JPS6271862A - 抗体または免疫学的活性物質を可逆的に固定するように変性されたタンパク質担体、および抗原または類似物の定量および精製に対するその応用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、酵素で標識された抗体または免疫学的に活性
の物質を可逆的に固定するように変性されたタンパク質
担体に関り゛るものである。また本発明は、これらの担
体の種々の用途、特に抗原、ハプテン、または一般的に
生物学的液中の免疫学的に活性の物質の定量および精製
に対する応用に関するものである。

（従来技術と問題点） 周知のように生物学的液中に低濃度で存在する物質の各
数四定漬は多年にわたって放射線免疫学的方法によって
実施されている。免疫学的に活性の物質の定量のために
放射線同位元素を使用する方法は実際に最も信頼性のあ
る方法とみなされているが、種々の欠点を有する。特に
、精度が低く、また得られた結果の再現性に欠番プる。

その上、放射線同位元素は高価であり、その使用には種
々の投与上の拘束があるので、最近になって研究者は酵
素の触媒活性を利用する他の宙吊法を研究するようにな
った。

これらの生物学的マクロ分子の触媒活性は実際にに＜知
られており、この活性の特異性は広い事もあるが、多く
の場合に狭い。また、遊ｔｍＭ索によるある種の物質の
定量は以前から使用されている。例えば、グルコースを
グルコースオキシダーピによって定吊し、これがグルコ
ースをグルタミン酸と過酸化水素とに変換１ノ、この過
酸化水素が比の５１分析用の着色剤を醸化する。同様に
、グルタミン酸はグルタミン耐デカルボキシラーゼによ
って定量され、これが炭酸ガスを発生し、これが公知の
手段によって検出される。

しかしさらに最近の技術は、免疫学的分析プロセスにお
いて介入する分子の標識下段として酵素活性を使用して
おり、抗原または抗体を放射線同位元素によってではな
く、グルコース　オキシダーピなどの酵素によって標識
し、この酵素の活性を比色側によって容易に定量する事
ができる。この酵素−免疫学と呼ばれる技術は大きな関
心を呼び起こしたが、処理される生物学的媒質の中に存
在するある種の化合物によって、使用される酵素の比色
計媒質との直接的接触を含まない物理−化学的技術を考
点せざるをえなくなった。

従って、人口タンパク質膜上に、Ｍ索によ−）でａ識さ
れ−た、特定の抗原の特異性抗体を固定し、このように
変性された膜の酵素活性を、研究される生物学的液の抗
１ｔｊｉ濃度と関連づける方法が提案されている（Ｓ、
Ｌ、ボアシラー、Ｇ、デスタ、Ｄ、　　トマ、“臨床分
析における生物学的キヤツチＶうの発展”、Ａｎｎ、　
Ｂｉｏｌ、　ｃｌｉｎ、、　　１９８５．４３゜１８３
−１９１参照）。グルコース電極とｐｏ２電極とを組合
わｕ１βグルコースの特異性酵素、グルコース　オキシ
ダーゼを含浸したポリプロティンフィルムから出発して
、ｐＯ２電極またはクラーク電極まｌ−はで−の他の任
意の電気化学的キャブヂャラ（Ｈ２０２電極または特異
性電極または若干の−＜オン）を含む酊索−免疫学的電
極を作成し、その９部に人［１タンパク質膜を固着し、
その膜上に、定量♂れる抗原の特異性抗体または酵素と
連結さｐ、た抗体を固定した。

言うまでもなく、酵素活性は、特にその活性部（ｆｆに
Ｊ３ける三次構造の一体性の保持に関連し、従って酵素
の固定モードは温和なよく制御されたプロセスを必要と
覆る。

従って、そのためには、担体中の介入、吸着またはイオ
ン結合、共有結合または網状化による固定法が考えられ
る。しかしこれらの方法け２、酵素が不可逆的に固定さ
れたタンパク質担体を生じ、従って酵素免疫学的電極を
使用する定量の場合には、各定量レベルにおいて、電極
に連結された酵素活性担体膜を交換する必要がある。こ
のような制約が定石プロセスを複雑化し、定量速度を遅
くして完全自動化を妨げる。

〔発明の目的および効果〕

本発明は、抗体を可逆的に固定する事のできる新規なタ
ンパク質担体を提案し、この１１１体からなる股に連結
された電極によって１回の定量または一連の定石を実施
した後に抗体が担体から容易に分離され得るようにした
方法によって前記の欠点を解決しようとするものである
。

また本発明の目的は、このような完全自動化し得る電極
による抗原またはハプテン、ウィルス、抗体またはその
他の免疫学的活性物質の定Ｍ方法を提供するにある。

また最後に本発明は、種々の免疫学的活性物質の同一担
体による精製に利用され得るタンパク質担体を提供する
にある。

そのため本発明の目的は、生物学的活性物質を可逆的に
固定するように変性されたタンパク質担体において、前
記担体はその表面に、抗体または生物学的活性物質と可
逆的に結合する事のできる配位子からなる近接可能の部
位を含むようにしたタンパク質担体にある。

タンパク質担体は、電気−酵素型キャプチャラの膜とし
て当業界において使用される型の任意の担体とする事が
できるが、好ましい担体は、十分な機械的強度を与える
事のできるプラスチックまたは類駕物質の膜に付着され
たブタ皮ぜラチンによって構成される。

配位子は例えば、予め還元された免疫グロブリンのチオ
ール基、または免疫グロブリンに連結した物質、例えば
還元型リボヌクレアーゼのチオール基と共に二硫化結合
を成１′事のできるヂＡ−ルｉを有するものとする。

この場合、担体に連結された杭体−抗原複合体の“離脱
１は、例えば、メルカプトエタノールまたｉｃｔジヂη
トレイトー・ル、または変性された担体の状態を変更す
ることなく二硫化結合を切ることのできるその他の任意
の化合物によって実施される。

また本発明によるタンパク質担体の配位子は、抗体に連
結した第２酊索、例えばβ−ガラクトシダーゼの特異性
阻害剤を成すアミノフェニル　チオ　βガラクトシド（
ＡＴＰＧ）によって構成される事ができる。

この場合、担体とその上に固定された抗体−抗原複合体
との分離は、抗体に連結した酵素の脱着剤、β−ガラク
トシダーゼの場合には、尿素、ジチオトレイトールまた
はグアニジンを用いて実施される。

抗原または類似物の定石のために本発明の変性担体を使
用するには、それ自体公知の型の２技術が使用される。

すなわち“リー〕！ドイッチ”法および“競争”法が使
用される。

放射線−免疫技術において非常に使用されるいわゆる゛
サンドイッチ”法においては、定量される抗原の特異性
抗体が担体上に固定されており、この担体を定石される
抗原のｒａ液液中浸漬し、洗浄の後、これを例えばグル
コース　オキシダーゼによって適当に“標識′”された
対応の抗体と接触さゼる。次に、この担体の股を備えた
クラーク電極またはその伯の電極を用いて、膜のグルコ
ースーオキシグーゼ活性を測定する。ａ質の抗原濃度は
測定されたグルコース活性に比例している。この定量法
はｍ１単であって、精製抗原を必要としないので、純粋
状態の抗原の製造と安定化の困難さとその取り扱い中の
危険性を考慮ツればこれは非常に効果的である。

他の方法として、いわゆる“競争”法を使用する事がで
きる。これは、チオール基を含む担体上に予め同定され
た抗体を飽和するために、定量される抗原が酵素によっ
ＩＩａ識された精製抗原と競争ざ「らねるのでこのよう
に呼ばれる。従ってこの場合、＋ｊンドイツチ法と同様
に本発明によるｔｎ体膜をクラーク電（〜またはその他
の型の電気化学的キャブチＶうに婦えて、標識された抗
原の酵素触媒反応を測定する。例えば゛ノボヌクレアー
ゼの場合には発生される閣素最を測定する。

この方法は業界公知のものであって、特にハプテンの定
量に使用される。このハプテンの抗原性は、その分子が
場合によっては中間化合物を経由して不活性タンパク質
ど結合する事によって得られる。

従ってまた本発明は抗原または類似物の定量−のために
前述の変性担体を利用づろ方法にＪ３いで、測定される
抗原の特異性抗体を前記担体の膜上に固定する段階と、
電気化学的キｔ・ブチ１戸う上にこの膜を装＠するＩＩ
２階と、前記の膜を定量される抗原の溶液の中に浸漬し
次に酵素によ−）で標識されたこの抗原の特異性抗体の
溶液の中に浸漬する段階と、前記酵素の触媒反応を前記
電極によって測定する段階とを含む方法にある。

また変形として本発明の目的番よ、抗原または類似物の
定量のために前述の変性担体を利用する方法において、
測定される抗原の特異性抗体を前記担体の膜上に固定す
る段階と、電気化学的キャプチャラ、例えばクラーク電
極の上にこの膜を装着する段階と、定量される抗原と酵
素によって標識された抗原との溶液の中に前記の膜を浸
漬する段階と、前記酵素の触媒反応を前記電極によって
測定する段階とを含む方法にある。

前記の再変形において、定量操作〃終了したときに抗原
−抗体対はこの担体に影響しない脱着剤によってタンパ
ク質担体から離脱されなｔＪればならない。この担体は
再使用されるからである。これに対して、脱着剤が標識
酵素を変性しても差し支えない。これらの酵素は再使用
されないからである。。

前記の２種類の変性担体について出願人の行ったテス１
−の結果、クラーク電極上で使用された膜の脱着剤によ
る再生は後続の各テスト中のその活性に顕著に影響する
ことな（、これは相異なる媒ｒｔ聞のために同一のキャ
ブブヤラ（電極士膜）を使用しまた測定ブＯセスを完全
に自動化り゛る事ができるという大きな利点を示す。

（実施例） 以下、本発明を図面に示す二つの実施例について詳細に
説明する。この付図は本発明による定量プロセスにＪ３
いて使用される電気−酵素型キャブチｐうを丞す。

まず第１実／＃：態様について述べれば、この実施態様
においてタンパク質担体は抗体（免疫グ巳プリン）と共
に二硫化結合を形成するチオール基を９有する。

この担体は下記のようにして：ｌｉｌ製される。

ｐＨ６，８，９，１モルのリン酸塩緩衝液１００Ｉｄｌ
の中で１時間、ブタ皮ゼラチン５グを膨潤させた。使用
されたゼラチンはルスロ（Ｒｏｕｓｓｅｌｏｔ　）によ
って販舟されているものであって、２４０プルームのゲ
ル力を有する。これは、１０℃±０．１℃で１６〜１８
時間熟成されたのらに６．６７％の濃度のゲルの中に直
径角１／２秒のプランジャを４ＪＩＩｌＩ押し込むため
に加えられるｇ数に対応する（Ａ、ルスロ、Ｉｎｆ、　
Ｔｃｃｈ、　、　１９７３．０．８による）。２ このゲルを５重量％の１１瓜で使用する。これにより加
水分解の際にすぐれた粘度が得られる。

この溶液゛を・、ずぐれた溶解度の得られるまで５０℃
の温水浴中に配置する。すぐれた機械的安定性を示す膜
を得るように、この溶液１−を３５ｃｉの表面積をポリ
プロピレンフィルムの上に忌速にＩＰｔ張づる。このフ
ィルムは、ゼラチン薄膜の接着性を改良１−るため、予
めｐＨ６，３，０，０１Ｍのリン酸塩緩衝液中の０．５
９．＞硫酸ラウリル溶液をもって処理しである。

次に、乾燥フィルムｈ；得られるまで周囲空気中で乾燥
した。

そこで、ジアルデヒド、すなわちグルタルアルデヒドを
もってゼラチンフィルムの活性化（いわゆる“なめし”
）４実ｆＩｌ！ｉする。

そ１７）　／コめ、ｐＨ５，２，０、０１Ｔ：）、ｔ（
Ｄ　’）　ンＭ塩緩衝液中のグルタルアルデヒド１ψｒ
％溶液の中に乾燥フィルムを５分間浸漬する。次に魚溜
水τ数回洗浄して余分の不飽和重合体の形、すなわらポ
リグルタルアルデヒドの形に反応して、リジンの２アミ
ン残塁の間に共役結合による安定したアミン結きを生じ
る事が示された（これは、なめし処Ｌ１１！後の膜の黄
色化を説明する）。ポリグルタルアルデヒドの分子の沿
ったアルデヒド基の分布はこの分子の相対的可撓性に関
連し、結合されるタンパク質とアミン担体との間の１１
遍の確率、従つで反応の確率を増大する（平均的ゼラチ
ンは１０００残基あたり３５アミン残基（リジン）を含
有１゛る）。このポリグルタルアルデヒドの長さは媒質
のｐＨ、グルタルアルデヒドの濃度に依存する。

従ってグルタルアルデヒドによるこのなめし処理の後、
−Ｃ／＜　　　および−〇〇〇Ｈ塁を有するト１ タンパク質膜が得られる。

膜をチオール化するため、蒸溜水中０．２％Ｍのシステ
ィン溶液の中にこの膜を浸漬する。チオール化剤として
、Ｎアセプル　ホモシスティンチオラクトン、無水メル
カプト−コハク酸アセチル、メルカプドブプルイミダ−
１−１または５ＰＤＰ（Ｎ　　スクシンイミジル）−３
−（２−ビリジルジヂ号）−プルビオナートを使用する
事ができよう。しかし、 好ましいチオール化剤である。

このようにして、二硫化結合を成すに適したＯＯＨ −ＣＯＯＨ基　と　、　　−ＣＨ＝　　Ｎ　　−ＣＨ−
ＣＨ２ＲＨ基とを有するチオール化膜が得られる。

従って、先に述べたように、予めそれ自体−Ｓ　Ｉ−１
基を右するように処理された抗体をブオール基の上に可
逆的に固定する事ができる。このような基を右する酵素
と結合された抗体、例えばリボヌクレアーゼと結合され
た免疫グロブリン、また・Ｌ＝’　ｉＷ元処理を受けた
抗体が問題となる。

このような還元された共役体を構成ジるためには、例え
ばカド、［ｕｒ、Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　、　６２．
２８５．１９７６によって開発された方法により家つリ
゛ギの免疫グロブリンと共に二硫化結合を成すのに役）
°Ｌつ。望よしくは、得られたヂオール基の安定性を増
大するため、１１！ｌｉ（のＥＤ１’Ａ（エブレンジア
ミンテトう酢酸）を含有する緩衝液を使用する。

このようにして１ｑられＩこチンド−ル化担体を抗原の
定石に使用するため、何区に示す型のｐ０２クラーク電
極の頂部に、この担体から調製された膜を備える。この
電極は、Ａａ／ＡａＣｌ型の参照電極に対して負に成極
された白金の非腐蝕性マイクロ電極１を含む。電極１の
本体２の中に配置され、ガスに対して選択性の例えばプ
ロピレンの疎水性膜３によって、被処理ＩＩ、質から分
離されている。この膜３は電極の頂部に対して当接させ
られ、また酸素に対して非常に微弱な透過係数を有する
。

電極間の電位差は６３０ｍＶであり、これは正極におけ
る酸素の還元電流に対応する。この電流は酸素の分圧に
比例している。この測定は２５℃で実施され、Ｅ）０２
の分析器のゼ０位はジヂオニット溶液を、使用して調整
された。

測定を実施するため、チオール化膜を表面積１ｃｄのデ
ィスク状に切１１ｉＩＪる。これらのディスクを、１時
間還元されたばかりのＩＱＧ溶＠（免疫グロブリン）の
中に浸漬する（二硫化結合の最大限形成を得るように最
初に非常に長い時間を使用するが、原則としてこの結合
は急速に生じなｃ）ればならない）。

つぎに、これらのディスクを最大応答を得るように低希
釈＋ｆ（１／１０）のグルコースオキシダーゼの共役体
５０μｍと２時間接触させ、丁寧：こ洗浄する。

このディスク４を疎水性膜３の外側面と接触するように
電橋本体２上に配とし、継手５をもつτ組立体を密封す
るａ躾によって閉鎖された電極本体の１／３の高ざまで
電解質を））１だし、つぎに電極を導入し、その末端に
測定しル６を密着する。

この測定セル６は、ポンプによって各種の液を循環させ
るための入ロアと出口８とを含む。

まず、リン酸塩緩衝液（ｐＨ６，８；０．０１Ｍ；流ｆ
ｆ１１ｄ／分〉を通過させる。信号が安定するのを待ち
、そこで基質（ｐＨ６，８，０，０１Ｍのリン酸塩中５
０ｇ／ｌグルコース）を通過させる。使用された緩衝液
のｐＨは、グルコースオキシダーゼの最大活性に対応す
る。

酵素の動力学の定常相に達したとき、再び緩衝液を通過
させ、新たに測定を実ｌＩＩする事ができる。

還元へ〇／ＡＣ？Ｕ合体からの模の分離は、メルカブト
エタ、′−ル溶液またはジチＡ　ｈレイ１〜−ルによっ
て実施される。二硫化結合の裂間破［ｆＦｉ時間はこれ
らの反応体のｆｌ　Ｉｆｆに依存している。

次に本発明の第２実施態様について説明づる。

この場合、タンパク負担体の配位子は酵素、アミノフェ
ニル　チオβ−ガラクトシド（略号、ＡＴＰＧ）からな
り、この酵素は、抗体の結合された第２′Ｍ素、β−ガ
ラクトシダーゼの特異性阻害剤を成す。

本発明の前記の第１実施態様と同様に、タンパク負担体
として、ブタ皮ゼラチンを使用する。これは次の二重の
利点を有する。

（１）このゼラチンはＡＴＰＧの固定に使用され得る官
能基を右する。

ゼラチンはコラーゲンの加水分解誘導体であって、１０
００残基に対して３５アミン残基と１２０カルボン酸残
基とを有し、その３５％はアミド化されている。

コラーゲンの塩基性加水分解は小割合のアミド官能基し
か含有しないゼラチンを生じる（ｐＨイソエレクトリッ
ク酸）。コラーゲンの酸性加水分解は、アミド官能基の
大部分が保存されるので、コラーゲンのｐＨ；に近しゝ
ＤＩ−１ｉを有するゼラチンを生じる。

下記において使用されるのはこの後者の加水分解である
。事実、後で述べるように２アミン官能基を結合するグ
ルタルアルデヒドによるゼラチンの網状化に際して、こ
の網状化が５１Ｊｊ率的であるために最大限のアミン官
能基を有する必要がある。

、（２）ぜラヂンは水よりも２５倍の酸素を貯蔵する事
ができる。従ってゼラチンは反応に対する酸素タンクの
役割を成づ。これににす、反応媒質の０２ｉ１１度の変
動に門連する測定上の制約から曲数される。。

タンパク負担体を製造するため、２５０ブルームの硬度
を有するブタ皮ゼラチン５％を蒸溜水の中で１時間常温
でＷ８潤させる。

ゼラチンの完全ゲル化まで（１時間）４０℃恒温槽の中
に配置した後、１ｄのゼラチンを３５ｃＩＩのポリプロ
ピレンフィルム上に展張する。このポリブＯピレンフィ
ルムは予め０．５％硫酸ラウリル溶液によって処理され
ている（ゼラチンの良好な接着を可能とする界面活性剤
）。膜の厚さは、その機械的特性を変更しないようにし
て電極の良好な応答を得るように選択される。

次に膜を常温で１時間乾燥さ往、次に乾燥フィルムを得
るまで冷空気で２時間乾燥する。

次にグルタルアルデヒドによる“なめし′°によってゼ
ラチン膜の活性化を実施する。そのｌこめ、０、ＯＩＭ
％ＤＨ５，２（１）’）ンＭ塩ｖｉｋ液中０．５％グル
タルアルデヒド溶液を乾燥膜上に５分間展張Ｊる。次に
、余分量のグルタルアルデヒドが反応しないように、前
記の膜を蒸溜水で１−分に洗浄する。

グルタルアルデヒドは、ゼラチンのアミン官能幕間の兵
役結合を成して膜の良好な機械的強さを生じると共に、
ＡＴＰＧの固定に使用されるアルデヒド官能基を作るよ
うに作用する。

次にこの膜を０．１Ｍ酢酸中０．１Ｍクリシルグリシン
溶液をもって１時間、常温て゛処理する。

０．０″ｉＭ、ｐｌ−１５．７のリンＭ１旧■１液をも
って洗浄する。

次にＯ，ＯＩＭ、ｐＨ１５，７リン酸坦緩街液中の、７
ｒｒｉＭの△１−　Ｐ　Ｇと、１４０ｍＭの１−丁ブル
−３（３−ジメチルアミノ′プロピル）カルボジイミド
との混合物をもって、膜を１２時間４℃で処理する事に
よりＡＴＰＧの固定を鶏する。同一のリン酸塩緩衝液を
６って洗浄する。

０．０１Ｍ、　ｐＨ５，７のリン酸ｉ！２緩衝液甲２Ｍ
のグリシン溶液をもって膜の残留活性化カルボン酸官能
基を２時間常温で飽和さけ、次に０．１Ｍ、ｐＨ９のホ
ウ酸緩酌液中０．１Ｍのホウ水素化ナトリウムによって
膜上に残留Ｊるアルう−じドを還元する。

このようにして１！：４られた膜を蒸溜水の中にヂツ化
ナトリウムＮ　ａ　Ｎ　３　＠どの０．０２％の抗［２
ｉ　Ｆｄ＋と共に保存する。

担体上に固定されたＡ　Ｔ　Ｐ　Ｇは、抗体に結合され
た第２酵素、β−ガシクトシダーゼの特異性■害シ）を
なし、このよ゛）にして抗体は膜Ｆに固定され、また定
量されろ抗原とグルコースオキシダーゼによって標識さ
れた抗原をこの抗体と競争的に反応ざ”Ｊる。

１１体上にβ−ガラクトシダーＵを固定−ノ′るため、
０．１Ｍ、ｐニー１６．８のリン酸塩緩衝液中の７０μ
ｍのβ−カライノ１〜シダーピ（アスペルギルス・Ａリ
ビ・シグマ、３　＃Ｉ９　／　ｍＲＪ３よび５μ／ｍ９
）を各型の膜Ｉ　Ｃｌ１−１：で１時間培養する。次に
同一の緩衝液で膜を洗浄する。

担体上に固定されたβ−ガラクトシダー１のｒｉｌが固
定されたＡＴＰＧの；（１に比例りる１）を確認づる。

使用されたグルコースオキシダーゼｌ役体は下記のよう
にして調製される。

グルタルアルデヒドによってグルコースオキシダーゼの
アミン官能基を活性化するため、、２５％のグルタルア
ルアヒトを含有する０、１Ｍ、ｐＨ６，８のリン［ａ緩
Ｖ１１液１　ｍＱの中で、１０■のグル」−スオキシダ
ーゼ（アスペルギルス・ニガー、シグマ、１６μ／η）
を常温で１８時間培養する。

ゲル上か過によってグルタルアルデヒドの余分量を除去
する。

活性化されたグルコースオキシダーゼを、２巧の家ウサ
ギ抗体（マイルス）を含有うる０、１５ＭのＮａＣｌ溶
液０．５ｍと２ｉ簡間４℃ｉ”ｒ？を触させる事によっ
て結合反応を実ｆＭちる。グルコースオキシダーゼ上に
存在するアルデヒド官能Ｌ１が抗体のアミン官能基と反
応する。

この結合反応は、０．２Ｍリジン０．５＋ｎｅを２＋Ｉ
ｊ　（＋ｉｌ　４°Ｃで加え、グルコースオキシダーゼ
上に；ｊｌ餠残存するアルデヒド官能桔を飽和する事に
Ｊ、って停止される。

０．１Ｍ、　ｐｉ１６．８のリン酸塩緩衝液をもって平
衡されたセファデックスＧ２００カラ、　（σ録商？Ａ
）上に試料を通過させる事により共役体を精製した。

従って前述のように、ＡＴＰＧを固定しまたβ−ガラク
トシグーゼを固定した肱を電気化学的−■ャブチャラと
共に、標識された抗原の存在における他の抗原の競争法
による定量のために使用し、電気化学的キｐブヂャラは
演費された酸素量の測定によってグルコースオキシダー
ゼの活性を定量する事がでざる。

一連の測定の後に、抗体−抗原対の膜からの離脱は８Ｍ
尿素による洗浄によって実膿される。

【図面の簡単な説明】

付図は本発明の方法を実施りるに置の断面図て・ある。 １・・・クラーク電極、２・・・本体、３・・・疎水ｔ
／ｌ膜、４・・・ディスク状膜、５・・・継手、６・・
・測）とセル、７・・・入口、８・・・出口。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、生物学的活性物質を可逆的に固定するように変性さ
   れたタンパク質担体において、前記の担体は、抗体また
   は生物学的活性物質と可逆的に結合する事のできる配位
   子によって構成された近接可能な部位をその表面に有し
   、プラスチックフィルム、または類似物、特にポリプロ
   ピレンフィルムに付着したブタ皮ゼラチンを含むことを
   特徴とする変性タンパク質担体。 ２、配位子は、固定される抗体、特に予め還元された免
   疫グロブリンのチオール基、または固定される抗体、特
   に免疫グロブリンと結合された物質のチオール基と共に
   二硫化結合を成す事のできる少なくとも１つのチオール
   基を含むことを特徴とする特許請求の範囲第１項による
   変性タンパク質担体。 ３、配位子は、固定される抗体に結合された第２酵素の
   特異性阻害剤を成す酵素を含むことを特徴とする特許請
   求の範囲第１項による変性タンパク質担体。 ４、測定される抗原の特異性抗体を前記担体の膜上に固
   定する段階と、クラーク電極などの電気化学的キャプチ
   ャラをこの膜に装着する段階と、定量される抗原の溶液
   中に、つぎに酵素によって標識されたこの抗原の特異性
   抗体の溶液中に前記膜を浸潰する段階と、前記酵素の触
   媒反応を前記電極によって測定する段階とを含むことを
   特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第３項のいずれか
   による担体を抗原または類似物の定量に使用する方法。 ５、測定される抗原の特異性抗体を前記担体の膜上に固
   定する段階と、クラーク電極などの電気化学的キャプチ
   ャラをこの膜に装着する段階と、定量される抗原と酵素
   によって標識された抗原との溶液中に前記膜を浸漬する
   段階と、前記酵素の触媒反応を前記電極によって測定す
   る段階とを含むことを特徴とする特許請求の範囲第１項
   乃至第３項のいずれかによる担体を抗原または類似物の
   定量に使用する方法。 ６、定量の終了時にタンパク質担体に影響しない脱着剤
   によって、形成された抗原−抗体対をタンパク質担体か
   ら離脱させることを特徴とする特許請求の範囲第４項ま
   たは第５項のいずれかによる方法。 ７、前記脱着剤は、二硫化結合を破断する事のできる化
   合物、特にメルカプト−エタノールまたはジチオトレイ
   トールの溶液を含むことを特徴とする特許請求の範囲第
   ２項による担体の特許請求の範囲第６項による利用方法
   。 ８、前記の脱着剤は抗体に結合した酵素の脱着剤を含む
   ことを特徴とする特許請求の範囲第３項による担体の特
   許請求の範囲第６項による方法。 ９、抗体に結合した酵素がβ−ガラクトシダーゼである
   場合、前記脱着剤は尿素、ジチオトレイトールおよびグ
   アニジンからなるグループから選ばれることを特徴とす
   る特許請求の範囲第８項による方法。 １０、免疫学的活性物質の同一担体による精製のために
   特許請求の範囲第１項乃至第３項のいずれかによるタン
   パク質担体を利用する方法。