JPH0414960B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

［産業上の利用分野］ 本発明はニチニチソウの細胞培養によりアルブ
チンを製造する方法に関する。 ［従来の技術］ 従来のアルブチンの製造方法には合成法
（ArtherD.Jarett−corp of Delaware U.S.
P.3201385）とウワウルシ（Arctostaphylos uva
−ursi）、コケモモ（Vaccinium vitis−idaea）
などの天然植物から抽出する方法がある。 ［発明が解決しようとする問題点］ 合成法は、(1)グルコースのアセチル化、(2)ベン
ジルエーテルの付加、(3)脱アセチル化、(4)脱ベン
ジル化、の４工程からなり非常に繁雑であるこ
と、また抽出法については、天然のウワウルシや
コケモモのアルブチン含有量が、それぞれ乾燥重
量の5.0〜7.5％、4.0〜7.0％と少ないうえに抽出
の際に大量の鉛を使用する。鉛を使用する方法は
直接人体に摂取されたり、接触するような医薬、
農薬、化粧料添加物食品添加物などに使用するた
めの物質あるいはその原料を製造する方法として
は、重金属である鉛混入の危険があり、かつ使用
済の重金属を含む廃液の処理、廃棄などにも難点
があり不適当である。 ［問題点を解決するための手段］ 上記の事情に鑑み、本発明者等は鋭意研究を重
ねた結果、ニチニチソウのカルス又は腫瘍組織の
組織培養培地にハイドロキノンを添加することに
より、極めて大量のアルブチンを培養物中に蓄積
することを認め、この知見にもとずいて本発明を
完成するに至つた。以下に本発明を詳細に説明す
る。まずニチニチソウの芽生え（幼植物）の根、
胚軸、子葉、成熟植物の根、茎、葉、葉柄、花、
花粉などの細胞群又は組織片を出発原料として、
これを通常の方法にてオーキシンやサイトカイニ
ンを添加した培地で培養すればカルスが誘導され
る。この場合、材料としていずれの植物の器官の
細胞群、組織を使用しても難易の差はあるがカル
スは誘導される。使用する培地はムラシゲースク
ーグ培地に寒天をまぜたもとが通常用いられるが
これに限らず、White，Gamborg，Nitsch，
Heller，Schenk−Hildebrandt，Nitsch−
Nitsch，Kohlenbach−Schmidtなどのいずれの
培地を用いてもよい。勿論、寒天を含まない液体
培地でもカルスは誘導できる。また一般にカルス
誘導に際してはオーキシンが必要とされるが、
２，４−ジクロロフエノキシ酢酸（２，４−Ｄ）、
α−ナフタリン酢酸（NAA）、２，４，５−ト
リクロロフエノキシ酢酸（２，４，５−Ｔ）、イ
ンドール酢酸（IAA）などいずれを添加しても
よい。またサイトカイニンもゼアチン、６−ベン
ジルアデニン、カイネチン、リボシルゼアチン、
イソペンテニルアデニンなどいずれを添加しても
よい。添加するオーキシンの濃度は、10^-7Mから
10^-5Mの範囲であり、サイトカイニンの濃度も
10^-8Mから10^-4Mの範囲である。この様にして誘
導したカルスは上記培地に寒天を加えない液体培
地に植え継ぎ振とう培養を行う。もちろん寒天を
含む培地でもカルスは分裂生長する。液体振とう
培養では通気のために回転式振とう培養機か往復
式振とう培養機で常に振とうする。回転数は
50rpmから150rpmの範囲であればいずれでもよ
いが、110rpm程度が望ましい。培養中、光は照
射してもしなくてもよい。培養温度は20℃から30
℃であるが、そのうちでも27℃程度が望ましい。
カルスは週１回新しい培地に植え継ぎ、継代培養
される。アルブチンを得るためにはこの培地にハ
イドロキノンを添加する。カルスが誘導されて１
週めにハイドロキノンを添加してもアルブチンは
生産されるが、カルスの形質が安定するまで100
回以上植え継いだ後の方がよい。ハイドロキノン
は新しく植え継いで１日目から10日目のいつ添加
してもよいが、好ましくは３日目から７日目の間
がよい。またハイドロキノンの添加量は濃度にし
て10ｍＭ以下の範囲であればいずれの濃度でもア
ルブチンは生産されるが、特に２ｍＭから５ｍＭ
の間が望ましい。 ［実施例］ 次に実施例をあげて本発明をさらに詳細に説明
する。 実施例 １ オーキシン類として２，４−Ｄを2.2×10^-6M
含み寒天を含まないムラシゲースクーグ培地
（KC社製）200mlづつを500mlの三角フラスコに分
注したものを10本オートクレーブで滅菌した。常
法によりニチニチソウの茎より誘導し105回の継
代培養を行つた後のカルス2.0ｇを培地に植え込
み、光無照射下、回転式振とう培養装置（いわし
や科学製）を用いて110rpmで振とう培養を行つ
た。培養温度は27℃とした。植え込んで４日目に
ハイドロキノン（三井石油化学製）66.0mgを水溶
液として培地に添加した（3.0ｍＭ）。対照として
ハイドロキノンを無添加の他は同条件のものを５
本培養した。５日目、培養液を東洋濾紙No.２で吸
引濾過し残渣を充分純水で洗浄した。残渣をなす
型フラスコに移し、50mlの純水を加えて10分間ホ
モジナイズし、湯浴上100℃で２時間熱水抽出を
行つた。これを遠心分離により上澄液をストツク
し、沈澱物はもう１度同じ条件で熱水抽出した。
２回の抽出で得られた100mlの抽出液を凍結乾燥
し668.0mgの粉体を得た。これをシリカゲルカラ
ム（Wakogel Ｃ−300 和光純薬製）50ｇにか
け、混合溶出液（クロロホルム：メタノール：水
＝30：10：１）で溶出し、溶媒を留去してアルブ
チンを結晶として113.2mg得た。フラスコ10本分
での平均アルブチン生産量は105.6mgであつた。
対照区ではアルブチンの生産は認められなかつ
た。 実施例 ２ 実施例１と同様の培地を調製し、500mlの三角
フラスコに200mlずつ分注しオートクレーブで滅
菌した。常法によりニチニチソウの茎より誘導
し、107回継代培養を行つた後のカルス2.0ｇを培
地に植え込み、実施例１と同様の条件で培養を行
つた。植え込んで３日目にハイドロキノンを66.0
mg、４日目に22.0mgを水溶液として培地に添加し
た（それぞれ3.0ｍＭと1.0ｍＭ）。５日目、実施
例１の要領で抽出、精製を行い、アルブチンの結
晶142.3mgを得た。表１に実施例１，２における
アルブチン生産量と転換率を示す。ただし数値は
10フラスコで生産された総量の平均値である。

【表】 ＊ 液体クロマトグラフイーにて確認
本発明によつて生産されたアルブチンの機器分
析によるデータは、紫外吸収、赤外吸収、¹³C核磁
気共鳴の各スペクトル分析において、市販されて
いるアルブチン（シグマ社製）のものと一致し
た。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ニチニチソウ（Catharanthus roseus L.）
   のカルス又は腫瘍組織の組織培養培地中にハイド
   ロキノンを添加し、培養物よりアルブチンを分離
   採取することを特徴とする植物の組織培養による
   アルブチンの製造法。