JPWO2013125124A1 - 標的粒子の検出方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)溶液中にて分散しランダムに運動する粒子を、発光プローブを用いて間接的に検出する方法であって、
(a)検出の対象である標的粒子、及び、前記標的粒子と直接的又は間接的に結合する1種類以上の発光プローブを含む溶液を調製する工程;
(b)前記溶液中で、前記標的粒子及び前記発光プローブを含む複合体を形成する工程;
(c)前記複合体を含む前記溶液から、前記標的粒子に結合していない発光プローブを除去して、前記複合体を回収する工程;
(d)前記回収された複合体から前記発光プローブを解離させ、遊離した発光プローブ、及び標的粒子を分離して、別個に回収する工程;
を行い、
(e)以下の工程:
(a’)前記工程(d)において遊離の発光プローブと分離して回収された標的粒子に、前記発光プローブを新たに添加した溶液を調製する工程;
(b’)前記工程(a’)の後、前記溶液中で、前記標的粒子と前記発光プローブとを含む複合体を形成する工程;
(c’)前記工程(b’)の後、前記溶液から、前記標的粒子と結合していない発光プローブと分離して、前記複合体を回収する工程;
(d’)前記工程(c’)において回収された複合体から前記発光プローブを解離させた後、遊離の発光プローブと前記標的粒子とを、互いに分離して回収する工程;
からなるサイクルを1回以上繰り返した後、前記工程(d)及び(d’)において回収された遊離の発光プローブの全量を含む一の測定試料溶液を調製する工程;並びに、
(f)前記測定試料溶液中の前記発光プローブの分子数を、共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡の光学系を用いて、前記測定試料溶液内において前記光学系の光検出領域の位置を移動させながら、当該光検出領域中の前記発光プローブから発される光を検出する方法により算出する工程と、
を含む、標的粒子の検出方法。
(2) 前記工程(d’)において、前記複合体からの前記発光プローブの解離を、前記工程(d)において回収された遊離の発光プローブを含む溶液中で行う、前記(1)の標的粒子の検出方法。
(3) 前記工程(e)において、前記工程(d)及び(d’)の各工程において回収された遊離の発光プローブを含む溶液を全て混合した後、濃縮処理を行うことにより、一の測定試料溶液を調製する、前記(1)の標的粒子の検出方法。
(4) 前記工程(a)において、前記溶液にさらに、前記発光プローブとは独立して前記標的粒子と結合する分離用プローブを添加し、
前記工程(b)及び(b’)において形成される複合体が、前記標的粒子と前記発光プローブと前記分離用プローブとを含み、
前記工程(d)及び(d’)において、前記分離用プローブと結合した複合体の状態で、標的粒子を、遊離の発光プローブと分離して回収する、前記(1)〜(3)のいずれかの標的粒子の検出方法。
(5) 前記標的粒子が核酸分子である、前記(1)〜(4)のいずれかの標的粒子の検出方法。
(6) 前記標的粒子が核酸分子であり、かつ前記標的粒子と前記分離用プローブとの複合体のTm値が、前記標的粒子と前記発光プローブとの複合体のTm値よりも高い、前記(4)の標的粒子の検出方法。
(7) 前記工程(d)及び(d’)において、前記複合体を含む溶液の温度を、前記標的粒子と前記発光プローブとの複合体のTm値よりも高く、かつ前記標的粒子と前記分離用プローブとの複合体のTm値よりも低い温度にすることによって、前記複合体からの前記発光プローブの解離を行う、前記(6)の標的粒子の検出方法。
(8) 前記発光プローブが、発光物質が結合した天然型のオリゴヌクレオチドであり、前記分離用プローブが、ペプチド核酸からなるオリゴヌクレオチドである、前記(4)〜(7)のいずれかの標的粒子の検出方法。
(9) 前記工程(d)の前に、前記工程(b)において形成された複合体中の、前記標的粒子と前記分離用プローブとの間に少なくとも1の共有結合を形成させる工程を行う、前記(4)又は(5)の標的粒子の検出方法。
(10) 前記工程(c)における前記複合体の回収、並びに前記工程(d)及び(d’)における遊離の発光プローブの回収を、前記分離用プローブと直接的又は間接的に結合する固相担体を用いた固液分離処理により行う、前記(4)〜(9)のいずれかの標的粒子の検出方法。
(11) 前記1種以上の発光プローブが、2以上の発光プローブである、前記(1)〜(10)のいずれかの標的粒子の検出方法。
(a)検出の対象である標的粒子、及び、前記標的粒子と直接的又は間接的に結合する1種類以上の発光プローブを含む溶液を調製する工程;
(b)前記溶液中で、前記標的粒子及び前記発光プローブを含む複合体を形成する工程;
(c)前記複合体を含む前記溶液から、前記標的粒子に結合していない発光プローブを除去して、前記複合体を回収する工程;
(d)前記回収された複合体から前記発光プローブを解離させ、遊離した発光プローブ、及び標的粒子を分離して、別個に回収する工程;
を行い、
(e)以下の工程:
(a’)前記工程(d)において遊離の発光プローブと分離して回収された標的粒子に、前記発光プローブを新たに添加した溶液を調製する工程と;
(b’)前記工程(a’)の後、前記溶液中で、前記標的粒子と前記発光プローブとを含む複合体を形成する工程と;
(c’)前記工程(b’)の後、前記溶液から、前記標的粒子と結合していない発光プローブと分離して、前記複合体を回収する工程;
(d’)前記工程(c’)において回収された複合体から前記発光プローブを解離させた後、遊離の発光プローブと前記標的粒子とを、互いに分離して回収する工程;
からなるサイクルを1回以上繰り返した後、前記工程(d)及び(d’)において回収された遊離の発光プローブの全量を含む一の測定試料溶液を調製する工程;並びに、
(f)前記測定試料溶液中の前記発光プローブの分子数を、共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡の光学系を用いて、前記測定試料溶液内において前記光学系の光検出領域の位置を移動させながら、当該光検出領域中の前記発光プローブから発される光を検出する方法により算出する工程。
例えば、標的粒子が核酸分子又は核酸類似物質からなるオリゴヌクレオチドであり、発光プローブ中の、標的粒子と結合する部位が、核酸分子又は核酸類似物質からなる、標的粒子とハイブリダイズするオリゴヌクレオチドである場合、前記複合体を含む溶液の温度を、標的粒子と発光プローブの特異的会合条件よりも充分に高くしたり、前記複合体を含む溶液の塩濃度を、標的粒子と発光プローブの特異的会合条件よりも充分に低くすることにより、発光プローブと標的粒子の結合を解消させ、前記複合体から発光プローブを解離させることができる。
標的粒子に対して発光プローブを1種類用いた場合よりも、複数種類用いた場合の方が、走査分子計数法による測定において高いシグナルが得られることを示す実験を行った。
標的粒子として、配列番号1に示す塩基配列からなるポリヌクレオチド(以下、標的核酸分子1)を用い、発光プローブとして、配列番号2〜5に示す塩基配列からなり、5’末端に蛍光物質ATTO(登録商標) 647N(ATTO−TEC社製)が結合したオリゴヌクレオチド(発光プローブ1〜4)を用い、分離用プローブとして、配列番号6に示す塩基配列からなり、3’末端にビオチンが結合したオリゴヌクレオチド(ビオチン化プローブ1)を用いた。それぞれの塩基配列を表1に示す。標的核酸分子1中、下線部はそれぞれ、発光プローブ及びビオチン化プローブが結合する領域を示す。なお、標的核酸分子1、発光プローブ1〜4及びビオチン化プローブ1は、全て天然型のヌクレオチドからなるポリヌクレオチドである。
下記の条件:
20μ秒<ピーク幅<400μ秒
ピーク強度>1(フォトン/10μ秒)
相関係数>0.90
を満たすピーク信号のみを発光プローブに対応する光信号であると判定する一方、上記の条件を満たさないピーク信号はノイズとして無視し、発光プローブに対応する光信号であると判定された信号の数を「ピーク数」として計数した。
標的粒子として、配列番号7に示す塩基配列からなる天然型のポリヌクレオチド(以下、標的核酸分子2)を用い、発光プローブとして参考例1で用いた発光プローブ1を用い、分離用プローブとして配列番号8に示す塩基配列からなり、3’末端にビオチンが結合したPNAからなるオリゴヌクレオチド(ビオチン化プローブ2)を用いた。標的核酸分子2及びビオチン化プローブ2の塩基配列を表2に示す。標的核酸分子2中、下線部はそれぞれ、発光プローブ1及びビオチン化プローブ2が結合する領域を示す。また、ビオチン化プローブ2のPNAの塩基配列は、PNAを対応する天然型のヌクレオチドに置き換えて示す。
まず、トリスバッファー(10mM Tris−HCl,400mM NaCl,0.05% Triton X−100)に標的核酸分子2が1pM、発光プローブ1が200pM、ビオチン化プローブ2が200pM、Poly(deoxyinosinic−deoxycytidylic)acid(Sigma−Aldrich社)が0.1U/mLとなるように試料溶液(100μL)を3つ(試料溶液A〜C)調製した。また、標的核酸分子2を含まない以外は試料溶液1と同様にして、対照試料溶液も3つ(対照試料溶液A〜C)用意した。
それらの試料溶液を、95℃で5分間加熱後、0.1℃/分の速度で25℃にまで液温を低下させた。0.1% BSA(ウシ血清アルブミン)を1μL加えた後、ストレプトアビジンでコートした磁気ビーズ(Invitrogen社、カタログ番号:650−01)10μgを添加し、25℃で90分間、振とうさせながら反応させた。続いて、試料溶液中の磁気ビーズを、磁石を用いて500μLの洗浄バッファー(10mM Tris−HCl,400mM NaCl,0.05% Triton X−100)によって3回洗浄した後、100μLの溶出バッファー(10mM Tris−HCl,0.05% Triton X−100)を加え、50℃で5分間インキュベートした。次いで、磁石で磁気ビーズを容器側壁に集めた後、上清を回収した。回収された上清を「上清1」とし、容器側壁に集めた磁気ビーズを「磁気ビーズ1」とした。試料溶液A及び対照試料溶液Aについては、この時点で終了し、得られた上清1を、走査分子計数法による測定の測定試料溶液とした。試料溶液B、C及び対照試料溶液B、Cについては、以降の工程に進めた。
次に、前記トリスバッファーに、発光プローブ1が200pM、Poly(deoxyinosinic−deoxycytidylic)acid(Sigma−Aldrich社)が0.1U/mL、BSAが0.001%となるように調製した溶液(100μL)を、磁気ビーズ1に添加して混合し、得られた試料溶液を25℃で1時間、振とうさせながら反応させた。続いて、当該試料溶液中の磁気ビーズを、磁石を用いて500μLの前記洗浄バッファーによって3回洗浄した後、前記上清1を加え、50℃で5分間インキュベートした。次いで、磁石で磁気ビーズを容器側壁に集めた後、上清を回収した。回収された上清を「上清2」とし、容器側壁に集めた磁気ビーズを「磁気ビーズ2」とした。試料溶液B及び対照試料溶液Bについては、この時点で終了し、得られた上清2を、走査分子計数法による測定の測定試料溶液とした。試料溶液C及び対照試料溶液Cについては、以降の工程に進めた。
次いで、前記トリスバッファーに、発光プローブ1が200pM、Poly(deoxyinosinic−deoxycytidylic)acid(Sigma−Aldrich社)が0.1U/mL、BSAが0.001%となるように調製した溶液(100μL)を、磁気ビーズ2に添加して混合し、得られた試料溶液を25℃で1時間、振とうさせながら反応させた。続いて、当該試料溶液中の磁気ビーズを、磁石を用いて500μLの前記洗浄バッファーによって3回洗浄した後、前記上清2を加え、50℃で5分間インキュベートした。次いで、磁石で磁気ビーズを容器側壁に集めた後、上清を回収した。
回収された上清を「上清3」とし、容器側壁に集めた磁気ビーズを「磁気ビーズ3」とした。試料溶液C及び対照試料溶液Cについては、この時点で終了し、得られた上清3を、走査分子計数法による測定の測定試料溶液とした。
得られた測定試料溶液(上清1〜3)中の発光プローブ1の分子数を、走査分子計数法によって計測した。計測は、測定時間を20秒間とした以外は、参考例1と同様にして行った。各測定試料溶液のピーク数の計数結果を図3に示す。図3中、「上清1」〜「上清3」はそれぞれ、試料溶液から調製された測定試料溶液のピーク数(標的粒子存在下におけるピーク数)から、対照試料溶液から調製された測定試料溶液のピーク数(標的粒子非存在下におけるピーク数)を差し引いたピーク数を示す。この結果、上清1よりも上清2のほうが、そして上清2よりも上清3のほうが、ピーク数が多くなっていた。つまり、本発明の工程(a’)〜(d’)を繰り返した回数に依存して、得られるピーク数が多くなることが確認された。これらの結果から、本発明の検出方法により、一分子の標的粒子から複数のシグナル源を発生させることができ、よって計測時間を従来よりも短時間化したり、標的粒子の検出感度をより高められることが明らかである。
本発明の検出方法により、溶液中にて分散しランダムに運動する粒子を、高感度に検出することができるため、本発明の検出方法は、試料中の粒子を検出又は定量解析するような生化学、分子生物学、臨床検査等の分野で利用が可能である。
1…標的粒子、2…発光プローブ、3…分離用プローブ、4…固相担体。
Claims (11)
- 溶液中にて分散しランダムに運動する粒子を、発光プローブを用いて間接的に検出する方法であって、
(a)検出の対象である標的粒子、及び、前記標的粒子と直接的又は間接的に結合する1種類以上の発光プローブを含む溶液を調製する工程;
(b)前記溶液中で、前記標的粒子及び前記発光プローブを含む複合体を形成する工程;
(c)前記複合体を含む前記溶液から、前記標的粒子に結合していない発光プローブを除去して、前記複合体を回収する工程;及び
(d)前記回収された複合体から前記発光プローブを解離させ、遊離した発光プローブ、及び標的粒子を分離して、別個に回収する工程;
を行い、
(e)以下の工程:
(a’)前記工程(d)において遊離の発光プローブと分離して回収された標的粒子に、前記発光プローブを新たに添加した溶液を調製する工程;
(b’)前記工程(a’)の後、前記溶液中で、前記標的粒子と前記発光プローブとを含む複合体を形成する工程;
(c’)前記工程(b’)の後、前記溶液から、前記標的粒子と結合していない発光プローブと分離して、前記複合体を回収する工程;
(d’)前記工程(c’)において回収された複合体から前記発光プローブを解離させた後、遊離の発光プローブと前記標的粒子とを、互いに分離して回収する工程;
からなるサイクルを1回以上繰り返した後、前記工程(d)及び(d’)において回収された遊離の発光プローブの全量を含む一の測定試料溶液を調製する工程;並びに、
(f)前記測定試料溶液中の前記発光プローブの分子数を、共焦点顕微鏡又は多光子顕微鏡の光学系を用いて、前記測定試料溶液内において前記光学系の光検出領域の位置を移動させながら、当該光検出領域中の前記発光プローブから発される光を検出する方法により算出する工程;
を含む、標的粒子の検出方法。 - 前記工程(d’)において、前記複合体からの前記発光プローブの解離を、前記工程(d)において回収された遊離の発光プローブを含む溶液中で行う、請求項1に記載の標的粒子の検出方法。
- 前記工程(e)において、前記工程(d)及び(d’)の各工程において回収された遊離の発光プローブを含む溶液を全て混合した後、濃縮処理を行うことにより、一の測定試料溶液を調製する、請求項1に記載の標的粒子の検出方法。
- 前記工程(a)において、前記溶液にさらに、前記発光プローブとは独立して前記標的粒子と結合する分離用プローブを添加し、
前記工程(b)及び(b’)において形成される複合体が、前記標的粒子と前記発光プローブと前記分離用プローブとを含み、
前記工程(d)及び(d’)において、前記分離用プローブと結合した複合体の状態で、標的粒子を遊離の発光プローブと分離して回収する、
請求項1〜3のいずれか一項に記載の標的粒子の検出方法。 - 前記標的粒子が核酸分子である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の標的粒子の検出方法。
- 前記標的粒子が核酸分子であり、かつ前記標的粒子と前記分離用プローブとの複合体のTm値が、前記標的粒子と前記発光プローブとの複合体のTm値よりも高い、請求項4に記載の標的粒子の検出方法。
- 前記工程(d)及び(d’)において、前記複合体を含む溶液の温度を、前記標的粒子と前記発光プローブとの複合体のTm値よりも高く、かつ前記標的粒子と前記分離用プローブとの複合体のTm値よりも低い温度にすることによって、前記複合体からの前記発光プローブの解離を行う、請求項6に記載の標的粒子の検出方法。
- 前記発光プローブが、発光物質が結合した天然型のオリゴヌクレオチドであり、
前記分離用プローブが、ペプチド核酸からなるオリゴヌクレオチドである、請求項4〜7のいずれか一項に記載の標的粒子の検出方法。 - 前記工程(d)の前に、前記工程(b)において形成された複合体中の、前記標的粒子と前記分離用プローブとの間に少なくとも1の共有結合を形成させる工程を行う、請求項4又は5に記載の標的粒子の検出方法。
- 前記工程(c)における前記複合体の回収、並びに前記工程(d)及び(d’)における遊離の発光プローブの回収を、前記分離用プローブと直接的又は間接的に結合する固相担体を用いた固液分離処理により行う、請求項4〜9のいずれか一項に記載の標的粒子の検出方法。
- 前記1種以上の発光プローブが、2以上の発光プローブである、請求項1〜10のいずれか一項に記載の標的粒子の検出方法。
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---|---|---|---|---|
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Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004121231A (ja) * | 2002-08-29 | 2004-04-22 | Juki Corp | 標的核酸の検出方法 |
JP2008298743A (ja) * | 2007-06-04 | 2008-12-11 | Olympus Corp | 蛍光分析による分子間相互作用検出方法 |
JP2010019553A (ja) * | 2006-11-02 | 2010-01-28 | Olympus Corp | 一分子蛍光分析による分子の特異的結合反応検出方法 |
WO2012014778A1 (ja) * | 2010-07-26 | 2012-02-02 | オリンパス株式会社 | 発光プローブを用いて溶液中の希薄粒子を検出する方法 |
Family Cites Families (79)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4251733A (en) | 1978-06-29 | 1981-02-17 | Hirleman Jr Edwin D | Technique for simultaneous particle size and velocity measurement |
US4421860A (en) | 1980-10-07 | 1983-12-20 | The Regents Of The University Of California | Homogeneous fluoroimmunoassay involving autocorrelation processing of optically sensed signals |
AU8103687A (en) | 1986-10-14 | 1988-05-06 | Beckman Instruments, Inc. | Improved nucleic acid hybridization technique and kit therefor |
GB8827160D0 (en) | 1988-11-21 | 1988-12-29 | Apothekernes Lab | Detection & quantitative determination of rna & dna |
JPH04337446A (ja) | 1991-05-15 | 1992-11-25 | Hitachi Ltd | 微粒子計測方法、定量方法および微粒子計測装置 |
EP0610215A1 (en) | 1991-06-17 | 1994-08-17 | Chiron Corporation | Polynucleotide determination with selectable cleavage sites |
JPH06113896A (ja) | 1992-10-08 | 1994-04-26 | Hitachi Ltd | 核酸の測定方法 |
US5547849A (en) | 1993-02-17 | 1996-08-20 | Biometric Imaging, Inc. | Apparatus and method for volumetric capillary cytometry |
US6495676B1 (en) | 1993-04-13 | 2002-12-17 | Naxcor | Nucleic acid sequence detection employing probes comprising non-nucleosidic coumarin derivatives as polynucleotide-crosslinking agents |
US5866336A (en) | 1996-07-16 | 1999-02-02 | Oncor, Inc. | Nucleic acid amplification oligonucleotides with molecular energy transfer labels and methods based thereon |
EP0836090A1 (en) | 1996-10-12 | 1998-04-15 | Evotec BioSystems GmbH | Method of analysis of samples by determination of the distribution of specific brightnesses of particles |
US6235471B1 (en) | 1997-04-04 | 2001-05-22 | Caliper Technologies Corp. | Closed-loop biochemical analyzers |
US6710871B1 (en) | 1997-06-09 | 2004-03-23 | Guava Technologies, Inc. | Method and apparatus for detecting microparticles in fluid samples |
GB2326229A (en) | 1997-06-13 | 1998-12-16 | Robert Jeffrey Geddes Carr | Detecting and analysing submicron particles |
SE9800360D0 (sv) | 1998-02-06 | 1998-02-06 | Goeteborg University Science I | Method, apparatus and flow cell for high sensitivity detection of fluorescent molecules |
US6388788B1 (en) | 1998-03-16 | 2002-05-14 | Praelux, Inc. | Method and apparatus for screening chemical compounds |
KR100618502B1 (ko) | 1998-03-16 | 2006-09-01 | 지이 헬스케어 바이오-사이언시즈 코프. | 공초점 마이크로스코피 영상 시스템에서 사용하기 위한 전자기 방출의 집속 시스템 및 방법 |
US20030036855A1 (en) | 1998-03-16 | 2003-02-20 | Praelux Incorporated, A Corporation Of New Jersey | Method and apparatus for screening chemical compounds |
US6203989B1 (en) | 1998-09-30 | 2001-03-20 | Affymetrix, Inc. | Methods and compositions for amplifying detectable signals in specific binding assays |
AU3162500A (en) | 1999-03-03 | 2000-09-21 | Evotec Analytical Systems Gmbh | Homogeneous fluorescence assay |
US6376843B1 (en) | 1999-06-23 | 2002-04-23 | Evotec Oai Ag | Method of characterizing fluorescent molecules or other particles using generating functions |
DE60001731T2 (de) | 1999-04-29 | 2004-02-05 | Evotec Oai Ag | Verfahren zur erfassung von fluoreszierenden molekülen oder anderen teilchen mittels erzeugenden funktionen |
WO2000071991A1 (en) | 1999-05-25 | 2000-11-30 | Biometric Imaging, Inc. | Apparatus and method for optical detection in a limited depth of field |
US8264680B2 (en) | 1999-05-28 | 2012-09-11 | Yokogawa Electric Corporation | Biochip reader and electrophoresis system |
US6965113B2 (en) | 2000-02-10 | 2005-11-15 | Evotec Ag | Fluorescence intensity multiple distributions analysis: concurrent determination of diffusion times and molecular brightness |
US20010035954A1 (en) | 2000-03-10 | 2001-11-01 | Rahn John Richard | Method and apparatus for measuring particle size distributions using light scattering |
US20060008799A1 (en) | 2000-05-22 | 2006-01-12 | Hong Cai | Rapid haplotyping by single molecule detection |
DE10035190C5 (de) | 2000-07-20 | 2009-07-16 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Verfahren und Vorrichtung zur Fluoreszenzmessung |
US6947133B2 (en) | 2000-08-08 | 2005-09-20 | Carl Zeiss Jena Gmbh | Method for increasing the spectral and spatial resolution of detectors |
DE10038528A1 (de) | 2000-08-08 | 2002-02-21 | Zeiss Carl Jena Gmbh | Verfahren und Anordnung zur Erhöhung der spektralen und räumlichen Detektorauflösung |
HU226937B1 (en) | 2000-11-17 | 2010-03-29 | Mta Szegedi Biolog Koezpont | Method and apparatus for determining polarization amount of material by a laser scanning microscope |
WO2002048693A1 (fr) | 2000-12-14 | 2002-06-20 | Olympus Optical Co., Ltd. | Analyseur fluorometrique et analyse fluorometrique |
US6782297B2 (en) | 2001-05-24 | 2004-08-24 | Eric Paul Tabor | Methods and apparatus for data smoothing |
US6750963B2 (en) | 2002-05-21 | 2004-06-15 | Agilent Technologies, Inc. | Imaging systems for signals on a surface |
AU2003268269A1 (en) | 2002-08-29 | 2004-03-19 | Naxcor | Polymorphism detection among homologous sequences |
DE60320828D1 (de) | 2002-11-07 | 2008-06-19 | Univ Erasmus | Fret proben und verfahren zur erkennung aufeinander einwirkeneden moleküle |
JP2004187607A (ja) | 2002-12-12 | 2004-07-08 | Olympus Corp | 核酸増幅産物に関する情報を得る方法 |
US7038848B2 (en) | 2002-12-27 | 2006-05-02 | Olympus Corporation | Confocal microscope |
JP4315794B2 (ja) | 2002-12-27 | 2009-08-19 | オリンパス株式会社 | 共焦点顕微鏡 |
WO2005010201A2 (en) | 2003-01-29 | 2005-02-03 | Naxcor, Inc. | Methods and compositions for detecting nucleic acid sequences |
JP2005098876A (ja) | 2003-09-25 | 2005-04-14 | Institute Of Physical & Chemical Research | 2成分相互作用分析方法 |
JP2005308412A (ja) | 2004-04-16 | 2005-11-04 | Olympus Corp | 無細胞タンパク質合成系で作られた蛍光を利用した効率的なタンパク質の機能解析スクリーニングの方法 |
JP2005328758A (ja) | 2004-05-20 | 2005-12-02 | Hitachi Ltd | 核酸増幅方法及びこれを利用した一塩基多型の解析 |
US20060078998A1 (en) | 2004-09-28 | 2006-04-13 | Singulex, Inc. | System and methods for sample analysis |
WO2006084283A2 (en) | 2005-01-31 | 2006-08-10 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Methods and devices for characterizing particles in clear and turbid media |
EP1884766A4 (en) * | 2005-05-20 | 2013-10-16 | Hitachi Chemical Co Ltd | BIOCHEMICAL ANALYSIS PROCESS |
JP2006333739A (ja) | 2005-05-31 | 2006-12-14 | Hitachi High-Technologies Corp | 単分子計測による核酸分析方法 |
JP4757103B2 (ja) | 2005-06-13 | 2011-08-24 | 学校法人関西文理総合学園 | 試料中のウイルスを検出する方法およびシステム |
WO2007010803A1 (ja) | 2005-07-15 | 2007-01-25 | Olympus Corporation | 光測定装置 |
WO2007118209A2 (en) | 2006-04-07 | 2007-10-18 | Kim Laboratories | Apparatus and method for rapid detection of analytes |
US8445655B2 (en) | 2006-06-16 | 2013-05-21 | Cornell Research Foundation, Inc. | Functional nucleic acid ligands to fluorescent proteins |
WO2008007580A1 (fr) | 2006-07-13 | 2008-01-17 | Olympus Corporation | Procédé d'analyse de particules fines |
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US20080052009A1 (en) | 2006-08-23 | 2008-02-28 | Washington, University Of | Method for deconvolving single-molecule intensity distributions for quantitative biological measurements |
GB0618057D0 (en) | 2006-09-14 | 2006-10-25 | Perkinelmer Ltd | Improvements in and relating to scanning confocal microscopy |
JP5473202B2 (ja) | 2006-10-13 | 2014-04-16 | 滋賀県 | 試料中の蛍光性物質を検出する方法およびシステム |
WO2008080417A1 (en) | 2006-12-28 | 2008-07-10 | Flult Biosystems Gmbh | A method of determining characteristic properties of a sample containing particles |
US7804594B2 (en) | 2006-12-29 | 2010-09-28 | Abbott Laboratories, Inc. | Method and apparatus for rapidly counting and identifying biological particles in a flow stream |
US8481259B2 (en) | 2007-02-05 | 2013-07-09 | Intelligent Bio-Systems, Inc. | Methods and devices for sequencing nucleic acids in smaller batches |
WO2008099778A1 (ja) | 2007-02-14 | 2008-08-21 | Nikon Corporation | スリット走査共焦点顕微鏡 |
JP2008292371A (ja) | 2007-05-25 | 2008-12-04 | Institute Of Physical & Chemical Research | 蛍光相関分光による複数成分相互作用の分析方法及び相互作用制御化合物のスクリーニング方法 |
JP4940311B2 (ja) | 2007-11-19 | 2012-05-30 | 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 | 光クロスリンク能を有する光応答性人工ヌクレオチド |
JP2009145242A (ja) | 2007-12-14 | 2009-07-02 | Olympus Corp | 光測定装置 |
JP2011508219A (ja) | 2007-12-19 | 2011-03-10 | シンギュレックス・インコーポレイテッド | 単一分子検出走査分析器およびその使用方法 |
JP2009250721A (ja) | 2008-04-03 | 2009-10-29 | Olympus Corp | 分子間相互作用の解析方法 |
JP5139885B2 (ja) | 2008-05-21 | 2013-02-06 | 浜松ホトニクス株式会社 | 蛍光解析装置及び解析方法 |
JP2009288161A (ja) | 2008-05-30 | 2009-12-10 | Olympus Corp | 光測定装置及び光測定方法 |
EP2358898B1 (en) | 2008-11-17 | 2016-08-31 | Headway Technologies, Inc. | Methods and compositions in particle-based detection of target molecules using covalent bond forming reactive pairs |
US20100177190A1 (en) | 2008-12-16 | 2010-07-15 | Ann-Shyn Chiang | Microscopy system with revolvable stage |
JP5265408B2 (ja) | 2009-02-18 | 2013-08-14 | オリンパス株式会社 | 相関分光分析方法及び相関分光分析装置 |
JP2010276380A (ja) | 2009-05-26 | 2010-12-09 | Olympus Corp | 蛍光相関分光分析装置及び方法並びにそのためのコンピュータプログラム |
JP2011002415A (ja) | 2009-06-22 | 2011-01-06 | Olympus Corp | 蛍光相関分光装置 |
KR101029343B1 (ko) | 2009-07-30 | 2011-04-13 | 한국과학기술연구원 | 면역분석 기반의 항원 검출용 키트 및 항원 검출 방법 |
JP2011036150A (ja) | 2009-08-07 | 2011-02-24 | Olympus Corp | 標的核酸分子の定量方法及び標的核酸分子定量キット |
JP5687684B2 (ja) | 2010-03-01 | 2015-03-18 | オリンパス株式会社 | 光分析装置、光分析方法並びに光分析用コンピュータプログラム |
US20110312561A1 (en) | 2010-06-17 | 2011-12-22 | Geneasys Pty Ltd | Microfluidic device with photodiodes with controllable shunts to detect fluorescing hybridized probes |
EP2700935A4 (en) | 2011-04-18 | 2014-10-22 | Olympus Corp | QUANTITATIVE PROCEDURE FOR TARGET PARTICLES, PHOTOMETRIC ANALYSIS DEVICE AND COMPUTER PROGRAM FOR PHOTOMETRIC ANALYSIS |
CN103765194B (zh) * | 2011-08-30 | 2016-02-17 | 奥林巴斯株式会社 | 目标粒子的检测方法 |
CN104115003B (zh) | 2012-02-22 | 2016-03-23 | 奥林巴斯株式会社 | 目标粒子的检测方法 |
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004121231A (ja) * | 2002-08-29 | 2004-04-22 | Juki Corp | 標的核酸の検出方法 |
JP2010019553A (ja) * | 2006-11-02 | 2010-01-28 | Olympus Corp | 一分子蛍光分析による分子の特異的結合反応検出方法 |
JP2008298743A (ja) * | 2007-06-04 | 2008-12-11 | Olympus Corp | 蛍光分析による分子間相互作用検出方法 |
WO2012014778A1 (ja) * | 2010-07-26 | 2012-02-02 | オリンパス株式会社 | 発光プローブを用いて溶液中の希薄粒子を検出する方法 |
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