JPH0666806A - 発熱性物質吸着体とそれを用いた発熱性物質の定量方法 - Google Patents
発熱性物質吸着体とそれを用いた発熱性物質の定量方法Info
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- JPH0666806A JPH0666806A JP3169479A JP16947991A JPH0666806A JP H0666806 A JPH0666806 A JP H0666806A JP 3169479 A JP3169479 A JP 3169479A JP 16947991 A JP16947991 A JP 16947991A JP H0666806 A JPH0666806 A JP H0666806A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】発熱性物質（エンドトキシン）を定量する為の
担体、および発熱性物質（エンドトキシン）定量キット
を提供する。 【構成】発熱性物質（エンドトキシン）と親和性のある
リガンド（主に抗生物質）を共有結合させた担体および
発色試薬からなる。
担体、および発熱性物質（エンドトキシン）定量キット
を提供する。 【構成】発熱性物質（エンドトキシン）と親和性のある
リガンド（主に抗生物質）を共有結合させた担体および
発色試薬からなる。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］本発明は、医療領域で極めて重要
な問題と考えられる、発熱性物質の定量方法に関する。 ［従来技術］臨床医学の領域では注射剤に混入する不純
物により、静脈注射後に悪寒戦りつを伴う発熱があるこ
とは、好ましいことではない。それ故に注射剤の製造工
程では、これらの悪寒戦りつを伴う発熱性物質の混入を
防止することは、極めて重要である。また、製造された
注射剤が発熱性物質を含有しないことを確認することも
極めて重要なことである。ウサギを用いてｉｎ ｖｉｔ
ｒｏ で発熱性物質の有無を検出する試験を発熱性物質
試験という。近年、ウサギを用いた発熱性物質試験に代
わり、カブトガニの血球成分を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ
のＬｉｍｕｌｕｓ試験が汎用される様になっている。日
本ではＬｉｍｕｌｕｓ試験に用いられるカブトガニの血
球成分に標準規格が定められておらず、また、抽出成分
の純度や、反応試薬中に存在する反応阻害物質の問題
等、克服すべき問題が多い。 ［発明が解決しようとする問題点］本発明の目的は従
来、血液及び蛋白製剤を検査対象としたＬｉｍｕｌｕｓ
試験に求められた前処理、後処理の問題、Ｌｉｍｕｌｕ
ｓ試験の特異性の欠如の問題（（１→３）−β−Ｄ−Ｇ
ｌｕｃａｎに対する非特異反応の問題）を一挙に克服し
ようとするものである。即ち、被検検体が血液または蛋
白製剤である場合、従来のＬｉｍｕｌｕｓ試験では、検
体中の非特異的なアミダーゼ活性及びＬｉｍｕｌｕｓ反
応阻害物質（α２−プラスミンインヒビター、アンチト
ロンビンＩＩＩ、α１−アンチトリプシン）を除去する
為、クロロホルム法、エーテル法、酸処理法、アルカリ
処理法等の前処理が必須であった。また従来のＬｉｍｕ
ｌｕｓ試験では、被検検体がビリルビン等により黄褐色
に呈色していた場合、エンドトキシンの作用により、合
成基質から最終的に遊離されるｐ−ニトロアニリンの吸
収波長（４０５ｎｍ）と検体の黄褐色の吸収波長（４０
０ｎｍ付近）が重なり合い、正確な値が得られなかっ
た。この為ｐ−ニトロアニリンを更にジアゾ化し、黄褐
色系色素の影響を除く必要があった。更に、従来のＬｉ
ｍｕｌｕｓ試験では、カブトガニ血球抽出液全体を用い
ている為、凝固因子の一つであるＦａｃｔｏｒ Ｇ を
介してエンドトキシン以外の物質（（１→３）−β−Ｄ
−Ｇｌｕｃａｎ、真菌多糖、クレスチン、レンチナン、
ザイモサン、セルロース系血液透析膜の洗浄液等）に対
しても反応するという問題があった。この問題を解決す
る為には、カブトガニ血球抽出液からＦａｃｔｏｒ Ｇ
を除去する操作が必要であった。 ［問題点を解決するための手段］本発明の考案者らは発
熱性物質の定量方法について鋭意検討した結果、 （１）発熱性物質吸着体（ゲル）を固相化した容器、試
験管、球（ビーズ、ボール）、磁性粒子、チップ、薄
板、小片、薄膜、小棒、マイクロタイタープレート、ス
トリップ、ろ紙ディスク等の器具。 （２）−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ＝Ｎ−，−ＣＯ
ＮＨ− 等の反応性官能器を固相化し、その官能基に発
熱性物質と結合するリガンドを共有結合させた容器、試
験管、球（ビーズ、ボール）、磁性粒子、チップ、薄
板、小片、薄膜、小棒、マイクロタイタープレート、ス
トリップ、ろ紙ディスク等の器具。 を用いて発熱性物質を吸着した後、従来のＬｉｍｕｌｕ
ｓ試験で発熱性物質の定量を行なう方法が、従来の難問
を一挙に解決することを発見した。即ち、本発明に関わ
る器具を使用し、発熱性物質を特異的に吸着した後、Ｌ
ｉｍｕｌｕｓ試験、或いは、放射イムノアッセイ法、非
放射イムノアッセイ法等により、発熱性物質を定量する
ことにより、従来技術で不可欠であった検体の前処理、
後処理の必要が全く無くなるという利点が生ずる。ま
た、本発明に関わる器具が発熱性物質（エンドトキシ
ン）のみを特異的に吸着する為、カブトガニ血球抽出液
全体を用いてＬｉｍｕｌｕｓ試験を行なっても（１→
３）−β―Ｄ−Ｇｌｕｃａｎ等に対する非特異反応に配
慮する必要はない。以下に実施例を挙げて、本発明を更
に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例には、何ら
限定されるものではない。 実施例１．反応性官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ
Ｈ＝Ｎ−を固相化し、その官能基に発熱性物質と結合す
るリガンドであるヒスチジンを共有結合させたマイクロ
タイタープレートを調製した。その発熱性物質吸着マイ
クロタイタープレート（ブロック済）に、エンドトキシ
ン溶液（緩衝液に溶解したエンドトキシンまたは、血清
に溶解したエンドトキシン：濃度は何れも ２．５００
ＥＵ／ｍｌ）２００ｕｌを秤量し、室温で３０分ｉｎｃ
ｕｂａｔｅした。次に、マイクロタイタープレートの各
穴をリン酸緩衝液２００ｕｌで３回洗浄した。最後に、
発熱性物質定量用試薬エンドスペシー（（１→３）−β
−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎは検出しない）及びトキシカラー
（（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎも検出する）を用
いて、発熱性物質の定量を行ない、その結果を以下に示
した。尚、以上の操作に用いた器具、緩衝液等はすべて
エンドトキシンフリー及び（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕ
ｃａｎフリーのものを用いた。 表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着マイク
ロタイタープレートは、発熱性物質の良好な吸着性能を
示した。また、エンドスペー及びトキシカラーによるエ
ンドトキシンの定量結果も良好であった。 実施例２ 反応性官能基−Ｎ＝ＣＨ―（ＣＨ２）３−ＣＨ＝Ｎ―
を固相化し、その官能基に発熱性物質と結合するリガン
ドであるヒスタミンを共有結合させたマイクロタイター
プレートを調製した。その発熱性物質吸着マイクロタイ
タープレート（ブロック済）に、リン酸緩衝液に溶解し
た（１→３）−β―Ｄ−Ｇｌｕｃａｎ溶液（１ ｕｇ／
ｍｌ）１００ｕｌを秤量し、室温で３０分ｉｎｃｕｂａ
ｔｅした。次に、マイクロタイタープレートの各穴をリ
ン酸緩衝液２００ｕｌで３回洗浄した。最後に、発熱性
物質定量用試薬エンドスペシー（（１→３）−β―Ｄ−
Ｇｌｕｃａｎは検出しない）及びトキシカラー（（１→
３）−β―Ｄ−Ｇｌｕｃａｎも検出する）を用いて、発
熱性物質の定量を行ない、その結果を以下に示した。
尚、以上の操作に用いた器具、緩衝液等はすべてエンド
トキシンフリー及び（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎ
フリーのものを用いた。 表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着マイク
ロタイタープレートは、発熱性物質の特異な吸着性能を
示した。即ち、（１→３）−β―Ｄ−Ｇｌｕｃａｎは上
記マイクロタイタープレートには吸着されず、従って、
エンドスペー及びトキシカラーの両者によって（１→
３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎは検出されなかった。 実施例３．反応性官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ
Ｈ＝Ｎ−を固相化し、更にその官能基にリガンドとし
て、ポリミキシン Ｂ を共有結合させたビーズを調製
した。小試験管にリン酸緩衝液に２ｍｌ、発熱性物質吸
着ビーズ（ブロック済）、非溶血血清に溶解したエンド
トキシンまたは、溶血血清に溶解した標準エンドトキシ
ン（濃度は何れも５．０００ＥＵ／ｍｌ）２００ｕｌを
秤量し、室温で３０分ｉｎｃｕｂａｔｅした。次に、前
記ビーズをリン酸緩衝液２ｍｌで３回洗浄した。次に、
発熱性物質定量用試薬トキシカラー（（１→３）−β−
Ｄ−Ｇｌｕｃａｎも検出する）を用いて、発熱性物質の
定量を行ない、その結果を以下に示した。尚、以上の操
作に用いた器具、緩衝液等はすべてエンドトキシンフリ
ー及び（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎフリーのもの
を用いた。表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着ビーズ
は、発熱性物質の良好な吸着性能を示した。また、トキ
シカラーによるエンドトキシンの定量結果も良好であっ
た。即ち、溶血（ヘモグロビン）による４１５ｎｍの吸
収がｐ―ニトロアニリンの４０５ｎｍの吸収を妨害する
ことはなかった。 実施例４．反応性官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ
Ｈ＝Ｎ― を固相化し、更にその官能基にリガンドとし
て、コリスチンを共有結合させたビーズを調製した。小
試験管に緩衝液２ｍｌ、発熱性物質吸着ビーズ（ブロッ
ク済）、Ａ液（非溶血血清にエンドトキシン１．０００
ＥＵ／ｍｌを溶解したもの）、またはＢ液（非溶血血清
にエンドトキシン １．０００ＥＵ／ｍｌ とレンチナ
ン１００ｎｇ／ｍｌを溶解したもの）２００ｕｌを秤量
し、室温で３０分ｉｎｃｕｂａｔｅした。次に、前記ビ
ーズをリン酸緩衝液２ｍｌで３回洗浄した。次に、発熱
性物質定量用試試薬エンドスペシー（（１→３）−β−
Ｄ−Ｇｌｕｃａｎは検出しない）を用いて、発熱性物質
の定量を行ない、その結果を以下に示した。尚、以上の
操作に用いた器具、緩衝液等はすべてエンドトキシンフ
リー及び（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎフリーのも
のを用いた。 表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着ビーズ
は、発熱性物質の良好な吸着性能を示した。また、エン
ドスペーによるエンドトキシンの定量結果も良好であっ
た。即ち、レンチナンによる非特異反応は認められなか
った。 実施例５．反応性官能基−Ｎ−ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ
Ｈ＝Ｎ−を固相化し、更にその官能基にリガンドとし
て、カナマイシンンを共有結合させたビーズを調製し
た。小試験管に緩衝液２ｍｌ、発熱性物質吸着ビーズ
（ブロック済）、エンドトキシンＡ液（プール血清にエ
ンドトキシン５．０００ＥＵ／ｍｌ を溶解）または、
エンドトキシＢ液（プール血清にエンドトキシン５．０
００ＥＵ／ｍｌ及びレンチナン１ｕｇ／ｍｌ を溶解）
２００ｕｌを秤量し、室温で３０分ｉｎｃｕｂａｔｅし
た。次に、前記ビーズをリン酸緩衝液２ｍｌで３回洗浄
した。次に、発熱性物質定量用試薬エンドスペシー
（（１→３）−β―Ｄ―Ｇｌｕｃａｎは検出しない）及
びトキシカラー（（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎも
検出する）を用いて、発熱性物質の定量を行ない、その
結果を以下に示した。尚、以上の操作に用いた器具、緩
衝液等はすべてエンドトキシンフリー及び（１→３）−
β―Ｄ−Ｇｌｕｃａｎフリーのものを用いた。 表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着ビーズ
は、発熱性物質の良好な吸着性能を示した。また、エン
ドスペー及びトキシカラーによるエンドトキシンの定量
結果も良好であった。即ち、レンチナンによる影響は認
められなかった。 実施例６．反応性官能基―Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ
Ｈ＝Ｎ―を固相化し、更にその官能基にリガンドとし
て、ヒスチジンを共有結合させたポリスチレン製小試験
管を調製した。小試験管（ブロック済）に緩衝液２ｍ
ｌ、エンドトキシンＡ液（リン緩衝液にエンドトキシン
１．５００ＥＵ／ｍｌを溶解）または、エンドトキシン
Ｂ液（リン酸緩衝液にしエンドトキシン１．５００ＥＵ
／ｍｌ及びメシル酸ガベキサート８０ｕｇ／ｍｌを溶
解）２００ｕｌを秤量し、室温で３０分ｉｎｃｕｂａｔ
ｅした。次に、前記小試験管をリン酸緩衝液２ｍｌで３
回洗浄した。次に、発熱性物質定量用試薬エンドスペシ
ー（（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎは検出しない）
及びトキシカラー（（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎ
も検出する）を用いて、発熱性物質の定量を行ない、そ
の結果を以下に示した。尚、以上の操作に用いた器具、
緩衝液等はすべてエンドトキシンフリー及び（１→３）
−β―Ｄ−Ｇｌｕｃａｎフリーのものを用いた。 表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着小試験
管は、発熱性物質の良好な吸着性能を示した。また、エ
ンドスペー及びトキシカラーによるエンドトキシンの定
量結果も良好であった。即ち、メシル酸ガベキサートの
影響は認められなかった。 実施例７．反応性官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ
Ｈ＝Ｎ−を固相化し、更にその官能基にリガンドとし
て、ヒスチジンを共有結合させたポリスチレン製小試験
管を調製した。小試験管（ブロック済）に緩衝液２ｍ
ｌ、エンドトキシンＡ液（リン緩衝液にエンドトキシン
０．５００ＥＵ／ｍｌを溶解）または、エンドトキシン
Ｂ液（リン酸緩衝液にエンドトキシン０．５００ＥＵ／
ｍｌ及びアプロチニン１０ｕ／ｍｌを溶解）２００ｕｌ
を秤量し、室温で３０分ｉｎｃｕｂａｔｅした。次に、
前記小試験管をリン酸緩衝液２ｍｌで３回洗浄した。次
に、発熱性物質定量用試薬エンドスペシー（（１→３）
−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎは検出しない）及びトキシカラ
ー（（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎも検出する）を
用いて、発熱性物質の定量を行ない、その結果を以下に
示した。尚、以上の操作に用いた器具、緩衝液等はすべ
てエンドトキシンフリー及び（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌ
ｕｃａｎフリーのものを用いた。 表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着小試験
管は、発熱性物質の良好な吸着性能を示した。また、エ
ンドスペー及びトキシカラーによるエンドトキシンの定
量結果も良好であった。即ち、アプロチニンの影響は認
められなかった。実施例１〜実施例７に用いたエンドス
ペシー及びトキシカラーは、何れも（株）生化学工業
（東京）の製品である。
な問題と考えられる、発熱性物質の定量方法に関する。 ［従来技術］臨床医学の領域では注射剤に混入する不純
物により、静脈注射後に悪寒戦りつを伴う発熱があるこ
とは、好ましいことではない。それ故に注射剤の製造工
程では、これらの悪寒戦りつを伴う発熱性物質の混入を
防止することは、極めて重要である。また、製造された
注射剤が発熱性物質を含有しないことを確認することも
極めて重要なことである。ウサギを用いてｉｎ ｖｉｔ
ｒｏ で発熱性物質の有無を検出する試験を発熱性物質
試験という。近年、ウサギを用いた発熱性物質試験に代
わり、カブトガニの血球成分を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ
のＬｉｍｕｌｕｓ試験が汎用される様になっている。日
本ではＬｉｍｕｌｕｓ試験に用いられるカブトガニの血
球成分に標準規格が定められておらず、また、抽出成分
の純度や、反応試薬中に存在する反応阻害物質の問題
等、克服すべき問題が多い。 ［発明が解決しようとする問題点］本発明の目的は従
来、血液及び蛋白製剤を検査対象としたＬｉｍｕｌｕｓ
試験に求められた前処理、後処理の問題、Ｌｉｍｕｌｕ
ｓ試験の特異性の欠如の問題（（１→３）−β−Ｄ−Ｇ
ｌｕｃａｎに対する非特異反応の問題）を一挙に克服し
ようとするものである。即ち、被検検体が血液または蛋
白製剤である場合、従来のＬｉｍｕｌｕｓ試験では、検
体中の非特異的なアミダーゼ活性及びＬｉｍｕｌｕｓ反
応阻害物質（α２−プラスミンインヒビター、アンチト
ロンビンＩＩＩ、α１−アンチトリプシン）を除去する
為、クロロホルム法、エーテル法、酸処理法、アルカリ
処理法等の前処理が必須であった。また従来のＬｉｍｕ
ｌｕｓ試験では、被検検体がビリルビン等により黄褐色
に呈色していた場合、エンドトキシンの作用により、合
成基質から最終的に遊離されるｐ−ニトロアニリンの吸
収波長（４０５ｎｍ）と検体の黄褐色の吸収波長（４０
０ｎｍ付近）が重なり合い、正確な値が得られなかっ
た。この為ｐ−ニトロアニリンを更にジアゾ化し、黄褐
色系色素の影響を除く必要があった。更に、従来のＬｉ
ｍｕｌｕｓ試験では、カブトガニ血球抽出液全体を用い
ている為、凝固因子の一つであるＦａｃｔｏｒ Ｇ を
介してエンドトキシン以外の物質（（１→３）−β−Ｄ
−Ｇｌｕｃａｎ、真菌多糖、クレスチン、レンチナン、
ザイモサン、セルロース系血液透析膜の洗浄液等）に対
しても反応するという問題があった。この問題を解決す
る為には、カブトガニ血球抽出液からＦａｃｔｏｒ Ｇ
を除去する操作が必要であった。 ［問題点を解決するための手段］本発明の考案者らは発
熱性物質の定量方法について鋭意検討した結果、 （１）発熱性物質吸着体（ゲル）を固相化した容器、試
験管、球（ビーズ、ボール）、磁性粒子、チップ、薄
板、小片、薄膜、小棒、マイクロタイタープレート、ス
トリップ、ろ紙ディスク等の器具。 （２）−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ＝Ｎ−，−ＣＯ
ＮＨ− 等の反応性官能器を固相化し、その官能基に発
熱性物質と結合するリガンドを共有結合させた容器、試
験管、球（ビーズ、ボール）、磁性粒子、チップ、薄
板、小片、薄膜、小棒、マイクロタイタープレート、ス
トリップ、ろ紙ディスク等の器具。 を用いて発熱性物質を吸着した後、従来のＬｉｍｕｌｕ
ｓ試験で発熱性物質の定量を行なう方法が、従来の難問
を一挙に解決することを発見した。即ち、本発明に関わ
る器具を使用し、発熱性物質を特異的に吸着した後、Ｌ
ｉｍｕｌｕｓ試験、或いは、放射イムノアッセイ法、非
放射イムノアッセイ法等により、発熱性物質を定量する
ことにより、従来技術で不可欠であった検体の前処理、
後処理の必要が全く無くなるという利点が生ずる。ま
た、本発明に関わる器具が発熱性物質（エンドトキシ
ン）のみを特異的に吸着する為、カブトガニ血球抽出液
全体を用いてＬｉｍｕｌｕｓ試験を行なっても（１→
３）−β―Ｄ−Ｇｌｕｃａｎ等に対する非特異反応に配
慮する必要はない。以下に実施例を挙げて、本発明を更
に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例には、何ら
限定されるものではない。 実施例１．反応性官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ
Ｈ＝Ｎ−を固相化し、その官能基に発熱性物質と結合す
るリガンドであるヒスチジンを共有結合させたマイクロ
タイタープレートを調製した。その発熱性物質吸着マイ
クロタイタープレート（ブロック済）に、エンドトキシ
ン溶液（緩衝液に溶解したエンドトキシンまたは、血清
に溶解したエンドトキシン：濃度は何れも ２．５００
ＥＵ／ｍｌ）２００ｕｌを秤量し、室温で３０分ｉｎｃ
ｕｂａｔｅした。次に、マイクロタイタープレートの各
穴をリン酸緩衝液２００ｕｌで３回洗浄した。最後に、
発熱性物質定量用試薬エンドスペシー（（１→３）−β
−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎは検出しない）及びトキシカラー
（（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎも検出する）を用
いて、発熱性物質の定量を行ない、その結果を以下に示
した。尚、以上の操作に用いた器具、緩衝液等はすべて
エンドトキシンフリー及び（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕ
ｃａｎフリーのものを用いた。 表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着マイク
ロタイタープレートは、発熱性物質の良好な吸着性能を
示した。また、エンドスペー及びトキシカラーによるエ
ンドトキシンの定量結果も良好であった。 実施例２ 反応性官能基−Ｎ＝ＣＨ―（ＣＨ２）３−ＣＨ＝Ｎ―
を固相化し、その官能基に発熱性物質と結合するリガン
ドであるヒスタミンを共有結合させたマイクロタイター
プレートを調製した。その発熱性物質吸着マイクロタイ
タープレート（ブロック済）に、リン酸緩衝液に溶解し
た（１→３）−β―Ｄ−Ｇｌｕｃａｎ溶液（１ ｕｇ／
ｍｌ）１００ｕｌを秤量し、室温で３０分ｉｎｃｕｂａ
ｔｅした。次に、マイクロタイタープレートの各穴をリ
ン酸緩衝液２００ｕｌで３回洗浄した。最後に、発熱性
物質定量用試薬エンドスペシー（（１→３）−β―Ｄ−
Ｇｌｕｃａｎは検出しない）及びトキシカラー（（１→
３）−β―Ｄ−Ｇｌｕｃａｎも検出する）を用いて、発
熱性物質の定量を行ない、その結果を以下に示した。
尚、以上の操作に用いた器具、緩衝液等はすべてエンド
トキシンフリー及び（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎ
フリーのものを用いた。 表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着マイク
ロタイタープレートは、発熱性物質の特異な吸着性能を
示した。即ち、（１→３）−β―Ｄ−Ｇｌｕｃａｎは上
記マイクロタイタープレートには吸着されず、従って、
エンドスペー及びトキシカラーの両者によって（１→
３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎは検出されなかった。 実施例３．反応性官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ
Ｈ＝Ｎ−を固相化し、更にその官能基にリガンドとし
て、ポリミキシン Ｂ を共有結合させたビーズを調製
した。小試験管にリン酸緩衝液に２ｍｌ、発熱性物質吸
着ビーズ（ブロック済）、非溶血血清に溶解したエンド
トキシンまたは、溶血血清に溶解した標準エンドトキシ
ン（濃度は何れも５．０００ＥＵ／ｍｌ）２００ｕｌを
秤量し、室温で３０分ｉｎｃｕｂａｔｅした。次に、前
記ビーズをリン酸緩衝液２ｍｌで３回洗浄した。次に、
発熱性物質定量用試薬トキシカラー（（１→３）−β−
Ｄ−Ｇｌｕｃａｎも検出する）を用いて、発熱性物質の
定量を行ない、その結果を以下に示した。尚、以上の操
作に用いた器具、緩衝液等はすべてエンドトキシンフリ
ー及び（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎフリーのもの
を用いた。表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着ビーズ
は、発熱性物質の良好な吸着性能を示した。また、トキ
シカラーによるエンドトキシンの定量結果も良好であっ
た。即ち、溶血（ヘモグロビン）による４１５ｎｍの吸
収がｐ―ニトロアニリンの４０５ｎｍの吸収を妨害する
ことはなかった。 実施例４．反応性官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ
Ｈ＝Ｎ― を固相化し、更にその官能基にリガンドとし
て、コリスチンを共有結合させたビーズを調製した。小
試験管に緩衝液２ｍｌ、発熱性物質吸着ビーズ（ブロッ
ク済）、Ａ液（非溶血血清にエンドトキシン１．０００
ＥＵ／ｍｌを溶解したもの）、またはＢ液（非溶血血清
にエンドトキシン １．０００ＥＵ／ｍｌ とレンチナ
ン１００ｎｇ／ｍｌを溶解したもの）２００ｕｌを秤量
し、室温で３０分ｉｎｃｕｂａｔｅした。次に、前記ビ
ーズをリン酸緩衝液２ｍｌで３回洗浄した。次に、発熱
性物質定量用試試薬エンドスペシー（（１→３）−β−
Ｄ−Ｇｌｕｃａｎは検出しない）を用いて、発熱性物質
の定量を行ない、その結果を以下に示した。尚、以上の
操作に用いた器具、緩衝液等はすべてエンドトキシンフ
リー及び（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎフリーのも
のを用いた。 表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着ビーズ
は、発熱性物質の良好な吸着性能を示した。また、エン
ドスペーによるエンドトキシンの定量結果も良好であっ
た。即ち、レンチナンによる非特異反応は認められなか
った。 実施例５．反応性官能基−Ｎ−ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ
Ｈ＝Ｎ−を固相化し、更にその官能基にリガンドとし
て、カナマイシンンを共有結合させたビーズを調製し
た。小試験管に緩衝液２ｍｌ、発熱性物質吸着ビーズ
（ブロック済）、エンドトキシンＡ液（プール血清にエ
ンドトキシン５．０００ＥＵ／ｍｌ を溶解）または、
エンドトキシＢ液（プール血清にエンドトキシン５．０
００ＥＵ／ｍｌ及びレンチナン１ｕｇ／ｍｌ を溶解）
２００ｕｌを秤量し、室温で３０分ｉｎｃｕｂａｔｅし
た。次に、前記ビーズをリン酸緩衝液２ｍｌで３回洗浄
した。次に、発熱性物質定量用試薬エンドスペシー
（（１→３）−β―Ｄ―Ｇｌｕｃａｎは検出しない）及
びトキシカラー（（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎも
検出する）を用いて、発熱性物質の定量を行ない、その
結果を以下に示した。尚、以上の操作に用いた器具、緩
衝液等はすべてエンドトキシンフリー及び（１→３）−
β―Ｄ−Ｇｌｕｃａｎフリーのものを用いた。 表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着ビーズ
は、発熱性物質の良好な吸着性能を示した。また、エン
ドスペー及びトキシカラーによるエンドトキシンの定量
結果も良好であった。即ち、レンチナンによる影響は認
められなかった。 実施例６．反応性官能基―Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ
Ｈ＝Ｎ―を固相化し、更にその官能基にリガンドとし
て、ヒスチジンを共有結合させたポリスチレン製小試験
管を調製した。小試験管（ブロック済）に緩衝液２ｍ
ｌ、エンドトキシンＡ液（リン緩衝液にエンドトキシン
１．５００ＥＵ／ｍｌを溶解）または、エンドトキシン
Ｂ液（リン酸緩衝液にしエンドトキシン１．５００ＥＵ
／ｍｌ及びメシル酸ガベキサート８０ｕｇ／ｍｌを溶
解）２００ｕｌを秤量し、室温で３０分ｉｎｃｕｂａｔ
ｅした。次に、前記小試験管をリン酸緩衝液２ｍｌで３
回洗浄した。次に、発熱性物質定量用試薬エンドスペシ
ー（（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎは検出しない）
及びトキシカラー（（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎ
も検出する）を用いて、発熱性物質の定量を行ない、そ
の結果を以下に示した。尚、以上の操作に用いた器具、
緩衝液等はすべてエンドトキシンフリー及び（１→３）
−β―Ｄ−Ｇｌｕｃａｎフリーのものを用いた。 表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着小試験
管は、発熱性物質の良好な吸着性能を示した。また、エ
ンドスペー及びトキシカラーによるエンドトキシンの定
量結果も良好であった。即ち、メシル酸ガベキサートの
影響は認められなかった。 実施例７．反応性官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−Ｃ
Ｈ＝Ｎ−を固相化し、更にその官能基にリガンドとし
て、ヒスチジンを共有結合させたポリスチレン製小試験
管を調製した。小試験管（ブロック済）に緩衝液２ｍ
ｌ、エンドトキシンＡ液（リン緩衝液にエンドトキシン
０．５００ＥＵ／ｍｌを溶解）または、エンドトキシン
Ｂ液（リン酸緩衝液にエンドトキシン０．５００ＥＵ／
ｍｌ及びアプロチニン１０ｕ／ｍｌを溶解）２００ｕｌ
を秤量し、室温で３０分ｉｎｃｕｂａｔｅした。次に、
前記小試験管をリン酸緩衝液２ｍｌで３回洗浄した。次
に、発熱性物質定量用試薬エンドスペシー（（１→３）
−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎは検出しない）及びトキシカラ
ー（（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌｕｃａｎも検出する）を
用いて、発熱性物質の定量を行ない、その結果を以下に
示した。尚、以上の操作に用いた器具、緩衝液等はすべ
てエンドトキシンフリー及び（１→３）−β−Ｄ−Ｇｌ
ｕｃａｎフリーのものを用いた。 表に示した様に、本発明に関わる発熱性物質吸着小試験
管は、発熱性物質の良好な吸着性能を示した。また、エ
ンドスペー及びトキシカラーによるエンドトキシンの定
量結果も良好であった。即ち、アプロチニンの影響は認
められなかった。実施例１〜実施例７に用いたエンドス
ペシー及びトキシカラーは、何れも（株）生化学工業
（東京）の製品である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）発熱性物質吸着体（ゲル）を固相化した容器、試
験管、球（ビーズ、ボール）、磁性粒子、チップ、薄
板、小片、薄膜、小棒、マイクロタイタープレート、ス
トリップ、ろ紙ディスク等の器具。 （２）発熱性物質吸着体がポリペプチド系抗生物質（ポ
リミキシン類（Ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，
Ｅ，Ｆ，Ｋ，Ｍ，Ｐ，Ｓ，Ｔ）、コリスチン類（Ｃｏｌ
ｉｓｔｉｎ Ａ，Ｂ，Ｃ）、グラミシジンＳ類、タイロ
シジン類等）またはアミノグリコシド系抗生物質（カス
ガマイシン、エデイン、ストレプトマイシン、カナマイ
シン、ネオマイシン、パロモマイシン、ゲンタマイシ
ン、ネオマイシン、スペクチノマイシン、ゲンタマイシ
ン等）またはヒスタミン、またはヒスチジンをまたは、
β−（１−４）−２−ａｍｉｎｏ−２−ｄｅｏｘｙ−Ｄ
−ｇｌｕｃａｎ（キトサン）を固定化したアフィニティ
ークロマトグラフィー担体である請求項（１）記載の器
具。 （３）−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ＝Ｎ−，−ＣＯ
ＮＨ− 等の反応性官能器を固相化し、その官能基に発
熱性物質と結合するリガンドを共有結合させた容器、試
験管、球（ビーズ、ボール）、磁性粒子、チップ、薄
板、小片、薄膜、小棒、マイクロタイタープレート、ス
トリップ等の器具。 （４）リガンドがポリペプチド系抗性物質（ポリミキシ
ン類、コリスチン類、グラミシジンＳ類、タイロシジン
類等）またはアミノグリコシド系抗生物質、またはヒス
タミン、またはヒスチジン、またはキトサンである請求
項（３）記載の器具。 （５）請求項（１）及び請求項（３）に記載された実験
器具を用いて、発熱性物質を吸着した後、既知の方法
（放射イムノアッセイ法、非放射イムノアッセイ法、Ｌ
ｉｍｕｌｕｓ試験等）により定量する方法。 （６）請求項（５）の実施の為に構成された発熱性物質
定量キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3169479A JP2690415B2 (ja) | 1991-01-26 | 1991-01-26 | 発熱性物質吸着体とそれを用いた発熱性物質の定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3169479A JP2690415B2 (ja) | 1991-01-26 | 1991-01-26 | 発熱性物質吸着体とそれを用いた発熱性物質の定量方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33614896A Division JPH09178753A (ja) | 1996-12-16 | 1996-12-16 | 発熱性物質吸着体とそれを用いた発熱性物質の定量方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0666806A true JPH0666806A (ja) | 1994-03-11 |
| JP2690415B2 JP2690415B2 (ja) | 1997-12-10 |
Family
ID=15887311
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP3169479A Expired - Fee Related JP2690415B2 (ja) | 1991-01-26 | 1991-01-26 | 発熱性物質吸着体とそれを用いた発熱性物質の定量方法 |
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|---|---|
| JP (1) | JP2690415B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000007008A1 (en) * | 1998-07-28 | 2000-02-10 | Cranfield University | Detection of pyrogen and other impurities in water |
| WO2009148132A1 (ja) * | 2008-06-05 | 2009-12-10 | 興和株式会社 | 生物由来の生理活性物質の測定方法、生物由来の生理活性物質の測定用キット及び、生物由来の生理活性物質の測定装置 |
| JP2010243342A (ja) * | 2009-04-07 | 2010-10-28 | Peptide Door Co Ltd | リポ多糖又はリピッドａの分析方法 |
| WO2011052156A1 (ja) | 2009-10-30 | 2011-05-05 | パナソニック株式会社 | 電極箔およびこれを用いたコンデンサ |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5813519A (ja) * | 1981-07-16 | 1983-01-26 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | エンドトキシン吸着材及びそれを用いるエンドトキシンの除去方法 |
| JPS6356300A (ja) * | 1986-04-02 | 1988-03-10 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | 核酸またはエンドトキシンの除去剤および除去方法 |
| JPH02193072A (ja) * | 1988-07-05 | 1990-07-30 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | パイロジェン定量方法 |
-
1991
- 1991-01-26 JP JP3169479A patent/JP2690415B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5813519A (ja) * | 1981-07-16 | 1983-01-26 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | エンドトキシン吸着材及びそれを用いるエンドトキシンの除去方法 |
| JPS6356300A (ja) * | 1986-04-02 | 1988-03-10 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | 核酸またはエンドトキシンの除去剤および除去方法 |
| JPH02193072A (ja) * | 1988-07-05 | 1990-07-30 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | パイロジェン定量方法 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000007008A1 (en) * | 1998-07-28 | 2000-02-10 | Cranfield University | Detection of pyrogen and other impurities in water |
| WO2009148132A1 (ja) * | 2008-06-05 | 2009-12-10 | 興和株式会社 | 生物由来の生理活性物質の測定方法、生物由来の生理活性物質の測定用キット及び、生物由来の生理活性物質の測定装置 |
| JP2009294113A (ja) * | 2008-06-05 | 2009-12-17 | Kowa Co | エンドトキシン測定方法、エンドトキシン測定用キット及び、エンドトキシン測定装置。 |
| JP2010243342A (ja) * | 2009-04-07 | 2010-10-28 | Peptide Door Co Ltd | リポ多糖又はリピッドａの分析方法 |
| WO2011052156A1 (ja) | 2009-10-30 | 2011-05-05 | パナソニック株式会社 | 電極箔およびこれを用いたコンデンサ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2690415B2 (ja) | 1997-12-10 |
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