JPS608745B2 - 免疫活性物質−つや消しガラス複合体，その製造法及び該複合体を含有してなる測定試薬 - Google Patents
免疫活性物質−つや消しガラス複合体，その製造法及び該複合体を含有してなる測定試薬Info
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- JPS608745B2 JPS608745B2 JP53016342A JP1634278A JPS608745B2 JP S608745 B2 JPS608745 B2 JP S608745B2 JP 53016342 A JP53016342 A JP 53016342A JP 1634278 A JP1634278 A JP 1634278A JP S608745 B2 JPS608745 B2 JP S608745B2
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
- G01N33/552—Glass or silica
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/44—Antibodies bound to carriers
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- Y10S436/817—Steroids or hormones
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は免疫活性物質一つや消しガラス複合体、その製
造法および該複合体を含有してなる試薬に関するもので
あり、さらに詳しくは体液中のホルモン、タン白質など
の生理活性物質を非常に感度よく測定するに適した免疫
活性物質一つや消しガラス複合体、その製造法及び該複
合体を含有してなる試薬に関するものである。
造法および該複合体を含有してなる試薬に関するもので
あり、さらに詳しくは体液中のホルモン、タン白質など
の生理活性物質を非常に感度よく測定するに適した免疫
活性物質一つや消しガラス複合体、その製造法及び該複
合体を含有してなる試薬に関するものである。
体液（尿、血清等）中のホルモン（例えばインシュリン
、甲状腺刺激ホルモン、サイロキシン）、タンパク質（
例えばＱーフェ・トプロティン、ＣＥＡ）等の生理活性
物質を定量することは、診断上重要であり、その測定は
、従来放射免疫測定法（以下ＲＩＡと記載する）、酵素
免疫測定法（以下ＥＩＡと記載する）で行なわれている
。
、甲状腺刺激ホルモン、サイロキシン）、タンパク質（
例えばＱーフェ・トプロティン、ＣＥＡ）等の生理活性
物質を定量することは、診断上重要であり、その測定は
、従来放射免疫測定法（以下ＲＩＡと記載する）、酵素
免疫測定法（以下ＥＩＡと記載する）で行なわれている
。
ＲＩＡでは標識物質としてアイソトープを用い、ＥＩＡ
では標識物質として酵素を用いる点が異なるだけであり
、両側定法（ＲＩＡ、ＥＩＡ）の測定原理は抗原−抗体
反応の特異性を利用し、同一の測定原理に基づいている
。通常、一般に用いられているＲＩＡ、ＥＩＡの有用な
測定システムは、水不溶性の支持体の表面に、抗原又は
抗体（免疫活性物質）を結合させた不熔化免疫活性物質
を用いる固相システムである。
では標識物質として酵素を用いる点が異なるだけであり
、両側定法（ＲＩＡ、ＥＩＡ）の測定原理は抗原−抗体
反応の特異性を利用し、同一の測定原理に基づいている
。通常、一般に用いられているＲＩＡ、ＥＩＡの有用な
測定システムは、水不溶性の支持体の表面に、抗原又は
抗体（免疫活性物質）を結合させた不熔化免疫活性物質
を用いる固相システムである。
水不溶性の支持体としては、従来ｍポリスチレン、ポリ
エチレン等のプラステイツク、（２’セフアロース、セ
ルロース、等の天然高分子化合物、｛３’ガラスなどが
用いられている。これら水不瀞樺の支持体のうち、ポリ
スチレン、ポリエチレン等のプラスティックを用いた場
合、免疫活性物質とプラスティックとの結合は、通常物
的吸着で結合させている為、経時安定性、精度などが悪
いという欠点を有する。又免疫活性物質をセフア。ース
、セルロース等の天然高分子化合物に結合させたものは
フワフヮしており、取り扱いが難しく、測定に熟練を要
するという欠点を持つ。一方、ガラスは、上記の水不落
・性の支持体と異なり、免疫活性物質を共有結合させる
ことが出釆、ガラスに結合させた免疫活性物質の経時安
定性が良く、さらに取り扱いが簡単という長所を有する
が、反面ガラスへの免疫活性物質の結合量が少なくその
為、測定に用いた場合、測定感度、測定精度が今ひとつ
良くなくさらに測定領域も狭いという欠点を有する。本
発明者らは、上記種々の欠点を有しない不溶化免疫活性
物質を得ることを目的として鋭意検討した結果、本発明
に到達した。即ち、本発明は免疫活性物質を表面つや消
し処理されたガラスの表面に物理的又は化学的に結合さ
せてなる免疫活性物質一つや消しガラス複合体、その製
造法及び該複合体を含有してなる試薬である。本発明で
用いられる免疫活性物質とは、抗原及び抗体のことを示
し、抗原としては、ホルモン例えばインシュリン、ゴナ
ドトロピン、１７−ケトステロィド、成長ホルモン、サ
イロキシン、トリョードサィロニン、甲状腺刺激ホルモ
ンなど、またタンパク質例えば１ｇ０、１ｇＡ、１ｇけ
、１ｇＥ、Ｑーフエトプロテイン、ＣＥＡ、プロタミン
など、また種々の病因疾患に関連した細菌、ウイルス、
原虫などの抗原性成分（例えば連鎖球菌、肝炎ウイルス
、風疹ウイルス、トキソプラズマ源虫、マラリア源虫）
などが用いられる。
エチレン等のプラステイツク、（２’セフアロース、セ
ルロース、等の天然高分子化合物、｛３’ガラスなどが
用いられている。これら水不瀞樺の支持体のうち、ポリ
スチレン、ポリエチレン等のプラスティックを用いた場
合、免疫活性物質とプラスティックとの結合は、通常物
的吸着で結合させている為、経時安定性、精度などが悪
いという欠点を有する。又免疫活性物質をセフア。ース
、セルロース等の天然高分子化合物に結合させたものは
フワフヮしており、取り扱いが難しく、測定に熟練を要
するという欠点を持つ。一方、ガラスは、上記の水不落
・性の支持体と異なり、免疫活性物質を共有結合させる
ことが出釆、ガラスに結合させた免疫活性物質の経時安
定性が良く、さらに取り扱いが簡単という長所を有する
が、反面ガラスへの免疫活性物質の結合量が少なくその
為、測定に用いた場合、測定感度、測定精度が今ひとつ
良くなくさらに測定領域も狭いという欠点を有する。本
発明者らは、上記種々の欠点を有しない不溶化免疫活性
物質を得ることを目的として鋭意検討した結果、本発明
に到達した。即ち、本発明は免疫活性物質を表面つや消
し処理されたガラスの表面に物理的又は化学的に結合さ
せてなる免疫活性物質一つや消しガラス複合体、その製
造法及び該複合体を含有してなる試薬である。本発明で
用いられる免疫活性物質とは、抗原及び抗体のことを示
し、抗原としては、ホルモン例えばインシュリン、ゴナ
ドトロピン、１７−ケトステロィド、成長ホルモン、サ
イロキシン、トリョードサィロニン、甲状腺刺激ホルモ
ンなど、またタンパク質例えば１ｇ０、１ｇＡ、１ｇけ
、１ｇＥ、Ｑーフエトプロテイン、ＣＥＡ、プロタミン
など、また種々の病因疾患に関連した細菌、ウイルス、
原虫などの抗原性成分（例えば連鎖球菌、肝炎ウイルス
、風疹ウイルス、トキソプラズマ源虫、マラリア源虫）
などが用いられる。
また抗体としては、従来既知の方法でウサギ、ヒツジ等
のほ乳動物に上記抗原を免疫することによって得られた
抗血清が用いられる。硫安分画、ＤＥＡＥ−セルロース
カラムクロマトグラフイー、アフイニテイクロマトグラ
フィー等の従来既知の精製方法で、抗血清から精製され
た抗体が好ましい。またつや消し処理されたガラス（つ
や消しガラス）としては、化学大辞典（共立出版株式会
社、昭和３母王刊行）第９９９頁記載のつや消しガラス
があげられ、通常、物理的、化学的処理によってガラス
表面に不規則で微細なオゥトッが作られたガラスが用い
られる。
のほ乳動物に上記抗原を免疫することによって得られた
抗血清が用いられる。硫安分画、ＤＥＡＥ−セルロース
カラムクロマトグラフイー、アフイニテイクロマトグラ
フィー等の従来既知の精製方法で、抗血清から精製され
た抗体が好ましい。またつや消し処理されたガラス（つ
や消しガラス）としては、化学大辞典（共立出版株式会
社、昭和３母王刊行）第９９９頁記載のつや消しガラス
があげられ、通常、物理的、化学的処理によってガラス
表面に不規則で微細なオゥトッが作られたガラスが用い
られる。
物理的処理としては、研摩材、研摩紙、研摩布などで、
ガラス表面を摩耗する方法、金剛砂、ェメリーなどの研
摩材を加圧空気によってガラス表面に吹きつける（サン
ドブラスト）方法、研摩材とともにボールミルなどに入
れて、ガラス表面を摩耗する方法などがあげられる。化
学的処理としては、フッ化水素酸、フッ化アンモニウム
又はアカリなどをガラスに反応させ、エッチングを行う
ことによって化学的につや消しする方法があげられる。
作業性がよく、又効率よくつや消し処理することを考慮
すると物理的方法としては、サンドブラストする方法が
又化学的方法としてはフッ化水素酸およびフッ化アンモ
ニウム含有のつや消し液を使用する方法が好ましい。ま
たつや消しガラスとしては、通常１〜２比吻の最大径を
有するガラス体が用いられる。ガラス体の形状は特に制
限されないが、通常円柱体、球体、立方体のものが用い
られる。免疫活性物質とつや消しガラスとを結合させる
に際し、免疫活性物質とつや消しガラスとの重量比は特
に制限されず、目的に応じて広範囲に変えることができ
る。
ガラス表面を摩耗する方法、金剛砂、ェメリーなどの研
摩材を加圧空気によってガラス表面に吹きつける（サン
ドブラスト）方法、研摩材とともにボールミルなどに入
れて、ガラス表面を摩耗する方法などがあげられる。化
学的処理としては、フッ化水素酸、フッ化アンモニウム
又はアカリなどをガラスに反応させ、エッチングを行う
ことによって化学的につや消しする方法があげられる。
作業性がよく、又効率よくつや消し処理することを考慮
すると物理的方法としては、サンドブラストする方法が
又化学的方法としてはフッ化水素酸およびフッ化アンモ
ニウム含有のつや消し液を使用する方法が好ましい。ま
たつや消しガラスとしては、通常１〜２比吻の最大径を
有するガラス体が用いられる。ガラス体の形状は特に制
限されないが、通常円柱体、球体、立方体のものが用い
られる。免疫活性物質とつや消しガラスとを結合させる
に際し、免疫活性物質とつや消しガラスとの重量比は特
に制限されず、目的に応じて広範囲に変えることができ
る。
例えばつや消しガラス１０の熱こ対して免疫活性物質溶
液１０〜１００碇部、好ましくは５０〜３０唯部、濃度
は０．００１〜４０％Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．０１〜
０．１％Ｗ／Ｖ）である。免疫活性物質をつや消しガラ
スの表面に結合させる方法としては、物理的結合方法及
び化学的結合方法があげられる。物理的結合方法として
は、物理吸着により結合させる方法があげられ、通常０
．００１〜４．０％（Ｗ／Ｖ）好ましくは０．０１〜０
．１％Ｗ／Ｖ）の免疫活性物質溶液に「表面つや消しガ
ラスを浸潰し、適当な時間、放置することにより行なわ
れる。通常０〜４５℃で１〜４鞠時間放置することによ
り行なわれる。化学的結合方法としてはシランカップリ
ング剤及び必要により架橋剤を介して免疫活性物質をつ
や消しガラス表面に化学的に結合させる方法があげられ
る。免疫活性物質をつや消しガラスに強固に安定的に大
量に結合させるという点を考慮すれば、化学的結合方法
が好ましい。シランカップリング剤としては、その分子
中につや消しガラスのシラノール基と反応し得る官能基
と、免疫活性物質の有するアミ／基、カルボキシル基又
はチオール基と反応し得る官能基を併せ有する有機けし
、素化合物が用いられる。該シランカップリング剤にお
いて、シラノール基と反応し得る官能基としては、例え
ばアルコキシシリル基、ハロシリル基などであり、アミ
ノ基、カルボキシル基又はチオール基と反応し得る官能
基としては、例えばィソシアネート基、アルデヒド基、
ェポキシ基、カルボキシル基、カルボン酸ェステル基、
ハロカルボニル基、第１級アミノ基、第２級アミノ基、
ィミノ基、ニトリル基、チオール基などがあげられる。
かかる官能基を併せ有するシランカツプリング剤として
は、例えば下記のシランカツプリング剤があげられる。
‘１｝ アミノ基及びアルコキシシリル基含有シランカ
ップリング剤、例えば、アミノアルキルトリアルコキシ
シラン（ッーアミノプロピルトリメトキシシラン、シー
アミノプロピルトリエトキシシランなど）、Ｎ−８（ア
ミノエチル）ｙーアミノプロピルメチルジメトキシシラ
ン、Ｎ−８（アミノエチル）ｙーアミノプロピルトリエ
トキシシランなど■ チオール基及びァルコキシシリル
基含有シランカツプリング剤例えばメルカプトアルキル
トリアルコキシシラン（ｙ−メルカプトブロピルトリメ
トキシシランなど）など｛３１ェポキシ基及びアルコキ
シシリル基含有シランカップリング剤例えばｙーグリシ
ドキシプロピルトリメトキシシラン、トリエトキシシリ
ルメチルエチレンオキシド、３−（３・４ーエポキシシ
クロヘキシル）エチルトリメトキシシランなど‘４｝
カルボキシル基及びアルコキシシリル基含有シランカツ
プリング剤例えば２一（トリメトキシシリル）プロピオ
ン酸など。
液１０〜１００碇部、好ましくは５０〜３０唯部、濃度
は０．００１〜４０％Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．０１〜
０．１％Ｗ／Ｖ）である。免疫活性物質をつや消しガラ
スの表面に結合させる方法としては、物理的結合方法及
び化学的結合方法があげられる。物理的結合方法として
は、物理吸着により結合させる方法があげられ、通常０
．００１〜４．０％（Ｗ／Ｖ）好ましくは０．０１〜０
．１％Ｗ／Ｖ）の免疫活性物質溶液に「表面つや消しガ
ラスを浸潰し、適当な時間、放置することにより行なわ
れる。通常０〜４５℃で１〜４鞠時間放置することによ
り行なわれる。化学的結合方法としてはシランカップリ
ング剤及び必要により架橋剤を介して免疫活性物質をつ
や消しガラス表面に化学的に結合させる方法があげられ
る。免疫活性物質をつや消しガラスに強固に安定的に大
量に結合させるという点を考慮すれば、化学的結合方法
が好ましい。シランカップリング剤としては、その分子
中につや消しガラスのシラノール基と反応し得る官能基
と、免疫活性物質の有するアミ／基、カルボキシル基又
はチオール基と反応し得る官能基を併せ有する有機けし
、素化合物が用いられる。該シランカップリング剤にお
いて、シラノール基と反応し得る官能基としては、例え
ばアルコキシシリル基、ハロシリル基などであり、アミ
ノ基、カルボキシル基又はチオール基と反応し得る官能
基としては、例えばィソシアネート基、アルデヒド基、
ェポキシ基、カルボキシル基、カルボン酸ェステル基、
ハロカルボニル基、第１級アミノ基、第２級アミノ基、
ィミノ基、ニトリル基、チオール基などがあげられる。
かかる官能基を併せ有するシランカツプリング剤として
は、例えば下記のシランカツプリング剤があげられる。
‘１｝ アミノ基及びアルコキシシリル基含有シランカ
ップリング剤、例えば、アミノアルキルトリアルコキシ
シラン（ッーアミノプロピルトリメトキシシラン、シー
アミノプロピルトリエトキシシランなど）、Ｎ−８（ア
ミノエチル）ｙーアミノプロピルメチルジメトキシシラ
ン、Ｎ−８（アミノエチル）ｙーアミノプロピルトリエ
トキシシランなど■ チオール基及びァルコキシシリル
基含有シランカツプリング剤例えばメルカプトアルキル
トリアルコキシシラン（ｙ−メルカプトブロピルトリメ
トキシシランなど）など｛３１ェポキシ基及びアルコキ
シシリル基含有シランカップリング剤例えばｙーグリシ
ドキシプロピルトリメトキシシラン、トリエトキシシリ
ルメチルエチレンオキシド、３−（３・４ーエポキシシ
クロヘキシル）エチルトリメトキシシランなど‘４｝
カルボキシル基及びアルコキシシリル基含有シランカツ
プリング剤例えば２一（トリメトキシシリル）プロピオ
ン酸など。
架橋剤としては、用いるシランカップリング剤の種類に
よって及び結合させる免疫活性物質の種類によって、種
々の架橋剤が選ばれるが、シランカップリング剤と免疫
活性物質とを架橋結合させ得る化合物なら特に制限され
ない。
よって及び結合させる免疫活性物質の種類によって、種
々の架橋剤が選ばれるが、シランカップリング剤と免疫
活性物質とを架橋結合させ得る化合物なら特に制限され
ない。
通常、架橋剤としてはアミノ基とアミ／基とを架橋結合
する脂肪族ジアルデヒド例えば、グリオキサール、マロ
ンアルデヒド、スクシンアルデヒド、グルタールアルデ
ヒドなど、チオール基とチオール基を架橋結合するジマ
レィミド化合物例えばＮ・Ｎ′−ｏーフエニレンジマレ
イミド、Ｎ・Ｎ一ｍ−フエニレンジマレィミドなど、ア
ミノ基とチオール基とを架橋結合するマレィミドカルボ
キシルーＮ−ヒドロキシスクシンィミドェステル化合物
例えばメタマレイミドベンゾイルＮ−ヒドロキシスクシ
ンイミドエステル、４一（マレイミドメチル）シクロヘ
キサンー１ーカルボキシルＮーヒドロキシスクシンイミ
ドエステルなどが用いられる。本発明の複合体を化学的
結合方法により製造するに当っては、２つの態様がある
。
する脂肪族ジアルデヒド例えば、グリオキサール、マロ
ンアルデヒド、スクシンアルデヒド、グルタールアルデ
ヒドなど、チオール基とチオール基を架橋結合するジマ
レィミド化合物例えばＮ・Ｎ′−ｏーフエニレンジマレ
イミド、Ｎ・Ｎ一ｍ−フエニレンジマレィミドなど、ア
ミノ基とチオール基とを架橋結合するマレィミドカルボ
キシルーＮ−ヒドロキシスクシンィミドェステル化合物
例えばメタマレイミドベンゾイルＮ−ヒドロキシスクシ
ンイミドエステル、４一（マレイミドメチル）シクロヘ
キサンー１ーカルボキシルＮーヒドロキシスクシンイミ
ドエステルなどが用いられる。本発明の複合体を化学的
結合方法により製造するに当っては、２つの態様がある
。
第１の方法は、シランカップリング剤を介して免疫活性
物質をつや消し処理されたガラスの表面に結合させる方
法であり、シランカップリング剤でつや消しガラスを処
理しガラス表面のシラノール基と反応させることにより
、先ずつや消しガラスにシランカップリング剤を結合せ
しめ、次いでこれに免疫活性物質を反応させることによ
り、シランカップリング剤を介して免疫活性物質とつや
消しガラスとを結合させる方法であり、免疫活性物質と
つや消しガラスとを強固に、安定的に結合させるという
点を考慮するとシランカップリング剤として、特に好ま
しいものはアミノ基及びアルコキシシリル基含有シラン
カップリング剤、カルボキシル基及びアルコキシシリル
含有シランカツプリング剤である。シランカッブリング
剤と免疫活性物質とを反応せしめ結合させる場合、通常
行なわれる反応はべプチド形成反応であるが、その際脱
水縮合剤である水落性カルポジィミド例えばＮ−エチル
−Ｎ′−ジメチルアミノカルボジイミド、１ーエチルー
３ージイソプロピルカルボジイミド、１ーシ０クロヘキ
シルー３一〔２−モルホリニル−（４１ーエチル〕カル
ボジイミドを用いることは好ましいことである。第２の
方法はシランカップＩＪング剤と架橋剤とを介して免疫
活性物質をつや消し処理されたガラスの表面に結合させ
る方法であり、先ずつや消しガラスにシラソカッブＩＪ
ング剤を結合せしめ、次いで架橋剤をこれに反応させ、
さらに免疫活性物質を反応結合させることにより、シラ
ソカップリング剤と架橋剤を介して、免疫活性物質とつ
や消しガラスとを結合させる方法であり、免疫活性物質
をつや消しガラスの表面に強固にかつ安定的に結合させ
るという点を考慮すると、シランカップリング剤として
好ましいものは、アミノ基及びアルコキシシリル基含有
シランカップリング剤であり特にアミノアルキルトリア
ルコキシシランが好ましく、又架橋剤として好ましいも
のは、脂肪族ジアルデヒドであり特にグルタールアルデ
ヒドが好ましい。具体的にはシランカツプリング剤を介
して免疫活性物質をつや消しガラスの表面に結合させる
第１の方法においては、シランカップリング剤の０．０
１〜５０％（ＷＶ）好ましくは０．１〜１０％（Ｖ′Ｖ
）アセトン又はトルェンなどの有機溶媒溶液に、つや消
しガラスを十分に浸潰させ０〜８び０で１０分〜２独特
間放置反応させ、つや消しガラスにシランカップリング
剤を反応、結合させる。
物質をつや消し処理されたガラスの表面に結合させる方
法であり、シランカップリング剤でつや消しガラスを処
理しガラス表面のシラノール基と反応させることにより
、先ずつや消しガラスにシランカップリング剤を結合せ
しめ、次いでこれに免疫活性物質を反応させることによ
り、シランカップリング剤を介して免疫活性物質とつや
消しガラスとを結合させる方法であり、免疫活性物質と
つや消しガラスとを強固に、安定的に結合させるという
点を考慮するとシランカップリング剤として、特に好ま
しいものはアミノ基及びアルコキシシリル基含有シラン
カップリング剤、カルボキシル基及びアルコキシシリル
含有シランカツプリング剤である。シランカッブリング
剤と免疫活性物質とを反応せしめ結合させる場合、通常
行なわれる反応はべプチド形成反応であるが、その際脱
水縮合剤である水落性カルポジィミド例えばＮ−エチル
−Ｎ′−ジメチルアミノカルボジイミド、１ーエチルー
３ージイソプロピルカルボジイミド、１ーシ０クロヘキ
シルー３一〔２−モルホリニル−（４１ーエチル〕カル
ボジイミドを用いることは好ましいことである。第２の
方法はシランカップＩＪング剤と架橋剤とを介して免疫
活性物質をつや消し処理されたガラスの表面に結合させ
る方法であり、先ずつや消しガラスにシラソカッブＩＪ
ング剤を結合せしめ、次いで架橋剤をこれに反応させ、
さらに免疫活性物質を反応結合させることにより、シラ
ソカップリング剤と架橋剤を介して、免疫活性物質とつ
や消しガラスとを結合させる方法であり、免疫活性物質
をつや消しガラスの表面に強固にかつ安定的に結合させ
るという点を考慮すると、シランカップリング剤として
好ましいものは、アミノ基及びアルコキシシリル基含有
シランカップリング剤であり特にアミノアルキルトリア
ルコキシシランが好ましく、又架橋剤として好ましいも
のは、脂肪族ジアルデヒドであり特にグルタールアルデ
ヒドが好ましい。具体的にはシランカツプリング剤を介
して免疫活性物質をつや消しガラスの表面に結合させる
第１の方法においては、シランカップリング剤の０．０
１〜５０％（ＷＶ）好ましくは０．１〜１０％（Ｖ′Ｖ
）アセトン又はトルェンなどの有機溶媒溶液に、つや消
しガラスを十分に浸潰させ０〜８び０で１０分〜２独特
間放置反応させ、つや消しガラスにシランカップリング
剤を反応、結合させる。
反応後、処理したつや消しガラスを反応溶液から取り出
し、メタノール、引き続いて脱イオン水で完全に洗浄し
、０．００１〜４０％Ｗ／Ｖ）好ましくは０．０１〜０
．１％（Ｗ／Ｖ）の免疫活性物質をつや消しガラス１０
０部に対して、１０〜１０００部好ましくは５０〜３０
０部加え、約０〜４０００で】０分〜２岬寺間好ましく
は１〜３時間反応させシランカップリング剤を介してつ
や消しガラスと免疫活性物質を結合させる。シランカッ
プリング剤を結合させられたつや消しガラスに免疫活性
物質を反応せしめる際に、０．１〜１０％Ｗ′Ｖ）の水
溶性カルボジイミド溶液を用いることは好ましいことで
ある。シランカップリング剤と架橋剤を介して免疫活性
物質をつや消しガラスの表面に結合させる第２の方法に
おいては、シランカツプリング剤の０．０１〜５０％Ｗ
′Ｖ）好ましくは０．１〜１０％（Ｖ′Ｖ）アセトン又
はトルヱンなどの有機溶媒溶液に、つや消しガラスを十
分に浸潰させ０〜８０００で１０分〜２４時間放置反応
させ、つや消しガラスにシランカップリング剤を反応結
合させる。
し、メタノール、引き続いて脱イオン水で完全に洗浄し
、０．００１〜４０％Ｗ／Ｖ）好ましくは０．０１〜０
．１％（Ｗ／Ｖ）の免疫活性物質をつや消しガラス１０
０部に対して、１０〜１０００部好ましくは５０〜３０
０部加え、約０〜４０００で】０分〜２岬寺間好ましく
は１〜３時間反応させシランカップリング剤を介してつ
や消しガラスと免疫活性物質を結合させる。シランカッ
プリング剤を結合させられたつや消しガラスに免疫活性
物質を反応せしめる際に、０．１〜１０％Ｗ′Ｖ）の水
溶性カルボジイミド溶液を用いることは好ましいことで
ある。シランカップリング剤と架橋剤を介して免疫活性
物質をつや消しガラスの表面に結合させる第２の方法に
おいては、シランカツプリング剤の０．０１〜５０％Ｗ
′Ｖ）好ましくは０．１〜１０％（Ｖ′Ｖ）アセトン又
はトルヱンなどの有機溶媒溶液に、つや消しガラスを十
分に浸潰させ０〜８０００で１０分〜２４時間放置反応
させ、つや消しガラスにシランカップリング剤を反応結
合させる。
反応後処理したつや消しガラスを反応溶液から取り出し
、メタノール引き続いて脱イオン水で完全に洗浄し、次
いで０．０００１〜５０％（Ｗ／Ｗ）好ましくは０．１
〜２０％（Ｗ／Ｗ）の架橋剤水溶液に上記の処理された
つや消しガラスを十分に浸潰させ、約０〜４０ｏｏで３
０分〜１餌時間放置反応させ、つや消しガラスに結合し
たシランカップリング剤と架橋剤とを結合させる。さら
にこのつや消しガラスを反応溶液から取り出し、脱イオ
ン水で完全に洗浄した後、０．００１〜４０％（Ｗ′Ｖ
）好ましくは０．０１〜０．１％Ｗ′Ｖ）の免疫活性物
質をつや消しガラス１００部に対して１０〜１００疎部
好ましくは５０〜３０碇部加え、約０〜４０こ０で１０
分〜２４時間好ましくは１〜３時間反応させ、免疫活性
物質をシランカップリング剤と架橋剤とを介してつや消
しガラスに結合させる。このような方法で得られた免疫
活性物質一つや消しガラス複合体は、例えば０．１％窒
化ナトリウム、１％牛血清アルブミン含有ｐＨ７．２、
０．０１Ｍリン酸緩衝生理食塩水中４℃で保存すれば１
年以上安定である。
、メタノール引き続いて脱イオン水で完全に洗浄し、次
いで０．０００１〜５０％（Ｗ／Ｗ）好ましくは０．１
〜２０％（Ｗ／Ｗ）の架橋剤水溶液に上記の処理された
つや消しガラスを十分に浸潰させ、約０〜４０ｏｏで３
０分〜１餌時間放置反応させ、つや消しガラスに結合し
たシランカップリング剤と架橋剤とを結合させる。さら
にこのつや消しガラスを反応溶液から取り出し、脱イオ
ン水で完全に洗浄した後、０．００１〜４０％（Ｗ′Ｖ
）好ましくは０．０１〜０．１％Ｗ′Ｖ）の免疫活性物
質をつや消しガラス１００部に対して１０〜１００疎部
好ましくは５０〜３０碇部加え、約０〜４０こ０で１０
分〜２４時間好ましくは１〜３時間反応させ、免疫活性
物質をシランカップリング剤と架橋剤とを介してつや消
しガラスに結合させる。このような方法で得られた免疫
活性物質一つや消しガラス複合体は、例えば０．１％窒
化ナトリウム、１％牛血清アルブミン含有ｐＨ７．２、
０．０１Ｍリン酸緩衝生理食塩水中４℃で保存すれば１
年以上安定である。
本発明の免疫活性物質一つや消しガラス複合体は、体液
中の生理活性物質の測定用試薬として用いることができ
る。
中の生理活性物質の測定用試薬として用いることができ
る。
測定対称物である体液中の生理活性物質としては、イン
シュリン、ゴナドトロピン、１７−ケステロィド、成長
ホルモン、サイロキシン、トリョードサィロニン、甲状
腺刺激ホルモンなどのホルモン、１ｇＡ、１ｇＧ、１ｇ
Ｅ、１ｇＭ、Ｑーフエトプロテイン、ＣＥＡ、プロタミ
ンなどのタンパク質、連鎖球菌、肝炎ウイルス、風疹ウ
イルス、トキソプラズマ原虫、マラリア原虫などの種々
の病因疾患に関連した細菌、ウイルス又は原虫などの抗
原性成分、細菌、ウイルス、原虫又は薬物などに対する
抗体などがあげられる。本発明の免疫活性物質一つや消
しガラス複合体を体液中の生理活性物質の測定用試薬し
て用いる方法としては、通常の固相システムのＲＩＡ又
はＥＩＡに準ずる方法でよく、○｝ 測定対象物と酵素
又はアイソトープで際議した一定量の免疫活性物質（頚
Ｕ定対象物と同じ物質）とを、該測定対象物に対する抗
原又は抗体をつや消しガラスに結合させた免疫活性物質
−つや消しガラス複合体に対して、競合的に反応結合さ
せ、免疫活性物質−つや消しガラス複合体と結合した物
質の酵素活性もしく放射能又は免疫活性物質一つや消し
ガラス複合体に結合しなかった物質の酵素活性もしくは
放射能を測定し、その測定結果を予め既知量の測定対象
物において同様にして得られた結果と対比することによ
り定量を行う方法（競合反応法）、■ 測定対象物を、
該測定対象物に対する抗原又は抗体をつや消しガラスに
結合させた免疫活性物質−つや消しガラス複合体に反応
結合させ、さらに酵素又はアイソトープで標議した免疫
活性物質（該測定対象物に対する抗原又は抗体）を反応
結合させ、免疫活性物質一つや消しガラス複合体と結合
した物質の酵素活性又は放射能を測定し、その測定結果
を予め既知量の測定対象物において同様にして得られた
結果と対比することにより定量を行う方法（サンドウィ
ッチ法）、‘３｝ 測定対象物と酵素又はアィソト−プ
で標識した一定量の免疫活性物質（渡ｕ定対象物と同じ
物質）とを、該測定対象物に対する抗原又は抗体に対し
て、競合的に反応結合させ、さらに該抗原又は抗体に対
する抗体をつや消しガラスに結合させた免疫活性物質一
つや消しガラス複合体を反応結合させ、免疫活性物質一
つや消しガラス複合体と結合した物質の酵素活性又は放
射能もしくは、結合しなかった物質の酵素活性又は放射
能を測定し、その結果を予め既知量の測定対象物におい
て同様に得られた結果と対比することにより定量を行う
方法などは、その代表的な例としてあげられる。
シュリン、ゴナドトロピン、１７−ケステロィド、成長
ホルモン、サイロキシン、トリョードサィロニン、甲状
腺刺激ホルモンなどのホルモン、１ｇＡ、１ｇＧ、１ｇ
Ｅ、１ｇＭ、Ｑーフエトプロテイン、ＣＥＡ、プロタミ
ンなどのタンパク質、連鎖球菌、肝炎ウイルス、風疹ウ
イルス、トキソプラズマ原虫、マラリア原虫などの種々
の病因疾患に関連した細菌、ウイルス又は原虫などの抗
原性成分、細菌、ウイルス、原虫又は薬物などに対する
抗体などがあげられる。本発明の免疫活性物質一つや消
しガラス複合体を体液中の生理活性物質の測定用試薬し
て用いる方法としては、通常の固相システムのＲＩＡ又
はＥＩＡに準ずる方法でよく、○｝ 測定対象物と酵素
又はアイソトープで際議した一定量の免疫活性物質（頚
Ｕ定対象物と同じ物質）とを、該測定対象物に対する抗
原又は抗体をつや消しガラスに結合させた免疫活性物質
−つや消しガラス複合体に対して、競合的に反応結合さ
せ、免疫活性物質−つや消しガラス複合体と結合した物
質の酵素活性もしく放射能又は免疫活性物質一つや消し
ガラス複合体に結合しなかった物質の酵素活性もしくは
放射能を測定し、その測定結果を予め既知量の測定対象
物において同様にして得られた結果と対比することによ
り定量を行う方法（競合反応法）、■ 測定対象物を、
該測定対象物に対する抗原又は抗体をつや消しガラスに
結合させた免疫活性物質−つや消しガラス複合体に反応
結合させ、さらに酵素又はアイソトープで標議した免疫
活性物質（該測定対象物に対する抗原又は抗体）を反応
結合させ、免疫活性物質一つや消しガラス複合体と結合
した物質の酵素活性又は放射能を測定し、その測定結果
を予め既知量の測定対象物において同様にして得られた
結果と対比することにより定量を行う方法（サンドウィ
ッチ法）、‘３｝ 測定対象物と酵素又はアィソト−プ
で標識した一定量の免疫活性物質（渡ｕ定対象物と同じ
物質）とを、該測定対象物に対する抗原又は抗体に対し
て、競合的に反応結合させ、さらに該抗原又は抗体に対
する抗体をつや消しガラスに結合させた免疫活性物質一
つや消しガラス複合体を反応結合させ、免疫活性物質一
つや消しガラス複合体と結合した物質の酵素活性又は放
射能もしくは、結合しなかった物質の酵素活性又は放射
能を測定し、その結果を予め既知量の測定対象物におい
て同様に得られた結果と対比することにより定量を行う
方法などは、その代表的な例としてあげられる。
本発明の使用法がこれらの例示に限定されないことはも
ちろんであり、ＥＩＡ、ＲＩＡにおける種々の不溶化免
疫活性物質に代えて本発明の免疫活性物質−つや消しガ
ラス複合体を用いることができる。本発明の免疫活性物
質一つや消しガラス複合体は、大量の免疫活性物質が強
固に、安定に結合されており、ＲＩＡ又はＥＩＡに不熔
化免疫活性物質として免疫活性物質一つや消しガラス複
合体を用いた場合、測定感度、精度が極めて高くさらに
測定領域が広いなどの特長を有する他に長期の保存に耐
えること、取り扱いが簡単なこと、工業的に容易に生産
できることという特徴を有しており、診断医学上非常に
有用なものである。
ちろんであり、ＥＩＡ、ＲＩＡにおける種々の不溶化免
疫活性物質に代えて本発明の免疫活性物質−つや消しガ
ラス複合体を用いることができる。本発明の免疫活性物
質一つや消しガラス複合体は、大量の免疫活性物質が強
固に、安定に結合されており、ＲＩＡ又はＥＩＡに不熔
化免疫活性物質として免疫活性物質一つや消しガラス複
合体を用いた場合、測定感度、精度が極めて高くさらに
測定領域が広いなどの特長を有する他に長期の保存に耐
えること、取り扱いが簡単なこと、工業的に容易に生産
できることという特徴を有しており、診断医学上非常に
有用なものである。
次に、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発
明は以下の実施例によって限定されるものではない。
明は以下の実施例によって限定されるものではない。
実施例 １
川 つや消しガラスの作製（化学的方法）小ガラス管（
外径６肌、内径４肋、長さ１０肌）ＩＯＮ固を２００の
とのつや消し液（２％フッ化水素酸、１％フッ化アンモ
ニウム水溶液）に浸潰し、室温、１時間反応させた。
外径６肌、内径４肋、長さ１０肌）ＩＯＮ固を２００の
とのつや消し液（２％フッ化水素酸、１％フッ化アンモ
ニウム水溶液）に浸潰し、室温、１時間反応させた。
反応後小ガラス管を取り出し、水洗することにより、表
面が一様につや消し処理されたつや消しガラス管を作製
した。■ つや消しガラスの作製（物理的方法）ガラス
ビーズ（径３側）３０の固をメッシュ６０のェメリー（
研摩材）を２Ｘ９′ｃ鰭、１時間吹き付け、ガラスビー
ズをサンドプラストした。
面が一様につや消し処理されたつや消しガラス管を作製
した。■ つや消しガラスの作製（物理的方法）ガラス
ビーズ（径３側）３０の固をメッシュ６０のェメリー（
研摩材）を２Ｘ９′ｃ鰭、１時間吹き付け、ガラスビー
ズをサンドプラストした。
サンドブラスト後ガラスビーズに付着したェメリー（研
摩材）を洗浄除去し、表面が一様につや消し処理された
つや消しガラスビーズを作製した。｛３｝ 免疫活性物
質一つや消しガラス複合体の製造‘１’で作製したつや
消しガラス管（外径６肋、内径４側、長さ１仇舷）ＩＯ
Ｎ固を０．５（％）ｙーアミノプロピルトリェキシシラ
ンーアセトン溶液１００の【に浸潰し、室温で１０時間
放置反応させた。
摩材）を洗浄除去し、表面が一様につや消し処理された
つや消しガラスビーズを作製した。｛３｝ 免疫活性物
質一つや消しガラス複合体の製造‘１’で作製したつや
消しガラス管（外径６肋、内径４側、長さ１仇舷）ＩＯ
Ｎ固を０．５（％）ｙーアミノプロピルトリェキシシラ
ンーアセトン溶液１００の【に浸潰し、室温で１０時間
放置反応させた。
反応終了後櫨過し、メタノール引き続いて水で洗浄した
。乾燥後、酸による中和滴定法によればアミン６５仏ｍ
ｏｌｅ／（タつや消しガラス管）が結合していた。この
アミノ基含有シランカップリング剤を結合させたつや消
しガラス管ＩＯＮ固を生理食塩水４０の上に浸潰させ、
これにヒト・１ｇＧ５０雌の生理食塩水１０叫の溶液と
０．２％ＮーエチルーＮ′ージメチルアミノプロピルカ
ルボジィミド塩酸塩の生理食塩水１０の上の溶液を加え
て３７℃にて２時間処理した。反応終了後、水、ＩＭプ
ロピオン酸水溶液、水の順序にて洗浄して、洗液にタン
パク質を検出しなくなったのを確認した後、ヒト・１ｇ
Ｇ一つや消しガラス管複合体３の固をとって濃苛性ソー
ダ３０叫中で３７℃にて１餌時間処理し、櫨遇して櫨液
中ののタンパク量を測定した。その結果、ヒト・１ｇ０
６３仏夕／（タつや消しガラス管）が結合していた。実
施例 ２免疫活性物質一つや消しガラスビーズ管複合体
の製造実施例１の｛２｝で作製したつや消しガラスビー
ズ２０の固を０．５％ｙ−アミ／プロピルトリェトキシ
シランートルェン溶液１００の‘に浸潰し、７時間沸と
う反応させた。
。乾燥後、酸による中和滴定法によればアミン６５仏ｍ
ｏｌｅ／（タつや消しガラス管）が結合していた。この
アミノ基含有シランカップリング剤を結合させたつや消
しガラス管ＩＯＮ固を生理食塩水４０の上に浸潰させ、
これにヒト・１ｇＧ５０雌の生理食塩水１０叫の溶液と
０．２％ＮーエチルーＮ′ージメチルアミノプロピルカ
ルボジィミド塩酸塩の生理食塩水１０の上の溶液を加え
て３７℃にて２時間処理した。反応終了後、水、ＩＭプ
ロピオン酸水溶液、水の順序にて洗浄して、洗液にタン
パク質を検出しなくなったのを確認した後、ヒト・１ｇ
Ｇ一つや消しガラス管複合体３の固をとって濃苛性ソー
ダ３０叫中で３７℃にて１餌時間処理し、櫨遇して櫨液
中ののタンパク量を測定した。その結果、ヒト・１ｇ０
６３仏夕／（タつや消しガラス管）が結合していた。実
施例 ２免疫活性物質一つや消しガラスビーズ管複合体
の製造実施例１の｛２｝で作製したつや消しガラスビー
ズ２０の固を０．５％ｙ−アミ／プロピルトリェトキシ
シランートルェン溶液１００の‘に浸潰し、７時間沸と
う反応させた。
反応終了後櫨過し、メタノール引き続いて水で洗浄した
。乾燥後酸による中和瓶定法によればアミン１２３〃ｍ
ｏｌｅ／（タつや消しガラスビーズ）が結合していた。
このアミノ基含有シランカップリング剤を結合させたつ
や消しガラスビーズ２０Ｍ風こ２％グルタールアルデヒ
ド水溶液１００の‘を加え、４℃、２時間放置反応した
後、脱イオン水でグルタールアルデヒド臭がなくなるま
で４〜６回洗浄した。次いでこの処理されたつや消しガ
ラスビーズ２０の固を生理食塩水４０私に浸潰させ、こ
れに抗ヒト−インシュリンウサギ抗体６０の９の生理食
塩水１０の‘の溶液を加えて、３０ｑ０２時間反応した
。反応終了後、水でつや消しガラスビーズを十分に洗浄
して、．洗液にタンパク質を検出しなくなったのを確認
した後、抗ヒトーィンシュリンゥサギ抗体一つや消しガ
ラスビーズ複合体の３０個をとって濃苛性ソーダ３０泌
中で３７０にて１の時間処理し、櫨遇して、櫨液中のタ
ンパク量を測定した。その結果抗ヒトーィンシュリンウ
サギ抗体１４８り夕／（タつや消しガラスビーズ）が結
合していた。実施例 ３ 免疫活性物質−ガラス複合体を用いる生理活性物質（ヒ
ト・インシュリン）の測定（サンドウィッチ法、ＥＩＡ
）実施例２で作製した抗ヒトーインシュリンウサギ抗体
一つや消しガラスビーズ複合体を用いて、サンドウィッ
チ法によるＥＩＡでのインシュリンの定量測定をした。
。乾燥後酸による中和瓶定法によればアミン１２３〃ｍ
ｏｌｅ／（タつや消しガラスビーズ）が結合していた。
このアミノ基含有シランカップリング剤を結合させたつ
や消しガラスビーズ２０Ｍ風こ２％グルタールアルデヒ
ド水溶液１００の‘を加え、４℃、２時間放置反応した
後、脱イオン水でグルタールアルデヒド臭がなくなるま
で４〜６回洗浄した。次いでこの処理されたつや消しガ
ラスビーズ２０の固を生理食塩水４０私に浸潰させ、こ
れに抗ヒト−インシュリンウサギ抗体６０の９の生理食
塩水１０の‘の溶液を加えて、３０ｑ０２時間反応した
。反応終了後、水でつや消しガラスビーズを十分に洗浄
して、．洗液にタンパク質を検出しなくなったのを確認
した後、抗ヒトーィンシュリンゥサギ抗体一つや消しガ
ラスビーズ複合体の３０個をとって濃苛性ソーダ３０泌
中で３７０にて１の時間処理し、櫨遇して、櫨液中のタ
ンパク量を測定した。その結果抗ヒトーィンシュリンウ
サギ抗体１４８り夕／（タつや消しガラスビーズ）が結
合していた。実施例 ３ 免疫活性物質−ガラス複合体を用いる生理活性物質（ヒ
ト・インシュリン）の測定（サンドウィッチ法、ＥＩＡ
）実施例２で作製した抗ヒトーインシュリンウサギ抗体
一つや消しガラスビーズ複合体を用いて、サンドウィッ
チ法によるＥＩＡでのインシュリンの定量測定をした。
０．１％牛血清アルブミン、０．８５％ＮａＣＩ含有０
．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．２（以下、緩衝液Ａと記
載）を０．３叫を別々の試験管（０．９×１０弧）に入
れる。
．０１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．２（以下、緩衝液Ａと記
載）を０．３叫を別々の試験管（０．９×１０弧）に入
れる。
さらに実施例２で作製した抗ヒ＊ト・インシュリンウサ
ギ抗体−つや消しガラスビーズ複合体をそれぞれの試験
管に１個づっ加える。次いで緩衝液Ａでヒト・インシュ
リンを種々の濃度に希釈し、０．１肌づつをそれぞれの
試験管に加えて、室温で１時間振遼した。次いでアルカ
リフオスフオターゼ標識抗ヒトーィンシュリン抗体を０
．１の‘づつ加え１時間振鍵反応した。反応後生理食塩
水を約５の‘づつ加え、ミキサーで渡洋し上蒲をアスピ
レータ−を用いて吸引除去し洗浄した。この洗浄操作を
４回くり返した。酵素基質液（中外製薬Ｋ．Ｋ製品、Ａ
ＬＰ測定キットの試薬を使用）２．０の【づつを各試験
管に加え、３７℃、３び分間振縁反応させ、次いで発色
液（中外製薬Ｋ．Ｋ製品、ＡＬＰ測定キッドの試薬を使
用）を２．０泌づつ加え、３７０、３び分間振鐘反応さ
せた後、５７仇肋の吸光度を測定し、酵素活性を測定し
た。第１図は抗ヒトーィンシュリンゥサギ抗体一つや消
しガラスビーズ複合体を用いた時のヒトーィンシュリン
の定量曲線である。実施例 ４ 免疫活性物質一つや消しガラス複合体の性能評価１無処
理ガラスビーズ（つや消し処理をしてないガラスビーズ
、径６柵）を用いて、実施例２に従って抗ヒトーィンシ
ュリンウサギ抗体−無処理ガラスビーズ複合体を作製し
、実施例２で製造した抗ヒトーィンシュリンゥサギ抗体
一つや消しガラスビーズ複合体と結合タンパク量を比較
した。
ギ抗体−つや消しガラスビーズ複合体をそれぞれの試験
管に１個づっ加える。次いで緩衝液Ａでヒト・インシュ
リンを種々の濃度に希釈し、０．１肌づつをそれぞれの
試験管に加えて、室温で１時間振遼した。次いでアルカ
リフオスフオターゼ標識抗ヒトーィンシュリン抗体を０
．１の‘づつ加え１時間振鍵反応した。反応後生理食塩
水を約５の‘づつ加え、ミキサーで渡洋し上蒲をアスピ
レータ−を用いて吸引除去し洗浄した。この洗浄操作を
４回くり返した。酵素基質液（中外製薬Ｋ．Ｋ製品、Ａ
ＬＰ測定キットの試薬を使用）２．０の【づつを各試験
管に加え、３７℃、３び分間振縁反応させ、次いで発色
液（中外製薬Ｋ．Ｋ製品、ＡＬＰ測定キッドの試薬を使
用）を２．０泌づつ加え、３７０、３び分間振鐘反応さ
せた後、５７仇肋の吸光度を測定し、酵素活性を測定し
た。第１図は抗ヒトーィンシュリンゥサギ抗体一つや消
しガラスビーズ複合体を用いた時のヒトーィンシュリン
の定量曲線である。実施例 ４ 免疫活性物質一つや消しガラス複合体の性能評価１無処
理ガラスビーズ（つや消し処理をしてないガラスビーズ
、径６柵）を用いて、実施例２に従って抗ヒトーィンシ
ュリンウサギ抗体−無処理ガラスビーズ複合体を作製し
、実施例２で製造した抗ヒトーィンシュリンゥサギ抗体
一つや消しガラスビーズ複合体と結合タンパク量を比較
した。
結合タンパク量の測定は実施例２の方法に従って測定し
た。結果は表一１のとおりであった。表−Ｉ 表１の結果から判るように、つや消しガラスビーズを用
いた場合の方が、無処理ガラスビーズよりも、多量の免
疫活性物質を結合させることが出来る。
た。結果は表一１のとおりであった。表−Ｉ 表１の結果から判るように、つや消しガラスビーズを用
いた場合の方が、無処理ガラスビーズよりも、多量の免
疫活性物質を結合させることが出来る。
実施例 ５
免疫活性物質一つや消しガラス複合体の性能評価２無処
理ガラスビーズ（つや消し処理をしてないガラスビーズ
）を用いて、実施例２に従って抗ヒトーィンシュリンウ
サギ抗体一驚処理ガラスビーズ複合体を作製し、この抗
ヒト−インシュリンウサギ抗体−無処理ガラスビーズ複
合体と、実施例２で製造した抗ヒトーィンシュリンウサ
ギ抗体一つや消しガラスビーズ複合体とを用いて、実施
例３の方法に従って、それぞれヒトーィンシュリン＊を
定量測定し、測定感度、測定領域、測定精度を比較した
。
理ガラスビーズ（つや消し処理をしてないガラスビーズ
）を用いて、実施例２に従って抗ヒトーィンシュリンウ
サギ抗体一驚処理ガラスビーズ複合体を作製し、この抗
ヒト−インシュリンウサギ抗体−無処理ガラスビーズ複
合体と、実施例２で製造した抗ヒトーィンシュリンウサ
ギ抗体一つや消しガラスビーズ複合体とを用いて、実施
例３の方法に従って、それぞれヒトーィンシュリン＊を
定量測定し、測定感度、測定領域、測定精度を比較した
。
結果は表−２のとおりであった。
表−２
表−２の結果から判るようにつや消しガラスビーズを用
いて製造した免疫活性物質一つや消しガラスビーズ複合
体を使用した場合の方が、無処理ガラスビーズを用いて
作製した免疫活性物質一驚処理ガラスビーズ複合体を使
用した時よりも、預り定感度、測定領域、精度ともに極
めて優れている。
いて製造した免疫活性物質一つや消しガラスビーズ複合
体を使用した場合の方が、無処理ガラスビーズを用いて
作製した免疫活性物質一驚処理ガラスビーズ複合体を使
用した時よりも、預り定感度、測定領域、精度ともに極
めて優れている。
第１図は抗体−ガラス複合体を用いてインシュリンを定
量する場合の定量曲線を示す図である。
量する場合の定量曲線を示す図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 免疫活性物質を表面つや消し処理されたガラスの表
面に物理的又は化学的に結合させてなる免疫活性物質−
つや消しガラス複合体。 ２ シランカツプリング剤及び必要により架橋剤を介し
て免疫活性物質を表面つや消し処理されたガラスの表面
に化学的に結合させてなる特許請求の範囲第１項記載の
複合体。 ３ 免疫活性物質が抗原である特許請求の範囲第１項又
は第２項記載の複合体。 ４ 免疫活性物質が抗原である特許請求の範囲第１項又
は第２項記載の複合体。 ５ ガラスが、物理的に表面つや消し処理されたガラス
である特許請求の範囲第１〜第４項のいずれかに記載の
複合体。 ６ ガラスが、物理的に表面つや消し処理されたガラス
である特許請求の範囲第１〜第４項のいずれかに記載の
複合体。 ７ つや消しガラスが、１〜２０ｍｍの最大径を有する
ガラス体である特許請求の範囲第１〜第６項のいずれか
に記載の複合体。 ８ つや消しガラスが研摩材を吹きつけることによって
、物理的に表面つや消し処理されたガラスである特許請
求の範囲第５項記載の複合体。 ９ つや消しガラスが、フツ化水素酸およびフツ化アン
モニウム含有のつや消し液によって、化学的に表面つや
消し処理されたガラスである特許請求の範囲第６項記載
の複合体。 １０ つや消しガラスとシランカツプリング剤とを反応
させ、これと免疫活性物質及び必要により架橋剤を反応
せしめることを特徴とする免疫活性物質−つや消しガラ
ス複合体の製造法。 １１ 免疫活性物質−つや消しガラス複合体を含有して
なる体液中の生理活性物質測定用測定試薬。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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