KR20140023344A - Ｐｔｐｉｂ 발현의 안티센스 조절 - Google Patents

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Abstract

동물에서 PTPIB mRNA 및 단백질의 발현을 감소시키는 방법, 화합물, 및 조성물이 본 명세서에 제공된다. 그와 같은 방법, 화합물, 및 조성물은 대사 질환, 예를 들면, 당뇨병, 또는 그의 증상을 치료, 예방, 지연 또는 개선하는 데 유용하다.

Description

ＰＴＰＩＢ 발현의 안티센스 조절 {ANTISENSE MODULATION OF PTPIB EXPRESSION}
서열 목록
본원은 전자 형태로 서열 목록과 함께 출원되었다. 서열 목록은 111 Kb의 크기로 2012년 4월 12일에 제작된 BIOL0149WOSEQ.txt의 파일명으로 제공된다. 서열 목록의 전자 형태로의 정보는 그것의 전체가 참조로 본원에 포함된다.
분야
동물에서 PTPIB mRNA 및 단백질의 발현을 감소시키는 방법, 화합물, 및 조성물이 본원에 제공된다. 그와 같은 방법, 화합물, 및 조성물은, 예를 들면, 대사 장애, 특히 당뇨병과 연관된 장애와 연관된 질환을 치료, 예방, 지연 또는 경감시키는데 유용하다.
단백질 티로신 포스파타아제 IB (PTPIB)는 PTP 패밀리의 멤버이며 (Barford, 등, Science 1994. 263: 1397-1404), 세포질 효소이다 (Neel 및 Tonks, Curr. Opin. Cell Biol. 1997. 9: 193-204). 인슐린 대사의 주요 조절물질인 PTPIB는 간, 근육 및 지방과 같은 조직을 포함하여 편재되게 발현되며 (Goldstein, Receptor 1993. 3: 1-15), 여기서 PTPIB는 주요 PTP 효소이다.
PTPIB는 인슐린 시그널링의 음성 조절물질인 것으로 여겨진다. PTPIB는 인슐린 수용체와 상호작용하고 인슐린 수용체를 탈인산화하고, 따라서 인슐린 시그널링 전달을 약화시키고 잠재적으로 종결시킨다 (Goldstein 등, J. Biol. Chem. 2000. 275: 4383-4389). 인슐린 시그널링에서 PTPIB의 생리학적 역할은 녹아웃 마우스 모델에서 실증되었다. PTPIB 유전자가 결여된 마우스를 인슐린 내성 및 비만증에 대해 보호했다 (Elchebly 등, Science 1999. 283: 1544-1548). PTPIB-결핍된 마우스는 낮은 지방축적, 증가된 기초대사율 뿐만 아니라 총 에너지 소모를 가졌으며 식이-유도 비만증으로부터 보호되었다. 인슐린-자극된 글루코오스 흡수는 골격 근육에서 상승되었던 반면, 지방 조직에는, PTPIB-결핍된 마우스에서 증가된 인슐린 민감도가 조직-특이적이었다는 증거를 제공하면서 영향을 미치지 않았다 (Klaman 등, Mol. Cell. Biol. 2000. 20: 5479-5489). 이들 마우스는 표현형으로 정상이고, 또한 식이-유도 비만증, 인슐린 내성에 내성이었고, 고 지방 식이에 대해 유의미하게 낮은 트리글라이세라이드 수준을 가졌다. 따라서, 유형 II 당뇨병, 대사 증후군, 당뇨병 이상지질혈증, 또는 관련된 대사 질환을 앓고 있는 환자에서 PTPIB의 억제는 유익할 것이다.
PTPIB의 안티센스 억제는, 안티센스 억제제가 단백질에 대한 화합물의 경쟁적 결합에 의존하지 않고 PTPIB의 발현을 감소시킴으로써 직접 활성을 억제한다는 점에서 종래의 작은 분자 억제제에 비해 톡특한 이점을 제공한다. 안티센스 기술은 어떤 유전자 생성물의 발현을 감소시키기 위한 효과적인 수단으로서 출현했고 따라서 PTPIB의 조절을 위한 다수의 치료, 진단, 및 연구 적용에 독특하게 유용함을 입증할 수 있다.
현재, 대사 장애를 치료하기 위한 허용가능한 선택권이 부족하다. 따라서, 그와 같은 질환 및 장애의 치료를 위한 화합물 및 방법을 제공하는 것이 본원의 목적이다.
비제한적으로, 특허, 특허 출원, 기사, 서적 및 논문을 포함하는, 본원에 인용된 모든 문서, 또는 문서의 일부는 그의 전체 뿐만 아니라 본원에 논의된 문서의 일부에 대해 명백히 본원에 참조로 포함된다.
요약
PTPIB의 발현을 조절하고 대사 장애, 특히 당뇨병 및/또는 그의 증상과 연관된 장애와 연관된 질환을 치료, 예방, 지연 또는 경감시키기 위한 방법, 화합물, 및 조성물이 본원에 제공된다.
본 발명의 수많은 목적 및 이점은 수반되는 도면을 참조하여 당해분야의 숙련가에게 더 잘 이해될 수 있으며, 여기서:
도 1은 PTPIB 안티센스 올리고뉴클레오타이드, ISIS 404173 및 ISIS 142082의 웨스턴 블랏을 보여주며, 8mgk/주에서 PTPIB 단백질 발현의 감소는 상기 화합물의 효능을 입증한다. 표 47 참조.
도 2는 사이노몽구스 원숭이에서의 주요 내성 연구의 요약 표이다 (실시예 17 참고).
도 3은 용량 반응 전임상 연구에서 인간 PTPIB mRNA의 그래프로 나타낸 감소이다. ISIS 404173으로의 치료를 이전의 임상 후보물질인 ISIS 113715로의 치료와 비교했다. 본원에서 보여주는 바와 같이, ISIS 404173으로의 투여는 ISIS 113715로의 투여와 비교할 때 더 강력하며 PTPIB mRNA 수준에서 유의미한 감소를 유발했다. 특히, 0.3 μM 용량에서, ISIS 113715와 비교할 때 ISIS 404173을 사용하여 PTPIB mRNA 수준에서 5배 감소가 나타났다.
상세한 설명
상기 일반적인 설명 및 하기 상세한 설명 둘 모두는 예시적이고 단지 설명하기 위한 것이며 청구된 대로 본 발명을 제한하는 것은 아님을 이해해야 한다. 본원에서, 단수형의 사용은 구체적으로 달리 언급되지 않는 한 복수형을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, "또는"의 사용은 달리 언급되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 추가로, 용어 "포함하는" 뿐만 아니라 "포함하다" 및 "포함된"과 같은 다른 형태의 사용은 제한하지 않는다. 또한, "요소" 또는 "성분"과 같은 용어들은, 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 하나의 단위를 포함하는 요소들 및 성분들, 및 1 초과의 하위단위를 포함하는 요소들 및 성분들 둘 모두를 포함한다.
본원에 사용된 섹션 제목은 단지 조직상 목적이며 기재된 주제를 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다. 비제한적으로 특허, 특허 출원, 기사, 서적 및 논문을 포함하는, 본원에 인용된 모든 문서, 또는 문서의 일부는 그의 전체 뿐만 아니라 본원에 논의된 문서의 일부에 대해 명백히 본원에 참조로 포함된다.
정의
구체적인 정의가 제공되지 않는 경우, 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의약 화학 및 약화학과 관련되고 이들의 절차와 기술을 이용한 명명법이 당해분야에 익히 공지되고 통상 사용되는 것들이다. 화학적 합성, 및 화학적 분석을 위한 표준 기술을 사용할 수 있다. 허용된다면, 비제한적으로, 모든 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 잡지 간행물, 미국 국립생물공학정보센터 (NCBI)와 같은 데이타베이스를 통해 얻을 수 있는 유전자은행 수탁 번호 및 연관된 서열 정보, 및 본원의 개시내용을 통해 언급된 기타 데이타를 포함하는, 본원에 인용된 모든 문서, 또는 문서의 일부는 그의 전체 뿐만 아니라 본원에 논의된 문서의 일부에 대해 참조로 포함된다.
구체적인 정의가 제공되지 않는 경우, 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의약 화학 및 약화학과 관련되고 이들의 절차와 기술을 이용한 명명법이 당해분야에 익히 공지되고 통상 사용되는 것들이다. 화학적 합성, 및 화학적 분석을 위한 표준 기술을 사용할 수 있다. 허용된다면, 모든 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 간행물, 미국 국립생물공학정보센터 (NCBI)와 같은 데이타베이스를 통해 얻을 수 있는 유전자은행 수탁 번호 및 연관된 서열 정보, 및 본원의 개시내용을 통해 언급된 기타 데이타는 그의 전체 뿐만 아니라 본원에 논의된 문서의 일부에 대해 참조로 포함된다.
달리 표시되지 않는 한, 하기 용어들은 하기 의미들을 갖는다:
"2'-O-메톡시에틸" (또한 2'-MOE 및 2'-O(CH2)2-OCH3)은 푸로실 고리의 2' 위치의 O-메톡시-에틸 변형을 나타낸다. 2'-O-메톡시에틸 변형된 당이 변형된 당이다.
"2'-O-메톡시에틸 뉴클레오타이드"는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오타이드를 의미한다.
"3' 표적 부위"는 특정 안티센스 화합물의 3'-최대(most) 뉴클레오타이드에 상보적인 표적 핵산의 뉴클레오타이드를 나타낸다.
"5' 표적 부위"는 특정 안티센스 화합물의 5'-최대 뉴클레오타이드에 상보적인 표적 핵산의 뉴클레오타이드를 나타낸다.
"5-메틸시토신"은 5' 위치에 부착된 메틸 그룹으로 변형된 시토신을 의미한다. 5-메틸시토신은 변형된 뉴클레오베이스이다.
"약"은 값의 ± 10% 이내를 의미한다. 예를 들면, "마커는 약 50%만큼 증가될 수 있다"라고 언급된 경우, 그것은 마커가 45%-55% 사이에서 증가될 수 있음을 의미한다.
"활성 약제학적 제제"는 개인에게 투여될 때 치료 이점을 제공하는 약제학적 조성물 중의 물질 또는 물질들을 의미한다. 예를 들면, 어떤 구현예에서 PTPIB에 표적된 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 활성 약제학적 제제이다.
"활성 표적 영역" 또는 "표적 영역"은 1 이상의 활성 안티센스 화합물이 표적된 영역을 의미한다. "활성 안티센스 화합물"은 표적 핵산 수준 또는 단백질 수준을 감소시키는 안티센스 화합물을 의미한다.
"지방세포분화"는 지방전구세포(preadipocyte)로부터의 지방 세포의 발달을 의미한다. "지방형성"은 지방 변성 혹은 지방 침윤이든, 지방의 생성 또는 형성을 의미한다.
"비만" 또는 "비만증"은 비만이거나 또는 제지방량와 관련하여 과다하게 높은 양의 체지방 또는 지방 조직이 존재하는 상태를 나타낸다. 체지방의 양은 신체 전반에 걸친 지방의 분포 및 지방 조직 침착물의 크기 및 질량 둘 모두에 대한 관계를 포함한다. 체지방 분포는 피하지방 두께 측정법, 허리-대-엉덩이 둘레 비, 또는 초음파, 컴퓨터 단층촬영, 또는 자기공명 이미지화와 같은 기술에 의해 추측될 수 있다. 질병통제예방센터에 따르면, 30 또는 그 초과의 체질량 지수 (BMI)를 갖는 개인은 비만인 것으로 간주된다. 본원에 사용된 바와 같이 용어 "비만증"은 신체 내에 지방 조직의 과잉 축적의 결과로서 신체적 요구량을 넘어서는 체지방의 증가가 나타나는 상태를 포함한다. 용어 "비만증"은, 비제한적으로, 하기 상태를 포함한다: 성인형 비만증; 영양 비만증; 내인성 또는 염증성 비만증; 내분비 비만증; 가족성 비만증; 고인슐린 비만증; 과형성-비대성 비만증; 성기능저하 비만증; 갑상선기능부전 비만증; 평생 동안 비만증; 병적인 비만증 및 외인성 비만증.
"부수적으로 투여되는"은 2 제제들을 둘 모두의 약리학적 효과가 환자에게 동시에 발현되는 임의의 방식으로 공-투여되는 것을 나타낸다. 부수적 투여는 모든 제제들이 단일 약제학적 조성물로, 동일한 복용량 형태로, 또는 동일한 투여 경로에 의해 투여되는 것을 필요로 하지 않는다. 모든 제제들의 효과는 동시에 그들 자체가 발현될 필요가 없다. 상기 효과는 단지 일정 기간 동안 중복되는 것이 필요하며 동일한 시간에 존재할 필요는 없다.
"투여하는"은 동물에게 제제를 제공함을 의미하고, 비제한적으로, 의료 전문가에 의한 투여 및 자가-투여를 포함한다.
"제제"는 동물에게 투여될 때 치료 이점을 제공할 수 있는 활성 물질을 의미한다. "제1 제제"는 본원에 제공된 치료 화합물을 의미한다. 예를 들면, 제1 제제는 PTPIB를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드일 수 있다. "제2 제제"는 본 발명의 제2 치료 화합물 (예를 들면 PTPIB를 표적으로 하는 제2 안티센스 올리고뉴클레오타이드) 및/또는 비- PTPIB 치료 화합물을 의미한다.
"개선"은 연관된 질환, 장애, 또는 상태의 적어도 1 인디케이터, 징후 또는 증상의 감소를 나타낸다. 인디케이터의 중증도는 당해분야의 숙련가에게 공지된 주관적 또는 객관적 측정법에 의해 결정될 수 있다.
"동물"은, 비제한적으로, 마우스, 랫트, 토끼, 개, 고양이, 돼지, 및 비-인간 영장류 (비제한적으로, 원숭이 및 침팬지를 포함함)를 포함하는 인간 또는 비-인간 동물을 나타낸다.
"안티센스 활성"은 안티센스 화합물의 그것의 표적 핵산에 대한 하이브리드화에 기인하는 임의 검출가능한 또는 측정가능한 활성을 의미한다. 어떤 구현예에서, 안티센스 활성은 표적 핵산 또는 그와 같은 표적 핵산에 의해 암호화된 단백질의 양 또는 발현에서의 감소이다.
"안티센스 화합물"은 수소 결합을 통해 표적 핵산에 하이브리드할 수 있는 올리고머 화합물을 의미한다.
"안티센스 억제"는 안티센스 화합물의 부재하의 표적 핵산 수준 또는 표적 단백질 수준과 비교하여 표적 핵산에 상보적인 안티센스 화합물의 존재하의 표적 핵산 수준 또는 표적 단백질 수준의 감소를 의미한다.
"안티센스 올리고뉴클레오타이드"는 표적 핵산의 상응하는 영역 또는 분절로의 하이브리드를 가능하게 하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 단일-가닥 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
"바이사이클릭 당"은 2 비-제미날(non-geminal) 고리 원자의 브릿징에 의해 변형된 푸로실 고리를 의미한다. 바이사이클릭 당은 변형된 당이다.
"바이사이클릭 핵산" 또는 "BNA"는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드의 푸라노스 부분이 푸라노스 고리 상의 2 탄소 원자들을 연결하는 브릿지를 포함하여 바이사이클릭 고리 시스템을 형성하는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오타이드를 나타낸다.
"캡 구조" 또는 "말단 캡 모이어티"는 안티센스 화합물의 양쪽 말단에 도입된 화학적 변형을 의미한다.
"화학적으로 뚜렷한 영역"은 동일한 안티센스 화합물의 또 하나 영역과 어느 정도 화학적으로 상이한 안티센스 화합물의 영역을 나타낸다. 예를 들면, 2'-O-메톡시에틸 뉴클레오타이드를 갖는 영역은 2'-O-메톡시에틸 변형이 없는 뉴클레오타이드를 갖는 영역과 화학적으로 구별된다.
"키메라 안티센스 화합물"은 적어도 2 화학적으로 뚜렷한 영역을 갖는 안티센스 화합물을 의미한다.
"공-투여"는 개인에게 2 또는 그 초과 제제들의 투여를 의미한다. 2 또는 그 초과 제제들은 단일 약제학적 조성물로 존재할 수 있거나, 또는 별도의 약제학적 조성물들로 존재할 수 있다. 각각의 2 또는 그 초과 제제들은 동일한 또는 상이한 투여 경로를 통해 투여될 수 있다. 공-투여는 병행 또는 순차적 투여를 포함한다.
"콜레스테롤"은 모든 동물 조직의 세포막에서 발견되는 스테롤 분자이다. 콜레스테롤은 초저밀도 지방단백질 (VLDL), 중간 밀도 지방단백질 (IDL), 저밀도 지방단백질 (LDL), 및 고밀도 지방단백질 (HDL)을 포함하는 지방단백질에 의해 동물의 혈액 혈장으로 운반되어야 한다. "혈장 콜레스테롤"은 혈장 또는 혈청에 존재하는 모든 지방단백질 (VDL, IDL, LDL, HDL) 에스테르화된 및/또는 비-에스테르화된 콜레스테롤의 합을 나타낸다.
"콜레스테롤 흡수 억제제"는 식사로부터 얻어지는 외인성 콜레스테롤의 흡수를 억제하는 제제를 의미한다.
"상보성"은 제1 핵산 및 제2 핵산의 뉴클레오베이스들 사이의 짝짓기(pairing)를 위한 용량을 의미한다.
"인접 뉴클레오베이스"는 서로 가까이에 인접한 뉴클레오베이스들을 의미한다.
"데옥시리보뉴클레오타이드"는 뉴클레오타이드의 당 부분의 2' 위치에서 수소를 갖는 뉴클레오타이드를 의미한다. 데옥시리보뉴클레오타이드는 다양한 치환체들 중의 어느 것으로 변형될 수 있다.
"진성 당뇨병" 또는 "당뇨병"은 불충분한 수준의 인슐린 또는 감소된 인슐린 민감도로부터 초래하는 장애가 있는 대사 및 비정상적으로 높은 혈당 (고혈당증)을 특징으로 하는 증후군이다. 특징적인 증상은 높은 혈액 글루코오스 수준으로 인한 과잉 소변 생산 (다뇨증), 증가된 배뇨를 보충하려는 과잉 갈증 및 증가된 유체 섭취 (다음다갈증), 눈의 광학에 대한 높은 혈액 글루코오스 효과로 인한 흐릿한 시력, 설명되지 않은 체중 감소, 및 무기력이다.
"당뇨병 이상지질혈증" 또는 "이상지질혈증을 수반하는 유형 2 당뇨병"은 유형 2 당뇨병, 감소된 HDL-C, 상승된 트리글라이세라이드, 및 상승된 작은, 고밀도 LDL 입자를 특징으로 하는 상태를 의미한다.
"희석제"는 약리학적 활성이 없지만 약제학적으로 필요한 또는 바람직한 조성물 중의 성분을 의미한다. 예를 들면, 주사되는 조성물 중의 희석제는 액체, 예를 들면 식염수 용액일 수 있다.
"이상지질혈증"은 지질 및/또는 지방단백질 과잉생산 또는 결핍을 포함하는, 지질 및/또는 지방단백질 대사의 장애를 나타낸다. 이상지질혈증은 콜레스테롤 및 트리글라이세라이드 뿐만 아니라 저-밀도 지방단백질 (LDL) 콜레스테롤과 같은 지방단백질과 같은 지질의 상승으로 발현될 수 있다.
"복용량 단위"는 약제학적 제제, 예를 들면 알약, 정제, 또는 당해분야에 공지된 다른 복용량 단위가 제공되는 형태를 의미한다. 어떤 구현예에서, 복용량 단위는 동결건조된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 함유하는 바이알이다. 어떤 구현예에서, 복용량 단위는 재구성된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 함유하는 바이알이다.
"용량"은 단일 투여에 또는 명시된 기간 내에 제공되는 약제학적 제제의 명시된 양을 의미한다. 어떤 구현예에서, 용량은 1, 2, 또는 그 초과의 볼루스, 정제 또는 주사액으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 피하 투여를 원하는 어떤 구현예에서, 원하는 용량은 단일 주사에 의해 용이하게 수용되지 않는 용적을 필요로 하고, 따라서, 2 또는 그 초과 주사가 원하는 용량을 달성하는데 사용될 수 있다. 어떤 구현예에서, 약제학적 제제는 연장된 기간에 걸쳐 또는 연속적으로 주입에 의해 투여되다. 용량은 1시간, 1일, 1주 또는 1개월에 대한 약제학적 제제의 양으로서 언급될 수 있다.
"효과적인 양" 또는 "치료적으로 효과적인 양"은 제제가 필요한 개인에서 원하는 생리학적 결과를 유발하기에 충분한 활성 약제학적 제제의 양을 의미한다. 효과적인 양은 치료될 개인의 건강 및 신체적 상태, 치료될 개인의 분류 집단, 조성물의 제형, 개인의 의료 상태의 평가, 및 다른 관련된 인자들에 의존하여 개인들에 따라 가변적일 수 있다.
"완전히 상보적인" 또는 "100% 상보적인"은 제1 핵산의 뉴클레오베이스 서열의 각각의 뉴클레오베이스가 제2 핵산의 제2 뉴클레오베이스 서열에 상보적인 뉴클레오베이스를 가짐을 의미한다. 어떤 구현예에서, 제1 핵산은 안티센스 화합물이고 표적 핵산은 제2 핵산이다.
"갭머"는 RNase H 절단을 유지하는 다수의 뉴클레오사이드를 갖는 내부 영역이 1 이상의 뉴클레오사이드를 갖는 외부 영역들 사이에 위치해 있는 키메라 안티센스 화합물을 의미하며, 여기서 내부 영역을 포함하는 뉴클레오사이드들은 외부 영역을 포함하는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드들과 화학적으로 구별된다. 내부 영역은 "갭 분절"로서 통칭될 수 있고 외부 영역은 "윙 분절"로서 통칭될 수 있다.
"갭-확대된"은 1 내지 6 뉴클레오사이드를 갖는 5' 및 3' 윙 분절들 사이에 위치하거나 상기 5' 및 3' 윙 분절들에 가까이에 인접한 12 또는 그 초과의 인접 2'-데옥시리보뉴클레오사이드의 갭 분절을 갖는 키메라 안티센스 화합물을 의미한다.
"글루코스"는 에너지 공급원 및 염증성 중간체로서 세포에 의해 사용되는 모노사카라이드이다. "혈장 글루코오스"는 혈장에 존재하는 글루코오스를 나타낸다.
"HMG-CoA 환원효소 억제제"는 아토르바스타틴, 로수바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴, 및 심바스타틴과 같이 효소 HMG-CoA 환원효소의 억제를 통해 작용하는 제제를 의미한다.
"하이브리드화"는 상보적인 핵산 분자들의 어널링을 의미한다. 어떤 구현예에서, 상보적인 핵산 분자는 안티센스 화합물 및 표적 핵산을 포함한다.
"고지혈증" 또는 "고지방혈증"은 상승된 혈청 지질 또는 순환 (혈장) 지질을 특징으로 하는 상태이다. 이 상태는 비정상적으로 고농도의 지방을 나타낸다. 순환 혈액 중의 지질 분획은 콜레스테롤, 저밀도 지방단백질, 초저밀도 지방단백질 및 트리글라이세라이드이다.
"하이퍼트리글리세라이드혈증"은 상승된 트리글라이세라이드 수준을 특징으로 하는 상태를 의미한다.
"대사작용(metabolic)을 갖는 동물을 확인하는 또는 선택하는"은 대사 질환, 또는 대사 장애로 진단된 대상체를 확인 또는 선택하거나; 비제한적으로, 대사 증후군, 고혈당증, 고트리글라이세라이드 혈증, 고혈압 증가된 인슐린 내성, 감소된 인슐린 민감도, 상기 정상 체중, 및/또는 상기 정상 체지방 또는 이들의 임의 조합을 포함하는 대사질환 중의 임의 증상을 갖는 대상체를 확인 또는 선택함을 의미한다. 그와 같은 확인은, 비제한적으로, 표준 임상 시험 또는 평가, 예를 들면, 혈청 또는 순환 (혈장) 혈액-글루코오스의 측정, 혈청 또는 순환 (혈장) 트리글라이세라이드의 측정, 혈압 측정, 체지방 측정, 체중 측정 등을 포함하는 임의 방법에 의해 수행될 수 있다.
"가까이에 인접한"은 가까이에 인접한 원소들 사이에 간섭하는 원소들이 존재하지 않음을 의미한다.
"개인" 또는 "대상체" 또는 "동물"은 치료 또는 요법을 위해 선택되는 인간 또는 비-인간 동물을 의미한다.
"발현 또는 활성을 억제하는"은 RNA 또는 단백질의 발현 또는 활성의 감소 또는 봉쇄를 나타내고 반드시 발현 또는 활성의 모든 제거를 나타내지는 않는다.
"인슐린 내성"은 인슐린의 정상 양이 지방, 근육 및 간 세포로부터 정상 인슐린 반응을 생성하는데 부적절한 상태로서 규정된다. 지방 세포에서의 인슐린 내성은 저장된 트리글라이세라이드의 가수분해를 유발하여 혈액 혈장 중에 유리 지방산을 상승시킨다. 근육에서의 인슐린 내성은 글루코오스 흡수를 감소시키는 반면, 간에서의 인슐린 내성은 글루코오스 보관을 감소시키고, 두 가지 모든 효과는 혈액 글루코오스를 상승시키는 역할을 한다. 인슐린 내성에 기인한 인슐린 및 글루코오스의 높은 혈장 수준은 종종 대사 증후군 및 유형 2 당뇨병을 유도한다.
"인슐린 민감도"는 얼마나 효과적으로 개인이 글루코오스를 처리하는지의 척도이다. 높은 인슐린 민감도를 갖는 개인은 글루코오스를 효과적으로 처리하는 반면, 낮은 인슐린 민감도를 갖는 개인은 글루코오스를 효과적으로 처리하지 못한다.
"뉴클레오사이드간 결합"은 뉴클레오사이드들 사이의 화학 결합을 나타낸다.
"정맥내 투여"는 정맥 내로 투여함을 의미한다.
"연결된 뉴클레오사이드"는 함께 결합된 인접한 뉴클레오사이드를 의미한다.
"지질-저하 요법" 또는 "지질 저하제"는 대상체에서 1 이상의 지질을 감소시키기 위해 대상체에게 제공된 치료 처방계획을 의미한다. 어떤 구현예에서, 지질-저하 요법은 대상체에서 1 이상의 ApoB, 총 콜레스테롤, LDL-C, VLDL-C, IDL-C, 비-HDL-C, 트리글라이세라이드, 작은 고밀도 LDL 입자, 및 Lp(a)를 감소시키기 위해 제공된다. 지질-저하 요법의 예는 스타틴, 피브레이트, 및 MTP 억제제를 포함한다.
"주요 위험 인자"는 특정 질환 또는 상태에 대한 높은 위험의 원인이 되는 인자를 나타낸다. 어떤 구현예에서, 관상동맥 심장 질환에 대한 주요 위험 인자는, 제한 없이, 담배 흡연, 고혈압, 저 HDL-C, 관상동맥 심장 질환의 가족 이력, 연령, 및 본원에 개시된 다른 인자들을 포함한다.
"대사 질환" 또는 "대사 장애"는 대사 기능에서의 변경 또는 교란을 특징으로 하는 상태를 나타낸다. "대사작용(metabolic)" 및 "대사(metabolism)"는 당해분야에 익히 공지된 용어들이고 일반적으로 살아있는 유기체 내에서 일어나는 모든 범위의 생화학적 공정을 포함한다. 대사 질환 또는 장애는, 비제한적으로, 비만증, 당뇨병, 고혈당증, 전당뇨병, 비-알코올성 지방 간 질환 (NAFLD), 대사 증후군, 인슐린 내성, 당뇨병 이상지질혈증, 또는 고트리글라이세라이드 혈증 또는 이들의 조합을 포함한다.
"대사 증후군"은 대사 기원의 지질 및 비-지질 심혈관 위험 인자의 클러스터링(clustering)을 특징으로 하는 상태를 의미한다. 어떤 구현예에서, 대사 증후군은 하기 인자들 중의 어느 3개의 존재에 의해 확인된다: 남성의 경우 102 cm 초과의 허리 둘레 또는 여성의 경우 88 cm 초과의 허리 둘레; 적어도 150 mg/dL의 혈청 트리글라이세라이드; 남성의 경우 40 mg/dL 미만의 HDL-C 또는 여성의 경우 50 mg/dL 미만의 HDL-C; 적어도 130/85 mmHg의 혈압; 및 적어도 110 mg/dL의 공복 글루코오스. 이들 결정요인은 임상 실행시 쉽게 측정될 수 있다 (JAMA, 2001, 285: 2486-2497).
"불일치" 또는 "비-상보적인 뉴클레오베이스"는 제1 핵산의 뉴클레오베이스가 제2 또는 표적 핵산의 상응하는 뉴클레오베이스와 짝지을 수 없는 경우를 나타낸다.
"혼합된 이상지질혈증"은 상승된 콜레스테롤 및 상승된 트리글라이세라이드를 특징으로 하는 상태를 의미한다.
"변형된 뉴클레오사이드간 결합"은 천연 생성 뉴클레오사이드간 결합 (즉, 포스포디에스테르 뉴클레오사이드간 결합)으로부터 치환 또는 임의 변화를 나타낸다.
"변형된 뉴클레오베이스"는 아데닌, 시토신, 구아닌, 티미딘, 또는 우라실이 아닌 임의 뉴클레오베이스를 나타낸다. "비변형된 뉴클레오베이스"는 퓨린 염기들 아데닌 (A) 및 구아닌 (G), 및 피리미딘 염기 티민 (T), 시토신 (C), 및 우라실 (U)을 의미한다.
"변형된 뉴클레오사이드"는, 독립적으로, 변형된 당 모이어티 또는 변형된 뉴클레오베이스를 갖는 뉴클레오사이드를 의미한다.
"변형된 뉴클레오타이드"는, 독립적으로, 변형된 당 모이어티, 변형된 뉴클레오사이드간 결합, 또는 변형된 뉴클레오베이스를 갖는 뉴클레오타이드를 의미한다. "변형된 뉴클레오사이드"는, 독립적으로, 변형된 당 모이어티 또는 변형된 뉴클레오베이스를 갖는 뉴클레오사이드를 의미한다.
"변형된 올리고뉴클레오타이드"는 적어도 1 변형된 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
"변형된 당"은 천연 당으로부터의 치환 또는 변화를 나타낸다.
"모티프"는 안티센스 화합물에서의 화학적으로 뚜렷한 영역의 패턴을 의미한다.
"MTP 억제제"는 효소, 마이크로솜 트리글라이세라이드 전달 단백질을 억제하는 제제를 의미한다.
"천연 생성 뉴클레오사이드간 결합"은 3' 내지 5' 포스포디에스테르 결합을 의미한다.
"천연 당 모이어티"는 DNA (2'-H) 또는 RNA (2'-OH)에서 발견되는 당을 의미한다.
"비-알코올성 지방 간 질환" 또는 "NAFLD"는 과잉 알코올 사용 (예를 들면, 20 g/1일을 초과하는 알코올 소비)에 기인하지 않은 간의 지방 염증을 특징으로 하는 상태를 의미한다. 어떤 구현예에서, NAFLD는 인슐린 내성 및 대사 증후군과 관련된다. NAFLD는 간세포에서의 단순 트리글라이세라이드 축적 (간 지방증)으로부터 염증을 수반하는 간 지방증 (지방간염), 섬유화, 및 간경변까지 범위의 질환 스펙트럼을 포함한다.
"비알코올성 지방간염" (NASH)은 트리글라이세라이드의 침적을 넘어서 NAFLD의 진행으로 일어난다. 괴사, 염증, 및 섬유화를 유도할 수 있는 "제2 히트(hit)"는 NASH의 발달을 위해 필요하다. 제2-히트에 대한 후보물질은 넓은 카테고리 내에서 분류될 수 있다: 산화 스트레스에서 증가를 유발하는 인자, 및 전염증성 시토카인의 발현을 촉진하는 인자.
"핵산"은 모노머 뉴클레오타이드로 이루어진 분자를 나타낸다. 핵산은 리보핵산 (RNA), 데옥시리보핵산 (DNA), 단일-가닥 핵산, 이중-가닥 핵산, 작은 개재 리보핵산 (siRNA), 및 마이크로RNA (miRNA)를 포함한다. 핵산은 또한 단일 분자에서 이들 원소들의 조합을 포함할 수 있다.
"뉴클레오베이스"는 또 하나의 핵산의 염기와 짝을 지을 수 있는 헤테로사이클릭 모이어티를 의미한다.
"뉴클레오베이스 서열"은 임의 당, 결합, 또는 뉴클레오베이스 변형과는 독립적인 인접 뉴클레오베이스의 순서를 의미한다.
"뉴클레오사이드"는 당에 연결된 뉴클레오베이스를 의미한다.
"뉴클레오사이드 모방체"는 당 또는 당과 염기 및, 반드시 필수적이진 않지만, 올리고머 화합물, 예를 들면, 모폴리노를 갖는 뉴클레오사이드 모방체, 사이클로헥세닐, 사이클로헥실, 테트라하이드로피라닐, 바이사이클로 또는 트리사이클로 당 모방체 예를 들면, 비푸라노스 당 단위의 1 이상의 위치에서의 결합을 대체하는데 사용되는 구조를 포함한다.
"뉴클레오타이드"는 뉴클레오사이드의 당 부분에 공유결합으로 연결된 포스페이트 그룹을 갖는 뉴클레오사이드를 의미한다.
"뉴클레오타이드 모방체"는 뉴클레오사이드, 및 올리고머 화합물, 예를 들면, 펩타이드 핵산 또는 모폴리노 (-N(H)-C(=O)-O- 또는 다른 비-포스포디에스테르 결합에 의해 연결된 모폴리노)의 1 이상의 위치에서의 결합을 대체하는데 사용되는 구조를 포함한다.
"올리고머 화합물" 또는 "올리고머"는 2 또는 그 초과의 하위-구조를 포함하고 핵산 분자의 영역에 하이브리드할 수 있는 폴리머 구조를 나타낸다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오사이드이다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 안티센스 화합물이다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다. 어떤 구현예에서, 올리고머 화합물은 키메라 올리고뉴클레오타이드이다.
"올리고뉴클레오타이드"는 각각이 서로 독립적으로 변형되거나 비변형될 수 있는 연결된 뉴클레오사이드의 폴리머를 의미한다.
"비경구 투여"는 주사 또는 주입을 통한 투여를 의미한다. 비경구 투여는 피하 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 동맥내 투여, 비강내 투여, 또는 두개내 투여, 예를 들면 경막내 또는 뇌심실내 투여를 포함한다. 투여는 연속적, 또는 만성, 또는 단기간 또는 간헐적일 수 있다.
"펩타이드"는 아마이드 결합에 의해 적어도 2 아미노산을 연결함으로써 형성된 분자를 의미한다. 펩타이드는 폴리펩타이드 및 단백질을 나타낸다.
"약제학적 제제"는 개인에게 투여될 때 치료 이점을 제공하는 물질을 의미한다. 예를 들면, 어떤 구현예에서, PTPIB에 대해 표적된 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 약제학적 제제이다.
"약제학적 조성물"은 개인에게 투여하기에 적합한 물질의 혼합물을 의미한다. 예를 들면, 약제학적 조성물은 1 이상의 활성제 및 멸균 수용액을 포함할 수 있다.
"약제학적으로 허용가능한 담체"는 올리고뉴클레오타이드의 구조를 간섭하지 않는 매질 또는 희석제를 의미한다. 그와 같은 담체들 중의 일부는 약제학적 조성물을, 예를 들면, 정제, 알약, 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 서스펜션 및 대상체에 의한 경구 섭취용 로젠지로 제형화시킬 수 있다. 예를 들면, 약제학적으로 허용가능한 담체는 멸균 수용액일 수 있다.
"약제학적으로 허용가능한 유도체"는 본원에 기재된 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염, 콘주게이트, 전구약물 또는 이성질체를 포함한다.
"약제학적으로 허용가능한 염"은 안티센스 화합물의 생리적으로 및 약제학적으로 허용가능한 염, 즉, 모 올리고뉴클레오타이드의 원하는 생물학적 활성을 유지하고 그것에 원하지 않는 독성효과를 부여하지 않는 염을 의미한다.
"포스포로티오에이트 결합"은 포스포디에스테르 결합이 비-브릿징 산소 원자들 중의 하나를 황 원자로 대체함으로써 변형되는 뉴클레오사이드들 사이의 결합을 의미한다. 포스포로티오에이트 결합은 변형된 뉴클레오사이드간 결합이다.
"부분(portion)"은 규정된 수의 핵산의 인접 (즉, 연결된) 뉴클레오베이스를 의미한다. 어떤 구현예에서, 부분은 규정된 수의 표적 핵산의 인접 뉴클레오베이스이다. 어떤 구현예에서, 부분은 규정된 수의 안티센스 화합물의 인접 뉴클레오베이스이다.
"예방하다"는 수분 내지 무기한의 기간 동안 질환, 장애, 또는 상태의 개시 또는 발달을 지연시키거나 미연에 방지하는 것을 나타낸다. 예방은 또한 질환, 장애, 또는 상태가 발생할 위험을 감소시키는 것을 의미한다.
"전구약물"은 불활성 형태로 제조되어 신체 또는 세포 내에서 내인성 효소 또는 다른 화학물질 또는 조건의 작용에 의해 활성 형태로 전환되는 치료제를 의미한다.
"단백질 티로신 포스파타아제 1B" 또는 "PTPIB" (또한 PTPN1; 단백질 티로신 포스파타아제, 비-수용체 유형 1; PTP-1B; RKPTP로도 공지됨)는 PTPIB의 임의 핵산 또는 단백질을 의미한다.
"PTPIB 발현"은 PTPIB를 암호화하는 유전자로부터 전사된 mRNA의 수준 또는 mRNA로부터 번역된 단백질의 수준을 의미한다. PTPIB 발현은 노던 또는 웨스턴 블랏과 같은 당해분야 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다.
"PTPIB 핵산"은 PTPIB를 암호화하는 임의 핵산을 의미한다. 예를 들면, 어떤 구현예에서, PTPIB 핵산은 PTPIB를 암호화하는 DNA 서열, PTPIB를 암호화하는 DNA로부터 전사된 RNA 서열 (인트론 및 엑손을 포함하는 게놈 DNA 포함), 및 PTPIB를 암호화하는 mRNA 서열을 포함한다. "PTPIB mRNA"는 PTPIB 단백질을 암호화하는 mRNA을 의미한다.
"부작용"은 원하는 효과 이외에 치료에서 기인하는 생리 반응을 의미한다. 어떤 구현예에서, 부작용은 주사 부위 반응, 간 기능 시험 이상, 신장 기능 이상, 간독성, 신장 독성, 중추 신경계 이상, 근병증, 및 권태감을 포함한다. 예를 들면, 혈청에서 증가된 아미노트랜스페라제 수준은 간독성 또는 간 기능 이상을 나타낸다. 예를 들면, 증가된 빌리루빈은 간독성 또는 간 기능 이상을 나타낸다.
"단일-가닥 올리고뉴클레오타이드"는 상보적인 가닥에 하이브리드되지 않은 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
"특이적으로 하이브리드가능한"은 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 표적 핵산 사이에 충분한 정도의 상보성을 가져 원하는 효과를 유도하는 반면, 특이적 결합을 원하는 조건하에, 즉, 생체내 검정 및 치료학적 처치의 경우에 생리 조건하에 비-표적 핵산에 대해 최소 효과를 나타내거나 효과가 없는 안티센스 화합물을 나타낸다.
"스타틴"은 HMG-CoA 환원효소의 활성을 억제하는 제제를 의미한다.
"피하 투여"는 피부 바로 아래 투여를 의미한다.
"표적으로 하는" 또는 "표적된"은 표적 핵산에 특이적으로 하이브리드하여 원하는 효과를 유도할 안티센스 화합물의 디자인 및 선택의 과정을 의미한다.
"표적 핵산", "표적 RNA", 및 "표적 RNA 전사체" 모두는 안티센스 화합물에 의해 표적될 수 있는 핵산을 나타낸다.
"표적 분절"은 안티센스 화합물에 의해 표적된 표적 핵산의 뉴클레오타이드 서열을 의미한다. "5' 표적 부위"는 표적 분절의 5'-최대 뉴클레오타이드를 나타낸다. "3' 표적 부위"는 표적 분절의 3'-최대 뉴클레오타이드를 나타낸다.
"치료적으로 효과적인 양"은 개인에게 치료 이점을 제공하는 제제의 양을 의미한다.
"치료 생활방식 변화"는 저 지방/지방 조직 질량 및/또는 콜레스테롤로 의도된 식이 및 생활방식 변화를 의미한다. 그와 같은 변화는 심장 질환 발병 위험을 감소시킬 수 있고, 총 1일 칼로리, 총 지방, 포화 지방, 다중불포화된 지방, 모노불포화된 지방, 카보하이드레이트, 단백질, 콜레스테롤, 불용성 섬유질의 식이 섭취에 대한 권고, 뿐만 아니라 신체 활동에 대한 권고를 포함할 수 있다.
"트리글라이세라이드" 또는 "TG"는 3 지방산 분자로 조합된 글리세롤로 이루어진 지질 또는 중성 지방을 의미한다.
"유형 2 당뇨병" (또한 "유형 2 진성 당뇨병" 또는 "진성 당뇨병, 유형 2", 그리고 "진성 당뇨병 유형 2", "비-인슐린-의존적 당뇨병 (NIDDM)", "비만증 관련된 당뇨병", 또는 "성인형 당뇨병"이라고 이전에 통칭됨)은 인슐린 내성, 상대적 인슐린 결핍, 및 고혈당증을 주로 특징으로 하는 대사 장애이다.
"치료하다"는 질환, 장애, 또는 상태를 변경시키거나 개선시키기 위해 동물에게 약제학적 조성물을 투여함을 의미한다.
"비변형된 뉴클레오타이드"는 천연 생성 뉴클레오베이스, 당 모이어티, 및 뉴클레오사이드간 결합으로 구성된 뉴클레오타이드를 의미한다. 어떤 구현예에서, 비변형된 뉴클레오타이드는 RNA 뉴클레오타이드 (즉, β-D-리보뉴클레오사이드) 또는 DNA 뉴클레오타이드 (즉, β-D-데옥시리보뉴클레오사이드)이다.
어떤 구현예
어떤 구현예는 PTPIB 발현을 억제하는 방법, 화합물, 및 조성물을 제공한다.
어떤 구현예는 PTPIB 핵산에 표적화된 안티센스 화합물을 제공한다. 어떤 구현예에서, PTPIB 핵산은 하기에서 제시된 서열 중 어떤 것이다: 유전자은행 승인 번호 NM_002827.2 (서열번호: 1로서 본 명세서에 포함됨), 뉴클레오타이드 14178000 내지 14256000로부터 끝이 잘린 유전자은행 승인 번호 NT_011362.9 (서열번호: 2로서 본 명세서에 포함됨); 및 붉은털원숭이 PTPIB 스캐폴드의 엑손 1-9, 인트론 9 및 엑손 10로부터의 서열의 연속 (서열번호: 3으로서 본 명세서에 포함됨).
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 10 내지 30개의 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 10 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 10 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32 또는 100-111의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 가질 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 10 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26 또는 44의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 가질 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 10 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438373, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 가질 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 10 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 가질 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 15 내지 30개의 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 15 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 15 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32 또는 100-111의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 가질 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 15 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26 또는 44의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 가질 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 15 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438373, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 가질 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 15 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 가질 수 있다
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 18 내지 21개의 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 18 내지 21개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 18 내지 21개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32 또는 39-49의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 18 내지 21개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26 또는 44의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 18 내지 21개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438373, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 18 내지 21개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 20 내지 35개의 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32 또는 50의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438373, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 30개의 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32 또는 50의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472의 어떤 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 가질 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 25개의 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472의 어떤 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스을 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 화합물 또는 조성물은 20 내지 24개의 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 24개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 24개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 24개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 24개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438373, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 24개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 23개의 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438373, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 22개의 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 22개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 또는 22개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 22개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 22개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 22개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438373, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 22개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 21개의 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 21개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 21개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 21개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 21개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438373, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472의 임의의 것의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20 내지 21개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20개의 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26의 적어도 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 ISIS 번호: 404173, 410002, 438373, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472의 임의의 것으로 이루어진다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 ISIS 번호: 404173으로 이루어진다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 26으로 이루어진다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 변형된 올리고뉴클레오타이드의 염 으로 이루어진다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 추가로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오베이스 서열은 변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같이 서열번호: 1-3의 어느 하나에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 상보적이다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오베이스 서열은 변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같이 서열번호: 4-32 또는 39-50의 어느 하나에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오베이스 서열은 변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같이 서열번호: 26 또는 44의 어느 하나에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오베이스 서열은 변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같이 ISIS 번호: 404173, 410002, 438373, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472의 어느 하나에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오베이스 서열은 변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같이 ISIS 번호: 404173 에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물은 단일-가닥 변형된 올리고뉴클레오타이드로 이루어진다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물. 어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 18개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 결합은 변형된 뉴클레오사이드간 결합이다. 어떤 구현예에서, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 결합이다.
어떤 구현예에서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 변형된 뉴클레오베이스를 포함한다. 어떤 구현예에서, 변형된 뉴클레오베이스는 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 c) 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절. 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함한다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 갭 분절은 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어지고, 5' 윙 분절은 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 3' 윙 분절은 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신은 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 갭 분절은 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어지고, 5' 윙 분절은 6개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 3' 윙 분절은 6개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신은 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 갭 분절은 13개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어지고, 5' 윙 분절은 2개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 3' 윙 분절은 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신은 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 18개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 갭 분절은 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어지고, 5' 윙 분절은 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 3' 윙 분절은 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신은 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절. 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 1-3의 임의의 것의 동등 길이부에 대해 상보적인 적어도 8개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 18개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 8개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 6개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 c) 6개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절. 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 4-32의 적어도 19개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절. 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 26의 적어도 19개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절. 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 26의 뉴클레오베이스 서열을 갖는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절. 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 26 또는 44의 적어도 19개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절. 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. 어떤 구현예에서, 화합물 또는 조성물은 ISIS 번호: 404173, 410002, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472 중 어느 하나의 화합물을 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 4-32의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절. 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 26의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스을 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절. 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 서열번호: 26의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스을 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: a) 10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절; b) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및 c) 5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절. 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 각 윙 분절의 각각의 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고 각 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. 어떤 구현예에서, 화합물 또는 조성물은 화합물은IS 번호: 404173을 포함한다.
어떤 구현예는 PTPIB 발현을 억제하는 방법, 화합물, 및 조성물을 제공한다.
어떤 구현예는 동물에서 PTPIB 발현을 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 동물에게 본 명세서에 기재된 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 화합물은 PTPIB로 표적화된 길이에서 변형된 올리고뉴클레오타이드 10 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 화합물은 PTPIB로 표적화된 길이에서 변형된 올리고뉴클레오타이드 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 화합물은 PTPIB로 표적화된 길이에서 변형된 올리고뉴클레오타이드 20 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 화합물은 PTPIB로 표적화된 길이에서 변형된 올리고뉴클레오타이드 20 내지 24개의 연결된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 화합물은 PTPIB로 표적화된 길이에서 변형된 올리고뉴클레오타이드 20 내지 23개의 연결된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 화합물은 PTPIB로 표적화된 길이에서 변형된 올리고뉴클레오타이드 20 내지 22개의 연결된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 화합물은 PTPIB로 표적화된 길이에서 변형된 올리고뉴클레오타이드 20 내지 21개의 연결된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 화합물은 변형된 PTPIB로 표적화된 길이에서 올리고뉴클레오타이드 20개의 연결된 뉴클레오사이드를 포함한다.
어떤 구현예는 동물에서 대사 질환을 예방, 개선 또는 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 동물에게 본 명세서에 기재된 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 화합물은 PTPIB로 표적화된 길이에서 변형된 올리고뉴클레오타이드 10 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 화합물은 PTPIB로 표적화된 길이에서 변형된 올리고뉴클레오타이드 20개의 연결된 뉴클레오사이드를 포함한다. 대사 질환 또는 장애의 예는 비제한적으로 비만증, 당뇨병, 고혈당증, 전당뇨병, 비-알코올성 지방 간 질환 (NAFLD), 대사 증후군, 인슐린 내성, 당뇨병 이상지질혈증, 또는 하이퍼트리글리세라이드혈증 또는 이들의 조합을 포함한다.
어떤 구현예는 동물에서 글루코오스 수준을 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 동물에게 본 명세서에 기재된 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 화합물은 PTPIB로 표적화된 길이에서 변형된 올리고뉴클레오타이드 10 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 화합물은 PTPIB로 표적화된 길이에서 변형된 올리고뉴클레오타이드 20개의 연결된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 동물에서 글루코오스 수준의 감소는 대사 질환을 예방, 개선 또는 치료한다. 어떤 구현예에서, 동물에서 글루코오스 수준의 감소는 당뇨병을 예방, 개선 또는 치료한다. 어떤 구현예에서, 동물에서 글루코오스 수준의 감소는 비만증을 예방, 개선 또는 치료한다. 어떤 구현예에서, 동물에서 글루코오스 수준의 감소는 대사 증후군을 예방, 개선 또는 치료한다. 어떤 구현예에서, 동물에서 글루코오스 수준의 감소는 인슐린 내성을 예방, 개선 또는 치료한다. 어떤 구현예에서, 동물에서 글루코오스 수준의 감소는 고혈당증을 예방, 개선 또는 치료한다. 어떤 구현예에서, 동물에서 글루코오스 수준의 감소는 NAFLD을 예방, 개선 또는 치료한다. 어떤 구현예에서, 동물에서 글루코오스 수준의 감소는 당뇨병 이상지질혈증을 예방, 개선 또는 치료한다. 어떤 구현예에서, 글루코오스 수준은 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%까지 감소된다.
어떤 구현예에서, PTPIB는 하기중 어떤 것에서 제시된 서열을 갖는다: 유전자은행 수탁 번호 유전자은행 승인 번호 NM_002827.2 (서열번호: 1로서 본 명세서에 포함됨), 뉴클레오타이드 14178000 내지 14256000로부터 끝이 잘린 유전자은행 승인 번호 NT_011362.9 (서열번호: 2로서 본 명세서에 포함됨); 및 붉은털원숭이 PTPIB 스캐폴드의 엑손 1-9, 인트론 9 및 엑손 10로부터의 서열의 연속 (서열번호: 3으로서 본 명세서에 포함됨). 어떤 구현예에서, PTPIB는 서열번호: 1-2에서 제시된 인간 서열을 갖는다. 어떤 구현예에서, PTPIB는 서열번호: 3에서 제시된 붉은털원숭이 서열을 갖는다).
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 그의 염, 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 조성물은 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32, 50에서 인용된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 조성물은 20 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32, 50에서 인용된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 조성물은 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32, 50에서 인용된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 제공된 화합물 또는 조성물은 그의 염, 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 조성물은 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26에서 인용된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 조성물은 20 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26에서 인용된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 조성물은 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26에서 인용된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 화합물 또는 조성물은 그의 염, 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 조성물은 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472에서 인용된 뉴클레오베이스 서열 중에서부터 선택된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 조성물은 20 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472에서 인용된 뉴클레오베이스 서열 중에서부터 선택된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 조성물은 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472에서 인용된 뉴클레오베이스 서열 중에서부터 선택된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 화합물 또는 조성물은 그의 염, 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 조성물은 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173에서 인용된 뉴클레오베이스 서열 중에서부터 선택된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 조성물은 20 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173에서 인용된 뉴클레오베이스 서열 중에서부터 선택된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다. 어떤 구현예에서, 조성물은 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173에서 인용된 뉴클레오베이스 서열 중에서부터 선택된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 염 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다.
어떤 구현예는 하기를 포함하는, PTPIB 관련된 질환 또는 상태에 있는 동물을 치료하는 방법을 제공한다: a) PTPIB 관련된 질환 또는 상태에 있는 상기 동물을 확인하는 단계, 및 b) 상기 동물에게, 10 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같이 서열번호: 1-3의 어떤 것에 대해 적어도 90% 상보적인 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 치료적으로 효과적인 양으로 투여하는 단계. 어떤 구현예에서, 동물에게 투여된 화합물의 치료적으로 효과적인 양은 동물에서 PTPIB 관련된 질환 또는 상태, 또는 그의 증상을 치료 또는 감소시킨다. 어떤 구현예에서, PTPIB 관련된 질환 또는 상태는 당뇨병이다.
어떤 구현예는 하기를 포함하는, PTPIB 관련된 질환 또는 상태에 있는 동물을 치료하는 방법을 제공한다: a) PTPIB 관련된 질환 또는 상태에 있는 상기 동물을 확인하는 단계, 및 b) 상기 동물에게, 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 전체에 걸쳐 측정된 바와 같이 서열번호: 1-3의 어떤 것에 대해 적어도 100% 상보적인 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 치료적으로 효과적인 양으로 투여하는 단계. 어떤 구현예에서, 동물에게 투여된 화합물의 치료적으로 효과적인 양은 동물에서 PTPIB 관련된 질환 또는 상태, 또는 그의 증상을 치료 또는 감소시킨다. 어떤 구현예에서, PTPIB 관련된 질환 또는 상태는 당뇨병이다.
어떤 구현예는 대사 질환을 치료, 예방, 또는 개선하는 방법을 제공한다. 어떤 구현예에서 대사 질환은 비만증, 당뇨병, 고혈당증, 전당뇨병, 비-알코올성 지방 간 질환 (NAFLD), 대사 증후군, 인슐린 내성, 당뇨병 이상지질혈증, 또는 하이퍼트리글리세라이드혈증 또는 이들의 조합이다.
어떤 구현예는 과증식성 장애를 치료, 예방, 또는 개선하는 방법을 제공한다.
어떤 구현예는 동물에게 본 명세서에 기재된 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 어떤 구현예에서, 본 방법은 동물에게, 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 4-32 또는 50에서 인용된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 것을 포함한다. 어떤 구현예는 동물에게 본 명세서에 기재된 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 어떤 구현예에서, 본 방법은 동물에게, 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 서열번호: 26에서 인용된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 것을 포함한다.
어떤 구현예는 동물에게 본 명세서에 기재된 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 어떤 구현예에서, 본 방법은 동물에게, 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173, 410002, 438383, 438445, 438454, 438463, 또는 438472에서 인용된 뉴클레오베이스 서열 중에서부터 선택된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 것을 포함한다.
어떤 구현예는 동물에게 본 명세서에 기재된 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 어떤 구현예에서, 본 방법은 동물에게, 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어지고 ISIS 번호: 404173에서 인용된 뉴클레오베이스 서열 중에서부터 선택된 뉴클레오베이스 서열의 적어도 20개의 인접 뉴클레오베이스를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 것을 포함한다.
어떤 구현예에서, 동물은 인간이다.
어떤 구현예에서, 투여는 본 명세서에 기재된 대사 질환을 예방, 치료, 개선하거나 그 진행을 느리게 한다.
어떤 구현예에서, 투여는 본 명세서에 기재된 당뇨병을 예방, 치료, 개선하거나 그 진행을 느리게 한다.
어떤 구현예에서, 화합물은 제2 제제와 공투여된다.
어떤 구현예에서, 화합물 및 제2 제제는 수반하여 투여된다.
어떤 구현예에서, 투여는 비경구 투여이다.
어떤 구현예는 추가로, 동물에서 PTPIB mRNA 또는 단백질 발현을 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 동물에게 본 명세서에 기재된 화합물 또는 조성물을 투여하여 동물에서 PTPIB mRNA 또는 단백질 발현을 감소시키는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 동물은 인간이다. 어떤 구현예에서, PTPIB mRNA 또는 단백질 발현의 감소는 대사 질환을 예방, 치료, 개선하거나 그 진행을 느리게 한다. 어떤 구현예에서, 대사 질환 또는 상태는 당뇨병이다.
어떤 구현예는 대사 질환이 있는 인간을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 질환이 있는 인간을 확인하는 단계 및 상기 인간에게, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 조성물을 치료적으로 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함한다. 어떤 구현예에서, 치료는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 증상을 감소시킨다: 대사 증후군, 고혈당증, 하이퍼트리글리세라이드혈증, 고혈압, 증가된 글루코오스 수준, 증가된 인슐린 내성, 감소된 인슐린 민감도, 상기 정상 체중, 및/또는 상기 정상 체지방 또는 그의 임의의 조합.
어떤 구현예는 당뇨병이 있는 인간을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 질환이 있는 인간을 확인하는 단계 및 상기 인간에게, 본 명세서에 기재된 화합물 또는 조성물을 치료적으로 효과적인 양으로 투여하는 단계. 어떤 구현예에서, 치료는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 증상을 감소시킨다: 대사 증후군, 고혈당증, 하이퍼트리글리세라이드혈증, 고혈압, 증가된 글루코오스 수준, 증가된 인슐린 내성, 감소된 인슐린 민감도, 상기 정상 체중, 및/또는 상기 정상 체지방 또는 그의 임의의 조합.
대사 질환을 감소 또는 예방하는 방법이 추가로 제공되고, 상기 방법은 인간에게 본 명세서에 기재된 화합물 또는 조성물을 치료적으로 효과적인 양으로 투여하고, 그렇게 함으로써 대사 질환을 감소 또는 예방하는 것을 포함한다.
당뇨병을 감소 또는 예방하는 방법이 추가로 제공되고, 상기 방법은 인간에게 본 명세서에 기재된 화합물 또는 조성물을 치료적으로 효과적인 양으로 투여하고, 그렇게 함으로써 당뇨병을 감소 또는 예방하는 것을 포함한다.
대사 질환의 증상을 개선하는 방법이 추가로 제공되고, 상기 방법은 그것이 필요한 인간에게 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 2, 또는 3에 특이적으로 하이브리드화되고, 그렇게 함으로써 인간의 대사 질환의 증상을 개선한.
당뇨병을 개선하는 방법이 추가로 제공되고, 상기 방법은 그것이 필요한 인간에게 10 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 2, 또는 3에 특이적으로 하이브리드화되고, 그렇게 함으로써 인간의 당뇨병의 증상을 개선한다.
당뇨병의 증상을 개선하는 방법이 추가로 제공되고, 상기 방법은 그것이 필요한 인간에게 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 2, 또는 3에 특이적으로 하이브리드화되고, 그렇게 함으로써 인간의 당뇨병의 증상을 개선한다.
대사 질환과 연관된 증상의 진행 속도를 감소시키는 방법이 추가로 제공되고, 상기 방법은 그것이 필요한 인간에게 10 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 2, 또는 3에 특이적으로 하이브리드화되고, 그렇게 함으로써 인간의 대사 질환의 증상의 진행 속도를 감소시킨다.
당뇨병과 연관된 증상의 진행 속도를 감소시키는 방법이 추가로 제공되고, 상기 방법은 그것이 필요한 인간에게 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 2, 또는 3에 특이적으로 하이브리드화되고, 그렇게 함으로써 인간의 당뇨병의 증상의 진행 속도를 감소시킨다.
당뇨병과 연관된 증상의 진행 속도를 감소시키는 방법이 추가로 제공되고, 상기 방법은 그것이 필요한 인간에게 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1, 2, 또는 3에 특이적으로 하이브리드화되고, 그렇게 함으로써 인간의 당뇨병의 증상의 진행 속도를 감소시킨다.
대사 질환의 치료, 예방, 또는 개선용 약제의 제조를 위한 방법 및 화합물이 또한 제공된다.
당뇨병의 치료, 예방, 또는 개선용 약제의 제조를 위한 방법 및 화합물이 또한 제공된다.
어떤 구현예는 대사 질환을 치료, 개선, 또는 예방하기 위한 약제의 제조에서의 본 명세서에 기재된 화합물의 용도를 제공한다.
어떤 구현예는 당뇨병을 치료, 개선, 또는 예방하기 위한 약제의 제조에서의 본 명세서에 기재된 화합물의 용도를 제공한다.
어떤 구현예는 본 명세서에 기재된 부가적 제제 또는 요법과 함께 병용 요법에 의해 본 명세서에 기재된 대사 질환을 치료, 예방, 또는 개선에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 화합물을 제공한다. 제제 또는 요법은 공투여 또는 수반하여 투여될 수 있다.
어떤 구현예는 본 명세서에 기재된 부가적 제제 또는 요법과 함께 병용 요법에 의해 본 명세서에 기재된 당뇨병을 치료, 예방, 또는 개선에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 화합물을 제공한다. 제제 또는 요법은 공투여 또는 수반하여 투여될 수 있다.
어떤 구현예는 본 명세서에 기재된 부가적 제제 또는 요법과 함께 병용 요법에 의해 본 명세서에 기재된 대사 질환을 치료, 예방, 또는 개선하기 위한 약제의 제조에서의 본 명세서에 기재된 화합물의 용도를 제공한다. 제제 또는 요법은 공투여 또는 수반하여 투여될 수 있다.
어떤 구현예는 본 명세서에 기재된 부가적 제제 또는 요법과 함께 병용 요법에 의해 본 명세서에 기재된 당뇨병을 치료, 예방, 또는 개선하기 위한 약제의 제조에서의 본 명세서에 기재된 화합물의 용도를 제공한다. 제제 또는 요법은 공투여 또는 수반하여 투여될 수 있다.
어떤 구현예는 본 명세서에 기재된 부가적 제제 또는 요법이 그 뒤에 투여된 환자에서 본 명세서에 기재된 대사 질환을 치료, 예방, 또는 개선하기 위한 약제의 제조에서의 본 명세서에 기재된 화합물의 용도를 제공한다.
어떤 구현예는 본 명세서에 기재된 부가적 제제 또는 요법이 그 뒤에 투여된 환자에서 본 명세서에 기재된 당뇨병을 치료, 예방, 또는 개선하기 위한 약제의 제조에서의 본 명세서에 기재된 화합물의 용도를 제공한다.
어떤 구현예는 본 명세서에 기재된 대사 질환을 치료, 예방, 또는 개선하기 위한 키트를 제공하고, 여기서 상기 키트는 하기를 포함한다:
(i) 본 명세서에 기재된 화합물; 및 대안적으로
(ii) 본 명세서에 기재된 부가적 제제 또는 요법.
어떤 구현예는 본 명세서에 기재된 당뇨병을 치료, 예방, 또는 개선하기 위한 키트를 제공하고, 여기서 상기 키트는 하기를 포함한다:
(i) 본 명세서에 기재된 화합물; 및 대안적으로
(ii) 본 명세서에 기재된 부가적 제제 또는 요법.
본 명세서에 기재된 키트는 본 명세서에 기재된 병용 요법에 의해 본 명세서에 기재된 대사 질환을 치료, 예방, 또는 개선하기 위해 키트를 사용하는 지침을 추가로 포함한다. 어떤 구현예에서, 대사 질환은 당뇨병이다.
안티센스 화합물
올리고머 화합물은 비제한적으로 하기를 포함한다: 올리고뉴클레오타이드, 올리고뉴클레오사이드, 올리고뉴클레오타이드 유사체, 올리고뉴클레오타이드 모방체, 안티센스 화합물, 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 siRNAs. 올리고머 화합물은, 수소 결합을 통해 표적 핵산에 대한 하이브리드화를 경험할 수 있다는 것을 의미하면서 표적 핵산에 대한 "안티센스"일 수 있다.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은, 5' 내지 3' 방향으로 기재될 때, 표적화된 표적 핵산의 표적 분절의 역 보체를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, 5' 내지 3' 방향으로 기재될 때, 표적화된 표적 핵산의 표적 분절의 역 보체를 포함하는 뉴클레오베이스 서열을 갖는다.
어떤 구현예에서, PTPIB 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 그 길이가 10 내지 30개의 뉴클레오타이드이다. 환언하면, 안티센스 화합물은 10 내지 30개의 연결된 뉴클레오베이스이다. 다른 구현예에서, 안티센스 화합물은 8 내지 80, 10 내지 50, 15 내지 30, 18 내지 21, 20 내지 80, 20 내지 35, 20 내지 30, 20 내지 29, 20 내지 28, 20 내지 27, 20 내지 26, 20 내지 25, 20 내지 24, 20 내지 23, 20 내지 22, 20 내지 21 또는 20개의 연결된 뉴클레오베이스로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 안티센스 화합물은 그 길이가 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80개의 연결된 뉴클레오베이스, 또는 상기 값 중 임의의 2개에 의해 한정된 범위로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 단축된 또는 끝이 잘린 변형된 올리고뉴클레오타이드. 단축된 또는 끝이 잘린 변형된 올리고뉴클레오타이드는 5' 말단 (5' 절단), 또는 대안적으로 3' 말단 (3' 절단)으로부터 결실된 단일 뉴클레오사이드를 가질 수 있다. 단축된 또는 끝이 잘린 올리고뉴클레오타이드는 5' 말단으로부터 결실된 2개의 뉴클레오사이드를 가질 수 있고, 또는 대안적으로 3' 말단으로부터 결실된 2개의 서브유닛을 가질 수 있다. 대안적으로, 결실된 뉴클레오사이드는, 예를 들면, 5' 말단으로부터 결실된 하나의 뉴클레오사이드 및 3' 말단으로부터 결실된 하나의 뉴클레오사이드를 갖는 안티센스 화합물에서 변형된 올리고뉴클레오타이드 도처에 분산될 수 있다.
단일 부가적 뉴클레오사이드가 길어진 올리고뉴클레오타이드에서 존재할 때, 부가적 뉴클레오사이드는 올리고뉴클레오타이드의 5' 또는 3' 말단에서 위치할 수 있다. 2 또는 그 초과의 부가적 뉴클레오사이드가 존재할 때, 부가된 뉴클레오사이드는 예를 들면, 올리고뉴클레오타이드의 5' 말단 (5' 부가), 또는 대안적으로 3' 말단 (3' 부가)에 부가된 2개의 뉴클레오사이드를 갖는 올리고뉴클레오타이드에서 서로 것에 인접할 수 있다. 대안적으로, 부가된 뉴클레오사이드는, 예를 들면, 5' 말단에 부가된 하나의 뉴클레오사이드 및 3' 말단에 부가된 하나의 서브유닛을 갖는 올리고뉴클레오타이드에서 안티센스 화합물 도처에 분산될 수 있다.
안티센스 화합물, 예컨대 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 길이를 증가 또는 감소시키고/거나 활성의 제거 없이 미스매치 염기를 도입할 수 있다. 예를 들면, Woolf 등 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992)에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드 13-25개의 뉴클레오베이스의 길이의 시리즈는 난모세포 주사 모델에서 표적 RNA의 절단을 도입하기 위한 그의 능력에 대해 시험되었다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 말단 근처의 8 또는 11 미스매치 염기를 갖는 안티센스 올리고뉴클레오타이드 25개 길이의 뉴클레오베이스는, 미스매치를 함유하지 않는 안티센스 올리고뉴클레오타이드보다 더 적기는 하지만 표적 mRNA의 특이적 절단을 지도할 수 있었다. 유사하게, 표적 특이적 절단은 1 또는 3 미스매치를 갖는 것을 포함하는 13개의 뉴클레오베이스 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 사용하여 달성되었다.
Gautschi 등 (J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001)는 시험관내 및 생체내 bcl-2 및 bcl-xL 모두의의 발현을 감소시키고 위해 bcl-2 mRNA에 대해 100% 상보성을 갖지며 bcl-xL mRNA에 대한 3 미스매치를 갖는 올리고뉴클레오타이드의 능력을 실증했다. 뿐만 아니라, 이러한 올리고뉴클레오타이드는 생체내 강력한 항-종양 활성을 실증했다.
Maher 및 Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358,1988)는 토끼 망상적혈구 검정에서 인간 DHFR의 번역을 저지하기 위한 그의 능력에 대해 탠덤 14개의 뉴클레오베이스 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 시리즈, 및 탠덤 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 2 또는 3의 서열을 포함하는 28 및 42개의 뉴클레오베이스 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 각각을 시험했다. 각각의 3 내기 14개의 뉴클레오베이스 안티센스 올리고뉴클레오타이드 단독은 28 또는 42개의 뉴클레오베이스 안티센스 올리고뉴클레오타이드보다 더 보통인 수준에서도 번역을 억제할 수 있었다.
안티센스 화합물 모티프
어떤 구현예에서, PTPIB 핵산에 대해 표적된 안티센스 화합물은, 안티센스 화합물에, 증대된 억제제 활성, 표적 핵산에 대한 증가된 결합 친화도, 또는 생체내 뉴클레아제에 의한 분해에 대한 내성과 같은 특성들을 제공하기 위해, 패턴, 또는 모티프에 배열된 화학적으로 변형된 서브유닛을 갖는다.
키메라 안티센스 화합물은 전형적으로 적어도 1 변형된 영역을 함유하여서, 뉴클레아제 분해에 대한 증가된 내성, 증가된 세포 흡수, 표적 핵산에 대한 증가된 결합 친화도, 및/또는 증가된 억제제 활성을 제공한다. 키메라 안티센스 화합물의 제2 영역은 RNA:DNA 이중 가닥의 RNA 가닥을 절단하는 세포 엔도뉴클레아제 RNase H에 대한 기질로서 임의로 작용할 수 있다.
갭머 모티프를 갖는 안티센스 화합물은 키메라 안티센스 화합물로 고려된다. 갭머에서, RNaseH 절단을 제공하는 다수의 뉴클레오타이드를 갖는 내부 영역은 내부 영역의 뉴클레오사이드와 화학적으로 구별되는 다수의 뉴클레오타이드를 갖는 외부 영역들 사이에 위치된다. 갭머 모티프를 갖는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 경우에, 갭 분절은 일반적으로 엔도뉴클레아제 절단을 위한 기질로서 작용하는 한편, 윙 분절은 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 갭머의 영역은 각각의 뚜렷한 영역을 포함하는 당 모이어티의 유형에 의해 구별된다. 갭머의 영역을 구별하는데 사용되는 당 모이어티의 유형은 일부 구현예에서 β-D-리보뉴클레오사이드, β-D-데옥시리보뉴클레오사이드, 2'-변형된 뉴클레오사이드 (그와 같은 2'-변형된 뉴클레오사이드는 그 중에서 2'-MOE 및 2'-O-CH3을 포함할 수 있다), 및 바이사이클릭 당 변형된 뉴클레오사이드 (그와 같은 바이사이클릭 당 변형된 뉴클레오사이드는 속박된(constrained) 에틸을 갖는 것들을 포함할 수 있다)을 포함할 수 있다. 어떤 구현예에서, 윙은, 예를 들면, 2'-MOE 및 속박된 에틸을 포함하는 몇 개의 변형된 당 모이어티를 포함할 수 있다. 어떤 구현예에서, 윙은 몇 개의 변형된 및 비변형된 당 모이어티를 포함할 수 있다. 어떤 구현예에서, 윙은 2'-MOE 뉴클레오사이드, 속박된 에틸 뉴클레오사이드, 및 2'-데옥시뉴클레오사이드의 다양한 조합을 포함할 수 있다.
각각의 뚜렷한 영역은 균일한 당 모이어티, 변이체, 또는 교차하는 당 모이어티를 포함할 수 있다. 윙-갭-윙 모티프는 "X-Y-Z"로서 빈번히 기재되며, 여기서, "X"는 5'-윙의 길이를 나타내고, "Y"는 갭의 길이를 나타내고, "Z"는 3'-윙의 길이를 나타낸다. "X" 및 "Z"는 균일한, 상이한 또는 교차하는 당 모이어티를 포함할 수 있다. 어떤 구현예에서, "X" 및 "Y"는 1 이상의 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함할 수 있다. "Y"는 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "X-Y-Z"로 기재된 갭머는 각각의 5'-윙 및 3' 윙에 가까이에 인접하게 위치되도록 하는 배치를 갖는다. 따라서, 5'-윙과 갭 또는 갭과 3'-윙 사이에 간섭하는 뉴클레오타이드가 존재하지 않는다. 본원에 기재된 안티센스 화합물들 중의 어느 것은 갭머 모티프를 가질 수 있다. 어떤 구현예에서, "X" 및 "Z"는 동일하고, 다른 구현예에서 "X" 및 "Z"는 상이하다. 어떤 구현예에서, "Y"는 8 내지 15 뉴클레오사이드이다. X, Y, 또는 Z는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30 또는 그 초과 뉴클레오사이드들 중의 어느 것일 수 있다.
어떤 구현예에서, PTPIB 핵산에 대해 표적된 안티센스 화합물은 5-10-5 갭머 모티프를 갖는다.
어떤 구현예에서, PTPIB 핵산에 대해 표적된 안티센스 화합물은 6-8-6 갭머 모티프를 갖는다.
어떤 구현예에서, PTPIB 핵산에 대해 표적된 안티센스 화합물은 5-8-5 갭머 모티프를 갖는다.
어떤 구현예에서, PTPIB 핵산에 대해 표적된 안티센스 화합물은 갭-확대된 모티프를 갖는다.
어떤 구현예에서, PTPIB 핵산에 대해 표적된 안티센스 화합물은 2-13-5 갭-확대된 모티프를 갖는다.
표적 핵산, 표적 영역 및 뉴클레오타이드 서열
어떤 구현예에서, PTPIB 핵산은 유전자은행 수납 번호 NM_002827.2 (서열번호: 1로서 본원에 포함됨), 뉴클레오타이드 14178000부터 14256000까지 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_011362.9 (서열번호: 2로서 본원에 포함됨); 및 붉은털원숭이 PTPIB 스캐폴드의 엑손 1-9, 인트론 9 및 엑손 10으로부터의 서열 연쇄 (서열번호: 3으로서 본원에 포함됨)에 제시된 서열들 중의 어느 것이다.
본원에 함유된 실시예에서 각각의 서열번호로 제시된 서열은 당 모이어티, 뉴클레오사이드간 결합, 또는 뉴클레오베이스에 대한 임의 변형과는 독립적이다. 그와 같이, 서열번호로 규정된 안티센스 화합물은, 독립적으로, 당 모이어티, 뉴클레오사이드간 결합, 또는 뉴클레오베이스에 대한 1 이상의 변형을 포함할 수 있다. ISIS 번호 (ISIS No)로 기재된 안티센스 화합물은 뉴클레오베이스 서열 및 모티프의 조합을 나타낸다.
어떤 구현예에서, 표적 영역은 표적 핵산의 구조적으로 규정된 영역이다. 예를 들면, 표적 영역은 3' UTR, 5' UTR, 엑손, 인트론, 엑손/인트론 접합, 코딩 영역, 번역 개시 영역, 번역 종료 영역, 또는 다른 규정된 핵산 영역을 포함할 수 있다. PTPIB에 대한 구조적으로 규정된 영역은 NCBI와 같은 서열 데이타베이스로부터 수납 번호에 의해 얻을 수 있으며, 그와 같은 정보는 본원에 참조로 포함되어 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역은 표적 영역 내의 1 표적 분절의 5' 표적 부위로부터 동일한 표적 영역 내의 또 하나의 표적 분절의 3' 표적 부위까지의 서열을 포함할 수 있다.
표적화는 원하는 효과가 발생하도록 안티센스 화합물을 하이브리드시키는 적어도 1 표적 분절의 결정을 포함한다. 어떤 구현예에서, 원하는 효과는 mRNA 표적 핵산 수준의 감소이다. 어떤 구현예에서, 원하는 효과는 표적 핵산 또는 표적 핵산과 연관된 표현형 변화에 의해 암호화된 단백질 수준의 감소이다.
표적 영역은 1 이상의 표적 분절을 함유할 수 있다. 표적 영역 내의 다중 표적 분절은 중복될 수 있다. 대안적으로, 표적 영역 내의 다중 표적 분절은 비-중복될 수 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역 내의 표적 분절은 단지 약 300 뉴클레오타이드만큼 떨어져 있다. 어떤 구현예에서, 표적 영역 내의 표적 분절은, 표적 핵산에 대해 약, 단지, 단지 약 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 또는 10 뉴클레오타이드인 다수의 뉴클레오타이드들 만큼 떨어져 있거나, 또는 상기 값들 중의 어느 2에 의해 규정된 범위이다. 어떤 구현예에서, 표적 영역 내의 표적 분절은 표적 핵산에 대해 단지, 또는 단지 약 5 뉴클레오타이드만큼 떨어져 있다. 어떤 구현예에서, 표적 분절은 인접하다. 본원에 기재된 5' 표적 부위 또는 3' 표적 부위 중의 어느 것인 개시 핵산을 갖는 범위로 규정된 표적 영역이 고려된다.
적합한 표적 분절은 5' UTR, 코딩 영역, 3' UTR, 인트론, 엑손, 또는 엑손/인트론 접합 내에서 발견될 수 있다. 개시 코돈 또는 중단 코돈을 함유하는 표적 분절이 또한 적합한 표적 분절이다. 적합한 표적 분절은 특이적으로 개시 코돈 또는 중단 코돈과 같은 어떤 구조적으로 규정된 영역을 제외할 수 있다.
적합한 표적 분절의 결정은 표적 핵산의 서열을 다른 서열과 게놈을 통해 비교하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, BLAST 알고리즘은 상이한 핵산들 중에서 유사성 영역을 확인하는데 사용될 수 있다. 이러한 비교는 선택된 표적 핵산 이외의 서열 (즉, 비-표적 또는 탈-표적 서열)에 비-특이적 방식으로 하이브리드할 수 있는 안티센스 화합물 서열의 선택을 방지할 수 있다.
활성 표적 영역 내에서 안티센스 화합물의 활성에서의 변화 (예를 들면, 표적 핵산 수준의 퍼센트 감소에 의해 규정된 바와 같음)가 존재할 수 있다. 어떤 구현예에서, PTPIB mRNA 수준의 감소는 PTPIB 발현의 억제를 나타낸다. PTPIB 단백질 수준의 감소는 또한 표적 mRNA 발현의 억제를 나타낸다. 추가로, 표현형 변화는 PTPIB 발현의 억제를 나타낸다. 어떤 구현예에서, 감소된 글루코오스 수준, 감소된 지질 수준, 및 감소된 체중은 PTPIB 발현의 억제를 나타낸다. 어떤 구현예에서, 대사 질환과 연관된 증상의 개선은 PTPIB 발현의 억제를 나타낸다. 어떤 구현예에서, 당뇨병과 연관된 증상의 개선은 PTPIB 발현의 억제를 나타낸다. 어떤 구현예에서, 인슐린 내성의 감소는 PTPIB 발현의 억제를 나타낸다. 어떤 구현예에서, 당뇨병 바이오마커의 감소는 PTPIB 발현의 억제를 나타낼 수 있다.
하이브리드화
일부 구현에에서, 하이브리드화는 본원에 개시된 안티센스 화합물 및 PTPIB 핵산 사이에서 일어난다. 가장 통상적 하이브리드화 기전은 핵산 분자들의 상보적인 뉴클레오베이스들 사이의 수소 결합 (예를 들면, 왓슨-크릭, 후그스틴 또는 역 후그스틴(reversed Hoogsteen) 수소 결합)을 수반한다.
하이브리드화는 다양한 조건하에 일어날 수 있다. 엄격한 조건은 서열-의존적이고 하이브리드될 핵산 분자의 특징 및 조성에 의해 결정된다.
서열이 표적 핵산에 대해 특이적으로 하이브리드 가능한지를 결정하는 방법은 당해분야에 익히 공지되어 있다. 어떤 구현예에서, 본원에 제공된 안티센스 화합물은 PTPIB 핵산과 특이적으로 하이브리드 가능하다.
상보성
안티센스 화합물 및 표적 핵산은 충분한 수의 안티센스 화합물의 뉴클레오베이스가 표적 핵산의 상응하는 뉴클레오베이스와 수소 결합할 수 있어서 원하는 효과 (예를 들면, PTPIB 핵산과 같은 표적 핵산의 안티센스 억제)가 발생할 경우 서로 상보적이다.
안티센스 화합물은, 간섭하는 또는 인접한 분절이 하이브리드화 사건 (예를 들면, 루프 구조, 불일치 또는 머리핀 구조)에 관여하지 않도록 PTPIB 핵산의 1 이상의 분절에 걸쳐 하이브리드할 수 있다.
어떤 구현예에서, 본원에 제공된 안티센스 화합물 또는 그것의 명시된 부분은 PTPIB 핵산, 표적 영역, 표적 분절, 또는 그것의 명시된 부분에 대해 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 상보적이거나 적어도 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 상보적이다. 안티센스 화합물의 표적 핵산과의 퍼센트 상보성은 일상적인 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
예를 들면, 안티센스 화합물의 20 뉴클레오베이스 중 18이 표적 영역에 상보적이어서 특이적으로 하이브리드할 것인 안티센스 화합물은 90 퍼센트 상보성을 나타낼 것이다. 이 예에서, 잔여 비상보적인 뉴클레오베이스는 클러스터를 형성하거나 상보적인 뉴클레오베이스들 사이에 배치될 수 있고 서로 또는 상보적인 뉴클레오베이스에 인접할 필요는 없다. 그와 같이, 표적 핵산과 완전한 상보성을 갖는 2 영역의 옆에 위치한 4 비상보적인 뉴클레오베이스를 갖는 길이가 18 뉴클레오베이스인 안티센스 화합물은 표적 핵산과 77.8% 전반적 상보성을 가질 것이고 따라서 본 발명의 범위 내에 속할 것이다. 안티센스 화합물의 표적 핵산의 영역과의 퍼센트 상보성은 당해분야에 공지된 BLAST 프로그램 (기본적 국소 정렬 검색 도구) 및 PowerBLAST 프로그램을 사용하여 일상적으로 결정될 수 있다 (Altschul 등, J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang 및 Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656). 퍼센트 동종성, 서열 동일성 또는 상보성은, 예를 들면, 스미스 및 워터맨 (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489)의 알고리즘을 사용한 디폴트 세팅을 사용하여, 갭 스포그램 (위스콘신 서열 분석 패키지, 유닉스를 위한 버전 8, 제네틱스 컴퓨터 그룹, 위스콘신주 매디슨 유니버시티리서치 파크)에 의해 결정될 수 있다.
어떤 구현예에서, 본원에 제공된 안티센스 화합물, 또는 그것의 명시된 부분은 표적 핵산, 또는 그것의 명시된 부분에 대해 완전히 상보적 (즉, 100% 상보적)이다. 예를 들면, 안티센스 화합물은 PTPIB 핵산, 또는 표적 영역, 또는 그것의 표적 분절 또는 표적 서열에 완전히 상보적일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "완전히 상보적인"은 안티센스 화합물의 각각의 뉴클레오베이스가 표적 핵산의 상응하는 뉴클레오베이스와 정확한 염기 짝짓기를 할 수 있음을 의미한다. 예를 들면, 20 뉴클레오베이스 안티센스 화합물은, 안티센스 화합물에 완전히 상보적인 표적 핵산의 상응하는 20 뉴클레오베이스 부분이 존재하는 한, 400 뉴클레오베이스 길이의 표적 서열과 완전히 상보적이다. 완전히 상보적인은 또한 제1 및/또는 제2 핵산의 명시된 부분과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들면, 30 뉴클레오베이스 안티센스 화합물 중의 20 뉴클레오베이스 부분은 400 뉴클레오베이스 길이의 표적 서열과 "완전히 상보적"일 수 있다. 30 뉴클레오베이스 올리고뉴클레오타이드 중의 20 뉴클레오베이스 부분은, 표적 서열이 상응하는 20 뉴클레오베이스 부분(여기서, 각각의 뉴클레오베이스는 안티센스 화합물의 20 뉴클레오베이스 부분에 상보적이다)을 갖는 경우 표적 서열에 완전히 상보적이다. 동시에, 전체 30 뉴클레오베이스 안티센스 화합물은, 안티센스 화합물의 잔여 10 뉴클레오베이스가 또한 표적 서열에 상보적인지 여부에 따라 표적 서열에 완전히 상보적일 수 있거나 완전히 상보적이지 않을 수 있다.
비-상보적인 뉴클레오베이스의 위치는 안티센스 화합물의 5' 말단 또는 3' 말단에 존재할 수 있다. 대안적으로, 비-상보적인 뉴클레오베이스 또는 뉴클레오베이스들은 안티센스 화합물의 내부 위치에 존재할 수 있다. 2 또는 그 초과의 비-상보적인 뉴클레오베이스가 존재할 때, 그들은 인접하거나 (즉, 연결되거나) 또는 인접하지 않을 수 있다. 일 구현예에서, 비-상보적인 뉴클레오베이스는 갭머 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 윙 분절에 위치한다.
어떤 구현예에서, 길이가 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20 뉴클레오베이스이거나, 최대 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20 뉴클레오베이스인 안티센스 화합물은 표적 핵산, 예를 들면, PTPIB 핵산, 또는 그것의 명시된 부분에 대해 단지 4, 단지 3, 단지 2, 또는 단지 1 비-상보적인 뉴클레오베이스(들)를 포함한다.
어떤 구현예에서, 길이가 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30 뉴클레오베이스이거나, 최대 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30 뉴클레오베이스인 안티센스 화합물은 표적 핵산, 예를 들면, PTPIB 핵산, 또는 그것의 명시된 부분에 대해 단지 6, 단지 5, 단지 4, 단지 3, 단지 2, 또는 단지 1 비-상보적인 뉴클레오베이스(들)를 포함한다.
본원에 제공된 안티센스 화합물은 또한 표적 핵산의 일부분에 상보적인 것들을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, "부분"은 표적 핵산의 영역 또는 분절 내의 규정된 수의 인접 (즉, 연결된) 뉴클레오베이스를 나타낸다. "부분"은 또한 규정된 수의 안티센스 화합물의 인접 뉴클레오베이스를 나타낼 수 있다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 8 뉴클레오베이스 부분에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 12 뉴클레오베이스 부분에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 13 뉴클레오베이스 부분에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 14 뉴클레오베이스 부분에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 15 뉴클레오베이스 부분에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 16 뉴클레오베이스 부분에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 17 뉴클레오베이스 부분에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 18 뉴클레오베이스 부분에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 19 뉴클레오베이스 부분에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 표적 분절의 적어도 20 뉴클레오베이스 부분에 상보적이다. 적어도 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 그 초과의 표적 분절의 뉴클레오베이스 부분, 또는 이들 값들 중의 어느 2에 의해 규정된 범위에 상보적인 안티센스 화합물이 또한 고려된다.
동일성
본원에 제공된 안티센스 화합물은 또한 구체적 ISIS 번호로 표시되는 특정 뉴클레오타이드 서열, 서열번호, 또는 화합물, 또는 그것의 부분에 대해 규정된 퍼센트 동일성을 가질 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 안티센스 화합물은, 그것이 동일한 뉴클레오베이스 짝짓기 능력을 갖는다면 본원에 개시된 서열과 동일하다. 예를 들면, 개시된 DNA 서열에서 티미딘 대신에 우라실을 함유하는 RNA는 우리실 및 티미딘 둘 모두가 아데닌과 쌍을 이루기 때문에 DNA 서열과 동일한 것으로 고려될 것이다. 본원에 기재된 안티센스 화합물의 단축된 그리고 연장된 버전 뿐만 아니라 본원에 제공된 안티센스 화합물과 비교하여 동일하지 않은 염기를 갖는 화합물도 또한 고려된다. 동일하지 않은 염기들은 서로 인접하거나 안티센스 화합물 전반에 걸쳐 분산될 수 있다. 안티센스 화합물의 퍼센트 동일성은 그것이 비교될 서열과 비교하여 동일한 염기 짝짓기를 갖는 염기들의 수에 따라 계산된다.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물, 또는 그것의 부분은 본원에 개시된 1 이상의 안티센스 화합물 또는 서열번호, 또는 그것의 부분과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다.
변형
뉴클레오사이드는 염기-당 조합이다. 뉴클레오사이드의 뉴클레오베이스 (또한 염기로도 공지됨) 부분은 보통 헤테로사이클릭 염기 모이어티이다. 뉴클레오타이드는 뉴클레오사이드의 당 부분에 공유결합으로 연결된 포스페이트 그룹을 추가로 포함하는 뉴클레오사이드이다. 펜토푸라노실 당을 포함하는 뉴클레오사이드에 대해, 포스페이트 그룹은 당의 2', 3' 또는 5' 하이드록실 모이어티에 연결될 수 있다. 올리고뉴클레오타이드는 서로 인접한 뉴클레오사이드들의 공유 결합을 통해 형성되어 선형 폴리머 올리고뉴클레오타이드 형성한다. 올리고뉴클레오타이드 구조 내에서, 포스페이트 그룹은 통상 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드간 결합을 형성하도록 지시된다.
안티센스 화합물에 대한 변형은 뉴클레오사이드간 결합, 당 모이어티, 또는 뉴클레오베이스에 대한 치환 또는 변화를 포함한다. 변형된 안티센스 화합물은 종종, 바람직한 특성, 예를 들면, 증대된 세포 흡수, 핵산 표적에 대한 증대된 친화도, 뉴클레아제의 존재하에 증가된 안정성, 또는 증가된 억제 활성 때문에 원상태 형태보다 바람직하다.
화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 또한 단축된 또는 끝이 잘린 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 그것의 표적 핵산에 대한 결합 친화도를 증가시키는데 이용될 수 있다. 결과적으로, 필적하는 결과는 종종 그와 같은 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 갖는 더 짧은 안티센스 화합물로 얻을 수 있다.
변형된 뉴클레오사이드간 결합
RNA 및 DNA의 천연 생성 뉴클레오사이드간 결합은 3' 내지 5' 포스포디에스테르 결합이다. 1 이상의 변형된, 즉 비-천연 생성 뉴클레오사이드간 결합을 갖는 안티센스 화합물은 종종, 바람직한 특성, 예를 들면, 증대된 세포 흡수, 표적 핵산에 대한 증대된 친화도, 및 뉴클레아제의 존재하에 증가된 안정성 때문에 천연 생성 뉴클레오사이드간 결합을 갖는 안티센스 화합물에 우선하여 선택된다.
변형된 뉴클레오사이드간 결합을 갖는 올리고뉴클레오타이드는 인 원자를 보유하는 뉴클레오사이드간 결합뿐만 아니라 인 원자를 갖지 않는 뉴클레오사이드간 결합을 포함한다. 대표적인 인 함유 뉴클레오사이드간 결합은, 비제한적으로, 포스포디에스테르, 포스포트리에스테르, 메틸포스포네이트, 포스포르아미데이트, 및 포스포로티오에이트를 포함한다. 인-함유 및 인-비함유 결합의 제조 방법은 익히 공지되어 있다.
어떤 구현예에서, PTPIB 핵산에 대해 안티센스 화합물은 1 이상의 변형된 뉴클레오사이드간 결합을 포함한다. 어떤 구현예에서, 변형된 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물의 각각의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 결합이다.
변형된 당 모이어티
본원에 제공된 안티센스 화합물은 당 그룹이 변형된 1 이상의 뉴클레오사이드를 임의로 함유할 수 있다. 그와 같은 당 변형된 뉴클레오사이드는 안티센스 화합물에 대해 증대된 뉴클레아제 안정성, 증가된 결합 친화도, 또는 일부 다른 유익한 생물학적 특성을 부여할 수 있다. 어떤 구현예에서, 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 리보푸라노스 고리 모이어티를 포함한다. 화학적으로 변형된 리보푸라노스 고리의 예는, 제한 없이, 치환제 그룹의 부가 (5' 및 2' 치환체 그룹 포함); 바이사이클릭 핵산 (BNA)의 형성을 위한 비-제미날 고리 원자의 브릿징; 리보실 고리 산소 원자의 S, N(R), 또는 C(R1)(R)2 (R = H, C1-C12 알킬 또는 보호 그룹)로의 교체; 및 이들의 조합을 포함한다. 화학적으로 변형된 당의 예는 2'-F-5'-메틸 치환된 뉴클레오사이드 (참고, 다른 개시된 5', 2'-비스 치환된 뉴클레오사이드에 대해 8/21/08에 발행된 PCT 국제 출원 WO 2008/101157), 2'-위치에서의 추가 치환으로 리보실 고리 산소 원자의 S로의 교체 (참고, 2005년 6월 16일에 발행된 공개된 미국 특허 출원 US2005/0130923), 또는, 대안적으로, BNA의 5'-치환 (참고, 11/22/07에 발행된 PCT 국제 출원 WO 2007/134181, 여기서 LNA는 예를 들면, 5'-메틸 또는 5'-비닐 그룹으로 치환된다)을 포함한다.
변형된 당 모이어티를 갖는 뉴클레오사이드의 예는, 제한 없이, 5'-비닐, 5'-메틸 (R 또는 S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH3, 및 2'-O(CH2)2OCH3 치환체 그룹을 포함하는 뉴클레오사이드를 포함한다. 2' 위치에서의 치환체는 또한 알릴, 아미노, 아지도, 티오, O-알릴, O-C1-C10 알킬, OCF3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), 및 O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn)으로부터 선택될 수 있고, 여기서 각각의 Rm 및 Rn은, 독립적으로, H 또는 치환된 또는 비치환된 C1-C10 알킬이다.
본원에 사용된 바와 같이, "바이사이클릭 뉴클레오사이드"는 바이사이클릭 당 모이어티를 포함하는 변형된 뉴클레오사이드를 나타낸다. 바이사이클릭 뉴클레오사이드의 예는, 제한 없이, 4' 및 2' 리보실 고리 원자들 사이의 브릿지를 포함하는 뉴클레오사이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 본원에 제공된 안티센스 화합물은 브릿지가 4' 내지 2' 바이사이클릭 뉴클레오사이드를 포함하는 1 이상의 바이사이클릭 뉴클레오사이드를 포함한다. 그와 같은 4' 내지 2' 바이사이클릭 뉴클레오사이드의 예는, 비제한적으로, 식: 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)-O-2' 및 4'-CH(CH2OCH3)-O-2', 및 이들의 유사체 (참고, 2008년 7월 15일에 발행된 미국 특허 7,399,845); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2', 및 그것의 유사체 (참고, 2009년 1월 8일에 발행된 공개된 PCT 국제 출원 WO2009/006478); 4'-CH2-N(OCH3)-2', 및 그것의 유사체 (참고, 2008년 12월 11일에 발행된 공개된 PCT 국제 출원 WO2008/150729); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (참고, 2004년 9월 2일에 발행된 공개된 미국 특허 출원 US2004/0171570); 4'-CH2-N(R)-O-2' (여기서 R은 H, C1-C12 알킬, 또는 보호 그룹이다) (참고, 2008년 9월 23일에 발행된 미국 특허 7,427,672); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (참고, Chattopadhyaya, 등, J. Org . Chem.,2009, 74, 118-134); 및 4'-CH2-C(=CH2)-2', 및 그것의 유사체 (참고, 2008년 12월 8일에 발행된 공개된 PCT 국제 출원 WO 2008/154401) 중의 하나를 포함한다. 또한, 예를 들면: Singh 등, Chem . Commun ., 1998, 4, 455-456; Koshkin 등, Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt 등, Proc . Natl . Acad . Sci . U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar 등, Bioorg . Med . Chem . Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh 등, J. Org . Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava 등, J. Am . Chem. Soc., 129(26) 8362-8379 (Jul. 4, 2007); Elayadi 등, Curr . Opinion Invens. Drugs , 2001, 2, 558-561; Braasch 등, Chem . Biol ., 2001, 8, 1-7; Orum 등, Curr . Opinion Mol . Ther ., 2001, 3, 239-243; 미국 특허 번호 미국 6,670,461, 7,053,207, 6,268,490, 6,770,748, 6,794,499, 7,034,133, 6,525,191, 7,399,845; 공개된 PCT 국제 출원 WO 2004/106356, WO 94/14226, WO 2005/021570, 및 WO 2007/134181; 미국 특허 공보 번호 US2004/0171570, US2007/0287831, 및 US2008/0039618; 및 미국 특허 시리즈 번호 12/129,154, 60/989,574, 61/026,995, 61/026,998, 61/056,564, 61/086,231, 61/097,787, 및 61/099,844; 및 PCT 국제 출원 번호 PCT/US2008/064591, PCT/US2008/066154, 및 PCT/US2008/068922를 참고한다. 예를 들면, α-L-리보푸라노스 및 β-D-리보푸라노스를 포함하는 1 이상의 입체화학적 당 배치를 갖는, 각각의 상기 바이사이클릭 뉴클레오사이드가 제조될 수 있다 (참고, WO 99/14226으로서 1999년 3월 25일에 발행된 PCT 국제 출원 PCT/DK98/00393).
어떤 구현예에서, BNA 뉴클레오사이드의 바이사이클릭 당 모이어티는 펜토푸라노실 당 모이어티의 4' 및 2' 위치 사이에 적어도 1의 브릿지를 갖는 화합물을 비제한적으로 포함하고, 그와 같은 브릿지는 -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x-, 및 -N(Ra)-로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2 내지 4개의 연결된 그룹을 포함하고;
여기서:
x는 0, 1, 또는 2이고;
n은 1, 2, 3, 또는 4이고;
각 Ra 및 Rb는, 독립적으로, H, 보호 그룹, 하이드록실, C1 -C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 헤테로사이클 라디칼, 치환된 헤테로사이클 라디칼, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, C5-C7알리사이클릭 라디칼, 치환된 C5-C7알리사이클릭 라디칼, 할로겐, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, 아실 (C(=O)-H), 치환된 아실, CN, 설포닐 (S(=O)2-J1),또는 설폭실 (S(=O)-J1)이고;
각 J1 및 J2는, 독립적으로, H, C1 -C12 알킬, 치환된 C1 -C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C5-C20 아릴, 치환된 C5-C20 아릴, 아실 (C(=O)-H), 치환된 아실, 헤테로사이클 라디칼, 치환된 헤테로사이클 라디칼, C1 -C12 아미노알킬, 치환된 C1 -C12 아미노알킬, 또는 보호 그룹이다.
어떤 구현예에서, 바이사이클릭 당 모이어티의 브릿지는, -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O-, 또는 C(RaRb)-O-N(R)-이다. 어떤 구현예에서, 브릿지는 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2', 및 4'-CH2-N(R)-O-2'-이고, 여기서 각 R은, 독립적으로, H, 보호 그룹, 또는 C1 -C12 알킬이다.
어떤 구현예에서, 바이사이클릭 뉴클레오사이드는 이성질체 배치에 의해 추가로 정의된다. 예를 들면, 4'-2' 메틸렌-옥시 브릿지를 포함하는 뉴클레오사이드는, α-L 배치 또는 β-D 배치일 수 있다. 이전에, α-L-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA는 안티센스 활성을 보여준 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 통합되었다 (Frieden 등, Nucleic Acids Research , 2003, 21,6365-6372).
어떤 구현예에서, 바이사이클릭 뉴클레오사이드는, 비제한적으로, (A) α-L-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA, (B) β-D-메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA, (C) 에틸렌옥시 (4'-(CH2)2-O-2') BNA, (D) 아미노옥시 (4'-CH2-O-N(R)-2') BNA, (E) 옥시아미노 (4'-CH2-N(R)-O-2') BNA, (F) 메틸(메틸렌옥시) (4'-CH(CH3)-O-2') BNA, (G) 메틸렌-티오 (4'-CH2-S-2') BNA, (H) 메틸렌-아미노 (4'-CH2-N(R)-2') BNA, (I) 메틸 카보사이클릭 (4'-CH2-CH(CH3)-2') BNA, 및 (J) 프로필렌 카보사이클릭 (4'-(CH2)3-2') BNA를 포함하고, 이는 이하에서 묘사되어 있다.
Figure pct00001
Figure pct00002
여기서 Bx는 염기 모이어티이고 R은, 독립적으로, H, 보호 그룹 또는 C1 -C12알킬이다.
어떤 구현예에서, 식 I로 표시되는 바이사이클릭 뉴클레오사이드:
Figure pct00003
여기서:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이고;
-Qa-Qb-Qc-는 -CH2-N(Rc)-CH2-, -C(=O)-N(Rc)-CH2-, -CH2-O-N(Rc)-, -CH2-N(Rc)-O-,또는 -N(Rc)-O-CH2이고;
Rc는 C1 -C12 알킬 또는 아미노 보호 그룹이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로, H, 하이드록실 보호 그룹, 콘주게이트 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티, 또는 매질을 지지하기 위한 공유 결합이다.
어떤 구현예에서, 식 II로 표시되는 바이사이클릭 뉴클레오사이드:
Figure pct00004
여기서:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로, H, 하이드록실 보호 그룹, 콘주게이트 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티, 또는 매질을 지지하기 위한 공유 결합이다.
Za는 C1 -C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C1 -C6 알킬, 치환된 C2-C6알케닐, 치환된 C2-C6알키닐, 아실, 치환된 아실, 치환된 아마이드, 티올, 또는 치환된 티오이다.
일 구현예에서, 각각의 치환된 그룹은, 독립적으로, 할로겐, 옥소, 하이드록실, OJc, NJcJd, SJc, N3, OC(=X)Jc, 및 NJeC(=X)NJcJd로부터 독립적으로 선택된 치환체 그룹으로 모노 또는 폴리 치환되고, 여기서 각 Jc,Jd , 및 Je는, 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 또는 치환된 C1 -C6 알킬이고 X는 O 또는 NJc이다.
어떤 구현예에서, 식 III로 표시되는 바이사이클릭 뉴클레오사이드:
Figure pct00005
여기서:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로, H, 하이드록실 보호 그룹, 콘주게이트 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티, 또는 매질을 지지하기 위한 공유 결합이다.
Zb는 C1 -C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C1 -C6알킬, 치환된 C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알키닐, 또는 치환된 아실 (C(=O)-)이다.
어떤 구현예에서, 식 IV로 표시되는 바이사이클릭 뉴클레오사이드:
Figure pct00006
여기서:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로 H, 하이드록실 보호 그룹, 콘주게이트 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티, 또는 매질을 지지하기 위한 공유 결합이다.
Rd는 C1-C6 알킬, 치환된 C1 -C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6알키닐, 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고;
각 qa, qb, qc 및 qd는, 독립적으로, H, 할로겐, C1 -C6알킬, 치환된 C1 -C6알킬, C2-C6알케닐, 치환된 C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, 또는 치환된 C2-C6알키닐, C1 -C6알콕실, 치환된 C1 -C6알콕실, 아실, 치환된 아실, C1 -C6아미노알킬, 또는 치환된 C1 -C6아미노알킬이고;
어떤 구현예에서, 식 V로 표시되는 바이사이클릭 뉴클레오사이드:
Figure pct00007
여기서:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이고;
Ta 및 Tb 각각은, 독립적으로, H, 하이드록실 보호 그룹, 콘주게이트 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티, 또는 매질을 지지하기 위한 공유 결합이다.
qa, qb, qe 및 qf 각각은, 독립적으로, 수소, 할로겐, C1 -C12 알킬, 치환된 C1 -C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C1 -C12 알콕시, 치환된 C1 -C12 알콕시, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj,O-C(=O)­NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)­NJjJk 또는 N(H)C(=S)NJjJk이고;
또는 qe 및 qf는 함께 =C(qg)(qh)이고;
qg 및 qh 각각은, 독립적으로, H, 할로겐, C1 -C12 알킬, 또는 치환된 C1 -C12 알킬이다.
그의 올리고머화, 및 핵산 인지 특성과 함께 메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA 모노머 아데닌, 시토신, gua9, 5-메틸-시토신, 티민, 및 우라실의 합성 및 제조는 기재되었다 (참고, 예를 들면, Koshkin 등, Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). BNAs 및 그의 제조는 WO 98/39352 및 WO 99/14226에 또한 기재되어 있다.
메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA, 메틸렌옥시 (4'-CH2-O-2') BNA, 및 2'-티오-BNAs의 유사체가 또한 제조되었다 (참고, 예를 들면, Kumar 등, Bioorg . Med . Chem. Lett ., 1998, 8, 2219-2222). 핵산 폴리머라제에 대한 기질로서 올리고데옥시리보뉴클레오타이드 듀플렉스를 포함하는 짜맞춘 뉴클레오사이드 유사체의 제조가 또한 기재되었다 (참고, 예를 들면, Wengel 등, WO 99/14226). 뿐만 아니라, 2'-아미노-BNA, 신규의 구조적으로 제한된 높은-친화도 올리고뉴클레오타이드 유사체의 합성이, 당해 기술에 기재되었다 (참고, 예를 들면, Singh 등, J. Org . Chem., 1998, 63, 10035-10039). 또한, 2'-아미노- 및 2'-메틸아미노-BNA가 제조되었고 상보적인 RNA 및 DNA 가닥을 갖는 그의 듀플렉스의 열 안정성은 이전에 보고되었다.
어떤 구현예에서, 식 VI로 표시되는 바이사이클릭 뉴클레오사이드:
Figure pct00008
여기서:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이고;
Ta및 Tb 각각은, 독립적으로, H, 하이드록실 보호 그룹, 콘주게이트 그룹, 반응성 인 그룹, 인 모이어티, 또는 매질을 지지하기 위한 공유 결합이다.
각 qi, qj, qk 및 ql는, 독립적으로, H, 할로겐, C1 -C12 알킬, 치환된 C1 -C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C1 -C12알콕실, 치환된 C1 -C12 알콕실, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)­NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)­NJjJk, 또는 N(H)C(=S)NJjJk이고;
qi 및 qj 또는 ql및 qk는 함께 =C(qg)(qh)이고, 여기서 qg 및 qh 각각은, 독립적으로, H, 할로겐, C1 -C12 알킬, 또는 치환된 C1 -C12 알킬이다.
4'-(CH2)3-2' 브릿지를 갖는 하나의 카보사이클릭 바이사이클릭 뉴클레오사이드 및 알케닐 유사체, 브릿지 4'-CH=CH-CH2-2'가 기재되었다 (참고, 예를 들면, Freier 등, Nucleic Acids Research, 1997, 25(22),4429-4443 및 Albaek 등, J. Org. Chem., 2006, 71,7731-7740). 그의 올리고머화 및 생화학적 연구와 함께 카보사이클릭 바이사이클릭 뉴클레오사이드의 합성 및 제조는 또한 기재되었다 (참고, 예를 들면, Srivastava 등, J. Am . Chem . Soc . 2007, 129(26), 8362-8379).
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "4'-2' 바이사이클릭 뉴클레오사이드" 또는 "4' 내지 2' 바이사이클릭 뉴클레오사이드"는 2' 탄소 원자 및 4' 탄소 원자를 연결하는 브릿지를 포함하는 푸라노스 고리를 포함하는 바이사이클릭 뉴클레오사이드를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "모노사이클릭 뉴클레오사이드"는 바이사이클릭 당 모이어티가 아닌 변형된 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. 어떤 구현예에서, 뉴클레오사이드의 당 모이어티, 또는 당 모이어티 유사체 는 임의의 위치에서 변형 또는 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "2'-변형된 당"은 2' 위치에서 변형된 푸라노실 당을 의미한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 변형은 하기로부터 선택된 치환체를 포함한다: 치환된 및 비치환된 알콕시, 치환된 및 비치환된 티오알킬, 치환된 및 비치환된 아미노 알킬, 치환된 및 비치환된 알킬, 치환된 및 비치환된 알릴, 및 치환된 및 비치환된 알키닐을 비제한적으로 포함하는 할라이다. 어떤 구현예에서, 2' 변형은 O[(CH2)nO]mCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3, O(CH2)nONH2, OCH2C(=O)N(H)CH3, 및 O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2를 비제한적으로 포함하는 치환체로부터 선택되고, 여기서 n 및 m 은 1 내지 약 10이다. 다른 2'- 치환체 그룹은 하기로부터 또한 선택될 수 있다: C1-C12 알킬; 치환된 알킬; 알케닐; 알키닐; 알카릴; 아르알킬; O-알카릴 또는 O-아르알킬; SH; SCH3; OCN; Cl; Br; CN; CF3; OCF3; SOCH3; SO2CH3; ONO2; NO2; N3; NH2; 헤테로사이클로알킬이고; 헤테로사이클로알카릴; 아미노알킬아미노; 폴리알킬아미노; 치환된 실릴; RNA 절단 그룹; 리포터 그룹; 삽입제; 약력학적 특성을 개선하기 위합 그룹; 및 안티센스 화합물의 약동학적 특성을 개선하기 위한 그룹, 및 유사한 특성을 갖는 다른 치환체. 어떤 구현예에서, 변형된 뉴클레오사이드는 2'-MOE 측쇄를 포함한다 (참고, 예를 들면, Baker 등, J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000). 그와 같은 2'-MOE 치환은 비변형된 뉴클레오사이드 및 다른 변형된 뉴클레오사이드, 예컨대 2'- O-메틸, O-프로필, 및 O-아미노프로필와 비교된 개선된 결합 친화도를 갖는 것으로 기재되었다. 2'-MOE 치환체를 갖는 올리고뉴클레오타이드는 생체내 용도를 위한 유만한 특징과 함께 유전자 발현의 안티센스 억제제인 것으로 또한 보여졌다 (참고, 예를 들면, Martin, P., Helv . Chim . Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann 등, Chimia, 1996,50, 168-176; Altmann 등, Biochem . Soc . Trans., 1996, 24, 630-637; 및 Altmann 등, Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926).
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "변형된 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드" 또는 "변형된 THP 뉴클레오사이드"는 노말 뉴클레오사이드 (당 대용물)에서 펜토푸라노실 잔기에 대해서 치환된6-원 테트라하이드로피란 "당"를 갖는 뉴클레오사이드를 의미한다. 변형된 TUP 뉴클레오사이드는, 비제한적으로, 헥시톨 핵산 (HNA), 아니톨 핵산 (ANA), 마니톨 핵산 (MNA)으로서 당해기술에 언급된 것 (참고 Leumann, CJ. Bioorg . & Med . Chem .(2002)10:841-854), 플루오로 HNA (F-HNA), 또는 식 X으로 표시되는 화합물을 포함한다:
식 X:
Figure pct00009
여기서 식 X의 각각의 상기 적어도 1 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드 유사체에 대해 독립적임:
Bx는 헤테로사이클릭 염기 모이어티이고;
T3 및 T4 각각은, 독립적으로, 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드 유사체를 안티센스 화합물에 연결하는 뉴클레오사이드간 연결 그룹이거나 T3 및 T4 중 하나는 테트라하이드로피란 뉴클레오사이드 유사체를 안티센스 화합물에 연결하는 뉴클레오사이드간 연결 그룹이고, T3 및 T4 중 다른 것은 H, 하이드록실 보호 그룹, 연결된 콘주게이트 그룹, 또는 5' 또는 3'-말단 그룹이고;
q1, q2, q3, q4, q5, q6 및 q7 각각은, 독립적으로, H, C1 -C6 알킬, 치환된 C1 -C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 또는 치환된 C2-C6 알키닐이고;
R1 및 R2 중 하나는 수소이고 다른 것은 할로겐, 치환된 또는 비치환된 알콕시, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2, 및 CN로부터 선택되고, 여기서 X는 O, S, 또는 NJ1이고, 각 J1, J2, 및 J3는, 독립적으로, H 또는 C1 -C6 알킬이다.
어떤 구현예에서, 식 X의 변형된 THP 뉴클레오사이드가 제공되고 여기서 qm, qn, qp, qr, qs, qt , 및 qu 각각은 H이다. 어떤 구현예에서, qm, qn, qp, qr, qs, qt, 및 qu 중 적어도 하나는 H 이외의 것이다. 어떤 구현예에서, qm, qn, qp, qr, qs, qt 및 qu 중 적어도 하나는 메틸이다. 어떤 구현예에서, 식 X의 THP 뉴클레오사이드가 제공되고 여기서 R1 및 R2 중 하나는 F이다. 어떤 구현예에서, R1은 플루오로이고 R2은 H이고, R1은 메톡시이고 R2은 H이고, R1은 메톡시에톡시이고 R2는 H이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "2'-변형된" 또는 "2'-치환된"는 H 또는 OH 이외의 2' 위치에서 치환체를 포함하는 당을 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. 2'-변형된 뉴클레오사이드는, 비제한적으로, 바이사이클릭 뉴클레오사이드를 포함하고 여기서 당 고리의 2개의 탄소 원자를 연결하는 상기 브릿지는 2' 탄소, 및 비-브릿징 2'치환체, 예컨대 알릴, 아미노, 아지도, 티오, O-알릴, O-C1 -C10알킬, -OCF3, O-(CH2)2-O-CH3, 2'-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), 또는 O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn)를 갖는 뉴클레오사이드 및 당고리의 다른 탄소를 연결하고, 여기서 각 Rm및 Rn은, 독립적으로, H 또는 치환된 또는 비치환된 C1 -C10 알킬이다. 2'-변형된 뉴클레오사이드는 예를 들면, 당의 다른 위치 및/또는 뉴클레오베이스에서 다른 변형을 추가로 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "2'-F"는 2' 위치에서 플루오로 그룹을 포함하는 당을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "2'-OMe" 또는 "2'-OCH3" 또는 "2'-O-메틸" 각각은 당 고리의 2' 위치에서 -OCH3 그룹을 포함하는 당을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "올리고뉴클레오타이드"는 복수의 연결된 뉴클레오사이드를 포함하는 화합물을 의미한다. 어떤 구현예에서, 복수의 뉴클레오사이드 중 하나 이상은 변형된다. 어떤 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 리보뉴클레오사이드 (RNA) 및/또는 데옥시리보뉴클레오사이드 (DNA)를 포함한다.
많은 다른 바이사이클로 및 트리사이클로 당 대용물 고리 시스템은 안티센스 화합물에 통합시키기 위해 뉴클레오사이드를 변형시키기 위해 사용될 수 있는 당해기술에 또한 공지되어 있다 (참고, 예를 들면, 검토 항목: Leumann, J. C, Bioorganic & Meciainal Chemistry , 2002, 10,841-854).
그와 같은 고리 시스템은 활성을 향상시키기 위해 다양한 부가적 치환을 경험할 수 있다.
변형된 당의 제조 방법은 당해분야의 숙련가에게 공지되어 있다.
변형된 당 모이어티를 갖는 뉴클레오타이드에서, 뉴클레오베이스 모이어티 (천연, 변형된, 또는 이들의 조합)는 적절한 핵산 표적에 의해 하이브리드화를 위해 유지된다.
어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 변형된 당 모이어티를 갖는 하나 이상의 뉴클레오타이드를 포함한다. 어떤 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 2'-MOE이다. 어떤 구현예에서, 2'-MOE 변형된 뉴클레오타이드는 갭머 모티프에서 배열된다. 어떤 구현예에서, 변형된 당 모이어티는 cEt이다. 어떤 구현예에서, cEt 변형된 뉴클레오타이드는 갭머 모티프의 윙 도처에 배열된다.
변형된 뉴클레오베이스
뉴클레오베이스 (또는 염기) 변형 또는 치환은 천연 생성 또는 합성 비변형된 뉴클레오베이스로부터 구조적으로 구별가능하고, 또한 기능적으로 교환가능하다. 천연 및 변형 모두 뉴클레오베이스는 수소 결합에 참여할 수 있다. 그와 같은 뉴클레오베이스 변형은 뉴클레아제 안정성, 결합 친화도 또는 일부 다른 유익한 생물학적 특성을 안티센스 화합물에 부여할 수 있다. 변형된 뉴클레오베이스는 합성 및 천연 뉴클레오베이스 예컨대, 예를 들면, 5-메틸시토신 (5-me-C)를 포함한다. 5-메틸시토신 치환를 포함하는 어떤 뉴클레오베이스 치환은, 표적 핵산에 대한 안티센스 화합물의 결합 친화도를 증가시키는데 특히 유용하다. 예를 들면, 5-메틸시토신 치환은 0.6-1.2 ℃까지 핵산 듀플렉스 안정성을 증가시키는 것으로 보였다 (Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. 및 Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993,페이지 276-278).
부가적 비변형된 뉴클레오베이스를 하기를 포함한다: 5-하이드록시메틸 시토신, 잔틴, 하이포잔틴, 2-아미노아데닌, 6-메틸 및 아데닌 및 gua9의 다른 알킬 유도체, 2-프로필 및 아데닌 및 gua9의 다른 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실 및 시토신, 5-프로피닐 (-CsC-C¾)우라실 및 시토신 및 피리미딘 염기의 다른 알키닐 유도체, 6-아조 우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실 (슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 및 다른 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로 특히 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 다른 5-치환된 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노-아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌 및 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌.
헤테로사이클릭 염기 모이어티는, 상기 퓨린 또는 피리미딘 염기가 다른 헤테로사이클, 예를 들면 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘 및 2-피리돈으로 치환된 것을 또한 포함할 수 있다. 안티센스 화합물의 결합 친화도를 증가시키는데 특히 유용한 뉴클레오베이스는 2 아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신을 포함하는 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린을 포함한다.
어떤 구현예에서, PTPIB 핵산에 표적화된 안티센스 화합물은 하나 이상의 변형된 뉴클레오베이스를 포함한다. 어떤 구현예에서, PTPIB 핵산에 대해 표적화된 갭 넓게된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 변형된 뉴클레오베이스. 어떤 구현예에서, 변형된 뉴클레오베이스는 5-메틸시토신을 포함한다. 어떤 구현예에서, 각각의 시토신은 5-메틸시토신이다.
약제학적 조성물을 제형화하기 위한 조성 및 방법
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 약제학적 조성물 또는 제형을 제조하기 위해 약제학적으로 허용가능한 활성 또는 불활성 물질과 혼합할 수 있다. 약제학적 조성물의 제형화를 위한 조성 및 방법은, 비제한적으로, 투여 경로, 질환의 정도, 또는 투여될 용량을 포함하는 다수의 기준에 의존적이다.
PTPIB 핵산에 대해 표적된 안티센스 화합물은, 안티센스 화합물을 적합한 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 배합함으로써 약제학적 조성물로 이용될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 희석제는 포스페이트-완충된 식염수 (PBS)를 포함한다. PBS는 비경구로 전달되는 조성물에 사용하기에 적합한 희석제이다. 따라서, 일 구현예에서, PTPIB 핵산에 대해 표적된 안티센스 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 희석제를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에 기재된 방법에 이용된다. 어떤 구현예에서, 약제학적으로 허용가능한 희석제는 PBS이다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다.
안티센스 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 임의의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 그와 같은 에스테르의 염, 또는, 인간을 포함하는 동물에게 투여시, 생물학적으로 활성 대사물 또는 그것의 잔사를 (직접적으로 또는 간접적으로) 제공할 수 있는 임의 다른 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 따라서, 예를 들면, 본 개시내용은 또한 안티센스 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염, 전구약물, 그와 같은 전구약물의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 다른 생물학적 동등물을 포함한다. 적합한 약제학적으로 허용가능한 염은, 비제한적으로, 나트륨염 및 칼륨염을 포함한다.
본원에 기재된 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염은 당해분야에 익히-공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염의 검토를 위해, Stahl 및 Wermuth, 약제학적 염들의 핸드북: 특성, 선택 및 사용 (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)을 참조한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 나트륨염은 인간에게 치료적 투여에 유용하고 잘 수용된다. 따라서, 일 구현예에서 본원에 기재된 화합물은 나트륨염의 형태로 존재한다.
전구약물은, 활성 안티센스 화합물을 형성하도록 신체 내에서 내인성 뉴클레아제에 의해 절단되는, 안티센스 화합물의 한쪽 또는 양쪽 말단에서 부가적 뉴클레오사이드의 도입을 포함할 수 있다.
콘주게이트화 안티센스 화합물
안티센스 화합물은 수득한 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 활성, 세포 분포 또는 세포 흡수를 증진시키는 1 이상의 모이어티 또는 콘주게이트에 공유결합으로 연결될 수 있다. 전형적인 콘주게이트 그룹은 콜레스테롤 모이어티 및 지질 모이어티를 포함한다. 부가적 콘주게이트 그룹은 카보히드레이트, 인지질, 바이오틴, 펜아진, 폴레이트, 페난트리딘, 안트라퀴논, 아크리딘, 플루오레세인, 로다민, 쿠마린, 및 염료를 포함한다.
안티센스 화합물은 또한, 예를 들면, 뉴클레아제 안정성과 같은 특성을 증진시키기 위해 안티센스 화합물의 한쪽 또는 양쪽 말단에 일반적으로 부착되는 1 이상의 안정화 그룹을 갖도록 변형될 수 있다. 캡 구조가 안정화 그룹에 포함된다. 이들 말단 변형은 말단 핵산을 갖는 안티센스 화합물을 엑소뉴클레아제 분해로부터 보호하고, 세포 내로의 전달 및/또는 국소화를 도울 수 있다. 캡은 5'-말단 (5'-캡), 또는 3'-말단 (3'-캡)에 존재할 수 있거나, 또는 양쪽 말단에 존재할 수 있다. 캡 구조는 당해분야에 익히 공지되어 있으며, 예를 들면, 역 데옥시 어베이직(abasic) 캡을 포함한다. 뉴클레아제 안정성을 부여하기 위해 안티센스 화합물의 한쪽 또는 양쪽 말단을 캡핑하는데 사용될 수 있는 추가 3' 및 5'-안정화 그룹은 2003년 1월 16일에 발행된 WO 03/004602에 개시된 것들을 포함한다.
세포 배양 및 안티센스 화합물 치료
PTPIB 핵산의 수준, 활성 또는 발현에 대한 안티센스 화합물의 효과는 다양한 세포 유형에서 시험관내 시험될 수 있다. 그와 같은 분석에 사용되는 세포 유형은 상업적 판매처 (예를 들면 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (American Type Culture Collection), 버지니아주 마나서스; 젠-바이오, 인코포레이티드 (Zen-Bio, Inc.), 노스캐롤라이나주 리서치 트라이앵글 파크; 클로네틱스 코포레이션 (Clonetics Corporation), 메릴랜드주 워커스빌)로부터 입수가능하고, 세포는 상업적으로 이용가능한 시약 (예를 들면, 인비트로겐 라이프 테크놀로지스 (Invitrogen Life Technologies), 캘리포니아주 칼즈배드)을 사용하여 판매자의 지침에 따라서 배양된다. 예시적인 세포 유형은, 비제한적으로, HepG2 세포, Hep3B 세포, 일차 간세포, A549 세포, GM04281 섬유아세포 및 LLC-MK2 세포를 포함한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드의 시험관내 시험
다른 안티센스 화합물로의 치료를 위해 적절하게 변형될 수 있는, 세포의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로의 치료 방법이 본원에 기재된다.
일반적으로, 세포는, 세포가 배양시 대략 60-80% 융합(confluence)에 도달할 때 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 치료된다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양된 세포 내로 도입하는데 통상 사용되는 하나의 시약은 양이온성 지질 전달감염 시약 LIPOFECTIN® (인비트로겐, 캘리포니아주 칼즈배드)을 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 OPTI-MEM® 1 (인비트로겐, 캘리포니아주 칼즈배드) 중의 LIPOFECTIN®과 혼합하여 원하는 최종 농도의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 LIPOFECTIN® 농도 (전형적으로 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드당 2 내지 12 ug/mL 범위임)를 달성한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양된 세포 내로 도입하는데 사용되는 또 하나의 시약은 lipofectAMINE 2000® (인비트로겐, 캘리포니아주 칼즈배드)을 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 OPTI-MEM® 1 감소된 혈청 매질 (인비트로겐, 캘리포니아주 칼즈배드) 중의 lipofectAMINE 2000®과 혼합하여 원하는 농도의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 lipofectAMINE® 농도 (전형적으로 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드당 2 내지 12 ug/mL 범위임)를 달성한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양된 세포 내로 도입하는데 사용되는 또 하나의 시약은 Cytofectin® (인비트로겐, 캘리포니아주 칼즈배드)을 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 OPTI-MEM® 1 감소된 혈청 매질 (인비트로겐, 캘리포니아주 칼즈배드) 중의 Cytofectin®과 혼합하여 원하는 농도의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 Cytofectin® 농도 (전형적으로 100 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드당 2 내지 12 ug/mL 범위임)를 달성한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드를 배양된 세포 내로 도입하는데 사용되는 또 하나의 기술은 전기천공을 포함한다.
세포는 일상적인 방법에 의해 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 치료된다. 세포는 전형적으로 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료 16-24 시간 후에 수확되고, 이때, 표적 핵산의 RNA 또는 단백질 수준은 당해분야에 공지되고 본원에 기재된 방법에 의해 측정된다. 일반적으로, 치료가 다수 반복으로 수행될 때, 데이타는 반복 치료의 평균으로서 주어진다.
사용된 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 농도는 세포주 별로 다양하다. 특정 세포주에 대한 최적의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 농도를 결정하는 방법은 당해분야에 익히 공지되어 있다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 전형적으로 lipofectAMINE 2000®, 리포펙틴 또는 사이토펙틴으로 전달감염될 때 1 nM 내지 300 nM 범위의 농도로 사용된다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 전기천공을 사용하여 전달감염될 때 625 내지 20,000 nM 범위의 더 높은 농도에서 사용된다.
RNA 단리
RNA 분석을 총 세포 RNA 또는 폴리(A)+ mRNA에 대해 수행할 수 있다. RNA 단리 방법은 당해분야에 익히 공지되어 있다. RNA는 당해분야에 익히 공지된 방법, 예를 들면, 제조자의 추천된 프로토콜에 따라서 TRIZOL® 시약 (인비트로겐, 캘리포니아주 칼즈배드)을 사용하여 제조된다.
표적 수준 또는 발현의 억제 분석
PTPIB 핵산의 수준 또는 발현의 억제를 당해분야에 공지된 다양한 방식으로 검정할 수 있다. 예를 들면, 표적 핵산 수준을, 예를 들면, 노던 블랏 분석, 경쟁적 폴리머라제 사슬 반응 (PCR), 또는 정량적 실시간 PCR로 정량화할 수 있다. RNA 분석을 총 세포 RNA 또는 폴리(A)+ mRNA에 대해 수행할 수 있다. RNA 단리 방법은 당해분야에 익히 공지되어 있다. 노던 블랏 분석은 또한 당해분야에 일상적이다. 정량적 실시간 PCR은 PE-어플라이드 바이오시스템즈 (PE-Applied Biosystems, 캘리포니아주 포스터 시티)로부터 입수가능하고, 제조자의 지침에 따라서 사용되는 상업적으로 이용가능한 ABI 프리즘® 7600, 7700, 또는 7900 서열 검출 시스템을 사용하여 편리하게 수행될 수 있다.
표적 RNA 수준의 정량적 실시간 PCR 분석
표적 RNA 수준의 정량화를 제조자의 지침에 따라 ABI 프리즘® 7600, 7700, 또는 7900 서열 검출 시스템 (PE-어플라이드 바이오시스템즈, 캘리포니아주 포스터 시티)을 사용한 정량적 실시간 PCR로 수행할 수 있다. 정량적 실시간 PCR의 방법은 당해분야에 익히 공지되어 있다.
실시간 PCR 전에, 단리된 RNA는, 이후 기질로서 실시간 PCR 증폭에 사용되는 상보적인 DNA (cDNA)를 생성하는, 역전사효소 (RT) 반응에 적용된다. RT 및 실시간 PCR 반응은 동일한 샘플에서 순차적으로 잘 수행된다. RT 및 실시간 PCR 시약은 인비트로겐 (캘리포니아주 칼즈배드)으로부터 입수된다. RT, 실시간-PCR 반응을 당해분야의 숙련가에게 익히 공지된 방법으로 수행한다.
실시간 PCR에 의해 얻어진 유전자 (또는 RNA) 표적 양은 사이클로필린 A와 같이 발현이 일정한 유전자의 발현 수준을 사용하거나, 또는 RIBOGREENEN® (인비트로겐, 인코포레이티드. 캘리포니아주 칼즈배드)을 사용하여 총 RNA를 정량함으로써 표준화된다. 사이클로필린 A 발현은 표적과 동시에 수행하거나, 멀티플렉싱하거나, 또는 별도로 수행함으로써 실시간 PCR에 의해 정량화된다. 총 RNA를 RIBOGREENEN® RNA 정량화 시약 (인비트로겐, 인코포레이티드, 오레곤 유진)을 사용하여 정량화한다. RJBOGREENEN®에 의한 RNA 정량화 방법은 Jones, L.J., 등 (Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374)에 교시되어 있다. CYTOFLUOR® 4000 기기 (PE 어플라이드 바이오시스템즈)를 RJBOGREENEN® 형광을 측정하는데 사용한다.
프로브 및 프라이머는 PTPIB 핵산에 하이브리드하도록 디자인된다. 실시간 PCR 프로브 및 프라이머를 디자인하는 방법은 당해분야에 익히 공지되어 있고, PRIMER EXPRESS® 소프트웨어 (어플라이드 바이오시스템, 캘리포니아주 포스터 시티)와 같은 소프트웨어를 사용함을 포함할 수 있다.
단백질 수준의 분석
PTPIB 핵산의 안티센스 억제를 PTPIB 단백질 수준을 측정함으로써 평가할 수 있다. PTPIB의 단백질 수준을 당해분야에 익히 공지된 다양한 방식, 예를 들면, 면역침전, 웨스턴 블랏 분석 (면역블랏팅), 효소-연결된 면역흡수 검정 (ELISA), 정량적 단백질 검정, 단백질 활성 검정 (예를 들면, 카스파제 활성 검정), 면역조직화학, 면역세포화학 또는 형광-활성화 세포 분류 (FACS)로 평가하거나 정량화할 수 있다. 표적으로 향하는 항체는 다양한 공급원, 예를 들면, 항체의 MSRS 카탈로그 (에어리 코포레이션 (Aerie Corporation), 미시간주 버밍엄)로부터 확인되고 입수될 수 있거나, 또는 당해분야에 익히 공지된 종래의 모노클로날 또는 폴리클로날 항체 생성 방법을 통해 제조될 수 있다. 인간 및 랫트 PTPIB의 검출에 유용한 항체가 상업적으로 이용가능하다.
안티센스 화합물의 생체내 시험
안티센스 화합물, 예를 들면, 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 PTPIB의 발현을 억제하고 표현형 변화를 산출하는 그의 능력을 평가하기 위해 동물에서 시험했다. 시험을 정상 동물 또는 실험적 질환 모델에서 수행할 수 있다. 동물로의 투여를 위해, 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포스페이트-완충된 식염수와 같은 약제학적으로 허용가능한 희석제로 제형화한다. 투여는 비경구 투여 경로를 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드로의 치료기간 후, RNA를 조직으로부터 단리하고 PTPIB 핵산 발현의 변화를 측정한다. PTPIB 단백질 수준의 변화도 또한 측정한다.
어떤 징후
어떤 구현예에서, 본원에 기재된 1 이상의 약제학적 조성물을 투여함을 포함하는, 개인을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 어떤 구현예에서, 개인은 대사 관련된 질환을 갖는다.
하기 실시예에서 보여주는 바와 같이, 본원에 기재된 PTPIB에 대해 표적된 화합물은 대사 증후군, 진성 당뇨병, 인슐린 내성, 당뇨병 이상지질혈증, 고트리글라이세라이드 혈증, 비만증 및 체중 증가를 포함하는 대사 관련된 질환의 생리 증상의 중증도를 감소시키는 것으로 나타났다. 어떤 실험에서, 화합물은 혈액 글루코오스 수준을 감소시켰고, 예를 들면, 동물은 증상을 계속 경험하였으나, 증상이 미처리된 동물에 비해 덜 심각했다. 그러나, 다른 실험에서, 화합물은 당뇨병의 증상을 감소시키는 것으로 나타났다; 예를 들면, 장기간 동안 치료된 동물은 단기간 동안 화합물을 투여한 경우보다 덜 심각한 증상을 경험했다. 그러나, 다른 실험에서, 화합물은 체중 증가를 억제하는 것으로 나타났다; 예를 들면, 장기간 동안 치료된 동물은 단기간 동안 화합물을 투여한 경우보다 덜 심각한 증상을 경험했다. 그러나, 다른 실험에서, 화합물은 고트리글라이세라이드 혈증을 억제하는 것으로 나타났다; 예를 들면, 장기간 동안 치료된 동물은 단기간 동안 화합물을 투여한 경우보다 덜 심각한 증상을 경험했다. 기능을 회복하려는 화합물의 능력은 하기 예시되어 있고, 따라서 이것은 질환의 증상이 본원에 기재된 화합물로의 치료에 의해 역전될 수 있음을 실증한다.
진성 당뇨병은 수많은 신체적 및 생리 증상을 특징으로 한다. 유형 2 당뇨병과 연관된 당해분야의 숙련가에게 공지된 임의의 증상은 경감되거나, 그렇지 않다면 상기 기재된 방법에서 상기 제시된 바와 같이 조절될 수 있다. 어떤 구현예에서, 증상은 증가된 글루코오스 수준, 증가된 체중 증가, 빈번한 배뇨, 비정상적 갈증, 극도의 배고픔, 극도의 피로, 흐릿한 시력, 빈번한 감염, 사지의 따끔거림 또는 저림, 건조하고 가려운 피부, 체중 감소, 늦은 상처 치유, 및 잇몸 부어오름으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 신체적 증상이다.
어떤 구현예에서, 증상은 증가된 인슐린 내성, 증가된 글루코오스 수준, 증가된 지방 질량, 감소된 대사율, 감소된 글루코오스 소거, 감소된 글루코오스 내성, 감소된 인슐린 민감도, 감소된 간 인슐린 민감도, 증가된 지방 조직 크기 및 중량, 증가된 체지방, 및 증가된 체중으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 생리 증상이다.
어떤 구현예에서, 신체적 증상은 증가된 체중 증가이다. 어떤 구현예에서, 증상은 빈번한 배뇨이다. 어떤 구현예에서, 증상은 비정상적 갈증이다. 어떤 구현예에서, 증상은 극도의 배고픔이다. 어떤 구현예에서, 증상은 극도의 피로이다. 어떤 구현예에서, 증상은 흐릿한 시력이다. 어떤 구현예에서, 증상은 빈번한 감염이다. 어떤 구현예에서, 증상은 사지의 따끔거림 또는 저림이다. 어떤 구현예에서, 증상은 건조하고 가려운 피부이다. 어떤 구현예에서, 증상은 체중 감소이다. 어떤 구현예에서, 증상은 늦은 상처 치유이다. 어떤 구현예에서, 증상은 잇몸의 부어오름이다. 어떤 구현예에서, 증상은 증가된 인슐린 내성이다. 어떤 구현예에서, 증상은 증가된 지방 질량이다. 어떤 구현예에서, 증상은 감소된 대사율이다. 어떤 구현예에서, 증상은 감소된 글루코오스 소거이다. 어떤 구현예에서, 증상은 감소된 글루코오스 내성이다. 어떤 구현예에서, 증상은 감소된 인슐린 민감도이다. 어떤 구현예에서, 증상은 감소된 간 인슐린 민감도이다. 어떤 구현예에서, 증상은 증가된 지방 조직 크기 및 중량이다. 어떤 구현예에서, 증상은 증가된 체지방이다. 어떤 구현예에서, 증상은 증가된 체중이다.
Liu 및 Chernoff는 PTPIB가 상피 성장 인자 수용체 (EGFR)에 결합하고 상피 성장 인자 수용체 (EGFR)의 기질로서 제공된다고 보여주었다 (Liu 및 Chernoff, Biochem. J., 1997, 327, 139-145). 추가로, A431 인간 표피모양 암종 세포에서, PT1B는 EGF의 부가에 의해 발생된 H2O2의 존재에 의해 불활성화되는 것으로 발견되었다. 이들 연구는 PTPIB가, 종양발생 동안 종종 탈조절되는, 세포의 산화 상태에 의해 음성적으로 조절될 수 있음을 나타낸다 (Lee 등, J. Biol . Chem ., 1998, 273, 15366-15372).
PTPIB의 과발현은 악성 난소암에서 실증되었고, 이러한 상관관계는 연관된 성장 인자 수용체 발현의 부수적 증가를 동반했다 (Wiener 등, Am . J. Obstet . Gynecol ., 1994, 170, 1177-1183).
PTPIB는 neu 종양유전자에 의해 유도된 NIH3T3 세포 (Brown-Shimer 등, Cancer Res ., 1992, 52, 478-482) 뿐만 아니라 v-srk, v-src, 및 v-ras에 의해 유도된 랫트 3Y1 섬유아세포 (Liu 등, Mol . Cell . Biol ., 1998, 18, 250-259) 및 bcr-abl에 의해 유도된 랫트-1 섬유아세포 (LaMontagne 등, Proc . Natl . Acad . Sci. U.S.A., 1998, 95, 14094-14099)에서의 변형을 억제하는 것으로 나타났다. 또한, PTPIB가 bcr-abl 종양단백질의 억제제가 하는 바와 유사한 방식으로, 만성 골수성 백혈병 세포주, K562 세포의 분화를 촉진하는 것을 보여주었다. 이들 연구는 만성 골수 백혈병의 발병을 제어하는데 PTPIB의 가능한 역할을 기재하고 있다 (LaMontagne 등, Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A., 1998, 95, 14094-14099).
따라서, 그 필요한 대상체 과증식성 장애와 연관된 증상을 개선하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 어떤 구현예에서, 과증식성 장애는 암이다. 어떤 구현예에서, 암과 연관된 증상을 개선하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 어떤 구현예에서, 과증식성 장애와 연관된 증상의 개시 속도를 감소시키는 방법이 제공된다. 어떤 구현예에서, 암과 연관된 증상의 개시 속도를 감소시키는 방법이 제공된다. 어떤 구현예에서, 과증식성 장애와 연관된 증상의 중증도를 감소시키는 방법이 제공된다. 어떤 구현예에서, 암과 연관된 증상의 중증도를 감소시키는 방법이 제공된다. 그와 같은 구현예에서, 본 방법은 그 필요한 개인에게 PTPIB 핵산에 표적화된 화합물을 치료적으로 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.
어떤 구현예에서, 개인에게 본 명세서에 기재된 하나 이상의 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 제공된다. 어떤 구현예에서, 개인은 대사 관련된 질환을 갖는다.
어떤 구현예에서, PTPIB 핵산에 표적화된 안티센스 화합물의 투여로 적어도 약 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 99%, 또는 이들 값의 임의의 2개에 의해 한정된 범위까지 PTPIB 발현을 감소시킨다.
어떤 구현예에서, 트랜스티레틴에 표적화된 안티센스 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 대사 관련된 질환을 앓고 있거나 그것에 민감한 환자를 치료하기 위한 약제의 제조에 사용하는데 유용하다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 기재된 방법은 서열번호: 26에서 인용된 서열 (ISIS 404173)의 본 명세서에 기재된 인접 뉴클레오베이스 부를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 것을 포함한다.
투여
어떤 구현예에서, 본 명에서에 기재된 화합물 및 조성물은 국소 또는 전신 치료가 원하는 지 및 치료 면적에 따라 수많은 방식으로 투여될 수 있다. 투여는 국소, 폐, 예를 들면, 네뷸라이저에 의한 것을 포함하는 분말의 흡입 또는 흡입제 또는 에어로졸에 의해; 기관내, 비강내, 상피 및 경피, 경구 또는 비경구일 수 있다. 본 명에서에 기재된 화합물 및 조성물은 직접적으로 조직 또는 장기에 투여될 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 명에서에 기재된 화합물 및 조성물은 비경구로 투여된다. "비경구 투여"는 주사 또는 주입에 의한 투여를 의미한다. 비경구 투여는 피하 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 동맥내 투여, 비강내 투여, 또는 두개내 투여, 예를 들면 뇌내 투여, 척추강내 투여, 뇌실내 투여, 심실 투여, 뇌심실내 투여, 뇌 뇌실내 투여 또는 뇌 심실 투여를 포함한다. 투여는 연속적, 또는 만성, 또는 짧은 또는 간헐적일 수 있다.
어떤 구현예에서, 비경구 투여는 주사에 의해서이다. 주사는 주사기 또는 펌프로 전달될 수 있다. 어떤 구현예에서, 주사는 볼러스 주사이다. 어떤 구현예에서, 주사는 조직 또는 장기이 직접적으로 투여된다.
어떤 구현예에서, 본 명에서에 기재된 화합물 및 조성물은 비경구로 투여된다.
어떤 구현예에서, 비경구 투여는 피하이다.
추가 구현예에서, 투여 제형은 본 명세서에 기재된 화합물 및 식염수.
어떤 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 주사로 또는 주입 매월 1회, 매 2 개월, 매 90 일, 매 3 개월, 매 6 개월, 1년에 2회 또는 1년에 1회 전달된다.
어떤 병용 요법
어떤 구현예에서, 본 발명의 하나 이상의 약제학적 조성물은 하나 이상의 다른 약제학적 제제와 함께 공투여된다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 하나 이상의 다른 약제학적 제제는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 약제학적 조성물로서 동일한 질환, 장애, 또는 상태를 치료하기 위해 디자인된다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 하나 이상의 다른 약제학적 제제는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 약제학적 조성물로서 상이한 질환, 장애, 또는 상태를 치료하기 위해 디자인된다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 하나 이상의 다른 약제학적 제제는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 약제학적 조성물의 원하지 않는 부작용을 치료하기 위해 디자인된다. 어떤 구현예에서, 하나 이상의 약제학적 조성물은 다른 약제학적 제제의 원하는 않는 효과를 치료하기 위해 다른 약제학적 제조와 공투여된다. 어떤 구현예에서, 하나 이상의 약제학적 조성물은 조합 효과를 얻기 위해 다른 약제학적 제제와 함께 공투여된다. 어떤 구현예에서, 하나 이상의 약제학적 조성물은 상승작용 효과를 얻기 위해다른 약제학적 제제와 함께 공투여된다.
어떤 구현예에서, 제1 제제 및 하나 이상의 제2 제제는 동시에 투여된다. 어떤 구현예에서, 제1 제제 및 하나 이상의 제2 제제는 상이한 시간에 투여된다. 어떤 구현예에서, 제1 제제 및 하나 이상의 제2 제제는 단일 약제학적 제형에서 함께 제조된다. 어떤 구현예에서, 제1 제제 및 하나 이상의 제2 제제는 별도로 제조된다.
어떤 구현예에서, 제2 화합물은 본 발명의 약제학적 조성물의 투여 전에 투여된다. 어떤 구현예에서, 제2 화합물은 본 발명의 약제학적 조성물의 투여 다음에 투여된다. 어떤 구현예에서, 제2 화합물은 본 발명의 약제학적 조성물과 동시에 투여된다. 어떤 구현예에서, 공투여된 제2 화합물의 용량은, 제2 화합물이 단독으로 투여된다면 투여되는 용량과 동일하다. 어떤 구현예에서, 공투여된 제2 화합물의 용량은, 제2 화합물이 단독으로 투여된다면 투여되는 용량 미만이다. 어떤 구현예에서, 공투여된 제2 화합물의 용량은, 제2 화합물이 단독으로 투여된다면 투여되는 용량 초과이다.
어떤 구현예에서, 제2 화합물의 공투여는 제1 화합물의 효과를 개선하고, 이로써 화합물의 공투여로 제1 화합물을 단독으로 투여하는 효과보다 더 큰 효과가 생긴다. 어떤 구현예에서, 공투여로 단독으로 투여될 때 화합물의 효과에 부가적인 효과가 생긴다. 어떤 구현예에서, 공투여로 단독으로 투여될 때 화합물의 효과에 초부자적인 효과가 생긴다. 어떤 구현예에서, 제1 화합물은 안티센스 화합물이다. 어떤 구현예에서, 제2 화합물은 안티센스 화합물이다.
어떤 구현예에서, 제2 제제는, 비제한적으로, 글루코오스-저하제를 포함한다. 글루코오스 저하제는 비제한적으로 하기를 포함할 수 있다: 치료 생활방식 변화, PPAR 작용제, 디펩티딜 펩티다아제 (IV) 억제제, GLP-1 유사체, 인슐린 또는 인슐린 유사체, 인슐린 분비촉진제, SGLT2 억제제, 인간 아밀린 유사체, 바이구아나이드, 알파-글루코시다제 억제제, 또는 이들의 조합. 글루코오스-저하제는 비제한적으로 하기를 포함할 수 있다: 메트포르민, 설포닐우레아, 로시글리타존, 메글리티나이드, 티아졸리딘디온, 알파-글루코시다제 억제제 또는 이들의 조합. 설포닐우레아은 하기일 수 있다: 아세토헥사마이드, 클로르프로파마이드, 톨부타마이드, 톨라자마이드, 글리메피라이드, 글리피자이드, 글라이부라이드, 또는 글라이클라자이드. 메글리티나이드는 나테글리나이드 또는 레파글리나이드일 수 있다. 티아졸리딘디온은 피오글리타존 또는 로시글리타존일 수 있다. 알파-글루코시다제는 아카보스 또는 미글리톨일 수 있다.
일부 구현에에서, 글루코오스-저하 치료제는 GLP-1 유사체이다. 일부 구현에에서, GLP-1 유사체는 엑센딘-4 또는 리라글루타이드이다.
다른 구현예에서, 글루코오스-저하 치료제는 설포닐우레아이다. 일부 구현에에서, 설포닐우레아는 아세토헥사마이드, 클로르프로파마이드, 톨부타마이드, 톨라자마이드, 글리메피라이드, 글리피자이드, 글라이부라이드, 또는 글라이클라자이드이다.
일부 구현에에서, 글루코오스-저하 약물은 바이구아나이드이다. 일부 구현에에서, 바이구아나이드는 메트포르민이고, 일부 구현에에서, 혈액 글루코오스 수준은 메트포르민 단독에 의한 치료 후에 관찰된 락트산증과 비교하여 증가된 락트산증없이 감소된다.
일부 구현에에서, 글루코오스-저하 약물은 메글리티나이드이다. 일부 구현에에서, 메글리티나이드는 나테글리나이드 또는 레파글리나이드이다.
일부 구현에에서, 글루코오스-저하 약물은 티아졸리딘디온이다. 일부 구현에에서, 티아졸리딘디온은 피오글리타존, 로시글리타존, 또는 트로글리타존이다. 일부 구현에에서, 혈액 글루코오스 수준은 로시글리타존 치료 단독으로 관찰된 더 큰 체중 증가 없이 감소된다.
일부 구현에에서, 글루코오스-저하 약물은 알파-글루코시다제 억제제이다. 일부 구현에에서, 알파-글루코시다제 억제제는 아카보스 또는 미글리톨이다.
어떤 구현예에서, 공투여된 글루코오스-저하제는 ISIS 113715이다.
어떤 구현예에서, 글루코오스-저하 요법은 치료 생활방식 변화이다.
어떤 구현예에서, 제2 제제는, 비제한적으로, 지질-저하제를 포함한다. 지질-저하제는 비제한적으로 아토르바스타틴, 심바스타틴, 로수바스타틴, 및 에제티마이브를 포함할 수 있다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 지질-저하제는 본 발명의 약제학적 조성물의 투여 전에 투여된다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 지질-저하제는 본 발명의 약제학적 조성물의 투여 다음에 투여된다. 어떤 그와 같은 구현예에서 지질-저하제는 본 발명의 약제학적 조성물과 동시에 투여된다. 어떤 그와 같은 구현예에서 공투여된 지질-저하제의 용량은 지질-저하제가 단독으로 투여되었다면 투여되는 용량과 동일하다. 어떤 그와 같은 구현예에서 공투여된 지질-저하제의 용량은 지질-저하제가 단독으로 투여되었다면 투여되는 용량 미만이다. 어떤 그와 같은 구현예에서 공투여된 지질-저하제의 용량은 지질-저하제가 단독으로 투여되었다면 투여되는 용량 초과이다.
어떤 구현예에서, 공투여된 지질-저하제는 HMG-CoA 환원효소 억제제이다. 어떤 그와 같은 구현예에서 HMG-CoA 환원효소 억제제는 스타틴이다. 어떤 그와 같은 구현예에서 스탄틴은 아토르바스타틴, 심바스타틴, 프라바스타틴, 플루바스타틴, 및 로수바스타틴으로부터 선택된다.
어떤 구현예에서, 공투여된 지질-저하제는 콜레스테롤 흡수 억제제이다. 어떤 그와 같은 구현예에서, 콜레스테롤 흡수 억제제는 에제티마이브이다.
어떤 구현예에서, 공투여된 지질-저하제는 공제형된 HMG-CoA 환원효소 억제제 및 콜레스테롤 흡수 억제제이다. 어떤 그와 같은 구현예에서 공제형된 지질-저하제는 에제티마이브/심바스타틴이다.
어떤 구현예에서, 공투여된 지질-저하제는 마이크로솜 트리글라이세라이드 전이 단백질 억제제 (MTP 억제제)이다.
어떤 구현예에서, 공투여된 지질-저하제는 ApoB에 표적화된 올리고뉴클레오타이드이다.
어떤 구현예에서, 제2 제제는, 비제한적으로 항-비만증 약물 또는 제제를 포함한다. 그와 같은항-비만증 제제는 비제한적으로 오를리스타트, 시부트라민, 또는 리모나반트를 포함하고, 지방질 또는 체중 저하제로서 상기에 기재된 바와 같이 투여될 수 있다. 어떤 구현예에서, 안티센스 화합물은 식욕 억제제와 함께 공투여될 수 있다. 그와 같은 식욕 억제제는 비제한적으로 디에틸프로피온 테누네이트, 마진돌, 오를리스타트, 펜디메트라진, 펜테르민, 및 시부트라민을 포함하고 본 명세서에 기재된 바와 같이 투여될 수 있다. 어떤 구현예에서, 항-비만증 제는 CNS 기반 예컨대, 비제한적으로, 시부트라민 또는 GLP-1 기반 예컨대, 비제한적으로, 리라글루타이드이다.
제형
본 명세서에 제공된 화합물은 섭취, 분포 및/또는 흡수를 돕기 위해 예를 들면, 리포솜, 수용체-표적화된 분자, 또는 다른 제형으로서 화합물의 다른 분자, 분자 구조 또는 혼합물과 또한 혼합, 콘주게이트화 또는 달리 연관될 수 있다. 그와 같은 흡수, 분포 및/또는 흡수-보조 제형의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는비제한적으로 하기를 포함한다: 미국: 5,108,921; 5,354,844; 5,416,016; 5,459,127; 5,521,291; 5,543,158; 5,547,932; 5,583,020; 5,591,721; 4,426,330; 4,534,899; 5,013,556; 5,108,921; 5,213,804; 5,227,170; 5,264,221; 5,356,633; 5,395,619; 5,416,016; 5,417,978; 5,462,854; 5,469,854; 5,512,295; 5,527,528; 5,534,259; 5,543,152; 5,556,948; 5,580,575; 및 5,595,756, 이들 각각은 참고로 본 명세서에 포함되어 있다.
본 명세서에 제공된 안티센스 화합물은 임의의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 그와 같은 에스테르의 염을 포함하거나, 인간을 포함하는 동물에 투여시 임의의 다른 화합물은 (직접적으로 또는 간접적으로) 생물학적으로 활성 대사물 또는 그의 잔기를 제공할 수 있다.
용어 "약제학적으로 허용가능한 염"은 본 명세서에 제공된 화합물 생리적으로 및 약제학적으로 허용가능한 염을 의미한다: 즉, 모 화합물의 원하는 생물학적 활성을 유지하고 원하지 않는 독물학적 효과을 그것에 부여하지 않는 염. 용어 "약제학적으로 허용가능한 염"은 무기 또는 유기 산 및 염기를 포함하는, 약제학적으로 허용가능한 비독성 산 또는 염기로부터 제조된 염을 포함한다. 올리고뉴클레오타이드에 대해, 약제학적으로 허용가능한 염 및 그의 용도의 바람직한 예는 그 전체가 본원에 포함되어 있는 미국 특허 6,287,860에 추가로 기재되어 있다. 나트륨 염은 적당한 형태의 올리고뉴클레오타이드 약물인 것으로 보여졌다.
용어 "약제학적으로 허용가능한 유도체"는, 비제한적으로, 본 명세서에 기재된 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 히드레이트, 에스테르, 전구약물, 다형체, 이성질체, 동위원소로 표지된 변이체를 포함한다.
본 발명은 본 명세서에 제공된 안티센스 화합물을 포함하는 약제학적 조성물 및 제형을 또한 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물은 국소 또는 전신 치료제가 원하는 지에 따라 그리고 치료될 면적에 따라 수많은 방식으로 투여될 수 있다. 투여는 비경구일 수 있다. 비경구 투여는 하기를 포함한다: 정맥내, 동맥내, 피하, 비강내 또는 근육내 주사 또는 주입; 또는 두개내, 예를 들면, 뇌내 투여, 척추강내 투여, 뇌실내 투여, 심실 투여, 뇌심실내 투여, 뇌 뇌실내 투여 또는 뇌 심실 투여.
비경구 투여는 간 및 혈장에서 PTPIB 발현을 표적으로 하는 것이 바람직하다. 적어도 1 2'-O-메톡시에틸 변형을 갖는 올리고뉴클레오타이드는 경구 투여에 특히 유용한 것으로 믿는다. 약제학적 조성물 및 국소 투여용 제형은 경피 패치, 연고, 로션, 크림, 겔, 물약, 좌약, 스프레이, 액체 및 분말을 포함할 수 있다. 종래의 약제학적 담체, 수성, 분말 또는 오일성 베이스, 증점제 등은 필요한 또는 바람직할 수 있다. 코팅된 콘돔, 글러브 등이 또한 유용할 수 있다.
단위 복용량 형태로 편리하게 제공될 수 있는 본 발명의 약제학적 제형은 약제학적 산업에서 공지된 종래의 기술에 따라 제조될 수 있다. 그와 같은 기술은 활성 성분을 약제학적 담체(들) 또는 부형제(들)와 회합하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 균일하게 및 친밀하게 활성 성분을 액체 담체 또는 미분된 고형 담체 또는 둘 모두와 회합하고, 그 다음, 필요하면, 생성물을 형성화하여 제조된다.
본 발명의 조성물은 임의의 많은 가능한 복용 형태 예컨대, 비제한적으로, 정제, 캡슐, 겔 캡슐, 액체 시럽, 연질 겔, 좌약, 및 관장으로 제형될 수 있다. 본 발명의 조성물은 수성, 비-수성 또는 혼합된 매질에서 서스펜션으로서 또한 제형될 수 있다. 수성 서스펜션은 예를 들면, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 소르비톨 및/또는 덱스트란을 포함하는 서스펜션의 점도를 증가시키는 물질을 추가로 함유할 수 있다. 서스펜션은 안정제을 또한 함유할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은, 비제한적으로, 용액, 에멀젼, 폼 및 리포솜-함유 제형을 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물 및 제형은 하나 이상의 침투 인핸서, 담체, 부형제 또는 다른 활성 또는 불활성 성분을 포함할 수 있다.
에멀션은, 직경이 0.1 μm를 통상 초과하는 소적의 형태로 또 다른 것에서 분산된 하나의 액체의 전형적으로 이질적 시스템이다. 에멀션은 분산된 상, 및 수성상, 오일상 또는 별개의 상으로서 자체 중 용액으로서 존재할 수 있는 활성 약물 외에 부가적 성번을 함유할 수 있다. 마이크로에멀션은 본 발명의 구현예로서 포함된다. 에멀션 및 그의 용도는 당해 기술에 공지되어 있고 그 전체가 본원에 포함되어 있는 미국 특허 6,287,860에 추가로 기재되어 있다.
본 발명의 제형은 리포솜 제형을 포함한다. 본 발명에서 사용된 바와 같이, 용어 "리포솜"은 구형 이중층 또는 이중층으로 배현된 친양쪽성의 지질로 구성된 소포를 의미한다. 리포솜은 친지질성 물질 및 전달될 조성물을 함유하는 수성 내부로부터 형성된 막을 가지고 있는 단일라멜라 또는 다중라멜라 소포이다. 양이온성 리포솜은 음으로 하전된 DNA 분자과 상호반응하여 안정된 복합물을 형성하는 것으로 믿어지는 양으로 하전된 리포솜이다. pH-감수성 또는 음으로 하전된 리포솜은 그와 복합되기 보다는 DNA를 포획하는 것으로 믿어진다. 양이온성 및 비양이온성 리포솜 모두는 DNA를 세포에 전달하기 위해 사용되었다.
리포솜은 "입체적으로 안정된" 리포솜을 또한 포함하고, 이 리포솜은, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 하나 이상의 특화된 지질을 포함하는 리포솜을 의미하고, 상기 지질은 리포솜에 통합될 때, 그와 같은 특화된 지질이 부족한 리포솜에 대한 순환 수명을 증대시킨다. 리포솜 및 그의 용도는 그 전체가 본원에 포함되어 있는 미국 특허 6,287,860에 추가로 기재되어 있다.
또 하나의 구현예에서, 본 발명의 제형은 식염수 제형을 포함한다. 어떤 구현예에서, 제형은 본 명세서에 기재된 화합물 및 식염수로 이루어진다. 어떤 구현예에서, 제형은 본 명세서에 기재된 화합물 및 식염수로 본질적으로 이루어진다. 어떤 구현예에서, 식염수는 약제학적으로 허용가능한 등급 식염수이다. 어떤 구현예에서, 식염수는 완충 식염수이다. 어떤 구현예에서, 식염수는 포스페이트 완충 식염수 (PBS)이다.
어떤 구현예에서, 제형은 리포솜을 제외한다. 어떤 구현예에서, 제형은 입체적으로 안정된 리포솜을 제외한다. 어떤 구현예에서, 제형은 포스포지질을 제외한다. 어떤 구현예에서, 제형은 본 명세서에 기재된 화합물 및 식염수로 본질적으로 이루어지고 리포솜을 제외한다.
본 발명의 약제학적 제형 및 조성물은 표면활성제를 또한 포함할 수 있다. 표면활성제 및 그의 용도는 그 전체가 본원에 포함되어 있는 미국 특허 6,287,860에 추가로 기재되어 있다.
일 구현예에서, 본 발명은 핵산, 특히 올리고뉴클레오타이드의 효율적인 전달에 영향을 미치기 위해 다양한 침투 인해서를 이용한다. 침투 인핸서 및 그의 용도는 그 전체가 본원에 포함되어 있는 미국 특허 6,287,860에 추가로 기재되어 있다.
당해분야의 숙련가는 제형이 그의 의도한 용도, 즉 투여 경로에 따라 일상적으로 디자인된다는 것을 인식할 것이다.
국소 투여용 제형은, 상기 올리고뉴클레오타이드 가 국소 전달제 예컨대 지질, 리포솜, 지방 산, 지방산 에스테르, 스테로이드, 킬레이트제 및 표면활성제와 혼합하여 제공되는 것을 포함한다. 바람직한 지질 및 리포솜은 하기를 포함한다: 천연 (예를 들면 디올레오일포스파티딜 DOPE 에탄올아민, 디미리스토일포스파티딜 콜린 DMPC, 디스테아로일포스파티딜 콜린) 음성 (예를 들면 디미리스토일포스파티딜 글리세롤 DMPG) 및 양이온성 (예를 들면 디올레오일테트라메틸아미노프로필 DOTAP 및 디올레오일포스파티딜 에탄올아민 DOTMA).
정맥내, 동맥내, 피하, 비강내, 근육내 주사 또는 주입, 또는 두개내를 포함하는 비경구 투여용 조성물 및 제형은 완충액, 희석제 및 다른 적당한 첨가물 예컨대, 비제한적으로, 침투 인핸서, 담체 화합물 및 다른 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 또한 함유할 수 있는 멸균 수용액을 포함할 수 있다.
본 명세서에 제공된 어떤 구현예는 하나 이상의 올리고머 화합물 및 비-안티센스 기전에 의해 기능하는 하나 이상의 다른 화학치료제를 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다. 그와 같은 화학치료제의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: 암 화학치료 약물 예컨대 다우노루비신, 다우노마이신, 닥티노마이신, 독소루비신, 에피루비신, 아이다루비신, 에소루비신, 블레오마이신, 마포스파마이드, 이포스파마이드, 시토신 아라바이노사이드, 비스-클로로에틸나이트로수레아, 부설판, 미토마이신 C, 악티노마이신 D, 미트라마이신, 프레드니손, 하이드록시프로게스테론, 테스토스테론, 타목시펜, 다카르바진, 프로카르바진, 헥사메틸­멜라민, 펜타메틸멜라민, 미톡산트론, 암사크린, 클로르암부실, 메틸사이클로헥실나이트로수레아, 질소 머스타드, 멜팔란, 사이클로포스파마이드, 6-머캅토퓨린, 6-티오gua9, 사이타라빈, 5-아자시티딘, 하이드록시우레아, 데옥시코포르마이신, 4-하이드록시퍼옥시사이클로포스포르아마이드, 5-플루오로우라실 (5-FU), 5-플루오로데옥시우리딘 (5-FUdR), 메토트렉세이트 (MTX), 콜히친, 탁솔, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포사이드 (VP-16), 트리메트렉세이트, 이리노테칸, 토포테칸, 젬시타빈, 테니포사이드, 시스플라틴 및 디에틸스틸베스트롤(DES). 본 명세서에 제공된 화합물과 함께 사용될 때, 그와 같은 화학치료제는 별도로 (예를 들면, 5-FU 및 올리고뉴클레오타이드), 순차적으로 (예를 들면, 일정 기간 동안 5-FU 및 올리고뉴클레오타이드, 그 다음 MTX 및 올리고뉴클레오타이드), 또는 하나 이상의 다른 그와 같은 화학치료제 (예를 들면, 5-FU, MTX 및 올리고뉴클레오타이드, 또는 5-FU, 방사선요법 및 올리고뉴클레오타이드)와 병용하여 사용될 수 있다. 비스테로이드 항-염증성 약물 및 코르티코스테로이드를 비제한적으로 포함하는 항-염증성 약물, 및 리비비린, 비다라빈, 아사이클로비르 및 간시클로비르를 비제한적으로 포함하는 항바이러스 약물은 본 명세서에서 제공된 조성물에서 또한 조합될 수 있다. 안티센스 화합물 및 다른 비-안티센스 약물의 조합은 또한 발명 본 발명의 범위 내에 있다. 2 또는 그 초과 조합된 화합물은 함께 또는 순차적으로 사용될 수 있다.
또 하나의 관련된 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 조성물은 하나 이상의 안티센스 화합물, 특히 제1 핵산에 표적화된 올리고뉴클레오타이드 및 제2 핵산 표적에 표적화된 하나 이상의 부가적 안티센스 화합물을 함유할 수 있다. 대안적으로, 본 명세서에서 제공된 조성물은 동일한 핵산 표적의 상이한 영역에 표적화된 2 또는 그 초과의 안티센스 화합물을 함유할 수 있다. 안티센스 화합물의 수많은 예는 당해기술에 공지되어 있다. 2 또는 그 초과 조합된 화합물은 함께 또는 순차적으로 사용될 수 있다.
복용
치료 조성물 및 그의 차후 투여 (복용)의 제형은 당해분야의 숙련가의 기술 내에서 전달된다. 투여는, 며칠 내지 몇 개월 지속되는 치료 과정과 함께, 또는 치료가 효과적이거나 질환 상태의 축소가 달성될 때까지, 치료될 질환 상태의 중증도 및 반응성에 의존적이다. 최적의 투여 계획은 환자의 신체의 약물 축적의 측정으로부터 계산될 수 있다. 최적 복용량은 개별적인 올리고뉴클레오타이드의 상대 효능에 따라 변할 수 있고, 시험관내 및 생체내 동물 모델에서 효과적인 것으로 발견된 EC50을 기준으로 일반적으로 추정될 수 있다. 일반적으로, 복용량은 0.01 μg 내지 100 g / 체중 kg이고, 1일 1회 초과, 매주, 매달 또는 매년, 또는 원하는 간격으로 1회 초과로 주어질 수 있다. 성공적인 치료 다음에, 환자가 질환 상태의 재발을 방지하기 위해 위해 유지 요법을 경험하는 것이 바람직할 수 있고, 여기서 상기 올리고뉴클레오타이드는 0.01 μg 내지 100 g / 체중 kg 범위의 유지 용량으로 1일 1회 초과 투여된다.
본 발명이 그의 바람직한 구현예의 어떤 것에 따라 특이성과 함께 기재되었지만, 하기 실시예는 본 발명을 단지 설명하기 위해 쓰이고 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본원에서 인용된 각각의 참조, 유전자은행 수탁 번호, 등은 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함되어 있다.
어떤 화합물
다양한 길이의 약 276개의 새로 디자인된 안티센스 화합물, 모티프 및 뼈대 조성물을, 몇 개의 세포 유형에서 시험관내에서 인간 PTPIB mRNA에 대한 그의 효과에 대해 시험했다. 신규 화합물을, 대부분의 강력한 안티센스 화합물의 일부인 것으로 시험관내에서 이전에 결정된 ISIS 107772, ISIS 107831, ISIS 142025, ISIS 142026, ISIS 142027, ISIS 142028, ISIS 142082, ISIS 146908, 및 ISIS 146909를 포함하는 약 500개의 이전에 디자인된 화합물과 비교했다 (참고 예를 들면, 미국 특허 공보 번호 US 2003/0220282 공개일 11/27/2003 및 PCT 특허 공보 번호 WO2007/131237 공개일 11/15/2007). 약 285개의 새로 디자인된 및 이전에 디자인된 안티센스 화합물 중에서, 약 11개의 화합물을, 시험관내 효능을 기반으로 한 추가 연구를 위해 선택했다. 선택된 화합물을, HuVEC, HepG2, HuVEC, LLC-MK2, 및 사이노몽구스 일차 간세포에서 용량 의존적 억제에 대해 시험했다. 부가적 올리고뉴클레오타이드는, 시험된 모든 세포주에서 PTPIB mRNA의 유의미한 감소를 실증한 선택된 화합물 중의 하나인 ISIS 409826의 마이크로워크를 기반으로 디자인되었다. 올리고뉴클레오타이드는 조기 스크린(실시예 1)으로부터 갬머와 함께 HuVEC 세포 (실시예 5)에서 시험되었다. 실시예 5의 스트린으로부터의 몇 개의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 선택했고 HuVEC 세포 (실시예 6) 및 HepG2 세포 (실시예 7)에서 용량-의존적 억제에 대해 시험했다. 부가적으로, 2개의 올리고뉴클레오타이드는 선택된 화합물 중의 하나인 ISIS 1428082에 대한 쇼트머로서 디자인되었다. 이들 2개의 쇼트머 (ISIS 446431 및 ISIS 446432), 뿐만 아니라 실시예 6 및 7에서 기재된 연구로부터 선택된 5개의 ISIS 올리고뉴클레오타이드는 HepG2 세포, LLC-MK2 세포, HuVEC 세포, 및 사이노몽구스 일차 간세포에서 시험되었다 (실시예 8-11). 모든 세포주에서 PTPIB mRNA의 용량-의존적 감소를 실증한 ISIS 올리고뉴클레오타이드는 생체내 내성에 대해 시험되었다. ISIS 409826에 대해 쇼트머로서 디자인된 2개 초과의 올리고뉴클레오타이드 ISIS 446433 및 ISIS 446434는 생체내 내성 연구에 또한 포함되었다.
선택된 12개의 갭머는 마우스 모델 (참고 실시예 12) 및 랫트 모델 (실시예 13)에서 시험되었다. 그의 상보적인 서열 덕분에, 화합물은 서열번호: 1의 영역 3291-3310, 989-1008, 3290-3309, 3287-3306, 3291-3310, 3288-3307, 3292-3309, 3293-3308, 3288-3305, 및 3289-3304에 대해 상보적이다. 생체내 모델에서, 체중 및 장기 중량, 간 대사 마커, 예컨대 알라닌 트랜스아미나제, 아스파르테이트 트랜스아미나제 및 빌리루빈, 신장 대사 마커, 예컨대 BUN 및 creati9, 혈장 글루코오스 수준, 콜레스테롤 및 트리글라이세라이드 수준, 및 염증성 시토카인 수준이 측정되었다. 시험된 12개의 화합물 중에서, 5개의 화합물, ISIS 142082, ISIS 404173, ISIS 410003, ISIS 446431, 및 ISIS 446432이 선택되었고 그의 점도가 측정되었다 (실시예 14). 모든 5개의 올리고뉴클레오타이드는 연구에 대해 언급된 기준에 따라 그의 점에서 최적인 것으로 간주되었다.
이들 연구의 최종 평가 (실시예 12-14)로, 서열번호: 27 (ISIS 142082), 46 (ISIS 446431), 26 (ISIS 404173), 및 23 (ISIS 409826)에서 인용된 서열의 뉴클레오베이스 서열을 갖는 4개의 화합물이 선택되었다. 그의 상보적인 서열 덕분에, 화합물은 서열번호: 1의 영역 3291-3310, 3292-3309, 3290-3309, 3287-3306에 상보적이다. 어떤 구현예에서, 본 명세서에 추가로 기재된 바와 같이 열거된 영역을 표적으로 하는 화합물은 본 명세서에 추가로 기재된 서열번호에서 인용된 서열의 일부 뉴클레오베이스 부분을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고, 어떤 구현예에서, 열거된 영역을 표적으로 하거나 열거된 서열번호에서 인용된 서열의 뉴클레오베이스 부분을 갖는 화합물은 본 명세서에서 추가로 기재된 바와 같이 그 길이가 다양할 수 있고 본 명세서에서 추가로 기재된 바와 같이 다양한 모티프 중의 하나를 가질 수 있다. 어떤 구현예에서, 영역을 표적으로 하거나 열거된 서열번호에서 인용된 서열의 뉴클레오베이스 부분을 갖는 화합물은 ISIS 번호: ISIS 142082, ISIS 446431, ISIS 404173, 및 ISIS 409826에 의해 나타낸 바와 같이 특정 길이 및 모티프를 갖는다.
서열번호: 27 (ISIS 142082), 23 (ISIS 404173), 및 46 (ISIS 446431)에서 인용된 서열의 뉴클레오베이스 서열을 갖는 2개의 화합물을, 마우스 모델에서 장기간, 6 개월 내성 연구에서 추가 시험했다 (참고 실시예 15). 서열번호: 53 (ISIS 409826), 27 (ISIS 142082), 26 (ISIS 404173), 및 46 (ISIS 446431)에서 인용된 서열의 뉴클레오베이스 서열을 갖는 모두 4개의 화합물의 CD1 마우스의 간에서의 반감기를 또한 평가했다 (실시예 16).
이들 4개의 화합물을, 사이노몽구스 원숭이에서 효능, 약력학적 프로파일 및 내성에 대해 시험했다 (실시예 17). 이들 원숭이에서의 억제 연구는, 이들 화합물의 일부에 의한 치료가 간 및 지방 조직에서의 PTPIB mRNA의 감소를 야기했다는 것을 나타내었다. 구체적으로, ISIS 409826, ISIS 142082, ISIS 446431 및 ISIS 404173에 의한 치료는 PBS 대조군과 비교하여 간 조직에서 45%, 48%, 18 및 22% PTPIB mRNA의 감소 각각을 야기했다. ISIS 409826, ISIS 142082, ISIS 446431 및 ISIS 404173에 의한 치료는 PBS 대조군과 비교하여 지방 조직에서 21%, 28%, 12% 및 31% PTPIB mRNA의 감소 각각을 야기했다. ISIS 404173가, 2개의 올리고뉴클레오타이드가 서열번호: 1의 그의 표적 영역의 단일 염기쌍 이동에 의해 서로 상이할지라도 ISIS 142082와 비교하여 PTPIB mRNA의 유사한 감소를 야기했다는 것이 주목했다. 간 조직의 단백질 분석은 웨스턴 블랏 분석으로 또한 수행되었다. ISIS 409826, ISIS 142082, ISIS 446431 및 ISIS 404173를 사용하는 PTPIB mRNA 감소를, 효능에 대해 40 mgk/주의 최대 용량 및 효능에 대해 8mgk/주의 저 용량에서 측정햇다 (참고 표 45). 8 mgk/주의 낮은 용량에서의 단백질 분석은, ISIS 404173가 ISIS 404173가 ISIS 142082보다 더 강력하다는 것을 실증하는 ISIS 142082 (20 %) 보다 PTPIB 단백질의 더 큰 감소 (33 %)를 야기했다는 것을 실증했다 (참고 표 47 및 도 1). 40 mg/주의 더 높은 용량에서의 단백질 분석은, ISIS 404173 (60% 단백질 감소)가 ISIS 142082 (65% 단백질 감소) 만큼 유효하다는 것을 실증했다. 마지막으로, ISIS 409826 및 ISIS 142082에 의한 치료로 트리글라이세라이드 수준이22% 감소되었고 한편 ISIS 404173에 의한 치료로 PBS 대조군과 비교하여 트리글라이세라이드 수준이 37% 감소되었다.
사이노몽구스 원숭이에서의 내성 연구(실시예 17)는, ISIS 142082에 의한 치료가 ISIS 404173에 의한 치료 만큰 영장류에서 내성이 있는 것은 아니라는 것을 나타내었다. 간에서 합성되고 염증의 마커로서 쓰이는 C-반응성 단백질의 수준은 93일째에 측정되었다. 40 mg/주의 더 높은 용량에서, ISIS 142082에 의한 치료는 1.2 mg/L의 대조군 수준과 비교하여12 mg/L의 CRP 수준의 유의미한 증가를 야기했다. 40 mg/L에서의 ISIS 404173에 의한 치료는 1.6 mg/L로의 CRP 수준의 증가를 야기했다. 시험된 다른 화합물, ISIS 409826 및 ISIS 446431은 4.8 mg/L 및 6.7 mg/L로의 CRP 수준의 증가를 야기했다. 따라서, ISIS 404173은, ISIS 404173이 극도의로 내성 및 비-전염증성인 것을 나타내는 CRP 수준의 적은 증가를 야기했다. 장기 중량은 원숭이에 의한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 내성을 평가하기 위해 또한 측정되었다. 40 mg/L의 용량에서의 ISIS 142082에 의한 치료는 21 g 및 18 g 각각의 신장 및 간 중량의 증가를 야기했는데, 이는 대조군에 대해 2-배 증가였다 (신장 10 g 및 간 10.5 g). ISIS 409826에 의한 치료는 간 중량에서의 2-배 증가 (대조군의 18.5 g 대 10.5 g) 및 비장 중량에서의 3-배 증가 (대조군 6.0 g 대 2.3 g)를 야기했다. ISIS 446431에 의한 치료는 비장 중량에서의 4-배 증가를 야기했다 (9.6 g 대 2.3 g 대조군). ISIS 404173에 의한 치료는 모든 장기에서의 1-배 미만 증가를 야기했다 (신장 14.8g; 간 15.5 g; 비장 3.7 g). 참고 (도 2). 그러므로, ISIS 142082, ISIS 409826, 및 ISIS 446431에 의한 치료는 원숭이에서 내성이 있는 것으로 간주되지 않았고, 반면에 ISIS 404173에 의한 치료는 내성이 있었다.
ISIS 142082에 의한 치료는 장기 중량 및 높은 수준의 CRP의 증가를 야기했는데, 이는 염증 상태를 나타낸다. ISIS 409826에 의한 치료는 높은 수준의 CRP 및 낮은 보체 C3 수준을 또한 야기했는데, 이는 병이 있는 상태를 나타낸다. ISIS 404173 및 ISIS 446431에 의한 치료는 사이노몽구스 원숭이에서 그의 내성 프로파일의 관점에서 최적인 것으로 간주되었다. 그러나, ISIS 446431은 ISIS 404173와 비교하여 더 적은 효능을 실증했다.
간 및 신장에서 올리고뉴클레오타이드의 약력학적 프로파일 연구의 경우에, ISIS 올리고뉴클레오타이드의 어떤 것도 간 대 신장에서의 농도의 임의의 비정상 비를 실증하지 못했다. ISIS 404173는 결과에서 표시된 바와 같이 ISIS 142082와 비교하여 더 나은 신장 누적기였다.
그러므로, 특히 사이노몽구스 원숭이에서의 생체내 연구는, ISIS 404173이 다른 화합물과 비교하여 강력하고 상당히 더 내성이 있었다는 것을 나타낸다. 연구는, ISIS 142082가, 단지 하나의 뉴클레오베이스에 의해 ISIS 407173로부터 이동될지라도, 유효하지만 대사 및 염증성 마커에 대한 검정에 의해 실증된 바와 같이 ISIS 404173보다 덜 강력하고 내성이 있다는 것을 실증한다. 전체적으로, ISIS 404173는 임의의 다른 화합물과 비교하여 더 강력하고 내성이 있었다.
따라서, 개선된 특징의 어느 하나 또는 그 초과를 갖는 안티센스 화합물이 제공된다. 어떤 구현예에서, 서열번호: 1의 뉴클레오타이드의 영역에 표적화되거나 그것과 특이적으로 하이브리드화된 본 명세서에 추가로 기재된 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물이 제공된다.
따라서, 개선된 특징의 어느 하나 또는 그 초과를 갖는 안티센스 화합물이 제공된다. 어떤 구현예에서, 서열번호: 2의 뉴클레오타이드의 영역에 표적화되거나 그것과 특이적으로 하이브리드화된 본 명세서에 추가로 기재된 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물이 제공된다.
어떤 구현예에서, 본 명세서에 기재된 화합물은, 실시예 11에 기재된 전기천공을 사용하여 사이노몽구스 원숭이 간세포 세포주에 전달될 때 0.4 μM 미만, 0.35 μM 미만, 0.3 μM 미만, 2.5 μM 미만, 2.0 μM 미만, 1.5 μM 미만, 1.0 μM 미만의 시험관내 IC50 중 적어도 하나를 갖는 것에 의해 유효하다. 어떤 구현예에서, 본 명세서에 기재된 화합물은 식염수 처리된 동물에 대해 4 배, 3 배, 또는 2 배 이하의 ALT 또는 AST 값의 증가; 또는 30%, 20%, 15%, 12%, 10%, 5% 또는 2% 초과의 간, 비장 또는 신장 중량의 증가 중 적어도 하나를 갖는 것으로 실증된 바와 같이 크게 내성이 있다.
실시예
비-제한 개시내용 및 참조에 의한 포함
본원에 기재된 어떤 화합물, 조성물 및 방법이 어떤 구현예에 따라 구체적으로 기재되는 반면, 하기 실시예는 단지 본원에 기재된 화합물을 설명하기 위해 제공되고 본원에 기재된 화합물을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본원에 인용된 각각의 참조, 유전자은행 수탁 번호, 등은 그것의 전체가 참조로 본원에 포함된다.
실시예 1: HuVEC 세포에서 인간 PTPIB mRNA 의 안티센스 억제
인간 PTPIB 핵산에 대해 표적된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 디자인하고 시험관내에서 PTPIB RNA 전사체에 대한 그의 효과에 대해 시험했다. 이전의 특허 (BIOL001USP2)에 청구된, ISIS 107772, ISIS 107831, ISIS 142025, ISIS 142026, ISIS 142027, ISIS 142028, ISIS 142082, ISIS 146908, 및 ISIS 146909를 비교를 위해 본 검정에 포함시켰다. 5,000 세포/웰 밀도의 배양된 HuVEC 세포를 LipofectAMINE 2000®을 사용하여 2 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 전달감염시켰다. 대략 24 시간 후, RNA를 세포로부터 단리하고 PTPIB mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR로 측정했다. PTPIB mRNA 수준을 RTBOGREEN®으로 측정함으로써, 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조군 세포과 비교하여 PTPIB mRNA 수준의 퍼센트 억제로서 주어진다.
표 1에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 5-10-5 MOE 갭머 또는 2-13-5 MOE 갭머이다. 5-10-5 MOE 갭머는 10의 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함하는 갭 분절 및 5의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함하는 2의 윙 분절을 갖는다. 2-13-5 MOE 갭머는 13의 2'-데옥시뉴클레오사이드를 포함하는 갭 분절, 2의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함하는 5' 윙 분절, 및 3의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함하는 3' 윙 분절을 갖는다. 각각의 갭머 전반에 걸친 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 (P=S) 결합이다. 각각의 갭머 전반에 걸친 모든 시토신 잔기는 5-메틸시토신이다. '표적 개시 부위'는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 인간 유전자 서열에서 표적으로 하는 5'-최대 뉴클레오타이드을 나타낸다. '표적 중단 부위'는 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 인간 유전자 서열에서 표적되는 3'-최대 뉴클레오타이드를 나타낸다. 표 1에 기재된 모든 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1 (유전자은행 수납 번호 NM_002827.2)로서 본원에 지정된 mRNA 서열 또는 서열번호: 2 (뉴클레오타이드 14178000부터 14256000까지 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_011362.9)로서 본원에 지정된 게놈 서열, 또는 둘 모두를 표적한다.
표 1의 인간 올리고뉴클레오타이드들 중 일부는 또한 붉은털원숭이 유전자 서열과 완전히 교차-반응성이다. 'n/a'는 인간 올리고뉴클레오타이드 및 붉은털원숭이 유전자 서열 사이에 3 초과의 염기 불일치가 존재했음을 나타낸다. 인간 올리고뉴클레오타이드 및 붉은털원숭이 서열 사이의 상보성이 더 클수록 인간 올리고뉴클레오타이드는 붉은털원숭이 서열과 더 교차-반응성일 수 있을 것 같아 보인다. 표 1의 인간 올리고뉴클레오타이드를 서열번호: 3 (붉은털원숭이 PTPIB 스캐폴드로부터 엑손 1-9, 인트론 9 및 엑손 10)과 비교했다. "붉은털원숭이 표적 개시 부위"는 갭머를 붉은털원숭이 유전자 서열에서 표적으로 하는 5'-최대 뉴클레오타이드를 나타낸다. "붉은털원숭이 표적 중단 부위"는 갭머를 붉은털원숭이 유전자 서열에서 표적으로 하는 3'-최대 뉴클레오타이드를 나타낸다.
표 1
서열번호: 1, 서열번호: 2, 및 서열번호: 3을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 HuVEC 세포에서의 인간 PTPIB RNA 전사체의 억제
Figure pct00010
Figure pct00011
실시예 2: HuVEC 세포에서 인간 PTPIB mRNA 의 용량-의존적 안티센스 억제
실시예 1에 기재된 연구에서 PTPIB mRNA의 유의미한 안티센스 억제를 보여주었던 몇 개의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 다양한 용량으로 HuVEC 세포에서 추가로 시험했다. 세포를 5,000 세포/웰 밀도로 평판배양하고, LipofectAMENE 2000®을 사용하여 0.9375 nM, 1.875 nM, 3.75 nM, 7.5 nM, 15 nM, 및 30 nM 농도의 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 전달감염시켰다. 대략 16 시간 후, RNA를 세포로부터 단리하고 PTPIB mRNA 전사체 수준을 프라이머 프로브 세트 RTS3000 (서열번호: 33으로서 본원에 지정된 순방향 서열 CTGGTTTAACCTCCTATCCTTGGA; 서열번호: 34로서 본원에 지정된 역방향 서열 CAGAGCAGCTCGCTACCTCTCT, 서열번호: 35로서 본원에 지정된 프로브 서열 CAGCTGGCTCTCCACCTTGTTACACATTATGT)를 사용한 정량적 실시간 PCR로 측정했다. PTPIB mRNA 수준을 RIBOGREEN®으로 측정함으로써 총 RNA 함량에 대해 표준화했다. 결과는 미처리된 대조군 세포와 비교하여 PTPIB mRNA의 퍼센트 억제로서 표 2에 주어진다.
표 2
HuVEC 세포에서 인간 PTPIB의 용량-의존적 안티센스 억제
Figure pct00012
실시예 3: LLC - MK2 세포에서 PTPIB mRNA 의 용량-의존적 안티센스 억제
실시예 2에 기재된 연구로부터의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 또한 붉은털원숭이 유전자 서열 (서열번호: 3)과 교차-반응성이고 다양한 용량으로 붉은털원숭이 LLC-MK2 세포에서 추가로 시험되었다. 세포를 3,000 세포/웰 밀도로 평판배양하고, 리포펙틴을 사용하여 3.125 nM, 6.25 nM, 12.5 nM, 25 nM, 50 nM, 및 100 nM 농도의 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 전달감염시켰다. 대략 16 시간 후, RNA를 세포로부터 단리하고 PTPIB mRNA 수준을 프라이머 프로브 세트 RTS198 (서열번호: 36으로서 본원에 지정된 순방향 서열 GGAGTTCGAGCAGATCGACAA; 서열번호: 37로서 본원에 지정된 역방향 서열 GGCCACTCTACATGGGAAGTC, 서열번호: 38로서 본원에 지정된 프로브 서열 AGCTGGGCGGCCATTTACCAGGAT)을 사용한 정량적 실시간 PCR로 측정했다. PTPIB mRNA 수준을 RIBOGREEN®으로 측정함으로써 총 RNA 함량에 대해 표준화했다. 결과는 미처리된 대조군 세포와 비교하여 PTPIB mRNA의 퍼센트 억제로서 표 3에 주어진다. 붉은털원숭이 서열번호: 3 (붉은털원숭이 PTPIB 스캐폴드 (유전자 스캐폴드 240)로부터의 엑손 1-9, 인트론 9 및 엑손 10 연쇄) 상의 각각의 올리고뉴클레오타이드의 개시 및 중단 부위가 표 4에 주어진다.
표 3
LLC-MK2 세포에서 PTPIB mRNA의 용량-의존적 안티센스 억제
Figure pct00013
표 4
붉은털원숭이 유전자 서열 (서열번호: 3) 상의 PTPIB를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 표적 부위
Figure pct00014
실시예 4: 사이노몽구스 일차 간세포에서 PTPIB mRNA 의 용량-의존적 안티센스 억제
실시예 1, 2 및 3에 기재된 연구로부터의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 중 일부를 다양한 용량으로 사이노몽구스 일차 간세포에서 추가로 시험했다. 세포를 35,000 세포/웰 밀도로 평판배양하고, 리포펙틴을 사용하여 6.25 nM, 12.5 nM, 25 nM, 50 nM, 100 nM, 및 200 nM 농도의 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 전달감염시켰다. 대략 16 시간 후, RNA를 세포로부터 단리하고 PTPIB mRNA 수준을 프라이머 프로브 세트 RTS198을 사용한 정량적 실시간 PCR로 측정했다. PTPIB mRNA 수준을 RIBOGREEN®으로 측정함으로써 총 RNA 함량에 대해 표준화했다. 결과는 미처리된 대조군 세포와 비교하여 PTPIB mRNA의 퍼센트 억제로서 표 5에 주어진다.
표 5
사이노몽구스 일차 간세포에서 PTPIB mRNA의 용량-의존적 안티센스 억제
Figure pct00015
실시예 5: 마이크로워크에 의해 디자인된 올리고뉴클레오타이드에 의한 HuVEC 세포에서의 인간 PTPIB mRNA 의 안티센스 억제
부가적 갭머를 시험된 모든 세포주에서 PTPIB의 유의미한 억제가 실증된 ISIS 409826를 기초로 디자인했다. 이들 갭머를, ISIS 409826의 약간 업스트림 및 다운스트림 이동된 갭머를 생성함 (즉, "마이크로워크")으로써 디자인했다. 올리고뉴클레오타이드는 또한 다양한 모티프, 예를 들면 5-10-5 MOE, 5-8-5 MOE, 2-13-5 MOE, 6-8-6 MOE 모티프로 생성되거나, 또는 데옥시 및 MOE 단위를 포함하는 균일한 올리고뉴클레오타이드이다. 이들 갭머를 시험관내에서 시험했다. ISIS 올리고뉴클레오타이드 ISIS 142082, ISIS 113715, ISIS 373125, ISIS 404161, ISIS 404172, ISIS 404173, ISIS 404176, ISIS 409825, ISIS 409827, ISIS 409828, ISIS 409829, ISIS 409845, ISIS 409998, ISIS 409999, ISIS 410000, ISIS 410001, ISIS 410002, ISIS 410003, ISIS 410004, 및 ISIS 410030 (실시예 1로부터), 뿐만 아니라 ISIS 399038, ISIS 404159, 및 ISIS 404174 (이전의 출원 (CORE0061WO15)으로부터)를 또한 비교를 위한 검정에 포함시켰다. 20,000 세포/웰 밀도로 배양된 HuVEC 세포를 전기천공을 사용하여 2,000 nM 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 전달감염시켰다. 대략 24 시간의 치료기간 후, RNA를 세포로부터 단리하고 PTPIB mRNA 수준을 정량적 실시간 PCR로 측정했다. 인간 프라이머 프로브 세트 RTS3000을 PTPIB mRNA 수준을 측정하는데 사용했다. PTPIB mRNA 수준을 RIBOGREEN®으로 측정함으로써 총 RNA 함량에 따라 조정했다. 결과는 미처리된 대조군 세포와 비교하여 PTPIB mRNA의 퍼센트 억제로서 주어진다. 결과는 표 6 및 7에 주어진다.
5-10-5 MOE 갭머는 길이가 20 뉴클레오타이드이고, 중심 갭 분절이 10의 2'-데옥시뉴클레오타이드로 구성되고 각각 5의 뉴클레오타이드를 포함하는 윙들이 양 측면에 (5' 및 3' 방향에) 배치된다. 5-8-5 MOE 갭머는 길이가 18 뉴클레오타이드이고, 중심 갭 분절이 8의 2'-데옥시뉴클레오타이드로 구성되고 각각 5의 뉴클레오타이드를 포함하는 윙들이 양 측면에 (5' 및 3' 방향에) 배치된다. 2-13-5 MOE 갭머는 길이가 20 뉴클레오타이드이고, 중심 갭 분절이 13의 2'-데옥시뉴클레오타이드로 구성되고 각각 2 및 5의 뉴클레오타이드를 포함하는 윙들로 5' 및 3' 방향에 배치된다. 6-8-6 MOE 갭머는 길이가 18 뉴클레오타이드이고, 중심 갭 분절이 8의 2'-데옥시뉴클레오타이드로 구성되고 각각 6의 뉴클레오타이드를 포함하는 윙들로 양 측면에 (5' 및 3' 방향에) 배치된다. 각각의 모티프 (5-10-5, 5-8-5, 2-13-5, 및 6-8-6)에 대해, 5' 윙 분절에서의 각각의 뉴클레오타이드 및 3' 윙 분절에서의 각각의 뉴클레오타이드는 2'-MOE 변형을 갖는다. 균일한 올리고뉴클레오타이드는 올리고뉴클레오타이드의 길이 전반에 걸쳐 분포된 데옥시 및 MOE 단위를 갖는다. 균일한 올리고뉴클레오타이드 서열에서 다양한 단위 화학에 대한 기호는 하기와 같다: 'd' = 2'-데옥시리보오스; 'e' = 2'-O-메톡시에틸 리보오스. 각각의 갭머 전반에 걸친 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 (P=S) 결합이다. 각각의 갭머 전반에 걸친 모든 시티딘 잔기는 5-메틸시티딘이다. "표적 개시 부위"는 갭머를 표적으로 하는 5'-최대 뉴클레오타이드을 나타낸다. "표적 중단 부위"는 갭머를 표적으로 하는 3'-최대 뉴클레오타이드를 나타낸다. 표 6에 기재된 각각의 갭머는 서열번호: 1 (유전자은행 수납 번호 NM_002827.2)을 표적한다. 표 7에 기재된 모든 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 2 (뉴클레오타이드 14178000부터 14256000까지 끝이 잘린 유전자은행 수납 번호 NT_011362.9)를 표적한다.
표 6 및 7에서 보여주는 바와 같이, ISIS 번호: 113715, 142082, 373125, 399038, 404159, 404161, 404172, 404173, 404176, 409826, 409827, 409999, 410000, 410001, 410002, 410003, 410004, 438371, 438372, 438373, 438374, 438375, 438377, 438379, 438380, 438381, 438382, 438383, 438384, 438439, 438442, 438443, 438444, 438445, 438450, 438451, 438452, 438453, 438454, 438455, 438456, 438458, 438459, 438460, 438461, 438462, 438464, 438465, 438468, 438469, 438472, 438473, 및 438474를 포함하는 몇 개의 갭머는 적어도 50% 억제율을 나타냈다.
ISIS 번호: 113715, 142082, 373125, 399038, 404161, 404172, 404173, 404176, 409826, 409827, 409999, 410000, 410001, 410002, 410003, 438373, 438374, 438380, 438381, 438382, 438442, 438444, 438445, 438450, 438451, 438452, 438453, 438459, 438460, 438461, 438462, 438468, 438469, 438472, 및 438474를 포함하는 몇 개의 갭머는 적어도 60% 억제율을 나타냈다.
ISIS 번호: 142082, 373125, 399038, 404161, 404172, 404173, 404176, 409826, 409827, 409999, 410000, 410001, 410002, 410003, 438373, 438374, 438444, 438451, 438452, 438453, 438460, 438461, 438462, 438468, 438469, 438472, 및 438474를 포함하는 몇 개의 갭머는 적어도 70% 억제율을 나타냈다.
ISIS 번호: 142082, 404161, 404173, 404176, 409826, 410000, 410001, 410002, 410003, 438451, 438452, 438460, 438461, 및 438474를 포함하는 몇 개의 갭머는 적어도 80% 억제율을 나타냈다.
ISIS 번호: 142082, 404161, 404173, 404176, 409826, 410001, 410002, 및 410003을 포함하는 몇 개의 갭머는 적어도 85% 억제율을 나타냈다.
ISIS 번호: 142082, 404161, 및 409826을 포함하는 몇 개의 갭머는 적어도 90% 억제율을 나타냈다.
표 6
서열번호: 1에 대해 표적된 키메라 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 인간 PTPIB mRNA 수준의 억제
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
표 7
서열번호: 2에 대해 표적된 키메라 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 인간 PTPIB mRNA 수준의 억제
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
실시예 6: HuVEC 세포에서 인간 PTPIB mRNA 의 용량-의존적 안티센스 억제
실시예 5에 기재된 연구에서 PTPIB mRNA의 유의미한 안티센스 억제를 나타냈던 몇 개의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 다양한 용량으로 HuVEC 세포에서 추가로 시험했다. 세포를 2,000 세포/웰 밀도로 평판배양하고, 전기천공에 의해 31.25 nM, 62.5 nM, 125 nM, 250 nM, 500 nM, 1000 nM, 2000 nM 및 4000 nM 농도의 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 전달감염시켰다. 대략 16 시간 후, RNA를 세포로부터 단리하고 PTPIB mRNA 수준을 프라이머 프로브 세트 RTS3000을 사용한 정량적 실시간 PCR로 측정했다. PTPIB mRNA 수준을 RIBOGREEN®으로 측정함으로써 총 RNA 함량에 대해 표준화했다. 결과는 미처리된 대조군 세포와 비교하여 PTPIB mRNA의 퍼센트 억제로서 표 8에 주어진다.
표 8
HuVEC 세포에서 인간 PTPIB의 용량-의존적 안티센스 억제
Figure pct00026
실시예 7: HepG2 세포에서 인간 mRNA PTPIB 의 용량-의존적 안티센스 억제
실시예 6에 기재된 연구에서 시험된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 다양한 용량으로 HepG2 세포에서 추가로 시험했다. 세포를 20,000 세포/웰 밀도로 평판배양하고, 전기천공에 의해 31.25 nM, 62.5 nM, 125 nM, 250 nM, 500 nM, 1000 nM, 2000 nM 및 4000 nM 농도의 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 전달감염시켰다. 대략 16 시간 후, RNA를 세포로부터 단리하고 PTPIB mRNA 수준을 프라이머 프로브 세트 RTS3000을 사용한 정량적 실시간 PCR로 측정했다. PTPIB mRNA 수준을 RIBOGREEN®으로 측정함으로써 총 RNA 함량에 대해 표준화했다. 결과는 미처리된 대조군 세포와 비교하여 PTPIB mRNA의 퍼센트 억제로서 표 9에 주어진다. mRNA 수준을 또한 붉은털원숭이 프라이머 프로브 세트 RTS198을 사용하여 분석했고, 결과는 표 10에 주어진다. 붉은털원숭이 서열번호: 3 상의 각각의 올리고뉴클레오타이드의 개시 및 중단 부위는 표 11에 주어진다.
표 9
RTS3000을 사용한 HepG2 세포에서의 인간 PTPIB의 용량-의존적 안티센스 억제의 분석
Figure pct00027
표 10
RTS198을 사용한 HepG2 세포에서의 인간 PTPIB의 용량-의존적 안티센스 억제의 분석
Figure pct00028
표 11
붉은털원숭이 유전자 서열 (서열번호: 3) 상의 PTPIB를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 표적 부위
Figure pct00029
실시예 8: HepG2 세포에서 인간 PTPIB mRNA 의 용량-의존적 안티센스 억제
ISIS 142082의 표적 부위에 대한 짧은 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 디자인했다. 이들 쇼트머(shortmer)들의 표적 부위, 모티프 및 서열 세부사항은 표 12에 주어진다. 이들 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 다양한 용량으로 HepG2 세포에서 시험했다. 실시예 7에 기재된 연구로부터의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 중 일부를 비교를 위한 검정에 포함시켰다. 세포를 20,000 세포/웰 밀도로 평판배양하고, 전기천공에 의해 78.125 nM, 156.25 nM, 312.5 nM, 625 nM, 1,250 nM, 2,500 nM, 5,000 nM 및 10,000 nM 농도의 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 전달감염시켰다. 대략 16 시간 후, RNA를 세포로부터 단리하고 PTPIB mRNA 수준을 프라이머 프로브 세트 RTS3000을 사용한 정량적 실시간 PCR로 측정했다. PTPIB mRNA 수준을 RIBOGREEN®으로 측정함으로써 총 RNA 함량에 대해 표준화했다. 결과는 미처리된 대조군 세포와 비교하여 PTPIB mRNA의 퍼센트 억제로서 표 13에 주어진다.
표 12
서열번호: 1을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 표적 부위
Figure pct00030
표 13
HepG2 세포에서 인간 PTPIB의 용량-의존적 안티센스 억제
Figure pct00031
실시예 9: LLC - MK2 세포에서 PTPIB mRNA 의 용량-의존적 안티센스 억제
실시예 8에 기재된 연구로부터의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 또한 붉은털원숭이 PTPIB 유전자 서열 (서열번호: 3)과 교차-반응성이고 다양한 용량으로 붉은털원숭이 LLC-MK2 세포에서 추가로 시험되었다. 세포를 25,000 세포/웰 밀도로 평판배양하고, 전기천공을 사용하여 78.125 nM, 156.25 nM, 312.5 nM, 625 nM, 1250 nM, 2500 nM, 5,000 nM, 및 10,000 nM 농도의 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 전달감염시켰다. 대략 16시간 후, RNA를 세포로부터 단리하고 PTPIB mRNA 수준을 프라이머 프로브 세트 RTS198을 사용한 정량적 실시간 PCR로 측정했다. PTPIB mRNA 수준을 RIBOGREEN®으로 측정함으로써 총 RNA 함량에 대해 표준화했다. 결과는 미처리된 대조군 세포와 비교하여 PTPIB mRNA의 퍼센트 억제로서 표 14에 주어진다. 붉은털원숭이 서열번호: 3 상의 각각의 올리고뉴클레오타이드의 개시 및 중단 부위는 표 15에 주어진다.
표 14
LLC-MK2 세포에서 PTPIB mRNA의 용량-의존적 안티센스 억제
Figure pct00032
표 15
서열번호: 3을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 표적 부위
Figure pct00033
실시예 10: HuVEC 세포에서 인간 PTPIB mRNA 의 용량-의존적 안티센스 억제
실시예 8 및 9에 기재된 연구에서 시험된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 다양한 용량으로 HuVEC 세포에서 추가로 시험했다. 세포를 20,000 세포/웰 밀도로 평판배양하고, 전기천공에 의해 31.25 nM, 62.5 nM, 125 nM, 250 nM, 500 nM, 1000 nM, 2000 nM 및 4000 nM 농도의 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 전달감염시켰다. 대략 16 시간 후, RNA를 세포로부터 단리하고 PTPIB mRNA 수준을 프라이머 프로브 세트 RTS3000을 사용한 정량적 실시간 PCR로 측정했다. PTPIB mRNA 수준을 RffiOGREEN®으로 측정함으로써 총 RNA 함량에 대해 표준화했다. 결과는 미처리된 대조군 세포와 비교하여 PTPIB mRNA의 퍼센트 억제로서 표 16에 주어진다.
표 16
HuVEC 세포에서의 인간 PTPIB의 용량-의존적 안티센스 억제
Figure pct00034
실시예 11: 사이노몽구스 일차 간세포에서 PTPIB mRNA 의 용량-의존적 안티센스 억제
실시예 8-10에서 기재된 연구로부터의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 다양한 용량으로 사이노몽구스 일차 간세포에서 추가로 시험했다. 세포를 35,000 세포/웰 밀도로 평판배양하고, 전기천공을 사용하여 31.25 nM, 62.5 nM, 125 nM, 250 nM, 500 nM, 1,000 nM, 2,000 nM, 및 4,000 nM 농도의 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 전달감염시켰다. 대략 16 시간 후, RNA를 세포로부터 단리하고 PTPIB mRNA 수준을 프라이머 프로브 세트 RTS198을 사용한 정량적 실시간 PCR로 측정했다. PTPIB mRNA 수준을 RJBOGREENEN®으로 측정함으로써 총 RNA 함량에 대해 표준화했다. 결과는 미처리된 대조군 세포와 비교하여 PTPIB mRNA의 퍼센트 억제로서 표 17에 주어진다.
표 17
사이노몽구스 일차 간세포에서 PTPIB mRNA의 용량-의존적 안티센스 억제
Figure pct00035
실시예 12: 마우스 모델에서 인간 PTPIB 를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 내성
실시예 8-11에 기재된 연구에서 용량-의존적 억제를 실증한 ISIS 올리고뉴클레오타이드를 CD1 마우스에서 다양한 대사 마커 수준의 변화를 모니터링함으로써 마우스 모델에서 내성에 대해 평가했다. 2개 더 ISIS 올리고뉴클레오타이드, ISIS 446433 (4-10-4 MOE; 5'- GTTTATTCCATGGCCATT -3' (서열번호: 42); 서열번호: 1에서 표적 개시 부위는 3288이다) 및 ISIS 446434 (3-10-3; 5'- TTTATTCCATGGCCAT -3' (서열번호: 49); 서열번호: 1에서 표적 개시 부위는 3289이다)를 ISIS 409826 (서열번호: 1에서 표적 개시 부위는 3287이다)에 대한 쇼트머로서 디자인했고 또한 이 연구에서 평가했다.
치료
CD1 마우스 (잭슨 랩으로부터 입수가능함, 메인주 바 하버)를 12시간 광/암 사이클에 유지시키고 정상 실험식 음식 (할런 레보러토리즈 (Harlan Laboratories), 인디애나주 인디아나폴리스)을 임의로 공급했다. 동물을 실험 개시 전에 연구 시설에서 적어도 7일 동안 순응시켰다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 PBS 중에서 제조하고 0.2 마이크론 필터를 통해 여과함으로써 멸균했다. 올리고뉴클레오타이드를 주사용 0.9% PBS에 용해시켰다.
5 CD1 마우스의 그룹들 각각을 4주 동안 100 mg/kg의 ISIS 142082, ISIS 373125, ISIS 404173, ISIS 409826, ISIS 410002, ISIS 410003, ISIS 438452, ISIS 438460, ISIS 446431, ISIS 446432, ISIS 446433, 또는 ISIS 446434로 주당 2회 피하로 주사했다. 5 CD1 마우스 중의 1 그룹을 4주 동안 PBS로 주당 2회 피하로 주사했다. 이 PBS 그룹을 대조군 그룹으로서 제공했다. 혈액 샘플을 꼬리 절단을 통해 수집했다. 마지막 용량 투여 2일 후, 체중을 측정하고, 마우스를 안락사시키고 장기 및 혈장을 추가 분석을 위해 수확했다.
체중 및 장기 중량
마우스의 체중을 매주 측정했다. 체중은 표 18에 주어진다. 간, 비장 및 신장 중량을 연구 종료시 측정했고, 표 19에 주어진다. 결과는 ISIS 올리고뉴클레오타이드들 중의 어느 것도 마우스의 전반적 건강에 어떠한 불리한 효과도 갖지 않았음을 실증한다.
표 18
안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료 동안 CD1 마우스의 매주 체중 (g)
Figure pct00036
표 19
안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료 후 CD1 마우스의 장기 중량 (g)
Figure pct00037
간 기능
간 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 혈장 수준의 트랜스아미나제를 자동 임상 화학 분석기 (히타치 올림푸스 (Hitachi Olympus) AU400e, 뉴욕주 멜빌)를 사용하여 측정했다. ALT (알라닌 트랜스아미나제) 및 AST (아스파르테이트 트랜스아미나제)의 혈장 수준을 격주로 측정했다. 결과는 표 20 및 21에 주어지고, 대부분의 ISIS 올리고뉴클레오타이드들이, 이들의 간 트랜스아미나제 프로파일에 의해 실증됨으로써, 마우스에서 허용되는 것으로 간주되었음을 나타낸다.
표 20
CD1 마우스의 ALT (IU/L)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00038
표 21
CD1 마우스의 AST (IU/L)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00039
혈장 글루코오스 수준
글루코오스 대사에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 글루코오스의 혈장 수준을 자동 임상 화학 분석기 (히타치 올림푸스 AU400e, 뉴욕주 멜빌)를 사용하여 측정했다. 결과는 표 22에 주어지고, mg/dL 단위로 표시된다. ISIS 올리고뉴클레오타이드들 중의 어느 것도 마우스의 글루코오스 대사에 어떠한 불리한 효과도 갖지 않았다.
표 22
CD1 마우스에서 혈장 글루코오스 수준에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 표과
Figure pct00040
혈장 지질 및 트리글라이세라이드 수준
콜레스테롤 및 트리글라이세라이드 대사에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 각각의 혈장 수준을 자동 임상 화학 분석기 (히타치 올림푸스 AU400e, 뉴욕주 멜빌)를 사용하여 측정했다. 결과는 표 23 및 24에 주어지고, mg/dL 단위로 표시된다. 대부분의 ISIS 올리고뉴클레오타이드들은 마우스의 지질 대사에 어떠한 불리한 효과도 갖지 않았다.
표 23
CD1 마우스에서 혈장 콜레스테롤 수준에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00041
표 24
CD1 마우스에서 혈장 트리글라이세라이드 수준에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00042
시토카인 수준
염증에 관여된 인자에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 혈액을 시토카인 수준의 측정을 위한 치료기간의 종료 후에 수집했다. 샘플을 분석을 위해 오손 바이오시스템즈 (Aushon Biosystems, 매사추세츠주 우번)에 보냈다. 쥣과 EL-6, JE, MIP-1α, 및 TNF-α의 수준을 쥣과 항체를 사용하여 측정했다. 결과는 표 25에 주어진다. 대부분의 ISIS 올리고뉴클레오타이드들은 마우스의 시토카인 수준에 어떠한 불리한 효과도 갖지 않았다.
표 25
CD1 마우스에서 혈장 시토카인 수준에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00043
실시예 13: 랫트 모델에서 인간 PTPIB 를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 내성
실시예 12에 기재된 연구로부터의 ISIS 올리고뉴클레오타이드를 스프래그 다우리 랫트에서 다양한 대사 마커의 수준의 변화를 모니터링함으로써 랫트 모델에서의 내성에 대해 추가로 평가했다.
치료
스프래그 다우리 랫트는 12시간 광/암 사이클에 유지시키고 정상 실험식 음식 (할런 레보러토리즈, 인디애나주 인디아나폴리스)을 임의로 공급했다. 동물을 실험 개시 전에 연구 시설에서 적어도 7일 동안 순응시켰다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 PBS 중에서 제조하고 0.2 마이크론 필터를 통해 여과함으로써 멸균했다. 올리고뉴클레오타이드를 주사용 0.9% PBS에 용해시켰다.
4 랫트의 그룹들 각각을 4주 동안 주당 2회 50 mg/kg의 용량으로, 이후 8주 동안 주당 2회 30 mg/kg의 용량으로 ISIS 142082, ISIS 373125, ISIS 404173, ISIS 409826, ISIS 410002, ISIS 410003, ISIS 438452, ISIS 438460, ISIS 446431, ISIS 446432, ISIS 446433, 또는 ISIS 446434로 주당 2회 피하로 주사했다. 4 랫트 중의 1 그룹을 12주 동안 PBS로 주당 2회 피하로 주사했다. 이 PBS 그룹을 대조군 그룹으로서 제공했다. 혈액 샘플을 꼬리 절단을 통해 수집했다. 마지막 용량 투여 2일 후, 체중을 측정하고, 랫트를 안락사시키고 장기 및 혈장을 추가 분석을 위해 수확했다.
체중 및 장기 중량
랫트의 체중을 매주 측정했다. 체중은 표 26에 주어진다. 간, 비장 및 신장 중량을 연구 종료시 측정했고, 표 27에 주어진다. 'n/a'는 특정 그룹에서의 모든 랫트가 특정 시점 전에 안락사되었기 때문에 특정 시점에서 특정 그룹에 대해 이용가능한 데이타가 없음을 나타낸다.
표 26
안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료 동안 스프래그 다우리 랫트의 격주 체중 (g)
Figure pct00044
표 27
안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료 동안 스프래그 다우리 랫트의 장기 중량 (g)
Figure pct00045
간 기능
간 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 트랜스아미나제의 혈장 수준을 자동 임상 화학 분석기 (히타치 올림푸스 AU400e, 뉴욕주 멜빌)를 사용하여 측정했다. ALT (알라닌 트랜스아미나제) 및 AST (아스파르테이트 트랜스아미나제)의 혈장 수준을 격주로 측정했다. 빌리루빈의 혈장 수준 (mg/dL)을 또한 동일한 임상 화학 분석기를 사용하여 측정했다. 결과는 표 28, 29, 30에 주어진다. 'n/a'는 특정 그룹에서의 모든 랫트가 특정 시점 전에 안락사되었기 때문에 특정 시점에서 특정 그룹에 대해 이용가능한 데이타가 없음을 나타낸다.
표 28
스프래그 다우리 랫트의 ALT (IU/L)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00046
표 29
스프래그 다우리 랫트의 AST (IU/L)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00047
표 30
스프래그 다우리 랫트의 빌리루빈 (mg/dL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00048
신장 기능
신장 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 혈액 우레아 질소 (BUN) 및 크레아티닌의 혈장 수준을 자동 임상 화학 분석기 (히타치 올림푸스 AU400e, 뉴욕주 멜빌)를 사용하여 측정했다. 결과는 표 31 및 32에 주어지고, mg/dL 단위로 표시된다. 총 소변 단백질 대 크레아티닌 비율을 또한 계산했고 결과는 표 33에 주어진다.
표 31
스프래그 다우리 랫트의 BUN (mg/dL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00049
표 32
스프래그 다우리 랫트의 크레아티닌 (mg/dL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00050
표 33
스프래그 다우리 랫트의 총 소변 단백질 대 소변 크레아티닌 비율에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00051
혈장 글루코오스 수준
글루코오스 대사에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 글루코오스의 혈장 수준을 자동 임상 화학 분석기 (히타치 올림푸스 AU400e, 뉴욕주 멜빌)를 사용하여 측정했다. 결과는 표 34에 주어지고, mg/dL 단위로 표시된다.
표 34
스프래그 다우리 랫트에서의 혈장 글루코오스 수준에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00052
혈장 지질 및 트리글라이세라이드 수준
총 콜레스테롤 및 트리글라이세라이드 수준에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 각각의 혈장 수준을 자동 임상 화학 분석기 (히타치 올림푸스 AU400e, 뉴욕주 멜빌)를 사용하여 측정했다. 결과는 표 35 및 36에 주어지고, mg/dL 단위로 표시된다.
표 35
스프래그 다우리 랫트에서 혈장 콜레스테롤 수준 (mg/dL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00053
표 36
스프래그 다우리 랫트에서 혈장 트리글라이세라이드 수준 (mg/dL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00054
시토카인 수준
염증에 관여된 인자에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 혈액을 시토카인 수준의 측정을 위한 치료기간의 종료 후에 수집했다. 샘플을 분석을 위해 오손 바이오시스템즈 (매사추세츠주 우번)로 보냈다. 랫트 IL-6, MCP-1, MIP-lct, 및 TNF-α의 수준을 이들의 각각의 항체로 측정했다. 결과는 표 37에 주어진다.
표 37
스프래그 다우리 랫트에서 혈장 시토카인 수준에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00055
실시예 14: 인간 PTPIB 를 표적으로 하는 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 점도 측정
실시예 12 및 13에 기재된 연구로부터 선택된 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 점도를, 165-185 mg/mL 농도에서 40 cP 초과의 점도를 갖는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 스크리닝하기 위해 측정했다. 40 cP 초과의 점도를 갖는 올리고뉴클레오타이드는 너무 점성이어서 임의의 대상체에게 투여될 수 없을 것이다.
ISIS 올리고뉴클레오타이드 (32-35 mg)를 유리 바이알 내에서 중량을 재고, 물 120 ㎕를 부가하고 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 50℃에서 바이알을 가열함으로써 용액에 용해시켰다. 미리 가열된 샘플의 일부 (75 ㎕)를 마이크로-점도계 (캠브리지 (Cambridge))로 피펫팅했다. 마이크로-점도계의 온도를 25℃로 설정하고 샘플의 점도를 측정했다. 미리 가열된 샘플의 또 하나의 부분 (20 ㎕)을 85℃에서 260 nM에서의 UV 판독 (케리 (Cary) UV 기기)을 위해 10 mL의 물에 피펫팅했다. 결과는 표 38에 주어지고, 모든 안티센스 올리고뉴클레오타이드 용액이 상기 언급된 기준하에 그의 점도에서 최적이었음을 나타낸다.
표 38
인간 PTPIB를 표적으로 하는 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 점도 및 농도
Figure pct00056
실시예 15: 마우스 모델에서 인간 PTPIB 를 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 6개월 내성 연구
실시예 12-14에 기재된 연구로부터 선택된 ISIS 올리고뉴클레오타이드를 CD1 마우스에서 다양한 대사 마커 수준의 변화를 모니터링함으로써 마우스 모델에서 장기간 내성에 대해 평가했다.
치료
수컷 CD1 마우스를 12시간 광/암 사이클에 유지시키고 정상 실험식 음식 (할런 레보러토리즈, 인디애나주 인디아나폴리스)을 임의로 공급했다. 동물을 실험 개시 전에 연구 시설에서 적어도 7일 동안 순응시켰다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 PBS 중에서 제조하고 0.2 마이크론 필터를 통해 여과함으로써 멸균했다. 올리고뉴클레오타이드를 주사용 0.9% PBS에 용해시켰다.
10 CD1 마우스의 그룹들 각각을 24주 동안 25 mg/kg의 ISIS 142082, ISIS 404173, 또는 ISIS 446431로 주당 2회 피하로 주사했다. 10 CD1 마우스 중의 1 그룹을 24주 동안 PBS로 주당 2회 피하로 주사했다. 이 PBS 그룹은 대조군 그룹으로서 제공했다. 혈액 샘플을 140일에 하악 출혈을 통해 수집했다. 168일에, 혈액을 CO2 마취하에 말단 심장 천자를 통해 수집하고, 마우스를 안락사시키고 장기를 추가 분석을 위해 수확했다.
혈장 글루코오스 수준
글루코오스 대사에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 글루코오스의 혈장 수준을 자동 임상 화학 분석기 (히타치 올림푸스 AU400e, 뉴욕주 멜빌)를 사용하여 측정했다. 결과는 표 39에 주어지고, mg/dL 단위로 표시된다.
표 39
168일에 혈장 글루코오스 수준에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00057
간 기능
간 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 트랜스아미나제의 혈장 수준을 자동 임상 화학 분석기 (히타치 올림푸스 AU400e, 뉴욕주 멜빌)를 사용하여 측정했다. 168일에 ALT (알라닌 트랜스아미나제) 및 AST (아스파르테이트 트랜스아미나제)의 혈장 수준을 측정했다. 빌리루빈의 혈장 수준 (mg/dL)을 또한 동일한 임상 화학 분석기를 사용하여 측정했다. 손상된 간 세포에 의해 증가된 양으로 합성된 알칼리성 포스파타제는 또한 간 질환의 마커이고 (Narayanan, S. Ann. Clin. Lab. Sci. 21: 12-8, 1991) 상기 알칼리성 포스파타제를 유사하게 측정했다. 간 질환에서 전형적으로 감소된 알부민 (Oettl, K. 등, Biochim. Biophys. Acta. 1782: 469-73, 2008)을 또한 유사하게 측정했다. 결과는 표 40에 주어진다.
표 40
168일에 간 대사 마커에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00058
심장 기능
심장 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 크레아틴 포스포키나아제 (CPK)의 혈장 수준을 168일에 자동 임상 화학 분석기 (히타치 올림푸스 AU400e, 뉴욕주 멜빌)를 사용하여 측정했다. 이 마커의 증가된 수준은 심장 근육 손상을 나타낸다 (Barohn, R.J. In: Goldman L, Ausiello D, eds. Cecil Medicine. 제23판 Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2007: chapter 447). 결과는 표 41에 주어진다.
표 41
168일에 심장 마커 CPK에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00059
췌장 기능
췌장 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 아밀라아제의 혈장 수준을 168일에 자동 임상 화학 분석기 (히타치 올림푸스 AU400e, 뉴욕주 멜빌)를 사용하여 측정했다. 이 마커의 증가된 수준은 급성 췌장염을 나타낸다 (Sternby, B. 등, Mayo Clin. Proc. 71: 1138-44, 1996). 결과는 표 42에 주어진다.
표 42
168일에 췌장 마커 아밀라아제에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00060
신장 기능
신장 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 혈액 우레아 질소 (BUN) 및 크레아티닌의 혈장 수준을 자동 임상 화학 분석기 (히타치 올림푸스 AU400e, 뉴욕주 멜빌)를 사용하여 측정했다. 결과는 표 43에 주어지고, mg/dL 단위로 표시된다.
표 43
168일에 신장 대사 마커에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00061
실시예 16: CD1 마우스 간에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 반감기 측정
CD1 마우스를 실시예 14에 기재된 연구로부터 선택된 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 치료하고, 올리고뉴클레오타이드 반감기 뿐만 아니라 간으로부터 올리고뉴클레오타이드 분해 및 제거에 대한 소요 시간을 평가했다.
치료
10 CD1 마우스의 그룹들 각각을 50 mg/kg의 ISIS 142082, ISIS 446431, ISIS 404173, 또는 ISIS 409826으로 2주 동안 주당 2회 피하로 주사했다. 각각의 그룹으로부터 5 마우스를 최종 용량 투여 3일 및 56일 후에 희생시켰다. 간을 분석을 위해 수확했다.
올리고뉴클레오타이드 농도의 측정
전체길이 올리고뉴클레오타이드의 농도를 측정했다. 사용된 방법은 페놀-클로로포름 (액체-액체) 추출 후 고체상 추출로 이루어진 이전에 공개된 방법 (Leeds 등, 1996; Geary 등, 1999)의 변형이다. 내부 표준 (ISIS 355868, 27-합체 2'-O-메톡시에틸 변형된 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오타이드, GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT, 서열번호: 50으로서 본원에 지정됨)을 추출 전에 부가했다. 조직 샘플 농도를 정량화 하한치 (lower limit of quantitation: LLOQ)가 대략 1.14 μg/g인 교정 곡선을 사용하여 계산했다. 그 다음, 반감기를 윈논린 (WinNonlin) 소프트웨어 (PHARSIGHT)를 사용하여 계산했다.
결과는 표 44에 주어진다. 11-34일 내의 반감기를 갖는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 추가 연구를 위해 선택했다.
표 44
CD1 마우스 간에서 전체길이 올리고뉴클레오타이드 농도 (μg/g) 및 올리고뉴클레오타이드의 반감기 (일수)
Figure pct00062
실시예 17: 사이노몽구스 원숭이에서 인간 PTPIB 를 표적으로 하는 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 효과
사이노몽구스 원숭이를 실시예 15 및 16에 기재된 연구로부터의 ISIS 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 치료했다. 간 및 신장에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드 효능 및 내성, 뿐만 아니라 그의 약력학적 프로파일을 평가했다.
치료
연구 전에, 원숭이를 30일 기간 동안 격리를 유지했고, 이 기간 동안, 혈청 화학 및 혈액학의 표준 패널, 배설물 샘플의 알 및 기생충에 대한 시험, 및 결핵 시험을 비정상 또는 병든 원숭이를 스크리닝하기 위해 수행했다. 6 그룹의 무작위로 배치된 3 수컷 및 2 암컷 사이노몽구스 원숭이 각각을 제1주 동안 주당 3회, 그 뒤에 그 다음 12주 동안 주당 1회 8 mg/kg 또는 40 mg/kg의 ISIS 142082, ISIS 446431, 또는 ISIS 404173으로 피하로 주사했다. 1 그룹의 3 수컷 및 2 암컷 사이노몽구스 원숭이를 제1주 동안 주당 3회, 그 뒤에 그 다음 12주 동안 주당 1회 40 mg/kg의 ISIS 409826으로 피하로 주사했다. 대조군 그룹의 3 수컷 및 2 암컷 사이노몽구스 원숭이를 제1주 동안 주당 3회, 그 뒤에 그 다음 12주 동안 주당 1회 PBS로 피하로 주사했다. 모든 그룹의 최종 희생을 93일에 마지막 용량 투여 48시간 후에 수행했다.
연구 기간 동안, 원숭이를 병 또는 고통의 징후에 대해 매일 관찰했다. 치료에 대해 불리한 효과를 보여주는 임의의 동물을 제외하고 수의사 및 연구 지도자에게 언급했다.
억제 연구
RNA 분석
RNA를, 각각 상이한 영역의 PTPIB mRNA를 표적으로 하는 프라이머 프로브 세트 1 (서열번호: 51로 본원에 지정된 정방향 서열 GACCAGCTGCGCTTCTCCTA; 서열번호: 52로 본원에 지정된 역방향 서열 CAGAGGAGTCCCCCATGATG; 서열번호: 53으로 본원에 지정된 프로브 서열 TTGGCTGTGATCGAAGGTGCCAAA) 또는 프라이머 프로브 세트 2 (서열번호: 54로 본원에 지정된 정방향 서열 GGGCCCTTTGCCTAACACA; 서열번호: 55로 본원에 지정된 역방향 서열 CGACACCCCTGCTTTTCTG; 서열번호: 56으로 본원에 지정된 프로브 서열 CGGTCACTTTTGGGAGATGGTGTGG)를 사용한 PTPIB의 실시간 PCR 분석을 위해 간 및 복부 지방 조직으로부터 추출했다. 결과는 RJBOGREENEN®으로 표준화되는, PBS 대조군과 비교된, PTPIB mRNA의 퍼센트 감소로서 주어진다. 표 45에서 보여주는 바와 같이, ISIS 안티센스 올리고뉴클레오타이드로의 치료는 PBS 대조군과 비교하여 PTPIB mRNA의 유의미한 감소를 초래했다. ISIS 404173으로의 치료는 ISIS 142082로의 치료와 유사한 PTPIB mRNA 수준의 감소를 유발했다.
표 45
PBS 대조군과 비교한 사이노몽구스 원숭이 간 및 지방 조직에서의 PTPIB mRNA의 억제
Figure pct00063
단백질 분석
조직을 웨스턴 블랏 분석에 의해 PTPIB 단백질 수준을 측정하기 위해 간으로부터 추출했다. 구체적으로, ISIS 404173으로 치료된 원숭이로부터의 PTPIB 단백질 샘플을 ISIS 142082로 치료된 것들과 비교했다. 결과는 대조군 수준과 비교된 백분율 감소로서 표시되어 표 46, 47 및 48에 주어진다. PTPIB 수준을 총 단백질 수준, 뿐만 아니라 구성적으로 발현된 단백질, IR-β에 대해 표준화했다. ISIS 404173으로의 치료는 8 mg/kg의 더 낮은 용량에서 ISIS 142082로 치료된 것보다 PTPIB 간 단백질의 더 큰 감소를 유발했다 (표 47).
표 46
사이노몽구스 원숭이 간에서 ISIS 404173으로의 치료 후 PTPIB 단백질 수준 감소
Figure pct00064
표 47
사이노몽구스 원숭이 간에서 8 mg/kg의 ISIS 404173 또는 ISIS 142082로의 치료 후 PTPIB 단백질 수준 감소
Figure pct00065
표 48
사이노몽구스 원숭이 간에서 40 mg/kg의 ISIS 404173 또는 ISIS 142082로의 치료 후 PTPIB 단백질 수준 감소
Figure pct00066
내성 연구
체중 및 장기 중량 측정
동물의 전반적 건강에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 체중 및 장기 중량을 최종 희생 후 측정했다. 체중을 측정하고 PBS 대조군 동물의 체중과 비교했다. 장기 중량을 측정하고 치료 그룹 중량을 상응하는 PBS 대조군 중량과 비교했다. 데이타는 표 49에 주어진다. ISIS 142082로의 치료는 더 높은 용량에서 간 및 신장 중량의 증가를 유발하지 않았다.
표 49
대조군과 비교한 사이노몽구스 원숭이에서의 최종 체중 및 장기 중량
Figure pct00067
간 기능
간 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 혈액 샘플을, 치료 개시 7일 전, 뿐만 아니라 치료기간 30, 58, 및 93일에 모든 연구 그룹으로부터 수집했다. 혈액 샘플을 혈청 분리를 위한 어떠한 항응고제도 사용하지 않고 튜브에서 수집했다. 튜브를 실온에서 90분 동안 유지시키고 그 다음 혈청을 얻기 위해 원심분리했다 (실온에서 10분 동안 3000 rpm).
트랜스아미나제의 수준을 도시바 (Toshiba) 200FR NEO 화학 분석기 (도시바 코포레이션, 일본)를 사용하여 측정했다. ALT (알라닌 트랜스아미나제) 및 AST (아스파르테이트 트랜스아미나제)의 혈장 수준을 측정했고 결과는 표 50 및 51에 주어지고, IU/L 단위로 표시된다. 손상된 간 세포에 의해 증가된 양으로 합성되고 또한 간 질환의 마커인 알칼리성 포스파타제를 유사하게 측정했고, 데이타는 표 52에 주어진다. 모든 치료 그룹에서의 AST, ALT 및 알칼리성 포스파타아제의 수준은 PBS 대조군 그룹에서의 수준과 유사했다.
간에서 합성되고 염증의 마커로서 제공되는 C-반응성 단백질 (CRP)도 또한 유사하게 측정했고, 데이타는 표 53에 주어진다. 더 높은 용량의 ISIS 142082 및 ISIS 409826으로의 치료는 간 염증을 시사하는 높은 수준의 CRP를 초래했다.
빌리루빈은 또한 간 대사 마커이고, 유사하게 측정되었고, 표 54에 주어지고 mg/dL 단위로 표시된다. 모든 치료 그룹의 빌리루빈 수준은 PBS 대조군 그룹의 수준과 유사한 것으로 발견되었다. 감마-글루타밀트랜스페라제 (GGT)는 간에서 생산된 효소이고 초기 간 손상 또는 담즙정체성 질환에 대한 유용한 실험실 마커이다 (Betro, M.G. 등, Am. J. Clin. Pathol. 60: 672-8, 1973). GGT 수준을 측정했고 결과는 표 55에 주어지고 PBS 대조군 및 치료 그룹 사이의 차이가 없음을 실증한다.
표 50
사이노몽구스 원숭이 혈청 중의 ALT (IU/L)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00068
표 51
사이노몽구스 원숭이 혈청 중의 AST (IU/L)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00069
표 52
사이노몽구스 원숭이에서 알칼리성 포스파타아제 (IU/L)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00070
표 53
사이노몽구스 원숭이 혈장 중의 CRP (mg/L)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00071
표 54
사이노몽구스 원숭이 혈장 중의 빌리루빈 (mg/dL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00072
표 55
사이노몽구스 원숭이 혈장 중의 GGT (IU/L)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00073
신장 기능
신장 기능에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 혈액 샘플을 모든 연구 그룹으로부터 수집했다. 혈액 샘플을 혈청 분리를 위한 어떠한 항응고제도 사용하지 않고 튜브에서 수집했다. 튜브를 90분 동안 실온에서 유지시키고 그 다음 혈청을 얻기 위해 원심분리했다 (실온에서 10분 동안 3000 rpm). BUN 및 크레아티닌의 수준을, 치료 개시 7일 전, 뿐만 아니라 치료기간 30, 58, 및 93일에 도시바 200FR NEO 화학 분석기 (도시바 코포레이션, 일본)를 사용하여 측정했다. 결과는 표 56 및 57에 주어지고 mg/dL 단위로 표시된다. ISIS 올리고뉴클레오타이드로의 치료는 BUN 또는 크레아티닌 수준에 어떠한 불리한 효과도 갖지 않았다.
표 56
사이노몽구스 원숭이에서 혈청 BUN 수준 (mg/dL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00074
표 57
사이노몽구스 원숭이에서 혈청 크레아티닌 수준 (mg/dL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00075
콜레스테롤 및 트리글라이세라이드 수준
지질 대사에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 혈액 샘플을 모든 연구 그룹으로부터 수집했다. 혈청 샘플을 혈청 분리를 위한 어떠한 항응고제도 사용하지 않고 튜브에서 수집했다. 튜브를 실온에서 90분 동안 유지시키고 그 다음 혈청을 얻기 위해 원심분리했다 (실온에서 10분 동안 3000 rpm). 콜레스테롤 및 트리글라이세라이드의 농도를 치료 개시 7일 전, 뿐만 아니라 치료기간 30, 58, 및 93일에 도시바 200FR NEO 화학 분석기 (도시바 코포레이션, 일본)를 사용하여 측정했다. 결과는 표 58 및 59에 주어지고, mg/dL 단위로 표시된다. ISIS 올리고뉴클레오타이드로의 치료는 콜레스테롤 또는 트리글라이세라이드 수준에 어떠한 불리한 효과도 갖지 않았다.
표 58
사이노몽구스 원숭이에서 혈청 콜레스테롤 수준 (mg/dL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00076
표 59
사이노몽구스 원숭이에서 혈청 트리글라이세라이드 수준 (mg/dL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00077
혈액학
사이노몽구스 원숭이에서 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 임의의 염증 효과를 평가하기 위해, 혈액 샘플을, EDTA 칼륨염을 함유하는 튜브 중에서 각각의 이용가능한 연구 동물로부터 수집된 대략 0.5 mL의 혈액이었다. 샘플을 ADVIA120 혈액학 분석기 (바이엘 (Bayer), 미국)를 사용하여 적혈구 (RBC) 수, 백혈구 (WBC) 수, 혈소판 수 및 헤모글로빈 함량에 대해 분석했다. 데이타는 표 60-63에 주어진다. ISIS 올리고뉴클레오타이드로의 치료는 혈구 수 또는 헤모글로빈 수준을 대조군과 비교하여 유의미하게 변경시키지 않았다.
표 60
사이노몽구스 원숭이에서 WBC (x 103/㎕)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00078
표 61
사이노몽구스 원숭이에서 RBC (x 106/㎕)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00079
표 62
사이노몽구스 원숭이에서 혈소판 (x 103/㎕)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00080
표 63
사이노몽구스 원숭이에서 헤모글로빈 수준 (g/dL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00081
염증 인자의 분석
염증 인자로서 보체 C3 분석에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 혈액을, 혈청 분리를 위한 항응고제를 사용하지 않고 튜브에서 모든 이용가능한 동물로부터 수집했다. 튜브를 실온에서 90분 동안 유지시키고 그 다음 혈청을 얻기 위해 원심분리했다 (실온에서 10분 동안 3000 rpm). 보체 C3을 자동 분석기 (도시바 200 FR NEO 화학 분석기, 도시바 코포레이션, 일본)를 사용하여 측정했다. 데이타는 표 64에 주어지고 mg/dL 단위로 표시된다. ISIS 409826으로의 치료는 병이 있는 상태를 나타내는 낮은 보체 C3 수준을 초래했다.
표 64
사이노몽구스 원숭이에서 혈청 C3 수준 (mg/dL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00082
인슐린 수준의 분석
갑상선에 대한 ISIS 올리고뉴클레오타이드의 효과를 평가하기 위해, 혈액을, EDTA로 처리된 튜브에서 밤새 단식한 동물로부터 42, 84 및 91일에 수집했다. 튜브를 얼음 위에서 유지시키고 혈장을 혈액 수집 30분 내에 원심분리 (4℃에서 10분 동안 3000 rpm) 후에 얻었다. 인슐린 수준을 자동 분석기 (도시바 200 FR NEO 화학 분석기, 도시바 코포레이션, 일본)를 사용하여 측정했다. 데이타는 표 65에 주어지고, ng/mL 단위로 표시된다.
표 65
사이노몽구스 원숭이에서 혈장 인슐린 수준 (ng/mL)에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 치료의 효과
Figure pct00083
약력학적 연구
올리고뉴클레오타이드 농도의 측정
전체길이 올리고뉴클레오타이드의 농도 뿐만 아니라 총 올리고뉴클레오타이드 농도 (분해된 형태 포함)를 측정했다. 사용된 방법은 페놀-클로로포름 (액체-액체) 추출 후 고체상 추출로 이루어진 이전에 공개된 방법 (Leeds 등, 1996; Geary 등, 1999)의 변형이다. 내부 표준 (ISIS 355868, 27-합체 2'-O-메톡시에틸 변형된 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오타이드, GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT, 서열번호: 50으로서 본원에 지정됨)을 추출 전에 부가했다. 조직 샘플 농도를 정량화 하한치 (LLOQ)가 대략 1.14 μg/g인 교정 곡선을 사용하여 계산했다. 결과는 표 66 및 67에 주어지고, μg/g 조직으로서 표시된다. 신장 대 간에서의 농도의 비를 계산했다. ISIS 올리고뉴클레오타이드로의 치료는 상기 비에 어떠한 이상도 초래하지 않았다. 상기 결과는 ISIS 404173이 더 높은 용량에서 ISIS 142082보다 더 나은 신장 축적자 (accumulator)임을 나타낸다.
표 66
사이노몽구스 원숭이의 간에서 총 올리고뉴클레오타이드 농도 (μg/g)
Figure pct00084
표 67
사이노몽구스 원숭이의 간에서 전체길이 올리고뉴클레오타이드 농도 (μg/g)
Figure pct00085
SEQUENCE LISTING <110> Isis Pharmaceuticals, Inc. Sanjay Bhanot Susan M. Freier <120> ANTISENSE MODULATION OF PTP1B EXPRESSION <130> BIOL0149WO <150> 61/474,981 <151> 2011-04-13 <160> 56 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 3318 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 gtgatgcgta gttccggctg ccggttgaca tgaagaagca gcagcggcta gggcggcggt 60 agctgcaggg gtcggggatt gcagcgggcc tcggggctaa gagcgcgacg cggcctagag 120 cggcagacgg cgcagtgggc cgagaaggag gcgcagcagc cgccctggcc cgtcatggag 180 atggaaaagg agttcgagca gatcgacaag tccgggagct gggcggccat ttaccaggat 240 atccgacatg aagccagtga cttcccatgt agagtggcca agcttcctaa gaacaaaaac 300 cgaaataggt acagagacgt cagtcccttt gaccatagtc ggattaaact acatcaagaa 360 gataatgact atatcaacgc tagtttgata aaaatggaag aagcccaaag gagttacatt 420 cttacccagg gccctttgcc taacacatgc ggtcactttt gggagatggt gtgggagcag 480 aaaagcaggg gtgtcgtcat gctcaacaga gtgatggaga aaggttcgtt aaaatgcgca 540 caatactggc cacaaaaaga agaaaaagag atgatctttg aagacacaaa tttgaaatta 600 acattgatct ctgaagatat caagtcatat tatacagtgc gacagctaga attggaaaac 660 cttacaaccc aagaaactcg 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tctttcataa cacttgtaaa 6600 gtccaaactc ctctttagca tggcagccag cttccagtcc ttccctccta tgtggcttcc 6660 attctagcca gacaagaaag ggcagcgttc tccaaactca tcctcgccct tcattcctct 6720 ataccattgc tgagcacttt gttgaggatg cctctcccgt tcaatctagc ttgcatcttc 6780 cagctcgaat gtgtgcttcc ttgcaccaga gttttgttcc gtcacctgtg tgttttcata 6840 caagctggca catatctctt ctaaagccct gctgtcattg tagctgcgtc tttacaaaca 6900 tttttttttt aaatttttat aaagtcaagg tctcactata ttgcccaggc tggtctcaaa 6960 ctcctgggct caagtgatcc tcctgccttg gcctcccaga gtgctgggat tataggtatg 7020 agacactgtg cccagctgta gctgctactt tatatcccag gtctatctcc aatggagccc 7080 aagcttcctg aggccacctg ttgtatcttt ctcattcatc ttgaagtcct ctgctcctgg 7140 cacagagtag gtacctaaca agagttggga ttgaattgat ggtcagtact ttgctagcct 7200 gatggtataa agatgtacaa aacatgttcc tggctcccac tctagggggg caatgatgga 7260 aacaaataga ttagcccaca ttagtaccaa tagtagaggt cactctggga gaaggccccc 7320 accacatttt gagtcatggc ctaatgaggt aatttagtat tgcctgctgc agtggctttg 7380 gaagaaaggc tggcattctt agccagtaga agctgatacc 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tgatggtgct cacgactctt cctgcaaagg 75540 gaactgaaga cctccacatt aagtggcttt ttaacatgaa aaacacggca gctgtagctc 75600 ccgagctact ctcttgccag cattttcaca ttttgccttt ctcgtggtag aagccagtac 75660 agagaaattc tgtggtggga acattcgagg tgtcaccctg cagagctatg gtgaggtgtg 75720 gataaggctt aggtgccagg ctgtaagcat tctgagctgg gcttgttgtt tttaagtcct 75780 gtatatgtat gtagtagttt gggtgtgtat atatagtagc atttcaaaat ggacgtactg 75840 gtttaacctc ctatccttgg agagcagctg gctctccacc ttgttacaca ttatgttaga 75900 gaggtagcga gctgctctgc tatatgcctt aagccaatat ttactcatca ggtcattatt 75960 ttttacaatg gccatggaat aaaccatttt tacaaaaata aaaacaaaaa aagcaaggtg 76020 ttttggtata ataccttttc aggtgtgtgt ggatacgtgg ctgcatgacc gggtgggtgg 76080 gggggagtgt ctcagggtct tctgtgacct cacagaactg tcagactgta cagttttcca 76140 acttgccata ttcatgatgg gtttgcattt tagctgcaac aataaaattt ttttctaaag 76200 aacatgaatt tggggtgctt cccatttttt tctttgctta atagagctaa accaggatga 76260 gtaactcctg tttctttcta tccctgctga tgtgaaacag atgttgtcaa tcagctgggg 76320 ttagagtttt ccacttctaa gaattaacct cagcatccct gcattgccag caccctcagg 76380 ctggagcgct ttccttgact gtgagcttgt tgaacacctt aggcctcagc ccatttcctt 76440 cccaaattga cgctttgcct gtgtagggcc ctcagataac ttaacaaact taccagtgtt 76500 gtttgaagaa cagtgttttg agttgtaatc tcaaaaccat atcccttacc caattacctg 76560 taagacacaa tggttaccac atctcagtac gtaaagtcca cttgatatag aattgactta 76620 gaaataagac agattagtat agtttttcat ttgtgtacaa aattaaacaa tgtaaattcc 76680 ccccaaagtg atttttttga ctttttgaag taattttgga cttgcaaaat gttgccaaaa 76740 tagtacgaag agttccccag taccctcgaa gtttcctcga ctgtttcaaa gctggctgca 76800 ggcccaggct catgagactg ggaagaggac aggctgtggt catgtggacc cacaggggcc 76860 tggggctgca gaagtcagtg tggcttccac catttcaggt ataaaaaagg gcatctaagc 76920 tttcaagaag agggaggatg ctctagggca gcggtcccca accttttctg gcaccaggaa 76980 ccggttccat ggaagacaat tttttcacag gcctgggggt ggtgagggat ggttttggga 77040 tagaaacttc cacctcagat catcaggcat cagattctca taaggagctt gcaacctgat 77100 ctcttgcaca cattcagttc acaatagggt tcacgctcct aagagaacct gatgctgcag 77160 ctgatctaac aggagatgga gctcaggtgg tcatgctcag tcgctcgcca ctcacctcct 77220 gccatgcagt ccagttccta acaggcctca gaccagtacc ggtctgtggc ctgggggttg 77280 aggacccctg ctctaggctg gtactgctga tgcttaaaaa gagagggttt gccagaaatc 77340 agatgggaca aaagggcaaa ggccgtgcca cagagtgccc atatagggga gagcacgcct 77400 ggagccttcg agagcatgca gagaagcctg gagactgcat ttaccggagc tgctgcctga 77460 ggccaccctc caagtgtccc cacagcgcac cacaagacca caggagtgac ctcctcactg 77520 gcaggtattt ggggaaacaa ctgctgtcta ctcttttggg taaaaagtga aacaccaata 77580 gtttaattga aatttcagaa aattgaacat atgaacaagg caaataaata ctaagtaagt 77640 taaaaacaca aaatatgtcc aggaagtatc gatgagaatg ttcaagttaa agttctccaa 77700 tgccattgct acagcaacct caaaccctag gttctctctg cactattaac acagacatct 77760 caggacatgg tttgcttttt tttaagactt aaataggaaa ctaatttttc tttctttaaa 77820 gcaattgcgt tcttcagtga actctttctt taggccagtt gatggcttct tagcagttta 77880 ttgacgagat cctagggtag cttccgaagc tgggttgatt gattgcattt gggtgcggat 77940 ggccaaagtg agtggcccta ctgcctgtgc tgctcagggc tcctgggctg atgtggtggc 78000 t 78001 <210> 3 <211> 4522 <212> DNA <213> Macaca mulatta <400> 3 gcggtgcgta gttccggctg ccggttgaca tgaagaagcc gcggcggcta gggcggcggt 60 agcggcagga gtcggtgctt gctgcggacc tcagggctaa gagcgcgacg cggcctagag 120 cggcggactg cgcagtgggc cgagaaggag gcgcagcagc cgccctggcc cgtcatggag 180 atggaaaagg agttcgagca gatcgacaag tccgggagct gggcggccat ttaccaggat 240 atccgacacg aagccagtga cttcccatgt agagtggcca agcttcctaa gaacaaaaac 300 cgaaataggt acagagacgt cagtcccttt gaccatagtc ggattaaact acatcaagaa 360 gataacgact atatcaacgc tagtttgata aaaatggaag aagcccaaag gagttacatc 420 cttacccagg gccctttgcc taacacatgc ggtcactttt gggagatggt gtgggaacag 480 aaaagcaggg gtgtcgtcat gctcaacaga gtgatggaga aaggttcgtt aaaatgcgca 540 cagtactggc cacaaaaaga agaaaaagaa atgatctttg aagacacaaa cttgaaatta 600 acattgatct ctgaagatat caaatcatat tatacagtgc gacagctaga attggaaaac 660 cttacaaccc aagaaactcg agagatctta catttccact ataccacatg gcctgacttt 720 ggagtccccg aatcgccagc ctcattcttg aactttcttt tcaaagtccg agagtcaggg 780 tcactcagcc cggagcatgg gcccgtcgtg gtgcactgca gtgcgggtat cggcaggtct 840 gggaccttct gtctggctga tacctgcctc ttgctgatgg acaagaggaa agacccttct 900 tccgttgata tcaagaaagt gctattagaa atgaggaagt ttcggatggg gctgatccag 960 acagcagacc agctgcgctt ctcctacttg gctgtgatcg aaggtgccaa attcatcatg 1020 ggggactcct ctgtgcagga tcagtggaag gagctttccc acgaggacct ggagccccca 1080 cccgagcacg tccccccacc tccccggcca cccaaacgaa tcctggagcc acacaatggg 1140 aaatgcaggg agttcttccc aaatcaccag tgggtgaagg atgagaccca ggaggataaa 1200 gactgcccca tcaaggaaga aacaggaagc cccttaaatg ccgcacccta cagcatggaa 1260 agcatgagtc aagacactga agttagaagt cgggtcgtgg ggggaagtct tcgaggtgcc 1320 caggctgcct ccctagccaa aggggagccg tcaccgccta agaaggagga ggaccatgca 1380 ctgagtcact ggaagccctt cctggtcaac atgtgtgtgg ctacggtcct cacggccggc 1440 gcgtacctct gctacagggt atgtttccac tgacagacgc gctggcgaga tgctcgtgtg 1500 cagagagcac tggccgctag cccgatggta ggattcagtt ctgtggcgca tctgagccag 1560 tctcagaaga aacagatcaa aggtttttaa agtctggaac tgtggaaggg ctaacgagaa 1620 ttaaggatcg atgcactggg gttttaagga gccctctggt cccaagaata taagagtcta 1680 atctcagggc cttaacctat tcaggagtaa gtagagaaaa tgccaaatac gtctgtctct 1740 ctctctctct ctttttttta ttcctttgtt tttggaaaaa aatagaatta caacacattg 1800 ttgtttttaa cctttataaa aagcagcttt ttgttatttc tggaaaaaaa acaaactagg 1860 cacttaatga aactttctcg tacccttagg tgatgtaatt agctatataa tttatatttg 1920 atttcccagg gaaggaatcc caaactttta cgaatgtaaa ctcccttgga gaagagggtt 1980 aggacgctct tgcgctcaag cccccctcag ctgtgtgcac actgagccag gacagggtct 2040 ttgagctttc ccactgtaag aacagcaaca caaggccgtc tagagaaaca gaacctgcct 2100 ctgcttctgc tcagggtgtc cgttgtcctt tctccattgc tccctcctgt gacagccatc 2160 ttgctcatgt accagccctc atcaccccat tcccataaaa gagtgtcctc gaggcctctc 2220 cctgggggtc agaggtcacc acagggtggc cctcagcatg tcagccctct gttaattcag 2280 aggagtgggc tccacctcat tgggagaagt gccatttcag cagaaatcca cacgttagac 2340 gtgtgttgct gttaagtaag gggaagagag gactagcctc agagctctgg ccatggaaat 2400 gacctcctga gactttttca tcgttttaaa tattttacct cttttcaggt ggccatctga 2460 gtacatcaga tggttttgca aaatgcaaac aattttttcc ttgggggtga tttttgggga 2520 gaaggggcta ctgtaaaaaa taaaaccaaa accccctttg ctccctcgga ggttgaagtt 2580 gccggggggt gtggccgggg tcgtgcatga ggcgacagct ctgcgggtgc gggtctgggc 2640 tcatctgaac tgtttggttt cattccagtt cctgttcaac agcaacacat agcctgaccc 2700 tcctccactc cacctccacc cactgtccgc ctctgcccgc agagcccacg cccgactagc 2760 aggcatgccg cggtaggtaa gggccgccgg accgcgtaga gagccgggcc ccggacggac 2820 gttggttctg cactaaaacc catcttcccc ggatgtgtgt ctcacccctc atccttttac 2880 tttttgcccc ttccactttg agtaccaaat ccacaagcca ttttttgagg agagtgaaag 2940 agtaccatgc tggcggcgca gagggagggg gcctgcacct gtctggaggc tcgccccacc 3000 cagggctccc tcctggagca tcccaggcag gtggtacacc aacagccccc ttgactcgca 3060 gggagcaact ctccactcca tatttattta aacaattttt ccccaaaggt gtccatagtg 3120 cactagcatt ttcttgaacc aataatgtat taaaaatttt tgatgtcagc cttgcatcaa 3180 gggctttatc aaaaagtaca ataataaatc ctcaggtagt actgggaatg gaagactttg 3240 ccatgggcct gctgcgtcag accagtactg ggaaggagga cggttgtaag gcagtcgtta 3300 tttagtgata ttgtgggtaa cgtgagaaga tagaacaatg ctataatata taatgaacac 3360 gtgggtattt aataagaaac atgatgtgag attactttgt cccgcttatt ctcctccctg 3420 ttatctgcta gatctagttc tcaaatcact gctcccccgt gtgtactaga atgcatgtaa 3480 ggtcttcttg tgtcctgatg aaaaatatgt gcttgaaatg agaaactttg atctctgctt 3540 actaatgtgc cccatgtcca agtccaacct gcctgtgcat gacctgatca ttacatggct 3600 gtggttccta agcctgttgc tgaagtcgtt gtcactcagc aatagggtgc agttttccag 3660 gaataggcat ttgcctcatt cctggcctga cactctagtg acttcctggt gagacccggc 3720 ctgtcctggt gcagcagggt ctcgctgtaa ctcagacatt ccaagggtat gggaagccat 3780 attcacacct cacgctctgg acattattta ggcaagcagg gacacccccc gccccccacc 3840 tttgggatca gcctctgcca ttccaagtca gcactcttct tgagcagact gtgatttgga 3900 agagaggcaa ctgctggaaa ccacacttct tgaaacagcc tgggtgacgg tcctttaggc 3960 agcctgccgc cgtctccgtc tgggttcacc ttgccgagag aggcgcgtct gccccaccct 4020 cgaaccctgt ggggcctgat ggtgctcacg actcttcctg caaagggaac tgaagacctc 4080 cacattaagt ggctttttaa caagaaaaac acggcagctg tagctcccga gctactctct 4140 tgccagcatt ttcacatttt gcctttctcg tggtagaagc cagtacagag aaattctgtc 4200 gtgggaacat tcgaggcatc accccataga gctgtggtga ggtgtggata aggcttaggt 4260 gccaggctgt aagcattctg agctgggctt gttgttttta agtcctgtat atgtatgtag 4320 tagtttgggt gtgtatatat agtagcattt caaaatggac gtactggttt aacctcctat 4380 cctcggagag cagctggctc tccaccttgt tacacgtatg ttagagaggt agcgagctgc 4440 tctgctatat gccttaagcc aatatttact catcaggtca ttatttttta caatggccat 4500 ggaataaacc atttttacaa aa 4522 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 4 ttgtcgatct gctcgaactc 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 5 gacttgtcga tctgctcgaa 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 6 cccggacttg tcgatctgct 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 7 gctcccggac ttgtcgatct 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 8 ccagctcccg gacttgtcga 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 9 ggcaccttcg atcacagcca 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 10 gctccttcca ctgatcctgc 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 11 ggtcatgcac aggcaggttg 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 12 aggtcatgca caggcaggtt 20 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 13 gatcaggtca tgcacaggca 20 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 14 tgatcaggtc atgcacaggc 20 <210> 15 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 15 acccttggaa tgtctgagtt 20 <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 16 cccataccct tggaatgtct 20 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 17 tcccataccc ttggaatgtc 20 <210> 18 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 18 ttcccatacc cttggaatgt 20 <210> 19 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 19 tattccatgg ccattgtaaa 20 <210> 20 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 20 ttattccatg gccattgtaa 20 <210> 21 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 21 tttattccat ggccattgta 20 <210> 22 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 22 gtttattcca tggccattgt 20 <210> 23 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 23 ggtttattcc atggccattg 20 <210> 24 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 24 tggtttattc catggccatt 20 <210> 25 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 25 atggtttatt ccatggccat 20 <210> 26 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 26 aatggtttat tccatggcca 20 <210> 27 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 27 aaatggttta ttccatggcc 20 <210> 28 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 28 aaaatggttt attccatggc 20 <210> 29 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 29 aaaaatggtt tattccatgg 20 <210> 30 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 30 aggaggtcat ttccatggcc 20 <210> 31 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 31 ggtcatttcc atggccagag 20 <210> 32 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 32 ggaggtcatt tccatggcca 20 <210> 33 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 33 ctggtttaac ctcctatcct tgga 24 <210> 34 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 34 cagagcagct cgctacctct ct 22 <210> 35 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Probe <400> 35 cagctggctc tccaccttgt tacacattat gt 32 <210> 36 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 36 ggagttcgag cagatcgaca a 21 <210> 37 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 37 ggccactcta catgggaagt c 21 <210> 38 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Probe <400> 38 agctgggcgg ccatttacca ggat 24 <210> 39 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 39 tattccatgg ccattgta 18 <210> 40 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 40 ttattccatg gccattgt 18 <210> 41 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 41 tttattccat ggccattg 18 <210> 42 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 42 gtttattcca tggccatt 18 <210> 43 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 43 ggtttattcc atggccat 18 <210> 44 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 44 tggtttattc catggcca 18 <210> 45 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 45 atggtttatt ccatggcc 18 <210> 46 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 46 aatggtttat tccatggc 18 <210> 47 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 47 aaatggttta ttccatgg 18 <210> 48 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 48 atggtttatt ccatgg 16 <210> 49 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 49 tttattccat ggccat 16 <210> 50 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 50 gcgtttgctc ttcttcttgc gtttttt 27 <210> 51 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 51 gaccagctgc gcttctccta 20 <210> 52 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Primer <400> 52 cagaggagtc ccccatgatg 20 <210> 53 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Probe <400> 53 ttggctgtga tcgaaggtgc caaa 24 <210> 54 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 54 gggccctttg cctaacaca 19 <210> 55 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 55 cgacacccct gcttttctg 19 <210> 56 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Probe <400> 56 cggtcacttt tgggagatgg tgtgg 25

Claims (56)

  1. 서열번호: 26 (ISIS 404173)의 모두 20개의 뉴클레오베이스를 포함하는 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물.
  2. 청구항 1에 있어서, 단일-가닥 변형된 올리고뉴클레오타이드로 이루어진 화합물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1에 대해 적어도 96% 상보적인 화합물.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1에 대해 적어도 97% 상보적인 화합물.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1에 대해 적어도 98% 상보적인 화합물.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1에 대해 적어도 99% 상보적인 화합물.
  7. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1에 대해 100% 상보적인 화합물.
  8. 청구항 1에 있어서, 상기 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 결합은 변형된 뉴클레오사이드간 결합인 화합물.
  9. 청구항 8에 있어서, 각 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 결합인 화합물.
  10. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는 화합물.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 적어도 하나의 변형된 당은 바이사이클릭 당인 화합물.
  12. 청구항 11에 있어서, 상기 적어도 하나의 바이사이클릭 당 각각은 4'-CH2-N(R)-O-2' 브릿지를 포함하고, R은 독립적으로 H, C1-C12 알킬, 또는 보호 그룹인 화합물.
  13. 청구항 11에 있어서, 상기 적어도 하나의 바이사이클릭 당 각각은 4'-CH(CH3)-O-2' 브릿지를 포함하는 화합물.
  14. 청구항 10에 있어서, 상기 적어도 하나의 변형된 당은 2'-O-메톡시에틸 그룹을 포함하는 화합물.
  15. 청구항 1에 있어서, 상기 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 변형된 뉴클레오베이스를 포함하는 화합물.
  16. 청구항 15에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오베이스는 5-메틸시토신인 화합물.
  17. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는,
    연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
    연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및
    연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절를 포함하고;
    상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 상기 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는 화합물.
  18. 청구항 17에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는,
    10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
    5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및
    5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고;
    상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 상기 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 변형된 당을 포함하는 화합물.
  19. 청구항 17에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는,
    10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
    5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절; 및
    5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절을 포함하고;
    상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 상기 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고; 상기 각 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합인 화합물.
  20. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
  21. 청구항 17에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
  22. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20 내지 30개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
  23. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
  24. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20 내지 24개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
  25. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20 내지 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
  26. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20 내지 22개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
  27. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20 내지 21개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 화합물.
  28. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 26의 뉴클레오베이스 서열 (404173)로 이루어진 화합물.
  29. 청구항 1에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 26의 뉴클레오베이스 서열 (404173)로 이루어지고 하기를 포함하고:
    10개의 연결된 데옥시뉴클레오사이드로 이루어진 갭 분절;
    5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 5' 윙 분절;
    5개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 3' 윙 분절;
    여기서 상기 갭 분절은 5' 윙 분절과 3' 윙 분절 사이에 위치하고, 상기 각 윙 분절의 각 뉴클레오사이드는 2'-O-메톡시에틸 변형된 당을 포함하고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이고, 여기서 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각 시티딘 잔기는 5-메틸시티딘인 화합물.
  30. 서열번호: 1의 뉴클레오타이드 3290-3309에 대해 상보적인 적어도 20개의 연속 뉴클레오베이스 부분을 포함하는 20 내지 35개의 연결된 뉴클레오사이드로 이루어진 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 1에 대해 적어도 96% 상보적인 화합물.
  31. 청구항 1 내지 30 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 염, 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제 중 적어도 하나를 포함하는 조성물.
  32. 청구항 1 내지 30 중 어느 한 항의 화합물 또는 조성물을 동물에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  33. 청구항 32에 있어서, 상기 동물은 인간인 방법.
  34. 청구항 32에 있어서, 상기 화합물의 투여는 대사 질환 또는 상태를 예방, 치료, 개선하거나 또는 그의 진행을 느리게 하는 방법.
  35. 청구항 34에 있어서, 상기 질환 또는 상태는 당뇨병인 방법.
  36. 청구항 34에 있어서, 상기 질환 또는 상태는 제2형 당뇨병인 방법.
  37. 청구항 34에 있어서, 상기 질환 또는 상태는 비만증인 방법.
  38. 청구항 34에 있어서, 상기 질환 또는 상태는 과증식성 상태인 방법.
  39. 청구항 38에 있어서, 상기 과증식성 상태는 암인 방법.
  40. 동물에서 혈액 글루코오스 수준을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 동물에게 청구항 1의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  41. 청구항 40에 있어서, 상기 동물은 인간인 방법.
  42. 청구항 40에 있어서, 상기 혈액 글루코오스 수준은 혈장 글루코오스 수준 또는 혈청 글루코오스 수준인 방법.
  43. 청구항 40에 있어서, 상기 동물은 당뇨병 동물인 방법.
  44. 동물에서 PTPIB와 연관된 질환 또는 상태를 예방하거나 그의 개시를 지연시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 동물에게 치료적으로 또는 예방적으로 효과적인 양의 청구항 1의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  45. 청구항 44에 있어서, 상기 동물은 인간인 방법.
  46. 청구항 44에 있어서, 상기 질환 또는 상태는 당뇨병인 방법.
  47. 청구항 44에 있어서, 상기 질환 또는 상태는 제2형 당뇨병인 방법.
  48. 청구항 44에 있어서, 상기 질환 또는 상태는 비만증인 방법.
  49. 청구항 44에 있어서, 상기 질환 또는 상태는 과증식성 상태인 방법.
  50. 청구항 49에 있어서, 상기 과증식성 상태는 암인 방법.
  51. 동물에서 혈액 글루코오스 수준의 증가를 예방하거나 그의 개시를 지연시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 동물에게 치료적으로 또는 예방적으로 효과적인 양의 청구항 1의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  52. 청구항 51에 있어서, 상기 동물은 인간인 방법.
  53. 청구항 51에 있어서, 상기 혈액 글루코오스 수준은 혈장 글루코오스 수준 또는 혈청 글루코오스 수준인 방법.
  54. 청구항 51에 있어서, 상기 동물은 당뇨병 동물인 방법.
  55. 청구항 30에 있어서, 화합물 또는 조성물 및 제2 제제를 공투여하는 것을 포함하는 방법.
  56. 청구항 55에 있어서, 상기 화합물 또는 조성물 및 제2 제제는 수반하여 투여되는 방법.
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