TW202325310A - Pcsk9表現之調節劑 - Google Patents

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艾瑞克 E 史瓦瑟
蘇珊 M 弗瑞爾
賀恩 荷亞 比伊
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美商Ionis製藥公司
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Abstract

本發明實施方式提供了可用於抑制PCSK9表現之方法、化合物、和組成物，該等方法、化合物、和組成物可用於治療、預防、或緩解與PCSK9相關之疾病。

Description

PCSK9表現之調節劑
本實施方式提供了可用於抑制蛋白原轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin 9型（PCSK9）表現，並且在某些情況下減少在細胞或動物中PCSK9蛋白質的量之方法、化合物、以及組成物，該等方法、化合物、以及組成物可以用於治療、預防、或緩解與PCSK9相關的疾病。
蛋白原轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin 9型（PCSK9）係脂蛋白代謝中具有重要作用的酶。PCSK9中罕見的功能獲得性突變導致高LDL-C水平和早發冠心病，然而功能缺失變體導致低LDL-C水平和降低的冠心病發病率（Zhao等人., Am. J. Hum. Genet. [美國人類遺傳學雜誌]2006, 79: 514-523；Horton等人, J. Lipid Res. [脂質研究雜誌]2009, 50: 增刊: S172-S177).因此，PCSK9係用於降低LDL-膽固醇療法的充分驗證的靶標（Hooper等人, Expert Opin. Biol. Ther. [生物療法的專家意見]2013, 13: 429-435）。
已經證明用於阻斷PCSK9、Alirocumab和Evolocumab的抗體降低循環的PCSK9水平並降低LDL-膽固醇水平，但具有短的作用持續時間，必須頻繁的皮下注射（Zhang等人, BMC Med. [BMC醫學]2015, 13: 123；Navarese等人, Ann. Intern. Med. [內科醫學年鑒] 2015, 163: 40-51）。
在此的目的是提供用於改進疾病（例如心血管疾病、血脂異常、混合性血脂異常、和高膽固醇血症）的治療之化合物、方法和藥物組成物。
在此提供的是用於減少PCSK9 mRNA的量或降低其活性、並且在某些實施方式中減少細胞或動物中PCSK9蛋白質的量之化合物和方法。在某些實施方式中，該動物患有心血管疾病。在某些實施方式中，該疾病係血脂異常。在某些實施方式中，該疾病係混合性血脂異常。在某些實施方式中，該疾病係高膽固醇血症。在此提供的某些化合物針對在動物中減少LDL-膽固醇的化合物和組成物。
在此提供的某些實施方式針對用於抑制PCSK9表現的強效且可耐受的化合物和組成物，該等化合物和組成物可以用於治療、預防、緩解心血管疾病，或減緩其進展。在此提供的某些實施方式針對相比公開揭露的化合物更強效或具有更高治療價值的化合物和組成物。
[序列表 ]
本申請案連同電子格式之序列表一起提交。該序列表被提供為創建於2018年2月16日的、標題為200615-WO-PCT-SequenceListing.txt之文件，其大小係431 kb。將電子格式的序列表之資訊藉由引用以其全文結合在此。
應理解的是，前面的概述和下面的詳述兩者都只是示例性和說明性的，並且不限制如所要求的實施方式。在此，單數的使用包括複數，除非另外明確說明。如在此使用的，“或”的使用意指“和/或”，除非另外說明。此外，術語“包括（including）”以及其他形式（如“包括”（includes）和“包括”（included））的使用沒有限制性。
在此使用的章節標題只是出於組織的目的，而不應被解釋為限制所描述的主題。在本申請中引用的所有文獻、或文獻的部分（包括但不限於專利案、專利申請案、文章、書籍、論文、以及GenBank和NCBI參考序列記錄）都針對在此討論的文獻的部分並且以其全文藉由引用而清楚地特此結合。
應理解的是，在此包含的實例中的每個SEQ ID NO中列出的序列獨立於對糖部分、核苷間連接、或核鹼基的任何修飾。因此，由SEQ ID NO定義的化合物可以獨立地包括對糖部分、核苷間連接、或核鹼基的一種或多種修飾。藉由ISIS編號（ISIS #）描述的化合物指示核鹼基序列、化學修飾、和模體的組合。 定義
除非另外指明，以下術語具有以下含義：
“2’-去氧核苷”意指包含2’-H(H)呋喃糖基糖部分的核苷，如在天然存在的去氧核糖核酸（DNA）中發現的。在某些實施方式中，2’-去氧核苷可以包括修飾的核鹼基或者可以包括RNA核鹼基（尿嘧啶）。
“2’-O-甲氧基乙基”（亦是2’-MOE和2’-O(CH 2) 2-OCH 3）係指呋喃糖基環的2’位置處的O-甲氧基-乙基修飾。2’-O-甲氧基乙基修飾的糖係修飾的糖。
“2’-MOE核苷”（亦是2’-O-甲氧基乙基核苷）意指包含2’-MOE修飾的糖部分的核苷。
“2’-取代的核苷”或“2-修飾的核苷”意指包含2’-取代的或2’-修飾的糖部分的核苷。如在此使用的，關於糖部分的“2’-取代的”或“2-修飾的”意指包含除H或OH之外的至少一種2'-取代基基團的糖部分。
“3’靶位點”係指與特定化 合物的最3’核苷酸互補的靶核酸的核苷酸。
“5’靶位點”係指與特定 化合物的最5’-核苷酸互補的靶核酸的核苷酸。
“5-甲基胞嘧啶”意指具有附接至5位的甲基基團的胞嘧啶。
“約”意指在某值的 ± 10%內。例如，如果指出“該等化合物影響PCSK9的約70%抑制”，則暗示PCSK9水平被抑制在60%和80%的範圍內。
“給予（administration）”或“給予（administering）”係指將在此提供的化合物或組成物引入個體體內以執行其預定功能的途徑。可以使用的給予途徑的實例包括但不限於胃腸外給予，如皮下、靜脈內、或肌內注射或輸注。
“緩解”係指相關疾病、障礙、或病症的至少一種指標、體征、或症狀的改善或減輕。在某些實施方式中，緩解包括病症或疾病的一種或多種指標的進展或嚴重性的延遲或減緩。指標的進展或嚴重性可以藉由熟習該項技術者已知的主觀或客觀量度來確定。
“動物”係指人或非人動物，包括但不限於小鼠、大鼠、兔、狗、貓、豬、以及非人靈長類動物（包括但不限於猴和黑猩猩）。
“反義活性”意指可歸因於反義化合物與其靶核酸的雜交的任何可檢測的和/或可測量的活性。在某些實施方式中，反義活性係與不存在靶標的反義化合物的情況下的靶核酸水平或由這樣的靶核酸編碼的蛋白質相比，該靶核酸或該靶蛋白水平的量或表現的降低。
“反義化合物”意指包含寡核苷酸和視情況一種或多種另外的特徵（如軛合物（conjugate）基團或端基）的化合物。反義化合物的實例包括單股的和雙股的化合物，如寡核苷酸、核糖酶、siRNA、shRNA、ssRNA、以及基於佔用的化合物。
“反義抑制”意指與不存在與靶核酸互補的反義化合物的情況下的靶核酸水平相比，在存在該反義化合物的情況下的靶核酸水平的降低。
“反義機制”係涉及化合物與靶核酸的雜交的所有那些機制，其中雜交的結果或作用係靶標降解或靶標佔用，同時伴隨涉及例如轉錄或剪接的細胞機器的停轉。
“反義寡核苷酸”意指具有與靶核酸或其區域或區段互補的核鹼基序列的寡核苷酸。在某些實施方式中，反義寡核苷酸可特異性地與靶核酸或其區域或區段雜交。
“二環核苷”或“BNA”意指包含二環糖部分的核苷。“二環糖”或“二環糖部分”意指包含兩個環的經修飾的糖部分，其中第二環經由連接第一環中的原子中的兩個的橋而形成，由此形成二環結構。在某些實施方式中，二環糖部分的第一環係呋喃糖基部分。在某些實施方式中，該二環糖部分不包括呋喃糖基部分。
“分支基團”意指具有至少3個以下位置的一組原子，該等位置能夠與至少3個基團形成共價鍵。在某些實施方式中，分支基團提供了用於經由軛合物接頭和/或可切割的部分將系股配位基連接至寡核苷酸的多個反應性位點。
“靶向細胞的部分”意指能夠結合至一種特定細胞類型或多種特定細胞類型的軛合物基團或軛合物基團的部分。
“cEt”或“受約束的乙基”意指包含連接4’-碳和2’-碳的橋的二環呋喃糖基糖部分，其中該橋具有式：4’-CH(CH 3)-O-2’。
“cEt核苷”意指包含cEt修飾的糖部分的核苷。
化合物中的“化學修飾”描述了相對於這樣的單位的初始狀態，藉由該化合物中的任何單位的化學反應的取代或改變。“修飾的核苷”意指獨立地具有修飾的糖部分和/或修飾的核鹼基的核苷。“修飾的寡核苷酸”意指包含至少一種修飾的核苷間連接、修飾的糖、和/或修飾的核鹼基的寡核苷酸。
“化學上不同的區域”係指化合物的在某種程度上來說與同一化合物的另一個區域在化學上不同的區域。例如，具有2’-O-甲氧基乙基核苷酸的區域在化學上不同於具有沒有2’-O-甲氧基乙基修飾的核苷酸的區域。
“嵌合反義化合物”意指具有至少2個化學上不同的區域的反義化合物，每個位置具有多個亞單位。
“可切割的鍵”意指能夠被分離的任何化學鍵。在某些實施方式中，可切割的鍵選自：醯胺、聚醯胺、酯、醚、磷酸二酯的一個酯或兩個酯、磷酸酯、胺基甲酸酯、二硫化物、或肽。
“可切割的部分”意指在例如細胞、動物或人內的生理條件下被切割的原子的鍵或基團。
關於寡核苷酸的“互補”意指當將兩個核鹼基序列在相反方向上進行比對時，這樣的寡核苷酸或其一個或多個區域的核鹼基序列匹配另一個寡核苷酸或核酸或其一個或多個區域的核鹼基序列。如在此描述的，核鹼基匹配或互補核鹼基限於以下鹼基對：腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）、腺嘌呤（A）和尿嘧啶（U）、胞嘧啶（C）和鳥嘌呤（G）、以及5-甲基胞嘧啶（ mC）和鳥嘌呤（G），除非另外說明。互補寡核苷酸和/或核酸無需在每個核苷處都具有核鹼基互補性，並且可以包括一個或多個核鹼基錯配。相比之下，關於寡核苷酸的“完全互補”或“100%互補”意指此類寡核苷酸在每個核苷處都具有核鹼基匹配而沒有任何核鹼基錯配。
“軛合物基團”意指附接至寡核苷酸的一組原子。軛合物基團包括軛合物部分和將軛合物部分附接至寡核苷酸的軛合物接頭。
“軛合物接頭”意指包含將軛合物部分連接至寡核苷酸的至少一個鍵的一組原子。
“軛合物部分”意指藉由軛合物接頭附接至寡核苷酸的一組原子。
在寡核苷酸的背景下，“連續”係指彼此緊鄰的核苷、核鹼基、糖部分、或核苷間連接。例如，“連續核鹼基”意指在序列中彼此緊鄰的核鹼基。
“設計”或“被設計為”係指設計與所選核酸分子特異性雜交的化合物的過程。
“不同修飾的”意指彼此不同的化學修飾或化學取代基，包括不存在修飾。因此，例如，MOE核苷和未經修飾的DNA核苷係“不同修飾的”，雖然該DNA核苷係未經修飾的。同樣地，DNA和RNA係“不同修飾的”，即使兩者都是天然存在的未經修飾的核苷。除包含不同的核鹼基以外相同的核苷不是不同修飾的。例如，包含2’-OMe修飾的糖和未經修飾的腺嘌呤核鹼基的核苷與包含2’-OMe修飾的糖和未經修飾的胸腺嘧啶核鹼基的核苷不是不同修飾的。
“雙股的反義化合物”意指包含兩種寡聚化合物的反義化合物，這兩種寡聚化合物彼此互補並且形成雙股體，並且其中這兩種所述寡聚化合物之一包括寡核苷酸。
“有效量”意指足以在對化合物有需要的個體體內實現所希望的生理學結果的化合物的量。有效量在個體之間可以取決於有待治療的個體的健康和身體狀況、有待治療的個體的分類群、組成物的配方、個體的醫學症狀的評估、以及其他相關因素而變化。
“功效”意指產生所希望的效果的能力。
“表現”包括借此以將基因的編碼資訊轉變成存在於細胞中並且在細胞中運轉的結構的所有功能。此類結構包括但不限於轉錄和翻譯的產物。
“缺口體（Gapmer）”意指寡核苷酸，該寡核苷酸包含多個核苷的內部區域，該等核苷支持被定位在具有一個或多個核苷的外部區域之間的RNase H切割，其中該等包含內部區域的核苷在化學上不同於包含外部區域的該一個核苷或多個核苷。內部區域可以被稱作“缺口（gap）”並且外部區域可以被稱作“翼（wing）”。
“雜交”意指寡核苷酸和/或核酸的退火。雖然不局限於具體的機制，但最常見的雜交機制涉及可以是在互補核鹼基之間的沃森-克裡克（Watson-Crick）、胡斯坦（Hoogsteen）或反向胡斯坦（Hoogsteen）氫鍵合的氫鍵合。在某些實施方式中，互補核酸分子包括但不限於反義化合物和核酸靶標。在某些實施方式中，互補核酸分子包括但不限於寡核苷酸和核酸靶標。
“緊鄰”意指在相同種類的緊鄰元件之間不存在間插元件（例如在緊鄰核鹼基之間沒有間插核鹼基）。
“個體”意指選擇用於治療或療法的人或非人動物。
“抑制表現或活性”係指相對於未經處理的或對照樣品中的表現或活性，表現或活性的降低或阻斷，並且不一定指示表現或活性的徹底消除。
“核苷間連接”意指在寡核苷酸中的相鄰核苷之間形成共價連接的基團或鍵。“修飾的核苷間連接”意指除天然存在的、磷酸酯核苷間連接之外的任何核苷間連接。非磷酸酯鍵在此意指修飾的核苷間連接。
“加長的寡核苷酸”係相對於在此揭露的寡核苷酸（例如母體寡核苷酸）具有一個或多個另外的核苷的那些。
“連接的核苷”意指藉由核苷間連接而連接在一起的相鄰核苷。
“接頭-核苷”意指將寡核苷酸連接至軛合物部分的核苷。接頭-核苷位於化合物的軛合物接頭內。不認為接頭-核苷係化合物的寡核苷酸部分的一部分（即使它們與寡核苷酸鄰接）。
“錯配”或“非互補”意指當將第一和第二寡核苷酸進行比對時，該第一寡核苷酸的核鹼基不與該第二寡核苷酸或靶核酸的相應核鹼基互補。例如，核鹼基（包括但不限於通用核鹼基、肌苷、和次黃嘌呤）能夠與至少一個核鹼基雜交，但是相對於它所雜交的核鹼基仍是錯配的或非互補的。作為另一個實例，當將第一和第二寡核苷酸進行比對時，不能夠雜交到該第二寡核苷酸或靶核酸的相應核鹼基上的該第一寡核苷酸的核鹼基係錯配或非互補核鹼基。
“調節”係指改變或調整細胞、組織、器官或生物體中的特徵。例如，調節PCSK9 RNA可以意指升高或降低PCSK9 RNA和/或PCSK9蛋白在細胞、組織、器官或生物體中的水平。“調節劑”在該細胞、組織、器官或生物體中實現該改變。例如，PCSK9化合物可以是降低細胞、組織、器官或生物體中的KRAS RNA和/或PCSK9蛋白的量的調節劑。
“MOE”意指甲氧基乙基。
“單體”係指寡聚體的單個單位。單體包括但不限於核苷和核苷酸。
“模體”意指未經修飾的和/或修飾的糖部分、核鹼基、和/或核苷間連接在寡核苷酸中的模式。
“天然的”或“天然存在的”意指在自然界中發現的。
“非-二環修飾的糖”或“非二環修飾的糖部分”意指修飾的糖部分，該糖部分包含不形成該糖的兩個原子之間的橋從而形成第二環的修飾（如取代）。
“核酸”係指由單體核苷酸組成的分子。核酸包括但不限於核糖核酸（RNA）、去氧核糖核酸（DNA）、單股核酸、以及雙股核酸。
“核鹼基”意指能夠與另一個核酸的鹼基配對的雜環部分。如在此使用的，“天然存在的核鹼基”係腺嘌呤（A）、胸腺嘧啶（T）、胞嘧啶（C）、尿嘧啶（U）、和鳥嘌呤（G）。“修飾的核鹼基”係經化學修飾的天然存在的核鹼基。“通用鹼基”或“通用核鹼基”係除了天然存在的核鹼基和修飾的核鹼基之外的核鹼基，並且能夠與任何核鹼基配對。
“核鹼基序列”意指在核酸或寡核苷酸中獨立於任何糖或核苷間連接的連續核鹼基的順序。
“核苷”意指包含核鹼基和糖部分的化合物。核鹼基和糖部分各自獨立地是未經修飾的或修飾的。“修飾的核苷”意指包含修飾的核鹼基和/或修飾的糖部分的核苷。修飾的核苷包括缺少核鹼基的無鹼基核苷。
“寡聚化合物”意指包含單個寡核苷酸和視情況一種或多種另外的特徵（如軛合物基團或端基）的化合物。
“寡核苷酸”意指連接的核苷的聚合物，該等核苷中的每個核苷都可以彼此獨立地被修飾或不被修飾。除非另有說明，寡核苷酸由8-80個連接的核苷組成。“修飾的寡核苷酸”意指寡核苷酸，其中至少一個糖、核鹼基、或核苷間連接係被修飾的。“未經修飾的寡核苷酸”意指不包含任何糖、核鹼基、或核苷間修飾的寡核苷酸。
“母體寡核苷酸”意指其序列被用作具有類似的序列但不同的長度、模體、和/或化學的更多的寡核苷酸的設計基礎的寡核苷酸。新設計的寡核苷酸可以具有與母體寡核苷酸相同的或重疊的序列。
“胃腸外給予”意指藉由注射或輸注給予。胃腸外給予包括皮下給予、靜脈內給予、肌內給予、動脈內給予、腹膜內給予、或顱內給予（例如鞘內或腦室內給予）。
“藥學上可接受的載體或稀釋劑”意指適合於在給予個體中使用的任何物質。例如，藥學上可接受的的載體可以是無菌水溶液，如PBS或注射用水。
“藥學上可接受的鹽”意指化合物（如寡聚化合物或寡核苷酸）的生理學和藥學上可接受的鹽，即保留母體化合物的所希望的生物學活性並且不對其賦予不希望的毒理學效應的鹽。
“藥劑”意指當給予至個體時提供治療益處的化合物。
“藥物組成物”意指適合給予個體的物質的混合物。例如，藥物組成物可以包括一種或多種化合物或其鹽和無菌水溶液。
“硫代磷酸酯連接”意指修飾的磷酸酯連接，其中非橋氧原子之一被硫原子替換。硫代磷酸酯核苷間連接係修飾的核苷間連接。
“磷部分”意指包含磷原子的一組原子。在某些實施方式中，磷部分包括單-、二-、或三-磷酸酯、或硫代磷酸酯。
“部分”意指核酸的限定數目的連續（即，連接的）核鹼基。在某些實施方式中，一個部分係靶核酸的限定數目的連續核鹼基。在某些實施方式中，一個部分係寡聚化合物的限定數目的連續核鹼基。
“預防”係指在從數分鐘到無限期的時間段內，延遲或預先阻止疾病、病症或病狀的發病、發展或進展。
“前藥”意指處於身體外形式的化合物，當給予至個體時，被代謝為其身體或細胞內的另一種形式。在某些實施方式中，代謝形式係該化合物（例如，藥物）的活性、或更具活性形式。通常，藉由存在於細胞或組織中的一種或多種酶（例如內源性或病毒性酶）或一種或多種化學物質的作用，和/或藉由生理條件促進前藥在體內的轉化。
“減少”意味著降低程度、規模、數量或數目。
“RefSeq No.”係分配給序列的字母和數位的唯一組合，從而表示該序列係針對特定靶轉錄物（例如，靶基因）。關於靶基因的這種序列和資訊（統稱為基因記錄）可以在遺傳序列資料庫中找到。遺傳序列資料庫包括NCBI參考序列資料庫、基因庫、歐洲核苷酸存檔、和日本DNA資料庫（後三者形成國際核苷酸序列資料庫合作或INSDC）。
“區域”被定義為具有至少一種可辨認的結構、功能、或特徵的靶核酸部分。
“RNAi化合物”意指至少部分地藉由RISC或Ago2而非藉由RNase H起作用以調節靶核酸和/或由靶核酸編碼的蛋白質的反義化合物。RNAi化合物包括但不限於雙股siRNA、單股RNA（ssRNA）、和微小RNA（包括微小RNA模擬物）。
“區段”被定義為核酸 內的更小的區域或區域的子部分。
“副作用”意指除所希望的作用以外的可歸因於治療的生理疾病和/或病症。在某些實施方式中，副作用包括注射部位反應、肝功能測試異常、腎功能異常、肝毒性、腎毒性、中樞神經系統異常、肌肉疾病、以及不適。例如，血清中的轉胺酶水平增加可以指示肝毒性或肝功能異常。例如，膽紅素增加可以指示肝毒性或肝功能異常。
關於化合物的“單股的”意指該化合物僅具有一種寡核苷酸。“自我互補”意指寡核苷酸至少部分地與其自身雜交。由一種寡核苷酸組成的化合物（其中該化合物的寡核苷酸係自我互補的）係單股化合物。單股的化合物可以能夠結合至互補化合物，以形成雙股體。
“位點”被定義為靶核酸內的獨特核鹼基位置。
“可特異性雜交”係指寡核苷酸在該寡核苷酸與靶核酸之間具有足夠的互補性程度以誘導所希望的效應，同時對非靶核酸展現出最小效應或沒有效應。在某些實施方式中，特異性雜交在生理條件下發生。
關於靶核酸的“特異性抑制”意指，當對非靶核酸展示出較少、最低、或無影響時，減少或阻斷靶核酸的表現。減少並不一定表明完全消除了靶核酸的表現。
“標準細胞測定”意指在實例中描述的一種或多種測定及其合理變化。
“標準體內實驗”意指一個或多個實例中描述的一個或多個程式及其合理變化。
“糖部分”意指未經修飾的糖部分或經修飾的糖部分。“未經修飾的糖部分”或“未經修飾的糖”意指如在RNA中發現的2’-OH(H)呋喃糖基部分（“未經修飾的RNA糖部分”）或如在DNA中發現的2’-H(H)部分（“未經修飾的DNA糖部分”）。未經修飾的糖部分在1’、3’、和4’位的每處具有一個氫，在3’位處具有氧，並且在5’位處具有兩個氫。“修飾的糖部分”或“修飾的糖”意指修飾的呋喃糖基糖部分或糖代用品。“修飾的呋喃糖基糖部分”意指呋喃糖基糖，其包含代替未經修飾的糖部分的至少一個氫的非氫取代基。在某些實施方式中，修飾的呋喃糖基糖部分係2’-取代的糖部分。此類修飾的呋喃糖基糖部分包括二環糖和非二環糖。
“糖代用品”意指具有不同於呋喃糖基部分的修飾的糖部分，該修飾的糖部分可以將核鹼基連接至另一個基團（如寡核酸中的核苷間連接、軛合物基團、或端基）。包含糖代用品的修飾的核苷可以摻入到寡核苷酸內的一個或多個位置，並且此類寡核苷酸能夠與互補化合物或核酸雜交。
“PCSK9”意指PCSK9的任何核酸或蛋白質。“PCSK9核酸”意指編碼PCSK9的任何核酸。例如，在某些實施方式中，PCSK9核酸包括編碼PCSK9的DNA序列、從編碼PCSK9的DNA（包括含有內含子和外顯子的基因組DNA）轉錄的RNA序列、以及編碼PCSK9的mRNA序列。“PCSK9mRNA”意指編碼PCSK9蛋白質的mRNA。靶標可以用大寫字母或小寫字母來表示。
“PCSK9 特異性抑制劑”係指能夠在分子水平上特異性抑制PCSK9 RNA和/或PCSK9蛋白表現或活性的任何試劑。例如，PCSK9特異性抑制劑包括能夠抑制PCSK9 RNA和/或PCSK9蛋白的表現的核酸（包括反義化合物）、肽、抗體、小分子、以及其他試劑。
“靶基因”係指編碼靶標的基因。
“靶向”意指化合物與靶核酸的特異性雜交以便引起所希望的效果。
“靶核酸”、“靶RNA”、“靶RNA轉錄物”以及“核酸靶標”全部意指能夠被在此描述的化合物靶向的核酸。
“靶區域”意指一種或多種化合物所靶向的靶核酸部分。
“靶區段”意指化合物所靶向的靶核酸的核苷酸序列。“5’靶位點”係指靶區段的最5’-核苷酸。“3’靶位點”係指靶區段的最3’核苷酸。
“端基”意指共價地連接至寡核苷酸的末端的化學基團或一組原子。
“治療有效量”意指為個體提供治療益處的化合物、藥劑、或組成物。
“治療”係指向動物給予化合物或藥物組成物，以便實現該動物的疾病、障礙或病症的改變或改善。 某些實施方式
某些實施方式提供了用於抑制PCSK9表現的方法、化合物和組成物。
某些實施方式提供了 靶向PCSK9核酸的化合物。在某些實施方式中，PCSK9核酸具有在RefSeq或基因庫登錄號NM_174936.3和從核苷酸55036001至55068000截短的基因庫登錄號NC_000001.11 （藉由引用合併，在此分別揭露為SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2）中列出的序列。在某些實施方式中，該化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，該化合物係單股的。在某些實施方式中，該化合物係雙股的。
某些實施方式提供了包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸的化合物，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少8個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，該化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，該化合物係單股的。在某些實施方式中，該化合物係雙股的。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長10至30個連接的核苷。
某些實施方式提供了包含長9至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸的化合物，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少9個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，該化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，該化合物係單股的。在某些實施方式中，該化合物係雙股的。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長10至30個連接的核苷。
某些實施方式提供了包含長10至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸的化合物，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少10個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，該化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，該化合物係單股的。在某些實施方式中，該化合物係雙股的。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長10至30個連接的核苷。
某些實施方式提供了包含長11至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸的化合物，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少11個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，該化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，該化合物係單股的。在某些實施方式中，該化合物係雙股的。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長11至30個連接的核苷。
某些實施方式提供了化合物，該化合物包含長 12至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少12個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，該化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，該化合物係單股的。在某些實施方式中，該化合物係雙股的。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長12至30個連接的核苷。
在某些實施方式中，該化合物包含長30個連接的核苷的修飾的寡核苷酸在某些實施方式中，該化合物係反義化合物或寡聚化合物。
某些實施方式提供了a包含長14至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸的化合物，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列的核鹼基序列。在某些實施方式中，該化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，該化合物係單股的。在某些實施方式中，該化合物係雙股的。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長14至30個連接的核苷。
某些實施方式提供了包含修飾的寡核苷酸之化合物，該修飾的寡核苷酸由SEQ ID NO: 3-1540中任一者的核鹼基序列組成。在某些實施方式中，該化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，該化合物係單股的。在某些實施方式中，該化合物係雙股的。
某些實施方式提供了包含長8至80個連接的核苷的修飾的寡核苷酸的化合物，並且該寡核苷酸在SEQ ID NO: 2的核鹼基6356-6371、12843-12947、12905-12948、17681-17700、19653-19673、27626-27669、27895-27949、和28105-28136中是互補的，其中所述修飾的寡核苷酸與SEQ ID NO: 2係至少85%、至少90%、至少95%、或100%互補的。在某些實施方式中，該化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，該化合物係單股的。在某些實施方式中，該化合物係雙股的。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長10至30個連接的核苷。
某些實施方式提供了化合物，該化合物包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該修飾的寡核苷酸具有包含與SEQ ID NO: 2的核鹼基6356-6371、12843-12947、12905-12948、17681-17700、19653-19673、27626-27669、27895-27949、和28105-28136的等長部分互補的至少8個連續核鹼基部分的核鹼基序列，其中所述修飾的寡核苷酸與SEQ ID NO: 2係至少85%、至少90%、至少95%、或100%互補的。在某些實施方式中，該化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，該化合物係單股的。在某些實施方式中，該化合物係雙股的。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長10至30個連接的核苷。
在某些實施方式中，化合物靶向PCSK9核酸的區域。在某些實施方式中，靶向PCSK9核酸的區域的此類化合物具有連續核鹼基部分，該連續核鹼基部分與該區域的等長核鹼基部分係互補的。例如，該部分可以是與在此列舉的區域的等長部分互補的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個連續核鹼基部分。在某些實施方式中，此類化合物 靶向SEQ ID NO: 2的以下核苷酸區域：6356-6371、12843-12947、12905-12948、17681-17700、19653-19673、27626-27669、27895-27949、和28105-28136。在某些實施方式中，該等化合物係反義化合物、寡聚化合物、或寡核苷酸。
在某些實施方式中，化合物包含長8至80個連接的核苷的修飾的寡核苷酸，並且該修飾的寡核苷酸具有與SEQ ID NO: 2的核苷酸6356-6371、12909-12924、17685-17700、19658-19673、27643-27658、27906-27921、27916-27931、27917-27932、和28107-28122中的等長部分互補的至少8、9、10、11、12、13、14、15、或16個連續的核鹼基部分。 在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長10至30個連接的核苷。
在某些實施方式中，化合物包含8至80個連接的核苷的修飾的寡核苷酸，並且該修飾的寡核苷酸在SEQ ID NO: 2的核苷酸6356-6371、12909-12924、17685-17700、19658-19673、27643-27658、27906-27921、27916-27931、27917-27932、和28107-28122中是互補的。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長10至30個連接的核苷。
在某些實施方式中，化合物包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項的至少8、9、10、11、12、13、14、15、或16個連續核鹼基部分的核鹼基序列。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長10至30個連接的核苷。
在某些實施方式中，化合物包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項的核鹼基序列。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長10至30個連接的核苷。
在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸具有由SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項組成的核鹼基序列。
在某些實施方式中，靶向PCSK9的化合物係ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681。在如以下實例部分中描述的篩選的超過1540種化合物中，ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681作為靠前的先導化合物而出現。特別地，在超過1540種化合物中ISIS 863633展示出就效力和/或可耐受性而言最佳的特性組合。
在某些實施方式中，上述修飾的寡核苷酸中任一種包括至少一種修飾的核苷間連接、至少一種修飾的糖、和/或至少一種修飾的核鹼基。
在某些實施方式中，上述修飾的寡核苷酸中任一種包括至少一種修飾的糖。在某些實施方式中，至少一種修飾的糖包括2’-O-甲氧基乙基基團。在某些實施方式中，至少一種修飾的糖係二環糖，如4’-CH(CH3)-O-2’基團、4’-CH2-O-2’基團、或4’-(CH2)2-O-2’基團。
在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸包括至少一種修飾的核苷間連接，如硫代磷酸酯核苷間連接。
在某些實施方式中，上述 修飾的寡核苷酸中任一種包括至少一種修飾的核鹼基，如5-甲基胞嘧啶。
在某些實施方式中，上述修飾的寡核苷酸中的任一種包括： 由連接的去氧核苷組成的缺口區段； 由連接的核苷組成的5’翼區段；及 由連接的核苷組成的3’翼區段；
其中該缺口區段位於該5’翼區段與該3’翼區段之間並且其中每個翼區段的每個核苷都包括修飾的糖。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長14至80個連接的核苷，並具有包含在SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項中列舉的序列的核鹼基序列。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長10至30個連接的核苷，並具有包含在SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項中列舉的序列的核鹼基序列。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長14個連接的核苷，並具有由在SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項中列舉的序列組成的核鹼基序列。
在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸或由其組成，該修飾的寡核苷酸長16-80個連接的核鹼基並且具有包含在SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項中列舉的序列的核鹼基序列，其中該修飾的寡核苷酸包括： 由十個連接的去氧核苷組成的缺口區段； 由三個連接的核苷組成的5’翼區段；及 由三個連接的核苷組成的3’翼區段； 其中該缺口區段位於該5’翼區段與該3’翼區段之間，其中每個翼區段的每個核苷包括cEt糖；其中每個核苷間連接都是硫代磷酸酯連接並且其中每個胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸由16-30個連接的核苷組成。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸由16個連接的核苷組成。
在某些實施方式中，化合物包括ISIS 863633或其鹽，或由ISIS 863633或其鹽組成，該ISIS 863633或其鹽具有以下化學結構：
在某些實施方式中，化合物包括ISIS 863633或其鹽，或由ISIS 863633或其鹽組成，該ISIS 863633或其鹽具有以下化學結構：
在某些實施方式中，化合物包括ISIS 863633的鈉鹽或由ISIS 863633的鈉鹽組成，該ISIS 863633的鈉鹽具有以下化學結構：
在上述實施方式的任一項中，該化合物或寡核苷酸可以與編碼PCSK9的核酸係至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、或100%互補的。
在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是單股的。在某些實施方式中，該化合物包括去氧核糖核苷酸。在某些實施方式中，該化合物係雙股的。在某些實施方式中，該化合物係雙股的並且包括核糖核苷酸。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是反義化合物或寡聚化合物。
在上述實施方式的任一項中，該化合物的長度可以是8至80、10至30、12至50、13至30、13至50、14至30、14至50、15至30、15至50、16至30、16至50、17至30、17至50、18至22、18至24、18至30、18至50、19至22、19至30、19至50、或20至30個連接的核苷。在某些實施方式中，該化合物包括寡核苷酸或由其組成。
在某些實施方式中，化合物包括在此描述的修飾的寡核苷酸、和軛合物基團。在某些實施方式中，該軛合物基團在該修飾的寡核苷酸的5’端連接至該修飾的寡核苷酸。在某些實施方式中，該軛合物基團在該修飾的寡核苷酸的3’端連接至該修飾的寡核苷酸。在某些實施方式中，該軛合物基團包括至少一個N-乙醯半乳糖胺（GalNAc）、至少兩個N-乙醯半乳糖胺（GalNAc）、或至少三個N-乙醯半乳糖胺（GalNAc）。
在某些實施方式中，在此提供的化合物或組成物包括該修飾的寡核苷酸的藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，該鹽係鈉鹽。在某些實施方式中，該鹽係鉀鹽。
在某些實施方式中，如在此描述的化合物或組成物由於具有小於5 µM、小於4.5 µM、小於4 µM、小於3.5 µM、小於3 µM、小於2.5 µM、小於2 µM、小於1.5 µM、小於1 µM、小於0.9 µM、小於0.8 µM、小於0.7 µM、小於0.6 µM、小於0.5 µM、小於0.4 µM、小於0.3 µM、小於0.2 µM、或小於0.1 µM的體外IC 50中的至少之一而是有活性的。
在某些實施方式中，如在此描述的化合物或組成物係可高度耐受的，如藉由具有相對於經鹽水處理的動物丙胺酸轉胺酶（ALT）或天冬胺酸轉胺酶（AST）值不超過4倍、3倍、或2倍的增加，或與對照處理的動物相比肝、脾、或腎重量不超過不超過30%、20%、15%、12%、10%、5%、或2%的增加中至少一者所證明的。在某些實施方式中，如在此描述的化合物或組成物係可高度耐受的，如藉由相對於對照處理的動物ALT或AST沒有增加所證明的。在某些實施方式中，如在此描述的化合物或組成物係可高度耐受的，如藉由相對於對照動物肝、脾、或腎重量沒有增加所證明的。
某些實施方式提供了組成物，該組成物包含前述提及的實施方式中任一項所述的化合物或或其任一種藥學上可接受的鹽以及至少一種藥學上可接受的載體或稀釋劑。在某些 實施方式中，該組成物具有小於約40厘泊（cP）、小於約30厘泊（cP）、小於約20厘泊（cP）、小於約15厘泊（cP）、或小於約10厘泊（cP）的黏度。在某些 實施方式中，具有前述提及的黏度中任一種的組成物包含處於約100 mg/mL、約125 mg/mL、約150 mg/mL、約175 mg/mL、約200 mg/mL、約225 mg/mL、約250 mg/mL、約275 mg/mL、或約300 mg/mL濃度的在此提供的化合物。在某些實施方式中，具有前述提及的黏度和/或化合物濃度中任一種的組成物具有的溫度為室溫或約20ºC、約21ºC、約22ºC、約23ºC、約24ºC、約25ºC、約26ºC、約27ºC、約28ºC、約29ºC、或約30ºC。 某些適應症
在此提供的某些實施方式涉及抑制PCSK9表現的方法，藉由給予靶向PCSK9的化合物，該方法可以用於在個體中治療、預防、或緩解與PCSK9相關的疾病。在某些實施方式中，該化合物可以是 PCSK9特異性抑制劑。在某些實施方式中，該化合物可以是靶向PCSK9的反義化合物、寡聚化合物、或寡核苷酸。
與在此提供的方法可治療，可預防和/或可緩解的PCSK9 相關的疾病的實例包括心血管疾病、血脂異常、混合性血脂異常、高膽固醇血症、LDL膽固醇降低、和動脈粥樣化載脂蛋白(a) [Lp(a)]降低。
在某些實施方式中，在個體中治療、預防、或緩解與PCSK9相關的疾病的方法包括給予該個體包含PCSK9特異性抑制劑的化合物，從而治療、預防、或緩解該疾病。在某些實施方式中，該個體被鑒定為患有與PCSK9相關的疾病或具有患該病的風險。在某些實施方式中，該疾病係心血管疾病。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的反義化合物。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的寡核苷酸。在某些實施方式中，化合物包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列的任一項的至少8個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含長14至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的任一項的核鹼基序列的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含由SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列組成的修飾的寡核苷酸。在某些實施方式中，化合物包含長14至80個連接的核苷的修飾的寡核苷酸，並且該修飾的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸具有由SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項組成的核鹼基序列。在上述實施方式的任一項中，該修飾的寡核苷酸可以長10至30個連接的核苷。在某些實施方式中，該化合物係ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是單股或雙股的。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，將該化合物胃腸外地給予至該個體。在某些實施方式中，給予該化合物降低LDL-膽固醇水平、降低Lp(a)水平、誘導LDL受體（LDL-R）活性，並且調節LDL受體-LDL-膽固醇體內平衡。
在某些實施方式中，治療、預防、或緩解心血管疾病的方法包括給予個體包含PCSK9特異性抑制劑的化合物，從而治療、預防、或緩解心血管疾病。在某些實施方式中，該心血管疾病係血脂異常或高膽固醇血症。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的反義化合物。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的寡核苷酸。在某些實施方式中，化合物包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少8個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含長14至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸由SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列組成。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸長14至80個連接的核苷，並具有包含SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸具有由SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項組成的核鹼基序列。在上述實施方式的任一項中，該修飾的寡核苷酸可以長10至30個連接的核苷。在某些實施方式中，該化合物係ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是單股或雙股的。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，將該化合物胃腸外地給予 個體。在某些實施方式中，給予該化合物降低LDL-膽固醇水平。在某些實施方式中，給予該化合物降低Lp(a)水平。在某些實施方式中，給予該化合物誘導LDL受體（LDL-R）活性。在某些實施方式中，給予該化合物調節LDL受體-LDL-膽固醇體內平衡。
在某些實施方式中，抑制細胞中PCSK9表現的方法包括使該細胞與包含PCSK9特異性抑制劑的化合物接觸，從而抑制細胞中PCSK9的表現。在某些實施方式中，該細胞係肝細胞。在某些實施方式中，該細胞在肝中。在某些實施方式中，該細胞在患有心血管疾病或具有患心血管疾病風險的個體的肝中。在某些實施方式中，該細胞在患有血脂異常或具有患血脂異常風險的個體的肝中。在某些實施方式中，該細胞在患有混合性血脂異常或具有患混合性血脂異常風險的個體的肝中。在某些實施方式中，該細胞在患有高膽固醇血症或具有患高膽固醇血症風險的個體的肝中。在某些實施方式中，給予該化合物抑制肝中PCSK9的表現。在某些實施方式中，該個體患有心血管疾病或具有患心血管疾病的風險。在某些實施方式中，該個體患有血脂異常或具有患血脂異常的風險。在某些實施方式中，該個體患有混合性血脂異常或具有患混合性血脂異常的風險。在某些實施方式中，該個體患有高膽固醇血症或具有患高膽固醇血症的風險。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的反義化合物。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的寡核苷酸。在某些實施方式中，化合物包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少8個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含長14至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸由SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列組成。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸長14至80個連接的核苷，並具有包含SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸具有由SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項組成的核鹼基序列。在上述實施方式的任一項中，該修飾的寡核苷酸可以長10至30個連接的核苷。在某些實施方式中，該化合物係ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是單股或雙股的。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，抑制細胞中PCSK9表現的方法包括使該細胞與包含PCSK9特異性抑制劑的化合物接觸，從而抑制細胞中PCSK9的表現。在某些實施方式中，該細胞係肝細胞。在某些實施方式中，該細胞在肝中。在某些實施方式中，該細胞在患有心血管疾病或具有患心血管疾病風險的個體的肝中。在某些實施方式中，該細胞在患有血脂異常或具有患血脂異常風險的個體的肝中。在某些實施方式中，該細胞在患有混合性血脂異常或具有患混合性血脂異常風險的個體的肝中。在某些實施方式中，該細胞在患有高膽固醇血症或具有患高膽固醇血症風險的個體的肝中。在某些實施方式中，給予該化合物抑制肝中PCSK9的表現。在某些實施方式中，該個體患有心血管疾病或具有患心血管疾病的風險。在某些實施方式中，該個體患有血脂異常或具有患血脂異常的風險。在某些實施方式中，該個體患有混合性血脂異常或具有患混合性血脂異常的風險。在某些實施方式中，該個體患有高膽固醇血症或具有患高膽固醇血症的風險。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的反義化合物。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的寡核苷酸。在某些實施方式中，化合物包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少8個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含長14至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸由SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列組成。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸長14至80個連接的核苷，並具有包含SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸具有由SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項組成的核鹼基序列。在上述實施方式的任一項中，該修飾的寡核苷酸可以長10至30個連接的核苷。在某些實施方式中，該化合物係ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是單股或雙股的。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是反義化合物或寡聚化合物。
在某些實施方式中，在患有與PCSK9相關的疾病或具有患該病的風險的個體的肝臟中降低或抑制LDL-膽固醇水平，降低或抑制Lp(a)水平，誘導LDL受體（LDL-R）活性，或調節LDL受體-LDL-膽固醇體內平衡的方法包括給予該個體包含PCSK9特異性抑制劑的化合物，從而在該個體的肝臟中降低或抑制LDL-膽固醇和Lp(a)水平，誘導LDL受體（LDL-R）活性，並調節LDL受體-LDL-膽固醇體內平衡。在某些實施方式中，該個體患有心血管疾病或具有患心血管疾病的風險。在某些實施方式中，該個體患有血脂異常或具有患血脂異常的風險。在某些實施方式中，該個體患有混合性血脂異常或具有患混合性血脂異常的風險。在某些實施方式中，該個體患有高膽固醇血症或具有患高膽固醇血症的風險。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的反義化合物。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的寡核苷酸。在某些實施方式中，化合物包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少8個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含長14至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸由SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列組成。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸長14至80個連接的核苷，並具有包含SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸具有由SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項組成的核鹼基序列。在上述實施方式的任一項中，該修飾的寡核苷酸可以長10至30個連接的核苷。在某些實施方式中，該化合物係ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是單股或雙股。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，將該化合物胃腸外地給予至該個體。在某些實施方式中，該個體被鑒定為患有與PCSK9相關的疾病或具有患該病的風險。
撰寫某些實施方式涉及包含PCSK9特異性抑制劑的化合物，該化合物用於在治療與PCSK9相關的疾病中使用。在某些實施方式中，該疾病係心血管疾病。在某些實施方式中，該疾病係血脂異常。在某些 實施方式中，該疾病係混合性血脂異常。在某些實施方式中，該疾病係高膽固醇血症。在某些實施方式中，該化合物包含靶向PCSK9的反義化合物。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的寡核苷酸。在某些實施方式中，化合物包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少8個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含長14至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸由SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列組成。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸長14至80個連接的核苷，並具有包含SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項的核鹼基序列。在某些實施方式中， 化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸具有由SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項組成的核鹼基序列。在上述實施方式的任一項中，該修飾的寡核苷酸可以長10至30個連接的核苷。在某些實施方式中，該化合物係ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是單股或雙股的。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，將該化合物胃腸外地給予至該個體。
撰寫某些實施方式涉及 包含PCSK9特異性抑制劑的化合物，該化合物用於在患有心血管疾病或具有患心血管疾病風險的個體中降低或抑制LDL-膽固醇、降低或抑制Lp(a)水平、誘導LDL受體（LDL-R）活性、以及調節LDL受體-LDL-膽固醇體內平衡中使用。在某些實施方式中，該心血管疾病係血脂異常或高膽固醇血症。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的反義化合物。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的寡核苷酸。在某些實施方式中，化合物包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少8個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含長14至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸由SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列組成。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸長14至80個連接的核苷，並具有包含SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸具有由SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項組成的核鹼基序列。在上述實施方式的任一項中，該修飾的寡核苷酸可以長10至30個連接的核苷。在某些實施方式中，該化合物係ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是單股或雙股。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是反義化合物或寡聚化合物。
撰寫某些實施方式涉及包含PCSK9特異性抑制劑的化合物用於生產或製備用於治療與PCSK9相關的疾病的藥物的用途。撰寫某些實施方式涉及包括PCSK9特異性抑制劑的用於製備用於治療與PCSK9相關的疾病的藥物的化合物的用途。在某些實施方式中，該疾病係心血管疾病。在某些實施方式中，該疾病係血脂異常。在某些實施方式中，該疾病係混合性血脂異常。在某些實施方式中，該疾病係高膽固醇血症。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的反義化合物。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的寡核苷酸。在某些實施方式中，化合物包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少8個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含長14至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並該修飾的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸由SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列組成。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸長14至80個連接的核苷，並具有包含SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸具有由SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項組成的核鹼基序列。在上述實施方式的任一項中，該修飾的寡核苷酸可以長10至30個連接的核苷。在某些實施方式中，該化合物係ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、以及ISIS 863681。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是單股或雙股的。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是反義化合物或寡聚化合物。
撰寫某些實施方式涉及包含PCSK9特異性抑制劑的化合物用於生產或製備藥物的用途，該藥物用於在患有心血管疾病或具有患心血管疾病風險的個體中降低或抑制LDL-膽固醇水平、降低或抑制Lp(a)水平、誘導LDL受體（LDL-R）活性、以及調節LDL受體-LDL-膽固醇體內平衡。在某些實施方式中，該心血管疾病係血脂異常或高膽固醇血症。撰寫某些實施方式涉及包含PCSK9特異性抑制劑的化合物用於製備藥物的用途，該藥物用於在患有心血管疾病或具有患心血管疾病風險的個體中降低或抑制LDL-膽固醇水平、降低或抑制Lp(a)水平、誘導LDL受體（LDL-R）活性、以及調節LDL受體-LDL-膽固醇體內平衡。在某些實施方式中，該心血管疾病係血脂異常或高膽固醇血症。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的反義化合物。在某些實施方式中，該化合物包括靶向PCSK9的寡核苷酸。在某些實施方式中，化合物包含長8至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並且該寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540的核鹼基序列中任一項的至少8個連續核鹼基的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含長14至80個連接核苷的修飾的寡核苷酸，並該修飾的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸由SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列組成。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸長14至80個連接的核苷，並具有包含SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項的核鹼基序列。在某些實施方式中，化合物包含修飾的寡核苷酸，該修飾的寡核苷酸具有由SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項組成的核鹼基序列。在上述實施方式的任一項中，該修飾的寡核苷酸可以長10至30個連接的核苷。在某些實施方式中，該化合物係ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、 ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是單股或雙股的。在上述實施方式的任一項中，該化合物可以是反義化合物或寡聚化合物。
在上述方法或用途的任一項中，該化合物可以靶向PCSK9。在某些實施方式中，該化合物包括修飾的寡核苷酸或由其組成，例如修飾的寡核苷酸長8至80個連接的核苷、10至30個連接的核苷、12至30個連接的核苷、或20個連接的核苷。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸與在SEQ ID NO:1、2、1545-1550中列舉的核鹼基序列中任一項係至少80%、85%、90%、95%、或100%互補的。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸包括至少一種修飾的核苷間連接、至少一種修飾的糖和/或至少一種修飾的核鹼基。在某些實施方式中，該修飾的核苷間連接係硫代磷酸酯核苷間連接，該修飾的糖係二環糖或2’-O-甲氧基乙基，並且該修飾的核鹼基係5-甲基胞嘧啶。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸包括由連接的去氧核苷組成的缺口區段；由連接的核苷組成的5’翼區段；及由連接的核苷組成的3’翼區段，其中該缺口區段被定位成緊鄰該5’翼區段和該3’翼區段並且位於它們之間，並且其中每個翼區段的每個核苷都包括修飾的糖。
在任何上述實施方式中，修飾的寡核苷酸長12至30、15至30、15至25、15至24、16至24、17至24、18至24、19至24、20至24、19至22、20至22、16至20、或17至20個連接的核苷。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸與SEQ ID NO: 1、2、1545-1550所列舉的核鹼基序列中任一項係至少80%、85%、90%、95%或100%互補。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸包括至少一種修飾的核苷間連接、至少一種修飾的糖和/或至少一種修飾的核鹼基。在某些實施方式中，該修飾的核苷間連接係硫代磷酸酯核苷間連接，該修飾的糖係二環糖或2’-O-甲氧基乙基，並且該修飾的核鹼基係5-甲基胞嘧啶。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸包括由連接的2’-去氧核苷組成的缺口區段；由連接的核苷組成的5’翼區段；及由連接的核苷組成的3’翼區段，其中該缺口區段被定位成緊鄰該5’翼區段和該3’翼區段並且位於它們之間，並且其中每個翼區段的每個核苷都包括修飾的糖。
在上述方法或用途的任一項中，該化合物包含修飾的寡核苷酸或由其組成，該寡核苷酸長14至30個連接核苷並且具有包含SEQ ID NO: 3-1540的任一項中的核鹼基序列，其中該修飾的寡核苷酸包含： 由連接的2’-去氧核苷組成的缺口區段； 由連接的核苷組成的5’翼區段；及 由連接的核苷組成的3’翼區段； 其中該缺口區段位於該5’翼區段與該3’翼區段之間並且其中每個翼區段的每個核苷都包括修飾的糖。
在上述方法或用途的任一項中，該化合物包括修飾的寡核苷酸或由其組成，該修飾的寡核苷酸長16至80個連接的核鹼基，並具有如下核鹼基序列，該核鹼基序列包含在SEQ ID NO: 1016、1528、763、1071、1147、1149、1016、955、1195、和353中任一項列舉的序列或由其組成，其中該修飾的寡核苷酸包括： 由十個連接的去氧核苷組成的缺口區段； 由三個連接的核苷組成的5’翼區段；及 由三個連接的核苷組成的3’翼區段； 其中該缺口區段位於該5’翼區段與該3’翼區段之間，其中每個翼區段的每個核苷包括cEt糖；其中每個核苷間連接都是硫代磷酸酯連接；其中每個胞嘧啶係5-甲基胞嘧啶。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長16-80個連接的核苷。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸長16-30個連接的核苷。
在上述方法或用途的任一項中，該化合物包括ISIS 863633或其鹽，或由ISIS 863633或其鹽組成，該ISIS 863633或其鹽具有以下化學結構：
在上述方法或用途的任一項中，該化合物包括ISIS 863633或其鹽，或由ISIS 863633或其鹽組成，該ISIS 863633或其鹽具有以下化學結構：
在上述方法或用途的任一項中，該化合物包括ISIS 863633的鈉鹽或由ISIS 863633的鈉鹽組成，該ISIS 863633的鈉鹽具有以下化學結構：
在上述方法或用途的任一項中，可以將該化合物胃腸外地給予。 例如，在某些實施方式中可以將該化合物藉由注射或輸注給予。胃腸外給予包括皮下給予、靜脈內給予、肌內給予、動脈內給予、腹膜內給予、或顱內給予（例如鞘內或腦室內給予）。 某些化合物
在某些實施方式中，在此描述的化合物可以是反義化合物。在某些實施方式中，該反義化合物包括寡聚化合物或由其組成。在某些實施方式中，該寡聚化合物包括修飾的寡核苷酸。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸具有與靶核酸的核鹼基序列互補的核鹼基序列。
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括修飾的寡核苷酸或由其組成。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸具有與靶核酸的核鹼基序列互補的核鹼基序列。
在某些實施方式中，化合物或反義化合物係單股的。這樣的單股化合物或反義化合物包括寡聚化合物或由其組成。在某些實施方式中，這樣的寡聚化合物包括寡核苷酸或由其組成，並且視情況軛合物基團。在某些實施方式中，該寡核苷酸係反義寡核苷酸。在某些實施方式中，該寡核苷酸被修飾。在某些實施方式中，單股反義化合物或寡聚化合物的寡核苷酸包括自我互補的核鹼基序列。
在某些實施方式中，化合物係雙股的。此類雙股化合物包括具有與靶核酸互補的區域的第一修飾的寡核苷酸以及具有與第一修飾的寡核苷酸互補的區域的第二修飾的寡核苷酸。在某些實施方式中，該修飾的寡核苷酸係RNA寡核苷酸。在此類實施方式中，在修飾的寡核苷酸中的胸腺嘧啶核鹼基被尿嘧啶核鹼基替換。在某些實施方式中，化合物包括軛合物基團。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸中的一種係軛合的。在某些實施方式中，兩種修飾的寡核苷酸均是軛合的。在某些實施方式中，第一修飾的寡核苷酸係軛合的。在某些實施方式中，第二修飾的寡核苷酸係軛合的。在某些實施方式中，第一修飾的寡核苷酸長12-30個連接的核苷，並且第二修飾的寡核苷酸長12-30個連接的核苷。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸中的一種具有包含SEQ ID NO: 3-1540中任一項的至少8個連續核鹼基的核鹼基序列。
在某些實施方式中，反義化合物係雙股的。此類雙股反義化合物包括具有與靶核酸互補的區域的第一寡聚化合物以及具有與第一寡聚化合物互補的區域的第二寡聚化合物。此類雙股的反義化合物的第一寡聚化合物通常包括修飾的寡核苷酸和視情況軛合物基團，或由修飾的寡核苷酸和視情況軛合物基團組成。此類雙股反義化合物的第二寡聚化合物的寡核苷酸可以是修飾的或未修飾的。雙股反義化合物的任一寡聚化合物或兩種寡聚化合物可以包括軛合物基團。雙股反義化合物的該等寡聚化合物可以包括非互補突出的核苷。
單股的和雙股的化合物的實例包括但不限於寡核苷酸、siRNA、靶向寡核苷酸的微小RNA、以及單股RNAi化合物，如小髮夾RNA（shRNA）、單股siRNA（ssRNA）、和微小RNA模擬物。
在某些實施方式中，在此描述的化合物具有以下核鹼基序列，當按5’至3’方向編寫時，該核鹼基序列包括所靶向的靶核酸的靶區段的反向互補序列。
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長10至30個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長12至30個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的a化合物包括 長12至22個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長14至30個連接的亞單位的寡核苷酸。 在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長14至20個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長15至30個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長15至20個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長16至30個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長16至20個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長17至30個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長17至20個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長18至30個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，a在此描述的化合物包括長18至21個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，a在此描述的化合物包括長18至20個連接的亞單位的寡核苷酸。 在某些實施方式中，a在此描述的化合物包括長20至30個連接的亞單位的寡核苷酸。換言之，此類寡核苷酸分別長12至30個連接的亞單位、14至30個連接的亞單位、14至20個亞單位、15至30個亞單位、15至20個亞單位、16至30個亞單位、16至20個亞單位、17至30個亞單位、17至20個亞單位、18至30個亞單位、18至20個亞單位、18至21個亞單位、20至30個亞單位、或12至22個連接的亞單位。在某些實施方式中，在此描述的 化合物 包括長14個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長16個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的 化合物 包括長17個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長18個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括長19個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些實施方式中，在此描述的 化合物 包括長20個連接的亞單位的寡核苷酸。在其他實施方式中，在此描述的化合物包括長8至80、12至50、13至30、13至50、14至30、14至50、15至30、15至50、16至30、16至50、17至30、17至50、18至22、18至24、18至30、18至50、19至22、19至30、19至50、或20至30個連接的亞單位的寡核苷酸。在某些這樣的實施方式中，在此描述的化合物包括長8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、或80個連接的亞單位，或由以上值中任兩個所限定的範圍的寡核苷酸。在一些實施方式中，該連接的亞單位係核苷酸、核苷、或核鹼基。
在某些實施方式中，該化合物可以進一步包括另外的附接至該寡核苷酸的特徵或元件，如軛合物基團。在某些實施方式中，此類化合物係反義化合物。在某些實施方式中，此類化合物係寡聚化合物。在軛合物基團包括核苷（即將該軛合物基團連接至該寡核苷酸的核苷）的實施方式中，該軛合物基團的核苷未被算在該寡核苷酸的長度中。
在某些實施方式中，化合物可以被縮短或截短。例如，可以從5’端（5’截短）、或可替代地從3’端（3’截短）刪除單個亞單位。靶向PCSK9核酸的經縮短的或經截短的化合物可以從該化合物的5’端刪除兩個亞單位，或可替代地，可以從該化合物的3’端刪除兩個亞單位。可替代地，被刪除的核苷可以分散遍及該化合物。
當單個的另外的亞單位存在於加長的化合物中時，該另外的亞單位可以位於該化合物的5’或3’端。當兩個或更多個另外的亞單位存在時，所添加的亞單位可以彼此相鄰，例如，在向該化合物的5’端（5’添加）、或可替代地向3’端（3’添加）添加了兩個亞單位的化合物中。可替代地，經添加的亞單位可以分散遍及該化合物。
增加或減少化合物（如寡核苷酸）的長度係可能的，和/或引入錯配鹼基而不消除活性（Woolf等人 Proc. Natl. Acad. Sci. USA[美國國家科學院院刊]1992, 89:7305-7309； Gautschi等人 J. Natl. Cancer Inst. [美國國立癌症研究所雜誌] 2001年3月, 93:463-471； Maher和Dolnick Nuc. Acid. Res. [核酸研究]1998, 16:3341-3358)。然而，表面上看來，寡核苷酸序列、化學和模體中的小變化可以在臨床開發所需的許多特性的一者或多者中造成較大的差異（Seth等人 J. Med. Chem.[藥物化學雜誌]2009, 52, 10； Egli等人 J. Am. Chem. Soc.[美國化學會志]） 2011, 133, 16642）。
在某些實施方式中，在此描述的化合物係干擾RNA化合物（RNAi），這包括雙股RNA化合物（也稱為短干擾RNA或siRNA）和單股RNAi化合物（或ssRNA）。此類化合物至少部分地通過RISC途徑起作用,以降解和/或螯合靶核酸（因此，包括微小RNA/微小RNA模擬化合物）。如在此使用的，術語siRNA意在與用於描述能夠介導序列特異性RNAi的核酸分子的其他術語係等效的，該等核酸分子係例如短干擾RNA（siRNA）、雙股RNA（dsRNA）、微小RNA（miRNA）、短髮夾RNA（shRNA）、短干擾寡核苷酸、短干擾核酸、短干擾修飾的寡核苷酸、化學修飾的siRNA、轉錄後基因沈默RNA（ptgsRNA）、以及其他。另外，如在此使用的，術語“RNAi”意在與用於描述序列特異性RNA干擾（如轉錄後基因沈默、翻譯抑制、或表觀遺傳學）的其他術語係等效的。
在某些實施方式中，在此描述的化合物可以包括靶向在此描述的PCSK9的寡核苷酸序列中的任一個。在某些實施方式中，該化合物可以是雙股的。在某些實施方式中，該化合物包括第一股和第二股，該第一股包含SEQ ID NO: 13-1540中任一項的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個連續核鹼基部分。在某些實施方式中，該化合物包括第一股和第二股，該第一股包含SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列。在某些實施方式中，該化合物包括核糖核苷酸，在該等核糖核苷酸中第一股具有代替SEQ ID NO: 3-1540的任一項中的胸腺嘧啶（T）的尿嘧啶（U）。在某些實施方式中，該化合物包括 (i) 第一股，其包含與PCSK9上的SEQ ID NO: 3-1540中任一項所靶向的位點互補的核鹼基序列，和 (ii) 第二股。在某些實施方式中，該化合物包括 一個或多個修飾的核苷酸，在該等核苷酸中糖中的2'位包含鹵素（如氟基團；2’-F）或包含烷氧基基團（如甲氧基基團；2’-OMe）。在某些實施方式中，該化合物包括至少一個2’-F糖修飾和至少一個2’-OMe糖修飾。在某些實施方式中，對於沿著該dsRNA化合物的股的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個連續核鹼基而言，該至少一個2’-F糖修飾和至少一個2’-OMe糖修飾被安排成交替模式。在某些實施方式中，該化合物在相鄰核苷酸之間包括除天然存在的磷酸二酯連接之外的一種或多種連接。此類連接的實例包括磷醯胺、硫代磷酸酯、和二硫代磷酸酯連接。該等化合物還可以是化學修飾的核酸分子，如在美國專利中所傳授的號6,673,661。在其他實施方式中，該化合物包含一條或兩條加帽股，如由例如2000年4月19日提交的WO 00/63364。
在某些實施方式中，該化合物的第一股係siRNA引導股，並且該化合物的第二股係siRNA過客股。在某些實施方式中，該化合物的第二股與第一股互補。在某些實施方式中，該化合物的每條股長16、17、18、19、20、21、22、或23個連接的核苷。在某些實施方式中，該化合物的第一股或第二股可以包括軛合物基團。
在某些實施方式中，在此描述的化合物可以包括靶向在此描述的PCSK9的寡核苷酸序列中的任一個。在某些實施方式中，該化合物係單股的。在某些實施方式中，這樣的化合物係單股RNAi（ssRNAi）化合物。在某些實施方式中，該化合物包括SEQ ID NO: 3-1540中任一項的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個連續核鹼基部分。在某些實施方式中，該化合物包括SEQ ID NO: 3-1540中任一項的核鹼基序列。在某些實施方式中，該化合物包括核糖核苷酸，其中在SEQ ID NO: 3-1540中任一項中尿嘧啶（U）替換胸腺嘧啶（T）。在某些實施方式中，該化合物包括與PCSK9上的SEQ ID NO: 3-1540中任一項所靶向的位點互補的核鹼基序列在某些實施方式中，該化合物包括一個或多個修飾的核苷酸，在該等核苷酸中糖中的2'位包含鹵素（如氟基團；2’-F）或包含烷氧基基團（如甲氧基基團；2’-OMe）。在某些實施方式中，該化合物包括至少一個2’-F糖修飾和至少一個2’-OMe糖修飾。在某些實施方式中，對於沿著該化合物的股的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個連續核鹼基而言，該至少一個2’-F糖修飾和至少一個2’-OMe糖修飾被安排成交替模式。在某些實施方式中，該化合物在相鄰核苷酸之間包括除天然存在的磷酸二酯連接之外的一種或多種連接。此類連接的實例包括磷醯胺、硫代磷酸酯、和二硫代磷酸酯連接。該等化合物還可以是化學修飾的核酸分子，如在美國專利案號6,673,661中所傳授的。在其他實施方式中，該化合物包含加帽股，如由例如2000年4月19日提交的WO 00/63364所揭露的。在某些實施方式中，該化合物由16、17、18、19、20、21、22、或23個連接的核苷組成。在某些實施方式中，該化合物可以包括軛合物基團。
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括修飾的寡核苷酸。某些修飾的寡核苷酸具有一個或多個不對稱中心並且因此產生鏡像異構物、非鏡像異構物、和其他立體異構組態，就絕對立體化學而言，它們可以被定義為(R)或(S)，或定義為α或β（如針對糖異頭物），或定義為(D)或(L)（如針對胺基酸）等。在此提供的修飾的寡核苷酸中包括所有此類可能的異構物，包括其外消旋的和光學純的形式，除非另外說明。同樣地，也包括所有順式-和反式-異構物以及互變異構形式。
在此描述的化合物包括其中一個或多個原子被指定元素的非放射性同位素或放射性同位素置換的變體。例如，包含氫原子的在此的化合物涵蓋對於每個 1H氫原子的所有可能的氘取代。由在此的化合物涵蓋的同位素取代包括但不限於： 2H或 3H代替 1H、 13C或 14C代替 12C、 15N代替 14N、 17O或 18O代替 16O、以及 33S、 34S、 35S、或 36S代替 32S。在某些實施方式中，非放射性同位素取代可以賦予化合物新的特性，該等特性有益於用作治療或研究工具。在某些實施方式中，放射性同位素取代可使化合物適合於研究或診斷目的，例如成像測定。 某些機制
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括修飾的寡核苷酸或由其組成。在某些實施方式中，在此描述的化合物係反義化合物。在某些實施方式中，化合物包括寡聚化合物。在某些實施方式中，在此描述的化合物能夠雜交到靶核酸上，從而產生至少一種反義活性。在某些實施方式中，在此描述的化合物選擇性地影響一個或多個靶核酸。此類化合物包括雜交到一個或多個靶核酸上的核鹼基序列，從而產生一種或多種所希望的反義活性，並且不雜交到一個或多個非靶核酸上或不以產生顯著所不希望的反義活性的這樣一種方式雜交到一個或多個非靶核酸上。
在某些反義活性中，在此描述的化合物與靶核酸的雜交導致募集切割該靶核酸的蛋白質。例如，在此描述的某些化合物致RNase H介導的靶核酸切割。RNase H係一種切割RNA : DNA雙股體的RNA股的細胞內切核酸酶。這樣的RNA : DNA雙股體中的DNA不必是未經修飾的DNA。在某些實施方式中，在此描述的化合物足夠“像DNA（DNA-like）”以引起RNase H活性。進一步地，在某些實施方式中，在缺口體的缺口中耐受一個或多個非DNA樣核苷。
在某些反義活性中，將在此描述的化合物或化合物的一部分載入到RNA誘導沈默複合體（RISC）中，從而最終導致靶核酸的切割。例如，在此描述的某些化合物導致該靶核酸被Argonaute切割。載入到RISC中的化合物係RNAi化合物。RNAi化合物可以是雙股（siRNA）或單股（ssRNA）的。
在某些實施方式中，在此描述的化合物與靶核酸的雜交不導致募集切割該靶核酸的蛋白質。在某些這樣的實施方式中，該化合物與靶核酸的雜交導致該靶核酸的剪接的改變。在某些實施方式中，該化合物與靶核酸的雜交導致該靶核酸與蛋白質或其他核酸之間的結合相互作用的抑制。在某些這樣的實施方式中，該化合物與靶核酸的雜交導致該靶核酸的翻譯的改變。
可以直接地或間接地觀察到反義活性。在某些實施方式中，反義活性的觀察或檢測涉及觀察或檢測靶核酸或由這樣的靶核酸編碼的蛋白質的量的變化、核酸或蛋白質的剪接變體的比率的變化、和/或細胞或動物中的表型變化。 靶核酸、靶區域以及核苷酸序列
在某些實施方式中，在此描述的的該等化合物包括以下寡核苷酸或由其組成，該寡核苷酸包含與靶核酸互補的區域。在某些實施方式中，該靶核酸係內源RNA分子。在某些實施方式中，該靶核酸編碼蛋白質。在某些這樣的實施方式中，該靶核酸選自：mRNA和前mRNA，包括內含子區、外顯子區和非翻譯區。在某些實施方式中，該靶RNA係mRNA。在某些實施方式中，該靶核酸係前mRNA。在某些這樣的實施方式中，該靶區域整個在內含子內。在某些實施方式中，該靶區域跨內含子/外顯子接點。在某些實施方式中，該靶區域的至少50%在內含子內。
編碼PCSK9的核苷酸序列包括但不限於以下：RefSEQ No. 基因庫登錄號NM_174936.3（SEQ ID NO: 1）、從核苷酸55036001至55068000（SEQ ID NO: 2）截短的基因庫登錄號NC_000001.11、基因庫登錄號AK124635.1（SEQ ID NO: 1545）、從核苷酸25475000至25504000（SEQ ID NO: 1546）截短的基因庫登錄號NT_032977.8、基因庫登錄號DA092236.1（SEQ ID NO: 1547）、基因庫登錄號DA803830.1（SEQ ID NO: 1548）、基因庫登錄號DC352135.1（SEQ ID NO: 1549）、和基因庫登錄號NR_110451.1（SEQ ID NO: 1550）。 雜交
在一些實施方式中，雜交發生在a在此揭露的化合物與PCSK9核酸之間。最常見的雜交機制涉及核酸分子的互補核鹼基之間的氫鍵合（例如，沃森-克裡克（Watson-Crick）、胡斯坦（Hoogsteen）或反向胡斯坦氫鍵合）。
雜交能在不同的條件下發生。雜交條件係序列依賴性的，並且由待雜交的核酸分子的性質和組成決定。
測定序列是否可與靶核酸特異性地雜交的方法係本領域熟知的。在某些實施方式中，在此提供的化合物與PCSK9核酸特異性地雜交。 互補性
當將兩個核鹼基序列在相反方向上進行比對時，這樣的寡核苷酸或其一個或多個區域的核鹼基序列匹配另一個寡核苷酸或核酸或其一個或多個區域的核鹼基序列，則寡核苷酸被說成與另一個核酸互補。如在此描述的，核鹼基匹配或互補核鹼基限於以下鹼基對：腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）、腺嘌呤（A）和尿嘧啶（U）、胞嘧啶（C）和鳥嘌呤（G）、以及5-甲基胞嘧啶（mC）和鳥嘌呤（G），除非另外說明。互補寡核苷酸和/或核酸無需在每個核苷處都具有核鹼基互補性，並且可以包括一個或多個核鹼基錯配。當此類寡核苷酸在每個核苷處都具有核鹼基匹配而沒有任何核鹼基錯配時，寡核苷酸係完全互補的或100%互補的。
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括修飾的寡核苷酸或由其組成。在某些實施方式中，在此描述的化合物係反義化合物。在某些實施方式中，化合物包括寡聚化合物。化合物與PCSK9核酸之間的非互補核鹼基可以被耐受，只要該化合物仍然能夠與靶核酸特異性地雜交。此外，化合物可以雜交到PCSK9核酸的一個或多個區段上，使得間插或相鄰區段不涉及在雜交事件中（例如，環結構、錯配或髮夾結構）。
在某些實施方式中，在此提供的化合物或其指定部分與PCSK9核酸、其靶區域、靶區段、或指定部分係、至少是、或高達70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%互補的。在某些實施方式中，在此提供的化合物或其指定部分與PCSK9核酸、其靶區域、靶區段、或指定部分係70%至75%、75%至80%、80%至85%、85%至90%、90%至95%、95%至100%或是在該等範圍之間的任何數目互補的。化合物與靶核酸的百分比互補性可以使用常規方法測定。
例如，在化合物的20個核鹼基中有18個與靶區域互補並且因此特異性雜交的化合物代表90%互補性。在這個實例中，剩餘的非互補核鹼基可以與互補核鹼基成簇或散佈，並且不需要彼此連續或與互補核鹼基連續。因此，長18個核鹼基、具有由與靶核酸完全互補的兩個區域側接的四個非互補核鹼基的化合物與靶核酸具有77.8%的總體互補性。使用本領域已知的BLAST程式（基本局部比對搜索工具）和PowerBLAST程式（Altschul等人， J. Mol. Biol.[分子生物學雜誌]，1990，215，403 410；Zhang和Madden，Genome Res. [基因組研究]，1997，7，649 656）可以常規地確定化合物與靶核酸區域的互補性百分比。可以藉由例如使用史密斯（Smith）和沃特曼（Waterman）演算法（（Adv. Appl. Math. [應用數學進展]，1981，2，482 489）的Gap程式（威斯康辛序列分析套裝軟體（Wisconsin Sequence Analysis Package），用於Unix的版本8，遺傳學電腦集團（Genetics Computer Group），威斯康辛州麥迪森大學科技園（University Research Park, Madison Wis.）），使用默認設置確定百分比同源性、序列一致性或互補性。
在某些實施方式中，在此描述的化合物或其指定部分與靶核酸、或其指定部分完全互補（即100%互補）。例如，化合物可以與PCSK9核酸、或其靶區域、或靶區段或靶序列完全互補。如在此使用的，“完全互補”意指化合物的每個核鹼基a與靶核酸的對應核鹼基係互補的。例如，只要400個核鹼基長的靶核酸中存在與20個核鹼基的化合物完全互補的的相應的20個核鹼基部分，則該化合物與該靶序列完全互補。完全互補也可以關於第一和/或第二核酸的指定部分來使用。例如，30個核鹼基 化合物的20個核鹼基部分可以與400個核鹼基長的靶序列“完全互補”。30個核鹼基的化合物的20個核鹼基部分與該靶序列完全互補，如果該靶序列具有相應的20個核鹼基部分、其中每個核鹼基與該化合物的20個核鹼基部分互補的話。同時，整個30個核鹼基的化合物可以完全或可以不完全與該靶序列互補，這取決於該化合物的剩餘10個核鹼基是否也與該靶序列互補。
在某些實施方式中，相對於該靶核酸，在此描述的化合物包括一個或多個錯配的核鹼基。在某些這樣的實施方式中，針對該靶標的反義活性被此類錯配降低，但是針對非靶標的活性被降低更大的量。因此，在某些這樣的實施方式中，該化合物的選擇性得以改進。在某些實施方式中，該錯配特異性地位於具有缺口體模體的寡核苷酸內。在某些這樣的實施方式中，該錯配在離該缺口區域的5’-端的位置1、2、3、4、5、6、7、或8處。在某些這樣的實施方式中，該錯配在離該缺口區域的3’-端的位置9、8、7、6、5、4、3、2、1處。在某些這樣的實施方式中，該錯配在離該翼區域的5’-端的位置1、2、3、或4處。在某些這樣的實施方式中，該錯配在離該翼區域的3’-端的位置4、3、2、或1處。在某些實施方式中，該錯配特異性地位於不具有缺口體模體的寡核苷酸內。在某些這樣的實施方式中，該錯配在離寡核苷酸的5’端的位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12處。在某些這樣的實施方式中，該錯配在離寡核苷酸的3’端的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12處。
非互補核鹼基的位置可以在該 化合物的5’端或3’端。可替代地，非互補核鹼基或核鹼基可以在該化合物的內部位置處。當存在兩個或更多個非互補核鹼基時，它們可以是連續的（即連接的）或不連續的。在一個實施方式中，非互補核鹼基位於缺口體寡核苷酸的翼區段中。
在某些實施方式中，長、或長達11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個核鹼基的在此描述的化合物相對於靶核酸（如PCSK9核酸）或其指定部分包括不超過4、不超過3、不超過2、或不超過1個非互補核鹼基。
在某些實施方式中，長、或長達11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30個核鹼基的在此描述的化合物相對於靶核酸（如PCSK9核酸）或其指定部分包括不超過6、不超過5、不超過4、不超過3、不超過2、或不超過1個非互補核鹼基。
在某些實施方式中，在此描述的化合物還包括與靶核酸的一部分互補的那些。如在此使用的，“部分”係指靶核酸的區域或區段內確定數目的連續的（即連接的）核鹼基。“部分”也可以指化合物的確定數目的連續核鹼基。在某些實施方式中，該等化合物與靶區段的至少8個核鹼基部分互補。在某些實施方式中，該等化合物與靶區段的至少9個核鹼基部分互補。在某些實施方式中，該等化合物與靶區段的至少10個核鹼基部分互補。在某些實施方式中，該等化合物與靶區段的至少11個核鹼基部分互補。在某些實施方式中，該等化合物與靶區段的至少12個核鹼基部分互補。在某些實施方式中，該等化合物與靶區段的至少13個核鹼基部分互補。在某些實施方式中，該等化合物與靶區段的至少14個核鹼基部分互補。在某些實施方式中，該等化合物與靶區段的至少15個核鹼基部分互補。在某些實施方式中，該等化合物與靶區段的至少16個核鹼基部分互補。還考慮了與靶區段的至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或更多個核鹼基部分、或由該等值中任兩個所限定的範圍互補的化合物。 一致性
在此提供的該等 化合物也可以與特定核苷酸序列、SEQ ID NO、或由特定ION編號代表的化合物、或其部分具有確定的百分比一致性。在某些實施方式中，在此描述的化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，在此描述的化合物係修飾的寡核苷酸。如在此使用的，如果化合物具有與在此揭露的序列相同的核鹼基配對能力，則該反義化合物與在此揭露的序列係一致的。例如，代替揭露的DNA序列中的胸腺嘧啶而包含尿嘧啶的RNA被認為與該DNA序列係一致的，因為尿嘧啶和胸腺嘧啶兩者均與腺嘌呤配對。還考慮了在此描述的化合物的縮短和加長形式以及相對於在此提供的化合物具有非一致鹼基的化合物c。該等非一致鹼基可以彼此相鄰或分散遍及該化合物。化合物的百分比一致性根據相對於與它正在進行比較的序列具有一致鹼基配對的鹼基數來計算。
在某些實施方式中，在此描述的化合物或其部分與在此揭露的 化合物或SEQ ID NO、或其部分的一個或多個係，或至少是70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的。在某些實施方式中，在此描述的化合物與特定核苷酸序列、SEQ ID NO、或由特定ION編號代表的化合物、或其部分係約70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%一致性，或該等值之間的任何百分比，其中該等化合物包括具有一個或多個錯配的核鹼基的寡核苷酸。在某些這樣的實施方式中，該錯配在離寡核苷酸的5’端的位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12處。在某些這樣的實施方式中，該錯配在離寡核苷酸的3’端的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12處。
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括反義化合物或由其組成。在某些實施方式中，將該反義化合物的一部分與該靶核酸的相同長度部分進行比較。在某些實施方式中，將8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、或25個核鹼基的部分與該靶核酸的相同長度部分進行比較。
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括寡核苷酸或由其組成。在某些實施方式中，將該寡核苷酸的一部分與該靶核酸的等長部分進行比較。在某些實施方式中，將8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、或25個核鹼基的部分與該靶核酸的相同長度部分進行比較。 某些修飾的化合物
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括寡核苷酸或由其組成，該寡核苷酸由連接的核苷組成。寡核苷酸可以是未經修飾的寡核苷酸（RNA或DNA）或可以是修飾的寡核苷酸。相對於未經修飾的RNA或DNA，修飾的寡核苷酸包括至少一種修飾（即，包括至少一種修飾的核苷（包含修飾的糖部分和/或修飾的核鹼基）和/或至少一種修飾的核苷間連接）。 A. 修飾的核苷
修飾的核苷包括修飾的糖部分或修飾的核鹼基或同時包括修飾的糖部分和修飾的核鹼基。 1.修飾的糖部分
在某些實施方式中，糖部分係非二環修飾的糖部分。在某些實施方式中，修飾的糖部分係二環的或三環的糖部分。在某些實施方式中，修飾的糖部分係糖代用品。此類糖代用品可以包括對應於修飾的糖部分其他類型的那些的一個或多個取代。
在某些實施方式中，修飾的糖部分係非二環修飾的糖部分，該等非二環修飾的糖部分包含具有一個或多個非環狀取代基（包括但不限於2’、4’、和/或5’位處的取代基）的呋喃糖基環。在某些實施方式中，非二環修飾的糖部分的一個或多個無環取代基係支股的。適合非二環修飾的糖部分的2’-取代基基團的實例包括但不限於：2’-F、2'-OCH 3（“OMe”或“O-甲基”）和2'-O(CH 2) 2OCH 3（“MOE”）。在某些實施方式中，2’-取代基基團選自：鹵素、烯丙基、胺基、疊氮基、SH、CN、OCN、CF 3、OCF 3、O-C 1-C 10烷氧基、O-C 1-C 10取代的烷氧基、O-C 1-C 10烷基、O-C 1-C 10取代的烷基、S-烷基、N(R m)-烷基、O-烯基、S-烯基、N(R m)-烯基、O-炔基、S-炔基、N(R m)-炔基、O-烷基烯基（alkylenyl）-O-烷基、炔基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基、O-芳烷基、O(CH 2) 2SCH 3、O(CH 2) 2ON(R m)(R n)或OCH 2C(=O)-N(R m)(R n)，其中每個R m和R n獨立地是H、胺基保護基團、或取代的或未取代的C 1-C 10烷基，以及在Cook等人，U.S. 6,531,584中描述的2’-取代基基團；庫克（Cook）等人，U.S. 5,859,221；以及Cook等人，U.S. 6,005,087。該等2'-取代基基團的某些實施方式可以進一步被獨立地選自以下項的一個或多個取代基基團取代：羥基、胺基、烷氧基、羧基、苄基、苯基、硝基（NO 2）、硫醇基、硫代烷氧基、硫代烷基、鹵素、烷基、芳基、烯基以及炔基。適合線性非二環修飾的糖部分的4’-取代基基團的實例包括但不限於烷氧基（例如，甲氧基）、烷基以及在Manoharan等人，WO 2015/106128中描述的那些。適於非二環修飾的糖部分的5’-取代基基團的實例包括但不限於：5’-甲基（R或S）、5'-乙烯基、和5’-甲氧基。在某些實施方式中，非二環修飾的糖包括不止一種非橋接糖取代基，例如，2'-F-5'-甲基糖部分，並且該修飾的糖部分和修飾的核苷描述於Migawa等人，US2010/190837和Rajeev等人，US2013/0203836中。
在某些實施方式中，2’-取代的核苷或2’-非二環修飾的核苷包括包含選自以下項的線性2’-取代基基團的糖部分：F、NH 2、N 3、OCF 3 、OCH 3、O(CH 2) 3NH 2、CH 2CH=CH 2、OCH 2CH=CH 2、OCH 2CH 2OCH 3、O(CH 2) 2SCH 3、O(CH 2) 2ON(R m)(R n)、O(CH 2) 2O(CH 2) 2N(CH 3) 2、以及N-取代的乙醯胺(OCH 2C(=O)-N(R m)(R n))，其中每個 R m和R n獨立地是H、胺基保護基團、或取代的或未取代的C 1-C 10烷基。
在某些實施方式中，2’-取代的核苷或2’-非二環修飾的核苷包括包含選自以下項的線性2’-取代基基團的糖部分：F、OCF 3 、OCH 3、OCH 2CH 2OCH 3、O(CH 2) 2SCH 3、O(CH 2) 2ON(CH 3) 2、O(CH 2) 2O(CH 2) 2N(CH 3) 2、以及OC 2C(=O)-N(H)CH 3（“NMA”）。
在某些實施方式中，2’-取代的核苷或2’-非二環修飾的核苷包括包含選自以下項的線性2’-取代基基團的糖部分：F、OCH 3、和OCH 2CH 2OCH 3。
包含修飾的糖部分（如非二環修飾的糖部分）的核苷藉由該核苷的糖部分上的一個或多個取代的位置來提及。例如，包含2’-取代的或2-修飾的糖部分的核苷被稱為2’-取代的核苷或2-修飾的核苷。
某些修飾的糖部分包括形成第二環的橋接糖取代基，從而產生二環糖部分。在某些這樣的實施方式中，該二環糖部分在4'與2'呋喃糖環原子之間包括橋。此類4’到2’橋接糖取代基的實例包括但不限於：4'-CH 2-2'、4'-(CH 2) 2-2'、4'-(CH 2) 3-2'、4'-CH 2-O-2’（ “LNA”）、4'-CH 2-S-2'、4'-(CH 2) 2-O-2’（“ENA”）、4'-CH(CH 3)-O-2'（當處於 S組態時，被稱為“受約束的乙基”或“cEt”）、4’-CH 2-O-CH 2-2’、4’-CH 2-N(R)-2’、4'-CH(CH 2OCH 3)-O-2’（“受約束的MOE”或“cMOE”）及其類似物（參見例如，Seth等人，U.S. 7,399,845；Bhat等人，U.S. 7,569,686；Swayze等人，U.S. 7,741,457，和Swayze等人，U.S. 8,022,193）、4'-C(CH 3)(CH 3)-O-2'及其類似物（參見，例如Seth等人，U.S. 8,278,283）、4'-CH 2-N(OCH 3)-2'及其類似物（參見，例如Prakash等人，U.S. 8,278,425）、4'-CH 2-O-N(CH 3)-2'（參見，例如Allerson等人，U.S. 7,696,345和Allerson等人，U.S. 8,124,745）、4'-CH 2-C(H)(CH 3)-2'（參見，例如，Zhou,等人 ， J. Org.Chem.[有機化學雜誌] ,2009, 74, 118-134), 4'-CH 2-C(=CH 2)-2'及其類似物（參見，例如Seth等人，U.S. 8,278,426）、4’‑C(R aR b)-N(R)-O-2’、4’-C(R aR b)-O-N(R)-2’、4'-CH 2-O-N(R)-2'、和4'-CH 2-N(R)-O-2'，其中每個R、R a、和R b獨立地是H、保護基團、或C 1-C 12烷基（參見，例如Imanishi等人，U.S. 7,427,672）。
在某些實施方式中，此類4’至2’橋獨立地包括從1至4個獨立地選自以下項的連接的基團： -[C(R a)(R b)] n-、-[C(R a)(R b)] n-O-、-C(R a)=C(R b)-、-C(R a)=N-、-C(=NR a)-、-C(=O)-、-C(=S)-、-O-、-Si(R a) 2-、-S(=O) x-、以及-N(R a)-；
其中：
x係0、1、或2；
n係1、2、3、或4； 每個R a和R b獨立地是H、保護基團、羥基、C 1-C 12烷基、取代的C 1-C 12烷基、C 2-C 12烯基、取代的C 2-C 12烯基、C 2-C 12炔基、取代的C 2-C 12炔基、C 5-C 20芳基、取代的C 5-C 20芳基、雜環基、取代的雜環基、雜芳基、取代的雜芳基、C 5-C 7脂環基、取代的C 5-C 7脂環基、鹵素、OJ 1、NJ 1J 2、SJ 1、N 3、COOJ 1、醯基（C(=O)-H）、取代的醯基、CN、磺醯基（S(=O) 2-J 1）、或次硫酸基（sulfoxyl，S(=O)-J 1）；並且每個J 1和 J 2獨立地是H、C 1-C 12烷基、取代的C 1-C 12烷基、C 2-C 12烯基、取代的C 2-C 12烯基、C 2-C 12炔基、取代的C 2-C 12炔基、C 5-C 20芳基、取代的C 5-C 20芳基、醯基(C(=O)-H)、取代的醯基、雜環基、取代的雜環基、C 1-C 12胺基烷基、取代的C 1-C 12胺基烷基、或保護基團。
另外的二環糖部分在本領域是已知的，參見，例如：Freier等人 , Nucleic Acids Research[核酸研究], 1997, 25( 22), 4429-4443, Albaek等人 , J. Org.Chem.[有機化學雜誌], 2006, 71, 7731-7740, Singh等人, Chem. Commun.[化學通訊]），1998， 4，455-456；科什金（Koshkin）等人， Tetrahedron[四面體]，1998， 54，3607-3630；瓦赫斯泰特（Wahlestedt）等人， Proc.Natl.Acad.Sci.U. S. A.[美國國家科學院院刊]，2000， 97，5633-5638；庫馬爾（Kumar）等人， Bioorg.Med.Chem.Lett.[生物有機化學與醫藥化學快報]，1998， 8，2219-2222；辛格（Singh）等人， J. Org.Chem.[有機化學雜誌]，1998， 63，10035-10039；斯裡瓦斯塔瓦（Srivastava）等人，（ J. Am. Chem.Soc.[美國化學會志], 2007, 129,8362-8379；伊萊雅迪（Elayadi）等人 ， Curr. Opinion Invens . Drugs [調查性藥物新見] ，2001， 2，558-561；布拉什（Braasch）等人 ， Chem.Biol.[化學與生物學], 2001, 8, 1-7；奧魯姆（Orum）等人 ， Curr.Opinion Mol.Ther.[分子治療學新見], 2001, 3, 239-243；Wengel等人,U.S.7,053,207，Imanishi等人，U.S. 6,268,490，Imanishi等人 U.S. 6,770,748，Imanishi等人，U.S. RE44,779；Wengel等人，U.S. 6,794,499，Wengel等人，U.S. 6,670,461；  Wengel等人，U.S. 7,034,133，Wengel等人，U.S. 8,080,644；Wengel等人，U.S. 8,034,909；Wengel等人，U.S. 8,153,365；Wengel等人，U.S. 7,572,582；和Ramasamy等人，U.S. 6,525,191，Torsten等人，WO 2004/106356，Wengel等人，WO 1999/014226；  Seth等人，WO 2007/134181；Seth等人，U.S. 7,547,684；Seth等人，U.S. 7,666,854；Seth等人，U.S. 8,088,746；Seth等人，U.S. 7,750,131；Seth等人，U.S. 8,030,467；Seth等人，U.S. 8,268,980；Seth等人，U.S. 8,546,556；Seth等人，U.S. 8,530,640；Migawa等人，U.S. 9,012,421；Seth等人，U.S. 8,501,805；Allerson等人，US2008/0039618；和Migawa等人，US2015/0191727。
在某些實施方式中，二環糖部分和摻入此類二環糖部分的核苷進一步藉由同分異構組態來定義。例如，LNA核苷（在此描述的）可以處於α-L組態或處於β-D組態。 α-L-亞甲基氧基（4’-CH 2-O-2’）或α-L-LNA二環核苷已經被摻入顯示反義活性的寡核苷酸中（Frieden等人， Nucleic Acids Research[核酸研究]，2003， 21 ，6365-6372）。在此，二環核苷的概述包括兩種同分異構組態。當在此處的示例實施方式中鑒定具體二環核苷（例如，LNA或cEt）的位置時，它們處於β-D組態，除非另外說明。
在某些實施方式中，修飾的糖部分包括一個或多個非橋接糖取代基和一個或多個橋接糖取代基（例如，5’-取代的和4’-2’橋接的糖）。
在某些實施方式中，修飾的糖部分係糖代用品。在某些這樣的實施方式中，該糖部分的氧原子被例如硫、碳或氮原子替換。在某些這樣的實施方式中，此類修飾的糖部分還包括在此描述的橋接和/或非橋接取代基。例如，某些糖代用品包括4’-硫原子和在2'-位（參見，例如Bhat等人，U.S. 7,875,733和Bhat等人，U.S. 7,939,677）和/或5’位處的取代。
在某些實施方式中，糖代用品包括具有不同於5個原子的環。例如，在某些實施方式中，糖代用品包括六員四氫哌喃（“THP”）。此類四氫哌喃可以被進一步修飾或取代。含有此類修飾的四氫哌喃的核苷包括但不限於己糖醇核酸（“HNA”）、安尼妥（anitol）核酸（“ANA”）、甘露醇核酸（“MNA”）（參見，例如，Leumann,CJ. Bioorg. & Med. Chem. [生物有機化學與醫藥化學] 2002， 10，841-854）、氟HNA： （“F-HNA”，參見例如，Swayze等人，U.S. 8,088,904；Swayze等人，U.S. 8,440,803；和Swayze等人，U.S. 9,005,906，F-HNA還可以稱為F-THP或3'-氟四氫哌喃）、以及包含另外的具有下式的修飾的THP化合物的核苷： 其中，獨立地，對於所述修飾的THP核苷中的每者：
Bx係核鹼基部分；
T 3和T 4各自獨立地是將該修飾的THP核苷連接至寡核苷酸的剩餘部分的核苷間連接基團，或T 3和T 4之一係將該修飾的THP核苷連接至寡核苷酸的剩餘部分的核苷間連接基團，並且T 3和T 4中另一者係H、羥基保護基團、連接的軛合物基團、或5’或3'-端基；q 1、q 2、q 3、q 4、q 5、q 6和q 7各自獨立地是H、C 1-C 6烷基、取代的C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、取代的C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、或取代的C 2-C 6炔基；並且 每個R 1和R 2獨立地選自：氫、鹵素、取代的或未取代的烷氧基、NJ 1J 2、SJ 1、N 3、OC(=X)J 1、OC(=X)NJ 1J 2、NJ 3C(=X)NJ 1J 2、和CN，其中X係O、S或NJ 1，並且每個J 1、J 2、和J 3獨立地是H或C 1-C 6烷基。
在某些實施方式中，提供了修飾的THP核苷，其中q 1、q 2、q 3、q 4、q 5、q 6和q 7各自是H。在某些實施方式中，q 1、q 2、q 3、q 4、q 5、q 6和q 7中至少一個不同於H。在某些實施方式中，q 1、q 2、q 3、q 4、q 5、q 6和q 7中至少一個係甲基。在某些實施方式中，提供了修飾的THP核苷，其中R 1和R 2之一係F。在某些實施方式中，R 1係F，並且R 2係H，在某些實施方式中， R 1係甲氧基，並且R 2係H，並且在某些實施方式中，R 1係甲氧基乙氧基，並且R 2係H。
在某些實施方式中，糖代用品包括具有超過5個原子和超過一個雜原子的環。例如，已經報導了包含𠰌啉基糖部分的核苷及其在寡核苷酸中的使用（參見，例如， Braasch等人，Biochemistry [生物化學], 2002, 41, 4503-4510和Summerton等人，U.S. 5,698,685；Summerton等人，U.S. 5,166,315；Summerton等人，U.S. 5,185,444；以及Summerton等人，U.S. 5,034,506）。如在此使用的，術語“𠰌啉基”意指具有以下結構的糖代用品： 在某些實施方式中，可以例如藉由添加或改變來自以上𠰌啉基結構的不同取代基基團來修飾𠰌啉基。此類糖代用品在此被稱為“修飾的𠰌啉基”。
在某些實施方式中，糖代用品包括非環狀部分。包含此類非環狀糖代用品的核苷和寡核苷酸的實例包括但不限於：肽核酸（“PNA”）、非環狀丁基核酸（參見，例如，Kumar等人，Org. Biomol. Chem. [有機化學與生物分子化學]，2013，11, 5853-5865），並且核苷和寡核苷酸描述於Manoharan等人，US2013/130378中。
在本領域中已知許多其他可以用於修飾的核苷中的二環和三環糖和糖代用品環系統。 2.修飾的核鹼基
核鹼基（或鹼基）修飾或取代在結構上可與天然存在的或合成的未經修飾的核鹼基區別，但是在功能上可與其互換。天然的和修飾的核鹼基兩者都能夠參與氫鍵合。此類核鹼基修飾可以賦予反義化合物以核酸酶穩定性、結合親和力或一些其他有益的生物學特性。
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括修飾的寡核苷酸。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸包括一個或多個包含未經修飾的核鹼基的核苷。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸包括一個或多個包含經修飾的核鹼基的核苷。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸包括一個或多個不包含核鹼基的核苷（被稱為無鹼基核苷）。
在某些實施方式中，修飾的核鹼基選自：5-取代的嘧啶、6-氮雜嘧啶、烷基或炔基取代的嘧啶、烷基取代的嘌呤、以及N-2、N-6和O-6取代的嘌呤。在某些實施方式中，修飾的核鹼基選自：2-胺丙基腺嘌呤、5-羥甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、6-N-甲基鳥嘌呤、6-N-甲基腺嘌呤、2-丙基腺嘌呤、2-硫尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶、5-丙炔基(C≡C-CH3) 尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶、6-偶氮胸腺嘧啶、5-核糖基尿嘧啶（假尿嘧啶）、4-硫代尿嘧啶、8-鹵代、8-胺基、8-硫醇基、8-硫代烷基、8-羥基、8-氮雜和其他8-取代的嘌呤、5-鹵代、（特別是5-溴、5-三氟甲基、5-鹵代尿嘧啶、和5-鹵代胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤、7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-胺基腺嘌呤、7-去氮雜鳥嘌呤、7-去氮雜腺嘌呤、3-去氮雜鳥嘌呤、3-去氮雜腺嘌呤、6-N-苯甲醯基腺嘌呤、2-N-異丁醯基鳥嘌呤、4-N-苯甲醯基胞嘧啶、4-N-苯甲醯基尿嘧啶、5-甲基 4-N-苯甲醯基胞嘧啶、5-甲基 4-N-苯甲醯基尿嘧啶、通用鹼基、疏水性鹼基、混雜的鹼基、大小擴大的鹼基、以及氟化的鹼基。另外的修飾的核鹼基包括三環嘧啶，如1,3-二氮雜啡㗁𠯤-2-酮、1,3-二氮雜吩噻𠯤-2-酮和9-(2-胺基乙氧基)-1,3-二氮雜啡㗁𠯤-2-酮（G-鉗）。修飾的核鹼基還可以包括其中的嘌呤或嘧啶鹼基被其他雜環替換的那些，例如7-去氮雜-腺嘌呤、7-去氮雜鳥苷、2-胺基吡啶和2-吡啶酮。另外的核鹼基包括揭露於Merigan等人, U.S. 3,687,808中的那些，揭露於The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering [高分子科學與工程簡明百科]，Kroschwitz，J.I.編輯，約翰·威利父子公司（John Wiley & Sons），1990，858-859；恩利施（Englisch）等人，應用化學（Angewandte Chemie），國際版，1991，30，613；Sanghvi，Y.S.，第15章， Antisense Research and Applications [反義研究與應用],Crooke，S.T. 和Lebleu, B.，編輯，CRC出版社，1993，273-288中的那些；以及揭露於第6和第15章，Antisense Drug Technology[反義藥物技術]，Crooke S.T.編輯，CRC出版社，2008，163-166和442-443中的那些。
傳授了上文指出的修飾的核鹼基中的某些以及其他修飾的核鹼基的製備的公開物包括但不限於Manoharan等人，US 2003/0158403，Manoharan等人，US 2003/0175906；Dinh等人，U.S. 4,845,205；Spielvogel等人，U.S. 5,130,302；Rogers等人，U.S. 5,134,066；Bischofberger等人，U.S. 5,175,273；Urdea等人，U.S. 5,367,066；Benner等人，U.S. 5,432,272；Matteucci等人，U.S. 5,434,257；Gmeiner等人，U.S. 5,457,187；Cook等人，U.S. 5,459,255；Froehler等人，U.S. 5,484,908；Matteucci等人，U.S. 5,502,177；Hawkins等人，U.S. 5,525,711；Haralambidis等人，U.S. 5,552,540；Cook等人，U.S. 5,587,469；Froehler等人，U.S. 5,594,121；Switzer等人，U.S. 5,596,091；Cook等人，U.S. 5,614,617；Froehler等人，U.S. 5,645,985；Cook等人，U.S. 5,681,941；Cook等人，U.S. 5,811,534；Cook等人，U.S. 5,750,692；Cook等人，U.S. 5,948,903；Cook等人，U.S. 5,587,470；Cook等人，U.S. 5,457,191；Matteucci等人，U.S. 5,763,588；Froehler等人，U.S. 5,830,653；Cook等人，U.S. 5,808,027；Cook等人，U.S. 6,166,199；以及Matteucci等人，U.S. 6,005,096。
在某些實施方式中，靶向PCSK9核酸的化合物包括一個或多個修飾的核鹼基。在某些實施方式中，該修飾的核鹼基係5-甲基胞嘧啶。在某些實施方式中，每個胞嘧啶都是5-甲基胞嘧啶。 3.修飾的核苷間連接
RNA和DNA的天然存在的核苷間連接係3'至5'磷酸二酯連接。在某些實施方式中，由於所希望的特性，例如像，增強的細胞攝取、對靶核酸的增強的親和力、和在核酸酶存在下增加的穩定性，具有一個或多個修飾的（即，非天然存在的）核苷間連接的在此描述的化合物被選擇為優於具有天然存在的核苷間連接的化合物。
在某些實施方式中，靶向PCSK9核酸的化合物包括一個或多個修飾的核苷間連接。在某些實施方式中，該修飾的核苷間連接係硫代磷酸酯連接。在某些實施方式中，反義化合物的每個核苷間連接均為硫代磷酸酯核苷間連接。
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括寡核苷酸。具有修飾的核苷間連接的寡核苷酸包括保留磷原子的核苷間連接以及不具有磷原子的核苷間連接。代表性的含磷核苷間連接包括但不限於磷酸二酯、磷酸三酯、甲基膦酸酯、胺基磷酸酯、以及硫代磷酸酯。製備含磷連接和非含磷連接的方法係熟知的。
在某些實施方式中，可以使用任何核苷間連接將修飾的寡核苷酸的核苷連接在一起。藉由存在或不存在磷原子來定義兩類主要的核苷間連接基團。代表性的含磷核苷間連接包括但不限於包含磷酸二酯鍵（“P=O”）的磷酸酯（也被稱為未經修飾的或天然存在的連接）、磷酸三酯、甲基膦酸酯、胺基磷酸酯、以及硫代磷酸酯（“P=S”）和二硫代磷酸酯（“HS-P=S”）。代表性的非含磷核苷間連接基團包括但不限於亞甲基甲亞胺基（-CH2-N(CH3)-O-CH2-）、硫代二酯、硫胺酯（-O-C(=O)(NH)-S-）；矽氧烷（-O-SiH2-O-）；以及N,N'-二甲基肼（-CH2-N(CH3)-N(CH3)-）。與天然存在的磷酸酯連接相比，修飾的核苷間連接可以用於改變（典型地是增加）寡核苷酸的核酸酶抗性。在某些實施方式中，具有手性原子的核苷間連接可以被製備為外消旋混合物，或製備為單獨的鏡像異構物。代表性的手性核苷間連接包括但不限於烷基膦酸酯和硫代磷酸酯。製備含磷核苷間連接和非含磷核苷間連接的方法係熟習該項技術者所熟知的。
中性核苷間連接包括但不限於磷酸三酯、甲基膦酸酯、MMI（3'-CH2-N(CH3)-O-5’）、醯胺-3（3'-CH2-C(=O)-N(H)-5’）、醯胺-4（3'-CH2-N(H)-C(=O)-5’）、縮甲乙醛（formacetal）（3'-O-CH2-O-5’）、甲氧丙基、以及硫代縮甲乙醛（3'-S-CH2-O-5’）。另外的中性核苷間連接包括包含矽氧烷（二烷基矽氧烷）、羧酸酯、羧醯胺、硫化物、磺酸酯和醯胺的非離子連接（參見例如：Carbohydrate Modifications in Antisense Research[反義研究中的碳水化合物修飾]；Y.S.Sanghvi和P.D.Cook編輯，ACS Symposium Series[ACS研討會文集]580；第3和第4章，40-65）。另外的中性核苷間連接包括包含混合的N、O、S和CH2組成部分的非離子連接。
在某些實施方式中，寡核苷酸包括沿著該寡核苷酸或其區域安排成限定模式或修飾的核苷間連接模體的修飾的核苷間連接。在某些實施方式中，核苷間連接被安排成帶缺口的模體。在這樣的實施方式中，兩個翼區域的每個中的核苷間連接與缺口區域中的核苷間連接係不同的。在某些實施方式中，翼中的核苷間連接係磷酸二酯，並且缺口中的核苷間連接係硫代磷酸酯。獨立地選擇核苷模體，所以具有帶缺口的核苷間連接模體的此類寡核苷酸可以具有或可以沒有帶缺口的核苷模體，並且如果它的確具有帶缺口的核苷模體，則翼和缺口長度可以相同或可以不相同。
在某些實施方式中，寡核苷酸包括具有交替的核苷間連接模體的區域。在某些實施方式中，寡核苷酸 包括一致修飾的核苷間連接的區域。在某些這樣的實施方式中，該寡核苷酸包括藉由硫代磷酸酯核苷間連接均勻地連接的區域。在某些實施方式中，該寡核苷酸藉由硫代磷酸酯均勻地連接。在某些實施方式中，該寡核苷酸的每個核苷間連接都選自磷酸二酯和硫代磷酸酯。在某些實施方式中，該寡核苷酸的每個核苷間連接選擇磷酸二酯和硫代磷酸酯，並且至少一種核苷間連接係硫代磷酸酯。
在某些實施方式中，該寡核苷酸包括至少6個硫代磷酸酯核苷間連接。在某些實施方式中，該寡核苷酸包括至少8個硫代磷酸酯核苷間連接。在某些實施方式中，該寡核苷酸包括至少10個硫代磷酸酯核苷間連接。在某些實施方式中，該寡核苷酸包括至少6個連續硫代磷酸酯核苷間連接的至少一個嵌段。在某些實施方式中，該寡核苷酸包括至少8個連續硫代磷酸酯核苷間連接的至少一個嵌段。在某些實施方式中，該寡核苷酸包括至少10個連續硫代磷酸酯核苷間連接的至少一個嵌段。在某些實施方式中，該寡核苷酸包括至少一種12個連續硫代磷酸酯核苷間連接的至少一個嵌段。在某些這樣的實施方式中，至少一個此類嵌段位於該寡核苷酸的3’端。在某些這樣的實施方式中，至少一個此類嵌段位於該寡核苷酸的3’端的3個核苷內。
在某些實施方式中，寡核苷酸包括一個或多個甲基膦酸酯連接。在某些實施方式中，具有缺口體核苷模體的寡核苷酸包括包含除一個或兩個甲基膦酸酯連接之外的所有硫代磷酸酯連接的連接模體。在某些實施方式中，一個甲基膦酸酯連接在具有缺口體核苷模體的寡核苷酸的中心缺口中。
在某些實施方式中，令人希望的是將硫代磷酸酯核苷間連接和磷酸二酯核苷間連接的數目安排成維持核酸酶抗性。在某些實施方式中，令人希望的是將硫代磷酸酯核苷間連接的數目和位置以及磷酸二酯核苷間連接的數目和位置安排成維持核酸酶抗性。在某些實施方式中，可以減少硫代磷酸酯核苷間連接的數目，並且可以增加磷酸二酯核苷間連接的數目。在某些實施方式中，可以減少硫代磷酸酯核苷間連接的數目，並且可以增加磷酸二酯核苷間連接的數目，同時仍維持核酸酶抗性。在某些實施方式中，令人希望的是減少硫代磷酸酯核苷間連接的數目，同時保留核酸酶抗性。在某些實施方式中，令人希望的是增加磷酸二酯核苷間連接的數目，同時保留核酸酶抗性。 4. 某些模體
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括寡核苷酸。寡核苷酸可以具有模體，例如未經修飾的和/或修飾的糖部分、核鹼基、和/或核苷間連接的模式。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸包括一個或多個修飾的核苷，該等核苷包含修飾的糖。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸包括一個或多個修飾的核苷，該等核苷包含修飾的核鹼基。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸包括一個或多個修飾的核苷間連接。在這樣的實施方式中，修飾的寡核苷酸的修飾的、未經修飾的、和不同修飾的糖部分、核鹼基、和/或核苷間連接限定了模式或模體。在某些實施方式中，糖部分、核鹼基、和核苷間連接的模式係各自彼此獨立的。因此，修飾的寡核苷酸可以由其糖模體、核鹼基模體和/或核苷間連接模體來描述（如在此使用的，獨立於核鹼基的序列，核鹼基模體描述了對該等核鹼基的修飾）。 a.某些糖模體
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括寡核苷酸。在某些實施方式中，寡核苷酸包括一種或多種類型的沿著該寡核苷酸或其區域安排成限定模式或糖模體的修飾的糖和/或未經修飾的糖部分。在某些情況下，此類糖模體包括但不限於在此討論的糖修飾中的任一種。
在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸包括具有缺口體模體的區域或由其組成，該缺口體模體包括兩個外部區域或“翼”和中心或內部區域或“缺口”。缺口體模體的這三個區域（5’-翼、缺口、和3’-翼）形成連續序列的核苷，其中該等翼中每者的核苷的糖部分中的至少一些不同於該缺口的核苷的糖部分中的至少一些。具體地，至少每個翼的核苷的離缺口最近的糖部分（5’-翼的最3’核苷和3’-翼的最5’核苷）不同於相鄰缺口核苷的糖部分，因此在翼與缺口之間限定了邊界（即，翼/缺口接點）。在某些實施方式中，缺口內的糖部分彼此相同。在某些實施方式中，該缺口包括一個或多個具有以下糖部分的核苷，該糖部分不同於該缺口的一個或多個其他核苷的糖部分。在某些實施方式中，這兩個翼的糖模體彼此相同（對稱缺口體）。在某些實施方式中，5'-翼的糖模體不同於3'-翼的糖模體（不對稱缺口體）。
在某些實施方式中，缺口體的翼包括1-5個核苷。在某些實施方式中，缺口體的翼包括2-5個核苷。在某些實施方式中，缺口體的翼包括3-5個核苷。在某些實施方式中，缺口體的核苷全部係修飾的核苷。
在某些實施方式中，缺口體的缺口包括7-12個核苷。在某些實施方式中，缺口體的缺口包括7-10個核苷。在某些實施方式中，缺口體的缺口包括8-10個核苷。在某些實施方式中，缺口體的缺口包括10個核苷。在某個實施方式中，缺口體的缺口的每個核苷都是未經修飾的2’-去氧核苷。
在某些實施方式中，該缺口體係去氧缺口體。在這樣的實施方式中，每個翼/缺口接點的缺口側上的核苷係未經修飾的2’-去氧核苷，並且每個翼/缺口接點的翼側上的核苷係修飾的核苷。在某些這樣的實施方式中，該缺口的每個核苷都是未經修飾的2’-去氧核苷。在某些這樣的實施方式中，每個翼的每個核苷都是修飾的核苷。
在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸具有完全修飾的糖模體，其中修飾的寡核苷酸的每個核苷包含修飾的糖部分。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸包括具有完全修飾的糖模體的區域，或由該區域組成，其中該區域的每個核苷包含修飾的糖部分。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸包括具有完全修飾的糖模體的區域或由其組成，其中該完全修飾的區域內的每個核苷都包括相同的修飾的糖部分，在此被稱為一致修飾的糖模體。在某些實施方式中，完全修飾的寡核苷酸係一致修飾的寡核苷酸。在某些實施方式中，一致修飾的寡核苷酸的每個核苷都包括相同的2’-修飾。
在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸可以包括糖模體，該糖模體被描述於Swayze等人，US2010/0197762；Freier等人，US2014/0107330；Freier等人，US2015/0184153；和Seth等人，US2015/0267195，其中每項藉由引用以其全部內容結合在此。 b.某些核鹼基模體
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括寡核苷酸。在某些實施方式中，寡核苷酸包括沿著該寡核苷酸或其區域安排成限定模式或模體的修飾的和/或未經修飾的核鹼基。在某些實施方式中，每個核鹼基都被修飾。在某些實施方式中，該等核鹼基都未被修飾。在某些實施方式中，每個嘌呤或每個嘧啶被修飾。在某些實施方式中，每個腺嘌呤被修飾。在某些實施方式中，每個鳥嘌呤被修飾。在某些實施方式中，每個胸腺嘧啶被修飾。在某些實施方式中，每個尿嘧啶被修飾。在某些實施方式中，每個胞嘧啶被修飾。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸中的一些或全部胞嘧啶核鹼基係5-甲基胞嘧啶。
在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸包括修飾的核鹼基的嵌段。在某些這樣的實施方式中，該嵌段在該寡核苷酸的3’-端處。在某些實施方式中，該嵌段在該寡核苷酸的3’-端的3個核苷內。在某些實施方式中，該嵌段在該寡核苷酸的5’-端處。在某些實施方式中，該嵌段在該寡核苷酸的5’-端的3個核苷內。
在某些實施方式中，具有缺口體模體的寡核苷酸包括包含修飾的核鹼基的核苷。在某些這樣的實施方式中，包含修飾的核鹼基的一個核苷在具有缺口體模體的寡核苷酸的中心缺口中。在某些這樣的實施方式中，所述核苷的糖部分係2’-去氧核糖基部分。在某些實施方式中，該修飾的核鹼基選自：2-硫代嘧啶和5-丙炔嘧啶。 c.某些核苷間連接模體
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括寡核苷酸。在某些實施方式中，寡核苷酸包括沿著該寡核苷酸或其區域安排成限定模式或模體的修飾的和/或未經修飾的核苷間連接。在某些實施方式中，基本上每個核苷間連接基團都是磷酸酯核苷間連接（P=O）。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸的每個核苷間連接基團都是硫代磷酸酯（P=S）。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸的每個核苷間連接基團獨立地選自硫代磷酸酯和磷酸酯核苷間連接。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸的糖模體係缺口體，並且該缺口內的核苷間連接全部係修飾的。在某些這樣的實施方式中，該等翼中的一些或所有核苷間連接係未經修飾的磷酸酯連接。在某些實施方式中，末端核苷間連接係修飾的。 5.某些修飾的寡核苷酸
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括修飾的寡核苷酸。在某些實施方式中，將以上該等修飾（糖、核鹼基、核苷間連接）摻入修飾的寡核苷酸中。在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸藉由其修飾、模體、和總長度來表徵。在某些實施方式中，此類參數各自彼此獨立。因此，除非另外指明，具有缺口體糖模體的寡核苷酸的每個核苷間連接都可以是修飾的或未經修飾的，並且可以或可以不遵循該等糖修飾的缺口體修飾模式。例如，糖缺口體的翼區域內的核苷間連接可以彼此相同或不同，並且可以與糖模體的缺口區域的核苷間連接相同或不同。同樣地，獨立於該等糖修飾的缺口體模式，此類缺口體寡核苷酸可以包括一個或多個修飾的核鹼基。此外，在某些情況下，藉由總長度或範圍並且藉由兩個或更多個區域（例如，具有指定糖修飾的核苷的區域）的長度或長度範圍來描述寡核苷酸，在這種情況下，可以選擇針對具有超出指定範圍的總長度的寡核苷酸的每個範圍的數值。在此類情況下，兩種因素必需滿足。例如，在某些實施方式中，修飾的寡核苷酸由15-20個連接的核苷組成並具有由三個區域（A、B、和C）組成的糖模體，其中區域 A 由具有指定糖模體的2-6個連接的核苷組成，區域B由具有指定糖模體的6-10個連接的核苷組成，並且區域C由具有指定糖模體的2-6個連接的核苷組成。此類實施方式不包括修飾的寡核苷酸，其中A和C各自由6個連接的核苷組成，並且B由10個連接的核苷組成（即使核苷的那些數量在A、B、和C的要求內允許），因為這樣的寡核苷酸的總長度係22，該長度超過修飾的寡核苷酸的總長度的上限（20）。在此，如果相對於一個或多個參數寡核苷酸的描述係未提及的，則這樣的參數不受限。因此，僅被描述為具有缺口體糖模體而沒有進一步描述的修飾的寡核苷酸可以具有任何長度、核苷間連接模體、和核鹼基模體。除非另外指明，所有修飾都獨立於核鹼基序列。 某些軛合的化合物
在某些實施方式中，在此描述的該等化合物包括寡核苷酸（修飾的或未修飾的）以及視情況一個或多個軛合物基團和/或端基或由其組成。軛合物基團由一個或多個軛合物部分和軛合物接頭組成，該軛合物接頭將軛合物部分連接至寡核苷酸。軛合物基團可以附接至寡核苷酸的任一端或兩端和/或附接在任何內部位置處。在某些實施方式中，軛合物基團附接至修飾的寡核苷酸的核苷的2'-位。某些實施方式中，附接至寡核苷酸的任一端或兩端的軛合物基團係端基。在某些這樣的實施方式中，軛合物基團或端基附接在寡核苷酸的3’和/或5’-端處。在某些這樣的實施方式中，軛合物基團（或端基）附接在寡核苷酸的3’-端處。在某些實施方式中，軛合物基團附接在寡核苷酸的3’-端附近。在某些實施方式中，軛合物基團（或端基）附接在寡核苷酸的5’-端處。在某些實施方式中，軛合物基團附接在寡核苷酸的5’-端附近。
在某些實施方式中，該寡核苷酸被修飾。在某些實施方式中，化合物的寡核苷酸具有與靶核酸互補的核鹼基序列。在某些實施方式中，寡核苷酸與信使RNA（mRNA）互補。在某些實施方式中，寡核苷酸與有義轉錄物互補。
端基的實例包括但不限於軛合物基團、加帽基團、磷酸酯部分、保護基團、修飾的或未經修飾的核苷、以及兩個或更多個獨立地修飾的或未經修飾的核苷。 A. 某些軛合物基團
在某些實施方式中，寡核苷酸共價地附接至一個或多個軛合物基團。在某些實施方式中，軛合物基團修飾該附接的寡核苷酸的一種或多種特性，包括但不限於藥效學、藥物動力學、穩定性、結合、吸收、組織分佈、細胞分佈、細胞攝取、電荷以及清除率。在某些實施方式中，軛合物基團賦予附接的寡核苷酸新的特性，例如能夠檢測寡核苷酸的螢光團或報告基團。
先前已經描述了某些軛合物基團和軛合物部分 ，例如：膽固醇部分（Letsinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國國家科學院院刊]，1989，86，6553-6556），膽酸（Manoharan等人， Bioorg. Med. Chem. Lett.[生物有機化學與醫藥化學快報], 1994, 4, 1053-1060），硫醚，例如己基-S-三苯甲基硫醇（Manoharan等人， N.Y.Acad.Sci. [紐約科學院年報]，1992， 660，306-309；Manoharan等人， Bioorg.Med.Chem.Lett.[生物有機化學與醫藥化學快報]，1993， 3，2765-2770），巰基膽固醇（Oberhauser等人， Nucl.Acids Res. [核酸研究]，1992， 20，533-538），脂肪鏈，例如十二烷二醇或十一烷基殘基（Saison-Behmoaras等人, EMBO J.[歐洲分子生物學學會雜誌] ,1991, 10, 1111-1118；Kabanov等人， FEBS Lett. [歐洲生化學會聯合會快報]，1990，259，327-330；斯維納祝（Svinarchuk）等人，生物化學（ Biochimie），1993， 75，49-54），磷脂例如二-十六烷基-外消旋-丙三醇或三乙基­銨 1,2-二-O-十六烷基-外消旋-丙三基-3-H-磷酸酯（馬諾哈蘭（Manoharan）等人，四面體快報（ Tetrahedron Lett.），1995， 36，3651-3654；Shea等人， Nucl.Acids Res. [核酸研究]，1990，18，3777-3783），聚胺或聚乙二醇鏈（Manoharan等人， Nucleosides & Nucleotides[核苷 & 核苷酸]，1995，14，969-973），或金剛烷乙酸，棕櫚基部分（Mishra等人， Biochim.Biophys.Acta[生物化學與生物物理學學報]，1995，1264，229-237），十八胺或己基胺基-羰基-羥膽固醇部分（Crooke等人， J. Pharmacol.Exp.Ther.[藥理學與實驗治療學雜誌] ，1996， i ，923-937）,生育酚基團（Nishina等人， Molecular Therapy Nucleic Acids[分子治療-核酸]，2015 ， 4，e220；doi:10.1038/mtna.2014.72和Nishina等人， Molecular Therapy[分子治療] ，2008，16，734-740），或GalNAc簇（例如，WO 2014/179620）。 1. 軛合物部分
軛合物部分包括但不限於，嵌入劑、報告分子、聚胺、聚醯胺、肽、碳水化合物（例如，GalNAc）、維生素部分、聚乙二醇、硫醚、聚醚、膽固醇、巰基膽固醇、膽酸部分、葉酸、脂質、磷脂、生物素、吩𠯤、啡啶、蒽醌、金剛烷、吖啶、螢光素、玫瑰紅、香豆素、螢光團、以及染料。
在某些實施方式中，軛合物部分包括活性藥品，例如，阿司匹林、華法令（warfarin）、保泰松（phenylbutazone）、布洛芬（ibuprofen）、舒洛芬（suprofen）、芬布芬（fen­bufen）、酮洛芬（ketoprofen）、( S)-(+)-普拉洛芬（(S)-(+)-pranoprofen）、卡洛芬（carprofen）、丹肌胺酸、2,3,5-三碘苯甲酸、芬戈莫德（fingolimod）、氟芬那酸（flufenamic acid）、亞葉酸、苯并噻二𠯤、氯噻𠯤（indo­methicin）、二氮呯、吲哚美辛、巴比妥、頭孢菌素、磺胺類藥物、抗糖尿病藥、抗菌藥或抗生素。 2. 軛合物接頭
軛合物部分藉由軛合物接頭附接至寡核苷酸。在某些化合物中，軛合物基團係單一化學鍵（即，藉由單鍵，軛合物部分經軛合物接頭附接至寡核苷酸）。在某些實施方式中，該軛合物接頭包括鏈結構（如烴基鏈），或重複單位（如乙二醇、核苷、或胺基酸單位）的寡聚體。
在某些實施方式中，軛合物接頭包括一個或多個選自以下項的基團：烷基、胺基、側氧基（oxo）、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚、以及羥基胺基。在某些這樣的實施方式中，該軛合物接頭包括選自以下項的基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺以及醚基。在某些實施方式中，該軛合物接頭包括選自烷基和醯胺基團的基團。在某些實施方式中，該軛合物接頭包括選自烷基和醚基的基團。在某些實施方式中，該軛合物接頭包括至少一個磷部分。在某些實施方式中，該軛合物接頭包括至少一個磷酸酯基團。在某些實施方式中，該軛合物接頭包括至少一個中性連接基團。
在某些實施方式中，軛合物接頭（包括上文描述的軛合物接頭）係雙功能連接部分，例如本領域中已知的有用於將軛合物基團附接至母體化合物（如在此提供的寡核苷酸）的那些。通常，雙功能連接部分包括至少兩個官能團。官能團之一被選擇為結合至化合物上的特定位點，並且另一官能團被選擇為結合至軛合物基團。用於雙功能連接部分中的官能團的實例包括但不限於用於與親核基團反應的親電子試劑和用於與親電子基團反應的親核試劑。在某些實施方式中，雙功能連接部分包括一個或多個選自以下項的基團：胺基、羥基、羧酸、硫醇基、烷基、烯基、以及炔基。
軛合物接頭的實例包括但不限於吡咯啶、8-胺基-3,6-二氧雜辛酸（ADO）、琥珀醯亞胺基4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯（SMCC）和6-胺基己酸（AHEX或AHA）。其他軛合物接頭包括但不限於取代的或未取代的C 1-C 10烷基、取代的或未取代的C 2-C 10烯基或取代的或未取代的C 2-C 10炔基，其中較佳的取代基基團的非限制性列表包括羥基、胺基、烷氧基、羧基、苄基、苯基、硝基、硫醇基、硫代烷氧基、鹵素、烷基、芳基、烯基以及炔基。
在某些實施方式中，軛合物接頭包括1-10個接頭-核苷。在某些實施方式中，此類接頭-核苷係修飾的核苷。在某些實施方式中，此類接頭-核苷包括修飾的糖部分。在某些實施方式中，接頭-核苷係修飾的。在某些實施方式中，接頭-核苷包括選自以下項的視情況受保護的雜環鹼基：嘌呤、取代的嘌呤、嘧啶或取代的嘧啶。在某些實施方式中，可切割的部分係選自以下項的核苷：尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、4-N-苯甲醯基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、4-N-苯甲醯基-5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤、6-N-苯甲醯基腺嘌呤、鳥嘌呤以及2-N-異丁醯基鳥嘌呤。通常理想的是接頭-核苷在其到達靶組織後從該化合物上被切割下來。因此，接頭-核苷通常藉由可切割鍵彼此連接並與化合物的剩餘部分連接。在某些實施方式中，此類可切割的鍵係磷酸二酯鍵。
在此，不認為接頭-核苷係該寡核苷酸的一部分。因此，在以下實施方式中，其中化合物包括由指定數目或範圍的連接的核苷組成的和/或與參考核酸指定的百分比互補性的寡核苷酸，並且該化合物還包括包含軛合物接頭的軛合物基團，該軛合物接頭含有接頭-核苷，那些接頭-核苷不計入寡核苷酸的長度並且不用於確定寡核苷酸對於參考核酸的百分比互補性。例如，化合物可以包括(1)由8-30個核苷組成的修飾的寡核苷酸，和(2)包含1-10個接頭-核苷的軛合物基團，該等接頭-核苷與修飾的寡核苷酸的核苷鄰接。在這樣的化合物中的連續連接的核苷的總數超過30個。可替代地，化合物可以包括修飾的寡核苷酸，該寡核苷酸由8-30個核苷組成並且沒有軛合物基團。在這樣的化合物中的連續連接的核苷的總數不超過30個。除非另有說明，軛合物接頭包括不超過10個接頭-核苷。在某些實施方式中，軛合物接頭包括不超過5個接頭-核苷。在某些實施方式中，軛合物接頭包括不超過3個接頭-核苷。在某些實施方式中，軛合物接頭包括不超過2個接頭-核苷。在某些實施方式中，軛合物接頭包括不超過1個接頭-核苷。
在某些實施方式中，理想的是軛合物基團從寡核苷酸上切割下來。例如，在某些情況下，包含特定軛合物部分的化合物被特定細胞類型更好地吸收，但是一旦化合物被吸收，則理想的是軛合物基團被切割以釋放未軛合的或母體寡核苷酸。因此，某些軛合物可以包含一個或多個可切割部分，典型地在軛合物接頭內。在某些實施方式中，可切割的部分係可切割的鍵。在某些實施方式中，可切割的部分係包含至少一個可切割的鍵的一組原子。在某些實施方式中，可切割的部分包括具有一個、兩個、三個、四個、或超過四個可切割的鍵的一組原子。在某些實施方式中，可切割的部分被選擇性地在細胞或亞細胞區室（如溶酶體）內切割。在某些實施方式中，可切割的部分被內源酶（如核酸酶）選擇性地切割。
在某些實施方式中，可切割的鍵選自：醯胺、酯、醚、磷酸二酯的一個酯或兩個酯、磷酸酯、胺基甲酸酯、或二硫化物。在某些實施方式中，可切割的鍵係磷酸二酯的一個酯或兩個酯。在某些實施方式中，可切割的部分包括磷酸酯或磷酸二酯。在某些實施方式中，該可切割的部分係寡核苷酸與軛合物部分或軛合物基團之間的磷酸酯連接。
在某些實施方式中，可切割的部分包括一個或多個接頭-核苷或由其組成。在某些這樣的實施方式中，一個或多個接頭-核苷藉由可切割的鍵彼此連接和/或與化合物的剩餘部分連接。在某些實施方式中，此類可切割的鍵係未經修飾的磷酸二酯鍵。在某些實施方式中，可切割的部分係2'-去氧核苷，該去氧核苷藉由磷酸酯核苷間連接附接至寡核苷酸的3'或5'-末端核苷並且藉由磷酸酯或硫代磷酸酯連接共價地附接至軛合物接頭或軛合物基團的剩餘部分。在某些這樣的實施方式中，該可切割的部分係2'-去氧腺苷。 3. 某些靶向細胞的軛合物部分
在某些實施方式中，軛合物基團包括靶向細胞的軛合物部分。在某些實施方式中，軛合物基團具有以下通式：
其中n係從1至約3（當n係1時m係0；當n係2或更大時m係1），j係1或0，並且k係1或0。
在某些實施方式中，n係1，j係1並且k係0。在某些實施方式中，n係1，j係0並且k係1。在某些實施方式中，n係1，j係1並且k係1。在某些實施方式中，n係2，j係1並且k係0。在某些實施方式中，n係2，j係0並且k係1。在某些實施方式中，n係2，j係1並且k係1。在某些實施方式中，n係3，j係1並且k係0。在某些實施方式中，n係3，j係0並且k係1。在某些實施方式中，n係3，j係1並且k係1。
在某些實施方式中，軛合物基團包括具有至少一個系股配位基的靶向細胞的部分。在某些實施方式中，靶向細胞的部分包括兩個共價地附接至分支基團的系股配位基。在某些實施方式中，靶向細胞的部分包括三個共價地附接至分支基團的系股配位基。
在某些實施方式中，該靶向細胞的部分包括包含一個或多個選自以下項的基團的分支基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚以及羥基胺基基團。在某些實施方式中，該分支基團包括包含選自以下項的基團的分支的脂族基：烷基、胺基、側氧基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚以及羥基胺基基團。在某些這樣的實施方式中，該分支的脂族基包括選自以下項的基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺以及醚基。在某些這樣的實施方式中，該分支的脂族基包括選自以下項的基團：烷基、胺基和醚基。在某些這樣的實施方式中，該分支的脂族基包括選自烷基和醚基的基團。在某些實施方式中，該分支基團包括單環的或多環的環系統。
在某些實施方式中，靶向細胞的部分的每個系股以任何組合包括一個或多個選自以下項的基團：烷基、取代的烷基、醚、硫醚、二硫化物、胺基、側氧基、醯胺、磷酸二酯、以及聚乙二醇。在某些實施方式中，每個系股係以任何組合包含一個或多個選自以下項的基團的直股脂族基：烷基、醚、硫醚、二硫化物、胺基、側氧基、醯胺、以及聚乙二醇。在某些實施方式中，每個系股係以任何組合包含一個或多個選自以下項的基團的直股脂族基：烷基、磷酸二酯、醚、胺基、側氧基、以及醯胺。在某些實施方式中，每個系股係以任何組合包含一個或多個選自以下項的基團的直股脂族基：烷基、醚、胺基、側氧基、以及醯胺。在某些實施方式中，每個系股係以任何組合包含一個或多個選自以下項的基團的直股脂族基：烷基、胺基、和側氧基。在某些實施方式中，每個系股係以任何組合包含一個或多個選自烷基和側氧基的基團的直股脂族基。在某些實施方式中，每個系股係以任何組合包含一個或多個選自烷基和磷酸二酯的基團的直股脂族基。在某些實施方式中，每個系股包括至少一個磷連接基團或中性連接基團。在某些實施方式中，每個系鏈包括長約6至約20個原子的股。在某些實施方式中，每個系鏈包括長約10至約18個原子的股。在某些實施方式中，每個系股包括的鏈長約10個原子。
在某些實施方式中，靶向細胞的部分的每個配位基都對靶細胞上的至少一種類型的受體具有親和力。在某些實施方式中，每個配位基都對哺乳動物肝細胞表面上的至少一種類型的受體具有親和力。在某些實施方式中，每個配位基都對肝脫唾液酸糖蛋白受體（ASGP-R）具有親和力。在某些實施方式中，每個配位基都是碳水化合物。在某些實施方式中，每個配位基都獨立地選自半乳糖、N-乙醯半乳糖胺（GalNAc）、甘露糖、葡萄糖、葡糖胺以及海藻糖。在某些實施方式中，每個配位基都是N-乙醯半乳糖胺（GalNAc）。在某些實施方式中，該靶向細胞的部分包括3個GalNAc配位基。在某些實施方式中，該靶向細胞的部分包括2個GalNAc配位基。在某些實施方式中，該靶向細胞的部分包括1個GalNAc配位基。
在某些實施方式中，靶向細胞的部分的每個配位基都是碳水化合物、碳水化合物衍生物、修飾的碳水化合物、多糖、修飾的多糖、或多糖衍生物。在某些這樣的實施方式中，該軛合物基團包括碳水化合物簇（參見，例如，Maier等人，“軛合至用於細胞靶向的多價碳水化合物簇的反義寡核苷酸的合成”（“Synthesis of Antisense Oligonucleotides Conjugated to a Multivalent Carbohydrate Cluster for Cellular Targeting,”） Bioconjugate Chemistry[生物軛合物化學]，2003，14，18-29，或Rensen等人，“用於將脂蛋白靶向肝脫唾液酸糖蛋白受體的新穎N-乙醯半乳糖胺封端的糖脂的設計與合成”（“Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asiaglycoprotein Receptor,”） J. Med.Chem.[藥物化學雜誌]2004，47，5798-5808，將其藉由引用以其全文結合在此）。在某些這樣的實施方式中，每個配位基都是胺基糖或硫糖。例如，胺基糖可以選自本領域已知的任何數目的化合物，如唾液酸、α-D-半乳糖胺、β-胞壁酸、2-去氧-2-甲基胺基-L-哌喃葡糖、4,6-二去氧-4-甲醯胺基-2,3-二- O-甲基-D-哌喃甘露糖、2-去氧-2-磺胺基-D-哌喃葡糖和 N-磺基-D-葡糖胺、以及 N-乙醇醯基-α-神經胺酸。例如，硫糖可以選自5-硫代-β-D-哌喃葡糖、甲基2,3,4-三- O-乙醯基-1-硫代-6- O-三苯甲基-α-D-哌喃葡糖苷、4-硫代-β-D-哌喃半乳糖、以及乙基 3,4,6,7-四- O-乙醯基-2-去氧-1,5-二硫代-α-D-葡-庚哌喃糖苷（heptopyranoside）。
在某些實施方式中，軛合物基團包括具有以下式的靶向細胞的部分： 。
在某些實施方式中，軛合物基團包括具有以下化學式的靶向細胞的部分： 。
在某些實施方式中，軛合物基團包括具有下式的靶向細胞的部分： 。
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括在此描述為“LICA-1”的軛合物基團。以下顯示LICA-1在軛合物接頭末端沒有視情況的可切割的部分：
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括LICA-1和軛合物接頭內的可切割的部分，該化合物具有下式： . 其中oligo係寡核苷酸。
傳授了上文指出的包含軛合物基團、系股、軛合物接頭、分支基團、配位基、可切割的部分以及其他修飾的軛合物基團和化合物中某些的製備的代表性公開物包括但不限於US 5,994,517、US 6,300,319、US 6,660,720、US 6,906,182、US 7,262,177、US 7,491,805、US 8,106,022、US 7,723,509、US 9,127,276、US 2006/0148740、US 2011/0123520、WO 2013/033230和WO 2012/037254，Biessen等人， J. Med. Chem. [藥物化學雜誌]） 1995，38，1846-1852，Lee等人， Bioorganic & Medicinal Chemistry[生物有機化學與醫藥化學] 2011,19, 2494-2500，Rensen等人， J. Biol. Chem. [生物化學雜誌]） 2001，276，37577-37584，Rensen等人, J. Med. Chem. [藥物化學雜誌]） 2004, 47, 5798-5808，Sliedregt等人, J. Med. Chem. [藥物化學雜誌]） 1999, 42, 609-618，以及Valentijn等人 ， Tetrahedron[四面體] 1997, 53 ,759-770，將其各自藉由引用以其全文結合在此。
在某些實施方式中，在此描述的化合物包括包含缺口體或完全修飾的模體的修飾的寡核苷酸以及包含至少一個、兩個、或三個GalNAc配位基的軛合物基團。在某些實施方式中，在此描述的化合物包括在以下參考文獻任一項中所發現的軛合物基團：Lee， Carbohydr Res[碳水化合物研究]，1978，67，509-514；Connolly等人， J Biol Chem[生物化學雜誌]，1982，257，939-945；Pavia等人， Int J Pep Protein Res[肽與蛋白質研究國際雜誌]，1983，22，539-548；Lee等人， Biochem[生物化學]，1984，23，4255-4261；Lee等人， Glycoconjugate J[糖軛合物雜誌]，1987，4，317-328；Toyokuni等人， Tetrahedron Lett[四面體快報]，1990，31，2673-2676；Biessen等人， J Med Chem[藥物化學雜誌]，1995，38，1538-1546；Valentijn等人， Tetrahedron[四面體]，1997，53，759-770；Kim等人， Tetrahedron Lett[四面體快報]，1997，38，3487-3490；Lee等人， Bioconjug Chem[生物軛合物化學]，1997，8，762-765；Kato等人， Glycobiol[糖生物學]，2001，11，821-829；Rensen等人， J Biol Chem[生物化學雜誌]，2001，276，37577-37584；Lee等人， Methods Enzymol[酶學方法]，2003，362，38-43；Westerlind等人， Glycoconj J[糖軛合物雜誌]，2004，21，227-241；Lee等人， Bioorg Med Chem Lett[生物有機化學與醫藥化學快報]，2006，16(19)，5132-5135；Maierhofer等人， Bioorg Med Chem[生物有機化學與醫藥化學]，2007，15，7661-7676；Khorev等人， Bioorg Med Chem[生物有機化學與醫藥化學]，2008，16，5216-5231；Lee等人， Bioorg Med Chem[生物有機化學與醫藥化學]，2011，19，2494-2500；Kornilova等人，Analyt Biochem[分析生物化學]，2012，425，43-46；Pujol等人， Angew Chemie Int Ed Engl[應用化學-國際版]，2012，51，7445-7448；Biessen等人， J Med Chem[藥物化學雜誌]，1995，38，1846-1852；Sliedregt等人， J Med Chem[藥物化學雜誌]，1999，42，609-618；Rensen等人， J Med Chem[藥物化學雜誌]，2004，47，5798-5808；Rensen等人， Arterioscler Thromb Vasc Biol[動脈硬化血栓與血管生物學]，2006，26，169-175；van Rossenberg等人， Gene Ther[基因治療]，2004，11，457-464；Sato等人， J Am Chem Soc[美國化學會志]，2004，126，14013-14022；Lee等人， J Org Chem[有機化學雜誌]，2012，77，7564-7571；Biessen等人， FASEB J[美國實驗生物學會聯合會會志]，2000，14，1784-1792；Rajur等人， Bioconjug Chem[生物軛合物化學]，1997，8，935-940；Duff等人， Methods Enzymol[酶學方法]，2000，313，297-321；Maier等人， Bioconjug Chem[生物軛合物化學]，2003，14，18-29；Jayaprakash等人， Org Lett[有機快報]，2010，12，5410-5413；Manoharan， Antisense Nucleic Acid Drug Dev[反義核酸藥物開發]，2002，12，103-128；Merwin等人， Bioconjug Chem[生物軛合物化學]，1994，5，612-620；Tomiya等人，Bioorg Med Chem[生物有機化學與醫藥化學]，2013，21，5275-5281； 國際申請WO1998/013381；WO 2011/038356；WO 1997/046098；WO 2008/098788；WO 2004/101619；WO 2012/037254；WO 2011/120053；WO 2011/100131；WO 2011/163121；WO 2012/177947；WO 2013/033230；WO 2013/075035；WO 2012/083185；WO 2012/083046；WO 2009/082607；WO 2009/134487；WO 2010/144740；WO 2010/148013；WO 1997/020563；WO 2010/088537；WO 2002/043771；WO 2010/129709；WO 2012/068187；WO 2009/126933；WO 2004/024757；WO 2010/054406；WO 2012/089352；WO 2012/089602；WO 2013/166121；WO 2013/165816；美國專利4,751,219；8,552,163；6,908,903；7,262,177；5,994,517；6,300,319；8,106,022；7,491,805；7,491,805；7,582,744；8,137,695；6,383,812；6,525,031；6,660,720；7,723,509；8,541,548；8,344,125；8,313,772；8,349,308；8,450,467；8,501,930；8,158,601；7,262,177；6,906,182；6,620,916；8,435,491；8,404,862；7,851,615；公開的美國專利申請公開US 2011/0097264；US 2011/0097265；US 2013/0004427；US 2005/0164235；US 2006/0148740；US 2008/0281044；US 2010/0240730；US 2003/0119724；US 2006/0183886；US 2008/0206869；US 2011/0269814；US 2009/0286973；US 2011/0207799；US 2012/0136042；US 2012/0165393；US 2008/0281041；US 2009/0203135；US 2012/0035115；US 2012/0095075；US 2012/0101148；US 2012/0128760；US 2012/0157509；US 2012/0230938；US 2013/0109817；US 2013/0121954；US 2013/0178512；US 2013/0236968；US 2011/0123520；US 2003/0077829；US 2008/0108801；以及US 2009/0203132；將其各自藉由引用以其全文而結合。 組成物和用於配製藥物組成物之方法
可以將在此描述的化合物與藥學上可接受的活性或惰性物質混合以製備藥物組成物或配製物。組成物和用於配製藥物組成物的方法取決於多個標準，包括但不限於給藥途徑、疾病程度。
某些實施方式提供了包含一種或多種化合物或其鹽的藥物組成物。在某些實施方式中，該等化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，該等化合物包括修飾的寡核苷酸或由其組成。在某些這樣的實施方式中，該藥物組成物包括適合的藥學上可接受的稀釋劑或載體。在某些實施方式中，藥物組成物包括無菌鹽溶液和一種或多種化合物。在某些實施方式中，這樣的藥物組成物由無菌鹽溶液和一種或多種化合物組成。在某些實施方式中，該無菌鹽水係藥用級鹽水。在某些實施方式中，藥物組成物包括一種或多種化合物和無菌水。在某些實施方式中，藥物組成物由一種化合物和無菌水組成。在某些實施方式中，該無菌水係藥用級水。在某些實施方式中，藥物組成物包括一種或多種化合物和磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）。在某些實施方式中，藥物組成物由一種或多種化合物和無菌PBS組成。在某些實施方式中，該無菌PBS係藥用級PBS。組成物和用於配製藥物組成物的方法取決於多個標準，包括但不限於給藥途徑、病程度。
可以在藥物組成物中利用靶向PCSK9核酸的在此描述的化合物，這係藉由將該化合物與適合的藥學上可接受的稀釋劑或載體組合。在某些實施方式中，藥學上可接受的稀釋劑係水，如適於注射的無菌水。因此，在一個實施方式中，在此描述的方法中採用的是包含 靶向PCSK9核酸的化合物和藥學上可接受的稀釋劑的藥物組成物。在某些實施方式中，該藥學上可接受的稀釋劑係水。在某些實施方式中，該化合物包括在此提供的修飾的寡核苷酸或由其組成。
包含在此提供的化合物的藥物組成物涵蓋任何藥學上可接受的鹽、酯、或此類酯的鹽、或任何其他寡核苷酸，它們在被給予動物（包括人）後能夠提供（直接地或間接地）生物上具有活性的代謝物或其殘餘物。在某些實施方式中，該等化合物係反義化合物或寡聚化合物。在某些實施方式中，該化合物包括修飾的寡核苷酸或由其組成。因此，例如，還撰寫本揭露涉及 化合物的藥學上可接受的鹽、前藥、該等前藥的藥學上可接受的鹽、以及其他生物等效物。適合的藥學上可接受的鹽包括但不限於鈉鹽和鉀鹽。
前藥可以包括在化合物的一端或兩端摻入另外的核苷，所述核苷在體內被內源核酸酶切割，以形成活性化合物。
在某些實施方式中，該等化合物或組成物進一步包括藥學上可接受的載體或稀釋劑。 某些選擇的化合物
在若干細胞類型中在體外對具有各種長度、化學成分、和模體的大約1540種新設計的化合物和幾種先前揭露的化合物測試其對人類PCSK9 mRNA的影響（實例1-2）。在體外以單劑量針對效力測試的1540種化合物中，在HepG2細胞中針對劑量依賴性抑制測試183種選擇的化合物（實例2）。由劑量響應測定測試的183種化合物中，在齧齒動物中針對單劑量體內可耐受性選擇134種寡核苷酸。這134種寡核苷酸與THA-C6-GalNAc3-(3R,5S)-5-(羥甲基)吡咯啶-3-醇磷酸酯端帽（此後被稱為3’-THA）在3’端係軛合的。
在單劑量齧齒動物可耐受性模型中，給予BALB/c小鼠高濃度3’-THA寡核苷酸，並且測量肝功能標記物（如丙胺酸轉胺酶和天冬胺酸轉胺酶）（實例3）。ISIS 863413（SEQ ID NO: 1096）、ISIS 863419（SEQ ID NO: 1419）、ISIS 863424（SEQ ID NO: 1297）、ISIS 863425（SEQ ID NO: 1528）、ISIS 863427（SEQ ID NO: 1145）、ISIS 863433（SEQ ID NO: 1223）、ISIS 863434（SEQ ID NO: 377）、ISIS 863436（SEQ ID NO: 763）、ISIS 863437（SEQ ID NO: 994）、ISIS 863438（SEQ ID NO: 1071）、ISIS 863439（SEQ ID NO: 1147）、ISIS 863441（SEQ ID NO: 1302）、ISIS 863444（SEQ ID NO: 1149）、ISIS 863445（SEQ ID NO: 455）、ISIS 863448（SEQ ID NO: 1380）、ISIS 863452（SEQ ID NO: 691）、ISIS 863472（SEQ ID NO: 926）、ISIS 863473（SEQ ID NO: 1233）、ISIS 863474（SEQ ID NO: 619）、ISIS 863475（SEQ ID NO: 388）、ISIS 863477（SEQ ID NO: 1542）、ISIS 863479（SEQ ID NO: 1158）、ISIS 863480（SEQ ID NO: 1235）、ISIS 863481（SEQ ID NO: 389）、ISIS 863482（SEQ ID NO: 1312）、ISIS 863483（SEQ ID NO: 1240）、ISIS 863484（SEQ ID NO: 549）、ISIS 863485（SEQ ID NO: 550）、ISIS 863486（SEQ ID NO: 781）、ISIS 863489（SEQ ID NO: 939）、ISIS 863490（SEQ ID NO: 1016）、ISIS 863491（SEQ ID NO: 1243）、ISIS 863493（SEQ ID NO: 629）、ISIS 863494（SEQ ID NO: 1017）、ISIS 863495（SEQ ID NO: 1092）、ISIS 863496（SEQ ID NO: 1244）、ISIS 863497（SEQ ID NO: 554）、ISIS 863498（SEQ ID NO: 478）、ISIS 863499（SEQ ID NO: 1094）、ISIS 863502（SEQ ID NO: 563）、ISIS 863506（SEQ ID NO: 410）、ISIS 863507（SEQ ID NO: 1411）、ISIS 863509（SEQ ID NO: 721）、ISIS 863510 (SEQ ID NO: 1258）、ISIS 863511（SEQ ID NO: 645）、ISIS 863512（SEQ ID NO: 955）、ISIS 863514（SEQ ID NO: 1413）、ISIS 863516（SEQ ID NO: 881）、ISIS 863517（SEQ ID NO: 648）、ISIS 863518（SEQ ID NO: 725）、ISIS 863520（SEQ ID NO: 1111）、ISIS 863522（SEQ ID NO: 1188）、ISIS 863524（SEQ ID NO: 885）、ISIS 863525（SEQ ID NO: 504）、ISIS 863526（SEQ ID NO: 1043）、ISIS 863527（SEQ ID NO: 1195）、ISIS 863531（SEQ ID NO: 426）、ISIS 863533（SEQ ID NO: 427）、ISIS 863536（SEQ ID NO: 585）、ISIS 863537（SEQ ID NO: 1047）、ISIS 863538（SEQ ID NO: 353）、ISIS 863539（SEQ ID NO: 1352）、ISIS 863541（SEQ ID NO: 1203）、ISIS 863545（SEQ ID NO: 1516）、ISIS 863547（SEQ ID NO: 1213）、ISIS 863548（SEQ ID NO: 367）、ISIS 863549（SEQ ID NO: 1061）、ISIS 863550（SEQ ID NO: 523）、ISIS 863552（SEQ ID NO: 831）、以及ISIS 863553（SEQ ID NO: 908）在此研究中被認為是可耐受的，並且被選擇用於在轉基因小鼠模型中的進一步評估。
在PCSK9轉基因小鼠可耐受性模型中，給予小鼠3’-THA軛合的寡核苷酸，並且測量丙胺酸轉胺酶、天冬胺酸轉胺酶、膽固醇、HDL-膽固醇、LDL-膽固醇和甘油三酯的血漿水平（實例4）。發現ISIS 863433、ISIS 863490、ISIS 863512、ISIS 863527、ISIS 863538、ISIS 863425、ISIS 863438、ISIS 863439、ISIS 863444、ISIS 863413、ISIS 863434、ISIS 863436、ISIS 863494、以及ISIS 863539係可耐受的。該等選擇的寡核苷酸序列與三己基胺基-(THA)-C6GalNAC3端帽在5’端係軛合的（此後被稱為5’-THA），並且 在CD-1小鼠模型中進行測試。5’THA軛合的寡核苷酸係ISIS 845219、ISIS 863568、ISIS 863576、ISIS 863577、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863637、ISIS 863655、ISIS 863670、ISIS 863681、和ISIS 863682。
在CD-1小鼠可耐受性模型中，對小鼠持續六週給予不同劑量的反義寡核苷酸，並且測量可耐受性標記物，例如肝和腎功能標記物（ALT、AST、白蛋白、BUN、肌酸酐、和膽紅素的血漿水平）；血液標記物（針對RBC、WBC、血小板、中性粒細胞、淋巴細胞、和單核細胞、以及血紅蛋白的血細胞計數、血細胞比容、和MCV含量）以及體重和器官重量（實例5）。只有那些寡核苷酸被選擇用於大鼠模型中的進一步評估，其中治療產生了這樣的標記物的血漿水平，該等標記物在用反義寡核苷酸處理後處於預期範圍內。選擇ISIS 863568、ISIS 863576、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、以及ISIS 863681用於大鼠模型中的進一步研究。
在史－道二氏大鼠（Sprague-Dawley rat）模型中，類似地，對該等大鼠持續六週給予反義寡核苷酸，並且測量可耐受性標記物，例如肝功能標記物（ALT、AST、白蛋白、BUN、肌酸酐、和膽紅素的血漿水平）；腎功能標記物（肌酸酐和總蛋白的尿水平），以及每週的體重和最終的器官重量（實例6）。
還針對該等寡核苷酸的黏度進行測試（實例8）並且在標準測試下發現所有的寡核苷酸在其黏度方面均是最佳的。
在PCSK9轉基因小鼠模型中針對功效在劑量依賴性四週的研究中測試ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681（實例7）。在4週結束時，針對PCSK9 mRNA表現水平分析小鼠肝，並且計算ED 50。另外，測量肝中的PCSK9血漿蛋白水平、LDL-膽固醇血漿水平、和LDL-受體水平。觀察到用反義寡核苷酸的治療導致PCSK9肝mRNA表現水平的抑制、血漿中LDL-膽固醇水平的降低、以及對應的肝中LDL受體水平的升高。特別地，發現ISIS 863633治療係有效的。
在食蟹猴中在12週的研究中針對活性、藥物動力學曲線、和可耐受性對ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681進行測試（實例9）。用與恒河猴基因序列完全交叉反應性的化合物的治療導致肝組織中PCSK9 mRNA表現的降低。特別地，與PBS對照相比，用ISIS 863633、ISIS 863670、和ISIS 863681的治療導致肝組織中PCSK9 mRNA表現的降低。與PBS對照相比，指出ISIS 863633導致PCSK9 mRNA表現的最高降低。PCSK9蛋白水平、LDL-膽固醇水平、總膽固醇水平、和肝的LDL-受體水平砝碼的變化係PCSK9 mRNA水平抑制的結果。用ISIS 863633、ISIS 863670、和ISIS 863681的處理導致PCSK9蛋白水平、LDL-膽固醇水平、總膽固醇水平的降低和肝的LDL-受體水平的誘導，其中ISIS 863633導致最大的變化。用反義寡核苷酸的治療不導致HDL-膽固醇或甘油三酯水平方面的任何變化。因此，就活性而言，在猴研究中ISIS 863633係最有效的。在該等猴子中用該等化合物的治療係耐受良好的，尤其是用ISIS 863633的治療。
將新化合物與先前設計的化合物相比，該等先前設計的化合物包括ISIS 405879和ISIS 405995，它們已經在先前被確定為體外的最強效的反義化合物中的一些（參見，例如美國專利8,084,437）以及ISIS 431131和ISIS 480604，以及在先前被描述於美國專利9,127,276中（實例10）。面對面（head-to-head）比較表明ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681比先前公開揭露的寡核苷酸中的任一者更有效。
因此，在此提供的是具有一種或多種改進特性中任一種的化合物。在某些實施方式中，如在此描述的該等化合物係強效和可耐受的。 實例
以下實例描述了用於鑒定靶向PCSK9的先導化合物的篩選過程。在篩選的超過1540種寡核苷酸中，ISIS 863568、ISIS 863579、ISIS 863581、ISIS 863582、ISIS 863587、ISIS 863633、ISIS 863655、ISIS 863670、和ISIS 863681作為靠前的先導化合物而出現。特別地，在超過1540種寡核苷酸中ISIS 863633展示出就效力和/或可耐受性而言最佳的特性組合。 非限制性揭露和藉由引用結合
雖然本文件所附序列表將每個序列根據需要鑒定為“RNA”或“DNA”，但實際上那些序列可以用化學修飾的任何組合進行修飾。熟習該項技術者應容易地意識到，如“RNA”或“DNA”這樣的名稱描述修飾的寡核苷酸在某些情況下是任意的。  例如，包含含有2’-OH糖部分和胸腺嘧啶鹼基的核苷的寡核苷酸可以被描述為具有修飾的糖（針對DNA的天然2’-H為2’-OH）的DNA或具有修飾的鹼基（針對RNA的天然尿嘧啶為胸腺嘧啶（甲基化的尿嘧啶））的RNA。如在此提供的，針對mRNA抑制測定的名稱‘0’僅僅表示該反義寡核苷酸不抑制mRNA表現水平。
因此，在此提供的核酸序列（包括但不限於在序列表中的那些）旨在涵蓋含有任何組合的天然或修飾的RNA和/或DNA的核酸，包括但不限於具有修飾的核鹼基的此類核酸。作為另外的實例而非限制，具有核鹼基序列“ATCGATCG”的寡核苷酸涵蓋具有這樣的核鹼基序列的任何寡核苷酸，無論是修飾的還是未經修飾的，包括但不限於包含RNA鹼基的此類化合物，如具有序列“AUCGAUCG”的那些以及具有一些DNA鹼基和一些RNA鹼基如“AUCGATCG”的那些，以及具有其他修飾的核鹼基例如“AT mCGAUCG”的化合物（其中 mC表示含有在5-位置處的甲基基團的胞嘧啶鹼）。
儘管在此描述的某些化合物、組成物和方法已經根據某些實施方式具體地進行了描述，但以下實例僅用以說明在此描述的化合物並不旨在限制它們。在本申請中引用的各個參考文獻藉由引用以其全文結合在此。 實例 1 ： 3-10-3 cEt 缺口體對 HepG2 細胞中人類 PCSK9 的反義抑制
設計靶向PCSK9核酸的反義寡核苷酸並且針對其在體外對PCSK9 mRNA的作用進行測試。將下表中的嵌合反義寡核苷酸設計為3-10-3 cEt缺口體。該等缺口體長16個核苷，其中中心缺口區段由十個2’-去氧核苷構成，並且在三個核苷各自的5’端和3’端側接翼區段。5’翼區段中的每個核苷和3’翼區段中的每個核苷都具有cEt糖修飾。遍及每個缺口體的核苷間連接都是硫代磷酸酯（P=S）連接。遍及每個缺口體的所有胞嘧啶殘基都是5-甲基胞嘧啶。
“起始位點”指示缺口體所靶向的人類基因序列中的最5’核苷。“終止位點”指示缺口體所靶向的人類基因序列中的最3’核苷。下表中所列的每個缺口體都被靶向人類PCSK9 mRNA（在此指定為SEQ ID NO: 1（基因庫登錄號NM_174936.3））或人類PCSK9基因組序列（在此指定為SEQ ID NO: 2（從核苷酸55036001至55068000截短的基因庫登錄號NC_000001.11））。‘n/a’指示反義寡核苷酸並未以100%互補性靶向該特定基因序列。
在一系列具有類似培養條件的實驗中對該等反義寡核苷酸進行測試。將每個實驗的結果呈現在如下所示的單獨的表中。 研究1
使用電穿孔用1,000 nM反義寡核苷酸以每孔20,000個細胞的密度轉染培養的HepG2細胞。先前在WO2014179620中揭露的ISIS 431131作為基準寡核苷酸也被包括在該研究中。在大約24小時的處理期之後，從細胞中分離RNA，並且藉由定量即時PCR測量PCSK9 mRNA水平。將從ABI（ID# Hs03037355_m1）中設置的人類PCSK9引物探針用於測量mRNA水平。如藉由RIBOGREEN®的測量，根據總RNA含量調整PCSK9 mRNA水平。將結果呈現為相對於未經處理的對照細胞的PCSK9抑制百分比。若干新設計的寡核苷酸比先前揭露的寡核苷酸ISIS 431131更強效。 [ 表 1]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
431131 1015 1034 GTCACACTTGCTGGCCTGTC 3 N/A N/A 3
859373 N/A N/A TCTGCCGTCCTTCCCA 36 4562 4577 4
859377 N/A N/A AGCATCTGCCGTCCTT 62 4566 4581 5
859381 N/A N/A TGTCAAGCACCACAGC 31 5010 5025 6
859385 N/A N/A TGACTTGTCAAGCACC 61 5015 5030 7
859389 N/A N/A ATAAGTGACTTGTCAA 45 5020 5035 8
859393 N/A N/A GCATTGTAAGTTCACT 84 5138 5153 9
859397 N/A N/A GCTTGCATTGTAAGTT 29 5142 5157 10
859401 N/A N/A GGTTTTCCCAGCTCTG 85 5897 5912 11
859405 N/A N/A CTCTGGTTTTCCCAGC 72 5901 5916 12
859409 N/A N/A CCACCTCTGGTTTTCC 67 5905 5920 13
859413 N/A N/A GTCTGCTCCAACTGCT 43 6714 6729 14
859417 N/A N/A CTCTTGTCTGCTCCAA 55 6719 6734 15
859421 N/A N/A TTTAGCTCTTGTCTGC 45 6724 6739 16
859425 N/A N/A GCAAGTCCCTGCTAGA 18 11238 11253 17
859429 N/A N/A CACCTGCAAGTCCCTG 15 11243 11258 18
859433 N/A N/A ATTGCCACCTGCAAGT 4 11248 11263 19
859437 N/A N/A TCATTCTCTCCTCAGG 58 11294 11309 20
859441 N/A N/A TGGACCCACCACATTG 34 11383 11398 21
859445 N/A N/A TGCATGGACCCACCAC 61 11387 11402 22
859449 N/A N/A CATGTTGCATGGACCC 61 11392 11407 23
859453 N/A N/A ACAGTAGCCCCCCAAC 46 11608 11623 24
859457 N/A N/A TCACACAGTAGCCCCC 52 11612 11627 25
859461 N/A N/A AAAGTCACACAGTAGC 51 11616 11631 26
859465 N/A N/A GGTCACACAGTTTGGG 58 11639 11654 27
859469 N/A N/A ACATATGCAAGGTCAC 74 11649 11664 28
859473 N/A N/A ACTCAGACATATGCAA 32 11655 11670 29
859477 N/A N/A AGTGTCCCTCTTGGTC 59 11950 11965 30
859481 N/A N/A TGCCAGTGTCCCTCTT 37 11954 11969 31
859485 N/A N/A TGATCCTCTGCCAGTG 58 11962 11977 32
859489 N/A N/A TCTGTGATCCTCTGCC 50 11966 11981 33
859493 N/A N/A GGTCTCTGTGATCCTC 67 11970 11985 34
859497 N/A N/A AGCTCTAGGGCCCATG 6 12671 12686 35
859501 N/A N/A AGCCAGCTCTAGGGCC 0 12675 12690 36
859505 N/A N/A GTGGGTGCTCAAAACG 28 12924 12939 37
859509 N/A N/A AATAATGCCCCCGTAG 26 13176 13191 38
859513 N/A N/A CTGGTTAATAATGCCC 47 13182 13197 39
859517 N/A N/A CTGGATACATTGGCAG 25 14125 14140 40
859521 N/A N/A CTCTGAGTGTGTTAGG 54 14473 14488 41
859525 N/A N/A TGCTCTCTGAGTGTGT 26 14477 14492 42
859529 N/A N/A GCATGCTGAGCAGGTC 78 14541 14556 43
859533 N/A N/A TGTAGCATGCTGAGCA 73 14545 14560 44
859537 N/A N/A ATTCAGTGGCTGCTCT 0 14755 14770 45
859541 N/A N/A GAGCAATTCAGTGGCT 24 14760 14775 46
859310 979 994 TCCTCGGGCACATTCT 34 16371 16386 47
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 8 16705 16720 48
859545 N/A N/A ATTTAGCAGCTACGGC 35 17441 17456 49
859549 N/A N/A CAACTATTTAGCAGCT 36 17446 17461 50
859553 N/A N/A AGGTTACCGCTGTCAG 73 20914 20929 51
859557 N/A N/A GACCTAGGTTACCGCT 33 20919 20934 52
859314 1498 1513 CCACTCTGTGACACAA 79 21470 21485 53
859318 1503 1518 ATGTCCCACTCTGTGA 49 21475 21490 54
859561 N/A N/A CTCGAAGGTAAGCCGC 66 21891 21906 55
859565 N/A N/A CAGCACTGTCCTGCAG 20 22880 22895 56
859569 N/A N/A TTTTTGCTGGTTTGAG 34 23030 23045 57
859573 N/A N/A CACTTTTTTGCTGGTT 58 23034 23049 58
859577 N/A N/A AATTCCACTTTTTTGC 15 23039 23054 59
859581 N/A N/A ATCTGTGCACTATCCT 28 23069 23084 60
859585 N/A N/A TGGCATCTGTGCACTA 55 23073 23088 61
859589 N/A N/A TCTCACACGAGCATTA 16 23176 23191 62
859593 N/A N/A CTGCCTCTCACACGAG 46 23181 23196 63
859597 N/A N/A TCTTATGGAGGAGGAA 23 23853 23868 64
859601 N/A N/A TGTTTTCGACACAGGG 68 24225 24240 65
859605 N/A N/A GGCATGTTTTCGACAC 68 24229 24244 66
859609 N/A N/A CATCTTTTCAGTACTC 43 26516 26531 67
859613 N/A N/A ATCGCATCTTTTCAGT 31 26520 26535 68
859322 2429 2444 CTGTCACTGGAGCTCC 26 27572 27587 69
859325 2495 2510 GTCGGAACCATTTTAA 34 27638 27653 70
859329 2501 2516 GGACAAGTCGGAACCA 29 27644 27659 71
859333 2505 2520 AGAGGGACAAGTCGGA 61 27648 27663 72
859337 3461 3476 ATCTCCGCCAGGCCAG 24 28604 28619 73
859341 3465 3480 AAGCATCTCCGCCAGG 68 28608 28623 74
859345 3470 3485 CTTAGAAGCATCTCCG 61 28613 28628 75
859349 3476 3491 CCATGCCTTAGAAGCA 58 28619 28634 76
859353 3538 3553 TGTCTGCTTGCTTGGG 62 28681 28696 77
859357 3544 3559 GATAAATGTCTGCTTG 37 28687 28702 78
859361 3593 3608 GTCTAGAAAAGTTGGC 63 28736 28751 79
859365 3597 3612 ACAGGTCTAGAAAAGT 64 28740 28755 80
859369 3606 3621 AAAAGCAAAACAGGTC 33 28749 28764 81
[ 表 2]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
431131 1015 1034 GTCACACTTGCTGGCCTGTC 0 N/A N/A 3
859374 N/A N/A ATCTGCCGTCCTTCCC 42 4563 4578 82
859378 N/A N/A CAGCATCTGCCGTCCT 62 4567 4582 83
859382 N/A N/A CTTGTCAAGCACCACA 61 5012 5027 84
859386 N/A N/A GTGACTTGTCAAGCAC 10 5016 5031 85
859390 N/A N/A TGTAAGTTCACTCATG 56 5134 5149 86
859394 N/A N/A TGCATTGTAAGTTCAC 71 5139 5154 87
859398 N/A N/A GGGCTTGCATTGTAAG 13 5144 5159 88
859402 N/A N/A TGGTTTTCCCAGCTCT 78 5898 5913 89
859406 N/A N/A CCTCTGGTTTTCCCAG 61 5902 5917 90
859410 N/A N/A TCCACCTCTGGTTTTC 41 5906 5921 91
859414 N/A N/A TTGTCTGCTCCAACTG 39 6716 6731 92
859418 N/A N/A GCTCTTGTCTGCTCCA 71 6720 6735 93
859422 N/A N/A TATAAATCTCCCATCC 0 7280 7295 94
859426 N/A N/A CTGCAAGTCCCTGCTA 12 11240 11255 95
859430 N/A N/A CCACCTGCAAGTCCCT 26 11244 11259 96
859434 N/A N/A CTCTCCTCAGGCCAGG 64 11289 11304 97
859438 N/A N/A CCCACCACATTGCATC 37 11379 11394 98
859442 N/A N/A ATGGACCCACCACATT 10 11384 11399 99
859446 N/A N/A TTGCATGGACCCACCA 40 11388 11403 100
859450 N/A N/A CGAGAACCGGTAAGGG 34 11447 11462 101
859454 N/A N/A CACAGTAGCCCCCCAA 32 11609 11624 102
859458 N/A N/A GTCACACAGTAGCCCC 69 11613 11628 103
859462 N/A N/A GCAAAGTCACACAGTA 64 11618 11633 104
859466 N/A N/A AGGTCACACAGTTTGG 83 11640 11655 105
859470 N/A N/A GACATATGCAAGGTCA 40 11650 11665 106
859474 N/A N/A TCCCTCTTGGTCTCTG 55 11946 11961 107
859478 N/A N/A CAGTGTCCCTCTTGGT 67 11951 11966 108
859482 N/A N/A CTGCCAGTGTCCCTCT 1 11955 11970 109
859486 N/A N/A GTGATCCTCTGCCAGT 35 11963 11978 110
859490 N/A N/A CTCTGTGATCCTCTGC 68 11967 11982 111
859494 N/A N/A GGGTCTCTGTGATCCT 33 11971 11986 112
859498 N/A N/A CAGCTCTAGGGCCCAT 56 12672 12687 113
859502 N/A N/A CAGCCAGCTCTAGGGC 31 12676 12691 114
859506 N/A N/A AGTGGGTGCTCAAAAC 23 12925 12940 115
859510 N/A N/A TTAATAATGCCCCCGT 32 13178 13193 116
859514 N/A N/A CCTGGTTAATAATGCC 36 13183 13198 117
859518 N/A N/A GAGTGTGTTAGGAGCT 83 14469 14484 118
859522 N/A N/A TCTCTGAGTGTGTTAG 21 14474 14489 119
859526 N/A N/A CTTGCTCTCTGAGTGT 42 14479 14494 120
859530 N/A N/A AGCATGCTGAGCAGGT 54 14542 14557 121
859534 N/A N/A CTGTAGCATGCTGAGC 71 14546 14561 122
859538 N/A N/A AATTCAGTGGCTGCTC 27 14756 14771 123
859542 N/A N/A AGAGCAATTCAGTGGC 42 14761 14776 124
859311 981 996 CCTCCTCGGGCACATT 14 16373 16388 125
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 0 16705 16720 48
859546 N/A N/A CTATTTAGCAGCTACG 57 17443 17458 126
859550 N/A N/A TCAACTATTTAGCAGC 56 17447 17462 127
859554 N/A N/A TAGGTTACCGCTGTCA 47 20915 20930 128
859558 N/A N/A GGACCTAGGTTACCGC 49 20920 20935 129
859315 1499 1514 CCCACTCTGTGACACA 94 21471 21486 130
859319 1505 1520 TGATGTCCCACTCTGT 31 21477 21492 131
859562 N/A N/A GTCCTGCAGCCTCTAG 30 22873 22888 132
859566 N/A N/A CCAGCACTGTCCTGCA 54 22881 22896 133
859570 N/A N/A TTTTTTGCTGGTTTGA 33 23031 23046 134
859574 N/A N/A CCACTTTTTTGCTGGT 21 23035 23050 135
859578 N/A N/A CAATTCCACTTTTTTG 41 23040 23055 136
859582 N/A N/A CATCTGTGCACTATCC 48 23070 23085 137
859586 N/A N/A ATGGCATCTGTGCACT 30 23074 23089 138
859590 N/A N/A CCTCTCACACGAGCAT 48 23178 23193 139
859594 N/A N/A TCTGCCTCTCACACGA 29 23182 23197 140
859598 N/A N/A TTCGACACAGGGTAGC 67 24221 24236 141
859602 N/A N/A ATGTTTTCGACACAGG 66 24226 24241 142
859606 N/A N/A TGGGCATGTTTTCGAC 0 24231 24246 143
859610 N/A N/A GCATCTTTTCAGTACT 55 26517 26532 144
859614 N/A N/A CATCGCATCTTTTCAG 40 26521 26536 145
468484 2430 2445 GCTGTCACTGGAGCTC 46 27573 27588 146
859326 2497 2512 AAGTCGGAACCATTTT 56 27640 27655 147
859330 2502 2517 GGGACAAGTCGGAACC 57 27645 27660 148
859334 3458 3473 TCCGCCAGGCCAGTGA 33 28601 28616 149
859338 3462 3477 CATCTCCGCCAGGCCA 57 28605 28620 150
859342 3466 3481 GAAGCATCTCCGCCAG 56 28609 28624 151
859346 3472 3487 GCCTTAGAAGCATCTC 67 28615 28630 152
859350 3477 3492 ACCATGCCTTAGAAGC 41 28620 28635 153
859354 3540 3555 AATGTCTGCTTGCTTG 69 28683 28698 154
859358 3546 3561 AAGATAAATGTCTGCT 69 28689 28704 155
859362 3594 3609 GGTCTAGAAAAGTTGG 51 28737 28752 156
859366 3602 3617 GCAAAACAGGTCTAGA 52 28745 28760 157
859370 3632 3647 ACCCAGAATAAATATC 28 28775 28790 158
[ 表 3]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
431131 1015 1034 GTCACACTTGCTGGCCTGTC 10 N/A N/A 3
859375 N/A N/A CATCTGCCGTCCTTCC 28 4564 4579 159
859379 N/A N/A CCAGCATCTGCCGTCC 55 4568 4583 160
859383 N/A N/A ACTTGTCAAGCACCAC 66 5013 5028 161
859387 N/A N/A AGTGACTTGTCAAGCA 84 5017 5032 162
859391 N/A N/A ATTGTAAGTTCACTCA 70 5136 5151 163
859395 N/A N/A TTGCATTGTAAGTTCA 82 5140 5155 164
859399 N/A N/A AAATTGAATGAATTGG 26 5768 5783 165
859403 N/A N/A CTGGTTTTCCCAGCTC 73 5899 5914 166
859407 N/A N/A ACCTCTGGTTTTCCCA 77 5903 5918 167
859411 N/A N/A TTCCACCTCTGGTTTT 23 5907 5922 168
859415 N/A N/A CTTGTCTGCTCCAACT 22 6717 6732 169
859419 N/A N/A AGCTCTTGTCTGCTCC 81 6721 6736 170
859423 N/A N/A ATTGAGGGAAAAAATC 12 7468 7483 171
859427 N/A N/A CCTGCAAGTCCCTGCT 42 11241 11256 172
859431 N/A N/A GCCACCTGCAAGTCCC 47 11245 11260 173
859435 N/A N/A ATTCTCTCCTCAGGCC 52 11292 11307 174
859439 N/A N/A GACCCACCACATTGCA 48 11381 11396 175
859443 N/A N/A CATGGACCCACCACAT 25 11385 11400 176
859447 N/A N/A GTTGCATGGACCCACC 65 11389 11404 177
859451 N/A N/A AGTAGCCCCCCAACTT 0 11606 11621 178
859455 N/A N/A ACACAGTAGCCCCCCA 42 11610 11625 179
859459 N/A N/A AGTCACACAGTAGCCC 83 11614 11629 180
859463 N/A N/A CACACAGTTTGGGTGT 37 11636 11651 181
859467 N/A N/A ATATGCAAGGTCACAC 49 11647 11662 182
859471 N/A N/A AGACATATGCAAGGTC 46 11651 11666 183
859475 N/A N/A TGTCCCTCTTGGTCTC 61 11948 11963 184
859479 N/A N/A CCAGTGTCCCTCTTGG 35 11952 11967 185
859483 N/A N/A TCTGCCAGTGTCCCTC 27 11956 11971 186
859487 N/A N/A TGTGATCCTCTGCCAG 42 11964 11979 187
859491 N/A N/A TCTCTGTGATCCTCTG 73 11968 11983 188
859495 N/A N/A TCTAGGGCCCATGCTT 21 12668 12683 189
859499 N/A N/A CCAGCTCTAGGGCCCA 53 12673 12688 190
859503 N/A N/A GGCAGCCAGCTCTAGG 42 12678 12693 191
859507 N/A N/A CGCACAGTGGGTGCTC 41 12930 12945 192
859511 N/A N/A GGTTAATAATGCCCCC 58 13180 13195 193
859515 N/A N/A GCCTGGTTAATAATGC 0 13184 13199 194
859519 N/A N/A CTGAGTGTGTTAGGAG 52 14471 14486 195
859523 N/A N/A CTCTCTGAGTGTGTTA 57 14475 14490 196
859527 N/A N/A TGCTGAGCAGGTCCTT 47 14538 14553 197
859531 N/A N/A TAGCATGCTGAGCAGG 79 14543 14558 198
859535 N/A N/A TTCTGTAGCATGCTGA 50 14548 14563 199
859539 N/A N/A CAATTCAGTGGCTGCT 62 14757 14772 200
859543 N/A N/A ACAGAGCAATTCAGTG 49 14763 14778 201
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 29 16705 16720 48
859547 N/A N/A ACTATTTAGCAGCTAC 65 17444 17459 202
859551 N/A N/A GTCAACTATTTAGCAG 73 17448 17463 203
859555 N/A N/A CTAGGTTACCGCTGTC 60 20916 20931 204
859559 N/A N/A GGGACCTAGGTTACCG 31 20921 20936 205
859312 1495 1510 CTCTGTGACACAAAGC 69 21467 21482 206
859316 1501 1516 GTCCCACTCTGTGACA 66 21473 21488 207
859563 N/A N/A GCACTGTCCTGCAGCC 44 22878 22893 208
859567 N/A N/A ATCCAGCACTGTCCTG 47 22883 22898 209
859571 N/A N/A CTTTTTTGCTGGTTTG 77 23032 23047 210
859575 N/A N/A TCCACTTTTTTGCTGG 0 23036 23051 211
859579 N/A N/A TGTGCACTATCCTGTA 39 23066 23081 212
859583 N/A N/A GCATCTGTGCACTATC 73 23071 23086 213
859587 N/A N/A AGATGGCATCTGTGCA 65 23076 23091 214
859591 N/A N/A GCCTCTCACACGAGCA 57 23179 23194 215
859595 N/A N/A ACTCTGCCTCTCACAC 27 23184 23199 216
859599 N/A N/A TTTTCGACACAGGGTA 69 24223 24238 217
859603 N/A N/A CATGTTTTCGACACAG 69 24227 24242 218
859607 N/A N/A CTTTTCAGTACTCTAT 28 26513 26528 219
859611 N/A N/A CGCATCTTTTCAGTAC 70 26518 26533 220
859615 N/A N/A TCCATCGCATCTTTTC 51 26523 26538 221
859320 2425 2440 CACTGGAGCTCCTGGG 45 27568 27583 222
859323 2431 2446 GGCTGTCACTGGAGCT 33 27574 27589 223
859327 2498 2513 CAAGTCGGAACCATTT 52 27641 27656 224
859331 2503 2518 AGGGACAAGTCGGAAC 28 27646 27661 225
859335 3459 3474 CTCCGCCAGGCCAGTG 25 28602 28617 226
859339 3463 3478 GCATCTCCGCCAGGCC 56 28606 28621 227
859343 3467 3482 AGAAGCATCTCCGCCA 63 28610 28625 228
859347 3474 3489 ATGCCTTAGAAGCATC 8 28617 28632 229
859351 3478 3493 GACCATGCCTTAGAAG 30 28621 28636 230
859355 3541 3556 AAATGTCTGCTTGCTT 51 28684 28699 231
859359 3589 3604 AGAAAAGTTGGCTGTA 37 28732 28747 232
859363 3595 3610 AGGTCTAGAAAAGTTG 74 28738 28753 233
859367 3604 3619 AAGCAAAACAGGTCTA 37 28747 28762 234
859371 3633 3648 AACCCAGAATAAATAT 30 28776 28791 235
[ 表 4]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
431131 1015 1034 GTCACACTTGCTGGCCTGTC 0 N/A N/A 3
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 25 16705 16720 48
859313 1497 1512 CACTCTGTGACACAAA 59 21469 21484 236
859317 1502 1517 TGTCCCACTCTGTGAC 10 21474 21489 237
859321 2428 2443 TGTCACTGGAGCTCCT 17 27571 27586 238
859324 2432 2447 GGGCTGTCACTGGAGC 46 27575 27590 239
859328 2499 2514 ACAAGTCGGAACCATT 60 27642 27657 240
859332 2504 2519 GAGGGACAAGTCGGAA 1 27647 27662 241
859336 3460 3475 TCTCCGCCAGGCCAGT 20 28603 28618 242
859340 3464 3479 AGCATCTCCGCCAGGC 60 28607 28622 243
859344 3468 3483 TAGAAGCATCTCCGCC 59 28611 28626 244
859348 3475 3490 CATGCCTTAGAAGCAT 0 28618 28633 245
859352 3480 3495 CCGACCATGCCTTAGA 63 28623 28638 246
859356 3542 3557 TAAATGTCTGCTTGCT 67 28685 28700 247
859360 3591 3606 CTAGAAAAGTTGGCTG 59 28734 28749 248
859364 3596 3611 CAGGTCTAGAAAAGTT 44 28739 28754 249
859368 3605 3620 AAAGCAAAACAGGTCT 62 28748 28763 250
859372 N/A N/A TGCCGTCCTTCCCACC 17 4560 4575 251
859376 N/A N/A GCATCTGCCGTCCTTC 40 4565 4580 252
859380 N/A N/A TCCCAGCATCTGCCGT 49 4570 4585 253
859384 N/A N/A GACTTGTCAAGCACCA 83 5014 5029 254
859388 N/A N/A AAGTGACTTGTCAAGC 77 5018 5033 255
859392 N/A N/A CATTGTAAGTTCACTC 77 5137 5152 256
859396 N/A N/A CTTGCATTGTAAGTTC 65 5141 5156 257
859400 N/A N/A TTTCCCAGCTCTGTAT 28 5894 5909 258
859404 N/A N/A TCTGGTTTTCCCAGCT 48 5900 5915 259
859408 N/A N/A CACCTCTGGTTTTCCC 78 5904 5919 260
859412 N/A N/A CTTCCACCTCTGGTTT 28 5908 5923 261
859416 N/A N/A TCTTGTCTGCTCCAAC 13 6718 6733 262
859420 N/A N/A TAGCTCTTGTCTGCTC 39 6722 6737 263
859424 N/A N/A ACCCTAGGTGTACTTT 27 7779 7794 264
859428 N/A N/A ACCTGCAAGTCCCTGC 31 11242 11257 265
859432 N/A N/A TGCCACCTGCAAGTCC 44 11246 11261 266
859436 N/A N/A CATTCTCTCCTCAGGC 38 11293 11308 267
859440 N/A N/A GGACCCACCACATTGC 19 11382 11397 268
859444 N/A N/A GCATGGACCCACCACA 56 11386 11401 269
859448 N/A N/A TGTTGCATGGACCCAC 53 11390 11405 270
859452 N/A N/A CAGTAGCCCCCCAACT 19 11607 11622 271
859456 N/A N/A CACACAGTAGCCCCCC 56 11611 11626 272
859460 N/A N/A AAGTCACACAGTAGCC 32 11615 11630 273
859464 N/A N/A GTCACACAGTTTGGGT 69 11638 11653 274
859468 N/A N/A CATATGCAAGGTCACA 59 11648 11663 275
859472 N/A N/A TCAGACATATGCAAGG 72 11653 11668 276
859476 N/A N/A GTGTCCCTCTTGGTCT 67 11949 11964 277
859480 N/A N/A GCCAGTGTCCCTCTTG 46 11953 11968 278
859484 N/A N/A CCTCTGCCAGTGTCCC 34 11958 11973 279
859488 N/A N/A CTGTGATCCTCTGCCA 58 11965 11980 280
859492 N/A N/A GTCTCTGTGATCCTCT 71 11969 11984 281
859496 N/A N/A GCTCTAGGGCCCATGC 16 12670 12685 282
859500 N/A N/A GCCAGCTCTAGGGCCC 16 12674 12689 283
859504 N/A N/A AGAGAAATGCATGCTA 68 12841 12856 284
859508 N/A N/A GGCGCACAGTGGGTGC 0 12932 12947 285
859512 N/A N/A TGGTTAATAATGCCCC 40 13181 13196 286
859516 N/A N/A TTGCCTGGTTAATAAT 12 13186 13201 287
859520 N/A N/A TCTGAGTGTGTTAGGA 62 14472 14487 288
859524 N/A N/A GCTCTCTGAGTGTGTT 56 14476 14491 289
859528 N/A N/A CATGCTGAGCAGGTCC 66 14540 14555 290
859532 N/A N/A GTAGCATGCTGAGCAG 79 14544 14559 291
859536 N/A N/A TCAGTGGCTGCTCTGA 24 14753 14768 292
859540 N/A N/A GCAATTCAGTGGCTGC 33 14758 14773 293
859544 N/A N/A TAGTTAACACACAGAA 17 16208 16223 294
859548 N/A N/A AACTATTTAGCAGCTA 43 17445 17460 295
859552 N/A N/A CGTCAACTATTTAGCA 66 17449 17464 296
859556 N/A N/A CCTAGGTTACCGCTGT 33 20917 20932 297
859560 N/A N/A GCACAGACCCTGACTG 23 21567 21582 298
859564 N/A N/A AGCACTGTCCTGCAGC 48 22879 22894 299
859568 N/A N/A TTTTGCTGGTTTGAGA 52 23029 23044 300
859572 N/A N/A ACTTTTTTGCTGGTTT 70 23033 23048 301
859576 N/A N/A ATTCCACTTTTTTGCT 24 23038 23053 302
859580 N/A N/A TCTGTGCACTATCCTG 38 23068 23083 303
859584 N/A N/A GGCATCTGTGCACTAT 75 23072 23087 304
859588 N/A N/A TCACACGAGCATTAAG 34 23174 23189 305
859592 N/A N/A TGCCTCTCACACGAGC 38 23180 23195 306
859596 N/A N/A TAGACAGGATCAACTC 18 23406 23421 307
859600 N/A N/A GTTTTCGACACAGGGT 61 24224 24239 308
859604 N/A N/A GCATGTTTTCGACACA 63 24228 24243 309
859608 N/A N/A ATCTTTTCAGTACTCT 48 26515 26530 310
859612 N/A N/A TCGCATCTTTTCAGTA 31 26519 26534 311
859616 N/A N/A AGCAGCTAGGCCACAG 20 26841 26856 312
研究2
使用電穿孔用3,000 nM反義寡核苷酸以每孔20,000個細胞的密度轉染培養的HepG2細胞。在大約24小時的處理期之後，從細胞中分離RNA，並且藉由定量即時PCR測量PCSK9 mRNA水平。將從ABI（ID# Hs03037355_m1）中設置的人類PCSK9引物探針用於測量mRNA水平。如藉由RIBOGREEN®的測量，根據總RNA含量調整PCSK9 mRNA水平。將結果呈現為相對於未經處理的對照細胞的PCSK9抑制百分比。 [ 表 5]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848304 757 772 AACTTCAAGGCCAGCT 66 N/A N/A 313
848215 108 123 CTGAACTGAACGGCGG 68 3583 3598 314
848231 320 335 GGCGAGGAGACCTAGA 87 3795 3810 315
848247 485 500 ACGCAAGGCTAGCACC 77 3960 3975 316
848788 N/A N/A GGCAAGCCCGCTTTCT 88 4456 4471 317
848804 N/A N/A CCCTTTTAAAGATTAG 67 5053 5068 318
848820 N/A N/A CCAGAGAAGAAACATC 62 5524 5539 319
848836 N/A N/A AAGAATCTGGAGCTGC 84 6430 6445 320
848852 N/A N/A CACTGAGGACCAAATT 65 6806 6821 321
848868 N/A N/A GCTATATAAAGGAATA 65 7161 7176 322
848884 N/A N/A CATGAGCAAGTCACTC 65 7387 7402 323
848900 N/A N/A AGTATAGTAGATGATA 82 7720 7735 324
848262 614 629 CGAGAGGTGGGTCTCC 54 7887 7902 325
466848 673 688 GTGAGGTATCCCCGGC 88 7946 7961 326
848289 689 704 GACATGCAGGATCTTG 79 7962 7977 327
848916 N/A N/A GGGAATTCTATACAGA 72 8193 8208 328
848932 N/A N/A CACCGAAGATGTGACA 51 8521 8536 329
848948 N/A N/A AAGGGAAAGGCCTGAG 53 9040 9055 330
848964 N/A N/A CCCCACAGGCAGCCTC 61 9610 9625 331
848980 N/A N/A CCGGAGGACAGACTAG 27 10368 10383 332
848319 862 877 TGGTATTCATCCGCCC 60 10623 10638 333
848996 N/A N/A AGCCAAACGGAGCTGG 51 11093 11108 334
849012 N/A N/A AAAGGAACAGGCTCTT 56 11842 11857 335
849028 N/A N/A CTCTAGGGCCCATGCT 56 12669 12684 336
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 96 13108 13123 337
849060 N/A N/A GATGATGTGACCACTG 86 13864 13879 338
849076 N/A N/A GGCCAGCAAGGTGGGC 35 14277 14292 339
849092 N/A N/A TGCTAGTAGGTCTGGG 72 14675 14690 340
849108 N/A N/A CCAAAGGAAGACTTCA 70 15400 15415 341
849124 N/A N/A ATTTAAAGACTCAAAG 16 15870 15885 342
849140 N/A N/A ACATTTGTGGGAGAGG 56 16250 16265 343
848334 984 999 CGTCCTCCTCGGGCAC 85 16376 16391 344
848348 1018 1033 TCACACTTGCTGGCCT 52 16648 16663 345
848364 1061 1076 ATCCCGGCCGCTGACC 57 16691 16706 346
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 48 16705 16720 48
848379 1085 1100 GCTGGCACCCTTGGCC 57 16715 16730 347
849156 N/A N/A AAGACATAAAGACATC 89 17083 17098 348
849172 N/A N/A CAGAAGGTTATTGATT 68 17735 17750 349
849188 N/A N/A TGCTAGTTATTAAGCA 15 18080 18095 350
849204 N/A N/A CAGTAACAGCTCTTTT 80 19020 19035 351
849220 N/A N/A CCTTATTATCCCTTTC 70 19396 19411 352
849236 N/A N/A CAACATCAAATTCTGC 92 19658 19673 353
848395 1165 1180 TTCCGAATAAACTCCA 73 19996 20011 354
848411 1345 1360 ACCTCGGGAGCTGAGG 20 20176 20191 355
849252 N/A N/A GATGGAGGTTTCGAGC 87 20381 20396 356
849268 N/A N/A TATCAAGTGGTTCTAA 44 21039 21054 357
848427 1458 1473 CACCAATGATGTCCTC 45 21430 21445 358
849284 N/A N/A TCTTATCGGCCAGGTG 75 21810 21825 359
848443 1608 1623 TGGCAGAGAAGTGGAT 21 22101 22116 360
848459 1730 1745 CCATACAGTCCTGCAA 40 22512 22527 361
848475 1807 1822 GAGCAGCTCAGCAGCT 44 22589 22604 362
849300 N/A N/A TACAGAAGAGCTGGAG 61 22767 22782 363
849316 N/A N/A ACACAGAGTGGTTTCA 79 23262 23277 364
848489 1951 1966 CTGCAGTTGGCCTGGG 57 23571 23586 365
848505 2006 2021 GTGGCAGTGGACACGG 71 23626 23641 366
849332 N/A N/A AGGAGAAGTAAGGTCA 91 23828 23843 367
849348 N/A N/A GGGCATGTTTTCGACA 65 24230 24245 368
849364 N/A N/A TTCCACCCAGAGATGG 34 25105 25120 369
849380 N/A N/A CGGTATGGTGGTGGCA 71 25630 25645 370
849396 N/A N/A GGGCAAGTGGATCCAA 38 26364 26379 371
849412 N/A N/A CCACACTTCATTTCTC 35 27298 27313 372
848521 2225 2240 GCAGGCCACGGTCACC 67 27368 27383 373
848537 2483 2498 TTAAAGCTCAGCCCCA 67 27626 27641 374
848553 2560 2575 CCCCGGAAAGGCGGAA 39 27703 27718 375
848569 2704 2719 CCGAGCACAGCTCGAC 62 27847 27862 376
848584 2739 2754 ACGGACATCGGCACAT 92 27882 27897 377
848600 2776 2791 GGCACGGAACAAGAGC 87 27919 27934 378
848616 2888 2903 ACCTTTCACACTCACC 92 28031 28046 379
468491 2971 2986 TGCCATCCAGAAAGCT 64 28114 28129 380
848646 3085 3100 CACCTTTGGGTGTTGC 80 28228 28243 381
848662 3132 3147 CCACTGCACACTGCCG 87 28275 28290 382
848678 3220 3235 TGGTTCCAGGTTTCTT 87 28363 28378 383
848693 3253 3268 CCTGCTGTGTGAGCTT 93 28396 28411 384
848709 3290 3305 CTTCAGAGCCAGCCCA 65 28433 28448 385
848725 3380 3395 CCGAGCTTCCTGGTCT 92 28523 28538 386
848741 3433 3448 GGGTGATAACGGAAAA 62 28576 28591 387
848756 3547 3562 AAAGATAAATGTCTGC 92 28690 28705 388
848772 3631 3646 CCCAGAATAAATATCT 89 28774 28789 389
[ 表 6]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 PCSK9 （% 抑制） SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848216 123 138 CTCCAGGCTCAGACCC 82 3598 3613 390
848232 353 368 GCCCATGAGGGCCAGG 67 3828 3843 391
848248 486 501 AACGCAAGGCTAGCAC 62 3961 3976 392
848789 N/A N/A CTATAATGGCAAGCCC 76 4463 4478 393
848805 N/A N/A CGTAGGGACGATTGTC 65 5073 5088 394
848821 N/A N/A ATGAACTTGAGGAGGC 85 5558 5573 395
848837 N/A N/A TTGGAAGAATCTGGAG 81 6434 6449 396
848853 N/A N/A CAACACTGAGGACCAA 77 6809 6824 397
848869 N/A N/A GGCAACACTTCTTAAA 60 7219 7234 398
848885 N/A N/A GTGCAGCCATGAGCAA 73 7394 7409 399
848901 N/A N/A ACAGAGTATAGTAGAT 73 7724 7739 400
848263 616 631 TGCGAGAGGTGGGTCT 42 7889 7904 401
848275 674 689 GGTGAGGTATCCCCGG 67 7947 7962 402
848290 690 705 AGACATGCAGGATCTT 56 7963 7978 403
848917 N/A N/A TCAAATGAAGATAGAC 68 8237 8252 404
848933 N/A N/A GAATACCCAGTCCCCT 49 8548 8563 405
848949 N/A N/A CTCAAGGGAAAGGCCT 59 9043 9058 406
848965 N/A N/A CATGGCAGCGGTGAAC 47 9638 9653 407
848981 N/A N/A GATCAAACCTGTCCCC 42 10427 10442 408
848997 N/A N/A TGCAGACCGTTTTCCA 83 11221 11236 409
849013 N/A N/A GGAAAGGAACAGGCTC 88 11844 11859 410
849029 N/A N/A TTTGAGGGCGGCAGCC 32 12687 12702 411
849045 N/A N/A TGCTGGATACACAGGC 79 13112 13127 412
849061 N/A N/A TGTACCTGGGTTCTGC 86 13885 13900 413
849077 N/A N/A CACTAGATATTGAGCT 55 14329 14344 414
849093 N/A N/A CTATGCTAGTAGGTCT 51 14678 14693 415
849109 N/A N/A GGCCAAAGGAAGACTT 22 15402 15417 416
849125 N/A N/A CTGCAAGAAAGACAAC 73 15889 15904 417
848320 887 902 CACCAGGCTGCCTCCG 49 16279 16294 418
848335 985 1000 CCGTCCTCCTCGGGCA 81 16377 16392 419
849141 N/A N/A CATCAGACGGCCGTGC 40 16416 16431 420
848349 1019 1034 GTCACACTTGCTGGCC 62 16649 16664 421
468459 1063 1078 GCATCCCGGCCGCTGA 76 16693 16708 422
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 46 16705 16720 48
848380 1091 1106 GCGCATGCTGGCACCC 45 16721 16736 423
849157 N/A N/A GATAACATAACAAAAG 29 17096 17111 424
849173 N/A N/A GCAGAAGGTTATTGAT 64 17736 17751 425
849189 N/A N/A ACAGCTGCTAGTTATT 96 18085 18100 426
18398 18413
849205 N/A N/A TGCTACTGTCAACAGT 86 19032 19047 427
849221 N/A N/A CAATAACCTTATTATC 6 19402 19417 428
849237 N/A N/A AGAGAACAGACTGAGG 83 19727 19742 429
848396 1170 1185 GGCTTTTCCGAATAAA 43 20001 20016 430
849253 N/A N/A GGCAGAGGACGCAGGG 40 20538 20553 431
849269 N/A N/A ACTATTCGGTGTATCA 82 21050 21065 432
848428 1466 1481 GCTGGAGGCACCAATG 0 21438 21453 433
849285 N/A N/A GTCTTATCGGCCAGGT 86 21811 21826 434
848444 1617 1632 TGACATCTTTGGCAGA 39 22110 22125 435
848460 1731 1746 ACCATACAGTCCTGCA 19 22513 22528 436
848476 1814 1829 GAAACTGGAGCAGCTC 54 22596 22611 437
849301 N/A N/A CATTGAAAATCCATCC 83 22895 22910 438
849317 N/A N/A CCCAAGGAAGACTGTT 56 23318 23333 439
848490 1977 1992 CCTCAGCTGGTGGAGC 54 23597 23612 440
848506 2007 2022 GGTGGCAGTGGACACG 46 23627 23642 441
849333 N/A N/A AGGTAATACCTTTTTC 51 23871 23886 442
849349 N/A N/A CACCATCCCTTGATGC 46 24285 24300 443
849365 N/A N/A GAAAACACCATCTTTC 26 25118 25133 444
849381 N/A N/A GGCGGTATGGTGGTGG 71 25632 25647 445
849397 N/A N/A ACCCAGGGCAAGTGGA 56 26369 26384 446
849413 N/A N/A CCCCACCCACACTTCA 53 27304 27319 447
848522 2227 2242 TCGCAGGCCACGGTCA 69 27370 27385 448
848538 2485 2500 TTTTAAAGCTCAGCCC 38 27628 27643 449
848554 2565 2580 AGCAGCCCCGGAAAGG 67 27708 27723 450
848570 2706 2721 ACCCGAGCACAGCTCG 90 27849 27864 451
848585 2741 2756 CCACGGACATCGGCAC 93 27884 27899 452
848601 2777 2792 TGGCACGGAACAAGAG 54 27920 27935 453
848617 2898 2913 GGCCATCAGCACCTTT 63 28041 28056 454
848632 2976 2991 CTAGATGCCATCCAGA 91 28119 28134 455
848647 3088 3103 GGCCACCTTTGGGTGT 46 28231 28246 456
848663 3141 3156 GTGCATGCACCACTGC 78 28284 28299 457
848679 3221 3236 CTGGTTCCAGGTTTCT 88 28364 28379 458
848694 3254 3269 TCCTGCTGTGTGAGCT 91 28397 28412 459
848710 3302 3317 GAAGAGGCTTGGCTTC 17 28445 28460 460
848726 3381 3396 ACCGAGCTTCCTGGTC 38 28524 28539 461
848742 3438 3453 GGCCTGGGTGATAACG 26 28581 28596 462
848757 3550 3565 CCAAAAGATAAATGTC 46 28693 28708 463
848773 3638 3653 TACAAAACCCAGAATA 59 28781 28796 464
848305 758 773 CAACTTCAAGGCCAGC 79 N/A N/A 465
848412 1349 1364 GATGACCTCGGGAGCT 38 N/A N/A 466
研究3
使用電穿孔用1,000 nM反義寡核苷酸以每孔20,000個細胞的密度轉染培養的HepG2細胞。在大約24小時的處理期之後，從細胞中分離RNA，並且藉由定量即時PCR測量PCSK9 mRNA水平。  將從ABI（ID# Hs03037355_m1）中設置的人類PCSK9引物探針用於測量mRNA水平。如藉由RIBOGREEN®的測量，根據總RNA含量調整PCSK9 mRNA水平。將結果呈現為相對於未經處理的對照細胞的PCSK9抑制百分比。 [ 表 7]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848205 4 19 CACCAGAGCCCCATCG 3 3479 3494 467
848221 189 204 CTGGGAGCCGCTGCTG 42 3664 3679 468
848237 389 404 TGGCAGCGGCCACCAG 0 3864 3879 469
848253 506 521 GGCCAGGCCGTCCTCC 51 3981 3996 470
848778 N/A N/A CCGCACCTTGGCGCAG 0 4035 4050 471
848794 N/A N/A GAAACAGATGGAATAC 28 4626 4641 472
848810 N/A N/A ACCCAGCACACTCAGA 0 5291 5306 473
848826 N/A N/A GTACTCTGTGCAGTGG 80 5748 5763 474
848842 N/A N/A GAGTAGAACAGAGTCC 54 6544 6559 475
848858 N/A N/A TTAATAATCAGCCTTC 46 6933 6948 476
848874 N/A N/A TACAAATGCAGGCAGA 40 7256 7271 477
848890 N/A N/A CTCGACAACAGGTTTT 65 7577 7592 478
848906 N/A N/A AGGAACATGATGACAT 0 7811 7826 479
848268 644 659 CTGCAGGCGGCGGGCA 0 7917 7932 480
848279 679 694 ATCTTGGTGAGGTATC 40 7952 7967 481
848294 695 710 ATGGAAGACATGCAGG 44 7968 7983 482
848922 N/A N/A TAAAATGACTCAGGCT 19 8406 8421 483
848938 N/A N/A CATCAAGTTAGAGGCC 49 8650 8665 484
848954 N/A N/A TATACGGGTACCTTCT 28 9143 9158 485
848970 N/A N/A GCTCAGTGCAAACTGC 0 10094 10109 486
848309 779 794 CTCGATGTAGTCGACA 62 10540 10555 487
848986 N/A N/A CCCGAGAAGTGGAAAC 12 10729 10744 488
849002 N/A N/A CCAAGATCCCACGAGA 56 11458 11473 489
849018 N/A N/A GAGAAAGTGGTCCTGC 35 12122 12137 490
849034 N/A N/A CAGCAATAACTGATTT 42 12825 12840 491
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 83 13108 13123 337
849050 N/A N/A CGCCTGAGAAGCTCAG 44 13353 13368 492
849066 N/A N/A CCACACAACGCACATC 15 14043 14058 493
849082 N/A N/A GACCAAACAGTGCTCG 28 14360 14375 494
849098 N/A N/A CTACAAAGACCTTTTC 0 14849 14864 495
849114 N/A N/A TAGGAGAAAGTAGGGA 26 15533 15548 496
849130 N/A N/A GAATATCAATATCTAA 19 15983 15998 497
848325 931 946 TCCCGGTGGTCACTCT 2 16323 16338 498
848340 990 1005 GGGTCCCGTCCTCCTC 38 16382 16397 499
849146 N/A N/A CCACATGAGAAAGACC 0 16614 16629 500
848354 1026 1041 CATGACTGTCACACTT 23 16656 16671 501
848369 1074 1089 TGGCCACGCCGGCATC 17 16704 16719 502
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 4 16705 16720 48
848385 1114 1129 TGGCAGTTGAGCACGC 0 16744 16759 503
849162 N/A N/A GTCTAGAAAAAGTCCT 65 17257 17272 504
849178 N/A N/A CCGTGCCAGGTCATGC 78 17957 17972 505
849194 N/A N/A CTGGGATACAGACACC 42 18254 18269 506
849210 N/A N/A AATTAAAAGACTCCAT 18 19154 19169 507
849226 N/A N/A TATTAGCAATTACACC 45 19502 19517 508
849242 N/A N/A TTACAGGCACAGAGTG 25 19914 19929 509
848401 1228 1243 CTGTACCCACCCGCCA 11 20059 20074 510
849258 N/A N/A AACAAGATTCCTTCCC 30 20814 20829 511
849274 N/A N/A GGCAGAACTCTGGCAC 56 21163 21178 512
848417 1402 1417 CCCAAAGTCCCCAGGG 0 21374 21389 513
849290 N/A N/A GGTGAAAGATGGTGAT 10 22003 22018 514
848433 1544 1559 CATCATGGCTGCAATG 0 22037 22052 515
848449 1636 1651 GGGAACCAGGCCTCAT 25 22129 22144 516
848465 1736 1751 TGCTGACCATACAGTC 0 22518 22533 517
849306 N/A N/A GTGCACTATCCTGTAG 28 23065 23080 518
849322 N/A N/A CAAAGACGGAAATGGG 44 23462 23477 519
848481 1925 1940 GCACCTGGCAATGGCG 34 23545 23560 520
848495 1993 2008 CGGGTCCCCATGCTGG 0 23613 23628 521
849338 N/A N/A TGCTTAGCACTCATCA 0 24102 24117 522
849354 N/A N/A CCTACATGCCAGCCTG 73 24472 24487 523
849370 N/A N/A AAAGAGATGCTGGCCT 28 25228 25243 524
848511 2082 2097 GCACAGGCGGCTTGTG 28 25413 25428 525
849386 N/A N/A CCATATTTATGCACAT 62 25806 25821 526
849402 N/A N/A TTTCAGTACTCTATAT 12 26511 26526 527
848527 2372 2387 AACGGCTGTCACGGCC 42 27515 27530 528
848543 2507 2522 AGAGAGGGACAAGTCG 47 27650 27665 529
848559 2603 2618 TTCCAGGCAAGGAGGC 23 27746 27761 530
848575 2712 2727 GGCAGCACCCGAGCAC 72 27855 27870 531
848590 2757 2772 ATAAAAGTCATTCTGC 15 27900 27915 532
848606 2787 2802 ATTGAATGCCTGGCAC 36 27930 27945 533
848622 2919 2934 CCACAGTTAGCTGGAG 45 28062 28077 534
848637 3036 3051 GCTCAGGAAACCAAGG 12 28179 28194 535
848652 3122 3137 CTGCCGAGTCAGTCCT 66 28265 28280 536
848668 3172 3187 TGCCGGGTAGTGGAGC 49 28315 28330 537
848683 3226 3241 CCCCTCTGGTTCCAGG 43 28369 28384 538
848699 3261 3276 GCTCAGTTCCTGCTGT 18 28404 28419 539
848715 3317 3332 AGCCGGGTGAAGTAAG 26 28460 28475 540
848731 3386 3401 CACTCACCGAGCTTCC 73 28529 28544 541
848747 3471 3486 CCTTAGAAGCATCTCC 52 28614 28629 542
848762 3576 3591 GTAAAAAGGCAACAGA 36 28719 28734 543
[ 表 8]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848206 7 22 CGCCACCAGAGCCCCA 30 3482 3497 544
848222 207 222 CGGAATCCTGGCTGGG 55 3682 3697 545
848238 476 491 TAGCACCAGCTCCTCG 53 3951 3966 546
848254 520 535 TGCTCGGGTGCTTCGG 35 3995 4010 547
848779 N/A N/A GGCTGCGGGTTCGCCC 13 4070 4085 548
848795 N/A N/A CGAGAATACCTCCGCC 73 4682 4697 549
848811 N/A N/A GCTGAGTAAGGACTTG 64 5317 5332 550
848827 N/A N/A TTCCGCTAAATAAAAA 9 5781 5796 551
848843 N/A N/A TCAGAGTAGAACAGAG 51 6547 6562 552
848859 N/A N/A GAGGGAGGTGCCAAGC 31 6954 6969 553
848875 N/A N/A CTACAAATGCAGGCAG 63 7257 7272 554
848891 N/A N/A AACTACGGGCCACACT 7 7591 7606 555
848907 N/A N/A ACGGATCCTGGCCCCA 45 7834 7849 556
848269 663 678 CCCGGCGGGCAGCCTG 18 7936 7951 557
848280 680 695 GATCTTGGTGAGGTAT 1 7953 7968 558
848295 699 714 GGCCATGGAAGACATG 18 7972 7987 559
848923 N/A N/A CTAGAGTCATGCTTTT 0 8425 8440 560
848939 N/A N/A GTGGAGAATCAGTGTG 40 8683 8698 561
848955 N/A N/A TTGAAGTCCAGCTCTC 16 9258 9273 562
848971 N/A N/A GCAATTCGGTTTGTCC 65 10140 10155 563
848310 795 810 AGACAGAGGAGTCCTC 31 10556 10571 564
848987 N/A N/A GATCATTTAAGGCAAG 26 10850 10865 565
849003 N/A N/A TCCCAAGATCCCACGA 5 11460 11475 566
849019 N/A N/A CAAGAGAAGCTTCTCC 20 12152 12167 567
849035 N/A N/A CTACAGCAATAACTGA 46 12828 12843 568
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 78 13108 13123 337
849051 N/A N/A GAGCAGGGAGCTCATT 0 13395 13410 569
849067 N/A N/A CTAGAAGACAGCACAG 15 14085 14100 570
849083 N/A N/A CCGACCTGAAGACATC 41 14380 14395 571
849099 N/A N/A GCCCACCGCATAATCC 18 14897 14912 572
849115 N/A N/A GACAAAGGTTAGGGTA 46 15549 15564 573
849131 N/A N/A TGAATATCAATATCTA 30 15984 15999 574
848326 939 954 CCTCGATTTCCCGGTG 30 16331 16346 575
848341 992 1007 GCGGGTCCCGTCCTCC 0 16384 16399 576
849147 N/A N/A GACCACATGAGAAAGA 0 16616 16631 577
848355 1029 1044 TGCCATGACTGTCACA 35 16659 16674 578
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 19 16705 16720 48
848370 1076 1091 CTTGGCCACGCCGGCA 0 16706 16721 579
848386 1133 1148 GCTAACCGTGCCCTTC 20 16763 16778 580
849163 N/A N/A CAGTAAGGGAGAGAAC 3 17363 17378 581
849179 N/A N/A CCCGTGCCAGGTCATG 38 17958 17973 582
849195 N/A N/A AGCTGCTAGTTATTTA 44 18396 18411 583
849211 N/A N/A GAAACAGGGACAGTTG 25 19189 19204 584
849227 N/A N/A GGAAGATATTAGCAAT 78 19508 19523 585
849243 N/A N/A CTTACAGGCACAGAGT 27 19915 19930 586
848402 1238 1253 GAGGACGCGGCTGTAC 25 20069 20084 587
849259 N/A N/A GTGGAACAAGATTCCT 40 20818 20833 588
849275 N/A N/A AGGCAGAACTCTGGCA 56 21164 21179 589
848418 1414 1429 CCAAAGTTGGTCCCCA 0 21386 21401 590
848434 1546 1561 AGCATCATGGCTGCAA 49 22039 22054 591
848450 1641 1656 CCTCAGGGAACCAGGC 28 22134 22149 592
849291 N/A N/A TGCCATCCTGCTTACC 30 22209 22224 593
848466 1738 1753 TGTGCTGACCATACAG 20 22520 22535 594
849307 N/A N/A CACCAAAATGCTGCAA 39 23094 23109 595
849323 N/A N/A GGCCTTAGAGTCAAAG 0 23473 23488 596
468479 1926 1941 AGCACCTGGCAATGGC 47 23546 23561 597
848496 1997 2012 GACACGGGTCCCCATG 28 23617 23632 598
849339 N/A N/A ACTAAGCTAAGTGCTT 7 24113 24128 599
849355 N/A N/A GCAAAATGGTGCTCTT 52 24690 24705 600
849371 N/A N/A ACCTAGAAACAACTCA 23 25251 25266 601
848512 2084 2099 CAGCACAGGCGGCTTG 14 25415 25430 602
849387 N/A N/A ATGCATATTGCATTTC 44 25828 25843 603
849403 N/A N/A GGCCAGACCACACTCC 13 26808 26823 604
848528 2375 2390 GGCAACGGCTGTCACG 52 27518 27533 605
848544 2509 2524 TGAGAGAGGGACAAGT 27 27652 27667 606
848560 2613 2628 AGTGAGTGAGTTCCAG 65 27756 27771 607
848576 2713 2728 TGGCAGCACCCGAGCA 56 27856 27871 608
848591 2761 2776 CTCAATAAAAGTCATT 45 27904 27919 609
848607 2791 2806 GAGGATTGAATGCCTG 37 27934 27949 610
848623 2921 2936 CTCCACAGTTAGCTGG 35 28064 28079 611
848638 3045 3060 GTAAAGGTGGCTCAGG 46 28188 28203 612
848653 3123 3138 ACTGCCGAGTCAGTCC 29 28266 28281 613
848669 3180 3195 GTGTACCCTGCCGGGT 3 28323 28338 614
848684 3227 3242 CCCCCTCTGGTTCCAG 54 28370 28385 615
848700 3263 3278 TGGCTCAGTTCCTGCT 36 28406 28421 616
848716 3321 3336 GCCCAGCCGGGTGAAG 26 28464 28479 617
848732 3388 3403 ATCACTCACCGAGCTT 69 28531 28546 618
848748 3473 3488 TGCCTTAGAAGCATCT 68 28616 28631 619
848763 3578 3593 CTGTAAAAAGGCAACA 52 28721 28736 620
[ 表 9]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848207 12 27 GATCACGCCACCAGAG 0 3487 3502 621
848223 209 224 CGCGGAATCCTGGCTG 1 3684 3699 622
848239 477 492 CTAGCACCAGCTCCTC 38 3952 3967 623
848255 533 548 GGCTGTGGTTCCGTGC 29 4008 4023 624
848780 N/A N/A AAACAGCACCGCACCG 0 4090 4105 625
848796 N/A N/A CCGCACACGGTCGGCA 35 4821 4836 626
848812 N/A N/A GAACAAGGAAGAGGGC 39 5341 5356 627
848828 N/A N/A CAAAGACCCATCTGAA 32 5803 5818 628
848844 N/A N/A TCATGAATCAAGTCCA 71 6650 6665 629
848860 N/A N/A GCAGAGATCAATCACA 36 6997 7012 630
848876 N/A N/A TCCCATCCAGATGCTC 34 7272 7287 631
848892 N/A N/A ATTCAGGCAAAAATGG 12 7608 7623 632
848270 665 680 TCCCCGGCGGGCAGCC 24 7938 7953 633
848281 681 696 GGATCTTGGTGAGGTA 23 7954 7969 634
848296 704 719 AAGAAGGCCATGGAAG 38 7977 7992 635
848908 N/A N/A TGCCATTCCCAAAAAG 0 8045 8060 636
848924 N/A N/A CAAAGGAATTTTGGAC 0 8442 8457 637
848940 N/A N/A TGCCATGTGGAGAATC 24 8689 8704 638
848956 N/A N/A TCGAACCCAGGCTGGT 0 9286 9301 639
848972 N/A N/A CATGACATAACAGCAC 24 10158 10173 640
848311 797 812 AAAGACAGAGGAGTCC 28 10558 10573 641
848988 N/A N/A AAAGAGGATCATTTAA 0 10856 10871 642
849004 N/A N/A CAAGAACGACAAAGCT 48 11493 11508 643
849020 N/A N/A GGACACGGAAGAGGCA 63 12166 12181 644
849036 N/A N/A ACAGAGAAATGCATGC 66 12843 12858 645
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 81 13108 13123 337
849052 N/A N/A CTCTATCTTCCAAACC 22 13578 13593 646
849068 N/A N/A ATACAGGCTTATCTAG 3 14097 14112 647
849084 N/A N/A CAATAGGCATCTACCA 59 14444 14459 648
849100 N/A N/A AGGACTTACAGCCCAC 12 14907 14922 649
849116 N/A N/A GCCCATGCAGGACAAA 11 15559 15574 650
849132 N/A N/A TATGAATATCAATATC 0 15986 16001 651
468453 950 965 CATGACCCTGCCCTCG 45 16342 16357 652
848342 995 1010 GAAGCGGGTCCCGTCC 17 16387 16402 653
849148 N/A N/A ACACAAGGACCACATG 0 16623 16638 654
848356 1040 1055 TGCCAGGTGGGTGCCA 26 16670 16685 655
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 0 16705 16720 48
848371 1077 1092 CCTTGGCCACGCCGGC 37 16707 16722 656
848387 1135 1150 CCGCTAACCGTGCCCT 17 16765 16780 657
849164 N/A N/A CTTGAGCTGTGCGACC 27 17497 17512 658
849180 N/A N/A CCCCGTGCCAGGTCAT 26 17959 17974 659
849196 N/A N/A ACAACAGCCACATTTA 56 18413 18428 660
849212 N/A N/A TGTGAAACAGGGACAG 17 19192 19207 661
849228 N/A N/A TAATATATACATCCTA 0 19564 19579 662
849244 N/A N/A CCTTACAGGCACAGAG 16 19916 19931 663
848403 1241 1256 GTTGAGGACGCGGCTG 19 20072 20087 664
849260 N/A N/A CCAACGCGCGCGCGCG 4 20870 20885 665
849276 N/A N/A GAAAATCTGACTGCCC 43 21180 21195 666
848419 1416 1431 GGCCAAAGTTGGTCCC 0 21388 21403 667
848435 1550 1565 AGACAGCATCATGGCT 43 22043 22058 668
848451 1656 1671 TCAGTACCCGCTGGTC 41 22149 22164 669
849292 N/A N/A GGTCACACAGACCTCC 24 22252 22267 670
848467 1744 1759 CCCGAGTGTGCTGACC 39 22526 22541 671
849308 N/A N/A TTCCACCAAAATGCTG 7 23097 23112 672
848482 1927 1942 CAGCACCTGGCAATGG 10 23547 23562 673
848497 1998 2013 GGACACGGGTCCCCAT 32 23618 23633 674
849324 N/A N/A GGCAAGCCCAGCCTCC 0 23667 23682 675
849340 N/A N/A AACGATAGCTAGAATT 12 24143 24158 676
849356 N/A N/A TGGTAGGGTTGTGGTT 0 24782 24797 677
849372 N/A N/A GCAAGAGCTAGGAAAC 60 25265 25280 678
848513 2086 2101 CTCAGCACAGGCGGCT 41 25417 25432 679
849388 N/A N/A ATGCATGCATATTGCA 0 25832 25847 680
849404 N/A N/A CTTCAGACTCCAGCCT 0 26944 26959 681
848529 2378 2393 GATGGCAACGGCTGTC 0 27521 27536 682
848545 2511 2526 GCTGAGAGAGGGACAA 54 27654 27669 683
848561 2617 2632 CCAGAGTGAGTGAGTT 30 27760 27775 684
848577 2714 2729 CTGGCAGCACCCGAGC 52 27857 27872 685
848592 2762 2777 GCTCAATAAAAGTCAT 44 27905 27920 686
848608 2795 2810 ACCTGAGGATTGAATG 16 27938 27953 687
848624 2944 2959 AATCAGGGAGCCCCCA 0 28087 28102 688
848639 3047 3062 GAGTAAAGGTGGCTCA 19 28190 28205 689
848654 3124 3139 CACTGCCGAGTCAGTC 51 28267 28282 690
848670 3186 3201 GCGAATGTGTACCCTG 81 28329 28344 691
848685 3229 3244 CGCCCCCTCTGGTTCC 57 28372 28387 692
848701 3264 3279 CTGGCTCAGTTCCTGC 69 28407 28422 693
848717 3330 3345 AAATGAGGAGCCCAGC 42 28473 28488 694
848733 3392 3407 TGCCATCACTCACCGA 48 28535 28550 695
848749 3482 3497 CCCCGACCATGCCTTA 43 28625 28640 696
848764 3580 3595 GGCTGTAAAAAGGCAA 68 28723 28738 697
[ 表 10]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848208 15 30 GCAGATCACGCCACCA 0 3490 3505 698
848224 212 227 GCGCGCGGAATCCTGG 21 3687 3702 699
848240 478 493 GCTAGCACCAGCTCCT 37 3953 3968 700
468441 541 556 TGGAAGGTGGCTGTGG 0 4016 4031 701
848781 N/A N/A CCGAGAGGAAACAGCA 52 4098 4113 702
848797 N/A N/A AGCAAACTCGCCCCGC 55 4833 4848 703
848813 N/A N/A GGCTCAGGGAACAAGG 39 5349 5364 704
848829 N/A N/A CACCATCATCGCTGAA 39 5834 5849 705
848845 N/A N/A GCAGACATACCTGCTT 24 6693 6708 706
848861 N/A N/A CTACATGTGCAGAGAT 52 7005 7020 707
848877 N/A N/A ATAAATCTCCCATCCA 36 7279 7294 708
848893 N/A N/A TTTCAAATGTGCCATT 22 7621 7636 709
468443 666 681 ATCCCCGGCGGGCAGC 52 7939 7954 710
848282 682 697 AGGATCTTGGTGAGGT 47 7955 7970 711
848297 732 747 CGCCACTCATCTTCAC 23 8005 8020 712
848909 N/A N/A GGCCTACTAAGCACAG 49 8100 8115 713
848925 N/A N/A TTCAAAGGAATTTTGG 0 8444 8459 714
848941 N/A N/A ACCCAGGTCCAGACTC 44 8793 8808 715
848957 N/A N/A GGTTAGACAGCCAATA 48 9318 9333 716
848973 N/A N/A CTAAATCATGACATAA 14 10164 10179 717
848312 799 814 GCAAAGACAGAGGAGT 46 10560 10575 718
848989 N/A N/A TCCAAGGTAAGTGCAG 52 10924 10939 719
849005 N/A N/A GACAAGAACGACAAAG 46 11495 11510 720
849021 N/A N/A GACAATGAAGAGGAGA 69 12240 12255 721
849037 N/A N/A CTCAATACCTGACAGA 50 12854 12869 722
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 81 13108 13123 337
849053 N/A N/A TGGTAAAAGCCCCCAC 39 13677 13692 723
849069 N/A N/A ATACATTGGCAGACAG 56 14121 14136 724
849085 N/A N/A ACTCATCAATAGGCAT 79 14450 14465 725
849101 N/A N/A CATCACAGGACTTACA 0 14913 14928 726
849117 N/A N/A CAAGAGACTCACTGGG 16 15581 15596 727
849133 N/A N/A TGCCAAGAAGGACCCA 61 16020 16035 728
848327 953 968 GACCATGACCCTGCCC 41 16345 16360 729
848343 997 1012 TGGAAGCGGGTCCCGT 11 16389 16404 730
849149 N/A N/A TGCTCGACGAACACAA 0 16633 16648 731
848357 1053 1068 CGCTGACCACCCCTGC 33 16683 16698 732
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 7 16705 16720 48
848372 1078 1093 CCCTTGGCCACGCCGG 49 16708 16723 733
848388 1137 1152 TGCCGCTAACCGTGCC 10 16767 16782 734
849165 N/A N/A GTGGAAGTCAAGCTGC 42 17550 17565 735
849181 N/A N/A GCCCCGTGCCAGGTCA 58 17960 17975 736
849197 N/A N/A TAGGAGACAGCTAGTG 25 18486 18501 737
849213 N/A N/A CACAAACTTGAACAGA 38 19248 19263 738
849229 N/A N/A CTTAATATATACATCC 0 19566 19581 739
849245 N/A N/A GCCAAGGTCACCCCTT 0 19963 19978 740
848404 1283 1298 GACCAGCACGACCCCA 13 20114 20129 741
849261 N/A N/A ACCTAGGTTACCGCTG 33 20918 20933 742
849277 N/A N/A AGGAAAATCTGACTGC 26 21182 21197 743
848420 1423 1438 ACACAGCGGCCAAAGT 0 21395 21410 744
848436 1552 1567 GCAGACAGCATCATGG 76 22045 22060 745
848452 1658 1673 GGTCAGTACCCGCTGG 29 22151 22166 746
849293 N/A N/A CCTATTTAAGGTGGCG 51 22311 22326 747
848468 1753 1768 CGTGTAGGCCCCGAGT 44 22535 22550 748
849309 N/A N/A CAGAAATGCCTGCCCC 64 23141 23156 749
848483 1928 1943 GCAGCACCTGGCAATG 0 23548 23563 750
848498 1999 2014 TGGACACGGGTCCCCA 2 23619 23634 751
849325 N/A N/A CCTCACCCCAGGGCAA 0 23678 23693 752
849341 N/A N/A GTAACGATAGCTAGAA 52 24145 24160 753
849357 N/A N/A TGAACATGGTAGGGTT 62 24788 24803 754
849373 N/A N/A AGGCAAGAGCTAGGAA 51 25267 25282 755
848514 2113 2128 ACGCACTGGTTGGGCT 5 25444 25459 756
849389 N/A N/A GTTAAATAGATCAGAG 15 25989 26004 757
849405 N/A N/A CCCCATAGCCTGCCCC 0 27058 27073 758
848530 2381 2396 GCAGATGGCAACGGCT 14 27524 27539 759
848546 2520 2535 CCATGGAGGGCTGAGA 3 27663 27678 760
848562 2619 2634 ACCCAGAGTGAGTGAG 29 27762 27777 761
848578 2715 2730 GCTGGCAGCACCCGAG 18 27858 27873 762
848593 2763 2778 AGCTCAATAAAAGTCA 61 27906 27921 763
848609 2820 2835 GAAGAATCCTGCCTCC 42 27963 27978 764
848625 2946 2961 TTAATCAGGGAGCCCC 31 28089 28104 765
848640 3050 3065 GCAGAGTAAAGGTGGC 38 28193 28208 766
848655 3125 3140 ACACTGCCGAGTCAGT 32 28268 28283 767
848671 3188 3203 GTGCGAATGTGTACCC 68 28331 28346 768
848686 3237 3252 GGCAGGCACGCCCCCT 17 28380 28395 769
848702 3265 3280 TCTGGCTCAGTTCCTG 51 28408 28423 770
848718 3332 3347 AAAAATGAGGAGCCCA 17 28475 28490 771
848734 3415 3430 TTCCATGCCTGCAGGC 35 28558 28573 772
848750 3502 3517 GGACAGTTGTTGGCCC 25 28645 28660 773
848765 3588 3603 GAAAAGTTGGCTGTAA 22 28731 28746 774
[ 表 11]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848209 51 66 ACCTTCTAGGGTGTGG 0 3526 3541 775
848225 242 257 CTGAAGTTCAGGAGCA 35 3717 3732 776
848241 479 494 GGCTAGCACCAGCTCC 58 3954 3969 777
848256 549 564 CGCAGCGGTGGAAGGT 15 4024 4039 778
848782 N/A N/A GCGAAGAGCCCTCGGC 33 4158 4173 779
848798 N/A N/A GGGAAGAAGCTTCCCA 0 4882 4897 780
848814 N/A N/A AGAAAGTCAAAGGCTC 74 5360 5375 781
848830 N/A N/A GACACCATCATCGCTG 67 5836 5851 782
848846 N/A N/A GGCAGACATACCTGCT 0 6694 6709 783
848862 N/A N/A GGCCTTAAGCTGCTTT 10 7048 7063 784
848878 N/A N/A ATATAAATCTCCCATC 9 7281 7296 785
848894 N/A N/A TCACATGGTTATATAA 37 7640 7655 786
848271 667 682 TATCCCCGGCGGGCAG 35 7940 7955 787
848283 683 698 CAGGATCTTGGTGAGG 49 7956 7971 788
848298 740 755 CAGCAGGTCGCCACTC 5 8013 8028 789
848910 N/A N/A AGCAATGGGCCTACTA 0 8107 8122 790
848926 N/A N/A AGCAACAGCTTCAAAG 11 8453 8468 791
848942 N/A N/A CTGATTAACCCATGGG 46 8833 8848 792
848958 N/A N/A TTACAGATAGAGGAAT 0 9365 9380 793
848974 N/A N/A GGACATGGAGTGAAGC 7 10200 10215 794
848313 801 816 GGGCAAAGACAGAGGA 11 10562 10577 795
848990 N/A N/A GGTAGAGTCACCATCA 40 10953 10968 796
849006 N/A N/A TCTCACAGCAACCTGT 0 11548 11563 797
849022 N/A N/A TCCTAACCCCCACAAC 0 12373 12388 798
849038 N/A N/A TGCAGGGCTAAAATCA 34 12880 12895 799
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 78 13108 13123 337
849054 N/A N/A GGCAGGTGGGCCTGGT 0 13689 13704 800
849070 N/A N/A GGATACATTGGCAGAC 41 14123 14138 801
849086 N/A N/A GTGTTAGGAGCTTTCA 60 14465 14480 802
849102 N/A N/A AGACACATCACAGGAC 27 14918 14933 803
849118 N/A N/A AAGAAGCAGGCACTGG 32 15608 15623 804
849134 N/A N/A AAGGAAAGGGAGGCCT 0 16081 16096 805
848328 964 979 TCGAAGTCGGTGACCA 17 16356 16371 806
848344 999 1014 TGTGGAAGCGGGTCCC 24 16391 16406 807
848358 1055 1070 GCCGCTGACCACCCCT 0 16685 16700 808
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 30 16705 16720 48
848373 1079 1094 ACCCTTGGCCACGCCG 30 16709 16724 809
848389 1145 1160 TATGAGGGTGCCGCTA 4 16775 16790 810
849150 N/A N/A ACTTACCTATGAGGGT 0 16782 16797 811
849166 N/A N/A GGCTTACAGTGGAAGT 8 17558 17573 812
849182 N/A N/A TGCCCCGTGCCAGGTC 41 17961 17976 813
849198 N/A N/A CCAGGAGCCGTGGCCA 12 18537 18552 814
849214 N/A N/A ACACAAACTTGAACAG 10 19249 19264 815
849230 N/A N/A TCTTAATATATACATC 0 19567 19582 816
849246 N/A N/A GAACAAAGCCAAGGTC 0 19970 19985 817
848405 1286 1301 GGTGACCAGCACGACC 0 20117 20132 818
849262 N/A N/A CCTTGATAGGCCAGGG 0 20937 20952 819
849278 N/A N/A TCCCACTCAAATGTCC 0 21205 21220 820
848421 1425 1440 CCACACAGCGGCCAAA 0 21397 21412 821
848437 1554 1569 CGGCAGACAGCATCAT 72 22047 22062 822
848453 1681 1696 GGCAGGGCGGCCACCA 0 22174 22189 823
849294 N/A N/A AAAATATTGCACAGCC 0 22353 22368 824
848469 1760 1775 GGCCATCCGTGTAGGC 0 22542 22557 825
849310 N/A N/A AGCATTAAGACCCCAT 21 23167 23182 826
848484 1929 1944 GGCAGCACCTGGCAAT 17 23549 23564 827
848499 2000 2015 GTGGACACGGGTCCCC 17 23620 23635 828
849326 N/A N/A AGAAAGAGACCCCTCC 0 23692 23707 829
849342 N/A N/A AAACAATAGTAACGAT 0 24153 24168 830
849358 N/A N/A TCTGAACATGGTAGGG 58 24790 24805 831
849374 N/A N/A GCCCATCCCCATCAGA 6 25303 25318 832
848515 2157 2172 GGGCATGGCAGCAGGA 17 25488 25503 833
849390 N/A N/A CTTCAGCATGCAGCTC 6 26093 26108 834
849406 N/A N/A TGAAACTGATGGCCCC 22 27070 27085 835
848531 2383 2398 CAGCAGATGGCAACGG 25 27526 27541 836
848547 2522 2537 GGCCATGGAGGGCTGA 0 27665 27680 837
848563 2623 2638 AGGCACCCAGAGTGAG 42 27766 27781 838
848579 2716 2731 AGCTGGCAGCACCCGA 20 27859 27874 839
848594 2770 2785 GAACAAGAGCTCAATA 13 27913 27928 840
848610 2822 2837 GGGAAGAATCCTGCCT 25 27965 27980 841
848626 2948 2963 CATTAATCAGGGAGCC 21 28091 28106 842
848641 3052 3067 GAGCAGAGTAAAGGTG 23 28195 28210 843
848656 3126 3141 CACACTGCCGAGTCAG 56 28269 28284 844
848672 3213 3228 AGGTTTCTTCCTCTGT 60 28356 28371 845
848687 3243 3258 GAGCTTGGCAGGCACG 67 28386 28401 846
848703 3266 3281 TTCTGGCTCAGTTCCT 20 28409 28424 847
848719 3334 3349 GTAAAAATGAGGAGCC 29 28477 28492 848
848735 3421 3436 AAAAAGTTCCATGCCT 9 28564 28579 849
848751 3506 3521 GGAGGGACAGTTGTTG 0 28649 28664 850
848766 3590 3605 TAGAAAAGTTGGCTGT 22 28733 28748 851
[ 表 12]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848345 1012 1027 TTGCTGGCCTGTCTGT 3 N/A N/A 852
848390 1148 1163 GCCTATGAGGGTGCCG 0 N/A N/A 853
848454 1708 1723 TGCCAACCTGCCCCAT 8 N/A N/A 854
848210 56 71 CGGAAACCTTCTAGGG 0 3531 3546 855
848226 244 259 AGCTGAAGTTCAGGAG 50 3719 3734 856
848242 480 495 AGGCTAGCACCAGCTC 37 3955 3970 857
848257 552 567 TGGCGCAGCGGTGGAA 0 4027 4042 858
848783 N/A N/A CCACTACCCGTCCTCC 0 4211 4226 859
848799 N/A N/A CGGGAAGAAGCTTCCC 0 4883 4898 860
848815 N/A N/A CCCCACAACATCCCTC 5 5377 5392 861
848831 N/A N/A AAAGAACTGTGGACAT 43 5935 5950 862
848847 N/A N/A AGGCAGACATACCTGC 0 6695 6710 863
848863 N/A N/A CTGCAAGCTCTCCAGG 17 7095 7110 864
848879 N/A N/A CAAGAGTGACGGTTAT 45 7295 7310 865
848895 N/A N/A TATTATTCACATGGTT 41 7646 7661 866
848272 668 683 GTATCCCCGGCGGGCA 37 7941 7956 867
848284 684 699 GCAGGATCTTGGTGAG 0 7957 7972 868
848299 743 758 CTCCAGCAGGTCGCCA 20 8016 8031 869
848911 N/A N/A ATACATACTTGCTGTC 21 8137 8152 870
848927 N/A N/A TGGATAGCAACAGCTT 70 8458 8473 871
848943 N/A N/A TGCTGAGCTGATTAAC 27 8840 8855 872
848959 N/A N/A AATTATTATAACTGGT 0 9381 9396 873
848975 N/A N/A GGGCAGGATGGACATG 4 10209 10224 874
848314 817 832 TTCCACGGGATGCTCT 3 10578 10593 875
848991 N/A N/A TTAAAGGATCTGGTCC 31 11011 11026 876
849007 N/A N/A GTGTATGCAAAGTCAC 55 11624 11639 877
849023 N/A N/A AGGGAACAGTGGCTGC 42 12407 12422 878
849039 N/A N/A TTATTGAATGGTAAGA 37 12905 12920 879
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 77 13108 13123 337
849055 N/A N/A CTGCAAGCATGGCCAG 33 13710 13725 880
849071 N/A N/A ACAACTGGATACATTG 57 14129 14144 881
849087 N/A N/A CACTTTGGTTTCTTCT 28 14560 14575 882
849103 N/A N/A CTTATGGCTTCGGTCA 42 15107 15122 883
849119 N/A N/A AGATACCAGGAGGGCT 48 15730 15745 884
849135 N/A N/A ATAGACAAGGAAAGGG 68 16087 16102 885
848329 971 986 CACATTCTCGAAGTCG 25 16363 16378 886
848359 1056 1071 GGCCGCTGACCACCCC 19 16686 16701 887
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 10 16705 16720 48
848374 1080 1095 CACCCTTGGCCACGCC 37 16710 16725 888
849151 N/A N/A ATGGAGAGAGACCAGC 20 16811 16826 889
849167 N/A N/A CACCAGAGCCAGTGTT 0 17590 17605 890
849183 N/A N/A CTGCCCCGTGCCAGGT 0 17962 17977 891
849199 N/A N/A TGTCAAATGAGGTGTG 15 18586 18601 892
849215 N/A N/A ATGAGAAGGGCACACT 0 19342 19357 893
849231 N/A N/A AACTCTTAATATATAC 0 19570 19585 894
849247 N/A N/A AGGAACAAAGCCAAGG 31 19972 19987 895
848406 1293 1308 CGGCAGCGGTGACCAG 0 20124 20139 896
849263 N/A N/A GCCTTGATAGGCCAGG 33 20938 20953 897
849279 N/A N/A AGAGAAAGGAGCCCAA 0 21290 21305 898
848422 1427 1442 GTCCACACAGCGGCCA 5 21399 21414 899
848438 1558 1573 GGCTCGGCAGACAGCA 58 22051 22066 900
849295 N/A N/A GGCTTAAAGAACATAC 28 22397 22412 901
848470 1772 1787 GGCGACGGCTGTGGCC 0 22554 22569 902
849311 N/A N/A GAGCATTAAGACCCCA 32 23168 23183 903
468480 1930 1945 AGGCAGCACCTGGCAA 19 23550 23565 904
848500 2001 2016 AGTGGACACGGGTCCC 56 23621 23636 905
849327 N/A N/A TCACACTTGTGAGGAC 0 23737 23752 906
849343 N/A N/A AAAGCAACGGGTGATG 0 24170 24185 907
849359 N/A N/A GTAAGATGGAAAGAGA 55 24877 24892 908
849375 N/A N/A CTGGGATGCTCCGTCT 0 25324 25339 909
848516 2172 2187 TGCATTCCAGACCTGG 6 25503 25518 910
849391 N/A N/A TGCTAACAACCTTCAG 0 26103 26118 911
849407 N/A N/A TACCATGCCAGTGCCA 29 27098 27113 912
848532 2386 2401 CGGCAGCAGATGGCAA 27 27529 27544 913
848548 2527 2542 TGCCAGGCCATGGAGG 0 27670 27685 914
848564 2628 2643 GGAGGAGGCACCCAGA 20 27771 27786 915
468487 2720 2735 GAGCAGCTGGCAGCAC 42 27863 27878 916
848595 2771 2786 GGAACAAGAGCTCAAT 47 27914 27929 917
848611 2828 2843 ATCCATGGGAAGAATC 15 27971 27986 918
848627 2951 2966 CTCCATTAATCAGGGA 26 28094 28109 919
848642 3055 3070 ATAGAGCAGAGTAAAG 0 28198 28213 920
848657 3127 3142 GCACACTGCCGAGTCA 46 28270 28285 921
848673 3214 3229 CAGGTTTCTTCCTCTG 34 28357 28372 922
848688 3245 3260 GTGAGCTTGGCAGGCA 70 28388 28403 923
848704 3267 3282 TTTCTGGCTCAGTTCC 54 28410 28425 924
848720 3336 3351 CCGTAAAAATGAGGAG 17 28479 28494 925
848736 3423 3438 GGAAAAAGTTCCATGC 57 28566 28581 926
468502 3508 3523 AAGGAGGGACAGTTGT 0 28651 28666 927
848767 3592 3607 TCTAGAAAAGTTGGCT 39 28735 28750 928
[ 表 13]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848258 561 576 ACGGATCCTTGGCGCA 38 N/A N/A 929
848300 753 768 TCAAGGCCAGCTCCAG 23 N/A N/A 930
848346 1014 1029 ACTTGCTGGCCTGTCT 0 N/A N/A 931
848391 1154 1169 CTCCAGGCCTATGAGG 0 N/A N/A 932
848211 58 73 TGCGGAAACCTTCTAG 0 3533 3548 933
848227 258 273 GAGGACTGTGCAGGAG 42 3733 3748 934
848243 481 496 AAGGCTAGCACCAGCT 23 3956 3971 935
848784 N/A N/A GGATATCCTGGCAGTG 0 4350 4365 936
848800 N/A N/A GAAAAAGCTAGTGGTC 30 4905 4920 937
848816 N/A N/A CTTGAAATGCCCTTTC 0 5408 5423 938
848832 N/A N/A TACATTTCAGACGGTG 61 6279 6294 939
848848 N/A N/A ATTATAGCAGCCACTA 13 6761 6776 940
848864 N/A N/A ATTTATTCAGCTCATG 1 7114 7129 941
848880 N/A N/A TGGGAAAGTCAAGAGT 44 7304 7319 942
848896 N/A N/A GCCAACTATTATTATT 26 7655 7670 943
466846 669 684 GGTATCCCCGGCGGGC 45 7942 7957 944
848285 685 700 TGCAGGATCTTGGTGA 0 7958 7973 945
848912 N/A N/A GATAAGTGCTCAATAC 33 8149 8164 946
848928 N/A N/A CTGGATAGCAACAGCT 71 8459 8474 947
848944 N/A N/A CGCCACAGGCCTTGGT 30 8881 8896 948
848960 N/A N/A CCAATTATTATAACTG 21 9383 9398 949
848976 N/A N/A AGCCAGGCTGTGCCAA 0 10231 10246 950
848315 824 839 CTCCAGGTTCCACGGG 0 10585 10600 951
848992 N/A N/A ATTAAAGGATCTGGTC 2 11012 11027 952
849008 N/A N/A CAGACATATGCAAGGT 68 11652 11667 953
849024 N/A N/A GCCCAAGGGAGAGGAG 0 12421 12436 954
849040 N/A N/A GTTATTATTGAATGGT 80 12909 12924 955
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 76 13108 13123 337
849056 N/A N/A CAGGAGGCTGCAAGCA 49 13717 13732 956
849072 N/A N/A CAGGAAGCAGCCCAAG 0 14175 14190 957
849088 N/A N/A CTCCACTGATCAGTCC 49 14582 14597 958
849104 N/A N/A CCAAATATGCTGCAGA 20 15185 15200 959
849120 N/A N/A AGAGACAGGAAGCTGC 63 15808 15823 960
849136 N/A N/A CACAGAAACTACAGAG 0 16199 16214 961
848330 974 989 GGGCACATTCTCGAAG 0 16366 16381 962
848360 1057 1072 CGGCCGCTGACCACCC 0 16687 16702 963
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 0 16705 16720 48
848375 1081 1096 GCACCCTTGGCCACGC 24 16711 16726 964
849152 N/A N/A CCAGATGGAGAGAGAC 26 16815 16830 965
849168 N/A N/A GGCTAGTGGGCTGCCT 0 17613 17628 966
849184 N/A N/A CCCTGCCCCGTGCCAG 0 17964 17979 967
849200 N/A N/A GCCTAACGCAGCTCTG 62 18644 18659 968
849216 N/A N/A GAGGAATGAGAAGGGC 61 19347 19362 969
849232 N/A N/A CCGCACGGTCACATGA 19 19592 19607 970
849248 N/A N/A GTGCCACAAGAAGCCC 9 20268 20283 971
20286 20301
848407 1301 1316 GAAGTTGCCGGCAGCG 24 20132 20147 972
849264 N/A N/A TAAATTCGGCCGCCAG 9 20958 20973 973
848423 1433 1448 AAAGAGGTCCACACAG 0 21405 21420 974
849280 N/A N/A CTGTTAGCATCACGGT 25 21542 21557 975
848439 1574 1589 GGCCAGGGTGAGCTCC 0 22067 22082 976
849296 N/A N/A GAGAGAGGAGGGCTTA 0 22407 22422 977
848455 1716 1731 AAAACAGCTGCCAACC 0 22498 22513 978
848471 1774 1789 CGGGCGACGGCTGTGG 0 22556 22571 979
849312 N/A N/A ACACGAGCATTAAGAC 45 23172 23187 980
848485 1932 1947 GCAGGCAGCACCTGGC 7 23552 23567 981
848501 2002 2017 CAGTGGACACGGGTCC 37 23622 23637 982
849328 N/A N/A CTGCAAGTCAGGCTTG 20 23764 23779 983
849344 N/A N/A TTTAAAGCAACGGGTG 47 24173 24188 984
849360 N/A N/A AGCTACACTGAGGCTC 23 24906 24921 985
848517 2177 2192 GACTTTGCATTCCAGA 41 25508 25523 986
849376 N/A N/A GGCAGAGGAAAGCCAG 0 25355 25370 987
849392 N/A N/A TGTCACATTCCAGGGC 43 26171 26186 988
849408 N/A N/A AGATAGACAGATGCCT 8 27113 27128 989
848533 2402 2417 CGCCAGGTGCCGGCTC 0 27545 27560 990
848549 2550 2565 GCGGAAGCATCCCCAT 0 27693 27708 991
848565 2669 2684 CCCCACAGTGAGGGAG 20 27812 27827 992
848580 2727 2742 ACATTGGGAGCAGCTG 34 27870 27885 993
848596 2772 2787 CGGAACAAGAGCTCAA 70 27915 27930 994
848612 2832 2847 CCCTATCCATGGGAAG 39 27975 27990 995
848628 2959 2974 AGCTAAGCCTCCATTA 15 28102 28117 996
848643 3057 3072 GCATAGAGCAGAGTAA 0 28200 28215 997
848658 3128 3143 TGCACACTGCCGAGTC 49 28271 28286 998
848674 3215 3230 CCAGGTTTCTTCCTCT 58 28358 28373 999
848689 3246 3261 TGTGAGCTTGGCAGGC 39 28389 28404 1000
848705 3268 3283 GTTTCTGGCTCAGTTC 3 28411 28426 1001
848721 3338 3353 ACCCGTAAAAATGAGG 0 28481 28496 1002
848737 3425 3440 ACGGAAAAAGTTCCAT 18 28568 28583 1003
848752 3511 3526 CTCAAGGAGGGACAGT 33 28654 28669 1004
848768 3599 3614 AAACAGGTCTAGAAAA 17 28742 28757 1005
[ 表 14]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
468456 1015 1030 CACTTGCTGGCCTGTC 22 N/A N/A 1006
848259 565 580 CTCCACGGATCCTTGG 0 N/A N/A 1007
848301 754 769 TTCAAGGCCAGCTCCA 42 N/A N/A 1008
848392 1159 1174 ATAAACTCCAGGCCTA 37 N/A N/A 1009
848212 64 79 CGTCGCTGCGGAAACC 41 3539 3554 1010
848228 293 308 GTCCACGCCGGCGGCG 32 3768 3783 1011
848244 482 497 CAAGGCTAGCACCAGC 45 3957 3972 1012
848785 N/A N/A GAAATCTGGGCAGGAT 39 4362 4377 1013
848801 N/A N/A CACCACAGCTAGTGAG 28 5003 5018 1014
848817 N/A N/A CACTATTTCCAGAACA 20 5445 5460 1015
848833 N/A N/A AATAATCTCATGTCAG 77 6356 6371 1016
848849 N/A N/A CAAATTATAGCAGCCA 85 6764 6779 1017
848865 N/A N/A GATTTATTCAGCTCAT 65 7115 7130 1018
848881 N/A N/A CCACAGTACCTATGAC 0 7330 7345 1019
848897 N/A N/A CAAATGCGGACCAAAA 38 7694 7709 1020
848273 670 685 AGGTATCCCCGGCGGG 26 7943 7958 1021
848286 686 701 ATGCAGGATCTTGGTG 0 7959 7974 1022
848913 N/A N/A CGATAAGTGCTCAATA 25 8150 8165 1023
848929 N/A N/A AAAGAAGGGACTTCAC 29 8476 8491 1024
848945 N/A N/A ACTTAGACTACGGGTT 25 8931 8946 1025
848961 N/A N/A TCCTTAAATGAATGTT 41 9399 9414 1026
848977 N/A N/A CTTGATCAGGCTGGGA 0 10332 10347 1027
848316 833 848 GGTAATCCGCTCCAGG 59 10594 10609 1028
848993 N/A N/A TCCCATTAAAGGATCT 23 11016 11031 1029
849009 N/A N/A ACACATGACCGACCAG 0 11773 11788 1030
849025 N/A N/A CTCCAGCCAAGCCCTT 40 12570 12585 1031
849041 N/A N/A TCTGGATACACTGTTG 27 13008 13023 1032
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 85 13108 13123 337
849057 N/A N/A GGTCAGGAGGCTGCAA 61 13720 13735 1033
849073 N/A N/A TGCTCAGGAAGCAGCC 43 14179 14194 1034
849089 N/A N/A CCCTAAGGCCTCCAGT 41 14610 14625 1035
849105 N/A N/A CTGAACAGCACCTCTG 37 15220 15235 1036
849121 N/A N/A TTAGAGACAGGAAGCT 28 15810 15825 1037
849137 N/A N/A CTTATAGTTAACACAC 0 16212 16227 1038
848331 980 995 CTCCTCGGGCACATTC 7 16372 16387 1039
848361 1058 1073 CCGGCCGCTGACCACC 30 16688 16703 1040
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 31 16705 16720 48
848376 1082 1097 GGCACCCTTGGCCACG 52 16712 16727 1041
849153 N/A N/A GCCCAAGCCACCTCCC 0 16840 16855 1042
849169 N/A N/A AGGAAAGTCTCAGGGC 78 17681 17696 1043
849185 N/A N/A AGCCCCTGCCCCGTGC 18 17967 17982 1044
849201 N/A N/A GGCCTAACGCAGCTCT 34 18645 18660 1045
849217 N/A N/A AGGCACCAAGAGGATG 20 19370 19385 1046
849233 N/A N/A GCGGATTTCAGACTTG 80 19613 19628 1047
848408 1304 1319 CCGGAAGTTGCCGGCA 3 20135 20150 1048
849249 N/A N/A CGTGCCACAAGAAGCC 21 20269 20284 1049
20287 20302
849265 N/A N/A GCCTTTAAATTCGGCC 0 20963 20978 1050
848424 1435 1450 GCAAAGAGGTCCACAC 0 21407 21422 1051
849281 N/A N/A GGCACTGGAGGTCCCG 31 21583 21598 1052
848440 1582 1597 CTCAACTCGGCCAGGG 43 22075 22090 1053
849297 N/A N/A TAGGAGAGAGGAGGGC 21 22410 22425 1054
848456 1718 1733 GCAAAACAGCTGCCAA 24 22500 22515 1055
848472 1778 1793 GCAGCGGGCGACGGCT 0 22560 22575 1056
849313 N/A N/A CTCTCACACGAGCATT 11 23177 23192 1057
848486 1933 1948 AGCAGGCAGCACCTGG 35 23553 23568 1058
848502 2003 2018 GCAGTGGACACGGGTC 43 23623 23638 1059
849329 N/A N/A GTATGGAACTGCAAGT 0 23772 23787 1060
849345 N/A N/A ATTTTAAAGCAACGGG 75 24175 24190 1061
849361 N/A N/A AAACCTAAAATAGTGG 4 24928 24943 1062
849377 N/A N/A GGGCAGAGGAAAGCCA 12 25356 25371 1063
848518 2190 2205 TTCCATGCTCCTTGAC 11 25521 25536 1064
849393 N/A N/A ATACACTCAGGTTTCT 45 26199 26214 1065
849409 N/A N/A ACCCAGGCGGTTCTGC 10 27185 27200 1066
848534 2427 2442 GTCACTGGAGCTCCTG 59 27570 27585 1067
848550 2554 2569 AAAGGCGGAAGCATCC 23 27697 27712 1068
848566 2677 2692 GTGAAATGCCCCACAG 34 27820 27835 1069
848581 2729 2744 GCACATTGGGAGCAGC 58 27872 27887 1070
848597 2773 2788 ACGGAACAAGAGCTCA 77 27916 27931 1071
848613 2869 2884 CAACGATGTTTGTCCC 67 28012 28027 1072
848629 2962 2977 GAAAGCTAAGCCTCCA 69 28105 28120 1073
848644 3059 3074 TGGCATAGAGCAGAGT 49 28202 28217 1074
848659 3129 3144 CTGCACACTGCCGAGT 48 28272 28287 1075
848675 3216 3231 TCCAGGTTTCTTCCTC 63 28359 28374 1076
848690 3247 3262 GTGTGAGCTTGGCAGG 78 28390 28405 1077
848706 3269 3284 CGTTTCTGGCTCAGTT 55 28412 28427 1078
848722 3342 3357 TGTTACCCGTAAAAAT 0 28485 28500 1079
848738 3427 3442 TAACGGAAAAAGTTCC 64 28570 28585 1080
848753 3513 3528 TGCTCAAGGAGGGACA 27 28656 28671 1081
848769 3601 3616 CAAAACAGGTCTAGAA 43 28744 28759 1082
[ 表 15]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848302 755 770 CTTCAAGGCCAGCTCC 0 N/A N/A 1083
848347 1016 1031 ACACTTGCTGGCCTGT 0 N/A N/A 1084
848213 85 100 CTGCAACCATGAGCGC 4 3560 3575 1085
848229 309 324 CTAGAGGCCGTGCGCG 18 3784 3799 1086
848245 483 498 GCAAGGCTAGCACCAG 45 3958 3973 1087
848786 N/A N/A GAAACTGGGAAATCTG 0 4370 4385 1088
848802 N/A N/A GTCAAGCACCACAGCT 54 5009 5024 1089
848818 N/A N/A CCTCAAGGGCTTGGTT 0 5509 5524 1090
848834 N/A N/A AATCTATGCAGCAAAA 0 6407 6422 1091
848850 N/A N/A AACAAATTATAGCAGC 75 6766 6781 1092
848882 N/A N/A GACCACAGTACCTATG 30 7332 7347 1093
848898 N/A N/A ACCAAATGCGGACCAA 66 7696 7711 1094
848260 571 586 GGCAACCTCCACGGAT 53 7844 7859 1095
466847 671 686 GAGGTATCCCCGGCGG 73 7944 7959 1096
848287 687 702 CATGCAGGATCTTGGT 5 7960 7975 1097
848914 N/A N/A TGCTTGGTACCCGATA 39 8161 8176 1098
848930 N/A N/A CCTAAAGAAGGGACTT 18 8479 8494 1099
848946 N/A N/A AGGCATTGACTTGTCA 46 8956 8971 1100
848962 N/A N/A TACCTAGCATCTGCTG 0 9437 9452 1101
848978 N/A N/A ACAGACTAGGAGCCTG 0 10361 10376 1102
848317 852 867 CCGCCCGGTACCGTGG 0 10613 10628 1103
848994 N/A N/A AGGCATCCCAGACAGG 52 11042 11057 1104
849010 N/A N/A GCACACATGACCGACC 0 11775 11790 1105
849026 N/A N/A CCCCATGCCAGCCCAA 33 12604 12619 1106
849042 N/A N/A ATTAATCTTCTGGATA 13 13016 13031 1107
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 82 13108 13123 337
849058 N/A N/A GGACAGGGTCAGGAGG 22 13726 13741 1108
849074 N/A N/A GGATACAGGTGCTCAG 55 14188 14203 1109
849090 N/A N/A ACACACACTGTCTACC 38 14629 14644 1110
849106 N/A N/A CCTCAGGTGGAATCAG 56 15306 15321 1111
849122 N/A N/A GAATAACAGTGATGTC 17 15852 15867 1112
849138 N/A N/A ACCTTATAGTTAACAC 4 16214 16229 1113
848332 982 997 TCCTCCTCGGGCACAT 21 16374 16389 1114
848362 1059 1074 CCCGGCCGCTGACCAC 0 16689 16704 1115
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 0 16705 16720 48
848377 1083 1098 TGGCACCCTTGGCCAC 0 16713 16728 1116
849154 N/A N/A GGTCAAGGCTGAACTC 27 17014 17029 1117
849170 N/A N/A TAGGAAAGTCTCAGGG 36 17682 17697 1118
849186 N/A N/A AGGCAATAGTGACTGT 52 17985 18000 1119
849202 N/A N/A CTGGAGACTGGAGGCC 0 18657 18672 1120
849218 N/A N/A GAAAGAGAGGCACCAA 0 19377 19392 1121
849234 N/A N/A TGCGGATTTCAGACTT 24 19614 19629 1122
848393 1161 1176 GAATAAACTCCAGGCC 0 19992 20007 1123
848409 1322 1337 GTAGAGGCAGGCATCG 42 20153 20168 1124
849250 N/A N/A CAGAAGGGTTCGGCCT 32 20310 20325 1125
849266 N/A N/A GGCTTTGTTTGCTTGA 68 20980 20995 1126
848425 1437 1452 GGGCAAAGAGGTCCAC 0 21409 21424 1127
849282 N/A N/A CATCAGGCCTACTTCA 0 21624 21639 1128
848441 1603 1618 GAGAAGTGGATCAGTC 0 22096 22111 1129
849298 N/A N/A TGCAAAAAGGGCCTGG 0 22482 22497 1130
848457 1720 1735 CTGCAAAACAGCTGCC 13 22502 22517 1131
848473 1780 1795 GCGCAGCGGGCGACGG 0 22562 22577 1132
849314 N/A N/A ATCCAGCCAGCTCCAC 7 23207 23222 1133
848487 1934 1949 TAGCAGGCAGCACCTG 0 23554 23569 1134
848503 2004 2019 GGCAGTGGACACGGGT 26 23624 23639 1135
849330 N/A N/A GGCAGAACCAGAGTAT 0 23784 23799 1136
849346 N/A N/A CAATAGTTGCCTATAC 0 24201 24216 1137
849362 N/A N/A AGACACACCCATTGGC 8 24948 24963 1138
848519 2198 2213 GGCCGGGATTCCATGC 0 25529 25544 1139
849378 N/A N/A ACGCAGCACCCCACCC 0 25581 25596 1140
849394 N/A N/A AAGGAGAGTTATACAC 53 26209 26224 1141
849410 N/A N/A GGACACAACCGTGTAT 0 27220 27235 1142
848535 2447 2462 ACCCATCCTGGGATGG 0 27590 27605 1143
848551 2556 2571 GGAAAGGCGGAAGCAT 38 27699 27714 1144
848567 2684 2699 TTGAATGGTGAAATGC 65 27827 27842 1145
848582 2731 2746 CGGCACATTGGGAGCA 33 27874 27889 1146
848598 2774 2789 CACGGAACAAGAGCTC 68 27917 27932 1147
848614 2872 2887 CCCCAACGATGTTTGT 32 28015 28030 1148
848630 2964 2979 CAGAAAGCTAAGCCTC 72 28107 28122 1149
466853 3067 3082 GCACAGCCTGGCATAG 51 28210 28225 1150
848660 3130 3145 ACTGCACACTGCCGAG 1 28273 28288 1151
848676 3218 3233 GTTCCAGGTTTCTTCC 43 28361 28376 1152
848691 3248 3263 TGTGTGAGCTTGGCAG 22 28391 28406 1153
848707 3284 3299 AGCCAGCCCAATCTGC 0 28427 28442 1154
848723 3348 3363 CCTCACTGTTACCCGT 36 28491 28506 1155
848739 3429 3444 GATAACGGAAAAAGTT 0 28572 28587 1156
848754 3543 3558 ATAAATGTCTGCTTGC 52 28686 28701 1157
848770 3603 3618 AGCAAAACAGGTCTAG 60 28746 28761 1158
[ 表 16]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848303 756 771 ACTTCAAGGCCAGCTC 43 N/A N/A 1159
848214 105 120 AACTGAACGGCGGCGC 0 3580 3595 1160
848230 311 326 ACCTAGAGGCCGTGCG 30 3786 3801 1161
848246 484 499 CGCAAGGCTAGCACCA 45 3959 3974 1162
848787 N/A N/A GGCGAGGCAGAAACTG 29 4379 4394 1163
848803 N/A N/A TCAAGGATAAGTGACT 42 5026 5041 1164
848819 N/A N/A AGAAACATCCTCAAGG 38 5517 5532 1165
848835 N/A N/A TAATCTATGCAGCAAA 0 6408 6423 1166
848851 N/A N/A CCAAATTTCCACATGA 41 6797 6812 1167
848867 N/A N/A AAGGAATACCTGAAGG 22 7153 7168 1168
848883 N/A N/A CCTCAGATACCTCTGC 17 7359 7374 1169
848899 N/A N/A GTATAGTAGATGATAA 0 7719 7734 1170
848261 576 591 TGCCAGGCAACCTCCA 14 7849 7864 1171
848274 672 687 TGAGGTATCCCCGGCG 14 7945 7960 1172
848288 688 703 ACATGCAGGATCTTGG 16 7961 7976 1173
848915 N/A N/A AGCCAGTAGTTACTGT 9 8176 8191 1174
848931 N/A N/A GAAGATGTGACATCCA 28 8517 8532 1175
848947 N/A N/A GAGCAGACTGATGGAA 4 8971 8986 1176
848963 N/A N/A GTGGTAACAGCCTCCT 26 9526 9541 1177
848979 N/A N/A GGACAGACTAGGAGCC 4 10363 10378 1178
848318 858 873 ATTCATCCGCCCGGTA 0 10619 10634 1179
848995 N/A N/A AGGTAGGCAGAGGCAT 20 11052 11067 1180
849011 N/A N/A GGCCGGGTCAGCACAC 0 11785 11800 1181
849027 N/A N/A GGCCCATGCTTGTGGC 0 12663 12678 1182
849043 N/A N/A AGGAATGGATTAATCT 48 13024 13039 1183
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 81 13108 13123 337
849059 N/A N/A TCTAAGTGCAGGCGGT 23 13776 13791 1184
849075 N/A N/A CAGCAAGGTGGGCAGA 10 14274 14289 1185
849091 N/A N/A GCACAGTCCGAACTGT 0 14660 14675 1186
849107 N/A N/A GCGGAAATGGCCTGGC 0 15353 15368 1187
849123 N/A N/A GGAGAATAACAGTGAT 62 15855 15870 1188
849139 N/A N/A AACCTTATAGTTAACA 0 16215 16230 1189
848333 983 998 GTCCTCCTCGGGCACA 18 16375 16390 1190
468457 1017 1032 CACACTTGCTGGCCTG 0 16647 16662 1191
848363 1060 1075 TCCCGGCCGCTGACCA 30 16690 16705 1192
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 0 16705 16720 48
848378 1084 1099 CTGGCACCCTTGGCCA 0 16714 16729 1193
849155 N/A N/A AGACATCACCGGATTT 42 17074 17089 1194
849171 N/A N/A CTGTAGGAAAGTCTCA 49 17685 17700 1195
849187 N/A N/A GGACACACAATCACCT 14 18033 18048 1196
849203 N/A N/A CAGTAACAGTTCTAAC 0 18706 18721 1197
849219 N/A N/A CTTATTATCCCTTTCC 29 19395 19410 1198
849235 N/A N/A TCAAATTCTGCAGGAA 0 19653 19668 1199
848394 1163 1178 CCGAATAAACTCCAGG 42 19994 20009 1200
848410 1324 1339 GAGTAGAGGCAGGCAT 0 20155 20170 1201
849251 N/A N/A CCAAAGCCAGAAGGGT 32 20317 20332 1202
849267 N/A N/A TTCTAAGTGCCACGGG 66 21029 21044 1203
848426 1455 1470 CAATGATGTCCTCCCC 0 21427 21442 1204
849283 N/A N/A TCCCGATCAAATGTCC 0 21772 21787 1205
848442 1606 1621 GCAGAGAAGTGGATCA 0 22099 22114 1206
849299 N/A N/A TGCCAACCTGCAAAAA 0 22490 22505 1207
848458 1728 1743 ATACAGTCCTGCAAAA 0 22510 22525 1208
848474 1803 1818 AGCTCAGCAGCTCCTC 11 22585 22600 1209
849315 N/A N/A ATCCAGGAGGCCAAAG 0 23228 23243 1210
848488 1937 1952 GGGTAGCAGGCAGCAC 0 23557 23572 1211
848504 2005 2020 TGGCAGTGGACACGGG 17 23625 23640 1212
849331 N/A N/A GGAGAAGTAAGGTCAC 52 23827 23842 1213
849347 N/A N/A GTCAATAGTTGCCTAT 33 24203 24218 1214
849363 N/A N/A GTTCAAGGGTAAGCCG 25 25011 25026 1215
849379 N/A N/A TGGCACAAACTGACAC 0 25619 25634 1216
849395 N/A N/A TTAAGAGTGGACTCCT 40 26260 26275 1217
849411 N/A N/A CCAAAGTGCAGACGGC 0 27260 27275 1218
848520 2222 2237 GGCCACGGTCACCTGC 0 27365 27380 1219
848536 2455 2470 CCCCAGACACCCATCC 26 27598 27613 1220
848552 2558 2573 CCGGAAAGGCGGAAGC 0 27701 27716 1221
848568 2700 2715 GCACAGCTCGACCTGT 3 27843 27858 1222
848583 2737 2752 GGACATCGGCACATTG 68 27880 27895 1223
848599 2775 2790 GCACGGAACAAGAGCT 19 27918 27933 1224
848615 2885 2900 TTTCACACTCACCCCC 7 28028 28043 1225
848631 2967 2982 ATCCAGAAAGCTAAGC 1 28110 28125 1226
848645 3072 3087 TGCTAGCACAGCCTGG 19 28215 28230 1227
848661 3131 3146 CACTGCACACTGCCGA 11 28274 28289 1228
848677 3219 3234 GGTTCCAGGTTTCTTC 61 28362 28377 1229
848692 3249 3264 CTGTGTGAGCTTGGCA 69 28392 28407 1230
848708 3288 3303 TCAGAGCCAGCCCAAT 8 28431 28446 1231
848724 3378 3393 GAGCTTCCTGGTCTGT 47 28521 28536 1232
848740 3431 3446 GTGATAACGGAAAAAG 65 28574 28589 1233
848755 3545 3560 AGATAAATGTCTGCTT 14 28688 28703 1234
848771 3616 3631 TTCAAGTTACAAAAGC 57 28759 28774 1235
[ 表 17]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848306 759 774 GCAACTTCAAGGCCAG 84 N/A N/A 1236
848217 149 164 AGCCAGTCTCACTGCC 30 3624 3639 1237
848233 362 377 GCTGACGGTGCCCATG 51 3837 3852 1238
848249 487 502 GAACGCAAGGCTAGCA 5 3962 3977 1239
848790 N/A N/A CCAAATCGGAACCCAC 88 4478 4493 1240
848806 N/A N/A ACAGAACTTTCCCTTC 57 5114 5129 1241
848822 N/A N/A TAAATTCGATTCCCAC 32 5600 5615 1242
848838 N/A N/A AGGCAGTAATGGGCAA 92 6461 6476 1243
848854 N/A N/A TCCAACACTGAGGACC 93 6811 6826 1244
848870 N/A N/A AAAGGCAACACTTCTT 61 7222 7237 1245
848886 N/A N/A CAATATTTACTGGTTG 57 7409 7424 1246
848902 N/A N/A CTTACAAATTACAACA 59 7751 7766 1247
848264 622 637 TCTGACTGCGAGAGGT 71 7895 7910 1248
466849 675 690 TGGTGAGGTATCCCCG 48 7948 7963 1249
468444 691 706 AAGACATGCAGGATCT 30 7964 7979 1250
848918 N/A N/A GACCAATGGGTTTGAT 13 8311 8326 1251
848934 N/A N/A GAGAATACCCAGTCCC 50 8550 8565 1252
848950 N/A N/A GCTCAAGGGAAAGGCC 3 9044 9059 1253
848966 N/A N/A GGACAAGAGTGCATCA 6 10011 10026 1254
848982 N/A N/A GGCCTTACCTGATCAA 12 10437 10452 1255
848998 N/A N/A CTAGAACCCTTCATTC 0 11304 11319 1256
849014 N/A N/A TCTCACCTGGTTGGAA 31 11856 11871 1257
849030 N/A N/A GTTAAGAGTGCAGGGT 90 12708 12723 1258
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 92 13108 13123 337
849046 N/A N/A CCGTAGGTCTTGGCTA 65 13166 13181 1259
849062 N/A N/A AGCTGTACCTGGGTTC 79 13888 13903 1260
849078 N/A N/A CCTAGAGGAACCACTA 51 14340 14355 1261
849094 N/A N/A ACATGAATTTCAGGCA 73 14731 14746 1262
849110 N/A N/A TCTCAGCCAGGCCAAA 0 15411 15426 1263
849126 N/A N/A CCCTATTATAGCCTTT 67 15920 15935 1264
848321 890 905 CTCCACCAGGCTGCCT 0 16282 16297 1265
848336 986 1001 CCCGTCCTCCTCGGGC 0 16378 16393 1266
849142 N/A N/A CCATCAGACGGCCGTG 48 16417 16432 1267
848350 1020 1035 TGTCACACTTGCTGGC 45 16650 16665 1268
848365 1064 1079 GGCATCCCGGCCGCTG 62 16694 16709 1269
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 0 16705 16720 48
848381 1098 1113 GCAGGCTGCGCATGCT 42 16728 16743 1270
849158 N/A N/A TGCAAGCAGAAGATAG 39 17153 17168 1271
849174 N/A N/A CAGGAACTGACCTGAC 21 17808 17823 1272
849190 N/A N/A TACAGCTGCTAGTTAT 59 18086 18101 1273
18399 18414
849206 N/A N/A GTGCAGGCCATGGTCT 68 19054 19069 1274
849222 N/A N/A ATATACGAACTCAGGG 0 19426 19441 1275
849238 N/A N/A GGCCTTAAGAGAACAG 46 19734 19749 1276
848397 1178 1193 GACCAGCTGGCTTTTC 2 20009 20024 1277
849254 N/A N/A CCCAAAGAGTATTGGG 0 20552 20567 1278
849270 N/A N/A AACTATTCGGTGTATC 67 21051 21066 1279
848413 1358 1373 CCCAACTGTGATGACC 0 21330 21345 1280
848429 1485 1500 CAAAGCAGGTGCTGCA 36 21457 21472 1281
849286 N/A N/A AGGTAAGACAGCCTCC 53 21856 21871 1282
848445 1619 1634 GATGACATCTTTGGCA 59 22112 22127 1283
848461 1732 1747 GACCATACAGTCCTGC 17 22514 22529 1284
848477 1816 1831 GAGAAACTGGAGCAGC 0 22598 22613 1285
849302 N/A N/A TAGCAGATCGCTGACC 67 22948 22963 1286
849318 N/A N/A ACTCAAGCACCCTCAT 0 23394 23409 1287
848491 1985 2000 CATGCTGGCCTCAGCT 11 23605 23620 1288
848507 2008 2023 TGGTGGCAGTGGACAC 71 23628 23643 1289
849334 N/A N/A AATGAGGCAGGTAATA 19 23879 23894 1290
849350 N/A N/A CCTCAGGGCACCATCC 72 24293 24308 1291
849366 N/A N/A GGGAAAACACCATCTT 31 25120 25135 1292
849382 N/A N/A AGCATCTACCTGGCAA 39 25666 25681 1293
849398 N/A N/A GTGTACCCAGGGCAAG 59 26373 26388 1294
849414 N/A N/A AAGCACATGTCTAGCG 8 27331 27346 1295
848523 2246 2261 AGTCAGGGTCCAGCCC 63 27389 27404 1296
848539 2487 2502 CATTTTAAAGCTCAGC 87 27630 27645 1297
848555 2580 2595 CTCAAGGGCCAGGCCA 70 27723 27738 1298
848571 2708 2723 GCACCCGAGCACAGCT 75 27851 27866 1299
848586 2743 2758 GCCCACGGACATCGGC 58 27886 27901 1300
848602 2778 2793 CTGGCACGGAACAAGA 8 27921 27936 1301
848618 2904 2919 GATGAGGGCCATCAGC 87 28047 28062 1302
848633 2978 2993 GGCTAGATGCCATCCA 64 28121 28136 1303
848648 3093 3108 CCGCAGGCCACCTTTG 12 28236 28251 1304
848664 3146 3161 AGACAGTGCATGCACC 10 28289 28304 1305
848680 3222 3237 TCTGGTTCCAGGTTTC 89 28365 28380 1306
848695 3255 3270 TTCCTGCTGTGTGAGC 63 28398 28413 1307
848711 3304 3319 AAGAAGAGGCTTGGCT 38 28447 28462 1308
848727 3382 3397 CACCGAGCTTCCTGGT 66 28525 28540 1309
848743 3446 3461 GTGAATCAGGCCTGGG 31 28589 28604 1310
848758 3558 3573 GGACAGACCCAAAAGA 71 28701 28716 1311
848774 3641 3656 TGCTACAAAACCCAGA 95 28784 28799 1312
[ 表 18]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848218 153 168 CCCGAGCCAGTCTCAC 1 3628 3643 1313
848234 368 383 CCTGGAGCTGACGGTG 18 3843 3858 1314
848250 488 503 GGAACGCAAGGCTAGC 77 3963 3978 1315
848791 N/A N/A TTCCAAACCAAATCGG 46 4485 4500 1316
848807 N/A N/A GGACAAAACTGCAAGT 42 5170 5185 1317
848823 N/A N/A TTCTAAATTCGATTCC 61 5603 5618 1318
848839 N/A N/A TTAGAAAGGCAGTAAT 30 6467 6482 1319
848855 N/A N/A CAAGGACGGCACCAAG 37 6881 6896 1320
848871 N/A N/A GAAGGGATGACTAAGT 0 7242 7257 1321
848887 N/A N/A AGGAAACCGTGGACCT 60 7437 7452 1322
848903 N/A N/A CCTACTTACAAATTAC 4 7755 7770 1323
848265 633 648 GGGCAGTGCGCTCTGA 78 7906 7921 1324
848276 676 691 TTGGTGAGGTATCCCC 66 7949 7964 1325
848291 692 707 GAAGACATGCAGGATC 61 7965 7980 1326
848919 N/A N/A GGCAGACCAATGGGTT 10 8315 8330 1327
848935 N/A N/A TAAGATTTGAAGCACT 60 8580 8595 1328
848951 N/A N/A CTGAACTGTAAGCTCA 46 9055 9070 1329
848967 N/A N/A GGCACTAGCAGGAGTT 62 10031 10046 1330
848983 N/A N/A ATGGATTCAGCTCAGA 66 10680 10695 1331
848999 N/A N/A TCCAACTAGAACCCTT 87 11309 11324 1332
849015 N/A N/A CACTGAAGAGGTCTCA 17 11867 11882 1333
849031 N/A N/A AGGAACCTGAAGATCA 72 12756 12771 1334
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 85 13108 13123 337
849047 N/A N/A TAATAATGCCCCCGTA 49 13177 13192 1335
849063 N/A N/A AGTTAGCCCAGGTGAG 6 13951 13966 1336
849079 N/A N/A CGCCACCCTAGAGGAA 0 14346 14361 1337
849095 N/A N/A AGCAATTCAGTGGCTG 49 14759 14774 1338
849111 N/A N/A CTCCAGCGCAGGTCTC 35 15433 15448 1339
849127 N/A N/A GTGTAAAATAAAGCCC 77 15934 15949 1340
848322 900 915 GGAGATACACCTCCAC 15 16292 16307 1341
848337 987 1002 TCCCGTCCTCCTCGGG 8 16379 16394 1342
849143 N/A N/A GGACAGTGACAGCTGG 39 16524 16539 1343
848351 1021 1036 CTGTCACACTTGCTGG 8 16651 16666 1344
848366 1070 1085 CACGCCGGCATCCCGG 3 16700 16715 1345
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 0 16705 16720 48
848382 1100 1115 GCGCAGGCTGCGCATG 0 16730 16745 1346
849159 N/A N/A ATGCAAGTGAGTGAGT 74 17187 17202 1347
849175 N/A N/A GGAAAGAACAGCCTCC 44 17842 17857 1348
849191 N/A N/A GATACAGACACCCACC 37 18250 18265 1349
849207 N/A N/A TACCATAACTCCCCAC 37 19123 19138 1350
849223 N/A N/A ATCAAACTAGCCAACC 0 19482 19497 1351
849239 N/A N/A GAAGACGGAGTAAGGC 81 19795 19810 1352
848398 1183 1198 GGCTGGACCAGCTGGC 0 20014 20029 1353
849255 N/A N/A GGCCCAAAGAGTATTG 0 20554 20569 1354
849271 N/A N/A GAAACTATTCGGTGTA 38 21053 21068 1355
848414 1370 1385 GGCATTGGTGGCCCCA 19 21342 21357 1356
848430 1492 1507 TGTGACACAAAGCAGG 84 21464 21479 1357
849287 N/A N/A CGAAGGTAAGCCGCCT 56 21889 21904 1358
848446 1626 1641 CCTCATTGATGACATC 0 22119 22134 1359
848462 1733 1748 TGACCATACAGTCCTG 19 22515 22530 1360
848478 1842 1857 GCTCGCCCCGCCGCTT 35 22624 22639 1361
849303 N/A N/A GGCTGAGTCCAGAGTA 89 22962 22977 1362
849319 N/A N/A GAAATGGGAATCTGCT 0 23454 23469 1363
848492 1986 2001 CCATGCTGGCCTCAGC 32 23606 23621 1364
849335 N/A N/A CAGCTATAGAGCGGCA 0 24045 24060 1365
849351 N/A N/A GAACAGCTCAGCCTCA 0 24304 24319 1366
849367 N/A N/A AGCCTTAGTTTCTCAG 25 25135 25150 1367
848508 2047 2062 TCCCAGTGGGAGCTGC 0 25378 25393 1368
849383 N/A N/A CCACAGCATCTACCTG 80 25670 25685 1369
849399 N/A N/A CCAGGAAGAGCACCTG 17 26406 26421 1370
849415 N/A N/A AGAAAGCACATGTCTA 0 27334 27349 1371
848524 2250 2265 AGCCAGTCAGGGTCCA 55 27393 27408 1372
848540 2490 2505 AACCATTTTAAAGCTC 45 27633 27648 1373
848556 2582 2597 CACTCAAGGGCCAGGC 37 27725 27740 1374
848572 2709 2724 AGCACCCGAGCACAGC 89 27852 27867 1375
848587 2752 2767 AGTCATTCTGCCCACG 78 27895 27910 1376
848603 2779 2794 CCTGGCACGGAACAAG 51 27922 27937 1377
848619 2906 2921 GAGATGAGGGCCATCA 80 28049 28064 1378
848634 2999 3014 GCGCACCTGTCTCCAG 0 28142 28157 1379
848649 3110 3125 TCCTAGGTGATGGCTC 80 28253 28268 1380
848665 3148 3163 TGAGACAGTGCATGCA 37 28291 28306 1381
848681 3223 3238 CTCTGGTTCCAGGTTT 43 28366 28381 1382
848696 3256 3271 GTTCCTGCTGTGTGAG 78 28399 28414 1383
848712 3306 3321 GTAAGAAGAGGCTTGG 75 28449 28464 1384
848728 3383 3398 TCACCGAGCTTCCTGG 50 28526 28541 1385
848744 3451 3466 GGCCAGTGAATCAGGC 17 28594 28609 1386
848759 3563 3578 AGAGAGGACAGACCCA 83 28706 28721 1387
848775 3644 3659 AAATGCTACAAAACCC 67 28787 28802 1388
848307 760 775 GGCAACTTCAAGGCCA 0 N/A N/A 1389
[ 表 19]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848219 181 196 CGCTGCTGCAACGACG 66 3656 3671 1390
848235 378 393 ACCAGGACCGCCTGGA 0 3853 3868 1391
848251 489 504 CGGAACGCAAGGCTAG 62 3964 3979 1392
848792 N/A N/A GTCATAAAGAAATTGC 47 4593 4608 1393
848808 N/A N/A TGGCAGAATTTTCCCC 17 5249 5264 1394
848824 N/A N/A TTTCATTCTAAATTCG 58 5608 5623 1395
848840 N/A N/A CTTTACCCAAAGCCTT 0 6523 6538 1396
848856 N/A N/A CATAGCGGGAGAACTT 51 6908 6923 1397
848872 N/A N/A GCAGAAGGGATGACTA 53 7245 7260 1398
848888 N/A N/A AGCCAGGAAACCGTGG 63 7441 7456 1399
848904 N/A N/A CCCTACTTACAAATTA 40 7756 7771 1400
848266 640 655 AGGCGGCGGGCAGTGC 31 7913 7928 1401
848277 677 692 CTTGGTGAGGTATCCC 65 7950 7965 1402
848292 693 708 GGAAGACATGCAGGAT 64 7966 7981 1403
848920 N/A N/A AGGCAGACCAATGGGT 63 8316 8331 1404
848936 N/A N/A CTAGAAGGTGGTGCAG 0 8619 8634 1405
848952 N/A N/A CCATAGTCAACTGTAC 7 9097 9112 1406
848968 N/A N/A AGCCAATGGGAGGCAC 15 10042 10057 1407
848308 761 776 GGGCAACTTCAAGGCC 7 10522 10537 1408
848984 N/A N/A GGGCAGAGCAAATGGA 0 10691 10706 1409
849000 N/A N/A GTTCACCCCAAGCTCT 29 11420 11435 1410
849016 N/A N/A CTCCACTGAAGAGGTC 66 11870 11885 1411
849032 N/A N/A GATTTAACCCTCCAAA 0 12814 12829 1412
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 86 13108 13123 337
849048 N/A N/A GTTAATAATGCCCCCG 80 13179 13194 1413
849064 N/A N/A GCTGAGTTAGCCCAGG 51 13955 13970 1414
849080 N/A N/A AAACAGTGCTCGCCAC 29 14356 14371 1415
849096 N/A N/A TACAGAGCAATTCAGT 33 14764 14779 1416
849112 N/A N/A TGCCAGGCAGGTCCAG 0 15506 15521 1417
849128 N/A N/A CAATATCTAACAATAA 0 15977 15992 1418
848323 905 920 GTCTAGGAGATACACC 72 16297 16312 1419
848338 988 1003 GTCCCGTCCTCCTCGG 33 16380 16395 1420
849144 N/A N/A AATCAGCAGGTGGCTG 0 16579 16594 1421
848352 1022 1037 ACTGTCACACTTGCTG 45 16652 16667 1422
848367 1072 1087 GCCACGCCGGCATCCC 27 16702 16717 1423
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 2 16705 16720 48
848383 1105 1120 AGCACGCGCAGGCTGC 0 16735 16750 1424
849160 N/A N/A CCACATCTGCCTGGCC 0 17226 17241 1425
849176 N/A N/A TGCCAGGTCATGCAAT 0 17954 17969 1426
849192 N/A N/A GGGATACAGACACCCA 48 18252 18267 1427
849208 N/A N/A CCATACCATAACTCCC 36 19126 19141 1428
849224 N/A N/A CAATTACACCAGCAAT 64 19496 19511 1429
849240 N/A N/A CTGCGAAAATATTTTT 32 19835 19850 1430
848399 1188 1203 CCACAGGCTGGACCAG 8 20019 20034 1431
849256 N/A N/A CCTCAACCGCTCCCAT 15 20631 20646 1432
849272 N/A N/A GAGATAGGAAACTATT 19 21060 21075 1433
848415 1388 1403 GGTCACCGGCTGGTCT 0 21360 21375 1434
848431 1500 1515 TCCCACTCTGTGACAC 93 21472 21487 1435
849288 N/A N/A ACAGACACTAAGCTCT 76 21910 21925 1436
848447 1628 1643 GGCCTCATTGATGACA 0 22121 22136 1437
848463 1734 1749 CTGACCATACAGTCCT 15 22516 22531 1438
848479 1850 1865 CTCCATGCGCTCGCCC 39 22632 22647 1439
849304 N/A N/A CTAGAGATGGCTGAGT 56 22970 22985 1440
849320 N/A N/A ACGGAAATGGGAATCT 0 23457 23472 1441
848493 1990 2005 GTCCCCATGCTGGCCT 33 23610 23625 1442
849336 N/A N/A ATACAGAGATGTTAAG 30 24079 24094 1443
849352 N/A N/A TCTTATTCCAGGCTGG 23 24362 24377 1444
849368 N/A N/A AGCTGACCAGCTGTGT 0 25180 25195 1445
848509 2064 2079 TGCCAAGGTCCTCCAC 18 25395 25410 1446
849384 N/A N/A CAAAAACAGACCCAGC 11 25733 25748 1447
849400 N/A N/A AAATAGATGCTCCAGG 35 26465 26480 1448
849416 N/A N/A CGAGGAAAAGAAAGCA 20 27342 27357 1449
848525 2254 2269 CTGCAGCCAGTCAGGG 1 27397 27412 1450
848541 2494 2509 TCGGAACCATTTTAAA 0 27637 27652 1451
848557 2585 2600 CCCCACTCAAGGGCCA 0 27728 27743 1452
848573 2710 2725 CAGCACCCGAGCACAG 23 27853 27868 1453
848588 2755 2770 AAAAGTCATTCTGCCC 62 27898 27913 1454
848604 2780 2795 GCCTGGCACGGAACAA 55 27923 27938 1455
848620 2909 2924 CTGGAGATGAGGGCCA 24 28052 28067 1456
848635 3021 3036 GCACAGCCTGTGACCA 71 28164 28179 1457
848650 3120 3135 GCCGAGTCAGTCCTAG 23 28263 28278 1458
848666 3150 3165 GCTGAGACAGTGCATG 47 28293 28308 1459
468497 3224 3239 CCTCTGGTTCCAGGTT 77 28367 28382 1460
848697 3257 3272 AGTTCCTGCTGTGTGA 44 28400 28415 1461
848713 3308 3323 AAGTAAGAAGAGGCTT 0 28451 28466 1462
848729 3384 3399 CTCACCGAGCTTCCTG 76 28527 28542 1463
848745 3456 3471 CGCCAGGCCAGTGAAT 44 28599 28614 1464
848760 3565 3580 ACAGAGAGGACAGACC 45 28708 28723 1465
848776 3661 3676 AGTCACCATATTAATA 63 28804 28819 1466
[ 表 20]靶向SEQ ID NO: 1和2的3-10-3 cEt缺口體對PCSK9 mRNA的抑制
ISIS 編號 SEQ ID: 1 起始位點 SEQ ID: 1 終止位點 序列 % 抑制 SEQ ID: 2 起始位點 SEQ ID 2: 終止位點 SEQ ID NO
848432 1535 1550 TGCAATGCCAGCCACG 0 N/A N/A 1467
848220 184 199 AGCCGCTGCTGCAACG 57 3659 3674 1468
848236 381 396 GCCACCAGGACCGCCT 28 3856 3871 1469
848252 492 507 CCTCGGAACGCAAGGC 38 3967 3982 1470
848793 N/A N/A AGCATGAGTTCTGTGT 43 4607 4622 1471
848809 N/A N/A CAGCACACTCAGACAG 47 5288 5303 1472
848825 N/A N/A AAAAGGATTGGTCTAA 0 5652 5667 1473
848841 N/A N/A CCCTTTACCCAAAGCC 71 6525 6540 1474
848857 N/A N/A AATCAGCCTTCAAGGG 39 6928 6943 1475
848873 N/A N/A GGCAGAAGGGATGACT 35 7246 7261 1476
848889 N/A N/A TCGACAACAGGTTTTC 58 7576 7591 1477
848905 N/A N/A TGACATGGAAGAAACC 34 7801 7816 1478
848267 642 657 GCAGGCGGCGGGCAGT 0 7915 7930 1479
848278 678 693 TCTTGGTGAGGTATCC 52 7951 7966 1480
848293 694 709 TGGAAGACATGCAGGA 26 7967 7982 1481
848921 N/A N/A TGCATTGGCACAAGAA 44 8340 8355 1482
848937 N/A N/A AGTTAGAGGCCAGGAA 25 8645 8660 1483
848953 N/A N/A TCCCATAGTCAACTGT 11 9099 9114 1484
848969 N/A N/A TTGCAAAGCTTCCAGT 7 10065 10080 1485
468446 775 790 ATGTAGTCGACATGGG 38 10536 10551 1486
848985 N/A N/A CGAGAAGTGGAAACCA 0 10727 10742 1487
849001 N/A N/A GTGAAAGCTGAGTTCA 6 11431 11446 1488
849017 N/A N/A GGGTGGTAATTTGTCA 15 12045 12060 1489
849033 N/A N/A AATAACTGATTTAACC 12 12821 12836 1490
849044 N/A N/A GGATACACAGGCTCGC 82 13108 13123 337
849049 N/A N/A GTTCATTCCACTGCTT 30 13216 13231 1491
849065 N/A N/A CAACGCACATCGAGCA 39 14038 14053 1492
849081 N/A N/A ACCAAACAGTGCTCGC 48 14359 14374 1493
849097 N/A N/A AATAAGGTCTGGCTCA 43 14829 14844 1494
849113 N/A N/A ACAGATGCCAGGCAGG 10 15511 15526 1495
849129 N/A N/A TCAATATCTAACAATA 0 15978 15993 1496
848324 917 932 CTGTATGCTGGTGTCT 0 16309 16324 1497
848339 989 1004 GGTCCCGTCCTCCTCG 0 16381 16396 1498
849145 N/A N/A CATGAGAAAGACCCCC 0 16611 16626 1499
848353 1024 1039 TGACTGTCACACTTGC 56 16654 16669 1500
848368 1073 1088 GGCCACGCCGGCATCC 0 16703 16718 1501
468460 1075 1090 TTGGCCACGCCGGCAT 0 16705 16720 48
848384 1109 1124 GTTGAGCACGCGCAGG 58 16739 16754 1502
849161 N/A N/A CTCCACCACATCTGCC 30 17231 17246 1503
849177 N/A N/A CGTGCCAGGTCATGCA 74 17956 17971 1504
849193 N/A N/A TGGGATACAGACACCC 5 18253 18268 1505
849209 N/A N/A TAAAAGACTCCATGCC 0 19151 19166 1506
849225 N/A N/A GCAATTACACCAGCAA 84 19497 19512 1507
849241 N/A N/A GCACAGAGTGATGGTT 66 19908 19923 1508
848400 1190 1205 CCCCACAGGCTGGACC 34 20021 20036 1509
849257 N/A N/A CTGCACCGGGCATGCG 0 20686 20701 1510
849273 N/A N/A CCCTACCATAGCCAGG 36 21118 21133 1511
848416 1394 1409 CCCCAGGGTCACCGGC 38 21366 21381 1512
849289 N/A N/A GCACACAGACACTAAG 0 21914 21929 1513
848448 1633 1648 AACCAGGCCTCATTGA 0 22126 22141 1514
848464 1735 1750 GCTGACCATACAGTCC 9 22517 22532 1515
849305 N/A N/A CTATCCTGTAGCATCA 73 23060 23075 1516
849321 N/A N/A GACGGAAATGGGAATC 0 23458 23473 1517
848480 1875 1890 GGCAGACCAGCTTGCC 0 23495 23510 1518
848494 1991 2006 GGTCCCCATGCTGGCC 0 23611 23626 1519
849337 N/A N/A TAGCACTCATCATTTC 33 24098 24113 1520
849353 N/A N/A GACGAGAATCAACTCT 6 24383 24398 1521
849369 N/A N/A CACCAGGACTCCTGTG 4 25209 25224 1522
848510 2074 2089 GGCTTGTGGGTGCCAA 15 25405 25420 1523
849385 N/A N/A CTCCAAGTGGAGTGGG 0 25786 25801 1524
849401 N/A N/A ACTAAAATAGATGCTC 34 26469 26484 1525
849417 N/A N/A TGCCAGAGCCCGAGGA 0 27352 27367 1526
848526 2259 2274 GGGCACTGCAGCCAGT 0 27402 27417 1527
848542 2500 2515 GACAAGTCGGAACCAT 77 27643 27658 1528
848558 2598 2613 GGCAAGGAGGCTGCCC 0 27741 27756 1529
848574 2711 2726 GCAGCACCCGAGCACA 70 27854 27869 1530
848589 2756 2771 TAAAAGTCATTCTGCC 56 27899 27914 1531
848605 2781 2796 TGCCTGGCACGGAACA 44 27924 27939 1532
848621 2915 2930 AGTTAGCTGGAGATGA 0 28058 28073 1533
848636 3027 3042 ACCAAGGCACAGCCTG 70 28170 28185 1534
848651 3121 3136 TGCCGAGTCAGTCCTA 69 28264 28279 1535
848667 3163 3178 GTGGAGCGGGTTGGCT 26 28306 28321 1536
848682 3225 3240 CCCTCTGGTTCCAGGT 23 28368 28383 1537
848698 3259 3274 TCAGTTCCTGCTGTGT 30 28402 28417 1538
848714 3311 3326 GTGAAGTAAGAAGAGG 47 28454 28469 1539
848730 3385 3400 ACTCACCGAGCTTCCT 63 28528 28543 1540
848746 3469 3484 TTAGAAGCATCTCCGC 44 28612 28627 1541
848761 3569 3584 GGCAACAGAGAGGACA 79 28712 28727 1542
848777 3666 3681 TAAAAAGTCACCATAT 9 28809 28824 1543
實例 2 ： 3-10-3 cEt 缺口體對 HepG2 細胞中的人類 PCSK9 的劑量依賴性反義抑制
從實例1選擇展示PCSK9 mRNA體外抑制的缺口體，在HepG2細胞中以不同劑量進行測試。在一系列具有類似培養條件的實驗中對該等反義寡核苷酸進行測試。將每個實驗的結果呈現在如下所示的單獨的表中。 研究1
將細胞以每孔20,000個細胞的密度鋪板，並且使用電穿孔用如下表所指定的46.88 nM、187.5 nM、750 nM、和3,000 nM濃度的反義寡核苷酸轉染。先前在WO2008066776中揭露的ISIS 405879作為基準寡核苷酸也被包括在該研究中。在大約16小時的處理期之後，從細胞中分離RNA，並且藉由定量即時PCR測量PCSK9 mRNA水平。  將從ABI（ID# Hs03037355_m1）中設置的人類PCSK9引物探針用於測量mRNA水平。如藉由RIBOGREEN ®的測量，根據總RNA含量調整PCSK9 mRNA水平。將結果呈現為相對於未經處理的對照細胞的PCSK9抑制百分比。
還呈現了每個寡核苷酸的半最大抑制濃度（IC 50）。在反義寡核苷酸處理的細胞中PCSK9 mRNA水平以劑量依賴性方式降低。與先前揭露的寡核苷酸ISIS 405879相比，若干新設計的反義寡核苷酸表現出優異的功效。特別地，與先前揭露的寡核苷酸ISIS 405879相比，ISIS 848542、ISIS 848593、ISIS 848597、ISIS 848598、ISIS 848630、ISIS 848833、ISIS 849040、ISIS 849171、和ISIS 849236表現出優異的功效。 [ 表 21]
ISIS 編號 46.875 nM 187.5 nM 750 nM 3,000 nM IC 50 （µM ）
405879 13 6 3 29 ＞3.00
466847 1 19 65 94 0.47
468497 12 27 60 83 0.48
848219 0 0 54 88 0.91
848241 0 5 31 63 1.78
848283 18 27 54 85 0.48
848306 0 19 53 91 0.62
848323 0 0 0 50 ＞3.00
848376 0 3 12 43 ＞3.00
848430 0 30 52 81 0.62
848431 67 79 92 96 ＜0.05
848500 6 30 55 82 0.54
848539 0 0 0 55 ＞3.00
848542 10 30 66 86 0.41
848560 12 32 76 91 0.33
848567 0 1 42 89 0.85
848570 23 27 67 87 0.35
848572 18 44 71 81 0.30
848574 0 5 68 95 0.55
848575 0 17 51 80 0.75
848576 11 18 45 74 0.86
848583 3 18 62 88 0.52
848584 0 22 54 89 0.57
848585 1 22 67 92 0.45
848593 0 25 53 83 0.63
848596 18 40 76 93 0.26
848597 22 42 78 87 0.24
848598 0 18 62 95 0.53
848616 0 14 55 88 0.66
848618 0 0 56 77 0.96
848619 3 7 41 74 1.07
848629 21 34 78 78 0.31
848630 7 22 65 83 0.50
848632 25 34 68 89 0.29
848635 0 0 49 83 0.92
848636 5 34 77 76 0.42
848649 5 10 43 78 0.89
848651 4 0 48 88 0.88
848652 0 6 28 80 1.16
848656 1 13 52 80 0.73
848670 0 38 84 85 0.39
848671 26 28 70 81 0.34
848672 0 11 27 73 1.37
848674 36 31 69 89 0.24
848677 2 32 69 90 0.41
848679 0 11 55 81 0.73
848680 11 20 64 81 0.52
848685 0 14 33 62 1.63
848687 0 25 63 90 0.51
848688 0 23 61 89 0.55
848690 15 21 78 84 0.39
848692 31 45 80 97 0.17
848693 8 23 69 88 0.44
848694 27 43 75 93 0.21
848701 0 10 39 77 1.02
848704 11 5 43 78 0.94
848725 0 9 51 81 0.79
848729 26 33 63 92 0.30
848731 0 15 60 89 0.55
848732 12 71 67 90 0.21
848736 6 18 40 73 1.00
848740 2 18 59 86 0.57
848748 9 42 60 85 0.39
848756 3 1 55 85 0.72
848759 18 37 75 94 0.28
848761 20 35 68 81 0.35
848764 0 8 37 64 1.52
848770 0 4 63 90 0.63
848771 3 23 57 93 0.50
848772 15 32 66 82 0.40
848774 0 8 64 90 0.61
848790 0 0 33 73 1.49
848795 9 42 62 91 0.35
848811 7 5 46 86 0.75
848814 17 20 64 89 0.43
848826 7 57 77 93 0.24
848830 0 35 45 86 0.62
848832 0 40 71 78 0.52
848833 19 43 68 81 0.32
848838 0 36 72 89 0.39
848841 5 24 62 86 0.50
848844 0 22 61 89 0.53
848849 9 48 79 92 0.26
848850 0 38 68 97 0.43
848854 2 7 58 84 0.66
848875 3 17 58 79 0.65
848890 0 6 27 65 1.74
848898 7 14 79 87 0.43
848927 12 25 75 95 0.35
848928 0 0 45 78 1.01
848971 0 21 54 82 0.65
848999 6 29 34 64 1.38
849007 0 4 41 78 1.02
849008 0 39 74 90 0.42
849013 4 17 47 86 0.67
849016 0 23 56 79 0.65
849020 0 13 40 67 1.28
849021 10 34 65 80 0.44
849030 2 28 58 86 0.52
849036 2 1 37 76 1.16
849040 28 55 79 96 0.15
849044 26 39 72 91 0.28
849048 0 30 60 79 0.61
849069 12 12 40 74 1.02
849071 2 31 65 92 0.42
849084 0 0 0 43 ＞3.00
849085 20 39 64 89 0.31
849086 13 40 69 81 0.36
849106 20 24 55 80 0.53
849120 0 15 61 80 0.64
849123 9 48 82 84 0.27
849133 0 0 29 70 1.62
849135 25 54 79 95 0.17
849162 0 4 35 75 1.19
849169 34 63 72 83 0.12
849171 9 60 63 83 0.30
849177 0 16 69 75 0.68
849178 0 22 53 83 0.65
849181 6 8 39 84 0.86
849189 24 44 81 90 0.21
849200 0 0 34 70 1.48
849205 7 29 51 88 0.52
849216 0 15 28 66 1.66
849225 23 47 78 94 0.21
849227 7 35 74 94 0.34
849233 9 42 68 93 0.32
849236 0 1 57 88 0.73
849239 18 38 74 86 0.30
849266 0 22 66 86 0.51
849267 18 69 72 94 0.17
849285 3 18 45 84 0.71
849288 0 0 0 52 ＞3.00
849303 18 33 57 72 0.54
849305 25 28 62 82 0.40
849309 10 18 59 82 0.57
849331 0 10 65 93 0.57
849332 0 0 48 76 1.09
849345 0 0 62 80 0.78
849354 0 0 43 64 1.49
849357 5 21 45 75 0.84
849358 0 10 45 79 0.88
849359 3 22 46 88 0.62
849372 0 15 29 82 1.04
849383 2 0 33 71 1.43
849386 11 18 51 84 0.60
研究2
將細胞以每孔20,000個細胞的密度鋪板，並且使用電穿孔用如下表所指定的78.13 nM、312.5 nM、1,250 nM、和5,000 nM濃度的反義寡核苷酸轉染。先前在WO2014179620中揭露的ISIS 431131作為基準寡核苷酸也被包括在該研究中。在大約16小時的處理期之後，從細胞中分離RNA，並且藉由定量即時PCR測量PCSK9 mRNA水平。將從ABI（ID# Hs03037355_m1）中設置的人類PCSK9引物探針用於測量mRNA水平。如藉由RIBOGREEN ®的測量，根據總RNA含量調整PCSK9 mRNA水平。將結果呈現為相對於未經處理的對照細胞的PCSK9抑制百分比。
還呈現了每個寡核苷酸的半最大抑制濃度（IC 50）。在反義寡核苷酸處理的細胞中PCSK9 mRNA水平以劑量依賴性方式降低。與先前揭露的寡核苷酸ISIS 431131相比，若干新設計的反義寡核苷酸表現出優異的功效。 [ 表 22]
ISIS 編號 78.125 nM 312.5 nM 1,250 nM 5,000 nM IC 50 （µM ）
431131 18 16 30 55 ＞5
849169 23 57 86 92 0.28
859341 24 48 69 85 1.54
859346 27 54 80 94 0.27
859358 0 30 69 89 0.76
859361 28 53 73 94 0.30
859363 38 50 79 82 0.20
859384 19 59 76 94 0.30
859387 36 66 79 96 0.16
859392 14 33 63 81 0.96
859393 20 59 90 96 0.27
859394 43 65 80 96 0.12
859395 37 51 82 91 0.21
859401 27 64 88 94 0.20
859408 0 59 61 92 0.55
859419 22 58 77 84 0.31
859459 33 55 91 93 0.19
859462 31 56 78 96 0.24
859469 26 48 76 83 0.36
859472 19 35 67 87 0.56
859504 19 47 59 80 0.57
859529 19 50 88 94 0.32
859531 33 52 76 69 0.29
859532 24 55 79 90 0.30
859533 9 40 77 91 0.51
859534 25 49 85 85 0.70
859551 25 41 51 78 0.69
859552 0 17 53 78 1.36
859553 24 45 79 94 0.35
859561 28 54 71 92 0.30
859571 35 34 76 73 0.43
859584 19 51 85 95 0.32
859598 33 55 73 83 0.25
859601 23 39 63 90 0.50
859603 0 6 70 71 1.25
859605 9 42 67 83 0.62
859611 21 22 47 76 1.16
實例 3 ：靶向人類 PCSK9 的 3’- 軛合的 3-10-3 cEt 缺口體在 BALB/c 小鼠中的可耐受性
將從以上研究中選擇的ISIS寡核苷酸與3’-THA-C6-GalNAc3-(3R,5S)-5-(羥甲基)吡咯啶-3-醇磷酸酯端帽（此後被稱為3’-THA）軛合。將針對血漿化學標記物水平的變化評估的162種3’-THA-軛合的ISIS反義寡核苷酸呈現在下表中。‘母體寡核苷酸’表明已經在上述研究中描述的、並且與3’-THA是軛合的、並在此研究中進行測試的ISIS寡核苷酸。 [ 表 23] 針對在 BALB/c 小鼠中的可耐受性評估選擇 3’- 軛合的 3-10-3 cEt 缺口體
ISIS 編號 母體寡核苷酸 SEQ ID NO
863413 466847 1096
863415 848219 1390
863416 848241 777
863418 848306 1236
863419 848323 1419
863421 848430 1357
863422 848431 1435
863423 848500 905
863424 848539 1297
863425 848542 1528
863426 848560 607
863427 848567 1145
863428 848570 451
863429 848572 1375
863433 848583 1223
863434 848584 377
863435 848585 452
863436 848593 763
863437 848596 994
863438 848597 1071
863439 848598 1147
863440 848616 379
863441 848618 1302
863442 848619 1378
863443 848629 1073
863444 848630 1149
863445 848632 455
863446 848635 1457
863447 848636 1534
863448 848649 1380
863449 848651 1535
863451 848656 844
863452 848670 691
863453 848671 768
863457 848679 458
863458 848680 1306
863464 848693 384
863465 848694 459
863468 848725 386
863472 848736 926
863473 848740 1233
863474 848748 619
863475 848756 388
863476 848759 1387
863477 848761 1542
863478 848764 697
863479 848770 1158
863480 848771 1235
863481 848772 389
863482 848774 1312
863483 848790 1240
863484 848795 549
863485 848811 550
863486 848814 781
863487 848826 474
863488 848830 782
863489 848832 939
863490 848833 1016
863491 848838 1243
863492 848841 1474
863493 848844 629
863494 848849 1017
863495 848850 1092
863496 848854 1244
863497 848875 554
863498 848890 478
863499 848898 1094
863500 848927 871
863501 848928 947
863502 848971 563
863503 848999 1332
863504 849007 877
863505 849008 953
863506 849013 410
863507 849016 1411
863508 849020 644
863509 849021 721
863510 849030 1258
863511 849036 645
863512 849040 955
863513 849044 337
863514 849048 1413
863515 849069 724
863516 849071 881
863517 849084 648
863518 849085 725
863519 849086 802
863520 849106 1111
863521 849120 960
863522 849123 1188
863523 849133 728
863524 849135 885
863525 849162 504
863526 849169 1043
863527 849171 1195
863531 849189 426
863532 849200 968
863533 849205 427
863535 849225 1507
863536 849227 585
863537 849233 1047
863538 849236 353
863539 849239 1352
863540 849266 1126
863541 849267 1203
863542 849285 434
863543 849288 1436
863544 849303 1362
863545 849305 1516
863546 849309 749
863547 849331 1213
863548 849332 367
863549 849345 1061
863550 849354 523
863551 849357 754
863552 849358 831
863553 849359 908
863554 849372 678
863555 849383 1369
863556 849386 526
884269 859561 55
884270 859459 180
884271 859395 164
884272 859603 218
884273 859504 284
884274 859394 87
884275 859598 141
884276 859531 198
884277 859469 28
884278 859346 152
884279 859361 79
884280 859472 276
BALB/c小鼠係多重目的的小鼠模型，頻繁用於安全性和功效測試。給予小鼠單劑量的寡核苷酸。使用自動臨床化學分析儀（日立奧林巴斯Au400e，梅爾維爾，紐約）測量轉胺酶的血漿水平。將導致超出反義寡核苷酸的預期範圍的ALT和/或AST的水平變化的ISIS寡核苷酸在進一步研究中排除。ISIS 863413、ISIS 863419、ISIS 863424、ISIS 863425、ISIS 863427、ISIS 863433、ISIS 863434、ISIS 863436、ISIS 863437、ISIS 863438、ISIS 863439、ISIS 863441、ISIS 863444、ISIS 863445、ISIS 863448、ISIS 863452、ISIS 863472、ISIS 863473、ISIS 863474、ISIS 863475、ISIS 863477、ISIS 863479、ISIS 863480、ISIS 863481、ISIS 863482、ISIS 863483、ISIS 863484、ISIS 863485、ISIS 863486、ISIS 863489、ISIS 863490、ISIS 863491、ISIS 863493、ISIS 863494、ISIS 863495、ISIS 863496、ISIS 863497、ISIS 863498、ISIS 863499、ISIS 863502、ISIS 863506、ISIS 863507、ISIS 863509、ISIS 863510、ISIS 863511、ISIS 863512、ISIS 863514、ISIS 863516、ISIS 863517、ISIS 863518、ISIS 863520、ISIS 863522、ISIS 863524、ISIS 863525、ISIS 863526、ISIS 863527、ISIS 863531、ISIS 863533、ISIS 863536、ISIS 863537、ISIS 863538、ISIS 863539、ISIS 863541、ISIS 863545、ISIS 863547、ISIS 863548、ISIS 863549、ISIS 863550、ISIS 863552、以及ISIS 863553在此研究中被認為是可耐受的，並且被選擇用於進一步評估。 實例 4 ：在轉基因小鼠模型中 PCSK9 的反義抑制的作用
使用人類 PCSK9基因組構建體在UCI開發轉基因小鼠模型，該構建體包含在福斯質粒ABC7-611722G24中並用Nhe1限制酶切以產生含有全部基因組序列以及8 Kb的5’和0.4 Kb的3’非編碼序列的DNA片段。經微核注射藉由隨機插入產生PCSK9轉基因小鼠。子代在肝中表現人類PCSK9 mRNA，並分泌人類PCSK9血漿蛋白。
在此模型（在此被稱為Tg小鼠）中評估3’-THA-軛合的ISIS寡核苷酸的功效。將測試的ISIS寡核苷酸呈現在下表中。‘母體ISIS編號’表明已經在上述研究中描述、並且與3’-THA軛合的並在此研究中進行測試的ISIS寡核苷酸。 [ 表 24]在Tg小鼠中測試ISIS寡核苷酸
ISIS編號 序列 母體ISIS編號 SEQ ID NO
863413 GAGGTATCCCCGGCGG 466847 1096
863419 GTCTAGGAGATACACC 848323 1419
863424 CATTTTAAAGCTCAGC 848539 1297
863425 GACAAGTCGGAACCAT 848542 1528
863427 TTGAATGGTGAAATGC 848567 1145
863433 GGACATCGGCACATTG 848583 1223
863434 ACGGACATCGGCACAT 848584 377
863436 AGCTCAATAAAAGTCA 848593 763
863437 CGGAACAAGAGCTCAA 848596 994
863438 ACGGAACAAGAGCTCA 848597 1071
863439 CACGGAACAAGAGCTC 848598 1147
863441 GATGAGGGCCATCAGC 848618 1302
863444 CAGAAAGCTAAGCCTC 848630 1149
863445 CTAGATGCCATCCAGA 848632 455
863448 TCCTAGGTGATGGCTC 848649 1380
863452 GCGAATGTGTACCCTG 848670 691
863472 GGAAAAAGTTCCATGC 848736 926
863473 GTGATAACGGAAAAAG 848740 1233
863474 TGCCTTAGAAGCATCT 848748 619
863475 AAAGATAAATGTCTGC 848756 388
863477 GGCAACAGAGAGGACA 848761 1542
863479 AGCAAAACAGGTCTAG 848770 1158
863480 TTCAAGTTACAAAAGC 848771 1235
863481 CCCAGAATAAATATC 848772 389
863482 TGCTACAAAACCCAG 848774 1312
863483 CCAAATCGGAACCCAC 848790 1240
863484 CGAGAATACCTCCGCC 848795 549
863485 GCTGAGTAAGGACTTG 848811 550
863486 AGAAAGTCAAAGGCTC 848814 781
863489 TACATTTCAGACGGTG 848832 939
863490 AATAATCTCATGTCAG 848833 1016
863491 AGGCAGTAATGGGCAA 848838 1243
863493 TCATGAATCAAGTCCA 848844 629
863494 CAAATTATAGCAGCCA 848849 1017
863495 AACAAATTATAGCAGC 848850 1092
863496 TCCAACACTGAGGACC 848854 1244
863497 CTACAAATGCAGGCAG 848875 554
863498 CTCGACAACAGGTTTT 848890 478
863499 ACCAAATGCGGACCAA 848898 1094
863502 GCAATTCGGTTTGTCC 848971 563
863506 GGAAAGGAACAGGCTC 849013 410
863507 CTCCACTGAAGAGGTC 849016 1411
863509 GACAATGAAGAGGAGA 849021 721
863510 GTTAAGAGTGCAGGGT 849030 1258
863511 ACAGAGAAATGCATGC 849036 645
863512 GTTATTATTGAATGGT 849040 955
863514 GTTAATAATGCCCCCG 849048 1413
863516 ACAACTGGATACATTG 849071 881
863517 CAATAGGCATCTACCA 849084 648
863518 ACTCATCAATAGGCAT 849085 725
863520 CCTCAGGTGGAATCAG 849106 1111
863522 GGAGAATAACAGTGAT 849123 1188
863524 ATAGACAAGGAAAGGG 849135 885
863525 GTCTAGAAAAAGTCCT 849162 504
863526 AGGAAAGTCTCAGGGC 849169 1043
863527 CTGTAGGAAAGTCTCA 849171 1195
863531 ACAGCTGCTAGTTATT 849189 426
863533 TGCTACTGTCAACAGT 849205 427
863536 GGAAGATATTAGCAAT 849227 585
863537 GCGGATTTCAGACTTG 849233 1047
863538 CAACATCAAATTCTGC 849236 353
863539 GAAGACGGAGTAAGGC 849239 1352
863541 TTCTAAGTGCCACGGG 849267 1203
863545 CTATCCTGTAGCATCA 849305 1516
863547 GGAGAAGTAAGGTCAC 849331 1213
863548 AGGAGAAGTAAGGTCA 849332 367
863549 ATTTTAAAGCAACGGG 849345 1061
863550 CCTACATGCCAGCCTG 849354 523
863552 TCTGAACATGGTAGGG 849358 831
863553 GTAAGATGGAAAGAGA 849359 908
處理
將 PCSK9轉基因小鼠保持在12小時光暗循環，並以任意量餵養正常的Purina小鼠食物。在開始實驗之前，動物在研究設備中適應至少7天。在緩衝鹽水（PBS）中製備反義寡核苷酸（ASO）並通過0.2微米過濾器過濾滅菌。將寡核苷酸溶解於0.9% PBS中用於注射。
PCSK9轉基因小鼠以2.5 mg/kg的劑量每週兩次，持續2週接受ISIS寡核苷酸皮下注射。兩組小鼠接受PBS皮下注射，持續2週。將鹽水注射的組作為對照組，將寡核苷酸處理的組與其進行比較。 血漿化學標記物
為評估ISIS寡核苷酸對該等小鼠的肝和腎功能的影響，使用自動臨床化學分析儀（日立奧林巴斯（Hitachi Olympus）Au400e，梅爾維爾，紐約）在第12天測量轉胺酶（ALT和AST）、膽固醇（CHOL）、HDL膽固醇（HDL）、LDL膽固醇（LDL）、和甘油三酯（TRIG）的血漿水平。結果呈現在下表中。將導致超出反義寡核苷酸的預期範圍的任何肝或腎功能標記物的水平變化的ISIS寡核苷酸在進一步的研究中排除。 [ 表 25]在Tg小鼠血漿中的血漿化學標記物
治療 ALT （IU/L ） AST （IU/L ） CHOL （mg/dL ） HDL （mg/dL ） LDL （mg/dL ） TRIG （mg/dL ）
PBS 17 37 114 73 35 65
PBS 23 102 105 68 32 76
863413 19 72 122 88 24 89
863419 15 44 115 73 31 104
863424 18 34 197 112 79 105
863425 25 53 143 101 36 104
863427 22 96 113 75 28 127
863433 17 54 92 67 19 61
863434 24 36 132 98 35 102
863436 17 50 124 81 31 96
863437 21 69 126 91 30 81
863438 18 66 57 39 15 54
863439 42 173 111 78 22 107
863441 20 57 84 58 20 56
863444 19 41 149 101 42 116
863445 20 36 169 111 48 111
863448 24 44 107 69 29 79
863452 20 67 114 78 23 100
863472 35 55 105 71 26 89
863473 23 67 152 105 38 130
863474 21 115 118 78 32 45
863475 23 87 179 112 62 92
863477 67 142 222 137 73 69
863479 29 60 142 96 32 90
863480 19 52 122 88 25 53
863481 28 50 223 132 70 115
863482 20 43 168 105 46 129
863483 19 34 174 110 47 139
863484 25 71 64 38 21 66
863485 19 71 170 113 42 110
863486 18 40 117 78 28 121
863489 38 68 90 66 18 89
863490 19 41 99 71 19 113
863491 20 40 148 99 35 146
863493 18 74 107 73 26 59
863494 19 41 149 106 32 104
863495 17 34 136 95 32 116
863496 545 275 136 97 31 29
863497 36 49 121 84 28 53
863498 23 44 181 122 42 98
863499 21 51 128 102 18 58
863502 34 144 116 84 22 86
863506 30 44 188 119 51 108
863507 19 46 108 78 18 100
863509 23 63 121 80 28 115
863510 40 71 149 111 28 51
863511 31 61 101 70 23 83
863512 21 52 83 59 14 103
863514 22 65 99 69 23 64
863516 18 52 117 73 33 122
863517 25 98 113 74 27 125
863518 35 116 96 65 23 70
863520 21 102 107 68 31 76
863522 31 55 89 56 24 77
863524 49 61 154 104 43 94
863525 20 58 208 116 66 155
863526 32 82 159 114 37 59
863527 25 112 98 66 23 101
863531 835 454 268 149 67 84
863533 0 109 276 152 80 98
863536 22 68 120 75 28 181
863537 29 102 134 97 27 52
863538 16 42 126 76 39 89
863539 22 53 100 65 25 64
863541 19 41 98 66 23 115
863545 28 53 109 73 25 114
863547 22 41 119 80 30 71
863548 550 433 188 125 33 60
863549 17 36 109 70 33 72
863550 32 62 158 98 43 77
863552 18 55 113 71 33 79
863553 18 43 103 62 30 86
實例 5 ：在 CD1 小鼠中靶向人類 PCSK9 的 ISIS 寡核苷酸的可耐受性
將從以上研究中選擇的ISIS寡核苷酸與5’-三己基胺基-(THA)-C6GalNAC3端帽（此後被稱為5’-THA）軛合。CD1®小鼠（Charles River，MA）係多重目的的小鼠模型，頻繁用於安全性和功效測試。用從以上描述的研究中選擇的與5’-THA係軛合的ISIS反義寡核苷酸治療小鼠，並且評估不同血漿化學標記物的水平中的變化。 研究1 治療
將雄性CD1小鼠的組用15 mg/kg的ISIS寡核苷酸每週一次持續6週進行皮下注射。將一組雄性CD1小鼠用PBS每週一次持續6週進行皮下注射。在最後給藥之後48小時，使小鼠安樂死，並且收穫器官和血漿用於進一步分析。
將測試的ISIS寡核苷酸呈現在下表中。‘未軛合的母體ISIS編號.’係指在上述體外研究中描述的具有相同序列的ISIS寡核苷酸。‘3’-THA對應物ISIS編號.’係指具有相同序列並且在上述轉基因小鼠研究中進行評估的3’THA軛合的寡核苷酸。 [ 表 26]在CD1小鼠可耐受性研究中測試的ISIS寡核苷酸
ISIS編號 未軛合的母體ISIS編號 3'-THA對應物ISIS編號 序列 SEQ ID NO
863576 848583 863433 GGACATCGGCACATTG 1223
863633 848833 863490 AATAATCTCATGTCAG 1016
863655 849040 863512 GTTATTATTGAATGGT 955
863670 849171 863527 CTGTAGGAAAGTCTCA 1195
863681 849236 863538 CAACATCAAATTCTGC 353
血漿化學標記物
為評估ISIS寡核苷酸對肝和腎功能的影響，使用自動臨床化學分析儀（日立奧林巴斯Au400e，梅爾維爾，紐約）測量轉胺酶、膽紅素、肌酸酐、和BUN的血漿水平。結果呈現在下表中。用ISIS寡核苷酸的治療不引起超出反義寡核苷酸的預期範圍的任何肝或腎功能標記物水平的變化。 [ 表 27]在第45天CD1小鼠血漿中的血漿化學標記物
ALT（IU/L） AST（IU/L） ALB（g/dL） BUN（mg/dL） CRE（mg/dL） TBIL（mg/dL）
PBS 25 41 2.6 20.1 0.07 0.13
ISIS 863576 125 134 2.8 24.5 0.10 0.14
ISIS 863633 35 60 2.6 21.8 0.10 0.14
ISIS 863655 77 84 2.4 20.0 0.06 0.13
ISIS 863670 25 61 2.7 22.5 0.09 0.15
ISIS 863681 27 47 2.8 26.5 0.12 0.14
血液測定
對獲得自所有小鼠組中的血液分析以下項：RBC、WBC、血小板、中性粒細胞、淋巴細胞、和單核細胞計數、連同血紅蛋白、HCT以及MCV水平。結果呈現在下表中。用ISIS寡核苷酸的治療不引起超出反義寡核苷酸的預期範圍的任何血液標記物水平的變化。 [ 表 28]在第45天CD1小鼠中的血細胞計數
RBC 血小板 WBC 中性粒細胞（x 10 3/µL） 淋巴細胞（x 10 3/µL） 單核細胞（x 10 3/µL）
（x 10 6/µL） （x 10 3/µL） （x 10 3/µL）
PBS 9.0 1288 11.3 12.6 9128 515
863576 8.3 1251 9.4 18.8 6643 316
863633 9.4 1338 10.1 13.5 8009 698
863655 8.9 1320 8.0 10.0 5919 473
863670 9.7 1335 8.3 21.3 6514 402
863681 9.5 1329 7.6 11.0 6376 310
[ 表 29]在第45天CD1小鼠中的血液標記物
血紅蛋白（g/dL） HCT（%） MCV（fL）
PBS 14.0 43 48
863576 12.9 40 48
863633 14.6 45 49
863655 14.1 44 50
863670 14.7 44 46
863681 14.6 45 47
身體重量和器官重量測量值
為評估ISIS寡核苷酸對該等動物的整體健康狀況的影響，測量體重和器官重量。每週測量體重，並且呈現在下表中。測量器官重量，並且還將數據呈現在下表中。該等結果表明用反義寡核苷酸治療對體重和器官重量的影響係在反義寡核苷酸的預期範圍內。 [ 表 30]CD1小鼠中的體重（g）
基線（第1天） 第1週（第8天） 第2週（第15天） 第3週（第22天） 第4週（第29天） 第5週（第36天） 第6週（第43天）
PBS 46 48 49 48 50 49 49
863576 29 33 35 36 38 38 39
863633 27 32 33 34 36 37 39
863655 28 33 33 35 37 38 39
863670 27 31 32 33 36 36 38
863681 28 33 33 35 37 38 40
[ 表 31]在CD1小鼠中的器官重量（g）
肝 脾 腎
PBS 2.25 0.16 0.63
863576 2.32 0.19 0.59
863633 2.25 0.11 0.50
863655 2.55 0.15 0.61
863670 1.89 0.11 0.51
863681 2.25 0.10 0.47
研究2 治療
將雄性CD1小鼠的組用15 mg/kg的ISIS寡核苷酸每週一次持續6週進行皮下注射。將一組雄性CD1小鼠用PBS每週一次持續6週進行皮下注射。在最後給藥之後48小時，使小鼠安樂死，並且收穫器官和血漿用於進一步分析。
將測試的ISIS寡核苷酸呈現在下表中。‘未軛合的母體ISIS編號.’係指在上述體外研究中描述的具有相同序列的ISIS寡核苷酸。‘3’-THA對應物ISIS編號.’係指具有相同序列並且在上述轉基因小鼠研究中進行了描述的3’THA軛合的寡核苷酸。 [ 表 32]在CD1小鼠可耐受性研究中測試的ISIS寡核苷酸
ISIS編號 未軛合的母體ISIS編號 3'-THA對應物ISIS編號 序列 SEQ ID NO
863568 848542 863425 GACAAGTCGGAACCAT 1528
863581 848597 863438 ACGGAACAAGAGCTCA 1071
863582 848598 863439 CACGGAACAAGAGCTC 1147
863587 848630 863444 CAGAAAGCTAAGCCTC 1149
血漿化學標記物
為評估ISIS寡核苷酸對肝和腎功能的影響，使用自動臨床化學分析儀（日立奧林巴斯Au400e，梅爾維爾，紐約）測量轉胺酶、膽紅素、肌酸酐、和BUN的血漿水平。
結果呈現在下表中。用ISIS寡核苷酸的治療不引起超出反義寡核苷酸的預期範圍的任何肝或腎功能標記物水平的變化。 [ 表 33]在第45天CD1小鼠血漿中的血漿化學標記物
ALT（IU/L） AST（IU/L） ALB（g/dL） BUN（mg/dL） CRE（mg/dL） TBIL（mg/dL）
PBS 25 51 2.6 25.8 0.10 0.12
ISIS 863568 72 67 2.6 20.4 0.10 0.14
ISIS 863581 74 77 2.7 25.0 0.10 0.14
ISIS 863582 71 89 2.8 24.4 0.11 0.13
ISIS 863587 60 60 2.5 24.6 0.11 0.10
血液測定
對獲得自所有小鼠組中的血液分析以下項：RBC、WBC、血小板、中性粒細胞、淋巴細胞、和單核細胞計數、連同血紅蛋白、HCT以及MCV水平。結果呈現在下表中。用ISIS寡核苷酸的治療不引起超出反義寡核苷酸的預期範圍的任何血液標記物水平的變化。 [ 表 34]在第45天CD1小鼠中的血細胞計數
RBC 血小板 WBC 中性粒細胞（x 10 3/µL） 淋巴細胞（x 10 3/µL） 單核細胞（x 10 3/µL）
（x 10 6/µL） （x 10 3/µL） （x 10 3/µL）
PBS 9.6 853 3.9 12 3174 129
863568 10.3 859 7.8 15 6060 347
863581 9.4 812 8.0 17 6162 359
863582 9.1 868 10.5 21 6671 713
863587 9.6 903 9.8 10 8233 344
[ 表 35]在第45天CD1小鼠中的血液標記物
血紅蛋白（g/dL） HCT（%） MCV（fL）
PBS 14.5 44 46
863568 16.2 47 46
863581 14.5 43 46
863582 13.5 41 45
863587 15.0 45 47
身體重量和器官重量測量值
為評估ISIS寡核苷酸對該等動物的整體健康狀況的影響，測量體重和器官重量。每週測量體重，並且呈現在下表中。測量器官重量，並且還將數據呈現在下表中。該等結果表明用反義寡核苷酸治療對體重和器官重量的影響係在反義寡核苷酸的預期範圍內。 [ 表 36]CD1小鼠中的體重（g）
基線（第1天） 第1週（第9天） 第2週（第16天） 第3週（第23天） 第4週（第30天） 第5週（第37天） 第6週（第43天）
PBS 30 33 36 36 37 39 39
863568 29 32 34 34 36 39 38
863581 29 33 35 36 36 39 39
863582 31 34 36 36 37 40 41
863587 30 35 37 37 39 41 43
[ 表 37]在CD1小鼠中的器官重量（g）
肝 脾 腎
PBS 2.06 0.11 0.59
863568 2.46 0.10 0.54
863581 2.23 0.13 0.56
863582 2.52 0.16 0.63
863587 2.94 0.16 0.64
研究3 治療
將雄性CD1小鼠的組用5 mg/kg或15 mg/kg的ISIS寡核苷酸每週一次持續6週進行皮下注射。將一組雄性CD1小鼠用PBS每週一次持續6週進行皮下注射。在最後給藥之後48小時，使小鼠安樂死，並且收穫器官和血漿用於進一步分析。
將測試的ISIS寡核苷酸呈現在下表中。‘未軛合的母體ISIS編號.’係指在上述體外研究中描述的具有相同序列的ISIS寡核苷酸。‘3’-THA對應物ISIS編號.’係指具有相同序列並且在上述轉基因小鼠研究中進行了描述的3’THA軛合的寡核苷酸。 [ 表 38]在CD1小鼠可耐受性研究中測試的ISIS寡核苷酸
ISIS編號 未軛合的母體ISIS編號 3'-THA對應物ISIS編號 序列 SEQ ID NO
845219 466847 863413 GAGGTATCCCCGGCGG 1096
863577 848584 863434 ACGGACATCGGCACAT 377
863579 848593 863436 AGCTCAATAAAAGTCA 763
863637 848849 863494 CAAATTATAGCAGCCA 1017
863682 849239 863539 GAAGACGGAGTAAGGC 1352
血漿化學標記物
為評估ISIS寡核苷酸對肝和腎功能的影響，使用自動臨床化學分析儀（日立奧林巴斯Au400e，梅爾維爾，紐約）測量轉胺酶、膽紅素、肌酸酐、和BUN的血漿水平。
結果呈現在下表中。將導致超出反義寡核苷酸的預期範圍的任何肝或腎功能標記物的水平變化的ISIS寡核苷酸在進一步的研究中排除。 [ 表 39]在第45天CD1小鼠血漿中的血漿化學標記物
劑量（mg/kg） ALT（IU/L） AST（IU/L） ALB（g/dL） BUN（mg/dL） CRE（mg/dL） TBIL（mg/dL）
PBS - 26 62 2.5 19.5 0.08 0.18
845219 5 96 64 2.4 19.3 0.08 0.15
15 187 115 2.3 22.0 0.07 0.17
863577 5 176 160 2.5 17.2 0.09 0.13
15 621 492 2.5 15.6 0.10 0.20
863579 5 50 50 2.5 19.9 0.10 0.13
15 87 70 2.4 20.3 0.11 0.13
863637 5 321 301 1.7 19.3 0.05 0.19
15 508 472 2.4 20.5 0.09 0.22
863682 5 306 156 2.3 20.0 0.06 0.13
15 373 212 2.4 21.0 0.06 0.14
血液測定
對獲得自所有小鼠組中的血液分析以下項：RBC、WBC、血小板、中性粒細胞、淋巴細胞、和單核細胞計數、連同血紅蛋白、HCT以及MCV水平。結果呈現在下表中。將導致超出反義寡核苷酸的預期範圍的任何血液標記物的水平變化的ISIS寡核苷酸在進一步的研究中排除。 [ 表 40]在第45天CD1小鼠中的血細胞計數
   劑量（mg/kg） RBC （x 10 6/µL） 血小板 （x 10 3/µL） WBC （x 10 3/µL） 中性粒細胞（x 10 3/µL） 淋巴細胞（x 10 3/µL） 單核細胞（x 10 3/µL）
PBS - 9.4 1218 8.8 13 7078 367
845219 5 9.4 1349 7.2 13 5749 444
15 9.3 1263 7.2 13 5664 511
863577 5 9.2 1401 8.0 17 5851 650
15 8.2 1299 10.0 10 7718 1034
863579 5 10.0 1252 9.0 16 6876 587
15 9.6 1256 8.2 11 6645 415
863637 5 9.0 956 5.7 14 4266 448
15 9.3 843 6.8 13 5044 696
863682 5 9.4 1040 5.9 13 4581 447
15 9.0 800 8.3 8 6757 694
[ 表 41]在第45天CD1小鼠中的血液標記物
劑量（mg/kg） 血紅蛋白（g/dL） HCT（%） MCV（fL）
PBS - 14.1 45 48
845219 5 14.2 45 49
15 13.8 43 46
863577 5 13.9 45 49
15 12.2 39 48
863579 5 14.9 47 48
15 15.3 48 50
863637 5 13.5 42 47
15 13.8 43 47
863682 5 14.5 45 48
15 13.6 43 48
身體重量和器官重量測量值 為評估ISIS寡核苷酸對該等動物的整體健康狀況的影響，測量體重和器官重量。每週測量體重，並且呈現在下表中。測量器官重量，並且還將數據呈現在下表中。該等結果表明用該反義寡核苷酸治療對體重和器官重量的影響係在反義寡核苷酸的預期範圍內。 [ 表 42]CD1小鼠中的體重（g）
劑量（mg/kg） 基線（第1天） 第1週（第8天） 第2週（第15天） 第3週（第22天） 第4週（第29天） 第5週（第36天） 第6週（第42天）
PBS - 27 30 32 32 33 35 35
845219 5 28 33 34 35 37 40 39
15 29 33 34 35 36 38 38
863577 5 26 31 32 33 34 37 35
15 27 31 31 32 34 36 35
863579 5 28 32 33 32 36 38 36
15 27 32 33 32 36 38 37
863637 5 28 33 34 35 36 37 38
15 27 32 34 34 36 38 38
863682 5 26 32 33 32 35 37 36
15 27 31 32 33 34 36 36
[ 表 43]CD1小鼠中的器官重量（g）
劑量（mg/kg） 肝 脾 腎
PBS - 1.84 0.08 0.50
845219 5 2.42 0.13 0.54
15 2.41 0.15 0.54
863577 5 2.47 0.11 0.58
15 2.62 0.15 0.59
863579 5 2.53 0.13 0.57
15 2.82 0.12 0.54
863637 5 2.38 0.17 0.52
15 2.67 0.22 0.58
863682 5 1.79 0.11 0.54
15 2.13 0.21 0.53
實例 6 ：靶向人類 PCSK9 的 ISIS 寡核苷酸在史－道二氏大鼠中的可耐受性
史－道二氏大鼠係用於安全性和功效測試的多重目的的模型。用來自以上實例中描述的研究中的ISIS反義寡核苷酸治療大鼠，並且評估不同血漿化學標記物水平方面的變化。 治療
將雄性史－道二氏大鼠保持在12小時光暗循環中，並以任意量餵養正常的Purina大鼠食物，飲食5001。用15 mg/kg的ISIS寡核苷酸皮下注射每組4隻的史－道二氏大鼠，每週一次，持續6週。在最後給藥之後48小時，使大鼠安樂死，並且收穫器官和血漿用於進一步分析。 肝功能
為評估ISIS寡核苷酸對肝功能的影響，使用自動臨床化學分析儀（日立奧林巴斯Au400e，梅爾維爾，紐約）測量轉胺酶的血漿水平。測量ALT（丙胺酸轉胺酶）和AST（天冬胺酸轉胺酶）的血漿水平，並且將該等結果呈現在下表中，以IU/L表示。使用相同的臨床化學分析儀還測量了膽紅素（TBIL）、BUN、白蛋白（ALB）、和肌酸酐（CRE）的血漿水平，並且將該等結果還呈現在下表中，以mg/dL表示。使用相同的臨床化學分析儀還測量了白蛋白的血漿水平並且將該等結果還呈現在下表中，以g/dL表示。 [ 表 44 ]在史－道二氏大鼠中的肝功能標記物
ALT（IU/L） AST（IU/L） ALB（g/dL） BUN（mg/dL） CRE（mg/dL） TBIL（mg/dL）
PBS 20 64 3.1 13 0.2 0.1
863568 40 70 3.5 14 0.2 0.2
863576 39 94 3.7 16 0.3 0.1
863579 33 91 3.3 14 0.2 0.1
863581 36 154 2.8 18 0.3 0.2
863582 38 122 2.9 20 0.3 0.1
863587 38 87 3.0 12 0.2 0.1
863633 26 78 3.0 16 0.3 0.1
863655 27 84 3.1 15 0.2 0.1
863670 30 91 3.2 15 0.2 0.1
863681 29 81 3.2 14 0.2 0.1
腎功能
為評估ISIS寡核苷酸對腎功能的影響，使用自動臨床化學分析儀（日立奧林巴斯Au400e，梅爾維爾，紐約）測量血肌酸酐和總蛋白的尿水平。結果呈現在下表中，以mg/dL表示。將導致超出反義寡核苷酸的預期範圍的任何腎功能標記物的水平變化的ISIS寡核苷酸在進一步的研究中排除。‘N/A’表明數據對該組係不可用的。 [ 表 45]在史－道二氏大鼠中的腎功能標記物（mg/dL）
CRE（mg/dL） TP（mg/dL）
PBS 79 59
863568 111 137
863576 N/A N/A
863579 93 117
863581 54 75
863582 71 91
863587 64 86
863633 100 85
863655 85 117
863670 89 104
863681 144 142
身體重量和器官重量
為評估ISIS寡核苷酸對該等動物的整體健康狀況的影響，測量體重和器官重量。每週測量體重，並且呈現在下表中。測量器官重量，並且還將數據呈現在下表中。該等結果表明用反義寡核苷酸治療對體重和器官重量的影響係在反義寡核苷酸的預期範圍內。 [ 表 46]體重（g）
基線（第1天） 第1週（第8天） 第2週（第15天） 第3週（第22天） 第4週（第29天） 第5週（第36天） 第6週（第43天）
PBS 201 267 344 389 433 451 470
863568 200 265 334 371 404 419 435
863576 272 327 361 389 417 424 435
863579 264 313 357 379 407 420 430
863581 195 258 329 361 397 411 430
863582 204 273 350 387 423 440 458
863587 205 273 353 398 439 459 474
863633 271 319 361 377 401 406 417
863655 195 256 330 366 406 417 435
863670 189 249 319 351 384 394 406
863681 275 312 364 386 415 426 435
[ 表 47]器官重量（g）
肝 脾 腎
PBS 12 0.8 3.4
863568 16 1.2 3.3
863576 12 1.3 3.0
863579 11 1.0 3.0
863581 13 2.0 3.1
863582 14 2.1 3.5
863587 14 1.1 3.4
863633 12 1.6 3.2
863655 11 1.7 3.4
863670 12 1.0 2.9
863681 12 1.1 3.3
實例 7 ：在轉基因小鼠模型中 PCSK9 的反義抑制的作用在UCI開發轉基因小鼠模型，並已經在文獻中進行了描述。包含在福斯質粒ABC7-611722G24中的人類 PCSK9基因組構建體用Nhe1限制酶切以產生含有全部基因組序列以及8 Kb的5’和0.4 Kb的3’非編碼序列的DNA片段。經微核注射藉由隨機插入產生PCSK9轉基因小鼠。子代在肝中表現人類PCSK9 mRNA，並分泌人類PCSK9血漿蛋白。 治療
將轉基因小鼠保持在12小時光暗循環，並以任意量餵養正常的Purina小鼠食物。在開始實驗之前，動物在研究設備中適應至少7天。在緩衝鹽水（PBS）中製備反義寡核苷酸（ASO）並通過0.2微米過濾器過濾滅菌。將寡核苷酸溶解於0.9% PBS中用於注射。
將Tg小鼠分成每組3隻小鼠的27個組。使該等組以0.25 mg/kg、1.00 mg/kg、或5.00 mg/kg的劑量接受ISIS寡核苷酸皮下注射，每週一次，持續4週。使4隻小鼠的一組接受PBS皮下注射，每週一次，持續4週。將鹽水注射的組作為對照組，將寡核苷酸處理的組與其進行比較。 RNA分析
在第26天，從肝中提取RNA用於PCSK9的mRNA表現的測量的即時PCR分析。結果呈現為相對於PBS對照，用RIBOGREEN ®標準化的mRNA變化的百分比。如下表中所示的，與PBS對照相比，用ISIS反義寡核苷酸的治療導致PCSK9 mRNA的顯著降低。 [ 表 48]相對於PBS對照，轉基因小鼠肝中PCSK9 mRNA的抑制百分比
每週的劑量（mg/kg ） 抑制% ED 50
863568 0.25 26 0.5
1 76
5 95
863579 0.25 9 1.4
1 41
5 84
863581 0.25 12 0.6
1 73
5 80
863582 0.25 32 0.5
1 71
5 91
863587 0.25 27 0.5
1 71
5 87
863633 0.25 60 0.2
1 96
5 99
863655 0.25 37 0.3
1 94
5 99
863670 0.25 0 1.0
1 62
5 87
863681 0.25 25 0.9
1 45
5 94
蛋白質分析
藉由人類特異性ELISA試劑盒（R&D系統公司（R&D Systems））測量PCSK9血漿蛋白。結果呈現為相對於PBS對照，蛋白質水平變化的百分比。如下表中所示的，與PBS對照相比，用ISIS反義寡核苷酸的治療導致PCSK9血漿蛋白水平的顯著降低。 [ 表 49]相對於PBS對照，轉基因小鼠中PCSK9血漿蛋白的抑制百分比
每週的劑量（mg/kg ） 抑制% ED 50
863568 0.25 37 0.4
1 74
5 97
863579 0.25 5 1.5
1 41
5 81
863581 0.25 31 0.6
1 59
5 91
863582 0.25 25 0.5
1 73
5 95
863587 0.25 33 0.4
1 77
5 93
863633 0.25 50 0.3
1 97
5 99
863655 0.25 44 0.3
1 93
5 99
863670 0.25 23 1.6
1 38
5 72
863681 0.25 28 0.8
1 54
5 89
LDL-膽固醇水平
藉由自動臨床化學分析儀（日立奧林巴斯Au400e，梅爾維爾，紐約）測量血漿中的LDL-膽固醇水平。還測量了肝中LDL受體（LDLr)蛋白質的水平。結果呈現為相對於PBS對照，水平變化的百分比。如下表中所示的，與PBS對照相比，用若干ISIS反義寡核苷酸的治療導致血漿中LDL-膽固醇水平的顯著降低。相應地，觀察到用ISIS反義寡核苷酸的治療導致小鼠中劑量依賴性肝LDLr蛋白的增加。 [ 表 50]相對於PBS對照，血漿中LDL-膽固醇水平的抑制
每週的劑量（mg/kg ） % 抑制
863568 0.25 7
1 41
5 59
863579 0.25 0
1 15
5 33
863581 0.25 30
1 17
5 41
863582 0.25 23
1 28
5 50
863587 0.25 20
1 38
5 38
863633 0.25 27
1 66
5 71
863655 0.25 29
1 58
5 74
863670 0.25 19
1 0
5 39
863681 0.25 21
1 23
5 35
[ 表 51]相對於PBS對照，轉基因小鼠中肝LDLr的增加百分比
每週的劑量（mg/kg ） % 增加
863568 0.25 3
1 61
5 245
863579 0.25 -46
1 -5
5 132
863581 0.25 -44
1 6
5 73
863582 0.25 -19
1 93
5 191
863587 0.25 -6
1 -10
5 95
863633 0.25 -22
1 131
5 269
863655 0.25 0
1 129
5 207
863670 0.25 9
1 81
5 78
863681 0.25 123
1 360
5 222
實例 8 ：靶向人類 PCSK9 的反義寡核苷酸的黏度的測量
測量來自以上描述的研究中選擇的反義寡核苷酸的黏度，其目的是篩選出具有高於40 厘泊（cP）的黏度的反義寡核苷酸。具有黏度高於40 cP的寡核苷酸將具有小於最佳的黏度。
將寡核苷酸（32 mg-35 mg）稱量到玻璃小瓶中，添加120 µL水，並且藉由在50ºC下加熱該小瓶將反義寡核苷酸溶解到溶液中。將預加熱的樣品的一部分（75 µL）用移液管移至微黏度計（劍橋）中。將微黏度計的溫度設置為25ºC，並且測量該樣品的黏度。將預加熱的樣品的另一部分（20 µL）用移液管移至10 mL水中用於在85ºC下在260 nM處進行UV讀數（卡裡UV儀器（Cary UV instrument））。將該等結果呈現在下表中，其中每種反義寡核苷酸的濃度係350 mg/ml，並且表明所有的反義寡核苷酸溶液在上述標準下處於其最佳黏度。 [ 表 52]靶向人類PCSK9的反義寡核苷酸的黏度
ISIS 編號 黏度（cP ） 濃度（mg/mL ）
863568 39 325
863576 20 325
863579 19 325
863581 25 300
863582 17 300
863587 14 325
863633 12 325
863655 10 325
863670 21 325
863681 15 325
實例 9 ：在食蟹猴中靶向人類 PCSK9 的 ISIS 反義寡核苷酸的作用
用從以上實例中描述的研究中選擇的ISIS反義寡核苷酸治療食蟹猴。評估反義寡核苷酸的功效和可耐受性，以及肝和腎中它們的藥物動力學曲線。
在進行這項研究的時候，食蟹猴基因組序列在國家生物技術資訊中心（NCBI）資料庫係不可得的；因此，無法確認與食蟹猴基因序列的交叉反應性。作為替代，將食蟹猴中所用的ISIS反義寡核苷酸的序列與恒河猴序列針對同源性進行比較。預期的是與恒河猴序列具有同源性的ISIS寡核苷酸也與食蟹猴序列具有完全交叉反應性。所測試的人類反義寡核苷酸與恒河猴基因組序列（從核苷酸83474000至83501000截短的基因庫登錄號NW_005092960.1的互補體，在此指定為SEQ ID NO: 1544）具有交叉反應性。人類寡核苷酸與恒河猴序列之間的互補性越高，人類寡核苷酸越有可能可以與恒河猴序列交叉反應。SEQ ID NO: 1544的每種寡核苷酸的起始位點和終止位點呈現在下表中。“起始位點”指示缺口體所靶向的恒河猴基因序列中的最5’核苷酸。 [ 表 53]與恒河猴PCSK9基因組序列（SEQ ID NO: 1544）互補的反義寡核苷酸
ISIS編號 靶起始位點 錯配 靶終止位點 SEQ ID NO
863568 25252 1 25267 1528
863579 25510 2 25525 763
863581 25520 1 25535 1071
863582 25521 1 25536 1147
863587 25712 2 25727 1149
863633 3911 0 3926 353
863655 10464 1 10479 1195
863670 15306 0 15321 1223
863681 17270 0 17285 955
處理
在研究之前，將猴保持隔離，在此期間每天觀察該等動物的一般健康狀況。該等猴子年齡係2-4歲，並且重2-4 kg。用ISIS寡核苷酸或PBS對每組5隻隨機分配的雄性食蟹猴的9個組在猴子的後背上的四個不同位置（即，左、右、上、和下）之間以順時針轉，每天給藥，一個位置一次劑量進行皮下注射。在最初的兩週，用10 mg/kg的ISIS寡核苷酸對該等猴子一週給藥兩次（第1、5、9、和14天），並然後隨後一週一次，持續10週（第21、28、35、42、49、56、63、70、77、和84天）。以類似的方式用PBS注射5隻食蟹猴的對照組，並作為對照組。
在研究期間，每天觀察兩次猴子，看是否有疾病或痛苦跡象。由於治療、傷害或疾病而經歷短暫或輕微疼痛或痛苦的任何動物，在與研究負責人協商後由獸醫工作人員使用經批准的鎮痛藥或藥物來緩解疼痛。任何健康狀況不佳或處於可能瀕死狀態的動物都被確定為進一步監測和可能的安樂死。在深度麻醉下，在第86天給藥後大約48小時藉由放血進行動物的安排的安樂死。在該實例中描述的方案得到了研究機構動物護理和使用委員會（IACUC）的批准。 靶標減少 RNA分析
在第86天，從肝中提取RNA用於PCSK9的mRNA表現的測量的即時PCR分析。結果呈現為相對於PBS對照，用RIBOGREEN ®標準化的mRNA變化的百分比。如下表中所示的，與PBS對照相比，用與恒河猴基因無錯配的ISIS 反義寡核苷酸ISIS 863633、ISIS 863670、和ISIS 863681的治療導致PCSK9 mRNA的顯著降低。 [ 表 54]相對於PBS對照，在食蟹猴肝中PCSK9 mRNA的抑制百分比
%抑制
863655 46
863633 88
863568 74
863579 35
863582 55
863581 53
863587 36
863670 84
863681 87
蛋白質分析
從所有可用的動物中在第 -7天（預處理）、第16、30、58、和86天（分別在第14、28、56、和84天大約48小時給藥後）採集大約1 mL的血液，並置於含有EDTA的鉀鹽的管中。將該等管離心（在4ºC下以3000 rpm持續10 min）以獲得血漿。將該等結果作為超過在第-7天（預處理水平）水平的增加或減少百分比呈現在下表中。如下表中所示的，用與恒河猴基因無錯配的ISIS 反義寡核苷酸ISIS 863633、ISIS 863670、和ISIS 863681的治療導致PCSK9蛋白水平的顯著降低。
針對LDL受體（LDLr）蛋白誘導水平的水平還對肝組織進行分析。結果呈現在下表中。該數據表明治療12週後，用與恒河猴基因組序列同源的三種反義寡核苷酸的治療導致肝的LDLr蛋白誘導。 [ 表 55]在食蟹猴中的血漿蛋白水平（%預處理水平）
第16天 第30天 第86天
PBS 34 36 18
863655 -13 -2 -36
863633 -90 -91 -91
863568 -19 -14 -22
863579 34 36 18
863582 8 2 35
863581 16 8 11
863587 -3 1 -12
863670 -79 -83 -86
863681 -80 -82 -86
[ 表 56]在食蟹猴中肝的LDLr蛋白質水平（% PBS對照）
%增加
863655 98
863633 399
863568 243
863579 163
863582 115
863581 156
863587 158
863670 521
863681 417
血脂水平
為評估ISIS寡核苷酸對總膽固醇、LDL-膽固醇、HDL-膽固醇、和甘油三酯水平的影響，在血液採集之前使猴子禁食過夜。從所有研究組中採集大約1.7 mL的血液樣品。將血液採集在管中，無需用於血清分離的抗凝劑。將該等管在室溫下保持最少90分鐘，並然後在室溫下以3,000 rpm離心10分鐘以獲得血清。使用Toshiba 200FR NEO化學分析儀（東芝公司（Toshiba Co.），日本）測量水平。該數據表明用與恒河猴基因組序列同源的三種反義寡核苷酸的治療導致血漿總膽固醇和LDL-膽固醇的顯著降低。如預期，人類PCSK9水平的降低不影響血漿HDL-膽固醇或甘油三酯水平。 [ 表 57]在第86天食蟹猴中的血脂水平（mg/dL）
總膽固醇 LDL-膽固醇 HDL-膽固醇 甘油三酯
PBS 146 37 110 71
863655 152 73 71 46
863633 115 17 99 57
863568 128 32 99 51
863579 109 44 71 45
863582 137 38 103 37
863581 174 51 122 34
863587 140 45 102 35
863670 95 17 83 45
863681 109 19 99 29
可耐受性研究 臨床化學參數
為評估ISIS寡核苷酸對肝功能的影響，在血液採集之前使猴子禁食過夜。從所有研究組中採集大約1.7 mL的血液樣品。將血液採集在管中，無需用於血清分離的抗凝劑。將該等管在室溫下保持最少90分鐘，並然後在室溫下以3,000 rpm離心10分鐘以獲得血清。使用Toshiba 200FR NEO化學分析儀（東芝公司，日本）測量總膽紅素（TBIL）、天冬胺酸轉胺酶（AST）、丙胺酸轉胺酶（ALT）、和白蛋白（ALB）的水平。該等結果表明反義寡核苷酸對肝功能沒有超過反義寡核苷酸的預期範圍的影響。特別地，觀察到ISIS 863633係耐受良好的。 [ 表 58]在第86天食蟹猴中的血漿化學標記物
ALT（IU/L） AST（IU/L） 膽紅素（mg/dL） ALB（g/dL）
PBS 65 64 0.2 4.1
863655 63 59 0.3 3.5
863633 47 70 0.3 4.0
863568 44 64 0.3 4.1
863579 50 52 0.2 4.1
863582 42 57 0.2 4.2
863581 55 61 0.3 4.2
863587 110 76 0.3 3.9
863670 42 64 0.3 4.1
863681 62 60 0.3 4.1
腎功能
為評估ISIS寡核苷酸對腎功能的影響，在血液採集之前使猴子禁食過夜。從所有研究組中採集大約1.7 mL的血液樣品。將血液採集在管中，無需用於血清分離的抗凝劑。將該等管在室溫下保持最少90分鐘，並然後在室溫下以3,000 rpm離心10分鐘以獲得血清。使用Toshiba 200FR NEO化學分析儀（東芝公司，日本）測量BUN和肌酸酐的水平。結果呈現在下表中，以mg/dL表示。
血漿化學數據表明大多數ISIS寡核苷酸對腎功能不具有超過反義寡核苷酸預期範圍的任何影響。特別地，觀察到ISIS 863633係耐受良好的。 [ 表 59]在第86天血漿食蟹猴中的BUN和肌酸酐水平（mg/dL）
BUN 肌酸酐
PBS 31 0.8
863655 26 0.8
863633 27 0.8
863568 27 0.9
863579 24 0.8
863582 24 0.8
863581 27 0.8
863587 24 0.8
863670 26 1.0
863681 23 0.8
血液學
為評估在食蟹猴中ISIS寡核苷酸對血液學參數的任何影響，將從可用的研究動物中的每一種中採集的大約0.5 mL血液置於含有K 2-EDTA的管中。使用ADVIA120血液學分析儀（拜耳公司，美國）針對紅細胞（RBC）計數、白細胞（WBC）計數、各個白血細胞計數，例如單核細胞、中性粒細胞、淋巴細胞、並且針對血小板計數、血紅蛋白含量和血細胞比容對樣品進行分析。將數據呈現在下表中。
數據指示該等寡核苷酸沒有導致超出在這個劑量下的反義寡核苷酸的預期範圍的血液學參數的任何變化。特別地，觀察到ISIS 863633係耐受良好的。 [ 表 60]在第86天食蟹猴中的血細胞計數
RBC （x 10 6/µL） 血小板 （x 10 3/µL） WBC （x 10 3/µL） 中性粒細胞（x 10 3/µL） 淋巴細胞（x 10 3/µL） 單核細胞（x 10 3/µL）
PBS 5.5 340 9.0 3.1 5.4 0.3
863655 5.6 361 9.7 3.7 5.4 0.3
863633 5.6 395 11.4 4.5 6.5 0.3
863568 5.8 409 12.1 602 5.4 0.3
863579 5.9 390 8.0 2.2 5.3 0.3
863582 5.6 333 8.9 3.0 5.5 0.3
863581 5.8 382 8.2 2.4 5.3 0.3
863587 6.0 348 8.8 2.3 6.0 0.2
863670 5.4 417 10.7 4.3 5.9 0.3
863681 5.6 408 9.0 3.1 5.5 0.2
[ 表 61]在第86天食蟹猴中的血液學參數
血紅蛋白（g/dL） HCT（%）
PBS 12.8 45
863655 13.0 43
863633 12.9 43
863568 13.0 44
863579 13.5 46
863582 12.4 43
863581 13.0 44
863587 13.5 46
863670 12.7 43
863681 12.7 43
大體上，該研究的該等結果表明ISIS 863633係那些所測試的化合物中用於抑制PCSK9的最強效的並且耐受良好的化合物，並且是用於治療心血管疾病，特別是用於降低LDL-膽固醇水平的重要的候選物。 實例 10 ：在劑量響應測定中靶向人類 PCSK9 的反義寡核苷酸的比較性抑制
將在猴子研究中所測試的反義寡核苷酸的未軛合的母體寡核苷酸與先前設計的化合物進行比較。針對功效，對ISIS 848542、ISIS 848593、ISIS 848597、ISIS 848598、ISIS 848630、ISIS 848833、ISIS 849040、ISIS 849171、和ISIS 849236進行測試，其中在先前已經確定ISIS 405879和ISIS 405995係體外最強效的反義化合物中的一些（參見，例如美國專利8,084,437），並且ISIS 431131和ISIS 480604已經在先前被描述於美國專利9,127,276中。
將細胞以每孔10,000個細胞的密度鋪板，並且將39.1 nM、156.25 nM、625 nM、2,500 nM、和10,000 nM濃度的反義寡核苷酸添加至培養基中用於由細胞自由攝取寡核苷酸。在大約48小時的處理期之後，從細胞中分離RNA，並且藉由定量即時PCR測量PCSK9 mRNA水平。將從ABI（ID# Hs03037355_m1）中設置的人類PCSK9引物探針用於測量mRNA水平。如藉由RIBOGREEN ®的測量，根據總RNA含量調整PCSK9 mRNA水平。將結果呈現為相對於未經處理的對照細胞的PCSK9抑制百分比。
還呈現了每個寡核苷酸的半最大抑制濃度（IC 50）。在反義寡核苷酸處理的細胞中PCSK9 mRNA水平以劑量依賴性方式降低。與所有先前揭露的寡核苷酸相比，ISIS 848542、ISIS 848593、ISIS 848597、ISIS 848598、ISIS 848630、ISIS 848833、ISIS 849040、ISIS 849171、和ISIS 849236證明了優異的功效。 [ 表 62]
ISIS編號 39.1 nM 156.25 nM 625.0 nM 2500.0 nM 10000.0 nM IC 50（µM）
405879 0 0 0 0 0 ＞10
405995 0 0 0 0 0 ＞10
431131 0 3 0 0 5 ＞10
480604 0 1 19 31 36 ＞10
848542 9 37 70 83 88 0.4
848593 19 36 51 53 69 1.1
848597 41 67 78 86 91 0.04
848598 41 64 76 85 90 0.1
848630 0 17 59 79 85 0.9
848833 4 66 88 93 94 0.2
849040 41 93 98 99 98 ＜0.03
849171 0 52 86 94 96 0.3
849236 0 26 71 89 95 0.6 
<![CDATA[<110>  美商IONIS製藥公司(Ionis Pharmaceuticals, Inc.)]]>
          <![CDATA[<120>  PCSK9表現之調節劑]]>
          <![CDATA[<130>  TW 107109928]]>
          <![CDATA[<150>  US 62/476,051]]>
          <![CDATA[<151>  2017-03-24]]>
          <![CDATA[<160>  1550  ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn 3.5版本]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  3731]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          gtccgatggg gctctggtgg cgtgatctgc gcgccccagg cgtcaagcac ccacacccta       60
          gaaggtttcc gcagcgacgt cgaggcgctc atggttgcag gcgggcgccg ccgttcagtt      120
          cagggtctga gcctggagga gtgagccagg cagtgagact ggctcgggcg ggccgggacg      180
          cgtcgttgca gcagcggctc ccagctccca gccaggattc cgcgcgcccc ttcacgcgcc      240
          ctgctcctga acttcagctc ctgcacagtc ctccccaccg caaggctcaa ggcgccgccg      300
          gcgtggaccg cgcacggcct ctaggtctcc tcgccaggac agcaacctct cccctggccc      360
          tcatgggcac cgtcagctcc aggcggtcct ggtggccgct gccactgctg ctgctgctgc      420
          tgctgctcct gggtcccgcg ggcgcccgtg cgcaggagga cgaggacggc gactacgagg      480
          agctggtgct agccttgcgt tccgaggagg acggcctggc cgaagcaccc gagcacggaa      540
          ccacagccac cttccaccgc tgcgccaagg atccgtggag gttgcctggc acctacgtgg      600
          tggtgctgaa ggaggagacc cacctctcgc agtcagagcg cactgcccgc cgcctgcagg      660
          cccaggctgc ccgccgggga tacctcacca agatcctgca tgtcttccat ggccttcttc      720
          ctggcttcct ggtgaagatg agtggcgacc tgctggagct ggccttgaag ttgccccatg      780
          tcgactacat cgaggaggac tcctctgtct ttgcccagag catcccgtgg aacctggagc      840
          ggattacccc tccacggtac cgggcggatg aataccagcc ccccgacgga ggcagcctgg      900
          tggaggtgta tctcctagac accagcatac agagtgacca ccgggaaatc gagggcaggg      960
          tcatggtcac cgacttcgag aatgtgcccg aggaggacgg gacccgcttc cacagacagg     1020
          ccagcaagtg tgacagtcat ggcacccacc tggcaggggt ggtcagcggc cgggatgccg     1080
          gcgtggccaa gggtgccagc atgcgcagcc tgcgcgtgct caactgccaa gggaagggca     1140
          cggttagcgg caccctcata ggcctggagt ttattcggaa aagccagctg gtccagcctg     1200
          tggggccact ggtggtgctg ctgcccctgg cgggtgggta cagccgcgtc ctcaacgccg     1260
          cctgccagcg cctggcgagg gctggggtcg tgctggtcac cgctgccggc aacttccggg     1320
          acgatgcctg cctctactcc ccagcctcag ctcccgaggt catcacagtt ggggccacca     1380
          atgcccaaga ccagccggtg accctgggga ctttggggac caactttggc cgctgtgtgg     1440
          acctctttgc cccaggggag gacatcattg gtgcctccag cgactgcagc acctgctttg     1500
          tgtcacagag tgggacatca caggctgctg cccacgtggc tggcattgca gccatgatgc     1560
          tgtctgccga gccggagctc accctggccg agttgaggca gagactgatc cacttctctg     1620
          ccaaagatgt catcaatgag gcctggttcc ctgaggacca gcgggtactg acccccaacc     1680
          tggtggccgc cctgcccccc agcacccatg gggcaggttg gcagctgttt tgcaggactg     1740
          tatggtcagc acactcgggg cctacacgga tggccacagc cgtcgcccgc tgcgccccag     1800
          atgaggagct gctgagctgc tccagtttct ccaggagtgg gaagcggcgg ggcgagcgca     1860
          tggaggccca agggggcaag ctggtctgcc gggcccacaa cgcttttggg ggtgagggtg     1920
          tctacgccat tgccaggtgc tgcctgctac cccaggccaa ctgcagcgtc cacacagctc     1980
          caccagctga ggccagcatg gggacccgtg tccactgcca ccaacagggc cacgtcctca     2040
          caggctgcag ctcccactgg gaggtggagg accttggcac ccacaagccg cctgtgctga     2100
          ggccacgagg tcagcccaac cagtgcgtgg gccacaggga ggccagcatc cacgcttcct     2160
          gctgccatgc cccaggtctg gaatgcaaag tcaaggagca tggaatcccg gcccctcagg     2220
          agcaggtgac cgtggcctgc gaggagggct ggaccctgac tggctgcagt gccctccctg     2280
          ggacctccca cgtcctgggg gcctacgccg tagacaacac gtgtgtagtc aggagccggg     2340
          acgtcagcac tacaggcagc accagcgaag gggccgtgac agccgttgcc atctgctgcc     2400
          ggagccggca cctggcgcag gcctcccagg agctccagtg acagccccat cccaggatgg     2460
          gtgtctgggg agggtcaagg gctggggctg agctttaaaa tggttccgac ttgtccctct     2520
          ctcagccctc catggcctgg cacgagggga tggggatgct tccgcctttc cggggctgct     2580
          ggcctggccc ttgagtgggg cagcctcctt gcctggaact cactcactct gggtgcctcc     2640
          tccccaggtg gaggtgccag gaagctccct ccctcactgt ggggcatttc accattcaaa     2700
          caggtcgagc tgtgctcggg tgctgccagc tgctcccaat gtgccgatgt ccgtgggcag     2760
          aatgactttt attgagctct tgttccgtgc caggcattca atcctcaggt ctccaccaag     2820
          gaggcaggat tcttcccatg gataggggag ggggcggtag gggctgcagg gacaaacatc     2880
          gttggggggt gagtgtgaaa ggtgctgatg gccctcatct ccagctaact gtggagaagc     2940
          ccctgggggc tccctgatta atggaggctt agctttctgg atggcatcta gccagaggct     3000
          ggagacaggt gcgcccctgg tggtcacagg ctgtgccttg gtttcctgag ccacctttac     3060
          tctgctctat gccaggctgt gctagcaaca cccaaaggtg gcctgcgggg agccatcacc     3120
          taggactgac tcggcagtgt gcagtggtgc atgcactgtc tcagccaacc cgctccacta     3180
          cccggcaggg tacacattcg cacccctact tcacagagga agaaacctgg aaccagaggg     3240
          ggcgtgcctg ccaagctcac acagcaggaa ctgagccaga aacgcagatt gggctggctc     3300
          tgaagccaag cctcttctta cttcacccgg ctgggctcct catttttacg ggtaacagtg     3360
          aggctgggaa ggggaacaca gaccaggaag ctcggtgagt gatggcagaa cgatgcctgc     3420
          aggcatggaa ctttttccgt tatcacccag gcctgattca ctggcctggc ggagatgctt     3480
          ctaaggcatg gtcgggggag agggccaaca actgtccctc cttgagcacc agccccaccc     3540
          aagcaagcag acatttatct tttgggtctg tcctctctgt tgccttttta cagccaactt     3600
          ttctagacct gttttgcttt tgtaacttga agatatttat tctgggtttt gtagcatttt     3660
          tattaatatg gtgacttttt aaaataaaaa caaacaaacg ttgtcctaac aaaaaaaaaa     3720
          aaaaaaaaaa a                                                          3731
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  32000]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          gtgaccatga gcggtagttg ccagtggtat tcacaaatat accctttctc ctccttctgg       60
          gcacttggtg tgattgcagt ttcctacatt tgaccttagg tgtggtcatg tgtctcgctt      120
          aggagaagga aatgtgaacg gaagtgttgt gggtcacttt tgtgtggaag ctgcatggag      180
          tcacctcttt gctttccgtc agcctcagtg ttcagcaatg ttctgaatga tggttgcttt      240
          atcagtctgg ttctggggtg agggtaatga agtagtgaag caaagtcctt gatggacatg      300
          tgaggtgaga cagaaataaa cctttgacat ttcaagcccc tgagatttgg ggcgtgcatg      360
          tgctggaagc agaacctagc ctattctgat ggattcctcc agcactgctc gtgggaagac      420
          atcatcaata tagagcattc atgtgccctt tatctcgaaa ttccacttcc aggaatttat      480
          gaaacagata ctctcacatg tgcaaacagc tatggataag gacagacatg gcaacttgga      540
          ttgcaatagc aaaagacaga aacaaccaac ggaaacacca accaatagga aattggctaa      600
          agacattgtg aaacatacat agaatgaaat aatctgcaac cagaaaaata aggcagtaga      660
          tgtatgtgta ccagtgtggt ttttattccg agattagggc taggttaaga cgtcagatta      720
          agttgtccct ctccacccca ccaatataaa taaaaagtta aaagtaaatc ataaactatt      780
          tttacaattt taaaaagtgg gttaaagagc ccatccaagt agttttataa aagtagacta      840
          tctccgaaaa gatacccaat aaataggtat attactttcc tggggctgtt ataacaagtt      900
          tctacaaatt tgctggcttc aaataacaaa aacgtattct cttgcagtta tggaagccag      960
          aagtatggaa tgaagggttg cagggtggtg ccctctccca aagctctagg ggaggaacat     1020
          tccttgcttc ttccagctcc tttgggggct cctggcattc cttggcttat gtcggcacag     1080
          ctctaatcgg cgcctccatt gttacatagg tgtttctgtg tctcaagtat ctctcccctt     1140
          tctcttctga tatcagtcat tggatttagg gaccatccta aacccaggat aatctcctca     1200
          tgagatcctt aggtcaatta catctgcaaa gatctcattt ccaaataagg tcacattcaa     1260
          aagtaccagg ggttagtctt agacttatct ttttggggga cacgattcaa cccactaccg     1320
          tgggtaacag tggttttccc tcagaaggtg gtggttcagg agtgggagga agatgaactt     1380
          ttcactgtat atcctttcaa actattcacg ttttaaaaaa aacattttca tgtaaattta     1440
          aaaaaattga acattcacac aaaaagatgc cccctccctt gcaaaaaaga gtatgcccgt     1500
          tcaaaatgtt gaaatgtaca ctcacagcaa tggtggctgc agactccaag tttctgaggt     1560
          tggagaaggt agccagggag cataaaagtg agttctatct actcattcag tctatgaggg     1620
          gaaggcaatg gctagaaaag cattttgagg gacagtaaaa gtggcatttt tagagggagg     1680
          aagccttgag gatgcttgtg gggtgaaggg aaagaataac tcaggaagag gcatttaggg     1740
          ataagaggag gagaggagat agtggaggta ggtgatccct gcggaggcca gattggggca     1800
          ggggagtgtc agctgagtat aagaggatgg tcccctctgc cctgaaggag gaaggcagga     1860
          ggggaaaagg atgggtgttg acccagaaag cacttgtggt ggaggggagg ccccagaaga     1920
          ggcttctgac ttaccctgat tgctggtacc tctcagggga gctggctgct tatttgctgg     1980
          ccagggtgtg ggggaaccca tttgagaaga gggagaaggt gacacaattc ctttgggcaa     2040
          cttatgggag gggtaattgg tgagggatga aagccctgcc aagtggcagg aggcccagct     2100
          ggggctgccc ctcataagag tgcagtggag gatatgggat gagaagtgac tgcccctctg     2160
          gttccatctg tcgcagagcc cagggtgctt ccttcctccc ccacctccct cagaacacac     2220
          ccactgcatg ctggacagca gcccccttcc tgggcctggg gacatccatg tccctctgtg     2280
          cacaggcttc atcattctct gggtgcacgg taacgacccc ggtaggtgag aggccaaggt     2340
          cccaaagggg agcagcaggg aaagttagct cccatctatt cttgctccag gggaggcctt     2400
          tgatgaggaa gctgccaaaa gcacattgca aatacaattc caattacagg caacaggaag     2460
          gagaaccacc tctgccacct ctgtcagcaa accatgagct cctactctgt gctgcgatgg     2520
          cgggctcgat ggggataact ctgaccttac ctcatggagt cactgtcaac ccactggttg     2580
          cactgtcttt gtgcactggc tctctggagt gaggtctttg caaacaaagt ggaaagagca     2640
          tcaactttgg actccagcac ctagattcag agcaggccat ttcactcgga atctgctgtg     2700
          catctgcaag ggaggatcat aaattcgcct ttgtttcttc ccagtatcga cagcccttcc     2760
          agaaagagca agcctcatgt catgccacat gtacaatctg aggccaggag ctctctttcc     2820
          ccttttcatc ctcctgcctg gtacacaata ggtgtttact ggatgcttgt ccagttgatt     2880
          tcttgaacat ggtgtgtaaa aggaatcttt gcaaattgaa tcttctggaa agctgagctt     2940
          gtgcctacca tagaattctg aatgtaccta tatgacgtct ttgcaaactt aaaacctgaa     3000
          tctttgtagt ataaatccct tgaaatgcat gtaggctgga catcaaaagc aagcaatctc     3060
          ttcaaggagc agctagttgg taaggtcagt gtgcagggtg cataaagggc agaggccgga     3120
          gggggtccag gctaagttta gaaggctgcc aggttaaggc cagtggaaag aattcggtgg     3180
          gcagcgagga gtccacagta ggattgattc agaagtctca ctggtcagca ggagacaagg     3240
          tggacccagg aaacactgaa aaggtgggcc cggcagaact tggagtctgg catcccacgc     3300
          agggtgagag gcgggagagg aggagcccct agggcgccgg cctgccttcc agcccagtta     3360
          ggatttggga gttttttctt ccctctgcgc gtaatctgac gctgtttggg gagggcgagg     3420
          ccgaaacctg atcctccagt ccgggggttc cgttaatgtt taatcagata ggatcgtccg     3480
          atggggctct ggtggcgtga tctgcgcgcc ccaggcgtca agcacccaca ccctagaagg     3540
          tttccgcagc gacgtcgagg cgctcatggt tgcaggcggg cgccgccgtt cagttcaggg     3600
          tctgagcctg gaggagtgag ccaggcagtg agactggctc gggcgggccg ggacgcgtcg     3660
          ttgcagcagc ggctcccagc tcccagccag gattccgcgc gccccttcac gcgccctgct     3720
          cctgaacttc agctcctgca cagtcctccc caccgcaagg ctcaaggcgc cgccggcgtg     3780
          gaccgcgcac ggcctctagg tctcctcgcc aggacagcaa cctctcccct ggccctcatg     3840
          ggcaccgtca gctccaggcg gtcctggtgg ccgctgccac tgctgctgct gctgctgctg     3900
          ctcctgggtc ccgcgggcgc ccgtgcgcag gaggacgagg acggcgacta cgaggagctg     3960
          gtgctagcct tgcgttccga ggaggacggc ctggccgaag cacccgagca cggaaccaca     4020
          gccaccttcc accgctgcgc caaggtgcgg gtgtagggat gggaggccgg ggcgaacccg     4080
          cagccgggac ggtgcggtgc tgtttcctct cgggcctcag tttcccccca tgtaagagag     4140
          gaagtggagt gcaggtcgcc gagggctctt cgcttggcac gatcttgggg actgcaggca     4200
          aggcggcggg ggaggacggg tagtggggag cacggtggag agcggggacg gccggctctt     4260
          tggggacttg ctggggcgtg cggctgcgct attcagtggg aaggttcgcg gggttgggag     4320
          acccggaggc cgaggaaggg cgagcagagc actgccagga tatcctgccc agatttccca     4380
          gtttctgcct cgccgcggca caggtgggtg aaggagtgaa tgcctggaac gtactgggaa     4440
          ctgcaccagg cacagagaaa gcgggcttgc cattatagtg ggttccgatt tggtttggaa     4500
          aacatgggca gcggagggtg gagggcctgg agagaaggcc ctacccgaga caggggcggg     4560
          gtgggaagga cggcagatgc tgggagcacg aggcaatttc tttatgacac agaactcatg     4620
          ctctagtatt ccatctgttt cagccgaaga aaagaaccag ctgaaggggc aggggagaag     4680
          gggcggaggt attctcgagg cccattggcg tcctttagga ctcaggcagg gaagggccct     4740
          tggtgctctg gagccggagg tggtgcgcct ggtactggga ccccggagct gagcccggcg     4800
          cctcagccca cctggctgtc tgccgaccgt gtgcggggcg agtttgctca acaactctgc     4860
          cagcttctgg ccctcaggct gtgggaagct tcttcccggg gcgagaccac tagctttttc     4920
          taagtattac cagcccagga cttggctgag gttctgtgtc ccccagcttg gagtcagatg     4980
          tggggttgaa tcttggcttc ctctcactag ctgtggtgct tgacaagtca cttatccttg     5040
          agcctccatt gcctaatctt taaaagggag gtgacaatcg tccctacggc tcagtggcag     5100
          cagatgggga gatgaaggga aagttctgtt gaccatgagt gaacttacaa tgcaagcccc     5160
          ggggggatca cttgcagttt tgtccctgtc tgcagtgtga cctgttggtg acattgtctt     5220
          tgctccaaac cacagctcct ggggcagagg ggaaaattct gccactcaca gctgcctgcc     5280
          cacgcttctg tctgagtgtg ctgggtggca ggatggcaag tccttactca gctcagtata     5340
          gccctcttcc ttgttccctg agcctttgac tttctcgagg gatgttgtgg ggttgtggcc     5400
          aggataagaa agggcatttc aagttaccac tgctccaaaa caactgttct ggaaatagtg     5460
          agtaccccat cctgagaggt gagtaagcag aggctgtatg accacctgaa ccaagccctt     5520
          gaggatgttt cttctctggt ggaagtttgg aacaggagcc tcctcaagtt catttattca     5580
          ttcattcaat ggttattttg tgggaatcga atttagaatg aaaatatttt ttggcaagca     5640
          gaaaataatt tttagaccaa tccttttctt ttagtcatga gaaactgagg cccagagaga     5700
          ggaggtcacc ccaggtgcat tagaactggg tttccagaac tgacactcca ctgcacagag     5760
          tactctccca attcattcaa tttttattta gcggaaggca ttttcagatg ggtctttgaa     5820
          gcattagtag gagttcagcg atgatggtgt catgagaatt ttattctagg attaggaggt     5880
          accatgaaca aagatacaga gctgggaaaa ccagaggtgg aagataagga gcacatgtcc     5940
          acagttcttt ttcttttttt tttgagatgg agtttcgctc ttgttgccca ggctggagtg     6000
          caatggtgca gtctcagctc actgcaacat ctgtctcccg ggttcaagtg gttctcctgc     6060
          ctcagcctcc caagaagctg ggattacagg tacctgccac cacgcccggc taatttttgt     6120
          atttttagta gagaaggggt ttcaccacgt tggccaggct agtcgcaaac tcctgacctc     6180
          ctcagtggat ccgaggaggt gatcctcccg cctcagcctc ccaaagtgct cgaattacag     6240
          gtgtgagcca ccacgcctgg cctccacagt tctttatcca ccgtctgaaa tgtaaaatgt     6300
          tacgaaaacc aaaagttttt tttgtgattt atttgatggt agcacctgac gtgaactgac     6360
          atgagattat ttttaattta gttgtgtgaa tatgcatatt catatatttt gctgcataga     6420
          ttacagtatg cagctccaga ttcttccaag cagactctga ttgcccatta ctgcctttct     6480
          aaaatccaaa caagttctga ggttcaaaac cgttttggcc ctaaggcttt gggtaaaggg     6540
          ggtggactct gttctactct gactggagtc caagatgcat atatacagag atatgggtga     6600
          tggggctgca aggtaggttg aggtaggggc caaggaggag catggagttt ggacttgatt     6660
          catgaggctg tggggagcca gtgaaggttc ttaagcaggt atgtctgcct gagagcagtt     6720
          ggagcagaca agagctaaaa accaaacaaa tcaccataga tagtggctgc tataatttgt     6780
          ttgtcccctc caaatctcat gtggaaattt ggtcctcagt gttggaagtg gggcctaatg     6840
          ggaggtgttt gggtcatggg ggaggaaccc ctgtgaaagg cttggtgccg tccttgtgat     6900
          aatgagtaag ttctcccgct atgatttccc ttgaaggctg attattaaaa agagcttggc     6960
          acctccctct cttctctctt gcttcttctc ttgccatgtg attgatctct gcacatgtag     7020
          gctccccttc accttctgcc atcagtgaaa gcagcttaag gccctcacca gaagcagatg     7080
          ctggtgccat gcttcctgga gagcttgcag aatcatgagc tgaataaatc ccttttcctt     7140
          gtaaattact caccttcagg tattccttta tatagcaaca caaaaggact aagacagtgg     7200
          ccttgacttt tctctctctt taagaagtgt tgcctttgct cacttagtca tcccttctgc     7260
          ctgcatttgt agagcatctg gatgggagat ttatataacc gtcactcttg actttcccag     7320
          caggcctatg tcataggtac tgtggtctct acaatacagc agaggtatct gaggctccga     7380
          gaggttgagt gacttgctca tggctgcaca accagtaaat attggagctg gaattcaggt     7440
          ccacggtttc ctggctccaa agcccatgat tttttccctc aatttattct gactggggca     7500
          tgggggaggg ggtggccttt gggcagggcc accaggagcg accaggcccg tagagagctg     7560
          ggtgcaggta cagaggaaaa cctgttgtcg agtgtggccc gtagttccca tttttgcctg     7620
          aatggcacat ttgaaagtgt tatataacca tgtgaataat aatagttggc ctatatgagt     7680
          tctttaattt gctttttggt ccgcatttgg taacttcttt atcatctact atactctgtt     7740
          gtgtctcttt tgttgtaatt tgtaagtagg ggtgagataa agtacaccta gggtttgctg     7800
          ggtttcttcc atgtcatcat gttcctcctt gcatggggcc aggatccgtg gaggttgcct     7860
          ggcacctacg tggtggtgct gaaggaggag acccacctct cgcagtcaga gcgcactgcc     7920
          cgccgcctgc aggcccaggc tgcccgccgg ggatacctca ccaagatcct gcatgtcttc     7980
          catggccttc ttcctggctt cctggtgaag atgagtggcg acctgctgga gctggtgagc     8040
          cacccttttt gggaatggca cttcctgata gggctgggcc actgcatata cactggggac     8100
          tgtgcttagt aggcccattg ctgaaaatca gaaggggaca gcaagtatgt attgagcact     8160
          tatcgggtac caagcacagt aactactggc tttctgtata gaattccctt taagcctggc     8220
          catgccccag tggtacgtct atcttcattt gaaagacgag gagactgaag ttcagagggg     8280
          accacacaga cagctagggg tagagcctgg atcaaaccca ttggtctgcc tgccagccat     8340
          tcttgtgcca atgcatctgc tgcctacgga aacctgtagg gacaaggccc tgggatgttc     8400
          agtggagcct gagtcatttt ataaaaaagc atgactctag ggtccaaaat tcctttgaag     8460
          ctgttgctat ccagagtgaa gtcccttctt taggacaggg tggccctcct ccctcctgga     8520
          tgtcacatct tcggtggagg ggcagaaagg ggactgggta ttctcctcac cctggcccta     8580
          gtgcttcaaa tcttaaaaaa acgtttttat ttgtgcttct gcaccacctt ctagcccacc     8640
          tcgtttcctg gcctctaact tgatgagagc gtgtgtcatt ttcacactga ttctccacat     8700
          ggcaggcggt gcttcttagc ctcctgcaga cagtgaggcc ccacggtctt gtccaaggtc     8760
          acacagcgtg taatgggcag ggtcagagtc tggagtctgg acctgggtct cctagctgca     8820
          ctgcactgct gccccatggg ttaatcagct cagcataccg tggctgaaca gctacctcat     8880
          accaaggcct gtggcgccat gacagggatt gacagggtcc ctgccttgga aacccgtagt     8940
          ctaagtagag gagactgaca agtcaatgcc ttccatcagt ctgctcaaca cacgtttacc     9000
          aagtgcctac tgtgtgctgc agaggcgaag atgacacagc tcaggccttt cccttgagct     9060
          tacagttcag gaggagagac tgaccagtga ctgccagtac agttgactat gggacaatgt     9120
          gctcagcctt ggggagagac gaagaaggta cccgtatagc accagatgac aggcacgagc     9180
          cccacaggcc agggcagctg ctcagaggag agtaggccaa gcagaaggca aacagaaggc     9240
          tgcaggcatt tgccatcgag agctggactt caaactgggc atcataccag cctgggttcg     9300
          agtcctgccc agccccttat tggctgtcta accctgagca aatcccttca cctctctgag     9360
          cctcattcct ctatctgtaa accagttata ataattggaa cattcattta aggactaaat     9420
          gaggtcgtga agcattcagc agatgctagg tacggaaact cgctgaagtg ggggcaggtt     9480
          aagaagcctc tggggatacg aaggcatcca gggactagtt gtggcaggag gctgttacca     9540
          cttaggtctg aagggtaagg agagggaata gctttccctc tgcccagttg gagccggtgg     9600
          catggaggag aggctgcctg tggggaatca cccgagggtt caccgctgcc atgcgcaggg     9660
          agtcaggagg tagggaggga gtggggcaga tgcacaccat tttttttttt ttttgagact     9720
          ctgttgccca gactggagtg cagtggtgcc atatctgcac ctctgcctcc cgggttcaag     9780
          ctcactgcaa cctctgcctc ccgggttcaa gcgattctcc tgcctcagcc tcccgagtag     9840
          ctgggactac aggtgtgtgc caccatgcct ggctaatttt tgtattttta atagagatgg     9900
          ggtttcacca tgttggccag gctggtctcg aactctcgac ctcaggtgat cccccacctc     9960
          ggcctcccaa agtgctggga ttacaggcgt gagtcaccgc tcccagctgc tgatgcactc    10020
          ttgtccttct aactcctgct agtgcctccc attggctgag cccaactgga agctttgcaa    10080
          gggagctggt gctgcagttt gcactgagca ggctggagaa ggctggagaa tagactaggg    10140
          gacaaaccga attgccagtg ctgttatgtc atgatttagg catggagtcc agggcctgag    10200
          cttcactcca tgtccatcct gcccagagcc ttggcacagc ctggctccca gacaagatgt    10260
          caagttcaga atccttccta aaaggaatcc tctatgccag accgtgttgc agggatatgg    10320
          gagtgctggg ctcccagcct gatcaaggag cgagaaaact caggctccta gtctgtcctc    10380
          cggggcacta gcagggacaa ggtgggaggc tgctgggctg ggatgtgggg acaggtttga    10440
          tcaggtaagg ccaggctgtg gctgtgtttg ctgctgtcca aatggcttaa gcagagtccc    10500
          ccggcctctc tggcttctgc aggccttgaa gttgccccat gtcgactaca tcgaggagga    10560
          ctcctctgtc tttgcccaga gcatcccgtg gaacctggag cggattaccc ctccacggta    10620
          ccgggcggat gaataccagc cccccggtaa gacccccatc tgtgccctgc cccaccccat    10680
          ctgagctgaa tccatttgct ctgccctggc ctggcctccc tgctggtggt ttccacttct    10740
          cggggggctt tgggactcag cacctccact gacccctttt tttctgtccc atccccatcc    10800
          cctgcagccc ccactgcctg ccttcctgtt gccccacaaa tgcaaaagtc ttgccttaaa    10860
          tgatcctctt ttccttcttt tctcttgttt tccttttctc accatttgga atggcccagc    10920
          aggctgcact taccttggaa ggagggttca tctgatggtg actctaccta gggcccccag    10980
          gcctctataa ctcccagtgc cctgcagact ggaccagatc ctttaatggg atagacacaa    11040
          ccctgtctgg gatgcctctg cctaccttcc tgttttgctg ctccacctgc ctccagctcc    11100
          gtttggcttc ctggggctcc ctgcctgggc cactttgtgt cttccctcta ggcctttctt    11160
          tccactgttc cctctgcctg gtgtggcctg gctatggaag ggagggagga ggagcggcca    11220
          tggaaaacgg tctgcattct agcagggact tgcaggtggc aattcagtcg gggaagactc    11280
          tagatgcacc tggcctgagg agagaatgaa gggttctagt tggactgtgt taagtttgag    11340
          gtgcccatgg tgtgaggtct ggagctcagc gcagagatga tgcaatgtgg tgggtccatg    11400
          caacatggtg ccaggacgca gagcttgggg tgaactcagc tttcacccct taccggttct    11460
          cgtgggatct tgggaagcca ctttcttcta tgagctttgt cgttcttgtc tgtaaaatgg    11520
          gcacataacc ctgtccctgt ccttctcaca ggttgctgtg agactccaat gagttgaagg    11580
          atgtgcagat gcttttggaa gtgaaaagtt ggggggctac tgtgtgactt tgcatacacc    11640
          caaactgtgt gaccttgcat atgtctgagt tgctgccatt gcaacagatc agagctggtg    11700
          ggctgggtgt ggagaaaggg tttgtgtggg ggacatcctc tggcaagggt ggcagcagca    11760
          gaagtgaggg gcctggtcgg tcatgtgtgc tgacccggcc tgggcagcct gtggccaggg    11820
          agaggacagc tcctctgtag gaagagcctg ttcctttcca accaggtgag acctcttcag    11880
          tggagccctg gagccccctg tactccacat cagtgcctca gggacctccc ggagcaggct    11940
          aatatcagag accaagaggg acactggcag aggatcacag agaccccagt ccaggcaggg    12000
          actgagaaga tcttgccccc taagttagtt tcctagcact gctgtgacaa attaccaccc    12060
          cctcggttgg aacaagttga ttctctgcag tcctggaggc cagaagcctg aatcagtgtc    12120
          ggcaggacca ctttctcccg gggggctcca gggagaagct tctcttgcct cttccgtgtc    12180
          ccaacagcgg cagcacacca atcccagcct ctgtcttcac acagccttct ctgtgtctct    12240
          ctcctcttca ttgtctcata aggacacttg tcattggatt tagggcccac tggatcctcc    12300
          aggatgatct catgtgggga accttaacca catctgcaag gacccttttt ccaaataagg    12360
          tcacagccac aggttgtggg ggttaggatg tgagtgtatc tctttggcag ccactgttcc    12420
          ctcctctccc ttgggccaga agcagacgtg gggccctttc ttccccatag gatgcccatg    12480
          gattgccccc cttcccgctt cccccgagtg tctgtgggag gtggcaggaa tggcaggcag    12540
          gggtgtggaa ccccttctgg agtcatatca agggcttggc tggaggaagt cctcctggag    12600
          ctgttgggct ggcatggggc aggctggctg ggcccagcag cagcttcttc attcatgggg    12660
          aggccacaag catgggccct agagctggct gccgccctca aacccagacc ctgcactctt    12720
          aactgtgtga ccttgcatac gtcactcacc ctctctgatc ttcaggttcc tctgcaaaag    12780
          ggaggtaatg ataaccctca ctctgggggg ctgtttggag ggttaaatca gttattgctg    12840
          tagcatgcat ttctctgtca ggtattgagt gaggtgctgt gattttagcc ctgcattttt    12900
          cttttcttac cattcaataa taacgttttg agcacccact gtgcgccagg caccatatta    12960
          ggtgctgggg atacaaatgt gaatgaaatg aatgtggtct cttcccccaa cagtgtatcc    13020
          agaagattaa tccattcctt aaacaaatgc tacttgacac agattagttc tggataggct    13080
          gagagctctg aaggagtgca ggcagctgcg agcctgtgta tccagcagaa ggatcaggaa    13140
          aggattcctg gaggaagcgc tgttctagcc aagacctacg ggggcattat taaccaggca    13200
          aaggggacgg tgtccaagca gtggaatgaa cgtggattga agctgtgagg caggagggag    13260
          tgtggcctgt gcagaaggga ccgaggctgg tgagaccagg agggcctggg tggcctccag    13320
          gtcagatgtg aaaggaagaa cttggccaca gtctgagctt ctcaggcgta tggcagggct    13380
          gcctggtgag agggaatgag ctccctgctc tggaggtatg caagcaggac tgggctctca    13440
          cctgccagag gccacagagc tttccagagg ctggaagagg ccactccaag gcctctttgc    13500
          ccctgagagt ggtggctctt cttgaggcca ccttgccacg ctgtcacagg gaactagcag    13560
          cccctgcctc acccgggggt ttggaagata gagggaggcc taggaagggc cctgtgtctc    13620
          atccgagctg ggcccctttc cagcctctca ctggaaggaa gcccaaggat gttcctgtgg    13680
          gggcttttac caggcccacc tgccctctgc tggccatgct tgcagcctcc tgaccctgtc    13740
          ccagcaggac agtgggctgg tgtgagcggg caggaaccgc ctgcacttag aaggtgtggg    13800
          gctgcctccc cgagcttcca tctgccgctg gggccacacc ccaggcccag ggatgggacc    13860
          ccacagtggt cacatcatct tgcagcagaa cccaggtaca gctcctggag cagatggtgg    13920
          tcccaagcac gggtgggacc agaaaggact ctcacctggg ctaactcagc tgcagcctca    13980
          gttccctcct cacacacgac gaggaacatg gactggaagc ctgcccagca ggccttctgc    14040
          tcgatgtgcg ttgtgtggct tacgtccagg gagggaagca gcctctgtgc tgtcttctag    14100
          ataagcctgt attccccggg ctgtctgcca atgtatccag ttgtcccgtc agcctggaag    14160
          ctctgaggga aaaccttggg ctgcttcctg agcacctgta tcccctgcag ccagcccggg    14220
          gcctctgcta ggagcagact gagcatggct tatgggcctg gcaccatctg gcctctgccc    14280
          accttgctgg ccttgtcttg tgtctgcccc ttcgacattc catagcccag ctcaatatct    14340
          agtggttcct ctagggtggc gagcactgtt tggtctccag atgtcttcag gtcggagctc    14400
          acagcgctct cagccacccc ttcccagtgt agcaccgggc acatggtaga tgcctattga    14460
          tgagtgaaag ctcctaacac actcagagag caaggactcc gcctcatccc acagcctggg    14520
          aggagaggca gactgccaag gacctgctca gcatgctaca gaagaaacca aagtgcccac    14580
          gggactgatc agtggagctt cctgccgaga ctggaggcct tagggcaggg tagacagtgt    14640
          gtgtgcaggc tggggactca cagttcggac tgtgcccaga cctactagca tagtgggtgg    14700
          gtgggaggat gcgggactgg gggccgacct tgcctgaaat tcatgtggga tctcagagca    14760
          gccactgaat tgctctgtag ggggctaaat agtggccccc acagatacac acacccagac    14820
          agagcctgtg agccagacct tatttggaga aaaggtcttt gtagatgtaa ttaagcatct    14880
          caagatggca tcatctggat tatgcggtgg gctgtaagtc ctgtgatgtg tctttatgag    14940
          agaaaggcag agggagattt gacacacaca ggaggggcca cgtggagaca gaggtggaga    15000
          ttggagaaat gtggccacaa gccagggaac accagcagcc accagaagcc ggaagacgtg    15060
          aggcagggtt cttcccagag ccttcgctgc tgagtctggg aatttgtgac cgaagccata    15120
          agaagtgggt acacgccctg agcctcccac acttgctcac ctgtcctgag atgagaatct    15180
          ctactctgca gcatatttgg aggatcactg cgggggccac agaggtgctg ttcagatggc    15240
          acttcagaag actcaggaga ccctggggca ggagcagttt gactgacagc ccagagggct    15300
          gccctctgat tccacctgag gccctgcttt tcctggctgc aggggttcca gggccaggcc    15360
          atttccgctg gcgcaggact ctgctagcag caacctgcct gaagtcttcc tttggcctgg    15420
          ctgagagttt ctgagacctg cgctggagcg gaggtgcttc cttccttgct tcctttcttc    15480
          ctctctccct tctccatcca gcaggctgga cctgcctggc atctgtgagc tctccctact    15540
          ttctcctata ccctaacctt tgtcctgcat gggcgactcc cccagtgagt ctcttgcagc    15600
          ttttacccca gtgcctgctt cttggagaat ccaaactgat ccagttaggg atgataaagt    15660
          gtagggtagg cgctcggtga ctgttttctc tgaggttgtg actcgtgtga ggcagaagca    15720
          gtccccgtga gccctcctgg tatcttgtgg agtggagaac gcttggacct ggagccagga    15780
          ggcccagaca tacatcctgt ccgagctgca gcttcctgtc tctaaaatga gccggccagc    15840
          gcaggtggcc agacatcact gttattctcc tttgagtctt taaatcttgt tgtctttctt    15900
          gcagactcgg tgagctgtga aaggctataa taggggcttt attttacact ttgatactat    15960
          tttttgaaca ttcatattat tgttagatat tgatattcat atgaaggagc aggatgactt    16020
          gggtccttct tggcagtagc attgccagct gatggccttg gacagttacc tgccctctct    16080
          aggcctccct ttccttgtct atgaaataca ttatagaata ggatgtagtg tgtgaggatt    16140
          ttttggaggt taaacgagtg aatatattta aggcgctttc accagtgcct gggatgtgct    16200
          ctgtagtttc tgtgtgttaa ctataaggtt gactttatgc tcattccctc ctctcccaca    16260
          aatgtcgcct tggaaagacg gaggcagcct ggtggaggtg tatctcctag acaccagcat    16320
          acagagtgac caccgggaaa tcgagggcag ggtcatggtc accgacttcg agaatgtgcc    16380
          cgaggaggac gggacccgct tccacagaca ggtaagcacg gccgtctgat gggagggctg    16440
          cctctgccca tatccccatc ctggaggtgg gtggggactg ccaccccaga gcgttgcagc    16500
          tgtactcctg ggttgcaccc cccccagctg tcactgtccc ctccctgcca tcagttgtgg    16560
          gaagggcgtt catccatcca gccacctgct gatttgttat agggtggagg gggggtcttt    16620
          ctcatgtggt ccttgtgttc gtcgagcagg ccagcaagtg tgacagtcat ggcacccacc    16680
          tggcaggggt ggtcagcggc cgggatgccg gcgtggccaa gggtgccagc atgcgcagcc    16740
          tgcgcgtgct caactgccaa gggaagggca cggttagcgg caccctcata ggtaagtgat    16800
          ggccccagac gctggtctct ctccatctgg acctggcctg ggaggtggct tgggctgggc    16860
          ccagggagag ctaatgtctc ctaaccaaga atgctgtggc agcctctgcc gcagagccag    16920
          agaaccagag tgccaaggct ggcagggttc ccagtggcca cgagtgcaga tgaagaaacc    16980
          caggccccaa gagggtcatg caggtagccc agggagttca gccttgaccc tgggtcaatg    17040
          acctttccac agttccacac tgctcccctt ttaaaatccg gtgatgtctt tatgtctttt    17100
          gttatgttat cttcaatgtg gagggactcg aggtgatcta agcaaacttt ttctatcttc    17160
          tgcttgcata cctctgagac caggggactc actcacttgc atgactgggc cctgcaggtc    17220
          acactggcca ggcagatgtg gtggaggaac tggcagagga ctttttctag actgtgacta    17280
          catttagtcc acccagcggc ccccctatga agtccagttg agaactagga ctctgggggc    17340
          cggtggacag agaagaggga gggttctctc ccttactgac ttccttctgt ggccagacat    17400
          tgagcaaggc ctctgtacag catgtcctgg ggctggcctt gccgtagctg ctaaatagtt    17460
          gacgaaacca gtccagagag gggaggtgac tgccagggtc gcacagctca agctggggaa    17520
          ctcgctggga aaactgtcag ctctgggcag cagcttgact tccactgtaa gccccagccc    17580
          ccagggtcaa acactggctc tggtgctggc agaggcagcc cactagcctg tttcaaaggc    17640
          tgagaaggcc caggagtctg ccctgtgctc caccagttct gccctgagac tttcctacag    17700
          agtacaggtt ttgatgttca gttttaaagg caagaatcaa taaccttctg ccccatcagg    17760
          tgaccccttg tgcctgtccc acccctttat tgactgacct cggctcagtc aggtcagttc    17820
          ctgaaggtca gtgtgtggag gggaggctgt tctttcccag aaaggccttc cccaggcctg    17880
          gtgctctggc ctctggagga cttcctggag aagtcccttc tttggggtcc cagtcagtgt    17940
          atgggaagcc cttattgcat gacctggcac ggggcagggg ctcaacagtc actattgcct    18000
          tccttgccac tgccatttcc tcctctgtaa gcaggtgatt gtgtgtccag tctgagcaca    18060
          gagataagca cacagcaggt gcttaataac tagcagctgt aggctgggcg cggtggctca    18120
          tgcctgtaat cccagcactt tgggaggccg aggtgggcag atcacctgag gtcaggagtt    18180
          cgagaccagc ctgttcaaca tggtgaaacc ccgtctctac taaaaataca aaaattagcc    18240
          aggcatggtg gtgggtgtct gtatcccagc tacttgggag gctaaggcag gagaatcgct    18300
          tgaacccagg aggtggaggt tgcagtgagc tgagatcgtg ccactgcaat ccagcctgag    18360
          tgatagagcg agattccatc tcaaaaataa ataagtaaat aactagcagc tgtaaatgtg    18420
          gctgttgttc ttcacctcca cactcagtgc cactccactc cctccctccg tggtgtgagg    18480
          ggcctcacta gctgtctcct aggaggagca tggctgtgag attccagctc catccttggc    18540
          cacggctcct ggagacatct tagaggccag gatccagaag gctcccacac ctcatttgac    18600
          aggggagaag ctgtcagttc caggtcccct tgcacatcag ggccagagct gcgttaggcc    18660
          tccagtctcc aggccactgg gccagagctc acaggctggc agagggttag aactgttact    18720
          ggtggctggg tgcagtggct cacgcctgta atcttagcac tttgggaggg caaggcggga    18780
          ggatcatgag gtcaggacat cgagaccatc cttgctaaca cggtgaagcc ccgtctctac    18840
          taaaactaca aaaaattagc cgggcgtggt ggcaggcgcc tgtagtccca gctactcagg    18900
          aggctgaggc aggagaatgg cgtgaacccg ggaggcggag cttgcagtga gccgagattg    18960
          cgccactgca ctccagcctg ggcaatagag cgagactccg tctggaaaga aaaaaaaaaa    19020
          aaagagctgt tactgttgac agtagcatga ggtagaccat ggcctgcacc aaaatggggg    19080
          agtggagtgc cactgaggcc agaaggaacc acaccctcaa gggtggggag ttatggtatg    19140
          gggggtccta ggcatggagt cttttaattc tttagacaat cctgggagca actgtccctg    19200
          tttcacagag ggcggggcca cacagctggt gagtgggcag ccaagactct gttcaagttt    19260
          gtgtgggtcc aacacttgcg gccacggtgg aggggcatct gagccaggcc tcagagagtg    19320
          gcgggggaag ttgggtgggg aagtgtgccc ttctcattcc tctgaggctc atcctcttgg    19380
          tgcctctctt tcatggaaag ggataataag gttattgtga ggatcccctg agttcgtata    19440
          ttcagacgct tagacagagc caggcacaga gaagggcccg gggttggcta gtttgattgc    19500
          tggtgtaatt gctaatatct tccagtttgt attggtcaag gttctgcaga gaagcagaac    19560
          cagtaggatg tatatattaa gagtttcaag ctcatgtgac cgtgcgggct ggcaagtctg    19620
          aaatccgcag ggcaggccag gcaggctggc aattcctgca gaatttgatg ttgcaatact    19680
          gagtcctaag gcagtcctgg ggcagaattc cttcttccct gggaggcctc agtctgttct    19740
          cttaaggcct tcaactgatt aaatgaggcc tgcccaagtt atagagagta acctgcctta    19800
          ctccgtcttc tgatttaaat gttagtcaca tctaaaaaat attttcgcag cagcatttcc    19860
          actggctttt gaccaaacat caggccacaa agttgatccc caaaattaac catcactctg    19920
          tgcctgtaag ggaggggctg ggaaagggga gcaggtctcc ccaaggggtg accttggctt    19980
          tgttcctccc aggcctggag tttattcgga aaagccagct ggtccagcct gtggggccac    20040
          tggtggtgct gctgcccctg gcgggtgggt acagccgcgt cctcaacgcc gcctgccagc    20100
          gcctggcgag ggctggggtc gtgctggtca ccgctgccgg caacttccgg gacgatgcct    20160
          gcctctactc cccagcctca gctcccgagg taggtgctgg ggctgctgcc ccaaggcgcg    20220
          ggtagggggc ggagggcgga gggcggaggg agggcgggcg ggcaggcggg cttcttgtgg    20280
          cacgtgggct tcttgtggca cgttcctgga ggccgaaccc ttctggcttt ggaaggagtc    20340
          gtcagagacc cccgccatgc gggaggctgg ggaggaaggg gctcgaaacc tccatcatcg    20400
          cagagtctga atagcagtgg ccccgccatg cgcccacgta gcggcgccta cgtagccacg    20460
          cccccacacc ccgtcctggc cactctccct cctgaaggtc ttctggtacc cgccccctcc    20520
          ccatctccat ccccaggccc tgcgtcctct gcccaatact ctttgggcct ccctgttgtc    20580
          cagctctctc cgcggctcca tgactgacaa cttgagcaag gctaatgtga atgggagcgg    20640
          ttgagggctc agacctctca cccgaggaac atccacagag tgtgccgcat gcccggtgca    20700
          gtgtggctgc ggggacacag acacggagcc tcggccctga ggagctgggg ggcagtgacc    20760
          gtccctcctc tgacccacca ctcctccagt gtcaggacac tgcgggtatc taggggaagg    20820
          aatcttgttc cacttcaagt ctggaacttc aagtctgtgt gtgtgcgtgc gcgcgcgcgc    20880
          gttgggggtg ggggttgcag agcagatgcg tacctgacag cggtaaccta ggtcccccct    20940
          ggcctatcaa ggcttccctg gcggccgaat ttaaaggcat caagcaaaca aagcccaaca    21000
          catctctgcc ttgtcctctc agtttccccc cgtggcactt agaaccactt gatacaccga    21060
          atagtttcct atctccccca ctaggatgta aactccacag gggcattggg aatgctgcct    21120
          ggctatggta gggacagagg ggagcaccag ggcggggcag gggtgccaga gttctgcctg    21180
          ggcagtcaga ttttccttag gaggggacat ttgagtggga cccaaacagg tgtatagcag    21240
          ttgtccagcc cagctggcaa ggcctgagtc tgcctctgca acccctctct tgggctcctt    21300
          tctctgccac ccacctcctc acctttccag gtcatcacag ttggggccac caatgcccaa    21360
          gaccagccgg tgaccctggg gactttgggg accaactttg gccgctgtgt ggacctcttt    21420
          gccccagggg aggacatcat tggtgcctcc agcgactgca gcacctgctt tgtgtcacag    21480
          agtgggacat cacaggctgc tgcccacgtg gctggtaagt caccacccca ctgcctcggc    21540
          caccgtgatg ctaacagccc ctttggcagt cagggtctgt gccgggacct ccagtgccag    21600
          gctctgtgca gggggaccag agatgaagta ggcctgatgg tgccttcaag gacactcagt    21660
          ctgatgaggg aggcgagtgc acagaggaaa cacgaggtca gggctgtatt agagggagcc    21720
          cagaggaggc acctgcccag cccgagggtc agagaaggca tcttggagga gggacatttg    21780
          atcgggagct tgatggatga ataggagttc acctggccga taagacagca actaccaagg    21840
          cttagaggtg tgagaggagg ctgtcttacc tcactgagta aggactgcag gcggcttacc    21900
          ttcgagaaga gagcttagtg tctgtgtgca cgtgtgtttg tgtgtatgtg tgtgcgtgtg    21960
          tgcactggca ggagtcccct gctggggcag gagggccggg ccatcaccat ctttcaccat    22020
          tcacccctgc accaggcatt gcagccatga tgctgtctgc cgagccggag ctcaccctgg    22080
          ccgagttgag gcagagactg atccacttct ctgccaaaga tgtcatcaat gaggcctggt    22140
          tccctgagga ccagcgggta ctgaccccca acctggtggc cgccctgccc cccagcaccc    22200
          atggggcagg taagcaggat ggcagggtgg gcaagtccag gctggggctt gggaggtctg    22260
          tgtgaccttg acagtctctc ccttctccct tgtctgtgta aggaggatga cgccacctta    22320
          aataggatta aatgagaatg gggctctgaa agggctgtgc aatattttca taacgtgttt    22380
          ttatagagac agttgagtat gttctttaag ccctcctctc tcctaccatg aactaaagat    22440
          ttctgtggag gtcccctcac tcccagcacc ccctcctcat cccaggccct ttttgcaggt    22500
          tggcagctgt tttgcaggac tgtatggtca gcacactcgg ggcctacacg gatggccaca    22560
          gccgtcgccc gctgcgcccc agatgaggag ctgctgagct gctccagttt ctccaggagt    22620
          gggaagcggc ggggcgagcg catggaggtg actgtacccc tccttcgtgt gtgtgtgtgt    22680
          gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtca gtgctgggcc ctcagggacc    22740
          cccagcaagc ccctccatcc tccagactcc agctcttctg taagcttaca gggctggcca    22800
          gaccaggagt ggggcactcc tcacttcacg cggctggggg ctgctggaga gagccacagc    22860
          gggaagggtt tcctagaggc tgcaggacag tgctggatgg attttcaatg ctcacctggg    22920
          tgtgagcgtg cggcagggcc gcgtgagggt cagcgatctg ctactctgga ctcagccatc    22980
          tctaggcccc tctcactcag gtgctccatg gttctgggag ctgagaaatc tcaaaccagc    23040
          aaaaaagtgg aattgatgtt gatgctacag gatagtgcac agatgccatc tggttgcagc    23100
          attttggtgg aagggcagtg cccagctagg agagtgagga ggggcaggca tttctggctt    23160
          gaggagatgg ggtcttaatg ctcgtgtgag aggcagagtg ggtggagtgg agctggctgg    23220
          atccttgctt tggcctcctg gatttctctc tatctccatt ttgaaaccac tctgtgtttg    23280
          gaagaacttt tgagtattca gagctgccca ctggcagaac agtcttcctt gggcaggagt    23340
          gagctccttg tccccagaag gctgggtctg gctggcccct ggcagggaca ctgatgaggg    23400
          tgcttgagtt gatcctgtct agtccctttc tgtgttttca aagcccattc taaagcagat    23460
          tcccatttcc gtctttgact ctaaggccca agggggcaag ctggtctgcc gggcccacaa    23520
          cgcttttggg ggtgagggtg tctacgccat tgccaggtgc tgcctgctac cccaggccaa    23580
          ctgcagcgtc cacacagctc caccagctga ggccagcatg gggacccgtg tccactgcca    23640
          ccaacagggc cacgtcctca caggtaggag gctgggcttg ccctggggtg aggaggggtc    23700
          tctttctcct tatgcaccca ctgcccgcga ggcttggtcc tcacaagtgt gatccatgag    23760
          actcaagcct gacttgcagt tccatactct ggttctgcca cttccatgcc ctttgagcct    23820
          gggcaggtga ccttacttct cctcatctca gcttcctcct ccataagagg gaaaaaggta    23880
          ttacctgcct cattgtgttg caaggagatg ggcagcatct agggcactgg cctggagtat    23940
          cgcaggtgct ttgcctaagg tggtgcagtc caggagaggc agctccagag agaggccccc    24000
          ggctggggct gaaaggaggg cagacctcgg tttgaatttc accctgccgc tctatagctg    24060
          tgtgacttgg gcaaattact taacatctct gtatgaggaa atgatgagtg ctaagcactt    24120
          agcttagtgc cgggacaata taaattctag ctatcgttac tattgttttc atcacccgtt    24180
          gctttaaaat ccagcctctg gtataggcaa ctattgacgg gctaccctgt gtcgaaaaca    24240
          tgcccaggca ggtagcagga agtcacagat ggggacctct tggggcatca agggatggtg    24300
          ccctgaggct gagctgttct ggttgggtgg agcatgagag gtctgggaag acagtgggac    24360
          tccagcctgg aataagaggc tcagagttga ttctcgtctg agcacgtcca ggggaaccac    24420
          tgagggtttg ggaacaggag agtgagggtg agaacctggt tctgggcaca gcaggctggc    24480
          atgtaggatg gatgttcagg aaagatgagc atagtcaggt ggctggtgcc cttgtccagg    24540
          ggagaggctc cgtcaggttc aggggtcctg gcttggaggg aagtccgcca tgctctaatc    24600
          acgctcccct ttggaagtgc tcagccgatg agctcacagg cacatgtcag tttgaagtca    24660
          tggaatctga ctccatgaag cgcacctcaa agagcaccat tttgcagcta agggaactgc    24720
          aggctggaca tgctgagtgg ctgccccgag cccttgcagc taggacatag agaatgctag    24780
          taaccacaac cctaccatgt tcagagcaca tgccaggctc catgctgggg cttcgcacgt    24840
          gtcatcttca cagtgtccct gtgagtaggt gtggtttctc tttccatctt acaaatgagt    24900
          aaacagagcc tcagtgtagc taagtaacca ctattttagg tttcttagcc aatgggtgtg    24960
          tctgactcct aagcccatgg agggcattct gaggtggttc agacagaccc cggcttaccc    25020
          ttgaacttct gcctgctggc tgcataggga ggggctgggg ggagtttgag catctcaggc    25080
          catagagccc ctgcctcact gtctccatct ctgggtggaa agatggtgtt ttccctgaga    25140
          aactaaggct cagagaggtt gaatggctct cccaaggtca cacagctggt cagctgcaga    25200
          gttgagaaca caggagtcct ggtgctcagg ccagcatctc tttttttctt tgagttgttt    25260
          ctaggtttcc tagctcttgc ctcagacctt aaagagagag ggtctgatgg ggatgggcac    25320
          tggagacgga gcatcccagc atttcacatc tgagctggct ttcctctgcc ccaggctgca    25380
          gctcccactg ggaggtggag gaccttggca cccacaagcc gcctgtgctg aggccacgag    25440
          gtcagcccaa ccagtgcgtg ggccacaggg aggccagcat ccacgcttcc tgctgccatg    25500
          ccccaggtct ggaatgcaaa gtcaaggagc atggaatccc ggcccctcag gagcaggtga    25560
          agaggcccgt gaggccgggt gggtggggtg ctgcgtgtct ctcctgcaca gcttttctgt    25620
          gtcagtttgt gccaccacca taccgccatg catcagggtg gcggtttgcc aggtagatgc    25680
          tgtgggcagc ttccgccatt gtgtggacag catgtatatg tgtctctgtg tggctgggtc    25740
          tgtttttgct tttgtccaga tcagtaaggt ttgctacctg ggtaccccac tccacttgga    25800
          gtagaatgtg cataaatatg gcataaagaa atgcaatatg catgcattta ttgattgatc    25860
          tatttttttc tgagatgggg tcttgctgtg ttgcccaggc tggtctcaaa ttcctgggct    25920
          caagcaatcc tctggtctca gcctccccaa gtgttgggat tataggcatg agccgctgca    25980
          cctggcctct ctgatctatt taacaaacct gctgggaggg tctcagggtc aggagcagca    26040
          ctgggctctg aggacacaga gctcactcag ccgtgaccca gagggggtgc ctgagctgca    26100
          tgctgaaggt tgttagcatg accagcaagg caagaaaagg ccctgccgag attagcaagg    26160
          catgtgccaa gccctggaat gtgacagccg ggccttctag aaacctgagt gtataactct    26220
          ccttaaaagc cagtaggagc tcctcaaaag gcagccctaa ggagtccact cttaaatgaa    26280
          ctcagagtca gttttaaaat gcaagtctgt gttgattctg gtctggatgg tgcattcctc    26340
          gagagcaaaa gacagtcttg gtcttggatc cacttgccct gggtacactg agggctgcta    26400
          ggttccaggt gctcttcctg gcactgggga gggatacagg cccaagagac atgctgttct    26460
          ccctcctgga gcatctattt tagtggagga agacagaaaa caaaccatta atatagagta    26520
          ctgaaaagat gcgatggaga aaactatagc aaggaaggga atggggtggg agagaggtca    26580
          ggagaggtct cgctgacaag gtggacgaaa caggccatga ggcagagaac atgttccagg    26640
          caaagcaaag gcccccaggt ggggatgtgc agggagtacc aggaaaccag agaggtggga    26700
          atagttatga gatggggggt gcctcagagg ggacagggcc aagtcaggtg agacctgagg    26760
          gtcacagtca gcagtgagct ggggccatgc aggggtctgg cctcagagga gtgtggtctg    26820
          gcctggatct gaacctctca ctgtggccta gctgctgagc tgagaagaga tgacaaggac    26880
          cttgggcaga agcagggaga ctggagggag gcggtggagg gtccaggcgt tggggcgggg    26940
          ctcaggctgg agtctgaagg gagcctgcag gcctggtggg tggatgtggg tgggagaggg    27000
          ggaggatggc accaaggctc gggcccctgg acagatggag ttgccattaa gtgggatggg    27060
          gcaggctatg gggccatcag tttcagaggg atgagtttgg cactggcatg gtaggcatct    27120
          gtctatctcc acggccctca aaccaggcat gaagcaggag ctcacgtgtt tggtcagcca    27180
          tggtgcagaa ccgcctgggt gggaggtgcg gggtgggaga tacacggttg tgtcccaaat    27240
          gggctctgag ccagcgaggg ccgtctgcac tttggcctca cagaaggatg tcggagggag    27300
          aaatgaagtg tgggtggggg tcccgggcca cgctagacat gtgctttctt ttcctcgggc    27360
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          ctgggacctc ccacgtcctg ggggcctacg ccgtagacaa cacgtgtgta gtcaggagcc    27480
          gggacgtcag cactacaggc agcaccagcg aaggggccgt gacagccgtt gccatctgct    27540
          gccggagccg gcacctggcg caggcctccc aggagctcca gtgacagccc catcccagga    27600
          tgggtgtctg gggagggtca agggctgggg ctgagcttta aaatggttcc gacttgtccc    27660
          tctctcagcc ctccatggcc tggcacgagg ggatggggat gcttccgcct ttccggggct    27720
          gctggcctgg cccttgagtg gggcagcctc cttgcctgga actcactcac tctgggtgcc    27780
          tcctccccag gtggaggtgc caggaagctc cctccctcac tgtggggcat ttcaccattc    27840
          aaacaggtcg agctgtgctc gggtgctgcc agctgctccc aatgtgccga tgtccgtggg    27900
          cagaatgact tttattgagc tcttgttccg tgccaggcat tcaatcctca ggtctccacc    27960
          aaggaggcag gattcttccc atggataggg gagggggcgg taggggctgc agggacaaac    28020
          atcgttgggg ggtgagtgtg aaaggtgctg atggccctca tctccagcta actgtggaga    28080
          agcccctggg ggctccctga ttaatggagg cttagctttc tggatggcat ctagccagag    28140
          gctggagaca ggtgcgcccc tggtggtcac aggctgtgcc ttggtttcct gagccacctt    28200
          tactctgctc tatgccaggc tgtgctagca acacccaaag gtggcctgcg gggagccatc    28260
          acctaggact gactcggcag tgtgcagtgg tgcatgcact gtctcagcca acccgctcca    28320
          ctacccggca gggtacacat tcgcacccct acttcacaga ggaagaaacc tggaaccaga    28380
          gggggcgtgc ctgccaagct cacacagcag gaactgagcc agaaacgcag attgggctgg    28440
          ctctgaagcc aagcctcttc ttacttcacc cggctgggct cctcattttt acgggtaaca    28500
          gtgaggctgg gaaggggaac acagaccagg aagctcggtg agtgatggca gaacgatgcc    28560
          tgcaggcatg gaactttttc cgttatcacc caggcctgat tcactggcct ggcggagatg    28620
          cttctaaggc atggtcgggg gagagggcca acaactgtcc ctccttgagc accagcccca    28680
          cccaagcaag cagacattta tcttttgggt ctgtcctctc tgttgccttt ttacagccaa    28740
          cttttctaga cctgttttgc ttttgtaact tgaagatatt tattctgggt tttgtagcat    28800
          ttttattaat atggtgactt tttaaaataa aaacaaacaa acgttgtcct aactcttgca    28860
          tagacttgac tgcctagggt gatgccttgc ttatactagg aactgggtaa gtttgttgaa    28920
          tagttgagta agccaagtat ttgatgagta cttttatctt gagtacaagt attgggcaag    28980
          tactggtgat gtgaacttac tccttgtgcc tatcctagga atgaaatgaa tgtcttcctg    29040
          cagctcccct gaccaccctg acagtcaaag tgcctcctcc ttggtgacag gtgccctaca    29100
          gcactctaga tgctctgttg tcctgacctc ccaatgccct tttcattctt ttctccccag    29160
          tacctggcac acagcctggc ccgagtattt acggaataag ttacagtgcc agatgcttct    29220
          gtaatgagcc agtgctaagt ccatggcttt tttcatgatt taaaattcag aacagtctca    29280
          gattgggtgc aatggctcac acctgtaatc tcagtacttt gggaggctga ggcaggagga    29340
          ttgcttgtgt ttaggaattc aagaccctgg gcaacagtga gaccccgtct ctataaaaaa    29400
          atttaaaaga ttagcgaggt gtggtagcac atgcctgtgg tcccggctac tcaggaggct    29460
          gatatgggag gcttgcttga gctgggaggc tgagggtgca gtgagctgta attacatcat    29520
          cactgcactg cagcctgggt tacagagtgc ataatgatcc cattcaatgt gggacctcca    29580
          ggccctccac tctaaggctg gtgaatatag ctgtcttaag caagttctct ctctctctag    29640
          acagcccatg tcataaggaa tctcaggcaa aattcctccc agattacatt ttctgacaat    29700
          tcagtgtcat atatggaaag cattcaagag ttgacagatg gcaatggctt gaacacccaa    29760
          ctgtgttatc tctgcccgtt ggaacctagg cctgtggtgc aaccctagac tctctctcct    29820
          tcccctccac agaatcaagt atcagctggt tagagatcca caccctgaca gctctgtgat    29880
          gttggaacaa cttggttctt gcagagggtt agcaggtggt caccagggat cggggaggaa    29940
          ggggtgtggc ttgcaggaag gcgaaaatct ggactagcaa atagggaagg ggacccatgt    30000
          gagcaacgct ggccactagg aatgagactg agacctgtgg gatctagcaa gaagcccagt    30060
          gtgaccagcg acacgatcta tgctggggac cacttgggag agccaaaagc tttggtggag    30120
          atgaatggag accatcaacc taagttcagc atcctcctct aagctttgca gatgaatcct    30180
          gaaatggtca gcccctccag agaaaagaac agcaacaggc tcagaggacc cacagtcccc    30240
          tttattagtg taaagtacta agaggaatca acagcattta gcaccaggca caggctcgtg    30300
          ttcccccgcc cactacggct gtgttctgat atatgaagaa tggcggcaag actccaactc    30360
          tgtttttgaa aaatttattt tatactctta gaagctaaga actttgccac acatgaacca    30420
          aatttagaat taaggttctt ccctagtgta tctacttcct tttgaaattt tataaacaag    30480
          attttataca caagaggtag cagaggaaaa ttccagtctg cttgttccaa gctcagaagg    30540
          taactgcaca cacctcgatg ttagcaggga aggtggggca ggacagggta agtctgatga    30600
          tacggcactc tagttcctaa aactgactgt agttgtcagt gaccgtgtga ggactccagg    30660
          agaagtcgtg gtgagatgcc cgctgggatg cttgttttct ttcccaggat gccttcaacg    30720
          ggcagaatcg gccatcttaa gatcggcctc actaagggag cttcttgaga acacacagca    30780
          ttattgagtt aattgtgcaa ttcctgctct gtttgcagac cattttgaaa ggtttataaa    30840
          aacatcttca tccaaaaaat tggcagtaaa aatgacaact cttccaaggt aagcctgtca    30900
          taactgtcac tgttgtacta cattaaaaaa agtcatcagc aggttcattg actgtagctg    30960
          tcagcaatca agtggttacc agcaaagtga aaacgatggt cattgcagca acaatataag    31020
          caacatgatc tgaagcgtat aatatacacg gtggacgatc ctgatgaagc tttacagtga    31080
          ggacggcagg tgctaggggt gcggaaggcg ttgtttccat aggaaataag gggactagaa    31140
          gtggcaattt cactcctgat tttgggctcc tgagagtgca gtcgccagcg atgatatccc    31200
          agtgtggatc atcgccagca tttcaaggtc atgtcccaca caatctcttg gtgaggatgt    31260
          gggcggagag aaggtgagaa tagggtaggg gaaacagtag gacaggaagt attcacgtac    31320
          tcaaaaccaa tggtagaaca tcacatttca aactgcaaga ccattggaac cgtctgaagt    31380
          ttgccactcg cctctgtccg tttctctaag ggtacagttc tgctcttaag tgctggccct    31440
          tccatcttct cagtgtgttt gacaaaggcc actgccaacc tccagcaagt cacagaataa    31500
          caatgaagtc tgacagcaca gaaaccctca ctgccagaga atgaaaagac tgggccatgg    31560
          cgagagcaca gtaatgagat gccatctgcc tggccacatg cccacacaat gccacagcag    31620
          ccagacaggc acttcagggc tggctgcgcc tctgtgactt ggcaaatctg acagtgaaaa    31680
          cctggcactt cctaaggctc cctagttctg tgcatggtga gatgaaaata aggcaggacc    31740
          tgtaactaaa ggcaaaacag ggccgaaaat gtgagcaatt caaaatacaa aatgtacaaa    31800
          atatatatga aatatgtggg tgtaaacctc tcccccacac cataaaaggg agctggtata    31860
          aatgagtgaa tggtgctata ctttggaaat acgactaaat ggatggttat tcaattgctt    31920
          tatatttatt tctgggaaaa taaatcttaa accttgactg acttttcagt gttaattagt    31980
          catgttgagg agaaacaaat                                                32000
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          gtcacacttg ctggcctgtc                                                   20
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          tctgccgtcc ttccca                                                       16
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          agcatctgcc gtcctt                                                       16
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          tgtcaagcac cacagc                                                       16
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          tgacttgtca agcacc                                                       16
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          ataagtgact tgtcaa                                                       16
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          gcattgtaag ttcact                                                       16
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          gcttgcattg taagtt                                                       16
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
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          ctctggtttt cccagc                                                       16
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          ccacctctgg ttttcc                                                       16
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          ctcttgtctg ctccaa                                                       16
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          tttagctctt gtctgc                                                       16
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          cacctgcaag tccctg                                                       16
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          atgttttcga cacagg                                                       16
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          tgggcatgtt ttcgac                                                       16
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          <![CDATA[<210>  202]]>
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          <![CDATA[<400>  202]]>
          actatttagc agctac                                                       16
          <![CDATA[<210>  203]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<400>  203]]>
          gtcaactatt tagcag                                                       16
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          <![CDATA[<400> ]]> 204
          ctaggttacc gctgtc                                                       16
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          <![CDATA[<400>  206]]>
          ctctgtgaca caaagc                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          taggagaaag taggga                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          gaatatcaat atctaa                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          agcatcatgg ctgcaa                                                       16
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          ccttgatagg ccaggg                                                       16
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          gataagtgct caatac                                                       16
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          caacgatgtt tgtccc                                                       16
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          acacacactg tctacc                                                       16
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          agacacaccc attggc                                                       16
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          tgccaggcaa cctcca                                                       16
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1172]]>
          tgaggtatcc ccggcg                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1173]]>
          acatgcagga tcttgg                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1174]]>
          agccagtagt tactgt                                                       16
          <![CDATA[<210>  1175]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<400>  1175]]>
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          gagcagactg atggaa                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          gtggtaacag cctcct                                                       16
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          attcatccgc ccggta                                                       16
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          aggtaggcag aggcat                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          cttattatcc ctttcc                                                       16
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          tcaaattctg caggaa                                                       16
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          <![CDATA[<400>  1201]]>
          gagtagaggc aggcat                                                       16
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1202]]>
          ccaaagccag aagggt                                                       16
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          ttcaagttac aaaagc                                                       16
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          ccataccata actccc                                                       16
          <![CDATA[<210>  1429]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1429]]>
          caattacacc agcaat                                                       16
          <![CDATA[<210>  1430]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1430]]>
          ctgcgaaaat attttt                                                       16
          <![CDATA[<210>  1431]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1431]]>
          ccacaggctg gaccag                                                       16
          <![CDATA[<210>  1432]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1432]]>
          cctcaaccgc tcccat                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          gagataggaa actatt                                                       16
          <![CDATA[<210>  1434]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          ggtcaccggc tggtct                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1435]]>
          tcccactctg tgacac                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1436]]>
          acagacacta agctct                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1437]]>
          ggcctcattg atgaca                                                       16
          <![CDATA[<210>  1438]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<400>  1438]]>
          ctgaccatac agtcct                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
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          ctccatgcgc tcgccc                                                       16
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          acggaaatgg gaatct                                                       16
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          gtccccatgc tggcct                                                       16
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          atacagagat gttaag                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          agctgaccag ctgtgt                                                       16
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          caaaaacaga cccagc                                                       16
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          gccgagtcag tcctag                                                       16
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          gctgagacag tgcatg                                                       16
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          <![CDATA[<400>  1493]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1494]]>
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1495]]>
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          ctccaagtgg agtggg                                                       16
          <![CDATA[<210>  1525]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1525]]>
          actaaaatag atgctc                                                       16
          <![CDATA[<210>  1526]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1526]]>
          tgccagagcc cgagga                                                       16
          <![CDATA[<210>  1527]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1527]]>
          gggcactgca gccagt                                                       16
          <![CDATA[<210>  1528]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1528]]>
          gacaagtcgg aaccat                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1529]]>
          ggcaaggagg ctgccc                                                       16
          <![CDATA[<210>  1530]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1530]]>
          gcagcacccg agcaca                                                       16
          <![CDATA[<210>  1531]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1531]]>
          taaaagtcat tctgcc                                                       16
          <![CDATA[<210>  1532]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1532]]>
          tgcctggcac ggaaca                                                       16
          <![CDATA[<210>  1533]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
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          agttagctgg agatga                                                       16
          <![CDATA[<210>  1534]]>
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          accaaggcac agcctg                                                       16
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          tgccgagtca gtccta                                                       16
          <![CDATA[<210>  1536]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1536]]>
          gtggagcggg ttggct                                                       16
          <![CDATA[<210>  1537]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1537]]>
          ccctctggtt ccaggt                                                       16
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          <![CDATA[<211>  16]]>
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          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1538]]>
          tcagttcctg ctgtgt                                                       16
          <![CDATA[<210>  1539]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1539]]>
          gtgaagtaag aagagg                                                       16
          <![CDATA[<210>  1540]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1540]]>
          actcaccgag cttcct                                                       16
          <![CDATA[<210>  1541]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  1541]]>
          ttagaagcat ctccgc                                                       16
          <![CDATA[<210>  1542]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1542]]>
          ggcaacagag aggaca                                                       16
          <![CDATA[<210>  1543]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  1543]]>
          taaaaagtca ccatat                                                       16
          <![CDATA[<210>  1544]]>
          <![CDATA[<211>  27001]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  食蟹猴]]>
          <![CDATA[<400>  1544]]>
          cattgcaaat acaattccag ttacaggcaa caggaaggaa aaccacctct gtcagcaaac       60
          aatgagctcc cactctgtgc tgcgatggtg gctcaatgcg gatagctctg accttacctc      120
          atggagtcac tgtcaaccca ctggttgcac agtctttgtg ccctggctct ctggagtgag      180
          gtctttgcaa acaaagtggg aaatgcagca actttggact ccagcaccta gattccgagc      240
          aggtcatttc actcagaata tgctgtgcat ctgcaatgac ggatcataaa gccgcctttg      300
          tttcttccca gtattgacag cccttccaga aagagcaagc ctcatggcat gccacatgta      360
          caatctgagg ccaggagctc tctttcccct tttcatcctc ctgcctagta cacaataggt      420
          gtttactgga tgcttgtcca gttgagttct tgaacatggt gtgtaaaagg aatctttgca      480
          aattgaatct tctggaacgc tgagcttgtg cctaccatag aattctgaac gtacctatat      540
          gacatctttg caaacttaaa acctgaatct ttgcagtata aatcccttga aacgcatgga      600
          ggctgggcat caaaagcaag cagtatcttc aaggaacagc tagtcggtaa ggtcagtgtg      660
          cagggtgcat aaagagcaga ggccggcggg ggtccaagat aagtttagaa ggttgccagg      720
          ttaaggtcgg tggaaagaat tcggtgggca gggaggagtc catagtagga ttgattcaga      780
          agtctcactg gtcagcaggt gacaaggtgg acccaggaaa cactgaaaag gtgggctggg      840
          cagaactcgg agtctggcat cccacgcagg gtgagaggcg ggagaggagg tgcctctaga      900
          gcgccgaccc gccttccagc ccagttagaa tttgggagtt ttttcttccc tctgcacgta      960
          atctgacgct gtttggggag ggcgaggccg aaacctgatc ctccagtccg ggggttccgt     1020
          taatgtttaa tcagatagga tcgtccgatg gggctctggt ggcgtgatct gcgggcccca     1080
          ggcgtcaagc acccacaccc tagaaggttt ccgcagcggc gtcgaggcgc tcgtggttgc     1140
          aggagggcgc cgccgctcag ttcagggtcc gagcctggag gagtgagcca ggcagtgaga     1200
          ctgtctcagg cgggccggga cgtgtcgttg cagcggcggc tcccagctcc cagccaggat     1260
          tccgcgcgcc ccttcgcgcg ccctgagcct gaactccagc tcctgcacag tcctccccac     1320
          cgtaaggctc aaggcgccgc ccgcgtggac cgtgcacggc ctctaggtct cctcatcagg     1380
          acggcaacct ctcccctggc cctgatgggt accgtcagct ccaggcggtc ctggtggcct     1440
          ctgccgctgc cactgctgct gctcctgctc ctgggtcccg ctggcgcccg tgcgcaggag     1500
          gacgaggacg gcgactacga ggagctggtg ctagccttgc gttccgagga ggacggcctg     1560
          gccgacgcac ccgagcacgg agccacagcc accttccacc gctgcgccaa ggtgcgggcg     1620
          gaggggtggc aggcctgggg gaacccgcag ccgggacggt gcgatgctgt ttcctctcgg     1680
          gtctcagttt ccccccattt aagagaggaa gtggggtgca ggtctccgag ggctcttcgc     1740
          ttggcacgat cttggggact gcaggcaagg cggcgtggga ggacgggtcg tggggagcgc     1800
          ggtggagagc ggggacggcc ggcctttcgg ggacttgcgg gggcgtgcgg ctgcgctatt     1860
          cagtgggaag gctcgcgggg ttgggagact gcgaggctga gggagggcgg gcagagcact     1920
          gccagggtct cctgcccaga tttcagactt tccgcctcgc cgcggcacag gtgggtgaag     1980
          aagtgaatgc ctggaaagca ctgggaacgc accagacaca gaggaagtgg gcttgccatt     2040
          atagtgggtt ccgattcggt ttgggaaata tgggcagcgg aggatggagg gcctggagag     2100
          aaggccctac ccgagacagg agcggggtgg gaaggactgc agatgctggg agcgcgaggc     2160
          aatttcttta cgacacagaa cttatgctgt agtattccat ctgtttcaat tgaagaaaag     2220
          aaccagctga aggggcaggg gagaaggggc ggagttattc tcgaggccca ttggtgtcct     2280
          ttaggactca ggcagggaag ggcccttggt gctctggagc cggaggtggc gcgcctggta     2340
          ctgggacccc gcagttgagc ccggcgcctc agcccacctg gctgtctgcc gaccgaccga     2400
          gggtgaggcg agtttgctca acgactctgc cagcatctgg ccctcaggct gtgggaagct     2460
          tcttcccggg gcggggtcac tagttttttc taagtattat cagcccagga cttggctgag     2520
          gttctgtgtc ccccagcttg gagtcagatc tggggttgaa tgatggcttc ctctcactag     2580
          ctgtggtgct tgacaagcca cttatccttg agcctccatt gcctagtctt taaaaaggaa     2640
          gtgacaatcc tccctaaggg ctcagtggca gcagatgggg agatgaaggg aaagttctgt     2700
          tgaccatgag tgacctcact catgcaagcc cagggaggga tcacttgcag ttttgcccct     2760
          gtctgcagcg tgacctgttg gtgacattgt ctttgctcca aactacagct cctggggcag     2820
          aggggaaaat tctgccactc acagctgcct gccccatctg agtgttctgg gtggcaggat     2880
          ggcaggtcct tactcagctc agtatagtcc tcttccttgt tccctgagcc tttgactttc     2940
          tagagggatg ttgtggggtt gtggccagga taagaaaagg cacttcaagt taccactgct     3000
          ccaaaacgac tgttctggaa atagtgagta ccccatcctg agaggtgagt aagcagaggc     3060
          tgtatgacca cctgaaccaa gcccttgagg atgtttcttc tctggtggaa atttggaaca     3120
          ggagcctcct cacgtttatt tattcattca ttcaatggat attctgtggg agtcgaattt     3180
          agaatgaaaa tattttttgg caagcagaaa agaattttta gaccaatcct tttgttttag     3240
          tcatgagaaa ctgaggctca gagagaggag gtcaccccag gtgcattaga actgggtttc     3300
          cagaactcac attccactgc acagagtact ctcccaattc attcgatttt tatttagcgg     3360
          aaggcatttt tagatgaatc tttgaagcat tagtaggagt tcagcgatga cgatgtcagg     3420
          agaattttat tctaggatta ggaggtacca tgaacaaagg cacagagctg ggaaaaccag     3480
          aggtggagga taaggagcac atgtccacag ttctttttct ttttttgaga tggagttttg     3540
          ctcttgttgc ccaggctggg gtgcaatggt gcagtctcag ctcactgcaa cctccacctc     3600
          ccaggttcaa gtgattctcc tgcctcagcc tcccaagaag ctgggattac aggcgcctgc     3660
          caccacaccc ggctaatttt tgtattttta gtagagacgg ggtttcacca tgctggtcag     3720
          gctggtcttg aactcctgac ctcctcagat ccactgattt gtccgccttg gtctcccaaa     3780
          gtgctggaat tacagttgtg agccactgcg cccaggctcc acagttcttt atccaccttc     3840
          tgaaatgtaa aatgttctga aaaccaaaag gtttttctgt gatttatttg atggtagcat     3900
          ctgacgtgaa ctgacatgag attattttta atctagttgt gtgaatatgt gtattcatgt     3960
          attttgctgc atagattaca catgcagctc cagattcctc caagcaggct ctctgattgc     4020
          ccactactgt ctttctaaaa tccaaacaag ttctgaggtt caaaaccgat ttggccctaa     4080
          ggctttgggt aaagggggtg aactctgttc tactctgact ggagtccaag atgcgtatat     4140
          acagagatgt gggtggtgag gctgcaaagg taggttgagg taggggccaa ggaggagcat     4200
          ggagtttgga cttgatccat gaggctgtgg ggagccagtg aaggttcttg agcaggtgtg     4260
          tctgcctgag agcagctgga gcagacgaga gctaaaacca aacaaatcac ctgcagatcg     4320
          tggctgctat agtttgtccc ctccaaatct catgtggaaa tgtggtcccc ggtgttggaa     4380
          gtggggccta atgggaggtg tttgggtcgt gggggaggaa cccccatgaa aggcttggtg     4440
          ccatccttgt gataatgact agattctccc tctatgattt cccttgaagg ctggttatta     4500
          aaaagagctt ggtacctccc tctcttctct cttgcttctt ctcttgccat gtgatagatc     4560
          tctgcacatg taggctcccc ttcaccttct gccatcaggg gaagcagctt aaggccctca     4620
          ccagaagcag atgctggtgc catgcttctt ggagagcttg cagagccatg agctgaataa     4680
          atcccttttc cttataaatt acccaccttc aggtattcct ttatatagca acacaaaagg     4740
          actaagacag tggccctgac tcttctctct ctttaagaag tgttgtcttt gctcacttag     4800
          tcatcccttc cgcctgcatt tgtagagcat ctggatggga gatttctaca accgtcactc     4860
          ttgaccttcc cagcaggcct gtgtcatacg tactatggtc tccacaatac agcggagata     4920
          tctgaggccc agagaggttg agtgacttgc tcatggccac acaaccagta aatattagag     4980
          ctggaattca ggtccacggt ttcctggctc caaagccatg agtttttccc tcagtttatt     5040
          ctgattgggg caggggggag gaggtggcct ttgggcaggg ccgccacggg taaccaggcc     5100
          catagagagc tggctgcagg tacagaggaa aacctcttgt cgagtgcggc ccatggttcc     5160
          catttttgcc tgactggcac atttgaaagt gttatataac tatgtgaata ataatagttg     5220
          gcctatatgc gttttttaat ttgcttttgg gtccgcattt ggtaacttct ttatcactta     5280
          ctacactctg ttgtgcctct tttgttgtaa ttctaatttg taagtagggg tgagataaag     5340
          tacacatagg gtttgctggg tttcttccac gtcatcatgt tcctccttgc acggggccag     5400
          gatccgtgga ggctgcccgg cacctacgtg gtggtgctga aggaggagac ccaccgctcg     5460
          cagtcagagc gcactgcccg ccgcctgcag gcccaagctg cccgccgggg atacctcacc     5520
          aagatcctgc atgtcttcca tcaccttctt cctggcttcc tggtgaagat gagtggcgac     5580
          ctgctggagc tggtgagcca ccctttctgg gaatggcact tcctgatagg gctgggccac     5640
          tgcatataca ctggggactg tgctcagtag gcctattgct gaaaatcaga aggggacagc     5700
          aagtatgtat tgagcactta ttgggtacca agcacagtaa ccactggctt tctgtatgga     5760
          attcccttta agcctggcca tgccccagtg gtatgtccat cttcatttga aagttcagag     5820
          gggaccacac agacagctag gggtaggacc tggatcaaac tcagtggtct gcctgccagc     5880
          cattcttatg ccaatgcatc tgctacctat ggaaaccttt agggacaagg ccctgggatg     5940
          ttcaatggag cctgagtcat tttataaaaa agcatgactc aagggtctac aatttctttg     6000
          aggctgctgc tatcagagta aagaccctac tttaggacag ggtggccctc ctccctcctg     6060
          gatgtcacat ctttggtgga gaggcagaaa ggggactggg tattctcctc accctggccc     6120
          taatgcttca aatcttaaaa aaaaaccttc ttgtttttgc ttctgcccca ccttctagcc     6180
          cacctctttt cctggcctgt cacttgatga gagcgtgtgt cattttcaca ctgattctcc     6240
          acatggcagg gggtgctttt cagcctcctg cagacagtga ggcccagggt cttgcccaag     6300
          gtcacacagc atgtaatggg cagggtcaga gtctggactt gggtctccta gctgcactgt     6360
          actgctgctc cacgggttaa tcagctcagc atcccgtggc tgaacagcga cctcatacca     6420
          aggcctgtgg gaccatgaca gggattgata gggtccctgc cttaggaacc cgtagtctaa     6480
          gtagaggaga ctgacaagtc aatgccttcc atcagtctgc tcaacacaca tttaccaagc     6540
          gcctactgtg tgctgcagag gcgaagatga cacagcccag gcctttccct cgagcttaca     6600
          gttcagaagg agagactgat cagtgaccgc cagccagtac agctgactat gggacaatgt     6660
          gctcagcagt ggggcgagac gaagaaggta cccgtatagc accagatgac aggcacaagc     6720
          cccacaggcc agggcagctg ctcagaggag agtaggccaa gcagaagcca agcggaaagc     6780
          tgcaggcatt tgccattgag acctgggctt caaactgggc atcctaccag cctgggtttg     6840
          agtcccaccc agccccttat tagttgttta accctgggca aatgccttca cctctctgag     6900
          cctcattccc ctatctgtaa accagttata ataatgggaa cattcattta aggactaaat     6960
          gaggttgtga agcattcagc agatgctagg tatagaaact cgccaaagtg ggggcaggtt     7020
          aagaagcctc tggggatacc aaggcatcca gggactagtt gtggcaggaa gctgttacca     7080
          cttaggtctg aagggtaagg agagggaata gttttccctc tgcccaattg gagctggtgg     7140
          catggaggag aggctgcccg tggggagtca cctgagagtt caccgctgcc atgcgcaggg     7200
          agtcaggagg tagggaggga gtggggcaga tgcacagttt tttgtttttg tttttgtttt     7260
          tgagattctg ttgcccaggc tggagtgcag tggtgccatg tcagctcact gcaacctctg     7320
          cctcccgggt tcaagcaatt ctcatgcctc agcctcctga gtagctggga ctacaggtgt     7380
          gtgccaccat gcccagctaa tttttgtatt tttaatagag atggagtttc accatgttgg     7440
          ccaggctggt ctcgaactct tgacctcagg tgatccccca cctcggcctc ccaaagtgct     7500
          gggattacag gcatgagcca ccgcgcccag ctgcagatgc actcttgtcc ctctaactcc     7560
          tgctggtgcc tcccattggc tgagcctaaa tggaggcttt gcaagggagc tggtgctgca     7620
          gtttgcactg agcaggctgg agaaggctgg ggaatagact gggggacaaa ccgaattgcc     7680
          agtgctgtta tgtcatgatt taggcatagt gtccagggcc tgagcttcac tccgtgtcca     7740
          tcctgcccag agccttagca cagcctggct cccagacaag atgtcaagtc cagaatcctt     7800
          cctaaaagga atcctttgtg ctaggccttg ttgcagggat atgggagtgc taggctccca     7860
          gcctgatcaa tgagtgagaa aactcaggct cctagtctgt cctccggggc accaggaggg     7920
          agtctgccgg gacaaggtgg gaggctgctg ggctgggata tggggacagg tgtgatcagg     7980
          tgaggccagg ctgtggctgt gtttgctgct gtccagatgg cttaagcaga atcccccaac     8040
          ctctctggct tctgcaggcc ctgaagttgc cccatgtcga ctacatcgag gaggactcct     8100
          ctgtcttcgc ccagagcatc ccatggaacc tggagcgaat tactcctgca cggtaccggg     8160
          cggatgaata ccagcccccc agtaagaccc cccatctgtg cgctgcccct tcacacctga     8220
          gctgaatcca tttgctctgc tctggccttg cctccctgcc agtggtttcc acttcttggg     8280
          gggctttggg actcagcacc tccactgacc cctttttttc tgtcccatcc ccaacccctg     8340
          cagcccccac tgcctgcctt cctgtagctc cacaaatgca aaagtcttgc cttaaatgat     8400
          cctcttttcc tccttgtctc ttgttttcct cttctctcca tttggaatgg cccagcaggc     8460
          tgcacttacc ttagaaggag ggttcatctg atggtgactc tacctagggc ccctccccag     8520
          gcctctataa ctcccagtgc cctgcagact ggaccagacc ccttaatggg acagacacaa     8580
          cccggactgg gatgcccctg cctagcttcc tgttttgctg ctctccctgc ctccagctct     8640
          gtttggcttt ctggatctcc ctgcatggcc cactttgtgt cttccctcta ggcctttcct     8700
          tccactgttc cctctgcctg gtgtggcctg actgtgggag ggagggagga ggagtagcca     8760
          tggaaaacag tctgcattct agcagggcct tgcaggtggc aattccttgc aggtggcaat     8820
          tcagtcaggg aagactctag atgcacctgg cctgaggaga ggatgaaggg ttctagttgg     8880
          actgtgttaa gtttgaggtg cccatggtgt gaggtctgca gctcagtgca gagacaatgc     8940
          aatgtggtgg gtccgtgcaa catggtgcca ggacgcagag cttggggtga actcagcttc     9000
          caccccttac cggttctcgt ggggtcttgg gaagccactt cgttctatta gtcttgtctt     9060
          tcttgtctgt aaaatgggca cataaccctg tccctgtcct tctcacaggt tgctgtgaga     9120
          ctccagtgag ttgaagggtg tgcagatgct tttggaagtg aaaagttggg ggcttctgtg     9180
          tgactttgca tactgtatga ccttgcatat gtctgagttg ctgccattgc aacagatcag     9240
          agctggtggg caggaggtgg agatagggtt tgtgcggggg acatcctctg gcaagggtgg     9300
          cagcagcaga agcgaggggc ctggttggtc atgtgtgctg acctgacctg ggcagcctgt     9360
          ggccagggag aggacagctc ctctgtagga ggagcctgtt cctttccaac caggtgggac     9420
          ctcttctgtg gattcctgga gccccctgca ctccacattg gcgcctcagg gacctcccgg     9480
          agcaggctaa tatcagagac tgagagggac actggcagag ggtcacagag gccccagtcc     9540
          aggcagaaga ccaagaagat cttgccccct aagttagttt cctagcactg ctgtgacaaa     9600
          ctaccacccc cttgttggaa caaattgatt ctctgcagta ctggaggcca gaagcctgaa     9660
          tcagtgttgg caggaccacg ttctccccgg gagctccagg gagaagcttc tcttgtctcc     9720
          tctgtgtccc aacagcggca gcacacccat cccagcctct gtcttcacac agccttctct     9780
          gtgtctctct cctcttcatt gtctcataag gacactcgtt gttggatttg gggccaactg     9840
          gatcatccag gatgatctca tgtggagaac cgtaaccaca tctgcaagga ccctttttcc     9900
          aaataaggtc acagccacag gcggtgcggg ttaagatgtg agtgtaccct ttggcagcca     9960
          ccattccctc ctctcccttg ggccagaagc agacgtgggg ccctttcctc cccataggat    10020
          gcccatggat tgtccccctc cccacttccc ccgagtgtct gtgggaagtg gcaggaatgg    10080
          caggcagggg tgtggaaccc cttctggagt cacatcaagg gcttggctgg aggatgtcct    10140
          cctggagctg ttgcgctggc atggggcagg ctggctgggc ccagcagcag cctcttcatt    10200
          catggggagg ccacaggcat gggccctgga gctggctgcc gccctcaaac ccagactctg    10260
          cactcttaac tgtgtgaccc tgcacacatc actcaccctc tctgatcctc aggttcctag    10320
          gttcctctgc aaaagcgagg gaatagtaag cctcgctctg gggggctgtt aggagggtta    10380
          aatgagttat tgctatagca tgcatttctc tgtcaggtat tgagtgaggt gctgtgattt    10440
          tagccctgca tttttctttt cttaccattc aacaataacg tcttgagcac ccactgtgtg    10500
          ccaggcaccg tattaggtgc tggggataca aaggtgaatg aaatggacgt ggtctctttc    10560
          cccaacagtg tatccagaag attaatccat tccttaaaca aatgctatcg acacaaatta    10620
          gttccggata ggctgagagc tctgaaggag tgcaggcaac tgtgagcctg tgtatccggc    10680
          agaaggatca ggaaaggctt cctggaggaa gcgctgttcc agccaagacc cacgggggca    10740
          ttattaacca ggccaagggg acagtgtcca agcagaggaa tgaacatgga ctgaagctgt    10800
          gaggcaggag ggagtgtagc ctgtacagaa gggactgagg ctggtgagac cagcagggcc    10860
          tgggtgacct ccagggcaga tgtgaaagga agaactcggc cacagtctga gcttctcagg    10920
          cgcatggcag ggctgcctgg tgagagctaa tgagctccct gctctggagg tatgcacgca    10980
          ggactgggct cccacctgcc agaggccgca gagctttctg taccaaccta gaggctggaa    11040
          gaggccactc caaggcctct ttgcccctga gagtggtggc ttttcttgag gccaccttgc    11100
          cacactgtca cacggaacta gcagcctctg cctcacccag gggtttggag gatagagggg    11160
          ggcctaggaa gggccccaga ggccctgtgt cctgtccgag ctgaaaccct ttccactgga    11220
          aggaagccca aggatgttcc tgtgggggct ttggcttgtg ctttccctcc agctgtagag    11280
          gccatggtgg ggctgtgggc cctgggtggg cgctccaggc ttacagcctc tctcctggca    11340
          gtgtcttacc aagagctgcc ccttcgccag gcccgcctgc cctctgctgg ccatgcttgc    11400
          agcctcctga ccctgtccca gcaggagagt gcgctggtgt cagcgggcag gaactgcctg    11460
          tatttagaag ttgtggggct gcgctggggc cacaccccag gcccagggat gtgacctcac    11520
          agtggtcaca tcatcttgca gcggacccca agtacagctc ctggagcaga tggtggtccc    11580
          aagcacaggt gggaccagaa aggattgtca cctgggctaa ctcagctgcg gcctcagttc    11640
          cctcctcaca cacgacgagc agcatggact ggaatcctgc ccagcaggcc tttggcttga    11700
          tgtgcgttgt gtggcttatg tccaggtggg gaagcagctt ctgtgctgtc ttctagatga    11760
          gcctgtatcc cctgggctgt ctgccaatgt atccagttgt accgtcagcc tggaagctct    11820
          gagggagaac cttgggctgc ttcctaagca cctgtatccc ctgtagccag ctcggggcct    11880
          ctgctaggag cagaccgagc atggcctatg ggcctggcac catctggcct ctgcccacct    11940
          tgctggcctt gtcatgtgtc tgcccctccg acattccata gcccagttca atatctagtg    12000
          gttcctctag ggtgaccagc accctttggt ctccacatgt cttcaggtcg gagctcacag    12060
          cgctctcaac taccccttcc cagtgcagca ccgggcacgt ggtagatgcc tactgatgag    12120
          tgaaagctcc taacacactc ggagagcaag gactctgcct catcccgcag cctgggagga    12180
          caggcagact gccgaggacc tgcccagcat gctacagaag taaccgaagt gcgcatgggc    12240
          actgatcagt ggagcgtcct gctgagactg gaggccatag ggcagggcga atagtgtctg    12300
          tgcaggctgg ggactcacag ttcggactgg gcccagccct actgccacag tgggtgggtg    12360
          ggaggacgta ggactgggag ctgaccttgc ctgaaattag tgtgggatct cagagcagcc    12420
          actgaattgc tctgtagtgg gctaaatagt ggcccccaca gatacacaca cccagacaga    12480
          gcctgtgagc cggaccttat ttggagaaaa ggtccttgta gatgtaatta agcatctcaa    12540
          gatgacatca tctggattat gcggtgggct gtaagtccgg tgatgtgtct ttatgagcga    12600
          aaggcggagg gagatttgag acacacagga ggggccactt ggagacagag gcagagattg    12660
          gagaaatgtg accacaagcc agggagcatc agcagctacc agaagccgga agacgtgagg    12720
          cagggttctc cctggagcct tcgttgctga gtctgggaat ttgttactga agccataaga    12780
          agcgacgaca ctccctgagc ctcccgtact tgctcacctg tcctgagatg agaatctcta    12840
          ctccgcagca tatttggagg atcactgccg gggacacaga ggtgctgttc agatagcact    12900
          tcagaagact caggagaccc tggggcagga gcaggttgat tgacagccca gagggctacc    12960
          atctggttcc acctgaggcc ctgcttctcc tggctgcagg ggttccaggg ccaggccatt    13020
          tccgctggcg caggactctt ctagcagcaa cctgcctaag tcttcctttg gcctggctga    13080
          gagtttctga gacccgcact ggagcggagg tgcttccttc cttgcttccc ttcttcctcc    13140
          cccccgtctc cgcccagtgg gctggacctg ccttgcatct gtgagctctc cctactttct    13200
          cctacacccc aatctttgtc ctgcacaggc aactccctca gtgagtctct tgcagctttt    13260
          accccagtgc cggcttcttg gagaatccaa actgatccaa ttaggtatag ggtaggctct    13320
          cggtgactgt tttctctgag gccgtgactc gtgtgaggcg gaagcagccc ctgtgagccc    13380
          ttctggtagc ttgtggagtg cagaatgctt ggacctggag tcaggaggcc cagacacaca    13440
          tcctgtccga gctgcagctt cctgtctcta aaatgagccg accagcgcag gcggccagac    13500
          atcactgtta ttctttgagt ctttaaatca tgttgtcttt ctcgcagact cggtgagctg    13560
          tgaaaagcta taataggggc tttattttac actatgatat tatttcttga acattcatat    13620
          tattgttgga tattgatatt aatatgaagg agcaggatga cttgggtcct tcctggcagt    13680
          agcattgcca gctgatggcc ttggacagtt atctgccccc tctaggcctc cctttccttg    13740
          tctatgaaat atagaatagg atctagcgtg cgaggatttt tttggaggtt caatgagtga    13800
          atatatttaa ggtgctttca ccagtgcctg ggatgtactc cacagtttct gtgtgttaac    13860
          tacaaggttg acttcatgct cattccctcc tctcccacaa atgtcacctt ggaaagaagg    13920
          aggcagcctg gtggaggtgt atctcctaga caccagcata cagagtgacc accgggaaat    13980
          cgagggcagg gtcatggtca ccgacttcga gagtgtgccc gaggaggacg ggacccgctt    14040
          ccacagacag gtaagcacgg ccctctggtg ggagggctgc ctctgcccat atccccatcc    14100
          tggaggtggg tggagactcc cgtccaagag tgttgcagct gtactgctgg gctacagtcc    14160
          ccagctgtca ctgtcccctc cctgccatca gttgtgggaa gggtgttcat ccatccagcc    14220
          acttgctgat ttgttatggg gtgggggggt ctttcttatg tggtccttgt gttggctgag    14280
          caggccagca agtgtgacag ccatggcacc cacctggcag gggtggtcag cggccgggat    14340
          gccggcgtgg ccaagggcgc cggcctgcgt agcctgcgcg tgctcaactg ccaagggaag    14400
          ggcacggtca gcggcaccct cataggtgag tgatggcccc agacagcgct ggtctctctc    14460
          catctggacc tggcctggga agtggcttgg gctgggccca gggagagcta gtctcctaac    14520
          caagaatgct gtggcagcct ctgccgcaga gccagagaac cagagtgcca aagctggcag    14580
          ggtccccagt gaccacgagt gcagatgaag aaacccaggc cccaagaggg ttacgcaggt    14640
          agcccaagga gtgcagactt gaccctgggt cagtgacctt tccacaattc cacactgctc    14700
          cccttttcaa acctggtgac atctttgtgt cttttgtgat gttatcttca atgtggaggg    14760
          actcgaggtg atctaagcaa acttcttcta tcttctgctt gcatacttct gagaccagag    14820
          gactcactta cttgcatgac tggccctgca ggtcacactg gccaggcaga tgtggtggag    14880
          gaactggcag aggacttttt ctagactatg actctgttta gtccatctgg cggcccccct    14940
          gtgaagtccc gctgagaact aggactccgg gggcctgtgg acagagaaga gggagggtgc    15000
          tctcccttac tgacttcctc ctgtggccac tgagcaaggc ctctgtacaa catgccctgg    15060
          ggctggcctt gccatagctg ctgaacagtt gatgaaacca gtccagagag gggaggtgac    15120
          tgcccagggt cacacagctc aagctgatga tgtcactggg aaaggtgcca gctctgggca    15180
          gcagcttgac ttccactgca ggccccaggc cccagggtca aacactggct ctggagccag    15240
          cggaagcagc ccatgggtcc gtttgaaagg ctgaggaggc ccaggagtct tccctgtgtc    15300
          tgccctgaga ctttcctaca gagtacaggt tttgatgttc agttttaaag gcaagaatca    15360
          ataaccttcg gccccatcag gtgacccctt gtgcctgtcc caccccttta ttgactgacc    15420
          tcggctcagt caggccagtt cctgaaggtc agtgtgtgga ggggaggctg ttctttccca    15480
          gaaaggcctt ccccaggcct ggtgctctgg cctctggagg acttcctgga gaagtccctt    15540
          ctttggcatc ccagtcagtg tatgggaagc ccttactgca tgacctggca cggggcaggg    15600
          gctcaacagt cactactgcc ttccttggcg ctgccatttc ctcctctgta agcaggtgat    15660
          tgtgtgtcga gtctgagcac acagataagc acacagcagg tgcttaataa ctagcagctg    15720
          caggctgggt gtggtggctc acgcctgtaa tcccagcact ttgggaggcc gaggtgggca    15780
          gatcacctga ggttaggagt tcgagaccag cctggccaac atggtgaaac cccatctcta    15840
          ctaaaaatac aaaaattagc caggcgtggt ggtgggtgcc tgtaattcca gctacttggg    15900
          ggctgaggca ggagaatcac ttgaacccag gaggtggagg ttgcagtgag ccgagattgt    15960
          gccactgcaa tccaacctgg gtgacacagc aagactccat ctcaaaaata aataaataaa    16020
          tacataacca gcagctgtaa atgtggctgt tgttcttcac ctccacactc agtgccactc    16080
          cgctcccttc ctccgtggtg tgagggtcct cactagctgt cttctaggag gagcatggct    16140
          gtgagattcc agctccatcc ttggccacag ctcctggaga catctcagag accaggatct    16200
          ggaaggctcc cacaccccat ttgacagggg agaaactgtc agttccaggt ccccttgcac    16260
          atcagggcca gagctgagtt aggctcccag tctccaggcc actgggccag agctcacagg    16320
          ctggcaaagg gttagaactg ttactggtgg ctgggtgtgg tggctcacac gtgtaatctt    16380
          agcactttgg gaggctgagg ctggcagatc acgaggtcag gagatcgaga ccatcctggt    16440
          gaaaccccgt ctctactaaa actacaaaaa attagccagg tgtggtggcg ggggcctgta    16500
          gttccagcta ctcaggaggc tgaggcagga gaatggcgtg aacccaggag gcggagcttg    16560
          cagtgagtcg agatctcgcc actgcactcc agcctgggca agagagcgag actccgtctc    16620
          aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa gagctgtcac tggtgacagt agcatgaggt agatcatggt    16680
          ctacaccaaa atgggggatg tagtgccact gaggccagag ggaaccacac cctcaaaggt    16740
          ggggagttat ggtatggggg ggtcctgggc gtggagtctt ttaattcttc agacaatcct    16800
          gggagcagct gtccctgttt catagagagt ggggtcacac agctggtgag tgggcagcca    16860
          agactctgtt caagtttgtg tgggttcaac acttgtggcc acggtggagg ggcatctgag    16920
          ccaggcctca gagagtggca gggagaagtt gggtggggca gggcgccctt ctcattcctc    16980
          tgaggctcat cctctcggtg cctccatttc ctggaaaggg ataataaggt tattgtgagg    17040
          atcccctgag ttcatatatt cagacactta gagccaggca cacagaaggg ccggggtcgg    17100
          ctagtttgat tgctgaggta attgctaata tcttccagtt tctattggtc aaggttccgc    17160
          agagaagcag agccagtagg atgtatatat taagagtttc aaggaattgg ctcatgtgac    17220
          cctgggggct ggcaagtctg aaatccacag ggcaggccag gcaattcctg cagaatttga    17280
          tgttgcagta ttaagtccta aggcaggcct ggagtagaat tccttcttcc ctgggaggcc    17340
          tcagtgtgtt ctctgcaggc cttcaactga ttagatgagg cccacccacg ttacggagag    17400
          taacctgcct tactcagtct cctgatttaa atgttagtca catctaaaaa gtattttcgc    17460
          agcagcattt ccactggctt ctgaccaaac atcaggtcac caagttgatc cccaaaatta    17520
          accatcactc tgtgcctgta agggaggggc tgggaatggg gaacagttct ccccaggggg    17580
          tgacctaggt ttgttcctcc caggcctgga gtttattcgg aaaagccagc tggtccagcc    17640
          cgtggggcca ctggttgtgc tgctgcccct ggcgggtggg tacagccggg tcttcaacgc    17700
          cgcctgccag cgcctggcga gggctggggt cgtgctggtc accgctgccg gcaacttccg    17760
          ggacgatgcc tgcctctact ccccagcctc ggctcccgag gtaggtgctg aagctgctgc    17820
          cccaagacgg ggagcgaagg gcaggcgggc ctcgtgggct tcttgcagca cgttcctgga    17880
          ggctgaaccc ttctggcttt ggaaggagtc gtcagagccc ccccgccatg cgggaggctg    17940
          gggaggaatg gcctcgagcc tccatcatcc cagagtctga acagcagtga ccccgccacg    18000
          cccccacgta gcggcgccca cgaagccacg cccccacacc ccgtcctggc cactctccct    18060
          cttgagggtc tcctggtagc cgccccctcc ccatctccct ccccaggccc tgcgtcctct    18120
          gcccaatagt cttagggccc gcccaatatt cttagggccc gcccaatagt cttaggccct    18180
          ccccactatc cagatccctc cgcagctgca tgactgacca cttgagcgag gctaatgtga    18240
          atgggaacag ttgagggctc agacctcacc cgagggacat ccagagagtg tgccgcaggg    18300
          ccgtgcagtg tggctgccgg gacacagaca cggagcctcg gccctgagga gctggggggc    18360
          agtgaccgtc cctcctgtga ccaccactcc tccagtgtca ggtcactgcg ggtatctagg    18420
          ggagagaatc ttgttccact tcaagtctgg aacttcaagt ctgtgtgtgt gcgcgcgcgc    18480
          gttgtgggtg gggattgcgg agcagaagca tacctgacag cggtaaccca gatcctccct    18540
          ggcctcggag gcttccctgg cagcccaatt taaaggcatc aagcaaacaa agcccaacac    18600
          atctctgcct tgccctctca gtctcccccc gtggcactta gagccacctg atacaccgag    18660
          tagtttccta tctccctcac tagaatgtaa actccacagg ggcattggga atgctgcctg    18720
          gctatggtag ggacagaggg gagcaccagg gcggggcagg ggtgccagag ttctgcctgg    18780
          ggagtcagat tttccttagg aggggacatt tgaatgggac ccaaacaggt gtatagcagt    18840
          tgttcagccc agctggcaag gcctcagttt gcttctgcaa cccctctctt gggctccttt    18900
          ctgtgccacc tacctcctca cctttccagg tcatcacagt tggggccacc aatgcccagg    18960
          accagccggt gaccctgggg actttgggga ccaactttgg ccgctgtgtg gacctctttg    19020
          ccccagggga ggacatcatt ggtgcctcca gcgactgcag cacctgcttt gtgtcacgga    19080
          gtgggacatc gcaggctgct gcccacgtgg ctggtaagtc accaccccac tgccttggcc    19140
          accgtgatgc taacagccct ttggcggtca gggtctgtgc caggacctcc agtgccaggc    19200
          tctgtgcagg gggaccagag atgagacagg cctgatggtg ccttcatgga cactcagtct    19260
          gatgagggag acgagtgcac agtgggaaca cgaggttagg gctgtattag agggagccca    19320
          gaggaggcac ctgcccagcc cgagggtcag agaaggcttc ttggacaagg gacatttgat    19380
          ctggagcttg atggatgaat aggagtccac ctggccgata agacagcaac taccaaggct    19440
          tagaggtgtg acggaaggct gtcttacctc actgtgtgag ggactgcagg cggcttacct    19500
          tctagaagag agcttggtgt ctctggtgtg tgcacgtgtt tttgtgtgta tgtgtgtgcg    19560
          tgtgtgcact ggcaggagtc ccctgctggg gcaggagggt caggccgtca ccatctttca    19620
          ccattcaccc ctgtaccagg cattgcagcc atgatgctgt ctgccgagcc ggagctcact    19680
          ctggccgagt tgaggcagag actgatccac ttctctgcca aagatgtcat caatgaggcc    19740
          tggttccctg aggaccagcg ggtactgacc cccaacctgg tggccgccct gccccccagc    19800
          acccacaggg caggtaagca ggacggcagg gtgggcgagg ccaggctggg gcttgggagg    19860
          tctgtgtgac cttgacagtc tctcccctct cccttgtctg tgtaaggagg atgacaccac    19920
          cttaaatagg attaaatgag aagggggctc tgaaagggct ttgcaatatt ttcataacat    19980
          gtttttatag agacagttga gtatgttctt taagccctcc tctctcctac catgaactaa    20040
          agatttttgt ggaggtcccc tcactcccag caccccctcc tcatcccagg cactttttgc    20100
          aggttggcag ctgttttgca ggactgtgtg gtcagcacac tcgggtccta cacggatggc    20160
          cacagccgta gcccgctgcg cccaggatga ggagctgctg agctgctcca gtttctccag    20220
          gagtgggaag cggcggggcg agcgcatcga ggtggctacc cctccttcgt gtgtgtgtgt    20280
          gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtga gtgctgggcc ctgagggacc    20340
          cgcagcaagc ccctccatcc tcgacactcc agctcttctg taagcttaca gggctggcca    20400
          gagcaggagt ggggcactcc tcatctcacg ctgctggggg ccgctggaga gagccacagt    20460
          gagaaggatt tcctagaggc tgcaggacag tgctggatgg attttcaatg ggtgctggat    20520
          gggtgtcagc gtgagggtca gggatctgct actctggact cagccatctc taggcccttc    20580
          tcactcaggt gctccatggt tctgggagct gagaaatctc aaaccagcaa aaaaggggaa    20640
          ttgatgttga tgctacaggg tagtgcacag atgccatctg gtcgcagcgt tttggtggaa    20700
          gggcagtgcc cagtcaggag agtgaggagg ggcaggcatt tctggcctgg gagatggtgt    20760
          cttaatgctt gtgtgggagg cagagtgggt ggggtggagc ccgctgggtc cttgctttgg    20820
          cctcttggat ttccctgtat ctccattttg aaaccactct gtgtttggaa gaacttttga    20880
          gtattcagag ctgcccattg gcagaacagt ctactttggg caggagcgag ctccttgtcc    20940
          ccagaaggct aggggcaggg tctgactggc ccctggtagg gacactgacg agggtgcttg    21000
          agttgatcct gtctagtccc tttctctgtt ttcaaagccc attctaaagc agattcctat    21060
          ttctgtcttt gactctcagg cccaaggggg caagcgggtc tgccgggccc acaacgcttt    21120
          tgggggtgag ggtgtctacg ccattgccag gtgctgcctg ctaccccagg tcaactgcag    21180
          cgtccacaca gctccaccag ctggggccag catggggacc cgtgtccact gccatcagca    21240
          gggccacgtc ctcacaggta ggaggctggg cctgccctgg ggtgaggaga gttccctttc    21300
          tccttatgca cccactgccc tcgaggcttg gtcctcatga gtgtgatcca tgagactgga    21360
          acccgacttt ccattccata ctctggttct gtcacttcca tgccctttga ccctgggcag    21420
          gtgaccttac ttctcgtctc agcttcctcc tccataagag ggaaaaaggt atcacctgcc    21480
          tcattgtgtt gcgaggagat agggcactgg cctggagcat ggcaggtgct ttgcctaagg    21540
          tggtgcagtt caggagaggc agctccagag agaggacccc ggctggggct gaaaggaggg    21600
          cagacctcgg tttgaatttc actctgccac tcgatagctc tgtgacctga gcaagttact    21660
          taacgtctct gtatgaggaa atgatgggtg ctaagcactt agcttaatgc ttggacaata    21720
          tagattctag ctatcgttac tattattgtc atcacctgtt gctttaaaat ccagtctctg    21780
          gtataggcaa ctattgatag gctaccctgt gtcgaaaaca tgtccaggca ggtagcagga    21840
          agtcacagat ggggactctt ggggcatcaa gggctggcgc cccaaggctg agctgttctg    21900
          gttgggtgga gcgtgagagg tctgggaaga cagtggagct ccagcctgga ataagaggct    21960
          cagagttgat tctcgtctga gcatgtccag gggagccact gagggtttgg gaacaggaag    22020
          gtgagggtga gaacctaact ctgggcacag caggctggca tgtgggatgg atgttcagga    22080
          aagatgagcg tagtcaggtg gctggtgccc ttgtccaggg gagaggctcc atccggtccg    22140
          gggatcctgg cttggaggga agtccgccat gctgtaatca cactcccctt tggaagtgct    22200
          cagccgatga actcacaggc acatgtcagt ttgaagtcat ggaatctgac tctatgaggc    22260
          acacctcaaa gagccccatt ttgcagctaa gggaactgca ggctggacat gctgagtgac    22320
          tgccctgagc ccttgcatct aggacataga gaatgctagt aaccacgacc ctaccatgtt    22380
          cagagcacat gccaggctcc atgctggcgc ttcacacgtg tcatcttcac agtgtccctg    22440
          tgagtaggtg cggtttctct ttccatctta caaatgagta aacagagcct cagtgtagct    22500
          gagtaataac tattttcggt ttcttagcca atgcgtgtgt ctgactccta agcccatgga    22560
          gggcatcccc aggtggtcca gacagacccc agcttaccgt tgaacttctg cctgctggct    22620
          gcatggggag tttgggggaa gtttgagcat ctcaggccat agagcccctg cttcactgtc    22680
          tccatctctg ggtggagaga tgatgttttt cctgagaaac taaggctcag gttgaatggc    22740
          tctcccatgg gcacacagct ggtcaggagt ggagttgaga acacaggagt cctgatgctc    22800
          aggccagcat ctcttatctt ctttgagttg tttctgggtt tcctagctcc tgcctcacac    22860
          tttaaagaga gaaggtctga tggggatggg cactggagac ggagcattcc agcatttcac    22920
          tatctgagct ggccttcctc tgacccaggc tgcagctccc actgggaggt ggaggacctt    22980
          ggcacccaca agccgcctgt gctgaggcca cgaggtcagc ccaaccagtg tgtgggccac    23040
          agggaggcca gcatccacgc ttcctgctgc catgccccag gtctggaatg caaagtcaag    23100
          gagcatggaa tcccggcccc tcaggagcag gtgaggaggc ctgtgaggac gggtgggtgg    23160
          ggtgccgtgg ggtggcgtga gtctctcctg tgcagctttt ctgggtcagt ttgtgccacc    23220
          accataccgc catgcatcag ggtggcggtt tgccgggtag atgctgtggg cagcttccgc    23280
          cattgtgtgg acagtgtgtg tatgtatctg tgtgtggctg ggtctgtttt tgcttttgtc    23340
          cagatcagta aggtttgttg cctgagtacc ccactccact tggtgtagaa tgtgcataaa    23400
          tttgccataa agaaatacaa tatgcatgca tttattgatt gatctatttt tttctaagat    23460
          ggggtcttgc tatgttgtcc aggctggtct caaattcctg ggctcaagcg atcctctggc    23520
          ctcagcctcc ccaaatgttg ggattacagg catgagccac tgcacctggc ctctctgatc    23580
          tatttaacaa acctgctggg aggttctcag ggtcaggagc agcactgggc tgtgaggaca    23640
          cagagctcac tcagccatga cccagagggg gtgcctgagc tgcatgccga aggttgttag    23700
          catgaccagc aaggcaagaa aaggccctgc ggagattagc gaggcacgtg ccaagccctg    23760
          gaatgtgaga gccaggcctt ctagaaacct gggtgtggac atgaccaaca gttgctctgg    23820
          aactctcctt tttaaaagcc agtgggagct tcttcaaagg cagccctaag gagtccgctc    23880
          ttaaatgaac tcagactcgg ttttaaaatg caagtctgtg ttgattctgg tctggatggt    23940
          gcattcctcc atagcaaaag acagtgttgt tcttggatcc actttccctg ggtgcactga    24000
          gggctgcgag gttccaggtg ctcttccggg cactggggag ggatacaggc tggacagaca    24060
          tgttgttctc cctcctggag catctgtttt agtgggggag gacagaaaac aaaccagtaa    24120
          attacagagt actgaaaaga tgcgatggag aaaactatag caaggaaggg aatggggtgg    24180
          gggagaagtc aggagaggtc ttgctgagaa ggtggaggaa atgggccatc aggcagggaa    24240
          tgtgttccag gcagagcaaa ggccccgggg tggggatgcg cccgggagta ccaggaaacc    24300
          agaggtggga gtagttacga ggtgggggat gcctcagagg ggacagggcc aagtcaggtg    24360
          agaccgaggg ccacagtcag gagtcagctg gggccacaca ggggtccagc ctagggggag    24420
          tgcgatctgg cctggatctg aacctctcac tgtggcctag ctgctgagct gagaagagat    24480
          gacaagggcc ttgggcagaa gcagggagac tggagggagg cggtggaggg tccaggcgtt    24540
          ggggcggggc tcaggctgga gtctgaaggg agcctgcagg cctggtgggt ggacatggat    24600
          gggagaaggg gaggacggca ccaaggctcg ggcccctgga cagatgcagt tgccattaag    24660
          tgggatgggg caggctgtgg ggccgtcagt ttcagaagga agatgagttt ggcattggca    24720
          tggtaggcat ctgtctgtcc ccgcgcccct caaaccaggc atgaagcagg agctcacgtg    24780
          tttggtcatc gatggtgcag aaccgccggg gcgggaggtg cggggtggga gatatgtgtt    24840
          tgtgtctcaa atgggctctg agccagggag ggctatctgc cccttggcct cacagcggga    24900
          tgttggaggg agaaatgaag tgtaggtggg ggtcccgggc catgctggac tgtgctttct    24960
          tctcctcggc tctggcaggt tatcgtggcc tgtgaggacg gctggaccct gaccggctgc    25020
          agtgccctcc ctgggacctc ccatgtcctg ggggcctacg ctgtagacaa cacgtgtgtg    25080
          gtcaggagcc gggacgtcag caccacaggc agcaccagca aagaagccgt ggcagccgtt    25140
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          acttgtccct ccctcagccc tccatggcct agcccgaggg gacggggatg cttccacctt    25320
          cctggagctg ctggcctggc ccttgagtgg ggcaggctcc ttgcccagaa ctcactctgg    25380
          atgccccctc ccctggtgga ggtgccagga agctccctcc ctcactgtgg ggcatttcac    25440
          cattgaaaca ggttgagctg tgcttggtgc tgccagctgc tcccaacatg ccaacatctg    25500
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          aagcatcgtc agggggcgag tgtgaaagat gctgatggcc ctcatctcca gctcactgtg    25680
          gggaagcccc ttggggctcc cttgattagt ggaggctcag ctttttggat ggcatctagc    25740
          cagaggctgg agatcaacgc gtccctggtg gtcatgggct gtgccttgtt ttcctgagtg    25800
          acctttactc tgctctatgc caggctgtgc taacaacacc caagggtggc ctgcagggag    25860
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          ctccactacc cagcagacta cacatttgca cccctgcttt acaggggaag caacctggaa    25980
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          cttttcccgt atcatctagg cctgattcac tgtggcctga tggagatgct tctaagggat    26220
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          atttatcttt tgggtctgtc ctctctgttg cctttttaca gccagctttt ctagacctgt    26340
          tttgcttttg taacttgaag atatttattc tgggttttgt agcattttta ttaatatagt    26400
          gactttttaa aataaaaaca aactttgtcc tgacttttgc atagacttga ctgcctcggg    26460
          tgatgccttg tttatactag gaactgggta agtttgttga gtaagccagg tacttgtatc    26520
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          gaatgaaatg aatgtcttcc tgcagctccc ctgatgaccc tggcagtcaa agtgcctcct    26640
          ccttggtgac ggatgcccta catcctagat gctctgttgt cctaacctcc caatcccctt    26700
          ttcattcttt tctccccagt tcctggcaca gggcctggcc cagagtattt atggaataaa    26760
          ttacagtgcc agatgcttct gtgatgagcc agtgctaagt ctatggctat ttttcatgat    26820
          ttaaaattca gaacagtctc aggtcgggtg caatggctca cacctgtaat accagtactt    26880
          tgggaggctg aggcttgcat gtaggagttc aagaccctgg gcaacacaaa cgtcatctct    26940
          acaaaaaaaa tttttttaat taggtaggtg tggtagcaca tgcctgtggt cccagatact    27000
          c                                                                    27001
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          ttatgagaga aaggcagagg gagatttgac acacacagga ggggccacgt ggagacagag       60
          gtggagattg gagaaatgtg gccacaagcc agggaacacc agcagccacc agaagccgga      120
          agacgtgagg cagggttctt cccagagcct tcgctgctga gtctgggaat ttgttaccga      180
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          ccctactttc tcctataccc taacctttgt cctgcatggg cgactccccc agtgagtctc      660
          ttgcagcttt taccccagtg cctgcttctt ggagaatcca aactgatcca gttagggatg      720
          ataaagtgta gggtaggtgc tcggtgactg ttttctctga ggttgtgact cgtgtgaggc      780
          agaagcagtc cccgtgagcc ctcctggtat cttgtggagt ggagaacgct tggacctgga      840
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          ccagcataca gagtgaccac cgggaaatcg agggcagggt catggtcacc gacttcgaga     1440
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          tgcgcagcct gcgcgtgctc aactgccaag ggaagggcac ggttagcggc accctcatag     1620
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          ctctctcagc cctccatggc ctggcacgag gggatgggga tgcttccgcc tttccggggc     2760
          tgctggcctg gcccttgagt ggggcagcct ccttgcctgg aactcactca ctctgggtgc     2820
          ctcctcccca ggtggaggtg ccaggaagct ccctccctca ctgtggggca tttcaccatt     2880
          caaacaggtc gagctgtgct cgggtgctgc cagctgctcc caatgtgccg atgtccgtgg     2940
          gcagaatgac ttttattgag ctcttgttcc gtgccaggca ttcaatcctc aggtctccac     3000
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          catcgttggg gggtgagtgt gaaaggtgct gatggccctc atctccagct aactgtggag     3120
          aagcccctgg gggctccctg attaatggag gcttagcttt ctggatggca tctagccaga     3180
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          ttactctgct ctatgccagg ctgtgctagc aacacccaaa ggtggcctgc ggggagccat     3300
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          actacccggc agggtacaca ttcgcacccc tacttcacag aggaagaaac ctggaaccag     3420
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          gctctgaagc caagcctctt cttacttcac ccggctgggc tcctcatttt tacgggtaac     3540
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          acccaagcaa gcagacattt atcttttggg tctgtcctct ctgttgcctt tttacagcca     3780
          acttttctag acctgttttg cttttgtaac ttgaagatat ttattctggg ttttgtagca     3840
          tttttattaa tatggtgact ttttaaaata aaaacaaaca aacgttgtcc t              3891
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          <![CDATA[<213>  智人]]>
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          acgttttaaa aaaaacattt tcatgtaaat ttaaaaaaat tgaacattca cacaaaaaga       60
          tgccccctcc cttgcaaaaa agagtatgcc cgttcaaaat gttgaaatgt acactcacag      120
          caatggtggc tgcagactcc aagtttctga ggttggagaa ggtagccagg gagcataaaa      180
          gtgagttcta tctactcatt cagtctatga ggggaaggca atggctagaa aagcattttg      240
          agggacagta aaagtggcat ttttagaggg aggaagcctt gaggatgctt gtggggtgaa      300
          gggaaagaat aactcaggaa gaggcattta gggataagag gaggagagga gatagtggag      360
          gtaggtgatc cctgcggagg ccagattggg gcaggggagt gtcagctgag tataagagga      420
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          aagcacttgt ggtggagggg aggccccaga agaggcttct gacttaccct gattgctggt      540
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          gaggatatgg gatgagaagt gactgcccct ctggttccat ctgtcgcaga gcccagggtg      780
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          tggagagaag gccctacccg agacaggggc ggggtgggaa ggacggcaga tgctgggagc     3180
          acgaggcaat ttctttatga cacagaactc atgctctagt attccatctg tttcagccga     3240
          agaaaagaac cagctgaagg ggcaggggag aaggggcgga ggtattctcg aggcccattg     3300
          gcgtccttta ggactcaggc agggaagggc ccttggtgct ctggagccgg aggtggtgcg     3360
          cctggtactg ggaccccgga gctgagcccg gcgcctcagc ccacctggct gtctgccgac     3420
          cgtgtgcggg gcgagtttgc tcaacaactc tgccagcttc tggccctcag gctgtgggaa     3480
          gcttcttccc ggggcgagac cactagcttt ttctaagtat taccagccca ggacttggct     3540
          gaggttctgt gtcccccagc ttggagtcag atgtggggtt gaatcttggc ttcctctcac     3600
          tagctgtggt gcttgacaag tcacttatcc ttgagcctcc attgcctaat ctttaaaagg     3660
          gaggtgacaa tcgtccctac ggctcagtgg cagcagatgg ggagatgaag ggaaagttct     3720
          gttgaccatg agtgaactta caatgcaagc cccgggggga tcacttgcag ttttgtccct     3780
          gtctgcagtg tgacctgttg gtgacattgt ctttgctcca aaccacagct cctggggcag     3840
          aggggaaaat tctgccactc acagctgcct gcccacgctt ctgtctgagt gtgctgggtg     3900
          gcaggatggc aagtccttac tcagctcagt atagccctct tccttgttcc ctgagccttt     3960
          gactttctcg agggatgttg tggggttgtg gccaggataa gaaagggcat ttcaagttac     4020
          cactgctcca aaacaactgt tctggaaata gtgagtaccc catcctgaga ggtgagtaag     4080
          cagaggctgt atgaccacct gaaccaagcc cttgaggatg tttcttctct ggtggaagtt     4140
          tggaacagga gcctcctcaa gttcatttat tcattcattc aatggttatt ttgtgggaat     4200
          cgaatttaga atgaaaatat tttttggcaa gcagaaaata atttttagac caatcctttt     4260
          cttttagtca tgagaaactg aggcccagag agaggaggtc accccaggtg cattagaact     4320
          gggtttccag aactgacact ccactgcaca gagtactctc ccaattcatt caatttttat     4380
          ttagcggaag gcattttcag atgggtcttt gaagcattag taggagttca gcgatgatgg     4440
          tgtcatgaga attttattct aggattagga ggtaccatga acaaagatac agagctggga     4500
          aaaccagagg tggaagataa ggagcacatg tccacagttc tttttctttt ttttttgaga     4560
          tggagtttcg ctcttgttgc ccaggctgga gtgcaatggt gcagtctcag ctcactgcaa     4620
          catctgtctc ccgggttcaa gtggttctcc tgcctcagcc tcccaagaag ctgggattac     4680
          aggtacctgc caccacgccc ggctaatttt tgtattttta gtagagaagg ggtttcacca     4740
          cgttggccag gctagtcgca aactcctgac ctcctcagtg gatccgagga ggtgatcctc     4800
          ccgcctcagc ctcccaaagt gctcgaatta caggtgtgag ccaccacgcc tggcctccac     4860
          agttctttat ccaccgtctg aaatgtaaaa tgttacgaaa accaaaagtt ttttttgtga     4920
          tttatttgat ggtagcacct gacgtgaact gacatgagat tatttttaat ttagttgtgt     4980
          gaatatgcat attcatatat tttgctgcat agattacagt atgcagctcc agattcttcc     5040
          aagcagactc tgattgccca ttactgcctt tctaaaatcc aaacaagttc tgaggttcaa     5100
          aaccgttttg gccctaaggc tttgggtaaa gggggtggac tctgttctac tctgactgga     5160
          gtccaagatg catatataca gagatatggg tgatggggct gcaaggtagg ttgaggtagg     5220
          ggccaaggag gagcatggag tttggacttg attcatgagg ctgtggggag ccagtgaagg     5280
          ttcttaagca ggtatgtctg cctgagagca gttggagcag acaagagcta aaaaccaaac     5340
          aaatcaccat agatagtggc tgctataatt tgtttgtccc ctccaaatct catgtggaaa     5400
          tttggtcctc agtgttggaa gtggggccta atgggaggtg tttgggtcat gggggaggaa     5460
          cccctgtgaa aggcttggtg ccgtccttgt gataatgagt aagttctccc gctatgattt     5520
          cccttgaagg ctgattatta aaaagagctt ggcacctccc tctcttctct cttgcttctt     5580
          ctcttgccat gtgattgatc tctgcacatg taggctcccc ttcaccttct gccatcagtg     5640
          aaagcagctt aaggccctca ccagaagcag atgctggtgc catgcttcct ggagagcttg     5700
          cagaatcatg agctgaataa atcccttttc cttgtaaatt actcaccttc aggtattcct     5760
          ttatatagca acacaaaagg actaagacag tggccttgac ttttctctct ctttaagaag     5820
          tgttgccttt gctcacttag tcatcccttc tgcctgcatt tgtagagcat ctggatggga     5880
          gatttatata accgtcactc ttgactttcc cagcaggcct atgtcatagg tactgtggtc     5940
          tctacaatac agcagaggta tctgaggctc cgagaggttg agtgacttgc tcatggctgc     6000
          acaaccagta aatattggag ctggaattca ggtccacggt ttcctggctc caaagcccat     6060
          gattttttcc ctcaatttat tctgactggg gcatggggga gggggtggcc tttgggcagg     6120
          gccaccagga gcgaccaggc ccgtagagag ctgggtgcag gtacagagga aaacctgttg     6180
          tcgagtgtgg cccgtagttc ccatttttgc ctgaatggca catttgaaag tgttatataa     6240
          ccatgtgaat aataatagtt ggcctatatg agttctttaa tttgcttttt ggtccgcatt     6300
          tggtaacttc tttatcatct actatactct gttgtgtctc ttttgttgta atttgtaagt     6360
          aggggtgaga taaagtacac ctagggtttg ctgggtttct tccatgtcat catgttcctc     6420
          cttgcatggg gccaggatcc gtggaggttg cctggcacct acgtggtggt gctgaaggag     6480
          gagacccacc tctcgcagtc agagcgcact gcccgccgcc tgcaggccca ggctgcccgc     6540
          cggggatacc tcaccaagat cctgcatgtc ttccatggcc ttcttcctgg cttcctggtg     6600
          aagatgagtg gcgacctgct ggagctggtg agccaccctt tttgggaatg gcacttcctg     6660
          atagggctgg gccactgcat atacactggg gactgtgctt agtaggccca ttgctgaaaa     6720
          tcagaagggg acagcaagta tgtattgagc acttatcggg taccaagcac agtaactact     6780
          ggctttctgt atagaattcc ctttaagcct ggccatgccc cagtggtacg tctatcttca     6840
          tttgaaagac gaggagactg aagttcagag gggaccacac agacagctag gggtagagcc     6900
          tggatcaaac ccattggtct gcctgccagc cattcttgtg ccaatgcatc tgctgcctac     6960
          ggaaacctgt agggacaagg ccctgggatg ttcagtggag cctgagtcat tttataaaaa     7020
          agcatgactc tagggtccaa aattcctttg aagctgttgc tatccagagt gaagtccctt     7080
          ctttaggaca gggtggccct cctccctcct ggatgtcaca tcttcggtgg aggggcagaa     7140
          aggggactgg gtattctcct caccctggcc ctagtgcttc aaatcttaaa aaaacgtttt     7200
          tatttgtgct tctgcaccac cttctagccc acctcgtttc ctggcctcta acttgatgag     7260
          agcgtgtgtc attttcacac tgattctcca catggcaggc ggtgcttctt agcctcctgc     7320
          agacagtgag gccccacggt cttgtccaag gtcacacagc gtgtaatggg cagggtcaga     7380
          gtctggagtc tggacctggg tctcctagct gcactgcact gctgccccat gggttaatca     7440
          gctcagcata ccgtggctga acagctacct cataccaagg cctgtggcgc catgacaggg     7500
          attgacaggg tccctgcctt ggaaacccgt agtctaagta gaggagactg acaagtcaat     7560
          gccttccatc agtctgctca acacacgttt accaagtgcc tactgtgtgc tgcagaggcg     7620
          aagatgacac agctcaggcc tttcccttga gcttacagtt caggaggaga gactgaccag     7680
          tgactgccag tacagttgac tatgggacaa tgtgctcagc cttggggaga gacgaagaag     7740
          gtacccgtat agcaccagat gacaggcacg agccccacag gccagggcag ctgctcagag     7800
          gagagtaggc caagcagaag gcaaacagaa ggctgcaggc atttgccatc gagagctgga     7860
          cttcaaactg ggcatcatac cagcctgggt tcgagtcctg cccagcccct tattggctgt     7920
          ctaaccctga gcaaatccct tcacctctct gagcctcatt cctctatctg taaaccagtt     7980
          ataataattg gaacattcat ttaaggacta aatgaggtcg tgaagcattc agcagatgct     8040
          aggtacggaa actcgctgaa gtgggggcag gttaagaagc ctctggggat acgaaggcat     8100
          ccagggacta gttgtggcag gaggctgtta ccacttaggt ctgaagggta aggagaggga     8160
          atagctttcc ctctgcccag ttggagccgg tggcatggag gagaggctgc ctgtggggaa     8220
          tcacccgagg gttcaccgct gccatgcgca gggagtcagg aggtagggag ggagtggggc     8280
          agatgcacac catttttttt tttttttgag actctgttgc ccagactgga gtgcagtggt     8340
          gccatatctg cacctctgcc tcccgggttc aagctcactg caacctctgc ctcccgggtt     8400
          caagcgattc tcctgcctca gcctcccgag tagctgggac tacaggtgtg tgccaccatg     8460
          cctggctaat ttttgtattt ttaatagaga tggggtttca ccatgttggc caggctggtc     8520
          tcgaactctc gacctcaggt gatcccccac ctcggcctcc caaagtgctg ggattacagg     8580
          cgtgagtcac cgctcccagc tgctgatgca ctcttgtcct tctaactcct gctagtgcct     8640
          cccattggct gagcccaact ggaagctttg caagggagct ggtgctgcag tttgcactga     8700
          gcaggctgga gaaggctgga gaatagacta ggggacaaac cgaattgcca gtgctgttat     8760
          gtcatgattt aggcatggag tccagggcct gagcttcact ccatgtccat cctgcccaga     8820
          gccttggcac agcctggctc ccagacaaga tgtcaagttc agaatccttc ctaaaaggaa     8880
          tcctctatgc cagaccgtgt tgcagggata tgggagtgct gggctcccag cctgatcaag     8940
          gagcgagaaa actcaggctc ctagtctgtc ctccggggca ctagcaggga caaggtggga     9000
          ggctgctggg ctgggatgtg gggacaggtt tgatcaggta aggccaggct gtggctgtgt     9060
          ttgctgctgt ccaaatggct taagcagagt cccccggcct ctctggcttc tgcaggcctt     9120
          gaagttgccc catgtcgact acatcgagga ggactcctct gtctttgccc agagcatccc     9180
          gtggaacctg gagcggatta cccctccacg gtaccgggcg gatgaatacc agccccccgg     9240
          taagaccccc atctgtgccc tgccccaccc catctgagct gaatccattt gctctgccct     9300
          ggcctggcct ccctgctggt ggtttccact tctcgggggg ctttgggact cagcacctcc     9360
          actgacccct ttttttctgt cccatcccca tcccctgcag cccccactgc ctgccttcct     9420
          gttgccccac aaatgcaaaa gtcttgcctt aaatgatcct cttttccttc ttttctcttg     9480
          ttttcctttt ctcaccattt ggaatggccc agcaggctgc acttaccttg gaaggagggt     9540
          tcatctgatg gtgactctac ctagggcccc caggcctcta taactcccag tgccctgcag     9600
          actggaccag atcctttaat gggatagaca caaccctgtc tgggatgcct ctgcctacct     9660
          tcctgttttg ctgctccacc tgcctccagc tccgtttggc ttcctggggc tccctgcctg     9720
          ggccactttg tgtcttccct ctaggccttt ctttccactg ttccctctgc ctggtgtggc     9780
          ctggctatgg aagggaggga ggaggagcgg ccatggaaaa cggtctgcat tctagcaggg     9840
          acttgcaggt ggcaattcag tcggggaaga ctctagatgc acctggcctg aggagagaat     9900
          gaagggttct agttggactg tgttaagttt gaggtgccca tggtgtgagg tctggagctc     9960
          agcgcagaga tgatgcaatg tggtgggtcc atgcaacatg gtgccaggac gcagagcttg    10020
          gggtgaactc agctttcacc ccttaccggt tctcgtggga tcttgggaag ccactttctt    10080
          ctatgagctt tgtcgttctt gtctgtaaaa tgggcacata accctgtccc tgtccttctc    10140
          acaggttgct gtgagactcc aatgagttga aggatgtgca gatgcttttg gaagtgaaaa    10200
          gttggggggc tactgtgtga ctttgcatac acccaaactg tgtgaccttg catatgtctg    10260
          agttgctgcc attgcaacag atcagagctg gtgggctggg tgtggagaaa gggtttgtgt    10320
          gggggacatc ctctggcaag ggtggcagca gcagaagtga ggggcctggt cggtcatgtg    10380
          tgctgacccg gcctgggcag cctgtggcca gggagaggac agctcctctg taggaagagc    10440
          ctgttccttt ccaaccaggt gagacctctt cagtggagcc ctggagcccc ctgtactcca    10500
          catcagtgcc tcagggacct cccggagcag gctaatatca gagaccaaga gggacactgg    10560
          cagaggatca cagagacccc agtccaggca gggactgaga agatcttgcc ccctaagtta    10620
          gtttcctagc actgctgtga caaattacca ccccctcggt tggaacaagt tgattctctg    10680
          cagtcctgga ggccagaagc ctgaatcagt gtcggcagga ccactttctc ccggggggct    10740
          ccagggagaa gcttctcttg cctcttccgt gtcccaacag cggcagcaca ccaatcccag    10800
          cctctgtctt cacacagcct tctctgtgtc tctctcctct tcattgtctc ataaggacac    10860
          ttgtcattgg atttagggcc cactggatcc tccaggatga tctcatgtgg ggaaccttaa    10920
          ccacatctgc aaggaccctt tttccaaata aggtcacagc cacaggttgt gggggttagg    10980
          atgtgagtgt atctctttgg cagccactgt tccctcctct cccttgggcc agaagcagac    11040
          gtggggccct ttcttcccca taggatgccc atggattgcc ccccttcccg cttcccccga    11100
          gtgtctgtgg gaggtggcag gaatggcagg caggggtgtg gaaccccttc tggagtcata    11160
          tcaagggctt ggctggagga agtcctcctg gagctgttgg gctggcatgg ggcaggctgg    11220
          ctgggcccag cagcagcttc ttcattcatg gggaggccac aagcatgggc cctagagctg    11280
          gctgccgccc tcaaacccag accctgcact cttaactgtg tgaccttgca tacgtcactc    11340
          accctctctg atcttcaggt tcctctgcaa aagggaggta atgataaccc tcactctggg    11400
          gggctgtttg gagggttaaa tcagttattg ctgtagcatg catttctctg tcaggtattg    11460
          agtgaggtgc tgtgatttta gccctgcatt tttcttttct taccattcaa taataacgtt    11520
          ttgagcaccc actgtgcgcc aggcaccata ttaggtgctg gggatacaaa tgtgaatgaa    11580
          atgaatgtgg tctcttcccc caacagtgta tccagaagat taatccattc cttaaacaaa    11640
          tgctacttga cacagattag ttctggatag gctgagagct ctgaaggagt gcaggcagct    11700
          gcgagcctgt gtatccagca gaaggatcag gaaaggattc ctggaggaag cgctgttcta    11760
          gccaagacct acgggggcat tattaaccag gcaaagggga cggtgtccaa gcagtggaat    11820
          gaacgtggat tgaagctgtg aggcaggagg gagtgtggcc tgtgcagaag ggaccgaggc    11880
          tggtgagacc aggagggcct gggtggcctc caggtcagat gtgaaaggaa gaacttggcc    11940
          acagtctgag cttctcaggc gtatggcagg gctgcctggt gagagggaat gagctccctg    12000
          ctctggaggt atgcaagcag gactgggctc tcacctgcca gaggccacag agctttccag    12060
          aggctggaag aggccactcc aaggcctctt tgcccctgag agtggtggct cttcttgagg    12120
          ccaccttgcc acgctgtcac agggaactag cagcccctgc ctcacccggg ggtttggaag    12180
          atagagggag gcctaggaag ggccctgtgt ctcatccgag ctgggcccct ttccagcctc    12240
          tcactggaag gaagcccaag gatgttcctg tgggggcttt taccaggccc acctgccctc    12300
          tgctggccat gcttgcagcc tcctgaccct gtcccagcag gacagtgggc tggtgtgagc    12360
          gggcaggaac cgcctgcact tagaaggtgt ggggctgcct ccccgagctt ccatctgccg    12420
          ctggggccac accccaggcc cagggatggg accccacagt ggtcacatca tcttgcagca    12480
          gaacccaggt acagctcctg gagcagatgg tggtcccaag cacgggtggg accagaaagg    12540
          actctcacct gggctaactc agctgcagcc tcagttccct cctcacacac gacgaggaac    12600
          atggactgga agcctgccca gcaggccttc tgctcgatgt gcgttgtgtg gcttacgtcc    12660
          agggagggaa gcagcctctg tgctgtcttc tagataagcc tgtattcccc gggctgtctg    12720
          ccaatgtatc cagttgtccc gtcagcctgg aagctctgag ggaaaacctt gggctgcttc    12780
          ctgagcacct gtatcccctg cagccagccc ggggcctctg ctaggagcag actgagcatg    12840
          gcttatgggc ctggcaccat ctggcctctg cccaccttgc tggccttgtc ttgtgtctgc    12900
          cccttcgaca ttccatagcc cagctcaata tctagtggtt cctctagggt ggcgagcact    12960
          gtttggtctc cagatgtctt caggtcggag ctcacagcgc tctcagccac cccttcccag    13020
          tgtagcaccg ggcacatggt agatgcctat tgatgagtga aagctcctaa cacactcaga    13080
          gagcaaggac tccgcctcat cccacagcct gggaggagag gcagactgcc aaggacctgc    13140
          tcagcatgct acagaagaaa ccaaagtgcc cacgggactg atcagtggag cttcctgccg    13200
          agactggagg ccttagggca gggtagacag tgtgtgtgca ggctggggac tcacagttcg    13260
          gactgtgccc agacctacta gcatagtggg tgggtgggag gatgcgggac tgggggccga    13320
          ccttgcctga aattcatgtg ggatctcaga gcagccactg aattgctctg tagggggcta    13380
          aatagtggcc cccacagata cacacaccca gacagagcct gtgagccaga ccttatttgg    13440
          agaaaaggtc tttgtagatg taattaagca tctcaagatg gcatcatctg gattatgcgg    13500
          tgggctgtaa gtcctgtgat gtgtctttat gagagaaagg cagagggaga tttgacacac    13560
          acaggagggg ccacgtggag acagaggtgg agattggaga aatgtggcca caagccaggg    13620
          aacaccagca gccaccagaa gccggaagac gtgaggcagg gttcttccca gagccttcgc    13680
          tgctgagtct gggaatttgt gaccgaagcc ataagaagtg ggtacacgcc ctgagcctcc    13740
          cacacttgct cacctgtcct gagatgagaa tctctactct gcagcatatt tggaggatca    13800
          ctgcgggggc cacagaggtg ctgttcagat ggcacttcag aagactcagg agaccctggg    13860
          gcaggagcag tttgactgac agcccagagg gctgccctct gattccacct gaggccctgc    13920
          ttttcctggc tgcaggggtt ccagggccag gccatttccg ctggcgcagg actctgctag    13980
          cagcaacctg cctgaagtct tcctttggcc tggctgagag tttctgagac ctgcgctgga    14040
          gcggaggtgc ttccttcctt gcttcctttc ttcctctctc ccttctccat ccagcaggct    14100
          ggacctgcct ggcatctgtg agctctccct actttctcct ataccctaac ctttgtcctg    14160
          catgggcgac tcccccagtg agtctcttgc agcttttacc ccagtgcctg cttcttggag    14220
          aatccaaact gatccagtta gggatgataa agtgtagggt aggcgctcgg tgactgtttt    14280
          ctctgaggtt gtgactcgtg tgaggcagaa gcagtccccg tgagccctcc tggtatcttg    14340
          tggagtggag aacgcttgga cctggagcca ggaggcccag acatacatcc tgtccgagct    14400
          gcagcttcct gtctctaaaa tgagccggcc agcgcaggtg gccagacatc actgttattc    14460
          tcctttgagt ctttaaatct tgttgtcttt cttgcagact cggtgagctg tgaaaggcta    14520
          taataggggc tttattttac actttgatac tattttttga acattcatat tattgttaga    14580
          tattgatatt catatgaagg agcaggatga cttgggtcct tcttggcagt agcattgcca    14640
          gctgatggcc ttggacagtt acctgccctc tctaggcctc cctttccttg tctatgaaat    14700
          acattataga ataggatgta gtgtgtgagg attttttgga ggttaaacga gtgaatatat    14760
          ttaaggcgct ttcaccagtg cctgggatgt gctctgtagt ttctgtgtgt taactataag    14820
          gttgacttta tgctcattcc ctcctctccc acaaatgtcg ccttggaaag acggaggcag    14880
          cctggtggag gtgtatctcc tagacaccag catacagagt gaccaccggg aaatcgaggg    14940
          cagggtcatg gtcaccgact tcgagaatgt gcccgaggag gacgggaccc gcttccacag    15000
          acaggtaagc acggccgtct gatgggaggg ctgcctctgc ccatatcccc atcctggagg    15060
          tgggtgggga ctgccacccc agagcgttgc agctgtactc ctgggttgca ccccccccag    15120
          ctgtcactgt cccctccctg ccatcagttg tgggaagggc gttcatccat ccagccacct    15180
          gctgatttgt tatagggtgg agggggggtc tttctcatgt ggtccttgtg ttcgtcgagc    15240
          aggccagcaa gtgtgacagt catggcaccc acctggcagg ggtggtcagc ggccgggatg    15300
          ccggcgtggc caagggtgcc agcatgcgca gcctgcgcgt gctcaactgc caagggaagg    15360
          gcacggttag cggcaccctc ataggtaagt gatggcccca gacgctggtc tctctccatc    15420
          tggacctggc ctgggaggtg gcttgggctg ggcccaggga gagctaatgt ctcctaacca    15480
          agaatgctgt ggcagcctct gccgcagagc cagagaacca gagtgccaag gctggcaggg    15540
          ttcccagtgg ccacgagtgc agatgaagaa acccaggccc caagagggtc atgcaggtag    15600
          cccagggagt tcagccttga ccctgggtca atgacctttc cacagttcca cactgctccc    15660
          cttttaaaat ccggtgatgt ctttatgtct tttgttatgt tatcttcaat gtggagggac    15720
          tcgaggtgat ctaagcaaac tttttctatc ttctgcttgc atacctctga gaccagggga    15780
          ctcactcact tgcatgactg ggccctgcag gtcacactgg ccaggcagat gtggtggagg    15840
          aactggcaga ggactttttc tagactgtga ctacatttag tccacccagc ggccccccta    15900
          tgaagtccag ttgagaacta ggactctggg ggccggtgga cagagaagag ggagggttct    15960
          ctcccttact gacttccttc tgtggccaga cattgagcaa ggcctctgta cagcatgtcc    16020
          tggggctggc cttgccgtag ctgctaaata gttgacgaaa ccagtccaga gaggggaggt    16080
          gactgccagg gtcgcacagc tcaagctggg gaactcgctg ggaaaactgt cagctctggg    16140
          cagcagcttg acttccactg taagccccag cccccagggt caaacactgg ctctggtgct    16200
          ggcagaggca gcccactagc ctgtttcaaa ggctgagaag gcccaggagt ctgccctgtg    16260
          ctccaccagt tctgccctga gactttccta cagagtacag gttttgatgt tcagttttaa    16320
          aggcaagaat caataacctt ctgccccatc aggtgacccc ttgtgcctgt cccacccctt    16380
          tattgactga cctcggctca gtcaggtcag ttcctgaagg tcagtgtgtg gaggggaggc    16440
          tgttctttcc cagaaaggcc ttccccaggc ctggtgctct ggcctctgga ggacttcctg    16500
          gagaagtccc ttctttgggg tcccagtcag tgtatgggaa gcccttattg catgacctgg    16560
          cacggggcag gggctcaaca gtcactattg ccttccttgc cactgccatt tcctcctctg    16620
          taagcaggtg attgtgtgtc cagtctgagc acagagataa gcacacagca ggtgcttaat    16680
          aactagcagc tgtaggctgg gcgcggtggc tcatgcctgt aatcccagca ctttgggagg    16740
          ccgaggtggg cagatcacct gaggtcagga gttcgagacc agcctgttca acatggtgaa    16800
          accccgtctc tactaaaaat acaaaaatta gccaggcatg gtggtgggtg tctgtatccc    16860
          agctacttgg gaggctaagg caggagaatc gcttgaaccc aggaggtgga ggttgcagtg    16920
          agctgagatc gtgccactgc aatccagcct gagtgataga gcgagattcc atctcaaaaa    16980
          taaataagta aataactagc agctgtaaat gtggctgttg ttcttcacct ccacactcag    17040
          tgccactcca ctccctccct ccgtggtgtg aggggcctca ctagctgtct cctaggagga    17100
          gcatggctgt gagattccag ctccatcctt ggccacggct cctggagaca tcttagaggc    17160
          caggatccag aaggctccca cacctcattt gacaggggag aagctgtcag ttccaggtcc    17220
          ccttgcacat cagggccaga gctgcgttag gcctccagtc tccaggccac tgggccagag    17280
          ctcacaggct ggcagagggt tagaactgtt actggtggct gggtgcagtg gctcacgcct    17340
          gtaatcttag cactttggga gggcaaggcg ggaggatcat gaggtcagga catcgagacc    17400
          atccttgcta acacggtgaa gccccgtctc tactaaaact acaaaaaatt agccgggcgt    17460
          ggtggcaggc gcctgtagtc ccagctactc aggaggctga ggcaggagaa tggcgtgaac    17520
          ccgggaggcg gagcttgcag tgagccgaga ttgcgccact gcactccagc ctgggcaata    17580
          gagcgagact ccgtctggaa agaaaaaaaa aaaaaagagc tgttactgtt gacagtagca    17640
          tgaggtagac catggcctgc accaaaatgg gggagtggag tgccactgag gccagaagga    17700
          accacaccct caagggtggg gagttatggt atggggggtc ctaggcatgg agtcttttaa    17760
          ttctttagac aatcctggga gcaactgtcc ctgtttcaca gagggcgggg ccacacagct    17820
          ggtgagtggg cagccaagac tctgttcaag tttgtgtggg tccaacactt gcggccacgg    17880
          tggaggggca tctgagccag gcctcagaga gtggcggggg aagttgggtg gggaagtgtg    17940
          cccttctcat tcctctgagg ctcatcctct tggtgcctct ctttcatgga aagggataat    18000
          aaggttattg tgaggatccc ctgagttcgt atattcagac gcttagacag agccaggcac    18060
          agagaagggc ccggggttgg ctagtttgat tgctggtgta attgctaata tcttccagtt    18120
          tgtattggtc aaggttctgc agagaagcag aaccagtagg atgtatatat taagagtttc    18180
          aagctcatgt gaccgtgcgg gctggcaagt ctgaaatccg cagggcaggc caggcaggct    18240
          ggcaattcct gcagaatttg atgttgcaat actgagtcct aaggcagtcc tggggcagaa    18300
          ttccttcttc cctgggaggc ctcagtctgt tctcttaagg ccttcaactg attaaatgag    18360
          gcctgcccaa gttatagaga gtaacctgcc ttactccgtc ttctgattta aatgttagtc    18420
          acatctaaaa aatattttcg cagcagcatt tccactggct tttgaccaaa catcaggcca    18480
          caaagttgat ccccaaaatt aaccatcact ctgtgcctgt aagggagggg ctgggaaagg    18540
          ggagcaggtc tccccaaggg gtgaccttgg ctttgttcct cccaggcctg gagtttattc    18600
          ggaaaagcca gctggtccag cctgtggggc cactggtggt gctgctgccc ctggcgggtg    18660
          ggtacagccg cgtcctcaac gccgcctgcc agcgcctggc gagggctggg gtcgtgctgg    18720
          tcaccgctgc cggcaacttc cgggacgatg cctgcctcta ctccccagcc tcagctcccg    18780
          aggtaggtgc tggggctgct gccccaaggc gcgggtaggg ggcggagggc ggagggcgga    18840
          gggagggcgg gcgggcaggc gggcttcttg tggcacgtgg gcttcttgtg gcacgttcct    18900
          ggaggccgaa cccttctggc tttggaagga gtcgtcagag acccccgcca tgcgggaggc    18960
          tggggaggaa ggggctcgaa acctccatca tcgcagagtc tgaatagcag tggccccgcc    19020
          atgcgcccac gtagcggcgc ctacgtagcc acgcccccac accccgtcct ggccactctc    19080
          cctcctgaag gtcttctggt acccgccccc tccccatctc catccccagg ccctgcgtcc    19140
          tctgcccaat actctttggg cctccctgtt gtccagctct ctccgcggct ccatgactga    19200
          caacttgagc aaggctaatg tgaatgggag cggttgaggg ctcagacctc tcacccgagg    19260
          aacatccaca gagtgtgccg catgcccggt gcagtgtggc tgcggggaca cagacacgga    19320
          gcctcggccc tgaggagctg gggggcagtg accgtccctc ctctgaccca ccactcctcc    19380
          agtgtcagga cactgcgggt atctagggga aggaatcttg ttccacttca agtctggaac    19440
          ttcaagtctg tgtgtgtgcg tgcgcgcgcg cgcgttgggg gtgggggttg cagagcagat    19500
          gcgtacctga cagcggtaac ctaggtcccc cctggcctat caaggcttcc ctggcggccg    19560
          aatttaaagg catcaagcaa acaaagccca acacatctct gccttgtcct ctcagtttcc    19620
          ccccgtggca cttagaacca cttgatacac cgaatagttt cctatctccc ccactaggat    19680
          gtaaactcca caggggcatt gggaatgctg cctggctatg gtagggacag aggggagcac    19740
          cagggcgggg caggggtgcc agagttctgc ctgggcagtc agattttcct taggagggga    19800
          catttgagtg ggacccaaac aggtgtatag cagttgtcca gcccagctgg caaggcctga    19860
          gtctgcctct gcaacccctc tcttgggctc ctttctctgc cacccacctc ctcacctttc    19920
          caggtcatca cagttggggc caccaatgcc caagaccagc cggtgaccct ggggactttg    19980
          gggaccaact ttggccgctg tgtggacctc tttgccccag gggaggacat cattggtgcc    20040
          tccagcgact gcagcacctg ctttgtgtca cagagtggga catcacaggc tgctgcccac    20100
          gtggctggta agtcaccacc ccactgcctc ggccaccgtg atgctaacag cccctttggc    20160
          agtcagggtc tgtgccggga cctccagtgc caggctctgt gcagggggac cagagatgaa    20220
          gtaggcctga tggtgccttc aaggacactc agtctgatga gggaggcgag tgcacagagg    20280
          aaacacgagg tcagggctgt attagaggga gcccagagga ggcacctgcc cagcccgagg    20340
          gtcagagaag gcatcttgga ggagggacat ttgatcggga gcttgatgga tgaataggag    20400
          ttcacctggc cgataagaca gcaactacca aggcttagag gtgtgagagg aggctgtctt    20460
          acctcactga gtaaggactg caggcggctt accttcgaga agagagctta gtgtctgtgt    20520
          gcacgtgtgt ttgtgtgtat gtgtgtgcgt gtgtgcactg gcaggagtcc cctgctgggg    20580
          caggagggcc gggccatcac catctttcac cattcacccc tgcaccaggc attgcagcca    20640
          tgatgctgtc tgccgagccg gagctcaccc tggccgagtt gaggcagaga ctgatccact    20700
          tctctgccaa agatgtcatc aatgaggcct ggttccctga ggaccagcgg gtactgaccc    20760
          ccaacctggt ggccgccctg ccccccagca cccatggggc aggtaagcag gatggcaggg    20820
          tgggcaagtc caggctgggg cttgggaggt ctgtgtgacc ttgacagtct ctcccttctc    20880
          ccttgtctgt gtaaggagga tgacgccacc ttaaatagga ttaaatgaga atggggctct    20940
          gaaagggctg tgcaatattt tcataacgtg tttttataga gacagttgag tatgttcttt    21000
          aagccctcct ctctcctacc atgaactaaa gatttctgtg gaggtcccct cactcccagc    21060
          accccctcct catcccaggc cctttttgca ggttggcagc tgttttgcag gactgtatgg    21120
          tcagcacact cggggcctac acggatggcc acagccgtcg cccgctgcgc cccagatgag    21180
          gagctgctga gctgctccag tttctccagg agtgggaagc ggcggggcga gcgcatggag    21240
          gtgactgtac ccctccttcg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg    21300
          tgtgtgtgtg tcagtgctgg gccctcaggg acccccagca agcccctcca tcctccagac    21360
          tccagctctt ctgtaagctt acagggctgg ccagaccagg agtggggcac tcctcacttc    21420
          acgcggctgg gggctgctgg agagagccac agcgggaagg gtttcctaga ggctgcagga    21480
          cagtgctgga tggattttca atgctcacct gggtgtgagc gtgcggcagg gccgcgtgag    21540
          ggtcagcgat ctgctactct ggactcagcc atctctaggc ccctctcact caggtgctcc    21600
          atggttctgg gagctgagaa atctcaaacc agcaaaaaag tggaattgat gttgatgcta    21660
          caggatagtg cacagatgcc atctggttgc agcattttgg tggaagggca gtgcccagct    21720
          aggagagtga ggaggggcag gcatttctgg cttgaggaga tggggtctta atgctcgtgt    21780
          gagaggcaga gtgggtggag tggagctggc tggatccttg ctttggcctc ctggatttct    21840
          ctctatctcc attttgaaac cactctgtgt ttggaagaac ttttgagtat tcagagctgc    21900
          ccactggcag aacagtcttc cttgggcagg agtgagctcc ttgtccccag aaggctgggt    21960
          ctggctggcc cctggcaggg acactgatga gggtgcttga gttgatcctg tctagtccct    22020
          ttctgtgttt tcaaagccca ttctaaagca gattcccatt tccgtctttg actctaaggc    22080
          ccaagggggc aagctggtct gccgggccca caacgctttt gggggtgagg gtgtctacgc    22140
          cattgccagg tgctgcctgc taccccaggc caactgcagc gtccacacag ctccaccagc    22200
          tgaggccagc atggggaccc gtgtccactg ccaccaacag ggccacgtcc tcacaggtag    22260
          gaggctgggc ttgccctggg gtgaggaggg gtctctttct ccttatgcac ccactgcccg    22320
          cgaggcttgg tcctcacaag tgtgatccat gagactcaag cctgacttgc agttccatac    22380
          tctggttctg ccacttccat gccctttgag cctgggcagg tgaccttact tctcctcatc    22440
          tcagcttcct cctccataag agggaaaaag gtattacctg cctcattgtg ttgcaaggag    22500
          atgggcagca tctagggcac tggcctggag tatcgcaggt gctttgccta aggtggtgca    22560
          gtccaggaga ggcagctcca gagagaggcc cccggctggg gctgaaagga gggcagacct    22620
          cggtttgaat ttcaccctgc cgctctatag ctgtgtgact tgggcaaatt acttaacatc    22680
          tctgtatgag gaaatgatga gtgctaagca cttagcttag tgccgggaca atataaattc    22740
          tagctatcgt tactattgtt ttcatcaccc gttgctttaa aatccagcct ctggtatagg    22800
          caactattga cgggctaccc tgtgtcgaaa acatgcccag gcaggtagca ggaagtcaca    22860
          gatggggacc tcttggggca tcaagggatg gtgccctgag gctgagctgt tctggttggg    22920
          tggagcatga gaggtctggg aagacagtgg gactccagcc tggaataaga ggctcagagt    22980
          tgattctcgt ctgagcacgt ccaggggaac cactgagggt ttgggaacag gagagtgagg    23040
          gtgagaacct ggttctgggc acagcaggct ggcatgtagg atggatgttc aggaaagatg    23100
          agcatagtca ggtggctggt gcccttgtcc aggggagagg ctccgtcagg ttcaggggtc    23160
          ctggcttgga gggaagtccg ccatgctcta atcacgctcc cctttggaag tgctcagccg    23220
          atgagctcac aggcacatgt cagtttgaag tcatggaatc tgactccatg aagcgcacct    23280
          caaagagcac cattttgcag ctaagggaac tgcaggctgg acatgctgag tggctgcccc    23340
          gagcccttgc agctaggaca tagagaatgc tagtaaccac aaccctacca tgttcagagc    23400
          acatgccagg ctccatgctg gggcttcgca cgtgtcatct tcacagtgtc cctgtgagta    23460
          ggtgtggttt ctctttccat cttacaaatg agtaaacaga gcctcagtgt agctaagtaa    23520
          ccactatttt aggtttctta gccaatgggt gtgtctgact cctaagccca tggagggcat    23580
          tctgaggtgg ttcagacaga ccccggctta cccttgaact tctgcctgct ggctgcatag    23640
          ggaggggctg gggggagttt gagcatctca ggccatagag cccctgcctc actgtctcca    23700
          tctctgggtg gaaagatggt gttttccctg agaaactaag gctcagagag gttgaatggc    23760
          tctcccaagg tcacacagct ggtcagctgc agagttgaga acacaggagt cctggtgctc    23820
          aggccagcat ctcttttttt ctttgagttg tttctaggtt tcctagctct tgcctcagac    23880
          cttaaagaga gagggtctga tggggatggg cactggagac ggagcatccc agcatttcac    23940
          atctgagctg gctttcctct gccccaggct gcagctccca ctgggaggtg gaggaccttg    24000
          gcacccacaa gccgcctgtg ctgaggccac gaggtcagcc caaccagtgc gtgggccaca    24060
          gggaggccag catccacgct tcctgctgcc atgccccagg tctggaatgc aaagtcaagg    24120
          agcatggaat cccggcccct caggagcagg tgaagaggcc cgtgaggccg ggtgggtggg    24180
          gtgctgcgtg tctctcctgc acagcttttc tgtgtcagtt tgtgccacca ccataccgcc    24240
          atgcatcagg gtggcggttt gccaggtaga tgctgtgggc agcttccgcc attgtgtgga    24300
          cagcatgtat atgtgtctct gtgtggctgg gtctgttttt gcttttgtcc agatcagtaa    24360
          ggtttgctac ctgggtaccc cactccactt ggagtagaat gtgcataaat atggcataaa    24420
          gaaatgcaat atgcatgcat ttattgattg atctattttt ttctgagatg gggtcttgct    24480
          gtgttgccca ggctggtctc aaattcctgg gctcaagcaa tcctctggtc tcagcctccc    24540
          caagtgttgg gattataggc atgagccgct gcacctggcc tctctgatct atttaacaaa    24600
          cctgctggga gggtctcagg gtcaggagca gcactgggct ctgaggacac agagctcact    24660
          cagccgtgac ccagaggggg tgcctgagct gcatgctgaa ggttgttagc atgaccagca    24720
          aggcaagaaa aggccctgcc gagattagca aggcatgtgc caagccctgg aatgtgacag    24780
          ccgggccttc tagaaacctg agtgtataac tctccttaaa agccagtagg agctcctcaa    24840
          aaggcagccc taaggagtcc actcttaaat gaactcagag tcagttttaa aatgcaagtc    24900
          tgtgttgatt ctggtctgga tggtgcattc ctcgagagca aaagacagtc ttggtcttgg    24960
          atccacttgc cctgggtaca ctgagggctg ctaggttcca ggtgctcttc ctggcactgg    25020
          ggagggatac aggcccaaga gacatgctgt tctccctcct ggagcatcta ttttagtgga    25080
          ggaagacaga aaacaaacca ttaatataga gtactgaaaa gatgcgatgg agaaaactat    25140
          agcaaggaag ggaatggggt gggagagagg tcaggagagg tctcgctgac aaggtggacg    25200
          aaacaggcca tgaggcagag aacatgttcc aggcaaagca aaggccccca ggtggggatg    25260
          tgcagggagt accaggaaac cagagaggtg ggaatagtta tgagatgggg ggtgcctcag    25320
          aggggacagg gccaagtcag gtgagacctg agggtcacag tcagcagtga gctggggcca    25380
          tgcaggggtc tggcctcaga ggagtgtggt ctggcctgga tctgaacctc tcactgtggc    25440
          ctagctgctg agctgagaag agatgacaag gaccttgggc agaagcaggg agactggagg    25500
          gaggcggtgg agggtccagg cgttggggcg gggctcaggc tggagtctga agggagcctg    25560
          caggcctggt gggtggatgt gggtgggaga gggggaggat ggcaccaagg ctcgggcccc    25620
          tggacagatg gagttgccat taagtgggat ggggcaggct atggggccat cagtttcaga    25680
          gggatgagtt tggcactggc atggtaggca tctgtctatc tccacggccc tcaaaccagg    25740
          catgaagcag gagctcacgt gtttggtcag ccatggtgca gaaccgcctg ggtgggaggt    25800
          gcggggtggg agatacacgg ttgtgtccca aatgggctct gagccagcga gggccgtctg    25860
          cactttggcc tcacagaagg atgtcggagg gagaaatgaa gtgtgggtgg gggtcccggg    25920
          ccacgctaga catgtgcttt cttttcctcg ggctctggca ggtgaccgtg gcctgcgagg    25980
          agggctggac cctgactggc tgcagtgccc tccctgggac ctcccacgtc ctgggggcct    26040
          acgccgtaga caacacgtgt gtagtcagga gccgggacgt cagcactaca ggcagcacca    26100
          gcgaaggggc cgtgacagcc gttgccatct gctgccggag ccggcacctg gcgcaggcct    26160
          cccaggagct ccagtgacag ccccatccca ggatgggtgt ctggggaggg tcaagggctg    26220
          gggctgagct ttaaaatggt tccgacttgt ccctctctca gccctccatg gcctggcacg    26280
          aggggatggg gatgcttccg cctttccggg gctgctggcc tggcccttga gtggggcagc    26340
          ctccttgcct ggaactcact cactctgggt gcctcctccc caggtggagg tgccaggaag    26400
          ctccctccct cactgtgggg catttcacca ttcaaacagg tcgagctgtg ctcgggtgct    26460
          gccagctgct cccaatgtgc cgatgtccgt gggcagaatg acttttattg agctcttgtt    26520
          ccgtgccagg cattcaatcc tcaggtctcc accaaggagg caggattctt cccatggata    26580
          ggggaggggg cggtaggggc tgcagggaca aacatcgttg gggggtgagt gtgaaaggtg    26640
          ctgatggccc tcatctccag ctaactgtgg agaagcccct gggggctccc tgattaatgg    26700
          aggcttagct ttctggatgg catctagcca gaggctggag acaggtgcgc ccctggtggt    26760
          cacaggctgt gccttggttt cctgagccac ctttactctg ctctatgcca ggctgtgcta    26820
          gcaacaccca aaggtggcct gcggggagcc atcacctagg actgactcgg cagtgtgcag    26880
          tggtgcatgc actgtctcag ccaacccgct ccactacccg gcagggtaca cattcgcacc    26940
          cctacttcac agaggaagaa acctggaacc agagggggcg tgcctgccaa gctcacacag    27000
          caggaactga gccagaaacg cagattgggc tggctctgaa gccaagcctc ttcttacttc    27060
          acccggctgg gctcctcatt tttacgggta acagtgaggc tgggaagggg aacacagacc    27120
          aggaagctcg gtgagtgatg gcagaacgat gcctgcaggc atggaacttt ttccgttatc    27180
          acccaggcct gattcactgg cctggcggag atgcttctaa ggcatggtcg ggggagaggg    27240
          ccaacaactg tccctccttg agcaccagcc ccacccaagc aagcagacat ttatcttttg    27300
          ggtctgtcct ctctgttgcc tttttacagc caacttttct agacctgttt tgcttttgta    27360
          acttgaagat atttattctg ggttttgtag catttttatt aatatggtga ctttttaaaa    27420
          taaaaacaaa caaacgttgt cctaactctt gcatagactt gactgcctag ggtgatgcct    27480
          tgcttatact aggaactggg taagtttgtt gaatagttga gtaagccaag tatttgatga    27540
          gtacttttat cttgagtaca agtattgggc aagtactggt gatgtgaact tactccttgt    27600
          gcctatccta ggaatgaaat gaatgtcttc ctgcagctcc cctgaccacc ctgacagtca    27660
          aagtgcctcc tccttggtga caggtgccct acagcactct agatgctctg ttgtcctgac    27720
          ctcccaatgc ccttttcatt cttttctccc cagtacctgg cacacagcct ggcccgagta    27780
          tttacggaat aagttacagt gccagatgct tctgtaatga gccagtgcta agtccatggc    27840
          ttttttcatg atttaaaatt cagaacagtc tcagattggg tgcaatggct cacacctgta    27900
          atctcagtac tttgggaggc tgaggcagga ggattgcttg tgtttaggaa ttcaagaccc    27960
          tgggcaacag tgagaccccg tctctataaa aaaatttaaa agattagcga ggtgtggtag    28020
          cacatgcctg tggtcccggc tactcaggag gctgatatgg gaggcttgct tgagctggga    28080
          ggctgagggt gcagtgagct gtaattacat catcactgca ctgcagcctg ggttacagag    28140
          tgcataatga tcccattcaa tgtgggacct ccaggccctc cactctaagg ctggtgaata    28200
          tagctgtctt aagcaagttc tctctctctc tagacagccc atgtcataag gaatctcagg    28260
          caaaattcct cccagattac attttctgac aattcagtgt catatatgga aagcattcaa    28320
          gagttgacag atggcaatgg cttgaacacc caactgtgtt atctctgccc gttggaacct    28380
          aggcctgtgg tgcaacccta gactctctct ccttcccctc cacagaatca agtatcagct    28440
          ggttagagat ccacaccctg acagctctgt gatgttggaa caacttggtt cttgcagagg    28500
          gttagcaggt ggtcaccagg gatcggggag gaaggggtgt ggcttgcagg aaggcgaaaa    28560
          tctggactag caaataggga aggggaccca tgtgagcaac gctggccact aggaatgaga    28620
          ctgagacctg tgggatctag caagaagccc agtgtgacca gcgacacgat ctatgctggg    28680
          gaccacttgg gagagccaaa agctttggtg gagatgaatg gagaccatca acctaagttc    28740
          agcatcctcc tctaagcttt gcagatgaat cctgaaatgg tcagcccctc cagagaaaag    28800
          aacagcaaca ggctcagagg acccacagtc ccctttatta gtgtaaagta ctaagaggaa    28860
          tcaacagcat ttagcaccag gcacaggctc gtgttccccc gcccactacg gctgtgttct    28920
          gatatatgaa gaatggcggc aagactccaa ctctgttttt gaaaaattta ttttatactc    28980
          ttagaagcta agaactttgc c                                              29001
          <![CDATA[<210>  1547]]>
          <![CDATA[<211>  544]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  1547]]>
          aatctgacgc tgtttgggga gggcgaggcc gaaacctgat cctccagtcc gggggttccg       60
          ttaatgttta atcagatagg atcgtccgat ggggctctgg tggcgtgatc tgcgcgcccc      120
          aggcgtcaag cacccacacc ctagaaggtt tccgcagcga cgtcgaggcg ctcatggttg      180
          caggcgggcg ccgccgttca gttcagggtc tgagcctgga ggagtgagcc aggcagtgag      240
          actggctcgg gcgggccggg acgcgtcgtt gcagcagcgg ctcccagctc ccagccagga      300
          ttccgcgcgc cccttcacgc gccctgctcc tgaacttcag ctcctgcaca gtcctcccca      360
          ccgcaaggct caaggcgccg ccggcgtgga ccgcgcacgg cctctaggtc tcctcgccag      420
          gacagcaacc tctcccctgg ccctcatggg caccgtcagc tccaggcggt cctggtggcc      480
          gctgccactg ctgctgctgc tgctgctgct cctgggtccc gcgggcgccc gtgcgcagga      540
          ggac                                                                   544
          <![CDATA[<210>  1548]]>
          <![CDATA[<211>  544]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  尚未歸類的特徵]]>
          <![CDATA[<222>  (371)..(371)]]>
          <![CDATA[<223>  n 是 a, c, g, 或 t]]>
          <![CDATA[<400>  1548]]>
          gagcacggtg gagagcgggg acggccggct ctttggggac ttgctggggc gtgcggctgc       60
          gctattcagt gggaaggttc gcggggttgg gagacccgga ggccgaggaa gggcgagcag      120
          agcactgcca ggatatcctg cccagatttc ccagtttctg cctcgccgcg gcacaggatc      180
          cgtggaggtt gcctggcacc tacgtggtgg tgctgaagga ggagacccac ctctcgcagt      240
          cagagcgcac tgcccgccgc ctgcaggccc aggctgcccg ccggggatac ctcaccaaga      300
          tcctgcatgt cttccatggc cttcttcctg gcttcctggt gaagatgagt ggcgacctgc      360
          tggagctggc ncttgaagtt gccccatgtc gactacatcg aggaggactc ctctgtcttt      420
          gcccagagca tcccgtggaa cctggagcgg attacccctc cacggtaccg ggcggatgaa      480
          taccagcccc ccgacggagg cagcctggtg ggaggtgtat ctcctagaca ccagcataca      540
          gagt                                                                   544
          <![CDATA[<210>  1549]]>
          <![CDATA[<211>  580]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  1549]]>
          agtggggagc acggtggaga gcggggacgg ccggctcttt ggggacttgc tggggcgtgc       60
          ggctgcgcta ttcagtggga aggttcgcgg ggttgggaga cccggaggcc gaggaagggc      120
          gagcagagca ctgccaggat atcctgccca gatttcccag tttctgcctc gccgcggcac      180
          agacggaggc agcctggtgg aggtgtatct cctagacacc agcatacaga gtgaccaccg      240
          ggaaatcgag ggcagggtca tggtcaccga cttcgagaat gtgcccgagg aggacgggac      300
          ccgcttccac agacaggcca gcaagtgtga cagtcatggc acccacctgg caggggtggt      360
          cagcggccgg gatgccggcg tggccaaggg tgccagcatg cgcagcctgc gcgtgctcaa      420
          ctgccaaggg aagggcacgg ttagcggcac cctcataggc ctggagttta ttcggaaaag      480
          ccagctggtc cagcctgtgg ggccactggt ggtgctgctg cccctggcgg gtgggtacag      540
          ccgcgtcctc aacgccgcct gccagcgcct ggcgagggct                            580
          <![CDATA[<210>  1550]]>
          <![CDATA[<211>  2976]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  1550]]>
          agtggggagc acggtggaga gcggggacgg ccggctcttt ggggacttgc tggggcgtgc       60
          ggctgcgcta ttcagtggga aggttcgcgg ggttgggaga cccggaggcc gaggaagggc      120
          gagcagagca ctgccaggat atcctgccca gatttcccag tttctgcctc gccgcggcac      180
          agacggaggc agcctggtgg aggtgtatct cctagacacc agcatacaga gtgaccaccg      240
          ggaaatcgag ggcagggtca tggtcaccga cttcgagaat gtgcccgagg aggacgggac      300
          ccgcttccac agacaggcca gcaagtgtga cagtcatggc acccacctgg caggggtggt      360
          cagcggccgg gatgccggcg tggccaaggg tgccagcatg cgcagcctgc gcgtgctcaa      420
          ctgccaaggg aagggcacgg ttagcggcac cctcataggc ctggagttta ttcggaaaag      480
          ccagctggtc cagcctgtgg ggccactggt ggtgctgctg cccctggcgg gtgggtacag      540
          ccgcgtcctc aacgccgcct gccagcgcct ggcgagggct ggggtcgtgc tggtcaccgc      600
          tgccggcaac ttccgggacg atgcctgcct ctactcccca gcctcagctc ccgaggtcat      660
          cacagttggg gccaccaatg cccaagacca gccggtgacc ctggggactt tggggaccaa      720
          ctttggccgc tgtgtggacc tctttgcccc aggggaggac atcattggtg cctccagcga      780
          ctgcagcacc tgctttgtgt cacagagtgg gacatcacag gctgctgccc acgtggctgg      840
          cattgcagcc atgatgctgt ctgccgagcc ggagctcacc ctggccgagt tgaggcagag      900
          actgatccac ttctctgcca aagatgtcat caatgaggcc tggttccctg aggaccagcg      960
          ggttggcagc tgttttgcag gactgtatgg tcagcacact cggggcctac acggatggcc     1020
          acagccgtcg cccgctgcgc cccagatgag gagctgctga gctgctccag tttctccagg     1080
          agtgggaagc ggcggggcga gcgcatggag gcccaagggg gcaagctggt ctgccgggcc     1140
          cacaacgctt ttgggggtga gggtgtctac gccattgcca ggtgctgcct gctaccccag     1200
          gccaactgca gcgtccacac agctccacca gctgaggcca gcatggggac ccgtgtccac     1260
          tgccaccaac agggccacgt cctcacaggc tgcagctccc actgggaggt ggaggacctt     1320
          ggcacccaca agccgcctgt gctgaggcca cgaggtcagc ccaaccagtg cgtgggccac     1380
          agggaggcca gcatccacgc ttcctgctgc catgccccag gtctggaatg caaagtcaag     1440
          gagcatggaa tcccggcccc tcaggagcag gtgaccgtgg cctgcgagga gggctggacc     1500
          ctgactggct gcagtgccct ccctgggacc tcccacgtcc tgggggccta cgccgtagac     1560
          aacacgtgtg tagtcaggag ccgggacgtc agcactacag gcagcaccag cgaaggggcc     1620
          gtgacagccg ttgccatctg ctgccggagc cggcacctgg cgcaggcctc ccaggagctc     1680
          cagtgacagc cccatcccag gatgggtgtc tggggagggt caagggctgg ggctgagctt     1740
          taaaatggtt ccgacttgtc cctctctcag ccctccatgg cctggcacga ggggatgggg     1800
          atgcttccgc ctttccgggg ctgctggcct ggcccttgag tggggcagcc tccttgcctg     1860
          gaactcactc actctgggtg cctcctcccc aggtggaggt gccaggaagc tccctccctc     1920
          actgtggggc atttcaccat tcaaacaggt cgagctgtgc tcgggtgctg ccagctgctc     1980
          ccaatgtgcc gatgtccgtg ggcagaatga cttttattga gctcttgttc cgtgccaggc     2040
          attcaatcct caggtctcca ccaaggaggc aggattcttc ccatggatag gggagggggc     2100
          ggtaggggct gcagggacaa acatcgttgg ggggtgagtg tgaaaggtgc tgatggccct     2160
          catctccagc taactgtgga gaagcccctg ggggctccct gattaatgga ggcttagctt     2220
          tctggatggc atctagccag aggctggaga caggtgcgcc cctggtggtc acaggctgtg     2280
          ccttggtttc ctgagccacc tttactctgc tctatgccag gctgtgctag caacacccaa     2340
          aggtggcctg cggggagcca tcacctagga ctgactcggc agtgtgcagt ggtgcatgca     2400
          ctgtctcagc caacccgctc cactacccgg cagggtacac attcgcaccc ctacttcaca     2460
          gaggaagaaa cctggaacca gagggggcgt gcctgccaag ctcacacagc aggaactgag     2520
          ccagaaacgc agattgggct ggctctgaag ccaagcctct tcttacttca cccggctggg     2580
          ctcctcattt ttacgggtaa cagtgaggct gggaagggga acacagacca ggaagctcgg     2640
          tgagtgatgg cagaacgatg cctgcaggca tggaactttt tccgttatca cccaggcctg     2700
          attcactggc ctggcggaga tgcttctaag gcatggtcgg gggagagggc caacaactgt     2760
          ccctccttga gcaccagccc cacccaagca agcagacatt tatcttttgg gtctgtcctc     2820
          tctgttgcct ttttacagcc aacttttcta gacctgtttt gcttttgtaa cttgaagata     2880
          tttattctgg gttttgtagc atttttatta atatggtgac tttttaaaat aaaaacaaac     2940
          aaacgttgtc ctaacaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa                               2976
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Claims (9)

  1. 一種具有下式(SEQ ID NO: 1016)之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製備在個體中治療、預防、或緩解與PCSK9相關的疾病之醫藥品，其中該疾病為高膽固醇血症、血脂異常、或混合性血脂異常 。
  2. 如請求項1之用途，其中投與該化合物或醫藥品抑制或降低LDL-膽固醇水平及總膽固醇水平，並且改善肝LDL受體水平之誘導。
  3. 一種具有下式(SEQ ID NO: 1016)之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製備抑制細胞中PCSK9表現之醫藥品 。
  4. 如請求項3之用途，其中該細胞係在個體的肝中。
  5. 如請求項3之用途，其中該個體患有高膽固醇血症、血脂異常、或混合性血脂異常，或具有患高膽固醇血症、血脂異常、或混合性血脂異常的風險。
  6. 一種具有下式(SEQ ID NO: 1016)之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其係用於製備在患有與PCSK9相關的疾病或具有患該疾病的風險的個體中降低或抑制LDL-膽固醇水平及總膽固醇水平之醫藥品 。
  7. 如請求項6之用途，其中該個體患有高膽固醇血症、血脂異常、或混合性血脂異常，或具有患高膽固醇血症、血脂異常、或混合性血脂異常的風險。
  8. 一種於活體外抑制細胞中PCSK9表現之方法，該方法包括使根據具下式(SEQ ID NO: 1016)之化合物或其醫藥上可接受之鹽接觸該細胞，從而抑制該細胞中PCSK9的表現 。
  9. 如請求項8之方法，其中該細胞係來自患有高膽固醇血症、血脂異常、或混合性血脂異常，或具有患高膽固醇血症、血脂異常、或混合性血脂異常的風險之個體。
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