JPH10260187A - 複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異的な抗体の測定法ならびに測定試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａに対する抗体の
ような、複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に
特異的な抗体のみを選択的に測定することを可能とす
る。 【構成】複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に
特異的な抗体を含有すると推測される試料に、前記の抗
原の共通抗原決定基を有する人工的に調製した第１の抗
原、及び前記の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決
定基を有しかつ第１の抗原が有する対立亜型抗原決定基
は有しない人工的に調製した第２の抗原を接触させ、こ
れにより形成された「第１の抗原−抗体（複数の亜型が
存在する抗原の共通抗原決定基に特異的な抗体）−第２
の抗原」の結合を検出する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、複数の亜型（サブ
タイプ）が存在する抗原に特異的な種々の抗体のうち、
全ての亜型が共通に保有する共通抗原決定基に特異的な
抗体を選択的に測定する測定方法及び測定試薬に関する
ものである。本発明は、特に臨床検査分野における疾病
の診断等に有用なものである。

【０００２】

【従来の技術】ＨＢｓ抗原に特異的な抗体である抗ＨＢ
ｓ抗体はＢ型肝炎診断のマーカーとして、酵素免疫測定
法（ＥＩＡ、ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩ
Ａ）、赤血球若しくはゼラチン粒子等を用いる粒子凝集
反応測定法又はラテックス凝集反応測定法等を原理とす
る測定試薬により広く測定されている。また、近年はＢ
型肝炎ワクチンの普及により、ワクチンの効果判定の指
標として抗ＨＢｓ抗体の測定が行われている。

【０００３】Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）の表面抗原で
あるＨＢｓ抗原は、ＨＢｓ抗原の全ての亜型が共通に保
有する共通抗原決定基ａと、その亜型により、ｄ又は
ｙ、そして、ｒ又はｗ、のうちのいずれかの抗原決定基
が規定される２組の対立亜型抗原決定基を有し、血清学
的に４つの主要亜型（ａｄｒ、ａｄｗ、ａｙｒ及びａｙ
ｗ）に分類されている。ＨＢｓ抗原のタンパク質は２２
６個のアミノ酸からなり、共通抗原決定基ａはＮ末端よ
り１２４−１４７番のアミノ酸が４つのシステインによ
り立体構造をとることにより規定されている。また、対
立亜型抗原決定基ｄ又はｙは、Ｎ末端より１２２番のア
ミノ酸がリジンの時にｄと規定され、これがアルギニン
の時にｙと規定されている。そして、対立亜型抗原決定
基ｒ又はｗは、Ｎ末端より１６０番のアミノ酸がアルギ
ニンの時にｒと規定され、これがリジンの時にｗと規定
されている。〔岡本ら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１４８巻，５００〜５０
４頁，１９８７年、岡本ら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖ
ｉｒｏｌｏｇｙ，６１巻，３０３０〜３０３４頁，１９
８７年〕（図１参照）

【０００４】

【図１】

【０００５】抗ＨＢｓ抗体は、Ｂ型肝炎ウィルスの中和
抗体とされているが、Ｂ型肝炎ウィルスのＨＢｓ抗原の
亜型によらずに感染防御能（ｃｒｏｓｓ ｐｒｏｔｅｃ
ｔｉｏｎ）を有するのは、共通抗原決定基ａに対する抗
体のみであると考えられている。〔Ｍｕｒｐｈｙら，Ｉ
ｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，３巻，３７８〜３８１頁，
１９７４年、Ｓｚｍｕｎｅｓｓら，Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅ
ｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎ
ｅ，３０７巻，１４８１〜１４８６頁，１９８２年〕 また、Ｊｉｌｇらは、Ｂ型肝炎ワクチンにより獲得され
た抗ＨＢｓ抗体中の共通抗原決定基ａに対する抗体の含
有率を検討した結果、１２〜９８％（平均４９％）と広
く分布して個体差が大きいことを報告し、従って、Ｂ型
肝炎ワクチンにより獲得された抗ＨＢｓ抗体による感染
防御能の判定には、抗ＨＢｓ抗体の総量よりも、Ｂ型肝
炎ウィルスのＨＢｓ抗原の亜型によらずに感染防御能を
有する、共通抗原決定基ａに対する抗体の量を知ること
がより重要であると記載している。〔Ｊｉｌｇら，Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇ
ｙ，１３巻，１７１頁，１９８４年〕

【０００６】しかし、従来の抗ＨＢｓ抗体測定方法及び
測定試薬において、赤血球やゼラチン粒子等を用いた粒
子凝集反応やラテックス凝集反応による測定では、粒子
担体に固定化したＨＢｓ抗原は１種類（単一の亜型ある
いは一定組成の亜型混合物）であり、また放射免疫測定
法や酵素免疫測定法による測定でも、固相に固定化した
ＨＢｓ抗原と検出のための標識を施したＨＢｓ抗原は同
一種類（単一の亜型あるいは一定組成の亜型混合物）で
あった。従って、ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａに対す
る抗体（抗ＨＢｓ・ａ抗体）とともにＨＢｓ抗原の対立
亜型抗原決定基（ｄ、ｙ、ｒ又はｗ）に対する抗体（抗
ＨＢｓ・ｄ抗体、抗ＨＢｓ・ｙ抗体、抗ＨＢｓ・ｒ抗体
又は抗ＨＢｓ・ｗ抗体）もＨＢｓ抗原と結合しうるの
で、測定された試料中の抗ＨＢｓ抗体量は共通抗原決定
基ａに対する抗体と、測定試薬に使用しているＨＢｓ抗
原の亜型の対立亜型抗原決定基に対する抗体（例えば、
測定試薬に使用しているＨＢｓ抗原の亜型がａｄｒであ
れば抗ＨＢｓ・ｄ抗体と抗ＨＢｓ・ｒ抗体）の総和を示
すことになる。そのため、従来の抗ＨＢｓ抗体測定方法
及び測定試薬では、試料中の抗ＨＢｓ・ａ抗体のみを選
択的に測定することができず、測定された抗ＨＢｓ抗体
量は必ずしも感染防御能を反映してはいないものであっ
た。（図２参照）

【０００７】

【図２】

【０００８】また、従来の抗ＨＢｓ抗体測定方法及び測
定試薬における問題点として、測定試薬間で同等の検出
感度を有するにもかかわらず、測定試薬間の判定の不一
致が少なからず生じることが指摘されてきたが、これも
各測定試薬で使用されているＨＢｓ抗原の亜型が異なる
ことにより、試料中の抗ＨＢｓ・ａ抗体は共通して測定
されるものの、対立亜型抗原決定基に対する抗体は測定
試薬により測定される場合と測定されない場合があるた
め、測定され得る総抗ＨＢｓ抗体量に差が生じることが
原因と考えられており、現状では避けられないこととさ
れてきた。

【０００９】一方、特許第２５２４１０１号公報では、
ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａに特異的な抗体を測定す
る方法が提示されている。この方法では、固相上に固定
化したＨＢｓ抗原の亜型と、マーカーで標識化したＨＢ
ｓ抗原の亜型が各々異なるので、ＨＢｓ抗原の共通抗原
決定基ａに対する抗体を特異的に測定することができ
る。しかし、この方法に使用するＨＢｓ抗原は、Ｂ型肝
炎ウィルスの保菌者（キャリア）より集められた血清も
しくは血漿より精製されたものである。Ｂ型肝炎ウィル
スはＤＮＡウィルスであるが、複製において逆転写過程
を経るために、持続感染中に変異が生じる頻度はＲＮＡ
ウィルスに匹敵するとされている。〔岡本ら，Ｊａｐａ
ｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ
ｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，５７巻，２３１〜２３６
頁，１９８７年〕 従って、このようなＢ型肝炎ウィルス保菌者（キャリ
ア）由来のＨＢｓ抗原は、共通抗原決定基ａ領域及びそ
の周辺に変異の生じたＨＢｓ抗原を含有している可能性
が高く、このようなＨＢｓ抗原は、抗ＨＢｓ・ａ抗体と
の反応性が消失あるいは低下していることが報告されて
いる。〔岡本ら，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ，３２巻，２６４〜２６８頁，１９９２年、Ｗａｔｅ
ｒら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎ
ｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，９０巻，２５４３〜２５４７
頁，１９９２年、山本ら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉ
ｒｏｌｏｇｙ，６８巻，２６７１〜２６７６頁，１９９
４年、Ｈｏｕら，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２１巻，２７
３〜２７８頁，１９９５年〕 このため、Ｂ型肝炎ウィルス保菌者（キャリア）由来の
ＨＢｓ抗原は、共通抗原決定基ａの抗原性について、均
一でないことが予想される。また、ＨＢｓ抗原の亜型に
ついても、ａｄまたはａｙとしか示されておらず、ｒ／
ｗについては確認されていないため、固相に固定化した
ＨＢｓ抗原とマーカーで標識化したＨＢｓ抗原が同一の
対立亜型抗原決定基（ｒ又はｗ）を含有する可能性があ
り、抗ＨＢｓ・ａ抗体とともに亜型抗原決定基抗体（抗
ＨＢｓ・ｒ抗体又は抗ＨＢｓ・ｗ抗体）が同時に測定さ
れている可能性も否定できない。以上のことから、抗Ｈ
Ｂｓ・ａ抗体を特異的に測定する目的で使用するＨＢｓ
抗原には、均一性、特異性の点で、さらに改良が必要と
される。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】前記のような現状に鑑
みて本発明者らは、複数の亜型が存在するＨＢｓ抗原に
対する抗体である抗ＨＢｓ抗体の測定方法及び測定試薬
において、下記のような課題を解決することを目的とし
て鋭意研究を行った。

【００１１】 従来の抗ＨＢｓ抗体測定方法及び測定
試薬により測定された抗ＨＢｓ抗体量は、ＨＢｓ抗原の
共通抗原決定基ａに対する抗体（抗ＨＢｓ・ａ抗体）
と、ＨＢｓ抗原の対立亜型抗原決定基に対する抗体の総
和を示しており、それぞれの亜型のＨＢｓ抗原を有する
Ｂ型肝炎ウィルスの全てに対して感染防御能を有する抗
ＨＢｓ・ａ抗体の単独の量は不明であるので、必ずしも
感染防御能を反映しているものではなかった。よって、
Ｂ型肝炎ウィルスに対する感染防御能を反映する抗ＨＢ
ｓ・ａ抗体を選択的に測定できるようにする。

【００１２】 Ｂ型肝炎ウィルスに対する感染防御能
を知るための抗ＨＢｓ抗体の測定において、従来の抗Ｈ
Ｂｓ抗体測定方法及び測定試薬がそれぞれ異なる亜型の
ＨＢｓ抗原を使用していることを原因とする、同等の検
出感度を有する抗ＨＢｓ抗体測定試薬間の判定の不一致
を解消する。

【００１３】 Ｂ型肝炎ウィルス保菌者（キャリア）
由来のＨＢｓ抗原よりも、共通抗原決定基ａの抗原性に
ついて均一性が高く、及び、全ての亜型抗原決定基が確
認されているＨＢｓ抗原を調製することにより、抗ＨＢ
ｓ・ａ抗体測定の特異性を向上させる。

【００１４】すなわち、本発明者らは、複数の亜型が存
在する抗原の共通抗原決定基に特異的な抗体のみを選択
的に測定することができる測定方法及び測定試薬を開発
すべく鋭意研究を行ってきた。その結果、本発明者ら
は、複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基を有す
る人工的に調製した第１の抗原及び前記の複数の亜型が
存在する抗原の共通抗原決定基を有しかつ前記の第１の
抗原が有する対立亜型抗原決定基は有しない人工的に調
製した第２の抗原を用いることにより、複数の亜型が存
在する抗原の共通抗原決定基に特異的な抗体の選択的な
測定が可能となることを見い出し、本発明を完成するに
至った。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明は、以下の発明を
提供する。

【００１６】（ｉ） （１）複数の亜型が存在する抗原
の共通抗原決定基に特異的な抗体を含有すると推測され
る試料に、前記の抗原の共通抗原決定基を有する人工的
に調製した第１の抗原を接触させ、（２）これと同時に
又はこの後に、前記の複数の亜型が存在する抗原の共通
抗原決定基を有しかつ前記の第１の抗原が有する対立亜
型抗原決定基は有しない人工的に調製した第２の抗原を
更に接触させ、（３）これにより形成された、「第１の
抗原−抗体−第２の抗原」の結合を検出する、ことより
なる複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異
的な抗体の測定方法。

【００１７】（ｉｉ） 人工的に調製した第１の抗原
が、遺伝子組み換え技術を用いて調製した抗原である、
前記（ｉ）記載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原
決定基に特異的な抗体の測定方法。

【００１８】（ｉｉｉ） 人工的に調製した第１の抗原
が、細胞工学的技術を用いて調製した抗原である、前記
（ｉ）記載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定
基に特異的な抗体の測定方法。

【００１９】（ｉｖ） 人工的に調製した第２の抗原
が、遺伝子組み換え技術を用いて調製した抗原である、
前記（ｉ）〜（ｉｉｉ）記載の複数の亜型が存在する抗
原の共通抗原決定基に特異的な抗体の測定方法。

【００２０】（ｖ） 人工的に調製した第２の抗原が、
細胞工学的技術を用いて調製した抗原である、前記
（ｉ）〜（ｉｉｉ）記載の複数の亜型が存在する抗原の
共通抗原決定基に特異的な抗体の測定方法。

【００２１】（ｖｉ） 「第１の抗原−抗体−第２の抗
原」の結合の検出を、第１の抗原又は第２の抗原を固定
化した粒子担体の凝集を検出することにより行う、前記
（ｉ）〜（ｖ）記載の複数の亜型が存在する抗原の共通
抗原決定基に特異的な抗体の測定方法。

【００２２】（ｖｉｉ） 「第１の抗原−抗体−第２の
抗原」の結合の検出を、第１の抗原及び／又は第２の抗
原に結合した標識物質を検出することにより行う、前記
（ｉ）〜（ｖ）記載の複数の亜型が存在する抗原の共通
抗原決定基に特異的な抗体の測定方法。

【００２３】（ｖｉｉｉ） 複数の亜型が存在する抗原
の共通抗原決定基に特異的な抗体が、ＨＢｓ抗原の共通
抗原決定基ａに特異的な抗体である、前記（ｉ）〜（ｖ
ｉｉ）記載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定
基に特異的な抗体の測定方法。

【００２４】（ｉｘ） （１）複数の亜型が存在する抗
原の共通抗原決定基を有する人工的に調製した第１の抗
原、及び（２）前記の複数の亜型が存在する抗原の共通
抗原決定基を有しかつ前記の第１の抗原が有する対立亜
型抗原決定基は有しない人工的に調製した第２の抗原、
を含む複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特
異的な抗体の測定試薬。

【００２５】（ｘ） 人工的に調製した第１の抗原が、
遺伝子組み換え技術を用いて調製した抗原である、前記
（ｉｘ）記載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決
定基に特異的な抗体の測定試薬。

【００２６】（ｘｉ） 人工的に調製した第１の抗原
が、細胞工学的技術を用いて調製した抗原である、前記
（ｉｘ）記載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決
定基に特異的な抗体の測定試薬。

【００２７】（ｘｉｉ） 人工的に調製した第２の抗原
が、遺伝子組み換え技術を用いて調製した抗原である、
前記（ｉｘ）〜（ｘｉ）記載の複数の亜型が存在する抗
原の共通抗原決定基に特異的な抗体の測定試薬。

【００２８】（ｘｉｉｉ） 人工的に調製した第２の抗
原が、細胞工学的技術を用いて調製した抗原である、前
記（ｉｘ）〜（ｘｉ）記載の複数の亜型が存在する抗原
の共通抗原決定基に特異的な抗体の測定試薬。

【００２９】（ｘｉｖ） 第１の抗原又は第２の抗原が
粒子担体に固定化されている、前記（ｉｘ）〜（ｘｉｉ
ｉ）記載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基
に特異的な抗体の測定試薬。

【００３０】（ｘｖ） 第１の抗原及び／又は第２の抗
原が標識物質を結合している、前記（ｉｘ）〜（ｘｉｉ
ｉ）記載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基
に特異的な抗体の測定試薬。

【００３１】（ｘｖｉ） 複数の亜型が存在する抗原の
共通抗原決定基に特異的な抗体が、ＨＢｓ抗原の共通抗
原決定基ａに特異的な抗体である、前記（ｉｘ）〜（ｘ
ｖ）記載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基
に特異的な抗体の測定試薬。

【００３２】本発明は、複数の亜型が存在する抗原に特
異的な種々の抗体のうち、全ての亜型が共通に保有する
共通抗原決定基に特異的な抗体を選択的に測定するため
に、「前記の抗原の共通抗原決定基を有する人工的に調
製した第１の抗原−抗体（前記の抗原の共通抗原決定基
に特異的な抗体）−前記の抗原の共通抗原決定基を有し
かつ第１の抗原が有する対立亜型抗原決定基は有しない
人工的に調製した第２の抗原」の結合を形成させ、この
結合を検出することよりなる複数の亜型が存在する抗原
の共通抗原決定基に特異的な抗体の測定方法及びこの測
定を実施するための測定試薬である。

【００３３】これは、複数の亜型が存在する抗原の共通
抗原決定基に特異的な抗体（以下、共通抗原決定基に特
異的な抗体と略すことがある）のみが、前記の抗原の共
通抗原決定基を有する人工的に調製した第１の抗原（以
下、第１の抗原と略すことがある）と前記の複数の亜型
が存在する抗原の共通抗原決定基を有しかつ第１の抗原
が有する対立亜型抗原決定基は有しない人工的に調製し
た第２の抗原（以下、第２の抗原と略すことがある）の
両方に結合し、「第１の抗原−抗体（共通抗原決定基に
特異的な抗体）−第２の抗原」の結合を形成することが
できるのに対して、前記の抗原の対立亜型抗原決定基に
特異的な抗体（以下、対立亜型抗原決定基に特異的な抗
体と略すことがある）は、結合できたとしても第１の抗
原又は第２の抗原のどちらか一方にしか結合できず、
「第１の抗原−抗体（対立亜型抗原決定基に特異的な抗
体）−第２の抗原」の結合を形成し得ないという原理に
よるものである。つまり、形成された「第１の抗原−抗
体−第２の抗原」の結合を検出することにより、試料中
の共通抗原決定基に特異的な抗体の存在を確かめること
ができるという原理に基づくものである。これを図３に
示した。

【００３４】

【図３】

【００３５】なお、本発明における第１の抗原及び第２
の抗原の調製法としては、遺伝子組み換え技術、細胞工
学技術又は化学合成技術等の公知の方法を用いることが
できる。

【００３６】遺伝子組み換え技術による調製法として
は、例えば、宿主に酵母を用いて、ＨＢｓ抗原発現プラ
スミドを導入し、形質転換させることにより、ＨＢｓ抗
原を発現させる方法がある。

【００３７】また、細胞工学的技術による調製法として
は、例えば、ＨＢｓ抗原産生能を有するヒト肝癌由来の
細胞株を培養して、その培養上澄液よりＨＢｓ抗原を得
る方法がある。

【００３８】更に、化学合成技術による調製法として
は、例えば、液相法及び固相法等のペプチド合成の方法
により合成することができ、またペプチド自動合成装置
を用いてもよく、日本生化学会編「生化学実験講座１
タンパク質の化学ＩＶ」，東京化学同人，１９７５．、
泉屋ら「ペプチド合成の基礎と実験」，丸善，１９８
５．、日本生化学会編「続生化学実験講座２ タンパク
質の化学下」，東京化学同人，１９８７．等に記載され
た方法に従い合成することができる。

【００３９】例えば、複数の亜型が存在する抗原の共通
抗原決定基に特異的な抗体であるＨＢｓ抗原の共通抗原
決定基ａに特異的な抗体（以下、抗ＨＢｓ・ａ抗体と略
すことがある）を選択的に測定する場合は、抗ＨＢｓ・
ａ抗体を含有すると推測される試料に、ＨＢｓ抗原の４
種類の亜型（ａｄｒ、ａｄｗ、ａｙｒ及びａｙｗ）から
選択した単一の亜型よりなる人工的に調製した第１の抗
原を接触させ、この接触と同時に又はこの接触の後に、
第１の抗原とはＨＢｓ抗原の２組の対立亜型抗原決定基
の両方ともが異なり第１の抗原が有する対立亜型抗原決
定基は有しないＨＢｓ抗原の亜型（例えば、第１の抗原
の亜型がａｙｒであればａｄｗ）よりなる人工的に調製
した第２の抗原を更に接触させ、これにより形成された
「第１の抗原−抗体（抗ＨＢｓ・ａ抗体）−第２の抗
原」の結合を検出することにより、試料中の抗ＨＢｓ・
ａ抗体の選択的な測定を実施することができる。

【００４０】本発明において、形成された「第１の抗原
−抗体−第２の抗原」の結合の検出は、公知の方法によ
り行うことができ、第１の抗原又は第２の抗原を固定化
した粒子担体の凝集を検出することにより、又は第１の
抗原及び／又は第２の抗原に結合した標識物質を検出す
ることにより行うことができる。

【００４１】第１の抗原又は第２の抗原を固定化した粒
子担体の凝集を検出することは、例えば、特開昭６４−
６９９５４号公報に記載された、試料中の抗体に対応す
る抗原を内壁に固定化させた測定容器に試料を加え、同
時に又は次いで測定容器に固定化させた抗原と同一の抗
原あるいは特異的結合の類縁体を固定化させた不溶性担
体粒子を測定容器に加え、これにより発現する測定容器
と「抗原−抗体−抗原」の結合を介して結合する不溶性
担体粒子の凝集の有無により試料中の抗体の有無を判定
する免疫学的測定方法等により行うことができる。

【００４２】また、第１の抗原及び／又は第２の抗原に
結合した標識物質を検出することは、例えば、公知の酵
素免疫測定法（ＥＩＡ、ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法
（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）又は発光免疫測
定法（ＬＩＡ）等により行うことができる。

【００４３】本発明において、複数の亜型が存在する抗
原の共通抗原決定基に特異的な抗体を含有すると推測さ
れる試料としては、例えば、ヒト又は動物等の血液、血
清、血漿、尿、大便、精液、髄液、唾液、汗、涙、腹水
若しくは羊水等の体液、又は細胞、組織若しくは臓器等
の抽出液等、抗ＨＢｓ・ａ抗体等の複数の亜型が存在す
る抗原の共通抗原決定基に特異的な抗体が含まれる可能
性のある試料であれば対象となる。

【００４４】本発明において、複数の亜型が存在する抗
原としては、ＨＢｓ抗原等の複数の亜型（サブタイプ）
が存在する抗原が対象となり、この複数の亜型が存在す
る抗原の共通抗原決定基に特異的な抗体としては、この
抗原に特異的な種々の抗体のうち、この抗原の全ての亜
型が共通に保有する抗原決定基である共通抗原決定基に
特異的な抗体、つまり、この共通抗原決定基のみに選択
的に結合することができる抗体であって測定を行う必要
があるものであれば対象となる。この複数の亜型が存在
する抗原の共通抗原決定基に特異的な抗体の例として
は、例えば、ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａに特異的な
抗体を挙げることができる。

【００４５】また、本発明において、複数の亜型が存在
する抗原の共通抗原決定基を有する人工的に調製した第
１の抗原は、複数の亜型が存在する抗原の全ての亜型が
共通に保有する共通抗原決定基を有する人工的に調製さ
れた物質であればよい。例えば、複数の亜型が存在する
抗原の亜型のうちの任意の人工的に調製したものを用い
ることができる。なお、これは共通抗原決定基さえ含む
ものであれば、この亜型の抗原の一部分よりなるもので
あってもよい。

【００４６】そして、本発明において、複数の亜型が存
在する抗原の共通抗原決定基を有しかつ第１の抗原が有
する対立亜型抗原決定基は有しない人工的に調製した第
２の抗原は、 複数の亜型が存在する抗原の全ての亜型が共通に保
有する共通抗原決定基を有し、 第１の抗原が対立亜型抗原決定基を有する場合に
は、その第１の抗原が有する対立亜型抗原決定基は有せ
ず、 人工的に調製されているという３つの条件を満たす物
質であればよい。例えば、複数の亜型が存在する抗原の
抗原決定基のうち共通抗原決定基以外の抗原決定基であ
る対立亜型抗原決定基が第１の抗原とは全て異なる亜型
の人工的に調製した抗原を用いることができる。なお、
これも共通抗原決定基さえ含むものであれば、この亜型
の抗原の一部分よりなるものであってもよい。

【００４７】また、本発明において、第１の抗原と第２
の抗原の間で同じ対立亜型抗原決定基は有しないという
条件を満たすものであれば、第１の抗原及び／又は第２
の抗原は、複数種類のものの混合物であってもよい。

【００４８】更に、本発明において、第１の抗原及び／
又は第２の抗原は、それぞれ複数の亜型が存在する抗原
の共通抗原決定基のみからなるものであってもよい。例
えば、ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａに特異的な抗体を
測定する場合には、ＨＢｓ抗原の抗原決定基のうち共通
抗原決定基ａのみのアミノ酸配列を含む人工的に調製し
たペプチド等の物質を第１の抗原及び／又は第２の抗原
として用いて測定を行うこともできる。

【００４９】本発明における、第１の抗原と第２の抗原
の組合せの例として、ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａに
特異的な抗体を測定する場合の第１の抗原と第２の抗原
の組合せを表１に示した。

【００５０】

【表１】

【００５１】

【発明の実施の形態】本発明において、「第１の抗原−
抗体−第２の抗原」の結合の検出を、第１の抗原又は第
２の抗原を固定化した粒子担体の凝集を検出することに
より行う場合について、以下例を挙げて説明を行う。

【００５２】まず、本発明における第１の抗原及び第２
の抗原の調製法としては、遺伝子組み換え技術、細胞工
学技術、又は化学合成技術等の公知の方法を用いること
ができる。

【００５３】遺伝子組み換え技術による調製法として
は、宿主に酵母を用いて、ＨＢｓ抗原発現プラスミドを
導入し、形質転換させることにより、ＨＢｓ抗原を発現
させる方法等を挙げることができる。例えば、まず初め
に酵母由来の抑制性酸性フォスファターゼ（ｐｈｏ５）
プロモーター領域を挿入した、大腸菌と酵母の両方でＤ
ＮＡの複製と選択が可能なシャトルベクター（ｐＡＭ８
２）を構築する。次に、このシャトルベクターにＨＢｓ
抗原コード領域をｐｈｏ５プロモーター下流に挿入し、
ＨＢｓ抗原発現プラスミド（ｐＡＨ３０１）を構築す
る。このプラスミドを酵母に導入することにより、ＨＢ
ｓ抗原を発現させ、菌体内にＨＢｓ抗原を蓄積させる。
菌体内からＨＢｓ抗原を抽出するために、超音波破壊等
の方法を用いて酵母を破壊し、硫安塩析を行った後、イ
オン交換クロマグラフィーを行う。次いで、塩化セシウ
ム及び蔗糖による密度勾配遠心分離を行い、精製ＨＢｓ
抗原を得ることができる。〔濱田，バイオサイエンスと
インダストリー，４６巻，３１６１〜３１６８頁，１９
８８年、濱田，阿蘇シンポジウム記録，１０ｔｈ，８６
〜９９頁，１９８７年〕

【００５４】また、細胞工学的技術による調製法として
は、ＨＢｓ抗原産生能を有するヒト肝癌由来の細胞株を
培養して、その培養上澄液よりＨＢｓ抗原を得る方法が
ある。例えば、ヒト肝癌細胞より得られたＨＢｓ抗原産
生能の高い細胞株ｈｕＧＫ−１４を培養し、培養液にＨ
Ｂｓ抗原を産生させる。以後培養液を回収し、培養上澄
液を濃縮、ＤＮａｓｅ処理した後、モノクローナル抗体
によるアフィニティカラムクロマグラフィーを行う。次
いで、塩化セシウム及び蔗糖による密度勾配遠心分離を
行い、精製ＨＢｓ抗原を得ることができる。〔小田ら，
肝胆膵，１３巻，５８５〜５９０頁，１９８６年〕

【００５５】更に、化学合成技術による調製法として
は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社
のモデル４３０Ａペプチド自動合成装置（Ｍｏｄｅｌ
４３０Ａ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）
により、取扱説明書に従って、ｔ−ブトキシカルボニル
アミノ酸固相法でＨＢｓ抗原ペプチドの合成を行うこと
ができる。副反応を抑制するためスカベンジャーとし
て、ジメチルスルファイド、ｐ−チオクレゾール、ｍ−
クレゾール、そしてアニソールの存在下でフッ化水素法
により樹脂からの合成したペプチドの脱離を行うことが
できる。その後、ジメチルエーテルによりスカベンジャ
ーを抽出し、そして２Ｎ酢酸により合成したペプチドの
抽出を行うことができる。陰イオン交換樹脂であるダウ
エックス１−Ｘ２（ＤＯＷＥＸ １−Ｘ２）により陰イ
オン交換カラムクロマトグラフィーを行い精製をして、
オクタデシル（ＯＤＳ）カラムでの高速液体クロマトグ
ラフィー（ＨＰＬＣ）により、メインピークのパターン
の確認を行うことができる。そして、エバポレーターに
より凍結乾燥をして濃縮を行った後、ＨＰＬＣにより精
製を行い分取することができる。なお、このＨＰＬＣ精
製時の装置及び条件は、山村化学研究所社の逆相ＯＤＳ
カラムＹＭＣ−Ｄ−ＯＤＳ−５（２０ｍｍ×３００ｍ
ｍ）を用い、日本分光工業社のＴＷＩＮＣＬＥポンプ及
び日本分光工業社のＧＰ−Ａ４０型グラジエンターで
０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）中アセトニトリル
の０％から７０％のグラジエントを流速７．０ｍｌ／分
で行い、日本分光工業社製ＵＶＩＤＥＣ−１００Ｖ型検
出器（２１０ｎｍ、１．２８ＡＵＦＳ）で検出を行えば
良い。ここで精製分取した合成ペプチドをエバポレータ
ーで凍結乾燥して濃縮することにより精製ＨＢｓ抗原を
得ることができる。

【００５６】次に、この測定の手順の一例を以下に示
す。 人工的に調製した第１の抗原を溶液収容部分に固定
化した測定容器を用意し、この第１の抗原を固定化した
測定容器の溶液収容部分に一定量の試料を添加して接触
させる。 この添加・接触と同時に又は一定時間のうちに、人
工的に調製した第２の抗原を固定化した粒子担体の一定
量をこの溶液収容部分に添加して接触させる。 そして、これをミキサー等で一定時間攪拌した後静
置して、試料中に共通抗原決定基に特異的な抗体が存在
する場合には「第１の抗原−抗体（共通抗原決定基に特
異的な抗体）−第２の抗原」の結合を形成させる。 静置後、一定時間内にこの第２の抗原を固定化した
粒子担体の溶液収容部分内における像を目視により判定
又はマイクロプレートリーダー等の測定装置により測定
し、凝集像が検出できれば試料中に共通抗原決定基に特
異的な抗体が存在すると判定し、凝集像が検出できなけ
れば試料中に共通抗原決定基に特異的な抗体は存在しな
いと判定することにより、試料中の共通抗原決定基に特
異的な抗体の測定を行う。

【００５７】この測定においては、測定容器の溶液収容
部分内壁と粒子担体が試料中の共通抗原決定基に特異的
な抗体を介して、「測定容器溶液収容部分内壁−第１の
抗原−抗体（共通抗原決定基に特異的な抗体）−第２の
抗原−粒子担体」と結合することにより、第２の抗原を
固定化した粒子担体の凝集像を得ることができるもので
ある。

【００５８】試料中の共通抗原決定基に特異的な抗体
は、測定容器の溶液収容部分の内壁に固定化された第１
の抗原と、粒子担体に固定化した第２の抗原の両方に結
合するので、前記の結合を形成することができ、試料中
の共通抗原決定基に特異的な抗体の量を反映した凝集像
（測定容器の溶液収容部分の内壁面底部に広がった像、
陽性像）が得られることになる。これを図４に示した。

【００５９】

【図４】

【００６０】一方、試料中の対立亜型抗原決定基に特異
的な抗体は、第１の抗原と結合することによる測定容器
の溶液収容部分内壁への結合〔「測定容器溶液収容部分
内壁−第１の抗原−抗体（対立亜型抗原決定基に特異的
な抗体）」〕、又は第２の抗原と結合することによる粒
子担体への結合〔「抗体（対立亜型抗原決定基に特異的
な抗体）−第２の抗原−粒子担体」〕を生ずることはで
きるが、第１の抗原と第２の抗原は同じ対立亜型抗原決
定基は有しないので、「第１の抗原−抗体（対立亜型抗
原決定基に特異的な抗体）−第２の抗原」の結合が形成
されることはなく、つまり「測定容器溶液収容部分内壁
−第１の抗原−抗体（対立亜型抗原決定基に特異的な抗
体）−第２の抗原−粒子担体」の結合は形成されないの
で、第２の抗原を固定化した粒子担体は測定容器の溶液
収容部分内壁面上を転がり（滑り）落ちてしまい、凝集
像は得られずに底部に収束した像（陰性像）が生じる。
これを図５に示した。

【００６１】

【図５】

【００６２】よって、これにより試料中の共通抗原決定
基に特異的な抗体のみを選択的に測定することができる
こととなる。

【００６３】なお、段階的に希釈した試料のそれぞれを
測定した時の粒子担体による凝集像が得られる最大の希
釈倍数である抗体価を求めることにより、試料中に含ま
れる共通抗原決定基に特異的な抗体の量を確かめること
ができる。この抗体価の測定は、常法に従って行えばよ
く、例えば、人工的に調製した第１の抗原を固定化した
測定容器（マイクロプレート等）のウェル等の溶液収容
部分に試料を添加し、これを緩衝液等よりなる試料の希
釈液で段階的に希釈してその希釈列を作り、次に各溶液
収容部分に人工的に調製した第２の抗原を固定化した粒
子担体を添加し、混合攪拌した後、静置してこの第２の
抗原を固定化した粒子担体による凝集の有無を判定又は
測定し、凝集像が得られた最大の希釈倍数を抗体価とし
て採用し、求めることができる。

【００６４】また、予め規定した希釈倍数で希釈した試
料を本発明により測定し、この時の凝集の有無から試料
中における共通抗原決定基に特異的な抗体の存在の有無
を定性的に測定することもできる。

【００６５】なお、本発明による試料中の共通抗原決定
基に特異的な抗体の測定においては、人工的に調製した
第１の抗原又は人工的に調製した第２の抗原を固定化し
た粒子担体の粒子担体として磁性粒子を用い、この第１
の抗原又は第２の抗原を固定化した粒子担体に磁力を作
用させることにより短時間で凝集像を生じさせることが
できる、特開平４−２１６４６６号公報及び特開平４−
２４２１６７号公報に記載されているような測定方法を
適用することもできる。

【００６６】そして、本発明による試料中の共通抗原決
定基に特異的な抗体の測定においては、まず人工的に調
製した第１の抗原を固定化した粒子担体と試料を混合し
接触させ、次いでこれを人工的に調製した第２の抗原を
固定化した測定容器の溶液収容部分に添加して接触さ
せ、「第１の抗原−抗体（共通抗原決定基に特異的な抗
体）−第２の抗原」の結合を形成させて、この結合によ
り生じた第１の抗原を固定化した粒子担体の凝集の凝集
像の検出により、試料中の共通抗原決定基に特異的な抗
体の量を測定することもできる。

【００６７】更に、本発明による試料中の共通抗原決定
基に特異的な抗体の測定においては、人工的に調製した
第１の抗原を固定化した測定容器の溶液収容部分に人工
的に調製した第２の抗原を固定化した粒子担体を存在さ
せておき、この測定容器の溶液収容部分に試料を添加し
て接触させ、「第１の抗原−抗体（共通抗原決定基に特
異的な抗体）−第２の抗原」の結合を形成させて、この
結合により生じた第２の抗原を固定化した粒子担体の凝
集の凝集像の検出により、試料中の共通抗原決定基に特
異的な抗体の量を測定することもできる。

【００６８】ところで、理論的には、人工的に調製した
第２の抗原（又は人工的に調製した第１の抗原）を固定
化した粒子担体同士が対立亜型抗原決定基に特異的な抗
体を介して結合し、「粒子担体−第２の抗原（又は第１
の抗原）−抗体（対立亜型抗原決定基に特異的な抗体）
−第２の抗原（又は第１の抗原）−粒子担体」の結合が
形成されることにより、試料中に共通抗原決定基に特異
的な抗体が存在しなくとも対立亜型抗原決定基に特異的
な抗体が存在すれば、粒子担体が凝集して凝集像が生じ
るように考えられるが、実際には凝集像が得られること
はない。この理由は定かではないが、「測定容器溶液収
容部分内壁−第１の抗原（又は第２の抗原）−共通抗原
決定基に特異的な抗体−第２の抗原（又は第１の抗原）
−粒子担体」の結合に比べて「粒子担体−第２の抗原
（又は第１の抗原）−対立亜型抗原決定基に特異的な抗
体−第２の抗原（又は第１の抗原）−粒子担体」の結合
の結合親和性、結合安定性又は結合力等が低いため、結
果として凝集像が得られることはなく、試料中に共通抗
原決定基に特異的な抗体が存在する場合のみ凝集像が得
られるものと推測される。

【００６９】本発明において、測定容器としては、溶液
を収容することができるものであれば、その種類、材
質、形状等は特に制限されずに用いることができる。こ
れは、赤血球やゼラチン粒子等を用いる粒子凝集反応測
定法又はラテックス凝集反応測定法等において一般的に
測定に用いられている容器については、問題なく用いる
ことができる。例えば、ガラス、ポリスチレン、ポリ塩
化ビニル又はポリメタクリレートなどからなる試験管、
マイクロプレート（マイクロタイタープレート）又はト
レイ等を用いることができる。なお、測定容器の溶液収
容部分（マイクロプレートのウェル等）の底面は、Ｕ
型、Ｖ型又はＵＶ型等の底面中央から周辺にかけて傾斜
をもつ形状であることが望ましい。

【００７０】粒子担体としては、一般に粒子凝集反応測
定法又はラテックス凝集反応測定法等に使用される粒子
担体であれば特に制限無く用いることができる。例え
ば、ヒツジ赤血球等の動物赤血球、リポソーム、ラテッ
クス、ゼラチン、ポリアクリルアミド、マイクロカプセ
ル若しくはエマルジョン等の有機高分子物質よりなる粒
子担体、ガラス、シリカゲル、カーボン若しくはベント
ナイト等の無機高分子物質よりなる粒子担体又はその他
の人工担体等を挙げることができる。 また、前記の高
分子粒子担体を強磁性体で被覆又は粒子成型時に強磁性
体を分散させて調製した磁性粒子担体等を用いることも
できる。これらの粒子担体は、粒子径が０．０１〜１０
０μｍの範囲のものが好ましく、特に好ましくは０．５
〜１０μｍのものである。また、これらの粒子担体の比
重は、１〜１０の範囲が好ましく、特に好ましくは１〜
２である。

【００７１】測定容器の溶液収容部分の内壁面又は粒子
担体に人工的に調製した第１の抗原又は人工的に調製し
た第２の抗原を固定化させる方法は、物理的吸着法又は
化学的結合法等の公知の方法を用いることができる。

【００７２】物理的吸着法による場合は、公知の方法に
従い、緩衝液等に溶解した人工的に調製した第１の抗原
若しくは人工的に調製した第２の抗原を測定容器の溶液
収容部分に添加し内壁面に接触させたり、又は人工的に
調製した第１の抗原若しくは人工的に調製した第２の抗
原と粒子担体を緩衝液等の溶液中で混合し接触させるこ
とにより行うことができる。例えば、緩衝液等に溶解し
た人工的に調製した第１の抗原若しくは人工的に調製し
た第２の抗原を測定容器の溶液収容部分に添加し内壁面
に接触させ、又は人工的に調製した第１の抗原若しくは
人工的に調製した第２の抗原と粒子担体を緩衝液等の溶
液中で混合し接触させ、これを約２℃〜約４０℃で約１
０分〜約１日間行う。

【００７３】また、化学的結合法により行う場合には、
日本臨床病理学会編「臨床病理臨時増刊特集第５３号
臨床検査のためのイムノアッセイ−技術と応用−」，臨
床病理刊行会，１９８３年、日本生化学会編「新生化学
実験講座１ タンパク質ＩＶ」，東京化学同人，１９９
１年等に記載の公知の方法に従い、測定容器の溶液収容
部分の内壁面又は粒子担体と人工的に調製した第１の抗
原又は人工的に調製した第２の抗原をグルタルアルデヒ
ド、カルボジイミド、イミドエステル又はマレイミド等
の二価性の架橋試薬と混合、接触させ、測定容器の溶液
収容部分の内壁面、粒子担体、第１の抗原又は第２の抗
原のそれぞれのアミノ基、カルボシキル基、ＳＨ基、ア
ルデヒド基又は水酸基等と反応させることにより固定化
を行うことができる。

【００７４】更に非特異的反応を抑制するために処理を
行う必要があれば、人工的に調製した第１の抗原又は人
工的に調製した第２の抗原を固定化させた測定容器の溶
液収容部分内壁面又は粒子担体を、ウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）、カゼイン、ゼラチン、卵白アルブミン若し
くはその塩などのタンパク質、界面活性剤又は脱脂粉乳
等を接触させ被覆させること等の公知の方法により処理
して、ブロッキング処理（マスキング処理）を行っても
よい。

【００７５】人工的に調製した第１の抗原若しくは人工
的に調製した第２の抗原を固定化した粒子担体を懸濁さ
せる分散媒、又は試料の希釈液については、各種水系溶
媒を用いることができる。例えば、精製水、生理食塩水
又はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液、
リン酸緩衝液若しくはリン酸緩衝生理食塩水などの各種
緩衝液等の水系溶媒を用いることができる。なお、この
緩衝液のｐＨについては、ｐＨ３〜１２の範囲内にある
ことが好ましい。

【００７６】また、人工的に調製した第１の抗原若しく
は人工的に調製した第２の抗原を固定化した粒子担体を
懸濁させる分散媒、又は試料の希釈液には、ＢＳＡ、ヒ
ト血清アルブミン、カゼイン若しくはその塩などのタン
パク質、塩化ナトリウムなどの各種塩類、各種糖類、脱
脂粉乳、正常ウサギ血清などの各種動物血清、アジ化ナ
トリウムなどの各種防腐剤又は非イオン性界面活性剤、
両イオン性界面活性剤若しくは陰イオン性界面活性剤な
どの各種界面活性剤等を適宜添加して用いることができ
る。そして、これらを添加する際の濃度は特に限定され
るものではないが、０．００１〜１０％（Ｗ／Ｖ）が好
ましく、特に０．０１〜５％（Ｗ／Ｖ）が好ましい。

【００７７】なお、この各種界面活性剤としては、ソル
ビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、デ
カグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソル
ビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン
脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステ
ル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシ
エチレンフィトステロール、フィトスタノール、ポリオ
キシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、
ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオ
キシエチレンヒマシ油、硬化ヒマシ油若しくはポリオキ
シエチレンラノリンなどの非イオン性界面活性剤、酢酸
ベタインなどの両性界面活性剤又はポリオキシエチレン
アルキルエーテル硫酸塩若しくはポリオキシエチレンア
ルキルエーテル酢酸塩などの陰イオン性界面活性剤等を
挙げることができる。

【００７８】次に、本発明において、「第１の抗原−抗
体−第２の抗原」の結合の検出を、第１の抗原及び／又
は第２の抗原に結合した標識物質を検出することにより
行う場合について、以下例を挙げて説明を行う。

【００７９】この第１の抗原及び／又は第２の抗原に結
合した標識物質を検出することは、酵素免疫測定法、蛍
光免疫測定法、放射免疫測定法又は発光免疫測定法など
の標識物質を用いた免疫測定法のサンドイッチ法又は均
一系（ホモジニアス系）等の手法により行うことができ
る。

【００８０】これらの免疫測定法により測定を行う場合
は、公知の方法の手順に従って行うことができるが、サ
ンドイッチ法により測定を行う場合の一例を以下に示
す。 人工的に調製した第１の抗原を固定化した固相担体
を用意し、この固相担体の第１の抗原を固定化した部分
に一定量の試料を添加して一定時間接触させる。 この添加・接触と同時に又は洗浄の後に、酵素等の
標識物質を結合した人工的に調製した第２の抗原の一定
量をこの固相担体の第１の抗原を固定化した部分に添加
して一定時間接触させて、試料中に共通抗原決定基に特
異的な抗体が存在する場合には「第１の抗原−抗体（共
通抗原決定基に特異的な抗体）−第２の抗原」の結合を
形成させる。 次に、固相担体に結合していない未結合の「標識物
質を結合した第２の抗原」を洗浄分離する。（Ｂ／Ｆ分
離） そして、「固相担体−第１の抗原−抗体（共通抗原
決定基に特異的な抗体）−第２の抗原−標識物質」の結
合により固相担体に結合した標識物質を検出することに
より、試料中の共通抗原決定基に特異的な抗体の測定を
行う。

【００８１】この測定においては、固相担体と標識物質
が試料中の共通抗原決定基に特異的な抗体を介して、
「固相担体−第１の抗原−抗体（共通抗原決定基に特異
的な抗体）−第２の抗原−標識物質」と結合するので、
固相担体に結合した標識物質の量を測定することにより
試料中に含まれていた共通抗原決定基に特異的な抗体の
量を測定することができるものである。

【００８２】試料中の共通抗原決定基に特異的な抗体
は、固相担体に固定化された第１の抗原と、標識物質を
結合した第２の抗原の両方に結合するので、前記の結合
を形成することができ、試料中の共通抗原決定基に特異
的な抗体の量を反映した量の固相担体に結合した標識物
質が得られることになる。これを図６に示した。

【００８３】

【図６】

【００８４】一方、試料中の対立亜型抗原決定基に特異
的な抗体は、第１の抗原と結合することによる固相担体
への結合〔「固相担体−第１の抗原−抗体（対立亜型抗
原決定基に特異的な抗体）」〕、又は第２の抗原と結合
することによる標識物質への結合〔「抗体（対立亜型抗
原決定基に特異的な抗体）−第２の抗原−標識物質」〕
を生ずることはできるが、第１の抗原と第２の抗原は同
じ対立亜型抗原決定基を有しないので、「第１の抗原−
抗体（対立亜型抗原決定基に特異的な抗体）−第２の抗
原」の結合が形成されることはなく、つまり「固相担体
−第１の抗原−抗体（対立亜型抗原決定基に特異的な抗
体）−第２の抗原−標識物質」の結合は形成されないの
で、固相担体に結合した標識物質が得られることはな
い。これを図７に示した。

【００８５】

【図７】

【００８６】よって、これにより試料中の共通抗原決定
基に特異的な抗体のみを選択的に測定することができる
こととなる。

【００８７】「第１の抗原−抗体（共通抗原決定基に特
異的な抗体）−第２の抗原」の結合により固相担体に結
合した標識物質の検出は、測定を酵素免疫測定法により
行う場合には、標識酵素にその至適条件下で基質を反応
させ、その反応生成物の量を反応生成物の吸光度を測る
などの光学的方法等により測定することにより行う。蛍
光免疫測定法により行う場合には、標識蛍光物質による
蛍光強度を測定することにより行う。放射免疫測定法に
より行う場合には、標識放射性物質による放射線量を測
定することにより行う。発光免疫測定法により行う場合
には、標識物質が係わる発光反応系による発光量を測定
することにより行う。いずれの場合においても、標識物
質を用いた免疫測定法の公知の手法に従って、標識物質
の検出を行うことができる。

【００８８】なお、本発明による試料中の共通抗原決定
基に特異的な抗体の測定においては、まず酵素等の標識
物質を結合した人工的に調製した第１の抗原と試料を混
合し接触させ、次いでこれを人工的に調製した第２の抗
原を固定化した固相担体の第２の抗原を固定化した部分
に添加して接触させ、「第１の抗原−抗体（共通抗原決
定基に特異的な抗体）−第２の抗原」の結合を形成させ
て、この結合により固相担体に結合した標識物質の量を
測定することによって、試料中の共通抗原決定基に特異
的な抗体の量を測定することもできる。

【００８９】また、本発明による試料中の共通抗原決定
基に特異的な抗体の測定においては、人工的に調製した
第１の抗原を固定化した固相担体上に、酵素等の標識物
質を結合させた人工的に調製した第２の抗原を存在させ
ておき、この固相担体に試料を添加して接触させ、「第
１の抗原−抗体（共通抗原決定基に特異的な抗体）−第
２の抗原」の結合を形成させて、この結合により固相担
体に結合した標識物質の量を測定することにより、試料
中の共通抗原決定基に特異的な抗体の量を測定すること
もできる。

【００９０】そして、本発明による試料中の共通抗原決
定基に特異的な抗体の測定は、特開平１−１２３１４８
号公報に記載されている、連続する一連の反応を触媒す
る２種類の酵素をそれぞれ別々に被検物質に対応する特
異結合相手と共に不溶性担体に結合した２種類の酵素標
識物質を用いて、これらを特異的結合部位を二つ以上有
する被検物質を介して近接させ連続した酵素反応により
被検物質量を求める、均一系（ホモジニアス系）による
特異的結合部位を有する物質の測定法に適用して測定を
行うこともできる。例えば、人工的に調製した第１の抗
原並びにグルコースオキシダーゼを結合したラテックス
粒子等の不溶性担体、及び人工的に調製した第２の抗原
並びにパーオキシダーゼを結合したラテックス粒子等の
不溶性担体を用意し、これらに共通抗原決定基に特異的
な抗体を含有すると推測される試料及びグルコースを混
合し接触させ、共通抗原決定基に特異的な抗体を介して
近接したグルコースオキシダーゼ及びパーオキシダーゼ
より生じた過酸化水素の量を、４−アミノアンチピリン
等及びフェノール誘導体若しくはアニリン誘導体等を用
いるトリンダー反応系により測定して、試料中に含まれ
ている共通抗原決定基に特異的な抗体を均一系（ホモジ
ニアス系）により測定することもできる。

【００９１】あるいは、本発明による試料中の共通抗原
決定基に特異的な抗体の測定においては、人工的に調製
した第１の抗原を固定化した固相担体、標識物質を結合
させていない人工的に調製した第２の抗原、第２の抗原
の対立亜型抗原決定基に特異的な抗体及び酵素等の標識
物質を結合させた“第２の抗原の対立亜型抗原決定基に
特異的な抗体”の由来動物種のイムノグロブリンに特異
的な抗体を用いて、「固相担体−第１の抗原−抗体（共
通抗原決定基に特異的な抗体）−第２の抗原−第２の抗
原の対立亜型抗原決定基に特異的な抗体−“第２の抗原
の対立亜型抗原決定基に特異的な抗体”の由来動物種の
イムノグロブリンに特異的な抗体−標識物質」の結合を
形成させて、固相担体に結合した標識物質の量を測定す
ることにより、試料中の共通抗原決定基に特異的な抗体
の量を測定することもできる。

【００９２】更に、酵素等の標識物質を結合させた人工
的に調製した第２の抗原を過剰に添加し、未結合のこの
第２の抗原の量を別に定量することにより、試料中の共
通抗原決定基に特異的な抗体の量を測定することもでき
る。

【００９３】また、本発明による試料中の共通抗原決定
基に特異的な抗体の測定においては、固相担体として磁
性体よりなる物質又は磁性体を含む物質を用い、これに
磁力を作用させて、Ｂ／Ｆ分離を磁気的に行うこともで
きる。

【００９４】本発明において、固相担体としては、人工
的に調製した第１の抗原及び人工的に調製した第２の抗
原を固定化することができる担体であれば、その種類、
材質、形状等を特に限定することなく使用することがで
きる。これは、酵素免疫測定法、蛍光免疫測定法、放射
免疫測定法又は発光免疫測定法などの標識物質を用いた
免疫測定法等において、一般的に測定に用いられている
担体については、問題なく用いることができる。例え
ば、ポリスチレン、ポリカーボネイト、ポリビニルトル
エン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニ
ル、ナイロン、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミ
ド、ラテックス、リポソーム、ゼラチン、アガロース、
セルロース、セファロース、ガラス、金属、セラミック
ス又は磁性体等の材質よりなる粒子、マイクロカプセ
ル、ビーズ、マイクロプレート、試験管、スティック又
は試験片等の固相担体を用いることができる。また、前
記の固相担体を強磁性体で被覆又は固相担体成型時に強
磁性体を含有させて調製した磁性固相担体等を用いるこ
ともできる。

【００９５】標識物質を人工的に調製した第１の抗原又
は人工的に調製した第２の抗原に結合させる方法は、化
学的結合法等の公知の方法を用いることができる。この
化学的結合法により行う場合には、日本臨床病理学会編
「臨床病理臨時増刊特集第５３号 臨床検査のためのイ
ムノアッセイ−技術と応用−」，臨床病理刊行会，１９
８３年、日本生化学会編「新生化学実験講座１ タンパ
ク質ＩＶ」，東京化学同人，１９９１年等に記載の公知
の方法に従い、酵素、蛍光物質又は放射性物質等の標識
物質と人工的に調製した第１の抗原又は人工的に調製し
た第２の抗原をグルタルアルデヒド、カルボジイミド、
イミドエステル又はマレイミド等の二価性の架橋試薬と
混合、接触させ、標識物質、第１の抗原又は第２の抗原
のそれぞれのアミノ基、カルボシキル基、ＳＨ基、アル
デヒド基又は水酸基等と反応させることにより結合を行
うことができる。

【００９６】固相担体に人工的に調製した第１の抗原又
は人工的に調製した第２の抗原を固定化させる方法は、
物理的吸着法又は化学的結合法等の公知の方法を用いる
ことができる。

【００９７】物理的吸着法による場合は、公知の方法に
従い、緩衝液等に溶解した人工的に調製した第１の抗原
若しくは人工的に調製した第２の抗原を固相担体の固定
化したい部分に添加し接触させたり、又は人工的に調製
した第１の抗原若しくは人工的に調製した第２の抗原と
固相担体を緩衝液等の溶液中で混合し接触させることに
より行うことができる。例えば、緩衝液等に溶解した人
工的に調製した第１の抗原若しくは人工的に調製した第
２の抗原を固相担体の固定化したい部分に添加し接触さ
せ、又は人工的に調製した第１の抗原若しくは人工的に
調製した第２の抗原と固相担体を緩衝液等の溶液中で混
合し接触させ、これを約２℃〜約４０℃で約１０分〜約
１日間行う。

【００９８】また、化学的結合法により行う場合には、
日本臨床病理学会編「臨床病理臨時増刊特集第５３号
臨床検査のためのイムノアッセイ−技術と応用−」，臨
床病理刊行会，１９８３年、日本生化学会編「新生化学
実験講座１ タンパク質ＩＶ」，東京化学同人，１９９
１年等に記載の公知の方法に従い、固相担体又は固相担
体の固定化したい部分と人工的に調製した第１の抗原又
は人工的に調製した第２の抗原をグルタルアルデヒド、
カルボジイミド、イミドエステル又はマレイミド等の二
価性の架橋試薬と混合、接触させ、固相担体、固相担体
の固定化したい部分、第１の抗原又は第２の抗原のそれ
ぞれのアミノ基、カルボシキル基、ＳＨ基、アルデヒド
基又は水酸基等と反応させることにより固定化を行うこ
とができる。

【００９９】更に、非特異的反応を抑制するために処理
を行う必要があれば、人工的に調製した第１の抗原又は
人工的に調製した第２の抗原を固定化させた固相担体の
固定化した部分を、ＢＳＡ、カゼイン、ゼラチン、卵白
アルブミン若しくはその塩などのタンパク質、界面活性
剤又は脱脂粉乳等を接触させ被覆させること等の公知の
方法により処理して、ブロッキング処理（マスキング処
理）を行ってもよい。

【０１００】標識物質を結合させた人工的に調製した第
１の抗原若しくは人工的に調製した第２の抗原を溶解さ
せる溶液、又は試料の希釈液については、各種水系溶媒
を用いることができる。例えば、精製水、生理食塩水又
はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液、リ
ン酸緩衝液若しくはリン酸緩衝生理食塩水などの各種緩
衝液等の水系溶媒を用いることができる。なお、この緩
衝液のｐＨについては、ｐＨ３〜１２の範囲内にあるこ
とが好ましい。

【０１０１】また、標識物質を結合させた人工的に調製
した第１の抗原若しくは人工的に調製した第２の抗原を
溶解させる溶液、又は試料の希釈液には、ＢＳＡ、ヒト
血清アルブミン、カゼイン若しくはその塩などのタンパ
ク質、塩化ナトリウムなどの各種塩類、各種糖類、脱脂
粉乳、正常ウサギ血清などの各種動物血清、アジ化ナト
リウムなどの各種防腐剤又は非イオン性界面活性剤、両
イオン性界面活性剤若しくは陰イオン性界面活性剤など
の各種界面活性剤等を適宜添加して用いることができ
る。そして、これらを添加する際の濃度は特に限定され
るものではないが、０．００１〜１０％（Ｗ／Ｖ）が好
ましく、特に０．０１〜５％（Ｗ／Ｖ）が好ましい。

【０１０２】なお、この各種界面活性剤としては、ソル
ビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、デ
カグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソル
ビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン
脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステ
ル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシ
エチレンフィトステロール、フィトスタノール、ポリオ
キシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、
ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオ
キシエチレンヒマシ油、硬化ヒマシ油若しくはポリオキ
シエチレンラノリンなどの非イオン性界面活性剤、酢酸
ベタインなどの両性界面活性剤又はポリオキシエチレン
アルキルエーテル硫酸塩若しくはポリオキシエチレンア
ルキルエーテル酢酸塩などの陰イオン性界面活性剤等を
挙げることができる。

【０１０３】標識物質としては、測定を酵素免疫測定法
により行う場合には、パーオキシダーゼ（ＰＯＤ）、ア
ルカリ性ホスファターゼ（ＡＬＰ）、β−ガラクトシダ
ーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコースオキシダー
ゼ、乳酸脱水素酵素若しくはα−アミラーゼ等の酵素
を、蛍光免疫測定法により行う場合には、フルオレセイ
ンイソチオシアネート、テトラメチルローダミンイソチ
オシアネート、置換ローダミンイソチオシアネート若し
くはジクロロトリアジンイソチオシアネート等の蛍光物
質を、そして放射免疫測定法により行う場合には、トリ
チウム、ヨウ素１２５又はヨウ素１３１等の放射性物質
を用いることができる。

【０１０４】また、測定を発光免疫測定法により行う場
合には、アクリジニウムエステル、アルカリ性ホスファ
ターゼ、パーオキシダーゼ又はグルコースオキシダーゼ
等を標識物質として用い、アクリジニウムエステル系、
ジオキセタン化合物系、ルミノール−過酸化水素−ＰＯ
Ｄ系又はＮＡＤＨ−ＦＭＮＨ₂ −ルシフェラーゼ系等に
より固相担体に結合した標識物質の検出を行うことがで
きる。

【０１０５】

【実施例】以下実施例を挙げて説明するが、本発明はこ
れにより限定されるものではない。

【０１０６】ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａに特異的な
抗体の測定 （１） ＨＢｓ抗原固定化マイクロプレ−トの調製 第１の抗原として、細胞工学的技術を用いて、ＨＢｓ抗
原産生能を有するヒト肝癌由来の細胞株を培養し、その
培養上澄液より調製された、亜型がａｄｒである精製Ｈ
Ｂｓ抗原（製造番号０１１Ｄ１−０００３、明治乳業社
製）を、０．１％アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝生
理食塩水（ＰＢＳ）にて３μｇ／ｍＬに調製し、測定容
器であるＵ型マイクロプレート（梁瀬産業社製）の各ウ
ェル（各穴）に５０μＬずつ分注した。これを３７℃で
３時間反応させて、亜型がａｄｒであるＨＢｓ抗原の固
定化を行った。次に、各ウェルの液を吸引除去し、０．
５％カゼイン及び０．１％アジ化ナトリウムを含む２５
０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）を各ウェルに２
００μＬずつ分注して、３７℃で３時間反応させて、ブ
ロッキング処理を行った。その後、各ウェルの液を十分
に除去し、亜型がａｄｒであるＨＢｓ抗原を固定化した
マイクロプレートを調製した。また、遺伝子組み換え技
術を用いて、酵母を宿主とし、ＨＢｓ抗原発現プラスミ
ドを導入し、形質転換させることにより発現された、亜
型がａｙｗである精製ＨＢｓ抗原（メーカーコード番号
８ＨＳ７、製造番号９５／０１／ＨＳ７、オリエンタル
酵母工業社製）を用い前記と同様にして、亜型がａｙｗ
であるＨＢｓ抗原を固定化したマイクロプレートを調製
した。

【０１０７】（２） ＨＢｓ抗原固定化粒子担体の調製 第２の抗原として、遺伝子組み換え技術を用いて、酵母
を宿主とし、ＨＢｓ抗原発現プラスミドを導入し、形質
転換させることにより発現された、亜型がａｙｗである
精製ＨＢｓ抗原（メーカーコード番号８ＨＳ７、製造番
号９５／０１／ＨＳ７、オリエンタル酵母工業社製）と
粒子担体である磁性粒子担体（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ
−４５０ ｕｎｃｏａｔｅｄ、ダイナル社製）を、亜型
がａｙｗであるＨＢｓ抗原が３０μｇ／ｍＬ、かつ磁性
粒子担体が１％の濃度となるように混合し、３７℃で１
時間振盪し、反応させた。次に、この粒子担体を０．５
％カゼイン及び０．１％アジ化ナトリウムを含む２５０
ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）にて洗浄し、そし
て、この０．５％カゼイン及び０．１％アジ化ナトリウ
ムを含む２５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）中
において静置してブロッキング処理を行った。その後、
この粒子担体を、０．５％カゼイン及び０．１％アジ化
ナトリウムを含む２５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
８．０）中にて粒子担体が０．１％となるように分散さ
せ、亜型がａｙｗであるＨＢｓ抗原を固定化した粒子担
体の懸濁液を調製した。また、細胞工学的技術を用い
て、ＨＢｓ抗原産生能を有するヒト肝癌由来の細胞株を
培養し、その培養上澄液より調製された、亜型がａｄｒ
である精製ＨＢｓ抗原（製造番号０１１Ｄ１−０００
３、明治乳業社製）を用い前記と同様にして、亜型がａ
ｄｒであるＨＢｓ抗原を固定化した粒子担体の懸濁液を
調製した。

【０１０８】（３） 試料としての抗体溶液の調製 ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａに特異的な抗体として、
以下の２種類のモノクローナル抗体を用意した。 抗ａ抗体：ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａに特異的な
モノクローナル抗体（融合細胞株番号７Ｇ４、自家調
製） 抗ａ抗体：ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａに特異的な
モノクローナル抗体（融合細胞株番号１Ａ１、自家調
製） また、ＨＢｓ抗原のそれぞれの対立亜型抗原決定基に特
異的な抗体として、以下の４種類のモノクローナル抗体
を用意した。 抗ｄ抗体：ＨＢｓ抗原の対立亜型抗原決定基ｄに特異的
なモノクローナル抗体（融合細胞株番号７Ｃ、自家調
製） 抗ｙ抗体：ＨＢｓ抗原の対立亜型抗原決定基ｙに特異的
なモノクローナル抗体（メーカーコード番号１０４１、
特殊免疫研究所社製） 抗ｒ抗体：ＨＢｓ抗原の対立亜型抗原決定基ｒに特異的
なモノクローナル抗体（メーカーコード番号１０２１、
特殊免疫研究所社製） 抗ｗ抗体：ＨＢｓ抗原の対立亜型抗原決定基ｗに特異的
なモノクローナル抗体（メーカーコード番号１０３１、
特殊免疫研究所社製） なお、前記の抗ａ抗体、抗ａ抗体及び抗ｄ抗体の３
種類の自家調製のモノクローナル抗体は、亜型がａｄｒ
であるＨＢｓ抗原（明治乳業社製）を免疫原として、Ｋ
ｏｅｈｌｅｒらのモノクローナル抗体作成技術〔Ｋｏｅ
ｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６巻，４９５〜４９７
頁，１９７５年〕に従って得られたモノクローナル抗体
について、ＨＢｓ抗原の４種類の亜型（ａｄｒ、ａｄ
ｗ、ａｙｒ及びａｙｗ）との反応性を比較して、特異性
を決定したものである。これらの前記の抗ａ抗体、抗
ａ抗体、抗ｄ抗体、抗ｙ抗体、抗ｒ抗体及び抗ｗ抗体
をそれぞれ０．５％カゼイン及び０．１％アジ化ナトリ
ウムを含む２５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）
にて、２５０，０００ｎｇ／ｍＬから０．０２５ｎｇ／
ｍＬまで段階的に希釈して、試料としての各濃度の各抗
体溶液を調製した。

【０１０９】（４）ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａに特
異的な抗体及びＨＢｓ抗原の対立亜型抗原決定基に特異
的な抗体の測定 前記（１）で調製した亜型がａｄｒであるＨＢｓ抗原を
固定化したマイクロプレートの各ウェルに、前記（３）
で調製した試料としての各濃度の抗ａ抗体、抗ａ抗体
、抗ｄ抗体、抗ｙ抗体、抗ｒ抗体及び抗ｗ抗体の抗体
溶液を２５μＬずつ加え、次に前記（２）で調製した亜
型がａｙｗであるＨＢｓ抗原を固定化した粒子担体の懸
濁液を各ウェルに２５μＬずつ添加した後、マイクロプ
レートミキサーで十分に攪拌した。室温で１時間静置
後、マイクロプレートの各ウェルの凝集像の判定を行っ
た。マイクロプレートのウェル内に広がった凝集像が見
られる場合を陽性像とし、ウェルの底面に収束した像が
見られる場合を陰性像とし、各抗体溶液の陽性像を呈す
る最低濃度を検出感度として測定した。なお、前記
（１）で調製した亜型がａｙｗであるＨＢｓ抗原を固定
化したマイクロプレートと前記（２）で調製した亜型が
ａｄｒであるＨＢｓ抗原を固定化した粒子担体を用い
て、前記（３）で調製した各濃度の抗ａ抗体、抗ａ抗
体、抗ｄ抗体、抗ｙ抗体、抗ｒ抗体及び抗ｗ抗体の抗
体溶液の陽性像を呈する最低濃度を検出感度として前記
と同様にして測定した。また、比較例として、前記
（１）で調製した亜型がａｄｒであるＨＢｓ抗原を固定
化したマイクロプレートと前記（２）で調製した亜型が
ａｄｒであるＨＢｓ抗原を固定化した粒子担体を用い、
更に前記（１）で調製した亜型がａｙｗであるＨＢｓ抗
原を固定化したマイクロプレートと前記（２）で調製し
た亜型がａｙｗであるＨＢｓ抗原を固定化した粒子担体
を用いて、マイクロプレートと粒子担体に固定化したＨ
Ｂｓ抗原が同一の亜型である（つまり同じ対立亜型抗原
決定基を有する）場合について、前記（３）で調製した
各濃度の各抗体溶液の陽性像を呈する最低濃度を検出感
度として前記と同様にして測定した。これらの測定の結
果を表２に示した。

【０１１０】

【表２】

【０１１１】この表２より、対立亜型抗原決定基の全て
が異なり同じ対立亜型抗原決定基は有しない亜型のＨＢ
ｓ抗原をそれぞれ固定化したマイクロプレートと粒子担
体を用いた本発明による測定では、共通抗原決定基ａに
対する抗ＨＢｓ・ａ抗体を低濃度まで高感度に検出でき
るが、対立亜型抗原決定基に対する抗ＨＢｓ・ｄ抗体、
抗ＨＢｓ・ｙ抗体、抗ＨＢｓ・ｒ抗体及び抗ＨＢｓ・ｗ
抗体はいずれも高濃度のものしか検出できず、その検出
感度の差は大変大きいので、ＨＢｓ抗原の共通抗原決定
基ａに対する抗体のみを選択的に測定できることがわか
る。

【０１１２】これに対して、同じ対立亜型抗原決定基を
有する同一の亜型のＨＢｓ抗原を固定化したマイクロプ
レートと粒子担体を用いた比較例による測定では、共通
抗原決定基ａに対する抗ＨＢｓ・ａ抗体を低濃度まで検
出できるものの、対立亜型抗原決定基に対する抗ＨＢｓ
・ｄ抗体、抗ＨＢｓ・ｙ抗体、抗ＨＢｓ・ｒ抗体及び抗
ＨＢｓ・ｗ抗体をも低濃度のものまで高感度に検出して
しまい、その検出感度に差がないので、ＨＢｓ抗原の共
通抗原決定基ａに対する抗体（抗ＨＢｓ・ａ抗体）のみ
を選択的に測定することができないことがわかる。

【０１１３】よって、本発明の測定においては、複数の
亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異的な抗体の
みを選択的に測定できることが確かめられた。

【０１１４】

【作用】本発明の測定においては、複数の亜型が存在す
る抗原に特異的な種々の抗体のうち、全ての亜型が共通
に保有する共通抗原決定基に特異的な抗体を選択的に測
定するために、前記の共通抗原決定基に特異的な抗体を
含有すると推測される試料に前記の抗原の共通抗原決定
基を有する人工的に調製した第１の抗原を接触させ、こ
れと同時に又はこの後に前記の複数の亜型が存在する抗
原の共通抗原決定基を有しかつ第１の抗原が有する対立
亜型抗原決定基は有しない人工的に調製した第２の抗原
を更に接触させる。

【０１１５】この時、試料中の共通抗原決定基に特異的
な抗体は、前記の第１の抗原と第２の抗原の両方に結合
し、「第１の抗原−抗体（共通抗原決定基に特異的な抗
体）−第２の抗原」の結合を形成することができるが、
これに対して、試料中の前記の抗原の対立亜型抗原決定
基に特異的な抗体は、結合できたとしても前記の第１の
抗原又は第２の抗原のどちらか一方にしか結合できず、
「第１の抗原−抗体（対立亜型抗原決定基に特異的な抗
体）−第２の抗原」の結合を形成することができない。

【０１１６】よって、試料、第１の抗原及び第２の抗原
の接触により形成された「第１の抗原−抗体−第２の抗
原」の結合の形成を検出することにより、「第１の抗原
−共通抗原決定基に特異的な抗体−第２の抗原」の結合
の形成を検出することができ、そして、この結合を検出
することによって、試料中の共通抗原決定基に特異的な
抗体の存在の有無及びその量を測定することができる。

【０１１７】

【発明の効果】本発明の測定方法及び測定試薬は、共通
抗原決定基の抗原性について均一性が高く、そして全て
の亜型抗原決定基が確認されている、複数の亜型が存在
する抗原の共通抗原決定基を有する人工的に調製した第
１の抗原及び前記の複数の亜型が存在する抗原の共通抗
原決定基を有しかつ第１の抗原が有する対立亜型抗原決
定基は有しない人工的に調製した第２の抗原を用いるこ
とにより、複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基
に特異的な抗体のみを選択的に測定することを可能とす
ることができた。

【０１１８】この本発明により、例えば、ヒト由来試料
中のそれぞれの亜型のＨＢｓ抗原を有するＢ型肝炎ウィ
ルスの全てに対して感染防御能を有する抗ＨＢｓ・ａ抗
体の単独の量を測定できるようになり、かつ抗ＨＢｓ抗
体測定試薬間の判定の不一致が解消され、更には抗ＨＢ
ｓ・ａ抗体測定の特異性を向上さることができる。従っ
て、Ｂ型肝炎の診断及び治療が的確に行えるようになっ
た。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＨＢｓ抗原の構造を示した図である。

【図２】従来の抗ＨＢｓ抗体測定の原理を示した図であ
る。

【図３】本発明による共通抗原決定基に特異的な抗体測
定の原理を示した図である。

【図４】本発明における「第１の抗原−抗体−第２の抗
原」の結合の検出を人工的に調製した第１の抗原又は人
工的に調製した第２の抗原を固定化した粒子担体の凝集
を検出することにより行う場合の、測定時の共通抗原決
定基に特異的な抗体の状態とこれを上方より観察した時
の凝集像を示した図である。

【図５】本発明における「第１の抗原−抗体−第２の抗
原」の結合の検出を人工的に調製した第１の抗原又は人
工的に調製した第２の抗原を固定化した粒子担体の凝集
を検出することにより行う場合の、測定時の対立亜型抗
原決定基に特異的な抗体の状態とこれを上方より観察し
た時の像を示した図である。

【図６】本発明における「第１の抗原−抗体−第２の抗
原」の結合の検出を人工的に調製した第１の抗原及び／
又は人工的に調製した第２の抗原に結合した標識物質を
検出することにより行う場合の、測定時の共通抗原決定
基に特異的な抗体の状態を示した図である。

【図７】本発明における「第１の抗原−抗体−第２の抗
原」の結合の検出を人工的に調製した第１の抗原及び／
又は人工的に調製した第２の抗原に結合した標識物質を
検出することにより行う場合の、測定時の対立亜型抗原
決定基に特異的な抗体の状態を示した図である。

【符号の説明】

１ 亜型がａｄｒであるＨＢｓ抗原 ２ 共通抗原決定基ａに特異的な抗体 ３ 対立亜型抗原決定基ｄに特異的な抗体 ４ 対立亜型抗原決定基ｒに特異的な抗体 ５ 標識物質 ６ 固相 ７ 人工的に調製した第１の抗原 ８ 人工的に調製した第２の抗原 ９ 共通抗原決定基Ａ １０ 対立亜型抗原決定基Ｂ １１ 対立亜型抗原決定基Ｃ １２ 対立亜型抗原決定基Ｄ １３ 対立亜型抗原決定基Ｅ １４ 対立亜型抗原決定基Ｆ １５ 対立亜型抗原決定基Ｇ １６ 対立亜型抗原決定基Ｈ １７ 共通抗原決定基Ａに特異的な抗体 １８ 対立亜型抗原決定基Ｂに特異的な抗体 １９ 対立亜型抗原決定基Ｃに特異的な抗体 ２０ 対立亜型抗原決定基Ｄに特異的な抗体 ２１ 対立亜型抗原決定基Ｅに特異的な抗体 ２２ 対立亜型抗原決定基Ｇに特異的な抗体 ２３ 固相担体又は測定容器等 ２４ 粒子担体 ２５ 測定容器 ２６ 固相担体

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】（１）複数の亜型が存在する抗原の共通抗
   原決定基に特異的な抗体を含有すると推測される試料
   に、前記の抗原の共通抗原決定基を有する人工的に調製
   した第１の抗原を接触させ、（２）これと同時に又はこ
   の後に、前記の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決
   定基を有しかつ前記の第１の抗原が有する対立亜型抗原
   決定基は有しない人工的に調製した第２の抗原を更に接
   触させ、（３）これにより形成された、「第１の抗原−
   抗体−第２の抗原」の結合を検出する、ことよりなる複
   数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異的な抗
   体の測定方法。
2. 【請求項２】人工的に調製した第１の抗原が、遺伝子組
   み換え技術を用いて調製した抗原である、請求項１記載
   の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異的
   な抗体の測定方法。
3. 【請求項３】人工的に調製した第１の抗原が、細胞工学
   的技術を用いて調製した抗原である、請求項１記載の複
   数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異的な抗
   体の測定方法。
4. 【請求項４】人工的に調製した第２の抗原が、遺伝子組
   み換え技術を用いて調製した抗原である、請求項１〜３
   のいずれか１項に記載の複数の亜型が存在する抗原の共
   通抗原決定基に特異的な抗体の測定方法。
5. 【請求項５】人工的に調製した第２の抗原が、細胞工学
   的技術を用いて調製した抗原である、請求項１〜３のい
   ずれか１項に記載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗
   原決定基に特異的な抗体の測定方法。
6. 【請求項６】「第１の抗原−抗体−第２の抗原」の結合
   の検出を、第１の抗原又は第２の抗原を固定化した粒子
   担体の凝集を検出することにより行う、請求項１〜５の
   いずれか１項に記載の複数の亜型が存在する抗原の共通
   抗原決定基に特異的な抗体の測定方法。
7. 【請求項７】「第１の抗原−抗体−第２の抗原」の結合
   の検出を、第１の抗原及び／又は第２の抗原に結合した
   標識物質を検出することにより行う、請求項１〜５のい
   ずれか１項に記載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗
   原決定基に特異的な抗体の測定方法。
8. 【請求項８】複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定
   基に特異的な抗体が、ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａに
   特異的な抗体である、請求項１〜７のいずれか１項に記
   載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異
   的な抗体の測定方法。
9. 【請求項９】（１）複数の亜型が存在する抗原の共通抗
   原決定基を有する人工的に調製した第１の抗原、及び
   （２）前記の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定
   基を有しかつ前記の第１の抗原が有する対立亜型抗原決
   定基は有しない人工的に調製した第２の抗原、を含む複
   数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異的な抗
   体の測定試薬。
10. 【請求項１０】人工的に調製した第１の抗原が、遺伝子
    組み換え技術を用いて調製した抗原である、請求項９記
    載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異
    的な抗体の測定試薬。
11. 【請求項１１】人工的に調製した第１の抗原が、細胞工
    学的技術を用いて調製した抗原である、請求項９記載の
    複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異的な
    抗体の測定試薬。
12. 【請求項１２】人工的に調製した第２の抗原が、遺伝子
    組み換え技術を用いて調製した抗原である、請求項９〜
    １１のいずれか１項に記載の複数の亜型が存在する抗原
    の共通抗原決定基に特異的な抗体の測定試薬。
13. 【請求項１３】人工的に調製した第２の抗原が、細胞工
    学的技術を用いて調製した抗原である、請求項９〜１１
    のいずれか１項に記載の複数の亜型が存在する抗原の共
    通抗原決定基に特異的な抗体の測定試薬。
14. 【請求項１４】第１の抗原又は第２の抗原が粒子担体に
    固定化されている、請求項９〜１３のいずれか１項に記
    載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異
    的な抗体の測定試薬。
15. 【請求項１５】第１の抗原及び／又は第２の抗原が標識
    物質を結合している、請求項９〜１３のいずれか１項に
    記載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特
    異的な抗体の測定試薬。
16. 【請求項１６】複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決
    定基に特異的な抗体が、ＨＢｓ抗原の共通抗原決定基ａ
    に特異的な抗体である、請求項９〜１５のいずれか１項
    に記載の複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に
    特異的な抗体の測定試薬。