JPH0699324B2 - 組織プラスミノーゲンアクチベーターの溶解法 - Google Patents
組織プラスミノーゲンアクチベーターの溶解法Info
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- JPH0699324B2 JPH0699324B2 JP4190012A JP19001292A JPH0699324B2 JP H0699324 B2 JPH0699324 B2 JP H0699324B2 JP 4190012 A JP4190012 A JP 4190012A JP 19001292 A JP19001292 A JP 19001292A JP H0699324 B2 JPH0699324 B2 JP H0699324B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は組繊プラスミノーゲンア
クチベーターの溶解方法に関するものである。詳細に
は、他の蛋白質を除く組織プラスミノーゲンアクチベー
ターの水溶液中の濃度を、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ
以上とする方法に関するものである。
クチベーターの溶解方法に関するものである。詳細に
は、他の蛋白質を除く組織プラスミノーゲンアクチベー
ターの水溶液中の濃度を、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ
以上とする方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来、血栓溶解剤としては尿または培養
腎細胞から分離精製されたウロキナーゼを中心として発
展し、その他にβ溶連菌より抽出されたストレプトキナ
ーゼが実用に供されてきた。しかし、ウロキナーゼは血
栓に対する親和性が低いため、所望の治療効果を得るに
は大量投与を必要とし、殊に全身投与の場合、血流中に
大量に生じたプラスミンによる凝固因子の破壊による出
血が危惧されていた。この点、ヒトまたは動物組織中、
それらの組織由来の細胞培養液または腫瘍細胞培養液中
に見出される組織プラスミノーゲンアクチベーター（以
下、ｔ−ＰＡと称する）は、ウロキナーゼに比して血栓
に対する親和性が高く、さらに血栓溶解能も優れている
ことから少量の投与で所望の治療効果が得られ、新しい
血栓溶解剤として期待されている。また、最近では遺伝
子工学的手段によってｔ−ＰＡを産生することが試みら
れており、今後の期待に拍車がかけられている。
腎細胞から分離精製されたウロキナーゼを中心として発
展し、その他にβ溶連菌より抽出されたストレプトキナ
ーゼが実用に供されてきた。しかし、ウロキナーゼは血
栓に対する親和性が低いため、所望の治療効果を得るに
は大量投与を必要とし、殊に全身投与の場合、血流中に
大量に生じたプラスミンによる凝固因子の破壊による出
血が危惧されていた。この点、ヒトまたは動物組織中、
それらの組織由来の細胞培養液または腫瘍細胞培養液中
に見出される組織プラスミノーゲンアクチベーター（以
下、ｔ−ＰＡと称する）は、ウロキナーゼに比して血栓
に対する親和性が高く、さらに血栓溶解能も優れている
ことから少量の投与で所望の治療効果が得られ、新しい
血栓溶解剤として期待されている。また、最近では遺伝
子工学的手段によってｔ−ＰＡを産生することが試みら
れており、今後の期待に拍車がかけられている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ｔ−Ｐ
Ａの精製を行い、これを有効成分とする血栓溶解剤の製
法について検討を加えてきた。ところが、ｔ−ＰＡは精
製の程度が進むに従って溶解性が低下することが明らか
になり、製剤化に際しての大きな障害となった。
Ａの精製を行い、これを有効成分とする血栓溶解剤の製
法について検討を加えてきた。ところが、ｔ−ＰＡは精
製の程度が進むに従って溶解性が低下することが明らか
になり、製剤化に際しての大きな障害となった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ｔ−ＰＡ
の溶解性の問題を解消すべく鋭意研究した結果、ｔ−Ｐ
Ａはアルギニンまたはその酸付加塩を含む溶媒系を使用
することにより、溶解性が著しく増加することを見い出
し、本発明を完成した。
の溶解性の問題を解消すべく鋭意研究した結果、ｔ−Ｐ
Ａはアルギニンまたはその酸付加塩を含む溶媒系を使用
することにより、溶解性が著しく増加することを見い出
し、本発明を完成した。
【０００５】本発明はｔ−ＰＡの溶解性を増加させるた
めに、アルギニンまたはその酸付加塩を有効量含有させ
ることを特徴とするｔ−ＰＡの溶解方法に関するもので
ある。
めに、アルギニンまたはその酸付加塩を有効量含有させ
ることを特徴とするｔ−ＰＡの溶解方法に関するもので
ある。
【０００６】本発明に用いるアルギニンはＤ体、Ｌ体あ
るいはラセミ体のいずれであってもよく、さらにこれら
の酸付加塩、例えば、塩酸塩であってもよい（以下、特
に記載のない場合は、アルギニンというときは、これら
全てを包含する。）。ｔ−ＰＡの溶解性を高めるために
必要なアルギニン量は１ｍＭ以上５００ｍＭ以下、好ま
しくは５ｍＭ〜２００ｍＭが適当である。後記実験例１
で示されるように、１０００ｍＭであっても有効である
が、それに見合うｔ−ＰＡの溶解性の上昇は見られない
ので、実用上５００ｍＭ以下が適当である。さらに、中
性塩、特に塩化ナトリウムを０．０２Ｍ〜２．０Ｍの濃
度、好ましくは、０．１〜１．０Ｍ濃度でアルギニンと
併用すればより好ましい。アルギニンまたはアルギニン
と塩化ナトリウム等の中性塩とを含有するｔ−ＰＡ溶液
はリン酸ナトリウム等の緩衝液でｐＨ２〜１２、好まし
くは、６〜１１の範囲に維持するのが好ましい。
るいはラセミ体のいずれであってもよく、さらにこれら
の酸付加塩、例えば、塩酸塩であってもよい（以下、特
に記載のない場合は、アルギニンというときは、これら
全てを包含する。）。ｔ−ＰＡの溶解性を高めるために
必要なアルギニン量は１ｍＭ以上５００ｍＭ以下、好ま
しくは５ｍＭ〜２００ｍＭが適当である。後記実験例１
で示されるように、１０００ｍＭであっても有効である
が、それに見合うｔ−ＰＡの溶解性の上昇は見られない
ので、実用上５００ｍＭ以下が適当である。さらに、中
性塩、特に塩化ナトリウムを０．０２Ｍ〜２．０Ｍの濃
度、好ましくは、０．１〜１．０Ｍ濃度でアルギニンと
併用すればより好ましい。アルギニンまたはアルギニン
と塩化ナトリウム等の中性塩とを含有するｔ−ＰＡ溶液
はリン酸ナトリウム等の緩衝液でｐＨ２〜１２、好まし
くは、６〜１１の範囲に維持するのが好ましい。
【０００７】本発明のｔ−ＰＡの溶解方法により製造さ
れる血栓溶解剤は、主成分であるｔ−ＰＡの他、少なく
とも、アルギニンを含有していればよく、必要に応じ、
その他の成分、例えばアルブミン、マンニトール、ゼラ
チン、塩化ナトリウム等製剤化の際に一般的に用いられ
る賦形剤、安定化剤等、リン酸、あるいはクエン酸等を
含有させることは任意である。
れる血栓溶解剤は、主成分であるｔ−ＰＡの他、少なく
とも、アルギニンを含有していればよく、必要に応じ、
その他の成分、例えばアルブミン、マンニトール、ゼラ
チン、塩化ナトリウム等製剤化の際に一般的に用いられ
る賦形剤、安定化剤等、リン酸、あるいはクエン酸等を
含有させることは任意である。
【０００８】本発明のｔ−ＰＡの溶解方法による血栓溶
解剤の製造は、精製したｔ−ＰＡをアルギニンを含有す
る溶媒に溶解させた後、無菌濾過し、アンプル、バイア
ル等に充填して行うが所望により凍結乾燥を行ってもよ
い。また、ｔ−ＰＡをアルギニンを含有する溶媒に溶解
する代わりに、ｔ−ＰＡと所定量のアルギニンを秤量
し、所望なら他の成分と共に適当な溶媒に溶解するか、
あるいはこれらの混合物として、適当な容器に充填する
ことにより製造してもよい。ここに使用する溶媒として
注射用蒸留水、生理食塩水、０．０１Ｍ〜０．１Ｍリン
酸緩衝液等を挙げることができる。製剤の剤型として
は、通常、注射剤とするのが有利であるが、ｔ−ＰＡの
血栓溶解能を維持できる限り任意の剤型としてよい。本
発明のｔ−ＰＡの溶解方法により製造される血栓溶解剤
の人体投与量は、おおむね２万〜５万ＩＵ／Ｋｇである
が、症状に応じて、適宜増減してよい。
解剤の製造は、精製したｔ−ＰＡをアルギニンを含有す
る溶媒に溶解させた後、無菌濾過し、アンプル、バイア
ル等に充填して行うが所望により凍結乾燥を行ってもよ
い。また、ｔ−ＰＡをアルギニンを含有する溶媒に溶解
する代わりに、ｔ−ＰＡと所定量のアルギニンを秤量
し、所望なら他の成分と共に適当な溶媒に溶解するか、
あるいはこれらの混合物として、適当な容器に充填する
ことにより製造してもよい。ここに使用する溶媒として
注射用蒸留水、生理食塩水、０．０１Ｍ〜０．１Ｍリン
酸緩衝液等を挙げることができる。製剤の剤型として
は、通常、注射剤とするのが有利であるが、ｔ−ＰＡの
血栓溶解能を維持できる限り任意の剤型としてよい。本
発明のｔ−ＰＡの溶解方法により製造される血栓溶解剤
の人体投与量は、おおむね２万〜５万ＩＵ／Ｋｇである
が、症状に応じて、適宜増減してよい。
【０００９】以上の様に、アルギニンを含む溶媒を使用
してｔ−ＰＡの溶解性を増加させれば、ｔ−ＰＡを高濃
度の溶液とすることが可能となり、従って、少容量の製
剤用容器、例えばバイアル、アンプル等に多量のｔ−Ｐ
Ａを充填することが可能となり治療上有効な血栓溶解剤
をつくることができる。
してｔ−ＰＡの溶解性を増加させれば、ｔ−ＰＡを高濃
度の溶液とすることが可能となり、従って、少容量の製
剤用容器、例えばバイアル、アンプル等に多量のｔ−Ｐ
Ａを充填することが可能となり治療上有効な血栓溶解剤
をつくることができる。
【００１０】なお、ｔ−ＰＡの精製過程における透析、
濾過、クロマトグラフィー等の精製工程、特に、ゲルク
ロマトグラフィーを実施する工程においてアルギニンを
含有する溶媒を用いるとｔ−ＰＡを高濃度の状態に維持
して精製することが可能になるので、効率的な精製を行
うことができる。従って、ｔ−ＰＡ溶液にアルギニンを
含有せしめることは、ｔ−ＰＡの製剤化に際して極めて
有用であると共に、高純度のｔ−ＰＡを工業的規模で効
率的に製造する上でも極めて有用である。
濾過、クロマトグラフィー等の精製工程、特に、ゲルク
ロマトグラフィーを実施する工程においてアルギニンを
含有する溶媒を用いるとｔ−ＰＡを高濃度の状態に維持
して精製することが可能になるので、効率的な精製を行
うことができる。従って、ｔ−ＰＡ溶液にアルギニンを
含有せしめることは、ｔ−ＰＡの製剤化に際して極めて
有用であると共に、高純度のｔ−ＰＡを工業的規模で効
率的に製造する上でも極めて有用である。
【００１１】次に、実験例および実施例によって本発明
をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例に
限定されるものではない。なお、以下の実験例および実
施例では、ヒトメラノーマ細胞培養液および遺伝子工学
的手段でｔ−ＰＡ遺伝子を移入したチャイニーズハムス
ターオバリー（以下、ＣＨＯと称する）細胞の培養液よ
り精製したｔ−ＰＡについて記述したが、ヒトまたは動
物組織から得たｔ−ＰＡ、ヒトまたは動物組織由来の細
胞培養液から精製したｔ−ＰＡあるいは前記以外の遺伝
子工学的手段で得たｔ−ＰＡ、すなわち、ｔ−ＰＡ遺伝
子を移入した真核細胞またはｔ−ＰＡ遺伝子を移入した
大腸菌、枯草菌、酵母等の微生物から得たｔ−ＰＡ等で
あってもよい。
をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例に
限定されるものではない。なお、以下の実験例および実
施例では、ヒトメラノーマ細胞培養液および遺伝子工学
的手段でｔ−ＰＡ遺伝子を移入したチャイニーズハムス
ターオバリー（以下、ＣＨＯと称する）細胞の培養液よ
り精製したｔ−ＰＡについて記述したが、ヒトまたは動
物組織から得たｔ−ＰＡ、ヒトまたは動物組織由来の細
胞培養液から精製したｔ−ＰＡあるいは前記以外の遺伝
子工学的手段で得たｔ−ＰＡ、すなわち、ｔ−ＰＡ遺伝
子を移入した真核細胞またはｔ−ＰＡ遺伝子を移入した
大腸菌、枯草菌、酵母等の微生物から得たｔ−ＰＡ等で
あってもよい。
【００１２】ｔ−ＰＡの活性測定は９５％凝固フィブリ
ノーゲン（プラスミノーゲン含有約５０カゼイン単位／
ｇ凝固蛋白）を用いて作成したフィブリン平板法によ
り、ｔ−ＰＡ（ＷＨＯ認定品）を標準品として用いて行
った。
ノーゲン（プラスミノーゲン含有約５０カゼイン単位／
ｇ凝固蛋白）を用いて作成したフィブリン平板法によ
り、ｔ−ＰＡ（ＷＨＯ認定品）を標準品として用いて行
った。
【００１３】（ｔ−ＰＡの製造例１） コーレン（Ｃｏｌｌｅｎ）らの方法（ザ ジャーナル
オブ バイオロジカルケミストリー（Ｔｈｅ Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２５６（１３）、７０３５−７０４
１、１９８１）によりヒトメラノーマ由来細胞を用いて
産生した粗ｔ−ＰＡ培養液約６０Ｌを、リーケン（Ｒｉ
ｊｋｅｎ）らの方法（トロンボシスアンド ヘモスタシ
ス（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔａｓ．）４８
（３）、２９４−２９６、１９８２）を参考にして精製
操作を行った。すなわち、培養液をＺｎ−キレートクロ
マトグラフィー（１３．５×１７．５ｃｍ）で精製した
後、Ｃｏｎ Ａセファロースクロマトグラフィー（５×
３０ｃｍ）を行った。ＣｏｎＡセファロースカラムより
０．４Ｍ α−Ｄメチルマンノシドを含む２．０Ｍチオ
シアン酸カリウム溶液で溶出したｔ−ＰＡをポリエチレ
ングリコールを用いて濃縮した後、０．２５Ｍアルギニ
ン塩酸塩を含む０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）
で平衡化したセファアクリルＳ２００（ファルマシア社
製）を充填したカラム（７．５×９０ｃｍ）でゲル濾過
を行い、精製ｔ−ＰＡを得た。この一連の精製工程によ
り、比活性２．５×１０５ＩＵ／ｍｇ、１８００万ＩＵ
の精製ｔ−ＰＡを得た。得られたｔ−ＰＡを４℃で一
夜、蒸留水に対して透析した後、凍結乾燥し、後述の実
験例および実施例に使用した。
オブ バイオロジカルケミストリー（Ｔｈｅ Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２５６（１３）、７０３５−７０４
１、１９８１）によりヒトメラノーマ由来細胞を用いて
産生した粗ｔ−ＰＡ培養液約６０Ｌを、リーケン（Ｒｉ
ｊｋｅｎ）らの方法（トロンボシスアンド ヘモスタシ
ス（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔａｓ．）４８
（３）、２９４−２９６、１９８２）を参考にして精製
操作を行った。すなわち、培養液をＺｎ−キレートクロ
マトグラフィー（１３．５×１７．５ｃｍ）で精製した
後、Ｃｏｎ Ａセファロースクロマトグラフィー（５×
３０ｃｍ）を行った。ＣｏｎＡセファロースカラムより
０．４Ｍ α−Ｄメチルマンノシドを含む２．０Ｍチオ
シアン酸カリウム溶液で溶出したｔ−ＰＡをポリエチレ
ングリコールを用いて濃縮した後、０．２５Ｍアルギニ
ン塩酸塩を含む０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）
で平衡化したセファアクリルＳ２００（ファルマシア社
製）を充填したカラム（７．５×９０ｃｍ）でゲル濾過
を行い、精製ｔ−ＰＡを得た。この一連の精製工程によ
り、比活性２．５×１０５ＩＵ／ｍｇ、１８００万ＩＵ
の精製ｔ−ＰＡを得た。得られたｔ−ＰＡを４℃で一
夜、蒸留水に対して透析した後、凍結乾燥し、後述の実
験例および実施例に使用した。
【００１４】（ｔ−ＰＡの製造例２） ペニカ（Ｐｅｎｎｉｃａ）らの方法（ネイチャー（Ｎａ
ｔｕｒｅ）３０１（２０）、２１４−２２１、１９８
３）に準じてｔ−ＰＡ遺伝子を作成し、カウフマン（Ｋ
ａｕｆｍａｎ）とシャープ（Ｓｈａｒｐ）の方法（ジャ
ーナル オブ モレキュラー バイオロジー（Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．）１５９、６０１−６２１、１９８２）
に準じて、前記ｔ−ＰＡ遺伝子をＣＨＯ細胞に移入した
後、このＣＨＯ細胞を用いて産生した粗ｔ−ＰＡ培養液
４０Ｌを得た。この粗ｔ−ＰＡ培養液をｔ−ＰＡの製造
例１と同様に精製し、比活性１．７×１０５ＩＵ／ｍ
ｇ、１２００万ＩＵの精製ｔ−ＰＡを得た。
ｔｕｒｅ）３０１（２０）、２１４−２２１、１９８
３）に準じてｔ−ＰＡ遺伝子を作成し、カウフマン（Ｋ
ａｕｆｍａｎ）とシャープ（Ｓｈａｒｐ）の方法（ジャ
ーナル オブ モレキュラー バイオロジー（Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．）１５９、６０１−６２１、１９８２）
に準じて、前記ｔ−ＰＡ遺伝子をＣＨＯ細胞に移入した
後、このＣＨＯ細胞を用いて産生した粗ｔ−ＰＡ培養液
４０Ｌを得た。この粗ｔ−ＰＡ培養液をｔ−ＰＡの製造
例１と同様に精製し、比活性１．７×１０５ＩＵ／ｍ
ｇ、１２００万ＩＵの精製ｔ−ＰＡを得た。
【００１５】（ｔ−ＰＡの製造例３） コーレン（Ｃｏｌｌｅｎ）らの方法（ザ ジャーナル
オブ バイオロジカルケミストリー（Ｔｈｅ Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２５６（１３）、７０３５−７０４
１、１９８１）によりヒトメラノーマ由来細胞を用いて
産生した粗ｔ−ＰＡ培養液約６０Ｌを、リーケン（Ｒｉ
ｊｋｅｎ）らの方法（トロンボシスアンド ヘモシスタ
ス（Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔａｓ． ）４８
（３）、２９４−２９６、１９８２）を参考にして精製
操作を行った。すなわち、培養液をＺｎ−キレートクロ
マトグラフィー（１３．５×１７．５ｃｍ）で精製した
後、Ｃｏｎ Ａセファロースクロマトグラフィー（５×
３０ｃｍ）を行なった。ＣｏｎＡセファロースカラムよ
り０．４Ｍ α−Ｄメチルマンノシドを含む２．０Ｍチ
オシアン酸カリウム溶液で溶出したｔ−ＰＡをポリエチ
レングリコールを用いて濃縮した後、０．２５Ｍアルギ
ニン塩酸塩を含む０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．
５）で平衡化したセファクリルＳ２００（ファルマシア
社製）を充填したカラム（７．５×９０ｃｍ）でゲル濾
過を行った。溶出したｔ−ＰＡをポリエチレングリコー
ルを用いて濃縮した後、０．２５Ｍアルギニン塩酸塩を
含む０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）で平衡化し
たセファクリルＳ２００を充填したカラム（７．５×９
０ｃｍ）で再度、ゲル濾過を行い、精製ｔ−ＰＡを得
た。この一連の精製工程により、比活性４．２×１０ ５
ＩＵ／ｍｇ、１４００万ＩＵの精製ｔ−ＰＡを得た。得
られたｔ−ＰＡを４℃で一夜、蒸留水に対して透析した
後、凍結乾燥し、以下の実験例および実施例に使用し
た。
オブ バイオロジカルケミストリー（Ｔｈｅ Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２５６（１３）、７０３５−７０４
１、１９８１）によりヒトメラノーマ由来細胞を用いて
産生した粗ｔ−ＰＡ培養液約６０Ｌを、リーケン（Ｒｉ
ｊｋｅｎ）らの方法（トロンボシスアンド ヘモシスタ
ス（Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔａｓ． ）４８
（３）、２９４−２９６、１９８２）を参考にして精製
操作を行った。すなわち、培養液をＺｎ−キレートクロ
マトグラフィー（１３．５×１７．５ｃｍ）で精製した
後、Ｃｏｎ Ａセファロースクロマトグラフィー（５×
３０ｃｍ）を行なった。ＣｏｎＡセファロースカラムよ
り０．４Ｍ α−Ｄメチルマンノシドを含む２．０Ｍチ
オシアン酸カリウム溶液で溶出したｔ−ＰＡをポリエチ
レングリコールを用いて濃縮した後、０．２５Ｍアルギ
ニン塩酸塩を含む０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．
５）で平衡化したセファクリルＳ２００（ファルマシア
社製）を充填したカラム（７．５×９０ｃｍ）でゲル濾
過を行った。溶出したｔ−ＰＡをポリエチレングリコー
ルを用いて濃縮した後、０．２５Ｍアルギニン塩酸塩を
含む０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）で平衡化し
たセファクリルＳ２００を充填したカラム（７．５×９
０ｃｍ）で再度、ゲル濾過を行い、精製ｔ−ＰＡを得
た。この一連の精製工程により、比活性４．２×１０ ５
ＩＵ／ｍｇ、１４００万ＩＵの精製ｔ−ＰＡを得た。得
られたｔ−ＰＡを４℃で一夜、蒸留水に対して透析した
後、凍結乾燥し、以下の実験例および実施例に使用し
た。
【００１６】 （実験例１） ｔ−ＰＡの溶解性に対するアルギニン濃度の影響を調べ
た。製造例１で得た精製ｔ−ＰＡを５ｍｇずつ秤量し、
それぞれ表１に示したアルギニン濃度の溶解液０．５ｍ
ｌで溶解し、溶液中のｔ−ＰＡの活性を測定してｔ−Ｐ
Ａの溶解度を調べた。ｔ−ＰＡが完全に溶解せず沈澱が
生じた場合には、その上清活性を測定した。結果を表１
および図１に示した。１ｍＭのアルギニン溶液で、ｔ−
ＰＡ０．２ｍｇ／ｍｌ以上の溶解性が得られた。
た。製造例１で得た精製ｔ−ＰＡを５ｍｇずつ秤量し、
それぞれ表１に示したアルギニン濃度の溶解液０．５ｍ
ｌで溶解し、溶液中のｔ−ＰＡの活性を測定してｔ−Ｐ
Ａの溶解度を調べた。ｔ−ＰＡが完全に溶解せず沈澱が
生じた場合には、その上清活性を測定した。結果を表１
および図１に示した。１ｍＭのアルギニン溶液で、ｔ−
ＰＡ０．２ｍｇ／ｍｌ以上の溶解性が得られた。
【００１７】
【表１】
【００１８】（実験例２）製造例３で得た精製ｔ−ＰＡの溶解性に対するアルギニ
ンの種類の影響を、実験例１と同様に調べた。その結
果、ｔ−ＰＡ溶解性に対して実験例１と同様の結果が得
られた。
ンの種類の影響を、実験例１と同様に調べた。その結
果、ｔ−ＰＡ溶解性に対して実験例１と同様の結果が得
られた。
【００１９】（実験例３） ｔ−ＰＡの溶解性に対するアルギニンの種類の影響を調
べた。表２に示した各種のアルギニン２５ｍＭを含む溶
液０．５ｍｌに、製造例１および２で精製したｔ−ＰＡ
１ｍｇを溶解し、実験例１と同様に溶液中のｔ−ＰＡの
活性を測定した。結果を表２に示した。
べた。表２に示した各種のアルギニン２５ｍＭを含む溶
液０．５ｍｌに、製造例１および２で精製したｔ−ＰＡ
１ｍｇを溶解し、実験例１と同様に溶液中のｔ−ＰＡの
活性を測定した。結果を表２に示した。
【００２０】
【表２】
【００２１】（実験例４） Ｌ−アルギニン塩酸塩と塩化ナトリウムとを含む溶媒系
での溶解性を調べた。Ｌ−アルギニン塩酸塩と塩化ナト
リウムとを含みそのｐＨ調整をした溶液０．５ｍｌに製
造例１で得た精製ｔ−ＰＡ５ｍｇまたは１ｍｇを溶解
し、溶液のｔ−ＰＡ活性を測定してｔ−ＰＡの溶解度を
調べた。結果を表３および表４に示した。
での溶解性を調べた。Ｌ−アルギニン塩酸塩と塩化ナト
リウムとを含みそのｐＨ調整をした溶液０．５ｍｌに製
造例１で得た精製ｔ−ＰＡ５ｍｇまたは１ｍｇを溶解
し、溶液のｔ−ＰＡ活性を測定してｔ−ＰＡの溶解度を
調べた。結果を表３および表４に示した。
【００２２】
【表３】
【００２３】
【表４】
【００２４】（実験例５） 毒性試験 後記実施例１および２で製造した製剤を生理食塩水また
は注射用蒸留水に溶解し、マウスおよびモルモットに５
０万ＩＵ／Ｋｇ投与したが、異常は認められなかった。
また、同製剤２０万ＩＵ／Ｋｇをウサギに投与して発熱
性物質試験を行なったが、いずれの製剤も陰性であっ
た。
は注射用蒸留水に溶解し、マウスおよびモルモットに５
０万ＩＵ／Ｋｇ投与したが、異常は認められなかった。
また、同製剤２０万ＩＵ／Ｋｇをウサギに投与して発熱
性物質試験を行なったが、いずれの製剤も陰性であっ
た。
【００２５】 以上の実験例から明らかな様に、アルギニ
ンはｔ−ＰＡの溶解性を高めるのに有用である。
ンはｔ−ＰＡの溶解性を高めるのに有用である。
【００２６】
【００２７】 （実施例１） ｔ−ＰＡ ５，０００，０００ ＩＵ Ｌ−アルギニン塩酸塩 ２１ ｍｇ リン酸ナトリウム １７３．９ ｍｇ 精製ゼラチン １００．０ ｍｇ 上記の各成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾
過した後１．０ｍｌずつバイアルに充填し、凍結乾燥し
て血栓溶解剤を調製した。
過した後１．０ｍｌずつバイアルに充填し、凍結乾燥し
て血栓溶解剤を調製した。
【００２８】 （実施例２） ｔ−ＰＡ ５，０００，０００ ＩＵ Ｌ−アルギニン塩酸塩 ５２．５ ｍｇ リン酸ナトリウム １７３．９ ｍｇ 塩化ナトリウム ６４．３ ｍｇ ヒト血清アルブミン ２０ ｍｇ 上記の各成分を秤取得し、実施例１と同様の方法で血栓
溶解剤を調製した。
溶解剤を調製した。
【図面の簡単な説明】図１はｔ−ＰＡの溶解度とアルギ
ニン濃度との関係を示すグラフである。
ニン濃度との関係を示すグラフである。
Claims (3)
- 【請求項１】 組織プラスミノーゲンアクチベーターの
溶解性を増加させるために、少なくとも、アルギニンま
たはその酸付加塩を有効量含有させて、組織プラスミノ
ーゲンアクチベーターの水溶液中の濃度を少なくとも
０．２ｍｇ／ｍｌ以上とする方法。 - 【請求項２】 アルギニンまたはその酸付加塩の前記有
効量が、１ｍＭ〜５００ｍＭである請求項１記載の方
法。 - 【請求項３】 アルギニンまたはその酸付加塩の前記有
効量が、５ｍＭ〜２００ｍＭである請求項１記載の方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4190012A JPH0699324B2 (ja) | 1985-10-02 | 1992-06-24 | 組織プラスミノーゲンアクチベーターの溶解法 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60219606A JPH0672105B2 (ja) | 1985-10-02 | 1985-10-02 | 血栓溶解剤及びその製法 |
| JP4190012A JPH0699324B2 (ja) | 1985-10-02 | 1992-06-24 | 組織プラスミノーゲンアクチベーターの溶解法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60219606A Division JPH0672105B2 (ja) | 1985-10-02 | 1985-10-02 | 血栓溶解剤及びその製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06206829A JPH06206829A (ja) | 1994-07-26 |
| JPH0699324B2 true JPH0699324B2 (ja) | 1994-12-07 |
Family
ID=26505813
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4190012A Expired - Lifetime JPH0699324B2 (ja) | 1985-10-02 | 1992-06-24 | 組織プラスミノーゲンアクチベーターの溶解法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0699324B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1332027C (zh) * | 2005-11-01 | 2007-08-15 | 武汉大学 | 一种重组人tPA的制备方法 |
-
1992
- 1992-06-24 JP JP4190012A patent/JPH0699324B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06206829A (ja) | 1994-07-26 |
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|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |