JPH07173076A - 安定化されたヒト組織プラスミノゲン活性化因子組成物の調製法 - Google Patents
安定化されたヒト組織プラスミノゲン活性化因子組成物の調製法Info
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- JPH07173076A JPH07173076A JP6183274A JP18327494A JPH07173076A JP H07173076 A JPH07173076 A JP H07173076A JP 6183274 A JP6183274 A JP 6183274A JP 18327494 A JP18327494 A JP 18327494A JP H07173076 A JPH07173076 A JP H07173076A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 安定化されたヒト組織プラスミノゲン活性化
因子組成物の調製法を提供する。 【構成】 組織プラスミノゲン活性化因子を活性成分と
し、アルギニウムイオンを共に含有してなる医薬組成物
中の組織プラスミノゲン活性化因子の溶解度は、該アル
ギニウムイオンを該ｔ−Ｐの溶解度を増大するのに有効
な量で存在させることにより増大させることができる。
因子組成物の調製法を提供する。 【構成】 組織プラスミノゲン活性化因子を活性成分と
し、アルギニウムイオンを共に含有してなる医薬組成物
中の組織プラスミノゲン活性化因子の溶解度は、該アル
ギニウムイオンを該ｔ−Ｐの溶解度を増大するのに有効
な量で存在させることにより増大させることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、タンパク質ヒト組織プ
ラスミノゲン活性化因子(t−ＰＡ)を含有する医薬組成
物、並びにその様な組成物の製造方法に関するものであ
る。さらに詳しくは、本発明は、t−ＰＡ成分の安定性
および溶解性を増大せしめた医薬組成物であって、ヒト
対象を治療するために安全かつ有効に投与し得る安定な
凍結乾燥製剤形にすることが可能な、凍結乾燥適合性
(リオフイライザビリティ)を有する組成物の製造方法に
関するものである。
ラスミノゲン活性化因子(t−ＰＡ)を含有する医薬組成
物、並びにその様な組成物の製造方法に関するものであ
る。さらに詳しくは、本発明は、t−ＰＡ成分の安定性
および溶解性を増大せしめた医薬組成物であって、ヒト
対象を治療するために安全かつ有効に投与し得る安定な
凍結乾燥製剤形にすることが可能な、凍結乾燥適合性
(リオフイライザビリティ)を有する組成物の製造方法に
関するものである。
【０００２】発明の背景 アオキ(Ａoki)は、ヒト死体の血管樹枝状構造から抽出
した血管プラスミノゲン活性化因子の不安定さを報告し
ている[ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リィ(Ｊ．Ｂiol．Ｃhem．)(トウキョウ)、７５、７３１
(１９７４)]。アオキは、約０．５Ｍ以上の高濃度の塩
化ナトリウムによってのみ、該活性化因子が安定化され
ることを見出したと報告している。
した血管プラスミノゲン活性化因子の不安定さを報告し
ている[ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リィ(Ｊ．Ｂiol．Ｃhem．)(トウキョウ)、７５、７３１
(１９７４)]。アオキは、約０．５Ｍ以上の高濃度の塩
化ナトリウムによってのみ、該活性化因子が安定化され
ることを見出したと報告している。
【０００３】ビンダーら(Ｂinder)は、ヒト死体灌流液
由来の血管性プラスミノゲン活性化因子の活性を維持す
るには、複数の精製工程の間中、高い塩濃度のアルギニ
ン含有バッファーを用いることが必須であると報告して
いる(ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
ィ、２５４、(１９７９))。この精製工程は０．３〜
１．０ＭのＮaＣlと０．１Ｍのアルギニンの存在下で行
われた。ラドクリフェら(Ｒadcliffe)は、リジン−セフ
ァロースクロマトグラフィーによるヒト血漿中のプラス
ミノゲン活性化因子の分離について報告している[アー
チブス・オブ・バイオケミストリィ・アンド・バイオフ
ィジックス(Ａrch．ofＢiochem．＆ Ｂiophy．１８
９、１８５(１９７８)]。１つの実験例では、０．６Ｍ
ＮaＣl中０Ｍ〜０．５Ｍアルギニングラジエントを用
いてリジンセファロースから、安定化血漿中の粗プラス
ミノゲン活性化因子を溶離している。
由来の血管性プラスミノゲン活性化因子の活性を維持す
るには、複数の精製工程の間中、高い塩濃度のアルギニ
ン含有バッファーを用いることが必須であると報告して
いる(ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
ィ、２５４、(１９７９))。この精製工程は０．３〜
１．０ＭのＮaＣlと０．１Ｍのアルギニンの存在下で行
われた。ラドクリフェら(Ｒadcliffe)は、リジン−セフ
ァロースクロマトグラフィーによるヒト血漿中のプラス
ミノゲン活性化因子の分離について報告している[アー
チブス・オブ・バイオケミストリィ・アンド・バイオフ
ィジックス(Ａrch．ofＢiochem．＆ Ｂiophy．１８
９、１８５(１９７８)]。１つの実験例では、０．６Ｍ
ＮaＣl中０Ｍ〜０．５Ｍアルギニングラジエントを用
いてリジンセファロースから、安定化血漿中の粗プラス
ミノゲン活性化因子を溶離している。
【０００４】天然の組織由来のヒト組織プラスミノゲン
活性化因子については、コレンらの報告がある[ヨーロ
ッパ特許出願Ｎo．０４１７６６、１９８１年１２月１
６日公表、最初の出願(１９８０年６月１１日)に基づ
く]。発明者らは、かなり高純度で組織プラスミノゲン
活性化因子を得ることのできる精製法を用いている。コ
レンらは彼らの精製組織プラスミノゲン活性化因子製剤
の溶液状態および凍結乾燥状態における安定性を調べ
て、凍結乾燥剤形の場合には、０．３Ｍ ＮaＣl含有溶
液から調製したものであっても常に不安定であることを
見出した。
活性化因子については、コレンらの報告がある[ヨーロ
ッパ特許出願Ｎo．０４１７６６、１９８１年１２月１
６日公表、最初の出願(１９８０年６月１１日)に基づ
く]。発明者らは、かなり高純度で組織プラスミノゲン
活性化因子を得ることのできる精製法を用いている。コ
レンらは彼らの精製組織プラスミノゲン活性化因子製剤
の溶液状態および凍結乾燥状態における安定性を調べ
て、凍結乾燥剤形の場合には、０．３Ｍ ＮaＣl含有溶
液から調製したものであっても常に不安定であることを
見出した。
【０００５】組織プラスミノゲン活性化因子のごとき物
質をヒトや患者の健康管理のために供給するには、これ
らの物質を医薬組成物として調製しておく必要がある。
その様な組成物は適当な期間安定であって、それ自身が
ヒトへの投与に適しているものであり、製造容易である
ことを要する。その様な組成物の一例は、非経口投与の
ための溶液である。多くの場合、医薬としての溶液製剤
は、即座に利用するのに適した液体状で供給されるが、
その様な非経口製剤は凍結または凍結乾燥剤形で提供さ
れていてもよい。前者の場合、組成物を使用前に解凍し
なければならない。当業者は、凍結乾燥製剤が一般にそ
の対応する液状製剤よりも安定であることを知っている
ので、組成物中に含まれている医薬物質が、極めて広範
囲に及ぶ保存条件の下でより一層安定であるために、後
者の剤形を採用することが多い。その様な凍結乾燥製剤
は、使用前に注射用滅菌水または滅菌した生理食塩水等
の適当な薬学上許容し得る希釈剤(類)を加えて再調製さ
れる。
質をヒトや患者の健康管理のために供給するには、これ
らの物質を医薬組成物として調製しておく必要がある。
その様な組成物は適当な期間安定であって、それ自身が
ヒトへの投与に適しているものであり、製造容易である
ことを要する。その様な組成物の一例は、非経口投与の
ための溶液である。多くの場合、医薬としての溶液製剤
は、即座に利用するのに適した液体状で供給されるが、
その様な非経口製剤は凍結または凍結乾燥剤形で提供さ
れていてもよい。前者の場合、組成物を使用前に解凍し
なければならない。当業者は、凍結乾燥製剤が一般にそ
の対応する液状製剤よりも安定であることを知っている
ので、組成物中に含まれている医薬物質が、極めて広範
囲に及ぶ保存条件の下でより一層安定であるために、後
者の剤形を採用することが多い。その様な凍結乾燥製剤
は、使用前に注射用滅菌水または滅菌した生理食塩水等
の適当な薬学上許容し得る希釈剤(類)を加えて再調製さ
れる。
【０００６】発明の要約 本発明はヒト組織プラスミノゲン活性化因子の安定な組
成物、就中、安定な、凍結乾燥剤形の組成物を調製する
ことを目的とするものである。
成物、就中、安定な、凍結乾燥剤形の組成物を調製する
ことを目的とするものである。
【０００７】本発明は、薬理学的に許容し得る組織プラ
スミノゲン活性化因子(t−ＰＡ)組成物中にアルギニン
(アルギニウムイオンとして)を含有せしめることにより
t−ＰＡの安定性と溶解性が著しく増大し、さらには、
適当な選択された対イオンを一緒に用いれば安定な凍結
乾燥剤形に調製し得るという知見に基づくものである。
本発明は、その様な組成物およびそれと関連するすべて
の同等物質並びにその様な組成物および同等物質を効率
良く製造する方法に関するものである。
スミノゲン活性化因子(t−ＰＡ)組成物中にアルギニン
(アルギニウムイオンとして)を含有せしめることにより
t−ＰＡの安定性と溶解性が著しく増大し、さらには、
適当な選択された対イオンを一緒に用いれば安定な凍結
乾燥剤形に調製し得るという知見に基づくものである。
本発明は、その様な組成物およびそれと関連するすべて
の同等物質並びにその様な組成物および同等物質を効率
良く製造する方法に関するものである。
【０００８】一般に、組成物中には、好ましくは、凍結
乾燥形製剤の安定性を減じない量であって、医薬として
投与する上で有効かつ安全な量の他の成分が含まれてい
てよい。
乾燥形製剤の安定性を減じない量であって、医薬として
投与する上で有効かつ安全な量の他の成分が含まれてい
てよい。
【０００９】本発明の組成物の調製における至適pＨは
約４〜約９であるが、これらの組成物は医薬として考慮
されているので、生理的なpＨ域、即ち、ほぼ中性であ
ることが好ましい。このpＨ域ではアルギニンは主に総
電荷＋１のプロトン化カチオン(陽イオン)として存在
し、それを、「アルギニウムイオン」と呼ぶことができ
る。本明細書では、「アルギニウムイオン」は系のpＨに
より「アルギニン」と同等であるため、「アルギニン」とい
う語句を、「アルギニウムイオン」という語句と互換性を
もって使用する。電気的な中性を維持するために、アル
ギニウムイオンと等量の、反対に荷電した(すなわち、
陰イオンに荷電した)イオン性の種(「対イオン」と呼称)
によって該アルギニウムイオンを平衡化する必要があ
る。アルギニウムイオン、他の陽イオン種、並びに様々
な対イオンの組み合わせを「アルギニウムイオン含有バ
ッファー系」と呼ぶことができる。許容し得る対イオン
には、薬学的に許容し得ることに加えて、組成物の見掛
けの共融温度または崩壊温度を調節し、組成物を凍結乾
燥し易く、凍結乾燥に特に適するようにするものが含ま
れる。その様な対イオンには、例えば、酢酸塩、リン酸
塩、クエン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、りん
ご酸塩、マレイン酸塩および炭酸塩等、並びにそれらと
機能上同等の物質が含まれる。あまり適切でない対イオ
ンの例として塩素イオンがある。
約４〜約９であるが、これらの組成物は医薬として考慮
されているので、生理的なpＨ域、即ち、ほぼ中性であ
ることが好ましい。このpＨ域ではアルギニンは主に総
電荷＋１のプロトン化カチオン(陽イオン)として存在
し、それを、「アルギニウムイオン」と呼ぶことができ
る。本明細書では、「アルギニウムイオン」は系のpＨに
より「アルギニン」と同等であるため、「アルギニン」とい
う語句を、「アルギニウムイオン」という語句と互換性を
もって使用する。電気的な中性を維持するために、アル
ギニウムイオンと等量の、反対に荷電した(すなわち、
陰イオンに荷電した)イオン性の種(「対イオン」と呼称)
によって該アルギニウムイオンを平衡化する必要があ
る。アルギニウムイオン、他の陽イオン種、並びに様々
な対イオンの組み合わせを「アルギニウムイオン含有バ
ッファー系」と呼ぶことができる。許容し得る対イオン
には、薬学的に許容し得ることに加えて、組成物の見掛
けの共融温度または崩壊温度を調節し、組成物を凍結乾
燥し易く、凍結乾燥に特に適するようにするものが含ま
れる。その様な対イオンには、例えば、酢酸塩、リン酸
塩、クエン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、りん
ご酸塩、マレイン酸塩および炭酸塩等、並びにそれらと
機能上同等の物質が含まれる。あまり適切でない対イオ
ンの例として塩素イオンがある。
【００１０】上記の如く、本発明者らは、t−ＰＡの医
薬組成物中にアルギニン(アルギニウムイオンとして)を
加えると、これらの組成物中のt−ＰＡの溶解度と安定
性が著しく増すことを見出した。投与される溶液中の、
および／または凍結乾燥製剤の場合には、凍結乾燥前の
溶液中におけるアルギニン濃度は、約０．０２Ｍ〜１
Ｍ、好ましくは約０．０５Ｍ〜約１．０Ｍ、さらに好ま
しくは約０．１Ｍ〜約０．５Ｍとすることができる。
薬組成物中にアルギニン(アルギニウムイオンとして)を
加えると、これらの組成物中のt−ＰＡの溶解度と安定
性が著しく増すことを見出した。投与される溶液中の、
および／または凍結乾燥製剤の場合には、凍結乾燥前の
溶液中におけるアルギニン濃度は、約０．０２Ｍ〜１
Ｍ、好ましくは約０．０５Ｍ〜約１．０Ｍ、さらに好ま
しくは約０．１Ｍ〜約０．５Ｍとすることができる。
【００１１】さらに、本発明の改良組成物中には、t−
ＰＡの安定性を一層増すために、ポリソルベート２０や
ポリソルベート８０等の非イオン界面活性剤を１または
それ以上、約０．００１〜約１％の割合で、随意含有せ
しめてもよい。また、当業者周知の、薬学的に許容し得
る他の賦形剤も、その様な組成物の一部を構成すること
ができる。これらには、例えば、種々の増量剤、付加的
な緩衝化剤、キレート剤、抗酸化剤、保存剤、コソルベ
ント類が含まれ、その具体例として、マンニトール、ト
ロメタミン塩(「トリスバッファー」)、エデト酸二ナトリ
ウム、ゼラチン、ヒト血清アルブミンその他のポリペプ
チド、グリシルグリシン等の様々な小ペプチド類等々を
挙げることができる。
ＰＡの安定性を一層増すために、ポリソルベート２０や
ポリソルベート８０等の非イオン界面活性剤を１または
それ以上、約０．００１〜約１％の割合で、随意含有せ
しめてもよい。また、当業者周知の、薬学的に許容し得
る他の賦形剤も、その様な組成物の一部を構成すること
ができる。これらには、例えば、種々の増量剤、付加的
な緩衝化剤、キレート剤、抗酸化剤、保存剤、コソルベ
ント類が含まれ、その具体例として、マンニトール、ト
ロメタミン塩(「トリスバッファー」)、エデト酸二ナトリ
ウム、ゼラチン、ヒト血清アルブミンその他のポリペプ
チド、グリシルグリシン等の様々な小ペプチド類等々を
挙げることができる。
【００１２】驚くべきことに、本発明のt−ＰＡ組成物
には約０．３Ｍまたはそれ以上の高い濃度の塩化ナトリ
ウムを用いる必要がない。実際、塩素イオン濃度の高い
ことは、これらの改良組成物の凍結乾燥適合性に害を及
ぼす。ある程度の量の塩素イオンならば許容し得るが、
約０．３Ｍ以下の低濃度であることが好ましく、生理学
上正常なレベル、すなわち、約０．１２Ｍ ＮaＣl以上
でないことが好ましい。塩素イオンが組成物から排除さ
れていることが最も好ましい。
には約０．３Ｍまたはそれ以上の高い濃度の塩化ナトリ
ウムを用いる必要がない。実際、塩素イオン濃度の高い
ことは、これらの改良組成物の凍結乾燥適合性に害を及
ぼす。ある程度の量の塩素イオンならば許容し得るが、
約０．３Ｍ以下の低濃度であることが好ましく、生理学
上正常なレベル、すなわち、約０．１２Ｍ ＮaＣl以上
でないことが好ましい。塩素イオンが組成物から排除さ
れていることが最も好ましい。
【００１３】t−ＰＡの「薬学的有効量」とは、種々の投
与方法において治療効果が表われる量を指す。本発明の
組成物は、t−ＰＡを、最少量約０．１mg／mlから約５
０mg／mlまで、好ましくは約０．４mg／mlから約５mg／
mlの範囲で含有させて調製される。これらの組成物を心
筋梗塞患者に投与する目的で用いる場合には、その組成
物は、その様な治療に現在計画されている量に相当す
る。例えば、約０．４mg／ml〜約３mg／mlの割合でt−
ＰＡを含有させればよい。
与方法において治療効果が表われる量を指す。本発明の
組成物は、t−ＰＡを、最少量約０．１mg／mlから約５
０mg／mlまで、好ましくは約０．４mg／mlから約５mg／
mlの範囲で含有させて調製される。これらの組成物を心
筋梗塞患者に投与する目的で用いる場合には、その組成
物は、その様な治療に現在計画されている量に相当す
る。例えば、約０．４mg／ml〜約３mg／mlの割合でt−
ＰＡを含有させればよい。
【００１４】本発明の組成物は、凍結乾燥剤形のものを
も含めて、一般に利用されている自体既知の医薬調剤法
に従って成分を調合することにより調製される。また、
当業者周知の標準的な凍結乾燥法および装置を用いる。
本発明のt−ＰＡ含有医薬組成物の調製法では、特に、
ゲル濾過のごとき既知の幾つかのバッファー交換法で精
製した(標準的なタンパク質精製法による)t−ＰＡを用
いる。この好ましい方法を用いて以後の安定性と溶解性
の研究に用いるt−ＰＡを単離し、精製した。この好ま
しい方法に用いたt−ＰＡは、組換え法によって、ＣＨ
Ｏ細胞培養培地中でt−ＰＡを分泌産物として発現し得
るように変化せしめたチャイニーズ・ハムスターの卵細
胞(ＣＨＯ細胞)から得たものである。
も含めて、一般に利用されている自体既知の医薬調剤法
に従って成分を調合することにより調製される。また、
当業者周知の標準的な凍結乾燥法および装置を用いる。
本発明のt−ＰＡ含有医薬組成物の調製法では、特に、
ゲル濾過のごとき既知の幾つかのバッファー交換法で精
製した(標準的なタンパク質精製法による)t−ＰＡを用
いる。この好ましい方法を用いて以後の安定性と溶解性
の研究に用いるt−ＰＡを単離し、精製した。この好ま
しい方法に用いたt−ＰＡは、組換え法によって、ＣＨ
Ｏ細胞培養培地中でt−ＰＡを分泌産物として発現し得
るように変化せしめたチャイニーズ・ハムスターの卵細
胞(ＣＨＯ細胞)から得たものである。
【００１５】詳しい説明 本発明者らは、アルギニウムイオン含有バッファーを構
成成分とすると、t−ＰＡ含有医薬組成物の生物学的活
性が著しく安定化され、しかも、その様な製剤中には
０．３Ｍ以下の濃度で塩化ナトリウムを用い得るが、組
成物の安定化のために塩化ナトリウムを用いる必要がな
いという効果を見出した。塩素イオン濃度は０．１Ｍま
たはそれ以下であることが好ましい。pＨ６〜８程度の
中性域において、t−ＰＡの安定性はアルギニウムイオ
ンの存在によって増大し、当業者が必要であるとみなし
ている多量の、安定化のための塩の存在なしに、かなり
高濃度の製剤を得ることができる。
成成分とすると、t−ＰＡ含有医薬組成物の生物学的活
性が著しく安定化され、しかも、その様な製剤中には
０．３Ｍ以下の濃度で塩化ナトリウムを用い得るが、組
成物の安定化のために塩化ナトリウムを用いる必要がな
いという効果を見出した。塩素イオン濃度は０．１Ｍま
たはそれ以下であることが好ましい。pＨ６〜８程度の
中性域において、t−ＰＡの安定性はアルギニウムイオ
ンの存在によって増大し、当業者が必要であるとみなし
ている多量の、安定化のための塩の存在なしに、かなり
高濃度の製剤を得ることができる。
【００１６】本明細書中、「ヒト組織プラスミノゲン活
性化因子」、「ヒトt−ＰＡ」あるいは「t−ＰＡ」という語
句は、ヒト外因性(組織型)プラスミノゲン活性化因子で
あって、例えば、天然起源から抽出して精製するか(コ
レンら、前掲)、あるいは本明細書に記載の如く組換え
細胞培養系により生産する等の方法によって得られる。
その配列および特性は、例えば、ヨーロッパ特許出願公
開Ｎo．９３６１６、(１９８３年１１月９日公開、１９
８２年５月５日の最初の出願に基づく)に記載されてい
る。さらには、ヨーロッパ特許出願公開Ｎo．４１７６
６(１９８１年１２月１６日公開、１９８０年６月１１
日の最初の出願に基づく)およびリケンら(Ｒijen)のジ
ャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリィ、２５
６、７０３５(１９８１)をも参照されたい。この語句は
生物学的に活性なヒト組織プラスミノゲン活性化因子同
等物であって、用いられた特定の培養条件、並びに組織
プラスミノゲン活性化因子が得られた宿主の性質によ
り、全配列中１またはそれ以上のアミノ酸が異なるか、
あるいはグリコシル化像の異なる物をも包含するもので
ある。
性化因子」、「ヒトt−ＰＡ」あるいは「t−ＰＡ」という語
句は、ヒト外因性(組織型)プラスミノゲン活性化因子で
あって、例えば、天然起源から抽出して精製するか(コ
レンら、前掲)、あるいは本明細書に記載の如く組換え
細胞培養系により生産する等の方法によって得られる。
その配列および特性は、例えば、ヨーロッパ特許出願公
開Ｎo．９３６１６、(１９８３年１１月９日公開、１９
８２年５月５日の最初の出願に基づく)に記載されてい
る。さらには、ヨーロッパ特許出願公開Ｎo．４１７６
６(１９８１年１２月１６日公開、１９８０年６月１１
日の最初の出願に基づく)およびリケンら(Ｒijen)のジ
ャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリィ、２５
６、７０３５(１９８１)をも参照されたい。この語句は
生物学的に活性なヒト組織プラスミノゲン活性化因子同
等物であって、用いられた特定の培養条件、並びに組織
プラスミノゲン活性化因子が得られた宿主の性質によ
り、全配列中１またはそれ以上のアミノ酸が異なるか、
あるいはグリコシル化像の異なる物をも包含するもので
ある。
【００１７】Ａ．図面 図１は種々の製剤中でのt−ＰＡの安定性を示すグラフ
である。図２はt−ＰＡの溶解度に対するアルギニン濃
度の影響を示すグラフである。図３は種々の濃度のリン
酸アルギニンバッファー(pＨ６、４℃)に対するt−ＰＡ
の溶解限界を示すグラフである。
である。図２はt−ＰＡの溶解度に対するアルギニン濃
度の影響を示すグラフである。図３は種々の濃度のリン
酸アルギニンバッファー(pＨ６、４℃)に対するt−ＰＡ
の溶解限界を示すグラフである。
【００１８】Ｂ．凍結乾燥 組成物の凍結乾燥は当業者周知の方法および装置を用い
て行われる。一般に、まず組成物をそのものの見掛けの
共融温度または崩壊温度以下で凍結させる。次いで、減
圧にし、氷を昇華除去するために凍結乾燥棚に熱を加え
るが、実質上、全ての氷が除去されるまでは、凍結した
塊の温度が見掛けの共融点または崩壊温度以下に維持さ
れるよう、棚の温度と容器内の圧力とを調節する。この
「一次乾燥」相の後、棚の温度をさらに上昇させ(容器内
の気圧は変化してもしなくともよい)、凍結乾燥固型物
中に残存している湿気を除く。
て行われる。一般に、まず組成物をそのものの見掛けの
共融温度または崩壊温度以下で凍結させる。次いで、減
圧にし、氷を昇華除去するために凍結乾燥棚に熱を加え
るが、実質上、全ての氷が除去されるまでは、凍結した
塊の温度が見掛けの共融点または崩壊温度以下に維持さ
れるよう、棚の温度と容器内の圧力とを調節する。この
「一次乾燥」相の後、棚の温度をさらに上昇させ(容器内
の気圧は変化してもしなくともよい)、凍結乾燥固型物
中に残存している湿気を除く。
【００１９】Ｃ．Ｓ−２２８８アッセイ 合成ペプチド基質、Ｓ−２２８８(Ｈ−Ｄ−Ｉle−Ｐro
−Ａrg−p−ニトロアニリド・２ＨＣl)をt−ＰＡで加水
分解すると、着色したp−ニトロアニリンとトリペプチ
ドが生成する。基質と生成物(p−ニトロアニリン)との
吸収における差は、４０５nmにおいて最大となる。p−
ニトロアニリンの生成を、時間の関数として、４０５nm
における吸収を分光光度計を用いて追跡し、監視した。
こうして得られた吸収−時間曲線はt−ＰＡ活性に比例
する。このアッセイは３７±０．２℃で行われる。
−Ａrg−p−ニトロアニリド・２ＨＣl)をt−ＰＡで加水
分解すると、着色したp−ニトロアニリンとトリペプチ
ドが生成する。基質と生成物(p−ニトロアニリン)との
吸収における差は、４０５nmにおいて最大となる。p−
ニトロアニリンの生成を、時間の関数として、４０５nm
における吸収を分光光度計を用いて追跡し、監視した。
こうして得られた吸収−時間曲線はt−ＰＡ活性に比例
する。このアッセイは３７±０．２℃で行われる。
【００２０】このアッセイに際しては、特定のt−ＰＡ
試料２０〜１００μlを０．３３mＭＳ−２２８８、０．
０６７Ｍトリス緩衝液(pＨ７．４)、０．０７Ｍ ＮaＣ
lを含んだ１．２mlの反応混合物に加え、３７℃で１０
分間インキュベートした。
試料２０〜１００μlを０．３３mＭＳ−２２８８、０．
０６７Ｍトリス緩衝液(pＨ７．４)、０．０７Ｍ ＮaＣ
lを含んだ１．２mlの反応混合物に加え、３７℃で１０
分間インキュベートした。
【００２１】吸収の変化を１分間監視し、製造業者によ
って標定された下記の等式を用い、４０５nmにおける吸
収に基づいて活性を計算した。
って標定された下記の等式を用い、４０５nmにおける吸
収に基づいて活性を計算した。
【数１】
【００２２】
Ｄ．実施例 実施例１ 精製t−ＰＡを終濃度０．２mg／mlに希釈し、小分けし
て表１に示すバッファーに対して透析した。
て表１に示すバッファーに対して透析した。
【００２３】
【表１】 表 １ ０.０１％ポリソルベート８０ 透析濃度 アルギニン 含有透析バッファー ＮaＣl (塩酸塩として) １．０.０１Ｍリン酸ナトリウムpＨ６ − − ２．０.０１Ｍリン酸ナトリウムpＨ６ ０.１２Ｍ ０.２Ｍ ３．０.０１Ｍリン酸ナトリウムpＨ６ − ０.２Ｍ ４．０.０１Ｍ酢酸ナトリウム pＨ５ − − ５．０.０１Ｍ酢酸ナトリウム pＨ５ ０.１２Ｍ −６．０.０１Ｍ酢酸ナトリウム pＨ５ ０.２Ｍ
【００２４】透析後、試料を遠心し、上清を１mlづつ凍
結乾燥した。凍結乾燥した試料を水で再構成し、Ｓ−２
２８８アッセイによりt−ＰＡ活性を測定した。その
後、再構成した試料を３７℃で放置し、種々の時間に測
定した。
結乾燥した。凍結乾燥した試料を水で再構成し、Ｓ−２
２８８アッセイによりt−ＰＡ活性を測定した。その
後、再構成した試料を３７℃で放置し、種々の時間に測
定した。
【００２５】この実験の結果を図１に示す。図から分か
るように、アルギニンを含有していない系においては、
t−ＰＡ活性の経時的な低下を阻止することができな
い。０．２Ｍアルギニン、または０．２Ｍアルギニンと
生理学的な量の塩素と含有する試料中のt−ＰＡ活性は
３７℃で４日間インキュベートした後も初期のt−ＰＡ
活性をほぼ完全に保持している。これらの結果は、０．
２Ｍアルギニンが、ＮaＣlと共存状態で、あるいはＮa
Ｃlの存在なしにt−ＰＡを著しく安定化することを示す
ものである。
るように、アルギニンを含有していない系においては、
t−ＰＡ活性の経時的な低下を阻止することができな
い。０．２Ｍアルギニン、または０．２Ｍアルギニンと
生理学的な量の塩素と含有する試料中のt−ＰＡ活性は
３７℃で４日間インキュベートした後も初期のt−ＰＡ
活性をほぼ完全に保持している。これらの結果は、０．
２Ｍアルギニンが、ＮaＣlと共存状態で、あるいはＮa
Ｃlの存在なしにt−ＰＡを著しく安定化することを示す
ものである。
【００２６】実施例２ アルギニン濃度の関数としてのt−ＰＡ活性を、様々な
温度におけるt−ＰＡ活性の消失速度を測定することに
より求めた。 処方例: １． ０.３５５mg／ml t−ＰＡ ０.０５Ｍ リン酸ナトリウム pＨ６.２ ０.０５Ｍ アルギニン(塩酸塩として) ２． ０.４９８mg／ml t−ＰＡ ０.０３Ｍ リン酸ナトリウム pＨ６.２ ０.２Ｍ アルギニン(塩酸塩として)
温度におけるt−ＰＡ活性の消失速度を測定することに
より求めた。 処方例: １． ０.３５５mg／ml t−ＰＡ ０.０５Ｍ リン酸ナトリウム pＨ６.２ ０.０５Ｍ アルギニン(塩酸塩として) ２． ０.４９８mg／ml t−ＰＡ ０.０３Ｍ リン酸ナトリウム pＨ６.２ ０.２Ｍ アルギニン(塩酸塩として)
【００２７】上記の処方に従った溶液０．５mlづつを２
mlのガラスビンに無菌的に充填し、密閉した。各溶液に
ついて２つのビンから、０、２０、５５および１６０日
目に試料をとりＳ−２２８８アッセイによってt−ＰＡ
活性を測定した。各温度での残存活性(％)の自然対数を
時間(日)に対してプロットし、これから、線状回帰分析
法を用いて速度定数を求めた。
mlのガラスビンに無菌的に充填し、密閉した。各溶液に
ついて２つのビンから、０、２０、５５および１６０日
目に試料をとりＳ−２２８８アッセイによってt−ＰＡ
活性を測定した。各温度での残存活性(％)の自然対数を
時間(日)に対してプロットし、これから、線状回帰分析
法を用いて速度定数を求めた。
【００２８】２種類のアルギニン濃度に関し、種々の温
度下でのt−ＰＡ安定性消失に係る速度定数(Ｋ)を表２
に示す。
度下でのt−ＰＡ安定性消失に係る速度定数(Ｋ)を表２
に示す。
【００２９】
【表２】 表 ２ t−ＰＡの安定性に及ぼすアルギニンの影響 Ｋ／日 処方例 アルギニン ２５℃ ３７℃ ４５℃ ０.０５Ｍリン酸 pＨ６.２ 0.05Ｍ 0.00137 0.0102 0.0167 ナトリウム ０.０３Ｍリン酸 pＨ６.２ 0.20Ｍ 0.00043 0.00569 0.01272 ナトリウム
【００３０】この表から分かるように、各表示温度にお
いて、０．２Ｍアルギニンにより得られる速度定数の方
が、０．０５Ｍアルギニンで得られる値よりも小さく、
このことはアルギニン濃度が高い方が、t−ＰＡの安定
性が増大することを示唆するものである。
いて、０．２Ｍアルギニンにより得られる速度定数の方
が、０．０５Ｍアルギニンで得られる値よりも小さく、
このことはアルギニン濃度が高い方が、t−ＰＡの安定
性が増大することを示唆するものである。
【００３１】実施例３ t−ＰＡの活性は非−イオン界面活性剤の濃度にも依存
する。データを表３に示す。
する。データを表３に示す。
【００３２】試料を０．０１Ｍコハク酸ナトリウムバッ
ファー(pＨ６．０)に対して透析してt−ＰＡを析出させ
た。透析試料を遠心してt−ＰＡ沈澱を収集した。この
沈澱を、様々な濃度のポリソルベート８０を含有する以
下の処方混合物に再溶解した。 処方: ０.２Ｍ アルギニン(塩酸塩として) ０.０２Ｍリン酸ナトリウム(pＨ７.２) ポリソルベート８０(０.０００５〜０.１０％)
ファー(pＨ６．０)に対して透析してt−ＰＡを析出させ
た。透析試料を遠心してt−ＰＡ沈澱を収集した。この
沈澱を、様々な濃度のポリソルベート８０を含有する以
下の処方混合物に再溶解した。 処方: ０.２Ｍ アルギニン(塩酸塩として) ０.０２Ｍリン酸ナトリウム(pＨ７.２) ポリソルベート８０(０.０００５〜０.１０％)
【００３３】この溶液を無菌的にビンに充填し、３５℃
および４０℃で放置した。ある時間(タイムポイント)毎
に各ビンから試料を採取し、Ｓ−２２８８アッセイを用
いて酵素活性を測定した。
および４０℃で放置した。ある時間(タイムポイント)毎
に各ビンから試料を採取し、Ｓ−２２８８アッセイを用
いて酵素活性を測定した。
【００３４】各温度における１０g(t−ＰＡ活性)−時間
曲線を線状回帰分析に付し、速度定数を求めた。結果を
表３に示す。
曲線を線状回帰分析に付し、速度定数を求めた。結果を
表３に示す。
【００３５】
【表３】 表 ３ t−ＰＡの安定性に及ぼすポリソルベート８０の影響 ポリソルベート８０ (％) Ｋ／日 ３５℃ ４０℃ ０.０００５ .００５５ .０１０６ ０.００５ .００４９ .００９１ ０.０１ .００４３ .００８８ ０.０２５ .００４０ .００８１ ０.０５ .００４１ .００７７ ０.１０ .００３７ .００７５
【００３６】この表から、ポリソルベート８０の濃度が
高くなると速度定数Ｋが小さくなることが分かる。この
ことは、より多くのポリソルベート８０を用いることに
より、より高い安定性を達成し得ることを示唆するもの
である。
高くなると速度定数Ｋが小さくなることが分かる。この
ことは、より多くのポリソルベート８０を用いることに
より、より高い安定性を達成し得ることを示唆するもの
である。
【００３６】実施例４ 精製t−ＰＡを以下のリン酸アルギニンを処方したバッ
ファーに対して透析し、さらに、バッファーでt−ＰＡ
が所望の終濃度になるまで希釈することによりt−ＰＡ
溶液を調製した。 処方バッファー: ０．２０Ｍ アルギニン ０．１８Ｍ リン酸 ０．０１％ ポリソルベート８０ pＨ６
ファーに対して透析し、さらに、バッファーでt−ＰＡ
が所望の終濃度になるまで希釈することによりt−ＰＡ
溶液を調製した。 処方バッファー: ０．２０Ｍ アルギニン ０．１８Ｍ リン酸 ０．０１％ ポリソルベート８０ pＨ６
【００３７】各製品を５または１０mlのビンに無菌的に
小分けして充填し、凍結乾燥して密閉した。ビンを様々
な温度に放置した。各処方につき２本のビンから、一定
時間毎に試料を採取し、Ｓ−２２８８アッセイによって
t−ＰＡ活性を測定した。結果を表４に示す。
小分けして充填し、凍結乾燥して密閉した。ビンを様々
な温度に放置した。各処方につき２本のビンから、一定
時間毎に試料を採取し、Ｓ−２２８８アッセイによって
t−ＰＡ活性を測定した。結果を表４に示す。
【００３８】
【表４】 表 ４ 凍結乾燥製剤中でのt−ＰＡ活性 残存(％)(２回の測定の平均値 t−ＰＡ 時間 ±標準偏差)(mg/ml)* pＨ (月) 5℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ 1.0 6.0 2.0 102.5±0.0 103.3±2.5 − 102.6±3.0 − 2.0 6.0 2.0 111.3±0.7 111.1±0.1 − 114.6±2.2 − 5.0 6.0 2.0 112.0±0.3 112.7±0.6 − 112.3±1.4 − 1.0 6.0 3.5 98.2±1.3 − 96.0±1.7 − 97.7±0.01 * 凍結乾燥する前の溶液中におけるt−ＰＡ濃度
【００３９】上記のデータは、t−ＰＡが凍結乾燥の形
で安定であることを示すものである。
で安定であることを示すものである。
【００４０】実施例５ t−ＰＡを約０．３〜０．５mg／ml含有する溶液を１０m
Ｍリン酸ナトリウムpＨ７．５、種々の濃度のアルギニ
ンを塩酸塩の形で含有する０．０１％ポリソルベート８
０に対して透析した。エッペンドルフ(Ｅppendorf)の微
小遠心管に入れて２分間遠心し、不溶性の物質を除去し
た。溶液中に残存しているt−ＰＡの量をＳ−２２８８
アッセイによって測定した。結果を図２に示す。
Ｍリン酸ナトリウムpＨ７．５、種々の濃度のアルギニ
ンを塩酸塩の形で含有する０．０１％ポリソルベート８
０に対して透析した。エッペンドルフ(Ｅppendorf)の微
小遠心管に入れて２分間遠心し、不溶性の物質を除去し
た。溶液中に残存しているt−ＰＡの量をＳ−２２８８
アッセイによって測定した。結果を図２に示す。
【００４１】５０mＭアルギニンという少量であってもt
−ＰＡの溶解度は著しく増加する。(高濃度のアルギニ
ンにおいて見掛け上、溶解度の増加が小さいのは、出発
物質中の元々のt−ＰＡ濃度が僅か０．３〜０．５mg／m
lであるために限界溶解度には決して至らないという事
実から、人為的なものといえる。)
−ＰＡの溶解度は著しく増加する。(高濃度のアルギニ
ンにおいて見掛け上、溶解度の増加が小さいのは、出発
物質中の元々のt−ＰＡ濃度が僅か０．３〜０．５mg／m
lであるために限界溶解度には決して至らないという事
実から、人為的なものといえる。)
【００４２】実施例６ ０．００１Ｍコハク酸ナトリウムバッファーpＨ６に対
して透析することによりt−ＰＡを析出させた。析出し
た沈澱を遠心分離した後、計量し、この物質を、所望の
バッファー系１ml中で、５℃において２０分間、撹拌下
に平衡化した。被験バッファー系は、pＨ６．０のリン
酸アルギニン系が生成する様にリン酸でアルギニンを滴
定することにより、調製された。保存溶液を水で希釈
し、アルギニンを０．１０Ｍ〜０．２０Ｍ(アルギニウ
ムイオンとして)含有する最終バッファーを得た。所望
のバッファーで平衡化した後、得られたt−ＰＡ製品を
遠心して不溶性物質を全て除去し、Ｓ−２２８８アッセ
イによって上清の可溶性t−ＰＡを測定した。
して透析することによりt−ＰＡを析出させた。析出し
た沈澱を遠心分離した後、計量し、この物質を、所望の
バッファー系１ml中で、５℃において２０分間、撹拌下
に平衡化した。被験バッファー系は、pＨ６．０のリン
酸アルギニン系が生成する様にリン酸でアルギニンを滴
定することにより、調製された。保存溶液を水で希釈
し、アルギニンを０．１０Ｍ〜０．２０Ｍ(アルギニウ
ムイオンとして)含有する最終バッファーを得た。所望
のバッファーで平衡化した後、得られたt−ＰＡ製品を
遠心して不溶性物質を全て除去し、Ｓ−２２８８アッセ
イによって上清の可溶性t−ＰＡを測定した。
【００４３】結果を図３に示す。t−ＰＡが最初に加え
たt−ＰＡ濃度で完全に溶解するならば、可溶性t−ＰＡ
の濃度は加えられたt−ＰＡ量と同一であるはずであ
る。逆に、t−ＰＡが、最初に加えられた濃度で完全に
溶解することがないならば、可溶性t−ＰＡの濃度は添
加量よりも低くなるであろう。図３から、t−ＰＡが１
００mＭリン酸アルギニン(pＨ６．０)中に最高約２mg／
mlまで溶けること、並びにリン酸アルギニン濃度が高く
なると溶解度が著しく高くなることが分かる。特に、２
００mＭリン酸アルギニン(pＨ６．０)の場合には、約５
４mg／mlにおいてさえt−ＰＡは完全に溶解することが
でき、限界溶解度はこれ以上であることが明らかであ
る。
たt−ＰＡ濃度で完全に溶解するならば、可溶性t−ＰＡ
の濃度は加えられたt−ＰＡ量と同一であるはずであ
る。逆に、t−ＰＡが、最初に加えられた濃度で完全に
溶解することがないならば、可溶性t−ＰＡの濃度は添
加量よりも低くなるであろう。図３から、t−ＰＡが１
００mＭリン酸アルギニン(pＨ６．０)中に最高約２mg／
mlまで溶けること、並びにリン酸アルギニン濃度が高く
なると溶解度が著しく高くなることが分かる。特に、２
００mＭリン酸アルギニン(pＨ６．０)の場合には、約５
４mg／mlにおいてさえt−ＰＡは完全に溶解することが
でき、限界溶解度はこれ以上であることが明らかであ
る。
【００４４】実施例７ 以下のリン酸アルギニン系をプレ凍結乾燥液として調製
した。 プレ凍結乾燥液 mg／ml t−ＰＡ ２．５２ Ｌ−アルギニン ８７．１ リン酸 ２６．８ ポリソルベート８０ ０．１ pＨ７．２
した。 プレ凍結乾燥液 mg／ml t−ＰＡ ２．５２ Ｌ−アルギニン ８７．１ リン酸 ２６．８ ポリソルベート８０ ０．１ pＨ７．２
【００４５】滅菌濾過した後、５０ccのガラスビンに約
２０mlづつ入れた。次いで、下記の如くにして凍結乾燥
を行った。 a)ガラスビンを凍結乾燥機内に入れ、常圧で１０時間、
−５０℃(棚温度)において凍結させた。 b)減圧処理(容器内の圧力を１００μmＨgとする)し、棚
の温度を１０°／時間で＋７℃まで昇温し、この温度下
に４１時間保った。 c)次いで、棚の温度を＋３５℃に昇温し、容器内の圧力
を５０μmに下げ、この状態で系を１４時間保った。
２０mlづつ入れた。次いで、下記の如くにして凍結乾燥
を行った。 a)ガラスビンを凍結乾燥機内に入れ、常圧で１０時間、
−５０℃(棚温度)において凍結させた。 b)減圧処理(容器内の圧力を１００μmＨgとする)し、棚
の温度を１０°／時間で＋７℃まで昇温し、この温度下
に４１時間保った。 c)次いで、棚の温度を＋３５℃に昇温し、容器内の圧力
を５０μmに下げ、この状態で系を１４時間保った。
【００４６】次いでガラスビンに栓をし、圧力を常圧に
戻し、凍結乾燥機からガラスビンを出した。
戻し、凍結乾燥機からガラスビンを出した。
【００４７】実施例８ 凍結乾燥したリン酸アルギニン固型物(ケーキ)の品質に
対する塩化ナトリウムの影響を調べた。塩化ナトリウム
濃度０．０１mＭ〜５００mＭの範囲まで包含する様、
０．８Ｍアルギニン(pＨ７)および０．２Ｍアルギニン
(pＨ６)(リン酸塩として)の試料を調製した。各溶液２m
lづつを１０ccのガラスビンに入れ、下記のサイクルに
よって凍結乾燥した。
対する塩化ナトリウムの影響を調べた。塩化ナトリウム
濃度０．０１mＭ〜５００mＭの範囲まで包含する様、
０．８Ｍアルギニン(pＨ７)および０．２Ｍアルギニン
(pＨ６)(リン酸塩として)の試料を調製した。各溶液２m
lづつを１０ccのガラスビンに入れ、下記のサイクルに
よって凍結乾燥した。
【００４８】 凍結乾燥の段階 棚の温度 容器内の圧力時間 (℃) (ミクロン) (時) 凍結 −４５ 周囲圧 １０ 一次乾燥 ２０゜／時間で−３５゜ ５０ ２４ まで昇温、次いで３゜ ／時間で＋３５゜まで 昇温 二次乾燥 ＋３５ ４０ ２６
【００４９】得られた固型物の品質は表５に示す。デー
タから、薬学的に許容し得る固型物の製剤は、塩化ナト
リウムを低濃度で含有する組成物によってのみ形成さ
れ、しかも、塩化ナトリウムの許容濃度の低さは、アル
ギニン濃度に依存することが分かる。
タから、薬学的に許容し得る固型物の製剤は、塩化ナト
リウムを低濃度で含有する組成物によってのみ形成さ
れ、しかも、塩化ナトリウムの許容濃度の低さは、アル
ギニン濃度に依存することが分かる。
【００５０】
【表５】
【００５１】当該技術分野における通常の技術者なら
ば、本明細書で開示した発明の態様に、本発明の範囲内
に包含されることを意図して様々な修飾を施すことがで
きる。
ば、本明細書で開示した発明の態様に、本発明の範囲内
に包含されることを意図して様々な修飾を施すことがで
きる。
【図１】 図１は種々の製剤中でのt−ＰＡの安定性を
示すグラフであり、図中、−黒丸−はホスフェート、…
白四角…はホスフェート／ＮaＣl／アルギニン、−黒四
角−はホスフェート／アルギニン、−・白三角・−は酢
酸ナトリウム、−・黒三角・−は酢酸ナトリウム／Ｎa
Ｃl／アルギニン、−・白丸・−は酢酸ナトリウム／ア
ルギニンを表わす図である。
示すグラフであり、図中、−黒丸−はホスフェート、…
白四角…はホスフェート／ＮaＣl／アルギニン、−黒四
角−はホスフェート／アルギニン、−・白三角・−は酢
酸ナトリウム、−・黒三角・−は酢酸ナトリウム／Ｎa
Ｃl／アルギニン、−・白丸・−は酢酸ナトリウム／ア
ルギニンを表わす図である。
【図２】 t−ＰＡの溶解度に対するアルギニン濃度の
影響を示すグラフであり、−黒丸−はタンパク質量を表
わす図である。
影響を示すグラフであり、−黒丸−はタンパク質量を表
わす図である。
【図３】 種々の濃度のリン酸アルギニンバッファー(p
Ｈ６、４℃)中のt−ＰＡの溶解限界を示すグラフであっ
て、図中、−黒ひし形−は１００mＭリン酸アルギニ
ン、−白ひし形−は１２５mＭリン酸アルギニン、−黒
四角−は１５０mＭリン酸アルギニン、−白四角−は２
００mＭリン酸アルギニンを表わす図である。
Ｈ６、４℃)中のt−ＰＡの溶解限界を示すグラフであっ
て、図中、−黒ひし形−は１００mＭリン酸アルギニ
ン、−白ひし形−は１２５mＭリン酸アルギニン、−黒
四角−は１５０mＭリン酸アルギニン、−白四角−は２
００mＭリン酸アルギニンを表わす図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 9/19 9/14 47/18 Ｇ Ｊ Ａ６１Ｋ 9/14 Ｌ (72)発明者 スチュアート・エリオット・ビルダー アメリカ合衆国カリフォルニア94002、ベ ルモント、ウェンバーリー・ドライブ2827 番 (72)発明者 ラリー・アラン・ガトリン アメリカ合衆国カリフォルニア94521、コ ンコード、プレストン・コート5467番
Claims (4)
- 【請求項１】 組織プラスミノゲン活性化因子を活性成
分とし、アルギニウムイオンを共に含有してなる医薬組
成物中の組織プラスミノゲン活性化因子の溶解度を増大
する方法であって、該アルギニウムイオンを該t−ＰＡ
の溶解度を増大するのに有効な量で存在させる方法。 - 【請求項２】 アルギニウムイオンを該組成物中に約
０．０２〜約１．０Ｍの濃度で存在させる請求項１記載
の方法。 - 【請求項３】 アルギニウムイオンを該組成物中に約
０．０５〜約１．０Ｍの濃度で存在させる請求項１記載
の方法。 - 【請求項４】 アルギニウムイオンを該組成物中に約
０．１〜約０．５Ｍの濃度で存在させる請求項１記載の
方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US811081 | 1985-12-17 | ||
| US06/811,081 US4777043A (en) | 1985-12-17 | 1985-12-17 | Stabilized human tissue plasminogen activator compositions |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61302767A Division JPH0714886B2 (ja) | 1985-12-17 | 1986-12-17 | 安定化されたヒト組織プラスミノゲン活性化因子組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07173076A true JPH07173076A (ja) | 1995-07-11 |
Family
ID=25205495
Family Applications (2)
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