JPWO2019131978A1 - 細胞培養用足場材料、細胞培養用容器、細胞培養用繊維及び細胞の培養方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、適度な親水性と強度を備え、幹細胞の播種後の定着性が高く、高効率に細胞増殖が可能な幹細胞培養用足場材料及びそれを用いた幹細胞培養方法を提供することを目的とする。
(1)表面自由エネルギーの分散成分γdが24.5以上45.0未満であり、表面自由エネルギーの双極子成分γpが1.0以上20.0未満である幹細胞培養用足場材料。
(2)幹細胞培養用足場材料が合成樹脂を含む、(1)記載の幹細胞培養用足場材料。
(3)合成樹脂がポリビニルアセタール骨格、ポリ(メタ)アクリル酸エステル骨格の少なくともいずれか一方を含む(2)記載の幹細胞培養用足場材料。
(4)合成樹脂がポリビニルアセタール樹脂である(2)記載の幹細胞培養用足場材料。
(5)合成樹脂を含有する幹細胞培養用足場材料であって、合成樹脂がポリビニルアセタール樹脂を含み、ポリビニルアセタール樹脂のアセタール化度が60モル%よりも高い幹細胞培養用足場材料。
(6)ポリビニルアセタール樹脂は、イミン構造を有する構成単位、アミノ基を有する構成単位、及びアミド構造を有する構成単位からなる群より選択される少なくとも一種を有する、(4)または(5)の幹細胞培養用足場材料。
(7)ポリビニルアセタール樹脂は、イミン構造を有する構成単位、アミノ基を有する構成単位、及びアミド構造を有する構成単位を合計した含有量が、0.1モル%以上20モル%以下である、(6)記載の幹細胞培養用足場材。
(8)幹細胞が多能性幹細胞である(1)〜(7)のいずれか1項記載の幹細胞培養用足場材料。
(9)細胞の培養領域の少なくとも一部に(1)〜(8)のいずれか1項記載の幹細胞培養用足場材料からなる樹脂膜を備える幹細胞培養用容器。
(10)(1)〜(8)のいずれか1項記載の幹細胞培養用足場材料を備える幹細胞培養用繊維。
(11)(1)〜(8)のいずれか1項記載の足場材料を用いる幹細胞の培養方法。
(12)足場材料上に細胞塊を播種する工程を含む、(11)記載の幹細胞の培養方法。
なお、本明細書で用いられる用語の説明を行う。
「幹細胞」とは、自己複製能と分化能を有する細胞をいう。幹細胞のうち、自己複製能を有し、かつ、1つの細胞から、内胚葉、中胚葉、外胚葉の全ての細胞へ分化できるものを「多能性幹細胞」という。
多能性幹細胞としては、例えば、人工多能性幹細胞(induced pluripotent stem cell、以下「iPS細胞」という。)、胚性幹細胞(embryonic stem cells、以下「ES細胞」という。)、Muse細胞(multilinege differentiating stress enduring cells)、胚性がん細胞(embryonic germ cell)、胚性生殖幹細胞(embryonic germ cell)、mGS細胞(multipotent germ stem cell)等が挙げられる。
幹細胞のうち、自己複製能を有し、外胚葉系組織、内胚葉系組織、中胚葉系組織、生殖系組織のいずれかに属し、それが属している臓器の構成細胞種への限られた分化能を示すものを「組織幹細胞」および「組織前駆細胞」という。
組織幹細胞および組織前駆細胞としては、例えば、神経幹細胞、神経堤幹細胞、網膜幹細胞、角膜幹細胞、ケラチノサイト表皮幹細胞、メラノサイト幹細胞、乳腺幹細胞、肝幹細胞、腸幹細胞、気道幹細胞、造血幹細胞、間葉系幹細胞、心臓幹細胞、血管内皮前駆細胞、血管周皮細胞、骨格筋幹細胞、脂肪幹細胞、腎前駆細胞、精子幹細胞等が挙げられる。この様な幹細胞としては、例えば「もっとよくわかる!幹細胞と再生医療」(羊土社、長船健二著)に記載の幹細胞を挙げることができる。
本発明者らは上述の課題を解決するべく、幹細胞培養用足場材料の表面自由エネルギーを制御することで、上述の課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明の第一の態様は、表面自由エネルギーの分散成分γdと双極子成分γpが、ある一定の範囲にある幹細胞培養用足場材料に関する。
なお、本明細書における表面自由エネルギーの分散成分γd及び双極子成分γpは、Kaelble−Uy理論式を用いて測定することができる。
ここで、Kaelble−Uyの理論式は、式(1)で表されるように、トータル表面自由エネルギーγが分散成分γdと、双極子成分γpとの和からなるとの仮定に基づく。
上記純水の接触角は、足場材料に純水1μLを着滴させ、30秒後の液滴像を、接触角計(協和界面化学社製、DMo−701)を用いて撮影することで得ることができる。また、上記ジヨードメタンの接触角は、足場材料にジヨードメタン1μLを着滴させ、同様に30秒後の液滴像を撮影することで得ることができる。
図1は主な合成樹脂の表面自由エネルギーの分散成分γdに対する双極子成分γpの関係をまとめた図である。図2、図3はそれぞれ図1の一部拡大図である。
本発明の幹細胞培養用足場材料の表面自由エネルギーの分散成分γdは、24.5以上45.0未満である。上記分散成分γdは、28.0以上38.0以下がより好ましく、32.8以上36.0以下がさらに好ましい。
本発明の幹細胞培養用足場材料の表面自由エネルギーの双極子成分γpは、1.0以上20.0未満である。上記双極子成分γpは、1.0以上10.0以下がより好ましく、2.5以上5.0以下がさらに好ましい。
上記分散成分γdおよび上記双極子成分γpは、例えば、以下で述べる合成樹脂の骨格を適宜変更することにより制御することができる。
上記分散成分γdは、例えば、合成樹脂の骨格の中から、非極性官能基量を増やすことや環状構造を有する官能基を導入することで大きくすることができ、合成樹脂中のブチル基成分の量を減らすこと等により小さくすることができる。合成樹脂としては、ポリビニルアセタール骨格、ポリ(メタ)アクリル酸エステル骨格の少なくともいずれか一方を含むことが好ましい。
合成樹脂は、重合性モノマー(以下、単に「モノマー」ともいう)を重合(重縮合も含む)して得られるポリマー(以下、単に「ポリマー」ともいう)を主成分とするものをいう。上記ポリマーは一種または二種以上の重合性モノマーのコポリマーも含む。
具体的な上記ポリマーとしては、例えば、ポリオレフィン、ポリエーテル、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセタール、ポリエステル、ポリ(メタ)アクリル酸エステル、エポキシ樹脂、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタン、ポリカーボネート、セルロース、ポリペプチド等が挙げられる。これらのなかでも、幹細胞の定着性の観点から、ポリ(メタ)アクリル酸エステル、ポリビニルアセタールが好ましく、ポリビニルアセタールがより好ましい。
なお、これらのポリマーは、一種類のみを用いてもよく、二種類以上を組み合わせて用いてもよい。二種類以上のポリマーを組み合わせる場合は、二種類以上のポリマーを混合して用いてもよく、二種類以上のポリマーの骨格を化学結合させたポリマーとして用いてもよい。合成樹脂として、二種類以上のポリマーを組み合わせる場合には、ポリ(メタ)アクリル酸エステルと、ポリビニルアセタールとを組み合わせることが好ましい。
上記(メタ)アクリル酸エステルとしては特に限定されないが、(メタ)アクリル酸アルキルエステル、(メタ)アクリル酸環状アルキルエステル、(メタ)アクリル酸アリールエステル、(メタ)アクリルアミド類、(メタ)アクリル酸ポリエチレングリコール類、(メタ)アクリル酸ホスホリルコリン等が挙げられる。
なお、これらの(メタ)アクリル酸アルキルエステルは、特に制限はないが、炭素原子数1〜3のアルコキシ基、テトラヒドロフルフリル基等の種々の置換基で置換されていてもよい。例としては、メトキシエチルアクリレート、テトラヒドロフルフリルアクリレート等が挙げられる。
上記(メタ)アクリル酸環状アルキルエステルとしては、例えば、シクロヘキシル(メタ)アクリレート、イソボルニル(メタ)アクリレートなどが挙げられる。
上記(メタ)アクリル酸アリールエステルとしては、例えば、フェニル(メタ)アクリレート、ベンジル(メタ)アクリレート等が挙げられる。
上記アクリルアミド類としては、例えば、(メタ)アクリルアミド、N−イソプロピル(メタ)アクリルアミド、N−tert−ブチル(メタ)アクリルアミド、N,N’−ジメチル(メタ)アクリルアミド、(3−(メタ)アクリルアミドプロピル)トリメチルアンモニウムクロリド、4−(メタ)アクリロイルモルホリン、3−(メタ)アクリロイル−2−オキサゾリジノン、 N−[3−(ジメチルアミノ)プロピル](メタ)アクリルアミド、N−(2−ヒドロキシエチル)(メタ)アクリルアミド、N−メチロール(メタ)アクリルアミド、6−(メタ)アクリルアミドヘキサン酸等が挙げられる。
上記(メタ)アクリル酸ポリエチレングリコール類としては、例えば、メトキシ-ポリエチレングリコール(メタ)アクリレート、エトキシ-ポリエチレングリコール(メタ)アクリレート、ヒドロキシ-ポリエチレングリコール(メタ)アクリレート、メトキシ-ジエチレングリコール(メタ)アクリレート、エトキシ-ジエチレングリコール(メタ)アクリレート、ヒドロキシ-ジエチレングリコール(メタ)アクリレート、メトキシ-トリエチレングルコール(メタ)アクリレート、エトキシ-トリエチレングルコール(メタ)アクリレート、ヒドロキシ-トリエチレングルコール(メタ)アクリレート等が挙げられる。
上記(メタ)アクリル酸ホスホリルコリンとしては、例えば、2−(メタ)アクリロイルオキシエチルホスホリルコリン等が挙げられる。
(メタ)アクリル酸エステル以外のモノマーとしては、特に限定はなく、(メタ)アクリル酸、エチレン、ビニルエステル等が挙げられる。
上記(メタ)アクリル酸エステルは単独で用いてもよく、2種以上を併用してもよい。なお、本明細書において、上記(メタ)アクリル酸とは、アクリル酸及びメタクリル酸を総称するものであり、上記(メタ)アクリレートとは、アクリレート及びメタクリレートを総称するものとする。
なお、本発明の第一の態様は、以下で述べる第二の態様を組み合わせたものが、幹細胞の定着性を高める観点より好ましい。
本発明者らは、鋭意検討した結果、ポリビニルアセタール樹脂を含有する合成樹脂を用いることで、上述の課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明の第二の態様は、合成樹脂を含有する幹細胞培養用足場材料であって、合成樹脂がポリビニルアセタール樹脂を含み、ポリビニルアセタール樹脂のアセタール化度が60モル%よりも高い幹細胞培養用足場材料に関する。なお、本発明の幹細胞培養用足場材料には、合成樹脂のみからなる態様が含まれる。
この幹細胞培養用足場材料は、適度な親水性と強度を備えるため、幹細胞の播種後の定着性が向上する。特にフィーダー細胞や接着タンパク質を含まない無血清培地培養において、幹細胞播種後の初期定着率が向上する。
ポリビニルアセタール樹脂は、ポリビニルアルコールをアルデヒドによりアセタール化することにより合成される樹脂であり、側鎖にアセチル基と水酸基、そしてアセタール基を有する。
上記ポリビニルアセタール樹脂のアセタール度は1H-NMR測定により測定可能である。
上記アルデヒドの種類は特に限定されないが、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド、ブチルアルデヒド、ペンタナール、ヘキサナール、ヘプタナール、オクタナール、ノナナール、デカナール、アクロレイン、ベンズアルデヒド、シンナムアルデヒド、ペリルアルデヒド、ホルミルピリジン、ホルミルイミダゾール、ホルミルピロール、ホルミルピペリジン、ホルミルピペリジン、ホルミルトリアゾール、ホルミルテトラゾール、ホルミルインドール、ホルミルイソインドール、ホルミルプリン、ホルミルプリン、ホルミルベンゾイミダゾール、ホルミルベンゾトリアゾール、ホルミルキノリン、ホルミルイソキノリン、ホルミルキノキサリン、ホルミルシンノリン、ホルミルプテリジン、ホルミルフラン、ホルミルオキソラン、ホルミルオキサン、ホルミルチオフェン、ホルミルチオラン、ホルミルチアン、ホルミルアデニン、ホルミルグアニン、ホルミルシトシン、ホルミルチミン、ホルミルウラシルなどが挙げられる。上記アルデヒドは鎖状であっても環状であっても良い。
本発明において、「ポリビニルアセタールからなるユニット」及び「ビニル化合物からなるユニット」とは、グラフト共重合体中に存在している「ポリビニルアセタール」、「ビニル化合物からなるユニット」のことをいう。また、ポリビニルアセタールからなるユニット及びビニル化合物からなるユニットからなるユニットを有するグラフト共重合体は、主鎖を構成する「ポリビニルアセタールからなるユニット」又は「ビニル化合物からなるユニット」に、該主鎖とは異なる側鎖を構成する「ポリビニルアセタールからなるユニット」又は「ビニル化合物からなるユニット」が結合した分岐状の共重合体のことをいう。
なお、本明細書において、ポリビニルアセタール樹脂の一部にブレンステッド塩基性基またはブレンステッド酸性基を有するポリビニルアセタール樹脂を変性ポリビニルアセタール樹脂という。
従って、このようなポリビニルアセタール樹脂としては、アミン構造を有する構成単位、イミン構造を有する構成単位、アミド構造を有する構成単位、及びイミド構造を有する構成単位からなる群から選択される少なくとも一種を構成単位として含むポリビニルアセタール樹脂が好ましい。上記アミン構造を有する構成単位、イミン構造を有する構成単位、アミド構造を有する構成単位、及びイミド構造を有する構成単位の合計の含有量は、ポリビニルアセタール樹脂中、0.1モル%〜30モル%であることが好ましく、播種直後の細胞接着性の観点から、1モル%〜10モル%であることがより好ましい。
上記芳香族系炭化水素基としては、例えば、フェニル基、トルイル基、キシリル基、t−ブチルフェニル基、ベンジル基等が挙げられる。
なお、上記イミン構造を有する構成単位の含有量は、1H-NMR測定により測定することができる。
上記ポリビニルアセタール樹脂は、上記イミノ基を側鎖に有することが好ましい。また、上記イミノ基は、ポリビニルアセタール樹脂の主鎖を構成する炭素に直接結合してもよく、アルキレン基等の連結基を介して結合していてもよい。
上記変性ポリビニルアセタール樹脂は、上記アミン構造又はアミド構造を側鎖に有することが好ましい。また、上記アミン構造又はアミド構造は、変性ポリビニルアセタール樹脂の主鎖を構成する炭素に直接結合してもよく、アルキレン基等の連結基を介して結合していてもよい。更に、上記アミン構造は第一級アミンでもよく、第二級アミンでもよく、第三級アミンでもよく、第四級アミンでもよい。これらのなかでも、幹細胞の定着性を高める観点から、第一級アミンが好ましい。
なお、上記アミン構造又はアミド構造を側鎖に有するとは、上記アミン構造又はアミド構造を変性ポリビニルアセタール樹脂のグラフト鎖に有することを意味する。
特に、上記アミン構造は、−NH2であることが好ましい。なお、本発明において、アミド構造とは、−C(=O)−NH−を有する構造をいう。なかでも、上記アミン構造を有する構成単位は、下記式(3)に示す構造であることが好ましい。また、上記アミド構造を有する構成単位は、下記式(4)に示す構造であることが好ましい。
ブレンステッド酸性基としては、カルボキシル基、スルホン酸基、マレイン酸基、スルフィン酸基、スルフェン酸基、リン酸基、ホスホン酸基、及び、それらの塩等が挙げられる。ブレンステッド酸性基としては、なかでも、カルボキシル基が好ましい。
上記ポリビニルアセタール樹脂を上記ブレンステッド酸性基により変性する方法としては特に限定されないが、上記ポリビニルアルコールを上記イタコン酸や(メタ)アクリル酸と共重合する方法、上記ポリビニルアルコールの側鎖にブレンステッド酸性基を導入する方法等によって得られる。
上記脂肪族エステル系溶剤としては、例えば、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル、プロピオン酸エチル、酪酸メチル、酪酸エチル、アセト酢酸メチル、アセト酢酸エチル等が挙げられる。
上記ケトン系溶剤としては、例えば、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン、メチルシクロヘキサノン、ベンゾフェノン、アセトフェノン等が挙げられる。上記低級パラフィン系溶剤としては、ヘキサン、ペンタン、オクタン、シクロヘキサン、デカン等が挙げられる。上記エーテル系溶剤としては、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、プロピレングリコールジエチルエーテル等が挙げられる。上記アミド系溶剤としては、N,N−ジメチルホルムアミド、N,N−ジメチルテセトアミド、N−メチルピロリドン、アセトアニリド等が挙げられる。
上記アミン系溶剤としては、アンモニア、トリメチルアミン、トリエチルアミン、n−ブチルアミン、ジn−ブチルアミン、トリn−ブチルアミン、アニリン、N−メチルアニリン、N,N−ジメチルアニリン、ピリジン等が挙げられる。
これらは、単体で用いることもできるし、2種以上の溶媒を混合で用いることもできる。これらのなかでも、樹脂に対する溶解性及び精製時の簡易性の観点から、エタノール、n−プロパノール、イソプロパノール、テトラヒドロフランが特に好ましい。
上述の幹細胞培養用足場材料によれば、様々な幹細胞を培養することができるが、その特性を考慮すると、幹細胞のなかでも多能性幹細胞の培養に用いることが好ましい。一般的に、多能性幹細胞は播種後の培養の定着率が低いとされているが、上述の幹細胞培養用足場材料は、培養培地の水分によって膨潤し難く、適度な親水性と強度を維持できるので、多能性幹細胞の播種後の定着率が向上するからである。
細胞培養用足場材料は、適度な親水性と強度を備えることから、二次元培養方法に用いられることが好ましい。
1つまたは複数のウェル(穴)を備える細胞培養用テストプレートや、細胞培養用フラスコの材質は特に限定されないが、高分子樹脂や金属、無機材料が挙げられる。上記高分子樹脂としては、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリイソプレン、シクロオレフィンポリマー、ポリイミド、ポリアミド、ポリアミドイミド、(メタ)アクリル樹脂、エポキシ樹脂、シリコーン等が挙げられる。金属としては、ステンレス、銅、鉄、ニッケル、アルミ、チタン、金、銀、白金等が挙げられる。無機材料としては、酸化ケイ素(ガラス)、酸化アルミ、酸化チタン、酸化ジルコニウム、酸化鉄、窒化ケイ素等が挙げられる。
多能性幹細胞の培養方法においては、合成樹脂を含有する幹細胞培養用足場材料上に細胞塊を播種することが好ましい。
細胞塊は、コンフルエントになった培養容器に細胞剥離剤を添加し、ピペッティングにより均一に破砕処理することで得ることが出来る。細胞剥離剤としては、特に限定されないが、エチレンジアミン/リン酸緩衝溶液が好ましい。細胞塊の大きさは50〜200μmであることが好ましい。
本発明は、上述の幹細胞培養用足場材料の他にも、その他の実施の形態として、幹細胞培養用足場材料を用いた発明が提供される。
例えば、上述の幹細胞培養用足場材料と、多糖類と、を含有する幹細胞培養用担体(媒体)が提供される。多糖類としては、特に制限なく様々な多糖類を用いることができる。なかでも水溶性多糖類が好ましい。
架橋剤としては特に限定されないが、ポリアルコールやポリカルボン酸、ヒドロキシカルボン酸、金属石鹸、多糖類等が挙げられる。
ポリアルコールとしては特に限定されないが、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブタンジオール、ペンタンジオール、ヘキサンジオール、ヘプタンジオール、オクタンジオール、ノナンジオール、デカンジオール、ドデカンジオール、ウンデカンジオール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール、ポリエチレングリコール、カテコール、ピロガロール、ジボロン酸、メチレンジボロン酸、エチレンジボロン酸、プロピレンジボロン酸、フェニレンジボロン酸、ビフェニルジボロン酸、ビスフェノール誘導体等が挙げられる。
ポリカルボン酸としては特に限定されないが、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、フタル酸、ポリ(メタ)アクリル酸等が挙げられる。
ヒドロキシカルボン酸としては特に限定されないが、グリコール酸、乳酸、タルトロン酸、グリセリン酸、ヒドロキシ酪酸、リンゴ酸、酒石酸、シトマル酸、クエン酸、イソクエン酸、ロイシン酸、メバロン酸、パントイン酸、リシノール酸、リシネライジン酸、セレブロン酸、キナ酸、シキミ酸、ヒドロキシ安息香酸、サリチル酸、クレオソート酸、バニリン酸、シリング酸、ピロカテク酸、レソルシル酸、プロトカテク酸、ゲンチジン酸、オルセリン酸、没食子酸、マンデル酸、ベンジル酸、アトロラクチン酸、メリロト酸、フロレト酸、クマル酸、ウンベル酸、コーヒー酸、フェルラ酸、シナピン酸、ヒドロキシステアリン酸等が挙げられる。
金属石鹸としては特に限定されないが、ステアリン酸、ラウリン酸、リシノール酸、オクチル酸などの脂肪酸と、リチウム、ナトリウム、マグネシウム、カルシウム、バリウム、亜鉛、アルミニウムなどの金属の塩が挙げられる。
多糖類としては特に限定されないが、ペクチン、グアーガム、キサンタンガム、タマリンドガム、カラギーナン、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロース、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲン、セルロース、キチン、アガロース、カラギーナン、ヘパリン、ヒアルロン酸、キシログルカン、グルコマンナン酸等が挙げられる。
(ポリビニルブチラールの調製)
攪拌装置を備えた反応機に、イオン交換水2700mL、平均重合度250、鹸化度99モル%のポリビニルアルコールを300g投入し、攪拌しながら加熱溶解し、溶液を得た。次に、この溶液に触媒として35重量%塩酸を、塩酸濃度が0.2重量%となるように添加し、温度を15℃に調整した後、攪拌しながらn-ブチルアルデヒド(n-BA)22gを添加した。その後、n-ブチルアルデヒド(n-BA)148gを添加したところ、白色粒子状のポリビニルブチラールが析出した。析出してから15分後に、35重量%塩酸を、塩酸濃度が1.8重量%になるように添加し、50℃に加熱し、50℃で2時間熟成させた。次いで、溶液を冷却し、中和した後、ポリビニルブチラールを水洗し、乾燥させることにより、ポリビニルブチラールを得た。
得られたポリビニルブチラールは、平均重合度250、水酸基量28モル%、アセチル基量1モル%、アセタール化度71モル%であった。
得られたポリビニルブチラール1gをブタノール19gに溶解させることで、ポリビニルブチラール溶液を得た。得られたポリビニルブチラール溶液150μLをφ22mmのカバーガラス(松浪社製、22丸No.1をエアダスターで除塵して使用)上に吐出し、スピンコーターを用いて2000rpm、20秒回転させて平滑な樹脂膜を得た。得られた上記樹脂膜をカバーガラスごとφ22mmのポリスチレンディッシュに配置することにより細胞培養用容器を得た。
上記樹脂膜の表面自由エネルギーについて接触角計(協和界面化学社製、DMoー701)を用いて測定した。上記樹脂膜上に純水1μLを着滴させ、30秒後の液滴像を撮影することで純水の接触角を得た。また、上記樹脂膜上にジヨードメタン1μLを着滴させ、30秒後の液滴像を撮影することでジヨードメタンの接触角を得た。得られた上記接触角をKaelble−Uy理論を用いて表面自由エネルギーγ、分散成分γd、双極子成分γpを導出した。
(細胞培養試験の方法)
得られた細胞培養用容器にリン酸緩衝生理食塩水1mLを加えて37℃のインキュベーター内で1時間静置した。ディッシュ内のリン酸緩衝生理食塩水を除いた後、h−iPS細胞253G1を1.5×104を播種し、培地TeSR E8(STEM CELL社製)1mLおよび、ROCK−Inhibitor(Y27632)10μM存在下、37℃、CO2濃度5%のインキュベーター内で培養を行った。24時間毎に培地を750μL除き、新たなTeSR E8 250μLを加え、ROCK−Inhibitor(Y27632)10μMに調整することで培地交換を行った。
得られた細胞培養用容器にリン酸緩衝生理食塩水1mLを加えて37℃のインキュベーター内で1時間静置後、培養容器内のリン酸緩衝生理食塩水を除いた。35mmディッシュにコンフルエント状態になったh−iPS細胞252G1のコロニーを加え、次に1mLの0.5mMエチレンジアミン/リン酸緩衝溶液を加え、室温で2分静置した。その後、エチレンジアミン/リン酸緩衝溶液を除き、1mLのTeSRE8培地でピペッティングにより50〜200μmに砕かれた細胞塊を1.0×105を培養容器に播種し、培地TeSR E8(STEM CELL社製)1mLおよび、ROCK−Inhibitor(Y27632)10μM存在下、37℃、CO2濃度5%のインキュベーター内で培養を行った。24時間毎に培地を750μL除き、新たなTeSR E8を250μL加えることで培地交換を行った。
(1)初期接着性
細胞培養試験において、細胞播種後24時間後の細胞像を位相差顕微鏡10×10倍の位相差顕微鏡(オリンパス社製、IX73)を用いて取得した。その際、培養容器内の最も平均的な接着形態を示す視野の画像の取得を行った。得られた画像を図4の見本1〜見本10と照らし合わせて、接着細胞数と接着細胞形態を加味して初期接着性の評価を行った。なお、図4において、見本1から見本8に向かうほど細胞が増加していることが示されている。また見本8から見本10に向かうほど、細胞の仮足が伸長し、より良好な接着状態にあることが示されている。得られた結果を図5、6にまとめて示す。
(2)細胞増殖性
細胞培養試験において、細胞播種後5日経過後の細胞像を位相差顕微鏡10×4倍の位相差顕微鏡(オリンパス社製、IX73)を用いて取得した。その際、培養容器内の最も平均的な接着形態を示す視野の画像の取得を行った。得られた画像を図7の見本1〜見本10と照らし合わせることで細胞増殖性の評価を行った。図7において、細胞増殖によりコロニーが成長するほど高評価とした。なお、コロニーは横方向(画面の縦横方向)に成長し過ぎると縦方向(画面の手前側方向)に積み重なり始めるため、光の透過性が低くなる傾向がある。得られた結果を図8、9にまとめて示す。
(3)接着維持性
細胞塊培養試験において、細胞塊の接着維持可能時間を以下の基準に従って評価した。
0:培地交換後30分未満で全ての細胞が剥離した。
1:培地交換後30分以上接着維持したが、1時間未満で全ての細胞が剥離した。
2:培地交換後1時間以上接着維持したが、24時間未満で全ての細胞が剥離した。
3:培地交換後24時間以上接着維持した。
得られた細胞塊はアルカリフォスファターゼ(ALP)染色試験により未分化性が保たれていることを確認した。
平均重合度850、鹸化度99モル%のポリビニルアルコールを使用したこと以外は、実施例1同様にして試験を行った。
平均重合度1700、鹸化度99モル%のポリビニルアルコールを使用したこと以外は、実施例1同様にして試験を行った。
平均重合度2400、鹸化度99モル%のポリビニルアルコールを使用したこと、および、n-ブチルアルデヒド(n-BA)の代わりに、アセトアルデヒドを使用すること以外は、実施例1同様にして試験を行った。
平均重合度850、鹸化度98モル%、エチレン変性度4モル%のポリビニルアルコールを使用したこと以外は、実施例1同様にして試験を行った。
平均重合度250、鹸化度99モル%、上記式(3)に示すアミノ基を有する構成単位を2モル%含有するポリビニルアルコールを使用したこと以外は、実施例1同様にして試験を行った。
平均重合度1600、鹸化度99モル%、上記式(3)に示すアミノ基を有する構成単位を2モル%含有するポリビニルアルコールを使用したこと以外は、実施例1同様にして試験を行った。
実施例1で得られた重合度約250のポリビニルアセタール100重量部、および、N−ビニルピロリドン1重量部を500重量部のテトラヒドロフランに溶解させてグラフト共重合体樹脂溶液を得た。得られた樹脂溶液にIrgacure184(BASF社製)0.05重量部を溶解させ、PETフィルム上に塗布した。塗布物を25℃にてアイグラフィックス社製、UVコンベア装置「ECS301G1」を用い、365nmの波長の光を積算光量2000mJ/cm2で照射することで複合樹脂溶液を得た。得られた複合樹脂溶液を80℃、3時間真空乾燥させることで複合樹脂を得た。得られた樹脂について、カラムとしてWaters社製「2690 Separations Model」を用いて、GPC法によってポリスチレン換算による重量平均分子量を測定したところ、約4万であった。得られた複合樹脂を3重量%ブタノール溶液に調整し、実施例1同様にして試験を行った。
ポリビニルアセタール100重量部に対してN−ビニルピロリドン10重量部を添加したこと以外は、実施例8同様にして試験を行った。得られた樹脂の重量平均分子量は約6万であった。
ポリビニルアセタール100重量部に対してN−ビニルピロリドン30重量部を添加したこと以外は、実施例8同様にして試験を行った。得られた樹脂の重量平均分子量は約5万であった。
ポリビニルアセタール100重量部に対してテトラヒドロフルフリルアクリレート5重量部を添加したこと以外は、実施例8同様にして試験を行った。得られた樹脂の重量平均分子量は約6万であった。
ポリビニルアセタール100重量部に対してメトキシエチルアクリレート5重量部を添加したこと以外は、実施例8同様にして試験を行った。得られた樹脂の重量平均分子量は約7万であった。
ポリビニルアセタール100重量部に対してブチルメタクリレート5重量部を添加したこと以外は、実施例8同様にして試験を行った。得られた樹脂の重量平均分子量は約6万。
N−イソプロピルアクリルアミド75重量部、および、ブチルメタクリレート25重量部をテトラヒドロフラン300重量部に溶解させてアクリルモノマー溶液を得た。得られたアクリルモノマー溶液にIrgacure184(BASF社製)2重量部を溶解させ、PETフィル上に塗布した。塗布物を25℃にてアイグラフィックス社製、UVコンベア装置「ECS301G1」を用い、365nmの波長の光を積算光量2000mJ/cm2で照射することでアクリル樹脂溶液を得た。得られたアクリル樹脂溶液を80℃、3時間真空乾燥させることでアクリル樹脂を得た。得られたアクリル樹脂を3重量%ブタノール溶液に調整し、実施例1同様にして試験を行った。得られたアクリル樹脂の重量平均分子量は約10万であった。
N−イソプロピルアクリルアミド75重量部、および、ブチルメタクリレート25重量部に代えて、メトキシエチルアクリレート90重量部、および、ブチルメタクリレート10重量部を使用したこと以外は実施例14と同様にして、アクリル樹脂を得た。得られたアクリル樹脂を3重量%ブタノール溶液に調整し、実施例1同様にして試験を行った。得られたアクリル樹脂の重量平均分子量は約8万であった。
N−イソプロピルアクリルアミド75重量部、および、ブチルメタクリレート25重量部に代えて、メトキシエチルアクリレート75重量部、および、ブチルメタクリレート25重量部を使用したこと以外は実施例14と同様にして、アクリル樹脂を得た。得られたアクリル樹脂を3重量%ブタノール溶液に調整し、実施例1同様にして試験を行った。得られた樹脂の重量平均分子量は約9万であった。
N−イソプロピルアクリルアミド75重量部、および、ブチルメタクリレート25重量部に代えて、ブチルメタクリレート2重量部、および、エチルアクリレート98重量部を使用したこと以外は実施例14と同様にして、アクリル樹脂を得た。得られたアクリル樹脂を3重量%ブタノール溶液に調整し、実施例1同様にして試験を行った。得られたアクリル樹脂の重量平均分子量は約8万であった。
足場材料を用いず、ポリスチレンディッシュのみで実施例1同様にて試験を行った。
2回目のn-ブチルアルデヒド(n-BA)の添加量を148gから89gに変更したこと以外は、実施例1同様にして試験を行った。
合成樹脂として平均重合度1000、鹸化度98モル%のポリビニルアルコールを使用したこと以外は、実施例1同様にして試験を行った。
N−イソプロピルアクリルアミド100重量部、酢酸エチル75重量部、アゾビスイソブチロニトリル0.5重量部を混合し、窒素雰囲気下、65℃で8時間重合を行うことでポリアクリルアミド樹脂を得た。得られた樹脂について、カラムとしてWaters社製「2690 Separations Model」を用いて、GPC法によってポリスチレン換算による重量平均分子量を測定したところ、約9万(重合度約800)であった。その他の操作は実施例1同様にして試験を行った。
N−イソプロピルアクリルアミド100重量部に代えてエチルアクリレート100重量部を使用したこと以外は比較例4と同様にして試験を行った。
N−イソプロピルアクリルアミド100重量部に代えてブチルメタクリレート100重量部を使用したこと以外は比較例4と同様にして試験を行った。得られた樹脂の重量平均分子量は約9万であった。
ポリビニルアセタール30重量部に対してN−ビニルピロリドン70重量部を添加したこと以外は、実施例8同様にして試験を行った。得られた樹脂の重量平均分子量は約9万であった。
[表2]
Claims (12)
- 表面自由エネルギーの分散成分γdが24.5以上45.0未満であり、
表面自由エネルギーの双極子成分γpが1.0以上20.0未満である幹細胞培養用足場材料。 - 前記幹細胞培養用足場材料が合成樹脂を含む、請求項1記載の幹細胞培養用足場材料。
- 前記合成樹脂がポリビニルアセタール骨格、ポリ(メタ)アクリル酸エステル骨格の少なくともいずれか一方を含む請求項2記載の幹細胞培養用足場材料。
- 前記合成樹脂がポリビニルアセタール樹脂である請求項2記載の幹細胞培養用足場材料。
- 合成樹脂を含有する幹細胞培養用足場材料であって、
前記合成樹脂がポリビニルアセタール樹脂を含み、
前記ポリビニルアセタール樹脂のアセタール化度が60モル%よりも高い幹細胞培養用足場材料。 - 前記ポリビニルアセタール樹脂は、アミン構造を有する構成単位、イミン構造を有する構成単位、及びアミド構造を有する構成単位からなる群から選択される少なくとも一種を構成単位として含む、請求項4または5記載の幹細胞培養用足場材料。
- 前記ポリビニルアセタール樹脂は、アミン構造を有する構成単位、イミン構造を有する構成単位、及びアミド構造を有する構成単位の合計の含有量が、0.1モル%以上30モル%以下である、請求項6記載の幹細胞培養用足場材料。
- 前記幹細胞が多能性幹細胞である請求項1〜7のいずれか1項記載の幹細胞培養用足場材料。
- 細胞の培養領域の少なくとも一部に請求項1〜8のいずれか1項記載の幹細胞培養用足場材料を含む、幹細胞培養用容器。
- 請求項1〜8のいずれか1項記載の幹細胞培養用足場材料を含む、幹細胞培養用繊維。
- 請求項1〜8のいずれか1項記載の幹細胞培養用足場材料を用いる幹細胞の培養方法。
- 前記幹細胞培養用足場材料上に細胞塊を播種する工程を含む、請求項11記載の幹細胞の培養方法。
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EP3971201A4 (en) * | 2019-05-15 | 2023-11-22 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | CELL CULTURE SCAFFOLDING MATERIAL AND CELL CULTURE CONTAINER |
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WO2021215456A1 (ja) * | 2020-04-21 | 2021-10-28 | 積水化学工業株式会社 | 樹脂組成物、合わせガラス用中間膜、及び合わせガラス |
WO2022115800A2 (en) * | 2020-11-30 | 2022-06-02 | Torres Lugo Madeline | Synthetic matrices for cell culture, methods of making and use thereof |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4537790A (en) * | 1977-08-08 | 1985-08-27 | Institut Pasteur | Process for growing cell cultures of diploid cells on cell supports |
JPH1052268A (ja) * | 1996-05-01 | 1998-02-24 | Kanebo Ltd | 微生物担持体及びその製造方法 |
JP2001089574A (ja) * | 1999-07-15 | 2001-04-03 | Kuraray Co Ltd | ポリビニルアルコール系含水ゲル、その製造方法及び排水処理装置 |
JP2001131325A (ja) * | 1999-10-29 | 2001-05-15 | Rengo Co Ltd | 多孔質球状粒子及びその製造方法 |
JP2006314285A (ja) * | 2005-05-13 | 2006-11-24 | Kuraray Co Ltd | 細胞培養用担体及び該細胞培養用担体を用いた細胞培養方法 |
JP2010168444A (ja) * | 2009-01-21 | 2010-08-05 | Sekisui Chem Co Ltd | ポリビニルアセタール樹脂多孔質体の製造方法 |
JP2015195752A (ja) * | 2014-03-31 | 2015-11-09 | 学校法人東京女子医科大学 | 細胞シート培養基材、細胞シート培養基材複合物、及び細胞シート/培養基材複合の製造方法 |
Family Cites Families (35)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1330684C (en) * | 1988-04-15 | 1994-07-12 | Robert Krantz Pinschmidt Jr. | Method for preparing poly(vinyl alcohol)- co-poly(vinylamine) via a two-phase process |
EP0531562A1 (de) * | 1991-09-11 | 1993-03-17 | Doerr, Hans-Wilhelm, Prof. Dr. med. | Kultivierung von Säugetierzellen |
JPH06153905A (ja) * | 1992-11-24 | 1994-06-03 | Sanyo Chem Ind Ltd | 細胞培養基材および細胞培養方法 |
JPH09131397A (ja) * | 1995-09-08 | 1997-05-20 | Kuraray Co Ltd | 医療用高分子材料およびその製造方法 |
US5880216A (en) * | 1995-12-22 | 1999-03-09 | Kuraray Co., Ltd. | Polyvinyl alcohol and gel containing the same |
JPH10204204A (ja) * | 1996-07-31 | 1998-08-04 | Kanebo Ltd | 多孔性球状粒子及びその製造方法 |
ATE482238T1 (de) * | 2003-01-23 | 2010-10-15 | Kuraray Co | Polyvinylacetal und dessen verwendung |
CA2541513C (en) * | 2003-10-17 | 2011-02-01 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | Method for preparing artificial cell tissue and substrate therefor |
DE102004026609A1 (de) * | 2004-06-01 | 2006-01-12 | Wacker Polymer Systems Gmbh & Co. Kg | Aminofunktionelle Polyvinylacetale |
JP4523812B2 (ja) * | 2004-07-02 | 2010-08-11 | 生化学工業株式会社 | 胚性幹細胞の培養用基材及びその用途 |
JP2006214285A (ja) * | 2005-02-01 | 2006-08-17 | Toyota Motor Corp | 燃料噴射制御装置 |
WO2006093207A1 (ja) * | 2005-03-02 | 2006-09-08 | National University Corporation Hokkaido University | 細胞の分化/増殖を制御するための基材 |
EP1801132A1 (de) * | 2005-12-21 | 2007-06-27 | Kuraray Europe GmbH | Verfahren zur Modifizierung von Polyvinylbutyralen |
EP2044145A1 (en) * | 2006-07-05 | 2009-04-08 | Agency for Science, Technology and Research | Porous polymeric articles |
JP2006272002A (ja) * | 2006-07-11 | 2006-10-12 | Kuraray Co Ltd | 医療用手当材 |
JP2009273444A (ja) * | 2008-05-19 | 2009-11-26 | Univ Of Tsukuba | 細胞培養支持体、その製造方法及び該支持体を用いた細胞培養方法 |
GB0815883D0 (en) * | 2008-09-01 | 2008-10-08 | Univ Edinburgh | Polymer blends |
JP2010158180A (ja) | 2009-01-06 | 2010-07-22 | Hokkaido Univ | 足場材料 |
JP5715565B2 (ja) * | 2009-08-07 | 2015-05-07 | 株式会社クラレ | ポリビニルアセタール組成物、積層体、およびその用途 |
WO2012023518A1 (ja) * | 2010-08-19 | 2012-02-23 | 株式会社クラレ | ポリビニルアセタール系粉体塗料 |
JP5287935B2 (ja) * | 2011-06-16 | 2013-09-11 | 東レ株式会社 | 蛍光体含有シート、それを用いたled発光装置およびその製造方法 |
US10119119B2 (en) * | 2012-01-31 | 2018-11-06 | Carnegie Mellon University and University of Pittsburgh—Of the Commonwealth System of Higher Education | Polysiloxane substrates with highly-tunable elastic modulus |
JP6196661B2 (ja) * | 2012-04-20 | 2017-09-13 | スリップチップ, エルエルシー | サンプル調製または自律分析のための流体デバイスおよびシステム |
US10487310B2 (en) * | 2012-06-08 | 2019-11-26 | Riken | Vessel for culturing human ES cells |
EP2821789A1 (en) * | 2013-07-02 | 2015-01-07 | ETH Zurich | Microtissues |
JP6384054B2 (ja) * | 2014-01-31 | 2018-09-05 | 大日本印刷株式会社 | 細胞積層体を製造するための細胞培養容器 |
TW201540829A (zh) * | 2014-02-28 | 2015-11-01 | Kuraray Co | 細胞培養用載體及使用其之細胞培養方法 |
JP6427450B2 (ja) * | 2014-03-31 | 2018-11-21 | 積水化学工業株式会社 | 変性ポリビニルアセタール樹脂 |
JP6318812B2 (ja) * | 2014-04-21 | 2018-05-09 | 日立化成株式会社 | フィブロイン複合体 |
KR101754342B1 (ko) * | 2015-01-26 | 2017-07-06 | 가톨릭관동대학교산학협력단 | 3차원적 연골배양부재 및 이를 포함하는 연골배양장치 |
JP2017023008A (ja) * | 2015-07-16 | 2017-02-02 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | ポリロタキサンブロック共重合体表面を有する培養器を用いた幹細胞の培養方法 |
JP6555993B2 (ja) * | 2015-09-04 | 2019-08-07 | 日本バイリーン株式会社 | 足場プレート及びその製造方法 |
US10711128B2 (en) * | 2015-09-30 | 2020-07-14 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Modified polyvinyl acetal resin composition |
JP6912789B2 (ja) * | 2016-03-16 | 2021-08-04 | 株式会社日本触媒 | 神経幹細胞の培養方法、およびニューロスフェロイドの形成方法 |
US20190106561A1 (en) * | 2017-10-10 | 2019-04-11 | Solutia Inc. | Poly(vinyl acetal) resin compositions, layers, and interlayers having enhanced properties |
-
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-
2020
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4537790A (en) * | 1977-08-08 | 1985-08-27 | Institut Pasteur | Process for growing cell cultures of diploid cells on cell supports |
JPH1052268A (ja) * | 1996-05-01 | 1998-02-24 | Kanebo Ltd | 微生物担持体及びその製造方法 |
JP2001089574A (ja) * | 1999-07-15 | 2001-04-03 | Kuraray Co Ltd | ポリビニルアルコール系含水ゲル、その製造方法及び排水処理装置 |
JP2001131325A (ja) * | 1999-10-29 | 2001-05-15 | Rengo Co Ltd | 多孔質球状粒子及びその製造方法 |
JP2006314285A (ja) * | 2005-05-13 | 2006-11-24 | Kuraray Co Ltd | 細胞培養用担体及び該細胞培養用担体を用いた細胞培養方法 |
JP2010168444A (ja) * | 2009-01-21 | 2010-08-05 | Sekisui Chem Co Ltd | ポリビニルアセタール樹脂多孔質体の製造方法 |
JP2015195752A (ja) * | 2014-03-31 | 2015-11-09 | 学校法人東京女子医科大学 | 細胞シート培養基材、細胞シート培養基材複合物、及び細胞シート/培養基材複合の製造方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JOURNAL OF BIOMEDICAL MATERIALS RESEARCH A, 2014, VOL.102A, PP.247-253, JPN6020014247, ISSN: 0004253707 * |
MACROMOLECULAR RESEARCH, 2011, VOL.19, PP.385-395, JPN6020014248, ISSN: 0004253708 * |
MACROMOLECULAR RESEARCH, 2011, VOL.19, PP.385-395, JPN6020025231, ISSN: 0004306714 * |
PHYS. CHEM. CHEM. PHYS., 2014, VOL.16, PP.17551-17559, JPN6020014249, ISSN: 0004306715 * |
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