JPS5813519A - エンドトキシン吸着材及びそれを用いるエンドトキシンの除去方法 - Google Patents
エンドトキシン吸着材及びそれを用いるエンドトキシンの除去方法Info
- Publication number
- JPS5813519A JPS5813519A JP56111340A JP11134081A JPS5813519A JP S5813519 A JPS5813519 A JP S5813519A JP 56111340 A JP56111340 A JP 56111340A JP 11134081 A JP11134081 A JP 11134081A JP S5813519 A JPS5813519 A JP S5813519A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、エンドトキシン吸着材及びそれを用いるエン
ドトキシン しくは、固定化ポリ電キシンからなるニジトドキシン吸
着材及びそれを用いるエンドトキシンの吸着除去方法に
関するものである。
ドトキシン しくは、固定化ポリ電キシンからなるニジトドキシン吸
着材及びそれを用いるエンドトキシンの吸着除去方法に
関するものである。
エンドトキシンは、グラム陰性菌細胞壁の外膜を構成す
るリポ多糖と蛋白の複合体であシ、人体に侵入し良場合
に強い発熱作用中シロツク症状を示す物質として医療上
注目を集めている。
るリポ多糖と蛋白の複合体であシ、人体に侵入し良場合
に強い発熱作用中シロツク症状を示す物質として医療上
注目を集めている。
とのエンドトキシンの存在を確認する方法として、カプ
シガニアメーバ様細胞抽出1ll(LAL)を用いるリ
ムルステストがむれまで活用されてIえが、定量性、感
度の点から充分とはいえなかつえ。
シガニアメーバ様細胞抽出1ll(LAL)を用いるリ
ムルステストがむれまで活用されてIえが、定量性、感
度の点から充分とはいえなかつえ。
しかし、本発明者らの出願に係る合成基質を用いる改嵐
されたLAL−テストにより、エンドトキシンO作用及
び構造研究が一段と進展してきた。
されたLAL−テストにより、エンドトキシンO作用及
び構造研究が一段と進展してきた。
エンドトキシンは、耐熱性で化学的にも安定であ)適尚
な失活O方法がなく、薬剤汚染や工ンドトキ*々アの治
療の1ineっている。加熱、酸、アルカリ処理;界面
活性剤等による失活化は、薬剤の本来の性質中生−構成
物質を損うことなく実施するヒとはでt&ない。
な失活O方法がなく、薬剤汚染や工ンドトキ*々アの治
療の1ineっている。加熱、酸、アルカリ処理;界面
活性剤等による失活化は、薬剤の本来の性質中生−構成
物質を損うことなく実施するヒとはでt&ない。
しかし珍から、tm的な条件下でエンドトキシンの活性
を失活させる屯のとして、ポリ電キシンが知られている
。ポリ電キシンは、バチルス・ポリ々キナ(Baci
1lus polymyxa )の産生するシア建ノ酪
酸を含む環状ペプチド性抗生物質で、ポリ電キシンム、
B、C,D、If、に、M及びPが分離されているが、
いずれも生体内でエンドトキシンの作用を中和すること
が知られている。しかしながら、これらは強い副作用を
有する故に医薬として使用されるのはこのうちで1〜2
種である。また、とのポリンキシンのエンドトキシン中
和作用の機構W4WIRは未だ確立されていない。
を失活させる屯のとして、ポリ電キシンが知られている
。ポリ電キシンは、バチルス・ポリ々キナ(Baci
1lus polymyxa )の産生するシア建ノ酪
酸を含む環状ペプチド性抗生物質で、ポリ電キシンム、
B、C,D、If、に、M及びPが分離されているが、
いずれも生体内でエンドトキシンの作用を中和すること
が知られている。しかしながら、これらは強い副作用を
有する故に医薬として使用されるのはこのうちで1〜2
種である。また、とのポリンキシンのエンドトキシン中
和作用の機構W4WIRは未だ確立されていない。
本願発明者らは、エンドトキシンの生理活性の機構解−
の一響としてエンドトキシン活性の不活化O検討を行な
い、抗生物質ポリ々キシνによるエンドトキシンの生体
内活性の不活化がポリンキシンとエンドトキシンの強い
親和性によ抄強固な複合体を形成し、結果的に1 ポリ
ンキシン及びエンドトキシンの活性がそれぞれ不活化さ
れるという新規事実な見出した。この性質を利用すれば
エンドトキシンを温和な条件下で分離除去すること□ が可能となり、人体に直接、間IIK適用さh◆医・1
.、 県中医療用具からエンドトキシンの作用を除去す謡1[
、: ることが可能となる。
の一響としてエンドトキシン活性の不活化O検討を行な
い、抗生物質ポリ々キシνによるエンドトキシンの生体
内活性の不活化がポリンキシンとエンドトキシンの強い
親和性によ抄強固な複合体を形成し、結果的に1 ポリ
ンキシン及びエンドトキシンの活性がそれぞれ不活化さ
れるという新規事実な見出した。この性質を利用すれば
エンドトキシンを温和な条件下で分離除去すること□ が可能となり、人体に直接、間IIK適用さh◆医・1
.、 県中医療用具からエンドトキシンの作用を除去す謡1[
、: ることが可能となる。
本発明の目的は、ポリンキシンを不溶性担体に固定化す
ることによるエンドトキシン吸着材の提供と、該吸着材
の利用法としてのエンドトキシンの除去法の提供にある
。
ることによるエンドトキシン吸着材の提供と、該吸着材
の利用法としてのエンドトキシンの除去法の提供にある
。
本発明のエンドトキシン吸着材はポリンキシンとエンド
トキシンO親和性を利用するものであり、その不溶性担
体として、アガ四−ス、業橋アガーース、南ルーース粉
並びに成形化上ル關−ス霞導体、デキストランゲルの如
き多糖体系樹脂、ポリビニルアルコール本樹脂勢の多価
アル;−ル性水Il!基を有する球状又は不走形のクー
マドグラフィー用担体中繊維状、膜状医用高分子が使用
できる。
トキシンO親和性を利用するものであり、その不溶性担
体として、アガ四−ス、業橋アガーース、南ルーース粉
並びに成形化上ル關−ス霞導体、デキストランゲルの如
き多糖体系樹脂、ポリビニルアルコール本樹脂勢の多価
アル;−ル性水Il!基を有する球状又は不走形のクー
マドグラフィー用担体中繊維状、膜状医用高分子が使用
できる。
tた、これら不溶性担体とポリンキシンとの結合反応は
、担体の有する水酸基と、ポリンキシンの分子中に複数
個存在するアンノ基との間の化学的共有結合化の分知の
方法を採用する辷とができる。
、担体の有する水酸基と、ポリンキシンの分子中に複数
個存在するアンノ基との間の化学的共有結合化の分知の
方法を採用する辷とができる。
例えば、BrCN活性゛化法、塩化シアメール法、エポ
キシド等を用いるオキシテン開裂反応、ハpゲン化ア竜
チー誘一体を用いる直接担体に結合する:1 方法でもよいし、叉、ヘキ′サメテレンジア々ンをスベ
ーを−として用いイソシアナーi誘導体を中間体として
ポリンキシンを結合せしめる方法等も使用できるが、本
発明の目的とするところ1は、担体固定化ポ)Jζキシ
νによるエンドトキシンの吸着材であるので、本発明の
目的とする範凹を越え1に%AエンドFキシン吸着材の
製造方法は全て適用できる。
キシド等を用いるオキシテン開裂反応、ハpゲン化ア竜
チー誘一体を用いる直接担体に結合する:1 方法でもよいし、叉、ヘキ′サメテレンジア々ンをスベ
ーを−として用いイソシアナーi誘導体を中間体として
ポリンキシンを結合せしめる方法等も使用できるが、本
発明の目的とするところ1は、担体固定化ポ)Jζキシ
νによるエンドトキシンの吸着材であるので、本発明の
目的とする範凹を越え1に%AエンドFキシン吸着材の
製造方法は全て適用できる。
エンドシキシン含有濱中のエンドトキシンを除去するk
は、上述し良固定化ポリ建キシンとエンド)今シンを接
触させ良後、固液を分離し1.エンドトキシンを會ま1
にい液を得ることができる。接触の方法は、例えば吸着
材をエンドトキシン含有液中KJI濁混合した後、炉別
して、エンドトキシンを含tない液を得てもよいし、吸
着・材をカラムに充填し、エンドトキシン吸着カラムを
調製し、これに、エンドトキシン會有液を通すことによ
)、溶出液として、エンドトキシン・フリーの液ヲ得る
こと−できる。着え、本発明の吸着材けそれ単独で用い
てもよいし、他の適当な担体と組食わせて用いてもよい
。
は、上述し良固定化ポリ建キシンとエンド)今シンを接
触させ良後、固液を分離し1.エンドトキシンを會ま1
にい液を得ることができる。接触の方法は、例えば吸着
材をエンドトキシン含有液中KJI濁混合した後、炉別
して、エンドトキシンを含tない液を得てもよいし、吸
着・材をカラムに充填し、エンドトキシン吸着カラムを
調製し、これに、エンドトキシン會有液を通すことによ
)、溶出液として、エンドトキシン・フリーの液ヲ得る
こと−できる。着え、本発明の吸着材けそれ単独で用い
てもよいし、他の適当な担体と組食わせて用いてもよい
。
本発明を実施例に基づき具体的に説明する。
実施例1 エンドトキシン吸着材!
ポVtキシン−セファレース・CL−4Bの調製 。
架橋アガロース担体(8*pharoI* ・CL−4
B) 56m1K2.3fのBrCN750dH10を
加え4℃に冷却した。INNNN上を$1111±0.
2に、温度を10〜1s℃に保ちながら8〜10分間で
滴下して、活性化した。無菌冷水を用いて充分洗浄しプ
7ナーレート上の余分の水を論い良。無菌条件下に洗浄
したBr eNN活性化架橋アガース担体1GF($1
潤状態)をカップリング緩衝液(0,I MNaHCO
,。
B) 56m1K2.3fのBrCN750dH10を
加え4℃に冷却した。INNNN上を$1111±0.
2に、温度を10〜1s℃に保ちながら8〜10分間で
滴下して、活性化した。無菌冷水を用いて充分洗浄しプ
7ナーレート上の余分の水を論い良。無菌条件下に洗浄
したBr eNN活性化架橋アガース担体1GF($1
潤状態)をカップリング緩衝液(0,I MNaHCO
,。
0.5M N暑Cj、11118.3)20dK懸濁せ
しめ、次いで、硫酸ポリンキシンB(、台糖ファイ望−
剃)1.0f/20−緩衝液を簾え室温下4時間攪拌反
応せしめた。未反応の活性基を0.2 Mダ1Jシン・
ト・リス−塩酸(Trls−HCj )緩衝液(pi(
8,0)Kて不活化しプフナーロートを用いて一過した
後、酢酸緩衝液(PH4,0)Kて洗浄し、1G−のエ
ンドFキシン吸着材ポリ電中シンーセ、7アロース・C
L−4Bを得え5゜ 実施例2 エンドFキシン吸着材璽 :Iリスチン(ポリンキシン11)*セルp−スビーズ
の調製 71 jl * # 11−ユ、−刈ヤ、。2アイ、■
、。
しめ、次いで、硫酸ポリンキシンB(、台糖ファイ望−
剃)1.0f/20−緩衝液を簾え室温下4時間攪拌反
応せしめた。未反応の活性基を0.2 Mダ1Jシン・
ト・リス−塩酸(Trls−HCj )緩衝液(pi(
8,0)Kて不活化しプフナーロートを用いて一過した
後、酢酸緩衝液(PH4,0)Kて洗浄し、1G−のエ
ンドFキシン吸着材ポリ電中シンーセ、7アロース・C
L−4Bを得え5゜ 実施例2 エンドFキシン吸着材璽 :Iリスチン(ポリンキシン11)*セルp−スビーズ
の調製 71 jl * # 11−ユ、−刈ヤ、。2アイ、■
、。
クツ■製造)GC−700をグラスフィルター上で充分
水洗し、吸引デ遇したビーズ(湿潤状態)21@1)2
dの1.4−ブタンジオールグリシジルエーテル(ム1
drjch Ch@m1cal s Compan
y 、bscg)と雪wq tD NaBH4を會む0
.6M NiOH2−を加え、28Cの反応槽中で振盪
しえ。8時間後ダラスフィルター上で歇引下水洗し、約
1.6電り篭べmm・le)のエポキシ基を導入し走エ
ポキシ基導入セルロースビーズを得良。
水洗し、吸引デ遇したビーズ(湿潤状態)21@1)2
dの1.4−ブタンジオールグリシジルエーテル(ム1
drjch Ch@m1cal s Compan
y 、bscg)と雪wq tD NaBH4を會む0
.6M NiOH2−を加え、28Cの反応槽中で振盪
しえ。8時間後ダラスフィルター上で歇引下水洗し、約
1.6電り篭べmm・le)のエポキシ基を導入し走エ
ポキシ基導入セルロースビーズを得良。
このエポ命V化セル■−スビーズ2tIICSHリスチ
ン硫酸(持薬抗生製造)400岬/ I M Na、C
偽4−を加え2電℃で16時間振盪反応せしめた。
ン硫酸(持薬抗生製造)400岬/ I M Na、C
偽4−を加え2電℃で16時間振盪反応せしめた。
未反応のエポキシ基を1Mエタノ−ルアζν中、室温下
で8時間処理し活性をな((シ良0反応P液からのコリ
スチンの回収率かb□′−算してはぼ90−のコリスチ
ンが結合したツリステンーセルロースビーズ(−潤状I
t)約2fを得え。
で8時間処理し活性をな((シ良0反応P液からのコリ
スチンの回収率かb□′−算してはぼ90−のコリスチ
ンが結合したツリステンーセルロースビーズ(−潤状I
t)約2fを得え。
実施何重で調製した工yトドキシン吸着材10力9 A
(I X 11g ) K11.@61息UKTBの
エンドトキシン生理食塩水溶液(10nf/sd) l
−を添加し滅11 ) リx −HCI (pH7,2
、0,0!IM)テ@出したが、溶出液中には、従来の
ゲル化によるりムルステストでも、発色性部質によるエ
ンド)命シン測定論でも、エンドトキシンは検出されな
かった。
(I X 11g ) K11.@61息UKTBの
エンドトキシン生理食塩水溶液(10nf/sd) l
−を添加し滅11 ) リx −HCI (pH7,2
、0,0!IM)テ@出したが、溶出液中には、従来の
ゲル化によるりムルステストでも、発色性部質によるエ
ンド)命シン測定論でも、エンドトキシンは検出されな
かった。
7.2.0.01M)+N麿01(0,03M)約1m
K懸濁し、これをカラムに充填して、水道水を0.1m
/分の速度で通過せしめたところ、通過液のエンドトキ
シンはほとんど除去されていた。
K懸濁し、これをカラムに充填して、水道水を0.1m
/分の速度で通過せしめたところ、通過液のエンドトキ
シンはほとんど除去されていた。
実施例1で調製しえエンド)今シン吸着材I(p@ly
mixim s@pkar@s@CL−48)t )リ
ス・塩酸緩@@($7.1,0.OIM)Kll濁して
l0XSOO。
mixim s@pkar@s@CL−48)t )リ
ス・塩酸緩@@($7.1,0.OIM)Kll濁して
l0XSOO。
のカラムを調製し、これに輸液調製用の精製水を通過せ
しめてエンドトキシンの除去効果を確めた。
しめてエンドトキシンの除去効果を確めた。
その結果、同カラムを通過せしめた精製水を用いて調製
した輸@にはエントドキシyは検出され亀かつ良が、カ
ラムを通過せしめなかつ*ものではエンド)キシンが検
出された。
した輸@にはエントドキシyは検出され亀かつ良が、カ
ラムを通過せしめなかつ*ものではエンド)キシンが検
出された。
実施例−エンドトキシン吸着材菖
幻・ノゲンプ論マイト(プ四ムシアン)活性化セファ調
−ス(ファルマシア社製)を用い、下!に!に示す工程
により、ポリ電キシンと反応させ、ポリtdPシンのr
−アミノ基をセファは−スに共有結合させ良。
−ス(ファルマシア社製)を用い、下!に!に示す工程
により、ポリ電キシンと反応させ、ポリtdPシンのr
−アミノ基をセファは−スに共有結合させ良。
ポリオキシン嗜セファ曹−ス(PxJ・ph)ポリ電キ
シ、ン竜ツア四−スは遊離polymixlaが検出さ
れなくなるまで、滅菌蒸留水で洗浄した。
シ、ン竜ツア四−スは遊離polymixlaが検出さ
れなくなるまで、滅菌蒸留水で洗浄した。
反応時にポリζキシンの濃度を高くすると結合するポリ
ζキシンの絶対量は多くなるが、逆に納会率は低下する
(次表参照)。
ζキシンの絶対量は多くなるが、逆に納会率は低下する
(次表参照)。
tえ、結合し友ポリ電キシンとエンドトキシンO結合率
は次の表の通りであつ九。
は次の表の通りであつ九。
測定法
なお、実施例において用いる測定法について述べる。
!、ポ・す々キシン測定法
イず一キ及びギx (Itghaakl & G11F
)の建りレビ瓢しット法で測定し良。
)の建りレビ瓢しット法で測定し良。
(文献: ILP、Itghaaki & D、M
、G11l: Anal。
、G11l: Anal。
Blo@h@m、 9 、401 (1964) )
2、発色性−質(Chromog@nic 5ubst
rata )にヨルエンドトキシンの測定法 測定試薬はパイロディツタ@(生化学工業■発売)を用
いた。仁の試薬は、N−第三ブチルオキシ★ルボニルレ
イシルグリシルアルギニンバラ=トay=リド(Boc
@ L@usGly *Ar1− pNム)及びカブ
トガ臭血球抽出液を含む製剤で、岩永らの方法をもと、
に調製されておシ、同法によりてエントドキシllll
l1Mjの宏量が可能である。
2、発色性−質(Chromog@nic 5ubst
rata )にヨルエンドトキシンの測定法 測定試薬はパイロディツタ@(生化学工業■発売)を用
いた。仁の試薬は、N−第三ブチルオキシ★ルボニルレ
イシルグリシルアルギニンバラ=トay=リド(Boc
@ L@usGly *Ar1− pNム)及びカブ
トガ臭血球抽出液を含む製剤で、岩永らの方法をもと、
に調製されておシ、同法によりてエントドキシllll
l1Mjの宏量が可能である。
(文献:中村(8,Nakamurm)、森田(’1’
、MOrit&)#岩永(8,Iwanaga)、丹羽
(M、 Niwa)。
、MOrit&)#岩永(8,Iwanaga)、丹羽
(M、 Niwa)。
高橋(K、 TakahasM )、
J、 Bioch@m−81* f567 (1G??
) :岩永(8,Ivanaga)、森田(To Mo
r口畠)。
) :岩永(8,Ivanaga)、森田(To Mo
r口畠)。
原田(T、 Harada)、中村(8,Nakamu
ra)。
ra)。
丹羽(M、Niwa)、高田(K、 Takads)。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 t iitw化ポリ々キシンからなることを特徴とす
るエンドトキシン吸着材。 1 固定化ポリ電キシンからなる吸着材をエンドトキシ
ン含有*に接触させ良後、該吸着材を分離することを特
徴とするエンドトキシンの除去方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP56111340A JPS5813519A (ja) | 1981-07-16 | 1981-07-16 | エンドトキシン吸着材及びそれを用いるエンドトキシンの除去方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP56111340A JPS5813519A (ja) | 1981-07-16 | 1981-07-16 | エンドトキシン吸着材及びそれを用いるエンドトキシンの除去方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5813519A true JPS5813519A (ja) | 1983-01-26 |
JPH0116389B2 JPH0116389B2 (ja) | 1989-03-24 |
Family
ID=14558706
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP56111340A Granted JPS5813519A (ja) | 1981-07-16 | 1981-07-16 | エンドトキシン吸着材及びそれを用いるエンドトキシンの除去方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5813519A (ja) |
Cited By (14)
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---|---|---|---|---|
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JPS60146076A (ja) * | 1984-01-06 | 1985-08-01 | 花王株式会社 | 漂白性向上剤 |
JPS61135674A (ja) * | 1984-12-05 | 1986-06-23 | 東レ株式会社 | 固定化ポリミキシン成形品からのエンドトキシン除去方法 |
JPS63222265A (ja) * | 1987-01-21 | 1988-09-16 | イー・アイ・デュポン・ドゥ・ヌムール・アンド・カンパニー | リポ多糖類の非免疫化学的結合およびそのサンドイッチ法による分析方法 |
JPH0222295A (ja) * | 1987-01-05 | 1990-01-25 | Univ Pittsburgh | ポリミキシンアガロースリポ多糖抗原及びこれに関連する方法 |
JPH02193072A (ja) * | 1988-07-05 | 1990-07-30 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | パイロジェン定量方法 |
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WO1995021179A1 (de) * | 1994-02-07 | 1995-08-10 | Qiagen Gmbh | Verfahren zur abreicherung oder entfernung von endotoxinen |
US5616557A (en) * | 1993-01-21 | 1997-04-01 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for selectively inhibiting activity of endotoxin |
US7026468B2 (en) | 1996-07-19 | 2006-04-11 | Valentis, Inc. | Process and equipment for plasmid purification |
WO2008029897A1 (fr) * | 2006-09-07 | 2008-03-13 | Chondrex Inc. | Absorbant d'endotoxine pour la prévention ou le traitement d'une maladie auto-immune |
JP2013010701A (ja) * | 2011-06-28 | 2013-01-17 | Jnc Corp | エンドトキシン吸着体、それを用いた全血灌流型体外循環用カラム及び医薬品精製用クロマトグラフィー充填剤 |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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US20150031568A1 (en) * | 2011-10-26 | 2015-01-29 | Kowa Company, Ltd. | Method for measuring physiologically active substance of biological origin, and microparticles and extract for use in the method |
-
1981
- 1981-07-16 JP JP56111340A patent/JPS5813519A/ja active Granted
Cited By (23)
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---|---|---|---|---|
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JPS60126227A (ja) * | 1983-12-12 | 1985-07-05 | Green Cross Corp:The | 発熱性物質吸着用不溶性担体 |
JPH0479360B2 (ja) * | 1983-12-12 | 1992-12-15 | Green Cross Corp | |
JPS60146076A (ja) * | 1984-01-06 | 1985-08-01 | 花王株式会社 | 漂白性向上剤 |
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