일치 또는 상보적 핵염기는 달리 명시되지 않는 한 아데닌(A) 및 티민(T), 아데닌(A) 및 우라실(U), 시토신(C) 및 구아닌(G), 및 5-메틸 시토신(mC) 및 구아닌(G)의 쌍으로 제한된다. 상보적 올리고뉴클레오티드 및/또는 핵산은 각각의 뉴클레오시드에서 핵염기 상보성을 가질 필요는 없으며, 하나 이상의 핵염기 불일치를 포함할 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 상기 올리고뉴클레오티드가 어떠한 핵염기 불일치 없이 각각의 뉴클레오시드에서 핵염기 일치를 갖는 경우에 완전히 상보적이거나 100% 상보적이다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성된다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 안티센스 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 올리고머 화합물을 포함한다. 화합물과 PCSK9 핵산 사이의 비-상보적 핵염기가 용인될 수 있으나, 단, 화합물은 표적 핵산에 특이적으로 하이브리드화될 수 있어야 한다. 또한, 화합물은 사이에 존재하거나 인접한 세그먼트가 하이브리드화 사건에 관여하지 않도록(예를 들어, 루프 구조, 불일치 또는 헤어핀 구조) 하는 PCSK9 핵산의 하나 이상의 세그먼트 상에서 하이브리드화될 수 있다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 화합물 또는 이의 특정 부분은 PCSK9 핵산, 표적 영역, 표적 세그먼트, 또는 이들의 특정 부분에 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적이거나, 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적이거나, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 이하로 상보적이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 화합물 또는 이의 특정 부분은 PCSK9 핵산, 표적 영역, 표적 세그먼트, 또는 이들의 특정 부분에 70% 내지 75%, 75% 내지 80%, 80% 내지 85%, 85% 내지 90%, 90% 내지 95%, 95% 내지 100%, 또는 이들 범위 내의 임의의 수로 상보적이다. 화합물과 표적 핵산의 상보성 퍼센트는 일상적인 방법을 이용하여 결정될 수 있다.
예를 들어, 화합물의 20개의 핵염기 중 18개가 표적 영역에 상보적이고, 따라서 특이적으로 하이브리드화되는 화합물은 90 퍼센트 상보성을 나타낼 것이다. 이러한 예에서, 나머지 비-상보적 핵염기는 상보적 핵염기와 군집을 이루거나 산재되어 있을 수 있고, 서로 또는 상보적 핵염기와 인접할 존재할 필요는 없다. 이와 같이, 표적 핵산과 완전한 상보성의 2개의 영역이 측접된 4개의 비-상보적 핵염기를 갖는 18개 핵염기 길이의 화합물은 표적 핵산과 77.8%의 전체 상보성을 가질 것이다. 화합물과 표적 핵산의 영역의 상보성 퍼센트는 당 분야에 공지된 BLAST 프로그램(기본 국소 정렬 검색 도구) 및 PowerBLAST 프로그램(문헌[Altschul et al., J. Mol . Biol ., 1990, 215, 403 410]; 문헌[Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656])을 이용하여 일상적으로 결정될 수 있다. 상동성 퍼센트, 서열 동일성 또는 상보성은, 예를 들어, 스미스 및 워터맨(Smith and Waterman)의 알고리즘을 이용하는 디폴트 설정을 이용한 Gap 프로그램(Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.)에 의해 결정될 수 있다(Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489).
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물 또는 이의 특정한 부분은 표적 핵산 또는 이의 특정한 부분과 완전히 상보적(즉, 100% 상보적)이다. 예를 들어, 화합물은 PCSK9 핵산, 또는 표적 영역, 또는 표적 세그먼트 또는 이들의 표적 서열에 완전히 상보적일 수 있다. 본원에서 사용되는 "완전히 상보적"은 화합물의 각각의 핵염기가 표적 핵산의 상응하는 핵염기와 상보적임을 의미한다. 예를 들어, 20개의 핵염기 화합물은 화합물에 완전히 상보적인 표적 핵산의 상응하는 20개의 핵염기 부분이 존재하는 한 400개 핵염기 길이인 표적 서열에 완전히 상보적이다. 완전한 상보성은 또한 제1 및/또는 제2 핵산의 특정 부분과 관련하여 이용될 수 있다. 예를 들어, 30개의 핵염기 화합물의 20개의 핵염기 부분은 400개의 핵염기 길이인 표적 서열과 "완전히 상보적"일 수 있다. 30개의 핵염기 화합물 중 20개의 핵염기 부분은 표적 서열이 각각의 핵염기가 화합물의 20개의 핵염기 부분에 상보적인 상응하는 20개의 핵염기 부분을 갖는 경우에 표적 서열에 완전히 상보적이다. 동시에, 전체 30개의 핵염기 화합물은 화합물의 나머지 10개의 핵염기가 또한 표적 서열과 상보적인지의 여부에 따라 표적 서열과 완전히 상보적이거나 그렇지 않을 수 있다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 표적 핵산에 비해 하나 이상의 불일치 핵염기를 포함한다. 특정한 상기 구현예에서, 표적에 대한 안티센스 활성은 상기 불일치에 의해 감소되나, 비-표적에 대한 활성은 더 많은 양으로 감소된다. 따라서, 특정한 상기 구현예에서, 화합물의 선택성이 개선된다. 특정 구현예에서, 불일치는 갭머 모티프를 갖는 올리고뉴클레오티드 내에 특이적으로 위치된다. 특정한 상기 구현예에서, 불일치는 갭 영역의 5'-말단으로부터 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8에 존재한다. 특정한 상기 구현예에서, 불일치는 갭 영역의 3'-말단으로부터 위치 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1에 존재한다. 특정한 상기 구현예에서, 불일치는 윙 영역의 5'-말단으로부터 위치 1, 2, 3 또는 4에 존재한다. 특정한 상기 구현예에서, 미스매치는 윙 영역의 3'-말단으로부터 위치 4, 3, 2 또는 1에 존재한다. 특정 구현예에서, 불일치는 갭머 모티프를 갖지 않는 올리고뉴클레오티드 내에 특이적으로 위치된다. 특정한 상기 구현예에서, 불일치는 올리고뉴클레오티드의 5'-말단으로부터 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12에 존재한다. 특정한 상기 구현예에서, 불일치는 올리고뉴클레오티드의 3'-말단으로부터 위치 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12에 존재한다.
비-상보적 핵염기의 위치는 화합물의 5' 말단 또는 3' 말단에 존재할 수 있다. 대안적으로, 비-상보적 핵염기 또는 핵염기들은 화합물의 내부 위치에 존재할 수 있다. 2개 이상의 비-상보적 핵염기가 존재하는 경우, 이들은 인접하거나(즉, 연결됨), 인접하지 않을 수 있다. 일 구현예에서, 비-상보적 핵염기는 갭머 올리고뉴클레오티드의 윙 세그먼트 내에 위치된다.
특정 구현예에서, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개의 핵염기 길이이거나, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 이하의 핵염기 길이인 본원에 기재된 화합물은 표적 핵산, 예를 들어, PCSK9 핵산, 또는 이의 특정 부분에 비해 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 비-상보적 핵염기(들)을 포함한다.
특정 구현예에서, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 핵염기 길이, 또는 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개 이하의 핵염기 길이인 본원에 기재된 화합물은 표적 핵산, 예를 들어, PCSK9 핵산, 또는 이의 특정 부분에 비해 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개 이하의 비-상보적 핵염기(들)을 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 또한 표적 핵산의 일부와 상보적인 화합물을 포함한다. 본원에서 사용되는 "일부"는 표적 핵산의 영역 또는 세그먼트 내의 정의된 수의 인접한(즉, 연결된) 핵염기를 나타낸다. "일부"는 또한 화합물의 정의된 수의 인접한 핵염기를 나타낼 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 8개의 핵염기 부분과 상보적이다. 특정 구현예에서, 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 9개의 핵염기 부분과 상보적이다. 특정 구현예에서, 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 10개의 핵염기 부분과 상보적이다. 특정 구현예에서, 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 11개의 핵염기 부분과 상보적이다. 특정 구현예에서, 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 12개의 핵염기 부분과 상보적이다. 특정 구현예에서, 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 13개의 핵염기 부분과 상보적이다. 특정 구현예에서, 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 14개의 핵염기 부분과 상보적이다. 특정 구현예에서, 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 15개의 핵염기 부분과 상보적이다. 특정 구현예에서, 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 16개의 핵염기 부분과 상보적이다. 표적 세그먼트의 적어도 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 또는 그 초과의 핵염기 부분, 또는 이들 값 중 임의의 2개에 의해 정의되는 범위에 상보적인 화합물이 또한 고려된다.
동일성
본원에 제공된 화합물은 또한 특정 뉴클레오티드 서열, SEQ ID NO, 또는 특정 ION 번호에 의해 표현되는 화합물, 또는 이들의 일부에 대한 규정된 동일성 퍼센트를 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 변형된 올리고뉴클레오티드이다. 본원에서 사용되는 화합물은 동일한 핵염기쌍 형성 능력을 갖는 경우 본원에 개시된 서열과 동일하다. 예를 들어, 개시된 DNA 서열 내에서 티미딘 대신에 우라실을 함유하는 RNA가 DNA 서열과 동일한 것으로 간주될 것인데 이는 우라실 및 티미딘 둘 모두가 아데닌과 쌍을 이루기 때문이다. 본원에 기재된 화합물의 단축된 형태 및 연장된 형태뿐만 아니라 본원에 제공된 화합물에 비해 동일하지 않은 염기를 갖는 화합물이 또한 고려된다. 동일하지 않은 염기는 서로 인접하거나, 화합물 전체에 걸쳐 분산되어 있을 수 있다. 화합물의 동일성 퍼센트는 비교되는 서열에 비한 동일한 염기쌍을 갖는 염기의 수에 따라 계산된다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물 또는 이의 일부는 본원에 개시된 화합물 또는 SEQ ID NO, 또는 이들의 일부 중 하나 이상과 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하거나, 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 특정 뉴클레오티드 서열, SEQ ID NO, 또는 특정 ION 번호에 의해 표현되는 화합물, 또는 이들의 일부와 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%, 또는 상기 값 사이의 임의의 백분율로 동일하며, 상기 화합물은 하나 이상의 불일치 핵염기를 갖는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정한 상기 구현예에서, 불일치는 올리고뉴클레오티드의 5'-말단으로부터 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12에 존재한다. 특정한 상기 구현예에서, 불일치는 올리고뉴클레오티드의 3'-말단으로부터 위치 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12에 존재한다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 안티센스 화합물을 포함하거나 이로 구성된다. 특정 구현예에서, 안티센스 화합물의 일부는 표적 핵산의 동일 길이 부분과 비교된다. 특정 구현예에서, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개의 핵염기 부분이 표적 핵산의 동일 길이 부분과 비교된다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 올리고뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성된다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 일부는 표적 핵산의 동일 길이 부분과 비교된다. 특정 구현예에서, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개의 핵염기 부분이 표적 핵산의 동일 길이 부분과 비교된다.
특정한 변형된 화합물
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 연결된 뉴클레오티드로 구성된 올리고뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성된다. 올리고뉴클레오티드는 변형되지 않은 올리고뉴클레오티드(RNA 또는 DNA)일 수 있거나, 변형된 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 변형된 올리고뉴클레오티드는 변형되지 않은 RNA 또는 DNA에 비해 적어도 하나의 변형을 포함(즉, 적어도 하나의 변형된 뉴클레오티드(변형된 당 모이어티 및/또는 변형된 핵염기를 포함함) 및/또는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오시드간 결합을 포함)한다.
A. 변형된 뉴클레오시드
변형된 뉴클레오시드는 변형된 당 모이어티 또는 변형된 핵염기 또는 변형된 당 모이어티 및 변형된 핵염기 둘 모두를 포함한다.
1. 변형된 당
모이어티
특정 구현예에서, 당 모이어티는 비-바이사이클릭 변형 당 모이어티이다. 특정 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 당 모이어티이다. 특정 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 당 대용물이다. 상기 당 대용물은 다른 유형의 변형된 당 모이어티의 것에 상응하는 하나 이상의 치환을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 2', 4' 및/또는 5' 위치에서의 치환기를 포함하나 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 무고리 치환기를 갖는 푸라노실 고리를 포함하는 비-바이사이클릭 변형 당 모이어티이다. 특정 구현예에서, 비-바이사이클릭 변형 당 모이어티의 하나 이상의 무고리 치환기는 분지된다. 비-바이사이클릭 변형 당 모이어티에 적합한 2'-치환기의 예는 2'-F, 2'-OCH3("OMe" 또는 "O-메틸") 및 2'-O(CH2)2OCH3("MOE")를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 구현예에서, 2'-치환기는 할로, 알릴, 아미노, 아지도, SH, CN, OCN, CF3, OCF3, O-C1-C10 알콕시, O-C1-C10 치환된 알콕시, O-C1-C10 알킬, O-C1-C10 치환된 알킬, S-알킬, N(Rm)-알킬, O-알케닐, S-알케닐, N(Rm)-알케닐, O-알키닐, S-알키닐, N(Rm)-알키닐, O-알케닐-O-알킬, 알키닐, 알카릴, 아르알킬, O-알카릴, O-아르알킬, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2ON(Rm)(Rn) 또는 OCH2C(=O)-N(Rm)(Rn)(여기서, 각각의 Rm 및 Rn은 독립적으로 H, 아미노 보호기, 또는 치환되거나 비치환된 C1-C10 알킬임), 및 U.S. 6,531,584호(Cook et al.); U.S. 5,859,221호(Cook et al.); 및 U.S. 6,005,087호(Cook et al.)에 기재된 2'-치환기로부터 선택된다. 이들 2'-치환기의 특정 구현예는 하이드록실, 아미노, 알콕시, 카르복시, 벤질, 페닐, 니트로(NO2), 티올, 티오알콕시, 티오알킬, 할로겐, 알킬, 아릴, 알케닐 및 알키닐로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 선형의 비-바이사이클릭 변형 당 모이어티에 적합한 4'-치환기의 예는 알콕시(예를 들어, 메톡시), 알킬 및 WO 2015/106128호(Manoharan et al.)에 기재된 것을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 비-바이사이클릭 변형 당 모이어티에 적합한 5'-치환기의 예는 5'-메틸(R 또는 S), 5'-비닐 및 5'-메톡시를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 구현예에서, 비-바이사이클릭 변형 당은 하나 초과의 비-브릿징 당 치환기, 예를 들어, 2'-F-5'-메틸 당 모이어티 및 US2010/190837호(Migawa et al.) 및 US2013/0203836호(Rajeev et al.)에 기재된 변형된 당 모이어티 및 변형된 뉴클레오시드를 포함한다.
특정 구현예에서, 2'-치환된 뉴클레오시드 또는 2'-비-바이사이클릭 변형 뉴클레오시드는 F, NH2, N3, OCF3, OCH3, O(CH2)3NH2, CH2CH=CH2, OCH2CH=CH2, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2ON(Rm)(Rn), O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2 및 N-치환된 아세트아미드(OCH2C(=O)-N(Rm)(Rn))로부터 선택된 선형의 2'-치환기를 포함하는 당 모이어티를 포함하며, 여기서 각각의 Rm 및 Rn은 독립적으로 H, 아미노 보호기, 또는 치환되거나 비치환된 C1-C10 알킬이다.
특정 구현예에서, 2'-치환된 뉴클레오시드 또는 2'-비-바이사이클릭 변형 뉴클레오시드는 F, OCF3, OCH3, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2ON(CH3)2, O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2 및 OCH2C(=O)-N(H)CH3("NMA")로부터 선택된 선형의 2'-치환기를 포함하는 당 모이어티를 포함한다.
특정 구현예에서, 2'-치환된 뉴클레오시드 또는 2'-비-바이사이클릭 변형 뉴클레오시드는 F, OCH3 및 OCH2CH2OCH3로부터 선택된 선형의 2'-치환기를 포함하는 당 모이어티를 포함한다.
변형된 당 모이어티, 예를 들어, 비-바이사이클릭 변형 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드는 뉴클레오시드의 당 모이어티 상의 치환(들)의 위치(들)에 의해 언급된다. 예를 들어, 2'-치환된 또는 2-변형된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드는 2'-치환된 뉴클레오시드 또는 2-변형된 뉴클레오시드로 언급된다.
특정한 변형된 당 모이어티는 두번째 고리를 형성하여 바이사이클릭 당 모이어티를 발생시키는 브릿징 당 치환기를 포함한다. 특정한 상기 구현예에서, 바이사이클릭 당 모이어티는 4'과 2' 푸라노스 고리 원자 사이에 브릿지를 포함한다. 상기 4' 대 2' 브릿징 당 치환기의 예는 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2'("LNA"), 4'-CH2-S-2', 4'-(CH2)2-O-2'("ENA"), 4'-CH(CH3)-O-2'(S 입체형태인 경우 "구속된 에틸" 또는 "cEt"로 언급됨), 4'-CH2-O-CH2-2', 4'-CH2-N(R)-2', 4'-CH(CH2OCH3)-O-2'("구속된 MOE" 또는 "cMOE") 및 이들의 유사체(예를 들어, U.S. 7,399,845호(Seth et al.), U.S. 7,569,686호(Bhat et al.), U.S. 7,741,457호(Swayze et al.), 및 U.S. 8,022,193호(Swayze et al.) 참조), 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' 및 이의 유사체(예를 들어, U.S. 8,278,283호(Seth et al.) 참조), 4'-CH2-N(OCH3)-2' 및 이의 유사체(예를 들어, U.S. 8,278,425호(Prakash et al.) 참조), 4'-CH2-O-N(CH3)-2'(예를 들어, U.S. 7,696,345호(Allerson et al.) 및 U.S. 8,124,745호(Allerson et al.) 참조), 4'-CH2-C(H)(CH3)-2'(예를 들어, 문헌[Zhou, et al., J. Org . Chem.,2009, 74, 118-134] 참조), 4'-CH2-C(=CH2)-2' 및 이의 유사체(예를 들어, U.S. 8,278,426호(Seth et al.) 참조), 4'-C(RaRb)-N(R)-O-2', 4'-C(RaRb)-O-N(R)-2', 4'-CH2-O-N(R)-2', 및 4'-CH2-N(R)-O-2'(여기서, 각각의 R, Ra 및 Rb는 독립적으로 H, 보호기 또는 C1-C12 알킬임)(예를 들어, U.S. 7,427,672호(Imanishi et al.) 참조)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정 구현예에서, 상기 4' 대 2' 브릿지는 독립적으로 -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x- 및 N(Ra)-로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 4개의 연결된 기를 포함하며;
여기서,
x는 0, 1 또는 2이고;
n은 1, 2, 3 또는 4이고;
각각의 Ra 및 Rb는 독립적으로 H, 보호기, 하이드록실, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 헤테로사이클 라디칼, 치환된 헤테로사이클 라디칼, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, C5-C7 무고리 라디칼, 치환된 C5-C7 무고리 라디칼, 할로겐, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, 아실(C(=O)-H), 치환된 아실, CN, 설포닐(S(=O)2-J1), 또는 설폭실(S(=O)-J1)이고; 각각의 J1 및 J2는 독립적으로 H, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 아실 (C(=O)-H), 치환된 아실, 헤테로사이클 라디칼, 치환된 헤테로사이클 라디칼, C1-C12 아미노알킬, 치환된 C1-C12 아미노알킬, 또는 보호기이다.
추가의 바이사이클릭 당 모이어티가, 예를 들어, 문헌[Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443], 문헌[Albaek et al., J. Org . Chem., 2006, 71, 7731-7740], 문헌[Singh et al., Chem . Commun ., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630]; 문헌[Wahlestedt et al., Proc . Natl. Acad . Sci . U. S. A., 2000, 97, 5633-5638]; 문헌[Kumar et al., Bioorg . Med . Chem. Lett ., 1998, 8, 2219-2222]; 문헌[Singh et al., J. Org . Chem ., 1998, 63, 10035-10039]; 문헌[Srivastava et al., J. Am. Chem . Soc ., 2007, 129, 8362-8379]; 문헌[Elayadi et al., Curr . Opinion Invens . Drugs, 2001, 2, 558-561]; 문헌[Braasch et al., Chem . Biol ., 2001, 8, 1-7]; ㅁ문헌[um et al., Curr . Opinion Mol . Ther ., 2001, 3, 239-243]; U.S. 7,053,207호(Wengel et al.), U.S. 6,268,490호(Imanishi et al.), U.S. 6,770,748호(Imanishi et al.), U.S. RE44,779호(Imanishi et al.); U.S. 6,794,499호(Wengel et al.), U.S. 6,670,461호(Wengel et al.); U.S. 7,034,133호(Wengel et al.), U.S. 8,080,644호(Wengel et al.); U.S. 8,034,909호(Wengel et al.); U.S. 8,153,365호(Wengel et al.); U.S. 7,572,582호(Wengel et al.); 및 U.S. 6,525,191호(Ramasamy et al.), WO 2004/106356호(Torsten et al.), WO 1999/014226호(Wengel et al.); WO 2007/134181호(Seth et al.); U.S. 7,547,684호(Seth et al.); U.S. 7,666,854호(Seth et al.); U.S. 8,088,746호(Seth et al.); U.S. 7,750,131호(Seth et al.); U.S. 8,030,467호(Seth et al.); U.S. 8,268,980호(Seth et al.); U.S. 8,546,556호(Seth et al.); U.S. 8,530,640호(Seth et al.); U.S. 9,012,421호(Migawa et al.); U.S. 8,501,805호(Seth et al.); US2008/0039618호(Allerson et al.); 및 US2015/0191727호(Migawa et al.)에서와 같이 당 분야에 공지되어 있다.
특정 구현예에서, 바이사이클릭 당 모이어티 및 상기 바이사이클릭 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드는 이성질체 입체형태에 의해 추가로 정의된다. 예를 들어, LNA 뉴클레오시드(본원에 기재됨)는 α-L-입체형태 또는 β-D-입체형태로 존재할 수 있다.
α-L-메틸렌옥시(4'-CH2-O-2') 또는 α-L-LNA 바이사이클릭 뉴클레오시드는 안티센스 활성을 나타낸 올리고뉴클레오티드에 포함되었다(문헌[Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372]). 본원에서, 바이사이클릭 뉴클레오시드의 일반적인 기재는 둘 모두의 이성질체 입체형태를 포함한다. 특정한 바이사이클릭 뉴클레오시드(예를 들어, LNA 또는 cEt)의 위치가 본원의 예시적 구현예에서 확인되는 경우, 이들은 달리 명시되지 않는 한 β-D-입체형태로 존재한다.
특정 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 하나 이상의 비-브릿징 당 치환기 및 하나 이상의 브릿징 당 치환기(예를 들어, 5'-치환된 및 4'-2' 브릿징된 당)를 포함한다.
특정 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 당 대용물이다. 특정한 상기 구현예에서, 당 모이어티의 산소 원자는, 예를 들어, 황, 탄소 또는 질소 원자로 대체된다. 특정한 상기 구현예에서, 상기 변형된 당 모이어티는 또한 본원에 기재된 바와 같은 브릿징 및/또는 비-브릿징 치환기를 포함한다. 예를 들어, 특정한 당 대용물은 4'-황 원자 및 2'-위치(예를 들어, U.S. 7,875,733호(Bhat et al.) 및 U.S. 7,939,677호(Bhat et al.) 참조) 및/또는 5' 위치에서의 치환을 포함한다.
특정 구현예에서, 당 대용물은 5개가 아닌 원자를 갖는 고리를 포함한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 당 대용물은 6원 테트라하이드로피란("THP")을 포함한다. 상기 테트라하이드로피란은 추가로 변형되거나 치환될 수 있다. 상기 변형된 테트라하이드로피란을 포함하는 뉴클레오시드는 헥시톨 핵산("HNA"), 아니톨 핵산("ANA"), 만니톨 핵산("MNA")(예를 들어, 문헌[Leumann, CJ. Bioorg . & Med . Chem. 2002, 10, 841-854] 참조), 플루오로 HNA ("F-HNA", 예를 들어, U.S. 8,088,904호(Swayze et al.); U.S. 8,440,803호(Swayze et al.); 및 U.S. 9,005,906호(Swayze et al.) 참조, F-HNA는 또한 F-THP 또는 3'-플루오로 테트라하이드로피란으로 언급될 수 있음), 및 화학식 을 갖는 추가의 변형된 THP 화합물을 포함하는 뉴클레오시드를 포함하나, 이에 제한되지는 않으며,
상기 화학식에서, 독립적으로, 상기 변형된 THP 뉴클레오시드의 각각에 대해,
Bx는 핵염기 모이어티이고;
T3 및 T4는 각각 독립적으로 올리고뉴클레오티드의 나머지에 변형된 THP 뉴클레오시드를 연결시키는 뉴클레오시드간 연결기이거나, T3 및 T4 중 하나는 올리고뉴클레오티드의 나머지에 변형된 THP 뉴클레오시드를 연결시키는 뉴클레오시드간 연결기이고, T3 및 T4 중 다른 하나는 H, 하이드록실 보호기, 연결된 컨쥬게이트 기, 또는 5' 또는 3'-말단 기이고; q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7은 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고; R1 및 R2 각각은 독립적으로 수소, 할로겐, 치환되거나 비치환된 알콕시, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2, 및 CN으로부터 선택되고, 여기서 X는 O, S 또는 NJ1이고, 각각의 J1, J2 및 J3는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이다.
특정 구현예에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7이 각각 H인 변형된 THP 뉴클레오시드가 제공된다. 특정 구현예에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 적어도 하나는 H가 아니다. 특정 구현예에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 적어도 하나는 메틸이다. 특정 구현예에서, R1 및 R2 중 하나가 F인 변형된 THP 뉴클레오시드가 제공된다. 특정 구현예에서, R1은 F이고, R2는 H이고, 특정 구현예에서, R1은 메톡시이고, R2는 H이고, 특정 구현예에서, R1은 메톡시에톡시이고, R2는 H이다.
특정 구현예에서, 당 대용물은 5개 초과의 원자 및 하나 초과의 헤테로원자를 갖는 고리를 포함한다. 예를 들어, 모르폴리노 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드 및 올리고뉴클레오티드에서의 이의 용도가 보고되었다(예를 들어, 문헌[Braasch et al., Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510] 및 U.S. 5,698,685호(Summerton et al.); U.S. 5,166,315호(Summerton et al.); U.S. 5,185,444호(Summerton et al.); 및 U.S. 5,034,506호(Summerton et al.) 참조). 본원에서 사용되는 용어 "모르폴리노"는 하기 구조를 갖는 당 대용물을 의미한다:
.
특정 구현예에서, 모르폴리노는, 예를 들어, 상기 모르폴리노 구조로부터 다양한 치환기를 첨가하거나 변경시킴으로써 변형될 수 있다. 상기 당 대용물은 "변형된 모르폴리노"로 본원에서 언급된다.
특정 구현예에서, 당 대용물은 무고리 모이어티를 포함한다. 상기 무고리 당 대용물을 포함하는 뉴클레오시드 및 올리고뉴클레오티드의 예는 펩티드 핵산("PNA"), 무고리 부틸 핵산(예를 들어, 문헌[Kumar et al., Org . Biomol . Chem ., 2013, 11, 5853-5865] 참조), 및 US2013/130378호(Manoharan et al.)에 기재된 뉴클레오시드 및 올리고뉴클레오티드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
변형된 뉴클레오시드에서 사용될 수 있는 많은 다른 바이사이클릭 및 트리사이클릭 당 및 당 대용물 고리 시스템은 당 분야에 공지되어 있다.
2. 변형된 핵염기
핵염기(또는 염기) 변형 또는 치환은 천연 발생 또는 합성의 변형되지 않은 핵염기와 구조적으로 구별 가능하나, 기능적으로는 상호교환 가능하다. 천연 및 변형 핵염기 둘 모두는 수소 결합에 참여할 수 있다. 상기 핵염기 변형은 안티센스 화합물에 뉴클레아제 안정성, 결합 친화성 또는 일부 다른 이로운 생물학적 특성을 부여할 수 있다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 변형되지 않은 핵염기를 포함하는 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 변형된 핵염기를 포함하는 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 무염기 뉴클레오시드로 언급되는 핵염기를 포함하지 않는 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함한다.
특정 구현예에서, 변형된 핵염기는 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘, 알킬 또는 알키닐 치환된 피리미딘, 알킬 치환된 퓨린, 및 N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 변형된 핵염기는 2-아미노프로필아데닌, 5-하이드록시메틸 시토신, 5-메틸시토신, 잔틴, 하이포잔틴, 2-아미노아데닌, 6-N-메틸구아닌, 6-N-메틸아데닌, 2-프로필아데닌 , 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-프로피닐 (C≡C-CH3) 우라실, 5-프로피닐시토신, 6-아조우라실, 6-아조시토신, 6-아조티민, 5-리보실우라실(슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실, 8-아자 및 다른 8-치환된 퓨린, 5-할로, 특히 5-브로모, 5-트리플루오로메틸, 5-할로우라실, 및 5-할로시토신, 7-메틸구아닌, 7-메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노아데닌, 7-데아자구아닌, 7-데아자아데닌, 3-데아자구아닌, 3-데아자아데닌, 6-N-벤조일아데닌, 2-N-이소부티릴구아닌, 4-N-벤조일시토신, 4-N-벤조일우라실, 5-메틸 4-N-벤조일시토신, 5-메틸 4-N-벤조일우라실, 보편 염기, 소수성 염기, 뒤섞인 염기, 크기-확장된 염기, 및 플루오르화 염기로부터 선택된다. 추가의 변형된 핵염기는 트리사이클릭 피리미딘, 예를 들어, 1,3-디아자페녹사진-2-온, 1,3-디아자페노티아진-2-온 및 9-(2-아미노에톡시)-1,3-디아자페녹사진-2-온(G-클램프)을 포함한다. 변형된 핵염기는 또한 퓨린 또는 피리미딘 염기가 다른 헤테로사이클, 예를 들어, 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘 및 2-피리돈으로 대체된 핵염기를 포함할 수 있다. 추가의 핵염기는 U.S. 3,687,808호(Merigan et al.)에 개시된 핵염기, 문헌[The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, 858-859]; 문헌[Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613]; 문헌[Sanghvi, Y.S., Chapter 15, Antisense Research and Applications, Crooke, S.T. and Lebleu, B., Eds., CRC Press, 1993, 273-288]에 개시된 핵염기; 및 문헌[Antisense Drug Technology, Crooke S.T., Ed., CRC Press, 2008, 163-166 및 442-443]의 챕터 6 및 15에 개시된 핵염기를 포함한다.
특정한 상기 기재된 변형된 핵염기뿐만 아니라 다른 변형된 핵염기의 제조를 교시하는 간행물은 US2003/0158403호(Manoharan et al.), US2003/0175906호(Manoharan et al.); U.S. 4,845,205호(Dinh et al.); U.S. 5,130,302호(Spielvogel et al.); U.S. 5,134,066호(Rogers et al.); U.S. 5,175,273호(Bischofberger et al.); U.S. 5,367,066호(Urdea et al.); U.S. 5,432,272호(Benner et al.); U.S. 5,434,257(Matteucci et al.); U.S. 5,457,187호(Gmeiner et al.); U.S. 5,459,255호(Cook et al.); U.S. 5,484,908호(Froehler et al.); U.S. 5,502,177호(Matteucci et al.); U.S. 5,525,711호(Hawkins et al.); U.S. 5,552,540호(Haralambidis et al.); U.S. 5,587,469호(Cook et al.); U.S. 5,594,121호(Froehler et al.); U.S. 5,596,091호(Switzer et al.); U.S. 5,614,617호(Cook et al.); U.S. 5,645,985호(Froehler et al.); U.S. 5,681,941호(Cook et al.); U.S. 5,811,534호(Cook et al.); U.S. 5,750,692호(Cook et al.); U.S. 5,948,903호(Cook et al.); U.S. 5,587,470호(Cook et al.); U.S. 5,457,191호(Cook et al.); U.S. 5,763,588호(Matteucci et al.); U.S. 5,830,653호(Froehler et al.); U.S. 5,808,027호(Cook et al.); U.S. 6,166,199호(Cook et al.); 및 U.S. 6,005,096호(Matteucci et al.)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정 구현예에서, PCSK9 핵산을 표적으로 하는 화합물은 하나 이상의 변형된 핵염기를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 핵염기는 5-메틸시토신이다. 특정 구현예에서, 각각의 시토신은 5-메틸시토신이다.
3. 변형된
뉴클레오시드간
결합
RNA 및 DNA의 천연 발생 뉴클레오시드간 결합은 3'에서 5'으로의 포스포디에스테르 결합이다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 변형된, 즉, 천연 발생이 아닌 뉴클레오시드간 결합을 갖는 본원에 기재된 화합물이 천연 발생 뉴클레오시드간 결합을 갖는 화합물보다 종종 선택되는데, 이는, 예를 들어, 향상된 세포 흡수, 표적 핵산에 대한 향상된 친화성 및 뉴클레아제의 존재 하에서의 증가된 안정성과 같은 바람직한 특성 때문이다.
특정 구현예에서, PCSK9 핵산을 표적으로 하는 화합물은 하나 이상의 변형된 뉴클레오시드간 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 특정 구현예에서, 안티센스 화합물의 각각의 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티에이트 뉴클레오시드간 결합이다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 변형된 뉴클레오시드간 결합을 갖는 올리고뉴클레오티드는 인 원자를 보유하는 뉴클레오시드간 결합뿐만 아니라 인 원자를 갖지 않는 뉴클레오시드간 결합을 포함한다. 대표적 인 함유 뉴클레오시드간 결합은 포스포디에스테르, 포스포트리에스테르, 메틸포스포네이트, 포스포라미데이트 및 포스포로티오에이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 인-함유 및 인-비함유 결합의 제조 방법은 널리 공지되어 있다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오시드는 임의의 뉴클레오시드간 결합을 이용하여 함께 연결될 수 있다. 뉴클레오시드간 연결기의 2개의 주요 부류는 인 원자의 존재 또는 부재에 의해 정의된다. 대표적 인-함유 뉴클레오시드간 결합은 포스포디에스테르 결합("P=O")(변형되지 않은 또는 천연 발생 결합으로도 언급됨), 포스포트리에스테르, 메틸포스포네이트, 포스포라미데이트, 및 포스포로티오에이트("P=S"), 및 포스포로디티오에이트("HS-P=S")를 함유하는 포스페이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 대표적 인-비함유 뉴클레오시드간 연결기는 메틸렌메틸이미노(-CH2-N(CH3)-O-CH2-), 티오디에스테르, 티오노카르바메이트(-O-C(=O)(NH)-S-); 실록산(-O-SiH2-O-); 및 N,N'-디메틸하이드라진(-CH2-N(CH3)-N(CH3)-)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 천연 발생 포스페이트 결합에 비해 변형된 뉴클레오시드간 결합은 올리고뉴클레오티드의 뉴클레아제 내성을 변경시키기 위해, 전형적으로는 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 키랄 원자를 갖는 뉴클레오시드간 결합은 라세미 혼합물 또는 별개의 거울상 이성질체로 제조될 수 있다. 대표적 키랄 뉴클레오시드간 결합은 알킬포스포네이트 및 포스포로티오에이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 인-함유 및 인-비함유 뉴클레오시드간 결합의 제조 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있다.
중성 뉴클레오시드간 결합은 포스포트리에스테르, 메틸포스포네이트, MMI(3'-CH2-N(CH3)-O-5'), 아미드-3 (3'-CH2-C(=O)-N(H)-5'), 아미드-4 (3'-CH2-N(H)-C(=O)-5'), 포르마세탈 (3'-O-CH2-O-5'), 메톡시프로필 및 티오포르마세탈 (3'-S-CH2-O-5')을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 추가의 중성 뉴클레오시드간 결합은 실록산(디알킬실록산), 카르복실레이트 에스테르, 카르복사미드, 설파이드, 설포네이트 에스테르 및 아미드를 포함하는 비이온성 결합을 포함한다(예를 들어, 문헌[Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y.S. Sanghvi and P.D. Cook, Eds., ACS Symposium Series 580; Chapters 3 and 4, 40-65] 참조). 추가의 중성 뉴클레오시드간 결합은 혼합된 N, O, S 및 CH2 성분 부분을 포함하는 비이온성 결합을 포함한다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 정의된 패턴 또는 변형된 뉴클레오시드간 결합 모티프 내에서 올리고뉴클레오티드 또는 이의 영역을 따라 배열된 변형된 뉴클레오시드간 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 뉴클레오시드간 결합은 갭이 있는 모티프 내에 배열된다. 상기 구현예에서, 2개의 윙 영역 각각에서의 뉴클레오시드간 결합은 갭 영역 내의 뉴클레오시드간 결합과 상이하다. 특정 구현예에서, 윙 내의 뉴클레오시드간 결합은 포스포디에스테르이고, 갭 내의 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티오에이트이다. 뉴클레오시드 모티프는 독립적으로 선택되고, 따라서 갭이 있는 뉴클레오시드간 결합 모티프를 갖는 상기 올리고뉴클레오티드는 갭이 있는 뉴클레오시드 모티프를 갖거나 갖지 않을 수 있고, 갭이 있는 뉴클레오시드 모티프를 갖는 경우, 윙 및 갭 길이는 동일하거나 동일하지 않을 수 있다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 교대로 존재하는 뉴클레오시드간 결합 모티프를 갖는 영역을 포함한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 균일하게 변형된 뉴클레오시드간 결합의 영역을 포함한다. 특정한 상기 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합에 의해 균일하게 연결된 영역을 포함한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트에 의해 균일하게 연결된다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 각각의 뉴클레오시드간 결합은 포스포디에스테르 및 포스포로티오에이트로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 각각의 뉴클레오시드간 결합은 포스포디에스테르 및 포스포로티오에이트로부터 선택되고, 적어도 하나의 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티오에이트이다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 6개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 8개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 10개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 6개의 연속적 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 8개의 연속적 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 10개의 연속적 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 12개의 연속적 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 특정한 상기 구현예에서, 적어도 하나의 상기 블록은 올리고뉴클레오티드의 3' 말단에 위치된다. 특정한 상기 구현예에서, 적어도 하나의 상기 블록은 올리고뉴클레오티드의 3' 말단의 3개의 뉴클레오시드 내에 위치된다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 메틸포스포네이트 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머 뉴클레오시드 모티프를 갖는 올리고뉴클레오티드는 1개 또는 2개의 메틸포스포네이트 결합을 제외하고는 모든 포스포로티오에이트 결합을 포함하는 결합 모티프를 포함한다. 특정 구현예에서, 하나의 메틸포스포네이트 결합은 갭머 뉴클레오시드 모티프를 갖는 올리고뉴클레오티드의 중심 갭에 존재한다.
특정 구현예에서, 뉴클레아제 내성을 유지시키기 위해 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합 및 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 결합의 수를 조정하는 것이 바람직하다. 특정 구현예에서, 뉴클레아제 내성을 유지시키기 위해 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합의 수 및 위치 및 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 결합의 수 및 위치를 조정하는 것이 바람직하다. 특정 구현예에서, 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합의 수는 감소될 수 있고, 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 결합의 수는 증가될 수 있다. 특정 구현예에서, 뉴클레아제 내성을 여전히 유지시키면서, 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합의 수는 감소될 수 있고, 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 결합의 수는 증가될 수 있다. 특정 구현예에서, 뉴클레아제 내성을 유지시키면서 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 결합의 수를 감소시키는 것이 바람직하다. 특정 구현예에서, 뉴클레아제 내성을 유지시키면서 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 결합의 수를 증가시키는 것이 바람직하다.
4. 특정 모티프
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 올리고뉴클레오티드는 모티프, 예를 들어, 변형되지 않은 및/또는 변형된 당 모이어티, 핵염기, 및/또는 뉴클레오시드간 결합의 패턴을 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 변형된 당을 포함하는 하나 이상의 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 변형된 핵염기를 포함하는 하나 이상의 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 변형된 뉴클레오시드간 결합을 포함한다. 상기 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드의 변형된, 변형되지 않은 및 상이하게 변형된 당 모이어티, 핵염기, 및/또는 뉴클레오시드간 결합은 패턴 또는 모티프를 정의한다. 특정 구현예에서, 당 모이어티, 핵염기 및 뉴클레오시드간 결합의 패턴은 각각 서로 독립적이다. 따라서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 이의 당 모티프, 핵염기 모티프 및/또는 뉴클레오시드간 결합 모티프(본원에서 사용되는 바와 같이, 핵염기 모티프는 핵염기의 서열과 독립적인 핵염기에 대한 변형을 기재함)에 의해 기재될 수 있다.
a. 특정 당 모티프
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 정의된 패턴 또는 당 모티프 내에 올리고뉴클레오티드 또는 이의 영역을 따라 배열된 하나 이상의 유형의 변형된 당 및/또는 변형되지 않은 당 모이어티를 포함한다. 특정 예에서, 상기 당 모티프는 임의의 본원에 논의된 당 변형을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 2개의 외부 영역 또는 "윙" 및 중심 또는 내부 영역 또는 "갭"을 포함하는 갭머 모티프를 갖는 영역을 포함하거나, 이로 구성된다. 갭머 모티프의 3개의 영역(5'-윙, 갭, 및 3'-윙)은 각각의 윙의 뉴클레오시드의 당 모이어티의 적어도 일부가 갭의 뉴클레오시드의 당 모이어티의 적어도 일부와 상이한 뉴클레오시드의 인접한 서열을 형성한다. 특히, 적어도 갭에 가장 가까운 각각의 윙의 뉴클레오시드(5'-윙의 가장 3'의 뉴클레오시드 및 3'-윙의 가장 5'의 뉴클레오시드)의 당 모이어티는 이웃하는 갭 뉴클레오시드의 당 모이어티와 상이하며, 이에 따라 윙과 갭 사이의 경계(즉, 윙/갭 접합부)를 정의한다. 특정 구현예에서, 갭 내의 당 모이어티는 서로 동일하다. 특정 구현예에서, 갭은 갭의 하나 이상의 다른 뉴클레오시드의 당 모이어티와 상이한 당 모이어티를 갖는 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 2개의 윙의 당 모티프는 서로 동일하다(대칭 갭머). 특정 구현예에서, 5'-윙의 당 모티프는 3'-윙의 당 모티프와 상이하다(비대칭 갭머).
특정 구현예에서, 갭머의 윙은 1개 내지 5개의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 윙은 2개 내지 5개의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 윙은 3개 내지 5개의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 뉴클레오시드는 모두 변형된 뉴클레오시드이다.
특정 구현예에서, 갭머의 갭은 7개 내지 12개의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 갭은 7개 내지 10개의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 갭은 8개 내지 10개의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 갭은 10개의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 갭머의 갭의 각각의 뉴클레오시드는 변형되지 않은 2'-데옥시 뉴클레오시드이다.
특정 구현예에서, 갭머는 데옥시 갭머이다. 상기 구현예에서, 각각의 윙/갭 접합부의 갭 측면 상의 뉴클레오시드는 변형되지 않은 2'-데옥시 뉴클레오시드이고, 각각의 윙/갭 접합부의 윙 측면 상의 뉴클레오시드는 변형된 뉴클레오시드이다. 특정한 상기 구현예에서, 갭의 각각의 뉴클레오시드는 변형되지 않은 2'-데옥시 뉴클레오시드이다. 특정한 상기 구현예에서, 각각의 윙의 각각의 뉴클레오시드는 변형된 뉴클레오시드이다.
특정 구현예에서, 변형된 올리노뉴클레오티드는 완전히 변형된 당 모티프를 가지며, 여기서 변형된 올리고뉴클레오티드의 각각의 뉴클레오시드는 변형된 당 모이어티를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 완전히 변형된 당 모티프를 갖는 영역을 포함하거나 이로 구성되며, 여기서 상기 영역의 각각의 뉴클레오시드는 변형된 당 모이어티를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 완전히 변형된 당 모티프를 갖는 영역을 포함하거나 이로 구성되며, 완전히 변형된 영역 내의 각각의 뉴클레오시드는 균일하게 변형된 당 모티프로 본원에서 언급되는 동일한 변형된 당 모이어티를 포함한다. 특정 구현예에서, 완전히 변형된 올리고뉴클레오티드는 균일하게 변형된 올리고뉴클레오티드이다. 특정 구현예에서, 균일하게 변형된 각각의 뉴클레오시드는 동일한 2'-변형을 포함한다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 US2010/0197762호(Swayze et al.); US2014/0107330호(Freier et al.); US2015/0184153호(Freier et al.); 및 US2015/0267195호(Seth et al.)에 기재된 당 모티프를 포함할 수 있으며, 상기 특허문헌 각각은 전체 내용이 참조로서 본원에 포함된다.
b. 특정
핵염기
모티프
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 정의된 패턴 또는 모티프 내에 올리고뉴클레오티드 또는 이의 영역을 따라 배열된 변형된 및/또는 변형되지 않은 핵염기를 포함한다. 특정 구현예에서, 각각의 핵염기는 변형된다. 특정 구현예에서, 핵염기 중 어느 것도 변형되지 않는다. 특정 구현예에서, 각각의 퓨린 또는 각각의 피리미딘은 변형된다. 특정 구현예에서, 각각의 아데닌은 변형된다. 특정 구현예에서, 각각의 구아닌은 변형된다. 특정 구현예에서, 각각의 티민은 변형된다. 특정 구현예에서, 각각의 우라실은 변형된다. 특정 구현예에서, 각각의 시토신은 변형된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드 내의 시토신 핵염기 중 일부 또는 전부는 5-메틸시토신이다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 변형된 핵염기의 블록을 포함한다. 특정한 상기 구현예에서, 블록은 올리고뉴클레오티드의 3'-말단에 존재한다. 특정 구현예에서, 블록은 올리고뉴클레오티드의 3'-말단의 3개의 뉴클레오시드 내에 존재한다. 특정 구현예에서, 블록은 올리고뉴클레오티드의 5'-말단에 존재한다. 특정 구현예에서, 블록은 올리고뉴클레오티드의 5'-말단의 3개의 뉴클레오시드 내에 존재한다.
특정 구현예에서, 갭머 모티프를 갖는 올리고뉴클레오티드는 변형된 핵염기를 포함하는 뉴클레오시드를 포함한다. 특정한 상기 구현예에서, 변형된 핵염기를 포함하는 하나의 뉴클레오시드는 갭머 모티프를 갖는 올리고뉴클레오티드의 중심 갭에 존재한다. 특정한 상기 구현예에서, 상기 뉴클레오시드의 당 모이어티는 2'-데옥시리보실 모이어티이다. 특정 구현예에서, 변형된 핵염기는 2-티오피리미딘 및 5-프로핀피리미딘으로부터 선택된다.
c. 특정
뉴클레오시드간
결합 모티프
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 정의된 패턴 또는 모티프 내에 올리고뉴클레오티드 또는 이의 영역을 따라 배열된 변형된 및/또는 변형되지 않은 뉴클레오시드간 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 본질적으로 각각의 뉴클레오시드간 연결기는 포스페이트 뉴클레오시드간 결합(P=O)이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드의 각각의 뉴클레오시드간 연결기는 포스포로티오에이트(P=S)이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드의 각각의 뉴클레오시드간 연결기는 포스포로티오에이트 및 포스페이트 뉴클레오시드간 결합으로부터 독립적으로 선택된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드의 당 모티프는 갭머이고, 갭 내의 뉴클레오시드간 결합은 모두 변형된다. 특정한 상기 구현예에서, 윙 내의 뉴클레오시드간 결합의 일부 또는 전부는 변형되지 않은 포스페이트 결합이다. 특정 구현예에서, 말단 뉴클레오시드간 결합은 변형된다.
5. 특정한 변형된 올리고뉴클레오티드
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 변형(당, 핵염기, 뉴클레오시드간 결합)은 변형된 올리고뉴클레오티드에 혼입된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 이의 변형, 모티프 및 전체 길이에 의해 특성규명된다. 특정 구현예에서, 상기 파라미터는 각각 서로 독립적이다. 따라서, 달리 명시되지 않는 한, 갭머 당 모티프를 갖는 올리고뉴클레오티드의 각각의 뉴클레오시드간 결합은 변형되거나 변형되지 않을 수 있고, 당 변형의 갭머 변형 패턴을 따르거나 따르지 않을 수 있다. 예를 들어, 당 갭머의 윙 영역 내의 뉴클레오시드간 결합은 서로 동일하거나 상이할 수 있고, 당 모티프의 갭 영역의 뉴클레오시드간 결합과 동일하거나 상이할 수 있다. 마찬가지로, 상기 갭머 올리고뉴클레오티드는 당 변형의 갭머 패턴과 독립적인 하나 이상의 변형된 핵염기를 포함할 수 있다. 또한, 특정 예에서, 올리고뉴클레오티드는 전체 길이 또는 범위 및 2개 이상의 영역(예를 들어, 특정 당 변형을 갖는 뉴클레오시드의 영역)의 길이 또는 길이 범위에 의해 기재되며, 이러한 상황에서, 특정 범위를 벗어나는 전체 길이를 갖는 올리고뉴클레오티드를 발생시키는 각각의 범위에 대한 수를 선택하는 것이 가능하다. 상기 상황에서, 둘 모두의 요소가 충족되어야 한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오티드는 15개 내지 20개의 연결된 뉴클레오시드로 구성되고, A, B 및 C의 3개의 영역으로 구성된 당 모티프를 가지며, A 영역은 특정 당 모티프를 갖는 2개 내지 6개의 연결된 뉴클레오시드로 구성되고, B 영역은 특정 당 모티프를 갖는 6개 내지 10개의 연결된 뉴클레오시드로 구성되고, C 영역은 특정 당 모티프를 갖는 2개 내지 6개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된다. 상기 구현예는 A 및 C가 각각 6개의 연결된 뉴클레오시드로 구성되고, B가 10개의 연결된 뉴클레오시드로 구성되는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하지 않는데(뉴클레오시드의 상기 수가 A, B 및 C에 대한 필요조건 내에서 허용 되더라도), 이는 상기 올리고뉴클레오티드의 전체 길이가 변형된 올리고뉴클레오티드의 전체 길이의 상한(20)을 초과하는 22이기 때문이다. 본원에서, 올리고뉴클레오티드의 기재가 하나 이상의 파라미터와 관련하여 침묵한다면, 상기 파라미터는 제한되지 않는다. 따라서, 추가 기재 없이 갭머 당 모티프를 갖는 것으로만 기재된 변형된 올리고뉴클레오티드는 임의의 길이, 뉴클레오시드간 결합 모티프 및 핵염기 모티프를 가질 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 모든 변형은 핵염기 서열과 독립적이다.
특정한
컨쥬게이션된
화합물
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 올리고뉴클레오티드(변형되거나 변형되지 않음) 및 선택적으로 하나 이상의 컨쥬게이트 기 및/또는 말단 기를 포함하거나 이로 구성된다. 컨쥬게이트 기는 하나 이상의 컨쥬게이트 모이어티 및 컨쥬게이트 모이어티를 올리고뉴클레오티드에 연결시키는 컨쥬게이트 링커로 구성된다. 컨쥬게이트 기는 올리고뉴클레오티드의 어느 하나 또는 둘 모두의 말단 및/또는 임의의 내부 위치에 부착될 수 있다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 변형된 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오시드의 2'-위치에 부착된다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 어느 하나 또는 둘 모두의 말단에 부착되는 컨쥬게이트 기는 말단 기이다. 특정한 상기 구현예에서, 컨쥬게이트 기 또는 말단 기는 올리고뉴클레오티드의 3' 및/또는 5'-말단에 부착된다. 특정한 상기 구현예에서, 컨쥬게이트 기(또는 말단 기)는 올리고뉴클레오티드의 3'-말단에 부착된다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 올리고뉴클레오티드의 3'-말단 근처에 부착된다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기(또는 말단 기)는 올리고뉴클레오티드의 5'-말단에 부착된다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 올리고뉴클레오티드의 5'-말단 근처에 부착된다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 변형된다. 특정 구현예에서, 화합물의 올리고뉴클레오티드는 표적 핵산에 상보적인 핵염기 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 메신저 RNA(mRNA)에 상보적이다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 센스 전사체에 상보적이다.
말단 기의 예는 컨쥬게이트 기, 캡핑 기, 포스페이트 모이어티, 보호기, 변형되거나 변형되지 않은 뉴클레오시드 및 독립적으로 변형되거나 변형되지 않는 2개 이상의 뉴클레오시드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
A. 특정
컨쥬게이트
기
특정한 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 컨쥬게이트 기에 공유적으로 부착된다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 약역학, 약동학, 안정성, 결합, 흡수, 조직 분포, 세포 분포, 세포 흡수, 전하 및 청소를 포함하나 이에 제한되지는 않는 부착된 올리고뉴클레오티드의 하나 이상의 특성을 변형시킨다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기, 예를 들어, 올리고뉴클레오티드의 검출을 가능하게 하는 형광단 또는 리포터 기는 부착된 올리고뉴클레오티드에 새로운 특성을 부여한다.
특정 컨쥬게이트 기 및 컨쥬게이트 모이어티는, 예를 들어, 콜레스테롤 모이어티(문헌[Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556]), 콜산(문헌[Manoharan et al., Bioorg . Med . Chem . Lett ., 1994, 4, 1053-1060]), 티오에테르, 예를 들어, 헥실-S-트리틸티올(문헌[Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad . Sci ., 1992, 660, 306-309]; 문헌[Manoharan et al., Bioorg . Med . Chem . Let., 1993, 3, 2765-2770]), 티오콜레스테롤(문헌[Oberhauser et al., Nucl . Acids Res., 1992, 20, 533-538]), 지방족 사슬, 예를 들어, 도-데칸-디올 또는 운데실 잔기(문헌[Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10, 1111-1118]; 문헌[Kabanov et al., FEBS Lett ., 1990, 259, 327-330]; 문헌[Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54]), 인지질, 예를 들어, 디-헥사데실-라크-글리세롤 또는 트리에틸-암모늄 1,2-디-O-헥사데실-라크-글리세로-3-H-포스포네이트(문헌[Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654]; 문헌[Shea et al., Nucl . Acids Res., 1990, 18, 3777-3783]), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 사슬(문헌[Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973]), 또는 아다만탄 아세트산, 팔미틸 모이어티(문헌[Mishra et al., Biochim . Biophys . Acta, 1995, 1264, 229-237]), 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카르보닐-옥시콜레스테롤 모이어티(문헌[Crooke et al., J. Pharmacol . Exp. Ther ., 1996, i, 923-937]), 토코페롤 기(문헌[Nishina et al., Molecular Therapy Nucleic Acids, 2015, 4, e220; doi:10.1038/mtna.2014.72] 및 문헌[Nishina et al., Molecular Therapy, 2008, 16, 734-740]), 또는 GalNAc 클러스터(예를 들어, WO2014/179620호)와 같이 이전에 기재된 적이 있다.
1.
컨쥬게이트
모이어티
컨쥬게이트 모이어티는 인터켈레이터(intercalator), 리포터 분자, 폴리아민, 폴리아미드, 펩티드, 탄수화물(예를 들어, GalNAc), 비타민 모이어티, 폴리에틸렌 글리콜, 티오에테르, 폴리에테르, 콜레스테롤, 티오콜레스테롤, 콜산 모이어티, 폴레이트, 지질, 인지질, 비오틴, 페나진, 페난트리딘, 안트라퀴논, 아다만탄, 아크리딘, 플루오레신, 로다민, 쿠마린, 형광단 및 염료를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정 구현예에서, 컨쥬게이트 모이어티는 활성 약물 물질, 예를 들어, 아스피린, 와파린, 페닐부타존, 이부프로펜, 수프로펜, 펜부펜, 케토프로펜, (S)-(+)-프라노프로펜, 카르프로펜, 단실사르코신, 2,3,5-트리요오도벤조산, 핑골리모드, 플루페남산, 폴리닌산, 벤조티아디아지드, 클로로티아지드, 디아제핀, 인도메티신, 바르비투레이트, 세팔로스포린, 설파 약물, 항당뇨제, 항균제 또는 항생제를 포함한다.
2.
컨쥬게이트
링커
컨쥬게이트 모이어티는 컨쥬게이트 링커를 통해 올리고뉴클레오티드에 부착된다. 특정 화합물에서, 컨쥬게이트 기는 단일 화학 결합이다(즉, 컨쥬게이트 모이어티는 단일 결합을 통해 컨쥬게이트 링커를 통해 올리고뉴클레오티드에 부착된다). 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 사슬 구조, 예를 들어, 하이드로카르빌 사슬, 또는 반복 단위의 올리고머, 예를 들어, 에틸렌 글리콜, 뉴클레오시드, 또는 아미노산 단위를 포함한다.
특정 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 알킬, 아미노, 옥소, 아미드, 디설파이드, 폴리에틸렌 글리콜, 에테르, 티오에테르 및 하이드록실아미노로부터 선택되는 하나 이상의 기를 포함한다. 특정한 상기 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 알킬, 아미노, 옥소, 아미드 및 에테르 기로부터 선택되는 기를 포함한다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 알킬 및 아미드 기로부터 선택되는 기를 포함한다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 알킬 및 에테르 기로부터 선택되는 기를 포함한다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 적어도 하나의 인 모이어티를 포함한다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 적어도 하나의 포스페이트 기를 포함한다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 적어도 하나의 중성 연결기를 포함한다.
특정 구현예에서, 상기 기재된 컨쥬게이트 링커를 포함하는 컨쥬게이트 링커는 이기능성 연결 모이어티, 예를 들어, 본원에 제공된 올리고뉴클레오티드와 같은 모 화합물에 컨쥬게이트 기를 부착시키는 데 유용한 것으로 당 분야에 공지된 이기능성 연결 모이어티이다. 일반적으로, 이기능성 연결 모이어티는 적어도 2개의 기능성 기를 포함한다. 기능성 기 중 하나는 화합물 상의 특정 부위에 결합하도록 선택되며, 나머지 하나는 컨쥬게이트 기에 결합하도록 선택된다. 이기능성 연결 모이어티에서 사용되는 기능성 기의 예는 친핵성 기와 반응시키기 위한 친전자체 및 친전자성 기와 반응시키기 위한 친핵체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 구현예에서, 이기능성 연결 모이어티는 아미노, 하이드록실, 카르복실산, 티올, 알킬, 알케닐 및 알키닐로부터 선택되는 하나 이상의 기를 포함한다.
컨쥬게이트 링커의 예는 피롤리딘, 8-아미노-3,6-디옥사옥탄산(ADO), 숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC) 및 6-아미노헥산산(AHEX 또는 AHA)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 다른 컨쥬게이트 링커는 치환되거나 비치환된 C1-C10 알킬, 치환되거나 비치환된 C2-C10 알케닐 또는 치환되거나 비치환된 C2-C10 알키닐을 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 바람직한 치환기의 비제한적인 목록은 하이드록실, 아미노, 알콕시, 카르복시, 벤질, 페닐, 니트로, 티올, 티오알콕시, 할로겐, 알킬, 아릴, 알케닐 및 알키닐을 포함한다.
특정 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 1개 내지 10개의 링커-뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 링커-뉴클레오시드는 변형된 뉴클레오시드이다. 특정 구현예에서, 상기 링커-뉴클레오시드는 변형된 당 모이어티를 포함한다. 특정 구현예에서, 링커-뉴클레오시드는 변형되지 않는다. 특정 구현예에서, 링커-뉴클레오시드는 퓨린, 치환된 퓨린, 피리미딘 또는 치환된 피리미딘으로부터 선택된 선택적으로 보호된 헤테로사이클릭 염기를 포함한다. 특정 구현에에서, 절단 가능한 모이어티는 우라실, 티민, 시토신, 4-N-벤조일시토신, 5-메틸시토신, 4-N-벤조일-5-메틸시토신, 아데닌, 6-N-벤조일아데닌, 구아닌 및 2-N-이소부티릴구아닌으로부터 선택되는 뉴클레오시드이다. 링커-뉴클레오시드가 표적 조직에 도달한 후 화합물로부터 절단되는 것이 전형적으로 바람직하다. 따라서, 링커-뉴클레오시드는 전형적으로 서로 및 절단 가능한 결합을 통해 화합물의 나머지에 연결된다. 특정 구현예에서, 상기 절단 가능한 결합은 포스포디에스테르 결합이다.
본원에서, 링커-뉴클레오시드는 올리고뉴클레오티드의 일부로 간주되지 않는다. 따라서, 화합물이 특정 수 또는 범위의 연결된 뉴클레오시드 및/또는 참조 핵산에 대한 특정 퍼센트의 상보성으로 구성된 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 화합물이 또한 링커-뉴클레오시드를 포함하는 컨쥬게이트 링커를 포함하는 컨쥬게이트 기를 포함하는 구현예에서, 이들 링커-뉴클레오시드는 올리고뉴클레오티드의 길에 대해 계수되지 않으며, 참조 핵산에 대한 올리고뉴클레오티드의 상보성 퍼센트를 결정하는 데 사용되지 않는다. 예를 들어, 화합물은 (1) 8개 내지 30개의 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드 및 (2) 변형된 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오시드와 인접한 1개 내지 10개의 링커-뉴클레오시드를 포함하는 컨쥬게이트 기를 포함할 수 있다. 상기 화합물 내의 인접한 연결된 뉴클레오시드의 전체 수는 30개를 초과한다. 대안적으로, 화합물은 8개 내지 30개의 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있고, 컨쥬게이트 기는 포함하지 않을 수 있다. 상기 화합물 내의 인접한 연결된 뉴클레오시드의 전체 수는 30개 이하이다. 달리 명시하지 않는 한, 컨쥬게이트 링커는 10개 이하의 링커-뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 5개 이하의 링커-뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 3개 이하의 링커-뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 2개 이하의 링커-뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 링커는 1개 이하의 링커-뉴클레오시드를 포함한다.
특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기가 올리고뉴클레오티드로부터 절단되는 것이 바람직하다. 예를 들어, 특정 상황에서, 특정 컨쥬게이트 모이어티를 포함하는 화합물은 특정 세포 유형에 의해 더 잘 흡수되나, 화합물이 일단 흡수되면, 컨쥬게이트 기가 컨쥬게이션되지 않은 올리고뉴클레오티드 또는 모 올리고뉴클레오티드를 방출시키기 위해 절단되는 것이 바람직하다. 따라서, 특정 컨쥬게이트는 전형적으로 컨쥬게이트 링커 내에 하나 이상의 절단 가능한 모이어티를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 절단 가능한 결합이다. 특정 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 적어도 하나의 절단 가능한 결합을 포함하는 원자의 기이다. 특정 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 1개, 2개, 3개, 4개 또는 4개 초과의 절단 가능한 결합을 갖는 원자의 기를 포함한다. 특정 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 세포 또는 세포하 구획 내부, 예를 들어, 리소좀에서 선택적으로 절단된다. 특정 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 내인성 효소, 예를 들어, 뉴클레아제에 의해 선택적으로 절단된다.
특정 구현예에서, 절단 가능한 결합은 아미드, 에스테르, 에테르, 포스포디에스테르의 하나 또는 둘 모두의 에스테르, 포스페이트 에스테르, 카르바메이트, 또는 디설파이드로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 절단 가능한 결합은 포스포디에스테르의 하나 또는 둘 모두의 에스테르이다. 특정 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 포스페이트 또는 포스포디에스테르를 포함한다. 특정 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 올리고뉴클레오티드와 컨쥬게이트 모이어티 또는 컨쥬게이트 기 사이의 포스페이트 결합이다.
특정 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 하나 이상의 링커-뉴클레오시드를 포함하거나 이로 구성된다. 특정한 상기 구현예에서, 하나 이상의 링커-뉴클레오시드는 서로 및/또는 절단 가능한 결합을 통해 화합물의 나머지에 연결된다. 특정 구현예에서, 상기 절단 가능한 결합은 변형되지 않은 포스포디에스테르 결합이다. 특정 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 포스페이트 뉴클레오시드간 결합에 의해 올리고뉴클레오티드의 3' 또는 5'-말단 뉴클레오시드에 부착되고, 포스페이트 또는 포스포로티오에이트 결합에 의해 컨쥬게이트 링커 또는 컨쥬게이트 모이어티의 나머지에 공유적으로 부착된 2'-데옥시 뉴클레오시드이다. 특정한 상기 구현예에서, 절단 가능한 모이어티는 2'-데옥시아데노신이다.
3.
특정 세포-
표적화
컨쥬게이트
모이어티
특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 세포-표적화 컨쥬게이트 모이어티를 포함한다. 특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 하기 일반식을 갖는다:
상기 식에서, n은 1 내지 약 3이고, n이 1인 경우에 m은 0이고, n이 2 이상인 경우에 m은 1이고, j는 1 또는 0이고, k는 1 또는 0이다.
특정 구현예에서, n은 1이고, j는 1이고, k는 0이다. 특정 구현예에서, n은 1이고, j는 0이고, k는 1이다. 특정 구현예에서, n은 1이고, j는 1이고, k는 1이다. 특정 구현예에서, n은 2이고, j는 1이고, k는 0이다. 특정 구현예에서, n은 2이고, j는 0이고, k는 1이다. 특정 구현예에서, n은 2이고, j는 1이고, k는 1이다. 특정 구현예에서, n은 3이고, j는 1이고, k는 0이다. 특정 구현예에서, n은 3이고, j는 0이고, k는 1이다. 특정 구현예에서, n은 3이고, j는 1이고, k는 1이다.
특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 적어도 하나의 테더링된 리간드를 갖는 세포-표적화 모이어티를 포함한다. 특정 구현예에서, 세포-표적화 모이어티는 분지 기에 공유적으로 부착된 2개의 테더링된 리간드를 포함한다. 특정 구현예에서, 세포-표적화 모이어티는 분지 기에 공유적으로 부착된 3개의 테더링된 리간드를 포함한다.
특정 구현예에서, 세포-표적화 모이어티는 알킬, 아미노, 옥소, 아미드, 디설파이드, 폴리에틸렌 글리콜, 에테르, 티오에테르 및 하이드록실아미노 기로부터 선택되는 하나 이상의 기를 포함하는 분지 기를 포함한다. 특정 구현예에서, 분지 기는 알킬, 아미노, 옥소, 아미드, 디설파이드, 폴리에틸렌 글리콜, 에테르, 티오에테르 및 하이드록실아미노 기로부터 선택되는 기를 포함하는 분지된 지방족 기를 포함한다. 특정한 상기 구현예에서, 분지된 지방족 기는 알킬, 아미노, 옥소, 아미드 및 에테르 기로부터 선택되는 기를 포함한다. 특정한 상기 구현예에서, 분지된 지방족 기는 알킬, 아미노 및 에테르 기로부터 선택되는 기를 포함한다. 특정한 상기 구현예에서, 분지된 지방족 기는 알킬 및 에테르 기로부터 선택되는 기를 포함한다. 특정 구현예에서, 분지 기는 모노 또는 폴리사이클릭 고리 시스템을 포함한다.
특정 구현예에서, 세포-표적화 모이어티의 각각의 테더(tether)는 임의의 조합의 알킬, 치환된 알킬, 에테르, 티오에테르, 디설파이드, 아미노, 옥소, 아미드, 포스포디에스테르 및 폴리에틸렌 글리콜로부터 선택되는 하나 이상의 기를 포함한다. 특정 구현예에서, 각각의 테더는 임의의 조합의 알킬, 에테르, 티오에테르, 디설파이드, 아미노, 옥소, 아미드 및 폴리에틸렌 글리콜로부터 선택되는 하나 이상의 기를 포함하는 선형 지방족 기이다. 특정 구현예에서, 각각의 테더는 임의의 조합의 알킬, 포스포디에스테르, 에테르, 아미노, 옥소 및 아미드로부터 선택되는 하나 이상의 기를 포함하는 선형 지방족 기이다. 특정 구현예에서, 각각의 테더는 임의의 조합의 알킬, 에테르, 아미노, 옥소 및 아미드로부터 선택되는 하나 이상의 기를 포함하는 선형 지방족 기이다. 특정 구현예에서, 각각의 테더는 임의의 조합의 알킬, 아미노 및 옥소로부터 선택되는 하나 이상의 기를 포함하는 선형 지방족 기이다. 특정 구현예에서, 각각의 테더는 임의의 조합의 알킬 및 옥소로부터 선택되는 하나 이상의 기를 포함하는 선형 지방족 기이다. 특정 구현예에서, 각각의 테더는 임의의 조합의 알킬 및 포스포디에스테르로부터 선택되는 하나 이상의 기를 포함하는 선형 지방족 기이다. 특정 구현예에서, 각각의 테더는 적어도 하나의 인 연결기 또는 중성 연결기를 포함한다. 특정 구현예에서, 각각의 테더는 약 6개 내지 약 20개의 원자 길이의 사슬을 포함한다. 특정 구현예에서, 각각의 테더는 약 10개 내지 약 18개의 원자 길이의 사슬을 포함한다. 특정 구현예에서, 각각의 테더는 약 10개의 원자의 사슬 길이를 포함한다.
특정 구현예에서, 세포-표적화 모이어티의 각각의 리간드는 표적 세포 상의 적어도 하나의 유형의 수용체에 대한 친화성을 갖는다. 특정 구현예에서, 각각의 리간드는 포유동물 간 세포의 표면 상의 적어도 하나의 유형의 수용체에 대한 친화성을 갖는다. 특정 구현예에서, 각각의 리간드는 간 아시알로당단백질 수용체(ASGP-R)에 대한 친화성을 갖는다. 특정 구현예에서, 각각의 리간드는 탄수화물이다. 특정 구현예에서, 각각의 리간드는 갈락토스, N-아세틸 갈락토스아민(GalNAc), 만노스, 글루코스, 글루코스아민 및 푸코스로부터 독립적으로 선택된다. 특정 구현예에서, 각각의 리간드는 N-아세틸 갈락토스아민(GalNAc)이다. 특정 구현예에서, 세포-표적화 모이어티는 3개의 GalNAc 리간드를 포함한다. 특정 구현예에서, 세포-표적화 모이어티는 2개의 GalNAc 리간드를 포함한다. 특정 구현예에서, 세포-표적화 모이어티는 1개의 GalNAc 리간드를 포함한다.
특정 구현예에서, 세포-표적화 모이어티의 각각의 리간드는 탄수화물, 탄수화물 유도체, 변형된 탄수화물, 다당류, 변형된 다당류, 또는 다당류 유도체이다. 특정한 상기 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 탄수화물 클러스터를 포함한다(예를 들어, 전체내용이 참조로서 본원에 포함되는 문헌[Maier et al., "Synthesis of Antisense Oligonucleotides Conjugated to a MultivalentCarbohydrate Cluster for Cellular Targeting," Bioconjugate Chemistry, 2003, 14, 18-29], 또는 문헌[Rensen et al., "Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asiaglycoprotein Receptor," J. Med . Chem . 2004, 47, 5798-5808] 참조). 특정한 상기 구현예에서, 각각의 리간드는 아미노 당 또는 티오 당이다. 예를 들어, 아미노 당은 당 분야에 공지된 임의의 수의 화합물, 예를 들어, 시알산, α-D-갈락토사민, β-무람산, 2-데옥시-2-메틸아미노-L-글루코피라노스, 4,6-디데옥시-4-포름아미도-2,3-디-O-메틸-D-만노피라노스, 2-데옥시-2-설포아미노-D-글루코피라노스 및 N-설포-D-글루코사민, 및 N-글리콜릴-α-뉴라민산으로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 티오 당은 5-티오-β-D-글루코피라노스, 메틸 2,3,4-트리-O-아세틸-1-티오-6-O-트리틸-α-D-글루코피라노시드, 4-티오-β-D-갈락토피라노스 및 에틸 3,4,6,7-테트라-O-아세틸-2-데옥시-1,5-디티오-α-D-글루코-헵토피라노시드로부터 선택될 수 있다.
특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 하기 식을 갖는 세포-표적화 모이어티를 포함한다:
.
특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 하기 식을 갖는 세포-표적화 모이어티를 포함한다:
.
특정 구현예에서, 컨쥬게이트 기는 하기 식을 갖는 세포-표적화 모이어티를 포함한다:
.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 "LICA-1"로 본원에 기재되는 컨쥬게이트 기를 포함한다. LICA-1은 컨쥬게이트 링커의 말단에 선택적인 절단 가능한 모이어티 없이 하기에 제시된다:
.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 LICA-1을 포함하고, 컨쥬게이트 링커 내의 절단 가능한 모이어티는 하기 화학식을 갖는다:
.
상기 식에서, 올리고는 올리고뉴클레오티드이다.
특정한 상기 기재된 컨쥬게이트 기 및 컨쥬게이트 기를 포함하는 화합물, 테더, 컨쥬게이트 링커, 분지 기, 리간드, 절단 가능한 모이어티뿐만 아니라 다른 변형의 제조를 교시하는 대표적 간행물은 US 5,994,517호, US 6,300,319호, US 6,660,720호, US 6,906,182호, US 7,262,177호, US 7,491,805호, US 8,106,022호, US 7,723,509호, US 9,127,276호, US 2006/0148740호, US 2011/0123520호, WO 2013/033230호 및 WO 2012/037254호, 문헌[Biessen et al., J. Med . Chem . 1995, 38, 1846-1852, 문헌[Lee et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry 2011, 19, 2494-2500], 문헌[Rensen et al., J. Biol . Chem . 2001, 276, 37577-37584], 문헌[Resen et al., J. Med . Chem . 2004, 47, 5798-5808], 문헌[Sliedregt et al., J. Med . Chem. 1999, 42, 609-618], 및 문헌[Valentijn et al., Tetrahedron, 1997, 53, 759-770]을 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 이들 간행물 각각은 전체내용이 참조로서 본원에 포함된다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 갭머 또는 완전히 변형된 모티프 및 적어도 1개, 2개 또는 3개의 GalNAc 리간드를 포함하는 컨쥬게이트 기를 포함하는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 하기 참고문헌 중 임의의 참고문헌에서 발견되는 컨쥬게이트 기를 포함하며, 이들 참고문헌 각각은 전체내용이 참조로서 포함된다: 문헌[Lee, Carbohydr Res, 1978, 67, 509-514; Connolly et al.], 문헌[J Biol Chem, 1982, 257, 939-945; Pavia et al.], 문헌[Int J Pep Protein Res, 1983, 22, 539-548]; 문헌[Lee et al., Biochem, 1984, 23, 4255-4261]; 문헌[Lee et al., Glycoconjugate J, 1987, 4, 317-328]; 문헌[Toyokuni et al., Tetrahedron Lett, 1990, 31, 2673-2676]; ㅁ문헌[essen et al., J Med Chem, 1995, 38, 1538-1546]; 문헌[Valentijn et al., Tetrahedron, 1997, 53, 759-770]; 문헌[Kim et al., Tetrahedron Lett, 1997, 38, 3487-3490]; 문헌[Lee et al., Bioconjug Chem, 1997, 8, 762-765]; 문헌[Kato et al., Glycobiol, 2001, 11, 821-829]; 문헌[Rensen et al., J Biol Chem, 2001, 276, 37577-37584]; 문헌[Lee et al., Methods Enzymol, 2003, 362, 38-43]; ㅁ무문헌[erlind et al., Glycoconj J, 2004, 21, 227-241]; 문헌[Lee et al., Bioorg Med Chem Lett, 2006, 16(19), 5132-5135]; 문헌[Maierhofer et al., Bioorg Med Chem, 2007, 15, 7661-7676]; 문헌[Khorev et al., Bioorg Med Chem, 2008, 16, 5216-5231]; 문헌[Lee et al., Bioorg Med Chem, 2011, 19, 2494-2500]; 문헌[Kornilova et al., Analyt Biochem, 2012, 425, 43-46]; 문헌[Pujolet al., Angew Chemie Int Ed Engl, 2012, 51, 7445-7448]; 문헌[Biessen et al., J Med Chem, 1995, 38, 1846-1852]; 문헌[Sliedregt et al., J Med Chem, 1999, 42, 609-618]; 문헌[Rensen et al., J Med Chem, 2004, 47, 5798-5808]; 문헌[Rensen et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2006, 26, 169-175]; 문헌[van Rossenberg et al., Gene Ther, 2004, 11, 457-464]; 문헌[Sato et al., J Am Chem Soc, 2004, 126, 14013-14022]; 문헌[Lee et al., J Org Chem, 2012, 77, 7564-7571]; 문헌[Biessen et al., FASEB J, 2000, 14, 1784-1792]; 문헌[Rajur et al., Bioconjug Chem, 1997, 8, 935-940]; 문헌[Duffet al., Methods Enzymol, 2000, 313, 297-321]; 문헌[Maier et al., Bioconjug Chem, 2003, 14, 18-29]; 문헌[Jayaprakash et al., Org Lett, 2010, 12, 5410-5413; 문헌[Manoharan, Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 2002, 12, 103-128]; 문헌[Merwin et al., Bioconjug Chem, 1994, 5, 612-620]; 문헌[Tomiya et al., Bioorg Med Chem, 2013, 21, 5275-5281]; 국제 출원 WO1998/013381호; WO2011/038356호; WO1997/046098호; WO2008/098788호; WO2004/101619호; WO2012/037254호; WO2011/120053호; WO2011/100131호; WO2011/163121호; WO2012/177947호; WO2013/033230호; WO2013/075035호; WO2012/083185호; WO2012/083046호; WO2009/082607호; WO2009/134487호; WO2010/144740호; WO2010/148013호; WO1997/020563호; WO2010/088537호; WO2002/043771호; WO2010/129709호; WO2012/068187호; WO2009/126933호; WO2004/024757호; WO2010/054406호; WO2012/089352호; WO2012/089602호; WO2013/166121호; WO2013/165816호; 미국 특허 4,751,219호; 8,552,163호; 6,908,903호; 7,262,177호; 5,994,517호; 6,300,319호; 8,106,022호; 7,491,805호; 7,491,805호; 7,582,744호; 8,137,695호; 6,383,812호; 6,525,031호; 6,660,720호; 7,723,509호; 8,541,548호; 8,344,125호; 8,313,772호; 8,349,308호; 8,450,467호; 8,501,930호; 8,158,601호; 7,262,177호; 6,906,182호; 6,620,916호; 8,435,491호; 8,404,862호; 7,851,615호; 공개된 미국 특허 출원 공보 US2011/0097264호; US2011/0097265호; US2013/0004427호; US2005/0164235호; US2006/0148740호; US2008/0281044호; US2010/0240730호; US2003/0119724호; US2006/0183886호; US2008/0206869호; US2011/0269814호; US2009/0286973호; US2011/0207799호; US2012/0136042호; US2012/0165393호; US2008/0281041호; US2009/0203135호; US2012/0035115호; US2012/0095075호; US2012/0101148호; US2012/0128760호; US2012/0157509호; US2012/0230938호; US2013/0109817호; US2013/0121954호; US2013/0178512호; US2013/0236968호; US2011/0123520호; US2003/0077829호; US2008/0108801호; 및 US2009/0203132호.
약학적 조성물을
제형화시키기
위한 조성 및 방법
본원에 기재된 화합물은 약학적 조성물 또는 제형의 제조를 위해 약학적으로 허용되는 활성 또는 비활성 물질과 혼합될 수 있다. 약학적 조성물의 제형화를 위한 조성 및 방법은 투여 경로, 또는 질병의 정도를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 기준에 의존한다.
특정 구현예는 하나 이상의 화합물 또는 이의 염을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성된다. 특정한 상기 구현예에서, 약학적 조성물은 적합한 약학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 포함한다. 특정 구현예에서, 약학적 조성물은 멸균 염수 용액 및 하나 이상의 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 약학적 조성물은 멸균 염수 용액 및 하나 이상의 화합물로 구성된다. 특정 구현예에서, 멸균 염수는 약학적 등급의 염수이다. 특정 구현예에서, 약학적 조성물은 하나 이상의 화합물 및 멸균수를 포함한다. 특정 구현예에서, 약학적 조성물은 하나의 화합물 및 멸균수로 구성된다. 특정 구현예에서, 멸균수는 약학적 등급의 물이다. 특정 구현예에서, 약학적 조성물은 하나 이상의 화합물 및 인산염 완충 염수(PBS)를 포함한다. 특정 구현예에서, 약학적 조성물은 하나 이상의 화합물 및 멸균 PBS로 구성된다. 특정 구현예에서, 멸균 PBS는 약학적 등급의 PBS이다. 약학적 조성물의 제형화를 위한 조성 및 방법은 투여 경로, 또는 질병의 정도를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 기준에 좌우된다.
PCSK9 핵산을 표적으로 하는 본원에 기재된 화합물은 화합물과 적합한 약학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 조합함으로써 약학적 조성물로 이용될 수 있다. 특정 구현예에서, 약학적으로 허용되는 희석제는 물, 예를 들어, 주사에 적합한 멸균수이다. 따라서, 일 구현예에서, PCSK9 핵산을 표적으로 하는 화합물 및 약학적으로 허용되는 희석제를 포함하는 약학적 조성물이 본원에 기재된 방법에서 사용된다. 특정 구현예에서, 약학적으로 허용되는 희석제는 물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 본원에 제공된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성된다.
본원에 제공된 화합물을 포함하는 약학적 조성물은 인간을 포함하는 동물에 투여시 생물학적 활성 대사물 또는 이의 잔여물을 제공(직접적 또는 간접적)할 수 있는 임의의 약학적으로 허용되는 염, 에스테르, 또는 상기 에스테르의 염, 또는 임의의 다른 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구현예에서, 화합물은 안티센스 화합물 또는 올리고머 화합물이다. 특정 구현예에서, 화합물은 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하거나, 이로 구성된다. 따라서, 예를 들어, 본 발명의 개시는 또한 화합물의 약학적으로 허용되는 염, 프로드러그, 상기 프로드러그의 약학적으로 허용되는 염 및 다른 생물학적 등가물에 관한 것이다. 적합한 약학적으로 허용되는 염은 나트륨 및 칼륨 염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
프로드러그는 신체 내에서 내인성 뉴클레아제에 의해 절단되어 활성 화합물을 형성하는 화합물의 하나 또는 둘 모두의 말단에 추가 뉴클레오시드의 혼입을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물 또는 조성물은 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 추가로 포함한다.
특정한 선택된 화합물
약 1540개의 새로이 설계된 화합물 및 다양한 길이, 화학 및 모티프의 이전에 개시된 몇 가지 화합물을 여러 세포 유형에서 시험관 내에서 인간 PCSK9 mRNA에 대한 이들의 효과에 대해 시험하였다(실시예 1 내지 2). 시험관 내 단일 용량에서 효능에 대해 시험된 1540개의 화합물 중, 183개의 선택된 화합물을 HepG2 세포에서 용량 의존성 억제에 대해 시험하였다(실시예 2). 용량 반응 검정에 의해 시험된 183개의 화합물 중, 134개의 올리고뉴클레오티드를 설치류에서 단일 용량 생체 내 용인성에 대해 선택하였다. 이들 134개의 올리고뉴클레오티드를 3'-말단에서 THA-C6-GalNAc3-(3R,5S)-5-(하이드록시메틸)피롤리딘-3-올 포스페이트 엔드캡(이후, 3'-THA로 언급됨)과 컨쥬게이션시켰다.
단일 용량 설치류 용인성 모델에서, BALB/c 마우스에 고농도의 3'-THA 올리고뉴클레오티드를 투여하고, 간 기능 마커, 예를 들어, 알라닌 트랜스아미나제 및 아스파테이트 트랜스아미나제를 측정한다(실시예 3). ISIS 863413(SEQ ID NO:1096), ISIS 863419(SEQ ID NO:1419), ISIS 863424(SEQ ID NO:1297), ISIS 863425(SEQ ID NO:1528), ISIS 863427(SEQ ID NO:1145), ISIS 863433(SEQ ID NO:1223), ISIS 863434(SEQ ID NO:377), ISIS 863436(SEQ ID NO:763), ISIS 863437(SEQ ID NO:994), ISIS 863438(SEQ ID NO:1071), ISIS 863439(SEQ ID NO:1147), ISIS 863441(SEQ ID NO:1302), ISIS 863444(SEQ ID NO:1149), ISIS 863445(SEQ ID NO:455), ISIS 863448(SEQ ID NO:1380), ISIS 863452(SEQ ID NO:691), ISIS 863472(SEQ ID NO:926), ISIS 863473(SEQ ID NO:1233), ISIS 863474(SEQ ID NO:619), ISIS 863475(SEQ ID NO:388), ISIS 863477(SEQ ID NO:1542), ISIS 863479(SEQ ID NO:1158), ISIS 863480(SEQ ID NO:1235), ISIS 863481(SEQ ID NO:389), ISIS 863482(SEQ ID NO:1312), ISIS 863483(SEQ ID NO:1240), ISIS 863484(SEQ ID NO:549), ISIS 863485(SEQ ID NO:550), ISIS 863486(SEQ ID NO:781), ISIS 863489(SEQ ID NO:939), ISIS 863490(SEQ ID NO:1016), ISIS 863491(SEQ ID NO:1243), ISIS 863493(SEQ ID NO:629), ISIS 863494(SEQ ID NO:1017), ISIS 863495(SEQ ID NO:1092), ISIS 863496(SEQ ID NO:1244), ISIS 863497(SEQ ID NO:554), ISIS 863498(SEQ ID NO:478), ISIS 863499(SEQ ID NO:1094), ISIS 863502(SEQ ID NO:563), ISIS 863506(SEQ ID NO:410), ISIS 863507(SEQ ID NO:1411), ISIS 863509(SEQ ID NO:721), ISIS 863510(SEQ ID NO:1258), ISIS 863511(SEQ ID NO:645), ISIS 863512(SEQ ID NO:955), ISIS 863514(SEQ ID NO:1413), ISIS 863516(SEQ ID NO:881), ISIS 863517(SEQ ID NO:648), ISIS 863518(SEQ ID NO:725), ISIS 863520(SEQ ID NO:1111), ISIS 863522(SEQ ID NO:1188), ISIS 863524(SEQ ID NO:885), ISIS 863525(SEQ ID NO:504), ISIS 863526(SEQ ID NO:1043), ISIS 863527(SEQ ID NO:1195), ISIS 863531(SEQ ID NO:426), ISIS 863533(SEQ ID NO:427), ISIS 863536(SEQ ID NO:585), ISIS 863537(SEQ ID NO:1047), ISIS 863538(SEQ ID NO:353), ISIS 863539(SEQ ID NO:1352), ISIS 863541(SEQ ID NO:1203), ISIS 863545(SEQ ID NO:1516), ISIS 863547(SEQ ID NO:1213), ISIS 863548(SEQ ID NO:367), ISIS 863549(SEQ ID NO:1061), ISIS 863550(SEQ ID NO:523), ISIS 863552(SEQ ID NO:831) 및 ISIS 863553(SEQ ID NO:908)이 본 연구에서 용인되는 것으로 간주되었고, 트랜스제닉 마우스 모델에서의 추가 평가를 위해 선택되었다.
PCSK9 트랜스제닉 마우스 용인성 모델에서, 마우스에 3'-THA 컨쥬게이션된 올리고뉴클레오티드를 투여하였고, 알라닌 트랜스아미나제, 아스파테이트 트랜스아미나제, 콜레스테롤, HDL-콜레스테롤, LDL-콜레스테롤 및 트리글리세라이드의 혈장 수준을 측정하였다(실시예 4). ISIS 863433, ISIS 863490, ISIS 863512, ISIS 863527, ISIS 863538, ISIS 863425, ISIS 863438, ISIS 863439, ISIS 863444, ISIS 863413, ISIS 863434, ISIS 863436, ISIS 863494 및 ISIS 863539가 용인되는 것으로 밝혀졌다. 선택된 올리고뉴클레오티드 서열을 5'-말단에서 트리스헥실아미노-(THA)-C6GalNAC3 엔드캡(이후, 5'-THA로 언급됨)과 컨쥬게이션시키고, CD-1 마우스 모델에서 시험하였다. 5' THA 컨쥬게이션된 올리고뉴클레오티드는 ISIS 845219, ISIS 863568, ISIS 863576, ISIS 863577, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863637, ISIS 863655, ISIS 863670, ISIS 863681 및 ISIS 863682이다.
CD-1 마우스 용인성 모델에서, 마우스에 6주 동안 다양한 용량의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여하고, 용인성 마커, 예를 들어, 간 및 신장 기능 마커(ALT, AST, 알부민, BUN, 크레아티닌 및 빌리루빈의 혈장 수준), 혈액학 마커(RBC, WBC, 혈소판, 호중구, 림프구 및 단핵구에 대한 혈액 세포 수, 뿐만 아니라 헤모글로빈, 적혈구용적율 및 MCV 함량) 및 체중 및 기관 중량을 측정하였다(실시예 5). 처리가 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리 후에 예상 범위 내인 상기 마커의 혈장 수준을 발생시킨 올리고뉴클레오티드만 랫트 모델에서 추가 평가를 위해 선택하였다. ISIS 863568, ISIS 863576, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681을 랫트 모델에서 추가 연구를 위해 선택하였다.
스프라그-돌리(Sprague-Dawley) 랫트 모델에서, 유사하게 랫트에 6주 동안 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여하였고, 용인성 마커, 예를 들어, 간 기능 마커(ALT, AST, 알부민, BUN, 크레아티닌 및 빌리루빈의 혈장 수준), 신장 기능 마커(크레아티닌 및 전체 단백질의 소변 수준), 및 매주의 체중, 및 최종 기관 중량을 측정하였다(실시예 6).
이들 올리고뉴클레오티드를 또한 이들의 점도에 대해 시험하였고(실시예 8), 모두 시험된 기준 하에 이들의 점도가 최적인 것으로 밝혀졌다.
ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681을 효능에 대해 PCSK9 트랜스제닉 마우스 모델에서 용량-의존적 4주 연구에서 시험하였다(실시예 7). 4주 종료시, 마우스 간을 PCSK9 mRNA 발현 수준에 대해 분석하고, ED50을 계산하였다. 또한, PCSK9 혈장 단백질 수준, LDL-콜레스테롤 혈장 수준 및 간에서의 LDL-수용체 수준을 측정하였다. 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리가 PCSK9 간 mRNA 발현 수준의 억제, 혈장에서의 LDL-콜레스테롤 수준의 감소 및 간에서의 LDL 수용체 수준에서의 상응하는 증가를 발생시킨 것이 관찰되었다. 특히, ISIS 863633 처리가 효과적인 것으로 밝혀졌다.
ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681을 시노몰구스 원숭이에서의 12주 연구에서 활성, 약동학 프로파일 및 용인성에 대해 시험하였다(실시예 9). 레서스 원숭이 유전자 서열과 완전히 교차 반응성인 화합물을 이용한 처리는 간 조직에서 PCSK9 mRNA 발현의 감소를 야기시켰다. 특히, ISIS 863633, ISIS 863670 및 ISIS 863681을 이용한 처리가 PBS 대조군에 비해 간 조직에서 PCSK9 mRNA 발현의 감소를 야기시켰다. ISIS 863633이 PBS 대조군에 비해 PCSK9 mRNA 발현의 가장 높은 감소를 야기시킨 것이 인지되었다. PCSK9 단백질 수준, LDL-콜레스테롤 수준, 총 콜레스테롤 수준 및 간 LDL-수용체 수준에서의 변화는 PCSK9 mRNA 수준의 억제의 결과이다. ISIS 863633, ISIS 863670 및 ISIS 863681을 이용한 처리는 PCSK9 단백질 수준, LDL-콜레스테롤 수준, 총 콜레스테롤 수준의 감소 및 간 LDL-수용체 수준의 유도를 야기시켰고, ISIS 863633이 가장 높은 변화를 야기시켰다. 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리는 HDL-콜레스테롤 또는 트리글리세라이드 수준에서 임의의 변화를 야기시키지 않았다. 그러므로, 활성의 측면에서, ISIS 863633이 원숭이 연구에서 가장 효과적이었다. 화합물을 이용한 처리, 특히 ISIS 863633을 이용한 처리는 원숭이에서 잘 용인되었다.
새로운 화합물을 시험관 내에서 가장 강력한 안티센스 화합물 중 일부인 것으로 이전에 결정된 ISIS 405879 및 ISIS 405995(예를 들어, 미국 특허 8,084,437호 참조), 뿐만 아니라 미국 특허 9,127,276호에 이전에 기재된 ISIS 431131 및 ISIS 480604를 포함하여 이전에 설계된 화합물과 비교하였다(실시예 10). 일 대 일 비교는 ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이 이전에 공개적으로 개시된 임의의 올리고뉴클레오티드보다 더 효과적임을 입증하였다.
따라서, 개선된 특성 중 어느 하나 이상을 갖는 화합물이 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 화합물은 강력하고 용인된다.
실시예
하기 실시예는 PCSK9을 표적으로 하는 선도 화합물을 확인하기 위한 스크리닝 방법을 기재한다. 스크리닝된 1540개가 넘는 올리고뉴클레오티드 중, ISIS 863568, ISIS 863579, ISIS 863581, ISIS 863582, ISIS 863587, ISIS 863633, ISIS 863655, ISIS 863670 및 ISIS 863681이 상위 선도 화합물로 나타났다. 특히, ISIS 863633은 1540개가 넘는 올리고뉴클레오티드 중 효능 및 용인성 측면에서 최적의 특성 조합을 나타내었다.
비제한적인
개시 및 참조로서의 포함
본 출원에 수반되는 서열 목록은 각각의 서열을 필요에 따라 "RNA" 또는 "DNA"로 확인하나, 실제로는 이들 서열은 화학적 변형의 임의의 조합으로 변형될 수 있다. 당업자는 변형된 올리고뉴클레오티드를 기재하기 위해 "RNA" 또는 "DNA"와 같은 상기 지정이 특정 예에서 임의적이라는 것을 용이하게 인지할 것이다. 예를 들어, 2'-OH 당 모이어티 및 티민 염기를 포함하는 뉴클레오시드를 포함하는 올리고뉴클레오티드는 변형된 당(DNA의 천연 2'-H에 대해 2'-OH)을 갖는 DNA 또는 변형된 염기(RNA의 천연 우라실에 대해 티민(메틸화된 우라실))를 갖는 RNA로 기재될 수 있다. 본원에 제공된 바와 같이, mRNA 억제 검정에 대한 '0'의 지정은 단지 안티센스 올리고뉴클레오티드가 mRNA 발현 수준을 억제하지 않은 것을 나타낸다.
따라서, 서열 목록 내의 핵산 서열을 포함하나 이에 제한되지는 않는 본원에 제공된 핵산 서열은 변형된 핵염기를 갖는 상기 핵산을 포함하나 이에 제한되지는 않는 천연 또는 변형된 RNA 및/또는 DNA의 임의의 조합을 함유하는 핵산을 포함하는 것으로 의도된다. 추가 예로서 및 비제한적으로, 핵염기 서열 "ATCGATCG"를 갖는 올리고뉴클레오티드는 RNA 염기를 포함하는 상기 화합물, 예를 들어, 서열 "AUCGAUCG"를 갖는 화합물 및 "AUCGATCG"와 같이 일부 DNA 염기 및 일부 RNA 염기를 갖는 화합물 및 다른 변형된 핵염기, 예를 들어, "ATmCGAUCG"(여기서, mC는 5-위치에서 메틸기를 포함하는 시토신 염기를 나타냄)를 갖는 화합물을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 변형되거나 변형되지 않았건 간에 상기 핵염기 서열을 갖는 임의의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
본원에 기재된 특정 화합물, 조성물 및 방법은 특정 구현예에 따라 상세하게 기재되었으나, 하기 실시예는 본원에 기재된 화합물을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 이를 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 출원에서 인용된 참고문헌 각각은 전체내용이 참조로서 본원에 포함된다.
실시예
1: 3
-10-3
cEt
갭머에
의한
HepG2
세포에서의 인간
PCSK9의
안티센스
억제
PCSK9 핵산을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 설계하고, 시험관 내에서 PCSK9 mRNA에 대한 이들의 효과에 대해 시험하였다. 하기 표에서 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드를 3-10-3 cEt 갭머로 설계하였다. 갭머는 16개의 뉴클레오시드 길이이며, 여기서 중심 갭 세그먼트는 10개의 2'-데옥시뉴클레오시드로 구성되고, 각각 3개의 뉴클레오시드의 5' 말단 및 3' 말단 상의 윙 세그먼트에 측접한다. 5' 윙 세그먼트 내의 각각의 뉴클레오시드 및 3' 윙 세그먼트 내의 각각의 뉴클레오시드는 cEt 당 변형을 갖는다. 각각의 갭머 전체에 걸친 뉴클레오시드간 결합은 포스포로티오에이트(P=S) 결합이다. 각각의 갭머 전체에 걸친 모든 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
"시작 부위"는 갭머가 인간 유전자 서열에서 표적으로 하는 가장 5'의 뉴클레오시드를 나타낸다. "정지 부위"는 갭머가 인간 유전자 서열에서 표적으로 하는 가장 3'의 뉴클레오시드를 나타낸다. 하기 표에 나열된 각각의 갭머는 SEQ ID NO:1로 본원에서 지정된 인간 PCSK9 mRNA(GENBANK 등록 번호 NM_174936.3) 또는 SEQ ID NO:2로 본원에서 지정된 인간 PCSK9 유전체 서열(뉴클레오티드 55036001 내지 55068000이 트렁케이션된 GENBANK 등록 번호 NC_000001.11)을 표적으로 한다. 'n/a'는 안티센스 올리고뉴클레오티드가 특정 유전자 서열을 100% 상보성으로 표적화하지 않음을 나타낸다.
안티센스 올리고뉴클레오티드를 유사한 배양 조건을 갖는 일련의 실험에서 시험하였다. 각각의 실험에 대한 결과는 하기 제시되는 별도의 표에 제시된다.
연구 1
웰 당 20,000개 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포를 전기천공을 이용하여 1,000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드로 형질감염시켰다. WO2014179620호에 이전에 개시된 ISIS 431131을 또한 벤치마크 올리고뉴클레오티드로서 연구에 포함시켰다. 약 24시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리시키고, PCSK9 mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR로 측정하였다. ABI로부터의 인간 PCSK9 프라이머 프로브 세트(ID# Hs03037355_m1)를 mRNA 수준을 측정하는 데 사용하였다. PCSK9 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 전체 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과는 미처리 대조군 세포에 비한 PCSK9의 억제 퍼센트로 제시된다. 새로이 설계된 여러 올리고뉴클레오티드는 이전에 개시된 올리고뉴클레오티드인 ISIS 431131보다 더 강력하였다.
[표 1]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 2]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 3]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 4]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
연구 2
웰 당 20,000개 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포를 전기천공을 이용하여 3,000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드로 형질감염시켰다. 약 24시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리시키고, PCSK9 mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR로 측정하였다. ABI로부터의 인간 PCSK9 프라이머 프로브 세트(ID# Hs03037355_m1)를 mRNA 수준을 측정하는 데 사용하였다. PCSK9 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 전체 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과는 미처리 대조군 세포에 비한 PCSK9의 억제 퍼센트로 제시된다.
[표 5]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 6]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
연구 3
웰 당 20,000개 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포를 전기천공을 이용하여 1,000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드로 형질감염시켰다. 약 24시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리시키고, PCSK9 mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR로 측정하였다. ABI로부터의 인간 PCSK9 프라이머 프로브 세트(ID# Hs03037355_m1)를 mRNA 수준을 측정하는 데 사용하였다. PCSK9 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 전체 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과는 미처리 대조군 세포에 비한 PCSK9의 억제 퍼센트로 제시된다.
[표 7]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 8]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 9]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 10]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 11]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 12]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 13]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 14]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 15]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 16]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 17]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 18]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 19]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
[표 20]
SEQ ID NO:1 및 2를 표적으로 하는 3-10-3 cEt 갭머에 의한 PCSK9 mRNA의 억제
실시예
2: 3
-10-3
cEt
갭머에
의한
HepG2
세포에서의 인간
PCSK9의
용량-의존적
안티센스
억제
PCSK9 mRNA의 시험관 내 억제를 나타내는 실시예 1로부터의 선택 갭머를 HepG2 세포에서 다양한 용량으로 시험하였다. 안티센스 올리고뉴클레오티드를 유사한 배양 조건을 갖는 일련의 실험에서 시험하였다. 각각의 실험에 대한 결과는 하기 제시되는 별도의 표에 제시된다.
연구 1
세포를 웰 당 20,000개 세포의 밀도로 플레이팅하고, 하기 표에 명시된 바와 같이 46.88 nM, 187.5 nM, 750 nM 및 3,000 nM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드로 전기천공을 이용하여 형질감염시켰다. WO2008066776호에 이전에 개시된 ISIS 405879를 또한 벤치마크 올리고뉴클레오티드로서 연구에 포함시켰다. 약 16시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리시키고, PCSK9 mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR로 측정하였다. ABI로부터의 인간 PCSK9 프라이머 프로브 세트(ID# Hs03037355_m1)를 mRNA 수준을 측정하는 데 사용하였다. PCSK9 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 전체 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과는 미처리 대조군 세포에 비한 PCSK9의 억제 퍼센트로 제시된다.
각각의 올리고뉴클레오티드의 반수 최대 억제 농도(IC50)가 또한 제시된다. PCSK9 mRNA 수준은 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 세포에서 용량-의존적 방식으로 감소되었다. 새로이 설계된 안티센스 올리고뉴클레오티드 중 여러 개가 이전에 개시된 올리고뉴클레오티드인 ISIS 405879에 비해 우수한 효능을 나타내었다. 특히, ISIS 848542, ISIS 848593, ISIS 848597, ISIS 848598, ISIS 848630, ISIS 848833, ISIS 849040, ISIS 849171 및 ISIS 849236은 이전에 개시된 올리고뉴클레오티드인 ISIS 405879에 비해 우수한 효능을 나타내었다.
[표 21]
연구 2
세포를 웰 당 20,000개 세포의 밀도로 플레이팅하고, 하기 표에 명시된 바와 같이 78.13 nM, 312.5 nM, 1,250 nM 및 5,000 nM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드로 전기천공을 이용하여 형질감염시켰다. WO2014179620호에 이전에 개시된 ISIS 431131을 또한 벤치마크 올리고뉴클레오티드로서 연구에 포함시켰다. 약 16시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리시키고, PCSK9 mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR로 측정하였다. ABI로부터의 인간 PCSK9 프라이머 프로브 세트(ID# Hs03037355_m1)를 mRNA 수준을 측정하는 데 사용하였다. PCSK9 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 전체 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과는 미처리 대조군 세포에 비한 PCSK9의 억제 퍼센트로 제시된다.
각각의 올리고뉴클레오티드의 반수 최대 억제 농도(IC50)가 또한 제시된다. PCSK9 mRNA 수준은 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 세포에서 용량-의존적 방식으로 감소되었다. 새로이 설계된 안티센스 올리고뉴클레오티드 중 여러 개가 이전에 개시된 올리고뉴클레오티드인 ISIS 431131에 비해 우수한 효능을 나타내었다.
[표 22]
실시예
3:
BALB
/c 마우스에서 인간
PCSK9을
표적으로 하는 3'-
컨쥬게이션된
3-10-3 cEt 갭머의 용인성
상기 연구로부터 선택된 ISIS 올리고뉴클레오티드를 3'-THA-C6-GalNAc3-(3R,5S)-5-(하이드록시메틸)피롤리딘-3-올 포스페이트 엔드캡(이후, 3'-THA으로 언급됨)과 컨쥬게이션시켰다. 혈장 화학 마커의 수준에서의 변화에 대해 평가된 162개의 3'-THA-컨쥬게이션된 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오티드가 하기 표에 제시된다. '모 올리고'는 상기 연구에서 기재되고, 3'-THA와 컨쥬게이션되고, 본 연구에서 시험된 ISIS 올리고뉴클레오티드를 나타낸다.
[표 23]
BALB
/c 마우스에서
용인성
평가를 위해 선택된 3'-
컨쥬게이션된
3-10-3
cEt
갭머
BALB/c 마우스는 다목적 마우스 모델이며, 안전성 및 효능 시험에 자주 이용된다. 마우스에 단일 용량의 올리고뉴클레오티드를 투여하였다. 트랜스아미나제의 혈장 수준을 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위를 벗어나는 ALT 및/또는 AST의 수준에서의 변화를 야기시킨 ISIS 올리고뉴클레오티드를 추가 연구에서 제외시켰다. ISIS 863413, ISIS 863419, ISIS 863424, ISIS 863425, ISIS 863427, ISIS 863433, ISIS 863434, ISIS 863436, ISIS 863437, ISIS 863438, ISIS 863439, ISIS 863441, ISIS 863444, ISIS 863445, ISIS 863448, ISIS 863452, ISIS 863472, ISIS 863473, ISIS 863474, ISIS 863475, ISIS 863477, ISIS 863479, ISIS 863480, ISIS 863481, ISIS 863482, ISIS 863483, ISIS 863484, ISIS 863485, ISIS 863486, ISIS 863489, ISIS 863490, ISIS 863491, ISIS 863493, ISIS 863494, ISIS 863495, ISIS 863496, ISIS 863497, ISIS 863498, ISIS 863499, ISIS 863502, ISIS 863506, ISIS 863507, ISIS 863509, ISIS 863510, ISIS 863511, ISIS 863512, ISIS 863514, ISIS 863516, ISIS 863517, ISIS 863518, ISIS 863520, ISIS 863522, ISIS 863524, ISIS 863525, ISIS 863526, ISIS 863527, ISIS 863531, ISIS 863533, ISIS 863536, ISIS 863537, ISIS 863538, ISIS 863539, ISIS 863541, ISIS 863545, ISIS 863547, ISIS 863548, ISIS 863549, ISIS 863550, ISIS 863552 및 ISIS 863553이 본 연구에서 용인되는 것으로 간주되었으며, 추가 평가를 위해 선택하였다.
실시예
4:
트랜스제닉
마우스 모델에서의
PCSK9의
안티센스
억제의 효과
트랜스제닉 마우스 모델은 전체 유전체 서열뿐만 아니라 8 Kb의 5' 및 0.4 Kb의 3' 비코딩 서열을 함유하는 DNA 단편을 생성시키기 위해 포스미드 ABC7-611722G24에 함유되고, Nhe1으로 제한된 인간 PCSK9 유전체 작제물을 이용하여 UCI에서 개발되었다. PCSK9 트랜스제닉 마우스를 소핵 주사를 통한 무작위 삽입에 의해 생성시켰다. 자손은 간에서 인간 PCSK9 mRNA를 발현하였고, 인간 PCSK9 혈장 단백질을 분비하였다.
3'-THA-컨쥬게이션된 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효능을 상기 모델(본원에서 Tg 마우스로 언급됨)에서 평가하였다. 시험된 ISIS 올리고뉴클레오티드는 하기 표에 제시된다. '모 ISIS 번호'는 상기 연구에서 기재되고, 3'-THA와 컨쥬게이션되고, 본 연구에서 시험된 ISIS 올리고뉴클레오티드를 나타낸다.
[표 24]
Tg 마우스에서 시험된 ISIS 올리고뉴클레오티드
처리
PCSK9 트랜스제닉 마우스를 12시간의 명/암 주기로 유지시켰고, 일반적인 퓨리나(Purina) 마우스 사료를 자유롭게 먹였다. 동물을 실험 개시 전에 연구 시설에서 적어도 7일 동안 순응시켰다. 안티센스 올리고뉴클레오티드(ASO)를 완충 염수(PBS)에서 제조하고, 0.2 마이크론 필터를 통한 여과에 의해 멸균시켰다. 올리고뉴클레오티드를 주사용 0.9% PBS에 용해시켰다.
PCSK9 트랜스제닉 마우스에 2주 동안 주 당 2회 2.5 ㎎/㎏의 용량으로 ISIS 올리고뉴클레오티드의 피하 주사를 제공하였다. 2개 그룹의 마우스에 2주 동안 PBS의 피하 주사를 제공하였다. 염수 주사된 그룹을 올리고뉴클레오티드 처리된 그룹과 비교하기 위한 대조군 그룹으로 사용하였다.
혈장 화학
마커
이들 마우스의 간 및 신장 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 트랜스아미나제(ALT 및 AST), 콜레스테롤(CHOL), HDL 콜레스테롤(HDL), LDL 콜레스테롤(LDL) 및 트리글리세라이드(TRIG)의 혈장 수준을 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 12일째에 측정하였다. 결과는 하기 표에 제시된다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위를 벗어나는 간 또는 신장 기능 마커 중 임의의 것의 수준에서의 변화를 야기시킨 ISIS 올리고뉴클레오티드를 추가 연구에서 제외시켰다.
[표 25]
Tg 마우스 혈장에서의 혈장 화학 마커
실시예
5: CD1 마우스에서 인간
PCSK9을
표적으로 하는 ISIS 올리고뉴클레오티드의 용인성
상기 연구로부터 선택된 ISIS 올리고뉴클레오티드를 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6GalNAC3 엔드캡(이후, 5'-THA로 언급됨)과 컨쥬게이션시켰다. CD1®마우스(Charles River, MA)는 다목적 마우스 모델이며, 안전성 및 효능 시험에 자주 이용된다. 마우스를 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리하고, 상기 기재된 연구로부터 선택하고, 5'-THA와 컨쥬게이션시키고, 다양한 혈장 화학 마커의 수준에서의 변화에 대해 평가하였다.
연구 1
처리
수컷 CD1 마우스의 그룹에 15 ㎎/㎏의 ISIS 올리고뉴클레오티드를 6주 동안 1주일에 1회 피하 주사하였다. 수컷 CD1 마우스의 한 그룹에 PBS를 6주 동안 1주일에 1회 피하 주사하였다. 마우스를 마지막 투여 48시간 후에 안락사시키고, 기관 및 혈장을 추가 분석을 위해 수거하였다.
시험된 ISIS 올리고뉴클레오티드는 하기 표에 제시된다. '컨쥬게이션되지 않은 모 ISIS 번호'는 동일 서열을 갖는 상기 시험관 내 연구에 기재된 ISIS 올리고뉴클레오티드를 나타낸다. '3'-THA 대응물 ISIS 번호'는 동일 서열을 갖고, 상기 트랜스제닉 마우스 연구에서 평가된 3'THA 컨쥬게이션된 올리고뉴클레오티드를 나타낸다.
[표 26]
CD1 마우스 용인성 연구에서 시험된 ISIS 올리고뉴클레오티드
혈장 화학
마커
간 및 신장 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 트랜스아미나제, 빌리루빈, 크레아티닌 및 BUN의 혈장 수준을 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다. 결과는 하기 표에 제시된다. ISIS 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리는 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위를 벗어나는 간 또는 신장 기능 마커 중 임의의 것의 수준에서 어떠한 변화도 야기시키지 않았다.
[표 27]
45일에서의 CD1 마우스 혈장에서의 혈장 화학 마커
혈액학 검정
모든 마우스 그룹으로부터 획득된 혈액을 RBC, WBC, 혈소판, 호중구, 림프구 및 단핵구 수, 뿐만 아니라 헤모글로빈, HCT 및 MCV 수준에 대해 분석하였다. 결과는 하기 표에 제시된다. ISIS 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리는 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위를 벗어나는 혈액학 마커 중 임의의 것의 수준에서 어떠한 변화도 야기시키지 않았다.
[표 28]
45일에서의 CD1 마우스에서의 혈액 세포 수
[표 29]
45일에서의 CD1 마우스에서의 혈액학 마커
체중 및 기관 중량 측정
동물의 전반적인 건강에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 체중 및 기관 중량을 측정하였다. 체중을 매주 측정하였고, 하기 표에 제시된다. 기관 중량을 측정하였고, 데이터는 또한 하기 표에 제시된다. 결과는 체중 및 기관 중량에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리의 효과가 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위 내인 것을 나타낸다.
[표 30]
CD1 마우스에서의 체중 (g)
[표 31]
CD1 마우스에서의 기관 중량 (g)
연구 2
처리
수컷 CD1 마우스의 그룹에 15 ㎎/㎏의 ISIS 올리고뉴클레오티드를 6주 동안 1주일에 1회 피하 주사하였다. 수컷 CD1 마우스의 한 그룹에 PBS를 6주 동안 1주일에 1회 피하 주사하였다. 마우스를 마지막 투여 48시간 후에 안락사시키고, 기관 및 혈장을 추가 분석을 위해 수거하였다.
시험된 ISIS 올리고뉴클레오티드는 하기 표에 제시된다. '컨쥬게이션되지 않은 모 ISIS 번호'는 동일 서열을 갖는 상기 시험관 내 연구에 기재된 ISIS 올리고뉴클레오티드를 나타낸다. '3'-THA 대응물 ISIS 번호'는 동일 서열을 갖고, 상기 트랜스제닉 마우스 연구에서 기재된 3'THA 컨쥬게이션된 올리고뉴클레오티드를 나타낸다.
[표 32]
CD1 마우스 용인성 연구에서 시험된 ISIS 올리고뉴클레오티드
혈장 화학
마커
간 및 신장 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 트랜스아미나제, 빌리루빈, 크레아티닌 및 BUN의 혈장 수준을 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다.
결과는 하기 표에 제시된다. ISIS 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리는 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위를 벗어나는 간 또는 신장 기능 마커 중 임의의 것의 수준에서 어떠한 변화도 야기시키지 않았다.
[표 33]
45일에서의 CD1 마우스 혈장에서의 혈장 화학 마커
혈액학 검정
모든 마우스 그룹으로부터 획득된 혈액을 RBC, WBC, 혈소판, 호중구, 림프구 및 단핵구 수, 뿐만 아니라 헤모글로빈, HCT 및 MCV 수준에 대해 분석하였다. 결과는 하기 표에 제시된다. ISIS 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리는 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위를 벗어나는 혈액학 마커 중 임의의 것의 수준에서 어떠한 변화도 야기시키지 않았다.
[표 34]
45일에서의 CD1 마우스에서의 혈액 세포 수
[표 35]
45일에서의 CD1 마우스에서의 혈액학 마커
체중 및 기관 중량 측정
동물의 전반적인 건강에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 체중 및 기관 중량을 측정하였다. 체중을 매주 측정하였고, 하기 표에 제시된다. 기관 중량을 측정하였고, 데이터는 또한 하기 표에 제시된다. 결과는 체중 및 기관 중량에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리의 효과가 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위 내인 것을 나타낸다.
[표 36]
CD1 마우스에서의 체중 (g)
[표 37]
CD1 마우스에서의 기관 중량 (g)
연구 3
처리
수컷 CD1 마우스의 그룹에 5 ㎎/㎏ 또는 15 ㎎/㎏의 ISIS 올리고뉴클레오티드를 6주 동안 1주일에 1회 피하 주사하였다. 수컷 CD1 마우스의 한 그룹에 PBS를 6주 동안 1주일에 1회 피하 주사하였다. 마우스를 마지막 투여 48시간 후에 안락사시키고, 기관 및 혈장을 추가 분석을 위해 수거하였다.
시험된 ISIS 올리고뉴클레오티드는 하기 표에 제시된다. '컨쥬게이션되지 않은 모 ISIS 번호'는 동일 서열을 갖는 상기 시험관 내 연구에 기재된 ISIS 올리고뉴클레오티드를 나타낸다. '3'-THA 대응물 ISIS 번호'는 동일 서열을 갖고, 상기 트랜스제닉 마우스 연구에서 기재된 3'THA 컨쥬게이션된 올리고뉴클레오티드를 나타낸다.
[표 38]
CD1 마우스 용인성 연구에서 시험된 ISIS 올리고뉴클레오티드
혈장 화학
마커
간 및 신장 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 트랜스아미나제, 빌리루빈, 크레아티닌 및 BUN의 혈장 수준을 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다.
결과는 하기 표에 제시된다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위를 벗어나는 간 또는 신장 기능 마커 중 임의의 것의 수준에서의 변화를 야기시킨 ISIS 올리고뉴클레오티드를 추가 연구에서 제외시켰다.
[표 39]
45일에서의 CD1 마우스 혈장에서의 혈장 화학 마커
혈액학 검정
모든 마우스 그룹으로부터 획득된 혈액을 RBC, WBC, 혈소판, 호중구, 림프구 및 단핵구 수, 뿐만 아니라 헤모글로빈, HCT 및 MCV 수준에 대해 분석하였다. 결과는 하기 표에 제시된다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위를 벗어나는 혈액학 마커 중 임의의 것의 수준에서의 변화를 야기시킨 ISIS 올리고뉴클레오티드를 추가 연구에서 제외시켰다.
[표 40]
45일에서의 CD1 마우스에서의 혈액 세포 수
[표 41]
45일에서의 CD1 마우스에서의 혈액학 마커
체중 및 기관 중량 측정
동물의 전반적인 건강에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 체중 및 기관 중량을 측정하였다. 체중을 매주 측정하였고, 하기 표에 제시된다. 기관 중량을 측정하였고, 데이터는 또한 하기 표에 제시된다. 결과는 체중 및 기관 중량에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리의 효과가 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위 내인 것을 나타낸다.
[표 42]
CD1 마우스에서의 체중 (g)
[표 43]
CD1 마우스에서의 기관 중량 (g)
실시예
6:
스프라그
-돌리
랫트에서
인간
PCSK9을
표적으로 하는 ISIS 올리고뉴클레오티드의 용인성
스프라그-돌리 랫트는 안전성 및 효능 평가에 이용되는 다목적 모델이다. 랫트를 상기 실시예에 기재된 연구로부터의 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리하고, 다양한 혈장 화학 마커의 수준에서의 변화에 대해 평가하였다.
처리
수컷 스프라그-돌리 랫트를 12시간의 명/암 주기로 유지시켰고, 일반적인 퓨리나(Purina) 랫트 사료인 다이어트 5001(diet 5001)을 자유롭게 먹였다. 4마리의 스프라그-돌리 랫트 그룹에 각각 15 ㎎/㎏의 ISIS 올리고뉴클레오티드를 6주 동안 1주일에 1회 피하 주사하였다. 마지막 투여 48시간 후, 랫트를 안락사시키고, 기관 및 혈장을 추가 분석을 위해 수거하였다.
간 기능
간 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 트랜스아미나제의 혈장 수준을 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다. ALT(알라닌 트랜스아미나제) 및 AST(아스파테이트 트랜스아미나제)의 혈장 수준을 측정하였고, 결과가 IU/ℓ로 표현된 하기 표에 제시된다. 빌리루빈(TBIL), BUN, 알부민(ALB) 및 크레아티닌(CRE)의 혈장 수준을 또한 동일 임상 화학 분석기를 이용하여 측정하였고, 결과가 또한 ㎎/㎗로 표현된 하기 표에 제시된다. 알부민의 혈장 수준을 또한 동일 임상 화학 분석기를 이용하여 측정하였고, 결과가 또한 g/㎗로 표현된 하기 표에 제시된다.
[표 44]
스프라그-돌리 랫트에서의 간 기능 마커
신장 기능
신장 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 혈액 크레아티닌 및 전체 단백질의 소변 수준을 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다. 결과는 ㎎/㎗로 표현된 하기 표에 제시된다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위를 벗어나는 신장 기능 마커 중 임의의 것의 수준에서의 변화를 야기시킨 ISIS 올리고뉴클레오티드를 추가 연구에서 제외시켰다. 'N/A'는 데이터가 해당 그룹에 대해 이용할 수 없음을 나타낸다.
[표 45]
스프라그-돌리 랫트에서의 신장 기능 마커(㎎/㎗)
체중 및 기관 중량
동물의 전반적인 건강에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 체중 및 기관 중량을 측정하였다. 체중을 매주 측정하였고, 하기 표에 제시된다. 기관 중량을 측정하였고, 데이터는 또한 하기 표에 제시된다. 결과는 체중 및 기관 중량에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리의 효과가 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위 내인 것을 나타낸다.
[표 46]
체중 (g)
[표 47]
기관 중량 (g)
실시예
7:
트랜스제닉
마우스 모델에서의
PCSK9의
안티센스
억제의 효과
트랜스제닉 마우스 모델을 UCI에서 개발하였고, 이는 문헌에서 기재된 적이 없다. 포스미드 ABC7-611722G24에 함유된 인간 PCSK9 유전체 작제물을 Nhe1으로 제한하여 전체 유전체 서열뿐만 아니라 8 Kb의 5' 및 0.4 Kb의 3' 비코딩 서열을 함유하는 DNA 단편을 생성시켰다. PCSK9 트랜스제닉 마우스를 소핵 주사를 통한 무작위 삽입에 의해 생성시켰다. 자손은 간에서 인간 PCSK9 mRNA를 발현하였고, 인간 PCSK9 혈장 단백질을 분비하였다.
처리
트랜스제닉 마우스를 12시간의 명/암 주기로 유지시켰고, 일반적인 퓨리나(Purina) 마우스 사료를 자유롭게 먹였다. 동물을 실험 개시 전에 연구 시설에서 적어도 7일 동안 순응시켰다. 안티센스 올리고뉴클레오티드(ASO)를 완충 염수(PBS)에서 제조하고, 0.2 마이크론 필터를 통한 여과에 의해 멸균시켰다. 올리고뉴클레오티드를 주사용 0.9% PBS에 용해시켰다.
Tg 마우스를 각각 3마리의 마우스의 27개의 그룹으로 나누었다. 그룹에 4주 동안 주 당 1회로 0.25 ㎎/㎏, 1.00 ㎎/㎏ 또는 5.00 ㎎/㎏의 용량의 ISIS 올리고뉴클레오티드의 피하 주사를 제공하였다. 4마리의 마우스의 하나의 그룹에 4주 동안 주 당 1회로 PBS의 피하 주사를 제공하였다. 염수 주사된 그룹을 올리고뉴클레오티드 처리된 그룹과 비교하기 위한 대조군 그룹으로 사용하였다.
RNA 분석
26일째에, PCSK9의 mRNA 발현 측정의 실시간 PCR 분석을 위해 간으로부터 RNA를 추출하였다. 결과는 RIBOGREEN®로 표준화된 PBS 대조군에 비한 mRNA의 변화 퍼센트로 제시된다. 하기 표에 제시된 바와 같이, ISIS 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리는 PBS 대조군과 비교하여 PCSK9 mRNA의 유의한 감소를 발생시켰다.
[표 48]
PBS 대조군에 비한 트랜스제닉 마우스 간에서의 PCSK9 mRNA의 억제 퍼센트
단백질 분석
PCSK9 혈장 단백질을 인간-특이적 ELISA 키트(R&D Systems)로 측정하였다. 결과는 PBS 대조군에 비한 단백질 수준의 변화 퍼센트로 제시된다. 하기 표에 제시된 바와 같이, ISIS 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리는 PBS 대조군과 비교하여 PCSK9 혈장 단백질 수준의 유의한 감소를 발생시켰다.
[표 49]
PBS 대조군에 비한 트랜스제닉 마우스에서의 PCSK9 혈장 단백질의 억제 퍼센트
LDL-콜레스테롤 수준
혈장에서의 LDL-콜레스테롤의 수준을 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)로 측정하였다. 간에서의 LDL 수용체(LDLr) 단백질의 수준을 또한 측정하였다. 결과는 PBS 대조군에 비한 수준의 변화 퍼센트로 제시된다. 하기 표에 제시된 바와 같이, 여러 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리는 PBS 대조군과 비교하여 혈장에서 LDL-콜레스테롤 수준의 유의한 감소를 발생시켰다. 이에 상응하여, ISIS 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리가 마우스에서 용량-의존적 간 LDLr 단백질 증가를 발생시킨 것이 관찰되었다.
[표 50]
PBS 대조군에 비한 혈장에서의 LDL-콜레스테롤 수준의 억제
[표 51]
PBS 대조군에 비한 트랜스제닉 마우스에서의 간 LDLr의 증가 퍼센트
실시예
8: 인간
PCSK9을
표적으로 하는
안티센스
올리고뉴클레오티드의 점도 측정
상기 기재된 연구로부터 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드의 점도를 40 센티푸아즈(cP) 초과의 점도를 갖는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 스크리닝하는 목적으로 측정하였다. 40 cP 초과의 점도를 갖는 올리고뉴클레오티드는 최적 점도 미만일 것이다.
올리고뉴클레오티드(32 내지 35 ㎎)를 유리 바이알로 칭량하고, 120 ㎕의 물을 첨가하고, 안티센스 올리고뉴클레오티드를 50℃에서 바이알을 가열함으로써 용액에 용해시켰다. 예비-가열된 샘플의 일부(75 ㎕)를 마이크로점도계(Cambridge)에 피펫팅하였다. 마이크로점도계의 온도를 25℃로 설정하고, 샘플의 점도를 측정하였다. 예비-가열된 샘플의 또 다른 부분(20 ㎕)을 85℃에서 260 nM에서의 UV 판독(Cary UV 기기)을 위해 10 ㎖의 물에 피펫팅하였다. 결과는 하기 표에 제시되며, 여기서 각각의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 농도는 350 ㎎/㎖였고, 모든 안티센스 올리고뉴클레오티드 용액이 상기 언급된 기준하에서 이들의 점도가 최적임을 나타낸다.
[표 52]
인간 PCSK9을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 점도
실시예
9:
시노몰구스
원숭이에서의
인간
PCSK9을
표적으로 하는 ISIS
안티센스
올리고뉴클레오티드의 효과
시노몰구스 원숭이를 상기 실시예에 기재된 연구로부터 선택된 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리하였다. 안티센스 올리고뉴클레오티드 효능 및 용인성뿐만 아니라 간 및 신장에서의 이들의 약동학 프로파일을 평가하였다.
본 연구가 수행된 당시, 시노몰구스 원숭이 유전체 서열이 미국 국립생물공학 정보센터(National Center for Biotechnology Information; NCBI) 데이터베이스에서 이용 가능하지 않았고; 따라서, 시노몰구스 원숭이 유전자 서열과의 교차-반응성이 확인될 수 없었다. 대신, 시노몰구스 원숭이에서 사용된 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오티드의 서열을 상동성에 대해 레서스 원숭이 서열과 비교하였다. 레서스 원숭이 서열과 상동성을 갖는 ISIS 올리고뉴클레오티드는 또한 시노몰구스 원숭이 서열과 완전히 교차-반응성인 것으로 예상된다. 시험된 인간 안티센스 올리고뉴클레오티드는 레서스 유전체 서열과 교차-반응성이다(본원에서 SEQ ID NO:1544로 지정된 뉴클레오티드 83474000 내지 83501000이 트렁케이션된 GENBANK 등록 번호 NW_005092960.1의 상보체). 인간 올리고뉴클레오티드와 레서스 원숭이 서열 사이의 상보성이 클수록, 인간 올리고뉴클레오티드가 레서스 원숭이 서열과 교차-반응성일 가능성이 높다. SEQ ID NO:1544에 대한 각각의 올리고뉴클레오티드의 시작 및 정지 부위가 하기 표에 제시된다. "시작 부위"는 갭머가 레서스 원숭이 유전자 서열에서 표적으로 하는 가장 5'의 뉴클레오티드를 나타낸다.
[표 53]
레서스 PCSK9 유전체 서열(SEQ ID NO:1544)에 상보적인 안티센스 올리고뉴클레오티드
처리
연구 전에, 원숭이를 격리하여 유지시켰고, 그 동안 동물을 전반적 건강에 대해 매일 관찰하였다. 원숭이는 2세 내지 4세였고, 체중은 2 kg 내지 4 ㎏이었다. 5마리의 무작위로 할당된 수컷 시노몰구스 원숭이의 9개의 그룹 각각에 각각의 투여일에 원숭이의 등 위의 4개의 상이한 부위(즉, 좌측, 우측, 상부 및 하부) 사이에 시계 방향으로 회전하여 ISIS 올리고뉴클레오티드 또는 PBS를 용량 당 하나의 부위에 피하 주사하였다. 원숭이에 10 ㎎/㎏의 ISIS 올리고뉴클레오티드를 처음 2주 동안 1주일에 2회(1, 5, 9 및 14일) 투여하고, 그 후 10주 동안 1주일에 1회(21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77 및 84일) 투여하였다. 5마리의 시노몰구스 원숭이의 대조군 그룹에 유사한 방식으로 PBS를 주사하였고, 대조군으로 사용하였다.
연구 기간 동안, 원숭이를 질병 또는 고통의 징후에 대해 매일 2회 관찰하였다. 치료, 손상 또는 질병으로 인해 순간적 또는 경미한 동통 또는 고통 이상을 경험하는 임의의 동물은 연구 책임자와의 협의 후 승인된 진통제 또는 동통을 경감시키기 위한 제제를 수의사에 의해 처리하였다. 불량한 건강 또는 가능한 빈사 상태에 있는 임의의 동물을 추가 모니터링 및 가능한 안락사를 위해 확인하였다. 동물의 예정된 안락사를 86일째에 깊은 마취하에 실혈(exsanguination)에 의해 투여 약 48시간 후에 수행하였다. 실시예에 기재된 프로토콜은 동물 실험 윤리 위원회(IACUC)에 의해 승인되었다.
표적 감소
RNA 분석
86일째에, PCSK9의 mRNA 발현 측정의 실시간 PCR 분석을 위해 간으로부터 RNA를 추출하였다. 결과는 RIBOGREEN®로 표준화된 PBS 대조군에 비한 mRNA의 변화 퍼센트로 제시된다. 하기 표에 제시된 바와 같이, 레서스 유전자와 불일치가 없는 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오티드인 ISIS 863633, ISIS 863670 및 ISIS 863681을 이용한 처리는 PBS 대조군과 비교하여 PCSK9 mRNA의 유의한 감소를 발생시켰다.
[표 54]
PBS 대조군에 비한 시노몰구스 원숭이 간에서의 PCSK9 mRNA의 억제 퍼센트
단백질 분석
약 1 ㎖의 혈액을 -7일(처리 전), 16일, 30일, 58일 및 86일(각각 14일, 28일, 56일 및 84일에서 투여 약 48시간 후)에서 모든 이용 가능한 동물로부터 수거하고, EDTA의 칼륨 염을 함유하는 튜브에 넣었다. 튜브를 원심분리(4℃에서 10분 동안 3000 rpm)하여 혈장을 획득하였다. 결과는 -7일(처리 전 수준)의 수준에 비한 증가 또는 감소 백분율로 하기 표에 제시된다. 하기 표에 제시된 바와 같이, 레서스 유전자와 불일치가 없는 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오티드인 ISIS 863633, ISIS 863670 및 ISIS 863681을 이용한 처리는 PCSK9 단백질 수준의 유의한 감소를 발생시켰다.
간 조직을 또한 LDL 수용체(LDLr) 단백질 유도 수준의 수준에 대해 분석하였다. 결과는 하기 표에 제시된다. 데이터는 레서스 원숭이 유전체 서열과 상동성인 3개의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리가 처리 12주 후에 간 LDLr 단백질 유도를 발생시킨 것을 입증한다.
[표 55]
시노몰구스 원숭이에서의 혈장 단백질 수준(처리 전 수준의 %)
[표 56]
시노몰구스 원숭이에서의 간 LDLr 단백질 수준(PBS 대조군의 %)
혈장 지질 수준
총 콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 및 트리글리세라이드 수준에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 원숭이를 혈액 수집 전에 밤새 금식시켰다. 모든 연구 그룹으로부터 약 1.7 ㎖의 혈액 샘플을 수집하였다. 혈액을 혈청 분리를 위한 항응고제 없이 튜브에 수집하였다. 튜브를 최소 90분 동안 실온에서 유지한 후, 실온에서 10분 동안 3,000 rpm에서 원심분리하여, 혈청을 획득하였다. 수준을 Toshiba 200FR NEO 화학 분석기(Toshiba Co., Japan)를 이용하여 측정하였다. 데이터는 레서스 원숭이 유전체 서열과 상동성인 3개의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 처리가 혈장 총 콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤의 유의한 감소를 발생시킨 것을 입증한다. 예상된 바와 같이, 인간 PCSK9 수준의 감소는 혈장 HDL-콜레스테롤 또는 트리글리세라이드 수준에 영향을 미치지 않았다.
[표 57]
86일에서의 시노몰구스 원숭이에서의 혈장 지질 수준(㎎/㎗)
용인성
연구
임상 화학 파라미터
간 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 원숭이를 혈액 수집 전에 밤새 금식시켰다. 모든 연구 그룹으로부터 약 1.7 ㎖의 혈액 샘플을 수집하였다. 혈액을 혈청 분리를 위한 항응고제 없이 튜브에 수집하였다. 튜브를 최소 90분 동안 실온에서 유지한 후, 실온에서 10분 동안 3,000 rpm에서 원심분리하여, 혈청을 획득하였다. 전체 빌리루빈(TBIL), 아스파테이트 아미노트랜스페라제(AST), 알라닌 아미노트랜스페라제(ALT) 및 알부민(ALB)의 수준을 Toshiba 200FR NEO 화학 분석기(Toshiba Co., Japan)를 이용하여 측정하였다. 결과는 안티센스 올리고뉴클레오티드가 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위를 벗어나는 간 기능에 대한 효과를 갖지 않는 것을 나타낸다. 특히, ISIS 863633이 잘 용인된 것으로 관찰되었다.
[표 58]
86일에서의 시노몰구스 원숭이에서의 혈장 화학 마커
신장 기능
신장 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 원숭이를 혈액 수집 전에 밤새 금식시켰다. 모든 연구 그룹으로부터 약 1.7 ㎖의 혈액 샘플을 수집하였다. 혈액을 혈청 분리를 위한 항응고제 없이 튜브에 수집하였다. 튜브를 최소 90분 동안 실온에서 유지한 후, 실온에서 10분 동안 3,000 rpm에서 원심분리하여, 혈청을 획득하였다. BUN 및 크레아티닌의 수준을 Toshiba 200FR NEO 화학 분석기(Toshiba Co., Japan)를 이용하여 측정하였다. 결과는 ㎎/㎗로 표현된 하기 표에 제시된다.
혈장 화학 데이터는 대부분의 ISIS 올리고뉴클레오티드가 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위를 벗어나는 신장 기능에 대한 어떠한 효과도 갖지 않은 것을 나타낸다. 특히, ISIS 863633이 잘 용인된 것으로 관찰되었다.
[표 59]
86일에서의 시노몰구스 원숭이에서의 혈장 BUN 및 크레아티닌 수준 (㎎/㎗)
혈액학
혈액학 파라미터에 대한 시노몰구스 원숭이에서의 ISIS 올리고뉴클레오티드의 임의의 효과를 평가하기 위해, 약 0.5 ㎖의 혈액을 K2-EDTA를 함유하는 튜브에 이용 가능한 연구 동물 각각으로부터 수집하였다. 샘플을 ADVIA120 혈액학 분석기(Bayer, USA)를 이용하여 적혈구(RBC) 수, 백혈구(WBC) 수, 개별적 백혈구 수, 예를 들어, 단핵구, 호중구, 림프구의 수, 뿐만 아니라 혈소판 수, 헤모글로빈 함량 및 적혈구용적율에 대해 분석하였다. 데이터는 하기 표에 제시된다.
데이터는 올리고뉴클레오티드가 상기 용량에서 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상 범위를 벗어나는 혈액학 파라미터에서의 임의의 변화를 야기시키지 않은 것을 나타낸다. 특히, ISIS 863633이 잘 용인된 것으로 관찰되었다.
[표 60]
86일에서의 시노몰구스 원숭이에서의 혈액 세포 수
[표 61]
86일에서의 시노몰구스 원숭이에서의 혈액학 파라미터
전반적으로, 연구 결과는 ISIS 863633이 PCSK9를 억제하기 위해 시험된 화합물 중 가장 강력하고 잘 용인된 화합물이고, 심혈관 질환의 치료, 특히 LDL-콜레스테롤 수준을 낮추기 위한 중요한 후보임을 나타낸다.
실시예
10: 용량 반응 검정에서의 인간
PCSK9을
표적으로 하는
안티센스
올리고뉴클레오티드의 비교 억제
원숭이 연구에서 시험된 안티센스 올리고뉴클레오티드의 컨쥬게이션되지 않은 모 올리고뉴클레오티드를 이전에 설계된 화합물과 비교하였다. ISIS 848542, ISIS 848593, ISIS 848597, ISIS 848598, ISIS 848630, ISIS 848833, ISIS 849040, ISIS 849171 및 ISIS 849236을 시험관 내에서 가장 강력한 안티센스 화합물 중 일부인 것으로 이전에 결정된 ISIS 405879 및 ISIS 405995(예를 들어, 미국 특허 8,084,437호 참조), 뿐만 아니라 미국 특허 9,127,276호에 이전에 기재된 ISIS 431131 및 ISIS 480604와 함께 효능에 대해 시험하였다.
세포를 웰 당 10,000개 세포의 밀도로 플레이팅하고, 39.1 nM, 156.25 nM, 625 nM, 2,500 nM 및 10,000 nM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 세포에 의한 올리고뉴클레오티드의 자유 흡수를 위해 배지에 첨가하였다. 약 48시간의 처리 기간 후, RNA를 세포로부터 분리시키고, PCSK9 mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR로 측정하였다. ABI로부터의 인간 PCSK9 프라이머 프로브 세트(ID# Hs03037355_m1)를 mRNA 수준을 측정하는 데 사용하였다. PCSK9 mRNA 수준을 RIBOGREEN®로 측정된 전체 RNA 함량에 따라 조정하였다. 결과는 미처리 대조군 그룹에 비한 PCSK9의 억제 퍼센트로 제시된다.
각각의 올리고뉴클레오티드의 반수 최대 억제 농도(IC50)가 또한 제시된다. PCSK9 mRNA 수준은 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 세포에서 용량-의존적 방식으로 감소되었다. ISIS 848542, ISIS 848593, ISIS 848597, ISIS 848598, ISIS 848630, ISIS 848833, ISIS 849040, ISIS 849171 및 ISIS 849236이 모든 이전에 개시된 올리고뉴클레오티드에 비해 우수한 효능을 나타내었다.
[표 62]
SEQUENCE LISTING
<110> Ionis Pharmaceuticals, Inc.
<120> MODULATORS OF PCSK9 EXPRESSION
<130> 200615-WO-PCT
<150> 62/476,051
<151> 2017-03-24
<160> 1550
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 3731
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
gtccgatggg gctctggtgg cgtgatctgc gcgccccagg cgtcaagcac ccacacccta 60
gaaggtttcc gcagcgacgt cgaggcgctc atggttgcag gcgggcgccg ccgttcagtt 120
cagggtctga gcctggagga gtgagccagg cagtgagact ggctcgggcg ggccgggacg 180
cgtcgttgca gcagcggctc ccagctccca gccaggattc cgcgcgcccc ttcacgcgcc 240
ctgctcctga acttcagctc ctgcacagtc ctccccaccg caaggctcaa ggcgccgccg 300
gcgtggaccg cgcacggcct ctaggtctcc tcgccaggac agcaacctct cccctggccc 360
tcatgggcac cgtcagctcc aggcggtcct ggtggccgct gccactgctg ctgctgctgc 420
tgctgctcct gggtcccgcg ggcgcccgtg cgcaggagga cgaggacggc gactacgagg 480
agctggtgct agccttgcgt tccgaggagg acggcctggc cgaagcaccc gagcacggaa 540
ccacagccac cttccaccgc tgcgccaagg atccgtggag gttgcctggc acctacgtgg 600
tggtgctgaa ggaggagacc cacctctcgc agtcagagcg cactgcccgc cgcctgcagg 660
cccaggctgc ccgccgggga tacctcacca agatcctgca tgtcttccat ggccttcttc 720
ctggcttcct ggtgaagatg agtggcgacc tgctggagct ggccttgaag ttgccccatg 780
tcgactacat cgaggaggac tcctctgtct ttgcccagag catcccgtgg aacctggagc 840
ggattacccc tccacggtac cgggcggatg aataccagcc ccccgacgga ggcagcctgg 900
tggaggtgta tctcctagac accagcatac agagtgacca ccgggaaatc gagggcaggg 960
tcatggtcac cgacttcgag aatgtgcccg aggaggacgg gacccgcttc cacagacagg 1020
ccagcaagtg tgacagtcat ggcacccacc tggcaggggt ggtcagcggc cgggatgccg 1080
gcgtggccaa gggtgccagc atgcgcagcc tgcgcgtgct caactgccaa gggaagggca 1140
cggttagcgg caccctcata ggcctggagt ttattcggaa aagccagctg gtccagcctg 1200
tggggccact ggtggtgctg ctgcccctgg cgggtgggta cagccgcgtc ctcaacgccg 1260
cctgccagcg cctggcgagg gctggggtcg tgctggtcac cgctgccggc aacttccggg 1320
acgatgcctg cctctactcc ccagcctcag ctcccgaggt catcacagtt ggggccacca 1380
atgcccaaga ccagccggtg accctgggga ctttggggac caactttggc cgctgtgtgg 1440
acctctttgc cccaggggag gacatcattg gtgcctccag cgactgcagc acctgctttg 1500
tgtcacagag tgggacatca caggctgctg cccacgtggc tggcattgca gccatgatgc 1560
tgtctgccga gccggagctc accctggccg agttgaggca gagactgatc cacttctctg 1620
ccaaagatgt catcaatgag gcctggttcc ctgaggacca gcgggtactg acccccaacc 1680
tggtggccgc cctgcccccc agcacccatg gggcaggttg gcagctgttt tgcaggactg 1740
tatggtcagc acactcgggg cctacacgga tggccacagc cgtcgcccgc tgcgccccag 1800
atgaggagct gctgagctgc tccagtttct ccaggagtgg gaagcggcgg ggcgagcgca 1860
tggaggccca agggggcaag ctggtctgcc gggcccacaa cgcttttggg ggtgagggtg 1920
tctacgccat tgccaggtgc tgcctgctac cccaggccaa ctgcagcgtc cacacagctc 1980
caccagctga ggccagcatg gggacccgtg tccactgcca ccaacagggc cacgtcctca 2040
caggctgcag ctcccactgg gaggtggagg accttggcac ccacaagccg cctgtgctga 2100
ggccacgagg tcagcccaac cagtgcgtgg gccacaggga ggccagcatc cacgcttcct 2160
gctgccatgc cccaggtctg gaatgcaaag tcaaggagca tggaatcccg gcccctcagg 2220
agcaggtgac cgtggcctgc gaggagggct ggaccctgac tggctgcagt gccctccctg 2280
ggacctccca cgtcctgggg gcctacgccg tagacaacac gtgtgtagtc aggagccggg 2340
acgtcagcac tacaggcagc accagcgaag gggccgtgac agccgttgcc atctgctgcc 2400
ggagccggca cctggcgcag gcctcccagg agctccagtg acagccccat cccaggatgg 2460
gtgtctgggg agggtcaagg gctggggctg agctttaaaa tggttccgac ttgtccctct 2520
ctcagccctc catggcctgg cacgagggga tggggatgct tccgcctttc cggggctgct 2580
ggcctggccc ttgagtgggg cagcctcctt gcctggaact cactcactct gggtgcctcc 2640
tccccaggtg gaggtgccag gaagctccct ccctcactgt ggggcatttc accattcaaa 2700
caggtcgagc tgtgctcggg tgctgccagc tgctcccaat gtgccgatgt ccgtgggcag 2760
aatgactttt attgagctct tgttccgtgc caggcattca atcctcaggt ctccaccaag 2820
gaggcaggat tcttcccatg gataggggag ggggcggtag gggctgcagg gacaaacatc 2880
gttggggggt gagtgtgaaa ggtgctgatg gccctcatct ccagctaact gtggagaagc 2940
ccctgggggc tccctgatta atggaggctt agctttctgg atggcatcta gccagaggct 3000
ggagacaggt gcgcccctgg tggtcacagg ctgtgccttg gtttcctgag ccacctttac 3060
tctgctctat gccaggctgt gctagcaaca cccaaaggtg gcctgcgggg agccatcacc 3120
taggactgac tcggcagtgt gcagtggtgc atgcactgtc tcagccaacc cgctccacta 3180
cccggcaggg tacacattcg cacccctact tcacagagga agaaacctgg aaccagaggg 3240
ggcgtgcctg ccaagctcac acagcaggaa ctgagccaga aacgcagatt gggctggctc 3300
tgaagccaag cctcttctta cttcacccgg ctgggctcct catttttacg ggtaacagtg 3360
aggctgggaa ggggaacaca gaccaggaag ctcggtgagt gatggcagaa cgatgcctgc 3420
aggcatggaa ctttttccgt tatcacccag gcctgattca ctggcctggc ggagatgctt 3480
ctaaggcatg gtcgggggag agggccaaca actgtccctc cttgagcacc agccccaccc 3540
aagcaagcag acatttatct tttgggtctg tcctctctgt tgccttttta cagccaactt 3600
ttctagacct gttttgcttt tgtaacttga agatatttat tctgggtttt gtagcatttt 3660
tattaatatg gtgacttttt aaaataaaaa caaacaaacg ttgtcctaac aaaaaaaaaa 3720
aaaaaaaaaa a 3731
<210> 2
<211> 32000
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
gtgaccatga gcggtagttg ccagtggtat tcacaaatat accctttctc ctccttctgg 60
gcacttggtg tgattgcagt ttcctacatt tgaccttagg tgtggtcatg tgtctcgctt 120
aggagaagga aatgtgaacg gaagtgttgt gggtcacttt tgtgtggaag ctgcatggag 180
tcacctcttt gctttccgtc agcctcagtg ttcagcaatg ttctgaatga tggttgcttt 240
atcagtctgg ttctggggtg agggtaatga agtagtgaag caaagtcctt gatggacatg 300
tgaggtgaga cagaaataaa cctttgacat ttcaagcccc tgagatttgg ggcgtgcatg 360
tgctggaagc agaacctagc ctattctgat ggattcctcc agcactgctc gtgggaagac 420
atcatcaata tagagcattc atgtgccctt tatctcgaaa ttccacttcc aggaatttat 480
gaaacagata ctctcacatg tgcaaacagc tatggataag gacagacatg gcaacttgga 540
ttgcaatagc aaaagacaga aacaaccaac ggaaacacca accaatagga aattggctaa 600
agacattgtg aaacatacat agaatgaaat aatctgcaac cagaaaaata aggcagtaga 660
tgtatgtgta ccagtgtggt ttttattccg agattagggc taggttaaga cgtcagatta 720
agttgtccct ctccacccca ccaatataaa taaaaagtta aaagtaaatc ataaactatt 780
tttacaattt taaaaagtgg gttaaagagc ccatccaagt agttttataa aagtagacta 840
tctccgaaaa gatacccaat aaataggtat attactttcc tggggctgtt ataacaagtt 900
tctacaaatt tgctggcttc aaataacaaa aacgtattct cttgcagtta tggaagccag 960
aagtatggaa tgaagggttg cagggtggtg ccctctccca aagctctagg ggaggaacat 1020
tccttgcttc ttccagctcc tttgggggct cctggcattc cttggcttat gtcggcacag 1080
ctctaatcgg cgcctccatt gttacatagg tgtttctgtg tctcaagtat ctctcccctt 1140
tctcttctga tatcagtcat tggatttagg gaccatccta aacccaggat aatctcctca 1200
tgagatcctt aggtcaatta catctgcaaa gatctcattt ccaaataagg tcacattcaa 1260
aagtaccagg ggttagtctt agacttatct ttttggggga cacgattcaa cccactaccg 1320
tgggtaacag tggttttccc tcagaaggtg gtggttcagg agtgggagga agatgaactt 1380
ttcactgtat atcctttcaa actattcacg ttttaaaaaa aacattttca tgtaaattta 1440
aaaaaattga acattcacac aaaaagatgc cccctccctt gcaaaaaaga gtatgcccgt 1500
tcaaaatgtt gaaatgtaca ctcacagcaa tggtggctgc agactccaag tttctgaggt 1560
tggagaaggt agccagggag cataaaagtg agttctatct actcattcag tctatgaggg 1620
gaaggcaatg gctagaaaag cattttgagg gacagtaaaa gtggcatttt tagagggagg 1680
aagccttgag gatgcttgtg gggtgaaggg aaagaataac tcaggaagag gcatttaggg 1740
ataagaggag gagaggagat agtggaggta ggtgatccct gcggaggcca gattggggca 1800
ggggagtgtc agctgagtat aagaggatgg tcccctctgc cctgaaggag gaaggcagga 1860
ggggaaaagg atgggtgttg acccagaaag cacttgtggt ggaggggagg ccccagaaga 1920
ggcttctgac ttaccctgat tgctggtacc tctcagggga gctggctgct tatttgctgg 1980
ccagggtgtg ggggaaccca tttgagaaga gggagaaggt gacacaattc ctttgggcaa 2040
cttatgggag gggtaattgg tgagggatga aagccctgcc aagtggcagg aggcccagct 2100
ggggctgccc ctcataagag tgcagtggag gatatgggat gagaagtgac tgcccctctg 2160
gttccatctg tcgcagagcc cagggtgctt ccttcctccc ccacctccct cagaacacac 2220
ccactgcatg ctggacagca gcccccttcc tgggcctggg gacatccatg tccctctgtg 2280
cacaggcttc atcattctct gggtgcacgg taacgacccc ggtaggtgag aggccaaggt 2340
cccaaagggg agcagcaggg aaagttagct cccatctatt cttgctccag gggaggcctt 2400
tgatgaggaa gctgccaaaa gcacattgca aatacaattc caattacagg caacaggaag 2460
gagaaccacc tctgccacct ctgtcagcaa accatgagct cctactctgt gctgcgatgg 2520
cgggctcgat ggggataact ctgaccttac ctcatggagt cactgtcaac ccactggttg 2580
cactgtcttt gtgcactggc tctctggagt gaggtctttg caaacaaagt ggaaagagca 2640
tcaactttgg actccagcac ctagattcag agcaggccat ttcactcgga atctgctgtg 2700
catctgcaag ggaggatcat aaattcgcct ttgtttcttc ccagtatcga cagcccttcc 2760
agaaagagca agcctcatgt catgccacat gtacaatctg aggccaggag ctctctttcc 2820
ccttttcatc ctcctgcctg gtacacaata ggtgtttact ggatgcttgt ccagttgatt 2880
tcttgaacat ggtgtgtaaa aggaatcttt gcaaattgaa tcttctggaa agctgagctt 2940
gtgcctacca tagaattctg aatgtaccta tatgacgtct ttgcaaactt aaaacctgaa 3000
tctttgtagt ataaatccct tgaaatgcat gtaggctgga catcaaaagc aagcaatctc 3060
ttcaaggagc agctagttgg taaggtcagt gtgcagggtg cataaagggc agaggccgga 3120
gggggtccag gctaagttta gaaggctgcc aggttaaggc cagtggaaag aattcggtgg 3180
gcagcgagga gtccacagta ggattgattc agaagtctca ctggtcagca ggagacaagg 3240
tggacccagg aaacactgaa aaggtgggcc cggcagaact tggagtctgg catcccacgc 3300
agggtgagag gcgggagagg aggagcccct agggcgccgg cctgccttcc agcccagtta 3360
ggatttggga gttttttctt ccctctgcgc gtaatctgac gctgtttggg gagggcgagg 3420
ccgaaacctg atcctccagt ccgggggttc cgttaatgtt taatcagata ggatcgtccg 3480
atggggctct ggtggcgtga tctgcgcgcc ccaggcgtca agcacccaca ccctagaagg 3540
tttccgcagc gacgtcgagg cgctcatggt tgcaggcggg cgccgccgtt cagttcaggg 3600
tctgagcctg gaggagtgag ccaggcagtg agactggctc gggcgggccg ggacgcgtcg 3660
ttgcagcagc ggctcccagc tcccagccag gattccgcgc gccccttcac gcgccctgct 3720
cctgaacttc agctcctgca cagtcctccc caccgcaagg ctcaaggcgc cgccggcgtg 3780
gaccgcgcac ggcctctagg tctcctcgcc aggacagcaa cctctcccct ggccctcatg 3840
ggcaccgtca gctccaggcg gtcctggtgg ccgctgccac tgctgctgct gctgctgctg 3900
ctcctgggtc ccgcgggcgc ccgtgcgcag gaggacgagg acggcgacta cgaggagctg 3960
gtgctagcct tgcgttccga ggaggacggc ctggccgaag cacccgagca cggaaccaca 4020
gccaccttcc accgctgcgc caaggtgcgg gtgtagggat gggaggccgg ggcgaacccg 4080
cagccgggac ggtgcggtgc tgtttcctct cgggcctcag tttcccccca tgtaagagag 4140
gaagtggagt gcaggtcgcc gagggctctt cgcttggcac gatcttgggg actgcaggca 4200
aggcggcggg ggaggacggg tagtggggag cacggtggag agcggggacg gccggctctt 4260
tggggacttg ctggggcgtg cggctgcgct attcagtggg aaggttcgcg gggttgggag 4320
acccggaggc cgaggaaggg cgagcagagc actgccagga tatcctgccc agatttccca 4380
gtttctgcct cgccgcggca caggtgggtg aaggagtgaa tgcctggaac gtactgggaa 4440
ctgcaccagg cacagagaaa gcgggcttgc cattatagtg ggttccgatt tggtttggaa 4500
aacatgggca gcggagggtg gagggcctgg agagaaggcc ctacccgaga caggggcggg 4560
gtgggaagga cggcagatgc tgggagcacg aggcaatttc tttatgacac agaactcatg 4620
ctctagtatt ccatctgttt cagccgaaga aaagaaccag ctgaaggggc aggggagaag 4680
gggcggaggt attctcgagg cccattggcg tcctttagga ctcaggcagg gaagggccct 4740
tggtgctctg gagccggagg tggtgcgcct ggtactggga ccccggagct gagcccggcg 4800
cctcagccca cctggctgtc tgccgaccgt gtgcggggcg agtttgctca acaactctgc 4860
cagcttctgg ccctcaggct gtgggaagct tcttcccggg gcgagaccac tagctttttc 4920
taagtattac cagcccagga cttggctgag gttctgtgtc ccccagcttg gagtcagatg 4980
tggggttgaa tcttggcttc ctctcactag ctgtggtgct tgacaagtca cttatccttg 5040
agcctccatt gcctaatctt taaaagggag gtgacaatcg tccctacggc tcagtggcag 5100
cagatgggga gatgaaggga aagttctgtt gaccatgagt gaacttacaa tgcaagcccc 5160
ggggggatca cttgcagttt tgtccctgtc tgcagtgtga cctgttggtg acattgtctt 5220
tgctccaaac cacagctcct ggggcagagg ggaaaattct gccactcaca gctgcctgcc 5280
cacgcttctg tctgagtgtg ctgggtggca ggatggcaag tccttactca gctcagtata 5340
gccctcttcc ttgttccctg agcctttgac tttctcgagg gatgttgtgg ggttgtggcc 5400
aggataagaa agggcatttc aagttaccac tgctccaaaa caactgttct ggaaatagtg 5460
agtaccccat cctgagaggt gagtaagcag aggctgtatg accacctgaa ccaagccctt 5520
gaggatgttt cttctctggt ggaagtttgg aacaggagcc tcctcaagtt catttattca 5580
ttcattcaat ggttattttg tgggaatcga atttagaatg aaaatatttt ttggcaagca 5640
gaaaataatt tttagaccaa tccttttctt ttagtcatga gaaactgagg cccagagaga 5700
ggaggtcacc ccaggtgcat tagaactggg tttccagaac tgacactcca ctgcacagag 5760
tactctccca attcattcaa tttttattta gcggaaggca ttttcagatg ggtctttgaa 5820
gcattagtag gagttcagcg atgatggtgt catgagaatt ttattctagg attaggaggt 5880
accatgaaca aagatacaga gctgggaaaa ccagaggtgg aagataagga gcacatgtcc 5940
acagttcttt ttcttttttt tttgagatgg agtttcgctc ttgttgccca ggctggagtg 6000
caatggtgca gtctcagctc actgcaacat ctgtctcccg ggttcaagtg gttctcctgc 6060
ctcagcctcc caagaagctg ggattacagg tacctgccac cacgcccggc taatttttgt 6120
atttttagta gagaaggggt ttcaccacgt tggccaggct agtcgcaaac tcctgacctc 6180
ctcagtggat ccgaggaggt gatcctcccg cctcagcctc ccaaagtgct cgaattacag 6240
gtgtgagcca ccacgcctgg cctccacagt tctttatcca ccgtctgaaa tgtaaaatgt 6300
tacgaaaacc aaaagttttt tttgtgattt atttgatggt agcacctgac gtgaactgac 6360
atgagattat ttttaattta gttgtgtgaa tatgcatatt catatatttt gctgcataga 6420
ttacagtatg cagctccaga ttcttccaag cagactctga ttgcccatta ctgcctttct 6480
aaaatccaaa caagttctga ggttcaaaac cgttttggcc ctaaggcttt gggtaaaggg 6540
ggtggactct gttctactct gactggagtc caagatgcat atatacagag atatgggtga 6600
tggggctgca aggtaggttg aggtaggggc caaggaggag catggagttt ggacttgatt 6660
catgaggctg tggggagcca gtgaaggttc ttaagcaggt atgtctgcct gagagcagtt 6720
ggagcagaca agagctaaaa accaaacaaa tcaccataga tagtggctgc tataatttgt 6780
ttgtcccctc caaatctcat gtggaaattt ggtcctcagt gttggaagtg gggcctaatg 6840
ggaggtgttt gggtcatggg ggaggaaccc ctgtgaaagg cttggtgccg tccttgtgat 6900
aatgagtaag ttctcccgct atgatttccc ttgaaggctg attattaaaa agagcttggc 6960
acctccctct cttctctctt gcttcttctc ttgccatgtg attgatctct gcacatgtag 7020
gctccccttc accttctgcc atcagtgaaa gcagcttaag gccctcacca gaagcagatg 7080
ctggtgccat gcttcctgga gagcttgcag aatcatgagc tgaataaatc ccttttcctt 7140
gtaaattact caccttcagg tattccttta tatagcaaca caaaaggact aagacagtgg 7200
ccttgacttt tctctctctt taagaagtgt tgcctttgct cacttagtca tcccttctgc 7260
ctgcatttgt agagcatctg gatgggagat ttatataacc gtcactcttg actttcccag 7320
caggcctatg tcataggtac tgtggtctct acaatacagc agaggtatct gaggctccga 7380
gaggttgagt gacttgctca tggctgcaca accagtaaat attggagctg gaattcaggt 7440
ccacggtttc ctggctccaa agcccatgat tttttccctc aatttattct gactggggca 7500
tgggggaggg ggtggccttt gggcagggcc accaggagcg accaggcccg tagagagctg 7560
ggtgcaggta cagaggaaaa cctgttgtcg agtgtggccc gtagttccca tttttgcctg 7620
aatggcacat ttgaaagtgt tatataacca tgtgaataat aatagttggc ctatatgagt 7680
tctttaattt gctttttggt ccgcatttgg taacttcttt atcatctact atactctgtt 7740
gtgtctcttt tgttgtaatt tgtaagtagg ggtgagataa agtacaccta gggtttgctg 7800
ggtttcttcc atgtcatcat gttcctcctt gcatggggcc aggatccgtg gaggttgcct 7860
ggcacctacg tggtggtgct gaaggaggag acccacctct cgcagtcaga gcgcactgcc 7920
cgccgcctgc aggcccaggc tgcccgccgg ggatacctca ccaagatcct gcatgtcttc 7980
catggccttc ttcctggctt cctggtgaag atgagtggcg acctgctgga gctggtgagc 8040
cacccttttt gggaatggca cttcctgata gggctgggcc actgcatata cactggggac 8100
tgtgcttagt aggcccattg ctgaaaatca gaaggggaca gcaagtatgt attgagcact 8160
tatcgggtac caagcacagt aactactggc tttctgtata gaattccctt taagcctggc 8220
catgccccag tggtacgtct atcttcattt gaaagacgag gagactgaag ttcagagggg 8280
accacacaga cagctagggg tagagcctgg atcaaaccca ttggtctgcc tgccagccat 8340
tcttgtgcca atgcatctgc tgcctacgga aacctgtagg gacaaggccc tgggatgttc 8400
agtggagcct gagtcatttt ataaaaaagc atgactctag ggtccaaaat tcctttgaag 8460
ctgttgctat ccagagtgaa gtcccttctt taggacaggg tggccctcct ccctcctgga 8520
tgtcacatct tcggtggagg ggcagaaagg ggactgggta ttctcctcac cctggcccta 8580
gtgcttcaaa tcttaaaaaa acgtttttat ttgtgcttct gcaccacctt ctagcccacc 8640
tcgtttcctg gcctctaact tgatgagagc gtgtgtcatt ttcacactga ttctccacat 8700
ggcaggcggt gcttcttagc ctcctgcaga cagtgaggcc ccacggtctt gtccaaggtc 8760
acacagcgtg taatgggcag ggtcagagtc tggagtctgg acctgggtct cctagctgca 8820
ctgcactgct gccccatggg ttaatcagct cagcataccg tggctgaaca gctacctcat 8880
accaaggcct gtggcgccat gacagggatt gacagggtcc ctgccttgga aacccgtagt 8940
ctaagtagag gagactgaca agtcaatgcc ttccatcagt ctgctcaaca cacgtttacc 9000
aagtgcctac tgtgtgctgc agaggcgaag atgacacagc tcaggccttt cccttgagct 9060
tacagttcag gaggagagac tgaccagtga ctgccagtac agttgactat gggacaatgt 9120
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tgcaggcatt tgccatcgag agctggactt caaactgggc atcataccag cctgggttcg 9300
agtcctgccc agccccttat tggctgtcta accctgagca aatcccttca cctctctgag 9360
cctcattcct ctatctgtaa accagttata ataattggaa cattcattta aggactaaat 9420
gaggtcgtga agcattcagc agatgctagg tacggaaact cgctgaagtg ggggcaggtt 9480
aagaagcctc tggggatacg aaggcatcca gggactagtt gtggcaggag gctgttacca 9540
cttaggtctg aagggtaagg agagggaata gctttccctc tgcccagttg gagccggtgg 9600
catggaggag aggctgcctg tggggaatca cccgagggtt caccgctgcc atgcgcaggg 9660
agtcaggagg tagggaggga gtggggcaga tgcacaccat tttttttttt ttttgagact 9720
ctgttgccca gactggagtg cagtggtgcc atatctgcac ctctgcctcc cgggttcaag 9780
ctcactgcaa cctctgcctc ccgggttcaa gcgattctcc tgcctcagcc tcccgagtag 9840
ctgggactac aggtgtgtgc caccatgcct ggctaatttt tgtattttta atagagatgg 9900
ggtttcacca tgttggccag gctggtctcg aactctcgac ctcaggtgat cccccacctc 9960
ggcctcccaa agtgctggga ttacaggcgt gagtcaccgc tcccagctgc tgatgcactc 10020
ttgtccttct aactcctgct agtgcctccc attggctgag cccaactgga agctttgcaa 10080
gggagctggt gctgcagttt gcactgagca ggctggagaa ggctggagaa tagactaggg 10140
gacaaaccga attgccagtg ctgttatgtc atgatttagg catggagtcc agggcctgag 10200
cttcactcca tgtccatcct gcccagagcc ttggcacagc ctggctccca gacaagatgt 10260
caagttcaga atccttccta aaaggaatcc tctatgccag accgtgttgc agggatatgg 10320
gagtgctggg ctcccagcct gatcaaggag cgagaaaact caggctccta gtctgtcctc 10380
cggggcacta gcagggacaa ggtgggaggc tgctgggctg ggatgtgggg acaggtttga 10440
tcaggtaagg ccaggctgtg gctgtgtttg ctgctgtcca aatggcttaa gcagagtccc 10500
ccggcctctc tggcttctgc aggccttgaa gttgccccat gtcgactaca tcgaggagga 10560
ctcctctgtc tttgcccaga gcatcccgtg gaacctggag cggattaccc ctccacggta 10620
ccgggcggat gaataccagc cccccggtaa gacccccatc tgtgccctgc cccaccccat 10680
ctgagctgaa tccatttgct ctgccctggc ctggcctccc tgctggtggt ttccacttct 10740
cggggggctt tgggactcag cacctccact gacccctttt tttctgtccc atccccatcc 10800
cctgcagccc ccactgcctg ccttcctgtt gccccacaaa tgcaaaagtc ttgccttaaa 10860
tgatcctctt ttccttcttt tctcttgttt tccttttctc accatttgga atggcccagc 10920
aggctgcact taccttggaa ggagggttca tctgatggtg actctaccta gggcccccag 10980
gcctctataa ctcccagtgc cctgcagact ggaccagatc ctttaatggg atagacacaa 11040
ccctgtctgg gatgcctctg cctaccttcc tgttttgctg ctccacctgc ctccagctcc 11100
gtttggcttc ctggggctcc ctgcctgggc cactttgtgt cttccctcta ggcctttctt 11160
tccactgttc cctctgcctg gtgtggcctg gctatggaag ggagggagga ggagcggcca 11220
tggaaaacgg tctgcattct agcagggact tgcaggtggc aattcagtcg gggaagactc 11280
tagatgcacc tggcctgagg agagaatgaa gggttctagt tggactgtgt taagtttgag 11340
gtgcccatgg tgtgaggtct ggagctcagc gcagagatga tgcaatgtgg tgggtccatg 11400
caacatggtg ccaggacgca gagcttgggg tgaactcagc tttcacccct taccggttct 11460
cgtgggatct tgggaagcca ctttcttcta tgagctttgt cgttcttgtc tgtaaaatgg 11520
gcacataacc ctgtccctgt ccttctcaca ggttgctgtg agactccaat gagttgaagg 11580
atgtgcagat gcttttggaa gtgaaaagtt ggggggctac tgtgtgactt tgcatacacc 11640
caaactgtgt gaccttgcat atgtctgagt tgctgccatt gcaacagatc agagctggtg 11700
ggctgggtgt ggagaaaggg tttgtgtggg ggacatcctc tggcaagggt ggcagcagca 11760
gaagtgaggg gcctggtcgg tcatgtgtgc tgacccggcc tgggcagcct gtggccaggg 11820
agaggacagc tcctctgtag gaagagcctg ttcctttcca accaggtgag acctcttcag 11880
tggagccctg gagccccctg tactccacat cagtgcctca gggacctccc ggagcaggct 11940
aatatcagag accaagaggg acactggcag aggatcacag agaccccagt ccaggcaggg 12000
actgagaaga tcttgccccc taagttagtt tcctagcact gctgtgacaa attaccaccc 12060
cctcggttgg aacaagttga ttctctgcag tcctggaggc cagaagcctg aatcagtgtc 12120
ggcaggacca ctttctcccg gggggctcca gggagaagct tctcttgcct cttccgtgtc 12180
ccaacagcgg cagcacacca atcccagcct ctgtcttcac acagccttct ctgtgtctct 12240
ctcctcttca ttgtctcata aggacacttg tcattggatt tagggcccac tggatcctcc 12300
aggatgatct catgtgggga accttaacca catctgcaag gacccttttt ccaaataagg 12360
tcacagccac aggttgtggg ggttaggatg tgagtgtatc tctttggcag ccactgttcc 12420
ctcctctccc ttgggccaga agcagacgtg gggccctttc ttccccatag gatgcccatg 12480
gattgccccc cttcccgctt cccccgagtg tctgtgggag gtggcaggaa tggcaggcag 12540
gggtgtggaa ccccttctgg agtcatatca agggcttggc tggaggaagt cctcctggag 12600
ctgttgggct ggcatggggc aggctggctg ggcccagcag cagcttcttc attcatgggg 12660
aggccacaag catgggccct agagctggct gccgccctca aacccagacc ctgcactctt 12720
aactgtgtga ccttgcatac gtcactcacc ctctctgatc ttcaggttcc tctgcaaaag 12780
ggaggtaatg ataaccctca ctctgggggg ctgtttggag ggttaaatca gttattgctg 12840
tagcatgcat ttctctgtca ggtattgagt gaggtgctgt gattttagcc ctgcattttt 12900
cttttcttac cattcaataa taacgttttg agcacccact gtgcgccagg caccatatta 12960
ggtgctgggg atacaaatgt gaatgaaatg aatgtggtct cttcccccaa cagtgtatcc 13020
agaagattaa tccattcctt aaacaaatgc tacttgacac agattagttc tggataggct 13080
gagagctctg aaggagtgca ggcagctgcg agcctgtgta tccagcagaa ggatcaggaa 13140
aggattcctg gaggaagcgc tgttctagcc aagacctacg ggggcattat taaccaggca 13200
aaggggacgg tgtccaagca gtggaatgaa cgtggattga agctgtgagg caggagggag 13260
tgtggcctgt gcagaaggga ccgaggctgg tgagaccagg agggcctggg tggcctccag 13320
gtcagatgtg aaaggaagaa cttggccaca gtctgagctt ctcaggcgta tggcagggct 13380
gcctggtgag agggaatgag ctccctgctc tggaggtatg caagcaggac tgggctctca 13440
cctgccagag gccacagagc tttccagagg ctggaagagg ccactccaag gcctctttgc 13500
ccctgagagt ggtggctctt cttgaggcca ccttgccacg ctgtcacagg gaactagcag 13560
cccctgcctc acccgggggt ttggaagata gagggaggcc taggaagggc cctgtgtctc 13620
atccgagctg ggcccctttc cagcctctca ctggaaggaa gcccaaggat gttcctgtgg 13680
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ccagcaggac agtgggctgg tgtgagcggg caggaaccgc ctgcacttag aaggtgtggg 13800
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tcccaagcac gggtgggacc agaaaggact ctcacctggg ctaactcagc tgcagcctca 13980
gttccctcct cacacacgac gaggaacatg gactggaagc ctgcccagca ggccttctgc 14040
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ctctgaggga aaaccttggg ctgcttcctg agcacctgta tcccctgcag ccagcccggg 14220
gcctctgcta ggagcagact gagcatggct tatgggcctg gcaccatctg gcctctgccc 14280
accttgctgg ccttgtcttg tgtctgcccc ttcgacattc catagcccag ctcaatatct 14340
agtggttcct ctagggtggc gagcactgtt tggtctccag atgtcttcag gtcggagctc 14400
acagcgctct cagccacccc ttcccagtgt agcaccgggc acatggtaga tgcctattga 14460
tgagtgaaag ctcctaacac actcagagag caaggactcc gcctcatccc acagcctggg 14520
aggagaggca gactgccaag gacctgctca gcatgctaca gaagaaacca aagtgcccac 14580
gggactgatc agtggagctt cctgccgaga ctggaggcct tagggcaggg tagacagtgt 14640
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agagcctgtg agccagacct tatttggaga aaaggtcttt gtagatgtaa ttaagcatct 14880
caagatggca tcatctggat tatgcggtgg gctgtaagtc ctgtgatgtg tctttatgag 14940
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ctctctccct tctccatcca gcaggctgga cctgcctggc atctgtgagc tctccctact 15540
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ttttggaggt taaacgagtg aatatattta aggcgctttc accagtgcct gggatgtgct 16200
ctgtagtttc tgtgtgttaa ctataaggtt gactttatgc tcattccctc ctctcccaca 16260
aatgtcgcct tggaaagacg gaggcagcct ggtggaggtg tatctcctag acaccagcat 16320
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gaagggcgtt catccatcca gccacctgct gatttgttat agggtggagg gggggtcttt 16620
ctcatgtggt ccttgtgttc gtcgagcagg ccagcaagtg tgacagtcat ggcacccacc 16680
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ggccccagac gctggtctct ctccatctgg acctggcctg ggaggtggct tgggctgggc 16860
ccagggagag ctaatgtctc ctaaccaaga atgctgtggc agcctctgcc gcagagccag 16920
agaaccagag tgccaaggct ggcagggttc ccagtggcca cgagtgcaga tgaagaaacc 16980
caggccccaa gagggtcatg caggtagccc agggagttca gccttgaccc tgggtcaatg 17040
acctttccac agttccacac tgctcccctt ttaaaatccg gtgatgtctt tatgtctttt 17100
gttatgttat cttcaatgtg gagggactcg aggtgatcta agcaaacttt ttctatcttc 17160
tgcttgcata cctctgagac caggggactc actcacttgc atgactgggc cctgcaggtc 17220
acactggcca ggcagatgtg gtggaggaac tggcagagga ctttttctag actgtgacta 17280
catttagtcc acccagcggc ccccctatga agtccagttg agaactagga ctctgggggc 17340
cggtggacag agaagaggga gggttctctc ccttactgac ttccttctgt ggccagacat 17400
tgagcaaggc ctctgtacag catgtcctgg ggctggcctt gccgtagctg ctaaatagtt 17460
gacgaaacca gtccagagag gggaggtgac tgccagggtc gcacagctca agctggggaa 17520
ctcgctggga aaactgtcag ctctgggcag cagcttgact tccactgtaa gccccagccc 17580
ccagggtcaa acactggctc tggtgctggc agaggcagcc cactagcctg tttcaaaggc 17640
tgagaaggcc caggagtctg ccctgtgctc caccagttct gccctgagac tttcctacag 17700
agtacaggtt ttgatgttca gttttaaagg caagaatcaa taaccttctg ccccatcagg 17760
tgaccccttg tgcctgtccc acccctttat tgactgacct cggctcagtc aggtcagttc 17820
ctgaaggtca gtgtgtggag gggaggctgt tctttcccag aaaggccttc cccaggcctg 17880
gtgctctggc ctctggagga cttcctggag aagtcccttc tttggggtcc cagtcagtgt 17940
atgggaagcc cttattgcat gacctggcac ggggcagggg ctcaacagtc actattgcct 18000
tccttgccac tgccatttcc tcctctgtaa gcaggtgatt gtgtgtccag tctgagcaca 18060
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cgagaccagc ctgttcaaca tggtgaaacc ccgtctctac taaaaataca aaaattagcc 18240
aggcatggtg gtgggtgtct gtatcccagc tacttgggag gctaaggcag gagaatcgct 18300
tgaacccagg aggtggaggt tgcagtgagc tgagatcgtg ccactgcaat ccagcctgag 18360
tgatagagcg agattccatc tcaaaaataa ataagtaaat aactagcagc tgtaaatgtg 18420
gctgttgttc ttcacctcca cactcagtgc cactccactc cctccctccg tggtgtgagg 18480
ggcctcacta gctgtctcct aggaggagca tggctgtgag attccagctc catccttggc 18540
cacggctcct ggagacatct tagaggccag gatccagaag gctcccacac ctcatttgac 18600
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taaaactaca aaaaattagc cgggcgtggt ggcaggcgcc tgtagtccca gctactcagg 18900
aggctgaggc aggagaatgg cgtgaacccg ggaggcggag cttgcagtga gccgagattg 18960
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agtggagtgc cactgaggcc agaaggaacc acaccctcaa gggtggggag ttatggtatg 19140
gggggtccta ggcatggagt cttttaattc tttagacaat cctgggagca actgtccctg 19200
tttcacagag ggcggggcca cacagctggt gagtgggcag ccaagactct gttcaagttt 19260
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aaatccgcag ggcaggccag gcaggctggc aattcctgca gaatttgatg ttgcaatact 19680
gagtcctaag gcagtcctgg ggcagaattc cttcttccct gggaggcctc agtctgttct 19740
cttaaggcct tcaactgatt aaatgaggcc tgcccaagtt atagagagta acctgcctta 19800
ctccgtcttc tgatttaaat gttagtcaca tctaaaaaat attttcgcag cagcatttcc 19860
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tgcctgtaag ggaggggctg ggaaagggga gcaggtctcc ccaaggggtg accttggctt 19980
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tggtggtgct gctgcccctg gcgggtgggt acagccgcgt cctcaacgcc gcctgccagc 20100
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atagtttcct atctccccca ctaggatgta aactccacag gggcattggg aatgctgcct 21120
ggctatggta gggacagagg ggagcaccag ggcggggcag gggtgccaga gttctgcctg 21180
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ttcgagaaga gagcttagtg tctgtgtgca cgtgtgtttg tgtgtatgtg tgtgcgtgtg 21960
tgcactggca ggagtcccct gctggggcag gagggccggg ccatcaccat ctttcaccat 22020
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ggctggggct gaaaggaggg cagacctcgg tttgaatttc accctgccgc tctatagctg 24060
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atatatatga aatatgtggg tgtaaacctc tcccccacac cataaaaggg agctggtata 31860
aatgagtgaa tggtgctata ctttggaaat acgactaaat ggatggttat tcaattgctt 31920
tatatttatt tctgggaaaa taaatcttaa accttgactg acttttcagt gttaattagt 31980
catgttgagg agaaacaaat 32000
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 3
gtcacacttg ctggcctgtc 20
<210> 4
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 4
tctgccgtcc ttccca 16
<210> 5
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 5
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<210> 6
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 6
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<210> 7
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 7
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<210> 8
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 8
ataagtgact tgtcaa 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 9
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 10
gcttgcattg taagtt 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 11
ggttttccca gctctg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 12
ctctggtttt cccagc 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 13
ccacctctgg ttttcc 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 14
gtctgctcca actgct 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 15
ctcttgtctg ctccaa 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 16
tttagctctt gtctgc 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 17
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 19
attgccacct gcaagt 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 20
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 22
tgcatggacc caccac 16
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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catgttgcat ggaccc 16
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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acagtagccc cccaac 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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tctgtgatcc tctgcc 16
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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attcagtggc tgctct 16
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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tcctcgggca cattct 16
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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caactattta gcagct 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 51
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 52
gacctaggtt accgct 16
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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ccactctgtg acacaa 16
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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atgtcccact ctgtga 16
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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ctcgaaggta agccgc 16
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 60
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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ctctcctcag gccagg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 98
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
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<400> 109
ctgccagtgt ccctct 16
<210> 110
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 110
gtgatcctct gccagt 16
<210> 111
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 111
ctctgtgatc ctctgc 16
<210> 112
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 112
gggtctctgt gatcct 16
<210> 113
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 113
cagctctagg gcccat 16
<210> 114
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 114
cagccagctc tagggc 16
<210> 115
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 115
agtgggtgct caaaac 16
<210> 116
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 116
ttaataatgc ccccgt 16
<210> 117
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 117
cctggttaat aatgcc 16
<210> 118
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 118
gagtgtgtta ggagct 16
<210> 119
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 119
tctctgagtg tgttag 16
<210> 120
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 120
cttgctctct gagtgt 16
<210> 121
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 121
agcatgctga gcaggt 16
<210> 122
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 122
ctgtagcatg ctgagc 16
<210> 123
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 123
aattcagtgg ctgctc 16
<210> 124
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 124
agagcaattc agtggc 16
<210> 125
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 125
cctcctcggg cacatt 16
<210> 126
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 126
ctatttagca gctacg 16
<210> 127
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 127
tcaactattt agcagc 16
<210> 128
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 128
taggttaccg ctgtca 16
<210> 129
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 129
ggacctaggt taccgc 16
<210> 130
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 130
cccactctgt gacaca 16
<210> 131
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 131
tgatgtccca ctctgt 16
<210> 132
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 132
gtcctgcagc ctctag 16
<210> 133
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 133
ccagcactgt cctgca 16
<210> 134
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 134
ttttttgctg gtttga 16
<210> 135
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 135
ccactttttt gctggt 16
<210> 136
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 136
caattccact tttttg 16
<210> 137
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 137
catctgtgca ctatcc 16
<210> 138
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 138
atggcatctg tgcact 16
<210> 139
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 139
cctctcacac gagcat 16
<210> 140
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 140
tctgcctctc acacga 16
<210> 141
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 141
ttcgacacag ggtagc 16
<210> 142
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 142
atgttttcga cacagg 16
<210> 143
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 143
tgggcatgtt ttcgac 16
<210> 144
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 144
gcatcttttc agtact 16
<210> 145
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 145
catcgcatct tttcag 16
<210> 146
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 146
gctgtcactg gagctc 16
<210> 147
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 147
aagtcggaac catttt 16
<210> 148
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 148
gggacaagtc ggaacc 16
<210> 149
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 149
tccgccaggc cagtga 16
<210> 150
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 150
catctccgcc aggcca 16
<210> 151
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 151
gaagcatctc cgccag 16
<210> 152
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 152
gccttagaag catctc 16
<210> 153
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 153
accatgcctt agaagc 16
<210> 154
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 154
aatgtctgct tgcttg 16
<210> 155
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 155
aagataaatg tctgct 16
<210> 156
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 156
ggtctagaaa agttgg 16
<210> 157
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 157
gcaaaacagg tctaga 16
<210> 158
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 158
acccagaata aatatc 16
<210> 159
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 159
catctgccgt ccttcc 16
<210> 160
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 160
ccagcatctg ccgtcc 16
<210> 161
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 161
acttgtcaag caccac 16
<210> 162
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 162
agtgacttgt caagca 16
<210> 163
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 163
attgtaagtt cactca 16
<210> 164
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 164
ttgcattgta agttca 16
<210> 165
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 165
aaattgaatg aattgg 16
<210> 166
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 166
ctggttttcc cagctc 16
<210> 167
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 167
acctctggtt ttccca 16
<210> 168
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 168
ttccacctct ggtttt 16
<210> 169
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 169
cttgtctgct ccaact 16
<210> 170
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 170
agctcttgtc tgctcc 16
<210> 171
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 171
attgagggaa aaaatc 16
<210> 172
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 172
cctgcaagtc cctgct 16
<210> 173
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 173
gccacctgca agtccc 16
<210> 174
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 174
attctctcct caggcc 16
<210> 175
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 175
gacccaccac attgca 16
<210> 176
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 176
catggaccca ccacat 16
<210> 177
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 177
gttgcatgga cccacc 16
<210> 178
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 178
agtagccccc caactt 16
<210> 179
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 179
acacagtagc ccccca 16
<210> 180
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 180
agtcacacag tagccc 16
<210> 181
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 181
cacacagttt gggtgt 16
<210> 182
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 182
atatgcaagg tcacac 16
<210> 183
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 183
agacatatgc aaggtc 16
<210> 184
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 184
tgtccctctt ggtctc 16
<210> 185
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 185
ccagtgtccc tcttgg 16
<210> 186
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 186
tctgccagtg tccctc 16
<210> 187
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 187
tgtgatcctc tgccag 16
<210> 188
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 188
tctctgtgat cctctg 16
<210> 189
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 189
tctagggccc atgctt 16
<210> 190
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 190
ccagctctag ggccca 16
<210> 191
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 191
ggcagccagc tctagg 16
<210> 192
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 192
cgcacagtgg gtgctc 16
<210> 193
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 193
ggttaataat gccccc 16
<210> 194
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 194
gcctggttaa taatgc 16
<210> 195
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 195
ctgagtgtgt taggag 16
<210> 196
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 196
ctctctgagt gtgtta 16
<210> 197
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 197
tgctgagcag gtcctt 16
<210> 198
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 198
tagcatgctg agcagg 16
<210> 199
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 199
ttctgtagca tgctga 16
<210> 200
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 200
caattcagtg gctgct 16
<210> 201
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 201
acagagcaat tcagtg 16
<210> 202
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 202
actatttagc agctac 16
<210> 203
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 203
gtcaactatt tagcag 16
<210> 204
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 204
ctaggttacc gctgtc 16
<210> 205
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 205
gggacctagg ttaccg 16
<210> 206
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 206
ctctgtgaca caaagc 16
<210> 207
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 207
gtcccactct gtgaca 16
<210> 208
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 208
gcactgtcct gcagcc 16
<210> 209
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 209
atccagcact gtcctg 16
<210> 210
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 210
cttttttgct ggtttg 16
<210> 211
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 211
tccacttttt tgctgg 16
<210> 212
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 212
tgtgcactat cctgta 16
<210> 213
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 213
gcatctgtgc actatc 16
<210> 214
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 214
agatggcatc tgtgca 16
<210> 215
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 215
gcctctcaca cgagca 16
<210> 216
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 216
actctgcctc tcacac 16
<210> 217
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 217
ttttcgacac agggta 16
<210> 218
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 218
catgttttcg acacag 16
<210> 219
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 219
cttttcagta ctctat 16
<210> 220
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 220
cgcatctttt cagtac 16
<210> 221
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 221
tccatcgcat cttttc 16
<210> 222
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 222
cactggagct cctggg 16
<210> 223
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 223
ggctgtcact ggagct 16
<210> 224
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 224
caagtcggaa ccattt 16
<210> 225
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 225
agggacaagt cggaac 16
<210> 226
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 226
ctccgccagg ccagtg 16
<210> 227
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 227
gcatctccgc caggcc 16
<210> 228
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 228
agaagcatct ccgcca 16
<210> 229
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 229
atgccttaga agcatc 16
<210> 230
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 230
gaccatgcct tagaag 16
<210> 231
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 231
aaatgtctgc ttgctt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 232
agaaaagttg gctgta 16
<210> 233
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 233
aggtctagaa aagttg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 234
aagcaaaaca ggtcta 16
<210> 235
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 235
aacccagaat aaatat 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 236
cactctgtga cacaaa 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 237
tgtcccactc tgtgac 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 238
tgtcactgga gctcct 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 239
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 240
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 241
gagggacaag tcggaa 16
<210> 242
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 242
tctccgccag gccagt 16
<210> 243
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 243
agcatctccg ccaggc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 244
tagaagcatc tccgcc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 245
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 246
ccgaccatgc cttaga 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 247
taaatgtctg cttgct 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 248
ctagaaaagt tggctg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 249
caggtctaga aaagtt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 250
aaagcaaaac aggtct 16
<210> 251
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 251
tgccgtcctt cccacc 16
<210> 252
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 252
gcatctgccg tccttc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 253
tcccagcatc tgccgt 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 254
gacttgtcaa gcacca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 255
aagtgacttg tcaagc 16
<210> 256
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 256
cattgtaagt tcactc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 257
cttgcattgt aagttc 16
<210> 258
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 258
tttcccagct ctgtat 16
<210> 259
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 259
tctggttttc ccagct 16
<210> 260
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 260
cacctctggt tttccc 16
<210> 261
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 261
cttccacctc tggttt 16
<210> 262
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 262
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<210> 263
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 263
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<210> 264
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 264
accctaggtg tacttt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 265
acctgcaagt ccctgc 16
<210> 266
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 266
tgccacctgc aagtcc 16
<210> 267
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 267
cattctctcc tcaggc 16
<210> 268
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 268
ggacccacca cattgc 16
<210> 269
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 269
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<210> 270
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 270
tgttgcatgg acccac 16
<210> 271
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 271
cagtagcccc ccaact 16
<210> 272
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 272
cacacagtag cccccc 16
<210> 273
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 273
aagtcacaca gtagcc 16
<210> 274
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 274
gtcacacagt ttgggt 16
<210> 275
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 275
catatgcaag gtcaca 16
<210> 276
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 276
tcagacatat gcaagg 16
<210> 277
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 277
gtgtccctct tggtct 16
<210> 278
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 278
gccagtgtcc ctcttg 16
<210> 279
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 279
cctctgccag tgtccc 16
<210> 280
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 280
ctgtgatcct ctgcca 16
<210> 281
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 281
gtctctgtga tcctct 16
<210> 282
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 282
gctctagggc ccatgc 16
<210> 283
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 283
gccagctcta gggccc 16
<210> 284
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 284
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<210> 285
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 285
ggcgcacagt gggtgc 16
<210> 286
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 286
tggttaataa tgcccc 16
<210> 287
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 287
ttgcctggtt aataat 16
<210> 288
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 288
tctgagtgtg ttagga 16
<210> 289
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 289
gctctctgag tgtgtt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 290
catgctgagc aggtcc 16
<210> 291
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 291
gtagcatgct gagcag 16
<210> 292
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 292
tcagtggctg ctctga 16
<210> 293
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 293
gcaattcagt ggctgc 16
<210> 294
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 294
tagttaacac acagaa 16
<210> 295
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 295
aactatttag cagcta 16
<210> 296
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 296
cgtcaactat ttagca 16
<210> 297
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 297
cctaggttac cgctgt 16
<210> 298
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 298
gcacagaccc tgactg 16
<210> 299
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 299
agcactgtcc tgcagc 16
<210> 300
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 300
ttttgctggt ttgaga 16
<210> 301
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 301
acttttttgc tggttt 16
<210> 302
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 302
attccacttt tttgct 16
<210> 303
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 303
tctgtgcact atcctg 16
<210> 304
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 304
ggcatctgtg cactat 16
<210> 305
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 305
tcacacgagc attaag 16
<210> 306
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 306
tgcctctcac acgagc 16
<210> 307
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 307
tagacaggat caactc 16
<210> 308
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 308
gttttcgaca cagggt 16
<210> 309
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 309
gcatgttttc gacaca 16
<210> 310
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 310
atcttttcag tactct 16
<210> 311
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 311
tcgcatcttt tcagta 16
<210> 312
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 312
agcagctagg ccacag 16
<210> 313
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 313
aacttcaagg ccagct 16
<210> 314
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 314
ctgaactgaa cggcgg 16
<210> 315
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 315
ggcgaggaga cctaga 16
<210> 316
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 316
acgcaaggct agcacc 16
<210> 317
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 317
ggcaagcccg ctttct 16
<210> 318
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 318
cccttttaaa gattag 16
<210> 319
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 319
ccagagaaga aacatc 16
<210> 320
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 320
aagaatctgg agctgc 16
<210> 321
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 322
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 324
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
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<212> DNA
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 420
catcagacgg ccgtgc 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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gtcacacttg ctggcc 16
<210> 422
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 422
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<210> 423
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 423
gcgcatgctg gcaccc 16
<210> 424
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 424
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 425
gcagaaggtt attgat 16
<210> 426
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 426
acagctgcta gttatt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 427
tgctactgtc aacagt 16
<210> 428
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 428
caataacctt attatc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 429
agagaacaga ctgagg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 430
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 432
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 434
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 442
aggtaatacc tttttc 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 444
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 445
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 446
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 447
ccccacccac acttca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 448
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 449
ttttaaagct cagccc 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 450
agcagccccg gaaagg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 452
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 453
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 454
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 455
ctagatgcca tccaga 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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tcctgctgtg tgagct 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 465
caacttcaag gccagc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 475
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 477
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 482
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 484
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 485
tatacgggta ccttct 16
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 491
cagcaataac tgattt 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 494
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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ctgggataca gacacc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 507
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 508
tattagcaat tacacc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 509
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 510
ctgtacccac ccgcca 16
<210> 511
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 512
ggcagaactc tggcac 16
<210> 513
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 513
cccaaagtcc ccaggg 16
<210> 514
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 514
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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catcatggct gcaatg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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gggaaccagg cctcat 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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tgctgaccat acagtc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 518
gtgcactatc ctgtag 16
<210> 519
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 519
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<210> 520
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 520
gcacctggca atggcg 16
<210> 521
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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cgggtcccca tgctgg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 522
tgcttagcac tcatca 16
<210> 523
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 523
cctacatgcc agcctg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 525
gcacaggcgg cttgtg 16
<210> 526
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 526
ccatatttat gcacat 16
<210> 527
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 527
tttcagtact ctatat 16
<210> 528
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 528
aacggctgtc acggcc 16
<210> 529
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 529
agagagggac aagtcg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 530
ttccaggcaa ggaggc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 531
ggcagcaccc gagcac 16
<210> 532
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 532
ataaaagtca ttctgc 16
<210> 533
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 533
attgaatgcc tggcac 16
<210> 534
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 534
ccacagttag ctggag 16
<210> 535
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 535
gctcaggaaa ccaagg 16
<210> 536
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 536
ctgccgagtc agtcct 16
<210> 537
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 537
tgccgggtag tggagc 16
<210> 538
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 538
cccctctggt tccagg 16
<210> 539
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 539
gctcagttcc tgctgt 16
<210> 540
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 540
agccgggtga agtaag 16
<210> 541
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 541
cactcaccga gcttcc 16
<210> 542
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 542
ccttagaagc atctcc 16
<210> 543
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 543
gtaaaaaggc aacaga 16
<210> 544
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 544
cgccaccaga gcccca 16
<210> 545
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 545
cggaatcctg gctggg 16
<210> 546
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 546
tagcaccagc tcctcg 16
<210> 547
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 547
tgctcgggtg cttcgg 16
<210> 548
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 548
ggctgcgggt tcgccc 16
<210> 549
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 549
cgagaatacc tccgcc 16
<210> 550
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 550
gctgagtaag gacttg 16
<210> 551
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 551
ttccgctaaa taaaaa 16
<210> 552
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 552
tcagagtaga acagag 16
<210> 553
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 553
gagggaggtg ccaagc 16
<210> 554
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 554
ctacaaatgc aggcag 16
<210> 555
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 555
aactacgggc cacact 16
<210> 556
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 556
acggatcctg gcccca 16
<210> 557
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 557
cccggcgggc agcctg 16
<210> 558
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 558
gatcttggtg aggtat 16
<210> 559
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 559
ggccatggaa gacatg 16
<210> 560
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 560
ctagagtcat gctttt 16
<210> 561
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 561
gtggagaatc agtgtg 16
<210> 562
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 562
ttgaagtcca gctctc 16
<210> 563
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 563
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<210> 564
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 564
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<210> 565
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 565
gatcatttaa ggcaag 16
<210> 566
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 566
tcccaagatc ccacga 16
<210> 567
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 567
caagagaagc ttctcc 16
<210> 568
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 568
ctacagcaat aactga 16
<210> 569
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 569
gagcagggag ctcatt 16
<210> 570
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 570
ctagaagaca gcacag 16
<210> 571
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 571
ccgacctgaa gacatc 16
<210> 572
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 572
gcccaccgca taatcc 16
<210> 573
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 573
gacaaaggtt agggta 16
<210> 574
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 574
tgaatatcaa tatcta 16
<210> 575
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 575
cctcgatttc ccggtg 16
<210> 576
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 576
gcgggtcccg tcctcc 16
<210> 577
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 577
gaccacatga gaaaga 16
<210> 578
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 578
tgccatgact gtcaca 16
<210> 579
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 579
cttggccacg ccggca 16
<210> 580
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 580
gctaaccgtg cccttc 16
<210> 581
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 581
cagtaaggga gagaac 16
<210> 582
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 582
cccgtgccag gtcatg 16
<210> 583
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 583
agctgctagt tattta 16
<210> 584
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 584
gaaacaggga cagttg 16
<210> 585
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 585
ggaagatatt agcaat 16
<210> 586
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 586
cttacaggca cagagt 16
<210> 587
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 587
gaggacgcgg ctgtac 16
<210> 588
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 588
gtggaacaag attcct 16
<210> 589
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 589
aggcagaact ctggca 16
<210> 590
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 590
ccaaagttgg tcccca 16
<210> 591
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 591
agcatcatgg ctgcaa 16
<210> 592
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 592
cctcagggaa ccaggc 16
<210> 593
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 593
tgccatcctg cttacc 16
<210> 594
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 594
tgtgctgacc atacag 16
<210> 595
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 595
caccaaaatg ctgcaa 16
<210> 596
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 596
ggccttagag tcaaag 16
<210> 597
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 597
agcacctggc aatggc 16
<210> 598
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 598
gacacgggtc cccatg 16
<210> 599
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 599
actaagctaa gtgctt 16
<210> 600
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 600
gcaaaatggt gctctt 16
<210> 601
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 601
acctagaaac aactca 16
<210> 602
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 602
cagcacaggc ggcttg 16
<210> 603
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 603
atgcatattg catttc 16
<210> 604
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 604
ggccagacca cactcc 16
<210> 605
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 605
ggcaacggct gtcacg 16
<210> 606
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 606
tgagagaggg acaagt 16
<210> 607
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 607
agtgagtgag ttccag 16
<210> 608
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 608
tggcagcacc cgagca 16
<210> 609
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 609
ctcaataaaa gtcatt 16
<210> 610
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 610
gaggattgaa tgcctg 16
<210> 611
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 611
ctccacagtt agctgg 16
<210> 612
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 612
gtaaaggtgg ctcagg 16
<210> 613
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 613
actgccgagt cagtcc 16
<210> 614
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 614
gtgtaccctg ccgggt 16
<210> 615
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 615
ccccctctgg ttccag 16
<210> 616
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 616
tggctcagtt cctgct 16
<210> 617
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 617
gcccagccgg gtgaag 16
<210> 618
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 618
atcactcacc gagctt 16
<210> 619
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 619
tgccttagaa gcatct 16
<210> 620
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 620
ctgtaaaaag gcaaca 16
<210> 621
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 621
gatcacgcca ccagag 16
<210> 622
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 622
cgcggaatcc tggctg 16
<210> 623
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 623
ctagcaccag ctcctc 16
<210> 624
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 624
ggctgtggtt ccgtgc 16
<210> 625
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 625
aaacagcacc gcaccg 16
<210> 626
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 626
ccgcacacgg tcggca 16
<210> 627
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 627
gaacaaggaa gagggc 16
<210> 628
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 628
caaagaccca tctgaa 16
<210> 629
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 629
tcatgaatca agtcca 16
<210> 630
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 630
gcagagatca atcaca 16
<210> 631
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 631
tcccatccag atgctc 16
<210> 632
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 632
attcaggcaa aaatgg 16
<210> 633
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 633
tccccggcgg gcagcc 16
<210> 634
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 634
ggatcttggt gaggta 16
<210> 635
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 635
aagaaggcca tggaag 16
<210> 636
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 636
tgccattccc aaaaag 16
<210> 637
<211> 16
<212> DNA
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 638
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 639
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 640
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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aaagacagag gagtcc 16
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 643
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 645
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 646
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 647
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 654
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 655
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 657
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 658
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 660
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 719
tccaaggtaa gtgcag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 720
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 722
ctcaatacct gacaga 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 724
atacattggc agacag 16
<210> 725
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 725
actcatcaat aggcat 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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tgccaagaag gaccca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 729
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 730
tggaagcggg tcccgt 16
<210> 731
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 731
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 732
cgctgaccac ccctgc 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 735
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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gccccgtgcc aggtca 16
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<212> DNA
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 740
gccaaggtca cccctt 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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gaccagcacg acccca 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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acctaggtta ccgctg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 743
aggaaaatct gactgc 16
<210> 744
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 744
acacagcggc caaagt 16
<210> 745
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 745
gcagacagca tcatgg 16
<210> 746
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 746
ggtcagtacc cgctgg 16
<210> 747
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 747
cctatttaag gtggcg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 748
cgtgtaggcc ccgagt 16
<210> 749
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 749
cagaaatgcc tgcccc 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 750
gcagcacctg gcaatg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 751
tggacacggg tcccca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 752
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 753
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 754
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 755
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 756
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 757
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 758
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 759
gcagatggca acggct 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 760
ccatggaggg ctgaga 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 761
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 762
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 763
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 764
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 765
ttaatcaggg agcccc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 766
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 767
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 768
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 769
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 770
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 771
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 772
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 773
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 774
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 775
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 776
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 777
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 778
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 779
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 780
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 781
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 782
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 783
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 784
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 785
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 786
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 787
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 788
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 789
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 790
agcaatgggc ctacta 16
<210> 791
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 791
agcaacagct tcaaag 16
<210> 792
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 792
ctgattaacc catggg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 793
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<210> 794
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 794
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<210> 795
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 795
gggcaaagac agagga 16
<210> 796
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 796
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<210> 797
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 797
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<210> 798
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 798
tcctaacccc cacaac 16
<210> 799
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 799
tgcagggcta aaatca 16
<210> 800
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 800
ggcaggtggg cctggt 16
<210> 801
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 801
ggatacattg gcagac 16
<210> 802
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 802
gtgttaggag ctttca 16
<210> 803
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 803
agacacatca caggac 16
<210> 804
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 804
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<210> 805
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 805
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<210> 806
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 806
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<210> 807
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 807
tgtggaagcg ggtccc 16
<210> 808
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 808
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<210> 809
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 809
acccttggcc acgccg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 810
tatgagggtg ccgcta 16
<210> 811
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 811
acttacctat gagggt 16
<210> 812
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 812
ggcttacagt ggaagt 16
<210> 813
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 813
tgccccgtgc caggtc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 814
ccaggagccg tggcca 16
<210> 815
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 815
acacaaactt gaacag 16
<210> 816
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 816
tcttaatata tacatc 16
<210> 817
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 817
gaacaaagcc aaggtc 16
<210> 818
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 818
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<210> 819
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 819
ccttgatagg ccaggg 16
<210> 820
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 820
tcccactcaa atgtcc 16
<210> 821
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 821
ccacacagcg gccaaa 16
<210> 822
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 822
cggcagacag catcat 16
<210> 823
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 823
ggcagggcgg ccacca 16
<210> 824
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 824
aaaatattgc acagcc 16
<210> 825
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 825
ggccatccgt gtaggc 16
<210> 826
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 826
agcattaaga ccccat 16
<210> 827
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 827
ggcagcacct ggcaat 16
<210> 828
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 828
gtggacacgg gtcccc 16
<210> 829
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 829
agaaagagac ccctcc 16
<210> 830
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 830
aaacaatagt aacgat 16
<210> 831
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 831
tctgaacatg gtaggg 16
<210> 832
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 832
gcccatcccc atcaga 16
<210> 833
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 833
gggcatggca gcagga 16
<210> 834
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 834
cttcagcatg cagctc 16
<210> 835
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 835
tgaaactgat ggcccc 16
<210> 836
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 836
cagcagatgg caacgg 16
<210> 837
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 837
ggccatggag ggctga 16
<210> 838
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 838
aggcacccag agtgag 16
<210> 839
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 839
agctggcagc acccga 16
<210> 840
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 840
gaacaagagc tcaata 16
<210> 841
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 841
gggaagaatc ctgcct 16
<210> 842
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 842
cattaatcag ggagcc 16
<210> 843
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 843
gagcagagta aaggtg 16
<210> 844
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 844
cacactgccg agtcag 16
<210> 845
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 845
aggtttcttc ctctgt 16
<210> 846
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 846
gagcttggca ggcacg 16
<210> 847
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 847
ttctggctca gttcct 16
<210> 848
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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gtaaaaatga ggagcc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 849
aaaaagttcc atgcct 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 850
ggagggacag ttgttg 16
<210> 851
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 851
tagaaaagtt ggctgt 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 852
ttgctggcct gtctgt 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 853
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 854
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 871
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 888
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 903
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 904
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 906
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 907
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 910
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 920
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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tttctggctc agttcc 16
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 930
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 932
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 942
tgggaaagtc aagagt 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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ctggatagca acagct 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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agccaggctg tgccaa 16
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<212> DNA
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
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cagacatatg caaggt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 954
gcccaaggga gaggag 16
<210> 955
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 955
gttattattg aatggt 16
<210> 956
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 956
caggaggctg caagca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 957
caggaagcag cccaag 16
<210> 958
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 958
ctccactgat cagtcc 16
<210> 959
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 959
ccaaatatgc tgcaga 16
<210> 960
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 960
agagacagga agctgc 16
<210> 961
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 961
cacagaaact acagag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 962
gggcacattc tcgaag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 963
cggccgctga ccaccc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 964
gcacccttgg ccacgc 16
<210> 965
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 965
ccagatggag agagac 16
<210> 966
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 966
ggctagtggg ctgcct 16
<210> 967
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 967
ccctgccccg tgccag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 968
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 969
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 970
ccgcacggtc acatga 16
<210> 971
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 971
gtgccacaag aagccc 16
<210> 972
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 972
gaagttgccg gcagcg 16
<210> 973
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 973
taaattcggc cgccag 16
<210> 974
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 974
aaagaggtcc acacag 16
<210> 975
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 975
ctgttagcat cacggt 16
<210> 976
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 976
ggccagggtg agctcc 16
<210> 977
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 977
gagagaggag ggctta 16
<210> 978
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 978
aaaacagctg ccaacc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 979
cgggcgacgg ctgtgg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 980
acacgagcat taagac 16
<210> 981
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 981
gcaggcagca cctggc 16
<210> 982
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 982
cagtggacac gggtcc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 983
ctgcaagtca ggcttg 16
<210> 984
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 984
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<210> 985
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 985
agctacactg aggctc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 986
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 987
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 988
tgtcacattc cagggc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 989
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 990
cgccaggtgc cggctc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 991
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 992
ccccacagtg agggag 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 993
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 994
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<210> 995
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 995
ccctatccat gggaag 16
<210> 996
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 996
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 997
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<210> 998
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 998
tgcacactgc cgagtc 16
<210> 999
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 999
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<210> 1000
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1000
tgtgagcttg gcaggc 16
<210> 1001
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1001
gtttctggct cagttc 16
<210> 1002
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1002
acccgtaaaa atgagg 16
<210> 1003
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1003
acggaaaaag ttccat 16
<210> 1004
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1004
ctcaaggagg gacagt 16
<210> 1005
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1005
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<210> 1006
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1006
cacttgctgg cctgtc 16
<210> 1007
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1007
ctccacggat ccttgg 16
<210> 1008
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1008
ttcaaggcca gctcca 16
<210> 1009
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1009
ataaactcca ggccta 16
<210> 1010
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1010
cgtcgctgcg gaaacc 16
<210> 1011
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1011
gtccacgccg gcggcg 16
<210> 1012
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1012
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<210> 1013
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1013
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<210> 1014
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1014
caccacagct agtgag 16
<210> 1015
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1015
cactatttcc agaaca 16
<210> 1016
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1016
aataatctca tgtcag 16
<210> 1017
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1017
caaattatag cagcca 16
<210> 1018
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1018
gatttattca gctcat 16
<210> 1019
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1019
ccacagtacc tatgac 16
<210> 1020
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1020
caaatgcgga ccaaaa 16
<210> 1021
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1021
aggtatcccc ggcggg 16
<210> 1022
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1022
atgcaggatc ttggtg 16
<210> 1023
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1023
cgataagtgc tcaata 16
<210> 1024
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1024
aaagaaggga cttcac 16
<210> 1025
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1025
acttagacta cgggtt 16
<210> 1026
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1026
tccttaaatg aatgtt 16
<210> 1027
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1027
cttgatcagg ctggga 16
<210> 1028
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1028
ggtaatccgc tccagg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1029
tcccattaaa ggatct 16
<210> 1030
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1030
acacatgacc gaccag 16
<210> 1031
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1031
ctccagccaa gccctt 16
<210> 1032
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1032
tctggataca ctgttg 16
<210> 1033
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1033
ggtcaggagg ctgcaa 16
<210> 1034
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1034
tgctcaggaa gcagcc 16
<210> 1035
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1035
ccctaaggcc tccagt 16
<210> 1036
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1036
ctgaacagca cctctg 16
<210> 1037
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1037
ttagagacag gaagct 16
<210> 1038
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1038
cttatagtta acacac 16
<210> 1039
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1039
ctcctcgggc acattc 16
<210> 1040
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1040
ccggccgctg accacc 16
<210> 1041
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1041
ggcacccttg gccacg 16
<210> 1042
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1042
gcccaagcca cctccc 16
<210> 1043
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1043
aggaaagtct cagggc 16
<210> 1044
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1044
agcccctgcc ccgtgc 16
<210> 1045
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1045
ggcctaacgc agctct 16
<210> 1046
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1046
aggcaccaag aggatg 16
<210> 1047
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1047
gcggatttca gacttg 16
<210> 1048
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1048
ccggaagttg ccggca 16
<210> 1049
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1049
cgtgccacaa gaagcc 16
<210> 1050
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1050
gcctttaaat tcggcc 16
<210> 1051
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1051
gcaaagaggt ccacac 16
<210> 1052
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1052
ggcactggag gtcccg 16
<210> 1053
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1053
ctcaactcgg ccaggg 16
<210> 1054
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1054
taggagagag gagggc 16
<210> 1055
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1055
gcaaaacagc tgccaa 16
<210> 1056
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1056
gcagcgggcg acggct 16
<210> 1057
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1057
ctctcacacg agcatt 16
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1058
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1059
gcagtggaca cgggtc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1060
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1061
attttaaagc aacggg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1062
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1063
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1064
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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cctcaagggc ttggtt 16
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1102
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1103
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1104
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1105
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1106
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1107
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1108
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1110
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1111
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1112
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1113
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1114
tcctcctcgg gcacat 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1115
cccggccgct gaccac 16
<210> 1116
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1116
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1117
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1118
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1119
aggcaatagt gactgt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1120
ctggagactg gaggcc 16
<210> 1121
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1121
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<210> 1122
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1122
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1124
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1126
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1127
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1128
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1129
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<210> 1131
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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ctgcaaaaca gctgcc 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1132
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1134
tagcaggcag cacctg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1135
ggcagtggac acgggt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1136
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1137
caatagttgc ctatac 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1138
agacacaccc attggc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1139
ggccgggatt ccatgc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1140
acgcagcacc ccaccc 16
<210> 1141
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1141
aaggagagtt atacac 16
<210> 1142
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1142
ggacacaacc gtgtat 16
<210> 1143
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1143
acccatcctg ggatgg 16
<210> 1144
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1144
ggaaaggcgg aagcat 16
<210> 1145
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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ttgaatggtg aaatgc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1146
cggcacattg ggagca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1147
cacggaacaa gagctc 16
<210> 1148
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1148
ccccaacgat gtttgt 16
<210> 1149
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1149
cagaaagcta agcctc 16
<210> 1150
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1150
gcacagcctg gcatag 16
<210> 1151
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1151
actgcacact gccgag 16
<210> 1152
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1152
gttccaggtt tcttcc 16
<210> 1153
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1153
tgtgtgagct tggcag 16
<210> 1154
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1154
agccagccca atctgc 16
<210> 1155
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1155
cctcactgtt acccgt 16
<210> 1156
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1156
gataacggaa aaagtt 16
<210> 1157
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1157
ataaatgtct gcttgc 16
<210> 1158
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1158
agcaaaacag gtctag 16
<210> 1159
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1159
acttcaaggc cagctc 16
<210> 1160
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1160
aactgaacgg cggcgc 16
<210> 1161
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1161
acctagaggc cgtgcg 16
<210> 1162
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1162
cgcaaggcta gcacca 16
<210> 1163
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1163
ggcgaggcag aaactg 16
<210> 1164
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1164
tcaaggataa gtgact 16
<210> 1165
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1165
agaaacatcc tcaagg 16
<210> 1166
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1166
taatctatgc agcaaa 16
<210> 1167
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1167
ccaaatttcc acatga 16
<210> 1168
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1168
aaggaatacc tgaagg 16
<210> 1169
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1169
cctcagatac ctctgc 16
<210> 1170
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1170
gtatagtaga tgataa 16
<210> 1171
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1171
tgccaggcaa cctcca 16
<210> 1172
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1172
tgaggtatcc ccggcg 16
<210> 1173
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1173
acatgcagga tcttgg 16
<210> 1174
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1174
agccagtagt tactgt 16
<210> 1175
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1175
gaagatgtga catcca 16
<210> 1176
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1176
gagcagactg atggaa 16
<210> 1177
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1177
gtggtaacag cctcct 16
<210> 1178
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1178
ggacagacta ggagcc 16
<210> 1179
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1179
attcatccgc ccggta 16
<210> 1180
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1180
aggtaggcag aggcat 16
<210> 1181
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1181
ggccgggtca gcacac 16
<210> 1182
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1182
ggcccatgct tgtggc 16
<210> 1183
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1183
aggaatggat taatct 16
<210> 1184
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1184
tctaagtgca ggcggt 16
<210> 1185
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1185
cagcaaggtg ggcaga 16
<210> 1186
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1186
gcacagtccg aactgt 16
<210> 1187
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1187
gcggaaatgg cctggc 16
<210> 1188
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1188
ggagaataac agtgat 16
<210> 1189
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1189
aaccttatag ttaaca 16
<210> 1190
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1190
gtcctcctcg ggcaca 16
<210> 1191
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1191
cacacttgct ggcctg 16
<210> 1192
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1192
tcccggccgc tgacca 16
<210> 1193
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1193
ctggcaccct tggcca 16
<210> 1194
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1194
agacatcacc ggattt 16
<210> 1195
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1195
ctgtaggaaa gtctca 16
<210> 1196
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1196
ggacacacaa tcacct 16
<210> 1197
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1197
cagtaacagt tctaac 16
<210> 1198
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1198
cttattatcc ctttcc 16
<210> 1199
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1199
tcaaattctg caggaa 16
<210> 1200
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1200
ccgaataaac tccagg 16
<210> 1201
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1201
gagtagaggc aggcat 16
<210> 1202
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1202
ccaaagccag aagggt 16
<210> 1203
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1203
ttctaagtgc cacggg 16
<210> 1204
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1204
caatgatgtc ctcccc 16
<210> 1205
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1205
tcccgatcaa atgtcc 16
<210> 1206
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1206
gcagagaagt ggatca 16
<210> 1207
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1207
tgccaacctg caaaaa 16
<210> 1208
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1208
atacagtcct gcaaaa 16
<210> 1209
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1209
agctcagcag ctcctc 16
<210> 1210
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1210
atccaggagg ccaaag 16
<210> 1211
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1211
gggtagcagg cagcac 16
<210> 1212
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1212
tggcagtgga cacggg 16
<210> 1213
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1213
ggagaagtaa ggtcac 16
<210> 1214
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1214
gtcaatagtt gcctat 16
<210> 1215
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1215
gttcaagggt aagccg 16
<210> 1216
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1216
tggcacaaac tgacac 16
<210> 1217
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1217
ttaagagtgg actcct 16
<210> 1218
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1218
ccaaagtgca gacggc 16
<210> 1219
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1219
ggccacggtc acctgc 16
<210> 1220
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1220
ccccagacac ccatcc 16
<210> 1221
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1221
ccggaaaggc ggaagc 16
<210> 1222
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1222
gcacagctcg acctgt 16
<210> 1223
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1223
ggacatcggc acattg 16
<210> 1224
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1224
gcacggaaca agagct 16
<210> 1225
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1225
tttcacactc accccc 16
<210> 1226
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1226
atccagaaag ctaagc 16
<210> 1227
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1227
tgctagcaca gcctgg 16
<210> 1228
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1228
cactgcacac tgccga 16
<210> 1229
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1229
ggttccaggt ttcttc 16
<210> 1230
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1230
ctgtgtgagc ttggca 16
<210> 1231
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1231
tcagagccag cccaat 16
<210> 1232
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1232
gagcttcctg gtctgt 16
<210> 1233
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1233
gtgataacgg aaaaag 16
<210> 1234
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1234
agataaatgt ctgctt 16
<210> 1235
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1235
ttcaagttac aaaagc 16
<210> 1236
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1236
gcaacttcaa ggccag 16
<210> 1237
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1237
agccagtctc actgcc 16
<210> 1238
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1238
gctgacggtg cccatg 16
<210> 1239
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1239
gaacgcaagg ctagca 16
<210> 1240
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1240
ccaaatcgga acccac 16
<210> 1241
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1241
acagaacttt cccttc 16
<210> 1242
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1242
taaattcgat tcccac 16
<210> 1243
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1243
aggcagtaat gggcaa 16
<210> 1244
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1244
tccaacactg aggacc 16
<210> 1245
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1245
aaaggcaaca cttctt 16
<210> 1246
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1246
caatatttac tggttg 16
<210> 1247
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1247
cttacaaatt acaaca 16
<210> 1248
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1248
tctgactgcg agaggt 16
<210> 1249
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1249
tggtgaggta tccccg 16
<210> 1250
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1250
aagacatgca ggatct 16
<210> 1251
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1251
gaccaatggg tttgat 16
<210> 1252
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1252
gagaataccc agtccc 16
<210> 1253
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1253
gctcaaggga aaggcc 16
<210> 1254
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1254
ggacaagagt gcatca 16
<210> 1255
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1255
ggccttacct gatcaa 16
<210> 1256
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1256
ctagaaccct tcattc 16
<210> 1257
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1257
tctcacctgg ttggaa 16
<210> 1258
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1258
gttaagagtg cagggt 16
<210> 1259
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1259
ccgtaggtct tggcta 16
<210> 1260
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1260
agctgtacct gggttc 16
<210> 1261
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1261
cctagaggaa ccacta 16
<210> 1262
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1262
acatgaattt caggca 16
<210> 1263
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1263
tctcagccag gccaaa 16
<210> 1264
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1264
ccctattata gccttt 16
<210> 1265
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1265
ctccaccagg ctgcct 16
<210> 1266
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1266
cccgtcctcc tcgggc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1267
ccatcagacg gccgtg 16
<210> 1268
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1268
tgtcacactt gctggc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1269
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1270
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1271
tgcaagcaga agatag 16
<210> 1272
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1272
caggaactga cctgac 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1273
tacagctgct agttat 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1274
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1275
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1276
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1277
gaccagctgg cttttc 16
<210> 1278
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1278
cccaaagagt attggg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1279
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1280
cccaactgtg atgacc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1281
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<210> 1282
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1282
aggtaagaca gcctcc 16
<210> 1283
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1283
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<210> 1284
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1284
gaccatacag tcctgc 16
<210> 1285
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1285
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<210> 1286
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1286
tagcagatcg ctgacc 16
<210> 1287
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1287
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<210> 1288
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1288
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1289
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1290
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1292
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1293
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1294
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1297
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1298
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1300
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1301
ctggcacgga acaaga 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1302
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1303
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<210> 1304
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1304
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<210> 1305
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1305
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<210> 1306
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1306
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<210> 1307
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1307
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1308
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<210> 1309
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1309
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1310
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<210> 1311
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1311
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<210> 1312
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1312
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<210> 1313
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1313
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<210> 1314
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1314
cctggagctg acggtg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1315
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<210> 1316
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1316
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<210> 1317
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1317
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1318
ttctaaattc gattcc 16
<210> 1319
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1319
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<210> 1320
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1320
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<210> 1321
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1321
gaagggatga ctaagt 16
<210> 1322
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1322
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<210> 1323
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1323
cctacttaca aattac 16
<210> 1324
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1324
gggcagtgcg ctctga 16
<210> 1325
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1325
ttggtgaggt atcccc 16
<210> 1326
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1326
gaagacatgc aggatc 16
<210> 1327
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1327
ggcagaccaa tgggtt 16
<210> 1328
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1328
taagatttga agcact 16
<210> 1329
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1329
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<210> 1330
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1330
ggcactagca ggagtt 16
<210> 1331
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1331
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<210> 1332
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1332
tccaactaga accctt 16
<210> 1333
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1333
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<210> 1334
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1334
aggaacctga agatca 16
<210> 1335
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1335
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<210> 1336
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1336
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<210> 1337
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1337
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1338
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1339
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<210> 1340
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1340
gtgtaaaata aagccc 16
<210> 1341
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1341
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<210> 1342
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1342
tcccgtcctc ctcggg 16
<210> 1343
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1343
ggacagtgac agctgg 16
<210> 1344
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1344
ctgtcacact tgctgg 16
<210> 1345
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1345
cacgccggca tcccgg 16
<210> 1346
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1346
gcgcaggctg cgcatg 16
<210> 1347
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1347
atgcaagtga gtgagt 16
<210> 1348
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1348
ggaaagaaca gcctcc 16
<210> 1349
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1349
gatacagaca cccacc 16
<210> 1350
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1350
taccataact ccccac 16
<210> 1351
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1351
atcaaactag ccaacc 16
<210> 1352
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1352
gaagacggag taaggc 16
<210> 1353
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1353
ggctggacca gctggc 16
<210> 1354
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1354
ggcccaaaga gtattg 16
<210> 1355
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1355
gaaactattc ggtgta 16
<210> 1356
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1356
ggcattggtg gcccca 16
<210> 1357
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1357
tgtgacacaa agcagg 16
<210> 1358
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1358
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1359
cctcattgat gacatc 16
<210> 1360
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1360
tgaccataca gtcctg 16
<210> 1361
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1361
gctcgccccg ccgctt 16
<210> 1362
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1362
ggctgagtcc agagta 16
<210> 1363
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1363
gaaatgggaa tctgct 16
<210> 1364
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1364
ccatgctggc ctcagc 16
<210> 1365
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1365
cagctataga gcggca 16
<210> 1366
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1366
gaacagctca gcctca 16
<210> 1367
<211> 16
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1367
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1368
tcccagtggg agctgc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1369
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1370
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1371
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1372
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1373
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1374
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1410
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1429
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1446
tgccaaggtc ctccac 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1447
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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aaatagatgc tccagg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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ctgcagccag tcaggg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1451
tcggaaccat tttaaa 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1452
ccccactcaa gggcca 16
<210> 1453
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1453
cagcacccga gcacag 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1455
gcctggcacg gaacaa 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1456
ctggagatga gggcca 16
<210> 1457
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1457
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1458
gccgagtcag tcctag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1459
gctgagacag tgcatg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1460
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1462
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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ctcaccgagc ttcctg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1464
cgccaggcca gtgaat 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1465
acagagagga cagacc 16
<210> 1466
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1466
agtcaccata ttaata 16
<210> 1467
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1467
tgcaatgcca gccacg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1468
agccgctgct gcaacg 16
<210> 1469
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1469
gccaccagga ccgcct 16
<210> 1470
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1470
cctcggaacg caaggc 16
<210> 1471
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1471
agcatgagtt ctgtgt 16
<210> 1472
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1472
cagcacactc agacag 16
<210> 1473
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1473
aaaaggattg gtctaa 16
<210> 1474
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1474
ccctttaccc aaagcc 16
<210> 1475
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1475
aatcagcctt caaggg 16
<210> 1476
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1476
ggcagaaggg atgact 16
<210> 1477
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1477
tcgacaacag gttttc 16
<210> 1478
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1478
tgacatggaa gaaacc 16
<210> 1479
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1479
gcaggcggcg ggcagt 16
<210> 1480
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1480
tcttggtgag gtatcc 16
<210> 1481
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1481
tggaagacat gcagga 16
<210> 1482
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1482
tgcattggca caagaa 16
<210> 1483
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1483
agttagaggc caggaa 16
<210> 1484
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1484
tcccatagtc aactgt 16
<210> 1485
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1485
ttgcaaagct tccagt 16
<210> 1486
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1486
atgtagtcga catggg 16
<210> 1487
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1487
cgagaagtgg aaacca 16
<210> 1488
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1488
gtgaaagctg agttca 16
<210> 1489
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1489
gggtggtaat ttgtca 16
<210> 1490
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1490
aataactgat ttaacc 16
<210> 1491
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1491
gttcattcca ctgctt 16
<210> 1492
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1492
caacgcacat cgagca 16
<210> 1493
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1493
accaaacagt gctcgc 16
<210> 1494
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1494
aataaggtct ggctca 16
<210> 1495
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1495
acagatgcca ggcagg 16
<210> 1496
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1496
tcaatatcta acaata 16
<210> 1497
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1497
ctgtatgctg gtgtct 16
<210> 1498
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1498
ggtcccgtcc tcctcg 16
<210> 1499
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1499
catgagaaag accccc 16
<210> 1500
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1500
tgactgtcac acttgc 16
<210> 1501
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1501
ggccacgccg gcatcc 16
<210> 1502
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1502
gttgagcacg cgcagg 16
<210> 1503
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1503
ctccaccaca tctgcc 16
<210> 1504
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1504
cgtgccaggt catgca 16
<210> 1505
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1505
tgggatacag acaccc 16
<210> 1506
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1506
taaaagactc catgcc 16
<210> 1507
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1507
gcaattacac cagcaa 16
<210> 1508
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1508
gcacagagtg atggtt 16
<210> 1509
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1509
ccccacaggc tggacc 16
<210> 1510
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1510
ctgcaccggg catgcg 16
<210> 1511
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1511
ccctaccata gccagg 16
<210> 1512
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1512
ccccagggtc accggc 16
<210> 1513
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1513
gcacacagac actaag 16
<210> 1514
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1514
aaccaggcct cattga 16
<210> 1515
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1515
gctgaccata cagtcc 16
<210> 1516
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1516
ctatcctgta gcatca 16
<210> 1517
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1517
gacggaaatg ggaatc 16
<210> 1518
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1518
ggcagaccag cttgcc 16
<210> 1519
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1519
ggtccccatg ctggcc 16
<210> 1520
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1520
tagcactcat catttc 16
<210> 1521
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1521
gacgagaatc aactct 16
<210> 1522
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1522
caccaggact cctgtg 16
<210> 1523
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1523
ggcttgtggg tgccaa 16
<210> 1524
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1524
ctccaagtgg agtggg 16
<210> 1525
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1525
actaaaatag atgctc 16
<210> 1526
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1526
tgccagagcc cgagga 16
<210> 1527
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1527
gggcactgca gccagt 16
<210> 1528
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1528
gacaagtcgg aaccat 16
<210> 1529
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1529
ggcaaggagg ctgccc 16
<210> 1530
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1530
gcagcacccg agcaca 16
<210> 1531
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1531
taaaagtcat tctgcc 16
<210> 1532
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1532
tgcctggcac ggaaca 16
<210> 1533
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1533
agttagctgg agatga 16
<210> 1534
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1534
accaaggcac agcctg 16
<210> 1535
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1535
tgccgagtca gtccta 16
<210> 1536
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1536
gtggagcggg ttggct 16
<210> 1537
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1537
ccctctggtt ccaggt 16
<210> 1538
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1538
tcagttcctg ctgtgt 16
<210> 1539
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1539
gtgaagtaag aagagg 16
<210> 1540
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1540
actcaccgag cttcct 16
<210> 1541
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1541
ttagaagcat ctccgc 16
<210> 1542
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1542
ggcaacagag aggaca 16
<210> 1543
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1543
taaaaagtca ccatat 16
<210> 1544
<211> 27001
<212> DNA
<213> Macaca fascicularis
<400> 1544
cattgcaaat acaattccag ttacaggcaa caggaaggaa aaccacctct gtcagcaaac 60
aatgagctcc cactctgtgc tgcgatggtg gctcaatgcg gatagctctg accttacctc 120
atggagtcac tgtcaaccca ctggttgcac agtctttgtg ccctggctct ctggagtgag 180
gtctttgcaa acaaagtggg aaatgcagca actttggact ccagcaccta gattccgagc 240
aggtcatttc actcagaata tgctgtgcat ctgcaatgac ggatcataaa gccgcctttg 300
tttcttccca gtattgacag cccttccaga aagagcaagc ctcatggcat gccacatgta 360
caatctgagg ccaggagctc tctttcccct tttcatcctc ctgcctagta cacaataggt 420
gtttactgga tgcttgtcca gttgagttct tgaacatggt gtgtaaaagg aatctttgca 480
aattgaatct tctggaacgc tgagcttgtg cctaccatag aattctgaac gtacctatat 540
gacatctttg caaacttaaa acctgaatct ttgcagtata aatcccttga aacgcatgga 600
ggctgggcat caaaagcaag cagtatcttc aaggaacagc tagtcggtaa ggtcagtgtg 660
cagggtgcat aaagagcaga ggccggcggg ggtccaagat aagtttagaa ggttgccagg 720
ttaaggtcgg tggaaagaat tcggtgggca gggaggagtc catagtagga ttgattcaga 780
agtctcactg gtcagcaggt gacaaggtgg acccaggaaa cactgaaaag gtgggctggg 840
cagaactcgg agtctggcat cccacgcagg gtgagaggcg ggagaggagg tgcctctaga 900
gcgccgaccc gccttccagc ccagttagaa tttgggagtt ttttcttccc tctgcacgta 960
atctgacgct gtttggggag ggcgaggccg aaacctgatc ctccagtccg ggggttccgt 1020
taatgtttaa tcagatagga tcgtccgatg gggctctggt ggcgtgatct gcgggcccca 1080
ggcgtcaagc acccacaccc tagaaggttt ccgcagcggc gtcgaggcgc tcgtggttgc 1140
aggagggcgc cgccgctcag ttcagggtcc gagcctggag gagtgagcca ggcagtgaga 1200
ctgtctcagg cgggccggga cgtgtcgttg cagcggcggc tcccagctcc cagccaggat 1260
tccgcgcgcc ccttcgcgcg ccctgagcct gaactccagc tcctgcacag tcctccccac 1320
cgtaaggctc aaggcgccgc ccgcgtggac cgtgcacggc ctctaggtct cctcatcagg 1380
acggcaacct ctcccctggc cctgatgggt accgtcagct ccaggcggtc ctggtggcct 1440
ctgccgctgc cactgctgct gctcctgctc ctgggtcccg ctggcgcccg tgcgcaggag 1500
gacgaggacg gcgactacga ggagctggtg ctagccttgc gttccgagga ggacggcctg 1560
gccgacgcac ccgagcacgg agccacagcc accttccacc gctgcgccaa ggtgcgggcg 1620
gaggggtggc aggcctgggg gaacccgcag ccgggacggt gcgatgctgt ttcctctcgg 1680
gtctcagttt ccccccattt aagagaggaa gtggggtgca ggtctccgag ggctcttcgc 1740
ttggcacgat cttggggact gcaggcaagg cggcgtggga ggacgggtcg tggggagcgc 1800
ggtggagagc ggggacggcc ggcctttcgg ggacttgcgg gggcgtgcgg ctgcgctatt 1860
cagtgggaag gctcgcgggg ttgggagact gcgaggctga gggagggcgg gcagagcact 1920
gccagggtct cctgcccaga tttcagactt tccgcctcgc cgcggcacag gtgggtgaag 1980
aagtgaatgc ctggaaagca ctgggaacgc accagacaca gaggaagtgg gcttgccatt 2040
atagtgggtt ccgattcggt ttgggaaata tgggcagcgg aggatggagg gcctggagag 2100
aaggccctac ccgagacagg agcggggtgg gaaggactgc agatgctggg agcgcgaggc 2160
aatttcttta cgacacagaa cttatgctgt agtattccat ctgtttcaat tgaagaaaag 2220
aaccagctga aggggcaggg gagaaggggc ggagttattc tcgaggccca ttggtgtcct 2280
ttaggactca ggcagggaag ggcccttggt gctctggagc cggaggtggc gcgcctggta 2340
ctgggacccc gcagttgagc ccggcgcctc agcccacctg gctgtctgcc gaccgaccga 2400
gggtgaggcg agtttgctca acgactctgc cagcatctgg ccctcaggct gtgggaagct 2460
tcttcccggg gcggggtcac tagttttttc taagtattat cagcccagga cttggctgag 2520
gttctgtgtc ccccagcttg gagtcagatc tggggttgaa tgatggcttc ctctcactag 2580
ctgtggtgct tgacaagcca cttatccttg agcctccatt gcctagtctt taaaaaggaa 2640
gtgacaatcc tccctaaggg ctcagtggca gcagatgggg agatgaaggg aaagttctgt 2700
tgaccatgag tgacctcact catgcaagcc cagggaggga tcacttgcag ttttgcccct 2760
gtctgcagcg tgacctgttg gtgacattgt ctttgctcca aactacagct cctggggcag 2820
aggggaaaat tctgccactc acagctgcct gccccatctg agtgttctgg gtggcaggat 2880
ggcaggtcct tactcagctc agtatagtcc tcttccttgt tccctgagcc tttgactttc 2940
tagagggatg ttgtggggtt gtggccagga taagaaaagg cacttcaagt taccactgct 3000
ccaaaacgac tgttctggaa atagtgagta ccccatcctg agaggtgagt aagcagaggc 3060
tgtatgacca cctgaaccaa gcccttgagg atgtttcttc tctggtggaa atttggaaca 3120
ggagcctcct cacgtttatt tattcattca ttcaatggat attctgtggg agtcgaattt 3180
agaatgaaaa tattttttgg caagcagaaa agaattttta gaccaatcct tttgttttag 3240
tcatgagaaa ctgaggctca gagagaggag gtcaccccag gtgcattaga actgggtttc 3300
cagaactcac attccactgc acagagtact ctcccaattc attcgatttt tatttagcgg 3360
aaggcatttt tagatgaatc tttgaagcat tagtaggagt tcagcgatga cgatgtcagg 3420
agaattttat tctaggatta ggaggtacca tgaacaaagg cacagagctg ggaaaaccag 3480
aggtggagga taaggagcac atgtccacag ttctttttct ttttttgaga tggagttttg 3540
ctcttgttgc ccaggctggg gtgcaatggt gcagtctcag ctcactgcaa cctccacctc 3600
ccaggttcaa gtgattctcc tgcctcagcc tcccaagaag ctgggattac aggcgcctgc 3660
caccacaccc ggctaatttt tgtattttta gtagagacgg ggtttcacca tgctggtcag 3720
gctggtcttg aactcctgac ctcctcagat ccactgattt gtccgccttg gtctcccaaa 3780
gtgctggaat tacagttgtg agccactgcg cccaggctcc acagttcttt atccaccttc 3840
tgaaatgtaa aatgttctga aaaccaaaag gtttttctgt gatttatttg atggtagcat 3900
ctgacgtgaa ctgacatgag attattttta atctagttgt gtgaatatgt gtattcatgt 3960
attttgctgc atagattaca catgcagctc cagattcctc caagcaggct ctctgattgc 4020
ccactactgt ctttctaaaa tccaaacaag ttctgaggtt caaaaccgat ttggccctaa 4080
ggctttgggt aaagggggtg aactctgttc tactctgact ggagtccaag atgcgtatat 4140
acagagatgt gggtggtgag gctgcaaagg taggttgagg taggggccaa ggaggagcat 4200
ggagtttgga cttgatccat gaggctgtgg ggagccagtg aaggttcttg agcaggtgtg 4260
tctgcctgag agcagctgga gcagacgaga gctaaaacca aacaaatcac ctgcagatcg 4320
tggctgctat agtttgtccc ctccaaatct catgtggaaa tgtggtcccc ggtgttggaa 4380
gtggggccta atgggaggtg tttgggtcgt gggggaggaa cccccatgaa aggcttggtg 4440
ccatccttgt gataatgact agattctccc tctatgattt cccttgaagg ctggttatta 4500
aaaagagctt ggtacctccc tctcttctct cttgcttctt ctcttgccat gtgatagatc 4560
tctgcacatg taggctcccc ttcaccttct gccatcaggg gaagcagctt aaggccctca 4620
ccagaagcag atgctggtgc catgcttctt ggagagcttg cagagccatg agctgaataa 4680
atcccttttc cttataaatt acccaccttc aggtattcct ttatatagca acacaaaagg 4740
actaagacag tggccctgac tcttctctct ctttaagaag tgttgtcttt gctcacttag 4800
tcatcccttc cgcctgcatt tgtagagcat ctggatggga gatttctaca accgtcactc 4860
ttgaccttcc cagcaggcct gtgtcatacg tactatggtc tccacaatac agcggagata 4920
tctgaggccc agagaggttg agtgacttgc tcatggccac acaaccagta aatattagag 4980
ctggaattca ggtccacggt ttcctggctc caaagccatg agtttttccc tcagtttatt 5040
ctgattgggg caggggggag gaggtggcct ttgggcaggg ccgccacggg taaccaggcc 5100
catagagagc tggctgcagg tacagaggaa aacctcttgt cgagtgcggc ccatggttcc 5160
catttttgcc tgactggcac atttgaaagt gttatataac tatgtgaata ataatagttg 5220
gcctatatgc gttttttaat ttgcttttgg gtccgcattt ggtaacttct ttatcactta 5280
ctacactctg ttgtgcctct tttgttgtaa ttctaatttg taagtagggg tgagataaag 5340
tacacatagg gtttgctggg tttcttccac gtcatcatgt tcctccttgc acggggccag 5400
gatccgtgga ggctgcccgg cacctacgtg gtggtgctga aggaggagac ccaccgctcg 5460
cagtcagagc gcactgcccg ccgcctgcag gcccaagctg cccgccgggg atacctcacc 5520
aagatcctgc atgtcttcca tcaccttctt cctggcttcc tggtgaagat gagtggcgac 5580
ctgctggagc tggtgagcca ccctttctgg gaatggcact tcctgatagg gctgggccac 5640
tgcatataca ctggggactg tgctcagtag gcctattgct gaaaatcaga aggggacagc 5700
aagtatgtat tgagcactta ttgggtacca agcacagtaa ccactggctt tctgtatgga 5760
attcccttta agcctggcca tgccccagtg gtatgtccat cttcatttga aagttcagag 5820
gggaccacac agacagctag gggtaggacc tggatcaaac tcagtggtct gcctgccagc 5880
cattcttatg ccaatgcatc tgctacctat ggaaaccttt agggacaagg ccctgggatg 5940
ttcaatggag cctgagtcat tttataaaaa agcatgactc aagggtctac aatttctttg 6000
aggctgctgc tatcagagta aagaccctac tttaggacag ggtggccctc ctccctcctg 6060
gatgtcacat ctttggtgga gaggcagaaa ggggactggg tattctcctc accctggccc 6120
taatgcttca aatcttaaaa aaaaaccttc ttgtttttgc ttctgcccca ccttctagcc 6180
cacctctttt cctggcctgt cacttgatga gagcgtgtgt cattttcaca ctgattctcc 6240
acatggcagg gggtgctttt cagcctcctg cagacagtga ggcccagggt cttgcccaag 6300
gtcacacagc atgtaatggg cagggtcaga gtctggactt gggtctccta gctgcactgt 6360
actgctgctc cacgggttaa tcagctcagc atcccgtggc tgaacagcga cctcatacca 6420
aggcctgtgg gaccatgaca gggattgata gggtccctgc cttaggaacc cgtagtctaa 6480
gtagaggaga ctgacaagtc aatgccttcc atcagtctgc tcaacacaca tttaccaagc 6540
gcctactgtg tgctgcagag gcgaagatga cacagcccag gcctttccct cgagcttaca 6600
gttcagaagg agagactgat cagtgaccgc cagccagtac agctgactat gggacaatgt 6660
gctcagcagt ggggcgagac gaagaaggta cccgtatagc accagatgac aggcacaagc 6720
cccacaggcc agggcagctg ctcagaggag agtaggccaa gcagaagcca agcggaaagc 6780
tgcaggcatt tgccattgag acctgggctt caaactgggc atcctaccag cctgggtttg 6840
agtcccaccc agccccttat tagttgttta accctgggca aatgccttca cctctctgag 6900
cctcattccc ctatctgtaa accagttata ataatgggaa cattcattta aggactaaat 6960
gaggttgtga agcattcagc agatgctagg tatagaaact cgccaaagtg ggggcaggtt 7020
aagaagcctc tggggatacc aaggcatcca gggactagtt gtggcaggaa gctgttacca 7080
cttaggtctg aagggtaagg agagggaata gttttccctc tgcccaattg gagctggtgg 7140
catggaggag aggctgcccg tggggagtca cctgagagtt caccgctgcc atgcgcaggg 7200
agtcaggagg tagggaggga gtggggcaga tgcacagttt tttgtttttg tttttgtttt 7260
tgagattctg ttgcccaggc tggagtgcag tggtgccatg tcagctcact gcaacctctg 7320
cctcccgggt tcaagcaatt ctcatgcctc agcctcctga gtagctggga ctacaggtgt 7380
gtgccaccat gcccagctaa tttttgtatt tttaatagag atggagtttc accatgttgg 7440
ccaggctggt ctcgaactct tgacctcagg tgatccccca cctcggcctc ccaaagtgct 7500
gggattacag gcatgagcca ccgcgcccag ctgcagatgc actcttgtcc ctctaactcc 7560
tgctggtgcc tcccattggc tgagcctaaa tggaggcttt gcaagggagc tggtgctgca 7620
gtttgcactg agcaggctgg agaaggctgg ggaatagact gggggacaaa ccgaattgcc 7680
agtgctgtta tgtcatgatt taggcatagt gtccagggcc tgagcttcac tccgtgtcca 7740
tcctgcccag agccttagca cagcctggct cccagacaag atgtcaagtc cagaatcctt 7800
cctaaaagga atcctttgtg ctaggccttg ttgcagggat atgggagtgc taggctccca 7860
gcctgatcaa tgagtgagaa aactcaggct cctagtctgt cctccggggc accaggaggg 7920
agtctgccgg gacaaggtgg gaggctgctg ggctgggata tggggacagg tgtgatcagg 7980
tgaggccagg ctgtggctgt gtttgctgct gtccagatgg cttaagcaga atcccccaac 8040
ctctctggct tctgcaggcc ctgaagttgc cccatgtcga ctacatcgag gaggactcct 8100
ctgtcttcgc ccagagcatc ccatggaacc tggagcgaat tactcctgca cggtaccggg 8160
cggatgaata ccagcccccc agtaagaccc cccatctgtg cgctgcccct tcacacctga 8220
gctgaatcca tttgctctgc tctggccttg cctccctgcc agtggtttcc acttcttggg 8280
gggctttggg actcagcacc tccactgacc cctttttttc tgtcccatcc ccaacccctg 8340
cagcccccac tgcctgcctt cctgtagctc cacaaatgca aaagtcttgc cttaaatgat 8400
cctcttttcc tccttgtctc ttgttttcct cttctctcca tttggaatgg cccagcaggc 8460
tgcacttacc ttagaaggag ggttcatctg atggtgactc tacctagggc ccctccccag 8520
gcctctataa ctcccagtgc cctgcagact ggaccagacc ccttaatggg acagacacaa 8580
cccggactgg gatgcccctg cctagcttcc tgttttgctg ctctccctgc ctccagctct 8640
gtttggcttt ctggatctcc ctgcatggcc cactttgtgt cttccctcta ggcctttcct 8700
tccactgttc cctctgcctg gtgtggcctg actgtgggag ggagggagga ggagtagcca 8760
tggaaaacag tctgcattct agcagggcct tgcaggtggc aattccttgc aggtggcaat 8820
tcagtcaggg aagactctag atgcacctgg cctgaggaga ggatgaaggg ttctagttgg 8880
actgtgttaa gtttgaggtg cccatggtgt gaggtctgca gctcagtgca gagacaatgc 8940
aatgtggtgg gtccgtgcaa catggtgcca ggacgcagag cttggggtga actcagcttc 9000
caccccttac cggttctcgt ggggtcttgg gaagccactt cgttctatta gtcttgtctt 9060
tcttgtctgt aaaatgggca cataaccctg tccctgtcct tctcacaggt tgctgtgaga 9120
ctccagtgag ttgaagggtg tgcagatgct tttggaagtg aaaagttggg ggcttctgtg 9180
tgactttgca tactgtatga ccttgcatat gtctgagttg ctgccattgc aacagatcag 9240
agctggtggg caggaggtgg agatagggtt tgtgcggggg acatcctctg gcaagggtgg 9300
cagcagcaga agcgaggggc ctggttggtc atgtgtgctg acctgacctg ggcagcctgt 9360
ggccagggag aggacagctc ctctgtagga ggagcctgtt cctttccaac caggtgggac 9420
ctcttctgtg gattcctgga gccccctgca ctccacattg gcgcctcagg gacctcccgg 9480
agcaggctaa tatcagagac tgagagggac actggcagag ggtcacagag gccccagtcc 9540
aggcagaaga ccaagaagat cttgccccct aagttagttt cctagcactg ctgtgacaaa 9600
ctaccacccc cttgttggaa caaattgatt ctctgcagta ctggaggcca gaagcctgaa 9660
tcagtgttgg caggaccacg ttctccccgg gagctccagg gagaagcttc tcttgtctcc 9720
tctgtgtccc aacagcggca gcacacccat cccagcctct gtcttcacac agccttctct 9780
gtgtctctct cctcttcatt gtctcataag gacactcgtt gttggatttg gggccaactg 9840
gatcatccag gatgatctca tgtggagaac cgtaaccaca tctgcaagga ccctttttcc 9900
aaataaggtc acagccacag gcggtgcggg ttaagatgtg agtgtaccct ttggcagcca 9960
ccattccctc ctctcccttg ggccagaagc agacgtgggg ccctttcctc cccataggat 10020
gcccatggat tgtccccctc cccacttccc ccgagtgtct gtgggaagtg gcaggaatgg 10080
caggcagggg tgtggaaccc cttctggagt cacatcaagg gcttggctgg aggatgtcct 10140
cctggagctg ttgcgctggc atggggcagg ctggctgggc ccagcagcag cctcttcatt 10200
catggggagg ccacaggcat gggccctgga gctggctgcc gccctcaaac ccagactctg 10260
cactcttaac tgtgtgaccc tgcacacatc actcaccctc tctgatcctc aggttcctag 10320
gttcctctgc aaaagcgagg gaatagtaag cctcgctctg gggggctgtt aggagggtta 10380
aatgagttat tgctatagca tgcatttctc tgtcaggtat tgagtgaggt gctgtgattt 10440
tagccctgca tttttctttt cttaccattc aacaataacg tcttgagcac ccactgtgtg 10500
ccaggcaccg tattaggtgc tggggataca aaggtgaatg aaatggacgt ggtctctttc 10560
cccaacagtg tatccagaag attaatccat tccttaaaca aatgctatcg acacaaatta 10620
gttccggata ggctgagagc tctgaaggag tgcaggcaac tgtgagcctg tgtatccggc 10680
agaaggatca ggaaaggctt cctggaggaa gcgctgttcc agccaagacc cacgggggca 10740
ttattaacca ggccaagggg acagtgtcca agcagaggaa tgaacatgga ctgaagctgt 10800
gaggcaggag ggagtgtagc ctgtacagaa gggactgagg ctggtgagac cagcagggcc 10860
tgggtgacct ccagggcaga tgtgaaagga agaactcggc cacagtctga gcttctcagg 10920
cgcatggcag ggctgcctgg tgagagctaa tgagctccct gctctggagg tatgcacgca 10980
ggactgggct cccacctgcc agaggccgca gagctttctg taccaaccta gaggctggaa 11040
gaggccactc caaggcctct ttgcccctga gagtggtggc ttttcttgag gccaccttgc 11100
cacactgtca cacggaacta gcagcctctg cctcacccag gggtttggag gatagagggg 11160
ggcctaggaa gggccccaga ggccctgtgt cctgtccgag ctgaaaccct ttccactgga 11220
aggaagccca aggatgttcc tgtgggggct ttggcttgtg ctttccctcc agctgtagag 11280
gccatggtgg ggctgtgggc cctgggtggg cgctccaggc ttacagcctc tctcctggca 11340
gtgtcttacc aagagctgcc ccttcgccag gcccgcctgc cctctgctgg ccatgcttgc 11400
agcctcctga ccctgtccca gcaggagagt gcgctggtgt cagcgggcag gaactgcctg 11460
tatttagaag ttgtggggct gcgctggggc cacaccccag gcccagggat gtgacctcac 11520
agtggtcaca tcatcttgca gcggacccca agtacagctc ctggagcaga tggtggtccc 11580
aagcacaggt gggaccagaa aggattgtca cctgggctaa ctcagctgcg gcctcagttc 11640
cctcctcaca cacgacgagc agcatggact ggaatcctgc ccagcaggcc tttggcttga 11700
tgtgcgttgt gtggcttatg tccaggtggg gaagcagctt ctgtgctgtc ttctagatga 11760
gcctgtatcc cctgggctgt ctgccaatgt atccagttgt accgtcagcc tggaagctct 11820
gagggagaac cttgggctgc ttcctaagca cctgtatccc ctgtagccag ctcggggcct 11880
ctgctaggag cagaccgagc atggcctatg ggcctggcac catctggcct ctgcccacct 11940
tgctggcctt gtcatgtgtc tgcccctccg acattccata gcccagttca atatctagtg 12000
gttcctctag ggtgaccagc accctttggt ctccacatgt cttcaggtcg gagctcacag 12060
cgctctcaac taccccttcc cagtgcagca ccgggcacgt ggtagatgcc tactgatgag 12120
tgaaagctcc taacacactc ggagagcaag gactctgcct catcccgcag cctgggagga 12180
caggcagact gccgaggacc tgcccagcat gctacagaag taaccgaagt gcgcatgggc 12240
actgatcagt ggagcgtcct gctgagactg gaggccatag ggcagggcga atagtgtctg 12300
tgcaggctgg ggactcacag ttcggactgg gcccagccct actgccacag tgggtgggtg 12360
ggaggacgta ggactgggag ctgaccttgc ctgaaattag tgtgggatct cagagcagcc 12420
actgaattgc tctgtagtgg gctaaatagt ggcccccaca gatacacaca cccagacaga 12480
gcctgtgagc cggaccttat ttggagaaaa ggtccttgta gatgtaatta agcatctcaa 12540
gatgacatca tctggattat gcggtgggct gtaagtccgg tgatgtgtct ttatgagcga 12600
aaggcggagg gagatttgag acacacagga ggggccactt ggagacagag gcagagattg 12660
gagaaatgtg accacaagcc agggagcatc agcagctacc agaagccgga agacgtgagg 12720
cagggttctc cctggagcct tcgttgctga gtctgggaat ttgttactga agccataaga 12780
agcgacgaca ctccctgagc ctcccgtact tgctcacctg tcctgagatg agaatctcta 12840
ctccgcagca tatttggagg atcactgccg gggacacaga ggtgctgttc agatagcact 12900
tcagaagact caggagaccc tggggcagga gcaggttgat tgacagccca gagggctacc 12960
atctggttcc acctgaggcc ctgcttctcc tggctgcagg ggttccaggg ccaggccatt 13020
tccgctggcg caggactctt ctagcagcaa cctgcctaag tcttcctttg gcctggctga 13080
gagtttctga gacccgcact ggagcggagg tgcttccttc cttgcttccc ttcttcctcc 13140
cccccgtctc cgcccagtgg gctggacctg ccttgcatct gtgagctctc cctactttct 13200
cctacacccc aatctttgtc ctgcacaggc aactccctca gtgagtctct tgcagctttt 13260
accccagtgc cggcttcttg gagaatccaa actgatccaa ttaggtatag ggtaggctct 13320
cggtgactgt tttctctgag gccgtgactc gtgtgaggcg gaagcagccc ctgtgagccc 13380
ttctggtagc ttgtggagtg cagaatgctt ggacctggag tcaggaggcc cagacacaca 13440
tcctgtccga gctgcagctt cctgtctcta aaatgagccg accagcgcag gcggccagac 13500
atcactgtta ttctttgagt ctttaaatca tgttgtcttt ctcgcagact cggtgagctg 13560
tgaaaagcta taataggggc tttattttac actatgatat tatttcttga acattcatat 13620
tattgttgga tattgatatt aatatgaagg agcaggatga cttgggtcct tcctggcagt 13680
agcattgcca gctgatggcc ttggacagtt atctgccccc tctaggcctc cctttccttg 13740
tctatgaaat atagaatagg atctagcgtg cgaggatttt tttggaggtt caatgagtga 13800
atatatttaa ggtgctttca ccagtgcctg ggatgtactc cacagtttct gtgtgttaac 13860
tacaaggttg acttcatgct cattccctcc tctcccacaa atgtcacctt ggaaagaagg 13920
aggcagcctg gtggaggtgt atctcctaga caccagcata cagagtgacc accgggaaat 13980
cgagggcagg gtcatggtca ccgacttcga gagtgtgccc gaggaggacg ggacccgctt 14040
ccacagacag gtaagcacgg ccctctggtg ggagggctgc ctctgcccat atccccatcc 14100
tggaggtggg tggagactcc cgtccaagag tgttgcagct gtactgctgg gctacagtcc 14160
ccagctgtca ctgtcccctc cctgccatca gttgtgggaa gggtgttcat ccatccagcc 14220
acttgctgat ttgttatggg gtgggggggt ctttcttatg tggtccttgt gttggctgag 14280
caggccagca agtgtgacag ccatggcacc cacctggcag gggtggtcag cggccgggat 14340
gccggcgtgg ccaagggcgc cggcctgcgt agcctgcgcg tgctcaactg ccaagggaag 14400
ggcacggtca gcggcaccct cataggtgag tgatggcccc agacagcgct ggtctctctc 14460
catctggacc tggcctggga agtggcttgg gctgggccca gggagagcta gtctcctaac 14520
caagaatgct gtggcagcct ctgccgcaga gccagagaac cagagtgcca aagctggcag 14580
ggtccccagt gaccacgagt gcagatgaag aaacccaggc cccaagaggg ttacgcaggt 14640
agcccaagga gtgcagactt gaccctgggt cagtgacctt tccacaattc cacactgctc 14700
cccttttcaa acctggtgac atctttgtgt cttttgtgat gttatcttca atgtggaggg 14760
actcgaggtg atctaagcaa acttcttcta tcttctgctt gcatacttct gagaccagag 14820
gactcactta cttgcatgac tggccctgca ggtcacactg gccaggcaga tgtggtggag 14880
gaactggcag aggacttttt ctagactatg actctgttta gtccatctgg cggcccccct 14940
gtgaagtccc gctgagaact aggactccgg gggcctgtgg acagagaaga gggagggtgc 15000
tctcccttac tgacttcctc ctgtggccac tgagcaaggc ctctgtacaa catgccctgg 15060
ggctggcctt gccatagctg ctgaacagtt gatgaaacca gtccagagag gggaggtgac 15120
tgcccagggt cacacagctc aagctgatga tgtcactggg aaaggtgcca gctctgggca 15180
gcagcttgac ttccactgca ggccccaggc cccagggtca aacactggct ctggagccag 15240
cggaagcagc ccatgggtcc gtttgaaagg ctgaggaggc ccaggagtct tccctgtgtc 15300
tgccctgaga ctttcctaca gagtacaggt tttgatgttc agttttaaag gcaagaatca 15360
ataaccttcg gccccatcag gtgacccctt gtgcctgtcc caccccttta ttgactgacc 15420
tcggctcagt caggccagtt cctgaaggtc agtgtgtgga ggggaggctg ttctttccca 15480
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ctttggcatc ccagtcagtg tatgggaagc ccttactgca tgacctggca cggggcaggg 15600
gctcaacagt cactactgcc ttccttggcg ctgccatttc ctcctctgta agcaggtgat 15660
tgtgtgtcga gtctgagcac acagataagc acacagcagg tgcttaataa ctagcagctg 15720
caggctgggt gtggtggctc acgcctgtaa tcccagcact ttgggaggcc gaggtgggca 15780
gatcacctga ggttaggagt tcgagaccag cctggccaac atggtgaaac cccatctcta 15840
ctaaaaatac aaaaattagc caggcgtggt ggtgggtgcc tgtaattcca gctacttggg 15900
ggctgaggca ggagaatcac ttgaacccag gaggtggagg ttgcagtgag ccgagattgt 15960
gccactgcaa tccaacctgg gtgacacagc aagactccat ctcaaaaata aataaataaa 16020
tacataacca gcagctgtaa atgtggctgt tgttcttcac ctccacactc agtgccactc 16080
cgctcccttc ctccgtggtg tgagggtcct cactagctgt cttctaggag gagcatggct 16140
gtgagattcc agctccatcc ttggccacag ctcctggaga catctcagag accaggatct 16200
ggaaggctcc cacaccccat ttgacagggg agaaactgtc agttccaggt ccccttgcac 16260
atcagggcca gagctgagtt aggctcccag tctccaggcc actgggccag agctcacagg 16320
ctggcaaagg gttagaactg ttactggtgg ctgggtgtgg tggctcacac gtgtaatctt 16380
agcactttgg gaggctgagg ctggcagatc acgaggtcag gagatcgaga ccatcctggt 16440
gaaaccccgt ctctactaaa actacaaaaa attagccagg tgtggtggcg ggggcctgta 16500
gttccagcta ctcaggaggc tgaggcagga gaatggcgtg aacccaggag gcggagcttg 16560
cagtgagtcg agatctcgcc actgcactcc agcctgggca agagagcgag actccgtctc 16620
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa gagctgtcac tggtgacagt agcatgaggt agatcatggt 16680
ctacaccaaa atgggggatg tagtgccact gaggccagag ggaaccacac cctcaaaggt 16740
ggggagttat ggtatggggg ggtcctgggc gtggagtctt ttaattcttc agacaatcct 16800
gggagcagct gtccctgttt catagagagt ggggtcacac agctggtgag tgggcagcca 16860
agactctgtt caagtttgtg tgggttcaac acttgtggcc acggtggagg ggcatctgag 16920
ccaggcctca gagagtggca gggagaagtt gggtggggca gggcgccctt ctcattcctc 16980
tgaggctcat cctctcggtg cctccatttc ctggaaaggg ataataaggt tattgtgagg 17040
atcccctgag ttcatatatt cagacactta gagccaggca cacagaaggg ccggggtcgg 17100
ctagtttgat tgctgaggta attgctaata tcttccagtt tctattggtc aaggttccgc 17160
agagaagcag agccagtagg atgtatatat taagagtttc aaggaattgg ctcatgtgac 17220
cctgggggct ggcaagtctg aaatccacag ggcaggccag gcaattcctg cagaatttga 17280
tgttgcagta ttaagtccta aggcaggcct ggagtagaat tccttcttcc ctgggaggcc 17340
tcagtgtgtt ctctgcaggc cttcaactga ttagatgagg cccacccacg ttacggagag 17400
taacctgcct tactcagtct cctgatttaa atgttagtca catctaaaaa gtattttcgc 17460
agcagcattt ccactggctt ctgaccaaac atcaggtcac caagttgatc cccaaaatta 17520
accatcactc tgtgcctgta agggaggggc tgggaatggg gaacagttct ccccaggggg 17580
tgacctaggt ttgttcctcc caggcctgga gtttattcgg aaaagccagc tggtccagcc 17640
cgtggggcca ctggttgtgc tgctgcccct ggcgggtggg tacagccggg tcttcaacgc 17700
cgcctgccag cgcctggcga gggctggggt cgtgctggtc accgctgccg gcaacttccg 17760
ggacgatgcc tgcctctact ccccagcctc ggctcccgag gtaggtgctg aagctgctgc 17820
cccaagacgg ggagcgaagg gcaggcgggc ctcgtgggct tcttgcagca cgttcctgga 17880
ggctgaaccc ttctggcttt ggaaggagtc gtcagagccc ccccgccatg cgggaggctg 17940
gggaggaatg gcctcgagcc tccatcatcc cagagtctga acagcagtga ccccgccacg 18000
cccccacgta gcggcgccca cgaagccacg cccccacacc ccgtcctggc cactctccct 18060
cttgagggtc tcctggtagc cgccccctcc ccatctccct ccccaggccc tgcgtcctct 18120
gcccaatagt cttagggccc gcccaatatt cttagggccc gcccaatagt cttaggccct 18180
ccccactatc cagatccctc cgcagctgca tgactgacca cttgagcgag gctaatgtga 18240
atgggaacag ttgagggctc agacctcacc cgagggacat ccagagagtg tgccgcaggg 18300
ccgtgcagtg tggctgccgg gacacagaca cggagcctcg gccctgagga gctggggggc 18360
agtgaccgtc cctcctgtga ccaccactcc tccagtgtca ggtcactgcg ggtatctagg 18420
ggagagaatc ttgttccact tcaagtctgg aacttcaagt ctgtgtgtgt gcgcgcgcgc 18480
gttgtgggtg gggattgcgg agcagaagca tacctgacag cggtaaccca gatcctccct 18540
ggcctcggag gcttccctgg cagcccaatt taaaggcatc aagcaaacaa agcccaacac 18600
atctctgcct tgccctctca gtctcccccc gtggcactta gagccacctg atacaccgag 18660
tagtttccta tctccctcac tagaatgtaa actccacagg ggcattggga atgctgcctg 18720
gctatggtag ggacagaggg gagcaccagg gcggggcagg ggtgccagag ttctgcctgg 18780
ggagtcagat tttccttagg aggggacatt tgaatgggac ccaaacaggt gtatagcagt 18840
tgttcagccc agctggcaag gcctcagttt gcttctgcaa cccctctctt gggctccttt 18900
ctgtgccacc tacctcctca cctttccagg tcatcacagt tggggccacc aatgcccagg 18960
accagccggt gaccctgggg actttgggga ccaactttgg ccgctgtgtg gacctctttg 19020
ccccagggga ggacatcatt ggtgcctcca gcgactgcag cacctgcttt gtgtcacgga 19080
gtgggacatc gcaggctgct gcccacgtgg ctggtaagtc accaccccac tgccttggcc 19140
accgtgatgc taacagccct ttggcggtca gggtctgtgc caggacctcc agtgccaggc 19200
tctgtgcagg gggaccagag atgagacagg cctgatggtg ccttcatgga cactcagtct 19260
gatgagggag acgagtgcac agtgggaaca cgaggttagg gctgtattag agggagccca 19320
gaggaggcac ctgcccagcc cgagggtcag agaaggcttc ttggacaagg gacatttgat 19380
ctggagcttg atggatgaat aggagtccac ctggccgata agacagcaac taccaaggct 19440
tagaggtgtg acggaaggct gtcttacctc actgtgtgag ggactgcagg cggcttacct 19500
tctagaagag agcttggtgt ctctggtgtg tgcacgtgtt tttgtgtgta tgtgtgtgcg 19560
tgtgtgcact ggcaggagtc ccctgctggg gcaggagggt caggccgtca ccatctttca 19620
ccattcaccc ctgtaccagg cattgcagcc atgatgctgt ctgccgagcc ggagctcact 19680
ctggccgagt tgaggcagag actgatccac ttctctgcca aagatgtcat caatgaggcc 19740
tggttccctg aggaccagcg ggtactgacc cccaacctgg tggccgccct gccccccagc 19800
acccacaggg caggtaagca ggacggcagg gtgggcgagg ccaggctggg gcttgggagg 19860
tctgtgtgac cttgacagtc tctcccctct cccttgtctg tgtaaggagg atgacaccac 19920
cttaaatagg attaaatgag aagggggctc tgaaagggct ttgcaatatt ttcataacat 19980
gtttttatag agacagttga gtatgttctt taagccctcc tctctcctac catgaactaa 20040
agatttttgt ggaggtcccc tcactcccag caccccctcc tcatcccagg cactttttgc 20100
aggttggcag ctgttttgca ggactgtgtg gtcagcacac tcgggtccta cacggatggc 20160
cacagccgta gcccgctgcg cccaggatga ggagctgctg agctgctcca gtttctccag 20220
gagtgggaag cggcggggcg agcgcatcga ggtggctacc cctccttcgt gtgtgtgtgt 20280
gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtga gtgctgggcc ctgagggacc 20340
cgcagcaagc ccctccatcc tcgacactcc agctcttctg taagcttaca gggctggcca 20400
gagcaggagt ggggcactcc tcatctcacg ctgctggggg ccgctggaga gagccacagt 20460
gagaaggatt tcctagaggc tgcaggacag tgctggatgg attttcaatg ggtgctggat 20520
gggtgtcagc gtgagggtca gggatctgct actctggact cagccatctc taggcccttc 20580
tcactcaggt gctccatggt tctgggagct gagaaatctc aaaccagcaa aaaaggggaa 20640
ttgatgttga tgctacaggg tagtgcacag atgccatctg gtcgcagcgt tttggtggaa 20700
gggcagtgcc cagtcaggag agtgaggagg ggcaggcatt tctggcctgg gagatggtgt 20760
cttaatgctt gtgtgggagg cagagtgggt ggggtggagc ccgctgggtc cttgctttgg 20820
cctcttggat ttccctgtat ctccattttg aaaccactct gtgtttggaa gaacttttga 20880
gtattcagag ctgcccattg gcagaacagt ctactttggg caggagcgag ctccttgtcc 20940
ccagaaggct aggggcaggg tctgactggc ccctggtagg gacactgacg agggtgcttg 21000
agttgatcct gtctagtccc tttctctgtt ttcaaagccc attctaaagc agattcctat 21060
ttctgtcttt gactctcagg cccaaggggg caagcgggtc tgccgggccc acaacgcttt 21120
tgggggtgag ggtgtctacg ccattgccag gtgctgcctg ctaccccagg tcaactgcag 21180
cgtccacaca gctccaccag ctggggccag catggggacc cgtgtccact gccatcagca 21240
gggccacgtc ctcacaggta ggaggctggg cctgccctgg ggtgaggaga gttccctttc 21300
tccttatgca cccactgccc tcgaggcttg gtcctcatga gtgtgatcca tgagactgga 21360
acccgacttt ccattccata ctctggttct gtcacttcca tgccctttga ccctgggcag 21420
gtgaccttac ttctcgtctc agcttcctcc tccataagag ggaaaaaggt atcacctgcc 21480
tcattgtgtt gcgaggagat agggcactgg cctggagcat ggcaggtgct ttgcctaagg 21540
tggtgcagtt caggagaggc agctccagag agaggacccc ggctggggct gaaaggaggg 21600
cagacctcgg tttgaatttc actctgccac tcgatagctc tgtgacctga gcaagttact 21660
taacgtctct gtatgaggaa atgatgggtg ctaagcactt agcttaatgc ttggacaata 21720
tagattctag ctatcgttac tattattgtc atcacctgtt gctttaaaat ccagtctctg 21780
gtataggcaa ctattgatag gctaccctgt gtcgaaaaca tgtccaggca ggtagcagga 21840
agtcacagat ggggactctt ggggcatcaa gggctggcgc cccaaggctg agctgttctg 21900
gttgggtgga gcgtgagagg tctgggaaga cagtggagct ccagcctgga ataagaggct 21960
cagagttgat tctcgtctga gcatgtccag gggagccact gagggtttgg gaacaggaag 22020
gtgagggtga gaacctaact ctgggcacag caggctggca tgtgggatgg atgttcagga 22080
aagatgagcg tagtcaggtg gctggtgccc ttgtccaggg gagaggctcc atccggtccg 22140
gggatcctgg cttggaggga agtccgccat gctgtaatca cactcccctt tggaagtgct 22200
cagccgatga actcacaggc acatgtcagt ttgaagtcat ggaatctgac tctatgaggc 22260
acacctcaaa gagccccatt ttgcagctaa gggaactgca ggctggacat gctgagtgac 22320
tgccctgagc ccttgcatct aggacataga gaatgctagt aaccacgacc ctaccatgtt 22380
cagagcacat gccaggctcc atgctggcgc ttcacacgtg tcatcttcac agtgtccctg 22440
tgagtaggtg cggtttctct ttccatctta caaatgagta aacagagcct cagtgtagct 22500
gagtaataac tattttcggt ttcttagcca atgcgtgtgt ctgactccta agcccatgga 22560
gggcatcccc aggtggtcca gacagacccc agcttaccgt tgaacttctg cctgctggct 22620
gcatggggag tttgggggaa gtttgagcat ctcaggccat agagcccctg cttcactgtc 22680
tccatctctg ggtggagaga tgatgttttt cctgagaaac taaggctcag gttgaatggc 22740
tctcccatgg gcacacagct ggtcaggagt ggagttgaga acacaggagt cctgatgctc 22800
aggccagcat ctcttatctt ctttgagttg tttctgggtt tcctagctcc tgcctcacac 22860
tttaaagaga gaaggtctga tggggatggg cactggagac ggagcattcc agcatttcac 22920
tatctgagct ggccttcctc tgacccaggc tgcagctccc actgggaggt ggaggacctt 22980
ggcacccaca agccgcctgt gctgaggcca cgaggtcagc ccaaccagtg tgtgggccac 23040
agggaggcca gcatccacgc ttcctgctgc catgccccag gtctggaatg caaagtcaag 23100
gagcatggaa tcccggcccc tcaggagcag gtgaggaggc ctgtgaggac gggtgggtgg 23160
ggtgccgtgg ggtggcgtga gtctctcctg tgcagctttt ctgggtcagt ttgtgccacc 23220
accataccgc catgcatcag ggtggcggtt tgccgggtag atgctgtggg cagcttccgc 23280
cattgtgtgg acagtgtgtg tatgtatctg tgtgtggctg ggtctgtttt tgcttttgtc 23340
cagatcagta aggtttgttg cctgagtacc ccactccact tggtgtagaa tgtgcataaa 23400
tttgccataa agaaatacaa tatgcatgca tttattgatt gatctatttt tttctaagat 23460
ggggtcttgc tatgttgtcc aggctggtct caaattcctg ggctcaagcg atcctctggc 23520
ctcagcctcc ccaaatgttg ggattacagg catgagccac tgcacctggc ctctctgatc 23580
tatttaacaa acctgctggg aggttctcag ggtcaggagc agcactgggc tgtgaggaca 23640
cagagctcac tcagccatga cccagagggg gtgcctgagc tgcatgccga aggttgttag 23700
catgaccagc aaggcaagaa aaggccctgc ggagattagc gaggcacgtg ccaagccctg 23760
gaatgtgaga gccaggcctt ctagaaacct gggtgtggac atgaccaaca gttgctctgg 23820
aactctcctt tttaaaagcc agtgggagct tcttcaaagg cagccctaag gagtccgctc 23880
ttaaatgaac tcagactcgg ttttaaaatg caagtctgtg ttgattctgg tctggatggt 23940
gcattcctcc atagcaaaag acagtgttgt tcttggatcc actttccctg ggtgcactga 24000
gggctgcgag gttccaggtg ctcttccggg cactggggag ggatacaggc tggacagaca 24060
tgttgttctc cctcctggag catctgtttt agtgggggag gacagaaaac aaaccagtaa 24120
attacagagt actgaaaaga tgcgatggag aaaactatag caaggaaggg aatggggtgg 24180
gggagaagtc aggagaggtc ttgctgagaa ggtggaggaa atgggccatc aggcagggaa 24240
tgtgttccag gcagagcaaa ggccccgggg tggggatgcg cccgggagta ccaggaaacc 24300
agaggtggga gtagttacga ggtgggggat gcctcagagg ggacagggcc aagtcaggtg 24360
agaccgaggg ccacagtcag gagtcagctg gggccacaca ggggtccagc ctagggggag 24420
tgcgatctgg cctggatctg aacctctcac tgtggcctag ctgctgagct gagaagagat 24480
gacaagggcc ttgggcagaa gcagggagac tggagggagg cggtggaggg tccaggcgtt 24540
ggggcggggc tcaggctgga gtctgaaggg agcctgcagg cctggtgggt ggacatggat 24600
gggagaaggg gaggacggca ccaaggctcg ggcccctgga cagatgcagt tgccattaag 24660
tgggatgggg caggctgtgg ggccgtcagt ttcagaagga agatgagttt ggcattggca 24720
tggtaggcat ctgtctgtcc ccgcgcccct caaaccaggc atgaagcagg agctcacgtg 24780
tttggtcatc gatggtgcag aaccgccggg gcgggaggtg cggggtggga gatatgtgtt 24840
tgtgtctcaa atgggctctg agccagggag ggctatctgc cccttggcct cacagcggga 24900
tgttggaggg agaaatgaag tgtaggtggg ggtcccgggc catgctggac tgtgctttct 24960
tctcctcggc tctggcaggt tatcgtggcc tgtgaggacg gctggaccct gaccggctgc 25020
agtgccctcc ctgggacctc ccatgtcctg ggggcctacg ctgtagacaa cacgtgtgtg 25080
gtcaggagcc gggacgtcag caccacaggc agcaccagca aagaagccgt ggcagccgtt 25140
gccatctgct gccggagccg gcacctggtg caggcctccc aggagctcca gtgacagccc 25200
catcccagga tggtgcctgg gtagggtcag gggctggggc tgagctttaa aatggttcca 25260
acttgtccct ccctcagccc tccatggcct agcccgaggg gacggggatg cttccacctt 25320
cctggagctg ctggcctggc ccttgagtgg ggcaggctcc ttgcccagaa ctcactctgg 25380
atgccccctc ccctggtgga ggtgccagga agctccctcc ctcactgtgg ggcatttcac 25440
cattgaaaca ggttgagctg tgcttggtgc tgccagctgc tcccaacatg ccaacatctg 25500
tgggcagaac ggcttttatt gagctcttgt tcggtgccag gcattcagtc ctcacgtctc 25560
caccaaggag gcaggattct tcccatgggt aggggaggag gtggtagggg cagcagggac 25620
aagcatcgtc agggggcgag tgtgaaagat gctgatggcc ctcatctcca gctcactgtg 25680
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cagaggctgg agatcaacgc gtccctggtg gtcatgggct gtgccttgtt ttcctgagtg 25800
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ctccactacc cagcagacta cacatttgca cccctgcttt acaggggaag caacctggaa 25980
ccagaggagg catgcctgcc aagctcacac agcaggaact gagccagaaa cccagattgg 26040
gctgcctctg aagccaagcc tcttcttact ttaccccgca ggtaacagtg aggctgggaa 26100
ggggaacaca gaccaggaag ctcagtgagt gatggtggaa cgatgcctgc aggcacggaa 26160
cttttcccgt atcatctagg cctgattcac tgtggcctga tggagatgct tctaagggat 26220
ggtgggagga gagggacaac tgtccctcct tgagcaccag ccccacccaa gcaagcagac 26280
atttatcttt tgggtctgtc ctctctgttg cctttttaca gccagctttt ctagacctgt 26340
tttgcttttg taacttgaag atatttattc tgggttttgt agcattttta ttaatatagt 26400
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acaaaaaaaa tttttttaat taggtaggtg tggtagcaca tgcctgtggt cccagatact 27000
c 27001
<210> 1545
<211> 3891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1545
ttatgagaga aaggcagagg gagatttgac acacacagga ggggccacgt ggagacagag 60
gtggagattg gagaaatgtg gccacaagcc agggaacacc agcagccacc agaagccgga 120
agacgtgagg cagggttctt cccagagcct tcgctgctga gtctgggaat ttgttaccga 180
agccataaga agtgggtaca cgccctgagc ctcccacact tgctcacctg tcctgagatg 240
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tttcttcctc tctcccttct ccatccagca ggctggacct gcctggcatc tgtgagctct 600
ccctactttc tcctataccc taacctttgt cctgcatggg cgactccccc agtgagtctc 660
ttgcagcttt taccccagtg cctgcttctt ggagaatcca aactgatcca gttagggatg 720
ataaagtgta gggtaggtgc tcggtgactg ttttctctga ggttgtgact cgtgtgaggc 780
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gccaggaggc ccagacatac atcctgtccg agctgcagct tcctgtctct aaaatgagcc 900
ggccagcgca ggtggccaga catcactgtt attctccttt gagtctttaa atcttgttgt 960
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tggtcccctc tgccctgaag gaggaaggca ggaggggaaa aggatgggtg ttgacccaga 480
aagcacttgt ggtggagggg aggccccaga agaggcttct gacttaccct gattgctggt 540
acctctcagg ggagctggct gcttatttgc tggccagggt gtgggggaac ccatttgaga 600
agagggagaa ggtgacacaa ttcctttggg caacttatgg gaggggtaat tggtgaggga 660
tgaaagccct gccaagtggc aggaggccca gctggggctg cccctcataa gagtgcagtg 720
gaggatatgg gatgagaagt gactgcccct ctggttccat ctgtcgcaga gcccagggtg 780
cttccttcct cccccacctc cctcagaaca cacccactgc atgctggaca gcagccccct 840
tcctgggcct ggggacatcc atgtccctct gtgcacaggc ttcatcattc tctgggtgca 900
cggtaacgac cccggtaggt gagaggccaa ggtcccaaag gggagcagca gggaaagtta 960
gctcccatct attcttgctc caggggaggc ctttgatgag gaagctgcca aaagcacatt 1020
gcaaatacaa ttccaattac aggcaacagg aaggagaacc acctctgcca cctctgtcag 1080
caaaccatga gctcctactc tgtgctgcga tggcgggctc gatggggata actctgacct 1140
tacctcatgg agtcactgtc aacccactgg ttgcactgtc tttgtgcact ggctctctgg 1200
agtgaggtct ttgcaaacaa agtggaaaga gcatcaactt tggactccag cacctagatt 1260
cagagcaggc catttcactc ggaatctgct gtgcatctgc aagggaggat cataaattcg 1320
cctttgtttc ttcccagtat cgacagccct tccagaaaga gcaagcctca tgtcatgcca 1380
catgtacaat ctgaggccag gagctctctt tccccttttc atcctcctgc ctggtacaca 1440
ataggtgttt actggatgct tgtccagttg atttcttgaa catggtgtgt aaaaggaatc 1500
tttgcaaatt gaatcttctg gaaagctgag cttgtgccta ccatagaatt ctgaatgtac 1560
ctatatgacg tctttgcaaa cttaaaacct gaatctttgt agtataaatc ccttgaaatg 1620
catgtaggct ggacatcaaa agcaagcaat ctcttcaagg agcagctagt tggtaaggtc 1680
agtgtgcagg gtgcataaag ggcagaggcc ggagggggtc caggctaagt ttagaaggct 1740
gccaggttaa ggccagtgga aagaattcgg tgggcagcga ggagtccaca gtaggattga 1800
ttcagaagtc tcactggtca gcaggagaca aggtggaccc aggaaacact gaaaaggtgg 1860
gcccggcaga acttggagtc tggcatccca cgcagggtga gaggcgggag aggaggagcc 1920
cctagggcgc cggcctgcct tccagcccag ttaggatttg ggagtttttt cttccctctg 1980
cgcgtaatct gacgctgttt ggggagggcg aggccgaaac ctgatcctcc agtccggggg 2040
ttccgttaat gtttaatcag ataggatcgt ccgatggggc tctggtggcg tgatctgcgc 2100
gccccaggcg tcaagcaccc acaccctaga aggtttccgc agcgacgtcg aggcgctcat 2160
ggttgcaggc gggcgccgcc gttcagttca gggtctgagc ctggaggagt gagccaggca 2220
gtgagactgg ctcgggcggg ccgggacgcg tcgttgcagc agcggctccc agctcccagc 2280
caggattccg cgcgcccctt cacgcgccct gctcctgaac ttcagctcct gcacagtcct 2340
ccccaccgca aggctcaagg cgccgccggc gtggaccgcg cacggcctct aggtctcctc 2400
gccaggacag caacctctcc cctggccctc atgggcaccg tcagctccag gcggtcctgg 2460
tggccgctgc cactgctgct gctgctgctg ctgctcctgg gtcccgcggg cgcccgtgcg 2520
caggaggacg aggacggcga ctacgaggag ctggtgctag ccttgcgttc cgaggaggac 2580
ggcctggccg aagcacccga gcacggaacc acagccacct tccaccgctg cgccaaggtg 2640
cgggtgtagg gatgggaggc cggggcgaac ccgcagccgg gacggtgcgg tgctgtttcc 2700
tctcgggcct cagtttcccc ccatgtaaga gaggaagtgg agtgcaggtc gccgagggct 2760
cttcgcttgg cacgatcttg gggactgcag gcaaggcggc gggggaggac gggtagtggg 2820
gagcacggtg gagagcgggg acggccggct ctttggggac ttgctggggc gtgcggctgc 2880
gctattcagt gggaaggttc gcggggttgg gagacccgga ggccgaggaa gggcgagcag 2940
agcactgcca ggatatcctg cccagatttc ccagtttctg cctcgccgcg gcacaggtgg 3000
gtgaaggagt gaatgcctgg aacgtactgg gaactgcacc aggcacagag aaagcgggct 3060
tgccattata gtgggttccg atttggtttg gaaaacatgg gcagcggagg gtggagggcc 3120
tggagagaag gccctacccg agacaggggc ggggtgggaa ggacggcaga tgctgggagc 3180
acgaggcaat ttctttatga cacagaactc atgctctagt attccatctg tttcagccga 3240
agaaaagaac cagctgaagg ggcaggggag aaggggcgga ggtattctcg aggcccattg 3300
gcgtccttta ggactcaggc agggaagggc ccttggtgct ctggagccgg aggtggtgcg 3360
cctggtactg ggaccccgga gctgagcccg gcgcctcagc ccacctggct gtctgccgac 3420
cgtgtgcggg gcgagtttgc tcaacaactc tgccagcttc tggccctcag gctgtgggaa 3480
gcttcttccc ggggcgagac cactagcttt ttctaagtat taccagccca ggacttggct 3540
gaggttctgt gtcccccagc ttggagtcag atgtggggtt gaatcttggc ttcctctcac 3600
tagctgtggt gcttgacaag tcacttatcc ttgagcctcc attgcctaat ctttaaaagg 3660
gaggtgacaa tcgtccctac ggctcagtgg cagcagatgg ggagatgaag ggaaagttct 3720
gttgaccatg agtgaactta caatgcaagc cccgggggga tcacttgcag ttttgtccct 3780
gtctgcagtg tgacctgttg gtgacattgt ctttgctcca aaccacagct cctggggcag 3840
aggggaaaat tctgccactc acagctgcct gcccacgctt ctgtctgagt gtgctgggtg 3900
gcaggatggc aagtccttac tcagctcagt atagccctct tccttgttcc ctgagccttt 3960
gactttctcg agggatgttg tggggttgtg gccaggataa gaaagggcat ttcaagttac 4020
cactgctcca aaacaactgt tctggaaata gtgagtaccc catcctgaga ggtgagtaag 4080
cagaggctgt atgaccacct gaaccaagcc cttgaggatg tttcttctct ggtggaagtt 4140
tggaacagga gcctcctcaa gttcatttat tcattcattc aatggttatt ttgtgggaat 4200
cgaatttaga atgaaaatat tttttggcaa gcagaaaata atttttagac caatcctttt 4260
cttttagtca tgagaaactg aggcccagag agaggaggtc accccaggtg cattagaact 4320
gggtttccag aactgacact ccactgcaca gagtactctc ccaattcatt caatttttat 4380
ttagcggaag gcattttcag atgggtcttt gaagcattag taggagttca gcgatgatgg 4440
tgtcatgaga attttattct aggattagga ggtaccatga acaaagatac agagctggga 4500
aaaccagagg tggaagataa ggagcacatg tccacagttc tttttctttt ttttttgaga 4560
tggagtttcg ctcttgttgc ccaggctgga gtgcaatggt gcagtctcag ctcactgcaa 4620
catctgtctc ccgggttcaa gtggttctcc tgcctcagcc tcccaagaag ctgggattac 4680
aggtacctgc caccacgccc ggctaatttt tgtattttta gtagagaagg ggtttcacca 4740
cgttggccag gctagtcgca aactcctgac ctcctcagtg gatccgagga ggtgatcctc 4800
ccgcctcagc ctcccaaagt gctcgaatta caggtgtgag ccaccacgcc tggcctccac 4860
agttctttat ccaccgtctg aaatgtaaaa tgttacgaaa accaaaagtt ttttttgtga 4920
tttatttgat ggtagcacct gacgtgaact gacatgagat tatttttaat ttagttgtgt 4980
gaatatgcat attcatatat tttgctgcat agattacagt atgcagctcc agattcttcc 5040
aagcagactc tgattgccca ttactgcctt tctaaaatcc aaacaagttc tgaggttcaa 5100
aaccgttttg gccctaaggc tttgggtaaa gggggtggac tctgttctac tctgactgga 5160
gtccaagatg catatataca gagatatggg tgatggggct gcaaggtagg ttgaggtagg 5220
ggccaaggag gagcatggag tttggacttg attcatgagg ctgtggggag ccagtgaagg 5280
ttcttaagca ggtatgtctg cctgagagca gttggagcag acaagagcta aaaaccaaac 5340
aaatcaccat agatagtggc tgctataatt tgtttgtccc ctccaaatct catgtggaaa 5400
tttggtcctc agtgttggaa gtggggccta atgggaggtg tttgggtcat gggggaggaa 5460
cccctgtgaa aggcttggtg ccgtccttgt gataatgagt aagttctccc gctatgattt 5520
cccttgaagg ctgattatta aaaagagctt ggcacctccc tctcttctct cttgcttctt 5580
ctcttgccat gtgattgatc tctgcacatg taggctcccc ttcaccttct gccatcagtg 5640
aaagcagctt aaggccctca ccagaagcag atgctggtgc catgcttcct ggagagcttg 5700
cagaatcatg agctgaataa atcccttttc cttgtaaatt actcaccttc aggtattcct 5760
ttatatagca acacaaaagg actaagacag tggccttgac ttttctctct ctttaagaag 5820
tgttgccttt gctcacttag tcatcccttc tgcctgcatt tgtagagcat ctggatggga 5880
gatttatata accgtcactc ttgactttcc cagcaggcct atgtcatagg tactgtggtc 5940
tctacaatac agcagaggta tctgaggctc cgagaggttg agtgacttgc tcatggctgc 6000
acaaccagta aatattggag ctggaattca ggtccacggt ttcctggctc caaagcccat 6060
gattttttcc ctcaatttat tctgactggg gcatggggga gggggtggcc tttgggcagg 6120
gccaccagga gcgaccaggc ccgtagagag ctgggtgcag gtacagagga aaacctgttg 6180
tcgagtgtgg cccgtagttc ccatttttgc ctgaatggca catttgaaag tgttatataa 6240
ccatgtgaat aataatagtt ggcctatatg agttctttaa tttgcttttt ggtccgcatt 6300
tggtaacttc tttatcatct actatactct gttgtgtctc ttttgttgta atttgtaagt 6360
aggggtgaga taaagtacac ctagggtttg ctgggtttct tccatgtcat catgttcctc 6420
cttgcatggg gccaggatcc gtggaggttg cctggcacct acgtggtggt gctgaaggag 6480
gagacccacc tctcgcagtc agagcgcact gcccgccgcc tgcaggccca ggctgcccgc 6540
cggggatacc tcaccaagat cctgcatgtc ttccatggcc ttcttcctgg cttcctggtg 6600
aagatgagtg gcgacctgct ggagctggtg agccaccctt tttgggaatg gcacttcctg 6660
atagggctgg gccactgcat atacactggg gactgtgctt agtaggccca ttgctgaaaa 6720
tcagaagggg acagcaagta tgtattgagc acttatcggg taccaagcac agtaactact 6780
ggctttctgt atagaattcc ctttaagcct ggccatgccc cagtggtacg tctatcttca 6840
tttgaaagac gaggagactg aagttcagag gggaccacac agacagctag gggtagagcc 6900
tggatcaaac ccattggtct gcctgccagc cattcttgtg ccaatgcatc tgctgcctac 6960
ggaaacctgt agggacaagg ccctgggatg ttcagtggag cctgagtcat tttataaaaa 7020
agcatgactc tagggtccaa aattcctttg aagctgttgc tatccagagt gaagtccctt 7080
ctttaggaca gggtggccct cctccctcct ggatgtcaca tcttcggtgg aggggcagaa 7140
aggggactgg gtattctcct caccctggcc ctagtgcttc aaatcttaaa aaaacgtttt 7200
tatttgtgct tctgcaccac cttctagccc acctcgtttc ctggcctcta acttgatgag 7260
agcgtgtgtc attttcacac tgattctcca catggcaggc ggtgcttctt agcctcctgc 7320
agacagtgag gccccacggt cttgtccaag gtcacacagc gtgtaatggg cagggtcaga 7380
gtctggagtc tggacctggg tctcctagct gcactgcact gctgccccat gggttaatca 7440
gctcagcata ccgtggctga acagctacct cataccaagg cctgtggcgc catgacaggg 7500
attgacaggg tccctgcctt ggaaacccgt agtctaagta gaggagactg acaagtcaat 7560
gccttccatc agtctgctca acacacgttt accaagtgcc tactgtgtgc tgcagaggcg 7620
aagatgacac agctcaggcc tttcccttga gcttacagtt caggaggaga gactgaccag 7680
tgactgccag tacagttgac tatgggacaa tgtgctcagc cttggggaga gacgaagaag 7740
gtacccgtat agcaccagat gacaggcacg agccccacag gccagggcag ctgctcagag 7800
gagagtaggc caagcagaag gcaaacagaa ggctgcaggc atttgccatc gagagctgga 7860
cttcaaactg ggcatcatac cagcctgggt tcgagtcctg cccagcccct tattggctgt 7920
ctaaccctga gcaaatccct tcacctctct gagcctcatt cctctatctg taaaccagtt 7980
ataataattg gaacattcat ttaaggacta aatgaggtcg tgaagcattc agcagatgct 8040
aggtacggaa actcgctgaa gtgggggcag gttaagaagc ctctggggat acgaaggcat 8100
ccagggacta gttgtggcag gaggctgtta ccacttaggt ctgaagggta aggagaggga 8160
atagctttcc ctctgcccag ttggagccgg tggcatggag gagaggctgc ctgtggggaa 8220
tcacccgagg gttcaccgct gccatgcgca gggagtcagg aggtagggag ggagtggggc 8280
agatgcacac catttttttt tttttttgag actctgttgc ccagactgga gtgcagtggt 8340
gccatatctg cacctctgcc tcccgggttc aagctcactg caacctctgc ctcccgggtt 8400
caagcgattc tcctgcctca gcctcccgag tagctgggac tacaggtgtg tgccaccatg 8460
cctggctaat ttttgtattt ttaatagaga tggggtttca ccatgttggc caggctggtc 8520
tcgaactctc gacctcaggt gatcccccac ctcggcctcc caaagtgctg ggattacagg 8580
cgtgagtcac cgctcccagc tgctgatgca ctcttgtcct tctaactcct gctagtgcct 8640
cccattggct gagcccaact ggaagctttg caagggagct ggtgctgcag tttgcactga 8700
gcaggctgga gaaggctgga gaatagacta ggggacaaac cgaattgcca gtgctgttat 8760
gtcatgattt aggcatggag tccagggcct gagcttcact ccatgtccat cctgcccaga 8820
gccttggcac agcctggctc ccagacaaga tgtcaagttc agaatccttc ctaaaaggaa 8880
tcctctatgc cagaccgtgt tgcagggata tgggagtgct gggctcccag cctgatcaag 8940
gagcgagaaa actcaggctc ctagtctgtc ctccggggca ctagcaggga caaggtggga 9000
ggctgctggg ctgggatgtg gggacaggtt tgatcaggta aggccaggct gtggctgtgt 9060
ttgctgctgt ccaaatggct taagcagagt cccccggcct ctctggcttc tgcaggcctt 9120
gaagttgccc catgtcgact acatcgagga ggactcctct gtctttgccc agagcatccc 9180
gtggaacctg gagcggatta cccctccacg gtaccgggcg gatgaatacc agccccccgg 9240
taagaccccc atctgtgccc tgccccaccc catctgagct gaatccattt gctctgccct 9300
ggcctggcct ccctgctggt ggtttccact tctcgggggg ctttgggact cagcacctcc 9360
actgacccct ttttttctgt cccatcccca tcccctgcag cccccactgc ctgccttcct 9420
gttgccccac aaatgcaaaa gtcttgcctt aaatgatcct cttttccttc ttttctcttg 9480
ttttcctttt ctcaccattt ggaatggccc agcaggctgc acttaccttg gaaggagggt 9540
tcatctgatg gtgactctac ctagggcccc caggcctcta taactcccag tgccctgcag 9600
actggaccag atcctttaat gggatagaca caaccctgtc tgggatgcct ctgcctacct 9660
tcctgttttg ctgctccacc tgcctccagc tccgtttggc ttcctggggc tccctgcctg 9720
ggccactttg tgtcttccct ctaggccttt ctttccactg ttccctctgc ctggtgtggc 9780
ctggctatgg aagggaggga ggaggagcgg ccatggaaaa cggtctgcat tctagcaggg 9840
acttgcaggt ggcaattcag tcggggaaga ctctagatgc acctggcctg aggagagaat 9900
gaagggttct agttggactg tgttaagttt gaggtgccca tggtgtgagg tctggagctc 9960
agcgcagaga tgatgcaatg tggtgggtcc atgcaacatg gtgccaggac gcagagcttg 10020
gggtgaactc agctttcacc ccttaccggt tctcgtggga tcttgggaag ccactttctt 10080
ctatgagctt tgtcgttctt gtctgtaaaa tgggcacata accctgtccc tgtccttctc 10140
acaggttgct gtgagactcc aatgagttga aggatgtgca gatgcttttg gaagtgaaaa 10200
gttggggggc tactgtgtga ctttgcatac acccaaactg tgtgaccttg catatgtctg 10260
agttgctgcc attgcaacag atcagagctg gtgggctggg tgtggagaaa gggtttgtgt 10320
gggggacatc ctctggcaag ggtggcagca gcagaagtga ggggcctggt cggtcatgtg 10380
tgctgacccg gcctgggcag cctgtggcca gggagaggac agctcctctg taggaagagc 10440
ctgttccttt ccaaccaggt gagacctctt cagtggagcc ctggagcccc ctgtactcca 10500
catcagtgcc tcagggacct cccggagcag gctaatatca gagaccaaga gggacactgg 10560
cagaggatca cagagacccc agtccaggca gggactgaga agatcttgcc ccctaagtta 10620
gtttcctagc actgctgtga caaattacca ccccctcggt tggaacaagt tgattctctg 10680
cagtcctgga ggccagaagc ctgaatcagt gtcggcagga ccactttctc ccggggggct 10740
ccagggagaa gcttctcttg cctcttccgt gtcccaacag cggcagcaca ccaatcccag 10800
cctctgtctt cacacagcct tctctgtgtc tctctcctct tcattgtctc ataaggacac 10860
ttgtcattgg atttagggcc cactggatcc tccaggatga tctcatgtgg ggaaccttaa 10920
ccacatctgc aaggaccctt tttccaaata aggtcacagc cacaggttgt gggggttagg 10980
atgtgagtgt atctctttgg cagccactgt tccctcctct cccttgggcc agaagcagac 11040
gtggggccct ttcttcccca taggatgccc atggattgcc ccccttcccg cttcccccga 11100
gtgtctgtgg gaggtggcag gaatggcagg caggggtgtg gaaccccttc tggagtcata 11160
tcaagggctt ggctggagga agtcctcctg gagctgttgg gctggcatgg ggcaggctgg 11220
ctgggcccag cagcagcttc ttcattcatg gggaggccac aagcatgggc cctagagctg 11280
gctgccgccc tcaaacccag accctgcact cttaactgtg tgaccttgca tacgtcactc 11340
accctctctg atcttcaggt tcctctgcaa aagggaggta atgataaccc tcactctggg 11400
gggctgtttg gagggttaaa tcagttattg ctgtagcatg catttctctg tcaggtattg 11460
agtgaggtgc tgtgatttta gccctgcatt tttcttttct taccattcaa taataacgtt 11520
ttgagcaccc actgtgcgcc aggcaccata ttaggtgctg gggatacaaa tgtgaatgaa 11580
atgaatgtgg tctcttcccc caacagtgta tccagaagat taatccattc cttaaacaaa 11640
tgctacttga cacagattag ttctggatag gctgagagct ctgaaggagt gcaggcagct 11700
gcgagcctgt gtatccagca gaaggatcag gaaaggattc ctggaggaag cgctgttcta 11760
gccaagacct acgggggcat tattaaccag gcaaagggga cggtgtccaa gcagtggaat 11820
gaacgtggat tgaagctgtg aggcaggagg gagtgtggcc tgtgcagaag ggaccgaggc 11880
tggtgagacc aggagggcct gggtggcctc caggtcagat gtgaaaggaa gaacttggcc 11940
acagtctgag cttctcaggc gtatggcagg gctgcctggt gagagggaat gagctccctg 12000
ctctggaggt atgcaagcag gactgggctc tcacctgcca gaggccacag agctttccag 12060
aggctggaag aggccactcc aaggcctctt tgcccctgag agtggtggct cttcttgagg 12120
ccaccttgcc acgctgtcac agggaactag cagcccctgc ctcacccggg ggtttggaag 12180
atagagggag gcctaggaag ggccctgtgt ctcatccgag ctgggcccct ttccagcctc 12240
tcactggaag gaagcccaag gatgttcctg tgggggcttt taccaggccc acctgccctc 12300
tgctggccat gcttgcagcc tcctgaccct gtcccagcag gacagtgggc tggtgtgagc 12360
gggcaggaac cgcctgcact tagaaggtgt ggggctgcct ccccgagctt ccatctgccg 12420
ctggggccac accccaggcc cagggatggg accccacagt ggtcacatca tcttgcagca 12480
gaacccaggt acagctcctg gagcagatgg tggtcccaag cacgggtggg accagaaagg 12540
actctcacct gggctaactc agctgcagcc tcagttccct cctcacacac gacgaggaac 12600
atggactgga agcctgccca gcaggccttc tgctcgatgt gcgttgtgtg gcttacgtcc 12660
agggagggaa gcagcctctg tgctgtcttc tagataagcc tgtattcccc gggctgtctg 12720
ccaatgtatc cagttgtccc gtcagcctgg aagctctgag ggaaaacctt gggctgcttc 12780
ctgagcacct gtatcccctg cagccagccc ggggcctctg ctaggagcag actgagcatg 12840
gcttatgggc ctggcaccat ctggcctctg cccaccttgc tggccttgtc ttgtgtctgc 12900
cccttcgaca ttccatagcc cagctcaata tctagtggtt cctctagggt ggcgagcact 12960
gtttggtctc cagatgtctt caggtcggag ctcacagcgc tctcagccac cccttcccag 13020
tgtagcaccg ggcacatggt agatgcctat tgatgagtga aagctcctaa cacactcaga 13080
gagcaaggac tccgcctcat cccacagcct gggaggagag gcagactgcc aaggacctgc 13140
tcagcatgct acagaagaaa ccaaagtgcc cacgggactg atcagtggag cttcctgccg 13200
agactggagg ccttagggca gggtagacag tgtgtgtgca ggctggggac tcacagttcg 13260
gactgtgccc agacctacta gcatagtggg tgggtgggag gatgcgggac tgggggccga 13320
ccttgcctga aattcatgtg ggatctcaga gcagccactg aattgctctg tagggggcta 13380
aatagtggcc cccacagata cacacaccca gacagagcct gtgagccaga ccttatttgg 13440
agaaaaggtc tttgtagatg taattaagca tctcaagatg gcatcatctg gattatgcgg 13500
tgggctgtaa gtcctgtgat gtgtctttat gagagaaagg cagagggaga tttgacacac 13560
acaggagggg ccacgtggag acagaggtgg agattggaga aatgtggcca caagccaggg 13620
aacaccagca gccaccagaa gccggaagac gtgaggcagg gttcttccca gagccttcgc 13680
tgctgagtct gggaatttgt gaccgaagcc ataagaagtg ggtacacgcc ctgagcctcc 13740
cacacttgct cacctgtcct gagatgagaa tctctactct gcagcatatt tggaggatca 13800
ctgcgggggc cacagaggtg ctgttcagat ggcacttcag aagactcagg agaccctggg 13860
gcaggagcag tttgactgac agcccagagg gctgccctct gattccacct gaggccctgc 13920
ttttcctggc tgcaggggtt ccagggccag gccatttccg ctggcgcagg actctgctag 13980
cagcaacctg cctgaagtct tcctttggcc tggctgagag tttctgagac ctgcgctgga 14040
gcggaggtgc ttccttcctt gcttcctttc ttcctctctc ccttctccat ccagcaggct 14100
ggacctgcct ggcatctgtg agctctccct actttctcct ataccctaac ctttgtcctg 14160
catgggcgac tcccccagtg agtctcttgc agcttttacc ccagtgcctg cttcttggag 14220
aatccaaact gatccagtta gggatgataa agtgtagggt aggcgctcgg tgactgtttt 14280
ctctgaggtt gtgactcgtg tgaggcagaa gcagtccccg tgagccctcc tggtatcttg 14340
tggagtggag aacgcttgga cctggagcca ggaggcccag acatacatcc tgtccgagct 14400
gcagcttcct gtctctaaaa tgagccggcc agcgcaggtg gccagacatc actgttattc 14460
tcctttgagt ctttaaatct tgttgtcttt cttgcagact cggtgagctg tgaaaggcta 14520
taataggggc tttattttac actttgatac tattttttga acattcatat tattgttaga 14580
tattgatatt catatgaagg agcaggatga cttgggtcct tcttggcagt agcattgcca 14640
gctgatggcc ttggacagtt acctgccctc tctaggcctc cctttccttg tctatgaaat 14700
acattataga ataggatgta gtgtgtgagg attttttgga ggttaaacga gtgaatatat 14760
ttaaggcgct ttcaccagtg cctgggatgt gctctgtagt ttctgtgtgt taactataag 14820
gttgacttta tgctcattcc ctcctctccc acaaatgtcg ccttggaaag acggaggcag 14880
cctggtggag gtgtatctcc tagacaccag catacagagt gaccaccggg aaatcgaggg 14940
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aggcctgtgg tgcaacccta gactctctct ccttcccctc cacagaatca agtatcagct 28440
ggttagagat ccacaccctg acagctctgt gatgttggaa caacttggtt cttgcagagg 28500
gttagcaggt ggtcaccagg gatcggggag gaaggggtgt ggcttgcagg aaggcgaaaa 28560
tctggactag caaataggga aggggaccca tgtgagcaac gctggccact aggaatgaga 28620
ctgagacctg tgggatctag caagaagccc agtgtgacca gcgacacgat ctatgctggg 28680
gaccacttgg gagagccaaa agctttggtg gagatgaatg gagaccatca acctaagttc 28740
agcatcctcc tctaagcttt gcagatgaat cctgaaatgg tcagcccctc cagagaaaag 28800
aacagcaaca ggctcagagg acccacagtc ccctttatta gtgtaaagta ctaagaggaa 28860
tcaacagcat ttagcaccag gcacaggctc gtgttccccc gcccactacg gctgtgttct 28920
gatatatgaa gaatggcggc aagactccaa ctctgttttt gaaaaattta ttttatactc 28980
ttagaagcta agaactttgc c 29001
<210> 1547
<211> 544
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1547
aatctgacgc tgtttgggga gggcgaggcc gaaacctgat cctccagtcc gggggttccg 60
ttaatgttta atcagatagg atcgtccgat ggggctctgg tggcgtgatc tgcgcgcccc 120
aggcgtcaag cacccacacc ctagaaggtt tccgcagcga cgtcgaggcg ctcatggttg 180
caggcgggcg ccgccgttca gttcagggtc tgagcctgga ggagtgagcc aggcagtgag 240
actggctcgg gcgggccggg acgcgtcgtt gcagcagcgg ctcccagctc ccagccagga 300
ttccgcgcgc cccttcacgc gccctgctcc tgaacttcag ctcctgcaca gtcctcccca 360
ccgcaaggct caaggcgccg ccggcgtgga ccgcgcacgg cctctaggtc tcctcgccag 420
gacagcaacc tctcccctgg ccctcatggg caccgtcagc tccaggcggt cctggtggcc 480
gctgccactg ctgctgctgc tgctgctgct cctgggtccc gcgggcgccc gtgcgcagga 540
ggac 544
<210> 1548
<211> 544
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (371)..(371)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 1548
gagcacggtg gagagcgggg acggccggct ctttggggac ttgctggggc gtgcggctgc 60
gctattcagt gggaaggttc gcggggttgg gagacccgga ggccgaggaa gggcgagcag 120
agcactgcca ggatatcctg cccagatttc ccagtttctg cctcgccgcg gcacaggatc 180
cgtggaggtt gcctggcacc tacgtggtgg tgctgaagga ggagacccac ctctcgcagt 240
cagagcgcac tgcccgccgc ctgcaggccc aggctgcccg ccggggatac ctcaccaaga 300
tcctgcatgt cttccatggc cttcttcctg gcttcctggt gaagatgagt ggcgacctgc 360
tggagctggc ncttgaagtt gccccatgtc gactacatcg aggaggactc ctctgtcttt 420
gcccagagca tcccgtggaa cctggagcgg attacccctc cacggtaccg ggcggatgaa 480
taccagcccc ccgacggagg cagcctggtg ggaggtgtat ctcctagaca ccagcataca 540
gagt 544
<210> 1549
<211> 580
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1549
agtggggagc acggtggaga gcggggacgg ccggctcttt ggggacttgc tggggcgtgc 60
ggctgcgcta ttcagtggga aggttcgcgg ggttgggaga cccggaggcc gaggaagggc 120
gagcagagca ctgccaggat atcctgccca gatttcccag tttctgcctc gccgcggcac 180
agacggaggc agcctggtgg aggtgtatct cctagacacc agcatacaga gtgaccaccg 240
ggaaatcgag ggcagggtca tggtcaccga cttcgagaat gtgcccgagg aggacgggac 300
ccgcttccac agacaggcca gcaagtgtga cagtcatggc acccacctgg caggggtggt 360
cagcggccgg gatgccggcg tggccaaggg tgccagcatg cgcagcctgc gcgtgctcaa 420
ctgccaaggg aagggcacgg ttagcggcac cctcataggc ctggagttta ttcggaaaag 480
ccagctggtc cagcctgtgg ggccactggt ggtgctgctg cccctggcgg gtgggtacag 540
ccgcgtcctc aacgccgcct gccagcgcct ggcgagggct 580
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1550
agtggggagc acggtggaga gcggggacgg ccggctcttt ggggacttgc tggggcgtgc 60
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ccgcgtcctc aacgccgcct gccagcgcct ggcgagggct ggggtcgtgc tggtcaccgc 600
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cacagttggg gccaccaatg cccaagacca gccggtgacc ctggggactt tggggaccaa 720
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ctgcagcacc tgctttgtgt cacagagtgg gacatcacag gctgctgccc acgtggctgg 840
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actgatccac ttctctgcca aagatgtcat caatgaggcc tggttccctg aggaccagcg 960
ggttggcagc tgttttgcag gactgtatgg tcagcacact cggggcctac acggatggcc 1020
acagccgtcg cccgctgcgc cccagatgag gagctgctga gctgctccag tttctccagg 1080
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gccaactgca gcgtccacac agctccacca gctgaggcca gcatggggac ccgtgtccac 1260
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ggcacccaca agccgcctgt gctgaggcca cgaggtcagc ccaaccagtg cgtgggccac 1380
agggaggcca gcatccacgc ttcctgctgc catgccccag gtctggaatg caaagtcaag 1440
gagcatggaa tcccggcccc tcaggagcag gtgaccgtgg cctgcgagga gggctggacc 1500
ctgactggct gcagtgccct ccctgggacc tcccacgtcc tgggggccta cgccgtagac 1560
aacacgtgtg tagtcaggag ccgggacgtc agcactacag gcagcaccag cgaaggggcc 1620
gtgacagccg ttgccatctg ctgccggagc cggcacctgg cgcaggcctc ccaggagctc 1680
cagtgacagc cccatcccag gatgggtgtc tggggagggt caagggctgg ggctgagctt 1740
taaaatggtt ccgacttgtc cctctctcag ccctccatgg cctggcacga ggggatgggg 1800
atgcttccgc ctttccgggg ctgctggcct ggcccttgag tggggcagcc tccttgcctg 1860
gaactcactc actctgggtg cctcctcccc aggtggaggt gccaggaagc tccctccctc 1920
actgtggggc atttcaccat tcaaacaggt cgagctgtgc tcgggtgctg ccagctgctc 1980
ccaatgtgcc gatgtccgtg ggcagaatga cttttattga gctcttgttc cgtgccaggc 2040
attcaatcct caggtctcca ccaaggaggc aggattcttc ccatggatag gggagggggc 2100
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ctgtctcagc caacccgctc cactacccgg cagggtacac attcgcaccc ctacttcaca 2460
gaggaagaaa cctggaacca gagggggcgt gcctgccaag ctcacacagc aggaactgag 2520
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tgagtgatgg cagaacgatg cctgcaggca tggaactttt tccgttatca cccaggcctg 2700
attcactggc ctggcggaga tgcttctaag gcatggtcgg gggagagggc caacaactgt 2760
ccctccttga gcaccagccc cacccaagca agcagacatt tatcttttgg gtctgtcctc 2820
tctgttgcct ttttacagcc aacttttcta gacctgtttt gcttttgtaa cttgaagata 2880
tttattctgg gttttgtagc atttttatta atatggtgac tttttaaaat aaaaacaaac 2940
aaacgttgtc ctaacaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 2976
Claims (66)
- 하기 화학식(SEQ ID NO:1016)에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
- 제1항에 있어서, 약학적으로 허용되는 염이 나트륨 염인 화합물.
- 제1항에 있어서, 약학적으로 허용되는 염이 칼륨 염인 화합물.
- 제1항의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 심혈관 질환, 이상지질혈증, 혼합 이상지질혈증 및 고콜레스테롤혈증 중 하나 이상을 치료하거나 예방하기 위한 조성물.
- 변형된 올리고뉴클레오티드 및 컨쥬게이트 기로 구성된 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이며, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오티드가 16개의 연결된 뉴클레오시드 길이이고, SEQ ID NO:1016의 서열로 구성되고, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드가,
10개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트
로 구성되며;
갭 세그먼트가 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 위치되고, 각각의 윙 세그먼트의 각각의 뉴클레오시드가 cEt 당을 포함하고; 각각의 뉴클레오시드간 결합이 포스포로티오에이트 결합이고; 각각의 시토신이 5-메틸시토신이고; 컨쥬게이트 기가 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6GalNAC3이고 변형된 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 위치되는 것인, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염. - 제5항에 있어서, 약학적으로 허용되는 염이 나트륨 염인 화합물.
- 제5항에 있어서, 약학적으로 허용되는 염이 칼륨 염인 화합물.
- 제5항의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 심혈관 질환, 이상지질혈증, 혼합 이상지질혈증 및 고콜레스테롤혈증 중 하나 이상을 치료하거나 예방하기 위한 조성물.
- SEQ ID NO:1016의 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 16개의 연결된 뉴클레오시드 길이로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드로 구성된 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이며, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오티드가,
10개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트
를 포함하며;
갭 세그먼트가 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 위치되고, 각각의 윙 세그먼트의 각각의 뉴클레오시드가 cEt 당을 포함하고; 각각의 뉴클레오시드간 결합이 포스포로티오에이트 결합이고; 각각의 시토신이 5-메틸시토신인, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염. - SEQ ID NO:1016으로 구성된 핵염기 서열을 갖는 16개의 연결된 뉴클레오시드 길이의 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염이며, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오티드가,
10개의 연결된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 5' 윙 세그먼트; 및
3개의 연결된 뉴클레오시드로 구성된 3' 윙 세그먼트
를 포함하며;
갭 세그먼트가 5' 윙 세그먼트와 3' 윙 세그먼트 사이에 위치되고, 5' 윙 세그먼트 및 3' 윙 세그먼트가 cEt 당을 포함하고; 각각의 뉴클레오시드간 결합이 포스포로티오에이트 결합이고; 각각의 시토신이 5-메틸시토신인, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염. - 삭제
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