JPS62106369A - 免疫測定法 - Google Patents
免疫測定法Info
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- JPS62106369A JPS62106369A JP60248329A JP24832985A JPS62106369A JP S62106369 A JPS62106369 A JP S62106369A JP 60248329 A JP60248329 A JP 60248329A JP 24832985 A JP24832985 A JP 24832985A JP S62106369 A JPS62106369 A JP S62106369A
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
-
- G—PHYSICS
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、免疫測定法に於て、フィプロインに包括固定
化した固定化抗体又は抗原を繰り返し使用することを特
徴とする免疫測定法に関する。
化した固定化抗体又は抗原を繰り返し使用することを特
徴とする免疫測定法に関する。
抗原抗体反応の高い特賢性を利用して検体中に含まれる
特定の抗原あるいは抗体を検出、定量し、疾病等の診断
あるいは治療に役立たせることは広く行われている。特
に、ラジオイムノアッセイやエンザイムイムノアッセイ
は臨床検査における微量分析手法として、その有用性は
益々高まって東ている。
特定の抗原あるいは抗体を検出、定量し、疾病等の診断
あるいは治療に役立たせることは広く行われている。特
に、ラジオイムノアッセイやエンザイムイムノアッセイ
は臨床検査における微量分析手法として、その有用性は
益々高まって東ている。
この免疫測定法を実施するに尚っては、測定端１τある
いは操作の簡便性等の観点から、一般に測定対象の抗原
（あるいは抗体）に対応する抗体（あるいは抗原）を予
め適当な不溶性担体に化学結合法、吸着法、又は包括法
などによって固定化しておき、この固定化抗体（あるい
は抗原）に測定対象の抗原（あるいは抗体）を反応させ
るいわゆる固相法が用いられている。
いは操作の簡便性等の観点から、一般に測定対象の抗原
（あるいは抗体）に対応する抗体（あるいは抗原）を予
め適当な不溶性担体に化学結合法、吸着法、又は包括法
などによって固定化しておき、この固定化抗体（あるい
は抗原）に測定対象の抗原（あるいは抗体）を反応させ
るいわゆる固相法が用いられている。
固相法による免疫測定法に於て 固定化抗体又は抗原を
繰り返し測定に使用することができれば貴改な抗体又は
抗原を再利用でき、また例えば連続自動測定装置に適用
して多数のサンプル処理を容易に行うことができる。
繰り返し測定に使用することができれば貴改な抗体又は
抗原を再利用でき、また例えば連続自動測定装置に適用
して多数のサンプル処理を容易に行うことができる。
固定化抗体又は抗原を繰り返し使用するためには、測定
後、一旦、抗原と抗体の結合を実質上完全に解離させ、
且つその結合能を全く損わないようにする必要がある。
後、一旦、抗原と抗体の結合を実質上完全に解離させ、
且つその結合能を全く損わないようにする必要がある。
木発明者等は上記の点に鑑み種々検討した結果、免疫測
定法に於て、フィプロインに包括固定化した固定化抗体
又は抗原に測定対象の抗原又は抗体、及び標識抗体又は
標識抗原を結合させ、次いで標識物によって測定対象の
抗原又は抗体量を測定後、一旦、ｐＨ約２〜４の緩衝液
に浸漬することによって結合したそれら抗原又は抗体を
固定化抗体又は抗原から容易にその結合能を損うことな
く解離させ、再度、免疫測定に繰り返し使用することが
できることを見出して本発明を完成した。
定法に於て、フィプロインに包括固定化した固定化抗体
又は抗原に測定対象の抗原又は抗体、及び標識抗体又は
標識抗原を結合させ、次いで標識物によって測定対象の
抗原又は抗体量を測定後、一旦、ｐＨ約２〜４の緩衝液
に浸漬することによって結合したそれら抗原又は抗体を
固定化抗体又は抗原から容易にその結合能を損うことな
く解離させ、再度、免疫測定に繰り返し使用することが
できることを見出して本発明を完成した。
本発明に用いるフィプロインに包括固定化した固定化抗
体又は抗原は特開昭８０−１４２２５９号公報又は特開
昭６０−１５５１２９号公報に記載の方法によって製造
すことができる（後記製造側参照）。
体又は抗原は特開昭８０−１４２２５９号公報又は特開
昭６０−１５５１２９号公報に記載の方法によって製造
すことができる（後記製造側参照）。
ト記固定化抗体又は抗原の形状は特に限定されないが１
本発明方法に於てはフィルム状のものが好適に使用され
る。
本発明方法に於てはフィルム状のものが好適に使用され
る。
本発明方法で測定しうる物質としては、例えば以下のよ
うなものが具体例として挙げられる。
うなものが具体例として挙げられる。
（℃ インシュリン、絨毛性ゴナドトロピン、胎盤性ラ
クトゲン、黄体形成ホルモンなどのポリペプチド系ホル
モン及びこれらの抗体。
クトゲン、黄体形成ホルモンなどのポリペプチド系ホル
モン及びこれらの抗体。
Ｌカ ＩｇＧ 、 ＴｇＡ 、 ＩｇＭ 、 ＩｇＥ
、α−フェトプロティン、カルシ／エンプリオニツクア
ンチケン、ハプトグロビンなどの血清蛋白及びこれらの
抗体。
、α−フェトプロティン、カルシ／エンプリオニツクア
ンチケン、ハプトグロビンなどの血清蛋白及びこれらの
抗体。
Ｌｊ） 大腸菌毒素、コレラトキシン、肝炎ウィルス
、風疹ウィルス、インフルエンザウィルスなどの毒素あ
るいはウィルス及びこれらの抗体。
、風疹ウィルス、インフルエンザウィルスなどの毒素あ
るいはウィルス及びこれらの抗体。
・■ エストラジオール、プロゲステロン、テストステ
ロン、フェニトイン、プロ力インアミド、カナマイシン
、ペニシリン、バルビッール酸などのステロイドホルモ
ンあるいは薬剤及びこれらの抗体。
ロン、フェニトイン、プロ力インアミド、カナマイシン
、ペニシリン、バルビッール酸などのステロイドホルモ
ンあるいは薬剤及びこれらの抗体。
上記物質を測定する際には、夫々に対応する抗体量は抗
原をフィプロインに包括固定化した固定化抗体又は抗原
が用いられる。
原をフィプロインに包括固定化した固定化抗体又は抗原
が用いられる。
測定に際しては、競争反応法又はサンドインチ法等の非
競争反応法のいずれによっても行うことができる。
競争反応法のいずれによっても行うことができる。
抗体又は抗原の標識には酵素、蛍光物質又は放射性同位
元素等を用いることができる。
元素等を用いることができる。
ｐＨ約２〜４の緩衝液としては、例えば夫々濃度０８０
５〜０．２モル／愛のグリシン−塩酸緩衝液又は酒石酸
−水酸化ナトリウム緩衝液が用いられ、この緩衝液に通
常１０〜４０ ’Ｃで３〜１０分間浸漬することによっ
て、結合した測定対象の抗原又は抗体及び標識抗体又は
標識抗原を固定化抗体又は抗原から容易にその結合能を
損うことなく解離させ、再度１免疫測定に繰り返Ｉ７使
用することができる。
５〜０．２モル／愛のグリシン−塩酸緩衝液又は酒石酸
−水酸化ナトリウム緩衝液が用いられ、この緩衝液に通
常１０〜４０ ’Ｃで３〜１０分間浸漬することによっ
て、結合した測定対象の抗原又は抗体及び標識抗体又は
標識抗原を固定化抗体又は抗原から容易にその結合能を
損うことなく解離させ、再度１免疫測定に繰り返Ｉ７使
用することができる。
ｐＨが上記範囲を越えると抗原−抗体間の結合がＭａＬ
にくくなり、また逆に低くなると固定化抗体又は抗唸が
変性し易くなるなど好ましくない。
にくくなり、また逆に低くなると固定化抗体又は抗唸が
変性し易くなるなど好ましくない。
又、Ｌ記緩衝液に塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸
ナトリウム等の中性塩を０．５〜１０重輻％含有させる
と解離操作を一層容易に行うことができる。
ナトリウム等の中性塩を０．５〜１０重輻％含有させる
と解離操作を一層容易に行うことができる。
本発明方法によれば、以下の試験結果に示すとおり、固
定化抗体又は抗原を繰り返し免疫測定に使用することが
できるため貴重な抗体又は抗原を再利用でき、また例え
ば連続自動測定装置に適用して多数のサンプルの処理を
容易に行うことができる。
定化抗体又は抗原を繰り返し免疫測定に使用することが
できるため貴重な抗体又は抗原を再利用でき、また例え
ば連続自動測定装置に適用して多数のサンプルの処理を
容易に行うことができる。
試験例１
１）供試試料
製ｉａ＠ｌで得らｋた表記フ４ブロインフ４ルムを７
Ｘ １２ｍｍの大きさに裁断し、厚さ２００−のポリエ
ステルシート（巾２ｍｍ、長さ１０ＣＩｌ）の先端部と
該フィルムの短辺の一端とをシアノアクリレート系接着
剤で接着し供試試料とした。
Ｘ １２ｍｍの大きさに裁断し、厚さ２００−のポリエ
ステルシート（巾２ｍｍ、長さ１０ＣＩｌ）の先端部と
該フィルムの短辺の一端とをシアノアクリレート系接着
剤で接着し供試試料とした。
２）試験方法
内径１０ｍｍの試験管に０．５重量％牛血清アルブミン
を含む生理食塩液を０．５ ｄずつ分注し１．Ｌ記フィ
ルム（ｎ＝ｆ＋２）を各々が完全に浸漬するように入れ
、室温で１時間放置した０次いで該０．５重量％牛血清
アルブミンを含む生理食塩液を吸引除去した後、８０ｎ
ｇ／ａＱの標準ＡＦＰ 。
を含む生理食塩液を０．５ ｄずつ分注し１．Ｌ記フィ
ルム（ｎ＝ｆ＋２）を各々が完全に浸漬するように入れ
、室温で１時間放置した０次いで該０．５重量％牛血清
アルブミンを含む生理食塩液を吸引除去した後、８０ｎ
ｇ／ａＱの標準ＡＦＰ 。
ｌＯ重偏形馬血清およびモノクローナル抗ヒトＡＦＰ抗
体（免疫動物マウス、但し、固定化したモノクローナル
抗体とは認識部位の異なるもの。）のペルオキシダーゼ
標識物（１，２ｇ／ｄ、酵素標識は、ジャーナル・才ブ
・ヒストケミストリー−エンド−サイトケミストリー（
Ｊｏｕｒｒ＋ａｌ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ ａｎｄ Ｃｙｔｏｃｈｅｍｉ−ｓｔｒｙ）第２２巻
、１０８４頁（１９７４年）に記載の方法に準じて過ヨ
ウ素酸酸化法によ、り行った。〕の入った０、１重量％
牛血清アルブミンを含む生理食塩液を０．５ ｄずつ入
れ、２２℃で１時間静置した。次いでへ留水で、夫々３
回洗浄した後、別に準備した内径１５ｍｍの試験管中に
入れ、各試験管に夫々＋９．１ｍＭ ｏ ７ ｘ ＝
レンジアミ７ 、２．４５ｍＭ過酸化水素を含むクエン
酸−リン酸２ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ５，０）０．５
ＩＩＬＱずつを加え入れ、室温下暗所に３０分間静置
した。フィルムを取り出した後、ＩＮ硫酸２−によって
酵素反応を停止させ、この反応液について４９２ｎｍの
吸光度（Ａｂｓ４９２）を測定した。次に、取り出した
フィルムを第１表に示す緩衝液に２０℃で５分間浸漬し
、水洗後標準ＡＦＰを加えずに、その他はＬ記と同様の
操作を行った（ブランク値）。
体（免疫動物マウス、但し、固定化したモノクローナル
抗体とは認識部位の異なるもの。）のペルオキシダーゼ
標識物（１，２ｇ／ｄ、酵素標識は、ジャーナル・才ブ
・ヒストケミストリー−エンド−サイトケミストリー（
Ｊｏｕｒｒ＋ａｌ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ ａｎｄ Ｃｙｔｏｃｈｅｍｉ−ｓｔｒｙ）第２２巻
、１０８４頁（１９７４年）に記載の方法に準じて過ヨ
ウ素酸酸化法によ、り行った。〕の入った０、１重量％
牛血清アルブミンを含む生理食塩液を０．５ ｄずつ入
れ、２２℃で１時間静置した。次いでへ留水で、夫々３
回洗浄した後、別に準備した内径１５ｍｍの試験管中に
入れ、各試験管に夫々＋９．１ｍＭ ｏ ７ ｘ ＝
レンジアミ７ 、２．４５ｍＭ過酸化水素を含むクエン
酸−リン酸２ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ５，０）０．５
ＩＩＬＱずつを加え入れ、室温下暗所に３０分間静置
した。フィルムを取り出した後、ＩＮ硫酸２−によって
酵素反応を停止させ、この反応液について４９２ｎｍの
吸光度（Ａｂｓ４９２）を測定した。次に、取り出した
フィルムを第１表に示す緩衝液に２０℃で５分間浸漬し
、水洗後標準ＡＦＰを加えずに、その他はＬ記と同様の
操作を行った（ブランク値）。
上記と同様の操作を、引き続き繰り返し行った。
３）結果
試験例２
１）供試試料
製造例２で得られた表記フィプロインフィルムを１．２
Ｘ Ｏ，７ｃｍの大きさに裁断し、試験例１と同様に
してポリエステルシートに接着り供Ｘ試料とした。
Ｘ Ｏ，７ｃｍの大きさに裁断し、試験例１と同様に
してポリエステルシートに接着り供Ｘ試料とした。
２） 試験方法
４鵡ｈＣＧを０．１０．３０，１００，３００履１０／
ｄの濃度で含有する０、１重量％牛血清アルブミン生理
食塩液の夫々０．５姻中に上記フィルム（ｎ＝各１０）
を各々浸漬し、２５℃で１時間反応した。水洗後、坑ｈ
ＣＧ抗体（家兎血清のＩｇＧ画分）の西洋ワサビペルオ
キシダーゼ標識物〔１，０μｇ／ａ、酵素標識は試験例
１と同様にして行った。〕を含有する０、１重量％牛血
清アルブミンの生理食塩液０．５−中に浸漬し、２５℃
で１時間反応した６次いで未結合の該標識物を蒸留水で
洗浄除去し、夫々のフィルムについて試験例１と同様に
して酵素反応を行い、この反応液についてＡｂｓ４９２
を測定した。次に、取り出したフィルムを第２表に示す
緩衝液に２０℃で５分間浸漬後、水洗し、引き続き上記
と同様の操作を各フィルムについて、標準ｈＣＧ各濃度
に対して夫々ランダムに１０回繰り返し行った。
ｄの濃度で含有する０、１重量％牛血清アルブミン生理
食塩液の夫々０．５姻中に上記フィルム（ｎ＝各１０）
を各々浸漬し、２５℃で１時間反応した。水洗後、坑ｈ
ＣＧ抗体（家兎血清のＩｇＧ画分）の西洋ワサビペルオ
キシダーゼ標識物〔１，０μｇ／ａ、酵素標識は試験例
１と同様にして行った。〕を含有する０、１重量％牛血
清アルブミンの生理食塩液０．５−中に浸漬し、２５℃
で１時間反応した６次いで未結合の該標識物を蒸留水で
洗浄除去し、夫々のフィルムについて試験例１と同様に
して酵素反応を行い、この反応液についてＡｂｓ４９２
を測定した。次に、取り出したフィルムを第２表に示す
緩衝液に２０℃で５分間浸漬後、水洗し、引き続き上記
と同様の操作を各フィルムについて、標準ｈＣＧ各濃度
に対して夫々ランダムに１０回繰り返し行った。
３）結果
結果を第２表に示した。
第２表
〔実施例〕
以丁に実施例および製造例を挙げて１本発明を更に具体
的に説明する。
的に説明する。
製造例１
４町 ・
（１）フィプロイン水溶液の調製：
生糸１００ｇを１．０重ｔ％のマルセル石けん水溶液５
父中に浸漬し、８０℃で３時間精練した。水洗後、更に
０．５子機％のマルセル石けん水溶液５文に浸漬して８
０℃で３時間精練し、セリシン等を実質的に除去したフ
ィプロイン原料７２ｇを得た。
父中に浸漬し、８０℃で３時間精練した。水洗後、更に
０．５子機％のマルセル石けん水溶液５文に浸漬して８
０℃で３時間精練し、セリシン等を実質的に除去したフ
ィプロイン原料７２ｇを得た。
水ｌｏｏｇとエチルアルコール８０ｇの入ったニーグー
中に塩化カルシウム１５０ｇを溶解し、７５℃に昇温後
、前記のフィプロイン原料７０ｇを投入、攪拌下に１時
間溶解した。次いで１８０ｇの温水（７５℃）を加えて
希釈混合した。フィプロインの溶解液を冷却した後、士
ローフアイバー型の透析器を用いて、温水に対して透析
税＄Ｌ、、５．７屯量％のフィプロイン水溶液＋２００
ｄを得た。塩化カルシウムの残留昂は０．０８℃量％で
あった。
中に塩化カルシウム１５０ｇを溶解し、７５℃に昇温後
、前記のフィプロイン原料７０ｇを投入、攪拌下に１時
間溶解した。次いで１８０ｇの温水（７５℃）を加えて
希釈混合した。フィプロインの溶解液を冷却した後、士
ローフアイバー型の透析器を用いて、温水に対して透析
税＄Ｌ、、５．７屯量％のフィプロイン水溶液＋２００
ｄを得た。塩化カルシウムの残留昂は０．０８℃量％で
あった。
（２）モノクローナル抗ヒｈＡＦＰ抗体固定化フィプロ
インフィルムの製造： モノクローナル抗ヒトＡＦＰ抗体（免疫動物マウス）を
生理食塩液に溶解し、２５０ｇ／ａＱの抗体溶液をｙＪ
製した。次にこの溶液を四方を仕切ったガラス板ヒに抗
体量が１０重ｇ／ａ／となるように流延し、１５℃で３
時間乾燥した。前記フィプロイン水溶液にグリセリンを
フィプロインに対して３０重に％になるように加えた溶
液をその上から流延し、２０°Ｃで１０時間乾燥するこ
とによって皮膜化させ、厚さ６０−の表記モノクローナ
ル抗ヒ）ＡＦＰ抗体固定化フィプロインフィルムを得た
。
インフィルムの製造： モノクローナル抗ヒトＡＦＰ抗体（免疫動物マウス）を
生理食塩液に溶解し、２５０ｇ／ａＱの抗体溶液をｙＪ
製した。次にこの溶液を四方を仕切ったガラス板ヒに抗
体量が１０重ｇ／ａ／となるように流延し、１５℃で３
時間乾燥した。前記フィプロイン水溶液にグリセリンを
フィプロインに対して３０重に％になるように加えた溶
液をその上から流延し、２０°Ｃで１０時間乾燥するこ
とによって皮膜化させ、厚さ６０−の表記モノクローナ
ル抗ヒ）ＡＦＰ抗体固定化フィプロインフィルムを得た
。
！Ａ造例２
肌工・
モノクローナル抗ｈＣＧ抗体（免疫動物マウス）を生理
食塩液に溶解し、２５０ｇｇ／ｄの抗体溶液を調製した
。次にこの溶液を、四方を仕切ったガラス板ヒに抗体着
が１０μｇ／ａｔとなるように塗布し、２０°Ｃで３詩
間乾燥した。次いで製造例１（１）と同様にして得たフ
ィプロイン水溶液を濃縮して１５．７千昂％のフィプロ
イン水溶液とし、更にグリセリンを２イブロインに対し
て３０重研％になるように加えた溶液をその上から流延
し、２０℃で８時間乾燥することによって皮膜化させ、
厚さ９０％の表記モノクローナル抗ｈＣＧ抗体固定化フ
ィプロインフィルムを得た。
食塩液に溶解し、２５０ｇｇ／ｄの抗体溶液を調製した
。次にこの溶液を、四方を仕切ったガラス板ヒに抗体着
が１０μｇ／ａｔとなるように塗布し、２０°Ｃで３詩
間乾燥した。次いで製造例１（１）と同様にして得たフ
ィプロイン水溶液を濃縮して１５．７千昂％のフィプロ
イン水溶液とし、更にグリセリンを２イブロインに対し
て３０重研％になるように加えた溶液をその上から流延
し、２０℃で８時間乾燥することによって皮膜化させ、
厚さ９０％の表記モノクローナル抗ｈＣＧ抗体固定化フ
ィプロインフィルムを得た。
実施例
１ｍ清中Ａ Ｆ ＰＦ ノｆｉ＋ 、’ Ｌ測″″：製
造例１と同様にして得たモノクローナル抗ヒトＡＦＰ抗
体固定化フィプロインフィルムを０．２５Ｘ １０ｃｍ
の大きさに裁断し、内径０．３ｃｍ長さ１１Ｃ１１のカ
ラス管内に挿入して反応カラムとし、第１図に示すよう
なフロ一式の測定装置を組んだ。
造例１と同様にして得たモノクローナル抗ヒトＡＦＰ抗
体固定化フィプロインフィルムを０．２５Ｘ １０ｃｍ
の大きさに裁断し、内径０．３ｃｍ長さ１１Ｃ１１のカ
ラス管内に挿入して反応カラムとし、第１図に示すよう
なフロ一式の測定装置を組んだ。
（１）標準曲線の作成：
反応カラムに蒸留水を満たし、これに標準ＡＦＰを０．
１．２５．２．５．５．１０．２０又は４０ｎｇ／ ａ
Ｑ 、馬血清１０セ量％、抗ヒトＡＦＰ抗体のカタラー
ゼ標識物（’Ｘ）０．８μｇ／ｄを含有する０、１屯着
％牛血清アルブミン生理食塩液０．７ｍ、Ｑを導入し、
２０分間静置後・２０ｄ／■１ｎ、の流速で１分間Ｉ入
留水を流しア反応カラムを洗浄した０次いで、１７．８
ｍＭ過酸化水素を含むＬＩＭリン酸緩衝液（ｐ）！７．
０）０．７−を反応カラムに導入し、５分間静Ｍ後、０
．５ ＠ｉ ／ ｗｉｎ、の流速で蒸留水により反応液
をガルバニ−型酸素電極セル（ＡＮ型、オリエンタル電
気株製）に流し、酸素１度に比例した電流値から一ヒ昇
電位を求めた。
１．２５．２．５．５．１０．２０又は４０ｎｇ／ ａ
Ｑ 、馬血清１０セ量％、抗ヒトＡＦＰ抗体のカタラー
ゼ標識物（’Ｘ）０．８μｇ／ｄを含有する０、１屯着
％牛血清アルブミン生理食塩液０．７ｍ、Ｑを導入し、
２０分間静置後・２０ｄ／■１ｎ、の流速で１分間Ｉ入
留水を流しア反応カラムを洗浄した０次いで、１７．８
ｍＭ過酸化水素を含むＬＩＭリン酸緩衝液（ｐ）！７．
０）０．７−を反応カラムに導入し、５分間静Ｍ後、０
．５ ＠ｉ ／ ｗｉｎ、の流速で蒸留水により反応液
をガルバニ−型酸素電極セル（ＡＮ型、オリエンタル電
気株製）に流し、酸素１度に比例した電流値から一ヒ昇
電位を求めた。
続いテ０−１８グリシンー塩酸緩衝掖（ｐＨ２、５、Ｎ
ａＣＱ ２％含有）を０．５１Ｊ ／ ｗｉｎ、の流速
で３分間流して結合した抗体と抗原を解離させ、更に２
０ａＱ ／ ｍｉｄ、の流速で１０秒間蒸留水を流して
反応カラムを洗浄した０次に、再び前記の標準ＡＦＰ溶
液を反応カラムに導入して同様な操作を各濃度夫々２回
ずつ繰り返して標準曲線（第２図）を得た。（なお、操
作は全て室温下に行った。） ※ 抗ヒ１−ＡＦＰ抗体のカタラーゼ標識は次のように
して行なった。
ａＣＱ ２％含有）を０．５１Ｊ ／ ｗｉｎ、の流速
で３分間流して結合した抗体と抗原を解離させ、更に２
０ａＱ ／ ｍｉｄ、の流速で１０秒間蒸留水を流して
反応カラムを洗浄した０次に、再び前記の標準ＡＦＰ溶
液を反応カラムに導入して同様な操作を各濃度夫々２回
ずつ繰り返して標準曲線（第２図）を得た。（なお、操
作は全て室温下に行った。） ※ 抗ヒ１−ＡＦＰ抗体のカタラーゼ標識は次のように
して行なった。
［！０ チ、抗体ＩＢ、カタラーゼ（牛肝臓由来、シグ
マ社製）３Ｉ１ｇをＯ，１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０
）ｌｄ中に溶解後、１０重量％グルタルアルデヒド水溶
液１０μＱを添加し、１５℃で３時間反応した０次に水
素化ホウ素ナトリウム２ｍｇを添加し、３０分後に反１
５液を透析チューブに入れ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，０）に対して４時間透析した。この反応液をゲルろ
過して結合した両分を採取し、標識抗体として用いた。
マ社製）３Ｉ１ｇをＯ，１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０
）ｌｄ中に溶解後、１０重量％グルタルアルデヒド水溶
液１０μＱを添加し、１５℃で３時間反応した０次に水
素化ホウ素ナトリウム２ｍｇを添加し、３０分後に反１
５液を透析チューブに入れ０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，０）に対して４時間透析した。この反応液をゲルろ
過して結合した両分を採取し、標識抗体として用いた。
（２）大血清中ＡＦＰ量の繰り返し測定：健常人血清（
ＡＦＰ量がラジオイムノアッセイで５ｍｇ／ａＱ以下と
判明しているもの。）ｌｄに標準ＡＦＰを夫ｈ ０．３
０．５０．８０，１５０，３００１１ｇ添加し、カタラ
ーゼ標識抗体０．８に／並を含有する０、１ 七量％牛
血清アルブミン生理食塩液で１０倍に希釈した後、」−
肥厚応力ラムを用いて上記と同様の操作を各濃度夫々２
回ずつ繰り返し、第３表の如き結東第３表 第３表から明らかなように、大血清中ＡＦＰＩを繰り返
しＩＩＩＩ定することができた。
ＡＦＰ量がラジオイムノアッセイで５ｍｇ／ａＱ以下と
判明しているもの。）ｌｄに標準ＡＦＰを夫ｈ ０．３
０．５０．８０，１５０，３００１１ｇ添加し、カタラ
ーゼ標識抗体０．８に／並を含有する０、１ 七量％牛
血清アルブミン生理食塩液で１０倍に希釈した後、」−
肥厚応力ラムを用いて上記と同様の操作を各濃度夫々２
回ずつ繰り返し、第３表の如き結東第３表 第３表から明らかなように、大血清中ＡＦＰＩを繰り返
しＩＩＩＩ定することができた。
第１図は実施例で用いたフロ一式の測定装置の概略図を
表わし、第２図はヒトＡＦＰの標準曲線を表わす。 第１図 府 燐 広 質 溶 液 第２図
表わし、第２図はヒトＡＦＰの標準曲線を表わす。 第１図 府 燐 広 質 溶 液 第２図
Claims (1)
- 免疫測定法に於て、フィプロインに包括固定化した固定
化抗体又は抗原に測定対象の抗原又は抗体、及び標識抗
体又は標識抗原を結合させ、次いで標識物によって測定
対象の抗原又は抗体量を測定後、一旦、ｐＨ約２〜４の
緩衝液に浸漬して結合したそれら抗原又は抗体を固定化
抗体又は抗原から解離させ、再度、免疫測定に繰り返し
使用することを特徴とする免疫測定法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60248329A JPS62106369A (ja) | 1985-11-05 | 1985-11-05 | 免疫測定法 |
| DE8686906453T DE3686717T2 (de) | 1985-11-05 | 1986-10-30 | Immuntestverfahren. |
| AT86906453T ATE80467T1 (de) | 1985-11-05 | 1986-10-30 | Immuntestverfahren. |
| PCT/JP1986/000552 WO1987002780A1 (en) | 1985-11-05 | 1986-10-30 | Method of immunoassay |
| EP86906453A EP0245509B1 (en) | 1985-11-05 | 1986-10-30 | Method of immunoassay |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60248329A JPS62106369A (ja) | 1985-11-05 | 1985-11-05 | 免疫測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62106369A true JPS62106369A (ja) | 1987-05-16 |
Family
ID=17176460
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60248329A Pending JPS62106369A (ja) | 1985-11-05 | 1985-11-05 | 免疫測定法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0245509B1 (ja) |
| JP (1) | JPS62106369A (ja) |
| AT (1) | ATE80467T1 (ja) |
| DE (1) | DE3686717T2 (ja) |
| WO (1) | WO1987002780A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008118211A2 (en) | 2006-11-03 | 2008-10-02 | Trustees Of Tufts College | Biopolymer photonic crystals and method of manufacturing the same |
| WO2008127401A2 (en) | 2006-11-03 | 2008-10-23 | Trustees Of Tufts College | Biopolymer optical waveguide and method of manufacturing the same |
| JP2010509593A (ja) * | 2006-11-03 | 2010-03-25 | トラスティーズ オブ タフツ カレッジ | バイオポリマーセンサーおよびその製造方法 |
| EP2650112B1 (en) | 2006-11-03 | 2016-08-24 | Trustees Of Tufts College | Nanopatterned biopolymer optical device and method of manufacturing the same |
| WO2009061823A1 (en) | 2007-11-05 | 2009-05-14 | Trustees Of Tufts College | Fabrication of silk fibroin photonic structures by nanocontact imprinting |
| WO2010126640A2 (en) | 2009-02-12 | 2010-11-04 | Trustees Of Tufts College | Nanoimprinting of silk fibroin structures for biomedical and biophotonic applications |
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| EP2474054A4 (en) | 2009-08-31 | 2013-03-13 | Tufts University Trustees Of Tufts College | SILK-BASED TRANSISTOR DEVICES |
Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
| JPS49125517A (ja) * | 1973-03-19 | 1974-12-02 | ||
| JPS60142269A (ja) * | 1983-12-24 | 1985-07-27 | エム・テー・ウー・モトーレン‐・ウント・ツルビーネン‐ウニオーン・ミユンヘン・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 流体の流れを光学的に測定するための方法及び装置 |
| JPS60155129A (ja) * | 1984-01-24 | 1985-08-15 | Kanebo Ltd | 固定化抗原または抗体の製造方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58176547A (ja) * | 1982-04-12 | 1983-10-17 | Denki Kagaku Kogyo Kk | イムノアフイニテイ−クロマトグラフイ−用担体 |
| JPS60108755A (ja) * | 1983-11-18 | 1985-06-14 | Olympus Optical Co Ltd | 免疫学的分析方法 |
| JPS60142259A (ja) * | 1983-12-29 | 1985-07-27 | Kanebo Ltd | 固定化抗体 |
| JPS63209605A (ja) * | 1987-02-24 | 1988-08-31 | 尾崎 公造 | 扇子の製造方法 |
| JPH0513525A (ja) * | 1991-07-05 | 1993-01-22 | Mitsubishi Electric Corp | Ｉｃソケツト |
-
1985
- 1985-11-05 JP JP60248329A patent/JPS62106369A/ja active Pending
-
1986
- 1986-10-30 DE DE8686906453T patent/DE3686717T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-10-30 EP EP86906453A patent/EP0245509B1/en not_active Expired
- 1986-10-30 WO PCT/JP1986/000552 patent/WO1987002780A1/ja active IP Right Grant
- 1986-10-30 AT AT86906453T patent/ATE80467T1/de not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS49125517A (ja) * | 1973-03-19 | 1974-12-02 | ||
| JPS60142269A (ja) * | 1983-12-24 | 1985-07-27 | エム・テー・ウー・モトーレン‐・ウント・ツルビーネン‐ウニオーン・ミユンヘン・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 流体の流れを光学的に測定するための方法及び装置 |
| JPS60155129A (ja) * | 1984-01-24 | 1985-08-15 | Kanebo Ltd | 固定化抗原または抗体の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3686717T2 (de) | 1993-01-28 |
| EP0245509A4 (en) | 1989-07-11 |
| DE3686717D1 (de) | 1992-10-15 |
| EP0245509A1 (en) | 1987-11-19 |
| EP0245509B1 (en) | 1992-09-09 |
| WO1987002780A1 (en) | 1987-05-07 |
| ATE80467T1 (de) | 1992-09-15 |
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