KR20240033305A - 앤지오텐시노겐 발현 조정을 위한 화합물 및 방법 - Google Patents
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Abstract
AGT를 조정하고, 그리고 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 및/또는 상태의 조정이 필요한 개체에서 이를 조정하기 위하여 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물 및 화합물이 본 명세서에서 제공된다. 개체에서 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 및/또는 상태, 이를 테면, 고혈압은 AGT를 표적으로 하는 안티센스 화합물의 투여에 의해 치료, 개선, 지연 또는 방지될 수 있다.
Description
서열 목록
본 출원은 전자 포맷의 서열 목록과 함께 출원되었다. 서열 목록은 2016년 10월 3일에 456 Kb 크기로 생성된 BIOL0270WOSEQ_ST25.txt라는 제목의 파일로 제공된다. 서열 목록의 전자 포맷 내 정보는 그 전체가 본 명세서에서 참고로서 포함된다.
발명의 분야
본 발명은 동물에서 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 또는 상태 조절을 목적으로 앤지오텐시노겐 (AGT) 발현을 조절하는 화합물, 조성물 및 방법을 제공한다. 본 발명은 AGT 억제제를 동물에게 투여함으로써, 고혈압 및 장기 손상을 감소시키기 위한 화합물, 조성물 및 방법을 또한 제공한다.
발명의 배경
앤지오텐시노겐 (AGT)은 SERPINA8 또는 ANHU로도 알려져 있는데, 이는 세르핀 패밀리의 구성원으로써, 레닌-앤지오텐신-알도스테론 시스템 (RAAS)의 성분(component)이다. 이것은 주로 간에서 만들어지고, 순환계로 방출되며, 순환계에서 레닌은 이것을 앤지오텐신 I으로 전환시킨다. 앤지오텐신 I은 앤지오텐ㅅ신(angiotensin) 전환 효소 (ACE)에 의해 후속적으로 앤지오텐신으로 전환된다. 앤지오텐신 II는 혈관수축을 야기하고, 다시 후속적으로 혈압을 증가시킬 수 있는 펩티드 호르몬이다. 앤지오텐신 II는 또한 부신피질로부터 호르몬 알도스테론의 방출을 촉진한다. 알도스테론은 신장에 의한 나트륨과 물의 재흡수 증가를 야기시킴으로써, 체내의 유체 체적 증가의 원인이 되고, 이는 다시 혈압을 상승시킬 수 있다. RAAS 경로의 과다 자극이나 또는 활성은 고혈압을 유발할 수 있다. 만성적으로 높은 혈압은 고혈압으로 알려져 있다. 고혈압 환자의 높은 혈압은 혈관을 통해 혈액을 순환시키기 위해 심장이 더 열심히 일하도록 요구한다.
세계 보건기구 (WHO)는 고혈압이 심혈관 이환율의 주요 원인이라고 밝혔다. 고혈압은 다양한 질환, 장애 및 상태, 이를 테면, 수명 단축, 만성 신장 질환, 뇌졸중, 심근경색, 심부전, 혈관의 동맥류(가령, 대동맥류), 말초 동맥 질환, 심장 이상 (가령, 심장 확대 또는 비대) 및 기타 심혈관 관련된 질환, 장애 및/또는 상태의 주요 위험 요인이다.
저항성 고혈압 (RHTN), 약물 치료에 저항성인 고혈압의 만연은 인구 고령화 및 비만 발생율의 꾸준한 증가로 인하여 그 수가 꾸준히 증가되고 있다. 현재 전망으로는 미국에서 RHTN을 갖는 성인은 약 천만 명으로 계속 증가할 것으로 예상된다.
항-고혈압 치료제, 신장 신경제거(denervation), 압력수용기(baroreceptor) 활성화 요법, 식이 요법 변화 및 생활 습관 변화는 고혈압을 감소시킬 수 있으며, 고혈압과 관련된 질병, 장애 및/또는 상태를 감소시킬 수 있다(Paulis et al., Nat Rev Cardiol, 2012, 9:276-285). 그러나, 모든 고혈압 환자의 상당한 하위 집단이 적절하게 혈압을 조절하지 못하기 때문에, 고혈압 치료를 위해 현재 승인된 치료법에는 한계가 있다. 예를 들면, ACE 억제제 및 레닌-앤지오텐신 시스템 (RAS) 경로의 일부를 표적으로 하는 앤지오텐신 수용체 차단제 (ARBs)와 같은 약물은 RAAS 경로를 저해하는 능력이 제한된다 (Nobakht et al., Nat Rev Nephrol, 2011, 7:356-359). 추가적으로, ACE 억제제와 같은 특정 항-고혈압제는 신장 질환을 앓고 있는 고혈압 환자에서 신장 기능을 손상시킬 수 있는 가능성으로 인하여, 금지된다
따라서, RAAS 경로를 억제하고, 고혈압을 치료하는 대체 치료를 찾을 필요가 있다. 안티센스 기술은 특정 유전자 산물의 발현을 감소시키는 효과적인 수단으로 부상하고 있다. 그러나, AGT를 표적으로 하는 초기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 제한적 이익 (WO 1997/33623)을 제공하거나, 또는 인간의 것이 아닌 AGT를 표적으로 하였다 (WO 2014/018930). 본 발명의 화합물 및 조성물은 인간 AGT를 저해하기 위한 신규하고, 매우 강력하며, 용인가능한 화합물을 제공하며, 인간 대상에서의 사용에 적합하다. 추가적으로, 본 발명에 개시된 화합물은 안티센스 화합물을 간에 전달하고, 이들의 신장 분포 및 활성을 제한하는 접합 전략을 사용함으로써, 고칼슘 혈증 및/또는 신장 질환의 위험이 있는 환자의 전통적인 RAS 차단제의 내약성(tolerability) 문제를 완화시킬 것으로 예상된다.
특허, 특허 출원, 물품, 서적, 및 조약을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 본 명세서에 인용된 모든 문서, 또는 문서의 일부는 본 명세서에 언급된 문서 일부 뿐만 아니라 그 전체가 참고로서 명시적으로 본 명세서에 포함된다.
발명의 요약
본 발명에서는 동물에서 AGT mRNA 및/또는 단백질의 수준을 낮추기 위한 조성물, 화합물 및 방법을 제공한다.
본원에 개시된 특정 구체예들은 AGT를 인코딩하는 핵산 서열을 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다. 특정 구체예들에서, 상기 화합물은 서열 번호: 1-6중 임의의 핵염기 서열로 나타낸 AGT 서열을 표적으로 한다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1의 핵염기 2250 내지 2337의 대등한 길이 부분에 상보적인 최소한 8개의 연접 핵염기 일부가 포함되는 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물을 제공하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1의 핵염기 2281 내지 2300의 대등한 길이의 부분에 상보적인 최소한 8개의 연접 핵염기 일부가 포함되는 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물을 제공하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 46, 53-54, 61, 68, 76, 83, 85, 93, 96-97, 109, 127, 129-130, 132, 134-15, 137-39, 142, 163-172, 180-184, 186, 189, 234, 236, 238-239, 267, 313, 411, 452, 463-470, 475-478, 480, 500-503, 512, 517-518, 524-526, 654, 689, 702, 725-726, 728, 738, 779, 786-787, 800, 808, 810-811, 825, 865, 868, 889, 894, 903, 905, 909, 954, 966, 1011, 1015, 1021, 1024, 1080, 1085, 1258-1259, 1261-1262, 1293-1294, 1299, 1325, 1470, 1472-1473, 1522, 1542, 1604, 1623-1624, 1667, 1670, 1682-1683, 1687, 1700, 1703-1704, 1708, 1714, 1716, 1719-1720, 1724-1726, 1729-1730, 1827, 1936, 1843-1844, 1846, 1886, 1893-1894, 1914, 1923, 1925, 1932, 1979, 1986, 1988, 1990, 2003, 2015, 2018, 2020, 2027-2028, 2035, 2037, 2039, 2044의 핵염기 서열중 임의의 최소한 8개의 연접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖고, 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물을 제공한다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 다음 식에 따라 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물을 제공하며: mCes Aes mCes Aes Aes Ads mCds Ads Ads Gds mCds Tds Gds Gds Tds mCes Ges Ges Tes Te (서열 번호: 1914); 이때, A는 아데닌이며, mC는 5-메틸시토신이며, G는 구아닌이며, T는 티민이며, e는 2'-O-메톡시에틸 변형된 뉴클레오시드이며, d는 2'-데옥시뉴클레오시드이며, 그리고 s는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트(conjugate)를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 다음의 화학식을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물을 제공한다:
발명의 상세한 설명
선행된 일반 설명 및 이어지는 상세한 설명은 모두 예시와 설명을 위한 것이며, 청구된 본 발명을 제한하는 것이 아니라는 것을 이해해야 한다. 본 명세서에서, 단수의 사용은 달리 구체적으로 언급되지 않은 한, 복수를 포함한다. 본 명세서에서 사용된, "또는"의 사용은 달리 언급되지 않은 한, "및/또는"을 포함한다. 게다가, 용어 "포함하는" 뿐 아니라 다른 형태, 가령, "포함한다" 및 "포함되다"는 제한하는 것이 아니다. 또한, "요소(element)" 또는 "성분(component)"과 같은 용어는, 달리 구체적으로 언급되지 않은 한, 하나 초과의 소단위를 포함하는 하나의 단위 및 요소 및 성분을 포함하는 요소 및 성분 둘다를 포괄한다.
본 명세서에서 사용된 섹션 제목은 오로지 구획을 분리하려는 목적을 위함이며, 서술된 주제를 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다. 특허, 특허 출원, 물품, 서적, 및 조약을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 본 명세서에 인용된 모든 문서, 또는 문서의 일부는 본 명세서에 언급된 문서 일부 뿐만 아니라 그 전체가 참고로서 명시적으로 본 명세서에 포함된다.
정의
특정 정의가 제공되지 않는 한, 본원에 기술된 분석 화학, 합성 유기 화학 및 의약 및 약학 화학과 관련하여 사용된 명명법 및 절차 및 기술은 당업계에 널리 공지되어 있고 통상적으로 사용되는 것이다. 표준 기술은 화학 합성 및 화학 분석에 사용될 수 있다. 허용되는 경우, 본 명세서 전반에 걸쳐 언급된 모든 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 간행물 그리고 GENBANK 기탁 번호 및 National Center for Biotechnology Information (NCBI)와 같은 데이터베이스를 통하여 수득가능한 연합된 서열 정보 및 기타 데이터는 본 발명에서 논의된 서류의 일부 및 그 전체가 본 명세서에 참조로서 병합된다.
달리 명시되지 않는 한, 다음의 용어는 이하의 의미를 지닌다:
"2'-O-메톡시에틸" (또한 2'-MOE 및 2'-O(CH2)2-OCH3)은 퓨로실 고리의 2' 위치에서의 O-메톡시-에틸 변형을 가리킨다. 2'-O-메톡시에틸 변형된 당은 변형된 당이다.
"2'-O-메톡시에틸 뉴클레오티드" 는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당 모이어티가 포함된 뉴클레오티드를 의미한다.
"5-메틸시토신"은 5 위치에 부착된 메틸 기로 변형된 시토신을 의미한다. 5-메틸시토신은 변형된 핵염기다.
"약(about)"은 수치의 ±10% 이내를 의미한다. 예를 들면, "표지가 약 50 % 증가할 수 있다"라고 명시되어 있다면, 이 표지는 45%-55% 사이에서 증가할 수 있음을 암시한다.
앤지오텐신 II 재활성화로 또한 공지된 "ACE 도피(escape)"는 현재 이용가능한 ACE 억제제 치료가 혈장 앤지오텐신 II 수준을 확실히 억제하지 못함을 지칭한다. ACE 억제 동안 혈장 안지오텐신 II 수준의 증가는 안지오텐신 I를 안지오텐신으로 전환시키는 다른 효소를 통해 일어난다. 이 안지오텐신 II 수준의 불완전한 차단은 ACE 억제제가 일부 고혈압 대상을 효과적으로 치료하는 것을 방해한다. 앤지오텐신 수용체 차단제 (ARBs)는 또한 AT1 수용체 이외의 다른 수용체가 안지오텐신 대사산물에 관여하기 때문에, ACE 도피에 또한 걸리기 쉽다.
"약학적 활성 물질(active pharmaceutical agent)" 또는 "약학적 물질(pharmaceutical agent)"은 개체에 투여했을 때, 약학 조성물내에 치료요법적 이익을 제공하는 물질 또는 물질들을 의미한다. 예를 들면, 특정 구체예들에서, AGT를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드는 약학적 활성 물질이다.
"활성 표적 영역" 또는 "표적 영역(target region)"이란 하나 또는 그 이상의 활성 안티센스 화합물이 표적으로 하는 영역을 의미한다.
"활성 안티센스 화합물(Active antisense compounds)"이란 표적 핵산 수준 또는 단백질 수준을 감소시키는 안티센스 화합물을 의미한다.
"수반적으로 투여된(administered concomitantly)"이란 두 가지 물질의 약력학적 효과가 환자에게 동시에 나타나도록 하는 임의의 방식으로 2가지 물질이 공동-투여됨을 말한다. 공통 투여는 두 물질이 단일 약학 조성물 안에, 동일한 투약형(dosage form) 안에 또는 동일한 투여 경로에 의해 투여되는 것을 요구하지는 않는다. 두 가지 물질의 효과는 동시에 나타나지 않아도 된다. 효과는 일정한 시간 동안 중첩되어야 할 뿐 공존해야 할 필요는 없다.
"투여하는" 이란 개체에게 약학 물질이 제공됨을 의미하며, 의료 전문인과 자가-투여에 의해 투여되지만 이에 국한되지 않는다.
"알도스테론 도피(Aldosterone escape)" 또는 "알도스테론 돌파구(aldosterone breakthrough)" 란 현재 이용가능한 ACE 억제제 앤지오텐신 수용체 차단제 (ARB) 및/또는 직접적 레닌 억제제 (DRI) 치료로 일부 처리된 대상에서 알도스테론 방출을 확실히 억제하지 못함을 지칭한다. 이와 같은 알도스테론의 불완전한 차단은 ACE 억제제, DRIs 및 ARBs가 일부 고혈압 대상을 효과적으로 치료하는 것을 방해한다.
"물질(agent)"은 동물에게 투여했을 때, 치료적 이익을 제공하는 활성 물질을 의미한다. "제 1 물질"은 본 발명에서 제공되는 치료 화합물을 의미한다. 예를 들면, 제 1 물질은 AGT를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드다. "제 2 물질"은 본 발명에서 기술되는 제 2 치료 화합물을 의미한다. 예를 들면, 제 2 물질은 AGT 또는 비-AGT 표적을 표적으로 하는 제 2 안티센스 올리고뉴클레오티드다. 대안으로, 제 2 물질은 안티센스 올리고뉴클레오티드이외의 화합물이 될 수 있다.
"개선(Amelioration)" 또는 "개선하다(ameliorate)"란 연관된 질환, 장애, 또는 상태의 적어도 하나의 지표, 징후, 및/또는 증상의 감소를 가리킨다. 특정 구체예에서, 개선은 상태, 장애 및/또는 질환의 하나 이상의 지표의 진행을 지연 또는 지체시키는 것을 포함한다. 지표의 심각성은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 주관적이거나 객관적인 측정에 의해 확인될 수 있다.
"앤지오텐시노겐(Angiotensinogen)" 및 "AGT"은 본 발명에서 호환이용된다. 앤지오텐시노겐은 SERPINA8 및 ANHU으로도 또한 공지되어 있다.
"앤지오텐시노겐 핵산" 또는 "AGT 핵산"이란 AGT를 인코딩하는 임의의 핵산을 의미한다. 예를 들면, 특정 구체예들에서, AGT 핵산은 AGT를 인코딩하는 DNA 서열, AGT를 인코딩하는 DNA (인트론 및 엑손을 포함하는 유전체 DNA를 포함)로부터 전사된 RNA 서열, 및 AGT를 인코딩하는 mRNA 서열을 포함한다. "AGT mRNA"는 AGT 단백질을 인코딩하는 mRNA를 의미한다.
"AGT 특이적 억제제"란 AGT mRNA 및/또는 AGT 단백질의 발현을 특이적으로 저해할 수 있는 임의의 물질을 말한다. 예를 들면, AGT 특이적 억제제는 AGT mRNA 및/또는 AGT 단백질의 발현을 특이적으로 억제할 수 있는 핵산 (안티센스 화합물, 이를 테면, RNasH, siRNA 및 차단체(blockmer) 안티센스 화합물 포함), 펩티드, 항체, 소분자 및 기타 물질을 포함한다. 특정 구체예들에서, AGT mRNA 수준 및/또는 AGT 단백질 발현을 특이적으로 조정함으로써, AGT 특이적 억제제는 레닌-앤지오텐신-알도스테론 시스템 (RAAS) 경로의 성분들에 영향을 줄 수 있다. 특정 구체예들에서, AGT mRNA 수준 및/또는 AGT 단백질 발현을 특이적으로 조정함으로써, AGT 특이적 억제제는 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 및/또는 상태 이를 테면, 혈압에 영향을 줄 수 있다. 유사하게, 특정 구체예들에 있어서, AGT 특이적 저해제들은 동물의 다른 분자 프로세스에 영향을 줄 수 있다.
"동물"은 인간 또는 인간이-아닌 동물, 가령, 이에 제한되지 않지만, 마우스, 래트, 토끼, 개, 고양이, 돼지, 및 인간이-아닌 영장류, 가령, 이에 제한되지 않지만, 원숭이 및 침팬지를 가리킨다.
"항-고혈압 약물(Anti-hypertensive drug)"이란 혈압을 낮출 수 있는 약물을 말한다. 이러한 약물의 예로는 RAAS 억제제, 이뇨제, 칼슘 채널 차단제, 아드레날린성 수용체 길항제, 아드레날린 항진제 및 혈관 확장제를 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 한 예로써, 항-고혈압 약물 캡토프릴(captopril)은 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 및/또는 상태를 갖는 또는 걸리게 될 위험을 가진 동물을 치료하기 위하여 본 발명에서 기술된 AGT 화합물과 복합하여 이용될 수 있다.
"항-고혈압 과정(Anti-hypertensive procedure)"이란 대상의 고혈압을 낮추기 위하여 실행되는 의학적 절차를 말한다. 이러한 과정의 예로는 신장 신경제거 및 압력수용기 활성화 요법을 포함한다.
"항체"는 일부 방식으로 항원과 특이적으로 반응하는 것을 특징으로 하는 분자를 말하는데, 이때, 항체 및 항원은 각각 서로에 대하여 특정된다. 항체란 온전한 항체 분자 또는 이의 임의의 단편 또는 영역, 이를 테면, 중쇄, 경쇄, Fab 영역, 및 Fc 영역을 말할 수 있다.
"안티센스 활성(Antisense activity)"은 안티센스 화합물이 이의 표적 핵산에 혼성화됨으로써 나타나는 임의의 검출가능하거나 측정가능한 활성을 의미한다. 특정 구체예들에서, 안티센스 활성은 이러한 표적 핵산에 의해 인코딩되는 표적 핵산 또는 단백질의 양 또는 발현이 감소하는 것이다.
"안티센스 화합물"이란 수소 결합을 통해 표적 핵산에 대해 혼성화를 진행할 수 있는 올리고머 화합물을 의미한다.
"안티센스 억제(Antisense inhibition)"란 안티센스 화합물이 부재시 표적 핵산 수준 또는 표적 단백질 수준과 비교하여, 표적 핵산에 상보적인 안테센스 화합물 존재시 표적 핵산 수준 또는 표적 단백질 수준의 감소를 의미한다.
"안티센스 올리고뉴클레오티드(Antisense oligonucleotide)"란 표적 핵산의 대응하는 영역 또는 세그먼트(segment)에 혼성화를 허용하는 핵염기를 갖는 단일-가닥 올리고뉴클레오티드를 말한다.
"바이사이클릭 당(Bicyclic sugar)"이란 2개의 비-제미럴(geminal) 고리 원자의 가교에 의해 변형된 퓨로실 고리를 의미한다. 바이사이클릭 당은 변형된 당이다.
"바이사이클릭 핵산" 또는 "BNA"는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드이며, 이때, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 퓨라노스 부분은 퓨라노스 고리 상의 2개 탄소 원자를 연결하는 다리를 포함하며, 이로 인하여 바이사이클릭 고리 시스템이 형성된다.
"혈압"은 혈관벽에 대항하는 순환계의 혈액 압력을 나타낸다. 혈압은 주로 동물의 심장 박동 때문이다. 각 심장 박동 중에 혈압은 최대 (수축기) 혈압 (SBP)과 최소 (이완기) 혈압 (DBP) 사이에서 가변적이다. 평균 동맥압 (MAP)은 심장 박동주기 동안의 평균 동맥압이다. 혈압은 혈압계 (가령, 맥압계)에 의해 측정될 수 있다. 안정상태에서 정상적인 혈압은 수축기 혈압 100-140mmHg이고, 이완기 혈압이 60-90mmHg이며, 일반적으로 수축기 혈압 (최고 판독치) / 이완기 혈압 (하단 판독치) mmHg로 표시된다.
"캡 구조(Cap structure)"또는 "말단 캡 모이어티(terminal cap moiety)"는 안티센스 화합물의 양쪽 말단에 혼입된 화학적 변형을 의미한다.
"cEt" 또는 "제한된 에틸(constrained ethyl)"은 4'-탄소와 2'-탄소를 연결하는 가교를 포함하는 바이사이클릭 당 모이어티를 의미하며, 여기서 가교는 다음 식을 가진다: 4'-CH(CH3)-O-2'.
"제한된 에틸 뉴클레오시드"(또한 cEt 뉴클레오시드)는 4'-CH(CH3)-O-2' 가교를 포함하는 바이사이클릭 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드를 의미한다.
"화학적으로 구별되는 영역(chemically distinct region)"이란 동일한 안티센스 화합물의 또다른 영역과 어떤 방식으로든 화학적으로 상이한 안티센스 화합물의 영역을 가리킨다. 예를 들면, 2'-O-메톡시에틸 뉴클레오티드를 가지는 영역은 2'-O-메톡시에틸 수식이 없는 뉴클레오티드를 가지는 영역과 화학적으로 구별된다.
"키메라 안티센스 화합물(Chimeric antisense compound)"은 적어도 2개의 화학적으로 구별되는 영역을 가지는 안티센스 화합물을 의미한다.
"공동-투여(Co-administration)"란 개체에게 2개 또는 그 이상의 약학 물질의 투여를 의미한다. 상기 2개 또는 그 이상의 약학 물질은 단일 약학 조성물 안에 존재하거나, 또는 별도의 약학 조성물에 존재할 수 있다. 2개 또는 그 이상의 약학 물질 각각은 동일 또는 상이한 투여 경로를 통하여 투여될 수 있다. 공동-투여는 병용(concomitant), 병행(parallel) 또는 순차(sequential)적 투여를 포함한다.
"상보성(Complementarity)"이란 제 1 핵산과 제 2 핵산의 핵염기 쌍형성 능력을 말한다. 특정 구체예들에서, 제 1 핵산은 안티센스 화합물이며, 제 2 핵산은 표적 핵산이다.
"연접 핵염기(Contiguous nucleobases)"란 서로의 바로 옆에 있는 핵염기를 의미한다.
"데옥시리보뉴클레오티드(Deoxyribonucleotide)"는 뉴클레오티드의 당 부분의 2' 위치에 수소를 가지는 뉴클레오티드를 의미한다. 데옥시리보뉴클레오티드는 다양한 임의의 치환체에 의하여 변형될 수 있다.
"희석제(diluent)"란 약리학적 활성은 없지만, 제약학적으로 필요한 또는 바람직한 조성물내 성분을 말한다. 예를 들면, 주사된 조성물 안에 희석제는 액체, 가령, 인산염 완충된 염수(PBS) 또는 물과 같은 용액일 수 있다.
"투약형 단위(Dosage unit)"란 약학 조성물이 제공되는 형태, 가령, 알약, 테블릿, 또는 당분야에 공지된 다른 투약형 단위를 말한다. 특정 구체예들에서, 투약형 단위는 동결건조된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 함유하는 바이알이다. 특정 구체예들에서, 투약형 단위는 재구성된(reconstituted) 안티센스 올리고뉴클레오티드를 함유하는 바이알이다.
"용량(Dose)"은 단일 투여로, 또는 명시된 기간 내에 제공되는 약제학적 물질의 구체적인 양을 의미한다. 특정 구체예에서, 용량은 하나, 둘 또는 그 이상의 볼루스(bolus), 정제, 또는 주사로 투여될 수 있다. 예를 들면, 특정 구체예들에 있어서 피하 투여가 바람직할 경우, 바람직한 투여분량은 단일 주사에 의해 용이하게 수용되지 않은 용적을 요구하며, 따라서, 2개 또는 그 이상의 주사는 원하는 투여분량을 획득하는데 이용될 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, 약학 물질은 연장된 기간에 걸쳐 또는 연속적으로 주입에 의해 투여된다. 용량은 각 시간, 일, 주 또는 월에 대한 약학 물질의 양으로 언급될 수 있다.
"유효량(effective amount)" 또는 "치료 효과량(herapeutically effective amount)"은 물질을 필요로 하는 개체에서 요망되는 생리학적 결과를 나타내기에 충분한 활성 약학 물질의 양을 의미한다. 유효량은 개체에 따라 치료받는 개체의 건강 및 신체 조건, 치료받는 개체의 분류군, 조성물의 제형, 개체의 의학적인 상태의 평가, 및 다른 관련 요인에 의존하여 달라질 수 있다. 한 예로써, AGT 안티센스 올리고뉴클레오티드의 유효량은 혈압을 감소시키거나 및/또는 고혈압으로 인한 장기 손상을 개선시킨다.
"충분히 상보적(Fully complementary)" 또는 "100% 상보적"이란 제 1 핵산의 핵염기 서열의 각 핵염기가 제 2 핵산의 제 2 핵염기 서열에서 상보적 핵염기를 갖는다는 것을 의미한다. 특정 구체예들에서, 제 1 핵산은 안티센스 화합물이며, 제 2 핵산은 표적 핵산이다.
"갭머(Gapmer)"는 내부 영역이 하나 또는 이상의 뉴클레오시드를 가지는 외부 영역 사이에 위치하는, RNase H 절단을 지원하는 다수의 뉴클레오시드를 가지는 키메라 안티센스 화합물을 의미하며, 여기서 내부 영역을 포함하는 뉴클레오시드는 외부 영역을 포함하는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오시드들과 화학적으로 구별된다. 내부 영역은 "갭(gap) 세그먼트"라고 지칭되며, 외부 영역은 "날개(wing) 세그먼트"로 지칭될 수 있다.
"갭-확장된(Gap-widened)"이란 1 내지 6개의 뉴클레오시드를 갖는 5' 및 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하여 위치한 12개 또는 그 이상의 연접 2'-데옥시뉴클레오시드의 갭 세그먼트를 갖는 키메라 안티센스 화합물을 말한다.
"혼성화(Hybridization)"는 상보적 핵산 분자의 어닐링(annealing)을 의미한다. 특정 구체예들에서, 상보적 핵산 분자는 안티센스 화합물 및 핵산 표적을 포함한다.
"고혈압" 또는 "HTN"는 동물에서 혈압이 상승된 만성적 의학 상태를 지칭한다. 상승된 혈압은 혈관을 통해 혈액을 순환시키기 위해 심장이 더 열심히 일하도록 요구한다. 혈압이 지속적으로 140/90 mmHg 이상인 경우, 고혈압이 있다고 한다. 고혈압은 일차(본태성) 또는 속발성으로 분류된다. 일차 고혈압은 명확한 원인이 없으며, 유전적, 식사, 운동 부족 및 비만과 관련이 있다고 본다. 속발성 고혈압은 다른 의학적 상태로 기인한 것이다. 고혈압은 수명 단축, 만성 신장 질환, 뇌졸중, 심근경색, 심부전, 혈관의 동맥류(가령, 대동맥류), 말초 동맥 질환, 장기 이상 (가령, 심장 확대 또는 비대) 및 기타 심혈관 관련된 질환, 장애 및/또는 상태 또는 이의 증상의 주요 위험 요인이다. 항-고혈압 치료제, 식이 요법 변화 및 생활 습관 변화는 고혈압을 감소시킬 수 있으며, 고혈압과 관련된 질병, 장애 및/또는 상태를 감소시킬 수 있다. 고혈압은 약물 개입에 대하여 비-저항성 (가령, 상업적으로 이용가능한 약물 요법에 의해 조절가능한) 또는 약물 개입에 저항성일 수 있다.
"RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태를 가지거나 가질 위험이 있는 동물의 식별"은 RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태를 진단받은 동물을 식별하는 것 또는 RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태의 발병 가능성이 높은 동물을 식별하는 것을 의미한다. RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태가 발생되는 성향이 있는 개체는 예를 들면, RAAS 관련된 질환, 이를 테면, 고혈압의 가족력을 가진 개체를 포함한다. 이러한 식별은 개체의 의료 기록 및 표준 임상 시험 또는 평가를 비롯한 임의의 방법에 의해 이루어질 수 있다.
"바로 인접한(Immediately adjacent)"이란 바로 인접한 요소 사이에 끼어든 요소가 전혀 없는 것을 의미한다.
"개체(Individual)" 또는 "대상(subject)" 또는 "동물"이란 치료 또는 요법을 위해 선택된 인간 또는 인간이-아닌 동물을 의미한다.
"발현 또는 활성을 저해하는"이란 RNA 또는 단백질의 발현 또는 활성을 감소 또는 차단을 말하고, 반드시 발현 또는 활성의 완전한 제거를 의미하지는 않는다.
"뉴클레오시드간 링키지(Internucleoside linkage)"란 뉴클레오시드 사이의 화학 결합을 의미한다.
"정맥내 투여(Intravenous administration)"란 정맥으로 투여를 의미한다.
"연계된 뉴클레오시드(Linked nucleosides)"란 서로 결합된 인접한 뉴클레오시드를 의미한다.
"표지(Marker)" 또는 "생물표지(biomarker)"는 건강- 또는 생리학-관련 평가의 지표 역할을 하는 측정가능하고, 정량화 가능한 임의의 생물학적 매개 변수다. 예를 들면, 혈압의 증가, 또는 장기 손상 (가령, 섬유증)의 감소는 RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태의 표지로 간주될 수 있다.
"미스매치(Mismatch)" 또는 "비-상보적 염기(non-complementary nucleobase)" 또는 "MM"이란 제 1 핵산의 핵염기가 제 2 또는 표적 핵산의 대응하는 핵염기와 쌍을 이루지 못하는 경우를 지칭한다.
"변형된 뉴클레오시드간 링키지(Modified internucleoside linkage)" 란 자연 발생적 뉴클레오시드간 결합에서 치환 또는 임의의 변화 (가령, 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 결합)를 지칭한다.
"변형된 핵염기(Modified nucleobase)"는 아데닌, 시토신, 구아닌, 티미딘, 또는 우라실이 아닌 임의의 핵염기를 의미한다. 예를 들면, 변형된 핵염기는 5-메틸시토신일 수 있다. "변형되지 않은 핵염기(unmodified nucleobase)"는 퓨린 염기 아데닌(A) 및 구아닌(G), 및 피리미딘 염기 티민(T), 시토신(C) 및 우라실(U)을 의미한다.
"변형된 뉴클레오시드(Modified nucleoside)"는 독립적으로, 변형된 당 모이어티 및/또는 변형된 핵염기를 가지는 뉴클레오시드를 의미한다.
"변형된 뉴클레오티드(Modified nucleotide)"는 독립적으로, 변형된 당 모이어티, 변형된 뉴클레오시드간 연결, 및/또는 변형된 핵염기를 가지는 뉴클레오티드를 의미한다.
"변형된 올리고뉴클레오티드(Modified oligonucleotide)"는 변형된 뉴클레오시드간 연결, 변형된 당, 및/또는 변형된 핵염기를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
"변형된 당(Modified sugar)"이란 천연 당으로부터 치환 또는 변화를 지칭한다. 예를 들면, 변형된 당은 2'-MOE일 수 있다.
"조절하는(Modulating)"이란 세포, 조직, 장기 또는 유기체에서 특징을 변화시키거나 조정하는 것을 가리킨다. 예를 들면, 예를 들면, AGT mRNA의 조절은 세포, 조직, 장기 또는 유기체에서 AGT mRNA 및/또는 AGT 단백질의 수준을 증가 또는 감소시키는 것을 의미할 수 있다. RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태에서 AGT mRNA 및/또는 단백질의 조절은 세포, 조직, 장기 또는 유기체에서 증가 또는 감소시키는 것을 의미할 수 있다. "조절인자(modulator)"는 세포, 조직, 장기 또는 유기체에 변화를 일으킨다. 예를 들면, AGT 안티센스 화합물 세포, 조직, 장기 또는 유기체에서 AGT mRNA 및/또는 AGT 단백질의 양을 감소시키는 조절인자일 수 있다.
"모노머(Monomer)"는 올리고머의 단일 단위체를 지칭한다. 모노머는 자연발생적이든 변형된 것이든, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
"모티프(Motif)"란 안티센스 화합물에서 화학적으로 뚜렷한 영역의 패턴을 의미한다.
"자연 발생적 뉴클레오시드간 링키지(Naturally occurring internucleoside linkage)"는 3'에서 5'로의 포스포디에스테르 링키지를 의미한다.
"천연 당 모이어티(Natural sugar moiety)"란 DNA (2'-H) 또는 RNA (2'-OH)에서 발현되는 당을 의미한다.
"비저항성 고혈압(Nonresistant hypertension)", "비난치성 고혈압(nonrefractory hypertension)" 또는 "조절된 고혈압(controlled hypertension)"이란 예를 들면, 최대 3 개의 항 고혈압제를 동시에 사용 치료에 반응하여, 혈압의 SBP이 < 140 mmHg이거나 또는 DBP가 < 90 mmHg를 야기하는, 치료에 반응하는 고혈압으로 정의된다.
"핵산(Nucleic acid)"은 모노머 뉴클레오티드로 이루어진 분자를 지칭한다. 핵산은 리보핵산 (RNA), 데옥시리보핵산 (DNA), 단일-가닥으로된 핵산, 이중-가닥으로된 핵산, 작은 간섭 리보핵산 (siRNA), 및 microRNAs (miRNA)를 포함한다.
"핵염기(Nucleobase)"는 또다른 핵산의 염기와 쌍을 형성할 수 있는 헤테로사이클릭 모이어티를 의미한다.
"핵염기 서열(Nucleobase sequence)"은 임의의 당, 링키지(linkage), 또는 핵염기 변형과는 독립적인 인접한 핵염기의 순서를 말한다.
"뉴클레오시드(Nucleoside)"란 당에 연계된 핵염기를 말한다.
"뉴클레오시드 모방체(mimetic)"는 올리고머 화합물의 하나 또는 그 이상의 위치에서 당 또는 당과 염기, 그리고 필수적인 것은 아니지만, 링키지를 대체하는데 이용되는 구조를 포함하며; 이를 테면, 예를 들면, 몰포리노, 시클로헥세닐, 시클로헥실, 테트라히드로피라닐, 바이시클로 또는 트리시클로 당 모방체, 가령, 비 퓨라노스 당 단위를 갖는 뉴클레오시드 모방체이다.
"뉴클레오티드(Nucleotide)"는 뉴클레오시드의 당 부분에 공유적으로 연결된 포스페이트 기를 가지는 뉴클레오시드를 의미한다.
"뉴클레오티드 모방체(Nucleotide mimetic)"는 올리고머 화합물의 하나 또는 그 이상의 위치에서 뉴클레오시드 및 링키지를 대체하는데 이용되는 구조를 포함하며; 이를 테면, 예를 들면, 펩티드 핵산 또는 몰포리노 (-N(H)-C(=O)-O- 또는 다른 비-포스포디에스테르 링키지에 의해 연계된 몰포리노).
"장기 손상(Organ damage)" 또는 "말단 장기 손상(end organ damage)"이란 순환계, 이를 테면, 심장 (가령, 심장 근육 비대, 감소된 심장 기능 및/또는 심부전), 신장 (가령, 알부민뇨, 단백뇨, 감소된 신장 기능 및/또는 신장 부전), 눈 (가령, 고혈압 망막병증), 뇌 (가령, 뇌졸중) 및 이와 유사한 것들에 의해 공급되는 주요 장기에서 발생하는 손상을 지칭한다. 장기는 동물의 고혈압으로 손상될 수 있다. 특정 구체예들에서, 심장 이상은 섬유증, 심장 세포 및/또는 근육 비대이며, 이는 심장 비대로 이어진다.
"올리고머 화합물(Oligomeric compound)" 또는 "올리고머(oligomer)"는 2 또는 그 이상의 하위-구조 (단량체)를 포함하고, 핵산 분자의 영역에 혼성화할 수 있는 중합체 구조를 의미한다. 특정 구체예들에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다. 특정 구체예들에서, 올리고머 화합물은 안티센스 화합물이다. 특정 구체예들에서, 올리고머 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오티드이다. 특정 구체예들에서, 올리고머 화합물은 키메라 올리고뉴클레오티드이다.
"올리고뉴클레오티드(Oligonucleotide)"는 각각 서로 독립적으로 변형되거나 변형되지 않을 수 있는 뉴클레오시드가 연결된 고분자를 의미한다.
"비경구 투여(Parenteral administration)"는 주사 또는 주입을 통한 투여를 의미한다. 비경구 투여는 피하 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 동맥-내 투여, 복강 내 투여, 또는 두개 내(intracranial) 투여, 예컨대 척추강 내 또는 뇌실 내 투여를 포함한다. 투여는 지속적, 만성적, 단기간 또는 간헐적일 수 있다.
"펩티드"는 아미드 결합에 의해 최소한 2개 아미노산이 연계되어 형성된 분자를 지칭한다. 펩티드는 폴리펩티드 및 단백질을 지칭한다.
"약학 조성물"은 개체에게 투여하기 적절한 물질들의 혼합물을 의미한다. 예를 들면, 약학 조성물은 하나 또는 그 이상의 활성 약학물질 및 무균 수용액을 포함할 수 있다.
"약학적으로 수용가능한 운반체(Pharmaceutically acceptable carrier)"는 올리고뉴클레오티드 구조를 간섭하지 않은 매체(medium) 또는 희석제를 의미한다. 이러한 특정 운반체는 약제 조성물이 예를 들어, 대상이 경구 섭취를 위한 테블릿, 환제, 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 및 로젠지로 제형화될 수 있도록 한다. 예를 들면, 약학적으로 수용가능한 운반체는 무균 수용액, 이를 테면, 무균수 또는 PBS일 수 있다.
"약학적으로 수용가능한 유도체(derivative)"는 발명에서 기술된 화합물의 약학적으로 수용가능한 염, 콘쥬게이트, 프로드럭(prodrugs) 또는 이성질체가 포괄된다.
"약학적으로 수용가능한 염(salt)"이란 안티센스 화합물들의 생리학적으로 그리고 약학적으로 수용가능한 염, 이를 테면, 모체(parent) 올리고뉴클레오티드의 바람직한 생물학적 활성은 유지하고, 이에 바람직하지 않은 독성 효과를 부여하지 않는 염을 의미한다.
"포스포로티오에이트 링키지(Phosphorothioate linkage)"란 포스포디에스테르 결합의 비-가교성 산소 원자 중 하나가 황 원자로 대체되어 변형된, 뉴클레오시드간 링키지를 의미한다. 포스포로티오에이트 링키지는 변형된 뉴클레오시드간 링키지이다.
"부분(Portion)"은 소정의 수의 핵산이 연접한(즉, 연계된) 핵염기를 의미한다. 특정 구체예에서, 부분은 표적 핵산의 소정의 수의 연접한 핵염기다. 특정 구체예들에 있어서, 부분은 안티센스 화합물에서 한정된 수의 연접 핵염기다.
"방지하다(Prevent)"란 질환, 장애, 또는 상태의 개시, 발달 또는 진행을 몇 분 내지 무한한 기간 동안 지연 또는 방지하는 것을 가리킨다. 방지하다란 질환, 장애, 또는 상태의 발생 위험을 감소시킨다는 것을 또한 의미한다.
"프로드럭(Prodrug)"이란 비활성 형태로 만들어지고, 내생성(endogenous) 효소 또는 다른 화학물 또는 조건의 작용에 의해 신체 또는 세포 안에서 활성 형태로 전환되는 치료 물질을 의미한다.
"레닌-앤지오텐신-알도스테론 시스템(Renin-angiotensin-aldosterone system)", "레닌-앤지오텐신-알도스테론 시스템 경로(Renin-angiotensin-aldosterone system pathway)", "RAAS 경로" 또는 "RAAS"란 다중-성분 효소 경로를 말하는 것으로, 여기에서 전구체 성분 (앤지오텐시노겐)은 다양한 효소, 이를 테면, 레닌 및 효소 앤지오텐신-전환-효소 (ACE)에 의해 하류 성분, 이를 테면, 앤지오텐신 I 및 앤지오텐신 II로 전환된다. 앤지오텐신 I은 이 경로에서 스테로이드 알도스테론의 분비를 촉진한다. RAAS 경로는 체내 혈압 및 유체 균형을 조절한다.
"레닌-앤지오텐신 시스템", 또는 "RAS" 또는 "RAS 경로"는 RAAS 경로의 일부분을 지칭한다. 이 경로의 다양한 성분들은 상기 성분들의 생산을 차단하는 항진제 또는 길항제의 표적이 되었다. 예를 들면 레닌 억제제, ACE 억제제, 앤지오텐신-수용체 차단제 (ARBs) 및 이와 유사한 것들은 RAS 경로를 억제 또는 차단하기 위하여 발생되었다. 그러나, 다양한 RAS 경로 성분들을 표적으로 하는 상업적으로 이용가능한 치료제들은 다양한 기전으로 인하여 RAS 경로를 완전하게 억제 또는 차단시키는데 비효과적이었다 (Nobakht et al., Nat Rev Nephrol, 2011, 7:356-359).
"RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태" 또는 "RAAS 경로 관련된 질환, 장애 및/또는 상태"는 동물에서 RAAS에 관련된 임의의 질환, 장애 또는 상태를 지칭한다. RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태의 예로는 수명 단축, 고혈압 (가령, 비저항성 고혈압, 저항성 고혈압), 신장 질환 (가령,만성 신장 질환, 다낭성 신장 질환), 뇌졸중, 심장 질환 (가령, 심근경색, 심부전, 판막 심장 질환), 혈관의 동맥류(가령, 대동맥류), 말초 동맥 질환, 장기 손상 (가령, 심장 이상 또는 비대), 조직 섬유증 및 기타 심혈관 질환, 장애 및/또는 상태 또는 이의 증상들을 포함한다. 특정 구체예들에서, RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태는 고혈압을 포함하지 않는다.
"저항성 고혈압(Resistant hypertension)" 또는 "RHTN"는 (1) 상이한 약물 분류로부터 3 가지 항-고혈압제의 동시 사용에도 불구하고, 또는 (2) 혈압과 무관하에 ≥4 가지의 항-고혈압 약물의 사용에도 불구하고, SBP 혈압 ≥140 mmHg 또는 DBP 혈압 ≥90 mmHg으로 정의된다.
"부작용(Side effects)"은 치료에서 기인했으나 요망되는 효과가 아닌 생리학적 질환 및/또는 상태를 의미한다. 특정 구체예에서, 부작용은 주사 부위 반응, 간 기능 시험 이상, 신장 기능 이상, 간 독성, 신장 독성, 중추 신경계 이상, 근 장애, 및 불안감을 포함한다. 예를 들면, 혈청 내 아미노전이효소 수준 증가는 간 독성 또는 간 기능 이상을 나타낼 수 있다. 예를 들면, 빌리루빈 증가는 간 독성 또는 간 기능 이상을 나타낼 수 있다.
"단일-가닥(Single-stranded) 올리고뉴클레오티드"란 상보적 가닥에 혼성화되지 않은 올리고뉴클레오티드를 말한다.
"특이적으로 혼성화가능한(Specifically hybridizable)"이란 특이적 결합이 바람직한 조건, 가령, 생체내 검사 및 치료제의 경우 생리학적 조건하에서, 비-표적 핵산에 대해서는 최소의 효과를 나타내거나 아예 나타내지 않으면서, 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 표적 핵산 사이에는 충분한 정도의 상보성을 가져서 요망되는 효과를 유발하는 안티센스 화합물을 가리킨다. 한 예로써, 안티센스 화합물은 화합물이 이 표적 핵산에 결합함으로써, 상기 표적 핵산의 정상 기능을 간섭하여 활성 상실 원인이 될 때, 이 표적에 특이적으로 혼성화가능하며, 그리고 특이적 결합이 바람직한 조건하에서 비-표적 핵산 서열에 안티센스 화합물의 비-특이적 결합을 피하기 위하여 충분한 수준의 상보성을 갖는다.
"피하 투여(Subcutaneous administration)"란 피부 바로 아래 투여하는 것을 말한다.
"표적화하는(targeting)" 또는 "표적화된(targeted)"이란 표적 핵산에 특이적으로 혼성화하고, 원하는 효과를 유도하는 안티센스 화합물의 기획 및 선별 과정을 말한다
"표적 핵산", "표적 RNA", "표적 RNA 전사물" 모두가 안티센스 화합물에 의해 표적화될 수 있는 핵산을 의미한다.
"표적 세그먼트(Target segment)"는 안티센스 화합물이 표적으로 하는 표적 핵산의 뉴클레오티드의 서열을 의미한다. "5' 표적 부위"는 표적 세그먼트의 5'-극단 뉴클레오티드를 가리킨다. "3' 표적 부위"는 표적 세그먼트의 3'-극단 뉴클레오티드를 가리킨다.
"치료요법적으로 유효량(Therapeutically effective amount)"이란 동물에게 치료요법적으로 이점을 제공하는 약물 물질의 양을 말한다.
"치료하다(Treat)"란 동물에서 질환, 장애, 또는 상태의 개선 또는 향상을 얻기 위해 동물에게 약제학적 조성물을 투여하는 것을 가리킨다. 특정 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 약학 조성물은 동물에게 투여될 수 있다.
"변형되지 않은 뉴클레오티드(Unmodified nucleotide)"는 자연발생적인 핵염기, 당 모이어티, 및 뉴클레오시드간 연결로 이루어진 뉴클레오티드를 의미한다. 특정 구체예들에서, 변형되지 않은 뉴클레오티드는 RNA 뉴클레오티드 (가령, β-D-리보뉴클레오티드) 또는 DNA 뉴클레오티드 (가령, β-D-데옥시리보뉴클레오티드)이다.
특정 구체예들
특정 구체예들은 AGT를 특이적으로 조절하는 화합물을 제공한다. 특정 구체예들에서, AGT 특이적 조절인자는 RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태를 치료, 방지 또는 개선시키는데 사용되는 AGT 특이적 억제제다. 특정 구체예들에서, AGT 특이적 억제제는 AGT mRNA 및/또는 AGT 단백질의 발현을 억제시킬 수 있는 핵산 화합물이다. 특정 구체예들에서, 상기 핵산 화합물은 올리고머 화합물이다. 특정 구체예들에서, 상기 올리고머 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오티드이다. 특정 구체예들에서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드이다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 AGT 핵산을 표적으로 한다. 특정 구체예들에서, AGT 핵산은 GENBANK 수탁 번호. NM_000029.3 (서열 번호: 1로 본 발명에 편입됨), GENBANK 수탁 번호. NT_167186.1 (서열 번호: 2로 본 발명에 편입됨), GENBANK 수탁 번호. AK307978.1 (서열 번호: 3으로 본 발명에 편입됨), GENBANK 수탁 번호. AK303755.1 (서열 번호: 4로 본 발명에 편입됨), GENBANK 수탁 번호. AK293507.1 (서열 번호: 5로 본 발명에 편입됨), 및 GENBANK 수탁 번호. CR606672.1 (서열 번호: 6으로 본 발명에 편입됨)의 뉴클레오티드 24354000 내지 24370100의 보체로 제시된 임의의 인간 서열이다.
본원에 개시된 특정 구체예들은 AGT를 인코딩하는 핵산 서열을 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다. 특정 구체예들에서, 상기 화합물은 서열 번호: 1-6중 임의의 핵염기 서열에 나타낸 AGT 서열을 표적으로 한다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1-6의 대등한 길이 부분에 상보적인 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 20개의 연접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 갖는, 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드를 포함하는 화합물을 제공한다.
특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1-6의 대등한 길이 부분에 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 상보적이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 서열 번호: 1-6중 임의의 것의 대등한 길이 부분에 100% 상보적인 핵염기 서열을 포함한다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1의 핵염기 2027-2068의 대등한 길이의 부분에 상보적인 최소한 8개의 연접 핵염기 일부가 포함되는 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물을 제공하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1의 핵염기 2027-2068의 대등한 길이의 부분에 상보적인 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 최소한 20 개의 연접 핵염기의 일부분이 포함된 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1의 핵염기 2250 내지 2337의 대등한 길이의 부분에 상보적인 최소한 8개의 연접 핵염기 일부가 포함되는 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물을 제공하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1의 핵염기 2050-2337의 대등한 길이의 부분에 상보적인 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 최소한 20 개의 연접 핵염기의 일부분이 포함된 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1의 핵염기 2266 내지 2337의 대등한 길이의 부분에 상보적인 최소한 8개의 연접 핵염기 일부가 포함되는 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물을 제공하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1의 핵염기 2266 내지 2337의 대등한 길이의 부분에 상보적인 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 최소한 20 개의 연접 핵염기의 일부분이 포함된 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1의 핵염기 2281 내지 2300의 대등한 길이의 부분에 상보적인 최소한 8개의 연접 핵염기 일부가 포함되는 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물을 제공하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1의 핵염기 2281 내지 2300의 대등한 길이의 부분에 상보적인 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 최소한 20 개의 연접 핵염기의 일부분이 포함된 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1의 핵염기 2324 내지 2346의 대등한 길이의 부분에 상보적인 최소한 8개의 연접 핵염기 일부가 포함되는 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물을 제공하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 1의 핵염기 2324 내지 2346의 대등한 길이의 부분에 상보적인 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 최소한 20 개의 연접 핵염기의 일부분이 포함된 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 서열 번호: 14-2051의 임의의 핵염기 서열의 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 20개의 연접 핵염기 서열이 포함된 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 다음의 서열 번호중 임의의 핵염기 서열의 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 20개의 연접 핵염기 서열이 포함된 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다: 서열 번호: 40, 42, 46, 47, 49, 53 내지 55, 61, 62, 68, 71, 76, 82, 84, 85, 89, 93, 96 내지 98, 102, 109, 114, 119, 127, 129, 130 내지 135, 137 내지 140, 142, 143, 160, 162 내지 207, 209, 210, 223, 225 내지 227, 230 내지 243, 252 내지 254, 257, 258, 262 내지 273, 276, 278, 279, 281, 284, 452, 463, 464, 466, 467, 470, 477, 480, 500, 502, 512, 517, 525, 526, 726, 728, 868, 905, 906, 954, 961, 962, 963, 965, 966, 971, 973, 986, 987, 989, 990, 991, 994, 997, 998, 1000, 1001, 1011, 1015, 1021, 1024, 1035, 1080, 1085, 1150, 1258, 1259 내지 1262, 1293, 1294, 1299, 1325, 1326, 1354, 1355 내지 1357, 1370, 1384, 1391, 1393 내지 1395, 1406 내지 1408, 1431, 1467, 1468, 1470, 1472 내지 1474, 1476, 1488, 1489, 1500, 1503, 1504, 1522, 1524, 1526, 1528, 1535, 1536, 1539, 1542, 1543, 1545, 1585, 1592, 1594, 1595, 1599, 1604, 1610 내지 1612, 1615, 1618, 1619 내지 1624, 1626, 1628, 1629, 1631, 1632, 1635 내지 1637, 1640, 1658, 1662, 1665 내지 1671, 1673, 1676 내지 1679, 1681 내지 1683, 1686, 1687, 1699 내지 1710, 1712, 1714 내지 1721, 1724 내지 1726, 1728 내지 1731, 1735, 1736, 1739 내지 1741, 1751, 1755, 1771, 1778, 1781 내지 1783, 1827, 1834, 1836, 1843 내지 1846, 1872, 1874, 1875 내지 1888, 1890 내지 1895, 1897, 1898, 1900, 1904 내지 1927, 1931 내지 1933, 1937, 1939, 1940, 1943, 1950, 1951, 1953, 1955 내지 1959, 1962, 1964 내지 1967, 1969 내지 1971, 1973, 1977 내지 1981, 1984 내지 1991, 1993 내지 1996, 2000 내지 2005, 2007 내지 2012, 2014 내지 2025, 2027, 2028, 2030, 2032 내지 2037, 2039-2045, 2047, 2051.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 다음의 서열 번호중 임의의 핵염기 서열의 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 20개의 연접 핵염기 서열이 포함된 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다: 서열 번호: 46, 53, 54, 68, 76, 85, 96, 97, 114, 127, 129 내지 132, 134, 135, 137 내지 139, 142, 162 내지 207, 225, 226, 230 내지 243, 252, 264, 266 내지 270, 284, 464, 467, 962, 963, 965, 966, 973, 990, 991, 997, 1000, 1001, 1011, 1261, 1299, 1355, 1356, 1470, 1472, 1473, 1503, 1504, 1522, 1526, 1535, 1536, 1542, 1543, 1545, 1595, 1599, 1604, 1620, 1623, 1624, 1626, 1640, 1662, 1666, 1667, 1669, 1670, 1673, 1682, 1683, 1687, 1699 내지 1706, 1708, 1712, 1714 내지 1716, 1719 내지 1721, 1724 내지 1726, 1729, 1730, 1736, 1778, 1783, 1836, 1843, 1875 내지 1888, 1893 내지 1895, 1897, 1900, 1904 내지 1908, 1911, 1914 내지 1918, 1920, 1922, 1923, 1925, 1926, 1931 내지 1933, 1937, 1939, 1955, 1958, 1959, 1962, 1966, 1967, 1970, 1971, 1973, 1977, 1978 내지 1981, 1985, 1986, 1987, 1988, 1990, 1991, 1994, 1996, 2000, 2002 내지 2005, 2010, 2011, 2014 내지 2025, 2027, 2028, 2035 내지 2037, 2039, 2041 내지 2045.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 다음의 서열 번호중 임의의 핵염기 서열의 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 20개의 연접 핵염기 서열이 포함된 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다: 서열 번호: 96, 127, 129 내지 132, 139, 162 내지 169, 171 내지 189, 191 내지 193, 195, 196, 198 내지 206, 234, 236, 238 내지 240, 267 내지 270, 966, 1000, 1522, 1542, 1623, 1624, 1667, 1682, 1683, 1700, 1703, 1704, 1708, 1714, 1719, 1720, 1724 내지 1726, 1729, 1875, 1876, 1878, 1884 내지 1886, 1893, 1894, 1906, 1908, 1914, 1917, 1918, 1922, 1923, 1925, 1926, 1932, 1933, 1967, 1970, 1978 내지 1981, 1985, 1986, 1988, 1990, 1991, 2003, 2010, 2015, 2016, 2018, 2020, 2021, 2024, 2025, 2027, 2028, 2035, 2037, 2039, 2044.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 다음의 서열 번호중 임의의 핵염기 서열의 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 20개의 연접 핵염기 서열이 포함된 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다: 서열 번호: 129, 130, 132, 163 내지 168, 171, 172, 175 내지 186, 188, 189, 192, 193, 195, 198 내지 206, 238, 239, 966, 1703, 1720, 1726, 1923, 1925, 2003, 2015.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 다음의 서열 번호중 임의의 핵염기 서열의 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 20개의 연접 핵염기 서열이 포함된 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다: 서열 번호: 46, 53-54, 61, 68, 76, 83, 85, 93, 96-97, 109, 127, 129-130, 132, 134-15, 137-39, 142, 163-172, 180-184, 186, 189, 234, 236, 238-239, 267, 313, 411, 452, 463-470, 475-478, 480, 500-503, 512, 517-518, 524-526, 654, 689, 702, 725-726, 728, 738, 779, 786-787, 800, 808, 810-811, 825, 865, 868, 889, 894, 903, 905, 909, 954, 966, 1011, 1015, 1021, 1024, 1080, 1085, 1258-1259, 1261-1262, 1293-1294, 1299, 1325, 1470, 1472-1473, 1522, 1542, 1604, 1623-1624, 1667, 1670, 1682-1683, 1687, 1700, 1703-1704, 1708, 1714, 1716, 1719-1720, 1724-1726, 1729-1730, 1827, 1936, 1843-1844, 1846, 1886, 1893-1894, 1914, 1923, 1925, 1932, 1979, 1986, 1988, 1990, 2003, 2015, 2018, 2020, 2027-2028, 2035, 2037, 2039, 2044.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 다음의 서열 번호중 임의의 핵염기 서열의 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 20개의 연접 핵염기 서열이 포함된 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물을 제공한다: 서열 번호: 238, 1714, 1719, 1893-1894, 1914, 1923, 1925, 2003.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 8 내지 80, 20 내지 80, 10 내지 50, 20 내지 35, 10 내지 30, 12 내지 30, 15 내지 30, 16 내지 30, 20 내지 30, 20 내지 29, 20 내지 28, 20 내지 27, 20 내지 26, 20 내지 25, 20 내지 24, 20 내지 23, 20 내지 22, 20 내지 21, 15 내지 25, 16 내지 25, 15 내지 24, 16 내지 24, 17 내지 24, 18 내지 24, 19 내지 24, 19 내지 22, 16 내지 21, 18 내지 21 또는 16 내지 20개의 연계된 핵염기로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 화합물은 16개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 화합물은 20개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 길이가 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80개의 연계된 핵염기, 또는 상기 값중 임의의 두 값 사이로 특정된 범위의 연계된 핵염기로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 단일-가닥이다.
특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 최소한 하나의 변형된 뉴클레오시드간 링키지를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지이다. 특정 구체예들에서, 최소한 하나의 변형된 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지이다. 특정 구체예들에서, 변형된 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지이다.
특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 변형된 당이 포함된 최소한 하나의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 최소한 하나의 변형된 당은 바이사이클릭 당을 포함한다. 특정 구체예들에서, 최소한 하나의 변형된 당은 2'-O-메톡시에틸, 제한된 에틸, 3'-플루오르-HNA 또는 4'- (CH2)n-O-2' 다리를 포함하며, 이때, n은 1 또는 2이다.
특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 변형된 핵염기가 포함된 최소한 하나의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 핵염기는 5-메틸시토신이다.
특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 콘쥬게이트 그룹을 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 탄수화물 모이어티이다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 GalNAc 모이어티이다. 특정 구체예들에서, GalNAc는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3이다. 특정 구체예들에서, 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트는 다음 구조를 갖는다.
특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 서열 번호: 1의 영역 2250 내지 2337 부분의 대등한 길이에 상보적인 또는 이를 표적으로 하는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 다음을 포함한다: (a) 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; (b) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고 (c) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트; 이때, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하고, 그리고 그 사이에 위치하며, 이때, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 최소한 하나의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 서열 번호: 1의 영역 2266 내지 2337 부분의 대등한 길이에 상보적인 또는 이를 표적으로 하는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 다음을 포함한다: (a) 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; (b) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고 (c) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트; 이때, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하고, 그리고 그 사이에 위치하며, 이때, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 최소한 하나의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 서열 번호: 1의 영역 2281 내지 2300 부분의 대등한 길이에 상보적인 또는 이를 표적으로 하는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 다음을 포함한다: (a) 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; (b) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고 (c) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트; 이때, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하고, 그리고 그 사이에 위치하며, 이때, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 최소한 하나의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 서열 번호: 1의 영역 2027 내지 2068 부분의 대등한 길이에 상보적인 또는 이를 표적으로 하는 20개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하며, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 다음을 포함한다: (a) 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; (b) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고 (c) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트; 이때, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하고, 그리고 그 사이에 위치하며, 이때, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하며, 이때, 최소한 하나의 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이며, 그리고 이때, 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. 특정 구체예들에서, 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 16 내지 20개의 연계된 뉴클레오시드로 구성되며, 그리고 서열 번호: 14-2051의 최소한 8개의 연접한 핵염기가 포함된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 다음을 포함한다: (a) 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; (b) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고 (c) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트; 이때, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하고, 그리고 그 사이에 위치하며, 이때, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함하며, 이때, 최소한 하나의 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이며, 그리고 이때, 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. 특정 구체예들에서, 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다. 특정 구체예들에서, 상기 화합물은 16 내지 20개의 연계된 뉴클레오시드로 구성되며, 다음의 서열 번호의 최소한 8개의 연접한 핵염기가 포함된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하고: 서열 번호: 40, 42, 46, 47, 49, 53 내지 55, 61, 62, 68, 71, 76, 82, 84, 85, 89, 93, 96 내지 98, 102, 109, 114, 119, 127, 129, 130 내지 135, 137 내지 140, 142, 143, 160, 162 내지 207, 209, 210, 223, 225 내지 227, 230 내지 243, 252 내지 254, 257, 258, 262 내지 273, 276, 278, 279, 281, 284, 452, 463, 464, 466, 467, 470, 477, 480, 500, 502, 512, 517, 525, 526, 726, 728, 868, 905, 906, 954, 961, 962, 963, 965, 966, 971, 973, 986, 987, 989, 990, 991, 994, 997, 998, 1000, 1001, 1011, 1015, 1021, 1024, 1035, 1080, 1085, 1150, 1258, 1259 내지 1262, 1293, 1294, 1299, 1325, 1326, 1354, 1355 내지 1357, 1370, 1384, 1391, 1393 내지 1395, 1406 내지 1408, 1431, 1467, 1468, 1470, 1472 내지 1474, 1476, 1488, 1489, 1500, 1503, 1504, 1522, 1524, 1526, 1528, 1535, 1536, 1539, 1542, 1543, 1545, 1585, 1592, 1594, 1595, 1599, 1604, 1610 내지 1612, 1615, 1618, 1619 내지 1624, 1626, 1628, 1629, 1631, 1632, 1635 내지 1637, 1640, 1658, 1662, 1665 내지 1671, 1673, 1676 내지 1679, 1681 내지 1683, 1686, 1687, 1699 내지 1710, 1712, 1714 내지 1721, 1724 내지 1726, 1728 내지 1731, 1735, 1736, 1739 내지 1741, 1751, 1755, 1771, 1778, 1781 내지 1783, 1827, 1834, 1836, 1843 내지 1846, 1872, 1874, 1875 내지 1888, 1890 내지 1895, 1897, 1898, 1900, 1904 내지 1927, 1931 내지 1933, 1937, 1939, 1940, 1943, 1950, 1951, 1953, 1955 내지 1959, 1962, 1964 내지 1967, 1969 내지 1971, 1973, 1977 내지 1981, 1984 내지 1991, 1993 내지 1996, 2000 내지 2005, 2007 내지 2012, 2014 내지 2025, 2027, 2028, 2030, 2032 내지 2037, 2039-2045, 2047, 2051, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 (a) 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; (b) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고 (c) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트; 이때, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하고, 그리고 그 사이에 위치하며, 이때, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함하며, 이때, 최소한 하나의 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이며, 그리고 이때, 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. 특정 구체예들에서, 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 16 내지 20개의 연계된 뉴클레오시드로 구성되며, 다음의 서열 번호의 최소한 8개의 연접한 핵염기가 포함된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하고: 서열 번호: 46, 53, 54, 68, 76, 85, 96, 97, 114, 127, 129 내지 132, 134, 135, 137 내지 139, 142, 162 내지 207, 225, 226, 230 내지 243, 252, 264, 266 내지 270, 284, 464, 467, 962, 963, 965, 966, 973, 990, 991, 997, 1000, 1001, 1011, 1261, 1299, 1355, 1356, 1470, 1472, 1473, 1503, 1504, 1522, 1526, 1535, 1536, 1542, 1543, 1545, 1595, 1599, 1604, 1620, 1623, 1624, 1626, 1640, 1662, 1666, 1667, 1669, 1670, 1673, 1682, 1683, 1687, 1699 내지 1706, 1708, 1712, 1714 내지 1716, 1719 내지 1721, 1724 내지 1726, 1729, 1730, 1736, 1778, 1783, 1836, 1843, 1875 내지 1888, 1893 내지 1895, 1897, 1900, 1904 내지 1908, 1911, 1914 내지 1918, 1920, 1922, 1923, 1925, 1926, 1931 내지 1933, 1937, 1939, 1955, 1958, 1959, 1962, 1966, 1967, 1970, 1971, 1973, 1977, 1978 내지 1981, 1985, 1986, 1987, 1988, 1990, 1991, 1994, 1996, 2000, 2002 내지 2005, 2010, 2011, 2014 내지 2025, 2027, 2028, 2035 내지 2037, 2039, 2041 내지 2045, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 (a) 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; (b) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고 (c) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트; 이때, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하고, 그리고 그 사이에 위치하며, 이때, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함하며, 이때, 최소한 하나의 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이며, 그리고 이때, 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. 특정 구체예들에서, 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 16 내지 20개의 연계된 뉴클레오시드로 구성되며, 다음의 서열 번호의 최소한 8개의 연접한 핵염기가 포함된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하고: 서열번호 : 96, 127, 129 내지 132, 139, 162 내지 169, 171 내지 189, 191 내지 193, 195, 196, 198 내지 206, 234, 236, 238 내지 240, 267 내지 270, 966, 1000, 1522, 1542, 1623, 1624, 1667, 1682, 1683, 1700, 1703, 1704, 1708, 1714, 1719, 1720, 1724 내지 1726, 1729, 1875, 1876, 1878, 1884 내지 1886, 1893, 1894, 1906, 1908, 1914, 1917, 1918, 1922, 1923, 1925, 1926, 1932, 1933, 1967, 1970, 1978 내지 1981, 1985, 1986, 1988, 1990, 1991, 2003, 2010, 2015, 2016, 2018, 2020, 2021, 2024, 2025, 2027, 2028, 2035, 2037, 2039, 2044, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 (a) 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; (b) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고 (c) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트; 이때, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하고, 그리고 그 사이에 위치하며, 이때, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함하며, 이때, 최소한 하나의 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이며, 그리고 이때, 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. 특정 구체예들에서, 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 16 내지 20개의 연계된 뉴클레오시드로 구성되며, 다음의 서열 번호의 최소한 8개의 연접한 핵염기가 포함된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하고: 서열 번호: 129, 130, 132, 163 내지 168, 171, 172, 175 내지 186, 188, 189, 192, 193, 195, 198 내지 206, 238, 239, 966, 1703, 1720, 1726, 1923, 1925, 2003, 2015, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 (a) 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; (b) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고 (c) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트; 이때, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하고, 그리고 그 사이에 위치하며, 이때, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함하며, 이때, 최소한 하나의 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이며, 그리고 이때, 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. 특정 구체예들에서, 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 16 내지 20개의 연계된 뉴클레오시드로 구성되며, 다음의 서열 번호의 최소한 8개의 연접한 핵염기가 포함된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하고: 서열 번호: 46, 53-54, 61, 68, 76, 83, 85, 93, 96-97, 109, 127, 129-130, 132, 134-15, 137-39, 142, 163-172, 180-184, 186, 189, 234, 236, 238-239, 267, 313, 411, 452, 463-470, 475-478, 480, 500-503, 512, 517-518, 524-526, 654, 689, 702, 725-726, 728, 738, 779, 786-787, 800, 808, 810-811, 825, 865, 868, 889, 894, 903, 905, 909, 954, 966, 1011, 1015, 1021, 1024, 1080, 1085, 1258-1259, 1261-1262, 1293-1294, 1299, 1325, 1470, 1472-1473, 1522, 1542, 1604, 1623-1624, 1667, 1670, 1682-1683, 1687, 1700, 1703-1704, 1708, 1714, 1716, 1719-1720, 1724-1726, 1729-1730, 1827, 1936, 1843-1844, 1846, 1886, 1893-1894, 1914, 1923, 1925, 1932, 1979, 1986, 1988, 1990, 2003, 2015, 2018, 2020, 2027-2028, 2035, 2037, 2039, 2044, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 (a) 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; (b) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고 (c) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트; 이때, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하고, 그리고 그 사이에 위치하며, 이때, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함하며, 이때, 최소한 하나의 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이며, 그리고 이때, 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. 특정 구체예들에서, 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 16 내지 20개의 연계된 뉴클레오시드로 구성되며, 다음의 서열 번호의 최소한 8개의 연접한 핵염기가 포함된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하고: 서열번호: 238, 1714, 1719, 1893-1894, 1914, 1923, 1925, 2003, 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 (a) 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; (b) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고 (c) 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트; 이때, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하고, 그리고 그 사이에 위치하며, 이때, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함하며, 이때, 최소한 하나의 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이며, 그리고 이때, 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. 특정 구체예들에서, 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
특정 구체예들에서, 상기 화합물은 20개의 연계된 뉴클레오시드로 구성되며, 서열 번호: 1914의 최소한 8개의 연접한 핵염기가 포함된 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하고: 이때, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 (a) 10개의 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트; (b) 5개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고 (c) 5개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트; 이때, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트에 바로 연접하고, 그리고 그 사이에 위치하며, 이때, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함하며, 이때, 최소한 하나의 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이며, 그리고 이때, 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. 특정 구체예들에서, 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 다음 식에 따라 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물을 제공하며: mCes Aes mCes Aes Aes Ads mCds Ads Ads Gds mCds Tds Gds Gds Tds mCes Ges Ges Tes Te (서열 번호: 1914); 이때, A는 아데닌이며, mC는 5-메틸시토신이며, G는 구아닌이며, T는 티민이며, e는 2'-O-메톡시에틸 변형된 뉴클레오시드이며, d는 2'-데옥시뉴클레오시드이며, 그리고 s는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트를 더 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트는 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트이다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 다음의 화학식을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물을 제공한다:
특정 구체예들에서, 본 발명에서 개시된 화합물 또는 조성물은 상기 변형된 올리고뉴클레오티드 염을 포함한다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 개시된 화합물 또는 조성물은 약학적으로 수용가능한 운반체 또는 희석제를 더 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 동물은 인간이다.
특정 구체예들은 본 발명에서 기술된 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 조성물 또는 화합물을 제공하며, 이때, 점성 수준은 40 cP미만이다. 특정 구체예들에서, 상기 조성물의 점성 수준은 15 cP 미만이다. 특정 구체예들에서, 상기 조성물의 점성 수준은 12 cP 미만이다. 특정 구체예들에서, 상기 조성물의 점성 수준은 10 cP 미만이다.
본 발명에 개시된 특정 구체예들은 세포, 조직, 장기 또는 동물에서 AGT 감소를 위하여, AGT를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물 및 조성물을 제공한다. 특정 구체예들에서, AGT 감소는 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 및/또는 상태, 또는 이의 증상을 치료, 저지, 진행의 지연, 개시를 지연시킨다. 특정 구체예들에서, AGT의 감소는 고혈압을 감소시킨다. 특정 구체예들에서, AGT의 감소는 섬유증을 감소 또는 방지한다. 특정 구체예들에서, AGT의 감소는 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 및/또는 상태의 증상 또는 표지를 조절한다. 특정 구체예들에서, 상기 표지는 수명 단축, 고혈압, 만성 신장 질환, 뇌졸중, 심근경색, 심부전, 판막 심장 질환, 혈관의 동맥류, 말초 동맥 질환, 장기 손상 및 기타 심혈관 질환, 장애 및/또는 상태 또는 이의 증상들중 하나 또는 그 이상에서 선택될 수 있다.
특정 구체예들에서, 치료법에 사용하기 위하여 AGT를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물 및 조성물을 제공한다. 특정 구체예들에서, AGT를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물 및 조성물의 치료요법적으로 유효량이 동물에게 투여된다.
특정 구체예들에서, 의약품 제조에 사용하기 위한 AGT를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 화합물 및 조성물이 제공된다. 특정 구체예들에서, 상기 의약품은 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 및/또는 상태, 또는 이의 증상을 치료, 저지, 진행의 지연, 개시를 지연시키는데 이용된다.
특정 구체예들에서, RAAS 경로 관련된 질환 및/또는 상태, 질환, 장애 또는 상태를 치료, 저지 또는 개신시키기 위한 키트가 제공되는데, 이때, 상기 키트는 다음을 포함한다: (i) 본 발명에서 기술된 AGT 특이적 억제제; 그리고 임의선택적으로 (ii) 본 발명에서 기술된 추가 물질 또는 요법. 본 발명의 키트는 본 발명에서 기술된 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 또는 상태를 치료, 방지 또는 개선시키기 위하여 상기 키트를 이용하는 지침을 더 포함할 수 있다.
특정 구체예들에서, RAAS 경로 관련된 질환, 장애 또는 상태는 수명 단축, 고혈압, 신장 질환 (가령, 만성 신장 질환), 뇌졸중, 심장 질환 (가령, 심근경색, 심부전, 판막 심장 질환), 혈관의 동맥류, 말초 동맥 질환, 장기 손상 및 기타 RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태 또는 이의 증상들이다. 특정 구체예들에서, 고혈압은 비저항성 고혈압 또는 저항성 고혈압이다. 특정 구체예들에서, 혈관의 동맥류는 대동맥류이다. 특정 구체예들에서, 장기 손상은 장기 또는 조직에서 심장 근육 비대 또는 섬유증이다. 특정 구체예들에서, 장기는 심장, 간 또는 신장이며, 상기 조직은 심장, 간 또는 신장으로부터 유도된다.
상기 화합물은 본 발명에 기재된 바와 같은 하나 이상의 추가의 물질 또는 요법과의 병용 요법으로 사용될 수 있다. 물질 또는 요법은 동물에게 동시 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 특정 구체예들에서, AGT를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 조성물 또는 화합물은 하나 또는 그 이상의 제 2 물질(들)과 공동-투여된다. 특정 구체예들에서, 상기 제 2 물질은 고혈압을 감소시키는 과정, 식이 변화, 생활방식 변화, 항-섬유증 약물 및 항-고혈압 약물, 이를 테면, RAS 또는 RAAS 억제제, 이뇨제, 칼슘 채널 차단제, 아드레날린성 수용체 길항제, 아드레날린성 항진제 및 혈관확장제를 포함한다. 특정 구체예들에서, 제 2 물질은 제 2 안티센스 화합물이다. 추가 구체예들에서, 제 2 안티센스 화합물은 AGT를 표적으로 한다. 다른 구체예들에서, 제 2 안티센스 화합물은 비-AGT 화합물을 표적으로 한다.
안티센스 화합물(Antisense Compounds)
올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드, 올리고뉴클레오시드, 올리고뉴클레오티드 유사체, 올리고뉴클레오티드 모방체, 안티센스 화합물, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 및 siRNA를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 올리고머 화합물은 표적 핵산에 대해 "안티센스"일 수 있고, 이는 이것이 수소 결합을 통해 표적 핵산에 대해 혼성화를 진행할 수 있음을 의미한다.
특정 구체예에서, 안티센스 화합물은 5'에서 3'로의 방향으로 썼을 때, 이것이 표적으로 하는 표적 핵산의 표적 세그먼트의 역상보체(reverse complement)를 포함하는 핵염기 서열을 가진다. 특정 구체예에서, 안티센스 화합물은 5'에서 3'로의 방향으로 썼을 때, 이것이 표적으로 하는 표적 핵산의 표적 세그먼트의 역상보체를 포함하는 핵염기 서열을 가진다.
특정 구체예들에서, AGT 핵산을 표적으로 하는 안티센스 화합물은 10 내지 30개 뉴클레오티드 길이다. 환언하면, 안티센스 화합물은 10 내지 30개의 연계된 핵염기이다. 다른 구체예들에서, 상기 안티센스 화합물은 8 내지 80, 10 내지 80, 12 내지 50, 15 내지 30, 18 내지 24, 19 내지 22, 또는 20개의 연계된 핵염기로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 화합물은 길이가 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80개의 연계된 핵염기, 또는 상기 값중 임의의 두 값 사이로 특정된 범위의 연계된 핵염기로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 안티센스 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오티드이다.
특정 구체예들에서, 상기 안티센스 화합물은 짧아진 또는 절두된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 상기 짧아진 또는 절두된 변형된 올리고뉴클레오티드는 5' 말단으로부터 결실된(5' 절단), 중앙 부분에 결실된, 또는 대안적으로 3' 말단으로부터 결실(3' 절단)될 수 있다. 짧아진 또는 절두된 올리고뉴클레오티드는 5' 말단으로부터 2개 또는 그 이상의 뉴클레오시드가 결실되거나, 중앙 부분에서 2개 또는 그 이상의 뉴클레오시드가 결실되거나, 또는 대안으로 3' 말단으로부터 2개 또는 그 이상의 뉴클레오시드가 결실될 수 있다. 대안으로, 상기 결실된 뉴클레오시드는 상기 변형된 올리고뉴클레오티드를 통하여 분산될 수 있는데, 예를 들면, 5' 말단에서 하나 또는 그 이상의 뉴클레오시드가 결실되거나, 중앙 부분에서 하나 또는 그 이상의 뉴클레오시드가 결실되거나 및/또는 3' 말단에서 하나 또는 그 이상의 뉴클레오시드 결실된 안티센스 화합물이다.
하나의 추가 뉴클레오시드가 늘어져 있는 올리고뉴클레오티드에 존재할 경우, 상기 추가 뉴클레오시드는 상기 올리고뉴클레오티드의 5' 말단, 3' 말단 또는 중앙 부분에 위치될 수 있다. 2개 또는 그 이상의 추가 뉴클레오시드가 존재할 경우, 추가된 뉴클레오시드는 서로 인접할 수 있는데, 예를 들면, 올리고뉴클레오티드는 이 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 추가되거나 (5' 추가), 3' 말단에 추가되거나 (3' 추가) 또는 중앙 부분에 2개의 추가된 뉴클레오시드를 갖는다. 대안으로, 상기 추가된 뉴클레오시드는 상기 안티센스 화합물을 통하여 분산될 수 있는데, 예를 들면, 올리고뉴클레오티드는 5' 말단에 하나 또는 그 이상의 뉴클레오시드가 추가되거나, 3' 말단에 하나 또는 그 이상의 뉴클레오시드가 추가되거나, 및/또는 중앙 부분에 하나 또는 그 이상의 뉴클레오시드가 추가된다.
제거 활성 없이 안티센스 화합물, 가령, 안티센스 올리고뉴클레오티드의 길이를 늘이거나 줄이는 것, 및/또는 미스매치 염기를 도입하는 것이 가능하다. 예를 들면, Woolf et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992)에서 길이가 13-25개의 핵염기인 일련의 안티센스 올리고뉴클레오티드는 난모세포 주입 모델에서 표적 RNA의 절단을 유도하는 능력에 대하여 테스트되었다. 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드의 말단 부근에 8 또는 11개의 미스매치 염기를 갖고, 길이가 25개인 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 비록 미스매치가 없는 안티센스 올리고뉴클레오티드보다 더 적기는 하지만, 표적 mRNA의 특이적 절단을 지시할 수 있었다. 유사하게, 1 또는 3 개의 미스매치를 갖는 것들을 비롯하여 13개의 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 표적 특이적 절단이 이루어졌다.
Gautschi et al (J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001)는 bcl-2 mRNA에 대하여 100% 상보적이며, bcl-xL mRNA에 대하여 3개 미스매치를 보유한 올리고뉴클레오티드의 생체내 및 시험관내 bcl-2 및 bcl-xL 모두의 발현을 감소시키는 능력을 실증하였다. 더욱이, 이 올리고뉴클레오티드는 생체내 잠재적 항-종양 활성을 실증하였다.
Maher 및 Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358, 1988)는 텐덤(tandem) 14개 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오티드, 그리고 차례로 2 또는 3개의 텐덤 안티센스 올리고뉴클레오티드 서열을 포함하는 28개 및 42개 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오티드 시리즈를 토끼 망상적혈구 분석에서 인간 DHFR의 해독을 저지하는 이들의 능력을 테스트하였다. 28 또는 42개 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오티드보다는 좀더 보통 수준이기는 하지만, 13개의 14개 핵염기 안티센스 올리고뉴클레오티드 각각은 단독으로 해독을 저해할 수 있었다.
특정 안티센스 화합물 모티프 및 기전
특정 구체예들에서, 상기 안티센스에 화합물 성질, 이를 테면, 강화된 억제 활성, 표적 핵산에 대한 결합 친화력 증가, 또는 생체내 뉴클레아제에 의한 분해에 저항성을 부여하기 위하여, 안티센스 화합물은 패턴 또는 모티프로 정렬된 화학적으로 변형된 하위단위를 보유한다.
키메라 안티센스 화합물은 전형적으로 뉴클레아제 분해에 대한 증가된 저항성, 증가된 세포성 취입(uptake), 표적 핵산에 대한 증가된 결합 친화력, 및/또는 증가된 억제 활성을 부여하기 위하여 변형된 최소한 하나의 영역을 함유한다. 키메라 안티센스 화합물의 제 2 영역은 또다른 원하는 성질을 부여할 수 있는데, 가령, RNA:DNA 듀플렉스에서 RNA 가닥을 절단하는 세포성 엔도뉴클레아제 RNase H의 기질로 작용한다.
안티센스 활성은 상기 안티센스 화합물 (가령, 올리고뉴클레오티드)이 표적 핵산에 혼성화하는 것이 연관된 임의의 기전으로부터 야기될 수 있으며, 이때, 상기 혼성화로 인하여 궁극적으로 생물학적 효과가 초래된다. 특정 구체예들에서, 상기 표적 핵산의 양 및/또는 활성은 조절된다. 특정 구체예들에서, 상기 표적 핵산의 양 및/또는 활성은 감소된다. 특정 구체예들에서, 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 혼성화는 표적 핵산 분해를 궁극적으로 초래한다. 특정 구체예들에서, 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 혼성화는 표적 핵산 분해를 초래하지 않는다. 이러한 특정 구체예들에서, 표적 핵산에 혼성화된 안티센스 화합물 (점유)의 존재는 안티센스 활성의 조정을 초래한다. 특정 구체예들에서, 특정 화학적 모티프 또는 화학적 변형의 패턴을 갖는 안티센스 화합물은 하나 또는 그 이상의 기전을 이용하는데 특히 적합하다. 특정 구체예들에서, 안티센스 화합물은 설명되지 않은 하나 이상의 기전 및/또는 기전들을 통하여 기능을 한다. 따라서, 본 발명에서 기술된 안티센스 화합물은 특정 기전에 의해 제한되지 않는다.
안티센스 기전은 RNase H 중재된 안티센스를 포함하나 이에 국한되지 않으며; siRNA, ssRNA 및 microRNA 기전을 포함하나, 이에 국한되지 않는 RISC 경로를 이용하는 RNAi 기전; 그리고 점유 기반 기전을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 특정 안티센스 화합물은 이러한 하나 이상의 기전 및/또는 추가적인 기전을 통하여 작용할 수 있다.
RNase H-중재된 안티센스
특정 구체예들에서, 안티센스 활성은 부분적으로 RNase H에 의해 표적 RNA의 분해를 초래한다. RNase H는 RNA:DNA 이중복합체의 RNA 가닥를 절단하는 세포의 엔도뉴클레아제이다. 당업계에서 단일-가닥 안티센스 화합물은 포유동물 세포에서 RNase H 활성을 유도하는 "DNA-유사"한 것으로 알려져 있다. 따라서, DNA 또는 DNA-유사 뉴클레오시드의 최소 일부분이 포함된 안티센스 화합물은 RNase H를 활성화시킬 수 있고, 이로 인하여 표적 핵산이 절단된다. 특정 구체예들에서, RNase H를 이용하는 안티센스 화합물은 하나 또는 그 이상의 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 이러한 안티센스 화합물은 1-8개의 변형된 뉴클레오시드의 최소한 하나의 블록을 포함한다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 변형된 뉴클레오시드는 RNase H 활성을 지원하지 않는다. 특정 구체예들에서, 이러한 안티센스 화합물은 본 발명에서 기술된 바와 같이, 갭머다. 이러한 특정 구체예들에서, 갭머의 갭은 DNA 뉴클레오시드를 포함한다. 이러한 특정 구체예들에서, 갭머의 갭은 DNA-유사 뉴클레오시드를 포함한다. 이러한 특정 구체예들에서, 갭머의 갭은 DNA 뉴클레오시드 및 DNA-유사 뉴클레오시드를 포함한다.
갭머 모티프를 갖는 특정 안티센스 화합물은 키메라 안티센스 화합물로 간주된다. 갭머에서, RNase H 절단을 지원하는 다수의 뉴클레오시드를 가지는 내부 영역은 상기 내부 영역의 뉴클레오시드와 화학적으로 구별되는 다수의 뉴클레오티드를 갖는 외부 영역 사이에 위치한다. 갭머 모티프를 갖는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 경우에서, 갭 세그먼트는 일반적으로 엔도뉴클레아제 절단을 위한 기질로 작용하며, 한편 날개 세그먼트는 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 갭머의 영역은 각 별개 영역이 포함된 당 모이어티 유형에 의해 구별된다. 갭머의 영역을 구별하는데 이용되는 당 모이어티 유형은 일부 구체예들에서 β-D-리보뉴클레오시드, β-D-데옥시리보뉴클레오시드, 2'-변형된 뉴클레오시드 (이러한 2'-변형된 뉴클레오시드는 다른것들 중에서 2'-MOE 및 2'-O-CH3를 포함할 수 있음), 그리고 바이사이클릭 당 변형된 뉴클레오시드 (이러한 바이사이클릭 당 변형된 뉴클레오시드는 제한된 에틸을 갖는 것들을 포함할 수 있음)를 포함한다. 특정 구체예들에서, 날개에서 뉴클레오시드는 예를 들면 2'-MOE 및 바이사이클릭 당 모이어티 이를 테면, 제한된 에틸 (cEt) 또는 LNA가 포함된 몇 가지 변형된 당 모이어티를 포함할 수 있다. 특정 구체예들에서, 날개는 몇 가지 변형된 그리고 변형되지 않은 당 모이어티를 포함할 수 있다. 특정 구체예들에서, 날개는 2'-MOE 뉴클레오시드, 바이사이클릭 당 모이어티 이를 테면, 제한된 에틸 뉴클레오시드 또는 LNA 뉴클레오시드, 그리고 2'-데옥시뉴클레오시드의 다양한 조합을 포함할 수 있다.
각 별개 영역은 균일한 당 모이어티, 변이체(variant), 또는 대체(alternating) 당 모이어티를 포함할 수 있다. 날개-갭-날개 모티프는 흔히 "X-Y-Z"로 표시되며, 이때, "X"는 5'-날개 길이를 나타내며, "Y"는 갭의 길이를 나타내며, 그리고 "Z"는 3'-날개 길이를 나타낸다. "X" 및 "Z"는 균일한, 변이체, 또는 대체 당 모이어티를 포함할 수 있다. 특정 구체예들에서, "X" 및 "Y"는 하나 또는 그 이상의 2'-데옥시뉴클레오시드를 포함할 수 있다. "Y"는 2'-데옥시뉴클레오시드를 포함할 수 있다. 본 발명에서 사용된 바와 같이, "X-Y-Z"로 표시된 갭머는 갭이 5'-날개와 3' 날개의 각각에 바로 인접하게 위치되도록 배치를 갖는다. 따라서, 5'-날개와 갭 사이, 또는 갭과 3'-날개 사이에 끼워진 뉴클레오티드는 없다. 본 발명에서 기술된 임의의 안티센스 화합물은 갭머 모티프를 가질 수 있다. 특정 구체예들에서, "X" 와 "Z"는 동일하다; 다른 구체예들에서 이들은 상이하다. 특정 구체예들에서, "Y"는 8 내지 15개의 뉴클레오시드이다. X, Y, 또는 Z는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30개 또는 그 이상의 뉴클레오시드중 임의의 것일 수 있다.
특정 구체예들에서, 상기 AGT 핵산을 표적으로 하는 안티센스 화합물는 갭이 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 갭머 모티프를 갖는다.
특정 구체예들에서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 다음의 화학식 A로 표시된 당 모티프를 갖는다: (J)m-(B)n-(J)p-(B)r-(A)t-(D)g-(A)v-(B)w-(J)x-(B)y-(J)z
이때:
각 A는 독립적으로 2'-치환된 뉴클레오시드이며;
각 B는 독립적으로 바이사이클릭 뉴클레오시드이며;
각 J는 독립적으로 2'-치환된 뉴클레오시드 또는 2'-데옥시뉴클레오시드이며;
각 D는 2'-데옥시뉴클레오시드이며;
m은 0-4이고; n은 0-2이고; p는 0-2이고; r은 0-2이고; t는 0-2이고; v는 0-2이고; w는 0-4이고; x는 0-2이고; y는 0-2이고; z는 0-4이고; g는 6-14이며;
전제조건으로는 다음과 같다:
m, n, 및 r중 최소 하나는 0이 아니고;
w와 y중 최소 하나는 0이 아니고;
m, n, p, r, 및 t의 합은 2 내지 5이며; 그리고
v, w, x, y, 및 z의 합은 2 내지 5이다.
RNAi 화합물
특정 구체예에서, 안티센스 화합물은 이중-가닥 RNA 화합물(또한 소형-간섭 RNA 또는 siRNA로도 지칭됨) 및 단일-가닥 RNAi 화합물(또는 ssRNA)를 포함하는 간섭 RNA 화합물(RNAi)이다. 그러한 화합물은 적어도 부분적으로 RISC 경로를 통해 작동하여 표적 핵산을 분해 및/또는 고립시킨다(따라서, microRNA/microRNA-모방 화합물을 포함). 특정 구체예들에서, 안티센스 화합물은 이러한 기전에 특히 적합하도록 만든 변형을 포함한다.
i.
ssRNA 화합물
특정 구체예들에서, 단일-가닥 RNAi 화합물 (ssRNA)로 사용하는데 특별히 적합한 것들이 포함된 안티센스 화합물은 변형된 5'-단부 말단을 포함한다. 이러한 특정 구체예들에서, 5'-단부 말단은 변형된 포스페이트 모이어티를 포함한다. 특정 구체예들에서, 이러한 변형된 포스페이트는 안정화된다 (가령, 변형되지 않은 5'-포스페이트와 비교하였을 때, 분해/절단에 저항성). 특정 구체예들에서, 이러한 5'-단부 뉴클레오시드는 5'-인(phosphorous)을 함유한 모이어티를 안정화시킨다. 특정 변형된 5'-단부 뉴클레오시드는 당분야, 예를 들면 WO 2011/139702에서 찾아볼 수 있다.
특정 구체예들에서, ssRNA 화합물의 5'-뉴클레오시드는 화학식 IIc를 갖는다:
이때:
T1 은 임의선택적으로 보호된 인(phosphorus) 모이어티이며;
T2는 화학식 IIc의 화합물을 상기 올리고머 화합물에 연계시키는 뉴클레오시드간 연계 기이며;
A는 다음중 하나의 구조를 갖고:
Q1 및 Q2는 각각, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C2-C6 알키닐 또는 N(R3)(R4)이며;
Q3은 O, S, N(R5) 또는 C(R6)(R7)이며;
각 R3, R4 R5, R6 및 R7은 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬 또는 C1-C6 알콕시이며;
M3은 O, S, NR14, C(R15)(R16), C(R15)(R16)C(R17)(R18), C(R15)=C(R17), OC(R15)(R16) 또는 OC(R15)(Bx2)이며;
R14는 H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이며;
R15, R16, R17 및 R18은 각각, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이며;
Bx1은 헤테로사이클릭 염기 모이어티이며;
또는 만일 Bx2가 존재한다면, Bx2는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이고, Bx1은 H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이며;
J4, J5, J6 및 J7은 각각, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이며;
또는 J4는 J5 또는 J7 중 하나와 다리를 형성하고, 이때, 전술한 다리는 O, S, NR19, C(R20)(R21), C(R20)=C(R21), C[=C(R20)(R21)] 및 C(=O)로부터 선택된 1 내지 3개의 연계된 이가라디칼 기를 포함하며, 그리고 J5, J6 및 J7 중 다른 두개는 각각, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이며;
각 R19, R20 및 R21은 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이며;
G는 H, OH, 할로겐 또는 O-[C(R8)(R9)]n-[(C=O)m-X1]j-Z이며;
각 R8 및 R9는 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬 또는 치환된 C1-C6 알킬이며;
X1은 O, S 또는 N(E1)이며;
Z는 H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C2-C6 알키닐 또는 N(E2)(E3)이며;
E1, E2 및 E3은 각각, 독립적으로, H, C1-C6 알킬 또는 치환된 C1-C6 알킬이며;
n은 1 내지 약 6이며;
m은 0 또는 1이며;
j는 0 또는 1이며;
각 치환된 기는 할로겐, OJ1, N(J1)(J2), =NJ1, SJ1, N3, CN, OC(=X2)J1, OC(=X2)N(J1)(J2) 및 C(=X2)N(J1)(J2)로부터 독립적으로 선택된 하나 또는 그 이상의 임의선택적으로 보호된 치환체 기를 포함하며;
X2는 O, S 또는 NJ3이며;
각 J1, J2 및 J3은 독립적으로, H 또는 C1-C6 알킬이며;
j가 1인 경우, Z는 할로겐 또는 N(E2)(E3)이 아니며; 그리고
이때, 전술한 올리고머 화합물은 표적 핵산의 최소 일부에 혼성화가능하고, 8 내지 40개의 모노머 하위 단위를 포함한다.
특정 구체예들에서, M3은 O, CH=CH, OCH2 또는 OC(H)(Bx2)이다. 특정 구체예들에서, M3은 O이다.
특정 구체예들에서, J4, J5, J6 및 J7은 각각 H다. 특정 구체예들에서, J4는 J5 또는 J7중 하나와 다리를 형성한다.
특정 구체예들에서, A는 다음중 하나의 구조를 갖는다:
이때:
Q1 및 Q2는 각각, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시 또는 치환된 C1-C6 알콕시이다. 특정 구체예들에서, Q1 및 Q2는 각각 H이다. 특정 구체예들에서, Q1 및 Q2는 각각, 독립적으로, H 또는 할로겐이다. 특정 구체예들에서, Q1 및 Q2는 H이며, 다른 Q1 및 Q2는 F, CH3 또는 OCH3이다.
특정 구체예들에서, T1은 다음의 구조식을 갖는다:
이때:
Ra 및 Rc는 각각, 독립적으로, 보호된 히드록실, 보호된 티올, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 치환된 C1-C6 알콕시, 보호된 아미노 또는 치환된 아미노이며; 그리고
Rb는 O 또는 S이다. 특정 구체예들에서, Rb는 O이고, Ra 및 Rc는 각각, 독립적으로, OCH3, OCH2CH3 또는 CH(CH3)2이다.
특정 구체예들에서, G는 할로겐, OCH3, OCH2F, OCHF2, OCF3, OCH2CH3, O(CH2)2F, OCH2CHF2, OCH2CF3, OCH2-CH=CH2, O(CH2)2-OCH3, O(CH2)2-SCH3, O(CH2)2-OCF3, O(CH2)3-N(R10)(R11), O(CH2)2-ON(R10)(R11), O(CH2)2-O(CH2)2-N(R10)(R11), OCH2C(=O)-N(R10)(R11), OCH2C(=O)-N(R12)-(CH2)2-N(R10)(R11) 또는 O(CH2)2-N(R12)-C(=NR13)[N(R10)(R11)]이며, 이때, R10, R11, R12 및 R13은 각각, 독립적으로, H 또는 C1-C6 알킬이다. 특정 구체예들에서, G는 할로겐, OCH3, OCF3, OCH2CH3, OCH2CF3, OCH2-CH=CH2, O(CH2)2-OCH3, O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2, OCH2C(=O)-N(H)CH3, OCH2C(=O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2 또는 OCH2-N(H)-C(=NH)NH2이다. 특정 구체예들에서, G는 F, OCH3 또는 O(CH2)2-OCH3이다. 특정 구체예들에서, G는 O(CH2)2-OCH3이다.
특정 구체예들에서, 5'-단부 뉴클레오시드는 구조식 IIe을 갖는다:
특정 구체예들에서, ssRNA에 특별히 적합한 것들을 포함하는 안티센스 화합물은 소정의 패턴 또는 당 변형 모티프에서 올리고뉴클레오티드 또는 이의 영역을 따라 정렬된 하나 또는 그 이상의 유형의 변형된 당 모이어티 및/또는 자연 발생적 당 모이어티를 포함한다. 이러한 모티프는 본 출원에서 논의된 임의의 당 변형 및/또는 다른 공지의 당 변형을 포함할 수 있다.
특정 구체예들에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 균일한 당 변형을 갖는 영역을 포함하거나, 이것으로 구성된다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 영역의 각 뉴클레오시드는 동일한 RNA-유사 당 변형을 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 영역의 각 뉴클레오시드는 2'-F 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, 상기 영역의 각 뉴클레오시드는 2'-OMe 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, 상기 영역의 각 뉴클레오시드는 2'-MOE 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, 상기 영역의 각 뉴클레오시드는 cEt 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, 상기 영역의 각 뉴클레오시드는 LNA 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, 상기 균일한 영역은 상기 올리고뉴클레오티드 모두 또는 필수적으로 모두로 구성된다. 특정 구체예들에서, 상기 영역은 1-4개 단부 뉴클레오시드를 제외하고, 전체 올리고뉴클레오티드로 구성된다.
특정 구체예들에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 또는 그 이상의 영역의 대체 당 변형을 포함하며, 이때, 상기 뉴클레오시드는 제 1 유형의 당 변형을 갖는 뉴클레오티드와 제 2 유형의 당 변형을 갖는 뉴클레오티드를 교번한다. 특정 구체예들에서, 두 가지 유형의 뉴클레오시드는 모두 RNA-유사 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서 상기 대체 뉴클레오시드는 다음으로부터 선택된다: 2'-OMe, 2'-F, 2'-MOE, LNA, 및 cEt. 특정 구체예들에서, 상기 대체 변형은 2'-F 및 2'-OMe이다. 이러한 영역들은 연접될 수 있거나, 또는 상이하게 변형된 뉴클레오시드 또는 콘쥬게이트화된 뉴클레오시드에 의해 중단될 수 있다.
특정 구체예들에서, 대체 변형의 각 대체 영역은 단일 뉴클레오시드로 구성된다 (가령, 상기 패턴은 (AB)xAy 이며, 이때, A는 제 1 유형의 당 변형을 갖는 뉴클레오시드이고, B는 제 2 유형의 당 변형을 갖는 뉴클레오시드이며; x는 1-20이며, 그리고 y는 0 또는 1이다). 특정 구체예들에서, 대체 모티프에서 하나 또는 그 이상의 대체 영역은 단일 유형의 이상의 뉴클레오시드를 포함한다. 예를 들면, 올리고뉴클레오티드는 다음 임의의 뉴클레오시드 모티프의 하나 또는 그 이상의 영역을 포함할 수 있다:
AABBAA;
ABBABB;
AABAAB;
ABBABAABB;
ABABAA;
AABABAB;
ABABAA;
ABBAABBABABAA;
BABBAABBABABAA; 또는
ABABBAABBABABAA;
이때, A는 제 1 유형의 뉴클레오시드이고, B는 제 2 유형의 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, A 및 B는 각각 2'-F, 2'-OMe, BNA, 및 MOE로부터 선택된다.
특정 구체예들에서, 이러한 대체 모티프를 갖는 올리고뉴클레오티드는 또한 변형된 5' 단부 뉴클레오시드, 이를 테면, 구조식 IIc 또는 IIe의 것들을 포함한다.
특정 구체예들에서, 올리고뉴클레오티드는 2-2-3 모티프를 갖는 영역을 포함한다. 이러한 영역들은 다음 모티프를 포함한다:
-(A)2-(B)x-(A)2-(C)y-(A)3-
이때: A는 제 1 유형의 변형된 뉴클레오시드이며;
B 및 C는 A와는 상이하게 변형된 뉴클레오시드이지만, 그러나, B 및 C는 서로 동일한 또는 상이한 변형을 보유할 수 있고;
x 및 y는 1 내지 15이다.
특정 구체예들에서, A는 2'-OMe 변형된 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, B 및 C는 모두 2'-F 변형된 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, A는 2'-OMe 변형된 뉴클레오시드이며, B 및 C는 모두 2'-F 변형된 뉴클레오시드이다.
특정 구체예들에서, 올리고뉴클레오시드는 다음의 당 모티프를 갖는다:
5'- (Q)- (AB)xAy-(D)z
이때:
Q는 안정화된 포스페이트 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, Q는 구조식 IIc 또는 IIe을 갖는 뉴클레오시드이며;
A는 제 1 유형의 변형된 뉴클레오시드이며;
B는 제 2 유형의 변형된 뉴클레오시드이며;
D는 이에 인접된 뉴클레오시드와는 상이한 변형을 포함하는 변형된 뉴클레오시드이다. 따라서, 만일 y가 0이면, 그때, D는 B와는 상이하게 변형되어야 하고, 만일 y가 1이면, 그때, D는 A와는 상이하게 변형되어야 한다. 특정 구체예들에서, D는 A 및 B 모두와 상이하다.
X는 5-15이며;
Y는 0 또는 1이며;
Z는 0-4이다.
특정 구체예들에서, 올리고뉴클레오시드는 다음의 당 모티프를 갖는다:
5'- (Q)- (A)x-(D)z
이때:
Q는 안정화된 포스페이트 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, Q는 구조식 IIc 또는 IIe을 갖는 뉴클레오시드이며;
A는 제 1 유형의 변형된 뉴클레오시드이며;
D는 A와는 상이한 변형을 포함하는 변형된 뉴클레오시드이다.
X는 11-30이며;
Z는 0-4이다.
특정 구체예들에서, 상기 모티프에서 A, B, C, 및 D는 다음으로부터 선택된다: 2'-OMe, 2'-F, 2'-MOE, LNA, 및 cEt. 특정 구체예들에서, D는 단부 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, 이러한 단부 뉴클레오시드는 상기 표적 핵산에 혼성화되지 않도록 기획된다 (비록 하나 또는 그 이상은 우연히 혼성화될 수도 있지만). 특정 구체예들에서, 각 D 뉴클레오시드의 핵염기는 표적 핵산의 대응 위치에 있는 핵염기의 실체와 무관하게, 아데닌이다. 특정 구체예들에서, 각 D 뉴클레오시드의 핵염기는 티민이다.
특정 구체예들에서, ssRNA로 사용하기에 특별히 적합한 것들을 포함하는 안티센스 화합물은 소정의 패턴 또는 변형된 뉴클레오시드간 연결 모티프에서 올리고뉴클레오티드 또는 이의 영역을 따라 배열된 변형된 뉴클레오시드간 연결을 포함한다. 특정 구체예에서, 올리고뉴클레오티드는 교번하는 뉴클레오시드간 링키지 모티프를 가지는 영역을 포함한다. 특정 구체예에서, 올리고뉴클레오티드는 균일하게 변형된 뉴클레오시드간 랑키지의 영역을 포함한다. 그러한 특정 구체예에서, 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지에 의해 균일하게 연결된 영역을 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지에 의해 균일하게 연계된다. 특정 구체예에서, 올리고뉴클레오티드의 각각의 뉴클레오시드간 링키지는 포스포디에스테르 및 포스포로티오에이트 중에서 선택된다. 특정 구체예들에서, 상기 올리고뉴클레오티드의 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포디에스테르 및 포스포로티오에이트로부터 선택되며, 최소한 하나의 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트이다.
특정 구체예들에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 최소한 6개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 최소한 8개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 최소한 10개의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지를 포함한다. 특정 구체예에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 6개의 연속적 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 특정 구체예에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 8개의 연속적 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 특정 구체예에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 10개의 연속적 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 특정 구체예에서, 올리고뉴클레오티드는 적어도 12개의 연속적 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지의 적어도 하나의 블록을 포함한다. 이러한 특정 구체예들에서, 최소한 하나의 이러한 블록은 상기 올리고뉴클레오티드의 3' 말단에 위치한다. 이러한 특정 구체예들에서, 최소한 하나의 이러한 블록은 상기 올리고뉴클레오티드의 3' 말단의 3개 뉴클레오시드 안에 위치한다.
본 발명에서 기술된 임의의 다양한 당 모티프를 갖는 올리고뉴클레오티드는 임의의 링키지 모티프를 보유할 수 있다. 예를 들면, 상기에서 기술된 것을 포함하나, 이에 국한되지 않는 올리고뉴클레오티드는 하기 표로부터 비-제한적으로 선택된 링키지 모티프를 보유할 수 있다:
i.
siRNA 화합물
특정 구체예들에서, 안티센스 화합물은 이중-가닥(double-stranded) RNAi 화합물 (siRNA)이다. 이러한 구체예들에서, 하나 또는 양 가닥은 ssRNA를 위하여 상기에서 기술된 임의의 변형 모티프를 포함할 수 있다. 특정 구체예들에서, ssRNA 화합물은 변형되지 않은 RNA일 수 있다. 특정 구체예들에서, siRNA 화합물은 변형되지 않은 RNA 뉴클레오시드를 포함할 수 있지만, 변형된 뉴클레오시드간 링키지를 포함할 수도 있다.
일부 구체예들은 이중-가닥 조성물에 관계되는데, 이때, 각 가닥은 하나 또는 그 이상의 변형된 또는 변형되지 않은 뉴클레오시드의 위치로 특정된 모티프를 포함한다. 특정 구체예들에서, 듀플렉스 영역을 형성하기 위하여 완전하게 또는 최소한 부분적으로 혼성화되는 제 1 및 제 2 올리고머 화합물을 포함하고, 그리고 핵산 표적에 상보적이며, 이에 혼성화되는 영역이 더 포함된 조성물이 제공된다. 이러한 조성물은 핵산 표적에 완전하게 또는 부분적 상보성을 갖는 안티센스 가닥인 제 1 올리고머 화합물, 그리고 제 1 올리고머 화합물에 상보적인 하나 또는 그 이상의 영역을 갖고, 이와 함께 최소한 하나의 듀플렉스 영역을 형성하는 센스 가닥인 제 2 올리고머 화합물을 포함하는 것이 적절하다.
몇 가지 구체예들의 상기 조성물은 핵산 표적에 혼성화됨으로써, 이의 정상적 기능이 상실되는 결과를 초래함으로써, 유전자 발현을 조절한다. 일부 구체예들에서, 상기 표적 핵산은 AGT이다. 특정 구체예에서, 표적화된 AGT의 분해는 본 발명의 조성물과 함께 형성되는 활성화된 RISC 복합체에 의해 실행된다.
몇 가지 구체예들은 이중-가닥 조성물에 관한 것이며, 이때, 가닥중 하나는 예를 들면, RISC (또는 절단) 복합체 안으로 반대 가닥의 선호적 로딩(loading)에 영향을 주는데 유용하다. 상기 조성물은 선별된 핵산 분자를 표적으로 하고, 하나 또는 그 이상의 유전자의 발현 조정에 유용하다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물은 표적 RNA의 일부분에 혼성화되어, 상기 표적 RNA의 정상 기능이 상실된다.
특정 구체예들은 이중-가닥 조성물에 관한 것으로, 이때, 양 가닥은 헤미머(hemimer) 모티프, 온전히 변형된 모티프, 위치상으로 변형된 모티프 또는 대체 모티프를 포함한다. 본 발명의 조성물의 각 가닥은 예를 들면, siRNA 경로에서 특정 역할을 충실히 하도록 변형될 수 있다. 각 가닥에서 상이한 모티프 또는 각 가닥에서 상이한 화학적 변형을 갖는 동일한 모티프의 사용은 센스 가닥의 혼입을 저해하면서, RISC 복합체에 대한 안티센스 가닥을 표적으로 할 수 있다. 이 모델에서, 각 가닥은 독립적으로 변형되어, 특정 역할에 대하여 강화된다. 상기 안티센스 가닥은 RISC의 한 영역에서 이의 역할을 강화시키기 위하여 5'-말단에서 변형될 수 있고, 한편 3'-말단은 RISC의 상이한 영역에서 이의 역할을 강화시키기 위하여 차등적으로 변형될 수 있다.
이중-가닥 올리고뉴클레오티드 분자는 자가-상보적 센스 및 안티센스 영역을 포함하는 이중-가닥 폴리뉴클레오티드 분자일 수 있고, 이때, 상기 안티센스 영역은 표적 핵산 분자 또는 이의 일부분에서 뉴클레오티스 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 센스 영역은 상기 표적 핵산 서열 또는 이의 일부분에 상응하는 뉴클레오티드 서열을 갖는다. 상기 이중-가닥 올리고뉴클레오티드 분자들은 2개의 별도 올리고뉴클레오티드로부터 합체될 수 있는데, 여기에서 한 가닥은 센스 가닥이며, 다른 가득은 안티센스 가닥이 되고, 이때, 상기 안티센스 가닥과 센스 가닥은 자가-상보적 (가령, 각 가닥은 또다른 가닥의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함함; 이를 테면, 안티센스 가닥과 센스 가닥은 듀플렉스 또는 이중-가닥 구조, 예를 들면 이때, 상기 이중-가닥 영역은 약 15 내지 약 30개, 가령, 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 염기 쌍이며; 상기 안티센스 가닥은 표적 핵산 분자 또는 이의 일부분의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 센스 가닥은 상기 표적 핵산 서열 또는 이의 일부분에 대응하는 뉴클레오티스 서열을 포함한다 (가령, 상기 이중-가닥 올리고뉴클레오티드 분자의 약 15 내지 약 25개 또는 그 이상의 뉴클레오티드는 상기 표적 핵산 또는 이의 일부분에 상보적이다). 대안으로, 상기 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 단일 올리고뉴클레오티드로부터 합체되며, 여기에서 siRNA의 자가-상보적 센스 영역 및 안티센스 영역은 핵산 기반의 또는 비-핵산-기반의 링커(들) 수단을 통하여 연계된다.
상기 이중-가닥 올리고뉴클레오티드은 자가-상보적 센스 영역과 안티센스 영역을 갖는 듀플렉스, 비대칭 듀플렉스, 헤어핀 또는 비대칭 헤어핀 제 2차 구조의 폴리뉴클레오티드이며, 이때, 상기 안티센스 영역은 별도의 표적 핵산 분자 또는 이의 일부분에서 뉴클레오티스 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 센스 영역은 상기 표적 핵산 서열 또는 이의 일부분에 상응하는 뉴클레오티드 서열을 갖는다. 상기 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 2개 또는 그 이상의 루프 구조와 자가-상보적 센스 영역과 안티센스 영역을 포함하는 스템을 갖는 원형의 단일-가닥 폴리뉴클레오티드일 수 있으며, 상기 안티센스 영역은 표적 핵산 분자 또는 이의 일부분에서 뉴클레오티스 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 센스 영역은 상기 표적 핵산 서열 또는 이의 일부분에 상응하는 뉴클레오티드 서열을 갖고, 그리고 이때, 원형 폴리뉴클레오티드는 생체내 또는 시험관에서 프로세싱되어, RNAi를 중재할 수 있는 활성 siRNA 분자가 만들어질 수 있다.
특정 구체예들에서, 상기 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 별도의 센스 및 안티센스 서열 또는 영역을 포함하며, 이때, 상기 센스 영역과 안티센스 영역은 당분야에 공지된 뉴클레오티드 또는 비-뉴클레오티드 링커 분자에 의해 공유적으로 연계되거나, 또는 대안으로 이온 상호작용, 수소 결합, 반 데르 발스(van der waals) 상호작용, 소수성 상호작용, 및/또는 스태킹(stacking) 상호작용에 의해 비-공유적으로 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 표적 유전자의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또다른 구체예에서, 상기 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 표적 유전자의 발현 억제를 야기하는 방식으로 표적 유전자의 뉴클레오티드 서열과 상호작용한다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 오직 RNA만이 포함된 분자로 제한될 필요는 없지만, 화학적으로 변형된 뉴클레오티드 및 비-뉴클레오티드를 더 포괄할 수 있다. 특정 구체예들에서, 짧은 간섭 핵산 분자는 2'-히드록시 (2'-OH) 함유 뉴클레오티드가 결여된다. 특정 구체예들에서 짧은 간섭 핵산은 임의선택적으로 임의의 리보뉴클레오티드 (가령, 2'-OH 기를 갖는 뉴클레오티드)를 포함하지 않는다. 그러나, RNAi를 지원하는 이 분자 안에 리보뉴클레오티드를 요구하지 않는 이러한 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 부착된 링커 또는 링커들 또는 기타 부착된 또는 연합된 기들, 모이어티, 또는 2'-OH 기를 갖는 하나 또는 그 이상의 뉴크레오티드를 함유하는 쇄를 갖는다. 임의선택적으로, 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 상기 뉴클레오티드 위치의 약 5, 10, 20, 30, 40, 또는 50%에 리보뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 siRNA는 서열 특이적 RNAi를 중재할 수 있는 핵산 분자를 기술하기 위한 다른 용어, 예를 들면 짧은 간섭 RNA(siRNA), 이중-가닥 RNA(dsRNA), micro-RNA(miRNA), 소형 헤어핀 RNA(shRNA), 작은 간섭 올리고뉴클레오티드, 작은 간섭 핵산, 변형된 작은 간섭 올리고뉴클레오티드, 화학적으로 변형된 siRNA, 전사-후 유전자 침묵화 RNA(ptgsRNA), 등과 동등한 것으로 의도된다. 또한, 본 명세서에서 사용된 용어 RNAi는 서열 특이적 RNA 간섭을 기술하기 위한 다른 용어, 가령, 전사후 유전자 침묵화, 해독 저해, 또는 후성유전과 동등한 것으로 의도된다. 예를 들면, 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 전사-후 수분 및 전사-전 수준 모두에서 후성유전적으로 유전자를 침묵시키는데 이용될 수 있다. 비-제한적 예에서, 본 발명의 siRNA 분자에 의한 유전자 발현의 후성유전적 조절은 유전자 발현을 변경시키기 위하여 크로마틴 구조 또는 메틸화 패턴의 siRNA 중재된 변형으로부터 기인될 수 있다(예를 들면, Verdel et al., 2004, Science, 303, 672-676; Pal-Bhadra et al., 2004, Science, 303, 669-672; Allshire, 2002, Science, 297, 1818-1819; Volpe et al., 2002, Science, 297, 1833-1837; Jenuwein, 2002, Science, 297, 2215-2218; 그리고 Hall et al., 2002, Science, 297, 2232-2237 참고).
본 발명에서 제공되는 몇 가지 구체예들의 화합물 및 조성물은 가령, "헤어핀" 또는 스템-루프 이중-가닥 RNA 작동체(effector) 분자가 포함된 dsRNA-중재된 유전자 침묵화 또는 RNAi 기전에 의해 AGT를 표적할 수 있으며, 이때, 자가-상보적 서열을 갖는 단일 RNA 가닥은 이중-가닥 형태구조, 또는 RNA의 2개 별도의 가닥이 포함된 듀플렉스 dsRNA 작동체 분자를 취할 수 있다. 다양한 구체예들에서, dsRNA는 전적으로 리보뉴클레오티드로 구성되거나, 또는 리보뉴클레오티드와 데옥시뉴클레오티드의 혼합물, 이를 테면, 예를 들면, WO 00/63364(2000년 4월 19일자로 제출된) 또는 U.S. 일련 번호 60/130,377(1999년 4월 21일자로 제출된)에서 기술된 RNA/DNA 하이브리드로 구성된다. dsRNA 또는 dsRNA 작동체 분자는 이 분자의 한 세그먼트의 뉴클레오티드는 이 분자의 또다른 세그먼트의 뉴클레오티드와 염기쌍을 이루도록 자가-상보성 영역을 갖는 단일 분자일 수 있다. 다양한 구체예들에서, 단일 분자로 구성된 dsRNA는 전적으로 리보뉴클레오티드로 구성되거나, 또는 데옥시리보뉴클레오티드의 영역에 상보적인 리보뉴클레오티드의 영역을 포함한다. 대안으로, dsRNA는 서로에 대하여 상보적인 영역을 갖는 2개의 상이한 가닥을 포함할 수 있다.
다양한 구체예들에서, 양 가닥은 전적으로 리보뉴클레오티드로 구성되거나, 한 가닥은 전적으로 리보뉴클레오티드로 구성되며, 다른 가닥은 전적으로 데옥시리보뉴클레오티드로 구성되거나, 또는 한 가닥 또는 양 가닥은 리보뉴클레오티드와 데옥시리보뉴클레오티드의 혼합물을 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 상보적 영역은 서로에 대하여 그리고 표적 핵산 서열에 대하여 최소한 70, 80, 90, 95, 98, 또는 100% 상보적이다. 특정 구체예들에서, 이중-가닥 형태구조 안에 존재하는 dsRNA의 영역은 최소한 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 50, 75,100, 200, 500, 1000, 2000 또는 5000개의 뉴클레오티드를 포함하거나, 또는 dsRNA로 나타난 cDNA 또는 다른 표적 핵산 서열에 있는 뉴클레오티드 모두를 포함한다. 일부 구체예들에서, 상기 dsRNA는 임의의 단일 가닥의 영역, 이를 테면, 단일 가닥의 말단을 포함하지 않고, 또는 상기 dsRNA는 헤어핀이다. 다른 구체예들에서, 상기 dsRNA는 하나 또는 그 이상의 단일 가닥의 영역 또는 오버행(overhangs)을 갖는다. 특정 구체예들에서, RNA/DNA 하이브리드(hybrids)는 안티센스 가닥 또는 영역 (가령, 표적 핵산에 최소한 70, 80, 90, 95, 98, 또는 100% 상보성을 갖고)인 DNA 가닥 또는 영역, 그리고 센스 가닥 또는 영역 (가령, 표적 핵산에 최소한 70, 80, 90, 95, 98, 또는 100% 상보성을 갖고)인 RNA 가닥 또는 영역을 포함하고, 그리고 이의 역을 포함한다.
다양한 구체예들에서, 상기 RNA/DNA 하이브리드는 효소적 또는 화학적 합성 방법, 이를 테면, 본 명세서에서 기술된 것들, 또는 WO 00/63364(2000년 4월 19일자로 제출된) 또는 U.S. 일련 번호 60/130,377(1999년 4월 21일자로 제출된)에서 기술된 방법을 이용하여 시험관에서 만들어진다. 다른 구체예들에서, 시험관에서 합성된 DNA 가닥은 세포 안으로 DNA 가닥의 형질전환 전, 후 또는 동시에 생체내 또는 시험관에서 만들어진 RNA와 복합된다. 여전히 다른 구체예들에서, 상기 dsRNA는 센스 영역 및 안티센스 영역이 포함된 단일 원형 핵산이거나, 또는 상기 dsRNA는 원형 핵산 및 제 2 원형 핵산 또는 선형 핵산 (예를 들면, WO 00/63364(2000년 4월 19일자로 제출된) 또는 U.S. 일련 번호 60/130,377(1999년 4월 21일자로 제출된) 참고)을 포함한다. 예시적인 원형 핵산은 레리어트(lariat) 구조를 포함하는데, 이때, 뉴클레오티드의 자유 5' 포스포릴 기는 루프 백 방식으로 또다른 뉴클레오티드의 2'히드록실기에 연계된다.
다른 구체예들에서, 상기 dsRNA는 하나 또는 그 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하는데, 이때, 당내 2' 위치는 할로겐 (이를 테면, 불소 기) 또는 알콕시 기 (이를 테면, 메톡시 기)을 포함하며, 이들은 대응하는 2' 위치에 수소 또는 히드록실 기를 포함하는 대응하는 dsRNA와 비교하였을 때, 시험관 또는 생체내에서 상기 dsRNA의 반감기를 증가시킨다. 여전히 다른 구체예들에서, 상기 dsRNA는 인접한 뉴클레오티드 사이에 자연-발생적 포스포디에스테르 링키지가 아닌 하나 이상의 링키지를 포함한다. 이러한 링키지의 예로는 포스포아미드, 포스포로티오에이트, 및 포스포로디티오에이트 링키지를 포함한다. 상기 dsRNAs는 미국 특허 번호 6,673,661호에 교시된 바와 같은 화학적으로 변형된 핵산 분자일 수 있다. 다른 구체예들에서, 상기 dsRNA는 예를 들면, WO 00/63364(2000년 4월 19일자로 제출된) 또는 U.S. 일련 번호 60/130,377(1999년 4월 21일자로 제출된)에서 개시된 하나 또는 두 개의 캡핑된(capped) 가닥을 함유한다.
다른 구체예들에서, 상기 dsRNA는 WO 00/63364에서 기술된 최소한 부분적인 임의의 dsRNA 분자, 뿐만 아니라 U.S. 가출원 60/399,998; 그리고 U.S. 가출원 60/419,532, 및 PCT/US2003/033466에서 기술된 에서 기술된 임의의 dsRNA 분자일 수 있고, 이들의 각 교시는 본 명세서의 참고자료에 편입된다. 임의의 상기 dsRNAs는 본 발명에서 기술된 방법 또는 표준 방법, 이를 테면, WO 00/63364에서 기술된 방법을 이용하여 시험관 또는 생체네에서 발현된다.
점유(Occupancy)
특정 구체예들에서, 안티센스 화합물은 RNase H를 통하여 표적 핵산을 절단하거나, 또는 RISC 경로를 통하여 절단 또는 격리(sequestration)를 초래하지는 않는 것으로 예상된다. 이러한 특정 구체예들에서, 안티센스 활성은 점유로 인한 것으로써, 이때, 혼성화된 안티센스 화합물의 존재는 상기 표적 핵산의 활성을 파괴한다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 안티센스 화합물은 균일하게 변형될 수 있거나, 또는 변형 및/또는 변형된 그리고 변형되지 않은 뉴클레오시드의 혼합물을 포함할 수 있다.
표적 핵산, 표적 영역 및 뉴클레오티드 서열
AGT를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열은, 제한없이, 다음을 포함한다: GENBANK 수탁 번호. NM_000029.3 (서열 번호: 1로 본 발명에 편입됨), GENBANK 수탁 번호. NT_167186.1의 뉴클레오티드 24354000 내지 24370100의 보체 (서열 번호: 2로 본 발명에 편입됨), GENBANK 수탁 번호. AK307978.1 (서열 번호: 3으로 본 발명에 편입됨), GENBANK 수탁 번호. AK303755.1 (서열 번호: 4로 본 발명에 편입됨), GENBANK 수탁 번호. AK293507.1 (서열 번호: 5로 본 발명에 편입됨), 및 GENBANK 수탁 번호. CR606672.1 (서열 번호: 6으로 본 발명에 편입됨). 특정 구체예들에서, 물본 발명에서 기술된 안티센스 화합물은 AGT를 인코딩하는 핵산 서열을 표적으로 한다. 특정 구체예들에서, 물본 발명에서 기술된 안티센스 화합물은 서열 번호: 1-6중 임의의 서열을 표적으로 한다.
본 명세서에 포함된 실시예에서 각각의 서열 번호에 제시된 서열은 당 모이어티, 뉴클레오시드간 링키지, 또는 핵염기의 어떤 변형에도 무관한 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 서열 번호에 의해 정의된 안티센스 화합물은 독립적으로, 당 모이어티, 뉴클레오시드간 링키지, 또는 핵염기에 하나 이상의 변형을 포함할 수 있다. ISIS 번호(ISIS No)로 서술되는 안티센스 화합물은 핵염기 서열, 및 모티프의 조합을 가리킨다.
특정 구체예들에서, 표적 영역은 상기 표적 핵산의 구조적으로 정의된 영역이다. 예를 들면, 표적 영역은 3' UTR, 5' UTR, 엑손, 인트론, 엑손/인트론 접합부(junction), 코딩 영역 , 해독 개시 영역 , 해독 종료 영역 , 또는 다른 특정된 핵산 영역을 포괄할 수 있다. AGT에 대한 구조적으로 특정된 영역은 서열 데이터베이스 이를 테면, NCBI에서 수탁번호에 의해 획득될 수 있고, 이러한 정보는 본 명세서의 참고자료에 편입된다. 특정 구체예들에 있어서, 표적 영역은 표적 영역 내 하나의 표적 세그먼트의 5' 표적 부위에서 표적 영역의 또다른 표적 세그먼트의 3' 표적 부위까지의 서열을 포괄할 수 있다. 특정 구체예들에서, 표적 영역은 안티센스 화합물 안에 상기 안티센스 화합물의 5' 말단부로부터 최소한 8개의 연속 핵염기로부터 선별된 최소한 8개의 연속 핵염기를 포괄할 수 있다 (나머지 핵염기는 상기 표적 핵산에 특이적으로 혼성화가능한 상기 안티센스의 5'-단부의 바로 상류에서 시작되고, 그리고 상기 영역이 약 8 내지 약 80개 핵염기를 포함할 때, 까지 지속되는 연속 띠다). 특정 구체예들에서, 표적 영역은 안티센스 화합물 안에 상기 안티센스 화합물의 3' 말단부로부터 최소한 8개의 연속 핵염기로부터 선별된 최소한 8개의 연속 핵염기를 포괄할 수 있다 (나머지 핵염기는 상기 표적 핵산에 특이적으로 혼성화가능한 상기 안티센스의 3'-단부의 바로 하류에서 시작되고, 그리고 상기 영역이 약 8 내지 약 80개 핵염기를 포함할 때, 까지 지속되는 연속 띠다). 특정 구체예들에서, 상기 표적 영역은 서열 번호: 14-2051중 임의의 것으로부터 선별된 최소한 8개의 연속 핵염기를 포함하고, 그리고 상기 8개의 연속 핵염기 서열의 5' 또는 3' 최대 80개 핵염기까지 지속된다.
특정 구체예들에서, "표적 세그먼트(target segment)"는 핵산 안에 표적 영역의 더 작은, 하위-부분이다. 예를 들면, 표적 세그먼트는 하나 또는 그 이상의 안티센스 화합물이 표적으로 하는 표적 핵산의 뉴클레오티드의 서열일 수 있다. "5' 표적 부위"는 표적 세그먼트의 5'-극단 뉴클레오티드를 가리킨다. "3' 표적 부위"는 표적 세그먼트의 3'-극단 뉴클레오티드를 가리킨다.
표적화는 안티센스 화합물이 혼성화되고, 원하는 효과가 발생되는 최소한 하나의 표적 세그먼트의 결정(determination)을 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 원하는 효과는 mRNA 표적 핵산 수준의 감소다. 특정 구체예들에서, 상기 원하는 효과는 상기 표적 핵산에 인코드된 단백질 수준의 감소 또는 표적 핵산과 연합된 표현형 변화이다.
표적 영역은 하나 또는 그 이상의 표적 세그먼트를 포함할 수 있다. 표적 영역 안에 다중 표적 세그먼트는 중첩(overlapping)될 수 있다. 대안으로, 이들은 비-중첩될 수 있다. 특정 구체예들에서, 표적 영역 안에 표적 세그먼트는 최대(no more than) 약 300개의 뉴클레오티드에 의해 분리된다. 특정 구체예들에서, 표적 영역 안에 표적 세그먼트는 상기 표적 핵산 상에서 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 또는 10개의 뉴클레오티드, 대략(about) 이 수치, 최대 대략 이 수치 또는 선행한 임의의 두 값 사이의 범위의 수의 뉴클레오티드에 의해 분리된다. 특정 구체예들에서, 표적 영역 안에 표적 세그먼트는 상기 표적 핵산 상에서 최대, 또는 최대로 대략, 5개의 뉴클레오티드에 의해 분리된다. 특정 구체예들에서, 표적 세그먼트는 연접되어 있다. 본 발명에서 열거된 5' 표적 부위 또는 3' 표적 부위중 임의의 부위에 출발 핵산을 갖는 범위로 특정된 표적 영역이 고려된다.
적합한 표적 세그먼트는 5' UTR, 코딩 영역, 3' UTR, 인트론, 엑손, 또는 엑손/인트론 접합부 안에서 찾을 수 있다. 시작 코돈 또는 정지 코돈이 포함된 표적 세그먼트 또한 적합한 표적 세그먼트이다. 적합한 표적 세그먼트는 구조적으로 특정된 영역, 이를 테면, 시작 코돈 또는 정지 코돈을 특별히 배제할 수 있다.
적합한 표적 세그먼트의 결정은 게놈을 통하여 다른 서열과 표적 서열의 비교를 포함할 수 있다. 예를 들면, BLAST 알고리즘을 이용하여 상이한 핵산즐중에 유사성 영역을 식별할 수 있다. 이와 같은 비교는 선별된 표적 핵산이외의 서열 (가령, 비-표적 또는 오프-표적 서열)에 비-특이적 방식으로 혼성화될 수 있는 안티센스 화합물 서열이 선별되는 것을 방지할 수 있다.
활성 표적 영역 안에 안티센스 화합물의 활성(가령, 표적 핵산 수준의 감소 백분율로 정의된)에 변화가 있을 수 있다. 특정 구체예들에서, AGT mRNA 수준에서 감소는 AGT 발현 억제를 나타낸다. AGT 단백질 수준의 감소는 AGT 발현 억제를 나타낸다. 또한, 표현형 변화는 AGT 발현의 억제를 나타낸다. 예를 들면, 조직에서 섬유증 감소는 AGT 발현의 억제를 나타낼 수 있다. 또다른 예에서, 고혈압 감소는 AGT 발현의 억제를 나타낼 수 있다.
혼성화(Hybridization)
일부 구체예들에서, 혼성화는 본 명세서에 개시된 안티센스 화합물과 AGT 핵산 사이에 일어난다. 가장 일반적인 혼성화 메커니즘은 핵산의 상보적 핵염기 간의 수소 결합(예컨대, 왓슨-크릭형, 후그스틴형 또는 역전된 후그스틴형 수소 결합)을 수반한다.
혼성화는 다양한 조건 하에 일어날 수 있다. 스트린젼트(Stringent) 조건은 서열-의존적이고 혼성화되는 핵산 분자의 성질 및 조성에 의해 결정된다.
한 서열이 표적 핵산에 대해 특이적으로 혼성화가능한지 여부를 결정하는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. (Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed., 2001). 특정 구체예에서, 본 명세서에 제공된 안티센스 화합물은 AGT 핵산과 특이적으로 혼성화가능하다.
상보성(Complementarity)
안티센스 화합물의 충분한 수의 핵염기가 표적 핵산의 대응하는 핵염기와 수소 결합하여 , 원하는 효과가 발생되면 (가령, 표적 핵산, 이를 테면, AGT 핵산의 안티센스 억제) 안티센스 화합물과 표적 핵산은 서로 상보성이다.
안티센스 화합물과 AGT 핵산 사이의 비-상보적 핵염기는 용인될 수 있으며, 단서 조항으로 안티센스 화합물은 AGT 핵산에 특이적으로 혼성화가능하게 유지되어야 한다. 게다가, 안티센스 화합물은 끼어들거나 인접한 분절(예컨대, 루프 구조, 미스매치 또는 헤어핀 구조)이 혼성화 과정에 연루되지 않도록 하기 위해 AGT 핵산의 하나 이상의 분절에 걸쳐 혼성화될 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 명세서에 제공된 안티센스 화합물, 또는 이의 특정 부분은 AGT 핵산, 표적 영역, 표적 분절, 또는 이의 특정 부분에 대해 최소한 70%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 86%, 최소한 87%, 최소한 88%, 최소한 89%, 최소한 90%, 최소한 91%, 최소한 92%, 최소한 93%, 최소한 94%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 최소한 99%, 또는 100% 상보적이다. 안티센스 화합물과 표적 핵산의 백분율 상보성은 일상적인 방법을 이용하여 확인될 수 있다. 예를 들면, 안티센스 화합물의 20개 중 18개의 핵염기가 표적 영역에 대해 상보적이며, 따라서 특이적으로 혼성화가능한 안티센스 화합물은 90 % 상보성을 나타낼 것이다. 이 예시에서, 나머지 비상보적 핵염기는 상보적 핵염기와 뭉쳐있거나 산재되어 있을 수 있고 반드시 서로에 또는 상보적 핵염기에 연접할 필요는 없다. 따라서, 표적 핵산과 완전히 상보적인 두 영역 측면에 4개의 비상보적 핵염기를 가지는 18개 핵염기 길이의 안티센스 화합물은 표적 핵산과 77.8%의 전반적인 상보성을 가질 것이며, 따라서 본 발명의 범위에 속한다.
표적 핵산의 영역과 안티센스 화합물의 백분율 상보성은 당해 분야에 공지된 BLAST 프로그램(염기 위치 배열 검색 도구) 및 PowerBLAST 프로그램을 이용하여 일상적으로 확인될 수 있다(Altschul 등, J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang 및 Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656). 백분율 상동성, 서열 동일성 또는 상보성은 예를 들면, Gap 프로그램(Wisconsin Sequence Analysis Package, Unix 버전 8, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.)에 의해, Smith 및 Waterman의 알고리즘(Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489)을 이용하는 디폴트 설정을 이용하여 확인될 수 있다.
특정 구체예에서, 본 명세서에 제공된 안티센스 화합물 또는 이의 특정 부분은 표적 핵산, 또는 이의 특정 부분에 대해 전부 상보적(즉 100% 상보적)이다. 예를 들면, 안티센스 화합물은 AGT 핵산, 또는 이의 표적 영역, 또는 표적 분절 또는 표적 서열에 대해 전부 상보적일 수 있다. 본 명세서에서 사용된 "전부 상보적(fully complementary)"이란 안티센스 화합물의 각각의 핵염기가 표적 핵산의 상응하는 핵염기와 완벽한 염기 쌍을 형성할 수 있음을 의미한다. 예를 들면, 400개 핵염기 길이의 표적 서열에 대하여 20개의 핵염기 안티센스 화합물은 안티센스 화합물에 전부 상보적인 표적 핵산의 상응하는 20개 핵염기 부분이 존재하는 한, 온전히 상보적이다. 전부 상보적이란 또한 첫 번째 및 /또는 두 번째 핵산의 특정 부분에 대하여 사용될 수 있다. 예를 들면, 30개 핵염기 안티센스 화합물의 20개 핵염기 부분은 400개 핵염기 길이인 표적 서열에 대해 "전부 상보적"일 수 있다. 30개 핵염기 올리고뉴클레오티드의 20개 핵염기 부분은 표적 서열이 상응하는 20개의 핵염기 부분을 가지고 여기서 각각의 핵염기는 안티센스 화합물의 20개 핵염기 부분에 대해 상보적일 때, 표적 서열에 대해 전부 상보적이다. 동시에, 전체 30개 핵염기 안티센스 화합물은 안티센스 화합물의 나머지 10개 핵염기가 역시 표적 서열에 상보적인지 여부에 따라, 표적 서열에 대해 전부 상보적이거나, 또는 그렇지 않을 수 있다.
비-상보적 핵염기의 위치는 안티센스 화합물의 5' 말단 또는 3' 말단에 있을 수 있다. 대안적으로, 비-상보적 핵염기 또는 핵염기는 안티센스 화합물의 내부 위치에 있을 수 있다. 둘 이상의 비-상보적 핵염기가 존재하는 경우, 이들은 연접하거나(가령, 연계된), 또는 비-연접할 수 있다. 한 구체예에서, 비-상보적 핵염기는 갭머 안티센스 올리고뉴클레오티드의 날개 세그먼트 내에 위치한다.
특정 구체예에서, 길이가 최대 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 핵염기인 안티센스 화합물은 표적 핵산, 가령, AGT 핵산, 또는 이의 특정 부분에 비해 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하 또는 1개 이하로 비-상보적 핵염기(들)을 포함한다.
특정 구체예에서, 최대 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 핵염기 길이인 안티센스 화합물은 표적 핵산, 가령, AGT 핵산, 또는 이의 특정 부분에 비해 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하 또는 1개 이하로 비-상보적 핵염기(들)을 포함한다.
본 발명에서 제공된 안티센스 화합물은 또한 표적 핵산의 부분에 상보적인 것들을 포함한다. 본 명세서에서 사용된 "부분(portion)"은 표적 핵산의 영역 또는 분절 내부의 소정의 수의 연접한(즉, 연계된) 핵염기를 가리킨다. "부분(portion)"은 또한 안티센스 화합물의 소정의 수의 연접한 핵염기를 가리킬 수 있다. 특정 구체예에서, 안티센스 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 8개 핵염기 부분에 상보적이다. 특정 구체예에서, 안티센스 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 12개 핵염기 부분에 상보적이다. 특정 구체예에서, 안티센스 화합물은 표적 세그먼트의 적어도 15개 핵염기 부분에 상보적이다. 표적 세그먼트의 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 최소한 20개, 또는 그 이상의 핵염기 부분 또는 이들 수치 중 임의의 두 개에 의해 한정되는 범위에 상보적인 안티센스 화합물이 또한 고려된다.
동일성(Identity)
본 발명에서 제공된 안티센스 화합물은 또한 특정 뉴클레오티드 서열, 서열 번호, 또는 특정한 Isis 번호로 표시되는 화합물, 또는 이들의 부분에 대해 소정의 백분율 동일성을 가질 수 있다. 본 명세서에서 사용된 안티센스 화합물은 이것이 동일한 핵염기 쌍 형성 능력을 가진 경우 본 발명에 개시된 서열과 동일하다. 예를 들면, 개시된 DNA 서열에서 티미딘 대신 우라실을 함유하는 RNA는 우라실 및 티미딘이 아데닌과 쌍을 이루기 때문에, 이 DNA 서열과 동일하다고 간주될 것이다. 본 발명에 기술된 안티센스 화합물의 단축된 형태 및 연장된 형태 뿐만 아니라 본 명세서에 제공된 안티센스 화합물에 비해 비-동일한 염기를 가지는 화합물이 또한 고려된다. 비-동일한 염기는 안티센스 화합물 전체에 걸쳐 서로 인접하거나, 또는 산재되어 있을 수 있다. 안티센스 화합물의 백분율 동일성은 이것이 비교되는 서열에 비해 동일한 염기 쌍을 형성하는 염기의 수에 따라 산출된다.
특정 구체예들에서, 상기 안티센스 화합물, 또는 이의 일부분은 본 발명에서 기술된 하나 또는 그 이상의 안티센스 화합물 또는 서열 번호, 또는 이의 일부분에 대하여 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 96%, 최소한 97%, 최소한 98%, 최소한 99% 또는 100% 동일하다.
변형(Modifications)
뉴클레오시드는 염기-당 조합(combination)이다. 상기 뉴클레오시드의 핵염기 (또한 염기로도 공지됨) 부분은 보통 헤테로사이클릭 염기 모이어티다. 뉴클레오티드는 상기 뉴클레오시드의 당 부분에 공유적으로 연결된 포스페이트 기를 더 포함하는 뉴클레오시드를 의미한다. 펜토퓨라노실 당이 포함된 뉴클레오시드의 경우, 포스페이트 기는 이 당의 2', 3' 또는 5' 히드록실 모이어티에 연계될 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 선형 중합체 올리고뉴클레오티드를 만들기 위하여 인접 뉴클레오시드가 서로 공유적 링키지를 통하여 형성된다. 상기 올리고뉴클레오티드 구조 안에서, 포스페이트 기는 상기 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오시드간 링키지를 형성하는 것으로 흔히 지칭된다.
안티센스 화합물 대한 변형은 뉴클레오시드간 링키지, 당 모이어티, 또는 핵염기에 대한 치환 또는 변화를 포괄한다. 변형된 안티센스 화합물은 요망되는 특성 가령, 예를 들면, 강화된 세포 흡수, 핵산 표적에 대한 강화된 친화성, 뉴클레아제의 존재에서 증가된 안정성, 또는 증가된 저해 활성으로 인하여, 대개는 자연적인 형태보다 선호된다.
화학적으로 변형된 뉴클레오시드는 또한 짧아지거나 말단이 잘린 안티센스 올리고뉴클레오티드의 이의 표적 핵산에 대한 결합 친화성을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 결과적으로, 그러한 화학적으로 변형된 뉴클레오시드를 가지는 더 짧은 안티센스 화합물을 이용하여 필적하는 결과를 흔히 얻을 수 있다.
변형된 뉴클레오시드간 링키지
RNA 및 DNA의 자연발생적인 뉴클레오시드간 링키지는 3' 내지 5' 포스포디에스테르 링키지이다. 하나 이상의 변형된, 즉 비-자연발생적, 뉴클레오시드간 링키지를 가지는 안티센스 화합물은 요망되는 특성 가령, 예를 들면, 강화된 세포 흡수, 표적 핵산에 대한 강화된 친화성, 뉴클레아제의 존재에서 증가된 안정성으로 인해 흔히 자연발생적 뉴클레오시드간 연결을 가지는 안티센스 화합물보다 선호된다.
변형된 뉴클레오시드간 링키지를 가지는 올리고뉴클레오티드는 인 원자를 보유하는 뉴클레오시드간 링키지 뿐만 아니라 인 원자를 보유하지 않는 뉴클레오시드간 링키지를 포함한다. 대표적인 인 함유 뉴클레오시드간 링키지는 포스포디에스테르, 포스포트리에스테르, 메틸포스포네이트, 포스포라미데이트, 및 포스포로티오에이트를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 인-함유 및 비-인-함유 링키지를 제작하는 방법은 널리 공지되어 있다.
특정 구체예들에서, AGT 핵산을 표적으로 하는 안티센스 화합물은 하나 또는 그 이상의 변형된 뉴클레오시드간 링키지를 포함한다. 특정 구체예들에서, 최소한 하나의 상기 변형된 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 링키지이다. 특정 구체예들에서, 안티센스 화합물의 각 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지이다.
변형된 당 모이어티
본 발명의 안티센스 화합물은 당 기가 변형된 하나 이상의 뉴클레오시드를 임의로 함유할 수 있다. 이러한 당 변형된 뉴클레오시드는 강화된 뉴클레아제 안정성, 증가된 결합 친화성, 또는 일부 다른 유익한 생물학적 특성을 안티센스 화합물에 부여할 수 있다. 특정 구체예들에서, 뉴클레오시드는 화학적으로 변형된 리보퓨라노즈 고리 모이어티를 포함한다. 화학적으로 변형된 리보퓨라노즈 고리의 예는 치환체 기 (5' 및 2' 치환체 기 포함, 바이사이클릭 핵산 (BNA)을 형성하기 위하여 비-제미날 고리 원자의 다리연결, 리보실 고리 산소 원자를 S, N(R), 또는 C(R1)(R2)로 대체 (R, R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, C1-C12 알킬 또는 보호기임) 및 이의 조합을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 화학적으로 변형된 당의 예로는 2'-F-5'-메틸 치환된 뉴클레오시드 (다른 개시된 5',2'-비스 치환된 뉴클레오시드의 경우 8/21/08에 공개된 PCT 국제 출원 WO 2008/101157 참고) 또는 리보실 고리 산소 원자는 2'-위치에서 추가 치환을 갖는 S로 대체 (2005년 6월 16일자로 공개된 U.S. 특허 출원 2005-0130923 참고) 또는 BNA의 5'-치환 (11/22/07에 공개된 PCT 국제 출원 WO 2007/134181 참고, 이때, LNA는 예를 들면, 5'-메틸 또는 5'-비닐 기)로 대체된다.
변형된 당 모이어티를 갖는 뉴클레오시드의 예는 5'-비닐, 5'-메틸 (R 또는 S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH3, 2'-OCH2CH3, 2'-OCH2CH2F 및 2'-O(CH2)2OCH3 치환체 기를 포함하는 뉴클레오시드를 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 2' 위치에서 치환체는 또한 알릴, 아미노, 아지도, 티오, O-알릴, O-C1-C10 알킬, OCF3, OCH2F, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), 및 O-CH2-C(=O)-N(Rl)-(CH2)2-N(Rm)(Rn)로부터 선택될 수 있으며, 이때, 각 Rl, Rm 및 Rn은 독립적으로, H 또는 치환된 또는 치환안된 C1-C10 알킬이다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, "바이사이클릭 뉴클레오시드(bicyclic nucleosides)"는 바이사이클릭 당 모이어티를 포함하는 변형된 뉴클레오시드를 지칭한다. 바이사이클릭 핵산 (BNAs)의 예로는 4' 및 2' 리보실 고리 원자 사이에 다리를 포함하는 뉴클레오시드를 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 특정 구체예들에서, 본 발명에서 제공되는 안티센스 화합물은 하나 또는 그 이상의 BNA 뉴클레오시드를 포함하며, 이때, 상기 다리는 다음중 하나의 구조식을 포함한다: 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)-O-2' (cEt) 및 4'-CH(CH2OCH3)-O-2' (그리고 이의 유사체들, 2008년 7월 15일자로 등록된 U.S. 특허 7,399,845 참고); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' (그리고 이의 유사체들, 2009년 1월 8일자로 WO/2009/006478로 공개된 PCT/US2008/068922 참고); 4'-CH2-N(OCH3)-2' (그리고 이의 유사체들, 2008년 12월 11일자로 WO/2008/150729로 공개된 PCT/US2008/064591 참고); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (2004년 9월 2일자로 공개된 U.S. 특허 출원 US2004-0171570 참고); 4'-CH2-N(R)-O-2', 이때, R은 H, C1-C12 알킬, 또는 보호기 (2008년 9월 23일자로 등록된 U.S. 특허 7,427,672 참고); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (Zhou et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134 참고); 그리고 4'-CH2-C(=CH2)-2' (그리고 이의 유사체들 2008년 12월 8일자로 WO 2008/154401로 공개된 PCT/US2008/066154 참고).
추가적인 바이사이클릭 뉴클레오시드는 공개된 문헌에서 보고되고 있다(예를 들면: Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372; Elayadi et al., Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; 또는um et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; U.S. 특허 번호: 7,399,845; 7,053,207; 7,034,133; 6,794,499; 6,770,748; 6,670,461; 6,525,191; 6,268,490; U.S. 특허 공개 번호: US2008-0039618; US2007-0287831; US2004-0171570; U.S. 특허 출원 일련 번호: 12/129,154; 61/099,844; 61/097,787; 61/086,231; 61/056,564; 61/026,998; 61/026,995; 60/989,574; 국제 출원 WO 2007/134181; WO 2005/021570; WO 2004/106356; WO 99/14226; 그리고 PCT 국제 출원 번호: PCT/US2008/068922; PCT/US2008/066154; 그리고 PCT/US2008/064591 참고). 전술한 바이사이클릭 뉴클레오시드 각각은 예를 들면 α-L-리보퓨라노즈 및 β-D-리보퓨라노즈를 비롯한 하나 또는 그 이상의 입체화학적 당 배열을 갖도록 준비될 수 있다 (1999년 3월 25일자로 WO 99/14226로 공개된 PCT 국제 출원 PCT/DK98/00393 참고).
본 발명에서 사용된 바와 같이, "모노사이클릭 뉴클레오시드(monocyclic nucleosides)"는 바이사이클릭 당 모이어티가 아닌 변형된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드를 지칭한다. 특정 구체예들에서, 뉴클레오시드의 당 모이어티, 또는 당 모이어티 유사체는 임의의 위치에서 변형되거나 또는 치환될 수 있다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, "4'-2' 바이사이클릭 뉴클레오시드" 또는 "4' 내지 2' 바이사이클릭 뉴클레오시드"란 퓨라노즈 고리의 2개 탄소 원자를 연결하는 다리는 상기 당의 2' 탄소 원자와 4' 탄소 원자를 연결하며, 이 다리가 포함된 퓨라노즈 고리를 포함하는 바이사이클릭 뉴클레오시드를 지칭한다.
특정 구체예들에서, BNA 뉴클레오시드의 바이사이클릭 당 모이어티는 -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x-, 및 -N(Ra)-로부터 독립적으로 선별된 1, 또는 1 내지 4개의 연계된 기가 포함된 다리를 포함하나, 이에 국한되지 않는 펜토퓨라노실 당 모이어티의 4' 탄소원자와 2' 탄소원자 사이에 최소한 하나의 다리를 갖는 화합물을 포함하나, 이에 국한되지 않으며; 이때: x는 0, 1, 또는 2이며; n은 1, 2, 3, 또는 4이며; 각 Ra 및 Rb는 독립적으로, H, 보호 기, 히드록실, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 헤테로사이클 라디칼, 치환된 헤테로사이클 라디칼, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, C5-C7 알리사이클(alicyclic) 라디칼, 치환된 C5-C7 알리사이클 라디칼, 할로겐, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, 아실 (C(=O)-H), 치환된 아실, CN, 술포닐 (S(=O)2-J1), 또는 술포옥실 (S(=O)-J1)이며; 그리고 각 J1 및 J2는 독립적으로, H, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 아실 (C(=O)-H), 치환된 아실, 헤테로사이클 라디칼, 치환된 헤테로사이클 라디칼, C1-C12 아미노알킬, 치환된 C1-C12 아미노알킬 또는 보호 기다.
특정 구체예들에서, 바이사이클릭 당 모이어티의 다리는 -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- 또는 C(RaRb)-O-N(R)-이다. 특정 구체예들에서, 상기 다리는 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2' 및 4'-CH2-N(R)-O-2'-이며, 이때, 각 R은 독립적으로, H, 보호 기 또는 C1-C12 알킬이다.
특정 구체예들에서, 바이사이클릭 뉴클레오시드는 이성질체 배열에 의해 더욱 한정된다. 예를 들면, 4'-(CH2)-O-2' 다리를 포함하는 뉴클레오시드는 α-L 배열(configuration) 또는 β-D 배열로 된다. 기존에, α-L-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA's는 안티센스 활성을 보였던 안티센스 올리고뉴클레오티드에 혼입되었다(Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).
특정 구체예들에서, 바이사이클릭 뉴클레오시드는 4'에서 2'로의 다리를 갖는 것들을 포함하며, 이때, 이러한 다리는 α-L-4'-(CH2)-O-2', β-D-4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2', 4'-CH2-N(R)-O-2', 4'-CH(CH3)-O-2', 4'-CH2-S-2', 4'-CH2-N(R)-2', 4'-CH2-CH(CH3)-2', 및 4'-(CH2)3-2'을 포함하나, 이에 국한되지 않으며, 이때, R은 H, 보호 기 또는 C1-C12 알킬이다.
특정 구체예에서, 바이사이클릭 뉴클레오시드는 다음 구조식을 갖는다:
이때:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이다;
-Qa-Qb-Qc-는 -CH2-N(Rc)-CH2-, -C(=O)-N(Rc)-CH2-, -CH2-O-N(Rc)-, -CH2-N(Rc)-O- 또는 -N(Rc)-O-CH2이며;
Rc는 C1-C12 알킬 또는 아미노 보호 기이며; 그리고
Ta 및 Tb는 각각, 독립적으로 H, 히드록실 보호 기, 콘쥬게이트 그룹, 반응성 인 기, 인 모이어티 또는 지지(support) 매질에 공유적 부착이다.
특정 구체예들에서, 바이사이클릭 뉴클레오시드는 다음 구조식을 갖는다:
이때:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이다;
Ta 및 Tb는 각각, 독립적으로 H, 히드록실 보호 기, 콘쥬게이트 그룹, 반응성 인 기, 인 모이어티 또는 지지 매질에 공유적 부착이다.
Za는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C1-C6 알킬, 치환된 C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알키닐, 아실, 치환된 아실, 치환된 아미드, 티올 또는 치환된 티올이다.
한 구체예에서, 치환된 기 각각은 할로겐, 옥소, 히드록실, OJc, NJcJd, SJc, N3, OC(=X)Jc, 및 NJeC(=X)NJcJd,로부터 독립적으로 선택된 치환체 기로 단일 또는 다중 치환되며, 이때, 각 Jc, Jd 및 Je 는 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 또는 치환된 C1-C6 알킬이며, 그리고 X는 O 또는 NJc이다.
특정 구체예들에서, 바이사이클릭 뉴클레오시드는 다음 구조식을 갖는다:
이때:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이다;
Ta 및 Tb는 각각, 독립적으로 H, 히드록실 보호 기, 콘쥬게이트 그룹, 반응성 인 기, 인 모이어티 또는 지지 매질에 공유적 부착이다.
Zb는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C1-C6 알킬, 치환된 C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알키닐 또는 치환된 아실 (C(=O)-)이다.
특정 구체예들에서, 바이사이클릭 뉴클레오시드는 다음 구조식을 갖는다:
이때:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이다;
Ta 및 Tb는 각각, 독립적으로 H, 히드록실 보호 기, 콘쥬게이트 그룹, 반응성 인 기, 인 모이어티 또는 지지 매질에 공유적 부착이다.
Rd는 C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이며;
각 qa, qb, qc 및 qd는, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐, C1-C6 알콕실, 치환된 C1-C6 알콕실, 아실, 치환된 아실, C1-C6 아미노알킬 또는 치환된 C1-C6 아미노알킬이다;
특정 구체예들에서, 바이사이클릭 뉴클레오시드는 다음 구조식을 갖는다:
이때:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이다;
Ta 및 Tb는 각각, 독립적으로 H, 히드록실 보호 기, 콘쥬게이트 그룹, 반응성 인 기, 인 모이어티 또는 지지 매질에 공유적 부착이다.
qa, qb, qe 및 qf는 각각, 독립적으로, 수소, 할로겐, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C1-C12 알콕시, 치환된 C1-C12 알콕시, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJk 또는 N(H)C(=S)NJjJk이며;
또는 qe와 qf는 함께 =C(qg)(qh)이며;
qg 및 qh는 각각, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C12 알킬 또는 치환된 C1-C12 알킬이다.
4'-CH2-O-2' 다리를 갖는 아데닌, 시토신, 구아닌, 5-메틸-시토신, 티민 및 우라실 바이사이클릭 뉴클레오시드의 합성 및 제조 그리고 이들의 올리고머화, 및 핵산 인지 성질이 기술되어 있다 (Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). 바이사이클릭 뉴클레오시드의 합성은 WO 98/39352 및 WO 99/14226에서 기술된다.
4'에서 2'를 연결하는 다리 기, 이를 테면, 4'-CH2-O-2' 및 4'-CH2-S-2'를 갖는 다양한 바이사이클릭 뉴클레오시드 유사체 또한 제조되었다 (Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222). 핵산 중합효소ㄹ의 기질로 사용하기 위하여 바이사이클릭 뉴클레오시드를 포함하는 올리고데옥시리보뉴클레오티드 듀플렉스의 제조 또한 기술되었다 (Wengel et al., WO 99/14226 ). 더욱이, 2'-아미노-BNA, 신규한 배열로 제한된 고-친화력 올리고뉴클레오티드 유사체의 합성은 당분야에 기술되어 있다 (Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039). 또한, 2'-아미노- 및 2'-메틸아미노-BNA's들이 제조되었고, 상보적 RNA 및 DNA 가닥을 갖는 이들의 듀플렉스의 열 안정성이 이미 보고되었다.
특정 구체예들에서, 바이사이클릭 뉴클레오시드는 다음 구조식을 갖는다:
이때:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이다;
Ta 및 Tb는 각각, 독립적으로 H, 히드록실 보호 기, 콘쥬게이트 그룹, 반응성 인 기, 인 모이어티 또는 지지 매질에 공유적 부착이다.
각 qi, qj, qk 및 ql 은 독립적으로, H, 할로겐, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C1-C12 알콕실, 치환된 C1-C12 알콕실, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJk 또는 N(H)C(=S)NJjJk이며; 그리고
qi 와 qj 또는 ql 와 qk 는 함께 =C(qg)(qh)이며, 이때, qg 및 qh 는 각각, 독립적으로, H, 할로겐, C1-C12 알킬 또는 치환된 C1-C12 알킬이다.
4'-(CH2)3-2' 다리 및 알케닐 유사체 다리 4'-CH=CH-CH2-2'를 갖는 하나의 카르보사이클 바이사이클릭 뉴클레오시드도 기술되었다 (Frier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 및 Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740). 카보사이클릭 바이사이클릭 뉴클레오시드의 합성 및 제조 그리고 그들의 올리고머화 및 생화학적 연구 또한 기술되어 있다 (Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc. 2007, 129(26), 8362-8379).
특정 구체예들에서, 바이사이클릭 뉴클레오시드는 하기에서 도시된 바와 같이, (A) α-L-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA , (B) β-D-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA , (C) 에틸렌옥시 (4'-(CH2)2-O-2') BNA, (D) 아미노옥시 (4'-CH2-O-N(R)-2') BNA, (E) 옥시아미노 (4'-CH2-N(R)-O-2') BNA, (F) 메틸(메틸렌옥시) (4'-CH(CH3)-O-2') BNA (제한된 에틸 또는 cEt로도 지칭됨), (G) 메틸렌-티오 (4'-CH2-S-2') BNA, (H) 메틸렌-아미노 (4'-CH2-N(R)-2') BNA, (I) 메틸 카르보사이클릭 (4'-CH2-CH(CH3)-2') BNA, (J) 프로필렌 카르보사이클릭 (4'-(CH2)3-2') BNA, 및 (K) 비닐 BNA를 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
이때, Bx는 염기 모이어티이며, R은 독립적으로, H, 보호 기, C1-C6 알킬 또는 C1-C6 알콕시이다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, 용어 "변형된 테트라히드로피란(tetrahydropyran) 뉴클레오시드" 또는 "변형된 THP 뉴클레오시드"이란 정상적인 뉴클레오시드의 펜토퓨라노실 잔기에 대하여 치환된 6-원(membered) 테트라히드로피란 "당" 을 갖는 뉴클레오시드를 말하며, 그리고 당 대용체(surrogate)로도 지칭될 수 있다. 변형된 THP 뉴클레오시드는 하기에서 도시된 바와 같이, 테트라히드로피라닐 고리 시스템을 갖는 헥시톨 핵산 (HNA), 아니톨 핵산 (ANA), 만니톨 핵산 (MNA) (Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854 참고) 또는 플루오르 HNA (F-HNA)로 지칭되는 것을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
특정 구체예에서, 당 대용체는 다음 구조식을 갖는 것으로 선택된다:
이때:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이다;
T3 및 T4는 각각, 독립적으로, 상기 올리고머 화합물에 테트라히드로피란 뉴클레오시드 유사체를 연계시키는 뉴클레오시드간 연계기이거나, 또는 T3 과 T4 중 하나는 올리고머 화합물 또는 올리고뉴클레오티드에 테트라히드로피란 뉴클레오시드 유사체를 연계시키는 뉴클레오시드간 연계 기이며, 그리고 T3 과 T4 중 나머지 하나는 H, 히드록실 보호 기, 연계된 콘쥬게이트 그룹 또는 5' 또는 3'-단부 기이며;
q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7은 각각 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐 또는 치환된 C2-C6 알키닐이며; 그리고
R1과 R2 중 하나는 수소이고, 다른 하나는 할로겐, 치환된 또는 치환안된 알콕시, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2 및 CN으로부터 선택되며, 이때, X는 O, S 또는 NJ1 이며, 그리고 각 J1, J2 및 J3은 독립적으로, H 또는 C1-C6 알킬이다.
특정 구체예들에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 은 각각 H이다. 특정 구체예들에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 최소한 하나는 H가 아니다. 특정 구체예들에서, q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 중 최소한 하나는 메틸이다. 특정 구체예들에서, THP 뉴클레오시드가 제공되는데, 이때, R1 과 R2 중 하나는 F이다. 특정 구체예들에서, R1은 플루오르이고, R2는 H이며; R1은 메톡시이고, R2는 H이며, 그리고 R1 은 메톡시에톡시이고, R2는 H이다.
특정 구체예에서, 당 대용체는 5개 초과의 원자 및 하나 초과의 헤테로원자를 가지는 고리를 포함한다. 예를 들면, 몰포리노 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드 및 올리고머 화합물에서 이들의 사용이 보고되었다 (예를 들면: Braasch et al., Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510; 그리고 U.S. 특허 5,698,685; 5,166,315; 5,185,444; 그리고 5,034,506). 본 발명에서 사용된 바와 같이, 용어 "몰포리노(morpholino)"는 다음 구조식을 갖는 당 대용체를 의미한다:
특정 구체예에서, 몰포리노는 예를 들면, 다양한 치환기를 부가 또는 변경하여 상기 몰포리노 구조로부터 변형될 수 있다. 이러한 당 대용체는 본 명세서에서 "변형된 몰포리노"로 지칭된다.
변형의 조합이 또한 제공되는데, 이를 테면, 2'-F-5'-메틸 치환된 뉴클레오시드 (다른 공개된 5', 2'-비스 치환된 뉴클레오시드의 경우 8/21/08 공개된 PCT 국제 출원 WO 2008/101157 참고) 및 리보실 고리 산소 원자는 2'-위치에서 추가 치환을 갖는 S로 대체 (2005년 6월 16일자로 공개된 U.S. 특허 출원 2005-0130923 참고) 또는 대안으로 바이사이클릭 핵산의 5'-치환 (11/22/07에 공개된 PCT 국제 출원 WO 2007/134181 참고, 이때, 4'-CH2-O-2' 바이사이클릭 뉴클레오시드는 5' 위치에서 5'-메틸 또는 5'-비닐 기로 추가 치환됨)를 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 카보사이클릭 바이사이클릭 뉴클레오시드의 합성 및 제조 그리고 그들의 올리고머화 및 생화학적 연구 또한 기술되어있다 (가령, Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc. 2007, 129(26), 8362-8379 참고).
특정 구체예들에서, 안티센스 화합물는 자연 발생적 뉴클레오시드에서 펜토퓨라노실 잔기를 대신하여 6-원(membered) 시클로헥세닐을 갖는 변형된 하나 또는 그 이상의 시클로헥세닐 뉴클레오시드를 포함한다. 변형된 시클로헥세닐 뉴클레오시드는 당분야에서 기술된 것들을 포함하나, 이에 국한되지 않는다(예를 들면, 2010년 4월 10일자로 공개된 공동 소유의 공개된 PCT 출원 WO 2010/036696, Robeyns et al., J. Am. Chem. Soc., 2008, 130(6), 1979-1984; Horvath et al., Tetrahedron Letters, 2007, 48, 3621-3623; Nauwelaerts et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(30), 9340-9348; Gu et al.,, Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2005, 24(5-7), 993-998; Nauwelaerts et al., Nucleic Acids Research, 2005, 33(8), 2452-2463; Robeyns et al., Acta Crystallographica, Section F: Structural Biology and Crystallization Communications, 2005, F61(6), 585-586; Gu et al., Tetrahedron, 2004, 60(9), 2111-2123; Gu et al., Oligonucleotides, 2003, 13(6), 479-489; Wang et al., J. Org. Chem., 2003, 68, 4499-4505; Verbeure et al., Nucleic Acids Research, 2001, 29(24), 4941-4947; Wang et al., J. Org. Chem., 2001, 66, 8478-82; Wang et al., Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2001, 20(4-7), 785-788; Wang et al., J. Am. Chem., 2000, 122, 8595-8602; 공개된 PCT 출원, WO 06/047842; 그리고 공개된 PCT 출원 WO 01/049687 참고; 이들 각 내용은 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다). 특정 변형된 시클로헥세닐 뉴클레오시드는 구조식 X를 갖는다.
이때, 구조식 X의 전술한 최소한 하나의 시클로헥세닐 뉴클레오시드 유사체 각각에 대하여 독립적으로:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이고;
T3 및 T4는 각각, 독립적으로, 시클로헥세닐 뉴클레오시드 유사체를 안티센스 화합물에 연계시키는 뉴클레오시드간 연계 기이거나, 또는 T3 과 T4 중 하나는 테트라히드로피란 뉴클레오시드 유사체를 안티센스 화합물에 연계시키는 뉴클레오시드간 연계 기이며, T3 과 T4 중 다른 하나는 H, 히드록실 보호 기, 연계된 콘쥬게이트 그룹, 또는 5'- 또는 3'-단부 기이며; 그리고
q1, q2, q3, q4, q5, q6, q7, q8 및 q9는 각각, 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C2-C6 알키닐 또는 다른 당 치환체 기이다.
많은 다른 모노사이클릭, 바이사이클릭 및 트리사이클릭 고리 시스템이 당분야에 공지되어 있고, 그리고 본 명세서에서 제시된 바와 같이, 올리고머 화합물로 혼입되기 위하여 뉴클레오시드를 변형하는데 이용될 수 있는 당 대용체로 적합하다(예를 들면, 검토 문헌: Leumann, Christian J. Bioorg. & Med. Chem., 2002, 10, 841-854 참고). 이러한 고리 시스템은 이들의 활성을 더 강화시키기 위하여, 다양한 추가 치환을 겪을 수 있다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, "2'-변형된 당"이란 2' 위치에서 변형된 퓨라노실 당을 말한다. 특정 구체예들에서, 이러한 변형은 치환된 그리고 치환안된 알콕시, 치환된 그리고 치환안된 티오알킬, 치환된 그리고 치환안된 아미노 알킬, 치환된 그리고 치환안된 알킬, 치환된 그리고 치환안된 알릴, 및 치환된 그리고 치환안된 알키닐이 포함된 할로겐화물로부터 선택된 치환체를 포함한다. 특정 구체예들에서, 2' 변형은 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않은 치환체로부터 선택된다: O[(CH2)nO]mCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3, O(CH2)nF, O(CH2)nONH2, OCH2C(=O)N(H)CH3, 및 O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2, 이때, n 및 m은 1 내지 약 10이다. 다른 2'- 치환체 기 또한 다음으로부터 선택될 수 있다: C1-C12 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 알키닐, 알카릴, 아랄킬, O-알카릴 또는 O-아랄킬, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, F, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알카릴, 아미노알킬아미노, 폴리알킬아미노, 치환된 실일, RNA 쪼갬 기, 리포터 기, 삽입체(intercalator), 안티센스 화합물, 및 유사한 성질을 갖는 다른 치환체약동학 성질을 개선시키는 기, 또는 약물력학 성질을 개선시키는 기. 특정 구체예들에서, 변형된 뉴클레오시드는 2'-MOE 측쇄를 포함한다 (Baker et al., J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000). 이러한 2'-MOE 치환은 변형되지 않은 뉴클레오시드와 다른 변형된 뉴클레오시드, 이를 테면, 2'- O-메틸, O-프로필, 및 O-아미노프로필과 비교하였을 때, 결합 친화력이 개선된 것으로 기술되었다. 2'-MOE 치환체를 갖는 올리고뉴클레오티드는 또한 유전자 발현의 안티센스 억제제이며, 생체내 사용에도 전망이 밝다 (Martin, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann et al., Chimia, 1996, 50, 168-176; Altmann et al., Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637; 그리고 Altmann et al., Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926).
본 발명에서 사용된 바와 같이, "2'-변형된" 또는 "2'-치환된" 이란 2' 위치에서 H 또는 OH이외의 치환체가 포함된 당을 포함하는 뉴클레오시드를 지칭한다. 2'-변형된 뉴클레오시드는 비-다리연결 2'치환체, 이를 테면, 알릴, 아미노, 아지도, 티오, O-알릴, O-C1-C10 알킬, -OCF3, O-(CH2)2-O-CH3, 2'-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), 또는 O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn)를 갖는 뉴클레오시드를 포함하나, 이에 국한되지 않으며, 여기에서 각 Rm 및 Rn은 독립적으로, H 또는 치환된 또는 치환안된 C1-C10 알킬이다. 2'-변형된 뉴클레오시드는 예를 들면, 상기 당의 다른 위치 및/또는 핵염기에서 다른 변형을 더 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, "2'-F"란 상기 당 고리의 2' 위치에서 플루오르기가 포함된 당을 포함하는 뉴클레오시드를 지칭한다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, "2'-OMe" 또는 "2'-OCH3", "2'-O-메틸" 또는 "2'-메톡시" 란 각각 상기 당 고리의 2' 위치에서 -OCH3 기가 포함된 당을 포함하는 뉴클레오시드를 지칭한다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, "MOE" 또는 "2'-MOE" 또는 "2'-OCH2CH2OCH3" 또는 "2'-O-메톡시에틸"이란 각각 상기 당 고리의 2' 위치에서 -OCH2CH2OCH3 기가 포함된 당을 포함하는 뉴클레오시드를 지칭한다.
변형된 당을 만드는 방법은 당해 분야의 숙련가에게 널리 공지되어 있다. 이러한 변형된 당의 제조를 교시하는 일부 대표적인 U.S. 특허는 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다, U.S.: 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785; 5,519,134; 5,567,811; 5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873; 5,646,265; 5,670,633; 5,700,920; 5,792,847 및 6,600,032 및 국제 출원 PCT/US2005/019219, 이는 2005년 6월 2일자로 제출되고, 2005년 12월 22일자로 WO 2005/121371로 공개된 공개됨, 이들 각각은 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, "올리고뉴클레오티드(oligonucleotide)"는 연계된 뉴클레오시드가 다수 포함된 화합물을 지칭한다. 특정 구체예들에서, 다수의 뉴클레오시드중 하나 또는 그 이상은 변형된다. 특정 구체예들에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 또는 그 이상의 리보뉴클레오시드 (RNA) 및/또는 데옥시리보뉴클레오시드 (DNA)를 포함한다.
변형된 당 모이어티를 갖는 뉴클레오티드에서, 상기 핵염기 모이어티 (천연, 변형된 또는 이의 조합)는 적절한 핵산 표적과 혼성화를 위하여 유지된다.
특정 구체예들에서, 안티센스 화합물은 변형된 당 모이어티를 갖는 하나 또는 그 이상의 뉴클레오시드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 당 모이어티는 2'-MOE이다. 특정 구체예들에서, 상기 2'-MOE 변형된 뉴클레오시드는 갬머 모티프내에 배열된다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 당 모이어티는 (4'-CH(CH3)-O-2') 다리연결 기를 갖는 바이사이클릭 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, (4'-CH(CH3)-O-2') 변형된 뉴클레오시드는 갬머 모티프의 날개를 통하여 배열된다.
변형된 핵염기(Modified Nucleobases)
핵염기(또는 염기) 변형 또는 치환은 자연발생적 또는 합성된 변형되지 않은 핵염기와 구조적으로 구별되지만, 기능적으로 상호교환가능하다. 자연적인 및 변형된 핵염기는 둘다 수소 결합에 참여할 수 있다. 이러한 핵염기 변형은 뉴클레아제 안정성, 결합 친화성 또는 일부 다른 유익한 생물학적 특성을 안티센스 화합물에 부여할 수 있다. 변형된 핵염기는 합성 및 천연 핵염기, 이를 테면, 예를 들면, 5-메틸시토신 (5-me-C)을 포함한다. 5-메틸시토신 치환이 포함된 특정 핵염기 치환은 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 결합 친화력을 증가시키는데 특히 유용하다. 예를 들면, 5-메틸시토신 치환은 핵산 듀플렉스 안정성을 0.6-1.2℃ 증가시키는 것으로 나타났다 C (Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. and Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278).
추가적인 변형되지 않은 핵염기는 아데닌 및 구아닌의 5-히드록시메틸 시토신, 산틴, 하이포산틴, 2-아미노아데닌, 6-메틸 및 기타 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 기타 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실 및 시토신, 5-프로피닐 (-C≡C-CH3) 우라실 및 시토신 그리고 피리미딘 염기의 기타 알키닐 유도체, 6-아조 우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실 (슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-히드록실 및 기타 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로 특히, 5-브로모, 5-트리플루오르메틸 및 기타 5-치환된 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노-아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌 및 3-데아자구아닌 그리고 3-데아자아데닌을 포함한다.
헤테로사이클릭 염기 모이어티는 또한 퓨린 또는 피리미딘 염기가 다른 헤테로사이클, 예를 들면 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘 및 2-피리돈으로 대체된 것들을 포함할 수 있다. 안티센스 화합물의 결합 친화력을 증가시키는데 특히 유용한 핵염기는 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘 그리고 2 아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신이 포함된, N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린을 포함한다.
특정 구체예들에서, AGT 핵산을 표적으로 하는 안티센스 화합물은 하나 또는 그 이상의 변형된 핵염기를 포함한다. 특정 구체예들에서, AGT 핵산을 표적으로 하는 갭-확장된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 하나 또는 그 이상의 변형된 핵염기를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 변형된 핵염기중 최소 하나는 5-메틸시토신이다. 특정 구체예들에서, 각 시토신은 5-메틸시토신이다.
약학 조성물을 제형화하기 위한 조성물 및 방법
안티센스 올리고뉴클레오티드는 약학 조성물 또는 제제(formulations)를 만들기 위한 약학적으로 수용가능한 활성 또는 비활성 물질과 혼합될 수 있다. 약제학적 조성물의 제형화를 위한 조성물 및 방법은 투여 경로, 질환의 수준, 또는 투여되어야 하는 용량을 비롯하지만 이에 제한되지 않는 수많은 기준에 의존적이다
AGT 핵산을 표적으로 하는 안티센스 화합물은 안티센스 화합물을 적절한 약제학적으로 허용되는 희석제 또는 운반체와 조합함으로써 약제학적 조성물에서 사용될 수 있다. 약학적으로 수용가능한 희석제는 물, 가령, 주입용-물(WFI)을 포함한다. 약학적으로 수용가능한 희석제는 염수, 가령, 포스페이트-완충된 염수 (PBS)를 포함한다. 물 또는 염수는 비경구로 조성물이 전달되는데 사용하기에 적합한 희석제다. 따라서, 한 구체예에서, 본 명세서에 기술된 방법에서 사용되는 것은 AGT 핵산을 표적으로 하는 안티센스 화합물 및 약제학적으로 허용되는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물이다. 특정 구체예들에서, 약학적으로 수용가능한 희석제는 물 또는 염수다. 특정 구체예들에서, 상기 안티센스 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오티드이다.
안티센스 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 인간을 비롯한 동물에게 투여시, 생물학적으로 활성인 대사산물 또는 이의 잔여물을 (직접 또는 간접적으로) 제공할 수 있는 임의의 약제학적으로 허용되는 염, 에스테르, 또는 그러한 에스테르의 염, 또는 임의의 다른 올리고뉴클레오티드를 포괄한다. 따라서, 예를 들면, 본 발명의 개시는 또한 안티센스 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 프로드럭, 이러한 프로드럭의 약제학적으로 허용되는 염, 및 다른 생물학적 균등물에 접근한다. 적절한 약제학적으로 허용되는 염은 나트륨 및 칼륨 염을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 기술하고 있는 화합물의 약학적으로 수용가능한 염은 당업계에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 약학적으로 수용가능한 염의 검토를 위하여, Stahl and Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)을 참고한다. 안티센스 올리고뉴클레오티드의 나트륨 염은 유용하며 인간에 대한 치료학적 투여에 잘 수용된다. 따라서, 한 구체예에서, 본 명세서에서 기술하고 있는 화합물들은 나트륨 염의 형태다.
프로드럭은 신체 내부에서 내인성 뉴클레아제에 의해 절단되나, 활성 안티센스 화합물을 형성하는 안티센스 화합물의 한쪽 또는 양쪽 말단에 추가적인 뉴클레오시드가 포함된 것을 포함할 수 있다.
투약(Dosing)
특정 구체예들에서, 약학 조성물은 투약 방식(dosing regimen)(가령, 투약분량, 투약 빈도 및 기간)에 따라 투여되며, 이때, 상기 투여 방식은 원하는 효과를 얻기 위하여 선택될 수 있다. 상기 원하는 효과는 예를 들면, AGT의 감소, 또는 AGT와 연합된 질환, 장애 또는 상태를 방지, 감소, 개선 또는 진행의 지연이 될 수 있다.
특정 구체예들에서, 상기 투약 방식의 변수들은 대상에서 약학 조성물의 원하는 농도를 얻도록 조정된다. 투여 방식과 관련하여 사용된 "약학 조성물의 농도"는 약학 조성물의 화합물, 올리고뉴클레오티드, 또는 활성 성분을 지칭할 수 있다. 예를 들면, 특정 구체예들에서, 투약 및 투약 빈도는 원하는 효과를 얻는데 충분한 양으로 약학 조성물의 조직 농도 또는 혈장 농도를 제공하기 위하여 조정된다.
투약은 치료되는 질병 상태의 심각성 및 반응성에 의존적이며, 치료 과정은 수 일내지 수 개월간 지속되거나, 또는 치료가 이루어지거나 또는 질병 상태의 감소될 때까지 진행된다. 투약은 약물의 효력 및 신진 대사에 따라 또한 달려진다. 특정 구체예들에서, 투여량(dosage)은 체중 kg 당 0.01μg 내지 100mg, 또는 0.001mg 내지 1000mg의 투여량 범위 안이며, 그리고 매일, 매주, 매2주, 매월, 분지별, 반년마다, 또는 연간 또는 매 2 내지 20년에 일회 또는 그 이상으로 제공될 수 있다. 성공적인 치료 후, 질병 상태의 재발을 방지하기 위하여 환자는 유지요법을 받는 것이 바람직할 수 있고, 이때, 상기 올리고뉴클레오티드는 일일 일회 또는 그이상의 빈도로, 체중 kg 당, 0.01μg 내지 100mg의 범위에서 매 20년간 일회, 또는 0.001mg 내지 1000mg의 투약 범위로 유지투약으로 투여된다.
투여(Administration)
본 발명의 화합물 또는 약학 조성물은 국소 치료 또는 전신 치료가 바람직한 지 여부 및 치료될 영역에 따라 여러 가지 방법으로 투여 될 수 있다. 투여는 흡입 (가령, 폐), 장 (가령, 장의), 비경구 또는 국소 투여 될 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 기술된 바와 같이 상기 화합물 및 조성물은 비경구로 투여된다. 비경구(Parenteral) 투여는 정맥 내, 동맥 내, 피하, 복강 내, 안구 내, 근육 내, 두개 내(intracranial), 척수강 내, 골수 내, 뇌실 내 또는 종양 내 주사 또는 주입을 포함 하나, 이에 한정되지 않는다. 비경구 투여는 또한 비강내(intranasal) 투여를 포함한다.
특정 구체예들에서, 비경구 투여는 주입에 의해 이루어진다. 주입은 만성적, 또는 연속적, 또는 단기 또는 간헐적일 수 있다. 특정 구체예들에서, 주입된 약제는 펌프로 운반된다.
특정 구체예들에서, 비경구 투여는 주사에 의해 이루어진다. 주사는 주사기 또는 펌프로 전달될 수 있다. 특정 구체예들에서, 상기 주사는 볼루스(bolus) 주사다. 특정 구체예들에서, 주사는 조직 또는 기관에 직접 투여된다.
특정 구체예들에서, 비경구 투여용 제형은 완충제, 희석제 및 기타 적합한 첨가제, 가령, 침투 증강제, 운반체 화합물 및 기타 약학적으로 수용가능한 운반 또는 부형제와 같은 다른 적합한 첨가제가 포함될 수 있는 멸균 수용액을 포함할 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 기술된 바와 같이 상기 화합물 및 조성물은 장으로 투여된다. 장 투여는 경구, 점막, 장 또는 직장 (예를 들어, 좌제, 관장)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 특정 구체예들에서, 화합물 또는 조성물의 장 투여용 제제는 약학 운반체, 부형제, 분말 또는 과립, 미립자, 나노입자, 물 또는 비-수성 매질 중 현탁액 또는 용액, 캡슐, 겔 캡슐, 샤세(sachets), 테블릿 또는 미니테블릿(minitablets)을 포함할 수 있지만, 이에 국한되지 않는다. 증점제, 풍미제, 희석제, 유화제, 분산 보조제 또는 결합제가 바람직할 수 있다. 특정 구체예들에서, 장내 제제는 본원에서 제공되는 화합물이 하나 이상의 침투 증강제, 계면활성제 및 킬레이터와 함께 투여되는 것이다.
특정 구체예들에서, 투여는 폐 투여를 포함한다. 특정 구체예들에서, 폐 투여는 에어로졸화된 올리고뉴클레오티드의 흡입에 의해 환자의 폐로 전달하는 것을 포함한다. 대상이 에어로졸화된 올리고뉴클레오티드를 흡입 후, 올리고뉴클레오티드는 폐포 대 식세포, 호산구, 상피, 혈관 내피 및 기관지 상피를 포함하는 정상 및 염증 폐 조직 모두의 세포로 분포된다. 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약학적 조성물의 전달에 적합한 장치는 표준 분무기(nebulizer) 장치를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 추가적으로 적절한 장치는 건조 분말 흡입기(inhalers) 또는 계량 투약 흡입기를 포함한다.
특정 구체예들에서, 약학 조성물은 전신 노출보다는 국소 노출을 달성하기 위해 투여된다. 예를 들면, 폐 투여는 최소한의 전신 노출로 폐에 약학 조성물을 전달한다.
콘쥬게이트화된 안티센스 화합물
특정 구체예들에서, 본원에 제공된 올리고뉴클레오티드 또는 올리고머 화합물은 하나 이상의 콘쥬게이트 그룹의 공유 부착에 의해 변형된다. 일반적으로, 콘쥬게이트 그룹은 부착된 올리고뉴클레오티드 또는 올리고머 화합물의 하나 이상의 특성, 가령, 약력학, 약동학, 안정성, 결합, 흡수, 세포의 분포, 세포의 흡수, 전하 및 투명도를 변형시키지만, 이에 제한되지 않는다. 본 발명에서 사용된 바와 같이, "콘쥬게이트 그룹(conjugate group)"란 올리고뉴클레오티드 또는 올리고머 화합물에 부착된 원자 기들을 포함하는 라디칼 기를 말한다. 특정 구체예에서, 콘쥬게이트 그룹은 이들이 부착된 화합물의 하나 또는 그 이상의 특성, 가령, 약력학, 약동학, 안정성, 결합, 흡수, 세포의 분포, 세포의 흡수, 전하 및/또는 청소 성질을 변형시키지만, 이에 국한되지 않는다. 콘쥬게이트 그룹은 화학 분야에서 일상적으로 사용되며, 콘쥬게이트 그룹을 올리고뉴클레오티드 또는 올리고머 화합물에 공유적으로 연계시키는 콘쥬게이트 링커를 포함할 수 있다. 특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹은 상기 콘쥬게이트 그룹을 올리고뉴클레오티드 또는 올리고머 화합물에 공유적으로 연계시키는 절단가능한 모이어티를 포함한다. 특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹은 상기 콘쥬게이트 그룹을 올리고뉴클레오티드 또는 올리고머 화합물에 공유적으로 연계시키는 콘쥬게이트 링커 및 절단가능한 모이어티를 포함한다. 특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹은 일반 구조식을 갖는다:
이때, n은 1 내지 약 3이며, n은 1일 때, m은 0이거나, 또는 n은 2 또는 3일 때, m은 1이며, j는 1 또는 0이고, k는 1 또는 0이며, 그리고 j와 k의 합은 최소한 1일다.
특정 구체예에서, n는 1이고, j는 1이고, k는 0이다. 특정 구체예에서, n는 1이고, j는 0이고, k는 1이다. 특정 구체예에서, n는 1이고, j는 1이고, k는 1이다. 특정 구체예에서, n는 2이고, j는 1이고, k는 0이다. 특정 구체예에서, n는 2이고, j는 0이고, k는 1이다. 특정 구체예에서, n는 2이고, j는 1이고, k는 1이다. 특정 구체예에서, n는 3이고, j는 1이고, k는 0이다. 특정 구체예에서, n는 3이고, j는 0이고, k는 1이다. 특정 구체예에서, n는 3이고, j는 1이고, k는 1이다.
콘쥬게이트 그룹은 본원에서 올리고뉴클레오티드와 같은 올리고머 화합물에 공유 결합을 형성하기 위한 결합을 제공하는, 라디칼 역할을 한다. 특정 구체예들에서, 상기 올리고머 화합물에 부착 지점은 3'-단부 뉴클레오시드 또는 변형된 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, 상기 올리고머 화합물에 부착 지점은 3' 단부 뉴클레오시드 또는 변형된 뉴클레오시드의 3'-히드록실 기의 3'-산소 원자다. 특정 구체예들에서, 상기 올리고머 화합물에 부착 지점은 5'-단부 뉴클레오시드 또는 변형된 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, 상기 올리고머 화합물에 부착 지점은 5' 단부 뉴클레오시드 또는 변형된 뉴클레오시드의 5'-히드록실 기의 5'-산소 원자다. 특정 구체예들에서, 상기 올리고머 화합물에 부착 지점은 뉴클레오시드, 변형된 뉴클레오시드 또는 뉴클레오시드간 링키지 상에 임의의 반응 부위다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, "절단가능한 모이어티(cleavable moiety)" 및 "절단가능한 결합(cleavable bond)"은 특정 생리학적 조건 하에서 절단가능한 결합 또는 절단되는 또는 쪼개지는 원자 군을 의미한다. 특정 구체예들에서, 절단가능한 모이어티는 절단가능한 결합이다. 특정 구체예들에서, 절단가능한 모이어티는 절단가능한 결합을 포함한다. 특정 구체예들에서, 절단가능한 모이어티는 원자 군이다. 특정 구체예들에서, 절단가능한 모이어티는 세포 또는 세포-하부 구획, 이를 테면, 리소좀 내부에서 선택적으로 절단된다. 특정 구체예에서, 절단가능한 모이어티는 내인성 효소, 가령, 뉴클레아제에 의해 선택적으로 절단된다. 특정 구체예들에서, 절단가능한 모이어티는 1, 2, 3, 4, 또는 4개 이상의 절단가능한 결합을 갖는 원자 그룹을 포함한다.
특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹은 절단가능한 모이어티를 포함한다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 상기 올리고머 화합물을 상기 콘쥬게이트 링커에 공유적으로 부착시킨다. 이러한 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 상기 올리고머 화합물을 세포-표적으로 하는 모이어티에 공유적으로 부착시킨다.
특정 구체예에서, 절단가능한 결합은 다음 중에서 선택된다: 아미드, 폴리아미드, 에스테르, 에테르, 포스포디에스테르의 하나 또는 두 개의 에스테르, 포스페이트 에스테르, 카르바메이트, 디-설파이드, 또는 펩티드. 특정 구체예에서, 절단가능한 결합은 포스포디에스테르중 하나이다. 특정 구체예에서, 절단가능한 결합은 포스포디에스테르의 하나 또는 두 개의 에스테르이다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 상기 콘쥬게이트 그룹의 나머지 사이에 포스포디에스테르 링키지다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 올리고머 화합물과 상기 콘쥬게이트 그룹의 나머지 사이에 위치한 포스포디에스테르 링키지를 포함한다. 특정 구체예에서, 절단가능한 모이어티는 포스페이트 또는 포스포디에스테르를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스포디에스테르 또는 포스포로티오에이트 링키지에 의해 콘쥬게이트 링커에 부착된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스포디에스테르 링키지에 의해 콘쥬게이트 링커에 부착된다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 그룹은 절단가능한 모이어티를 포함하지 않는다.
특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 절단가능한 뉴클레오시드 또는 변형된 뉴클레오시드이다. 특정 구체예들에서, 상기 뉴클레오시드 또는 변형된 뉴클레오시드는 퓨린, 치환된 퓨린, 피리미딘 또는 치환된 피리미딘 중에서 선택된 임의로 보호된 헤테로사이클릭 염기를 포함한다. 특정 구체예에서, 절단가능한 모이어티는 우라실, 티민, 시토신, 4-N-벤조일시토신, 5-메틸시토신, 4-N-벤조일-5-메틸시토신, 아데닌, 6-N-벤조일아데닌, 구아닌 및 2-N-이소부티릴구아닌 중에서 선택된 뉴클레오시드이다.
특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 올리고머 화합물의 3' 또는 5'-단부 뉴클레오시드에 포스포디에스테르 링키지에 의해 부착되고, 그리고 상기 콘쥬게이트 그룹의 나머지에 포스포디에스테르 또는 포스포로티오에이트 링키지를 통하여 공유적으로 부착된 2'-데옥시 뉴클레오시드다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 올리고머 화합물의 3' 또는 5'-단부 아데노신에 포스포디에스테르 링키지에 의해 부착되고, 그리고 상기 콘쥬게이트 그룹의 나머지에 포스포디에스테르 또는 포스포로티오에이트 링키지를 통하여 공유적으로 부착된 2'-데옥시 뉴클레오시드다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 3'-단부 뉴클레오시드 또는 변형된 뉴클레오시드의 3'-히드록실 기의 3'-산소 원자에 포스포디에스테르 링키지를 통하여 부착된 2'-데옥시 아데노신이다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 5'-단부 뉴클레오시드 또는 변형된 뉴클레오시드의 5'-히드록실 기의 5'-산소 원자에 포스포디에스테르 링키지를 통하여 부착된 2'-데옥시 아데노신이다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 올리고머 화합물의 뉴클레오시드 또는 변형된 뉴클레오시드의 2' 위치에 부착된다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, 콘쥬게이트 그룹 맥락에서 "콘쥬게이트 링커(conjugate linker)"란 직접적적으로 또는 상기 절단가능한 모이어티를 통하여 상기 올리고머 화합물에 세포-표적 모이어티를 공유적으로 연계시키는 임의의 원자 또는 원자 군이 포함된 콘쥬게이트 그룹의 일부분을 의미한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 링커는 알킬, 아미노, 옥소, 아미드, 디설파이드, 폴리에틸렌 글리콜, 에테르, 티오에테르 (-S-) 및 히드록실아미노 (-O-N(H)-)로부터 선택된 그룹을 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 링커는 알킬, 아미노, 옥소, 아미드 및 에테르 기 중에서 선택된 기를 포함한다. 특정 구체예에서, 콘쥬게이트 링커는 알킬 및 아미드 기 중에서 선택된 기를 포함한다. 특정 구체예에서, 콘쥬게이트 링커는 알킬 및 에테르 기 중에서 선택된 기를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 링커는 최소한 하나의 인 연계 기를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 링커는 최소한 하나의 포스포디에스테르 기를 포함한다. 특정 구체예에서, 콘쥬게이트 링커는 적어도 하나의 중성 연결기를 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 링커는 상기 올리고머 화합물에 공유적으로 부착된다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 링커는 상기 올리고머 화합물와 분지(branching) 기에 공유적으로 부착된다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 링커는 상기 올리고머 화합물 및 테터화된(tethered) 리간드에 공유적으로 부착된다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 링커는 상기 절단가능한 모이어티에 공유적으로 부착된다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 링커는 상기 절단가능한 모이어티와 분지 기에 공유적으로 부착된다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 링커는 상기 절단가능한 모이어티와 테터화된 리간드에 공유적으로 부착된다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 링커는 하나 또는 그 이상의 절단가능한 결합을 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 그룹은 콘쥬게이트 링커를 포함하지 않는다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, "분지(branching) 기"란 2개 또는 그 이상의 테터-리간드와 콘쥬게이트 구룹의 나머지에 공유 링키지를 형성할 수 있는 최소한 3개 위치를 갖는 그룹을 말한다. 일반적으로, 분지 기는 상기 콘쥬게이트 링커 및/또는 상기 절단가능한 모이어티를 통하여 올리고머 화합물에 테터드화된 리간드를 연결시키는 다수의 반응성 부위를 제공한다. 특정 구체예들에서, 상기 분지 기는 알킬, 아미노, 옥소, 아미드, 디설파이드, 폴리에틸렌 글리콜, 에테르, 티오에테르 및 히드록실아미노 기로부터 선택된 기를 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 분지 기는 알킬, 아미노, 옥소, 아미드, 디설파이드, 폴리에틸렌 글리콜, 에테르, 티오에테르 및 하이드록실아미노 기 중에서 선택된 기를 포함하는 분지형 지방족 기를 포함한다. 이러한 특정 구체예에서, 분지형 지방족 기는 알킬, 아미노, 옥소, 아미드 및 에테르 기 중에서 선택된 기를 포함한다. 이러한 특정 구체예들에서, 분지형 지방족 기는 알킬, 아미노 및 에테르 기 중에서 선택된 기를 포함한다. 이러한 특정 구체예들에서, 분지형 지방족 기는 알킬 및 에테르 기 중에서 선택된 기를 포함한다. 특정 구체예들에서, 분지 기는 모노 또는 폴리사이클릭 고리 시스템을 포함한다.
특정 구체예들에서, 상기 분지 기는 상기 콘쥬게이트 링커에 공유적으로 부착된다. 특정 구체예들에서, 상기 분지 기는 상기 절단가능한 모이어티에 공유적으로 부착된다. 특정 구체예들에서, 상기 분지 기는 상기 콘쥬게이트 링커와 각 테터화된 리간드에 공유적으로 부착된다. 특정 구체예들에서, 상기 분지 기는 하나 또는 그 이상의 절단가능한 결합을 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 콘쥬게이트 그룹은 분지 기를 포함하지 않는다.
특정 구체예들에서, 본 명세서에서 제공된 콘쥬게이트 그룹은 최소한 하나의 테터화된 리간드를 갖는 세포-표적 모이어티를 포함한다. 특정 구체예들에서, 세포-표적화 모이어티는 분지 기에 공유적으로 부착된 두 개의 테터화된 리간드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 세포-표적화 모이어티는 분지 기에 공유적으로 부착된 세 개의 테터화된 리간드를 포함한다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, "테터(tether)"란 상기 콘쥬게이트 그룹의 나머지에 리간드를 연결시키는 원자 기를 말한다. 특정 구체예들에서, 각 테터는 알킬, 치환된 알킬, 에테르, 티오에테르, 디설파이드, 아미노, 옥소, 아미드, 포스포디에스테르 및 폴리에틸렌 글리콜 기로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 기들이 임의의 조합으로 포함된 선형 지방족 기다. 특정 구체예에서, 각각 테터는 알킬, 에테르, 티오에테르, 디설파이드, 아미노, 옥소, 아미드, 및 폴리에틸렌 글리콜 중에서 선택된 하나 이상의 기를, 임의의 조합으로 포함하는 선형 지방족 기이다. 특정 구체예들에서, 각 테터는 알킬, 치환된 알킬, 포스포디에스테르, 에테르 및 아미노, 옥소, 아미드 기로부터 선택된 하나 이상의 기를, 임의의 조합으로 포함하는 선형 지방족 기이다. 특정 구체예들에서, 각 테터는 알킬, 에테르 및 아미노, 옥소, 아미드 기로부터 선택된 하나 이상의 기를, 임의의 조합으로 포함하는 선형 지방족 기이다. 특정 구체예들에서, 각 테터는 알킬, 아미노, 및 옥소 기중에서 선택된 하나 이상의 기를, 임의의 조합으로 포함하는 선형 지방족 기이다. 특정 구체예들에서, 각 테터는 알킬, 및 옥소 기중에서 선택된 하나 이상의 기를, 임의의 조합으로 포함하는 선형 지방족 기이다. 특정 구체예들에서, 각 테터는 알킬 및 포스포디에스테르 중에서 선택된 하나 이상의 기를, 임의의 조합으로 포함하는 선형 지방족 기이다. 특정 구체예들에서, 각 테터는 적어도 하나의 인 연결기 또는 중성 연결기를 포함한다.
특정 구체예들에서, 테터는 하나 또는 그 이상의 절단가능한 결합을 포함한다. 특정 구체예들에서, 각 테터화된 리간드는 분지 기에 부착된다. 특정 구체예들에서, 각 테터화된 리간드는 아미드 기를 통하여 분지 기에 부착된다. 특정 구체예들에서, 각 테터화된 리간드는 에테르 기를 통하여 분지 기에 부착된다. 특정 구체예들에서, 각 테터화된 리간드는 인 연계 기 또는 중성 연계 기를 통하여 분지 기에 부착된다. 특정 구체예들에서, 각 테터화된 리간드는 포스포디에스테르 기를 통하여 분지 기에 부착된다. 특정 구체예들에서, 각 테터는 아미드 또는 에테르 기를 통하여 리간드에 부착된다. 특정 구체예들에서, 각 테터는 에테르 기를 통하여 리간드에 부착된다.
특정 구체예들에서, 각 테터는 리간드와 상기 분지 기 사이에 사슬 길이가 약 8 내지 20개 원자를 포함한다. 특정 구체예들에서, 각 테터는 리간드와 상기 분지 기 사이에 사슬 길이가 약 10 내지 18개 원자를 포함한다. 특정 구체예에서, 각각의 테터는 사슬 길이 내에 약 13개의 사슬 길이의 원자를 포함한다.
특정 구체예들에서, 본 명세서는 리간드를 제공하는데, 이때, 각 리간드는 테터를 통하여 상기 콘쥬게이트 그룹의 나머지에 공유적으로 부착된다. 특정 구체예들에서, 각 리간드는 표적 세포 상에서 최소한 하나의 유형의 수용체에 대한 친화력을 갖는 것으로 선택된다. 특정 구체예들에서, 리간드는 포유류의 간세포 표면 상에서 최소한 하나의 유형의 수용체에 대한 친화성을 가지는 것으로 선택된다. 특정 구체예들에서, 리간드는 간의 아시알로당단백질 수용체(ASGP-R)에 대한 친화성을 갖는 것으로 선택된다. 특정 구체예들에서, 각 리간드는 탄수화물이다. 특정 구체예들에서, 각 리간드는 갈락토스, N-아세틸 갈락토사민, 만노스, 글루코스, 글루코사민 및 푸코스 중에서 독립적으로 선택된다. 특정 구체예에서, 각각의 리간드는 N-아세틸 갈락토사민(GalNAc)이다. 특정 구체예들에서, 상기 표적화 모이어티는 1 내지 3개 리간드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 표적화 모이어티는 3개 리간드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 표적화 모이어티는 2개 리간드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 표적화 모이어티는 1개 리간드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 표적화 모이어티는 3개의 N-아세틸 갈락토사민 리간드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 표적화 모이어티는 2개의 N-아세틸 갈락토사민 리간드를 포함한다. 특정 구체예들에서, 상기 표적화 모이어티는 1개의 N-아세틸 갈락토사민 리간드를 포함한다.
특정 구체예들에서, 각 리간드는 탄수화물, 탄수화물 유도체, 변형된 탄수화물, 다가(multivalent) 탄수화물 클러스트, 다당류, 변형된 다당류, 또는 다당류 유도체다. 특정 구체예들에서, 각 리간드는 아미노 당 또는 티오 당이다. 예를 들면, 아미노 당은 당분야에 공지된 임의의 다수의 화합물, 예를 들면 글루코사민, 시알산, α-D-갈락토사민, N-아세틸갈락토사민, 2-아세토아미도-2-데옥시-D-갈락토피라노즈 (GalNAc), 2-아미노-3-O-[(R)-1-카르복시에틸]-2-데옥시-β-D-글루코피라노즈 (β-무람산), 2-데옥시-2-메틸아미노-L-글루코피라노즈, 4,6-디데옥시-4-포름아미도-2,3-디-O-메틸-D-만노피라노즈, 2-데옥시-2-술포아미노-D-글루코피라노즈 및 N-술포-D-글루코사민, 그리고 N-글리콜오일-α-뉴라민산으로부터 선택될 수 있다. 예를 들면, 티오 당은 5-티오-β-D-글루코피라노즈, 메틸 2,3,4-트리-O-아세틸-1-티오-6-O-트리틸-α-D-글루코파라노시드, 4-티오-β-D-갈락토피라노즈, 및 에틸 3,4,6,7-테트라-O-아세틸-2-데옥시-1,5-디티오-α-D-글루코-헵토파라노시드로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 명세서에서 제공되는 콘쥬게이트 그룹은 탄수화물 클러스트를 포함한다. 본 발명에서 사용된 바와 같이, "탄수화물 클러스트(carbohydrate cluster)"란 콘쥬게이트 그룹의 일부분을 의미하며, 이때, 2개 또는 그 이상의 탄수화물 잔기는 테터 기를 통하여 분지기에 부착된다. (가령, Maier et al., "Synthesis of Antisense Oligonucleotides Conjugated to a Multivalent Carbohydrate Cluster for Cellular Targeting," Bioconjugate Chemistry, 2003, (14): 18-29 참고, 이는 전문이 참고자료에 편입됨, 또는 Rensen et al., "Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asiaglycoprotein Receptor," J. Med. Chem. 2004, (47): 5798-5808, for examples of carbohydrate conjugate clusters 참고).
본 발명에서 사용된 바와 같이, "변형된 탄수화물"이란 자연적으로 발생하는 탄수화물과 비교하여, 하나 이상의 화학적 변형을 갖는 임의의 탄수화물을 의미한다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, "탄수화물 유도체"는 탄수화물을 출발 물질 또는 중간생성물(intermediate)로 사용하여 합성될 수 있는 임의의 화합물을 의미한다.
본 발명에서 사용된 바와 같이, "탄수화물"은 자연적으로 발생하는 탄수화물, 변형된 탄수화물 또는 탄수화물 유도체를 의미한다.
특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹이 제공되는데, 이때, 세포-표적화 모이어티는 다음 구조식을 갖는다:
특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹이 제공되는데, 이때, 세포-표적화 모이어티는 다음 구조식을 갖는다:
특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹이 제공되는데, 이때, 세포-표적화 모이어티는 다음 구조식을 갖는다:
특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹은 다음 구조식을 갖는다:
.
특정 구체예들에서, 상기 구조식에 나타낸 콘쥬게이트 그룹에 연계된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 서열 번호: 1914의 핵염기 서열을 갖는다.
상기 표시된 콘쥬게이트 그룹, 콘쥬게이트화된 올리고머 화합물, 이를 테면, 콘쥬게이트 그룹, 테터, 콘쥬게이트 링커들, 분지 기, 리간드, 절단가능한 모이어티 뿐만 아니라 다른 변형을 포함하는 안티센스 화합물의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허, 미국 특허 출원 공개, 및 국제 특허 출원은 US 5,994,517, US 6,300,319, US 6,660,720, US 6,906,182, US 7,262,177, US 7,491,805, US 8,106,022, US 7,723,509, US 2006/0148740, US 2011/0123520, WO 2013/033230, WO 2014/179620 및 WO 2012/037254을 포함하나, 이에 국한되지 않으며, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로서 포함된다.
상기 언급된 콘쥬게이트 그룹, 콘쥬게이트화된 올리고머 화합물, 이를 테면, 콘쥬게이트 그룹, 테터, 콘쥬게이트 링커들, 분지 기, 리간드, 절단가능한 모이어티 뿐만 아니라 다른 변형이 포함된 안티센스 화합물의 제조를 교시하는 대표적인 공개는 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다:BIESSEN et al., "The Cholesterol Derivative of a Triantennary Galactoside with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor: a Potent Cholesterol Lowering Agent" J. Med. Chem. (1995) 38:1846-1852, BIESSEN et al., "Synthesis of Cluster Galactosides with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor" J. Med. Chem. (1995) 38:1538-1546, LEE et al., "New and more efficient multivalent glyco-ligands for asialoglycoprotein receptor of mammalian hepatocytes" Bioorganic & Medicinal Chemistry (2011) 19:2494-2500, RENSEN et al., "Determination of the Upper Size Limit for Uptake and Processing of Ligands by the Asialoglycoprotein Receptor on Hepatocytes in Vitro and in Vivo" J. Biol. Chem. (2001) 276(40):37577-37584, RENSEN et al., "Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor" J. Med. Chem. (2004) 47:5798-5808, SLIEDREGT et al., "Design and Synthesis of Novel Amphiphilic Dendritic Galactosides for Selective Targeting of Liposomes to the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor" J. Med. Chem. (1999) 42:609-618, 그리고 Valentijn et al., "Solid-phase synthesis of lysine-based cluster galactosides with high affinity for the Asialoglycoprotein Receptor" Tetrahedron, 1997, 53(2), 759-770 참고, 이들 각각은 그 전체가 본 명세서에 참고로서 포함된다.
특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹은 삽입체, 리포터 분자, 폴리아민, 폴리아미드, 폴리에틸렌 글리콜, 티오에테르, 폴리에테르, 콜레스테롤, 티오콜레스테롤, 콜산 모이어티, 폴레이트, 지질, 인지질, 비오틴, 페나진, 페난트리딘, 안트라퀴논, 아다만탄, 아크리딘, 플루오레세인, 로다민, 쿠마린, 형광단, 및 염료를 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 특정 콘쥬게이트 그룹은 기존에, 예를 들면: 콜레스테롤 모이어티(Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556), 콜산(Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053-1060), 티오에테르, 예컨대, 헥실-S-트리틸티올(Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765-2770), 티오콜레스테롤(Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538), 지방족 사슬, 예컨대, 도-데칸-디올 또는 운데실 잔기(Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54), 인지질, 예컨대, 디-헥사데실-락-글리세롤 또는 트리에칠-암모늄 1,2-디-O-헥사데실-락-글리세로-3-H-포스포네이트(Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 사슬(Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973), 또는 아다만탄 아세트산(Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), 팔미틸 모이어티(Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237), 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카르보닐-옥시콜레스테롤 모이어티(Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937)에 기술된 바 있다.
특정 구체예에서, 콘쥬게이트 그룹은 활성 약물 물질, 예를 들면, 아스피린, 와파린, 페닐부타존, 이부프로펜, 수프로펜, 펜-부펜, 케토프로펜, (S)-(+)-프라노프로펜, 카프로펜, 단실사르코신, 2,3,5-트리아이오도벤조산, 플루페남산, 폴린산, 벤조티아디아지드, 클로로티아지드, 디아제핀, 인도-메티신, 바비투레이트, 세팔로스포린, 설파제, 항당뇨제, 항균제 또는 항생제를 포함한다.
콘쥬게이트 링커들의 일부 비-제한적인 예로는 피롤리딘, 8-아미노-3,6-디옥사옥탄산(ADO), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC) 및 6-아미노헥산산(AHEX 또는 AHA)을 포함한다. 다른 콘쥬게이트 링커는 치환된 C1-C10 알킬, 치환되거나 미치환된 C2-C10 알케닐 또는 치환되거나 미치환된 C2-C10 알키닐을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며, 여기서 바람직한 치환 기의 비제한적인 목록은 하이드록실, 아미노, 알콕시, 카르복시, 벤질, 페닐, 니트로, 티올, 티오알콕시, 할로겐, 알킬, 아릴, 알케닐 및 알키닐을 포함한다.
콘쥬게이트 그룹은 올리고뉴클레오티드 (단부 콘쥬게이트 그룹)의 한쪽 또는 양쪽 말단 및/또는 임의의 내부 위치에 부착될 수 있다.
특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹은 올리고머 화합물의 올리고뉴클레오티드의 3'-말단 근처에 있다. 특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹은 3'-말단 근처에 있다. 특정 구체예들에서, 콘쥬게이트는 올리고머 화합물의 3' 말단에, 그러나 하나 또는 그 이상의 단부 기 뉴클레오시드 앞에 부착된다. 특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹은 단부 기 안에 위치한다.
특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹은 올리고머 화합물의 올리고뉴클레오티드의 5'-말단 근처에 있다. 특정 구체예들에서, 콘쥬게이트 그룹은 5'-말단 근처에 있다.
특정 구체예에서, 본 명세서에 기술된 AGT를 표적으로 하는 변형된 올리고뉴클레오티드는 GalNAc 콘쥬게이트 그룹을 더욱 포함한다. 특정 구체예들에서, GalNAc 콘쥬게이트 그룹은 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3이다. 특정 구체예들에서, 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트는 다음 구조식을 갖는다.
특정 구체예들에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 절단가능한 모이어티를 통하여 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 콘쥬게이트에 연계된다. 특정 구체예들에서, 상기 절단가능한 모이어티는 포스페이트 기이다.
세포 배양 및 안티센스 화합물 치료
AGT 핵산의 수준, 활성 또는 발현에 대한 안티센스 화합물의 효과는 시험관내 다양한 세포 유형으로 시험할 수 있다. 이러한 분석에 이용되는 세포 유형은 상업적 공급업자(가령, American Type Culture Collection, Manassas, VA; Zen-Bio, Inc., Research Triangle Park, NC; Clonetics Corporation, Walkersville, MD)에서 이용가능하며, 세포는 상업적으로 이용가능한 시약들 (가령, Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA)을 이용하여 공급업자의 지시에 따라 배양된다. 예시적인 세포 유형은 HepG2 세포, Hep3B 세포, Huh7 (간세포 암종) 세포, 일차 간세포, A549 세포, GM04281 섬유아세포 및 LLC-MK2 세포를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
시험관내 안티센스 올리고뉴클레오티드 테스트
세포를 안티센스 올리고뉴클레오티드로 치료하는 방법이 본 발명에서 기술되는데, 이때, 다른 안티센스 화합물을 이용한 치료에는 이들은 적절하게 변형될 수 있다.
일반적으로, 세포가 배양에서 대략 60-80 %의 합류에 도달하면 세포를 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리한다.
배양된 세포로 안티센스 올리고뉴클레오티드를 도입하는데 흔히 이용되는 한 가지 시약은 양이온 지질 형질감염 시약 LIPOFECTIN® (Invitrogen, Carlsbad, CA)을 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 OPTI-MEM® 1 (Invitrogen, Carlsbad, CA)에서 LIPOFECTIN®와 혼합되어, 원하는 최종 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드와 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드 당 2 내지 12 ug/mL의 전형적인 범위의 LIPOFECTIN® 농도를 얻는다.
배양된 세포로 안티센스 올리고뉴클레오티드를 도입하는데 이용되는 또다른 시약은 LIPOFECTAMINE 2000® (Invitrogen, Carlsbad, CA)를 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 OPTI-MEM® 1 감소된 혈청 배지(Invitrogen, Carlsbad, CA)에서 LIPOFECTAMINE 2000®와 혼합되어, 원하는 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드와 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드 당 2 내지 12 ug/mL의 전형적인 범위의 LIPOFECTAMINE® 농도를 얻는다.
배양된 세포로 안티센스 올리고뉴클레오티드를 도입하는데 이용되는 또다른 시약은 Cytofectin® (Invitrogen, Carlsbad, CA)를 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 OPTI-MEM® 1 감소된 혈청 배지(Invitrogen, Carlsbad, CA)에서 Cytofectin® 와 혼합되어, 원하는 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드와 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드 당 2 내지 12 ug/mL의 전형적인 범위의 Cytofectin® 농도를 얻는다.
배양된 세포로 안티센스 올리고뉴클레오티드를 도입하는데 이용되는 또다른 시약은 Oligofectamine™ (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA)를 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 Opti-MEM™-1 감소된 혈청 배지(Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA)에서 Oligofectamine™ 와 혼합되어, 100 nM 올리고뉴클레오티드에 있어서 대략적으로 0.2 내지 0.8 μL의 Oligofectamine™의 비율을 갖는, 원하는 올리고뉴클레오티드 농도를 얻는다.
배양된 세포로 안티센스 올리고뉴클레오티드를 도입하는데 이용되는 또다른 시약은 FuGENE 6 (Roche Diagnostics Corp., Indianapolis, IN)을 포함한다. 안티센스 올리고머 화합물은 1 mL의 무-혈청 RPMI에서 FuGENE 6와 혼합되어, 100 nM 당 대략적으로 1 내지 4 μL의 FuGENE 6 대 올리고뉴클레오티드 비율을 갖는, 원하는 올리고뉴클레오티드 농도를 얻는다.
배양된 세포로 안티센스 올리고뉴클레오티드를 도입하는데 이용되는 또다른 기술은 전기천공 (Sambrook and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001)을 포함한다.
통상적인 방법으로 세포는 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리된다. 전형적으로, 세포는 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리 후 16 내지 24 시간에 수확되며, 이 시점에서 표적 핵산의 RNA 또는 단백질 수준은 당업계에 공지된 방법 및 본 명세서에 기술된 방법에 의해 측정된다(Sambrook and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001). 일반적으로 치료가 여러 번의 반복으로 수행되는 경우, 데이터는 반복 치료의 평균으로 표시된다.
이용되는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 농도는 세포 계통마다 다양하다. 특정 세포계통에 대한 최적의 안티센스 올리고뉴클레오티드 농도를 결정하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다(Sambrook and Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001). 안티센스 올리고뉴클레오티드는 LIPOFECTAMINE2000®, Lipofectin 또는 Cytofectin으로 형질감염될 때, 1 nM 내지 300 nM 범위의 농도에서 전형적으로 이용된다. 전기천공을 이용하여 형질감염될 때, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 625 내지 20,000 nM의 좀더 높은 농도로 이용된다.
RNA 단리
RNA 분석은 전체 세포 RNA 또는 poly(A)+ mRNA에서 수행할 수 있다. RNA 단리 방법은 당업계에 잘 알려져있다(Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed., 2001). RNA는 예를 들면, TRIZOL® 시약(Invitrogen, Carlsbad, CA) 을 이용하여 제조업자가 권장하는 프로토콜에 따라 당분야에 공지된 방법으로 준비된다.
표적 수준 또는 발현 억제 분석
AGT 핵산의 수준 또는 발현의 저해는 당업계에 공지된 다양한 방법으로 분석할 수 있다(Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed., 2001). 예를 들면, 표적 핵산 수준은 예를 들어 노던(Northern) 블롯 분석, 경쟁적 중합 효소 연쇄 반응 (PCR) 또는 정량적 실시간 PCR에 의해 정량화될 수 있다. RNA 분석은 전체 세포 RNA 또는 poly(A)+ mRNA에서 수행할 수 있다. RNA 단리 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 노던 블롯 분석 또한 당업계에서 일상적이다. 정량적 실시간 PCR은 상업적으로 이용가능한 ABI PRISM® 7600, 7700, 또는 7900 서열 탐지 시스템(PE-Applied Biosystems, Foster City, CA)을 이용하여 제작자의 지침에 따라 실행되고, 이용될 수 있다.
표적 RNA 수준의 정량적 실시간 PCR 분석
표적 RNA 수준의 정량화는 ABI PRISM® 7600, 7700, 또는 7900 서열 탐지 시스템 (PE-Applied Biosystems, Foster City, CA)을 이용하여 제작자의 지침에 따라 정량적 실시간 PCR에 의해 실행될 수 있다. 정량적 실시간 PCR의 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
실시간 PCR에 앞서, 단리된 RNA는 역전사 효소 (RT) 반응을 거치고, 이에 의해 실시간 PCR 증폭을 위한 기질로 사용되는 상보형 DNA (cDNA)가 생산된다. RT 및 실시간 PCR 반응은 동일한 시료 웰에서 순차적으로 수행된다. RT 및 실시간 PCR 시약은 Invitrogen (Carlsbad, CA)으로부터 구한다. RT, 실시간 PCR 반응은 당업자에게 공지된 방법에 의해 수행된다.
실시간 PCR에 의해 획득된 유전자 (또는 RNA) 표적 양은 유전자의 발현이 일정한, 이를 테면, 시클로필린 A의 발현 수준을 이용하여 표준화되거나, 또는 RIBOGREEN® (Invitrogen, Inc. Carlsbad, CA)을 이용하여 총 RNA를 정량화함으로써 표준화된다. 시클로필린 A 발현은 실시간 PCR에 의해 표적과 동시에 실행되거나, 다중화되거나 또는 개별적으로 정량된다. 총 RNA는 RIBOGREEN® RNA 정량화 시약 (Invitrogen, Inc. Eugene, OR)을 이용하여 정량화된다. RIBOGREEN®에 의한 RNA 정량화 방법은 Jones, L.J., et al, (Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374)에 교시된다. CYTOFLUOR® 4000 기구 (PE Applied Biosystems)를 이용하여 RIBOGREEN® 형광을 측정한다.
프로브와 프라이머는 AGT 핵산에 혼성화하도록 기획된다 . 실시간 PCR 프로브 및 프라이머를 디자인하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 소프트웨어, 이를 테면, 프라이머 EXPRESS® Software (Applied Biosystems, Foster City, CA)를 이용하는 것이 포함될 수 있다.
단백질 수준 분석
AGT 핵산의 안티센스 저해는 AGT 단백질 수준을 측정함으로써 평가할 수 있다. AGT의 단백질 수준은 면역침강법, 웨스턴 블랏 분석 (면역블랏팅), 효소 연계된 면역흡착 분석법 (ELISA), 정량적 단백질 분석법, 단백질 활성 분석법 (예를 들어, 카스파제 활성 분석법), 면역조직화학, 면역세포화학 또는 형광-활성화된 세포 분류(FACS)와 같은 당업계에 널리 공지된 다양한 방법으로 평가되거나 정량화 될 수 있다 (Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed., 2001). 표적에 대한 항체는 다양한 상업적으로 이용가능한 공급원으로부터 확인되고, 얻어질 수 있거나, 또는 당업계에 공지된 통상적인 단클론 항체 또는 폴리클론 항체 생성 방법을 통해 제조될 수 있다.
안티센스 화합물의 생체내 테스트
동물에서 AGT의 발현을 억제하고, 신체의 감소된 고혈압과 같은 표현형 변화를 일으키는 능력을 평가하기 위해 안티센스 화합물, 예를 들면, 안티센스 올리고뉴클레오티드를 시험한다. 테스트는 정상적인 동물, 또는 실험적인 질병 모델에서 수행될 수 있다. 동물에게 투여하기 위하여, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 약학적으로 수용가능한 희석제, 이를 테면, 주입용 무균수 또는 포스페이트-완충된 염수에서 제형화된다. 투여는 복강 내, 정맥 내 및 피하와 같은 비경구 투여 경로를 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오티드 투여량 및 투여 빈도의 계산은 투여 경로 및 동물 체중과 같은 인자들에 따라 달라진다. 한 구체예에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리한 후, 간 조직으로부터 RNA를 분리하고, AGT 핵산 발현의 변화를 측정한다. AGT 단백질 수준의 변화를 직접 측정할 수 있다. AGT 발현의 변화는 RAAS 경로의 억제 수준을 측정하여 측정할 수 있다. RAAS 경로 관련 질환, 장애 및/또는 상태는 AGT 억제 수준을 결정하는 지표로서 사용될 수 있다.
특정 조짐(Indications)
본 발명의 특정 구체예들는 AGT 수준을 감소시키기 위한 화합물, 조성물 및 화합물 및 조성물의 사용 방법을 제공한다. 특정 구체예들에서, 본 발명은 화합물, 조성물 그리고 치료요법적 유효량의 화합물 또는 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 화합물 및 화합물을 사용하여 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 특정 구체예들에서, 상기 대상은 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 또는 상태를 가지거나, 또는 이의 위험에 처해있다. 특정 구체예들에서, 상기 화합물 또는 조성물은 안티센스 화합물을 포함한다.
특정 구체예들에서, 치료요법적으로 유효량의 AGT 핵산을 표적으로 하는 안티센스 화합물 투여는 상기 안티센스 화합물에 대한 대상의 반응을 결정하기 위하여 대상의 혈청 또는 조직에서 AGT 수준의 모니터를 수반한다. 상기 안티센스 화합물의 투여에 대한 대상의 반응은 치료 중개 기간 및 그 양을 결정하는데 사용될 수 있다.
특정 구체예들에서, AGT 핵산을 표적으로 하는 안티센스 화합물의 투여는 최소한 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99% 또는 100% 또는 이들 값중 임의의 두 개에 의해 한정되는 범위로 AGT 발현 감소를 초래한다. 특정 구체예들에서, AGT 핵산을 표적으로 하는 안티센스 화합물의 투여는 최소한 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99% 또는 100% 또는 이들 값중 임의의 두 개에 의해 한정되는 범위로 RAAS 경로 억제를 초래한다. 특정 구체예들에서, AGT 핵산을 표적으로 하는 안티센스 화합물의 투여는 RAAS 경로 관련된 질환, 장애, 상태, 증상 또는 표지 (가령, 고혈압 또는 장기 손상)의 변화를 초래한다. 특정 구체예들에서, AGT 안티센스 화합물의 투여는 RAAS 관련된 질환, 장애, 상태, 증상 또는 표지를 최소한 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99% 또는 100% 또는 이들 값중 임의의 두 개에 의해 한정되는 범위로 증가 또는 감소시킨다.
특정 구체예들에서, AGT를 표적으로 하는 안테센스 화합물이 포함된 약학 조성물은 AGT 수준을 감소시키는 약물 제조에 이용된다. 특정 구체예들에서, AGT를 표적으로 하는 안테센스 화합물이 포함된 약학 조성물은 RAAS 관련된 질환, 장애 또는 상태를 앓는 또는 앓을 가능성이 있는 대상을 치료하기 위한 약물 제조에 이용된다.
특정 구체예들에서, 대상에서 AGT 수준 감소는 질환, 상태 또는 장애를 치료, 개선, 방지, 진행의 지연 또는 개시를 지연시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 질환, 상태 또는 장애는 수명 단축, 고혈압, 고혈압성 긴급증 (가령, 악성 고혈압), 신장 질환 (가령, 만성 신장 질환, 다낭성 신장 질환), 전-자간증, 마르판 증후군(Marfan Syndrome), 뇌졸중, 심장 질환 (가령, 심근경색, 심부전, 충혈성 심부전, 판막 심장 질환), 혈관의 동맥류, 배동맥자루(abdominal aneurysm), 말초 동맥 질환, 장기 손상, 폐 동맥 고혈압, 비만, 대사 증후군, 비-알코올성 지방간염 (NASH), 비-알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 및 RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태 또는 이의 증상들이다. 특정 구체예들에서, 고혈압은 비저항성 고혈압 또는 저항성 고혈압이다. 특정 구체예들에서, 혈관의 동맥류는 대동맥류이다. 특정 구체예들에서, 장기 손상은 장기 또는 조직에서 심장 근육 비대 또는 섬유증이다. 특정 구체예들에서, 장기는 심장, 간 또는 신장이며, 상기 조직은 심장, 간 또는 신장으로부터 유도된다.
특정 구체예들에서, 대상에서 AGT 수준 감소는 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 또는 상태를 치료, 개선, 방지, 진행의 지연 또는 개시를 지연시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 또는 상태 는 수명 단축, 고혈압, 고혈압성 긴급증 (가령, 악성 고혈압), 신장 질환 (가령, 만성 신장 질환, 다낭성 신장 질환), 전-자간증, 마르판 증후군, 뇌졸중, 심장 질환 (가령, 심근경색, 심부전, 충혈성 심부전, 판막 심장 질환), 혈관의 동맥류, 배동맥자루, 말초 동맥 질환, 장기 손상, 폐 동맥 고혈압, 비만, 대사 증후군, NASH, NAFLD 및 기타 RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태 또는 이의 증상들이다. 특정 구체예들에서, 고혈압은 비저항성 고혈압 또는 저항성 고혈압이다. 특정 구체예들에서, 혈관의 동맥류는 대동맥류이다. 특정 구체예들에서, 장기 손상은 장기 또는 조직에서 심장 근육 비대 또는 섬유증이다. 특정 구체예들에서, 장기는 심장, 간 또는 신장이며, 상기 조직은 심장, 간 또는 신장으로부터 유도된다.
특정 구체예들에서, 질환, 장애 및/또는 상태의 증상 또는 표지를 조절하는 화합물, 조성물 및 방법이 제공된다. 특정 구체예들에서, 상기 표지는 수명 단축, 고혈압, 고혈압성 긴급증 (가령, 악성 고혈압), 신장 질환 (가령, 만성 신장 질환, 다낭성 신장 질환), 전-자간증, 마르판 증후군, 뇌졸중, 심장 질환 (가령, 심근경색, 심부전, 충혈성 심부전, 판막 심장 질환), 혈관의 동맥류, 배동맥자루, 말초 동맥 질환, 장기 손상 및 기타 RAAS 관련된 질환, 장애 및/또는 상태 또는 이의 증상들중 하나 또는 그 이상으로부터 선택될 수 있다.
특정 조합 요법
특정 구체예들에서, 본 명세서에서 제공되는 안티센스 화합물이 포함된 제 1 물질은 하나 또는 그 이상의 제 2 물질과 공통-투여된다. 특정 구체예들에서, 상기 안티센스 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오티드이다. 특정 구체예들에서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드는 변형된 올리고뉴클레오티드이다.
특정 구체예들에서, 이러한 제 2 물질은 본 명세서에 기재된 제 1 물질과 동일한 RAAS 경로 관련된 질환, 장애 또는 상태를 치료하도록 고안된다. 특정 구체예들에서, 이러한 제 2 물질은 본 명세서에 기재된 제 1 물질과 상이한 질환, 장애 또는 상태를 치료하도록 고안된다. 특정 구체예들에서, 본 발명에서 기술된 바와 같이 이러한 제 2 물질은 하나 또는 그 이상의 약학 조성물의 바람직하지 못한 부작용을 치료하도록 기획된다. 특정 구체예들에서, 이러한 제 1 물질은 제 2 물질의 바람직하지 못한 부작용을 치료하도록 기획된다. 특정 구체예들에서, 제 2 물질은 제 1 물질의 바람직하지 못한 효과를 치료하기 위하여 제 1 물질과 공동-투여된다. 특정 구체예들에서, 제 2 물질은 제 1 물질과 함께 투여되어 복합 또는 부가 효과를 생성한다. 특정 구체예들에서, 제 2 물질은 제 1 물질과 함께 투여되어 공조 효과를 생성한다.
특정 구체예들에서, 제 1 물질과 제 2 물질의 공동 투여는 이 물질이 독립적 치료제로서 투여되는 경우 치료 효과 또는 예방 효과를 달성하는데 필요한 것보다 더 적은 투여량의 사용을 허용한다. 특정 구체예들에서, 동시 투여된 제 2 물질의 투여량은 제 2의 물질이 단독으로 투여되는 경우에 투여되는 투여량과 동일하다. 특정 구체예들에서, 동시 투여된 제 2 물질의 투여량은 제 2의 물질이 단독으로 투여되는 경우에 투여되는 투여량보다 더 많다.
특정 구체예들에서, 제 1 물질과 하나 또는 그 이상의 제 2 물질은 동시에 투여된다. 특정 구체예들에서, 제 1 물질과 하나 또는 그 이상의 제 2 물질은 상이한 시기에 투여된다. 특정 구체예들에서, 제 1 물질과 하나 또는 그 이상의 제 2 물질은 단일 약학 제제에서 함께 조제된다. 특정 구체예들에서, 제 1 물질과 하나 또는 그 이상의 제 2 물질은 별도로 조제된다.
특정 구체예들에서, 제 2 물질은 고혈압을 감소시키는 과정, 식이 변화, 생활방식 변화, 항-섬유증 약물 및 항-고혈압 약물, 이를 테면, RAAS 억제제, 엔도텔린 수용체 길항제, 네프릴리신 억제제, 이뇨제, 칼슘 채널 차단제, 아드레날린성 수용체 길항제, 아드레날린성 항진제 및 혈관확장제를 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
고혈압을 감소시킬 수 있는 과정의 예는 신장 신경제거 및 압력수용기활성화 요법을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
RAS 또는 RAAS 억제제의 예로는 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다: ACE 억제제 (가령, 캡토프릴, 에나라프릴(enalapril), 포시노프릴(fosinopril), 리시노프릴(lisinopril), 페린도프릴(perindopril), 퀴나프릴(quinapril), 라미프릴(ramipril), 트란도라프릴(trandolapril) 및 베나제프릴(benazepril)), 앤지오텐신 II 수용체 길항제 (가령, 칸데사르탄(candesartan), 에프로사르탄(eprosartan), 이르베사르탄(irbesartan), 로사르탄(losartan), 올메사르탄(olmesartan), 텔미사르탄(telmisartan) 및 발사르탄(valsartan))), 레닌 억제제 (가령, 아리스키렌(aliskiren)), 알도스테론 수용체 길항제 (가령, 에플레논(eplerenone), 스피로노락톤(spironolactone) 및 페네레논( finerenone)).
엔도텔린 수용체 길항제의 예로는 암브리센탄(ambrisentan), 시타센탄(sitaxentan), 아프라센탄(atrasentan), BQ-123, 지보텐탄(zibotentan), 보센탄(bosentan), 마씨텐탄(macitentan) 및 테조센탄(tezosentan)을 포함한다.
네프리리신(neprilysin) 억제제의 예로는 사쿠비트릴(sacubitril) 및 오마파트리라트(omapatrilat)를 포함한다.
이뇨제의 예로는 루프 이뇨제 (가령, 부메타니드(bumetanide), 에타크리닌산(ethacrynic acid), 푸로세미드(furosemide), 토르세미드(torsemide)), 티아지드(thiazide) 이뇨제 (가령, 에피티지드(epitizide), 히드로클로로티아지드(hydrochlorothiazide), 클로로티아지드(chlorothiazide) 및 벤드로플루메트티아지드(bendroflumethiazide)), 티아지드-유사 이뇨제 (가령, 인타파미드(indapamide), 클로로탈리돈(chlorthalidone) 및 메토라존(metolazone)) 및 칼슘-보존(sparing) 이뇨제 (가령, 아밀로리드(amiloride), 트리암테렌(triamterene) 및 시프로락톤(spironolactone))을 포함한다.
칼슘 채널 차단제의 예로는 디히드로피리딘 (가령, 암로디핀(amlodipine), 펠로디핀(felodipine), 이스라디핀(isradipine), 레프카니디핀(lercanidipine), 니카르디핀(nicardipine), 니페디핀(nifedipine), 니모디핀(nimodipine) 및 니트렌디핀(nitrendipine)) 및 비-디히드로피리딘 (가령, 디리티아젬(diltiazem) 및 베라파밀(verapamil))을 포함한다.
아드레날린성 수용체 길항제는 베타 차단제 (가령, 아테노롤(atenolol), 메토프로롤(metoprolol), 나돌롤(nadolol), 옥스페리노롤(oxprenolol), 핀돌롤(pindolol), 프로파노롤(propranolol) 및 티몰롤(timolol)), 알파 차단제 (가령, 독사조신(doxazosin), 펜토라민(phentolamine), 인도라민(indoramin), 페녹시벤자민(phenoxybenzamine), 프라조신(prazosin), 테라조신(terazosin) 및 토라졸린(tolazoline)) 그리고 알파 + 베타 혼합형 차단제 (가령, 부친돌롤(bucindolol), 카르베디롤(carvedilol) 및 라베탈롤(labetalol))을 포함한다.
혈관확장제의 예로는 니트로프루시드 나트륨(sodium nitroprusside) 및 히드랄라진(hydralazine) 및 이의 유도체들을 포함한다.
아드레날린성 항진제의 예로는알파-2 항진제 (가령, 클로니딘(clonidine), 구아나벤즈(guanabenz), 메틸도파(methyldopa) 및 목소니딘(moxonidine))을 포함한다.
추가적인 예시적인 항-고혈압 약물은 구아네티딘( guanethidine), 레세르핀(reserpine) 및 이와 유사한 것들을 포함한다.
제 2 물질은 질환, 장애 및/또는 상태, 이를 테면, 고혈압, 장기 손상 및 이와 유사한 것들을 감소시키기 위하여 본 명세서에서 기술된 치료요법 화합물과 복합 이용될 수 있다.
특정 화합물
인간에서 치료요법적 치료제로서의 그의 용도를 향상시키는 유익한 특성을 갖는 바람직한 안티센스 화합물은 본원의 실시예에서 입증된다. 간단히 하기 위해, 바람직한 안티센스 화합물의 선택에 기여한 연구들만이 설명된다. 참고의 용이성을 위하여 실시예들의 간단한 요약이 하기에 제시된다.
인간 AGT를 표적으로 하는 MOE 함유 및/또는 cEt 함유 갭머 모티프를 갖는 2000개 이상의 안티센스 화합물이 기획되었다. 실시예 1은 HepG2 세포에서 시험된 2000 개 이상의 강력한 안티센스 화합물의 인간 AGT mRNA에 대한 효과에 대한 대표적인 단일 용량 억제 데이터를 나타낸다.
HepG2 세포에서 최대 억제 농도의 절반(IC50) 을 결정하기 위해, 시험관내에서 단일 투여량으로 시험된 2000 개 이상의 안티센스 화합물 중에서 160 개 이상의 안티센스 화합물이 용량 의존적 억제 연구에서 시험용으로 선택되었다(실시예 2).
시험관내 투여량 반응 연구에 기초하여, 50개 이상의 안티센스 화합물은 실시예 3의 예시적인 연구에 기재된 바와 같이, 인간 AGT 유전자도입된(transgenic) (huAGT tg) 마우스에서 단일 용량 효능 및 내약성(tolerability) 시험용으로 선택되었다. 50 개 이상의 안티센스 화합물 중 huAGT tg 마우스에 대한 용량 반응 및 내약성 연구를 위해 약 14 개의 안티센스 화합물이 더 선택되었다(실시예 4).
huAGT 마우스에서 유의적인 효력 및 내성을 나타내는 9 개의 안티센스 화합물이 추가 연구용으로 선택되었다: 점성 측정분석(assay) (실시예 5); CD1 마우스(실시예 6)와 Sprague-Dawlay 렛에서에서 상기 안티센스 화합물의 내약성 평가 (실시예 7); 원숭이 간세포에서 원숭이 AGT 억제에 있어서 종간(cross-species) 효력을 테스트하기 위하여(실시예 8); 그리고 시노몰구스(cynomolgus) 원숭이에서 효력 및 내약성 평가 (실시예 9). 실시예 9에서 기술된 연구에서 상기 안티센스 화합물은 시노몰구스 원숭이에서 테스트되었지만, 시노몰구스 원숭이 AGT 서열은 상기 안티센스 화합물의 서열에 비교용으로 이용할 수 없었고, 따라서, 상기 안티센스 화합물의 서열들은 상당히 관련된 붉은털원숭이(rhesus monkey)의 것과 비교되었다 (실시예 8).
9개 안티센스 화합물의 방대한 특징에 근거하여, 안티센스 화합물 ISIS 654472 (부모계 화합물)의 서열은 추가 연구용으로 선택되었다 (실시예 10). 6 개의 안티센스 화합물은 부모계 화합물 ISIS의 서열 654472로 디자인되었지만, 화학적 변형이 다르며 GalNAc 접합체를 가지고 있다. 6 개의 새로 설계된 화합물을 CD1 마우스 (실시예 10) 및 Sprague-Dawley 렛 (실시예 11)에 투여하여, 이들 동물 모델에서의 내약성을 시험하였다. 6개 GalNAc 콘쥬게이트화된 안티센스 화합물중에서, 화합물 ISIS 757456은 부모계 안티센스 화합물 ISIS 654472와 비교하여 huAGT 마우스에서 테스트하기 위하여 선택되었다. ISIS 757456은 콘쥬게이트화안된 화합물 ISIS 654472와 비교하여 효능이 8배 개선되었다.
따라서, 치료제로서의 용도로 유익한 임의의 하나 이상의 특성을 갖는 안티센스 화합물이 본 명세서에 제공된다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 1-6중 임의의 것으로부터 선택된 뉴클레오티드 영역을 표적으로 하거나, 또는 특이적으로 혼성화되는 본 명세서에서 기술된 변형된 올리고뉴클레오티드가 포함된 안티센스 화합물이 제공된다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 기술된 바와 같이 특정 안티센스 화합물은 AGT 발현 억제에 이들의 효능에 비추어 효과적이다. 특정 구체예들에서, 상기 화합물 또는 조성물은 최소한 40%, 최소한 45%, 최소한 50%, 최소한 55%, 최소한 60%, 최소한 65%, 최소한 70%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 90% 또는 최소한 95% AGT를 억제한다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 기술된 바와 같은 특정 안티센스 화합물은 인간 세포, 예를 들면, Hep3B 세포계통 (실시예 2에서 기술된 바와 같이)에서 테스트되었을 때, 시험관 IC50이 20 μM 미만, 10 μM 미만, 8 μM 미만, 5μM 미만, 2 μM 미만, 1 μM 미만, 0.9 μM 미만, 0.8 μM 미만, 0.7 μM 미만, 0.6 μM 미만, 또는 0.5 μM 미만으로 효과적이다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 기술된 바와 같은 특정 안티센스 화합물은 실시예 4에서 나타낸 바와 같이, 생체내 평균 유효량 (ED50)이 ≤ 10 mpk/wk, ≤ 9 mpk/wk, ≤ 8 mpk/wk, ≤ 7 mpk/wk, ≤ 6 mpk/wk, ≤ 5 mpk/wk, ≤ 4 mpk/wk, ≤ 3 mpk/wk, ≤ 2 mpk/wk, 또는 ≤ 1 mpk/wk로, 효과적이다. 특정 구체예들에서, 바람직한 안티센스 화합물, 이를 테면, 안티센스 화합물 ISIS 757456은 실시예 12에서 나타낸 바와 같이, ED50 ≤ 3 mpk/wk을 갖는다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 기술된 바와 같은 특정 안티센스 화합물은 실시예 5에서 기술된 바와 같이, 점성이 40 cP 미만, 35 cP 미만, 30 cP 미만, 25 cP 미만, 20 cP 미만, 15 cP 미만, 또는 12 cP 미만으로 효과적이다. 40 cP 이상의 점도를 갖는 올리고뉴클레오티드는 최적의 점도보다 낮은 점성을 보유할 것이다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 기술된 바와 같은 특정 안티센스 화합물은 실시예들에 기재된 생체 내 내약성 측정치에 의해 입증된 바와 같이 상당한 내성을 가진다. 특정 구체예들에서, 본 발명에서 기술된 바와 같은 특정 안티센스 화합물은 염수 처리된 동물과 비교하여 ALT 및/또는 AST 값을 3배 이내, 2배 이내, 또는 1.5배 이내로 증가시킴으로써 실증된 바와 같이 상당한 내성을 가진다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 기술된 바와 같은 특정 안티센스 화합물은 50% 이상의 억제 효능, ED50 ≤ 5 mpk/wk, 40 cP 미만의 점성, 유전자도입된 마우스에서 3배 이내의 ALT 및/또는 AST 증가중 하나 또는 그 이상을 보유함으로써 효과적이다.
특정 구체예들에서, ISIS 757456 (서열 번호: 1914)이 바람직하다. 이 화합물은 AGT 유전자도입된 마우스에서 강력한 억제제이며, CD-1 마우스에서 매우 내성이 있는 안티센스 화합물로 밝혀졌다. 마우스에서, 이 화합물은 염수 처리된 동물과 비교하여 ALT 및/또는 AST 수준이 3배 이내 증가되었다. 이 화합물은 huAGT 유전자도입된 마우스에서 ED50 ≤ 3 mpk/wk를 갖는다.
실시예
비-제한적인 개시 및 참고로서의 포함
본 명세서에 기술된 특정 화합물, 조성물 및 방법이 특정 구체예와 함께 구체적으로 기술되었지만, 이하의 실시예는 본 명세서에 기술된 화합물을 예시하는 목적을 수행할 뿐이며 이를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본 출원에 나열된 각각의 문헌은 그 전체가 본 명세서에 참고로서 포함된다.
실시예 1: HepG2 세포에서 인간 앤지오텐시노겐 (AGT)의 안티센스 억제
인간 AGT 핵산을 표적으로 하는 2000개 이상의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 설계하였고, 유사한 배양 조건을 갖는 일련의 시험관내 실험에서 AGT mRNA에 대한 이들의 효과를 시험했다. 대표적인 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 결과는 하기 표에 나타낸다.
하기 표에서 신규하게 설계된 키메라 안티센스 올리고뉴클레오티드는 MOE 및/또는 cEt 함유 갭머로 디자인되었다. MOE 함유하는 올리고뉴클레오티드는 5' 방향 및 3' 방향에서 날개 세그먼트의 측면에 있는 2'-데옥시뉴클레오시드가 포함된 중앙 갭 세그먼트를 갖는다. 5' 날개 세그먼트에서 최소한 하나의 뉴클레오시드 및/또는 3' 날개 세그먼트에서 하나의 뉴클레오시드는 2'-MOE 당 변형을 갖는다. cEt 함유하는 올리고뉴클레오티드는 5' 방향 및 3' 방향에서 날개 세그먼트의 측면에 있는 2'-데옥시뉴클레오시드가 포함된 중앙 갭 세그먼트를 갖는다. 5' 날개 세그먼트에서 최소한 하나의 뉴클레오시드 및/또는 3' 날개 세그먼트에서 하나의 뉴클레오시드는 cEt 당 변형을 갖는다. 일부 경우에서, 올리고뉴클레오티드는 MOE 및 cEt를 모두 보유하도록 기획되었다. MOE 및 cEt 함유하는 올리고뉴클레오티드는 5' 방향 및 3' 방향에서 날개 세그먼트의 측면에 있는 2'-데옥시뉴클레오시드가 포함된 중앙 갭 세그먼트를 갖는다. 5' 날개 세그먼트에서 최소한 하나의 뉴클레오시드 및/또는 3' 날개 세그먼트에서 하나의 뉴클레오시드는 MOE 및/또는 cEt 당 변형을 갖는다.
"화학(Chemistry)" 컬럼은 각 올리고뉴클레오티드의 당 변형을 나타낸다. "k"는 cEt 당 변형을 나타내고; "d"는 데옥시리보스를 나타내고; 그리고 "e"는 MOE 변형을 나타낸다. 각각의 갭머 전체의 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트(P=S) 연결이다. 각각의 갭머 전체의 모든 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
"시작 부위(Start site)"는 인간 유전자 서열에서 갭머가 표적화하는 5'-극단 뉴클레오시드를 가리킨다. "중지 부위(Stop site)"는 인간 유전자 서열에서 갭머가 표적화하는 3'-극단 뉴클레오시드를 가리킨다. 하기 표에 나열된 각각의 갭머는 본 명세서에서 서열 번호: 1 (GENBANK Accession NM_000029.3)로 표시되는 인간 AGT mRNA 및/또는 본 명세서에서 서열 번호: 2 (뉴클레오티드 24354000내지 24370100으로부터 절두된 GENBANK Accession NT_167186.1)로 표시되는 인간 AGT 게놈 서열을 표적으로 한다.
표 1은 4500 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 전기천공으로 형질감염된 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포에서 AGT mRNA의 억제를 나타낸다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721 (순방향 서열 CCCTGATGGGAGCCAGTGT, 서열 번호: 8로 지정됨; 역방향 서열 AGCAGGGAGAAGCCCTTCA, 서열 번호: 9로 지정된; 그리고 프로브 서열 CCCTGGCTTTCAACACCTACGTCCACTX, 이때, X는 형광 라벨, 서열 번호: 10으로 지정됨)를 이용하여 mRNA 수준을 측정하였다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 2는 추가적인 갭머 올리고뉴클레오티드에 의한 AGT mRNA의 억제 백분율을 나타낸다. 웰당 약 20,000개의 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포를 전기천공을 이용하여 4,000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드로 형질주입시켰다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 3은 500 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 전기천공으로 형질감염된 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포에서 AGT mRNA의 억제를 나타낸다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 4는 1000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 전기천공으로 형질감염된 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포에서 AGT mRNA의 억제를 나타낸다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 5는 1000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 전기천공으로 형질감염된 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포에서 AGT mRNA의 억제를 나타낸다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 6은 1000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 전기천공으로 형질감염된 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포에서 AGT mRNA의 억제를 나타낸다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS4039 (순방향 서열 GGACAAGGTGGAGGGTCTCA, 서열 번호: 11로 지정됨; 역방향 서열 AGATCCTTGCAGCACCAGTTG, 서열 번호: 12로 지정된; 그리고 프로브 서열 ATGAAGAAACTATCTCCCCGGACCATCCAX, 이때, X는 형광 라벨, 서열 번호: 13으로 지정됨)를 이용하여 mRNA 수준을 측정하였다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 7은 1000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 전기천공으로 형질감염된 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포에서 AGT mRNA의 억제를 나타낸다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS4039를 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 8은 4000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 전기천공으로 형질감염된 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포에서 AGT mRNA의 억제를 나타낸다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 9는 4000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 전기천공으로 형질감염된 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포에서 AGT mRNA의 억제를 나타낸다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS4039를 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 10은 4000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 전기천공으로 형질감염된 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포에서 AGT mRNA의 억제를 나타낸다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 11은 500 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 전기천공으로 형질감염된 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포에서 AGT mRNA의 억제를 나타낸다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 12는 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의한 AGT mRNA의 억제 백분율을 나타낸다. 웰당 약 20,000개의 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포를 전기천공을 이용하여 3,000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드로 형질주입시켰다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 13은 4000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 전기천공으로 형질감염된 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포에서 AGT mRNA의 억제를 나타낸다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
표 14는 4000 nM 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하여 전기천공으로 형질감염된 웰당 20,000 세포의 밀도로 배양된 HepG2 세포에서 AGT mRNA의 억제를 나타낸다. 대략 24 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
실시예 2: HepG2 세포에서 인간 앤지오텐시노겐 (AGT)의 약량-의존적 안티센스 억제
실시예 1에서 설명된 단일 약량 시험관 측정 분석에서 기획되고, 테스트된 2000개 이상의 안티센스 올리고뉴클레오티드중에서 AGT mRNA의 상당한 억제를 나타내는 것들중 일부를 선별하고, HepG2 세포에서 다양한 용량으로 더 테스트되었다. 몇 가지 일련의 실험에서 테스트된 예시적인 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 결과는 하기 표들에서 나타낸다.
세포를 웰당 20,000 세포의 밀도로 플레이팅하고 전기천공을 이용하여 0.406 μM, 0.813 μM, 1.63 μM, 3.25 μM, 6.5 μM 및 13.0 μM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드로, 하기 표 15에 특정되어 있는 바와 같이 형질주입시켰다. 대략 16 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다. 각각의 올리고뉴클레오티드의 반수 최대 저해 농도(IC50)가 또한 제시된다. AGT mRNA 수준은 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 세포에서 용량-의존적인 방식으로 크게 감소되었다.
세포를 웰당 20,000 세포의 밀도로 플레이팅하고 전기천공을 이용하여 39.1 nM, 156.3 nM, 625.0 nM, 2500 nM 및 10,000 nM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드로, 하기 표 16에 특정되어 있는 바와 같이 형질주입시켰다. 대략 16 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시되며, 두 실험의 평균이 된다. 각각의 올리고뉴클레오티드의 반수 최대 저해 농도(IC50)가 또한 제시된다. AGT mRNA 수준은 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 세포에서 용량-의존적인 방식으로 크게 감소되었다.
세포를 웰당 20,000 세포의 밀도로 플레이팅하고 전기천공을 이용하여 312.5 nM, 625 nM, 1250 nM, 2500 nM 및 5000 nM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드로, 하기 표 17 및 18에 특정되어 있는 바와 같이 형질주입시켰다. 대략 16 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시되며, 두 실험의 평균이 된다. 각각의 올리고뉴클레오티드의 반수 최대 저해 농도(IC50)가 또한 제시된다. AGT mRNA 수준은 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 세포에서 용량-의존적인 방식으로 크게 감소되었다.
세포를 웰당 20,000 세포의 밀도로 플레이팅하고 전기천공을 이용하여 37 nM, 111 nM, 333 nM, 1.000 nM 및 3,000 nM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드로, 하기 표 19에 특정되어 있는 바와 같이 형질주입시켰다. 대략 16 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시되며, 두 실험의 평균이 된다. 각각의 올리고뉴클레오티드의 반수 최대 저해 농도(IC50)가 또한 제시된다. AGT mRNA 수준은 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 세포에서 용량-의존적인 방식으로 크게 감소되었다.
세포를 웰당 20,000 세포의 밀도로 플레이팅하고 전기천공을 이용하여 12.3 nM, 37 nM, 111 nM, 333 nM, 1,000 nM 및 3,000 nM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드로, 하기 표 20에 특정되어 있는 바와 같이 형질주입시켰다. 대략 16 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시되며, 두 실험의 평균이 된다. 각각의 올리고뉴클레오티드의 반수 최대 저해 농도(IC50)가 또한 제시된다. AGT mRNA 수준은 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 세포에서 용량-의존적인 방식으로 크게 감소되었다.
세포를 웰당 20,000 세포의 밀도로 플레이팅하고 전기천공을 이용하여 0.33 μM, 1.0 μM, 3.0 μM 및 9.0 μM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드로, 하기 표 21에 특정되어 있는 바와 같이 형질주입시켰다. 대략 16 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다. 각각의 올리고뉴클레오티드의 반수 최대 저해 농도(IC50)가 또한 제시된다. AGT mRNA 수준은 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 세포에서 용량-의존적인 방식으로 크게 감소되었다.
세포를 웰당 20,000 세포의 밀도로 플레이팅하고 전기천공을 이용하여 0.44 μM, 1.33 μM, 4.0 μM 및 12.0 μM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드로, 하기 표 22에 특정되어 있는 바와 같이 형질주입시켰다. 대략 16 시간의 처리 시간 후에, RNA를 세포로부터 단리하고 AGT mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR에 의해 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3721을 이용하여 mRNA 수준을 측정했다. AGT mRNA 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다. 각각의 올리고뉴클레오티드의 반수 최대 저해 농도(IC50)가 또한 제시된다. AGT mRNA 수준은 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 세포에서 용량-의존적인 방식으로 크게 감소되었다.
실시예 3: 유전자도입된 마우스 모델에서 인간 AGT를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 내약성 및 단일 용량 치료의 효과
유전자도입된 (Tg) 마우스 모델 "huAGT"를 만들고, 이 huAGT Tg 모델에서 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하였다. 시험관내 연구로부터 선별된 AGT 안티센스 올리고뉴클레오티드가 huAGT 마우스에서 평가되었다.
huAGT 유전자도입된 마우스를 12-시간 빛/암흑 주기에 유지하고, 자유롭게(ad libitum) 정상적인 마우스 음식을 급여했다. 실험 개시 전에 연구 시설에서 최소한 7 일 동안 동물을 순응시켰다. 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASOs)를 완충된 염수 (PBS)에서 제조하고, 0.2 미크론 필터로 여과하여 멸균시켰다. 올리고뉴클레오티드를 주사용 0.9 % PBS에 용해시켰다.
치료 #1
유전자도입된 huAGT 10주령의 암컷 마우스는 각 4 마리의 마우스 군으로 분할하였다. 8 군은 2.5 주 동안(3회 치료) 20 mg/kg의 용량으로 1 주일에 1 회 안티센스 올리고뉴클레오티드의 피하 주사를 받았다. 한 군의 쥐는 2.5 주 동안 PBS의 피하 주사를 1 주일에 1 회 받았다. 염수-주사 군은 대조군으로써, 올리고뉴클레오티드로 처리한 군과 비교용으로 사용하였다.
RNA 분석, 치료 #1
17 일째, 실시간 PCR 분석 및 인간 AGT mRNA 발현 측정을 위해 유전자도입된 마우스의 간 및 신장으로부터 총 RNA를 추출 하였다. 결과는 PBS 대조군에 대한, 저해 백분율로 제시되며, RIBOGREEN®에 대해 정상화했다. 하기 표 23에 나타난 바와 같이, PBS 대조와 비교하였을 때, 대부분의 안티센스 올리고뉴클레오티드로의 처리는 인간 AGT mRNA의 유의한 감소를 야기했다.
혈장 화학 표지, 치료 #1
간 및 신장 기능, 아미노기전이효소, 빌리루빈, 총 빌리루빈 및 혈뇨 질소(BUN)의 혈장 수준에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다. 결과가 하기 표 24에 제시된다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상된 범위 밖으로 간 또는 신장 기능 마커 중 어느 하나의 수준 변화를 야기한 안티센스 올리고뉴클레오티드는 추가적인 연구에서 배제시켰다.
체중 및 장기 중량, 치료 #1
유전자도입된 마우스의 체중은 15일차에 측정했고, 각 군의 평균 체중은 하기 표에 제시된다. 간, 비장 및 신장 중량을 연구 마지막에 측정했고, 이 또한 하기 표 25에 제시된다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상된 범위 밖의 장기 중량의 임의의 변화를 야기한 안티센스 올리고뉴클레오티드는 추가의 연구에서 배제시켰다.
치료 #2
2 마리의 huAGT 마우스 그룹 각각은 2 주 동안 25mg/kg/wk의 용량으로 안티센스 올리고뉴클레오티드의 피하 주사를 제공받았다. huAGT 마우스 한 그룹은 대조군으로써, PBS를 피하 주입받았고, 이는 올리고뉴클레오티드-처리된 그룹과 비교용으로 사용하였다.
RNA 분석, 치료 #2
10 일째, 실시간 PCR 분석 및 인간 AGT mRNA 발현 측정을 위해 유전자도입된 마우스의 간으로부터 총 RNA를 추출 하였다. 결과는 2마리 마우스 각 그룹에 대한 평균이며, RIBOGREEN®로 표준화된, PBS 대조와 비교하여 억제 백분율로 나타낸다. 하기 표 26에 나타난 바와 같이, PBS 대조와 비교하였을 때, 대부분의 안티센스 올리고뉴클레오티드로의 처리는 인간 AGT mRNA의 유의한 감소를 야기했다.
혈장 화학 표지, 치료 #2
간 기능, 아미노기전이효소의 혈장 수준에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다. 결과는 2마리 마우스 각 그룹에 대한 평균이며, 표 27에 나타낸다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상된 범위 밖으로 간 기능 마커 중 어느 하나의 수준 변화를 야기한 안티센스 올리고뉴클레오티드는 추가적인 연구에서 배제시켰다.
체중 및 장기 중량, 치료 #2
huAGT 마우스의 모든 치료 그룹의 체중을 1 일차 및 8 일차에 측정하고, 동물을 희생시키고 간을 10 일째에 수확하고, 중량을 측정하였다. 결과는 2마리 마우스 각 그룹에 대한 평균이며, 표 28에 나타낸다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상된 범위 밖의 장기 중량의 임의의 변화를 야기한 안티센스 올리고뉴클레오티드는 추가의 연구에서 배제시켰다.
치료 #3
2 마리의 huAGT 마우스 그룹 각각은 2 주 동안 25mg/kg/wk의 용량으로 안티센스 올리고뉴클레오티드의 피하 주사를 제공받았다. 4마리의 huAGT 마우스 한 그룹은 대조군으로써, PBS를 피하 주입받았고, 이는 올리고뉴클레오티드-처리된 그룹과 비교용으로 사용하였다.
RNA 분석, 치료 #3
10 일째, 실시간 PCR 분석 및 인간 AGT mRNA 발현 측정을 위해 유전자도입된 마우스의 간으로부터 총 RNA를 추출 하였다. 결과는 2마리 마우스 각 그룹에 대한 평균이며, RIBOGREEN®로 표준화된, PBS 대조와 비교하여 억제 백분율로 나타낸다. 하기 표 29에 나타난 바와 같이, PBS 대조와 비교하였을 때, 대부분의 안티센스 올리고뉴클레오티드로의 처리는 인간 AGT mRNA의 유의한 감소를 야기했다.
혈장 화학 표지, 치료 #3
간 기능, 아미노기전이효소의 혈장 수준에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다. 결과는 2마리 마우스 각 그룹에 대한 평균이며, 표 30에 나타낸다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상된 범위 밖으로 간 기능 마커 중 어느 하나의 수준 변화를 야기한 안티센스 올리고뉴클레오티드는 추가적인 연구에서 배제시켰다.
체중 및 장기 중량, 치료 #3
huAGT 마우스의 모든 치료 그룹의 체중을 1 일차 및 8 일차에 측정하고, 동물을 희생시키고 간을 10 일째에 수확하고, 중량을 측정하였다. 결과는 2마리 마우스 각 그룹에 대한 평균이며, 표 31에 나타낸다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상된 범위 밖의 중량의 임의의 변화를 야기한 안티센스 올리고뉴클레오티드는 추가의 연구에서 배제시켰다.
치료 #4
유전자도입된 huAGT 6주령의 암컷 마우스는 각 3-4 마리의 마우스 군으로 분할하였다. 8 군은 2 주 동안 5 mg/kg의 용량으로 1 주일에 1 회 안티센스 올리고뉴클레오티드의 피하 주사를 받았다. 한 군의 쥐는 2 주 동안 PBS의 피하 주사를 1 주일에 1 회 받았다. 염수-주사 군은 대조군으로써, 올리고뉴클레오티드로 처리한 군과 비교용으로 사용하였다.
RNA 분석, 치료 #4
17 일째, 실시간 PCR 분석 및 인간 AGT mRNA 발현 측정을 위해 유전자도입된 마우스의 간 및 신장으로부터 총 RNA를 추출 하였다. 결과는 PBS 대조군에 대한, 저해 백분율로 제시되며, RIBOGREEN®에 대해 정상화했다. 하기 표 32에 나타난 바와 같이, PBS 대조와 비교하였을 때, 대부분의 안티센스 올리고뉴클레오티드로의 처리는 인간 AGT mRNA의 유의한 감소를 야기했다.
혈장 화학 표지, 치료 #4
15일차에, 간 및 신장 기능, 아미노기전이효소, 빌리루빈, 총 빌리루빈 및 혈뇨 질소(BUN)의 혈장 수준에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다. 결과가 하기 표 33에 제시된다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상된 범위 밖으로 간 기능 마커 중 어느 하나의 수준 변화를 야기한 안티센스 올리고뉴클레오티드는 추가적인 연구에서 배제시켰다.
체중 및 장기 중량, 치료 #4
유전자도입된 마우스의 체중은 1, 8 및 13일차에 측정했고, 각 군의 평균은 하기 표에 제시된다. 15일차에 간, 비장 및 신장 중량을 연구 마지막에 측정했고, 이 또한 하기 표 34에 제시된다. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 예상된 범위 밖의 중량의 임의의 변화를 야기한 안티센스 올리고뉴클레오티드는 추가의 연구에서 배제시켰다.
실시예 4: 유전자도입된 마우스 모델에서 인간 AGT를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 내약성 및 다중 용량 치료의 효과
huAGT 유전자도입된 마우스에서 단일 용량으로부터 선별된 AGT 안티센스 올리고뉴클레오티드는 huAGT 유전자도입된 마우스에서 용량 반응 연구에서 더 평가되었다.
huAGT 유전자도입된 마우스를 12-시간 빛/암흑 주기에 유지하고,자유롭게(ad libitum) 정상적인 마우스 음식을 급여했다. 실험 개시 전에 연구 시설에서 최소한 7 일 동안 동물을 순응시켰다. 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASOs)를 완충된 염수 (PBS)에서 제조하고, 0.2 미크론 필터로 여과하여 멸균시켰다. 올리고뉴클레오티드를 주사용 0.9 % PBS에 용해시켰다.
치료 #1
4 점 용량-반응 연구를 위해, 수컷 huAGT 마우스를 각각 4 마리의 마우스로 구성된 37개 그룹으로 나누었다. 36개 그룹은 2.5 주 (총 3 회 투여) 동안 5, 10, 25 및 50 mg/kg/주 투여용량의 안티센스 올리고뉴클레오티드 피하 주사를 받았다. huAGT 마우스 한 그룹은 대조군으로써, 염수를 피하 주입받았고, 이는 올리고뉴클레오티드-처리된 그룹과 비교용으로 사용하였다.
RNA 분석, 치료 #1
17 일차에 huAGT 마우스는 희생되었고, 실시간 PCR 분석 및 인간 AGT mRNA 발현 측정을 위해 간 및 신장으로부터 총 RNA를 추출 하였다. RT-PCR 결과는 염수-처리된 그리고 RIBOGREEN®에 대해 정상화된, 대조군과 비교하여 평균 억제 백분율로 제시된다. 하기 표 35에 나타난 바와 같이, 염수 대조와 비교하였을 때, 선택된 올리고뉴클레오티드로의 처리는 인간 AGT mRNA의 유의한 감소를 야기했다.
체중 및 장기 중량, 치료 #1
huAGT 마우스의 모든 치료군의 체중을 실험 1, 8 및 15 일차에 측정 하였다. 결과는 마우스 각 그룹에 대한 평균이며, 표 36에 나타낸다.
치료 #2
기존 연구로부터 인간 AGT를 표적으로 하는 5개의 강한 안티센스 올리고뉴클레오티드(ISIS 번호 620003, 654451, 654472, 654691 및 654999)는 또다른 4점 용량-반응 연구를 위하여 선택되었으며, 시험관내에서 효능이 있었고, 단일 용량의 huAGT 유전자도입된 마우스 연구에서 효능이 있고, 내약성이 있었던 ISIS 568637와 비교되었다. 이 연구에서 huAGT 마우스는 각각 3마리의 마우스로된 25개 그룹으로 나누었다. 이들 그룹은 10일간에 걸쳐 2회 주입으로 1, 4, 10 및 40 mg/kg의 투여분량에서 안티센스 올리고뉴클레오티드 피하 주사를 받았다. huAGT 마우스 3마리의 한 그룹은 대조군으로써, 염수를 피하 주입받았고, 이는 올리고뉴클레오티드-처리된 그룹과 비교용으로 사용하였다.
RNA 분석, 치료 #2
10일 차에 상기 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 huAGT 마우스는 희생되었고, 실시간 PCR 분석 및 인간 AGT mRNA 발현 측정을 위해 간 및 신장으로부터 총 RNA를 추출 하였다. 결과는 PBS 대조군에 대하여, mRNA의 평균 억제 백분율로 제시되며, 그리고 RIBOGREEN®에 대해 정상화된다. 하기 표 37에 나타난 바와 같이, 염수 대조와 비교하였을 때, 올리고뉴클레오티드로의 처리는 인간 AGT mRNA의 유의한 감소를 야기했다.
혈장 화학 표지, 치료 #2
간 및 신장 기능에서 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 10일 차에 아미노기전이효소, 빌리루빈, 및 BUN의 혈장 수준은 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다 . 결과가 하기 표 38에 제시된다.
치료 #3
기존 연구로부터 인간 AGT를 표적으로 하는 5개의 강한 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ISIS 번호 568637, 594622, 594624, 594625 및 594627)는 3-점 용량-반응 연구를 위하여 선택되었다. 이 연구에서 huAGT 마우스는 각각 3마리의 마우스로된 16개 그룹으로 나누었다. 이들 그룹은 1주일의 과정에 걸쳐 2회 주입으로 1, 5 및 15 mg/kg의 투여분량에서 안티센스 올리고뉴클레오티드 피하 주사를 받았다. huAGT 마우스 3마리의 한 그룹은 대조군으로써, 염수를 피하 주입받았고, 이는 올리고뉴클레오티드-처리된 그룹과 비교용으로 사용하였다.
RNA 분석, 치료 #3
8 일째, 실시간 PCR 분석 및 인간 AGT mRNA 발현 측정을 위해 유전자도입된 마우스의 간 및 신장으로부터 총 RNA를 추출 하였다. 결과는 PBS 대조군에 대한, 저해 백분율로 제시되며, RIBOGREEN®에 대해 정상화했다. 하기 표 39에 나타난 바와 같이, PBS 대조와 비교하였을 때, 대부분의 안티센스 올리고뉴클레오티드로의 처리는 인간 AGT mRNA의 유의한 감소를 야기했다.
혈장 화학 표지, 치료 #3
8일차에, 간 및 신장 기능, 아미노기전이효소, 빌리루빈, 총 빌리루빈 및 혈뇨 질소(BUN)의 혈장 수준에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다. 결과가 하기 표 40에 제시된다.
체중 및 장기 중량, 치료 #3
유전자도입된 마우스의 체중은 1, 8 및 13일차에 측정했고, 각 군의 평균은 하기 표에 제시된다. 15일차에 간, 비장 및 신장 중량을 연구 마지막에 측정했고, 이 또한 하기 표 41에 제시된다.
실시예 5: AGT를 표적으로 하는 9개의 선두 안티센스 올리고뉴클레오티드의 점성 평가
점도가 40cP 이상인 안티센스 올리고뉴클레오티드를 스크리닝하는 목적으로 9 개의 안티센스 올리고뉴클레오티드의 점도를 측정하였다. 40cP보다 큰 점도를 갖는 올리고뉴클레오티드는 너무 점성이 커서, 임의의 대상에게 투여 될 수 없다고 여겨진다.
유리 바이알에 안티센스 올리고뉴클레오티드 (32-35 mg)를 칭량하고, 물 120 μL를 첨가하고, 바이알을 50℃에서 가열하여 용액에 안티센스 올리고뉴클레오티드를 용해시켰다. 예열된 시료의 일부 (75 μL)를 마이크로-점도계 (Cambridge)로 피펫팅했다. 마이크로-점도계의 온도를 25℃로 설정하고, 시료의 점도를 측정 하였다. 예열된 시료의 다른 부분 (20 μL)을 85℃에서 260 nM의 UV 판독을 위해 10 mL의 물에 피펫팅하였다 (Cary UV 기기). 그 결과를 표 42에 나타내었고, 시험된 안티센스 올리고뉴클레오티드가 40cP의 점도를 초과하지 않음을 나타낸다.
실시예 6: CD1 마우스에서 AGT를 표적으로 하는 9가지 선두 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASOs) 의 내약성
CD1® 마우스(Charles River, MA)는 다목적용 마우스 모델로, 안전성 및 효능 시험을 위해 흔히 사용된다. 마우스를 상기 기술된 연구들로부터 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리하고 다양한 혈장 화학 마커 수준의 변화를 평가했다.
상기 실시예에서 확인된 9 개의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 CD1 마우스에서 내약성에 대해 시험하였다. 마우스를 그룹당 4 마리의 마우스 그룹으로 나누고, 50mg/kg의 안티센스 올리고뉴클레오티드 (100mg/kg/주 투여용량)를 6 주 동안 1 주일에 2 회 피하 주사하였다. 수컷 CD1 마우스의 군을 PBS로 6주 동안 일주일에 두 차례 피하 주사했다. 마지막 투여 48 시간 후에 마우스를 안락사시키고, 추가적인 분석을 위해 장기 및 혈장을 수확했다.
체중 및 장기 중량
ASO 처리된 CD1 마우스의 체중을 매주 측정하였다. 43 일째에 마우스를 희생시키고, 장기를 수확하고 무게를 달았다. 시험 종료시 체중과 장기 중량(g)은 표 43에 나타내었다.
혈장 화학 표지
간 및 신장 기능에서 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, ALT (알라닌 아미노전이효소) 및 AST (아스파르테이트 아미노전이효소), 빌리루빈, 크레아티닌 및 BUN의 혈장 수준은 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다 .
결과는 마우스 각 그룹에 대한 평균이며, 표 44에 이들의 선택이 제시된다.
별도의 연구에서 안티센스 화합물 ISIS 568637, 594622, 594624, 594625 및 594627 또한 CD1 생쥐에서 시험되었지만, 일부는 내약성 문제를 나타내었으며, 이 연구는 조기 종료되었다.
실시예 7: Sprague-Dawley 렛에서 인간 AGT를 표적으로 하는 9가지 선두 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASOs) 의 내약성
Sprague-Dawley (SD) 렛은 안전성 및 효능 평가에 사용되는 다목적용 모델이다. SD 렛을 상기 실시예에서 설명된 연구로부터 선별된 9가지 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리하고, 다양한 혈장 화학 마커 수준의 변화를 평가했다.
치료
수컷 SD 렛을 12-시간 빛/암흑 주기에 유지하고 Purina 일반 렛 사료를 자유롭게(ad libitum) 급여했다. 렛을 그룹당 4 마리의 마우스 그룹으로 나누고, 각 그룹에 6 주 동안 100 mg/kg/week를 피하 주사하였다. 마지막 투여 48시간 후에 래트를 안락사시키고, 추가적인 분석을 위해 장기 및 혈장을 수확했다.
장기 중량
안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 렛의 간, 비장 및 신장 중량을 연구 마지막에 측정했다. 체중과 장기 중량은 표 45에 나타내었다.
간 및 신장 기능
간 및 신장 기능에서 9가지 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, ALT (알라닌 아미노전이효소) 및 AST (아스파르테이트 아미노전이효소), 알부민, BUN, 크레아티닌, 빌리루빈 혈장 수준은 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였고, 그리고 총 뇨 단백질 및 뇨 크레아티닌 수준도 측정되었고, 그리고 크레아티닌에 대한 총 뇨 단백질의 비율 (P/C 비율)이 측정되었다.
각 그룹의 결과를 평균을 내고, 표 46에 이들의 선택이 제시된다.
조직학
안티센스 올리고뉴클레오티드-처리된 렛의 간 및 신장을 현미경으로 관찰한 결과, 치료와 관련된 이상 반응이 관찰되지 않았다.
별도의 연구에서 안티센스 화합물 ISIS 568637, 594622, 594624, 594625 및 594627 또한 SD 렛에서 시험되었지만, 일부는 내약성 문제를 나타내었으며, 이 연구는 조기 종료되었다.
실시예 8: 시노몰구스 원숭이 간세포에서 인간 AGT를 표적으로 하는 9가지 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASOs)의 효능
이 연구를 진행한 시점에, 사이노몰구스 원숭이 유전체 서열을 미 국립 생물공학 정보센터(NCBI) 데이터베이스에서 얻을 수 없었고; 그러므로, 사이노몰구스 원숭이 유전자 서열을 이용한 교차-반응성을 확인할 수 없었다. 그 대신에, 사이노몰구스 원숭이에서 사용된 안티센스 올리고뉴클레오티드의 서열을 붉은털 원숭이 서열과 상보성에 대해 비교했다. 붉은털 원숭이 서열에 상보성을 갖는 안티센스 올리고뉴클레오티드는 전부 사이노몰구스 원숭이 서열과 교차-반응할 것이라고 예상된다.
시험된 인간 안티센스 올리고뉴클레오티드는 붉은털원숭이 게놈 서열 ( 뉴클레오티드 16090000 내지 16106000이 절두된 GENBANK 기탁 NW_001109259.1, 본 명세서에서 서열 번호: 7로 명시됨)과 최대 3개의 미스매치를 갖는다. 인간 올리고뉴클레오티드 및 붉은털 원숭이 서열 사이의 상보성이 높을 수록, 인간 올리고뉴클레오티드는 붉은털원숭이원숭이 서열 및 시노몰구스 원숭이 서열과 교차-반응할 가능성이 더 클 수 있다. 서열 번호: 7에 대한 각각의 올리고뉴클레오티드의 시작 및 중지 부위가 하기 표 47에 제시된다. "시작 부위"는 붉은털 원숭이 유전자 서열에서 갭머가 표적화하는 5'-극단 뉴클레오티드를 나타낸다.
기존 연구에서 AGT mRNA의 상당한 억제 및 내약성을 나타낸 9가지 안티센스 올리고뉴클레오티드가 선별되었고, 냉동보존된 개체 수컷 시노몰구스 원숭이 일차 간세포에서 다양한 용량으로 테스트되었다. 이들 9가지 선두 안티센스 올리고뉴클레오티드는 하기 표에서 설명된다.
시노몰구스 원숭이 일차 간세포는 웰당 35,000개 세포의 밀도로 도말되고, 하기 표 48에서 명시된 바와 같이, 0.156 μM, 0.313 μM, 0.625 μM, 1.25 μM, 2.5 μM, 5.0 μM, 10.0 μM 및 20.0 μM 농도의 안티센스 올리고뉴클레오티드로 전기천공에 의해 형질감염되었다. 약 24 시간의 처리 기간 후, 세포를 세척하고, 용해시켜, RNA를 단리하였다. 원숭이 AGT mRNA 수준은 프라이머 프로브 세트 RTS4039를 이용하여 정량적 실시간 PCR에 의해 측정되었다. AGT mRNA 표적 수준을 RIBOGREEN®에 의해 측정된 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조 세포에 대한 AGT의 백분율 저해로 제시된다.
대부분 원숭이 AGT mRNA 수준은 안티센스 올리고뉴클레오티드 처리된 세포에서 용량-의존적인 방식으로 크게 감소되었다.
실시예 9: 시노몰구스 원숭이에서 인간 AGT를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과
12-주 용량 반응 연구에서, 시노몰구스 원숭이는 상기 실시예에서 기술된 연구로부터 선택된 9가지 안티센스 올리고뉴클레오티드로 처리했다. 안티센스 올리고뉴클레오티드 효과 및 내약성, 뿐만 아니라 간 및 신장에서의 이들의 약동학 프로파일이 평가되었다.
치료
연구 전에, 원숭이에서 동물의 일반적인 건강을 매일 관찰하는 동안 격리되었다 원숭이는 2 내지 4살이었고, 체중은 2 - 4 Kg이었다. 5마리씩 무작위 배정한 수컷 사이노몰구스 원숭이의 10 개 그룹에 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 PBS를 피하 주사하였다. 원숭이는 12 주 동안 1 주일에 1 회 40mg/kg/wk의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 투여하여 총 15 회 투약하였다(원숭이는 1주차와 2주차에 40 mg/kg의 2 회 용량의 로딩(loading) 치료를 받았다). 시노몰구스 원숭이의 대조군에 PBS를 비슷한 방법으로 주입하고, 대조군으로 사용 하였다.
연구 기간 동안 질병이나 고통의 징후에 대하여 매일 2 회 원숭이를 관찰하였다. 치료, 상해 또는 질병으로 인해 순간적 또는 경미한 통증이나 고통을 경험하는 동물은 연구 책임자와 협의 한 후, 승인된 진통제 또는 통증을 완화시키는 물질로 동물 병원 직원이 치료했다. 추가 모니터링 및 가능한 안락사를 위해 건강 상태가 좋지 않거나 또는 거의 죽은 상태에 있는 동물이 확인되었다. 12 주 연구가 끝나면 원숭이가 희생되었고, 장기가 제거되었다. 실시예에 기술된 프로토콜은 실험동물 운영위원회(Institutional Animal Care and Use Committee, IACUC)에 의해 승인되었다.
체중 및 장기 중량
체중은 매주 평가하였고, 안티센스 올리고뉴클레오티드의 체중에 대한 현저한 효과는 관찰되지 않았다. 77 일째의 체중 및 79 일째의 장기 중량을 측정하여, 하기 표 49에 나타내었다.
약물력학
연구 중에 혈장, 혈청 및 소변은 분석을 위하여 수거했다. 간 및 신장 기능에서 9가지 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과를 79일차에 평가하기 위해, ALT (알라닌 아미노전이효소) 및 AST (아스파르테이트 아미노전이효소), BUN 및 빌리루빈의 혈장 수준은 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다 . 표 50에서 나타낸 바와 같이, ALT, AST, BUN 및 빌리루빈에는 유의한 영향이 관찰되지 않았다.
또한, ECG, 혈압, 혈장 전해질, 단백뇨, 염증 반응 (가령, CRP 수준) 또는 신장 축적의 유의적인 변화는 관찰되지 않았다. 일반적으로, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 잘 용인되었다.
RNA 분석
연구가 종료될 때, AGT의 mRNA 발현 측정에 대한 실시간 PCR 분석을 위해 원숭이 간과 신장으로부터 RNA를 추출했다. 프라이머 프로브 세트 RTS4039를 이용하였고, 각 그룹에 대한 결과를 평균하여, RIBOGREEN®으로 정상화된 PBS 대조군과 비교하여, mRNA 저해 백분율로서 나타내었다. 표 51에 나타난 바와 같이, 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용한 치료는 AGT mRNA 수준에 다양한 효과를 초래하였다.
실시예 10: CD-1 마우스에서 GalNAc 콘쥬게이트화된 안티센스 올리고뉴클레오티드의 내약성
상기 연구들로부터 선두 후보 물질 (ISIS 654472) 5-10-5 완전 포스포로티오에이트 MOE 갭머가 선택되었고, 하기 표 52에서 설명된 바와 같이, 동일한 뉴클레오티드 서열을 보유하지만, 기본 구조에서 차이가 있는 6개의 5'-트리스헥실아미노-(THA)-C6 GalNAc3 (a.k.a. "GalNAc") -콘쥬게이트화된 5-10-5 MOE 갭머의 기획의 근간으로 이용되었다. "s"는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지이다. "o"는 포스포디에스테르 뉴클레오시드간 링키지이다. "A"는 아데닌 핵염기다. "mC"는 5-메틸시토신 핵염기다. "G"는 구아닌 핵염기다. "T"는 티민 핵염기다. "e"는 MOE 변형을 나타낸다. "d"는 데옥시리보스를 나타낸다.
3 점 용량 반응 연구를 위해, 4 마리의 CD1 마우스의 16 그룹에 각각 4 주 동안에 걸쳐 10mg/kg/주의 GalNAc-콘쥬게이트화된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 피하 주사하였다. 마우스의 군을 PBS로 6주 동안 일주일에 두 차례 피하 주사했다. ASO 처리된 CD1 마우스의 체중을 매주 측정하였다. 마지막 투여 48 시간 후에 마우스를 안락사시키고, 추가적인 분석을 위해 장기 및 혈장을 수확했다. 혈장 및 뇨를 수거하였고, 간 및 신장에서 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 아미노기전이효소, 빌리루빈, 및 BUN의 혈장 수준은 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다 . 실험이 끝날 때, 간, 신장 및 비장을 수거하였고, 중량을 측정했다.
결과는 각 그룹에 대한 평균이며, 표 53에 제시된다.
실시예 11: SD 렛에서 GalNAc 콘쥬게이트화된 ASOs의 내약성
28 마리의 수컷 SD 렛을 그룹당 4 마리씩 7 그룹으로 나누었다. 렛은 4주 과정에 걸쳐 미처리된 대조군으로써 PBS를 피하로 주사하거나, 또는 10 mg/kg/주의 GalNAc 콘쥬게이트화된 안티센스 올리고뉴클레오티드를 피하 주하였다.
혈장 및 뇨를 수거하였고, 간 및 신장에서 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효과를 평가하기 위해, 자동화 임상 화학 분석기(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)를 이용하여 측정하였다. 실험이 끝날 때, 간, 신장 및 비장을 수거하였고, 중량을 측정했다.
결과는 각 그룹에서 4 마리의 동물의 평균으로 나타내며, 표 54에 나타내었다.
실시예 12: 암컷 및 수컷 huAGT 마우스에서 콘쥬게이트화안된 그리고 GalNAc 콘쥬게이트화된 안티센스 올리고뉴클레오티드의 투여용량 반응 비교
이전 실시예들에서 설명한 바와 같이, huAGT 마우스는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효능을 시험하는데 유용하다. 동일한 서열을 갖는 GalNAc 콘쥬게이트화된 화합물 (ISIS 757456)에 대한 부모계 5-10-5 MOE 갭머 (ISIS 654472)의 투여 량 반응 비교가 수행되었다. 표 55에 나타낸 바와 같이, 상기 GalNAc 콘쥬게이트화된 안티센스 올리고뉴클레오티드는 콘쥬게이트화안된 안티센스 올리고뉴클레오티드보다 8-배 더 강력하다.
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gtctggccaa gtgatgtaac cctcctctcc agcctgtgca caggcagcct gggaacagct 420
ccatccccac ccctcagcta taaatagggc atcgtgaccc ggccggggga agaagctgcc 480
gttgttctgg gtactacagc agaagggtat gcggaagcga gcaccccagt ctgagatggc 540
tcctgccggt gtgagcctga gggccaccat cctctgcctc ctggcctggg ctggcctggc 600
tgcaggtgac cgggtgtaca tacacccctt ccacctcgtc atccacaatg agagtacctg 660
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<210> 2
<211> 16101
<212> DNA
<213> Homo sapiens
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<213> Homo sapiens
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<210> 4
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<212> DNA
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gcaagggtgt caggcccgcc accccagagc accattactc ccaggacgcg gctgggtgca 3540
gacctggaaa cagcctaggg agcagctgca gatcacaact gagaacaaac gacagtctct 3600
gccttaaaaa tggcccaagg aattgcgtct ctggagatgg tacctgcgca ggagcagcac 3660
agtgagtggg ctgcaccgac cagcgccatc caaaccccga acaggtggcg cttgtcaggc 3720
aggacttccc agcagtcggt tcccacaggt ttcccctgac gacctgatgt gatgtgactg 3780
tctagattag gtgagaactg gtggctcagg cttctctgca cagacaggcc tgcaagcagc 3840
agggagagtt ttctgttctg tttttccatg tcgtgtggct cttcctgaga acagcggatg 3900
gagtcaacgc atggggagtg gggtgaggcg gtagctgagg tcagaagtca aagtctcttt 3960
ggcatttgaa tgactgaagc agaacgaaac acaccaggta cttcagcagt tgcaccgtgt 4020
tgagggcagg tgctggttac cggtctgggg ggaagccagc tgctaatgta agaagaatga 4080
ctgggtgtgc ttaggtgaag cagaaaaatc taggcatcaa ggtggcctcg agtcagtgat 4140
gacctgctac agctccaagg aagcctggcg tagccctggg gggacagaaa aggctaagca 4200
gtgacgatat tgcagtacac cccctccaca agaaatgagt gagatgtggt acaaactgtt 4260
agaattgaat gaatcaatag aatcaacgtt catcccgtca atcaggaaga gtcagatgaa 4320
atgaattagc agggccagcc caagaacctt gtcttctggg gtctcggggt agtcttcatt 4380
tgcagcagct gaggctgaag cccagtggca aggcctttga gagaacatgg tgccggaccc 4440
gtgtctaagg caggggttct aaaccctgct tacatatcag agccacctga gaaatttttt 4500
tttttttaat ttttattttt ttaatctaag gaatccaagt atcagtgggc aaaccatgct 4560
aggtgtgcat gcctttgggg ctctgcaggg gatagcacta tggagggatg gttgagagct 4620
ggttttgggg ttgagacacg tggaaaatac ttgggctttg ggttgagcct gtggtgctca 4680
tcctggctgc atattaggac cacaaggaga tgagaaaacc attcccaacc ctcaccctag 4740
ggcccttgaa tgagcatctc aggggtctag gagtcctccg caaagaccta ctgattggca 4800
cgtatgtgtt tttctaggag agaacttaca gccgcaggca ggagcatgtc ttagtgtgct 4860
tgggctgcca taagtaccac agactgggag gcttcaacaa cagaaatgta ttatctcaca 4920
gttctggaag ctagaagccc gggagcaagc catcggcaga gttggtttcc tctggggcct 4980
ctatccttgc cttgtagatg gctgtcttct ctctctgtcc tcacatggtc ttccctctgt 5040
gtgtgtccat gtcctcatct ccccttctca taaggacaca ggtcatatta gatcagggct 5100
cactctcatg gcctcatttt aacttaatca tctctttaaa gattctgtct ccaaataatg 5160
gtcacattct gaggtcctgg ggttgaggac ttcaacatat gcattgtggc cattggggga 5220
gttaggacat gattcagcct atattggtgc attttgcact tggatcatgt agatattttc 5280
catggagctt agaatccatt tcttttcttt ttttgtagac atgaatggac ttattctggg 5340
ctaaatggtg acagagaata ttgagacaat gaaaaatctg gttagatggc acttaacgat 5400
cagttaatag taatcacctt tcaccctttg caaaatgata tttcagggta tgcagaagcg 5460
agcaccccag tccgagatgg ctcctgccag cgtgagcctg agggccacca tcctctgcct 5520
cctggcctgg gctggcctgg ccacaggtga ccgggtgtac atacacccct tccacctcgt 5580
catccacaat gagagtacct gtgagcagct ggcaaaggcc gatgctggga agcccaaaga 5640
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gcaggaccag ctagtgctgg tcgctgcaaa actcgacacc gaggacaagt tgagagccgc 5760
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atggggcgtg gtccatgggg ccaccatcct ctccccaacg gctgtctttg gcaccctggc 5880
ctctctctac ctgggagcgt tggaccacac agccgacagg ctacaggcaa tcctgggcgt 5940
cccttggaag gacaagaact gcacctcccg gctggatgcg cacaaggtcc tctctgccct 6000
gcaggctgta cagggcctgc tggtggccca gggcagggct gacggccagt cccagctgct 6060
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gcagggcctg gctctctatg cccctgtggt cctcccacgc tctctggact tcacagacct 6180
ggaagtcgct gctgagaaga ttgacaggtt catgcaggct gtgacaggat ggaagattag 6240
cagccccctg acgggagcca gtgcggacag caccctggtt ttcaacacct acgtccattt 6300
ccaaggtagg gcaaacccct ctgccggctc tgccctagga cttagtttcc aatgcatagc 6360
tgagctcagc aggtcaggcc ttggagatgg gcaggggcag ccctgcggac atacctggtg 6420
gccaccctcg aggagtgggg aagtggctgc tctgctgggt ccctggatgg atgtccacct 6480
cccggacctg ctgccctact atgcacgact acactacatc ctttttctta catcatttaa 6540
tccccttatg atgtgatgca gaggtatttg tgcctttgtt tactggtaaa gaaatagaga 6600
ctcggagaaa caaagtgcct tgctcaagat ggcactgcca ccagtggggg tcctgggatt 6660
tcagcccaca tctcctggcc ccacagccca gttctacgct cagagggtac gggttcttgt 6720
ctctggagat ggtcaggagc tggggtccct ggcctatgca gaaataagca attggcttgc 6780
ttaaatccct ttcatgttag gaggggcatt actgaaaacc cgtactacaa agatcgttgg 6840
gttttttttt tttttttttt ttttaattga gacagggtct cgctctgtcc cccaggctga 6900
agtgcagtgg tgcaatcatt gttcactgta tccttgaact cctggctgca agcgatcctc 6960
ccacctcagc cttccaaagt gttgggatta caggcatgag ccactgcacc cagccaaaga 7020
ttgcttaaag cattctttta acaaatactc attgaggatt tgctacttgt aagactttaa 7080
gcctggcatc tcagaggagg ccagaggagg gttgtagagg ccctgactcc aggcttttaa 7140
aggtcaatgg gcaaacgcct aggatatgga gctgcaggga aacgtgctgt acaaggtact 7200
cagggagggc tcggagccct cagaggacag aggtcactgg ggagtggaga gcaggcctca 7260
cctggcagtg aggggaacgg ggctggtgaa gccaggagca agcatgatgg gcccagcctg 7320
cagagtttgg ggcaaggaat gaggatgggg tgtttggctt ggcatgagtg ttgaaccaga 7380
aaatgggcct ggggagggca gagctggaga cactttgaat gccatgccag gtaggtgtgg 7440
gaacggggac gcattcgttc agaggtcgtc ccggaagccc gccgtgtgtg gactggaggc 7500
agggagggtt gtttgaaggt tacgcaagag tccaggcaca cagtcacggg aacacgcgct 7560
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ttgatgaggc tccgtcaaga tgtgtaacct cgtgagggac agagagccag gcgggcggtg 7680
aaagacagga cggtggagaa agaggttcag tggcgcgtgg tgattttctc accatggcaa 7740
cattcttgag gtctctcccc gcgggttcag gggaggtgat agacggggga ttgctcagcc 7800
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gtggcatctg aaatgggtct cccttcgaaa gacagcccat ccacctcacc cagacctcag 8040
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cctcccgaga ctgagtgctc cgaggactga ggacgaggaa tatgccaggt ctgccactgc 8760
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ccactgtttc tgaaccatct ctactcagac tcccaagcgt cacgtgccca gaggactgct 8940
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tttcaaggtg agtgggagga cagccgaggg catcctgtga tgcactagtg taaggtcgag 9060
gcagagggcg agctgccgtc atggagagac cccgggtaac tgcttcacac acaagtttgt 9120
gtccttctcc cacgccgggc tctcccgagt tctctgtctt ctccacggcc ctgtgagcgg 9180
ggcagggggt ggggagaaca gagggctcac ccctgccccc agggcccagt gtgcaaatcc 9240
attcgtcaca gcgaggtctt gtgagtctcc tcagtagcaa gggctgctga agaatggagc 9300
cctcgttccc ggagcctgcg tggccagctc tgtattccgt gactgtgatg ggggagggtg 9360
ggggccacag gacagccggc aggctctgcc actgctgcgg ctggacatgg attaaaaagt 9420
gagcatgagc aggggcctct aggagcagtg ggatactgca gtggtggctg cgcgtcattc 9480
tacatgcatg caaacccaca gaatgtaaaa caccaggacg gagccccaaa gaaaaccatc 9540
aactttgggt gctgaggatg tgtcaatgca ggttcatcaa ctgcaataaa tgggccactc 9600
tggtgtgaga tgttgatcac ggggaaggct gtgtgtgggg ggacaggagt tatatgggaa 9660
ctttttgtac tttctgctcg attttgctgt gaacgtagtc actctaaaaa agagtatctc 9720
ttaaaatttt taaaaagtga gtgtgtcaaa tcacagcctc tgtgtcagga cagatgtagg 9780
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ccggttcagt gcctagcatg ttacatgtct tcagcaggtg gcagttaggg ctgcctcagt 9900
gaactcaaat ggctgcattt tgcaggaaga tatgagctac atttggggtc ctgtggccag 9960
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ctccccgtct cctgtctgga tttcagggaa gatgagggac ttcttcctgc tggctgagcc 10140
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catcctgctg ggggtgtgtt ccatgtcctg ctccgcctcc tcctgctaga agtgtgttcc 12660
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tgggaggacg tgaggggcgt ggtagggagg agccggtacg tgagtttggc cactgtggcc 13080
aagtaagggt catctacaca gacacaccct tgcctacact gaggagcagg catacactgt 13140
gcatcctcct ggcagactgg acaatgtctc cctccaggac agtgcacatc acagaggtcc 13200
tgagccctcc ccggccctct agccctcagc accctgggtc acccagtgcg ccctcagaat 13260
gaccctgatg tctgccgctt tgcaggtgct gaacagcatt ttttttgaac tcgaagcgga 13320
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tgtgattata aggtgttatt ccggaagccc ctgggggggt tatgggatat acactatatg 15840
ggccacttta ccttcctaaa atctgaaaaa ttccaacgac tgaaacatgg actgaaggtt 15900
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<223> Primer
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<213> Artificial sequence
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<223> Primer
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<223> Probe
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 19
gccacaggga catgca 16
<210> 20
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 20
tgacccagcc ccggga 16
<210> 21
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 21
tgtgacagcc tgaggc 16
<210> 22
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 22
tccctaggtg tgtgac 16
<210> 23
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 23
gaaacgggag catctc 16
<210> 24
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 24
aaggttccca gaaacg 16
<210> 25
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 25
agtttgcagg agtcgg 16
<210> 26
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 26
tcgagttaca cattta 16
<210> 27
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 27
agagtgagcc ggtgca 16
<210> 28
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 28
actgctgaac agagtg 16
<210> 29
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 29
gcagagtttc actgct 16
<210> 30
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 30
agtgatcgat gcagag 16
<210> 31
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 31
aggaagtctt agtgat 16
<210> 32
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 32
tgggacctct tccagg 16
<210> 33
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 33
ggccagacca caggct 16
<210> 34
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 34
tacatcactt ggccag 16
<210> 35
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 35
agaggagggt tacatc 16
<210> 36
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 36
gtgcacaggc tggaga 16
<210> 37
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 37
tatttatagc tgaggg 16
<210> 38
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 38
cacgatgccc tattta 16
<210> 39
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 39
tacccagaac aacggc 16
<210> 40
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 40
gccatctcag actggg 16
<210> 41
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 41
accggcagga gccatc 16
<210> 42
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 42
tcaggctcac accggc 16
<210> 43
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 43
atggtggccc tcaggc 16
<210> 44
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 44
ggtcacctgc agccag 16
<210> 45
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 45
atgtacaccc ggtcac 16
<210> 46
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 46
ggtactctca ttgtgg 16
<210> 47
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 47
agctgctcac aggtac 16
<210> 48
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 48
cttcccggca ttggcc 16
<210> 49
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 49
agcaggtatg aaggtg 16
<210> 50
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 50
cctgaattgg agcagg 16
<210> 51
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 51
gatgtcttgg cctgaa 16
<210> 52
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 52
cttttcatcc acaggg 16
<210> 53
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 53
agcaccagct ggtcct 16
<210> 54
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 54
tgcagcgact agcacc 16
<210> 55
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 55
tgtcaagttt tgcagc 16
<210> 56
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 56
cggccctcaa cttgtc 16
<210> 57
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 57
tcccgaccat tgcggc 16
<210> 58
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 58
ttggccagca tcccga 16
<210> 59
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 59
gcccaagaag ttggcc 16
<210> 60
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 60
atatacggaa gcccaa 16
<210> 61
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 61
tgcatgccat atatac 16
<210> 62
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 62
gccccatagc tcactg 16
<210> 63
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 63
ggccccatgg accacg 16
<210> 64
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 64
aaagacagcc gttggg 16
<210> 65
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 65
ccagggtgcc aaagac 16
<210> 66
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 66
cagatagaga gaggcc 16
<210> 67
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 67
gtgtggtcca aggctc 16
<210> 68
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 68
cacccaggat tgcctg 16
<210> 69
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 69
ttccaaggaa caccca 16
<210> 70
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 70
agccgggagg tgcagt 16
<210> 71
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 71
tccagccggg aggtgc 16
<210> 72
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 72
acagcctgca gggcag 16
<210> 73
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 73
ccactagcag gccctg 16
<210> 74
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 74
tatcagccct gccctg 16
<210> 75
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 75
tgggcctggc tatcag 16
<210> 76
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 76
cgtggacagc agcagc 16
<210> 77
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 77
gtgaacacgc ccacca 16
<210> 78
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 78
tcaggtgcag gcctgg 16
<210> 79
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 79
gccctgcaca aacggc 16
<210> 80
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 80
tagagagcca ggccct 16
<210> 81
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 81
cgtgggagga ccacag 16
<210> 82
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 82
tgaagtccag agagcg 16
<210> 83
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 83
gcaacatcca gttctg 16
<210> 84
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 84
tcttctcagc agcaac 16
<210> 85
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 85
cctgtcacag cctgca 16
<210> 86
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 86
ttccatcctg tcacag 16
<210> 87
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 87
tgtccaccca gaactc 16
<210> 88
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 88
tgttgtccac ccagaa 16
<210> 89
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 89
tgctgttgtc caccca 16
<210> 90
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 90
aggtgctgtt gtccac 16
<210> 91
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 91
ctgaggtgct gttgtc 16
<210> 92
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 92
acactgaggt gctgtt 16
<210> 93
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 93
cagacactga ggtgct 16
<210> 94
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 94
agcatgggaa cagaca 16
<210> 95
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 95
cccatgccag agagca 16
<210> 96
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 96
actccagtgc tggaag 16
<210> 97
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 97
gtcactccag tgctgg 16
<210> 98
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 98
gtcctggatg tcactc 16
<210> 99
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 99
ccgagaagtt gtcctg 16
<210> 100
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 100
acttgagtca ccgaga 16
<210> 101
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 101
agtgaagggc acttga 16
<210> 102
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 102
ctggatcagc agcagg 16
<210> 103
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 103
ggtcagaggc atagtg 16
<210> 104
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 104
tggaaagtga gaccct 16
<210> 105
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 105
ggagttttgc tggaaa 16
<210> 106
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 106
tccagttgag ggagtt 16
<210> 107
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 107
ggagatagtt tcttca 16
<210> 108
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 108
tcaggtggat ggtccg 16
<210> 109
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 109
tgcagcacca gttggg 16
<210> 110
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 110
ataagatcct tgcagc 16
<210> 111
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 111
agcaggtcct gcaggt 16
<210> 112
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 112
cgggcagctc agcctg 16
<210> 113
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 113
tgcagaatgg cgggca 16
<210> 114
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 114
cagctcggtg tgcaga 16
<210> 115
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 115
tttgcaggtt cagctc 16
<210> 116
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 116
ggtcattgct caattt 16
<210> 117
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 117
accctgatgc ggtcat 16
<210> 118
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 118
gcttcaagct caaaaa 16
<210> 119
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 119
tgttgggtag actctg 16
<210> 120
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 120
caggcttgtt aagctg 16
<210> 121
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 121
tccaagacct caggct 16
<210> 122
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 122
aggaatgggc ggttca 16
<210> 123
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 123
cggcccagga agtgca 16
<210> 124
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 124
gttggccacg cggccc 16
<210> 125
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 125
tgctcagcgg gttggc 16
<210> 126
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 126
ggccctggcc tcatgc 16
<210> 127
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 127
ggccttgcca ggcact 16
<210> 128
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 128
gcctcaaagg ccaggg 16
<210> 129
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 129
cgctgatttg tccggg 16
<210> 130
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 130
ggtgacacat cgctga 16
<210> 131
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 131
gaaaaggtgg gagact 16
<210> 132
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 132
cgactcatta gaagaa 16
<210> 133
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 133
acggctgctt tccagc 16
<210> 134
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 134
ccaaggagaa acggct 16
<210> 135
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 135
cacacttaga ccaagg 16
<210> 136
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 136
tgccgctgca ggcttc 16
<210> 137
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 137
ggtgcatttg tgccgc 16
<210> 138
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 138
tggtcggttg gaattc 16
<210> 139
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 139
acaaacaagc tggtcg 16
<210> 140
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 140
cttgaaaagg gaacac 16
<210> 141
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 141
aacccaattt ttgttc 16
<210> 142
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 142
ggcaatgcaa aaatgt 16
<210> 143
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 143
tacattcaag acacta 16
<210> 144
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 144
ggtcatgttc ttacat 16
<210> 145
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 145
actacacgga ggtcat 16
<210> 146
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 146
tattacagac actaca 16
<210> 147
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 147
ggtgcttgca tctttc 16
<210> 148
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 148
cagaaattca ggtgct 16
<210> 149
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 149
ccgcattcaa acagaa 16
<210> 150
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 150
agctatggtt ccgcat 16
<210> 151
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 151
tactaacaca agggag 16
<210> 152
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 152
ttattgtggc aagacg 16
<210> 153
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 153
ttactaatac agccca 16
<210> 154
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 154
ggtttccctg atgcag 16
<210> 155
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 155
tgatagttgg attcct 16
<210> 156
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 156
tgtggtccca acatgc 16
<210> 157
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 157
ttgaagtcct caaccc 16
<210> 158
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 158
ctcttggatg tcacag 16
<210> 159
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 159
gatggcaaat tttgtt 16
<210> 160
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 160
tgtgttactt gggtaa 16
<210> 161
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 161
gccacacagt gagggc 16
<210> 162
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 162
ctgctgctgg cctttg 16
<210> 163
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 163
gttatctgct gctggc 16
<210> 164
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 164
gggttgttat ctgctg 16
<210> 165
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 165
tcgctgattt gtccgg 16
<210> 166
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 166
catcgctgat ttgtcc 16
<210> 167
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 167
gacacatcgc tgattt 16
<210> 168
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 168
aaaggtggga gactgg 16
<210> 169
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 169
attagaagaa aaggtg 16
<210> 170
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 170
gtcgactcat tagaag 16
<210> 171
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 171
tcaaagtcga ctcatt 16
<210> 172
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 172
cagctcaaag tcgact 16
<210> 173
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 173
gctgctggcc tttgcc 16
<210> 174
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 174
tgctgctggc ctttgc 16
<210> 175
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 175
tctgctgctg gccttt 16
<210> 176
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 176
atctgctgct ggcctt 16
<210> 177
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 177
tatctgctgc tggcct 16
<210> 178
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 178
ttatctgctg ctggcc 16
<210> 179
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 179
tgttatctgc tgctgg 16
<210> 180
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 180
ttgttatctg ctgctg 16
<210> 181
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 181
gttgttatct gctgct 16
<210> 182
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 182
ggttgttatc tgctgc 16
<210> 183
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 183
atcgctgatt tgtccg 16
<210> 184
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 184
acatcgctga tttgtc 16
<210> 185
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 185
cacatcgctg atttgt 16
<210> 186
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 186
acacatcgct gatttg 16
<210> 187
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 187
tgacacatcg ctgatt 16
<210> 188
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 188
gtgacacatc gctgat 16
<210> 189
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 189
gggtgacaca tcgctg 16
<210> 190
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 190
aaaaggtggg agactg 16
<210> 191
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 191
agaaaaggtg ggagac 16
<210> 192
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 192
tagaagaaaa ggtggg 16
<210> 193
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 193
ttagaagaaa aggtgg 16
<210> 194
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 194
cattagaaga aaaggt 16
<210> 195
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 195
tcattagaag aaaagg 16
<210> 196
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 196
ctcattagaa gaaaag 16
<210> 197
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 197
actcattaga agaaaa 16
<210> 198
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 198
gactcattag aagaaa 16
<210> 199
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 199
tcgactcatt agaaga 16
<210> 200
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 200
agtcgactca ttagaa 16
<210> 201
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 201
aagtcgactc attaga 16
<210> 202
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 202
aaagtcgact cattag 16
<210> 203
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 203
caaagtcgac tcatta 16
<210> 204
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 204
ctcaaagtcg actcat 16
<210> 205
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 205
gctcaaagtc gactca 16
<210> 206
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 206
agctcaaagt cgactc 16
<210> 207
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 207
aggccttgcc aggcactgtg 20
<210> 208
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 208
gaggccttgc caggcactgt 20
<210> 209
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 209
agaggccttg ccaggcactg 20
<210> 210
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 210
cagaggcctt gccaggcact 20
<210> 211
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 211
gcagaggcct tgccaggcac 20
<210> 212
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 212
ggcagaggcc ttgccaggca 20
<210> 213
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 213
gggcagaggc cttgccaggc 20
<210> 214
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 214
ctttgcctca aaggccaggg 20
<210> 215
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 215
cctttgcctc aaaggccagg 20
<210> 216
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 216
gcctttgcct caaaggccag 20
<210> 217
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 217
ggcctttgcc tcaaaggcca 20
<210> 218
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 218
tggcctttgc ctcaaaggcc 20
<210> 219
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 219
ctggcctttg cctcaaaggc 20
<210> 220
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 220
gctggccttt gcctcaaagg 20
<210> 221
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 221
tgctggcctt tgcctcaaag 20
<210> 222
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 222
ctgctggcct ttgcctcaaa 20
<210> 223
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 223
gctgctggcc tttgcctcaa 20
<210> 224
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 224
tgctgctggc ctttgcctca 20
<210> 225
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 225
ctgctgctgg cctttgcctc 20
<210> 226
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 226
tctgctgctg gcctttgcct 20
<210> 227
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 227
atctgctgct ggcctttgcc 20
<210> 228
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 228
tatctgctgc tggcctttgc 20
<210> 229
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 229
ttatctgctg ctggcctttg 20
<210> 230
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 230
gttatctgct gctggccttt 20
<210> 231
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 231
tgttatctgc tgctggcctt 20
<210> 232
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 232
ttgttatctg ctgctggcct 20
<210> 233
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 233
gttgttatct gctgctggcc 20
<210> 234
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 234
ggttgttatc tgctgctggc 20
<210> 235
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 235
gggttgttat ctgctgctgg 20
<210> 236
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 236
acatcgctga tttgtccggg 20
<210> 237
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 237
cacatcgctg atttgtccgg 20
<210> 238
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 238
acacatcgct gatttgtccg 20
<210> 239
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 239
gacacatcgc tgatttgtcc 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 240
tgacacatcg ctgatttgtc 20
<210> 241
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 241
gtgacacatc gctgatttgt 20
<210> 242
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 242
ggtgacacat cgctgatttg 20
<210> 243
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 243
gggtgacaca tcgctgattt 20
<210> 244
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 244
aagaaaaggt gggagactgg 20
<210> 245
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 245
gaagaaaagg tgggagactg 20
<210> 246
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 246
agaagaaaag gtgggagact 20
<210> 247
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 247
tagaagaaaa ggtgggagac 20
<210> 248
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 248
ttagaagaaa aggtgggaga 20
<210> 249
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 249
attagaagaa aaggtgggag 20
<210> 250
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 250
cattagaaga aaaggtggga 20
<210> 251
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 251
tcattagaag aaaaggtggg 20
<210> 252
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 252
ctcattagaa gaaaaggtgg 20
<210> 253
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 253
actcattaga agaaaaggtg 20
<210> 254
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 254
gactcattag aagaaaaggt 20
<210> 255
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 255
cgactcatta gaagaaaagg 20
<210> 256
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 256
tcgactcatt agaagaaaag 20
<210> 257
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 257
gtcgactcat tagaagaaaa 20
<210> 258
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 258
agtcgactca ttagaagaaa 20
<210> 259
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 259
aagtcgactc attagaagaa 20
<210> 260
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 260
aaagtcgact cattagaaga 20
<210> 261
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 261
caaagtcgac tcattagaag 20
<210> 262
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 262
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 263
ctcaaagtcg actcattaga 20
<210> 264
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 264
gctcaaagtc gactcattag 20
<210> 265
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 265
agctcaaagt cgactcatta 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 266
cagctcaaag tcgactcatt 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 267
ccagctcaaa gtcgactcat 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 268
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 269
ttccagctca aagtcgactc 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 270
tttccagctc aaagtcgact 20
<210> 271
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 271
ctttccagct caaagtcgac 20
<210> 272
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 272
gctttccagc tcaaagtcga 20
<210> 273
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 273
tgctttccag ctcaaagtcg 20
<210> 274
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 274
ctgctttcca gctcaaagtc 20
<210> 275
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 275
gctgctttcc agctcaaagt 20
<210> 276
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 276
ggctgctttc cagctcaaag 20
<210> 277
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 277
cggctgcttt ccagctcaaa 20
<210> 278
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 278
acggctgctt tccagctcaa 20
<210> 279
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 279
aacggctgct ttccagctca 20
<210> 280
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 280
aaacggctgc tttccagctc 20
<210> 281
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 281
gaaacggctg ctttccagct 20
<210> 282
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 282
agaaacggct gctttccagc 20
<210> 283
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 283
gagaaacggc tgctttccag 20
<210> 284
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 284
ggagaaacgg ctgctttcca 20
<210> 285
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 285
cctgctgccc gctcat 16
<210> 286
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 286
ctgaccctgc tgcccg 16
<210> 287
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 287
cacttctgac cctgct 16
<210> 288
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 288
gtcttgctta ggcaac 16
<210> 289
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 289
ggtgcagagg gcagag 16
<210> 290
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 290
ccggaggtgc agaggg 16
<210> 291
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 291
gcaggccgga ggtgca 16
<210> 292
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 292
gacatgcagg ccggag 16
<210> 293
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 293
acagggacat gcaggc 16
<210> 294
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 294
aggccacagg gacatg 16
<210> 295
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 295
ccaagaggcc acaggg 16
<210> 296
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 296
tacccccaag aggcca 16
<210> 297
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 297
agatgtaccc ccaaga 16
<210> 298
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 298
ccgggagatg tacccc 16
<210> 299
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 299
cagccccggg agatgt 16
<210> 300
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 300
ccttctgacc cagccc 16
<210> 301
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 301
ccaggccttc tgaccc 16
<210> 302
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 302
accacccagg ccttct 16
<210> 303
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 303
ggccaaccac ccaggc 16
<210> 304
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 304
cctgaggcca accacc 16
<210> 305
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 305
gacagcctga ggccaa 16
<210> 306
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 306
tgtgtgacag cctgag 16
<210> 307
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 307
ctaggtgtgt gacagc 16
<210> 308
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 308
tctccctagg tgtgtg 16
<210> 309
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 309
gagcatctcc ctaggt 16
<210> 310
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 310
aacgggagca tctccc 16
<210> 311
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 311
ccagaaacgg gagcat 16
<210> 312
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 312
ggttcccaga aacggg 16
<210> 313
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 313
gccaaggttc ccagaa 16
<210> 314
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 314
gtttgcagga gtcggg 16
<210> 315
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 315
ccgaagtttg caggag 16
<210> 316
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 316
atttaccgaa gtttgc 16
<210> 317
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 317
tacacattta ccgaag 16
<210> 318
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 318
cgagttacac atttac 16
<210> 319
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 319
agggtcgagt tacaca 16
<210> 320
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 320
ggtgcagggt cgagtt 16
<210> 321
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 321
gagccggtgc agggtc 16
<210> 322
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 322
tgaacagagt gagccg 16
<210> 323
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 323
gtttcactgc tgaaca 16
<210> 324
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 324
tcgatgcaga gtttca 16
<210> 325
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 325
gtcttagtga tcgatg 16
<210> 326
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 326
cttccaggaa gtctta 16
<210> 327
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 327
ggacctcttc caggaa 16
<210> 328
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 328
cgctgggacc tcttcc 16
<210> 329
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 329
actcacgctg ggacct 16
<210> 330
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 330
gcgacactca cgctgg 16
<210> 331
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 331
cagaagcgac actcac 16
<210> 332
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 332
gatgccagaa gcgaca 16
<210> 333
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 333
ggacagatgc cagaag 16
<210> 334
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 334
cagaaggaca gatgcc 16
<210> 335
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 335
ctggccagaa ggacag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 336
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<210> 337
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 337
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<210> 338
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 338
tggccagacc acaggc 16
<210> 339
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 339
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 340
ttacatcact tggcca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 341
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<210> 342
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 342
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<210> 343
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 343
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 344
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 345
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 346
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 347
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 348
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 349
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 350
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 351
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 352
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 353
gttcagggtc acctcc 16
<210> 354
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 354
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<210> 355
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 355
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<210> 356
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 356
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<210> 357
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 357
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 358
cagcaaacag gaatgg 16
<210> 359
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 359
tacacagcaa acagga 16
<210> 360
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 360
gatcatacac agcaaa 16
<210> 361
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 361
tttgatcata cacagc 16
<210> 362
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 362
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 363
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<210> 364
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 364
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 365
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 366
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 367
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 368
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 369
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 370
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 372
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 373
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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tcatgctgtg ctcagc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 375
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 376
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 377
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 378
ctggcctcat gctgtg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 379
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 380
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 381
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 382
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 383
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 384
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 385
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 386
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 387
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<210> 388
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 388
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 389
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 390
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<210> 391
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 391
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<210> 392
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 392
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<210> 393
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 393
gctggccttt gcctca 16
<210> 394
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 394
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 395
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<210> 396
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 396
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 397
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 398
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 399
cggctgcttt ccagct 16
<210> 400
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 400
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 401
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 402
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 403
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<210> 404
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 404
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 405
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 406
aggagaaacg gctgct 16
<210> 407
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 407
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 408
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 409
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 410
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 412
tagaccaagg agaaac 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 413
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<210> 414
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 414
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 415
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<210> 416
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<210> 417
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 417
agcacactta gaccaa 16
<210> 418
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 418
cagcacactt agacca 16
<210> 419
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 419
gcagcacact tagacc 16
<210> 420
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 420
tgcagcacac ttagac 16
<210> 421
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 421
atgcagcaca cttaga 16
<210> 422
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 422
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<210> 423
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 423
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<210> 424
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 424
tccatgcagc acactt 16
<210> 425
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 425
ctccatgcag cacact 16
<210> 426
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 426
actccatgca gcacac 16
<210> 427
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 427
cactccatgc agcaca 16
<210> 428
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 428
tcactccatg cagcac 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 429
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<210> 430
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 430
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<210> 431
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 431
ccgctgcagg cttcta 16
<210> 432
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 432
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<210> 433
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 433
gtgccgctgc aggctt 16
<210> 434
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 434
tgtgccgctg caggct 16
<210> 435
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 435
ttgtgccgct gcaggc 16
<210> 436
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 436
tttgtgccgc tgcagg 16
<210> 437
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 437
atttgtgccg ctgcag 16
<210> 438
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 438
catttgtgcc gctgca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 439
gcatttgtgc cgctgc 16
<210> 440
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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tgcatttgtg ccgctg 16
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<211> 16
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 442
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 462
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 504
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 520
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<210> 523
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 523
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<210> 524
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 525
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<210> 526
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<210> 527
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 527
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<210> 528
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 530
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 532
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<210> 533
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<210> 542
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 542
cactaaatac aaaccg 16
<210> 543
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 543
gacactaaat acaaac 16
<210> 544
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 544
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<210> 545
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 545
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<212> DNA
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<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 546
ttcaagacac taaata 16
<210> 547
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 547
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<210> 548
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 548
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<210> 549
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 549
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 550
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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acggaggtca tgttct 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 564
tttggaggct tattgt 16
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 567
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<212> DNA
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 570
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 590
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 593
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 599
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 605
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 606
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 609
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 610
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 612
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 619
caacggcagc ttcttc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 620
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 621
ccagaacaac ggcagc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 624
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 625
cttctgctgt agtacc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 626
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 628
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 629
cttccgcata cccttc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 630
tcgcttccgc ataccc 16
<210> 631
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 631
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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gggtgctcgc ttccgc 16
<210> 633
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 634
caccggcagg agccat 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 635
tcacaccggc aggagc 16
<210> 636
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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ggctcacacc ggcagg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 638
gtggccctca ggctca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 639
cagaggatgg tggccc 16
<210> 640
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 640
cccggtcacc tgcagc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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acacccggtc acctgc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 642
tgtacacccg gtcacc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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gtatgtacac ccggtc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 644
ggtgtatgta cacccg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 645
tgacgaggtg gaaggg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 647
tgtggatgac gaggtg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 648
cattgtggat gacgag 16
<210> 649
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 649
tctcattgtg gatgac 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 650
ctctcattgt ggatga 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 651
actctcattg tggatg 16
<210> 652
<211> 16
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 652
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 653
gtactctcat tgtgga 16
<210> 654
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 654
caggtactct cattgt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 655
acaggtactc tcattg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 656
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 657
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 658
ctcacaggta ctctca 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 659
ctgctcacag gtactc 16
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 660
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 662
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 664
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 665
tcccggcatt ggcctt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 666
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 667
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 670
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 671
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 672
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 673
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 674
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 675
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 676
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 677
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 679
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 680
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 681
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 682
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 686
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 691
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 692
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 693
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 694
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 695
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 698
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 700
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 701
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 702
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 703
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 704
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 705
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 706
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 707
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 708
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 710
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 712
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 713
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 714
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 715
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<210> 716
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 720
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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atatatacgg aagccc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 722
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 723
catgccatat atacgg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 724
gtgcatgcca tatata 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 729
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 730
atggaccacg ccccat 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 731
ccccatggac cacgcc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 732
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 733
cggtggcccc atggac 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 734
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 735
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 736
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 737
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 738
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 739
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 740
aggccagggt gccaaa 16
<210> 741
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 741
tcccagatag agagag 16
<210> 742
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 742
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<210> 743
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 743
caaggctccc agatag 16
<210> 744
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 744
gtccaaggct cccaga 16
<210> 745
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 745
gtggtccaag gctccc 16
<210> 746
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 746
tgtgtggtcc aaggct 16
<210> 747
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 747
agctgtgtgg tccaag 16
<210> 748
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 748
gtcagctgtg tggtcc 16
<210> 749
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 749
cagaggcata gtgagg 16
<210> 750
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 750
ccaggtcaga ggcata 16
<210> 751
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 751
ttgtccaggt cagagg 16
<210> 752
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 752
accttgtcca ggtcag 16
<210> 753
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 753
ccctccacct tgtcca 16
<210> 754
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 754
gagaccctcc accttg 16
<210> 755
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 755
aagtgagacc ctccac 16
<210> 756
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 756
tgctggaaag tgagac 16
<210> 757
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 757
ttttgctgga aagtga 16
<210> 758
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 758
gagttttgct ggaaag 16
<210> 759
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 759
agggagtttt gctgga 16
<210> 760
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 760
gttgagggag ttttgc 16
<210> 761
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 761
ccagttgagg gagttt 16
<210> 762
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 762
catccagttg agggag 16
<210> 763
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 763
cttcatccag ttgagg 16
<210> 764
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 764
agatagtttc ttcatc 16
<210> 765
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 765
aggtggatgg tccggg 16
<210> 766
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 766
gtcaggtgga tggtcc 16
<210> 767
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 767
catggtcagg tggatg 16
<210> 768
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 768
gggcatggtc aggtgg 16
<210> 769
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 769
ccttgcagca ccagtt 16
<210> 770
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 770
gatccttgca gcacca 16
<210> 771
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 771
taagatcctt gcagca 16
<210> 772
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 772
tcataagatc cttgca 16
<210> 773
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 773
caggtcataa gatcct 16
<210> 774
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 774
ctgcaggtca taagat 16
<210> 775
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 775
gtcctgcagg tcataa 16
<210> 776
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 776
cgagcaggtc ctgcag 16
<210> 777
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 777
gggcgagcag gtcctg 16
<210> 778
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 778
cctgggcgag caggtc 16
<210> 779
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 779
tggcgggcag ctcagc 16
<210> 780
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 780
gaatggcggg cagctc 16
<210> 781
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 781
gcagaatggc gggcag 16
<210> 782
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 782
tgtgcagaat ggcggg 16
<210> 783
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 783
cggtgtgcag aatggc 16
<210> 784
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 784
gctcggtgtg cagaat 16
<210> 785
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 785
tcagctcggt gtgcag 16
<210> 786
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 786
ggttcagctc ggtgtg 16
<210> 787
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 787
gcaggttcag ctcggt 16
<210> 788
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 788
tttttgcagg ttcagc 16
<210> 789
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 789
caatttttgc aggttc 16
<210> 790
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 790
gctcaatttt tgcagg 16
<210> 791
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 791
attgctcaat ttttgc 16
<210> 792
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 792
gtcattgctc aatttt 16
<210> 793
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 793
gcggtcattg ctcaat 16
<210> 794
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 794
gatgcggtca ttgctc 16
<210> 795
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 795
cctgatgcgg tcattg 16
<210> 796
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 796
caccctgatg cggtca 16
<210> 797
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 797
ccccaccctg atgcgg 16
<210> 798
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 798
ctcccccacc ctgatg 16
<210> 799
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 799
gttcagcacc tccccc 16
<210> 800
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 800
gctgttcagc acctcc 16
<210> 801
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 801
aatgctgttc agcacc 16
<210> 802
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 802
aaaaatgctg ttcagc 16
<210> 803
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 803
cttcaagctc aaaaaa 16
<210> 804
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 804
ccgcttcaag ctcaaa 16
<210> 805
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 805
catccgcttc aagctc 16
<210> 806
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 806
tctcatccgc ttcaag 16
<210> 807
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 807
ctctctcatc cgcttc 16
<210> 808
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 808
gctctctctc atccgc 16
<210> 809
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 809
gtgggctctc tctcat 16
<210> 810
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 810
actctgtggg ctctct 16
<210> 811
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 811
tagactctgt gggctc 16
<210> 812
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 812
tgggtagact ctgtgg 16
<210> 813
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 813
agctgttggg tagact 16
<210> 814
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 814
ttaagctgtt gggtag 16
<210> 815
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 815
ttgttaagct gttggg 16
<210> 816
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 816
ggcttgttaa gctgtt 16
<210> 817
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 817
tcaggcttgt taagct 16
<210> 818
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 818
acctcaggct tgttaa 16
<210> 819
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 819
aagacctcag gcttgt 16
<210> 820
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 820
acacggaggt catgtt 16
<210> 821
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 821
tacacggagg tcatgt 16
<210> 822
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 822
ctacacggag gtcatg 16
<210> 823
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 823
cactacacgg aggtca 16
<210> 824
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 824
acactacacg gaggtc 16
<210> 825
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 825
gacactacac ggaggt 16
<210> 826
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 826
agacactaca cggagg 16
<210> 827
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 827
cagacactac acggag 16
<210> 828
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 828
acagacacta cacgga 16
<210> 829
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 829
tacagacact acacgg 16
<210> 830
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 830
ttacagacac tacacg 16
<210> 831
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 831
attacagaca ctacac 16
<210> 832
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 832
gtattacaga cactac 16
<210> 833
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 833
ctaaggtatt acagac 16
<210> 834
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 834
actaaggtat tacaga 16
<210> 835
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 835
aactaaggta ttacag 16
<210> 836
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 836
aaactaaggt attaca 16
<210> 837
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 837
aaaactaagg tattac 16
<210> 838
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 838
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<210> 839
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 839
caagcatctg tggaaa 16
<210> 840
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 840
cacaagcatc tgtgga 16
<210> 841
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 841
tcacaagcat ctgtgg 16
<210> 842
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 842
atcacaagca tctgtg 16
<210> 843
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 843
aatcacaagc atctgt 16
<210> 844
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 844
gtattgttca aaaatc 16
<210> 845
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 845
cgtattgttc aaaaat 16
<210> 846
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 846
aggtgcttgc atcttt 16
<210> 847
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 847
caggtgcttg catctt 16
<210> 848
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 848
tcaggtgctt gcatct 16
<210> 849
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 849
ttcaggtgct tgcatc 16
<210> 850
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 850
attcaggtgc ttgcat 16
<210> 851
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 851
aattcaggtg cttgca 16
<210> 852
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 852
aaattcaggt gcttgc 16
<210> 853
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 853
gaaattcagg tgcttg 16
<210> 854
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 854
agaaattcag gtgctt 16
<210> 855
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 855
acagaaattc aggtgc 16
<210> 856
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 856
cgcattcaaa cagaaa 16
<210> 857
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 857
tccgcattca aacaga 16
<210> 858
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 858
ttccgcattc aaacag 16
<210> 859
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 859
gttccgcatt caaaca 16
<210> 860
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 860
ggttccgcat tcaaac 16
<210> 861
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 861
tggttccgca ttcaaa 16
<210> 862
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 862
atggttccgc attcaa 16
<210> 863
<211> 16
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 863
tatggttccg cattca 16
<210> 864
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 864
ctatggttcc gcattc 16
<210> 865
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 865
gctatggttc cgcatt 16
<210> 866
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 866
cagctatggt tccgca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 867
ccagctatgg ttccgc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 868
accagctatg gttccg 16
<210> 869
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 869
aaccagctat ggttcc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 870
taaccagcta tggttc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 871
ataaccagct atggtt 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 872
aaataaccag ctatgg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 873
gaaataacca gctatg 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 874
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 875
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 876
actaacacaa gggaga 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 877
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 878
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 879
tattactaac acaagg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 880
ttattactaa cacaag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 881
gtttattact aacaca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 882
cgtttattac taacac 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 883
cttattgtgg caagac 16
<210> 884
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 884
gcttattgtg gcaaga 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 885
ggcttattgt ggcaag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 886
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 887
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 888
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 889
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 890
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 891
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 892
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 893
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 894
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 895
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 896
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 897
cttgtccttc caagga 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 898
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 899
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 900
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 901
ggaggtgcag ttcttg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 902
ccgggaggtg cagttc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 903
cagccgggag gtgcag 16
<210> 904
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 904
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 905
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 906
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 907
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 908
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 909
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 910
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 911
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 912
gccctgtaca gcctgc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 913
gcaggccctg tacagc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 914
ctagcaggcc ctgtac 16
<210> 915
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 915
gccactagca ggccct 16
<210> 916
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 916
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 917
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 918
ctgccctggg ccacta 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 919
ggctatcagc cctgcc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 920
cctggctatc agccct 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 921
gggcctggct atcagc 16
<210> 922
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 922
gctgggcctg gctatc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 923
ccgtggacag cagcag 16
<210> 924
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 924
ccaccgtgga cagcag 16
<210> 925
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 925
ccaccaccgt ggacag 16
<210> 926
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 926
cgcccaccac cgtgga 16
<210> 927
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 927
acacgcccac caccgt 16
<210> 928
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 928
tgaacacgcc caccac 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 929
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 930
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 931
gcttcaggtg caggcc 16
<210> 932
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 932
gctgcttcag gtgcag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 933
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<210> 934
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 934
caaacggctg cttcag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 935
gcacaaacgg ctgctt 16
<210> 936
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 936
cctgcacaaa cggctg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 937
ggccctgcac aaacgg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 938
gtatagagag ccaggc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 939
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 940
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<210> 941
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 941
ccagttctgt gaagtc 16
<210> 942
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 942
catccagttc tgtgaa 16
<210> 943
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 943
caacatccag ttctgt 16
<210> 944
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 944
cagcaacatc cagttc 16
<210> 945
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 945
caatcttctc agcagc 16
<210> 946
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 946
tgtcaatctt ctcagc 16
<210> 947
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 947
acctgtcaat cttctc 16
<210> 948
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 948
tgaacctgtc aatctt 16
<210> 949
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 949
gcatgaacct gtcaat 16
<210> 950
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 950
cctgcatgaa cctgtc 16
<210> 951
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 951
cagcctgcat gaacct 16
<210> 952
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 952
cacagcctgc atgaac 16
<210> 953
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 953
tcacagcctg catgaa 16
<210> 954
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 954
atcctgtcac agcctg 16
<210> 955
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 955
ccatcctgtc acagcc 16
<210> 956
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 956
tccatcctgt cacagc 16
<210> 957
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 957
cttccatcct gtcaca 16
<210> 958
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 958
agtcttccat cctgtc 16
<210> 959
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 959
agccagtctt ccatcc 16
<210> 960
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 960
cacccagaac tcctgg 16
<210> 961
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 961
gtccacccag aactcc 16
<210> 962
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 962
gttgtccacc cagaac 16
<210> 963
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 963
gctgttgtcc acccag 16
<210> 964
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 964
ggtgctgttg tccacc 16
<210> 965
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 965
tgaggtgctg ttgtcc 16
<210> 966
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 966
cactgaggtg ctgttg 16
<210> 967
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 967
catgggaaca gacact 16
<210> 968
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 968
gagcatggga acagac 16
<210> 969
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 969
agagagcatg ggaaca 16
<210> 970
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 970
gccagagagc atggga 16
<210> 971
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 971
catgccagag agcatg 16
<210> 972
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 972
gcccatgcca gagagc 16
<210> 973
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 973
ggtgcccatg ccagag 16
<210> 974
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 974
gaaggtgccc atgcca 16
<210> 975
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 975
ctggaaggtg cccatg 16
<210> 976
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 976
agtgctggaa ggtgcc 16
<210> 977
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 977
tccagtgctg gaaggt 16
<210> 978
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 978
cactccagtg ctggaa 16
<210> 979
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 979
tgtcactcca gtgctg 16
<210> 980
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 980
atgtcactcc agtgct 16
<210> 981
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 981
gatgtcactc cagtgc 16
<210> 982
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 982
ggatgtcact ccagtg 16
<210> 983
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 983
tggatgtcac tccagt 16
<210> 984
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 984
cctggatgtc actcca 16
<210> 985
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 985
tgtcctggat gtcact 16
<210> 986
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 986
agttgtcctg gatgtc 16
<210> 987
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 987
agaagttgtc ctggat 16
<210> 988
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 988
tcaccgagaa gttgtc 16
<210> 989
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 989
gagtcaccga gaagtt 16
<210> 990
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 990
cttgagtcac cgagaa 16
<210> 991
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 991
gcacttgagt caccga 16
<210> 992
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 992
agggcacttg agtcac 16
<210> 993
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 993
tgaagggcac ttgagt 16
<210> 994
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 994
cagtgaaggg cacttg 16
<210> 995
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 995
tctcagtgaa gggcac 16
<210> 996
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 996
cgctctcagt gaaggg 16
<210> 997
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 997
agcagcaggc aggcgc 16
<210> 998
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 998
gatcagcagc aggcag 16
<210> 999
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 999
gctggatcag cagcag 16
<210> 1000
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1000
gaggctggat cagcag 16
<210> 1001
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1001
agtgaggctg gatcag 16
<210> 1002
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1002
catagtgagg ctggat 16
<210> 1003
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1003
aggcatagtg aggctg 16
<210> 1004
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1004
agacacacag gccgcc 16
<210> 1005
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1005
acactaactg gagagc 16
<210> 1006
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1006
agagggcgga ttgcaa 16
<210> 1007
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1007
cagagggcgg attgca 16
<210> 1008
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1008
tctcagaggg cggatt 16
<210> 1009
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1009
ctctcagagg gcggat 16
<210> 1010
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1010
tctctcagag ggcgga 16
<210> 1011
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1011
gctgtgtgtc aggtgt 16
<210> 1012
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1012
aagaagctct tggatg 16
<210> 1013
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1013
tccaagaagc tcttgg 16
<210> 1014
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1014
ccagccgcca gccgcc 16
<210> 1015
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1015
ttagtgtttc agcagg 16
<210> 1016
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1016
agttagtgtt tcagca 16
<210> 1017
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1017
aacctcgagg acatcg 16
<210> 1018
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1018
acttataaga gctgac 16
<210> 1019
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1019
agcacttata agagct 16
<210> 1020
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1020
gcagtgttct tgatga 16
<210> 1021
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1021
acagcagtgt tcttga 16
<210> 1022
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1022
ataatgcact gtgtct 16
<210> 1023
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1023
gatgaggacc taggaa 16
<210> 1024
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1024
ccgatgagga cctagg 16
<210> 1025
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1025
acgacaggga tgtttg 16
<210> 1026
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1026
ggtcaggcac agacac 16
<210> 1027
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1027
atcccggttt caactc 16
<210> 1028
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1028
tcccgctggc ccccgt 16
<210> 1029
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1029
ctaacttagc acagag 16
<210> 1030
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1030
ccatggccca ccagtg 16
<210> 1031
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1031
ttggccatgg cccacc 16
<210> 1032
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1032
ggcagaattc ctggct 16
<210> 1033
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1033
gcaagggtgt gtctgt 16
<210> 1034
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1034
ggcaagggtg tgtctg 16
<210> 1035
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1035
ctcagtgtag gcaagg 16
<210> 1036
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1036
gaggatgcac agtgta 16
<210> 1037
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1037
gctcaggacc tctgtg 16
<210> 1038
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1038
ggctcaggac ctctgt 16
<210> 1039
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1039
ggcgcactgg gtgacc 16
<210> 1040
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1040
tctgagggcg cactgg 16
<210> 1041
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1041
tcattctgag ggcgca 16
<210> 1042
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1042
gctcctaccg gggaga 16
<210> 1043
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1043
acacatacct ccccca 16
<210> 1044
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1044
cgcataccct gaaata 16
<210> 1045
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1045
ggatggtcct ggggag 16
<210> 1046
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1046
ttcagcacct gcaaag 16
<210> 1047
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1047
ccggcttacc ttctgc 16
<210> 1048
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1048
cccccggctt accttc 16
<210> 1049
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1049
gggcccccgg cttacc 16
<210> 1050
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1050
gtgaatgtga gccccg 16
<210> 1051
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1051
tccctcctta taaccc 16
<210> 1052
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1052
ccgggcactc tcaact 16
<210> 1053
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1053
agtaatggtg ctctgg 16
<210> 1054
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1054
tcctgggagt aatggt 16
<210> 1055
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1055
tctcagttgt gatctg 16
<210> 1056
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1056
tccagagacg caattc 16
<210> 1057
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1057
tctccagaga cgcaat 16
<210> 1058
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1058
acctgtggga accgac 16
<210> 1059
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1059
aaacctgtgg gaaccg 16
<210> 1060
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1060
cctagatttt tctgct 16
<210> 1061
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1061
gccttttctg tccccc 16
<210> 1062
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1062
catttcttgt ggaggg 16
<210> 1063
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1063
tgggctggcc ctgcta 16
<210> 1064
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1064
gagccccaaa ggcatg 16
<210> 1065
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1065
tctaatatga cctgtg 16
<210> 1066
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1066
tgatctaata tgacct 16
<210> 1067
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1067
gtcctcaacc ccagga 16
<210> 1068
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1068
gctccatgga aaatat 16
<210> 1069
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1069
tccattcatg tctaca 16
<210> 1070
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1070
ttaagtgcca tctaac 16
<210> 1071
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1071
gcataccctg aaatat 16
<210> 1072
<211> 16
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1072
tgtctactcc ccaccc 16
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<211> 16
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1073
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1074
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1076
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1092
agggagcagc cagtct 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1094
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1095
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1100
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1111
agaagccctt catctt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1112
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1114
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<210> 1116
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1118
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1120
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1121
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<210> 1122
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1122
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<210> 1123
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1123
ccgagacagc ccccga 16
<210> 1124
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1124
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1125
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<210> 1126
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1126
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1127
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1128
tctctagtgg gacaca 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1129
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1130
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1131
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1132
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1133
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<210> 1134
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1134
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1135
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1138
tgagtagaga tggttc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1139
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1140
gccctcggct gtcctc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1141
ctcgacctta cactag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1142
cctctgcctc gacctt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1143
aactcgggag agcccg 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1144
aacgagggct ccattc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1145
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1148
ctggtacctg ccaggt 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1149
agttcactga ggcagc 16
<210> 1150
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1150
ccatttgagt tcactg 16
<210> 1151
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1151
gcagccattt gagttc 16
<210> 1152
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1152
aaggcccaga tcctgc 16
<210> 1153
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1153
gaaatccaga caggag 16
<210> 1154
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1154
tgccttacct tggaag 16
<210> 1155
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1155
catcttccct gaaatc 16
<210> 1156
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1156
aggtatgtcc gcaggg 16
<210> 1157
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1157
tagtagggca gcaggt 16
<210> 1158
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1158
ttgtttctcc gagtct 16
<210> 1159
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1159
aggcactttg tttctc 16
<210> 1160
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1160
caaggcactt tgtttc 16
<210> 1161
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1161
tagaactggg ctgtgg 16
<210> 1162
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1162
ccctcctaac atgaaa 16
<210> 1163
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1163
cttacaagta gcaaat 16
<210> 1164
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1164
gccaggctta aagtct 16
<210> 1165
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1165
attgaccttt aaaagc 16
<210> 1166
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1166
tctggttcaa cactca 16
<210> 1167
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1167
ttcccgtgac tgtgtg 16
<210> 1168
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1168
cgagctgctc cctgag 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1169
caccccaccc atggat 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1170
tctctgtccc tcacga 16
<210> 1171
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1171
tttcgaaggg agaccc 16
<210> 1172
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1172
catctagctg cctgct 16
<210> 1173
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1173
tgggacacat ctagct 16
<210> 1174
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1174
atcctcaggt cctctc 16
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1175
atggttcaga aacagt 16
<210> 1176
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1176
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1177
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<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1178
atcgagcaga aagtac 16
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1179
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1180
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1181
ctgaccctgc tgcccgctca 20
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1182
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1183
tcttgcttag gcaacacggg 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1184
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1192
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1194
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1196
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1197
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1198
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1200
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1201
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1202
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1204
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1210
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1212
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1215
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1220
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1221
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<210> 1222
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1222
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<210> 1223
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1223
gcgacactca cgctgggacc 20
<210> 1224
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1224
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<210> 1225
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1225
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<210> 1226
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1226
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1227
tggccagaag gacagatgcc 20
<210> 1228
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1228
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<210> 1229
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1229
cagaccacag gctggccaga 20
<210> 1230
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1230
cttggccaga ccacaggctg 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1231
acatcacttg gccagaccac 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1232
agggttacat cacttggcca 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1233
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1234
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1235
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1240
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1241
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<210> 1242
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1242
ccgggtcacg atgccctatt 20
<210> 1243
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1243
ccccggccgg gtcacgatgc 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1244
ttcccccggc cgggtcacga 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1246
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1247
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1248
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1249
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1250
cagaacaacg gcagcttctt 20
<210> 1251
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1251
acccagaaca acggcagctt 20
<210> 1252
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1252
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<210> 1253
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1253
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<210> 1254
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1254
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<210> 1255
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1255
ttctgctgta gtacccagaa 20
<210> 1256
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1256
cccttctgct gtagtaccca 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1257
atacccttct gctgtagtac 20
<210> 1258
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1258
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1259
ttccgcatac ccttctgctg 20
<210> 1260
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1260
cgcttccgca tacccttctg 20
<210> 1261
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1262
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<210> 1263
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1263
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<210> 1264
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1264
ggcaggagcc atctcagact 20
<210> 1265
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1265
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<210> 1266
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1266
cacaccggca ggagccatct 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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caggctcaca ccggcaggag 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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cctcaggctc acaccggcag 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1270
ggccctcagg ctcacaccgg 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1271
ggtggccctc aggctcacac 20
<210> 1272
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1272
gatggtggcc ctcaggctca 20
<210> 1273
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1273
gaggatggtg gccctcaggc 20
<210> 1274
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1274
gcagaggatg gtggccctca 20
<210> 1275
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1275
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1277
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1278
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1279
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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ccccatagct cactgtgcat 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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acgccccata gctcactgtg 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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accacgcccc atagctcact 20
<210> 1361
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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ccatggacca cgccccatag 20
<210> 1363
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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gccccatgga ccacgcccca 20
<210> 1364
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1364
gtggccccat ggaccacgcc 20
<210> 1365
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1365
acggtggccc catggaccac 20
<210> 1366
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1366
aggacggtgg ccccatggac 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1367
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1371
aggccagggt gccaaagaca 20
<210> 1372
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1372
gagaggccag ggtgccaaag 20
<210> 1373
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1373
agagagaggc cagggtgcca 20
<210> 1374
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1374
gatagagaga ggccagggtg 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1375
ccagatagag agaggccagg 20
<210> 1376
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1376
ctcccagata gagagaggcc 20
<210> 1377
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1377
aggctcccag atagagagag 20
<210> 1378
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1378
ccaaggctcc cagatagaga 20
<210> 1379
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1379
ggtccaaggc tcccagatag 20
<210> 1380
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1380
tgtggtccaa ggctcccaga 20
<210> 1381
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1381
ctgtgtggtc caaggctccc 20
<210> 1382
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1382
cagctgtgtg gtccaaggct 20
<210> 1383
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1383
tgtcagctgt gtggtccaag 20
<210> 1384
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1384
gcctgtcagc tgtgtggtcc 20
<210> 1385
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1385
gtagcctgtc agctgtgtgg 20
<210> 1386
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1386
cctgtagcct gtcagctgtg 20
<210> 1387
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1387
ttgcctgtag cctgtcagct 20
<210> 1388
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1388
ggattgcctg tagcctgtca 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1389
ccaggattgc ctgtagcctg 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1390
cacccaggat tgcctgtagc 20
<210> 1391
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1391
gaacacccag gattgcctgt 20
<210> 1392
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1392
aaggaacacc caggattgcc 20
<210> 1393
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1393
tccaaggaac acccaggatt 20
<210> 1394
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1394
ccttccaagg aacacccagg 20
<210> 1395
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1395
tgtccttcca aggaacaccc 20
<210> 1396
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1396
tcttgtcctt ccaaggaaca 20
<210> 1397
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1397
agttcttgtc cttccaagga 20
<210> 1398
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1398
tgcagttctt gtccttccaa 20
<210> 1399
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1399
aggtgcagtt cttgtccttc 20
<210> 1400
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1400
gggaggtgca gttcttgtcc 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1401
gccgggaggt gcagttcttg 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1402
ccagccggga ggtgcagttc 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1403
catccagccg ggaggtgcag 20
<210> 1404
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1404
gcgcatccag ccgggaggtg 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1405
tgtgcgcatc cagccgggag 20
<210> 1406
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1406
ccttgtgcgc atccagccgg 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1407
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1408
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1409
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<210> 1410
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1410
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<210> 1411
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1411
gcagggcaga caggaccttg 20
<210> 1412
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1412
cctgcagggc agacaggacc 20
<210> 1413
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1413
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<210> 1414
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1414
gtacagcctg cagggcagac 20
<210> 1415
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1415
cctgtacagc ctgcagggca 20
<210> 1416
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1416
ggccctgtac agcctgcagg 20
<210> 1417
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1417
gcaggccctg tacagcctgc 20
<210> 1418
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1418
ctagcaggcc ctgtacagcc 20
<210> 1419
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1419
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<210> 1420
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1420
gggccactag caggccctgt 20
<210> 1421
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1421
cctgggccac tagcaggccc 20
<210> 1422
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1422
tgccctgggc cactagcagg 20
<210> 1423
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1423
ccctgccctg ggccactagc 20
<210> 1424
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1424
cagccctgcc ctgggccact 20
<210> 1425
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1425
tatcagccct gccctgggcc 20
<210> 1426
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1426
ggctatcagc cctgccctgg 20
<210> 1427
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1427
cctggctatc agccctgccc 20
<210> 1428
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1428
gggcctggct atcagccctg 20
<210> 1429
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1429
gctgggcctg gctatcagcc 20
<210> 1430
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1430
gcagctgggc ctggctatca 20
<210> 1431
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1431
gcagcagctg ggcctggcta 20
<210> 1432
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1432
acagcagcag ctgggcctgg 20
<210> 1433
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1433
tggacagcag cagctgggcc 20
<210> 1434
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1434
ccgtggacag cagcagctgg 20
<210> 1435
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1435
ccaccgtgga cagcagcagc 20
<210> 1436
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1436
ccaccaccgt ggacagcagc 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1437
cgcccaccac cgtggacagc 20
<210> 1438
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1438
acacgcccac caccgtggac 20
<210> 1439
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1439
tgaacacgcc caccaccgtg 20
<210> 1440
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1440
ctgtgaacac gcccaccacc 20
<210> 1441
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1441
gggctgtgaa cacgcccacc 20
<210> 1442
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1442
gcttcaggtg caggcctggg 20
<210> 1443
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1443
gctgcttcag gtgcaggcct 20
<210> 1444
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1444
acggctgctt caggtgcagg 20
<210> 1445
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1445
caaacggctg cttcaggtgc 20
<210> 1446
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1446
gcacaaacgg ctgcttcagg 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1447
cctgcacaaa cggctgcttc 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1448
ggccctgcac aaacggctgc 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1449
ccaggccctg cacaaacggc 20
<210> 1450
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1450
gagccaggcc ctgcacaaac 20
<210> 1451
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1451
agagagccag gccctgcaca 20
<210> 1452
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1452
tatagagagc caggccctgc 20
<210> 1453
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1453
gggtatagag agccaggccc 20
<210> 1454
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1454
tctgtgaagt ccagagagcg 20
<210> 1455
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1455
agttctgtga agtccagaga 20
<210> 1456
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1456
tccagttctg tgaagtccag 20
<210> 1457
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1457
acatccagtt ctgtgaagtc 20
<210> 1458
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1458
gcaacatcca gttctgtgaa 20
<210> 1459
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1459
gcagcaacat ccagttctgt 20
<210> 1460
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1460
tcagcagcaa catccagttc 20
<210> 1461
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1461
ttctcagcag caacatccag 20
<210> 1462
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1462
atcttctcag cagcaacatc 20
<210> 1463
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1463
tcaatcttct cagcagcaac 20
<210> 1464
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1464
ctgtcaatct tctcagcagc 20
<210> 1465
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1465
aacctgtcaa tcttctcagc 20
<210> 1466
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1466
atgaacctgt caatcttctc 20
<210> 1467
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1467
tgcatgaacc tgtcaatctt 20
<210> 1468
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1468
gcctgcatga acctgtcaat 20
<210> 1469
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1469
acagcctgca tgaacctgtc 20
<210> 1470
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1470
gtcacagcct gcatgaacct 20
<210> 1471
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1471
cctgtcacag cctgcatgaa 20
<210> 1472
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1472
catcctgtca cagcctgcat 20
<210> 1473
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1473
ttccatcctg tcacagcctg 20
<210> 1474
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1474
gtcttccatc ctgtcacagc 20
<210> 1475
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1475
ccagtcttcc atcctgtcac 20
<210> 1476
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1476
cagccagtct tccatcctgt 20
<210> 1477
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1477
gagcagccag tcttccatcc 20
<210> 1478
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1478
agggagcagc cagtcttcca 20
<210> 1479
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1479
atcagggagc agccagtctt 20
<210> 1480
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1480
cccatcaggg agcagccagt 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1481
gctcccatca gggagcagcc 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1482
ctggctccca tcagggagca 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1483
acactggctc ccatcaggga 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1484
tccacactgg ctcccatcag 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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ctgtccacac tggctcccat 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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gtgctgtcca cactggctcc 20
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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agggtgctgt ccacactggc 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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aaagccaggg tgctgtccac 20
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1491
gtgttgaaag ccagggtgct 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1492
taggtgttga aagccagggt 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1493
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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ccttcatctt cccttggaag 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1520
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1530
cgagaagttg tcctggatgt 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1532
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1533
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1534
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1540
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1542
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1544
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1551
caccttgtcc aggtcagagg 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1552
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1554
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1555
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1556
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1557
ctggaaagtg agaccctcca 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1558
ttgctggaaa gtgagaccct 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1559
gttttgctgg aaagtgagac 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1560
ggagttttgc tggaaagtga 20
<210> 1561
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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gagggagttt tgctggaaag 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1562
gttgagggag ttttgctgga 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1563
ccagttgagg gagttttgct 20
<210> 1564
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1564
catccagttg agggagtttt 20
<210> 1565
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1565
cttcatccag ttgagggagt 20
<210> 1566
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1566
tttcttcatc cagttgaggg 20
<210> 1567
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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agatagtttc ttcatccagt 20
<210> 1569
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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gggagatagt ttcttcatcc 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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gggcatggtc aggtggatgg 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1573
tccttgcagc accagttggg 20
<210> 1574
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1574
agatccttgc agcaccagtt 20
<210> 1575
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1575
ataagatcct tgcagcacca 20
<210> 1576
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1576
gtcataagat ccttgcagca 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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caggtcataa gatccttgca 20
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<211> 20
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1578
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1579
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1580
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1581
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1582
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1583
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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agcctgggcg agcaggtcct 20
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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tttgatcata cacagcaaac 20
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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agcacactta gaccaaggag 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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tgcagcacac ttagaccaag 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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ccatgcagca cacttagacc 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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actccatgca gcacacttag 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1677
ctcactccat gcagcacact 20
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1680
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 20
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1780
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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tactaacaca agggagaaat 20
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1860
ctaaaataaa cccagcaaac 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1861
ctctaaaata aacccagcaa 20
<210> 1862
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1862
tctctaaaat aaacccagca 20
<210> 1863
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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attctctaaa ataaacccag 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1868
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1876
tggttcttgc ctccccaccc 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<210> 1880
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1880
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<210> 1881
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1881
ctaaacactg gttcttgcct 20
<210> 1882
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1882
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1883
gcgctaaaca ctggttcttg 20
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1884
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1886
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1954
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1955
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1956
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1957
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1958
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<210> 1959
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1960
gaggccttgc caggcac 17
<210> 1961
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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gctgctggcc tttgcct 17
<210> 1962
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1962
tatctgctgc tggcctt 17
<210> 1963
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1963
ttatctgctg ctggcct 17
<210> 1964
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1964
tgttatctgc tgctggc 17
<210> 1965
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1965
ttgttatctg ctgctgg 17
<210> 1966
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<213> Artificial sequence
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<223> Synthetic oligonucleotide
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1967
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1968
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<210> 1969
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1969
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<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1970
cacatcgctg atttgtc 17
<210> 1971
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1971
acacatcgct gatttgt 17
<210> 1972
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1972
tgacacatcg ctgattt 17
<210> 1973
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1973
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1974
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<210> 1975
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1976
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<210> 1977
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1977
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<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1978
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<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1979
cagctcaaag tcgactc 17
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<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1980
ccagctcaaa gtcgact 17
<210> 1981
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1981
tccagctcaa agtcgac 17
<210> 1982
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1982
ctttccagct caaagtc 17
<210> 1983
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1983
agaaacggct gctttcc 17
<210> 1984
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1984
accaaggaga aacggct 17
<210> 1985
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1985
gcatttgtgc cgctgca 17
<210> 1986
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1986
ggtgcatttg tgccgct 17
<210> 1987
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1987
agcaaactgg gaggtgc 17
<210> 1988
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1988
ggttcttgcc tccccac 17
<210> 1989
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1989
ctaaacactg gttcttg 17
<210> 1990
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1990
gcgctaaaca ctggttc 17
<210> 1991
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1991
aacagtagtc ccgcgct 17
<210> 1992
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1992
ggttggaatt ctttttg 17
<210> 1993
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1993
ctggtcggtt ggaattc 17
<210> 1994
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1994
acaaacaagc tggtcgg 17
<210> 1995
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1995
ttcacaaaca agctggt 17
<210> 1996
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1996
acttgaaaag ggaacac 17
<210> 1997
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1997
tcaacttgaa aagggaa 17
<210> 1998
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1998
ttctcaactt gaaaagg 17
<210> 1999
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 1999
caatttttgt tctcaac 17
<210> 2000
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2000
acccaatttt tgttctc 17
<210> 2001
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2001
atctgctgct ggccttt 17
<210> 2002
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2002
gttatctgct gctggcc 17
<210> 2003
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2003
tcgctgattt gtccggg 17
<210> 2004
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2004
acagtagtcc cgcgcta 17
<210> 2005
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2005
gaacagtagt cccgcgc 17
<210> 2006
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2006
gttggaattc tttttgg 17
<210> 2007
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2007
cggttggaat tcttttt 17
<210> 2008
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2008
tggtcggttg gaattct 17
<210> 2009
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2009
gctggtcggt tggaatt 17
<210> 2010
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2010
caaacaagct ggtcggt 17
<210> 2011
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2011
cacaaacaag ctggtcg 17
<210> 2012
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2012
ttatctgctg ctggcctt 18
<210> 2013
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2013
ttgttatctg ctgctggc 18
<210> 2014
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2014
gttgttatct gctgctgg 18
<210> 2015
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2015
atcgctgatt tgtccggg 18
<210> 2016
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2016
catcgctgat ttgtccgg 18
<210> 2017
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2017
acatcgctga tttgtccg 18
<210> 2018
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2018
cacatcgctg atttgtcc 18
<210> 2019
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2019
acacatcgct gatttgtc 18
<210> 2020
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2020
cagctcaaag tcgactca 18
<210> 2021
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2021
gaacagtagt cccgcgct 18
<210> 2022
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2022
cggttggaat tctttttg 18
<210> 2023
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2023
gctggtcggt tggaattc 18
<210> 2024
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2024
acaaacaagc tggtcggt 18
<210> 2025
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2025
cacaaacaag ctggtcgg 18
<210> 2026
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2026
ggttggaatt ctttttgg 18
<210> 2027
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2027
ccagctcaaa gtcgactc 18
<210> 2028
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2028
ggaacagtag tcccgcgc 18
<210> 2029
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2029
tatctgctgc tggccttt 18
<210> 2030
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2030
tgttatctgc tgctggcc 18
<210> 2031
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2031
tcggttggaa ttcttttt 18
<210> 2032
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2032
ttatctgctg ctggccttt 19
<210> 2033
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2033
ttgttatctg ctgctggcc 19
<210> 2034
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2034
gttgttatct gctgctggc 19
<210> 2035
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2035
catcgctgat ttgtccggg 19
<210> 2036
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2036
acatcgctga tttgtccgg 19
<210> 2037
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2037
cacatcgctg atttgtccg 19
<210> 2038
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2038
acacatcgct gatttgtcc 19
<210> 2039
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2039
cagctcaaag tcgactcat 19
<210> 2040
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2040
aacagtagtc ccgcgctaa 19
<210> 2041
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2041
gaacagtagt cccgcgcta 19
<210> 2042
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2042
cggttggaat tctttttgg 19
<210> 2043
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2043
gctggtcggt tggaattct 19
<210> 2044
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2044
cacaaacaag ctggtcggt 19
<210> 2045
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2045
tcacaaacaa gctggtcgg 19
<210> 2046
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2046
tatctgctgc tggcctttg 19
<210> 2047
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2047
tgttatctgc tgctggcct 19
<210> 2048
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2048
agctcaaagt cgactcatt 19
<210> 2049
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2049
ggttggaatt ctttttgga 19
<210> 2050
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2050
acaaacaagc tggtcggtt 19
<210> 2051
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<220>
<223> Synthetic oligonucleotide
<400> 2051
ccagctcaaa gtcgactca 19
Claims (24)
- 서열 번호: 1의 핵염기 2027 내지 2068 또는 서열 번호: 1의 핵염기 2324 내지 2346의 대등한 길이의 부분에 상보적인 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19 또는 최소한 20개의 연접 핵염기 일부가 포함되는 핵염기 서열을 갖는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물이며, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열이 서열 번호: 1에 대하여 최소한 80% 상보적인, 화합물.
- 제1항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 15 내지 30, 15 내지 25, 15 내지 24, 16 내지 24, 17 내지 24, 18 내지 24, 19 내지 24, 20 내지 24, 19 내지 22, 20 내지 22, 16 내지 20, 16 또는 20개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된, 화합물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열은 서열 번호: 1에 최소한 85%, 최소한 90%, 최소한 95%, 또는 100% 상보적인, 화합물.
- 서열 번호: 14-1913 및 1915-2051 중 어느 하나의 핵염기 서열의 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 20개의 연접 핵염기가 포함된 핵염기 서열을 갖고, 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드를 포함하는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 화합물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열이 서열 번호: 129-130, 163-167, 180-184, 186, 189, 234, 236, 238-239, 524-526, 1724-1726, 1729-1730, 1923, 1925, 1932, 2003, 2015, 2018, 2035, 2037의 핵염기 서열의 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10, 최소한 11, 최소한 12, 최소한 13, 최소한 14, 최소한 15, 최소한 16, 최소한 17, 최소한 18, 최소한 19, 또는 20개의 연접 핵염기를 포함하는 것인 화합물.
- 제4항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열이 서열 번호: 14-1913 및 1915-2051 중 어느 하나의 핵염기 서열로 구성된 것인 화합물.
- 제5항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드의 핵염기 서열이 서열 번호: 129-130, 163-167, 180-184, 186, 189, 234, 236, 238-239, 524-526, 1724-1726, 1729-1730, 1923, 1925, 1932, 2003, 2015, 2018, 2035, 2037 중 어느 하나의 핵염기 서열로 구성된 것인 화합물.
- 제1항, 제2항, 제4항 및 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 단일-가닥 또는 이중-가닥인, 화합물.
- 제1항, 제2항, 제4항 및 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 최소한 하나의 뉴클레오시드간 링키지는 변형된 뉴클레오시드간 링키지인, 화합물.
- 제9항에 있어서, 최소한 하나의 변형된 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지이거나, 또는 각 변형된 뉴클레오시드간 링키지는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지인, 화합물.
- 제1항, 제2항, 제4항 및 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 최소한 하나의 변형된 당을 포함하는, 화합물.
- 제11항에 있어서:
(i) 최소한 하나의 변형된 당은 바이사이클릭 당이거나, 또는
(ii) 최소한 하나의 변형된 당은 2'-O-메톡시에틸, 제한된 에틸 (cEt), 3'-플루오로-HNA 또는 4'- (CH2)n-O-2' 다리를 포함하며, 이때, n은 1 또는 2인, 화합물. - 제1항, 제2항, 제4항 및 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 최소한 하나의 뉴클레오시드는 변형된 핵염기를 포함하는, 화합물.
- 제13항에 있어서, 상기 변형된 핵염기는 5-메틸시토신인, 화합물.
- 제1항, 제2항, 제4항 및 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 12 내지 30개의 연계된 뉴클레오시드로 구성되며, 하기를 포함하는, 화합물:
a. 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
b. 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고
c. 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트;
여기서 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트 및 3' 날개 세그먼트 사이에 위치하며, 각 날개 세그먼트의 각 뉴클레오시드는 변형된 당을 포함한다. - 제15항에 있어서:
(i) 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 16 내지 20개의 연계된 핵염기로 구성되고/되거나,
(ii) 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 최소한 하나의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 링키지를 포함하고/하거나,
(iii) 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 변형된 핵염기를 포함하고/하거나,
(iv) 상기 변형된 올리고뉴클레오티드는 하기를 포함하는 것인, 화합물:
a. 10개의 연계된 데옥시뉴클레오시드로 구성된 갭 세그먼트;
b. 3 내지 5개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 5' 날개 세그먼트; 그리고
c. 3 내지 5개의 연계된 뉴클레오시드로 구성된 3' 날개 세그먼트;
여기서, 상기 갭 세그먼트는 5' 날개 세그먼트와 3' 날개 세그먼트 사이에 위치하고, 각 날개 세그먼트의 최소한 하나의 또는 각 뉴클레오시드는 2'-O-메톡시에틸 당을 포함한다. - 제1항, 제2항, 제4항 및 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 콘쥬게이트 그룹을 더 포함하는 화합물.
- 제17항에 있어서, 상기 콘쥬게이트 그룹은 GalNAc 모이어티인, 화합물.
- 제1항, 제2항, 제4항 및 제6항 중 어느 한 항의 화합물 또는 변형된 올리고뉴클레오티드 또는 이들의 염 그리고 약제학적으로 허용되는 운반체 또는 희석제를 포함하는 조성물.
- 치료에 사용하기 위한, 제1항, 제2항, 제4항 및 제6항 중 어느 한 항의 화합물 또는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물.
- 약물 제조에 사용하기 위한, 제1항, 제2항, 제4항 및 제6항 중 어느 한 항의 화합물 또는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물.
- 세포, 조직, 장기 또는 동물에서 AGT RNA 및/또는 AGT 단백질의 양을 감소시키는 데 사용하기 위한, 제1항, 제2항, 제4항 및 제6항 중 어느 한 항의 화합물 또는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약제학적 조성물.
- 동물에서 레닌-앤지오텐신-알도스테론 시스템 (RAAS) 경로 관련 질환, 장애 또는 상태의 치료, 예방, 증상의 개선 또는 진행의 지연에 사용하기 위한, 제1항, 제2항, 제4항 및 제6항 중 어느 한 항의 화합물 또는 변형된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약제학적 조성물.
- 제23항에 있어서, 상기 질환, 장애 또는 상태는 심장 질환, 고혈압, 심근경색, 심부전, 판막 심장 질환 또는 마르판 증후군(Marfan syndrome)인 약제학적 조성물.
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