JP2566778B2 - Ｃ−１０２７物質 - Google Patents
Ｃ−１０２７物質Info
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、制癌性抗生物質Ｃ−1027物質に関する。
従来の技術 本発明のＣ−1027物質は、文献末記載の新規化合物で
ある。
ある。
発明が解決しようとする問題点 本発明の目的は、抗腫瘍作用を有する制癌性抗生物質
として有用な新規物質を提供することにある。
として有用な新規物質を提供することにある。
問題点を解決するための手段 上記目的は、下記性質を有するＣ−1027物質により達
成される。
成される。
性状：白色粉末状形態を有する。
溶解性：水に易溶であるが、メタノール、エタノー
ル、アセトン、酢酸エチル等の有機溶媒には溶けない。
ル、アセトン、酢酸エチル等の有機溶媒には溶けない。
紫外部吸収スペクトル：水溶液中、0.01N塩酸溶液中
及び0.01N水酸化ナトリウム溶液中で測定した紫外部吸
収スペクトルは、第１図にそれぞれ曲線（１）、（２）
及び（３）として示す通りであり、該図より中・酸性水
溶液中では270〜275nm及び350〜360nmに、アルカリ性水
溶液中では270〜275nm及び340〜345nmに吸収極大を示す
ことが判る。
及び0.01N水酸化ナトリウム溶液中で測定した紫外部吸
収スペクトルは、第１図にそれぞれ曲線（１）、（２）
及び（３）として示す通りであり、該図より中・酸性水
溶液中では270〜275nm及び350〜360nmに、アルカリ性水
溶液中では270〜275nm及び340〜345nmに吸収極大を示す
ことが判る。
赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠として測定し
た結果は、第２図に示す通りであり、3300、1640、1530
cm-1に主な吸収が認められる。
た結果は、第２図に示す通りであり、3300、1640、1530
cm-1に主な吸収が認められる。
融点：明確な融点、分解点を示さず、発泡しつつ徐々
に褐変・炭化し、260℃で完全に炭化する。
に褐変・炭化し、260℃で完全に炭化する。
呈色反応：ニンヒドリン、ビューレット、フォーリン
−ロウリィ反応に陽性で、アンスロン、アニリン−フタ
ル酸反応に陰性である。
−ロウリィ反応に陽性で、アンスロン、アニリン−フタ
ル酸反応に陰性である。
等電点:pH3.5〜3.7である。
塩基性、酸性、中性の区別：酸性を呈する。
元素分析：炭素45.22％、水素6.65％、窒素14.03％で
ある。
ある。
分子量:TSKゲルＧ−2000SW（東洋曹達社製）を用いた
高速ゲル過クロマトグラフィー及びSDS−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動法により算出される分子量は約15
000である。
高速ゲル過クロマトグラフィー及びSDS−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動法により算出される分子量は約15
000である。
アミノ酸構成:6N塩酸に溶解後、110℃、20時間加水分
解して測定した結果は下記第１表の通りであり、構成ア
ミノ酸として、アスパラギン酸、スレオニン、セリン、
グルタミン酸、プロリン、グリシン、アラニン、シスチ
ン、バリン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェ
ニルアラニン、ヒスチジン、リジン、アルギニンが検出
される。但し、シスチンはＳ−スルホシステインとし
て、トリプトファンは水酸化ナトリウムによるアルカリ
加水分解による分析値として示す。
解して測定した結果は下記第１表の通りであり、構成ア
ミノ酸として、アスパラギン酸、スレオニン、セリン、
グルタミン酸、プロリン、グリシン、アラニン、シスチ
ン、バリン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェ
ニルアラニン、ヒスチジン、リジン、アルギニンが検出
される。但し、シスチンはＳ−スルホシステインとし
て、トリプトファンは水酸化ナトリウムによるアルカリ
加水分解による分析値として示す。
Ｎ末端アミノ酸:DNP法、DNS法によりＮ末端としてア
ラニンが検出される。
ラニンが検出される。
本発明のＣ−1027物質は、微生物の培養により得るこ
とができる。即ち、本物質は、Ｃ−1027物質の生産能力
を有する菌株（以下Ｃ−1027物質生産菌と称する）を適
当な条件下で培養することによつて、培養液から採取す
ることができる。
とができる。即ち、本物質は、Ｃ−1027物質の生産能力
を有する菌株（以下Ｃ−1027物質生産菌と称する）を適
当な条件下で培養することによつて、培養液から採取す
ることができる。
本物質の製造に用い得るＣ−1027物質生産菌には、ス
トレプトミセス（Streptomyces）属に属する菌株が包含
される。その一例としては、ストレプトミセス セトニ
イ Ｃ−1027（Streptomyces setonii C−1027）を例示
できる。この菌株は、本発明者らが中華人民共和国雲南
省の土壌から新たに分離したストレプトミセス属に属す
る菌株であり、通商産業省工業技術院微生物工業技術研
究所に、微生物の表示「Strain C−1027」、受託番号
「微工研条寄第1299号」（FERM BP−1299）として寄託
されている。その菌学的性質は次の通りである。
トレプトミセス（Streptomyces）属に属する菌株が包含
される。その一例としては、ストレプトミセス セトニ
イ Ｃ−1027（Streptomyces setonii C−1027）を例示
できる。この菌株は、本発明者らが中華人民共和国雲南
省の土壌から新たに分離したストレプトミセス属に属す
る菌株であり、通商産業省工業技術院微生物工業技術研
究所に、微生物の表示「Strain C−1027」、受託番号
「微工研条寄第1299号」（FERM BP−1299）として寄託
されている。その菌学的性質は次の通りである。
（ａ）形態 胞子形成菌糸の分枝法：単純分枝 胞子形成の形態：直鎖状〜波状 胞子の数:15個以上 胞子の表面構造：平滑 胞子の形：円筒状 胞子の大きさ:0.5〜0.6μｍ×0.7〜0.8μｍ 鞭毛胞子の有無：無 胞子のうの有無：無 胞子柄の着生位置：気菌糸 菌該形成性の有無：無 （ｂ）各種培地における生育状態 各種培地における生育状態は、第２表に示す通りであ
る。
る。
（ｃ）生理的性質 １）生育温度範囲:27〜30℃の温度範囲で良好に生育す
るが、40℃以上の温度では生育しない ２）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトンゼラチン培
地、27℃）：陽性 ３）ミルクの凝固（37℃）：陽性 ４）ミルクのペプトン化（37℃）：陽性 ５）メラミン様色素の生成： チロシン寒天（ISP−７培地）上、ペプトン・酵母エキ
ス・鉄寒天（ISP−６培地）上及びトリプトン・イース
ト・ブロス（ISP−１培地）中で陰性 ６）硫化水素の産生：陽性 ７）スターチの加水分解（ISP−４培地）：陽性 ８）硝酸塩の還元：陽性 ９）セルロースの加水分解：陰性 （ｄ）炭素源の利用性（プリードハム・ゴトリーブ寒天
培地、ISP−９培地） Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコー
ス、Ｄ−フラクトース、Ｌ−ラムノース、Ｄ−マンニト
ール、スターチ、マルトース、グリセリンを利用してよ
く生育し、シュークロース、イノシトール、ラフィノー
スは利用しない。
るが、40℃以上の温度では生育しない ２）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトンゼラチン培
地、27℃）：陽性 ３）ミルクの凝固（37℃）：陽性 ４）ミルクのペプトン化（37℃）：陽性 ５）メラミン様色素の生成： チロシン寒天（ISP−７培地）上、ペプトン・酵母エキ
ス・鉄寒天（ISP−６培地）上及びトリプトン・イース
ト・ブロス（ISP−１培地）中で陰性 ６）硫化水素の産生：陽性 ７）スターチの加水分解（ISP−４培地）：陽性 ８）硝酸塩の還元：陽性 ９）セルロースの加水分解：陰性 （ｄ）炭素源の利用性（プリードハム・ゴトリーブ寒天
培地、ISP−９培地） Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコー
ス、Ｄ−フラクトース、Ｌ−ラムノース、Ｄ−マンニト
ール、スターチ、マルトース、グリセリンを利用してよ
く生育し、シュークロース、イノシトール、ラフィノー
スは利用しない。
（ｅ）菌体組成 ベツカー（Becker）らの方法［アプライドミクロバイ
オロジー（Appl.Microbiol.），12、421〜423（196
4）］により分析した結果、LL−型のジアミノピメリン
酸が検出された。
オロジー（Appl.Microbiol.），12、421〜423（196
4）］により分析した結果、LL−型のジアミノピメリン
酸が検出された。
以上の菌学的性質、特に基生菌糸より多数の胞子の連
鎖を有する気菌糸を形成し、ジアミノピメリン酸がLL−
型であり、鞭毛胞子や胞子のうを形成しない性質より、
本Ｃ−1027株はストレプトミセス属に属する菌株である
ことが明らかである。
鎖を有する気菌糸を形成し、ジアミノピメリン酸がLL−
型であり、鞭毛胞子や胞子のうを形成しない性質より、
本Ｃ−1027株はストレプトミセス属に属する菌株である
ことが明らかである。
また、之等の性状より既知の菌株を検索すると、スト
レプトミセス・セトニイ（Streptomyces setonii;Journ
al of Systematic Bacteriology,19巻、481頁、1969
年）が最も近縁の種として挙げられる。従って、本Ｃ−
1027株をストレプトミセス・セトニイISP5395株と比較
検討した結果、両者は基生菌糸の色がわずかに異なるの
みで、他はかなりよく一致していることが確認された。
よつて、本株をストレプトミセス・セトニイと同定し、
これをストレプトミセス・セトニイＣ−1027（Streptom
yces setonii C−1027）と命名した。
レプトミセス・セトニイ（Streptomyces setonii;Journ
al of Systematic Bacteriology,19巻、481頁、1969
年）が最も近縁の種として挙げられる。従って、本Ｃ−
1027株をストレプトミセス・セトニイISP5395株と比較
検討した結果、両者は基生菌糸の色がわずかに異なるの
みで、他はかなりよく一致していることが確認された。
よつて、本株をストレプトミセス・セトニイと同定し、
これをストレプトミセス・セトニイＣ−1027（Streptom
yces setonii C−1027）と命名した。
本発明のＣ−1027物質は、例えば上記Ｃ−1027株又は
その変異株等のストレプトミセス属に属する各種のＣ−
1027物質生産菌を適当な培地で培養することにより製造
できる。
その変異株等のストレプトミセス属に属する各種のＣ−
1027物質生産菌を適当な培地で培養することにより製造
できる。
上記微生物の培養は、原則的に一般微生物の培養に準
じるものであり、通常液体培養による振盪培養法、通気
撹拌培養法等の好気的条件下で行なわれるのが好適であ
る。
じるものであり、通常液体培養による振盪培養法、通気
撹拌培養法等の好気的条件下で行なわれるのが好適であ
る。
培養に用いられる培地としては、Ｃ−1027物質生産菌
が利用できる栄養源を含有する培地であればよく、各種
の合成培地、半合成培地、天然培地等をいずれも用いる
ことができる。培地組成としては炭素源としてのグルコ
ース、シユークロース、フラクトース、グリセリン、デ
キストリン、澱粉、糖蜜、コーン・ステイープ・リカ
ー、有機酸等を単独又は組合せて用い得る。窒素源とし
てはフアーマメデイア、ペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、大豆粉、カゼイン、アミノ酸、尿素等の有機窒素
源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム等の無機窒素源
を単独又は組合せて用い得る。また培地には、ナトリウ
ム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩、その他
の重金属塩等も必要に応じて適宜添加使用され得る。
が利用できる栄養源を含有する培地であればよく、各種
の合成培地、半合成培地、天然培地等をいずれも用いる
ことができる。培地組成としては炭素源としてのグルコ
ース、シユークロース、フラクトース、グリセリン、デ
キストリン、澱粉、糖蜜、コーン・ステイープ・リカ
ー、有機酸等を単独又は組合せて用い得る。窒素源とし
てはフアーマメデイア、ペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、大豆粉、カゼイン、アミノ酸、尿素等の有機窒素
源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモニウム等の無機窒素源
を単独又は組合せて用い得る。また培地には、ナトリウ
ム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩、その他
の重金属塩等も必要に応じて適宜添加使用され得る。
尚、培養中発泡の著しい時は、例えば大豆油、亜麻仁
油等の植物油、オクタデカノール、テトラデカノール、
ヘプタデカノール等の高級アルコール類、各種シリコン
化合物等の消泡剤を適宜培地中に添加することもでき
る。
油等の植物油、オクタデカノール、テトラデカノール、
ヘプタデカノール等の高級アルコール類、各種シリコン
化合物等の消泡剤を適宜培地中に添加することもでき
る。
培地のpHは、やや酸性ないし中性付近とするのが好ま
しい。培養温度は、Ｃ−1027物質生産菌が良好に生育す
る温度、通常約20〜37℃、特に好ましくは約27〜30℃付
近に保つのがよい。培養時間は、液体振盪培養及び通気
撹拌培養のいずれの場合も、一般に２〜５日間程度とさ
れる。上記培養によって目的とするＣ−1027物質が生成
蓄積される。勿論上述した各種の培養条件は、使用微生
物の種類や特性、外部条件等に応じて適宜変更でき、ま
たそれぞれ応じて上記範囲から最適条件を選択、調節で
きる。
しい。培養温度は、Ｃ−1027物質生産菌が良好に生育す
る温度、通常約20〜37℃、特に好ましくは約27〜30℃付
近に保つのがよい。培養時間は、液体振盪培養及び通気
撹拌培養のいずれの場合も、一般に２〜５日間程度とさ
れる。上記培養によって目的とするＣ−1027物質が生成
蓄積される。勿論上述した各種の培養条件は、使用微生
物の種類や特性、外部条件等に応じて適宜変更でき、ま
たそれぞれ応じて上記範囲から最適条件を選択、調節で
きる。
上記培養により生産されるＣ−1027物質の単離は、発
酵生産物を採取する一般的な方法に準じて実施でき、例
えば塩析、ハイドロフォービッククロマトグラフィー、
イオン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィ
ー、ゲル過クロマトグラフィー等の各種手段を単独又
は任意の順序で組合せることにより実施できる。
酵生産物を採取する一般的な方法に準じて実施でき、例
えば塩析、ハイドロフォービッククロマトグラフィー、
イオン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィ
ー、ゲル過クロマトグラフィー等の各種手段を単独又
は任意の順序で組合せることにより実施できる。
より詳しくは、上記培養により生産されるＣ−1027物
質は主として培養液体（液）中に存在するので、常法
に従いまず過、遠心分離等を行なって、培養液と菌
体固形分とを分離し、得られる液に硫酸アンモニウム
等の公知の塩析剤を添加し塩析する。次いで、所望のＣ
−1027物質を含有する沈澱物を遠心分離するか、珪藻土
等の過助剤を添加して過する。上記操作の際、沈澱
物の回収を容易にするために、例えば硫酸第二鉄、塩化
第二鉄、硫酸アルミニウム等の凝集剤を添加使用するこ
ともできる。また上記凝集剤の添加等により、溶液のpH
が大巾に変化する場合は、炭酸ナトリウム、炭酸カリウ
ム、リン酸一ナトリウム等の中和剤を凝集剤の添加直前
に添加してpHを５〜８に保持することもできる。上記塩
析は繰返し行なうこともできる。
質は主として培養液体（液）中に存在するので、常法
に従いまず過、遠心分離等を行なって、培養液と菌
体固形分とを分離し、得られる液に硫酸アンモニウム
等の公知の塩析剤を添加し塩析する。次いで、所望のＣ
−1027物質を含有する沈澱物を遠心分離するか、珪藻土
等の過助剤を添加して過する。上記操作の際、沈澱
物の回収を容易にするために、例えば硫酸第二鉄、塩化
第二鉄、硫酸アルミニウム等の凝集剤を添加使用するこ
ともできる。また上記凝集剤の添加等により、溶液のpH
が大巾に変化する場合は、炭酸ナトリウム、炭酸カリウ
ム、リン酸一ナトリウム等の中和剤を凝集剤の添加直前
に添加してpHを５〜８に保持することもできる。上記塩
析は繰返し行なうこともできる。
上記操作により得られた沈澱物は、次いでこれを水又
は適当な緩衝液、例えばトリス−塩酸緩衝液、リン酸塩
緩衝液等に溶解させ、直接又はセロファン膜、限外過
膜等を用いて脱塩した後、更に精製することができる。
この精製は、例えばダウエックス１（ダウケミカル社
製）、アンバーライトIRA−400（ローム・アンド・ハー
ス社製）等の強塩基性イオン交換樹脂、アンバーライト
IR−45（ローム・アンド・ハース社製）、DEAE−セルロ
ース等の弱塩基性イオン交換樹脂やハイフロ・スーパー
セル（ジョーンズ・マンビル・セールズ社製）、ハイド
ロキシアパタイト等の公知の吸着剤に、目的とするＣ−
1027物質を含有する水溶液を通して、夾雑物を吸着除去
させ、次いで通過液をイオン交換セファデックス（ファ
ルマシア社製）、イオン交換セルロース等に付してＣ−
1027物質を吸着させ、これを食塩等の中性塩水溶液、ト
リス−塩酸緩衝液、リン酸緩衝液等の適当な緩衝液で溶
出させることにより行ない得る。上記で得られるＣ−10
27物質の水溶液は、これを限外過等により濃縮後、セ
ファデックスＧ−50、セファデックスＧ−75（いずれも
ファルマシア社製）等のゲル過によって、更に精製で
きる。また、最終的に得られる精製物に低分子の塩類が
含まれる場合には、セファデックスＧ−25（ファルマシ
ア社製）を用いてクロマトグラフィーや限外過、透析
等の通常の手段によりこれを除去することができる。
尚、上記各種クロマトグラフィー操作は之等を繰返し行
なうのが、夾雑物の除去に、より有効である。
は適当な緩衝液、例えばトリス−塩酸緩衝液、リン酸塩
緩衝液等に溶解させ、直接又はセロファン膜、限外過
膜等を用いて脱塩した後、更に精製することができる。
この精製は、例えばダウエックス１（ダウケミカル社
製）、アンバーライトIRA−400（ローム・アンド・ハー
ス社製）等の強塩基性イオン交換樹脂、アンバーライト
IR−45（ローム・アンド・ハース社製）、DEAE−セルロ
ース等の弱塩基性イオン交換樹脂やハイフロ・スーパー
セル（ジョーンズ・マンビル・セールズ社製）、ハイド
ロキシアパタイト等の公知の吸着剤に、目的とするＣ−
1027物質を含有する水溶液を通して、夾雑物を吸着除去
させ、次いで通過液をイオン交換セファデックス（ファ
ルマシア社製）、イオン交換セルロース等に付してＣ−
1027物質を吸着させ、これを食塩等の中性塩水溶液、ト
リス−塩酸緩衝液、リン酸緩衝液等の適当な緩衝液で溶
出させることにより行ない得る。上記で得られるＣ−10
27物質の水溶液は、これを限外過等により濃縮後、セ
ファデックスＧ−50、セファデックスＧ−75（いずれも
ファルマシア社製）等のゲル過によって、更に精製で
きる。また、最終的に得られる精製物に低分子の塩類が
含まれる場合には、セファデックスＧ−25（ファルマシ
ア社製）を用いてクロマトグラフィーや限外過、透析
等の通常の手段によりこれを除去することができる。
尚、上記各種クロマトグラフィー操作は之等を繰返し行
なうのが、夾雑物の除去に、より有効である。
上記各種の精製操作及び之等の組合せにより得られる
目的のＣ−1027物質含有精製液は、凍結乾燥することが
でき、これによりＣ−1027物質を白色粉末として収得で
きる。
目的のＣ−1027物質含有精製液は、凍結乾燥することが
でき、これによりＣ−1027物質を白色粉末として収得で
きる。
本発明のＣ−1027物質が単一物質であることは、SDS
−ポリアクリルアミドゲル・ディスク電気泳動での単一
帯、セファデックスＧ−50（ファルマシア社製）のカラ
ムクロマトグラフィでの対称型の単一ピーク、TSKゲルG
2000SW（東洋曹達社製）を用いた高速ゲル過クロマト
グラフィーにおける単一ピーク、アンホライン（LKB社
製）を用いた等電点電気泳動における単一帯等によって
証明される。
−ポリアクリルアミドゲル・ディスク電気泳動での単一
帯、セファデックスＧ−50（ファルマシア社製）のカラ
ムクロマトグラフィでの対称型の単一ピーク、TSKゲルG
2000SW（東洋曹達社製）を用いた高速ゲル過クロマト
グラフィーにおける単一ピーク、アンホライン（LKB社
製）を用いた等電点電気泳動における単一帯等によって
証明される。
本発明Ｃ−1027物質は、上記各種性質を有する点にお
いて特徴付けられると共に、以下の生物学的活性を有す
る点においても特徴付けられる。
いて特徴付けられると共に、以下の生物学的活性を有す
る点においても特徴付けられる。
抗菌活性 グラム陽性細菌の発育を強く阻害する。本発明Ｃ−10
27物質の抗菌活性（抗菌スペクトラム）を、ミュラーヒ
ントン寒天培地を用いた系列２倍希釈法に従い測定し
た。得られた最小発育阻止濃度（M.I.C.）を、下記第３
表に示す。
27物質の抗菌活性（抗菌スペクトラム）を、ミュラーヒ
ントン寒天培地を用いた系列２倍希釈法に従い測定し
た。得られた最小発育阻止濃度（M.I.C.）を、下記第３
表に示す。
上記第３表から、本発明Ｃ−1027物質はグラム陽性細
菌を強く阻害することが判る。
菌を強く阻害することが判る。
抗腫瘍活性 本発明Ｃ−1027物質の抗腫瘍活性を、次に示すように
マウス白血病に対する延命効果により判定した。即ち、
試験動物としてBALB/cとDBA/2の交配第一代マウスCDF1
マウスを各群６匹用い、DBA/2マウス由来の白血病P388
細胞の106個を腹腔内移植してP388白血病担癌マウスを
作成した。上記移植の翌日より第１、５、９日目に生理
食塩水に溶解したＣ−1027物質を0.33mg/kg腹腔内投与
し、上記担癌マウスの生存日数を観察した。
マウス白血病に対する延命効果により判定した。即ち、
試験動物としてBALB/cとDBA/2の交配第一代マウスCDF1
マウスを各群６匹用い、DBA/2マウス由来の白血病P388
細胞の106個を腹腔内移植してP388白血病担癌マウスを
作成した。上記移植の翌日より第１、５、９日目に生理
食塩水に溶解したＣ−1027物質を0.33mg/kg腹腔内投与
し、上記担癌マウスの生存日数を観察した。
また同様にして、L1210白血病担癌マウスを作成し、
同様にＣ−1027物質の0.5mg/kgを腹腔内投与し、その生
存日数を観察した。
同様にＣ−1027物質の0.5mg/kgを腹腔内投与し、その生
存日数を観察した。
得られた生存日数から下式に従い延命率を求めた。結
果を第４表に示す。
果を第４表に示す。
またマウスザルコーマ180（Sarcoma180）皮下移植系
に対しても、本発明Ｃ−1027物質は腫瘍増殖抑制効果が
認められる。また試験管内KB細胞に対する殺細胞効果で
のED50値（50％有効量）は、0.001〜0.0001μg/mlと非
常に低い値を示す。
に対しても、本発明Ｃ−1027物質は腫瘍増殖抑制効果が
認められる。また試験管内KB細胞に対する殺細胞効果で
のED50値（50％有効量）は、0.001〜0.0001μg/mlと非
常に低い値を示す。
上記の通り、本発明Ｃ−1027物質は、微量で抗腫瘍作
用を有する点において注目される。
用を有する点において注目される。
また、本発明Ｃ−1027物質のpH、温度及び光に対する
安定性を調べた結果は次の通りである。即ち、37℃の水
溶液中、pH4〜９では比較的安定であるが、強度、強ア
ルカリでは急速に活性を失う。室温に放置すれば徐々に
活性が低下する。数十分間の紫外線照射で活性は殆んど
失われる。
安定性を調べた結果は次の通りである。即ち、37℃の水
溶液中、pH4〜９では比較的安定であるが、強度、強ア
ルカリでは急速に活性を失う。室温に放置すれば徐々に
活性が低下する。数十分間の紫外線照射で活性は殆んど
失われる。
実施例 以下、本発明のＣ−1027物質の製造例を実施例として
挙げる。
挙げる。
なお、精製工程中の有効物質の確認は、Ｃ−1027物質
により増殖抑制作用のみられるスタフイロコツカス・ア
ウレウス FDA 209P（Staphylococcus aureus FDA 209
P）、ミクロコッカス・ルテウス ATCC 9341（Micrococc
us luteus ATCC 9341）等の微生物を用いたバイオアツ
セイ法又はヒト鼻咽腔癌由来の株化培養細胞（KB細胞）
に対する殺細胞効果を調べることにより行なつた。
により増殖抑制作用のみられるスタフイロコツカス・ア
ウレウス FDA 209P（Staphylococcus aureus FDA 209
P）、ミクロコッカス・ルテウス ATCC 9341（Micrococc
us luteus ATCC 9341）等の微生物を用いたバイオアツ
セイ法又はヒト鼻咽腔癌由来の株化培養細胞（KB細胞）
に対する殺細胞効果を調べることにより行なつた。
実施例 １ グリセロール2.0％、デキストリン2.0％、ソイトン1.
0％、酵母エキス0.3％、硫酸アンモニウム0.2％及び炭
酸カルシウム0.2％よりなる培地（pH6.6）100mlを、500
mlの三角フラスコに分注し、滅菌後、該培地にストレプ
トミセス セトニイ Ｃ−1027株（微工研条寄第1299
号）の一白金耳量を接種し、27℃で48時間回転振盪培養
した（毎分180回転、振幅10cm）。次にグリセロール2.0
％、デキストリン2.0％、フィッシュミール1.0％、プロ
テオースペプトン0.5％、硫酸アンモニウム0.2％及び炭
酸カルシウム0.2％よりなる培地（pH6.8）を500mlの三
角フラスコに100mlずつ分注し、滅菌後、上記の種菌を
５％の割合で加え、27℃で、96時間回転振盪培養した。
0％、酵母エキス0.3％、硫酸アンモニウム0.2％及び炭
酸カルシウム0.2％よりなる培地（pH6.6）100mlを、500
mlの三角フラスコに分注し、滅菌後、該培地にストレプ
トミセス セトニイ Ｃ−1027株（微工研条寄第1299
号）の一白金耳量を接種し、27℃で48時間回転振盪培養
した（毎分180回転、振幅10cm）。次にグリセロール2.0
％、デキストリン2.0％、フィッシュミール1.0％、プロ
テオースペプトン0.5％、硫酸アンモニウム0.2％及び炭
酸カルシウム0.2％よりなる培地（pH6.8）を500mlの三
角フラスコに100mlずつ分注し、滅菌後、上記の種菌を
５％の割合で加え、27℃で、96時間回転振盪培養した。
培養終了後、培養液（pH8.0）10を採取し、遠心、
過後、得られた培養液7.0を塩酸でpH4.0に調整
し、硫酸アンモニウム3.5kgを溶解後、５℃で３時間撹
拌した。析出したＣ−1027物質を含む沈澱を遠心分離
（５℃、3000r.p.m.、30分）して集めた。得られた沈澱
物を400mlの脱イオン水に溶解させ、セロファン膜を用
いて透析後、凍結乾燥して、粗粉末5.3gを得た。
過後、得られた培養液7.0を塩酸でpH4.0に調整
し、硫酸アンモニウム3.5kgを溶解後、５℃で３時間撹
拌した。析出したＣ−1027物質を含む沈澱を遠心分離
（５℃、3000r.p.m.、30分）して集めた。得られた沈澱
物を400mlの脱イオン水に溶解させ、セロファン膜を用
いて透析後、凍結乾燥して、粗粉末5.3gを得た。
上記粗粉末2.0gを400mlの脱イオン水に溶解させ、遠
心分離（５℃、3000r.p.m.、30分）により不溶物を除去
した後、DEAE−セルロース（和光純薬株式会社製）を充
填したカラムに通して、活性物質を吸着させた。脱イオ
ン水400mlで洗浄後、0.1M塩化ナトリウム溶液で溶出さ
せ、得られた活性画分112mlをセロファン膜を用いて冷
脱イオン水に対して透析し、透析内液を凍結乾燥した。
心分離（５℃、3000r.p.m.、30分）により不溶物を除去
した後、DEAE−セルロース（和光純薬株式会社製）を充
填したカラムに通して、活性物質を吸着させた。脱イオ
ン水400mlで洗浄後、0.1M塩化ナトリウム溶液で溶出さ
せ、得られた活性画分112mlをセロファン膜を用いて冷
脱イオン水に対して透析し、透析内液を凍結乾燥した。
かくして得られた粗精製物245mgを水に溶解させ、セ
ファデックスＧ−50（ファルマシア社製）を充填したカ
ラムに添加し、脱イオン水でクロマトグラフィーを行な
い、活性を示す画分80mlを凍結乾燥して白色粉末120mg
を得た。これを再度水に溶解後、セファデックスＧ−75
（ファルマシア社製）を充填したカラムを用いて同様に
してクロマトグラフィーを行なった。活性画分を集め、
凍結乾燥して、目的とするＣ−1027物質の白色粉末62mg
を得た。
ファデックスＧ−50（ファルマシア社製）を充填したカ
ラムに添加し、脱イオン水でクロマトグラフィーを行な
い、活性を示す画分80mlを凍結乾燥して白色粉末120mg
を得た。これを再度水に溶解後、セファデックスＧ−75
（ファルマシア社製）を充填したカラムを用いて同様に
してクロマトグラフィーを行なった。活性画分を集め、
凍結乾燥して、目的とするＣ−1027物質の白色粉末62mg
を得た。
得られたＣ−1027物質の諸性質及び生物学的特性は前
述した通りであった。
述した通りであった。
第１図は、水、0.01N塩酸及び0.01N水酸化ナトリウム水
溶液中のそれぞれで測定したＣ−1027物質の紫外部吸収
スペクトルの結果を示す図であり、第２図は臭化カリウ
ム錠剤法で測定した同Ｃ−1027物質の赤外部吸収スペク
トルの結果を示す図である。
溶液中のそれぞれで測定したＣ−1027物質の紫外部吸収
スペクトルの結果を示す図であり、第２図は臭化カリウ
ム錠剤法で測定した同Ｃ−1027物質の赤外部吸収スペク
トルの結果を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 丸中 照義 徳島県板野郡松茂町広島字丸須１−217 (72)発明者 斉藤 等 徳島県徳島市庄町５丁目132 (72)発明者 山田 雄次 徳島県徳島市住吉４丁目２−８
Claims (1)
- 【請求項１】次の性質を有するＣ−1027物質。 性状：白色粉末 溶解性：水に易溶であるが、メタノール、エタノー
ル、アセトン、酢酸エチルには溶けない 紫外部吸収スペクトル： 中・酸性水溶液中では270〜275nm及び350〜360nmに、ア
ルカリ性水溶液中では270〜275nm及び340〜345nmに吸収
極大を示す 赤外部吸収スペクトル： 3300、1640、1530cm-1に大きな吸収を示す 融点：明確な融点、分解点を示さず、発泡しつつ徐々
に褐変・炭化し、260℃で完全に炭化する 呈色反応：ニンヒドリン、ビューレット、フォーリン
−ロウリィ反応に陽性で、アンスロン、アニリン−フタ
ル酸反応に陰性である 等電点:pH3.5〜3.7である 塩基性、酸性、中性の区別：酸性を呈する 元素分析：炭素45.22％、水素6.65％、窒素14.03％で
ある 分子量：ゲル過法及びSDS−ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動法により測定される分子量は、約15000であ
る アミノ酸構成：加水分解によって検出されるアミノ酸
は、アスパラギン酸、スレオニン、セリン、グルタミン
酸、プロリン、グリシン、アラニン、シスチン、バリ
ン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、フェニルアラ
ニン、ヒスチジン、リジン、アルギニンである。 Ｎ末端アミノ酸：アラニンである。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62160279A JP2566778B2 (ja) | 1987-06-26 | 1987-06-26 | Ｃ−１０２７物質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62160279A JP2566778B2 (ja) | 1987-06-26 | 1987-06-26 | Ｃ−１０２７物質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01104183A JPH01104183A (ja) | 1989-04-21 |
| JP2566778B2 true JP2566778B2 (ja) | 1996-12-25 |
Family
ID=15711557
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62160279A Expired - Lifetime JP2566778B2 (ja) | 1987-06-26 | 1987-06-26 | Ｃ−１０２７物質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2566778B2 (ja) |
-
1987
- 1987-06-26 JP JP62160279A patent/JP2566778B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01104183A (ja) | 1989-04-21 |
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