KR101502299B1

KR101502299B1 - 신규한 옥신토모듈린 유도체 및 이를 포함하는 비만 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101502299B1
Application number: KR1020120061166A
Authority: KR
Inventors: 정성엽; 장명현; 신령애; 박영경; 박영진; 권세창
Original assignee: 한미사이언스 주식회사
Priority date: 2011-06-10
Filing date: 2012-06-07
Publication date: 2015-03-11
Also published as: US20170022261A1; EP3434687B1; WO2012169798A2; RU2013154066A; KR101573636B1; EP2718318B1; DK3878859T5; AR086866A1; AU2016273908A1; AU2016273908B2; RU2017105866A3; KR20140130659A; RU2612906C2; US20170342122A1; US10442848B2; KR20120137271A; NZ731342A; RS57711B1; SI2718318T1; NZ755534A

Abstract

본 발명은 글루카곤-유사 펩티드-1의 수용체와 글루카곤의 수용체에 대하여 천연형의 옥신토모듈린 보다도 우수한 활성을 나타내는 신규한 펩티드 및 상기 펩티드를 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 신규한 펩티드는 부작용을 나타내지 않으면서도, 천연형 옥신토모듈린에서 나타나지 않는 음식물 섭취량의 감소, 위 배출 억제 및 지방분해 촉진 효과를 나타내고, 천연형 옥신토모듈린에 비하여 우월한 수용체 활성화 효과를 나타내므로, 안전하면서도 효과적인 비만치료에 널리 활용될 수 있다.

Description

신규한 옥신토모듈린 유도체 및 이를 포함하는 비만 치료용 조성물{Novel oxyntomodulin derivatives and Pharmaceutical Composition for treating obesity comprising the same}

본 발명은 글루카곤-유사 펩티드-1의 수용체와 글루카곤의 수용체에 대하여 원래의 옥신토모듈린 보다도 우수한 활성을 나타내는 신규한 펩티드 및 상기 펩티드를 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

경제성장과 생활방식의 변화에 따라 식습관에도 최근 많은 변화가 있어 왔다. 특히, 바쁜 현대인들은 패스트푸드 등의 고열량 식이와 적은 운동량으로 인하여 과체중 및 비만이 증가하고 있다. 국제보건기구(World Health Organisation, WHO)에 따르면, 전세계적으로 10억 이상의 성인이 과체중이고, 그 중 적어도 300만 이상이 임상적으로 비만이며, 특히 유럽에서 매년 250,000명, 전세계에서 250만명 이상이 과체중과 관련되어 사망하였다고 밝힌 바 있다(World Health Organisation, Global Strategy on Diet, Physical Activity and Health, 2004).

과체중 및 비만은 혈압과 콜레스테롤 수치를 증가시켜서 심장 질환, 당뇨, 관절염 등의 각종 질환의 발병 또는 악화의 원인이 되고 있다. 또한, 과체중 및 비만은 성인뿐만 아니라, 어린이나 청소년들에서도 동맥경화, 고혈압, 고지혈증 또는 심장질환 등의 발병률을 증가시키는 주요한 요인이 되고 있다.

이와 같이, 비만은 전세계적인 질병으로서 각종 질환의 원인이 되기도 하는 심각한 질병이지만 개인의 자구적인 노력에 의하여 극복될 수 있다고 믿어지고 있어, 비만 환자는 환자 자신의 자제력이 약하기 때문인 것으로 평가되고 있다. 그러나, 비만은 의외로 치료가 용이하지 않은데, 그 이유는 비만이 식욕조절 및 에너지 대사의 작용기작이 관련된 복잡한 질환이기 때문이다. 따라서, 비만을 치료하기 위하여는, 환자 자신의 노력뿐만 아니라, 식욕조절 및 에너지 대사와 관련된 비정상적인 작용기작을 치료하는 방법이 동시에 수행되어야만 하므로, 상기 비정상적인 작용기작을 치료할 수 있는 의약을 개발하려는 노력이 계속되고 있다. 상술한 노력의 결과로서, Rimonabant(Sanofi-Aventis), Sibutramin(Abbott), Contrave(Takeda), Orlistat(Roche) 등의 의약이 개발되었으나, 이들은 치명적인 부작용을 나타내거나 비만치료효과가 미비하다는 단점이 있었다. 예를 들어, Rimonabant(Sanofi-Aventis)는 중추신경장애 부작용을 나타내고, Sibutramin(Abbott)과 Contrave(Takeda)는 심혈관 부작용을 나타내며, Orlistat(Roche)은 1년 복용시 약 4kg의 체중감소 효력이 나타내는 것에 불과하다고 보고되었다. 따라서, 현재 비만 환자에게 안전하게 처방될 수 있는 비만 치료제는 거의 없는 상태이다.

이처럼, 종래의 비만치료제의 문제점을 해소할 수 있는 비만치료제를 개발하려는 연구가 활발히 진행되고 있으며, 최근에는 글루카곤 유도체에 관심이 집중되고 있다. 글루카곤은 약물 치료 또는 질병, 호르몬이나 효소 결핍등의 원인으로 혈당이 떨어지기 시작하면 췌장에서 생산된다. 글루카곤은 간에 글리코겐을 분해하여 글루코오스를 방출하도록 신호하고, 혈당 수준을 정상 수준까지 높이는 역할을 한다. 뿐만 아니라, 글루카곤은 혈당 상승효과 이외에 식욕억제 및 지방세포의 호르몬 민감성 리파제(hormone sensitive lipase)를 활성화시켜 지방 분해를 촉진하여 항비만 효과를 나타냄이 보고되었다. 이러한 글루카곤의 유도체 중의 하나인 글루카곤-유사 펩티드-1(glucagon-like peptide-1, GLP-1)은 당뇨 환자의 고혈당증을 감소시키는 치료제로 개발 중인 물질로서, 인슐린 합성과 분비 촉진, 글루카곤의 분비 저해, 위공복 억제, 글루코오스 사용 증진과 더불어 음식물 섭취를 저해하는 기능을 가진다. GLP-1과 대략 50% 아미노산 상동성을 가지는 도마뱀 독액(lizard venom)으로부터 만들어지는 엑센딘-4(exendin-4) 또한 GLP-1 수용체를 활성화시켜 당뇨 환자의 고혈당증을 감소시키는 것으로 알려져 있다. 그러나, 상기 GLP-1를 포함하는 비만 치료용 의약은 구토와 메스꺼움의 부작용을 발생시킨다는 문제점을 나타내는 것으로 보고되었다.

이에, 상기 GLP-1의 대안으로서, GLP-1과 글루카곤의 두 펩타이드의 수용체에 모두 결합할 수 있는 옥신토모듈린(oxyntomodulin)이 각광받고 있다. 상기 옥신토모듈린은 글루카곤의 전구체인 프리-글루카곤(pre-glucagon)으로부터 만들어지는 펩타이드로서, GLP-1의 음식물 섭취 저해, 포만감 증진 효력과 글루카곤의 지방분해 기능을 보여 항-비만 치료제로서의 가능성을 높이고 있다.

이러한 옥신토모듈린 펩타이드의 이중 기능성(dual fuction)에 기반하여 비만 치료 목적의 약제를 개발하기 위한 연구가 활발하게 진행 중에 있다. 예를 들어, 특허등록 제925017호에는 옥신토모듈린을 유효성분으로 포함하는, 인간에서 과체중을 치료하기 위한, 경구, 비경구, 점막(mucosal), 직장, 피하 또는 경피성 투여용 약학적 조성물이 개시되어 있다. 그러나, 옥신토모듈린을 포함하는 비만치료제는 생체내에서 반감기가 짧고, 하루에 3번씩 고용량을 투여하여도 비만 치료효과 또한 낮은 수준을 나타내는 것으로 보고되고 있다. 따라서, 옥신토모듈린을 변형시켜서, 생체내 반감기를 증대시키거나 또는 비만 치료효과를 증대시키려는 노력이 계속되고 있다.

예를 들어, 듀얼 아고니스트 옥신토모듈린(Merck사)은 옥신토모듈린의 2번째 아미노산 L-세린을 D-세린으로 치환하여 디펩티딜 펩티다제 Ⅳ(dipeptidyl peptidase-Ⅳ, DPP-Ⅳ)에 대한 저항성을 높이는 동시에 C-말단에 콜레스테롤 모이어티를 붙여 혈중 반감기를 증가시킨 것이다. ZP2929(Zealand)는 옥신토모듈린의 2번째 아미노산 L-세린을 D-세린으로 치환하여 DPP-Ⅳ 저항성을 높이고, 17번째 아미노산인 아르기닌을 알라닌으로 치환하여 프로테아제에 대한 저항성을 높였으며, 27번째 아미노산인 메티오닌을 리신으로 치환하여 산화적 안정성을 증가시켰고, 20번째와 24번째 아미노산인 글루타민과 28번째 아미노산인 아스파라긴을 각각 아스파르트산, 알라닌 및 세린으로 치환하여 탈아미드화에 대한 안정성(deamidation stability)를 증가시킨 것이다. 그러나, 반감기를 증가시킨 듀얼 아고니스트 옥신토모듈린 (Merck 사)의 경우에도 천연형 옥신토모듈린의 반감기인 8~12분보다 길어졌지만 여전히 1.7시간으로 생체 내 반감기가 매우 짧으며 약물의 투여 용량 또한 수 mg/ kg으로 매우 높은 수준이다. 따라서, 옥신토모듈린 또는 그의 유도체는 여전히 짧은 반감기와 낮은 약효로 인해 매일 투여해야 하는 단점과 과량의 약물을 투여해야 하는 두 가지 커다란 단점을 가지고 있다.

이에, 본 발명자는 천연형 옥신토모듈린의 비만 치료 효과를 증진시키고, 투여량을 감소시키기 위하여, 옥신토모듈린의 아미노산 서열이 일부 변형된 유도체를 개발하고, 천연형의 옥신토모듈린보다 글루카곤 및 GLP-1의 각 수용체에 대하여 우수한 활성을 나타냄을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 우수한 비만치료 효과를 나타내는 신규한 펩티드를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 펩티드를 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 일 실시양태에 의하면, 본 발명은 하기의 일반식 1의 아미노산 서열을 포함하는 신규한 펩티드를 제공한다.

R1-X1-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-R2(일반식 1)

상기 식에서,

R1은 히스티딘, 데스아미노-히스티딜 (desamino-histidyl), 디메틸-히스티딜 (N-dimethyl-histidyl), 베타-히드록시 이미다조프로피오닐 (beta-hydroxyimidazopropionyl), 4-이미다조아세틸(4-imidazoacetyl), 베타-카르복시 이미다조프로피오닐 (beta-carboxy imidazopropionyl) 또는 티로신이며;

X1은 Aib(aminoisobutyric acid), d-알라닌, 글리신, Sar(N-methylglycine), 세린 또는 d-세린이고;

X2는 글루탐산 또는 글루타민이며;

X3은 류신 또는 티로신이고;

X4는 세린 또는 알라닌이며;

X5는 리신 또는 아르기닌이며;

X6는 글루타민 또는 티로신이고;

X7은 류신 또는 메티오닌이며;

X8은 아스파르트산 또는 글루탐산이고;

X9은 글루탐산, 세린, 알파-메틸-글루탐산 또는 결실된 서열이며;

X10는 글루타민, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 세린 또는 결실된 서열이고;

X11은 알라닌, 아르기닌, 발린 또는 결실된 서열이며;

X12은 알라닌, 아르기닌, 세린, 발린 또는 결실된 서열이고;

X13는 리신, 글루타민, 아르기닌, 알파-메틸-글루탐산 또는 결실된 서열이며;

X14은 아스파르트산, 글루탐산, 류신 또는 결실된 서열이고;

X15는 페닐알라닌 또는 결실된 서열이며;

X16는 이소류신, 발린 또는 결실된 서열이며;

X17는 알라닌, 시스테인, 글루탐산, 리신, 글루타민, 알파-메틸-글루탐산 또는 결실된 서열이고;

X18는 트립토판 또는 결실된 서열이며;

X19은 알라닌, 이소류신, 류신, 세린, 발린 또는 결실된 서열이며;

X20는 알라닌, 리신, 메티오닌, 글루타민, 아르기닌 또는 결실된 서열이고;

X21은 아스파라긴 또는 결실된 서열이며;

X22은 알라닌, 글리신, 트레오닌 또는 결실된 서열이며;

X23는 시스테인, 리신 또는 결실된 서열이고;

X24은 알라닌, 글리신 및 세린의 조합으로 구성된 2 내지 10개의 아미노산을 가지는 펩타이드 또는 결실된 서열이며; 및,

R2는 KRNRNNIA(서열번호 32), GPSSGAPPPS(서열번호 33), GPSSGAPPPSK(서열번호 34), HSQGTFTSDYSKYLD(서열번호 35), HSQGTFTSDYSRYLDK(서열번호 36), HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK(서열번호 37) 또는 결실된 서열이다(단, 상기 일반식 1의 아미노산 서열이 서열번호 1과 동일한 경우는 제외한다).

본 발명에서 용어 "펩티드"란 2개 이상의 α-아미노산이 펩티드결합으로 연결된 형태의 화합물을 의미한다. 본 발명의 목적상, GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체를 모두 활성시켜 항비만 효과를 나타내는 펩티드를 의미한다. 본 발명에 따른 펩티드는 옥신토모듈린의 일부 아미노산을 부가, 결실 또는 치환의 형태로 변형시켜서, GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체를 모두 활성화 시킬 수 있고, 원래의 옥신토모듈린에 비하여 상기 각 수용체를 높은 수준으로 활성화시킬 수 있는 펩티드, 펩티드 유도체 또는 펩티드 모방체 등을 포함한다.

본 명세서에서 언급된 아미노산은 IUPAC-IUB 명명법에 따라 다음과 같이 약어로 기재하였다.

알라닌A 아르기닌R

아스파라긴N 아스파르트 산D

시스테인C 글루타민 산E

글루타민Q 글리신G

히스티딘H 아이소루이신I

루이신L 리신K

메티오닌M 페닐알라닌F

프롤린P 세린S

트레오닌T 트립토판W

타이로신Y 발린V

본 명세서에서 상기 펩티드는 옥신토모듈린의 아미노산 서열(HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA, 서열번호 1)에서 아미노산의 치환, 부가 결실 또는 번역후 변형(예를 들어, 메틸화, 아실화, 유비퀴틴화, 분자내 공유결합)되어, 글루카곤과 GLP-1 수용체를 동시에 활성화시킬 수 있는 임의의 펩티드를 포괄한다. 상기 아미노산의 치환 또는 부가시에는 인간 단백질에서 통상적으로 관찰되는 20개의 아미노산 뿐만 아니라 비정형 또는 비-자연적 발생 아미노산을 사용할 수 있다. 비정형 아미노산의 상업적 출처에는 Sigma-Aldrich, ChemPep과 Genzyme pharmaceuticals가 포함된다. 이러한 아미노산이 포함된 펩타이드와 정형적인 펩타이드 서열은 상업화된 펩타이드 합성 회사, 예를 들어 미국의 American peptide company나 Bachem, 또는 한국의 Anygen을 통해 합성 및 구매가능하다.

본 발명의 펩티드는 야생형의 옥신토모듈린의 글루카곤 수용체 및 GLP-1 수용체에 대한 활성을 높이기 위해 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열의 1번 아미노산인 히스티딘의 알파 카본을 결실시킨 4-이미다조아세틸(4-imidazoacetyl), N-말단 아미노기를 결실시킨 데스아미노-히스티딜 (desamino-histidyl), N-말단 아미노기를 2개의 메틸그룹으로 수식한 디메틸-히스티딜 (N-dimethyl-histidyl), N-말단 아미노기를 하이드록실 그룹으로 치환한 베타-히드록시 이미다조프로피오닐 (beta-hydroxyimidazopropionyl), N-말단 아미노기를 카르복실 그룹으로 치환한 베타-카르복시 이미다조프로피오닐 (beta-carboxy imidazopropionyl) 또는 티로신으로 치환할 수 있다. 또한, GLP-1 수용체와 결합하는 부위를 소수성 결합과 이온 결합을 강화시키는 아미노산으로 치환시키거나 또는 이들을 조합할 수 있다. 또한 , 옥신토모듈린 서열의 일부 서열을 GLP-1의 아미노산 서열 또는 Exendin-4의 아미노산 서열로 치환하여 GLP-1 수용체의 활성을 높일 수 있다.

또한, 옥신토모듈린 서열의 일부 서열을 알파 헬릭스를 강화시키는 서열로 치환시킬 수 있다. 바람직하게는 상기 일반식 1의 아미노산 서열의 10, 14, 16, 20, 24 및 28번 아미노산이 알파 헬릭스에 도움을 주는 것으로 알려진 Tyr(4-Me), Phe, Phe(4-Me), Phe(4-Cl), Phe(4-CN), Phe(4-NO2), Phe(4-NH2), Phg, Pal, Nal, Ala(2-thienyl) 또는 Ala(benzothienyl)로 구성되는 아미노산 혹은 아미노산 유도체로 치환될 수 있으며, 삽입될 수 있는 알파 헬릭스에 도움을 주는 아미노산 혹은 아미노산 유도체의 종류 및 개수는 제한되지 않는다. 또한, 바람직하게는 10과 14번, 12와 16번, 16과 20번, 20과 24번 및 24와 28번은 각각 링을 형성할 수 있는 글루탐산 또는 리신으로 치환하여 링을 형성할 수 있으며, 삽입되는 링의 개수 역시 제한되지 않고, 가장 바람직하게는 하기의 일반식 2 내지 6으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 펩티드일 수 있다.

구체적인 일 양태에서, 본 발명의 펩티드는 옥신토모듈린의 아미노산 서열에 엑센딘 혹은 GLP-1의 서열로 치환한 하기 일반식 2의 아미노산을 포함하는 옥신토모듈린 유도체이다.

R1-A-R3(일반식 2)

다른 구체적인 일 양태에서, 본 발명의 펩티드는 옥신토모듈린의 아미노산 서열 일부와 엑센딘 또는 GLP-1의 서열 일부를 적당한 아미노산 링커로 연결한 하기 일반식 3의 아미노산을 포함하는 옥신토모듈린 유도체이다.

R1-B-C-R4(일반식 3)

다른 구체적인 일 양태에서, 본 발명의 펩티드는 옥신토모듈린의 아미노산 서열의 일부를 GLP-1 수용체와의 결합력을 높이는 아미노산으로 치환, 예컨대 26번째 Leu을 GLP-1 수용체와 소수성 결합을 하는 바 소수성을 증가시키는 아미노산인 Ile 혹은 Val으로 치환된 하기 일반식 4를 포함하는 옥신토모듈린 유도체에 관한 것이다.

R1-SQGTFTSDYSKYLD-D1-D2-D3-D4-D5-LFVQW-D6-D7-N-D8-R3(일반식 4)

다른 구체적인 일 양태에서, 본 발명의 펩티드는 고유 옥신토모듈린의 GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체의 활성을 높이기 위해 아미노산 서열 일부를 삭제하거나 아미노산 일부를 삽입하거나 아미노산 일부를 다른 아미노산으로 치환한 하기 일반식 5를 포함하는 옥신토모듈린 유도체에 관한 것이다.

R1-E1-QGTFTSDYSKYLD-E2-E3-RA-E4-E5-FV-E6-WLMNT-E7-R5(일반식 5)

상기 일반식 2 내지 5에 있어서,

R1은 상기 일반식 1에서 설명된 구성과 동일하고;

A는 SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT(서열번호 38), SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNT(서열번호 39), SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNT(서열번호 40), GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNG(서열번호 41), GQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLKNG(서열번호 42), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEWAA(서열번호 43) 및 SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNG(서열번호 44)로 구성되는 군으로부터 선택되고;

B는 SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT(서열번호 38), SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNT(서열번호 39), SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNT(서열번호 40), GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNG(서열번호 41), GQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLKNG(서열번호 42), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEWAA(서열번호 43), SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNG(서열번호 44), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEW(서열번호 45), 및 SQGTFTSDYSRYLD(서열번호 46)로 구성되는 군으로부터 선택되며;

C는 알라닌, 글리신 및 세린의 조합으로 구성된 2 내지 10개의 아미노산을 가지는 펩타이드이고;

D1은 세린, 글루탐산 또는 아르기닌이며;

D2는 아르기닌, 글루탐산 또는 세린이고;

D3은 아르기닌, 알라닌 또는 발린이며;

D4는 아르기닌, 발린 또는 세린이고;

D5는 글루타민, 아르기닌 또는 리신이며;

D6은 이소류신, 발린 또는 세린이고;

D7은 메티오닌, 아르기닌 또는 글루타민이며;

D8은 트레오닌, 글리신 또는 알라닌이고;

E1은 세린, Aib, Sar, d-알라닌 또는 d-세린이며;

E2는 세린 또는 글루탐산이고;

E3은 아르기닌 또는 리신이며;

E4는 글루타민 또는 리신이고;

E5는 아스파르트산 또는 글루탐산이며;

E6는 글루타민, 시스테인 또는 리신이고;

E7은 시스테인, 리신 또는 결실된 서열이며;

R3은 KRNRNNIA(서열번호 32), GPSSGAPPPS(서열번호 33) 또는 GPSSGAPPPSK(서열번호 34)이며;

R4는 HSQGTFTSDYSKYLD(서열번호 35), HSQGTFTSDYSRYLDK(서열번호 36) 또는 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK(서열번호 37)이고; 및,

R5는 KRNRNNIA(서열번호 32), GPSSGAPPPS(서열번호 33), GPSSGAPPPSK(서열번호 34) 또는 결실된 서열이다(단, 상기 일반식 2 내지 5의 아미노산 서열이 서열번호 1과 동일한 경우는 제외한다).

바람직하게는, 본 발명의 신규 펩타이드는 하기 일반식 6일 수 있다.

R1-X1-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-R2(일반식 6)

상기 일반식 6에 있어서,

R1은 히스티딘, 데스아미노-히스티딜 (desamino-histidyl), 4-이미다조아세틸(4-imidazoacetyl) 또는 티로신이며;

X1은 Aib(aminoisobutyric acid), 글리신 또는 세린이고;

X2는 글루탐산 또는 글루타민이며;

X3은 류신 또는 티로신이고;

X4는 세린 또는 알라닌이며;

X5는 리신 또는 아르기닌이며;

X6는 글루타민 또는 티로신이고;

X7은 류신 또는 메티오닌이며;

X8은 아스파르트산 또는 글루탐산이고;

X9은 글루탐산, 알파-메틸-글루탐산 또는 결실된 서열이며;

X10는 글루타민, 글루탐산, 리신, 아르기닌 또는 결실된 서열이고;

X11은 알라닌, 아르기닌 또는 결실된 서열이며;

X12은 알라닌, 발린 또는 결실된 서열이고;

X14은 아스파르트산, 글루탐산, 류신 또는 결실된 서열이고;

X15는 페닐알라닌 또는 결실된 서열이며;

X16는 이소류신, 발린 또는 결실된 서열이며;

X17는 알라닌, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 알파-메틸-글루탐산 또는 결실된 서열이고;

X18는 트립토판 또는 결실된 서열이며;

X19은 알라닌, 이소류신, 류신, 발린 또는 결실된 서열이며;

X20는 알라닌, 리신, 메티오닌,아르기닌 또는 결실된 서열이고;

X21은 아스파라긴 또는 결실된 서열이며;

X22은 트레오닌 또는 결실된 서열이며;

X23는 시스테인, 리신 또는 결실된 서열이고;

X24은 글리신으로 구성된 2 내지 10개의 아미노산을 가지는 펩타이드 또는 결실된 서열이며; 및,

R2는 KRNRNNIA(서열번호 32), GPSSGAPPPS(서열번호 33), GPSSGAPPPSK(서열번호 34), HSQGTFTSDYSKYLD(서열번호 35), HSQGTFTSDYSRYLDK(서열번호 36), HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK(서열번호 37) 또는 결실된 서열이다(단, 상기 일반식 6의 아미노산 서열이 서열번호 1과 동일한 경우는 제외한다).

보다 바람직하게는 본 발명의 펩티드는 서열번호 1 내지 31의 펩티드로 구성된 그룹으로부터 선택된 것일 수 있다. 보다 더 바람직하게는 실시예 2-1의 표 1에 기재된 옥신토모듈린 유도체일 수 있다.

또한, 옥신토모둘린은 GLP-1과 글루카곤 두 개의 펩타이드 활성을 가지고 있으며 GLP-1은 인슐린 분비에 의한 혈당 강하효력이 있으나 글루카곤은 혈당증가 효력이 있으며, GLP-1은 음식물섭취억제와 위배출지연, 글루카곤은 지방분해 및 에너지 대사량 증가에 의한 체중감소 효력 등 서로 다른 생물학적 효능이 있어 하나의 펩타이드에 상기 두 펩타이드가 존재할 경우 어느 한 쪽의 효력이 클 경우 원치 않는 효력, 예를 들어 글루카곤의 효력이 GLP-1의 효력보다 클 경우 혈당이 올라갈 수 있으며, GLP-1의 효력이 클 경우 메스꺼음과 구토와 같은 부작용이 클 수도 있다. 따라서 본 발명의 옥신토모듈린 유도체는 무조건 적인 활성의 증가을 위한 유도체만을 개시하고 있지 않으며, 예를 들어 옥신토모듈린의 첫 번째와 11번째 아미노산은 글루카곤 활성을 낮추는 것으로 알려져 있어 글루카곤과 GLP-1의 활성비를 조절할 때 상기 아미노산을 변경할 수 있다.

본 발명자들은 In vitro 실험을 통하여 본 발명의 펩티드가 옥신토모듈린에 비해 우월한 GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체 활성을 나타냄을 확인하였으므로, 본 발명의 펩티드가 GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체를 활성화시켜서 종래의 옥신토모듈린보다도 우수한 비만 치료효과를 나타낼 것으로 예상된다. 또한, in vivo 음식물 섭취 억제 효과를 확인해 본 결과, 기존의 옥신토모듈린 보다 음식물 억제 효과가 뛰어난 것으로 확인되었다 (도 1).

본 발명의 옥신토모듈린 유도체들의 치료 효과를 높이기 위해 사용되고 있는 PEG, 당쇄 등을 비롯한 고분자의 수식이나 알부민, 트랜스페린, 지방산, 면역글로불린등과의 융합등 통상의 기술을 이용하여 옥신토모듈린 유도체들을 변이시킬 경우 고유 옥신토모듈린 보다 우월한 치료학적 효과가 나타나리라는 것은 당업자에게 있어 주지의 사실로서 상기 옥신토모듈린 유도체의 변이체들도 본 발명의 범위에 포함된다.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.

본 발명에서 폴리뉴클레오티드에 대해 사용된 용어 "상동성"이란 야생형 (wild type) 아미노산 서열 및 야생형 핵산 서열과의 유사한 정도를 나타내기 위한 것으로서, 상기 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열과 75% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상 동일할 수 있는 유전자 서열을 포함한다. 이러한 상동성의 비교는 육안으로나 구입이 용이한 비교 프로그램을 이용하여 수행한다. 시판되는 컴퓨터 프로그램은 2개 이상의 서열간의 상동성을 백분율 (%)로 계산할 수 있다. 상동성(%)은 인접한 서열에 대해 계산될 수 있다. 상기 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 벡터에 삽입하여 이를 발현시킴으로써 상기 펩타이드를 다량으로 확보할 수 있다.

다른 실시양태로서, 본 발명은 상기 펩티드를 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서 용어, "예방"은 상기 펩티드 또는 조성물의 투여로 비만의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하며, "치료"는 상기 펩티드 또는 조성물의 투여로 비만의 증세가 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 상기 조성물의 투여 경로는 특별히 이에 제한되지 않으나, 상기 조성물이 생체내 표적에 도달할 수 있는 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있으며, 예를 들어 복강 내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장 내 투여 등이 될 수 있다. 그러나 경구 투여 시, 펩타이드는 소화가 되기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 용어, "비만"은 체내에 지방조직이 과다한 상태로, 신체비만지수(체중(kg)을 신장(m)의 제곱으로 나눈 값)가 25 이상이면 비만으로 정의된다. 비만은 오랜 기간에 걸쳐 에너지 소비량에 비해 영양소를 과다하게 섭취할 경우 에너지 불균형에 의해 유발되는 것이 통상적이다. 비만은 신체 전체에 영향을 미치는 대사질환으로 당뇨병 및 고지혈증에 걸릴 가능성이 높아지고, 성기능 장애, 관절염, 심혈관계 질환의 발병 위험이 커지며 일부의 경우 암의 발생과도 연관이 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 본 발명에서 용어, "약학적으로 허용"이란 치료효과를 나타낼 수 있을 정도의 충분한 양과 부작용을 일으키지 않는 것을 의미하며, 질환의 종류, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 투여 경로, 투여 방법, 투여횟수, 치료 기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물 등 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 유도체를 포함한 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다. 상기 담체는 담체는 특별히 이에 제한되지는 않으나, 경구투여시에는 결합제, 활택제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있고, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장화제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서, 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 형태로 제조할 수 있다. 기타, 용액, 현탁액, 정제, 환약, 캡슐, 서방형 제제 등으로 제형화 할 수 있다.

한편, 제제화에 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 약제학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다.

또한, 상기 조성물은 약학적 분야에서 통상의 방법에 따라 환자의 신체 내 투여에 적합한 단위투여형의 제제, 바람직하게는 펩타이드 의약품의 투여에 유용한 제제 형태로 제형화시켜 당업계에서 통상적으로 사용하는 투여 방법을 이용하여 경구, 또는 피부, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 수막강내, 심실내, 폐, 경피, 피하, 복내내, 비강내, 소화관내, 국소, 설하, 질내 또는 직장 경로를 포함하는 비경구투여 경로에 의하여 투여될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.

또한, 상기 펩타이드는 생리식염수 또는 유기용매와 같이 약제로 허용된 여러 전달체(carrier)와 혼합하여 사용될 수 있고, 안정성이나 흡수성을 증가시키기 위하여 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란과 같은 카보하이드레이트, 아스코르브 산 (ascorbic acid) 또는 글루타치온과 같은 항산화제 (antioxidants), 킬레이팅 물질 (chelating agents), 저분자 단백질 또는 다른 안정화제 (stabilizers)들이 약제로 사용될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물의 투여량과 횟수는 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별 및 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께, 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다.

본 발명의 조성물의 총 유효량은 단일 투여량 (single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량 (multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법 (fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 바람직하게 본 발명의 펩타이드의 바람직한 전체 용량은 1일당 환자 체중 1 ㎏ 당 약 0.0001 ㎍ 내지 500 mg일 수 있다. 그러나 상기 펩타이드의 용량은 약학적 조성물의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 본 발명의 조성물의 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 생체 내 지속성 및 역가가 우수하므로, 본 발명의 약제학적 제제의 투여 횟수 및 빈도를 현저하게 감소시킬 수 있다.

아울러, 상기 약제학적 조성물은 단독 또는 다른 비만 예방 또는 치료효과를 나타내는 약학적 제제와 병용하여 투여될 수 있다. 상기 비만 예방 또는 치료효과를 나타내는 약학적 제제는 특별히 이에 제한되지 않으나, GLP-1 수용체 아고니스트, 렙틴(Leptin) 수용체 아고니스트, DPP-IV 저해제, Y5 수용체 안타고니스트, MCH (Melanin-concentrating hormone) 수용체 안타고니스트, Y2/3 수용체 아고니스트, MC3/4 수용체 아고니스트, 위/췌장 리파아제(gastric/pancreatic lipase) 저해제, 5HT2c 아고니스트, β3A 수용체 아고니스트, 아밀린(Amylin) 수용체 아고니스트, 그랠린 (Ghrelin) 안타고니스트, 및/또는 그랠린 수용체 안타고니스트 등이 될 수 있다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 펩티드 또는 이를 포함하는 약학적 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 비만의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

본 발명에서 상기 개체는 비만이 의심되는 개체로서, 상기 비만 의심 개체는 비만이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 쥐, 가축 등을 포함하는 포유 동물을 의미하나, 본 발명의 펩티드로 치료 가능한 개체는 제한 없이 포함된다. 본 발명의 펩티드를 포함하는 약학적 조성물을 비만 의심 개체에 투여함으로써, 개체를 효율적으로 치료할 수 있다. 상기 비만에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명의 치료 방법은 펩티드를 포함하는 약학적 조성물을 약학적 유효량으로 투여하는 것을 포함할 수 있다. 적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있으며, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 본 발명의 목적상, 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 경우에 따라 다른 제제가 사용되는지의 여부를 비롯한 구체적 조성물, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 구체적 조성물과 함께 사용되거나 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 비만의 예방 또는 치료용 의약의 제조에 있어서, 상기 펩티드의 용도를 제공한다.

본 발명의 신규한 펩티드는 부작용을 나타내지 않으면서도, 천연형 옥신토모듈린에서 나타나지 않는 음식물 섭취량의 감소, 위 배출 억제 및 지방분해 촉진 효과를 나타내고, 고유의 옥신토모듈린에 비하여 우월한 수용체 활성화 효과를 나타내므로, 안전하면서도 효과적인 비만치료에 널리 활용될 수 있을 것이다.

도 1은 옥신토모듈린 또는 옥신토모듈린 유도체의 투여량에 따른 사료 섭취량의 변화를 나타내는 그래프이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: in vitro 활성용 세포주 생산

실시예 1-1: GLP -1에 대해 cAMP 반응을 보이는 세포주의 생산

인간 GLP-1 수용체 유전자의 cDNA(OriGene Technologies, Inc. USA)에서 ORF (open reading frame)에 해당하는 부분을 주형으로 하고, HindIII 절단부위와 EcoRI 절단부위를 각각 포함하는 하기의 정방향 및 역방향 프라이머를 이용한 PCR을 수행하여, PCR 산물을 수득하였다.

정방향 프라이머: 5'-CCCGGCCCCCGCGGCCGCTATTCGAAATAC-3'(서열번호 47)

역방향 프라이머: 5'-GAACGGTCCGGAGGACGTCGACTCTTAAGATAG-3'(서열번호 48)

상기 PCR 산물을 공지된 동물세포 발현벡터인 x0GC/dhfr에 클로닝하여 제조합 벡터 x0GC/GLP1R를 제조하였다.

상기 재조합 벡터 x0GC/GLP1R를 DMEM/F12 (10% FBS) 배지에서 배양한 CHO DG44 세포주에 리포펙타민(Lipofectamine, invitrogene, USA)을 이용하여 형질전환하고, 1mg/mL G418 및 10 nM 메토트락세이트(methotraxate)를 포함하는 선별배지에서 선별 배양하였다. 이로부터 limit dilution법으로 단일 클론 세포주를 선별하고, 이 중에서 GLP-1에 대해 우수한 농도의존적 cAMP 반응을 보이는 세포주를 최종적으로 선별하였다.

실시예 1-2: 글루카곤에 대해 cAMP 반응을 보이는 세포주의 생산

인간 글루카곤 수용체 유전자의 cDNA(OriGene Technologies, Inc. USA)에서 ORF에 해당하는 부분을 주형으로 하고, EcoRI 절단부위와 XhoI 절단부위를 각각 포함하는 하기의 정방향 및 역방향 프라이머를 이용한 PCR을 수행하여, PCR 산물을 수득하였다.

정방향 프라이머: 5'-CAGCGACACCGACCGTCCCCCCGTACTTAAGGCC-3'(서열번호 49)

역방향 프라이머: 5'-CTAACCGACTCTCGGGGAAGACTGAGCTCGCC-3'(서열번호 50)

상기 PCR 산물을 공지된 동물세포 발현벡터인 x0GC/dhfr에 클로닝하여 제조합 벡터 x0GC/GCGR을 제조하였다.

상기 제조한 재조합 벡터 x0GC/GCGR를 DMEM/F12 (10% FBS) 배지에서 배양한 CHO DG44 세포주에 리포펙타민을 이용하여 형질전환하고, 1mg/mL G418 및 10 nM 메토트락세이트를 포함하는 선별배지에서 선별 배양하였다. 이로부터 limit dilution법으로 단일 클론 세포주를 선별하고, 이 중에서 글루카곤에 대해 우수한 농도의존적 cAMP 반응을 보이는 세포주를 최종적으로 선별하였다.

실시예 2. 옥신토모듈린 유도체의 in vitro 활성 확인

실시예 2-1: 옥신토모듈린 유도체의 합성

옥신토모듈린 유도체들의 in vitro 활성을 측정하기 위하여 하기의 아미노산 서열을 가지는 옥신토모듈린 유도체들을 합성하였다(표 1).

옥신토모듈린 및 옥신토모듈린 유도체

서열번호	아미노산 서열
서열번호 1	HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA
서열번호 2	CA-SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNTKRNRNNIA
서열번호 3	CA-SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNTGPSSGAPPPS
서열번호 4	CA-GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS
서열번호 5	CA-GQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS
서열번호 6	CA-GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEWAAHSQGTFTSDYSKYLD
서열번호 7	CA-SQGTFTSDYSRYLDEEAVRLFIEWLMNTK
서열번호 8	CA-SQGTFTSDLSRQLEEEAVRLFIEWLMNK
서열번호 9	CA-GQGTFTSDYSRYLDEEAVXLFIEWLMNTKRNRNNIA
서열번호 10	CA-SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNGGPSSGAPPPSK
서열번호 11	CA-GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEWAAHSQGTFTSDYSRYLDK
서열번호 12	CA-SQGTFTSDYSRYLDGGGHGEGTFTSDLSKQMEEEAVK
서열번호 13	CA-SQGTFTSDYSRYLDXEAVXLFIEWLMNTK
서열번호 14	CA-GQGTFTSDYSRYLDEEAVXLFIXWLMNTKRNRNNIA
서열번호 15	CA-GQGTFTSDYSRYLDEEAVRLFIXWLMNTKRNRNNIA
서열번호 16	CA-SQGTFTSDLSRQLEGGGHSQGTFTSDLSRQLEK
서열번호 17	CA-SQGTFTSDYSRYLDEEAVRLFIEWIRNTKRNRNNIA
서열번호 18	CA-SQGTFTSDYSRYLDEEAVRLFIEWIRNGGPSSGAPPPSK
서열번호 19	CA-SQGTFTSDYSRYLD E EAV K LFIEWIRNTKRNRNNIA
서열번호 20	CA-SQGTFTSDYSRYLD E EAV K LFIEWIRNGGPSSGAPPPSK
서열번호 21	CA-SQGTFTSDYSRQLEEEAVRLFIEWVRNTKRNRNNIA
서열번호 22	DA-SQGTFTSDYSKYLD E KRA K EFVQWLMNTK
서열번호 23	HAibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVCWLMNT
서열번호 24	HAibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTC
서열번호 25	HAibQGTFTSDYSKYLD E KRA K EFVQWLMNTC
서열번호 26	HAibQGTFTSDYS K YLD E KRAKEFVQWLMNTC
서열번호 27	HAibQGTFTSDYSKYLD E QAA K EFICWLMNT
서열번호 28	HAibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNT
서열번호 29	CA-AibQGTFTSDYSKYLD E KRA K EFVQWLMNTC
서열번호 30	HAibQGTFTSDYAKYLD E KRA K EFVQWLMNTC
서열번호 31	YAibQGTFTSDYSKYLD E KRA K EFVQWLMNTC

상기 표 1에서 볼드체 및 밑줄로 표시된 아미노산들은 링형성을 의미하며 X로 표기된 아미노산은 비천연형 아미노산인 알파-메틸-글루탐산을 의미한다. 또한 CA는 4-이미다조아세틸(4-imidazoacetyl)을 DA는 데스아미노-히스티딜 (desamino-histidyl)을 의미한다.

실시예 2-2: 옥신토모듈린 유도체의 in vitro 활성 측정

상기 실시예 2-1에서 합성된 옥신토모듈린 유도체의 항 비만 효력을 측정하기 위해 상기 실시예 1-1 및 1-2에서 제조한 세포주를 이용하여, in vitro에서 세포 활성을 측정하는 방법을 이용하였다.

상기 각 세포주는 CHO (chinese hamster ovary)에 인간 GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체 유전자를 각각 발현하도록 형질전환된 것으로서, GLP-1과 글루카곤의 활성을 측정하기에 적합하다. 따라서, 각 옥신토모듈린 유도체의 활성을 각각의 형질전환세포주를 이용하여 측정하였다.

구체적으로, 상기 각 세포주를 1주일에 2 또는 3회 계대배양하였고, 96웰 플레이트에 각 웰당 1 X 105개의 계대배양된 세포주를 분주하여 24시간 동안 배양하였다.

상기 배양된 세포를 KRB 완충액으로 세척하고, 1mM IBMX를 포함하는 KRB 완충액 40㎖에 현탁시킨 다음, 5분간 상온에 정치하였다. 옥신토모듈린(서열번호 1) 또는 옥신토모듈린 유도체들(대표적으로 서열번호 2-6, 8, 10-13, 17, 18, 23-25, 27-30 및 31)을 1000 nM부터 5배씩 0.02 nM까지 연속적으로 희석하고, 이를 40㎖씩 상기 세포에 첨가한 다음, 1시간 동안 37℃의 온도조건으로 CO2 배양기에서 배양하였다. 그런 다음, 세포용해완충액(cell lysis buffer)을 20㎖씩 가하여 세포를 용해시키고, 상기 세포용해물을 cAMP assay kit(Molecular Device, USA)에 적용하여 cAMP 농도를 측정하고, 이로부터 EC50값을 산출한 후, 상호 비교하였다. EC50 값은 하기 표 2에 나타내었다.

옥신토모듈린 및 옥신토모듈린 유도체의 GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체 in vitro 활성비교

서열번호	EC ₅₀ ( nM )
서열번호	CHO / GLP -1R	CHO / GCGR
서열번호 1	50 - 210	10 - 43
서열번호 2	51.8	12.8
서열번호 3	>1,000	637.7
서열번호 4	5.5	>1000
서열번호 5	5.9	>1000
서열번호 6	500.1	>1000
서열번호 8	419.6	>1000
서열번호 10	>1,000	>1000
서열번호 11	>1,000	>1000
서열번호 12	>1,000	>1,000
서열번호 13	>1,000	>1000
서열번호 17	97.9	>1000
서열번호 18	96.3	>1000
서열번호 23	2.46	5.8
서열번호 24	1.43	6.95
서열번호 25	1.9	1.3
서열번호 27	2.8-5.5	3.1-5.6
서열번호 28	3.1	0.3
서열번호 29	14.25	17.3
서열번호 30	2.20	80.2
서열번호 31	12.5	1.0

상기 표 2에서 보듯이, 서열번호 1인 고유 옥신토모듈린의 in vitro 활성에 비해 우수한 GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체의 각 활성 및 서로 다른 활성비를 보인 옥신토모듈린 유도체들이 확인되었다.

옥신토모듈린은 GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체의 활성화를 통해 식욕억제 및 포만감 증진, 지방세포 분해 촉진을 통해 비만치료효과가 있음이 알려져 있다. 본 발명에 따른 옥신토모듈린 유도체는 야생형 옥신토모듈린에 비해 GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체에 대해 높은 in vitro 활성을 가지고 있는 바, 기존 옥신토모듈린에 비해 높은 효력의 비만치료제로 사용할 수 있다.

실시예 3. 옥신토모듈린 유도체의 in vivo 활성 확인

옥신토모듈린 유도체의 in vivo 비만 치료 활성을 측정하기 위하여 ob/ob mouse에서 대조약물로 고유 옥신토모듈린을 사용하여 옥신토모듈린 유도체 투여에 따른 사료 섭취량 변화를 측정하였다.

구체적으로, 비만 당뇨제제 효능 시험 시 일반적으로 가장 많이 사용되는 모델 동물인 ob/ob 마우스를 16 시간 동안 절식 시킨 후, 1 또는 10mg/kg의 옥신토모듈린, 또는 0.02, 0.1, 1 또는 10mg/kg의 서열번호 2의 옥신토모듈린 유도체를 각각 투여하고, 2 시간 동안의 사료 섭취량을 측정하였다(도 1). 도 1은 옥신토모듈린 또는 옥신토모듈린 유도체의 투여량에 따른 사료 섭취량의 변화를 나타내는 그래프이다. 도 1에서 보듯이, 1mg/kg의 옥신토모듈린 유도체를 투여한 경우, 10mg/kg의 옥신토모듈린을 투여한 경우보다도, 우수한 사료 섭취 억제 효과를 나타냄을 확인하였다.

즉, 본 발명의 옥신토모듈린 유도체는 기존의 야생형 옥신토모듈린에 비해 항비만 효과가 현저히 높으며, 적은 양을 투여해도 비만 치료 효과가 우수한 바, 기존에 항비만 효력이 낮고 하루에 3회 고용량을 투여해야 했던 야생형 옥신토모듈린의 문제점이 개선된 것임을 알 수 있다.

<110> HANMI SCIENCE CO., LTD. <120> Novel oxyntomodulin derivatives and Pharmaceutical Composition for treating obesity comprising the same <130> PA120525/KR <150> KR 10-2011-0056472 <151> 2011-06-10 <160> 50 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 37 <212> PRT <213> oxyntomodulin <400> 1 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 2 <211> 37 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 2 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 3 <211> 39 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 3 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Ala Trp Leu Lys Asn Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 4 <211> 39 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 4 His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 5 <211> 39 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 5 His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 6 <211> 42 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 6 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Ala Ala His Ser Gln Gly Thr 20 25 30 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp 35 40 <210> 7 <211> 30 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 7 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Thr Lys 20 25 30 <210> 8 <211> 29 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 8 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Leu Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Lys 20 25 <210> 9 <211> 37 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <220> <221> VARIANT <222> (20) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 9 His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Xaa Leu Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 10 <211> 40 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 10 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 11 <211> 43 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 11 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Ala Ala His Ser Gln Gly Thr 20 25 30 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Lys 35 40 <210> 12 <211> 38 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 12 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Gly 1 5 10 15 Gly Gly His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met 20 25 30 Glu Glu Glu Ala Val Lys 35 <210> 13 <211> 30 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <220> <221> VARIANT <222> (16) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <220> <221> VARIANT <222> (20) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 13 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Glu Ala Val Xaa Leu Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Thr Lys 20 25 30 <210> 14 <211> 37 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <220> <221> VARIANT <222> (20) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <220> <221> VARIANT <222> (24) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 14 His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Xaa Leu Phe Ile Xaa Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 15 <211> 37 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <220> <221> VARIANT <222> (24) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 15 His Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Xaa Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 16 <211> 34 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 16 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gly Gly His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Leu 20 25 30 Glu Lys <210> 17 <211> 37 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 17 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Ile Arg Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 18 <211> 40 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 18 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Ile Arg Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 19 <211> 37 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 19 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Lys Leu Phe Ile Glu Trp Ile Arg Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 20 <211> 40 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 20 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Lys Leu Phe Ile Glu Trp Ile Arg Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 21 <211> 37 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <400> 21 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Gln Leu Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Val Arg Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 22 <211> 30 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, desamino-histidyl. <400> 22 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys 20 25 30 <210> 23 <211> 29 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 23 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 24 <211> 30 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 24 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys 20 25 30 <210> 25 <211> 30 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 25 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys 20 25 30 <210> 26 <211> 30 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 26 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys 20 25 30 <210> 27 <211> 29 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative' <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 27 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 28 <211> 29 <212> PRT <213> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 28 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 29 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (1) <223> This "H" refers a derivative of histidine, 4-imidazoacetyl. <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 29 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys 20 25 30 <210> 30 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 30 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ala Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys 20 25 30 <210> 31 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> oxyntomodulin derivative <220> <221> VARIANT <222> (2) <223> Xaa = aminoisobutyric acid <400> 31 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Cys 20 25 30 <210> 32 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group R2 <400> 32 Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala 1 5 <210> 33 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group R2 <400> 33 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 34 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group R2 <400> 34 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 1 5 10 <210> 35 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group R2 <400> 35 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 36 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group R2 <400> 36 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 <210> 37 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group R2 <400> 37 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Lys 20 <210> 38 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group A or B <400> 38 Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg 1 5 10 15 Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 39 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group A or B <400> 39 Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Glu 1 5 10 15 Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 40 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group A or B <400> 40 Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg 1 5 10 15 Arg Ala Gln Asp Phe Val Ala Trp Leu Lys Asn Thr 20 25 <210> 41 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group A or B <400> 41 Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Glu Glu Glu 1 5 10 15 Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly 20 25 <210> 42 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group A or B <400> 42 Gly Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Gln Met Glu Glu Glu 1 5 10 15 Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly 20 25 <210> 43 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group A or B <400> 43 Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Met Glu Glu Glu 1 5 10 15 Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Ala Ala 20 25 <210> 44 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group A or B <400> 44 Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Gln Met Glu Glu Glu 1 5 10 15 Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Gly 20 25 <210> 45 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group B <400> 45 Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Arg Gln Met Glu Glu Glu 1 5 10 15 Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp 20 <210> 46 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> group B <400> 46 Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp 1 5 10 <210> 47 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 47 cccggccccc gcggccgcta ttcgaaatac 30 <210> 48 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 48 gaacggtccg gaggacgtcg actcttaaga tag 33 <210> 49 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 49 cagcgacacc gaccgtcccc ccgtacttaa ggcc 34 <210> 50 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 50 ctaaccgact ctcggggaag actgagctcg cc 32

Claims

하기 일반식 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드:
R1-X1-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-R2(일반식 1)
상기 식에서,
R1은 히스티딘이며;
X1은 Aib(aminoisobutyric acid)이고;
X2는 글루탐산 또는 글루타민이며;
X3은 류신 또는 티로신이고;
X4는 세린 또는 알라닌이며;
X5는 리신 또는 아르기닌이며;
X6는 글루타민 또는 티로신이고;
X7은 류신 또는 메티오닌이며;
X8은 아스파르트산 또는 글루탐산이고;
X9은 글루탐산, 세린, 알파-메틸-글루탐산 또는 결실된 서열이며;
X10는 글루타민, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 세린 또는 결실된 서열이고;
X11은 알라닌, 아르기닌, 발린 또는 결실된 서열이며;
X12은 알라닌, 아르기닌, 세린, 발린 또는 결실된 서열이고;
X13는 리신, 글루타민, 아르기닌, 알파-메틸-글루탐산 또는 결실된 서열이며;
X14은 아스파르트산, 글루탐산, 류신 또는 결실된 서열이고;
X15는 페닐알라닌 또는 결실된 서열이며;
X16는 이소류신, 발린 또는 결실된 서열이며;
X17는 알라닌, 시스테인, 글루탐산, 리신, 글루타민, 알파-메틸-글루탐산 또는 결실된 서열이고;
X18는 트립토판 또는 결실된 서열이며;
X19은 알라닌, 이소류신, 류신, 세린, 발린 또는 결실된 서열이며;
X20는 알라닌, 리신, 메티오닌, 글루타민, 아르기닌 또는 결실된 서열이고;
X21은 아스파라긴 또는 결실된 서열이며;
X22은 알라닌, 글리신, 트레오닌 또는 결실된 서열이며;
X23는 시스테인, 리신 또는 결실된 서열이고;
X24은 알라닌, 글리신 및 세린의 조합으로 구성된 2 내지 10개의 아미노산을 가지는 펩타이드 또는 결실된 서열이며; 및,
R2는 KRNRNNIA(서열번호 32), GPSSGAPPPS(서열번호 33), GPSSGAPPPSK(서열번호 34), HSQGTFTSDYSKYLD(서열번호 35), HSQGTFTSDYSRYLDK(서열번호 36), HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK(서열번호 37) 또는 결실된 서열임.
제1항에 있어서, 상기 펩티드는 GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체를 활성화시킬 수 있는 옥신토모듈린 유도체인 것인 펩티드.
제1항에 있어서, 상기 펩티드는 항비만 효과가 있는 것인 펩티드.
제1항에 있어서, 상기 일반식 1의 아미노산 서열 중 X19는 류신이고, X20은 메티오닌이고, X21은 아스파라긴이고, X22는 트레오닌 것인 펩티드.
제1항에 있어서, 상기 일반식 1의 아미노산 서열의 R1을 기준으로 10과 14번, 12와 16번, 16과 20번, 20과 24번 및 24와 28번 아미노산 쌍 중 어느 하나 이상의 아미노산 쌍은 각각 링을 형성할 수 있는 글루탐산 또는 리신으로 치환되는 것인 펩티드.
제5항에 있어서, 상기 일반식 1의 아미노산 서열의 R1을 기준으로 10과 14번, 12와 16번, 16과 20번, 20과 24번 및 24와 28번 아미노산 쌍 중 어느 하나 이상의 아미노산 쌍이 글루탐산 또는 리신으로 치환되어 링을 형성한 것인 펩티드.
제1항에 있어서, 상기 펩티드는 서열번호 23 내지 28 및 30으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것인 펩티드.
제1항에 있어서, 상기 일반식 1의 아미노산 서열 중 X24와 R2가 결실된 서열인 것인 펩티드.
제1항에 있어서, 상기 일반식 1의 아미노산 서열 X2가 글루타민인 것인 펩티드.
삭제
제1항의 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
제1항의 펩티드를 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제12항에 있어서, 약제학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 것인 약학적 조성물.
제12항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 단독 또는 다른 비만 예방 또는 치료효과를 나타내는 약학적 제제와 병용하여 투여되는 것인 약학적 조성물.
제14항에 있어서, 상기 비만 예방 또는 치료효과를 나타내는 약학적 제제는 GLP-1 수용체 아고니스트, 렙틴(Leptin) 수용체 아고니스트, DPP-IV 저해제, Y5 수용체 안타고니스트, MCH (Melanin-concentrating hormone) 수용체 안타고니스트, Y2/3 수용체 아고니스트, MC3/4 수용체 아고니스트, 위/췌장 리파아제(gastric/pancreatic lipase) 저해제, 5HT2c 아고니스트, β3A 수용체 아고니스트, 아밀린(Amylin) 수용체 아고니스트, 그랠린 (Ghrelin) 안타고니스트 및 그랠린 수용체 안타고니스트로 구성된 그룹으로 부터 선택되는 것인 약학적 조성물.