JPH05344885A - 生理活性物質固定化材料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 任意の基材に任意の生理活性物質を共有結合
により固定でき、しかも活性の高い固定化物を得る。 【構成】 下式で表わされるシラノール誘導体からなる
生理活性物質固定化材料をシランカップリング反応によ
り基材に導入した後、カルボニルジイミダゾールにより
活性化し、次に生理活性物質を接触させて固定化する。 【化１】 （Ｒ¹はＨまたはメチル基、Ｒ²はメチル基またはエチル
基、Ｒ³はＨ、メチル基またはエチル基。ｍ＞０、ｎ＝
０または１、ｐ＝０〜２、ｑ＝１〜３、ただしｐ＋ｑ＝
３。）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は酵素、抗体、補酵素、レ
クチン等の機能をもつ蛋白質、糖蛋白質、糖類などの生
理活性物質を共有結合により固定化する生理活性物質固
定化材料、ならびに生理活性物質の固定方法および固定
化物に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、生理活性物質を基材上に共有結合
により固定化する方法として、例えば酵素の固定化を行
う方法として、シッフ塩基法がよく知られている。この
方法には、基材として多孔性アルキルアミン化ガラスビ
ーズを用い、これと酵素蛋白質中のＮ末端、リシン残
基、ヒスチジン残基とを、固定化試薬としてグルタルア
ルデヒドを使用することでシッフ塩基を形成させて結合
させる方法（Ｊ．Ｅｎｄｏ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃ
ｔａ，９５，４１１（１９７９））、またはペルオキシ
ダーゼの固定化で見られるように、酵素中の糖残基を過
ヨウ素酸により酸化し、ジアルデヒド基とし、これとガ
ラスビーズ上のアミノ基とでシッフ塩を形成させること
により固定化する方法（Ｐ．Ｋ．Ｎａｋａｎｅ，Ｊ．Ｈ
ｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．，２２，１０８
４（１９７４））などがある。

【０００３】また生理活性能を有する糖類を共有結合に
より固定化する方法として、ヘパリンのポリエーテルウ
レタン尿素（ＰＥＵＵ）への固定化の例が知られている
（Ｙ．Ｉｔｏ，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅ
ｓ．，２０，１１５７（１９８６））。この方法は、あ
らかじめＬ−リシンメチルエステルを化学組成中に含む
ＰＥＵＵを合成し、これを成膜後、表面のエステル基を
加水分解・中和し、カルボキシル基に誘導した後、ヘパ
リン中のアミノ基と縮合させてアミド結合により固定化
する方法である。

【０００４】しかし上記従来の技術によれば、それぞれ
の方法によって使用できる基材が限定されてしまい、ま
た非常に煩雑な操作を必要とするという問題点がある。
また基材と生理活性物質をつなぐアーム（スペーサー）
について考察すると、固定化される生理活性物質の特性
を発揮するために最適なアームの長さや親水／疎水のバ
ランスを選択できないという問題点がある。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上記
問題点を解決するため、任意の生理活性物質を任意の基
材に共有結合により固定化することができ、しかも固定
化する生理活性物質の活性を高い活性で発揮させるため
のアームの長さや親水／疎水のバランスを選択すること
ができる生理活性物質固定化材料を提供することであ
る。本発明の他の目的は、上記生理活性物質固定化材料
を用いて生理活性物質を基材上に簡単に固定することが
できる生理活性物質の固定方法を提案することである。
本発明の別の目的は、上記生理活性物質固定化材料によ
り生理活性物質が基材上に固定された、活性の高い固定
化物を提供することである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は次の生理活性物
質固定化材料、ならびに生理活性物質の固定方法および
固定化物である。 （１）下記一般式〔１〕で表わされるシラノール誘導体
からなることを特徴とする生理活性物質固定化材料。

【化２】 〔式中、Ｒ¹は水素原子またはメチル基、Ｒ²はメチル基
またはエチル基、Ｒ³は水素原子、メチル基またはエチ
ル基を示す。ｍは正数（ただしｍは平均付加モル数）、
ｎは０または１、ｐは０〜２の整数、ｑは１〜３の整数
（ただしｐ＋ｑ＝３）である。〕 （２）上記（１）記載の生理活性物質固定化材料を、シ
ランカップリング反応により基材に導入した後、カルボ
ニルジイミダゾールにより活性化し、次に生理活性物質
を接触させることを特徴とする生理活性物質の固定方
法。 （３）上記（１）記載の生理活性物質固定化材料により
生理活性物質が基材上に固定されたことを特徴とする生
理活性物質の固定化物。

【０００７】前記一般式〔１〕のｍは、固定化する生理
活性物質の活性が最も良く発現できるようなモビリティ
または親水性を付与できる数が好ましく、通常１〜５０
０、好ましくは１〜１５０が望ましい。

【０００８】本発明の生理活性物質固定化材料は、前記
一般式〔１〕で表わされるシラノール誘導体からなり、
−ＯＲ³で示されているシランカップリング能を有する
官能基と、ヒドロキシル基とを兼備えている。このため
シランカップリング能を有する官能基が担体となる基材
とシランカップリングにより結合し、またヒドロキシル
基が生理活性物質と共有結合することにより、生理活性
物質を基材に固定化することができる。

【０００９】前記一般式〔１〕で表わされるシラノール
誘導体は、例えば次のような方法で製造することができ
る。相当するポリアルキレンエーテルを有するアリル化
合物とトリメトキシシランとの付加反応、または市販の
３−メルカプトプロピルトリメトキシシランとポリエチ
レングリコールモノメタクリレートとの付加反応などに
よって容易に行うことができる。これらの反応は、無溶
媒でまたはトルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフ
ラン、１，４−ジオキサン、メチルエチルケトン、アセ
トン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド等
の溶媒中で、白金、ニッケルなどの無機触媒またはトリ
エチルアミン、ピリジンなどの有機塩基性触媒の存在
下、−４０〜１２０℃で３０分〜９６時間、好ましくは
−２０〜８０℃で１〜２４時間反応させることにより行
うことができる。

【００１０】本発明の固定化材料により固定化すること
ができる生理活性物質としては、アミノ基を有している
ものであれば特に制限されず、天然および非天然のいず
れのものでもよく、例えば抗体、酵素、補酵素、レクチ
ン、ヘパリン等の蛋白質、糖類および糖蛋白質などがあ
げられる。

【００１１】本発明の生理活性物質の固定方法は、前記
生理活性物質固定化材料を、基材に導入した後活性化
し、これに生理活性物質を固定化する方法である。

【００１２】前記固定化材料を導入する基材としては、
シランカップリング剤を化学的にまたは物理的に担持し
うるものであればいかなるものでも使用でき、例えばガ
ラス、シリカゲル、アルミナ、石英、カオリン、マイ
カ、タルク、クレイ、オラストナイト、鉄粉、チタン酸
カリウム、アスベスト、酸化チタン、酸化亜鉛、炭化ケ
イソ、窒化ケイ素、ボロン、各種セラミック等の無機高
分子類；ウレタン、ナイロン、ポリ塩化ビニル、ポリス
チレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、アクリル樹
脂、ポリカーボネート、エポキシ樹脂、メラミン樹脂、
ポリ酢酸ビニル、酢酸ビニル−エチレンコポリマー等の
合成高分子；再生セルロース、アセチルセルロース等の
セルロース誘導体やキトサン等の天然由来高分子材料な
どがあげられる。またその形状もビーズ状、チューブ
状、シート状、カップ状など、どのような形状およびサ
イズであってもよい。

【００１３】本発明の生理活性物質固定化材料により生
理活性物質を基材に固定化するには、 基材に生理活性物質固定化材料をシランカップリング
反応により導入し、 これをカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）により活
性化させ、 活性化基材と生理活性物質とを接触させる工程により
行うことができる。

【００１４】本発明の生理活性物質の固定方法の反応ス
キームを下記に示す。

【化３】

【００１５】前記の工程は、前記任意の基材上に前記
一般式〔１〕で表わされるシラノール誘導体をシランカ
ップリング反応により導入する工程である。ここで使用
される基材は一般的なシランカップリング処理の際に用
いられるのと同様の前処理、例えばＮａＯＨ水溶液処
理、プラズマ処理、プレコート処理等を施した後、この
工程に供することができる。

【００１６】シラノール誘導体はそのままで使用しても
よいし、水、エタノール、メタノール、メチルエチルケ
トン、トルエン、ベンゼン、ジメチルホルムアミド、ジ
メチルアセトアミド、ジメチルスルホキシドおよびこれ
らの混合溶媒などで０．０１〜８０％に希釈して使用し
てもよいし、またはさらに加水分解によりシラノール基
に変換した後、さらに軽度に重合させてプライマーとし
たものを使用してもよい。

【００１７】シラノール誘導体を基材上に塗布する方法
としては、使用する基材の材質、形状により様々であ
り、特定されないが、浸漬法、スプレー法、はけ塗り法
など、一般的な種々の方法を使用することができる。塗
布後のシランカップリング反応は、所定時間の風乾およ
び温度条件下で行われる。この際の反応条件は、０〜２
５０℃で３０分〜１０００時間、好ましくは２０〜１４
０℃で１〜２４時間が望ましい。

【００１８】前記の工程は、の工程により基材上に
導入されたシラノール誘導体残基中のヒドロキシル基を
ＣＤＩにより活性化させる工程である。ＣＤＩは乾燥さ
せたアセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジ
オキサン、メチルエチルケトン、アセトン、トルエン、
ベンゼン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミ
ド、ジメチルスルホキシドおよびこれらの混合溶媒など
に溶解させて使用するのが好ましい。この際のＣＤＩ濃
度は特に限定されないが、０．０１〜２０ｗｔ％が好ま
しい。

【００１９】活性化反応は、先の工程により得られた基
材をＣＤＩ溶液中に浸漬またはＣＤＩ溶液をその基材上
に塗布し、−２０〜１２０℃で１分〜１０００時間、好
ましくは０〜４０℃で１０分〜２４時間行うのが望まし
い。この際、水分によるＣＤＩの加水分解を防ぐため、
乾燥させた空気、二酸化炭素、ヘリウム、窒素、アルゴ
ンガスなどの雰囲気下で行うのが好ましい。反応終了
後、得られた活性化基材は水、エタノール、メタノー
ル、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジ
オキサン、メチルエチルケトン、アセトン、トルエン、
ベンゼン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミ
ド、ジメチルスルホキシドなどの溶媒により洗浄し、そ
のまま、または乾燥させた後次の工程に供される。

【００２０】前記の工程は、の工程で得られた活性
化基材に生理活性物質を接触させて固定化する工程であ
る。活性化基材と前記生理活性物質とを接触させること
により、生理活性物質が共有結合により固定化される。

【００２１】固定化反応は、生理活性物質を水または種
々の緩衝水溶液、生理食塩水、エタノール、メタノー
ル、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、１，４−ジ
オキサン、メチルエチルケトン、アセトン、ジメチルホ
ルムアミド、ジメチルアセトアミドおよびこれらの混合
溶媒等に溶解させた後、活性化基材をこの溶液中に浸漬
するか、またはこの溶液を塗布し、−２０〜１２０℃で
１分〜１０００時間、好ましくは０〜４０℃で１０分〜
２００時間行うのが望ましい。

【００２２】反応終了後、水または種々の緩衝水溶液、
生理食塩水、エタノール、メタノール、アセトニトリ
ル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、メチル
エチルケトン、アセトン、ジメチルホルムアミド、ジメ
チルアセトアミドおよびこれらの混合溶媒等により洗浄
した後、そのままで、または乾燥させることにより、目
的の生理活性物質が基材に固定された固定化物を得るこ
とができる。

【００２３】このようにして得られた固定化物は抗体固
定化システム、固定化酵素、分析・精製用カラム充填
剤、抗血栓性材料、抗菌材料、その他種々のハイブリッ
ド型バイオマテリアルなどとして利用される。

【００２４】

【発明の効果】以上の通り、本発明によれば、任意の生
理活性物質を任意の基材に、共有結合により固定化する
ことができ、しかも固定化する生理活性物質の活性を高
活性で発揮させるためのアームの長さや親水／疎水のバ
ランスを選択することができる生理活性物質固定化材料
が得られる。

【００２５】また本発明によれば、上記生理活性物質固
定化材料を用いて生理活性物質を基材上に簡単に固定す
ることができる。

【００２６】さらに本発明によれば、上記生理活性物質
固定化材料により生理活性物質が基材上に固定化され
た、活性の高い固定化物が得られる。

【００２７】

【実施例】以下、本発明を実施例により、さらに詳細に
説明する。各例中、％は重量％である。

【００２８】実施例１ ガラスビーズ上への３−ヒドロキシプロピルトリメト
キシシランの導入 ３００メッシュのガラスビーズ（基材）１０．０ｇを１
０％ＮａＯＨ水溶液中、６０℃で３０分間処理した後、
蒸留水でよく洗浄し、乾燥させた。一方、５％の３−ヒ
ドロキシプロピルトリメトキシシラン（生理活性物質固
定化材料）を含むエタノール／水（８／２（ｖ／ｖ））
５０ｍｌを１Ｎ酢酸でｐＨ＝４．５に調整し、室温で３
０分間攪拌したものに、上記ガラスビーズを浸漬し、濾
過により取出した後、１０分間室温で風乾させ、さらに
１１０℃のオーブン中で１時間加熱処理を行い３−ヒド
ロキシプロピル化ビーズを得た。

【００２９】３−ヒドロキシプロピル化ビーズのＣＤ
Ｉによる活性化 よく乾燥させアルゴンガスで満たした３つ口フラスコ中
に、乾燥テトラヒドロフラン５０ｍｌ、３−ヒドロキシ
プロピル化ビーズ１０．０ｇおよびＣＤＩ １００ｍｇ
を加え、室温で４時間攪拌した後、蒸留水１０ｍｌを加
え、余剰のＣＤＩを加水分解した。さらに蒸留水でデカ
ンテーションを３回繰返し、濾過によりイミダゾール活
性化ビーズを得た。得られた活性化ビーズは、凍結乾燥
し以下の反応に用いた。

【００３０】ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の固定化 活性化ビーズ５００ｍｇを５００μｇ／ｍｌのＢＳＡ
（０．１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ＝７．４）１０ｍｌ中に浸
漬し、４℃で３日間振盪した。濾過した後、ビーズ上の
未反応の活性化部位を加水分解するためｐＨ＝８．５の
０．１Ｍリン酸緩衝液を加え、さらに室温で１２時間振
盪した。反応終了後、ビーズを０．１％のドデシルベン
ゼンスルホン酸水溶液および精製水でよく洗浄した後、
蛋白質の検出法として汎用的なキサントプロテイン反応
により固定化の確認を行った。すなわち、ＢＳＡ固定化
ビーズ１０ｍｇに濃硝酸１ｍｌを加え、１０分間煮沸し
た後、室温まで冷やし、０．１％ＮａＯＨ水溶液を加え
た。この際、ビーズ表面および溶液が橙黄色に着色する
ことから、ＢＳＡの固定化が確認できた。

【００３１】実施例２ 生理活性物質固定化材料として、式〔２〕

【化４】 で表わされるシラノール誘導体を次の方法で製造した。

【００３２】すなわち、３−メルカプトプロピルトリメ
トキシシラン１９．６ｇ（０．１ｍｏｌ）、２−ヒドロ
キシエチルアクリレート１１．６ｇ（０．１ｍｏｌ）お
よびトリエチルアミン０．０５ｇを混合し、４０℃で２
４時間攪拌した。

【００３３】このようにして得られたシラノール誘導体
を３−ヒドロキシプロピルトリメトキシシランの代わり
に用いた以外は実施例１のおよび工程と同様にして
活性化ビーズを得た。得られた活性化ビーズ５００ｍｇ
を８０μｇ／ｍｌのウシ小腸由来のアルカリフォスファ
ターゼ（ＡＬＰ）（０．１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ＝７．
４）５ｍｌ中に浸漬し、４℃で３日間振盪した。さらに
未反応の活性化部位をブロッキングするため、１５０μ
ｇ／ｍｌのＢＳＡ（０．１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ＝７．
４）１ｍｌを加え、さらに室温で１日振盪した。

【００３４】反応終了後、ＡＬＰの固定化の確認を、４
−ニトロフェニルフォスフェートによるＡＬＰの比色検
出法にて行った。すなわち、光路長１ｃｍの石英ガラス
セル中、ＡＬＰを固定化したウェットなビーズ約１０ｍ
ｇに、０．１ｍｏｌ／ｌグリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐ
Ｈ１０．３）０．５ｍｌを加えて３７℃で５分間インキ
ュベートし、さらに２ｇ／ｌの４−ニトロフェニルフォ
スフェート０．５ｍｌを加えて３７℃で３０分間インキ
ュベートした。２Ｎ ＮａＯＨ水溶液０．１ｍｌを加
え、４０５ｎｍの吸光度を測定した。この結果、０．８
３の吸光度が得られたことより、ＡＬＰがその酵素活性
能を維持したままで、基材上に固定化されたことが確認
できた。

【００３５】実施例３ 生理活性物質固定化材料として、式〔３〕

【化５】 で表わされるシラノール誘導体を次の方法で製造した。

【００３６】すなわち、３−メルカプトプロピルトリメ
トキシシラン１９．６ｇ（０．１ｍｏｌ）、ジエチレン
グリコールメタクリレート１７．４ｇ（０．１ｍｏｌ）
およびトリエチルアミン０．０５ｇを混合し、４０℃で
２４時間攪拌した。

【００３７】このようにして得られたシラノール誘導体
を３−ヒドロキシプロピルトリメトキシシランの代わり
に用いた以外は実施例１のおよび工程と同様にして
活性化ビーズを得た。得られた活性化ビーズ５００ｍｇ
を８０μｇ／ｍｌを抗ヒトＨｂウサギＩｇＧ（０．１Ｍ
リン酸緩衝液ｐＨ＝７．４）５ｍｌ中に浸漬し、４℃で
３日間振盪した。さらに未反応の活性化部位をブロッキ
ングするため、１５０μｇ／ｍｌのＢＳＡ（０．１Ｍリ
ン酸緩衝液ｐＨ＝７．４）１ｍｌを加え、さらに室温で
１日振盪した。

【００３８】反応終了後、ビーズは固定化を確認するた
め精製水でよく洗浄した後、以下の評価に用いた。抗ヒ
トＨｂ−ウサギＩｇＧの固定化の確認は、ヒトＨｂとＡ
ＬＰで標識した抗ヒトＨｂ−ウサギＩｇＧとの３者のサ
ンドイッチコンプレックスの形成を４−ニトロフェニル
フォスフェートによるＡＬＰの比色検出法にて行った。

【００３９】すなわち、光路長１ｃｍの石英ガラスセル
中、抗ヒトＨｂ−ウサギＩｇＧを固定化したウェットな
ビーズ約１０ｍｇを、ヒトＨｂ ４ｍｇとＡＬＰで標識
した抗ヒトＨｂ−ウサギＩｇＧ ８ｍｇを含む０．１ｍ
ｏｌ／ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）１ｍｌ中に浸漬
し、室温で３０分間インキュベートした。精製水でよく
洗浄した後、０．１ｍｏｌ／グリシン−ＮａＯＨ緩衝液
（ｐＨ１０．３）０．５ｍｌを加え、３７℃で５分間イ
ンキュベートし、さらに２ｇ／ｌの４−ニトロフェニル
フォスフェート０．５ｍｌを加え、３７℃で３０分間イ
ンキュベートした。２Ｎ ＮａＯＨ水溶液０．１ｍｌを
加え、４０５ｎｍの吸光度を測定した。この結果、０．
６の吸光度が得られたことより、抗ヒトＨｂウサギＩｇ
Ｇはその抗体活性を維持したままで、固定化されている
ことが確認できた。

【００４０】実施例４ 生理活性物質固定化材料として、式〔４〕

【化６】 で表わされるシラノール誘導体を次の方法で製造した。

【００４１】すなわち、３−メルカプトプロピルトリエ
トキシシラン２３．８ｇ（０．１ｍｏｌ）、ポリエチレ
ングリコール（ｍ≒６）メタクリレート３５．０ｇ
（０．１ｍｏｌ）およびトリエチルアミン０．０５ｇを
混合し、４０℃で２４時間攪拌した。

【００４２】このようにして得られたシラノール誘導体
を３−ヒドロキシプロピルトリメトキシシランの代わり
に用いた以外は実施例１と同様にしてＢＳＡの固定化を
行った。反応終了後、ビーズは精製水でよく洗浄した
後、キサントプロティン反応により、ビーズ表面および
溶液が橙黄色に着色することから、ＢＳＡの固定化が確
認できた。

【００４３】実施例５ 生理活性物質固定化材料として、式〔５〕

【化７】 で表わされるシラノール誘導体を次の方法で製造した。

【００４４】すなわち、３−メルカプトプロピルメチル
ジメトキシシラン１８．０ｇ（０．１ｍｏｌ）、ポリエ
チレングリコール３０００アクリレート３１．０ｇ
（０．１ｍｏｌ）およびトリエチルアミン０．０５ｇを
混合し、４０℃で２４時間攪拌した。

【００４５】このようにして得られたシラノール誘導体
を３−ヒドロキシプロピルトリメトキシシランの代わり
に用いた以外は実施例１と同様にしてＢＳＡの固定化を
行った。反応終了後、ビーズは精製水でよく洗浄した
後、キサントプロテイン反応により、ビーズ表面および
溶液が橙黄色に着色することから、ＢＳＡの固定化が確
認できた。

【００４６】実施例６ 生理活性物質固定化材料として、式〔６〕

【化８】 で表わされるシラノール誘導体を次の方法で製造した。

【００４７】すなわち、３−メルカプトプロピルトリメ
トキシシラン１９．６ｇ（０．１ｍｏｌ）、ポリプロピ
レングリコール６００アクリレート６７．０ｇ（０．１
ｍｏｌ）、およびトリエチルアミン０．０５ｇを混合
し、４０℃で２４時間攪拌した。

【００４８】このようにして得られたシラノール誘導体
を３−ヒドロキシプロピルトリメトキシシランの代わり
に用いた以外は実施例１と同様にしてＢＳＡの固定化を
行った。反応終了後、ビーズは精製水でよく洗浄した
後、キサントプロテイン反応により、ビーズ表面および
溶液が橙黄色に着色することから、ＢＳＡの固定化が確
認できた。

【００４９】実施例７ 生理活性物質固定化材料として、式〔７〕

【化９】 で表わされるシラノール誘導体を次の方法で製造した。

【００５０】すなわち、３−メルカプトプロピルトリエ
トキシシラン２３．８ｇ（０．１ｍｏｌ）、ポリプロピ
レングリコール１２００メタクリレート１３０ｇ（０．
１ｍｏｌ）およびトリエチルアミン０．０５ｇを混合
し、４０℃で２４時間攪拌した。

【００５１】このようにして得られたシラノール誘導体
を３−ヒドロキシプロピルトリメトキシシランの代わり
に用いた以外は実施例１と同様にしてＢＳＡの固定化を
行った。反応終了後、ビーズは精製水でよく洗浄した
後、キサントプロテイン反応により、ビーズ表面および
溶液が橙黄色に着色することから、ＢＳＡの固定化が確
認できた。

【００５２】比較例１ 実施例１ので得られた３−ヒドロキシプロピル化ビー
ズ５００ｍｇを５００μｇ／ｍｌのＢＳＡ（０．１Ｍリ
ン酸緩衝液ｐＨ＝７．４）１０ｍｌ中に浸漬し、４℃で
３日間振盪した。精製水でよく洗浄した後、キサントプ
ロテイン反応を行ったが、ビーズ表面および溶液中に全
く着色は見られなかった。すなわちＣＤＩ処理を行って
いないビーズ上にはＢＳＡは全く固定化されていなかっ
た。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式〔１〕で表わされるシラノー
   ル誘導体からなることを特徴とする生理活性物質固定化
   材料。 【化１】 〔式中、Ｒ¹は水素原子またはメチル基、 Ｒ²はメチル基またはエチル基、 Ｒ³は水素原子、メチル基またはエチル基を示す。ｍは
   正数（ただしｍは平均付加モル数）、 ｎは０または１、 ｐは０〜２の整数、ｑは１〜３の整数（ただしｐ＋ｑ＝
   ３）である。〕
2. 【請求項２】 請求項１記載の生理活性物質固定化材料
   を、シランカップリング反応により基材に導入した後、
   カルボニルジイミダゾールにより活性化し、次に生理活
   性物質を接触させることを特徴とする生理活性物質の固
   定方法。
3. 【請求項３】 請求項１記載の生理活性物質固定化材料
   により生理活性物質が基材上に固定されたことを特徴と
   する生理活性物質の固定化物。