JPS62194459A - 固相化試薬の安定化剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の目的〕 本発明は固相化試薬を乾燥条件下で長期間、免疫化学的
活性を損うことなく安定に保存するための安定化剤に関
するものである。

ここに固相化試薬とは免疫化学的測定に用いる抗体を固
相担体に物理的または化学的に結合さｉ不溶化した試薬
をいう。近年、ラジオイムノアッセイやエンザイムイム
ノアツセイが広く行なわれるようになり、すでに多くの
測定試薬が実用に供されている。これらの測定試薬の多
くは、抗原・抗体結合物を分離する手段として固相化試
薬を用いている。そこでこれらの固相化試薬の免疫活性
を乾燥状態で長期間安定に保つ方法がいくつか知られて
いる（例えば英国特許２１２４２３１号、西独特許２９
１０７０７号１日本特開昭５８−１２３４５９号、メソ
ッドインエンザイモロジ−（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ｅ
ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）　７３巻、２２４〜２４５頁、１
９８１年）。しかしイムノアッセイは増々高感度化の方
向にあり、それにともない固相化する抗原や抗体も増々
希薄な溶液を用いるようになって来ているので、従来法
では満足し得なくなり更に強力な安定化の手法の開発が
望まれていた。

本発明者らは乾燥状態で免疫活性低下の少ない固相化試
薬を開発すべく種々検討の結果、本発明を完成した。

〔発明の構成〕

本発明は、 １、　水溶性アミノ酸およびその塩並びにアンモニウム
塩から選ばれた１種または２種以上からなる固相化試薬
の安定化剤、または ２、■牛血清アルブミン並びに■水溶性アミノ酸および
その塩並びにアンモニウム塩から選ばれた１種または２
種以上からなる同相化試薬の安定化剤、 に関する。

ここに、水溶性アミノ酸としては例えば、グリシン、ア
ラニン、バリン、ロイシンのヨウ表中性アミノ酸、セリ
ン、人しオニンのようなオキシアミノ酸、メチオニンの
ようなイオウを含むアミノ酸、アスパラギン酸、グルタ
ミン酸のような酸性アミノ酸、リジン、アルギニンのよ
うな塩基性アミノ酸、プロリン、オキシプロリン、ヒス
チジンのような複素環を有するアミノ酸などをあげるこ
とができる。

また、これらの水溶性アミノ酸の塩としては例えばナト
リウム、カリウムのようなアルカリ金属との塩をあげる
ことができる。

アンモニウム塩としては例えば、塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウ
ム、炭酸アンモニウム、モリブデン酸アンモニウムのよ
うな無機アンモニウム塩、キ酸アンモニウム、酢酸アン
モニウム、シュウ酸アンモニウム、クエン酸アンモニウ
ム、酒石酸アンモニウムのような有機アンモニウム塩を
あげることができる。

本発明における固相化試薬の安定化剤は、水溶性アミノ
酸およびその塩並びにアンモニウム塩から選ばれた１種
でもよいが、これらの２種以上を併用して使用すること
もできる。

あるいは、上記の安定化剤に牛血清アルブミンを添加し
て使用することもできる。

本発明においては、牛血清アルブミンを添加した方が安
定化剤として好適である。

本発明の安定化剤の使用濃度は特に限定はないが、水溶
性アミノ酸およびその塩、アンモニウム塩については０
．０１〜１モル、好ましくは０．０２〜０．３モルであ
り、牛血清アルブミンは０．０１〜１チ、好ましくは０
．１〜０．５％である。

本発明による固相化試薬の安定化は前述の安定化剤を含
む水溶液に固相化試薬を浸漬し乾燥することによって得
られる。

本発明に係る固相化担体には免疫化学測定法に用いる全
ての固相担体を包含するが、好ましくはプラスチック、
ガラス、紙などから作られタチューブ、ビーズ、スティ
ック、マイクロタイタープレート状のものが用いられる
。固相担体と抗体の結合は物理的吸着または、化学的吸
着のいずれでもよい。

抗体を不溶化した固相化試薬の安定化剤を含む水溶液へ
の浸漬処理時間は３０分〜５０時間であるが、一般に低
温稈長時間を要する。好適には２℃で２４時間或いは室
温（１５℃）で２時間などである。固相化試薬の浸漬処
理後の乾燥は自然乾燥１通気乾燥、真空乾燥、凍結乾燥
のいずれの方法でもよい。

〔発明の効果〕

次に本発明について実施例をあげて詳細に説明する。

実施例１ 抗ウサギ血清ヤギ抗体溶液をトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７，３）に５μ１１７ｆｎｌの濃度に溶解させた液のう
ち、０．６−をポリスチレンチューブ（１０Ｘ　７０　
ｍａ　）に注入し、冷所で２４時間放置し不溶化した。

抗体溶液を吸引除去し、表１記載の０．１Ｍアミノ酸水
溶液（ｐＨ７，３）で洗浄後、再び所定の安定化剤溶液
である前記アミノ酸水溶液を１．５ｒＩＬｌ充填し１５
℃、２時間放置してコーティングした。安定化剤溶液を
吸引除去し、真空乾燥して、抗体不溶化チューブ（乾燥
品）を作った。なお、対照品として０．３％牛血清アル
ブミン（ＢＳＡ）処理したものを作製した。

室温（３０℃）で経時的に抗体活性を測定した。ポリス
チレンチューブに不溶化した抗ウサギ血清ヤギ抗体の活
性測定は次の様に行った。

即ち、抗体不溶化乾燥チューブにリン酸ナトリウム緩衝
液ｏ、３ｍｌ、グルコースオキシダーゼ標識１７−α−
ヒドロキシプロダステロン抗原ｉｏ、１ｄおよび抗１７
−α−ヒドロキシゾログステロンウサギ抗血清（５０万
倍液）　０．１　ｄを加えよく混和し、４℃で１夜イン
キユベートした。反応液を吸引除去したのち、リン酸緩
衝液で３回洗浄した。これにグルコース、ｐ−ヒドロキ
シフェニル酢酸、ワサビパーオキシダーゼを加え３７℃
で３時間インキュベートした。反応停止液０．１１を加
えたのちよく混和し螢光測定（ＥＸ３２５ｎｍ　＊　Ｅ
ｍ　４０７ｎｍ　）　ｌ、た。抗体活性（チ）は次式を
用いて計算した。

ここに、コントロールチューブは０．３　％　ＢＡＡ溶
液で浸漬したままのチューブである。

測定結果を表１に示す。

実施例２゜ 実施例１において、所定の安定化剤溶液として「前記ア
ミノ酸水溶液」の代りに「（前記アミノ酸水溶液＋０．
３　％　ＢＡＡ浴液）」を用いて同様に実施した。

対照品の調製および抗体活性の測定は実施例１と同様に
行なった。

測定結果を表２に示す。

表　　　　２ 実施例３゜ 抗ウサギ血清ヤギ抗体溶液をトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７，３）に５μｍ７７ｍ１の濃度に溶解させた液のうち
、０．６１Ｌｌをポリスチレンチューブ（１０×７０■
）に注入し、冷所で２４時間放置し不溶化した。抗体溶
液を吸引除去し、表３記載の０．１Ｍアンモニウム塩水
溶液（ｐＨ７，３）で洗浄後、再び所定の安定化剤溶液
である前記アンモニウム塩水溶液を１．５　Ｗ１１充填
し１５℃、２時間放置してコーティングした。安定化剤
溶液を吸引除去し、真空乾燥して、抗体不溶化チューｆ
（乾燥品）を作った。

対照品の調製および抗体活性の測定は実施例１と同様に
行なった。

測定結果を表３に示す。

表　　　　　３ 実施例４゜ 実施例３において、所定の安定化剤溶液として「前記ア
ンモニウム塩水溶液」の代りに「（前記アンモニウム塩
水溶液＋Ｑ、　３　％　ＢＳＡ溶液）」を用いて同様に
実施した。

対照品の調製および抗体活性の測定は実施例１と同様に
行なった。

測定結果を表４に示す。

表　　　４ 実施例５゜ 抗１７α−ヒドロキシプロダステロンウサギ抗血清をト
リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，３）に１０μｌ／７ｆｎｌ
の濃度に溶解させた液のうち、０．６コをポリスチレン
チューブ（１０Ｘ７０■）に注入し、冷所で２４時間放
置し不溶化した。抗体溶液を吸引除去し、トリス緩衝液
で洗浄後、表５記載の所定の安定化剤溶液を１．５　ｍ
ｌ！充填し２℃、２４時間放置してコーティングした。

安定化剤溶液を吸引除去し、真空乾燥して、抗体不溶化
チューブ（乾燥品）を作った。なお、対照品として０、
３％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）処理したものを作製し
た。

抗体活性の測定は、実施例１と同様に行なった。測定結
果を表５に示す。

表　　　　５ 実施例６゜ 抗サイロキシン・ウサギ抗血清をトリス−塩酸緩衝液（
ｐＨ７，３）に１０μ９〜の濃度に溶解させた液のうち
、０．６ＷＬｔをポリスチレンチューブ（１０Ｘ７０ｍ
）に注入し、冷所で２４時間放置し不溶化した。抗体溶
液を吸引除去し、トリス緩衝液で洗浄後、表６記載の所
定の安定化剤溶液を１．５ｄ充填し２℃、２４時間放置
してコーティングした。安定化剤溶液を吸引除去し、真
空乾燥して、抗体不溶化チューブ（乾燥品）を作った。

なお、対照品として０，３チ牛血清アルゾミン（Ｂ８Ａ
）処理したものを作製した。

抗体活性の測定はグルコースオキシダーゼ標ｗ１．１７
−α−ヒドロキシプロプステロン抗原液をグルコースオ
キシダーゼ標識サイロキシン抗原液に変え、実施例１と
同様に行なった。この場合、抗１７−α−ヒドロキシプ
ロダステロン・ウサギ抗血清は不要である。

測定結果を表６に示す。

表　　　　　６ 特計出願人三共株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、水溶性アミノ酸およびその塩並びにアンモニウム塩
   から選ばれた１種または２種以上からなる固相化試薬の
   安定化剤。 ２、（１）牛血清アルブミン並びに（２）水溶性アミノ
   酸およびその塩並びにアンモニウム塩から選ばれた１種
   または２種以上からなる固相化試薬の安定化剤。