JPH0759567A - 生理活性物質固定化用担体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 生理活性物質の活性を保持したまま、簡便か
つ効果的に固定することができ、固定化生理活性物質の
遊離等不都合な事態を招くことのない生理活性物質固定
化用担体を提供する。 【構成】 支持体となる水不溶性固体表面に、ポリアル
キレン骨格を有する親水性スペーサーを介してアミノ基
が導入され、さらにその末端アミノ基に末端ジカルボン
酸を作用させて得られる構造から成る生理活性物質固定
化用担体。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は水不溶性固体表面に、ポ
リアルキレンオキサイド骨格を有する親水性スペーサー
を介して、−ＮＨＣＯ−Ｒ−ＣＯＯＨの構造から成る官
能基を持っていることを特徴とする生理活性物質固定化
用担体に関するものである。より詳細に述べると、支持
体となる水不溶性固体表面に、ポリエチレンオキサイ
ド、またはポリプロピレンオキサイド、またはポリテト
ラメチレングリコール等の骨格から成る親水性スペーサ
ーを介してアミノ基が導入され、さらにその末端アミノ
基に末端ジカルボン酸を作用させて得られる構造から成
ることを特徴とする生理活性物質固定化用担体に関す
る。本発明において生理活性物質とは、酵素、補酵素、
酵素阻害剤、ホルモン、抗菌剤、抗原、抗体、細胞、そ
の他機能を有する蛋白質、さらにこのような物質と親和
性を有する低分子化合物および（または）高分子化合物
を指し、これらをリガンドと称することもある。また、
本発明において生理活性物質を固定化する水不溶性固体
を単に支持体、もしくは担体と称することもあり、スペ
ーサーとは生理活性物質を担体表面から離して固定する
ための腕のことを指す。また、スペーサーのうち化１に
おいて−〔Ｏ・・・・Ｏ−と表示した部分、もしくはそ
の両端部分を含めて−Ｚ・・・・Ｚ’−ＮＨと表示した
部分、あるいは支持体に導入した結果これらの構造にな
る原料を親水性スペーサー、ＣＯ−Ｒ³−ＣＯＯＨと表
示した部分、あるいは支持体に導入した結果この構造に
なる原料を両末端ジカルボン酸と呼ぶことがある。

【０００２】

【従来の技術】生理活性物質を不溶性固体に固定し、得
られた生理活性物質固定化担体を化学反応触媒、分離精
製用特異的吸着材、臨床検査材料、医療用材料として利
用する方法は１９６０年代から活発な研究が開始され、
現在各国で盛んに研究が進められている。生理活性物質
を固体に担持させる方法は、物理的方法と化学的方法に
大別できる。前者はアガロースゲルなどに包み込んで閉
じこめる包括法や、非特異的な吸着力を利用した吸着法
などがある。後者には生理活性物質の官能基を利用して
化学結合させる共有結合法や、生理活性物質の持つ電荷
と反対の電荷を固体に付与して両者をイオン結合で結合
させるイオン結合法などがある。

【０００３】生理活性物質の固定で最も重要な問題とな
るのはいかにしてもとの活性を損なうことなく、安定に
固定し、なおかつ使用に際して生理活性物質の遊離が防
げるかということである。物理的方法によって固定した
場合、包括法では生理活性物質を包み込んでしまうた
め、酵素そのものは活性を維持していても、反応溶媒と
の接触が妨げられ、もとの活性が充分に発揮されない可
能性が大きく、吸着法では使用中の生理活性物質遊離の
問題がある。従って、このような問題を解決するには、
化学的方法、なかでも共有結合法によって固定化を行う
ことが望ましい。

【０００４】従来、共有結合法として採用されてきた方
法としては、臭化シアン法、エポキシ法が一般的であ
る。臭化シアン法は、担体上の水酸基と臭化シアン（Ｃ
ＮＢｒ）を作用させてシアン酸エステル（ＲＯＣＮ）ま
たはイミドカーボネート（（ＲＯ）₂Ｃ＝ＮＨ）を生成
させ、これにアミノ基を有する物質をイソウレア結合
（ＲＯＣ（＝ＮＨ）ＮＨ−Ｌ）やウレタン結合（ＲＯ
（ＣＯ）ＮＨ−Ｌ）で固定する方法である。（Ｒは固定
を行う担体、Ｌは生理活性物質）この方法は比較的容易
に固定化ができるので広く利用されているが、架橋部に
形成されるイミド基が帯電しているため、これとの静電
相互作用によって非特異吸着が起こる。また、固定化さ
れた生理活性物質と担体との結合が不安定であるため、
生理活性物質が遊離する可能性がある。リガンドが遊離
するという欠点は特に医療用材料、つまり、血液や血液
成分を接触させて含有される病因物質を吸着除去する吸
着材では致命的とも言える。さらに、臭化シアンはそれ
自体毒性を持った化合物であるため、未反応の臭化シア
ンが残存する可能性のあるこの方法は医療用材料には事
実上応用ができない。

【０００５】エポキシ法は臭化シアン法のこのような欠
点を解消するために考案された方法のひとつである。こ
の方法は例えば、担体上の水酸基とエピクロルヒドリン
をアルカリ性条件のもとで作用させてエポキシ基を導入
し、これに水酸基を有する物質を作用させてエーテル結
合により固定化させるものである。この方法は、水酸基
の代わりにアミノ基を利用して固定する方法や、担体に
直接エポキシ基を導入するのではなく、両末端にエポキ
シ基を有する化合物をスペーサーとして担体の水酸基と
反応させ、もう一方のエポキシ基を利用して含水酸基物
質を固定する方法などのバリエーションも考案されてい
る。

【０００６】エポキシ法では臭化シアン法と比べて （１）静電相互作用による非特異吸着がない。 （２）生理活性物質との結合部位にあるエーテル結合、
アルキルアミノ結合は安定であり、生理活性物質の遊離
が少ない。 などの利点を有する。しかし、このエポキシ法では生理
活性物質固定の際、アルカリ溶液で長時間の処理を要す
るという欠点があり、これは生理活性物質の失活を招く
恐れがおおいにある。

【０００７】さらに別の方法としては、以下のような手
段が考案されている。 （１）含オレフィン化合物溶液と酵素溶液とを担体表面
に塗布し、これに電離性放射線を照射する方法（特公平
３−６１４２６） （２）アミド化反応を利用して生理活性物質を固定する
方法（有機合成化学、第３８巻、１２８〜１３８頁（１
９８０年）；Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第８７巻、５３５
〜５４０頁（１９８０年）） （３）両末端にアルデヒドを有する化合物をスペーサー
として導入し、これを介して生理活性物質を固定する方
法（特公平３−５９０８０）

【０００８】（１）の方法は包括法に分類されるもの
で、酵素水溶液およびビニル系重合性単量体から成る混
合物を多孔質粒子の表面に被覆した後電離性放射線を照
射して重合せしめ、酵素を固定するものである。この方
法では包括法の利点、すなわち活性の保持、複数成分か
ら成る複雑な酵素反応系をそのまま固定できることなど
を保ったまま、酵素の遊離が低く抑えられる。しかしな
がら、反応溶媒との接触が制限されてしまうことは避け
られず、また、固定化に電離性放射線の照射を要するの
で装置が大がかりなものとなってしまい、手軽に実施し
にくい。

【０００９】（２）の方法は、エポキシ活性化担体をア
ンモニアでアミノ誘導体とした後、無水コハク酸で処理
し、スクシニルアミノ誘導体とし、これにカルボジイミ
ドとアミノ基を有する生理活性物質とを作用させて生理
活性物質の固定化を行うものである。しかしこの方法で
は、次に述べる（３）の方法と同じ理由で欠点を有す
る。

【００１０】（３）の方法は、アミノ基を有する担体
（もしくはアミノ基を導入した担体）と、両末端にアル
デヒドを有する化合物を作用させ、シッフ塩基形成-還
元によってアルキルアミノ結合でこれを固定し、さらに
アミノ基を有する生理活性物質を同様にして結合させ
て、スペーサーを介して生理活性物質を担体に固定する
方法である。この方法は生理活性物質を固定するという
目的を達成するだけなら優れた方法であるが、使用時の
生理活性発揮について考えると、改善の余地がある。

【００１１】この発明においては両末端にアルデヒドを
有する化合物、すなわちスペーサーについての考慮が充
分でない。スペーサーの効果は生理活性物質の運動性を
高めることによって、使用の際にその活性を充分に引き
出すということが挙げられる。ところが、特公平３−５
９０８０の方法に用いられるスペーサーはその鎖長が、
炭素数にしてわずかに２〜１０となっている。このよう
に短いスペーサーでは生理活性物質の運動性向上に対す
る寄与は充分ではないと考えられる。

【００１２】また、生理活性物質固定化担体は主とし
て、水系溶媒中で使用されることが圧倒的に多い。特公
平３−５９０８０に挙げられたスペーサーは疎水性のメ
チレン鎖から成っているため水系溶媒中では充分に伸び
きったコンフォメーションをとるのが困難であり、スペ
ーサー鎖長と併せて考えると、本来スペーサーに期待さ
れる効果はほとんど発揮されないと言っても過言ではな
い。

【００１３】生理活性物質固定化担体が医療用材料、す
なわち血液や血液成分を接触させて含有される病因物質
を吸着除去する吸着材として使用される場合には親水性
スペーサーの持つ意義はさらに大きくなる。すなわち、
血液中の血球成分や、被吸着物質でない蛋白の付着を防
止することである。親水性スペーサーはその周辺に水を
吸着している。このため吸着材表面は水の層に覆われ、
この水の層が血球成分の付着を防いでいる（排除体積効
果）。また、水の層を形成するスペーサーが運動するこ
とにより、さらに血球成分の付着は困難になり、付着し
た血球成分は脱離しやすくなる。また、凝固因子や補体
の活性化が抑制されるといった利点を有する。

【００１４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記従来技術
の欠点を解決し、種々の生理活性物質の固定を汎用的
に、充分な濃度で、安定に行うことができ、かつ生理活
性物質の活性を充分に引き出すことのできる生理活性物
質の固定化法を提供しようとしたものである。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明の生理活性物質固
定化用担体は、支持体となる水不溶性固体表面に、ポリ
エチレンオキサイド、またはポリプロピレンオキサイ
ド、またはポリテトラメチレングリコール等の骨格から
成る親水性スペーサーを介してアミノ基が導入され、さ
らにその末端アミノ基に末端ジカルボン酸を作用させて
得られる構造から成ることを特徴とするものである。具
体的な構造は化１に示した通りであるが、模式的に表示
すると［支持体］−［親水性スペーサー］−［アミド結
合］−［炭化水素鎖］−［カルボキシル基］となる。

【００１６】本発明の生理活性物質固定化用担体は、支
持体がポリスチレン、ポリメタクリル酸およびその誘導
体或いはこれらの共重合体などの合成有機高分子化合
物、セルロース、キチン、キトサン等の天然有機高分子
化合物、またはアシルセルロース、アシルキチン等の改
質天然有機高分子化合物であることが好ましい。これら
の高分子化合物のうち、機械的強度、親水性スペーサー
導入の容易さ、親水性スペーサー導入後の水不溶性の保
持を考慮すると、適度に架橋したポリスチレン、ポリメ
タクリル酸およびその誘導体或いはこれらの共重合体、
アシルセルロース、セルロースやキチン、キトサンが望
ましく、さらに好ましくは架橋ポリメタクリル酸誘導
体、アシルセルロース、セルロースが望ましい。

【００１７】本発明における親水性スペーサーは、化１
に示した構造を有する限りあらゆるものが使用可能であ
るが、なかでもポリエチレンオキサイド、ポリプロピレ
ンオキサイド、ポリテトラメチレングリコール骨格のも
のが望ましく、さらに好ましくはポリエチレンオキサイ
ド骨格が望ましい。

【００１８】本発明において、親水性スペーサーと末端
のカルボキシル基を結ぶ炭化水素鎖部分は、化１に示し
た通り炭素数１〜１０の直鎖、もしくは分枝状飽和アル
キレン基が利用されるが、なかでも直鎖炭化水素鎖が望
ましい。

【００１９】本発明の生理活性物質固定化用担体には、
親水性スペーサーと疎水性の炭化水素鎖が共存している
ことがひとつの特徴である。親水性スペーサーの効果に
ついてはすでに述べたとおりであるが、固定化生理活性
物質が相互作用する物質（例えば、固定化生理活性物質
が抗体なら液中の抗原、酵素なら液中の基質）の相互作
用部位が水系溶媒中でつねに表面近傍に露出していると
は限らない。相互作用部位が疎水性リッチな場合、極性
の大きい水系溶媒中では表面から奥に入り込んでいるこ
とが考えられる。このような場合、水系溶媒中で固定化
生理活性物質を使用しても、親水性スペーサーの導入だ
けでは充分な効果が期待できるとは限らない。親水性ス
ペーサーの効果でリガンドの運動性が向上し、疎水性の
炭化水素鎖がスペーサーの末端近辺にあることによって
疎水的な環境にある相互作用部位との接近が容易になる
というふたつの相乗効果によって、より大きな効果が期
待される。

【００２０】本発明の生理活性物質固定化用担体は最終
的に化１に示した構造を有していればよく、その製造法
については制限を受けるものではないが、支持体と親水
性スペーサーの結合は共有結合であることが必要であ
る。支持体となる水不溶性固体に適当な官能基が含まれ
ていない場合には適当な手段によって官能基を導入する
必要がある。その導入方法については特に制限されない
が、ポリスチレンを支持体として利用する場合、以下の
ような方法でクロロメチル基を導入する手段が利用され
得る。

【００２１】ジビニルベンゼンを１重量％〜７０重量
％、好ましくは２重量％〜３５重量％含む架橋ポリスチ
レンにクロロホルムを加え、室温で１５分以上、好まし
くは３０分以上撹拌して充分に膨潤させた後、クロロメ
チルメチルエーテルと触媒を加え、２５℃〜１００℃、
好ましくは３０℃〜６０℃で３０分〜１２時間、好まし
くは２時間〜７時間窒素気流気下にて撹拌しながら反応
させると、クロロメチル基導入率１０％〜１００％、好
ましくは２５％〜９５％の架橋ポリクロロメチルスチレ
ンが得られる。上記触媒としては、塩化アルミニウムの
ようなアルミニウム系触媒、塩化錫のような錫系触媒、
塩化亜鉛のような亜鉛系触媒が挙げられる。触媒は反応
溶液中に０．３％〜５．０％、好ましくは０．４％〜
３．０％の含量で添加される。上記クロロメチル化反応
において、各成分の混合重量比は次の通りである。ポリ
スチレンとクロロホルムの重量比は２／１〜１／１０、
好ましくは１／１〜１／７；ポリスチレンとクロロホル
ムの合計量とクロロメチルメチルエーテルの混合重量比
は３０／１〜１／５、好ましくは１５／１〜１／３であ
る。

【００２２】セルロースを利用する場合、以下のような
方法でアルデヒドを導入する手法が利用され得る。過沃
素酸ナトリウムを０．１規定〜５．０規定、好ましくは
０．５規定〜１．５規定の硫酸に溶解した溶液に、粒状
多孔質セルロースを添加し、１０℃〜５０℃、好ましく
は２０℃〜３０℃で、５時間〜３０時間、好ましくは１
０時間〜２４時間反応させる。上記過沃素酸ナトリウム
-硫酸溶液の過沃素酸ナトリウム濃度は２重量％〜１５
重量％、好ましくは４重量％〜１０重量％である。ま
た、上記粒状多孔質セルロースの過沃素酸ナトリウム溶
液への浴比は１０容量％〜５０容量％、好ましくは１５
容量％〜４０容量％である。この反応混合物を濾過して
生成物を回収し、充分に水洗して、膨潤状態でアルデヒ
ド含量０．１０ｍｅｑ／ｍｌ〜２．００ｍｅｑ／ｇ、好
ましくは０．２０ｍｅｑ／ｍｌ〜１．５０ｍｅｑ／ｍｌ
のアルデヒドセルロースを得る。このアルデヒドセルロ
ースは下記（化２）に示すように、一部のグルコースユ
ニットが開環した構造をしている。

【００２３】

【化２】

【００２４】上記のようにして活性官能基を導入した支
持体に親水性スペーサー、および両末端ジカルボン酸を
作用させることによって、本発明の構造を有する担体が
得られる。最終組成物を合成する手順は本発明の制限を
受けるものではないが、具体的には２種類の経路が考え
られるであろう。第１に、支持体に、両末端に活性官能
基を有する親水性スペーサーを導入し、続いて両末端ジ
カルボン酸を導入する方法、第２に、あらかじめ両末端
ジカルボン酸を導入した親水性スペーサーを、支持体に
導入する方法である。

【００２５】第１の方法によって支持体がセルロースか
ら成る担体を合成する場合、例えば次のような方法が利
用され得る。 （１）両末端アミノ基含有親水性スペーサーの導入 両末端にアミノ基を有する親水性スペーサーをｐＨ９．
５の緩衝液に溶解させる。これにアルデヒドセルロース
を添加して撹拌しながら１０℃〜５０℃好ましくは２０
℃〜３０℃で、５時間〜３０時間、好ましくは１０時間
〜２４時間反応させる。上記両末端アミノ基含有親水性
スペーサー-緩衝液の濃度は０．２重量％〜５．０重量
％、好ましくは０．４重量％〜３．０重量％、この溶液
へのアルデヒドセルロースの浴比は３容量％〜５０容量
％、好ましくは５容量％〜２５容量％であり、アルデヒ
ドセルロースに含まれるアルデヒドと両末端アミノ基含
有親水性スペーサーの混合モル比が３／１〜１／１０好
ましくは１／１〜１／５となるよう適当に調整されるの
が望ましい。

【００２６】この反応混合物を濾過して生成物を回収、
水洗し、これをｐＨ９．０の緩衝液に分散させ、水素化
ホウ素ナトリウムを添加して１０℃〜５０℃好ましくは
２０℃〜３０℃で、５時間〜３０時間、好ましくは１０
時間〜２４時間反応させてシッフ塩基の水素添加を行
う。含シッフ塩基［セルロース］−［両末端アミノ基含
有親水性スペーサー］の緩衝液への浴比は３容量％〜５
０容量％、好ましくは５容量％〜２５容量％、含シッフ
塩基［セルロース］−［両末端アミノ基含有親水性スペ
ーサー］と水素化ホウ素ナトリウムの仕込比は２０／１
〜３／２、好ましくは１５／１〜３／１（いずれも容量
／重量比）である。こうしてアミノ基含量０．０１０ｍ
ｅｑ／ｍｌ〜３．００ｍｅｑ／ｍｌ、好ましくは０．０
５０ｍｅｑ／ｍｌ〜２．００ｍｅｑ／ｍｌの［セルロー
ス］−［両末端アミノ基含有親水性スペーサー］を得
る。

【００２７】（２）両末端ジカルボン酸の導入 環状ジカルボン酸無水物を塩基性溶媒に溶解させ、上記
（１）で得た［セルロース］−［両末端アミノ基含有親
水性スペーサー］を加えて０℃〜５０℃好ましくは１０
℃〜４０℃で２時間〜３０時間、好ましくは５時間〜２
４時間反応させて両末端ジカルボン酸の導入を行う。
［セルロース］−［両末端アミノ基含有親水性スペーサ
ー］の塩基性溶媒への浴比は３容量％〜５０容量％、好
ましくは５容量％〜２５容量％であり、［セルロース］
−［両末端アミノ基含有親水性スペーサー］に含まれる
アミノ基と両末端ジカルボン酸無水物の混合モル比が３
／１〜１／１０好ましくは１／１〜１／５となるよう適
当に調整されるのが望ましい。

【００２８】上記反応に用いられる塩基性溶媒はピリジ
ン、トリエチルアミンなどの第３級アミン、これら第３
級アミンと他の不活性有機溶媒もしくは水との混合物、
水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液などの
アルカリ水溶液、種々のアルカリ性緩衝液等が挙げられ
る。

【００２９】上記の例は両末端ジカルボン酸の導入方法
として環状ジカルボン酸無水物を使用しているが、この
ほか酸ハライド、活性エステル、直鎖状酸無水物などを
使用することも可能である。また、カルボジイミドなど
の縮合剤を用いてカルボキシル基とアミノ基を縮合させ
てもよい。しかし、反応の簡便性、両末端カルボキシル
基による架橋の回避などの点から考慮すると環状ジカル
ボン酸無水物を使用するのが好ましい。

【００３０】両末端ジカルボン酸導入に使用される試薬
としては、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル
酸、アジピン酸等の直鎖両末端ジカルボン酸やこれらの
異性体、さらにこれらの酸ハライド、活性エステル、環
状無水物、直鎖状無水物などの誘導体が例示される。こ
のうち、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、
アジピン酸およびその誘導体が好ましく、なかでもマロ
ン酸、コハク酸、グルタル酸の環状無水物が特に好まし
い。

【００３１】本発明に用いられる親水性スペーサーの鎖
長は、固定化される生理活性物質の種類、得られた生理
活性物質固定化担体の用途によって適当に選択されるこ
とが好ましい。例えば、生理活性物質として抗ＬＤＬ
（低比重リポ蛋白）抗体を固定し、血液中のＬＤＬを選
択的に除去する吸着材として用いる場合、両末端アミノ
基含有ポリエチレングリコール（以下ＰＥＯアミンと略
記する）をスペーサーに用いるのであれば、分子量（Ｇ
ＰＣ測定、ポリエチレングリコール換算）にして２００
〜１００００、好ましくは４００〜５０００が望まし
い。

【００３２】第２の方法、すなわち、あらかじめ両末端
ジカルボン酸を導入した親水性スペーサーを支持体に導
入する方法を採用して支持体がセルロースから成る担体
を合成する場合、例えば次のような方法が利用され得
る。 （１）支持体へのアミノ基の導入 分子内にアミノ基を有する化合物をｐＨ９．５の緩衝液
に溶解させる。これにアルデヒドセルロースを添加して
撹拌しながら１０℃〜５０℃好ましくは２０℃〜３０℃
で、５時間〜３０時間、好ましくは１０時間〜２４時間
反応させる。上記アミノ基含有化合物-緩衝液の濃度は
０．２重量％〜１０．０重量％、好ましくは０．４重量
％〜５．０重量％、この溶液へのアルデヒドセルロース
の浴比は３容量％〜５０容量％、好ましくは５容量％〜
２５容量％であり、アルデヒドセルロースに含まれるア
ルデヒドとアミノ基含有化合物の混合モル比が３／１〜
１／１０好ましくは１／１〜１／５となるよう適当に調
整されるのが望ましい。

【００３３】この反応混合物を濾過して生成物を回収、
水洗し、これをｐＨ９．０の緩衝液に分散させ、水素化
ホウ素ナトリウムを添加して１０℃〜５０℃好ましくは
２０℃〜３０℃で、５時間〜３０時間、好ましくは１０
時間〜２４時間反応させてシッフ塩基の水素添加を行
う。含シッフ塩基［セルロース］−［アミノ基含有化合
物］の緩衝液への浴比は３容量％〜５０容量％、好まし
くは５容量％〜２５容量％、含シッフ塩基［セルロー
ス］−［アミノ基含有化合物］と水素化ホウ素ナトリウ
ムの仕込比は２０／１〜３／２、好ましくは１５／１〜
３／１（いずれも容量／重量比）である。こうしてアミ
ノ基含量０．０１０ｍｅｑ／ｍｌ〜３．００ｍｅｑ／ｍ
ｌ、好ましくは０．０５０ｍｅｑ／ｍｌ〜２．００ｍｅ
ｑ／ｍｌの［セルロース］−［アミノ基含有化合物］を
得る。

【００３４】上記反応に用いられるアミノ基含有化合物
はアンモニア；ヒドラジン；エチレンジアミン；ジエチ
レントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチ
レンペンタミンなどのエチレンジアミン縮合化合物；ジ
アミノプロパン、ジアミノブタン、ジアミノペンタン、
ジアミノヘキサン、トリアミノプロパン、トリアミノブ
タン、トリアミノペンタン、トリアミノヘキサンなどの
ポリアミノアルキル；ジアミノシクロペンタン、トリア
ミノシクロペンタン、ジアミノシクロヘキサン、トリア
ミノシクロヘキサンなどのポリアミノシクロアルキル；
ジアミノベンゼン、ジアミノナフタレン、トリアミノベ
ンゼン、トリアミノナフタレンなどのポリアミノアリー
ル等が挙げられるが、アルデヒドへの求核反応が容易な
のは第１級アミノ基なので、第１級アミノ基が少なくと
もひとつ、好ましくはふたつ以上含まれる化合物が望ま
しい。なかでも、エチレンジアミンおよびジエチレント
リアミン、トリエチレンテトラミン、ジアミノヘキサン
（ヘキサメチレンジアミン）が特に好ましい。

【００３５】 （２）両末端ジカルボン酸導入親水性スペーサーの合成 分子量（ＧＰＣ測定、ポリエチレングリコール換算）１
００〜１００００、好ましくは４００〜６０００のＰＥ
Ｏアミンを塩基性溶媒に溶解し、これに環状ジカルボン
酸無水物の溶液を加えて０℃〜５０℃、好ましくは１０
℃〜４０℃で２時間〜３０時間、好ましくは５時間〜２
４時間反応させて両末端ジカルボン酸の導入を行う。上
記塩基性溶媒としてはピリジン、トリエチルアミンなど
の第３級アミン、これら第３級アミンと他の不活性有機
溶媒もしくは水との混合物、水酸化ナトリウム水溶液、
水酸化カリウム水溶液などのアルカリ水溶液、種々のア
ルカリ性緩衝液等が好ましい。ＰＥＯアミン溶液および
環状酸無水物の濃度は５重量％〜７０重量％が望まし
く、さらに好ましくは１０重量％〜５０重量％が望まし
い。ＰＥＯアミンと環状ジカルボン酸無水物の混合モル
比は３／１〜１／１０が望ましく、さらに好ましくは１
／１〜１／５が望ましい。この反応生成物は濃縮してそ
のまま支持体に導入することも可能であるが、濃縮した
後セルロース半透膜に入れて蒸留水もしくはイオン交換
水で透析することによって低分子量の不純物を除去する
ことができ、より好ましい。

【００３６】（３）アミノ基含有支持体への両末端ジカ
ルボン酸導入親水性スペーサーの固定化 ｐＨ５．５の緩衝液に上記（２）の操作で得た両末端ジ
カルボン酸導入親水性スペーサーを溶解させる。酸もし
くはアルカリ溶液でｐＨを調節した後水溶性カルボジイ
ミドを加えて０℃〜３０℃好ましくは０℃〜１５℃で、
１０分〜１８０分、好ましくは１５分〜６０分反応させ
てカルボキシル基を活性化させる。この溶液に上記
（１）の操作で得たアミノ基含有セルロースを加えて５
℃〜４０℃、好ましくは１０℃〜３０℃で１時間〜３６
時間、好ましくは４時間〜２４時間反応させてアミド結
合を生成させて支持体への両末端ジカルボン酸導入親水
性スペーサー固定化を行う。上記両末端ジカルボン酸導
入親水性スペーサー−緩衝液の濃度は０．２〜２０．０
重量％、好ましくは０．４〜１０．０重量％、この溶液
へのアミノ基含有セルロースの浴比は３容量％〜５０容
量％、好ましくは５容量％〜２５容量％であり、アミノ
基含有セルロース由来のアミノ基と両末端ジカルボン酸
導入親水性スペーサー由来のカルボキシル基の混合モル
比が３／１〜１／１０好ましくは１／１〜１／５となる
よう適当に調整されるのが望ましい。

【００３７】こうして得られた生理活性物質固定化用担
体に生理活性物質の固定化を行う。この固定化方法はカ
ルボキシル基の負電荷を利用したイオン結合も利用でき
るが、より安定に固定化を行うためには生理活性物質に
含まれる求核性置換基を利用した共有結合による方法が
好ましい。なかでも、生理活性物質中のアミノ基との間
にアミド結合を作って固定化する方法がより好ましい。

【００３８】本発明に使用される水不溶性固体の形状は
粒子状、繊維状、膜状等いずれの公知の形状も用いられ
得るが、固定化される生理活性物質の種類、得られた生
理活性物質固定化担体の用途によって適当に選択される
ことが好ましい。

【００３９】例えば、生理活性物質として抗ＬＤＬ（低
比重リポ蛋白）抗体を固定し、血液中のＬＤＬを選択的
に除去する吸着材として用いる場合、粒子状担体の平均
粒径は１０μｍ〜５ｍｍ、好ましくは３０μｍ〜１ｍ
ｍ、さらに好ましくは５０μｍ〜５００μｍの範囲にあ
ることが望ましい。これより粒径が小さくなると血液、
あるいは血液成分の流通抵抗が大きくなり、粒径が大き
くなると担体充填量の減少、ひいては有効表面積の減少
を招くこととなる。粒子形状については、細胞に損傷を
与えにくいことや、物理的外力に対する強度、さらに調
整の容易さから、球状であることが望ましい。同じ理由
から、繊維状担体の繊維直径は０．１μｍ〜５０μｍ、
好ましくは０．３μｍ〜２５μｍ、さらに好ましくは
０．５μｍ〜１５μｍが望ましい。

【００４０】固定化される生理活性物質の種類、得られ
た生理活性物質固定化担体の用途によっては、有効表面
積を拡大するために担体表面に微小孔が存在することが
好ましい場合も多い。

【００４１】例えば、生理活性物質として抗ＬＤＬ（低
比重リポ蛋白）抗体を固定し、血液中のＬＤＬを選択的
に除去する吸着材として用いる場合、粒子状担体では、
２０Å〜２００００Å、好ましくは１００Å〜１５００
０Å、さらに好ましくは１０００Å〜１２０００Å、繊
維状担体では２０Å〜３０００Å、好ましくは１００Å
〜２０００Åの微小孔が存在することが望ましい。これ
より平均孔径が小さいと被吸着物質が微小孔内部まで到
達できず、これより大きいと有効表面積を拡大する効果
が不十分であり、また担体の強度低下を招く恐れがあ
る。

【００４２】

【実施例】以下実施例を用いて本発明を説明する。 〈実施例１〉粒状多孔質セルロース（平均粒径５０μ
ｍ、平均孔径１５００ ）１０００ｍｌを、過沃素酸ナ
トリウム１５０ｇを１規定−硫酸３０００ｍｌに溶解し
た溶液に添加し、２５℃で１８時間反応させた後、濾
別、水洗し、アルデヒド含量０．５５ｍｅｑ／ｍｌのア
ルデヒドセルロース（ＣA-１）を得た。アルデヒドの定
量はオキシム法によって行った。すなわち、ＣA-１約
１．０ｍｌを正確に秤量し（この量をＶ₁ ｍｌとす
る）、これに０．５規定塩酸ヒドロキシルアミン溶液
（塩酸ヒドロキシルアミン３５ｇを水１６０ｍｌに溶か
し、９５％エタノールで希釈して１ｌとしたもの）１０
ｍｌ、ピリジンブロムフェノールブルー溶液（４％ブロ
ムフェノールブルー０．２５ｍｌとピリジン２０ｍｌの
混合液を９５％エタノールに希釈して１ｌとしたもの）
３５ｍｌを加えた。この懸濁液（以下サンプルと呼ぶ）
を、ＣA-１を入れずに０．５規定塩酸ヒドロキシルアミ
ン溶液１０ｍｌとピリジンブロムフェノールブルー溶液
３５ｍｌを加えたもの（以下ブランクと呼ぶ）と併せて
超音波洗浄器内に１５分間放置した。サンプルとブラン
クを取り出し、サンプルの呈する色がブランクと同じに
なるまで０．１規定水酸化ナトリウム−メタノール溶液
を滴下した。この際滴下した水酸化ナトリウム量をＷ₁
ｍｌ、力価をＦ₁ とすると、アルデヒド含量ｘ₁ ｍｅｑ
／ｍｌは次式によって得られる。 ｘ₁＝（０．１×Ｆ₁×Ｗ₁）／Ｖ₁

【００４３】分子量１０００（ＧＰＣ測定、ポリエチレ
ングリコール換算）のＰＥＯアミン２７５ｇをｐＨ９．
５の炭酸緩衝液５０００ｍｌに溶解させておき、これに
上記で得たＣA-１を２５０ｍｌ添加して撹拌しながら２
５℃で、１８時間反応させた。この反応混合物を濾過し
て生成物を回収、水洗し、これをｐＨ９．０の炭酸緩衝
液５０００ｍｌに分散させ、水素化ホウ素ナトリウム１
００ｇを添加して２５℃で、１８時間反応させてシッフ
塩基の水素添加を行った。こうしてＰＥＯアミン由来の
アミノ基含量０．２１ｍｅｑ／ｍｌの［セルロース］−
［ＰＥＯアミン］（ＣPEO−１）を得た。アミノ基の定
量は以下の方法によって行った。ＣPEO-１約０．１ｍｌ
を正確に秤量し（この量をＶ₂ ｍｌとする）、０．１規
定塩酸水溶液１０ｍｌ（力価をＦ₂ とする）を加え、こ
の懸濁液をジオキサンで希釈して全量で４０ｍｌにする
（この懸濁液を以下サンプルと呼ぶ）。サンプルを約３
０分撹拌した後、自動滴定装置（平沼産業製ＣＯＭＴＩ
ＴＥ１０１）を用いて０．１規定水酸化ナトリウム水溶
液（力価をＦ₂’とする）で滴定を行う。サンプルを中
和するまでに要した０．１規定水酸化ナトリウム水溶液
の量をＷ₂ｍｌとすると、ＣPEO-１のアミノ基含量ｘ₂
ｍｅｑ／ｍｌは次式によって得られる。 Ｖ₂×ｘ₂＋０．１×Ｆ₂’×Ｗ₂＝０．１×Ｆ₂×１０

【００４４】無水コハク酸８．４ｇをピリジン／アセト
ニトリル（１／９容量比）混合液１５００ｍｌに溶解さ
せ、上記で得たＣPEOー１を１００ｍｌ加えた。２５℃で
約１８時間撹拌して反応させた後生成物を回収、稀塩
酸、続いて水で充分に洗浄して［セルロース］−［ＰＥ
Ｏアミン］−［コハク酸］（ＣPEOＳＡ−１）を得た。
カルボキシル基含量は上記でＣPEO-１のアミノ基含量を
求めたのと同様の方法で、０．１規定塩酸水溶液を０．
１規定水酸化ナトリウム水溶液に、０．１規定水酸化ナ
トリウム水溶液を０．１規定塩酸水溶液にそれぞれ替え
て、滴定により測定した。ＣPEOＳＡ−１のカルボキシ
ル基含量は０．１８ｍｅｑ／ｍｌであった。

【００４５】上記で得たＣPEOＳＡ-１を１００ｍｌ取っ
て、ｐＨ５．５のリン酸緩衝液１５００ｍｌ（容量）に
分散させておき、１−エチル−３−（３−ジメチルアミ
ノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（以下ＥＤＣと略
記する。）３．０ｇを加え、反応容器を０℃のアイスバ
スに２０分間浸漬してカルボキシル基を活性化した。こ
れに抗ＬＤＬ抗体のｐＨ５．５リン酸緩衝液溶液（５０
ｍｇ／ｍｌ）５０ｍｌを加えて２５℃で１８時間撹拌し
て反応させた。ここで用いた抗ＬＤＬ抗体は、以下の方
法で得た抗ヒトＬＤＬ抗体である。すなわち、ヒトＬＤ
Ｌを完全アジュバントとともに注射により投与し免疫し
たレグホンの鶏卵の卵黄部分を取り出し、その５倍量の
０．１％λカラギーナン水溶液を混合して１５００×
ｇ，１０分遠心分離し、その上清をＤＥＡＥクロマトグ
ラフィおよび塩析により精製した。生成物を回収、洗浄
水がｐＨ７．０になるまで充分にイオン交換水で洗浄し
て［セルロース］−［ＰＥＯアミン］−［コハク酸］−
［抗ＬＤＬ抗体］（ＣPEOＳＡ−ＩｇＹ−１）を得た。

【００４６】上記で得たＣPEOＳＡ−ＩｇＹ−１を８０
ｍｌ取って１００ｍｌのカラムに充填し、１００Ｕ／ｍ
ｌのヘパリンを含む生理食塩液１００ｍｌ、続いて１Ｕ
／ｍｌのヘパリンを含む生理食塩液１００ｍｌでカラム
内、および血液回路内を洗浄した。一方、クエン酸加豚
血１ｌをビーカーにとり、カラムを通して再びこのビー
カーに戻すよう血液回路を組んだ。この装置を用いて血
液流量５０ｍｌ／ｍｉｎで潅流実験を３時間連続して行
い、カラム前後の血中ＬＤＬの量を測定した。また、潅
流開始前後の全血液中のアルブミン量、総蛋白量、血小
板量を測定した。ＬＤＬの定量は和光純薬製β−リポ蛋
白Ｃ−テストワコーを用いてヘパリン沈澱・比色法によ
って行った。アルブミン量はブロムクレゾールグリーン
法、総蛋白量はビウレット法、血小板量は自動血球算定
装置を用いて定量した。結果は表１、表２に示した。な
お、ＬＤＬの量は実際の測定値（単位はｍｇ／ｄｌ）、
アルブミン、総蛋白、血小板については残存率で表示し
た。

【００４７】

【表１】

【００４８】

【表２】

【００４９】〈実施例２〉実施例１で得たＣPEOＳＡ−
１を１００ｍｌ取り、ｐＨ５．５のリン酸緩衝液１５０
０ｍｌ（容量）に分散させておき、ＥＤＣ３．０ｇを加
え、反応容器を０℃のアイスバスに２０分間浸漬してカ
ルボキシル基を活性化した。これに市販ヒトハプトグロ
ビン溶液（２０Ｕ／ｍｌ；ミドリ十字社製）１００ｍｌ
を加えて２５℃で１８時間撹拌して反応させた。反応混
合物を濾過して生成物を回収し、充分に水洗して、［セ
ルロース］−［ＰＥＯアミン］−［コハク酸］−［ハプ
トグロビン］（ＣPEOＳＡ−Ｈｐ−２）を得た。

【００５０】上記で得たＣPEOＳＡ−Ｈｐ−２を８０ｍ
ｌ取って１００ｍｌのカラムに充填し、１００Ｕ／ｍｌ
のヘパリンを含む生理食塩液１００ｍｌ、続いて１Ｕ／
ｍｌのヘパリンを含む生理食塩液１００ｍｌでカラム
内、および血液回路内を洗浄した。一方、抗ヒトハプト
グロビン抗体を固定化した担体を用いて、ヒト全血から
ヒト遊離ハプトグロビンを除去したクエン酸加ハプトグ
ロビンフリー血に、ヒト遊離ヘモグロビンを５０ｍｇ／
ｄｌ添加し、これを１ｌビーカーに取って、カラムを通
して再びこのビーカーに戻すよう血液回路を組んだ。こ
の装置を用いて血液流量５０ｍｌ／ｍｉｎで潅流実験を
３時間連続して行い、カラム後の血中ヒト遊離ヘモグロ
ビン量を測定した。また、潅流開始前後の全血液中のア
ルブミン量、総蛋白量、血小板量を測定した。遊離ヘモ
グロビン量はテトラメチルベンジジン法により定量し
た。アルブミン量はブロムクレゾールグリーン法、総蛋
白量はビウレット法、血小板量は自動血球算定装置を用
いて定量した。結果は表３に示した。なお、アルブミ
ン、総蛋白、血小板（血小板のみは個／ｍｌでの測定）
については残存率で表示した。

【００５１】

【表３】

【００５２】〈実施例３〉実施例１で得たＣPEOＳＡ−
１を５０ｍｌ取り、ｐＨ５．５のリン酸緩衝液７００ｍ
ｌ（容量）に分散させておき、ＥＤＣ３．０ｇを加え、
反応容器を０℃のアイスバスに２０分間浸漬してカルボ
キシル基を活性化した。これにバチルス属由来のアミラ
ーゼを６０００単位（ＪＩＳＫ−７００１による糖化
力）添加して１５℃で１０時間撹拌して反応させた。反
応混合物を濾過して生成物を回収し、充分に水洗して
［セルロース］−［ＰＥＯアミン］−［コハク酸］−
［アミラーゼ］（ＣPEOＳＡ−Ａｍ−３）を得た。この
反応に用いたアミラーゼは、新規にスクリーニングを行
って得られたバチルス属由来のもので、耐アルカリ性を
有している（至適ｐＨは８から９）。

【００５３】上記で得られたＣPEOＳＡ−Ａｍ−３を、
可溶性デンプンを０．１％の濃度で溶解させた緩衝液に
分散させ、３７℃で３０分撹拌後、濾過を行い、濾液に
おける加水分解度によってＣPEOＳＡ−Ａｍ−３におけ
るアミラーゼ活性を測定した。活性測定は、反応溶液に
ヨウ素−ヨウ化カリウム水溶液を加え、その吸光度低下
率から算出した。結果は表４に示した。なお、固定化酵
素の活性は固定を行っていない遊離アミラーゼ（Ｆｒｅ
ｅ^* ）のｐＨ８．５における活性を１００として百分率
によって表示した。

【００５４】

【表４】

【００５５】上記で得られたＣPEOＳＡ−Ａｍ−３をｐ
Ｈ１０の緩衝液に分散させて撹拌し、経過時間と活性と
の関係を測定した。結果は図１に示す。活性は、処理前
の遊離アミラーゼの活性を１００として、相対値で表示
した。

【００５６】〈比較例１〉ヘキサメチレンジアミン６５
ｇをｐＨ９．５の炭酸緩衝液５０００ｍｌに溶解させて
おき、これに実施例１で得たＣA−１を２５０ｍｌ添加
して撹拌しながら２５℃で１８時間反応させた。この反
応混合液を濾過して生成物を回収、水洗し、これをｐＨ
９．０の炭酸緩衝液５０００ｍｌに分散させ、水素化ホ
ウ素ナトリウム１００ｇを添加して２５℃で、１８時間
反応させてシッフ塩基（−Ｎ＝ＣＨ−）の水素添加を行
った。こうしてヘキアメチレンジアミン由来のアミノ基
含量０．５０ｍｅｑ／ｍｌの［セルロース］−［ヘキサ
メチレンジアミン］（ＣHMDA−４）を得た。

【００５７】上記で得たＣHMDA−４を１００ｍｌ取って
ｐＨ９．５の炭酸緩衝液２０００ｍｌに分散させてお
き、２５％グルタルアルデヒド水溶液５０ｍｌを加え
た。炭酸ナトリウムと重炭酸ナトリウムを適当に加えて
ｐＨを９．５に調節して、２５℃で約１８時間撹拌して
反応させた。生成物を回収、洗浄水がｐＨ７．０になる
まで充分にイオン交換水で洗浄して［セルロース］−
［グルタルアルデヒド］（ＣG-４）を得た。

【００５８】上記で得たＣG-４を１００ｍｌ取ってｐＨ
９．５の炭酸緩衝液２０００ｍｌに分散させておき、こ
れに抗ＬＤＬ抗体３ｇを加えて２５℃で６時間撹拌して
反応させた。ここで用いた抗ＬＤＬ抗体は、実施例１で
用いたのと同じものである。生成物を回収、洗浄水がｐ
Ｈ７．０になるまで充分にイオン交換水で洗浄して含シ
ッフ塩基［セルロース］−［グルタルアルデヒド］−
［抗ＬＤＬ抗体］（ｓ−ＣG−ＩｇＹ−４）を得た。

【００５９】上記ｓ−ＣG−ＩｇＹ-４を１００ｍｌ取っ
てｐＨ９．０の炭酸緩衝液２０００ｍｌに分散させてお
き、これに水素化ホウ素ナトリウム３０ｇを加えて２５
℃で４時間撹拌して反応させた。生成物を回収、洗浄水
がｐＨ７．０になるまで充分にイオン交換水で洗浄して
［セルロース］−［グルタルアルデヒド］−［抗ＬＤＬ
抗体］（ＣG−ＩｇＹ−４）を得た。

【００６０】上記で得たＣG-ＩｇＹ−４のＬＤＬ吸着
能、アルブミン、総蛋白、血小板の残存率を実施例１と
同様の方法で評価した。結果は表１、表２に示した。

【００６１】〈比較例２〉実施例１で得たＣHMDA−４を
１００ｍｌ取ってｐＨ５．５のリン酸緩衝液１５００ｍ
ｌに分散させておき、ＥＤＣ３．０ｇ、抗ＬＤＬ抗体の
ｐＨ５．５リン酸緩衝液溶液（５０ｍｇ／ｍｌ）５０ｍ
ｌを加えて２５℃で１８時間撹拌して反応させた。ここ
で用いた抗ＬＤＬ抗体は、実施例１で用いたのと同じも
のである。生成物を回収、洗浄水がｐＨ７．０になるま
で充分にイオン交換水で洗浄して［セルロース］−［抗
ＬＤＬ抗体］（ＣHMDA−ＩｇＹ−５）を得た。

【００６２】上記で得たＣ−ＩｇＹ−５のＬＤＬ吸着
能、アルブミン、総蛋白、血小板の残存率を実施例１と
同様の方法で評価した。結果は表１、表２に示した。

【００６３】〈比較例３〉比較例１で得たＣG-４を１０
０ｍｌ取り、ｐＨ９．０の炭酸緩衝液２０００部（容
量）に分散させておき、これに市販ヒトハプトグロビン
溶液（２０Ｕ／ｍｌ；ミドリ十字社製）１００ｍｌを加
えて２５℃で６時間撹拌して反応させた。生成物を回
収、充分にイオン交換水で洗浄して含シッフ塩基［セル
ロース］−［グルタルアルデヒド］−［ハプトグロビ
ン］（ｓ−ＣG-Ｈｐ−６）を得た。

【００６４】上記ｓ-ＣG-Ｈｐ-６を１００ｍｌ取ってｐ
Ｈ８．５の炭酸緩衝液２０００ｍｌに分散させておき、
これに水素化ホウ素ナトリウム３０ｇを加えて２５℃で
４時間撹拌して反応させた。生成物を回収、これを充分
に水洗し、［セルロース］−［グルタルアルデヒド］−
［ハプトグロビン］（ＣG-Ｈｐ−６）を得た。

【００６５】上記で得たＣG-Ｈｐ-６の性能を実施例２
と同様の方法で評価した。結果は表３に示した。

【００６６】〈比較例４〉実施例１で得たＣHMDA-４を
１００ｍｌ取り、ｐＨ５．５のリン酸緩衝液１５００ｍ
ｌに分散させておき、ＥＤＣ３．０ｇ、市販ヒトハプト
グロビン溶液（２０Ｕ／ｍｌ；ミドリ十字社製）１００
ｍｌを加えて２５℃で６時間撹拌して反応させた。生成
物を回収、洗浄水がｐＨ７．０になるまで充分にイオン
交換水で洗浄して［セルロース］−［ハプトグロビン］
（ＣHMDA−Ｈｐ−７）を得た。

【００６７】上記で得たＣHMDA−Ｈｐ−７の性能を実施
例２と同様の方法で評価した。結果は表３に示した。

【００６８】〈比較例５〉比較例１で得たＣG-４を５０
ｍｌ取り、ｐＨ８．５の炭酸緩衝液７００ｍｌに分散さ
せておき、バチルス属由来のアミラーゼを６０００単位
（ＪＩＳＫ−７００１による糖化力）を添加し、１５℃
で１０時間撹拌して反応させた。ここで用いたアミラー
ゼは実施例３で用いたのとおなじものである。生成物を
回収、充分にイオン交換水で洗浄して含シッフ塩基［セ
ルロース］−［グルタルアルデヒド］−［アミラーゼ］
（ｓ−ＣG-Ａｍ−８）を得た。

【００６９】上記ｓ−ＣG-Ａｍ−８を５０ｍｌ取ってｐ
Ｈ８．５の炭酸緩衝液７００ｍｌに分散させておき、こ
れに水素化ホウ素ナトリウム１５ｇを加えて１５℃で１
０時間撹拌して反応させた。生成物を回収、イオン交換
水で充分に洗浄し、［セルロース］−［グルタルアルデ
ヒドアルデヒド］−［アミラーゼ］（ＣG-Ａｍ−８）を
得た。

【００７０】上記で得られたＣG-Ａｍ-８の性能を、実
施例３と同様の方法で評価した。結果は表４、図１に示
した。

【００７１】〈比較例６〉実施例１で得たＣHMDA−４を
５０ｍｌ取り、ｐＨ５．５のリン酸緩衝液７００ｍｌに
分散させておき、ＥＤＣ３．０ｇ、バチルス属由来のア
ミラーゼを６０００単位（ＪＩＳＫ−７００１による糖
化力）を添加し、１５℃で１０時間撹拌して反応させ
た。生成物を回収、洗浄水がｐＨ７．０になるまで充分
にイオン交換水で洗浄して［セルロース］−［アミラー
ゼ］（ＣHMDA−Ａｍ−９）を得た。

【００７２】上記で得られたＣHMDA−Ａｍ−９の性能
を、実施例３と同様の方法で評価した。結果は表４、図
１に示した。

【００７３】表１〜４、および図１から明らかなよう
に、本発明の生理活性物質固定化用担体は生理活性物質
の持つ活性を充分に保持したまま簡便に固定化すること
が可能であることがわかった。これは親水性スペーサー
によってもたらされる効果が大きいと考えることができ
る。生理活性物質固定化担体が主として水系溶媒中で使
用されることに着目し、生理活性物質の溶媒中における
モービリティー向上を実現するために親水性スペーサー
を導入したことが妥当であったと考えられる。特に血液
処理の分野に本発明の生理活性物質固定化用担体を用い
た場合、親水性スペーサーの排除体積効果によってアル
ブミン、血小板等の吸着が抑制され、良好な血液適合性
が実現された。

【００７４】

【発明の効果】本発明の生理活性物質固定化用担体は、
支持体に親水性スペーサーを介してアミノ基が導入さ
れ、さらにその末端アミノ基に末端ジカルボン酸を作用
させて得られる構造を有している。親水性スペーサーの
効果によって、水系溶媒中における生理活性物質のモー
ビリティーが増し、生理活性物質の持つ活性が充分に発
揮される。特に、本発明の生理活性物質の固定化法を血
液処理の分野に応用した場合、親水性スペーサーの排除
体積効果によって良好な血液適合性をも実現される。ま
た、本発明の生理活性物質固定化用担体に共有結合で固
定化された生理活性物質は、安定に固定されるため吸着
法や包括法でしばしば見られる生理活性物質の遊離もな
い。このようなことから、本発明により簡便な操作で効
果的に生理活性物質固定化担体を得ることができ、化学
反応触媒、分離精製用特異的吸着材、臨床検査材料、医
療用材料など広範な分野への応用が可能である。

【図面の簡単な説明】

【図１】アミラーゼ固定化担体のＰＨ１０の緩衝液に対
する耐性を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 田中 昌和 滋賀県大津市堅田二丁目１番１号 東洋紡 績株式会社総合研究所内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 水不溶性の固体を支持体とし、かつ下記
   化１の構造を有することを特徴とする生理活性物質固定
   化用担体。 【化１】 化１において、ｌ＝１〜３ ｍ＝２〜４００の整数であ
   る。Ｒ¹、Ｒ²は水素原子またはメチル基で、それぞれ同
   じもしくは異なってもよい。Ｒ³は炭素数１〜１０の直
   鎖、もしくは分枝状飽和アルキレン基である。ＺはＮＨ
   （ＣＨ₂ ）_n ，ＣＨ₂ ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₂ ，ＣＯ（ＣＨ
   ₂ ）_n ，ＣＯＲ³ ＣＯＮＨ（ＣＨ₂）_n ，ＣＯＲ³ ＣＯ
   ＮＨＣＨ₂ ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₂ ，ＣＯＲ³ ＣＯＮＨ（Ｃ
   Ｈ₂ ）_n'ＮＨＣＯ（ＣＨ₂ ）_n のいずれか１種であり、 Ｚ’は（ＣＨ₂ ）_n ，ＣＨ₂ ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₂ ，（Ｃ
   Ｈ₂ ）_n ＣＯＮＨ（ＣＨ₂ ）_n'のいずれか１種であり、
   ｎは１〜１０、ｎ’は０〜１０の整数である。