JPWO2019004479A1 - 毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７（ｆｇｆ−７）産生促進剤、血管内皮増殖因子（ｖｅｇｆ）産生促進剤、インシュリン様増殖因子−１（ｉｇｆ−１）産生促進剤、肝細胞増殖因子（ｈｇｆ）産生促進剤及び育毛剤 - Google Patents

Abstract

従来より優れた効果を発揮する新規な毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤及びこれら促進剤の少なくとも１種を含有する育毛剤を提供する。該育毛剤は、ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン及びトラメテノール酸の少なくとも１種を有効成分として含有する。

Description

本発明は、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤及び育毛剤に関する。

育毛に関与する因子として、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）及び肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）等が知られている。

ミノキシジルやアデノシンは、上述のＦＧＦ−７、ＶＥＧＦ等の因子の産生を促進するといわれており、これらを有効成分として含有する育毛剤が知られている（特許文献１，２）。また、マンネンタケから抽出されるある種のラノスタン型トリテルペン類が男性型脱毛症の予防や治療に有効な５α−リダクターゼ阻害作用を有することが知られている（特許文献３）。

特開平５−４９０８号公報 特開２０００−２９７０１５号公報 国際公開第２００５／０７９１６４号

近年、より優れた育毛効果を示す育毛剤を得るために、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤及び肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤に対して、より高い効果が求められている。

そこで本発明は、従来より優れた効果を発揮する新規な毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤及びこれらの促進剤の少なくとも１種を含有する育毛剤を提供することを目的とする。

本発明に係る毛乳頭細胞増殖促進剤は、ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン及びトラメテノール酸の少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係る線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤は、ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール及び３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエンの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係る血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤は、トラメテノール酸を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係るインシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤は、イノトジオールを有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係る肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤は、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール及びイノトジオールの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係る育毛剤は、ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン及びトラメテノール酸の少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係る毛乳頭細胞増殖促進剤は、エルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、エルゴステロールペルオキシド及びイノノツサンＣの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係る線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤は、エルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、ベツリン、β−シトステロール、エルゴステロールペルオキシド、イノノツサンＣ、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン及びイノノツトリオールＡの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係る血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤は、エルゴステロール、イノトラクトンＢ及びベツリンの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係るインシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤は、エルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、β−シトステロール、イノノツサンＣ及び３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエンの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係る肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤は、エルゴステロール、ステラステロール及びイノトラクトンＢの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係る育毛剤は、エルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、ベツリン、β−シトステロール、エルゴステロールペルオキシド、イノノツサンＣ、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン及びイノノツトリオールＡの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係る育毛剤は、ラノスタン型トリテルペンを有効成分として含有することを特徴とする。

本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン及びトラメテノール酸の少なくとも１種を、あるいはエルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、エルゴステロールペルオキシド及びイノノツサンＣの少なくとも１種を有効成分として含有するので、従来の毛乳頭細胞増殖促進剤よりも優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を発揮することができる。

本発明の線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤は、ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール及び３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエンの少なくとも１種を、あるいはエルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、ベツリン、β−シトステロール、エルゴステロールペルオキシド、イノノツサンＣ、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン及びイノノツトリオールＡの少なくとも１種を有効成分として含有するので、従来のＦＧＦ−７産生促進剤よりも優れたＦＧＦ−７産生促進作用を発揮することができる。

本発明の血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤は、トラメテノール酸を、あるいはエルゴステロール、イノトラクトンＢ及びベツリンの少なくとも１種を有効成分として含有するので、従来のＶＥＧＦ産生促進剤よりも優れたＶＥＧＦ産生促進作用を発揮することができる。

本発明のインシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤は、イノトジオールを、あるいはエルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、β−シトステロール、イノノツサンＣ及び３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエンの少なくとも１種を有効成分として含有するので、従来のＩＧＦ−１産生促進剤よりも優れたＩＧＦ−１産生促進作用を発揮することができる。

本発明の肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤は、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール及びイノトジオールの少なくとも１種を、あるいはエルゴステロール、ステラステロール及びイノトラクトンＢの少なくとも１種を有効成分として含有するので、従来のＨＧＦ産生促進剤よりも優れたＨＧＦ産生促進作用を発揮することができる。

本発明の育毛剤は、毛乳頭細胞増殖促進作用、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進作用及び肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進作用のうちのいずれか１または２以上の作用を有するラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン及びトラメテノール酸の少なくとも１種、エルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、ベツリン、β−シトステロール、エルゴステロールペルオキシド、イノノツサンＣ、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン及びイノノツトリオールＡの少なくとも１種、あるいはラノスタン型トリテルペンを有効成分として含有するので、従来の育毛剤よりも優れた育毛効果を発揮することができる。

５種類のラノスタン型トリテルペノイド及びミノキシジルの毛乳頭細胞増殖促進率を示すグラフである。 エルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、ベツリン、β−シトステロール、ラノステロール及びミノキシジルの毛乳頭細胞増殖促進率を示すグラフである。 エルゴステロールペルオキシド、イノノツサンＣ、ラノステロール及びミノキシジルの毛乳頭細胞増殖促進率を示すグラフである。

以下、本発明に係る実施形態について詳細に説明する。

本発明者らは、ラノステロール（CAS登録番号：79-63-0）、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール（CAS登録番号：96574-03-7）、イノトジオール（CAS登録番号：35963-37-2）、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（CAS登録番号：267649-99-0）及びトラメテノール酸（CAS登録番号：24160-36-9）という５種類のラノスタン型トリテルペノイドが、育毛に関与する毛乳頭細胞増殖促進作用、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進作用及び肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進作用のうちのいずれか１または２以上の作用を有することを見出した。これら５種類のラノスタン型トリテルペノイドは、下記一般式（ＬＴＴ）で表わすことができる。

上記一般式（ＬＴＴ）中、Ｒ¹とＲ²との組み合わせは、以下のａ），ｂ），ｃ），ｄ）及びｅ）から選択される。
ａ）Ｒ¹＝ＣＨ₃かつＲ²＝Ｈ；
ｂ）Ｒ¹＝ＣＨＯかつＲ²＝Ｈ；
ｃ）Ｒ¹＝ＣＨ₃かつＲ²＝ＯＨ；
ｄ）Ｒ¹＝ＣＨ₂ＯＨかつＲ²＝Ｈ；
ｅ）Ｒ¹＝ＣＯＯＨかつＲ²＝Ｈ。

上記一般式（ＬＴＴ）で表わされる５種類のラノスタン型トリテルペノイドは、例えば、植物体から抽出・単離して取得することができる。植物体からの抽出は、一般的な方法により行うことができる。植物体としては、カバノアナタケが挙げられる。カバノアナタケの子実体から溶剤抽出して得られる抽出物を、カラムクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の適切な分離精製手段を用いて分離・精製することで、上記一般式（ＬＴＴ）で表わされる５種類のラノスタン型トリテルペノイドが得られる。なお、この例では、植物は菌類を含む広い意味で用いており、植物体には、菌類の子実体等を含む。

カバノアナタケの抽出物には、上述の５種類のラノスタン型テルペノイドが全て含まれているので、カバノアナタケから抽出・単離することにより、この５種類のラノスタン型テルペノイドを効率よく得ることができる。

前述の５種の化合物は、必ずしも単一の植物体から抽出・単離されたものである必要はなく、任意の方法により取得することができる、例えば、５種類のラノスタン型トリテルペノイドのそれぞれを、別個の植物体から抽出・単離して取得してもよい。５種類のラノスタン型テルペノイドは、化学合成されたものであってもよい。

また、本発明者らは、エルゴステロール（CAS登録番号：57-87-4）、ステラステロール（CAS登録番号：2465-11-4）、イノトラクトンＢ（CAS登録番号：1587735-79-2）、ベツリン（CAS登録番号：473-98-3）、β−シトステロール（CAS登録番号：83-46-5）、エルゴステロールペルオキシド（CAS登録番号：2061-64-5）、イノノツサンＣ（CAS登録番号：1889275-09-5）、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン（CAS登録番号：106483-69-6）、イノノツトリオールＡ（CAS登録番号：374797-72-5）（以下、これらの９種類の化合物をまとめて化合物９種と称することがある）についても、育毛に関与する毛乳頭細胞増殖促進作用、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進作用及び肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進作用のうちのいずれか１または２以上の作用を有することを見出した。化合物９種のうちのイノトラクトンＢ、イノノツサンＣ、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン、イノノツトリオールＡは、ラノスタン型テルペノイドである。

化合物９種のそれぞれについても、上記一般式（ＬＴＴ）で表わされる５種類のラノスタン型トリテルペノイド（以下、これらの５種類の化合物を総称して化合物５種と称することがある）と同様に、例えば、植物体から抽出して取得することができ、一般的な方法により植物体から抽出できる。化合物９種についても、植物体としては、カバノアナタケが挙げられる。カバノアナタケの子実体から溶剤抽出して得られる抽出物を、カラムクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の適切な分離精製手段を用いて分離・精製することで、化合物９種が得られる。カバノアナタケの抽出物には、化合物９種の全ての化合物が含まれているので、カバノアナタケから抽出することにより、化合物９種の各化合物を効率よく得ることができる。カバノアナタケからは化合物５種の全ての化合物とともに化合物９種の全ての化合物を取得できるので、カバノアナタケを材料とすることは非常に有用である。

化合物９種の各化合物は、必ずしも単一の植物体から得たものである必要はなく、任意の方法により取得することができる、例えば、化合物９種の各化合物のそれぞれを別個の植物体から抽出して取得してもよい。また、化合物９種は、化学合成されたものであってもよい。

上記化合物５種の化合物と化合物９種の化合物とを組み合わせて用いてもよい。この場合において、組み合わせられる化合物５種の化合物と化合物９種の化合物が、異なる植物体から抽出されたものであってもよく、それらの一方または両方が化学合成されたものであってもよい。

以下では、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤をＦＧＦ−７産生促進剤または線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）と称することがある。また、血管内皮増殖因子産生促進剤をＶＥＧＦ産生促進剤または血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤と称し、インシュリン様増殖因子−１産生促進剤をＩＧＦ−１産生促進剤またはインシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤と称し、肝細胞増殖因子産生促進剤をＨＧＦ産生促進剤または肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤と称することがある。

ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン及びトラメテノール酸、エルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、ベツリン、β−シトステロール、エルゴステロールペルオキシド、イノノツサンＣ、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン、イノノツトリオールＡの少なくとも１種を用いることによって、以下に説明するような本発明に係る毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤及び育毛剤を得ることができる。

上記１４種の化合物のうちの一般式（ＬＴＴ）で表わされる５種類のラノスタン型トリテルペノイドと、イノトラクトンＢ、イノノツサンＣ、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン、イノノツトリオールＡがラノスタン型テルペンであり、本発明者らは、ラノスタン型テルペノイドのうち特にラノスタン型テルペンが育毛剤として有用であることを見出した。すなわち、ラノスタン型テルペンが育毛に関与する毛乳頭細胞増殖促進作用、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進作用及び肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進作用のいずれか１または２以上の作用を有することを見出した。

なお、以下の説明では、ラノステロールを化合物Ｚ１、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アールを化合物Ｚ２、イノトジオールを化合物Ｚ３、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエンを化合物Ｚ４、トラメテノール酸を化合物Ｚ５、エルゴステロールを化合物Ｚ６、ステラステロールを化合物Ｚ７、イノトラクトンＢを化合物Ｚ８、ベツリンを化合物Ｚ９、β−シトステロールを化合物Ｚ１０、エルゴステロールペルオキシドを化合物Ｚ１１、イノノツサンＣを化合物Ｚ１２、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエンを化合物Ｚ１３、イノノツトリオールＡを化合物Ｚ１４と称しまたそれら名称を付記することがある。

＜毛乳頭細胞増殖促進剤＞
本発明に係る毛乳頭細胞増殖促進剤は、ラノステロール（化合物Ｚ１）、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール（化合物Ｚ２）、イノトジオール（化合物Ｚ３）、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（化合物Ｚ４）トラメテノール酸（化合物Ｚ５）、エルゴステロール（化合物Ｚ６）、ステラステロール（化合物Ｚ７）、イノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）、エルゴステロールペルオキシド（化合物Ｚ１１）、イノノツサンＣ（化合物Ｚ１２）の少なくとも１種を有効成分として含有し、さらに必要に応じてその他の成分を含有する。有効成分としては、前述の１０化合物のうちの１種を単独で、または２種以上を併用して用いることができる。２種以上を併用する場合、５種化合物の化合物同士、９種化合物の化合物同士を組み合わせて用いてもよく、５種化合物と９種化合物とを組み合わせて用いてもよい。なお、このような化合物の組み合わせについては、他の促進剤、育毛剤についても同様である。

毛乳頭細胞増殖促進剤中の有効成分の含有量は、目的に応じて適宜選択することができ、特に限定されない。有効成分の含有量は、例えば単位投薬量形状あたり１μｇ〜１００ｍｇ程度とすることができる。本発明に係る毛乳頭細胞増殖促進剤は、前述の有効成分そのものであってもよい。

毛乳頭細胞増殖促進剤におけるその他の成分は、本発明の効果を損なわない限り、特に限定されず、目的に応じて適宜選択することができる。その他の成分としては、例えば、薬理学的に許容される担体が挙げられる。担体は、例えば、前述の有効成分を各種の剤型として用いる場合において、その剤型に応じて適宜選択することができる。

剤型は特に限定されず、投与方法に応じて適宜選択することができる。剤型としては、例えば、経口固形剤（錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、トローチ剤など）、経口液剤（内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤など）、注射剤（溶液、懸濁液、用時溶解用固形剤など）、吸入散剤、軟膏剤、外用液剤、貼付剤、塗布剤、点眼剤、点鼻剤及び点耳剤が挙げられる。

経口固形剤は、例えば、前述の有効成分に賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味・矯臭剤などの添加剤を加えて、一般的な方法により製造することができる。賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース及び珪酸などが挙げられる。

添加剤は、特に限定されず、目的に応じて適宜選択することができる。結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム及びポリビニルピロリドンなどが挙げられる。

崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド及び乳糖などが挙げられる。滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂及びポリエチレングリコールなどが挙げられる。着色剤としては、例えば酸化チタン、酸化鉄などが挙げられる。矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸及び酒石酸などが挙げられる。

経口液剤は、例えば、前述の有効成分に、矯味・矯臭剤、緩衝剤、安定化剤などの添加剤を加えて、一般的な方法により製造することができる。添加剤は特に限定されず、目的に応じて適宜選択することができる。矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸及び酒石酸などが挙げられる。緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウムなどが挙げられる。安定剤としては、例えば、トラガント、アラビアゴム及びゼラチンなどが挙げられる。

注射剤は、例えば前述の有効成分に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤などを添加して、一般的な方法により製造することができる。注射剤は、皮下用注射剤、筋肉内用注射剤、または静脈内用注射剤である。ｐＨ調節剤及び緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及びリン酸ナトリウムなどが挙げられる。

安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸及びチオ乳酸などが挙げられる。等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖などが挙げられる。局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカインなどが挙げられる。

本発明に係る毛乳頭細胞増殖促進剤は、毛乳頭細胞増殖促進作用を有する有効成分を含有しているので、毛乳頭細胞の増殖促進作用を介して、毛乳頭を活性化することができる。本発明に係る毛乳頭細胞増殖促進剤は、例えば、毛乳頭細胞の増殖促進機構、毛乳頭細胞の増殖促進により改善される症状の研究、毛乳頭細胞の増殖促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。

毛乳頭細胞増殖促進剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の促進剤や、症状（疾患や、脱毛などの「好ましくない症状」を含む）の予防・治療用途の促進剤が挙げられる。症状としては、例えば、薄毛、脱毛及び男性型脱毛症などが挙げられる。

本発明に係る毛乳頭細胞増殖促進剤の使用方法は、特に限定されず、目的に応じて適宜選択することができる。例えば、任意の方法で、毛乳頭細胞に直接接触させて使用することができる。本発明に係る毛乳頭細胞増殖促進剤は、頭髪及び頭皮の一方または両方に任意の方法で接触させて使用してもよい。

＜線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤＞
本発明に係る線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤は、ラノステロール（化合物Ｚ１）、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール（化合物Ｚ２）、イノトジオール（化合物Ｚ３）、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（化合物Ｚ４）、エルゴステロール（化合物Ｚ６）、ステラステロール（化合物Ｚ７）、イノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）、ベツリン（化合物Ｚ９）、β−シトステロール（化合物Ｚ１０）、エルゴステロールペルオキシド（化合物Ｚ１１）、イノノツサンＣ（化合物Ｚ１２）、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン（化合物Ｚ１３）及びイノノツトリオールＡ（化合物Ｚ１４）の少なくとも１種を有効成分として含有し、必要に応じて上述したようなその他の成分を含有する。有効成分としては、前述の１３化合物のうちの１種を単独で、または２種以上を併用して用いることができる。

ＦＧＦ−７産生促進剤中における有効成分の含有量は、目的に応じて適宜選択することができ、特に限定されない。有効成分の含有量は、例えば単位投薬量形状あたり１μｇ〜１００ｍｇ程度とすることができる。本発明に係るＦＧＦ−７産生促進剤は、前述の有効成分そのものであってもよい。

本発明に係るＦＧＦ−７産生促進剤は、ＦＧＦ−７産生促進作用を有する有効成分を含有している。したがって、本発明に係るＦＧＦ−７産生促進剤は、例えば、ＦＧＦ−７産生の促進機構、ＦＧＦ−７産生の促進により改善される症状の研究、ＦＧＦ−７産生の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。

＜血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤＞
本発明に係る血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤は、トラメテノール酸（化合物Ｚ５）、エルゴステロール（化合物Ｚ６）、イノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）及びベツリン（化合物Ｚ９）の少なくとも１種を有効成分として含有し、必要に応じて上述したようなその他の成分を含有する。有効成分としては、前述の４化合物のうちの１種を単独で、または２種以上を併用して用いることができる。ＶＥＧＦ産生促進剤中における有効成分の含有量は、目的に応じて適宜選択することができる。有効成分の含有量は、例えば単位投薬量形状あたり１μｇ〜１００ｍｇ程度とすることができる。本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤は、前述の有効成分そのものであってもよい。

本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤は、ＶＥＧＦ産生促進作用を有する有効成分を含有している。したがって、本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤は、例えば、ＶＥＧＦ産生の促進機構、ＶＥＧＦ産生の促進により改善される症状の研究、ＶＥＧＦ産生の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。

＜インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤＞
本発明に係るインシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤は、イノトジオール（化合物Ｚ３）、エルゴステロール（化合物Ｚ６）、ステラステロール（化合物Ｚ７）、イノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）、β−シトステロール（化合物Ｚ１０）、イノノツサンＣ（化合物Ｚ１２）及び３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン（化合物Ｚ１３）の少なくとも１種を有効成分として含有し、必要に応じて上述したようなその他の成分を含有する。有効成分としては、前述の７化合物のうちの１種を単独で、または２種以上を併用して用いることができる。ＩＧＦ−１産生促進剤中における有効成分の含有量は、目的に応じて適宜選択することができる。有効成分の含有量は、例えば単位投薬量形状あたり１μｇ〜１００ｍｇ程度とすることができる。本発明に係るＩＧＦ−１産生促進剤は、前述の有効成分そのものであってもよい。

本発明に係るＩＧＦ−１産生促進剤は、ＩＧＦ−１産生促進作用を有する有効成分を含有している。したがって、本発明に係るＩＧＦ−１産生促進剤は、例えば、ＩＧＦ−１産生の促進機構、ＩＧＦ−１産生の促進により改善される症状の研究、ＩＧＦ−１産生の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。

＜肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤＞
本発明に係る肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤は、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール（化合物Ｚ２）、イノトジオール（化合物Ｚ３）、エルゴステロール（化合物Ｚ６）、ステラステロール（化合物Ｚ７）及びイノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）の少なくとも１種を有効成分として含有し、必要に応じて上述したようなその他の成分を含有する。有効成分としては、前述の５化合物のうちの１種を単独で、または２種以上を併用して用いることができる。ＨＧＦ産生促進剤中における有効成分の含有量は、目的に応じて適宜選択することができる。有効成分の含有量は、例えば単位投薬量形状あたり１μｇ〜１００ｍｇ程度とすることができる。本発明に係るＨＧＦ産生促進剤は、前述の有効成分そのものであってもよい。

本発明に係るＨＧＦ産生促進剤は、ＨＧＦ産生促進作用を有する有効成分を含有している。したがって、本発明に係るＨＧＦ産生促進剤は、例えば、ＨＧＦ産生の促進機構、ＨＧＦ産生の促進により改善される症状の研究、ＨＧＦ産生の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。

＜育毛剤＞
本発明に係る育毛剤は、ラノステロール（化合物Ｚ１）、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール（化合物Ｚ２）、イノトジオール（化合物Ｚ３）、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（化合物Ｚ４）、トラメテノール酸（化合物Ｚ５）、エルゴステロール（化合物Ｚ６）、ステラステロール（化合物Ｚ７）、イノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）、ベツリン（化合物Ｚ９）、β−シトステロール（化合物Ｚ１０）、エルゴステロールペルオキシド（化合物Ｚ１１）、イノノツサンＣ（化合物Ｚ１２）、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン（化合物Ｚ１３）、イノノツトリオールＡ（化合物Ｚ１４）の少なくとも１種を有効成分として含有する。有効成分としては、前述の１４化合物のうちの１種を単独で、または２種以上を併用して用いることができる。例えば化合物Ｚ１〜Ｚ５の５化合物を含むカバノアナタケの抽出物を用いる場合、育毛剤中における抽出物の含有量は、０．１〜５．０質量％程度とすることができる。また、化合物Ｚ１〜Ｚ１４の１４化合物を含むカバノアナタケの抽出物を用いる場合、育毛剤中における抽出物の含有量は、０．１〜１０質量％程度とすることができる。

また、本発明に係る育毛剤は、ラノスタン型トリテルペンを有効成分として含有する。有効成分としてのラノスタン型トリテルペンである化合物は、１種を単独で、または２種以上を含むことができる。

本発明に係る育毛剤には、必要に応じ水、低級アルコール（メタノール、エタノール、変性エタノール、イソプロピルアルコール等）、溶解補助剤、界面活性剤、乳化安定剤、ゲル化剤、粘着剤、その他、所望する剤型を得るために通常使用される基剤成分を配合することができる。

本発明に係る育毛剤の使用目的に応じて、育毛剤に慣用される他の成分を、本発明の効果を損なわない範囲で配合してもよい。他の成分としては、例えば、ミノキシジル、塩化カルプロニウム等の血管拡張剤；スピロノラクトン、フルタミド、シプロテロンアセテート、オキセンドロン等の男性ホルモン受容体阻害剤；フィナステライド、エピリステライド等のステロイド−５α−レダクターゼ阻害剤；グリチルレチン酸、アズレン等の抗炎症剤；酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸デキサメサゾン等の副腎皮質ホルモン；尿素、サリチル酸等の角質溶解剤；プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、マクロゴール、グリセリン、ジプロピレングリコール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類；グリセリルモノペンタデカノエート等の脂肪酸グリセリンエステル、塩酸ジフェンヒドラミン等の抗ヒスタミン剤などが挙げられる。

さらに、グルコン酸クロルヘキシジン、イソプロピルペチルフェノール、第４級アンモニウム塩、ヒノキチオール、ピロクトンオラミン等の殺菌剤；ヒアルロン酸ナトリウム、グリセリン、コンドロイチン硫酸等の保湿剤；イチイ、ボタンビ、カンゾウ、オトギリソウ、附子、ビワ、カワラヨモギ、コンフリー、アシタバ、サフラン、サンシシ、ローズマリー、セージ、モッコウ、セイモッコウ、ホップ、プラセンタなどの動植物の抽出物；酢酸レチノール、塩酸ピリドキシン、アスコルビン酸、硝酸チアミン、シアノコバラミン、ビオチン、酢酸トコフェノール等のビタミン類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、スクワラン、流動パラフィン、レシチン等の油分；ポリオキシエチレンソルビダン脂肪酸エステル、ソルビダン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などの界面活性剤；ジブチルヒドロキシトルエン、イソプロピルガレート等の抗酸化剤、エチレンジアミンテトラアセテート等のキレート剤、メントール、カンフル等の清涼化剤が挙げられる。場合によっては、色素、香料、経皮吸収促進剤等を配合してもよい。

本発明に係る育毛剤は、外用剤であることが好ましく、外用剤として通常用いられる任意の剤型として使用することができる。剤型としては、例えばローション剤、乳剤、クリーム剤、トニック剤、軟膏剤、ゲル剤及びエアゾール剤等が挙げられるが、限定されるものではない。本発明に係る育毛剤は、例えば、１日１〜数回、適量を頭皮に塗布して使用することができる。

本発明に係る育毛剤は、例えば、育毛機構、育毛により改善される症状の研究、育毛の促進により改善される症状の予防や治療に利用することができる。本発明に係る育毛剤の具体的な態様としては、例えば、試薬用途の育毛剤や、症状の予防・治療用途の育毛剤が挙げられる。症状としては、例えば、男性型脱毛症などが挙げられる。

本発明に係る育毛剤は、ラノステロール（化合物Ｚ１）、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール（化合物Ｚ２）、イノトジオール（化合物Ｚ３）、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（化合物Ｚ４）、トラメテノール酸（化合物Ｚ５）、エルゴステロール（化合物Ｚ６）、ステラステロール（化合物Ｚ７）、イノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）、ベツリン（化合物Ｚ９）、β−シトステロール（化合物Ｚ１０）、エルゴステロールペルオキシド（化合物Ｚ１１）、イノノツサンＣ（化合物Ｚ１２）、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン（化合物Ｚ１３）、イノノツトリオールＡ（化合物Ｚ１４）の少なくとも１種を有効成分として含有するので、毛乳頭細胞増殖促進作用、ＦＧＦ−７産生促進作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用及びＨＧＦ産生促進作用のうちのいずれか１または２以上の作用を備えている。

イノトジオール（化合物Ｚ３）及び３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（化合物Ｚ４）は、上述した作用に加えて、さらにテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用を有している。したがって、例えば、５種類のラノスタン型トリテルペノイドである化合物Ｚ１〜Ｚ５を全て含むことにより、毛乳頭細胞増殖促進作用、ＦＧＦ−７産生促進作用、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用及びＨＧＦ産生促進作用に優れるとともに、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用を備えた育毛剤を得ることができる。もちろん、イノトジオール（化合物Ｚ３）と３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（化合物Ｚ４）の一方または両方と、化合物５種及び９種化合物の他の１または複数の化合物との組み合わせによっても、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用を備えた育毛剤を得ることができる。

以下に実施例を説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。

（実施例１）
実施例１は、カバノアナタケから抽出物を抽出した実施例である。
１）カバノアナタケの子実体の刻み５．０ｋｇ（ロシア産；ロット番号Ｎｏ．１３１００８、チハヤ株式会社）に８０％エタノールを加え、室温で抽出した。
２）上記１）で得られた抽出物を５０％エタノールで溶解・吸引濾過して、不溶部（５６．１ｇ）と可溶部（１８３．０ｇ）とを得た。すなわち、抽出物を５０％エタノールで溶解処理した処理液を吸引濾過することで、可溶部と不溶部とに分離した。なお、溶解処理で得た処理液は、懸濁した状態の懸濁液であった。
なお、８０％エタノール、５０％エタノールは、いずれもエタノール水溶液であり、エタノール水溶液の全体積に対するエタノールの体積が８０％、５０％である。以下、同様に表記する。

不溶部には、極性の低い化合物すなわち低極性化合物が含有される。一方、極性の高い化合物すなわち高極性化合物、例えばイノシトールは２５℃における水への溶解度が１４ｇ／１００ｍＬであることから、可溶部に含まれる。

（実施例２）
実施例２は、実施例１で得られたカバノアナタケからの抽出物から、ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン及びトラメテノール酸（化合物Ｚ１〜Ｚ５）を単離した実施例である。

得られた５０％エタノール不溶部１ｇから、化合物Ａ（８４．８ｍｇ）、化合物Ｂ（５５．０ｍｇ）、化合物Ｃ（２１９．９ｍｇ）、化合物Ｄ（２８．１ｍｇ）及び化合物Ｅ（１１７．６ｍｇ）を単離した。具体的には、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて、ヘキサン：酢酸エチルの混合溶媒（１２：１→１０：１→９：１→８：１→４：１→２：１）を用い、グラジェント溶出を行った（分画操作１）。

単離された化合物Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ及びＥの分子構造を¹³Ｃ−ＮＭＲ及び¹Ｈ−ＮＭＲにより解析し、実測値を文献値と比較した。その結果、以下に記載するように、化合物Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ及びＥは、いずれも上記一般式（ＬＴＴ）で表わされるラノスタン型トリテルペノイドであることが確認された。

なお、この実施例において、可溶部は、エタノール水溶液に実際に溶解した物質（化合物）からなる溶解部を、また不溶部ないし５０％エタノール不溶部は、実際に溶解しなかった物質（化合物）からなる非溶解部を意味する。本実施例では、化合物Ｚ１〜Ｚ５を不溶部から抽出したが可溶部からの抽出を否定するものではない。後述の化合物Ｚ６〜Ｚ１４の抽出についても同様である。

化合物Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ及びＥについての¹³Ｃ−ＮＭＲ及び¹Ｈ−ＮＭＲの実測値を、下記表１，２，３，４及び５に示す。

以上の実測値を、下記文献１）〜４）の値と比較して、化合物Ａ〜Ｄを同定した。
１）秋久俊博，松本太郎，ステロール及びトリテルペンアルコールの¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル，油化学，Ｖｏｌ．３６（５），：３０１−３１９，１９８７
２）Satoru Sawai, Tomoyoshi Akashi, Nozomu Sakurai, Hideyuki Suzuki, Daisuke Shibata, Shin-ichi Ayabe, and Toshio Aoki Satoru, Plant Lanosterol Synthase: Divergence of the Sterol and Triterpene Biosynthetic Pathways in Eukaryotes, Plant Cell Physiol (May 2006) 47 (5): 673-677, supplementary data
３）Zheng-Fei Yan, Yang Yang, Feng-Hua Tian, Xin-Xin Mao, Yu Li, and Chang-Tian Li, Inhibitory and Acceleratory Effects of Inonotus obliquus on Tyrosinase Activity and Melanin Formation in B16 Melanoma Cells, Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine,Vol.2014, 1-11.
４）Kahlos, Kirsti; Hiltunen, R.; Von Schantz, M., 3β-Hydroxylanosta-8,24-dien-21-al, a new triterpene from Inonotus obliquus, Planta Medica (1984), 50(2), 197-8.

化合物Ａの実測値は文献１）〜３）に記載されている値と比較し、化合物Ｂ，Ｄの実測値は文献４）に記載されている値と比較した。化合物Ｃ，Ｅの実測値は、文献３）、４）に記載されている値と比較した。

化合物Ａは、上記一般式（ＬＴＴ）において、Ｒ¹＝ＣＨ₃かつＲ²＝Ｈの化合物、すなわち、下記化学式（Ｓ１）で表わされるラノステロール（化合物Ｚ１）と同定された。

化合物Ｂは、上記一般式（ＬＴＴ）において、Ｒ¹＝ＣＨＯかつＲ²＝Ｈの化合物、すなわち、下記化学式（Ｓ２）で表わされる３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール（化合物Ｚ２）と同定された。

化合物Ｃは、上記一般式（ＬＴＴ）において、Ｒ¹＝ＣＨ₃かつＲ²＝ＯＨの化合物、すなわち、下記化学式（Ｓ３）で表わされるイノトジオール（化合物Ｚ３）と同定された。

化合物Ｄは、上記一般式（ＬＴＴ）において、Ｒ¹＝ＣＨ₂ＯＨかつＲ²＝Ｈの化合物、すなわち、下記化学式（Ｓ４）で表わされる３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（化合物Ｚ４）と同定された。

化合物Ｅは、上記一般式（ＬＴＴ）において、Ｒ¹＝ＣＯＯＨかつＲ²＝Ｈの化合物、すなわち、下記化学式（Ｓ５）で表わされるトラメテノール酸（化合物Ｚ５）と同定された。

（実施例３）
実施例３は、実施例２で単離した５種類のラノスタン型トリテルペノイド（化合物Ｚ１〜Ｚ５）について、毛乳頭細胞増殖促進作用試験を行った実施例である。

まず、正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（東洋紡績株式会社製、商品名「ヒト頭髪毛乳頭細胞 Human Follicle Dermal Papilla Cells (ＨＦＤＰＣ) (Ｃode No.CA60205a)」）を培養した。用いた培地は、低血清培地である毛乳頭細胞増殖培地（東洋紡績株式会社製、商品名「毛乳頭細胞増殖培地」（PCGM）（Ｃｏｄｅ.TMTPGM-250））の基礎培地２５０ｍＬに、培地添加物であるウシ胎児血清（ＦＣＳ）２．５ｍＬ、インスリン・トランスフェリン・トリヨードサイロニン混液（ＩＴＴ）１．２５ｍＬ、牛下垂体抽出液（ＢＰＥ）２．５ｍＬ及びサイプロテロンアセテート（Ｃｙｐ）１．２５ｍＬを添加した毛乳頭細胞増殖培地である。

３７℃、５％ＣＯ_２で培養された細胞を、トリプシン／ＥＤＴＡ溶液（０．０５％濃度）によりトリプシン処理した。処理後の細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコ変法イーグル培地ＤＭＥＭ（ナカライテスク株式会社製、以下、「ＤＭＥＭ」と略記する）を用いて、１．０×１０^４細胞／ｍＬの濃度に希釈した。希釈された細胞を、９６ウエルのマイクロプレートFalcon（登録商標）（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ社製、商品名「ＭＩＣＲＯＴＥＳＴ^ＴＭ ９６」）に、２００μＬ／ウエルで播種した。３日間培養した後、培地を吸引除去した。

被験試料としての化合物Ｚ１〜Ｚ５を、所定の濃度で無血清ＤＭＥＭに溶解した。濃度は、０．０１９５３μｍｏｌ／Ｌ、０．０７８１２５μｍｏｌ／Ｌ、０．３１２５μｍｏｌ／Ｌ、１．２５μｍｏｌ／Ｌ、５μｍｏｌ／Ｌ、２０μｍｏｌ／Ｌとした。溶解された各被験試料を、上記の細胞を播種した９６ウエルマイクロプレートの各ウエルに２００μＬ／ウエルの量で添加した。さらに４日間培養した後、上記培地を吸引除去した。毛乳頭細胞増殖作用は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。即ち、ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２―イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）を、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで無血清のＤＭＥＭに溶解し、１００μＬ／ウエルで添加した。

２時間培養後、細胞内にブルーホルマザンの生成が確認された。このブルーホルマザンを、５０μＬの２−プロパノールで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定して、第１の吸光度を得た。同時に、濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定して、第２の吸光度を得た。第１の吸光度と第２の吸光度の差をもってブルーホルマザン生成量とした。毛乳頭細胞増殖促進率（％）は、下記式（１）により算出した。

毛乳頭細胞増殖促進率（％）＝Ａ１／Ｂ１ × １００
・・・式（１）
Ａ１：被験試料添加時のブルーホルマザン生成量
Ｂ１：被験試料無添加時のブルーホルマザン生成量

化合物Ｚ１〜Ｚ５のそれぞれについて算出された毛乳頭細胞増殖促進率を、下記表６にまとめる。毛乳頭細胞増殖促進率は、化合物Ｚ１〜Ｚ５の各濃度について、それぞれ６点求めた。６点の平均値及び標準誤差を、（平均値±標準誤差）として表６中に示す。参照としては、毛乳頭細胞増殖促進作用を有することが知られているミノキシジルを用いた。

上記表６に示されるように、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（化合物Ｚ４）は、０．３１２５μｍｏｌ／Ｌという低濃度で、８０μｍｏｌ／Ｌのミノキシジルに匹敵する毛乳頭細胞増殖促進作用を示すことが認められた。また、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（化合物Ｚ４）は、１．２５μｍｏｌ／Ｌの濃度では、８０μｍｏｌ／Ｌのミノキシジルを超える毛乳頭細胞増殖促進作用が得られている。

トラメテノール酸（化合物Ｚ５）もまた、０．３１２５μｍｏｌ／Ｌという低濃度で、８０μｍｏｌ／Ｌのミノキシジルと同程度の毛乳頭細胞増殖促進作用が得られている。０．３１２５μｍｏｌ／Ｌのイノトジオール（化合物Ｚ３）及び２０μｍｏｌ／Ｌのラノステロール（化合物Ｚ１）にも、８０μｍｏｌ／Ｌのミノキシジルに近い毛乳頭細胞増殖促進作用が確認された。

５種類のラノスタン型トリテルペノイド（化合物Ｚ１〜Ｚ５）の低濃度における毛乳頭細胞増殖促進作用試験の結果を、下記表７及び図１に示す。これらの表７及び図１には、比較のために、ミノキシジルについての結果も合わせて示してある。

３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール（化合物Ｚ２）もまた、０．０１９５３μｍｏｌ／Ｌ及び０．０７８１２５μｍｏｌ／Ｌという低濃度で、８０μｍｏｌ／Ｌのミノキシジルを超える毛乳頭細胞増殖促進作用が得られている。

実施例３の結果から、ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン及びトラメテノール酸、（化合物Ｚ１〜Ｚ５）は、毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分となり得ることが確認された。これらの化合物Ｚ１〜Ｚ５は、ミノキシジルより低濃度でミノキシジルを超える毛乳頭細胞増殖促進作用を示している。したがって、ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン及びトラメテノール酸（化合物Ｚ１〜Ｚ５）は、ミノキシジルより毛乳頭細胞増殖促進作用が優れていることがわかる。

（実施例４）
実施例４は、実施例２で単離した５種類のラノスタン型トリテルペノイド（化合物Ｚ１〜Ｚ５）の混合物について、毛乳頭細胞増殖促進作用試験を行った実施例である。

混合物における各化合物の濃度（選択濃度）は、ラノステロール（２０μｍｏｌ／Ｌ），３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール（０．３１２５μｍｏｌ／Ｌ），イノトジオール（０．３１２５μｍｏｌ／Ｌ），３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（５μｍｏｌ／Ｌ）及びトラメテノール酸（１．２５μｍｏｌ／Ｌ）とした。

この混合物について、上述と同様の手法により毛乳頭細胞増殖促進作用試験を行った。算出された毛乳頭細胞増殖促進率を、各種濃度のミノキシジルについての結果とともに、下記表８にまとめる。

上記表８に示されるように、５種類のラノスタン型テルペノイドである化合物Ｚ１〜Ｚ５を所定の濃度で含む混合物は、２０μｍｏｌ／Ｌのミノキシジルを超える毛乳頭細胞増殖促進作用を示すことが認められた。

（実施例５）
実施例５は、実施例２で単離した５種類のラノスタン型トリテルペノイド（化合物Ｚ１〜Ｚ５）について、ヘアサイクルに関与する各種増殖因子遺伝子に対する産生促進試験を行った実施例である。産生促進試験は、ｍＲＮＡの発現を評価するｍＲＮＡ発現促進作用試験により行った。

ヒト正常毛乳頭細胞（ＨＦＤＰＣ：頭頂部由来）を６０ｍｍシャーレに播種し、ヒト正常毛乳頭細胞用培地（ＰＣＧＭ）を用いて培養した。細胞がコンフルエントになった後、培地を１０％ＦＢＳ含有のＤＭＥＭ培地へ交換して２時間培養した。被験試料としての化合物Ｚ１〜Ｚ５は、所定の濃度で無血清のＤＭＥＭ培地に溶解した。濃度は、１．２５μｍｏｌ／Ｌ、５μｍｏｌ／Ｌ、２０μｍｏｌ／Ｌとした。

溶解された各被験試料を、培養後の各シャーレに３ｍＬずつ添加した。さらに６時間培養後、一般的な方法によりtotalＲＮＡを調製した。被験試料無添加で培養した細胞についても、同様にtotalＲＮＡを調製した。それぞれのＲＮＡ量を分光光度計で測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにtotalＲＮＡを調製した。

このtotalＲＮＡを鋳型とし、ヘアサイクルに関与する各種増殖因子及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（登録商標）（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR（登録商標）Prime Script TM RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (code No.RR063A)によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。

各種増殖因子のｍＲＮＡ発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し算出した。各種増殖因子ｍＲＮＡの発現率は、下記式（２）により算出した。
各種増殖因子ｍＲＮＡ発現率（％）＝Ａ２／Ｂ２ × １００
・・・式（２）
Ａ２：被験試料添加時の補正値
Ｂ２：被験試料無添加時（コントロール）の補正値

上記増殖因子としては、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）及び肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）について調べた。

化合物Ｚ１〜Ｚ５のそれぞれについての各種増殖因子ｍＲＮＡ発現率を、下記表９〜表１３にまとめる。表９〜表１３に示すｍＲＮＡ発現率は、それぞれ１点について、コントロールを１００％とした相対値である。さらに、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用を有することが従来から知られているアデノシンについて、ｍＲＮＡ発現率を下記表１４にまとめる。

上記表に示されるように、ラノステロール（化合物Ｚ１）、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール（化合物Ｚ２）、イノトジオール（化合物Ｚ３）及び３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（化合物Ｚ４）には、被験試料無添加の１．２〜１．６倍程度のＦＧＦ−７ ｍＲＮＡ産生促進作用が認められている。

実施例５の結果から、ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール及び３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（化合物Ｚ１〜Ｚ４）のそれぞれは、ＦＧＦ−７産生促進剤の有効成分となり得ることが確認された。これらの化合物Ｚ１〜Ｚ４は、いずれも５μｍｏｌ／Ｌという低濃度で、２５μｍｏｌ／Ｌのアデノシンと同等以上の産生促進作用を示すことから、従来知られているアデノシンよりＦＧＦ−７産生促進作用が優れていることがわかる。

上記表１３に示されるように、２０μｍｏｌ／Ｌのトラメテノール酸（化合物Ｚ５）は、被験試料無添加の１．５倍程度のＶＥＧＦ ｍＲＮＡ発現促進作用が認められている。トラメテノール酸（化合物Ｚ５）は、ＶＥＧＦ産生促進剤の有効成分となり得ることが、実施例５の結果に示されている。しかも、トラメテノール酸（化合物Ｚ５）は、２０μｍｏｌ／Ｌでも、２５μｍｏｌ／Ｌのアデノシンを超えるＶＥＧＦ ｍＲＮＡ発現促進作用を示しており、従来知られているアデノシンよりＶＥＧＦ産生促進作用が優れている。

さらに、イノトジオール（化合物Ｚ３）には、被験試料無添加の１．２倍程度のＩＧＦ−１ ｍＲＮＡ発現促進作用が確認された。３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール（化合物Ｚ２）及びイノトジオール（化合物Ｚ３）には、ＨＧＦ ｍＲＮＡ発現促進作用が確認された。イノトジオール（化合物Ｚ３）は、ＩＧＦ−１産生促進剤の有効成分として用いることができる。３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール（化合物Ｚ２）及びイノトジオール（化合物Ｚ３）のそれぞれは、ＨＧＦ産生促進剤の有効成分として用いることができる。

（実施例６）
実施例６は、実施例２で単離した５種類のラノスタン型トリテルペノイド（化合物Ｚ１〜Ｚ５）について、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用試験を行った実施例である。

テストステロンをプロピレングリコールに溶解して、濃度４．２ｍｇ／ｍＬの溶液を調製した。この溶液２０μＬと、１ｍｇ／ｍＬ ＮＡＤＰＨ含有５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔns−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１３）８２５μＬとを、蓋付きＶ底試験管で混合した。被験試料としての化合物Ｚ１〜Ｚ５は、エタノール、５０％エタノールまたは精製水に溶解して溶液を調製した。

前述の蓋付きＶ底試験管中の混合液に、被験試料の溶液８０μＬ及びＳ−９ラット肝ホモジネート７５μＬを加えて再び混合した。試験管中の内容物を３７℃で６０分間反応させた後、塩化メチレン１ｍＬを加えて反応を停止した。反応後の混合物を遠心分離（１６００×ｇ、１０分）し、塩化メチレン相について、下記の条件でガスクロマトグラフィー分析を行った。さらに、同様の方法で空試験を行った。

テストステロンから３α−アンドロスタンジオール及びジヒドロテストステロンへの変換率を求めるために、予め、３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン及びテストステロンの標準品のエタノール溶液をガスクロマトグラフィー分析し、これら３化合物のピーク面積を求めた。

Ｓ−９による反応後の３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン及びテストステロンそれぞれのピーク面積について、標準品のピーク面積に対する相対比を下記式（３）にしたがって求めた。その後、式（４）にしたがって被験試料の変換率を算出した。

相対比＝被験試料のピーク面積／標準品のピーク面積 ・・・式（３）
変換率（％）＝（Ａ３＋Ｂ３）／（Ａ３＋Ｂ３＋Ｃ３）×１００
・・・式（４）
Ａ３：３α−アンドロスタンジオールの相対比
Ｂ３：ジヒドロテストステロンの相対比
Ｃ３：テストステロンの相対比

算出された変換率に基づき、下記式（５）にしたがってテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率を求めた。
テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率（％）
＝（１−Ｅ／Ｄ）×１００ ・・・式（５）
Ｄ：空試験での変換率
Ｅ：被験試料添加での変換率

なお、ガスクロマトグラフィーの条件は、以下のとおりである。
使用機器 ：Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＧＣ−２０１０
カラム ：ＤＢ−１７０１
（φ０．５３ｍｍ×３０ｍ。膜厚：１．０μｍ）
カラム／注入温度 ：２４０℃／３００℃
検出器 ：ＦＩＤ
キャリアガス ：窒素ガス

化合物Ｚ１〜Ｚ５についてのテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率及び５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀）を、陽性対照としてのβ−エストラジオールの結果とともに、下記表１５にまとめる。

実施例６の結果から、イノトジオール（化合物Ｚ３）及び３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン（化合物Ｚ４）は、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用を有することが確認された。

（実施例７）
実施例７は、実施例１で得られたカバノアナタケからの抽出物から、エルゴステロール（化合物Ｚ６）、ステラステロール（化合物Ｚ７）、イノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）、ベツリン（化合物Ｚ９）、β−シトステロール（化合物Ｚ１０）、エルゴステロールペルオキシド（化合物Ｚ１１）、イノノツサンＣ（化合物Ｚ１２）、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン（化合物Ｚ１３）、イノノツトリオールＡ（化合物Ｚ１４）をそれぞれ抽出した実施例である。

実施例１で得られた５０％エタノール不溶部から、以下に説明する手順により、化合物Ｆ、化合物Ｇ、化合物Ｈ１、化合物Ｈ２、化合物Ｉ、化合物Ｊ、化合物Ｋ、化合物Ｌ、化合物Ｍ、化合物Ｎを得た。

実施例２の分画操作１の際に得られる１８個のフラクションＦＡ１〜ＦＡ１８のうちの５番目〜７番目のフラクションＦＡ５〜ＦＡ７のそれぞれから溶離溶媒を除去して分取物を得た。フラクションＦＡ５〜ＦＡ７から得た分取物の混合物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離溶媒：「ヘキサン：酢酸エチルの混合溶媒（１２：１）」）にて、９個のフラクションＦＢ１〜ＦＢ９に分画した（分画操作２）。

分画操作２で得られるフラクションＦＢ１〜ＦＢ９のうちの６番と７番目のフラクションＦＢ６、ＦＢ７のそれぞれから溶離溶媒を除去して分取物を得た。フラクションＦＢ６、ＦＢ７から得た分取物の混合物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離溶媒：トルエン→「トルエン：アセトンの混合溶媒（３０：１→１５：１）」→酢酸エチル）にて１０個のフラクションＦＣ１〜ＦＣ１０に分画した（分画操作３）。

なお、上記溶離溶媒の説明における矢印は、溶離溶媒の組成ないしそれに用いる混合溶媒の比率を変化させることを示し、グラジェント溶出を行っていることを意味する。後述する、高速液体クロマトグラフィーに用いる溶離液についても同様である。

分画操作３で得られるフラクションＦＣ１〜ＦＣ１０のうちの３番目のフラクションＦＣ３から溶離溶媒を除去したものを化合物Ｆ（１２．０ｍｇ）として取得した。また、４番目のフラクションＦＣ４から溶離溶媒を除去したものを化合物Ｇ（４．３ｍｇ）として取得した。

また、実施例１で得られた５０％エタノール不溶部３９．４ｇを、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離溶媒：「ヘキサン：酢酸エチルの混合溶媒（１２：１→１１：１→１０：１→９：１→８：１→６：１→４：１→２：１）」）にて、８個のフラクションＦＤ１〜ＦＤ８に分画した（分画操作４）。

フラクションＦＤ１〜ＦＤ８のうちの４番のフラクションＦＤ４から溶離溶媒を除去した分取物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離溶媒：「ヘキサン：酢酸エチルの混合溶媒（１５：１→１３：１→１０：１→８：１→６：１→４：１）」）にて１１個のフラクションＦＥ１〜ＦＥ１１に分画した（分画操作５）。

フラクションＦＥ１〜ＦＥ１１のうちの８番目と９番目のフラクションＦＥ８，ＦＥ９のそれぞれから溶離溶媒を除去して分取物を得た。フラクションＦＥ８，ＦＥ９から得た分取物の混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離溶媒：「トルエン：アセトンの混合溶媒（２０：１→１９：１→１８：１）」）にて６個のフラクションＦＦ１〜ＦＦ６に分画した（分画操作６）。

分画操作５によるフラクションＦＥ１〜ＦＥ１１のうちの６番目及び７番目のフラクションＦＥ６、ＦＥ７と、分画操作６によるフラクションＦＦ１〜ＦＦ６のうちの１番目のフラクションＦＦ１とからそれぞれ溶離溶媒を除去し、それぞれ分取物を得た。フラクションＦＥ６、ＦＥ７及びフラクションＦＦ１からの得た各分取物の混合物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離溶媒：「ヘキサン：酢酸エチルの混合溶媒（１２：１→１０：１→９：１→８：１→７：１）」）にて１４個のフラクションＦＧ１〜ＦＧ１４に分画した（分画操作７）。

上記分画操作７で得られたフラクションＦＧ１〜ＦＧ１４のうちの８番目のフラクションＦＧ８から溶離溶媒を除去したものを化合物Ｊ（１１３．９ｍｇ）として取得した。

分画操作４によるフラクションＦＤ１〜ＦＤ８のうちの６番目のフラクションＦＤ６から溶離溶媒を除去した分取物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離溶媒：「トルエン：アセトンの混合溶媒（３０：１→２５：１→２０：１→１５：１）」）にて１０個のフラクションＦＨ１〜ＦＨ１０に分画した（分画操作８）。

分画操作８で得られたフラクションＦＨ１〜ＦＨ１０のうちの５番目のフラクションＦＨ５から溶離溶媒を除去したものを化合物Ｈ１（２０９ｍｇ）として取得した。また、６番目のＦＨ６から溶離溶媒を除去したものを化合物Ｈ２（１２０．８ｍｇ）として取得した。

フラクションＦＨ１〜ＦＨ１０のうちの７番目と８番目のフラクションＦＨ７、ＦＨ８のそれぞれから溶離溶媒を除去した分取物を得た。フラクションＦＨ７、ＦＨ８から得た分取物の混合液を、高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｎ−２タイプ、溶離液：「ヘキサン：酢酸エチルの混合溶媒（８：２）」、流量７．０ｍＬ／分）にて８個のフラクションＦＩ１〜ＦＩ８に分画した（分画操作９）。

分画操作９で得られたフラクションＦＩ１〜ＦＩ８のうちの４番目のフラクションＦＩ４から溶離溶媒を除去したものを化合物Ｉ（１０．２ｍｇ）として取得した。

また、分画操作８により得られたフラクションＦＨ１〜ＦＨ１０のうちの９番目のフラクションＦＨ９から溶離溶媒を除去した分取物を得、この分取物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離溶媒：「ヘキサン：酢酸エチルの混合溶媒（６：１→５：１→４：１→３：１）」）にて１２個のフラクションＦＪ１〜ＦＪ１２に分画した（分画操作１０）。

分画操作１０で得られたフラクションＦＪ１〜ＦＪ１２のうちの９番目のフラクションＦＪ９から溶離溶媒を除去したものを化合物Ｋ（９．４ｍｇ）として取得した。

分画操作４によるフラクションＦＤ１〜ＦＤ８のうちの８番目のフラクションＦＤ８から溶離溶媒を除去した分取物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離溶媒：「ヘキサン：酢酸エチルの混合溶媒（６：１→４：１→２：１→１：１）」）にて１３個のフラクションＦＫ１〜ＦＫ１３に分画した（分画操作１１）。

分画操作１１により得られたフラクションＦＫ１〜ＦＫ１３のうち１０番目のフラクションＦＫ１０から溶離溶媒を除去した分取物を得た。このフラクションＦＫ１０から得た分取物を、高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｎ−６タイプ、溶離液：「ヘキサン：酢酸エチルの混合溶媒（６：１）」、流量３．０ｍＬ／分）にて、１８個のフラクションＦＬ１〜ＦＬ１８に分画した（分画操作１２）。

フラクションＦＬ１〜ＦＬ１８のうちの１７番目のフラクションＦＬ１７を、高速液体クロマトグラフィー（カラム：Ｒ−４１タイプ、溶離液：「アセトニトリル（ＣＨ_３ＣＮ）：水（Ｈ_２Ｏ）の混合溶媒（７：３）」、流量５．０ｍＬ／分）にて、１２個のフラクションＦＬ１〜ＦＬ１２に分画した（分画操作１３）。

分画操作１３で得られるフラクションＦＬ１〜ＦＬ１２のうちの２番目のフラクションＦＬ２から溶離溶媒を除去したものを化合物Ｍ（７．７ｍｇ）として、１２番目のフラクションＦＬ１２から溶離溶媒を除去したものを化合物Ｎ（４７．３ｍｇ）としてそれぞれ取得した。

以上のようにして得た化合物Ｆ、Ｇ、Ｈ１、Ｈ２、Ｉ〜Ｎの分子構造を^１３Ｃ−ＮＭＲ及び^１Ｈ−ＮＭＲにより解析した。この結果、化合物Ｈ１と化合物Ｈ２とは同一の化合物を抽出したものと確認された。また、化合物Ｌ(４７．３ ｍｇ)は、分画操作１で得られるフラクションＦＡ１〜ＦＡ１８のうちの１０番目のフラクションＦＡ１０から取得される化合物と同一の化合物を抽出したものと確認された。さらに、化合物Ｉは、１２番目のフラクションＦＡ１２から取得される化合物と、化合物Ｎは、１６番目のフラクションＦＡ１６から取得される化合物とそれぞれ同一の化合物を抽出したものと確認された。

化合物Ｆ、Ｇ、Ｈ１、Ｈ２及びＩ〜Ｎの^１３Ｃ−ＮＭＲ及び^１Ｈ−ＮＭＲの実測値を文献値と比較した。その結果、以下に記載するように、化合物Ｆ、Ｇ、Ｈ１、Ｈ２及びＩ〜Ｎは、エルゴステロール（化合物Ｚ６）、ステラステロール（化合物Ｚ７）、イノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）、ベツリン（化合物Ｚ９）、β−シトステロール（化合物Ｚ１０）、エルゴステロールペルオキシド（化合物Ｚ１１）、イノノツサンＣ（化合物Ｚ１２）、ラノスタ−８，２３ Ｅ−ジエン−３β−，２２Ｒ，２５−トリオール（化合物Ｚ１３）、イノノツトリオールＡ（化合物Ｚ１４）を抽出したものであることが確認された。

化合物Ｆ、Ｇ、Ｈ１、Ｈ２及びＩ〜Ｎについての^１３Ｃ−ＮＭＲ及び^１Ｈ−ＮＭＲの実測値を、表１６〜表２４に示す。なお、表２１には、他の分画操作で得られ化合物Ｋと同一と確認された化合物Ｋ０の実測値を、表２２にはフラクションＦＡ１０から取得された化合物Ｌ０の実測値をあわせて示す。

化合物の同定は、実測値を上記文献１）と次の文献５）〜１４）とに記載された文献値とを比較することによって行った。
５） Seo, Hyo Won; Arch.Pharm. Res., 2009, 32(11), 1573-1579
６） Jeffrey L.C. Wright, Can. J. Chem.,1979, 57,2569-2571
７） Alejandro F. Barrero,et.al.,A.C.S.and A.S.P,1998,1491-1496
８） You-Min Ying,et.al.,Phytochemistry,2014,108,171-176
９） Mochammad Sholichin,Kazuo Yamasaki, Ryoji Kasai and Osamu,Chem.Pharma.Bull.,1980, 28(3), 1006-1008
１０） Kuo-Ching Kao, Yu-Ling Ho, I-Hsin Lin,Li-Kang Ho and Yuan-Shiun Chang, J. Chin. Chem. Soc.,2004, 51(1),199-204
１１） Garg. V.K., and Nes, W.R., Phytochemistry, 1984, 23, 2925-2929
１２） T. Akihisa, S. Thakur, F.U. Rosenstein, T. Matsumoto, Lipids, 1986, 21, 39-47
１３） Zhao Fenqin, et.al.Fitoterapia,2015,101,34-40
１４） S Taji, et al., European Journal of Medicinal Chemistry 43 (2008),2373-2379
１５） Sayaka Taji, Takeshi Yamada and Reiko Tanaka,Helvetica Chimica Acta, 2008,91,1513-1524

化合物Ｆ、Ｇの実測値は文献１）、５）〜７）に記載されている値と比較し、化合物Ｈの実測値は文献８）に記載されている値と比較し、化合物Ｉの実測値は文献９）、１０）に記載されている値と比較した。また、化合物Ｊの実測値は文献１）、１１）、１２）に記載されている値と比較し、化合物Ｋの実測値は文献５）に記載されている値と比較し、化合物Ｌの実測値は文献１３）に記載されている値と比較した。さらに、化合物Ｍの実測値は文献１４）に記載されている値と比較し、化合物Ｎの実測値は文献１５）に記載されている値と比較した。

化合物Ｆは、下記化学式（Ｓ６）で表わされるエルゴステロール（化合物Ｚ６）と判断できた。

化合物Ｇは、下記化学式（Ｓ７）で表わされるステラステロール（化合物Ｚ７）と判断できた。

化合物Ｈ１、Ｈ２は、下記化学式（Ｓ８）で表わされるイノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）と判断できた。

化合物Ｉは、下記化学式（Ｓ９）で表わされるベツリン（化合物Ｚ９）と判断できた。

化合物Ｊは、下記化学式（Ｓ１０）で表わされるβ−シトステロール（化合物Ｚ１０）と判断できた。

化合物Ｋは、下記化学式（Ｓ１１）で表わされるエルゴステロールペルオキシド（化合物Ｚ１１）と判断できた。

化合物Ｌは、下記化学式（Ｓ１２）で表わされるイノノツサンＣ（化合物Ｚ１２）と判断できた。

化合物Ｍは、下記化学式（Ｓ１３）で表わされる３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン（化合物Ｚ１３）と判断できた。

化合物Ｎは、下記化学式（Ｓ１４）で表わされるイノノツトリオールＡ（化合物Ｚ１４）と判断できた。

（実施例８）
実施例８は、実施例７で得られた化合物Ｚ６〜Ｚ１２について、毛乳頭細胞増殖促進作用試験を行った実施例である。

上述の実施例３と同じ手法により、毛乳頭細胞増殖促進作用試験を行い、毛乳頭細胞増殖促進率を、実施例７で得たエルゴステロール（化合物Ｚ６）、ステラステロール（化合物Ｚ７）、イノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）、ベツリン（化合物Ｚ９）、β−シトステロール（化合物Ｚ１０）、エルゴステロールペルオキシド（化合物Ｚ１１）及びイノノツサンＣ（化合物Ｚ１２）について求めた。被験試料としての化合物Ｚ６〜Ｚ１２の濃度は、０．３１２５μｍｏｌ／Ｌ、１．２５μｍｏｌ／Ｌ、５μｍｏｌ／Ｌ、２０μｍｏｌ／Ｌとした。化合物Ｚ６〜Ｚ１０の試験と化合物Ｚ１、Ｚ１２の試験とは、別々に行った。各試験では、参照として化合物Ｚ１及びミノキシジルを用いた。

毛乳頭細胞増殖促進率（％）は、前述の式（１）により算出した。化合物Ｚ６〜Ｚ１０についての毛乳頭細胞増殖促進率を表２５及び図２のグラフに、化合物Ｚ１１、Ｚ１２についての毛乳頭細胞増殖促進率を表２６及び図３のグラフにそれぞれ示す。表２５、表２６には、各濃度のラノステロール（化合物Ｚ１）及びミノキシジルについての結果をあわせて示す。表２５、表２６に示される、化合物Ｚ６〜Ｚ１２、Ｚ１及びミノキシジルの濃度ごとの毛乳頭細胞増殖促進率は、それぞれ３点の平均値±標準誤差である。

表２５に示されるように、濃度が１．２５μｍｏｌ／Ｌのエルゴステロール（化合物Ｚ６）、ステラステロール（化合物Ｚ７）及びイノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）は、同濃度及びそれ以上の濃度のラノステロール（化合物Ｚ１）及びミノキシジルよりも強い毛乳頭細胞増殖促進作用を示すことが認められた。また、表２６に示されるように、濃度が０．３１５μｍｏｌ／Ｌのエルゴステロールペルオキシド（化合物Ｚ１１）及びイノノツサンＣ（化合物Ｚ１２）は、同濃度のラノステロール（化合物Ｚ１）及び同濃度以上のミノキシジルよりも強い毛乳頭細胞増殖促進作用を示すことが認められた。これらは、ラノスタン骨格が活性にとって重要であることを示唆している。

実施例８の結果から、エルゴステロール（化合物Ｚ６）、ステラステロール（化合物Ｚ７）、イノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）、エルゴステロールペルオキシド（化合物Ｚ１１）及びイノノツサンＣ（化合物Ｚ１２）は、毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分となり得ることが確認された。これらの化合物Ｚ６〜Ｚ８、Ｚ１１、Ｚ１２は、ミノキシジルより低濃度でミノキシジルを超える毛乳頭細胞増殖促進作用を示している。したがって、化合物Ｚ６〜Ｚ８、Ｚ１１、Ｚ１２は、ミノキシジルより毛乳頭細胞増殖促進作用が優れていることがわかる。

（実施例９）
実施例９は、実施例２で得た化合物Ｚ６〜Ｚ１４について、ヘアサイクルに関与する各種増殖因子遺伝子に対する産生促進試験を行った実施例である。産生促進試験は、ｍＲＮＡの発現を評価するｍＲＮＡ発現促進作用試験により行った。

エルゴステロール（化合物Ｚ６）、ステラステロール（化合物Ｚ７）、イノトラクトンＢ（化合物Ｚ８）、ベツリン（化合物Ｚ９）、β−シトステロール（化合物Ｚ１０）、エルゴステロールペルオキシド（化合物Ｚ１１）、イノノツサンＣ（化合物Ｚ１２）、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン（化合物Ｚ１３）、イノノツトリオールＡ（化合物Ｚ１４）を被験試料として、上述と実施例５と同様の手法により、ｍＲＮＡ発現促進作用試験を行った。各被験試料の濃度は、１．２５μｍｏｌ／Ｌ、５μｍｏｌ／Ｌ、２０μｍｏｌ／Ｌとした。

上記試験により、増殖因子としては、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）及び肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）の各ｍＲＮＡ発現量を求めた。増殖因子のｍＲＮＡ発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、前述の式（２）により増殖因子ｍＲＮＡ発現率（％）を算出した。 化合物Ｚ６〜Ｚ１４のそれぞれについての各種増殖因子ｍＲＮＡ発現率を、表２７〜３５にまとめる。表２７〜３５に示されるｍＲＮＡ発現率（単位：％）は、それぞれ１点について、コントロールを１００％とした相対値である。また、濃度が２５μｍｏｌ／Ｌのアデノシンについて、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）及び血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）のｍＲＮＡ発現率（％）を表３６に示す。

表２７〜表３５に示されるように、化合物Ｚ６〜Ｚ１４には、被験試料無添加の場合の１．１５〜１．６倍程度のＦＧＦ−７ ｍＲＮＡ産生促進作用が認められる。この実施例９の結果から、化合物Ｚ６〜Ｚ１４は、ＦＧＦ−７産生促進剤の有効成分となり得ることが確認された。特に、２０μｍｏｌ／Ｌの化合物Ｚ６、化合物Ｚ８及び化合物Ｚ１０は、２５μｍｏｌ／Ｌのアデノシンの１．０１〜１．０８倍程度のＦＧＦ−７ ｍＲＮＡ産生促進作用が認められ、従来知られているアデノシンよりＦＧＦ−７産生促進作用が優れていることがわかる。

表２７、表２９、表３０に示されるように、化合物Ｚ６、化合物Ｚ８及び化合物Ｚ９は、例えば１．２５μｍｏｌ／Ｌにおいて被験試料無添加の１．１倍〜１．２倍程度の、また２０μｍｏｌ／Ｌにおいて被験試料無添加の１．２〜２．１倍程度のＶＥＧＦ ｍＲＮＡ発現促進作用が認められる。この実施例９の結果から、化合物Ｚ６、化合物Ｚ８及び化合物Ｚ９は、ＶＥＧＦ産生促進剤の有効成分となり得ることが確認された。しかも、化合物Ｚ６、化合物Ｚ８及び化合物Ｚ９は、２０μｍｏｌ／Ｌ以下でも、２５μｍｏｌ／Ｌのアデノシンに匹敵ないしそれを超えるＶＥＧＦ ｍＲＮＡ発現促進作用を示しており、従来知られているアデノシンよりＶＥＧＦ産生促進作用が優れていることがわかる。

表２７〜表２９、表３１、表３３、表３４に示されるように、化合物Ｚ６〜Ｚ８、Ｚ１０、Ｚ１２、Ｚ１３は、被験試料無添加の１．１〜１．５５倍程度のＩＧＦ−１ ｍＲＮＡ発現促進作用が確認された。これにより、化合物Ｚ６〜Ｚ８、Ｚ１０、Ｚ１２、Ｚ１３は、ＩＧＦ−１産生促進剤の有効成分として用いることができることがわかる。

表２７〜表２９に示されるように、化合物Ｚ６〜Ｚ８は、被験試料無添加の１．３〜１．４倍程度のＨＧＦ ｍＲＮＡ発現促進作用が確認された。これにより、ＨＧＦ産生促進剤の有効成分として用いることができることがわかる。

以上の各実施例の結果より、化合物Ｚ１〜Ｚ１４は、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤、インシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤及び肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤としての新規な有効成分であることがわかる。また、化合物Ｚ１〜Ｚ１４は、ＦＧＦ−７、ＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１及びＨＧＦのｍＲＮＡ発現に対しては、異なる機構を介して毛髪の成長を刺激し得ると推察される。この効果は、ラノスタン骨格の８位の二重結合及び４位のジメチルの有無とは無関係に思われるが、ラノスタン型トリテルペノイドの側鎖に関係があると推察される。

（実施例１０）
実施例１０は、実施例１で得られた８０％エタノール抽出物（５０％エタノール不溶部及び可溶部）について、発毛に関する活性評価試験を行った結果である。

下記表３７には、毛乳頭細胞増殖促進作用試験の結果を示す。毛乳頭細胞増殖促進作用試験は、実施例３で説明した手法により行った。

上記表３７に示されるように、５０％エタノール不溶部は、３．１２５μｇ／ｍＬという低濃度で、４．１８５μｇ／ｍＬのミノキシジルを超える毛乳頭細胞増殖作用を示すことが認められた。この際の不溶部の毛乳頭細胞増殖作用は、１２．５μｇ／ｍＬの可溶部の毛乳頭細胞増殖促進作用に匹敵する。

下記表３８、表３９には、ヘアサイクルに関与する各種増殖遺伝子に対する産生促進試験の結果を示す。各種増殖遺伝子に対する産生促進試験は、実施例５で説明した手法により行った。表３８は、濃度を３．１２５μｇ／ｍＬとした際の結果であり、表３９は、濃度を１２．５μｇ／ｍＬとした際の結果である。さらに、アデノシンについての結果を、下記表４０にまとめる。

上記表に示されるように、５０％エタノール不溶部は、３．１２５μｇ／ｍＬという低濃度で、１３．４μｇ／ｍＬのアデノシンに匹敵するＦＧＦ−７産生促進作用及びＶＥＧＦ産生促進作用を示すことが認められた。

下記表４１には、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用試験の結果を示す。テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用試験は、実施例６で説明した手法により行った。

上記表４１には、５０％エタノール不溶部が、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用を有することが示されている。

さらに、５０％エタノール不溶部及び可溶部について、アンドロゲンレセプター拮抗阻害作用試験を行った。試験方法を以下に説明する。

まず、マウス自然発生乳がん（シオノギ癌，ＳＣ−１１５）よりクローニングされたＳＣ−３細胞を、２％ＤＣＣ−ＦＢＳ及び１０^-8ｍｏｌ／Ｌテストステロンを含有するＭＥＭ培地（ＭＥＭ／２培地）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、ＭＥＭ／２培地で１．０×１０⁵細胞／ｍＬの濃度に希釈した。希釈された細胞を、９６ウエルプレートに１００μＬ／ウエルで播種した。

一晩培養した後、培地を抜き抜いた。０．５％ＢＳＡ含有Ｈａｍ Ｆ１２＋ＭＥＭ（ＨＭＢ）に溶解した１０^−９ｍｏｌ／Ｌジヒドロテストステロンと被験試料を１００μＬ添加した。４８時間培養後、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＭＥＭ／２に溶解したＭＴＴを、１００μＬ／ウエルで添加した。

２時間培養した後、ブルーホルマザンの生成が確認された。このブルーホルマザンを、２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定して、第１の吸光度を得た。同時に、濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定して、第２の吸光度を得た。第１の吸光度と第２の吸光度の差をもってブルーホルマザン生成量とした。

空試験としてＨＭＢのみで培養した細胞を用い、陽性対照として１０^−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴのみを含有したＨＭＢで培養した細胞を用い、同様の方法で試験を行って補正した。得られた結果を、下記表４２に示す。

上記表４２には、５０％エタノール不溶部が中程度のアンドロゲンレセプター拮抗阻害作用を有することが示されている。

（実施例８）
以下に、本発明に係る育毛剤の処方例を示す。
カバノアナタケ抽出物 ０．５ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
ニンジンエキス ０．２ｇ
Ｄ−パントテニルアルコール ０．１ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム ０．３ｇ
センブリエキス ０．２ｇ
ビワ葉エキス ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ５．０ｇ
エタノール ２５．０ｇ
香料 適量
精製水 残部
合計 １００．０ｇ

Claims (13)

1. ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン及びトラメテノール酸の少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤。
2. ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール及び３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエンの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤。
3. トラメテノール酸を有効成分として含有することを特徴とする血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤。
4. イノトジオールを有効成分として含有することを特徴とするインシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤。
5. ３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール及びイノトジオールの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤。
6. ラノステロール、３β−ヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン−２１−アール、イノトジオール、３β，２１−ジヒドロキシラノスト−８，２４−ジエン及びトラメテノール酸の少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
7. エルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、エルゴステロールペルオキシド及びイノノツサンＣの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤。
8. エルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、ベツリン、β−シトステロール、エルゴステロールペルオキシド、イノノツサンＣ、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン及びイノノツトリオールＡの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤。
9. エルゴステロール、イノトラクトンＢ及びベツリンの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤。
10. エルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、β−シトステロール、イノノツサンＣ及び３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエンの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とするインシュリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）産生促進剤。
11. エルゴステロール、ステラステロール及びイノトラクトンＢの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）産生促進剤。
12. エルゴステロール、ステラステロール、イノトラクトンＢ、ベツリン、β−シトステロール、エルゴステロールペルオキシド、イノノツサンＣ、３β，２２Ｒ，２５−トリヒドロキシラノスト−８，２３Ｅ−ジエン及びイノノツトリオールＡの少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
13. ラノスタン型トリテルペンを有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
    
    

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