JPWO2007020889A1 - 新規ムチン型糖タンパク質及びその用途 - Google Patents
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Abstract
Description
Val−Xaa−Glu−Thr−Thr−Ala−Ala−Pro (I)
〔式中、XaaはVal又はIleである。〕
で示されるアミノ酸配列からなる繰り返し単位を3回以上含む繰り返し構造を有し、該構造における1以上のアミノ酸残基に1以上の単糖からなる糖鎖が結合していることを特徴とするムチン型糖タンパク質。
Val−Xaa−Glu−Thr−Thr−Ala−Ala−Pro (I)
〔式中、XaaはVal又はIleである。〕
で示されるアミノ酸配列からなる繰り返し単位を1〜2000回含む繰り返し構造を有することを特徴とするタンパク質。
Val−Xaa−Glu−Thr−Thr−Ala−Ala−Pro (I)
〔式中、XaaはVal又はIleである。〕
で示されるアミノ酸配列からなる繰り返し単位を3〜2000回含む繰り返し構造を有し、該構造における1以上のアミノ酸残基に1以上の単糖からなる糖鎖が結合しているムチン型糖タンパク質を含み、分子量分布と分子分布の中央値が絶対分子量測定法で測定された分子量マーカー。
Val−Xaa−Glu−Thr−Thr−Ala−Ala−Pro (I)
〔式中、XaaはVal又はIleである。〕
で示されるアミノ酸配列からなる繰り返し単位を3〜2000回含む繰り返し構造を有し、該構造における1以上のアミノ酸残基に1以上の単糖からなる糖鎖が結合しているムチン型糖タンパク質をサイズ排除クロマトグラフィーに供して分取する工程、分取された分画を集積して精製する工程、及び精製された分画の絶対分子量を測定する工程を含むことを特徴とする分子量マーカーの製造方法。
Val−Xaa−Glu−Thr−Thr−Ala−Ala−Pro (I)
〔式中、XaaはVal又はIleである。〕
で示されるアミノ酸配列からなる繰り返し単位を3回以上含む繰り返し構造を有する。ムチン型糖タンパク質は、その性質として不定分子量の高分子化合物であり、上記単位の繰り返し回数は、たとえ同じ種に由来し、同一実験において得られたムチン型糖タンパク質であっても個々の分子によって異なる。ゲル濾過分析の結果、本発明者が単離したムチン型糖タンパク質の分子量は、アミノ酸配列解析で得られた数平均を用いてゲル濾過の解析を補正すると10〜1400kDaであったことから、後述する糖鎖の構造もあわせて検討すると、実験で得られた分子量(繰り返し回数が3〜700回程度)の3倍程度の大きさの高分子も自然界に存在すると予測され、そのムチン型糖タンパクでも大きく物性や機能が変化するとは考えられないので、上記単位の繰り返し回数は、約3〜2000回程度、好ましくは3〜700回であると推測される。ここで、トレオニン(Thr)残基の全てに糖鎖が結合し、かつ糖鎖部分が最も典型的な−GalNAc−Galであると仮定すると、例えば分子量約4.5kDaの場合には、上記単位の繰り返し回数が約3回、分子量約750kDaの場合には、上記単位の繰り返し回数が約40回であると推定される。なお、本明細書では分子量から繰り返し回数を算出する場合、特に断らない限り同様の仮定を用いるものとする。
により表される。
(1)粘膜そのものの補充。粘膜の持つ様々な機能(組織の保護、保湿、潤滑など)を強化する
(2)病変(たとえば胃内壁における胃潰瘍)などで不足した粘膜質を補充する治療において代用粘液として用いる
(3)粘液質と接触している組織に対して、薬剤を効果的に供給するドラッグデリバリ担体として用いる
(4)粘液質と接触している組織に感染するウイルス、細菌などをトラップし、人工的な抗菌効果を示すマトリックスとして用いる。
log(分子量)=A−B×溶出時間(溶出体積)
〔式中、A及びBは正の数である〕
が成立する分子量の範囲で用いることが望ましい。これ以降この検量線(分子量と溶出時間の関係)を用いて未知試料の測定を行えばよい。
2)残った固形部分をハサミで切断し5mm〜1cm四方程度の断片に切断した
3)アセトン処理による脱脂及び脱水を行った後、水で膨潤させた
4)固形試料を0.2%NaCl水溶液に投入し、4℃で振とう抽出を行った
5)4)の溶液を4℃のまま10000gで、15分間遠心分離した
6)5)の抽出液に3倍容のエタノールを投入するとゲル状の沈殿物を生じた
7)6)を一晩冷蔵庫に静置した後、4℃のまま10000gで、15分間遠心分離を行った
8)7)の沈殿物を少量の水に溶解し、4℃のまま10000gで、15分間遠心分離を行った
9)8)の上澄みを分離し、透析処理により精製し、凍結乾燥したものを粗ムチンとした
10)さらに8)の沈殿物に対して7)及び8)の操作を適当な回数繰り返して行い、粗ムチンを得た。
Claims (24)
- 下記式I:
Val−Xaa−Glu−Thr−Thr−Ala−Ala−Pro (I)
〔式中、XaaはVal又はIleである。〕
で示されるアミノ酸配列からなる繰り返し単位を3〜2000回含む繰り返し構造を有し、該構造における1以上のアミノ酸残基に1以上の単糖からなる糖鎖が結合していることを特徴とするムチン型糖タンパク質。 - 繰り返し単位を3〜700回含む繰り返し構造を有する、請求項1記載のムチン型糖タンパク質。
- 繰り返し単位を40〜180回含む繰り返し構造を有する、請求項1又は2記載のムチン型糖タンパク質。
- 繰り返し単位が、直接結合している又はリンカーを介して結合している、請求項1〜3のいずれか1項に記載のムチン型糖タンパク質。
- 糖鎖の結合するアミノ酸残基がトレオニン(Thr)である、請求項1〜4のいずれか1項に記載のムチン型糖タンパク質。
- 糖鎖の結合するアミノ酸残基の98%以上がトレオニン(Thr)である、請求項5記載のムチン型糖タンパク質。
- 糖鎖が、N−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、N−アセチルグルコサミン、シアル酸、アラビノース、及びフコースからなる群より選択される単糖を含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載のムチン型糖タンパク質。
- 糖鎖がN−アセチルガラクトサミンを含む、請求項7記載のムチン型糖タンパク質。
- 糖鎖がN−アセチルガラクトサミン及びガラクトースを含む、請求項7又は8記載のムチン型糖タンパク質。
- N末端に存在する1若しくは数個のアミノ酸を欠損するものである、請求項1〜9のいずれか1項に記載のムチン型糖タンパク質。
- クラゲから抽出されたものである、請求項1〜10のいずれか1項に記載のムチン型糖タンパク質。
- クラゲの固形部分を切断する工程、切断したクラゲを塩溶液を用いて抽出する工程、抽出物から遠心分離及び透析により粗ムチンを分離する工程、並びにムチン型糖タンパク質を精製する工程を含む方法によって製造されるムチン型糖タンパク質。
- クラゲの固形部分を切断する工程、切断したクラゲを塩溶液を用いて抽出する工程、抽出物から遠心分離及び透析により粗ムチンを分離する工程、並びにムチン型糖タンパク質を精製する工程を含み、0〜25℃で全ての工程を行うことを特徴とするムチン型糖タンパク質の製造方法。
- 請求項1〜12のいずれか1項に記載のムチン型糖タンパク質を含む組成物。
- 細胞組織保護、皮膚表面保湿若しくは吸湿、健康増進、薬剤投与、疾患の治療若しくは予防、又は抗菌に用いられる、請求項14記載の組成物。
- 水溶液、膜状又は樹脂状の形態を有する、請求項14又は15記載の組成物。
- 請求項1〜12のいずれか1項に記載のムチン型糖タンパク質の糖鎖に糖転移酵素を作用させ、糖鎖を改変することを特徴とするムチン型糖タンパク質の改変方法。
- 下記式I:
Val−Xaa−Glu−Thr−Thr−Ala−Ala−Pro (I)
〔式中、XaaはVal又はIleである。〕
で示されるアミノ酸配列からなる繰り返し単位を1〜2000回含む繰り返し構造を有することを特徴とするタンパク質。 - 請求項18記載のタンパク質における少なくとも1つのアミノ酸残基に1以上の単糖からなる糖鎖を結合させることを特徴とする糖タンパク質の製造方法。
- 下記式I:
Val−Xaa−Glu−Thr−Thr−Ala−Ala−Pro (I)
〔式中、XaaはVal又はIleである。〕
で示されるアミノ酸配列からなる繰り返し単位を3〜2000回含む繰り返し構造を有し、該構造における1以上のアミノ酸残基に1以上の単糖からなる糖鎖が結合しているムチン型糖タンパク質を含み、分子量分布と分子分布の中央値が絶対分子量測定法で測定された分子量マーカー。 - 分子量が10〜14,000kDaである、請求項20記載の分子量マーカー。
- 凍結乾燥されたものである、請求項20又は21記載の分子量マーカー。
- 下記式I:
Val−Xaa−Glu−Thr−Thr−Ala−Ala−Pro (I)
〔式中、XaaはVal又はIleである。〕
で示されるアミノ酸配列からなる繰り返し単位を3〜2000回含む繰り返し構造を有し、該構造における1以上のアミノ酸残基に1以上の単糖からなる糖鎖が結合しているムチン型糖タンパク質をサイズ排除クロマトグラフィーに供して分取する工程、分取された分画を集積して精製する工程、及び精製された分画の絶対分子量を測定する工程を含むことを特徴とする分子量マーカーの製造方法。 - 精製された分画を凍結乾燥する工程をさらに含む、請求項23記載の方法。
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