JP2001133460A

JP2001133460A - Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原の高感度免疫測定試薬

Info

Publication number: JP2001133460A
Application number: JP31654999A
Authority: JP
Inventors: Koji Shintani; 晃司新谷
Original assignee: Tosoh Corp
Current assignee: Tosoh Corp
Priority date: 1999-11-08
Filing date: 1999-11-08
Publication date: 2001-05-18

Abstract

(57)【要約】【課題】感染の初期から高感度にＨＢＶを測定するため
の免疫測定試薬の提供。【解決手段】Ｂ型肝炎ウイルスを検出するための免疫測
定試薬であって、不溶性担体に結合し又は結合した抗体
（固相抗体）と、標識物質と結合し又は結合した抗体
（標識抗体）から構成され、前記固相抗体と標識抗体は
Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原のプレＳ１領域、プレＳ２領
域及び／又はＳ領域に対する抗体から選択された１種以
上の抗体であることを特徴とする免疫測定試薬（ただし
固相抗体と標識抗体がそれぞれ前記から選ばれた一種類
の同一抗体である場合を除く）。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、血清等の血液試料中の
Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（以下ＨＢｓ抗原と記載す
る）の検出に関し、詳しくは、ＨＢｓ抗原のプレＳ１、
プレＳ２及びＳ領域に対する抗体の組み合わせを固相又
は標識抗体として使用する、ＨＢｓ抗原の高感度免疫測
定試薬に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】Ｂ型肝炎ウイルス(以下ＨＢＶと記載す
る)は１９６５年にＢｌｕｍｂｅｒｇらによってＡｕＳ
ｔｒａｌｉａ抗原として発見された。その後の研究によ
り、ＨＢＶの外皮抗原であるＨＢｓ抗原はＨＢＶが肝細
胞内で増殖する際に血中に放出される抗原であり、一過
性感染においては同抗原が一過性に検出され、持続性感
染においては同抗原が持続的に検出されることが判明し
た。

【０００３】一過性感染の大部分は不顕性感染を経て治
癒するが、一部は急性肝炎、劇症肝炎に進行することが
ある。持続性感染の大部分は無症候性キャリアとして経
過するが、この中から急性肝炎として発症し慢性肝炎に
移行し、更に、肝硬変、肝細胞癌と進行する可能性があ
る。

【０００４】Ｂ型肝炎は、日本を含む極東、東南アジ
ア、アフリカに多発しているウイルス性疾患で、主とし
て血液を介して感染する。この疾患の原因がＨＢＶであ
り、その抗原決定基に基づいてａｄｗ型、ａｄｒ型、ａ
ｙｗ型又はａｙｒ型という４つのサブタイプに分類され
る。（岡本ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒ
ｅＳ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１４８巻、５００〜５０４、
１９８７年）日本で検出されるのはａｄｒ型とａｄｗ型
であり、特にａｄｒが多い。一方欧米ではａｙｗ型とａ
ｄｗ型が多い。

【０００５】ＨＢＶは、生物学、分子生物学及び免疫学
的研究から次第にその構造と機能が明らかにされてきた
が、近年になってＨＢＶ粒子には３つの関連抗原蛋白が
含まれることが明らかとなり、メジャー蛋白、ミドル蛋
白及びラージ蛋白として分類された。これらはそれぞ
れ、ＨＢＶ遺伝子上のＳ遺伝子領域、プレＳ２〜Ｓ遺伝
子領域、そして、Ｓ１〜プレｓ２〜Ｓ遺伝子領域にコー
ドされている（Ｈｅｅｒｍａｎ、Ｋ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏ
ｌ．，５２：３９６−４０２、１９８４参照）。従って
ＨＢＶ粒子のエンベロープ蛋白（ＨＢｅ）において抗原
性を発揮するのは（注；ＨＢｓ抗原の抗原性というべき
か？）、Ｓ領域遺伝子産物に由来するＳ領域、プレＳ１
領域遺伝子産物に由来するプレＳ１領域、そして、プレ
Ｓ２領域遺伝子産物に由来するプレＳ２領域がある（田
中慧、医学のあゆみ、１５１（１３）：７５０−７５
４、１９８９年）。

【０００６】ＨＢｅ抗原陽性期には、血清中にラージ蛋
白とミドル蛋白を有する管状粒子とミドル蛋白を有する
小型球形粒子が主として存在する。そのため当該期には
プレＳ１領域及びプレＳ２領域が高値を示すが、ＨＢｅ
抗体陽性期には、プレＳ１領域は陰性でプレＳ２領域も
比較的低値を示すといわれている（山中太郎ら、日本臨
床、４８巻、２９１−２９７、１９９０年）。また、特
にプレＳ２領域の値はＨＢＶの増殖状態を反映し、その
存在量はＨＢｓ抗原量と比較的良く相関することが知ら
れている（飯野四郎、ＭｅｄｉｃａｌＰｒａｃｔｉｃ
ｅ、５巻、５３０−５４３、１９８８年）。

【０００７】ＨＢｓ抗原の測定は、肝疾患の診断、無症
候性のキャリアの判別、感染後の経緯モニターに有用で
あり、また輸血用血液を検査することによって輸血後肝
炎を防止するためにもに不可欠なものである。このた
め、ＨＢｅ抗原陽性期等の感染初期において、ＨＢｓ抗
原を高感度測定する必要がある。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】従来から行われている
ＨＢｓ抗原の測定は、Ｓ領域に対する抗体を用いたサン
ドイッチ法によるものである。これは、不溶性担体に固
定したＳ領域に対する抗体と、検出可能な標識物質を結
合したＳ領域に対する抗体を用い、血清等の試料中にＳ
領域が存在していた場合にＳ領域を介して前記標識物質
が前記不溶性担体に結合されることを利用するものであ
る。

【０００９】しかしながらこの方法はプレＳ１又はプレ
Ｓ２領域に着眼していないために、感染初期（ＨＢｅ抗
原陽性期）においてＨＢＶを測定するにはなおいっそう
の高感度化が必要であった。

【００１０】そこで本発明は、感染の初期から高感度に
ＨＢＶを測定するための免疫測定試薬を提供しようとす
るものである。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明は、ＨＢＶ感染初
期には、ＨＢｓ抗原のＳ領域はもとより、プレＳ領域や
プレＳ２領域が見出されることに着目して完成されたも
のである。即ち前記目的を達成するためになされた本願
請求項１の発明は、ＨＢＶを検出するための免疫測定試
薬であって、不溶性担体に結合し又は結合した抗体（固
相抗体）と、標識物質と結合し又は結合した抗体（標識
抗体）から構成され、前記固相抗体と標識抗体はＨＢｓ
抗原のプレＳ１領域、プレＳ２領域及び／又はＳ領域に
対する抗体から選択された１種以上の抗体であることを
特徴とする免疫測定試薬（ただし固相抗体と標識抗体が
それぞれ前記から選ばれた一種類の同一抗体である場合
を除く）である。

【００１２】本願請求項２の発明は、請求項１の免疫測
定試薬に係り、前記固相抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗
原のＳ領域に対する抗体であり、前記標識抗体がＢ型肝
炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体及びプレＳ１
領域に対する抗体であることを特徴とする。本願請求項
３の発明は、請求項１の免疫測定試薬に係り、前記固相
抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体
であり、前記標識抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ
領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体である
ことを特徴とする。本願請求項４の発明は、請求項１の
免疫測定試薬に係り、前記固相抗体がＢ型肝炎ウイルス
表面抗原のＳ領域に対する抗体であり、前記標識抗体が
Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体、プレ
Ｓ１領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体で
あることを特徴とする。

【００１３】本願請求項５の発明は、請求項１の免疫測
定試薬に係り、前記固相抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗
原のＳ領域に対する抗体及びプレＳ１領域に対する抗体
であり、前記標識抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ
領域に対する抗体であることを特徴とする。本願請求項
６の発明は、請求項１の免疫測定試薬に係り、前記固相
抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体
及びプレＳ１領域に対する抗体であり、前記標識抗体が
Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体及びプ
レＳ１領域に対する抗体であることを特徴とする。本願
請求項７の発明は、請求項１の免疫測定試薬に係り、前
記固相抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対す
る抗体及びプレＳ１領域に対する抗体であり、前記標識
抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体
及びプレＳ２領域に対する抗体であることを特徴とす
る。本願請求項８の発明は、請求項１の免疫測定試薬に
係り、前記固相抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領
域に対する抗体及びプレＳ１領域に対する抗体であり、
前記標識抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対
する抗体、プレＳ１領域に対する抗体及びプレＳ２領域
に対する抗体であることを特徴とする。

【００１４】本願請求項９の発明は、請求項１の免疫測
定試薬に係り、前記固相抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗
原のＳ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体
であり、前記標識抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ
領域に対する抗体であることを特徴とする。本願請求項
１０の発明は、請求項１の免疫測定試薬に係り、前記固
相抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗
体及びプレＳ２領域に対する抗体であり、前記標識抗体
がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体及び
プレＳ１領域に対する抗体であることを特徴とする。本
願請求項１１の発明は、請求項１の免疫測定試薬に係
り、前記固相抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域
に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体であり、前
記標識抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対す
る抗体及びプレＳ２領域に対する抗体であることを特徴
とする。本願請求項１２の発明は、請求項１の免疫測定
試薬に係り、前記固相抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原
のＳ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体で
あり、前記標識抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領
域に対する抗体、プレＳ１領域に対する抗体及びプレＳ
２領域に対する抗体であることを特徴とする。

【００１５】本願請求項１３の発明は、請求項１の免疫
測定試薬に係り、前記固相抗体がＢ型肝炎ウイルス表面
抗原のＳ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する抗体
及びプレＳ２領域に対する抗体であり、前記標識抗体が
Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体である
ことを特徴とする。本願請求項１４の発明は、請求項１
の免疫測定試薬に係り、前記固相抗体がＢ型肝炎ウイル
ス表面抗原のＳ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対す
る抗体及びプレＳ２領域に対する抗体であり、前記標識
抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体
及びプレＳ１領域に対する抗体であることを特徴とす
る。本願請求項１５の発明は、請求項１の免疫測定試薬
に係り、前記固相抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ
領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する抗体及びプレ
Ｓ２領域に対する抗体であり、前記標識抗体がＢ型肝炎
ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体及びプレＳ２領
域に対する抗体であることを特徴とする。本願請求項１
６の発明は、請求項１の免疫測定試薬に係り、前記固相
抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗
体、プレＳ１領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対す
る抗体であり、前記標識抗体がＢ型肝炎ウイルス表面抗
原のＳ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する抗体及
びプレＳ２領域に対する抗体であることを特徴とする。

【００１６】そして本願請求項１７の発明は、請求項１
〜１６いずれかの免疫測定試薬に係り、前記抗体がモノ
クローナル抗体であることを特徴とする。

【００１７】以下、本発明の免疫測定試薬を、これを使
用したＨＢＶ測定と併せて詳細に説明する。

【００１８】本発明における固相抗体は、Ｓ領域に対す
る抗体を必須成分として含むが、更にはＨＢｓ抗原のプ
レＳ１領域、プレＳ２領域に対する抗体から選択された
１種以上の抗体を含むことが好ましい。Ｓ領域に対する
抗体を必須成分とするのは、前述の効果を達成するため
には該抗体が必要だからである。これら抗体はポリクロ
ーナル抗体であってもモノクローナル抗体であっても良
いが、均一な試薬を製造するという観点、ＨＢＶとの均
一な反応性という観点等から、モノクローナル抗体を用
いることが好ましい。ポリクローナル抗体であってもモ
ノクローナル抗体であっても、前記各抗原を用いて通常
の抗体調製方法を実施することにより本願発明に使用す
る抗体を容易に取得することができる。

【００１９】不溶性担体は、後述するサンドイッチ複合
体を形成した後に、該複合体を形成した標識抗体と該複
合体を形成していない複合体を分離する目的で使用され
る担体であり、その大きさや形状は特に制限されない。
例えば、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、デキ
ストラン等を原料とする、直径１ｍｍから１ｃｍ程度の
ビーズ状、チューブ状、プレート状の担体を例示でき
る。またこれら不溶性担体は、均質な材料で構成されて
いる必要はなく、例えば攪拌や吸引のための磁性物質を
含有していても良い。

【００２０】前記不溶性担体と抗体は、物理的結合、化
学的な結合（担体表面の適当な官能基と抗体中のアミノ
基を結合させる直接的な結合の他、担体表面と抗体とを
シラン化合物等の二官能性架橋剤を中間体として介在さ
せ結合する間接的な結合を含む）、そして更には前記の
ような方法に従い、結合させようとする抗体に対する抗
体（抗抗体）を予め結合し、これを介して結合すれば良
い。また不溶性担体と抗体は、実際の測定に先立って結
合されている必要はなく、例えば血清等の血液試料を添
加した状態で不溶性担体と結合されるものであっても良
い。

【００２１】本発明の標識抗体もまた、Ｓ領域に対する
抗体を必須成分として含むが、ＨＢｓ抗原のプレＳ１領
域、プレＳ２領域に対する抗体から選択された１種以上
の抗体を含むことが好ましい（ただし固相抗体と標識抗
体がそれぞれ前記から選ばれた一種類の同一抗体である
場合を除く）。これら抗体は、ポリクローナル抗体であ
っても、モノクローナル抗体であっても良いが、均一な
試薬を製造するという観点からモノクローナル抗体を用
いることが好ましい。ポリクローナル抗体であっても、
モノクローナル抗体であっても、前記各抗原を用いて通
常の抗体調製方法を実施することにより容易に取得する
ことができる。なおＨＢｓ抗原は多価抗原であることが
知られており、固相抗体と標識抗体に同一のモノクロー
ナル抗体を使用することもできる。

【００２２】前記標識物質は、それ自体が検出可能な信
号を発し、或いは、検出可能な物質を発生させることの
できる物質であればいかなるものでも良く、例えば前者
の例としては種々の蛍光物質、発光物質又は放射性同位
元素等を例示することができる。例えば後者の例として
は、アルカリ性フォスファターゼ等の酵素を例示するこ
とができる。

【００２３】標識物質と抗体は、例えば化学的な結合
（標識物質中の適当な官能基と抗体中のアミノ基を結合
させる直接的な結合の他、標識物質と抗体とをシラン化
合物等の二官能性架橋剤を中間体として介在させ結合す
る間接的な結合を含む）や、アビジンとビオチン等のリ
ガンド結合を利用することにより結合することができ
る。標識物質と抗体とは、実際の測定に先立って結合さ
れている必要はなく、測定操作の実施中に、例えば血清
等の血液試料を添加した状態で結合されるものであって
も良い。固相抗体における不溶性担体と抗体間の結合
と、標識抗体における標識物質と抗体間の結合とは、互
いに干渉しない、即ちＨＢＶを介することなしに標識物
質が不溶性担体に結合するようなことがないように、異
なる物質や様式によって結合するよう考慮しておく。

【００２４】固相抗体又は標識抗体として使用する抗体
は、それぞれ前記した群から任意に選択することが可能
であるが、本発明者らの知見によれば、特に以下のよう
な組み合わせが、ＨＢＶの高感度測定のために好適であ
る。

【００２５】（第１の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体標識抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ１領域に対す
る抗体の混合、（第２の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体標識抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対す
る抗体の混合、（第３の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体標識抗体：Ｓ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する
抗体及びプレＳ２領域に対する抗体の混合、（第４の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ１領域対する
抗体の混合標識抗体：Ｓ領域に対する抗体、（第５の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ１領域対する
抗体の混合標識抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ１領域に対す
る抗体の混合、（第６の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ１領域に対す
る抗体の混合標識抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対す
る抗体の混合、（第７の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ１領域に対す
る抗体の混合標識抗体：Ｓ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する
抗体及びプレＳ２領域に対する抗体の混合、（第８の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対す
る抗体の混合標識抗体：Ｓ領域に対する抗体、（第９の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対す
る抗体の混合標識抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ１領域に対す
る抗体の混合、（第１０の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対す
る抗体の混合標識抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対す
る抗体の混合、（第１１の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対す
る抗体の混合標識抗体：Ｓ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する
抗体及びプレＳ２領域に対する抗体の混合、（第１２の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する
抗体及びプレＳ２領域に対する抗体の混合標識抗体：Ｓ領域に対する抗体、（第１３の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する
抗体及びプレＳ２領域に対する抗体の混合標識抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ１領域に対す
る抗体の混合、（第１４の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する
抗体及びプレＳ２領域に対する抗体の混合標識抗体：Ｓ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対す
る抗体の混合、（第１５の組み合わせ）固相抗体：Ｓ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する
抗体及びプレＳ２領域に対する抗体の混合標識抗体：Ｓ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する
抗体及びプレＳ２領域に対する抗体の混合。

【００２６】前記したように、これら抗体はポリクロー
ナル抗体であっても良いが、全てモノクローナル抗体で
あることが好ましい。

【００２７】本発明の免疫測定試薬は、種々の状態で提
供することができる。例えば適当な容器中に前記固相抗
体と標識抗体を分注し、凍結乾燥状態にしておけば、該
容器に試料となる血清等の血液試料を分注するのみで、
不溶性担体−抗体−ＨＢｓ抗原−抗体−標識物質という
サンドイッチ複合体（ここで、少なくとも抗体−ＨＢｓ
抗原−抗体間の結合は免疫結合である）が形成され得
る。この他にも、例えば固相抗体又は標識抗体の一方み
を容器に分注して予め凍結乾燥し他方を液状のままにし
たり、或いは、両方を液状のままにしても良い。

【００２８】血液試料と抗体を混合してサンドイッチ複
合体を形成させ、該複合体に結合していない標識抗体を
分離するまでの操作は、例えば試料、固相抗体及び標識
抗体を一度に混合してインキュベート後、未結合の標識
抗体を分離する方法の他、試料と固相抗体をまず混合・
インキュベート後、必要により固相抗体と結合していな
い試料成分を分離し、続いて標識抗体を混合・インキュ
ベート後、未結合の標識抗体を分離する方法や、これと
は逆に、試料と標識抗体をまず混合・インキュベート
後、固相抗体を混合・インキュベートし、未結合の標識
抗体を分離する方法のいずれを採用しても良い。

【００２９】前記操作における、サンドイッチ複合体を
形成していない未結合標識抗体の分離は、例えば遠心分
離の他、不溶性担体を通過させないフィルターや吸引管
を用いて実施することができる。

【００３０】サンドイッチ複合体を形成させ、未結合の
標識抗体を分離したならば、サンドイッチ複合体に結合
しているか、或いは前記のようにして分離された成分中
の標識物質量を測定する。この測定操作は、標識物質の
性質に応じて適宜選択されるが、例えば蛍光物質、発光
物質又は放射性同位元素等のそれ自体が検出可能な信号
を発する標識物質においては、光学的測定や放射能測定
を実施すれば良い。

【００３１】一方、アルカリ性フォスファターゼ等の酵
素のように、それ自体は信号を発しないが、検出可能な
物質を発生させることのできる物質を標識物質として使
用した場合は、引き続き検出可能な物質を発生させる作
業を行った後、該物質を検出する。例えば標識物質が酵
素であれば、該酵素の作用によって検出可能な物質に変
換される基質を添加し、光学的測定等を行う。かかる酵
素基質として、アルカリ性フォスファターゼに対する４
メチルウンベリフェリルりん酸塩等を例示することがで
きる。またこの場合、基質等を混合してから一定時間経
過後に一回だけ測定を行うことも可能であるが、高精度
の測定を行うためには、基質等を混合後、一定時間が経
過した時点から一定期間中に複数回の測定を行い、検出
可能な物質の増加速度を算出する、いわゆるレート測定
を行うことが好ましい。

【００３２】標識物質の測定後、その結果を、既知濃度
のＨＢｓ抗原を含む標準試薬について同様の操作を行っ
て得られた結果に照らし合わせることにより、試料中に
存在するＨＢｓ抗原の濃度を知ることができる。

【００３３】

【発明の実施の形態】以下、実施例により本発明を更に
詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものでは
ない。なお実施例では、免疫測定装置として自動免疫測
定装置（ＡＩＡ−１２００、東ソー（株）製）を用い、
試料、固相抗体及び標識抗体を一度の混合する、いわゆ
る１ステップサンドイッチ測定で測定した。より具体的
には、固相抗体とアルカリ性フォスファターゼと結合し
た標識抗体を分注した容器にヒトの血清を分注し、３７
℃にて攪拌保温した後、前記装置の分離手段を用いて未
結合標識抗体を除去し、４メチルウンベリフェリルりん
酸塩添加し、単位時間当たりの４メチルウンベリフェロ
ンの生成速度（ｎＭ／秒）を蛍光測定した。

【００３４】実施例１ＨＢｓ抗原のＳ領域に対するマウスモノクローナル抗体
を結合した直径約１ｍｍのビーズ状担体と、前記標識物
質を結合した２種類の抗体（一方は前記マウスモノクロ
ーナル抗体とは異なる、Ｓ領域に対するマウスモノクロ
ーナル抗体であり、もう一方はプレＳ２領域に対するマ
ウスモノクローナル抗体である）とを含む溶液を、容量
１．２ｍｌの容器に分注して凍結乾燥し、本発明の測定
試薬（以下試薬Ａとする）を調製した。比較のため、標
識物質と結合したプレＳ２領域に対する抗体を含まない
以外は試薬Ａと同様の従来試薬（以下試薬Ｂとする）を
調製した。なお試薬Ａにおける標識抗体量と試薬Ｂにお
ける固相抗体量及び標識抗体量は、蛋白質レベルで同一
である。

【００３５】ＨＢｓ抗原陰性血清（３検体；表１上部）
とＨＢｓ抗原陽性血清（２検体；下部）について、前記
試薬Ａ及びＢを用いて測定を行った。結果を表１に示
す。

【００３６】

【表１】

【００３７】表１中の測定値は各検体について５重測定
を行った平均値であり、「Ｓ／Ｎ」は各検体についての
測定値を陰性血清３検体の平均値で割った比である。

【００３８】ＨＢｓ抗原陰性血清の測定値に関しては、
試薬Ａ、Ｂとも同程度の測定値を示したが、ＨＢｓ抗原
陽性血清の測定値に関しては、試薬Ａの測定値が試薬Ｂ
の測定値の１．３から１．４倍程度高い値になった。こ
の結果は、ＨＢｓ抗原陽性血清に対するＳ／Ｎ値は試薬
Ａが試薬Ｂよりも大きく、試薬Ａがより高感度であるこ
とを示すものである。

【００３９】実施例２実施例１で用いたＨＢｓ抗原陽性血清をＨＢｓ抗原陰性
血清で希釈し、４濃度の希釈列を調製した。この希釈列
及びＨＢｓ抗原陰性血清（対照）を実施例１で調製した
試薬Ａ及びＢを用いて測定し、両者の測定結果を比較し
た。結果を表２に示す。

【００４０】

【表２】

【００４１】表２中の測定値は各希釈列について５重測
定を行った平均値であり、「Ｓ／Ｎ」は各希釈列につい
ての測定値を陰性血清の測定値で割った比である。

【００４２】ＨＢｓ抗原陰性血清の測定値に関しては、
試薬Ａ、Ｂとも同程度の測定値を示したが、希釈列の測
定値に関しては、試薬Ａの測定値が試薬Ｂの測定値の
１．２から１．３倍程度高い値になった。この結果は、
希釈列１から４のＳ／Ｎ値は試薬Ａが試薬Ｂよりも大き
く、試薬Ａがより高感度であることを示すものである。

【００４３】実施例３実施例１で調製した試薬Ａ及びＢを用い、セロコンバー
ジョン血清パネル２セット（ＢｏｓｔｏｎＢｉｏｍｅ
ｄｉｃａ社製、ＰＨＭ９２２、ＰＨＭ９０７）を測定
して測定結果を比較した。なおＳ／Ｎ比を求めるために
ＨＢｓ抗原陰性血清についても測定を行った。

【００４４】ＰＨＭ９２２を用いた測定結果を表３に示
す。表３中「Ｓ／Ｎ」は各測定値をＨＢｓ抗原陰性血清
の測定値で割った比を、「経過日数」は最初に採血して
からの経過日数を、そして「ＤＯ」はｄｅｔｅｃｔｏ
ｖｅｒ、即ち測定装置の検量域外の高値を示したことを
意味する。表３からわかるように、試薬ＢではＳ／Ｎが
１４日目付近から高くなっているが、試薬Ａでは7日目
付近から高くなっている。また７日目以降、試薬Ａでは
Ｓ／Ｎが試薬Ｂより１．４〜１．８倍高くなっている。
この結果は、試薬Ａが試薬Ｂよりも高感度であり、より
早期にＨＢｓ抗原を検出していることを示すものであ
る。

【００４５】

【表３】

【００４６】ＰＨＭ９０７を用いた測定結果を表４に示
す。表４中「Ｓ／Ｎ」は各測定値をＨＢｓ抗原陰性血清
の測定値で割った比を、「経過日数」は最初に採血して
からの経過日数を、そして「ＤＯ」はｄｅｔｅｃｔｏ
ｖｅｒ、即ち測定装置の検量域外の高値を示したことを
意味する。表４からわかるように、試薬ＢではＳ／Ｎが
５０日目付近から高くなっているが、試薬Ａでは４３日
目付近から高くなっている。また７日目以降、試薬Ａで
はＳ／Ｎが試薬Ｂより１．３〜１．７倍高くなってい
る。この結果は、試薬Ａが試薬Ｂよりも高感度であり、
より早期にＨＢｓ抗原を検出していることを示すもので
ある。

【００４７】

【表４】

【００４８】以上の結果から、試薬Ａは試薬Ｂよりも感
度が高く、早期にＨＢｓ抗原を検出可能であり、この結
果ＨＢＶ感染の早期検出に有用であることが分かる。

【００４９】

【発明の効果】以上に説明したように本発明によれば、
ＨＶＢ感染等を知るにあたり、ＨＢｓ抗原を測定するに
当たり、従来試薬が測定しているＳ領域に加え、プレＳ
１領域やプレＳ２領域をも測定対象とすることにより、
ＨＢｓ抗原、そして結果的にはＨＢＶの高感度検出を実
現したものである。

【００５０】またＨＢＶ感染初期感染初期（ＨＢｅ抗原
陽性期）に血液中に放出されるＨＢｓ抗原は主としてプ
レＳ１及びプレＳ２領域であることから、本発明は感染
初期におけるＨＢＶをも高感度検出し得るという効果を
有するものである。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】Ｂ型肝炎ウイルスを検出するための免疫測
定試薬であって、不溶性担体に結合し又は結合した抗体
（固相抗体）と、標識物質と結合し又は結合した抗体
（標識抗体）から構成され、前記固相抗体と標識抗体は
Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原のプレＳ１領域、プレＳ２領
域及び／又はＳ領域に対する抗体から選択された１種以
上の抗体であることを特徴とする免疫測定試薬（ただし
固相抗体と標識抗体がそれぞれ前記から選ばれた一種類
の同一抗体である場合を除く）。
【請求項２】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原
のＳ領域に対する抗体であり、前記標識抗体はＢ型肝炎
ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体及びプレＳ１領
域に対する抗体であることを特徴とする請求項１の免疫
測定試薬
【請求項３】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原
のＳ領域に対する抗体であり、前記標識抗体はＢ型肝炎
ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体及びプレＳ２領
域に対する抗体であることを特徴とする請求項１の免疫
測定試薬。
【請求項４】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原
のＳ領域に対する抗体であり、前記標識抗体はＢ型肝炎
ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体、プレＳ１領域
に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体であること
を特徴とする請求項１の免疫測定試薬。
【請求項５】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原
のＳ領域に対する抗体及びプレＳ１領域に対する抗体で
あり、前記標識抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領
域に対する抗体であることを特徴とする請求項１の免疫
測定試薬。
【請求項６】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原
のＳ領域に対する抗体及びプレＳ１領域に対する抗体で
あり、前記標識抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領
域に対する抗体及びプレＳ１領域に対する抗体であるこ
とを特徴とする請求項１の免疫測定試薬。
【請求項７】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原
のＳ領域に対する抗体及びプレＳ１領域に対する抗体で
あり、前記標識抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領
域に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体であるこ
とを特徴とする請求項１の免疫測定試薬。
【請求項８】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原
のＳ領域に対する抗体及びプレＳ１領域に対する抗体で
あり、前記標識抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領
域に対する抗体、プレＳ１領域に対する抗体及びプレＳ
２領域に対する抗体であることを特徴とする請求項１の
免疫測定試薬。
【請求項９】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原
のＳ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体で
あり、前記標識抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領
域に対する抗体であることを特徴とする請求項１の免疫
測定試薬。
【請求項１０】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗
原のＳ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体
であり、前記標識抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ
領域に対する抗体及びプレＳ１領域に対する抗体である
ことを特徴とする請求項１の免疫測定試薬。
【請求項１１】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗
原のＳ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体
であり、前記標識抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ
領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体である
ことを特徴とする請求項１の免疫測定試薬。
【請求項１２】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗
原のＳ領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体
であり、前記標識抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗原のＳ
領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する抗体及びプレ
Ｓ２領域に対する抗体であることを特徴とする請求項１
の免疫測定試薬。
【請求項１３】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗
原のＳ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する抗体及
びプレＳ２領域に対する抗体であり、前記標識抗体はＢ
型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体であるこ
とを特徴とする請求項１の免疫測定試薬。
【請求項１４】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗
原のＳ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する抗体及
びプレＳ２領域に対する抗体であり、前記標識抗体はＢ
型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体及びプレ
Ｓ１領域に対する抗体であることを特徴とする請求項１
の免疫測定試薬。
【請求項１５】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗
原のＳ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する抗体及
びプレＳ２領域に対する抗体であり、前記標識抗体はＢ
型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体及びプレ
Ｓ２領域に対する抗体であることを特徴とする請求項１
の免疫測定試薬。
【請求項１６】前記固相抗体はＢ型肝炎ウイルス表面抗
原のＳ領域に対する抗体、プレＳ１領域に対する抗体及
びプレＳ２領域に対する抗体であり、前記標識抗体はＢ
型肝炎ウイルス表面抗原のＳ領域に対する抗体、プレＳ
１領域に対する抗体及びプレＳ２領域に対する抗体であ
ることを特徴とする請求項１の免疫測定試薬。
【請求項１７】前記抗体はモノクローナル抗体であるこ
とを特徴とする請求項１〜１６いずれかに記載の免疫測
定試薬。