JPS6230793A

JPS6230793A - ３０１物質

Info

Publication number: JPS6230793A
Application number: JP17134085A
Authority: JP
Inventors: Koushiyou Kiyo; 許鴻　章; Sekiriyou Shiyou; 庄錫　亮; Teruyoshi Marunaka; 丸中　照義; Yoshiyuki Miyake; 三宅　美行; Yoshinori Minami; 南　慶典
Original assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taiho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1985-08-02
Filing date: 1985-08-02
Publication date: 1987-02-09
Also published as: JPH0360836B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は医薬として有用な新規化合物に関する。

児米五返Ｉ本発明の化合物は、文献未載の新規化合物である。

発明が解決しようとする問題占本発明は、制癌作用及び抗菌作用を有する新規物質を提
供することを目的とする。

口題点を解決するための手段本発明は、一般式［式中、Ｒ１及びＲ２は共に水素原子を示ずが、或いは
Ｒ１がメチル基で且っＲ２が水素原子、基又は０ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ基を示す。］で表わされる３０１物質及びその塩を提供するものであ
る。

本発明の３０１物質は、上記一般式（Ｉ）においてＲ１
がメチル基でＲ２が水素原子であるＡ１物質、Ｒ１及び
Ｒ２が共に水素原子であるＡ２物質、Ｒ１がメチル基で
Ｒ２が基であるＢ物質、並びにＲ１がメチル基でＲ２が基で必
るＣ物質を包含する。

Ａ＋　、Ａ２　、Ｂ、Ｃの各物質の理化学的性質は次の
通りでおる。

（１）３０］−Ａ１物質く塩酸塩）（ｉ）実験式：Ｃ３ｓＨｔｔＮ２０＋２　（高分解能ファースト・アト
ム・ボンバードメント・マス・スペクトル法）。

（ｉｉ）分子ｉ：６８４（マス・スペクトル法）。

（ｉｉｉ　）溶解性：水、メタノールに易溶。クロロホ
ルムに難溶。ジエチルエーテル、ヘキサンに不溶。

ＡＩ　、　０ｆｆ（ｉｖ）紫外吸収スペクトル、λアミ□　、ｎｍ（ε）
：５３０　（４６２０）、４９５　（８０００）、４８０　（７２００）、２９２　（５４２０）、２５４　（１７２４０）、２３５　（２１９００）。

チャートを第１図に示す。

（）赤外吸収スペクトル、νｍａよ　、ｃｍ−’　：９
９５．１０３０．１２０２．１４２５．１５７Ｂ、１６
２０，２９８０．３４００゜チャートを第２図に示す。

（ｖｉ）物質の性状：赤色粉末の塩基性物質。

（ｖｉｉ）融点：２４５〜２５０’Ｃ（分解）。

（２＞３０１−Ａ２物質（塩酸塩）く１）実験式：Ｃ３４Ｈ４２Ｎ２０＋　２　　（高分解能ファースト・
アトム・ボンバードメント・マス・スペクトル法）。

（１１）分子ｔｉ：６７０（マス・スペクトル法）。

ｚＯＨ（ｉＶ）ｇ外吸収スペクトル、λ□ａエ　、ｎｍ（ε）
：５４２　（４４９０）、４９７　（７３１０）、４７８　（７０４０）、２９２　（５０９０）、２５３　（１６２００）、２３６　（１８２００）。

チャートを第３図に示す。

ＫＢ。

（Ｖ）赤外吸収スペクトル、ν　　　、Ｃｍ−１：９９
０．１０３０．’ｌ　２０２．１２５０゜１４２０．１
５７０，１６２０゜２９７０．３４００゜チャートを第４図に示す。

（ｖｉ）物質の性状：赤色粉末の塩基性物質。

（ｖｉｉ）融点：２４０〜２４５℃（分解）。

（３）３０１−Ｂ物質（塩酸塩）（ｉ）実験式：Ｃｓ　９　Ｈｓ　ｏ　Ｈ４０２ｓ　　（高分解能ファー
スト・アトム・ボンバードメント・マス・スペクトル法
）。

（ｉｉ）分子ｆｔ：１２６０（マス・スペクトル法）。

ｋｌｔＯＨ（ｉｖ）紫外吸収スペクトル、λ□□　、ｎｍ（ε）：５４２　（６１２０）、４９７　（１０２００）、４８０　（９９２０）、２９６　（７１４０）、２５３　（２２７００＞、２３６　（２６９００＞。

チャートを第５図に示す。

Ｂｒ（Ｖ）赤外吸収スペクトル、ν　　　、ｃｍ−’　：９
６０１１０００．１０３０，１０６０゜１２００．１２
５８．１４０５．１５４０．１５７０，１６１０．１７２５．２９９０，３４００゜チャートを第６図に示す。

（ｖｉ）物質の性状：赤色粉末の両性物質。

（ｖｉｉ）融点＝２２４〜２２７℃（分解）。

（４）３０１−Ｃ物質（塩酸塩）（１）実験式：Ｃｓ　ｏ　Ｈａ　２　Ｎ４０２　ｙ　　（高分解能ファ
ースト・アトム・ボンバードメント・マス・スペクトル
法）。

（ｉｉ）　分子ｍ　：　１２９０　（マス−スペクトル
法）。

（４ｉｉ　）溶解性：水、メタノールに易溶。クロロホ
ルムに難溶。ジエチルエーテル、ヘキサンに不溶。

（ｉｖ）紫外吸収スペクトル、λ“、ＯＨｍａ　ｚ　　
　ゝｎｍ（ε）　：５４３　（４７７０）、４９８　（９５４０）、４８５　（９２２０）、２９２　（６８３０）、２５３　（２２６００＞、２３６　（２８２００＞。

チャートを第７図に示す。

Ｂｒ（Ｖ）赤外吸収スペクトル、ν　　　、Ｃｍ−’　：９
６０．１０００，１０３０．１０６０．１２００．１３
８０，１５４０．１５７８．１６２０．１７２０．２９８０．３４００゜チャートを第８図に示す。

（ｖｌ）物質の性状：赤色粉末の両性物質。

（ｖｉｉ）融点＝２６０〜２６５℃（分解）。

本発明の３０１物質は、ストレプトマイセス属に属する
３０１物質生産菌を培地に培養し、得られる培養物から
、３０１物質を分離、採取することにより製造すること
ができる。

３０１物質生産菌の一例として、発明者らが中華人民共
和国福建省南平の土壌から新たに分離したストレプトマ
イセス属に属する菌株を挙げることができる。この３０
１物質生産菌は、工業技術院微生物工業技術研究所に受
託番号微工研条奇第７８９号（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−７８
９）として寄託されている。

上記３０１物質生産菌の菌学的性質は下記の通りである
。

（ａ＞　　形態学的性質（１）胞子形成菌糸の分枝法単純分枝を示し、輪生技は認められない。

（２）形態鉤状［レチナキュラム・アパルタム（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌｕｍ　　Ａｐａｒｔｕｍ）型］あ
るいは螺旋状［スパイラル（ｓｐｉｒａｌ）型］の気菌
糸を形成する。

（３）胞子柄の着生位置気菌糸上に着生する。

（４）胞子の数１０〜６０個位の胞子の連鎖を認める。

（５）胞子の表面構造及び大きざ胞子表面は平滑であり、胞子の大きさは、０．９〜１．
２Ｘ２．Ｏ〜２，８ミクロン程度である。

（６）その他鞭毛胞子、胞子のう及び菌核形成は、認められない。

（ｂ＞　　各種培地における生育状態（１）シュークロース・硝酸塩寒天培地うす黄茶色の発
育上に明るい紫味灰の気菌糸を着生し、溶解性色素は認
められない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地黄色味がかっ
た発育上に白〜灰味茶の気菌糸を着生し、溶解性色素の
産生は認められない。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ培地
−５）黄色味がかった発育上に明るい紫味灰の気菌糸を着生し
、溶解性色素の産生は認められない。

（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ培地うす黄茶
の発育上に明るい灰色の気菌糸を着生し、溶解性色素の
産生は認められない。

（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ培地−７）うす黄茶の
発育上に灰味茶の気菌糸を着生し、溶解性色素はわずか
に茶色味をおびる。

（６）栄養寒天培地発育はうす黄茶、気菌糸は着生せず、溶解性色素の産生
は認められない。

（７）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ培地−黄茶の発
育上に灰味茶の気菌糸を着生し、溶解性色素はわずかに
茶色味をおびる。

（８）オート・ミール寒天培地（ＩＳＰ培地−茶色味を
おびた発育上に灰抹茶の気菌糸を着生し、溶解性色素の
産生は認められない。

く９）クラシリニコフＮα１合成寒天培地うす黄橙の発
育上に明るい紫味灰の気菌糸を着生し、溶解性色素はわ
ずかにピンク味をおびる。

（１０）ガラスＮ００１合成寒天培地茶灰の発育上に灰味茶の気菌糸を着生し、溶解性色素の
産生は認められない。

（Ｃ）　　生理的諸性質（１）生育温度範囲２０〜３７℃の何れの温度でも発育する。

（２）メラニン様色素の生成くチロシン寒天、ＩＳＰ培
地−７）、硝酸塩の還元、硫化水素の産生、ゼラチンの
液化、ミルクの凝固とペプトン化、セルロースの分解、
及びスターチの加水分解はいずれも陽性である。

（３）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地、ＩＳＰ培地−９）Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、Ｌ−ラムノース、
Ｄ−マンニット、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、
シュークロースを利用してよく生育し、イノシトール、
ラフィノース、ガラクトースはおそらく利用していると
判定される。

（４）細胞壁構成成分の分析全菌体加水分解物中にり、Ｌ−ジアミノピメリン酸とグ
リシンが検出される。又、全菌体主要糖成分としてガラ
クトース、Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノースが検出さ
れる。

これらの性状より既知菌種を検索すると本３０１物質生
産菌に最も類似の菌種として、ストレプトマイセス　ビ
ルギイニア（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＶｉｒｇｉｎｉ
ａｅ　）　　［ニス、ニー、ワックスマン（Ｓ。

Ａ、Δａｋｓｍａｎ　）著、ジ　アクチノマイセテス（
Ｔｈｅ　　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　）　、２巻（
１９６１）、ザ　ジャーナル　オブ　アンティバイオテ
ィックス（Ｔｈｅ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ａｎ
ｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　）　、３６巻、４５１−４５３頁
（１９８３）、インターナショナル　ジャーナル　オブ
　システマテイツク　バクテリオロシー（Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆＳｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ　　ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｑｙ）　、’１８
巻、１７Ｂ頁（１９６８）］が挙げられる。本菌株と比
較検討したところ、ストレプトマイセス　ビルギイニア
に非常によく似ており、シュークロースとＤ−マンニッ
トの利用性がわずかに異なるのみである。

従って本３０１物質生産菌は、ストレプトマイセス　ビ
ルギイニア変種ナンピンゲネシス３０１（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ　　Ｖｉｒｇｉｎｉａｅ　　Ｖａｒ。

Ｎａｎｏｉｎｑｅｎｅｓｉｓ　）と同定した。次に本発
明の３０１物質を、例えば上記のようなストレプトマイ
セス属に属する３０１物質生産菌を培地に培養すること
によって製造する場合について説明する。

培養方法は、原則的には一般微生物の培養方法に準する
が、通常は液体培地による撹拌通気培養法が有利である
。培養に用いられる培地としては、ストレプトマイセス
属に属する３０１物貿生産菌が利用できる栄養源を含有
する培地であればよい。

すなわち、合成培地、半合成培地あるいは天然培地を用
いることができる。培地の組成は、炭素源としては例え
ばグルコース、マンノース、グリセリン、シュークロー
ス、糖蜜、でん粉、液化でん粉等が用いられ、窒素源と
しては例えば肉エキス、カザミノ酸、ペプトン、グルテ
ンミール、コーンミール、綿実油、ソイビーンミール、
コーンスチープリカー、乾燥酵母、リン酸アンモニウム
、硫酸アンモニウム、尿素等が用いられる。また、例え
ばリン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、炭
酸カルシウム、塩化マグネシウム等の金属のリン酸塩、
炭酸塩、塩化物等の無機塩も必要に応じて添加される。

また、培養中発泡の著しい時には、例えば大豆油、亜麻
仁油等の植物油、オクタデカノール、テトラデカノール
、ヘプタデカノール等の高級アルコール類、各種シリコ
ン化合物等の消泡剤を適宜添加してもよい。

３０Ｔ物質生産菌は、通常２０〜３７°Ｃ程度の温度下
で生育する。３０’ｌ物質の生産は２５〜３７℃程度の
範囲で行なうのが好ましい。本培養の培養時間は通常５
０〜１００時間程度が適当であり、培地の濃厚化に従っ
て、培養時間を更に延長してもよい。培養中は撹拌通気
培養で通常行なわれるように、培地へ滅菌空気を吹込む
のが好ましい。微生物の効率的生育のためには、タンク
培養に用いる空気量を１分間あたり栄養培地１容量部に
対して０．３〜０．６容量部程度とし、毎分２００〜４
００回転程度で撹拌するのがよい。以上述べた培養条件
から、使用菌株の特性に応じてそれぞれ最適の条件を適
宜選択して適用することができる。

このようにして培養物中に蓄積された３０１物質は、主
に培養菌体中に含有されているので、遠心分離またはン
濾過により培養物から菌体を分別し、菌体から一般抗生
物質の製造に用いられる常用の手段によって分離精製で
きる。すなわち、減圧濃縮、凍結乾燥、アセトン、メタ
ノール、エタノール、クロロホルム等による溶媒抽出、
液性交換例えば陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂、
非イオン性吸着樹脂等の樹脂による処理あるいは活性炭
、けい酸、シリカゲル、アルミナ等の吸着剤による処理
、あるいは結晶化、再結晶等の手段を単独あるいは任意
の順序に組み会わせ、また反復して用いることにより、
３０１物質の分離、精製そして採取を行なうことができ
る。

３０１物質に用いられる塩としては医薬上で通常用いる
塩を意味し、例えばナトリウム、カリウム、リチウム等
のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアル
カリ土類金属塩、トリメチルアミン、トリエチルアミン
等の有機アミン塩等を、また用いられる酸としては例え
ば塩酸、硝酸、硫酸等の無′ＦＡ酸塩あるいはギ酸、酢
酸、シュウ醒、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、パラト
ルエンスルホン酸等の有機酸塩を挙げることができる。

かくして得られる本発明の３０１物質は、制癌作用及び
抗菌作用を有しており、医薬として有用である。

実施例次に実施例を挙げて更に詳細に説明する。

実施例　１グルコース２．０％、スターチ１．０％、ソイビーンミ
ール０．５％、「ソイトン」　［ディフコ（ＤＩＦＣＯ
）社製コ０．２％、塩化ナトリウム０．３％、硝酸ナト
リウム０．３％、炭酸カルシウム０．３％の組成を有す
る発酵培地（ｐＨ７，０〜７．５）１Ｑを５００脱三角
フラスコ１０本にそれぞれ１００ｍＱずつ分注した。１
２１°Ｃｌ２Ｏ分間オートクレーブで滅菌後、スターチ
寒天培地上で発育した３０１物質生産菌（微工研条奇第
７８９号）分生胞子及び菌糸体の０．５ｃｒｉｔを各フ
ラスコに接種し、２７℃、２日間回転振とう培養（毎分
２２０回転、１０ｃｍ＞を行なった。

得られた前培養液を、上記と同組成の発酵培地５Ｑを入
れた１（ｌ容発酵槽２台にそれぞれ３００購ずつ接種し
、２７℃で３日間通気撹拌培養（通気量　０．３〜０．
６Ｖ／Ｖ／ｍｉ　ｎ、毎分２５０回転）を行なった。培
養液中の消泡剤として［シリコンＫＭ７０Ｊ　　（信越
化学工業（株）製）を用いた。

培養終了後遠心分離し、菌体についてスタフィロコッカ
スφアウレウス（５ｔａｌ）ｌＷＩＯｃＯｃｃｕｓａｕ
ｒｅｕｓ　）　２０９　Ｐに対する抗菌力を指標に以下
の分離精製操作を行なった。

約１．２Ｎｇの湿菌体を６Ｑの８０％アセトンにて抽出
し、抽出液を減圧下口−タリーエバポレータで濃縮した
。得られた赤色水溶液をｐＨ８，０〜８．５に調整し、
６Ｑのクロロホルムで抽出した。クロロホルム層を減圧
下口−タリーエバポレータで濃縮し、活性を有する油状
物５ｇを得た。

前記赤色油状物１ｇをクロロホルム−メタノール（９：
１）混液３ｍｆ２に溶解し、オクタデシールシリール（
ＯＤＳ）樹脂（山村化学研究新製、３０μｍ）のカラム
（１５Ｘ５００ｍｍ）に付し吸着ざぜた。０．０５％ト
リフルオロ酢酸溶液とアセトニトリルとの混液による勾
配溶出（アセトニトリル、３０→６０％）により活性成
分を溶出し、溶出類にＡ、Ｂ、Ｃとした３つの画分に分
割して採取した。

これら３画分をロータリーエバポレータにて濃縮した後
、凍結乾燥を行なって、活性を有する粗粉末Ａ２０＋ｇ
、Ｂ２５Ｉｒｔｇ、Ｃ４０ｍｇを得た。

これらの粗粉末から、それぞれ以下に述べる高速液体ク
ロマトグラフィーによる分取精製により、活性物質を単
離した。

ａ）粗粉末Ａの精製粗粉末Ａを水に１０ｍｇ／ｍＱの濃度に溶解し、その２
００μＱを下記の高速液体クロマトグラフに注入した。

カラム：［マイクロボンダパック（μ Ｂｏｎｄａｐａｋ　）　Ｃ１８Ｊ　　（７，８Ｘ３００
ｍ、ウォーターズ社製）。

移動相：２５％アセトニトリル１０．０５％トリフルオ
ロ酢酸水溶液。

流速：２．０ＴＩｌ１２／分。

検　出：ｕｖ−２５４ｎｍ。

保持時間的７．８〜８．２分、及び約８．４〜９．０分
のピークを分取し、この操作を繰り返して、２つの両分
を集めた。この分取溶液をロータリーエバポレータによ
り濃縮した後、５％炭酸ナトリウム溶液にてｐＨ８，０
〜８．５に調整し、５倍量のクロロホルムにて抽出した
。クロロホルム層をロータリーエバポレータにより濃縮
乾固した後、Ｏ，０ＯＩＮ塩酸溶液に溶解し凍結乾燥す
ることにより、活性物質の塩酸塩３０１Ａ＋２ｍｓ及び
３０１　　Ａ２　１．５ｍ！Ｊを得た。

ｂ）粗扮末巳の精製粗粉末Ｂを水に１０ｍ１／ｍｉの濃度に溶解し、その２
００μＱを下記の高速液体クロマトグラフに注入した。

カラム：「マイクロボンダパック（μ Ｂｏｎｄａｐａｋ　）　Ｃ１８Ｊ　　（７，８Ｘ３００
ｍ、ウォーターズ社製）。

移動相：３３％アセトニトリル１０．０５％トリフルオ
ロ酢酸水溶液。

流速：２．ＯｍＱ／分。

検　出：ＵＵＶ−２５４ｎ。

保持時間的１１．０〜１２．０分のピークを分取し、こ
の操作を繰り返してこの両分を集めた。

得られた分取溶液をロータリーエバポレータにて濃縮し
た後、５％炭酸ナトリウム溶液にてｐＨ８，０〜８．５
に調整し、５倍量のクロロホルムにて抽出した。クロロ
ホルム層をロータリーエバポレータにて濃縮乾固した後
、０．００１Ｎ塩酸溶液に溶解し凍結乾燥することによ
り活性物質の塩酸塩３０，１−８　５ｍｓを得た。

Ｃ）粗粉末Ｃの精製粗粉末Ｃを水に１０ｍｙ／−の濃度に溶解し、その２０
０μＱを下記の高速液体クロマトグラフに注入した。

移動相：５０％アセトニトリル１０．０５％トリフルオ
ロ酢酸水溶液。

流速：２．０ｍ１２／分。

検出：ｔＪＶ−２５４ｎｍ。

保持時間的８．０〜９．０分のピークを分取し、この操
作を繰り返してこの画分を集めた。得られた分取溶液を
ロータリーエバポレータにて濃縮した後、５％炭酸ナト
リウム溶液にてｐＨ８，０〜８．５に調整し、５倍量の
クロロホルムにて抽出した。クロロホルム層をロータリ
ーエバポレータにて濃縮乾固した後、Ｏ，０ＯＩＮ塩酸
溶液に溶解し凍結乾燥することにより、活性物質の塩酸
塩３０１−Ｃ２ＩＩｔｇを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の３０１　　Ａ１物質（塩酸塩）の紫外
吸収スペクトルを、第２図はその赤外吸収スペクトル（
ＫＢｒ法）を示す。第３図は３０１Ａ２物質（塩酸塩）
の紫外吸収スペクトルを、第４図はその赤外吸収スペク
トル（ＫＢｒ法）を示す。第５図は３０１−８物質（塩
酸塩）の紫外吸収スペクトルを、第６図はその赤外吸収
スペクトル（ＫＢｒ法）を示す。第７図は３０１−Ｃ物
質（塩酸塩）の紫外吸収スペクトルを、第８図はその赤
外吸収スペクトル（ＫＢｒ法）を示す。（以　上）代理人　弁理士　三　枝　英　二　１．１−・、、−、
，７：；

Claims

【特許請求の範囲】

（１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１及びＲ＿２は共に水素原子を示すか、或
いはＲ＿１がメチル基で且つＲ＿２が水素原子、▲数式
、化学式、表等があります▼ 基又は ▲数式、化学式、表等があります▼ 基を示す。］で表わされる３０１物質及びその塩。