KR950010322B1 - 안정화된 인체 조직 플라스미노겐 활성제 조성물 - Google Patents
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Abstract
내용 없음.
Description
제1도는 여러가지 제제물에 있어서 t-PA의 안정도를 나타낸 것임.
제2도는 t-PA의 용해도에 대한 아르기닌 농도의 효과를 나타낸 것임.
제3도는 pH 6, 4℃에서, 여러가지 인산 아르기니늄 완충제 농도에서 t-PA의 용해도 한계를 나타낸 것임.
본 발명은 단백질 인체 조직 플라스미노겐 활성제(t-PA)를 함유하는 제약 조성물, 그의 제조 방법 및 사용 방법에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 t-PA 성분에 대해 증가된 안정도 및 용해도 특성을 갖는 제약 조성물 및 인체에 안전하고 효과적으로 치료 투약하기 위한 안정한 동결건조형을 만들어낼 수 있는 능력을 갖는, 용이한 동결건조능을 갖는 조성물을 제공하는 것이다.
인체 시체의 혈관 수지상 구조로부터 추출된 혈관 플라스미노겐 활성제의 불안정성은 아오끼(Aoki)의 논문, J. Biol. Chem. (도오코), 제75호 제731페이지(1974년)에 기재되어 있다. 아오끼는 약 0.5M 이상의 고농도 염화나트륨에 의해서만 활성제가 안정화됨을 발견하였다.
바인더(Binder) 등의 J. Biol. Chem. 제254호, 제1998페이지(1979년)에는 인체 시체의 관류액으로부터 얻은 혈관 플라스미노겐 활성제의 활성을 유지시키는데 필수적인 다단계 정제 처리중에 고농도의 염과 아르기닌 함유 완충제를 사용하는 방법이 기재되어 있다. 이 논문에서는 0.3 내지 1.0M NaCl과 0.1M 아르기닌 존쟈하에 정제 단계를 행하였다.
래드클리프(Radcliffe) 등의 Arch. of Biochem. & Biophy. 제189호, 제185페이지(1978년)에는 라이신- 세파로스 상에서 크로마토그래피시켜서 인체 혈장으로부터 플라스미노겐 활성제를 분리하는 방법이 기재되어 있다. 한 실험에서, 안정화된 혈장으로부터 얻은 조 플라스미노겐 활성제를 0.6M NaCl 중에서 0 내지 0.5M의 아르기닌 구배를 사용하여 라이신-세파로스로부터 용출시켰다.
천연 조직원으로부터 얻은 인체 조직 플라스미노겐 활성제는 1980년 6월 11일의 최초 출원에 기해서 1981년 12월 16일에 공개된 콜렌(Collen) 등의 유럽 특허 공고 제041766호에 기재되어 있다. 이 특허에서는 비교적 고순도로 조직 플라스미노겐 활성제를 제공하는 정제 방법을 사용하였다. 콜렌 등은 액체 상태에서 동결건조된 상태의 정제된 조직 플라스미노겐 활성제 제제물의 안정성을 연구한 결과, 0.3M NaCl을 함유하는 용액으로부터 제조하는 경우에도 동결건조된 형태가 불안정한 것으로 발견되었다.
조직 플라스미노겐 활성제와 같은 물질을 건강에 주의를 요하는 사람 및 환자에 제공하기 위해서는 이 물질을 제약 조성물로서 제조해야 한다. 이와 같은 조성물을 적당한 시간 동안 안정해야 하고, 당연히 인체에 투여할 수 있어야 하고, 용이하게 제조될 수 있어야 한다. 이와 같은 조성물의 한 예로서 비경구 투여용 용액제를 들 수 있다. 많은 경우에 있어서, 제약학적 용액제는 즉시 사용하기에 적합한 액상 상태로 제공되지만, 비경구 투여용 제제물은 동결된 형태 또는 동결건조된 형태로 제공될 수도 있다. 전자의 경우에, 조성물은 사용전에 해동(解凍)시켜야 한다. 동결 건조된 제제물이 일반적으로 그의 대응하는 액상 제제물보다 더 안정하다는 사실이 당 업계의 숙련자에게 인식되어 있기 때문에, 후자의 형태가 보다 다양한 저장 조건하에서 조성물 중에 함유된 약제의 안정성을 향상시키는데 흔히 사용된다. 이와 같은 동결건조된 제제물은 주사용 멸균수 또는 멸균 생리 식염수 등과 같은, 제약학상 허용되는 적합한 희석제를 첨가하여 사용 전에 재구성한다.
본 발명의 목적은 인체 조직 플라스미노겐 활성제의 안정성 조성물, 특히 안정한 동결건조 형태의 조성물을 제조하는 것이다.
본 발명은 조직 플라스미노겐 활성제(t-PA)의 제약학상 허용되는 조성물 중에 아르기닌을(아르기니늄 이온으로서) 함유시키면 t-PA의 안정도와 용해도가 현저하게 증가되고, 또한 적합한 반대 이온을 선택함에 따라 안정한 동결건조 형태의 조성물의 제조가 가능하다는 발견에 기초한 것이다. 그리하여, 본 발명은 이와 같은 조성물 및 이에 관련된 모든 균등물 및 이러한 조성물 및 균등물을 효과적으로 생산하기 위한 방법에 관한 것이다.
일반적으로, 조성물에 기타 성분들을 바람직하기로는 안정하고 동결건조될 수 있는 형태의 제조를 방해하지 않는 양으로, 또한 효과적이고 안전한 투약에 적합한 양으로 함유시킬 수 있다.
본 발명에 의한 조성물의 제조에 적합한 pH 범위는 약 4 내지 약 9이며, 적합하기로는 이들 조성물이 제약용으로 생리학적인 pH 범위, 즉 거의 중성이다. 이 pH 범위에서 아르기닌은 주로 전체 전하 ＋1을 갖는 양성자첨가 양이온으로 존재하는데, 이것을 "아르기니늄 이온"이라 칭한다. 본 명세서에서는 "아르기닌"이란 용어를 "아르기니늄 이온"과 서로 교환해서 사용하는데, 이것은 시스템의 pH로 인해 "아르기니늄 이온"이 같은 의미가 되기 때문이다. 전기적 중성을 유지하기 위해서, 아르기니늄 이온은 반대로 하전된(즉, 음으로 하전된) 이온종을 동량 사용하여 평형시켜야 하며, 이 이온종을 "반대 이온"이라 칭할 수 있다. 아르기니늄 이온, 기타 양이온종 및 각종 반대 이온들의 조합을 "아르기니늄 이온-함유 완충제"라고 칭할 수 있다. 허용되는 반대 이온은 제약학상 허용되는 이온과, 또한 조성물이 용이한 동결건조에 특히 적합하도록 조성물의 겉보기 공융 온도 또는 붕괴 온도를 조절할 수 있는 이온을 포함한다. 이와 같은 반대이온으로서는 아세테이트 이온, 포스페이트 이온, 타르트레이트 이온, 말레이트 이온, 말레에이트 이온, 카보네이트 이온 등과 그의 기능성 균등물을 예로 들 수 있다. 적합하지 않은 반대 이온의 예는 염화 이온이다.
상기한 바와 같이, 본 발명자들은 t-PA의 제약 조성물 중에 아르기닌을(아르기니늄 이온으로서) 함유시키면 이들 조성물 중에서 t-PA의 용해도 및 안정도가 현저하게 증가됨을 발견하였다. 투여한 용액 중에, 및(또는) 동결건조된 제제물의 경우, 동결건조되기 전의 용액 중에서, 아르기닌의 농도는 약 0.02M 내지 1M, 바람직하기로는 약 0.05M 내지 약 1.0M, 보다 바람직하기로는 약 0.1M 내지 약 0.5M의 범위일 수 있다.
또한, 개선된 조성물은 t-PA의 안정도를 더욱 향상시키기 위해서 임의로 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80 등과 같은 1개 이상의 비이온계 세정제를 약 0.001 내지 약 1%의 양으로 함유시킬 수 있다. 또한, 당업계의 숙련자들에게 공지된 기타 제약학상 허용되는 부형제를 이 조성물의 일부를 포함할 수 있다. 이것으로는 예를 들면, 각종 부피 조정제, 부가 완충제, 킬레이트제, 산화 방지제, 방부제, 공용매 등이 포함될 수 있으며, 이들의 구체적인 예로는 만니톨, 트로메타민염("트리스 완충제"), 에데트산 이나트륨, 젤라틴, 인체 혈청 알부민 또는 기타 폴리펩티드, 글리실글리신과 같은 각종 소펩티드 등을 들 수 있다.
놀라웁게도, 본 발명에 의한 t-PA 조성물은 고농도, 즉 약 0.3M 이상의 염화나트륨을 사용할 필요가 없다. 실제로, 고농도의 염화이온은 이들 개선된 조성물의 동결건조능에 유해하다. 소량의 염화 이온은 허용되지만, 약 0.3M 미만인 낮은 농도가 바람직하고, 적합하기로는 정상 생리적 농도, 즉 약 0.12M NaCl 이하의 낮은 농도이다. 가장 바람직한 것은 조성물에서 염화 이온을 제외시키는 것이다.
t-PA의 "제약학상 유효한 양"이란 각종 투여 형태에서 치료 효과를 제공하는 양을 의미한다. 본 발명에 의한 조성물은 t-PA를 적어도 약 0.1mg/ml 이상 약 50mg/ml 이하, 적합하기로는 약 0.4mg/ml 내지 약 5mg/ml의 양으로 함유시켜 제조할 수 있다. 이들 조성물을 심근 경색증을 앓고 있는 환자에 투여하기 위해서는, 이들 조성물에 예를 들면, 이들 치료를 위해 일반적으로 예정된 복용률에 해당하는 약 0.4mg/ml 내지 약 3mg/ml의 양으로 t-PA를 함유시킬 수 있다.
동결건조된 형태를 포함한 본 발명의 조성물은 일반적으로 당업계에 공지된 제약 혼합 기술을 사용하여 각 성분들을 혼합하여 제조한다. 마찬가지로, 당업계에 공지된 표준 동결건조 처리법 및 장치를 이용한다. 본 발명에 의한 t-PA의 제약 조성물을 제조하기 위한 특별한 방법은 임의의 표준 단백질 정제 방법에 의해 정제된 t-PA를 겔 여과법과 같은 몇개의 공지된 완충제 교환법 중 어느 하나의 방법에서 사용하는 것을 포함한다. 이 바람직한 방법을 하기한 안정도 및 용해도 연구에서 출발 물질로서 사용된 t-PA를 단리시키고 정제시키는데 사용하였다. 상기 바람직한 방법에서 사용된 t-PA는 t-PA를 Chiness Hamster Ovary Cells(CHO 세포) 배지 중에 분비되는 생성물로서 발현시킬 수 있는 재조합 변형된 CHO 세포로부터 얻었다.
본 발명의 발명자들은 t-PA의 제약 조성물을 아르기니늄 이온-함유 완충제를 일 성분으로 하는 경우에 현저하게 안정된 생물학적 작용을 가지며, 이와 같은 제제물은 0.3M 미만의 염 농도를 사용할 수 있다 할지라도 안정화시키기 위해 염화나트륨을 필요로 하지 않는다는 확정적인 효과를 발견하였다. 바람직한 실시 형태에서, 염화 이온의 농도는 0.1M 이하이다. 중성 pH 범위, 즉, 약 pH 6 내지 8에서, 당업계에서 높은 안정성을 위해 필요하다고 간주하는 양의 염을 존재시키지 않더라도, 비교적 고농도로 제제화되는 아르기니늄 이온이 존재하면 t-PA의 용해도는 증가된다.
본 명세서에서 사용된 "인체 조직 플라스미노겐 활성제", "인체 t-PA" 또는 "t-PA"는 예를 들면 천연원 추출법 및 정제법[상기한 콜린 등의 논문 참조] 및 본 명세서에서 기재된 재조합 세포 배양계에 의해 생성된 인체 외인성(조직형) 플라스미노겐 활성제를 의미한다. 그의 서열 및 특성은 예를 들면, 본 발명의 참고 문헌으로 삽입된 1982년 5월 25일자 최초 출원에 기초한 유럽 특허 공고 제93619호(공고 일자 1983년 11월 9일)에 기재되어 있다. 역시 본 발명의 참고 문헌으로 삽입한, 1980년 6월 11일자로 최초 출원된 유럽 특허 공고 제41766호(공고 일자 1981년 12월 16일) 및 리즈켄(Rijken) 등의 Journal of Biol. Chem. 제256호, 제7035페이지(1981년)에 기재되어 있다. 이들 용어는 마찬가지로 전체 서열 또는 글리코실화 패턴에 있어서 1개 이상의 아미노산이 상이한, 생물학적으로 활성인 인체 조직 플라스미노겐 활성제 균등물을 포함하며, 이들은 사용된 특정 배양 조건 및 조직 플라스미노겐 활성제가 얻어지는 숙주의 특성에 좌우된다.
동결건조
조성물의 동결건조는 당업계의 숙련자들에게 공지된 방법 및 장치를 사용하여 행한다. 전형적으로는, 먼저 조성물을 그의 겉보기 공융 온도 또는 붕괴 온도 이하의 온도로 동결시킨다. 이어서 진공을 만든 후, 승화에 의해 얼음을 제거하기 위하여, 실질적으로 얼음이 모두 제거될 때까지 동결된 덩어리의 온도가 겉보기 공융 온도 또는 붕괴 온도 이하로 유지되도록 선반 온도 및 챔버 압력을 조절하면서 동결건조기 선반에 열을 가한다. 이와 같은 "1차 건조" 단계 후 선반 온도를 좀더 상승시킬 수 있으며(이때 챔버 압력은 변화시키거나 또는 변화시키지 않음), 동결건조된 케이크 중의 수분을 제거한다.
S-2288 분석
합성 펩티드 기질, S-2288(H-D-Ile-Pro-Arg-p-니트로아닐리드·2HCI)을 t-PA를 형성시키는 착색된 p-니트로아닐린과 트리펩티드에 의해 가수분해시킨다. 기질과 생성물(p-니트로아닐린)간의 최대 시차 흡광도는 405nm에서 나타났다. p-니트로아닐린의 생성은 405nm에서 흡광도를 시간의 함수로서 추적하여 분광학적으로 모니터한다. 이로부터 얻은 시간에 대한 흡광도에 기울기는 t-PA 활성에 비례한다. 이 분석을 37±0.2℃에서 행한다.
이 분석을 위해서, 주어진 t-PA 시료 20-100 마이크로리터를 S-2288 0.33mM, 트리스 완충제(pH 7.4) 0.067M과 NaCl 0.07M을 함유하는 반응 혼합물 1.2ml에 첨가한 후, 37℃에서 10분 동안 인큐베이션시켰다. 흡광도의 변화를 1분 동안 모니터한 후, 제조자에 의해 표준화된 하기 반응식을 사용하여 405nm에서의 흡광도로부터, 활성을 계산하였다.
[실시예]
이하, 실시예에 의해 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다.
[실시예 1]
정제한 t-PA를 희석하여 최종 농도를 0.2mg/ml로 만든 후, 분취하여, 하기 표 1에 나타낸 완충제에 대하여 투석하였다.
[표 1]
투석시킨 후, 시료를 원심분리시키고, 상층액을 1ml 분취액으로 동결건조시켰다. 동결건조한 시료를 물을 첨가하여 재구성한 후, S-2288 분석법으로 t-PA의 활성을 분석하였다. 그 후, 재구성된 시료를 37℃에 두고, 여러 시간 간격으로 분석하였다.
이들 실험의 결과를 첨부 도면 제1도에 나타내었다. 이 도면에서 알 수 있는 바와 같이, 아르기닌을 함유하지 않는 시스템은 시간에 따른 t-PA 활성의 감소를 방지하지 않는다. 0.2M 아르기닌 또는 0.2M 아르기닌＋생리적 량의 염화물을 함유하는 시료에서의 t-PA 활성은 37℃에서 4일 동안 인큐베이션시킨 후에도, 초기 t-PA 활성이 거의 그대로 유지되었다. 이들 결과는 NaCl의 존재 또 부존재를 불문하고, 0.2M 아르기닌이 t-PA를 상당히 안정시킴을 나타내주는 것이다.
[실시예 2]
여러가지 온도에서 t-PA 활성의 손실율을 측정하여 아르기닌 농도 함수로서 t-PA 안정도를 결정하였다.
제제물 : 1. 0.355mgs/ml t-PA
0.05M 인산나트륨 pH 6.2
0.05M 아르기닌(염산염으로서)
2. 0.498 mgs/ml t-PA
0.03M 인산나트륨 pH 6.2
0.2M 아르기닌(염산염으로서)
상기 제제물을 첨가한 용액의 0.5ml 분취액을 무균적으로 2ml용 유리 바이알에 넣은 후, 밀봉하였다. 이 바이알을 25℃, 37℃ 및 45℃에서 두었다. 0일, 20일, 55일 및 160일에서 각 용액 당 2개의 바이알을 샘플로 취해서, S2288 분석법을 사용하여 t-PA 활성을 측정하였다. 잔존 활성 백분율의 자연 대수를 각 온도에서 시간(일)에 대해 플롯하고, 이로부터 선형 회귀 분석하여 속도 상수를 계산하였다.
2개의 상이한 아르기닌 농도 및 여러가지 온도에서 t-PA 안정도의 감소에 대한 속도 상수(k)를 하기 표 2에 나타내었다.
[표 2]
t-PA 안정도에 대한 아르기닌의 효과
상기 표에서 알 수 있는 바와 같이, 0.2M 아르기닌은 각 지정된 온도에서 0.05M 아르기닌에서 얻은 속도 상수보다 작은 속도 상수를 나타냈으며, 이것은 아르기닌의 농도가 증가하면 t-PA의 안정도가 증가함을 의미한다.
[실시예 3]
t-PA 안정도는 또한 비이온성 계면활성제의 농도에 의존한다. 이 데이타는 하기 표 3에 나타내었다.
t-PA를 0.01M 숙신산나트륨 완충제(pH 6.0)에 대해 투석하여 침전시켰다. 투석한 시료를 원심분리하여 t-PA 침전물을 모았다. 이 침전물을 가변 농도의 폴리소르베이트 80을 함유하는 하기 제제물 중에 다시 용해시켰다.
제제물 : 0.2M 아르기닌(염산염으로서)
0.02M 인산나트륨 pH 7.2
폴리소르베이트 80(0.0005 내지 0.10%)
각 용액을 무균적으로 바이알에 넣은 후, 35℃ 및 40℃에서 방치하였다. 각 시간대에서 2개의 바이알을 샘플로 취해서, S2288 분석법을 사용하여 효소 활성을 분석하였다.
각 온도에서 시간에 대한 10g(t-PA 활성)의 곡선을 선형 회귀 분석하여 속도 상수를 계산하였으며, 이것을 하기 표 3에 나타내었다.
[표 3]
t-PA 안정도에 대한 폴리소르베이트 80의 효과
상기 표는 폴리소르베이트 80의 농도가 증가함에 따라 속도 상수(k)가 감소되는 것을 보여준다. 이것은 폴리소르베이트 80을 보다 많이 첨가하면 보다 큰 안정도를 얻을 수 있음을 나타내준다.
[실시예 4]
정제한 t-PA를 하기 인산 아르기니늄 제제물 완충제에 대하여 투석한 후, 완충제를 더 첨가하여 목적하는 최종 t-PA 농도까지 희석하여 t-PA 용액을 제조하였다.
제제물 완충제 : 0.20M 아르기닌
0.18M 인산
0.01% 폴리소르베이트 80 pH 6
각 제제물의 분취액을 5 또는 10ml용 바이알에 무균적으로 충전시키고, 동결건조시킨 후, 밀봉하였다. 각 바이알을 몇가지 다른 온도에서 방치하였다. 각 제제물 당 2개의 바이알을 각 시간대에서 샘플로 취해서, S2288 분석법에 의해 t-PA 활성을 측정하였다. 이 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
[표 4]
동결건조된 제제물에서 t-PA의 안정도
* 동결건조전의 용액중의 t-PA 농도
상기 데이타는, t-PA 동결건조된 상태가 안정함을 보여준다.
[실시예 5]
t-PA 약 0.3 내지 05mg/ml를 함유하는 용액을 10mM 인산나트륨(pH 7.5), 여러가지 농도의 아르기닌(염산염으로서)을 함유하는 pH 7.5의 0.01% 폴리소르베이트 80에 대하여 투석하였다. 에펜도르프 마이크로퓨즈(Eppendorf microfuge) 중에서 2분 동안 원심분리시켜서 불용성 물질을 제거하였다. 용액 중에 잔존하는 t-PA의 양을 S2288 분석법으로 분석하였다. 그 결과를 첨부 도면 제2도에 나타내었다.
50mM의 아르기닌과 같이 거의 소량의 아르기닌도 t-PA의 용해도를 상당히 증가시킨다(보다 높은 아르기닌 농도에서는 겉보기 용해도가 보다 적게 증가한다는 사실을 예측할 수 있는데, 그 이유는 출발 물질중 t-PA의 원래 농도가 0.3 내지 0.5mg/ml에 불과하므로, 한계 용해도에 전혀 도달되지 않았기 때문이다).
[실시예 6]
t-PA를 0.001M 숙신산 나트륨 완충제(pH 6)에 대해서 투석하여 침전시켰다. 생성된 침전물을 원심분리에 의해 단리시키고, 이어서, 이 물질의 측정된 양을 5℃에서 20시간 동안 진탕시키면서 소정의 완충계 1ml 중에서 평형화시켰다. 아르기닌을 인산으로 적정하여 인산 아르기니늄계(Ph 6.0)를 얻어 시험 대상 완충계를 제조하였다. 원액을 물로 희석하여 0.10 내지 0.20M 아르기닌(아르기니늄 이온으로서)을 함유하는 최종 완충액을 얻었다. 소정의 완충계와 평형화시키고, 생성된 t-PA 제제물을 원심분리하려 불용성 물질을 제거하고, 이어서 상층액을 S-2288 분석법을 사용하여 용해된 t-PA에 대해 분석하였다.
이 결과를 첨부 도면 제3도에 나타내었다. 원래 첨가한 t-PA의 농도에서 t-PA가 완전히 용해되면, 용해된 t-PA의 농도는 첨가한 농도와 동일해야 한다. 반대로, 원래 첨가한 농도에서 t-PA가 완전히 용해되지 않으면, 용해된 t-PA의 농도는 첨가한 농도 미만이 된다. 제3도는 t-PA가 100mM 인산 아르기닌(pH 6.0) 중에서 최대로 약 2mg/ml 용해되며, 보다 높은 인산 아르기닌 농도에서의 용해도는 현저하게 증가됨을 나타낸다. 특히, 200mM 인산 아르기닌(pH 6.0) 중에서 t-PA는 약 54mg/ml에서도 완전히 용해되며, 한계 용해도가 이것보다 훨씬 높음이 분명하다.
[실시예 7]
하기 인산 아르기니늄계를 동결건조하기 전 용액으로서 제조하였다.
멸균 여과시킨 후, 약 20ml의 분취액을 50cc용 바이알에 넣었다. 이어서, 다음과 같이 동결건조를 행하였다.
a) 각 바이알을 동결건조기 중에 넣고, 상압하 －50℃(선반 온도)에서 10시간 동안 동결시켰다.
b) 진공 상태를 만들고(100㎍ Hg의 챔버 압력), 선반 온도를 시간당 10℃씩 상승시켜서 ＋7℃까지 상승시킨 후, 이 온도에서 41시간 동안 방치하였다.
c) 이어서 선반 온도를 ＋35℃까지 상승시키고, 챔버 압력을 50㎛로 저하시킨 후, 이 시스템을 이 상태에서 14시간 동안 방치하였다.
이어서 각 바이알의 마개를 막은 후, 압력을 다시 상압으로 회복시키고, 바이알을 동결건조기에서 분리시켰다.
[실시예 8]
동결건조된 인산 아르기닌 케이크의 특성에 대한 염화 나트륨의 효과를 조사하였다. 인산염으로 0.8M 아르기닌(pH 7)과 0.2M 아르기닌(pH 6)의 시료를 제조하여 여기에 염화나트륨을 0.01 내지 500mM의 농도로 함유시켰다. 각 용액의 2ml 분취액을 10cc용 바이알 중에 넣고, 다음과 같은 주기를 사용하여 동결건조시켰다.
생성된 케이크의 특성은 하기 표 5에 기재하였다. 이 데이타는 염화나트륨을 낮은 농도로 함유하는 조성물을 사용했을 경우에만 제약학상 허용되는 케이크가 형성되며, 염화나트륨의 최소 허용 농도는 아르기닌의 농도에 의존함을 나타내준다.
[표 5]
선택된 농도의 염화나트륨을 함유하는 동결건조된 아르기닌 완충계의 특성
Claims (30)
- 인체 조직 플라스미노겐 활성제와 제약학상 허용되는 아르기니늄 이온을 함유하는 완충제를 혼합하는 것을 특징으로 하는 염화 이온의 농도가 약 0.3M 미만인 제약 조성물의 제조 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물을 동결건조시키는 단계를 더 포함하는 것인 방법.
- 활성 성분으로서 조직 플라스미노겐 활성제(t-PA)를 함유하는 제약 조성물 중에 아르기니늄 이온이 상기 t-PA의 용해도를 증가시키는데 유효한 양으로 존재하도록 상기 조성물에 아르기니늄 이온을 함유시키는 것을 특징으로 하는, 제약 조성물 중의 조직 플라스미노겐 활성제의 용해도를 증가시키는 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 아르기니늄 이온은 상기 조성물 중에서 약 0.02M 내지 1.0M의 농도로 존재하는 것인 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 아르기니늄 이온은 상기 조성물 중에서 약 0.05M 내지 1.0M의 농도로 존재하는 것인 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 아르기니늄 이온은 상기 조성물 중에서 약 0.1M 내지 0.5M의 농도로 존재하는 것인 방법.
- 제2항에 있어서, 상기 조성물의 동결건조된 상태를 재구성하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 아르기니늄 완충제는 염화아르기니늄 이외인 것인 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 완충제는 아르기니늄 이온과, 조성물의 붕괴 온도를 용이하게 동결건조될 수 있는 상태로 조절할 수 있는 반대 이온에 의하여 제공되는 것인 방법.
- 제9항에 있어서, 상기 반대 이온은 시트레이트, 포스페이트, 타르트레이트, 술페이트, 말레이트, 말레에이트 및 숙시네이트로 되는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
- 제9항에 있어서, 상기 반대 이온은 시트레이트 및 포스페이트로 되는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
- 제9항에 있어서, 상기 반대 이온은 포스페이트인 것인 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 인체 조직 플라스미노겐 활성제는 농도가 적어도 약 1.0mg/ml이고, 상기 아르기니늄 이온은 농도가 약 0.05 내지 약 1.0M인 것인 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 인체 조직 플라스미노겐 활성제는 농도가 적어도 약 0.4 내지 약 5.0mg/ml이고, 상기 아르기니늄 이온은 농도가 약 0.1 내지 약 0.5M인 것인 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 4 내지 약 9인 것인 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 제약학상 허용되는 희석제로 희석되는 것인 방법.
- 제15항에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 5인 것인 방법.
- 제15항에 있어서, 상기 조성물의 pH는 약 6인 것인 방법.
- 인체 조직 플라스미노겐 활성제, 제약학적 허용되는 아르기니늄 이온을 함유하는 완충제와 조성물의 약 0.001 내지 1%로 되는 비이온성 세정제를 혼합하는 특징으로 하는 염화 이온의 농도가 약 0.3M 미만인 제약 조성물의 제조 방법.
- 제19항에 있어서, 상기 조성물을 동결건조시키는 단계를 더 포함하는 것인 방법.
- 제19항에 있어서, 상기 아르기니늄 이온은 상기 조성물 중에서 약 0.02M 내지 1.0M의 농도로 존재하는 방법.
- 제19항에 있어서, 상기 아르기니늄 이온은 상기 조성물 중에서 약 0.05M 내지 1.0M의 농도로 존재하는 방법.
- 제19항에 있어서, 상기 아르기니늄 이온은 상기 조성물 중에서 약 0.1M 내지 0.5M의 농도로 존재하는 방법.
- 제20항에 있어서, 상기 조성물의 동결건조된 상태를 재구성하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.
- 제19항에 있어서, 상기 아르기니늄 완충제는 염화 아르기니늄 이외인 것인 방법.
- 제19항에 있어서, 상기 완충제는 아르기니늄 이온과, 조성물의 붕괴 온도를 용이하게 동결건조될 수 있는 상태로 조절할 수 있는 반대 이온에 의하여 제공되는 것인 방법.
- 제26항에 있어서, 상기 반대 이온은 시트레이트, 포스레이트, 타르트레이트, 술페이트, 말레이트, 말레에이트 및 숙시네이트로 되는 군 중에서 선택되는 것인 방법.
- 제19항에 있어서, 상기 인체 조직 플라스미노겐 활성제는 농도가 적어도 약 1.0mg/ml이고, 상기 아르기니늄 이온은 농도가 약 0.05 내지 약 1.0M인 것인 방법.
- 제19항에 있어서, 상기 인체 조직 플라스미노겐 활성제는 농도가 적어도 약 0.4 내지 약 5.0mg/ml이고, 상기 아르기니늄/이온은 약 0.1 내지 약 0.5M인 것인 방법.
- 제19항에 있어서, 조성물의 pH는 약 4 내지 약 9인 것인 방법.
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