JPS62164632A - 安定化されたヒト組織プラスミノゲン活性化因子組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、タンパク質ヒト組織プラスミノゲン活性化因
子（ｔ−ＰＡ）ｆ含有する医薬組成物、並びにその様な
組成物の製造方法および使用方法に関するものである。

さらに詳しくは、本発明は、ｔ−ＰＡ、５３２：分の安
定性および溶解性を増大せしめた医薬組成物であって、
ヒト対象を治療するために安全かつ有効に投与し得る安
定な凍結乾燥調剤形にすることが可能な、凍結乾燥適合
性（リオフイライザビリティ）を有する組成物に関する
ものである。

発明の背景 アオキ（Ａｏｋｉ）は、ヒト死体の血管樹枝状構造から
抽出した血管プラスミノゲン活性化因子の不安定さを報
告している〔ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ
ストリイ（Ｊ、Ｂｉｏｌ、　　Ｃｈｅｍ、）（トウキヨ
ウ〕、７５．７３１（１９７４）］。アオキは、約０．
５　Ｍ以上の高ａ度の塩化ナトリヴムによってのみ、該
活性化因子が安定化されることを見出したと報告してい
る。

ビンダーら（Ｂｉｎｄｅｒ、）は、ヒト死体血流液由来
の血管性プラスミノゲン活性化因子の活性を維持するに
は、複数の精製工程の間中、高い塩ａ度のアルギニン含
有バッファーを用いることが必須であると報告している
（シナ−ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリイ、
２５４（１９７９，ｌ、ｌ。

この精製工程は帆３〜１．０　ＭのＮａＣｇと０．１　
Ｍのアルギニンの存在下で行われた。

ラドクリフエら（ＲａｄｃｌｉｆｆｅＪ　　は、リジン
−セファロースクロマトグラフィーによるヒト血漿中の
プラスミノゲン活性化因子の分離について報告している
〔アーチブス・オブ・バイオヶミストリイ・アンド・バ
イオフィジックス（Ａｒｃｈ、　ｏｆＢｉｏｃｈｅｍ、
　＆　Ｂｉｏｐｈｙ、　ｌ　８９．１８５（１９７８）
］。

１つの実験例では、Ｏ−６Ｍ　ＮａＣ＃中０Ｍ−０，５
Ｍアルギニングラジェントを用いてリジンセファロース
から、安定化血漿中の粗プラスミノゲン活性化因子を溶
離している。

天然の組織由来のヒト組織プラスミノゲン活性化因子に
ついては、コレンらの報告がある〔ヨーロッパ特許出願
遅０４１７６６．１９８１年１２月１６日公表、最初の
出願（１９８０年６月１１日〕に基つく〕。発明者らは
、がなり高純度で組織プラスミノゲン活性化因子を得る
ことのできる精製法を用いている。コレンらは彼らの精
製組織プラスミノゲン活性化因子製剤の溶液状態および
凍結乾燥状態における安定性を調べて、凍結乾燥剤形の
場合には、０．３　Ｍ　ＮａＣｅ含有溶液から調製した
ものであっても常に不安定であることを見い出した。

組織プラスミノゲン活性化因子の如き物質を人や患者の
健康管理のために供給するには、これらの物質を医薬組
成物として調製しておく必要がある。その様な組成物は
適当な期間安定であって、それ自身かヒトへの投与に適
しているものであり、製造容易であることを要する。そ
の様な組成物の１例は、非経口投与のだめの溶液である
。多くの場合、医薬としての溶液製剤は、即座に利用す
るのに適した液体状で供給されるが、その様な非経口製
剤は凍結または凍結乾燥剤形で提供されていてもよい。

前者の場合、組成物を使用前に解凍しなければならない
。当業者は、凍結乾燥製剤が一般にその対応する液状製
剤よりも安定であることを仰っているので、組成物中に
含まれている医薬物質が、極めて広範囲に及ぶ保存条件
の下でより一層安定であるために、後者の剤形を採用す
ることが多い。その様な凍結乾燥製剤は、使用ｍＪに注
肘用滅菌水または滅菌した生理食塩水等の適当な薬学上
許容し得る希釈剤（類）を加えて再調製される。

発明の要約 本発明はヒト組織プラスミノゲン活性化因子の安定な組
成物、就中、安定な、凍結乾燥剤形の組成物を調製する
ことを目的とするものである。

本発明は、薬理学的に許容し得る組織プラスミノゲン活
性化囚子（ｔ−Ｐ／ｌ）組成物中にアルギニン（アルギ
ニウムイオンとして〕を含有せしめることによりｔ−Ｐ
Ａの安定性と溶解性が著しく増大し、さらには、適当に
選択された対イオンを一緒に用いれば安定な凍結乾燥剤
形に調製し得るという知見に基づくものである。本発明
は、その様な組成物およびそれと関連するすべての同等
物質並びにその様な組成物および同等物質を効率良く製
造する方法に関するものである。

一般に、組成物中には、好ましくは、凍結乾燥剤形剤の
安定性を減じない量であって、医薬として投与する上で
有効かつ安全な量の他の成分が含まれていてよい。

本発明の組成物の調製における至適ｐＨは約４〜約９で
あるが、これらの組成物は医薬として考慮されているの
で、生理的なｐＨ域、即ち、はぼ中性であることが好ま
しい。このｐＨ域ではアルギニンは王に総′屯荷＋１の
プロトン化カチオン（陽イオンつとして存在し、それを
、「アルギニウムイオン」と呼ぶことができる。本明細
書では、「アルギニウムイオン」は系のｐＨにより「ア
ルギニン」と同等であるため、「アルギニン」という語
句ヲ、「アルギニウムイオン」という語句と互換性をも
って使用する。電気的な中性を維持するために、アルギ
ニウムイオンと等量の、反対に荷電した（すなわち、陰
イオンに荷電した）イオン性の種（「対イオン」と呼称
）によって該アルギニウムイオンを平衡化する必要があ
る。アルギニウムイオン、他の陽イオン種、並びに様々
な対イオンの組合わせを「アルギニウムイオン含有バッ
ファー系」と呼ぶことができる。許容し得る対イオンに
は、薬学的に許容し得ることに加えて、組成物の見掛け
の共融温度または崩壊温度を調節し、組成物を凍結乾燥
し易く、凍結乾燥に特に適するようにするものが含まれ
る。その様な対イオンには、例えば、酢酸塩、りん酸塩
、クエン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、りんご
酸塩、マレイン酸塩および炭酸塩等、並びにそれらと機
能上向等の物質が含まれる。あまり適切でない対イオン
の例として塩素イオンがある。

上記のｙ口く、本発明者らは、ｔ−ＰＡの医薬組成物中
にアルギニン（アルギニウムイオンとして）を加えると
、これらの組成物中のｔ−ＰＡの溶合には、凍結乾燥前
の溶液中におけるアルギニン濃度は、約０．０２Ｍ−Ｌ
Ｍ、好まシくハ約０．０５Ｍ〜約１．０Ｍ、さらに好ま
しくは約０．１　Ｍ〜約０．５Ｍとすることかできる。

さらに、本発明の改良組成物中には、ｔ　−ＰＡの安定
性を一層増すために、ポリンルベー）２０やポリソルベ
ート８０等の非イオン界面活性剤を■またはそれ以上、
約０．００１〜約１％の割合で、一部を構成することが
できる。これらには、例えば、種々の増量剤、付加的な
緩衝化剤、キレート剤、抗酸化剤、保存剤、コソルベン
ト類が含まれ、その具体例として−”Ｋトール、トロメ
タミン塩（「トリスバッファー」）、エデト酸二ナトリ
ウム、ゼラチン、ヒト血清アルブミンその他のポリペプ
チド、グリシルグリシン等の様々な小ペプチド、類等々
を挙げることかできる。

舅くべきことに、本発明のｔ−ＰＡ組成物には約０．３
　Ｍまたはそれ以上の高い濃度の塩化ナトリウムを用い
る必要かない。実際、塩素イオン濃度の高いことは、こ
れらの改良組成物の凍結乾燥適合性に害を及ぼす。ある
程度の債の塩素イオンならば許容し得るか、約０．３Ｍ
以下の低濃度であることが好ましく、生理学上正常なレ
ベル、即ち約０．１２　Ｍ　ＮａＣ１！以上でないこと
が好ましい。塩素イオンが組成物から排除されているこ
とか最も好ましい。

ｔ−ＰＡの「薬学的有効量」とは、種々の投与方法にお
いて治療効果が表われる量を指す。本発明の組成物は、
ｔ−ＰＡを、最少量的０．１〜ｉ　ｙｔｌから約５０　
・Ｗ／　ｔｎｌまで、好ましくは約０．４　ＭＱ　／　
ｔｔｔｌから約５〜／　ｍｌの範囲で含有させて調製さ
れる。

これらの組成物を心筋梗塞患者に投与する目的で用いる
場合には、その組成物は、その様な治療に現在計画され
ている量に相当する、例えば、約０．４〜／　ｍｌ〜約
３〜／　ｍｌの割合でｔ−ＰＡを含有させればよい。

本発明の組成物は、凍結乾燥剤形のものをも含めて、一
般に利用されている自体既知の医薬調剤法に従って成分
を調合することにより調製される。

また、当業者周知の標準的な凍結乾燥法および装置を用
いる。本発明のｔ−ＰＡ含有医桑組成物の調製法では、
特に、ゲル沖過の如き既知の幾つかのバッファー交換法
で精製した（標準的なタンパク質精製法による）ｔ−Ｐ
Ａを用いる。この好ましい方法を用いて以後の安定性と
溶解性の研究に用いるｔ−ＰＡを単離し、精製した。こ
の好ましい方法に用いたｔ−ＰＡは、組換え法によって
、ＣＦ（Ｏ細胞培曹培地中でｔ−ＰＡを分泌産物として
発現し得るように変化せしめたチャイニーズ・ハムスタ
ーの卵細胞（ＣＨＯ則胞〕から潟たものである。

詳しい説明 本発明者らは、アルギニウムイオン含有バッファーを構
成々分とすると、ｔ−ＰＡ含有医薬組成物の生物学的活
性が著しく安定化され、しかも、その様な製剤中には０
．３　Ｍ以下のａ度で塩化ナトリウムを用い得るか、組
成物の安定化のために塩化ナトリウムを用いる必要かな
いという効果を見い出した。塩素イオン濃度は０．１Ｍ
またはそれ以下であることが好ましい。ｐＨ６〜８程度
の中性域において、ｔ−ＰＡの安定性はアルギニウムイ
オンの存在によって増大し、当業者が必要であるとみな
している多量の、安定化のための塩の存在なしに、かな
り高ａ度の製剤を得ることができる。

本明細書中、「ヒト組織プラスミノゲン活性化因子」、
「ヒトｔ−ＰＡ　Ｊちるいはｒ　ｔ　−ＰＡＪという語
句は、ヒト外因性（組織型〕ブラスミノゲン活性化因子
であって、例えば、天然起源から抽出して精製するか（
コレンら、前掲）、あるいは本明細書に記載のｙ口く組
換え細胞培養系により生産する等の方法によって得られ
る。その配列および特性は、例えば、ヨーロッパ特許出
願公開隘９３６１６、（１９８３年１１月９日公開、１
９８２年５月５日の最初の出願に基つく〕に記載されて
いる。さらには、ヨーロッパ特許出願公開述手１７６６
（１９８１年１２月１６日公開、１９８０年６月１１日
の最初の出願に基づく〕およびリケンら（Ｒｉｊｋｅｎ
）のジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリイ
、２５６　７０３５（１９８１）をも参照されたい。こ
の語句は生物学的に活性なヒト組織プラスミノゲン活性
化因子同等物であって、用いられた特定の培養条件、並
びに組織プラスミゲン活性化因子が得られた宿主の性質
により、全配列中１またはそれ以上のアミノ酸が異なる
か、あるいはグリコジル化像の異なる物をも包含するも
のである。

Ａ０図面 第１図は種々の製剤中でのｔ−ＰＡの安定性を示すグラ
フである。第２図はｔ　−ＰＡの溶解度に対するアルギ
ニン濃度の影響を示すグラフである。

第３図は種々の濃度のりん酸アルギニンバッファー　（
ｐＨ６，４℃〕に対するｔ−ＰＡの溶解限界を示すグラ
フである。

組成物の凍結乾燥は当業者周知の方法および装置を用い
て行われる。一般に、まず組成物をそのものの見掛けの
共融温度または崩壊温度以下で凍結させる。次いで、減
圧にし、氷を昇華除去するために凍結乾燥棚に熱を加え
るが、実質上、全ての氷が除去されるまでは、凍結した
塊の温度が見掛けの共融点または崩壊温度以下に維持さ
れるよう、棚の温度と容器内の圧力とを調節する。この
「−次乾燥」相の後、棚の温度をさらに上昇させ（容器
内の気圧は変化してもしなくともよい〕、凍結乾燥固型
物中（（残存している湿気を除く。

Ｃ，Ｓ−２２８８アツセイ 合成ペプチド基質、Ｓ−２２５−２２８８（Ｈ−Ｄ−１
（ｌｅ−Ｐｒｏ−Ａｒニトロアニリド−２ＨＣ６）をｔ
−ＰＡで加水分解すると、着色したｐ−ニトロアニリン
とトリペプチドか生成する。基質と生成物（ｐ−ニトロ
アニリン）との吸収における差は％４０５　ｎｍにおい
て最大となる。ｐ−ニトロアニリンの生成を、時間の関
数として、４０５ｎｍにおける吸収を分光光度計を用い
て追跡し、監視した。こうして得られた吸収一時間曲線
はｔ　−ＰＡ活性に比例する。このアッセイは３７±０
．２℃で行われる。

このアッセイに際しては、特定のｔ−ＰＡ試料２０〜１
００μｅ％０．３３ｍＭ　　Ｓ−２２８８，０，０６７
Ｍ）リス緩衝液（ｐＨ７，４）、Ｏ，０，７ＭＮａＣｅ
を含んだ１．２ｍ／の反応混合物に加え、３７℃で１０
分間インキュベートシタ。

吸収の変化を１分間監視し、製造業者によって標定され
た下記の等式を用い、４０５１ｍにおける吸収に基づい
て活性を計算した〇 活性（ＩＵ　ｉ国際単位）＝＝ △ＯＤｘ？　９３．６５　（希釈因子〕インキュベージ
時間待間ｘ試料容積 り、実施例 実施例１ 精１ｔ−ＰＡを終濃度０．２〜／肩ｌに希釈し、小分け
して表１に示すバッファーに対して透析した。

表１ ０、Ｏ１％ポリンルベート８０　　　　　透析７１度２
、　０．ＯＩＭりん酸ナトリウムｐＨ６０，１２Ｍ　　
　０．２Ｍ３、　０．０１Ｍりん酸ナトリウムｐＨ６−
０，２Ｍ４、　　Ｏ，０１Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ５−−
５、０，０１Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ５０，１２Ｍ　　　
　−６、０，ＯＩＭ酢酸ナトリ’７　ムｐＨ５０，２Ｍ
透析後、試料を遠心し、上清をｌ　ｍｌづつ凍結乾燥し
た。凍結乾燥した試料を水で再構成し、Ｓ−２２８８ア
ツセイによりｔ−ＰＡ活性を測定した。

その後、再構成した試料を３７℃で放置し、種々の時間
に測定した。

この実験の結果を第１図に示す。図から分る様に、アル
ギニンを含有していない系においては、ｔ−ＰＡ活性の
経時的な低下を阻止することができない。０．２Ｍアル
ギニン、または０．２Ｍアルギニンと生理学的な陸の塩
素とを含有する試料中のｔ−ＰＡ活性は３７℃で４日間
インキュベートした後も初期のｔ−ＰＡ活性をはり完全
に保持している。これらの結果は、０．２Ｍアルギニン
が。

ＮａＣ６と共存状態で、あるいはＮａ（Ｊ！の存在なし
にｔ−ＰＡを著しく安定化することを示すものである。

実施例２ アルギニンａ度の関数としてのｔ−ＰＡ活性を、様々な
温度におけるｔ−ＰＡ活性の消失速度を測定することに
より求めた。

処方例：１．　０．３５５Ｍ！／／ｙｎｌ　　ｔ−ＰＡ
ｏ、０５Ｍ　　りん酸ナトリウムｐＨ６，２０，０５Ｍ
　　アルギニン（塩酸塩として〕２．０．４９８〜／ｘ
ｌ　　ｔ−ＰＡ ｏ、０３Ｍ　　りん酸ナトリウム、ｐＨ６，２０、２Ｍ
　　アルギニン（塩酸塩として〕上記の処方に従った溶
液０．５　ｎｌづつを２　ｍｌのガラスビンに無菌的に
充填し、密閉した。各溶液について２つのビンから、０
．２０．５５および１６０日目ロー料をとり５２２８８
アツセイによってｔ−ＰＡ活性を測定した。各温度での
残存活性（％）の自然対数を時間（日〕に対してプロッ
トシ、これから、線状回帰分析法を用いて速度定数を求
めた。

２種類のアルギニンａ度に関し、種々の温度下でのｔ−
ＰＡ安定性消失に係る速度定数（Ｋ）を表２に示す。

表　２　　ｔ−ＰＡの安定性に及ぼすアルギニンの影響 に７日 ０．０３Ｍ　　　　　ｐＨ６Ｊ　　（Ｌ２０Ｍ　　ＱＯ
ＯＯ４３０００５６９ＱＯ１２７２りん酸ナトリウム この表から分るように、各表示温度において、０．２Ｍ
アルギニンにより得られる速度定数の方が、０．０５Ｍ
アルギニンで得られる値よりも小さく、このことは、ア
ルギニン慮度が高い方が、ｔ−ＰＡの安定性が増大する
ことを示唆するものである。

実施例３ ｔ−ＰＡの活性は非−イオン界面活性剤の濃度にも依存
する。データー２表３に示す。

試・＄４ｉｏ−０１Ｍコハク酸ナトリウムバッファー（
ｐＨ６，０）に対して透析してｔ−ＰＡを析出させた。

透析試料を遠心してｔ−ＰＡ沈殿を収集した。

この沈殿を、様々な濃度のポリソルベート８０を含有す
る以下の処方混合物に再溶解した。

処方：　　　０．２Ｍアルギニン（塩酸塩として）０．
０２Ｍりん酸ナトリウム（ｐＨ７，２）ポリソルベート
８０Ｃ０，０００５〜０，１０％）この溶液５−無菌的
にビンに充填し、３５℃および１０℃で放置した。ある
時間（タイムポイント〕苺に各ビンから試料を採取し、
５２２８８アツセイを用いて酵素活性を測定した。

各温度における１０ｇＣｔ−ＰＡ后性つ一時間曲線を線
状回帰分析に付し、速度定数を求めた。

結果を表３に示す。

表　３　　ｔ−ＰＡの安定性に及ぼすポリソルベート８
０の影響 ポリソルベート８０ （％）　　　　　　　Ｋ／日 ３５℃　　　　４０℃ ０．０００５　　．００５５　　．０１０６０．００５
　　　．００４９　　．００９１０．０１　　　　．０
０４３　　．００８８（１０２５，００４０，００８１ （１０５，００４１，００’／’１ ０．１０　　　　．００３７　　．００７５この表から
、ポリソルベート８０の４度が高くなると速度定数Ｋが
小さくなることが分る。このことは、より多くのポリソ
ルベート８０そ用いることにより、より高い安定性を達
成し得ることを示唆するものである。

実施例１１ 精製ｔ−ＰＡを以下のりん酸アルギニンを処方したバッ
ファーに対して透析し、さらに、バッファーでｔ−ＰＡ
が所望の終濃度になるまで希釈することによりｔ−ＰＡ
浴溶液調製した。

０．１８Ｍ　　りん酸 ０．０１％　ポリソルベート８０ Ｈ６ 各製品を５またはｌＯ肩ｔのビンに無菌的に小分けして
充填し、凍結乾燥して密閉した。ビンを様々な温度に放
置した。各処方につき２本のビンから、一定時間毎に試
ｆ−１を採取し、５２２８８アツセイによってｔ−ＰＡ
活性を測定した。結果を表４・に示す。

＊　凍結乾燥する前の溶液中におけるｔ　−ＰＡ１度 上記のデーターは、ｔ−ＰＡが凍結乾燥の形で安定であ
ることを示すものである。

実施例５ ｔ−ＰＡを約０．３〜０．５ダ／肩ｌ含有する溶液を１
０ｍＭりん酸ナトリウムｐＨ７，５、ｄ々のａ度のアル
ギニンを塩酸塩の形で含有する０、０１％ポリソルベー
ト８０に対して透析した。エツペンドルフ（Ｅｐｐｅｎ
ｄｏｒｆ　）の微小遠心管に入れて２分間遠心し、不溶
性の物質を除去した。溶液中に残存しているｔ−ＰＡの
量をＳ−２２８８アツセイによって測定した。結果を第
２図に示す。

５０ｍＭアルギニンという少量であってもｔ−ＰＡの溶
解度は著しく増加する。（高濃度のアルギニンにおいて
見掛は上、溶解度の増加が小さいのは、出発物質中の元
々のｔ−ＰＡ濃度が僅か０．３〜０．５Ｗ／ｌｓｌであ
るために限界溶解度には決して至らないという事実から
、人為的なものといえる。） 実施例６ ０．００１　Ｍコハク酸ナトリウムバッファーｐＨ６に
対して透析することによりｔ　−ＰＡを析出させた。析
出した沈＠を遠心分離した後、計量し、この物質ヲ、所
望のバッファー系ｌ　ｒｎｌ中で、５℃において２０分
間、攪拌下に平衡化した。被験バッファー系は、ｐＨ６
，０のりん酸アルギニン系が生成する様にりん酸でアル
ギニンを滴定することにより、調製された。保存溶液を
水で希釈し、アルギニンを肌１０Ｍ−０，２０Ｍ　（ア
ルギニウムイオンとして）き有する最終バッファーを得
た。所望のバッファーで平衡化した後、得られたｔ−Ｐ
Ａ製品を遠心して不溶性物質を全て除去し、８２２８８
アツセイによって上清の可溶性ｔ−ＰＡを測定した。

結果を第３図に示す、ｔ−ＰＡが最初に加えたｔ−ｐＡ
ａ度で完全に溶解するならば、可溶性ｔ−ＰＡの濃度は
加えられたｔ　−ＰＡ量と同一であるはずである。逆に
、ｔ−ＰＡが、最初に加えられた濃度で完全に溶解する
ことがないならば、可溶性ｔ−ＰＡの濃度は添加量より
も低くなるであろう。第３図から、ｔ−ＰＡが１００ｍ
Ｍりん酸アルギニン（ｐＨ６，０）　　中に最高約２！
ＩＩｇ／ゴまで溶けること、並びにりん酸アルギニンａ
度が高くなると溶解度が著しく高くなることか分る。特
に、２００ｍＭりん酸アルギニン（ｐＨ６，０）の場合
には、約５４４　／　Ｍｉにおいてさえ＋４−　Ｐ　Ａ
は完全に溶解することができ、限界溶解度はこれ以上で
あることが明らかである。

実施例７ 以下のりん酸アルギニン系をプレ凍結乾燥液として調製
した。

ｔ　−Ｐ　Ａ　　　　　　　　　　　　２．５Ｌ−アル
ギニン　　　　　８７．ｌ りん酸　　　　　　　　　２６．８ ポリソルベート８０　　　　０．１ ｐＨ７・２ 滅菌を過した後、５０ＣＣのガラスビンに約２０ｍ１づ
つ入れた。次いで、下記のクロくにして凍結乾燥を行っ
た。

ａ）がラスピンを凍結乾燥機内に入れ、常圧で１０時間
％−５０℃（棚温塵）において凍結させた。

ｂ）減圧処理（容器内の圧力を１００μｍＨｇとする）
し、棚の温度を１０８７時間で＋７℃まで昇温し、この
温度下に４１時間保った。

Ｃ）次いで棚の温度を＋３５℃に！＋温し、容器内の圧
力を５０μｍに下げ、この状態で系を１４時間保った。

次いでガラスビンに栓をし、圧力を常圧に戻し、凍結乾
燥機からがラスピンを出した。

実施例８ 凍結乾燥したりん酸アルギニン固型物（ケーキ〕の品質
に対する塩化ナトリウムの影響を稠べた。

塩化ナトリウムａ度０．０１　ｍＭ　〜５００ｍＭの範
囲まで包含する様、０．８Ｍアルギニン（ｐＨ７）およ
び０．２Ｍアルギニン（ｐＨ６）（りん酸塩として〕の
試料を調製した。各溶液２　ｍｌづつを１０ｃｃ　　の
ガラスビンに入れ、下記のサイクルによって凍結乾燥し
た。

凍結乾燥　　　　　棚の温度　　容器内の圧力時間の段
階　　　　　　　（℃）　　　（ミクロン）（時〕凍結
　　　　　　　−４５周囲圧　　１〇−次乾燥　　２０
／時間で一３５°　　５０　　２４まで昇温、次いで３
゜ ７時間で＋３５°まで 昇温 二次乾燥　　　　　＋３５　　　　４０　　　２６得ら
れた固型物の品質を表５に示す。データーから、薬学的
に許容し得る固型物の製剤は、塩化ナトリウムを低濃度
で含有する組成物によってのみ形成され、しかも、塩化
ナトリウムの許容濃度の低さは、アルギニン濃度に依存
することが分る。

表　５　選択された濃度の塩化ナトリウムを含有する、
凍結乾燥したアルギニンバッ ファー系の品質 表　５　（つつき〕 当該技術分野における通常の技術者ならば、本明細嘗で
開示しだ発明の態様に、本発明の範囲内に包含されるこ
とを意図して様々な降飾を施すことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は種々の製剤中でのｔ−ＰＡの安定性を示すグラ
フであり、図中、−・−はホスフェート、・・、０．、
、はホスフェ−、）　／　Ｎａ（Ｊ？　／　アルギニン
、−■−はホスフェート／／’ルギニン、−・△・−は
酢酸ナトリウム、−・ム・−は酢酸ナトリウム／Ｎａ（
Ｊ／アルギニン、−・０・−は酢酸ナトリウム／アルギ
ニンを表わす。第２図はｔ−ＰＡの溶解度に対するアル
ギニン濃度の影響を示すグラフであり、−・−はタンパ
ク質量を表わす。第３図は徨々の濃度のりん酸アルギニ
ンバッファー（ｐＨ６，４℃］中でのｔ−ＰＡの溶解限
界を示すグラフであって、図中、−◆−はｌｏｏｍＭり
ん酸アルギニン、−〇−は１２５ｍＭりん酸アルギニン
、−■−ハ１５０　ｍＭりん酸アルギニン、−ローは２
００　ｍＭりん酸アルギニンを表わす。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、薬学上有効な量のヒト組織プラスミノゲン活性化因
   子と薬学上許容し得るアルギニウムイオン含有バッファ
   ーとを含んでいる医薬組成物であって、塩素イオン濃度
   が約０．３Ｍ以下である組成物。 ２、凍結されている第１項記載の組成物。 ３、凍結乾燥形に変換されている第２項記載の組成物。 ４、第２項記載の凍結組成物を凍結乾燥して得られる凍
   結乾燥組成物。 ５、該凍結乾燥形のものが復元される第３項または第４
   項記載の組成物。 ６、該アルギニウムバッファーが塩化アルギニン以外の
   ものである第１項記載の組成物。 ７、該バッファーが、組成物の崩壊温度を凍結乾燥され
   易い状態に調節し得る対イオンとアルギニンによって与
   えられるものである第１項記載の組成物。 ８、該対イオンがクエン酸塩、りん酸塩、酒石酸塩、硫
   酸塩、りんご酸塩、マレイン酸塩およびコハク酸塩から
   なる群から選択されるものである第７項記載の組成物。 ９、該対イオンがクエン酸塩およびりん酸塩からなる群
   から選択されるものである第７項記載の組成物。 １０、該対イオンがりん酸塩である第７項記載の組成物
   。 １１、該ヒト組織プラスミノゲン活性化因子の濃度が少
   くとも約０．１ｍｇ／ｍｌであり、該アルギニウムイオ
   ンの濃度が約０．０５〜約１．０Ｍである第１項記載の
   組成物。 １２、該ヒト組織プラスミノゲン活性化因子の濃度が少
   くとも約０．４〜約５．０ｍｇ／ｍｌであり、該アルギ
   ニウムイオンの濃度が約０．１〜約０．５Ｍである第１
   項記載の組成物。 １３、ｐＨが約４〜約９である第１項記載の組成物。 １４、該組成物が薬学的に許容し得る希釈剤で希釈され
   ている第１項記載の組成物。 １５、組成物が、該組成物の約０．００１〜１％の非イ
   オン界面活性剤を含有している第１項記載の組成物。 １６、該ｔ−ＰＡとアルギニウムイオン含有バッファー
   とを調合する工程を含む、第１項記載の組成物の製造方
   法。 １７、該組成物を凍結乾燥することを含む第１６項記載
   の方法。