JPS61124391A - アルブチンの製造法 - Google Patents
アルブチンの製造法Info
- Publication number
- JPS61124391A JPS61124391A JP24357984A JP24357984A JPS61124391A JP S61124391 A JPS61124391 A JP S61124391A JP 24357984 A JP24357984 A JP 24357984A JP 24357984 A JP24357984 A JP 24357984A JP S61124391 A JPS61124391 A JP S61124391A
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- medium
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- arbutin
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明はニチニチソウの細胞培養によりアルブチンを製
造する方法に関する。
造する方法に関する。
［従来の技術］
従来アルブチンの製造方法には合成法（ＡｒｔｈｅｒＤ
、Ｊａｒｅｔｔ−ｃｏｒｐ ｏｆ Ｄｅｌａｗａｒｅ
Ｕ、Ｓ、Ｐ、 ３２０１３８５）とウワウルシ（Ａｒｃ
ｔｏｓｔａｐｈｙｌｏｓ ｕｖａ−ｕｒｓｉ）、コケモ
モ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｖｉｔｉｓ−ｉｄａｅａ）な
どの天然植物から抽出する方法がある。
、Ｊａｒｅｔｔ−ｃｏｒｐ ｏｆ Ｄｅｌａｗａｒｅ
Ｕ、Ｓ、Ｐ、 ３２０１３８５）とウワウルシ（Ａｒｃ
ｔｏｓｔａｐｈｙｌｏｓ ｕｖａ−ｕｒｓｉ）、コケモ
モ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｖｉｔｉｓ−ｉｄａｅａ）な
どの天然植物から抽出する方法がある。
［発明が解決しようとする問題点］
合成法は、１）グルコースのアセチル化、２）ベンジル
エーテルの付加、３）脱アセチル化、４）脱ベンジル化
、の４工程からなり非常に繁雑であること、また抽出法
については、天然のウワウルシやコケモモのアルブチン
含有量が、それぞれ乾燥重量の５．０〜７．５ ％、
４．０〜７．止ど少ないうえに抽出の際に大量の鉛を使
用する。鉛を使用する方法は直接人体に摂取されたり、
接触するような医薬、農薬、化粧料添加物、食品添加物
などに使用するための物質あるいはその原料を製造する
方法としては、重金属である鉛混入の危険があり、かつ
使用済の重金属を含む廃液の処理、廃棄などにも難点が
あり不適当である。
エーテルの付加、３）脱アセチル化、４）脱ベンジル化
、の４工程からなり非常に繁雑であること、また抽出法
については、天然のウワウルシやコケモモのアルブチン
含有量が、それぞれ乾燥重量の５．０〜７．５ ％、
４．０〜７．止ど少ないうえに抽出の際に大量の鉛を使
用する。鉛を使用する方法は直接人体に摂取されたり、
接触するような医薬、農薬、化粧料添加物、食品添加物
などに使用するための物質あるいはその原料を製造する
方法としては、重金属である鉛混入の危険があり、かつ
使用済の重金属を含む廃液の処理、廃棄などにも難点が
あり不適当である。
［問題点を解決するための手段］
上記の事情に鑑み、本発明者等は鋭意研究を重ねた結果
、ニチニチソウのカルス又は腫瘍組織の組織培養培地に
ハイドロキノンを添加することにより、極めて大量のア
ルブチンを培養物中に蓄積することを認め、この知見に
もとずいて本発明を完成するに至った。以下に本発明の
詳細な説明する。まずニチニチソウの芽生え（幼植物）
の根、胚軸、子葉、成熟植物の根、茎、葉、葉柄、花、
花粉などの細胞群又は組織片を出発原料として、これを
通常の方法にてオーキシンやサイトカイニンを添加した
培地で培養すればカルスが誘導される。この場合、材料
としていずれの植物の器官の細胞群、組織を使用しても
難易の差はあるがカルスは誘導される。使用する培地は
ムラシゲ−スクーグ培地に寒天をまぜたものが通常用い
られるがこれに原らず、Ｗｈｉｔｅ、 Ｇａｍｂｏｒｇ
＋旧ｔｓｃｈ。
、ニチニチソウのカルス又は腫瘍組織の組織培養培地に
ハイドロキノンを添加することにより、極めて大量のア
ルブチンを培養物中に蓄積することを認め、この知見に
もとずいて本発明を完成するに至った。以下に本発明の
詳細な説明する。まずニチニチソウの芽生え（幼植物）
の根、胚軸、子葉、成熟植物の根、茎、葉、葉柄、花、
花粉などの細胞群又は組織片を出発原料として、これを
通常の方法にてオーキシンやサイトカイニンを添加した
培地で培養すればカルスが誘導される。この場合、材料
としていずれの植物の器官の細胞群、組織を使用しても
難易の差はあるがカルスは誘導される。使用する培地は
ムラシゲ−スクーグ培地に寒天をまぜたものが通常用い
られるがこれに原らず、Ｗｈｉｔｅ、 Ｇａｍｂｏｒｇ
＋旧ｔｓｃｈ。
Ｈｅ１ｆｅｒ、 ５ｃｈｅｎｋ−旧１ｄｅｂｒａｎｄｔ
、旧ｔｓｃｈ−旧ｔｓｃｈ。
、旧ｔｓｃｈ−旧ｔｓｃｈ。
Ｋｏｈｌｅｎｂａｃｈ−Ｓｃｈｍｆｄｔなどのいずれの
培地を用いてもよい。勿論、寒天を含まない液体培地で
もカルスは誘導で伊る。また一般にカルス誘導に際して
はオーキシンが必要とされるが、２．４−ジクロロフェ
ノキシ酢酸（２，４７Ｄ）、α−ナフタリン酢酸（ＨＭ
Ａ）、２．４．５− トリクロロフェノキシ酢酸（２，
４，５−Ｔ）、インドール酢酸（ＩＡＡ）などいずれを
添加してもよい。またサイトカイニンもゼアチン、６−
ベンジルアデニン、カイネチン、リボシルゼアチン、イ
ソペンテニルアデニンなどいずれを添加してもよい。添
加するオーキシンの濃度は、１０−７Ｍから１０−５Ｍ
の範囲であり、サイトカイニンの濃度も１０゜８Ｍから
１０°４Ｍの範囲である。この様にして誘導したカルス
は上記培地に寒天を加えない液体培地に植え継ぎ振どう
培養を行う。もちろん寒天を含む培地でもカルスは分裂
生長する。液体振どう培養では通気のために回転式振ど
う培養機か往復大振どう培養機で常に振とうする。回転
数は５０ ｒｐ鳳から１５０ ｒｐｉｌの範囲であれば
いずれでもよいが、１１０ｒｐ麿程度が望ましい。培養
中、光は照射してもしムつてもよい。培養温度は２０°
Ｃから３０°Ｃであるが、そのうちでも２７°Ｃ程度が
望ましい。カルスは週１回新しい培地に植え継ぎ、継代
培養される。アルブチンを得るためにはこの培地にハイ
ドロキノンを添加する。カルスが誘導されて１遅めにハ
イドロキノンを添加してもアルブチンは生産されるが、
カルスの形質が安定するまで１００回以上植え継いだ後
の方がよい。ハイドロキノンは新しく植え継いで１日目
から１００日目いつ添加してもよいが、好ましくは３日
目から７日目の間がよい。またハイドロキノンの添加量
は濃度にして１０＋ｍＭ以下ノ範囲であればいずれの濃
度でもアルブチンは生産されるが、特に２ｍＭから５ｍ
Ｍの間が望ましい。
培地を用いてもよい。勿論、寒天を含まない液体培地で
もカルスは誘導で伊る。また一般にカルス誘導に際して
はオーキシンが必要とされるが、２．４−ジクロロフェ
ノキシ酢酸（２，４７Ｄ）、α−ナフタリン酢酸（ＨＭ
Ａ）、２．４．５− トリクロロフェノキシ酢酸（２，
４，５−Ｔ）、インドール酢酸（ＩＡＡ）などいずれを
添加してもよい。またサイトカイニンもゼアチン、６−
ベンジルアデニン、カイネチン、リボシルゼアチン、イ
ソペンテニルアデニンなどいずれを添加してもよい。添
加するオーキシンの濃度は、１０−７Ｍから１０−５Ｍ
の範囲であり、サイトカイニンの濃度も１０゜８Ｍから
１０°４Ｍの範囲である。この様にして誘導したカルス
は上記培地に寒天を加えない液体培地に植え継ぎ振どう
培養を行う。もちろん寒天を含む培地でもカルスは分裂
生長する。液体振どう培養では通気のために回転式振ど
う培養機か往復大振どう培養機で常に振とうする。回転
数は５０ ｒｐ鳳から１５０ ｒｐｉｌの範囲であれば
いずれでもよいが、１１０ｒｐ麿程度が望ましい。培養
中、光は照射してもしムつてもよい。培養温度は２０°
Ｃから３０°Ｃであるが、そのうちでも２７°Ｃ程度が
望ましい。カルスは週１回新しい培地に植え継ぎ、継代
培養される。アルブチンを得るためにはこの培地にハイ
ドロキノンを添加する。カルスが誘導されて１遅めにハ
イドロキノンを添加してもアルブチンは生産されるが、
カルスの形質が安定するまで１００回以上植え継いだ後
の方がよい。ハイドロキノンは新しく植え継いで１日目
から１００日目いつ添加してもよいが、好ましくは３日
目から７日目の間がよい。またハイドロキノンの添加量
は濃度にして１０＋ｍＭ以下ノ範囲であればいずれの濃
度でもアルブチンは生産されるが、特に２ｍＭから５ｍ
Ｍの間が望ましい。
［実施例］
次に実施例をあげて本発明をざらに詳細に説明する。
実施例１
オーキシン類として２．４−Ｄを２．２Ｘ１０−６１４
含み寒天を含まないムラシゲ−スクーグ培地（ＫＣ社製
）２００醜ｌづつを５００１の三角フラスコに分注した
ものを１０本オートクレーブで滅菌した。常法によりニ
チニチソウの茎より誘導し１０５回の継代培養を行った
後のカルス２．Ｏｇを培地に植え込み、光熱照射下、回
転式振どう培養装置（いわしゃ科学製）を用いて１１０
ｒｐｍで振とう培養を行った。培養温度は２７°Ｃとし
た。植え込んで４日目にハイドロキノン（三井石油化学
製） ８６．０ｍｇを水溶液として培地に添加した（３
．０ｍＭ）。対照としてハイドロキノンを無添加の他は
同条件のものを５本培養した。５日目、培養液を東洋濾
紙Ｎｏ、 ２で吸引濾過し残渣を充分純水で洗浄した。
含み寒天を含まないムラシゲ−スクーグ培地（ＫＣ社製
）２００醜ｌづつを５００１の三角フラスコに分注した
ものを１０本オートクレーブで滅菌した。常法によりニ
チニチソウの茎より誘導し１０５回の継代培養を行った
後のカルス２．Ｏｇを培地に植え込み、光熱照射下、回
転式振どう培養装置（いわしゃ科学製）を用いて１１０
ｒｐｍで振とう培養を行った。培養温度は２７°Ｃとし
た。植え込んで４日目にハイドロキノン（三井石油化学
製） ８６．０ｍｇを水溶液として培地に添加した（３
．０ｍＭ）。対照としてハイドロキノンを無添加の他は
同条件のものを５本培養した。５日目、培養液を東洋濾
紙Ｎｏ、 ２で吸引濾過し残渣を充分純水で洗浄した。
残渣をなす型フラスコに移し、５０■ｌの純水を加えて
１０分間ホモジナイズし、湯浴上１００°Ｃで２時間熱
水抽出を行った。これを遠心分前により上澄液をストッ
クし、沈澱物はもう１度同じ条件で熱水抽出した。２回
の抽出で得られた１００ｍ１の抽出液を凍結乾燥し６６
８ 、０ｍｇの粉体を得た。これをシリカゲルカラム（
ＷａｋｏｇｅｌＣ−３００和光純薬製）５０ｇにかけ、
混合溶出液（クロロホルム：メタノール：水＝３０：１
０：１）で溶出し、溶媒を留去してアルブチンを結晶と
して１１３゜２ ｍｇ得た。フラスコ１０本分での平均
アルブチン生産量は１０５．６ｍｇであった。対照区で
はアルブチンの生産は認められなかった。
１０分間ホモジナイズし、湯浴上１００°Ｃで２時間熱
水抽出を行った。これを遠心分前により上澄液をストッ
クし、沈澱物はもう１度同じ条件で熱水抽出した。２回
の抽出で得られた１００ｍ１の抽出液を凍結乾燥し６６
８ 、０ｍｇの粉体を得た。これをシリカゲルカラム（
ＷａｋｏｇｅｌＣ−３００和光純薬製）５０ｇにかけ、
混合溶出液（クロロホルム：メタノール：水＝３０：１
０：１）で溶出し、溶媒を留去してアルブチンを結晶と
して１１３゜２ ｍｇ得た。フラスコ１０本分での平均
アルブチン生産量は１０５．６ｍｇであった。対照区で
はアルブチンの生産は認められなかった。
実施例２
実施例１と同様゛の培地を調製し、５００ｍ１の三角フ
ラスコに２００ｍ１ずつ分注しオートクレーブで滅菌し
た。常法によりニチニチソウの茎より誘導し、１０７回
継代培養を行った後のカルス２．Ｏｇを培地に植え込み
、実施例１と同様の条件で培養を行った。植え込んで３
日目にハイドロキノンを６６．０Ｉｍｇ、 ４日目に２
２．０厘ｇを水溶液として培地に添加した（それぞれ３
．０＋＊Ｍと１．０ｍＭ）。５日目、実施例１の要領で
抽出、精製を行い、アルブチンの結晶１４２゜３６を得
た。表１に実施例１．２におけるアルブチン生産量と転
換率を示す。ただし数値は１０フラスコで生産された総
量の平均値である。
ラスコに２００ｍ１ずつ分注しオートクレーブで滅菌し
た。常法によりニチニチソウの茎より誘導し、１０７回
継代培養を行った後のカルス２．Ｏｇを培地に植え込み
、実施例１と同様の条件で培養を行った。植え込んで３
日目にハイドロキノンを６６．０Ｉｍｇ、 ４日目に２
２．０厘ｇを水溶液として培地に添加した（それぞれ３
．０＋＊Ｍと１．０ｍＭ）。５日目、実施例１の要領で
抽出、精製を行い、アルブチンの結晶１４２゜３６を得
た。表１に実施例１．２におけるアルブチン生産量と転
換率を示す。ただし数値は１０フラスコで生産された総
量の平均値である。
表１
＊液体クロマトグラフィーにて確認
本発明によフて生産きれたアルブチンの機蕃分析による
データは、紫外吸収、赤外吸収、１３Ｃ核磁気共鳴の各
スペクトル分析において、市販されているアルブチン（
シグマ社！りのものと一致した。
データは、紫外吸収、赤外吸収、１３Ｃ核磁気共鳴の各
スペクトル分析において、市販されているアルブチン（
シグマ社！りのものと一致した。
Claims (1)
- ニチニチソウ（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ ｒｏｓｅｕ
ｓ Ｌ．）のカルス又は腫瘍組織の組織培養培地中にハ
イドロキノンを添加し、培養物よりアルブチンを分離採
取することを特徴とする植物の組織培養によるアルブチ
ンの製造法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24357984A JPS61124391A (ja) | 1984-11-16 | 1984-11-16 | アルブチンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24357984A JPS61124391A (ja) | 1984-11-16 | 1984-11-16 | アルブチンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61124391A true JPS61124391A (ja) | 1986-06-12 |
| JPH0414960B2 JPH0414960B2 (ja) | 1992-03-16 |
Family
ID=17105921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24357984A Granted JPS61124391A (ja) | 1984-11-16 | 1984-11-16 | アルブチンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61124391A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63251092A (ja) * | 1987-04-07 | 1988-10-18 | Shiseido Co Ltd | アルブチンの製造方法 |
| JPH01269498A (ja) * | 1988-04-22 | 1989-10-26 | Shiseido Co Ltd | アルブチンの製造方法 |
| JP2006111581A (ja) * | 2004-10-15 | 2006-04-27 | Nitto Best Kk | アルブチンの分離精製方法 |
-
1984
- 1984-11-16 JP JP24357984A patent/JPS61124391A/ja active Granted
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63251092A (ja) * | 1987-04-07 | 1988-10-18 | Shiseido Co Ltd | アルブチンの製造方法 |
| JPH01269498A (ja) * | 1988-04-22 | 1989-10-26 | Shiseido Co Ltd | アルブチンの製造方法 |
| JP2006111581A (ja) * | 2004-10-15 | 2006-04-27 | Nitto Best Kk | アルブチンの分離精製方法 |
| JP4738788B2 (ja) * | 2004-10-15 | 2011-08-03 | 日東ベスト株式会社 | アルブチンの分離精製方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0414960B2 (ja) | 1992-03-16 |
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