JPH0672105B2 - 血栓溶解剤及びその製法 - Google Patents
血栓溶解剤及びその製法Info
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- JPH0672105B2 JPH0672105B2 JP60219606A JP21960685A JPH0672105B2 JP H0672105 B2 JPH0672105 B2 JP H0672105B2 JP 60219606 A JP60219606 A JP 60219606A JP 21960685 A JP21960685 A JP 21960685A JP H0672105 B2 JPH0672105 B2 JP H0672105B2
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- JP
- Japan
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- arginine
- thrombolytic agent
- solubility
- acid addition
- plasminogen activator
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6456—Plasminogen activators
- C12N9/6459—Plasminogen activators t-plasminogen activator (3.4.21.68), i.e. tPA
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21069—Protein C activated (3.4.21.69)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は血栓溶解剤及びその製法に関するものである。
（従来技術） 従来、血栓溶解剤としては尿又は培養腎細胞から分離精
製されたウロキナーゼを中心として発展し、その他にβ
溶連菌より抽出されたストレプトキナーゼが実用に供さ
れてきた。しかし、ウロキナーゼは血栓に対する親和性
が低いため、所望の治療効果を得るには大量投与を必要
とし、殊に全身投与の場合、血流中に大量に生じたプラ
スミンによる凝固因子の破壊による出血が危惧されてい
た。この点、ヒト又は動物組織中、それらの組織由来の
細胞培養液又は腫瘍細胞培養液中に見出される組織プラ
スミノーゲンアクチベーター（以下ｔ−PAと称する）
は、ウロキナーゼに比して血栓に対する親和性が高く、
更に血栓溶解能も優れていることから少量の投与で所望
の治療効果が得られ、新しい血栓溶解剤として期待され
ている。また、最近では遺伝子工学的手段によってｔ−
PAを産生することが試みられており、今後の期待に拍車
がかけられている。
製されたウロキナーゼを中心として発展し、その他にβ
溶連菌より抽出されたストレプトキナーゼが実用に供さ
れてきた。しかし、ウロキナーゼは血栓に対する親和性
が低いため、所望の治療効果を得るには大量投与を必要
とし、殊に全身投与の場合、血流中に大量に生じたプラ
スミンによる凝固因子の破壊による出血が危惧されてい
た。この点、ヒト又は動物組織中、それらの組織由来の
細胞培養液又は腫瘍細胞培養液中に見出される組織プラ
スミノーゲンアクチベーター（以下ｔ−PAと称する）
は、ウロキナーゼに比して血栓に対する親和性が高く、
更に血栓溶解能も優れていることから少量の投与で所望
の治療効果が得られ、新しい血栓溶解剤として期待され
ている。また、最近では遺伝子工学的手段によってｔ−
PAを産生することが試みられており、今後の期待に拍車
がかけられている。
一方、Binderらはヒト血管灌流液からのプラスミノーゲ
ン活性化因子の精製に0.1Mアルギニンを含む緩衝液を用
いている（The Journal of Biological Chemistry 254
（６） 1988-2003 1979）。また、Camioloらは、外科的
に取りだした組織からの、0.3M NaCl,0.1Mアルギニン含
有緩衝液を基本組成として各種緩衝液によるｔ−PAの抽
出効率を検討している（Preparative Biochemistry 12
（４） 297-305 1982）。しかし、これらは組織からの
ｔ−PAの抽出あるいは精製工程に関するものであり、製
剤を目的とするような記述はない。更に、これらで用い
られているｔ−PAの精製度は低く、濃度も低い。
ン活性化因子の精製に0.1Mアルギニンを含む緩衝液を用
いている（The Journal of Biological Chemistry 254
（６） 1988-2003 1979）。また、Camioloらは、外科的
に取りだした組織からの、0.3M NaCl,0.1Mアルギニン含
有緩衝液を基本組成として各種緩衝液によるｔ−PAの抽
出効率を検討している（Preparative Biochemistry 12
（４） 297-305 1982）。しかし、これらは組織からの
ｔ−PAの抽出あるいは精製工程に関するものであり、製
剤を目的とするような記述はない。更に、これらで用い
られているｔ−PAの精製度は低く、濃度も低い。
GB985498には、製剤にアルギニンを添加することが記載
されているが、これはプラスミンに関する記述であり、
分子量を始め、等電点、溶解性、安定性等においてｔ−
PAとは全く異なるものである。
されているが、これはプラスミンに関する記述であり、
分子量を始め、等電点、溶解性、安定性等においてｔ−
PAとは全く異なるものである。
（発明が解決しようとする問題点） 本発明者らはｔ−PAについて、精製を行いこれを有効成
分とする血栓溶解剤の製法について検討を加えてきた。
ところが、ｔ−PAは精製の程度が進むに従って溶解性が
低下することが明らかになり、製剤化に際しての大きな
障害となった。
分とする血栓溶解剤の製法について検討を加えてきた。
ところが、ｔ−PAは精製の程度が進むに従って溶解性が
低下することが明らかになり、製剤化に際しての大きな
障害となった。
ｔ−PA水溶液の溶解性あるいは安定性の低下の問題を解
決するために、従来さまざまな試みが行われている。特
開昭60-181028号公報ではリジン添加が、また、特開昭6
0-1842026号公報ではオルニチン添加がｔ−PAの溶解補
助方法として開示されている。しかしながら、リジンは
プラスミンの線溶活性を阻害し（Muramatu et al.The J
ournal of Biochemistry 57 （３） 450-453 1965）、
また、オルニチンは日本薬局方、日本薬局方外医薬品成
分規格等に収載されておらず、実用例もなく、製剤用の
添加剤としては実用性が明らかにされていない。
決するために、従来さまざまな試みが行われている。特
開昭60-181028号公報ではリジン添加が、また、特開昭6
0-1842026号公報ではオルニチン添加がｔ−PAの溶解補
助方法として開示されている。しかしながら、リジンは
プラスミンの線溶活性を阻害し（Muramatu et al.The J
ournal of Biochemistry 57 （３） 450-453 1965）、
また、オルニチンは日本薬局方、日本薬局方外医薬品成
分規格等に収載されておらず、実用例もなく、製剤用の
添加剤としては実用性が明らかにされていない。
このように、これまで提案されてきた添加剤は、いずれ
も、実用上の問題点を有しており、安価で実用的な溶解
補助物質が求められていた。
も、実用上の問題点を有しており、安価で実用的な溶解
補助物質が求められていた。
（問題点を解決するための手段） 本発明者らはｔ−PAの溶解性の問題を解消すべく鋭意研
究した結果、ｔ−PAはアルギニン又はその酸付加塩を含
む溶媒系を使用することにより、溶解性が著しく増加す
ることを見出し本発明を完成した。
究した結果、ｔ−PAはアルギニン又はその酸付加塩を含
む溶媒系を使用することにより、溶解性が著しく増加す
ることを見出し本発明を完成した。
本発明はｔ−PAの溶解性を増加させるために、アルギニ
ン又はその酸付加塩を含有させたことを特徴とする血栓
溶解剤及びその製法である。
ン又はその酸付加塩を含有させたことを特徴とする血栓
溶解剤及びその製法である。
本発明に用いるアルギニンはＤ体,L体又はラセミ体のい
ずれであっても良く、更にそれらの酸付加塩、例えば塩
酸塩であっても良い（以下、特に記載のない場合は、ア
ルギニンというときはこれら全てを包含する。）。ｔ−
PAの溶解性を高めるために必要なアルギニン量は1mM以
上500mM以下、好ましくは5mM〜200mMが適当である。後
記実施例１で示されるように1000mMであっても有効であ
るがそれに見合うｔ−PAの溶解性の上昇は見られないの
で、実用上500mM以下が適当である。更に、中性塩，特
に塩化ナトリウムを0.02M〜2.0Mの濃度で、好ましくは
0.1〜1.0M濃度でアルギニンと併用すればより好まし
い。アルギニン又はアルギニンと塩化ナトリウム等の中
性塩とを含有するｔ−PA溶液はリン酸ナトリウム等の緩
衝液でpH2〜12、好ましくは６〜11の範囲に維持するの
が好ましい。
ずれであっても良く、更にそれらの酸付加塩、例えば塩
酸塩であっても良い（以下、特に記載のない場合は、ア
ルギニンというときはこれら全てを包含する。）。ｔ−
PAの溶解性を高めるために必要なアルギニン量は1mM以
上500mM以下、好ましくは5mM〜200mMが適当である。後
記実施例１で示されるように1000mMであっても有効であ
るがそれに見合うｔ−PAの溶解性の上昇は見られないの
で、実用上500mM以下が適当である。更に、中性塩，特
に塩化ナトリウムを0.02M〜2.0Mの濃度で、好ましくは
0.1〜1.0M濃度でアルギニンと併用すればより好まし
い。アルギニン又はアルギニンと塩化ナトリウム等の中
性塩とを含有するｔ−PA溶液はリン酸ナトリウム等の緩
衝液でpH2〜12、好ましくは６〜11の範囲に維持するの
が好ましい。
本発明の血栓溶解剤は主成分であるｔ−PAの他、少なく
ともアルギニンを含有していれば良く、必要に応じ、そ
の他の成分、例えばアルブミン、マンニトール、ゼラチ
ン、塩化ナトリウム等製剤化の際に一般的に用いられる
賦形剤、安定化剤等、リン酸、あるいはクエン酸を含有
させることは任意である。
ともアルギニンを含有していれば良く、必要に応じ、そ
の他の成分、例えばアルブミン、マンニトール、ゼラチ
ン、塩化ナトリウム等製剤化の際に一般的に用いられる
賦形剤、安定化剤等、リン酸、あるいはクエン酸を含有
させることは任意である。
本発明の血栓溶解剤の製造は精製したｔ−PAをアルギニ
ンを含有する溶媒に溶解させた後、無鉤濾過してアンプ
ル、バイアル等に充填して行うが所望により凍結乾燥を
行っても良い。又、ｔ−PAをアルギニンを含有する溶媒
に溶解する代わりに、ｔ−PAと所定量のアルギニンを秤
量し、所望なら他の成分と共に適当な溶媒に溶解するか
或いはこれらの混合物を適当な容器に充填することによ
り製造しても良い。ここに使用する溶媒として注射用蒸
留水、生理食塩水、0.01M〜0.1Mリン酸緩衝液等を挙げ
ることが出来る。製剤の剤型としては通常、注射剤とす
るのが有利であるが、ｔ−PAの血栓溶解能を維持できる
限り任意の剤型として良い。本発明の血栓溶解剤の人体
投与量は概ね２万〜５万IU/Kgであるが、症状に応じ
て、適宜増減してよい。
ンを含有する溶媒に溶解させた後、無鉤濾過してアンプ
ル、バイアル等に充填して行うが所望により凍結乾燥を
行っても良い。又、ｔ−PAをアルギニンを含有する溶媒
に溶解する代わりに、ｔ−PAと所定量のアルギニンを秤
量し、所望なら他の成分と共に適当な溶媒に溶解するか
或いはこれらの混合物を適当な容器に充填することによ
り製造しても良い。ここに使用する溶媒として注射用蒸
留水、生理食塩水、0.01M〜0.1Mリン酸緩衝液等を挙げ
ることが出来る。製剤の剤型としては通常、注射剤とす
るのが有利であるが、ｔ−PAの血栓溶解能を維持できる
限り任意の剤型として良い。本発明の血栓溶解剤の人体
投与量は概ね２万〜５万IU/Kgであるが、症状に応じ
て、適宜増減してよい。
以上の様に、アルギニンを含む溶媒を使用して製剤化を
行えば、ｔ−PAを高濃度の溶液とすることが可能とな
り、従って、少容量の製剤用容器、例えばバイアル、ア
ンプル等に多量のｔ−PAを充填することが可能となり治
療上有効な血栓溶解剤を造ることが出来る。尚、ｔ−PA
の精製過程における透析、濾過、クロマトグラフィー等
の精製工程、特にゲルクロマトグラフィーを実施する工
程においてアルギニンを含有する溶媒を用いるとｔ−PA
を高濃度の状態に維持して精製することが可能となるの
で、効率的な精製を行うことが出来る。従って、ｔ−PA
溶液にアルギニンを含有せしめることは、ｔ−PAの製剤
化に際して極めて有用であると共に高純度のｔ−PAを工
業的規模で効率的に製造する上でも極めて有用である。
行えば、ｔ−PAを高濃度の溶液とすることが可能とな
り、従って、少容量の製剤用容器、例えばバイアル、ア
ンプル等に多量のｔ−PAを充填することが可能となり治
療上有効な血栓溶解剤を造ることが出来る。尚、ｔ−PA
の精製過程における透析、濾過、クロマトグラフィー等
の精製工程、特にゲルクロマトグラフィーを実施する工
程においてアルギニンを含有する溶媒を用いるとｔ−PA
を高濃度の状態に維持して精製することが可能となるの
で、効率的な精製を行うことが出来る。従って、ｔ−PA
溶液にアルギニンを含有せしめることは、ｔ−PAの製剤
化に際して極めて有用であると共に高純度のｔ−PAを工
業的規模で効率的に製造する上でも極めて有用である。
次に実施例及び実施例によって本発明を更に詳しく説明
するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものでは
ない。尚、以下の実験例及び実施例では、ヒトメラノー
マ細胞培養液および遺伝子工学的手段でｔ−PA遺伝子を
移入したチャイニーズハムスターオバリー（以下、CHO
と称する）細胞の培養液より精製したｔ−PAについて記
述したが、ヒト又は動物組織から得たｔ−PA、ヒト又は
動物組織由来の細胞培養液から精製したｔ−PAあるいは
前記以外の遺伝子工学的手段で得たｔ−PA、すなわち、
ｔ−PA遺伝子を移入した真核細胞またはｔ−PA遺伝子を
移入した大腸菌，枯草菌，酵母等の微生物から得たｔ−
PA等であっても良い。
するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものでは
ない。尚、以下の実験例及び実施例では、ヒトメラノー
マ細胞培養液および遺伝子工学的手段でｔ−PA遺伝子を
移入したチャイニーズハムスターオバリー（以下、CHO
と称する）細胞の培養液より精製したｔ−PAについて記
述したが、ヒト又は動物組織から得たｔ−PA、ヒト又は
動物組織由来の細胞培養液から精製したｔ−PAあるいは
前記以外の遺伝子工学的手段で得たｔ−PA、すなわち、
ｔ−PA遺伝子を移入した真核細胞またはｔ−PA遺伝子を
移入した大腸菌，枯草菌，酵母等の微生物から得たｔ−
PA等であっても良い。
ｔ−PAの活性測定は95％凝固フィブリノーゲン（プラス
ミノーゲン含量 約50カゼイン単位/g凝固蛋白）を用い
て作成したフィブリン平板法により、ｔ−PA（WHO認定
品）を標準品として用いて行った。
ミノーゲン含量 約50カゼイン単位/g凝固蛋白）を用い
て作成したフィブリン平板法により、ｔ−PA（WHO認定
品）を標準品として用いて行った。
ｔ−PAの製造例1. D.Collenらの方法（The Journal of Biological chemis
try 256（13）7035-7041 1981）によりヒトメラノーマ
由来細胞を用いて産生した粗ｔ−PA培養液約60Lを、D.
C.Rijkenらの方法（Thromb.Haemostas.48（３）294-296
1982）を参考にして精製操作を行った。すなわち、培
養液をZn−キレートクロマトグラフィー（13.5×17.5c
m）で精製した後更にCon Aセファロースクロマトグラフ
ィー（５×30cm）を行った。Con Aセファロースカラム
より0.4M α−Ｄメチルマンノシドを含む2.0Mチオシア
ン酸カリウム溶液で溶出したｔ−PAをポリエチレングリ
コールを用いて濃縮した後、0.25Mアルギニン塩酸塩を
含む0.01Mリン酸緩衝液（pH7.5）で平衡化したセファア
クリルS200（ファマシア社製）を充填したカラム（7.5
×90cm）でゲル濾過を行い、精製ｔ−PAを得た。この一
連の精製工程により、比活性2.5×10５ IU/mg,1800万I
Uの精製ｔ−PAを得た。得られたｔ−PAを４℃で一夜、
蒸留水に対して透析した後、凍結乾燥し、以下の実施例
及び実施例に使用した。
try 256（13）7035-7041 1981）によりヒトメラノーマ
由来細胞を用いて産生した粗ｔ−PA培養液約60Lを、D.
C.Rijkenらの方法（Thromb.Haemostas.48（３）294-296
1982）を参考にして精製操作を行った。すなわち、培
養液をZn−キレートクロマトグラフィー（13.5×17.5c
m）で精製した後更にCon Aセファロースクロマトグラフ
ィー（５×30cm）を行った。Con Aセファロースカラム
より0.4M α−Ｄメチルマンノシドを含む2.0Mチオシア
ン酸カリウム溶液で溶出したｔ−PAをポリエチレングリ
コールを用いて濃縮した後、0.25Mアルギニン塩酸塩を
含む0.01Mリン酸緩衝液（pH7.5）で平衡化したセファア
クリルS200（ファマシア社製）を充填したカラム（7.5
×90cm）でゲル濾過を行い、精製ｔ−PAを得た。この一
連の精製工程により、比活性2.5×10５ IU/mg,1800万I
Uの精製ｔ−PAを得た。得られたｔ−PAを４℃で一夜、
蒸留水に対して透析した後、凍結乾燥し、以下の実施例
及び実施例に使用した。
ｔ−PAの製造例２ D.Pennicaらの方法（Nature 301（20）214〜221,1983）
に順じてｔ−PA遺伝子を作成し、R.J.KaufmanとP.A.Sha
rpの方法（Journal of Molecular Biology 159 601-62
1,1982）に準じて、前記ｔ−PA遺伝子をCHO細胞に移入
した後、このCHO細胞を用いて産生した粗ｔ−PA培養液4
0Lを得た。この粗ｔ−PA培養液をｔ−PAの製造例1.と同
様に精製し、比活性1.7×10５IU/mg、1200万IUの精製ｔ
−PAを得た。
に順じてｔ−PA遺伝子を作成し、R.J.KaufmanとP.A.Sha
rpの方法（Journal of Molecular Biology 159 601-62
1,1982）に準じて、前記ｔ−PA遺伝子をCHO細胞に移入
した後、このCHO細胞を用いて産生した粗ｔ−PA培養液4
0Lを得た。この粗ｔ−PA培養液をｔ−PAの製造例1.と同
様に精製し、比活性1.7×10５IU/mg、1200万IUの精製ｔ
−PAを得た。
実験例1. ｔ−PAの溶解性に対するアルギニン濃度の影響を調べ
た。製造例１で得た精製ｔ−PAを5mgがつ秤量し、それ
ぞれ第１表に示したアルギニン濃度の溶解液0.5mlで溶
解し、溶液中のｔ−PAの活性を測定してｔ−PAの溶解度
を調べた。ｔ−PAが完全に溶解せず沈澱が生じた場合に
は、その上清活性を測定した。結果を第１表及び第１図
に示した。
た。製造例１で得た精製ｔ−PAを5mgがつ秤量し、それ
ぞれ第１表に示したアルギニン濃度の溶解液0.5mlで溶
解し、溶液中のｔ−PAの活性を測定してｔ−PAの溶解度
を調べた。ｔ−PAが完全に溶解せず沈澱が生じた場合に
は、その上清活性を測定した。結果を第１表及び第１図
に示した。
実験例2. ｔ−PAの溶解性に対するアルギニンの種類の影響を調べ
た。第２表に示した各種のアルギニン25mMを含む溶液0.
5mlに、製造例1.および２で精製したｔ−PA 1mgを溶解
し、実施例1.と同様に溶液中のｔ−PAの活性を測定し
た。結果を第２表に示した。
た。第２表に示した各種のアルギニン25mMを含む溶液0.
5mlに、製造例1.および２で精製したｔ−PA 1mgを溶解
し、実施例1.と同様に溶液中のｔ−PAの活性を測定し
た。結果を第２表に示した。
実験例3. Ｌ−アルギニン塩酸塩と塩化ナトリウムとを含む溶媒系
での溶解性を調べた。Ｌ−アルギニン塩酸塩と塩化ナト
リウムとを含みそのpH調整をした溶液0.5mlに製造例１
で得た精製ｔ−PA 5mg又は1mgを溶解し、溶液のｔ−PA
活性を測定してｔ−PAの溶解性を調べた。結果を第３表
及び第４表に示した。
での溶解性を調べた。Ｌ−アルギニン塩酸塩と塩化ナト
リウムとを含みそのpH調整をした溶液0.5mlに製造例１
で得た精製ｔ−PA 5mg又は1mgを溶解し、溶液のｔ−PA
活性を測定してｔ−PAの溶解性を調べた。結果を第３表
及び第４表に示した。
実験例4. 毒性試験 後記実施例１及び２で製造した製剤を生理食塩水又は注
射用蒸留水に溶解し、マウス及びモルモットに50万IU/K
g投与したが、異常は認められなかった。又、同製剤20
万IU/Kgをウサギに投与して発熱性物質試験を行なった
が、いずれの製剤も陰性であった。
射用蒸留水に溶解し、マウス及びモルモットに50万IU/K
g投与したが、異常は認められなかった。又、同製剤20
万IU/Kgをウサギに投与して発熱性物質試験を行なった
が、いずれの製剤も陰性であった。
以上の実験例から明らかな様に、アルギニンはｔ−PAの
溶解性を高めるのに有用である。
溶解性を高めるのに有用である。
実施例1. ｔ−PA 5,000,000IU Ｌ−アルギニン塩酸塩 21mg リン酸ナトリウム 173.9mg 精製ゼラチン 100mg 上記の各成分を注射用蒸留水10mlに溶解し、無菌濾過し
た後1.0mlずつバイアルに充填し、凍結乾燥して血栓溶
解剤を調製した。
た後1.0mlずつバイアルに充填し、凍結乾燥して血栓溶
解剤を調製した。
実施例2. ｔ−PA 5,000,000IU Ｌ−アルギニン塩酸塩 52.5mg リン酸ナトリウム 173.9mg 塩化ナトリウム 64.3mg ヒト血清アルブミン 20mg 上記の各成分を秤取得し、実施例1.と同様の方法で血栓
溶解剤を調製した。
溶解剤を調製した。
第１図はｔ−PAの溶解度とアルギニン濃度との関係を示
すグラフである。
すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭60−184026（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−181028（ＪＰ，Ａ)
Claims (7)
- 【請求項１】組織プラスミノーゲンアクチベーターと、
少なくとも、アルギニンを含有することを特徴とする血
栓溶解剤。 - 【請求項２】アルギニンが、Ｄ体、Ｌ体、ラセミ体及び
その酸付加塩からなる群から選ばれたものである特許請
求の範囲第１項記載の血栓溶解剤。 - 【請求項３】アルギニン又はその酸付加塩1mM〜500mMを
含有していることを特徴とする特許請求の範囲第１項記
載の血栓溶解剤。 - 【請求項４】更に賦形剤及び／又は安定化剤を含有して
いることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の血栓
溶解剤。 - 【請求項５】血栓溶解剤の剤形が注射用凍結乾燥剤であ
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の血栓溶
解剤。 - 【請求項６】組織プラスミノーゲンアクチベーターをア
ルギニン又はその酸付加塩共存下に製剤容器に充填する
ことを特徴とする血栓溶解剤の製法。 - 【請求項７】組織プラスミノーゲンアクチベーターをア
ルギニン又はその酸付加塩共存下に製剤容器に充填して
凍結乾燥することを特徴とする血栓溶解剤の製法。
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