JPS5918036B2 - 新抗生物質ｓｆ−１９０８物質およびその製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なペプタイド系、抗菌、抗真菌性抗生物質
ＳＦ−１９０８物質およびその製造法に５ 関するもの
であり、更に詳しく述べると、ストレプトバーテイシリ
ウム属に属するＳＦ−１９０８物質生産菌を培地に培養
し、得られた培養物から採取した新抗生物質ＳＦ−１９
０８物質およびその製造法に関するものである。

本発明者らはスト９ レプトバーテイシリウム属に属す
る或る菌株の培養物中にバチルス属及び糸状菌類に対し
て抗菌力を示す物質が生産されていることを見出し、そ
の有効物質を培養物から純枠に単離し、その性状を調べ
た結果、既知の物質とは異なる新抗生物質で５ あるこ
とを確かめ、この有効物質をＳＦ−１９０８物質と命名
して本発明を完成した。すなわち、本発明は、ストレプ
トバーテイシリウム属に属するＳＦ−１９０８物質生産
菌を培養し、その培養物中にＳＦ−１９０８物質を生成
せフ しめこれを採取することを特徴とする抗生物質Ｓ
Ｆ−１９０８物質の製造法を要旨とするものである。

本発明の方法で使用されるストレプトバーテイシリウム
属のＳＦ−１９０８物質生産菌の１例と５ しては、本
発明者らによつて和歌山県西牟婁郡白浜の土壌から新た
に分離されたストレプトバーテイシリウム・シンナモネ
ウム・ＳＦ−１９０８株がある。

この菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌
寄第３７８５号として寄託されている。この菌の菌学的
性状は次のとおりである。１．形態 気菌糸はスターチ寒天、オートミル寒天、イースト・麦
芽寒天等で良好に着生し、胞子形成も豊富である。

分枝は主に一次輪生枝を形成し、その先端はまつすぐに
のび、ラセン状の形態は認められない。胞子は１０個以
内またはそれ以上の連鎖を形成し、菌核等は認められな
い。電子顕微鏡による胞子の表面構造は平滑で、胞子は
円筒形で大きさは、０．４〜０．６×０．８〜１．３ミ
クｐンである。．各種培地上の生育状態 各種培地上におけるＳＦ−１９０８株の生育状態を第１
表に要約して示す。

第１表における色調コードはカラー・ハーモニ一・マニ
ユアル（コンテイナ・コーポーレイシヨン・オブ・アメ
リカ社製）による色の分類にしたがつたものである。上
記からＳＦ−１９０８株の菌学的特徴を要約すると、気
菌糸は輪生枝を形成し、胞子表面構造は平滑である。

発育色調は黄色〜黄褐色となり、気菌糸は白色〜桃黄灰
色となる。可溶性色素の産生は弱く、一部の培地で淡黄
色の色素を産生し、非クロモゲニツク型である。本菌株
の性状は、ストレプトバーテイシリウム・シンナモネウ
ム（ＳｔｒｅｐｔＯｖｅｒｔｉｃｉｌｌｌｕｍｃｉｎｎ
ａｍＯ−Ｎｅｕｎｌ）（インターナシヨナル・ジヤーナ
ル・オブ・システイマテイツク・バクテリオロジ一、１
８巻、４号、３０９〜３１０頁、１９６８年）の性状と
よく一致している。

即ち、ストレプトバーテイシリウム・シンナモネウムは
、気菌糸は輪生枝を形成し、胞子表面構造は平滑で、発
育色調は灰黄色〜黄褐色または褐色となり、気菌糸はイ
ースト・麦芽寒天、オートミール寒天、スターチ寒天で
灰黄桃色を呈することおよび非クロモゲニツク型である
点でよく一致している。炭素源の利用性で相違する点が
認められるが、上記の特徴をそなえていることから、ス
トレプトバーテイシリウム・シンナモネウムの種に属さ
せるのが妥当であり、本発明者らは、ＳＦ−１９０８株
をストレプトバーテイシリウム・シンナモネウムＳＦ−
１９０８（Ｓｔｒｅｐｔｖｅｒｔｉｃｌｌｌｌｕｍｌｃ
ｉｎｎａｍＯｎｅｕｍＳＦ−１９０８）と命名し公知の
菌株と区別することにした。ＳＦ−１９０８株は他のス
トレプトミセスの場合にみられるようにその性状が変化
しやすく、例えば紫外線、エツクス線、高周波、放射線
、薬品等を用いる人工的手段で変異しうるものであり、
このような変異株であつてもＳＦ−１９０８物質の生産
能を有するものは全て本発明の方法に使用することが出
来る。本発明の方法では、前記菌株を通常微生物が利用
しうる栄養物を含有する培地で培養する。

栄養源としては、従来ストレプトミセス属の菌の培養に
利用されている公知のものが使用できる。例えば炭素源
としてグルコース、スターチ、グリセリン、デキストリ
ン、シユクロース、水あめ、糖みつ、大豆油等を使用し
うる。また窒素源として、大豆粉、コーンステイープリ
カ一、小麦胚芽、コツトンシードミール、硫酸アンモン
、硝酸ソーダ等を使用しうる。その他必要に応じて炭酸
カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリ、燐酸塩等の無
機塩を添加するほか、菌の発育を助け、ＳＦ−１９０８
物質の生産を促進するごとき有機および無機物を適当に
添加することが出来る、培養法としては、一般抗生物質
生産の方法と同じく、液体培養法、特に深部培養法が最
も適している。

培養は好気的条件下で行われ、培養に適当な温度は２５
〜３５℃であるが、多くの場合２８℃付近で培養する。
かくしてＳＦ−１９０８物質の生産は振盪培養、タンタ
培養共に２〜５日で最高に達する。以上述べた培養条件
は使用される培養菌株の特性に応じて、それぞれの最適
条件を選択して適用することができる。

ＳＦ−１９０８物質は中性の両性ペプタイド抗生物質で
あり、後記するような理化学性状を有しているので、Ｓ
Ｆ−１９０８物質の採取に当つてはその性状を利用して
抽出、精製することができる。

即ち、培養液中に蓄積されたＳＦ−１９０８物質は活性
炭末およびアンバーライトＸＡＤ−２（米国ローム・ア
ンド・ハース社）やダイヤイオンＨＰ−１０，ＨＰ−２
０（三菱化成）等の非イオン性の交叉したポリスチレン
重合体の吸着樹脂に吸着され、水とアセトン、アルコー
ル等の有機溶剤との混液で容易に溶出することができる
。また、ＳＦ−１９０８物質は陽イオン交換樹脂ダウエ
ツクス５０ＷＸ２（Ｈ型）に吸着され、アンモニア水で
溶出することができる。ＳＦ−１９０８物質をさらに精
製するには陽イオン交換性のＳＰ−セフアデツクス、Ｓ
Ｅ−セフアデツクス（フアルマシア社）およびセフアデ
ツクスＧ−１０（フアルマシア社）を用い、食塩水でク
ロマトグラフイ一を行ない、吸着樹脂で脱塩し濃縮乾固
すると、ＳＦ−１９０８物質の白色粉末を得ることが出
来る。

本発明によつて得られるＳＦ−１９０８物質の理化学的
性状は以下の通りである。

本物質の水溶液中での紫外部吸収スペクトルを第１図に
示す。

弱い吸収極大を有する。

５）赤外部吸収スペクトル： 臭化カリ錠剤法による本物質の赤外部吸収スベクトルを
第２図に示す。

３３８０，３０４０，２９５０，１６６０，１５２０，
１２４０，７００ＣＴＩＩ−１の各波長に吸収帯を有す
る。

６）元素分析値； 炭素４８．０６％、水素６，０４％、窒素１４．２８％
、硫黄５．２４％、酸素（差）２６．３８％７）分子量
： 約２５００（蒸気圧法） ８）溶解度：本物質は水に易溶であるが、メタノール、
エタノール、ｎ−ブタノール、アセトン、クロロホルム
、酢酸エチル、ベンゼン、ヘキサン、エーテルなどに難
溶または不溶である。

９）呈色反応：ニンヒドリン反応、ビユーレツト反応が
陽極で、坂口反応、エールリツヒ反応、モーリツシユ反
応、アンスロン反応、硝酸銀反応、塩化鉄反応が陰性で
ある。

１０）安定性：ＰＨｌ〜１０の間で安定である。

１１）高圧ろ紙電気泳動：東洋ろ紙滝５１で３０００Ｖ
，３０分間電気泳動を行なうと、ＰＨｌ．９バツハ一で
陰極に対照のＤＬ−アラニン２０．５ｃｍ）に対してＳ
Ｆ−１９０８物質５．５ｃｍ移動し、ＰＨ６．４バツハ
一でＤＬ−アラニン１．５儂，ＳＦ−１９０８物質２．
５ｃｆｒＬ陰極に移動した。

１２）アミノ酸分析：本物質を６規定塩酸で１１０℃，
２０時間加水分解して、アミノ酸自動分析機（日本電子
、ＪＬＣ６ＡＨ）で分析した結果、グリシン、フエニル
アラニン、プロリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、
リジン、バリン、イソロイシン、および不明のアミノ酸
３個が存在することが認められた。

１３）シリカゲル薄層クロマトグラフイ一におけるＳＦ
−１９０８物質の検定に当つては、次の方法が用いられ
る。

検定培地としてグルコース・ブイヨン寒天を用い、検定
菌はバチルス・ズブチリスを用いる。ＳＦ−１９０８物
質はこれを用いた検定に於て１００６ｍｃ９／ｍｌ〜１
２５ｍｃ９／ｍｌに於て、それぞれ２３，２ｍ７！Ｌ〜
１８．３關の阻止円を与える。（ベーパーデイスク平板
法）ＳＦ−１９０８物質の抗菌スペクトルは第２表に示
す通りである。

また本物質のマウスによる急性毒性試験ではＬＤ５Ｏは
靜脈注射で２３ＴＩ１９／Ｋｇであつた。

以上の様な理化学的性質および生物学的性質を有する既
知の硫黄を含む水溶性ペプタイド抗生物質と比較すると
、シンナマイシン（アンテイビオチク・アンド・ケモテ
ラピイ一、４巻、１１号、１１３５〜１１４２頁、１９
５４年）、デユラマイシン（ジヤーナル・オブ・アメリ
カン・ケミカル・ソサイテイ）８０、巻、１５号、３９
１２〜３９１５，１９５８年）、アルシマイシン（ドイ
ツ特許１０９０３８００ｃｔ．６，１９６０）、ロイコ
ペプチン（ジヤーナル・オブ・アンテイバイオチクス、
１７巻、６号、２６２〜２６３頁、１９６４）、ロイシ
ナマイシン（ジヤーナル・オブ・アンテイバイオチクス
、１０巻、４号、１９４〜１９９頁、１９６７）があげ
られるが、本物質とはアミノ酸組成の点で明らかに区別
される。従つて、ＳＦ−１９０８物質は全く新規な抗生
物質であると認められる。次に実施例を示すが、本発明
において、ここに例示しない多くの変契約いは修飾手段
を用いることは勿論である。

実施例 １ ストレプトバーテイシリウム・シンナモネウムＳＦ−１
９０８株（微工研菌寄第３７８５号）の胞子をスターチ
１％、大豆粉３％（ＰＨ７）の液体培地６００ｍ１（坂
ロフラスコ６本使用）に接種し、２８℃で４０時間振盪
培養したものを種母とする。

グルコース２．５％、小麦胚芽２．０％、ソリユーブル
・ベジタブルプロテイン０．５％、食塩０．２５％（Ｐ
Ｈ７）の組成からなる液体培地２０１に前記の種母を接
種し、２８℃で６６時間通気かくはん培養した。（５０
１ジヤーフアーメンタ一）この培養物に済過助剤ハイフ
ロスーパーセルを加えて淵過し培養ろ液１２１を得た。

この培養ろ液をダイヤイオンＨＰ−１０１．２１のカラ
ムを通過せしめると、ＳＰ−１９０８物質は樹脂に吸着
される。６１の水で洗滌後、６０％アセトン水１０１で
溶出し、２１ずつ分画すると、最初の４１に活性区分が
得られた。

これを減圧濃縮して２１の水溶液が得られ、回収率は９
０％であつた。ＳＦ−１９０８物質を含む水溶液２１を
陰イオン交換樹脂セフアデツクスＡ−２５（フアルマシ
ア社）２５０ｍ１のカラムを通過させ、１１の水で洗滌
し、洗液と合し、ＳＦ−１９０８物質を含有する水溶液
２．８１を得る。これをＳＰ−セフアデツクス２００ｍ
１のカラムを通過させると、ＳＦ−１９０８物質は吸着
される。

さらに、１１の水で洗滌後、０．０２５Ｍ塩化ナトリウ
ムで展開し、５００ｍ１ずつ分画すると、分画１〜４に
活性区分２１が得られた。この溶液をダイヤイオンＨＰ
−１．０１００ｍ１のカラムに吸着させ、５００ｍ１の
水で洗滌後、６０％アセトン水３００ｍ１で溶出し、減
圧下にて濃縮乾固し、ＳＦ−１９０８物質の淡黄白色粉
末１．４２９を得た。（純度９０％）実施例 ２ 実施例１で得た純度９０％のＳＦ−１９０８物質の淡黄
白色粉末の１９を５ｍ１に溶解し、セフアデツクスＧ−
１０６００ｍ１カラム（直径２．５？、長さ９０ｃＴｎ
）の上端にのせ、１１の水で水洗後、０．０２５ＭＮａ
Ｃｔにて展開すると、１５９画分で、分画７３〜９５に
活性区分が得られた。

活性区分３００ｍ１をダイヤイオンＨＰ−１０３０ｍ１
のカラムに吸着させ、１５０ｍ１の水で洗滌後、６０％
アセトン水１００ｍ１にて溶出し、減圧下にて、濃縮乾
固すると、ＳＦ−１９０８物質の白色粉末７２０ηを得
た。

【図面の簡単な説明】

第１図はＳＦ−１９０８物質の水での紫外部吸収スペク
トルである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次の物理的特性を有するＳＦ−１９０８物質：白色
   粉末、中性を示す両性物質；比旋光度▲数式、化学式、
   表等があります▼−８９．１°（Ｃ＿１、水中）平均元
   素組成（重量％）炭素４８．０６、水素６．０４、窒素
   １４．２８、硫黄５．２４％、酸素（差）２６．３８％
   ；融点２１１〜２３２℃で徐々に褐変する；紫外部吸収
   スペクトル２５０ｎｍ（▲数式、化学式、表等がありま
   す▼）、２５６ｎｍ（▲数式、化学式、表等があります
   ▼）、２６３ｎｍ（▲数式、化学式、表等があります▼
   ）、２６６ｎｍ（▲数式、化学式、表等があります▼）
   （第１図）；赤外部吸収スペクトル３３８０、３０４０
   、２９５０、１６６０、１５２０、１２４０、７００ｃ
   ｍ＾−＾１（臭化カリ錠剤法、第２図）；水に易溶でメ
   タノール、エタノール、ｎ−ブタノール、アセトン、ク
   ロロホルム、酢酸エチル、ベンゼン、ヘキサン、エーテ
   ルには難溶または不溶；ニンヒドリン反応、ビューレッ
   ト反応が陽性、坂口反応、エールリツヒ反応、モーリツ
   シユ反応、アンスロン反応、硝酸銀反応、塩化鉄反応が
   陰極。 ２ ストレプトバーテイシリウム属に属する抗生物質Ｓ
   Ｆ−１９０８物質生産菌を培養し、その培養物からＳＦ
   −１９０８物質を採取することからなる、新抗生物質Ｓ
   Ｆ−１９０８物質の製造法。